MX2007009012A - Metodos para tratar carcinoma de celulas renales. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a metodos para tratar carcinoma de celulas renales usando dosis bajas de IL-2. En particular, la invencion se refiere a metodos para tratar carcinoma de celulas renales metastasicas en pacientes quienes son afectados renalmente y/o intolerantes a terapias de dosis altas de IL-2. El regimen terapeutico descrito en este documento, inhibe significativamente, el crecimiento del tumor con toxicidad reducida y efectos colaterales adversos, comparados con la terapia de dosis altas de IL-2.

Description

MÉTODOS PARA TRATAR CARCINOMA DE CÉLULAS RENALES CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención pertenece en general, a métodos para tratar carcinoma de células renales con IL-2. En particular, la invención se refiere a métodos para tratar carcinoma de células renales en pacientes quienes son afectados renalmente o intolerantes a terapia de dosis altas de IL-2.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La interleucina-2 (IL-2) es un estimulador potente de proliferación y función de células T y citoliticas naturales (NK) (Morgan et al . (1976) Science 193:1007-1011). Esta linfocina que se origina naturalmente, ha sido mostrada por tener actividad anti-tumoral contra una variedad de malignidades ya sea sola o cuando se combina con células citoliticas activadas por la linfocina (LAK) o linfocitos infiltrantes del tumor (TIL) (véase por ejemplo, Rosenberg et al . , N. Engl . J. Med. (1987) ^16:889-897; Rosenberg, Ann . Surg. (1988) 208:121-135; Topalian et al., J Clin . Oncol . (1988) 6:839-853; Rosenberg et al., N. Engl . J. Med. (1988) 31_9: 1676-1680; y Weber et al., J. Clin . Oncol . (1992) 10:33-40). La actividad anti-tumoral de IL-2 ha sido mejor descrita en pacientes con melanoma metastásico y carcinoma de células REF: 184856 renales usando Proleukin®, una formulación de IL-2 comercialmente disponible de Chiron Corporation, Emeryville, CA. Otras enfermedades, que incluyen linfoma, también parecen responder al tratamiento con IL-2 (Gisselbrecht et al., Blood (1994)83^:2020-2022). Sin embargo, altas dosis de IL-2 usadas para lograr resultados terapéuticos positivos con respecto a crecimiento de tumor, frecuentemente causa severos efectos colaterales, que incluyen fiebre y escalofríos, hipotensión y pérdida capilar (síndrome de pérdida vascular o VLS) , y cambios neurológicos (véase por ejemplo, Duggan et al., J Immunotherapy (1992)12:115-122; Gisselbrecht et al., Blood (1994)83^:2081-2085; y Sznol and Parkinson, Blood (1994) 83:2020-2022) . El carcinoma de células renales metastásicas (RCC) , es en general, resistente a quimioterapia, ya sea con agentes únicos o con agentes múltiples en combinación. Se han visto grandes éxitos con inmunoterapia, particularmente con el uso de IL-2. La terapia con dosis altas de IL-2 intravenosa, ha resultado en respuestas de tumor objetivas en aproximadamente 15% de pacientes, algunos con durabilidad prolongada. Sin embargo, la administración de dosis altas de IL-2 está asociada con el síndrome de pérdida capilar, el cual resulta en hipotensión y perfusión de órgano reducida, el cual puede ser severo y algunas veces, fatal. Estas toxicidades han restringido en general, el uso de IL-2 en un grupo altamente seleccionado de pacientes administrados pos especialistas con experiencia significante en su administración. El uso de dosis más bajas y regímenes de administración subcutáneamente de IL-2 sola o en combinación con otros agentes biológicos, tales como interferón-oí, ha sido explorado en un esfuerzo por desarrollar una terapia ampliamente aplicable para esta enfermedad (véase por ejemplo, Nieken et al., Cáncer Biother. Radiopharm . (1996)11:289-295; Sleijfer et al., J. Clin . Oncol . (1992) 1_0: 1119-1123; Lessoni et al., An ti cancer Res . (2002)22:1061-1-1064; Tourani et al., J. Clin Oncol . (1998) 16:2505; y Schiller et al. Cáncer Res . (1993)53:1286-1292) . Permanece una necesidad de una terapia mejorada para tratar pacientes que tienen carcinoma de células renales que podría reducir la toxicidad y eficacia terapéutica mejorada.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método eficaz para tratar carcinoma de células renales con IL-2. El método utiliza una dosis relativamente baja de IL-2, comparada con dosificaciones usadas previamente en terapias de dosis altas de IL-2, para reducir la toxicidad. Como se muestra en los ejemplos de este documento, el régimen terapéutico, inhibe significantemente el crecimiento del tumor con efectos colaterales adversos reducidos y proporciona un tratamiento alternativo para pacientes quienes no pueden tolerar terapia de dosis altas de IL-2. En un aspecto, la invención proporciona un método para tratar un paciente humano que tiene carcinoma de células renales. En ciertas modalidades, el paciente es afectado renalmente. En ciertas modalidades, el carcinoma de células renales es metastásico. En ciertas modalidades, el paciente es intolerante a tratamiento de dosis altas de IL-2. En una modalidad, el método comprende: a) administrar una dosis de 1-52 MIU de IL-2 por día, en 1-3 dosis un día por 3-6 días una semana, repetida por 1-24 semanas; y b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas. En otra modalidad, el método comprende: a) administrar una dosis de 1-52 MIU de IL-2 cada 5 días hasta 1 mes, repetido por 1-24 semanas, en donde la IL-2 es convenientemente conjugada a un polietilenglicol o poliol polioxietilado; y b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas. En una modalidad adicional, el método comprende: a) administrar una dosis de 9-18 MIU de IL-2 por día, en 1-3 dosis un día, por 3-6 días una semana, repetida por 1-24 semanas; b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas; c) administrar una dosis de 9 MIU de IL-2 por día, en 1-3 dosis un día por 3-6 días una semana, repetida por 1-24 semanas; y d) no administrar IL-2 por 1-4 semanas. En aún otra modalidad, el método comprende: a) primero, administrar una dosis de 18 MIU de IL-2 por día por 5 días durante una semana; b) segundo, administrar una dosis de 9 MIU de IL-2 por día por 2 días, seguida por administración de una dosis de 18 MIU de IL-2 por día por 3 días, durante cada semana, repetida por 5 semanas; c) tercero, no administrar IL-2 por 3 semanas; d) cuarto, administrar una dosis de 9 MIU de IL-2 por día por 5 días de cada semana, repetida por 6 semanas; y e) quinto, no administrar IL-2 por 3 semanas. En cualquiera de los métodos descritos en este documento, la IL-2 puede ser IL-2 recombinantemente producida. La IL-2 puede incluir, IL-2 humana o variantes de las mismas, que comprenden una secuencia que tiene al menos aproximadamente 70-10% de identidad de secuencia con la secuencia de IL-2 humana (SEC ID NO: 1) , que incluye cualquier porcentaje de identidad dentro de estos intervalos, tales como, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% de identidad de secuencia en esta. En ciertas modalidades, la IL-2 es una muteina IL-2, por ejemplo, pero no limitada a, IL-2 de Ala104 Ser?25; IL-2 de des-Alax des-Pro2 des-Thr3 des-Ser4 Ala?04 Ser125; e IL-2des-Alax des-Pro2 des-Thr3 des-Ser4 des-Ser5 des-Ser6. En una modalidad preferida, la muteina IL-2 es des-alanilo-1 , serina-125 de interleucina-2 humana (aldesleucina) .

En ciertas modalidades la IL-2 es conjugada a un polietilenglicol. Los glicoles de polietileno ejemplares incluyen pero no se limitan a polietilenglicol que tiene un peso molecular promedio de 1,000 hasta 40,000 daltons, un polietilenglicol que tiene un peso molecular de 2,000 hasta 20,000 daltons, y un polietilenglicol que tiene un peso molecular promedio de 3,000 y 12,000 daltons En otras modalidades, la IL-2 es covalentemente conjugada a un poliol polioxietilado . Polioles polioxietilados ejemplares incluyen, pero no se limitan a: Sorbitol polioxietilado, glucosa polioxietilada, y glicerol polioxietilado. en ciertas modalidades el poliol polioxietilado es un glicerol polioxietilado que tiene un peso molecular promedio de 1000 a 40000. En cualquiera de los métodos descritos en este documento, ciclos múltiples del método de tratamiento, se pueden administrar al sujeto por un periodo de tiempo suficiente para efectuar al menos, una respuesta tumoral parcial. En ciertas modalidades, el periodo de tiempo es al menos, 6 meses. En ciertas modalidades, el periodo de tiempo es al menos, 12 meses. En ciertas modalidades, el periodo de tiempo es suficiente para efectuar una respuesta tumoral completa. En ciertas modalidades, el método de tratamiento además comprende ciclos múltiples de un tratamiento que comprende: a) administrar una dosis de MIU 9 de IL-2 por día, en 1-3 dosis un día, por 3-6 días una semana, repetido por 1- 24 semanas; y b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas; administrando a dicho sujeto por un periodo suficiente de tiempo para efectuar al menos, una respuesta de tumor parcial . En cualquiera de los métodos descritos en este documento, la IL-2 puede ser administrada por administración subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, oral, pulmonar, nasal, tópica, o transdérmica, o por infusión o supositorios. En una modalidad preferida, la IL-2 es administrada subcutáneamente. Estas y otras modalidades de la invención sujeta, ocurrirán fácilmente para aquellos de habilidad en la técnica, en vista de las descripciones de este documento.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 compara la eficacia relativa de dosis bajas de IL-2 en pacientes con carcinoma de células renales metastásicas que tienen función renal normal (creatinina del suero (SCr) <_ 1.5 mg/dl) y renal deteriorada (SCr > 1.5 mg/dl) , después de la administración del régimen descrito en el Ejemplo 3. La Figura 1 muestra un trazo del porcentaje de sujetos que exhiben supervivencia libre de progreso (PFS) contra tiempo en años y un trazo del porcentaje de sujetos que sobreviven contra el tiempo en años . La Figura 2 muestra una gráfica de barras que representa las velocidades de respuesta total para pacientes con carcinoma de células renales metastásicas, que tienen función renal normal (SCr <_ 1.5 mg/dl) y función renal afectada (SCr > 1.5 mg/dl), tratados con dosis bajas de IL-2, después del régimen de administración descrito en el Ejemplo 3. El porcentaje de sujetos que muestran una respuesta completa (CR) , se muestra con sombreado ligero. El porcentaje de sujetos que muestran una respuesta parcial (PR) , se muestra con sombreado oscuro. La Figura 3 compara las características del paciente (PS, antes de la nefrectomía) de la población tratada en el estudio clínico Fase IV de dosis bajas de IL-2 descrito en este documento a grupos de control históricos. Véase, Pyrhonen et al. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2859-2867; Motzer et al. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2530-40; Ritchie et al. (1999) Lancet 353:14-17; Kriegmair et al. (1995) Urology 45:758-762; y Jones et al. (1993) Cáncer Biother. 8:275-288; Gleave et al (1998) New Engl. J. Med. 338:1265-1271; Steineck et al. (1990) Acta Oncol. 29:155-162; y Osband et al. (1990) Lancet 335:994-998, para una descripción de grupos de control históricos a partir de estudios clínicos de pacientes con carcinoma de células renales. La Figura 4 compara los resultados de pacientes (OR, PFS, OS a 1 año, PS a 2 años) de la población tratada en el estudio clínico Fase IV de dosis baja de IL-2 descrita en este documento para grupos de control históricos. La Figura 5 compara la relación de supervivencia de pacientes tratados con dosis bajas de IL-2, después del régimen de administración en el Ejemplo 3, con aquel de un grupo de control histórico de pacientes tratados con quimioterapia en lugar de IL-2 (Jones et al. (1993) J. Clin. Oncol. 12:2714-2722). Los pacientes fueron subdivididos en grupos de riesgo de conformidad con las estratificaciones del factor de riesgo del sistema Jones como sigue: Buen riesgo (0-1 factores de riesgo) , Riesgo Moderado (2 factores de riesgo) , y Escaso Pronóstico (todos los 3 factores de riesgo) . La Figura 5 muestra trazos separados del porcentaje de supervivencia de sujetos contra tiempo en años para cada uno de los grupos de riesgo. Los datos para sujetos tratados con dosis bajas de IL-2, se muestran con una línea sólida. Los datos para sujetos tratados con quimioterapia se muestran con una línea punteada.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique de otro modo, métodos convencionales de farmacología, química, bioquímica, técnicas de ADN recombinante e inmunología, dentro de la habilidad en la técnica. Tales técnicas son explicadas completamente en la literatura. Véase por ejemplo, Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D.M. Weir and CC. Blackwell eds., Blackwell Scientific Publications) ; A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., current addition); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Labora tory Manual (2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.) Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en este documento, sea anteriormente o posteriormente, están por este medio, incorporadas por referencia en sus totalidades.

I . Definiciones En la descripción de la presente invención, se emplearán los siguientes términos, y están propuestos para ser definidos como se indican posteriormente. Se debe notar que, como se usa en esta especificación y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares, "un", "uno", y "lo", incluyen referencias plurales a menos que el contexto lo dicte claramente de otro modo. De este modo, por ejemplo, referencia a "un agente quimioterapéutico" , incluye una mezcla de dos o más de tales agentes, y similares. El término "IL-2" , como se usa en este documento, es una proteína derivada de una linfocina que es producida por linfocitos de sangre periférica normal y está presente en el cuerpo a concentraciones bajas. La IL-2 es primero descrita por Morgan et al . (1976) Science 193:1007-1008 y originalmente se llamó factor de crecimiento de células T, debido a su capacidad para inducir proliferación de linfocitos T estimulados. Es una proteína con un peso molecular reportado en el intervalo de 13,000 hasta 17,000 (Gillis and Watson (1980) J. Exp . Med. 159:1709) y tiene un punto isoeléctrico en el intervalo DE 6-85. Tanto las proteínas de longitud completa IL-2 como los fragmentos biológicamente activos del mismo, están abarcados por la definición. El término también incluye modificaciones postexpresión de la IL-2, por ejemplo, glicosilación, acetilación, fosforilación y similares. Además, para propósitos de la presente invención, el término "IL-2", se refiere a una proteína la cual incluye modificaciones, tales como supresiones, adiciones y sustituciones (en general, conservativas en naturaleza) , con la secuencia nativa, tan pronto como la proteína mantenga su actividad biológica, es decir, actividad anti-tumoral. Estas modificaciones pueden ser deliberadas, a través de mutagénesis dirigida al sitio, o pueden ser accidentales, tales como a través de mutaciones de hospederos los cuales producen las proteínas o errores debido a la amplificación por RCP.

