MX2008000379A

MX2008000379A - Anticuerpo anti-citla-1 y terapia de combinacio con oligodesoxinucleotido sintetico que contiene motivo cpg.

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Publication number: MX2008000379A
Application number: MX2008000379A
Authority: MX
Inventors: Jesus Gomez-Navarro; Arthur M Krieg; David Robert John Readett; Jarl Ulf Birger Jungnelius; Douglas C Hanson
Original assignee: Coley Pharm Group Inc
Priority date: 2005-07-07
Filing date: 2006-06-30
Publication date: 2008-03-18
Also published as: WO2007008463A3; SG163583A1; IL188588A0; WO2007008463A2; EA200800268A1; ZA200801190B; TW200801042A; US20090117132A1; NZ565311A; BRPI0612408A2; AU2006269555A1; CN101268101A; KR20080030656A; EP1904530A2; AR054536A1; US20120003179A1; JP2009500412A; CA2614320A1

Abstract

La invencion se refiere a la administracion de un anticuerpo anti-CTLA-4, particularmente a anticuerpos humanos para el CTLA-4 humano, tales como aqueellos que tienen secuencias de aminoacidos de los anticuerpos 3.1.1., 4.1.1., 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1, 12.9.1.1 y MDX-010, en combinacion con un nucleotido inmunoestimulador, es decir CpG ODN PF3512676, para el tratamiento de cancer; la invencion se refiere a la administracion de una combinacion de un anticuerpo anti-CTLA-4 y CpG ODN PF3512676 como terapia de cancer de neoadyuvante, adyuvante, primera linea, segunda linea y tercera linea, ya sea localizada o metastatizada y en cualquiera o cualesquiera puntos a lo largo del proceso continuo de la enfermedad (por ejemplo, en cualquier etapa del cancer).

Description

ANTICUERPO ANTI-ANT1GENO 4 CITOTOXICO ASOCIADO AL LINFOCITO T Y TERAPIA DE COMBINACIÓN DE OLIGODESOXINUCLEOTIDO SINTÉTICO QUE CONTIENE MOTIVO CPG- PARA EL TRATAMIENTO DEL CÁNCER SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad a la solicitud provisional de E.U.A. que tiene número de serie 60/697082, con título "ANTICUERPO ANTI-CTLA-4 Y TERAPIA DE COMBINACIÓN DE OLIGODESOXINUCLEOTIDO SINTÉTICO QUE CONTIENE MOTIVO CPG-PARA EL TRATAMIENTO DEL CÁNCER", y presentada el 7 de julio de 2005, cuyos contenidos se incorporan para referencia aquí.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere al uso de anticuerpo anti-CTLA-4 en combinación con oligonucleótidos CpG para el tratamiento del cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Un enfoque alterno para la terapia contra el cáncer es dirigirse al sistema inmune ("inmunoterapia") más que y/o además de tener como objetivo el propio tumor. Un beneficio potencial de inmunoterapia es proveer eficacia mejorada al incrementar la propia respuesta inmune del paciente hacia los tumores mientras se minimizan los efectos nocivos a las células normales. El antígeno 4 citotóxico asociado al linfocito T (CTLA-4; CD 152) es un receptor superficial celular en células T activadas. Los ligandos naturales para CTLA-4 son B7.1 (CD80) y B7.2 (CD86), que se presentan en células que presentan antígeno (APC, incluyendo células dendríticas, células B activadas, y monocitos). CTLA-4 es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulina (Ig) de proteínas que actúan para sub-regular la activación de células T y mantener la homeostasis inmunológica. En particular, se piensa que CD28 y CTLA-4 suministran señales opuestas que se integran por medio de la célula T en la determinación de la respuesta a antígeno. El efecto de la estimulación del receptor de células T por medio de antígenos se regula por señales co-estimuladoras CD28, así como señales inhibidoras derivadas de CTLA-4. También se determina por interacción de CD28 o CTLA-4 con en células T con moléculas B7 expresadas en células que presentan antígeno. Evidencia experimental indica que la unión de B7 a CTLA-4 suministra una señal reguladora negativa a las células T, y que el bloqueo de esta señal negativa resulta en una función inmune de células T incrementada y actividad anti-tumoral en modelos animales (Thompson and Allison, 1997, Immunity 7:445-450; McCoy and LeGros, 1999, Immunol.&Cell Biol. 77:1-10). Varios estudios han demostrado que el tratamiento de ratones con mAb de bloqueo de CTLA-4 antimurino incrementa de manera notable la eliminación mediada por células T de varios tumores sólidos murino, incluyendo tumores establecidos, y puede inducir inmunidad anti-tumoral (Leach et al., 1996, Science 271 : 1734-1736; Kwon et al., 1997, Proc Nati. Acad. Sci USA 94: 8099-8103; Kwon et al., 1999, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 96: 15074-15079; Yang et al., 1997, cáncer Res. 57:4036-4041 ; Patente de E.U.A. No. 6,682,736, para Hanson et al.). Además, los polimorfismos de CTLA-4 en humanos se han asociado con un riesgo incrementado de enfermedades auto-inmunes tales como artritis reumatoide y diabetes melitus tipo I. Además, la Patente de E.U.A. 5,811 ,097 de Allison et al., se refiere a la administración de agentes de bloqueo de CTLA-4 para disminuir el crecimiento de células tumorosas. Publicación Internacional No. WO 00/37504 (publicada el 29 de junio de 2000) se refiere a anticuerpos anti-CTLA-4 de humano, y al uso de dichos anticuerpos en el tratamiento del cáncer. El documento WO 01/14424 (publicado el 1 de marzo de 2001) se refiere a anticuerpos anti-CTLA-4 de humano adicionales, y al uso de dichos anticuerpos en el tratamiento del cáncer. WO 93/00431 (publicado el 7 de enero de 1993) se refiere a la regulación de las interacciones celulares con un anticuerpo monoclonal reactivo con una proteína de fusión CTLA-4-lg. WO 00/32231 (publicado el 8 de junio de 2000) se refiere a una combinación de un agente de bloqueo de CTLA-4 con una vacuna tumorosa para estimular las células T. WO 03/086459 se refiere a un método para promover una respuesta de memoria usando anticuerpos CTLA-4. De este modo, el potencial de desarrollar terapéuticos que comprenden la inhibición de unión a CTLA-4 para incrementar y/o prolongar una respuesta anti-tumoral se ha demostrado en la técnica. El ADN bacteriano tiene efectos estimuladores inmunes para activar las células B y células asesinas naturales (Tokunaga, T., et al., 1988, Jpn. J. Cáncer Res. 79:682-686; Tokunaga, T., et al., 1984, JNCI 72:955-962; Messina, J.P., et al., 1991 , J. Immunol. 147: 1759-1764; y revisado en Krieg, 1998, In: Applied Oligonicleotide Technology, C.A. Stein and A.M. Krieg, (Eds.), John Wiley and Sons, Inc, New Cork, NY, pp. 431-448). Los efectos estimuladores inmunes de ADN bacteriano son un resultado de la presencia de dinucleótidos CpG no metilados en particular contextos base (motivos CpG), que son comunes en el ADN bacteriano, pero metilados u sub-representados en ADN de vertebrado (Krieg et al, 1995 Nature 374:546-549; Krieg, 1999 Biochim. Biophys. Acta 93321 :1-10). Los efectos estimuladores inmunes de ADN bacteriano se pueden imitar con oligodesoxinucleótidos sintéticos (ODN) que contienen estos motivos CpG. Dichos ODN CpG tienen efectos altamente estimuladores en leucocitos de humano y murino, que inducen proliferación de células B, citosina y secreción inmunoglobulina, actividad lítica de células asesinas naturales (NK), secreción de IFN-?, y activación de células dendríticas (DC) y otras células que presentan antígeno para expresar moléculas co-estimuladoras y secretan citocinas, especialmente las citocinas tipo Th1 que son importantes en la promoción del desarrollo de las respuestas de células T tipo Th1. Los efectos estimuladores inmunes de ODN CpG de cadena primaria fosfodiéster nativos son altamente específicos para CpG debido a que los efectos se reducen dramáticamente si el motivo CpG es metilado, cambia a un GpC, o se elimina o altera de otra forma (Krieg et al, 1995 Nature 374:546-549; Hartman et al, 1999 Proc. Nati. Acad. Sci USA 96:9305-10). Se pensaba previamente que los efectos estimuladores inmunes requieren el motivo CpG en el contexto de una secuencia purina-purina-CpG-pirimidina-pirimidina (Krieg et al, 1995 Nature 374: 546-549; Pisetsky, 1996 J. Immunol. 156:421-423; Hacker et al., 1998 EMBO J. 17:6230-6240; Lipford et al, 1998 Trends in Microbiol. 6:496-500). Sin embargo, ahora es claro que los linfocitos de ratón responden muy bien a los motivos de CpG de fosfodiéster no en este contexto (Yi et al., 1998 J. Immunol. 160:5898-5906) y lo mismo es cierto de las células B de humano y células dendríticas (Hartman et al, 1999 Proc. Nati. Acad. Sci USA 96:9305-10; Liang, 1996 J. Clin. Invest. 98:1119-1129). Una clase de ODN CpG es potente para la activación de células B pero es relativamente débil en la inducción de activación celular de IFN-a y NK; esta clase se ha denominado la clase B. La clase B oligonucleótidos CpG típicamente se estabilizan completamente e incluyen un dinucleótido CpG no metilado con ciertos contextos de base preferidos. Ver, por ejemplo, la Patente de E.U.A. Nos. 6,194,388; 6,207,6465; 6,214,806; 6,218,371 ; 6,239,116; y 6,339,068. Aunque el uso individual de anticuerpos anti-CTLA-4 u ODN para inducir una respuesta anti-tumoral mantiene una gran esperanza en el tratamiento del cáncer, permanece una necesidad de desarrollar terapias novedosas para tratar tumores, más particularmente, tumores sólidos, con dichos métodos ¡nmunoterapéuticos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN El desarrollo de nuevos regímenes terapéuticos, particularmente aquellos con capacidad de aumentar o potenciar la actividad anti-tumoral del sistema inmune del paciente, mientras reduce los efectos secundarios citotóxicos de quimioterapéuticos comunes, si es necesario. La presente invención provee dichos regímenes. De este modo, en una modalidad, la invención provee un método para el tratamiento de cáncer en un paciente en necesidad de dicho tratamiento, dicho método comprendiendo la administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-CTLA-4, o su porción de unión a antígeno, en combinación con una cantidad terapéuticamente efectiva de ODN CpG PF3512676 (CpG 7909 (también conocido como ProMune); TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT; SEQ ID NO: 37). En una modalidad, el método es un método sin vacuna. En una modalidad, dicho ODN CpG se administra diariamente, un día si y el otro no, dos veces por semana, o semanalmente. En una modalidad, dicho tratamiento es una terapia seleccionada del grupo que consta de terapia con neo-adyuvante, terapia con adyuvante, terapia de primera línea, terapia de segunda línea, y terapia de tercera línea. Dependiendo en la modalidad, dicho cáncer se selecciona del grupo que consta de cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer cervical, carcinoma colorrectal, linfoma de célula T cutáneo, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, melanoma, leucemia mieloide aguda, linfoma de no Hodgkin, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, y sarcoma. En otras modalidades, dicha cantidad terapéuticamente efectiva de dicho anticuerpo anti-CTLA-4 de humano varía desde aproximadamente 0.1 mg/kg, o desde aproximadamente 0.3 mg/kg a 20 mg/kg, incluyendo pero sin limitarse a una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho anticuerpo anti-CTLA-4 de humano seleccionado del grupo que consta de al menos 1 mg/kg, al menos 3 ,g/kg, al menos 6 mg/kg, al menos 10 mg/kg y al menos 15 mg/kg. En una modalidad, dicho anticuerpo anti-CTLA-4, o su porción de unión a antígeno, es al menos un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de (a) un anticuerpo de humano que tiene una afinidad de unión para CTLA-4 de aproximadamente 10~8 o más, y que inhibe la unión entre CTLA-4 y B7-1 , y unión entre CTLA-4 y B7-2; (b) un anticuerpo de humano que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende al menos una secuencia CDR de humano que corresponde a una secuencia de CDR de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 , y 10D1 ; (c) un anticuerpo de humano que tiene la secuencia de aminoácidos de una cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 y 10D1 ; (d) un anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, que compite para la unión con CTLA-4 con al menos un anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 y 10D1 ; y (e) un anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, que compite en forma cruzada para unión con CTLA-4 con por lo menos un anticuerpo que tiene el aminoácido de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 y 10D1. En otra modalidad, dicho anticuerpo es un anticuerpo de humano que tiene la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.13.1 , 11.2.1 y 10D1. En modalidades relacionadas, dicho anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, comprende una cadena pesada y una cadena ligera en donde las secuencias de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada de dicho dominio variable de cadena pesada y de cadena ligera de dicha cadena ligera se seleccionan del grupo que consta de (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:3 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:9; (b) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:15 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:21 ; (c) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:27 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:33; (d) la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 y la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:7; (e) la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 13 y la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:19; (f) la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:25 y la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:31 ; y (g) la secuencia de aminoácidos de un dominio variable de anticuerpo 10D1. En otra modalidad relacionada, dicho anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, es un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de (a) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 y SEQ ID NO:12; (b) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23 y SEQ ID NO:24; y (c) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO.28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35 y SEQ ID NO:36. En otra modalidad relacionada todavía, dicho anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:27 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:33.

Aún en otra modalidad relacionada, dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consta de (a) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:2 y SEQ ID NO:8; (b) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:14 y SEQ ID NO:20; y (c) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:26 y SEQ ID NO:32. En una modalidad, dicho anticuerpo se administra 1-7 días antes de la administración de dichos ODN CpG. En esta y otras modalidades, dichos ODN CpG se administra desde aproximadamente uno a cien dias después de dicho anticuerpo. En una modalidad, dicho ODN CpG se administra de manera subcutánea. En otra modalidad, dicho ODN CpG se administra en una cantidad de 1 mg-50 mg por día. En otro aspecto, la invención provee una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer, dicha composición comprendiendo una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-CTLA-4, o su porción de unión a antígeno, y una cantidad terapéuticamente efectiva de ODN CpG PF3512676, y un portador farmacéuticamente aceptable. Estas y otras modalidades de la invención se describirán con mayor detalle aquí. Cada una de las limitaciones de la invención puede incluir varias modalidades de la invención. Por tanto se anticipa que cada una de las limitaciones de la invención involucra cualquier elemento o combinaciones de elementos se pueden incluir en cada aspecto de la invención. Esta invención no se limita en su aplicación a los detalles de construcción y la disposición de componentes expuestos en la siguiente descripción o ilustrados en los dibujos anexos. La invención es capaz de otras modalidades y de ser practicada o de realizarse de varias formas. La fraseología y terminología usada aqui tiene el propósito de descripción y no se debe considerar como limitante. El uso de "que incluye", "que comprende", o "que tiene", "que contiene", "que involucra" y sus variaciones en la presente, se refiere a que incluye los ítems enlistados en adelante y sus equivalentes así como ítems adicionales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS El bosquejo anterior, así como la siguiente descripción detallada de la invención, se entenderá mejor cuando se lea junto con los dibujos anexos. Para propósitos de ilustrar la invención los dibujos muestran modalidad(es) que se prefieren presentemente. Se puede entender, sin embargo, que la invención no se limita a las disposiciones y mediaciones precisas mostradas. En los dibujos anexos: Las figuras 1A-1 D, muestran las secuencias de aminoácidos y de nucleótidos de anticuerpo 4.1.1 anti-CTLA-4. La figura 1A muestra la secuencia de nucleótido de longitud completa para la cadena pesada 4.1.1 (SEQ ID NO:1). La figura 1 B muestra la secuencia de aminoácido de longitud completa para la cadena pesada 4.1.1 (SEQ ID NO:2), y la secuencia de aminoácidos para la región variable de cadena pesada 4.1.1 (SEQ ID NO:3) designada entre los corchetes "[ ]". La secuencia de aminoácidos de cada CDR de cadena pesada 4.1.1 es subrayada. Las secuencias CDR son como siguen: CDR1 : GFTFSSHGMH (SEQ ID NO:4); CDR2: VIWYDGRNKYYADSV (SEQ ID NO:5); y CDR3: GGHFGPFDY (SEQ ID NO:6). La figura 1C muestra la secuencia de nucleótidos para la cadena ligera 4.1.1 (SEQ ID NO:7). La figura 1 D muestra la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera 4.1.1 de longitud completa (SEQ ID NO:8), y la región variable como se indica entre los corchetes "[ ]" (SEQ ID NO:9). La secuencia de aminoácidos de cada CDR se indica como sigue: CDR1 : RASQSISSSFLA (SEQ ID NO:10); CDR2: GASSRAT (SEQ ID NO:11); y CDR3: CQQYGTSPWT (SEQ ID NO: 12). Las figuras 2A-2D, muestran las secuencias de aminoácidos y de nucleótidos de anticuerpo 4.13.1 anti-CTLA-4. La figura 2A muestra la secuencia de nucleótido de longitud completa para la cadena pesada 4.13.1 (SEQ ID NO:13). La figura 2B muestra la secuencia de aminoácidos de longitud completa para la cadena pesada 4.13.1 (SEQ ID NO:14), y la secuencia de aminoácidos para la región variable de cadena pesada 4.13.1 (SEQ ID NO: 15) designada entre los corchetes "[ ]". La secuencia de aminoácidos de cada CDR de cadena pesada 4.13.1 es subrayada. Las secuencias CDR son como siguen: CDR1 : GFTFSSHGIH (SEQ ID NO:16); CDR2: VIWYDGRNKDYADSV (SEQ ID NO:12); y CDR3: VAPLGPLDY (SEQ ID NO: 18). La figura 2C muestra la secuencia de nucleótidos para la cadena ligera 4.13.1 (SEQ ID NO:19). La figura 2D muestra la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera 4.13.1 de longitud completa (SEQ ID NO:20), y la región variable como se indica entre los corchetes "[ ]" (SEQ ID NO:21). La secuencia de aminoácidos de cada CDR se indica como sigue: CDR1 : RASQSVSSYLA (SEQ ID NO:22); CDR2: GASSRAT (SEQ ID NO:23); y CDR3: CQQYGRSPFT (SEQ ID NO: 24). Las figuras 3A-3D, muestran las secuencias de aminoácidos y de nucleótidos de anticuerpo 11.2.1 anti-CTLA-4. La figura 3A muestra la secuencia de nucleótido de longitud completa para la cadena pesada 11.2.1 (SEQ ID NO:25). La figura 3B muestra la secuencia de aminoácidos de longitud completa para la cadena pesada 11.2.1 (SEQ ID NO:26), y la secuencia de aminoácidos para la región variable de cadena pesada 11.2.1 (SEQ ID NO:27) designada entre los corchetes "[ ]". La secuencia de aminoácidos de cada CDR de cadena pesada 11.2.1 es subrayada. Las secuencias CDR son como siguen: CDR1: GFTFSSYGMH (SEQ ID NO:28); CDR2: VIWYDGSNKYYADSV (SEQ ID NO:29); y CDR3: DPRGATLYYYYYGMDV (SEQ ID NO:30). La figura 3C muestra la secuencia de nucleótidos para la cadena ligera 11.2.1 (SEQ ID NO:31). La figura 3D muestra la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera 11.2.1 de longitud completa (SEQ ID NO:32), y la región variable como se indica entre los corchetes "[ ]" (SEQ ID NO:33). La secuencia de aminoácidos de cada CDR se indica como sigue: CDR1 : RASQSINSYLD (SEQ ID NO:34); CDR2: AASSLQS (SEQ ID NO:35); y CDR3: QQYYSTPFT (SEQ ID NO: 36).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a nuevos métodos terapéuticos que comprenden la co-administración de una combinación de un anticuerpo anti-CTLA-4 y un ODN CpG (es decir, ODN CpG PF3512676), para el tratamiento del cáncer. Los cánceres a ser tratados de acuerdo a la invención incluyen, pero sin limitarse, a cáncer de vejiga, tumores de cerebro, cáncer de mama, cáncer cervical, cáncer colorrectal, cáncer gastrointestinal, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma hepatocelular, enfermedad de Hodgkin, sarcoma de Kaposi, leucemias agudas y crónicas, leucemia de célula T cutánea, leucemias mieloide y linfoide, cáncer de pulmón (incluyendo carcinoma de pulmón de célula no pequeña), melanoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, carcinoma de célula escamosa de la piel, cáncer de tiroides, y carcinomas y sarcomas de otros tipos (por ejemplo, liposarcoma, osteosarcoma) entre muchos otros. En varias modalidades, el método comprende la administración de ODN CpG PF 3512676 en combinación con el anticuerpo para la terapia neo-adyuvante, adyuvante, de primera línea, segunda línea, o tercera línea para el cáncer. Los anticuerpos que se pueden emplear en la presente invención, y métodos para su producción, se describen en la solicitud internacional No. PCT/US99/30895, publicada el 29 de junio de 2000 como WO 00/37504, solicitud de patente Europea No. EP 1262193 A1 , publicada el 12 de abril de 2002, la solicitud de patente de E.U.A. No. 09/472,087, ahora emitida como patente de E.U.A. No. 6,682,736, solicitud de patente de E.U.A. No. 09/948,939, ahora publicada como publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. 2002/0086014 (por ejemplo, MDX-010, Medarex, Princeton, NJ), cada una de las cuales se incorpora para referencia aquí en su totalidad. Aunque la información en las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos se refiere a estos anticuerpos se proporciona aquí, información adicional se puede encontrar en la Patente de E.U.A. No. 6,682,736, así como solicitudes publicadas WO 00/37504, EP 1262193, y US2002/0086014; las secuencias expuestas en aquellas solicitudes se incorporan por la presente aquí para referencia. Ciertos usos para estos anticuerpos para tratar varios cánceres se discuten en la solicitud de patente de E.U.A. No. 10/153,382, ahora publicada como publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. 2003/0086930, que se incorpora para referencia como si expusiera aquí en su totalidad. El oligonucleótido inmuno-estimulador CpG usado en la presente invención es un oligonucleótido inmuno-estimulador CpG clase B. Los oligonucleótidos inmunoestimuladores CpG clase B se han descrito en USP 6,194,388 B1 y 6,239,116 B1 , emitida el 27 de febrero de 2001 y el 29 de mayo de 2001 , respectivamente. El oligonucleótido inmunoestimulador CpG de la invención se denomina ODN CpG PF3512676 y se define por la siguiente secuencia de nucleótidos 5' TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT 3' (SEQ ID NO:37) ODN CpG PF3512676 activa fuertemente células B de humano y tiene efectos mínimos en la inducción de interferón-a. Como se describió con gran detalle aquí, ODN CpG PF3512676 puede tener una cadena primaria homogénea o quimérica, incluyendo pero sin limitarse a enlaces de cadena primaria fosfodiéster y fosforotioato. En otra modalidad, la combinación anticuerpo-CpG ODN PF3512676 se administra con al menos un agente terapéutico adicional, tal como, pero sin limitarse a otros anticuerpos monoclonales no dirigidos a CTLA-4 (por ejemplo, AVASTIN (bevacizumab), MYELOTARG (gemtuzumab), BEXXAR (tositumomab), RITUXAN (rituximab), HERCEPTIN (trastuzumab)), o ligandos de proteína que tienen efectos similares; agentes que activan células que presentan antígeno (células dendriticas, macrófagos, células B, monocitos), incluyendo interferones tipo 1 (por ejemplo, interferón alfa y beta); interferón gama; BCG; agentes que proveen antígenos tumorales en cualquiera y todas las formas, incluyendo antígenos de proteína, antígenos de péptido, lisados de células completas y sus derivados; antígenos codificados genéticamente (por ejemplo, antígenos codificados por adenovirus), componentes celulares del sistema inmune que se han alterado ya sea in vivo o ex vivo para incrementar sus propiedades inmunes (por ejemplo, células dendríticas antologas, linfocitos, proteínas de choque térmico, etc.); agentes quimioterapéuticos tales como, pero sin limitarse a, ciclofosfamida, metotrexato, etoposida, adriamicina, taxanos, fluorouracilo, citosina arabinosida (AraC), y agentes que contienen platino, entre otros. Ejemplos de antígenos incluyen antígenos PSA (por ejemplo PROSTVAC/TRICOM) y antígenos gp 100 derivados de melanoma. La combinación se puede administrar en combinación con una citosina o factor de crecimiento tal como, pero sin limitarse a GM-CSF. En una modalidad, el método de tratamiento es un método sin vacuna. Como se usa aquí, un método sin vacuna se refiere a que la combinación de CpG ODN PF3512676 y anticuerpo anti-CTLA-4 no se usa junto con un antígeno exógeno con el propósito de estimular una respuesta inmune al antígeno. Un método sin vacuna sin embargo puede incluir respuestas inmunes de estimulación a antígenos endógenos. Los antígenos endógenos incluyen aquellos expresados, liberados o esparcido por una célula o masa cancerígena in vivo.

