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MX2009002859A - Enlazadores biodegradables a base de ester impedido para suministro de oligonucleotidos. - Google Patents

Enlazadores biodegradables a base de ester impedido para suministro de oligonucleotidos.

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MX2009002859A
MX2009002859A MX2009002859A MX2009002859A MX2009002859A MX 2009002859 A MX2009002859 A MX 2009002859A MX 2009002859 A MX2009002859 A MX 2009002859A MX 2009002859 A MX2009002859 A MX 2009002859A MX 2009002859 A MX2009002859 A MX 2009002859A
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MX2009002859A
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Inventor
Hong Zhao
Original Assignee
Enzon Pharmaceuticals Inc
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Publication date
Application filed by Enzon Pharmaceuticals Inc filed Critical Enzon Pharmaceuticals Inc
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Abstract

La invención provee enlazadores biodegradables a base de éster impedido para el suministro de oligonucleótidos in vivo, así como un método para hacer y usar los mismos.

Description

ENLAZADORES BIODEGRADABLES A BASE DE ESTER IMPEDIDO PARA SUMINISTRO DE OLIGONUCLEOTIDOS REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la solicitud de patente provisional de E.U.A. No. 60/845,028 presentada el 15 de septiembre de 2006, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia.
CAMPO DE LA INVENCION La invention provee enlazadores biodegradables a base de éster para el suministro de oligonucleótidos in vivo.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las intervenciones terapéuticas clásicas en medicina se han enfocado típicamente en interacciones con proteínas corporales, tales como receptores, enzimas, hormonas y similares, en esfuerzos para moderar sus funciones causantes de enfermedad o potenciadoras de enfermedad. En enfoques terapéuticos más recientes, se desea la modulación de la producción real de dichas proteínas. Al interferir con la producción de proteínas, el efecto terapéutico máximo se puede obtener con efectos colaterales mínimos. Por lo tanto, un objeto general de dichos enfoques terapéuticos es interferir con, o de otra manera modular, la expresión de gen, que conduciría a la formación de proteína no deseada. Un método para inhibir la expresión de gen específica es con el uso de oligonucleótidos, especialmente oligonucleótidos que son complementarios a una secuencia de ARN mensajero objetivo específico (ARNm). Generalmente, las secuencias de ácido nucleico complementarias a los productos de transcripción de gen {v.gr. , ARNm) se designan "de antisentido", y las secuencias de ácido nucleico que tienen la misma secuencia que la transcripción o que son producidas como la transcripción se designan "de sentido". Véase v.gr., Crooke, 1992, Annu. Rev. Pharmacol. Toxico/., 32: 329-376. Un oligonucleótido de antisentido se puede seleccionar para hibridar todo o una parte de un gen, de tal manera que modula la expresión del gen. Factores de transcripción interactúan con ADN de doble cadena durante la regulación de la transcripción. Los oligonucleótidos pueden servir como inhibidores competitivos de factores de transcripción para modular su acción. Varios reportes recientes describen dichas interacciones (véase Bielinska, A., et al., 1990, Science, 250: 997-1000; y Wu, H., et al. , 1990, Gene 89: 203-209). Se están desarrollando estrategias moleculares para regular descendentemente expresión de gen no deseada. Recientemente, el uso de compuestos de oligonucleótido modificados se ha desarrollado en un método de tratamiento prometedor contra dichas enfermedades como infecciones virales, trastornos inflamatorios y genéticos y, de manera importante, cáncer. Los ADNs de antisentido fueron concebidos primero como oligodeoxinucleótidos complementarios alquilantes dirigidos contra ácidos nucleicos que ocurren naturalmente (Belikova, et al. , Tetrahedron Lett. 37:3557-3562, 1967). Zamecnik y Stephenson fueron los primeros en proponer el uso de oligonucleótidos de antisentido sintéticos para propósitos terapéuticos. (Zamecnik y Stephenson, 1978, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S. A., 75:285-289; Zamecnik y Stephenson, 1978, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 75:280-284). Reportan que el uso de un oligonucleótido de 13-meros complementario al ARN de virus de sarcoma de Rous inhibió el crecimiento del virus en cultivo de células. Desde entonces, se han publicado muchos otros estudios que manifiestan la eficacia in vitro de inhibición de crecimiento viral, v.gr., virus de estomatitis vesicular (Leonetti et al., 1988, Gene, 72:323), virus de herpes simple (Smith et al., 1987, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S. A. 83:2787), y virus de la influenza (Seroa; et al. , 1987, Nucleic Acids Res. 15:9909) por oligonucleótido de antisentido. Los oligonucleótidos también han encontrado uso, entre otros, en pruebas de diagnóstico, reactivos de investigación, v.gr., iniciadores en tecnología de PCR y otros procedimientos de laboratorio. Los oligonucleótidos pueden ser sintetizados de manera personalizada para contener propiedades que son ajustadas a un uso deseado. Por lo tanto, numerosas modificaciones químicas se han introducido en compuestos oligoméricos para incrementar su utilidad en diagnóstico, como reactivos de investigación y como entidades terapéuticas. Aunque los oligonucleótidos, especialmente oligonucleótidos de antisentido muestran ser prometedores como agentes terapéuticos, son muy susceptibles a nucleasas y pueden ser rápidamente degradados antes y después de que entran a las células objetivo haciendo a los oligonucleótidos de antisentido no modificados inadecuados para usarse en sistemas in vivo. Debido a que las enzimas responsables de la degradación se encuentran en la mayoría de los tejidos, se han hecho modificaciones a los oligonucleótidos en un intento para estabilizar los compuestos y remediar este problema. Se han hecho las modificaciones más ampliamente probadas a la porción de estructura de base de los compuestos de oligonucleótido. Véase generalmente Uhlmann y Peymann, 1990, Chemical Reviews 90, en las páginas 545-561 y referencias citadas en la misma. Entre muchas estructuras de base diferentes hechas, sólo el fosforotioato mostró actividad de antisentido significativa. Véase, por ejemplo, Padmapriya y Agrawal, 1993, Bioorg. & Med. Chem. Lett. 3, 761. Aunque la introducción de átomos de azufre a la estructura de base muestra la velocidad de degradación de enzima, también se incrementa la toxicidad al mismo tiempo. Otra desventaja de añadir átomos de azufre es que cambia la estructura de base de aquiral a quiral y da por resultado segundos diaestereómeros. Esto puede causar efectos colaterales adicionales. Aun más desventajas de los presentes oligonucleótidos de antisentido son que pueden portar una carga negativa en el grupo fosfato que inhibe la capacidad para pasar a través de la membrana celular principalmente lipofílica. Mientras más tiempo permanezca el compuesto fuera de la célula, más degradado se volverá dando por resultado que menos compuesto activo llegue al objetivo. Una desventaja adicional de los presentes compuestos de antisentido es que los oligonucleótidos tienden a formar estructuras de solución secundarias y de orden alto. Una vez que se forman estas estructuras, se convierten en objetivos de varias enzimas, proteínas, ARN y ADN para unión. Esto da por resultado efectos colaterales no específicos y cantidades reducidas de compuesto activo que se une a ARNm. Otros intentos para mejorar la terapia de oligonucleótido ha incluido la adición de una porción enlazadora y polietilenglicol. Véase, por ejemplo, Kawaguchi, et al., Stability, Specific Binding Activity, and Plasma Concentration in Mice of an Oligodeoxynucleotide Modified at 5'-Terminal with Poly(ethylene glycol), Biol. Pharm. Bull., 18(3) 474-476 (1995), y patente de E.U.A. No. 4,904,582. En estos dos ejemplos, las modificaciones implican el uso de porciones enlazadoras que son permanentes en naturaleza en un esfuerzo por estabilizar el oligonucleótido contra degradación e incrementar la permeabilidad de la célula. Sin embargo, estos dos esfuerzos no proveen ninguna eficacia in vivo. Más recientemente, en el documento U.S. Ser. No. 10/822,205 de propiedad común, incorporado aquí por referencia en su totalidad, se han provisto oligonucleótidos conjugados de polímero amino-liberable. Sin embargo, sería incluso más deseable liberar el oligonucleótido en el plasma de una manera controlada sin la necesidad de un enlazador de cola de amino.
Debido a la inadecuación de los presentes métodos, existe la necesidad de mejorar la estabilidad y resistencia a degradación por nucleasa así como disminuir la toxicidad e incrementar la afinidad de unión a ARNm de compuestos de oligonucleótido. La terapia de oligonucleótido actual es costosa. Esto se debe principalmente al problema de degradación. Por lo tanto, existe una necesidad real de proteger los compuestos de oligonucleótido de antisentido contra degradación, prevenir la formación de estructuras de orden superior y al mismo tiempo suministrar cantidades suficientes de compuestos de oligonucleótido de antisentido al objetivo. Esta invención provee esas mejoras.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En un aspecto de la presente invención, la presente invención provee compuestos para el suministro in vivo polinucleótidos, tales como oligonucleótidos, que incluyen una estructura de conformidad con la fórmula (I) en donde A es un grupo bloqueador o Ri es un polímero soluble en agua sustancialmente no antigénico; Li y L'i son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de o C(=Y'i), preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 8, y muy preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 átomos de C(=Y o 0(=??); I_2 y L'2 son enlazadores bifuncionales independientemente seleccionados; Yi y ?? son independientemente O, S, o NR5; X y X' son independientemente O o S; R2, R'2, R3, R'3 y R5 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3- 9, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de C -6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de C -6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C -6 y arilcarboniloxi sustituido, o R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 independientemente forman un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contiene por lo menos tres carbonos; R4 y R'4 son independientemente polinucleótidos seleccionados y derivados de los mismos; (p) y (?') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 3, muy preferiblemente cero o 1 ; y (q) y (q') son independientemente zero ó 1 , siempre que R3 sea un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tenga por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y además siempre que L-? no sea el mismo que C(R2)(R3). En ciertas modalidades preferidas de este aspecto de la invención, el polímero sustancialmente no antigénico es un óxido de polialquileno y muy preferiblemente es polietilengliol (de aquí en adelante PEG). En otros aspectos, el PEG es ya sea bloqueado en un extremo terminal con un grupo CH3, es decir, mPEG, mientras que en otras modalidades, PEGs bis-activados se proveen tales como aquellos correspondientes a la fórmula: Aspectos adicionales de la invención incluyen métodos para hacer conjugados que contienen el éster impedido así como métodos de tratamiento basados en administrar cantidades efectivas de conjugados que contienen una porción biológicamente activa a un paciente (mamífero) que necesita el mismo. También se incluyen métodos de suministro del conjugado a las células que requieren dicho tratamiento. Los sistemas de suministro poliméricos descritos aquí incluyen enlazadores novedosos que pueden formar un enlace liberable tal como un enlace de éster entre el polímero y la porción biológicamente activa tales como oligonucleótidos. Aunque el éster impedido de los oligonucleótidos es estable durante el almacenamiento, puede liberar los oligonucleótidos nativos sin ningunas colas al hidrolizar los enlaces de fosfodiéster o fosfotioéster. Además, el compuesto polimérico de la invención puede facilitar la hidrólisis del enlace de ester impedido estable por asistencia anquimérica de los enlazadores. Una ventaja de los sistemas de transporte poliméricos basados en éster impedido descritos aquí es que los sistemas de suministro poliméricos tienen estabilidad mejorada. Sin estar limitado por ninguna teoría, el enlace de éster en un ambiente estéricamente impedido entre el polímero y una porción tal como un oligonucleótido puede inhibir el enlace de éster de ser expuesto a un medio acuoso básico o enzimas, y por lo tanto estabiliza el enlace covalente. La estabilidad de los sistemas poliméricos permite una vida de anaquel más larga para el conjugado polimérico. La estabilidad mejorada incrementa la eficacia en cuanto a costos. Los sistemas de suministro poliméricos descritos aquí son especialmente bien adecuados para usarse con oligonucleótidos y ARN de interferencia corto (ARNic) de antisentido relacionados o compuestos de ácido nucleico bloqueados (LNA). La presencia del grupo éster impedido en proximidad al oligonucleótido unido al mismo provee estabilidad y resistencia mejoradas a la degradación por nucleasa. También ayuda a disminuir la toxicidad e incrementar la afinidad de unión a ARNm de compuestos de oligonucleótido. Los conjugados hechos de conformidad con la invención proveen un medio para proteger compuestos de oligonucleótido de antisentido contra degradación, previniendo la formación de estructura de orden superior. Más aún, los conjugados de polímero permiten al experto en la técnica suministrar suficientes cantidades de compuestos de oligonucleótido de antisentido activos al objetivo. El enlazador inventivo es estable bajo todas las condiciones de regulador de pH adecuado para administración intravenosa a animales o humanos en forma acuosa. El enlazador inventivo se hidrolizará para liberar el oligonucleótido intacto en el plasma en presencia de enzimas en el plasma. La variación del impedimento estérico sobre el enlazador modificará la velocidad de hidrólisis, según se requiera para sistemas de suministro particulares. Otra ventaja de los polímeros activados que contienen los ésteres impedidos es que permite al experto en la técnica a conjugar más fácilmente oligonucleótidos de elección. No hay necesidad de modificar el oligonucleótido o porción objetivo con el éster impedido antes de pegilación. Los oligonucleótidos se toman como tales y son pegilados con el enlazador de PEG activado que contiene el grupo protector de éster impedido deseado en el mismo.
