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WO2025127025A1 - Ｌ－メチオニンを含む線虫防除用組成物および線虫の防除方法 - Google Patents

Ｌ－メチオニンを含む線虫防除用組成物および線虫の防除方法 Download PDF

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Publication number
WO2025127025A1
WO2025127025A1 PCT/JP2024/043595 JP2024043595W WO2025127025A1 WO 2025127025 A1 WO2025127025 A1 WO 2025127025A1 JP 2024043595 W JP2024043595 W JP 2024043595W WO 2025127025 A1 WO2025127025 A1 WO 2025127025A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
methionine
nematode
nematodes
soil
ppm
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
PCT/JP2024/043595
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
隆之 水久保
泰裕 鎌田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Maruwa Biochemical Co Ltd
Original Assignee
Maruwa Biochemical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Maruwa Biochemical Co Ltd filed Critical Maruwa Biochemical Co Ltd
Priority to JP2025525798A priority Critical patent/JPWO2025127025A1/ja
Publication of WO2025127025A1 publication Critical patent/WO2025127025A1/ja
Pending legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/12—Powders or granules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P5/00—Nematocides

Definitions

  • Plant parasitic nematodes are nematodes that parasitize plants and are known to cause damage such as inhibiting plant growth and causing plant death.
  • plant parasitic soil nematodes such as root-knot nematodes, root-lesion nematodes, and cyst nematodes are one of the factors that inhibit agricultural crop production, and nematode damage accounts for 16% of the causes of continuous crop damage in Japan. Furthermore, the average yield reduction due to nematodes in all crops around the world is 12%. Meanwhile, damage caused by plant parasitic nematodes is also known to occur in the production and use of useful plants such as lawns and shrubs. Therefore, it is an urgent task to provide an effective method for controlling nematodes in order to reduce damage caused by nematodes to plants and to increase crop productivity.
  • Non-Patent Document 1 Non-Patent Document 1
  • D-D agents are restricted by the EPA in the United States due to their carcinogenicity and other issues, and their pesticide registration in the EU has already expired.
  • Chloropicrin is also highly irritating to the human body, so its use in crowded environments tends to be avoided.
  • soil reduction disinfection one of the agricultural methods, is expected to contribute to the promotion of sustainable agriculture because of its low environmental impact, but there are many restrictions on its implementation and it has not been widely adopted.
  • Non-Patent Document 2 the nematode Acanthurus nigricans
  • Non-Patent Document 6 the wheat cyst nematode
  • Non-Patent Document 6 the peel nematode
  • Non-Patent Document 7 Patent Documents 2, and 3
  • a species of the genus Veronoraimus Non-Patent Document 8
  • a species of the genus Mesocrichonema Non-Patent Document 8
  • Non-Patent Document 7 reports that the toxicity of D- and L-methionine to potato cyst nematodes was equivalent, and the mechanism of action is said to be oral toxicity.
  • Patent Document 2 reports that the oral toxicity of D-methionine to potato cyst nematodes was lower than that of L-methionine.
  • Non-Patent Document 3 cites Non-Patent Document 4 and states that while the DL-methionine showed contact toxicity to sweet potato root-knot nematodes, the L-methionine did not show contact toxicity.
  • JP 2000-007506 A International Publication No. 2019/004252 JP 2022-118806 A
  • Nematologica 13 318-323. Evans, K. and Trudgill, D.L. 1971 Effects of amino acids on the reproduction of Heterodera rostochiensis. Nematologica 17: 495-500. Crow, W.T., Cuda, J.P., Stevens, B.R. 2009. Efficacy of Methionine Against Ectoparasitic Nematodes on Golf Course Turf. Journal of Nematology, 41: 217-220. Epstein, E. 1973.
  • the objective of this disclosure is to provide a nematode control composition and control method that exhibits high control activity even when the application rate of methionine is small.
  • the inventors discovered that when L-methionine is applied, it is effective in controlling nematodes even at low concentrations, and thus completed the disclosed nematode control composition and control method.
  • a first aspect of the present disclosure is a method for manufacturing a semiconductor device comprising: A composition for controlling nematodes comprising methionine, The methionine comprises more than 50% by weight of L-methionine based on the total weight of the methionine.
  • a second aspect of the present disclosure is a method for manufacturing a semiconductor device comprising: A method for controlling nematodes, comprising the steps of: applying methionine in an amount of 5 to 80 kg per 1000 m2 of field; The methionine comprises more than 50% by weight of L-methionine based on the total weight of the methionine.
  • the nematode control composition disclosed herein contains methionine, and since the methionine contains L-methionine, it can control nematodes safely, inexpensively, and effectively. Furthermore, the nematode control composition disclosed herein has a small environmental impact and can be applied easily, so it can contribute to the promotion of sustainable agriculture.
  • the nematode control method of the present disclosure applies 5 to 80 kg of methionine per 10 a (1000 m2 ) of field, and the methionine contains L-methionine, thereby enabling nematodes to be controlled safely, inexpensively, and effectively compared to conventional control methods. Furthermore, the method of the present disclosure has the advantage that, since the amount of methionine applied is smaller than that of conventional methods, it is not toxic to plants and can be carried out during the cultivation period. Furthermore, the method of the present disclosure has a small environmental impact and is simple, and can therefore contribute to the spread of sustainable agriculture.
  • the nematode-inhibiting effect of an aqueous methionine solution was evaluated using the method described in Example 1, and the results are shown in terms of the relationship between methionine concentration and survival rate.
  • (A) shows the results after 1 day
  • (B) shows the results after 4 days.
  • the results are shown as time-dependent changes in the nematode-inhibiting effect of an aqueous methionine solution evaluated by the method described in Example 1.
  • (A) shows the results at 2500 ppm
  • (B) shows the results at 250 ppm. 1 shows the results of evaluating the effect of the ratio of L-methionine to D-methionine on the inhibitory effect against Meloidogyne incognita, using the method described in Example 2.
  • (A) shows the results at 300 ppm, (B) at 600 ppm, and (C) at 1200 ppm.
  • the nematode-inhibiting effect of an aqueous methionine solution was evaluated by the method described in Example 4, and the results are shown in terms of the relationship between the methionine concentration and the survival rate.
  • 1 shows the results of evaluating the inhibitory effect of an aqueous methionine solution against Meloidogyne root-knot nematode by the method described in Example 5.
  • (A) shows the results after 1 day, and (B) shows the results after 4 days.
  • the results of evaluating the inhibitory effect of an aqueous methionine solution against Meloidogyne arenaria knot nematode are shown in terms of the relationship between methionine concentration and survival rate by the method described in Example 6.
  • (A) shows the results after 3 hours
  • (B) shows the results after 2 days
  • (C) shows the results after 3 days.
  • the control effects of optical isomers of methionine on Meloidogyne incognita were compared using the method described in Example 7, and the results are shown below. Photographs of tomato roots harvested from the test described in Example 7.
  • (A) are two control tomato roots
  • (B) are two tomato roots spiked with 67 ppm D-methionine
  • (C) are, from the right, roots from tomato roots spiked with 67 ppm, 133 ppm, and 200 ppm D-methionine.
  • Photographs of tomato roots harvested from the test described in Example 7. (A) shows, from the right, tomato roots supplemented with 67 ppm, 133 ppm, and 200 ppm L-methionine.
  • (B) shows, from the right, tomato roots supplemented with 67 ppm, 133 ppm, and 200 ppm DL-methionine.
  • compositions for controlling nematodes comprising methionine.
  • the composition of the present disclosure may comprise 20 to 100% by weight, preferably 40 to 100% by weight, more preferably 60 to 100% by weight of methionine.
  • the composition of the present disclosure may consist of methionine alone.
  • the methionine comprises L-methionine.
  • the composition of the present disclosure comprises 50 to 100% by weight, preferably 75 to 100% by weight, more preferably 95 to 100% by weight of L-methionine, based on the total weight of the composition.
  • Methionine is one of the 20 amino acids that make up proteins, and is an essential amino acid. It exists in D-form (D-methionine) and L-form (L-methionine), and when the D-form and L-form exist in equal amounts, it is called a racemic mixture (DL-methionine, DL-form). Methionine is widely used as a human medicine, veterinary medicine, food additive, and feed additive, and is a highly safe substance. Furthermore, it is less expensive than existing pesticides.
  • the methionine comprises L-methionine.
  • the methionine comprises more than 50% by weight, preferably 75% by weight or more, more preferably 85% by weight or more, even more preferably 95% by weight or more, and most preferably 99% by weight or more of L-methionine based on the total weight of methionine.
  • the methionine comprises up to 100% by weight of methionine.
  • the methionine may consist only of L-methionine.
  • the L-methionine in this disclosure may be produced by any method.
  • methods for producing L-methionine include a synthetic method, an enzymatic method, an extraction method, and a fermentation method.
  • the synthetic method is a method for isolating only L-methionine from a racemic form of methionine that has been chemically synthesized by a known method.
  • the enzymatic method is a method for converting a precursor to L-methionine by an enzyme reaction.
  • the extraction method is a method for isolating only L-methionine from a mixture of amino acids obtained by decomposing proteins.
  • the fermentation method is a method for selectively producing only L-methionine by fermenting the raw material using a microorganism.
  • the methionine does not contain D-methionine. If present, it is desirable that the amount of D-methionine is less than 50% by weight, preferably 25% by weight or less, more preferably 15% by weight or less, even more preferably 5% by weight or less, and most preferably 1% by weight or less, based on the total weight of methionine. In one embodiment, the compositions of the present disclosure do not contain D-methionine.
  • the composition of the present disclosure may further contain a surfactant.
  • a surfactant By containing a surfactant in the composition of the present disclosure, it is possible to promote the penetration of methionine into voids in the soil and promote the contact between L-methionine and the target nematode.
  • the composition of the present disclosure may contain the surfactant in an amount of 0.1 to 20% by weight, preferably 0.1 to 10% by weight.
  • Surfactants that can be used in the composition of the present disclosure include, for example, nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, etc.
  • Nonionic surfactants include, but are not limited to, polyoxyethylene alkyl ethers, polyoxyethylene alkyl phenyl ethers, sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, sucrose fatty acid esters, polyoxyethylene castor oil, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, alkyl glycosides, etc.
  • Anionic surfactants include alkyl sulfates, alkyl ether sulfates, lignin sulfonates, etc.
  • Cationic surfactants include, for example, quaternary alkyl ammonium salts, etc.
  • composition of the present disclosure may further contain additional components, such as a bulking agent, a solvent, a pH adjusting agent, a binder, a disintegrant, a physical property improving agent, an antifungal agent, a stabilizer, a colorant, a fragrance, a chemical harm reducing agent, and the like.
  • additional components such as a bulking agent, a solvent, a pH adjusting agent, a binder, a disintegrant, a physical property improving agent, an antifungal agent, a stabilizer, a colorant, a fragrance, a chemical harm reducing agent, and the like.
  • bulking agents include, but are not limited to, talc, bentonite, diatomaceous earth, amorphous silica, clay, attapulgite, calcium carbonate, and other inorganic salts.
  • Solvents include, but are not limited to, water, methanol, and ethanol.
  • pH adjusters include, but are not limited to, sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, sodium bicarbonate, lactic acid, sodium lactate, phosphoric acid, sodium dihydrogen phosphate, citric acid, and sodium citrate.
  • Binders include, but are not limited to, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, carboxymethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, starch, starch derivatives, sodium acrylates, oils and fats (e.g., vegetable oils such as soybean oil, palm oil, and corn oil, and animal oils such as lard, fish oil, and butter).
  • oils and fats e.g., vegetable oils such as soybean oil, palm oil, and corn oil, and animal oils such as lard, fish oil, and butter).
  • the composition of the present disclosure can be in any form.
  • the composition of the present disclosure can be in the form of a solid or liquid that can be directly mixed or sprayed on soil, or in the form of a solid or liquid that can be dissolved in a solvent such as water before use.
  • the form of the composition of the present disclosure includes, but is not limited to, dust, granule, powder, wettable powder, water-soluble, emulsion, liquid (including solution), oil, aerosol, coating agent, microcapsule, etc.
