MX2007000775A - Componentes de una aparato y metodos para utilizar los componentes de un aparato para detectar la presencia de un analito. - Google Patents

Abstract

Se describen componentes de un aparato incluyendo soportes rigidos adecuados para usarse en una columna de afinidad, columnas de afinidad, y una columna de afinidad en comunicacion de fluido con una columna analitica, tal como una columna de cromatografia de liquidos a alta presion (CLAP). Tambien se describen metodos para usar los componentes de un aparto para detectar la presencia de uno o mas analitos.

Description

COMPONENTES DE UN APARATO Y MÉTODOS PARA UTILIZAR LOS COMPONENTES DE UN APARATO PARA DETECTAR LA PRESENCIA DE UN ANALITO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere generalmente a componentes de un aparato que incluyen soportes rígidos adecuados para usarse en columnas de afinidad, columnas de afinidad, y aparatos que comprenden una columna de afinidad en comunicación de fluido con una columna analítica, tal como una columna de cromatografía liquida de alta presión (CLAP) .

La presente invención además se refiere a métodos para usar los componentes de un aparato para detectar la presencia de uno o más analitos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se conocen componentes de un aparato y métodos para analizar muestras de prueba que contienen potencialmente uno o más analitos. Sin embargo, existe una necesidad en la técnica de análisis de muestras para uno o más de los siguientes beneficios: (1) componentes de un aparato usado solo o en combinación con otro que permita menos pasos de preparación de muestras y menos pasos de manejo de muestras; (2) métodos que permitan menos pasos de preparación de muestras y menos pasos de manejo de muestras, (3) componentes de un aparato usados solos o en combinación con otro que permita el análisis altamente preciso de muestras de prueba complejas para un analito dado con minima interferencia de (i) componentes sin analitos dentro de la muestra de prueba compleja (es decir, unión indeseable de materiales diferentes al analito blanco para uno o más ligandos usados en el aparato) ; y (ii) unión indeseable del analito blanco a sitios reactivos diferentes a los ligandos usados en el aparato; (4) componentes de un aparato usados solos o en combinación con otro que permita el análisis altamente preciso de muestras de prueba complejas para analitos específicos (v.gr., analitos que tienen actividad estrogénica) con interferencia minima de (i) componentes sin analitos dentro de la muestra de prueba compleja (es decir, unión indeseable de materiales diferentes al analito blanco a uno o más ligandos usados en el aparato) , y (ii) unión indeseable del analito blanco a sitios reactivos diferentes a ligandos usados en el aparato; y (5) la capacidad de utilizar una columna de afinidad en linea o en comunicación de fluido con una columna analítica.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a componentes de un aparato que incluyen soportes rígidos adecuados para usarse en columnas de afinidad, columnas de afinidad que contienen soporte rígidos y aparatos que contienen una columna de afinidad en comunicación de fluido con una columna analítica, tal como una columna de cromatografía de líquidos de alta presión (CLAP) . Los componentes de un aparato pueden usarse para capturar y cuantificar uno o más analitos de una variedad de mezclas complejas. En una modalidad de la presente invención, el componente de aparato comprende soportes rígidos adecuados para usarse en columnas de afinidad. Un soporte rígido ilustrativo de la presente invención comprende una pluralidad de partículas inorgánicas, en donde cada partícula comprende (i) un sustrato inorgánico; (ii) una superficie de sustrato modificado que reduce la unión no específica de materiales sin analitos (es decir, unión no específica de materiales diferentes al analito blanco) y materiales de analitos específicos para un ligando (es decir, unión no específica del analito blanco para sitios reactivos diferentes a sitios reactivos provistos por uno o más ligandos) al sustrato inorgánico; y (iii) uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico, en donde uno o más ligando comprenden un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo anti-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2,4-diclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2, , 5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo antiácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo antiácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) butírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo anti-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17-a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina Bi2 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-pirimifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. En modalidades ilustrativas de la presente invención, las partículas inorgánicas comprenden partículas de óxido de metal inorgánico, tales como sílice o partículas de gel de sílice.

La presente invención se dirige además a columnas de afinidad que contienen un material de soporte rígido. En una modalidad ilustrativa de la presente invención, la columna de afinidad comprende una estructura de columna que tiene un volumen de columna; y un soporte rígido colocado en el volumen de columna de la estructura de columna, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas inorgánicas, en donde cada partícula comprende (i) un sustrato inorgánico; (ii) una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales sin analitos y materiales de analitos específicos para ligandos al sustrato inorgánico; y (iii) uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo anti-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo antiácido 2, 4-diclorofenoxiacético, un anticuerpo anti-ácido 2, 4, 5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo antiácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo antiácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) butírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo anti-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17~a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti- itamina B_.2 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-pirimifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. La presente invención se dirige aún más a un aparato que comprende una columna de afinidad en comunicación de fluido con una columna analítica, en donde la columna de afinidad contiene un soporte rígido (i) capaz de soportar una presión de columna de hasta aproximadamente 200 bar, y (ii) que tiene uno o más ligandos unidos a la misma, en donde uno o más ligandos son capaces de unirse selectivamente a uno o más analitos dentro de una solución de muestra dada. En una modalidad ilustrativa, la columna de afinidad del aparato contiene materiales de soporte rígidos de la presente invención. La presente invención también se dirige a métodos para prepara soportes rígidos, columnas de inmunoafinidad, y aparatos que contienen una columna de inmunoafinidad, así como métodos para usar los soportes rígidos, columnas de inmunoafinidad, y aparato para detectar la presencia de uno o más analitos en una muestra dada. Los métodos de la presente invención se pueden usar para analizar una muestra de prueba que contiene potencialmente por lo menos un analito. En una modalidad ilustrativa de la presente invención, la presente invención se dirige a métodos para hacer materiales de soporte rígidos que comprenden un sustrato inorgánico. En un método ilustrativo, el método comprende los siguientes pasos (1) unir los grupos R a por lo menos una primera porción de la superficie del sustrato inorgánico, en donde los grupos R tienen una reactividad menor que cualquiera de los grupos funcionales sobre una superficie del sustrato inorgánico antes del paso de unión, (2) la unión de uno o más enlazadores a por lo menos una segunda porción de la superficie del sustrato inorgánico, en donde uno o más enlazadores comprende un grupo funcional de aldehido; y (3) unir selectivamente uno o más ligandos a uno o más enlazadores. En una modalidad ilustrativa de la presente invención, la presente invención se dirige a métodos para analizar muestras de prueba que contienen potencialmente por lo menos un analito. En una modalidad ilustrativa, el método para analizar una muestra de prueba que contiene potencialmente por lo menos un analito comprende el paso de (a) introducir una muestra de prueba en una columna de afinidad que contiene un soporte rígido, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas inorgánicas, en donde cada partícula comprende (1) un sustrato inorgánico; (ii) una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales sin analitos y materiales de analitos específicos para ligandos al sustrato inorgánico; y (iii) uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo anti-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2,4-diclorofenoxiacético, un anticuerpo anti-ácido 2,4,5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4- (2, -diclorofenoxi) butírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo anti-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17-a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina B?2 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-piri ifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. El método ilustrativo para analizar una muestra de prueba que contiene potencialmente por lo menos un analito puede comprender además los siguientes pasos: (a) permitir que la muestra de prueba entre en contacto con el soporte rígido y ligandos sobre el mismo; (b) enjuagar el soporte rígido para lavar cualquier componente de la muestra de prueba que no se une a los ligandos; (c) introducir una solución eluyente en la columna de afinidad de manera que la solución eluyente entra en contacto con uno o más analitos unidos a los ligandos sobre el soporte rígido; (d) permitir que la solución eluyente permanezca en contacto con el soporte rígido durante un tiempo de manera que forma una muestra eluyente conteniendo potencialmente uno o más analitos, y (e) analizar contenido sobre la columna analítica para determinar una presencia de uno o más analitos en la muestra de prueba. En una modalidad adicional ilustrativa, la presente invención se dirige a un método para analizar una muestra de prueba que contiene potencialmente por lo menos un compuesto que tiene actividad estrogénica, en donde el método comprende los pasos de introducir la muestra de prueba en una columna de afinidad conteniendo un soporte rígido que tiene uno o más ligandos unidos al mismo, en donde uno o más ligandos son capaces de unir selectivamente a uno o más compuestos que tienen actividad estrogénica. La presente invención se dirige además a métodos para analizar una muestre de eluyente, en donde el método comprende los pasos de transferir una muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analizar contenidos de la columna analítica para determinar la presencia de uno o más analitos en la muestra de eluyente. Por ejemplo, la muestra eluyente puede contener una micotoxina, ácido fólico, vitamina B?2 (cianocobalamina), o una combinación de los mismos. En una modalidad ilustrativa, el método para analizar una muestra de eluyente comprende analizar una muestra de eluyente que contiene potencialmente por lo menos una micotoxina, en donde el método comprende los pasos de transferir la muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analizar contenidos de la columna analítica para determinar una presencia de por lo menos una mícotoxina en la muestra de eluyente. En una modalidad adicional ilustrativa, el método para analizar una muestra de eluyente comprende analizar una muestra de eluyente que contiene potencialmente ácido fólico, vitamina B12 (cianocobalamina) , o una combinación de los mismos, en donde el método comprende los pasos de transferir la muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analiza contenidos de la columna analítica para determinar una presencia de ácido fólico, vitamina B1 (cianocobalamina) , o ambos en la muestra de eluyente. Estos y otros aspectos y ventajas de la presente invención serán evidentes después de una revisión de la siguiente descripción detallada de las modalidades descritas y las reivindicaciones anexas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La presente invención se describe además con referencia a las figuras anexas, en donde: La Fig. 1 describe una vista esquemática de un aparato ilustrativo de la presente invención, La Fig. 2 describe una columna de afinidad ilustrativa de la presente invención; La Fig. 3 describe otro aparato ilustrativo de la presente invención mostrando flujo de fluido a través del aparato durante la carga de una muestra en un bucle de muestras; La Fig. 4 describe un aparato ilustrativo de la Fig. 3 durante la inyección de una muestra en la columna de afinidad; La Fig. 5 describe el aparato ilustrativo de la Fig. 3 durante la elusión de la muestra de la columna de afinidad, y La Fig. 6 describe un aparato ilustrativo de la Fig. 3 durante la detección de muestra.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a componentes de un aparato incluyendo (i) soportes rígidos adecuados para usarse en columnas de afinidad, (ii) columnas de afinidad que contienen soportes rígidos (iii) aparatos que contienen un soporte rígido y/o una columna de afinidad de la presente invención en combinación con una columna analítica, tal como una columna de cromatografía de líquidos de alta presión (CLAP) . La presente invención además se dirige a métodos para formar uno o más de los componentes de un aparato, así como métodos para usar uno o más de los componentes de aparato para analizar muestras de prueba, incluyendo mezclas complejas, que contienen potencialmente uno o más analitos. La presente invención se dirige aún más a métodos para usar uno o más analitos. La presente invención se dirige aún más a métodos para usar uno o más de los componentes de un aparato para capturar y/o cuantificar uno o más analitos de una variedad de mezclas complejas. Un aparato ilustrativo 10 de la presente invención se muestra en la Fig. 1. Los aparatos ilustrativos 10 comprenden columna de afinidad 11, columna analítica 12, detector 13, primera bomba 14, segunda bomba 15, primera válvula 16, segunda válvula 17, entrada de muestra de prueba 20, primera entrada de regulador 21, entrada de regulado de elusión 22, primera salida de desechos 23, y salida de desechos de columna de afinidad 24. En una modalidad deseada de la presente invención, columna de afinidad 11 y columna analítica 12 se unen entre ellas vía un acoplamiento (no mostrado) de tal manera que la columna de afinidad 11 está en comunicación de fluido con columna analítica 12. Como se usa en la presente, el término "en comunicación de fluido con" describe una modalidad de la presente invención en donde una muestra de eluyente que sale de una columna de afinidad fluye directamente en una columna analítica vía un acoplamiento entre la columna de afinidad y la columna analítica. Dicha disposición (también denominada en la presente como una "configuración en línea") elimina la necesidad de manejar y/o almacenar una muestra de eluyente entre una columna de afinidad y una columna analítica.

En otras modalidades de la presente invención, la columna de afinidad 11 y la columna analítica 12 no están en comunicación de fluido entre ellas. En esta modalidad, una muestra de eluyente que sale de una columna de afinidad puede recopilarse y/o almacenarse para un uso futuro (es decir, para introducción futura en la columna analítica 12) . Dicha disposición también se denomina en la presente como una "configuración fuera de línea". Como se muestra antes, el aparato 10 ilustrativo de la presente invención puede comprender un número de componentes. Enseguida se provee una descripción de componentes individuales y métodos para usar componentes individuales solos o en combinación. 1 . Componentes de un Apara to El aparato de la presente invención puede comprender, pero no estar limitado a, uno o más de los siguientes componentes. A. Columna de Afinidad La presente invención se dirige a columnas de afinidad, tales como la columna de afinidad 11 ilustrativa mostrada en la Fig. 1, comprendiendo uno o más de los siguientes componentes. Como se usa en la presente, el término "columna de afinidad" incluye columnas que tienen uno o más de los siguientes componentes, incluyendo columnas de afinidad tales como columnas de inmunoafinidad. 1. Estructura de columnas Las columnas de afinidad de la presente invención comprenden una estructura de columna que tienen dimensiones deseadas, volumen de columna, e integridad estructural. Normalmente, la estructura de columna comprende una estructura tubular que tiene tapas extremas removibles sobre ambos extremos de la estructura tubular. Las tapas extremas forman un sello a prueba de fugas con la estructura tubular con el fin de evitar que el material escape indeseablemente de la estructura tubular. Una columna de afinidad 11 ilustrativa de la presente invención se muestra en la Fig. 2. Como se muestra en la Fig. 2, la columna de afinidad ilustrativa 11 comprende la estructura tubular 110 que tienen primer extremo 111 y segundo extremo 112. Las tapas extremas 113 y 114 forman sellos a prueba de fugas en el primero y el segundo extremos 111 y 112 respectivamente. Las tapas extremas 113 y 114 son particularmente útiles durante el almacenamiento de la columna de afinidad ilustrativa 11 de manera que evitan (i) la fuga de materiales dentro de la columna de afinidad ilustrativa 11, y/o (ii) secar materiales dentro de la columna de afinidad ilustrativa 11. La columna de afinidad ilustrativa 11 comprende demás material de soporte rígido 30 y primera solución reguladora 31 (descrita más adelante) colocada dentro de una cavidad de columna 32 de la columna de afinidad 11 ilustrativa.

