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WO2024101345A1 - 異常タンパク質の凝集体蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤 - Google Patents

異常タンパク質の凝集体蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤 Download PDF

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WO2024101345A1
WO2024101345A1 PCT/JP2023/040020 JP2023040020W WO2024101345A1 WO 2024101345 A1 WO2024101345 A1 WO 2024101345A1 JP 2023040020 W JP2023040020 W JP 2023040020W WO 2024101345 A1 WO2024101345 A1 WO 2024101345A1
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WO
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seq
amino acid
acid sequence
set forth
sequence set
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PCT/JP2023/040020
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English (en)
French (fr)
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龍禎 奥野
幹人 清水
俊英 山下
操 須賀
拓也 藤田
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Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
University of Osaka NUC
Original Assignee
Osaka University NUC
Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
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    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present invention relates to an agent for suppressing the accumulation of abnormal protein aggregates, particularly an agent for preventing or treating frontotemporal lobar degeneration, which contains an RGMa inhibitor.
  • Non-Patent Document 1 Misfolded protein aggregates can also spread between adjacent cells and to distant areas of the brain via cerebrospinal fluid, causing the aggregation lesions to spread.
  • Ubiquitin is one of the tags for misfolded proteins, and harmful protein aggregates that cause neurodegeneration (such as aggregates of TDP-43, Tau, ⁇ -Synuclein, and SOD1) are also ubiquitinated (Non-Patent Document 1). Detection of ubiquitin-positive protein aggregates and inclusions in autopsies of patient brains has been reported in various neurodegenerative diseases (Non-Patent Document 3).
  • Frontotemporal Dementia is a group of neurodegenerative diseases that cause significant behavioral abnormalities, psychiatric symptoms, and language disorders due to progressive and localized neurodegeneration and atrophy of the frontal and anterior temporal lobes of the brain (Non-Patent Document 4).
  • FTD is broadly divided into behavioral variant FTD (bvFTD), nonfluent-variant primary progressive aphasia (nfvPPA; progressive nonfluent aphasia, PNFA), and semantic-variant PPA (svPPA; semantic dementia, SD) (Non-Patent Document 4).
  • FTD-MND accompanied by motor neuron disease
  • bvFTD is the most common subtype, accounting for approximately 50% of FTD cases. It typically affects adults under the age of 65 and is characterized by severe impairment of behavior, personality, and cognition.
  • FTD is a frontotemporal lobar degeneration (FTLD) in which specific proteins aggregate and accumulate in inclusion bodies in neurons and glial cells.
  • Tau protein, transactive response DNA binding protein of 43 kDa (TDP-43) protein, and fused in sarcoma (FUS) protein have been identified as the main components of inclusion bodies, and are used as a pathological classification (Non-Patent Document 5).
  • a group in which tau protein is found among the proteins accumulated in intracellular inclusion bodies is classified as FTLD-tau. It is known that tau protein accumulated in the brains of FTLD-tau patients undergoes various post-translational modifications such as hyperphosphorylation, fragmentation, and ubiquitination (Non-Patent Document 6).
  • Non-Patent Document 5 A clinical-pathological correlation report has shown that more than half of clinically diagnosed bvFTD cases are FTLD-TDP, approximately 70% of nfvPPA (PNFA) cases are FTLD-tau, and approximately 80% of svPPA (SD) cases are FTLD-TDP (Non-Patent Document 7). If the clinical diagnosis is FTD, there is a very high possibility that the underlying pathology has ubiquitinated protein aggregates.
  • PNFA nfvPPA
  • SD svPPA
  • RGM (repulsive guidance molecule) is a membrane protein that was initially identified as an axon guidance molecule in the visual system (Non-Patent Document 8).
  • the RGM family includes three members called RGMa, RGMb, and RGMc (Non-Patent Document 9), and it is known that at least RGMa and RGMb act in the same signal transduction mechanism (Non-Patent Document 10).
  • RGMc plays an important role in iron metabolism. Subsequent research has revealed that RGM has functions such as axon guidance and lamina formation in Xenopus and chicken embryos, and control of closure of the cranial neural tube in mouse embryos (Non-Patent Document 11).
  • Patent Document 1 discloses an axon regeneration promoter containing an anti-RGM neutralizing antibody as an active ingredient.
  • RGMa is believed to be an inhibitor of axonal regeneration after central nervous system injury because it is re-expressed after central nervous system injury in adult humans and rats, and RGMa inhibition enhances axonal growth and promotes functional recovery after spinal cord injury in rats (Non-Patent Document 12).