El término "forma derivada" como se usa en este documento, identifica la fuente original de una molécula, pero no significa limitar el método por el cual la molécula es elaborada, la cual puede ser, por ejemplo, por síntesis química o medios recombinantes. Los términos "variante" , "análogo" y "muteina" , se refieren a derivados biológicamente activos de la molécula de referencia, que retiene la actividad deseada, tal como actividad anti-tumoral en el tratamiento de carcinoma de células renales descrito en este documento. En general, los términos "variante" y "análogo" , se refieren a compuestos que tienen una secuencia y estructura de polipéptido nativo con una o más adiciones, sustituciones (en general conservativas en naturaleza) y/o supresiones de aminoácidos, con relación a la molécula nativa, tan pronto como las modificaciones no destruyan la actividad biológica y las cuales son, "sustancialmente homologas" a la molécula de referencia como se define abajo. En general, las secuencias de aminoácido de tales análogos, tendrá un grado alto de homología de secuencia con la secuencia de referencia, por ejemplo, homología de secuencia de aminoácido de más de 50%, en general, de más de 60%-70%, aún más particularmente, 80%-85%, tal como al menos 90%-95% o más, cuando las dos secuencias son alineadas. A menudo, los análogos incluirán el mismo número de aminoácidos, pero incluirán sustituciones, como se explica en este documento. El término "muteina", además incluye polipéptidos que tienen una o más moléculas similares a aminoácidos que incluyen pero no se limitan a, compuestos que comprenden solamente moléculas amino y/o imino, polipéptidos que contienen uno o más análogos de aminoácido (que incluyen por ejemplo, aminoácidos no naturales, etc.), polipéptidos con enlaces sustituidos, así como también otras modificaciones conocidas en la técnica, moléculas tanto que se originan naturalmente como que no se originan naturalmente (por ejemplo, sintéticas), ciclizadas, ramificadas y similares . El término también incluye moléculas que comprenden uno o más residuos de glicina N-sustituida (un "peptoide") y otros aminoácidos o péptidos sintéticos. (Véase por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 5,831,005; 5,877,278; y 5,977,301; Nguyen et al., Chem Biol. (2000) 7:463-473; y Simón et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA (1992) 89:9367-9371, para descripciones de peptoides). Preferiblemente, el análogo o muteina tiene al menos, la misma actividad anti-tumoral como la molécula nativa. Los métodos para elaborar análogos peptídicos y muteinas, son conocidos en la técnica y se describen además posteriormente. Como se explica anteriormente, los análogos en general, incluyen sustituciones que son conservativas en naturaleza, es decir, aquellas sustituciones que toman lugar dentro de una familia de aminoácidos que están relacionados con sus cadenas laterales. Específicamente, los aminoácidos son en general, divididos en cuatro familias: (1) acídica -aspartato y glutamato; (2) básica -- lisina, arginina, histidina; (3) no polares - alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano; y (4) polar no cargado - glicina, asparagina, glutamina, cisteína, serina, treonina, tirosina. Fenilalanina, triptófano y tirosina, son algunas veces clasificados como aminoácidos aromáticos. Por ejemplo, es razonablemente predecible que un reemplazo aislado de leucina con isoleucina o valina, un aspartato con un glutamato, una treonina con una serina, o un reemplazo conservativo similar de un aminoácido con un aminoácido estructuralmente relacionado, no tendrá un efecto principal en la actividad biológica. Por ejemplo, el polipéptido de interés puede incluir hasta aproximadamente 5-10 sustituciones de aminoácido conservativas o no conservativas, o aún, hasta aproximadamente 15-25 sustituciones de aminoácido conservativas o no conservativas, o cualquier número entero entre 5-25, tan pronto como la función deseada de la molécula permanezca intacta. Un experto en la técnica, puede fácilmente determinar regiones de la molécula de interés que pueden tolerar cambios por referencia a trazos Hopp/Woods y Kyte-Doolittle, bien conocidos en la técnica. Por "derivado", se pretende cualquier modificación adecuada del polipéptido nativo de interés, de un fragmento de polipéptido nativo, o de sus análogos respectivos, tales como glicosilación, fosforilación, conjugación polimérica (tal como con polietilenglicol) , u otra adición de porciones extrañas, tan pronto como la actividad biológica deseada del polipéptido nativo se retenga. Métodos para elaborar fragmentos, análogos y derivados de polipéptido, son en general, disponibles en la técnica. Por "fragmento", se pretende una molécula que consiste de solamente una parte de la secuencia y estructura de longitud completa intacta. El fragmento puede incluir una supresión C-terminal, una supresión N-terminal, y/o supresión interna del polipéptido nativo. Los fragmentos activos de una proteína particular en general, incluirán al menos, aproximadamente 5-10 residuos de aminoácidos contiguos de la molécula de longitud completa, preferiblemente al menos, aproximadamente 12-25 residuos de aminoácidos contiguos de la molécula de longitud completa, y más preferiblemente, al menos aproximadamente 20-50 o más residuos de aminoácidos contiguos de la molécula de longitud completa, o cualquier número entero entre 5 aminoácidos y la secuencia de longitud completa, siempre que el fragmento en cuestión retenga la actividad biológica, tal como la actividad anti-tumoral, como se define en este documento. "Sustancialmente purificado", en general, se refiere al aislamiento de una sustancia (compuesto, polinucleótido, proteína, polipéptido, composición de polipéptido) , de manera tal que la sustancia comprende la mayoría del porcentaje de la muestra en la cual reside. Típicamente, en una muestra, un componente sustancialmente purificado comprende 50%, preferiblemente 80%-85%, más preferiblemente, 90%- 95% de la muestra. Las técnicas para purificar polinucleótidos y polipéptidos de interés, son bien conocidas en el arte e incluyen, por ejemplo, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad y sedimentación, de conformidad con la densidad. Por "aislado" , significa, cuando se refiere a un polipéptido, que la molécula indicada es separada y discreta del organismo completo con el cual, la molécula se encuentra en la naturaleza o está presente en la ausencia sustancial de otras macro-moléculas del mismo tipo. El término "aislado", con respecto a un polinucleótido, es una molécula de ácido nucleico desprovista, en todo o parte, de secuencias normalmente asociadas con éstas en la naturaleza; o secuencias, como existen en la naturaleza, pero que tienen secuencias heterólogas en asociación con estas; o una molécula disasociada del cromosoma. "Homología", se refiere al porcentaje de identidad entre dos polinucleótidos o dos porciones de polipéptidos. Dos ácidos nucleicos o dos secuencias de polipéptido, son "sustancialmente homologas" entre sí, cuando las secuencias exhiben al menos, aproximadamente 50%, preferiblemente al menos aproximadamente 75%, más preferiblemente, al menos aproximadamente 80%- 85%, preferiblemente al menos aproximadamente 90%, y más preferiblemente, al menos aproximadamente 95%-98% de la identidad de secuencia sobre una longitud definida de las moléculas. Como se usa en este documento, sustancialmente homólogo, también se refiere a secuencias que muestran completa identidad a la secuencia especificada. En general, "identidad", se refiere a una correspondencia exacta de nucleótido a nucleótido o aminoácido a aminoácido, de dos secuencias de polinucleótidos o polipéptidos, respectivamente. Se puede determinar el porcentaje de identidad por una comparación directa de la información de secuencia entre dos moléculas (la secuencia de referencia y una secuencia con % de identidad desconocido con la secuencia de referencia) , alineando las secuencias, contando el número exacto de apareamiento entre las dos secuencias alineadas, dividiendo por la longitud de la secuencia de referencia, y multiplicando el resultado por 100. Pueden ser usados programas de ordenadores fácilmente disponibles, para ayudar en el análisis, tal como ALIGN, Dayhoff, M.O. en Atlas of Protein Sequence and Structure M.O. Dayhoff ed. , 5 Suppl. 3:353-358, National biomedical Research Foundation, Washington, DC, el cual adapta el algoritmo de homología local de Smith and Waterman Advances in Appl . Ma th . 2:482-489, 1981, para análisis peptídico. Los programas para determinar identidad de secuencia de nucleótidos, están disponibles en el Paquete de Análisis de Secuencia Wisconsin, Versión 8 (disponible de Genetics Computer Group, Madison, Wl) , por ejemplo, los programas BESTFIT, FASTA y GAP, los cuales también confían en el algoritmo de Smith y Waterman. Estos programas son fácilmente utilizados con los parámetros de defecto recomendados por el fabricante y descritos en el Paquete de Análisis de Secuencia Wisconsin, referidos anteriormente. Por ejemplo, el porcentaje de identidad de una secuencia de nucleótido particular con una secuencia de referencia, se puede determinar usando el algoritmo de homología de Smith y Waterman con una tabla de registro de defecto y una omisión gap de seis posiciones de nucleótidos. Otro método para establecer el porcentaje de identidad en el contexto de la invención, es usar el paquete MPSRCH de programas registrados por la Universidad de Edinburg, desarrollados por John F. Collins y Shane S. Sturrok, y distribuido por IntelliGenetics, Inc. (Mountain View, CA) . De esta serie de paquetes, se puede emplear el algoritmo Smith-Waterman, en donde los parámetros de defecto son usados para la tabla de registro (por ejemplo, omisión de apertura gap de 12, omisión de extensión gap de uno y un gap de seis) . A partir de los datos generados, los valores "Apareados", reflejan la "identidad de secuencia". Otros programas adecuados para calcular la identidad de porcentaje o similitud entre secuencias, son en general conocidos en la técnica, por ejemplo, otro programa de alineación es BLAST, usado con los parámetros de defecto. Por ejemplo, BLASTN, y BASTP, pueden ser usados empleando los siguientes parámetros de defecto: código genético = estándar; filtro = ninguno; hebra = ambas; valor límite = 60; esperado = 10; Matriz = BLOSUM 62; Descripciones = 50 secuencias; clasificación por = REGISTRO ALTO; Base de datos = no redundante, GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + traducciones CDS GenBank + proteína Swiss + Spupdate + PIR. Detalles de estos programas son fácilmente disponibles . Alternativamente, la homología puede ser determinada por hibridización de polinucleótidos bajo condiciones las cuales forman duplos entre regiones homologas, seguido por digestión con nucleasa (s) específicas de la hebra única, y determinación de tamaño de los fragmentos digeridos. Las secuencias de ADN que son sustancialmente homologas, pueden ser identificadas en un experimento de hibridización Southern bajo, por ejemplo, condiciones rigurosas, como se define para tal sistema particular. Definir las condiciones de hibridización apropiadas, está dentro de la habilidad de la técnica. Véase por ejemplo, Sambrook et al., supra ; DNA Cloning, supra ; Nucleic Acid Hybridiza tion , supra . "Recombinante" como se usa en este documento, describe una molécula de ácido nucleico que significa un polinucleótido de origen genómico, ADNc, viral, semisintético o sintético, el cual en virtud de su origen o manipulación, no está asociado con toda o una porción del polinucleótido con el cual se asocia en la naturaleza. El término "recombinante" como se usa con respecto a una proteína o polipéptido, significa un polipéptido producido por expresión de un polinucleótido recombinante. En general, el gen de interés es clonado y después expresado en organismos transformados, como se describe además posteriormente. El organismo hospedero expresa el gen extraño para producir la proteína bajo condiciones de expresión. "Afectado renalmente" como se usa en este documento, se refiere a un paciente, quien tiene una velocidad de filtración glomerular insuficiente. Tal paciente está caracterizado en este documento, por un nivel de creatinina del suero (SCr) mayor de 1.5 mg/dl. Por "actividad anti-tumoral", está propuesta una reducción en la velocidad de proliferación celular y por lo tanto, un decline en la velocidad de crecimiento de un tumor existente o en un tumor que se origina durante la terapia, y/o destrucción de células neoplásicas existentes (tumor) o células neoplásicas recientemente formadas, y por lo tanto, una disminución en el tamaño total de un tumor durante la terapia. Tal actividad puede ser valorada usando modelos animales, tales como modelos xenógrafos de carcinoma de células renales humanas. Véase por ejemplo, et al, In Vivo (2000) 14:393-400 y Everitt et al., Toxi col . Let t . (1995) 82-83:621-625 para una descripción de modelos animales. Por "dosis o cantidad terapéuticamente efectiva" de IL-2 o una variante de la misma, se pretende una cantidad que, cuando se administra como se describe en este documento, lleva aproximadamente una respuesta terapéutica positiva, tal como actividad antitumoral. El término "respuesta tumoral" , como se usa en este documento, significa una reducción o eliminación de todas las lesiones medibles . El criterio para respuesta tumoral se basa en el Criterio de Reporte WHO [WHO Offset Publication, 48-World Health Organization, Geneva, Suiza, (1979)]. Idealmente, todas las lesiones uni o bidimensionalmente medibles, deben ser medidas en cada valoración. Cuando se presentan lesiones múltiples en cualquier órgano, tales mediciones pueden no ser posibles y, bajo tales circunstancias, hasta 6 lesiones representativas deben ser seleccionadas, si son disponibles. El término "respuesta completa" (CR) como se usa en este documento, significa una desaparición completa de todas las enfermedades malignas clínicamente detectables, determinadas por 2 valoraciones al menos, 4 semanas aparte. El término "respuesta parcial" (PR) como se usa en este documento, significa una reducción del 50% o mayor a partir de la línea base en la suma de los productos de los diámetros perpendiculares más largos de todas las enfermedades medibles sin progreso de enfermedad evaluable y sin evidencia de cualquier lesión nueva como se determina por al menos, dos valoraciones consecutivas en al menos, cuatro semanas aparte. Las valoraciones deben mostrar una disminución parcial en el tamaño de las lesiones líticas, recalcificaciones de lesiones líticas, o densidad reducida de lesiones blásticas. Las lesiones individuales las cuales parecen incrementar en tamaño, no necesariamente descalifican un PR a menos que el incremento en el documento en dos mediciones secuenciales tome al menos, 28 días aparte. El término "enfermedad progresiva" (PD) como se usa en este documento, se refiere a un incremento de 25% o más en el tamaño de al menos, una lesión unidimensionalmente o bidimensionalmente (producto de los diámetros perpendiculares más largos) medible; empobrecimiento claro de cualquier lesión evaluable; reaparición de cualquiera de las lesiones que hayan desaparecido; o la aparición de nuevas lesiones; como se determina por al menos, dos valoraciones consecutivas en al menos, 28 días aparte.