I. Definiciones A menos que se defina otra cosa en la presente, los términos científicos y técnicos usados junto con la presente invención pueden tener los significados que son entendidos comúnmente por aquellos con experiencia en la técnica. Además, a menos que se requiera lo contrario por el contexto, términos singulares pueden incluir pluralidades y términos plurales pueden incluir el singular. Generalmente, la nomenclatura usada junto con, y las técnicas de, cultivo celular y de tejido, biología molecular, inmunología, microbiología, genéticas y química de proteína y ácido nucleico e hibridación que se describen aquí son aquellas bien conocidas y comúnmente usada en la técnica. Los métodos y técnicas de la presente invención generalmente se realizan de acuerdo a los métodos bien conocidos en la técnica y como se describe en varias referencias generales y más específicas que se citan y discuten a lo largo de la presente especificación a menos que se indique lo contrario. Dichas referencias incluyen, por ejemplo, Sambrook y Russell, Molecular Cloning, A Laboratory Approach, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (2001), Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002), y Harlow and Lañe Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1990), las cuales se incorporan en la presente para referencia. Las reacciones enzimáticas y las técnicas de purificación se realizan de acuerdo a las especificaciones del fabricante, como comúnmente se realiza en la técnica o como se describe aquí. Las nomenclaturas usadas junto con, y los procedimientos de laboratorio y técnicas de, química analítica, química orgánica sintética, y química medicinal y farmacéutica descrita aquí son aquellas bien conocidas y usadas comúnmente en la técnica. Las técnicas estándar se usan para la síntesis química, análisis químicos, preparación farmacéutica, formulación, y suministro, y tratamiento de pacientes. Como se usa aquí, cada uno de los siguientes términos tiene el significado asociado con estos en esta sección. Los artículos "un" y "uno" se usan aquí para referirse a uno o más de uno (es decir, al menos uno) del objetivo gramático del artículo. A manera de ejemplo, "un elemento" se refiere a un elemento o más de un elemento. Como se usa aquí, los veinte aminoácidos convencionales y sus abreviaturas siguen el uso convencional. Véase Immunology-A Synthesis (2a Edición, E. S. Golub and D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)), que se incorpora en la presente para referencia. Notación convencional se usa aquí a secuencias de polipéptidos retrato: el extremo izquierdo de una secuencia polipeptídica es al amino-terminal; el extremo derecho de una secuencia polipeptídica es el carboxilo-terminal. Una "sustitución aminoácido conservadora" es una en donde un residuo de aminoácido se sustituye por otro residuo de aminoácido que tiene un grupo R de cadena lateral con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad). En general, una sustitución de aminoácido conservadora no cambiará sustancialmente las propiedades funcionales de una proteína. En casos donde dos o más secuencias de aminoácidos difieren entre sí por sustituciones conservadoras, el porcentaje de identidad de secuencia o grado de similitud se puede ajustar de manera ascendente para corregir la naturaleza conservadora de la sustitución. Medios para hacer este ajuste se conocen bien por aquellos con experiencia en la técnica. Véase, por ejemplo, Pearson, Methods Mol. Biol. 243:307-31 (1994). Ejemplos de grupos de aminoácidos que tienen cadenas laterales con propiedades químicas similares 1) cadenas laterales alifáticas; glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; 2) cadenas laterales alifatica-hidróxilo; serina y treonina; 3) cadenas laterales que contienen amida: asparagina y glutamina; 4) cadenas laterales aromáticas: fenilalanina, tirosina y triptofano; 5) cadenas laterales básicas: lisina, arginina e histidina; 6) cadenas laterales acidas: ácido aspártico y ácido glutámico; y 7) cadenas laterales que contienen azufre: cisteína y metionina. Los grupos de sustitución de aminoácidos conservadores son: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina, glutamato-aspartato, y asparagina-glutamina. Alternativamente, un reemplazo conservador es cualquier cambio que tiene un valor positivo en la matriz PAM250 probabilidad-log descrita en Gonnet et al., Science 256:1443-45 (1992), aquí incorporada para referencia. Un reemplazo "moderadamente conservador" es cualquier cambio que tiene un valor no negativo en la matriz PAM250 probabilidad-log. Las sustituciones de aminoácidos preferidas son aquellas que: (1) reducen susceptibilidad a proteolisis, (2) reducen susceptibilidad a oxidación, (3) alteran la afinidad de unión para formar complejos proteínicos, y (4) confieren o modifican otras propiedades fisicoquímicas o funcionales de dichos análogos. Los análogos que comprenden sustituciones, supresiones, y/o inserciones pueden incluir varias luteínas de una secuencia diferente de la secuencia peptídico de origen natural. Por ejemplo, las sustituciones de aminoácidos sencillos o múltiples (preferiblemente sustituciones de aminoácido conservadores) se pueden hacer en la secuencia de origen natural (preferiblemente en la porción del polipéptido fuera del o los dominios que forma contactos intermoleculares). Una sustitución de aminoácido conservador no cambia sustancialmente las características estructurales de la secuencia de origen (por ejemplo, un aminoácido de reemplazo no tiende a romper un espiral que se presenta en la secuencia de origen, o interrumpe otros tipos de estructura secundaria que caracteriza la secuencia de origen). Ejemplos de estructuras secundarias y terciarias polipeptídicas reconocidas en la técnica se describen en Proteins, Structures and Molecular Principies (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); y Thornton et al., Nature 354:105 (1991), que se incorporan cada una aquí para referencia. La similitud de la secuencia para los polipéptidos, que también se refiere como identidad de secuencia, normalmente se mide usando un software de análisis de secuencia. El software de análisis de proteína hace coincidir secuencias similares usando medidas de similitud asignada a varias sustituciones, supresiones y otras modificaciones incluyendo sustituciones de aminoácido conservadoras. Por ejemplo, GCG contiene programas tales como "GAP" y "Bestfit" que se pueden usar con parámetros de omisión para determinar la homología de secuencia o identidad de secuencia entre los polipéptidos relacionados estrechamente, tales como polipéptidos homólogos de diferentes especies de organismos o entre una proteína tipo silvestre y su muteína. Ver, por ejemplo, GCG Versión 6.1. Las secuencias polipeptídicas también se pueden comparar usando FASTA que usa parámetros de omisión o recomendados, un programa en GCG versión 6.1. FASTA (por ejemplo, FASTA2 y FASTA3) provee alineaciones y porcentaje de identidad de secuencia de las regiones del mejor traslape entre las secuencias de consulta e investigación (Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000)). Otro algoritmo preferido cuando se compara una secuencia de la invención con una base de datos que contiene un gran número de secuencias de diferentes organismos es el programa de computadora BLAST, especialmente blastp o tbiastn, usando parámetros de omisión. Ver, por ejemplo, Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990); Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997); incorporada aquí para referencia. Un "anticuerpo" intacto comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. Véase generalmente, Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)) (incorporada para referencia en su totalidad para todos sus propósitos). Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (HCVR o VH) y una región constante de cadena pesada (CH). La región constante de cadena pesada comprende de tres dominios, CH1 , CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende de una región variable de cadena ligera (LCVR o V ) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera comprende de un dominio, C . Las regiones VH y VL se pueden subdividir adicionalmente en regiones de hiper-variabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), dispersados con regiones que son más conservadas, denominadas regiones de entramado (FR). Cada V y VL se compone de tres CDR y cuatro FR, dispuestas de amino-terminal a carboxilo-terminal en el siguiente orden: FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio está de acuerdo con las definiciones de Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 and 1991)), or Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989). Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a tejidos o factores hospederos, incluyendo varias células del sistema inmune (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Ciq) del sistema complementario clásico. El término "anticuerpo" puede incluir porciones de unión a antígeno de un anticuerpo intacto que retiene la capacidad de unir específicamente el antígeno del anticuerpo intacto, por ejemplo, CTLA-4. Las porciones de unión a antígeno se pueden producir por medio de técnicas de ADN recombinante o por medio de división enzimática o química de anticuerpos intactos. Ejemplos de porciones de unión a antigeno incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consta de los dominios VL, VH, CL y CH1 ; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente disulfurp en la región de articulación; (iii) un fragmento Fd que consta de los dominios VH y CH1 ; (iv) un fragmento Fv que consta de los dominios VL y VH de un brazo sencillo de un anticuerpo, (v) un anticuerpo de dominio sencillo ("dAb"), que consta de un dominio VH como se describe en Ward et al., Nature 341 :544-546 (1989); y (vi) una región determinante de complementariedad aislada (CDR). Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VH y VL se codifican por genes separados, se pueden unir, usando métodos recombinantes, por medio de un enlazador sintético que permite ser hechos como una cadena de proteina sencilla en donde el par de regiones V y VL para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFc); ver, por ejemplo, Bird et al. Science 242:423-426 (1988); y Huston et al. Proc. Nati. Acad. ScL USA 85:5879-5883 (1988)). Dichos anticuerpos de cadena sencilla se incluyen para referencia al término "anticuerpo". Un "anticuerpo bi-específico" tiene dos diferentes especificidades de unión diferentes, ver, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 5,922,845 y la patente de E.U.A. No. 5,837,243; Zeilder J. Immunol. 163:1246-1252 (1999); Somasundaram Hum. Antibodies 9:47-54 (1999); Keler Cáncer Res. 57:4008-4014 (1997). Por ejemplo, la invención provee anticuerpos bi-específicos que tienen un sitio de unión para un antígeno superficial celular, tal como CTLA-4 humano, y un segundo sitio de unión para un receptor Fe sobre la superficie de una célula efectora. La invención también provee anticuerpos multi-especificos, los cuales tienen al menos tres sitios. El término "anticuerpos bi-específicos" incluye además "diacuerpos". Lo diacuerpos son anticuerpos bivalentes, bi-específicos en donde los dominios VH y V se expresan en una cadena polipeptídica sencilla, pero usando un enlazador que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena, forzando de este modo los dominios para formar un par con los dominios complementarios de otra cadena y creando dos sitios de unión a antígeno (véase, por ejemplo, Holliger et al., Proc. Nati. Acad. Sci USA 90:6444-6448 (1993); Poljak et al., Structure 2:1121-1 123 (1994)). Los términos "anticuerpos humanos" o "anticuerpo de secuencia humana", como se usan de manera intercambiable aqui, incluyen anticuerpos que tienen regiones variables y constantes (si están presentes) derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal de humano. Los anticuerpos de secuencia de humano de la invención pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de línea germinal de humano (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica del sitio in vitro o por mutación somática in vivo). No obstante, el término "anticuerpo de humano", como se usa aquí, no pretende incluir anticuerpos "quiméricos" en donde las secuencias CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como un ratón, se han injertado sobre secuencias de entramado de humano (es decir, anticuerpos "humanizados" o PRIMATIZED™). El término "anticuerpo quimérico" como se usa aqui significa un anticuerpo que comprende regiones de dos o más diferentes anticuerpos. En una modalidad, uno o más de las CDR se derivan de un anticuerpo anti-CTLA-4 de humano. En otra modalidad, todas las CDR se derivan de un anticuerpo anti-CTLA-4 de humano. En otra modalidad, las CDR de más de un anticuerpo anti-CTLA-4 de humano se combinan en un anticuerpo humano quimérico. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 de la cadena ligera de un primer anticuerpo anti-CD40 de humano, una CDR2 de la cadena ligera de un segundo anticuerpo anti-CTLA-4 de humano y una CDR3 y CDR3 de la cadena ligera de un tercer anticuerpo anti-CTLA-4 de humano, y las CDR de la cadena pesada se puede derivar de uno o más otros anticuerpos anti-CD40. Además, las regiones de entramado se pueden derivar de uno de los mismos anticuerpos anti-CTLA-4 o de uno o más humanos diferentes. Además, como se discutió previamente en este documento, el anticuerpo quimérico incluye un anticuerpo que comprende una porción derivada de las secuencias de línea germinal de más de una especie.

Por el término "compite", como se usa aquí con respecto a un anticuerpo, se refiere a que un primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, compite para unión con un segundo anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, donde la unión del primer anticuerpo con su epítope cognado disminuye detectablemente en presencia del segundo anticuerpo en comparación con la unión del primer anticuerpo en ausencia del segundo anticuerpo. La alternativa, cuando la unión del segundo anticuerpo a su epítope también disminuye detectablemente en presencia del primer anticuerpo, puede, pero no necesita ser el caso. Esto es, un primer anticuerpo puede inhibir la unión de un segundo anticuerpo a su epítope sin que el segundo anticuerpo inhiba la unión del primer anticuerpo a su respectivo epítope. Sin embargo, cuando cada anticuerpo inhibe detectablemente la unión del otro anticuerpo con su epítope o ligando cognado, ya sea del mismo, mayor o menor grado, se dice que los anticuerpos "compiten en forma cruzada" uno con otro para la unión de su o sus respectivos epítopes. Por ejemplo, los anticuerpos de competición cruzada pueden unirse al epítope, o porción del epítope, al cual los anticuerpos de la invención se unen (por ejemplo, 3.1.1 , 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , y 12.9.1.1). Ambos anticuerpos de competición y de competición cruzada están incluidos por la presente invención. Sin considerar el mecanismo por medio del cual dicha competición o competición cruzada ocurre (por ejemplo, impedimento estérico, cambio de conformación, o unión a un epítope común, o su porción, y lo similar), la persona con experiencia en la técnica apreciará, con base en las enseñanzas provistas aquí, que dichos anticuerpos de competición y/o competición cruzada se incluyen y pueden ser útiles para los métodos descritos en la presente. El término "epítope" incluye cualquier determinante proteínico capaz de unirse a una inmunoglobulina o receptor de célula T. Los determinantes epitópicos usualmente consisten de agrupaciones superficialmente activas de manera química de moléculas tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar normalmente tienen tres características estructurales dimensionales especificas, así como características de carga específicas. Los epítopes de conformación y no conformación se distinguen en la unión al formador pero sin que el último se pierda en presencia de solventes desnaturantes. Por la frase "une específicamente", como se usa aquí, se refiere a un compuesto, por ejemplo, una proteína, un ácido nucleico, un anticuerpo, y lo similar, que reconoce y une una molécula especifica, pero no reconoce sustancialmente o une otras moléculas en una muestra. Por ejemplo, un anticuerpo o un inhibidor de péptido que reconoce y une un ligando cognado (por ejemplo, un anticuerpo anti-CTLA-4 que se une con su antigeno cognado, CTLA-4) en una muestra, pero no reconoce sustancialmente o une otras moléculas en la muestra. De este modo, bajo condiciones de ensayo designadas, el radical de unión especificado (por ejemplo, un anticuerpo o una porción de unión a antígeno del mismo) se une preferentemente a una molécula objetivo particular y no se une en una cantidad significativa a otros componentes presentes en una muestra de prueba. Una variedad de formatos de ensayos se pueden usar para seleccionar un anticuerpo que se une específicamente a una molécula de interés. Por ejemplo, inmunoensayo ELISA de fase sólido, inmunoprotección, BIAcore y análisis Western blot se usan para identificar un anticuerpo que reacciona específicamente con CTLA-4. Normalmente una reacción específica o selectiva será al menos dos veces la señal o ruido de fondo y más normalmente más de 10 veces el fondo, aún más específicamente, se dice que un anticuerpo se "une específicamente" a un antígeno cuando la constante de disociación en equilibrio (KD) es < 1 µM, preferiblemente < 100 nM y todavía más preferiblemente < 10 nM. El término "KD" se refiere a la constante de disociación en equilibrio de una interacción particular anticuerpo-antígeno. Como se usa aquí, "sustancialmente puro" se refiere a que una especie objeto es la especie predominante presente (es decir, en una base molar es más abundante que cualquier otra especie individual en la composición), y preferiblemente una fracción sustancialmente purificada es una composición en donde las especies objeto (por ejemplo, un anticuerpo anti-CTLA-4) comprende al menos aproximadamente 50 por ciento (en una base molar) de todas las especies macromoleculares presentes. Generalmente, una composición sustancialmente pura comprenderá más de aproximadamente 80 por ciento de todas las especies macromoleculares presentes en la composición, más preferiblemente más de aproximadamente el 85%, 90%, 95% y 99%. Más preferiblemente, las especies objeto se purifican hasta una homogeneidad esencial (especies contaminantes no se pueden detectar en la composición por métodos de detección convencionales) en donde la composición consiste esencialmente de una especie macromolecular sencilla. Por el término "cantidad efectiva", o "cantidad terapéuticamente efectiva" como se usa aquí, se refiere a una cantidad que cuando se administra a un mamífero, preferiblemente un ser humano, media una respuesta terapéutica detectable en comparación a la respuesta detectada en ausencia del compuesto. Una respuesta terapéutica, tal como, pero sin limitarse a, inhibición de y/o crecimiento de tumor disminuido, (incluyendo estasis de tamaño del tumor), tamaño del tumor, metástasis, y lo similar, se pueden valorar fácilmente por medio de una plétora de métodos reconocidos en la técnica, incluyendo, por ejemplo, dichos métodos como los descritos aquí. La persona con experiencia en la técnica puede entender que la cantidad efectiva del compuesto o composición administrada en la presente varía y se puede determinar fácilmente con base en un número de factores tales como la enfermedad o condición a ser tratada, la etapa de la enfermedad, la edad y salud y condición física del mamífero a ser tratado, la severidad de la enfermedad, el compuesto particular a ser administrado, y lo similar. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" o una "cantidad efectiva" pretende calificar la cantidad de un agente requerida para reducir detectablemente en algún grado uno o más de los síntomas de un trastorno de neoplasia, incluyendo, pero sin limitarse a: 1) reducción en el número de células cancerosas; 2) reducción en el tamaño del tumor; 3) inhibición (es decir, disminución en algún grado, preferiblemente la interrupción) de infiltración de células cancerígenas en órganos periféricos; 4) inhibición (es decir, disminución en algún grado, preferiblemente la interrupción) de la metástasis tumoral; 5) inhibición, en algún grado, de crecimiento tumoral; 6) aliviar o reducir en algún grado uno o más de los síntomas asociados con el trastorno; y/o 7) aliviar o reducir los efectos secundarios asociados con la administración de agentes anti-cancerígenos. Combinado con las enseñanzas mencionadas aquí, al seleccionar entre los varios compuestos activos y ponderando factores tales como la potencia, bio-disponibilidad relativa, peso corporal del paciente, severidad de efectos secundarios adversos y modo preferido de administración, un régimen de tratamiento profiláctico o terapéutico se puede planear el cual no cause toxicidad sustancial y aún sea efectivo completamente para tratar el sujeto particular. La cantidad efectiva para cualquier aplicación particular puede variar dependiendo en dichos factores como la enfermedad o condición a ser tratada, la severidad de la enfermedad o condición, y la salud y tamaño del sujeto. Una persona con experiencia en la técnica puede determinar de manera empírica la cantidad efectiva de CpG ODN PF3512676, anticuerpos anti-CTLA-4, y/o otros agentes terapéuticos sin necesitar experimentación indebida.