  • Specific antibodies that neutralize RGMa are described in, for example, Patent Document 2 (e.g., 5F9, 8D1), Patent Document 3 (e.g., AE12-1, AE12-1Y), and Patent Document 4 (e.g., r116A3, r70E4, r116A3C, rH116A3).
  • Patent Document 2 e.g., 5F9, 8D1
  • Patent Document 3 e.g., AE12-1, AE12-1Y
  • Patent Document 4 e.g., r116A3, r70E4, r116A3C, rH116A3
  • Repulsive guidance molecule b inhibits neurite growth and is increased after spinal cord injury. Biochem. Biophys. Res. Commun. 382, 795-800 (2009) Yamashita, T., Mueller, B.K. & Hata, K. Neogenin and repulsive guidance molecule signaling in the central nervous system. Curr. Opin. Neurobiol.17, 29-34 (2007) Hata, K. et al. RGMa inhibition promotes axonal growth and recovery after spinal cord injury. J. Cell Biol. 173, 47-58 (2006)
  • the objective of the present invention is to provide a drug that has the effect of inhibiting the accumulation of abnormal protein aggregates and is effective against diseases involving the accumulation of abnormal protein aggregates.
  • RGMa inhibitors in particular anti-RGMa neutralizing antibodies, have the effect of suppressing the accumulation of abnormal protein aggregates and are expected to be effective in treating diseases involving the accumulation of abnormal protein aggregates, and thus completed the present invention. That is, the present invention is as follows.
  • An agent for suppressing the accumulation of abnormal protein aggregates comprising an RGMa inhibitor as an active ingredient.
  • An inhibitor of the uptake of abnormal proteins into nerve cells which contains an RGMa inhibitor as an active ingredient.
  • the agent according to 1 or 2 above, wherein the agent for suppressing accumulation of abnormal protein aggregates or the inhibitor of uptake of abnormal proteins into nerve cells is an agent for preventing or treating a disease associated with accumulation of abnormal protein aggregates. 4.
  • the disease associated with accumulation of abnormal protein aggregates is a disease selected from spinocerebellar degeneration, spinocerebellar ataxia, dentatorubral-pallidoluysian atrophy, fragile X-associated tremor/ataxia syndrome, spinal-bulbar muscular atrophy, fragile X syndrome, fragile XE syndrome, myotonic dystrophy (type 1), fatal insomnia, frontotemporal dementia or frontotemporal lobar degeneration, Pick's disease, primary progressive aphasia, primary progressive non-fluent aphasia, progressive supranuclear palsy, corticobasal degeneration, argyrophilic grain dementia, glial cell spheroid inclusion tauopathy, and dementia with Lewy bodies.
  • a disease selected from spinocerebellar degeneration, spinocerebellar ataxia, dentatorubral-pallidoluysian atrophy, fragile X-associated tremor/ataxia syndrome, spinal-bulbar muscular atrophy,
  • the disease associated with accumulation of abnormal protein aggregates is frontotemporal dementia (FTD) or frontotemporal lobar degeneration (FTLD).
  • FTD frontotemporal dementia
  • FTLD frontotemporal lobar degeneration
  • the RGMa inhibitor is an anti-RGMa neutralizing antibody.
  • the anti-RGMa neutralizing antibody is a humanized antibody.
  • the anti-RGMa neutralizing antibody is an antibody that recognizes an amino acid sequence selected from SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, and SEQ ID NO: 39.
  • the anti-RGMa neutralizing antibody is one of the following (a) to (l): (a) an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:5, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:6, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:7, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:8, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:9, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:10; (b) an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:
  • a method for preventing or treating a disease associated with the accumulation of abnormal protein aggregates comprising administering an effective amount of an RGMa inhibitor to a mammal in need of treatment.
  • 11. The method for prevention or treatment according to 10 above, wherein the RGMa inhibitor is an anti-RGMa neutralizing antibody.
  • 12. Use of an RGMa inhibitor for the manufacture of an agent for the prevention or treatment of a disease involving the accumulation of abnormal protein aggregates.
  • 13. The use according to 12 above, wherein the RGMa inhibitor is an anti-RGMa neutralizing antibody.
