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WO2025103667A1 - Reinigungsmittel enthaltend protease - Google Patents

Reinigungsmittel enthaltend protease Download PDF

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Publication number
WO2025103667A1
WO2025103667A1 PCT/EP2024/078314 EP2024078314W WO2025103667A1 WO 2025103667 A1 WO2025103667 A1 WO 2025103667A1 EP 2024078314 W EP2024078314 W EP 2024078314W WO 2025103667 A1 WO2025103667 A1 WO 2025103667A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
particularly preferably
amino acid
agent
protease
toilet
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
PCT/EP2024/078314
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Nadine BLUHM
Helga Werner
Sabine Schuemann
Fabian Falkenberg
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henkel AG and Co KGaA
Original Assignee
Henkel AG and Co KGaA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel AG and Co KGaA filed Critical Henkel AG and Co KGaA
Publication of WO2025103667A1 publication Critical patent/WO2025103667A1/de
Pending legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38618—Protease or amylase in liquid compositions only
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D1/00—Detergent compositions based essentially on surface-active compounds; Use of these compounds as a detergent
    • C11D1/66—Non-ionic compounds
    • C11D1/662—Carbohydrates or derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D1/00—Detergent compositions based essentially on surface-active compounds; Use of these compounds as a detergent
    • C11D1/66—Non-ionic compounds
    • C11D1/72—Ethers of polyoxyalkylene glycols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D2111/00—Cleaning compositions characterised by the objects to be cleaned; Cleaning compositions characterised by non-standard cleaning or washing processes
    • C11D2111/10—Objects to be cleaned
    • C11D2111/14—Hard surfaces

Definitions

  • the invention lies in the field of cleaning agents, in particular cleaning agents for hard surfaces, preferably liquid cleaning agents for cleaning sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet bowls, cisterns, and toilet rims.
  • cleaning agents according to the invention which contain surfactant and protease and have a neutral pH value, represent a gentle cleaning agent alternative with very good cleaning performance.
  • the invention therefore relates, in a first aspect, to a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent for cleaning hard surfaces, particularly preferably a liquid cleaning agent for cleaning sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, comprising at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5 wt.%, preferably 0.001 to 2.5 wt.%, particularly preferably 0.005 to 1 wt.%, very particularly preferably 0.01 to 0.5 wt.%, based on active protein and total weight of the agent, at least one surfactant, wherein the surfactant is selected from the group consisting of non-ionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, amphoteric surfactants and mixtures thereof, preferably in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5%
  • agents according to the invention comprise a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1 (i) at least one of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 and 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 74, 136, 143, 154, 160, 161, 163, 171, 181, 183,
  • the agent comprises a protease which has proteolytic activity and which comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and which has one of the following amino acid substitution combinations: S3T- V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I-R
  • the agent comprises at least one reversible protease inhibitor or stabilizer, wherein the inhibitor/stabilizer is selected from the group consisting of polyols such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA), antioxidants, peptide inhibitors, preferably in an amount of 0.1 to 2 wt.%, preferably 0.3 to 1.5 wt.%, based on the total weight of the agent.
  • the inhibitor/stabilizer is selected from the group consisting of polyols such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA), antioxidants, peptide
  • the agent comprises at least two surfactants, wherein the second surfactant is different from the first surfactant and is selected from the group consisting of non-ionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, amphoteric surfactants and mixtures thereof, preferably in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%, very particularly preferably 0.1 to 2.5 wt.%, based on active substance and total weight of the agent.
  • the second surfactant is different from the first surfactant and is selected from the group consisting of non-ionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, amphoteric surfactants and mixtures thereof, preferably in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%,
  • the first and second surfactants are different from each other and are selected from the group consisting of alcohol ethoxylates and alkyl polyglycosides.
  • the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%, very particularly preferably 0.1 to 2.5 wt.% and the second surfactant is an alkyl polyglycoside, in an amount of 0.0005 to 6.5 wt.%, preferably 0.005 to 5 wt.%, particularly preferably 0.03 to 3 wt.%, very particularly preferably 0.05 to 1.5 wt.%, in each case based on the active substance and the total weight of the agent.
  • the first surfactant and the second surfactant are present in a ratio of 1:0.1 to 1:1.5, preferably 1:0.2 to 1:1.2, particularly preferably 1:0.25 to 1:1, very particularly preferably 1:0.5 to 1:0.75, e.g. 1:0.1, 1:0.2, 1:0.25, 1:0.3, 1:0.4, 1:0.5, 1:0.6, 1:0.65, 1:0.7, 1:0.75, 1:0.8, 1:0.9, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.25, 1:3, 1 :4, 1 :5.
  • Method for cleaning hard surfaces in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet bowls, cisterns, toilet rims, characterized in that a cleaning agent described herein is used in at least one method step, the method preferably being carried out in a temperature range of about 15°C to about 30°C, preferably about 18°C to about 25°C, particularly preferably about 25°C, most particularly preferably about 20°C;
  • a protease in a cleaning agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, preferably in a temperature range of about 15°C to about 30°C, preferably about 18°C to about 25°C, more preferably about 25°C, most preferably about 20°C, wherein the protease is as defined herein;
  • a cleaning agent described herein for cleaning hard surfaces in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, preferably in a temperature range of about 15°C to about 30°C, preferably about 18°C to about 25°C, more preferably about 25°C, most preferably about 20°C.
  • Numerical ranges specified in the format "from x to y" include the specified values. If multiple preferred numerical ranges are specified in this format, it goes without saying that all ranges resulting from the combination of the different endpoints will also be included.
  • At least one as used herein means one or more, i.e. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or more.
  • cleaning agent as used herein is synonymous with the term “agent” and refers to a composition for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, as explained in the description.
  • Liquid includes liquids and gels, as well as pasty compositions. It is preferred that the liquid compositions be flowable and pourable at room temperature, but it is also possible that they have a yield point.
  • a substance e.g. a composition or an agent, is solid according to the definition of the invention if it is in the solid state at 25°C and 1,013 mbar.
  • a substance e.g., a composition or agent, is liquid according to the invention's definition if it is in the liquid state at 25°C and 1,013 mbar. Liquid also includes gel.
  • Variant refers to natural or artificially produced variations of a native enzyme that have a modified amino acid sequence compared to the reference form.
  • the present invention is based on the surprising finding of the inventors that cleaning agents according to the invention which contain surfactant and protease and have a neutral pH represent a gentle cleaning agent alternative with very good cleaning performance.
  • a protease is used in a cleaning agent.
  • the use of a protease in a cleaning agent according to the invention or the use of a cleaning agent according to the invention leads to improved cleaning of hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, and toilet rims.
  • Agents according to the invention contain a protease.
  • suitable proteases are subtilisins BPN' from Bacillus amyloliquefaciens and Carlsberg from Bacillus licheniformis, protease PB92, subtilisins 147 and 309, protease from Bacillus lentus, subtilisin DY, and the enzymes thermitase, proteinase K, and proteases TW3 and TW7, which are classified as subtilases but no longer as subtilisins in the narrower sense.
  • Subtilisin Carlsberg is available in a further developed form under the trade name Alcalase® from Novozymes.
  • Subtilisins 147 and 309 are marketed by Novozymes under the trade names Esperase® and Savinase®, respectively.
  • Protease variants are derived from the protease from Bacillus lentus DSM 5483, described in e.g. WO 95/23221, WO 92/21760, WO 2013/060621 and EP 3660151.
  • Other useful proteases are e.g.
  • proteases from Bacillus gibsonii and Bacillus pumilus which are disclosed in WO 2008/086916, WO 2007/131656, WO 2017/215925, WO 2021/175696 and WO 2021/175697, are also particularly preferably used.
  • Other usable proteases are those that are naturally present in the microorganisms Stenotrophomonas maltophilia, in particular Stenotrophomonas maltophilia K279a, Bacillus intermedius and Bacillus sphaericus.
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one and increasingly preferably at least two, three or four of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one and increasingly preferably at least two, three or four amino acid substitution(s) selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 74, 136, 143, 154, 160, 161,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least two of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least two amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 74, 136, 143, 154, 160, 16
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 by at least 70% and increasingly preferably by at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100%, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least three of the positions which corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 74, 136, 143, 154, 160, 161, 16
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions which positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 74, 136, 143, 154, 160, 161, 163, 171, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one and increasingly preferably two, three or four of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one and increasingly preferably two, three or four amino acid substitution(s) selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one
  • the protease contained in the agent according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one of the positions, corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least two of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least two amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1 , (i) at least three of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions which corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least one of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200, 203, 209 or 256, at least
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least two of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least two of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least two amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least two of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least three of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least two of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions which corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least two of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200, 203, 209 or 256, at least
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least three of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least two of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least two amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least three of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least three of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least three of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in the agent according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions which positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least three of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200, 203, 209 or 256, at least three amino acid
  • the protease contained in the agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one of the positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least four of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least two of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least two amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least four of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least three of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least four of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions which correspond to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least four of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200, 203, 209 or 256, at least four amino acid sequence which
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least five of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least two of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least two amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least five of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least three of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least five of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions which corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least five of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200, 203, 209 or 256, at least
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least one of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least six of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least two of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least two amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least six of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at least three of the Positions corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, at least three amino acid substitutions selected from the group consisting of S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least six of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200,
  • the protease contained in agents according to the invention is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions which corresponding to positions 3, 4, 99 or 199, the amino acid substitutions S3T, V4I, R99E and V199I, and (ii) at least six of the positions corresponding to positions 154, 160, 181, 183, 185, 200, 203, 209 or 256, at least
  • cleaning agents according to the invention contain a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than 100% identical to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length, and which has one of the following amino acid substitution combinations: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-
  • cleaning agents according to the invention contain a protease which has proteolytic activity and has one of the following amino acid substitution combinations: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-
  • agents according to the invention contain the protease according to the invention increasingly preferably in an amount of from 1 x 10 -8 to 5% by weight, from 0.0001 to 1% by weight, from 0.0005 to 0.5% by weight, from 0.001 to 0.1% by weight, based on active protein and total weight of the agent.
  • agents according to the invention contain the protease according to the invention in an amount of 0.0001 to 5 wt.%, preferably 0.001 to 2.5 wt.%, particularly preferably 0.005 to 1 wt.%, very particularly preferably 0.01 to 0.5 wt.%, based on active protein and total weight of the agent.
  • the protein concentration can be determined using known methods, e.g., the BCA method (bicinchoninic acid; 2,2'-biquinolyl-4,4'-dicarboxylic acid) or the biuret method (Gornall et al., J. Biol. Chem., 1948, 177, 751-766).
  • the determination of the active protein concentration can be carried out by titration of the active sites using a suitable irreversible inhibitor and determination of the residual activity (Bender et al., J. Am. Chem. Soc., 1966, 88, 24, 5890-5913).
  • the enzymes described herein are preferably mature enzymes, i.e., the catalytically active molecule without signal and/or propeptide(s). Unless otherwise stated, the sequences given also refer to mature (processed) enzymes.
  • the respective enzyme is a free enzyme. This means that the enzyme can interact directly with all components of the agent and, if the agent is a liquid agent, that the enzyme is in direct contact with the agent's solvent (e.g., water).
  • an agent may contain enzymes that form an interaction complex with other molecules or that contain an "envelope.” In this case, a single or multiple enzyme molecules may be separated from the other components of the agent by a surrounding structure. Such a separating structure may be formed by, but is not limited to, vesicles, such as a micelle or a liposome.
  • the surrounding structure may also be a virus particle, a bacterial cell, or a eukaryotic cell.
  • an agent may contain cells of Bacillus pumilus or Bacillus subtilus that express enzymes, or cell culture supernatants of such cells.
  • an enzyme has the indicated substitution(s) (or deletion or insertion) means that it contains one of the indicated substitution(s) (or deletion or insertion) at the respective position, i.e., at least the indicated positions are not otherwise mutated or deleted, e.g., by fragmentation of the enzyme.
  • the enzymes described herein, with the exception of the explicitly mentioned substitutions have the sequence of the respective reference sequence, i.e., apart from the substituted positions, they are 100% identical to the respective reference sequence.
  • sequence comparison is based on the BLAST algorithm, which is established and commonly used in the state of the art (Altschul et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410, and Altschul et al., Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res., 1997, 25, 3389-3402) and is essentially achieved by matching similar sequences of nucleotides or amino acids in the nucleic acid or amino acid sequences. A tabular assignment of the relevant positions is called an alignment.
  • Another algorithm available in the state of the art is the FASTA algorithm.
  • Sequence comparisons are created using computer programs. Frequently used are, for example, the Clustal series (Chenna et al., Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs, Nucleic Acid Res., 2003, 31 , 3497-3500), T-Coffee (Notredame et al., T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments, J. Mol. Biol., 2000, 302, 205-217) or programs based on these Programs or algorithms.
  • Sequence comparisons are also possible using the computer program Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, California, USA) with the specified standard parameters, whose AlignX module for sequence comparisons is based on ClustalW, or Clone Manager 10 (using the BLOSUM 62 scoring matrix for sequence alignment at the amino acid level). Unless otherwise stated, the sequence identity stated herein is determined using the BLAST algorithm.
  • Such a comparison also allows a statement to be made about the similarity of the compared sequences. This is usually expressed as percent identity, i.e., the proportion of identical nucleotides or amino acid residues at the same or corresponding positions in an alignment.
  • the broader term "homology" in amino acid sequences includes conserved amino acid substitutions, i.e., amino acids with similar chemical activity, since these usually exert similar chemical activities within the peptide, protein, or enzyme. Therefore, the similarity of the compared sequences can also be expressed as percent homology or percent similarity. Identity and/or homology statements can be made for entire polypeptides or genes or just for individual regions. Homologous or identical regions of different nucleic acid or amino acid sequences are therefore defined by similarities in the sequences.
  • Such regions often have identical functions. They can be small and comprise only a few nucleotides or amino acids. Such small regions often perform essential functions for the overall activity of the peptide, protein, or enzyme. It may therefore be useful to refer sequence matches only to individual, possibly small regions. Unless otherwise stated, identity or homology statements in this application refer to the entire length of the respective nucleic acid or amino acid sequence.
  • an amino acid position corresponds to a numerically designated position in SEQ ID NO:1 therefore means that the corresponding position is assigned to the numerically designated position in SEQ ID NO:1 in an alignment as defined above.
  • amino acid exchanges amino acid exchanges
  • 130D/V thus means that position 130 is mutated to D or V.
  • additional amino acids are named after the sequence position.
  • deletions the missing amino acid is replaced by a symbol, e.g., an asterisk or a dash, or an A is indicated before the corresponding position.
  • P9T describes the substitution of proline at position 9 with threonine
  • P9TH the insertion of histidine after the amino acid threonine at position 9
  • P9* or AP9 the deletion of proline at position 9.
  • the enzymes contained in the agent and/or other ingredients of the agent can be coated with a substance that is impermeable to the enzyme at room temperature or in the absence of water, which substance becomes permeable to the enzyme under the conditions of use of the agent.
  • Such an embodiment of the invention is thus characterized in that the enzyme is coated with a substance that is impermeable to the enzyme at room temperature or in the absence of water.
  • the enzymes to be used can also be formulated together with accompanying substances, such as those from fermentation.
  • the enzymes are preferably used as liquid enzyme formulation(s).
  • the enzymes are generally not provided in the form of pure protein, but rather in the form of stabilized, storable, and transportable preparations.
  • These prefabricated preparations include, for example, liquid or gel-like products, solutions of the enzymes, preferably as concentrated as possible, with little water content, and/or containing stabilizers or other additives.
  • agents according to the invention can comprise one or more reversible protease inhibitors/stabilizers, preferably in an amount of 0.1 to 2% by weight, more preferably 0.3 to 1.5% by weight, based on the total weight of the agent. If several inhibitors/stabilizers are present, these details refer to the total concentration. In preferred embodiments, these are selected from the group consisting of polyols, such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA), antioxidants, special peptide compounds and combinations thereof.
  • polyols such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic
  • agents according to the invention may contain boric acid as a stabilizer/inhibitor, preferably in an amount of 0.05 to 5.5 wt% and increasingly preferably 0.075 to 4.5 wt%, 0.09 to 3.5 and 0.1 to 2.49 wt%.
  • agents according to the invention can contain a phenylboronic acid derivative as a stabilizer/inhibitor, preferably in an amount of 0.0005 to 2.0% by weight, preferably 0.001 to 1.0% by weight, particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight and very particularly preferably 0.02 to 0.2% by weight.
  • phenylboronic acid derivative is understood to mean a compound of formula (I): where R is hydrogen, a hydroxyl, a C1-8-alkyl, a substituted C1-8-alkyl, a C1-6-alkenyl, or a substituted C1-6-alkenyl group.
  • the radical R in the phenylboronic acid derivative is a C1-6-alkyl group, and more preferably -CH3, -CH3CH2, or -CH3CH2CH2. More preferably, the radical R in the phenylboronic acid derivative is hydrogen.
  • the phenylboronic acid derivative is particularly preferably 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA).
  • Phenylboronic acid derivatives which can be used according to the invention can also have further chemical modifications on the phenyl ring, in particular they can have one or more methyl, amino, nitro, chloro, fluoro, bromo, hydroxyl, formyl, ethyl, acetyl, t-butyl, anisyl, benzyl, trifluroacetyl, N-hydroxysuccinimide, t-butyloxycarbonyl, benzoyl, 4-methylbenzyl, thioanicyl, thiocresyl, benzyloxymethyl, 4-nitrophenyl, benzyloxycarbonyl, 2-nitrobenzoyl, 2-nitrophenylsulphenyl, 4-toluenesulphonyl, pentafluorophenyl, diphenylmethyl, 2-chlorobenzyloxycarbonyl, 2,4,5-trichlorophenyl, 2-bromobenzyloxycarbonyl,
  • agents according to the invention can contain at least one peptide inhibitor as a stabilizer/inhibitor, preferably in a concentration of 0.01 to 50 mM, more preferably 0.05 to 5 mM, and particularly preferably 0.1 to 0.5 mM. If multiple peptide inhibitors are present, these details refer to the total concentration.
  • peptide inhibitor is understood to mean a compound of general formula (II) or a compound of general formula (III), optionally the compound of formula (II) or (III) being present together with a salt of formula (IV).
  • the compound of formula (II) has the following structural formula:
  • ZA-NH-CH(R)-C(O)-X (II), where A is an amino acid residue; X is hydrogen; Z is an N-capping residue selected from phosphoramidate [(R'O)2(O)P-], sulfenamide [(SR')2-], sulfonamide [(R'(O)2S-], sulfonic acid [SO3H], phosphinamide [(R')2(O)P-], sulfamoyl derivatives [R'O(O)2S-], thiourea [(R')2N(O)C-], thiocarbamate [R'O(S)C-], phosphonate [R'-P(O)OH], amidophosphate [R'O(OH)(O)P-], carbamate (R'O(O)C-) and urea (R'NH(O)C-), wherein each R' is independently selected from straight-chain or branched C1-C8 un
  • the compound of formula (III) has the following structural formula:
  • Y-B1-B0-X (III), wherein X is hydrogen; Bi is a single D- or L-amino acid residue; Bo is an amino acid residue and Y consists of one or more, preferably one or two, amino acid residues and optionally of an N-capping residue, wherein the N-capping residue is as defined under (I).
  • the salt of formula (IV) has the following structural formula:
  • C is a cation selected from the group consisting of Al3 + , Ca2 + , Li + , Mg2 + , Mn2 + , Ni2 + , K + , NRV and Na + , wherein each R" independently represents H or a linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl, aryl or alkenyl group, all of which may optionally contain one or more heteroatom(s);
  • E is an integer from 1 to 3 and corresponds to the valence of the cation; p corresponds to the number of cations in the salt;
  • D is an anion selected from the group consisting of CH5COO-, Br, CO5 2 ', CI', C3H5O(COO)3 3 ', HCOO-, HCO5', HSO4', C2O4 2 ', SO4 2 ' and SO3 2- is;
  • F is an integer from 1 to 3 and correspond
  • Preferred radicals R are selected from methyl, iso-propyl, sec-butyl, iso-butyl, -CeHs, -CH2-C6H5, and -CH2-CH2-C6H5, such that the part -NH-CH(R)-C(O)-X of the compound of formula (II) is derived from the amino acids Ala, Val, Ile, Leu, PGly (phenylglycine), Phe and HPhe (homophenylalanine) by converting the carboxyl group into an aldehyde or trifluoromethyl ketone group.
  • aldehydes of the peptide inhibitors used herein can be prepared from the corresponding amino acids by converting the C-terminal carboxyl group of the amino acid into an aldehyde group.
  • aldehydes can be prepared by known methods, as described, for example, in US 5015627, EP 0185930, EP 0583534, and DE 3200812.
  • trifluoromethyl ketones used herein can also be prepared from the corresponding amino acids by converting the C-terminal carboxyl group into a trifluoromethyl ketone group.
  • Such trifluoromethyl ketones can be prepared by known methods, such as those described in EP 0583535.
  • substituent A is selected from Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Phe and Lys.
  • the N-terminal end of the peptide inhibitor according to formula (II) and/or the peptide inhibitor according to formula (III) is protected by a protecting group which caps the N-terminus, wherein the group is selected from the group consisting of carbamates, ureas, sulfonamides, phosphonamides, thioureas, sulfenamides, sulfonic acids, phosphinamides, thiocarbamates, amidophosphates and phosphonamides.
  • the N-terminal end is protected by a methyl, ethyl or benzylcarbamate group [CH3O-(O)C-; CH3CH2O-(O ) C-; or C6H5CH2O- (O)C-], a methyl, ethyl or benzylurea group [ CH3NH- (O)C-; CH3CH2NH- (O)C-; or C6H5CH2NH- (O)C-], a methyl, ethyl or benzylsulfonamide group [ CH3SO2- ; CH3CH2SO2- ; or C6H5CH2SO2- ], or a methyl, ethyl or benzylamidophosphate group [CH3O(OH)(O)P-; CH3CH2O ( OH )(O)P-; or C6H5CH2O ( OH )(O)P-].
  • N-capping groups can be carried out using methods known to the person skilled in the art, see, for example, EP 3263289 or the references cited therein.
  • agents according to the invention may comprise, in addition to a peptide inhibitor of formula (II) or (III), salts of formula (IV). These salts may be present in a concentration of 50 to 2,000 mM, preferably 70 to 1,500 mM, more preferably 100 to 1,000 mM, more preferably 150 to 500 mM, and most preferably 200 mM.
  • the salt of formula (IV) is particularly preferred: Na2SO4 .
