MX2008012295A

MX2008012295A - Formulacion de un anticuerpo monoclonal humano anti-igf-1r.

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Publication number: MX2008012295A
Application number: MX2008012295A
Authority: MX
Inventors: Hanns-Christian Mahler; Edelbert Grossmann; Astrid Pappenberger; Oliver Boris Stauch; Jan Olaf Stracke
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2006-03-28
Filing date: 2007-03-19
Publication date: 2008-10-09
Also published as: CL2007000797A1; CA2647111A1; TW200815029A; NO20083895L; AU2007229554A1; MA30345B1; CR10295A; IL193904A0; KR20080104160A; WO2007110339A1; JP2009531371A; RU2008142359A; AR060130A1; ECSP088778A; EP1998806A1; BRPI0709229A2; CN101410137A

Abstract

La presente invención está relacionada con una formulación de anticuerpo monoclonal humano anti-IGF-1R, un proceso para la preparación y usos del mismo.

Description

FORMULACION DE UN ANTICUERPO MONOCLONAL HUMANO ANTI-IGF-1R DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención está relacionada con una formulación de un anticuerpo monoclonal humano anti-IGF-lR, un proceso para su preparación y los usos del mismo. En un aspecto, la invención está relacionada con una formulación de IGF-IR que comprende: entre 1 y alrededor de 150 mg/mL de huMab IGF-IR, entre 0.001 y alrededor del 1% de al menos un surfactante, y entre 1 y alrededor de 100 mM de un amortiguador, un pH de entre alrededor de 5.0 y alrededor de 7.0. EL IGF-IR (receptor del factor de crecimiento similar a la insulina de tipo 1), está implicado en promover la transformación oncogénica, crecimiento, y supervivencia de las células cancerígenas. Se han detectado altos niveles de expresión de IGF-IR en un amplio abanico de neoplasias humanas. Además, se han detectado altos niveles de expresión de IGF-I y IGF-II en tumores y células estromales asociadas y pueden estimular el crecimiento de células cancerígenas de forma autocrina o paracrina. Estudios epidemiológicos han correlacionado en el quintil superior, los niveles en plasma de IGF-I con un aumento del riesgo para el cáncer de próstata, colon, pulmón, y cáncer de mama. Además de estos papeles en la proliferación de células cancerígenas, el IGF-IR protege las Ref.: 196404 células de la apoptosis provocada por la privación del factor de crecimiento, independencia de anclaje, o tratamiento con fármacos citotóxicos. Una estrategia prometedora para inhibir la función de IGF-IR en células cancerígenas es aplicar anticuerpos humanos anti-IGF-lR que se unen a los dominios extracelulares de IGF-IR e inhiben la activación del receptor. Se ha desarrollado tal anticuerpo monoclonal antagonista, completamente humano, designado huMab IGF-IR, que se une específicamente al receptor del factor de crecimiento similar a la insulina de tipo 1 (IGF-IR) e inhibe la transducción de señales y las funciones de proliferación del receptor en células cancerígenas. El anticuerpo comprendido en la formulación de la invención se describió por primera vez en la solicitud de patente PCT Núm. O2005/005635 en la que el Solicitante es propietario y el contenido de la misma, especialmente las reivindicaciones se incorporan aquí como referencia. Tal como se describe en WO2005/005635, dicho anticuerpo se une a IGF-IR e inhibe la unión de IGF-I e IGF-II al IGF-IR, y se caracteriza en que: a) es del isotipo IgGl, b) muestra una proporción de valores CI50 de inhibición ¦ de la unión de IGF-I a IGF-IR a la inhibición de la unión de IGF-II a IGF-IR de 1:3 a 3:1, c) a una concentración de 5 nM, inhibe al menos en un 80%, preferiblemente al menos en un 90%, la fosforilación de IGF-1R en un ensayo de fosforilación celular utilizando células HT29 en un medio que contiene un 0.5% de suero fetal bovino inactivado por calor (FCS) en comparación con el mismo ensayo sin dicho anticuerpo, y d) a una concentración de 10 µ , no muestra actividad estimuladora de IGF-1R medida como la fosforilación de pkB en un ensayo de fosforilación celular utilizando células 3T3 proporcionando de 400,000 a 600,000 moléculas de IGF-1R por célula en un medio que contiene un 0.5% de suero fetal bovino inactivado por calor (FCS) en comparación con el mismo ensayo sin dicho anticuerpo. Los anticuerpos comprendidos en la formulación de acuerdo con la invención muestran beneficios para los pacientes que necesitan de una terapia antitumoral y proporcionan la reducción del crecimiento tumoral y una prolongación significativa del tiempo de progresión. Los anticuerpos comprendidos en la formulación de acuerdo con la invención