La cantidad terapéuticamente efectiva de ODN y/o anticuerpos de manera individual o en conjunto se puede determinar inicialmente de modelos de animales. Una dosis terapéuticamente efectiva también se puede determinar de datos de humano para el ODN específico y/o anticuerpos específicos o para otros compuestos que son conocidos para exhibir actividades farmacológicas similares. Dosis más altas se pueden requerir para la administración parenteral. La dosis aplicada se puede ajustar con base en la bio-disponibilidad y potencias relativa del compuesto administrado. El ajuste de la dosis para lograr la máxima eficacia con base en los métodos descritos anteriormente y otros métodos se conoce bien en la técnica dentro de las capacidades de la persona con experiencia ordinaria. "Material de instrucción", como el término se usa aquí, incluye una publicación, un registro, un diagrama, o cualquier otro medio de expresión que se pueda usar para comunicar la utilidad del compuesto, combinación, y/o composición de la invención en el equipo para afectar, aliviar o tratar las varias enfermedades o trastornos nombrados en la presente. Opcionalmente, o alternativamente, el material de instrucción puede describir uno o más métodos para aliviar las enfermedades o trastornos en una célula, un tejido, o un mamífero, incluyendo lo descrito en otra parte aqui. El material de instrucción del equipo puede, por ejemplo, fijarse a un contenedor que contiene el compuesto y/o composición de la invención o embarcarse en conjunto con un contenedor que contiene el compuesto y/o composición. Alternativamente, el material de instrucción se puede embarcar de manera separada del contenedor con la intención de que el recipiente use el material de instrucción y el compuesto de manera cooperativa. El ODN y/o anticuerpo de la invención se puede proporcionar en un dispensador medicinal. Un dispensador medicinal es un paquete que define una pluralidad de compartimientos de almacenamiento medicinal, cada compartimiento para alojar una unidad individual de medicamento. Un curso medicinal completo de tratamiento se aloja en una pluralidad de compartimientos de almacenamiento medicinal. Un paquete que define una pluralidad de compartimientos de almacenamiento medicinal puede ser cualquier tipo de paquete farmacéutico desechable o cartoncillo que mantenga los medicamentos en compartimientos individuales. Por ejemplo, el paquete es un paquete tipo burbuja construido de cartoncillo, que se puede hacer de material de papel rígido, una hoja con burbuja y una hoja de soporte. Dichos cartoncillos se conocen bien por aquellos con experiencia en la técnica. Como un ejemplo, un dispensador medicinal puede alojar un curso de tratamiento medicinal completo. El dispensador puede incluir los indicios del día para indicar que día las unidades individuales de medicamento se tienen que tomar. Estos se pueden marcar a lo largo de de un primer lado del paquete medicinal. Los indicios de la dosis también se pueden marcar, por ejemplo a lo largo de un segundo lado del paquete medicinal perpendicular al primer lado del paquete medicinal, indicando de este modo el tiempo en el cual la unidad individual de medicamento se debe tomar. Las dosis unitarias se pueden contener en el dispensador que es un paquete tipo burbuja. Excepto cuando se indique, los términos "paciente" o "sujeto" se usan de manera intercambiable y se refieren a mamíferos tales como pacientes humanos y primates no humanos, así como sujetos veterinarios tales como conejos, ratas, y ratones, y otros animales. Preferiblemente, el paciente se refiere a un humano. Como se usa aquí, para "tratar" se refiere a reducir la frecuencia con la cual los síntomas de una enfermedad (es decir, crecimiento tumoral y/o metástasis, u otros efectos mediados por los números y/o actividad de células inmunes, y lo similar) se presentan en un paciente. El término incluye la administración de los compuestos o agentes de la presente invención para prevenir o retardar el inicio de los síntomas, complicaciones o indicios bioquímicos de una enfermedad (por ejemplo, elevación del nivel de PSA en el cáncer de próstata), aliviar los síntomas o suprimir o inhibir el desarrollo adicional de la enfermedad, condición o trastorno. El tratamiento puede ser profiláctico (para prevenir o retardar el inicio de la enfermedad, o para prevenir la manifestación de síntomas clínicos o sub-clínicos de la misma) o supresión terapéutica o alivio de síntomas después de la manifestación de la enfermedad. "Terapia de combinación" incluye la administración de un CpG ODN PF3512676 y un anticuerpo CTLA-4 como parte de un régimen de tratamiento específico propuesto para proporcionar un efecto benéfico de la co-acción de estos agentes terapéuticos. El efecto benéfico de la combinación incluye, pero sin limitarse a, co-acción farmacocinética o farmacodinámica que resulta de la combinación de agentes terapéuticos. La administración de estos agentes terapéuticos en combinación normalmente se realiza durante un periodo de tiempo definido (normalmente minutos, horas, días o semanas dependiendo de la combinación seleccionada). "Terapia de combinación" no pretende incluir la administración de dos o más de estos agentes terapéuticos como parte de regímenes de mono-terapia separados que incidentalmente y arbitrariamente resultan en las combinaciones de la presente invención. "Terapia de combinación" incluye la administración de estos agentes terapéuticos de una manera secuencial, es decir, en donde cada agente terapéutico se administra en un momento diferente, así como administración de estos agentes terapéuticos, o al menos dos de los agentes terapéuticos, de una manera sustancialmente simultanea. La administración sustancialmente simultánea se puede realizar, por ejemplo, por medio de la administración al sujeto de una cápsula sencilla que tiene una relación fija de cada agente terapéutico o en múltiples cápsulas sencillas para cada uno de los agentes terapéuticos. La administración secuencial sustancialmente simultánea de cada agente terapéutico se puede realizar por cualquier ruta de administración apropiada incluyendo, pero sin limitarse a, rutas orales, rutas intravenosas, intramuscular, rutas subcutánea, y absorción directa a través de tejidos de membrana de la mucosa. Los agentes terapéuticos se pueden administrar por la misma ruta o por diferentes rutas. Por ejemplo, un primer agente terapéutico (por ejemplo, CpG ODN PF3512676) se puede administrar por medio de inyección sub-cutánea, y un segundo agente (por ejemplo, anticuerpo anti-CTLA-4) se puede administrar de manera intravenosa. Además, un primer agente terapéutico de la combinación seleccionada se puede administrar por medio de inyección intravenosa mientras los otros agentes terapéuticos de la combinación se pueden administrar oralmente. Alternativamente, por ejemplo, ambos agentes terapéuticos se pueden administrar oralmente o ambos agentes terapéuticos se pueden administrar por medio de inyección intravenosa. "Terapia de combinación" también puede abarcar la administración de los agentes terapéuticos como se describió anteriormente en combinación adicional con otros ingredientes biológicamente activos (tales como, pero sin limitarse a, un segundo y diferente agente anti-neoplásico, una vacuna dendrítica u otra vacuna contra un tumor) y terapias sin fármacos (tales como, pero sin limitarse a, cirugía o tratamiento con radiación). Cuando la terapia de combinación comprende además tratamiento de radiación, el tratamiento con radiación se puede realizar en cualquier momento adecuado siempre que se logre un efecto benéfico de la co-acción de la combinación de los agentes terapéuticos y tratamiento con radiación. Por ejemplo, en casos apropiados, el efecto benéfico se logra todavía cuando el tratamiento con radiación se remueve temporalmente de la administración de los agentes terapéuticos, probablemente por dias o aún semanas.

II. Anticuerpos anti-CTLA-4 Como se estableció anteriormente en otra parte en la presente el anticuerpo anti-CTLA-4 preferido es un anticuerpo de humano que se une específicamente a CTLA-4 de humano. Anticuerpos anti-CTLA-4 de humano ejemplares se describen con detalle en la solicitud internacional No. PCT/US99/30895, publicada el 29 de junio de 2000 como WO 00/37504, solicitud de patente europea No. EP 1262193 A1 , publicada el 12 de abril de 2002, y la solicitud de patente de E.U.A. No. 09/472,087, ahora emitida como patente de E.U.A. No. 6,682,736, para Hanson et al., así como solicitud de patente de E.U.A. No. 09/948,939, publicada como US2002/0086014, cuya descripción completa se incorpora por la presente para referencia. Dichos anticuerpos incluyen, pero sin limitarse a, 3.1.1 , 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , y 12.9.1.1 , así como MDX-010. Los anticuerpos de humano proveen una ventaja sustancial en los métodos de tratamiento de la presente invención, ya que se espera que minimicen las respuestas inmunogénicas y alérgicas que se asocian con el uso de anticuerpos humanos en pacientes humanos. Características de los anticuerpos anti-CTLA-4 de humano útiles de la invención se discuten extensamente en WO 00/37504, EP 1262193, y la patente de E.U.A. No. 6,682,736 así como la publicación de solicitud de patente de E.U.A. Nos. US2002/0086014 y US2003/0086930, y las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos expuestas en estas se incorporan para referencia aquí en su totalidad. Brevemente, los anticuerpos de la invención incluyen anticuerpos que tienen secuencias de aminoácidos de un anticuerpo tal como, pero sin limitarse a, anticuerpo 3.1.1 , 4.1 .1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 1 1.2.1 , 11.6.1 , 1 1.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1 .1 , y MDX-010. La invención también se refiere a anticuerpos que tienen las secuencias de aminoácidos de las CDR de las cadenas ligeras y pesadas de estos anticuerpos, así como aquellos que tienen cambios en las regiones CDR. Como se describió en las solicitudes y patentes citadas anteriormente. La invención también se refiere a anticuerpos que tienen las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras de aquellos anticuerpos. En otra modalidad, el anticuerpo se selecciona de un anticuerpo que tiene la longitud completa, región variable, o CDR, secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de anticuerpos 3.1.1 , 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 1 1.2.1 , 11.6.1 , 1 1.7.1 , 12.3.1.1 , y 12.9.1.1 , y MDX-010. En una modalidad, la invención comprende una combinación de anticuerpo-agente terapéutico que comprende un anticuerpo anti-CTLA-4 de humano descrita en la solicitud de patente de E.U.A. No. 09/948,939, publicada como publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. 2002/0086014 y No. 2003/0086930, y referencias citadas aquí, incluyendo, pero sin limitarse a, MAb 10D1 (MDX-010, Medarex, Princeton, NJ). Aún más preferiblemente, el anticuerpo anti-CTLA-4 es MDX-010. Alternativamente, el anticuerpo anti-CTLA-4 es 1 1.2.1 (Ticilimumab; CP-675,206). En otra modalidad, la secuencia de aminoácidos del VH comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NOs:3, 15 y 27. Todavía en otra modalidad el VL comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NOs:9, 21 y 33. Más preferiblemente, VH y VL comprenden las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:3 (V 4.1.1) y SEQ ID NO:9 (V 4.1.1), respectivamente; las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:15 (VH 4.13.1) y SEQ ID NO:21 (VL 4.13.1), respectivamente; y las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:27 (VH 11.2.1 ) y SEQ ID NO:33 (VL 11.2.1 ), respectivamente. Aún en otra modalidad, la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácido codificada por un ácido nucleico que comprende las secuencias de ácidos nucleicos expuestas en SEQ ID NOs: 1 , 13, y 25. Todavía en otra modalidad, la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos codificada por un ácido nucleico que comprende las secuencias de ácido nucleico expuestas en SEQ ID NOs:7, 19 y 31. Más preferiblemente, las cadenas pesada y ligera comprenden las secuencias de aminoácido codificadas por ácidos nucleicos que comprenden las secuencias de ácido nucleico expuestas en SEQ ID NO:1 (cadena pesada 4.1.1) y SEQ ID NO:7 (cadena ligera 4.1.1), respectivamente; las secuencias de ácido nucleico expuestas en SEQ ID NO:13 (cadena pesada 4.13.1) y SEQ ID NO:19 (cadena ligera 4.13.1), respectivamente; y las secuencias de ácido nucleico expuestas en SEQ ID NO:25 (cadena pesada 11.2.1) y SEQ ID NO:31 (cadena ligera 11.2.1), respectivamente. Además, el anticuerpo puede comprender una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que comprende secuencias de aminoácidos CDR de humano derivadas de VH 3-30 o 3-33 genes, o sustituciones conservadoras o mutaciones somáticas en estas. El anticuerpo también puede comprender regiones CDR en su cadena ligera derivada del gen A27 u 012, es decir, menos de cinco, o menos de diez de dichas mutaciones. El anticuerpo también puede comprender regiones de entramado de estos genes, incluyendo aquellas que difieren por menos de diez, o menos de diez aminoácidos. También se incluyen anticuerpos con las regiones de entramado descritas aquí que se han mutado para reflejar la secuencia de línea germinal original. En otras modalidades de la invención, el anticuerpo inhibe la unión entre CTLA-4 y B7-1 , B7-2, o ambos. Preferiblemente, el anticuerpo puede inhibir la unión con B7-1 con una IC50 de aproximadamente 100 nM o menos, más preferiblemente, aproximadamente 10 nM o menos, por ejemplo aproximadamente 5 nM o menos, aún más preferiblemente, aproximadamente 2 nM o menos, o aún más preferiblemente, por ejemplo aproximadamente 1 nM o menos. Así mismo, el anticuerpo puede inhibir la unión con B7-2 con una IC50 de aproximadamente 100 nM o menos, más preferiblemente, 10 nM o menos, por ejemplo aún más preferiblemente, aproximadamente 5 nM o menos, aún más preferiblemente aproximadamente 2 nM o menos, o aún más preferiblemente, aproximadamente 1 nM o menos. Además, en otra modalidad, el anticuerpo anti-CTLA-4 tiene una afinidad de unión para CTLA-4 de aproximadamente 10~8, o una afinidad mayor, más preferiblemente, aproximadamente 10~9, o una afinidad mayor, más preferiblemente, aproximadamente 10~10, o una afinidad mayor, y todavía más preferiblemente, aproximadamente 10"1 , o una afinidad mayor. El anticuerpo anti-CTLA-4 puede competir para unirse con un anticuerpo que tiene secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 6.1.1 , 11.2.1 , 4.13.1 y 4.14.3. Además, el anticuerpo anti-CTLA-4 puede competir para unirse con un anticuerpo MDX-010. En otra modalidad, el anticuerpo preferiblemente compite en forma cruzada con un anticuerpo que tiene una secuencia de cadena pesada y ligera, una secuencia de cadena pesada variable y cadena ligera variable, y/o secuencias CDR pesada y ligera de anticuerpo 4.1.1 , 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1. o 11.2.1. Por ejemplo, el anticuerpo puede unirse al epítope al cual un anticuerpo que tiene secuencias de aminoácido de cadena pesada y cadena ligera, secuencias variables y/o secuencias CDR, de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , o 11.2.1 se une. En otra modalidad, el anticuerpo compite de forma cruzada con un anticuerpo que tiene secuencias de cadena pesada y ligera, o secuencias de unión a antígeno de MDX-010. En otra modalidad, la invención se practica usando un anticuerpo anti-CTLA-4 que comprende una cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de CDR-1 , CDR-2, y CDR-3, y una cadena ligera que comprende las secuencias de aminoácidos de CDR-1 , CDR-2, y CDR-3, de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 3.1.1 , 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , y 12.9.1.1 , o secuencias que tienen cambios de dichas secuencias CDR seleccionadas del grupo que consta de cambios conservadores, en donde los cambios conservadores se seleccionan del grupo que consta de reemplazo de residuos no polares por otros residuos no polares, reemplazo de residuos de carga polar por otros residuos sin carga polar, reemplazo de residuos de carga polar por otros residuos de carga polar, y sustitución de residuos estructuralmente similares; sustituciones no conservadoras, en donde las sustituciones no conservadoras se seleccionan del grupo que consta de sustitución de residuo con carga polar por residuos sin carga polar y sustitución de residuos no polares por residuos polares, adiciones y supresiones. En una modalidad adicional de la invención, el anticuerpo contiene menos de 10, 7, 5, o 3 cambios de aminoácidos de la secuencia de línea germinal en las regiones de entramado o regiones CDR. En otra modalidad, el anticuerpo contiene menos de 5 cambios de aminoácidos en las regiones de entramado y menos de 10 cambios en las regiones CDR. En una modalidad preferida, el anticuerpo contiene menos de 3 cambios de aminoácidos en las regiones de entramado y menos de 7 cambios en las regiones CDR. En una modalidad preferida, los cambios en las regiones de entramado son conservadoras y aquellos en las regiones CDR son mutaciones somáticas. En una modalidad, el anticuerpo tiene al menos 80%, más preferiblemente, al menos 85%, aún más preferiblemente, al menos 90%, todavía más preferiblemente, al menos 95%, más preferiblemente, al menos 99%, de identidad de secuencia sobre las secuencias de cadena pesada y ligera CDR-1, CDR-2 Y CDR-3 con las secuencias CDR de anticuerpo 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1, y 12.9.1.1. Aún más preferiblemente, el anticuerpo comparte 100% de identidad de secuencia sobre la cadena pesada y ligera CDR-1, CDR-2 y CDR-3 con la secuencia de anticuerpo 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1, y 12.9.1.1. Todavía en otra modalidad, el anticuerpo tiene al menos 80%, más preferiblemente, al menos 85%, aún más preferiblemente, al menos 90%, todavía más preferiblemente, al menos 95%, más preferiblemente, al menos 99%, de identidad de secuencia sobre las secuencias de región variable de cadena pesada y ligera con las secuencias de región variable de anticuerpo 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1, y 12.9.1.1. Aún más preferiblemente, el anticuerpo comparte 100% de identidad de secuencia sobre las secuencias de región variable de cadena pesada y ligera con las secuencias de anticuerpo 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1,4.14.3,6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1, y 12.9.1.1. Aunque los anticuerpos anti-CTLA-4 discutidos previamente en la presente pueden ser preferidos, la persona con experiencia en la técnica, con base en la descripción dada aquí, podrá apreciar que la invención incluye una amplia variedad de anticuerpos anti-CTLA-4 y no se limita a estos anticuerpos particulares. Más particularmente, aunque los anticuerpos de humano son preferidos, la invención de ninguna manera se limita a anticuerpos de humano; más bien, la invención incluye anticuerpos útiles sin considerar el origen de las especies, e incluye, entre otros, anticuerpos humanizados y/o primatizados quiméricos. También, aunque los anticuerpos ejemplificados aquí se obtienen usando una mamífero transgénico, por ejemplo, un ratón que comprende un repertorio inmune humano, el experto en la técnica, con base en la descripción dada aquí, puede entender que la presente invención no se limita a un anticuerpo producido por este o cualquier otro método particular. En cambio, la invención incluye un anticuerpo anti-CTLA-4 producido por algún método, pero sin limitarse a, un método conocido en la técnica (por ejemplo, clasificación de genotecas de despliegue de fago, y lo similar) o para ser desarrollo en el futuro para la producción de un anticuerpo anti-CTLA-4 de la invención. Con base en la descripción extensa dada en la presente y en, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 6,682,736, para Bedian et al., y la publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. 2002/0088014, una persona con experiencia en la técnica puede producir fácilmente e identificar un anticuerpo útil para el tratamiento de cáncer de mama en combinación con un agente terapéutico usando los métodos novedosos descritos en la presente. La presente invención incluye anticuerpos de humano producidos usando un mamífero no humano transgénico, es decir, XenoMouse™ (Abgenix, Inc., Fremont, CA) como se describe en el documento U.S. 6,682,736, para Hanson et al. Otro sistema de ratón transgénico para la producción de anticuerpos "humanos" se refiere a "HuMAb-Mouse™" (Medarex, Princeton, NJ), que contiene mini-sitios de gen de inmunoglobulina de humano que codifica las secuencias de inmunoglobulina de cadena ligera kappa y pesada (mu y gamma) sub-reagrupada, junto con mutaciones que fueron objetivo que inactivan los sitios de cadena mu y kappa endógenos (Lonberg et al. Nature 368:856-859 (1994), y la patente de E.U.A. No. 5,770,429). Sin embargo, la invención usa anticuerpos anti-CTLA-4 de humano producidos usando cualquier mamífero tal como, pero sin limitarse a, el Kirin TC Mouse™ (Kirin Beer Kabushiki Kaisha, Tokio, Japón) como se describe en, por ejemplo, Tomizuka et al., Proc Nati Acad Sci USA 97:722 (2000); Kuroiwa et al., Nature Biotechnol 18:1086 (2000); publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. 2004/0120948, para Mikayama et al.; y el HuMAb-Mouse™ (Medarex, Princeton, NJ) y XenoMouse™ (Abgenix, Inc., Fremont, CA), supra. De este modo, la invención incluye el uso de un anticuerpo anti-CTLA-4 producido usando cualquier animal transgénico u otro animal no humano. Además, aunque el método preferido de producción de un anticuerpo anti-CTLA-4 de humano comprende la generación de los anticuerpos usando un mamífero transgénico no humano que comprende un repertorio inmune humano, la presente invención no se limita a este método. Más bien, se podrá apreciar por una persona con experiencia en la técnica una vez armado con la descripción dada en la presente, que la invención incluye el uso de cualquier método para la producción de un humano, o cualquier anticuerpo específico para CTLA-4 producido de acuerdo a cualquier método conocido en la técnica o para ser desarrollado en el futuro para la producción de anticuerpos que se unen específicamente a un antígeno de interés. Los anticuerpos de humano se pueden desarrollar por medio de métodos que incluyen, pero no se limitan a, uso de genotecas de anticuerpo de despliegue de fago. Usando estas técnicas, los anticuerpos se pueden generar para células que expresan CTLA-4, CTLA-4 por sí mismo, formas de CTLA-4, epítopes o sus péptidos, y genotecas de expresión para esto (ver, por ejemplo, la patente de E.U.A. 5,703,057), que se pueden clasificar después para las actividades descritas anteriormente. En otra modalidad, los anticuerpos empleados en los métodos de la invención no son completamente humanos, pero son "humanizados". En particular, anticuerpos murino o anticuerpos de otras especies se pueden "humanizar" o "primatizar" usando técnicas bien conocidas en la técnica. Ver, por ejemplo, Winter and Harris Immunol. Today 14:43-46 (1993), Wright et al. Crit. Reviews in Immunol. 12:125-168 (1992), y la patente de E.U.A. No. 4,816,567, PARA Cabilly et al, y Mage y Lamoyi en Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications pp. 79-97, Marcel Dekker, Inc., New York, NY (1987). Como se apreciará con base en la descripción dada en la presente, que anticuerpos para usarse en la invención se pueden obtener de un mamífero no humano transgénico, e hibridomas derivados de ahí, pero también se pueden expresar en líneas celulares diferentes de hibridomas. Las lineas celulares de mamíferos como hospederos para la expresión se conocen bien en la técnica e incluyen muchas lineas celulares inmortalizadas disponibles de la colección de cultivo tipo americano (ATCC), incluyendo pero sin limitarse a células de ovario de hámster chino (CHO), NSO, células HeLa, células de riñon de hámster recién nacido (BHK), células de riñon de mono (COS), y células de carcinoma hepatocelulares de humano (por ejemplo, Hep G2). Células procarióticas y eucarióticas de no mamífero también se pueden emplear, incluyendo células bacterianas, de levadura, de insecto y vegetales. Varios sistemas de expresión se pueden usar como es bien sabido en la técnica, tal como, pero sin limitarse a, aquellos descritos en, por ejemplo, Sambrook and Russell, Molecular Cloning, A Laboratory Approach, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (2001), y Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002). Estos sistemas de expresión incluyen sistemas basados en dihidrofolato reductasa (DHFR), entre muchos otros. El sistema glutamina sintetasa de expresión se discute en su totalidad o parcialmente junto con las patentes europeas Nos. EP 216 846, EP 256 055, y EP 323 997 y la solicitud de patente europea 89303964. En una modalidad, el anticuerpo usado se hace en células NSO usando un sistema glutamina sintetasa (GS-NS0). En otra modalidad, el anticuerpo se hace en células CHO usando un sistema DHFR. Ambos sistemas son bien conocidos en la técnica y se describen en, entre otros, Barnes et al. Biotech & Bioengineering 73:261-270 (2001), referencias citadas aquí. La mutagénesis dirigida al sitio del dominio CH2 anticuerpo para eliminar la glicosilación se puede preferir con el fin de prevenir cambios en cualquiera la inmunogenicidad, farmacocinética, y/o funciones efectoras que resultan de la glicosilación diferente de humano. Además, el anticuerpo puede ser deglicosilado por métodos enzimáticos (véase, por ejemplo, Thotakura et al. Meth. Enzymol. 138:350 (1987)) y/o químicos (ver, por ejemplo, Hakimuddin et al., Arch. Biochem. Biophys. 259:52 (1987)). Además, la invención incluye el uso de un anticuerpo anti-CLTA-4 que comprende un patrón de glicosilación alterado. La persona con experiencia podrá apreciar, con base en la descripción dada aquí, que un anticuerpo anti-FLTA-4 se puede modificar para comprender sitios de glicosilación adicionales, unos cuantos, o diferentes en comparación con el anticuerpo de origen natural. Dichas modificaciones se describen en, por ejemplo, la publicación de solicitud de patente Nos. 2003/0207336, y 2003/0157108, y publicación de patente internacional Nos. WO 01/81405 y 00/24893. Además, la invención comprende usar un anticuerpo anti-CTLA-4 sin considerar la glicoforma, si hay, presente en el cuerpo. Además, los métodos para remodelar de manera extensa la glicoforma presente en una glicoproteína se conocen bien en la técnica e incluyen, por ejemplo, aquellos descritos en la publicación de patente internacional WO 03/031464 , WO 98/58964, y WO 99/22764, y publicación de solicitud de patente de E.U.A. Nos. 2004/006391 1 , 2004/0132640, 2004/0142856, 2004/0072290, y patente de E.U.A. No. 6,602,684 para Umaña et al. Además, la invención incluye el uso de un anticuerpo anti-CTLA-4 con cualquier modificación covalente y no covalente conocida en la técnica, incluyendo, pero sin limitarse a, unión del polipéptido a uno de una variedad de polímeros no proteináceos, por ejemplo, polietilen glicol, polipropilen glicol, o polioxialquilenos, de la forma descrita en, por ejemplo, la publicación de solicitud de patente de E.U.A. Nos. 2003/0207346 y 2004/0132640, y patente de E.U.A. Nos. 4,640,835; 4,496,689; 4,301 ,144; 4,670,417; 4,791 ,192; 4,179,337. Adicionalmente, la invención incluye el uso de un anticuerpo anti-CTLA-4, o una porción de unión a antígeno del mismo, proteína quimérica que comprende, por ejemplo, un polipéptido de albúmina de suero humano, o fragmento del mismo. Ya sea que la proteína quimérica se produzca usando métodos recombinantes, por ejemplo, al clonar un ácido nucleico quimérico que codifica la proteína quimérica, o por medio del enlace químico de las dos porciones peptídicas, la persona con experiencia en la técnica entenderá una vez armada con las enseñanzas dadas aquí que dichas proteínas quiméricas son bien conocidas en la técnica y pueden conferir propiedades biológicas deseables tales como, pero sin limitarse a, estabilidad incrementada y vida media de suero al anticuerpo de la invención y dichas moléculas son por tanto incluidas en la presente. Los anticuerpos que son generados para usarse en la invención no necesitan poseer inicialmente un isotipo deseado particular. Más bien, el anticuerpo como se genera puede poseer cualquier isotipo y puede ser un isotipo conmutado en adelante usando técnicas convencionales. Estas incluyen técnicas recombinantes directas (ver, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 4,816,397), y técnicas de fusión célula-célula (ver, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 5,916,771). La función efectora de los anticuerpos de la invención se puede cambiar por medio de conmutación del isótopo a un IgGI, lgG2, lgG3, lgG4, IgD, IgA, IgE, o IgM para varios usos terapéuticos. Además, la dependencia en complemento para asesinar la célula se puede evitar a través del uso de bi-específicos, inmunotoxinas, o radio-etiquetas, por ejemplo. Por tanto, aunque los anticuerpos preferidos usados en la invención se ejemplifican por los anticuerpos que tienen las secuencias de aminoácidos de 3.1.1 , 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 , y MDX-010, o, por ejemplo, las secuencias de las regiones V o CDR de las mismas, la presente invención no se limita en ninguna manera a usar estos, o cualquier otro, anticuerpo particular. La invención incluye la administración de combinación de cualquier anticuerpo anti-CTLA-4 de la invención con al menos un agente de terapia hormonal. Preferiblemente, el anticuerpo es 4.1.1 , 4.13.1 , 11.2.1 , y/o MDX-010. Sin embargo, cualquier anticuerpo anti-CTLA-4, o su porción de unión a antígeno, como se describe en otra parte aquí, o como se conoce en la técnica o desarrollado en el futuro, se puede usar en un método de la invención. Más particularmente, los anticuerpos quiméricos humanizados, anticuerpos ant-CTLA-4 derivados de cualquier especie (incluyendo anticuerpos de cadena sencilla obtenidos de camélidos como se describe en, por ejemplo, en la patente de E.U.A. Nos. 5,759,808 y 6,765,087, para Casterman y Hamers), así como cualquier anticuerpo, se puede combinar con un agente terapéutico para practicar los métodos novedosos descritos aquí. La invención también incluye dichos anticuerpos como se describe en, ínter alia, publicación de patente internacional Nos. WO 00/37504 (publicada el 29 de junio de 2000); WO 01/14424 (publicada el 1 de marzo de 2001); WO 93/00431 (publicada el 7 de enero de 1993); y WO 00/32231 (publicada el 8 de junio de 2000), entre muchas otras. Aunque el anticuerpo 4.1.1 , 4.13.1 y 11.2.1 son anticuerpos lgG2 y las secuencias de las regiones variables de los anticuerpos se proporcionan aquí (figuras 1A-3D), y en las solicitudes y patentes referenciadas e incorporadas aquí, se entiende que las secuencias de longitud completa de estos anticuerpos se incluyen aquí, así como el uso de cualquier anticuerpo que comprende las secuencias expuestas en SEQ ID NOs: 1-36, y que comprende además cualquier región constante, sin considerar el isotipo como se discute completamente en cualquier parte aquí. Así mismo, cualquier anticuerpo que comprende la secuencia de longitud completa de MDX-010, o cualquier porción de la misma, incluyendo una secuencia que codifica una porción de unión a antígeno de MDX-010, se puede administrar en combinación con al menos dos agentes de terapia hormonal tratando de este modo cáncer de próstata. De este modo, la persona con experiencia en la técnica, una vez que haya entendido las enseñanzas que se proporcionan aquí, apreciarán que la combinación de anticuerpo anti-CTLA-4-agente terapéutico de la invención puede comprender una amplia plétora de anticuerpos anti-CTLA-4. Además, la persona con experiencia en la técnica, una vez que haya entendido las enseñanzas que se proporcionan aquí, entenderá que la invención no se limita a administración de solo un anticuerpo sencillo; más bien, la invención incluye la administración de al menos un anticuerpo anti-CTLA-4, por ejemplo, 4.1.1 , 4.13.1 y 11.2.1 , en combinación con un agente terapéutico. Además, la invención incluye la administración de cualquier combinación de cualquier anticuerpo anti-CTLA-4, conocido, incluyendo, pero sin limitarse a, administración de un agente terapéutico en combinación con, por ejemplo, 4.1.1 , 4.13.1 y 11.2.1 , y MDX-010. De este modo, cualquier combinación de anticuerpos anti-CTLA-4 se puede combinar con al menos un agente terapéutico y la presente terapéutico abarca cualquier combinación y permutación de estos.