  • an RGMa inhibitor particularly an anti-RGMa neutralizing antibody, has an effect of inhibiting the accumulation of abnormal protein aggregates or the uptake of abnormal proteins into nerve cells, and is useful as a preventive or therapeutic agent for diseases involving the accumulation of abnormal protein aggregates, such as spinocerebellar degeneration, spinocerebellar ataxia, dentatorubral-pallidoluysian atrophy, fragile X-associated tremor/ataxia syndrome, spinal-bulbar muscular atrophy, fragile X syndrome, fragile XE syndrome, myotonic dystrophy (type 1), fatal insomnia, frontotemporal dementia or frontotemporal lobar degeneration, Pick's disease, primary progressive aphasia, primary progressive non-fluent aphasia, progressive supranuclear palsy, corticobasal degeneration, argyrophilic grain dementia, glial cell globular inclusion tauopathy, or dementia with Lewy bodies.
  • abnormal protein aggregates such as spinocerebellar degeneration, spin
  • Figure 1 shows immunostaining images (photographs in place of drawings) and diagrams showing that anti-RGMa neutralizing antibody (Anti-RGMa Ab; hereafter, the terms in the drawings are synonymous) preserves the number of motor neurons with normal morphology in mSOD1 mice.
  • A Representative images of motor neurons in the spinal cord of mSOD1 mice detected by Nissl staining. The number of anterior horn cells in mSOD1 mice administered with control antibody (Control Ab; hereafter, the terms in the drawings are synonymous) was smaller than that in mSOD1 mice administered with anti-RGMa neutralizing antibody, and it was observed that the anterior horn cells in the mSOD1 mice administered with control antibody were atrophied.
  • Figure 4(B) shows that RGMa enhances the entry of mutant SOD1 protein into cells in primary rat cortical neurons.
  • FITC-positive cells were selected using immunostained images depicting SOD1 protein with FITC-conjugated anti-FLAG antibody, and the average signal intensity was quantitatively analyzed. A total of 36 cells selected from three wells for each condition were quantified. Mean values ⁇ standard error are shown with individual plots for each cell.
  • Statistical analysis was performed using one-way ANOVA and Tukey's multiple comparisons test.
  • FIG. 5 shows that cellular entry of mutant SOD1 protein enhanced by RGMa is inhibited by anti-RGMa neutralizing antibody in primary rat cortical neurons.
  • FITC-positive cells were selected using immunostaining images in which SOD1 protein was visualized using FITC-conjugated anti-FLAG antibody, and the average signal intensity was quantitatively analyzed. A total of 36 cells selected from three wells for each condition were quantified. Values are shown as mean ⁇ standard error with individual plots for each cell. Statistical analysis was performed using one-way ANOVA and Tukey's multiple comparisons test.
  • FIG 6 shows that RGMa enhances the entry of dextran into cells in primary rat cortical neurons, which is inhibited by anti-RGMa neutralizing antibodies.
  • a total of 36 cells were selected from three wells for each condition, and the mean fluorescence intensity, which indicates the uptake of dextran into cells, was quantitatively analyzed. The values are shown as mean ⁇ standard error with individual plots for each cell. Statistical analysis was performed using one-way ANOVA and Tukey's multiple comparisons test.
  • Figure 7 shows that RGMa enhances the entry of human Tau protein into cells in primary rat cortical neurons and is inhibited by anti-RGMa neutralizing antibody.
  • Statistical analysis was performed using Welch's t-test. 9 shows that RGMa concentrations are elevated in the cerebrospinal fluid of FTD patients.
  • ANCOVA was used for statistical analysis.
  • ND indicates non-neurodegenerative disease patients
  • OND indicates other neurodegenerative disease patients.
  • neutralization refers to the ability to bind to a target of interest and inhibit any of the functions of that target.
  • an RGMa inhibitor is a substance that inhibits the biological activity of RGMa as a result of binding to RGMa.
  • an epitope includes a polypeptide determinant capable of specific binding to an immunoglobulin or T-cell receptor.
  • an epitope includes a chemically active surface grouping of a molecule (e.g., amino acids, sugar side chains, phosphoryl or sulfonyl) and in certain embodiments may have specific three-dimensional structural characteristics and/or specific charge characteristics.
  • An epitope is the region of an antigen that is bound by an antibody.
  • isolated in reference to an isolated RGMa inhibitor (e.g., an antibody, etc.) means that it has been identified and separated and/or recovered from components in the natural state. Impurities in the natural state are substances that may interfere with the diagnostic or therapeutic use of the antibody, and include enzymes, hormones, and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes.
  • an RGMa inhibitor purified by at least one purification step can be referred to as an "isolated RGMa inhibitor.”
  • an antibody broadly refers to an immunoglobulin (Ig) molecule consisting of four polypeptide chains, two heavy chains (H chains) and two light chains (L chains), which substantially retain the epitope-binding property of an Ig molecule.