El término "enfermedad estable" (SD) o "sin cambio" , como se usa en este documento con referencia a (a) enfermedad bidimensionalmente medible, significa menos de aproximadamente 50% de decremento o menos de aproximadamente 25% de incremento en la suma de los productos de los diámetros perpendiculares más largos de todas las lesiones medibles y(b) enfermedad unidimensionalmente medible, significa menos de aproximadamente 50% de decremento o menos de aproximadamente 25% de incremento, en la suma de los diámetros de todas las lesiones. No deben aparecer nuevas lesiones. Es la ausencia de una respuesta completa, respuesta parcial o progreso. Debido a la respuesta lenta de las lesiones óseas al tratamiento, la designación "sin cambio", no debe ser aplicada hasta que todas las ocho semanas hayan transcurrido a partir del inicio de la terapia. El término "no respondedor" , como se usa en este documento, significa pacientes con enfermedad estable o respuestas menores (mayores de 25%, pero menos de 50% de reducción en el límite del tumor) . El término "progreso", como se usa en este documento, significa un incremento en 25% en la suma de los productos de todas las lesiones medibles sobre la suma más baja observada, o sobre la línea base si no se reduce de la línea base; empobrecimiento claro de cualquiera de las lesiones evaluables; reaparición de cualquiera de las lesiones que habían desaparecido; apariencia de cualquier lesión o sitios nuevos, que incluyen, nuevos sitios de enfermedad no evaluable; y/o en casos en donde una anchura de tumor inicial puede ocurrir (hipercalcemia, dolor óseo, eritema de lesiones de la piel) , los síntomas deben ya sea, persistir más allá de cuatro semanas, o deben ser evidencia adicional de progreso. El término "respuesta total" como se usa en este documento, significa la respuesta como se determina a partir de considerar todos los sitios de enfermedad maligna. En sujetos con enfermedad medible, la respuesta más pobre debe ser la respuesta total. Ningún cambio en las lesiones no medibles, no se apartará de una respuesta parcial en las lesiones medibles,- es decir, la respuesta total será una respuesta parcial. Ningún cambio en las lesiones no medibles reducirá una respuesta completa en las lesiones medibles; es decir, la respuesta total será una respuesta parcial. El término "duración de respuesta" como se usa en este documento, significa el tiempo de la primera documentación de la mejor respuesta de tumor objetivo, al tiempo del progreso. El término "supervivencia", como se usa en este documento, significa el tiempo a partir de la primera dosis de IL-2 al tiempo de la muerte. El término "supervivencia libre de progreso" (PFS) , como se usa en este documento, significa para respondedores, el tiempo a partir de la primera dosis de IL-2, al tiempo del progreso del tumor, muerte o la última visita clínica por el paciente si está todavía en respuesta.

II . Modos para Llevar a Cabo la Invención Antes de describir la presente invención en detalle, se entiende que esta invención no está limitada a formulaciones particulares o parámetros de procesos, como tales, pueden por supuesto, variar. También se entiende que la terminología usada en este documento, es para propósitos de describir modalidades particulares de la invención solamente, y no se pretende ser limitante. Aunque un número de métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en este documento pueden ser usados en la práctica de la presente invención, los materiales y métodos preferidos son descritos en este documento . La presente invención se basa en el descubrimiento de una nueva metodología terapéutica para tratar de manera segura y efectiva, carcinoma de células renales, por administración de dosis bajas de IL-2. El régimen de tratamiento descrito en este documento, inhibe significantemente el crecimiento del tumor con toxicidad inferior y efectos colaterales adversos reducidos, comparados con tratamientos de dosis altas de IL-2. Mientras los métodos de la invención se dirigen al tratamiento de un tumor existente, se reconoce que los métodos pueden ser empleados en la prevención de crecimientos de tumor adicionales que se originan durante la terapia. Los métodos de la invención son particularmente empleados en el tratamiento de sujetos que tienen carcinoma de células renales metastásicas, quienes tienen función renal afectada y/o no pueden tener tratamiento tolerado con altas dosis de IL-2. La IL-2 para uso en los métodos de la invención, puede ser nativa o se puede obtener por técnicas recombinantes, y pueden ser de cualquier fuente, que incluye fuentes de mamíferos tales como por ejemplo, ratón, rata, conejo, primate, cerdo y humano. Las secuencias IL-2 a partir de un número de especies, son bien conocidas en la técnica e incluyen pero no se limitan a, las siguientes: IL-2 humana ( Homo sapiens ; secuencia precursora, Acceso GenBank No.

AAH66254; secuencia madura representada por los residuos 21-153, de GenBank Acceso No. AAH66254); IL-2 de mono rhesus (Maca co mula t to ; secuencia precursora, Acceso GenBank No.

P51498; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de Acceso GenBank No. P51498); IL-2 de babuino oliva ( Papio anubis ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. Q865Y1; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de Acceso GenBank No. Q865Y1) ; IL-2 de mono mangabey enegrecido IL-2 ( Cercocebus torqua tus a tys ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. P46649; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de Acceso GenBank No. P46649) ; IL-2 de macaco cangrejero (Ma ca ca fascícularis ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. Q29615; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de Acceso GenBank No. Q2961) ; IL-2 de gibón común IL-2 (Hylpba tes lar; secuencia precursora, Acceso GenBank No. ICGI2; secuencia madura representada por los residuos 21-153 de la secuencia de Acceso GenBank No. ICGI2) ; IL-2 de mono común de la ardilla ( Saimiri sci ureus ; secuencia precursora, Acceso GenBank No.

Q8MKH2; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de Acceso GenBank No. Q8MKH2) ; IL-2 de vaca (Bos ta urus ; secuencia precursora, Acceso de GenBank No.