Una ventaja adicional es que el enlazador inventivo se puede conjugar con cualquiera de los nucleótidos (A, G, C, T, U, etc) y después puede ser convertido, por ejemplo, a su fosforamidita. La fosforamidita entonces se puede utilizar bajo condiciones de síntesis de oligonucleótido de fase sólida normales para hacer moléculas de oligonucleótido. El enlace entre el enlazador y el oligonucleótido es estable bajo las condiciones necesarias para la síntesis y purificación. Otras y adicionales ventajas serán evidentes a partir de la siguiente descripción. Para los propósitos de la presente invención, por el término "residuo" se debe entender aquella porción de un compuesto biológicamente activo, tal como un oligonucleótido, que queda después de que ha sufrido una reacción en la cual la porción portadora de profármaco ha sido unida por modificación de v.gr. , un grupo hidroxilo o amino disponible, para formar, por ejemplo, un grupo éster o amida, respectivamente. Análogamente, el residuo de un polímero sustancialmente no antigénico, v.gr., un polímero de óxido de polialquileno, es aquella porción del polímero que queda después de que ha sufrido una reacción en la cual el polímero ha sido unido a un enlazador, separador y/o compuesto biológicamente activo o residuos de los mismos. Para los propósitos de la presente invención, el uso del singular o plural no pretende ser limitante del número del detalle u objeto referenciado. Por lo tanto, el uso del singular para referirse a una célula, polímero o fármaco no implica que sólo una célula es tratada, sólo una molécula es preparada o utilizada, y/o sólo un fármaco es utilizado, y el uso del plural no excluye la aplicación a un detalle individual referenciado, a menos que se establezca expresamente. A menos que se defina de otra manera, para los propósitos de la presente invención: el término "alquilo" incluirá alquilos de cadena recta, ramificada, sustituidos, v.gr., halógeno-, alcoxi-, y nitro-alquilos de C1-12, cicloalquilos de C3-8 o cicloalquilos sustituidos, etc.; el término "sustituido" incluye añadir o reemplazar uno o más átomos contenidos dentro de un grupo funcional o compuesto con uno o más átomos diferentes; el término "alquilos sustituidos" incluye carboxialquilos, aminoalquilos, dialquilaminos, h id rox ¡alquilos y mercaptoalquilos; el término "cicloalquilos sustituidos" incluye porciones tales como 4-clorociclohexilo; arilos incluyen porciones tales como naftilo; arilos sustituidos incluyen porciones tales como 3-bromofenilo; aralquilos incluyen porciones tales como toluilo; heteroalquilos incluyen porciones tales como etiltiofeno; el término "heteroalquilos sustituidos" incluyen porciones tales como 3-metoxi-tiofeno; alcoxi incluye porciones tales como metoxi; y fenoxi incluye porciones tales como 3-nitrofenoxi; el término "halógeno" incluirá fluoro, cloro, yodo y bromo; y los términos "cantidades suficientes " y "cantidades efectivas" para propósitos de la presente invención significarán una cantidad que logra un efecto terapéutico tal como es entendido por los expertos en la técnica.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION A. Generalidades La invención provee enlazadores biodegradables a base de éster impedido para suministro de oligonucleótido in vivo. Por lo tanto, la presente invención provee fármacos de oligonucleótido enlazados a polímero útiles que tienen muchos usos prácticos, incluyendo usos como reactivos de diagnóstico y analíticos, como herramientas de investigación y pesquiza, tanto in vitro como in vivo, y como agentes terapéuticos. De conformidad con lo anterior, se proveen compuestos de la fórmula (I) en donde A es un grupo bloqueador o Ri es un polímero soluble en agua sustancialmente no antigénico; L-\ y ?_? son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de o preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 8, y muy preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 átomos de C(=Y1) o C(=Y'1); L-2 y L'2 son enlazadores bifuncionales independientemente seleccionados; Yi y ?? son independientemente O, S, o NR5; X y X' son independientemente O o S; R2, R'2, R3, R'3 y R5 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-i9, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C1-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido, o R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 independientemente forman un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contiene por lo menos tres carbonos; R4 y R'4 son independientemente polinucleótidos seleccionados y derivados de los mismos; (p) y (?') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 3, muy preferiblemente cero o 1 ; y (q) y (q') son independientemente zero ó 1 , siempre que R3 sea un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tenga por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y además siempre que l_i no sea el mismo que C(R2)(R3). En algunos aspectos de la invención, los compuestos descritos aquí contienen polímeros de conformidad con la fórmula (la): en donde, (q) es 1. En ciertas modalidades preferidas de este aspecto de la invención, el polímero sustancialmente no antigénico es un óxido de polialquileno y es muy preferiblemente polietilenglicol (de aquí en adelante PEG). En otros aspectos, el PEG es ya sea bloqueado en un extremo terminal con un grupo CH3, es decir, mPEG. En otras modalidades, se proveen PEGs bis-activados tales como aquellos correspondientes a la fórmula (II): (II). Dentro de esos aspectos de la invención, los sustituyentes contemplados para sustitución, en donde las porciones correspondientes a R2, R'2, R3- R'3 y 5 son indicadas como que son posiblemente sustituidas pueden incluir, por ejemplo, acilo, amino, amido, amidina, ara-alquilo, arilo, azido, alquilmercapto, arilmercapto, carbonilo, carboxilato, ciano, éster, éter, formilo, halógeno, heteroarilo, heterocicloalquilo, hidroxi, imino, nitro, tiocarbonilo, tioéster, tioacetato, tioformiato, alcoxi, fosforilo, fosfonato, fosfinato, sililo, sulfhidrilo, sulfato, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamida, y sulfonilo. Preferiblemente, l_i y ?_? son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a ocho muy preferiblemente cuatro a seis; y tanto Y En otros aspectos de la invención, los polinucleótidos incluyen oligonucleótidos, preferiblemente de aproximadamente 2 a aproximadamente 100 oligómeros, muy preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 50 oligómeros, muy preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 oligómeros. En un aspecto adicional, A se puede seleccionar de entre H, NH2, OH, CO2H, alcoxi de Ci-6, y alquilos de Ci-6. En algunas modalidades preferidas, A puede ser metilo, etilo, metoxi, etoxi, H y OH. A es muy preferiblemente metilo o metoxi. En un aspecto adicional, la presente invención provee intermediarios para extender el polinucleótido. De conformidad con este aspecto, los compuestos de la fórmula (I) además incluyen ?,?-tetraisopropil-cianoetilfosforamidita y forman compuestos de la fórmula (Ib): Con respecto a este aspecto, preferiblemente (q) es cero.
B. Polímeros solubles en agua sustancialmente no antiqénicos Los polímeros utilizados en los sistemas de suministro polimérico descritos aquí son polímeros preferiblemente solubles en agua y sustancialmente no antigénicos tales como óxidos de polialquileno (PAO's). En un aspecto de la invención, los compuestos descritos aquí incluyen un óxido de polialquileno lineal, terminalmente ramificado o de brazos múltiples. En algunas modalidades preferidas, el óxido de polialquileno incluye polietilenglicol y polipropilenglicol. El óxido de polialquileno tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 2,000 a aproximadamente 100,000 daltons, preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 60,000 daltons. En algunos aspectos el óxido de polialquileno puede ser de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 25,000, y preferiblemente de aproximadamente 12,000 a aproximadamente 20,000 daltons cuando las proteínas u oligonucleótidos son unidos o alternativamente de aproximadamente 20,000 a aproximadamente 45,000 daltons, y preferiblemente de aproximadamente 30,000 a aproximadamente 40,000 daltons cuando los compuestos farmacéuticamente activos (moléculas pequeñas) se utilizan en los compuestos descritos aquí. El óxido de polialquileno incluye polietilenglicoles y polipropilenglicoles. Muy preferiblemente, el óxido de polialquileno incluye polietilenglicol (PEG). PEG es generalmente representado por la estructura: -0-(CH2CH20)n- en donde (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300, y depende del número de brazos de polímero cuando se usan polímeros de brazos múltiples. Alternativamente, la porción de residuo de polietilenglicol (PEG) de la invención se puede seleccionar de entre: -Y71-(CH2CH20)n-CH2CH2Y7i- , -Y7i-(CH2CH20)n-CH2C(=Y72)-Y71- , -Y7i-C(=Y72)-(CH2)a7i-Y73-(CH2CH20)n-CH2CH2-Y73-(CH2)a71-C(=Y72)-Y7 , y -Y71-(CR71 R72)a72-Y73-(CH2)b71-0-(CH2CH20)n-(CH2)b71-Y73-(CR71 R72)a72-Y7i- , en donde: Y71 y Y73 son independientemente O, S, SO, SO2, NR73 o un enlace; Y72 es O, S, o NR74; R7i-7 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3_8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de Ci_6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido; (a2) y (b2) son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 6, y muy preferiblemente 1 ; y (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2300. Ramificados o derivados de U-PEG se describen en las patentes de E.U.A Nos. 5,643,575, 5,919,455, 6,1 13,906 y 6,566,506, cuya descripción se incorpora aquí por referencia. Una lista no limitante de dichos polímeros corresponde a los sistemas de polímero (i) - (vii) con las siguientes estructuras: O H m-PEG N— C \ CH— (Y63CH2)w61C(=0)- / m-PEG- -C O (Ü). O m-PEG-0 — C- (Y63CH2)w61C(=0)-m-PEG-0 — C — N' o II H (iü), o II H m-PEG-0 — C N \ (cH2)w62 HC (Y63CH2)w61C(=0)- (CH2)w63 m-PEG-O— C N o II H (v), y O m-PEG — C II NH \ (CH2)W62 HC (Y63CH2)w61C(=0)- (CH2)w63 m-PEG — C N O II H (Vi), en donde: Y6i-62 son independientemente O, S o NR61; Y63 es O, NR62, S, SO o SO2 (w62), (w63) y (w64) son independientemente 0 o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 3; (w61 ) es 0 ó 1 ; mPEG es metoxi PEG en donde PEG es anteriormente definido y un peso molecular total de la porción de polímero es