  • Ig immunoglobulin
  • human antibodies refers to an antibody in which both the light chain and the heavy chain are derived from human immunoglobulin.
  • human antibodies include IgG (including IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4) having a ⁇ heavy chain, IgM having a ⁇ heavy chain, IgA (including IgA1 and IgA2) having an ⁇ heavy chain, IgD having a ⁇ heavy chain, or IgE having an ⁇ heavy chain.
  • the light chain includes either a ⁇ chain or a ⁇ chain.
  • a humanized antibody refers to an antibody that is composed of a variable region consisting of a complementarity determining region of an antibody derived from a non-human animal and a framework region derived from a human antibody, and a constant region derived from a human antibody.
  • a chimeric antibody refers to an antibody in which the light chain, the heavy chain, or both, are composed of a variable region of non-human origin and a constant region of human origin.
  • a monospecific antibody is an antibody that has a single antigen specificity and has a single independent antigen recognition site.
  • a monospecific antibody that recognizes RGMa may be referred to as an RGMa monospecific antibody in the present specification.
  • a multispecific antibody refers to an antibody that has two or more independent antigen recognition sites having two or more different antigen specificities, and examples of such an antibody include a bispecific antibody having two antigen specificities and a trispecific antibody having three antigen specificities.
  • Complementarity determining region refers to the region of the variable region of an immunoglobulin molecule that forms an antigen binding site, also called hypervariable region, and refers to the part in which the amino acid sequence varies greatly from one immunoglobulin molecule to another.
  • the CDRs of an immunoglobulin molecule are determined according to the Kabat numbering system (Kabat et al., 1987 and 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA). In this specification, CDR sequences defined according to the Kabat numbering system are used unless otherwise stated. In addition, the CDR sequences of SEQ ID NOs: 5 to 15 are defined according to the numbering system of IMGT (Lefranc M. -P., Immunology Today 18,509 (1997); Lefranc M.
  • An effective amount refers to an amount of a prophylactic or therapeutic agent sufficient to reduce or ameliorate the severity and/or duration of a disorder or one or more symptoms thereof, prevent the progression of a disorder, reverse a disorder, prevent the recurrence, occurrence, onset or progression of one or more symptoms associated with a disorder, detect a disorder, or enhance or improve one or more prophylactic or therapeutic effects of another treatment (e.g., a prophylactic or therapeutic agent).
  • Percent (%) identity of an amino acid sequence of a candidate polypeptide sequence such as a variable region, with respect to an amino acid sequence of a reference polypeptide sequence is defined as the percentage of amino acid residues in the candidate sequence that are identical to the amino acid residues of a particular reference polypeptide sequence, after aligning the sequences, introducing gaps, if necessary, to obtain the maximum percent identity, and not considering any conservative substitutions as part of the sequence identity. Alignment for purposes of determining percent identity can be achieved by a variety of methods within the skill of the art, such as using publicly available computer software, such as BLAST, BLAST-2, ALIGN, or Megalign (DNASTAR) software.
  • percent identity values are obtained by using the sequence comparison computer program BLAST in pairwise alignments.
  • percent identity of a given amino acid sequence A with a given amino acid sequence B is calculated as follows: 100 times the fraction X/Y, where X is the number of amino acid residues scored as identical by the sequence alignment program BLAST program alignment of A and B, and Y is the total number of amino acid residues in B.
  • Conservative substitution means replacing an amino acid residue with another chemically similar amino acid residue without substantially altering the activity of the peptide.
  • a hydrophobic residue may be replaced with another hydrophobic residue
  • a polar residue may be replaced with another polar residue with the same charge, etc.
  • Examples of functionally similar amino acids that can be substituted in this way include non-polar (hydrophobic) amino acids such as alanine, valine, isoleucine, leucine, proline, tryptophan, phenylalanine, and methionine.
  • Polar (neutral) amino acids include glycine, serine, threonine, tyrosine, glutamine, asparagine, and cysteine.
  • Positively charged (basic) amino acids include arginine, histidine, and lysine.
  • Negatively charged (acidic) amino acids include aspartic acid and glutamic acid.
  • Treatment includes any treatment of a disease in a subject, preferably a mammal, especially a human, including arresting the progression of diseases and conditions, eliminating, curing, reducing or alleviating such diseases and conditions.
  • prevention includes preventing or suppressing the onset of the above-mentioned disease in a subject to be treated, preferably a mammal, particularly a human. Furthermore, “prevention” in the present invention also includes “prevention of recurrence” which prevents the recurrence of the above-mentioned disease which repeats remission and recurrence in a subject to be treated, preferably a mammal, particularly a human.