P05016; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de Acceso GenBank No. P05016; véase también la secuencia precursora variante reportada en el Acceso de GenBank No. NP- 851340; secuencia madura representada por los residuos 24-158 de la secuencia de Acceso GenBank No. NP-851340) ; IL-2 de búfalo de agua (Bubal us bubalis ; secuencia precursora, GenBank Q95KP3; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de GenBank Q95KP3) ; IL-2 de caballo ( Equus caball us ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. P37997; secuencia madura representada por los residuos 21-149 de la secuencia de Acceso GenBank No. P37997) ; IL-2 de cabra ( Copra hircus ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. P36835; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de Acceso GenBank No. P36835) ; IL-2 de oveja ( Ovis aríes ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. P19114; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de Acceso GenBank No. P19114) ; IL-2 de cerdo IL-2 (Sus scrofa ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. P26891; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de Acceso GenBank No. P26891) ; IL-2 de ciervo rojo ( Cervus elaphus ; secuencia precursora, GenBank Accesso No. P51747; secuencia madura representada por los residuos 21-162 de la secuencia de Acceso GenBank No. P51747); IL-2 de perro ( Canis familiaris ; secuencia precursora, Acceso GenBank No, Q29416; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de Acceso GenBank No. Q29416) ; IL-2 de gato ( Felis ca tus ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. Q07885; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de Acceso GenBank No. Q07885) ; IL-2 de conejo ( Oryctolagus cunicul us ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. 077620; secuencia madura representada por los residuos 21-153 de la secuencia de Acceso GenBank No. 077620) ; IL-2 de orea ( Orcinus orea ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. 097513; secuencia madura representada por los residuos 21-152 de la secuencia de Acceso GenBank No. 097513); IL-2 de elefante del norte (Mirounga angustirostris ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. 062641; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de Acceso GenBank No. 062641); IL-2 de ratón doméstico (Mus muscul us ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. NP_032392; secuencia madura representada por los residuos 21-169 de la secuencia de Acceso GenBank No. NP_332392) ; IL-2 de ratón nativo del oeste (Mus spretus ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. Q08867; secuencia madura representada por los residuos 21-166 de la secuencia de Acceso GenBank No. Q08867) ; IL-2 de rata Noruega (Ra ttus norvegicus ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. P17108; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de Acceso GenBank No. P17108) ; IL-2 de Jerbo de Mongolia (Meriones i ingui cula tus ; secuencia precursora, Acceso GenBank No. Q08081; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de Acceso GenBank No. Q08081) ; cualquiera de los polipétidos IL-2 variantes descritos en estos Números de Acceso de GenBank mencionados anteriormente; cada uno de los cuales, los reportes de GenBank están incorporado en este documento por referencia en su totalidad. Aunque cualquier fuente de IL-2 puede ser utilizada para practicar la invención, preferiblemente la IL-2 se deriva de una fuente humana, particularmente cuando el sujeto sometido a terapia es un humano. En algunas modalidades, la IL-2 para uso en los métodos de la invención, es recombinantemente producida, por ejemplo, proteínas IL-2 recombinantes humanas, que incluyen, pero no se limitan a, aquellas obtenidas a partir de hospederos microbianos. Las composiciones empleadas en los métodos de la invención pueden comprender variantes biológicamente activas de IL-2, que incluyen variantes de IL-2 de cualquiera de las especies. Tales variantes deben retener la actividad biológica del polipéptido nativo de manera tal que la composición farmacéutica que comprende el polipéptido variante, tiene el mismo efecto terapéutico como la composición farmacéutica que comprende el polipéptido nativo cuando se administra a un sujeto. Esto es, el polipéptido variante servirá como un componente terapéuticamente activo en la composición farmacéutica, en una manera similar que aquella observada por el polipéptido nativo. Los métodos están disponibles en la técnica para determinar si un polipéptido variante retiene la actividad biológica deseada, y por lo tanto, sirve como un componente terapéuticamente activo en la composición farmacéutica. La actividad biológica también puede ser medida usando ensayos específicamente diseñados para medir la actividad de la proteína o polipéptido nativo, incluyendo ensayos descritos en la presente invención. Adicionalmente, los anticuerpos surgidos contra un polipéptido nativo biológicamente activo se pueden probar para su capacidad de enlazar el polipéptido variante, en donde el enlace efectivo es indicativo de un polipéptido que tiene una conformación similar a aquella del polipéptido nativo. Las variantes biológicamente activas adecuadas de IL-2 que se presenta naturalmente o nativa pueden ser fragmentos, análogos, y derivados de aquel polipéptido, como se definió anteriormente. Por ejemplo, las variantes de secuencia de aminoácido del polipéptido se pueden preparar por mutaciones en la secuencia de ADN clonada que codifica el polipéptido nativo de interés. Los métodos de mutagénesis y alteraciones de secuencia de nucleótido son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York); Kunkel (1985) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 2:488-492; Kunkel et al. (1987) Methods Enzymol. 154:367-382; Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York); Patente de los Estados Unidos No. 4,873,192; y las referencias citadas en la presente; incorporadas en la presente para referencia. La guía en cuanto a las sustituciones de aminoácido apropiadas que no afectan la actividad biológica del polipéptido de interés se pueden encontrar en el modelo de Dayhoff et al. (1978) in Atlas of Protein Sequence and Structure (Nati. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), incorporada en la presente para referencia. Las sustituciones conservadoras tales como intercambio de un aminoácido con otro que tiene propiedades similares, pueden ser preferidas. Los ejemplos de sustituciones conservadoras incluyen, pero no se limitan a, Gly=>Ala, Val=>Ile=Leu, AspoGlu, Lys=>Arg, Asn<=>Gln, y Phe=>Trp=>Tyr . La guía en cuanto a las regiones de la proteína IL-2 que se pueden alterar ya sea vía las sustituciones de residuo, supresiones, o inserciones se pueden encontrar en la técnica. Véase, por ejemplo, las relaciones de estructura/función y/o estudios de enlace discutidos en Bazan (1992) Science 257:410-412; McKay (1992) Science 257:412; Theze et al. (1996) Immunol . Today 17:481-486; Buchli and Ciardelli (1993) Arch. Biochem. Biophys. 3_07: 411-415 ; Collins et al. (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:7709-7713; Kuziel et al. (1993) J. Immunol . 150:5731; Eckenberg et al. (1997) Cytokine 9 : 488-498; los contenidos de las cuales se incorporan en la presente para referencia en su totalidad. En la construcción de variantes del polipéptido IL-2 de interés, las modificaciones se hacen de modo que las variantes continúan teniendo la actividad deseada. Obviamente, cualquiera de las mutaciones hechas en el ADN que codifica el polipéptido variante no debe colocar la secuencia fuera del cuadro de lectura y preferiblemente no creará regiones complementarias que podrán producir estructura de ARNm secundaria. Véase Publicación de Solicitud de Patente EP NO. 75,444. Las variantes biológicamente activas de IL-2 generalmente tendrán al menos aproximadamente 70%, preferiblemente al menos aproximadamente 80%, más preferiblemente al menos aproximadamente 90% a 95% o más, y muy preferiblemente al menos aproximadamente 98%, 99% o más identidad de secuencia de aminoácido a la secuencia de aminoácido de la molécula de polipéptido IL-2 de referencia, tal como IL-2 humana nativa, la cual sirve como la base de comparación. El porcentaje de identidad de secuencia se determina usando el algoritmo de búsqueda de homología Smith-Waterman usando una búsqueda de abertura afín con una penalización abierta de abertura de 12 y una penalización de extensión de abertura de 2, matriz BLOSUM de 62. El algoritmo de búsqueda de homología Smith-Waterman se enseña en Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. (1981) 2:482-489. Una variante puede, por ejemplo, diferir tan poco como 1 a 15 residuos de aminoácido, tan poco como 1 a 10 residuos, tal como 6-10, tan poco como 5, tan poco como 4, 3, 2 o aún 1 residuo de aminoácido . Con respecto a la alineación óptima de dos secuencias de aminoácido, el segmento contiguo de la secuencia de aminoácido variante puede tener el mismo número de aminoácidos, residuos de aminoácido adicionales o residuos de aminoácido suprimidos con respecto a la secuencia de aminoácido de referencia. El segmento contiguo usado para comparación a la secuencia de aminoácido de referencia incluirá al menos 20 residuos de aminoácido contiguos, y puede ser 30, 40, 50 o más residuos de aminoácido. Las correcciones de identidad de secuencia asociadas con las sustituciones de residuos conservadoras o aberturas se pueden hacer (véase algoritmo de búsqueda de homología Smith Waterman) . Una variante biológicamente activa de un polipéptido IL-2 nativo de interés puede diferir del polipéptido nativo tan poco como 1-15 aminoácidos, tan poco como 1-10, tal como 6-10, tan poco como 5, tan poco como 4, 3, 2, o aún 1 residuo de aminoácido. La estructura química precisa de un polipéptido que tiene actividad de IL-2 depende de un número de factores. Cuando grupos carboxilo y amino ionizables están presentes en la molécula, un polipéptido particular se puede obtener como una sal acida o básica, o en forma neutra. Todas las preparaciones que retienen su actividad biológica cuando se coloca en condiciones ambientales adecuadas se incluyen en la definición de polipéptidos que tienen actividad de IL-2 cuando se usan en la presente. Además, la secuencia de aminoácido primaria del polipéptido puede ser aumentada por derivación usando porciones de azúcar (glicosilación) o por otras moléculas complementarias tales como lípidos, fosfato, grupos acetilo y similares. También se puede aumentar por conjugación con sacáridos. Ciertos aspectos de tal aumento se realizan a través de los sistemas de procesamiento post-traduccionales del hospedador productor; otras modificaciones se pueden introducir in vitro. En cualquier caso, tales modificaciones se incluyen en la definición de un polipéptido de IL-2 usado en la presente siempre que la actividad de IL-2 del polipéptido no se destruya. Se espera que tales modificaciones pueden cuantitativamente o cualitativamente afectar la actividad, ya sea aumentando o disminuyendo la actividad del polipéptido, en los diversos ensayos. Además, los residuos de aminoácido individuales en la cadena se pueden modificar por oxidación, reducción, u otra derivación, y el polipéptido se puede escindir para obtener fragmentos que retienen la actividad. Tales alteraciones que no destruyen la actividad no remueven la secuencia de polipéptido de la definición de polipéptidos de IL-2 de interés como se usa en la presente. La técnica proporciona guía sustancial con respecto a la preparación y uso de variantes de polipéptido. En la preparación de las variantes de IL-2, uno de experiencia en la técnica fácilmente puede determinar cuales modificaciones a la secuencia de aminoácido o nucleótido de proteína nativa resultarán en una variante que es adecuada para el uso como un componente terapéuticamente activo de una composición farmacéutica usada en los métodos de la presente invención. La IL-2 o variantes de la misma para el uso en los métodos de la presente invención pueden ser de cualquier fuente, pero preferiblemente es producida recombinantemente. Por "IL-2 recombinante" o "variante de IL-2 recombinante" se propone la interleucina- 2 o variante de la misma que tiene actividad biológica comparable con la secuencia nativa de IL-2 y que se ha preparado por técnicas de ADN recombinante como se describe, por ejemplo, por Taniguchi et al. (1983) Nature 302:305-310 and Devos (1983) Nucleic Acids Research 11:4307-4323 o IL-2 alterada de manera mutante como se describe por Wang et al. (1984) Science 224:1431-1433. En general, el gen que codifica IL-2 se clona y luego se expresa en organismos transformados, preferiblemente un microorganismo, y muy preferiblemente E. coli, como se describe en la presente. El organismo hospedador expresa el gen extraño para producir IL-2 bajo condiciones de expresión. La IL-2 recombinante sintética también se puede producir en eucariotas, tales como células humanas o levadura. Los procesos para crecimiento, recolección, interrupción, o extracción de IL-2 de células sustancialmente se describen en, por ejemplo, Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,604,377; 4,738,927; 4,656,132; 4,569,790; 4,748,234; 4,530,787; 4,572,798; 4,748,234; y 4,931,543, incorporadas en la presente para referencia en sus totalidades . Para ejemplos de proteínas IL-2 variante, véase Publicación de Patente Europea (EP) No. EP 136,489 (la cual describe una o más de las siguientes alteraciones en la secuencia de aminoácido de IL-2 que se presenta naturalmente: Asn26 a Gln26; Trpl21 a Phel21; Cys58 a Ser58 o Ala58, Cysl05 a Serl05 o Alal05; Cysl25 a Serl25 o Alal25; supresión de todos los residuos después de Arg 120; y las formas Met-1 de los mismos) ; y las muteinas de IL-recombinante descritas en la Solicitud de Patente Europea No. 83306221.9, presentada el 13 de Octubre de 1983 (publicada el 30 de Mayo de 1984 bajo Publicación No. EP 109,748), la cual es el equivalente a la Patente Belga No. 893,016, y Patente de los Estados Unidos comúnmente apropiada No. 4,518,584 (la cual describe muteina de IL-2 recombinante en donde la cisteína en la posición 125, numerada de conformidad con la IL-2 humana nativa, se suprime o reemplaza por un aminoácido neutro; alanil-serl25-IL-2 ; y des-alanil-serl25-IL-2) . También véase Patente de los Estados Unidos No. 4,752,585 (la cual describe las siguientes proteína IL-2 variantes: alal04 serl25 IL-2, alal04 IL-2, alal04 alal25 IL-2, vall04 serl25 IL2, vall04 IL-2, vall04 alal25 IL-2, des-alai alal04 serl25 IL-2, des-alai alal04 IL-2, des-alai alal04 alal25 IL-2, des-alai vall04 serl25 IL-2, des-alai vall04 IL-2 , des-alai vall04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 alal04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 alal04 IL-2, des-alai des-pro2 alal04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 vall04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 vall04 IL-2, des-alai des-pro2 vall04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 alal04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 alal04 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 alal04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 vall04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 vall04 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 vall04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 alal04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 alal04 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 alal04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 vall04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 vall04 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 vall04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 alal04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 alal04 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 alal04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 vall04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 vall04 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 vall04 alal25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 alal04 alal25 IL-2, des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 alal04 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 alal04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 vall04 serl25 IL-2, des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 vall04 IL-2, y des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 vall04 alal25 IL-2) y Patente de los Estados Unidos No. 4,931,543 (la cual describe la muteina de IL-2 des-alanil-1, IL-2 humana serina-125 usada en los ejemplos en la presente, así como las otras muteinas de IL-2) . También véase Publicación de Patente Europea No. EP 200,280 (publicada el 10 de Diciembre de 1986), la cual describe las muteinas de IL-2 recombinante en donde la metionina en la posición 104 se ha reemplazado por un aminoácido conservador. Los ejemplos incluyen las siguientes muteinas: ser4 des-ser5 alal04 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 alal04 alal25 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 glul04 ser5 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 glul04 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 glul04 alal25 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 alal04 alal25 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 alal04 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 alal04 serl25 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-serd glul04 serl25 IL-2; des-alai des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 glul04 IL-2; y des-ala des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 glul04 alal25 IL-2. Véase también Publicación de Patente Europea No. EP 118,617 y Patente de los Estados Unidos No. 5,700,913, las cuales describe variantes de IL-2 humana no glicosilada que portan alanina en lugar de metionina como el aminoácido N-terminal como se encuentra en la molécula nativa; una IL-2 humana no glicosilada con la metionina inicial suprimida de modo que la prolina es el aminoácido N-terminal; y una IL-2 human no glicosilada con una alanina insertada entre la metionina N-terminal y los aminoácidos prolina. Otras muteinas de IL-2 incluyen aquellas descritas en WO 99/60128 (sustituciones del aspartato en la posición 20 con histidina o isoleucina, la asparagina en la posición 88 con arginina, glicina, o isoleucina, o la glutamina en la posición 126 con leucina o ácido glutámico) , las cuales según se informa tienen actividad selectiva para receptores de IL-2 de alta afinidad expresados por células que expresan receptores de célula T de preferencia a células NK y toxicidad de IL-2 reducida; las muteinas descritas en la Patente de los Estados Unidos No. 5,229, 109 (sustituciones de arginina en la posición 38 con alanina, o sustituciones de fenilalanina en la posición 42 con lisina) , las cuales exhiben enlace reducido al receptor de IL-2 de alta afinidad cuando se compara con IL-2 nativa mientras mantiene la capacidad de estimular las células LAK; las muteinas descritas en la Publicación Internacional No. WO 00/58456 (alteración o supresión de una secuencia (x)D(y) que se presenta naturalmente en IL-2 nativa donde D es ácido aspártico, (x) es leucina, isoleucina, glicina, o valina, y (y) es valina, leucina o serina) , las cuales se reivindican para reducir el síndrome de filtración vascular, el péptido IL-2 pl-30 descrito en la Publicación Internacional No. WO 00/04048 (correspondiente a los primeros 30 aminoácidos de IL-2, los cuales contienen un a-hélice A completo de IL-2 e interactúa con la cadena b del receptor de IL-2) , la cual según se informa estimula las células NK e inducción de células LAK; y una forma mutante del péptido IL-2 pl-30 también se describe en WO 00/04048 (sustitución de ácido aspártico en la posición 20 con lisina) , la cual según se informa es incapaz de inducir los sangrados vasculares pero permanece capaz de generar células LAK. Adicionalmente, la IL-2 se puede modificar con polietilenglicol para proporcionar solubilidad mejorada y un perfil farmacocinético alterado (ver Patente Norteamericana No. 4,766,106). Los ejemplos adicionales de muteinas IL-2 con toxicidad reducida predicha se describen en la Solicitud Provisional de Estados Unidos Serie No. 60/550,868, presentada el 5 de Marzo de 2004, incorporada en la presente como referencia en su totalidad. Estas muteinas comprenden la secuencia de aminoácidos de IL-2 humano maduro con una serina sustituida por cisteína en la posición 125 de la secuencia IL-2 humana madura y al menos una sustitución de aminoácido adicional dentro de la secuencia IL-2 humana madura tal que la muteina tiene las siguientes características funcionales: 1) mantenimiento o mejoramiento de la proliferación de células asesinas naturales (NK, por sus siglas en inglés) , y 2) induce a un nivel disminuido de producción de citocina pro- inflamatoria por células NK; cuando se compara con una cantidad similar de des-alanil-1 , IL-2 humana C125S o IL-2 humana C125S bajo condiciones de ensayo comparables. En algunas modalidades, la sustitución adicional se selecciona del grupo que consiste de T7A, T7D, T7R, K8L, K9A, K9D, K9R, K9S, K9V, K9W, T10K, T10N, Q11A, Q11R, Q11T, E15A, HI6D, H16E, L19D, L19E, D20E, I24L, K32A, K32W, N33E, P34E, P34R, P34S, P34T, P34V, K35D, K35I, K35L, K35M, K35N, K35P, K35Q, K35T, L36A, L36D, L36E, L36F, L36G, L36H, L36I, L36K, L36M, L36N, L36P, L36R, L36S, L36W, L36Y, R38D, R38G, R38N, R38P, R38S, L40D, L40G, L40N, L40S, T41E, T41G, F42A, F42E, F42R, F42T, F42V, K43H, F44K, M46I, E61K, E61M, E61R, E62T, E62Y, K64D, K64E, K64G, K64L, K64Q, K64R, P65D, P65E, P65F, P65G, P65H, P65I, P65K, P65L, P65N, P65Q, P65R, P65S, P65T, P65V, P65W, P65Y, L66A, L66F, E67A, L72G, L72N, L72T, F78S, F78W, H79F, H79M, H79N, H79P, H79Q, H79S, H79V, L80E, L80F, L80G, L80K, L80N, L80R, L80T, L80V, L80W, L80Y, R81E, RS1K, R81L, R81M, R81N, R81P, R81T, D84R, S87T, N88D, N88H, N88T, V91A, V91D, V91E, V91F, V91G, V91N, V91Q, V91W, L94A, L94I, L94T, L94V, L94Y, E95D, E95G, E95M, T102S, T102V, M104G, E106K, Y107H, Y107K, Y107L, Y107Q, Y107R, Y107T, E116G, N119Q, T123S, T123C, Q126I, y Q126V; donde la posición del residuo de aminoácido es relativa a la numeración de la secuencia de aminoácido IL-2 humana madura. En otras modalidades, estas muteinas comprenden la secuencia de aminoácidos de IL-2 humana madura con una alanina sustituida por cisteína en la posición 125 de la secuencia IL-2 humana madura y al menos una sustitución de aminoácido adicional dentro de la secuencia IL-2 humana madura de modo que la muteina tiene estas mismas características funcionales. En algunas modalidades, la sustitución adicional se selecciona del grupo que consiste de T7A, T7D, T7R, K8L, K9A, K9D, K9R, K9S, K9V, K9W, T10K, T10N, Q11A, Q11R, Q11T, E15A, H16D, H16E, L19D, L19E, D20E, 124L, K32A, K32W, N33E, P34E, P34R, P34S, P34T, P34V, K35D, K35I, K35L, K35M, K35N, K35P, K35Q, K35T, L36A, L36D, L36E, L36F, L36G, L36H, L36I, L36K, L36M, L36N, L36P, L36R, L36S, L36W, L36Y, R38D, R38G, R38N, R38P, R38S, L40D, L40G, L40N, L40S, T41E, T41G, F42A, F42E, F42R, F42T, F42V, K43H, F44K, M46I, E61K, E61M, E61R, E62T, E62Y; K64D, K64E, K64G, K64L, K64Q, K64R, P65D, P65E, P65F, P65G, P65H, P65I, P65K, P65L, P65N, P65Q, P65R, P65S, P65T, P65V, P65W, P65Y, L66A, L66F, E67A, L72G, L72N, L72T, F78S, F78W, H79F, H79M, H79N, H79P, H79Q, H79S, H79V, L80E, L80F, L80G, L80K, L80N, L80R, L80T, L80V, L80W, L80Y, R81E, R81K, R81L, R81M, R81N, R81P, R81T, D84R, S87T, N88D, N88H, N88T, V91A, V91D, V91E, V91F, V91G, V91N, V91Q, V91W, L94A, L94I, L94T, L94V, L94Y, E95D, E95G, E95M, T102S, T102V, M104G, E106K, Y107H, Y107K, Y107L, Y107Q, Y107R, Y107T, E116G, N119Q, T123S, T123C, Q1261, y Q126V; donde la posición de residuo de aminoácido es relativa a la numeración de la secuencia de aminoácidos IL-2 humana madura. En modalidades alternativas, estas muteinas comprenden la secuencia de aminoácido de IL-2 humana madura con al menos una sustitución de aminoácidos adicional dentro de la secuencia IL-2 humana madura de modo que la muteina tiene las mismas características funcionales. En algunas modalidades, la sustitución adicional se selecciona del grupo que consiste de T7A, T7D, T7R, K8L, K9A, K9D, K9R, K9S, K9V, K9W, T10K, T10N, Q11A, Q11R, Q11T, E15A, H16D, H16E, L19D, L19E, D20E, 124L, K32A, K32W, N33E, P34E, P34R P34S, P34T, P34V, K35D, K35I, K35L, K35M, K35N, K35P, K35Q, K35T, L36A, L36D, L36E, L36F, L36G, L36H, L36I, L36K, L36M, L36N, L36P, L36R, L36S, L36W, L36Y, R38D, R38G, R38N, R38P, R38S, L40D, L40G, L40N, L40S, T41E, T41G, F42A, F42E, F42R, F42T, F42V, K43H, F44K, M46I, E61K, E61M, E61R, E62T, E62Y, K64D, K64E, K64G, K64L, K64Q, K64R, P65D, P65E, P65F, P65G, P65H, P65I, P65K, P65L, P65N, P65Q, P65R, P65S, P65T, P65V, P65W, P65Y, L66A, L66F, E67A, T72Q, L72N, L72T, F78S, F78W, H79F, H79M, H79N, H79P, H79Q, H79S, H79V, L80E, L80F, L80G, L80K, L80N, L80R, L80T, L80V, L80W, L80Y, R81E, R81K, R81L, R81M, R81N, R81P, R81T, D84R, S87T, N88D, N88H, N88T, V91A, V91D, V91E, V91F, V91G, V91N, V91Q, V91W, L94A, L94I, L94T, L94V, L94Y, E95D, E95G, E95M, T102S, T102V, M104G, E106K, Y107H, Y107K, Y107L, Y107Q, Y107R, Y107T, E116G, N119Q, T123S, T123C, Q126I, y Q126V; donde la posición de residuo de aminoácidos es relativa a la numeración de la secuencia de aminoácidos IL-2 humana madura. Las muteinas adicionales descritas en la Solicitud Provisional de Estados Unidos Serie No. 60/550,868 incluyen muteinas identificadas precedentes, con la excepción de tener el residuo de alanina inicial en la posición 1 de la secuencia IL-2 humana madura suprimida. El término IL-2 como se usa en la presente también se pretende que incluya fusiones o conjugados de IL-2 que comprenden IL-2 fusionadas a una segunda proteína o conjugada covalentemente a poliproplina o un polímero soluble en agua para reducir las frecuencias de dosificación o para mejorar la tolerabilidad a IL-2. Por ejemplo, la IL-2 (o una variante de la misma como se define en la presente) se puede fusionar albúmina humana o un fragmento de albúmina usando métodos conocidos en la técnica (ver WO 01/79258) . Alternativamente, la IL-2 puede ser conjugada covalentemente a homopolímeros de polietilenglicol o poliprolina y polioles polioxietilados, en donde el homopolímero es insustituido o sustituido en un extremo con un grupo alquilo y el poliol es insustituido, usando métodos conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Patentes Norteamericanas Nos. 4,766,106; 5,206,344, 4,894,226, y 5,830,452).