La estructura tubular 110 pueden hacerse de una variedad de materiales y tienen una construcción de pare de manera que soportan presión relativamente alta dentro de la estructura tubular 110. Convenientemente, la estructura tubular 110 tiene una integridad estructural que soporta una presión constante de hasta aproximadamente 400 bar, más convenientemente, de aproximadamente 200 bar a alrededor de 300 bar. Los materiales adecuados para formar la estructura tubular 110 incluyen, pero no están limitados a, polímeros tales como polieteretercetona (PEEC) y polipropileno; metales tales como acero inoxidable; y materiales inorgánicos tales como vidrio. En una modalidad deseada de la presente invención, la estructura tubular 110 comprende polieteretercetona (PEEC) . La estructura tubular 110 puede tener dimensiones que varían dependiendo de cierto número de factores incluyendo, pero no limitado a, tamaño y geometría de partícula, régimen de flujo, volumen de inyección, número de placas requeridas, etc. Normalmente, la estructura tubular 110 tiene un área transversal circular, un diámetro externo que varía de aproximadamente 2 mm a alrededor de 20 mm, un diámetro interno que varía de aproximadamente 1 mm a alrededor de 10 mm, y una longitud global que varía de aproximadamente 2 mm a alrededor de 250 mm. En una modalidad deseada de la presente invención, la estructura tubular 110 tiene un área en sección transversal circular, un diámetro externo de aproximadamente 11 mm, un diámetro interno de aproximadamente 4.5 mm, y una longitud global de aproximadamente 50 mm. Las tapas extremas 113 y 114 para usarse con estructura tubular 110 normalmente se forman de PEEC, y tienen dimensiones de manera que forman un sello a prueba de fugas con extremos de estructura tubular 110. Se deberá observar que aunque las estructuras tubulares que tienen un área en sección transversal también están dentro del alcance de la presente invención. Las configuraciones en sección transversal adecuadas para una variedad de estructuras tubulares incluyen, pero no están limitadas a, configuraciones en sección transversal cuadrada, rectangular, triangular, oblonga, pentagonal y hexagonal. 2. Material de Soporte Rígido La presente invención además se dirige a materiales de soporte rígido adecuados para usarse en columnas de afinidad, tales como material de soporte rígido ilustrativo 30 mostrado en la Figura 2. Los materiales de soporte rígido de la presente invención comprenden uno o más lo los siguientes componentes. a. Sustrato Inorgánico Los sustratos inorgánicos adecuados para usarse en la presente invención incluyen productos comercialmente disponibles como medios cromatográficos. Los sustratos inorgánicos pueden prepararse usando métodos conocidos en la materia. El sustrato inorgánico provee soporte para uno o más componentes adicionales aplicados a una superficie del sustrato inorgánico. En general, el sustrato inorgánico es un óxido inorgánico, más adecuadamente un óxido de metal inorgánico, silicato o aluminosilicato o vidrio de poro controlado. Un óxido de metal inorgánico, silicato o aluminosilicato o vidrio de poro controlado. Un óxido de metal inorgánico es más conveniente. Los óxidos inorgánicos adecuados para usarse en a presente invención tienen normalmente grupos libres de hidroxilo capaces de unirse a, o reaccionar con, otras funcionalidades químicas. Convenientemente, el óxido inorgánico tiene aproximadamente 1 a alrededor de 10 grupos hidroxilo por nanómetro cuadrado de óxido inorgánico sólido. Los óxidos de metales inorgánicos adecuados incluyen, pero no están limitados a, sílice tal como sílice de grado cromatográfico o gel de sílice, alúmina, sílice-alúmina, zirconia, zirconato, vidrio de poro controlado o titania. En una modalidad deseada de la presente invención, el óxido de metal inorgánico es sílice, más convenientemente, sílice de grado cromatográfico o gel de sílice. Los óxidos de metal inorgánico de respuesta magnética, tal como las partículas magnéticas revestidas con óxido de silicio descritas en WO 98/31461 (la descripción de la cual se incorpora aquí en su totalidad por referencia) también se pueden usar en la presente invención. También se pueden usar óxidos de metal inorgánico mezclado, v.gr., co-geles de sílice y alúmina, o co-precipitados . Los óxidos de metales inorgánicos sólidos pueden tener una forma física de materiales en partículas, placas de fibras, o una combinación de los mismos. Convenientemente, los óxidos de metales inorgánicos sólidos tienen una forma física de materiales en partículas o partículas que tienen una forma sustancialmente esférica. Sin importar la forma física, los óxidos de metales inorgánicos sólidos normalmente tienen una dimensión más larga (es decir, longitud, anchura o diámetro) de hasta aproximadamente 100 micrómetros (µm) . Cuando el óxido de metal inorgánico sólido comprende una pluralidad de partículas que tiene una forma sustancialmente esférica, la pluralidad de partículas tiene convenientemente un diámetro de partícula promedio que varía de aproximadamente 100 µm. En una modalidad deseada de la presente invención, el óxido de metal inorgánico sólido comprende una pluralidad de sílice o partículas de gel de sílice que tienen una forma sustancialmente esférica, en donde la pluralidad de sílice o partículas de el de sílice tienen un diámetro de partícula promedio que varía de aproximadamente 15 µm a alrededor de 20 µm.