  • the present invention has a novel use of an RGMa inhibitor, which has the effect of inhibiting the accumulation of abnormal protein aggregates, and provides a preventive or therapeutic agent for diseases associated with the accumulation of abnormal protein aggregates.
  • the present invention also provides a method for preventing or treating a disease associated with the accumulation of abnormal protein aggregates, comprising the step of administering to a mammal in need of treatment a preventive or therapeutic agent containing an effective amount of an RGMa inhibitor.
  • the RGMa inhibitor of the present invention may be any substance that acts on RGMa itself and inhibits or attenuates the activity of RGMa (hereinafter, in this specification, may be simply referred to as "RGMa activity").
  • RGMa activity a substance that has the activity of binding to RGMa and directly inhibiting (attenuating) RGMa activity, or the activity of inhibiting the binding of RGMa to a receptor and indirectly inhibiting (attenuating) RGMa activity (e.g., the compounds and antibodies described below) is referred to as the RGMa inhibitor of the present invention.
  • the RGMa inhibitor of the present invention may be a substance that suppresses the expression of RGMa, and for example, substances that inhibit the expression of RGMa and inhibit (attenuate) RGMa activity (e.g., the nucleic acid molecules described below) are also included in the RGMa inhibitor of the present invention.
  • RGMa has been identified as a neurite outgrowth inhibitor in the central nervous system, and human RGMa protein is biosynthesized as a precursor protein consisting of 450 amino acids as shown in SEQ ID NO:1.
  • the signal peptide Met1-Pro47 (referring to the peptide from the first methionine residue from the N-terminus to the 47th proline residue, hereafter the same) present at the N-terminus is removed, and the peptide bond between Asp168 and Pro169 is cleaved to generate the N-terminal domain, and the C-terminal peptide Ala425-Cys450 of the fragment on the C-terminus side of Pro169 is removed, and a GPI anchor is added to the C-terminal carboxyl group of Ala424, which has become the C-terminus, to generate the C-terminal domain.
  • Human RGMa protein is expressed on the cell membrane via a GPI anchor as a mature protein in which the N-terminal domain (Cys48-Asp168) and the C-terminal domain (Pro169-Ala424) are linked by disulfide bonds.
  • RGMa may be derived from any animal, but is preferably human RGMa.
  • the precursor protein of human RGMa consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
  • the precursor protein of mouse RGMa consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 in the sequence listing, and the precursor protein of rat RGMa consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3 in the sequence listing, but since the C-terminal peptide is removed, the mature proteins have the same amino acid sequence.
  • the RGMa gene includes, but is not limited to, the human RGMa gene having the base sequence shown in SEQ ID NO: 4.
  • the base sequences of RGM genes derived from various organisms can be easily obtained from known databases (GenBank, etc.).
  • RGMa inhibitors of the present invention include low molecular weight compounds, anti-RGMa neutralizing antibodies, functionally modified antibodies thereof, conjugated antibodies thereof, or antigen-binding fragments thereof, as well as RGMa nucleic acid molecules such as siRNA (short interfering RNA), shRNA (short hairpin RNA), or antisense oligonucleotides.
  • RGMa nucleic acid molecules such as siRNA (short interfering RNA), shRNA (short hairpin RNA), or antisense oligonucleotides.
  • anti-RGMa neutralizing antibodies preferred are anti-RGMa neutralizing antibodies, functionally modified antibodies thereof, conjugated antibodies thereof, and antigen-binding fragments thereof, more preferred are anti-RGMa neutralizing antibodies or antigen-binding fragments thereof, with anti-RGMa neutralizing antibodies being particularly preferred.
  • the anti-RGMa neutralizing antibody may be any antibody that binds to RGMa and neutralizes RGMa activity, and may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody. In the present invention, a monoclonal antibody is preferred.
  • the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention may be an RGMa monospecific antibody or a multispecific antibody that recognizes multiple RGMa and other antigens, but is preferably an RGMa monospecific antibody.
  • Specific epitopes in human RGMa are preferably one or more of SEQ ID NO:16 (amino acid numbers 47-69 of SEQ ID NO:1), SEQ ID NO:36 (amino acid numbers 298-311 of SEQ ID NO:1), SEQ ID NO:37 (amino acid numbers 322-335 of SEQ ID NO:1), SEQ ID NO:38 (amino acid numbers 349-359 of SEQ ID NO:1), and SEQ ID NO:39 (amino acid numbers 367-377 of SEQ ID NO:1), more preferably the combination of SEQ ID NO:36 and 37, and particularly preferably the combination of SEQ ID NO:36, 37, and 39.