Cualquier composición farmacéutica que comprende IL-2 como el componente terapéuticamente activo se puede usar en los métodos de la invención. Tales composiciones farmacéuticas son conocidas en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, aquellas descritas en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,745,180; 4,766,106; 4,816,440; 4,894,226; 4,931,544; y 5,078,997; incorporadas en la presente como referencia. Estas composiciones secadas por aspersión o liofilizadas, líquidas que comprenden IL-2 o variantes de la misma que son conocidas en la técnica se pueden preparar como una solución o suspensión acuosa o no acuosa para administración subsiguiente a un sujeto de acuerdo con los métodos de la invención. Cada una de estas composiciones comprenderá IL-2 o variantes de la misma como un componente terapéuticamente o profilácticamente activo. Por "componente terapéuticamente o profilácticamente activo" se entiende la IL-2 o variantes de la misma es incorporada específicamente en la composición para causar una respuesta terapéutica o profiláctica deseada con respecto al tratamiento o prevención de una enfermedad o condición dentro del sujeto cuando la composición farmacéutica es administrada a este sujeto. Preferiblemente, las composiciones farmacéuticas comprenden agentes estabilizadores apropiados, agentes volumétricos, o ambos para minimizar problemas asociados con pérdida de estabilidad de proteína y actividad biológica durante la preparación y almacenamiento. En modalidades preferidas de la invención, la IL-2 que contiene composiciones farmacéuticas útiles en los métodos de la invención son composiciones que comprenden IL-2 monoméricas estabilizadas o variantes de la misma, composiciones que comprenden IL-2 multimérica o variantes de la misma, y composiciones que comprenden IL-2 liofilizada estabilizada o variantes de la misma. Las composiciones farmacéuticas que comprenden IL-2 monomérico estabilizado o variantes de los mismos, se describen en la Solicitud de PCT No. PCT/US00/27156 , presentada el 3 de Octubre de 2000, descripción la cual está con ello incorporada en este documento por referencia. Por IL-2 "monomérico", se pretende que las moléculas de proteína estén presentes sustancialmente en su forma monomérica, no en una forma agregada, en las composiciones farmacéuticas descritas en este documento. Por lo tanto, los oligómeros o agregados covalentes o hidrofóbicos de IL-2, no están presentes. Brevemente, la IL-2 o variantes de la misma en estas composiciones líquidas, son formuladas con una cantidad de base de aminoácido, suficiente para reducir la formación de agregados de IL-2 o variantes de los mismos, durante el almacenaje. La base de aminoácido es un aminoácido o una combinación de aminoácidos, en donde cualquier aminoácido dado está presente y asea en su forma de base libre o en su forma de sal. Los aminoácidos preferidos se seleccionan del grupo que consiste de arginina, lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico. Estas composiciones además comprende un agente amortiguador para mantener pH de las composiciones líquidas dentro de un intervalo aceptable para estabilidad de IL-2 o variantes de los mismo, en donde el agente amortiguador es un ácido sustancialmente libre de su forma de sal, un ácido en su forma de sal, o una mezcla de un ácido y su forma de sal. Preferiblemente, el ácido se selecciona del grupo que consiste de ácido succínico, ácido cítrico, ácido fosfórico y ácido glutámico. Tales composiciones son referidas en este documento, como composiciones farmacéuticas de IL-2 monoméricas estabilizadas. La base de aminoácido en estas composiciones, sirve para estabilizar la IL-2 o variantes de los mismos, contra la formación de agregados durante el almacenaje de la composición farmacéutica líquida, mientras el uso de un ácido y su forma de sal como el agente amortiguador, resulta en una composición líquida que tiene una osmolaridad que es casi isotónica. La composición farmacéutica líquida puede adicionalmente, incorporar otros agentes estabilizantes, más particularmente, metionina, un tensoactivo no iónico tal como polisorbato 80, y EDTA, para además, incrementar la estabilidad del polipéptido. Tales composiciones farmacéuticas líquidas se dice, son estabilizadas, como adición de base de aminoácido en combinación con un ácido sustancialmente libre de su forma de sal, un ácido en su forma de sal, o una mezcla de un ácido y su forma de sal, resulta en las composiciones que tienen estabilidad de almacenaje incrementada, con relación a las composiciones farmacéuticas líquidas formuladas en la ausencia de la combinación de estos dos componentes . Estas composiciones farmacéuticas líquidas que comprenden IL-2 monoméricas estabilizadas o variantes de las mismas, pueden ser ya sea, usados en una forma líquida acuosa, o almacenadas para uso posterior en un estado congelado, o en una forma seca para reconstitución posterior en una forma líquida u otra forma adecuada para administración a un sujeto, de conformidad con los métodos de la presente invención. Por "forma seca", se pretende que la composición o formulación farmacéutica se seque ya sea por secado por congelamiento (es decir, liofilización, véase por ejemplo, Williams and Polli (1984) J. Paren teral Sci . Technol . 55:48-59), secado por atomización (véase Masters (1991) en Spray-Drying Handbook (5th ed; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp . 491-676; Broadhead et al . (1992) Drug Devel . Ind. Pharm . 75:1169- 1206; y Mumenthaler et al . (1994) Pharm . Res . 11:12-20), o secado por aire (Carpenter and Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; and Roser (1991) Biopharm . 4:47-53).

Otros ejemplos de formulaciones de IL-2 que comprenden IL-2 en su estado monomérico no agregado, incluyen aquellos descritos en Whittington and Faulds (1993) Drugs 46 (3) :446-514. Estas formulaciones incluyen el producto IL-2 recombinante en el cual, la muteina IL-2 recombinante Teceleucina (IL-2 humana no glicosilada con un residuo de metionina agregado en el amino-terminal) , es formulada con albúmina de suero humano al 0-25% en un polvo liofilizado que es reconstituido en salina isotónica, y la muteina IL-2 recombinante Bioleucina (IL-2 humano con un residuo de metionina agregado en el amino-terminal, y una sustitución del residuo de cisteína en la posición 125 de la secuencia IL-2 humana con alanina), formulada de manera tal que 0.1 a 1.0 m/ml de muteina de IL-2 se combina con ácido, en donde la formulación tiene un pH de 3.0 a 4.0, ventajosamente, sin amortiguador, y una conductividad de menos de 1000 mmhos/cm (ventajosamente menos de 500 mmhos/cm) . Véase, documento EP 373,679; Xhang et al . (1996) Pharma ceut . Res . 13(4) :643-644; y Prestrelski et al . (1995) Pharma ceut . Res . 12(9):1250-1258. Se describen ejemplos de composiciones farmacéuticas que comprenden IL-2 multimérica o variantes de la misma en la comúnmente poseída Patente Estadounidense No. 4,604,377, la descripción de la cual se incorpora por referencia en este documento. Por "multimérico" se que piensa las moléculas de proteína están presentes en la composición farmacéutica en una forma de microagregados, que tiene una asociación molecular promedio de 10-50 moléculas. Estos multímeros están presentes como moléculas IL-2 físicamente asociadas, holgadamente unidas. Una forma liofilizada de estas composiciones están disponibles comercialmente bajo el nombre comercial Proleukin® (Chiron Corporation, Emeryville, California) . Las formulaciones liofilizadas descritas en esta referencia, comprenden IL-2 recombinante, microbialmente producida, selectivamente oxidada en el cual la IL-2 recombinante se mezcló con un portador soluble en agua, tal como manitol que proporciona volumen, y una cantidad suficiente de dodecil sulfato de sodio para asegurar la solubilidad de IL-2 recombinante en agua. Estas composiciones son adecuadas para reconstitución en inyecciones acuosas para administración parenteral y son estables y bien toleradas en pacientes humanos. Cuando se reconstituye, la IL-2 o variantes de la misma, retienen su estado. Tales composiciones liofilizadas o líquidas que comprenden IL-2 multimérica o variantes de la misma son abarcadas por los métodos de la presente invención. Tales composiciones son referidas en este documento como composiciones farmacéuticas IL-2 multiméricas. Los métodos de la presente invención pueden también usar composiciones farmacéuticas liofilizadas estabilizadas o secadas por atomización, que comprenden IL-2 o variantes de la misma, los cuales pueden ser reconstituidos en una forma líquida u otra adecuada para administración de conformidad con métodos de la invención. Se describen tales composiciones farmacéuticas en la solicitud Estadounidense No. 09/724,810 copendiente, presentada el 28 de Noviembre del 2000 y Solicitud Internacional PCT/US00/35452 , presentada el 27 de Diciembre del 2000, incorporadas por referencia en este documento en su totalidad. Estas composiciones pueden además comprender al menos un agente de volumen, al menos un agente en una cantidad suficiente para estabilizar la proteína durante el proceso de secado, o ambos. Por "estabilizado", se piensa la proteína IL-2, o variantes de la misma, retienen su forma monomérica o multimérica, así como sus otras propiedades clave de calidad, pureza y potencia después de la liofilización o secado por atomización para obtener la forma sólida o polvo en seco de la composición. En estas composiciones, materiales portadores preferidos para uso como un agente de volumen, incluyen glicina, manitol, alanina, valina o cualquier combinación de estos, más preferiblemente glicina. El agente de volumen está presente en la formulación en el intervalo de 0% hasta aproximadamente 10% (p/v) , dependiendo del agente usado. Materiales portadores preferidos para uso como un agente de estabilización, incluyen cualquier azúcar o alcohol de azúcar o cualquier aminoácido. Azúcares preferidos incluyen sacarosa, trehalosa, rafinosa, estaquiosa, sorbitol, glucosa, lactosa, dextrosa o cualquier combinación de estos, preferiblemente sacarosa. Cuando el agente de estabilización es un azúcar, está presente en el intervalo de aproximadamente 0% hasta aproximadamente 9.0% (p/v), preferiblemente aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 5.0%, más preferiblemente aproximadamente 1.0% hasta aproximadamente 3.0%, más preferiblemente aproximadamente 1.0%. Cuando el agente de estabilización es un aminoácido, está presente en el intervalo de aproximadamente 0% hasta aproximadamente 1.0% (p/v), preferiblemente aproximadamente 0.3% hasta aproximadamente 0.7%, más preferiblemente aproximadamente 0.5%. Estas composiciones liofilizadas estabilizadas o secadas por atomización, pueden opcionalmente comprender metionina, ácido etilendiamintetraacético (EDTA) o una de sus sales tal como EDTA de disodio u otro agente quelante, el cual protege la IL-2 o variantes de la misma contra oxidación de metionina. Se describe el uso de estos agentes en esta manera en la Solicitud Provisional Estadounidense No. de Serie 60/157696 copendiente, incorporada en este documento por referencia. Las composiciones liofilizadas estabilizadas o secadas por atomización pueden ser formuladas usando un agente amortiguador, el cual mantiene el pH de la composición farmacéutica dentro de un intervalo aceptable, preferiblemente entre aproximadamente pH 4.0 hasta aproximadamente pH 8.5, cuando en una fase líquida, tal como durante el proceso de formulación o después de la reconstitución de la forma seca de la composición. Son escogidos amortiguadores de forma tal que son compatibles con el proceso de secado y no afecta la calidad, pureza, potencia y estabilidad de la proteína durante el proceso y en almacenaje . Las composiciones farmacéuticas de IL-2 monoméricas estabilizadas, multiméricas y liofilizadas estabilizadas o secadas por atomización previamente descritas, representan composiciones adecuadas para uso en los métodos de la invención. Sin embargo, es abarcada cualquier composición farmacéutica que comprende IL-2 o variante de la misma como un componente terapéuticamente activo por los métodos de la invención.