poseen propiedades nuevas e inventivas que dan lugar a un beneficio para un paciente que padece una enfermedad asociada con una desregulación de IGF, especialmente una enfermedad tumoral. Los anticuerpos comprendidos en la formulación de la invención están caracterizados por las propiedades mencionadas - - anteriormente. Las propiedades son por lo tanto especialmente especificas para la unión a IGF-1R, inhibiendo la unión de IGF-I y IGF-II al IGF-1R en la proporción mencionada anteriormente, siendo del isotipo IgGl, y no activando la señalización del IGF-1R aún cuando las células sobreexpresen IGF-1R a una concentración 200 veces de su valor de CI50. Los anticuerpos que no poseen una "actividad mimética de IGF-I" proporcionan una fuerte ventaja cuando se utilizan como un agente terapéutico. El término "anticuerpo monoclonal humano anti-IGF-lR" o "hu Ab IGF-1R" denota un anticuerpo como se ha descrito y se reivindica en WO2005/005635, el contenido del cual, especialmente las reivindicaciones, se incorporan aquí como referencia . El término "anticuerpo" abarca las diferentes formas de anticuerpos que incluye pero no se limita a anticuerpos enteros, fragmentos de anticuerpo, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados y anticuerpos modificados genéticamente mientras que se retienen las propiedades características de acuerdo con la invención. "Fragmentos de anticuerpo" comprende una porción de un anticuerpo de longitud completa, generalmente al menos la porción de unión a antígeno o la región variable del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluye diacuerpos, moléculas de anticuerpo de cadena única, inmunotoxinas , y - - anticuerpos multiespecí fieos formados a partir de fragmentos de anticuerpo. Además, los fragmentos de anticuerpo comprenden polipéptidos de cadena única que poseen las características de una cadena VH, siendo ésta capaz de ensamblarse junto con la cadena VL o de una cadena VL que se une a IGF-1R, siendo ésta capaz de ensamblarse junto con una cadena VH a una región de unión a antígeno funcional y proporcionar de esta manera la propiedad de inhibir la unión de IGF-I e IGF-II al IGF-1R. "Fragmentos de anticuerpo" también comprende tales fragmentos que per se no son capaces de proporcionar funciones efectoras (ADCC/CDC) pero proporcionan esta función de una forma de acuerdo a la invención tras combinarse con un dominio (s) constante de anticuerpo apropiado. Los términos "anticuerpo monoclonal" o "composición de anticuerpo monoclonal" tal como se utiliza aquí se refiere a una preparación de moléculas de anticuerpo de una composición de aminoácidos única. De acuerdo con esto, el término "anticuerpo monoclonal humano" se refiere a anticuerpos que muestran una especificidad de unión única que posee regiones variables y constantes derivadas de una línea germinal humana de secuencias de inmunoglobulinas . En una modalidad, los anticuerpos monoclonales humanos se producen mediante un hibridoma que incluye una célula B obtenida de un animal transgénico no humano, por ejemplo, un ratón transgénico, que posee un genoma que comprende una cadena humana pesada transgénica y una cadena humana ligera transgénica fusionada con una célula inmortalizada. El término "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo monoclonal que comprende una región variable, es decir, una región de unión, de una fuente o especies y al menos una porción de una región constante derivada de una fuente diferente o especies, normalmente preparada mediante técnicas de ADN recombinante . Los anticuerpos quiméricos que comprenden una región murina variable y una región constante humana son especialmente preferidas. Tales anticuerpos murino/humanos quiméricos son el producto de genes de inmunoglobulina expresados que comprenden segmentos de ADN que codifican regiones variables de inmunoglobulina murina y segmentos de ADN que codifican regiones constantes de inmunoglobulina humana. Otras formas de "anticuerpos quiméricos" abarcadas por la presente invención son aquellos en que la clase o subclase ha sido modificada o cambiada de aquélla del anticuerpo original. Tales anticuerpos "quiméricos" se denominan también "anticuerpos de cambio de clase." Los métodos para producir anticuerpos quiméricos involucran las técnicas convencionales de ADN recombinante y transfección de genes que son bien conocidas en la materia. Véase, por ejemplo, Morrison, S.L., et al., Proc. Nati. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; Patentes Estadounidenses Núm. 5,202,238 y 5,204,244.