Una variedad de óxidos de metales inorgánicos sólidos comercialmente disponibles pueden usarse en la presente invención. Los óxidos de metales inorgánicos sólidos adecuados incluyen, pero no están limitados a, partículas de sílice comercialmente disponibles de Grace Vydac (Columbia, MD) bajo la designación comercial DAVISIL®, tales como medios de sílice DAVISIL® XWP (poro extra ancho) , que tienen forma irregular con un tamaño de poro promedio de aproximadamente 500 Á, convenientemente de aproximadamente 500 A a alrededor de 3000 Á, convenientemente de aproximadamente 500 Á a alrededor de 1500 A, o sílice VYDAC® que tiene una forma esferoidal y un tamaño de poro promedio de aproximadamente 300 Á. En una modalidad deseada de la presente invención, la sílice VYDAC® que tiene una forma esferoidal y un tamaño de poro promedio inicial de aproximadamente 300 Á se usa después de ser modificado para incrementar el tamaño de poro promedio a aproximadamente 800 A. b. Superficie de Sustrato Inorgánico Modificado Las superficies de los sustratos inorgánicos descritos antes se tratan o modifican con el fin de reducir la unión y/o adsorción no selectiva, no específica, de materiales sin analito (es decir, unión no específica de materiales diferentes al analito blanco) y materiales de analitos específicos para ligandos (es decir, unión no específica del analito blanco a sitios reactivos diferentes a los sitios reactivos provistos por uno o más ligandos) en el sustrato inorgánico. La superficie de sustrato modificado resultante tiene (i) menos afinidad para materiales sin analitos (es decir, materiales diferentes al analito blanco) debido a la presencia de grupos R relativamente inertes en la superficie inorgánica, y (ii) una cantidad controlada de sitios reactivos para unirse selectivamente a uno o más ligandos (descritos adelante) a la superficie del substrato inorgánico directamente o a través de un enlazador. La cantidad de sitios reactivos para unirse selectivamente a uno o más ligandos conduce a la unión selectiva, controlada, de uno o más analitos de interés a uno o más ligandos únicos a la superficie del sustrato inorgánico. La superficie de sustrato modificada comprende grupos R relativamente inertes unidos a por lo menos una porción de la superficie de la superficie inorgánica. Como se usa en la presente, el término "grupos R relativamente inertes" se usa para describir grupos R unidos a la superficie del sustrato inorgánico, en donde los grupos R tienen reactividad mejor a la de la superficie del sustrato inorgánico original (es decir, no modificada) . Por ejemplo, cuando el sustrato inorgánico comprende partículas de sílice, los grupos R relativamente inertes unidos a por lo menos una porción de la superficie de la superficie inorgánica tienen una reactividad menor a la de los grupos hidroxilo presentes en la superficie de sílice original o no modificada. Los grupos R relativamente inertes se pueden unir a por lo menos una porción de la superficie de la superficie inorgánica usando una variedad de técnicas incluyendo, pero no limitado a, técnicas descritas en la presente, así como técnicas descritas en la Solicitud de Patente de E.U.A. Serie No. 09/929,621, titulada "SOLID COMPOSITIONS FOR SELECTIVE ADSORPTION FROM COMPLEX MIXTURES" presentada el 14 de agosto de 2001, el tema principal de la cual se incorpora aquí en su totalidad por referencia. En una modalidad ilustrativa de la presente invención, se unen los grupos R relativamente inertes a por lo menos una porción de la superficie de la superficie inorgánica, en donde los grupos R relativamente inertes comprenden porciones de superficie de R10. Las porciones de superficies de R10 relativamente adecuadas, incluyen, pero no están limitadas a, -CH2OH, -CH(0H)2, CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(0H)2CH3, -CH2CH(OH)2, -CH(OH)CH3, -CH2CH(OH)2 y CH (OH) CH2 (OH) . En una modalidad ilustrativa de la presente invención, las porciones de superficie de R_o comprenden -CH2OH, -CH(0H(CH3, -CH2CH2OH o -CH (OH) CH2 (OH) . En una modalidad deseada de la presente invención, las porciones de superficie de Rio comprenden -CH2OH. La porción Rio se localiza en por lo menos una superficie de la sustancia inorgánica. Por "localiza" se entiende que Rio puede unirse directamente a una funcionalidad en la superficie de la sustancia inorgánica de partida. Rio puede localizarse sobre el área superficial presente en la periferia de la sustancia inorgánica, o localizarse en el área superficial presentadas en poros, que penetran en el interior de la sustancia inorgánica y tienen aberturas (poro) en la periferia de la sustancia. Rio también se puede "localizar" en la superficie de la sustancia inorgánica estando unida a la superficie de la sustancia inorgánica vía porción bivalente o átomo (-X-) para formar un grupo que tiene la fórmula -X-R?0, v.gr., un átomo de metal residual (v.gr., átomo de silicio), originándose de un reactivo de silano. La porción o átomo residual se une directamente al sustrato inorgánico, y convenientemente a través de los grupos hidroxilo sobre la superficie del sustrato inorgánico. Los grupos -X- en dichos reactivo varían de reactivo a reactivo, pero pueden ser átomos de metales tales como silicio, aluminio, zirconio o similares. El sustrato inorgánico seleccionado también puede determinar la selección de -X- y su reactivo asociado. Generalmente, cualquier reactivo que contiene -X- será el que pueda reaccionar con funcionalidad reactiva en el sustrato inorgánico. En el caso de óxidos inorgánicos, los reactivos adecuados normalmente son aquellos capaces de reaccionar con grupos hidroxilo. La química de los compuestos de reacción, v.gr., aquellos capaces de crear Rio en un sustrato inorgánico, se conoce en la materia, v.gr., Smith, Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1994; March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, Cuarta Edición, 1992; Larock, Comprehensive Organic Transformations, John Wiley & Sons, Segunda Edición, 1999; Brook, Silicon in Organic, Organometallic, and Polymer Chemistry, John Wiley & Sons, 2000; Hermanson y otros, Immobilized Affinity Ligand Techniques, 1992; Weetall, "Covalent Coupling Methods for Inorganic Suppport Materials", en Methods in Enzymology, vol. XLIV, editado por K. Mosbach, págs. 134-148, 1976; Abbott, Patente de E.U.A. No. 4,298,500; y Arkles, Patente de E.U.A. No. 5,371,262; las descripciones de cada uno de estos documentos se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Por ejemplo, un soporte rígido que comprende grupos de Rio localizados en la superficie de la sustancia inorgánica pueden prepararse de un reactivo o agente de revestimiento tal como alcoxisilano, dialcoxisilano o trialcoxisilano que tiene un grupo precursor de R10. Por ejemplo, el acetiloximetilo puede ser el grupo precursor de hidroximetilo. El agente de revestimiento luego se deja reaccionar con la superficie de la sustancia inorgánica, seguido por hidrólisis del precursor para producir una sustancia inorgánica que tienen grupos de Rio unidos . La superficie del sustrato modificado además comprende una cantidad controlada de sitios reactivo para unirse selectivamente a uno o más ligandos (descritos adelante) . Los sitios reactivos pueden estar directamente sobre una superficie del sustrato inorgánico o pueden formarse vía los enlazadores unidos a la superficie del sustrato inorgánico. Los ligandos pueden unirse directamente a una superficie del sustrato inorgánico usando métodos conocidos en la técnica (v.gr., Hermanson y otros, Immobilized Affinity Ligand Techniques, Academic Press, 1992 y los otras referencias citadas antes con respecto a la unión con las porciones de Rio) . Por ejemplo, el ligando puede unirse vía una reacción con los grupos funcionales de la superficie (es decir, sitios reactivos), v.gr., hidroxilo, en el óxido inorgánico de partida. Alternativamente, el ligando puede unirse a la sustancia inorgánica vía un enlazador unido a la superficie del sustrato inorgánico (es decir, un sitio reactivo alternativo) . El enlazador puede ser un grupo químico bivalente, que se sustituye opcionalmente. El grupo químico bivalente sustituido opcionalmente puede comprender n grupos -R-, n siendo el número de los grupos -R-, n siendo un número entero de por lo menos 1, preferiblemente no mayor a 30, y más preferiblemente no mayor a 15. Más normalmente, el grupo químico bivalente es de aproximadamente a alrededor de 30 átomos, preferiblemente de aproximadamente 1 a alrededor de 20 átomos, más preferiblemente de aproximadamente 5 a alrededor de 15 átomos, en longitud medida desde el ligando a la sustancia inorgánica. El grupo químico -R- puede seleccionarse del grupo que consiste de -C(R?)H-, C(R2)=C(R3)~ y -C=C-, en donde R, R2 y R3 siendo independientemente H, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquinilo, cicloalquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquinilo, cicloalquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, aralquilo o aralquilo sustituido, dicho grupo -R- reemplazado opcionalmente con -O-, -S-, carbonilo, tiocarbonilo, -OC(O)-, -0(0)0-, ~C(0)0-, -SC(0)-, -C(0)S-, -OC(S)-, -C(S)0-, -C(S)S-, -SC(S)-, -N(R4)-, -N(R4)C(0)-, -C(0)N(R4)-, -C(R5)=N-, -N=C(R5)-, C(R5)=N0-, -ON=C(R5)-, -P-, -P(0H)0-, arileno, arileno sustituido, cicloalquileno, cicloalquileno sustituido, cicloalquenileno, cícloalquenileno sustituido, heterociclilo bivalente o heterociclilo sustituido bivalente, en donde R4 y R5 son cada uno independientemente H, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, cicloalquenilo, cicloalquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, cicloalquinilo, cícloalquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, aralquilo o aralquilo sustituido. El grupo "hidrocarbilo" es ilustrativo del grupo químico comprendiendo n grupos-R- y en donde n se describió antes, por lo menos un grupo -R- es -CH2- y los (n-1) grupos -R- son reemplazados opcionalmente con los grupos R mencionados antes, v.gr., -0-, -S-, etc. La química de los enlazadores de reacción de sustratos inorgánicos se describe bien se describen bien en la literatura (véase Hermanson y otros, Immobilized Affinity Ligand Techniques, 1992, y Weetall, Methods in Enzymology, vol. XLIV, págs. 134-148, 1976). La química particular para hacer reaccionar un enlazador y un sustrato inorgánico depende del sustrato inorgánico y enlazador empleado. Sí mismo, la química para hacer reaccionar el enlazador con un ligando depende del enlazador y el ligando empleado. Los ejemplos específicos de química de acoplamiento de enlazador/ligando se describen en la Solicitud de Patente de E.ü.A. No. 08¿9/929, 621, titulada "SOLID COMPOSITIONS FOR SELECTIVE ADSORPTION FROM COMPLEX MIXTURES" presentada el 14 de agosto de 2001, el asunto principal de la cual se incorpora aquí en su totalidad por referencia. Como se describió en la Solicitud de Patente de E.U.A. Serie No. 09/929,621, por ejemplo, un ligando puede acoplarse a un enlazador vía un grupo amino, sulfhidrilo, carbonilo o hidroxilo o un átomo de hidrógeno en el ligando y/o enlazador. En una modalidad ilustrativa de la presente invención, uno o más ligandos se acoplan a un sustrato inorgánico vía un enlazador que tiene por lo menos un grupo funcional aldehido sobre el mismo. El grupo funcional aldehido puede usarse para unirse a un ligando, un primer enlazador unido al sustrato inorgánico, o ambos. En una modalidad deseada de la presente invención, se acoplan uno o más ligandos a un sustrato inorgánico vía un primero o segundo enlazador, en donde el primer enlazado se une al sustrato inorgánico, y el segundo enlazador se une al primer enlazador. En una modalidad deseada de la presente invención, el primer enlazador comprende un siloxano aminofuncional, tal como aminopropiltrimetoxisilano, y el segundo enlazador comprende un dialdehído, tal como glutaraldehído. En esta modalidad, la porción de aldehido libre se usa para unir un ligando al sustrato inorgánico. Esta modalidad ilustrativa de la presente invención se describe más adelante en el Ejemplo 1 . Para formar soportes rígidos de la presente invención que tienen una superficie de sustrato modificada, en donde el soporte rígido comprende grupos enlazadores, puede variar el orden en que se crean los grupos enlazadores junto con la adición de grupos de Rio a la sustancia inorgánica. Los grupos de Rio pueden crearse en la superficie inorgánica después de unir aun enlazador, o los grupos de Rio pueden crearse antes de hacer reaccionar al sustrato inorgánico con un enlazador. Alternativamente, los precursores para Ro o el enlazador o ambos pueden crearse y/o unirse, con los precursores que se hacen reaccionar después para crear el Rio y/o enlazador final. La concentración de grupos enlazadores en la superficie inorgánica modificada puede variar. EN ciertas modalidades de la presente invención, el ligando comprende grandes moléculas de proteínas, que pueden "sombrear" grandes regiones de la superficie de soporte rígido no necesita ser relativamente alta. La concentración puede optimizarse basado en el tamaño del complejo de ligando/analito contemplado. Los factores que determinan las concentraciones de Rio y ligando incluyen, pero no están limitados a, la identidad de grupos de Rio y ligandos, la concentración de sitios reactivos en la sustancia inorgánica, la concentración de grupos enlazadores y la identidad del analito. En general, la concentración de Rio puede estar en la escala de aproximadamente 1 a alrededor de 10 grupos por nanómetro cuadrado (nm2) del área superficial del soporte rígido, basado en el área superficial medida por BET. En ciertas modalidades, la concentración de ligando depende principalmente del analito que se pretende recuperar cuando se usa la composición. Como se indicó antes, la concentración de ligando también puede depender de la concentración en la escala de 0.04 a alrededor de 4 grupos por nanómetro cuadrado. Además, un ligando dado no siempre se une a un enlazador en una estequiometría de uno a uno. En ciertas modalidades, v.gr., cuando el ligando se prepara de una gran molécula de proteína, el ligando puede unirse por varios grupos enlazadores. En otras modalidades que emplean ligandos más pequeños, se utilizan menos cantidades estequiométricas de ligando y cualquier grupo enlazador sin reaccionar se "tapa" para evitar la interferencia cuando la invención se usa para una separación. La cantidad de Rio y ligando o enlazador opcional también se puede establecer en términos de cuántos grupos funcionales en la sustancia inorgánica de partida se hacen reaccionar o se "cubren" por () el grupo de Rio y (ii) ligando y/o enlazadores opcionales. Por ejemplo, de aproximadamente 50% a alrededor de 99% de los sitios reactivos, tales como grupos hidroxi superficiales, en el sustrato inorgánico pueden cubrirse con porciones superficiales de Rio y de aproximadamente 50% a alrededor de 1% de los sitios reactivos se pueden cubrir con el ligando y/o enlazador opcional. En ciertas modalidades de la presente invención, de aproximadamente 70% a alrededor de 95% de los sitios reactivo en la superficie del sustrato inorgánico se cubren con porciones superficiales de Rio y de aproximadamente 30% a alrededor de 5% de los sitios reactivos se cubren con el ligando y/o enlazador opcional. c . Ligandos Los materiales de soporte rígido de la presente invención comprenden además uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico descrito ante. Uno o más ligandos pueden unirse directamente a sitios reactivos en el sustrato inorgánico u opcionalmente vía un enlazador unido al sustrato inorgánico como se describió antes. El ligando puede ser cualquier molécula o fragmento de molécula capas de unirse a otra porción o analito basado en molécula, v.gr., unión a través de interacción hidrofóbica, unión covalente o interacción Colúmbica. Dichos ligandos son bien conocidos por los expertos en la industria de separaciones. Los ligandos normalmente usados en la industria de bioseparaciones incluyen, pero no están limitados a, biotina, avidina, estreptavidina, proteína natural o no natural, péptido, antígeno y ácido nucleico. En a presente invención, el ligando preferiblemente es un receptor o anticuerpo. Los ligandos adecuados para usarse en la presente invención incluyen cualquier ligando que se une selectivamente a un analito dado. Ejemplos no limitantes de ligandos adecuados para usarse en la presente invención incluyen, pero no están limitados a, anti-aflatoxina Bl monoclonal, anticuerpos anti-aflatoxina Gl monoclonales, anticuerpos anti-aflatoxina Ql monoclonales, anticuerpos anti-aflatoxina B2 monoclonales, anticuerpos anti-aflatoxina G2 monoclonales, anticuerpos anti-Bisfenol A monoclonales, anticuerpos anti-ácido 2, 4-diclorofenoxiacético monoclonales, anticuerpos anti-ácido 2, , 5-triclorofenoxiacético monoclonales, anticuerpos anti-ácido 4-cloro-2-metilacético monoclonales, anticuerpos anti-ácido 4- (2, -diclorofenoxi) butírico monoclonales, anticuerpos anti-esterona monoclonales, anticuerpos anti-17-ß-estradiol monoclonales, anticuerpos anti-17-a-etinilestradiol monoclonales, anticuerpos anti-lactoferrina monoclonales, anticuerpos anti-testosterona monoclonales, anticuerpos anti-nortestosterona monoclonales, anticuerpos herbicidas anti-fenilurea monoclonales (v.gr., anticuerpos monoclonales de metobromurona, cinosulfurona, triasulfurona y/o prosulfurona) , anticuerpos anti-vinclozolina monoclonales, anticuerpos de anti-ácido fólico monoclonales, anticuerpos anti-vitamina B?2 (cianocobalamina) monoclonales, anticuerpos pesticidas anti-organofosfóricos monoclonales (v.gr., anticuerpos monoclonales de fenitrotiona, clorpirifos y/o pirimifos), anticuerpos anti-catecolamina (v.gr., anticuerpos monoclonales de adrenalina, noradrenalina y/o dopamina) , receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. Como se muestra en la siguiente Tabla 1, se puede usar una variedad de ligandos para capturar un analito dado.

Tabla 1. Ligandos Ilustrativos y Analitos que serán Detectados Los ligandos ilustrativos anteriores están comercialmente disponibles de un número de fuentes. Los ligandos comercialmente disponibles adecuados para usarse en la presente invención incluyen pero no están limitados a, ligandos mostrados en la Tabla 2 siguiente. Tabla 2. Ligandos Ilustrativos Comercialmente Disponibles En una modalidad deseada de la presente invención, el ligando comprende un anticuerpo capaz de unir selectivamente una micotoxina de una mezcla compleja. En esta modalidad, el ligando deseable comprende un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, o una combinación de los mismos. Además, en esta modalidad, las mezclas complejas pueden incluir, pero no están limitadas a, nueces y productos de nueces, cereales, fruta seca, hierbas, especias, café, cacao, coco, alimento animal, aceite vegetal, cerveza, agua, fluidos biológicos, etc. En una modalidad adicional deseada de la presente invención, el ligando comprende un anticuerpo capaz de unir selectivamente el ácido fólico, vitamina B12 (cianocobalamina), o ambos de una mezcla compleja. En esta modalidad, el ligando comprende deseablemente un anticuerpo anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vítamina Bi2 monoclonal (cianocobalamina) , o una combinación de los mismos. Además, en esta modalidad, las mezclas complejas pueden incluir, pero no está limitado a, muestras de alimentos, (v.gr., fórmula infantil, alimento de mascotas, bebidas deportivas, y tabletas de vitaminas) , muestras biológicas (v.gr., tejido animal, muestras biológicas, etc.).

En aún una modalidad adicional deseada de la presente invención, el ligando comprende el receptor de estrógeno nativo, el receptor de estrógeno recombinante o cualquier derivado del mismo, una proteína recombinante y/o cualquier otro ligando imitando la parte activa biológica del receptor capaz de unirse selectivamente a uno o más interruptores endocrinos de una mezcla compleja. El término "interruptores endocrinos" se usa para identificar una clase de compuestos que se sospecha que interfieren con el sistema endocrino de seres humanos y vida salvaje. "Interruptores endocrinos" (también llamados "xeno-estrógenos") alteran el balance hormonal y pueden tener efectos dañinos en seres humanos, animales y su descendencia. Los interruptores endocrinos ilustrativos conocidos incluyen, pero no está limitados a, Bisfenol A, estrona, 17- -estradiol, 17-ß-estradiol, 17- -etinilestradiol, alquilfenilos, dietilesilbestrol, metoxicloro, zearalenona, genisteína, o,p'-DDT, p,p'-DDT y ftalato de butilbencilo. Sin embargo, se piensa que hay muchos interruptores endocrinos desconocidos que interfieren potencialmente con las funciones de sistema endocrinos normales de seres humanos y vida salvaje. Por lo tanto, esta modalidad de la presente invención puede ser útil para identificar uno o más interruptores endocrinos conocidos o desconocidos en una mezcla compleja. En esta modalidad, las mezclas complejas pueden incluir, pero no están limitadas a, fluidos biológicos humanos o bovinos (tales como suero y orina) , agua corriente, agua subterránea, agua de procesos, muestras ambientales como aguas de tierra, lodo, superficial en general y aguas superficiales conteniendo contaminación farmacéutica posible en articular, formulaciones químicas industriales, alimentos contaminado debido a fuga de químicos de materiales de empaque y materiales de empaque. En esta modalidad, el ligando comprende convenientemente un receptor de estrógenos. El ligando receptor de estrógenos extrae compuestos que tienen actividad estrogénica de mezclas complejas, mientras que esencialmente no tienen afinidad para compuestos en la mezcla que no tienen actividad estrogénica. Como se usa en la presente, el término "compuesto (s) que tiene (n) actividad estrogénica" se refiere a compuestos que se definen como interruptores endocrinos (v.gr., un agente exógeno que interfiere con la producción, liberación, transporte, metabolismo, unión, acción o eliminación de hormonas naturales en el cuerpo responsable del mantenimiento de homeostasís y la regulación de procesos de desarrollo, Kavlock y otros, "Research need for the risk assessment of heal th and environ ental effects of endocrine dísruptors: A report of the U. S. EPA-sponsored workshop". Environ, Health Perspect. 104 Suppl 4:715740 (1996)) y descrita en una Endocrine Disruptor Knowledge Base (EDKB) accesible de un sitio en la red pública de AAF (FDA por sus siglas en inglés): http: //edkb. fda . gov. Los ligandos receptores de estrógenos adecuados para usarse en la presente invención incluyen, el receptor de estrógenos humano nativo, un receptor de estrógenos humano (REh) recombinante o derivados de los mismos, una proteína que imita la parte activa biológica del receptor de estrógenos o derivados de los mismos o cualquier ligando, el cual reconoce selectivamente compuestos en su actividad biológica como interruptor endocrino. Convenientemente, el ligando receptor de estrógenos comprende un receptor de estrógenos humano (REh) recombinante. En aún una modalidad adicional deseada de la presente invención, el ligando comprende un anticuerpo capaz de unirse selectivamente a una o más hormonas esteroidales de una mezcla compleja. Las hormonas esteroidales incluyen, pero no están limitadas a, estradiol, estrona, etinilestradiol, testosterona y nortestosterona. En esta modalidad, las mezclas complejas pueden incluir, pero no estar limitadas a, agua corriente, agua subterránea, aguas de procesos, muestras ambientales como aguas en tierra, lodo y superficiales, en general, y aguas superficiales que contienen posible contaminación farmacéutica, en particular, formulaciones farmacéuticas, fluidos biológicos de humanos y animales (tales como suero y orina) , y otras muestras biológicas (v.gr., tejido animal, muestras biológicas, etc.).