Administración Se administrará al menos un ciclo de tratamiento terapéuticamente efectivo con dosis baja de IL-2 o una variante de la misma. Por "ciclo de tratamiento terapéuticamente efectiva" se piensa en un ciclo de tratamiento que cuando se administra, que lleva aproximadamente una respuesta terapéutica positiva con respecto al tratamiento de un individuo para carcinoma de célula renal, particularmente carcinoma de la célula renal metastásica. De particular interés es un ciclo de tratamiento con dosis baja de IL-2, que proporciona un efecto anti-tumor, como se define en este documento. Por "respuesta terapéutica positiva" se piensa el individuo es sometido al tratamiento, de conformidad con la invención, exhibe un mejoramiento en uno o más síntomas de carcinoma de célula renal, por lo cual el individuo es sometido a terapia. Así, por ejemplo, una "respuesta terapéutica positiva" será un mejoramiento en la enfermedad en asociación con la terapia, y/o un mejoramiento en uno o más síntomas de la enfermedad en asociación con la terapia. Por lo tanto, por ejemplo, una respuesta terapéutica positiva se refiere a uno o más de los siguientes mejoramientos en la enfermedad: (1) reducción en tamaño del tumor; (2) reducción en el número de células cancerígenas; (3) inhibición (es decir, disminución de la velocidad para alguna extensión, preferiblemente interrumpido) del crecimiento del tumor; (4) inhibición (es decir, disminución de la velocidad para alguna extensión, preferiblemente interrumpido) de infiltración de célula cancerígena en los órganos periféricos; (5) inhibición (es decir, disminución de la velocidad para alguna extensión, preferiblemente interrumpido) de metástasis del tumor; y (6) alguna extensión de alivio a partir de uno o más síntomas asociados con el cáncer. Tales respuestas terapéuticas pueden además ser caracterizadas como el grado de mejoramiento. Así, por ejemplo, un mejoramiento puede ser caracterizado como una respuesta completa. Por "respuesta completa" se piensa en la documentación de la desaparición de todos los síntomas y signos de todas las enfermedades medibles o evaluables confirmados por estudios de examen físico, laboratorio, nuclear o radiográfico (es decir, TC (termografía computarizada) y/o IMR (formación de imagen por resonancia magnética) ) y procedimientos no invasivos repetidos para todas las anormalidades iniciales o sitios positivos al tiempo de entrar en el estudio. Alternativamente, un mejoramiento en la enfermedad puede ser clasificada siendo una respuesta inicial. Por "respuesta parcial" se piensa en una reducción de mayor que 50% en la suma de los productos de los diámetros perpendiculares en todas las lesiones medibles, cuando se comparan con mediciones de pretratamiento y sin progreso de la enfermedad evaluable, ni formación de cualquier nueva lesión por al menos 28 días. En ciertas modalidades de la invención, la composición farmacéutica que comprende IL-2 o variante de la misma, es una formulación de liberación sostenida, o una formulación que es administrada usando un dispositivo de liberación sostenida. Tales dispositivos son bien conocidos en la técnica, e incluyen, por ejemplo, parches transdérmicos, y bombas implantables en miniatura que pueden proporcionar para suministro de fármaco durante un tiempo en una forma de estado regular, continuo en una variedad de dosis para lograr un efecto de liberación sostenida con una composición farmacéutica de liberación no sostenida. Composiciones farmacéuticas que comprenden IL-2 o una variante de la misma, por lo tanto pueden ser administradas de conformidad con cualquier método médicamente aceptable conocido en la técnica. Rutas adecuadas de administración, incluyen administración parenteral, tal como subcutánea (SC) , intraperitoneal (IP) , intramuscular (IM) , intravenosa (IV), o infusión, oral y pulmonar, nasal, tópica, transdérmica y supositorios. Cuando la composición se administra vía suministro pulmonar, la dosis terapéuticamente efectiva se ajusta de forma tal que el nivel soluble del agente, tal como la IL-2 o variante de la misma en la corriente sanguínea, es equivalente al obtenido con la dosis terapéuticamente efectiva que se administra parenteralmente, por ejemplo SC, IP, IM o IV. En algunas modalidades de la invención, la composición farmacéutica que comprende IL-2 o una variante de la misma, se administra por inyección IM o SC, particularmente por inyección IM o SC, localmente a la región en donde se administra el agente o agentes terapéuticos usados en el protocolo de terapia contra cáncer. Factores que influencian la cantidad de IL-2 a ser administrada incluyen, pero no se limitan a, la forma de administración, la frecuencia de administración, la enfermedad particular sometida a terapia, la severidad de la enfermedad, la historia de la enfermedad, si el individuo es sometido simultáneamente a terapia con otro agente terapéutico, y la edad, altura, peso, salud y condición física del individuo sometido a terapia. Generalmente, se prefiere la dosis más alta de este agente con peso incrementado del sujeto sometido a terapia. Para lograr la eficacia, el nivel en sangre de IL-2 debe ser arriba de un nivel específico por un tiempo específico. La eficacia es dependiente de la dosis y niveles más altos de IL-2 contribuyen a mayores efectos anti-tumor. Para minimizar la toxicidad, el nivel en sangre de IL-2 debe estar debajo de un cierto nivel dentro de un tiempo específico y por un tiempo específico (debe haber un "periodo de descanso" para permitir la depuración de IL-2) . Es decir, el fármaco debe estar abajo de un cierto nivel por un cierto tiempo, antes que se de la siguiente dosis. Descansos más cortos entre dosis contribuyen a mayor toxicidad. En ciertas modalidades, el método de tratamiento de un paciente que tiene carcinoma de célula renal, comprende un ciclo de tratamiento con dosis bajas de IL-2 (1-52 MIU) seguido por un periodo de descanso para permitir al paciente "recuperarse" de los efectos indeseados de IL-2. Se pueden administrar dosis múltiples de IL-2 o una variante de la misma de conformidad con un régimen de dosificación diaria, por ejemplo, 1-52 MIU de IL-2, o más preferiblemente 9-18 MIU de IL-2, se administra por día en una o tres dosis por día, por tres a seis días en una semana, por 1-24 semanas, seguido por un periodo de descanso. Preferiblemente, el periodo de descanso es de una a cuatro semanas entre los regímenes de dosificación. Por lo tanto, se puede administrar un nuevo esquema de dosificación de IL-2, para proporcionar al sistema inmune con otro refuerzo. En ciertas modalidades, el segundo ciclo de tratamiento comprende administrar 9 MIU en uno a tres dosis por día, por tres a seis días a la semana, por 1-24 semanas, seguido por un periodo de descanso. En ciertas modalidades, el método de tratamiento de un paciente que tiene carcinoma de célula renal, comprende un ciclo de tratamiento que consiste de seis semanas de tratamiento con dosis baja de IL-2 (9-18 MIU) , una vez al día por cinco días en una semana (qd x 5d) , seguido por un "periodo de descanso" de una a cuatro semanas, en el cual no se administra IL-2 y un ciclo de tratamiento subsecuente que consiste de seis semanas de tratamiento con IL-2 a una dosis de 9 MIU una vez al día por cinco días en una semana, seguido por un periodo de descanso de una a cuatro semanas en el cual no se administra IL-2. En ciertas modalidades, el ciclo de tratamiento subsecuente, que consiste de seis semanas de tratamiento con IL-2 a una dosis de 9 MIU una vez al día por cinco días en una semana, seguido por un periodo de descanso de una a cuatro semanas en el cual no se administra IL-2, es repetido varias veces . En una modalidad preferida, un paciente que tiene carcinoma de célula renal es tratado primero, administrando una dosis de 18 MIU de IL-2 por día por 5 días durante una semana; segundo, administrando una dosis de 9 MIU de IL-2 por día por 2 días, seguido por la administración de una dosis de 18 MIU de IL-2 por día por 3 días durante cada semana, repetida por 5 semanas; tercero, no administrando IL-2 por 3 semanas, cuarto, administrando una dosis de 9 MIU de IL por día cada 5 días de cada semana, repetida por 6 semanas; y quinto, no administrando IL-2 por 3 semanas. En ciertas modalidades, la IL-2 usada para tratamiento de un paciente que tiene carcinoma de célula renal, es covalentemente conjugada a polietilen glicol o poliol polioxietilado. En ciertas modalidades, un ciclo de tratamiento con IL-2, conjugado con polietilenglicol o poliol polioxietilado, comprende administrar 1-52 MIU de IL-2 cada 5 días a 1 mes, repetido por 1-24 semanas, seguido por un periodo de descanso. En ciertas modalidades, se administran ciclos múltiples de tratamiento por cualquiera de los métodos descritos en este documento, a un paciente por un periodo de tiempo suficiente para provocar al menos una respuesta parcial al tumor, por ejemplo, el periodo de tiempo puede ser al menos 6 meses o al menos 12 meses. Preferiblemente, el periodo de tiempo suficiente para provocar una respuesta completa al tumor. En ciertas modalidades, un paciente que tiene carcinoma de célula renal está renalmente afectado (SCr>1.5 mg/dl) , intolerante o inelegible para tratamiento con dosis altas de IL-2. Tal paciente puede ser tratado con dosis bajas de IL-2 por cualquiera de los métodos descritos en este documento. En donde un sujeto sometido a terapia de conformidad con los regímenes de dosificación previamente mencionados, exhiben una respuesta parcial, o una recaída después de un periodo prolongado de suspensión, subsecuente al curso de terapia, puede ser necesario para lograr suspensión completa de la enfermedad. Así, subsecuente a un periodo de tiempo a partir de un primer periodo de tratamiento, un sujeto puede recibir uno o más periodos de tratamiento adicional de terapia IL-2. Tal periodo de tiempo entre periodos de tratamiento se refiere en este documento, como un periodo de tiempo de interrupción. Se reconoce que la duración del periodo de tiempo de interrupción es dependiente del grado de respuesta al tumor (es decir, completo contra parcial) logrado con cualquiera de los periodos de tratamiento de terapia con IL-2.

III . Experimental Abajo hay ejemplos de modalidades específicas para llevar a cabo la presente invención. Los ejemplos se presentan para únicamente propósitos ilustrativos, y no son para pretender limitar el alcance de la presente invención en cualquier forma. Se han hecho esfuerzos para asegurar la exactitud con respecto a números usados (por ejemplo, cantidades, temperaturas, etc.), pero algún error y desviación experimental deben, por supuesto, ser permitidos.