  • SEQ ID NO:16 amino acid numbers 47-69 of SEQ ID NO:1
  • SEQ ID NO:36 amino acid numbers 298-311 of SEQ ID NO:1
  • SEQ ID NO:37 amino acid numbers 322-335 of SEQ ID NO:1
  • SEQ ID NO:38 amino acid numbers 349-359 of SEQ
  • the anti-RGMa neutralizing antibodies of the present invention include polyclonal and monoclonal antibodies obtained by immunizing a mammal such as a mouse with an antigen, the RGMa protein or a partial fragment thereof (for example, the epitope fragment described above), chimeric and humanized antibodies produced using recombinant gene technology, and human antibodies produced using transgenic animals producing human antibodies.
  • a mammal such as a mouse
  • an antigen for example, the epitope fragment described above
  • chimeric and humanized antibodies produced using recombinant gene technology for example, the epitope fragment described above
  • human antibodies produced using transgenic animals producing human antibodies transgenic animals producing human antibodies.
  • anti-RGMa neutralizing antibodies of the present invention include the following antibodies (a) to (l), and the methods described in Patent Documents 2 to 4 can be used for producing each of them.
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22;
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28;
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 31, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34
  • the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having an epitope of SEQ ID NO: 16
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34
  • the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having SEQ ID NO: 16 as an epitope
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 40, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34
  • the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having an epitope of SEQ ID NO: 16
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 41, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34
  • the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having SEQ ID NO: 16 as an epitope
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 42, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34
  • the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having an epitope of SEQ ID NO: 16
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34
  • the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having an epitope of SEQ ID NO: 16
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34 (the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having SEQ ID NO: 16 as an epitope); and SEQ ID NO: 29: TGTSSSVGDSIYVS SEQ ID NO: 30: DVTKRPS SEQ ID NO:44: ISYAGTDTL SEQ ID NO: 32: SHGIS SEQ ID NO: 33: WISPYSGNTNYAQKLQG SEQ ID NO: 34
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising an LCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, an LCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, and an LCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45, and a heavy chain variable region comprising an HCDR1 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, an HCDR2 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, and an HCDR3 comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34
  • the anti-RGMa neutralizing antibody further includes an antibody having an epitope of SEQ ID NO: 16
  • examples of the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention include the antibodies described in WO2016/175236, WO2009/106356, and WO2013/112922, and the antibodies described in these publications are also included in the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention.
  • examples of the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention include antibodies selected from the following (a') to (i').
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 47;
  • SEQ ID NO: 46 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYFCQQLNTLPWTFGGGTKVEME
  • SEQ ID NO: 47 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFSDAWMDWVRQAPGKGLEWVAEIRSKANNHATYYAESVKGRFTISRDDSKSIVYLQMNSLRTEDTALYYCTRRDGAYWGKGTTVTVSS
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48 and a heavy chain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 49;
  • SEQ ID NO:48 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYFCQQLNTLPWTFGGGTKVEMERTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
  • SEQ ID NO:49 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFSDAWMDWVRQAPGKGLEWVAEIRSKANNHATYYAESVKGRFTISRDDSKSIVYLQMNSLRTEDTALYYCTRRDGAYWGKG
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 51;
  • SEQ ID NO:50 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52 and a heavy chain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 53;
  • SEQ ID NO:52 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
  • SEQ ID NO:53 DVKLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITTSYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGTNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLRLNSVTTEDTA
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 54 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 55;
  • SEQ ID NO:54 DVVLTQTPVSLSVTLGDQASMSCRSSQSLEYSDGYTFLEWFLQKPGQSPQLLIYEVSNRFSGVPDRFIGSGSGTDFTLKISRVEDLGVYYCFQATHDPLTFGSGTKLEIKR
  • SEQ ID NO:55 EVQLVESGGGLVQPGSSLKLSCVASGFTFSNYGMNWIRQAPKKGLEWIGMIYYDSSEKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLEMNSLRSEDTAIYYCAKGTTPDYWGQGVMVTVSS
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 57;
  • SEQ ID NO:56 DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIDNYLAWYHQKPGKSPRLLIYGATNLADGVPSRFSGSRSGTQFSLKINRLQIEDLGIYYCLQGYIPPRTFGGGTKLELKR
  • SEQ ID NO:57 EVQLQQSGPELVKPGTSVKMSCKTSGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYIIPYNDNTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARRNEYYGSSFFDYWGQGTTLTVSS
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region (lambda chain) comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 58 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 59;
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 60 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 59; and SEQ ID NO: 60: QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSSVGDSIYVSWYQQHPGKAPKLMLYDVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCYSYAGTDTLFGGGTKVTVL SEQ ID NO:59: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHGISWVRQAPGQGLDWMGWISPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR VGSGPYYYMDVWGQGTLVTVSS
  • SEQ ID NO: 61 QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSSVGDSIYVSWYQQHPGKAPKLMLYDVTKRPSGVPDRFSGSSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCYSYAGTDTLFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 62: EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHGISWVRQAPGQGLDWMGWISPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVGS
  • the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention can be produced by a commonly used existing production method.