  • alkyl refers to an aliphatic hydrocarbon group, which may be straight or branched and comprises 1 to 20 carbon atoms in the chain.
  • aryl refers to an aromatic monocyclic or multicyclic ring system comprising 6 to 14 carbon atoms.
  • alkenyl refers to an aliphatic hydrocarbon group containing at least one carbon-carbon double bond, which may be straight or branched and comprises 2 to 15 carbon atoms in the chain.
  • Bo is a D- or L-amino acid residue selected from the group consisting of Tyr, m-tyrosine, 3,4-dihydroxyphenylalanine, Phe, Val, Met, Nva, Leu, Ile and Nie
  • Bi is a D- or L-amino acid residue with an (optionally substituted) small aliphatic side group, preferably Ala, Cys, Gly, Pro, Ser, Thr, Val, Nva or Nie.
  • B 2 and B3 are each independently an amino acid residue and Z is an N-capping residue, the N-capping residue being as defined above.
  • B 2 selected from Val, Gly, Ala, Arg, Leu, Phe and Thr
  • B3 selected from Phe, Tyr, Trp, phenylglycine, Leu, Val, Nva, Nie and Ile.
  • peptide inhibitors of formulas (II) and (III) that can be used in agents according to the invention include, but are not limited to, Cbz-Arg-Ala-Tyr-H, Ac-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Val-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Phe-H, Cbz-Gly-Ala-Val-H, Cbz-Gly-Gly-Tyr-H, Cbz-Gly-Gly-Phe-H, Cbz-Arg-Val-Tyr-H, Cbz-Leu-Val-Tyr-H, Ac-Le
  • Cbz refers to the benzyloxycarbonyl group with the molecular formula C7H7O. This is used as a protecting group.
  • Other terminal groups in the peptide inhibitors of the present invention may be: "Ph”: phenyl; “Ac”: acetyl; and “Me”: methyl.
  • urea is synonymous with urea.
  • the invention also encompasses all stereoisomers, in particular enantiomers and diastereomers, tautomers and salts of the compounds described above.
  • a salt of formula (IV) to a peptide inhibitor of formula (II) or (III) further stabilizes the enzyme-peptide inhibitor complex by removing free reactive water molecules. This increases the binding efficiency of the peptide inhibitor to the enzyme and/or increases the ionic strength, which ultimately stabilizes the enzyme-peptide inhibitor complex.
  • at least one salt of formula (IV) it is possible to employ the peptide inhibitors in moderate concentrations (0.01 to 50 mM).
  • the protease and any other proteins contained therein, in particular other enzymes are thus protected against proteolysis by this enzyme, in particular proteases (stabilized against proteolysis) and thus retain their full effectiveness even after storage.
  • these peptide inhibitor compounds have good water solubility, so that they can be easily incorporated into corresponding agents and precipitation during storage is avoided.
  • All compounds that can be used as stabilizers/inhibitors in the present invention can be present in the compositions in all profaned or deprotonated forms. Furthermore, all such compounds, especially their deprotonated forms, can be associated with cations. Preferred cations In this regard, monovalent or polyvalent, in particular divalent, cations are preferred, in particular Na ions (Na + ), K ions (K + ), Li ions (Li + ), Ca ions (Ca 2+ ), Mg ions (Mg 2+ ), Mn ions (Mn 2+ ), and Zn ions (Zn 2+ ). Na ions (Na + ) are particularly preferred.
  • agents according to the invention can contain an enzyme composition in which the protease and the stabilizer-inhibitor compound are preformulated.
  • the enzyme protein constitutes only a fraction of the total weight of conventional enzyme preparations.
  • the protease preparations contain between 0.1 and 40 wt.%, preferably 0.2 and 30 wt.%, particularly preferably 0.4 and 20 wt.%, and most preferably 0.8 and 10 wt.% of the enzyme protein.
  • the stabilizer compound can be present in an amount of 0.05 to 35 wt.%, preferably 0.05 to 10 wt.%, based on the total weight in the enzyme composition.
  • Agents according to the invention contain at least one surfactant.
  • the surfactant can be selected from the group consisting of nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, amphoteric surfactants, and mixtures thereof.
  • agents according to the invention contain at least one non-ionic surfactant.
  • agents according to the invention contain at least two surfactants, wherein the two surfactants are different from one another and are selected from the group consisting of nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, amphoteric surfactants and mixtures thereof.
  • agents according to the invention contain at least two nonionic surfactants which are different from one another.
  • agents according to the invention contain at least two non-ionic surfactants, wherein the two surfactants are different from one another and are selected from the group consisting of alcohol ethoxylates and alkyl polyglycosides.
  • agents according to the invention contain at least two non-ionic surfactants, the first surfactant being an alcohol ethoxylate and the second surfactant being an alkyl polyglycoside.
  • At least one further surfactant may be included, which is selected from the group consisting of nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, amphoteric surfactants and mixtures thereof.
  • agents according to the invention contain the surfactant or surfactants in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%, very particularly preferably 0.1 to 2.5 wt.%, in each case based on active substance and total weight of the agent.
  • agents according to the invention contain a first surfactant, wherein the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.1 to 10 wt.%, preferably 0.25 to 7.5 wt.%, preferably 0.3 to 6 wt.%, particularly preferably 0.5 to 5 wt.%, and a second surfactant, wherein the second surfactant is an alkyl polyglycoside, in an amount of 0.05 to 6.5 wt.%, preferably 0.1 to 5.5 wt.%, preferably 0.2 to 4 wt.%, particularly preferably 0.3 to 3.5 wt.%, in each case based on the active substance and the total weight of the agent.
  • agents according to the invention contain a first surfactant, wherein the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, preferably 0.05 to 5 wt.%, very particularly preferably 0.1 to 2.5 wt.%, and a second surfactant, wherein the second surfactant is an alkyl polyglycoside, in an amount of 0.0005 to 6.5 wt.%, preferably 0.005 to 5 wt.%, very particularly preferably 0.03 to 3 wt.%, very particularly preferably 0.05 to 1.5 wt.%, in each case based on the active substance and the total weight of the agent.
  • agents according to the invention contain a first surfactant, wherein the first surfactant is an alcohol ethoxylate, and a second surfactant, wherein the second surfactant is an alkyl polyglycoside, wherein the first surfactant and the second surfactant are present in a ratio of 1:0.1 to 1:1.5, preferably 1:0.2 to 1:1.2, particularly preferably 1:0.25 to 1:1, very particularly preferably 1:0.5 to 1:0.75, e.g. 1:0.1, 1:0.2, 1:0.25, 1:0.3, 1:0.4, 1:0.5, 1:0.6, 1:0.65, 1:0.7, 1:0.75, 1:0.8, 1:0.9, 1:1, 1:1,1, 1:1,2, 1:1,25, 1:3, 1:4, 1:5.
  • agents according to the invention contain a first surfactant, wherein the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, preferably 0.05 to 5 wt.%, very particularly preferably 0.1 to 2.5 wt.%, and a second surfactant, wherein the second surfactant is an alkyl polyglycoside, in an amount of 0.0005 to 6.5 wt.%, preferably 0.005 to 5 wt.%, particularly preferably 0.03 to 3 wt.%, very particularly preferably 0.05 to 1.5 wt.%, in each case based on active substance and total weight of the agent, wherein the first surfactant and the second surfactant are present in a ratio of 1:0.1 to 1:1.5, preferably 1:0.2 to 1:1.2, particularly preferably 1:0.25 to 1:1, very particularly preferably 1:0.5 to 1:0.75, e.g.
  • Suitable nonionic surfactants are, in particular, alkyl glycosides and ethoxylation and/or propoxylation products of alkyl glycosides or linear or branched alcohols, each having 8 to about 18 carbon atoms in the alkyl moiety and 3 to 20, preferably 4 to 10, alkyl ether groups. Furthermore, corresponding ethoxylation and/or propoxylation products of N-alkylamines, vicinal diols, fatty acid esters and fatty acid amides, which, with regard to the alkyl moiety, correspond to the aforementioned long-chain alcohol derivatives, as well as of alkylphenols having 5 to 12 carbon atoms in the alkyl radical, are also suitable.
  • nonionic surfactants which can be used either as the sole nonionic surfactant or in combination with other nonionic surfactants are alkoxylated, preferably ethoxylated or ethoxylated and propoxylated fatty acid alkyl esters, preferably having 1 to 4 carbon atoms in the alkyl chain, in particular fatty acid methyl esters.
  • Nonionic surfactants within the scope of the invention can be alkoxylates such as polyglycol ethers, fatty alcohol polyglycol ethers, alkylphenol polyglycol ethers, end-capped polyglycol ethers, mixed ethers and hydroxy mixed ethers and fatty acid polyglycol esters.
  • Ethylene oxide/propylene oxide block polymers fatty acid alkanolamides and fatty acid polyglycol ethers can also be used.
  • Another important class of nonionic surfactants that can be used according to the invention are polyol surfactants, and here in particular glycosurfactants, such as alkyl polyglycosides and fatty acid glucamides.
  • the alkyl polyglycosides in particular the alkyl polyglucosides, wherein the alcohol is particularly preferably a long-chain fatty alcohol or a mixture of long-chain fatty alcohols with branched or unbranched Cs to Cis-alkyl chains and the degree of oligomerization (DP) of the sugars is between 1 and 10, preferably 1 to 6, preferably 1.1 to 3, particularly preferably 1.1 to 1.7, e.g. Cs-io-alkyl-1.5-glucoside (DP of 1.5).
  • the alcohol is particularly preferably a long-chain fatty alcohol or a mixture of long-chain fatty alcohols with branched or unbranched Cs to Cis-alkyl chains and the degree of oligomerization (DP) of the sugars is between 1 and 10, preferably 1 to 6, preferably 1.1 to 3, particularly preferably 1.1 to 1.7, e.g. Cs-io-alkyl-1.5-glucoside (DP of 1.5).
  • fatty alcohol alkoxylates are also preferred, in particular unbranched or branched, saturated or unsaturated Cs-22 alcohols alkoxylated with ethylene oxide (EO) and/or propylene oxide (PO) and having a degree of alkoxylation of up to 30, preferably ethoxylated Cs-22 fatty alcohols having a degree of ethoxylation of less than 30, preferably 12 to 28, particularly preferably 20 to 28, very particularly preferably 25, e.g. Cs-16-18 fatty alcohol ethoxylates with 25 EO.
  • EO ethylene oxide
  • PO propylene oxide
  • Nonionic surfactants used are preferably alkoxylated, advantageously ethoxylated, especially primary alcohols with preferably 8 to 18 carbon atoms and an average of 1 to 12 moles of ethylene oxide (EO) per mole of alcohol.
  • the alcohol radical can be linear or, preferably, methyl-branched in the 2-position, or can contain linear and methyl-branched radicals in a mixture, as is usually the case in oxo alcohol radicals.
  • alcohol ethoxylates with linear radicals from alcohols of native origin with 12 to 18 carbon atoms, e.g., from coconut, palm, tallow, or oleyl alcohol, and an average of 2 to 8 EO per mole of alcohol are particularly preferred.
  • Preferred ethoxylated alcohols include, for example, C12-C14 alcohols with 3 EO or 4 EO, C8-C14 alcohols with 7 EO, C13-C15 alcohols with 3 EO, 5 EO, 7 EO, or 8 EO, C18-C19 alcohols with 3 EO, 5 EO, or 7 EO, and mixtures thereof, such as mixtures of C12-C14 alcohol with 3 EO and C12-C18 alcohol with 5 EO.
  • the stated degrees of ethoxylation represent statistical averages, which can be a whole or fractional number for a specific product.
  • Preferred alcohol ethoxylates have a narrow homolog distribution (narrow range ethoxylates, NRE).
  • fatty alcohols with more than 12 EO can also be used. Examples of this are tallow fatty alcohol with 14 EO, 25 EO, 30 EO or 40 EO.
  • APG alkyl polyglycosides
  • RO(G) Z in which R is a linear or branched, in particular 2-methyl-branched, saturated or unsaturated, aliphatic radical having 8 to 22, preferably 12 to 18 C atoms and G is the symbol that represents a glycose unit with 5 or 6 C atoms, preferably glucose.
  • the degree of glycosidation z is between 1 and 4, preferably between 1 and 2, and more preferably between 1.1 and 1.4.
  • Linear alkyl polyglycosides are preferred, i.e., alkyl polyglycosides in which the polyglycosyl radical is a glucose radical and the alkyl radical is an n-alkyl radical.
  • the agent according to the invention can contain at least one anionic surfactant.
  • anionic surfactants are fatty alcohol sulfates, fatty alcohol ether sulfates, dialkyl ether sulfates, monoglyceride sulfates, alkylbenzenesulfonates, olefinsulfonates, alkanesulfonates, ethersulfonates, n-alkyl ether sulfonates, estersulfonates, and ligninsulfonates.
  • fatty acid cyanamides sulfosuccinates (sulfosuccinic acid esters), in particular sulfosuccinic acid mono- and di-Ca-is-alkyl esters, sulfosuccinamates, sulfosuccinamides, fatty acid isethionates, acylaminoalkanesulfonates (fatty acid taurides), fatty acid sarcosinates, ether carboxylic acids, and alkyl (ether) phosphates, as well as ⁇ -sulfofatty acid salts, acylglutamates, monoglyceride disulfates, and alkyl ethers of glycerol disulfate.
  • sulfosuccinates sulfosuccinic acid esters
  • sulfosuccinic acid mono- and di-Ca-is-alkyl esters sulfosuccinamates, sulf
  • linear alkylbenzenesulfonates, fatty alcohol sulfates, and/or fatty alcohol ether sulfates, in particular fatty alcohol sulfates are preferred within the scope of the present invention.
  • Fatty alcohol sulfates are products of sulfation reactions on corresponding alcohols
  • fatty alcohol ether sulfates are products of sulfation reactions on alkoxylated alcohols.
  • alkoxylated alcohols to be the reaction products of alkylene oxide, preferably ethylene oxide, with alcohols, preferably with longer-chain alcohols within the meaning of the present invention.
  • n moles of ethylene oxide and one mole of alcohol generally form a complex mixture of addition products with varying degrees of ethoxylation.
  • Another embodiment of the alkoxylation involves the use of mixtures of alkylene oxides, preferably a mixture of ethylene oxide and propylene oxide.
  • Preferred fatty alcohol ether sulfates are the sulfates of low-ethoxylated fatty alcohols with 1 to 4 ethylene oxide units (EO), in particular 1 to 2 EO, e.g., 1,3 EO.
  • EO ethylene oxide units
  • alkylbenzenesulfonates those with about 12 C atoms in the alkyl moiety are particularly preferred, such as linear sodium C10-18-alkylbenzenesulfonate.
  • Preferred olefinsulfonates have a carbon chain length of 14 to 16.
  • the anionic surfactants are preferably used as sodium salts, but can also be present as other alkali or alkaline earth metal salts, e.g., magnesium salts, or in the form of ammonium or mono-, di-, tri-, or tetraalkylammonium salts; in the case of sulfonates, also in the form of their corresponding acid, e.g., dodecylbenzenesulfonic acid.
  • Sophorolipids can also be used as further surfactants. These are to be assumed to be anionic in alkaline conditions and are therefore to be understood as anionic surfactants in the context of the present application.
  • the agent according to the invention may also contain cationic surfactants and/or amphoteric surfactants.
  • Suitable amphoteric surfactants are, for example, betaines of the formula
  • R iii )(R iv )(R v )N + CH 2 COO- in which " represents an alkyl radical having 8 to 25, preferably 10 to 21, carbon atoms, optionally interrupted by heteroatoms or heteroatom groups, and R iv and R v represent identical or different alkyl radicals having 1 to 3 carbon atoms, in particular C 10-18 alkyldimethylcarboxymethylbetaine and C n-17 alkylamidopropyldimethylcarboxymethylbetaine.
  • Suitable cationic surfactants include the quaternary ammonium compounds of the formula (Rvi)(Rvii)( R viii)( R ix) N + X; in which R vi to R ix represent four identical or different, in particular two long-chain and two short-chain, alkyl radicals and X- represents an anion, in particular a halide ion, e.g. didecyldimethylammonium chloride, alkylbenzyldidecylammonium chloride and mixtures thereof.
  • Suitable cationic surfactants are the quaternary surface-active compounds, in particular those containing a sulfonium, phosphonium, iodonium or arsonium group, which are also known as antimicrobial agents.
  • the agent can be given an antimicrobial effect or its already existing antimicrobial effect, which may be due to other ingredients, can be improved.
  • the total surfactant content of such a preferably aqueous cleaning agent formulation is preferably 0.001 to 10% by weight, preferably 0.01 to 7.5% by weight, particularly preferably 0.05 to 5% by weight, very particularly preferably 0.1 to 2.5% by weight, based on the active substance and the total weight of the formulation.
  • Agents according to the invention have a pH in a range from about 7 to about 10, preferably about 7 to about 9, particularly preferably about 7.5 to about 8, most particularly preferably about 7, in a 1% by weight solution in deionized water at 20°C.
  • agents according to the invention can contain system- and environmentally compatible acids, in particular citric acid, acetic acid, tartaric acid, malic acid, lactic acid, glycolic acid, succinic acid, glutaric acid, and/or adipic acid, but also mineral acids, in particular sulfuric acid or alkali metal hydrogen sulfates, or bases, in particular ammonium or alkali metal hydroxides, preferably sodium hydroxide.
  • Such pH regulators are preferably present in agents according to the invention in a concentration of no more than 10% by weight, preferably 0.5 to 6% by weight, particularly preferably 0.3 to 2% by weight, based on the total weight of the agent.
  • agents according to the invention may further contain one or more buffer substances, usually in amounts of 0.001 to 5 wt.%, preferably 0.005 to 3 wt.%, more preferably 0.01 to 2 wt.%, particularly preferably 0.05 to 1 wt.%, very particularly preferably 0.1 to 0.5 wt.%, e.g., 0.2 wt.%.
  • buffer substances that are also complexing agents or even chelating agents.
  • Particularly preferred buffer substances are citric acid or citrate, in particular sodium and potassium citrate, e.g., trisodium citrate 2 H2O and tripotassium citrate H2O.
  • agents according to the invention in a 1 wt.% solution in deionized water at 20°C have a pH in a range from about 7 to about 10, preferably about 7 to about 9, particularly preferably about 7.5 to about 8, most particularly preferably about 7, the pH being adjusted by adding citric acid or NaOH.
  • cleaning performance refers to the ability of a cleaning agent to partially or completely remove existing soiling.
  • an agent and the cleaning liquor formed by this agent have a respective cleaning performance.
  • the cleaning performance is preferably determined as indicated in Examples 2 and 3.
  • cleaning liquor refers to the working solution containing the cleaning agent that acts on the surfaces to be cleaned, especially sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, and toilet rims, and thus comes into contact with the soiling present on the surfaces.
  • the cleaning liquor is usually created when the cleaning process begins and the agent is diluted with water, for example, in a suitable container.
  • Preferred embodiments of uses and agents according to the invention achieve such advantageous cleaning performance even at low temperatures, in particular in a temperature range from about 10°C to about 30°C, preferably about 15°C to about 30°C, preferably about 18°C to about 25°C, particularly preferably about 25°C, very particularly preferably about 20°C.
  • the protease according to the invention is used in cleaning agents.
  • the combination of surfactant(s) and protease according to the invention is used in cleaning agents.
  • cleaning agents according to the invention include all conceivable types of cleaning agents, both concentrated and undiluted, for use on a commercial scale in hand cleaning. These include, for example, cleaners for hard surfaces such as metal, glass, porcelain, ceramics, tiles, stone, painted surfaces, plastics, wood, or leather, for which the term "cleaning agent” is used, i.e., also scouring agents, glass cleaners, toilet air fresheners, etc.
  • Preferred embodiments include all liquid, gel-like, or pasty dosage forms of agents according to the invention, which may optionally also consist of multiple phases and may be present in compressed or non-compressed form, e.g., in the form of a non-aqueous cleaning agent or a non-aqueous paste, or in the form of an aqueous cleaning agent or a water-containing paste.
  • Liquid agents are generally preferred.
  • the agent may be present as a single-component system. Such agents consist of one phase. Alternatively, an agent may also consist of multiple phases. Such an agent is therefore divided into multiple components.
  • the agent according to the invention is a liquid cleaning agent.
  • the agent according to the invention is a Liquid cleaning agent for cleaning sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, and toilet rims.
  • agents according to the invention when they are in liquid form, they preferably contain, based on their total weight, more than 40% by weight and increasingly preferably more than 50% by weight, 60% by weight, 70% by weight, 80% by weight, 90% by weight, 91% by weight, 92% by weight, 93% by weight, 94% by weight, 95% by weight, 96% by weight or 97% by weight, and less than 100% by weight, of water.
  • Agents according to the invention can contain, in addition to the inventive combination of surfactant(s) and protease, all known ingredients customary in such agents, with at least one further ingredient preferably being present in the agent.
  • Agents according to the invention can, in particular, contain further surfactants, builders, complexing agents, polymers, glass corrosion inhibitors, corrosion inhibitors, fillers, bleaching agents, bleach activators or bleach catalysts, water-miscible organic solvents, further enzymes, enzyme stabilizers, sequestering agents, electrolytes, pH regulators and/or further auxiliaries such as foam regulators, as well as dyes and fragrances.
  • the cleaning agent according to the invention is an aqueous cleaning agent for hard surfaces, in particular for cleaning sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, and toilet rims.
  • it may contain one or more other water-soluble organic solvents, typically in an amount of 0 to 15 wt.%, preferably 1 to 12 wt.%, more preferably 3 to 8 wt.%.
  • the solvents are used as needed, particularly as hydrotropes and viscosity regulators. They act as solubilizers, particularly for surfactants and electrolytes, as well as perfumes and dyes, and thus contribute to their incorporation, prevent the formation of liquid-crystalline phases, and contribute to the formation of clear products.
  • the viscosity of the compositions according to the invention decreases with increasing solvent quantity.
  • the cold turbidity and clear point of the compositions according to the invention decrease with increasing solvent quantity.
  • Suitable solvents are, for example, saturated or unsaturated, preferably saturated, branched or unbranched C1-20 hydrocarbons, preferably C2-15 hydrocarbons, having at least one hydroxyl group and optionally one or more ether functions COC, i.e. oxygen atoms interrupting the carbon atom chain.
  • Preferred solvents are C2-6 alkylene glycols and poly-C2-3 alkylene glycol ethers, optionally etherified on one side with a C1-6 alkanol, having an average of 1 to 9 identical or different, preferably identical, alkylene glycol groups per molecule, as well as C1-6 alcohols, preferably ethanol, n-propanol or isopropanol.