Ejemplo 1 Composición Farmacéutica de IL-2 para Ensayo Clinico en Humano Fase IV La formulación IL-2 usada, se fabricó por Chiron Corporation de Emeryville, California, bajo el nombre comercial Proleukin® . La IL-2 en esta formulación es una muteina IL-2 humana no glicosilada, recombinantemente producida, llamada aldesleucina, la cual difiere de la secuencia de aminoácido IL-2 humana nativa en que tiene el residuo de alanina inicial eliminado y el residuo de cisteína en posición 125 reemplazado por un residuo de serina (referido como des-alanil-1, serina-125 de interleucína-2 humana) . Esta muteina IL-2 se expresa en E . coli , y subsecuentemente se purifica por diafiltración y cromatografía de intercambio catiónico como se describe en la Patente Estadounidense No. 4,931,543, incorporada en este documento por referencia en su totalidad. La formulación IL-2 comercializada como Proleukin® se proporciona como un polvo liofilizado libre de preservativos, blanco a blancuzco, estéril, en viales que contienen 1.3 mg de proteína (22 MIU) .

Ejemplo 2 Criterio de Selección para Pacientes con Carcinoma de Célula Renal Metastásica para Tratamiento con IL-2 en Ensayo Clínico Human de Fase IV Se aplica la siguiente selección de criterio a pacientes con carcinoma de célula renal metastásica: Criterio de Inclusión: Pacientes que tienen carcinoma de célula renal histológicamente documentado (tumores de células claras, papilarias, mezclada o sarcomatoide) con evidencia de enfermedad metastásica; Pacientes que tienen enfermedad neoplásíca medible o evaluable, la cual se determina dentro de cuatro semanas de entrar al estudio; Estado del Desempeño Karnofsky del paciente es = 60, que corresponde a un estado de desempeño (ED) del Grupo Oncológico Cooperativo de Este (GOCE) de 0-2; El paciente debe ser mayor de 18 años de edad; Los pacientes deben tener función renal adecuada como se pone en evidencia por un nivel de creatinina de suero menor de 1.8 mg/dl; Hemoglobina = 10 mg/dl; Célula de Glóbulos Blancos = 4,000/ml; Plaquetas 100,000/ml; Nivel normal de la hormona que estimula la tiroides (THS) ; y El paciente es voluntario y capaz de dar consentimiento por escrito de estar informado para participar en este estudio, que incluye todos los procedimientos de estudio requeridos y visitas siguientes.

Criterio de Exclusión: Pacientes que ha tenido tratamiento previo con Proleukin®; Pacientes con enfermedad activa en el sistema nervioso central detectada en tomografía computarizada (TC) o exploración de formación de imagen en resonancia magnética (IRM) ; Pacientes que tiene conocida hipersensibilidad a cualquiera de los compuestos de Proleukin®; Pacientes en simultáneos ensayos clínicos que involucran agentes de investigación, o pacientes que han recibido agentes de investigación dentro de las cuatro semanas precedentes; Pacientes que ha tenido terapia sistémica anterior para carcinoma de célula renal (pacientes, los cuales ha sufrido cirugía para carcinoma de célula renal son elegibles por inclusión; pacientes los cuales se ha sometido a terapia por radiación para una lesión sin índice, son elegibles para estudios dos semanas después de terminar la radiación) ; Pacientes que tiene enfermedad cardiaca Clase III o IV de la Asociación Cardiaca de New York (ACNY) ; Pacientes que tienen enfermedades autoinmunes conocidas, tal como enfermedad de Crohn; Paciente femenino embarazada o lactando; y Pacientes que tienen enfermedad metastásica sin evidencia de la enfermedad después de operación quirúrgica de la metástasis.

Ejemplo 3 Estudio Clínico de Fase IV de Dosis Baja de IL-2 Administrada a Humanos Diseño y Objetivos del Estudio Clínico Se diseñó el estudio clínico de fase IV de interleucina- 2 en una dosis alternativa (ILIAD) como un estudio de etiqueta abierta, de grupo único, de centro múltiple, prospectivo, para evaluar la eficacia y seguridad de dosis baja de Proleukin® administrado subcutáneamente en pacientes con carcinoma de célula renal metastásica. El principal punto final es un intervalo de respuesta objetiva (00R) = 16%. Puntos finales secundarios incluyen intervalo de respuesta completa (RC) y respuesta parcial, duración de respuesta, progreso de supervivencia libre (PL) , supervivencia total (ST) , e incidencia de eventos adversos (IEa) . Los participantes incluyen investigadores médicos de posición tanto de la comunidad como académicos, con una preponderancia de médicos comunitarios. El estudio ILIAD, seleccionó a 270 pacientes, de los cuales 267 se inscribieron . Las evaluaciones de pretratamiento incluyen una historia completa, examen médico, conteo sanguíneo completo (CSC) , cuadro químico de suero, nivel de la hormona que estimula la tiroides (THS) y estudios radiográficos apropiados para ubicar el documento de la enfermedad metastásica. Las evaluaciones durante el tratamiento incluyen un CSC, cuadro de química de suero, THS y examen físico antes de inicio de cada nuevo ciclo de tratamiento, un CSC antes de la semana cuatro en cada ciclo de tratamiento, y valoración de IEa en cada contacto con el paciente . Antes de iniciar cada nuevo ciclo de tratamiento después de 2 ciclos, se requieren mediciones radiográficas de sitios previamente determinados de la enfermedad metastásica. Formas de reporte del caso documentan áreas evaluadas con de la enfermedad metastásica y los métodos usados para hacer tales determinaciones . Régimen de Tratamiento ILIAD Todos los pacientes recibieron Proleukin® en el siguiente esquema de tratamiento: Se administró Proleukin ® a 18 millones de unidades internacionales (MIU) /día por 5 días (semana 1, ciclo 1), 9 MlU/día por 2 días seguido por 18 MlU/día por 3 días (semanas 2-6, ciclo 1), y 9 MlU/día por 5 días (semanas 1-6, ciclos = 2). Todos los ciclos de tratamiento son de nueve semanas de duración con seis semanas en y tres semanas de tratamiento. La duración del tratamiento se pensó para continuar por al menos dos ciclos. Los pacientes con enfermedad progresiva se retiraron del estudio, mientras los que responden deben continuar con el tratamiento a la discreción del investigador. Se evaluó la respuesta al tumor cada nueve semanas hasta el progreso de la enfermedad por hasta dos años. Los pacientes se evaluaron para supervivencia a uno y dos años. La población propuesta para tratamiento ILIAD (ITT) (n = 263 pacientes) recibieron al menos una dosis de fármaco de estudio. Las modificaciones de dosis para toxicidades se hicieron de conformidad a las guías estipuladas en el protocolo. Los pacientes que experimentaron Grado 3 o mayores toxicidades, tienen tratamiento retenido hasta que los síntomas se resuelvan, y tienen dosis subsecuentes reducidas a la mitad. Si es tolerado, se implementa una escala de dosis gradual nuevamente a la dosis de protocolo especificado. La relación de la escala de dosis y la dosis final se deja a la discreción del investigador. De acuerdo al protocolo, cualquier dosis objetivo será suficientemente bajo para permitir al paciente recibir Proleukin® como un paciente externo, pero bastante alta para asegurar la absorción sistémica (en general esto es en el intervalo de 5-10 MlU/día para administración subcutánea) . Las toxicidades que persisten por más de dos semanas, resultan en la eliminación del paciente del estudio. Se colectaron datos para un total de 270 pacientes.

Tres de los 270 pacientes se sometieron a revisión por fallas y 4 se inscribieron pero nunca se medicaron. Los 263 pacientes restantes recibieron al menos una dosis de medicación del estudio y son elegibles para análisis (la población propuesta para tratamiento) . De acuerdo a los registros de dosificación de los 263 pacientes, 142 pacientes recibieron dos ciclos del fármaco de estudio (la población por-protocolo) . Sesenta y cinco por ciento de los pacientes propuestos para tratamiento y 70.4% de los pacientes por-protocolo se retiraron debido al progreso de la enfermedad o recaída.

Eficacia Después de dos ciclos de tratamiento, los pacientes se evaluaron para progreso o respuesta por los investigadores (véase tabla abajo) . Las categorías de respuesta son "respuesta completa" (RC) , "respuesta parcial" (RP) , "enfermedad progresiva" (EP) , "enfermedad estable" (EE) e "indeterminada" (ID) . Seis de los 263 pacientes propuestos para tratamiento (2.3%) se valoraron como los de respuesta completa por el investigador y 12 (4.6%) como los de respuesta parcial. Cuarenta y ocho pacientes propuestos para tratamiento (18.3%) tiene enfermedad estable y 156 (59.3%) tienen estado de enfermedad progresiva. Treinta y ocho pacientes propuestos para tratamiento (14.4%) se consideraron indeterminables y 3 (1.1%) tienen valoraciones erradas. La velocidad de respuesta total (respuesta parcial más completa) es 6.8% con un intervalo de confianza del 95% (IC) de 4.1-10.6%.

Seis de los 142 pacientes por-protocolo (es decir, que recibieron dos ciclos del fármaco de estudio) se valoraron como los de respuesta completa por el investigador y 11 (7.7%) como los de respuesta parcial. La velocidad de respuesta total (respuesta parcial más respuesta completa) es 12.0% con un intervalo de confianza del 95% de 7.1-18.5%.

Valoración del Investigador de Mejor Respuesta Entre los 263 pacientes propuestos para tratamiento, ocurrieron 169 muertes (64.3%) durante el periodo de seguimiento de dos años. Entre los 142 pacientes por-protocolo, ocurrieron 73 muertes (51.4%). La siguiente tabla resume los resultados de análisis de supervivencia.

Supervivencia Subgrupos de Función Renal Se realizó un análisis del subgrupo de los datos del estudio ILIAD comparando pacientes con función renal normal (creatinina de suero (SCr) = 1.5 mg/dl) a pacientes con función renal afectada (SCr > 1.5 mg/dl). Una comparación de los subgrupos normales y renalmente afectados muestran una frecuencia similar por nefrectomía (73 contra 70%), PS = 0 (28 contra 23%), PS=1 (59 contra 60%) y PS = 2-3 (13 contra 17%), respectivamente. Véase la tabla abajo.

Comparación de Eficacia para Pacientes con Función Renal Normal y Afectada Se encontraron pacientes con función renal normal y afectada por tener resultados similares. Las figuras 1-3 describen gráficas que comparan la eficacia relativa a dosis baja de IL-2 en pacientes con carcinoma de célula renal metastásica (creatinina de suero (SCr) = 1.5 mg/dl) y función renal afectada (SCr > 1.5 mg/dl) después del régimen de administración descrito arriba. Comparando a pacientes con función renal normal, pacientes renalmente afectados tienen incidencias similares o mayores de PR (5.7 contra 4.3%), ORR (7.6 contra 6.7%) PFS medio (0.34 contra 0.33 años). PFS-1 año (28 contra 18%), PFS-2 años (16 contra 10%) y OS-2 años (3 contra 31%). CR (1.9 contra 2.4%). Supervivencia media (1.0 contra 1.1 años) y OS-1 año (52 contra 55%) son ligeramente menores para el subgrupo renalmente afectado.

Véase la tabla abajo para una comparación de la eficacia del tratamiento para los subgrupos renales.

Cuando el subgrupo renal se controló para antes de la nefrectomía y estados de rendimiento, PFS y OS permanecen comparables. Se generaron modelos de regresión logística incondicional univariante usando programas SAS estándar para estimar proporciones de probabilidades e intervalos de confianza del 95% Wald para ORR. Para pacientes renalmente afectados, ORR es numéricamente inferior que los pacientes con función renal normal, cuando los subgrupos se controlan por nefrectomía (relación de probabilidad = 0.52), PS = 0 (relación de probabilidad = 5.7) y PS = 1 (relación de probabilidad = 0.63). Sin embargo, estas diferencias no son estadísticamente significantes y deben ser interpretadas con precaución, debido al número pequeño de los de respuesta en el subgrupo de función renal normal (n = 14) y afectada (n = 4). Se usaron modelos de regresión de riesgo proporcionales Cox para obtener relaciones de riesgo e intervalos de confidencia del 95% para PFS y OS. PFS para pacientes renalmente afectados es similar a los pacientes con función renal normal, cuando el subgrupo es controlado por nefrectomía (relación de riesgo = 0.86), sin nefrectomía (relación de riesgo = 1.09), PS = 0 (relación de riesgo = 1.15) y PS = 1 (relación de riesgo = 0.71). La supervivencia para pacientes renalmente afectados también es similar a los pacientes con función renal normal, cuando los subgrupos se controlan por nefrectomía (relación de riesgo = 0.92), sin nefrectomía = 1.02), PS = 0 (relación de riesgo = 1.11), y PS = 1 (relación de riesgo = 0.82) . Véase tabla abajo.

Evaluación Univariante de Subgrupos ILIAD (SCr > 1.5 contra < 1.5 mg/dl) No estimable Comparación con Controles Históricos Una literatura busca identificar ocho publicaciones que usan grupos de control de placebo o pseudo-placebo en estudios de pacientes con carcinoma de célula renal no tratados previamente con inmunoterapia ((Pyrhonen et al., (1999) J. Clin. Oncol. 17:2859-2867; Motzer et al. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2530-40; Ritchie et al. (1999) Lancet 353:14-17; Kriegmair et al. (1995) Urology 45:758-762; y Jones et al. (1993) Cáncer Biother, 8:275-288; Gleave et al (1998) New Engl. J. Med. 338:1265-1271; Steineck et al. (1990) Acta Oncol. 29:155-162; Osband et al. (1990) Lancet 335:994-998). Resultados para el grupo de control en estos estudios publicados varían enormemente, más probablemente debido a las diferencias en tratamiento de control (ninguno, hormonal o quimioterapia) diseño de estudios, criterio de selección de paciente y tratamiento previo del paciente. Véase tabla abaj o .