III. ODN CpG Los oligonucleótidos CpG contienen secuencias específicas encontradas para producir una respuesta inmune. Estas secuencias específicas son referidas como "motivos inmunoestimuladores" y los oligonucleótidos que contienen motivos inmunoestimuladores son referidos como "moléculas de oligonucleótido ¡nmunoestimulador" y equivalentemente. Los oligonucleótidos inmunoestimuladores incluyen al menos un motivo inmunoestimulador, y preferiblemente ese motivo es un motivo interno. El término "motivo inmunoestimulador interno" se refiere a la posición de la secuencia del motivo dentro de una secuencia de oligonucleótido que es al menos un nucleótido más largo (en ambos extremos 5'y 3') que la secuencia del motivo. Los oligonucleótidos CpG incluyen al menos un dinucleótido CpG no metilado. Un oligonucleótido que contiene al menos un dinucleótido CpG no metilado es una molécula de oligonucleótido que contiene una secuencia de dinucleótido citosina-guanina (es decir, "ADN CpG" o ADN que contiene una citosina 5' unida por medio de un enlace fosfato a una guanina 3') y activa el sistema inmune. El oligonucleótido CpG total puede ser no metilado o porciones pueden ser no metiladas pero al menos el C del 5' CG 3' debe ser no metilado. La clase B de los oligonucleótidos CpG se representa por la fórmula: 5' X1CGX2 3' en donde X-i y X2 son nucleótidos. En algunas modalidades, Xi puede ser adenina, guanina, o timina y/o X2 puede ser citosina, adenina, o timina. La clase B de oligonucleótidos CpG también se presenta por la fórmula: 5' X?X2CGX3X4 3' en donde X-i, X2, X3, y X4 son nucleótidos. X2 puede ser adenina, guanina o timina. X3 puede ser citosina, adenina, o timina. La clase B de oligonucleótido CpG incluye oligonucleótidos representados por al menos la fórmula: 5' N1X1X2CGX3X4N2 3' en donde X^ X2, X3, y X4 son nucleótidos y N es cualquier nucleótido y N-i y N2 son secuencias de oligonucleótido compuestas de aproximadamente 0-25 N cada una. X^2 puede ser un dinucleótido seleccionado del grupo que consta de: GpT, GpG, GpA, ApA, ApT, ApG, CpT, CpA, CpG, TpA, TpT, y TpG; y X3X puede ser un dinucleótido seleccionado del grupo que consta de: TpT, ApT, TpG, ApG, CpG, TpC, ApC, CpC, TpA, ApA, y CpA. La clase B de oligonucleótidos CpG se describe en las solicitudes de patente publicadas PCT PCT/US95/01570 y PCT/US97/19791 , y USP 6,194,388 B1 y USP 6,239,116 B1 , emitida el 27 de febrero de 2001 y el 29 de mayo de 2001 respectivamente. Las moléculas de oligonucleótido inmunoestimuladoras pueden tener una cadena primaria (por ejemplo, fosfodiéster enteramente o fosfotioato enteramente) o una cadena primaria quimérica. Para propósitos de la presente invención, una cadena primaria quimérica se refiere a una cadena primaria estabilizada parcialmente, en donde al menos un enlace internucleótido es fosfodiéster o tipo fosfodiéster, y en donde al menos un enlace internucleótido diferente es un enlace internucleótido estabilizado, en donde el al menos un enlace fosfodiéster o tipo fosfodiéster y el al menos un enlace estabilizado son diferentes. Ya que los enlaces boranofosfonato se han reportado por ser estabilizados en relación a enlaces fosfodiéster, para propósitos de la naturaleza quimérica de la cadena primaria, los enlaces boranofosfonato se pueden clasificar como tipo fosfodiéster o como estabilizado, dependiendo del contexto. Por ejemplo, una cadena primaria de acuerdo a la presente invención puede, en una modalidad, incluye al menos un enlace fosfodiéster (fosfodiéster o tipo fosfodiéster) y al menos un enlace boranofosfonato (estabilizado). En otra modalidad, una cadena primaria quimérica de acuerdo a la presente invención puede incluir boranofosfonato (fosfodiéster o tipo fosfodiéster) y enlaces fosforotiotato (estabilizados). Un "enlace internucleótido estabilizado" se refiere a un enlace internucleótido que relativamente resistente a degradación in vivo (por ejemplo, vía una exo- o endo-nucleasa), en comparación a un enlace intemucleótido fosfodiéster. Los enlaces internucleótido estabilizados preferidos incluyen, sin limitación, fosforotioato, fosforoditioato, metilfosfonato y metil fosforotioato. Otros enlaces estabilizados internucleótido incluyen, sin limitación, péptido, alquilo, enlaces tipo defosfo, y otros como se describió anteriormente. Las cadenas primarias modificadas tales como fosforotioatos se pueden sintetizar usando técnicas automatizadas que emplean químicas fosforamidato o H-fosfonato. Aril- y alquil-fosfonatos se pueden hacer, por ejemplo, como se describe en la patente de E.U.A. No. 4,469,863; y alquilfosfotriésteres (en donde el radical oxígeno cargado es alquilado), por ejemplo, como se describe en la patente de E.U.A. No. 5,023,243 y patente europea No. 092,574, se pueden preparar por medio de síntesis en fase sólida automatizada usando reactivos comercialmente disponibles. Métodos para elaborar otras modificaciones de la cadena primaria de ADN y sustituciones se han descrito. Uhlmann E et al. (1990) Chem Rev 90:544; Goodchild J (1990) Bioconjugate Chem 1 :165. Métodos para la preparación de oligonucleótidos quiméricos son también conocidos. Por ejemplo las patentes emitidas para Uhlmann et al. han descrito dichas técnicas. El ODN modificado en la cadena primaria mezclada se puede sustituir usando un sintetizador de ADN comercialmente disponible y química fosforamidita estándar (F. E. Eckstein, "Oligonucleotides and Analogues - A Practical Approach" IRL Press, Oxford, UK, 1991 , y M. D. Matteucci y M. H. Caruthers, Tetrahedron Lett. 21. 719 (1980)). Después del acoplamiento, los enlaces PS se introducen por sulfuración usando el reactivo Beaucage (R. P. lyer, W. Egan, J. B. Regan y S. L. Beaucage, J. Am. Chem. Soc. 1 12, 1253 (1990)) (0.075 M en acetonitrilo) o disulfuro de fenil acetilo (PADS) seguido por el bloqueo del extremo con anhídrido acético, 2,6-lutidina en tetrahidrofurano (1 :1 :8; v:v:v) y N-metilimidazol (16 % en tetrahidrofurano). Esta etapa de bloqueo de extremo se realiza después de la reacción de sulfuración para minimizar la formación de enlaces fosfodiéster indeseados (PO) en posiciones donde un enlace fosforotioato se puede localizar. En el caso de la introducción de un enlace fosfodiéster, por ejemplo, en un dinucleótido CpG, el fosforo-lll intermedio se oxida por medio del tratamiento con una solución de yodo en agua/piridina. Después de la escisión del soporte sólido y desprotección final por medio del tratamiento con amoníaco concentrado (15 horas a 50 °C), los ODN se analizan por HPLC en una columna Gen-Pak Fax (Millipore-Waters) usando un gradiente NaCI (por ejemplo, regulador de pH A: 10 mM NaH2PO4 en acetonitrilo/agua = 1 :4/v:v pH 6.8; regulador de pH B: 10 mM NaH2PO4 1.5 M NaCI en acetonitrilo/agua = 1 :4/v:v; 5 a 60% de B en 30 minutos a 1 ml/min) o por electrofóresis de gel capilar. Los ODN se pueden purificar por HPLC o por FPLC en una columna de alto desempeño Source (Amersham Pharmacia). Las fracciones HPLC-homogéneas se combinan y desalan vía una columna C18 o por medio de ultra-filtración. Los ODN se analizan por medio de espectrometría de masas MALDI-TOF para confirmar las masas calculadas. Los oligonucleótidos de la invención pueden incluir también otras modificaciones. Estas incluyen análogos de ADN no iónicos, tales como alquil-y aril-fosfatos (en donde el oxígeno fosfonato cargado se reemplaza por un grupo alquilo o arilo), fosfodiéster y alquilfosfotriésteres, en donde el radical oxígeno cargado es alquilado. Los oligonucleótidos que contienen diol, tales como tetraetilenglicol o hexaetilenglicol, en cualquiera o ambas terminales también han mostrado que son sustancialmente resistentes a la degradación de nucleasa. En lagunas modalidades los oligonucleótidos pueden ser oligonucleótidos suaves o semi-suaves. Un oligonucleótido suave es un oligonucleótido inmunoestimulador que tiene una cadena primaria estabilizada parcialmente, en donde los enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster ocurren solo dentro y adyacentes inmediatamente a al menos un dinucleótido pirimidina-purina interno (YZ). Preferiblemente YZ es YG, un dinucleótido pirimidina-guanosina (YG). El al menos un dinucleótido YZ interno por sí mismo tiene un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster. Un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster que ocurre inmediatamente adyacente a al menos un dinucleótido YZ puede ser 5', 3', o ambos 5' y 3' a al menos un dinucleótido YZ interno. En particular, los enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster involucran "dinucleótidos internos". Un dinucleótido interno en general se refiere a cualquier par de nucleótidos adyacentes conectados por medio de un enlace internucleótido, en donde ni el nucleótido en el par de nucleótidos es un nucleótido terminal, es decir, ni el nucleótido en el par de nucleótidos es un nucleótido que define el extremo 5' o 3' del oligonucleótido. De este modo un oligonucleótido lineal que es n nucleótidos de largo tiene un total de n-1 dinucleótidos y solamente n-3 dinucleótidos internos. Cada enlace internucleótido en un dinucleótido interno es un enlace internucleótido interno.

De este modo un oligonucleotido lineal que es n nucleótidos de largo tiene un total de n-1 enlaces internucleótido y solamente n-3 enlaces internucleótido internos. Los enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster colocados estratégicamente, por lo tanto, se refieren a enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster colocados entre cualquier par de nucleótidos en la secuencia de oligonucleótido. En algunas modalidades los enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster no se colocan entre el par de nucleótidos más cerca al extremo 5' o 3'. Preferiblemente un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster que ocurre inmediatamente adyacente a al menos un dinucleótido YZ interno es por sí mismo un enlace ¡nternucleótido interno. De este modo para una secuencia N?YZN2, en donde Ni y N2 son cada uno, independiente uno del otro, cualquier nucleótido sencillo, el dinucleótido YZ tiene un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster, y además (a) NT y Y se enlazan por medio de un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster cuando Ni es un nucleótido interno, (b) Z y N2 se enlazan por medio de un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster cuando N2 es un núcleótido interno, o (c) N, y Y se enlazan por medio de un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster cuando Ni es un nucleótido interno y Z y N2 se enlazan por medio de un enlace internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster cuando N2 es un nucleótido interno. Los oligonucleótidos suaves de acuerdo a la presente invención se piensa son susceptibles a escisión de nucleasa en comparación a los oligonucleótidos completamente estabilizados. Sin pretender ligarse por alguna teoría o mecanismo, se cree que los oligonucleótidos suaves de la invención son susceptibles a escisión resultando en fragmentos con actividad ¡nmunoestimuladora reducida o sin ésta relativa a oligonucleótidos suaves de longitud completa. La incorporación de al menos un enlace internucleótido sensible a nucleasa, particularmente cerca de la parte media del oligonucleótido, se piensa que provee un "desvío" que altera los farmacocinéticos del oligonucleótido para reducir la duración de máxima actividad inmunoestimuladora máxima del oligonucleótido. Esto puede ser de valor particular en tejidos y en aplicaciones clínicas en donde es deseable evitar una lesión relacionada a la inflamación o inmuno-estimulación local crónica, por ejemplo, el riñon. Un oligonucleótido semi-suave es un oligonucleótido inmuno-estimulador que tiene una cadena primaria parcialmente estabilizada, en donde los enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster ocurren solo con por lo menos un dinucleótido pirimidina-purina interno (YZ). Los oligonucleótidos semi-suaves poseen generalmente potencia inmuno-estimuladora incrementada relativa a oligonucleótidos inmuno-estimuladores totalmente estabilizados correspondientes. Debido a la gran potencia de oligonucleótidos semi-suaves, oligonucleótidos semi-suaves se pueden usar, en algunos casos, en concentraciones efectivas más bajas y tienen dosis efectivas más bajas que los oligonucleótidos inmuno-estimuladores completamente estabilizados convencionales con el fin de lograr un efecto biológico deseado. Se piensa que las propiedades anteriores de oligonucleótidos semi-suaves generalmente se incrementan al incrementar la "dosis" de enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster que involucran dinucleótidos YZ internos. De este modo se piensa, por ejemplo, que generalmente para una secuencia de oligonucleótido dada con cuatro dinucleótidos YZ internos, un oligonucleótido con cuatro enlaces internucleótido YZ fosfodiéster o tipo fosfodiéster internos es más inmuno-estimulador que un oligonucleótido con tres enlaces internucleótido YZ fosfodiéster o tipo fosfodiéster internos, que a su vez es más inmuno-estimulador que un oligonucleótido con dos enlaces internucleótido YZ fosfodiéster o tipo fosfodiéster internos, que a su vez es más inmuno-estimulador que un oligonucleótido con un enlace internucleótido YZ fosfodiéster o tipo fosfodiéster interno. Importantemente, la inclusión de aún un enlace ¡ntemucleótido YZ fosfodiéster o tipo fosfodiéster interno a veces puede ser conveniente a no tener un enlace internucleótido YZ fosfodiéster o tipo fosfodiéster interno. Además del número de enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster, la posición a lo largo de la longitud del oligonucleótido también puede afectar la potencia. Los oligonucleótidos suaves o semi-suaves generalmente incluirán además de los enlaces internucleótido fosfodiéster o tipo fosfodiéster interno en posiciones internas preferidas, extremos 5' y 3' que son resistentes a la degradación. Dichos extremos resistentes a la degradación pueden involucrar cualquier modificación adecuada que resulta en una resistencia incrementada contra la digestión de exonucleasa sobre los extremos no modificados correspondientes. Por ejemplo, los extremos 5' y 3' se pueden estabilizar por medio de la inclusión ahí de al menos una modificación fosfato de la cadena primaria. En una modalidad preferida, la al menos una modificación fosfato de la cadena primaria en cada extremo es independientemente un enlace internucleótido fosforotioato, fosforoditioato, metilfosfonato, o metilfosforotioato. En otra modalidad, el extremo resistente a la degradación incluye una o más unidades de nucleótido conectadas por un péptido o enlaces amida en el extremo 3'. Un enlace internucleótido fosfodiéster es el tipo de enlace característico de oligonucleótidos encontrados en la naturaleza. El enlace internucleótido fosfodiéster incluye un átomo de fósforo flanqueado por dos átomos de oxígeno de formación de puente y se encuentran también por dos átomos de oxígeno adicionales, uno cargado y el otro no cargado. El enlace internucleótido fosfodiéster es particularmente preferido cuando es importante reducir la vida media del tejido del oligonucleótido. Un enlace internucleótido tipo fosfodiéster es un grupo de formación de puente que contiene fósforo que es químicamente y/o diastereoméricamente similar a fosfodiéster. Mediciones de similitud a fosfodiéster incluyen susceptibilidad a digestión de nucleasa y capacidad para activar RNasa H. De este modo, por ejemplo oligonucleótidos fosfodiéster, pero no fosforotioato, son susceptibles a digestión de nucleasa, aunque ambos oligonucleótidos fosfodiéster y fosforotioato activan RNasa H. En una modalidad preferida el enlace internucleótido tipo fosfodiéster es un enlace boranofosfato (o equivalentemente, boranofosfonato). La patente de E.U.A. No. 5,177,198; La patente de E.U.A. No. 5,859,231 ; La patente de E.U.A. No. 6,160, 109; La patente de E.U.A. No. 6,207,819; Sergueev et al., (1998) J Am Chem Soc 120:9417-27. En otra modalidad preferida el enlace internucleótido tipo fosfodiéster es fosforotioato Rp diastereoméricamente puro. Se piensa que fosforotioato Rp diastereoméricamente puro es más susceptible a digestión de nucleasa y es mejor en RNasa H de activación que fosforotioato Sp mezclado o diastereoméricamente puro. Estereoisómeros de oligonucleótidos CpG son el sujeto de solicitud PCT publicada PCT/US99/17100 (WO 00/06588). Es de notar que para propósitos de la presente invención, el término "enlace internucleótido tipo fosfodiéster" excluye de manera específica enlaces internucleótido fosforoditioato y metilfosfonato. Como se describe anteriormente los oligonucléotidos suaves y semi-suaves de la invención pueden tener enlaces similares a fosfodiéster entre C y G. Un ejemplo de enlaces similares a fosfodiéster es un enlace de fosforotioato en una conformación Rp. La p-quiralidad de oligonucléotido puede tener efectos aparentemente opuestos en la actividad inmune de un oligonucléotido CpG, dependiendo del punto de tiempo en el cual la actividad se mide. (Krieg et al., 2003, Oligonucleotides, 13(6): 491-499). En un punto de tiempo anticipado de 40 minutos, el estereoisómero Rp pero no el Sp de oligonucleótido CpG de fosforotioato induce fosforilación JNK en células de bazo de ratón. En contraste, cuando se ensaya en un punto de tiempo retardado de 44 hr, el estereoisómero Sp pero no el Rp es activo en la estimulación de proliferación celular de bazo. Esta diferencia en las cinéticas y bioactividad de los estereoisómeros Rp y Sp no resulta de cualquier diferencia en la captación celular, pero de preferencia más similarmente es debido a dos papeles biológicos opuestos de la p-quiralidad. Primero, la actividad aumentada del estereoisómero Rp comparada con Sp para la estimulación de células inmunes en puntos de tiempo anticipados indica que Rp puede ser más efectiva en la interacción con el receptor CpG, TLR9, o la inducción de las trayectorias de señalización corrientes abajo. Por otra parte, la degradación más rápida de PS-oligonucléotidos Rp comparada con Sp resulta en una duración mucho más corta de señalización, de manera que los PS-oligonucleótidos Sp parecen ser más activos biológicamente cuando se prueban en puntos de tiempo retardados. Un efecto sorpresivamente fuerte se alcanza mediante la p-quiralidad en el dinucleótido CpG por si mismo. En comparación con un oligonucléotido CpG estéreo al azar el congénere en el cual el dinucleótido CpG sencillo se enlaza en Rp es ligeramente más activo, mientras el congénere que contiene un enlace Sp es casi inactivo para la inducción de la proliferación celular del bazo. Así los oligonucleótidos pueden ser heterogéneos en la composición de cadena principal con lo cual contienen cualquier combinación posible de unidades de polímero enlazadas juntas. El término "oligonucleótido" también incluye oligonucleótidos con sustituciones o modificaciones, tales como en los azúcares. Por ejemplo, incluyen oligonucleótidos que tienen azúcares de cadena principal que se unen de manera covalente a grupos orgánicos de peso molecular bajo diferentes de un grupo hidroxilo en la posición 2' y diferente de un grupo fosfato o grupo hidroxi en la posición 5'. De esta manera los oligonucleótidos modificados pueden incluir un grupo ribosa 2'-0-alquilado. Además, los oligonucleótidos modificados pueden incluir azúcares tales como arabinosa o 2'-fluoroarabinosa en lugar de ribosa. Los oligonucleótidos inmunoestimuladores de la presente invención pueden incluir varias modificaciones y sustituciones químicas, en comparación con el ARN y ADN natural, que involucran un puente internucleótido de fosfodiéster, o una unidad ß-D-ribosa. Ejemplos de modificaciones químicas son conocidos para una persona con experiencia en la técnica y se describen, por ejemplo, en Uhlmann E et al (1990) Chem Rev 90:543; "Protocols for Oligonucleotídes and Analogs" Synthesis and Properties & Synthesis y Analytical Techniques, S. Agrawal, Ed, Humana Press, Totowa, USA 1993; Crooke ST et al (1996) Annu Rev Pharmacol Toxicol 36:107-129; y Hunziker J et al. (1995) Mod Synth Methods 7:331-417. Un oligonucleótido de acuerdo con la invención puede tener una o más modificaciones, en donde cada modificación se localiza en un puente internucleótido de fosfodiéster particular y/o en una unidad de ß-D-ribosa particular en comparación con un oligonucleótido en la misma secuencia la cual esta compuesta de ADN o ARN natural. Por ejemplo, la invención describe un oligonucleótido que puede comprender una o más modificaciones y en donde cada modificación se selecciona independientemente de: a) el reemplazo de un puente internucleótido de fosfodiéster localizado en el extremo 3' y/o 5' de un nucleótído por un puente internucleótido modificado, y b) el reemplazo del puente de fosfodiéster localizado en el extremo 3' y 5' de un nucleótido por un puente defosfo. c) el reemplazo de una unidad de fosfato de azúcar de la cadena principal de fosfato de azúcar por otra unidad, y d) el reemplazo de una unidad ß-D-ribosa por una unidad de azúcar modificada. Más ejemplos detallados para la modificación química de un oligonucleótido son como siguen: Un puente internucleótido de fosfodiéster localizado en el extremo 3' y/o 5' de un nucleótido se puede reemplazar por un puente internucleótido modificado, en donde el puente internucleótido modificado es por ejemplo seleccionado de puentes fosforotioato, fosforoditioato, NR1R2-fosforamidato, boranofosfato, fosfonato de a-hidroxibencilo, éster fosfato-(C C2?)-0-alquílico, fosfato-[(C6-C12)arilo-(CrC2?)-0-alquil]éster, alquilfosfonato de (C?-C6) y/o arilfosfonato de (C6-C?2), (C -C-?2)-D-hidroximetil-aplo (por ejemplo el descrito en WO 95/01363), en donde arilo de (C6-C-?2), arilo de (C8-C2o) y arilo de (C6-C1 ) se sustituyen opcionalmente por halógeno, alquilo, alcoxi, nitro, ciano, y donde R1 y R2 son, independientemente uno de otro, hidrógeno, alquilo de (C?-C-?8), arilo de (C6-C2o)> arilo-(C8-C? )-alquilo-(CrC8), preferiblemente hidrógeno, alquilo de (CrCs), preferiblemente alquilo de (d-C4) y/o metoxietilo, o R1 y R2 forman, junto con el átomo de nitrógeno que los portan, un anillo heterocíclico de 5-6 miembros que puede contener adicionalmente un heteroátomo adicional del grupo O, S y N. El reemplazo de un puente de fosfodiéster localizado en el extremo 3' y/o 5' de un nucleótido por un puente defosfo (puentes defosfo se describen, por ejemplo, en Uhlmman E y Peyman A en "Methods in molecular Biology", Vol. 20, "Protocols for Oligonucleotides and Analogs", S Agrawal, Ed., Humana Press, Totowa 1993, capitulo 16, pp. 355 ff), en donde un puente defosfo es por ejemplo seleccionado de puentes defosfo de formacetal, 3'-tioformacetal, metilhidroxilamina, oxima, metilendimetil-hidrazo, dimetilensulfona y/o grupos sililo. Una unidad de fosfato de azúcar (es decir, un puente internucleótido de fosfodiéster y ß-D-ribosa juntos formando una unidad de fosfato de azúcar) de la cadena principal de fosfato de azúcar (es decir, la cadena principal de fosfato de azúcar se compone de unidades de fosfato de azúcar) se puede reemplazar por otra unidad, en donde la otra unidad es por ejemplo adecuada para construir un oligómero "morfolino-derivado" (como se describe, por ejemplo, en Stirchak EP et al. (1989) Oligonucleotides Res 17:6129-41), esto es, por ejemplo, el reemplazo por una unidad monfolino-derivado; o para construir un oligonucleótido de poliamida ("PNA"; como se describe por ejemplo, en Nielsen PE et al (1994) Bioconjug Chem 5:3-7), esto es, por ejemplo, el reemplazo por una unidad de cadena principal PNA, por ejemplo mediante 2-aminoetilglicina. Una unidad de ß-ribosa o una unidad de ß-D-2'-deoxiribosa se puede reemplazar por una unidad de azúcar modificada, en donde la unidad de azúcar modificada es por ejemplo seleccionada de ß-D-ribosa, a-D-2'-deoxiribosa, L-2'-deoxiribosa, 2'-F-2'-deoxiribosa, 2'-F-arabinosa, 2'-0-alquilo-(C CeJ-ribosa, preferiblemente 2'-0-alquilo-(C?-C6)-ribosa es 2'-0-metilribosa, 2'-0-alquenilo-(C2-C6)-ribosa, 2'-[0-alquilo(C1-C6)-0-(alquilo(C1-C6))-ribosa, 2'-NH2-2'-deoxiribosa, ß-D-xilo-furanosa, a-arabinofuranosa, 2,4-dideoxi-ß-D-eritro-hexo-piranosa, y análogos de azúcar carbociclicos (descritos, por ejemplo en Froehler J (1992) Am Chem Soc 114: 8320) y/o de cadena abierta (descritos por ejemplo, en Vandendriessche et al. (1993) Tetrahedron 49:7223) y/o análogos de bicicloazúcar (descritos, por ejemplo, en Tarkov M et al (1993) Helv Chim Acta 76: 481). En algunas modalidades el azúcar es 2'-0-metilribosa, particularmente para uno o ambos nucleótidos enlazados por un enlace internucleótido de fosfodiéster o similar a fosfodiéster. En secuencias particulares descritas aqui se define un conjunto de bases modificadas. Por ejemplo la letra Y se usa para referir a un nucleótido que contiene una citosina o una citosina modificada. Una citosina modificada como se usa aquí es un análogo de base de pirimidina de origen natural o no de origen natural de citosina que puede reemplazar esta base sin dañar la actividad inmunoestimuladora del oligonucleótido. Las citosinas modificadas incluyen pero no se limitan a citosinas 5-sustituidas (por ejemplo, 5-metil-citosina, 5-fluoro-citosina, 5-cloro-citosina, 5-bromo-citosina, 5-yodo-citosina, 5-hidroxi-citosina, 5-hidroximetil-citosina, 5-difluorometil-citosina, y 5-alquinil-citosina no sustituida o sustituida), citosinas 6-sustituidas, citosinas N4-sustituidas (por ejemplo, N4-etil-citosina), 5-aza-citosina, 2-mercapto-citosina, isocitosina, psuedo-isocitocina, análogos de citosina con sistemas de anillo condensados (por ejemplo, N,N'-propileno citosina o fenoxazina) y uracilo y sus derivados (por ejemplo 5-fluoro-uracilo, 5-bromo-uracilo, 5-bromovinil-uracilo, 4-tlo-uracilo, 5-hidroxi-uracilo, 5-propinil-uracilo). Algunas de las citosinas preferidas incluyen 5-metilcitosina, 5-fluoro-citosina, 5-hidroxi-citosina, 5-hidroximetil-citosina, y N4-etil-citosina. En otra modalidad de la invención, la base de citosina se sustituye por una base universal (por ejemplo, 3-nitropirrolo, P-base), un sistema de anillo aromático (por ejemplo, fluorobenceno o difluorobenceno) o un átomo de hidrógeno (dEspaciador). La letra Z se usa para referir a guanina o una base de guanina modificada. Una guanina modificada como se usa aquí es un análogo de base de purina de origen natural o no se origen natural que puede reemplazar esta base sin dañar la actividad inmunoestimuladora del oligonucleótido. Las guaninas modificadas incluyen pero no se limitan a 7-deazaguanina, guanina 7-deaza-7-sustituida (tal como 7-deaza-7-(C2-C6)alquinilguanina), guanina 7- deaza-8-sustituida, hipoxantina, guaninas N2-sustituidas (por ejemplo, N-2-metil-guanina), 5-amino-3-metil-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona, 2,6-diaminopurina, 2-aminopurina, purina, indol, adenina, adeninas sustituidas (por ejemplo, N6-metil-adenina, 8-oxo-adenina) guanina 8-sustituida (por ejemplo 8-hidroxiguanina y 8-bromoguanina), y 6-tioguanina. En otra modalidad de la invención, la base de guanina se sustituye por una base universal (por ejemplo 4-metil-indol, 5-nitro-indol, y K-base) un sistema de anillo aromático (por ejemplo, bencimidazol o dicloro-bencimidazol, amida del ácido 1-metil-1 H-[1 ,2,4]triazol-3-carboxílico) o un átomo de hidrógeno (dEspaciador). Los oligonucleótidos pueden tener uno o más extremos 5' accesibles. Es posible crear oligonucleótidos modificados que tienen dos extremos 5'. Esto se puede alcanzar, por ejemplo mediante la unión de dos oligonucleótidos a través de un 3'-3' enlace para generar un oligonucleótido que tiene uno o dos extremos 5' accesibles. El enlace 3'-3' puede ser un fosfodiéster, fosforotioato o cualquier otro puente internucleótido modificado. Métodos de realización de dichos enlaces son conocidos en la técnica. Por ejemplo, dichos enlaces se han descrito en Seliger, H.; et al., Oligonucleotide analogs with terminal 3'-3'- y 5'-5'-internucleotidic linkages as antisense inhibitors of viral gene expresión, Nucleotides & Nucleotides (1991), 10(1-3), 469-77 y Jlang et al., Pseudo-ciclic oligonucleotides: in vito and in vivo properties, Bioorganic & Medicinal Chemistry (1999), 7(12), 2727-2735. De manera adicional, oligonucleótidos 3',3'-enlazados donde el enlace entre los nucleótidos de 3'-terminal no es un fosfodiéster, fosforotioato u otro puente modificado, se pueden preparar usando un espaciador adicional, tal como radical fosfato de tri- o tetra-etilenglicol (Durand M et al., Triple-helix formation by an oligonucleotide containing one (dA)12 and two (dT) 12 sequences bridged by two hexaethylene glycol chains, Biochemistry (1992), 31(38), 9197-204, Patente de E.U.A. No. 5658738, y patente de E.U.A. No. 5668265). De manera alternativa, el enlazador no nucleótico se puede derivar de etanodiol, propanodiol, o de una unidad de deoxiribosa abásica (dEspaciador) (Fontanel, Marie Laurence et al., Sterical recognition by T4 polynucleotide kinase of non-nucleosidic moieties 5'-attached to oligonucleotides; Oligonucleotides Research (1994), 22(11), 2022-7) usando química de fosforamidita estándar. Los enlazadores no nucleotídicos se pueden incorporar una vez o múltiples veces, o combinados uno con otro permitiendo cualquier distancia deseable entre los 3'-extremos de dos ODN a ser enlazados. Los oligonucleótidos son parcialmente resistentes a la degradación (por ejemplo son estabilizados). Una "molécula de oligonucleótido estabilizado" significa un oligonucleótido que es relativamente resistente a degradación in vivo (por ejemplo vía una exo- o endo-nucleasa). La estabilización de oligonucleótido se puede realizar vía modificaciones de la cadena principal. Los oligonucleótidos que tienen enlaces fosforotioato proveen actividad máxima y protegen al oligonucleótido de la degradación mediante exo- y endo-nucleasas. Otros oligonucleótidos modificados incluyen oligonucleótidos modificados de fosfonodiéster, las combinaciones de oligonucleótido de fosfodiéster y fosforotioato, metilfosfonato, metilfosforotioato, fosforoditioato, p-etoxi, y sus combinaciones. Oligonucleótidos que contienen diol, tales como tetraetilenglicol o hexaetilenglicol, en uno o ambos términos han mostrado ser sustancialmente resistentes a la degradación de nucleasa. Los oligonucleótidos inmunoestimuladores también pueden contener uno o más enlaces inusuales entre los radicales de nucleótido o análogo de nucleótido. El enlace internucleósido usual es un 3',5'-enlace. Todos los otros enlaces se consideran por ser enlaces internucleósido inusuales, tales como 2', 5'-, 5', 5'-, 3', 3'-, 2', 2'-, 2',3'-enlaces. La nomenclatura 2' a 5' se elige de acuerdo al átomo de carbono de ribosa. Sin embargo, si los radicales de azúcar no naturales se emplean, tales como análogos de azúcar expandidos en anillo (por ejemplo, hexanosa, ciclohexano o piranosa) o análogos de azúcar bi- o tricíclicos, después esta nomenclatura cambia de acuerdo con la nomenclatura del monómero. En análogos 3'-deoxi-ß-D-ribopiranosa (también llamado p-ADN), los mononucleótidos son, por ejemplo, conectados vía un 4',2'-enlace. Si el oligonucléotido contiene un 3',3'-enlace, después este oligonucleótido puede tener dos 5'-extremos no enlazados. De manera similar, si el oligonucleótido contiene un 5,5'-enlace, después este oligonucleótido puede tener dos 3'-extremos no enlazados. La accesibilidad de extremos no enlazados de nucleótidos puede ser mejor accesible por sus receptores.

Ambos tipos de enlaces inusuales (3', 3'- y 5', 5') se describen por Ramalho Ortigao et al. (Antisense Research and Development (1992) 2, 129-46), con lo cual los oligonucleótidos que tienen un 3',3'-enlace se reportan por mostrar estabilidad aumentada hacia la división por las nucleasas. Diferentes tipos de enlaces también se pueden combinar en una molécula que puede conducir a la ramificación de oligómero. Si una parte del oligonucleótido esta conectado en el 3'-extremo via un 3',3'-enlace a una segunda parte de oligonucleótido en el 2'-extremo via 2',3'-enlace a una tercera parte de la molécula, esto resulta en, por ejemplo, en un oligonucleótido ramificado con tres 5'-extremos (3', 3'-, 2',3'-ramificado). 3',5'-enlace 2',5'-enlace 3',3'-enlace X es por ejemplo: 3', 3', 2',3'-ramificado ramificado vía el enlazador X es por ejemplo: X es por ejemplo: 3' 3' IV. Terapia de combinación de CpG ODN PF3512676 y anticuerpo anti-CTLA-4 La presente invención describe la terapia de combinación que comprende la co-administración de CpG ODN PF3512676, y un anticuerpo ant?-CTLA-4, preferiblemente, un anticuerpo que comprende una porción de unión de antígeno del anticuerpo 4.1.1 , 4.13.1 , y 11.2.1 , 10D1 (MDX-010), entre otros. En una modalidad, una combinación de un anticuerpo anti-CTLA-4 y un CpG PF3512676 se co-administran a un paciente para tratar el cáncer.

Tipos de cáncer Combinación de anticuerpo anti-CTLA-4 y CpG ODN PF3512676 es útil para el tratamiento de canceres primarios y secundarios (es decir metastáticos). Más específicamente, entre cualquiera de las opciones de tratamiento de mucho potencial, terapia de combinación de anti-CTLA-4 y CpG ODN PF3512676 se puede usar para tratar carcinoma celular renal, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer ovárico, cáncer de pulmón de célula no pequeña, melanoma, linfoma de célula T cutáneo, y NHL (incluyendo indolente y agresivo), entre muchos otros. Mientras estos canceres se prefieren, la presente invención describe el tratamiento de una amplia variedad de trastornos proliferativos celulares malignos, incluyendo, pero sin limitarse a carcinomas y sarcomas. Ejemplos adicionales incluyen sarcoma de Kaposi, sarcoma sinovial, eritroblastoma, mesotelioma, hepatobiliaridad (ducto hepático y biliar), un tumor cerebral primario y secundario, cáncer de pulmón (NSCLC y SCLC), cáncer de huesos, cáncer de la piel, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, canceres de huesos, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer gastrointestinal (gástrico, colorrectal y duodenal), canceres de colon, cáncer uterino, carcinoma de trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cerviz, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroide, cáncer de la glándula paratiroide, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejido suave, cáncer de la uretra, canceres de próstata, cáncer de pene, cáncer testicular, leucemia mieloide crónica o aguda, leucemia linfocitica aguda crónica, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer del riñon o uretra, carcinoma de la pelvis renal, canceres pancreáticos, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) incluyendo tumor CNS primario o secundario, linfoma CNS primario, tumores del eje espinal, glioma de cepa cerebral, glioblastoma, meningloma, mioblastoma, astrocitoma, adenoma pituitario, cáncer adrenocortical, cáncer de vejiga biliar, mieloma múltiple, colanglocarcinoma, fibrosarcoma, neuroblastoma, retinoblastoma, o una combinación de uno o más de los canceres anteriores. Los cánceres a ser tratados pueden ser canceres refractarios. Un cáncer refractario como se usa aquí es un cáncer que es resistente al estándar ordinario de cuidado prescrito. Estos canceres pueden parecer inicialmente sensibles a un tratamiento (y después repetirse), o pueden ser completamente insensibles al tratamiento. El estándar ordinario de cuidado variará dependiendo del tipo de cáncer, y el grado de progresión en el sujeto. Puede ser una quimioterapia, una inmunoterapia, cirugía o radiación o su combinación. Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica son concientes de dichos estándares de cuidado. Los sujetos a ser tratados de acuerdo con la invención para un cáncer refractario por lo tanto pueden haber sido ya expuestos a otro tratamiento para su cáncer. De manera alternativa, si el cáncer es probable a ser refractario (por ejemplo, dado un análisis de células cancerígenas o historia del sujeto), después el sujeto ya no puede haber sido expuesto a otro tratamiento. Ejemplos de canceres refractarios incluyen pero no se limitan a leucemias, melanomas, células renales, carcinomas, cáncer de colon, canceres de hígado (hepático), cáncer pancreático, linfoma no de Hodgkin, y cáncer de pulmón.

Tipo de terapia La persona con experiencia apreciará, una vez provistas las enseñanzas descritas aquí, que la invención incluye terapia CpG ODN combinada con un anticuerpo anti-CTLA-4 con, o consecutivamente (precediendo o siguiendo) con cirugía, radioterapia, o ambas, para tratar el cáncer. Esto es, varios tratamientos se pueden combinar con terapia de combinación de anticuerpo anti-CTLA4-CpG ODN PF3512676, como se debe entender por una persona con experiencia en la técnica una vez armado con las enseñanzas provistas aquí. Los métodos de la invención en ciertas circunstancias pueden ser útiles para reemplazar los procedimientos quirúrgicos existentes o terapias de fármacos, aunque en otras instancias la presente invención es útil en mejorar la eficacia de terapias existentes para el tratamiento de dichas condiciones. En consecuencia la terapia de combinación se puede usar para tratar sujetos que se someten o que serán sometidos a tratamiento para cáncer inter alia. Por ejemplo, los agentes se pueden administrar a un sujeto en combinación con otra terapia anti-proliferativa (por ejemplo, anti-cáncer). Terapias anti-cancerigenas adecuadas incluyen procedimientos quirúrgicos para remover la masa tumoral, quimioterapia o radiación localizada. La otra terapia anti-proliferativa se puede administrar antes, concurrente con, o después del tratamiento con la combinación CpG ODN PF3512676/anticuerpo anti-CTLA-4 de la invención. También puede haber un retraso de varias horas, días y en algunos casos semanas entre la administración de los diferentes tratamientos, tal que la combinación CpG ODN PF3512676/anticuerpo anti-CTLA-4 se puede administrar antes o después del otro tratamiento. La invención además contempla el uso de la combinación CpG ODN PF3512676/anticuerpo anti-CTLA-4 en sujetos con cáncer antes y después de la cirugía, radiación o quimioterapia. Así la invención incluye el uso de un anticuerpo anti-CTLA-4 en combinación con CpG ODN PF3512676 como un tratamiento neo-adyuvante, adyuvante, de primera línea, terapia de segunda línea y/o tercera línea, en inducción de remisión o terapia de mantenimiento de cáncer. Esto es, en una modalidad, la combinación anticuerpo-CpG ODN PF3512676 se puede administrar como terapia neoadyuvante antes de, por ejemplo, el rechazo quirúrgico de un tumor (por ejemplo, cáncer de próstata, pecho y pulmón). En otra modalidad, la combinación anticuerpo- CpG ODN PF3512676 se puede administrar como una terapia neoadyuvante (es decir, antes de la cirugía) y también después de la cirugía como una terapia adyuvante. La combinación se puede usar como un tratamiento de primera línea para otro agente (por ejemplo, interferon-alfa). Los métodos y composiciones de la invención son útiles no solamente en pacientes no tratados sino también útiles en el tratamiento de pacientes insensibles parcialmente o completamente a otras terapias anti- cancerígenas tales como pero sin limitarse a CpG ODN PF3512676 administrado solo (o en combinación con otro agente anti-cancerígeno) o anticuerpo anti-CTLA-4 administrado solo (o en combinación con otro agente anti-cancerígeno). En varias modalidades, la invención provee métodos y composiciones útiles para el tratamiento de enfermedades o trastornos en pacientes que se han mostrado por ser o pueden ser refractarios o insensibles a terapias que comprenden la administración a ambos o anticuerpo anti-CTLA-4 y/o CpG ODN PF3512676 y en donde el tratamiento se mejora por una respuesta inmune aumentada. En una modalidad, el método comprende la combinación de un CpG ODN PF3512676 y un anticuerpo anti-CTLA-4 (preferiblemente, anticuerpo 4.1.1 , anticuerpo 4.13.1 , anticuerpo 11.2.1 , anticuerpo MDX-010, o cualquiera de sus combinaciones). De esta manera, por ejemplo, la combinación se puede usar para tratar carcinoma celular renal metastático como una terapia de segunda linea en pacientes refractarios de citosina, como una terapia de segunda línea en NHL indolente en la combinación adicional con rituximab, y como la terapia de segunda línea en CHOP-R (ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, y prednisona, con rituximab) en NHL agresivo, entre muchos otros. Combinaciones de estas terapias, donde la combinación anticuerpo anti-CTLA-4-CpG ODN PF3512676 se co-administra, también se incluyen en la presente invención, tales como, pero sin limitarse a, donde la combinación se usa para terapia de neoadyuvante, adyuvante, de primera línea, de segunda línea, y de tercera línea, o cualquiera de sus combinaciones.

CpG ODN PF3512676 se puede usar junto con un anticuerpo anti-CTLA-4 (como se describe anteriormente) para inducción de remisión, seguido por CpG ODN PF3512676 solo para terapia de mantenimiento. Así, la terapia de inducción de remisión puede requerir uno o más ciclos repetidos de combinación de terapia CpG ODN PF3512676/anticuerpo anti-CTLA-4. Sin embargo, una vez que se observa una remisión (como será aparente para un practicante médico, el sujeto se puede colocar en terapia de mantenimiento. Dicha terapia de mantenimiento puede involucrar monoterapia con CpG ODN PF3512676. Para el propósito de terapia de mantenimiento, CpG ODN PF3512676 se puede administrar una vez o dos veces semanalmente o bisemanalmente, preferiblemente subcutáneamente. Mientras la presente invención se ejemplifica por métodos que relacionan terapia adyuvante, de primera línea, segunda línea y/o tercera línea que comprende la administración de una combinación que comprende la co-administración de un CpG ODN PF3512676 y un anticuerpo anti-CTLA-4, la persona con experiencia, armado con las enseñanzas provistas aquí, podrían entender que la invención no se limita a cualquier terapia particular. De preferencia, los métodos que comprenden terapia CpG ODN PF3512676 y anticuerpo anti-CLTA-4 combinados incluye el uso de la combinación entre la enfermedad completa y el tratamiento continuo. Más específicamente, los métodos novedosos descritos aquí pueden proveer un beneficio terapéutico antes y después de la metástasis, así como a pacientes que han llegado a ser refractarios a un agente quimiterapéutico, en que el anticuerpo puede aumentar una respuesta inmune, incluyendo cualquier respuesta mediada por terapia así como cualquier respuesta mediada por CpG ODN PF3512676. Así, la presente invención no se limita al uso de las combinaciones de la invención únicamente para terapia neoadyuvante; en cambio, la invención incluye el espectro de tratamiento entero, incluyendo, pero sin limitarse a, terapia adyuvante, de primera línea, segunda línea y/o tercera línea para cáncer. Esto es debido a que los datos descritos aquí sugieren que la inmunoterapia que comprende un anticuerpo anti-CTLA-4 puede proveer un beneficio terapéutico ya sea sola o combinada con por lo menos un agente adicional, en cualquier punto durante el tratamiento. Esto es, la eficacia de un método que media la liberación de antígenos específicos de tumor, tales como terapias citotóxicas (por ejemplo, radiación, quimioterapéuticas, y lo similar), donde dichos antígenos que se exponen al sistema inmune, pueden ser intensificados mediante la administración de un anticuerpo anti-CTLA-4 de la invención. Efectivamente, los datos descritos aquí además sugieren que un efecto sinergístico esta mediado por la administración combinada del anticuerpo con CpG ODN PF3512676 para tratamiento de cáncer, más particularmente de próstata, mama, CRC, melanoma, pancreático, pulmón, NSCLC, NHL, RCC entre otros canceres. Por lo tanto, la presente invención provee terapéuticos novedosos importantes para el tratamiento de cáncer con lo cual el sistema inmune del paciente se intensifica para proveer un efecto anti-tumoral. En otra modalidad, la combinación de CpG ODN PF3512676 y un anticuerpo anti-CTLA-4 se co-administra para aumentar y/o prolongar una respuesta inmune a un tumor. Esto es debido a que esto puede ser una interacción entre el efecto anti-tumoral de CpG ODN PF3512676 como, ínter alia, un agonista de TLR9 y el bloqueo mediado por anticuerpo anti-CTLA-4 de la señalización CTLA-4/B7 de la invención que conduce a efecto anti-tumoral más efectivo que el agente solo. Así, sin desear ligarse por cualquier teoría particular, la combinación de CpG ODN PF3512676 y anticuerpo anti-CTLA-4 puede inducir una respuesta inmunológica más robusta dentro del tumor que se espera. Sin desear ligarse por cualquier teoría particular, la liberación de antigeno(s) de tumor mediado(s) por efectos anti-tumorales de CpG ODN PF3512676 mediados por, por ejemplo, la activación de linfocitos B y función celular de antígeno-presentación mejorada (por ejemplo, DCs) y otros efectos de intensificación inmune mediados por la activación de TLR9, pueden incrementar el efecto inmunoterapéutico de un anti-CTLA-4, incluyendo la reducción o rompimiento de tolerancia inmune a dichos antígenos. Esto es probable en que el bloqueo de CTLA-4 usando un anticuerpo y activación inmune por CpG ODN PF3512676 se ha demostrado que romper la tolerancia (por ejemplo, invertir o prevenir anergia o tolerización a antígenos de tumor) con lo cual hace a las células tumorales más susceptibles al ataque inmune. Inversamente, los efectos inhibidores de las células T reguladoras (Treg) que dependen en parte de CTLA-4 pueden limitar la efectividad de la inmunoterapia de CpG, así bloqueando estos efectos con un anti-CTLA-4 ab mejorando la eficacia de CpG. Por lo tanto, la combinación de CpG ODN PF3512676 con un anticuerpo anti-CTLA-4 puede proveer un aditivo potencial o efecto sinergístico el cual provee un tratamiento terapéutico novedoso importante para cáncer. En una modalidad, la invención provee unas composiciones y métodos de producción o incrementando una respuesta anti-tumoral usando una combinación anticuerpo anti-CTLA-4-CpG ODN PF3512676, en donde CpG ODN PF3512676 aumenta una respuesta anti-tumoral por una cantidad de anticuerpo que es de otra manera sub-óptimo para inducir el mismo nivel de respuesta anti-tumoral cuando se usa solo. En ciertas modalidades, cuando CpG ODN PF3512676 no se usa en conjunción con un anticuerpo para producir una respuesta anti-tumoral, la administración de CpG ODN PF3512676 solo no produce o aumenta la respuesta anti-tumoral. En modalidades alternativas, tanto CpG ODN PF3512676 como anticuerpo anti-CTLA-4 pueden producir una respuesta anti-tumoral, solos y/o cuando se administran en combinación. En ciertas modalidades, el CpG ODN PF3512676 puede aumentar los efectos del anticuerpo anti-CTLA-4 (o viceversa) en una manera aditiva. En una modalidad preferida, el CpG ODN PF3512676 aumenta los efectos del anticuerpo anti-CTLA-4 (o viceversa) en una manera sinergistica. En otra modalidad, el anticuerpo anti-CTLA4 aumenta el efecto de un CpG ODN PF3512676 en una manera aditiva. Preferiblemente, los efectos se intensifican en una manera sinergística. Así, en ciertas modalidades, la invención incluye métodos de tratamiento o prevención de enfermedad que proveen mejores perfiles terapéuticos que la administración de CpG ODN PF3512676 solo y anticuerpo anti-CTLA-4 solo. Incluidas por la invención son terapias de combinación que tienen potencia aditiva o un efecto terapéutico aditivo mientras reducen o evitan efectos secundarios no deseados o adversos. La invención también incluye combinaciones sinergísticas donde la eficacia terapéutica es mayor que el aditivo, mientras los efectos no deseados o adversos se reducen o evitan. En ciertas modalidades, los métodos de la invención permiten el tratamiento o prevención de enfermedades y trastornos en donde el tratamiento se mejora por una respuesta anti-tumoral aumentada usando dosis inferiores y/o menos frecuentes de anticuerpo anti-CTLA-4 y/o CpG ODN PF3512676 para reducir la incidencia de efectos secundarios no deseados o adversos causados por la administración de anticuerpo anti-CTLA-4 y/o CpG ODN PF3512676 solo, mientras se mantiene o aumenta la eficacia del tratamiento, preferiblemente incrementado el acatamiento del paciente, mejorando la terapia y/o reduciendo efectos secundarios no deseados o adversos.

V. Terapia de combinación adicional Basado en la descripción provista aquí, incluyendo el efecto intensificador inmune de la administración de un anticuerpo anti-CTLA-4 a un paciente, y el efecto aditivo o sinergistico combinado de la co-administración de dicho anticuerpo en combinación con CpG ODN PF3512676, será apreciado por un experto en la técnica que la invención incluye numerosas terapias de combinación en donde el anticuerpo-CpG ODN PF3512676 se administra al paciente en combinación con por lo menos otro agente terapéutico con lo cual se provee un beneficio terapéutico. Aunque muchas combinaciones serán fácilmente aparentes para un experto en la técnica una vez armado con las enseñanzas provistas aquí, varias combinaciones se discuten ahora. Sin embargo, la presente invención no es una manera limitada para estas combinaciones, que se establecen aqui principalmente para propósitos ilustrativos. La co-administración de anticuerpo-CpG ODN PF3512676 con un agente terapéutico adicional (terapia de combinación) incluye la coadministración de ambos, el anticuerpo antí-CTLA-4, CpG ODN PF3512676, y uno o más agentes terapéuticos adicionales, y también incluye la coadministración de dos o más composiciones farmacéuticas separadas, una que comprende el anticuerpo anti-CTLA-4 y otra(s) que comprende(n) el CpG ODN PF3512676, y otra(s) que comprende(n) por lo menos un agente terapéutico adicional. Además, aunque la co-administración o terapia de combinación (conjuntas) generalmente significa que el anticuerpo, CpG ODN PF3512676, y agentes terapéuticos adicionales se administran al mismo tiempo uno con otro, también incluye la dosificación simultánea, secuencia o separada de componentes individuales de tratamiento. De manera adicional, donde un anticuerpo se administra intravenosamente y el agente anti-cancerigeno se administra oralmente (por ejemplo, agente quimioterapéutico), o mediante inyección subcutánea o intramuscular, será entendido que la combinación es preferiblemente administrada como dos, tres, o más composiciones farmacéuticas separadas. Cuando un mamífero se somete a quimioterapia adicional, agentes quimioterapéuticos bien conocidos en la técnica se pueden usar en combinación con un anti-CTLA-4 y CpG ODN PF3512676. De manera adicional, se pueden usar inhibidores del factor de crecimiento, modificadores de respuesta biológica, agentes de alquilación, antibióticos de intercalación, alcaloides de vincapervinca, taxanos, moduladores del receptor estrógeno selectivo (SERM), inhibidores de angiogénesis, entre muchos agentes terapéuticos, algunos de los cuales se describen posteriormente.

Inhibidores de anqioqénesis El uso de un inhibidor de angiogénesis en combinación con un anticuerpo anti-CLTA-4 se ha discutido previamente en otra parte aquí. Además, un inhibidor de angiogénesis incluye, pero no se limita a, bevacizumab (AVASTIN, Genentech), un anticuerpo humanizado de VEGF, se puede usar en combinación con 5FU, y se indica como un tratamiento de primera línea de pacientes con carcinoma metastático de colon o recto. Agentes que dirigen directamente los factores angiogénicos o sus receptores ofrecen el prospecto para actividad mayor en malignidades hematológicas competentes de receptor mediante la interrupción de la señalización del receptor autocrino. Bevacizumab produce neutralización sostenida de la circulación de VEGF y puede ser útil para el tratamiento de síndrome mielodisplastico (MDS), linfoma, leucemia mieloide aguda (AML), y tumores sólidos. Las tirosinas cinasas del receptor (RTKI), incluyendo PTK787/ZK222584 (Novartis), están siendo valoradas para tratar AML y otras malignidades hematológicas competentes del receptor. La invención también incluye el tratamiento de cáncer, por ejemplo, carcinoma renal, cáncer de mama, linfoma no de Hodgkin, carcinoma colorectal, y lo similar, usando una combinación de anticuerpo anti-CTLA-4 y CpG ODN PF3512676, y por lo menos un inhibidor de angiogénesis adicional, tales inhibidores son bien conocidos en la técnica o se pueden desarrollar en el futuro. Así, agentes anti-angiogénesis, tales como inhibidores de MMP-2 (matriz-metaloproteinasa 2), inhibidores de MMP-9 (matriz-metaloproteinasa), e inhibidores de COX-ll (ciclooxigenasa II), se pueden usar en conjunción con la combinación anticuerpo-CpG ODN PF3512676 de la invención. Ejemplos de inhibidores de COX-ll útiles incluyen CELEBREX™ (celecoxib), valdecoxib, rofecoxib, parecoxib, deracoxib, SD-8381 , ABT-963, etoricoxib, lumiracoxib, BMS-347070, NS-398, RS 57067, meloxicamb. Ejemplos de inhibidores de metaloproteinasa de matriz útiles se describen en las publicaciones de patente internacionales Nos. WO 96/33172; WO 96/27583; WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918; WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667, Solicitudes de patente Europea Nos. 780386 (publicada en junio 25, 1997), 97304971.1 (presentada en julio 8, 1997), 99308617.2 (presentada en octubre 29, 1999), 606046 (publicada en julio 13, 1994), 931788 (publicada en julio 28, 1999), 99302232.1 (presentada en marzo 25, 1999), solicitud internacional PCT/IB98/01113 (presentada en julio 21 , 1998), número de solicitud de patente de Gran Bretaña 9912961.1 (presentada en junio 3, 1999), Solicitud de patente provisional de E.U.A. No. 60/148.464 (presentada en agosto 12, 1999) y patentes de E.U.A. Nos. 5,863,949, y 5,661 ,510. Inhibidores de MMP-2 y MMP-9 preferidos son aquellos que tienen poca o sin actividad de inhibición de MMP-1. Más preferidos son aquellos que inhiben selectivamente MMP-2 y/o MMP-9 relativos a otras metaloproteinasas de matriz (es decir, MMP-1 , MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11 , MMP-12 y MMP-13).

Inhibidor de transducción de señal Los tratamientos descritos aquí también se pueden usar con inhibidores de transducción de señal, tales como agentes que pueden inhibir respuestas de EGFR (receptor de factor de crecimiento epidérmico), tales como anticuerpos de EGFR, anticuerpos EGF, y moléculas que son inhibidores de EGFR; inhibidores de VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular), tales como receptores de VEGF y moléculas que pueden inhibir VEGF, e inhibidores del receptor erbB2, tales como moléculas o anticuerpos orgánicos que unen al receptor erbB2, por ejemplo, HERCEPTIN (Genentech, Inc., San Francisco, CA). Inhibidores de EGFR se describen en, por ejemplo en Publicaciones de patente internacional Nos. WO 95/19970, WO 98/14451 , WO 98/02434, y Patente de E.U.A. No. 5,747, 498 y dichas sustancias se pueden usar en la presente invención como se describe aquí. Agentes que inhiben EGFR incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos C225 monoclonales, anti-EGFR 22Mab (InClone Systems Inc., New York, NY), y ABX-EGF (Abgenix Inc., remont, CA), los compuestos ZD-1839 (AstraZeneca), BBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex, Inc., Amandale, NJ), y OLX-103 (Merck & Co., Whitehouse Station, NJ), VRCTC-310 (Ventech Research) y toxina fusión EGF (Seragen Inc., Hopkinton, MA). Estos y otros agentes de inhibición de EGFR se pueden usar en la presente invención. Compuestos dirigidos a la inhibición del receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) tirosina cinasa (TK) representa una clase relativamente nueva de fármacos antineoplásticos que son útiles en el método de la presente invención. Muchos canceres humanos expresan miembros de la familia EGFR en la superficie celular. Cuando un ligando se une a EGFR, este establece una cascada de reacciones celulares que resultan en la división celular incrementada y la influencia de otros aspectos de cáncer de desarrollo y progresión, incluyendo angiogénesis, esparcido metastático, e inhibición de apóptosis. Inhibidores de EGFR-TK pueden dirigir selectivamente uno de los miembros de la familia EGFR (EGFR (también conocido como HER1 o ErbB-1), HER2/neu (también conocido como ErbB-2), HER3 (también conocido ErbB-3), o HER4 (también conocido como ErbB-4)), o dirigir dos o más de estos. Inhibidores de EGFR-TK adecuados para el uso en la presente invención incluyen gefltinib (IRESSA), eriotinib (TARCEVA), CI-1033 (Pfizer), GW2016 (GlaxoSmithKIine), EKB-569 (Wyeth), PKI-166 (Novartis), CP-724, 714 (Pfizer), y BIBX-1382 (Boeringer-lngelheim). Inhibidores de EGFR-TK adicionales se describen en la solicitud de patente de Estados Unidos No. 09/883, 752, presentada en junio 18, 2001. Inhibidores de VEGF, además para SU11248 (Sugen Inc., San Francisco, CA), también se puede emplear en combinación con la combinación de anticuerpo y CpG ODN PF3512676. Inhibidores VEGF se describen por ejemplo en solicitud de patente internacional No. PCT/IB99/00797 (presentada en mayo 3, 1999), publicación de patente internacional Nos. WO 99/24440; WO 95/21613; WO 99/61422; WO 99/61422; WO 98/50356; WO 99/10349; WO 97/32856; WO 97/22596; WO 98/54093; WO 98/02438; WO 99/16755; WO 98/02437; patente de E.U.A. Nos. 5,834,504; 5,883,1 13; 5,886,020 y 5,792,783. Otros ejemplos de algunos inhibidores de VEGF específicos útiles en la presente invención son IM862 (Cytran, Inc., kirkland, WA); anticuerpo IMC-1 C1 1 Imclon, anticuerpo monoclonal anti-VEGF de Genentech, Inc., San Francisco, CA; y angiozima, una ribozima sintética de Ribozima (Boulder, CO) y quíron (Emeryville, CA). Inhibidores del receptor ErbB2, tales como GW-282974 (Glaxo Wellcome pie), y los anticuerpos monoclonales AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc., Wordlands, TX) y 2B-1 (quiron), se pueden combinar adicionalmente con la combinación anticuerpo-CpG ODN PF3512676, por ejemplo aquellos indicados en publicaciones de patentes internacionales Nos.

WO 98/02434; WO 99/35146; WO 99/35132; WO 98/02437; WO 97/13760; WO 95/19970; patente de E.U.A. Nos. 5,587,458 y 5,877,305. Inhibidores del receptor ErbB2 útiles en la presente invención también se describen en EP1029853 (publicado en agosto 23, 2000) y en la publicación de patente internacional No. WO 00/44728, (publicada en agosto 3, 2000). Los compuestos de inhibidor del receptor erbB2 y la sustancia descrita en las solicitudes de PCT mencionadas anteriormente, patentes de E.U.A. y solicitudes provisionales de E.U.A., así como otros compuestos y sustancias que inhiben el receptor erbB2, se pueden usar con el anticuerpo de acuerdo con la presente invención. Los tratamientos de la invención también se usan con otros agentes útiles en el tratamiento de crecimiento celular anormal o cáncer, incluyendo pero sin limitarse a otros agentes capaces de intensificar respuestas inmunes antitumorales, tales como anticuerpos de CTLA4, diferentes adicionales, y otros agentes también capaces de bloquear CTLA4, y agentes de anti-proliferativos tales como inhibidores de transferasa de proteína famesil (por ejemplo, BMS 214662), e inhibidores de avß3, tales como anticuerpo avß3 VITAXIN, inhibidores avß5, inhibidores p53, y lo similar. Cuando el anticuerpo de la invención se administra en combinación con otro agente inmunomodulador, el agente inmunomodulador se puede seleccionar por ejemplo del grupo que consiste de activador celular dendrítico, así como intensificadores de presentación de antígeno, intensificadores de tropismo T-celular, inhibidores de factores inmunosupresores relacionados con tumor, tales como TGF-ß (transformación del factor beta de crecimiento), y IL-10.

Inhibidor de IGF-1 R La presente invención incluye métodos que comprenden la combinación de CpG ODN PF3512676 con inmunoterapia (anti-CTLA-4) adicional combinado con agentes adicionales y terapias. Esto es, la persona con experiencia en la técnica, basada en la descripción provista aquí, apreciará que terapia de CpG ODN PF3512676 y terapia de combinación de anticuerpo anti-CTLA-4 se pueden combinar adicionalmente con una amplia plétora de terapéutica, cirugía, radiación y otros terapéuticos para tratar a un paciente. Agentes terapéuticos son numerosos y se han descrito en, por ejemplo, publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. 2004/0005318, No. 2003/0086930, No. 2002/0086014, y solicitud internacional No. WO 03/086459, todos de los cuales se incorporan para referencia aquí, entre muchos otros. Dichos agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de topoisomerasa I; otros anticuerpos (rituximab, trastuzumab, y lo similar); agentes quimioterapéuticos tales como, pero sin limitarse a, limitinib (GLEEVEC, GLIVEC o STI571 ; Novartis), sorafenib (BAY 43-9006; Bayer Pharmaceuticals Corp./Onyx Pharmaceuticals), inhibidores del receptor de tirosína cinasa, moduladores del receptor de estrógeno selectivo (SERMs), taxanos, alcaloides de vincapervinca, temozolomida, inhibidores de angiogénesis, inhibidores de EGFR, inhibidores de VEGF, inhibidores del receptor ErbB2, agentes anti-proliferativos (por ejemplo inhibidores de transferasa de proteína farnesil, e inhibidores de avß5, inhibidores de p53, y lo similar), inmunomoduladores, citocinas, vacunas tumorales, antígenos específicos de tumor, dendríticos y terapias de células madre, agente de alquilación, antagonistas de folato, antagonistas de pirimidina; antibióticos de antraciclina; compuestos de platino; moléculas co-estimuladoras (por ejemplo, CD4, CD25, PD-1 , B7-H3, 4-1 BB; OX40, ICOS, CD30, HLA-DR, MHCII, y LFA).

Radioterapia La terapia de radiación se puede co-administrar con terapia de combinación CpG ODN PF3512676/anticuerpo anti-CTLA-4. La radioterapia se administra de acuerdo con métodos de radioterapia bien conocidos para el tratamiento de cáncer. La dosis y régimen para radioterapia puede ser fácilmente determinada por una persona con experiencia en la técnica y se basa en la etapa de la enfermedad, y otros factores bien conocidos en la técnica.

Agentes paliativos La invención también incluye la administración de otros agentes terapéuticos además del primero y segundo componentes, ambos concurrentemente con uno o más de aquellos componentes, o consecutivamente. Dichos agentes terapéuticos incluyen analgésicos, vacunas de cáncer, agentes anti-vasculares, agentes anti-proliferativos, agentes anti-eméticos, y agentes anti-diarréicos. Agentes antieméticos preferidos incluyen clorhidrato de onsansetron, clorhidrato de granisetron, y metoclopramida. Agentes antidiarreicos preferidos incluyen difenoxilato y atropina (LOMOTIL), liperamida (IMMODIUM), y octreótido (SANDOSTATINA).

Terapia basada en células madre La combinación de terapia anticuerpo- CpG ODN PF3512676 descrita aquí se puede combinar con transplante de células madre para proveer un beneficio terapéutico a un paciente que padece de cáncer. El transplante de células madre se puede realizar de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica. Alguno métodos se describen en Appealbaum in Harrison's principies of intemal Medicine, capítulo 14, Braunwald et al., Eds., 15a ed., McGraw-Hill Professional (2001), que se incorpora aqui para referencia. Así, los métodos de la presente invención relacionan al tratamiento dé cáncer en un mamífero quien se ha sometido a transplante de células madre, cuyos métodos comprenden la administración a un mamífero de una cantidad de un anticuerpo anti-CTLA-4 humano en combinación con CpG ODN PF3512676, cuya combinación de terapia anticuerpo-CpG ODN PF3512676 es efectiva en el tratamiento de cáncer en combinación adicional con el transplante de células madre. Cuando el método comprende el transplante de células madre, la primera dosis de la combinación de agente de terapia anticuerpo-CpG ODN PF3512676 se puede administrar después de que el sistema inmune del mamífero se ha recuperado del transplante, por ejemplo, en el periodo de uno a 12 meses después del transplante. En ciertas modalidades, la primera dosis se administra en el periodo de uno a tres, o uno a cuatro meses después del transplante. El paciente se puede someter al transplante de células madre y tratamiento(s) preparatorio(s). La invención también describe un método para el tratamiento de cáncer en un mamífero que comprende las etapas de (i) desarrollar el transplante de células madre en el mamífero, y (ii) administración de una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-CTLA-4 humano en combinación con una cantidad efectiva de CpG ODN PF3512676. Preferiblemente, el mamífero es un humano, el transplante de células madre puede ser transplante de células madre alogéneico o antologo. Además, el transplante de células incluye la transferencia adoptiva de linfocitos, ya sea del mismo paciente y/o de un donador HLA-equilibrado. Además, los métodos de la invención puede ser combinados con terapia de radiación y transplante de células madre, y cualquier combinación de cualquiera de los tratamientos descritos aquí, conocidos en la técnica, o para desarrollarse en el futuro. Como se índica previamente en otra parte de aquí, donde un anticuerpo anti-CTLA-4 se combina con un tratamiento de cáncer estándar, tal como inter alia, regímenes quimioterapéuticos, puede ser posible reducir la dosis de reactivo quimioterapéutico administrado (Mokyr, M et al. Cáncer Research 58: 5301-5304 (1998). Esto es debido a que el uso combinado de un anticuerpo anti-CTLA-4 y un nucleótido intensificador inmune, tal como CpG ODN PF3512676 como se describe aquí para el tratamiento de cáncer, puede mediar la muerte celular, o de otra manera proveer un efecto sinergistico entre el bloqueo de CTLA-4 y la acción agonística TLRp del nucleótido. Así sin desear ligarse a cualquier teoría particular, la muerte celular tumoral mediada por la respuesta inmune incrementada o prolongada por el anticuerpo CTLA-4, CpG ODN PF3512676, o su combinación, frecuentemente resulta en niveles incrementados de antígeno específico de tumor en la trayectoria de presentación de antígeno, y el anticuerpo anti-CTLA-4 media la respuesta inmune incrementada a esto tal que la coadministración de CpG ODN PF3512676 con el anticuerpo media un incremento aditivo o sinergistico en la respuesta inmune dirigida al antígeno de tumor. Otras terapias de combinación que pueden resultar en sinergia con anti-CpG ODN PF3512676 intensificado de la respuesta inmune a través de la liberación de la muerte celular de antígenos específicos de tumor son radiación, cirugía, quimioterapia, y administración a una amplia plétora de agentes anti-tumorales bien conocidos en la técnica y como se ejemplifica aquí, entre muchos otros. Cada uno de estos protocolos, y otros descritos en una parte aquí, crean una fuente de antígeno específico de tumor en el huésped por muerte celular de tumor que puede alimentar el antígeno de tumor dentro de las trayectorias de presentación de antígeno del huésped. Por lo tanto, las terapias de combinación aquí pueden proveer una fuente incrementada de antígenos específicos de tumor con lo cual proveen una respuesta inmune incrementada para el tumor el cual, a su vez, provee un beneficio terapéutico para el paciente.

VI. Regímenes de dosificación Regímenes de dosificación se pueden ajustar para proveer la respuesta deseada óptima. Por ejemplo, un bolo sencillo se puede administrar, varias dosis divididas se pueden administrar sobre el tiempo o la dosis puede ser proporcionalmente reducida o incrementada como se indica por las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso para formular las composiciones parenterales en forma de dosificación unitaria para facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La forma de dosificación unitaria usada aquí se refiere a unidades discretas físicamente adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a ser tratados; cada unidad conteniendo una cantidad pre-determinada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación para las formas de dosificación unitaria de la invención son prescritas por y directamente dependientes en (a) las características únicas del anticuerpo, y el efecto terapéutico o profiláctico particular a ser alcanzado, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de la formación de compuestos tales como un compuesto activo para el tratamiento o sensibilización en individuos.

Así, la persona con experiencia en la técnica apreciará, basada en la descripción provista aquí, que la dosis y régimen de dosificación se ajusta de acuerdo con métodos bien conocidos en las técnicas terapéuticas. Esto es, la dosis tolerable máxima se puede estabilizar fácilmente, y la cantidad efectiva provee un beneficio terapéutico detectable a un paciente se puede determinar, como pueden los requerimientos temporales para administración de cada agente proveer un beneficio terapéutico detectable al paciente. En consecuencia, mientras ciertas dosis y regímenes de administración ser ejemplifican aqui, estos ejemplos en régimen de administración y dosis no limitante que se pueden proveer a un paciente en la práctica de la presente invención. Además, una persona con experiencia en la técnica podría entender, una vez armada con las enseñanzas provistas aquí, que un beneficio terapéutico, tal como, pero sin limitarse a, disminución detectable en tamaño de tumor y/o metástasis y tiempo incrementado a la recurrencia, entre muchos otros parámetros, se pueden valorar por una amplia variedad de métodos bien conocidos en la técnica la valoración de la eficacia de tratamiento de cáncer, y estos métodos se incluyen aquí, así como métodos para ser desarrollados en el futuro. Se hace notar que los valores de dosificación pueden variar con el tipo de severidad de la condición a ser aliviada, y pueden incluir dosis sencillas o múltiples. Es para ser entendido adicionalmente que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosificación específica deben ser ajustados sobre el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona administrando o supervisando la administración de las composiciones, y que los intervalos de dosificación expuestos aquí son ejemplares solamente y no tiene la intención de limitar el alcance o práctica de la composición reclamada. Por ejemplo, las dosis se pueden ajustar basadas en farmacocinética o parámetros farmacodinámicos, que pueden incluir efectos clínicos tales como efectos tóxicos y/o valores de laboratorio. Así, la presente invención incluye intensificación de dosis intra-paciente como se determina por la persona con experiencia en la técnica. La determinación de dosificaciones y regímenes apropiados para administración del anticuerpo son bien conocidos en la técnica relevante y podrían ser entendidos para ser incluidos por la persona con experiencia en la técnica una vez provistas las enseñanzas descritas aquí.

Dosificación ODN CpG ODN PF3512676 se puede administrar de acuerdo con regímenes de dosificación estándar bien conocidas en la técnica. Las dosis sometidas de CpG ODN PF3512676 para suministro mucosai o local usualmente varían de aproximadamente 1 µg a 100 µg por administración, que depende de la aplicación que puede ser diariamente, semanalmente, o mensualmente o cualquier otra cantidad de tiempo entre estos. Más usualmente las dosis mucosales o locales varían de aproximadamente 100 µg a 50 mg por administración, y más usualmente de aproximadamente 1 a 10 mg, con 2-4 administraciones siendo espaciadas días o semanas aparte.

Las dosis sometidas de compuestos descritos aquí para suministro parenteral para el propósito de inducir una respuesta inmune sistémica pueden ser usualmente 2 a 1 ,000 veces más altas que la dosis mucosai, y más usualmente2 a 100 veces más alta, y más usualmente 5 a 50 veces más alta. Las dosis de CpG ODN PF3512676 para suministro parenteral (incluyendo subcutánea) para inducir una respuesta inmune cuando CpG ODN PF3512676 se administra en combinación con otros agentes terapéuticos, tales como anticuerpos de la invención, o en vehículos de suministro especializados usualmente varían de aproximadamente 10 µg a 1000 mg por administración, que depende de la aplicación puede ser dada diariamente, semanalmente o mensualmente y cualquier otra cantidad de tiempo entre estas. Más usualmente las dosis parenterales para estos propósitos varían de aproximadamente 1 a 500 mg por administración, y más usualmente de aproximadamente 5 a 100 mg, con 2-4 administraciones siendo espaciadas días o semanas aparte. En algunas modalidades, sin embargo, las dosis parenterales para estos propósitos se pueden usar en un intervalo de 5 a 10,000 veces más alto que las dosis usuales descritas anteriormente. En algunas modalidades, el ODN se administra una vez semanalmente en cantidades que varían de 10-40 mg total. El ODN se puede administrar en dosis de 5 o 10 mg cada una, con lo cual resulta en bolos múltiples o inyecciones dependiendo de la cantidad total a ser administrada.

Por ejemplo, si la cantidad total a ser administrada es 10 mg, esta puede ser administrada por, por ejemplo 2 x 5 mg de dosis de inyección. Como otro ejemplo, si la cantidad total a ser administrada es 40 mg, esta puede ser administrada por, por ejemplo 4 x 10 mg dosis de inyecciones.

Dosificación de anticuerpo Un intervalo no limitante, ejemplar para una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo administrado de acuerdo con la invención es por lo menos aproximadamente 0.1 mg/kg, por lo menos aproximadamente 0.3 mg/kg, por lo menos aproximadamente 1 mg/kg, por lo menos aproximadamente 5 mg/kg, por lo menos aproximadamente 6 mg/kg, por lo menos aproximadamente 10 mg/kg, por lo menos aproximadamente 15 mg/kg, por lo menos aproximadamente 20 mg/kg, por lo menos aproximadamente 30 mg/kg, o por lo menos aproximadamente 50 mg/kg. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente efectiva de anticuerpo puede variar de aproximadamente 0.1-30 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 0.3-25 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 1-20 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 3-20 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 5-20 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 10-20 mg/kg, o aproximadamente 3-15 mg/kg, o aproximadamente 5-15 mg/kg, o aproximadamente 10-15 mg/kg. En otra modalidad, el anticuerpo se administra en una dosis de por lo menos 0.3 mg/kg, preferiblemente, por lo menos 1 mg/kg, más preferiblemente, por lo menos 3 mg/kg, aún más preferiblemente, por lo menos 6 mg/kg, preferiblemente, por lo menos 6 mg/kg, aún más preferiblemente, por lo menos 10 mg/kg, aún más preferiblemente, por lo menos 15 mg/kg, y aún más preferiblemente, por lo menos 20 mg/kg. Además, el anticuerpo se administra por infusión i.v. en una dosis que varía de aproximadamente 0.1 mg/kg a 50 mg/kg, más preferiblemente, de aproximadamente 0.3 mg/kg a 20 mg/kg, más preferiblemente, de aproximadamente de aproximadamente 1 mg/kg a 15 mg/kg, aún más preferiblemente de aproximadamente 3 mg/lg a 15 mg/kg, aún más preferiblemente, de aproximadamente 6 mg/kg a 15 mg/kg. En una modalidad, el anticuerpo se administra en una formulación intravenosa como una solución acuosa estéril que contiene aproximadamente 5 a 20 mg/ml de anticuerpo, en un sistema regulador de pH apropiado. Además, un protocolo de intensificación de dosis ejemplar se puede usar para determinar la dosis tolerada máxima (MTD), para valorar toxicidad de limitación de dosis (DLT), si cualquiera, asociada con la administración de terapia de combinación anticuerpo-CpG ODN PF3512676, y lo similar, comprende la administración de dosis incrementada, tal como pero sin limitarse a, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg, 15 mg/kg, o más de 15 mg/kg, o cualquier combinación de las misma, más preferiblemente, dosis sucesivas de 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg o 20 mg/kg se administran y el paciente se valora para toxicidad, así como para eficacia de tratamiento, entre otros parámetros. Dichos estudios para determinar la toxicidad y eficacia de regímenes de dosis son bien conocidos en la técnica.

Regulación de administración CpG ODN PF3512676 se puede administrar sustancialmente subcutáneamente o consecutivamente con anticuerpos anti-CTLA-4 de la invención. Cuando la administración es simultánea, el ODN y el anticuerpo pueden estar en las mismas formulaciones o separadas aunque se pueden administrar al mismo tiempo. El término "sustancialmente simultáneo" significa que los compuestos se administran dentro de minutos uno con otro (por ejemplo, dentro de 10 minutos uno de otro) y tiene la intención incluir administración junta así como administración consecutiva, pero si la administración es consecutiva esta separada en tiempo por solamente un periodo corto (por ejemplo, el tiempo se toma un especialista medico para administrar dos compuestos separadamente). Como se usa aquí, administración concurrente y administración sustancialmente simultánea se usan de manera intercambiable. La administración secuencial se refiere a administración temporalmente separada de ODN y el anticuerpo. La separación en el tiempo entre la administración de estos compuestos es deliberadamente más larga que el tiempo que toma administrar dos medicamentos separadamente, uno después de otro, sin un retardo propuesto. La co-administración así incluye cualquier combinación temporal de administración del anticuerpo y el CpG ODN PF3512676 tal que la administración de los dos media un beneficio terapéutico para el paciente que es mayor detectable que la administración del agente en la ausencia del otro. El CpG ODN se puede administrar antes, concurrente con, o después (o cualquier combinación de los mismos) de la administración del anticuerpo, y viceversa. El CpG ODN se puede administrar diariamente (incluyendo una o más administraciones por día), un día si y otro no, cada tres días, cada cuatro días, cada cinco dias, cada seis días, o cada semana, cada mes, cada dos meses, cada tres meses, cada cuatro meses, cada cinco meses, cada seis meses, o cada año. El anticuerpo se puede administrar diariamente, un día si y otro no, cada tres días, cada cuatro días, cada cinco días, cada seis días, cada semana, cada dos semanas, mensualmente, o cada veinte días, cada 25 días, cada 28 dias, cada 30 días, cada 40 días, cada 50 días, cada dos meses, cada 70 días, cada 80 dias, cada tres meses, cada seis meses, o anualmente. Una dosis sencilla o dosis múltiples del anticuerpo se pueden administrar. De manera alternativa, o por lo menos tres, seis o 12 dosis se pueden administrar. Las dosis se pueden administrar, por ejemplo. La administración del ODN y el anticuerpo se puede alterar. En una modalidad, parte de la dosis se administra por un bolo intravenoso y el resto mediante infusión de la formulación del anticuerpo. Por ejemplo, una inyección intravenosa del anticuerpo se puede dar como bolo, y el resto de una dosis de anticuerpo predeterminado se puede administrar por inyección intravenosa. Una dosis predeterminada del anticuerpo se puede administrar, por ejemplo, sobre un periodo de tiempo de aproximadamente una hora y media a aproximadamente cinco horas.

En una modalidad, CpG ODN PF3512676 y el anticuerpo se coadministran en lo que CpG ODN PF3512676 se administra en las dosis descritas aquí, preferiblemente parenteralmente (por ejemplo, mediante por via subcutánea o IV). En otra modalidad, el anticuerpo anti-CTLA-4 se administra primero para bloquear los efectos inhibidores que podrían limitar la eficacia de CpG ODN. En esta modalidad, el anticuerpo CTLA-4 se proporciona preferiblemente de 1 semana a 1 día antes del CpG ODN, y más preferiblemente de 2-3 días antes del CpG ODN. En otra modalidad, el CpG ODN se proporciona primero para cebar el sistema inmunológico para tener una mejor respuesta de activación inmune al anticuerpo anti-CTLA-4 y cualquiera de otras inmunoterapias u otra terapia que se pueda dar en conjunción con esta (por ejemplo, vacuna contra tumor o etc.). En esta modalidad, el CpG ODN se proporciona preferiblemente de 1 semana a 1 día antes del anticuerpo anti-CTLA-4, y más preferiblemente de 2-3 días antes del anticuerpo anti-CTLA-4. Aunque cualquier periodo latente adecuado se puede usar entre la administración de CpG ODN PF3512676 y anticuerpo anti-CTLA-4, la presente invención no requiere un período de espera y el anticuerpo y CpG ODN PF3512676 se pueden co-adminístrar sustancíalmente simultáneamente. Así, en una modalidad, el anticuerpo se administra com una inyección sencilla y CpG ODN PF3512676 se administra aproximadamente 1-7 días antes o después del anticuerpo. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo se puede administrar con el CpG ODN PF3512676 en un ciclo multi-día o multi-semana. El ciclo multi-día es un ciclo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más días, o un ciclo de 2, 3, 4 o más semanas. El anticuerpo o fragmento del mismo se puede administrar el el primer día de dicho ciclo, seguido por la administración de CpG ODN PF3512676 en el primer día de cada semana de un ciclo de multi-semanas. Por ejemplo, el CpG ODN PF3512676 se puede administrar en los días 1 , 7 y 14 de un ciclo se tres semanas. El ciclo de tres semanas se puede repetir una vez, dos, tres veces o más. El tratamiento entero se puede preceder por la administración de tanto el ODN como el anticuerpo solo, por ejemplo a fin de cebar el sistema inmune o hacer el sujeto más sensible a la terapia consecutiva. Ciclos adicionales del anticuerpo y CpG ODN PF3512676 se puede proveer como se determina por métodos reconocidos en la técnica. Sin embargo, la presente invención no se limita a estas o cualquier dosificación particular o regímenes de administración para administración de CpG ODN PF3512676 en combinación con un anticuerpo anti-CTLA-4. De preferencia, la dosis, vía y régimen óptimo para administración del anticuerpo y CpG ODN PF3512676 se puede determinar fácilmente por una persona de experiencia ordinaria en la técnica relevante usando métodos bien conocidos. La combinación anticuerpo-CpG ODN PF3512676 se puede administrar como una terapia neoadyuvante antes de la cirugía, terapia de radiación, y cualquier otro tratamiento, a fin de sensibilizar las células tumorales o de otra manera confieren un beneficio terapéutico al paciente. De manera adicional, la combinación puede ser co-administrada como terapia neoadyuvante seguida del tratamiento localizado (por ejemplo cirugía, radiación o ambas). Además, la combinación se puede administrar como una terapia de segunda línea, tal como, pero sin limitarse a, una vez que cualquier terapia de primera línea ha fallado. De manera alternativa, la combinación se puede administrar concurrentemente con la terapia de primera linea y o en cualquier punto durante la terapia de primera línea, la cual se puede administrar siguiendo el tratamiento inicial. Esto es debido a una combinación de un anticuerpo anti-CTLA-4 y CpG ODN PF3512676 que puede proveer un beneficio terapéutico una vez que la terapia de primera línea ha fallado, una vez que la terapia adyuvante sistémica ha fallado, y lo similar. Así, la invención incluye la administración de un anticuerpo y CpG ODN PF3512676 en combinación, con o sin terapia adicional, incluyendo, pero sin limitarse a hormonal (por ejemplo, anti-andrógeno, inhibidor de aromatasa, y lo similar), radioterapia, y cualquier agente terapéutico adicional (quimioterapia, terapia de inhibición adicional, entre otras), y lo similar, será apreciado por una persona con experiencia en la técnica basado en la descripción provista aquí.

Vil. Composiciones farmacéuticas La invención también describe un artículo de fabricación (por ejemplo, forma de dosificación adaptada por administración i.v.) que comprende un anticuerpo anti-CTLA-4 humano en una cantidad efectiva para tratar cáncer (por ejemplo por lo menos 1 mg/kg, por lo menos 3 mg/kg, por lo menos 5 mg/kg, por lo menos 10 mg/kg, por lo menos 15 mg/kg, o por lo menos 20 mg/kg) y una cantidad terapéuticamente efectiva de CpG ODN PF3512676. En ciertas modalidades, el artículo de fabricación comprende un contenedor o contenedores que comprenden un anticuerpo anti-CTLA-4 humano, CpG ODN PF3512676, y una etiqueta y/o instrucciones para el uso para tratar cáncer. La invención incluye la preparación y uso de composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-CTLA-4 humano de la invención como un ingrediente activo en combinación con y sin CpG ODN PF3512676. Dicha composición farmacéutica puede consistir de cada ingrediente activo solo, como una combinación de por lo menos un ingrediente activo (por ejemplo, una dosis efectiva de un anti-CTLA-4, una dosis efectiva de CpG ODN PF3512676) en una forma de adecuada para administración a un sujeto, o la composición farmacéutica puede comprender el ingrediente activo y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, uno o más ingredientes adicionales (activo y/o inactivo), o alguna combinación de estos. CpG ODN PF3512676 se puede administrar directamente al sujeto o se puede administrar en conjunción con un complejo de suministro de ácido nucleico. Un complejo de suministro de ácido nucleico significa una molécula de ácido nucleico asociada con (por ejemplo, iónicamente o covalentemente unida a; o encapsulada dentro) medios de direccionamiento (por ejemplo, una molécula que resulta en alta afinidad unida a la célula objetivo. Ejemplos de complejos de suministro de ácido nucleico incluyen oligonulceotidos asociados con un esterol (por ejemplo colesterol), un lípido (por ejemplo un lípido catiónico, virosoma o liposoma), o un agente de unión especifico de célula objetivo (por ejemplo, un ligando reconocido por el receptor especifico de célula objetivo). Complejos preferidos pueden ser suficientemente estables in vivo para prevenir el desacoplamiento significante antes de la internalización por la célula objetivo. Sin embargo, el complejo se puede dividir bajo condiciones apropiadas dentro de la célula de manera que el ácido nucleico se libera en una forma funcional. Los vehículos de suministro o dispositivos de suministro para el antígeno y olígonucleótidos a superficies se han descrito. El CpG ODN PF3512676 y/o el antígeno y/o otros terapéuticos se pueden administrar solos (por ejemplo, en solución salina y regulador de pH) o usando cualquiera de los vehículos suministrados conocidos en la técnica. Por ejemplo los siguientes vehículos de suministro se han descrito: cocleatos, emulsomas, ISCOMs; liposomas; vectores bacterianos vivos (por ejemplo, Escherichia coli, Bacillus calmate-guerin, Shigella, Lactobacillus); vectores virales vivos (por ejemplo, vaccinia, adenovirus, herpes simple); microesferas; vacunas de oligonucleotidos; polímeros, anillos de polímero; proteosomas, fluoruro de sodio; plasntas transgénicas; virosomas; partículas similares al virus, y lípidos catiónicos, péptidos, u otros portadores que tienen una interacción de carga con los oligonucleótídos polianiónicos. Otros vehículos de suministro son conocidos en la técnica y algunos ejemplos adicionales se proveen posteriormente en la discusión de los vectores. En una modalidad, el anticuerpo se suministra parenteralmente (por ejemplo, intravenosamente) en una solución acuosa mientras el CpG ODN PF3512676 se describe en la publicación de solicitud de patente de E.U.A. No. US2004/0198680, la descripción de la cual se incorpora aquí para referencia en su totalidad. Sin embargo, la persona con experiencia en la técnica podría entender, basado en la descripción provista aqui, que la invención no se limita a esta, o cualquier otras, formulaciones y dosis, vías de administración, y lo similar. De preferencia, la invención incluye cualquier formulación o método de administración de un anticuerpo en combinación con un CpG ODN PF3512676, incluyendo, pero sin limitarse a, la administración de cada agente separadamente en una formulación diferente vía una ruta diferente de administración (por ejemplo, administración de un anticuerpo anti-CTLA-4 i.v. mientras se co-administra un CpG ODN PF3512676 subcutáneamente, entre muchos otros. Así, la siguiente discusión describe varias formulaciones para practicar los métodos de la invención que comprenden la administración de cualquier anticuerpo anti-CRTLA-4 en combinación con un CpG ODN PF3512676, pero la invención no se limita a estas formulaciones sino comprende cualquier formulación como puede ser fácilmente determinado por una persona con experiencia en la técnica una vez armado con las enseñanzas provistas aquí en los métodos de la invención. Los anticuerpos empleados en la invención se pueden incorporan en composiciones farmacéuticas adecuadas para administración a un sujeto. Usualmente, la composición farmacéutica comprende el anticuerpo y un portador farmacéuticamente aceptable. Como se usa aquí, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera de todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifungales, agentes se suministro isotónicos y absorción, y lo similar que son fisiológicamente compatibles. Ejemplos de portadores farmacéuticamente aceptables incluyen uno o más de agua, solución salina, solución salina regulada de pH con fosfato, dextrosa, trehalosa, glicerol, etanol y lo similar, así como sus combinaciones. En muchos casos será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio en la composición. Sustancias farmacéuticamente aceptables tales como humedad o cantidades menores de sustancias auxiliares tales como humedad o agentes de emulsionamiento, preservativos o reguladores de pH, que intensifican la vida de anaquel o efectividad del anticuerpo o porción de anticuerpo. Los anticuerpos pueden estar en una variedad de formas. Estas incluyen, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semi-sólidas y sólidas, tales como soluciones líquidas (por ejemplo, inyectables y soluciones infusibles), dispersiones o suspensiones, tabletas, pildoras, polvos, liposomas y supositorios. La forma preferida depende de la manera propuesta de administración y aplicación terapéutica. Composiciones preferidas usuales están en la inmunización de humanos con otros anticuerpos. La manera preferida de administración es parenteral (por ejemplo, intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, intramuscular). En una modalidad preferida, el anticuerpo se administra por infusión o inyección intravenosa. En otra modalidad preferida, el anticuerpo se administra por inyección intramuscular o subcutánea. Las composiciones terapéuticas deben ser estériles y estables bajo condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición se puede formular como una solución, microemulsión, dispersión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para aumentar la concentración de fármaco. Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar mediante la incorporación del anticuerpo en la cantidad requerida en una solvente apropiado con uno o una combinación de de ingredientes enumerados anteriormente, como se requiere seguido por la esterilización filtrada. Generalmente, las dispersiones se preparan al incorporar el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de aquellos enumerados. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secados en vacío y secados por congelamiento que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional a partir de su solución filtrada. La fluidez apropiada de una solución se puede mantener, por ejemplo, por el uso de un recubrimiento tal como lecítina, por un mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y por el uso de agentes tensioactivos. La absorción prolongada de composiciones inyectables se puede llevar cerca al incluir en la composición un agente que retarda la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina. Los anticuerpos y/o CpG ODN PF3512676 se pueden administrar por una variedad de métodos conocidos en la técnica, incluyendo, pero sin limitarse a, oral, parenteral, mucosai, mediante inhalación, tópica, bucal, nasal, y rectal. Para muchas aplicaciones terapéuticas, las rutas/maneras preferidas de administración es subcutánea, intramuscular, intravenosa o infusión. Se puede emplear inyección sin aguja, si se desea. Como será apreciado por una persona con experiencia en la técnica que la ruta y/o manera de administración variará dependiendo de los resultados deseados. Los regímenes de dosificación se pueden ajustar para proveer la respuesta deseada óptima. Por ejemplo, un bolo sencillo se puede administrar, varias dosis divididas se pueden administrar sobre el tiempo o la dosis se puede reducir proporcionalmente o incrementar como se indica por las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso para formular composiciones parenterales en forma de dosificación unitaria para fácil administración y uniformidad de dosificaciones. La forma de dosificación unitaria como se usa aquí se refiere a unidades discretas físicamente adecuadas como dosificaciones unitarias para el mantenimiento de sujetos a ser tratados, cada unidad conteniendo una cantidad predeterminada de compuesto activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación para las formas de dosificación unitaria de la invención se dictan por y directamente dependientes en (a) las características únicas del anticuerpo y el efecto terapéutico o profiláctico particular a ser alcanzado, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de formación de compuestos tal como un compuesto activo para el tratamiento de sensibilidad en individuos. Se debe hacer notar que los valores de dosificación pueden variar con el tipo y severidad de la condición a ser aliviada, y pueden incluir dosis sencillas o múltiples. Se debe entender que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosificación específicos se debe ajustar sobre tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y estos intervalos de dosificación expuestos aquí son ejemplares solamente y no tiene la intención de limitar el alcance o práctica de la composición reclamada. En una modalidad, el anticuerpo se administra en una formulación intravenosa como una solución acuosa estéril que contiene 5 o 10 mg/ml de anticuerpo, con acetato de sodio, polisorbato 80, y cloruro de sodio en un pH que varía de aproximadamente 5 a 6. Preferiblemente, la formulación intravenosa es una solución acuosa estéril que contiene 5 o 10 mg/ml de anticuerpo, con 20 mM de acetato de sodio, 0.2 mg/ml de polisorbato 80, y 140 mM de cloruro de sodio a pH 5.5.

En una modalidad, parte de la dosis se administra por un bolo intravenoso y el resto por infusión de la formulación de anticuerpo. Por ejemplo, 0.01 mg/kg de inyección intravenosa del anticuerpo se puede proporcionar como un bolo, y el resto de una dosis de anticuerpo predeterminado se puede administrar por inyección intravenosa. Una dosis predeterminada del anticuerpo se puede administrar, por ejemplo, sobre un periodo de una hora y media a dos horas, a cinco horas. Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas descritas aquí se pueden preparar por cualquier método conocido o antes desarrollado en la técnica de farmacología. En general, dichos métodos preparatorios incluyen la etapa de llevar el ingrediente activo en asociación con un portador o uno o más de otros ingredientes de accesorios, y después, si es necesario o deseable, dar forma o empacar el producto en una unidad de dosis sencilla o múltiple deseada. Una composición farmacéutica de la invención se puede preparar, empacar o vender a granel, como una dosis unitaria sencilla, o una pluralidad de dosis unitarias sencillas. Como se usa aqui, una "dosis unitaria" es la cantidad discreta de la composición farmacéutica que comprende una cantidad predeterminada del ingrediente activo. La cantidad del ingrediente activo es generalmente igual para las dosificaciones del ingrediente activo que se pueden administrar a un sujeto o una fracción conveniente de dicha dosificación tal como, por ejemplo, un medio o un tercio de dicha dosificación. Las cantidades relativas del ingrediente activo, el portador farmacéuticamente aceptable, y cualquiera de los ingredientes adicionales en una composición farmacéuticade la invención variará, dependiendo de la identidad, tamaño y condición del sujeto a ser tratado y adicionalmente dependiendo de la ruta por la cual la composición se administra. A manera de ejemplo, la composición puede comprender entre 0.1% y 100% (p/p) de ingrediente activo. Además del ingrediente activo, una composición farmacéutica de la invención puede comprender adicionalmente uno o más agentes farmacéuticamente activos adicionales. Agentes adicionales contemplados particularmente incluyen anti-eméticos, anti-diarreicos, agentes quimioterapéuticos, citocinas, y lo similar. Formulaciones de liberación controlada o sostenida o una composición farmacéutica de la invención se pueden hacer usando tecnología convencional. Como se usa aquí, "administración parenteral" de una composición farmacéutica incluye cualquier ruta de administración caracterizada por la ruptura física de un tejido de un sujeto y la administración de la composición farmacéutica a través de la ruptura en el tejido. La administración parenteral así incluye, pero no se limita a, administración de una composición farmacéutica mediante la inyección de la composición, por la aplicación de la composición a través de una incisión quirúrgica, por la aplicación de la composición a través de una herida no quirúrgica penetrante del tejido, y lo similar. En particular, la administración parenteral esta contemplada por incluir, pero sin limitarse a, subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, inyección transdérmica, y técnicas de infusión dialítica de riñon. Formulaciones de una composición farmacéutica adecuada para administración parenteral comprende el ingrediente activo con un portador farmacéuticamente aceptable, tal como agua estéril o solución salina isotónica estéril. Dichas formulaciones se pueden preparar, empacar, o comercializado en una forma adecuada para administración de bolo o para administración continua. Se pueden preparar, empacar o comercializar formulaciones inyectables en una forma de dosificación unitaria, tales como en ampolletas o en contenedores de dosis múltiples que contienen un preservativo. Formulaciones para administración parenteral incluyen, pero no se limitan a, suspensiones, soluciones, emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, pastas, y formulaciones biodegradables o de liberación sostenida implantables como se describe posteriormente. Dichas formulaciones pueden comprender adicionalmente uno o más ingredientes adicionales incluyendo, pero sin limitarse a, agentes de suspensión, estabilización o dispersión. En una modalidad de una formulación para administración parenteral, el ingrediente activo se provee en forma seca (es decir, polvo o granular) para la reconstitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua libre de pirógenos estéril) antes de la administración parenteral de la composición reconstituida. Una composición de la presente invención se puede administrar por una variedad de métodos conocidos en la técnica. La ruta y/o manera de administración varia dependiendo de los resultados deseados. Los compuestos activos se pueden preparar con portadores que protegen el compuesto contra la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes, parches transdérmicos, y sistemas de suministro microencapsulado. Polímeros biocompatibles, biodegradables se pueden usar, tales como acetato de etilen vinilo, polianhidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Muchos métodos para la preparación de dichas formulaciones como se describe por ejemplo por Sustained and Controlled reléase Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978). Las composiciones farmacéuticas preferiblemente se fabrican bajo condiciones GMP. Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar, empacar, o comercializar en la forma de una suspensión o solución acuosa o aceitosa inyectable estéril. Esta suspensión o solución se puede formular de acuerdo con la técnica conocida, y puede comprender, además del ingrediente activo, ingredientes adicionales tales como agentes de dispersión, agentes humectantes, o agentes de suspensión descritos aquí. Dichas formulaciones inyectables estériles se pueden preparar usando un siluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, tal como agua o 1 ,3-butano diol, por ejemplo. Otros diluyentes y solventes aceptables incluyen, pero no se limitan a, solución de Ringer, solución de cloruro de sodio isotónico, y se aceites fijados tales como mono- o di-glicéridos sintéticos. Otras formulaciones admínistrables parenteralmente que son útiles incluyen aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina, en una preparación liposomal, o como un componente de sistemas de polímero biodegradable. Composiciones para liberación sostenida o implantación pueden comprender materiales hidrófobos o poliméricos farmacéuticamente aceptables tales como una emulsión, una resina de intercambio iónico, un polímero escasamente soluble, o sal escasamente soluble. La combinación de ingrediente activo de anticuerpo anti-CTLA-4/ CpG ODN PF3512676 de la invención se puede administrar a un animal, preferiblemente un humano. Aunque la dosificación precisa administrada de cada ingrediente activo variará dependiendo de cualquier número de factores, incluyendo pero sin limitarse a, el tipo de animal y tipo de estado de enfermedad a ser tratada, la edad del animal y la(s) ruta(s) de administración. Una combinación de anticuerpo-CpG ODN PF3512676 de la invención se puede co-administrar con otros numerosos compuestos (agentes de terapia antohormonal, citocinas, fármacos quimioterapéuticos y/o antivirales, entre muchos otros). De manera alternativa, el(los) compuesto(s) se pueden administrar una hora, un día, una semana, un mes, o aún más, anticipadamente de la combinación anticuerpo- CpG ODN PF3512676, o cualquier permutación de la misma. Además, el(los) compuesto(s) se pueden administrar una hora, una semana, o aún más, después de la administración de radiación, transplante de células madre, o administración de cualquier agente terapéutico (por ejemplo, citosina, compuesto quimioterapéutico, y lo similar), o cualquier permutación de los mismos. La frecuencia y régimen de administración será ya aparentes para una persona con experiencia en la técnica y dependerá de cualquier número de factores tales como, pero sin limitarse a, tipo y severidad de la enfermedad a ser tratada, la edad y estatus de salud del animal, la identidad del compuesto o compuestos a ser administrados, la ruta de administración de varios compuestos, y lo similar. Varios métodos de demostración de ejemplos instructivos de la coadministración de un anticuerpo- CpG ODN PF3512676 para tratar cáncer se proveen, pero la invención no se limita en cualquier manera a estos ejemplos, que sirven meramente para ilustrar métodos incluidos por la invención.

VIII. Equipos La invención incluye varios equipos para tratamiento de cáncer. Estos equipos comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-CTLA-4 humano de la invención y una cantidad terapéuticamente efectiva de CpG ODN PF3512676, conjuntamente con un aplicador y materiales de instrucción que describen el uso de la combinación para desarrollar los métodos de la invención. Aunque equipos ejemplares se describe posteriormente, los contenidos de otros equipos útiles serán aparentes para los de experiencia ordinaria en vista de la presente descripción. Cada uno de estos equipos se incluye dentro de la invención. La invención incluye un equipo para el tratamiento de carcinoma celular renal en un paciente innecesidad de mismo. El equipo incluye un anticuerpo anti-CTLA-4 de la invención y CpG ODN PF3512676. El equipo adicional comprende un aplicador, incluyendo, pero sin limitarse a, una jeringa, para administración de los componentes del equipo a un paciente. Además, el equipo comprende un material de instrucción exponiendo la información pertinente para el uso del grupo del grupo para tratar cáncer de mama en el paciente. Más preferiblemente, el equipo comprende por lo menos un anticuerpo anti-CTLA-4 seleccionado de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 , y MDX-010, aún más preferiblemente, el anticuerpo es 4.13.1 , 11.2.1 y MDX-010. La invención incluye un equipo que comprende cualquier combinación de un anticuerpo anti-CTLA-4 y CpG ODN PF3512676. Aunque dicho equipo es preferido, la invención no se limita a esta combinación particular. Además, el equipo puede comprender una plétora amplia de agentes adicionales para el tratamiento cáncer. Dichos agentes se exponen previamente e incluyen compuestos quimioterapéuticos, vacunas contra el cáncer, agonistas de TLR diferentes de un CpG ODN PF3512676, otros CpG ODN, inhibdores del receptor de tirosian cinasa (tales como, pero sin limitarse a, SU11248), agentes útiles en el tratamiento de crecimiento celular anormal o cáncer, anticuerpos u otros ligandos que inhiben crecimiento tumoral mediante la unión a IGF-1R, un agente químioterapéutico (taxano, alcaloide vincapervinca, compuesto de platino, antibióticos de intercalación, entre muchos otros), y citocinas, entre muchos otros, así como agentes paliativos para tratar, por ejemplo, cualquiera de las toxinas que surgen durante el tratamiento tal como, pero sin limitarse a, un anti-diarreico, un anti-emético, y lo similar. La invención además se describe en detalle para referencia a los siguientes ejemplos experimentales. Estos ejemplos se proveen para propósitos de ilustración solamente, y no tiene la intención de ser limitantes a menos que se especifique de otra manera. Así, la invención no debería ser construida como siendo limitada a los siguientes ejemplos, pero de preferencia, debería ser construida para incluir cualquiera y todas las variaciones que llegan a ser evidentes como un resultado de las enseñanzas provistas aquí.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Anticuerpo anti-CTLA-4 en combinación con CpG ODN PF3512676 para el tratamiento de cáncer de mama Siguiendo la cirugía/radioterapia, si cualquiera, de los pacientes que tienen cáncer de mama metastático con por lo menos una lesión que se puede medir exactamente en dos dimensiones mediante exploración CT convencional o mediante exploración CT de espiral se proporciona CpG ODN PF3512676 por protocolos establecidos. Brevemente, CpG ODN PF3512676 se administra subcutáneamente o IV en dosis de 0.02 a 20 mg/kg, y más preferiblemente aproximadamente 0.2 mg/kg para SC y 2 mg/kg para IV. El paciente es administrado adicionalmente con una infusión IV sencilla (100 ml/hr) de anticuerpo anti-CTLA-4 11.2.1 como se describe aquí en una dosis aproximadamente de 10 mg/kg, proporcionada entre 7 días antes o 7 dias después del tratamiento CpG ODN PF3512676. El tratamiento se repite después de 28 días sin aumento de la dosis de anticuerpo anti-CTLA-4, cada 28 días después del máximo de 12 ciclos en la ausencia de toxicidad intolerable o progresión de la enfermedad. El paciente se puede pre-medicar con antihistamia (H1) por lo menos una hora antes de la infusión de anti-CTLA-4. Sin embargo, aunque la pre-medicación se puede administrar, preferiblemente, el paciente usualmente no se pre-trata. Más preferiblemente la administración de antiestamina (H1), y/u otras mediciones terapéuticas, se proveen a pacientes quienes experimentan reacciones de infusión. Anti-eméticos y anti-diarreicos, entre otros tratamientos paliativos, se proporcionan como apropiados durante y después del tratamiento. CpG ODN PF3512676 se administra consecutivamente o simultáneamente con anticuerpo anti-CTLA-4 humano 11.2.1 , ambos una vez, o repetidamente, como se determina. El anticuerpo anti-CTLA se provee en frascos de vidrio claro con un tapón de caucho y un sello de aluminio. Cada frasco contiene 5 mg/ml (con un relleno nominal de 50 mg/frasco) de anticuerpo anti-CLTA-4, en una solución acuosa estéril que comprende 20 mM de acetato de sodio, 0.2 mg/ml de polisorbato 80, y 140 mM de cloruro de sodio a pH 5.5. CpG ODN PF3512676 se provee en una solución regulada de pH con fosfato libre de preservativo estéril en varias concentraciones para administración parenteral. Para todos los pacientes, el estatus de desempeño ECOG, signos vitales, y peso del cuerpo se valoran pre-dosis, y los signos vítales se pueden repetir post-dosis, como se indica clínicamente. Un examen físico (incluyendo valoración oftamológica y signos de autoinmunidad) se realizan en el día 1. Muestras para panel hematológico (hematocrito, conteo RBC, conteno WBC, diferencial), química (fosfatasa alcalina, calcio, cloruro, GGT, LDH, magnesio, fósforo, glucosa tomada al azar, sodio, urea, ácido úrico), urinalisis (sangre, proteina), otros (tiempo de tromboplastina parcial activada [APTT], tiempo de protrombina (PT), panel autoanticuerpo, proteína reactiva C, TSH, T3, T4, amilasa, lipasa, suero C3, C4, suero nivel Ig), se obtienen. El valorador de anticuerpo anti-humano humano de línea se base (HAHA) se determina y el espécimen de farmacocinética (PK) se obtiene pre-dosis. Los siguientes puntos finales se miden: parámetros PK, HAHA, velocidad de respuesta y tiempo para progresión. Tiempo para progresión y supervivencia toral se calculan usando el método de producto Kaplan-Meler.

Equivalentes Aunque la invención se ha descrito con referencia a modalidades específicas, es aparente que otras modalidades y variaciones de esta invención se pueden idear por otras personas con experiencia en la técnica sin desviarse de la esencia y alcance verdaderos de la invención. Las reivindicaciones anexadas tienen la intención de ser construidas para incluir todas las modalidades y variaciones equivalentes. Las descripciones de cada una y varias patentes, solicitudes de patente, y publicaciones citadas aquí son incorporadas por la presente aquí para referencia en su totalidad.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1 - El uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-CTLA-4, o una porción de unión a antígeno del mismo, en combinación con una cantidad terapéuticamente efectiva de CpG ODN PF3512676 (SEQ ID NO:37) para la elaboración de un medicamento útil para el tratamiento de cáncer.

2 - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho CpG ODN PF3512676 (SEQ ID NO:37) está formulado para ser administrable diariamente, un dia sí y el otro no, dos veces por semana, o semanalmente.

3 - El uso que se reclama en la reivindicación 1 ó 2, en donde dicho tratamiento es una terapia seleccionada del grupo que consta de terapia neo-adyuvante, terapia adyuvante, terapia de primera linea, terapia de segunda línea, y terapia de tercera línea. 4.- El uso que se reclama en la reivindicación 1 , 2 ó 3, en donde dicho anticuerpo anti-CTLA-4 humano está adaptado para ser administrable en una cantidad que varía de aproximadamente 0.1 mg/kg a 50 mg/kg. 5.- El uso que se reclama en la reivindicación 4, en donde dicho anticuerpo anti-CTLA-4 humano está adaptado para ser administrable en una cantidad que varía de aproximadamente 0.3 mg/kg a 20 mg/kg. 6.- El uso que se reclama en la reivindicación 5, en donde dicho anticuerpo anti-CTLA-4 humano está adaptado para ser administrable en una cantidad seleccionada del grupo que consta de al menos 1 mg/kg, al menos 3 mg/kg, al menos 6 mg/kg, al menos 10 mg/kg, y al menos 15 mg/kg. 7.- El uso que se reclama en la reivindicación 1-5 ó 6, en donde dicho cáncer se selecciona del grupo que consta de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer pancreático, melanoma, cáncer de pulmón, leucemia mieloide aguda, carcinoma colorrectal, carcinoma de célula renal, linfoma de célula T cutánea, linfoma no Hodgkin, cánceres gástricos, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de hígado, cáncer cervical, cáncer de cerebro, y sarcoma. 8.- El uso que se reclama en la reivindicación1-6 ó 7, en donde dicho anticuerpo anti-CTLA-4, o porción de unión a antígeno del mismo, es al menos un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de: (a) un anticuerpo de humano que tiene una afinidad de unión para CTLA-4 de aproximadamente 10'8 o más, y que inhibe la unión entre CTLA-4 y B7-1 , y unión entre CTLA-4 y B7-2; (b) un anticuerpo de humano que tiene una secuencia de aminoácidos que comprende al menos una secuencia CDR de humano que corresponde a una secuencia de CDR de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1 1 , y 10D1 ; (c) un anticuerpo de humano que tiene la secuencia de aminoácidos de cadenas pesada y ligera de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 y 10D1 ; (d) un anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, que compite para la unión con CTLA-4 con al menos un anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácido de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 11.2.1 , 1 1.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 y 10D1 ; y (e) un anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, que compite en forma cruzada para unión con CTLA-4 con por lo menos un anticuerpo que tiene el aminoácido de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.8.1 , 4.10.2, 4.13.1 , 4.14.3, 6.1.1 , 1 1.2.1 , 11.6.1 , 11.7.1 , 12.3.1.1 , 12.9.1.1 y 10D1. 9.- El uso que se reclama en la reivindicación 1-7 u 8, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo humano que tiene la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de 4.1.1 , 4.13.1 , 11.2.1 , y 10D1. 10.- El uso que se reclama en la reivindicación 9, en donde dicho anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, comprende una cadena pesada y una cadena ligera en donde las secuencias de aminoácidos del dominio variable de cadena pesada de dicha cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera de dicha cadena ligera se seleccionan del grupo que consta de: (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:3 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:9; (b) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:21 ; (c) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N0.27 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:33; (d) la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 y la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:7; (e) la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 13 y la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 19; (f) la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:25 y la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO:31 ; y (g) la secuencia de aminoácidos de un dominio variable de anticuerpo 10D1. 11 - El uso que se reclama en la reivindicación 9, en donde dicho anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, es un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de: (a) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 y SEQ ID NO:12; (b) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23 y SEQ ID NO:24; y (c) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35 y SEQ ID NO:36. 12 - El uso que se reclama en la reivindicación 9, en donde dicho anticuerpo, o su porción de unión a antígeno, comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:27 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:33. 13.- El uso que se reclama en la reivindicación 9, en donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consta de (a) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:2 y SEQ ID NO:8; (b) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:14 y SEQ ID NO:20; y (c) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:26 y SEQ ID NO:32. 14.- El uso que se reclama en la reivindicación 1-12 ó 13, en donde dicho anticuerpo está formulado para ser administrable 1-7 dias antes de la administración de dicho CpG ODN PF3512676 (SEQ ID NO:37). 15.- El uso que se reclama en la reivindicación 1-13 ó 14, en donde dicho CpG ODN PF3512676 (SEQ ID NO:37) está formulado para ser administrable de aproximadamente uno a cien días después de dicho anticuerpo. 16.- El uso que se reclama en la reivindicación 1-14 ó 15, en donde dicho CpG ODN PF3512676 (SEQ ID NO:37) está formulado para ser administrable de manera subcutánea. 17.- El uso que se reclama en la reivindicación 1-15 ó 16, en donde dicho CpG ODN PF3512676 (SEQ ID NO:37) está formulado para ser administrable en una cantidad de 1 mg - 50 mg por día. 18.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer, dicha composición comprendiendo una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-CTLA-4, o porción de unión a antígeno del mismo, y una cantidad terapéuticamente efectiva de CpG ODN PF3512676 (SEQ ID NO:37), y un portador farmacéuticamente aceptable.