Las columnas de afinidad de la presente invención tienen convenientemente una capacidad de captura de analitos. La capacidad de captura de analitos deseada para una columna de afinidad dada puede variar dependiendo de cierto número de factores incluyendo, pero no limitado a, el contenido y tipo de analito, el tamaño de muestra de prueba disponible, sensibilidad y limites de detección del dispositivo de medición, etc. Normalmente, las columnas de afinidad de la presente invención son capaces de capturar hasta aproximadamente 500 picomoles (pMol) de un analito dado. Convenientemente, las columnas de afinidad son capaces de capturar de aproximadamente 50 pMol a alrededor de 1000 pMol de un analito dado. 3. Solución Reguladora de Ph Las columnas de afinidad de la presente invención además pueden comprender una solución reguladora, tal como la primera solución reguladora 31 ilustrativa mostrada en la Fig. 2. Las primeras soluciones reguladoras adecuadas proveen un medio protector o reactivo para el material de soporte rígido dentro de la columna de afinidad durante el almacenamiento y/o el uso de la columna de afinidad. Las primeras soluciones reguladoras de pH adecuadas para usarse en la presente invención incluyen, pero no están limitadas a, solución reguladora de solución salina regulada con fosfato (SRF) o una solución reguladora de SRF que contiene aproximadamente 0.02% en peso de azida de sodio. Las primeras soluciones reguladoras específicas incluye, pero no están limitadas a, una solución reguladora de fosfato 0.01 M + NaCl 0.15 M que tiene un pH de aproximadamente 7.0. Normalmente, la primera solución reguladora tiene un pH que varía de aproximadamente 6.0 a alrededor de 8.0. La primera solución reguladora convenientemente tiene un pH que varía de aproximadamente 6.8 a alrededor de 7.4, más convenientemente, un pH que varía de aproximadamente 7.0 a alrededor de 7.4 y aún más convenientemente un pH de aproximadamente 7.0. Convenientemente, la primera solución reguladora de pH comprende solución reguladora de SRF que contiene aproximadamente 0.02% en peso de azida de sodio durante el almacenamiento de la columna de afinidad conteniendo un material de soporte rígido como se describió antes. Las columnas de afinidad convenientemente se almacenan a una temperatura que varía de aproximadamente +4°C a alrededor de +8°C en la solución reguladora de SRF. Además, la primera solución reguladora comprende convenientemente solución reguladora de SRF que tiene un pH de aproximadamente 7.0 durante el uso de la columna de afinidad conteniendo un material de soporte rígido. 3. Columna Analí tica El aparato de la presente invención además puede comprender una o más columnas analíticas tales como la columna analítica ilustrativa 12 mostrada en la Figura 1. Cada columna analítica se puede usar para capturar uno o más analitos presentes en una muestra de eluyente. Cualquier columna analítica comercialmente disponible puede usarse en la presente invención en combinación con cualquiera de los componentes de un aparato descritos antes. Las columnas analíticas comercialmente disponibles incluyen, pero no están limitadas a, columnas analíticas disponibles de Grace GmbH & Co. KG (Worms, Alemania) bajo las designaciones comerciales GÉNESIS® y DENALI™ tal como GÉNESIS© C8 e/c teniendo una variedad de tamaños incluyendo 5 µm, 4.6 x 250 mm; y 5 µm, 4.6 x 150 mm; GÉNESIS© C18 teniendo una variedad de tamaños incluyendo 5 µm, 4.6 x 150 mm; y DENALI™ C18 teniendo una variedad de tamaños incluyendo 5 µm, 4.6 x 150 mm; las columnas analíticas disponibles de Grom Analytik + CLAP GmbH (Rottenburg-Hailfingen, Alemania) bajo la designación comercial GrOAM-Sil, tal como columnas de tipo ODS de GOR-Sil teniendo una variedad de tamaños incluyendo 5 µm, 4.6 x 150 mm; y columnas de intercambio de cationes disponibles de Amersham Biosciences (Uppsala, Suecia) bajo la designación comercial Mono S, tal como Mono S hr5/5 teniendo una variedad de tamaños incluyendo 10 µm, 1 ml . En una modalidad deseada de la presente invención, una columna analítica se conecta a una columna de afinidad de manera que la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica. En esta modalidad, es conveniente que la estructura tubular de la columna analítica esté hecha de materiales y tenga una construcción de pared suficiente para soportar presión relativamente alta dentro de la estructura tubular (es decir, hasta aproximadamente 400 bar, más convenientemente, de aproximadamente 200 bar a alrededor de 300 bar) . Los materiales de estructura tubular adecuados incluyen los materiales descritos antes para formar una estructura tubular de una columna de afinidad de a presente invención. Normalmente, la columna analítica forma parte de un dispositivo de cromatografía de líquidos, tal como un dispositivo de cromatografía de líquidos de alta presión (CLAP) . El equipo de cromatografía de líquidos adecuada para usarse en la presente invención incluye, pero no está limitada a, equipo para cromatografía de líquidos comercialmente disponible de compañías tales como Shimadzu (Columbia, MND) , Agilent Technologies (Wilmington, DE) , Applied Biosystems (Fostercity, CA) , Dionex Corporation (Sunnyvale, CA) , Varan Inc. (Palo Alto, CA) y Waters Inc. (Milford, MA) . C. Detector El aparato de la presente invención además puede comprender uno o más detectores tal como del detector 13 ilustrativo mostrado en la Fíg. 1. Los detectores se pueden usar para detectar y cuantificar analitos presentes en una muestra de fase móvil. Cualquier detector comercialmente disponible puede usarse en la presente invención en combinación con cualquiera de los componentes de un aparato descritos antes. Los detectores comercialmente disponibles adecuados incluyen, pero no están limitados a, detectores UV-VIS disponibles de Shimadzu, Inc. (columna, MD) , tal como el Detector de UV/Vis Serie SPD10, u otros tipos de detectores tales como, pero no limitados a, detectores de fluorescencia, detectores de índice refractor, detectores selectivos de masa y detectores electroquímicos, que están comercialmente disponibles de compañías tales como, pero no limitado a, Agilent Technologies (Wílmington, DE) , Applied Biosystems (Fostercity, CA) , Dionex Corporation (Sunnyvale, CA) , Varian Inc. (Palo Alto, CA) , y Waters Inc. (Milford, MA) .

Convenientemente, el detector comprende un detector de UV-VIS que opera a una longitud de onda que varía de aproximadamente 230 manómetros (nm) a alrededor de 400 nm. Por ejemplo, las siguientes longitudes de onda ilustrativas son útiles en la presente invención: UF-VIS a 230 nm; UV-VIS a 240 nm (vinclozolina) ; y UV-VIS a 361 nm (vitamina 12 ) . D. Acoplamiento El aparato de la presente invención además puede comprender un acoplamiento entre la columna de afinidad y una o más columnas analíticas. Cualquier material de acoplamiento pede usarse en la presente invención que se utiliza convencionalmente en proceso de cromatografía. Normalmente, el acoplamiento comprende conexiones de volumen muerto bajas de tubería de plástico, metal o vidrio. En modalidad de la presente invención en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, el acoplamiento se hace de materiales y tiene una construcción de pared suficiente para soportar presión relativamente alta dentro del acoplamiento (es decir, hasta aproximadamente 400 bar, más convenientemente de aproximadamente 200 bar a alrededor de 300 bar) . E . Bomba s El aparato de la presente invención además puede comprender una o más bombas tales como la primera bomba 14 y la segunda bomba 15 ilustrativas mostradas en la Fig. 1. Cada bomba provee flujo de fluido a través de los componentes de un aparato descritos antes. Cualquier bomba comercialmente disponible se puede usar en la presente invención en combinación con cualquiera los componentes de un aparato descritos antes. Las bombas adecuadas comercialmente disponibles incluyen, pero no están limitadas a, bombas disponibles de Shimadzu (Columbia, MD) , Agilent Technologies (Wilmington, DE) , Applied Biosystems (Fostercity, CA) , Dionex Corporation (Sunnyvale, CA) , Varian Inc. (Palo Alto, CA) , y Waters Inc.

(Milford, MA) . Convenientemente, las bombas comprenden bombas de gradiente de presión bajo o alto programable que tienen por o menos tres canales comercialmente disponibles de Agilent Technologies (Wilmington, DE) bajo la designación comercial Serie 1100, tal como la bomba cuaternaria de modelo 1100. En una modalidad deseada de la presente invención, se utiliza una primera bomba para proveer flujo de fluido de la primera solución reguladora de pH y una muestra de prueba a través de la columna de afinidad, mientras que se usa una segunda bomba para proveer flujo de fluido de una solución reguladora de pH de elusión y una muestra de eluyente a través de la columna analítica. F. Válvulas El aparato de la presente invención además puede comprender una o más válvulas tales como la primera válvula 16 y la segunda válvula 17 ilustrativas mostradas en la Figura 1. Cada válvula controla el flujo de fluido a través de los componentes de un aparato descritos antes Cualquier válvula comercialmente disponible puede usarse en la presente invención en combinación con cualquiera de los componentes de un aparato descritos antes.

Las válvulas comercialmente disponibles adecuadas incluyen, pero no están limitadas a, válvulas disponibles de VICI Valco Instruments Co . , Inc. (Houston, TX) o VWR International Ltd. (Dorset, RU) . Convenientemente, los valores comprenden válvulas de seis vías de eos posiciones programables (denominadas en la presente como válvulas de seis vías programables) comercialmente disponibles de VWR International Ltd. (Dorset, RU) bajo la designación comercial RHEODYNE, tal como el inyector de muestras modelo 7725. En una modalidad deseada de la presente invención, se usa una primera válvula programable de seis vías para controlar el flujo de fluidos de la primera solución reguladora y/o una muestra de prueba a través de la columna de afinidad, mientras que se utiliza una segunda válvula de seis vías programable para controlar el flujo de fluido de una solución reguladora de elusión y una muestra de eluyente a través de la columna analítica. II. Métodos para formar Componentes de un Aparato . La presente invención además se dirige a métodos para formar los componentes de un aparato descritos antes. Los materiales de soporte rígido, por ejemplo, pueden hacerse como se describió antes y en los siguientes ejemplos. En general, el método para formar un material de soporte rígido de la presente invención comprende los siguientes pasos: (1) modificar una superficie externa de un sustrato inorgánico con el fin de reducir la unión no selectiva y/o adsorción de materiales sin analitos en el sustrato inorgánico; y (2) unir selectivamente uno o más ligandos a la superficie del sustrato inorgánico. Como se describió antes, el paso de modificar la superficie de sustrato inorgánico comprende (i) unir grupos R relativamente inertes a por lo menos una porción de la superficie del sustrato inorgánico, y opcionalmente (ii) unir uno o más enlazadoras a por lo menos una porción de la superficie del sustrato inorgánico. El paso de unir grupos Re relativamente inertes a por lo menos una porción de la superficie del sustrato inorgánico puede tomar lugar antes o después del paso opcional de unir uno o más enlazadores a por lo menos una porción de la superficie del sustrato inorgánico. El paso de unir selectivamente uno o más ligandos a la superficie del sustrato inorgánico puede comprender (i) unir una cantidad controlada de uno o más ligandos directamente a sitios reactivos sobre la superficie de sustrato inorgánico, o (ii) unir una cantidad controlada de uno o más ligandos a uno o más enlazadores que se extienden de la superficie de sustrato inorgánico. Usando una cantidad controlada de uno o más ligandos se une directamente a sitios reactivos en la superficie del sustrato inorgánico, o (ii) unir una cantidad controlada de uno o más ligandos a uno o más enlazadores extendiéndose de la superficie de sustrato inorgánico. Cuando una cantidad controlada de uno o más ligandos se une directamente a sitios reactivos en la superficie del sustrato inorgánico, el paso de unir selectivamente uno o más ligandos a la superficie del sustrato inorgánico puede ocurrir antes o después del paso de unir grupos R relativamente inertes a por lo menos una porción de la superficie del sustrato inorgánico. En una modalidad deseada de la presente invención, el método para formar un material de soporte rígido comprende los siguientes pasos: (1) unir grupos R a por lo menos una primera porción de la superficie del sustrato inorgánico, en donde los grupos R tienen una reactividad menor que cualquier grupo funcional en la superficie del sustrato inorgánico antes del paso de unión; (2) unir uno o más enlazadores a por lo menos una segunda porción de al superficie del sustrato inorgánico; y (3) unir selectivamente uno o más ligandos a uno o más enlazadores. Los pasos (1) y (2) pueden conducirse en cualquier orden. Convenientemente, uno o más enlazadores comprenden un siloxano amino-sustituido en combinación con un dialdehído. Más convenientemente, uno o más enlazadores comprenden aminopropiltrimetoxisilano en combinación con glutaraldehído . Las columnas de afinidad de la presente invención pueden prepararse usando los siguientes pasos: (1) sellar un primer extremo de una estructura tubular; (2) llenar por lo menos parcialmente una cavidad de columna de la estructura tubular con un material de soporte rígido, tal como cualquiera de los materiales de soporte rígidos descritos antes; (3) llenar por lo menos parcialmente la cavidad de columna de la estructura tubular con una primera solución reguladora para encapsular el material de soporte rígido, y, opcionalmente; (4) sellar el extremo opuesto (es decir, el segundo extremo) de la estructura tubular. La columna de afinidad puede almacenarse para uso futuro o puede conectarse subsecuentemente a un aparato que comprende uno o todos los componentes del aparato descritos antes. III . Métodos para Analizar Muestras La presente invención además se dirige a métodos para analizar muestras de prueba que contienen potencialmente uno o más analitos de interés. En una modalidad ilustrativa de la presente invención, el método comprende el paso de (a) introducir la muestra de prueba en una columna de afinidad que contiene un soporte rígido, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas de óxido metálico en donde cada partícula comprende (i) un sustrato de óxido metálico; (ii) una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales sin analitos (es decir, unión no específica de materiales diferentes al analito blanco) y materiales de analitos específicos para ligandos (es decir, unión no específica del analito blanco a sitios reactivos diferentes a los sitios reactivos provistos por uno o más ligandos) al sustrato inorgánico; y (iii) uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico. Los métodos para analizar muestras de prueba de la presente invención pueden usar una variedad de ligandos incluyendo, pero no limitado a, un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo anti-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2, 4-diclorofenoxiacético, un anticuerpo anti-ácido 2, 4 , 5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) butírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo anti-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17-a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina B?2 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-pirimifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. El método para analizar una muestra de prueba además puede comprender los pasos de (b) permitir que la muestra de prueba entre en contacto con el soporte rígido y ligandos sobre la misma; (c) enjuagar el soporte rígido para lavar cualquier componente de muestra de prueba que no se una a los ligandos; (d) introducir una solución eluyente en la columna de afinidad de manera que la solución de eluyente entre en contacto con uno o más analitos unidos a los ligandos en el soporte rígido; (e) permitir que la solución de eluyente permanezca en contacto con el soporte rígido durante un tiempo de manera que forme una muestra de eluyente que contenga potencialmente uno o más analitos; y (f) analizar contenido de la columna analítica para determinar la presencia de uno o más analitos en la muestra de prueba. Las Figs. 3 - 6 describen varios pasos en un método ilustrativo para analizar una muestra de prueba usando uno o más de los componentes de un aparato descritos antes. Como se muestra en las Figs. 3-6, el aparato 40 ilustrativo comprende la columna de afinidad 41, columna analítica 42, detector 43, primera bomba 44, segunda bomba 45, primera válvula 46, segunda válvula 47, bucle de muestras de prueba 48, entrada de muestras de prueba 50, primera entrada de solución reguladora 51, entrada de solución reguladora de elusión 52, primera salida de desechos 53, y salida de desechos de columna de afinidad 54. En esta modalidad de la presente invención, la columna de afinidad 41 y la columna analítica 42 están en comunicación de fluido entre ellas. Además, el bucle de muestras de prueba 48 se utiliza para almacenar temporalmente una muestra de prueba antes de juntar a la muestra de prueba con una primera solución reguladora que fluye a través de la columna de afinidad 41. La Fig. 3 exhibe el aparato 40 ilustrativo durante un paso de carga de muestra de prueba. Una muestra de prueba se carga en la entrada de muestra de prueba 50. Como se muestra en la Fig. 3, durante este paso, la primera válvula de seis vías programable 46 está en la "Posición A" y la segunda válvula de seis vías programable 47 está en la "Posición B", lo cual permite que (i) una muestra de prueba fluya de la entrada de muestra de prueba 50 al bucle de muestras de prueba 48, y (ii) una primera solución reguladora para fluir a través de la columna de afinidad 41. Las muestras de prueba posibles pueden contener cualquiera de los analitos mencionados antes en una mezcla compleja. Las primeras soluciones reguladoras adecuadas que pueden usarse en el aparato ilustrativo 40 incluyen cualquiera de las primeras soluciones reguladoras descritas antes. En un paso separado, la muestra de prueba fluye a través de la columna de afinidad 41 como se muestra en la Fig. 4. Durante este paso, la primera válvula de seis vías programable 46 está en una "Posición B" y la segunda válvula de seis vías programable 47 está en la "Posición A", que permite que (i) la muestra de prueba con la primera solución reguladora fluya desde el bucle de la muestra de prueba 48 hacia y a través de la columna de afinidad 41, (ii) el fluido fluya desde la entrada de muestra de prueba 50 para proceder a la primera salida de desechos 53, y (iii) una solución reguladora de elusión fluya desde la entrada de solución reguladora de elusión 52 a través de la columna analítica 42, pero no a través de la columna de afinidad 41. Una variedad de soluciones reguladoras de elusión se pueden usar durante este paso. Las soluciones reguladoras de elusión liberan efectivamente los analitos unidos al material de soporte rígido a medida que la solución reguladora de elusión viaja a través de la columna de afinidad 41. Las soluciones reguladoras de elusión adecuadas para usarse en la presente invención incluyen, pero no están limitadas a, glicina 0.1 M pH 2.5, NaCl 5 M, fosfato 10 mM, pH 7.2, MgCl2 3.5 M, fosfato 10 mM, pH 7.2, urea 2 a 8 M, guanidina HCl 2 M, tiocianato 3 a 5 M, 10% dioxano, 50% etilenglicol, soluciones acuosas que contienen acetonitrilo, y combinaciones de los mismos. Las soluciones reguladoras de elusión específicas incluye, pero no están limitadas a, una solución reguladora de elusión con 35% v/v de acetonitrilo/ 65% v/v de agua (v.gr., para Bisfenol A, 17- -estaradiol, 17a-etinilestradiol, testosterona y nortestosterona) ; solución reguladora de elusión de 10% v/v acetonitrilo/90% v/v agua (v.gr., para un herbicida de ácido clorofenoxiacético) ; una solución reguladora de HCl 0.01 M + NaCl 0.15 M (v.gr., para lactoferrina y vitamina B?2) ; y una solución reguladora de elusión de 10% v/v metanol en HCl 0.01M + NaCl 0.15 M (v.gr., para vinclozolina) . En un paso adicional separado mostrado en la Fig. 5, la solución reguladora de elusión fluye a través de la columna de afinidad 41 y columna analítica 42. Durante este paso, la primera válvula de seis vías programable 46 está en la "Posición B" y la segunda válvula de seis vías programable 47 está en la "Posición B", lo cual permite que (i) el fluido fluya desde la primera entrada de la solución reguladora 51 a la salida de desechos 54 de la columna de afinidad, (ii) el fluido fluya desde la entrada de muestra de prueba 50 a la primera salida de desechos 53, y (iii) la solución reguladora de elusión fluya desde la entrada de solución reguladora de elusión 52 a través de la columna de afinidad 41 y luego directamente en la columna analítica 42. En otro paso separado mostrado en la Fig. 6, una solución en fase móvil fluye a través de la columna analítica 42. Durante este paso, la primera válvula de seis vías programable 46 está en la "Posición B" y la segunda válvula de seis vías programable 47 está en la "Posición A", que permite que (i) el fluido fluya desde la primera entrada de solución reguladora 51 a través de la columna de afinidad 41 a la salida de desechos 54 de la columna de afinidad, (ii) el fluido fluya desde la entrada de muestras de prueba 50 a la primera salida de desechos 53, y (iii) la solución en fase móvil fluya desde la entrada de solución reguladora de elusión 52 a través de la columna analítica 42 al detector 43. Una variedad de soluciones de fase móvil pueden usarse en la presente invención. Las soluciones de fase móvil adecuadas liberan efectivamente analitos unidos a las estructuras de soporte en la columna analítica 42 a medida que la solución en fase móvil viaja a través de la columna analítica 42. Las soluciones de fase móvil adecuadas para usarse en la presente invención incluyen, pero no están limitada a, soluciones acuosas que contienen metanol o acetonitrilo, una solución de HCl, una solución de metanol/HCl, una solución de fosfato/NaCl, una solución de acetato de sodio, una solución de metanol/acetato de sodio, una solución de acetonitrilo/HCl, y una solución de metanol/HCl/NaCl, y combinaciones de las mismas. Las soluciones en fase móvil específicas adecuadas para usarse en la presente invención incluyen, pero no están limitadas a, una solución en fase móvil de 345% v/v acetonitrilo/55% v/v agua (v.gr., para analito de Bisfenol A); solución en fase móvil de HCl 0.01 M (v.gr., para un analito herbicida de ácido clorofenoxiacético) ; la solución en fase móvil (v.gr., para un analíto herbicida de ácido clorofenoxiacético) ; una solución de 70% v/v acetonitrilo/30%v/v agua (v.gr., para 17-a-estradiol, 17- o¡-etinilestradiol, testosterona, y nortestosterona) ; una solución en fase móvil de fosfato 0.10 M + NaCl 1.5 M (pH 7.0) (v.gr., para lactoferrina) ; una solución en fase móvil de acetato de sodio 50 mM (pH 6.0) (v.gr., para herbicida de fenilurea) ; una solución en fase móvil de 55% v/v metanol en acetato de sodio 50 mM (pH 6.0) (v.gr., para herbicida de fenilurea) ; una solución en fase móvil de 64 %v/v de acetonitrilo en HCl 0.01 M (v.gr., para vinclozolina) ; y una solución en fase móvil de 30% v/v metanol/70% v/v de HCl 0.01 M + NaCl 0.15 M (v.gr., para vitamina Bi2) . En una modalidad deseada de la presente invención, el método para analizar una muestra comprende un método para analizar una muestra de eluyente, en donde el método comprende los paso de transferir la muestre de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analiza los contenidos de la columna analítica para determinar una presencia de uno o más analitos en la muestra de eluyente. Por ejemplo, el método para analizar una muestra de eluyente puede usarse para analizar una muestra conteniendo potencialmente uno o más analitos seleccionados del grupo que consiste de aflatoxina Bl, aflatoxina Gl, aflatoxina Ql, aflatoxina B2, aflatoxina G2, Bisfenol A, ácido 2, 4-diclorofenoxiacético, ácido 2,4,5-triclorofenoxiacético, ácido 4-cloro-2-metilacético, ácido 4- (2, -diclorofenoxi) butírico, estrona, 17-ß-estradiol, 17- a-etinilestradiol, lactoferrina, testosterona, nortestosterona, metobromurona, cinosulfurona, triasulfurona, prosulfurona, vinclozolina, ácido fólico, vitamina B?2 (cianocobalamina) , fenitrotiona, clorpirifos, pirimifos, adrenalina, noradrenalina, dopamina, un interruptor endocrino (v.gr., un compuesto que tiene actividad estrogénica) , y combinaciones de los mismos. En esta modalidad, el método para analizar una muestra de eluyente en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, el método además puede comprender uno o más de los siguientes pasos: (1) introducir una muestra de prueba en una columna de afinidad conteniendo un soporte rígido capaz de soportar una presión de columna de hasta aproximadamente 200 bar, en donde el soporte rígido tienen uno o más ligandos unidos al mismo, en donde uno o más ligandos son capaces de unirse selectivamente a uno o más analitos; (2) permitir que la muestra de prueba entre en contacto con el soporte rígido y los ligandos sobre la misma; (3) enjuagar el soporte rígido para lavar cualquier componente de muestra de prueba diferente a uno o más analitos; (4) introducir una solución de eluyente en la columna de afinidad de manera que la solución de eluyente entra en contacto con uno o más analitos unidos a los ligandos en el soporte rígido; y (5) permitir que la solución de eluyente permanezca en contacto con el soporte rígido durante un tiempo de manera que forme la muestra de eluyente. Normalmente, la solución de eluyente permanece en contacto con el soporte rígido durante un tiempo que varía de aproximadamente 5 minutos a alrededor de 15 minutos. En un método ilustrativo para analizar una muestra de eluyente, el método comprende un método para analizar una muestra de eluyente que contiene potencialmente una micotoxina. En este método ilustrativo, el método comprende los pasos de transferir la muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analiza el contenido de la columna analítica para determinar una presencia de por lo menos una micotoxína en la muestra de eluyente. La muestra de eluyente puede analizarse para la presencia de aflatoxina Bl, aflatoxina gl, aflatoxina Ql, aflatoxina B2, aflatoxina G2, o una combinación de los mismos. En un método adicional ilustrativo para analizar una muestra de eluyente, el método comprende un método para analizar una muestra de eluyente gue contiene potencialmente ácido fólico, vitamina Bi2 (cianocobalamina) , o una combinación de los mismos, en donde el método comprende los paso de transferir la muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analizar los contenidos de la columna analítica para determinar una presencia de ácido fólico, vitamina BX2 (cianocobalamina), o ambos en la muestra de eluyente. La presente invención además se dirige a métodos para analizar las muestras de prueba, en donde la muestra de prueba contiene potencialmente por lo menos un compuesto que tiene actividad estrogénica. En esta modalidad, el método comprende los pasos de introducir la muestra de prueba en una columna de afinidad conteniendo un soporte rígido que tiene uno o más ligandos unidos a la misma, en donde uno o más ligandos son capaces de unirse selectivamente en uno o más compuestos que tienen actividad estrogénica, tal como el receptor de estrógeno humano nativo, un receptor de estrógeno humano (REh) recombinante o derivados del mismo, una proteína recombinante que imita la parte activo biológica del receptor de estrógeno o derivado del mismo o cualquier ligando que reconoce selectivamente los compuestos en su actividad biológica como interruptor endocrino. En una modalidad deseada, uno o más ligandos comprende receptor de estrógeno humano (REh) recombinante. El método ilustrativo para analizar muestras de prueba que contienen potencialmente por lo menos un compuesto que tiene actividad estrogénica además puede comprender uno o más de los siguientes pasos: (1) permitir que la muestra de prueba entre en contacto con el soporte rígido y ligandos sobre la misma; (2) enjuagar el soporte rígido para lavar cualquier componente de neutra de prueba que no exhiba actividad estrogénica; (3) introducir una solución de eluyente en la columna de afinidad de manera que la solución de eluyente entre en contacto con uno o más compuestos que tienen actividad estrogénica unida a los ligandos en el soporte rígido; (4) permitir que la solución de eluyente permanezca en contacto con el soporte rígido durante un tiempo de manera que forma una muestra de eluyente que contiene los compuestos que tienen actividad estrogénica, y (5) analizar el contenido de la columna analítica para determinar una presencia de uno o más compuestos que tienen actividad estrogénica en la muestra de eluyente. En una variación deseada de esta modalidad, el soporte rígido es capaz de soportar una presión de columna de hasta aproximadamente 200 bar, y la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica. Las columnas de afinidad de la presente invención se pueden volver a usar. Por lo tanto, cualquiera de los métodos ilustrativos descritos además puede incluir uno o más de los siguientes pasos: (1) enjuagar la columna de afinidad con una primera solución reguladora; y (2) introducir una segunda muestra de prueba en la columna de afinidad. La presente invención se describió antes y se ilustra más delante a manera de ejemplo, que no se deberán interpretar en ninguna manera que imponga limitaciones sobre el alcance de la invención. Por el contrario, se deberá entender más claramente que se puede recurrir a otras varias modalidades, modificaciones y equivalencias de las mismas, que después de leer la presente descripción, puedan sugerirse a los expertos en la materia sin alejarse del espíritu de la presente invención y/o al alcance de las reivindicaciones anexas .

EJEMPLO 1 Preparación de un Soporte Rígido Que Comprende Anticuerpo Anti-Vi tamina B?2 Monoclonal Un soporte rígido ilustrativo se preparó de la siguiente manera. Una solución de 500 g de tolueno y 1.52 g de 3-aminopropiltrietoxisilano se agregaron a un matraz de fondo redondo de 1000 ml. Al matraz de fondo redondo se agregaron 100 g de sílice Grace Vydac teniendo un tamaño de poro promedio agrandado de 800 Á (tamaño de partícula promedio de aproximadamente 15 a alrededor de aproximadamente 20µ) que se calcinaron previamente durante 2 horas a 200°C. El matraz de fondo redondo se colocó en un manto de calentamiento y se conectó un condensador. El manto de calentamiento se conectó a la parte superior de un agitador orbital, el cual se operó a una velocidad de 115 rpm. N2 se pasó a través del matraz de fondo redondo y el condensador para remover aire guante toda la reacción.

El contenido del matraz de fondo redondo se calentó a ebullición (~110°C) durante 4 horas. La muestra se filtró y se lavó con 2 x 100 ml de tolueno, se secó a 115 °C y luego se calcinó durante 2 horas a 150 °C. La muestra resultante se marcó como Intermediario A. La concentración de los grupos de -C3H6NH2 en la sílice se calculó que era de 0.54 y se basó en el área superficial (BET) del soporte de sílice (43 m2/g) , contenido de carbono (LECO) del intermediario (0.41%). Véase ASTM D5373 (para carbón vegetal) y ASTM 5291. 400 ml de NaCl 1M se mezcló con el Intermediario A en un agitador y se agitó con un agitador magnético. El pH inicial fue de 4.79. Se agregó HCl 1M por goteo hasta que el pH alcanzó 2.0. El pH se mantuvo a 2.0 durante 15 minutos. La muestra luego se filtró y lavó con 5 x 100 ml de H20 DI, se secó a 115°C y luego se calcinó durante 2 horas a 200°C. Esta muestra se marcó como Intermediario B. 400 g de tolueno y 48.78 g de acetoximetiltrietoxisilano se mezclaron con el Intermediario B en un matraz de fondo redondo. El matraz de fondo redondo se colocó en un manto de calentamiento con un condensador conectado. El manto de calentamiento se conectó a la parte superior de un agitador orbital que opera a una velocidad de 115 rpm. Se pasó N2 a través del matraz de fondo redondo y el condensador para remover aire durante toda la reacción. La muestra se calentó a ebullición (~110°C) durante 24 horas, se filtró, se lavó con 3x100 ml de tolueno, se secó a 115°C y luego se calcinó durante 2 horas a 150 °C. Esta muestra se marcó como Intermediario C. En el siguiente paso de reacción, se agregaron 20 g del Intermediario C a 80 ml de ácido clorhídrico 01 M y se hirvió durante 4 horas. La sílice se filtró y se lavó 4 veces con 60 ml de agua desionizada. Esta muestra se marcó como Intermediario D. 20 g del Intermediario D y 300 ml de solución reguladora de acoplamiento (Na2P04 0.1 M + NaCl 0.15 M; pH = 7.0) se mezclaron en un agitador de 1000 ml y se agitaron durante 5 minutos. La muestra se filtró para formar una torta húmeda. Después, 57.53 g de 50% en peso de glutaraldehído y 2.89 g de NaCNBH3 se agregaron al agitador seguido por la adición de la torta de filtrado húmeda del Intermediario D. La muestra se agitó durante 4 horas, se filtró, se lavó con 400 ml de solución reguladora de acoplamiento y se volvió a formar como una lechada en 400 ml de solución reguladora de acoplamiento para obtener una nueva muestra, que se filtró, se lavó con 200 ml de solución reguladora de acoplamiento y se volvió a formar en lechada en 200 ml de solución reguladora de acoplamiento 2 veces más. La muestra que se volvió a lavar y formar en lechada se filtró y luego se lavó con 400 ml de solución reguladora de acoplamiento. Esta muestra se marcó como Intermediario E. 1.5 g de la solución reguladora de acoplamiento y 250 ml de anticuerpo anti-vitamina B?2 monoclonal (Producto No. V9505 comercialmente disponible de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) ) que tiene una concentración de próximamente 10 a 15 mg de anticuerpo por mililitro) se agregaron a un matraz de fondo redondo de 10 ml . 160 mg de NaCNBH3 y 50 mg de etanolamina se agregaron al matraz de fondo redondo de 10 ml y luego se mezcló en un agitador durante 4 horas. La muestra se filtró y se lavó 4 veces con 10 ml de solución reguladora de acoplamiento. El material de soporte rígido resultante se colocó en solución reguladora de SRF conteniendo azida de sodio 0.02% y se almacenó a 4°C.

EJEMPLO 2 Preparación de una Col umna de afinidad para Detectar Vitamina Bi? Se preparó una columna de afinidad ilustrativa empacando una columna de afinidad I.D. de 4.6 x 50 mm con el material de soporte rígido producido en el Ejemplo 1. La columna empacada después se rellenó con una solución reguladora de fosfato (pH 7.4) conteniendo 0.02% en peso de azida de sodio. La columna de afinidad ilustrativa resultante se almacenó a una temperatura de 4°C.

EJEMPLO 3 Análisis de Composi ción que Contiene Vi tamina B?2 La columna de afinidad ilustrativa del Ejemplo 2 se acopló a un aparato similar al aparato ilustrativo 40 como se muestra en la Figura 3. El aparato comprendió un Cromatógrafo de Líquidos de Alto Rendimiento (CLAP) (modelo serie 1100, Agilent Technologies, Wilmington, DE) . Se realizó la inyección con un inyector de muestras modelo RHEODYNE 77251 (VSWR International Ltd., Dorset, RU) equipado con un bucle de muestras de 200 µl. Por medio un inyector de muestras modelo RHEODYNE 7725, fue posible para intercambiar la columna de afinidad de una configuración en línea (es decir, la columna de afinidad estuvo en comunicación de fluido con la CLAP) a una configuración fuera de línea con la CLAP (es decir, la columna de afinidad no estuvo en comunicación de fluido con la CLAP) . Por medio de una bomba de líquidos de alta presión modelo LC10AD (Shimadzu, Columbia, MD) , la muestra se transfirió del inyector de muestra a través de la columna de afinidad. Los picos se detectaron con un detector de UV-VIS modelo 1100 (Agilent Technologies, Wilmington, DE) a 361 nm. Una solución reguladora de unión que comprende (0.01 M de Na2P04 + NaCl 0.15 M; pH 7.0) se bombeó a través de la columna de afinidad para equilibrar la columna. Se usó un total de 10 volúmenes de columna de solución reguladora de unión. Una muestra de prueba que contiene vitamina B? se preparó de la siguiente manera. Un material sólido que contiene aproximadamente 1 mg/g de vitamina B?2 y que pesa 0.1 g de la muestra de prueba se disolvió en 100 ml de la solución reguladora de unión para formar una mezcla. La mezcla se filtró usando un filtro de 0.22 µm. Antes de cargar la muestra de prueba, se siguieron los siguientes pasos: (1) La CLAP-FI se programó como se especifica adelante; (2) todas las soluciones reguladoras se desgasificaron y filtraron usando un filtro de 0.45 µm; (3) la tubería de la bomba se rellenó con las soluciones reguladas apropiadas antes de conectar la columna de afinidad y las columnas analíticas al aparato para evitar que el aire entre a las columnas; (4) se removieron las tapas extremas de las columnas, y las columnas se conectaron al aparato; (5) cada columna se equilibró con por lo menos 10 volúmenes de columna de una solución reguladora de unión o hasta que no se detectó señal en el efluente; y (6) la muestra de prueba se cargó en un bucle de muestra.

Se usaron las siguientes condiciones cromatográficas : Columna 1: columna de inmunoafinidad anti-vitamina B?2 Columna 2: GÉNESIS® C18, 4 µm, 4.6 x 250 mm Régimen de Flujo: 1 ml/min Detección: UV-VIS a 361 nm Solución reguladora de unión: fosfato 0.01 M + NaCl 0.15M, pH 7.0 Solución reguladora de elusión: HCl 0.01M + NaCl 0.15 M Fase móvil: 30% v/v metanol/70%v/v HCl 0.01 M + NaCl 0.15 M Se programaron los siguientes períodos con los ajustes del aparato: EJEMPLO 4 Preparación de un Soporte Rígido que Comprende Anticuerpo Anti -Afla toxina Bl Monoclonal Un soporte rígido ilustrativo se preparó de la siguiente manera. 1.5 g de solución reguladora de acoplamiento y 250 µg de anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal (Producto No. A89555 comercialmente disponible de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) ) teniendo una concentración de aproximadamente 7.6 mg de anticuerpo por mililitro) se agregaron a un matraz de fondo redondo de 10 ml. 160 mg de NaCNBH3 y 50 mg de etanolamina se agregaron al matraz de fondo redondo de 10 ml y luego se mezclaron en un agitador durante 4 horas. La muestra se filtró y se lavó 4 veces con 10 ml de la solución reguladora de acoplamiento. El material de soporte rígido resultante se colocó en solución reguladora de SRF conteniendo 0.02% de azida de sodio y se almacenó a 4°C.

EJEMPLO 5 Preparación de una Columna de Afinidad para detectar Aflatoxina Bl Una columna de afinidad ilustrativa se preparó empacando una columna de afinidad de I.D. de 4.6 x 50 mm con el material de soporte rígido producido en el ejemplo 4. La columna empacada se llenó entonces con solución reguladora de fosfato 20 mM, pH 7.4, conteniendo 0.02 % en peso de azida de sodio. La columna de afinidad ilustrativa resultante se almacenó a una temperatura de 4°C.

EJEMPLO 6 Análisis de una Composición que Contiene Aflatoxina La columna de afinidad ilustrativa del Ejemplo 5 se acopló a un aparato similar al aparato 40 ilustrativo como se muestra en la Fig. 3. El aparato comprendió un Cromatógrafo de Líquidos de Alto Rendimiento (CLAP) (modelo Serie 1100, Agilent Technologies, Wilmington, DE) equipado con una célula modelo Cobra post-columna (Lamers & Pleuger's, Hertogenbosch, NI) . La inyección se realizó con un inyector de muestras modelo RHEODYNE 7725 ¡ (VWR Internacional Ltd, Dorset, RU) equipado con un bucle de muestra de 500 µl . Por medio de un inyector de muestras modelo RHEODYNE 7725, fue posible intercambiar la columna de afinidad en línea y fuera de línea con la CLAP. Por medio de una bomba de líquidos de alta presión modelo LC10AD (Shimadzu, Columbia, MD) , la muestra se transfirió del inyector de muestra a través de la columna de afinidad. Los picos se detectaron con un detector de UV-VIS modelo 1100 (Agilent Technologies, Wilmington, DE) a 365 nm y un detector de fluorescencia programable modelo 1046A (Agilent Technologies, Wilmington, DE) a 365/430 nm. Una solución reguladora de unión que comprende (0.01 M de Na2P04 + NaCl 0.15 M; pH 7.0) se bombeó a través de la columna de afinidad para equilibrar la columna. Se usó un total de 10 volúmenes de columna de solución reguladora de unión. Las muestras de prueba conteniendo Aflatoxina Bl, B2, Gl y G2 se prepararon de la siguiente manera. Un material sólido que contiene aproximadamente 10 a 100 ng/g de Aflatoxina Bl, B2, Gl y G2 y que pesan 25 g se suspendió en 100 ml de acetonitrilo. Las mezclas se extrajeron de manera ultrasónica durante 15 minutos. La fracción líquida se centrifugó durante 10 minutos a 6000 rpm. lOOµl del sobrenadante se diluyó con 900 µl de solución reguladora de unión. Antes de cargar la muestra de prueba, se siguieron los siguientes pasos: (1) La CLAP-FI se programó como se especifica adelante; (2) todas las soluciones reguladoras se desgasificaron y filtraron usando un filtro de 0.45 µm; (3) la tubería de la bomba se rellenó con las soluciones reguladas apropiadas antes de conectar la columna de afinidad y las columnas analíticas al aparato para evitar que el aire entre a las columnas; (4) se removieron las tapas extremas de las columnas, y las columnas se conectaron al aparato; (5) cada columna se equilibró con por lo menos 10 volúmenes de columna de una solución reguladora de unión o hasta que no se detectó señal en el efluente; y (6) la muestra de prueba se cargó en un bucle de muestra. Se usaron las siguientes condiciones cromatográficas : Columna 1: columna de inmunoafinidad anti-aflatoxina Bl Columna 2: GÉNESIS® C18, 4 µm, 4.6 x 250 mm Detección 1: UV-VIS a 361 nm Detección 2: Detección de fluorescencia (365/430 nm) Solución reguladora de unión: fosfato 0.01 M + NaCl 0.15 M, pH 7.0 Régimen de Flujo: 0.5 ml/min Solución reguladora de elusión: 10% v/v acetonitrilo en agua Fase móvil: 600 ml de metanol + 80ml de acetonitrilo + 200 µl de ácido nítrico concitado + 50 mg de bromuro de potasio y se ajustó a 1000 ml con agua Régimen de flujo: 0.8 ml/min Se programaron los siguientes períodos con los ajustes del aparato: EJEMPLO 7 Preparación de un Soporte Rígido que Comprende Receptor de Estrógeno Humano (REh) Recombinante como el Ligando Activo Un soporte rígido ilustrativo se preparó de la siguiente manera. 1.5 g de solución reguladora de acoplamiento y 50 µg de receptor de estrógeno humano recombinante (Producto No. AB RP-310 comercialmente disponible de lOP's (Breda, NL) ) se agregaron a un matraz de fondo redondo de 10 ml. 160 mg de NaCNBH3 y 50 mg de etanolamina se agregaron al matraz de fondo redondo de 10 ml y luego se mezclaron en un agitador durante 4 horas. La muestra se filtró y se lavó 4 veces con 10 ml de la solución reguladora de acoplamiento. El material de soporte rígido resultante se colocó en solución reguladora de SRF conteniendo 0.02% de azida de sodio y se almacenó a 4°C.

EJEMPLO 8 Preparación de una Columna de Afinidad para detectar un Interruptor Endocrino Una columna de afinidad ilustrativa se preparó empacando una columna de afinidad de I.D. de 4.6 x 50 mm con el material de soporte rígido producido en el ejemplo 7. La columna empacada se llenó entonces con solución reguladora de fosfato 20 M, pH 7.4, conteniendo 0.02 % en peso de azida de sodio. La columna de afinidad ilustrativa resultante se almacenó a una temperatura de 4°C.

EJEMPLO 9 Análisis de Composición que Contiene Interruptor Endocrino La columna de afinidad ilustrativa del Ejemplo 8, se acopló a un aparato similar al aparato usado en el Ejemplo 3. Una solución reguladora de unión que comprende (0.01 M de Na2P04 + NaCl 0.15 M; pH 7.0) se bombeó a través de la columna de afinidad para equilibrar la columna. Se usó un total de 10 volúmenes de columna de solución reguladora de unión.

Una muestra de prueba que contiene una mezcla de 17-ß-estradiol, 17-a-estradiol, 17-a-etinilestradiol, estrona, bisfenol A, nonilfenol y ftalato de butilbencilo se preparó de la siguiente manera. Las soluciones de reserva que contienen de 250 a 1000 mg/l de 17-ß-estradiol, 17-a-estradiol, 17-a-etinilestradiol, estrona, bisfenol A, nonilfenol y ftalato de butilbencilo se diluyeron por un factor de 1000 en 100 ml de solución reguladora de unión para formar una mezcla. Antes de cargar la muestra de prueba, se siguieron los siguientes pasos: (1) La CLAP-FI se programó como se especifica adelante; (2) todas las soluciones reguladoras se desgasificaron y filtraron usando un filtro de 0.45 µm; (3) la -tubería de la bomba se rellenó con las soluciones reguladas apropiadas antes de conectar la columna de afinidad y las columnas analíticas al aparato para evitar que el aire entre a las columnas; (4) se removieron las tapas extremas de las columnas, y las columnas se conectaron al aparato; (5) cada columna se equilibró con por lo menos 10 volúmenes de columna de una solución reguladora de unión o hasta que no se detectó señal en el efluente; y (6) la muestra de prueba se cargó en un bucle de muestr . Se usaron las siguientes condiciones cromatográficas : Columna 1: columna de afinidad de receptor de estrógeno humano (REh) recombinante Columna 2: GÉNESIS® C18, 4 µm, 4.6 x 250 mm Régimen de Flujo: 0.8 ml/min Detección: UV-VIS a 230 nm Solución reguladora de unión: fosfato 0.01 M + NaCl 0.15M, pH 7.0 Solución reguladora de elusíón: 25% v/v tiocianato de potasio 6M, 50% v/v solución reguladora de unión, 25% v/v metanol Fase móvil A: HCl 0.01 N en agua Fase móvil B: Acetonitrilo Se programaron los siguientes períodos con los ajustes del aparato: Mientras que la especificación se ha descrito en detalle con respecto a modalidades específicas de la misma, se apreciará que los expertos en la materia, al obtener un entendimiento de la anterior, pueden concebir fácilmente las alteraciones, variaciones y equivalencias a estas modalidades. Consecuentemente, el alcance de la presente invención se deberá evaluar con respecto a las reivindicaciones anexas y alguna equivalente a las mismas.

Claims (1)