  • the antigen may be used for immunization as is, or may be used as a complex with a carrier protein.
  • Condensing agents such as glutaraldehyde, carbodiimide, and maleimide active ester can be used to prepare the complex of the antigen and carrier protein.
  • carrier proteins include bovine serum albumin, thyroglobulin, hemocyanin, and KLH.
  • Mammals to be immunized include mice, rats, hamsters, guinea pigs, rabbits, cats, dogs, pigs, goats, horses, and cows, and inoculation methods include subcutaneous, intramuscular, or intraperitoneal administration.
  • the vaccine may be administered by mixing with complete or incomplete Freund's adjuvant, and is usually administered once every 2 to 5 weeks.
  • Antibody-producing cells obtained from the spleen or lymph nodes of immunized animals are fused with myeloma cells and isolated as hybridomas. Myeloma cells derived from mammals, such as mice, rats, and humans, are used.
  • Polyclonal antibodies can be obtained, for example, by immunizing a mammal as described above with the antigen, optionally together with Freund's adjuvant, and from the serum obtained from the immunized animal.
  • monoclonal antibodies can be obtained as follows. That is, the above-mentioned antigen is used as an immunogen, and the immunogen, together with Freund's adjuvant as necessary, is injected subcutaneously, intramuscularly, intravenously, into the footpad, or intraperitoneally into the above-mentioned mammal once or several times, or is implanted therein, to immunize the mammal. Usually, immunization is performed once to four times at intervals of about 1 to 14 days from the first immunization, and antibody-producing cells are obtained from the immunized mammal about 1 to 5 days after the final immunization.
  • Monoclonal antibodies can be obtained using methods well known to those skilled in the art (e.g., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987); Antibodies: A Laboratory Manual, Ed. Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)).
  • Hybridomas that secrete monoclonal antibodies can be prepared according to the method of Köhler and Milstein et al. (Nature, 256, 495, 1975) or a modification method similar thereto. That is, they are prepared by cell fusion of antibody-producing cells contained in the spleen, etc. obtained from an immunized mammal, with myeloma cells from a mammal, preferably a mouse, rat or human, that are not capable of producing autoantibodies.
  • Myeloma cells that can be used for cell fusion include, for example, mouse-derived myeloma P3/X63-AG8.653 (653), P3/NSI/1-Ag4-1 (NS-1), P3/X63-Ag8. U1 (P3U1), SP2/0-Ag14 (Sp2/O, Sp2), PAI, F0, or BW5147, rat-derived myeloma 210RCY3-Ag. 2.3, human-derived myeloma U-266AR1, GM1500-6TG-A1-2, UC729-6, CEM-AGR, D1R11, or CEM-T15.
  • fusion promoters include polyethylene glycol, and cell fusion can be achieved by reacting for approximately 1 to 10 minutes using polyethylene glycol (average molecular weight 1000 to 4000) at a concentration of approximately 20 to 50%, at a temperature of 20 to 40°C, preferably 30 to 37°C, at a ratio of antibody-producing cells to myeloma cells of approximately 1:1 to 10:1.
  • polyethylene glycol average molecular weight 1000 to 4000
  • cell fusion can be achieved by reacting for approximately 1 to 10 minutes using polyethylene glycol (average molecular weight 1000 to 4000) at a concentration of approximately 20 to 50%, at a temperature of 20 to 40°C, preferably 30 to 37°C, at a ratio of antibody-producing cells to myeloma cells of approximately 1:1 to 10:1.
  • Hybridoma clones that produce monoclonal antibodies can be screened by culturing the hybridomas, for example, in a microtiter plate and measuring the reactivity of the culture supernatant in the wells to the immunogen by an immunochemical method such as ELISA.
  • Hybridoma selection and breeding are usually performed in animal cell medium containing 10-20% fetal bovine serum with the addition of HAT (hypoxanthine, aminopterin, thymidine).