  • solvents include: buteth-3, butoxydiglycol, butoxyethanol, butoxyisopropanol, butoxypropanol, n-butyl alcohol, t-butyl alcohol, butylene glycol, butyloctanol, diethylene glycol, dimethoxydiglycol, dimethyl ether, dipropylene glycol, ethoxydiglycol, ethoxyethanol, ethylhexanediol, glycol, hexanediol, 1 ,2,6-Hexanetriol, Hexylalcohol, Hexylene glycol, Isobutoxypropanol, Isopentyldiol, Isopropyl alcohol (isopropanol), 3-Methoxybutanol, Methoxydiglycol, Methoxyethanol, Methoxyisopropanol, Methoxymethylbutanol, Methoxy PEG-10, Methylal, Methyl alcohol,
  • the solvent is preferably selected from the group comprising ethanol, propanol, isopropanol, ethylene glycol, butyl glycol, propylene glycol, polypropylene glycols, and alcohol amines, in particular monoethanolamine, and mixtures thereof.
  • Particularly preferred solvents are the C2 and C8 alcohols, ethanol, n-propanol, and/or isopropanol, as well as the polyalkylene glycols, especially polypropylene glycols, in particular PPG-400, and alcohol amines, in particular monoethanolamine, and mixtures thereof.
  • 1-Butoxypropan-2-ol and/or ethanol and/or isopropanol are very particularly preferably used as the organic solvent.
  • agents according to the invention can contain one or more complexing agents.
  • Complexing agents ICI chelating agents
  • sequestering agents are ingredients capable of complexing and inactivating metal ions to prevent their adverse effects on the stability or appearance of the agents according to the invention, e.g., cloudiness.
  • it is important to complex the calcium and magnesium ions of water hardness, which are incompatible with numerous ingredients.
  • the complexing of the ions of heavy metals such as iron or copper delays the oxidative decomposition of the finished agents. Furthermore, the complexing agents support the cleaning effect.
  • Suitable complexing agents are selected from, for example: aminotrimethylenephosphonic acid, ß-alaninediacetic acid, calcium disodium EDTA, citric acid, cyclodextrin, cyclohexanediaminetetraacetic acid, diammonium citrate, diammonium EDTA, diethylenetriaminepentamethylenephosphonic acid, dipotassium EDTA, disodium azacycloheptanediphosphonate, disodium EDTA, disodium pyrophosphate, EDTA, etidronic acid, galactaric acid, gluconic acid, glucuronic acid, HEDTA, hydroxypropylcyclodextrin, methylcyclodextrin, pentapotassium triphosphate, pentasodium aminotrimethylenephosphonate, pentasodium ethylenediaminetetramethylenephosphonate, pentasodium pentetate, pentasodium triphosphate,
  • phosphonates particularly preferred complexing agents are phosphonates, provided their use is permitted by regulations.
  • the complexing phosphonates include a number of different compounds, such as diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid) (DTPMP).
  • DTPMP diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid)
  • hydroxyalkane and aminoalkanephosphonates are particularly preferred.
  • 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonate (HEDP) is of particular importance as a cobuilder. It is preferably used as the sodium salt, with the disodium salt being neutral and the tetrasodium salt being alkaline (pH 9).
  • Preferred aminoalkanephosphonates are ethylenediaminetetramethylenephosphonate (EDTMP), diethylenetriaminepentamethylenephosphonate (DTPMP), and their higher homologues. They are preferably used in the form of neutral sodium salts, e.g., as the hexasodium salt of EDTMP or as the hepta- and octa-sodium salt of DTPMP. HEDP, a preferred builder from the phosphonate class, is used. Aminoalkanephosphonates also possess pronounced heavy metal binding capacity.
  • agents also contain bleach, to use aminoalkanephosphonates, particularly DTPMP, or mixtures of the aforementioned phosphonates.
  • a preferred agent within the scope of this application contains one or more phosphonate(s) from the group consisting of aminotrimethylenephosphonic acid (ATMP) and/or salts thereof;
  • Ethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) Ethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) (EDTMP) and/or its salts; diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid) (DTPMP) and/or its salts; 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid (HEDP) and/or its salts; 2-phosphonobutane-1,2,4-tricarboxylic acid (PBTC) and/or its salts; hexamethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) (HDTMP) and/or its salts; nitrilotri(methylenephosphonic acid) (NTMP) and/or its salts.
  • DTPMP diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid)
  • HEDP 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid
  • PBTC 2-phosphonobutane-1,2,4-tricarboxylic acid
  • HDTMP hexamethylenedi
  • agents which contain 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid (HEDP) or diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid) (DTPMP) as phosphonates are particularly preferred.
  • agents according to the invention can contain two or more different phosphonates.
  • agents according to the invention can contain at least one complexing agent from the group of phosphonates, preferably 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonate, wherein the weight proportion of the phosphonate in the total weight of the agent is preferably from 0.1 to 8.0 wt.%, preferably 0.2 to 5.0 wt.%, particularly preferably 0.3 to 3.0 wt.% and most preferably 0.5 to 2.0 wt.%.
  • agents according to the invention are substantially free of phosphonate-containing compounds.
  • substantially free of phosphonate-containing compounds in this context means that the corresponding agents or compositions contain less than 2 wt.%, preferably less than 1 wt.%, more preferably less than 0.5 wt.%, and particularly preferably less than 0.1 wt.%, of phosphonate-containing compounds, based on the total weight of the agent.
  • these agents/compositions are free of phosphonate-containing compounds.
  • agents according to the invention may further contain builders, preferably at least one water-soluble and/or water-insoluble, organic and/or inorganic builder.
  • Builders include, in particular, silicates, carbonates, and organic cobuilders.
  • Organic cobuilders include, in particular, polycarboxylates/polycarboxylic acids, polymeric polycarboxylates, aspartic acid, polyacetals, dextrins, other organic cobuilders, and phosphonates. These classes of substances are described below. Organic cobuilder substances can, if desired, be present in amounts of up to 40% by weight, preferably up to 25% by weight, more preferably from 1 to 8% by weight, and particularly preferably from 0.01 to 4% by weight, based on the total weight of the composition.
  • Useful organic builders include, for example, polycarboxylic acids, which can be used in the form of the free acid and/or their sodium salts. Polycarboxylic acids are understood to be carboxylic acids that carry more than one acid function.
  • Examples include citric acid, adipic acid, succinic acid, glutaric acid, malic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, sugar acids and carboxymethyl inulins, monomeric and polymeric aminopolycarboxylic acids, in particular glycinediacetic acid, methylglycinediacetic acid, glutaminediacetic acid, nitrilotriacetic acid (NTA), iminodisuccinate such as ethylenediamine-N,N'-disuccinic acid and hydroxyiminodisuccinates, ethylenediaminetetraacetic acid and polyaspartic acid, polyphosphonic acids, in particular aminotris(methylenephosphonic acid), ethylenediaminetetrakis(methylenephosphonic acid), lysinetetra(methylenephosphonic acid) and 1-hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid, polymeric hydroxy compounds such as dextrin and polymeric (poly)carboxylic acids
  • Such organic builder substances can, if desired, be present in amounts of up to 50% by weight, preferably up to 25% by weight, preferably from 10 to 20% by weight, more preferably from 1 to 5% by weight and particularly preferably from 0.01 to 3% by weight, based on the total weight of the agent.
  • the free acids typically also have the property of an acidifying component and thus also serve to adjust a lower and milder pH value of agents.
  • citric acid, succinic acid, glutaric acid, adipic acid, gluconic acid and any mixtures of Citric acid or citric acid salts are particularly preferred as the builder substance.
  • MGDA methylglycinediside acid
  • GLDA glutamic acid diacetate
  • ASDA aspartic acid diacetate
  • HEIDA hydroxyethyliminodiacetate
  • IDS iminodisuccinate
  • EDDS ethylenediamine disuccinate
  • citric acid and/or citrate is used as the water-soluble, organic builder. Particular preference is given to using, based on the total weight of the agent, from 0.001 to 25 wt. %, preferably from 0.005 to 12.5 wt. %, preferably from 0.0075 to 10 wt. %, particularly preferably from 0.01 to 4 wt. %, citric acid and/or 0.001 to 25 wt. %, preferably from 0.005 to 12.5 wt. %, preferably from 0.0075 to 10 wt. %, particularly preferably from 0.01 to 4 wt. %, citrate, preferably alkali metal citrate, preferably sodium citrate.
  • Citric acid/citrate can each be used in the form of their hydrates; for example, citric acid can be used in the form of the monohydrate, and citrate in the form of the trisodium citrate dihydrate.
  • the builder substances can be selected from MGDA and GLDA.
  • MGDA includes, among others, methylglycinediacetic acid, ⁇ -alaninediacetic acid, N-(1-carboxyethyl)iminodiacetic acid, and N,N-bis(carboxymethyl)-DL-alanine, including the free acid forms and the corresponding salts, preferably alkali salts, especially trisodium salts.
  • GLDA includes, among others, glutamic acid diacetic acid, L-glutamic acid N,N-diacetic acid, and N,N-bis(carboxylatomethyl)-L-glutamate, including the free acid forms and the corresponding salts, preferably alkali salts, especially tetrasodium salts.
  • higher MGDA or GLDA concentrations are possible, preferably up to 25% by weight, based on the total weight of the agent, 0.2 to 5% by weight, more preferably 0.25 to 3% by weight, and particularly preferably 0.5 to 2% by weight of MGDA, preferably MGDA trisodium salt (MGDA-Nas), is preferably used.
  • GLDA preferably GLDA tetrasodium salt (GLDA-Na4), based on the total weight of the agent.
  • Polymeric polycarboxylates are also suitable as builders. These include, for example, the alkali metal salts of polyacrylic acid or polymethacrylic acid, e.g., those with a relative molecular weight of 500 to 70,000 g/mol.
  • the molar masses stated for polymeric polycarboxylates are weight-average molar masses Mw of the respective acid form, which were generally determined by gel permeation chromatography (GPC) using a UV detector. The measurement was carried out against an external polyacrylic acid standard, which, due to its structural similarity to the polymers investigated, provides realistic molar weight values. These figures differ significantly from the molar weight figures used for polystyrenesulfonic acids as standards.
  • Suitable polymers include, in particular, polyacrylates, which preferably have a molecular weight of 2,000 to 20,000 g/mol. Due to their superior solubility, the short-chain polyacrylates from this group, which have molecular weights of 2,000 to 10,000 g/mol, and particularly preferably of 3,000 to 5,000 g/mol, may in turn be preferred.
  • Copolymeric polycarboxylates are also suitable, in particular those of acrylic acid with methacrylic acid and of acrylic acid or methacrylic acid with maleic acid.
  • Copolymers of acrylic acid with maleic acid which contain 50 to 90% by weight of acrylic acid and 50 to 10% by weight of maleic acid, have proven particularly suitable.
  • Their relative molecular weight, based on free acids is generally 2,000 to 70,000 g/mol, preferably 20,000 to 50,000 g/mol, and in particular 30,000 to 40,000 g/mol.
  • Agents according to the invention are preferably free of phosphate builders, i.e. they contain, based on the total weight of the agent, less than 1% by weight, preferably no deliberately added phosphate builder.
  • cleaning-active polymers can be contained in the inventive agents in addition to the previously described builders.
  • the weight fraction of cleaning-active polymers in the total weight of the inventive agents is preferably 0.1 to 20 wt. %, more preferably 1.0 to 15 wt. %, and particularly preferably 2.0 to 12 wt. %.
  • agents according to the invention may contain one or more other auxiliaries and additives which are customary, particularly in cleaning agents for hard surfaces.
  • auxiliaries and additives include, for example, organic suspending agents (e.g. sugar, sugar alcohols, glycerin, glycols and polymers thereof), hydrophobicity enhancers (e.g. paraffin), UV stabilizers, perfume oils, antimicrobial agents, pearlescent agents (opacifying agents; e.g. glycol distearate, e.g. Cutina® AGS from BASF, or mixtures containing it, e.g. Euperlane® from BASF), other opacifiers, dyes, corrosion inhibitors, bittering agents, preservatives (e.g.
  • 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol which is commercially available, for example, as Myacide® BT or Boots Bronopol BT from Boots, or Bronopol-containing mixtures such as Preventol® (ex Lanxess) or Parmetol® (ex Schülke & Mayr)), disinfectants, Enzymes, pH adjusters, fragrances, and skin-feel-improving or skin-care additives (e.g., dermatologically active substances such as vitamin A, vitamin B2, vitamin B12, vitamin C, vitamin E, D, panthenol, sericerin, collagen partial hydrolysate, various vegetable protein partial hydrolysates, protein hydrolysate-fatty acid condensates, liposomes, cholesterol, vegetable and animal oils such as lecithin, soybean oil, etc., plant extracts such as aloe vera, azulene, witch hazel extracts, algae extracts, etc., allantoin, A.H.A. complexes, g
  • agents according to the invention may contain one or more fragrances, preferably in an amount of 0.001 to 10% by weight, preferably 0.05 to 1 Wt.%, particularly preferably from 0.1 to 5 wt.%.
  • suitable perfume components d-limonene, essential oils, such as pine, citrus, jasmine, patchouli, rose, or ylang-ylang oil, clary sage, chamomile, lavender, clove, lemon balm, mint, cinnamon leaf, linden blossom, juniper berry, vetiver, olibanum, galbanum, labdanum, orange blossom, neroli, orange peel, and sandalwood oil.
  • agents according to the invention can contain one or more antimicrobial active ingredients, preferably in an amount of 0.01 to 1 wt. %, preferably 0.02 to 0.8 wt. %, more preferably 0.05 to 0.5 wt. %, particularly preferably 0.1 to 0.3 wt. %, most particularly preferably 0.2 wt.
  • the terms disinfection, sanitation, antimicrobial effect and antimicrobial active ingredient, as used herein, have the customary technical meaning.
  • disinfection in the narrower sense of medical practice means the killing of - theoretically all - infectious germs
  • sanitation is understood to mean the elimination as far as possible of all germs - including saprophytic germs that are normally harmless to humans.
  • the extent of disinfection or sanitation depends on the antimicrobial effect of the agent used, which decreases with decreasing content of antimicrobial active ingredient or increasing dilution of the agent for application.
  • Suitable antimicrobial agents can be selected from the groups of alcohols, aldehydes, antimicrobial acids or their salts, carboxylic acid esters, acid amides, phenols, phenol derivatives, diphenyls, diphenylalkanes, urea derivatives, oxygen and nitrogen acetals and formals, benzamidines, isothiazoles and their derivatives such as isothiazolines and isothiazolinones, phthalimide derivatives, pyridine derivatives, antimicrobial surface-active compounds, guanidines, antimicrobial amphoteric compounds, quinolines, 1,2-dibromo-2,4-dicyanobutane, iodo-2-propynylbutylcarbamate, iodine, iodophores, active chlorine-releasing compounds and peroxides.
  • Preferred antimicrobial agents can be selected from the group comprising ethanol, n-propanol, i-propanol, 1,3-butanediol, phenoxyethanol, 1,2-propylene glycol, glycerin, undecylenic acid, citric acid, lactic acid, benzoic acid, salicylic acid, thymol, 2-benzyl-4-chlorophenol, 2,2'-methylene-bis-(6-bromo-4-chlorophenol), 2,4,4'-trichloro-2'-hydroxydiphenyl ether, N-(4-chlorophenyl)-N-(3,4-dichlorophenyl)urea, N,N'-(1,10-decanediyldi-1-pyridinyl-4-ylidene)-bis-(1-octanamine) dihydrochloride, N,N'-bis-(4-chlorophenyl)-3,12-diimino-2,
  • Preferred antimicrobial quaternary surfactants contain an ammonium, sulfonium, phosphonium, iodonium, or arsonium group.
  • antimicrobially active essential oils can also be used, which simultaneously provide fragrance for the cleaning product.
  • particularly preferred antimicrobial active ingredients are selected from the group comprising salicylic acid, quaternary surfactants, in particular benzalkonium chloride, peroxo compounds, in particular hydrogen peroxide, alkali metal hypochlorite, sodium dichloroisocyanurate and mixtures thereof.
  • agents according to the invention may contain preservatives. These can essentially be the substances mentioned under the antimicrobial active ingredients.
  • agents according to the invention can contain one or more dyes.
  • Both water-soluble and oil-soluble dyes can be used as dyes, whereby compatibility with other ingredients, e.g., bleaching agents, must be taken into account, and the dye used should not have a substantive effect on the metal and ceramic, even after prolonged exposure.
  • the dyes are preferably present in an amount of 0.0001 to 0.1 wt. %, preferably 0.0005 to 0.05 wt. %, particularly preferably 0.001 to 0.01 wt. %.
  • agents according to the invention can contain corrosion inhibitors.
  • Suitable corrosion inhibitors include, for example: cyclohexylamine, diammonium phosphate, dilithium oxalate, dimethylaminomethylpropanol, dipotassium oxalate, dipotassium phosphate, disodium phosphate, disodium pyrophosphate, disodium tetrapropenylsuccinate, hexoxyethyldiethylammonium, phosphate, nitromethane, potassium silicate, sodium aluminate, sodium hexametaphosphate, sodium metasilicate, sodium molybdate, sodium nitrite, sodium oxalate, sodium silicate, stearamidopropyl dimethicone, tetrapotassium pyrophosphate, tetrasodium pyrophosphate, and triisopropanolamine.
  • agents according to the invention can contain rinse-off regulators.
  • the substances referred to as rinse-off regulators primarily serve to control the consumption of the agents during use so that the intended service life is maintained.
  • Suitable regulators are preferably solid long-chain fatty acids, such as stearic acid, but also salts of such fatty acids, fatty acid ethanolamides, such as coconut fatty acid monoethanolamide, or solid polyethylene glycols, such as those with molecular weights between 10,000 and 50,000.
  • agents according to the invention can contain foam regulators.
  • foam regulators include, for example, polysiloxane-silica mixtures, the finely divided silica contained therein preferably being silanized or otherwise hydrophobized.
  • the polysiloxanes can consist of linear compounds as well as crosslinked polysiloxane resins and mixtures thereof.
  • defoamers are paraffin hydrocarbons, in particular microparaffins and paraffin waxes whose melting point is above 40°C, saturated fatty acids or soaps with, in particular, 20 to 22 carbon atoms, e.g., sodium behenate, and alkali metal salts of phosphoric acid mono- and/or dialkyl esters in which the alkyl chains each have 12 to 22 carbon atoms.
  • sodium monoalkyl phosphate and/or dialkyl phosphate with C 16-18 alkyl groups is preferably used.
  • the proportion of foam regulators may preferably be 0.2 to 2% by weight, preferably not more than 1% by weight, based on the total weight of the agent.
  • agents according to the invention may contain, in addition to the protease described herein, further hydrolytic enzymes or other enzymes in a form suitable for The enzymes are preferably used in concentrations appropriate for the effectiveness of the agent.
  • Enzymes that can exhibit catalytic activity in agents according to the invention are selected in particular from proteases, lipases, amylases, cellulases, hemicellulases, mannanases, tannases, xylanases, xanthanases, xyloglucanases, ß-glucosidases, pectinases, carrageenases, perhydrolases, oxidases, oxidoreductases, and mixtures thereof.
  • Enzymes are advantageously contained in the agent in an amount of 1 x 10 -8 to 5 wt.%, based on the active protein and the total weight of the agent. Increasingly preferably, each enzyme is present in agents according to the invention in an amount of 1 x 10 -7 to 3 wt.%, 0.00001 to 1 wt.%, 0.00005 to 0.5 wt.%, 0.0001 to 0.1 wt.%, and particularly preferably 0.0001 to 0.05 wt.%, based on active protein and total weight of the agent. Enzymes particularly preferably exhibit synergistic cleaning performance against certain soils or stains, i.e., the enzymes contained in the agent composition mutually support each other in their cleaning performance.
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5 wt.%, preferably 0.001 to 2.5 wt.%, particularly preferably 0.005 to 1 wt.%, most preferably 0.01 to 0.5 wt.%, based on active protein and total weight of the agent, at least two surfactants, wherein the first surfactant and the second surfactant are different from one another and are selected from the group consisting of alcohol ethoxylates and alkyl polyglycosides, preferably the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%, most
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5 wt.%, preferably 0.001 to 2.5 wt.%, particularly preferably 0.005 to 1 wt.%, very particularly preferably 0.01 to 0.5 wt.%, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which belongs to the amino acid sequence described in SEQ ID NO:1 is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%,
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5% by weight, preferably 0.001 to 2.5% by weight, particularly preferably 0.005 to 1% by weight, very particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5 wt.%, preferably 0.001 to 2.5 wt.%, particularly preferably 0.005 to 1 wt.%, most preferably 0.01 to 0.5 wt.%, based on active protein and total weight of the agent, at least two surfactants, wherein the first surfactant and the second surfactant are different from one another and are selected from the group consisting of alcohol ethoxylates and alkyl polyglycosides, preferably the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%, most
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5% by weight, preferably 0.001 to 2.5% by weight, particularly preferably 0.005 to 1% by weight, very particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%,
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5% by weight, preferably 0.001 to 2.5% by weight, particularly preferably 0.005 to 1% by weight, very particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5 wt.%, preferably 0.001 to 2.5 wt.%, particularly preferably 0.005 to 1 wt.%, most preferably 0.01 to 0.5 wt.%, based on active protein and total weight of the agent, at least two surfactants, wherein the first surfactant and the second surfactant are different from one another and are selected from the group consisting of alcohol ethoxylates and alkyl polyglycosides, preferably the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%, most
  • the agent in 1 wt.% solution in deionized water at 20°C has a pH in a range from about 7 to about 10, preferably about 7 to about 9, more preferably about 7.5 to about 8, most preferably about 7.
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, Toilet bowl, cistern, WC rim, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5% by weight, preferably 0.001 to 2.5% by weight, particularly preferably 0.005 to 1% by weight, very particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%
  • the agent in 1 wt.% solution in deionized water at 20°C has a pH in a range of about 7 to about 10, preferably about 7 to about 9, more preferably about 7.5 to about 8, most preferably about 7.
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, WC rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5% by weight, preferably 0.001 to 2.5% by weight, particularly preferably 0.005 to 1% by weight, very particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70%, and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% and less than
  • the agent in 1 wt.% solution in deionized water at 20°C has a pH in a range of about 7 to about 10, preferably about 7 to about 9, more preferably about 7.5 to about 8, most preferably about 7.