Datos de Control Históricos 95% IC se da en paréntesis, intervalos se dan en corchetes desconoc. = desconocido, NE = no estimable MPA = medroxiprogesterona, VLB = vinblastina, CIM cimetidina Resultados para el subgrupo de función renal normal, subgrupo de función renal afectada, y población de ILIAD ITT, fueron más favorables que la mayoría de los resultados medidos en los grupos de control históricos. El porcentaje de pacientes con PS = 0, PS = 1, y nefrectomía previa para los subgrupos renales ILIAD y población ITT, fueron casi la media del intervalo para los grupos de control históricos, sugiriendo que la población de pacientes con ILIAD, es comparable con aquella de los controles históricos (véase Figura 1) . Por el contrario, la población ILIAD ITT y los subgrupos renales, fueron numéricamente más favorables que los controles históricos por una mayoría (43/50, 85%) de los resultados de eficacia (véase Figura 4) . Los resultados para los subgrupos renales y población ITT, fueron los mismos o numéricamente inferiores, comparados con 7/50 (14%) de los resultados de eficacia de los controles históricos: CR en el estudio de Steineck (1990) ; PR en el estudio de Osband (1990) ; PR y ORR en el estudio de Ritchie (1999) ; y CR, supervivencia media y OS-lyr en el estudio de Gleave (1998) . Cuando se comparan por puntos finales, el estudio ILIAD es más favorable que los controles históricos por una mayoría de resultados de respuesta (16/21, 76%), PFS (8/8, 100%) y supervivencia (91/21, 90%) . Además, pacientes ILIAD estratificados por grupos de riesgo, tienen una relación de supervivencia superior que los controles históricos. La relación de supervivencia de pacientes tratados con bajas dosis de IL-2, se comparó con aquella de un grupo de control histórico (descrito en Jones et al., supra), de pacientes tratados con quimioterapia en lugar de IL-2. Pacientes se subdividieron en grupos de riesgo, de conformidad con el sistema de Jones de estratificación del factor de riesgo, el cual se basa en una combinación de factores de riesgo identificados: ECOG PS > 1, tiempo de diagnóstico a tratamiento < 2 años, y metástasis a más de un sitio. Pacientes se subdividieron en los siguientes grupos de Riesgo Jones: Buen riesgo (0-1 factores de riesgo), Riesgo moderado (2 factores de riesgo) , y Pronóstico pobre (todos los 3 factores de riesgo) . La Figura 5 muestra trazos separados del porcentaje de sujetos supervivientes contra tiempo en años, para cada uno de los grupos de riesgo. Los pacientes tratados con sujetos dosis bajas de IL-2 de conformidad con el régimen descrito en el Ejemplo 3, tienen una relación de supervivencia numéricamente superior en los tres grupos de Riesgo Jones, comparados con los controles históricos. Sin embargo, la diferencia en supervivencia entre los pacientes ILIAD y los controles históricos, parece disminuir conforme los grupos de riesgo llegan a ser menos favorables. Véase tabla siguiente. 95% Cl se da en paréntesis.

Toxicidad Se determinaron eventos adversos por ser "no relacionados", "posiblemente relacionados" o "probablemente relacionados", para estudiar el tratamiento por el investigador. El efecto adverso que se origina más frecuentemente es fatiga (41.1% de pacientes), seguido por rigidez (36.9%), náuseas (36.5%), pirexia (31.7%), vómito NOS (22.1%) y anorexia (20.9%). Se observaron los siguientes eventos adversos relacionados con el tratamiento en al menos, 10% de los pacientes (véase tabla siguiente) : La terapia de Proleukin® de dosis baja, es menos nefrotóxica que la Proleukin® de dosis alta. La terapia de Proleukin® de dosis alta, ha sido mostrada por causar toxicidad renal significante, medida por el pico medio SCr > 4 mg/dl en el primer ciclo de tratamiento y > 6 mg/dl durante el segundo ciclo de terapia para pacientes con SCr elevado en la línea base (Belldegrun et al. 1987). Se observó un incremento menor, pero todavía dramático en el pico medio SCr (hasta 3 mg/dl) para pacientes con SCr normal en la línea base. Los niveles de SCr regresaron a la línea base dentro de 30 días por 60% de pacientes con función renal afectada comparado con 98% de pacientes con función renal normal. Estos resultados sugieren que dosis altas de Proleuki®, produce nefrotoxicidad superior en pacientes renalmente afectados, que en pacientes con función renal normal. Por el contrario, dosis bajas de Proleukin® producen solamente menores incrementos en SCr durante el tratamiento (en general < 2 mg/dl) , que fueron comparables entre los subgrupos de función renal afectada y normal. La evaluaciones en SCr > 3 mg/dl, fueron raros para cualquier subgrupo. Pacientes con excursiones de SCr en este intervalo (< 3 mg/dl), no podría esperarse que tengan síntomas severos de requerimientos de tratamiento específicos. La frecuencia y grado de eventos adversos (Aes) , fue en general, comparable entre los subgrupos de pacientes con función renal afectada y normal. Comparados con el subgrupo normal, el subgrupo renalmente afectado, tiene un número ligeramente inferior de eventos adversos serios totales (SAEs) (26 contra 30%), AE (77 contra 8)%), y AE relacionado con fármacos (71 contra 81%) . El número de AE que conduce a discontinuidad, fue ligeramente superior en el subgrupo renalmente afectado (30 contra 25%) . En subgrupos tanto normales como renalmente afectados, el porcentaje más alto de AE fue Grado 3 (42 contra 34%), seguido por Grado 2 (33 contra 23%), Grado 4 (9 contra 13), Grado 1 (4 contra 8%) y Grado 5 (1 contra 0%), respectivamente.

Los eventos adversos más comunes (reportados en >10% de pacientes en cualquier subgrupo), fueron en general, comparables entre los subgrupos tanto normales como renalmente afectados e incluyen fatiga (43 contra 45%) , rigidez (38 contra 36%) , pirexia (39 contra 23%) , reacción del sitio de inyección (18 contra 21%) , náuseas (39 contra 36%) , vómito (25 contra 19%) , diarrea (20 contra 19%) , dermatitis NOS (18 contra 11%) , anorexia (23 contra 19%) , tos (20 contra 9%) , disnea NOS (13 contra 26%) , insomnio (9 contra 17%) , artralgia (12 contra 13%) , mialgia (11 contra 9%), edema de extremidad inferior (8 contra 17%), peso reducido (11 contra 4%) , e hipotensión NOS (6 contra 11%) , respectivamente . La nefrotoxicidad de LD Proleukin®, fue similar entre subgrupos renales. La nefrotoxicidad de terapia de LD Proleukin®, se evaluó comparando niveles de SCr durante cada ciclo de tratamiento a mediciones de línea base. Aunque los niveles de SCr del pico se incrementan ligeramente durante el tratamiento por un gran número de pacientes, pico SCr >2.0 mg/dl, fue observado en solamente cinco pacientes en el subgrupo renalmente afectado y ocho pacientes en el subgrupo de función renal normal. Pico SCr > 3.0 mg/ml no fue común y se observó en solamente un paciente en el subgrupo renalmente afectado y dos pacientes en el subgrupo de función renal normal.

Conclusión La interleucina-2 de dosis baja, parece ser segura y efectiva para tratar pacientes renalmente afectados con carcinoma de células renales metastásicas, quienes no son elegibles para terapia de dosis altas de IL-2. Los resultados del estudio clínico Fase IV, indican que la Proleukin® de dosis baja, produce velocidades de respuesta similares, progreso de supervivencia libre (PFS) y supervivencia total (OS), en pacientes tanto normales como renalmente afectados. Los resultados de eficacia para pacientes normales y renalmente afectados tratados con Proleukin® de baja dosis, fueron en general, superiores que aquellos reportados para los grupos de control históricos. La nefrotoxicidad con dosis bajas de Proleukin®, fue similar entre los subgrupos renales y dramáticamente inferiores que aquellos observados con Proleukin® de dosis altas en pacientes renalmente afectados.

Ejemplo 4 Tratamiento de Carcinoma de Células Renales Metastásicas por Administración de Dosis Bajas de IL-2 Se administró una formulación de IL-2 apacientes con un diagnóstico histológico de carcinoma de células renales metastásicas . La concentración de IL-2 en la formulación es aproximadamente 22 MIU. La formulación de IL-2 es administrada por inyección subcutánea. El tratamiento comprende 2 ciclos de 9 semanas. El primer ciclo comprende seis semanas de tratamiento con dosis IL-2 bajas a 9-18 MIU, una vez por día por cinco días por una semana (qd x 5d) , seguido por un periodo de descanso de tres semanas. El segundo ciclo comprende seis semanas de tratamiento con dosis bajas de IL-2 a 9 MIU, una vez al día por cinco días por una semana (qd x 5 d) , seguido por un periodo de descanso de tres semanas. Los ciclos de tratamiento son repetidos en pacientes que responden. Mientras las modalidades preferidas de la invención han sido ilustradas y descritas, ser apreciar-a que se pueden hacer varios cambios en esta, sin apartarse el espíritu y alcance de la invención.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (30)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones .

1. Método para tratar un paciente humano, que tiene carcinoma de célula renal, en donde el paciente está renalmente afectado, caracterizado porque el método comprende : a) administrar una dosis de 1-52 MIU de IL-2 por día, en 1-3 dosis al día, por 3-6 días a la semana, repetida por 1-24 semanas; y b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas.

2. Método para tratar un paciente humano que tiene carcinoma de célula renal, en donde el paciente está renalmente afectado, caracterizado porque el método comprende : a) administrar una dosis de 1-52 MIU de IL-2 cada 5 días por 1 mes, repetida por 1-24 semanas, en donde la IL-2 es covalentemente conjugada al polietilenglicol o poliol polioxietilado; y b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas.

3. Método para tratar un paciente humano que tiene carcinoma de célula renal, caracterizado porque comprende: a) administrar una dosis de 9-18 MIU de IL-2 por día, en 1-3 dosis al día, por 3-6 días a la semana, repetida por 1-24 semanas; b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas; c) administrar una dosis de 9 MIU de IL-2 por día, en 1-3 dosis al día, por 3-6 días a la semana, repetida por 1-24 semanas; y d) no administrar IL-2 por 1-4 semanas.

4. Método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque comprende: a) primero, administrar una dosis de 18 MIU de IL-2 por día, por 5 días durante una semana; b) segundo, administrar una dosis de 9 MIU de IL-2 por día, por 2 días, seguido de la administración de una dosis de 18 MIU de IL-2 por día, por 3 días durante cada semana, repetida por 5 semanas; c) tercero, no administrar IL-2 por 3 semanas; d) cuarto, administrar una dosis de 9 MIU de IL-2 por día, por 5 días de cada semana, repetida por 6 semanas; y e) quinto, no administrar IL-2 por 3 semanas.

5. Método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la IL-2, es IL-2 recombinantemente producida, que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 70% de identidad de secuencia para la secuencia de aminoácidos de IL-2 humana.

6. Método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la IL-2 comprende una secuencia de aminoácido que tiene al menos 80% de identidad de secuencia para la secuencia de aminoácidos de IL-2 humana.

7. Método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la IL-2 comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 90% de identidad de secuencia para la secuencia de aminoácidos de IL-2 humana.

8. Método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la IL-2 comprende una secuencia de aminoácido que tiene al menos 95% de identidad de secuencia para la secuencia de aminoácidos de IL-2 humana.

9. Método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la IL-2 es una muteina IL-2.

10. Método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la IL-2 es des-alanil-1, serina-125 de interleucina-2 humana (aldesleucina) .

11. Método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la IL-2 se selecciona del grupo que consiste de IL-2 de Ala10 ; Ser125 ; IL-2 de des-Alai des-Pro2 des-Thr3 des-Ser4 Ala104 Ser?25; e IL-2 de des-Alai des-Pro2 des-Thr3 des Ser4 des-Ser5 des-Ser6.

12. Método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la IL-2 es conjugada con un polietilenglicol.

13. Método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el polietilenglicol tiene un peso molecular promedio de 1,000 hasta 40,000 daltons.

14. Método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el polietilenglicol tiene un peso molecular promedio de 2,000 hasta 20,000 daltons.

15. Método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el polietilenglicol tiene un peso molecular promedio de 3,000 lasta 12,000 daltons.

16. Método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la IL-2 es covalentemente conjugada a un poliol polioxietilado.

17. Método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el poliol polioxietilado es un elemento seleccionado del grupo que consiste de sorbitol polioxoetilado, glucosa polioxietilada y glicerol polioxietilado .

18. Método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el poliol polioxoetilado es glicerol polioxietilado.

19. Método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el glicerol polioxietilado tiene un peso molecular promedio de 1,000 hasta 40,000.

20. Método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el carcinoma de célula renal es metastásico.

21. Método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque se administran ciclos múltiples del método de tratamiento al sujeto por un tiempo suficiente para provocar al menos una respuesta parcial al tumor.

22. Método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque además comprende ciclos múltiples de un tratamiento que comprende : a) administrar una dosis de 9 MIU de IL-2 por día, en 1-3 dosis al día, por 3-6 días a la semana, repetida por 1-24 semanas; y b) no administrar IL-2 por 1-4 semanas; administrar al sujeto por un periodo de tiempo suficiente para provocar al menos una respuesta parcial al tumor.

23. Método de conformidad con la reivindicación 21 ó 22, caracterizado porque el periodo de tiempo es al menos 6 meses .

24. Método de conformidad con la reivindicación 21 ó 22, caracterizado porque el periodo de tiempo es al menos 12 meses.

25. Método de conformidad con la reivindicación 21 ó 22, caracterizado porque se provoca una respuesta completa al tumor.

26. Método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la IL-2 se administra por administración subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, oral, pulmonar, nasal, tópica o transdérmica, o por infusión o supositorios.

27. Método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la IL-2 se administra subcutáneamente.

28. Método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el paciente está renalmente afectado.

29. Método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el paciente es intolerante a tratamiento de dosis altas de IL-2.

30. Uso de IL-2 en la manufactura de un medicamento para tratar un paciente humano, que tiene carcinoma de célula renal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes .