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WO2025092985A1 - 磷酸二酯酶4b抑制剂及其制备方法与用途 - Google Patents

磷酸二酯酶4b抑制剂及其制备方法与用途 Download PDF

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WO2025092985A1
WO2025092985A1 PCT/CN2024/129408 CN2024129408W WO2025092985A1 WO 2025092985 A1 WO2025092985 A1 WO 2025092985A1 CN 2024129408 W CN2024129408 W CN 2024129408W WO 2025092985 A1 WO2025092985 A1 WO 2025092985A1
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WO
WIPO (PCT)
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alkyl
mmol
hydrogen
halogen
hydroxyl
Prior art date
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Pending
Application number
PCT/CN2024/129408
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English (en)
French (fr)
Inventor
许勤龙
储昭兴
汪艳
林高峰
莫佳佳
邵莉
赵炎
叶文峰
何广卫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hefei Amvite Pharmaceutical Co Ltd
Hefei Institute Of Pharmaceutical Industry Co Ltd
Original Assignee
Hefei Amvite Pharmaceutical Co Ltd
Hefei Institute Of Pharmaceutical Industry Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hefei Amvite Pharmaceutical Co Ltd, Hefei Institute Of Pharmaceutical Industry Co Ltd filed Critical Hefei Amvite Pharmaceutical Co Ltd
Publication of WO2025092985A1 publication Critical patent/WO2025092985A1/zh
Pending legal-status Critical Current
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicinal chemistry, and in particular to a class of selective phosphodiesterase 4B inhibitors and a preparation method and use thereof.
  • Inflammation is a very common and important basic pathological process.
  • the defensive response of living tissues with vascular systems to damaging factors is called inflammation.
  • Inflammatory reactions are closely related to many diseases, such as dermatitis, psoriasis, systemic lupus erythematosus, etc.
  • systemic lupus erythematosus is caused by genetic changes, which causes epidermal hyperplasia, thereby causing a series of inflammatory reactions. Therefore, treating inflammation plays an important role in treating the above diseases.
  • cAMP and cGMP play an important regulatory role in cell activity, and the regulation of their concentration is mainly determined by the balance between the synthesis of nucleotide cyclase and the hydrolysis of phosphodiesterase (PDEs).
  • PDE4A to PDE4D There are 4 subtypes of PDE4, namely PDE4A to PDE4D.
  • Existing PDE4 inhibitors such as rolipram, roflumilast, cilomilast, apremilast, etc. are all non-selective PDE4 inhibitors. Due to poor selectivity, existing PDE4 inhibitors cause a variety of drug side effects, especially the inhibition of PDE4D in the central nervous system, which can cause severe vomiting reactions.
  • International patent application WO2013026797 discloses a new type of PDE4B inhibitor-Compound II, but further studies have found that Compound II is not highly selective for PDE4D, and vomiting side effects have occurred in clinical trials. Therefore, it is of great clinical significance to find and discover PDE4B inhibitors with better selectivity.
  • R 1 is selected from H, C 1 -C 6 alkyl
  • R 1 ' is selected from C 3 -C 8 carbocyclyl, C 6 -C 10 aryl, 5-10 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl; wherein the carbocyclyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl is substituted by R 4 -(CR a R b ) m - and is optionally substituted by halogen, hydroxyl, amino, mercapto, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • R 2 , R 2 ', R 3 , R 3 ' are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl;
  • Het is selected from 5- or 6-membered nitrogen aromatic group
  • L is selected from a bond, C 1 -C 6 alkylene, -C( ⁇ O)-, -NR a C( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)-N(R a )-, -OC( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)O-;
  • Ar is selected from 5-10 membered heterocyclic group, 5-10 membered heteroaryl group, C 6 -C 10 aryl group, C 3 -C 8 carbocyclic group; the heterocyclic group, heteroaryl group, aryl group, carbocyclic group are optionally substituted by one or more groups selected from the following: halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl group, C 1 -C 6 alkoxy group;
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound represented by formula (I) or its stereoisomers, tautomers, solvates, prodrugs, isotope-labeled substances and pharmaceutically acceptable salts thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I) or its stereoisomers, tautomers, solvates, prodrugs, isotope-labeled substances and pharmaceutically acceptable salts, or a pharmaceutical composition comprising the same, for use in the preparation of a medicament for preventing and/or treating a disease mediated by phosphodiesterase 4B.
  • the compounds of the present invention not only have significantly better inhibitory activity of phosphodiesterase 4B and stronger target selectivity, but also have better therapeutic effects on idiopathic pulmonary fibrosis.
  • FIG1 shows the results of lung tissue pathology test on the effects of the compounds of the present invention on chronic pulmonary obstructive pulmonary disease in rats.
  • FIG2 shows the results of lung tissue pathology examination of the effects of the compounds of the present invention on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats.
  • alkyl refers to a monovalent group of a straight or branched saturated hydrocarbon chain (typically having 1 to 6 carbon atoms, 1 to 4 carbon atoms, or 1 to 3 carbon atoms). This term is exemplified by groups such as methyl, ethyl, 1-propyl (n-propyl), 2-propyl (isopropyl), 1-butyl (n-butyl), 2-methyl-1-propyl (isobutyl), 2-butyl (sec-butyl), 2-methyl-2-propyl (tert-butyl), 1-pentyl (n-pentyl), 2-pentyl, 3-pentyl, 2-methyl-2-butyl, 3-methyl-2-butyl, 3-methyl-1-butyl, 2-methyl-1-butyl, 1-hexyl, 2-hexyl, 3-hexyl, 2-methyl-2-pentyl, 3-methyl-2-pentyl, 4-methyl-2-penty
  • alkylene refers to a divalent radical of a straight or branched saturated hydrocarbon chain (typically having 1 to 6 carbon atoms, 1 to 4 carbon atoms, or 1 to 3 carbon atoms).
  • the term is exemplified by radicals such as methylene, ethylene, propylene, butylene, pentylene, hexylene, and the like.
  • alkenyl refers to a linear or branched unsaturated hydrocarbon chain monovalent group having 2 to 6 carbon atoms (more typically 2 to 4 carbon atoms, or 2 to 3 carbon atoms) and having carbon-carbon double bonds (e.g., 1 or 2 carbon-carbon double bonds).
  • alkynyl refers to a linear or branched unsaturated hydrocarbon chain monovalent group (typically having 2 to 6 carbon atoms, 2 to 4 carbon atoms, or 2 to 3 carbon atoms) and having carbon-carbon triple bonds (e.g., 1 or 2 carbon-carbon triple bonds).
  • the term is exemplified by groups such as ethynyl (i.e., -C ⁇ CH), propargyl (i.e., -CH2C ⁇ CH ), propynyl (i.e., -C ⁇ CCH3 ), and the like.
  • aryl refers to an aromatic carbocyclic group of 6 to 14 carbon atoms (more typically 6 to 10 carbon atoms, or 6 carbon atoms) having a single ring (e.g., phenyl) or multiple rings (e.g., biphenyl) or multiple condensed (fused) rings (e.g., naphthyl, fluorenyl, and anthracenyl).
  • the term is exemplified by groups such as phenyl, fluorenyl, naphthyl, anthracenyl, 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene (if the point of attachment is through the aryl group), and the like.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • alkoxy refers to an "alkyl-O-" group, wherein alkyl is as defined herein. This term is exemplified by groups such as methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, tert-butoxy, and the like.
  • carbocyclic radical refers to a monoradical saturated or partially unsaturated group having 3 to 8 carbon atoms as 3 to 8 yuan of monocyclic rings or a plurality of thick (fused) rings or bridged rings or spirocycles.
  • Carbocyclic ring or carbocyclic radical can be saturated or partially unsaturated, and can be fused with another saturated, partially unsaturated or aromatic ring, provided that the ring atom connected with the target molecule is not aromatic carbon.
  • the example of carbocyclic ring or carbocyclic radical includes, but is not limited to cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclohexane, cyclobutene, cyclopentene, cyclohexene, cycloheptene, cyclopentadiene etc.
  • heteroaryl refers to an aromatic ring group containing a monocyclic or multiple condensed (fused) ring (e.g., containing 2 rings) of 5 to 10 ring atoms in the ring, wherein in addition to carbon atoms, the ring atoms also include at least one heteroatom selected from oxygen, nitrogen and/or sulfur. If the ring is aromatic, sulfur and nitrogen atoms can also exist in oxidized form.
  • Multiple condensed (fused) ring heteroaryl is a monocyclic heteroaryl as defined above fused with one or more rings selected from the following to form a multiple condensed ring system: heteroaryl (to form, for example, naphthyridinyl, such as 1,8-naphthyridinyl), heterocycle (for example, 1,2,3,4-tetrahydronaphthyridinyl, such as 1,2,3,4-tetrahydro-1,8-naphthyridinyl), carbocycle (to form, for example, 5,6,7,8-tetrahydroquinolinyl) and aryl (to form, for example, indazolyl).
  • heteroaryl to form, for example, naphthyridinyl, such as 1,8-naphthyridinyl
  • heterocycle for example, 1,2,3,4-tetrahydronaphthyridinyl, such as 1,2,3,4-tetrahydro
  • heteroaryl can be on any suitable atom of the heteroaryl, including carbon atoms and heteroatoms (e.g., nitrogen).
  • exemplary heteroaryl groups include, but are not limited to, pyridinyl, pyrrolyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazolyl, thienyl, indolyl, imidazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, furanyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, quinolinyl, isoquinolinyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, indazolyl, quinoxalinyl, quinazolinyl, 5,6,7,8-tetrahydroisoquinolinyl, benzofuranyl, benzimidazolyl, thiaindenyl, pyrrolo[2,3-
  • heterocyclyl refers to a monovalent or divalent saturated or partially unsaturated group having a 3-8-membered monocyclic ring or a plurality of condensed (fused) rings or bridged rings or spirocycles having 3 to 14 ring atoms in the ring, wherein the ring atoms also include at least one nitrogen atom in addition to carbon atoms.
  • heterocyclyl groups include, but are not limited to, aziridine rings, azetidine rings, tetrahydropyrrole rings, piperidine rings, azepane rings, azocyclooctane rings, tetrahydroimidazole rings, tetrahydropyrazole rings, tetrahydrooxazole rings, tetrahydroisoxazole rings, tetrahydrothiazole rings, tetrahydroisothiazole rings, piperazine rings, morpholine rings, dihydropyridyl, 4,5,6,7-tetrahydro-1H-benzo[d]imidazole, 4,5,6,7-tetrahydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridine, etc.
  • the term "therapeutically effective amount” refers to an amount sufficient to affect treatment as defined below when administered to a mammal in need of such treatment.
  • the therapeutically effective amount will vary with the subject and disease condition being treated, the weight and age of the subject, the severity of the disease condition, the mode of administration, etc., and can be readily determined by one of ordinary skill in the art.
  • stereoisomer refers to a compound having the same chemical composition and connectivity, but whose atoms have different orientations in space that cannot be interchanged by single bond rotation.
  • Stepoisomer includes “diastereomers” and “enantiomers”.
  • Diastereomers refers to stereoisomers with two or more chiral centers and whose molecules are not mirror images of each other. Diastereomers have different physical properties, such as melting points, boiling points, spectral characteristics and reactivity. Diastereomeric mixtures can be separated under high-resolution analytical procedures (such as crystallization, electrophoresis and chromatography).
  • Enantiomers refers to two stereoisomers that are non-overlapping mirror images of each other.
  • tautomer refers to the coexistence of two (or more) compounds that differ only in the position and electron distribution of one (or more) mobile atoms, such as keto-enol tautomers.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to salts that retain the biological effectiveness and properties of a given compound and are not biologically or otherwise undesirable.
  • Pharmaceutically acceptable salts can be acid addition salts and/or base addition salts.
  • Acid addition salts can be prepared from inorganic acids and organic acids.
  • Salts derived from inorganic acids include hydrochlorides, hydrobromides, sulfates, nitrates, phosphates, carbonates, bisulfates, hydrogenphosphates, dihydrogenphosphates, bicarbonates, etc.; salts derived from organic acids include formates, acetates, propionates, glycolates, pyruvates, oxalates, malates, malonates, succinates, maleates, fumarates, tartrates, citrates, benzoates, cinnamates, mandelates, methanesulfonates, ethanesulfonates, p-toluenesulfonates, salicylates, lactates, nicotinates, lauryl sulfates, naphthylsulfonates, camphorsulfonates, gluconates, glucuronates, oleates, palmitates, stearates, pamoates, triflu
  • Base addition salts can be formed with inorganic or organic bases.
  • Salts derived from inorganic bases include sodium, potassium, ammonium, calcium, magnesium, iron, zinc, copper, lithium, barium, aluminum salts and the like;
  • salts derived from organic bases include salts formed with various primary, secondary and tertiary amines, for example, ethylamine, diethylamine, n-propylamine, isopropylamine, diethanolamine, meglumine, lysine, piperazine, piperidine, morpholine, tromethamine, choline and the like.
  • any general formula or structure given herein, including any general formula disclosed herein, including general formula I, is also intended to represent the unlabeled form and isotope-labeled form of the compound. These forms of compounds may also be referred to as "isotope-labeled substances". Isotope-labeled substances have the structure described herein, except that one or more atoms are replaced by atoms with selected atomic mass or mass number.
  • isotopes examples include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, fluorine, chlorine and iodine, such as, but not limited to 2 H (deuterium, D), 3 H (tritium), 11 C, 13 C, 14 C, 13 N, 15 N, 15 O, 17 O, 18 O, 31 P, 32 P, 35 S, 18 F, 36 Cl , 123 I and 125 I.
  • isotope-labeled substances of the present invention such as those in which radioactive isotopes (such as 3 H, 13 C and 14 C) are incorporated.
  • Such compounds are synthesized by means well known in the art, for example by employing starting materials in which one or more hydrogens have been replaced with deuterium.
  • the compound of the present invention is a compound represented by formula (I):
  • the compound of the present invention is a compound represented by formula (I) or its stereoisomers, tautomers, solvates, prodrugs, isotope-labeled substances and pharmaceutically acceptable salts thereof. middle,
  • R 2 , R 2 ', R 3 , R 3 ' are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl;
  • Ra and Rb are each independently selected from hydrogen, C1 - C6 alkyl, halogen, hydroxyl, or Ra and Rb together with the carbon atom to which they are attached form a C3 - C6 carbocyclic group;
  • Rc and Rd are each independently selected from hydrogen, C1 - C6 alkyl, or Rc and Rd together with the nitrogen atom to which they are attached form a 3- to 6-membered heterocyclic group;
  • Het is selected from 5- or 6-membered nitrogen aromatic group
  • L is selected from a bond, C 1 -C 6 alkylene, -C( ⁇ O)-, -NR a C( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)-N(R a )-, -OC( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)O-;
  • R 1 ' is selected from cyclobutane, phenyl, pyridinyl; the above groups are substituted by R 4 -(CR a R b ) m - and are optionally substituted by halogen;
  • R 2 , R 2 ', R 3 , R 3 ' are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl;
  • Ra and Rb are each independently selected from hydrogen, C1 - C3 alkyl, halogen, or Ra and Rb together with the carbon atom to which they are attached form a cyclopropane or cyclobutane group;
  • Rc and Rd are each independently selected from hydrogen, C1 - C3 alkyl, or Rc and Rd together with the nitrogen atom to which they are attached form a 3- to 6-membered heterocyclic group;
  • Het is selected from 5- or 6-membered nitrogen aromatic group
  • L is selected from a bond, C 1 -C 6 alkylene, -C( ⁇ O)-, -NR a C( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)-N(R a )-, -OC( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)O-;
  • Ar is selected from pyrrolyl, furanyl, thienyl, imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, phenyl; the above groups are optionally substituted by one or more groups selected from the following: halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • the compound of the present invention is a compound represented by formula (II):
  • R 1 is selected from H, C 1 -C 6 alkyl
  • L is selected from a bond, C 1 -C 6 alkylene, -C( ⁇ O)-, -NR e C( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)-N( Re )-, -OC( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)O-;
  • Re is selected from hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
  • Ar is selected from pyrrolyl, furanyl, thienyl, imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, phenyl; the above groups are optionally substituted by one or more groups selected from the following: halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • the compound of the present invention is a compound represented by formula (III):
  • R 1 is selected from H, C 1 -C 6 alkyl
  • L is selected from a bond, C 1 -C 6 alkylene, -C( ⁇ O)-, -NR e C( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)-N( Re )-, -OC( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)O-;
  • Re is selected from hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
  • the compound of the present invention is a compound represented by formula (IV):
  • R 1 is selected from H, C 1 -C 6 alkyl
  • Ar is selected from pyrrolyl, furanyl, thienyl, imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, phenyl; the above groups are optionally substituted by one or more groups selected from the following: halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • R 1 is selected from H, C 1 -C 6 alkyl
  • Ra and Rb are each independently selected from hydrogen, C1 - C3 alkyl, halogen, or Ra and Rb together with the carbon atom to which they are attached form a cyclopropane or cyclobutane group;
  • Rc and Rd are each independently selected from hydrogen, C1 - C3 alkyl, or Rc and Rd together with the nitrogen atom to which they are attached form a 3- to 6-membered heterocyclic group;
  • R 5 is selected from halogen, hydroxyl, amino, mercapto, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • Het is selected from 5- or 6-membered nitrogen aromatic group
  • L is selected from a bond, C 1 -C 6 alkylene, -C( ⁇ O)-, -NR e C( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)-N( Re )-, -OC( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)O-;
  • Re is selected from hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
  • Ar is selected from pyrrolyl, furanyl, thienyl, imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, phenyl; the above groups are optionally substituted by one or more groups selected from the following: halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • the compound of the present invention is a compound represented by formula (V) or its stereoisomers, tautomers, solvates, prodrugs, isotope-labeled substances, and pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein:
  • R 1 is selected from H, C 1 -C 6 alkyl
  • Ra and Rb are each independently selected from hydrogen and halogen, or Ra and Rb together with the carbon atom to which they are connected form a cyclopropane group or a cyclobutane group;
  • R 5 is selected from halogen, hydroxyl, amino, mercapto, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • Het is selected from triazole
  • L is selected from a bond, C 1 -C 6 alkylene, -C( ⁇ O)-, -NR e C( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)-N( Re )-, -OC( ⁇ O)-, -C( ⁇ O)O-;
  • Re is selected from hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
  • Ar is selected from pyridyl, pyrimidinyl, phenyl; the above groups are optionally substituted by one or more groups selected from the following: halogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy;
  • compounds of the invention include, but are not limited to, the following compounds:
  • the pharmaceutical composition provided by the present invention comprises the compound of the present invention or its stereoisomer, tautomer, solvate, prodrug, isotope-labeled substance and pharmaceutically acceptable salt thereof, and at least one pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers are known to those skilled in the art, including diluents, Lubricants, disintegrants, binders, buffers, preservatives, stabilizers, wetting agents, glidants, emulsifiers, colorants, flavoring agents, sweeteners, etc.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared in solid form (including but not limited to tablets, capsules, pills, granules, powders, suppositories) or liquid form (including but not limited to solutions, suspensions, emulsions, tinctures, syrups).
  • the pharmaceutically acceptable carrier generally includes one or more of the following: a) diluents, such as lactose, glucose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose, etc.; b) lubricants, such as silicon dioxide, talc, stearic acid, polyethylene glycol, etc.; c) binders, such as magnesium aluminosilicate, gelatinized starch, gelatin, tragacanth gum, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, etc.; d) disintegrants, such as starch, alginic acid, agar, corn starch; e) stabilizers, such as antioxidants such as ascorbic acid; f) glidants, such as silicon dioxide; g) flavoring agents, such as mint, methyl salicylate; sweeteners, such as sucrose, saccharin.
  • diluents such as lactose, glucose, sucrose
  • the pharmaceutically acceptable carrier generally includes one or more of the following: a) a diluent, such as water for injection, physiological saline, Ringer's solution, polyethylene glycol, glycerol, propylene glycol, etc.; b) an antioxidant, such as ascorbic acid or sodium bisulfite; c) a buffer, such as acetate, phosphate, etc.
  • a diluent such as water for injection, physiological saline, Ringer's solution, polyethylene glycol, glycerol, propylene glycol, etc.
  • an antioxidant such as ascorbic acid or sodium bisulfite
  • a buffer such as acetate, phosphate, etc.
  • the effective dose of the compounds of the present invention depends at least on the nature, extent, delivery method and pharmaceutical dosage form of the condition being treated, and will be ultimately determined by the clinician. It can be expected that about 0.0001 to about 100 mg per kilogram of body weight per day; generally about 0.01 to about 10 mg per kilogram of body weight per day; more typically, about 0.01 to about 5 mg per kilogram of body weight per day; most typically about 0.05 to about 0.5 mg per kilogram of body weight per day.
  • the daily candidate dose for an adult of about 70 kg body weight will be in the range of 1 mg to 1000 mg, preferably in the range of 5 mg to 500 mg, and can be administered in the form of a single dose or multiple doses.
  • the compounds of the present invention have extremely strong inhibitory activity on PDE4B and can be used to prevent and/or treat inflammatory diseases associated with PDE4B, including but not limited to atopic dermatitis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), idiopathic pulmonary fibrosis, interstitial lung disease, chronic sinusitis, allergic rhinitis, allergic dermatitis, contact dermatitis, psoriasis, systemic lupus erythematosus, ulcerative colitis, Crohn's disease, depression, bipolar depression, mania, anxiety, schizophrenia, Alzheimer's disease, stroke, chronic pain, liver fibrosis, renal fibrosis, and nephritis.
  • COPD chronic obstructive pulmonary disease
  • Example 1 compound as a white solid, with a yield of 44.6%.
  • the filter cake was collected, and then stirred at room temperature for 1 h with pure water (150 mL) and filtered.
  • the filter cake was washed with water (30 mL ⁇ 2), and the filter cake was collected and dried to obtain 11.20 g of white solid intermediate 6, with a yield of 76.2%.
  • intermediate 9 300 mg, 1.05 mmol
  • DCM 15 mL
  • 85% m-CPBA 532 mg, 2.62 mmol
  • Example 5 intermediate 8 150 mg, 0.66 mmol
  • compound 1 (0.10 mg, 0.55 mmol
  • Xantphos 48 mg, 0.083 mmol
  • Na 2 CO 3 120 mg, 1.10 mmol
  • 1,4-dioxane 2 mL
  • Pd 2 (dba) 3 25 mg, 0.028 mmol
  • Example 5 Into a 100 mL single-mouth bottle, add the intermediate 10 of Example 5 (600 mg, 1.89 mmol), acetonitrile (30 mL), trimethylethynylsilane (1.11 g, 11.3 mmol), cuprous iodide (54 mg, 0.28 mmol), triethylamine (0.8 mL, 5.66 mmol) and tetrakis(triphenylphosphine)palladium (327 mg, 0.28 mmol) in sequence, under nitrogen protection, react at 80°C for 2 h.
  • the intermediate 10 of Example 5 600 mg, 1.89 mmol
  • acetonitrile 30 mL
  • trimethylethynylsilane 1.11 g, 11.3 mmol
  • cuprous iodide 54 mg, 0.28 mmol
  • triethylamine 0.8 mL, 5.66 mmol
  • intermediate 3 (520mg, 1.37mml), methanol (15mL) and tetrahydrofuran (15mL) in sequence, and add lithium hydroxide monohydrate (58mg, 1.37) in an aqueous solution (15mL) dropwise under an ice-water bath. After addition, react at room temperature for 30min.
  • intermediate 2 (231 mg, 1.22 mmol), 4 (250 mg, 0.81 mmol), tert-butyl alcohol (8 mL), water (2 mL), anhydrous copper sulfate (20 mg, 0.08 mmol) and sodium ascorbate (32 mg, 0.16 mmol) were added in sequence, and the mixture was reacted at 60° C. overnight under nitrogen protection.
  • intermediate 2 (2.30 g, 6.44 mmol), 1,4-dioxane (45 mL), biboronic acid pinacol ester (1.96 g, 7.72 mmol), potassium acetate (1.90 g, 19.3 mmol) and Pd(dppf)Cl 2 (470 mg, 0.64 mmol) in sequence, and react at 60°C for 3 h under nitrogen protection.
  • intermediate 3 (2.70 g, 6.44 mmol, 80% wt), 1,4-dioxane/water (40 mL/5 mL), 5-chloro-2-iodopyrimidine (1.86 g, 7.72 mmol), sodium carbonate (2.05 g, 19.3 mmol) and tetrakis(triphenylphosphine)palladium (675 mg, 0.64 mmol), nitrogen protection, react at 90 ° C overnight.
  • intermediate 6 (137 mg, 0.61 mmol), intermediate 8 of Example 1 (177 mg, 0.61 mmol), tetrahydrofuran/water (6 mL/1.5 mL) and DIPEA (238 mg, 1.84 mmol) were added in sequence, and the mixture was protected by nitrogen and reacted at 65°C overnight.
  • Example 15 150 mg, 0.29 mmol
  • water 2.5 mL
  • sodium hydroxide 13 mg, 0.32 mmol
  • acetone 15 mL
  • a white solid precipitates, continue stirring for 30 min, then filter and dry to obtain 105 mg of white solid Example 16, with a yield of 67.2%.
  • Example 11 intermediate 3 (2.00 g, 5.0 mmol), Example 1 intermediate 3 (1.28 g, 5.5 mmol), tetrahydrofuran/water (40 mL/4 mL) and DIPEA (2.7 mL, 15.0 mmol) were added to a 250 mL single-mouth bottle in sequence, and the mixture was reacted at 65° C. overnight under nitrogen protection.
  • Example 18 (80 mg, 0.15 mmol) and water (5 mL) were added to a 25 mL single-necked bottle in sequence. The solid did not dissolve. 27% ammonia water was added dropwise under an ice-water bath to adjust the pH to 8. After stirring for 15 min, the system became clear. Acetone (10 mL) was added and stirring was continued. A white solid slowly precipitated. After 30 min, it was filtered and dried to obtain 40 mg of white solid Example 19 with a yield of 48.5%.
  • Example 11 300 mg, 0.55 mmol
  • THF 4.5 mL
  • methanol 4.5 mL
  • Ammonia water 0.1 mL
  • the system gradually became turbid from clear, filtered, and the filter cake was rinsed with water (2 mL ⁇ 3) and collected.
  • 200 mg of white solid Example 20 was obtained by air drying at 50 ° C overnight, with a yield of 64.5%.
  • Step 7 Synthesis of 2-(2-chloro-4-((2-(4-(5-chloropyrimidin-2-yl)piperidin-1-yl)-5,5-dioxo-7,8-dihydro-6H-thiopyrano[3,2-d]pyrimidin-4-yl)amino)phenyl)acetic acid (Example 21)
  • intermediate 5 (1.89g, 8.47mmol), anhydrous 1,4-dioxane (28mL), intermediate 8 of Example 5 (2.25g, 10.16mmol), Pd2 (dba) 3 (590mg, 0.64mmol), XantPhos (730mg, 1.27mmol) and sodium carbonate (1.80g, 16.94mmol) were added in sequence, and the mixture was reacted at 75°C for 16h under nitrogen protection.
  • Example 25 Into a 25 mL single-necked bottle, add the intermediate 7 of Example 25 (210 mg, 0.53 mmol), the intermediate 3 of Example 1 (114 mg, 0.58 mmol), DIPEA (205 g, 1.59 mmol), THF (4 mL) and H 2 O (1 mL) in sequence, and react at 65° C. overnight under nitrogen protection.
  • the compounds of the present invention have extremely strong PDE4B inhibitory activity, and the activity of some compounds is much stronger than the inhibitory activity of compound II disclosed in WO2013026797.
  • the compound of the present invention has better selectivity for PDE4B and is superior to compound 2 disclosed in patent WO2013026797.
  • HEK-293 cell line stably expressing hERG potassium channel was used (purchased from Creacell: item number: A-0320).
  • HEK293 cell line was cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and 0.8 mg/mL G418, the culture temperature was 37°C, and the carbon dioxide concentration was 5%.
  • DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and 0.8 mg/mL G418, the culture temperature was 37°C, and the carbon dioxide concentration was 5%.
  • cells were separated with TrypLETM Express before the test, 4 ⁇ 10 3 cells were plated on the cover sheet, and cultured in a 24-well plate (final volume: 500 ⁇ L). After 18 hours, the test was performed.
  • Whole-cell patch clamp detection After the whole-cell seal is formed, the cell membrane voltage is clamped at -80mV. The clamp voltage is also depolarized from -80mV to -50mV for 0.5s (as a leakage current detection), then stepped to 30mV for 2.5s, and then quickly restored to -50mV for 4s to stimulate the tail current of the hERG channel. Repeat the data collection every 10s to observe the effect of the drug on the hERG tail current. A 0.5s -50mV stimulation is used as a leakage current detection. The experimental data is collected by the EPC-10 amplifier and stored in the software. When the hERG current recorded by the whole cell is stable, the drug is administered.
  • each test compound detects the data at (0.03 ⁇ M, 0.3 ⁇ M, 1 ⁇ M, 3 ⁇ M, 10 ⁇ M, 30 ⁇ M) concentrations, and the hERG IC 50 value is calculated according to the calculation formula.
  • Fifty SD rats were randomly divided into five groups according to their body weight, with 10 rats in each group, half of which were male and half were female, including a blank control group, a model control group, and an Example 11 medication group (doses were 5, 10, and 20 mg/kg, respectively).
  • Test sample solution Weigh 5 mg, 10 mg and 20 mg of the compound of Example 11 respectively and dissolve them in 10 ml of 0.5% CMC-Na aqueous solution to prepare solutions with concentrations of 0.5, 1 and 2 mg/ml.
  • bleomycin solution was injected into the trachea through the vocal cords, the dose was 5 mg/kg, and the administration volume was 1 ml/kg; the blank group rats were injected with an equal amount of normal saline into the trachea.
  • the time for intratracheal injection of bleomycin was set at the first day, and oral administration began on the 8th day, with an administration volume of 10 ml/kg, twice a day, for 14 consecutive days. Blood and lungs were collected from animals in each group on the 22nd day. After the rats were killed, the trachea was exposed, and the intravenous cannula was inserted into the rat bronchi. PBS (5 ml) was lavaged twice, and the lavage fluid was collected. Then, centrifuged at 1500 r/min for 10 minutes. The supernatant was collected.
  • the degree of fibrosis was determined by Masson’s staining; meanwhile, ELISA was used to measure the levels of IL-6, TNF- ⁇ , and TGF- ⁇ 1 in bronchoalveolar lavage fluid.
  • the model group rats can significantly increase the collagen fiber content of lung tissue after bleomycin induction (P ⁇ 0.01), indicating that the model is successful; compared with the model control group, the Example 11 administration group can significantly reduce the collagen fiber content of lung tissue (P ⁇ 0.05, P ⁇ 0.01), This suggests that the drug-treated group has a therapeutic effect.
  • the model group rats could significantly increase the content of TGF- ⁇ and IL-6 in the alveolar lavage fluid after bleomycin induction (P ⁇ 0.01), indicating that the model was successfully established; compared with the model control group, the Example 11 administration group could significantly reduce the content of TGF- ⁇ and IL-6 in the alveolar lavage fluid (P ⁇ 0.05, P ⁇ 0.01), indicating that the administration group had a therapeutic effect.

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Abstract

本发明提供一类磷酸二酯酶4B选择性抑制剂及其制备方法和用途。具体地，本发明提供一种式(I)所示化合物，或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，以及包含其的药物组合物。本发明还提供了本发明的化合物和/或药物组合物在制备用于预防和/或治疗炎症性疾病、纤维化疾病的药物中的用途。本发明的化合物和/或药物组合物表现出较高的磷酸二酯酶4B抑制活性。

Description

磷酸二酯酶4B抑制剂及其制备方法与用途 技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体地涉及一类选择性磷酸二酯酶4B抑制剂及其制备方法与用途。
背景技术
炎症是一种十分常见而又重要的基本病理过程，具有血管系统的活体组织对损伤因子的防御性反应都称为炎症。炎症反应与多种疾病的关系密切，例如皮炎、银屑病、系统性红斑狼疮等。例如系统性红斑狼疮就是由于基因的改变，引起表皮增生，从而引起一系列炎症反应。因此，治疗炎症对于治疗上述疾病具有重要作用。有研究表明，体内各类炎症反应和细胞内cAMP的摩尔浓度有关。cAMP和cGMP对于细胞活动起着重要的调节作用，其浓度的调节主要由核苷酸环化酶的合成和磷酸二酯酶(PDEs)水解作用之间的平衡决定。
磷酸二酯酶(PDEs)具有水解细胞内第二信使环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的功能。细胞内cAMP或cGMP含量的下降会造成这些第二信使所传导的生化作用失常。PDEs在人体内分布广泛，生理作用涉及多个研究领域。PDEs体内含量过高会导致cAMP浓度下降从而诱发诸如哮喘、抑郁症、银屑病、炎症等疾病。PDEs有11个亚型，其中之一的PDE4在炎症细胞中的作用明显。近年来，PDEs作为新的治疗靶点，引起了众多学者广泛的关注，成为一个新的研究热点。
PDE4共有4个亚型，分别为PDE4A～PDE4D，现有的PDE4抑制剂如洛利普兰、罗氟司特、西洛司特、阿普斯特等，均属于PDE4非选择性抑制剂。由于选择性不佳，现有的PDE4抑制剂导致多种药物副作用，特别是对中枢系统PDE4D的抑制，会导致严重的呕吐反应。国际专利申请WO2013026797公开了一类新型的PDE4B抑制剂—化合物II，但是进一步研究发现，化合物II对PDE4D的选择性不高，临床试验中出现了呕吐的副作用。因此，寻找和发现选择性更佳的PDE4B抑制剂具有重要的临床意义。
发明内容
为了克服现有技术的不足，一方面，本发明提供了一种具有下列式(I)的化合物，
或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物，及其药学上可接受的盐，其中
X选自S＝O、S(＝O)2；
R1选自H、C1-C6烷基；
R1’选自C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基；其中所述碳环基、芳基、杂芳基、杂环基被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基取代；
R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)NRcRd；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基、卤素、羟基，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成C3-C6碳环基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C6烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
Het选自 5或6元氮杂芳基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NRaC(＝O)-、-C(＝O)-N(Ra)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；
Ar选自5-10元杂环基、5-10元杂芳基、C6-C10芳基、C3-C8碳环基；所述杂环基、杂芳基、芳基、碳环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
条件是：当X为S＝O、Het为R1’为C3-C8碳环基时，L不为键。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
再一方面，本发明提供了式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，或者包含其的药物组合物在制备用于预防和/或治疗由磷酸二酯酶4B介导的疾病的药物中的用途。
有益效果：与现有技术相比，本发明的化合物不仅具有显著更佳的磷酸二酯酶4B的抑制活性，更强的靶点选择性，而且对于特发性肺纤维化的治疗效果更佳。
附图简要说明
图1示出了本发明化合物针对大鼠慢性肺阻塞影响的肺组织病理学检验结果。
图2示出了本发明化合物对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化影响的肺组织病理学检验结果。
具体实施方式
定义
如在本说明书中所使用的，除非使用它们的上下文指示其它含义，否则下列词和短语通常旨在具有如下所阐述的含义。
如本文所使用的，术语“烷基”是指(典型地具有1至6个碳原子，1至4个碳原子，或者1至3个碳原子)直链或支链的饱和烃链的单价基团。该术语例示性地为基团如甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、2-丙基(异丙基)、1-丁基(正丁基)、2-甲基-1-丙基(异丁基)、2-丁基(仲丁基)、2-甲基-2-丙基(叔丁基)、1-戊基(正戊基)、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基等。
如本文所使用的的，术语“亚烷基”是指(典型地具有1至6个碳原子，1至4个碳原子，或者1至3个碳原子)的直链或支链的饱和烃链的二价基团。该术语例示性地为基团如亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基等。
如本文所使用的，术语“烯基”是指具有2至6个碳原子(更典型地具有2至4个碳原子，或者2至3个碳原子)并具有碳-碳双键(例如1或2个碳-碳双键)的直链或支链的不饱和烃链单价基团。该术语例示性地为基团如乙烯基(即-CH＝CH2)、丙烯-1-基(即-CH＝CHCH3)、丙烯-3-基(或烯丙基，即-CH2CH＝CH2)、丙烯-2-基(即-C(CH3)＝CH2)、丁二烯基(包括1,2-丁二烯基和1,3-丁二烯基)等。
如本文中使用的，术语“炔基”是指(典型地具有2至6个碳原子，2至4个碳原子，或者2至3个碳原子)并具有碳-碳三键(例如1或2个碳-碳三键)的直链或支链的不饱和烃链单价基团。该术语例示性地为基团如乙炔基(即-C≡CH)、炔丙基(即-CH2C≡CH)、丙炔基(即-C≡CCH3)等。
如本文所使用的，术语“芳基”是指具有单环(例如苯基)或多环(例如联苯基)或多个稠(稠合的)环(例如萘基、芴基和蒽基)的6至14个碳原子(更典型地具有6至10个碳原子，或者6个碳原子)的芳族碳环基团。该术语例示性地为基团如苯基、芴基、萘基、蒽基、1,2,3,4-四氢萘(如果连接点是通过芳基基团)等。
如本文所使用的，术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
如本文所使用的，术语“烷氧基”是指“烷基-O-”基团，其中烷基如本文所定义。该术语例示性地为基团如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
如本文所使用的，术语“碳环基”是指具有3至8个碳原子作为环原子的3至8元单环或者多个稠(稠合的)环或桥环或螺环的单基饱和或部分不饱和基团。碳环或碳环基可以是饱和的或者部分不饱和的，并且可以与另一个饱和的、部分不饱和的或者芳族的环稠合，条件是与目标分子连接的环原子不是芳香碳。碳环或者碳环基的实例包括，但不限于环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环丁烯、环戊烯、环己烯、环庚烯、环戊二烯等。
如本文所使用的，术语“杂芳基”是指在环中包含5至10个环原子的单环或多重稠(稠合的)环(例如，包含2个环)的芳族环基团，其中除了碳原子以外，所述环原子还包含至少一个以上选自氧、氮和/或硫的杂原子。如果环是芳族的，则硫和氮原子也可以氧化形式存在。多重稠(稠合的)环杂芳基是由如上定义的单环杂芳基与选自以下的一个或多个环稠合以形成多重稠环系统：杂芳基(以形成例如萘啶基，诸如1,8-萘啶基)，杂环(例如形成1,2,3,4-四氢萘啶基，如1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基)，碳环(以形成例如5,6,7,8-四氢喹啉基)和芳基(以形成例如吲唑基)。应理解，杂芳基的连接点可以在杂芳基的任何合适的原子上，包括碳原子和杂原子(例如氮)。示例性杂芳基包括但不限于：吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、呋喃基、噁二唑基、噻二唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基、5,6,7,8-四氢异喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、硫杂茚基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3H)-酮、三唑基、4,5,6,7-四氢-1H-吲唑基和3b,4,4a,5-四氢-1H-环丙烷[3,4]环戊烷[1,2-c]吡唑基。
如本文所使用的，术语“杂环基”是指具有在环内具有3至14个环原子的3至8元单环或者多个稠(稠合的)环或桥环或螺环的单价或二价饱和或部分不饱和基团，其中除了碳原子以外，所述环原子还包含至少一个以上氮原子。杂环基基团的实例包括，但不限于氮杂环丙烷环、氮杂环丁烷环、四氢吡咯环、哌啶环、氮杂环庚烷环、氮杂环辛烷环、四氢咪唑环、四氢吡唑环、四氢噁唑环、四氢异噁唑环、四氢噻唑环、四氢异噻唑环、哌嗪环、吗啉环、二氢吡啶基、 4,5,6,7-四氢-1H-苯并[d]咪唑、4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶等。
如本文所使用的，术语“治疗有效量”是指当给予需要这种治疗的哺乳动物时，如下所限定的足以影响治疗的量。治疗有效量将随着被治疗的对象和疾病状况、受试者的重量和年龄、疾病状况的严重性、给药方式等而变化，其可以由本领域的普通技术人员容易地确定。
如本文所使用的，术语“立体异构体”是指具有相同的化学组成和连接性，但是其原子在空间具有不同取向的化合物，该取向不能通过单键旋转互换。“立体异构体”包括了“非对映异构体”和“对映异构体”。“非对映异构体”是指具有两个或多个手性中心且其分子并非彼此镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，如熔点、沸点、光谱特性和反应性。非对映异构体混合物可在高分辨率分析程序(诸如结晶、电泳和色谱法)下进行分离。“对映异构体”是指彼此为非重叠镜像化合物的两种立体异构体。
如本文所使用的，术语“互变异构体”指的是两种(或两种以上)化合物的共存，这些化合物之间的区别只在于一个(或一个以上)活动原子的位置和电子分布，例如酮-烯醇互变异构体。
如本文中使用的，术语“药学上可接受的盐”是指保留给定化合物的生物有效性和特性的盐，并且所述盐不是在生物学上或在其他方面不期望的。药学上可接受的盐可以是酸加成盐和/或碱加成盐。酸加成盐可以从无机酸和有机酸制得。从无机酸衍生的盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、碳酸盐、硫酸氢盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、碳酸氢盐等；从有机酸衍生的盐包括甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、丙酮酸盐、草酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、乳酸盐、烟酸盐、月桂基硫酸盐、萘磺酸盐、樟脑磺酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、双羟萘酸盐、三氟乙酸盐等。碱加成盐可以与无机碱或有机碱形成。从无机碱衍生的盐包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锂、钡、铝盐等；从有机碱衍生的盐包括与各种伯胺、仲胺、叔胺形成的盐，例如乙胺、二乙胺、正丙胺、异丙胺、二乙醇胺、葡甲胺、赖氨酸、哌嗪、哌啶、吗啉、氨丁三醇、胆碱等盐。
如本文所使用的，术语“药学上可接受的”表示该物质或组合物与包含制剂和/或用其处理的哺乳动物的其他成分必须化学和/或毒理学上兼容。
如本文所用，术语“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的缔合物或复合物。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。
如文本所用，术语“前药”是指在生理条件下容易经历化学变化以提供本发明的化合物的那些化合物。另外，可以在离体环境中通过化学或生化方法将前药转化为本发明的化合物。例如，当将前药与合适的酶或化学试剂一起置于透皮贴剂储库中时，可以将前药缓慢转化为本发明的化合物。
本文中给出的任何通式或结构，包括通式I或本文公开的任何通式，还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。这些形式的化合物也可以称为“同位素标记物”。同位素标记物具有本文所描绘的结构，不同之处在于一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子代替。可以掺入到本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，例如但不限于2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。本发明的各种同位素标记物，例如其中掺入了放射性同位素(例如3H、13C和14C)的那些。通过所属领域中熟知的手段，例如通过采用一个或多个氢已经被氘置换的起始材料来合成这类化合物。
化合物
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(I)所示的化合物：
或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，其中X、R1、R1’、R2、R2’、R3、R3’、Het、L、Ar、n如前文所述。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，其 中，
X选自S＝O、S(＝O)2；
R1选自H、C1-C6烷基；
R1’选自C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基；其中所述碳环基、芳基、杂芳基被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基取代；
R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)NRcRd；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基、卤素、羟基，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成C3-C6碳环基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C6烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
Het选自 5或6元氮杂芳基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
Ar选自5-10元杂芳基、C6-C10芳基；所述杂芳基、芳基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
条件是：当X为S＝O、Het为R1’为C3-C8碳环基时，L不为键。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(I)所示化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中
R1’选自环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、苯基、吡咯基、呋喃 基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基；上述基团被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基取代；
R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C20烷基、-C(＝O)NRcRd；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基、卤素、羟基，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成C3-C6碳环基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C6烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
Het选自 5或6元氮杂芳基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NRaC(＝O)-、-C(＝O)-N(Ra)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；
Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
条件是：当X为S＝O、Het为R1’为环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、或环己烷基时，L不为键。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，其中
R1’选自环丁烷基、苯基、吡啶基；上述基团被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素取代；
R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C20烷基、-C(＝O)NRcRd；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C3烷基、卤素，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成环丙烷基、环丁烷基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C3烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
Het选自 5或6元氮杂芳基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NRaC(＝O)-、-C(＝O)-N(Ra)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；
Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
条件是：当X为S＝O、Het为R1’为环丁烷基时，L不为键。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(II)所示的化合物：
或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
X选自S＝O、S(＝O)2；
R1选自H、C1-C6烷基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
条件是：当X为S＝O时，L不为键。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(III)所示化合物：
或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
X选自S＝O、S(＝O)2；
R1选自H、C1-C6烷基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(IV)所示化合物：
或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
X选自S＝O、S(＝O)2；
R1选自H、C1-C6烷基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
条件是：当X为S＝O时，L不为键。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(V)所示化合物：
或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
X选自S＝O、S(＝O)2；
R1选自H、C1-C6烷基；
R4选自羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)NRcRd；
Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C3烷基、卤素，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成环丙烷基、环丁烷基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C3烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
R5选自卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
Het选自 5或6元氮杂芳基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
p选自1、2或3；q选自1、2或3。
在一个实施方案中，本发明的化合物为式(V)所示化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
X选自S＝O、S(＝O)2；
R1选自H、C1-C6烷基；
R4选自羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基；
Ra、Rb各自独立地选自氢、卤素，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成环丙烷基、环丁烷基；
R5选自卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
Het选自 三氮唑基；
L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
Ar选自吡啶基、嘧啶基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
p选自1；q选自1。
在一个实施方案中，本发明的化合物包括但不限于下列化合物：

或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、药学上可接受的盐。
药物组合物和给药
本发明提供的药物组合物包含本发明的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体是本领域技术人员已知的，包括稀释剂、 润滑剂、崩解剂、粘合剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、助流剂、乳化剂、着色剂、调味剂、甜味剂等。根据药物的给药途径的不同，例如口服给药、胃肠外给药和直肠给药等，本发明的药物组合物可以以固体形式(包括但不限于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、粉剂、栓剂)或者液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂、乳剂、酊剂、糖浆剂)制成。当本发明的药物组合物为固体形式时，药学上可接受的载体通常包括以下中的一种或多种：a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素等；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、聚乙二醇等；c)粘合剂，例如硅铝酸镁、胶化淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等；d)崩解剂，例如淀粉、海藻酸、琼脂、玉米淀粉；e)稳定剂，例如抗氧化剂如抗坏血酸；f)助流剂，例如二氧化硅；g)调味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯；甜味剂，例如蔗糖、糖精。当本发明的药物组合物为液体形式时，药学上可接受的载体通常包括以下中的一种或多种：a)稀释剂，例如注射用水、生理盐水、林格氏溶液、聚乙二醇、甘油、丙二醇等；b)抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；c)缓冲剂，例如乙酸盐、磷酸盐等。
本发明化合物的有效剂量至少取决于所治疗病症的性质、程度、递送方法和药物剂型，并且将由临床医师最终确定。可以预期每天每千克体重约0.0001至约100mg；通常为每天每千克体重约0.01至约10mg；更典型地，每天每千克体重约0.01至约5mg；最典型的是每天每千克体重约0.05至约0.5mg。例如，约70kg体重的成年人的每日候选剂量将在1mg至1000mg的范围内，优选在5mg至500mg的范围内，并且可以采取单剂量或多剂量的形式给药。
适应症
本发明化合物对PDE4B具有极强的抑制活性，可用于预防和/或治疗与PDE4B相关的炎症性疾病，包括但不限于特应性皮炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、特发性肺纤维化、间质性肺病、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、接触性皮炎、银屑病、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、抑郁症、双极性抑郁症、躁狂症、焦虑、精神分裂症、阿尔兹海默症、脑卒中、慢性疼痛、肝纤维化、肾纤维化、和肾炎。
实施例
实施例1
步骤1 4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2)的合成
向100mL单口瓶中依次加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1,1.00g,3.23mmol)、5-氯-2-碘嘧啶(932mg，3.88mmol)、二噁烷(10mL)、H2O(2mL)和Na2CO3(1.02g，9.70mmol)，氮气置换3次，最后加入Pd(PPh3)4(186mg，0.16mmol)，90℃反应16h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)监测原料反应完全。向反应液中加入水(50mL)，混合物用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经柱层析(SiO2，V石油醚：V乙酸乙酯＝20：1)纯化得510mg白色固体2，收率53.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.62(s,2H,ArH),7.19(s,1H,CH),4.17(m,2H,CHCH2),3.63(m,2H,NCH2),2.68(m,2H,CCH2),1.49(s,9H,C(CH3)3).
步骤2 5-氯-2-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶盐酸盐(3)的合成
向50mL单口瓶中依次加入2(510mg，1.72mmol)、无水二氯甲烷(2mL)和HCl(4M二噁烷溶液,6mL)溶液。氮气保护，室温反应2h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)监测原料反应完全。反应液直接浓缩得到390mg白色固体3粗品，未经纯化直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.03(s,2H,NH,HCl),8.95(s,2H,ArH),7.16(s,1H,C＝CH),3.86(d,J＝4.4Hz,2H,CHCH2),3.38(m,2H,NHCH2),2.77(d,J＝2.1Hz,2H,CCH2).
步骤3(1-氨基环丁基)甲醇盐酸盐(5)的合成
向50mL Schlenk反应管中依次加入(1-(羟甲基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(4，3.00g，14.90mmol)和二氯甲烷(6mL)，搅拌溶解后在0℃下向反应体系中滴加氯化氢1,4-二噁烷溶液(4.0M，6mL)，加毕，氮气保护室温反应3h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)监测原料反应完全。减压浓缩反应液，将得到的粗品用乙酸乙酯打浆(5mL)，过滤，干燥后得到1.98g白色固体5，收率96.6％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.20(br,3H,NH2,HCl),5.47(t,J＝5.3Hz,1H,OH),3.55(d,J＝5.3Hz,2H,CH2OH),2.23-2.11(m,2H,CH2CH2CH2),2.05-1.96(m,2H,CH2CH2CH2),1.90-1.81(m,1H,H of CH2CH2CH2),1.79-1.71(m,1H,Hof CH2CH2CH2)；HRMS(ESI):m/z[M-HCl+H]+理论值C5H11NO:102.0919；实测值:102.0915.
步骤4(1-((2-氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)环丁基)甲醇(7)的合成
向50mL Schlenk中依次加入2,4-二氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶(6,1.37g，6.60mmol)、5(1.00g，7.27mmol)、乙腈(8mL)和三乙胺(3.34g，33.00mmol)，氮气保护76℃反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)监测反应结束，原料约剩余30％。减压浓缩反应液后经快速制备色谱纯化(20g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)得到1.08g白色固体7，收率60.0％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):4.67(s,1H,NH),3.90(s,3H,CH2OH),3.44-3.39(m,2H,SCH2),3.31-3.23(m,2H,SCH2CH2),2.41-2.32(m,2H, CH2CH2CH2),2.19-2.11(m,2H,CH2CH2CH2),2.03-1.94(m,1H,H of CH2CH2CH2),1.94-1.85(m,1H,H of CH2CH2CH2)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C11H14ClN3OS:272.0624；实测值:272.0604.
步骤5 2-氯-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-5-氧化物(8)的合成
向50mL Schlenk反应管中依次加入7(500mg，1.84mmol)、S-(-)-BINOL(53mg，0.184mmol)、二氯甲烷(3mL)、钛酸四异丙酯(26mg，0.092mmol)和水(33mg，1.84mmol)，加毕，氮气保护下室温搅拌1h，随后加入过氧化叔丁醇(262mg，2.03mmol)，加毕，氮气保护下室温反应2h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝15：1)监测原料反应完全。体系不经处理直接柱层析纯化(SiO2，V二氯甲烷：V甲醇＝15：1)得到340mg淡黄色固体8，收率64.2％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.61(s,1H,NH),4.90(t,J＝5.6Hz,1H,OH),3.75-3.65(m,2H,CH2OH),3.60-3.52(m,1H,H of SCH2),3.39-3.34(m,1H,H of SCH2),3.18-3.10(m,1H,H of SCH2CH2),3.06-2.99(m,1H,H of SCH2CH2),2.31-2.15(m,4H,CH2CH2CH2),1.83-1.69(m,2H,CH2CH2CH2)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C11H14ClN3O2S:288.0573；实测值：288.0554.
步骤6 2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-6,7-二氢噻吩[3,2-d]嘧啶-5-氧化物(实施例1)的制备
向50mL单口瓶中依次加入3(168mg,0.72mmol)、8(200mg,0.69mmol)、N,N-二异丙基乙胺(224mg,1.73mmol)、四氢呋喃(8mL)和水(2mL)，加毕，氮气置换三次，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全。向反应液加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经过厚制备板纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)得到104mg白色固体实施例1化合物，收率44.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.88(s,2H,ArH),7.37(s,1H,C＝CH),7.28(s,1H,NH),4.84(t,J＝5.7Hz,1H,OH),4.45(s,2H,CH2OH),3.96(t,J＝5.6Hz,2H,NCH2CH2),3.76-3.69(m,2H,NCH2CH),3.41(d,J＝8.5Hz,1H,H of SCH2),3.22-3.14(m,1H,H of SCH2),2.98-2.90(m,1H,H of SCH2CH2),2.89-2.82(m,1H,H of SCH2CH2),2.64(s,2H,NCH2CH2),2.35(m,2H,H of CH2CH2CH2),2.25-2.16(m,2H,H of CH2CH2CH2),1.78(d,J＝9.5Hz,2H,H of CH2CH2CH2)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ(ppm):175.32,162.09,158.12,156.22,128.79,58.97,48.94,29.47,14.41.；HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C20H23ClN6O2S:447.1370；实测值:447.1363
实施例2
步骤1 2-溴甲基-5-氯嘧啶(2)的合成
向50mL单口瓶中依次加入化合物1(1.0g，7.78mmol)和四氯化碳(20 mL)，搅拌下，加入NBS(1.52g，8.56mmol)和BPO(0.19g，0.78mmol)，加毕，氮气保护回流反应36h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)监测原料剩余30％。反应液冷却至室温，过滤，滤饼用二氯甲烷(10mL)洗涤，滤液浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)得到320mg白色固体中间体2，收率17.8％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.68(s,2H,ArH),4.58(s,2H,CH2).
步骤2 4-((5-氯嘧啶-2-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体2(0.35g，1.69mmol)，N-Boc-哌嗪(0.38g，2.03mmol)和二氯甲烷(20mL)，降温至0℃，加入三乙胺(0.21g，2.03mmol)，加毕，氮气保护下，室温反应3h。TLC(乙酸乙酯)监测反应结束。加水(1 5mL)淬灭反应，反应液用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(50mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)得到281mg白色固体中间体3，收率53.3％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.86(s,2H,ArH),3.70(s,2H,CH2),3.27-3.23(m,4H,哌嗪-H),2.41-2.39(m,4H,哌嗪-H),1.34(s,9H,C(CH3)3).
步骤3 1-((5-氯嘧啶-2-基)甲基)哌嗪三氟乙酸盐(4)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体3(0.28g，0.9mmol)和二氯甲烷(6mL)，降温至0℃，加入TFA(2mL)，加毕，氮气保护下，室温反应1h。TLC(乙酸乙酯)监测反应结束。浓缩得到190mg白色固体中间体4，收率99％。
步骤4 2-(4-((5-氯嘧啶-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶5-氧化物(实施例2)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体4(0.095g，0.45mmol)，实施例1中间体8(0.129g，0.45mmol)，DIPEA(0.174g，1.35mmol)，THF(4mL)和H2O(0.5mL)，加毕，氮气保护下，65℃下反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测反应结束。减压浓缩，加入THF(4mL)，打浆1h，过滤，滤饼烘干，得到100mg白色固体实施例2，收率47.9％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.68(s,2H,ArH),5.90(s,1H,NH),4.13(s,1H,OH),3.91-3.84(m,4H,Piperazine-H),3.84-3.82(m,4H,Piperazine-H),3.61-3.50(m,1H,H of CH2),3.41-3.32(m,1H,H of CH2),3.05-2.91(m,2H,CH2),2.58(t,J＝4.9Hz,4H,CH2,CH2),2.29-2.21(m,4H,CH2CH2),1.97-1.89(m,1H,H of CH2),1.87-1.82(m,1H,H of CH2).
13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):175.50,165.42,162.37,158.18,156.13,129.73,109.85,64.11,63.86,59.01,52.83,48.97,44.21,32.96,30.19,30.03,14.90.
MS(ESI):m/z[M+H]+理论值C20H26ClN7O2S:464.1635；实测值:464.1625.
实施例3
步骤1 4-(5-氯嘧啶-2-甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2)的合成
向100mL单口瓶中依次加入化合物1(500mg，3.15mmol)、DMF(10mL)、HATU(1.37g，3.6mmol)和DIPEA(0.84mL，4.8mmol)，氮气保护， 室温下搅拌0.5h后加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(447mg，2.4mmol)，室温反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。加水(30mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，柱层析纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝15：1)，得到370mg黄色固体中间体2，收率47.0％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.04(s,2H,ArH),3.65-3.61(m,2H,哌嗪-CH2),3.44-3.41(m,2H,哌嗪-CH2),3.29-3.25(m,2H,哌嗪-CH2),3.20-3.17(m,2H,哌嗪-CH2),1.40(s,9H,C(CH3)3).
步骤2(5-氯嘧啶-2-基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐(3)的合成
向50mL单口瓶中加入化合物2(320mg，0.98mmol)和1M HCl/二噁烷(6mL)溶液，氮气保护，室温下反应1h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。反应液直接减压浓缩干，加入乙酸乙酯(30mL)打浆过滤，得到150mg黄色固体3，收率58.2％。
1H NMR(400MHz,D2O)δ(ppm):8.88(s,2H,ArH),3.95(t,J＝5.6Hz,2H,哌嗪-CH2),3.66(t,J＝5.2Hz,2H,哌嗪-CH2),3.35(t,J＝5.6Hz,2H,哌嗪-CH2),3.23(t,J＝5.2Hz,2H,哌嗪-CH2).
步骤3(5-氯嘧啶-2-基)(4-(4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)甲酮(实施例3)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体3(150mg，0.57mmol)、实施例1中间体8(156mg，0.54mmol)、四氢呋喃(8mL)、DIPEA(0.24mL，1.35mmol)和水(2mL)，氮气保护，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原 料反应完全。向反应液中加入水(10mL)，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(4g，V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)，得到200mg粗品。粗品经四氢呋喃(10mL)打浆得170mg白色固体实施例3，收率65.9％
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.79(s,2H,ArH),6.29(s,1H,NH),4.07-3.93(m,3H,哌嗪-H),3.89-3.81(m,5H,哌嗪-H),3.78-3.72(m,1H,OH),3.62-3.53(m,1H,H of SOCH2),3.43-3.33(m,3H,1H of SOCH2,2H of SOCH2CH2),3.08-2.94(m,2H,CH2OH),2.37-2.24(m,2H,NHCCH2),2.23-2.14(m,2H,NHCCH2),1.93-1.81(m,2H,NHCCH2CH2).
13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ(ppm):175.50,164.52,162.37,159.99,158.19,156.84,131.29,110.54,64.08,59.06,49.05,46.32,44.60,43.83,41.56,33.03,30.21,30.05,14.92.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C20H24ClN7O3S:478.1428；实测值:478.1399.实施例4
步骤1 2-氯-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(2)的合成
向25mL单口瓶中依次加入实施例1中间体7(100mg，0.37mmol)、间氯过氧苯甲酸(85％，189mg，0.93mmol)和二氯甲烷(4mL)，加毕，混合物于室温下反应7h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)监测原料反应完全。向反应液中加入二氯甲烷(10mL)，稀释后，依次用饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(4g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)，得到79mg白色固体中间体2，收率70.3％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.53(s,1H,NH),4.99(t,J＝5.6Hz,1H,OH),3.67(d,J＝5.7Hz,2H,CH2OH),3.63(t,J＝6.9Hz,2H,SCH2),3.26-3.20(m,2H,SCH2CH2),2.40-2.30(m,2H,CH2CH2CH2),2.20-2.12(m,2H,CH2CH2CH2),1.86-1.69(m,2H,CH2CH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C11H14ClN3O3S:304.0522；实测值:304.0503.
步骤2 2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-4-((6-(羟甲基)双环[3.2.0]庚烷-6-基)氨基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(实施例4)的合成
向10mL Schlenk反应管中依次加入中间体2(150mg，0.494mmol)、5-氯-2-(哌啶-4-基)嘧啶(103mg，0.519mmol)、四氢呋喃(2mL)、水(0.5mL)和N,N-二异丙基乙胺(160mg，1.24mmol)，加毕，氮气保护下65℃反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：2)监测原料反应完全。反应体系过滤，滤饼用四氢呋喃洗涤(5mL)，干燥后得到167mg白色固体实施例4，收率72.7％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.62(s,2H,ArH),5.61(s,1H,NH),4.48-5.10(m,2H,OH and 1H of SCH2),3.90(d,J＝5.2Hz,2H,CH2OH),3.85(t,J＝5.4Hz,1H,H of SCH2),3.42(t,J＝7.0Hz,2H,SCH2CH2),3.22-3.14(m,1H,CH),3.14-3.04(m,4H,N(CH2)2),2.35-2.28(m,2H,CHCH2),2.28-2.20(m,2H,CHCH2),2.11-2.03(m,2H,CH2CH2CH2),2.02-1.94(m,1H,H of CH2CH2CH2),1.93-1.78(m,3H,CH2CH2CH2和1H of CH2CH2CH2).
13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):170.71,168.62,162.49,156.20,155.63,129.06,104.65,64.68,58.78,50.53,44.42,30.75,29.94,28.84,14.46.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C20H25ClN6O3S:465.1475；实测值:465.1457.
实施例5
步骤1 4-((2-甲氧基-2-氧代乙基)硫)丁酸甲酯(3)的合成
向500mL单口瓶中依次加入化合物2(13.36g，0.126mol)和甲醇(90mL)，室温搅拌0.5h后加入碘化钾(150mg，0.88mmol)和化合物1(20.00g，0.146mol)，65℃搅拌20h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)监测原料反应完全，反应液降至室温，过滤，收集滤液并浓缩，加入DCM(200mL)溶解，饱和食盐水(100mL×3)洗涤，干燥，过滤并浓缩得到26.00g浅黄色油状物中间体3，收率93.1％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):δ3.72(s,3H,OCH3),3.66(s,3H,OCH3),3.21(s,2H,COCH2S),2.67(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2),2.43(t,J＝7.2Hz,2H,COCH2),1.95-1.90(m,2H,COCH2SCH2CH2).
步骤2 3-氧代四氢-2H-噻喃-2-甲酸甲酯(4)的合成
向500mL单口瓶中依次加入甲醇钠(7.50g，0.139mol)、甲苯(260mL)和中间体3(26.00g，0.126mol)，在氮气氛围下105℃搅拌3h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)监测原料反应完全，反应液降至冰浴后加入浓盐酸(35mL)中，加入EA(150mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL×3)洗涤，干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(120g×2，V石油醚：V乙酸乙酯＝100：3)，得到15.10g浅黄色油状物中间体4，收率86.7％。
步骤3 2-(甲硫基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-醇(6)的合成
向250mL单口瓶中依次加入氢氧化钾(6.30g，0.113mol)、甲醇(85mL)、S-甲基异硫脲硫酸盐(5)(12.80g，0.046mol)和中间体4(12.00g，0.069mol)，在氮气氛围下室温搅拌16h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝15：1)监测原料反应完全，反应液倒入冰水(150mL)中，加入醋酸(20mL)，冰浴搅拌0.5h后过滤，收集滤饼，再经纯水(150mL)室温搅拌1h后过滤，滤饼用水(30mL×2)洗涤，收集滤饼并干燥得到11.20g白色固体中间体6，收率76.2％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):2.91-2.87(m,2H,SCH2),2.61(t,J＝6.3Hz,2H,ArCH2),2.45(s,3H,SCH3),2.04-1.99(m,2H,SCH2CH2).
步骤4 7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-2,4-二醇(7)的合成
向250mL单口瓶中依次加入中间体6(8.00g，37.41mmol)、水(30mL)和醋酸(60mL)，在氮气氛围下110℃搅拌3天。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全，反应液冰浴下降温至固体析出，过滤，滤饼用水(30mL×2)洗涤，收集滤饼并干燥得到5.60g白色固体中间体7，收率82.3％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.16(s,1H,OH),10.82(s,1H,OH),2.93-2.74(m,2H,SCH2),2.46-2.35(m,2H,ArCH2),1.99-1.96(m,2H,SCH2CH2).
步骤5 2,4-二氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶(8)的合成
向250mL单口瓶中依次加入中间体7(2.60g，14.20mmol)、三氯氧磷(6mL)和N,N-二甲基苯胺(172mg，1.42mmol)，在氮气氛围下110℃搅拌3h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝15：1)监测原料反应完全，降至室温，将反应液滴加至冰水(100mL)中淬灭，加入DCM(100mL×3)萃取，加饱和食盐水(50mL×3)洗涤，干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)，得到2.50g白色固体中间体8，收率80.6％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):3.15-3.11(m,2H,SCH2),2.90(t,J＝6.2Hz,2H,ArCH2),2.12-2.05(m,2H,SCH2CH2).
步骤6(1-((2-氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)环丁基)甲醇(9)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体8(584mg，2.64mmol)、乙腈(8mL)、实施例1中间体5(400mg，2.91mmol)和三乙胺(1.34g，16.52mmol)，在氮气氛围下75℃搅拌16h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)监测原料反应完全，减压浓缩并经快速制备色谱纯化(24g，V石油醚：V乙酸乙酯＝3：2)，得到420mg白色固体中间体9，收率55.9％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):6.16(s,1H,NH),4.86(t,J＝5.6Hz,1H,OH),3.65(d,J＝5.7Hz,2H,HOCH2),3.09-3.04(m,2H,SCH2),2.67(t,J＝6.3Hz,2H,ArCH2),2.31-2.26(m,2H,SCH2CH2),2.15-2.05(m,4H,CH2CH2),1.84-1.68(m,2H,CH2).
步骤7 2-氯-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(10)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体9(300mg，1.05mmol)、DCM(15mL)和85％m-CPBA(532mg，2.62mmol)，在氮气氛围下室温搅拌4h。TLC(V石 油醚：V乙酸乙酯＝1：1)监测原料反应完全，加入硫代硫酸钠水溶液(30mL)淬灭，DCM(40mL×3)萃取，合并有机相，依次用饱和NaHCO3溶液(20mL×2)、饱和食盐水(30mL)洗涤，干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)，得到320mg白色固体中间体10，收率90.9％。
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C12H16ClN3O3S:3187.0684；实测值:318.0663.
步骤8 2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(实施例5)的合成
向25mL单口瓶中依次加入化合物10(315mg，0.99mmol)、THF(4mL)、水(0.5mL)、DIPEA(320mg，2.48mmol)和5-氯-2-(哌啶-4-基)嘧啶(236mg，1.19mmol)。氮气氛围下65℃室温过夜。TLC(V二氯甲烷：V乙酸乙酯＝1：1)监测原料反应完全，加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V二氯甲烷： V甲醇＝50：1)，得到粗品，粗品用混合溶剂(DCM:MeOH＝10:1，15mL)打浆过夜，过滤，滤饼用水(10mL)洗涤，收集滤饼并干燥得到410mg白色固体实施例5，收率90.5％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.61(s,2H,ArH),6.81(s,1H,NH),4.74(br,2H,SO2CH2),4.12(t,J＝5.2Hz,1H,OH),3.88(d,J＝5.1Hz,2H,HOCH2),3.34-3.26(m,2H,ArCH2),3.19-3.11(m,1H,CH),3.07-2.96(m,2H,NCH2),2.76(t,J＝6.5Hz,2H,NCH2),2.43-2.40(m,2H,SCH2CH2),2.34-2.31(m,2H,CHCH2),2.25-2.17(m,2H,CHCH2),2.09-2.01(m,2H,CCH2),1.98-1.74(m,4H,CCH2CH2).
13C NMR(151MHz,CDCl3)δ(ppm):170.77,166.01,159.45,157.34,156.20,129.05,105.62,64.28,58.80,51.61,44.47,43.88,31.92,30.74,30.08,18.95,14.60.
实施例6
步骤1 1-(叔丁基)4-(4-硝基苯基)哌啶-1,4-二甲酸酯(2)的合成
向250mL单口瓶中依次加入化合物1(2.00g，8.72mmol)、对硝基苯酚(1.21g，8.72mmol)和乙腈(90mL)，搅拌溶解再后加入DCC(1.80g，8.72mmol)，加毕，氮气保护室温反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)监测原料反应完全。过滤反应体系，滤液减压浓缩后经快速制备色谱纯化(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)得到1.65g白色固体中间体2，收率54.0％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.37-8.22(m,2H,ArH),7.32-7.26(m,2H,ArH),4.12(s,2H,NCH2),3.03-2.86(m,2H,NCH2),2.83-2.71(m,1H,CH),2.06(d,J＝13.0Hz,2H,CHCH2),1.85-1.71(m,2H,CHCH2),1.48(s,9H,(CH3)3).
步骤2 4-((3,5-二氯吡啶-4-基)氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体2(1.00g，2.85mmol)、4-氨基-3,5-二氯吡啶(930mg，5.70mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，随后在0℃下向反应体系中分两批加入氢化钠(60％，分散于矿物油中，205mg，5.13mmol)，加毕，氮气保护下室温反应4h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)监测原料反应完全。向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)得到950mg白色固体中间体3，收率89.0％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.53(d,J＝1.4Hz,2H,ArH),4.17(s,2H,NCH2),2.93 -2.79(m,2H,NCH2),2.62-2.51(m,1H,CH),1.98(d,J＝13.2Hz,2H,CHCH2),1.87-1.72(m,2H,CHCH2),1.47(s,9H,(CH3)3).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C16H21Cl2N3O3:374.1038；实测值:373.0960.
步骤3 N-(3,5-二氯吡啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐(4)的合成
向50mL Schlenk反应管中依次加入中间体3(950mg，2.54mmol)和二氯甲烷(3mL)，搅拌溶解后在0℃下向反应体系中滴加氯化氢1,4-二氧六环溶液(4.0M，3mL)，氮气保护室温反应2h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝2：1)监测原料反应完全。过滤反应体系，滤饼用乙酸乙酯洗涤(5mL)，干燥后得到766mg白色固体中间体4，收率97.0％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.48(s,1H,HCl),9.24(s,1H,NH),8.85(s,1H,NH),8.69(s,2H,ArH),3.29(d,J＝13.5Hz,2H,NCH2),3.00-2.89(m,2H,NCH2),2.87-2.77(m,1H,CH),2.09-1.97(m,2H,CHCH2),1.95-1.79(m,2H,CHCH2).
步骤4 N-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1-(4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺(实施例6)的合成
向10mL Schlenk中依次加入中间体4(240mg，0.77mmol)、实施例1中间体8(202mg，0.70mmol)、四氢呋喃(3mL)、水(0.75mL)和N,N-二异丙基乙胺(272mg，2.10mmol)，加毕，氮气保护65℃反应过夜。TLC(V二氯 甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全。过滤反应体系，滤饼用四氢呋喃洗涤(10mL)，干燥后得到162mg白色固体实施例6，收率44.0％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.22(s,1H,NH),8.67(s,2H,ArH),7.36(s,1H,NH),4.84(t,J＝5.7Hz,1H,OH),4.66(d,J＝13.0Hz,2H,CH2OH),3.79-3.68(m,2H,SCH2),3.47-3.37(m,1H,H of SCH2CH2),3.26-3.16(m,1H,H of SCH2CH2),3.08-2.98(m,2H,NCH2),2.97-2.77(m,3H,NCH2 and CH),2.41-2.25(m,2H,CHCH2),2.23-2.11(m,2H,CHCH2),1.89(d,J＝12.9Hz,2H,CH2CH2CH2),1.83-1.69(m,2H,CH2CH2CH2),1.64-1.49(m,2H,CH2CH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C22H26Cl2N3O3S:525.124；实测值:525.121.
实施例7
步骤1 4-(2-羟基-5-甲基苯甲酰胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3)的合成
向100mL单口瓶中依次加入化合物1(1.00g，6.57mmol)、化合物2(1.58g，7.88mmol)、HATU(3.00g，7.88mmol)、DIPEA(1.70g，13.17mmol)和二氯甲烷(20mL)，氮气保护下，室温反应1h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝2：1)监测反应结束后，水(20mL)加入反应液，二氯甲烷(50mL×3)萃取，收集有机相。饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)得到350mg白色固体中间体3，收率15.9％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.34(s,1H,OH),8.53(d,J＝7.8Hz,1H,ArH),7.68(d,J＝2.1Hz,1H,HN),7.21(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2.1Hz,1H,ArH),6.78(d,J＝8.3Hz,1H,ArH),4.07-3.91(m,3H,CH2,CH),2.94-2.74(m,2H,CH2),2.24(s,3H,ArCH3),1.83-1.76(m,2H,CH2),1.41(s,9H,C(CH3)3).
步骤2 2-羟基-5-甲基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺三氟乙酸盐(4)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体3(0.2g，0.6mmol)和二氯甲烷(3mL)，降温至0℃，缓慢滴加TFA(3mL)，加毕，室温反应1h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝2：1)监测反应结束后，浓缩得到206mg黄色油状物中间体4，收率99％，直接用于下一步。
步骤3 2-羟基-N-(1-(4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-5-甲基苯甲酰胺(实施例7)的合成
向50mL Schlenk反应管中依次加入中间体4(0.10g，0.30mmol)、实施例1中间体8(0.086g，0.3mmol)、DIPEA(0.116g，0.90mmol)、THF(4mL)和H2O(1mL)，氮气保护下，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测反应结束后，浓缩并经制备板纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)得到105mg白色固体实施例7，收率71.4％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.40(s,1H,ArOH),8.51(d,J＝7.9Hz,1H,NH),7.67(d,J＝2.4Hz,1H,NH),7.40(s,1H,ArH),7.20(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2.1Hz,1H,ArH),6.78(d,J＝8.3Hz,1H,ArH),4.85(t,J＝5.6Hz,1H,OH),4.69-4.56(m,2H,CH2),4.24-4.12(m,1H,CH),3.78-3.68(m,2H,CH2),3.51-3.39(m,1H,H of CH2),3.26-3.16(m,1H,H of CH2),2.98-2.84(m,2H,CH2),2.41-2.26(m,2H,CH2),2.22(s,3H,CH3),2.20-2.12(m,2H,CH2),1.87-1.71(m,4H,CH2CH2),1.56-1.43(m,2H,CH2).
13C NMR(101MHz,MeOD)δ(ppm):175.89,168.94,162.44,158.13,157.56,134.11,127.97,127.52,116.86,115.25,107.24,64.21,58.72,43.14,32.09,31.24,31.20,29.85,29.72,19.14,14.45.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C24H31N5O4S:486.2175；实测值:486.2161.
实施例8
步骤1 6-(5-氯嘧啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(2)的合成
向50mL单口瓶中依次加入化合物1(700mg，3.53mmol)、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(848mg，3.53mmol)、四氢呋喃(20mL)和三乙胺(429mg，4.24mmol)，加毕，室温反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝4：1)监测原料反应完全。反应液直接浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V石油醚：V乙酸乙 酯＝4：1)得到825mg白色固体中间体2，收率75.2％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.40(s,2H,ArH),4.16(s,4H,N(CH2)2),4.02(s,4H,N(CH2)2),1.37(s,9H,C(CH3)3).
步骤2 2-(5-氯嘧啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷(3)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体2(500mg，1.61mmol)、四氢呋喃(8mL)和三氟乙酸(2mL)，加毕，室温反应2h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全。反应液浓缩，残渣加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)，加毕，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩得到320mg白色固体中间体3，未经纯化直接用于下一步。
步骤3 2-(6-(5-氯嘧啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶5-氧化物(实施例8)的合成
向50mL单口瓶中依次加入实施例1中间体8(228mg，0.79mmol)、中间体3(200mg，0.95mmol)、N,N-二异丙基乙胺(306mg，2.37mmol)和四氢呋喃(10mL)加毕，氮气保护80℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全。反应液直接浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)得到210mg白色固体(实施例8)，收率44.1％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.41(s,2H,ArH),7.36(s,1H,NH),4.85(t,J＝5.6Hz,1H,OH),4.23(s,4H,N(CH2)2),4.19(s,4H,N(CH2)2),3.70(d,J＝5.7Hz,2H,SCH2),3.45-3.34(m,1H,H of CH2OH),3.22-3.14(m,1H,H of CH2OH),2.97-2.82(m,2H,SCH2CH2),2.42-2.28(m,2H,H of CH2CH2CH2),2.17-2.06(m,2H,H of CH2CH2CH2),1.85-1.69(m,2H,H of CH2CH2CH2).
13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ(ppm):175.21,163.44,161.08,158.30,156.47,118.79,110.66,64.63,60.60,60.12,59.10,48.97,33.68,32.77,30.32,30.15,14.77.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C20H24ClN7O2S:462.1479；实测值:462.1474.
实施例9
步骤1 2-氯-N-(3,5-二氯吡啶-4-基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-胺(2)的合成
向100mL Schlenk反应管中依次加入化合物1(500mg，2.27mmol)、4-氨基-3,5-二氯吡啶(740mg，4.54mmol)、Pd2(dba)3(211mg，0.23mmol)、BINAP(143mg，0.23mmol)、叔丁醇钾(509mg，4.54mmol)和无水甲苯(20mL)，氮气保护下，100℃反应15h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3:1)监测反应结束，反应液冷却至室温。过滤、浓缩并经快速制备色谱(20g，V石油醚：V乙 酸乙酯＝4:1)纯化得到130mg黄色固体中间体2，收率16.5％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.54(s,2H,ArH),6.57(s,1H,NH),3.19-3.15(m,2H,SCH2),2.97-2.92(m,2H,CH2CH2CH2),2.35-2.29(m,2H,CH2CH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C12H9Cl3N4S:346.9692；实测值:346.9670.
步骤2 2-氯-4-((3,5-二氯吡啶-4-基)氨基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(3)的合成
向100mL单口瓶中依次加入中间体2(600mg，1.73mmol)、m-CPBA(85％，879mg，4.33mmol)和二氯甲烷(20mL)，N2保护下，室温搅拌5h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3:1)监测显示反应结束。加饱和硫代硫酸钠水溶液(100mL)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相再用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL×3)洗，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝9:1～1:1)纯化得110mg白色固体中间体3，收率16.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.65(s,1H,NH),8.59(s,2H,ArH),3.54-3.42(m,2H,SO2CH2),3.13-3.04(m,2H,CH2CH2CH2),2.66-2.53(m,2H,CH2CH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M-H]-理论值C12H9Cl3N4O2S:376.9434；实测值:376.9456.
步骤3 2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-4-((3,5-二氯吡啶-4-基)氨基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(实施例9)的合成
向100mL单口瓶中依次加入中间体3(110mg，0.29mmol)、5-氯-2-(哌啶 -4-基)嘧啶(57mg，0.29mmol)、四氢呋喃(8mL)、水(2mL)和DIPEA(112mg，0.87mmol)，氮气保护下，65℃反应3h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝50:1)监测反应结束，浓缩并经快速制备色谱(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1:1)纯化得到93mg白色固体实施例9，收率59.2％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.61(s,2H,ArH),8.58(s,1H,NH),8.51(s,2H,ArH),4.87(br,1H,H of SO2CH2),4.39(br,1H,H of SO2CH2),3.45-3.34(m,2H,NCH2),3.16-3.07(m,1H,CH),3.05-2.83(m,4H,NCH2,CH2CH2CH2),2.54-2.43(m,2H,CH2CH2CH2),2.03-1.87(m,2H,CHCH2),1.82-1.69(m,2H,CHCH2).
13C NMR(101MHz,CDCl3)δ(ppm):170.43,166.25,159.21,155.62,155.54,148.02,141.17,129.14,128.73,106.06,51.77,44.64,43.67,31.78,30.66,18.72.
HRMS(ESI):m/z[M+Na]+理论值C21H20Cl3N7O2S:562.0363；实测值:562.0380.
实施例11
步骤1 2-(4-((2-氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(2)的合成
向100mL单口瓶中依次加入实施例5中间体8(150mg，0.66mmol)、化合物1(0.10mg，0.55mmol)、Xantphos(48mg，0.083mmol)、Na2CO3(120mg，1.10mmol)和1，4–二噁烷(2mL)，充分置换氮气，加入Pd2(dba)3(25mg，0.028mmol)，加毕，继续置换氮气三次。于70℃下，反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝2：1)监测反应结束后，乙酸乙酯(10mL)加入反应液，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)得到200mg白色固体中间体2，收率41.3％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.71(s,1H,NH),7.46(dd,J1＝12.2Hz,J2＝2.1Hz,1H,ArH),7.37-7.33(m,1H,ArH),7.29(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),3.70(s,2H,ArCH2),3.63(s,3H,OCH3),3.17-3.12(m,2H,CH2),2.79(t,J＝6.4Hz,2H,CH2),2.17-2.10(m,2H,CH2).
步骤2 2-(4-(((2-氯-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(3)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体2(280mg，0.76mmol)和DCM(10mL)，室温下，分两批加入m-CPBA(85％，390mg，1.90mmol)，加毕，氮气保护下，室温反应2.5h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)监测反应结束后，饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)淬灭反应液，DCM(30mL×3)萃取，收集有机相。依次用饱和碳酸氢钠溶液(30mL×3)和饱和食盐水(30mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)得到202mg白色固体中间体3，收率72.4％。
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C16H15ClFN3O4S:400.0530；理论值:400.0534.
步骤3 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(4)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体3(210mg，0.53mmol)、5-氯-2-(哌啶-4-基)嘧啶(114mg，0.58mmol)、DIPEA(205g,1.59mmol)、THF(4mL)和H2O(1mL)，氮气保护下，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝30：1)监测反应结束，浓缩，四氢呋喃(1mL)打浆得到130mg白色固体中间体4，收率87.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.87(s,2H,ArH),8.68(s,1H,NH),7.61(dd,J1＝12.3Hz,J2＝2.0Hz,1H,ArH),7.31(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.26-7.22(m,1H,ArH),4.80-4.51(m,2H,CH2),3.70(s,2H,ArCH2),3.62(s,3H,OCH3),3.59-3.55(m,2H,CH2),3.23-3.12(m,3H,CH2CH2),2.82(t,J＝6.4Hz,2H,CH2),2.31-2.26(m,2H,CH2),2.05-2.00(m,2H,CH2),1.75-1.64(m,2H,CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C25H26ClFN6O4S:561.1487；实测值:561.1479.
步骤4 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸(实施例11)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体4(150mg，0.28mmol)、乙醇(1mL)、四氢呋喃(1mL)和水(0.5mL)，N2保护下，室温反应2h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝30：1)监测反应结束，1M盐酸调节溶液pH至7，浓缩。加入H2O(2mL)，用1M盐酸调节溶液pH至5，过滤，滤饼烘干，得到132mg白色固体实施例11，收率90.7％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.47(s,1H,COOH),8.87(s,2H,ArH),8.67(s,1H,NH),7.59(dd,J1＝12.2Hz,J2＝2.1Hz,1H,ArH),7.30(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.24-7.20(m,1H,ArH),4.76-4.48(m,2H,CH2),3.59-3.54(m,4H,CH2,CH2),3.24-3.12(m,3H,CH2CH2),2.82(t,J＝6.4Hz,2H,CH2),2.32-2.25(m,2H,CH2),2.06-2.00(m,2H,CH2),1.78-1.63(m,2H,CH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):172.33,170.55,167.29,160.75(d,JC- F＝243.4Hz),156.23,156.14,138.91(d,JC-F＝11.1Hz),132.31(d,JC-F＝6.1Hz),129.01,117.78(d,JC-F＝17.2Hz),117.17(d,JC-F＝3.0Hz),108.48(d,JC-F＝27.3Hz),106.03,51.36,44.11,43.91,34.30,31.92,30.63,18.77.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C24H24ClFN6O4S:547.1331；实测值:547.1300.
实施例12
步骤1 4-叠氮-3,5-二氯吡啶(2)的合成
向25mL单口瓶中依次加入化合物1(500mg，2.7mmol)、DMSO(5mL)和叠氮钠(356mg，5.4mmol)，氮气保护，30℃反应36h。TLC(V石油醚：V乙 酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全，冷却，加水(15mL)淬灭反应，固体析出，过滤干燥，得到450mg蓝白色固体中间体2，收率86.9％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.40(s,2H,ArH).
步骤2 4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-2-((三甲基硅基)乙炔基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(3)的合成
向100mL单口瓶中依次加入实施例5中间体10(600mg，1.89mmol)、乙腈(30mL)、三甲基乙炔基硅(1.11g，11.3mmol)、碘化亚铜(54mg，0.28mmol)、三乙胺(0.8mL，5.66mmol)和四(三苯基膦)钯(327mg，0.28mmol)，氮气保护，80℃反应2h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)监测原料反应完全，冷却，直接浓缩，柱层析纯化(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)，得到520mg黄色固体中间体3，收率72.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):6.93(s,1H,NH),5.02(t,J＝5.6Hz,1H,OH),3.66(d,J＝5.6Hz,2H,CH2OH),3.63-3.56(m,2H,SO2CH2),2.85(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2),2.33-2.23(m,4H,SO2CH2CH2CH2,环丁烷-CH2),2.17-2.09(m,2H,环丁烷-CH2),1.92-1.82(m,1H,环丁烷-CH2),1.80-1.72(m,1H,环丁烷-CH2),0.24(s,9H,(CH3)3).
步骤3 2-乙炔基-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(4)的合成
向100mL单口瓶中依次加入中间体3(520mg，1.37mml)、甲醇(15mL)和四氢呋喃(15mL)，冰水浴下滴加氢氧化锂一水合物(58mg，1.37)的水溶液(15mL)，加毕，室温反应30min。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：2)监测原料反应完全，加水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：2)，得到390mg黄色固体中间体4，收率92.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):6.94(s,1H,NH),5.01(t,J＝5.6Hz,1H,OH),4.31(s,1H,CH),3.67(d,J＝5.2Hz,2H,CH2OH),3.64-3.56(m,2H,SO2CH2),2.85(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2),2.32-2.24(m,4H,SO2CH2CH2CH2,环丁烷-CH2),2.17-2.09(m,2H,环丁烷-CH2),1.93-1.82(m,1H,环丁烷-CH2),1.80-1.73(m,1H,环丁烷-CH2).
步骤4 2-(1-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶5,5-二氧化物(实施例12)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体2(231mg，1.22mmol)、4(250mg，0.81mmol)、叔丁醇(8mL)、水(2mL)、无水硫酸铜(20mg，0.08mmol)和抗坏血酸钠(32mg，0.16mmol)，氮气保护，60℃反应过夜。TLC(V石油醚： V乙酸乙酯＝1：2)监测原料反应完全，冷却至室温，加水(20mL)稀释，二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)，得到160mg白色固体实施例12，收率39.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.19(s,1H,ArH),9.03(s,2H,ArH),7.01(s,1H,NH),5.03(s,1H,OH),3.77(d,J＝5.6Hz,2H,CH2OH),3.67-3.60(m,2H,SO2CH2),2.98(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2),2.46-2.31(m,4H,SO2CH2CH2CH2,环丁烷-CH2),2.26-2.18(m,2H,环丁烷-CH2),2.03-1.92(m,1H,环丁烷-CH2),1.85-1.73(m,1H,环丁烷-CH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):165.66,157.56,156.74,149.58,146.84,139.78,129.89,129.67,114.37,64.36,59.33,55.38,51.01,31.59,30.21,18.79,14.45.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C19H19Cl2N7O3S:496.0725；实测值496.0711.
实施例13
步骤1 5-(((三氟甲基)磺酰)氧基)-2-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-2-甲酸叔丁酯(2)的合成
向50mL单口瓶中依次加入化合物1(1.30g，5.77mmol)和四氢呋喃(40mL)，氮气保护，-78℃下滴加LiHMDS(11.5mL，11.5mmol，1M in THF)，保温30min，再滴加2-[N,正双(三氟甲烷烷磺酰)氨基]-5-氯吡啶(3.40g，8.66mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，加毕，缓慢升至室温反应过夜。TLC(V石油 醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全，加水(30mL)淬灭反应，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(V石油醚：V乙酸乙酯＝20：1)，得到1.96g黄色油状物中间体2，收率95.0％。
步骤2 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2基)-2-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-2- 甲酸叔丁酯(3)的合成
向100mL单口瓶中依次加入中间体2(2.30g，6.44mmol)、1,4-二噁烷(45mL)、联硼酸频那醇酯(1.96g，7.72mmol)、乙酸钾(1.90g，19.3mmol)和Pd(dppf)Cl2(470mg，0.64mmol)，氮气保护，60℃反应3h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全，冷却，加水(30mL)淬灭反应，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到2.70g黑色油状物中间体3，按80％纯度直接用于下一步。
步骤3 5-(5-氯嘧啶-2-基)-2-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-2-甲酸叔丁酯(4)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体3(2.70g，6.44mmol，80％wt)、1,4-二噁烷/水(40mL/5mL)、5-氯-2-碘嘧啶(1.86g，7.72mmol)、碳酸钠(2.05g，19.3mmol)和四(三苯基膦)钯(675mg，0.64mmol)，氮气保护，90℃反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全，冷却，加水(30mL)淬灭反应，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)，得到1.40g黄色油状物中间体4，两步收率67.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.64(s,2H,ArH),7.60-7.52(m,1H,ArH),5.00-4.78(br,1H,NCH),3.88-3.80(m,1H,NCH2CH),3.39-3.34(m,1H,H of NCH2),3.12-3.02(m,1H,H of NCH2),2.10-2.04(m,1H,H of CH2CH2),1.82-1.74(m,1H,Hof CH2CH2),1.48-1.46(m,2H,H of CH2CH2),1.45-1.40(m,9H,(CH3)3).
步骤4 5-(5-氯嘧啶-2-基)-2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸叔丁酯(5)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体4(0.90g，2.80mmol)、乙酸乙酯(30mL)和二氧化铂(90mg)，在氢气(15psi)氛围下室温反应过夜。TLC(V石油 醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全，冷却，经硅藻土过滤，浓缩，柱层析纯化(V石油醚：V乙酸乙酯＝15：1)，得到390g白色固体中间体5，收率43.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.66-8.58(m,2H,ArH),4.19(s,0.5H,NCH),4.06(s,0.5H,NCH),3.38-3.23(m,2H,NCH2),3.24-3.15(m,1H,NCH2CH),2.64-2.56(m,1H,CH),2.41-2.32(m,1H,H of CH2CH2),2.14-1.90(m,2H,CH2),1.87-1.66(m,3H,H of CH2CH2),1.45(d,J＝11.2Hz,9H,(CH3)3).
步骤5 5-(5-氯嘧啶-2-基)-2-氮杂双环[2.2.2]辛烷盐酸盐(6)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体5(200mg，0.62mmol)和4N HCl/EA(5mL)，氮气保护，室温反应1h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全，直接浓缩，得到137g白色固体中间体6，未经纯化直接用于下一步。
步骤6 2-(5-(5-氯嘧啶-2-基)-2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)-4-((1-(羟甲基)环丁基)氨基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶5-氧化物(实施例13)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体6(137mg，0.61mmol)、实施例1中间体8(177mg，0.61mmol)、四氢呋喃/水(6mL/1.5mL)和DIPEA(238mg，1.84mmol)，氮气保护，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全，冷却，加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)纯化，再经制备板(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)纯化，得到175mg白色固体实施例13，两步收率59.7％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.95-8.80(m,2H,ArH),7.19(s,1H,NH),4.84-4.82(m,1H,OH),4.79-4.69(m,1H,NCH),3.72-3.71(m,1H,NCH2CH),3.66-3.61(m,1H,CH),3.42-3.32(m,4H,CH2OH,NCH2CH),3.29-3.09(m,2H,SOCH2CH2),2.94-2.79(m,2H,SOCH2CH2),2.41-2.22(m,3H,氮杂双环-辛烷-CH2),2.17-2.00(m,3H,氮杂双环-辛烷-CH2),1.90-1.63(m,6H,环丁烷-CH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):175.42,175.00,170.35,161.48,158.17,157.81,155.92,128.80,109.55,109.09,64.29,58.90,48.92,46.18,43.77,43.03,42.52,32.78,31.94,31.03,30.13,25.59,14.85.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C22H27ClN6O2S:475.1683；实测值475.1696
实施例14
步骤1 2-(4-((2-氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(3)的合成
向500mL单口瓶中依次加入化合物1(6.90g，33.3mmol)、2(6.10g，33.3mmol)、1，4-二噁烷(130mL)、Pd2(dba)3(1.14g，1.25mmol)、Xantphos(1.45g，2.50mmol)和碳酸钠(7.06g，66.6mmol)，氮气保护，75℃反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)监测原料反应完全，冷却，过滤，浓缩，经柱层析纯化(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)，得到6.50g白色固体中间体3，收率55.1％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.29(s,1H,NH),7.52(dd,J1＝12.4Hz,J2＝2.0Hz,1H,ArH),7.36(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2.0Hz,1H,ArH),7.29(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),3.69(s,2H,CH2COOCH3),3.63(s,3H,COOCH3),3.46-3.39(m,2H,SCH2),3.25(t,J＝8.4Hz,2H,SCH2CH2).
步骤2 2-(4-((2-氯-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(4)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体3(2.00g，5.6mmol)、二氯甲烷(15mL)、S-(-)-BINOL(160mg，0.56mmol)、钛酸四异丙酯(80mg，0.28mmol)和水(100mg，5.6mmol)，氮气保护，室温反应1h，再滴加70％wt过氧叔丁醇(800mg，6.1mmol)，加毕，继续反应2h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全，湿法上样，经柱层析纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)，得到1.85g黄色固体中间体4，收率88.4％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.56(s,1H,NH),7.55(dd,J1＝12.0Hz, J2＝2.0Hz,1H,ArH),7.44-7.33(m,2H,ArH),3.73(s,2H,CH2COOCH3),3.72-3.65(m,1H,H of SOCH2),3.64(s,3H,COOCH3),3.49-3.42(m,1H,H of SOCH2),3.30-3.23(m,1H,H of SOCH2CH2),3.17-3.11(m,1H,H of SOCH2CH2).
步骤3 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(5)的合成
向250mL单口瓶中依次加入中间体4(2.00g，5.4mmol)、实施例1中间体3(1.32g，5.7mmol)、四氢呋喃/水(40mL/10mL)和DIPEA(2.9mL，16.3mmol)，氮气保护，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝15：1)监测原料反应完全，冷却，浓缩，柱层析纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)，再经两次打浆(30mL×2，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1，V乙酸乙酯：V二氯甲烷＝5：1)纯化，得到930mg白色固体中间体5，收率32.5％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.72(s,1H,NH),8.90(s,2H,ArH),7.67(d,J＝10.4Hz,1H,ArH),7.56(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.35-7.28(m,2H,ArH和C＝CH),4.50(br,2H,NCH2CH),4.01(br,2H,NCH2CH2),3.71(s,2H,CH2COOCH3),3.64(s,3H,COOCH3),3.59-3.51(m,1H,H of SOCH2),3.30-3.26(m,1H,H of SOCH2),3.12-3.06(m,1H,H of SOCH2CH2),3.03-2.96(m,1H,H of SOCH2CH2),2.70(br,2H,NCH2CH2).
步骤4 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸(实施例14)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体5(450mg，0.85mmol)、乙酸(4.5mL)和37％浓盐酸(1.5mL)，氮气保护，60℃反应4h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全，冷却，直接浓缩，加水(20mL)，固体析出，过滤，再经打浆(15mL，V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)纯化，得到250mg白色固体实施例14，收率57.0％.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.43(s,1H,COOH),9.71(s,1H,NH),8.90(s,2H,ArH),7.65(d,J＝10.4Hz,1H,ArH),7.54(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.33-7.28(m,2H,ArH and C＝CH),4.50(br,2H,NCH2CH),4.02(br,2H,NCH2CH2),3.59(s,2H,CH2COOH),3.59-3.51(m,1H,H of SOCH2),3.30-3.26(m,1H,H of SOCH2),3.13-3.06(m,1H,H of SOCH2CH2),3.02-2.96(m,1H,H of SOCH2CH2),2.70(br,2H,NCH2CH2).
实施例15
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(2)的合成
向25mL单口瓶中依次加入实施例14中间体4(307mg，0.83mmol)、THF(8mL)、H2O(2mL)、5-氯-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(1，180mg，0.90mmol)和DIPEA(322mg，2.49mmol)，加毕，氮气保护，65℃过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲 醇＝15：1)监测原料反应完全，反应液浓缩，并经快速制备色谱(12g，V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)纯化，得到395mg白色固体中间体2，收率90.2％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.73(s,1H,NH),8.44(s,2H,ArH),7.59(d,J＝12.8Hz,1H,ArH),7.51(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.30(t,J＝8.8Hz,1H,ArH),3.91-3.76(m,8H,N(CH2CH2)2),3.69(s,2H,CH2COOCH3),3.63(s,3H,COOCH3),3.57-3.48(m,1H,H of SOCH2),3.27-3.25(m,1H,H of SOCH2),3.11-3.03(m,1H,Hof SOCH2CH2),3.01-2.95(m,1H,H of SOCH2CH2).
步骤2 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸(实施例15)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体2(300mg，0.58mmol)、MeOH(3.7mL)、THF(3.7mL)、H2O(2.7mL)和NaOH(108mg，2.70mmol)，氮气保护，35℃反应4h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全，加水(10mL)淬灭，用稀HCl(1M)调节pH至5，淡黄色固体析出。过滤，固体用MeOH(10mL)打浆4h，过滤得到200mg淡黄色固体实施例15，收率68.41％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.42(s,1H,COOH),9.73(s,1H,NH),8.46(s,2H,ArH),7.57(d,J＝12.8Hz,1H,ArH),7.50(d,J＝6.4Hz,1H,ArH),7.29(t,J＝8.6Hz,1H,ArH),3.95-3.77(m,8H,N(CH2CH2)2),3.59(s,2H,CH2COOH),3.57- 3.50(m,1H,H of SOCH2),3.28-3.26(m,1H,H of SOCH2),3.11-3.05(m,1H,H of SOCH2CH2),3.02-2.97(m,1H,H of SOCH2CH2).
实施例16
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸钠盐(实施例16)的合成
向25mL单口瓶中依次加入实施例15(150mg，0.29mmol)、水(2.5mL)和氢氧化钠(13mg，0.32mmol)，氮气保护，室温反应0.5h，固体缓慢溶解，冰水浴降温，30min后加入丙酮(15mL)，白色固体析出，继续搅拌30min后过滤干燥，得到105mg白色固体实施例16，收率67.2％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.68(s,1H,NH),8.45(s,2H,ArH),7.43(d,J＝12.4Hz,1H,ArH),7.36(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.20(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),3.91-3.78(m,8H,N(CH2CH2)2),3.57-3.49(m,1H,H of SOCH2),3.30-3.24(m,1H,Hof SOCH2),3.18(s,2H,CH2COONa),3.09-3.03(m,1H,H of SOCH2CH2),3.00-2.95(m,1H,H of SOCH2CH2).
实施例17
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(2)的合成
向25mL单口瓶中依次加入实施例14中间体4(307mg，0.83mmol)、THF(8mL)、H2O(2mL)、5-氯-2-(哌啶-4-基)嘧啶(1，180mg，0.91mmol)和DIPEA(322mg，2.49mmol)，加毕，氮气保护，65℃过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲 醇＝15：1)监测原料反应完全，反应液浓缩，并经快速制备色谱(12g，V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)纯化，得到320mg黄色固体中间体2，收率73.85％。
步骤2 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5-氧代-6,7-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸(实施例17)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体2(200mg，0.39mmol)、MeOH(2.5mL)、THF(2.5mL)、H2O(1.8mL)和NaOH(71mg，1.78mmol)，加毕，氮气保护，35℃反应4h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝10：1)监测原料反应完全，加水(10mL)淬灭反应，用稀HCl(1N)调节pH至5，淡黄色固体析出。过滤后用MeOH(10mL)打浆4h，过滤、干燥得到115mg淡黄色固体实施例17，收率60.52％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.40(s,1H,COOH),9.68(s,1H,NH),8.87(s,2H,ArH),7.62(d,J＝12.8Hz,1H,ArH),7.47(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.26(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),4.69(br,2H,SOCH2),3.57(s,2H,CH2COOH),3.55-3.48(m,1H,CH),3.29-3.13(m,4H,CH2NCH2),3.09-3.02(m,1H,H of SOCH2CH2),3.01-2.95(m,1H,H of SOCH2CH2),2.07-1.98(m,2H,NCH2CH2),1.78-1.64(m,2H,NCH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C22H24ClFN6O3S:517.1225；实测值:517.1194.
实施例18
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(2)的合成
向250mL单口瓶中依次加入化合物实施例11中间体3(2.00g，5.0mmol)、实施例1中间体3(1.28g，5.5mmol)、四氢呋喃/水(40mL/4mL)和DIPEA(2.7mL，15.0mmol)，氮气保护，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全，冷却，加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)纯化，再经打浆(150mL，V石油醚：V乙酸乙酯＝2：1)纯化，得到850mg白色固体中间体2，收率30.4％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.89(s,2H,ArH),8.70(s,1H,NH),7.63(d,J＝12.0Hz,1H,CH),7.38-7.25(m,3H,ArH),4.46(br,2H,NCH2),3.96(br,2H,NCH2),3.72(s,2H,COCH2),3.64(s,3H,OCH3),3.58-3.55(m,2H,SO2CH2),2.84(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2),2.68(s,2H,SO2CH2CH2CH2),2.33-2.25(m,2H,NCH2CH2).
步骤2 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸(实施例18)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体2(50mg，0.09mmol)、乙酸(2.0mL)和37％浓盐酸(1.0mL)，氮气保护，80℃反应1h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全，冷却，直接浓缩，加水(10mL)，固体析出，过滤干燥，得到35mg白色固体实施例18，收率71.8％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.44(s,1H,COOH),8.89(s,2H,ArH),8.70(s,1H,NH),7.62(d,J＝12.0Hz,1H,CH),7.35-7.24(m,3H,ArH),4.46(br,2H,NCH2),3.97(br,2H,NCH2),3.64-3.54(m,4H,SO2CH2),2.84(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2),2.68(d,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.33-2.25(m,2H,NCH2CH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):172.24,167.11,160.70(d,J＝240.5Hz),156.09,155.89,138.91,132.29,128.83,117.71(d,J＝13.4Hz),117.27,108.55(d,J＝27.0Hz),106.78,51.29,44.61,34.20,31.85,25.18,18.71.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C24H22ClFN6O4S:545.1174；实测值545.1160.
实施例19
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸铵(实施例19)的合成
向25mL单口瓶中依次加入实施例18(80mg，0.15mmol)和水(5mL)，固体未溶解，冰水浴下滴加27％氨水调节pH至8，搅拌15min后体系澄清，加入丙酮(10mL)，继续搅拌，白色固体缓慢析出，30min后过滤干燥，得到40mg白色固体实施例19，收率48.5％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.89(s,2H,ArH),7.58(d,J＝12.1Hz,1H,CH),7.35-7.22(m,3H,ArH),4.46(br,2H,NCH2),3.96(br,2H,NCH2),3.61-3.53(m,2H,COCH2),3.49(s,2H,SO2CH2),2.84(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2),2.68(s,2H,SO2CH2CH2CH2),2.29(t,J＝6.0Hz,2H,NCH2CH2).
实施例20
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸铵(实施例20)的合成
向50mL单口瓶中依次加入实施例11(300mg，0.55mmol)、THF(4.5mL)和甲醇(4.5mL)，室温搅拌至均相。氨水(0.1mL)缓慢滴入上述反应体系，室温反应过夜。体系由澄清逐渐混浊，过滤，滤饼以水(2mL×3)淋洗，收集滤饼。50℃鼓风干燥过夜得到200mg白色固体实施例20，收率64.5％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.86(s,2H,ArH),8.63(s,1H,NH),7.56(dd,J1＝12.2Hz,J2＝2.1Hz,1H,ArH),7.27(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.19(dd, J1＝8.3Hz,J2＝2.1Hz,1H,ArH),4.60(br,2H,SO2CH2),3.58-3.54(m,2H,NCH2),3.52(s,2H,ArCH2CO),3.23-3.11(m,3H,NCH2和CH),2.81(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.31-2.24(m,2H,SO2CH2CH2),2.04-2.00(m,2H,NCH2CH2),1.70-1.67(m,2H,NCH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C24H24ClFN6O4S:547.1331；实测值:547.1342.
实施例21
步骤1 2-(2-氯-4-硝基苯基)丙二酸二甲酯(2)的合成
向250mL反应瓶中依次加入化合物1(5.00g，28.51mmol)、NMP(100mL)、丙二酸二甲酯(4.78g，36.22mmol)和氢氧化钠(2.40g，59.85mmol)，在氮气保护下，80℃反应2h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)监测反应完全。反应液降至室温，加水(300mL)淬灭，在冰浴条件下用稀盐酸(1N)调pH至3，固体析出，过滤，滤饼用水(50mL)润洗，收集滤饼并经真空干燥2h得到7.90g黄色固体中间体2，收率85.4％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.30(d,J＝2.4Hz,1H,ArH),8.15(dd,J1＝8.6Hz,J2＝2.4Hz,1H,ArH),7.74(d,J＝8.6Hz,1H,ArH),5.31(s,1H,CH),3.81(s,6H,2CH3).
步骤2 2-(2-氯-4-硝基苯基)乙酸甲酯(3)的合成
向50mL反应瓶中依次加入中间体2(1.00g，3.48mmol)、DMSO(10mL)、水(0.06mL)和氯化钠(366mg，6.26mmol)，氮气保护，在110℃反应16h。 TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测反应完全。反应液降至室温，加水(30mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL×4)洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油 醚：V乙酸乙酯＝5：1)，得到320mg黄色油状中间体3，收率40.1％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.28(d,J＝2.4Hz,1H,ArH),8.11(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2.4Hz,1H,ArH),7.50(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),3.88(s,2H,CH2),3.74(s,3H,CH3).
步骤3 2-(4-氨基-2-氯苯基)乙酸甲酯(4)的合成
向25mL反应瓶中依次加入中间体3(320mg，1.39mmol)、乙醇(4mL)、水(1mL)、铁粉(389mg，6.97mmol)和氯化铵(38mg，0.70mmol)，在氮气保护下，85℃反应1h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)监测原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)润洗，收集滤液，浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)，得到220mg黄色油状中间体4，收率75.5％。
步骤4 2-(2-氯-4-((2-氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酸甲酯(5)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体4(210mg，1.05mmol)、1,4-二噁烷(5mL)、实施例5中间体8(280mg，1.26mmol)、碳酸钠(223mg，2.10mmol)、Xantphos(91mg，0.16mmol)和Pd2(dba)3(72mg，0.08mmol)，氮气保护下， 70℃反应16h。TLC(V乙酸乙酯：V石油醚＝3：1)监测原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)润洗，收集滤液，浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)，得到290mg白色固体中间体5，收率57.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.70(s,1H,NH),7.69(d,J＝2.2Hz,1H,ArH),7.50(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2.2Hz,1H,ArH),7.36(d,J＝8.4Hz,1H,ArH),3.79(s,2H,CH2COOCH3),3.64(s,3H,COOCH3),3.16-3.09(m,2H,SCH2),2.79(t,J＝6.3Hz,2H,SCH2CH2CH2),2.16-2.10(m,2H,SCH2CH2).
步骤5 2-(2-氯-4-((2-氯-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酸甲酯(6)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体5(280mg，0.73mmol)、DCM(10mL)和间氯过氧苯甲酸(85％，371mg，3.84mmol)，在氮气保护下，室温反应2h。TLC(V乙酸乙酯：V石油醚＝2：1)监测原料反应完全。加入饱和硫代硫酸钠(10mL)淬灭，二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL×3)洗涤，收集有机相，干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)，得到230mg白色固体中间体6，收率75.9％。
步骤6 2-(2-氯-4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酸甲酯(7)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体6(230mg，0.55mmol)、四氢呋喃(3mL)、水(0.6mL)、5-氯-2-(哌啶-1-基)嘧啶(121mg，0.61mmol)和DIPEA(215mg，1.66mmol)，在氮气氛围下，65℃反应16h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。反应液降至室温，直接拌样，浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)，得到280mg白色固体中间体7，收率91.5％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.87(s,2H,ArH),8.66(s,1H,ArH),7.92(s,1H,NH),7.37(s,2H,ArH),4.56(br,2H,SO2CH2),3.78(s,2H,CH2COOCH3),3.62(s,3H,CH2COOCH3),3.59-3.52(m,2H,NCH2),3.26-3.10(m,3H,NCH2和CH),2.82(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.31-2.25(m,2H,SO2CH2CH2),2.04-1.99(m,2H,CHCH2),1.70(br,2H,CHCH2).
步骤7：2-(2-氯-4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酸(实施例21)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体7(270mg，0.48mmol)、甲醇(3mL)、THF(3mL)、水(2.2mL)和氢氧化钠(89mg，2.23mmol)，在氮气保护下，室温反应2h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。在冰浴条件下 用稀盐酸(1M)调pH至4，固体析出，过滤，滤饼用水(20mL)润洗，收集滤饼并经鼓风干燥16h得到220mg白色固体实施例21，收率93.7％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.53(s,1H,COOH),8.87(s,2H,ArH),8.65(s,1H,ArH),7.91(s,1H,NH),7.34(s,2H,ArH),4.70-4.55(m,2H,SO2CH2),3.66(s,2H,COCH2),3.61-3.55(m,2H,NCH2),3.25-3.09(m,3H,NCH2和CH),2.82(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.31-2.25(m,2H,SO2CH2CH2),2.07-1.97(m,2H,CHCH2),1.70(s,2H,CHCH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):172.18,170.52,167.34,159.49,156.18,156.14,138.49,133.90,132.48,129.01,128.86,121.97,120.23,106.05,51.36,44.09,43.92,38.64,31.92,18.76.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C24H24Cl2N6O4S:563.1035；实测值:563.1025.
实施例22
步骤1 2-(2,6-二氟-4-硝基苯基)丙二酸3-乙基1-苄酯(3)的合成
向50mL反应瓶中依次加入氢化钠(60％，497mg，12.43mmol)和DMF(10mL)，在氮气保护下，冰浴条件下，向体系内滴加中间体2(2.51g，11.31mmol)的DMF(2mL)溶液，加毕，保温反应0.5h，再滴加化合物1(1.00g，5.65mmol)的DMF(3mL)溶液，70℃反应1h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测反应完全。反应液降至冰浴，加水(30mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL×4)洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)，得到2.00g黄色油状中间体3，收率95.2％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.84(s,1H,ArH),7.82(s,1H,ArH),7.38-7.35(m,5H,ArH),5.19(s,2H,ArCH2),5.07(s,1H,CH),4.28-4.21(q,J＝7.2Hz,1H,CH3CH2),1.25(t,J＝6.4Hz,3H,CH3).
步骤2 2-(4-氨基-2,6-二氟苯基)乙酸乙酯(4)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体3(1.80g，4.75mmol)、乙醇(18mL)、甲酸铵(1.51mg，23.7mmol)和Pd/C(10％wet，270mg，0.15w/w)，在氮气保护下，60℃反应3h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)监测原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)润洗，收集滤液，浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)，得到530mg白色固体中间体4，收率52.0％。
步骤3 2-(4-((2-氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2,6-二氟苯基)乙酸乙酯(5)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体4(530mg，2.63mmol)、1,4-二噁烷(10mL)、实施例5中间体8(699mg，3.16mmol)、碳酸钠(558mg，5.26mmol)、Xantphos(228mg，0.40mmol)和Pd2(dba)3(180mg，0.20mmol)，氮气保护下，70℃反应16h。TLC(V乙酸乙酯：V石油醚＝3：1)监测原料反应完全。反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)润洗，收集滤液，浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)，得到690mg白色固体中间体5，收率54.2％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.84(s,1H,NH),7.43(d,J＝9.7Hz,2H, ArH),4.11(q,J＝7.2Hz,2H,CH2CH3),3.68(s,2H,ArCH2CO),3.19-3.12(m,2H,SCH2),2.81(t,J＝6.3Hz,2H,SCH2CH2CH2),2.16-2.10(m,2H,SCH2CH2),1.19(t,J＝7.0Hz,3H,CH3).
步骤4 2-(4-((2-氯-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2,6-二氟苯基)乙酸乙酯(6)的合成
向100mL单口瓶中依次加入中间体5(690mg，1.73mmol)、DCM(20mL)和间氯过氧苯甲酸(85％，869mg，4.32mmol)，在氮气保护下，室温反应2h。TLC(V乙酸乙酯：V石油醚＝2：1)监测原料反应完全。加入饱和硫代硫酸钠(20mL)淬灭，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水(50mL×3)洗涤，收集有机相，干燥，过滤，浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)，得到570mg白色固体中间体6，收率76.5％。
步骤5 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2,6-二氟苯基)乙酸乙酯(7)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体6(570mg，1.32mmol)、四氢呋喃(6mL)、水(1mL)、5-氯-2-(哌啶-4-基)嘧啶(287mg，1.45mmol)和DIPEA (512mg，3.96mmol)，在氮气氛围下，65℃反应16h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。反应液降至室温，直接拌样，浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V二氯甲烷：V甲醇＝100：1)，得到720mg白色固体中间体7，收率92.1％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.87(s,2H,ArH),8.75(s,1H,NH),7.42(d,J＝9.6Hz,2H,ArH),4.61(br,2H,SO2CH2),4.10(m,2H,CH2CH3),3.67(s,2H,COCH2),3.59-3.54(m,2H,NCH2),3.23-3.13(m,3H,NCH2和CH),2.83(t,J＝6.4Hz,2H,SCH2CH2CH2),2.31-2.24(m,2H,SCH2CH2),2.07-1.97(m,2H,CHCH2),1.73-1.63(m,2H,CHCH2),1.18(t,J＝7.2Hz,3H,CH3).
步骤6 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2,6-二氟苯基)乙酸(实施例22)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体7(300mg，0.51mmol)、乙醇(4mL)、THF(4mL)、水(2.2mL)和氢氧化钠(89mg，2.23mmol)，在氮气保护下，室温反应2h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。在冰浴条件下用稀盐酸(1N)调pH至4，固体析出，过滤，滤饼用水(20mL)润洗，收集滤饼并经鼓风干燥16h得到250mg白色固体实施例22，收率87.7％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.64(s,1H,COOH),8.86(d,J＝2.4Hz,2H,ArH),8.74(s,1H,NH),7.40(d,J＝9.4Hz,2H,ArH),4.61(br,2H,SO2CH2),3.57(s,4H,NCH2和COCH2),3.25-3.14(m,3H,NCH2和CH),2.83(br,2H,SCH2CH2CH2),2.31-2.26(m,2H,SCH2CH2),2.05-2.01(m,2H,CHCH2),1.70(s,2H,CHCH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):171.34,170.50,167.54,161.03(dd,J1＝244.4Hz,J2＝11.0Hz),159.41,156.13,139.26(t,J＝14.2Hz),129.01,106.34, 104.56(d,J＝29.8Hz),51.36,44.06,43.92,31.93,27.95,18.71.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C24H23ClF2N6O4S:565.1236；实测值:565.1227.
实施例23
步骤1 1-(2-氟苯基)环丙烷-1-甲腈(2)的合成
向250mL三口瓶中加入化合物1(10.00g，74mmol)、1,2-二溴乙烷(27.82g，148mmol)、四丁基溴化胺(2.38g，7.4mmol)、50％NaOH(60mL)和甲苯(60mL)，搅拌均匀后，氮气保护下室温反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙 酯＝5：1)监测原料反应完全。向反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(120g，V石油醚：V乙酸乙酯＝10：1)，得到5.26g无色油状物中间体2，收率44.1％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.37-7.29(m,2H,ArH),7.16-7.02(m,2H,ArH),1.70-1.67(m,2H,环丙基-H),1.41-1.38(m,2H,环丙基-H).
步骤2 1-(2-氟-4-硝基苯基)环丙烷-1-甲腈(3)的合成
向250mL单口瓶中加入中间体2(4.50g，28.04mmol)和硫酸(25mL)，氮气保护下冰水浴中加入硝酸钾(3.11g，30.84mmol)，室温反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝2：1)监测原料反应完全。向反应液中加入水(50mL)，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速 制备色谱纯化(40g，V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)，得到6.60g白色固体中间体3，收率79.4％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.30-8.22(m,1H,ArH),8.19(dd,J1＝6.4Hz,J2＝2.9Hz,1H,ArH),7.48(t,J＝9.1Hz,1H,ArH),1.48-1.41(m,2H,环丙基-H),1.10-1.07(m,2H,环丙基-H).
步骤3 1-(2-氟-4-硝基苯基)环丙烷-1-甲酸乙酯(4)的合成
向250mL单口瓶中加入中间体3(2.60g，12.61mmol)和乙醇(26mL)，氮气保护下加入硫酸(5.20mL)，反应回流过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)监测原料反应完全。向反应液加入水(50mL)，乙酸乙酯(150mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(40g，V石油 醚：V乙酸乙酯＝10：1)，得到2.50g无色油状物中间体4，收率78.3％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.26-8.12(m,2H,ArH)7.19(t,J＝8.9Hz,1H,ArH),4.12(q,J＝7.1Hz,2H,CH2),1.76-1.73(m,2H,环丙基-H),1.25-1.22(m,2H,环丙基-H),1.17(t,J＝7.1Hz,3H,CH3).
步骤4 1-(4-氨基-2-氟苯基)环丙烷-1-甲酸乙酯(5)的合成
向100mL单口瓶中加入中间体4(2.00g，7.89mmol)、无水乙醇(40mL)加入10％湿钯碳(400mg，20％wt)。在15psi的氢气压力下，60℃反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝3：1)监测原料反应完全。向反应液中加入乙酸乙酯(50mL)稀释，硅藻土过滤，浓缩经快速制备色谱纯化(20g，V石油醚：V乙酸乙酯＝5： 1)，得到1.90g无色油状物中间体5，收率86.3％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):6.83(t,J＝8.9Hz,1H,ArH),6.60-6.51(m,2H,ArH),4.10(q,J＝7.1Hz,2H,CH2),1.62-1.59(m,2H,环丙基-H),1.20-1.13(m,5H,环丙基-H和CH3).
步骤5 1-(4-((2-氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丙烷-1-甲酸乙酯(6)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体5(1.00g，4.47mmol)、实施例5中间体8(1.18g，5.37mmol)、XantPhos(388mg，0.67mmol)、碳酸钠(949mg，8.96mmol)和1,4-二氧六环(12mL)。氮气保护下，加入三二亚苄基丙酮二钯(307mg，0.34mmol)，75℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。向反应液加入水(100mL)，乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V石油醚：V乙酸乙酯＝5：1)，得到850mg白色固体中间体6，收率46.6％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.53-7.46(m,1H,ArH),7.41(dd,J1＝6.4Hz,J2＝2.8Hz,1H,ArH),7.03(t,J＝9.1Hz,1H,ArH),6.56(s,1H,NH),4.11(q,J＝7.1Hz,2H,CH2CH3),3.21-3.05(m,2H,SCH2),2.88(t,J＝6.4Hz,2H,NCCH2),2.31-2.21(m,2H,SCH2CH2),1.67-1.65(m,2H,环丙基-H),1.23-1.19(m,2H,环丙基-H),1.17(t,J＝7.1Hz,3H,CH3).
步骤6 1-(4-((2-氯-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丙烷-1-甲酸乙酯(7)的合成
向50mL单口瓶中加入中间体6(850mg，2.08mmol)和二氯甲烷(12mL)，氮气保护下，分两批加入间氯过氧苯甲酸(1.06g，5.2mmol)，室温反应过夜。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1)监测原料反应完全。向反应液中加入饱和硫代硫酸钠溶液(20mL)并搅拌10min，二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝2：1)，得到800mg白色固体中间体7，收率87.4％。
步骤7 1-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丙烷-1-甲酸乙酯(8)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体7(300mg，0.68mmol)、四氢呋喃(5mL)、水(1mL)、5-氯-2-(哌啶-1-基)嘧啶(148mg，0.75mmol)和N,N-二异丙基乙胺(264mg，2.05mmol)，氮气保护下65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲 醇＝40：1)监测原料反应完全。向反应液加入水(50mL)，乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：2)，得到400mg白色固体中间体8，收率97.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.62(s,2H,ArH),8.43(s,1H,ArH),7.51(dd,J1＝6.5Hz,J2＝2.7Hz,1H,ArH),7.36-7.32(m,1H,ArH),6.98(t,J＝9.1Hz,1H,NH),4.11(q,J＝7.1Hz,2H,CH2CH3),3.40-3.32(m,2H,SCH2),3.19-3.12(m,1H,CH),3.02(t,J＝12.8Hz,2H,NCH2),2.84(t,J＝6.5Hz,2H,NCH2),2.46-2.43(m,2H,NCCH2),2.06-2.03(m,2H,SCH2CH2)1.90-1.75(m,2H,CHCH2),1.63-1.61(m,2H,CHCH2),1.50-1.43(m,2H,环丙基-H)1.18-1.12(m,5H,CH3和环丙基-H).
步骤8 1-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丙烷-1-甲酸(实施例23)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体8(300mg，0.50mmol)、氢氧化钠(120mg，3mmol)、水(3mL)和乙醇(3mL)，氮气保护下35℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)监测原料反应完全。向反应液加入水(5mL)，并用1M盐酸调节pH至5，二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱纯化(20g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1：2)，得到38mg淡黄色固体实施例23，收率13.3％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.63(s,2H,ArH),8.41(s,1H,ArH),7.54(dd,J1＝6.4Hz,J2＝2.7Hz,1H,ArH),7.35-7.31(m,1H,ArH),6.98(t,J＝9.1Hz,1H,NH),4.78(br,2H,SCH2),3.39-3.32(m,2H,NCCH2),3.19-3.12(m,1H,CH),3.01(t,J＝11.7Hz,2H,NCH2),2.83(t,J＝6.5Hz,2H,NCH2),2.48-2.40(m,2H SCH2CH2),2.05-2.02(m,2H,CHCH2),1.82-1.78(m,2H,CHCH2),1.70-1.67(m,2H,环丙基-H),1.26-1.24(m,2H,环丙基-H).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm)174.82,170.58,167.02,159.49，158.67(d,J＝244.42Hz),156.35,156.12,134.09(d,J＝2.0Hz),128.99,127.69(d,J＝15.2Hz),126(d,J＝4.0Hz),122.65(d,J＝8.08Hz),115.51(d,J＝23.23Hz),105.76,51.46,44.20,43.74,31.92,30.66,24.03,18.80,15.78.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C26H26ClFN6O4S:573.1487；实测值:573.1454
实施例24
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)-N-新戊基乙酰胺(实施例24)的合成
向100mL单口瓶中依次加入实施例11(300mg，0.55mmol)、无水DMF(12mL)、HATU(316mg，0.83mmol)、HOBT(112mg，0.83mmol)、DIPEA(213mg，1.65mmol)和特戊胺(72mg，0.83mmol)，氮气保护下，室温反应15h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝30:1)监测反应结束，加水(50mL)淬灭反应体系，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，收集有机相。饱和氯化钠水溶液(50mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱(12g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1:1)纯化得到208mg白色固体实施例24，收率61.4％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.87(br,2H,2NH),8.64(s,1H,ArH),7.95(t,J＝6.3Hz,1H,ArH),7.60-7.50(m,1H,ArH),7.28(t,J＝8.4Hz,1H,ArH),7.24-7.16(m,1H,ArH),4.87-4.37(m,2H,NCH2),3.61-3.52(m,2H,NCH2),3.47(s,2H,Hof ArCH2CO),3.25-3.05(m,3H,CH and SO2CH2),2.89(d,J＝6.2Hz,2H,NHCH2),2.81(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.34-2.22(m,2H,SO2CH2CH2CH2),2.07-1.96(m,2H,CHCH2),1.79-1.57(m,2H,CHCH2),0.81(s,9H,3CH3).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):170.09,169.24,166.80,160.13(d,JC- F＝243.4Hz),159.09,155.78,155.68,138.03(d,JC-F＝11.1Hz),131.55(d,JC-F＝6.1Hz),128.55,118.66(d,JC-F＝16.2Hz),116.76(d,JC-F＝2.0Hz),108.14(d,JC-F＝27.3Hz),105.54,50.90,49.74,43.65,43.42,34.99,32.03,31.44,30.16,27.21,18.31.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C29H35ClFN7O3S:616.2273；实测值:616.2241.
实施例25
步骤1 2-(2-氟-4-硝基苯基)丙二酸二甲酯(2)的合成
向1L单口瓶中加入氢化钠(60％，10.00g，250.00mmol)和无水DMF(250mL)，冷至0℃，滴加丙二酸二甲酯(30.03g，227.28mmol)，氮气保护下，0℃反应30min，再滴加化合物1(25.00g，113.64mmol)的无水DMF(120mL)溶液，70℃反应17h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝4:1)监测反应结束。加饱和氯化铵水溶液(1L)淬灭反应体系，乙酸乙酯(1L×3)萃取，收集有机相。饱和氯化钠水溶液(1L×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经柱层析(V石油醚：V乙酸乙酯＝4:1)纯化得到30.60g黄色固体中间体2，收率99.3％。
步骤2 2-(2-氟-4-硝基苯基)乙酸甲酯(3)的合成
向500mL单口瓶中依次加入中间体2(30.59g，112.79mmol)、DMSO(210mL)、氯化钠(6.59g，112.79mmol)和水(4.2mL)，氮气保护下，120℃反应4h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10:1)监测反应结束，加水(500mL) 淬灭反应体系，乙酸乙酯(500mL×3)萃取，收集有机相。饱和氯化钠水溶液(500mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经柱层析(V石油醚：V乙酸乙酯＝10:1)纯化得到8.13g黄色油状中间体3，收率33.8％。
步骤3 1-(2-氟-4-硝基苯基)环丁烷-1-甲酸甲酯(4)的合成
向500mL单口瓶中加入氢化钠(60％，4.95g，123.86mmol)和无水DMF(230mL)，冰浴下，加入中间体3(12.00g，56.30mmol)，0℃反应0.5h，再加入1，3-二碘丙烷(19.99g，67.56mmol)，氮气保护下，0℃反应4h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝10:1)监测反应结束，加饱和氯化铵水溶液(500mL)淬灭反应体系，乙酸乙酯(500mL×3)萃取，收集有机相。饱和氯化钠水溶液(500mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱(120g×2，V石油醚：V乙酸乙酯＝9:1)纯化得到8.53g黄色油状中间体4，收率59.8％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.07-8.02(m,1H,ArH),7.92-7.85(m,1H,ArH),7.49-7.38(m,1H,ArH),3.69(s,3H,CH3),2.91-2.83(m,2H,CCH2),2.59-2.50(m,2H,CCH2),2.39-2.23(m,1H,H of CCH2CH2),2.02-1.87(m,1H,H of CCH2CH2).
步骤4 1-(4-氨基-2-氟苯基)环丁烷-1-甲酸甲酯(5)的合成
向250mL单口瓶中依次加入中间体4(2.53g，9.99mmol)、乙酸乙酯(85mL)和10％Pd/C(13wt％，0.33g)，氢气氛围下，室温反应15h。TLC(V石油 醚：V乙酸乙酯＝3:1)监测反应结束。过滤、浓缩并经快速制备色谱(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝4:1)纯化得到1.40g黄色油状中间体5，收率62.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):6.95(t,J＝8.8Hz,1H,ArH),6.34(d,J＝8.3Hz,1H,ArH),6.25(d,J＝13.4Hz,1H,ArH),5.29(s,2H,NH2),3.56(s,3H,CH3),2.66-2.55(m,2H,CCH2),2.43-2.29(m,2H,CCH2),2.07-1.92(m,1H,H of CCH2CH2),1.90-1.74(m,1H,H of CCH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C12H14FNO2:224.1087；实测值:224.1051.
步骤5 1-(4-((2-氯-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丁烷-1-甲酸甲酯(6)的合成
向100mL单口瓶中依次加入中间体5(1.89g，8.47mmol)、无水1，4-二氧六环(28mL)、实施例5中间体8(2.25g，10.16mmol)、Pd2(dba)3(590mg，0.64mmol)、XantPhos(730mg，1.27mmol)和碳酸钠(1.80g，16.94mmol)，氮气保护下，75℃反应16h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝2:1)监测反应结束，反应液冷却至室温。过滤、浓缩并经快速制备色谱(80g，V石油醚：V乙酸乙酯＝3:1)纯化得到5.81g黄色固体中间体6，收率67.5％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.73(s,1H,NH),7.48-7.27(m,3H,ArH),3.60(s,3H,CH3),3.20-3.08(m,2H,SCH2),2.84-2.76(m,2H,SCH2CH2CH2),2.75-2.61(m,2H,SCH2CH2CH2),2.49-2.41(m,2H,CCH2),2.20-2.01(m,3H,CCH2,H of CCH2CH2),1.95-1.81(m,1H,H of CCH2CH2).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C19H19ClFN3O2S:408.0949；实测值:408.0912.
步骤6 1-(4-(((2-氯-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丁烷-1-甲酸甲酯(7)的合成
向250mL单口瓶中依次加入中间体6(2.90g，7.11mmol)、m-CPBA(85％，3.61g，17.78mmol)和二氯甲烷(87mL)，N2保护下，室温反应2h。TLC(V石油醚：V乙酸乙酯＝1:1)监测显示反应结束，加饱和硫代硫酸钠水溶液(200mL)淬灭反应体系，二氯甲烷(200mL×3)萃取，收集有机相。饱和碳酸氢钠水溶液(200mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩并经快速制备色谱(40g，V石油醚：V乙酸乙酯＝1:1)纯化得2.86g黄色固体中间体7，收率91.4％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.10(s,1H,NH),7.50-7.36(m,2H,ArH),7.35-7.29(m,1H,ArH),3.75-3.67(m,2H,SCH2),3.61(s,3H,CH3),2.98(t,J＝6.3Hz,2H,SO2CH2CH2),2.75-2.64(m,2H,SO2CH2CH2),2.52(d,J＝8.2Hz,1H,H of CCH2),2.47(d,J＝9.4Hz,1H,H of CCH2),2.39-2.28(m,2H,CCH2),2.16-2.02(m,1H,H of CCH2CH2),1.95-1.81(m,1H,H of CCH2CH2).
步骤7 1-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丁烷-1-甲酸甲酯(8)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体7(500mg，0.29mmol)、5-氯-2-(哌啶-4-基)嘧啶(247mg，1.25mmol)、四氢呋喃(8.8mL)、水(1.8mL)和DIPEA(442mg，3.42mmol)，氮气保护下，65℃反应16h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝50:1)监测反应结束，浓缩并经快速制备色谱(12g，V二氯甲烷：V甲醇＝50:1)纯化得到644mg白色固体中间体8，收率94.0％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.87(s,2H,ArH),8.68(s,1H,NH),7.57(d,J＝13.2Hz,1H,ArH),7.42-7.07(m,2H,ArH),4.95-4.28(m,2H,SO2CH2),3.67-3.48(m,5H,NCH2 and CH3),3.24-3.10(m,3H,NCH2 and CH),2.92-2.77(m,2H,SO2CH2CH2CH2),2.49-2.38(m,2H,SO2CH2CH2CH2),2.36-2.22(m,2H,CCH2),2.09-2.02(m,3H,CCH2,H of CHCH2),1.93-1.81(m,1H,H of CHCH2),1.80-1.58(m,2H,CHCH2),1.33-1.22(m,2H,CCH2CH2).
步骤8 1-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丁烷-1-甲酸(实施例25)的合成
向50mL单口瓶中依次加入中间体8(344mg，0.57mmol)、乙醇(6mL)、四氢呋喃(12mL)、水(6mL)和氢氧化钠(114mg，2.85mmol)，氮气保护下，35℃反应1.5h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝50:1)监测原料剩余约10％，冰浴下，用1N稀盐酸调pH至7，浓缩去除有机溶剂。再用1N稀盐酸调pH至3，过滤，收集滤饼，再经厚制备板(V二氯甲烷：V甲醇＝19:1)纯化得到71mg白色固体实施例25，收率21.3％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.37(s,1H,COOH),8.87(s,2H,ArH),8.67(s,1H,NH),7.60-7.51(m,1H,ArH),7.35-7.22(m,2H,ArH),4.63(br,2H, SO2CH2),3.59-3.52(m,2H,NCH2),3.27-3.09(m,3H,CH和NCH2),2.82(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.71-2.61(m,2H,SO2CH2CH2CH2),2.47-2.38(m,2H,CCH2),2.33-2.23(m,2H,CCH2),2.15-1.99(m,3H,H of CHCH2 and CHCH2),1.88-1.80(m,1H,H of CHCH2),1.77-1.66(m,2H,CCH2CH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):175.87,170.10,166.83,159.82(d,JC- F＝244.4Hz),159.10,155.72,155.67,138.22(d,JC-F＝11.1Hz),128.56,128.20(d,JC- F＝6.1Hz),126.07(d,JC-F＝15.2Hz),116.22(d,JC-F＝3.0Hz),108.15(d,JC-F＝27.3Hz),105.60,50.90,48.37,43.65,43.49,31.46,31.06,30.18,18.31,16.83.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C27H28ClFN6O4S:587.1643；实测值:587.1639.
实施例26
步骤1 1-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丁烷-1-甲酸甲酯(2)的合成
向25mL单口瓶中依次加入实施例25中间体7(210mg，0.53mmol)、实施例1中间体3(114mg，0.58mmol)、DIPEA(205g,1.59mmol)、THF(4mL)和H2O(1mL)，氮气保护下，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝30：1)监测反应结束，浓缩，四氢呋喃(1mL)打浆得到130mg白色固体中间体2，收率87.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.91(s,2H,ArH),8.72(s,1H,NH),7.60(d,J＝13.0Hz,1H,ArH),7.39(d,J＝5.2Hz,2H,ArH),7.30(s,1H,C＝CH),4.48(br, 2H,SO2CH2),3.99(br,2H,NCH2),3.64-3.57(m,3H,NCH2,H of NCH2CH2),3.62(s,3H,CH3),3.16-3.11(m,1H,H of NCH2CH2),2.86(t,J＝6.5Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.74-2.67(m,4H,CH2CH2CH2),2.33-2.27(m,2H,SO2CH2CH2CH2),2.14-2.07(m,1H,H of CH2CH2CH2),1.94-1.86(m,1H,H of CH2CH2CH2).
步骤2 1-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)环丁烷-1-甲酸(实施例26)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体2(280mg，0.47mmol)、醋酸(5mL)和浓盐酸(2.5mL)，氮气保护下，90℃反应40min。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝15：1)监测反应结束，浓缩至(4mL)，残留物中加入冰水(8mL)，室温搅拌1h。过滤，滤饼以水(2mL×3)淋洗，收集滤饼。制备板纯化(V二氯甲烷：V甲醇＝20：1)三次得到49mg白色固体实施例26，收率17.8％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.39(s,1H,COOH),8.90(s,2H,ArH),8.70(s,1H,NH),7.58(d,J＝13.0Hz,1H,ArH),7.34-7.33(m,2H,ArH),7.31-7.28(m,1H,C＝CH),4.47(br,2H,SO2CH2CH2CH2),3.98(br,2H,NCH2),3.59-3.56(m,2H,NCH2CH2),2.85(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.72-2.65(m,4H,CH2CH2CH2),2.47-2.42(m,2H,NCH2CH2),2.32-2.26(m,2H,SO2CH2CH2CH2),2.14-2.07(m,1H,H of CH2CH2CH2),1.89-1.85(m,1H,H of CH2CH2CH2).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):176.35,167.12,161.90,160.11(d,JC- F＝245.4Hz),159.55,156.06,155.88,138.23(d,JC-F＝11.1Hz),134.03,128.85,128.41(d,JC-F＝6.0Hz),126.58(d,JC-F＝15.1Hz),116.74,108.64(d,JC-F＝27.2Hz),106.44,67.47,55.36,51.33,48.84,44.66,31.89,31.52,25.21,18.74,17.30.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C27H26ClFN6O4S:585.1487；实测值:585.1507
实施例27
步骤1 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(1)的合成
向25mL单口瓶中依次加入实施例11中间体3(200mg，0.50mmol)、5-氯-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(109mg，0.55mmol)、DIPEA(194mg,1.50mmol)、THF(5mL)和H2O(1mL)，氮气保护下，65℃反应过夜。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)监测反应结束，浓缩，四氢呋喃(2mL)打浆得到142mg白色固体中间体1，收率87.6％。
步骤2 2-(4-((2-(4-(5-氯嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-5,5-二氧代-7,8-二氢-6H-噻喃并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-氟苯基)乙酸(实施例27)的合成
向25mL单口瓶中依次加入中间体1(142mg，0.25mmol)、乙醇(2mL)、四氢呋喃(2mL)、水(2mL)和氢氧化钠(15mg，0.38mmol)，N2保护下，30℃反应4h。TLC(V二氯甲烷：V甲醇＝50：1)监测反应结束，3M盐酸调节溶液pH至7，浓缩，继续用3M盐酸调节溶液pH至4，过滤，滤饼用水(10mL) 洗涤，滤饼烘干，得到120mg白色固体实施例27，收率87.6％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.62(s,1H,COOH),8.70(s,1H,NH),8.46(s,2H,ArH),7.56(dd,J1＝12.1Hz,J2＝2.1Hz,1H,ArH),7.36-7.24(m,2H,ArH),3.82-3.80(m,8H,哌嗪-H),3.63-3.56(m,4H,CH2COOH,SO2CH2),2.84(t,J＝6.4Hz,2H,SO2CH2CH2CH2),2.35-2.25(m,2H,SO2CH2CH2).
13C NMR(101MHz,DMSO)δ(ppm):172.35,167.22,160.74(d,JC-F＝244.4Hz),159.87,159.63,156.49,156.19,138.70(d,JC-F＝11.1Hz),132.31(d,JC-F＝6.1Hz),118.20,118.08(d,JC-F＝17.2Hz),117.37(d,JC-F＝3.0Hz),108.66(d,JC-F＝27.3Hz),106.42,51.35,43.72,43.50,34.44,31.89,18.75.
HRMS(ESI):m/z[M+H]+理论值C23H23ClFN7O4S:548.1283；实测值:548.1215.
生物活性研究
(一)本发明化合物对PDE4B酶的抑制活性
1.材料与仪器
2实验过程
2.1化合物制备和处理：所有化合物均用二甲基亚砜复配成50mM的储备液。
2.2工作储备液的制备：a)参考咯利普兰用二甲基亚砜从2mmol开始连续稀释3倍，共稀释10个浓度。b)用二甲基亚砜(DMSO)将2mmol本发明化合物连续稀释3倍，共稀释10个浓度。c)准备200X阳性对照(2mM罗利普仑)和200X载体对照(100％二甲亚砜)。d)将化合物平板以1000rpm离心1分钟。
2.3复合物筛选
a)使用Echo 550将20nL化合物稀释液转移到检测板的每个孔中。
b)封好检测板，1000rpm离心1分钟。
c)在冷冻的PDE检测缓冲液中制备2X PDE4B2。
d)在检测板(步骤b中制备)的每个孔中加入2μL 2X PDE4B2。
e)封上检测板并在RT条件下平衡10分钟。
f)在PDE检测缓冲液中制备2X Cyclic-3',5'-AMP。
g)将2μl 2X Cyclic-3',5'-AMP(在步骤f中制备)加入检测板(在步骤e中制备)的每个孔中，开始反应。在室温条件下孵育60分钟。
h)加入4μL AMP-Glo试剂I。
i)加入8μL AMP检测溶液。在室温条件下孵育60分钟。
k)在Envision 2105读板机上读取RLU信号。
3.检测结果
如下表所示，本发明化合物具有极强的PDE4B抑制活性，部分化合物的活性远强于WO2013026797公开的化合物II的抑制活性。

注：“+”：IC50>1μM
“++”IC50＝100nM～1μM
“+++”IC50＝20nM～100nM
“++++”IC50＝1～20nM
“+++++”IC50<1nM
(二)本发明化合物对PDE4酶亚型的选择性
1.材料与仪器
2.方法
同PDE4B的检测方法
3.结果
本发明化合物针对PDE4B的选择性更好，优于专利WO2013026797公开的化合物2。
(三)本发明化合物对hERG的毒性
采用稳定表达hERG钾通道的HEK-293细胞系(购于Creacell公司:货号：A-0320)。将HEK293细胞系在含10％胎牛血清及0.8mg/mL G418的DMEM培养基中培养，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。膜片钳检测，试验之前细胞用TrypLETMExpress分离，将4×103细胞铺到盖破片上，在24孔版中培养(最终体积：500μL)，18个小时后，进行试验检测。
全细胞膜片钳检测：当形成全细胞封接后细胞膜电压钳制于-80mV。钳制也压由-80mV除极至-50mV维持0.5s(作为漏电流检测)，然后阶跃至30mV维持2.5s，再迅速恢复至-50mV维持4s可以激发出hERG通道的尾电流。每隔10s重复采集数据，观察药物别hERG尾电流的作用。以0.5s的-50mV剌激作为漏电流检测。实验数据由EPC-10放大器进行采集并储存于软件中。当全细胞记录的hERG电流稳定后开始给药，每个药物浓度作用至5min(或者电流至稳定)后检测下一个浓度，每一个测试化合物检测(0.03μM、0.3μM、1μM，3μM、10μM、30μM)浓度下的数据，并依据计算公式计算hERG的IC50值。
与WO2013026797中公开的化合物II相比，本发明化合物抑制hERG钾通道的活性明显降低，大部分化合物抑制hERG的IC50>30μM，心脏毒性风险小，具有更高的安全性。

(四)本发明化合物对大鼠慢性肺阻塞性肺疾病的影响
1.动物与试剂
2.实验过程
2.1实验分组
将40只SD大鼠在动物实验中心适应性饲养7天，12小时交替照明，环境温度为20～25℃，湿度为50％～65％。随后，将SD大鼠按体重随机分为5组，每组8只，雌雄各半，分别为空白对照组、模型对照组、实施例11给药组(剂量分别为5、10、20mg/kg)。
2.2实验试剂配制
待测样品溶液：分别称取5mg、10mg和20mg实施例11化合物溶于10ml0.5％ CMC-Na水溶液中，配制成浓度为0.5、1、2mg/ml的溶液。
2.3实验方案
除空白对照组以外的SD大鼠采用烟熏+气管内滴注LPS的方式建立慢性肺阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型，在建模的第1天、14天、28天、42天大鼠采用水合氯醛麻醉，然后气管滴注125μL LPS(2mg/mL)溶液，其余时间将动物放置于自制烟熏箱中，每组大鼠均用点燃的10根香烟持续烟熏1.5小时(上下午各一次)，连续50天。造模完成后，各组大鼠连续给药28天，每天两次。
2.4实验结果
2.4.1 COPD大鼠肺功能用力肺活量(FVC)和第1秒钟最大呼气量(FEV1)结果
采用大鼠肺功能检测仪在治疗给药第14天和末次给药均进行肺功能FVC和FEV1检测，并计算FEV1/FVC的比值，结果如表1所示。
表1.实施例11对慢性肺阻塞大鼠FEV1/FVC的影响(Mean±SD，n＝8)
##P<0.01vs空白组；*P<0.05，**P<0.01vs模型组。
与空白组相比，模型组大鼠FEV1/FVC(1秒呼出最大肺活量百分比)显著性降低(P<0.01)，提示造模成功；与模型组相比，实施例11化合物给药组能显著性改善大鼠FEV1/FVC肺功能(P<0.05，P<0.01)，提示具有良好治疗作用；实施例11化合物的10mg/kg、20mg/kg剂量给药组均显著性优于5mg/kg剂量给药组(P<0.01)，提示有剂量梯度关系。
2.4.2 COPD大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量
末次给药后采血进行炎症指标测定，按照ELISA说明书检测血清中IL-1β和TNF-α含量，结果如表2所示。
表2.实施例11对COPD大鼠血清中IL-1β和TNF-α的影响(平均值±SD，n＝8)
##P<0.01vs空白组；*P<0.05，**P<0.01vs模型组。
与空白组相比，模型组大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量显著性升高 (P<0.01)，提示造模成功；与模型组相比，实施例11化合物给药组能显著性改善大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量(P<0.01)，提示具有显著性治疗作用；且提示有剂量梯度关系。
2.4.3 COPD大鼠肺组织病理学检验结果
末次治疗给药后，将大鼠右肺3叶全部取出，置于10％甲醛中固定、脱水，石蜡包埋后切片，进行HE染色，观察各组大鼠肺组织形态变化，结果如图1和表3所示。
表3.实施例11对COPD大鼠肺组织病理学评分的影响(平均值±SD，n＝8)
##P<0.01vs空白组；*P<0.05，**P<0.01vs模型组。
与空白组相比，模型组大鼠肺组织中肺泡间隔增宽且炎性细胞浸润，邻近肺组织、肺泡腔呈代偿性扩张，提示造模成功；与模型组相比，实施例11化合物给药组能显著性改善大鼠肺组织病理评分(P<0.01)，提示具有显著性治疗作用；且提示有剂量梯度关系。
(五)本发明化合物对屋尘螨提取物诱导的小鼠嗜酸性粒细胞哮喘的影响
1.动物与试剂
2.实验过程
2.1实验分组
将50只BALB/c小鼠按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为 空白对照组、模型对照组、实施例11给药组(剂量分别为5、10、20mg/kg)。
2.2实验试剂配制
屋尘螨提取物溶液：称取25mg屋尘螨提取物，加入1ml生理盐水中混匀，配制成浓度为25mg/ml的溶液。
待测样品溶液：分别取5mg、10mg和20mg实施例11化合物溶于10ml 0.5％CMC-Na水溶液中，配制成浓度为0.5、1、2mg/ml的溶液。
2.3实验方案
除空白对照组以外的BALB/c小鼠于建模的第1、7、14天分别予以屋尘螨提取物溶液滴鼻致敏，用水合氯醛麻醉小鼠后，将25mg/ml的屋尘螨提取物溶液经鼻逐滴缓慢滴入(20ul)；在第20-25天连续6天，以50mg/ml的屋尘螨提取物溶液滴鼻激发(20ul)，建立小鼠嗜酸性粒细胞哮喘模型。之后，各给药组连续给药治疗14天，每日两次。
2.4实验结果
2.4.1嗜酸性粒细胞的计数与喷嚏次数结果
统计小鼠肺部灌洗液嗜酸性粒细胞的计数，以及末次给药后20min内小鼠喷嚏次数的计数，结果如表4所示。
表4.实施例11对嗜酸性粒细胞哮喘小鼠嗜酸性粒细胞和喷嚏次数的影响(平均值±SD，n＝10)
##P<0.01vs空白组；*P<0.05，**P<0.01vs模型组。
与空白组相比，模型组肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞百分比显著性升高(P<0.01)，提示造模成功；与模型组相比，实施例11化合物给药组能显著性降低嗜酸性粒细胞(P<0.05，P<0.01)，具有显著性治疗作用；且提示有剂量梯度关系。
与空白组相比，模型组20分钟内喷嚏次数显著性升高(P<0.01)，提示造模 成功；与模型组相比，实施例11化合物给药组均能显著性降低20分钟内喷嚏次数(P<0.01)，具有显著性治疗作用；且提示有剂量梯度关系。
2.4.2肺泡灌洗液中IgE、IL-4的含量
测量小鼠嗜酸性粒细胞哮喘肺泡灌洗液中IgE和IL-4的含量，结果如表5所示。
表5.实施例11对小鼠嗜酸性粒细胞哮喘肺泡灌洗液中IgE和IL-4的影响(Mean±SD，n＝10)
##P<0.01vs空白组；*P<0.05，**P<0.01vs模型组。
与空白组相比，模型组小鼠肺泡灌洗液中IgE含量显著性升高(P<0.01)，提示造模成功；与模型组相比，实施例11化合物给药组均能显著性降低肺泡灌洗液中IgE含量(P<0.05，P<0.01)，具有显著性治疗作用；且提示有剂量梯度关系。
与空白组相比，模型组小鼠肺泡灌洗液中IL-4含量显著性升高(P<0.01)，提示造模成功；与模型组相比，实施例11化合物给药组均能显著性降低肺泡灌洗液中IL-4含量(P<0.01)，具有显著性治疗作用；且提示有剂量梯度关系。
(六)本发明化合物对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响
1.动物与试剂
2.实验过程
2.1实验分组
将50只SD大鼠按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为空白对照组、模型对照组、实施例11给药组(剂量分别为5、10、20mg/kg)。
2.2实验试剂配制
博来霉素溶液：称取5mg博来霉素粉末，加入1ml生理盐水中混匀，配制成浓度为5mg/ml的溶液。
待测样品溶液：分别称取5mg、10mg和20mg实施例11化合物溶于10ml0.5％ CMC-Na水溶液中，配制成浓度为0.5、1、2mg/ml的溶液。
2.3实验方案
大鼠水合氯醛麻醉后，将博来霉素溶液通过声带注入气管，剂量为5mg/kg，给药体积1ml/kg；空白组大鼠气管内注射等量生理盐水。气管内注射博莱霉素的时间定为第1天，第8天开始灌胃给药，给药容积为10ml/kg，每日两次，连续给药14天。各组动物于第22天取血与肺脏。处死大鼠后，暴露气管，将静脉插管至大鼠支气管，PBS(5ml)灌洗2次，收集灌洗液。然后，1500r/min离心10min。收集上清液。
2.4实验结果
通过Masson’s染色判断纤维化程度；同时，ELISA测量肺泡灌洗液中的IL-6、TNF-α和TGF-β1水平。
表6.实施例11对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响(平均值±SD，n＝10)
##P<0.01vs空白组；*P<0.05，**P<0.01vs模型组。
如图2和表6所示，与空白对照组相比，模型组大鼠在博来霉素诱导后能显著性升高肺组织的胶原纤维含量(P<0.01)，提示造模成功；与模型对照组相比，实施例11给药组均能显著性降低肺组织胶原纤维含量(P<0.05，P<0.01)， 提示给药组有治疗作用。
表7.实施例11对博来霉素诱导的大鼠肺泡灌洗液中TGF-β和IL-6的影响(平均值±SD，n＝10)
#P<0.05，##P<0.01vs空白组；*P<0.05，**P<0.01vs模型组。
如表7所示，与空白对照组相比，模型组大鼠在博来霉素诱导后能显著性升高肺泡灌洗液中TGF-β和IL-6的含量(P<0.01)，提示造模成功；与模型对照组相比，实施例11给药组均能显著性降低肺泡灌洗液中TGF-β和IL-6的含量(P<0.05，P<0.01)，提示给药组有治疗作用。
本文提及的参考文献均通过引用并入本文。应当理解，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，可以对本发明的技术方案进行许多变化和修改。

Claims (14)

  1. 式(I)所示的化合物
    或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中
    X选自S＝O、S(＝O)2；
    R1选自H、C1-C6烷基；
    R1’选自C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基；其中所述碳环基、芳基、杂芳基、杂环基被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基取代；
    R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
    R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)NRcRd；
    Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基、卤素、羟基，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成C3-C6碳环基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C6烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
    Het选自 5或6元氮杂芳基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
    Ar选自5-10元杂环基、5-10元杂芳基、C6-C10芳基、C3-C8碳环基；所述杂 环基、杂芳基、芳基、碳环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
    条件是：当X为S＝O、Het为R1’为C3-C8碳环基时，L不为键。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中
    X选自S＝O、S(＝O)2；
    R1选自H、C1-C6烷基；
    R1’选自C3-C8碳环基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基；其中所述碳环基、芳基、杂芳基被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基取代；
    R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)NRcRd；
    Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基、卤素、羟基，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成C3-C6碳环基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C6烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
    Het选自 5或6元氮杂芳基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
    Ar选自5-10元杂芳基、C6-C10芳基；所述杂芳基、芳基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
    条件是：当X为S＝O、Het为R1’为C3-C8碳环基时，L不为键。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中
    R1’选自环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基；上述基团被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基取代；
    R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C20烷基、-C(＝O)NRcRd；
    Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C6烷基、卤素、羟基，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成C3-C6碳环基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C6烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
    Het选自 5或6元氮杂芳基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NRaC(＝O)-、-C(＝O)-N(Ra)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；
    Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
    条件是：当X为S＝O、Het为R1’为环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、或环己烷基时，L不为键。
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中
    R1’选自环丁烷基、苯基、吡啶基；上述基团被R4-(CRaRb)m-取代且任选地被卤素取代；
    R2、R2’、R3、R3’各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    R4选自羟基、氨基、巯基、羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C20烷基、-C(＝O)NRcRd；
    Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C3烷基、卤素，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成环丙烷基、环丁烷基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C3烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
    Het选自 5或6元氮杂芳基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NRaC(＝O)-、-C(＝O)-N(Ra)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；
    Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    n选自1或2；m选自1、2、3、4、5或6；
    条件是：当X为S＝O、Het为R1’为环丁烷基时，L不为键。
  5. 根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其为式(II)所示化合物：
    或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
    X选自S＝O、S(＝O)2；
    R1选自H、C1-C6烷基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
    Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    条件是：当X为S＝O时，L不为键。
  6. 根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其为式(III)所示化合物：
    或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
    X选自S＝O、S(＝O)2；
    R1选自H、C1-C6烷基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
    Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
  7. 根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其为式(IV)所示化合物：
    或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
    X选自S＝O、S(＝O)2；
    R1选自H、C1-C6烷基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
    Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    条件是：当X为S＝O时，L不为键。
  8. 根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其为式(V)所示化合物：
    或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
    X选自S＝O、S(＝O)2；
    R1选自H、C1-C6烷基；
    R4选自羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基、-
    C(＝O)NRcRd；
    Ra、Rb各自独立地选自氢、C1-C3烷基、卤素，或者Ra、Rb与其连接的碳原 子一起形成环丙烷基、环丁烷基；Rc、Rd各自独立地选自氢、C1-C3烷基，或者Rc、Rd与其连接的氮原子一起形成3至6元杂环基；
    R5选自卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    Het选自 5或6元氮杂芳基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
    Ar选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；p选自1、2或3；q选自1、2或3。
  9. 根据权利要求8所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物、及其药学上可接受的盐，其中，
    X选自S＝O、S(＝O)2；
    R1选自H、C1-C6烷基；
    R4选自羧基、-SO3H、-PO4H、四氮唑基、三氮唑基、-C(＝O)OC1-C6烷基；
    Ra、Rb各自独立地选自氢、卤素，或者Ra、Rb与其连接的碳原子一起形成环丙烷基、环丁烷基；
    R5选自卤素、羟基、氨基、巯基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    Het选自 三氮唑基；
    L选自键、C1-C6亚烷基、-C(＝O)-、-NReC(＝O)-、-C(＝O)-N(Re)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)O-；Re选自氢或C1-C6烷基；
    Ar选自吡啶基、嘧啶基、苯基；上述基团任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
    p选自1；q选自1。
  10. 根据权利要求1所述的化合物，选自：

    或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐。
  11. 药物组合物，包含根据权利要求1-10中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
  12. 根据权利要求1-10中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、前药、同位素标记物及其药学上可接受的盐以及根据权利要求 11所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗由磷酸二酯酶4B介导的疾病的药物中的用途。
  13. 根据权利要求12所述的用途，其中所述疾病为炎症性疾病。
  14. 根据权利要求12所述的用途，其中所述由磷酸二酯酶4B介导的炎症性疾病，包括但不限于特应性皮炎、类风湿性关节炎、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、特发性肺纤维化、间质性肺病、慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、接触性皮炎、银屑病、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、抑郁症、双极性抑郁症、躁狂症、焦虑、精神分裂症、阿尔兹海默症、脑卒中、慢性疼痛、肝纤维化、肾纤维化、和肾炎。
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