  • the composition of the present disclosure is preferably in the form of a dust, granule, powder, wettable powder, or water-soluble, and more preferably in the form of a granule, powder, powder, or water-soluble.
  • the composition of the present disclosure can be prepared by any method known in the art.
  • the composition of the present disclosure can be prepared by using a process such as grinding, mixing, classification, granulation, etc., alone or in combination.
  • the composition of the present disclosure can be obtained in the form of a solution by, for example, a dissolving process, or the composition of the present disclosure can be obtained in the form of a suspension or emulsion by, for example, a dispersing process.
  • the raw powder of methionine can be used as the composition of the present disclosure.
  • the milling process is a process in which bulk methionine powder is milled to a desired particle size by methods known in the art.
  • the milled methionine may be used as a composition of the present disclosure or may be provided to further processes.
  • the blending step is a step in which raw or milled methionine is blended with additional ingredients, such as bulking agents, by methods known in the art.
  • additional ingredients such as bulking agents
  • the blend of methionine and additional ingredients may be a composition of the present disclosure, or the blend may be subjected to further steps.
  • the classification process is a process in which methionine or a raw material containing methionine is separated according to the particle size of the powder or particles.
  • Classification methods are broadly classified into dry classification and wet classification, both of which are known in the art.
  • the methionine or a composition containing methionine obtained by the classification process may be used as the composition of the present disclosure, or may be further provided to another process.
  • the granulation process is a process in which methionine or a mixture of methionine and additional ingredients is processed to a desired particle size.
  • Granulation methods are broadly classified into wet granulation and dry granulation, and are known in the art.
  • the resulting granulated product may be used as the composition of the present disclosure, or may be further subjected to another process.
  • the dispersion process is a process in which methionine or a raw material containing methionine in a solid or liquid form is dispersed in a solvent or oil.
  • the methionine or a raw material containing methionine may be obtained through the above-mentioned processes of grinding, mixing, classification, granulation, etc.
  • the dispersion process can be carried out by any method known in the art.
  • the obtained dispersion may be used as the composition of the present disclosure, or may be further provided to another process.
  • Nematodes are a general term for animals belonging to the phylum Nematoda, and are long, slender worms with body lengths of 0.1 mm to 1000 mm. Nematodes live in large numbers in all biospheres on Earth, and are divided into free-living and parasitic species. In the agricultural field, a group of parasitic species called plant-parasitic nematodes (also called harmful nematodes or plant-pathogenic nematodes) are problematic because they cause agricultural damage.
  • the composition of the present disclosure can be suitably used for controlling plant parasitic nematodes, more specifically, plant parasitic nematodes that live in soil.
  • Nematodes that can be controlled by the composition of the present disclosure include, but are not limited to, root-knot nematodes, root-leach nematodes, and cyst nematodes. Examples of root-knot nematodes include Meloidogyne incognita, Meloidogyne nervosa, Meloidogyne arenaria, and Meloidogyne javanica.
  • Root-leach nematodes examples include Meloidogyne nervosa, Meloidogyne nervosa, Meloidogyne nervosa, Meloidogyne nervosa, and Meloidogyne nervosa.
  • cyst nematodes examples include the potato cyst nematode, the potato white cyst nematode, the soybean cyst nematode, the clover cyst nematode, and the sugar beet cyst nematode.
  • Other examples include the nematode Nematode gracilis, Nematode umbellata, and Nematode nigricans.
  • the composition of the present disclosure can be applied to soil by any method known in the art.
  • the composition of the present disclosure may be applied before planting the plant or after planting. It may also be applied both before and after planting the plant.
  • the composition of the present disclosure is applied after planting, it is preferable to apply it 20 to 60 days, preferably 25 to 50 days, more preferably 30 to 40 days, and most preferably 30 days after planting. It is preferable that the soil to which the composition of the present disclosure is applied is uniformly mixed.
  • the term "plant” includes plants cultivated in fields, i.e., crops, and useful plants other than crops, such as lawns and trees.
  • the term “useful plant” refers to a plant that is useful for human life.
  • composition of the present disclosure can be applied in an amount corresponding to 5 to 40 kg, preferably 7.5 to 30 kg, and more preferably 10 to 20 kg of L-methionine per 10 a (1000 m2 ) of field. This range is preferable because it does not inhibit plant growth and can effectively control nematodes.
  • field includes not only a place where crops are cultivated, but also a place where useful plants other than crops are grown.
  • composition of the present disclosure may be mixed with a surfactant at the time of application, or may be dissolved or dispersed in a solvent or oil.
  • the composition of the present disclosure may be in a solid or liquid form.
  • the surfactant, solvent, and oil are as described in the (Additional Components) section.
  • composition disclosed herein contains L-methionine as an active ingredient, and is therefore highly safe, inexpensive, and effective in controlling nematodes.
  • the composition disclosed herein requires a smaller amount of methionine than conventional compositions, and therefore has the advantage that it does not inhibit plant growth and can be applied during the cultivation period.
  • the composition disclosed herein has a small environmental impact and can be applied easily, making it possible to contribute to the spread of sustainable agriculture.
  • the second aspect of the present disclosure relates to a method for controlling nematodes.
  • the method of the present disclosure includes applying methionine in an amount of 5 to 80 kg, preferably 7.5 to 60 kg, more preferably 10 to 40 kg per 10 a (1000 m 2 ) of field, the methionine comprising more than 50% by weight of L-methionine based on the total weight of methionine.
  • the methionine comprises up to 100% by weight of L-methionine based on the total weight of methionine.
  • Methionine is as described in the section (methionine) of "1. Composition".
  • methionine can be applied by any method known in the art.
  • methionine may be applied to soil in a powdered or granular solid form, or methionine may be dissolved in a solvent and then applied.
  • Methionine or a solution thereof may be mixed with a surfactant at the time of application.
  • methionine formulated by a method known in the art may be applied. Methods for formulating methionine are described in the section "1. Composition" (Methionine Manufacturing Method), and surfactants are described in the section “Additional Components.”
  • methionine may be applied before or after planting of the plant.
  • the methods of the present disclosure include applying methionine within 20 days, preferably within 15 days, and more preferably within 10 days before planting.
  • the methods of the present disclosure include applying methionine 20-60 days, preferably 25-50 days, more preferably 30-40 days, and most preferably 30 days after planting.
  • the methods of the present disclosure include applying methionine before planting and applying methionine after planting.
  • the method of the present disclosure preferably includes uniformly mixing the soil after application of methionine.
  • the depth of the soil to be mixed can be 20 cm, more preferably 15 cm, from the soil surface.
  • the method of the present disclosure may further include applying a surfactant.
  • Surfactants that can be used in the method of the present disclosure are as described in the section "1. Composition" (Surfactant).
  • the surfactant may be applied before or after the methionine. Also, by blending methionine and a surfactant, they can be applied simultaneously.
  • the method disclosed herein is highly safe, inexpensive, and effective in controlling nematodes. Furthermore, the method disclosed herein has the advantage that it requires a smaller amount of methionine to be applied than conventional methods, is not toxic to plants, and can be carried out during the cultivation period. Furthermore, the method disclosed herein has a small environmental impact and is simple, so it can contribute to the spread of sustainable agriculture.
  • Example 1 Comparison of the nematode suppression effect of methionine aqueous solution by optical isomers (1) Aqueous solutions of D-, L-, and DL-methionine at various concentrations were contacted with Meloidogyne incognita to evaluate the inhibitory effect of each optical isomer against the nematode.
  • Test method 1 Meloidogyne incognita (MAFF108258 strain) was added to tap water to prepare a nematode suspension at 250 heads/mL, which was then stored at 10° C. until use. Note that Meloidogyne incognita hatched larvae were collected 6 days after egg capsule collection and immediately used to prepare the suspension.
  • D-methionine (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity >99.0%), L-methionine (Asuka Animal Health Co., Ltd., purity 99.6%), and DL-methionine (Asuka Animal Health Co., Ltd., purity 99.5%) were each dissolved in purified water to prepare aqueous methionine solutions with concentrations of 0.5 ppm, 5 ppm, 50 ppm, 500 ppm, and 5,000 ppm.
  • 100 ⁇ L of nematode suspension was poured into each well of a 96-well plate (round bottom, water-repellent coating) using a glass pipette.
  • Tables 1-2 and Figures 1-2 show the relationship between the concentration of each isomer of methionine and the survival rate of nematodes after 1 day and 4 days.
  • Table 2 and Figure 2 show the change in survival rate of nematodes over time for 2500 ppm and 250 ppm. Each value is an average value.
  • the results show that the L-methionine form showed concentration-dependent contact toxicity to Meloidogyne incognita one day after immersion, whereas the D- and DL-methionine forms did not. However, after four days of immersion, the D- and DL-methionine forms also showed concentration-dependent contact toxicity. Looking at the results by concentration, at a concentration of 250 ppm, the time course of survival rates of nematodes exposed to the L- and DL-methionine forms showed a similar tendency, reaching around 40% after four days, but not reaching 0%.
  • the survival rate of the L-methionine form reached 0% after four days, whereas the D- and DL-methionine forms were around 60% after four days and did not reach 0% even after seven days.
  • the LD 50 of the DL form should be 120 ppm, which is twice that of the L form, but in reality it was about 9 times that value. From this, it was suggested that, without being bound by theory, the D-isomer may inhibit the inhibitory effect of the L-isomer against nematodes.
  • the aqueous solution concentration (ppm) was converted to the amount of soil to be treated in the field as follows.
  • the rotary tillage depth is about 15 cm, so if the depth of the field to be mixed is 15 cm, the amount of soil per 10 a (1000 m2 ) is 150,000 kg. Since soil also contains a lot of air, if its density is assumed to be 1 kg/L, the volume is 150,000 L.
  • Example 2 Effect of the Mixture Ratio of L- and D-Methionine on Inhibition of Meloidogyne incognita Since the results of Example 1 suggested that the D-methionine may inhibit the inhibitory effect of the L-methionine on nematodes, the mixture ratio of the L- and D-methionine was gradually changed to evaluate the effect of the D-methionine on the nematode inhibitory effect of the L-methionine.
  • Test method (1) Meloidogyne incognita (strain MAFF108258) was added to tap water to prepare a nematode suspension at 250 nematodes/mL, which was stored at 10°C until use. (2) A total of 0.24 g of L-methionine (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity >99.0%) and D-methionine (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity >99.0%) were dissolved in 100 mL of purified water to give ratios (weight ratios) of 100:0, 99:1, 95:5, 85:15, 75:25, and 50:50, respectively, to prepare 6 levels of 2400 ppm methionine aqueous solutions with a ratio of L-form to the total methionine ranging from 100% by weight to 50% by weight.
  • a 1200 ppm aqueous solution was prepared by diluting 10 mL of this 2400 ppm aqueous solution with 10 mL of purified water. Furthermore, a 600 ppm aqueous solution of methionine was prepared by diluting 5 mL of the 2400 ppm aqueous solution with 15 mL of purified water. (3) 100 ⁇ L of the nematode suspension was poured into each well of a 96-well plate (round bottom, water-repellent coating) using a glass pipette. In addition, 100 ⁇ L of methionine solution of each concentration was added to each well.
  • the methionine concentrations when the nematodes were immersed were 300 ppm, 600 ppm, and 1200 ppm, respectively.
  • 100 ⁇ L of purified water was added to the control (0 ppm, CTL).
  • the number of surviving nematodes was counted under transmitted illumination using a stereomicroscope immediately after immersion in the methionine aqueous solution (0 days), and 1, 3, and 6 days after immersion. The number of surviving nematodes was determined in the same manner as in 1. Test method (4) of Example 1.
  • the aqueous solutions with an L-isomer proportion of 99% by weight and 100% by weight exhibited a high nematode suppression effect at all concentrations, and at 600 ppm (corresponding to a field treatment amount of 30 kg/10a) and 1200 ppm (corresponding to a field treatment amount of 60 kg/10a), the nematode survival rate after 6 days was almost 0%. From these results, it was shown that the composition of the present disclosure can provide an excellent nematode suppression effect by containing more than 50% by weight of L-methionine based on the total weight of methionine, and that the effect is enhanced as the proportion of L-isomers increases.
  • Example 3 Comparison of nematode suppression effects of methionine aqueous solution using optical isomers (2) From the results of Example 1, it was found that in the case of L-methionine, the survival rate of nematodes changed significantly between 250 ppm and 2500 ppm. Therefore, the concentration of the methionine solution was changed and tests were conducted in the same manner as in Example 1 to evaluate in more detail the relationship between the methionine concentration and the nematode suppression effect.
  • Test Method The test was carried out in the same manner as in Example 1, except that aqueous methionine solutions were prepared at concentrations of 600 ppm, 1200 ppm, 1800 ppm, 2400 ppm, and 5000 ppm.
  • Example 4 Comparison of nematode suppression effects of methionine aqueous solution using optical isomers (3)
  • Examples 1 to 3 showed the inhibitory effect of L-methionine when it was in contact with nematodes for a long period of time. Therefore, tests were conducted with a shorter contact time to evaluate the inhibitory effect of nematodes (Meloidogyne incognita) when it was in contact for a short period of time.
  • Test Method The test was carried out in the same manner as in Example 1, except that the concentrations of the methionine aqueous solution were 0 ppm, 300 ppm, 600 ppm, 1200 ppm, 1800 ppm, 2400 ppm, and 4800 ppm, and the test time was 4 hours. The test was carried out in duplicate.
  • Example 5 Evaluation of Inhibitory Effect of Methionine on Meloidogyne northern root-knot nematode
  • Meloidogyne northern root-knot nematode was used to evaluate the inhibitory effect of each optical isomer of methionine.
  • Test method The test was conducted in the same manner as in Example 1, except that the concentrations of the prepared methionine aqueous solutions were 300 ppm, 600 ppm, 1200 ppm, and 1800 ppm, and Meloidogyne nigra (MAFF108260 strain) was used as the nematode. The number of surviving nematodes was counted 1 day and 4 days after the start of the test.
  • L-methionine After one day, only L-methionine showed an inhibitory effect against Meloidogyne. After four days, L-methionine showed an excellent inhibitory effect against Meloidogyne. On the other hand, D-methionine and DL-methionine showed no inhibitory effect after one day, and after four days, a decrease in survival rate was observed, but the effect was slight.
  • Example 6 Evaluation of Inhibitory Effect of Methionine on Meloidogyne arenaria Root-knot Meloidogyne The control effect of each optical isomer of methionine was evaluated using Meloidogyne arenaria as the nematode.
  • Test method As the optical isomers of methionine, D-methionine (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity >99.0%), L-methionine (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity >99.0%) and DL-methionine (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity >99.0%) were used.
  • the test was conducted in the same manner as in Example 1, except that the concentrations of the prepared methionine aqueous solutions were 300 ppm, 600 ppm, 1200 ppm, 1800 ppm, 2400 ppm and 4800 ppm, and that Meloidogyne arenaria (MAFF108262 strain) was used as the nematode. The number of surviving nematodes was counted 3 hours, 2 days and 3 days after the start of the test.
  • the D- and DL-methionine forms showed high survival rates of nematodes at all concentrations.
  • the L-methionine form showed a high nematode suppression effect, and the effect increased roughly in proportion to the concentration.
  • the survival rate of nematodes treated with the D-methionine form was maintained at a high level.
  • the survival rate of nematodes treated with the DL-methionine form decreased in a concentration-dependent manner up to 1200 ppm, but at 2400 ppm, the survival rate recovered and showed a high value.
  • the presence of a high concentration of the D-methionine form nematode suppressed the suppressive effect of the L-methionine form against the root-knot nematode.
  • the survival rate of nematodes treated with the L-methionine form was maintained at a low level at all concentrations. This result indicates that the composition of the present disclosure also shows a high suppressive effect against the root-knot nematode.
  • Example 7 Comparison of the control effects of optical isomers of methionine against Meloidogyne incognita D-, L- and DL-methionine were added at various concentrations to soil inoculated with Meloidogyne incognita, and the effect on the degree of damage caused by root clubs in tomatoes was evaluated .
  • Test method Soil in which Meloidogyne incognita (strain MAFF108258, purchased from the National Agriculture and Food Research Organization Gene Bank) was grown, commercially available black soil, and horticultural nursery soil (manufactured by Hokusan Co., Ltd.) were mixed in a ratio of 1:1:1 to prepare nematode-contaminated soil.
  • D-methionine (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity >99.0%), L-methionine (Asuka Animal Health Co., Ltd., purity 99.6%), and DL-methionine (Asuka Animal Health Co., Ltd., purity 99.5%) were each dissolved in ion-exchanged water to a concentration of 0.5% (w/v) to prepare a 0.5% aqueous methionine solution.
  • 3 8 mL, 16 mL, and 24 mL of 0.5% methionine solution were added to 600 mL of nematode-infested soil and mixed.
  • Test method (1) Meloidogyne arenaria (MAFF108262 line, obtained from the National Agriculture and Food Research Organization Gene Bank) was propagated on tomatoes planted in black soil. The soil was sieved through a 2.5 mm mesh screen to remove the roots. (2) A portion of the soil prepared in step (1) was removed, and the number of nematodes in the soil was measured by isolating the nematodes from the soil using the Bellman funnel method. First, 20 g of soil was placed on a mesh plate covered with paper, immersed in a glass funnel filled with water, and left to stand for three days to separate the nematodes into a vial attached to the leg of the glass funnel.
  • MAFF108262 line obtained from the National Agriculture and Food Research Organization Gene Bank
  • nematode larvae that had settled in the vial were collected, and the number of individuals was counted using a plankton counting slide.
  • An appropriate amount of the sieved soil from step (1) was mixed with commercially available black soil whose moisture content had been adjusted to 33% to prepare nematode-infested soil with an initial density of 2.5 nematodes per gram of soil.
  • Control value (%) (1 - average number of nematodes under each condition / average number of nematodes in the control) x 100
  • L-methionine showed a higher control value than D-methionine.
  • the nematode density was 0 at a treatment concentration of 30 kg/10a of L-methionine.
  • the control value was lower with D-methionine, and at a treatment concentration of 15 kg/10a the control value was negative.
  • Example 9 Comparison of the effects of optical isomers of methionine on suppressing root-knot nematode damage in sweet potato Since the demand for nematode control agents is particularly high in sweet potato cultivation, L- and DL-methionine were added to soil inoculated with Meloidogyne incognita, and the effect on the degree of root-knot damage in sweet potato was evaluated.
  • Test method (1) Meloidogyne incognita (MAFF108258 line, obtained from the National Agriculture and Food Research Organization Gene Bank) was propagated on tomatoes planted in black soil. The soil was sieved through a 2.5 mm mesh screen to remove the roots. (2) Nematodes were isolated using the same procedure as the Bellman funnel method described in step (2) of Example 8, and the number of individuals was counted using a plankton counting slide. (3) Test nematode-infested soil was prepared in the same manner as in (3) of Example 8. The initial density of nematodes was 1.25 nematodes per gram of soil.
  • the nematode-infested soil containing the L- and DL-nematodes was filled into a 3-L planter, and a single sweet potato vine (variety: Takakei 14) was planted in each.
  • the control was an untreated control (CTL), in which soil not containing methionine was used.
  • CTL untreated control
  • the planters were placed in a glass chamber and grown for 52 days (maximum temperature 35°C, average temperature 28°C). During the growth period, the soil was watered once a day to prevent the soil surface from drying out. (7) 52 days after the start of cultivation, the roots were removed from the pots.
  • the soil was removed by rinsing in the shower, and the vines and potatoes were removed from the roots.
  • the washed roots were stored in a freezer at -20°C until the number of root galls was counted.
  • the thawed roots were cut into 5 mm lengths, suspended in water, transferred to a tea strainer, and squeezed to remove the water.
  • the weight (g) of the entire roots was measured, and 2 g was taken from it to count the number of root galls and egg sacs.
  • the egg sacs included those whose presence was estimated from the peeling traces left on the root galls.
  • the number of root galls was equal to the number of egg sacs when two or more egg sacs or their peeling traces were found on one lump.
  • the number of root galls and egg sacs per plant was calculated by multiplying the number of root galls and egg sacs per 2 g by the weight (g) of the entire roots, and then dividing by 2.
  • Control value (%) (1 - average number of galls or egg sacs / average number of galls or egg sacs in the control) x 100
  • Example 10 Comparison of nematode-inhibiting effects of L-methionine powder and aqueous solution L-methionine was applied to soil in different forms to evaluate its effect on nematode-inhibiting effects.
  • Nematode Meloidogyne incognita (strain MAFF108258) was mixed with commercially available sterilized andosol to give a nematode density of 20 nematodes/20 g soil, to prepare nematode-contaminated soil.
  • Nematode-infested soil was treated with L-methionine under the following conditions A to C.
  • the control (CTL) was soil that was not treated with L-methionine.
  • A Powder mixing treatment 4 g of sand in which L-methionine had been diluted 100-fold was mixed with 600 mL of nematode-infested soil so that the amount of L-methionine was 67 ppm (corresponding to a field treatment amount of 10 kg/10 a). Water was added to adjust the soil moisture content to 32%, and the mixture was placed in a plastic bag and allowed to stand at 25°C for 3 days in a sealed state. Four days after mixing with L-methionine, the soil was filled into a pot and used to grow tomatoes.
  • B Aqueous solution mixing treatment
  • L-methionine was dissolved in ion-exchanged water to prepare a 0.5% methionine aqueous solution.
  • the results are shown in Table 17.
  • the number of root clubs is the average value, and the ratio to CTL indicates the ratio (percentage) of the number of root clubs under each condition to the number of root clubs in the control.
  • the control value is the value obtained by subtracting the ratio to CTL from 100%.
  • L-methionine showed superior inhibitory effects compared to the control, but especially under conditions A (powder mixing treatment) and B (aqueous solution mixing treatment), it showed a high inhibitory effect.
  • Example 11 Evaluation of nematode suppression effect by L-methionine The effect of suppressing root clubs was evaluated by changing the amount of L-methionine applied to the soil in powder form. A similar test was also performed with DL-methionine to compare the suppression effects.
  • Test method (1) Meloidogyne incognita (MAFF108258 line) was grown in cherry tomatoes (variety: Regina) in a planter filled with andosol. The soil in which Meloidogyne incognita had grown was diluted with commercially available sterilized andosol to prepare nematode-contaminated soil with a nematode density of 20 nematodes/20 g soil. (2) L-methionine powder was diluted 100-fold with sand, and 3 g and 4 g of sand were mixed with 600 mL of nematode-contaminated soil.
  • the L-methionine concentrations were 50 ppm and 67 ppm (equivalent to 7.5 kg and 10 kg per 10 a of soil, respectively, indicated as “L7.5” and “L10", respectively).
  • DL-methionine powder was mixed with 600 mL of soil to a concentration of 67 ppm (DL10).
  • the control was soil without methionine (CTL).
  • CTL methionine
  • the soil was placed in a plastic bag and left to stand for 3 days in a sealed state.
  • CTL methionine
  • Each soil was filled into the pot.
  • One cherry tomato (variety: Regina) was planted in each pot 31 days after sowing, and grown for 24 days under LED light for plant growth in a thermostatic room at 25°C. After 24 days, each root was removed from the pot, the soil was washed off with a shower, and the number of root galls was counted under a stereomicroscope.

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Abstract

本開示は、メチオニンの施用量が少ない場合であっても高い防除活性を示す、線虫防除用組成物および防除方法を提供することを課題とする。本開示は、メチオニンを含む、線虫防除用の組成物であり、当該メチオニンが、当該メチオニンの総重量に対して５０重量％超のＬ－メチオニンを含む。さらに、本開示は、線虫の防除方法であって、圃場１０００ｍ2あたり５～８０ｋｇの量のメチオニンを施用することを含む方法も提供する。

Description

Ｌ－メチオニンを含む線虫防除用組成物および線虫の防除方法
　本開示は、植物に寄生して成長を妨げる線虫に対する防除用組成物に関し、より具体的には、Ｌ－メチオニンを含む線虫防除用組成物に関する。さらに、本開示は、Ｌ－メチオニンを用いた線虫の防除方法に関する。
　植物寄生性線虫は植物に寄生する線虫であり、植物の生長阻害および枯死などの被害をもたらすことが知られている。例えば、ネコブセンチュウ、ネグサレセンチュウ、シストセンチュウなどの植物寄生性土壌線虫は、農作物の生産阻害要因の一つであり、日本国内の連作障害要因の１６％を線虫害が占めている。また、世界の作物全体における線虫による減収率は、平均で１２％に及んでいる。一方、芝生および植木などの有用植物の生産および利用の場面でも植物寄生性線虫による被害が知られている。したがって、植物の線虫による被害を低減させるため、および作物の生産性を高めるために、効果的な線虫の防除方法を提供することが喫緊の課題である。
　農業分野における線虫防除技術または線虫害抑制技術は、化学的方法、物理的方法、生物的方法、耕種的方法に分けられる。化学的方法には、くん蒸剤、粒剤などの形態で供給される一連の農薬の利用がある。物理的方法としては、熱を利用するもの（太陽熱土壌消毒、熱水土壌消毒、蒸気消毒）と、水を用いる湛水処理（かけ流し、田畑輪換）が知られる。生物的方法には、線虫への寄生、捕食作用を持つ微生物資材の利用がある。耕種的方法としては、輪作、線虫抵抗性品種の開発利用、線虫抑制緑肥などの開発および利用、土壌還元消毒法の利用などがある。
　これらの線虫防除および抑制技術の中で、例えばサツマイモに寄生するネコブセンチュウに対する防除対策は、Ｄ－Ｄ剤およびクロルピクリンくん蒸剤を代表とするくん蒸剤およびホスチアゼート剤などを代表とする粒剤などの、化学合成農薬に大きく依存している。これに対し、耕種的方法の普及率は極めて低く、物理的方法および生物的方法はほとんど採用されていない（非特許文献１）。しかし、Ｄ－Ｄ剤は米国のＥＰＡがその発がん性などの問題により使用規制農薬としており、ＥＵでは農薬登録がすでに失効している。また、クロルピクリンも人体への刺激性が強いため、集住環境での使用は回避される傾向にある。一方、耕種的方法の一つである土壌還元消毒法は、環境負荷が小さいことから持続的農業の推進への貢献が期待されているが、実施には制約が多く、普及が進んでいないのが現状である。
　環境負荷が小さい防除方法として、アミノ酸を用いた有害土壌線虫の防除技術の開発が試みられてきた。非特許文献２、３は、Ｌ体のアミノ酸の代謝阻害剤としてＤ体を含む、ＤＬ体のアミノ酸を植物に適用しており、様々なアミノ酸の中でサツマイモネコブセンチュウに対してＤＬ－メチオニンが最も高い毒性を示したことを報告している。サツマイモネコブセンチュウに対するＤＬ－メチオニンの毒性は非特許文献４、非特許文献３、非特許文献５でも報告され、ＤＬ－メチオニンを用いたネコブセンチュウの防除技術も開発されてきた（特許文献１）。ＤＬ－メチオニンの毒性が発現したその他の線虫属種に、例えば、ユミハリセンチュウ（非特許文献２）、ムギシストセンチュウ（非特許文献６）、ハガレセンチュウ（非特許文献６）、ジャガイモシストセンチュウ（非特許文献７、特許文献２、特許文献３)、ベロノライムス属の一種（非特許文献８）、メソクリコネマ属の一種（非特許文献８）を挙げることができる。
　しかし、ＤＬ－メチオニンの毒性が及ばなかった例も報告されている。そのような線虫としては、ラセンセンチュウの一種（非特許文献２）、ニセネコブセンチュウ（非特許文献６）、イモグサレセンチュウ（非特許文献６）、ナガハリセンチュウの一種（非特許文献９）が挙げられる。このように、ＤＬ－メチオニンの毒性は、あらゆる線虫に及ぶものではないことが明らかとなっている。
　メチオニンが線虫に対して毒性を示す機序としては、経口毒性および接触毒性が考えられている。例えば、非特許文献７は、ジャガイモシストセンチュウに対するメチオニンのＤ体およびＬ体の毒性は同等であったことを報告しており、その作用機序は経口毒性とされている。また、特許文献２は、ジャガイモシストセンチュウに対して、Ｄ体のメチオニンの経口毒性がＬ体よりも低かったことを報告している。一方、接触毒性に関しては、非特許文献３による非特許文献４の引用において、メチオニンのＤＬ体はサツマイモネコブセンチュウに対して接触毒性を示したものの、Ｌ体は接触毒性を示さなかったことが記載されている。
　メチオニンを線虫の防除に使用する上での主な課題として、植物毒性が挙げられる。非特許文献６、非特許文献７、非特許文献３、特許文献１、非特許文献１０は、ＤＬ－メチオニンがトマトまたはジャガイモの生育を阻害したことを報告している。しかし、特許文献１および特許文献２によれば、ＤＬ－メチオニンが植物の生育を阻害しない使用量では、ジャガイモシストセンチュウおよびサツマイモネコブセンチュウに対しては確実な防除効果が得られないことも明らかとなっている。
特開２０００－００７５０６号公報 国際公開第２０１９／００４２５２号 特開２０２２－１１８８０６号公報
水久保隆之（２０１５）日本の線虫防除研究と防除技術の動向－日本線虫学会２０周年記念事業：線虫防除に関するアンケート（１９９９～２０１１年度）の集計－日本線虫学会誌４５：６３－７６ Overman, A.J. and Woltz, S.S. 1962. Effects of Amino acid antimetabolites upon nematodes and tomatoes. Florida Agricultural Experiment Stations Journal Series No. 1524: 166-170. Reddy, P.P., Govindu, H.C. and Setty, K.G.H. 1975. Studies on the effect of amino acids on the root-knot nematode Meloidogyne incognita infecting tomato. Indian Journal of Nematology 5: 36-41. Setty, K.G.H. 1968 Studies on the biology and host-parasite relationships of root-knot nematode (Meloidogyne spp.) on tomatoes. Ph. D Thesis, univ. Lond. 293pp. Reddy, P.P., Govindu, H.C. and Setty, K.G.H. 1975. Studies on the action of DL-methionine on Meloidogyne incognita infecting tomato. Indian Journal of Nematology 5: 42-48. Prasad, S.K., and Webster, J.M. 1967. The effect of amino acid antimetabolites on four nematode species and their host plants. Nematologica 13: 318-323. Evans, K. and Trudgill, D.L. 1971 Effects of amino acids on the reproduction of Heterodera rostochiensis. Nematologica 17: 495-500. Crow, W.T., Cuda, J.P., Stevens, B.R. 2009. Efficacy of Methionine Against Ectoparasitic Nematodes on Golf Course Turf. Journal of Nematology, 41: 217-220. Epstein, E. 1973. Effect of pretreatment with some amino acids and amino acids antimetabolites on Longidorus africanus infected and non-infected Bidens triparitita. Nematologica 18: 555-562. Talavera, M., and Mizukubo, T. 2005. Effects of DL-methionine on hatching and activity of Meloidogyne incognita eggs and juveniles. Pest Management Science 61: 413-416.
　本開示は、メチオニンの施用量が少ない場合であっても高い防除活性を示す、線虫防除用組成物および防除方法を提供することを課題とする。
　発明者らは、Ｌ－メチオニンを施用した場合に、低濃度でも線虫の防除効果が得られることを見出し、本開示の線虫防除用組成物および防除方法を完成させた。
　本開示の第１の態様は、
　メチオニンを含む、線虫防除用の組成物であって、
　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して５０重量％超のＬ－メチオニンを含む。
　本開示の第２の態様は、
　線虫の防除方法であって、
　圃場１０００ｍ2あたり５～８０ｋｇの量のメチオニンを施用することを含み、
　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して５０重量％超のＬ－メチオニンを含む。
　本開示の線虫防除用組成物は、メチオニンを含み、当該メチオニンがＬ－メチオニンを含むことにより、高い安全性で、安価かつ効果的に線虫を防除することができる。さらに、本開示の線虫防除用組成物は、環境負荷が小さく、かつ簡便に施用できるため、持続的農業の推進に貢献することができる。
　本開示の線虫の防除方法は、圃場１０ａ（１０００ｍ2）あたり５～８０ｋｇの量のメチオニンを施用すること、および当該メチオニンがＬ－メチオニンを含むことにより、従来の防除方法と比べて高い安全性で、安価かつ効果的に線虫を防除することができる。また、本開示の方法は、従来の方法と比べてメチオニンの施用量が少ないため、植物に毒性を示すことがなく、栽培期間中にも実施することができるという利点を有する。さらに、本開示の方法は、環境負荷が小さく、かつ簡便であるため、持続的農業の普及に貢献することができる。
実施例１に記載の方法により、メチオニン水溶液の線虫抑制効果を評価した結果をメチオニン濃度と生存率の関係で示す。（Ａ）は１日後の結果を示し、（Ｂ）は４日後の結果を示す。 実施例１に記載の方法により、メチオニン水溶液の線虫抑制効果を評価した結果を経時変化で示す。（Ａ）は２５００ｐｐｍの結果を示し、（Ｂ）は２５０ｐｐｍの結果を示す。 実施例２に記載の方法により、メチオニンのＬ体とＤ体との比率がサツマイモネコブセンチュウの抑制効果に与える影響を評価した結果を示す。（Ａ）は３００ｐｐｍ、（Ｂ）は６００ｐｐｍ、（Ｃ）は１２００ｐｐｍの結果を示す。 実施例４に記載の方法により、メチオニン水溶液の線虫抑制効果を評価した結果を、メチオニン濃度と生存率の関係で示す。 実施例５に記載の方法により、メチオニン水溶液のキタネコブセンチュウに対する抑制効果を評価した結果を示す。（Ａ）は１日後の結果を示し、（Ｂ）は４日後の結果を示す。 実施例６に記載の方法により、メチオニン水溶液のアレナリアネコブセンチュウ対する抑制効果を評価した結果をメチオニン濃度と生存率の関係で示す。（Ａ）は３時間後、（Ｂ）は２日後、（Ｃ）は３日後の結果を示す。 実施例７に記載の方法により、メチオニンの光学異性体のサツマイモネコブセンチュウに対する防除効果を比較した結果を示す。 実施例７に記載する試験で回収したトマトの根の写真である。（Ａ）は対照のトマトの根２つであり、（Ｂ）はＤ－メチオニンを６７ｐｐｍで添加したトマトの根２つであり、（Ｃ）は右から、Ｄ－メチオニンを６７ｐｐｍ、１３３ｐｐｍ、２００ｐｐｍで添加したトマトの根である。 実施例７に記載する試験で回収したトマトの根の写真である。（Ａ）は右から、Ｌ－メチオニンを６７ｐｐｍ、１３３ｐｐｍおよび２００ｐｐｍで添加したトマトの根である。（Ｂ）は右から、ＤＬ－メチオニンを６７ｐｐｍ、１３３ｐｐｍおよび２００ｐｐｍで添加したトマトの根である。 実施例１１に記載の方法により、粉体形態のＬ－メチオニンおよびＤＬ－メチオニンによる線虫抑制効果を評価した結果を示す。（Ａ）は根こぶ数の比較を示し、（Ｂ）は防除価の比較を示す。
　以下、本開示の実施の形態について説明するが、本開示は以下の実施の形態に限定されるものではない。なお、同一の構成要素に関しては重複する説明を割愛する場合がある。
１．組成物
　本開示の第１の態様は、メチオニンを含む線虫防除用組成物に関する。本開示の組成物は、２０～１００重量％、好ましくは４０～１００重量％、より好ましくは６０～１００重量％のメチオニンを含むことができる。本開示の組成物は、メチオニンのみからなるものでもよい。さらに、本開示の組成物において、メチオニンはＬ－メチオニンを含む。一実施形態において、本開示の組成物は、組成物の総重量に対して、５０～１００重量％、好ましくは７５～１００重量％、より好ましくは９５～１００重量％のＬ－メチオニンを含む。
（メチオニン）
　メチオニンは、タンパク質を構成する２０種類のアミノ酸の１つであり、必須アミノ酸である。Ｄ体（Ｄ－メチオニン）とＬ体（Ｌ－メチオニン）が存在し、Ｄ体とＬ体が同量で存在する場合、ラセミ体（ＤＬ－メチオニン、ＤＬ体）という。メチオニンは、ヒト用医薬品、動物用医薬品、食品添加物、および飼料添加物として広く使用されており、安全性の高い物質である。さらに、既存の農薬よりも安価である。
　本開示の組成物において、メチオニンはＬ－メチオニンを含む。メチオニンは、メチオニンの総重量に対して５０重量％超、好ましくは７５重量％以上、より好ましくは８５重量％以上、さらにより好ましくは９５重量％以上、最も好ましくは９９重量％以上のＬ－メチオニンを含む。また、一実施形態において、メチオニンは、最大１００重量％のメチオニンを含む。一実施形態において、メチオニンは、Ｌ－メチオニンのみからなるものでもよい。本開示の組成物は、有効成分としてＬ－メチオニンを含むことにより、安全性が高く、安価で環境負荷の小さい線虫防除用組成物を提供することができる。
　本開示におけるＬ－メチオニンはどのように製造されたものでもよい。Ｌ－メチオニンの製造方法としては、例えば、合成法、酵素法、抽出法、発酵法などが挙げられる。合成法は、既知の方法により化学合成されたメチオニンのラセミ体から、Ｌ－メチオニンのみを単離する方法である。酵素法は、酵素反応により、前駆物質をＬ－メチオニンに変換する方法である。抽出法は、タンパク質を分解して得られるアミノ酸の混合物からＬ－メチオニンのみを単離する方法である。発酵法は、原料を微生物を用いて発酵させることによりＬ－メチオニンのみを選択的に生産する方法である。
　実施例の項にて述べるように、本開示の組成物において、Ｄ－メチオニンはＬ－メチオニンの線虫防除効果を妨げる可能性があることが示唆された。したがって、一実施形態において、メチオニンは、Ｄ－メチオニンを含まないことが望ましい。存在する場合、Ｄ－メチオニンの量は、メチオニンの総重量に対して、５０重量％未満、好ましくは２５重量％以下、より好ましくは１５重量％以下、さらにより好ましくは５重量％以下、最も好ましくは１重量％以下であることが望ましい。一実施形態において、本開示の組成物は、Ｄ－メチオニンを含まない。
（界面活性剤）
　本開示の組成物は、さらに界面活性剤を含むことができる。本開示の組成物が界面活性剤を含むことにより、メチオニンの土壌内空隙への浸透を促進させＬ－メチオニンと防除対象線虫との接触を促進させることができる。本開示の組成物は、０．１～２０重量％、好ましくは０．１～１０重量％の量の界面活性剤を含むことができる。
　本開示の組成物において使用することできる界面活性剤としては、例えば、非イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤などが挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、これらに限定されるものではないが、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アルキルグリコシドなどが挙げられる。陰イオン性界面活性剤としては、アルキル硫酸塩、アルキルエーテル硫酸塩、リグニンスルホン酸塩などが挙げられる。陽イオン性界面活性剤としては、例えば、四級アルキルアンモニウム塩などが挙げられる。
（追加の成分）
　本開示の組成物は、さらに追加の成分を含んでもよい。追加の成分としては、例えば、増量剤、溶剤、ｐＨ調節剤、結合剤、崩壊剤、物理性改良剤、防黴剤、安定化剤、着色剤、香料、薬害軽減剤などが挙げられる。
　増量剤としては、これらに限定されるものではないが、例えば、タルク、ベントナイト、珪藻土、非晶質シリカ、クレー、アタパルジャイト、炭酸カルシウムおよびその他の無機塩類などが挙げられる。
　溶剤としては、これらに限定されるものではないが、例えば、水、メタノール、およびエタノールなどが挙げられる。
　ｐＨ調節剤としては、これらに限定されるものではないが、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム、リン酸、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。
　結合剤としては、これらに限定されるものではないが、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプン、デンプン誘導体、アクリル酸ソーダ類、油脂（例えば、大豆油、パーム油、コーン油などの植物性油、およびラード、魚油、バターなどの動物性油など）などが挙げられる。
（組成物の形態）
　本開示の組成物は、あらゆる形態とすることができる。本開示の組成物は、例えば、土壌に直接混和もしくは散布することができる固体もしくは液体の形態、または水などの溶剤に溶解させてから使用するための固体もしくは液体の形態とすることができる。より具体的には、本開示の組成物の形態としては、これらに限定されるものではないが、例えば、粉剤、粒剤、粉粒剤、粉末、水和剤、水溶剤、乳剤、液剤（溶液を含む）、油剤、エアゾル、塗布剤、マイクロカプセル剤などが挙げられる。本開示の組成物は、好ましくは、粉剤、粒剤、粉粒剤、粉末、水和剤、または水溶剤の形態であり、より好ましくは、粒剤、粉粒剤、粉剤、粉末、または水溶剤の形態である。
（組成物の製造方法）
　本開示の組成物は、当技術分野で既知のあらゆる方法により製造することができる。例えば、固体形態の場合、本開示の組成物は粉砕、混合、分級、造粒などの工程を単独で、または任意選択的に組み合わせて使用することにより製造することができる。また、液体形態の場合、例えば、溶解工程により、溶液形態の本開示の組成物を得てもよく、分散工程によって懸濁液またはエマルションの形態の本開示の組成物を得てもよい。なお、メチオニンの原末をそのまま本開示の組成物としてもよい。
　粉砕工程は、メチオニンの原末を当技術分野で既知の方法により所望の粒径まで粉砕する工程である。粉砕されたメチオニンを本開示の組成物としてもよく、さらに別の工程に提供してもよい。
　混合工程は、未加工または粉砕済みのメチオニンを、当技術分野で既知の方法により、増量剤などの追加の成分と混合する工程である。メチオニンと追加の成分との混合物を本開示の組成物としてもよく、当該混合物をさらに別の工程に提供してもよい。
　分級工程は、メチオニンまたはメチオニンを含む原料を、粉体または粒子の粒子径によって分ける工程である。分級方法は乾式分級と湿式分級に大別され、いずれも当技術分野において既知である。分級工程により得られたメチオニンまたはメチオニンを含む組成物を本開示の組成物としてもよく、さらに別の工程に提供してもよい。
　造粒工程は、メチオニンまたはメチオニンと追加の成分との混合物を、任意の粒径に加工する工程である。造粒方法は、湿式造粒および乾式造粒に大別され、当技術分野において既知である。得られた造粒物を本開示の組成物としてもよく、さらに別の工程に提供してもよい。
　溶解工程は、メチオニンを含む原料を溶剤に溶解させる工程である。溶剤に溶解させる原料は、メチオニンのみからなるものでもよく、追加の成分を含むものでもよい。また、溶解工程は、上述の粉砕、混合、造粒工程と組み合わせて使用することもできる。例えば、溶解工程では、メチオニンの原末を溶剤に溶解させてもよく、粉砕、混合および造粒工程の少なくとも１つにより加工したメチオニンを含む原料を溶剤に溶解させてもよい。得られた溶液を本開示の組成物としてもよく、さらに別の工程に提供してもよい。
　分散工程は、固体形態または液体形態のメチオニンもしくはメチオニンを含む原料を、溶剤または油脂などに分散させる工程である。メチオニンまたはメチオニンを含む原料は、上述の粉砕、混合、分級、造粒などの工程を経て得られたものでもよい。分散工程は、当技術分野において既知のあらゆる方法により行うことができる。得られた分散液を本開示の組成物としてもよく、さらに別の工程に提供してもよい。
　なお、上述の製造方法は単なる例示であり、本開示の組成物の製造方法はこれらに限定されるものではない。各工程における追加の成分および溶剤については、（追加の成分）の項に記載したとおりである。
（線虫）
　線虫とは、線形動物門に属する動物の総称であり、体長０．１ｍｍ～１０００ｍｍほどの細長い蠕虫である。線虫は地球上のあらゆる生物圏に多数生息しており、自活性種と寄生性種に分けられる。農業分野では、寄生性種の中でも植物寄生性線虫（有害線虫、植物病原線虫ともいう）と呼ばれるグループが、農業被害をもたらすため問題となる。
　本開示の組成物は、植物寄生性線虫、より具体的には、土壌中に生息する植物寄生性線虫の防除に好適に使用することができる。本開示の組成物により防除することができる線虫としては、これらに限定されるものではないが、例えばネコブセンチュウ、ネグサレセンチュウ、およびシストセンチュウなどが挙げられる。ネコブセンチュウとしては、例えば、サツマイモネコブセンチュウ、キタネコブセンチュウ、アレナリアネコブセンチュウ、ジャワネコブセンチュウなどが挙げられる。ネグサレセンチュウとしては、例えば、キタネグサレセンチュウ、ミナミネグサレセンチュウ、クルミネグサレセンチュウ、クマモトネグサレセンチュウ、モロコシネグサレセンチュウなどが挙げられる。シストセンチュウとしては、例えばジャガイモシストセンチュウ、ジャガイモシロシストセンチュウ、ダイズシストセンチュウ、クローバーシストセンチュウ、テンサイシストセンチュウなどが挙げられる。この他にイシュクセンチュウ、ユミハリセンチュウ、ニセフクロセンチュウを挙げることができる。
（使用方法）
　本開示の組成物は、当技術分野で既知のあらゆる方法により土壌に施用することができる。本開示の組成物は、植物の植え付け前に施用してもよく、植え付け後に施用してもよい。また、植物の植え付け前および植え付け後の両方で施用してもよい。本開示の組成物を植え付け前に施用する場合、植物の植え付け前２０日以内、好ましくは１５日以内、より好ましくは１０日以内に施用することが好ましい。また、本開示の組成物が施用された土壌は、均一に混和されることがさらに好ましい。本開示の組成物を植え付け後に施用する場合、植え付けから２０～６０日後、好ましくは２５～５０日後、より好ましくは３０～４０日後、最も好ましくは３０日後に施用することが好ましい。本開示の組成物が施用された土壌は均一に混和されることが好ましい。なお、本明細書において「植物」という語は、田畑で栽培される植物、すなわち作物と、芝生および植木などの作物以外の有用植物とを含む。本明細書において、「有用植物」という語は、人間の生活に役に立つ植物を指す。
　本開示の組成物は、圃場１０ａ（１０００ｍ2）あたり、５～４０ｋｇ、好ましくは７．５～３０ｋｇ、より好ましくは１０～２０ｋｇのＬ－メチオニンに対応する量で施用することができる。この範囲であれば、植物の生長を阻害せず、かつ線虫を効果的に防除できるため好ましい。なお、本明細書において、「圃場」という語は、作物を栽培する場所だけでなく、作物以外の有用植物を育てる場所を含む。
　また、本開示の組成物は、施用時に界面活性剤と混合されてもよく、溶剤または油脂などに溶解または分散させてもよい。この場合において、本開示の組成物は、固体形態または液体形態とすることができる。界面活性剤、溶剤および油脂については、（追加の成分）の項に記載したとおりである。
　本開示の組成物は、有効成分としてＬ－メチオニンを含むことにより、高い安全性で、安価かつ効果的に線虫を防除することができる。また、本開示の組成物は、従来の組成物と比べて必要なメチオニンの量が少ないため、植物の生長を阻害せず、栽培期間中にも施用することができるという利点を有する。さらに、本開示の組成物は環境負荷が小さく、かつ簡便に施用できるため、持続的農業の普及に貢献することができる。
２．線虫の防除方法
　本開示の第２の態様は、線虫の防除方法に関する。本開示の方法は、圃場１０ａ（１０００ｍ2）あたり５～８０ｋｇ、好ましくは７．５～６０ｋｇ、より好ましくは１０～４０ｋｇの量のメチオニンを施用することを含み、メチオニンは、メチオニンの総重量に対して５０重量％超のＬ－メチオニンを含む。一実施形態において、メチオニンは、メチオニンの総重量に対して最大１００重量％のＬ－メチオニンを含む。メチオニンについては、「１．組成物」の（メチオニン）の項に記載したとおりである。
　本開示の方法において、メチオニンは、当技術分野で既知のあらゆる方法により施用することができる。例えば、土壌に対して、粉末または粒状の固体形態のメチオニンを施用してもよく、メチオニンを溶剤に溶解させた後に施用してもよい。メチオニンまたはその溶液は、施用時に界面活性剤と混合されてもよい。また、当技術分野で既知の方法により製剤化したメチオニンを施用してもよい。メチオニンの製剤化の方法については「１．組成物」の（組成物の製造方法）の項に、界面活性剤については（追加の成分）の項に記載したとおりである。
　本開示の方法において、メチオニンは、植物の植え付け前に施用されてもよく、植え付け後に施用されてもよい。一実施形態において、本開示の方法は、植え付け前２０日以内、好ましくは１５日以内、より好ましくは１０日以内にメチオニンを施用することを含む。別の実施形態において、本開示の方法は、植え付けから２０～６０日後、好ましくは２５～５０日後、より好ましくは３０～４０日後、最も好ましくは３０日後にメチオニンを施用することを含む。さらに別の実施形態において、本開示の方法は、植え付け前にメチオニンを施用し、かつ植え付け後にメチオニンを施用することを含む。
　線虫は、主に土壌表面から１０～２０ｃｍの深さに生息する。したがって、一実施形態において、本開示の方法は、メチオニンの施用後に土壌を均一に混和することを含むことが好ましい。混和する土壌の深さは、土壌表面から２０ｃｍ、より好ましくは１５ｃｍとすることができる。メチオニンの施用後に土壌を混和することにより、植物の線虫被害を効果的に低減することができる。
　本開示の方法は、界面活性剤を施用することをさらに含んでもよい。本開示の方法において使用することのできる界面活性剤は、「１．組成物」の（界面活性剤）の項に記載したとおりである。本開示の方法は、メチオニンの前に界面活性剤を施用してもよく、メチオニンの後に界面活性剤を施用してもよい。また、メチオニンと界面活性剤とを配合することにより、同時に施用することもできる。
　本開示の方法は、高い安全性で、安価かつ効果的に線虫を防除することができる。さらに、本開示の方法は、従来の方法と比べてメチオニンの施用量が少ないため、植物に毒性を示すことがなく、栽培期間中にも実施することができるという利点を有する。また、本開示の方法は、環境負荷が小さく、かつ簡便であるため、持続的農業の普及に貢献することができる。
　以下、実施例および比較例によって本開示を具体的に説明するが、本開示は以下の実施例に限定されない。
　実施例１　メチオニン水溶液の線虫抑制効果の光学異性体による比較（１）
　Ｄ体、Ｌ体、ＤＬ体のメチオニンの水溶液を様々な濃度でサツマイモネコブセンチュウに接触させ、それぞれの光学異性体の線虫に対する抑制効果を評価した。
１．試験方法
（１）サツマイモネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２５８系統）を水道水に加え、２５０頭／ｍＬの線虫懸濁液とし、使用するまで１０℃で保存した。なお、サツマイモネコブセンチュウは、卵嚢を採取してから６日後に孵化幼虫を回収し、直ちに懸濁液の調製に使用した。
（２）Ｄ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）、Ｌ－メチオニン（あすかアニマルヘルス株式会社、純度９９．６％）、およびＤＬ－メチオニン（あすかアニマルヘルス株式会社、純度９９．５％）をそれぞれ精製水に溶解し、０．５ｐｐｍ、５ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、５０００ｐｐｍの濃度のメチオニン水溶液を調製した。
（３）９６ウェルプレート（丸底、撥水防止加工）の各ウェルに１００μＬの線虫懸濁液をガラスピペットで注入した。さらに、各ウェルに各濃度のメチオニン水溶液を１００μＬ加えた。したがって、線虫を浸漬させた際のメチオニンの濃度は、それぞれ０．２５ｐｐｍ、２．５ｐｐｍ、２５ｐｐｍ、２５０ｐｐｍ、２５００ｐｐｍであった。また、対照（０ｐｐｍ、ＣＴＬ）には、１００μＬの精製水を加えた。試験数はｎ＝４とした。
（４）メチオニン水溶液への浸漬から１、３、４、７日後に、実体顕微鏡透過照明下で生存している線虫の数を数えた。線虫は、運動している個体および体が曲がって運動していない個体を生存個体と判断した。真直に伸びている個体は死んでいると判断した。
２．結果
　結果を以下の表１～２および図１～２に示す。表１および図１は、１日後および４日後について、それぞれの異性体のメチオニンの濃度と線虫の生存率の関係を示す。表２および図２は、２５００ｐｐｍおよび２５０ｐｐｍについて、線虫の生存率の経時変化を示す。それぞれの値は平均値である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　先行技術に基づく予想に反し、結果から分かるとおり、メチオニンのＬ体は浸漬から１日後に、サツマイモネコブセンチュウに対して濃度に依存した接触毒性を示したが、Ｄ体およびＤＬ体では接触毒性を示さなかった。しかし、浸漬４日後には、Ｄ体およびＤＬ体においても濃度依存的な接触毒性が示された。濃度別の結果を見ると、２５０ｐｐｍの濃度では、Ｌ体およびＤＬ体に接触させた線虫の生存率の経時的推移は似た傾向を示し、４日後には４０％前後を示したが、０％には至らなかった。一方、２５００ｐｐｍでは、Ｌ体では４日後に生存率が０％となったが、Ｄ体およびＤＬ体では、４日後では６０％前後であり、７日後にも０％にはならなかった。これらの結果から、メチオニンのＬ体は、Ｄ体およびＤＬ体と比べて優れた線虫抑制効果を有することが示された。
　また、図１のグラフの近似式から、それぞれのメチオニンの光学異性体についてＬＤ50を予測した。４日後のＬ－メチオニンについて、グラフの近似式から、ＬＤ50は６０ｐｐｍ（圃場処理量３ｋｇ／１０ａに相当）と見積もられた。一方、４日後のＤ－メチオニンおよびＤＬ－メチオニンでは、ＬＤ50はそれぞれ１９０００ｐｐｍ（圃場処理量９５０ｋｇ／１０ａに相当）および１１００ｐｐｍ（圃場処理量５５ｋｇ／１０ａに相当）と算出された。ＤＬ体はその半量がＬ－メチオニンであり、Ｌ－メチオニンのＬＤ50が６０ｐｐｍであったことを考えると、ＤＬ体のＬＤ50はＬ体の２倍の１２０ｐｐｍとなるはずだが、実際にはその約９倍の値であった。このことから、理論に拘束されるものではないが、Ｄ体はＬ体の線虫に対する抑制効果を阻害している可能性があることが示唆された。
　なお、水溶液濃度（ｐｐｍ）の圃場処理量への換算は以下のとおり行った。ロータリー耕転の深さは概ね１５ｃｍであることから、混和処理する圃場の深さを１５ｃｍとすると、１０ａ（１０００ｍ2）あたりの土壌量は１５０，０００ｋｇである。土壌は空気も多く含むことから、その密度を１ｋｇ／Ｌと仮定すると、容積は１５０，０００Ｌとなる。また、日本に多い黒ボク土の重量含水率は３０％前後であり、すなわち、土壌の重量のうち水分は約１／３である。したがって、メチオニン水溶液の濃度（ｐｐｍ＝ｍｇ／Ｌ）に土壌容積１５０，０００Ｌを掛け、３で割った値を圃場１０ａ（１０００ｍ2）あたりの処理量とした。
　実施例２　メチオニンのＬ体及びＤ体の配合比率がサツマイモネコブセンチュウの抑制に及ぼす効果
　実施例１の結果より、メチオニンのＤ体は、Ｌ体の線虫に対する抑制効果を阻害している可能性があることが示唆されたことから、Ｌ体とＤ体との配合比率を段階的に変化させ、Ｄ体がＬ体の線虫抑制効果に与える影響を評価した。
１．試験方法
（１）サツマイモネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２５８系統）を水道水に加え、２５０頭／ｍＬの線虫懸濁液とし、使用するまで１０℃で保存した。
（２）合わせて０．２４ｇのＬ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）およびＤ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）を、それぞれ１００：０、９９：１、９５：５、８５：１５、７５：２５、５０：５０の割合（重量比）となるように１００ｍＬの精製水に溶解し、メチオニン全体に対するＬ体の割合が１００重量％から５０重量％の６段階の２４００ｐｐｍのメチオニン水溶液を調製した。この２４００ｐｐｍの水溶液１０ｍＬを、精製水１０ｍＬで希釈することにより１２００ｐｐｍの水溶液を調製した。さらに、２４００ｐｐｍの水溶液５ｍＬを精製水１５ｍＬで希釈することにより、６００ｐｐｍのメチオニン水溶液を調製した。
（３）９６ウェルプレート（丸底、撥水防止加工）の各ウェルに１００μＬの線虫懸濁液をガラスピペットで注入した。さらに、各ウェルに各濃度のメチオニン水溶液を１００μＬ加えた。したがって、線虫を浸漬させた際のメチオニンの濃度は、それぞれ３００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、１２００ｐｐｍであった。また、対照（０ｐｐｍ、ＣＴＬ）には、１００μＬの精製水を加えた。試験数はｎ＝４とした。
（４）メチオニン水溶液への浸漬の直後（０日後）、および１、３、６日後に、実体顕微鏡透過照明下で生存している線虫の数を数えた。生存している線虫は、実施例１の１．試験方法（４）と同様に判断した。
　結果を以下の表３～５および図３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　表３～５および図３を参照すると、Ｌ体の割合が増加すると線虫抑制効果も増加することが示された。また、Ｌ体の割合が７５～１００重量％の水溶液ではいずれも、Ｌ体の割合が５０重量％（すなわちＤＬ体）の水溶液と比べて高い線虫抑制効果を示した。特に、Ｌ体の割合が９９重量％および１００重量％の水溶液は、いずれの濃度においても線虫に対して高い抑制効果を示し、６００ｐｐｍ（圃場処理量３０ｋｇ／１０ａに相当）および１２００ｐｐｍ（圃場処理量６０ｋｇ／１０ａに相当）では６日後の線虫の生存率がほぼ０％であった。この結果から、本開示の組成物は、メチオニンの総重量に対して５０重量％を超えるＬ－メチオニンを含むことにより優れた線虫抑制効果を提供することができること、および、その効果はＬ体の割合の増加に伴って増強されることが示された。
　実施例３　メチオニン水溶液の線虫抑制効果の光学異性体による比較（２）
　実施例１の結果から、Ｌ－メチオニンの場合、線虫の生存率は２５０ｐｐｍから２５００ｐｐｍの間で大きく変化することが分かった。そこで、メチオニン水溶液の濃度を変更し、実施例１と同様に試験を行い、メチオニン濃度と線虫抑制効果の関係をより詳細に評価した。
１．試験方法
　メチオニン水溶液を６００ｐｐｍ、１２００ｐｐｍ、１８００ｐｐｍ、２４００ｐｐｍ、５０００ｐｐｍの濃度で調製した以外は、実施例１と同様に試験した。
２．結果
　得られた結果の平均値を以下の表６～８に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　表６の４日後の結果を見ると、Ｌ－メチオニンの場合、９００ｐｐｍで、２５００ｐｐｍと同程度の効果が得られることが分かった。９００ｐｐｍは、圃場１０ａ（１０００ｍ2）あたり４５ｋｇのＬ－メチオニン量に相当する。また、Ｌ－メチオニンは、３００ｐｐｍ（１５ｋｇ／１０ａに相当）でも線虫に対して十分な抑制効果を有することが示された。一方、Ｄ－メチオニンおよびＤＬ－メチオニンでは、４日後の生存率は、ほとんどの濃度で５０％を超えていた。これらの結果から、Ｌ－メチオニンはＤ－メチオニンおよびＤＬ－メチオニンと比べて低濃度でも優れた線虫抑制効果を有することが示された。
　実施例４　メチオニン水溶液の線虫抑制効果の光学異性体による比較（３）
　実施例１～３により、Ｌ－メチオニンを線虫と長時間接触させた場合の抑制効果が示された。そこで、接触時間を短縮して試験を行うことで、短時間の接触による線虫（サツマイモネコブセンチュウ）抑制効果を評価した。
１．試験方法
　メチオニン水溶液の濃度を０ｐｐｍ、３００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、１２００ｐｐｍ、１８００ｐｐｍ、２４００ｐｐｍ、４８００ｐｐｍとし、試験時間を４時間とした以外は実施例１と同様に試験した。試験はｎ＝２で行った。
２．結果
　結果を以下の表９および図４に示す。結果は平均値である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　結果から、メチオニン水溶液との接触から４時間後では、Ｌ体において濃度依存的に生存率が低下した。また、どの濃度においても、Ｄ体およびＤＬ体と比べて、Ｌ体は線虫の生存率が低かった。この結果から、Ｌ体はＤ体およびＤＬ体と比べて、いずれの濃度においても優れた線虫抑制効果を有することが示された。なお、Ｌ体の対数近似直線（ｙ＝－１６．２８ｌｎ（ｘ）＋１２７．２、Ｒ2＝０．６６）から、Ｌ体の４時間後のＬＤ50は、１１５ｐｐｍと計算された。これは、圃場１０ａ（１０００ｍ2）に対して６ｋｇに相当する。
　実施例５　メチオニンのキタネコブセンチュウに対する抑制効果の評価
　線虫としてキタネコブセンチュウを使用し、メチオニンの各光学異性体による抑制効果の評価を行った。
１．試験方法
　調製するメチオニン水溶液の濃度を３００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、１２００ｐｐｍ、１８００ｐｐｍとし、線虫としてキタネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２６０系統）を使用した以外は実施例１と同様に試験した。線虫の生存数のカウントは、試験開始から１日後および４日後に行った。
２．結果
　結果を以下の表１０および図５に示す。結果は平均値である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　キタネコブセンチュウに対して、１日後では、Ｌ－メチオニンのみが抑制効果を示した。また、４日後ではＬ－メチオニンはキタネコブセンチュウに対して優れた抑制効果を示した。一方、Ｄ－メチオニンおよびＤＬ－メチオニンでは、１日後では抑制効果が認められず、４日後では生存率低下が認められたが、その効果はわずかであった。これらの結果ら、Ｌ－メチオニンは、サツマイモネコブセンチュウに限らず、ネコブセンチュウに広く効果を有することが示唆された。
　実施例６　メチオニンのアレナリアネコブセンチュウに対する抑制効果の評価
　線虫としてアレナリアネコブセンチュウを使用し、メチオニンの各光学異性体による防除効果の評価を行った。
１．試験方法
　メチオニンの光学異性体として、Ｄ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）、Ｌ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）およびＤＬ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）を使用した。調製するメチオニン水溶液の濃度を３００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、１２００ｐｐｍ、１８００ｐｐｍ、２４００ｐｐｍ、４８００ｐｐｍとし、線虫としてアレナリアネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２６2系統）を使用した以外は実施例１と同様に試験した。線虫の生存数のカウントは、試験開始から３時間後、２日後および３日後に行った。
２．結果
　結果を表１１および図６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　表１１および図６が示すように、浸漬から３時間後では、メチオニンのＤ体およびＤＬ体は全ての濃度で線虫の高い生存率を示した。一方、Ｌ体は、高い線虫抑制効果を示し、その効果は概ね濃度に比例して高くなった。２日後および３日後においても、Ｄ体で処理した線虫の生存率は高い水準で維持されていた。これに対し、ＤＬ体で処理した線虫の生存率は、１２００ｐｐｍまでは濃度依存的に低下したが、２４００ｐｐｍではむしろ生存率は回復し、高い値を示した。理論に拘束されるものではないが、アレナリアネコブセンチュウに対しては、高濃度のＤ体の存在がＬ体の抑制効果を打ち消した可能性が考えられる。一方、２日後および３日後において、Ｌ体で処理した線虫の生存率はいずれの濃度においても低い水準で維持されていた。この結果から、本開示の組成物は、アレナリアネコブセンチュウに対しても高い抑制効果を示すことが示された。
　実施例７　メチオニンの光学異性体のサツマイモネコブセンチュウに対する防除効果の比較
　メチオニンのＤ体、Ｌ体、ＤＬ体を、サツマイモネコブセンチュウを接種した土壌に様々な濃度で添加し、トマトの根こぶ被害度に与える影響を評価した。
１．試験方法
（１）サツマイモネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２５８系統、（独）農研機構ジーンバンクより購入）の増殖土壌、市販の黒ボク土、および園芸用育苗培土（ホクサン株式会社製）を、１：１：１の比率で混合し、線虫汚染土壌を調合した。
（２）Ｄ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）、Ｌ－メチオニン（あすかアニマルヘルス株式会社、純度９９．６％）およびＤＬ－メチオニン（あすかアニマルヘルス株式会社、純度９９．５％）をそれぞれ０．５％（ｗ／ｖ）となるようにイオン交換水に溶解させ、０．５％メチオニン水溶液を調製した。
（３）線虫汚染土壌６００ｍＬに対し、０．５％メチオニン水溶液をそれぞれ８ｍＬ、１６ｍＬおよび２４ｍＬずつ添加し、混合した。これらはそれぞれ、土壌１０ａ（１０００ｍ2）あたり１０ｋｇ（６７ｐｐｍ）、２０ｋｇ（１３３ｐｐｍ）および３０ｋｇ（２００ｐｐｍ）のメチオニンの量に相当する。０．５％メチオニン水溶液の添加後、水をさらに追加して土壌含水率を３２％に調整した。なお、対照（ＣＴＬ）は０．５％メチオニン水溶液を混和していない土壌とした。得られた土壌は、ビニルマルチ処理条件を模すため、ポリ袋に入れて３日間密閉状態で２５℃に静置した。
（４）手順（３）で用意した土壌の一部を取り出し、ベルマン法を用いて土壌から線虫を分離することで、土壌中の線虫数の測定を行った。まず、ガラス容器に紙皿を置き、その上に土壌１０ｇを乗せ、３日間静置して線虫をガラス容器に分離した。沈殿した線虫の幼虫を回収し、プランクトン計数スライドを用いて個体数をカウントした。
（５）残りの土壌をそれぞれ容積６００ｍLの育苗ポットに充填した。ここに、播種後２４日のミニトマト（品種：レジナ、サカタのタネ）を１株ずつ植え付けた。ポットはガラス室に置き、２１日間育成した（最高気温３５℃、平均気温２８℃）。育成中は土壌表面が乾かないように１日１回灌水した。試験数はｎ＝３とした。育成開始から２１日後、ポットから根を取り出した。シャワーで水洗して土を落とし、目視観察によりそれぞれの条件について根こぶ被害度を確認した。
２．評価方法
　根こぶ被害度は、Ｚｅｃｋ階級値（Ｚｅｃｋ，Ｗ．Ｍ．（１９７１）：Ｐｆｌａｎｚｅｎｓｃｈｕｔｚ－Ｎａｃｈｉｃｈｔｅｎ．Ｂａｙｅｒ　ＡＧ，２４，１４１－１４４．）を用いて以下の１１段階で評価した。得られたスコアから３株の平均値および標準偏差（ＳＤ）を求めた。
０：根こぶが全く認められない。
１：注意深い観察によって、数個の小さな根こぶを認めることができる。
２：１と同様の数個の小さな根こぶが容易に確認できる。
３：多くの小さな根こぶがあり、そのいくつかは融合している。根の機能はほとんどそこなわれていない。
４：多数の小さな根こぶがあり、大きな根こぶもいくつかある。根の多くは機能している。
５：根の２５％に著しく根こぶが着生し、機能していない。
６：根の５０％に著しく根こぶが着生し、機能していない。
７：根の７５％に著しく根こぶが着生し、根の再生能力も失われている。
８：健全な根は皆無であり、植物の養分吸収は阻害されている。茎葉部はまだ青い。
９：完全に根こぶに被われた根系が腐敗しつつある。植物は枯死しつつある。
１０：植物も根も枯死。
３．結果
　結果を以下の表１２～１３および図７に示す。また、回収した根の写真を図８～９に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　線虫密度に関して、いずれのメチオニン量においても、Ｌ－メチオニンおよびＤＬ－メチオニンは、Ｄ－メチオニンよりも線虫密度が著しく低かった。したがって、Ｄ－メチオニンの線虫抑制効果は、Ｌ体およびＤＬ体よりも著しく低いことが示された。
　根こぶ被害度に関して、２００ｐｐｍにおいては、対照と比較していずれのメチオニンでも防除効果が認められた。一方、１３３ｐｐｍでは、Ｌ体およびＤＬ体のメチオニンにおいて高い防除効果が認められたが、Ｄ体のメチオニンはＬ体およびＤＬ体と比較して防除効果が劣っていた。６７ｐｐｍでは、いずれのメチオニンも対照と比較して低い値となったが、Ｄ体、ＤＬ体のメチオニンに対して、Ｌ体のメチオニンにおいて顕著に高い防除効果が認められた。この結果から、Ｄ体、ＤＬ体のメチオニンと比較して、Ｌ体のメチオニンが低濃度において線虫に対する高い防除効果を発揮することが示された。特に、６７ｐｐｍのＬ－メチオニンは、根こぶ被害度を１３３ｐｐｍのＤＬ－メチオニンと同程度に抑えていることから、線虫の防除にＬ－メチオニンを使用することで、これまで示唆されていたＤＬ－メチオニンを使用する方法よりも使用量を減らすことができ、結果としてコストの削減につながると考えられる。
　実施例８　メチオニンの光学異性体のアレナリアネコブセンチュウに対する防除効果の比較
　アレナリアネコブセンチュウを接種した土壌にメチオニンのＤ体およびＬ体を添加し、土壌中生存率に与える影響を評価した。
１．試験方法
（１）アレナリアネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２６２系統、（独）農研機構ジーンバンクより入手）を黒ボク土に植えたトマトで増殖させた。この土壌を目合２．５ｍｍのふるいにかけ、根を除去した。
（２）手順（１）で用意した土壌の一部を取り出し、ベルマン漏斗法を用いて土壌から線虫を分離することで、土壌中の線虫数を測定した。まず、紙を敷いた網皿に土壌２０ｇを乗せ、水を張ったガラス漏斗に浸し、３日間静置して線虫をガラス漏斗の脚に取り付けたバイアルに分離した。バイアルに沈殿した線虫の幼虫を回収し、プランクトン計数スライドを用いて個体数を数えた。
（３）手順（１）でふるい済みの土壌の適量を、含水率３３％に調整した市販の黒ボク土と混合し、初期密度が土壌１グラム当たり２．５頭の線虫汚染土壌を調合した。
（４）Ｄ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）、Ｌ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）およびＤＬ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）をそれぞれ１ｇずつ、５０ｍＬの精製水に溶解して２％メチオニン水溶液を調製した。さらに１０倍に希釈して、０．２％メチオニン水溶液を調製した。
（５）処理濃度は１００ｍｇ／Ｌ（圃場処理量１５ｋｇ／１０ａに相当）および２００ｍｇ／Ｌ（圃場処理量３０ｋｇ／１０ａ）とした。１００ｍｇ／Ｌ（１５ｋｇ／１０ａ）では、線虫汚染土壌６００ｍＬに対し、０．２％メチオニン水溶液３０ｍＬを土壌に噴霧し、さらに水３０ｍＬを噴霧した。２００ｍｇ／Ｌ（３０ｋｇ／１０ａ）では、線虫汚染土壌６００ｍＬに対し、０．２％メチオニン水溶液６０ｍＬを土壌に噴霧した。対照（ＣＴＬ）では、水６０ｍＬを噴霧した。土壌は、空気で膨らませたポリ袋に入れて回転させることにより混合した。得られた土壌は、ビニルマルチ処理条件を模すため、ポリ袋に入れて２５℃で３日間、密閉状態で静置した。
（６）手順（２）と同様のベルマン漏斗法により、土壌から線虫を分離して、土壌中の線虫数を測定した。試験数はｎ＝３とした（土壌１～３）。
３．結果
　結果を以下の表１４に示す。防除価は以下の式により計算した。
　防除価（％）＝（１－各条件の線虫数の平均値／対照の線虫数の平均値）×１００
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
　Ｄ－メチオニンと比較してＬ－メチオニンで高い防除価が示された。特に、Ｌ－メチオニンの３０ｋｇ／１０ａの処理濃度では線虫密度は０であった。一方、Ｄ－メチオニンでは防除価は低くなり、１５ｋｇ／１０ａの処理濃度では防除価はマイナスとなった。この結果から、Ｌ－メチオニンは、アレナリアネコブセンチュウに対しても、Ｄ－メチオニンと比較して高い抑制効果を有することが示された。
　実施例９　メチオニンの光学異性体のサツマイモにおけるネコブセンチュウ被害の抑制効果の比較
　線虫防除剤の需要はサツマイモ栽培で特に高いことから、メチオニンのＬ体とＤＬ体とをサツマイモネコブセンチュウを接種した土壌に添加し、サツマイモの根こぶ被害度に与える影響を評価した。
１．試験方法
（１）サツマイモネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２５８系統、（独）農研機構ジーンバンクより入手）を黒ボク土に植えたトマトで増殖させた。この土壌を目合２．５ｍｍのふるいにかけ、根を除去した。
（２）実施例８の手順（２）に示したベルマン漏斗法と同様の手順で線虫を分離し、プランクトン計数スライドを用いて個体数を数えた。
（３）実施例８の手順（３）と同様の手順で試験用線虫汚染土壌を調合した。線虫の初期密度は土壌１グラムあたり１．２５頭とした。
（４）Ｌ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）およびＤＬ－メチオニン（東京化成工業株式会社、純度＞９９．０％）の粉体０．９ｇずつを、それぞれ９９．１の黒ボク土に混和してメチオニンを９％の濃度で含む土壌を調製した。
（５）処理濃度は１００ｍｇ／Ｌ（圃場処理量１５ｋｇ／１０ａに相当）とした。線虫汚染土壌９Ｌに対しメチオニンを９％で含む土壌を１００ｇ添加し、空気で膨らませたポリ袋に入れて回転させることにより混合した。
（６）Ｌ体、ＤＬ体を混和した線虫汚染土壌をそれぞれ容積３Ｌのプランターに充填し、ここに、サツマイモ（品種：高系１４号）の蔓を１本ずつ植え付けた。対照は無処理（ＣＴＬ）とし、メチオニンを混和していない土壌を使用した。試験数はｎ＝３（株１～株３）とした。プランターはガラス室に置き、５２日間育成した（最高気温３５℃、平均気温２８℃）。育成中は、土壌表面が乾かないように１日１回灌水した。
（７）育成開始から５２日後、ポットから根を取り出した。シャワーで水洗して土を落とし、蔓と芋を根から外した。洗浄した根は根こぶ数を数えるまで－２０℃の冷凍庫で保存した。解凍した根を長さ５ｍｍに裁断し、水に入れて懸濁させた後に茶こしに移し、絞って水を切った。全根の重量（ｇ）を測定した後、そこから２ｇ取り分け、根こぶおよび卵のうの数を数えた。卵のうについては、根こぶに残った剥離痕跡から存在が推定されたものも含めた。根こぶ数は、卵のうもしくはその剥離痕跡が一つの瘤に２つ以上認められた場合は、卵のう数と一致させた。株あたりの根こぶ数および卵のう数を、２ｇ当たりの根こぶ数および卵のう数に全根の重量（ｇ）を掛け、さらに２で除して求めた。
３．結果
　結果を以下の表１５および１６に示す。防除価は以下の式により計算した。
　防除価（％）＝（１－根こぶ数または卵のう数の平均値／対照の根こぶ数または卵のう数の平均値）×１００
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
　サツマイモにおいて、ＤＬ－メチオニンで処理したサツマイモでは根こぶ数および卵のう数のどちらもＣＴＬと同等であり、防除価はマイナスであった。これに対し、Ｌ－メチオニンで処理したサツマイモでは根こぶ数および卵のう数が減少し、防除価もＤＬ－メチオニンと比べて高くなった。この結果から、サツマイモにおいても、Ｌ－メチオニンはＤＬ－メチオニンと比較して、線虫抑制効果を提供できることが示された。
　実施例１０　Ｌ－メチオニンの粉体および水溶液による線虫抑制効果比較
　Ｌ－メチオニンを異なる形態で土壌に適用し、線虫抑制効果への影響を評価した。
１．試験方法
（１）サツマイモネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２５８系統）を、線虫密度が２０頭／２０ｇ土壌となるように市販の滅菌済み黒ボク土と混和し、線虫汚染土壌を調合した。
（２）線虫汚染土壌に対し、以下のＡ～Ｃの条件でＬ－メチオニン処理を行った。対照（ＣＴＬ）はＬ－メチオニン処理を行っていない土壌とした。
（Ａ：粉体混和処理）
　Ｌ－メチオニンの量が６７ｐｐｍ（圃場処理量１０ｋｇ／１０ａに相当）となるように、Ｌ－メチオニンを１００倍希釈した砂４ｇを６００ｍＬの線虫汚染土壌と混和した。ここに水を添加して、土壌水分量を３２％に調節し、ポリ袋に入れて密閉状態で３日間２５℃に静置した。Ｌ－メチオニンとの混和から４日後に、土壌をポットに充填して、トマトの育成に使用した。
（Ｂ：水溶液混和処理）
　Ｌ－メチオニンをイオン交換水に溶解させて、０．５％メチオニン水溶液を調製した。このメチオニン水溶液８ｍＬを、Ｌ－メチオニンの量が６７ｐｐｍとなるように６００ｍＬの線虫汚染土壌と混和した。ここに水を添加して、土壌水分量を３２％に調節し、ポリ袋に入れて密閉状態で３日間２５℃に静置した。Ｌ－メチオニンとの混和から４日後に、土壌をポットに充填して、トマトの育成に使用した。
（Ｃ：灌注処理）
　６００ｍＬの線虫汚染土壌をポットに充填した。８ｍＬの０．５％メチオニン水溶液を水で５０ｍＬに希釈し、電動スプレーで土壌表面に噴霧した。翌日、および翌々日には同様に、水５０ｍＬを土壌表面に噴霧した。
（３）手順（２）で用意した各ポットに、播種後３１日のミニトマト（品種：レジナ）を１株ずつ植え付け、２５℃の恒温室内で、植物育成用のＬＤライトの照明下で２４日間栽培した。２４日後、ポットから根を取り出し、土をシャワーで洗い落として実体顕微鏡下で根こぶ数を数えた。Ａ～Ｃの条件はｎ＝３で行い、対照はｎ＝４で行った。
２．結果
　結果を表１７に示す。根こぶ数は平均値であり、対ＣＴＬ比は、対照の根こぶ数に対する各条件における根こぶ数の割合（百分率）を示す。防除価は、１００％から対ＣＴＬ比を引いた値である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
　いずれの条件においても、Ｌ－メチオニンは対照と比較して優れた抑制効果を示したが、特に条件Ａ（粉体混和処理）およびＢ（水溶液混和処理）において高い抑制効果が示された。
　実施例１１　Ｌ－メチオニンによる線虫抑制効果の評価
　粉体形態のＬ－メチオニンについて、土壌への施用量を変えて根こぶの抑制効果を評価した。また、ＤＬ－メチオニンでも同様に試験を行い、抑制効果の比較を行った。
１．試験方法
（１）黒ボク土を入れたプランターのミニトマト（品種：レジナ）でサツマイモネコブセンチュウ（ＭＡＦＦ１０８２５８系統）を増殖させた。サツマイモネコブセンチュウが増殖した土壌を、市販の滅菌済み黒ボク土で希釈し、線虫密度が２０頭／２０ｇ土壌の線虫汚染土壌を調合した。
（２）Ｌ－メチオニンの粉体を砂で１００倍に希釈し、３ｇおよび４ｇの砂をそれぞれ６００ｍＬの線虫汚染土壌と混和した。Ｌ－メチオニンの濃度はそれぞれ５０ｐｐｍ、６７ｐｐｍ（それぞれ土壌１０ａあたり７．５ｋｇおよび１０ｋｇに相当、それぞれ「Ｌ７．５」、「Ｌ１０」と記載）であった。また、比較対象として、ＤＬ－メチオニンの粉体を６７ｐｐｍとなるように土壌６００ｍＬと混和した（ＤＬ１０）。対照は、メチオニンを含まない土壌（ＣＴＬ）とした。土壌はポリ袋に入れ、密閉状態で３日間静置した。
（３）メチオニンと土壌との混和から４日後に、ポットにそれぞれの土壌を充填した。播種後３１日のミニトマト（品種：レジナ）をそれぞれのポットに１株ずつ植え付け、２５℃の恒温室内で、植物育成用ＬＥＤライトの照射下で２４日間育成した。２４日後、それぞれの根をポットから取り出し、土をシャワーで洗い落として、実体顕微鏡下で根こぶの数を数えた。試験はｎ＝３（ＣＴＬのみｎ＝４）で行った。
２．結果
　それぞれの条件における根こぶ数の平均値を表１８および図１０に示す。また、得られた根こぶ数から、それぞれの条件について防除価を算出した。防除価の計算式は以下に示すとおりである。図１０は、根こぶ数および防除価をグラフとして示す。
　防除価（％）＝（１－各条件の根こぶ数／対照の根こぶ数）×１００
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
　根こぶ数は、Ｌ－メチオニンの６７ｐｐｍ、５０ｐｐｍの順で少なかった。根こぶの防除価は７０％を超えていた。この結果から、メチオニンのＬ体は、低濃度において優れた線虫抑制効果を発揮することが示唆された。一方、ＤＬ－メチオニンの６７ｐｐｍでは、防除価は２３％にとどまった。したがって、より低い濃度のＤＬ－メチオニンでは十分な防除効果が得られないことが示唆された。

Claims (13)

  1. 　メチオニンを含む、線虫防除用の組成物であって、
    　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して５０重量％超のＬ－メチオニンを含む、組成物。
  2. 　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して７５重量％以上のＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して９５重量％以上のＬ－メチオニンを含む、請求項２に記載の組成物。
  4. 　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して最大１００重量％のＬ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  5. 　前記メチオニンが、Ｄ－メチオニンを含む、請求項１に記載の組成物。
  6. 　前記線虫が、ネコブセンチュウである、請求項１に記載の組成物。
  7. 　前記ネコブセンチュウが、サツマイモネコブセンチュウ、キタネコブセンチュウおよびアレナリアネコブセンチュウである、請求項６に記載の組成物。
  8. 　圃場１０００ｍ2あたり５～４０ｋｇのＬ－メチオニンに相当する量で施用される、請求項１に記載の組成物。
  9. 　粉末の形態である、請求項１に記載の組成物。
  10. 　線虫の防除方法であって、
    　圃場１０００ｍ2あたり５～８０ｋｇの量のメチオニンを施用することを含み、
    　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して５０重量％超のＬ－メチオニンを含む、方法。
  11. 　前記メチオニンが、前記メチオニンの総重量に対して７５重量％以上のＬ－メチオニンを含む、請求項１０に記載の方法。
  12. 　前記メチオニンが、最大１００重量％のＬ－メチオニンを含む、請求項１０に記載の方法。
  13. 　前記線虫が、ネコブセンチュウである、請求項１０に記載の方法。
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