de aproximadamente 2,000 a aproximadamente 100,000 daltons; y R6i y R62 son independientemente las mismas porciones que se pueden usar para R73. En otro aspecto adicional, los polímeros incluyen productos de PEG-OH de brazos múltiples o "PEG de estrella" tales como aquellos descritos en NOF Corp. Drug Delivery System catalog, Ver. 8, abril de 2006, cuya descripción se incorpora aquí por referencia. Los conjugados de polímero de brazos múltiples contienen cuatro o más brazos de polímero y preferiblemente cuatro u ocho brazos de polímero. Para propósitos de ilustración y no de limitación, el residuo de polietilenglicol (PEG) de brazos múltiples puede ser H2C O — (CH2CH20)nH I HC O — (CH2CH20)nH CH2 O I CH2 HC O — (CH2CH20)nH CH2 r O - i CH2 HC O — (CH2CH20)nH H2C O — (CH2CH20)nH en donde: (x) es 0 y un entero positivo, es decir, de aproximadamente 0 a aproximadamente 28; y (n) es el grado de polimerización. En una modalidad particular de la presente invención, el PEG de brazos múltiples tiene la estructura: H2C O — (CH2CH20)nH I HC O (CH2CH20)nH CH, 1 i CH2 HC O — (CH2CH20)„H CH2 O i CH2 I HC O — (CH2CH20)nH H2C O — (CH2CH20)nH en donde n es un entero positivo. En una modalidad preferida de la invención, los polímeros tienen un peso molecular total de aproximadamente 5,000 Da a aproximadamente 60,000 Da, y preferiblemente de 12,000 Da a 40,000 Da. En otra modalidad particular, el PEG de brazos múltiples tiene la estructura: o en donde n es un entero positivo. En una modalidad preferida de la invención, el grado de polimerización para el polímero de brazos múltiples (n) es de aproximadamente 28 a aproximadamente 350 para proveer polímeros que tienen un peso molecular total de aproximadamente 5,000 Da a aproximadamente 60,000 Da, y preferiblemente de aproximadamente 65 a aproximadamente 270 para proveer polímeros que tienen un peso molecular total de 12,000 Da a 45,000 Da. Esto representa el número de unidades de repetición en la cadena de polímero y depende del peso molecular del polímero. Los polímeros pueden ser convertidos a un polímero adecuadamente activado, usando las técnicas de activación descritas en las patentes de E.U.A Nos. 5,122,614 o 5,808,096. Específicamente, el PEG puede ser de la fórmula: en donde: (u') es un entero de aproximadamente 4 a aproximadamente 455; y hasta 3 porciones terminales del residuo es/son bloqueados con un metilo u otro alquilo inferior. En algunas modalidades preferidas, todos los cuatro brazos de PEG pueden ser convertidos a grupos activadores adecuados, para facilitar la unión a grupos aromáticos. Dichos compuestos antes de la conversión incluyen: Las sustancias poliméricas incluidas aquí son preferiblemente solubles en agua a temperatura ambiente. Una lista no limitante de dichos polímeros incluye homopolimeros de óxido de polialquileno tales como políetilenglicol (PEG) o polipropilenglícoles, polioles polioxietílenados, copolímeros de los mismos y copolímeros de bloque de los mismos, siempre que la solubilidad en agua de los copolímeros de bloque se mantenga. En una modalidad adicional y como una alternativa a polímeros a base de PAO, uno o más materiales efectivamente no antigénicos tales como dextrano, alcoholes polivinílicos, polímeros a base de carbohidratos, hidroxipropilmetacrilamida (HPMA), óxidos de polialquileno, y/o copolímeros de los mismos se pueden usar, Véase también patente de E.U.A. comúnmente cedida No. 6,153,655, cuyos contenidos se incorporan aquí por referencia. Los expertos en la técnica entenderán que el mismo tipo de activación se utiliza como se describe aquí para PAO's tal como PEG. Los expertos en la técnica se darán cuenta que la lista anterior es simplemente ilustrativa y que todos los materiales poliméricos que tienen las cualidades descritas aquí se contemplan. Para los propósitos de la presente invención, "sustancialmente o efectivamente no antigénico" significa todos los materiales entendidos en la técnica como siendo no tóxicos y que no inducen una respuesta inmunogénica apreciable en mamíferos. En algunos aspectos, los polímeros que tienen grupos amina terminal pueden ser utilizados para hacer los compuestos descritos aquí. Los métodos de preparación de polímeros que contienen aminas terminales en alta pureza se describen en las solicitudes de patente de E.U.A Nos. 1 1/508,507 y 1 1/537,172, cuyos contenidos se incorporan aquí por referencia. Por ejemplo, los polímeros que tienen azidas reaccionan con agente reductor a base de fosfina tal como trifenilfosfina o un agente reductor de borhidruro de metal alcalino tal como NaBH4. Alternativamente, los polímeros que incluyen grupos residuales que reaccionan con sales de amina protegidas tales como sal de potasio de ¡midodicarbonato de metil-ter-butilo (KNMeBoc) o la sal de potasio de ¡midodicarbonato de di-ter-butilo (KNBoc2) seguido por desprotección del grupo amino protegido. La pureza de los polímeros que contienen las aminas terminales formadas por estos procedimientos es mayor que aproximadamente 95% y preferiblemente mayor que 99%. En aspectos alternativos, los polímeros que tienen grupos ácido carboxílico terminal se pueden utilizar en los sistemas de suministro polimérico descritos aquí. Los métodos de preparación de polímeros que tienen ácidos carboxílicos terminales en alta pureza se describen en la solicitud de patente de E.U.A No. 1 1/328,662, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia. Los métodos incluyen primero preparar un éster alquílico terciario de un óxido de poiialquileno seguido por conversión al derivado de ácido carboxílico del mismo. El primer paso de la preparación de los ácidos carboxílicos de PAO del proceso inclye formar un intermediario tal como éster ter-butílíco de ácido carboxílico de óxido de poiialquileno. El intermediario se forma haciendo reaccionar un PAO con un halogenoacetato de f-butilo en presencia de una base tal como f^utóxído de potasio. Una vez que el intermediario de éster f-butílico se ha formado, el derivado de ácido carboxílico del óxido de poiialquileno puede ser fácilmente provisto en purezas que exceden 92%, preferiblemente que exceden 97%, muy preferiblemente que exceden 99% y muy preferiblemente aún que exceden 99.5% de pureza.
C. Esteres impedidos Para los propósitos de la presente invención, "impedidos" significa o incluye ambiente estéricamente sobrecargado alrededor de C(=Yi). Dicho ambiente puede hacerse típicamente incluyendo sustituyentes volumétricos, tales como porciones cíclicas o ramificadas. Cada una de las porciones CR2R3 y CR'2R'3 adyacentes a C(=Yi) y C(=Y'i) de conformidad con la fórmula (I) forman ésteres impedidos. Los R2, R'2, R3, R'3 y R5 se pueden seleccionar de entre hidrógeno, alquilo de C-i.6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de 03.19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci_6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquillo sustituido de C3_8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de C -6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de C1-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi. Cualquiera de los posibles grupos descritos aquí para R2 y R3 (R'2 y R'3) se pueden usar siempre que tanto R2 como R3 (R'2 y R'3) no sean simultáneamente H. Cuando uno de R2 y R3 (R'2 y R'3) es H, el otro contiene por lo menos tres hidrocarburos. En una modalidad preferida, R2, R'2, R3 y R'3 incluyen metilo, etilo e isopropilo. En una modalidad alternativa, R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 pueden formar un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contienen por lo menos tres carbonos.
D. Separadores: y L'i En otro aspecto de la presente invención, pares de electrones libres de separadores U y ?_? enlazados a las porciones CR2R3 y CR'2R'3 proveen efectos enquiméricos Sin estar limitado por ninguna teoría, los pares de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de facilitan (modifican) la velocidad de liberación de las porciones biológicamente activas, grupos dirigidos a objetivo y agentes de diagnóstico de los sistemas de suministro polimérico descritos aquí. En una modalidad preferida, los separadores de L1 y ?_? se pueden seleccionar de entre: -S(CR12R13)S- , -O(CR12R13)s- , -[C(=0)]r(CR12R13)s- , -NRii(CRi2Ri3)s Ri6(CR-|4Ri5)s'- , -NRníCR^R^O CR^R!^- , -O(CR12R13)sO(CR14Ri5)s'- , -0(CR12R13)sS(CR14R15)s'- , -0(CRi2 i3)sNRi6(CR14 i5)s- , -0(CRi2Ri30)s(CRi4Ri5)s- ¦ en donde: R-11-R-16 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, amino, amino sustituido, azido, carboxi, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, éter silílico, sulfonilo, mercapto, alquilmercapto de d-e, arilmercapto, arilmercapto sustituido, alquiltio sustituido de Ci-6, alquilos de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de 03.19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de C-i-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalqulo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de C1-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, y arilcarboniloxi; (s) y (s') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; y (r) es 0 ó 1. Alternativamente, los grupos ?_? ?_? se pueden seleccionar de entre: -NH-(CH2-CH2-0)P-CH2-, -C(=O)-(CH2)n-, -NH-(CH2)n- , -S-(CH2)P- , -NH-(CH2)P-0-CH2- y -NH- C(=0)-(CH2)p-NH-C(=0)-(CH2)q- en donde (p) es un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 12, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 8, muy preferiblemente de aproximadamente a aproximadamente 5; y (q) son independientemente un entero positivo, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 8, y muy preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 4. L-[ y L'i preferiblemente incluyen -(CH2)X2i- o -(CH2)x2 -W-(CH2)x22-, en donde (x21 ) y (x22) son enteros que varían en valor de 1 a 7, y W es O o NH. En otra modalidad preferida, los pares de electrones de los separadores L-i-2 y L 2 están ubicados cuatro a ocho átomos de y Muy preferiblemente, los pares de electrones están ubicados cuatro a cinco átomos de Las modalidades preferidas de conformidad con el aspecto preferido son -L1-C(R2)(R3)-C(=Y1)- y -L'1-C(R,2)(R'3)-C(=Y'1) incluyen: En otro aspecto, los sistemas de suministro poliméricos descritos aquí incluyen que R3 es un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tiene por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y l_i no es el mismo que C(R2)(R3).
E. Enlazadores bifuncionales Los compuestos descritos aquí pueden incluir enlazadores bifuncionales. Los enlazadores bifuncionales incluyen aminoácidos o derivados de aminoácido. Los aminoácidos pueden estar entre los aminoácidos que ocurren naturalmente y que no ocurren naturalmente. Derivados y análogos de los aminoácidos que ocurren naturalmente, así como los diversos aminoácidos que no ocurren naturalmente conocidos en la técnica (D o L), hidrofóbicos o no hidrofóbicos también se contemplan dentro del alcance de la invención. Una lista no limitante adecuada de los aminoácidos que no ocurren naturalmente incluyen ácido 2-aminoadípico, ácido 3-aminoadípico, beta-alanina, ácido beta-aminopropiónico, ácido 2-aminobutírico, ácido 4-aminobutírico, ácido piperidínico, ácido 6-aminocaproico, ácido 2-aminoheptanoico, ácido 2-aminoisobutirico, ácido 3-aminoisobutírico, ácido 2-aminopimélico, ácido 2, 4-aminobutírico, desmosina, ácido 2,2-diaminopimélico, ácido 2,3-diaminopropiónico, N-etilglicina, N- etilasparagina, 3-hidroxiprolina, 4-hidroxiprolina, isodesmosina, alo-isoleucina, N-metilglicina, sarcosina, N-metil-isoleucina, 6-N-metil-lisina, N-metilvalina, norvalina, norleucina y ornitina. Algunos residuos de aminoácido preferidos se seleccionan de glicina, alanina, metionina y sarcosina, y muy preferiblemente glicina. Alternativamente, L2 y L'2 se pueden seleccionar de entre: -[C(=0)]v(CR22R23)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23),-O[C(=O)]v-, -[C(=O)]v(CR22R23),-NR26[C(=O)]v-, -[C(=0)]vO(CR22R23),[C(=0)]v-, -[C(=0)]vO(CR22R23).0[C(=0)]v-, -[C(=0)]vO(CR22R23),NR26[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR21(CR22R23),[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR21(CR22R23),O[C(=O)]v-, -[C(=O)]vNR21(CR22R23),NR26[C(=O)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23),0-(CR28R29)».[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23),NR26-(CR28R29)t.[C(=0)]v.-, -[C(=0)]v(CR22R23)tS-(CR28R29),.[C(=0)]v-, -[C(=0)]vO(CR22R23)tO-(CR28R29)r[C(=0)]v-, -[C(=0)]vO(CR22R23),NR26-(CR28R29)t [C(=0)]v.-, -[C(=O)]vO(CR22R23),S-(CR28R29)t[C(=0)]v.-, -[C(=0)]vNR21(CR22R23)»0-(CR28R29)» [C(=O)]v-, -[C(=O)]vNR21(CR22R23),NR26-(CR28R29),[C(=0)]v-, -[C( =0) ]vNR21(CR22R23)tS-(CR28R29)t.[C(=O)]v-, -[C( =0) ]v(CR22R23CR28R290),NR26[C(=O)]v -, -[C( =0) ]v(CR22R23CR28R290),[C( = 0)]v-, -[C( =0) ]vO(CR22R23CR28R29O)tNR26[C(=0)]v.-, -[c< =0) ]vO(CR22R23CR28R29O)t[C(=O)]v-, -[C( =0) ]vNR21(CR22R23CR28R290),NR26[C(=O)]v-, -[C( =0) ]vNR21(CR22R23CR28R290),[C(=0)]v-, -[C( =0) ]v(CR22R23CR28R29O)t(CR24R25)tiC(=0)]v-, -[C( =0) ]vO(CR22R23CR28R29O),(CR24R25)t'[C( = O)]v-, -[C( =0) ]vNR2l(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t'[C(=0)]v-, -[C( =0) ]V(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t [C( = 0)]v-, -[C( =o) ]V(CR22R23)t(CR24R25CR28R290),.[C( = 0)]v-, -[C( =0) ]v(CR22R23)t(CR24R25CR28R290),.NR26[C(=0)]v.-> -[C( =0) ]vO(CR22R23CR28R29O),(CR24R25). O[C(=0)]v-, -[C( =0) ]vO(CR22R23),(CR24R25CR28R29O) [C(=O)]v.-, -[C( =0) ]vO(CR22R23)t(CR24CR25CR28R290)t.NR26[C(=0)]v.-, -[C( =0) ]vNR21(CR22R23CR28R290),(CR24R25)tO[C(=0)]v-, -[C( =0) ]vNR21(CR22R23),(CR24R25CR28R29O),.[C(=O)]v-, -[C( =0) ]vNR21(CR22R23),(CR24R25CR28R290), NR26[C(=O)]v en donde: R21-29 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, aqluilos de Ci-6, alquilos ramificados de C3-12, cicloalquilos de C3-8, alquilos sustituidos de C-i-6, cicloalquilos sustituidos de C3_8, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de Ci_6, heteroalquilos sustituidos de C 1-6, alcoxi de Ci-6, fenoxi y heteroalcoxi de Ci-6; (t) y (f) son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 12, muy preferiblemente un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 8, y muy preferiblemente 1 ó 2; y (v) y (?') son independientemente cero o 1. En una modalidad preferida, L2 y L'2 se pueden seleccionar de -[C(=O)]rNH(CH2)2CH=N-NHC(=0)-(CH2)2-, -[C(=O)]rNH(CH2)2(CH2CH2O)2(CH2)2NH[C(=O)]r -, -[C(=O)]rNH(CH2CH2)(CH2CH2O)2NH[C(=O)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s.[C(=0)]r-, -[C(=0)]r NH(CH2CH2)sS(CH2CH2)s [C(=0)]r-, -[C(=O)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)[C(=O)]r-, -[C(=O)]rNH(CH2CH2)sO(CH2CH2)s.[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)(CH2)NH[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)2(CH2)[C(=O)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)s(CH2)s [C(=0)]r-, -[C(=0)]rNHCH2CH2NH[C(=0)]r-, -[C(=O)]rNH(CH2CH2)2O[C(=0)], -, -[C(=O)]rNH(CH2CH2O)[C(=O)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2)3[C(=0)]r-, -[C(=O)]rO(CH2CH2O)2(CH2)[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)2NH(CH2)2[C(=0)]r-, -[C(=O)]rO(CH2CH2O)2NH[C(=O)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)20(CH2)2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)2S(CH2)2[C(=0)]r-, -[C(=O)]rO(CH2CH2)NH[C(=O)]r-, -[C(=0)]rO(CH2CH2)0[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)3NH[C(=0)],-, -[C(=0)]rO(CH2)30[C(=0)],-, -[C(=0)]rO(CH2)3[C(=0)]r-, -[C(=0)]rCH2NHCH2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rCH2OCH2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rCH2SCH2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rS(CH2)3[C(=0)]r-, -[C(=0)]r(CH2)3[C(=O)]r-, — [C(=0)]rOCH2- ^>-CH2NH[C(=0)]r.- en donde (r) y (r') son independientemente cero o 1. En otra modalidad, los enlazadores bifuncionales incluyen: -Val-Cit-, -Gly-Phe-Leu-Gly-, -Ala-Leu-Ala-Leu-, -Phe-Lys-, o I I H 5-Val — Cit— C-N- -Val-Cit-C(=0)-CH2OCH2-C(=0)-, -Val-Cit-C(=0)-CH2SCH2-C(=0)-, y -NHCH(CH3)-C(=O)-NH(CH2)6-C(CH3)2-C(=O)- en donde, Yn-19 son independientemente O, S o NR4e; R31-48, R50-51 y A51 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de Ci-6, alquilos ramificados de C3-12, cicloalquilos de C3-8, alquilos sustituidos de Ci-6, cicloalquilos sustituidos de C3-8, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de Ci-6, heteroalquilos sustituidos de Ci-6, alcoxi de C1-6, fenoxi y heteroalcoxi de Ci.6¡ Ar es una porción arito o heteroarilo; L-M-15 son separadores bifuncionales independientemente seleccionados; J y J' se seleccionan independientemente de entre porciones activamente transportadas hacia una célula objetivo, porciones hidrofóbicas, porciones de enlace bifuncional y combinaciones de las mismas; (c11), (h11), (k11), (111), (m11) y (n11) son enteros positivos independientemente seleccionados; (a11), (e11), (g11), (j11), (o"11) y (q1O son independientemente ya sea cero o un entero positivo; y (b11), (x11), (x'11), (f11), (¡11) y (p11) son independientemente cero o uno.
F. Grupos R4 y R'4 1. Grupos residuales Para los propósitos de la presente invención, los grupos residuales se entienden como aquellos grupos que son capaces de reaccionar con un nucléofilo encontrado en el objetivo deseado, es decir, un oligonucleótido, un separador bifuncional, intermediario, etc. Los objetivos por lo tanto contienen un grupo para desplazamiento, tal como grupos OH o SH encontrados en oligonucleótidos. Los grupos residuales unidos al éster impedido permiten la reacción covalente a la porción biológicamente activa de elección, es decir, compuestos farmacéuticamente activos (compuestos de peso molecular bajo), oligonucleótidos, etc. Los grupos residuales adecuados incluyen, sin limitación, halógeno (Br, Cl), ésteres activados, imidotiona cíclica, N-hidroxisuccinimidilo, N-hidroxiftalimidila, N-hidroxibenzotriazolilo, imidazol, tosilato, mesilato, tresílato, nosilato, alquiloxi de C C6, alcanoiloxi de Ci-C6, arilcarboniloxi, orto-nitrofenoxi, para-nitrofenoxi, pentafluorofenoxi, 1 ,3,5-triclorofenoxi, y 1 ,3,5-trifluorofenoxi u otros grupos residuales adecuados como es evidente para los expertos en la técnica. En modalidades particularmente preferidas de la invención, los grupos residuales se pueden seleccionar de entre OH, metoxi, ter-butoxi, para-nitrofenoxi y N-hidroxisuccinimidilo. 2. Porciones polinucleótido A fin de apreciar más completamente el alcance de la presente invención, se definen los siguientes términos. El experto en la técnica apreciará que los términos, "ácido nucleico" o "nucleótido" se aplican a ácido desoxirribonucleico ("ADN"), ácido ribonucleico, ("ARN) ya sea de una sola cadena o de doble cadena, a menos que se especifique otra cosa, y cualesquiera modificaciones químicas de los mismos. Un "oligonucleótido" es generalmente un polinucleótido relativamente corto, v.gr., que varía en tamaño de aproximadamente 2 a aproximadamente 200 nucleótidos, o muy preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 nucleótidos de longitud. Los oligonucleótidos de conformidad con la invención son generalmente ácidos nucleicos sintéticos, y son de una sola cadena, a menos que se especifique otra cosa. Los términos, "polinucleótido" y "polinucleico" también se pueden usar como sinónimos aquí. El término "antisentido," como se usa aquí, se refiere a secuencias de nucleótido que son complementarias a una secuencia de ADN o ARN específica que codifica un producto de gen o que codifica una secuencia de control. El término "cadena de antisentido" se usa en referencia a una cadena de ácido nucleico que es complementaria a la cadena de "sentido". En la operación normal del metabolismo celular, la cadena de sentido de una molécula de ADN es la cadena que codifica polipéptidos y/ otros productos de gen. La misma cadena sirve como una plantilla para síntesis de una transcripción de un ARN mensajero ("ARNm") (una cadena de antisentido) que, a su vez, dirige la síntesis de cualquier producto de gen codificado. Las moléculas de ácido nucleico de antisentido pueden ser producidas por cualesquiera métodos conocidos en la técnica, incluyendo síntesis por unión de gene(s) de interés en una orientación inversa a un promotor viral que permite la síntesis de una cadena complementaria. Una vez introducida en una célula, esta cadena transcrita se combina con secuencias naturales producidas por la célula para formar dúplex. Estos dúplex entonces bloquean ya sea la transcripción o traducción posterior. De esta manera, se pueden generar fenotipos mutantes. Las designaciones "negativo" o (-) también son conocidas en la técnica para referirse a la cadena de antisetido, y "positivo" o (+) también son conocidas en la técnica para referirse a la cadena de sentido. Por ejemplo, si se intenta regular descendentemente la expresión de una transcripción de ARNm en una célula o células, el oligonucleótido de antisentido se introduce en una célula. Una vez introducido en una célula, el oligonucleótido de antisentido híbrida a la secuencia de ARNm correspondiente a través de unión de Watson-Crick, formando un heterodúplex. Una vez que se forma el dúplex, la traducción de la proteína codificada por la secuencia de ARNm unido es inhibida. Por lo tanto, los oligonucleótidos de antisentído también se utilizan en la técnica como sondas, v.gr., sondas de hibridización, generalmente ligadas a una etiqueta o marcador, y son usadas para proveer regulación descendente precisa de la expresión de productos celulares específicos o elementos reguladores genéticos tanto para propósitos de investigación como terapéuticos. Una amplia variedad de porciones de polínucleótido se pueden unir a los polímeros activados descritos aquí. En un aspecto de la invención, los polinucleótídos son adecuados para uso medicinal o de diagnóstico en el tratamiento de animales, v.gr., mamíferos, incluyendo humanos, para condiciones para las cuales se desea el tratamiento. En otro aspecto adicional, los polinucleótídos que contienen hidroxilo o tiol están dentro del alcance de la presente invención. Las únicas limitaciones sobre los tipos de las porciones biológicamente activas adecuadas para incluirse las mismas es que hay disponible por lo menos un grupo hidroxilo o tiol que puede reaccionar y unirse con una porción de vehículo y no hay pérdida sustancial de bioactividad en la forma de conjugado a los sistemas de suministro poliméricos descritos aquí. Alternativamente, los compuestos progenitores adecuados para incorporarse en los compuestos conjugados de transporte polimérico de la invención pueden ser activados después de liberación hidrolítica del compuesto enlazado, o no activados después de liberación hidrolítica pero que se activarán después de pasar por un proceso de reacción química posterior. Por ejemplo, un fármaco anticanceroso que es suministrado al torrente sanguíneo por el sistema de transporte polimérico, puede permanecer inactivo hasta entrar a una célula cancerosa o tumoral, después de lo cual es activado por la química de la célula cancerosa o tumoral, v.gr., por medio de una reacción enzimática única para esa célula. En una modalidad preferida, la elección para conjugación es un oligonucleótido y después de la conjugación, el objetivo se refiere como un residuo de un oligonucleótido. Los oligonucleótidos se pueden seleccionar de entre cualquiera de los oligonucleótidos y oligodesoxinucleótidos conocidos con estructuras de base de fosforad iéster o estructuras de base de fosforotioato, ácidos nucleicos bloqueados (LNA), ácido nucleico con estructura de base peptídica (PNA), triciclo-ADN, oligonucleótido de doble cadena (decoy ODN), secuencia de ARN catalítica (ARNi), ribozimas, espiegelmeros, y oligómeros de CpG. Los expertos en la técnica se percatarán de que la lista anterior es simplemente ilustrativa y que se contemplan todos los materiales de ácido nucleico. Preferiblemente, los polinucleótidos incluyen oligonucleótidos de 2 a 100 oligómeros, muy preferiblemente 3 a 50 oligómeros y muy preferiblemente 10 a 30 oligómeros. También se contemplan todos los otros tamaños de oligonucleótidos. Los polinucleótidos de los compuestos descritos aquí pueden ser de una sola cadena o de doble cadena incluyendo la estructura de base de fosfo rod ¡éste r o la estructura de base de fosforotioato. El "polinucleótido" (u "oligonucleótido") incluye oligonucleótidos y oligodesoxinucleótidos, incluyendo por ejemplo un oligonucleótido que tiene la misma secuencia de nucleótidos o sustancialmente similar que Genasense (a/k/a oblimersen sodio, producido por Genta Inc., Berkeley Heights, NJ). Genasense es un oligonucleótido de antisentido de fosforotioato de 18-meros, TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ ID NO: 4), que es complementario a los primeros seis codones de la secuencia de iniciación del ARNm de bcl-2 humano (ARNm de bcl-2 humano es conocido en la técnica y se describe como, v.gr., como SEQ ID NO: 19 en la patente de E.U.A No. 6,414, 134, incorporada aquí por referencia). La Administración de Alimentos y Fármacos de E.U.A. (FDA, por sus siglas en inglés) dio el estado de Genasense Orphan Drug en agosto de 2000. Además, los oligonucleótidos y oligodesoxinucleótidos útiles de conformidad con la invención incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: Los oligonucleótidos y oligodesoxinucleótidos con estructura de base de fosforodiéster o estructura de base de fosforotioato naturales o cualesquiera otros análogos de estructura de base modificada; LNA (ácido nucleico bloqueado); PNA (ácido nucleico con estructura de base peptidica); triciclo-ADN; decoy ODN (oligonucleótido de doble cadena); secuencia de ARN catalítico; ribozimas; espiegelmeros (oligonucleótidos L-conformacionales); oligómeros de CpG y similares, tales como aquellos descritos en: Tides 2002, Oligonucleotide and Peptide Technology Conferences, 6-8 de Mayo de 2002, Las Vegas, NV y Oligonucleotide & Peptide Technologies, 18 y 19 de noviembre de 2003, Hamburgo, Alemania, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia. Oligonucleótidos de conformidad con la invención también pueden incluir opcionalmente cualesquiera análogos y derivados de nucleótidos conocidos en la técnica adecuados incluyendo aquellos listados en el cuadro 1 siguiente: CUADRO 1 Análogos y derivados de nucleótidos representativos Las modificaciones a los oligonucleótidos contempladas en la invención incluyen, por ejemplo, la adición a o sustitución de nucleótidos seleccionados con grupos o porciones funcionales que permiten el enlace covalente de un oligonucleótido a un polímero deseado, y/o la adición o sustitución de porciones funcionales que incorporan carga adicional, capacidad de polarización, unión de hidrógeno, interacción electrostática y funcionalidad a un oligonucleótido. Dichas modificaciones incluyen, pero no se limitan a modificaciones de azúcar en su posición 2', modificaciones de pirimidina en la posición 5, modificaciones de purina en la posición 8, modificaciones en aminas exocíclicas, sustitución de 4-tiouridina, sustitución de 5-bromo o 5-yodouracilo, modificaciones de estructura de base, metilaciones, combinaciones de pares de base tales como las ¡sobases isocitidina e isoguanidina, y combinaciones análogas. Las modificaciones de oligonucleótidos también puden incluir modificaciones 3' y 5' tales como bloqueo. Estructuras de análogos de nucleósido ilustrativas se proveen a continuación. 2'-(3-hidroxi)propilo Boranofosfatos Véase más ejemplos de análogos de nucleósidos descritos en Freier y Altmann; Nucí. Acid Res. , 1997, 25, 4429-4443 y Uhlmann; Curr. Opinión in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213, cuyos contenidos se incorporan aquí por referencia. Aunque se han mencionado oligonucleótidos de antisentido y compuestos relacionados como objetivos preferidos para la unión de polímeros que contienen los ésteres impedidos, se pretende que R4 o R'4 incluyen todos los polinucleótidos adecuados que se sabe que se benefician de unión a PEG o polímero. Preferiblemente, el oligonucleótido está implicado en células tumorales objetivo o regulando descendentemente una proteína implicada en la resistencia de células tumorales a terapéuticos anticancerosos. Por ejemplo, cualesquiera proteínas celulares conocidas en la técnica tales como BCL-2 para regulación descendente por oligonucleótidos de antisentido, para terapia de cáncer, se pueden usar para la presente invención. Véase solicitud de patente de E.U.A. No. 10/822,205 presentada el 9 de abril de 2004, cuyo sontenido se incorpora aquí por referencia. Una lista no limitante de oligonucleótidos terapéuticos preferidos incluye oligonucleótidos HIF-1 a de antisentido y oligonucleótidos Survivin de antisentido. Modalidades preferidas incluyen: (i) LNA de survivina de antisentido (SEQ ID NO: 1 ) mC3-Ts-mC3-As_as-ts-cs-cs-as-ts-gs-gs-mC3-As-Gs-C' en donde la letra mayúscula representa LNA, la "s" representa una estructura de base de fosforotioato; (¡i) Bcl2 ARNic de antisentido: SENTIDO 5'- GCAUGCGGCCUCUGUUUGAdTdT-3* (SEQ ID NO: 2) ANTISETIDO 3'- dTdTCGUACGCCGGAGACAAACU-5' (SEQ ID NO: 3) en donde dT representa ADN; (iii) Genasense (oligonucleótido de antisentido de fosforotioato): (SEQ ID NO: 4) ts~Cs-ts-cs-cs-cs-as-gs-cs-gs-ts-gs-cs-gs-cs-cs-cs-as-t en donde la letra minúscula representa ADN y "s" representa estructura de base de fosforotioato; (iv) HIF1 a LNA de antisentido 5'- sTsGsGsCsasasgsCsastscscsTsGsTsa -3' (SEQ ID NO: 5) en donde la letra mayúscula representa LNA, la "s" representa una estructura de base de fosforotioato. LNA incluye 2'-O, 4'-C metileno biciclonucleótido como se muestra a continuación: Monómero de LNA configuración ß-D Véase descripción detallada de LNA de survivina descrita en las solicitudes de patente de E.U.A. Serie Nos. 1 1/272,124, titulada "LNA Oligonucleotides and the Treatment of Cáncer" y 10/776,934, titulada Oligomeric Compounds for the Modulation Survivin Expression", el contenido de cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia. Véase también las solicitudes de patente de E.U.A. Serie Nos. 10/407,807, titulada Oligomeric Compounds for the Modulation HIF-1 Alpha Expression" y 1 1/271 ,686, titulada "Potent LNA Oligonucleótidos for Inhibition of HIF-1A Expression", el contenido de las cuales se incorpora aquí por referencia.
En una modalidad preferida, los compuestos descritos aquí pueden incluir oligonucleótidos modificados con enlazadores de amino (CH2)W que contienen éster impedido en el extremo 5' ó 3' de los oligonucleótidos, en donde w en este aspecto es un entero positivo of preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 10, preferiblemente aproximadamente 6. Los compuestos poliméricos pueden liberar los oligonucleótidos sin cola de amino. Por ejemplo, los oligonucleótidos pueden tener la estructura: en donde w es un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10, preferiblemente aproximadamente 6. En otra modalidad preferida, los oligonucleótidos pueden incluir enlazadores de sulfhidrilo (CH2)W (tio oligonucleótidos). Los tio oligonucleótidos se pueden usar para conjugar directamente a cisteina del péptido positivamente cargado o mediante el grupo alquileno de maleimidilo. Los tio oligonucleótidos pueden tener la estructura: Un aspecto adicional de la invención provee los compuestos conjugados opcionalmente preparados con una etiqueta de diagnóstico enlazada al sistema de suministro polimérico descrito aquí, en donde la etiqueta se selecciona para propósitos de diagnóstico y formación de imagen. Por lo tanto, una etiqueta adecuada se prepara enlazando cualquier porción adecuada, v.gr., un residuo de aminoácido, a cualquier isótopo emisor estándar en la técnica, marcador radio-opaco, marcador de resonancia magnética u otros marcadores isotópicos no radioactivos adecuados para formación de imagen de resonancia magnética, marcadores de tipo fluorescencia, marcadores que presentan colores visibles y/o capaces de emitir fluorescencia bajo estimulación ultravioleta, infrarroja o electroquímica, para permitir la formación de imagen de un tejido tumoral durante procedimientos quirúrgicos, etc. Opcionalmente, la etiqueta de diagnóticos e incorpora en y/o es enlazada a una porción terapéutica conjugada, permitiendo el monitoreo de la distribución de un material biológicamente activo terapéutico dentro de un paciente animal o humano. En un aspecto adicional de la invención, sus conjugados objetivo de la invención se preparan fácilmente, por métodos conocidos en la técnica, con cualquier marcador adecuado, incluyendo, v.gr., marcadores de radioisótopos. Simplemente a manera de ejemplo, estos incluyen 3 Yodo, 25Yodo, 99mTecnetio y/o 11 lndio para producir agentes radioinmunoescintigráficos para absorción selectiva en células tumorales, in vivo. Por ejemplo, existe un número de métodos conocidos en la técnica para enlazar el péptido a Tc-99m, incluyendo simplemente a manera de ejemplo aquellos mostrados por las patentes de E.U.A. Nos. 5,328,679; 5,888,474; 5,997,844; y 5,997,845, incorporadas aquí por referencia.
F. Modalidades preferidas correspondientes a la fórmula (I) El compuesto de conformidad con la fórmula (I) es covalentemente conjugado a un polímero sustancialmente no antigénico, v.gr., un óxido de polialquileno. En modalidades particularmente preferidas, el compuesto de conformidad con la fórmula (I) incluye los siguientes: II H H II en donde: R4 se selecciona de entre oligonucleótidos de sentido, oligonucleótidos de antisentido, ácidos nucleicos bloqueados (LNA), ARN de interferencia corto (ARNic), microARN (miARN), aptámeros, ácido nucleico peptídico (PNA), oligonucleótidos de fosforodiamidato morfolino (PMO), triciclo-ADN, oligonucleótido de doble cadena (decoy ODN), ARN catalítico (ARNi), aptámers, espiegelmeros, oligómeros de CpG y en combinación; (z) es un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10; (?') es cero o un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; mPEG tiene la fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-; PEG tiene la fórmula -O(CH2CH2O)n-; y (n) es un entero positivo de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300. Los compuestos poliméricos preferidos de conformidad con la presente invención incluyen: R4 = (SEQ l D NO: 4) Una modalidad preferida para R4 incluye: LNA de survivina de antisentido (SEQ ID NO: 1 ) mC3-Ts-mC3-As_as-ts-cs-cs-as-ts-gs-gs-mC3-As-Gs-C; en donde la letra mayúscula representa LNA, la "s" representa una estructura de base de fosforotioato; (¡i) Bcl2 ARNic de antisentido: SENTIDO 5'- GCAUGCGGCCUCUGUUUGAdTdT-3' (SEQ ID NO: 2) ANTISETIDO 3'- dTdTCGUACGCCGGAGACAAACU-5' (SEQ ID NO: 3) en donde dT representa ADN; (i¡¡) Genasense (oligonucleótido de antisentido de fosforotioato): (SEQ ID NO: 4) ts~Cs~ts~Cs_C3-C3-as-gs-C3-gs-ts-gs-C3-gs-C3-C3-C3-3s-t en donde la letra minúscula representa ADN y "s" representa estructura de base de fosforotioato; (iv) HIF1 a LNA de antisentido (SEQ ID NO: 5) 5 - sTsGsGsCsas3s9sCsastsCsCsTsGs sa ~3 en donde la letra mayúscula representa LNA, la "s" representa una estructura de base de fosforotioato. Para los propósitos de la presente invención, Genasense (SEQ ID NO: 4) se describe como TCTCCCAGCGTGCGCCAT o 5'-tscstscscscsasgscsgstsgscsgscscsast -3 .
G. Métodos para hacer los conjugados En un aspecto de la invención, el compuesto polimérico que tiene éster impedido se puede preparar conjugando un compuesto polimérico que tiene un OH o un grupo residual en el extremo terminal con un nucleófilo que tiene un éster impedido protegido o un ácido impedido en el extremo distal. La desprotección y activación posteriores del compuesto polimérico resultante proveerán el compuesto de la presente invención. El grupo terminal de la presente invención puede ser ya sea una forma de ácido carboxílico lista para ser acoplada con una porción que contiene OH o SH o una forma activada que puede ser remplazada al conjugar con la porción que contiene OH o SH. Alternativamente, un compuesto que contiene OH o SH puede ser conjugado para formar un intermediario de éster impedido, que a su vez reacciona con un polímero activado para el conjugado polimérico que tiene un éster impedido con una porción biológicamente activa. Para propósitos de ilustración, los métodos de preparación de un conjugado polimérico que contiene una porción acilo o éster impedida incluyen: hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (III): Ai Ri M (III) con un compuesto de la fórmula (IV) (IV) bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (V): (V) en donde: i es un grupo bloqueador o Mi ; A2 es un grupo bloqueador o Mi es un grupo residual tal como halógenos, carbonatos activados, isocianato, N-hidroxisuccinimidilo, tosilato, mesilato, tresilato, nosilato, orto-nitrofenoxi, imidazol y otros grupos residuales conocidos por los expertos en la técnica; M2 es -OH. -SH, o -NHR10i ; R-ioo es OH o OR10i ; en donde, R 0i se selecciona de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C-i-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de C1-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2.6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2_6 y arilcarboniloxi sustituido; y todas las otras variables se definieron anteriormente. La unión de la porción éster impedida de conformidad con la fórmula (IV) al PEG u otro polímero se puede hacer usando técnicas de síntesis química estándares bien conocidas por los expertos en la técnica. La porción polímero activado tal como SC-PEG, PEG-amina, ácidos de PEG, etc. se pueden obtener de cualesquiera fuentes comerciales o las puede sintetizar un experto sin experimentación extraordinaria. Para el propósito de la presente invención, una lista no limitante de dicha porción éster impedida incluye: en donde, (z) es como se definió antes. Los compuestos de la fórmula (V) pueden reaccionar además con una porción que contiene -OH o -SH en presencia de base y un agente de acoplamiento bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (la): (la) en donde: A3 es un grupo bloqueador o R103 se selecciona de entre agentes objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; y todas las otras variables se definieron anteriormente. Para los propósitos de la presente invención, el R103 se deberá entender como la parte de la porción que contiene OH o SH que queda después de que ha pasado por una reacción con el compuesto de la fórmula (V). Alternativamente, los compuestos descritos aquí se pueden preparar por métodos que incluyen: hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (VI): (VI) con un compuesto de la fórmula (VII): bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (VIII): en donde A4 es un grupo bloqueador o M4¡ A5 es un grupo bloqueador o M3 es -OH, SH, o -NHR105; M4 es un grupo residual tal como halógenos, carbonatos activados, isocianato, N-hidroxisuccinimidilo, tosilato, mesilato, tresilato, nosilato, orto-nitrofenoxi, ¡midazol y otros grupos residuales conocidos por los expertos en la técnica; R-104 se selecciona de porciones biológicamente activas, grupos objetivo y agentes de diagnóstico R 05 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3_-i9, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de C-i.6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterohlo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de C1-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido; y todas las otras variables se definieron anteriormente. La unión del grupo que contiene éster impedido a la porción polímero preferiblemente se lleva a cabo en presencia de un agente de acoplamiento. Una lista no limitante de agentes de acoplamiento adecuados incluyen 1 ,3-diisopropilcarbodiimida (DIPC), cualesquiera dialquilcarbodiimidas adecuadas, halogenuros de 2-halogeno-1 -alquil-piridinio, (reactivos de Mukaiyama), 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), anhídrido cíclico de ácido propanfosfónico (PPACA) y diclorofosfatos de fenilo, etc., que están disponibles, por ejemplo de fuentes comerciales tales como Sigma-Aldrich Chemical, o sintetizados usando técnicas conocidas.
Preferiblemente, las reacciones se llevan a cabo en un solvente inerte tal como cloruro de metileno, cloroformo, DMF o mezclas de los mismos. Las reacciones preferiblemente se pueden conducir en presencia de una base, tal como dimetilaminopiridina (DMAP), diisopropiletiilamina, piridina, trietilamina, etc., para neutralizar cualesquiera ácidos generados. Las reacciones se pueden llevar a cabo a una temperatura de aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 22°C (temperatura ambiente).
H. Métodos de tratamiento Otro aspecto de la presente invención provee métodos de tratamiento para varias condiciones médicas en mamíferos. Los métodos incluyen administrar, al mamífero que necesita dicho tratamiento, una cantidad efectiva de un compuesto descrito aquí. Los compuestos de conjugado polimérico son útiles para, entre otras cosas, tratar enfermedades que son similares a aquellas que son tratadas con el compuesto progenitor, v.gr., terapia de reemplazo de enzima, enfermedad neoplásica, reducción de carga de tumor, prevención de metástasis de neoplasmas y prevención de recurrencias de crecimientos de tumor/neoplásicos en mamíferos. La cantidad del conjugado polimérico que se administra dependerá de la cantidad de la molécula progenitora incluida en el mismo. Generalmente, la cantidad de conjugado polimérico usada en los métodos de tratamiento es aquella cantidad que efectivamente logra el resultado terapéutico deseado en mamíferos. Naturalmente, las dosis de los diversos compuestos de conjugado polimérico variarán algo dependiendo del compuesto progenitor, peso molecular del polímero, velocidad de hidrólisis in vivo, etc. Los expertos en la técnica determinarán la dosis óptima de los conjugados de transporte poliméricos seleccionados con base en la experiencia clínica y la indicación de tratamiento. Las dosis reales serán evidentes para el experto en la técnica sin experimentación extraordinaria. Los compuestos de la presente invención se pueden incluir en una o más composiciones farmacéuticas adecuadas para administrarse a mamíferos. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una solución, suspensión, tableta, cápsula o similar, preparadas de conformidad con métodos bien conocidos en la técnica. Cabe contemplar también que la administración de dichas composiciones puede ser por vías oral y/o parenteral dependiendo de las necesidades del experto en la técnica. Una solución y/o suspensión de la composición se puede utilizar, por ejemplo, como un vehículo para inyección o infiltración de la composición por métodos de la técnica anterior, v.gr., por inyección intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea y similares. Dicha administración también puede ser por infusión en un espacio o cavidad corporal, así como por inhalación y/o vía intranasal. En aspectos preferidos de la invención, sin embargo, los conjugados poliméricos son parenteralmente administrados a mamíferos que necesitan los mismos. En un aspecto adicional de la invención, se proveen métodos para administrar polinucleótidos (oligonucleótidos), preferiblemente oligonucleótidos de antisentido a células de mamífero. Los métodos incluyen suministrar una cantidad efectiva de un conjugado preparado como se describe aquí para la condición que está siendo tratada y dependerán de la eficacia de los polinucleótidos para dichas condiciones. Por ejemplo, si los oligonucleótidos no conjugados (por ejemplo, oligonucleótidos BCL2 de antisentido, oligonucleótidos de survivina de antisentido) tienen eficacia contra ciertas células cancerosas o neoplásicas, el método incluiría suministrar un conjugado de polímero que contenga los oligonucleótidos a las células que tienen susceptibilidad a los oligonucleótidos nativos. El suministro se puede hacer in vivo como parte de una composición farmacéutica adecuada o directamente a las células en un ambiente ex vivo. En un tratamiento particular, se pueden usar conjugados poliméricos que incluyen oligonucleótidos (SEQ ID NO. 1 , SEQ ID NOs: 2 y 3, y SEQ ID NO: 4).
EJEMPLOS Los siguientes ejemplos sirven para proveer apreciación adicional de la invención pero de ninguna manera pretenden restringir el alcance de la invención. Los números en negritas mencionados en los ejemplos corresponden a aquellos mostrados en los esquemas A-D. Las abreviaturas se usan en todos los ejemplos tales como, DCM (diclorometano), DIPEA (diisopropíletilamina), DMAP (4-dimetilaminopiridina), DMF (?,?'-dimetilformamida), EDC (1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida), IPA (¡sopropanol), Mmt (4-metoxitrifen¡lmetilo), NHS (N-hidroxisuccinimida), PEG (polietilenglicol), SCA-SH (anticuerpo de una sola cadena), SC-PEG (polietilenglicol de succinimidilcarbonato), TEAA (acetato de tetraetilammonio), TFA (ácido trifluoroacético) y THF (tetrahidrofurano). Procedimientos generales. Todas las reacciones se llevan a cabo bajo una atmósfera de nitrógeno seco o argón. Los reactivos comerciales se usan sin purificación adicional. Todos los compuestos de PEG se secan bajo vacio o por destilación azeotrópica a partir de tolueno antes de usarse. Los espectros de 13C RMN se obtuvieron a 75.46 MHz usando un espectrómetro de RMN Varían Mercury®300 NMR y cloroformo deuterado y piridina como los solventes a menos que se especifique otra cosa. Los desplazamientos químicos (d) se reportan en partes por millón (ppm) desde tetrametílsilano (TMS). Método de CLAR. Las mezclas de reacción y la pureza de los intermediarios y productos finales son monitoreadas por un instrumento de CLAR Beckman Coulter System Gold®. Utiliza una columna de fase inversa de C8 (150 x 4.6 mm) ZORBAX® 300SB o una columna de fase inversa de C 8 (150 x 4.6 mm) Phenomenex Júpiter® 300A con un detector de UV 168 Diode Array, usando un gradiente de 5-80 % de acetonitrilo en acetato de tetraetilamonio 0.05 M (TFAA) a una velocidad de flujo de 1 ml/min.) ESQUEMA A Métodos de síntesis descritos en los ejemplos 1-9 11 13 mPEG = CH30-(CH2CH20)n- R4 = SEQ ID NO. 4 ESQUEMA B Métodos de síntesis descritos en el ejemplo 10 15 mPEG = CH30-(CH2CH20)n-] ESQUEMA C Métodos de síntesis descritos en los ejemplos 11-13 21 mPEG = CH30-(CH2CH20)n- ESQUEMA D Métodos de síntesis descritos en el ejemplo 14 mPEG = CH30-(CH2CH20)n- EJEMPL0 1 Preparación de Br-HE-OEt, compuesto (3) Butil-litio (solución 1.6 M en t-BuOH, 200 mi) se añadió a una solución de isobutirato de etilo (compuesto 1 , 35 g) en THF (500 mi) a -78°C y la solución se agitó durante 1 hr a la misma temperatura. Se añadió 1 ,5-dibromopetano (compuesto 7, 100 g) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi). La capa orgánica se evaporó. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 10% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un líquido (29.2 g, rendimiento 36.7%).
EJEMPLO 2 Preparación de Ng-HE-OEt, compuesto (4) 7-Bromo-2,2-dimet¡lheptanoato de etilo (compuesto 3, 26.5 g) se calentó con azida de sodio (13 g) en DMF (500 mi) a 100°C durante 2 horas. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 10% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un líquido (20.5 g, rendimiento 90.3%).
EJEMPLO 3 Preparación de Ng-HE-OH, compuesto (5) 7-Azido-2,2-dimetilheptanoato de etilo (compuesto 4, 20.5 g) se calentó con hidróxido de sodio (10 g, 85%) en etanol (500 mi) bajo reflujo durante 2 horas. La mezcla se concentró y se añadió agua (400 mi). La mezcla se acidificó con ácido clorhídrico concentrado a pH 2 y se extrajo con acetato de etilo (500 mi). La capa orgánica se concentró y el residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 50% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un líquido (17.1 g, rendimiento 95%).
EJEMPLO 4 Preparación de Ng-HE-T, compuesto (7) Acido 7-azido-2,2-dimetilheptanoico (compuesto 5, 8 g) se disolvió en diclorometano (200 mi). Se añadió cloruro de oxalilo (6.4 g) y la mezcla se puso a reflujo durante 2 hr y se evaporó. El residue se disolvió en diclorometano (100 mi) y se añadió en 3'-acetiltomidina (compuesto 6, 5.85 g) en piridina (100 mi). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas y se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi). La mezcla se extrajo con diclorometano (500 mi) y la capa orgánica se concentró. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 5% de metanol en DCM para dar el producto deseado como un sólido incoloro (5.6 g, rendimiento 61 %).
EJEMPLO 5 Preparación de NHg-HE-T, compuesto (8) 5'-(7-Azido-2,2-dimetilheptanoil) 3'-acetiltimidina (compuesto 7, 4.65 g) se hidrogenó en metanol (200 mi) bajo 2.109 kg/cm2 en presencia de Pd/C (10%, 0.5 g) durante 1 hr. La mezcla se filtró y el filtrado se evaporó para dar un sólido (4.4 g, rendimiento 100%).
EJEMPLO 6 Preparación de MmtNH-HE-T, compuesto (9) 5'-(7-Am¡no-2,2-dimetilheptanoil) 3'-acetilt¡m¡dina (compuesto 8, 4.4 g), trietilamina (4 mi) y cloruro de 4-metoxitritilo (7.5 g) se agitaron en piridina (100 mi) durante 10 hr. Se añadió metilamina (40%, 10 mi) y la solución se agitó durante 2 hr. La mezcla se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi) y se extrajo con diclorometano (500 mi). La capa orgánica se concentró. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 5% de metanol en diclorometano para dar el producto deseado como un sólido incoloro (4.9 g, rendimiento 71 %).
EJEMPLO 7 Preparación de MmtNH-HE-T-fosforoamidita, compuesto (10) 5'-(7-[(MMT-Amino)-2,2-dimetilheptanoil]timidina (compuesto 9, 4.9 g), ?,?-tetraisopropil-cianoetil fosforamidita (3 g) y tetrazol (0.5 g) en acetonitrilo (50 mi) se agitó durante la noche. La mezcla se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi) y se extrajo con diclorometano (500 mi). La capa orgánica se concentró. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 50% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un sólido incoloro (4.5 g, rendimiento 71 %).
EJEMPLO 8 Preparación de NH2-HE-Oligo, compuestos (11) El compuesto 10 se transfirió a Trilink Biotechnologies, CA para usarse como el último monómero en la síntesis de oligo. El grupo Mmt fue desprotegido después de la síntesis y el oligo se purificó por CLAR-FI y el compuesto 11 como la amina libre se obtuvo para conjugación de PEG. La secuencia de oligonucleótido fue TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ ID NO. 4).
EJEMPLO 9 Preparación de PEG-HE-Oligo. compuestos (13) A una solución del compuesto 11 (10 mg, 1.7 µ?-noles) en un regulador de pH PBS (5 mi, pH 7.8) se añadió SC-PEG (compuesto 12, PM 30 kDa, 520 mg, 17 µ?????e) y se agitó a temperatura ambiente durante 5 hr. La mezcla de reacción se diluyó a 50 mi con agua y se cargó en una columna de intercambio de aniones fuerte Poros HQ (10 mm * 1.5 mm, volumen de lecho ~ 16 mi) que fue pre-equilibrada con 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4 (regulador de pH A). La columna se lavó con 3-4 volúmenes de columna de regulador de pH A para remover el exceso de enlazador de PEG. Después el producto fue eluido con un gradiente de 0 a 100 % de NaCI 1 M en 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4, regulador de pH B en 10 min, seguido por 100 % de regulador de pH B durante 10 min a una velocidad de flujo de 10 ml/min. El producto eluido se desaló usando una columna desaladora HiPrep (50 mi) y se liofilizó para dar 6 mg del producto. El equivalente de oligonucleótido en el conjugado medido por UV fue 60%, p/p.
EJEMPLO 10 Preparación de PEG-enlazador-HE-Oligo compuesto (15) A una solución del compuesto 11 (10 mg, 1.7 µ?t???) en regulador de pH PBS (5 mi, pH 7.8) se añadió PEG-enlazador-NHS (compuesto 14, PM 30 kDa, 520 mg, 17 µG???) y se agitó a temperatura ambiente durante 5 hr. La mezcla de reacción se diluyó a 50 mi con agua y se cargó en una columna de intercambio de aniones fuerte Poros HQ, (10 mm x 1.5 mm, volumen de lecho ~ 16 mi) que fue pre-equilibraada con 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4 (regulador de pH A). La columna se lavó con 3-4 volúmenes de regulador de pH A de columna para removee el exceso de enlazador de PEG. Después el producto fue eluido con un gradiente de 0 a 100 % de NaCI 1 M en 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4, regulador de pH B en 10 min, seguido por 100 % de regulador de pH B durante 10 min a una velocidad de flujo de 10 ml/min. El producto eluido se desaló usano columna desaladora de HiPrep (50 mi) y se liofilizó a sólido para dar 5 mg del producto deseado. El equivalente de oligonucleótido en el conjugado medido por UV fue 50%, p/p.
EJEMPLO 11 Preparación de BocNH-HE-T, compuesto (18) Acido 4-Boc-amino-2,2-dimetibutírico (compuesto 16, 0.50 g, 2.16 mmoles) se disolvió en una mezcla de cloroformo (10 mi) y DMF (5 mi), y se añadió timidina (compuesto 17, 0.79 g, 3.25 mmoles). La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo, y se añadió EDC (0.62 g, 3.25 mmoles), seguido por DMAP (0.40 g, 3.25 mmoles). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 20 horas con agitación. El solvente se removió bajo vacío y el residuo se suspendió en acetato de etilo, se lavó con HCI 0.1 N y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el solvente se removió bajo vacío para dar un aceite crudo. La cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice usando DCM / EtOAc (40:60, v/v) dio 0.28 g del producto deseado: 13C RMN d 177.21 , 164.08, 156.41 , 150.80, 135.46, 1 1 1.49, 85.43, 84.30, 80.21 , 71 .28, 63.77, 41.67, 41.08, 40.00, 37.69, 36.99, 28.87, 26.14, 25.55, 13.06.
EJEMPLO 12 Preparación de NHg-HE-T, compuestos (19) El compuesto 18 (0.25 g, 0.55 mmoles) se disolvió en DCM (5 mi), y a la solución se añadió TFA (0.25 mi) mediante una pipeta a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Los solventes y TFA fueron removidos bajo vacío co-evaporando con DCM para remover TFA completamente y para dar 0.32 g del producto como un sólido vitreo: 13C RMN (CD3CN) d 176.61 , 164.22, 150.81 , 136.41 , 136.18, 1 10.82, 85.14, 85.07, 84.14, 83.97, 70.99, 64.56, 41.32, 39.35, 37.13, 36.92, 25.10, 24.92, 24.75, 12.08, 1 1 .98.
EJEMPLO 13 Preparación de PEG-HE-T, compuestos (21) mPEG-enlazador-NHS (compuesto 20, PM. 20k, 0.50g, 0.0246 mmoles) y compuesto 19 (26 mg, 0.0738 mmoles) se disolvieron en una mezcla de DCM (5 mi) y a la solución se añadió DMF (1 mi), y DMAP (15 mg, 0.0123 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas. El solvente se removió bajo vacío, y el producto crudo se precipitó mediante la adición de éter etílico. El sólido se recogió por filtración y se recristalizó a partir de acetonitrilo/IPA para dar 0.43 g del producto como un sólido blanco puro: 13C RMN d 177.9, 168.0, 164.0, 150.9, 134.9, 133.1 , 129.8, 128.1 , 1 10.2, 84.4, 83.9, 70.4, 67.8, 64.5, 63.2, 60.0, 58.7, 40.1 , 39.4, 37.2, 25.2, 24.7, 16.1 , 12.2.
EJEMPLO 14 Preparación de PEG-HE-T, compuestos (23) mPEG-NHS (compuesto 22, PM. 20k, 1 g, 0.0492 mmoles) y compuesto 19 (26 mg, 0.1476 mmoles) se disolvieron en una mezcla de DCM (10 mi) ya la solución se añadió DMF (2 mi), y DMAP (30 mg, 0.246 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas. El solvente se removió bajo vacio, y el producto crudo se precipitó mediante la adición de éter etílico. El sólido se recogió por filtración y se recristalizó a partir de acetonitrilo/IPA para dar 0.90 g del producto como un sólido blanco: 3C RMN d 178.2, 162.9, 156.0, 149.5, 134.6, 1 10.3, 84.4, 83.4, 70.1 , 69.1 , 64.4, 63.5, 62.6, 61.2, 58.6, 40.6, 40.0, 39.4, 37.1 , 12.2.
EJEMPLO 15 Determinación de estabilidad de conjugados de PEG en regulador de pH y plasma de rata Las velocidades de hidrólisis se obtuvieron utilizando una columna de fase inversa de C8 (Zorbax® SB-C8) usando una fase móvil en gradientes que consistía de (a) regulador de pH de acetato de trietilamonio 0.1 M y (b) acetonitrilo. Se usó una velocidad de flujo de 1 ml/min, y se monitorearon cromatogramas usando un detector de UV a 227 nm para paclitaxel y 260 nm para oligonucleótidos. Para hidrólisis en regulador de pH, derivados de PEG se disolvieron en PBS 0.1 M, pH 7.4, o agua a una concentración de 5 mg/ml, mientras que para hidrólisis en el plasma, los derivados se disolvieron en agua destilada a una concentración de 20 mg / 100 µ?_ y a esta solución se añadieron 900 µ? de plasma de rata. La mezcla se sometió a acción de remolino durante 2 min y se dividió en viales de vidrio de 2 mi con 100 µ? de la alícuota por cada vial. Las soluciones se incubaron a 37°C durante varios períodos. Una mezcla de metanol - acetonitrilo (1 :1 , v/v, 400 µ?) se añadió a un vial en el intervalo apropiado y la mezcla se sometió a acción de remolino durante 1 min, seguido por filtración a través de membrana de filtro de 0.45 mm (opcíonalmente seguido por una segunda filtración a través de membrana de filtro de 0.2 mm). Una alícuota de 20 µ? del filtrado se inyectó en el CLAR. Con base en el área pico, se estimaron las cantidades de compuesto nativo y derivado de PEG, y la vida media de cada compuesto en diferentes medios se calculó usando análisis de regresión lineal a partir de la desaparición de derivado de PEG. Los resultados del estudio de estabilidad para compuestos en los ejemplos se exponen en el cuadro 1.
CUADRO 1 Resultado de estudio de estabilidad de conjugados de PEG Compuesto VÁ en PBS (hr) VA en plasma de rata (hr) Compuesto 13 >24 >24 Compuesto 15 >24 16.0

Claims (1)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1 .- Un compuesto que comprende una estructura de conformidad la fórmula (I) en donde A es un grupo bloqueador o Ri es un polímero soluble en agua sustancialmente no antigénico; l_i y ?_? son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de C(=Yi) o C(=Y'i); L2 y L'2 son enlazadores bifuncionales independientemente seleccionados; Yi y ?? son independientemente O, S, o NR5; X y X' son independientemente O o S; R2, R'2, R3, R'3 y 5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de 03.19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de C-i-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de C1-6, ariloxi, heteroalcoxi de d. 6, heteroariloxi, alcanoilo de C2.6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido, o R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 independientemente forman un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contiene por lo menos tres carbonos; R4 y R'4 son independientemente polinucleótidos seleccionados y derivados de los mismos; (p) y (?') son independientemente cero o un entero positivo; y (q) y (q') son independientemente zero ó 1 , siempre que R3 sea un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tenga por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y además siempre que l_i no sea el mismo que C(R2)(R3). 2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque tiene la fórmula (la): (la) en donde, (q) es 1. compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque comprende compuestos de la fórmula (Ib): 4 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque l_i y ?_? se seleccionan independientemente del grupo que consiste de: -0(CR12Ri3)sO(CR14Ri 5)s-, -0(CR12R13)sS(CR14R15)s -, -0(CR12Ri3)sNRi6(CR14R15)s-, -O(CR12R13O)s(CR14R15)s'-, en donde: Ri Rie se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, amino, amino sustituido, azido, carboxi, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, éter silílico, sulfonilo, mercapto, alquilmercapto de C-i-6, arilmercapto, arilmercapto sustituido, alquiltio sustituido de C-i-6, alquilos de C-i-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-i9, cicloalquilo de C3-e, alquilo sustituido de Ci_6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalqulo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, y arilcarboniloxi; (s) y (s') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; y (r) es 0 ó 1. 5.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L2 y L'2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de: -[C(=0)]rNH(CH2)2CH=N-NHC(=0)-(CH2)2-, -[C(=O)]rNH(CH2)2(CH2CH20)2(CH2)2NH[C(=O)]r -, -[C(=O)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)2NH[C(=O)]r -, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s.[C(=0)]r-, -[C(=0)]r NH(CH2CH2)sS(CH2CH2),.[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)sO(CH2CH2)s.[C(=0)]r-, -[C(=O)]rNH(CH2CH2O)(CH2)NH[C(=O)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r-, -[C(=O)]rNH(CH2CH2O)s(CH2)s [C(=O)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)20[C(=0)]r-, -[C(=O)]rNH(CH2CH2O)[C(=O)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2)3[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2CH20)2(CH2)[C(=O)]r-, -[C(=O)]rO(CH2)2NH(CH2)2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2CH20)2NH[C(=0)]r-, -[C(=O)]rO(CH2)2O(CH2)2[C(=O)],-, -[C(=O)]rO(CH2)2S(CH2)2[C(=O)]r-, -[C(=O)]rO(CH2CH2)NH[C(=O)]r-, -[C(=O)]rO(CH2CH2)O[C(=O)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)3NH[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)30[C(=0)] , -[C(=0)]rO(CH2)3[C(=O)]r-, -[C(=O)]rCH2NHCH2[C(=O)]r-, -[C(=0)]rCH2OCH2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rCH2SCH2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rS(CH2)3[C(=0)]r-, -[C(=0)]r(CH2)3[C(=0)]r-, — [C(=0)]rOCH2— ^^-CH2NH[C(=0)],.- — [C(=0)]rOCH2^^CH20[C(=0)]r.— -[C(=0)]rNHCH2- —VcH2NH[C(=0)]r- y en donde (r) y (r') son independientemente cero o 1. 6.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L2 y L'2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de: g i l1- Cit-, -Gly-Phe-Leu-Gly-, -Ala-Leu-Ala-Leu-, -Phe-Lys-, o H Val — Cit— C-N -Val-Cit— ^ O O , -Val-C¡t-C(=0)-CH2OCH2-C(=0)-, -Val-C¡t-C(=0)-CH2SCH2-C(=0)-, y -NHCH(CH3)-C(=0)-NH(CH2)6-C(CH3)2-C(=O)- en donde, Y11-19 son independientemente O, S o NR48; R3-i-48, R50-51 y A51 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de Ci-6, alquilos ramificados de C3-i2, cicloalquilos de C3-8, alquilos sustituidos de Ci-6, cicloalquilos sustituidos de C3-8, aritos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de d-6, heteroalquilos sustituidos de Ci.6, alcoxi de Ci-6l fenoxi y heteroalcoxi de C1.6; Ar es una porción arilo o heteroarilo; L-n.-is son separadores bifuncionales independientemente seleccionados; J y J' se seleccionan independientemente de entre porciones activamente transportadas hacia una célula objetivo, porciones hidrofóbicas, porciones de enlace bifuncional y combinaciones de las mismas; (c11), (h11), (k11), (111), (m11) y (n11) son enteros positivos independientemente seleccionados; (a11), (e11), (g11), (j11). (o 1) y (q1 ) son independientemente ya sea cero o un entero positivo; y (b11), (x11), (x'11), (f11), (¡11) y (p11) son independientemente cero o uno. 7. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque L2 y L'2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de un aminoácido, un derivado de aminoácido, y un péptido. 8. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque -L1-C(R2)(R3)-C(=Y1)- y -L'1-C(R'2)(R'3)-C(=Y'1) se seleccionan independientemente del grupo que consiste de: 9 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L y ?_? son independientemente -(CH2)X2i- o -(CH2)x2i-W-(CH2)x22-, en donde (x21 ) y (x22) son independientemente enteros seleccionados que varían en valor de 1 a 7, y W es O o NHC(O). 10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque tiene la fórmula (II): (II). 1 1.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque A se selecciona del grupo que consiste de H, NH2, OH, CO2H, alcoxi de C -6 y alquilo de d-6. 12. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R4 y R'4 son independientemente oligonucleótidos seleccionados. 13. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R y R'4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de oligonucleótidos de sentido, oligonucleótidos de antisentido, ácidos nucleicos bloqueados (LNA), ARN de interferencia corto (ARNic), microARN (miARN), aptámeros, ácido nucleico peptídico (PNA), oligonucleótidos de fosforodiamidato morfolino (PMO), triciclo-ADN, oligonucleótido de doble cadena (decoy ODN), ARN catalítico (ARNi), aptámers, espiegelmeros, oligómeros de CpG y en combinación. 14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R4 y R'4 independientemente comprenden ácidos ribonucleicos, ácidos desoxirribonucleicos, o en combinación. 15.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R y R' son independientemente oligonucleótidos de una sola cadena o nucleótidos de doble cadena. 16.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R y R'4 independientemente comprenden estructura de base de fosforodiéster o estructura de base de fosforotioato. 17 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ri comprende un óxido de polialquileno lineal, terminalmente ramificado o de brazos múltiples. 18. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque el óxido de polialquileno se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol y polipropilenglicol. 19. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque el óxido de polialquileno se selecciona del grupo que consiste de -Y7i-(CH2CH2O)n-CH2CH2Y7i-, -Y7i-(CH2CH2O)n-CH2C(=Y22)-Y71-, -Y7i-C(=Y72)-(CH2)a2-Y73-(CH2CH20)n-CH2CH2-Y73-(CH2)a2-C(=Y72)-Y71- y -Y7i-(CR71 R72)a2-Y73-(CH2)b2-0-(CH2CH2O)n-(CH2)b2-Y73-(CR -| R72)a2-Y7i-, en donde: Y7i y Y73 son independientemente O, S, SO, SO2, NR73 o un enlace; Y72 es O, S, o NR74; R7 4 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-i9, cicloalquilo de C3.8, alquilo sustituido de C-i-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C -6, heteroalquilo sustituido de C1-6, alcoxi de C -6, ariloxi, heteroalcoxi de C1-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido; (a2) y (b2) son independientemente cero o un entero positivo; y (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2300. 20. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque el óxido de polialquileno es un polietilenglicol de la fórmula, -O-(CH2CH2O)n-, en donde (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300. 21. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ri tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 2,000 a aproximadamente 100,000 daltons. 22. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ri tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 60,000 daltons. 23. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ri tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 25,000 daltons o de aproximadamente 20,000 a aproximadamente 45,000 daltons. 24. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2, R'2, R3 y R'3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de metilo, etilo e isopropilo. 25. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado además porque se selecciona del grupo que consiste de: PEG o 5 99 o o o o 0 0 0 0 R4-X" N H X"R mPEG X-R¿ O en donde: R4 se selecciona del grupo que consiste de OH, grupos residuales, grupos dirigidos a objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; (z) es un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10; (?') es cero o un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; mPEG tiene la fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-; PEG tiene la fórmula -O(CH2CH2O)n-; y (n) es un entero positivo de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300. 26.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R y R' se seleccionan independientemente del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 , SEQ ID NOs: 2 y 3, SEQ ID NO: 4, y SEQ ID NO: 5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque, R se selecciona del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 , SEQ ID NO: 2 y 3, SEQ ID NO: 4, y SEQ ID NO: 5. 28.- Un método de preparación de un conjugado polimérico que contiene una porción acilo o éster impedido que comprende: hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (VI): (VI) con un compuesto de la fórmula (VII): bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (VIII): en donde A4 es un grupo bloqueador o M4; A5 es un grupo bloqueador o M3 es -OH, SH, o -NHR105; M4 es un grupo residual tal como halógenos, carbonatos activados, isocianato, N-hidrox¡succinimidilo, tosilato, mesilato, tresilato, nosilato, orto-nitrofenoxi, imidazol y otros grupos residuales conocidos por los expertos en la técnica; Ri04 se selecciona de porciones biológicamente activas, grupos objetivo y agentes de diagnóstico; R105 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6> alquinilo de C-2-6, alquilo ramificado de C3-i9, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C-i-6, heteroalquilo sustituido de C1-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de d-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6> ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6> arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido; y todas las otras variables se definieron anteriormente. 29.- El uso de un compuesto de la fórmula (la) de conformidad con la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para el tratamiento de cáncer, enfermedad neoplásica, carga de tumor, metástasis de neoplasmas y recurrencias de crecimientos de tumor/neoplásicos en un mamífero, en donde R es un polinucleótido o un derivado del mismo.
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