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, WC rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5 wt.%, preferably 0.001 to 2.5 wt.%, particularly preferably 0.005 to 1 wt.%, most preferably 0.01 to 0.5 wt.%, based on active protein and total weight of the agent, at least two surfactants, wherein the first surfactant and the second surfactant are different from one another and are selected from the group consisting of alcohol ethoxylates and alkyl polyglycosides, preferably the first surfactant is an alcohol ethoxylate, in an amount of 0.001 to 10 wt.%, preferably 0.01 to 7.5 wt.%, particularly preferably 0.05 to 5 wt.%, most
  • inhibitor/stabilizer is selected from the group consisting of polyols, such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA), antioxidants, peptide inhibitors, preferably in an amount of 0.1 to 2% by weight, more preferably 0.3 to 1.5% by weight, based on the total weight of the agent; wherein the agent in 1 wt.% solution in deionized water at 20°C has a pH in a range of polyols, such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA), antioxidants, peptide inhibitors, preferably in an
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5% by weight, preferably 0.001 to 2.5% by weight, particularly preferably 0.005 to 1% by weight, very particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease is a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%,
  • inhibitor/stabilizer is selected from the group consisting of polyols, such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA), antioxidants, peptide inhibitors, preferably in an amount of 0.1 to 2% by weight, more preferably 0.3 to 1.5% by weight, based on the total weight of the agent; wherein the agent, in a 1% by weight solution in deionized water at 20°C, has a pH in a range from
  • the invention relates to an agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, characterized in that the agent is a cleaning agent, preferably a liquid cleaning agent, and comprises at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 5% by weight, preferably 0.001 to 2.5% by weight, particularly preferably 0.005 to 1% by weight, very particularly preferably 0.01 to 0.5% by weight, based on active protein and total weight of the agent, wherein the protease has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO:1 over its entire length to at least 70% and increasingly preferably to at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%
  • inhibitor/stabilizer is selected from the group consisting of polyols, such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters or derivatives, in particular phenylboronic acid derivatives or 4-formylphenylboronic acid (4-FPBA), antioxidants, peptide inhibitors, preferably in an amount of 0.1 to 2% by weight, more preferably 0.3 to 1.5% by weight, based on the total weight of the agent; wherein the agent, in a 1% by weight solution in deionized water at 20°C, has a pH in a range from
  • the invention relates to a method for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, WC rims, characterized in that in at least one method step a cleaning agent described herein is used, wherein the method preferably in a temperature range of about 20°C to about 30°C, preferably about 25°C, particularly preferably about 20°C.
  • Processes for cleaning surfaces are generally characterized by the fact that various cleaning-active substances are applied to the item to be cleaned in several process steps and washed off after the contact time, or that the item to be cleaned is treated in some other way with an agent or a solution or dilution of this agent.
  • the invention relates to the invention
  • a protease in a cleaning agent for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, preferably in a temperature range of about 15°C to about 30°C, preferably about 18°C to about 25°C, particularly preferably about 25°C, most particularly preferably about 20°C, wherein the protease is as defined in any one of claims 1 to 3;
  • a protease in a cleaning agent for improving the hygiene of hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet cisterns, toilet rims, preferably in a temperature range of about 15°C to about 30°C, preferably about 18°C to about 25°C, particularly preferably about 25°C, most particularly preferably about 20°C, wherein the protease is as defined in any one of claims 1 to 3;
  • a cleaning agent according to one of claims 1 to 7 for cleaning hard surfaces, in particular sanitary surfaces such as toilets, toilet bowls, toilet bowls, cisterns, toilet rims, preferably in a temperature range of about 15°C to about 30°C, preferably about 18°C to about 25°C, particularly preferably about 25°C, most particularly preferably about 20°C.
  • Example 1 Cleaning agents and proteases used
  • sample preparations shown in Table 3 were prepared from the detergent matrices shown in Table 1 and the proteases listed in Table 2.
  • the different proteases were used with equal activity, so that each sample contained 0.1 ppm of protease (based on active protein).
  • a soil a mixture of carbohydrates, fats, proteins, microorganisms (lactic acid bacteria: Streptococcus sp., Lactobacillus sp., Bifidobacterium sp.), and organic salts
  • the soil was applied to porcelain plaques and left to dry for 24 h at 40°C.
  • the soiled porcelain plaques were weighed before soiling and before and after treatment with a cleaning agent. 25 g of cleaning agent was applied to the soiled and dried porcelain plaques, left to act for 30 min, and then rinsed off (artificial waterfall to mimic a toilet flush, 3 L, 10 see). All experiments were conducted in duplicate.
  • FIGS 1 A & B show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 1C & D show porcelain tablets from Figures 1A & B after treatment with
  • FIGS 1 E & F show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 1 G & H show porcelain tablets from Figures 1 E & F after treatment with
  • FIGS 11 & J show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 1 K & L show porcelain tablets from Figures 11 & J after treatment with
  • Figures 1 M & N show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 1O & P show porcelain tablets from Figures 1M & N after treatment with
  • FIGS 1 Q & R show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 1S & T show porcelain tablets from Figures 1Q & R after treatment with
  • Figures 1 U & V show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 1W & X show porcelain tablets from Figures 1 U & V after treatment with
  • Figures 1 AA & AB show porcelain tablets from Figures 1 Y & Z after treatment with
  • FIGS. 2A & B show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 2C & D show porcelain tablets from Figures 2A & B after treatment with
  • FIGS. 2E & F show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 2G & H show porcelain tablets from Figures 2E & F after treatment with
  • FIGS. 3A & B show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 3C & D show porcelain tablets from Figures 3A & B after treatment with
  • FIGS. 3E & F show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 3G & H show porcelain tablets from Figures 3E & F after treatment with
  • FIGS. 3I & K show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 3K & L show porcelain tablets from Figures 3I & K after treatment with
  • Figures 3M & N show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 30 & P show porcelain tablets from Figures 3M & N after treatment with
  • Figures 3Q & R show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 3S & T show porcelain tablets from Figures 3Q & R after treatment with
  • Figures 3U & V show porcelain tablets with soiling before treatment
  • Figures 3W & X show porcelain tablets from Figures 3U & V after treatment with
  • the results show that the protease-containing detergents exhibit improved cleaning performance.
  • the cleaning performance of a combination of two surfactants and a protease shows significantly improved cleaning performance.
  • Example 2 To determine the cleaning performance of various cleaning agents, the fecal soil described in Example 2 was evenly applied to the inside surface of a toilet bowl. Each half of the toilet bowl was treated with a sample to be tested (25 g of sample applied, allowed to act for 30 minutes). The toilet was then flushed.
  • Figures 4A & B show a toilet bowl with soiling before treatment
  • Figure 4C shows half of the toilet bowl from Fig. 4A after treatment with
  • Figure 4D shows half of the toilet bowl from Fig. 4B after treatment with
  • Figures 4E & F show a toilet bowl with soiling before treatment
  • Figure 4G shows half of the toilet bowl from Fig. 4E after treatment with a conventional cleaner (V1)
  • Figure 4H shows half of the toilet bowl from Fig. 4F after treatment with
  • Figures 4I & J show a toilet bowl with soiling before treatment
  • Figure 4K shows half of the toilet bowl from Fig. 4I after treatment with
  • Sample preparation A2 Figure 4L shows half of the toilet bowl from Fig. 4J after treatment with

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Abstract

Die Erfindung liegt auf dem Gebiet der Reinigungsmittel, insbesondere Reinigungsmittel für harte Oberflächen, bevorzugt flüssige Reinigungsmittel zum Reinigen von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand. Die Erfindung betrifft ein Reinigungsmittel, vorzugsweise flüssiges Reinigungsmittel, bevorzugt flüssiges Reinigungsmittel zum Reinigen von harten Oberflächen, besonders bevorzugt flüssiges Reinigungsmittel zum Reinigen von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, umfassend mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels; mindestens ein Tensid, wobei das Tensid aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,001 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, insbesondere von etwa 7 bis etwa 9, weiter bevorzugt von etwa 7,5 bis etwa 8, besonders bevorzugt von etwa 7 aufweist.

Description

REINIGUNGSMITTEL ENTHALTEND PROTEASE
BESCHREIBUNG
Die Erfindung liegt auf dem Gebiet der Reinigungsmittel, insbesondere Reinigungsmittel für harte Oberflächen, bevorzugt flüssige Reinigungsmittel zum Reinigen von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand.
Das wichtigste Kriterium beim Reinigen von harten Oberflächen ist die Reinigungsleistung an verschiedensten Anschmutzungen. Für die Reinigung von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand und der gleichen stehen hauptsächlich verschiedene säurehaltige Reinigungsmittel zur Verfügung. Diese Reinigungsmittel sind aufgrund der eingesetzten Säuren (z.B. Salzsäure, Ameisensäure, Essigsäure) jedoch relativ aggressiv und harsch, und können dadurch zu Beschädigungen an empfindlicheren Oberflächen führen, insbesondere moderne Oberflächen im Sanitärbereich, z.B. Toilettenoberflächen, sind zunehmend beschichtet, die eine säurehaltige Behandlung nur schlecht vertragen. Zudem möchten viele Anwender nicht mit den säurehaltigen Reinigungsmitteln in Berührung kommen, da sie gesundheitliche Risiken befürchten.
Es besteht daher Bedarf, ein milderes Reinigungsmittel mit verbesserter Reinigungsleistung bereitzustellen.
Überraschenderweise wurde nun festgestellt, dass erfindungsgemäße Reinigungsmittel, die Tensid und Protease enthalten und einen neutralen pH-Wert aufweisen, eine schonende Reinigungsmittelalternative mit einer sehr guten Reinigungsleistung darstellen.
Gegenstand der Erfindung ist daher in einem ersten Aspekt ein Reinigungsmittel, vorzugsweise flüssiges Reinigungsmittel, bevorzugt flüssiges Reinigungsmittel zum Reinigen von harten Oberflächen, besonders bevorzugt flüssiges Reinigungsmittel zum Reinigen von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, umfassend mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, mindestens ein Tensid, wobei das Tensid aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist. In bevorzugten Ausführungsformen umfassen erfindungsgemäße Mittel eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 und 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 und 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T, L256D, L256E, L256Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das Mittel eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und die eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist: S3T- V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; S3T-V4I- R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V1991- N74D-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D- Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W- N212S-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209W-S154D- L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209K- S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W- A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das Mittel mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das Mittel mindestens zwei Tenside, wobei das zweite Tensid unterschiedlich zum ersten Tensid und aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels.
In bevorzugten Ausführungsformen sind das erste und zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt.
In bevorzugten Ausführungsformen ist das erste Tensid ein Alkoholethoxylat, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-% und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels.
In bevorzugten Ausführungsformen liegen das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vor, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5.
Weitere Gegenstände der Erfindung betreffen
• Verfahren zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein hierin beschriebenes Reinigungsmittel angewendet wird, wobei das Verfahren vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C, durchgeführt wird;
• Verwendung einer Protease in einem Reinigungsmittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C, wobei die Protease wie hierin definiert ist;
• Verwendung eines hierin beschriebenen Reinigungsmittels zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwas 20°C.
Diese und weitere Aspekte, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden für den Fachmann aus dem Studium der folgenden detaillierten Beschreibung und Ansprüche ersichtlich. Dabei kann jedes Merkmal aus einem Aspekt der Erfindung in jedem anderen Aspekt der Erfindung eingesetzt werden. Ferner ist es selbstverständlich, dass die hierin enthaltenen Beispiele die Erfindung beschreiben und veranschaulichen sollen, diese aber nicht einschränken und insbesondere die Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt ist.
Alle Prozentangaben sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozent (Gew.-%).
Numerische Bereiche, die in dem Format "von x bis y" angegeben sind, schließen die genannten Werte ein. Wenn mehrere bevorzugte numerische Bereiche in diesem Format angegeben sind, ist es selbstverständlich, dass alle Bereiche, die durch die Kombination der verschiedenen Endpunkte entstehen, ebenfalls erfasst werden.
"Mindestens eine", wie hierin verwendet, bedeutet eine oder mehrere, d.h. 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14 oder mehr.
Der Begriff "Reinigungsmittel", wie hierin verwendet, ist gleichbedeutend mit dem Begriff "Mittel" und bezeichnet eine Zusammensetzung zum Reinigen von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüsseln, Spülkasten, WC-Rand, wie in der Beschreibung erläutert.
"Etwa", "ca." oder "ungefähr", wie hierin in Bezug auf einen Zahlenwert verwendet, beziehen sich auf den entsprechenden Zahlenwert ±10%, vorzugsweise ±5%.
"Flüssig", wie hierin verwendet, schließt Flüssigkeiten und Gele sowie auch pastöse Zusammensetzungen ein. Es ist bevorzugt, dass die flüssigen Zusammensetzungen bei Raumtemperatur fließfähig und gießbar sind, es ist aber auch möglich, dass sie eine Fließgrenze aufweisen.
Ein Stoff, z.B. eine Zusammensetzung oder ein Mittel ist gemäß Definition der Erfindung festförmig, wenn sie bei 25°C und 1 .013 mbar im festen Aggregatzustand vorliegt.
Ein Stoff, z.B. eine Zusammensetzung oder ein Mittel ist gemäß Definition der Erfindung flüssig, wenn sie bei 25°C und 1.013 mbar im flüssigen Aggregatzustand vorliegt. Dabei umfasst flüssig auch gelförmig.
"Variante", wie hierin verwendet, bezieht sich auf natürliche oder artifiziell erzeugte Variationen eines nativen Enzyms, das eine gegenüber der Referenzform abgewandelte Aminosäuresequenz aufweist.
Die vorliegende Erfindung basiert auf der überraschenden Erkenntnis der Erfinder, dass erfindungsgemäße Reinigungsmittel, die Tensid und Protease enthalten und einen neutralen pH-Wert aufweisen, eine schonende Reinigungsmittelalternative mit einer sehr guten Reinigungsleistung darstellen.
Erfindungsgemäß wird eine Protease in einem Reinigungsmittel angewendet. Die Anwendung einer Protease in einem erfindungsgemäßen Reinigungsmittel bzw. die Anwendung eines erfindungsgemäßen Reinigungsmittels führt zu einer verbesserten Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüsseln, Spülkasten, WC-Rand.
Das ist insbesondere insoweit überraschend, als bisher die Anwendung einer Protease in solchen Reinigungsmitteln nicht beschrieben wurde. Insbesondere die Anwendung einer hierin beschriebenen Protease in Reinigungsmitteln zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüsseln, Spülkasten, WC-Rand, wurde bisher nicht beschrieben. Insbesondere die Anwendung der hierin beschriebenen Kombination aus Tensiden und Protease in flüssigen Reinigungsmitteln, insbesondere flüssige Reinigungsmitteln zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüsseln, Spülkasten, WC-Rand, wurde bisher nicht beschrieben.
Erfindungsgemäße Mittel enthalten eine Protease. Beispiele für geeignete Proteasen sind die Subtilisine BPN' aus Bacillus amyloliquefaciens und Carlsberg aus Bacillus licheniformis, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die Protease aus Bacillus lentus, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7. Subtilisin Carlsberg ist in weiterentwickelter Form unter dem Handelsnamen Alcalase® von dem Unternehmen Novozymes erhältlich. Die Subtilisine 147 und 309 werden unter den Handelsnamen Esperase® bzw. Savinase® von dem Unternehmen Novozymes vertrieben. Von der Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 leiten sich Protease- Varianten ab, beschrieben in z.B. WO 95/23221 , WO 92/21760, WO 2013/060621 und EP 3660151. Weitere brauchbare Proteasen sind z.B. die unter den Handelsnamen Durazym®, Relase®, Everlase®, Nafizym®, Kannase®, Progress Uno 101 L® und Ovozyme® von dem Unternehmen Novozymes, die unter den Handelsnamen, Purafect®, Purafect® OxP, Purafect® Prime, Excellase®, Properase®, Preferenz P100® und Preferenz P300® von dem Unternehmen Danisco/DuPont, das unter dem Handelsnamen Lavergy pro 104 LS® von dem Unternehmen BASF, das unter dem Handelsnamen Protosol® von dem Unternehmen Advanced Biochemicals Ltd., das unter dem Handelsnamen Wuxi® von dem Unternehmen Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., die unter den Handelsnamen Proleather® und Protease P® von dem Unternehmen Amano Pharmaceuticals Ltd., und das unter der Bezeichnung Proteinase K-16 von dem Unternehmen Kao Corp, erhältlichen Enzyme. Besonders bevorzugt eingesetzt werden auch die Proteasen aus Bacillus gibsonii und Bacillus pumilus, die offenbart sind in WO 2008/086916, WO 2007/131656, WO 2017/215925, WO 2021/175696 und WO 2021/175697. Weitere verwendbare Proteasen sind diejenigen, die in den Mikroorganismen Stenotrophomonas maltophilia, insbesondere Stenotrophomonas maltophilia K279a, Bacillus intermedius sowie Bacillus sphaericus natürlicherweise vorhanden sind. In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an mindestens zwei, drei oder vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei oder vier Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist/sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt an zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T und L256D, L256E, L256Q, vorzugsweise S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E, bestehenden Gruppe ausgewählt ist/sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T und L256D, L256E, L256Q bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T und L256D, L256E, L256Q bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine u Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T und L256D, L256E, L256Q bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T und L256D, L256E, L256Q bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt and zwei, drei oder vier der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt zwei, drei oder Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist/sind, und (ii) an mindestens einer und zunehmend bevorzugt and mindestes zwei, drei, vier, fünf oder sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine und zunehmend bevorzugt mindestens zwei, drei, vier, fünf oder sechs Aminosäuresubstitution(en), die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt ist/sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I, und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist. In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I, und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I, und (ii) an mindestens vier der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens vier Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I, und (ii) an mindestens fünf der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens fünf Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist. In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt sind, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in erfindungsgemäßen Mitteln enthaltene Protease eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 oder 199 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I, R99E und V199I, und (ii) an mindestens sechs der Positionen, die den Positionen 154, 160, 181 , 183, 185, 200, 203, 209 oder 256 entsprechen, mindestens sechs Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus S154D, S160G, A181 D, F183R, Q185R, Q200L, Y203W, A209K und L256E bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Reinigungsmittel eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und die eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I- R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I- S154D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- R143W-Y161 T-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; S3T-V4I-R99E- V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W- S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y- A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L- Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V1991- Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 .
In besonders bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Reinigungsmittel eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I- R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I- R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I- R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I- S154D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q- R143W-Y161 T-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E; S3T-V4I-R99E- V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D- A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W- S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y- A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L- Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V1991- Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 und wobei die Protease neben den genannten Aminosäuresubstitutionen keine weiteren Änderungen umfasst.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel die erfindungsgemäße Protease zunehmend bevorzugt in einer Menge von jeweils 1 x 10-8 bis 5 Gew.-%, von 0,0001 bis 1 Gew.-%, von 0,0005 bis 0,5 Gew.-%, von 0,001 bis 0,1 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel die erfindungsgemäße Protease in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels.
Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, z.B. dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2‘-Bichinolyl-4,4‘-dicarbonsäure) oder dem Biuret-Verfahren (Gornall et al., J. Biol. Chem., 1948, 177, 751-766) bestimmt werden. Die Bestimmung der Aktivproteinkonzentration kann diesbezüglich über eine Titration der aktiven Zentren unter Verwendung eines geeigneten irreversiblen Inhibitors und Bestimmung der Restaktivität (Bender et al., J. Am. Chem. Soc., 1966, 88, 24, 5890-5913) erfolgen.
Bei den hierin beschrieben Enzymen handelt es sich vorzugsweise um reife (mature) Enzyme, d.h. um das katalytisch aktive Molekül ohne Signal- und/oder Propeptid(e). Soweit nicht anders angegeben beziehen sich auch die angegebenen Sequenzen auf jeweils reife (prozessierte) Enzyme.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung ist das jeweilige Enzym ein frei vorliegendes Enzym. Dies bedeutet, dass das Enzym mit allen Komponenten des Mittels direkt agieren kann und, falls es sich bei dem Mittel um ein Flüssigmittel handelt, dass das Enzym direkt mit dem Lösungsmittel des Mittels (z.B. Wasser) in Kontakt steht. In anderen Ausführungsformen kann ein Mittel Enzyme enthalten, die einen Interaktionskomplex mit anderen Molekülen bilden oder die eine "Umhüllung" enthalten. Hierbei kann ein einzelnes oder mehrere Enzymmolekül(e) durch eine sie umgebende Struktur von den anderen Bestandteilen des Mittels getrennt sein. Eine solche trennende Struktur kann entstehen durch, ist allerdings nicht beschränkt auf, Vesikel, wie etwa eine Micelle oder ein Liposom. Die umgebende Struktur kann aber auch ein Viruspartikel, eine bakterielle Zelle oder eine eukaryotische Zelle sein. In verschiedenen Ausführungsformen kann ein Mittel Zellen von Bacillus pumilus oder Bacillus subtilus, die Enzyme exprimieren, oder Zellkulturüberstände solcher Zellen enthalten.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet das Merkmal, dass ein Enzym die angegebene(n) Substitution(en) (oder Deletion oder Insertion) aufweist, dass sie an der jeweiligen Position eine (der angegebenen) Substitution(en) (oder Deletion oder Insertion) enthält, d.h. zumindest die angegebenen Positionen nicht anderweitig mutiert oder, z.B. durch Fragmentierung des Enzyms, deletiert sind. In verschiedenen Ausführungsformen weisen die hierin beschriebenen Enzyme mit Ausnahme der explizit erwähnten Substitutionen die Sequenz der jeweiligen Referenzsequenz auf, d.h. sind abgesehen von den substituierten Positionen 100% identisch zu der jeweiligen Referenzsequenz.
Die Bestimmung der Identität von Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen erfolgt durch einen Sequenzvergleich. Dieser Sequenzvergleich basiert auf dem im Stand der Technik etablierten und üblicherweise genutzten BLAST-Algorithmus (Altschul et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410, und Altschul et al., Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res., 1997, 25, 3389-3402) und geschieht prinzipiell dadurch, dass ähnliche Abfolgen von Nukleotiden oder Aminosäuren in den Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen einander zugeordnet werden. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. Ein weiterer im Stand der Technik verfügbarer Algorithmus ist der FASTA-Algorithmus. Sequenzvergleiche (Alignments), insbesondere multiple Sequenzvergleiche, werden mit Computerprogrammen erstellt. Häufig genutzt werden z.B. die Clustal-Serie (Chenna et al., Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs, Nucleic Acid Res., 2003, 31 , 3497-3500), T-Coffee (Notredame et al., T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments, J. Mol. Biol., 2000, 302, 205-217) oder Programme, die auf diesen Programmen bzw. Algorithmen basieren. Ferner möglich sind Sequenzvergleiche (Alignments) mit dem Computer-Programm Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, Kalifornien, USA) mit den vorgegebenen Standardparametern, dessen AlignX-Modul für die Sequenzvergleiche auf ClustalW basiert, oder Clone Manager 10 (Verwendung der Scoring Matrix BLOSUM 62 für Sequenz-Alignment auf Aminosäureebene). Soweit nicht anders angegeben, wird die hierin angegebene Sequenzidentität mit dem BLAST-Algorithmus bestimmt.
Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen zueinander. Sie wird üblicherweise in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben oder in einem Alignment einander entsprechenden Positionen angegeben. Der weiter gefasste Begriff der Homologie bezieht bei Aminosäuresequenzen konservierte Aminosäure-Austausche in die Betrachtung mit ein, also Aminosäuren mit ähnlicher chemischer Aktivität, da diese innerhalb des Peptids, Proteins oder Enzyms meist ähnliche chemische Aktivitäten ausüben. Daher kann die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen auch Prozent Homologie oder Prozent Ähnlichkeit angegeben sein. Identitäts- und/oder Homologieangaben können über ganze Polypeptide oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Homologe oder identische Bereiche von verschiedenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen sind daher durch Übereinstimmungen in den Sequenzen definiert. Solche Bereiche weisen oftmals identische Funktionen auf. Sie können klein sein und nur wenige Nukleotide oder Aminosäuren umfassen. Oftmals üben solche kleinen Bereiche für die Gesamtaktivität des Peptids, Proteins oder Enzyms essenzielle Funktionen aus. Es kann daher sinnvoll sein, Sequenzübereinstimmungen nur auf einzelne, ggf. kleine Bereiche zu beziehen. Soweit nicht anders angegeben beziehen sich Identitätsoder Homologieangaben in der vorliegenden Anmeldung aber auf die Gesamtlänge der jeweils angegebenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresäuresequenz.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet die Angabe, dass eine Aminosäureposition einer numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 entspricht daher, dass die entsprechende Position der numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 in einem wie oben definierten Alignment zugeordnet ist.
Für die Beschreibung von Substitutionen, die genau eine Aminosäureposition betreffen (Aminosäureaustausche), wird hierin folgende Konvention angewendet: zunächst wird die natürlicherweise vorhandene Aminosäure in Form des international gebräuchlichen Einbuchstaben- Codes bezeichnet, dann folgt die zugehörige Sequenzposition und schließlich die eingefügte Aminosäure. Mehrere oder alternative Austausche innerhalb derselben Polypeptidkette werden durch Schrägstriche voneinander getrennt. "130D/V" bedeutet somit, dass die Position 130 zu D oder V mutiert ist. Bei Insertionen sind nach der Sequenzposition zusätzliche Aminosäuren benannt. Bei Deletionen ist die fehlende Aminosäure durch ein Symbol, z.B. einen Stern oder einen Strich, ersetzt oder vor der entsprechenden Position ein A angegeben. Beispielsweise beschreibt P9T die Substitution von Prolin an Position 9 durch Threonin, P9TH die Insertion von Histidin nach der Aminosäure Threonin an Position 9 und P9* oder AP9 die Deletion von Prolin an Position 9. Diese Nomenklatur ist dem Fachmann auf dem Gebiet der Enzymtechnologie bekannt. Einem Fachmann ist es über heutzutage allgemein bekannte Methoden, wie z.B. die chemische Synthese oder die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in Verbindung mit molekularbiologischen und/oder proteinchemischen Standardmethoden möglich, anhand bekannter DNA- und/oder Aminosäuresequenzen die entsprechenden Nukleinsäuren bis hin zu vollständigen Genen herzustellen. Derartige Methoden sind z.B. aus Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. 2001. Molecular cloning: a laboratory manual, 3. Edition Cold Spring Laboratory Press, bekannt.
Ferner können die in dem Mittel enthaltenen Enzyme und/oder weitere Inhaltsstoffe des Mittels mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für das Enzym undurchlässigen Substanz umhüllt sein, welche unter Anwendungsbedingungen des Mittels durchlässig für das Enzym wird. Eine solche Ausführungsform der Erfindung ist somit dadurch gekennzeichnet, dass das Enzym mit einer bei Raumtemperatur oder bei Abwesenheit von Wasser für das Enzym undurchlässigen Substanz umhüllt ist.
In den hierin beschriebenen Mitteln können die einzusetzenden Enzyme ferner zusammen mit Begleitstoffen, etwa aus der Fermentation, konfektioniert sein. In flüssigen Formulierungen werden die Enzyme bevorzugt als Enzymflüssigformulierung(en) eingesetzt.
Die Enzyme werden in der Regel nicht in Form des reinen Proteins, sondern vielmehr in Form stabilisierter, lager- und transportfähiger Zubereitungen bereitgestellt. Zu diesen vorkonfektionierten Zubereitungen zählen z.B. bei flüssigen oder gelförmigen Mitteln, Lösungen der Enzyme, vorteilhafterweise möglichst konzentriert, wasserarm und/oder mit Stabilisatoren oder weiteren Hilfsmitteln versetzt.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere reversible Proteaseinhibitor(en)/-stabilisator(en) umfassen, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels. Falls mehrere Inhibitoren/Stabilisatoren enthalten sind, beziehen sich diese Angaben auf die Gesamtkonzentration. In bevorzugten Ausführungsformen sind diese aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2- Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, speziellen Peptidverbindungen und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel Borsäure als Stabilisator/Inhibitor enthalten, vorzugsweise in einer Menge von 0,05 bis 5,5 Gew.-% und zunehmend bevorzugt 0,075 bis 4,5 Gew.-%, 0,09 bis 3,5 und 0,1 bis 2,49 Gew.-%.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel ein Phenylboronsäurederivat als Stabilisator/Inhibitor enthalten, vorzugsweise in einer Menge von 0,0005 bis 2,0 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 1 ,0 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-% und ganz besonders bevorzugt 0,02 bis 0,2 Gew.-%. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird unter "Phenylboronsäurederivat" eine Verbindung der Formel (I) verstanden:
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wobei R Wasserstoff, eine Hydroxyl-, eine Ci-s-Alkyl-, eine substituierte Ci-s-Alkyl-, eine C1-6- Alkenyl oder eine substituierte Ci-6-Alkenyl-Gruppe ist. Bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat eine Ci-6-Alkyl-Gruppe und hierunter weiter bevorzugt -CH3, -CH3CH2 oder - CH3CH2CH2 ist. Weiter bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat Wasserstoff. Besonders bevorzugt ist das Phenylboronsäurederivat 4-Formyl-phenylboronsäure (4-FPBA). Erfindungsgemäß einsetzbare Phenylboronsäurederivate können ferner weitere chemische Modifikationen am Phenylring aufweisen, insbesondere können sie einen oder mehrere Methyl-, Amino-, Nitro-, Chloro-, Fluoro-, Bromo,- Hydroxyl-, Formyl-, Ethyl-, Acetyl-, t-Butyl-, Anisyl-, Benzyl-, Trifluroacetyl-, N-hydroxysuccinimid-, t-Butyloxycarbonyl-, Benzoyl-, 4-Methylbenzyl-, Thioanizyl-, Thiocresyl-, Benzyloxymethyl-, 4-Nitrophenyl-, Benzyloxycarbonyl-, 2-Nitrobenzoyl-, 2- Nitrophenylsulphenyl-, 4-Toluenesulphonyl-, Pentafluorophenyl-, Diphenylmethyl-, 2- Chlorobenzyloxycarbonyl-, 2,4,5-trichlorophenyl-, 2-bromobenzyloxycarbonyl-, 9- Fluorenylmethyloxycarbonyl-, Triphenylmethyl-, 2,2,5,7,8-pentamethyl-chroman-6-sulphonyl-Reste bzw. Gruppen oder Kombinationen hiervon enthalten.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel mindestens einen Peptidinhibitor als Stabilisator/Inhibitor enthalten, vorzugsweise in einer Konzentration von 0,01 bis 50 mM, bevorzugt vn 0,05 bis 5 mM und besonders bevorzugt 0,1 bis 0,5 mM enthalten. Falls mehrere Peptidinhibitoren enthalten sind, beziehen sich diese Angaben auf die Gesamtkonzentration. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird unter "Peptidinhibitor" eine Verbindung der allgemeinen Formel (II) oder eine Verbindung der allgemeinen Formel (III) verstanden, wobei optional die Verbindung der Formel (II) oder (III) zusammen mit einem Salz der Formel (IV) vorliegt.
Die Verbindung der Formel (II) weist folgende Strukturformel auf:
Z-A-NH-CH(R)-C(O)-X (II), wobei A ein Aminosäurerest ist; X Wasserstoff ist; Z ein N-Verkappungsrest ausgewählt aus Phosphoramidat [(R'O)2(O)P-], Sulfenamid [(SR')2-], Sulfonamid [(R'(O)2S-], Sulfonsäure [SO3H], Phosphinamid [(R')2(O)P-], Sulfamoyl Derivaten [R'O(O)2S-], Thioharnstoff [(R')2N(O)C-], Thiocarbamat [R'O(S)C-], Phosphonat [R'-P(O)OH], Amidophosphat [R'O(OH)(O)P-], Carbamat (R'O(O)C-) und Harnstoff (R'NH(O)C-) ist, wobei jedes R' unabhängig ausgewählt ist aus geradkettigen oder verzweigten Ci-Ce unsubstituierten Alkyl-, Phenyl-, C7-C9 Alkylaryl- und Cycloalkyl- Resten, wobei der Cycloalkylring ein C4-C8 Cycloalkylring sein kann und ein oder mehrere Heteroatome enthalten kann, die ausgewählt sind aus O, N, und S; und R ausgewählt ist aus geradkettigen oder verzweigten Ci-Ce unsubstituierten Alkyl-, Phenyl und C7-C9 Alkylarylresten; und Stereoisomeren, Tautomeren und Salzen davon.
Die Verbindung der Formel (III) weist folgende Strukturformel auf:
Y-B1-B0-X (III), wobei X Wasserstoff ist; Bi ein einzelner D- oder L-Aminosäurerest ist; Bo ein Aminosäurerest ist und Y aus einem oder mehreren, bevorzugt ein oder zwei, Aminosäureresten und optional aus einem N-Verkappungsrest besteht, wobei der N-Verkappungsrest wie unter (I) definiert ist.
Das Salz der Formel (IV) weist folgende Strukturformel auf:
(CE+)P(DF )q (IV), wobei C ein Kation ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Al3+, Ca2+, Li+, Mg2+, Mn2+, Ni2+, K+, NRV und Na+ ist, wobei jedes R" unabhängig voneinander für H oder eine lineare oder verzweigte, substituierte oder unsubstituierte Alkyl-, Aryl- oder Alkenylgruppe steht, die alle optional ein oder mehrere Heteroatom(e) enthalten können; E eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist und der Valenz/Wertigkeit des Kations entspricht; p der Anzahl an Kationen im Salz entspricht; D ein Anion ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus CHsCOO-, Br, COs2’, CI’, C3H5O(COO)33’, HCOO-, HCOs’, HSO4’, C2O42', SO42’ und SO32- ist; F eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist und der Valenz/Wertigkeit des Anions entspricht; q der Anzahl an Anionen im Salz entspricht; wobei die Nettoladung des Salzes 0 ist, d.h. es gilt ((E) p) - ((F) q) = 0.
Bevorzugte Reste R sind ausgewählt aus Methyl, iso-Propyl, sec-Butyl, iso-Butyl, -CeHs, -CH2- C6H5, und -CH2-CH2-C6H5, so dass der Teil -NH-CH(R)-C(O)-X der Verbindung der Formel (II) von den Aminosäuren Ala, Val, Ile, Leu, PGly (Phenylglycin), Phe und HPhe (Homophenylalanin) abgeleitet ist, indem die Carboxylgruppe in eine Aldehyd- oder Trifluoromethylketongruppe umgewandelt wird. Obwohl solche Reste daher keine Aminosäuren sind (obwohl sie aus einem Aminosäurevorläufer synthetisiert sein können), wird hierin bei den beispielhaft aufgelisteten Enzymstabilisatoren der Einfachheit halber der Aldehydteil der Inhibitoren, der von der entsprechenden Aminosäuren abgeleitet ist, durch den Zusatz "H" nach der analogen Aminosäure bezeichnet (z.B. steht "-AlaH" für den Rest "-NHCH(CH3)C(O)H"). Trifluoromethylketone werden in gleicher weise durch den Zusatz "CF3" nach der analogen Aminosäure gekennzeichnet (z.B. steht "-AlaCFs" für den Rest "- NHCH(CH3)C(O)CF3").
Die Aldehyde der Peptidinhibitoren, wie hierin verwendet, können aus den entsprechenden Aminosäuren hergestellt werden, wobei die C-terminale Carboxylgruppe der Aminosäure in eine Aldehydgruppe umgewandelt wird. Derartige Aldehyde können mittels bekannter Verfahren hergestellt werden, wie z.B. in US 5015627, EP 0185930, EP 0583534 und DE 3200812 beschrieben.
Die Trifluoromethylketone, wie hierin verwendet, können ebenfalls aus den korrespondierenden Aminosäuren hergestellt werden, indem die C-terminale Carboxylgruppe in eine Trifluoromethylketongruppe umgewandelt wird. Solche Trifluoromethylketone können mittels bekannter Verfahren, wie z.B. in der EP 0583535 beschrieben, hergestellt werden. In bevorzugten Ausführungsformen ist der Substituent A ausgewählt aus Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Phe und Lys.
Das N-terminale Ende des Peptidinhibitors gemäß Formel (II) und/oder des Peptidinhibitors gemäß Formel (III), wird durch eine Schutzgruppe, die den N-Terminus verkappt geschützt, wobei die Gruppe aus der aus Carbamaten, Harnstoffen, Sulfonamiden, Phosphonamiden, Thioharnstoffen, Sulfenamiden, Sulfonsäuren, Phosphinamiden, Thiocarbamaten, Amidophosphaten und Phosphonamiden bestehenden Gruppe ausgewählt ist. Bevorzugt wird das N-terminale Ende jedoch durch eine Methyl-, Ethyl- oder Benzylcarbamatgruppe [CH3O-(O)C-; CH3CH2O-(O)C-; oder C6H5CH2O-(O)C-], eine Methyl-, Ethyl- oder Benzylharnstoffgruppe [CH3NH-(O)C-; CH3CH2NH-(O)C-; oder C6H5CH2NH-(O)C-], eine Methyl-, Ethyl- oder Benzylsulfonamidgruppe [CH3SO2-; CH3CH2SO2-; oder C6H5CH2SO2-], oder eine Methyl-, Ethyl oder Benzylamidophosphatgruppe [CH3O(OH)(O)P-; CH3CH2O(OH)(O)P-; oder C6H5CH2O(OH)(O)P-] geschützt.
Die Synthese der N-Verkappungsgruppen kann mithilfe von dem Fachmann bekannten Verfahren erfolgen, vgl. z.B. EP 3263289 bzw. die darin genannten Zitatstellen.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel zusätzlich zu einem Peptidinhibitor der Formel (II) oder (III) Salze der Formel (IV) umfassen. Diese Salze können in einer Konzentration von 50 bis 2.000 mM, vorzugsweise 70 bis 1.500 mM, bevorzugt 100 bis 1.000 mM, besonders bevorzugt 150 bis 500 mM und ganz besonders bevorzugt 200 mM enthalten sein. Besonders bevorzugt ist das Salz der Formel (IV) Na2SO4.
Der Begriff "Alkyl", wie hierin verwendet, bezieht sich auf eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe, die gerade oder verzweigt sein kann und 1 bis 20 Kohlenstoffatome in der Kette umfasst. Der Begriff "Aryl", wie hierin verwendet, bezieht sich auf ein aromatisches monocyclisches oder multicyclisches Ringsystem, das 6 bis 14 Kohlenstoffatome umfasst. Der Begriff "Alkenyl", wie hierin verwendet, bezieht sich auf eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe, die wenigstens eine Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung enthält und die gerade oder verzweigt sein kann und 2 bis 15 Kohlenstoffatome in der Kette umfasst.
Bevorzugt ist Bo ein D- oder L-Aminosäurerest, der aus der aus Tyr, m-Tyrosin, 3,4- Dihydroxyphenylalanin, Phe, Val, Met, Nva, Leu, Ile und Nie bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und/oder Bi ein D- oder L-Aminosäurerest mit einer (optional substituierten) kleinen aliphatischen Seitengruppe, bevorzugt Ala, Cys, Gly, Pro, Ser, Thr, Val, Nva oder Nie. Weiter bevorzugt ist Y B2, B3- B2, Z-B2, Z-B3-B2, wobei B2 und B3 jeweils unabhängig voneinander ein Aminosäurerest sind und Z ein N-Verkappungsrest ist, wobei der N-Verkappungsrest wie oben definiert ist. Weiter bevorzugt ist B2 ausgewählt aus Val, Gly, Ala, Arg, Leu, Phe und Thr, und/oder B3 ausgewählt aus Phe, Tyr, Trp, Phenylglycin, Leu, Val, Nva, Nie und Ile.
Sofern nicht anders angegeben, sind die Aminosäuren in den oben genannten Formeln über Peptidbindungen verknüpft und alle Peptide oder peptid-ähnlichen Verbindungen sind, sofern nicht anders angegeben, immer vom N- zum C-Terminus dargestellt. Beispielhafte Peptidinhibitoren der Formeln (II) und (III), die in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt werden können, umfassen, sind aber nicht beschränkt auf Cbz-Arg-Ala-Tyr-H, Ac-Gly-Ala- Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Val-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Phe-H, Cbz-Gly-Ala- Val-H, Cbz-Gly-Gly-Tyr-H, Cbz-Gly-Gly-Phe-H, Cbz-Arg-Val-Tyr-H, Cbz-Leu-Val-Tyr-H, Ac-Leu-Gly- Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Phe- H, Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H, Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H, MeO-CO-Val-Ala-Leu-H, MeNCO-Val-Ala-Leu-H, MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H, MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H, MeSO2-Phe-Gly- Ala-Leu-H, MeSO2-Val-Ala-Leu-H, PhCH2O(OH)(O)P-Val-Ala-Leu-H, EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H, PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H, PhCH2O(OH)(O)P-Leu-Ala-Leu-H, PhCH2O(OH)(O)P-Phe-Ala-Leu-H, MeO(OH)(O)P-Leu-Gly-Ala-Leu-H, a-MAPI, ß-MAPI, Phe-urea-Arg-Val-Tyr-H, Phe-urea-Gly-Gly-Tyr- H, Phe-urea-Gly-Ala-Phe-H, Phe-urea-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-urea-Gly-Ala-Leu-H, Phe-urea-Gly-Ala-Nva- H, Phe-urea-Gly-Ala-Nle-H, Tyr-urea-Arg-Val-Tyr-H, Tyr-urea-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-Cys-Ser-Arg-Val- Phe-H, Phe-Cys-Ser-Arg-Val-Tyr-H, Phe-Cys-Ser-Gly-Ala-Tyr-H, Antipain, GE20372A, GE20372B, Chymostatin A, Chymostatin B und Chymostatin C. Wie hierin verwendet, bezieht sich der Ausdruck "Cbz" auf die Benzyloxycarbonyl-Gruppe mit der Summenformel C7H7O. Diese wird als Schutzgruppe verwendet. Weitere terminale Gruppen in den Peptidinhibitoren der vorliegenden Erfindung können sein: "Ph": Phenyl; "Ac": Acetyl und "Me": Methyl. Der Ausdruck "urea"“, wie hierin verwendet, ist gleichbedeutend mit Harnstoff.
In verschiedenen Ausführungsformen umfasst die Erfindung auch alle Stereoisomere, insbesondere Enantiomere und Diastereomere, Tautomere und Salze der vorstehend beschriebenen Verbindungen.
Ohne an eine Theorie gebunden sein zu wollen, wird davon ausgegangen, dass die Zugabe eines Salzes der Formel (IV) zu einem Peptidinhibitor der Formel (II) oder (III) den Enzym- Peptidinhibitor-Komplex durch das Entfernen von freien reaktiven Wassermolekülen weiter stabilisiert. Dies erhöht die Bindungseffizienz des Peptidinhibitors an das Enzym und/oder erhöht die lonenstärke, wodurch letztendlich der Enzym-Peptidinhibitor-Komplex stabilisiert wird. Durch die Verwendung mindestens eines Salzes der Formel (IV) ist es möglich, die Peptidinhibitoren in moderaten Konzentrationen (0,01 bis 50 mM) einzusetzen. Die Protease und ggf. weitere enthaltene Proteine, insbesondere weitere Enzyme, werden auf diese Weise gegenüber einer Proteolyse durch dieses Enzym, insbesondere Proteasen, geschützt (gegen Proteolyse stabilisiert) und sind so auch nach einer Lagerung uneingeschränkt leistungsfähig.
Ferner verfügen diese Peptidinhibitor-Verbindungen über eine gute Wasserlöslichkeit, so dass sie in entsprechende Mittel einfach eingearbeitet werden können und ein Ausfallen während der Lagerung vermieden wird.
Alle Verbindungen, die im Rahmen der vorliegenden Erfindung als Stabilisator/Inhibitor in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt werden können, können in allen profanierten oder deprotonierten Formen in den Mitteln vorliegen. Ferner können alle derartigen Verbindungen, insbesondere deren deprotonierte Formen, mit Kationen vergesellschaftet sein. Bevorzugte Kationen sind diesbezüglich einwertige oder mehrwertige, insbesondere zweiwertige, Kationen, insbesondere Na-Ionen (Na+), K-Ionen (K+), Li-Ionen (Li+), Ca-Ionen (Ca2+), Mg-Ionen (Mg2+), Mn-Ionen (Mn2+) und Zn-Ionen (Zn2+). Besonders bevorzugt sind Na-Ionen (Na+).
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel eine Enzymzusammensetzung enthalten, in der die Protease und die Stabilisator-Zlnhibitorverbindung vorformuliert vorliegen. Wie aus den vorherigen Ausführungen ersichtlich, bildet das Enzym-Protein nur einen Bruchteil des Gesamtgewichts üblicher Enzymzubereitungen. Bevorzugt eingesetzte Proteasezubereitungen enthalten zwischen 0,1 und 40 Gew.-%, bevorzugt 0,2 und 30 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,4 und 20 Gew.-% und ganz besonders bevorzugt 0,8 und 10 Gew.-% des Enzymproteins. In solchen Zusammensetzungen kann die Stabilisatorverbindung in einer Menge von 0,05 bis 35 Gew.-%, vorzugsweise 0,05 bis 10 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht in der Enzymzusammensetzung, enthalten sein.
Erfindungsgemäße Mittel enthalten mindestens ein Tensid. Das Tensid kann aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt sein.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel mindestens ein nichtionisches Tensid.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel mindestens zwei Tenside, wobei die zwei Tenside unterschiedlich voneinander und aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt sind.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel mindestens zwei nichtionische Tenside, die unterschiedlich voneinander sind.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel mindestens zwei nichtionische Tenside, wobei die zwei Tenside unterschiedlich voneinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel mindestens zwei nichtionische Tenside, wobei das erste Tensid ein Alkoholethoxylat und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist.
In bevorzugten Ausführungsformen können zusätzlich zu dem einen Tensid oder zu den beiden Tensiden mindestens ein weiteres Tensid enthalten sein, das aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel das Tensid oder die Tenside jeweils in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel ein erstes Tensid, wobei das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,1 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 0,25 bis 7,5 Gew.-%, bevorzugt 0,3 bis 6 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,5 bis 5 Gew.-%, und ein zweites Tensid, wobei das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,05 bis 6,5 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 bis 5,5 Gew.-%, bevorzugt 0,2 bis 4 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,3 bis 3,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel ein erstes Tensid, wobei das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und ein zweites Tensid, wobei das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel ein erstes Tensid, wobei das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, und ein zweites Tensid, wobei das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5.
In bevorzugten Ausführungsformen enthalten erfindungsgemäße Mittel ein erstes Tensid, wobei das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und ein zweites Tensid, wobei das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5.
Geeignete nichtionische Tenside sind insbesondere Alkylglykoside und Ethoxylierungs- und/oder Propoxylierungsprodukte von Alkylglykosiden oder linearen oder verzweigten Alkoholen mit jeweils 8 bis etwa 18 C-Atomen im Alkylteil und 3 bis 20, vorzugsweise 4 bis 10 Alkylethergruppen. Weiterhin sind entsprechende Ethoxylierungs- und/oder Propoxylierungsprodukte von N-Alkylaminen, vicinalen Diolen, Fettsäureestern und Fettsäureamiden, die hinsichtlich des Alkylteils den genannten langkettigen Alkoholderivaten entsprechen, sowie von Alkylphenolen mit 5 bis 12 C-Atomen im Alkylrest brauchbar. Eine weitere Klasse bevorzugt eingesetzter nichtionischer Tenside, die entweder als alleiniges nichtionisches Tensid oder in Kombination mit anderen nichtionischen Tensiden eingesetzt werden, sind alkoxylierte, vorzugsweise ethoxylierte oder ethoxylierte und propoxylierte Fettsäurealkylester, vorzugsweise mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette, insbesondere Fettsäuremethylester. Nichtionische Tenside im Rahmen der Erfindung können Alkoxylate sein wie Polyglycolether, Fettalkoholpolyglycolether, Alkylphenolpolyglycolether, endgruppenverschlossene Polyglycolether, Mischether und Hydroxymischether und Fettsäurepolyglycolester. Ebenfalls verwendbar sind Ethylenoxid/Propylenoxid-Blockpolymere, Fettsäurealkanolamide und Fettsäurepolyglycolether. Eine weitere wichtige Klasse nichtionischer Tenside, die erfindungsgemäß verwendet werden kann, sind die Polyol-Tenside und hier besonders die Glykotenside, wie Alkylpolyglykoside und Fettsäureglucamide. Besonders bevorzugt sind die Alkylpolyglykoside, insbesondere die Alkylpolyglucoside, wobei besonders bevorzugt der Alkohol ein langkettiger Fettalkohol oder ein Gemisch langkettiger Fettalkohole mit verzweigten oder unverzweigten Cs bis Cis-Alkyl ketten ist und der Oligomerisierungsgrad (DP) der Zucker zwischen 1 und 10, vorzugsweise 1 bis 6, bevorzugt 1 ,1 bis 3, besonders bevorzugt 1 ,1 bis 1 ,7, beträgt, z.B. Cs-io-Alkyl-1 ,5-glucosid (DP von 1 ,5). Daneben sind auch die Fettalkoholalkoxylate (Fettalkoholpolyglycolether) bevorzugt, insbesondere mit Ethylenoxid (EO) und/oder Propylenoxid (PO) alkoxylierte, unverzweigte oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Cs-22-Alkohole mit einem Alkoxylierungsgrad bis zu 30, vorzugsweise ethoxylierte Ci2-22-Fettalkohole mit einem Ethoxylierungsgrad von weniger als 30, bevorzugt 12 bis 28, besonders bevorzugt 20 bis 28, ganz besonders bevorzugt 25, z.B. C16-18- Fettalkoholethoxylate mit 25 EO.
Als nichtionische Tenside werden vorzugsweise alkoxylierte, vorteilhafterweise ethoxylierte, insbesondere primäre Alkohole mit vorzugsweise 8 bis 18 C-Atomen und durchschnittlich 1 bis 12 Mol Ethylenoxid (EO) pro Mol Alkohol eingesetzt, in denen der Alkoholrest linear oder bevorzugt in 2- Stellung methylverzweigt sein kann bzw. lineare und methylverzweigte Reste im Gemisch enthalten kann, so wie sie üblicherweise in Oxoalkoholresten vorliegen. Insbesondere sind jedoch Alkoholethoxylate mit linearen Resten aus Alkoholen nativen Ursprungs mit 12 bis 18 C-Atomen, z.B. aus Kokos-, Palm-, Talgfett- oder Oleylalkohol, und durchschnittlich 2 bis 8 EO pro Mol Alkohol bevorzugt. Zu den bevorzugten ethoxylierten Alkoholen gehören z.B. Ci2-14-Alkohole mit 3 EO oder 4 EO, Cg-n-Alkohol mit 7 EO, Ci3-15-Alkohole mit 3 EO, 5 EO, 7 EO oder 8 EO, C s-Alkohole mit 3 EO, 5 EO oder 7 EO und Mischungen davon, wie z.B. Mischungen aus Ci2-14-Alkohol mit 3 EO und C12-18- Alkohol mit 5 EO. Die angegebenen Ethoxylierungsgrade stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein können. Bevorzugte Alkoholethoxylate weisen eine eingeengte Homologenverteilung auf (narrow range ethoxylates, NRE). Zusätzlich zu diesen nichtionischen Tensiden können auch Fettalkohole mit mehr als 12 EO eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind Talgfettalkohol mit 14 EO, 25 EO, 30 EO oder 40 EO.
Eine weitere Klasse nichtionischer Tenside sind die Alkylpolyglykoside (APG) mit der allgemeinen Formel
RO(G)Z, in der R für einen linearen oder verzweigten, insbesondere in 2-Stellung methylverzweigten, gesättigten oder ungesättigten, aliphatischen Rest mit 8 bis 22, vorzugsweise 12 bis 18 C-Atomen steht und G das Symbol ist, das für eine Glykoseeinheit mit 5 oder 6 C-Atomen, vorzugsweise für Glucose, steht. Der Glykosidierungsgrad z liegt dabei zwischen 1 und 4, vorzugsweise zwischen 1 und 2 und bevorzugt zwischen 1 ,1 und 1 ,4. Bevorzugt eingesetzt werden lineare Alkylpolyglykoside, also Alkylpolyglykoside, in denen der Polyglykosylrest ein Glucoserest und der Alkylrest ein n-Alkylrest ist.
Zusätzlich zu dem mindestens einen nichtionischen Tensid kann das erfindungsgemäße Mittel mindestens ein Aniontensid enthalten. Bevorzugte anionische Tenside sind hierbei Fettalkoholsulfate, Fettalkoholethersulfate, Dialkylethersulfate, Monoglyceridsulfate, Alkylbenzolsulfonate, Olefinsulfonate, Alkansulfonate, Ethersulfonate, n-Alkylethersulfonate, Estersulfonate und Ligninsulfonate. Ebenfalls im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendbar sind Fettsäurecyanamide, Sulfosuccinate (Sulfobernsteinsäureester), insbesondere Sulfobernsteinsäuremono- und -di-Ca-is-Alkylester, Sulfosuccinamate, Sulfosuccinamide, Fettsäureisethionate, Acylaminoalkansulfonate (Fettsäuretauride), Fettsäuresarcosinate, Ethercarbonsäuren und Alkyl(ether)phosphate sowie a-Sulfofettsäuresalze, Acylglutamate, Monoglyceriddisulfate und Alkylether des Glycerindisulfats. Wenn ein anionisches Tensid vorhanden ist, sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung die linearen Alkylbenzolsulfonate, Fettalkoholsulfate und/oder Fettalkoholethersulfate, insbesondere die Fettalkoholsulfate, bevorzugt. Fettalkoholsulfate sind Produkte von Sulfatierreaktionen an entsprechenden Alkoholen, während Fettalkoholethersulfate Produkte von Sulfatierreaktionen an alkoxylierten Alkoholen sind. Dabei versteht der Fachmann allgemein unter alkoxylierten Alkoholen die Reaktionsprodukte von Alkylenoxid, bevorzugt Ethylenoxid, mit Alkoholen, im Sinne der vorliegenden Erfindung bevorzugt mit längerkettigen Alkoholen. In der Regel entsteht aus n Molen Ethylenoxid und einem Mol Alkohol, abhängig von den Reaktionsbedingungen, ein komplexes Gemisch von Additionsprodukten unterschiedlicher Ethoxylierungsgrade. Eine weitere Ausführungsform der Alkoxylierung besteht im Einsatz von Gemischen der Alkylenoxide, bevorzugt des Gemisches von Ethylenoxid und Propylenoxid. Bevorzugte Fettalkoholethersulfate sind die Sulfate niederethoxylierter Fettalkohole mit 1 bis 4 Ethylenoxideinheiten (EO), insbesondere 1 bis 2 EO, z.B. 1 ,3 EO. Bei den Alkylbenzolsulfonaten sind insbesondere solche mit etwa 12 C-Atomen im Alkylteil bevorzugt, etwa lineares Natrium-Cio-18- Alkylbenzolsulfonat. Bevorzugte Olefinsulfonate weisen eine Kohlenstoffkettenlänge von 14 bis 16 auf. Die anionischen Tenside werden vorzugsweise als Natriumsalze eingesetzt, können aber auch als andere Alkali- oder Erdalkalimetallsalze, z.B. Magnesiumsalze, sowie in Form von Ammonium- oder Mono-, Di-, Tri- bzw. Tetraalkylammoniumsalzen enthalten sein, im Falle der Sulfonate auch in Form ihrer korrespondierenden Säure, z.B. Dodecylbenzolsulfonsäure. Als weitere Tenside können auch Sophorolipide verwendet werden. Diese sind im alkalischen als anionisch anzunehmen und sind im Sinne der vorliegenden Anmeldung daher als anionische Tenside zu verstehen.
Neben den bisher genannten Tensidtypen kann das erfindungsgemäße Mittel weiterhin auch kationische Tenside und/oder amphotere Tenside enthalten.
Geeignete Amphotenside sind z.B. Betaine der Formel
(Riii)(Riv)(Rv)N+CH2COO-, in der " einen ggf. durch Heteroatome oder Heteroatomgruppen unterbrochenen Alkylrest mit 8 bis 25, vorzugsweise 10 bis 21 Kohlenstoffatomen und Riv sowie Rv gleichartige oder verschiedene Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuten, insbesondere C10-18- Alkyldimethylcarboxymethylbetain und Cn-17-Alkylamidopropyldimethylcarboxymethylbetain.
Geeignete Kationtenside sind u.a. die quartären Ammoniumverbindungen der Formel (Rvi)(Rvii)(Rviii)(Rix)N+ X; in der Rvi bis Rix für vier gleich- oder verschiedenartige, insbesondere zwei lang- und zwei kurzkettige, Alkylreste und X- für ein Anion, insbesondere ein Halogenidion, stehen, z.B. Didecyldimethylammoniumchlorid, Alkylbenzyldidecylammoniumchlorid und deren Mischungen. Weitere geeignete kationische Tenside sind die quaternären oberflächenaktiven Verbindungen, insbesondere mit einer Sulfonium-, Phosphonium-, Jodonium- oder Arsoniumgruppe, die auch als antimikrobielle Wirkstoffe bekannt sind. Durch den Einsatz von quaternären oberflächenaktiven Verbindungen mit antimikrobieller Wirkung kann das Mittel mit einer antimikrobiellen Wirkung ausgestaltet werden bzw. dessen ggf. aufgrund anderer Inhaltsstoffe bereits vorhandene antimikrobielle Wirkung verbessert werden.
Der Gesamttensidgehalt einer solchen, vorzugsweise wässrigen, Reinigungsmittelformulierung beträgt vorzugsweise 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht der Formulierung.
Erfindungsgemäße Mittel weisen in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 auf.
Zur Einstellung des gewünschten pH-Werts können erfindungsgemäße Mittel system- und umweltverträgliche Säuren, insbesondere Citronensäure, Essigsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Milchsäure, Glykolsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure und/oder Adipinsäure, aber auch Mineralsäuren, insbesondere Schwefelsäure oder Alkalihydrogensulfate, oder Basen, insbesondere Ammonium- oder Alkalihydroxide, vorzugsweise Natriumhydroxid, enthalten. Derartige pH- Regulatoren sind in erfindungsgemäßen Mitteln vorzugsweise nicht über 10 Gew.-%, bevorzugt 0,5 bis 6 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,3 bis 2 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, enthalten.
Zur Einstellung und/oder Stabilisierung des pH-Werts können erfindungsgemäße Mittel weiterhin eine oder mehrere Puffer-Substanz(en) enthalten, üblicherweise in Mengen von 0,001 bis 5 Gew.-%, vorzugsweise 0,005 bis 3 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 2 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 0,5 Gew.-%, z.B. 0,2 Gew.-%. Bevorzugt sind Puffer- Substanzen, die zugleich Komplexbildner oder sogar Chelatbildner sind. Besonders bevorzugte Puffer-Substanzen sind Citronensäure bzw. Citrat, insbesondere die Natrium- und Kaliumcitrat, z.B. Trinatriumcitrat'2 H2O und Trikaliumcitrat H2O. In bevorzugten Ausführungsformen weisen erfindungsgemäße Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 auf, wobei der pH-Wert durch Zugabe von Citronensäure oder NaOH eingestellt wird.
Unter Reinigungsleistung wird im Rahmen der Erfindung das Vermögen eines Mittels, eine vorhandene Anschmutzung teilweise oder vollständig zu entfernen, verstanden. Im Rahmen der Erfindung weisen sowohl ein Mittel bzw. die durch dieses Mittel gebildete Reinigungsflotte eine jeweilige Reinigungsleistung auf. Die Reinigungsleistung wird bevorzugt ermittelt wie in den Beispielen 2 und 3 angegeben.
Unter Reinigungsflotte wird diejenige das Reinigungsmittel enthaltende Gebrauchslösung verstanden, die auf die zu reinigende Oberflächen, insbesondere sanitäre Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, einwirkt und damit mit den auf den Oberflächen vorhandenen Anschmutzungen in Kontakt kommt. Üblicherweise entsteht die Reinigungsflotte, wenn der Reinigungsvorgang beginnt und das Mittel z.B. in einem geeigneten Behältnis mit Wasser verdünnt wird.
Bevorzugte Ausführungsformen erfindungsgemäßer Verwendungen und Mittel erzielen solche vorteilhaften Reinigungsleistungen auch schon bei niedrigen Temperaturen, insbesondere in einem Temperaturbereich von etwa 10°C bis etwa 30°C, vorzugsweise etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C.
In bevorzugten Ausführungsformen wird die erfindungsgemäße Protease in Reinigungsmitteln eingesetzt. In bevorzugten Ausführungsformen wird die erfindungsgemäße Kombination aus Tensid(en) und Protease in Reinigungsmitteln eingesetzt. Zu solchen erfindungsgemäßen Reinigungsmitteln zählen alle denkbaren Reinigungsmittelarten, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Handreinigung. Dazu gehören z.B. Reiniger für harte Oberflächen wie Metall, Glas, Porzellan, Keramik, Kacheln, Stein, lackierte Oberflächen, Kunststoffe, Holz oder Leder, für die die Bezeichnung "Reinigungsmittel" verwendet wird, also z.B. auch Scheuermittel, Glasreiniger, WC-Duftspüler, usw.
Bevorzugte Ausführungsformen umfassen alle flüssigen, gelförmigen oder pastösen Darreichungsformen erfindungsgemäßer Mittel, die ggf. auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können, z.B. in Form eines nichtwässrigen Reinigungsmittels oder einer nicht-wässrigen Paste oder in Form eines wässrigen Reinigungsmittels oder einer wasserhaltigen Paste. Flüssige Mittel sind generell bevorzugt. Weiterhin kann das Mittel als Einkomponentensystem vorliegen. Solche Mittel bestehen aus einer Phase. Alternativ kann ein Mittel auch aus mehreren Phasen bestehen. Ein solches Mittel ist demnach in mehrere Komponenten aufgeteilt.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen ist das erfindungsgemäße Mittel ein flüssiges Reinigungsmittel. In besonders bevorzugten Ausführungsformen ist das erfindungsgemäße Mittel ein flüssiges Reinigungsmittel zur Reinigung von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüsseln, Spülkasten, WC-Rand.
Wenn erfindungsgemäße Mittel in flüssiger Form vorliegen, enthalten sie vorzugsweise bezogen auf ihr Gesamtgewicht mehr als 40 Gew.-% und zunehmend bevorzugt mehr als 50 Gew.-%, 60 Gew.-%, 70 Gew.-%, 80 Gew.-%, 90 Gew.-%, 91 Gew.-%, 92 Gew.-%, 93 Gew.-%, 94 Gew.-%, 95 Gew.-%, 96 Gew.-% oder 97 Gew.-%, und weniger als 100 Gew.-%, Wasser.
Erfindungsgemäße Mittel, die als homogene Lösungen oder Suspensionen vorliegen können, können neben der erfindungsgemäßen Kombination aus Tensid(en) und Protease alle bekannten und in derartigen Mitteln üblichen Inhaltsstoffe enthalten, wobei bevorzugt mindestens ein weiterer Inhaltsstoff in dem Mittel vorhanden ist. Erfindungsgemäße Mittel können insbesondere weitere Tenside, Builder, Komplexbildner, Polymere, Glaskorrosionsinhibitoren, Korrosionsinhibitoren, Füllstoffe, Bleichmittel, Bleichaktivatoren oder Bleichkatalysatoren, wassermischbare organische Lösungsmittel, weitere Enzyme, Enzymstabilisatoren, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH- Regulatoren und/oder weitere Hilfsstoffe wie Schaumregulatoren, sowie Färb- und Duftstoffe enthalten. Vorteilhafte Inhaltsstoffe erfindungsgemäßer Mittel sind offenbart in der internationalen Patentanmeldung WO 2009/121725, dort beginnend auf Seite 5, vorletzter Absatz, und endend auf Seite 13 nach dem zweiten Absatz. Auf diese Offenbarung wird ausdrücklich Bezug genommen und der dortige Offenbarungsgehalt in die vorliegende Patentanmeldung einbezogen.
In bevorzugten Ausführungsformen ist das erfindungsgemäße Reinigungsmittel ein wässriges Reinigungsmittel für harte Oberflächen, insbesondere zum Reinigen von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand. Neben Wasser kann es in bevorzugten Ausführungsformen ein oder mehrere weitere wasserlösliche organische Lösungsmittel enthalten, üblicherweise in einer Menge von 0 bis 15 Gew.-%, vorzugsweise 1 bis 12 Gew.-%, bevorzugt 3 bis 8 Gew.-%.
Die Lösungsmittel werden im Rahmen der erfindungsgemäßen Lehre nach Bedarf insbesondere als Hydrotropikum und Viskositätsregulator eingesetzt. Sie wirken lösungsvermittelnd insbesondere für Tenside und Elektrolyt sowie Parfüm und Farbstoff und tragen so zu deren Einarbeitung bei, verhindern die Ausbildung flüssigkristalliner Phasen und haben Anteil an der Bildung klarer Produkte. Die Viskosität erfindungsgemäßen Mittel verringert sich mit zunehmender Lösungsmittelmenge. Schließlich sinkt mit zunehmender Lösungsmittelmenge der Kältetrübungs- und Klarpunkt erfindungsgemäßen Mittel.
Geeignete Lösungsmittel sind z.B. gesättigte oder ungesättigte, vorzugsweise gesättigte, verzweigte oder unverzweigte Ci-20-Kohlenwasserstoffe, bevorzugt C2-15-Kohlenwasserstoffe, mit mindestens einer Hydroxygruppe und ggf. einer oder mehreren Etherfunktionen C-O-C, d.h. die Kohlenstoffatomkette unterbrechenden Sauerstoffatomen. Bevorzugte Lösungsmittel sind die - ggf. einseitig mit einem Ci-6-Alkanol veretherten - C2-6-Alkylenglykole und Poly-C2-3-alkylenglykolether mit durchschnittlich 1 bis 9 gleichen oder verschiedenen, vorzugsweise gleichen, Alkylenglykolgruppen pro Molekül wie auch die Ci-6-Alkohole, vorzugsweise Ethanol, n-Propanol oder iso-Propanol. Beispielhafte Lösungsmittel sind z.B.: Buteth-3, Butoxydiglykol, Butoxyethanol, Butoxyisopropanol, Butoxypropanol, n-Butylalkohol, t-Butylalkohol, Butylenglykol, Butyloctanol, Diethylenglykol, Dimethoxydiglykol, Dimethylether, Dipropylenglykol, Ethoxydiglykol, Ethoxyethanol, Ethylhexandiol, Glykol, Hexandiol, 1 ,2,6-Hexantriol, Hexylalcohol, Hexylenglykol, Isobutoxypropanol, Isopentyldiol, Isopropylalkohol (Isopropanol), 3-Methoxybutanol, Methoxydiglykol, Methoxyethanol, Methoxyisopropanol, Methoxymethylbutanol, Methoxy PEG-10, Methylal, Methylalkohol, Methylhexylether, Methylpropandiol, Neopentylglykol, PEG-4, PEG-6, PEG-7, PEG-8, PEG-9, PEG-6- Methylether, Pentylenglykol, Phenoxyethanol, PPG-7, PPG-2-Buteth-3, PPG-2-Butylether, PPG-3- Butylether, PPG-2-Methylether, PPG-3-Methylether, PPG-2-Propylether, Propandiol, Propylalkohol (n- Propanol), Propylenglykol, Propylenglykolbutylether, Propylenglykolpropylether, Tetrahydrofurfurylalkohol, Trimethylhexanol. Weiter bevorzugt sind längerkettige Polyalkylenglykole, insbesondere Polypropylenglykole. Besonders bevorzugt sind dabei PPG-400 oder PPG-450, aber auch Polypropylenglykole mit größeren Kettenlängen können im Sinne dieser Erfindung eingesetzt werden.
Vorzugsweise ist das Lösungsmittel ausgewählt aus der Gruppe umfassend Ethanol, Propanol, Isopropanol, Ethylenglykol, Butylglykol, Propylenglykol, Polypropylenglykole als auch Alkoholamine, insbesondere Monoethanolamin sowie Gemischen derselben. Besonders bevorzugte Lösungsmittel sind die C2- und Cs-Alkohole, Ethanol, n-Propanol und/oder Isopropanol sowie die Polyalkylenglykole, vor allem Polypropylenglykole, insbesondere PPG-400, als auch Alkoholamine, insbesondere Monoethanolamin, sowie Gemischen derselben. Ganz besonders bevorzugt wird 1-Butoxypropan-2-ol und/oder Ethanol und/oder Isopropanol als organisches Lösungsmittel verwendet.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere Komplexbildner enthalten. Komplexbildner (INCI Chelating Agents), auch Sequestrierungsmittel genannt, sind Inhaltsstoffe, die Metallionen zu komplexieren und inaktivieren vermögen, um ihre nachteiligen Wirkungen auf die Stabilität oder das Aussehen erfindungsgemäßer Mittel, z.B. Trübungen, zu verhindern. Einerseits ist es dabei wichtig, die mit zahlreichen Inhaltsstoffen inkompatiblen Calcium- und Magnesiumionen der Wasserhärte zu komplexieren. Die Komplexierung der Ionen von Schwermetallen wie Eisen oder Kupfer verzögert andererseits die oxidative Zersetzung der fertigen Mittel. Zudem unterstützen die Komplexbildner die Reinigungswirkung.
Geeignete Komplexbildner sind z.B. ausgewählt aus: Aminotrimethylenphosphonsäure, ß- Alanindiessigsäure, Calciumdinatrium-EDTA, Citronensäure, Cyclodextrin, Cyclohexandiamintetraessigsäure, Diammoniumcitrat, Diammonium-EDTA, Diethylentriaminpentamethylenphosphonsäure, Dikalium-EDTA, Dinatriumazacycloheptandiphosphonat, Dinatrium-EDTA, Dinatriumpyrophosphat, EDTA, Etidronsäure, Galaktarsäure, Gluconsäure, Glucuronsäure, HEDTA, Hydroxypropylcyclodextrin, Methylcyclodextrin, Pentakaliumtriphosphat, Pentanatriumaminotrimethylenphosphonat, Pentanatriumethylendiamintetramethylenphosphonat, Pentanatriumpentetat, Pentanatriumtriphosphat, Pentetinsäure, Phytinsäure, Kaliumcitrat, Kalium-EDTMP, Kaliumgluconat, Kaliumpolyphosphat, Kaliumtrisphosphonomethylaminoxid, Ribonsäure, Natriumchitosanmethylenphosphonat, Natriumcitrat, Natriumdiethylentriaminpentamethylenphosphonat, Natriumdihydroxyethylglycinat, Natrium-EDTMP, Natriumgluceptat, Natriumgluconat, Natriumglycereth-1 -Polyphosphat, Natriumhexametaphosphat, Natriummetaphosphat, Natriummetasilicat, Natriumphytat, Natriumpolydimethylglycinophenolsulfonat, Natriumtrimetaphosphat, TEA-EDTA, TEA-Polyphosphat, Tetrahydroxyethylethylendiamin, Tetrahydroxypropylethylendiamin, Tetrakaliumetidronat, Tetrakaliumpyrophosphat, Tetranatrium-EDTA, Tetranatriumetidronat, Tetranatriumpyrophosphat, Trikalium-EDTA, Trinatriumdicarboxymethylalaninat, Trinatrium-EDTA, Trinatrium-HEDTA, Trinatrium- NTA und Trinatriumphosphat.
Besonders bevorzugte Komplexbildner sind die Phosphonate, sofern ihr Einsatz regulatorisch zulässig ist. Die komplexbildenden Phosphonate umfassen neben der 1-Hydroxyethan-1 ,1- diphosphonsäure (HEDP) eine Reihe unterschiedlicher Verbindungen, wie z.B. Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP). In dieser Anmeldung bevorzugt sind insbesondere Hydroxyalkan- bzw. Aminoalkanphosphonate. Unter den Hydroxyalkanphosphonaten ist das 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonat (HEDP) von besonderer Bedeutung als Cobuilder. Es wird vorzugsweise als Natriumsalz eingesetzt, wobei das Dinatriumsalz neutral und das Tetranatriumsalz alkalisch (pH 9) reagiert. Als Aminoalkanphosphonate kommen vorzugsweise Ethylendiamintetramethylenphosphonat (EDTMP), Diethylentriaminpentamethylenphosphonat (DTPMP) sowie deren höhere Homologe in Frage. Sie werden vorzugsweise in Form der neutral reagierenden Natriumsalze, z.B. als Hexanatri umsalz der EDTMP bzw. als Hepta- und Octa- Natriumsalz der DTPMP, eingesetzt. Als Builder wird dabei aus der Klasse der Phosphonate bevorzugt HEDP verwendet. Die Aminoalkanphosphonate besitzen zudem ein ausgeprägtes Schwermetallbindevermögen. Dementsprechend kann es, insbesondere wenn die Mittel auch Bleiche enthalten, bevorzugt sein, Aminoalkanphosphonate, insbesondere DTPMP, einzusetzen, oder Mischungen aus den genannten Phosphonaten zu verwenden. Ein im Rahmen dieser Anmeldung bevorzugtes Mittel enthält ein oder mehrere Phosphonat(e) aus der Gruppe Aminotrimethylenphosphonsäure (ATMP) und/oder deren Salze;
Ethylendiamintetra(methylenphosphonsäure) (EDTMP) und/oder deren Salze; Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP) und/oder deren Salze; 1-Hydroxyethan-1 ,1- diphosphonsäure (HEDP) und/oder deren Salze; 2-Phosphonobutan-1 ,2,4-tricarbonsäure (PBTC) und/oder deren Salze; Hexamethylendiamintetra(methylenphosphonsäure) (HDTMP) und/oder deren Salze; Nitrilotri(methylenphosphonsäure) (NTMP) und/oder deren Salze. Besonders bevorzugt sind Mittel, welche als Phosphonate 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure (HEDP) oder Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP) enthalten. Selbstverständlich können erfindungsgemäße Mittel zwei oder mehr unterschiedliche Phosphonate enthalten.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel mindestens einen Komplexbildner aus der Gruppe der Phosphonate, vorzugsweise 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonat, enthalten, wobei der Gewichtsanteil des Phosphonat am Gesamtgewicht des Mittels vorzugsweise von 0,1 bis 8,0 Gew.-%, bevorzugt 0,2 bis 5,0 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,3 bis 3,0 Gew.-% und ganz besonders bevorzugt 0,5 bis 2,0 Gew.-% beträgt.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen sind erfindungsgemäße Mittel im Wesentlichen frei von phosphonathaltigen Verbindungen. "Im Wesentlichen frei von phosphonathaltigen Verbindungen" bedeutet in diesem Zusammenhang, dass die entsprechende Mittel oder Zusammensetzungen, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, weniger als 2 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 1 Gew.-%, bevorzugt weniger als 0,5 Gew.-% und besonders bevorzugt weniger als 0,1 Gew.-%, phosphonathaltige Verbindungen enthalten. In besonders bevorzugten Ausführungsformen sind diese Mittel/Zusammensetzungen frei von phosphonathaltigen Verbindungen.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel weiterhin Gerüststoff (Builder) enthalten, vorzugsweise mindestens einen wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen, organischen und/oder anorganischen Builder. Zu den Gerüststoffe zählen dabei insbesondere die Silikate, Carbonate und organische Cobuilder.
Als organische Cobuilder sind insbesondere Polycarboxylate/Polycarbonsäuren, polymere Polycarboxylate, Asparaginsäure, Polyacetale, Dextrine, weitere organische Cobuilder sowie Phosphonate zu nennen. Diese Stoffklassen werden nachfolgend beschrieben. Organische Cobuildersubstanzen können gewünschtenfalls in Mengen bis zu 40 Gew.-%, vorzugsweise bis zu 25 Gew.-%, bevorzugt von 1 bis 8 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,01 bis 4 Gew.-% enthalten sein, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels. Brauchbare organische Gerüstsubstanzen sind z.B. die in Form der freien Säure und/oder ihrer Natriumsalze einsetzbaren Polycarbonsäuren, wobei unter Polycarbonsäuren solche Carbonsäuren verstanden werden, die mehr als eine Säurefunktion tragen. Beispielsweise sind dies Citronensäure, Adipinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Zuckersäuren und Carboxymethylinuline, monomere und polymere Aminopolycarbonsäuren, insbesondere Glycindiessigsäure, Methylglycindiessigsäure, Glutamindiessigsäure, Nitrilotriessigsäure (NTA), Iminodisuccinat wie Ethylendiamin-N,N'- dibernsteinsäure und Hydroxyiminodisuccinate, Ethylendiamintetraessigsäure sowie Polyasparaginsäure, Polyphosphonsäuren, insbesondere Aminotris(methylenphosphonsäure), Ethylendiamintetrakis(methylenphosphonsäure), Lysintetra(methylenphosphosäure) und 1- Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure, polymere Hydroxyverbindungen wie Dextrin sowie polymere (Poly)carbonsäuren, insbesondere durch Oxidation von Polysacchariden bzw. Dextrinen zugängliche Polycarboxylate, und/oder polymere Acrylsäuren, Methacrylsäuren, Maleinsäuren und Mischpolymere aus diesen, die auch geringe Anteile polymerisierbarer Substanzen ohne Carbonsäurefunktionalität einpolymerisiert enthalten können. Derartige organische Buildersubstanzen können gewünschtenfalls in Mengen bis zu 50 Gew.-%, vorzugsweise bis zu 25 Gew.-%, bevorzugt von 10 bis 20 Gew.-%, weiter bevorzugt von 1 bis 5 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,01 bis 3 Gew.-% enthalten sein, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels. Die freien Säuren besitzen neben ihrer Builderwirkung typischerweise auch die Eigenschaft einer Säuerungskomponente und dienen somit auch zur Einstellung eines niedrigeren und milderen pH-Wertes von Mitteln. Insbesondere sind hierbei Citronensäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Gluconsäure und beliebige Mischungen aus diesen zu nennen. Mit besonderem Vorzug wird als Gerüstsubstanz die Citronensäure oder Salze der Citronensäure eingesetzt. Weitere bevorzugte Gerüstsubstanzen sind ausgewählt unter Methylglycindiessidsäure (MGDA), Glutaminsäurediacetat (GLDA), Asparaginsäurediacetat (ASDA), Hydroxyethyliminodiacetat (HEIDA), Iminodisuccinat (IDS) und Ethylendiamindisuccinat (EDDS), Carboxymethylinulin und Polyaspartat.
In bevorzugten Ausführungsformen wird als wasserlöslicher, organischer Builder Citronensäure und/oder Citrat eingesetzt. Besonders bevorzugt ist der Einsatz, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, von 0,001 bis 25 Gew.-%, vorzugsweise von 0,005 bis 12,5 Gew.-%, bevorzugt von 0,0075 bis 10 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,01 bis 4 Gew.-%, Citronensäure und/oder 0,001 bis 25 Gew.- %, vorzugsweise von 0,005 bis 12,5 Gew.-%, bevorzugt von 0,0075 bis 10 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,01 bis 4 Gew.-% Citrat, vorzugsweise Alkalicitrat, bevorzugt Natriumcitrat. Citronensäure/Citrat können jeweils in Form ihrer Hydrate eingesetzt werden, so kann z.B. Citronensäure in Form des Monohydrats, Citrat in Form des Trinatriumcitratdihydrats eingesetzt werden.
In bevorzugten Ausführungsformen können die Builder-Substanzen aus MGDA und GLDA ausgewählt werden. Wie hier verwendet, umfasst der Begriff "MGDA" unter anderem Methylglycindiessigsäure, a-Alanindiessigsäure, N-(1-Carboxyethyl)-iminodiessigsäure und N,N- Bis(carboxymethyl)-DL-Alanin, wobei die freien Säureformen und die entsprechenden Salze, vorzugsweise Alkalisalze, insbesondere Trinatriumsalze, eingeschlossen sind. Wie hier verwendet, umfasst der Begriff "GLDA" unter anderem Glutaminsäurediessigsäure, L-Glutaminsäure-N,N- diessigsäure und N,N-Bis(carboxylatomethyl)-L-Glutamat, wobei freie Säureformen und entsprechende Salze, vorzugsweise Alkalisalze, insbesondere Tetranatriumsalze, eingeschlossen sind. Obwohl, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, höhere MGDA- oder GLDA- Konzentrationen möglich sind, vorzugsweise bis zu 25 Gew.-%, wird bevorzugt 0,2 bis 5 Gew.-%, weiter bevorzugt 0,25 bis 3 Gew.-% und besonders bevorzugt 0,5 bis 2 Gew.-% MGDA, vorzugsweise MGDA-Trinatriumsalz (MGDA-Nas) verwendet. Noch bevorzugter ist die Verwendung, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, von 0,2 bis 5 Gew.-%, vorzugsweise 0,25 bis 3 Gew.-%, bevorzugt von 0,5 bis 2 Gew.-% GLDA, vorzugsweise GLDA-Tetranatriumsalz (GLDA-Na4).
Als Gerüststoffe sind weiter polymere Polycarboxylate geeignet, dies sind z.B. die Alkalimetallsalze der Polyacrylsäure oder der Polymethacrylsäure, z.B. solche mit einer relativen Molekülmasse von 500 bis 70.000 g/mol. Bei den für polymere Polycarboxylate angegebenen Molmassen handelt es sich im Sinne dieser Anmeldung um gewichtsmittlere Molmassen Mw der jeweiligen Säureform, die grundsätzlich mittels Gelpermeationschromatographie (GPC) bestimmt wurden, wobei ein UV-Detektor eingesetzt wurde. Die Messung erfolgte dabei gegen einen externen Polyacrylsäure-Standard, der aufgrund seiner strukturellen Verwandtschaft mit den untersuchten Polymeren realistische Molgewichtswerte liefert. Diese Angaben weichen deutlich von den Molgewichtsangaben ab, bei denen Polystyrolsulfonsäuren als Standard eingesetzt werden. Die gegen Polystyrolsulfonsäuren gemessenen Molmassen sind in der Regel deutlich höher als die in dieser Anmeldung angegebenen Molmassen. Geeignete Polymere sind insbesondere Polyacrylate, die bevorzugt eine Molekülmasse von 2.000 bis 20.000 g/mol aufweisen. Aufgrund ihrer überlegenen Löslichkeit können aus dieser Gruppe wiederum die kurzkettigen Polyacrylate, die Molmassen von 2.000 bis 10.000 g/mol, und besonders bevorzugt von 3.000 bis 5.000 g/mol, aufweisen, bevorzugt sein. Geeignet sind weiterhin copolymere Polycarboxylate, insbesondere solche der Acrylsäure mit Methacrylsäure und der Acrylsäure oder Methacrylsäure mit Maleinsäure. Als besonders geeignet haben sich Copolymere der Acrylsäure mit Maleinsäure erwiesen, die 50 bis 90 Gew.-% Acrylsäure und 50 bis 10 Gew.-% Maleinsäure enthalten. Ihre relative Molekülmasse, bezogen auf freie Säuren, beträgt im Allgemeinen 2.000 bis 70.000 g/mol, vorzugsweise 20.000 bis 50.000 g/mol und insbesondere 30.000 bis 40.000 g/mol.
Erfindungsgemäße Mittel sind vorzugsweise frei von Phosphat-Builder, d.h. enthalten, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, weniger als 1 Gew.-%, bevorzugt keinen bewusst zugegebenen Phosphat-Builder.
In bevorzugten Ausführungsformen können in Ergänzung zu den zuvor beschriebenen Gerüststoffen in erfindungsgemäßen Mitteln reinigungsaktive Polymere enthalten sein. Der Gewichtsanteil reinigungsaktiver Polymere am Gesamtgewicht erfindungsgemäßer Mittel beträgt vorzugsweise 0,1 bis 20 Gew.-%, bevorzugt 1 ,0 bis 15 Gew.-% und besonders bevorzugt 2,0 bis 12 Gew.-%.
Neben den bisher genannten Komponenten können erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere weitere - insbesondere in Reinigungsmitteln für harte Oberflächen - übliche Hilfs- und Zusatzstoffe enthalten. Hierzu zählen z.B. organische Stellmittel (z.B. Zucker, Zuckeralkohole, Glycerin, Glykole sowie Polymere derselben), Hydrophobizitätsvermittler (z.B. Paraffin), UV- Stabilisatoren, Parfümöle, antimikrobielle Wirkstoffe, Perlglanzmittel (Opacifying Agents; z.B. Glykoldistearat, z.B. Cutina® AGS der Fa. BASF, bzw. dieses enthaltende Mischungen, z.B. die Euperlane® der Fa. BASF), weitere Trübungsmittel, Farbstoffe, Korrosionsinhibitoren, Bitterstoffe, Konservierungsmittel (z.B. 2-Brom-2-nitropropan-1 ,3-diol, das z.B. als Myacide® BT oder als Boots Bronopol BT von der Firma Boots gewerblich erhältlich ist, oder auch Bronopol-haltige Gemische wie Preventol® (ex Lanxess) oder Parmetol®(ex Schülke & Mayr)), Desinfektionsmittel, Enzyme, pH- Stellmittel, Duftstoffe sowie Hautgefühl-verbessernde oder hautpflegende Additive (z.B. dermatologisch wirksame Substanzen wie Vitamin A, Vitamin B2, Vitamin B12, Vitamin C, Vitamin E, D Panthenol, Sericerin, Collagen-Partial-Hydrolysat, verschiedene pflanzliche Protein-Partial- Hydrolysate, Proteinhydrolysat-Fettsäure-Kondensate, Liposome, Cholesterin, pflanzliche und tierische Öle wie z.B. Lecithin, Sojaöl, usw., Pflanzenextrakte wie z.B. Aloe Vera, Azulen, Hamamelisextrakte, Algenextrakte, usw., Allantoin, A.H.A.-Komplexe, Glycerin, Harnstoff, quaternisierte Hydroxyethylcellulose), Additive zur Verbesserung des Ablauf- und Trocknungsverhaltens oder zur Stabilisierung. Diese Hilfs- und Zusatzstoffe sind insbesondere in Mengen von üblicherweise nicht mehr als 5 Gew.-% enthalten.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere Duftstoffe enthalten, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt von 0,05 bis 1 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,1 bis 5 Gew.-%. Beispiele für geeignete Parfümstoffkomponenten: d-Limonen, ätherische Ölen (essentielle Öle), wie z.B. Pine-, Citrus, Jasmin-, Patchouly-, Rosen- oder Ylang-Ylang-Öl, Muskateller-Salbei-, Kamillen-, Lavendel-, Nelken-, Melissen-, Minz-, Zimtblätter-, Lindenblüten-, Wacholderbeer-, Vetiver-, Olibanum-, Galbanum-, Labdanum-, Orangenblüten-, Neroli-, Orangenschalen- und Sandelholzöl.
Eine besondere Form der Reinigung stellen die Desinfektion und die Sanitation dar. In entsprechenden bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere antimikrobielle Wirkstoffe, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 1 Gew.-%, bevorzugt 0,02 bis 0,8 Gew.-%, weiter bevorzugt 0,05 bis 0,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,1 bis 0,3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,2 Gew.-%. Die Begriffe Desinfektion, Sanitation, antimikrobielle Wirkung und antimikrobieller Wirkstoff haben, wie hierin verwendet, die fachübliche Bedeutung. Während Desinfektion im engeren Sinne der medizinischen Praxis die Abtötung von - theoretisch allen - Infektionskeimen bedeutet, ist unter Sanitation die möglichst weitgehende Eliminierung aller - auch der für den Menschen normalerweise unschädlichen saprophytischen - Keime zu verstehen. Hierbei ist das Ausmaß der Desinfektion bzw. Sanitation von der antimikrobiellen Wirkung des angewendeten Mittels abhängig, die mit abnehmendem Gehalt an antimikrobiellem Wirkstoff bzw. zunehmender Verdünnung des Mittels zur Anwendung abnimmt. Geeignete antimikrobielle Wirkstoffe können aus den Gruppen der Alkohole, Aldehyde, antimikrobiellen Säuren bzw. deren Salze, Carbonsäureester, Säureamide, Phenole, Phenolderivate, Diphenyle, Diphenylalkane, Harnstoffderivate, Sauerstoff-, Stickstoff-Acetale sowie -Formale, Benzamidine, Isothiazole und deren Derivate wie Isothiazoline und Isothiazolinone, Phthalimidderivate, Pyridinderivate, antimikrobiellen oberflächenaktiven Verbindungen, Guanidine, antimikrobiellen amphoteren Verbindungen, Chinoline, 1 ,2-Dibrom-2,4- dicyanobutan, lodo-2-propynylbutylcarbamat, lod, lodophore, Aktivchlor abspaltenden Verbindungen und Peroxide ausgewählt sein. Bevorzugte antimikrobielle Wirkstoffe können aus der Gruppe umfassend Ethanol, n-Propanol, i-Propanol, 1 ,3-Butandiol, Phenoxyethanol, 1 ,2-Propylenglykol, Glycerin, Undecylensäure, Citronensäure, Milchsäure, Benzoesäure, Salicylsäure, Thymol, 2-Benzyl- 4-chlorphenol, 2,2’-Methylen-bis-(6-brom-4-chlorphenol), 2,4,4’-Trichlor-2’-hydroxydiphenylether, N-(4- Chlorphenyl)-N-(3,4-dichlorphenyl)-harnstoff, N,N’-(1 , 10-decandiyldi-1 -pyridinyl-4-yliden)-bis-(1 - octanamin)-dihydrochlorid, N,N’-Bis-(4-Chlorphenyl)-3,12-diimino-2,4,11 ,13- tetraazatetradecandiimidamid, antimikrobielle quaternäre oberflächenaktive Verbindungen, Guanidine und Natrium-Dichlorisocyanurat (DCI, 1 ,3-Dichlor-5H-1 ,3,5-triazin-2,4,6-trion Natriumsalz) ausgewählt sein. Bevorzugte antimikrobiell wirkende oberflächenaktive quaternäre Verbindungen enthalten eine Ammonium-, Sulfonium-, Phosphonium-, Jodonium- oder Arsoniumgruppe. Weiterhin können auch antimikrobiell wirksame ätherische Öle eingesetzt werden, die gleichzeitig für eine Beduftung des Reinigungsprodukts sorgen. Besonders bevorzugte antimikrobielle Wirkstoffe sind jedoch ausgewählt aus der Gruppe umfassend Salicylsäure, quaternäre Tenside, insbesondere Benzalkoniumchlorid, Peroxo-Verbindungen, insbesondere Wasserstoffperoxid, Alkalimetallhypochlorit, Natriumdichlorisocyanurat sowie Gemische derselben. In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel Konservierungsstoffe enthalten. Als solche können im Wesentlichen die bei den antimikrobiellen Wirkstoffen genannten Stoffe eingesetzt werden.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel einen oder mehrere Farbstoffe enthalten. Als Farbstoffe können dabei sowohl wasserlösliche als auch öllösliche Farbstoffe verwendet werden, wobei einerseits die Kompatibilität mit weiteren Inhaltsstoffen, z.B. Bleichmitteln, zu beachten ist und andererseits der eingesetzte Farbstoff gegenüber der Metall und Keramik auch bei längerem Einwirken nicht substantiv wirken sollte. Die Farbstoffe sind vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 0,1 Gew.-%, bevorzugt 0,0005 bis 0,05 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,001 bis 0,01 Gew.-%, enthalten.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel Korrosionsinhibitoren enthalten. Geeignete Korrosionsinhibitoren sind z.B.: Cyclohexylamin, Diammoniumphosphat, Dilithiumoxalat, Dimethylaminomethylpropanol, Dikaliumoxalat, Dikaliumphosphat, Dinatriumphosphat, Dinatriumpyrophosphat, Dinatriumtetrapropenylsuccinat, Hexoxyethyldiethylammonium, Phosphat, Nitromethan, Kaliumsilicat, Natriumaluminat, Natriumhexametaphosphat, Natriummetasilicat, Natriummolybdat, Natriumnitrit, Natriumoxalat, Natriumsilicat, Stearamidopropyldimethicon, Tetrakaliumpyrophosphat, Tetranatriumpyrophosphat, Triisopropanolamin.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel Abspülregulatoren enthalten. Die als Abspülregulatoren bezeichneten Substanzen dienen in erster Linie dazu, den Verbrauch der Mittel während des Einsatzes so zu steuern, dass die vorgesehene Standzeit eingehalten wird. Als Regulatoren eignen sich vorzugsweise feste langkettige Fettsäuren, wie Stearinsäure, aber auch Salze solcher Fettsäuren, Fettsäureethanolamide, wie Kokosfettsäuremonoethanolamid, oder feste Polyethylenglykole, wie solche mit Molekulargewichten zwischen 10.000 und 50.000.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel Schaumregulatoren enthalten. Zu den üblicherweise einsetzbaren Schaumregulatoren gehören z.B. Polysiloxan- Kieselsäure-Gemische, wobei die darin enthaltene feinteilige Kieselsäure vorzugsweise silaniert oder anderweitig hydrophobiert ist. Die Polysiloxane können sowohl aus linearen Verbindungen wie auch aus vernetzten Polysiloxan-Harzen sowie aus deren Gemischen bestehen. Weitere Entschäumer sind Paraffinkohlenwasserstoffe, insbesondere Mikro paraffine und Paraffinwachse, deren Schmelzpunkt oberhalb 40°C liegt, gesättigte Fettsäuren bzw. Seifen mit insbesondere 20 bis 22 C-Atomen, z.B. Natriumbehenat, und Alkalisalze von Phosphorsäuremono- und/oder -dialkylestern, in denen die Alkylketten jeweils 12 bis 22 C-Atome aufweisen. Unter diesen wird bevorzugt Natriummonoalkylphosphat und/oder -dialkylphosphat mit Ci6-18-Alkylgruppen eingesetzt. Der Anteil der Schaumregulatoren kann vorzugsweise 0,2 bis 2 Gew.-%, bevorzugt nicht mehr als 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, betragen.
In bevorzugten Ausführungsformen können erfindungsgemäße Mittel zusätzlich zu der hierein beschriebenen Protease weitere hydrolytische Enzyme oder andere Enzyme in einer für die Wirksamkeit des Mittels zweckmäßigen Konzentration enthalten. Als Enzyme bevorzugt einsetzbar sind alle Enzyme, die in erfindungsgemäßen Mitteln eine katalytische Aktivität entfalten können, insbesondere ausgewählt aus Proteasen, Lipasen, Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, Tannasen, Xylanasen, Xanthanasen, Xyloglucanasen, ß-Glucosidasen, Pektinasen, Carrageenasen, Perhydrolasen, Oxidasen, Oxidoreduktasen, sowie deren Gemische. Enzyme sind in dem Mittel vorteilhafterweise jeweils in einer Menge von 1 x 10-8 bis 5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, enthalten. Zunehmend bevorzugt ist jedes Enzym in einer Menge von 1 x 10-7 bis 3 Gew.-%, 0,00001 bis 1 Gew.-%, 0,00005 bis 0,5 Gew.-%, 0,0001 bis 0,1 Gew.-% und besonders bevorzugt 0,0001 bis 0,05 Gew.-% in erfindungsgemäßen Mitteln enthalten, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels. Besonders bevorzugt zeigen Enzyme synergistische Reinigungsleistungen gegenüber bestimmten Anschmutzungen oder Flecken, d.h. die in der Mittelzusammensetzung enthaltenen Enzyme unterstützen sich in ihrer Reinigungsleistung gegenseitig.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease eine Protease ist, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 und 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 und 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T, L256D, L256E, L256Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und die eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I- N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W- L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D- R143Y-A209W-N212S-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-V199I- Q200L-Y203W; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K- S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W- A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I- Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V1991- Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-% und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease eine Protease ist, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 und 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 und 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T, L256D, L256E, L256Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-% und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, insbesondere von etwa 7 bis etwa 9, weiter bevorzugt von etwa 7,5 bis etwa 8, besonders bevorzugt von etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und die eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I- N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W- L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D- R143Y-A209W-N212S-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-V199I- Q200L-Y203W; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K- S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W- A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I- Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V1991- Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-% und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, insbesondere von etwa 7 bis etwa 9, weiter bevorzugt von etwa 7,5 bis etwa 8, besonders bevorzugt von etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease eine Protease ist, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 und 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 und 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T, L256D, L256E, L256Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und die eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I- N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W- L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D- R143Y-A209W-N212S-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-V199I- Q200L-Y203W; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K- S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W- A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I- Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V1991- Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-% und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5; mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, bevorzugt etwa 7 bis etwa 9, besonders bevorzugt etwa 7,5 bis etwa 8, ganz besonders bevorzugt etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease eine Protease ist, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 und 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 und 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T, L256D, L256E, L256Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-% und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5; mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, insbesondere von etwa 7 bis etwa 9, weiter bevorzugt von etwa 7,5 bis etwa 8, besonders bevorzugt von etwa 7 aufweist.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Mittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ein Reinigungsmittel, vorzugsweise ein flüssiges Reinigungsmittel, ist, und umfasst mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und die eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist: S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I- N74D; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W- L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E; S3T- V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E; S3T-V4I-R99E- V199I-N74D-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W; S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L; S3T-V4I-R99E-V199I-N74D- R143Y-A209W-N212S-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L; S3T-V4I-R99E- V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L- Y203W-L256E; S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E; S3T-V4I-V199I- Q200L-Y203W; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K- S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W- A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209W-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I- Y203W-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E; S3T-V4I-V1991- Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 ; mindestens zwei Tenside, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind, vorzugsweise das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt von 0,1 bis 2,5 Gew.-% und das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5; mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt von 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, insbesondere von etwa 7 bis etwa 9, weiter bevorzugt von etwa 7,5 bis etwa 8, besonders bevorzugt von etwa 7 aufweist.
In weiteren bevorzugten Ausführungsformen betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein hierin beschriebenes Reinigungsmittel angewendet wird, wobei das Verfahren vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 20°C, durchgeführt wird.
Verfahren zur Reinigung von Oberflächen zeichnen sich im Allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Mittel oder einer Lösung oder Verdünnung dieses Mittels behandelt wird.
Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Mittel beschrieben sind, sind auch auf diese Erfindungsgegenstände anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehende erfindungsgemäße Verwendung gilt.
In weiteren bevorzugten Ausführungsformen betrifft die Erfindung die
• Verwendung einer Protease in einem Reinigungsmittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C, wobei die Protease wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert ist;
• Verwendung einer Protease in einem Reinigungsmittel zur Verbesserung der Hygiene von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C, wobei die Protease wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert ist;
• Verwendung eines Reinigungsmittels nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C.
Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Mittel beschrieben sind, sind auch auf diese Erfindungsgegenstände anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehende erfindungsgemäße Verwendung gilt. BEISPIELE
Beispiel 1 : Verwendete Reinigungsmittel und Proteasen
Tabelle 1 : Verwendete Reinigungsmittelmatrix
Figure imgf000052_0001
pH = 10 wurde durch Zugabe von NaOH erreicht
Tabelle 2: Verwendete Proteasen
Figure imgf000052_0002
Aus den in Tabelle 1 gezeigten Reinigungsmittelmatrizes und den in Tabelle 2 genannten Proteasen wurden die in Tabelle 3 gezeigten Probenansätze hergestellt. In den proteasehaltigen Ansätzen wurden die verschiedenen Proteasen aktivgleich eingesetzt, so dass in jeder Probe 0,1 ppm Protease (bezogen auf aktives Protein) enthalten war.
Tabelle 3: Probenansätze
Figure imgf000052_0003
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Beispiel 2: Bestimmung der Reiniqunqsleistunq
Um die Reinigungsleistung zu bestimmen, wurden zunächst eine Anschmutzung (Mischung aus Kohlenhydraten, Fetten, Proteinen, Mikroorganismen (Milchsäurebakterien: Streptococcus sp., Lactobacillus sp., Bifidobacterium sp.) und organischen Salzen) hergestellt, die die Eigenschaften von Fäkalschmutz simulieren. Die Anschmutzung wurden auf Porzellantäfelchen aufgetragen und für 24 h bei 40°C eintrocknen gelassen. Die verschmutzten Porzellantäfelchen wurden vor dem Anschmutzen sowie vor und nach dem Behandeln mit einem Reinigungsmittel gewogen. Auf die verschmutzten und getrockneten Porzellantäfelchen wurden 25 g Reinigungsmittel aufgetragen, 30 min einwirken gelassen und dann abgespült (künstlicher Wasserfall, um einen Toilettenspülgang zu imitieren, 3 L, 10 see). Alle Versuche wurden in Duplikaten durchgeführt.
Die Ergebnisse sind in den Tabellen 4-6 und Figuren 1-3 dargestellt, wobei
Figuren 1 A & B zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 1C & D zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 1A & B nach der Behandlung mit
Probenansatz A1
Figuren 1 E & F zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 1 G & H zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 1 E & F nach der Behandlung mit
Probenansatz A2
Figuren 11 & J zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 1 K & L zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 11 & J nach der Behandlung mit
Probenansatz A3
Figuren 1 M & N zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 1O & P zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 1 M & N nach der Behandlung mit
Probenansatz A1
Figuren 1 Q & R zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 1S & T zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 1Q & R nach der Behandlung mit
Probenansatz A4
Figuren 1 U & V zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 1W & X zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 1 U & V nach der Behandlung mit
Probenansatz A5 Figuren 1 Y & Z zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 1 AA & AB zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 1 Y & Z nach der Behandlung mit
Probenansatz A6
Figuren 2A & B zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 2C & D zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 2A & B nach der Behandlung mit
Probenansatz B1
Figuren 2E & F zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 2G & H zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 2E & F nach der Behandlung mit
Probenansatz B2
Figuren 3A & B zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 3C & D zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 3A & B nach der Behandlung mit
Probenansatz A1
Figuren 3E & F zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 3G & H zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 3E & F nach der Behandlung mit
Probenansatz A2
Figuren 3I & K zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 3K & L zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 3I & K nach der Behandlung mit
Probenansatz C1
Figuren 3M & N zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 30 & P zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 3M & N nach der Behandlung mit
Probenansatz C2
Figuren 3Q & R zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 3S & T zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 3Q & R nach der Behandlung mit
Probenansatz D1
Figuren 3U & V zeigen Porzellantäfelchen mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figuren 3W & X zeigen Porzellantäfelchen aus den Figuren 3U & V nach der Behandlung mit
Probenansatz D2
Tabelle 4a: Reiniqunqsleistunq eines Reinigungsmittels mit pH = 7 und verschiedenen Proteasen
Figure imgf000054_0001
Figure imgf000055_0001
Tabelle 4b: Reiniqunqsleistunq eines Reinigungsmittels mit pH = 7 und verschiedenen Proteasen
Figure imgf000055_0002
Die Ergebnisse zeigen, dass Proteasen, insbesondere die Proteasen P1 und P2, die Reinigungsleistung eines Reinigungsmittels mit pH = 7 an Fäkalanschmutzungen signifikant verbessern.
Tabelle 5: Reinigungsleistung eines Reinigungsmittels mit pH = 10 und Protease P1
Figure imgf000055_0003
Die Ergebnisse zeigen, dass die Protease P4 die bereits gute Reinigungsleistung eines Reinigungsmittels mit pH = 10 an Fäkalanschmutzungen weiter verbessern kann.
Tabelle 6: Reinigungsleistung der Reinigungsmittel A, C und D mit Protease P1
Figure imgf000055_0004
Figure imgf000056_0001
Die Ergebnisse zeigen, dass die proteasehaltigen Reinigungsmittel eine verbesserte Reinigungsleistung aufweisen. Insbesondere die Reinigungsleistung einer Kombination aus zwei Tensiden und einer Protease zeigt eine deutlich verbesserte Reinigungsleistung.
Beispiel 3: Bestimmung der Reiniqunqsleistunq
Um die Reinigungsleistung verschiedener Reinigungsmittel zu bestimmen, wurde die in Beispiel 2 beschriebene Fäkalanschmutzung gleichmäßig auf die Innenfläche einer Toilettenschüssel aufgetragen. Jeweils die Hälfte der Toilettenschüssel wurde mit einer zu untersuchenden Probe behandelt (Aufträgen von 25 g Probe, 30 min einwirken lassen). Anschließend wurde die Spülung der Toilette betätigt.
Die Ergebnisse sind in Figur 4 dargestellt, wobei
Figuren 4A & B zeigen eine Toilettenschüssel mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figur 4C zeigt die Hälfte der Toilettenschüssel aus Fig. 4A nach der Behandlung mit
Wasser
Figur 4D zeigt die Hälfte der Toilettenschüssel aus Fig. 4B nach der Behandlung mit
Probenansatz A1
Figuren 4E & F zeigen eine Toilettenschüssel mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figur 4G zeigt die Hälfte der Toilettenschüssel aus Fig. 4E nach der Behandlung mit einem herkömmlichen Reiniger (V1)
Figur 4H zeigt die Hälfte der Toilettenschüssel aus Fig. 4F nach der Behandlung mit
Probenansatz A1
Figuren 4I & J zeigen eine Toilettenschüssel mit Anschmutzung vor der Behandlung
Figur 4K zeigt die Hälfte der Toilettenschüssel aus Fig. 4I nach der Behandlung mit
Probenansatz A2 Figur 4L zeigt die Hälfte der Toilettenschüssel aus Fig. 4J nach der Behandlung mit
Probenansatz A1
Auf einer ersten Toilettenschüssel wurde die Wirkung von Wasser und einem Reinigungsmittel ohne Enzyme (Ansatz A1 , Tabelle 3) verglichen. Keines von beidem führte zu einer nennenswerten Entfernung der Anschmutzung (Figur 4A-D).
Auf einer zweiten Toilettenschüssel wurde die Wirkung eines herkömmlichen Reinigungsmittels (V1 , Tabelle 3) und einem Reinigungsmittel ohne Enzyme (Ansatz A1 , Tabelle 3) verglichen. Keines von beidem führte zu einer nennenswerten Entfernung der Anschmutzung (Figur 4E-H).
Auf einer dritten Toilettenschüssel wurde die Wirkung eines erfindungsgemäßen Reinigungsmittels mit Protease (Ansatz A2, Tabelle 3) und einem Reinigungsmittel ohne Enzyme (Ansatz A1 , Tabelle 3) verglichen (Figur 4I-L). Das erfindungsgemäße Reinigungsmittel führte zu einer signifikanten Verbesserung der Reinigungsleistung (Figur 4K).

Claims

PATENTANSPRÜCHE
1 . Reinigungsmittel, vorzugsweise flüssiges Reinigungsmittel, bevorzugt flüssiges Reinigungsmittel zum Reinigen von harten Oberflächen, besonders bevorzugt flüssiges Reinigungsmittel zum Reinigen von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, umfassend mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 5 Gew.-%, bevorzugt 0,001 bis 2,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 1 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 0,5 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein und Gesamtgewicht des Mittels, mindestens ein Tensid, wobei das Tensid aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels; wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 7 bis etwa 10, insbesondere von etwa 7 bis etwa 9, weiter bevorzugt von etwa 7,5 bis etwa 8, besonders bevorzugt von etwa 7 aufweist.
2. Reinigungsmittel nach Anspruch 1 , wobei die Protease eine Protease ist, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist und, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 3, 4, 99 und 199 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus S3T, V4I, R99E und V199I bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 74, 136, 143, 154, 160, 161 , 163, 171 , 181 , 183, 185, 200, 203, 209, 212 und 256 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus N74D, N74E, N74Q, A136Q, R143L, R143W, R143Y, S154D, S154Q, S160G, Y161T, A163G, V171 L, A181 D, F183R, Q185R, Q200A, Q200L, Q200S, Q200T, Y203K, Y203V, Y203W, A209K, A209W, N212S, N212T, L256D, L256E, L256Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist.
3. Reinigungsmittel nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% und weniger als 100% identisch ist, und die eine der folgenden Aminosäuresubstitutionskombinationen aufweist:
(a) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W; (b) S3T-V4I-R99E-V199I-N212S;
(c) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D;
(d) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-L256E;
(e) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E;
(f) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L-Y203W;
(g) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-Y203W-L256E;
(h) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-N212S;
(i) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Y203W-L256E;
(j) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Y203W;
(k) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-S154D-Q200L-L256E;
(l) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-Q200L;
(m) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-Q200L-Y203W;
(n) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-L256E;
(o) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-R143W-Y161 T-Q200L;
(p) S3T-V4I-R99E-V199I-N74D-R143Y-A209W-N212S-L256E;
(q) S3T-V4I-R99E-V199I-A136Q-S154D-V171 L-Q200L;
(r) S3T-V4I-R99E-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E;
(s) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-S160G-Q185R-Q200L-Y203W-L256E;
(t) S3T-V4I-R99E-V199I-S154D-A181 D-F183R-Q200L-Y203W-L256E;
(u) S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W;
(v) S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-S154D-L256E;
(w) S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E;
(x) S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209W-S154D-L256E;
(y) S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209W-S154D-L256E;
(z) S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209W-S154D-L256E;
(aa) S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203W-A209K-S154D-L256E;
(bb) S3T-V4I-V199I-Q200I-Y203Y-A209K-S154D-L256E;
(cc) S3T-V4I-V199I-Q200L-Y203W-A209K-S154D-L256E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 .
4. Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Mittel mindestens einen reversiblen Proteaseinhibitor oder -Stabilisator umfasst, wobei der Inhibitor/Stabilisator aus der aus Polyolen, wie Glycerin oder 1 ,2-Ethylenglycol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), Antioxidantien, Peptidinhibitoren, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,1 bis 2 Gew.-%, bevorzugt 0,3 bis 1 ,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.
5. Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Mittel mindestens zwei Tenside umfasst, wobei das zweite Tensid unterschiedlich zum ersten Tensid und aus der aus nichtionischen Tensiden, anionischen Tensiden, kationischen Tensiden, zwitterionischen Tensiden, amphoteren Tensiden und Mischungen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels.
6. Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das erste und zweite Tensid unterschiedlich zueinander und aus der aus Alkoholethoxylaten und Alkylpolyglykosiden bestehenden Gruppe ausgewählt sind.
7. Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das erste Tensid ein Alkoholethoxylat ist, in einer Menge von 0,001 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,01 bis 7,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 bis 5 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 2,5 Gew.-%, und wobei das zweite Tensid ein Alkylpolyglykosid ist, in einer Menge von 0,0005 bis 6,5 Gew.-%, bevorzugt 0,005 bis 5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,03 bis 3 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,05 bis 1 ,5 Gew.-%, jeweils bezogen auf Aktivsubstanz und Gesamtgewicht des Mittels.
8. Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das erste Tensid und das zweite Tensid in einem Verhältnis von 1 :0,1 bis 1 :1 ,5 vorliegen, bevorzugt 1 :0,2 bis 1 :1 ,2, besonders bevorzugt 1 :0,25 bis 1 :1 , ganz besonders bevorzugt 1 :0,5 bis 1 :0,75, z.B. 1 :0,1 , 1 :0,2, 1 :0,25, 1 :0,3, 1 :0,4, 1 :0,5, 1 :0,6, 1 :0,65, 1 :0,7, 1 :0,75, 1 :0,8, 1 :0,9, 1 :1 , 1 :1 ,1 , 1 :1 ,2, 1 :1 ,25, 1 :3, 1 :4, 1 :5.
9. Verfahren zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein Reinigungsmittel nach einem der Ansprüche 1 bis 8 angewendet wird, wobei das Verfahren vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C, durchgeführt wird.
10. Verwendung einer Protease in einem Reinigungsmittel zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C, wobei die Protease wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert ist.
11 . Verwendung einer Protease in einem Reinigungsmittel zur Verbesserung der Hygiene von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C, wobei die Protease wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert ist.
12. Verwendung eines Reinigungsmittels nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Reinigung von harten Oberflächen, insbesondere von sanitären Oberflächen wie Toiletten, Toilettenbecken, Toilettenschüssel, Spülkasten, WC-Rand, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 15°C bis etwa 30°C, bevorzugt etwa 18°C bis etwa 25°C, besonders bevorzugt etwa 25°C, ganz besonders bevorzugt etwa 20°C.
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