MX2009000382A

MX2009000382A - Composiciones de enantiomero zilpaterol y metodos para elaborar y usar tales composiciones.

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Publication number: MX2009000382A
Application number: MX2009000382A
Authority: MX
Inventors: Christian Miculka; Thorsten Meyer; Christopher Kern; Serge Droux
Original assignee: Intervet Int Bv
Priority date: 2006-07-10
Filing date: 2007-07-10
Publication date: 2009-01-27
Also published as: EP2040564A1; US8268813B2; CA2656312C; US20100022490A1; ZA200900068B; WO2008006828A1; CA2656312A1

Abstract

Esta invención se refiere generalmente a las composiciones del enantiómero zilpaterol, y, en particular, a las composiciones que comprenden el enantiómero zilpaterol 6R,7R en una cantidad que es mayor que la de cualquier otro enantiómero. Esta invención también se refiere a procesos para hacer tales composiciones; los métodos para usar las composiciones en, por ejemplo, el aumento del índice de aumento de peso, mejorar la eficiencia del alimento, y/o aumentar la delgadez de la masa corporal en ganado, aves de corral y/o peces; y a los usos de las composiciones para elaborar medicamentos. Esta invención se refiere adicionalmente a métodos para determinar las configuraciones absolutas de los enantiómeros zilpaterol.

Description

COMPOSICIONES DE ENANTIOMERO ZILPATEROL Y METODOS PARA ELABORAR Y USAR TALES COMPOSICIONES Campo de la Invención Esta invención se refiere generalmente a las composiciones de enantiómero zilpaterol, y, en particular, a las composiciones que comprenden, enantiómero zilpaterol 6R.7R. Esta invención también se refiere a los procesos para hacer tales composiciones; métodos de uso de las composiciones como, por ejemplo, aumento del índice de peso, mejorar la eficiencia del alimento, y/o aumentar la delgadez de la masa muscular en el ganado, aves de corral, y/o peces; y a los usos de tales composiciones para hacer medicamentos. Esta invención se refiere además a métodos para determinar las configuraciones absolutas de los enantiómeros zilpaterol. Antecedentes de la Invención Zilpaterol es un agonista ß-2 adrenérgico conocido, que tiene la siguiente estructura: El nombre IUPAC para el zilpaterol es 4,5,6,7-tetrahidro-7-hidroxi-6-(isopropilamino)imidazo[4,5,1-jk]-[1]benzazepin-2(1 H)-ona. El nombre de los Abstractos Químicos para el zilpaterol es 4,5,6,7-tetrahidro-7-hidroxi-6-[(1-metilo-etil)[amino]-imidazo 4,5,1 -jk][1 ]benzazepin-2(1 H)-ona. El zilpaterol tiene dos carbonos quirales: Carbonos Quirales Por lo tanto, el zilpaterol tiene cuatro enantiomeros ópticos. Se identifican estos enantiomeros como "(6R,7R)", "(6R.7S)", n(6S,7R)" y "(6S,7R)", y "(6S,7S)". CAS No. 119520-05-7 corresponde al trans zilpaterol racémico (es decir, una mezcla de enantiomeros (6R,7R) y (6S, 7S)), y se ha identificado en la literatura como "RU42173". Los enantiomeros trans tienen las siguientes estructuras: (6R,7 ) (6S,7S) El zilpaterol es bien conocido en la técnica. Por ejemplo, en la Patente Norteamericana 4,585,770, Frechet y colaboradores discute los compuestos comprendidos por un género caracterizado como los derivados 6-amino-7-hidroxi-4,5,6,7-tetrahidro-imidazo[4,5, 1 -j - k] [ 1 ]-benzazepin-2-(1 H)-ona, y, en particular, los derivados (y sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de las mismas) que corresponden a la siguiente estructura: Aquí, R puede ser varios sustituyentes, y las líneas onduladas indican que los enlaces en los grupos 6-amino y 7-OH tienen la configuración trans. Este género comprende trans zilpaterol racémico cuando R es isopropilo. Frechet y colaboradores indican que tales compuestos pueden utilizarse como un ingrediente activo para inducir la actividad antihipertensiva e hipotensa en un animal de sangre caliente.

En la Patente Norteamericana 4,900,735, Grandadam discute una composición zootécnica que comprende por ío menos un compuesto de la siguiente fórmula o de una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable del mismo: Aquí, R puede ser varios sustituyentes, y las líneas onduladas indican que los enlaces a los grupos 6-amino y 7-OH tienen la configuración trans. Como con el género discutido en la Patente Norteamericana 4,585,770, este género comprende trans zilpaterol racémico cuando R es isopropilo. Grandadam indica que tal composición puede utilizarse para aumentar el peso de ganados, cerdos, o aves de corral, y puede además comprender opcionalmente un esteroide. En las Patentes Norteamericanas 5,731,028 y 5,847,124 de Chevremont y colaboradores discuten el clorhidrato de zilpaterol anhidro cristalizado, y particularmente el clorhidrato de zilpaterol anhidro cristalizado en donde menos de 5% de los cristales tienen un tamaño menor de 15 µp?, y por lo menos 95% de los cristales tienen un tamaño menor de 250 µ??. De acuerdo a Chevremont y colaboradores, tales cristales pueden incorporarse en el alimento del animal para aumentar la calidad del peso corporal y la calidad de la carne. Chevremont y colaboradores proporciona métodos para hacer tales cristales, y discuten el uso de cristales para hacer premezclas del animal en donde los cristales se aseguran a un soporte de la mazorca de maíz que tiene un mayor tamaño de partícula. También se discuten los intermediarios de monohidrato y trihidrato que pueden ser útiles en, por ejemplo, haciendo cristales. En la Patente Norteamericana 7,207,289, Montgomery discute los métodos para aumentar la producción de carne de res, reduciendo la ingesta de alimento mientras se mantiene la producción de carne de res, y reduce las incidencias de absceso de hígado en ganados. Estos métodos comprenden administrar una alimento que comprende un antibiótico macrolido e ionóforo durante un período inicial, y después administrar un alimento que comprende zilpaterol con esencialmente ningún antibiótico ionóforo o macrolido. Ha habido una cierta discusión en la técnica con referencia a enantiómeros de varios agonistas ß-2 adrenérgico. Tal discusión puede encontrarse en, por ejemplo, la Patente Norteamericana 6,110,974; Solicitud de Publicación de Patente Norteamericana 2005/0 13456; y Solicitud de Publicación de Patente Norteamericana 2002/0132830. Existe aún una necesidad de composiciones y métodos alternativos para aumentar el índice de aumento de peso, mejorar la eficiencia del alimento, y/o aumentar la delgadez de la masa muscular en ganado, aves de corral, y/o peces. La siguiente invención describe tales composiciones y métodos. Breve Descripción de la Invención Esta invención se refiere a las composiciones que comprenden un enantiómero zilpaterol, mientras que contiene menos de por lo menos uno (y normalmente dos o tres) de los otros enantiómeros. Tal método es particularmente conveniente para usarse con ganado (por ejemplo, bóvidos y cerdos), aves de corral, y/o peces. Brevemente, esta invención se refiere, en parte, a una composición. La composición comprende una cantidad de un enantiómero 6R, 7R que corresponde en la estructura a la fórmula (IA) o a una sal de la misma: En algunas modalidades, la cantidad del enantiómero 6R, 7R o sal del mismo en la composición es mayor que cualquier cantidad de cualquier otro enantiómero que está comprendido por la fórmula (I) o sal del mismo: En otras modalidades, la composición exhibe perceptiblemente menos afinidad para el receptor µ-opioide que enlaza ¡n vitro a la composición que exhibe si el enantiómero 6R, 7R fue substituido con trans zilpaterol racémico en una cantidad que iguala dos veces la cantidad del enantiómero 6R, 7R. Esta invención también se refiere, en parte, a un método de alimentación de un animal. Este método comprende la alimentación de una composición al animal descrita anteriormente. Esta invención también se refiere, en parte, a métodos para aumentar el índice de aumento de peso en el animal, mejorar la eficiencia del alimento, y/o aumentar la delgadez de la masa muscular de un animal. Estos métodos comprenden administrar una composición al animal descrita anteriormente. Esta invención también se refiere, en parte, a un método de aumentar la producción de carne de res. Este método comprende administrar un primer régimen de dosificación a un bovino por un período inicial; y, al final del período inicial, administrar un segundo régimen de dosificación de aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días. El primer régimen de dosificación comprende administrar (por ejemplo, alimentar) un ionóforo y un antibiótico en cantidades que juntas constituyen una cantidad terapéuticamente efectiva; y el segundo régimen de dosificación comprende administrar (por ejemplo, alimentar) una composición descrita anteriormente y esencialmente ningún ionóforo o antibiótico. Esta invención también se refiere, en parte, a un método de reducir la ingesta de alimento de un animal bovino mientras que se mantiene la producción de carne de res. Este método comprende administrar un primer régimen de dosificación durante un período de finalización de hasta aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del final del período de finalización; y durante aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del final del período de finalización, administrar un segundo régimen de dosificación. El primer régimen de dosificación comprende administrar (por ejemplo, alimentar) un ionóforo y un antibiótico en cantidades que juntos constituyen una cantidad terapéuticamente eficaz. El segundo régimen de dosificación comprende administrar (por ejemplo, alimentar) una composición descrita anteriormente que no comprende esencialmente ningún agonista ß-2 con excepción del enantiómero, y esencialmente ningún ionóforo o antibiótico. Esta invención también se refiere, en parte, a un método de finalización de un animal bovino. Este método comprende administrar un primer régimen de dosificación durante un período de finalización hasta de aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del final del período de finalización; y durante aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del período de finalización, administrar un segundo régimen de dosificación. El primer régimen de dosificación comprende administrar (por ejemplo, alimentar) un ionóforo y un antibiótico en las cantidades que juntas constituyen una cantidad terapéuticamente eficaz. El segundo régimen de dosificación comprende administrar (por ejemplo, alimentar) una composición descrita anteriormente que no comprende esencialmente ningún agonista ß-2 con excepción del enantiómero, y esencialmente ningún ionóforo o antibiótico. Este método reduce el riesgo de un absceso de hígado en el animal bovino comparado al riesgo en un animal bovino similar que recibe el primer régimen de dosificación a través del período completo de finalización. Esta invención también se refiere, en parte, al uso de- una composición descrita anteriormente para hacer un medicamento. Los usos potenciales para tal medicamento incluyen aumentar el índice de aumento de peso en un animal, mejorar la eficiencia del alimento en un animal, y/o aumentar la delgadez de la masa muscular del animal. Esta invención también se refiere, en parte, a un método para separar los enantiomeros de la fórmula (I) o sales de los mismos. El método comprende la formación de derivados protegidos, y, en particular, de derivados bencilo carbamato, de los enantiomeros. Esta invención también se refiere, en parte, a un método para determinar la configuración absoluta de un enantiómero que corresponde en estructura a la fórmula (I) o a una sal del mismo. El método comprende hacer reaccionar el enantiómero con 2,4'-dibromoacetofenona para formar un derivado 4-bromofeniIacilo del enantiómero.

Otros beneficios de la invención del Solicitante serán evidentes en la técnica a la lectura de esta especificación. Descripción Detallada de las Modalidades Preferidas Esta descripción detallada de modalidades preferidas se desea para introducir únicamente a otros expertos en la técnica de la invención del Solicitante, sus principios, y su aplicación práctica de modo que otros expertos en la técnica puedan adaptar y aplicar la invención en sus numerosas formas, mientras que pueden ser más convenientes para los requisitos de un uso particular. Esta descripción detallada y sus ejemplos específicos, mientras que indican modalidades preferidas de esta invención, únicamente se desean para propósitos de ilustración. Esta invención, por lo tanto, no se limita a las modalidades preferidas descritas en esta especificación, y pueden modificarse de forma variada. Las composiciones de esta invención comprenden el enantiómero trans de la fórmula (I) (o una sal del mismo) que tiene un giro óptico negativo, según lo medido por un polarímetro:' Este enantiómero se identifica algunas veces en esta especificación como el "enantiómero trans negativo". Cuando se usa una columna CLAR para separar los enantiómeros en zilpaterol trans racémico bajo las condiciones establecidas en los ejemplos 1 y 2 abajo, este enantiómero emerge de la columna después de que el enantiómero tiene el giro óptico positivo (es decir, el "enantiómero trans positivo"). Los solicitantes han determinado que el enantiómero trans negativo es el enantiómero 6R, 7R, y que el enantiómero trans positivo es el enantiómero 6S, 7S. La relación de la cantidad del enantiómero 6R, 7R al enantiómero 6S, 7S en las composiciones de esta invención es mayor de 1:1. Preferiblemente, las composiciones están sustancialmente libres del enantiómero 6S, 7S, es decir, la relación de la cantidad del enantiómero 6R, 7R a la cantidad del enantiómero 6S,7S es mayor de aproximadamente 70:30. En algunas tales modalidades, la relación es mayor de aproximadamente 85:15, mayor de aproximadamente 90:10, mayor de aproximadamente 95:5, mayor de aproximadamente 98:2, mayor de aproximadamente 99:1, o mayor de aproximadamente 99.5:0.5. En general, la relación de la cantidad del enantiómero 6R, 7R con la cantidad total de todos los otros enantiómeros de la fórmula (I) combinados (es decir, la cantidad total del enantiómero 6S,7S y de los dos enantiómeros cis) en las composiciones de esta invención es mayor de 1:1. En algunas tales modalidades, las composiciones están sustancialmente libres del resto de los enantiómeros, es decir, la relación de la cantidad del enantiómero 6R.7R a la cantidad total de todos los otros enantiómeros combinados es mayor de aproximadamente 70:30. En algunas modalidades, la relación es mayor de aproximadamente 85:15, mayor de aproximadamente 90:10, mayor de aproximadamente 95:5, mayor de aproximadamente 98:2, mayor de aproximadamente 99:1, o mayor de aproximadamente 99.5:0.5. En algunas modalidades, la concentración del enantiómero 6R, 7R en las composiciones de esta invención es mayor de aproximadamente 50% (en peso). En algunas modalidades, la concentración es mayor de aproximadamente 70% (en peso), mayor de aproximadamente 85% (en peso), mayor de aproximadamente 90% (en peso), mayor de aproximadamente 95% (en peso), o mayor de aproximadamente 98% (en peso), o mayor de aproximadamente 99% (en peso), o mayor de aproximadamente .99.5% (en peso). La concentración del enantiómero 6S,7S en las composiciones de esta invención es menor de 50%. En algunas modalidades, la concentración del enantiómero 6S,7S es menor de aproximadamente 30% (en peso), menor de aproximadamente 15% (en peso), menor de aproximadamente 10% (en peso), menor de aproximadamente 5% (en peso), menor de aproximadamente 2% (en peso), menor de aproximadamente 1% (en peso), o menor de aproximadamente 0.5% (en peso). En algunas modalidades, la concentración total del enantiómero 6S,7S y de los dos enantiómeros cis combinados es menor de 50%. Por ejemplo, en algunas modalidades, la concentración total de estos enantiómeros es menor de aproximadamente 30% (en peso), menor de aproximadamente 15% (en peso), menor de aproximadamente 10% (en peso), menor de aproximadamente 5% (en peso), menor de aproximadamente 2% (en peso), menor de aproximadamente 1% (en peso), o menor de aproximadamente 0.5% (en peso). Una sal del enantiómero 6R,7R puede ser ventajosa sobre la base libre debido a una o más de las propiedades físicas de la sal, tales como estabilidad farmacéutica en temperaturas y humedades que diferencian; propiedades cristalinas; y/o una solubilidad deseable en agua, aceite, u otro solvente. En algunos casos, una sal puede utilizarse como soporte en el aislamiento, purificación, y/o resolución del enantiómero. Las sales pueden formarse normalmente por ejemplo, mezclando la base libre con un ácido usando varios métodos conocidos en la técnica. El grado de una sal del enantiómero 6R,7R se desea para administrarse ¡n vivo (es decir, a un animal) como un beneficio terapéutico, es preferible la sal farmacéuticamente aceptable. El término "farmacéuticamente aceptable" se utiliza adjetivamente para significar que el sustantivo modificado es apropiado para el uso en un producto farmacéutico. Cuando se utiliza, por ejemplo, para describir una sal o un excipiente, éste caracteriza la sal o el excipiente como compatibles con otros ingredientes de la composición, y no deletéreo al animal receptor previsto hasta el grado en que el efecto (s) deletéreo compense su beneficio (s). Las sales convenientes incluyen generalmente las sales de adición de ácido. En general, una sal de adición de ácido puede prepararse reaccionando el enantiómero de base libre con una cantidad aproximadamente estoiquiométrica de un ácido inorgánico u orgánico. Los ejemplos de ácidos inorgánicos con frecuencia convenientes para hacer sales farmacéuticamente aceptables incluyen el ácido hidroclórico, bromhídrico, hidroiódico, nítrico, carbónico, sulfúrico, y fosfórico. Los ejemplos de ácidos orgánicos convenientes con frecuencia para hacer sales farmacéuticamente aceptables incluyen generalmente, por ejemplo, clases de ácidos orgánicos alifáticos, cicloalifáticos, aromáticos, aralifáticos, heterocíclicos, carboxílicos, y sulfónicos. Los ejemplos específicos de ácidos orgánicos convenientes con frecuencia incluyen colato, sorbato, laurato, acetato, trifluoroacetato (o "CF3COOH" o "TFA"), formiato, propionato, succinato, glicolato, gluconato, digluconato, lactato, malato, ácido tartárico, citrato, ascorbato, glucuronato, maleato, fumarato, piruvato, aspartato, glutamato, ácido arilcarboxílico (por ejemplo, benzoato) ácido antranílico, mesilato, estearato, salicilato, p-hidroxibenzoato, fenilacetato, mandelato, embonato (pamoato), alquilsulfonato (por ejemplo, etanosulfonato), arilsulfonato (por ejemplo, bencenosulfonato), pantotenato, 2-hidroxietanosulfonato, sulfanilato, ciclohexilaminosulfonato, ácido ß-hidroxibutírico, galactarato, galacturonato, adipato, alginato, butirato, camforato, camforsulfonato, ciclopentanopropionato, dodecilsulfato, glicoheptanoato, glicerofosfato, heptanoato, hexanoato, nicotinato, 2-naftalsulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, tiocinato, tosilato y undecanoato. En algunas modalidades, por ejemplo, la sal comprende un trifluoroacetato, mesilato, o una sal de tosilato. En otras modalidades, la sal comprende una sal de ácido hidrociórico. Las composiciones de esta invención pueden utilizarse generalmente para aumentar el índice de aumento de peso, para mejorar la eficacia de la alimentación (es decir, aumentar la cantidad de alimento por la cantidad de peso ganado), y/o aumento en la delgadez de la masa corporal (es decir, aumento del contenido proteínico en el tejido suave) en ganado, aves de corral, y/o peces. Los beneficios contemplados del uso de composiciones de enantiómero de esta invención en zilpaterol racémico incluyen, por ejemplo, mayor eficacia, mayor selectividad, características de manejo mejoradas, pocos efectos secundarios, concentraciones más bajas de tejido fármaco, y/o capacidad de eliminar otro enantiómero que tiene efectos secundarios adversos. Se contempla particularmente que las composiciones del enantiómero 6R,7R de esta invención pueden ser beneficiosas debido a la carencia de afinidad del enantiómero 6R, 7R para el receptor µ-opioide. Según lo mostrado abajo en los ejemplos 4 y 5, el enantiómero zilpaterol 6R 7R, parece contar esencialmente para toda la actividad agonista ß2 del zilpaterol trans racémico. Y, según lo mostrado abajo en el ejemplo 6, los solicitantes han descubierto que el enantiómero zilpaterol 6R 7R proporciona esta actividad mientras que exhibe comparativamente menos afinidad hacia el receptor µ-opioide. Se sugiere en la técnica que menos afinidad del receptor µ-opioide puede coincidir generalmente con varios efectos ventajosos. Ver, por ejemplo, Solicitud de Publicación de Patente Internacional WO/2003/039469; Bodnar, Peptides, vol. 25, edición 4, pp. 697-725 (abril 2004); Zhang y colaboradores, European Journal of Pharmacology, vol. 545, Issues 2-3, pp. 147-152 (September 18, 2006); Linn, y colaboradores, "Peripherally restricted µ-opioid receptor antagonists: a review," Techniques in Regional Anesthesia and Pain Management, vol. 11, issue 1, pp. 27-32 (January 2007); Salmi, et al., European Journal of Pharmacology, vol. 458, no. 1, pp. 101-106 (January 1, 2003); and Colman, y colaboradores, "µ-1 opioid receptor stimulation decreases body temperature in conscious, unrestrained neonatal rats," Society for Experimental Biol Med, vol. 227(6), pp. 377-381 (2002) (estas referencias son incorporadas por referencia en esta patente). Por lo tanto, se contempla que el enantiómero 6R,7R puede proporcionar uno o más de tales efectos ventajosos sobre el zilpaterol trans racémico. Las ventajas contempladas incluyen, por ejemplo, mayor ingesta de alimento, que, a su vez, resulta en mayor aumento de peso corporal y/o en un mayor índice de crecimiento. Otros beneficios contemplados incluyen, por ejemplo, mayor motilidad gastrointestinal, mayor ventilación del pulmón, mayor vigilia, y/o termorregulación inalterada. Normalmente, las composiciones de esta invención se administran oralmente. En algunas modalidades, la composición se agrega al agua que bebe el animal receptor previsto. En otras modalidades, el enantiómero se agrega al alimento del receptor previsto, ya sea directo o como parte de una premezcla. Las formas de dosificación orales convenientes para tales modalidades incluyen, por ejemplo, las formas de dosificación sólidas (por ejemplo, tabletas, cápsulas suaves o duras, gránulos; polvos, etc.), pastas, y formas de dosificación líquidas (por ejemplo, soluciones, suspensiones, jarabes, etc.). Estas formas de dosificación comprenden opcionalmente uno o más excipientes convenientes. Tales excipientes incluyen generalmente, por ejemplo, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes, agentes preservativos, diluyentes inertes (por ejemplo, carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio, fosfato de sodio, o caolín), agentes granulosos y desintegrantes (por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico), agentes aglutinantes (por ejemplo, gelatina, acacia, o celulosa de carboximetilo), y agentes lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, o talco). Las composiciones líquidas comprenderán generalmente un solvente. El solvente tiené preferiblemente suficientes propiedades y cantidades químicas para mantener el enantiómero solubilizado a temperaturas en la temperatura de almacenamiento normal para la composición. En algunos casos, puede ser deseable para las composiciones que comprendan uno o más preservativos. La presencia de un preservativo puede, por ejemplo, dejar a las composiciones almacenarse en una mayor cantidad de tiempo. En algunas modalidades, el enantiómero zilpaterol está en forma de partículas adheridas a un soporte, que, a su vez, se alimenta al animal receptor previsto. El enantiómero soportado puede incorporarse en el alimento del receptor, ya sea directamente o como parte de una premezcla. Los soportes contemplados incluyen, por ejemplo, soportes de injerción, tales como carbonato de calcio, piedra caliza, harina de cáscara de ostra, talco, cáscaras de soja, comida de soja, alimento de soja, carne de soja, trigo molido, cáscaras de arroz, harina de maíz, cinuda de germen de maíz, gluten de maíz, almidón, sacarosa, y lactosa. Particularmente los soportes contemplados incluyen soportes de mazorca de maíz, tales como el soporte discutido en la Patente Norteamericana 5,731,028. En algunas modalidades que usan un soporte de mazorca de maíz, el tamaño del soporte es de aproximadamente 300 a aproximadamente 800 pm. Preferiblemente, las partículas del enantiómero zilpaterol que se adhieren al soporte tienen un tamaño de partícula que es menor que el tamaño del soporte. Así, por ejemplo, en algunas modalidades donde el soporte es de aproximadamente 300 a aproximadamente 800 pm, las partículas del enantiómero son (o por lo menos aproximadamente 95% de las partículas del enantiómero) son menores que aproximadamente 250 pm. En algunas modalidades, el tamaño de la mayoría de las partículas del enantiómero es de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 pm. Para evitar generar polvo al hacer el enantiómero soportado, se prefiere evitar usar partículas de enantiómero extremadamente pequeñas. En algunas modalidades, por ejemplo, la distribución del tamaño de partícula del enantiómero está tal que menos de aproximadamente 5% de las partículas del enantiómero tienen un tamaño de partícula menor de aproximadamente 15 pm. Los métodos discutidos en, por ejemplo, la Patente Norteamericana 5,731,028 (inventores: Chevremont y colaboradores; presentado el 6 de Junio de 1996; publicado el 24 de marzo de 1998; incorporado por referencia en esta patente) para hacer una distribución de tamaño específico del zilpaterol trans racémico cristalino puede aplicarse generalmente al hacer los cristales del enantiómero 6R,7R que tienen las distribuciones de tamaño descritas anteriormente. El grado de la composición se incorpora en el alimento, la mezcla del alimento variará dependiendo de, por ejemplo, el tipo (por ejemplo, especie y raza), edad, peso, actividad, y condición del receptor previsto. Para los bóvidos y cerdos, las varias alimentaciones son bien conocidas en la técnica, y comprenden con frecuencia cereales; azúcares; granos; araquídicos, tornasoles, y torta de prensa de soja; harinas de origen animal, tales como harina de pescado; aminoácidos; sales mineral; vitaminas; antioxidantes; etc. En general, la composición del enantiómero puede incorporarse en cualquier alimento que esté disponible y utilizado para el animal receptor previsto. Se contempla que las composiciones de esta invención se pueden administrar vía las rutas no-orales, tales como rectalmente, vía inhalación (por ejemplo, vía una niebla o un aerosol), transdérmicamente (por ejemplo, vía un parche transdérmico), o parenteralmente (por ejemplo, inyección subcutánea, inyección intravenosa, inyección intramuscular, dispositivo implantado, dispositivo parcialmente implantado etc.). En algunas modalidades particulares, las composiciones se administran vía implante, por ejemplo un implante subcutáneo. Para la administración a animales bóvidos o cerdos, por ejemplo, la composición puede administrarse en forma de un implante detrás del oído o barba. En general, las composiciones de esta invención se administran en una forma de dosificación que proporciona una cantidad efectiva del enantiómero 6R,7R. Esto es particularmente verdad donde el enantiómero es el único ingrediente activo en la composición. El grado del enantiómero se administra con otro ingrediente (s) activo, la dosificación comprende preferiblemente una cantidad de enantiómero que, junto con la cantidad del otro ingrediente (s) activo, constituye una cantidad efectiva. En el contexto del enantiómero, una "cantidad efectiva" es una cantidad suficiente para aumentar el índice de aumento de peso, mejorar la eficacia del alimento, y/o aumentar la delgadez de la masa muscular en el receptor previsto (normalmente ganado, aves de corral, y/o peces). Cuando la composición se administra oralmente, se prefiere normalmente utilizar una forma de dosificación diaria. La dosis diaria total preferida es normalmente mayor que aproximadamente 0.01 mg/kg (es decir, miligramo de enantiómero por kilogramo de peso corporal), particularmente para animales bóvidos y cerdos. En algunas tales modalidades, la dosis diaria es de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 50 mg/kg, de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 10 mg/kg, de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 2 mg/kg, de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 1, de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 0.2 mg/kg, o de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 0.2 mg/kg. En algunas modalidades donde el enantiómero se administra en el alimento del animal receptor, la concentración del enantiómero en el alimento (en un 90% base de materia seca) es por lo menos de aproximadamente 0.01 ppm (en peso). Para los animales bovinos, la concentración del enantiómero es preferiblemente no mayor de aproximadamente 75 ppm (en peso). En algunas modalidades, por ejemplo, la concentración del enantiómero no es mayor de aproximadamente 38 ppm, de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 20 ppm, de aproximadamente 3 a aproximadamente 8 ppm, o de aproximadamente 3.7 a aproximadamente 7.5 ppm (en peso). Para los animales cerdos, la concentración del enantiómero es preferiblemente no mayor de aproximadamente 45 ppm (en peso). En algunas modalidades, por ejemplo, la concentración es no mayor de aproximadamente 23 ppm, de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 20 ppm, de aproximadamente 2 a aproximadamente 5 ppm, o de aproximadamente 2.2 a aproximadamente 4.5 ppm (en peso). Aunque las dosis diarias orales solas se prefieren normalmente, se contempla que períodos más cortos o más largos entre las dosis pueden utilizarse, dependiendo de, por ejemplo, el metabolismo del receptor del enantiómero. Se contempla que la dosis más pequeña puede administrarse dos o más veces por día para lograr la dosis diaria total deseada. Tales múltiples dosis por día pueden, en algunos casos, utilizarse para aumentar la dosis diaria oral total, si es deseado. Cuando se administra vía un implante subcutáneo, la dosis diaria total preferida del enantiómero es normalmente mayor qué aproximadamente 0.05 mg/kg (es decir, miligramo de enantiómero por kilogramo en peso corporal), particularmente para los animales bóvidos y cerdos. En algunas modalidades, la dosis diaria es de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.25 mg/kg.

Si la composición del enantiómero se administra parenteralmente vía una inyección, la concentración dei enantiómero en forma de dosificación es preferiblemente suficiente para proporcionar la cantidad terapéuticamente efectiva deseada de enantiómero en un volumen que es aceptable para la administración parenteral. Como con el alimento oral, una forma de dosificación por inyección puede administrarse una vez por día, aunque se contempla que períodos más cortos o más largos entre las dosis también podrían utilizarse. Los factores que afectan el régimen de dosificación preferido pueden incluir, por ejemplo, el tipo (por ejemplo, especie y raza), edad, tamaño, sexo, dieta, actividad, y condición del receptor previsto; el tipo de administración usado (por ejemplo, oral vía el alimento, oral vía la toma de agua, implante subcutáneo, otra ruta parenteral, etc.); consideraciones farmacológicas, tales como los perfiles de actividad, eficiencia, farmacocinética, y toxicología de la composición particular administrada; y si el enantiómero está siendo administrado como parte de una combinación de ingredientes activos. Así, la cantidad preferida del enantiómero puede variar, y, por lo tanto, puede desviarse de las dosificaciones típicas establecidas anteriormente. Determinar tales ajustes de dosificación está generalmente dentro de la habilidad de los expertos en la técnica usando medios convencionales. Se contempla que la composición puede administrarse al receptor previsto al mismo tiempo. En general, sin embargo, la composición se administra en un cierto plazo. En algunas modalidades donde el animal receptor es un animal de ganado, por ejemplo, el enantiómero se administra diariamente por lo menos aproximadamente 2 días, más normalmente de forma diaria de aproximadamente 10 a aproximadamente 60 días, y aún más normalmente en forma diaria de aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días. En algunas modalidades particulares, la composición se administra diariamente para por lo menos aproximadamente los últimos 2 días del período de finalización. En algunas modalidades, se administra diariamente desde aproximadamente los últimos 10 a aproximadamente 60 días del período de finalización, o desde aproximadamente 20 a aproximadamente 40 últimos días del período de finalización. El término "período de finalización" se refiere a la etapa posterior del período de crecimiento para un animal. Durante este período, los animales de ganado se confinan normalmente en un corral. En algunas modalidades donde un animal de ganado es un bovino, este período dura de aproximadamente 90 a aproximadamente 225 días, y depende en, por ejemplo, el peso corporal de inicio del animal. Hay normalmente un período de retiro que sigue al período de finalización en el cual no se administra ningún enantiómero zilpaterol. La longitud de este período del retiro puede depender en, por ejemplo, el tipo (por ejemplo, especie y raza), edad, peso, actividad, y condición del animal receptor, así como la concentración máxima del residuo del enantiómero aceptable en la carne del animal. En algunas modalidades, el enantiómero zilpaterol 6R,7R se administra en combinación con otros ingredientes activos. La administración del otro activo (s) normalmente puede ser antes, simultáneamente con, y/o después de la administración del enantiómero. Mientras que se administra normalmente el enantiómero en un cierto tiempo, el otro activo (s) puede administrarse una vez, o, alternativamente, en una cantidad de tiempo, que puede ser igual que o diferente de la cantidad de tiempo en donde el enantiómero se administra. Hasta que el punto de administración es simultáneo, los activos combinados pueden ser parte de la misma forma de dosificación (por ejemplo, en la misma tableta, gránulo, o polvo) y/o formas de dosificación separadas. En algunas modalidades (particularmente para el ganado, tal como bóvidos o cerdos), el enantiómero se administra con un esferoide, tal como, por ejemplo, un esferoide que corresponde en estructura a la fórmula (II): Aquí, X es hidrógeno, alquilo C-i-C6 en donde uno de los grupos -CH2- se sustituye opcionalmente con -O-, o un acilo de un ácido carboxílico orgánico que tiene de 1 a aproximadamente 18 átomos de carbono. En algunas tales modalidades, por ejemplo, X es -C(0)CH3 (es decir, el esteroide comprende trenbolona acetato, también conocido como "17p-acetoxi-A4,9,11 -estratrieno-3-ona"): Trebolona Acetato El enantiómero también puede administrarse con, por ejemplo, zeranol o estradiol, particularmente para ganado. El zeronal o estradiol puede administrarse oralmente en la alimento. Normalmente, sin embargo, el zeranol o estradiol se administra parenteralmente, tal como vía la inyección o un implante subcutáneo. Las localizaciones convenientes para un implante subcutáneo incluyen, por ejemplo, detrás del oído o barba. El implante se implanta normalmente a partir de aproximadamente 20 días a aproximadamente 4 meses antes del sacrificio, y, más normalmente, de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 meses antes del sacrificio. La dosificación total típica de zeranol es de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mg, o de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 mg. La dosificación típica de estradiol es de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 50 mg. En algunas modalidades, un esteroide (por ejemplo, acetato de trenbolona) se administra además del zeranol o estradiol y el enantiómero 6R. El ganado, aves de corral, y peces con frecuencia se confinan y alimentan con dietas de gran energía, particularmente como métodos de recolección. Esto puede dar lugar en una variedad de condiciones perjudiciales. Los bovinos, por ejemplo, se confinan en corrales y alimentados con dietas de grano de gran energía. Esto tiende a causar la acidosis rumiante láctica, que ataca la integridad de la pared de la panza. Esto, a su vez, permite bacterias oportunistas (por ejemplo, Fusobacterium necrophorum y Actinomyces pyogenes) colonizar, entrar en la circulación sanguínea, y eventualmente infectar el hígado y causar abscesos de hígado. La acidosis por sí misma puede estar asociada a variaciones perjudiciales en la ingesta de alimento diario, mientras que los abscesos de hígado (particularmente abscesos severos) pueden asociarse a disminuciones perjudiciales en la ingesta de alimento, aumento diario de peso, y eficiencia del alimento. Ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana 7,207,289 y las citaciones en la misma. En algunas modalidades, la acidosis rumiante y los abscesos de hígado resultantes son reducidos o prevenidos completamente administrando el enantiómero como parte de un esquema de dosificación que también incluye administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más ionóforos. Los ionóforos contemplados incluyen, por ejemplo, monensina, lasalocida, propionato de laidlomicina, bambermicinand, y sales de los mismos. El monensina de sodio, por ejemplo, se comercializa bajo el nombre comercial RUMENSIN®. La determinación de un régimen de dosificación de ionóforo que es terapéuticamente efectivo para el tipo particular del receptor animal está generalmente dentro de la habilidad de la técnica. Cuando se administran correctamente, los ionóforos pueden ser eficaces para aumentar la eficiencia del alimento y/o mejoramiento del índice de aumento de peso corporal. Se cree que estos efectos surgen a partir de los efectos de los ionóforos que se tienen en la fermentación rumiante. Más específicamente, se cree que los ionóforos tienden a crear un ambiente que inhibe las bacterias que producen ácido láctico positivo gram (es decir, Streptococcus bovis y Lactobacillius spp.), mientras que no tienen ningún efecto en bacterias negativas gram de fermentación de ácido-láctico. Esto, a su vez, se cree que reduce la acidosis rumiante, de tal modo que mantiene la integridad de la pared de la panza. En algunas modalidades, los abscesos de hígado son reducidos o prevenidos completamente administrando el enantiómero como parte de un esquema de dosificación que también incluye administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más antibióticos. Los antibióticos contemplados incluyen, por ejemplo, los antibióticos macrolidos, tales como tilosina y sales de los mismos (fosfato de tilosina, por ejemplo, se comercializa bajo el nombre comercial TYLAN®). La determinación de un régimen de dosificación antibiótica que es terapéuticamente efectiva para el tipo particular del receptor animal está generalmente dentro de la habilidad de la técnica. Cuando son administrados correctamente, los antibióticos pueden ser efectivos para aumentar el índice de aumento de peso, mejorar la eficiencia del alimento, y/o reducir el tiempo para el recorte de la masa muscular. Se cree que estos efectos se originan de una reducción de las bacterias oportunistas (por ejemplo, Fusobacteríum necrophorum y Actinomyces pyogenes) que pueden infectar el hígado. En algunas modalidades, el enantiómero se administra como parte de un esquema de dosificación que también incluye administrar uno o más ionóforos en combinación con uno o más antibióticos. En estas modalidades, las cantidades de uno o más ionóforos y uno o más antibióticos juntos constituyen una cantidad que es terapéuticamente efectiva. En algunas modalidades, el enantiómero se administra como parte de un esquema de dosificación que incluye administrar (por ejemplo, alimentar) uno o más ionóforos y/o uno o más antibiótico (s) por un período antes de que se administre el enantiómero. En algunas tales modalidades, la administración del ionóforo (s) y/o antibiótico (s) se cesa cuando la administración (por ejemplo, alimentar) del enantiómero comienza. En modalidades particularmente contempladas, el ionóforo (s) y/o antibiótico (s) se administran durante una porción del período de finalización antes de que se administre cualquier enantiómero zilpaterol. Esto se sigue por un segundo período en el cual el enantiómero se administra sin (o con esencialmente ningún) ionóforo o antibiótico durante la porción restante del período de finalización. En algunas tales modalidades, la administración del enantiómero comienza por lo menos 2 días (o aproximadamente de 10 a aproximadamente 60 días, o de aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días) antes del final del período de finalización. Para ilustrar, se contempla que RUMENSIN® y TYLAN® podrían alimentarse a un bovino a través del período de finalización hasta los últimos 40 días antes del período de finalización, seguidos por la alimentación del enantiómero sin RUMENSIN® y TYLAN® por los 40 días restantes del período de finalización. Cuando el enantiómero se administra con "esencialmente sin" ionóforo o antibiótico, se administra sin una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquier ionóforo, antibiótico, o combinación del mismo. En algunas modalidades, el enantiómero 6R,7R se administra sin (o esencialmente ningún) otro agonista ß-2. Cuando el enantiómero se administra con "esencialmente ningún" otro agonista ß-2, se administra sin una cantidad terapéuticamente efectiva de cualquier otro agonista ß-2. A menos que se indique lo contrario, el término, la cantidad "terapéuticamente efectiva" significa una cantidad suficiente para producir por lo menos una porción de un efecto deseado discutido en esta patente. EJEMPLOS Los siguientes ejemplos son simplemente ilustrativos, y no limitativos al resto de la invención en cualquier manera. Ejemplo 1. Ilustración de una técnica para aislar los enantiómeros zilpaterol trans positivos y negativos. Parte A. Preparación del monohidrocloruro de zilpaterol trans racémico. El monohidrocloruro de zilpaterol trans racémico puede prepararse usando el método ilustrado en el ejemplo 13 en la columna 11 de Frechet y colaboradores de la Patente Norteamericana 4,585,770 (presentada el 12 de octubre de 1983; publicado el 29 de abril de 1986; incorporada en esta patente por referencia). Los enantiómeros trans en la mezcla corresponden a las siguientes estructuras: (6R,7R) (6S,7S) Parte B. Preparación de la base libre de zilpaterol trans racémico. Una solución acuosa de monohidrocloruro de zilpaterol trans racémico se trató con resina A BERLITE® IRA-67 (Fluka Chemie GmbH, Buchs, Suiza) durante 30 minutos, en cuyo tiempo el pH de la solución fue determinado para ser 8. La resina fue retirada vía filtración, y la solución se liofilizó. El sólido resultante se utilizó en la siguiente etapa sin el tratamiento adicional. Parte C. Separación del enantiómeros zilpaterol trans. El producto liofilizado de la parte B (1 mg) se disolvió en 0.1 mi de etanol con la ayuda de un baño ultrasónico. A la solución clara resultante se agregó 0.9 mi de n-hexano, y la solución resultante se filtró. La solución filtrada (0.03 mi) se inyectó después en una columna CLAR (CHIRACEL™ OD-H, Chiral Technologies Europe, lllkirch, France) bajo las siguientes condiciones: Diámetro de 4.6 mm columna interna Longitud de columna 250 mm Empaque Celulosa tris (3,5-dimetilfenilcarbamato) revestido en un soporte de sílice 5 µ?? Mezcla solvente de n-hexano/etanol a 90:10 v/v la fase móvil Caudal fase móvil 1 ml/min Temperatura fase 35°C móvil Tiempo de 15 min funcionamiento: Detección UV (220 nm) Los tiempos de retención de los dos enantiómeros trans fueron como sigue: Los giros ópticas de los enantiómeros fueron medidos usando un polarímetro 343 Perkin Elmer, (Perkin Elmer GmbH, Überlingen Alemania). Ejemplo 2. Ilustración de una segunda técnica para aislar los enantiómeros zilpaterol trans positivos y negativos. Parte A. Preparación de la base libre de zilpaterol trans racémico. Un recipiente de reacción de 4 L equipado con agitación mecánica se cargó de clorhidrato de zilpaterol (304.6 g, 1.023 mol) y agua (1.5 I). Una solución acuosa de NH4OH (20%, 150 mi) se agregó en porciones mientras se agitaba. La agitación fue continúa a temperatura ambiente durante 1 hora. El recipiente de reacción se colocó después bajo agitación en un baño de hielo durante otra hora. Esto resultó en la formación de un precipitado, que fue recolectado posteriormente, lavado con agua (1 l), lavado con éter de gasolina (500 mi), co-evaporado con tolueno, y secado bajo presión reducida para producir 256-6 g (96%) de una base libre de zilpaterol racémico como un sólido blanco. Parte B. Preparation del carbamato de bencilo de zilpaterol trans racémico. Un recipiente de reacción de 6 L equipado con agitación mecánica bajo N2 fue cargado con el producto de la etapa A (125 g, 0.48 mol) y acetona (3.5 I). Se agregó bicarbonato de sodio (160 g, 1.91 mol). La suspensión resultante se agitó y enfrió a 10°C mientras que el cloroformiato de bencilo (0.59 mol) diluido en tolueno (a un volumen total de 200 ml_) se agregó rápidamente gota a gota. Se agregó después de agitar a temperatura ambiente durante 15 horas, una solución adicional de cloroformiato de bencilo (55 mi, 50% del (en tolueno). La mezcla resultante se agitó nuevamente a temperatura ambiente durante 15 horas y después se filtró. El licor madre se reservó. Dos lotes adicionales (escala 125 y 83 g) fueron sintetizadas usando el mismo procedimiento. Los sólidos resultantes se combinaron y suspendieron en agua (4 L). Esta mezcla se agitó durante 30 minutos, y después se filtró. El sólido resultante se suspendió en agua (3 L). La mezcla se agitó después durante 15 minutos, y se filtró. El sólido se lavó con agua (2 x 11), éter de gasolina (500 mi), y éter de dietilo (500 mi). Esto produjo un residuo, que se secó bajo presión reducida para proporcionar 267 g de carbamato de bencilo de zilpaterol trans racémico como un sólido blanco. El licor madre reservado se concentró bajo vacío, y el residuo resultante se trituró en una solución acuosa a un pH de <_ 4 (HC1) para formar un precipitado, que, a su vez, se aclaró con agua y secó bajo presión reducida para producir 42 g adicionales del producto de carbamato de bencilo de zilpaterol trans racémico. Parte C. Separación de los enantiómeros de carbamato de benciio de zilpaterol trans racémico. El producto de la etapa B (como los lotes de 20-26 g) se disolvió en 1 L de metanol a 50°C y filtrado. La solución resultante se inyectó después en una columna CLAR LC200 DAC (Novasep) bajo las siguientes condiciones, el primer compuesto de elución fue marcado como "Isómero A" y el segundo compuesto de elución fue marcado como "Isómero B": CLAR se utilizó para analizar los productos de carbamato del isómero A y del isómero B bajo las siguientes condiciones: Los enantioselectivos ("ee") para los dos productos carbamato fueron determinados para ser como sigue: Parte D. Formación de la base libre del isómero zilpaterol trans positivo. El producto de carbamato de la etapa C (47 g, 119 mmol), 1,4-dioxano (750 mi), ácido acético (450 mi), agua (300 mi), y paladio en carbono (10%, 9.4 g) se cargaron en una bomba del reactor de 2 L ajustados con agitación magnética. Después de una purga con N2, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas bajo una atmósfera de 4 barras de H2 (ajustada en el consumo de H2). La mezcla resultante se filtró a través de celite, y el sólido resultante se lavó con 1,4-dioxano. Los volátiles se retiraron usando presión reducida. Un segundo lote (escala de 46 g) se sintetizó después usando el mismo procedimiento. Las mezclas del producto crudo se combinaron, y tomaron después en una cantidad mínima de agua. La solución resultante se basificó con 30% de una solución acuosa de NH4OH para impartir un pH de 9-10. Después esta solución acuosa fué sucesivamente extraída con 500 mi de porciones de acetato de etilo. Las capas orgánicas fueron combinadas, y secadas después en sulfato de magnesio. Después de la filtración y concentración bajo presión reducida, 53 g de la base libre del isómero zilpaterol trans positivo fueron obtenidos como un sólido amarillo pálido. Parte E. Formación del isómero del clorhidrato de zilpaterol trans positivo. Producto de la etapa D (53 g) y etanol (600 mi) fueron cargados bajo una atmósfera inerte de N2 en 2 L en un matraz de tres cuellos redondo equipado de un agitador, condensador, y un termómetro magnéticos. La mezcla se agitó a 70°C mientras que 20.8 mi (1.25eq) de HCI (12N) acuoso concentrado fueron agregados gota a gota. La mezcla resultante se agitó a 70°C durante 15 minutos adicionales, y después se dejó a temperatura ambiente. La mezcla se enfrió después con un baño de hielo, resultando en la formación de un precipitado. El precipitado se filtró, lavó con éter de dietilo, y secó bajo presión reducida para proporcionar 57 g (81% en dos etapas) del isómero clorhidrato de zilpaterol trans positivo como un sólido blanco ([a ]D + 33 c 1.01 en agua, T = 20°C). Parte F. Formación de la base libre del isómero zilpaterol trans negativo. El producto del carbamato de isómero B de la etapa C (45 g, 114 mmol), 1,4-dioxano (750 mi), ácido acético (450 mi), agua (300 mi), y paladio en carbono (10%, 9.0 g) fueron cargados en una bomba del reactor de 2 L ajustados con agitación magnética. Después de una purga inicial con N2, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas bajo una atmósfera de 5 barras de H2. La mezcla resultante se filtró a través de celite (lavada con 1,4-dioxano), y concentró bajo presión reducida a un volumen de 200 mi. Un segundo lote (escala de 45 g) fue sintetizado usando el mismo procedimiento. Las mezclas del producto crudo fueron combinadas, y después basificadas con NaOH y extraídas con acetato de etilo (3 x 500). Las capas orgánicas, a su vez, se combinaron y secaron en sulfato de magnesio. Después de la filtración y concentración bajo presión reducida, 59 g de la base libre del isómero de zilpaterol trans negativo se obtuvieron como un sólido amarillo pálido. Parte G. Formación del isómero de clorhidrato de zilpaterol trans negativo. Producto de la etapa F (59 g) y etanol (600 mi) se cargaron en un matraz de tres cuellos redondo de un 1 L equipado con un agitador magnético. La mezcla resultante se agitó a 70°C mientras que 24 mi (1.25 eq) de HCI acuoso concentrado (12N) se agregaron gota a gota. La mezcla se agitó a 70°C durante 15 minutos adicionales, y después se dejo llegar a temperatura ambiente. Posteriormente, la mezcla se enfrió con un baño de hielo para formar un precipitado. El precipitado se filtró, lavó con éter de dietilo, y secó bajo presión reducida para proporcionar 55.4 g (82% en dos etapas) del isómero de clorhidrato de zilpaterol trans negativo como un sólido blanco ([a]D -33 c 1.03 en agua, T = 20°C). Parte H. Determinación de los enantioselectivos de los productos del enantiómero de clorhidrato de zilpaterol trans positivo y negativo de las Partes E y G. CLAR fue utilizada para analizar los productos del enantiómero del clorhidrato de zilpaterol trans positivos y negativos de las Partes E y G bajo las siguientes condiciones: Los enantioselectivos de los dos productos fueron determinados para ser como sigue: Producto ee (%) Producto del enantiómero hidrocloruro de zIlpaterol 100 trans positivo Parte E Producto del enantiómero hidrocloruro de zilpaterol 100 trans netavito Pate G Ejemplo 3. Determinación de la configuración absoluta de (-)¦¦ zilpaterol por cristalografía de rayos X usando un solo crista! de un derivado bromofenacilo. Parte A. Síntesis de trans(-)4,5,6,7-tetrahidro-7-hidroxi-6-[(1 -metil-etil)amino]-1 -(4-bromofenacil)-imidazo[4,5,1 -jk][1]benzazepin-2(1H)-ona (C).

A una solución de 0.75 g de la base libre de (-)-zilpaterol en 15 mL de N.N-dimetilformamida seca (DMF) se agregó 172 de hidruro de sodio sólido (60 % de dispersión en aceite mineral). Diez minutos más tarde, 956 mg de 2,4'-dibromoacetofenona (B) se agregó. La mezcla de reacción resultante se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente. El agua después se agregó. La solución resultante se extrajo dos veces con éter de dietilo, y las capas orgánicas combinadas se lavaron tres veces con la solución de bicarbonato de sodio (5%). Después de secar en sulfato de magnesio, la fase orgánica se evaporó para secarse, y el residuo se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice (diclorometano/metanol 9:1 v/v). El derivado de bromofenacilo (C) se obtuvo como un sólido amarillo brillante (0.66 g, 50%): m.p. 169-170°C (dec, de etanol); [a]D = -27° (c 0.446, etanol, T = 20°C); Vmax/cm"1 (limpio) 3331, 2962, 2925, 1692, 1586, 1425, 1223, 1072, 984, 831, 748, 738, 700; d? (300 MHz, DMSO-d6) 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.03 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.70-1.83 (m, 1H), 2.20-2.36 (m, 1H), 2.91 (SP,J=6.2 Hz, 1H), 3.08-3.16 (m, 1H), 3.83-3.99 (m, 2H), 4.59 (d,J=6.4 Hz, 1H), 5.48 (b, 2H), 6.98 (dd, J = 7.7 Hz, J=7.7 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 7.7 Hz, J = 1.3 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 7.5 Hz, J = 1.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 8.04 (d,J = 8.6 Hz, 2H); d0 (75 MHz DMSO-d6) 22.5, 23.8, 28.4, 39.6, 44.9, 47.4, 58.3, 73.8, 107.1, 120.4, 122.5, 124.4, 126.4, 128.2, 129.6, 130.2 (2) 133.4, 153.8, 192.7; m/z (APCI) 460.1 (M + H+). Parte B. Ensayo de rayos X de trans(-)4,5,6,7-tetrahidro-7-hidroxi-6-[(1 -metil-etil)amino]-1 -(4-bromofenacilo)-imidazo [4,5,1-jk] [1]benzazep¡n-2(1 H)-ona (C). Un solo cristal del derivado trans(-)-zilpaterol (C) se obtuvo de una solución etanólica, y el ensayo de rayos X reveló la configuración absoluta de la fracción de alcohol amino para ser 6R,7R. De esta forma, siguiendo al isómero trans(-) zilpaterol (A) también se tiene la configuración 6R, 7R. Ejemplo 4. Evaluación de la actividad agonista del receptor adrenérgico ß2 de la mezcla de monohidrocloruro zilpaterol trans racémico y de los enantiomeros individuales usando un ensayo de enlace in vitro. En este experimento, un ensayo de enlace radioligando in vitro fue utilizado para determinar las afinidades del zilpaterol trans racémico y sus enantiomeros individuales con respecto al receptor adrenérgico ß2 recombinante humano en células transfectadas Sf-9. A. Procedimiento Experimental. Los ensayos de enlace farmacológicos in vitro para el receptor adrenérgico ß2 humano en células transfectadas Sf9 se describen generalmente en, por ejemplo, Smith y colaboradores, Beta-blocker selectivity at cloned human betal- and beta2-adrenergic receptors," Cardiovasc. Drugs Ther., 13, 123 (1999). Los homogenatos de la membrana de la célula (proteína 15-20 pg) fueron incubados durante 60 minutos a 22°C con 0.15 nM [ 3HJCGP 12177 (este compuesto es un estándar para este ensayo de enlace ß2, y está comercialmente disponible de varias fuentes, incluyendo PerkinElmer y Amersham Int'l) en ausencia o presencia del compuesto de prueba en un amortiguador que contiene 50 mM Tris-HCI (pH 7.4), 10 mM MgCI2, y 2 mM EDTA. El antagonista de referencia estándar fue ICI 118551 (comercialmente disponible de varias fuentes, incluyendo Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, y BIOMOL Int'l LP), que fue probado en cada experimento en varias concentraciones para obtener una curva de competición de la cual se calculó su Cl50.

El enlace no específico fue determinado en presencia de 50 µ?t? de alprenolol. Después de la incubación, las muestras fueron filtradas rápidamente bajo vacío a través de los filtros de fibra de vidrio (GF/B, Packard) pre-mojados con 0.3% PEI, y aclarados varias veces con 50 mm de Tris-HCI helado usando un cosechador de 96 células muestra (Unifilter, Packard). Los filtros se secaron, y contaron por radiactividad en un contador de centelleo (Topcount, Packard) usando un coctel de centelleo (Microscint 0, Packard). Los resultados se expresan como porcentaje de inhibición del enlace específico radioligando de control.

El enlace del ligando específico a los receptores es la diferencia entre el enlace total y el enlace no específico determinados en presencia de un exceso del ligando no etiquetado. Los resultados se expresan como un porcentaje del enlace específico de control y como un porcentaje de inhibición del enlace específico de control obtenido en presencia de los compuestos de la prueba. Los valores Cl50 (concentración que causa una inhibición mitad-máxima del enlace específico de control) y coeficientes Hill (nH) se determinaron por el ensayo de regresión no lineal de las curvas de competición usando el ajuste de la curva de la ecuación Hill. Las constantes de inhibición (K¡) se calcularon de la ecuación Cheng Prusoff: K, = Cl50/(1 + (L/KD) Aquí, L es la concentración del radioligando en el ensayo, y KD es la afinidad del radioligando para el receptor.

B. Resultados.

Las tablas 1 y 2 resumen los efectos del enlace del enantiómero zilpaterol 6S.7S, enantiómero zilpaterol 6R.7R, y zilpaterol trans racémico observados con respecto al receptor adrenérgico ß2 humano. El ensayo de enlace fue repetido para confirmar la confiabilidad de los datos. La tabla 1 resume los resultados del primer ensayo, y la tabla 2 resume los resultados del ensayo de repetición. Cada función dentro de cada ensayo fue conducida en duplicado. Las tablas 1 y 2 proporcionan los datos de enlace de cada una de las funciones, así como los valores promedio de estos datos.

Tabla 1 Resultados del Primer Ensayo de Enlace In Vitro Tabla 2 Resultados de la Repetición del Ensayo de Enlace In Vitro Compuesto Prueba de % de % de enlace específico de Concentración Inhibición control (M) del Función Función Promedio enlace de 1 2 control específico Enantiómero 1.OE-05 6 97.2 91.3 94.2 6S.7S Enatiómero 1.OE-05 83 18.3 15.3 16.8 6R.7R trans 1.OE-05 80 21.3 18.6 20.0 racémico El valor Cl50 y K¡ para el antagonista de referencia, ICI 118551, a partir de tres experimentos independientes se proporciona en la tabla 3. Estos datos están dentro de las unidades de registro ± 0.5. Los solicitantes creen que esto corrobora la contabilidad de los resultados del ensayo.

Tabla 3 Valores Cl50 y K¡ Observados para el Antagonista ICI 118551, de la referencia La tabla 4 proporciona los datos de enlace observados del enantiómero zilpaterol 6R,7R y del zilpaterol trans racémico. Como puede verse, cada función se condujo en duplicado. La tabla 4 proporciona los datos individuales de cada función, así como los valores promedios de los datos.

Tabla 4 Datos del Enlace Individual del Enantiómero Zilpaterol 6R.7R y del Zilpaterol trans Racémico Usados para Determinar los Valores Cl50 y K¡ en la tabla 5 Compuesto Prueba de % de enlace específico de Concentración control (M) Función Función Promedio 1 2 Enantiómero 1.OE-09 122.2 140.2 131.2 6S.7R Enatiómero 1.OE-08 132.6 126.9 129.7 6R.7R Enantiómero 3.0E-08 91.1 114.6 102.8 6R.7R Enantiómero 1.OE-07 105.3 106.0 105.7 6R.7R Enantiómero 3.0E-07 89.5 90.4 89.9 6R.7R Enantiómero 1.OE-06 46.6 51.8 49.2 6R.7R Enantiómero 3.0E-06 17.6 24.0 20.8 6R, 7R Enantiómero 3.0E-05 9.8 5.8 7.8 6R, 7R Trans racémico 1.OE-09 137.5 136.1 136.8 Trans racémico 1-0E-08 132.4 132.4 132.4 Compuesto Prueba de % de enlace específico de control Concentración (M) Función 1 Función 2 Promedio Trans racémico 3.0E-08 141.7 141.7 141.7 Trans racémico 1.OE-07 116.8 131.4 124.1 Trans racémico 3.0E-07 104.4 102.0 103.2 Trans racémico 1.OE-06 70.0 74.5 72.3 Trans racémico 3.0E-06 38.5 48.6 43.6 Trans racémico 3.0E-05 10.5 6.3 8.4 La tabla 5 muestra el valor CI5o y K¡ para el enantiómero zilpaterol 6R,7R y zilpaterol trans racémico calculado de los datos en la tabla 4. La determinación Cl50 para el enantiómero zilpaterol 6S,7S no se realizó debido a su débil enlace en 10 µ??. Tabla 5 Valores Observados de Cl50 Y K¡ para el Enantiómero Zilpaterol 6R,7R Y Zilpaterol Trans Racémico C. Conclusión. Los solicitantes han conducido los ensayos de enlace para determinar las actividades del agonista receptor adrenérgico ß2 del monohidrocloruro de zilpaterol trans racémico, así como los isómeros zilpaterol trans separados. Los resultados indican que la actividad del agonista ß2 adrenérgico del monohidrocloruro de zilpaterol trans racémico esencialmente provienen del enantiómero 6R,7R solo, y que el enantiómero 6S.7S, tiene actividad del receptor ß2 adrenérgico relativamente sin valor (Cl50 > 10 ym). Según lo mostrado en la tabla 4, el IC50 observado para la mezcla racémica y el enantiómero 6R.7R solo con respecto al receptor adrenérgico ß2 recombinante humano fueron 1.1 µ?? y 0.62 µ??, respectivamente. Los solicitantes creen que la diferencia de ~2-veces entre estos valores proviene del hecho de que la concentración del enantiómero 6R,7R en el zilpaterol trans racémico es aproximadamente de 50%. Ejemplo 5. Evaluación de la actividad del agonista receptor adrenérgico ß2 de la mezcla del monohidrocloruro de zilpaterol trans racémico y del uso de enantiómeros individuales. En este experimento, las actividades dei agonista receptor adrenérgico ß2 fueron funcionalmente determinadas usando un bioensayo cuantitativo de traquea de cerdo de guinea ex vivo. A. Procedimiento Experimental. Los ensayos farmacológicos funcionales ex-vivo para el receptor adrenérgico ß2 se describen generalmente en, por ejemplo, O'Donell, y colaboradores, "The importance of choice of agonists in studies designed to predict ß 1 : ß 2 adrenoceptor selectivity of antagonists from pA2 valúes on guinea-pig trachea and atria," Naunyn-Scmiedeberg's Arch. Pharmacol, 308, 183 (1979). Los anillos de la tráquea de cerdo de guinea se suspendieron en baños de órgano de 20-ml que contienen la solución de sal fisiológica pre-calentada (37°C) y oxigenada (95% 02 y 5% C02) que tienen un pH de 7.4 y la siguiente composición: NaCI 118.0 mm, KCI 4.7 mm, MgS04 1.2 mm, CaCI2 2.5 mm, KH2P04 1.2 mm, NaHC03 25 mm, y glucosa 11.0 mm. Además, CGS 15943 (1 pm; esto está comercialmente disponible de varias fuentes, incluyendo Research Biochemicals Int'l y Sigma-Aldrich), benextramina (1 pm), pirilamina (1 pm), cimetidina (10 pm), metisergide (1 pm), e indometacina (3 pm) estuvieron presentes para bloquear la adenosina A2, a-adrenérgico, histamina Hl, histamina H2 y receptores 5-HT2, y prevenir la liberación de prostanoide. Los tejidos se expusieron a una sola concentración efectiva del agonista de referencia respectivo para verificar sensibilidad y obtener una respuesta de control. Después de los lavados y recuperación extensa al estado inicial, los tejidos se expusieron a varias concentraciones solas o acumulativas de los compuestos de prueba o del mismo agonista. Cada concentración se dejó en contacto con los tejidos hasta que una respuesta estable se obtuvo. Cuando la respuesta tipo agonista se obtuvo, el antagonista respectivo de referencia se probó contra los compuestos de prueba para confirmar la implicación del receptor estudiado en esta respuesta. Los experimentos fueron realizados usando sistemas de órgano aislados semiautomatizados que poseen ocho baños de órgano, con datos de adquisición multicanal. El volumen y formiato del ensayo fueron baños de órgano de 20 mi. Cada compuesto de prueba se agregó como una solución concentrada de cien veces en H20 ó 1000-veces la solución concentrada en DMSO. La máxima concentración tolerable de DMSO fue de 0.1%. Para probar la actividad del agonista, los tejidos se contrajeron con carbacol (0.1 µ?t?), y después se expusieron a una concentración submáxima del agonista de referencia salbutamol (0.3 µ??) para verificar sensibilidad y obtener una relajación de control. Después de los lavados, los tejidos se contrajeron nuevamente con carbacol, y después se expusieron a las concentraciones de aumento del compuesto de prueba o del mismo agonista. Las diferentes concentraciones fueron agregadas acumulativamente, y cada una se dejó en contacto con los tejidos hasta que una respuesta estable se obtuvo o durante un máximo de 20 minutos. Si la respuesta tipo agonista (relajación) se obtuvo, el antagonista de referencia, ICI 118551 (0.3 pm), se probó contra la concentración más alta del compuesto para confirmar la implicación de los receptores ß2 en la respuesta. Para probar la actividad del antagonista, los tejidos se contrajeron con carbacol (0.1 µ??), y después se expusieron a una concentración submáxima del agonista de referencia salbutamol (0.3 pm) para obtener una relajación de control. Después de la estabilización de relajación inducida por salbutamol, que aumenta las concentraciones del compuesto de prueba o del antagonista de referencia, ICI 118551, se agregaron acumulativamente. Cada concentración se dejó en contacto con los tejidos hasta que una respuesta estable se obtuvo o durante un máximo de 20 minutos. Si esto ocurrió, una recuperación de la contracción por el compuesto de prueba indicó una actividad antagonista en los receptores ß2. El parámetro medido fue el cambio máximo en la tensión inducida por cada concentración compuesta. Los resultados fueron en forma de variación de porcentaje de la respuesta de control al agonista de referencia (valores promedio). La eficacia del agonista y la potencia de los compuestos de prueba fueron evaluados respectivamente en términos de valores Emax (respuesta máxima) y de valores CE50 (concentración produciendo una respuesta mitad-máximo). Éstos se determinaron de las curvas de concentración de respuesta. B. Resultados. La tabla 6 muestra los efectos observados del enantiómero zilpaterol 6S,7S, enantiómero zilpaterol 6R.7R, y zilpaterol trans racémico con respecto a la actividad del agonista en el receptor adrenérgico ß2 en bioensayos de órgano aislados en una concentración de 10 pm. La tabla 6 también muestra los efectos observados del agonista de referencia, salbutamol, en las concentraciones de 0.003, 0.03, y 0.3 µ?t?. Tabla 6 Actividad del Agonista en los Receptores Adrenérgicos ß2 en la Tráquea del Cerdo de Guinea La tabla 7 muestra los efectos observados del enantiomero zilpaterol 6S,7S, enantiomero zilpaterol 6R,7R, y zilpaterol trans racémico con respecto a la actividad agonista del receptor adrenérgico ß2 en bioensayos de órgano aislados en varias concentraciones. La tabla 7 también muestra los efectos observados del agonista de referencia, salbutamol, en las concentraciones de 0.003, 0.03, y 0.3 µ?t?, Tabla 7 Actividades del Agonista con Concentraciones de Aumento en los Receptores Adrenérgicos ß2 en la Tráquea del Cerdo de Guinea Compuesto Concentración Porcentaje de la Respuesta de Control (M) en Salbutamol en 3.0E-07M Función 1 Función 2 Promedio Enantiómero 1.0E-07 0 0 0 6S.7S 3.0E-07 4 5 5 1.OE-06 10 11 11 3.0E-06 26 23 25 1.OE-05 58 54 56 3.0E-05 92 94 93 1.0E-04 103 105 104 3.0E-04 104 105 105 +ICI 118551 1.OE-06 17 18 18 Enantiómero .0E-10 0 0 0 6R.7R 3.0E-10 0 0 0 1.0E-09 6 5 6 3.0E-09 16 18 17 1.OE-08 46 47 3.0E-08 89 88 89 Compuesto Concentración Porcentaje de la Respuesta de Control en <M) Salbutamol en 3.0E-07M Función 1 Función 2 Promedio Enantiómero 1.OE-07 103 100 102 6R.7R 3.0E-07 103 100 102 + ICI118551 1.OE-06 5 7 6 Trans 1.OE-10 0 0 0 racémico 3.0E-09 1 1 1 1.OE-09 5 7 6 3.0E-09 12 16 14 1.OE-08 30 37 34 3.0E-08 69 76 73 1.0E-07 95 100 98 3. OE-07 100 100 100 + ICI 118551 1.OE-06 15 16 16 Salbutamol 3. OE-09 11 3. OE-08 53 3. OE-07 104 + ICI 118551 3. OE-07 5 La tabla 8 muestra los valores de Emax y CE50 determinados el enantiómero zilpaterol 6S,7S, enantiómero zilpaterol 6R, y zilpaterol trans racémico.

Tabla 8 Valores Emax y CE50 en los receptores adrenérgicos ß2 en bioensayos de órganos aislados Compuestos Emax (%) CE50(M) Enantiómero 6S.7S 105 6.9E-06 Enantiómero 6R.7R 102 8.7E-09 Trans Racémico 100 1.3E-08 C. Conclusión. La potencia del enantiómero 6R.7R con respecto a la actividad agonística ß2 fue aproximadamente de tres órdenes de mayor magnitud que la del enantiómero 6S.7S. Específicamente, en los ensayos farmacológicos funcionales (tráquea de cerdo de Guinea ex-vivo), el CE50 del enantiómero 6R,7R fue 8.7 nm. El CE50 del zilpaterol trans racémico fue de 13 nm. Y el CE50 del enantiómero 6S.7S fue 6.9 pm. Ejemplo 6. Evaluación del enlace del receptor µ-opoide del enantiómero 6S,7S, enantiómero zilpaterol 6R,7R, y zilpaterol trans racémico. El propósito de este estudio fue investigar la afinidad del enantiómero zilpaterol-HCI 6S.7S, enantiómero zilpaterol-HCI 6R, 7R, y del zilpaterol-HCI trans racémico hacia el sitio del agonista µ-receptor (MOP) humano en células HEK-293 transfectadas. Esta investigación fue conducida usando un ensayo de enlace radioligando. A. Procedimiento Experimental. Ensayos de enlace farmacológico in vitro para el sitio del agonista µ-receptor se describen generalmente en, por ejemplo, Wang, y colaboradores, "Human µ-opiate receptor; cDNA and genomic clones, pharmacological characterization and chromosomal assignment," FEBS Lett, 338, 217 '-222 (1994). Los homogenatos de la membrana de la célula (75 g de proteína ) se incubaron durante 120 minutos a 22°C con 0.5 nm [3H]DAMGO (este compuesto es un estándar para este ensayo de enlace del receptor µ-opioide, y está comercialmente disponible de Amersham Int'l) en ausencia o presencia del compuesto de prueba en un amortiguador que contiene 50 mM Tris-HCI (pH 7.4) y 5 mm MgCI2. El compuesto estándar de referencia fue DAMGO, que fue probado en cada experimento en varias concentraciones para obtener una curva de competición de la cual se calculó su Cl50. El enlace no específico se determinó en presencia de 10 µ?? naloxona. El volumen y formiato del ensayo fue 250 µ? en la placa de 96 pozos. El compuesto de prueba se agregó como una solución concentrada diez veces, y la concentración DMSO máxima tolerable fue de 1%. Después de la incubación, las muestras se filtraron rápidamente bajo vacío a través de los filtros de fibra de vidrio (GF/B, Packard), pre-mojados con 0.3% PEI, y aclarados varias veces con 50 mm Tris-HCI helado usando un cosechador de 96 células muestra (Unifilter, Packard). Los filtros se secaron, y contaron para la radiactividad en un contador de centelleo (Topcount, Packard) usando un coctel de centelleo (Microscint 0, Packard). Los resultados se expresaron como porcentaje de inhibición del enlace específico radioligando de control. El ligando específico que enlaza a los receptores es la diferencia entre el enlace total y el enlace no específico determinados en presencia de un ligando no etiquetado. Los resultados se expresan como un porcentaje del enlace específico de control y como un porcentaje de inhibición del enlace específico de control obtenido en presencia de los compuestos de prueba. Los valores Cl50 (concentración que causa una inhibición mitad-máxima del enlace específico de control) y los coeficientes Hill (nH) se determinaron por el ensayo de regresión no lineal de las curvas de competición usando el ajuste de curva de la ecuación Hill. Las constantes de inhibición (K¡) se calcularon de la ecuación Cheng Prusoff: K¡ = CI50/(I + (L/KD). Aquí, L es la concentración del radioligando en el ensayo, y KD es la afinidad del radioligando para el receptor.

B. Resultados. Las tablas 9 y 10 resumen los efectos de los enlaces del enantiómero zilpaterol 6S,7s, enantiómero zilpaterol 6R, 7R, y zilpaterol trans racémico observado con respecto al receptor µ-opoide humano. El ensayo de enlace fue repetido para confirmar la confiabilidad de los datos. La tabla 9 resume los resultados del primer ensayo, y la tabla 10 resume los resultados del ensayo de repetición. Cada función dentro de cada ensayo fue conducida en duplicado. Las tablas 9 y 10 proporcionan los datos de enlaces de cada uno de los funcionamientos, así como los valores promedios de los datos.

Tabla 9 Resultados del Primer Ensayo de Enlace del Receptor µ- Opioide Humano Tabla 10 Resultados de la Repetición del Ensayo de Enlace del Receptor µ-Opioide Humano Compuesto Prueba de % de % de enlace específico de Concentración Inhibición control (M) del Función Función Promedio enlace 1 2 específico de control Enantiómero 1.OE-03 100 0.1 0.4 0.2 6S.7S Enatiómero 1.OE-03 82 17.8 18.0 17.9 6R.7R trans 1.OE-03 98 1.6 2.9 2.2 racémico El valor Cl50 y K¡ para el compuesto de referencia, DAMGO, a partir de tres experimentos independientes se proporciona en la tabla 11. Estos datos están dentro de las unidades de registro ± 0.5. Los solicitantes creen que esto corrobora la confiabilidad de los resultados del ensayo. Tabla 11 Valores observados Cl50 y K¡ para el compuesto de referencia, DAMGO «C50 (M) K¡ (M) nH 8.4E-10 3.4E-10 1.0 6.6E-10 2.7E-10 0.9 7.1E-10 2.9E-10 0.9 La tabla 12 proporciona los datos de enlaces observados del enantiómero zilpaterol 6S,7S, enantiómero zilpaterol 6R, 7R, y zilpaterol trans racémico. Como puede verse, cada función se condujo en duplicado. La tabla 12 proporciona los datos individuales de cada función, así como los valores promedios de los datos. Tabla 12 Datos de Enlaces del Enantiómero Zilpaterol 6S,7S, Enantiómero Zilpaterol 6R,7R, y Zilpaterol Trans Racémico Usados para Determinar los Valores Cl50 y K¡ en la Tabla 13 Compuesto Prueba de % de enlace específico de control Concentración (M) Función 1 Función 2 Promedio Enantiómero 3.0E-08 93.9. 97.7 95.8 6S.7S Enatiómero 3.0E-07 97.5 93.2 95.3 6S.7S Enantiómero 1.OE-06 90.9 84.6 87.7 6S.7S Enantiómero 3.0E-06 81.0 77.2 79.1 6S.7S Enantiómero 1.OE-05 61.1 59.2 60.2 6S.7S Compuesto Prueba de % de enlace específico de control Concentración (M) Función 1 Función 2 Promedio Enantiomero 3.0E-05 34.9 37.2 36.1 6S.7S Enatiómero 1.OE-04 15.9 16.9 16.4 6S.7S Enantiomero 1.OE-03 1.4 0.9 1.2 6S,7S Enantiomero 3.0E-07 94.8 92.4 93.6 6R.7R Enantiomero 1.OE-06 91.1 87.5 89.3 6R.7R Enantiomero 3.0E-06 92.1 88.7 90.4 6R.7R Enantiomero 1.OE-05 80.4 82.1 81.3 6R.7R Enantiomero 3.0E-05 73.9 87.5 80.7 6R.7R Enantiomero 1.04-04 71.3 70.8 71.1 6R.7R Compuesto Prueba de % de enlace específico de control Concentración (M) Función 1 Función 2 Promedio Enantiómero 3.0E-04 46.6 40.4 43.5 6R,7R Enantiómero 1.OE-03 23.0 25.2 24.1 6R.7R Trans Racémico 3.0E-08 105.8 90.9 98.3 Trans Racémico 3.0E-07 92.1 90.4 91.2 Trans Racémico 1 -0E-06 84.9 95.1 90.0 Trans Racémico 3.0E-06 76.2 87.4 81.8 Trans Racémico 1.OE-05 76.7 70.8 73.7 Trans Racémico 3.0E-05 49.3 45.6 47.5 Trans Racémico 1.OE-04 24.5 22.9 23.7 Trans Racémico 1.OE-03 2.4 3.3 2.9 La tabla 13 muestra el valor CI5o y K¡ para el enantiómero zilpaterol 6S.7S, enantiómero zilpaterol 6R.7R, y zilpaterol trans racémico calculado de los datos en la tabla 12. Tabla 13 Valores Observados de Clso y K¡ para el Enantiómero Zilpaterol 6S,7S, Enantiómero Zilpaterol 6R,7R, y el Zilpaterol Trans Racémico Compuesto Cl50 ( ) K¡ (M) nH Enantiomero 1.7E-05 7.0E-06 0.9 6S,7S Enantiomero 3.2E-04 1.3E-04 0.9 6R,7R Trans 3.1E-05 1.3E-05 0.9 Racémico C. Conclusión. El enantiomero zilpaterol 6R.7R enlaza de forma débil al receptor µ-opioide, mientras que el enantiomero 6S,7S y el Zilpaterol trans racémico exhibieron mayor enlace. Más específicamente, hay una diferencia de diez veces entre los valores K-i del enantiomero zilpaterol 6R,7R contra el zilpaterol trans racémico (es decir, 130 pm contra 13 pm), y mayor que una diferencia de 18 veces en los valores K¡ entre el enantiomero zilpaterol 6R,7R y el enantiomero zilpaterol 6S,7S (es decir, 130 µ?t? contra 7 µ?t?). Además, hay más de una diferencia de diez veces entre el Cl50 del enantiomero zilpaterol 6R,7R y el zilpaterol trans racémico (es decir, 320 pm contra 31 pm), y más que una diferencia de 18 veces entre el IC50 del enantiomero zilpaterol 6R,7R y el enantiomero zilpaterol 6S,7S (es decir, 320 pm contra 17 pm). Según lo mostrado en los ejemplos 4 y 5, el enantiomero zilpaterol 6R,7R parece contar esencialmente para toda la actividad del agonista ß2 del zilpaterol trans racémico. Y, según lo mostrado en este ejemplo 6, el enantiomero zilpaterol 6R,7R proporciona esta actividad mientras que también tiene una afinidad reducida al enlace del receptor µ-opioide. Se sugiere en la técnica que menos de la afinidad del receptor µ-opioide puede coincidir generalmente con varios efectos ventajosos. Por consiguiente, se contempla que el enantiomero 6R,7R puede proporcionar uno o más de tales efectos ventajosos en el zilpaterol trans racémico. Los beneficios contemplados incluyen, por ejemplo, la mayor ingesta de alimento, que, a su vez, resulta en un mayor aumento de peso corporal y/o mayor índice de crecimiento. Otros beneficios contemplados incluyen, por ejemplo, mayor motilidad gastrointestinal, mayor ventilación del pulmón, mayor vigilancia, mayor vigilia, y/o termorregulación imperturbable. Los bioensayos de órgano aislados ex-vivo funcionales también se condujeron para evaluar la respuesta del agonista del receptor µ-opioide del enantiomero zilpaterol 6R,7R, enantiomero zilpaterol 6S,7S, y zilpaterol trans racémico. Ensayos farmacológicos ex-vivo funcionales en el receptor µ-opioide se describen generalmente en, por ejemplo, Hutchinson, y colaboradores "Assessment in the guinea-pig ileum and mouse vas deferens of benzomorphans which have strong antinociceptive activity but not substitute for morphine in the dependent monkey." Brit. J. Pharmacol, 55, 541-546 (1975). Los resultados de los ensayos funcionales no correlacionaron con los datos del enlace del receptor µ-opioide descritos arriba. En contraste, los resultados mostraron que el enantiómero zilpaterol 6R.7R tienen una mayor respuesta contra el agonista µ-opioide que a ambos el enantiómero zilpaterol 6S,7S y zilpaterol trans racémico. Los solicitantes creen que los resultados de los ensayos funcionales pueden ser fallidos debido a los problemas asociados con los ensayos. Específicamente, los solicitantes creen que la respuesta µ-opioide en los ensayos funcionales pueden haberse desplazado debido, por ejemplo, a los efectos beta-agonísticos de los compuestos en los órganos aislados (es decir, íleo del cerdo de Guinea). Esta creencia se soporta por el hecho de que la respuesta observada del agonista en los ensayos funcionales fue invertida pobremente por el antagonista receptor µ-opioide, haloxona. La pobre regresión observada de la respuesta del agonista sugiere que por lo menos parte de la respuesta observada del agonista fue debido a otros objetivos (por ejemplo, receptores ß2) en los órganos aislados más que en el receptor µ-opioide. Ejemplo 7. Ilustración de una forma de dosificación conveniente contemplada. Una tableta se prepara conteniendo 2.5 ó 5 mg de enantiómero zilpaterol 6R,7R, y suficiente excipiente de lactosa, almidón de trigo, almidón tratado, almidón de arroz, talco, y estearato de magnesio para un peso final del 100 mg. Ejemplo 8. Ilustración adicional de una forma de dosificación conveniente contemplada. Los gránulos se preparan conteniendo 12.5 ó 25 del enantiómero zilpaterol 6R,7R en cada dosis diaria de gránulos. Ejemplo 9. Ilustración adicional de una forma de dosificación conveniente contemplada. Se cristaliza el enantiómero zilpaterol 6,7R usando la metodología discutida en la Patente Norteamericana 5,731,028 para hacer zilpaterol trans racémico cristalino. Menos de 5% de los cristales tienen un tamaño menor de 15 pm, y por lo menos 95% de los cristales tienen un tamaño menor de 250 µ?t?. Una premezcla del enantiómero 6R,7R cristalino asegurado a un soporte de la mazorca de maíz de 300-800 pm se obtuvo después usando la metodología discutida en la Patente Europea 0197188 (inventor: Grabitz; presentado el 7 de octubre de 1985; concesión publicada el 31 de mayo de 1989; incorporado por referencia en esta patente). La concentración del enantiómero 6R,7R en la premezcla es 3% (en peso). Ejemplo 10. Ilustración de la evaluación de la eficiencia del enantiómero zilpaterol 6R,7R. La eficiencia del enantiómero zilpaterol 6R.7R en bovinos puede evaluarse (solo o en conjunto con la otra terapéutica) usando varios protocolos. Este ejemplo ilustra uno de tales protocolos. Aquí, los animales bovinos se dividen en cuatro grupos: Grupo 1. 10 animales bovinos. Cada animal bovino en el grupo 1 es un control, y no recibe ningún compuesto de zilpaterol en el alimento. Grupo 2. 10 animales bovinos. Cada animal bovino en el grupo 2 recibe 0.2 mg/kg del enantiómero 6R.7R por día en el alimento. Grupo 3. 10 animales bovinos. Cada animal bovino en el grupo 3 recibe 0.2 mg/kg del enantiómero 6R,7R por día en el alimento, y tiene un implante que contiene 20 mg de acetato de trenbolona y 36 mg de zeranol. Grupo 4. 10 animales bovinos. Cada bovino en el grupo 4 no recibe ningún compuesto de zilpaterol en la alimento, sino tiene un implante que contiene 20 mg de acetato de trenbolona y 36 mg de zeranol. Antes de conducir este estudio, todos los animales bovinos se alimentaron del mismo alimento por 90 días. Los implantes en los grupos 3 y 4 se colocaron en el tejido subcutáneo en la parte posterior del oído. El estudio se condujo durante 28 días. El peso de cada animal bovino al principio y al final se midió, así como la cantidad de alimento consumido por cada animal bovino durante el estudio. De esto, el promedio diario de peso ganado, promedio total de peso ganado, y eficiencia del alimento para cada grupo se calculó y comparó. Este ejemplo es simplemente una ilustración que muestra cómo el enantiómero 6R,7R puede evaluarse. Aunque esta ilustración utiliza animales bovinos, un experto puede utilizar generalmente el protocolo con cualquier otra especie (por ejemplo, cerdos, corderos, etc.). Un experto también puede utilizar generalmente este protocolo para evaluar terapias de combinación con excepción del acetato de trenbolona y zeranol. Ejemplo 11. Ilustración de la evaluación de la delgadez en la masa muscular El efecto del enantiómero zilpaterol 6R,7R en la delgadez de la masa muscular puede evaluarse usando, por ejemplo, el protocolo ilustrativo siguiente. Los novillos y bueyes se alimentan de una dieta de terminación durante la fase del pretratamiento por lo menos 85 días antes de ser tratado con el 6R.7R. El alimento del enantiómero comienza 20 ó 40 días antes del sacrificio. Al ganado se le retira el enantiómero 6R.7R por 5 días antes del sacrificio. Al ganado se alimenta con una variedad de dietas que están en el intervalo en NEg de 62.3 a 70.9 cal/CWT de materia seca. El enantiómero 6R,7R se administra en la alimento en concentraciones dietéticas de 0.0 ó 6.8 g/ton (7.5 ppm) del alimento, en una base de 90% de materia seca. El ganado se maneja bajo condiciones que representan prácticas comerciales de engorda. Se evalúa la delgadez de la masa corporal usando el porcentaje de la proteína como la variable de la composición. El porcentaje de la proteína de la masa muscular es la medida del contenido proteínico en el tejido suave de la masa muscular que se comercializa en última instancia como carne de res comestible. Las masas corporales con niveles crecientes de proteína tienen un porcentaje más alto de producción de carne magra o de carne roja, y, así, carne roja más vendible. El efecto del enantiómero 6R,7R en el ensayo del porcentaje de proteína en la masa corporal se evalúa en una base del "peso mojado" (es decir, cálculos que no se corrigen por el contenido de materia seca). Además, los efectos del enantiómero 6R,7R en el porcentaje de proteína enla masa corporal se evalúan en una base de "peso igual" recolectando la masa muscular de control y tratada de los pesos de masa corporal caliente y grados de calidad similares. Los lados de las masas corporales de "peso igual" se disecan, y los pesos se obtienen para tejidos y huesos suaves (más tejido conectivo pesado o cualquier otro tejido no comestible tal como glándulas, aorta, etc.). El hueso y otros tejidos no comestibles se desechan después de pesarse. El tejido suave de cada masa corporal se muele, mezcla, congela en nitrógeno líquido, y se pulveriza. Las muestras se analizan para la humedad, proteína cruda, lípidos extractables de éter, y ceniza. La composición promedio de ios laterales de la masa corporal disecados (dos por pluma) representa la composición de la masa corporal de la pluma para el ensayo estadístico. El cambio en la delgadez de la masa corporal se mide en diferentes porcentajes de la proteína de la masa corporal, que se define como las veces del porcentaje de la proteína en el peso del tejido, dividido por el peso de masa corporal, 100 veces. Las palabras "comprende", "que comprende", y "comprenden" en esta patente (incluyendo reivindicaciones) se interpretan como inclusive más que exclusivamente. Esta interpretación se desea para ser la misma que la interpretación para las palabras proporcionadas bajo la ley de la patente de los Estados Unidos La descripción arriba detallada de las modalidades preferidas se desea para informar únicamente a otros expertos en la técnica de la invención, sus principios, y su aplicación práctica de modo que otros expertos en la técnica puedan adaptar y aplicar la invención en sus numerosas formas, siempre y cuando puedan ser más convenientes para los requisitos de un uso particular. Esta invención, por lo tanto, no se limita a las modalidades anteriores, y puede modificarse de formas variadas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Composición, en donde: la composición comprende una cantidad de un enantiómero 6R,7R que corresponde en estructura a la fórmula (IA) o una sal de la misma: la cantidad de enantiómero 6R.7R o sal del mismo en la composición es mayor que cualquier cantidad de cualquier otro enantiómero que se comprende por la fórmula (I) o sal de la misma:

2. Composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende una sal farmacéuticamente aceptable del enantiómero 6R.7R.

3. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en donde la composición comprende una composición de alimento.

4. Composición de conformidad con la reivindicación 3, en donde la composición comprende una composición de alimento para aves de corral.

5. Composición de conformidad con la reivindicación 3, en donde la composición comprende una composición de alimento para peces.

6. Composición de conformidad con la reivindicación 3, en donde la composición comprende una composición de alimento para ganado.

7. Composición de conformidad con la reivindicación 6, en donde la composición comprende una composición de alimento para un animal bovino.

8. Composición de conformidad con la reivindicación 6, en donde la composición comprende una composición de alimento para un animal para ganado porcino.

9. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, y 8, en donde la relación de la cantidad del enantiómero 6R, 7R o de sal del mismo a la cantidad total del resto de los enantiómeros de la fórmula (I) y de sales de los mismos en la composición es mayor que aproximadamente 70:30.

10. Composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, y 9, en donde la relación de la cantidad del enantiomero 6R.7R o de sal del mismo a la cantidad total del resto de los enantiomeros de la fórmula (I) y de las sales de los mismos en la composición es mayor de aproximadamente 95:5.

11. Composición que comprende una cantidad del enantiomero 6R, 7R que corresponde en estructura a la fórmula (IA) o una sal del mismo: en donde la composición exhibe perceptiblemente menos afinidad para el enlace in vitro del receptor µ-opioide que la composición exhibiría si los enantiomeros 6R,7R fueron sustituidos completamente con zilpaterol trans racémico en una cantidad que iguala dos veces la cantidad del enantiomero 6R.7R.

12. Método para separar los enantiomeros o sales de los mismos, en donde los enantiomeros corresponden en estructura a la fórmula (I): el método comprende la formación de los derivados del carbamato de bencilo de los enantiómeros.

13. Método de conformidad con la reivindicación 12, en donde los derivados del carbamato de bencilo se forman reaccionando el zilpaterol trans racémico con el cloroformiato de bencilo.

14. Método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 y 13, en donde además comprende pasar los derivados del carbamato de bencilo a través de una columna HPLC que comprende tris amilosa (3,5-dimetilfeniIcarbamato) recubierto en un soporte de sílice.

15. Uso de una composición de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y 11 para preparar un medicamento para aumentar el índice del animal de aumento de peso, mejorar la eficiencia del alimento, y/o aumentar la delgadez de la masa corporal de un animal.

16. Método de alimentar a un animal, en donde el método comprende alimentar la composición de las reivindicaciones 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y al animal.

17. Método de conformidad con la reivindicación 16, en donde la composición además comprende el acetato de trenbolona.

18. Método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, en donde la composición además comprende zeranol o estradiol.

19. Método para aumentar el índice de un animal de aumento del peso, en donde el método comprende administrar la composición de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, y 10 al animal.

20. Método para mejorar la eficiencia del alimento para el animal, en donde el método comprende administrar la composición de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y 11 al animal.

21. Método para aumentar la delgadez de la masa corporal de un animal, en donde el método comprende administrar la composición de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y 11 al animal.

22. Método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16, 17, 18, 19, 20, y 21, en donde: el animal se alimenta en confinamiento para sacrificio, y la composición se alimenta al animal por aproximadamente los últimos 20 a aproximadamente 40 últimos días donde el animal está en alimentación.

23. Método de aumentar la producción de carne de res, en donde: el método comprende: administrar un primer régimen de dosificación a un animal bovino por un período inicial, y en el final del período inicial, administrar un segundo régimen de dosificación al animal bovino por aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días; el primer régimen de dosificación comprende administrar un ionóforo y un antibiótico en cantidades que juntos constituyen una cantidad terapéuticamente efectiva; y el segundo régimen de dosificación comprende administrar una composición de las reivindicaciones 1, 2, 3, 6, 9, 10, y 11 y esencialmente sin ionóforo o antibiótico.

24. Método para reducir la ingesta de alimento de un animal bovino mientras se mantiene la producción de carne de res, en donde: el método comprende: administrar un primer régimen de dosificación al animal bovino durante un período de finalización hasta de aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del final del período de finalización, y durante aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del final del período de finalización, administrando un segundo régimen de dosificación al animal bovino; el primer régimen de dosificación comprende administrar un ionóforo y un antibiótico en cantidades que juntas constituyen una cantidad terapéuticamente efectiva; el segundo régimen de dosificación comprende administrar una composición de las reivindicaciones 1, 2, 3, 6, 9, 10, y 11; y la composición comprende: esencialmente ningún agonista ß2 con excepción del enantiómero, y esencialmente ningún ionóforo o antibiótico.

25. Método de finalizar a un animal bovino, en donde: el método comprende: administrar un primer régimen de dosificación al animal bovino durante un período de finalización hasta de aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del final del período de finalización, durante los aproximadamente 20 a aproximadamente 40 días antes del final del período de finalización, se administra un segundo régimen de dosificación al animal bovino; el primer régimen de dosificación comprende administrar un ionóforo y un antibiótico en cantidades que juntas constituyen una cantidad terapéuticamente efectiva; el segundo régimen de dosificación comprende administrar una composición de las reivindicaciones 1, 2, 3, 6, 9, 10, y 11; la composición comprende: esencialmente ningún agonista ß2 con excepción del enantiómero 6R, 7R o sal del mismo, y esencialmente ningún ionóforo o antibiótico; y el método de finalización reduce el riesgo de un absceso de hígado en el animal bovino comparado al riesgo a un animal bovino similar que recibe el primer régimen de dosificación a través del período de finalización completo.

26. Método para determinar la configuración absoluta de un enantiómero que corresponde en estructura a la fórmula (I) o una sal del mismo: en donde el método comprende hacer reaccionar el enantiómero con 2,4'-dibromoacetofenona para formar un derivado 4-bromofenilacilo del enantiómero.

27. Método de conformidad con la reivindicación 26, en donde el método además comprende analizar el derivado 4-bromofenilacilo con cristalografía de rayos X.