REIVINDICACIONES

1. - Un aparato que comprende una columna de afinidad en comunicación de fluido con una columna analítica, en donde la columna de afinidad contienen un soporte rígido capaz de soportar una presión de columna de hasta aproximadamente 200 bar, dicho soporte rígido teniendo uno o más ligandos unidos al mismo, dichos uno o más ligandos capaces de unirse selectivamente a uno o más analitos dentro de una solución de muestra dada. 2.- El aparato de la reivindicación 1, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas inorgánicas . 3.- El aparato de la reivindicación 2, en donde cada partícula inorgánica comprende 8i) un sustrato inorgánico y (ii) una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales no deseados al sustrato inorgánico. 4.- El aparato de la reivindicación 3, en donde la superficie de sustrato modificado comprende uno o más grupos de Rio unidos al sustrato inorgánico, en donde cada grupo de Rio se selecciona independientemente del grupo que consiste de -CH20H, -CH(0H)2, CH(0H)CH3, -CH2CH20H, -C(OH)2CH3, -CH2CH(OH)2, y -CH(OH)CH2(OH) . 5.- El aparato de la reivindicación 4, en donde cada grupo Rio comprende -CH2OH. 6.- El aparato de la reivindicación 1, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo antí-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2, 4-diclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2, 4, 5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) utírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo anti-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17-a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina B12 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-pirimifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. 7.- El aparato de la reivindicación 1, en donde uno o más analitos comprende aflatoxina Bl, aflatoxina Gl, aflatoxina Ql, aflatoxina B2, aflatoxina G2, Bisfenol A, ácido 2, 4-diclorofenoxiacético, ácido 2,4,5-triclorofenoxiacétíco, ácido 4-cloro-2-metilacético, ácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) butírico, estrona, 17-ß-estradiol, 17- a-etinilestradiol, lactoferrina, testosterona, nortestosterona, metobromurona, cinosulfurona, triasulfurona, prosulfurona, vinclozolina, ácido fólico, vitamina B?2 (cianocobalamina) , fenitrotiona, clorpirifos, pirimifos, adrenalina, noradrenalina, dopamina, un compuesto que tiene actividad estrogénica, o combinaciones de los mismos. 8.- El aparato de al reivindicación 1, en donde uno o más ligandos comprenden un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, o una combinación de los mismos. 9.- El aparato de la reivindicación 1, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina Bi2 (cianocobalamina) monoclonal, o una combinación de los mismos. 10.- El aparato de la reivindicación 1, en donde uno o más ligandos comprende un receptor de estrógeno humano (REh) recombinante. 11.- El aparato de al reivindicación 1, en donde la columna de afinidad se conecta a la columna analítica a través de un acoplamiento tubular. 12.- El aparato de la reivindicación 1, en donde la columna analítica forma parte de un dispositivo de Cromatografía de Líquidos de Alto Rendimiento de fase inversa (CLAP-FI) . 13.- El aparato de la reivindicación 12, que comprende además un dispositivo de detección de fluorescencia . 14.- El aparato de la reivindicación 1, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas de gel de sílice. 15.- El aparato de la reivindicación 14, en donde las partículas de gel de sílice tienen una forma esferoidal y un tamaño de poro promedio de aproximadamente 500 A a alrededor de 800 Á. 16.- Un soporte rígido adecuado para usarse en una columna de afinidad, dicho soporte rígido comprendiendo una pluralidad de partículas inorgánicas, en donde cada partícula comprende: un sustrato inorgánico; una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales sin analitos y materiales de analitos específicos de ligandos al sustrato inorgánico; y uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico, dicho uno o más ligandos comprendiendo un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo anti-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2, 4-diclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2,4,5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) butírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo anti-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17-a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina Bi2 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-pirimifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. 17.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde la superficie de sustrato modificado comprende uno o más grupos de Rio unido al sustrato inorgánico, en donde cada grupo de Rio se selecciona independientemente del grupo que consiste de -CH2OH, -CH(OH)2, CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, -CH2CH(OH)2, y -CH (OH) CH2 (OH) . 18.- El soporte rígido de la reivindicación 17, en donde uno o más grupos Rio están unidos al sustrato inorgánico vía una porción bivalente -X- . 19.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde uno o más ligandos están unidos al sustrato inorgánico vía uno o más enlazadores formando un enlace entre los sitios reactivos en el sustrato inorgánico y un grupo funcional en uno o más ligandos. 20.- El soporte rígido de la reivindicación 19, en donde uno o más enlazadores comprende un siloxano amino-sustituido en combinación con un dialdehído. 21.- El soporte rígido de la reivindicación 20, en donde el siloxano amino-sustituido comprende aminopropiltrimetoxisilano, y el dialdehído comprende glutaraldehído . 22.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde uno o más ligandos se unen directamente a sitios reactivos en el sustrato inorgánico. 23.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde la superficie de sustrato modificada comprende sitios reactivos, en donde de aproximadamente 50% a alrededor de 99% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie de sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 1% a alrededor de 50% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales . 24.- El soporte rígido de la reivindicación 23, en donde de aproximadamente 70% a alrededor de 95% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie del sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 5% a alrededor de 30% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales. 25.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, o una combinación de los mismos. 26.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina B?2 (cianocobalamina) monoclonal, o una combinación de los mismos . 27.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde uno o más ligandos comprende un receptor de estrógeno humano (REh) recombinante. 28.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas de gel de sílice. 29.- El soporte rígido de la reivindicación 16, en donde las partículas de gel de sílice tienen una forma esferoidal y un tamaño de poro promedio de aproximadamente 500 Á a alrededor de 800 Á. 30.- Una columna de afinidad que comprende el soporte rígido de cualquiera de las reivindicaciones 16 a 29. 31.- Un aparato que comprende una columna de afinidad en comunicación de fluido con una columna analítica, en donde la columna de afinidad comprende la columna de afinidad de la reivindicación 30. 32.- Una columna de afinidad que comprende: una estructura de columna que tiene un volumen de columna; y un soporte rígido colocado en el volumen de columna de la estructura de columna, dicho soporte rígido comprendiendo una pluralidad de partículas inorgánicas, en donde cada partícula comprende: un sustrato inorgánico; una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales sin analitos y materiales de analitos específicos de ligandos al sustrato inorgánico; y uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico, dicho uno o más ligandos comprendiendo un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo anti-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2, -diclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2,4,5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) butírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo anti-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17-a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina Bi2 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-pirimifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos. 33.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde la superficie de sustrato modificado comprende uno o más grupos de Rio unido al sustrato inorgánico, en donde cada grupo de Rio se selecciona independientemente del grupo que consiste de -CH2OH, -CH(OH)2, CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, -CH2CH(OH)2, y -CH (OH) CH2 (OH) . 34.- La columna de afinidad de la reivindicación 33, en donde uno o más grupos R10 están unidos al sustrato inorgánico vía una porción bivalente -X- . 35.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde uno o más lígandos están unidos al sustrato inorgánico vía uno o más enlazadores formando un enlace entre los sitios reactivos en el sustrato inorgánico y un grupo funcional en uno o más ligandos. 36.- La columna de afinidad de la reivindicación 35, en donde uno o más enlazadores comprende un siloxano amino-sustituido en combinación con un dialdehído. 37.- La columna de afinidad de la reivindicación 36, en donde el siloxano amino-sustituido comprende aminopropiltrimetoxisilano, y el dialdehído comprende glutaraldehído . 38.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde uno o más ligandos se unen directamente a sitios reactivos en el sustrato inorgánico. 39.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde la superficie de sustrato modificada comprende sitios reactivos, en donde de aproximadamente 50% a alrededor de 99% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie de sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 50% a alrededor de 1% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales . 40.- La columna de afinidad de la reivindicación 39, en donde de aproximadamente 70% a alrededor de 95% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie del sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 30% a alrededor de 5% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales. 41.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, o una combinación de los mismos. 42.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde uno o más ligandos comprende un anticuerpo antiácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina B?2 (cianocobalamina) monoclonal, o una combinación de los mismos . 43.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde uno o más ligandos comprende un receptor de estrógeno humano (REh) recombinante. 44.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas de gel de sílice. 45.- La columna de afinidad de la reivindicación 32, en donde las partículas de gel de sílice tienen una forma esferoidal y un tamaño de poro promedio de aproximadamente 500 A a alrededor de 800 A. 46.- Una aparato que comprende una columna de afinidad en comunicación de fluido con una columna analítica, en donde la columna de afinidad comprende la columna de afinidad de cualquiera de las reivindicaciones 30 y 32 a 45. 47.- Un método para analizar una muestra de prueba, el método comprendiendo los pasos de: poner en contacto a la muestra de prueba con el aparato, soporte rígido o columna de afinidad de cualquiera de las reivindicaciones 1-46. 48.- Un método para analizar una muestra de eluyente, dicho método comprendiendo los pasos de: transferir la muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analizar contenidos de la columna analítica para determina una presencia de uno o más analitos en la muestra de eluyente. 49.- El método de la reivindicación 48, en donde la muestra de eluyente comprende uno o más analitos en un solvente, dichos uno o más analitos siendo seleccionados del grupo que consiste de aflatoxina Bl, aflatoxina Gl, aflatoxina Ql, aflatoxina B2, aflatoxina G2, Bisfenol A, ácido 2, 4-diclorofenoxiacético, ácido 2,4,5-triclorofenoxiacético, ácido 4-cloro-2-metilacético, ácido 4- (2, -diclorofenoxi) butírico, estrona, 17-ß-estradiol, 17- a-etinilestradiol, lactoferrina, testosterona, nortestosterona, metobromurona, cinosulfurona, triasulfurona, prosulfurona, vinclozolina, ácido fólico, vitamina B?2 (cianocobalamína) , fenitrotionaa, clorpirifos, pirimifos, adrenalina, noradrenalina, dopamina, un compuesto que tiene actividad estrogénica, o combinaciones de los mismos. 50.- El método de la reivindicación 49, en donde la muestra de eluyente comprende una cantidad detectable de por lo menos una micotoxina. 51.- El método de la reivindicación 49, en donde la muestra de eluyente comprende una cantidad detectable de aflatoxina Bl, aflatoxina Gl, aflatoxina Ql, aflatoxina B2, aflatoxina G2, o una combinación de los mismos. 52.- El método de la reivindicación 49, en donde la muestra de eluyente comprende una cantidad detectable de ácido fólico, vitamina B?2 (cianocobalamina) , o combinación de los mismos. 53.- El método de la reivindicación 49, en donde la muestra de eluyente comprende una cantidad detectable de por lo menos un compuesto que tiene actividad estrogénica. 54.- El método de la reivindicación 48, en donde el paso de transferencia comprende aplicar presión de fluido en la muestra de eluyente para transportar la muestra de eluyente desde la columna de afinidad a la columna analítica. 55.- El método de la reivindicación 54, en donde la presión de fluido se aplica vía una bomba. 56.- El método de la reivindicación 48, en donde el paso de analizar comprende detectar la presencia de uno o más analitos en la muestra de eluyente, separando uno o más analitos entre ellos, cuantificando uno o más analitos en la muestra de eluyente o cualquier combinación de los mismos. 57.- El método de la reivindicación 56, en donde el paso de analizar comprende someter a la muestra de eluyente a Cromatografía de líquidos de Alto Rendimiento de Fase Inversa (CLAP-FI), detección de fluorescencia, o ambos. 58.- El método de cualquiera de las reivindicaciones 48 a 57, en donde la columna de afinidad contiene un soporte rígido capaz de soportar una presión de columna de hasta aproximadamente 300 bar, dicho soporte rígido teniendo uno o más ligandos unidos al mismo, y uno o más ligandos siendo capaces de unirse selectivamente a uno o más analitos dentro de una muestra de prueba. 59.- El método de la reivindicación 58, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas inorgánicas. 60.- El método de la reivindicación 59, en donde cada partícula inorgánica comprende un sustito inorgánico, y una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales sin analitos y materiales de analitos específicos para ligandos al sustrato inorgánico. 61.- El método de la reivindicación 60, en donde la superficie de sustrato modificada que comprende uno o más grupos de Rio unido al sustrato inorgánico, en donde cada grupo de Rio se selecciona independientemente del grupo que consiste de -CH2OH, -CH(0H)2, CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, -CH2CH(OH)2, y -CH (OH) CH2 (OH) . 62.- El método de la reivindicación 61, en donde cada grupo Rio comprende -CH2OH . 63.- El método de la reivindicación 61, en donde uno o más grupos R?0 están unidos al sustrato inorgánico vía una porción bivalente -X- . 64.- El método de la reivindicación 58, en donde uno o más ligandos están unidos al sustrato inorgánico vía uno o más enlazadores formando un enlace entre los sitios reactivos en el sustrato inorgánico y un grupo funcional en uno o más ligandos. 65.- El método de la reivindicación 64, en donde uno o más enlazadores comprende un siloxano amino-sustituido en combinación con un dialdehído. 66.- El método de la reivindicación 65, en donde el siloxano amino-sustituido comprende aminopropíltrimetoxisilano, y el dialdehído comprende glutaraldehído . 67.- El método de la reivindicación 58, ligandos se unen directamente a sitios reactivos en el sustrato inorgánico. 68.- El método de la reivindicación 60, en donde la superficie de sustrato modificada comprende sitios reactivos, en donde de aproximadamente 50% a alrededor de 99% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie de sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 50% a alrededor de 1% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales. 69.- El método de la reivindicación 68, en donde de aproximadamente 70% a alrededor de 95% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie del sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 30% a alrededor de 5% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales . 70.- El método de la reivindicación 59, en donde las partículas inorgánicas comprenden una pluralidad de partículas de gel de sílice. 71.- El método de la reivindicación 70, en donde las partículas de gel de sílice tienen una forma esferoidal y un tamaño de poro promedio que varía de aproximadamente 500 Á a alrededor de 800 Á. 72.- El método de cualquiera de las reivindicaciones 48 a 71, que comprende además los pasos de: introducir una muestra de prueba en una columna de afinidad que contiene un soporte rígido capaz de soportar una presión de columna de hasta aproximadamente 200 bar, dicho soporte rígido teniendo uno o más ligandos unidos al mismo, uno o más ligandos siendo capaces de unirse selectivamente a uno o más analitos; permitir que la muestra de prueba entre en contacto con el soporte rígido y ligandos sobre el mismo; enjuagar el soporta rígido para lavar cualquier componente de muestra de prueba diferente a uno o más analitos; introducir una solución eluyente en la columna de afinidad de manera que la solución de eluyente entre en contacto con uno o más analitos unidos a los ligandos en el soporte rígido; y permitir que la solución de eluyente permanezca en contacto con el suporte rígido durante un tiempo para formar la muestra de eluyente. 73.- El método de la reivindicación 72, en donde el tiempo varía de aproximadamente 5 minutos a alrededor de 15 minutos . 74.- El método de la reivindicación 72, que comprende además los pasos de: enjuagar la columna de afinidad con una primera solución reguladora; e introducir una segunda muestra de prueba en la columna de afinidad. 75.- Un método para analiza la muestra de eluyente que contiene potencíalmente por lo menos una micotoxina, dicho método comprendiendo los pasos de: transferir la muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analizar contenido de la columna analítica para determinar una presencia de por lo menos una micotoxina en la muestra de eluyente. 76.- El método de la reivindicación 75, en donde la muestra de eluyente comprende una cantidad detectable de aflatoxina Bl, aflatoxina Gl, aflatoxina Ql, aflatoxina B2, aflatoxina G2, o una combinación de los mismos. 77.- Un método para analizar una muestra de eluyente que contiene potencialmente ácido fólico, vitamina B12 (cianocobalamina) , o una combinación de los mismos, dicho método comprendiendo los pasos de: transferir la muestra de eluyente de una columna de afinidad a una columna analítica, en donde la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica, y analizar contenido de la columna analítica para determinar una presencia de ácido fólico, vitamina B?2 (cianocobalamina), o ambos en la muestra de eluyente. 78.- Un método para analizar una muestra de prueba que contiene potencialmente por lo menos un compuesto que tiene actividad de estrógeno, el método comprendiendo los pasos de: introducir la muestra de prueba en una columna de afinidad conteniendo un soporte rígido que tiene uno o más ligandos unidos al mismo, dichos uno o más ligandos siendo capaces de unirse selectivamente a uno o más compuesto teniendo actividad de estrógeno. 79.- El método de la reivindicación 78, en donde uno o más ligandos comprenden un receptor de estrógeno humano nativo, un receptor de estrógeno humano (REh) recombinante o derivado del mismo, una proteína recombinante que imita una parte biológicamente activa de un receptor de estrógeno o derivado del mismo o cualquier otro ligando que reconoce selectivamente un compuesto que tiene actividad biológica como un interruptor endocrino. 80.- El método de la reivindicación 78, en donde uno o más ligandos comprende receptor de estrógeno humano (REh) recombinante. 81.- El método de la reivindicación 78, que comprende además los pasos de: permitir que la muestra de prueba entre en contacto con el soporte rígido y ligandos en el mismo; enjuagar el soporte rígido para lavar cualquier componente de muestra de prueba que no exhiba actividad de estrógeno; introducir una solución eluyente en la columna de afinidad de manera que la solución de eluyente ente en contacto con uno o más compuestos que tienen actividad de estrógeno unido al ligando en el soporte rígido; y permitir que la solución eluyente permanezca en contacto con el soporte rígido durante un tiempo de manera que forma una muestra de eluyente que contenga los compuestos que tienen actividad de estrógeno; y analizar en contenido de la columna analítica para determina una presencia de uno o más compuesto que tienen actividad de estrógeno en la muestra de eluyente. 82.- El método de la reivindicación 81, en donde el soporte rígido es capaz de soportar una presión de columna de hasta aproximadamente 200 bar, y la columna de afinidad está en comunicación de fluido con la columna analítica. 83.- Un método para analizar una muestra de prueba que contiene potencialmente por lo menos un analito, dicho método comprendiendo los pasos de: introducir la muestra de prueba en una columna de afinidad conteniendo un soporte rígido, el soporte rígido comprendiendo una pluralidad de partículas inorgánicas, en donde cada partícula comprende: un sustrato inorgánico; una superficie de sustrato modificada que reduce la unión no específica de materiales sin analitos y materiales de analitos específicos de ligandos al sustrato inorgánico; y uno o más ligandos unidos al sustrato inorgánico, dicho uno o más ligandos comprendiendo un anticuerpo anti-aflatoxina Bl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Gl monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina Ql monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina B2 monoclonal, un anticuerpo anti-aflatoxina G2 monoclonal, un anticuerpo anti-Bisfenol A monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2, -diclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 2,4,5-triclorofenoxiacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4-cloro-2-metilacético monoclonal, un anticuerpo anti-ácido 4- (2, 4-diclorofenoxi) butírico monoclonal, un anticuerpo anti-esterona monoclonal, un anticuerpo antí-17-ß-estradiol monoclonal, un anticuerpo anti-17-a-etinilestradiol monoclonal, un anticuerpo anti-lactoferrina monoclonal, un anticuerpo anti-testosterona monoclonal, un anticuerpo anti-nortestosterona monoclonal, un anticuerpo anti-fenilurea monoclonal, un anticuerpo anti-vinclozolina monoclonal, un anticuerpo de anti-ácido fólico monoclonal, un anticuerpo anti-vitamina B12 (cianocobalamina) monoclonal, un anticuerpo anti-fenitrotiona monoclonal, un anticuerpo anti-clorpirifos monoclonal, un anticuerpo anti-pirimifos monoclonal, un anticuerpo anti-catecolamina, un receptor de estrógenos humanos (REh) recombinante, y combinaciones de los mismos; permitir que la muestra de prueba entre en contacto con el soporte rígido y ligandos en el mismo; enjuagar el soporte rígido para lavar cualquier componente de muestra de prueba que no exhiba actividad de estrógeno; introducir una solución eluyente en la columna de afinidad de manera que la solución de eluyente ente en contacto con uno o más compuestos que tienen actividad de estrógeno unido al ligando en el soporte rígido; y permitir que la solución eluyente permanezca en contacto con el soporte rígido durante un tiempo de manera que forma una muestra de eluyente que contenga los compuestos que tienen actividad de estrógeno; y analizar en contenido de la columna analítica para determina una presencia de uno o más compuesto que tienen actividad de estrógeno en la muestra de eluyente. 84.- El método de la reivindicación 83, en donde la superficie de sustrato modificado comprende uno o más grupos de Rio unido al sustrato inorgánico, en donde cada grupo de Rio se selecciona independientemente del grupo que consiste de -CH20H, -CH(0H)2, CH(0H)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, -CH2CH(OH)2, y -CH(OH)CH2(OH) . 85.- El método de la reivindicación 84, en donde uno o más grupos Rio están unidos al sustrato inorgánico vía una porción bivalente -X-. 86.- El método de la reivindicación 83, en donde uno o más ligandos están unidos al sustrato inorgánico vía uno o más enlazadores formando un enlace entre los sitios reactivos en el sustrato inorgánico y un grupo funcional en uno o más ligandos. 87.- El método de la reivindicación 86, en donde uno o más enlazadores comprende un siloxano amino-sustituido en combinación con un dialdehído. 88.- El método de la reivindicación 87, en donde el siloxano amino-sustituido comprende aminopropiltrimetoxisilano, y el dialdehído comprende glutaraldehído . 89.- El método de la reivindicación 83, en donde uno o más ligandos se unen directamente a sitios reactivos en el sustrato inorgánico. 90.- El método de la reivindicación 83, en donde la superficie de sustrato modificada comprende sitios reactivos, en donde de aproximadamente 50% a alrededor de 99% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie de sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 50% a alrededor de 1% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales. 91.- El método de la reivindicación 83, en donde de aproximadamente 70% a alrededor de 95% de los sitios reactivos se cubren con grupos R que son menos reactivos que cualquier grupo funcional en la superficie del sustrato antes de la modificación y de aproximadamente 30% a alrededor de 5% de los sitios reactivos se cubren con uno o más ligandos o enlazadores opcionales. 92.- El método de la reivindicación 83, en donde el soporte rígido comprende una pluralidad de partículas de gel de sílice. 93.- El método de la reivindicación 92, en donde las partículas de gel de sílice tienen una forma esferoidal y un tamaño de poro promedio de aproximadamente 500 A a alrededor de 800 Á. 94.- Un método para formar un material de soporte rígido que comprende un sustrato inorgánico, el método comprendiendo los siguientes pasos: (1) unir grupos R a por lo menos una primera porción de la superficie del sustrato inorgánico, en donde los grupos R tienen una reactividad menor que cualquier grupo funcional en una superficie del sustrato inorgánico antes del paso de unión; (2) unir uno o más enlazadora a por lo menos una segunda porción de la superficie del sustrato inorgánico, en donde uno o más enlazadores comprende un grupo funcional de aldehido; y (3) unir selectivamente uno o más ligandos a uno o más enlazadores. 95.- El método de la reivindicación 94, en donde el paso (2) se lleva a cabo antes del paso (1) . 96.- El método de la reivindicación 94, en donde uno o más enlazadores comprende un siloxano sustituido con amino en combinación con dialdehído. 97.- El método de la reivindicación 96, en donde el siloxano amino-sustituido comprende aminopropiltrimetoxisilano, y el glutaraldehido comprende dialdehído. 98.- Un método para formar una columna de afinidad, el método comprende los pasos de: (1) sellar un primer extremo de una estructura tubular; (2) llenar por lo menos parcialmente una cavidad de columna de la estructura tubular con el material de soporte rígido de cualquiera de las reivindicaciones 16 a 29 o el material de soporte rígido formado por el método de cualquiera de las reivindicaciones 94 a 97. (3) llenar por lo menos parcialmente la cavidad de columna de la estructura tubular con una primera solución reguladora para encapsular el material de soporte rígido; y, opcionalmente (d) sellar un extremo opuesto de la estructura tubular.