El término "anticuerpo humanizado" se refiere a anticuerpos en que el marco o "regiones determinantes de la complementariedad" (CDR) han sido modificadas para comprender el CDR de una inmunoglobulina de especificidad diferente cuando se compara a la de la inmunoglobulina parental. En una modalidad preferida, un CDR murino se injerta en una región marco de un anticuerpo humano para preparar el "anticuerpo humanizado" Véase, por ejemplo, Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; y Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270. Los CDR particularmente preferidos corresponden a aquellos que representan las secuencias que reconocen los antigenos citados antes para los anticuerpos quiméricos y bifuncionales . El término "anticuerpo humano", tal como se usa aquí, pretende incluir anticuerpos con regiones variables y constantes derivadas de una linea germinal humana de secuencias de inmunoglobulina. La cadena pesada variable deriva preferiblemente de la secuencia de la linea germinal DP-50 (GenBank L06618) y la cadena ligera variable deriva preferiblemente de la secuencia de la linea germinal L6 (GenBank X01668) . Las regiones constantes del anticuerpo son regiones constantes del tipo IgGl humano. Tales regiones pueden ser alotipicas y están descritas en, por ejemplo, Johnson, G., y Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218 y en las bases de datos citadas allí y son útiles mientras se retengan las propiedades de inducción de ADCC y preferiblemente CDC de acuerdo con la invención. El término "anticuerpo humano recombinante" , tal como se utiliza aquí, pretende incluir todos los anticuerpos humanos que se preparan, expresan, crean o aislan mediante métodos recombinantes , tales como anticuerpos aislados de una célula huésped como las células SP2-0, NSO o CHO o de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico para los genes de las inmunoglobulinas humanas o anticuerpos expresados utilizando un vector de expresión recombinante transfectado en una célula huésped. Tales anticuerpos humanos recombinantes poseen regiones variables y constantes derivadas de las secuencias de las lineas germinales humanas de inmunoglobulinas en una forma reorganizada. Los anticuerpos humanos recombinantes de acuerdo con la invención han sido sometidos a una hipermutación somática in vivo. Asi, las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, mientras que deriven de y estén relacionadas con las secuencias de las lineas germinales humanas de VH y VL, pueden no existir de forma natural dentro del repertorio humano de lineas germinales de anticuerpos in vivo. Tal como se utiliza aquí, "unión" se refiere a la unión de un anticuerpo a IGF-1R con una afinidad de alrededor de 10" 13 a 10~8 M (KD) , preferiblemente de alrededor de 10"13 a 10~9 M. El término "molécula de ácido nucleico", tal como se utiliza aquí, pretende incluir moléculas de ADN y moléculas de ARN . Una molécula de ácido nucleico puede ser de cadena sencilla o de doble cadena, pero preferiblemente es ADN de doble cadena. Los "dominios constantes" no están involucrados directamente en la unión de anticuerpo a un antigeno pero están involucrados en las funciones efectoras (ADCC, unión del complemento, y (CDC, por sus siglas en inglés) . El dominio constante de un anticuerpo de acuerdo con la invención es del tipo IgGl. Los dominios constantes humanos que poseen estas características se describen en detalle por Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991), y por Brüggemann, M . , et al., J. Exp. Med. 166 (1987) 1351-1361; Love, T.W., et al., Methods Enzymol . 178 (1989) 515-527. Los ejemplos se muestran en los Id. de Sec. Núm: 5 a 8 en WO2005/005635. Otros dominios constantes útiles y preferidos son los dominios constantes de los anticuerpos obtenibles de las líneas celulares de hibridoma depositadas con DSMZ para esta invención. Los dominios constantes útiles en la invención proporcionan la unión del complemento. ADCC y opcionalmente CDC se proporcionan mediante la combinación de dominios variables y constantes. La "región variable" (región variable de una cadena ligera (VL) , la región variable de una cadena pesada (VH) ) tal como se utiliza aquí denota cada par de cadenas ligeras y pesadas que están involucradas directamente en la unión del anticuerpo al antigeno. Los dominios de cadena ligera y pesada humana variable poseen la misma estructura general y cada dominio comprende cuatro regiones marco (FR) cuyas regiones están ampliamente conservadas, conectadas mediante tres "regiones hipervariables" (o regiones determinantes de complementariedad, CDR) . Las regiones marco adoptan una conformación de lámina ß y los CDR pueden formar lazos que conectan la estructura de lámina-ß. Los CDR en cada cadena se soportan en su estructura tridimensional mediante las regiones marco y forman junto con los CDR de la otra cadena el sitio de unión a antigeno. Las regiones CDR3 de las cadenas ligera y pesada del anticuerpo juegan un papel particularmente importante en la especificidad/afinidad de unión de los anticuerpos de acuerdo con la invención y por lo tanto proporcionan otro objeto de la invención. Los términos "región hipervariable" o "porción de unión a antigeno de un anticuerpo" cuando se utiliza aquí se refiere a residuos de aminoácidos de un anticuerpo que son responsables de la unión a antigeno. La región hipervariable comprende residuos de aminoácidos de las "regiones determinantes de complementariedad" o "CDR". Las regiones "Marco" o "FR" son aquellas regiones de dominio variable diferentes de los residuos de la región hipervariable como se han definido aquí.

Por lo tanto, las cadenas ligera y pesada de un anticuerpo comprenden los dominios FRl, CDR1, FR2 , CDR2, FR3, CDR3, y FR4 desde el extremo N- al extremo C- terminal. Especialmente, el CDR3 de la cadena pesada es la región que contribuye más a la unión a antigeno. Las regiones CDR y FR están determinadas de acuerdo con la definición estándar de Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed . Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) y/o aquellos residuos de un "lazo hipervariable" . El término "unión a IGF-1R" tal como se utiliza aquí significa la unión del anticuerpo al IGF-1R en un ensayo in vitro, preferiblemente en un ensayo de unión en que el anticuerpo está unido a una superficie y la unión de IGF-1R se mide mediante Resonancia del Plasmón en Superficie (RPS). Unión significa una afinidad de unión (KD) de 10~8 M o menos, preferiblemente 1CT13 a 1CT9 M. La unión a IGF-1R puede investigarse mediante un ensayo BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suecia). La afinidad de la unión está definida mediante el término ka (proporción constante para la asociación del anticuerpo del complejo anticuerpo/antigeno), kd (constante de disociación), y KD (kd/ka) . Los anticuerpos de acuerdo a la invención muestra una KD de 10"10 M o menos. La unión de IGF-I e IGF-II al IGF-1R también está inhibida mediante los anticuerpos de acuerdo con la invención.

- - La inhibición está medida como la CI50 en un ensayo para la unión de IGF-I/IGF-II al IGF-1R sobre células tumorales. Tal ensayo está descrito en el Ejemplo 7. En tal ensayo, la cantidad de IGF-I o IGF-II o fragmentos de los mismos de unión a IGF-1R radiomarcados unidos al IGF-1R proporcionado en la superficie de células tumorales (por ejemplo, HT29) se mide sin y con concentraciones increméntales del anticuerpo. Los valores de CI50 de los anticuerpos de acuerdo con la invención para la unión de IGF-I y IGF-II al IGF-1R no son más que 2 nM y la proporción de los valores de CI50 para la unión de IGF-I/IGF-II al IGF-1R está alrededor de 1:3 a 3:1. Los valores de CI50 se miden como la media o mediana de los valores de al menos tres mediciones independientes. Los valores de CI50 únicos pueden estar fuera del alcance. El término "inhibir la unión de IGF-I e IGF-II al IGF-1R" tal como se utiliza aquí, se refiere a la inhibición de la unión de IGF-I o IGF-II marcado con I125 al IGF-1R presentado en la superficie de células tumorales HT29 (ATCC HTB-38) en un ensayo in vitro. La inhibición significa un valor de IC50 de 2 nM o menos. El término "surfactante" tal como se utiliza aquí denota un surfactante farmacéuticamente aceptable. En la formulación de la invención, la cantidad de surfactante está descrita como un porcentaje expresado en peso/volumen. La unidad más comúnmente utilizada de peso/volumen es mg/mL. Los - 1 - surfactantes farmacéuticamente aceptables adecuados comprenden pero no se limitan a ásteres de ácidos grasos de polietilen-sorbitan, polietilen-polipropilen glicols, polioxietilen-estearatos y dodecil sulfatos de sodio. Los polietilen-sorbitan preferidos son ésteres de polietilen ( 20 ) -sorbitan (sinónimo de polisorbato 20, comercializado bajo el nombre comercial de Tween 20™) y polioxietilen ( 20 ) sorbitan monooleato (sinónimo de polisorbato 80 comercializado bajo el nombre comercial de Tween 80™) . Los polietilen-polipropilen glicoles preferidos son aquellos comercializados bajo los nombres Pluronic® F68 o Poloxamer 188™. Los polioxietilen-estearatos preferidos son aquellos comercializados bajo el nombre comercial de Myrj™. Los éteres de polioxietilen monolaurilo preferidos son aquellos comercializados bajo el nombre comercial de Brij™. Cuando se utilizan los ésteres de polietilen-sorbitan-polietilen (20) -sorbitan (Tween 20™) y polioxietilen ( 20 ) sorbitan monooleato (Tween 80™), se utilizan generalmente entre una cantidad de alrededor de 0.001 a alrededor de 1%, preferiblemente entre alrededor de 0.005 y alrededor de 0.1% y aún más preferiblemente entre alrededor de 0.01% y alrededor de 0.02% p/v. El término "amortiguador" tal como se utiliza aquí denota un amortiguador farmacéuticamente aceptable. Un amortiguador adecuado farmacéuticamente aceptable comprende pero no se limita a tampones de histidina, tampones de citrato, tampones - - de succinato, tampones de acetato y tampones de fosfato. Los tampones preferidos comprenden L-histidina o mezclas de L-histidina con clorhidrato de L-histidina con agentes de isotonicidad y ajuste de pH con un ácido o una base conocida en la materia. Los tampones de histidina mencionados anteriormente se utilizan generalmente en una cantidad de alrededor de lmM a alrededor de 100 mM, preferiblemente entre alrededor de 5 mM a alrededor de 50 mM y aún más preferiblemente alrededor de 20 mM. Independientemente del amortiguador utilizado, el pH se ajustará a un valor que comprende entre alrededor de 5.0 y alrededor de 7.0 y preferiblemente entre alrededor de 5.5 y alrededor de 6.5 y más preferiblemente alrededor de 6.0. El término "agentes de isotonicidad" tal como se utiliza aquí denota agentes de isotonicidad farmacéuticamente aceptables. Los agentes de isotonicidad se utilizan para proporcionar una formulación isotónica. Una formulación isotónica es un liquido o un liquido reconstituido de una forma sólida, por ejemplo, una forma liofilizada y denota una solución que posee la misma tonicidad que alguna otra solución con la que se compara, como una solución de sal fisiológica y el suero sanguíneo. Los agentes de isotonicidad adecuados comprenden pero no se limitan a cloruro sódico, cloruro potásico, glucosa, glicerina y cualquier componente del grupo de aminoácidos, azúcares y combinaciones de los mismos. Los - - agentes de isotonicidad se utilizan generalmente en una cantidad total de entre alrededor de 5 mM a alrededor de 350 mM. El término "liquido" tal como se utiliza aquí junto con la formulación de acuerdo con la invención denota una formulación que es liquida a una temperatura de entre al menos alrededor de 2 a alrededor de 8°C. El término "liofilizado" tal como se utiliza aquí junto con la formulación de acuerdo con la invención denota una formulación que se seca mediante la congelación de la formulación y la posterior sublimación del hielo del contenido congelado mediante cualquier método conocido en la materia sobre liofilización, por ejemplo los dispositivos de liofilización comercialmente disponibles. El término "aminoácido" tal como se utiliza aquí denota un aminoácido en una cantidad de alrededor de 1 a alrededor de 100 mg/mL que comprende pero no se limita a arginina, glicina, ornitina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido asparágico, isoleucina, leucina, alanina, fenilalanina , tirosina, triptófano, metionina, serina, prolina. El término "azúcar" tal como se utiliza aquí denota un azúcar farmacéuticamente aceptable utilizado en una cantidad de alrededor de 25 mM a alrededor de 500 mM. Azúcares adecuados comprenden pero no se limitan a trehalosa, sacarosa, lactosa, glucosa, mañosa, maltosa, galactosa, fructosa, sorbosa, rafinosa, glucosamina , N-Metilglucosamina (también llamada "Meglumina") , galactosamina y ácido neuraminico. El término "estabilizante" se refiere a estabilizantes farmacéuticamente aceptables, como por ejemplo pero sin limitarse a aminoácidos y azúcares como se han descrito en las secciones anteriores asi como a ciclodextrinas y dextranos de cualquier clase y peso molecular disponibles comercialmente como se conocen en la materia. El término "antioxidante" denota un antioxidante farmacéuticamente aceptable. Tal como se ha mencionado antes, en un aspecto, la invención se refiere a una formulación de IGF-IR que comprende : entre 1 y alrededor de 150 mg/mL de huMab IGF-IR, - entre 0.001 y alrededor del 1% de al menos un surfactante, y entre 1 y alrededor de 100 mM de un amortiguador, a un pH entre alrededor de 5.0 y alrededor de 7.0. La formulación de acuerdo con la invención preferiblemente comprende entre alrededor de 0.001 y alrededor del 1% de al menos un surfactante. En cierta modalidad, la formulación de acuerdo con la invención comprende: entre 1 y alrededor de 150 mg/mL de huMab IGF-IR, - entre 0.005 y alrededor de 0.05 % de al menos un - 1 - surfactante, y entre 1 y alrededor de 100 mM de un amortiguador, a un pH entre alrededor de 5.0 y alrededor de 7.0. La formulación de acuerdo con la invención puede estar en forma de liquido, en forma liofilizada o en forma de liquido reconstituido de una forma liofilizada. En cierta modalidad la formulación de acuerdo con la invención es una formulación liofilizada. La formulación liofilizada de acuerdo con la invención posee la ventaja de una estabilidad mejorada con respecto a la formación de partículas y agregados de mayor peso molecular que es normalmente difícil de alcanzar con formulaciones líquidas en la misma concentración de los anticuerpos monoclonales anti-IGF-1R humanos descritos. La formulación de acuerdo con la invención puede administrarse mediante administración intravenosa (i.v.), subcutánea (s.c.) o cualquier otro medio parental como aquellos conocidos en la materia farmacéutica. La formulación de la invención puede además comprender uno o más agentes de isotonicidad en una cantidad de alrededor de 5 mM a alrededor de 350 mM. Los agentes de isotonicidad adecuados pueden seleccionarse del grupo que consiste de cloruro de sodio (NaCl), cloruro de potasio, azúcares que comprenden glucosa, glicerina, aminoácidos, y combinaciones de las mismas.

La formulación de la invención puede además comprender un azúcar en una cantidad de alrededor de 25 mM a alrededor de 500 mM. Los azúcares adecuados pueden seleccionarse del grupo comprendido por trehalosa, sacarosa, lactosa, glucosa, mañosa, maltosa, galactosa, fructosa, sorbosa, rafinosa, glucosamina, N-Metilglucosamina , galactosamina , ácido neuraminico y combinaciones de los mismos. La formulación de la invención puede además comprender uno o más de los siguientes ingredientes: antioxidantes, ácido ascórbico, glutatión, conservantes, por ejemplo, m-cresol, fenol, bencilalcohol , metilparaben, propilparaben , clorbutanol, tiomersal, cloruro de benzalconio, ciclodextrina , por ejemplo, hidroxipropil-p-ciclodextrina , sulfobutilet?-ß-ciclodextrina , ß-Ciclodextrina , polietilenglicol , por ejemplo, PEG 3000, 3350, 4000, 6000, albúmina, albúmina de suero humano (HSA) , albúmina de suero bovino (BSA) , alcohol polihidratado, glicerol, etanol, manitol, sales, sales de acetato (por ejemplo, acetato de sodio), cloruro de magnesio, cloruro de calcio, trometamina, EDTA, (por ejemplo, Na-EDTA) . La formulación de la invención puede además comprender uno o más estabilizantes como se ha definido antes e ingredientes también conocidos en la materia como "lioprotectores" como los azúcares, azúcares de alcoholes, aminoácidos y dextranos como se conocen en la materia. En cierta modalidad, la formulación de la invención comprende las siguientes formulaciones, tanto en su forma liquida, liofilizada o liquida reconstituida de una forma liofilizada : ente 1 y alrededor de 150 mg/mL de huMab IGF-IR, 0.01% Tween 20 p/v, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0. La formulación de acuerdo con la invención también comprende las siguientes formulaciones especificas: - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - polisorbato 20 al 0.01%, - L-histidina 20 mM, -NaCl 140 mM, - a pH 6.0. o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - polisorbato 20 al 0.03%, - L-histidina 20 mM, - NaCl 140 mM, - a pH 6.0. o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - polisorbato 20 al 0.05%, - L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0. mg/mL de huMab IGF-1R, polisorbato 20 al 0.01%, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0. mg/mL de huMab IGF-1R, polisorbato 20 al 0.03%, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0. mg/mL de huMab IGF-1R, polisorbato 20 al 0.05%, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0. mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 5.5. - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - polisorbato 20 al 0.01%, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - a pH 5.5. o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - a pH 6.0. o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - polisorbato 20 al 0.01%, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - a pH 6.0. o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - polisorbato 20 al 0.05%, - a pH 6.0. o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 60 mM, - polisorbato 20 al 0.01%, - a pH 6.0. o - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - Succinato 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - polisorbato 20 al 0.01%, - a pH 5.5. o - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 60 mM, - polisorbato 20 al 0.01%, - a pH 6.0. En una modalidad preferida de la formulación de acuerdo con la invención, la formulación está en una forma liofilizada y comprende tras la reconstitución con la cantidad adecuada de agua para inyección: - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - polisorbato 20 al 0.01%, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - a pH 5.5.

Esta formulación muestra una buena estabilidad después de un almacenamiento de aproximadamente 6 meses a 2-8 °C y 25°C con especies de alto peso molecular inferior al 1.5% y sin la formación de partículas visibles y sub/visibles . La agitación y los pasos de congelación/descongelación múltiple se aplican a la formulación liquida para estimular las condiciones de estrés físico que suceden potencialmente durante la fabricación, por ejemplo, mediante filtración por presión y rellenado, liofilización y operaciones finales. Esta formulación se encontró que era estable tras una semana de agitación a 5°C y 25°C. La formación de partículas visibles y sub/visibles no se pudieron detectar y no se observó un aumento significativo en la fracción de especies de alto peso molecular que indican la formación de agregados solubles, (ver figura 1 ) .

EJEMPLOS Las formulaciones de fármaco líquido y liofilizado para administración intravenosa de acuerdo con la invención se desarrollaron como sigue a continuación: Preparación de formulaciones líquidas Las soluciones de aproximadamente 10 y 25 mg/mL de huMab IGF-1R en el amortiguador de producción (amortiguador histidina 10 mM aproximadamente, con NaCl 150 mM aproximadamente) se dializaron frente a grandes volúmenes de agua y de los respectivos sistemas de amortiguador salino para la formulación final (ver tabla con la composición exacta de las formulaciones). Si fue necesario, la concentración de proteina se incrementó mediante filtración utilizando dispositivos de filtro centrifugo disponibles comercialmente ) antes de la diálisis y luego se ajustó a la concentración de la proteina deseada mediante la dilución con amortiguador de diálisis. Los azúcares y sales para la estabilización de la proteina y para el ajuste de la tonicidad se añadieron al amortiguador de diálisis a medida que se necesitó. Se añadió surfactante a las formulaciones después de la diálisis como soluciones de reserva concentradas de 2 a 40 veces. AlteARNtivamente , se realizó un intercambio de amortiguador y concentración utilizando un dispositivo de filtración de flujo tangencial disponible comercialmente, por ejemplo, ÁKTA CF (GE Healthcare) con una membrana Sartorius Hydrosart (punto de corte de peso molecular 30.000 Da). Se añadieron los ingredientes como azúcares, sales o surfactantes tras el intercambio de amortiguador utilizando las cantidades apropiadas de soluciones de reserva concentradas. Todas las formulaciones se filtraron de forma estéril a través de filtros de baja unión a proteínas de 0.22 µ?t? y se alicuotaron de forma aséptica en viales de cristal estériles de 6 mL cerrados con tapones de goma recubiertos de Teflón y tapas de alucrimp. Estas formulaciones se almacenaron a diferentes - 5 - temperaturas durante diferentes intervalos de tiempo y se eliminaron para el análisis en los tiempos indicados en los párrafos individuales mediante 1) espectrofotometria UV, 2) Cromatografía de Exclusión de Tamaño (SEC) y 3) oscurecimiento de la luz para determinar la turbidez de la solución. Además, el análisis para las partículas visibles se realizó para cada muestra utilizando un instrumento Seidenader V90-T. La aparición de partículas subvisibles se valoró mediante un dispositivo HIAC Royco. Preparación de formulaciones liofilizadas Las soluciones de 25 mg/mL de hu ab IGF-1R se prepararon como se ha descrito antes para las formulaciones líquidas. Todas las formulaciones se filtraron de forma estéril a través de filtros de baja unión a proteínas de 0.22 µp? y se alicuotaron de forma aséptica en viales de cristal estériles. Los viales se cerraron parcialmente con tapones de goma recubiertos de Teflón adecuados para el uso en los procesos de liofilización y se transfirieron a la cámara de secado del liofilizador . Cualquier método de liofilización conocido en la materia pretende estar dentro del alcance de la invención. Por ejemplo, el proceso de liofilización utilizado para este estudio incluye el enfriamiento de la formulación de temperatura ambiente a aprox. 5°C (preenfriamiento ) seguido por una congelación a -40°C (Congelación I) a una tasa de progresión de alrededor de l°C/min a 5°C/min. El primer paso - - de secado puede aplicarse a una tasa de progresión de 0.3 a 0.5°C / min de -40°C a -30°C y entonces se mantiene a -30°C durante al menos 50 horas a una presión de cámara de aproximadamente 75 a 80 mTorr. Un segundo paso de secado puede llevarse a cabo a una tasa de progresión de 0.1 a 0.3°C / min de -30°C a 25°C y mantenerse a 25°C durante al menos 5 horas a una presión de cámara de alrededor de 50 a 80 mTorr. Se encontró que en las formulaciones de huMab IGF-1R que se secaron utilizando los procesos de liofilización descritos, los tiempos de reconstitución eran convenientemente rápidos, siendo de alrededor de < 5 min. La liofilización se llevó a cabo en un liofilizador LyoStar II (FTS Systems, Stone Ridge, NY, USA y Usifroid Orion, Maurepas, Francia). Todas las pastas liofilizadas en este estudio poseían un contenido residual de agua de aproximadamente 0.1 al 5.0% como se determinó por el método de Karl-Fischer . Los viales liofilizados se almacenaron a diferentes temperaturas durante diferentes intervalos de tiempo. Las formulaciones liofilizadas se reconstituyeron con el respectivo volumen de agua para inyección (API) antes del análisis mediante 1) espectrofotometría UV, 2) Determinación del tiempo de reconstitución 3) Cromatografía de Exclusión de Tamaño (SEC, por sus siglas en inglés) y 4) oscurecimiento de la luz para determinar la turbidez de la solución. Además, el análisis para las partículas visibles se realizó para cada muestra utilizando un instrumento Seidenader V90-T (Seidenader, Marktschwaben, Alemania). La aparición de partículas subvisibles se valoró mediante un dispositivo HIAC Royco . La Cromatografía de Exclusión de Tamaño (SEC) se realizó para detectar en las formulaciones especies solubles de alto peso molecular (agregados) y productos de hidrólisis de bajo peso molecular. El método utilizó un instrumento Merck Hitachi 7000 HPLC o un Waters Alliance 2795 con detector UV (longitud de onda de detección ?(280 nm) Ambos instrumentos estaban equipados con una columna TSK G3000 SWXL; el método utilizó K2HP04 0.2M / KCL 0.25M, pH 7.0 como fase móvil. La tasa de flujo fue de 0.5 mL/min ( i s o c r á t i co ) , tiempo de ejecución de 30 min a una temperatura de columna de 25 ° C . La espectroscopia UV para la determinación de la concentración de proteína se realizó tras la dilución de las muestras a una concentración de anticuerpo de 0.5 mg/mL en un Uvikon 932 (Kontron Instruments) a una longitud de onda de 278 nm y en un espectrofotometro UV Varían Cary Bio a 280 nm respectivamente. Para la determinación de la turbidez, se midió el oscurecimiento de la luz en FTU (unidades de turbidez) utilizando un turbidímetro HACH 2100AN a temperatura ambiente . Composiciones de formulaciones de producto líquido huMAb IGF-1R de acuerdo con la invención y datos de estabilidad tras 3 meses de almacenamiento a 2-8 °C Formulación A es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 6.0.

Formulación B es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, polisorbato 20 al 0.03%, a pH 6.0.

Formulación C es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, polisorbato 20 al 0.05%, a pH 6.0.

Concentración Especies de alto peso Turbidez Tiempo de proteina molecular (%) en FTU inicial 24.42 0.85 10.1 4 semanas 21.57 1.02 10.5 8 semanas 25.0 1.36 10.6 12 semanas 23.97 1.51 10.2 Formulación D es una formulación liquida composición 10 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 140 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 6.0 Formulación E es una formulación liquida con la composición 10 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, polisorbato 20 al 0.03%, a pH 6.0. Concentración Especies de alto Turbidez Tiempo de proteina peso molecular (%) en FTU inicial 9.98 0.69 4.26 4 semanas 9.68 0.79 4.72 8 semanas 9.68 1.05 4.54 12 semanas 9.62 1.59 4.26 - - Formulación F es una formulación liquida composición 10 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 140 mM, polisorbato 20 al 0.05%, a pH 6.0 Formulación G es una formulación liquida con la composición 10 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 5.5.

Formulación H es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, trehalosa dihidratada 250 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 5.5 Concentración Especies de alto Turbidez Tiempo de proteina peso molecular (%) en FTU inicial 27.1 1.29 3.58 4 semanas 26.9 1.27 3.74 8 semanas 29.33 1.43 5.03 12 semanas 26.44 1.38 4.10 Formulación I es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de hu ab IGF-1R, L-histidina 20 mM, trehalosa dihidratada 250 mM, a pH 6.0 Formulación J es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, trehalosa dihidratada 250 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 6.0 Formulación K es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, trehalosa dihidratada 250 mM, polisorbato 20 al 0.05%, a pH 6.0 Formulación L es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, trehalosa dihidratada 60 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 6.0 Formulación M es una formulación liquida con la composición 25 mg/mL de huMab IGF-1R, Succinato 20 mM, trehalosa dihidratada 250 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 5.5 Concentración Especies de alto Turbidez Tiempo de proteina peso molecular (%) en FTU inicial 26.13 1.49 7.06 4 semanas 27.93 1.46 7.25 8 semanas 26.59 1.62 8.20 12 semanas 26.89 1.62 7.10 Composiciones de producto liofilizado de huMAb IGF-1R de acuerdo con la invención y datos de estabilidad tras 3 meses de almacenamiento a 2-8°C Formulación N es una formulación liofilizada con la composición de la solución reconstituida de 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, trehalosa dihidratada 60 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 6.0 Formulación O es una formulación liofilizada con la composición de la solución reconstituida de 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, sacarosa 60 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 6.0 Concentración Especies de alto Turbidez Tiempo de proteina peso molecular (%) en FTU inicial 24.77 0.93 5.77 4 semanas 24.81 0.93 6.79 8 semanas 24.11 0.88 5.38 12 semanas 24.32 1.03 393 Formulación P es una formulación liofilizada con la composición de la solución reconstituida de 25 mg/mL de huMab IGF-1R, Succinato 20 mM, trehalosa dihidratada 250 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 5.5 Formulación Q es una formulación liofilizada con la composición de la solución reconstituida de 25 mg/mL de huMab IGF-1R, L-histidina 20 mM, trehalosa dihidratada 250 mM, polisorbato 20 al 0.01%, a pH 5.5 Concentración Especies de alto Turbidez Tiempo de proteina peso molecular (%) en FTU inicial 27.11 1.33 3.59 4 semanas 28.28 1.22 3.49 8 semanas 27.81 1.30 4.65 12 semanas 28.22 1.18 4.04 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Formulación caracterizada porque es seleccionada de un grupo que consiste de: - entre alrededor de 1 y alrededor de 150 mg/mL de huMab IGF-1R, - 0.01% de Tween 20 p/v, - L-histidina 20 mM, - NaCl 140 mM, - a pH 6.0. o - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - polisorbato 20 al 0.01%, - L-histidina 20 mM, - NaCl 140 mM, - a pH 6.0; o - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - polisorbato 20 al 0.03%, - L-histidina 20 mM, - NaCl 140 mM, - a pH 6.0; o 25 mg/mL de huMab IGF-IR, polisorbato 20 al 0.05%, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0; 10 mg/mL de huMab IGF-IR, polisorbato 20 al 0.01%, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0; 10 mg/mL de huMab IGF-IR, polisorbato 20 al 0.03%, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0; 10 mg/mL de huMab IGF-IR, polisorbato 20 al 0.05%, L-histidina 20 mM, NaCl 140 mM, a pH 6.0; 25 mg/mL de huMab IGF-IR,
- L-histidina 20 mM, - NaCl 140 mM, - a pH 5.5; o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - polisorbato 20 al 0.01%,
- L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - a pH 5.5; o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR,
- L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - a pH 6.0;. o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR, - polisorbato 20 al 0.01%,
- L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - a pH 6.0; o - 25 mg/mL de huMab IGF-IR,
- L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - polisorbato 20 al 0.05%, - a pH 6.0; o - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 60 mM, - polisorbato 20 al 0.01%, - a pH 6.0; o - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - Succinato 20 mM, - trehalosa dihidratada 250 mM, - polisorbato 20 al 0.01%, - a pH 5.5; o - 25 mg/mL de huMab IGF-1R, - L-histidina 20 mM, - trehalosa dihidratada 60 mM, - polisorbato 20 al 0.01%, - a pH 6.0. 2. Formulación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque está en forma de liquido, en una forma liofilizada o en una forma liquida reconstituida de una forma liofilizada . 3. Formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizada porque puede administrarse mediante administración intravenosa (i.v.) o subcutánea (s.c.) o cualquier otra administración parental. 4. Formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque comprende además uno o más agentes de isotonicidad en una cantidad de alrededor de 5 mM a alrededor de 350 mM. 5. Formulación de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque los agentes de isotonicidad se seleccionan del grupo que consiste en cloruro sódico (NaCl), cloruro potásico, azúcares como la glucosa, glicerina, aminoácidos y combinaciones de los mismos. 6. Formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque además comprende un azúcar en una cantidad de alrededor de 25 mM a alrededor de 500 mM.
7. Formulación de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque los azúcares se seleccionan del grupo que consiste en trehalosa, sacarosa, lactosa, glucosa, mañosa, maltosa, galactosa, fructosa, sorbosa, rafinosa, glucosamina, N-Metilglucosamina ( "Meglumina" ) , galactosamina y ácido neuraminico .
8. Formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque además comprende uno o más ingredientes seleccionados del grupo que consiste en farmacéuticamente aceptables: antioxidantes, ácido ascórbico, glutatión, conservantes, en particular, m-cresol, fenol, bencilalcohol , metilparaben, propilparaben, clorbutanol, tiomersal, cloruro de benzalconio, ciclodextrina , en particular, hidroxipropil-p-ciclodextrina , sulfobutilet??-ß-ciclodextrina , ß-Ciclodextrina , polietilenglicol, en particular, PEG 3000, 3350, 4000 o 6000, albúmina, albúmina de suero humano (HSA) , albúmina de suero bovino (BSA) , alcohol polihidratado, glicerol, etanol, manitol, sales, sales de acetato, en particular acetato de sodio, cloruro de magnesio, cloruro de calcio, trometamina, EDTA, en particular Na-EDTA.
9. Uso de una formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para la preparación de un medicamento útil para tratar enfermedades moduladas mediante el receptor IGF-1R.
10. Uso de conformidad con la reivindicación 9, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste de cáncer de mama, cáncer colorectal, cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) y cáncer de próstata.