  • Monoclonal antibodies can be produced from hybridomas by culturing the hybridomas in vitro or by growing them in vivo, such as in ascites of a mammal such as a mouse or rat, and isolating the antibodies from the resulting culture supernatant or from the ascites of the mammal.
  • the nutrient medium may be a known nutrient medium or a nutrient medium prepared from a basal medium.
  • Basic media include, for example, low-calcium media such as Ham'F12 medium, MCDB153 medium, or low-calcium MEM medium, and high-calcium media such as MCDB104 medium, MEM medium, D-MEM medium, RPMI1640 medium, ASF104 medium, or RD medium.
  • the basic media can contain, for example, serum, hormones, cytokines, and/or various inorganic or organic substances, depending on the purpose.
  • Isolation and purification of monoclonal antibodies can be performed by subjecting the above-mentioned culture supernatant or ascites to saturated ammonium sulfate, the euglobulin precipitation method, the caproic acid method, the caprylic acid method, ion exchange chromatography (DEAE or DE52, etc.), affinity column chromatography such as an anti-immunoglobulin column or a protein A column, etc.
  • purification of monoclonal antibodies can be achieved by using known methods for purifying immunoglobulins, for example, ammonium sulfate fractionation, PEG fractionation, ethanol fractionation, the use of an anion exchanger, and affinity chromatography using RGMa protein, etc.
  • Monoclonal antibodies can also be obtained by the phage display method.
  • phages selected from any phage antibody library are screened using the target immunogen, and phages with the desired binding affinity to the immunogen are selected.
  • the antibody-corresponding sequence contained in the phage is isolated or sequenced, and an expression vector containing a nucleic acid molecule encoding an antibody or antigen-binding domain is constructed based on the isolated sequence or the sequence information determined.
  • a cell line transfected with such an expression vector is cultured to produce a monoclonal antibody.
  • human antibody library as the phage antibody library, human antibodies with the desired binding affinity can be generated.
  • the nucleic acid molecule encoding the anti-RGMa neutralizing antibody or its antigen-binding fragment of the present invention can be obtained, for example, by the following method. First, total RNA is prepared from cells such as hybridomas using a commercially available RNA extraction kit, and cDNA is synthesized by reverse transcriptase using random primers or the like. Next, cDNA encoding the antibody is amplified by PCR using oligonucleotides of sequences conserved in the variable regions of known human antibody heavy chain genes and light chain genes as primers. The sequence encoding the constant region can be obtained by amplifying a known sequence by PCR.
  • the base sequence of the DNA can be determined by a conventional method, such as by incorporating it into a plasmid for sequencing.
  • DNA encoding the monoclonal antibody of the present invention can be obtained by chemically synthesizing the sequence of the variable region or a portion thereof and linking it to a sequence containing the constant region.
  • the nucleic acid molecule may encode all of the heavy and light chain constant and variable regions, or may encode only the heavy and light chain variable regions.
  • the base sequences of the heavy and light chain constant regions are preferably those described in Nucleic Acids Research vol.14, p1779, 1986, The Journal of Biological Chemistry vol.257, p1516, 1982, and Cell vol.22, p197, 1980.
  • the functionally modified anti-RGMa neutralizing antibody is prepared by the following method. For example, when the present anti-RGMa neutralizing antibody is produced using CHO cells in which the ⁇ 1,6-fucosyltransferase (FUT8) gene has been destroyed as a host cell, an antibody with a reduced fucose content in the sugar chain and enhanced cell killing function is obtained, and when the antibody is produced using CHO cells in which the FUT8 gene has been introduced as a host cell, an antibody with a reduced cell killing function is obtained (WO 2005/035586, WO 2002/31140, WO 00/61739).
  • the complement activation function can be regulated by modifying the amino acid residues in the Fc region (U.S.
  • the half-life in blood can be extended by using a mutant Fc region that enhances the binding to FcRn, one of the Fc receptors (Hashiguchi Shuhei et al., Seikagaku, 2010, Vol. 82(8), p. 710).
  • These functionally modified antibodies can be produced by genetic engineering.
  • the half-life in blood can be extended by using a mutant Fc region that enhances the binding to FcRn, one of the Fc receptors (Hashiguchi Shuhei et al., Seikagaku, 2010, Vol. 82(8), p. 710).
  • These functionally modified antibodies can be produced by genetic engineering.
  • a conjugate antibody can be used as a modified molecule of the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention.
  • the conjugate antibody include a conjugate antibody obtained by chemically or genetically binding a functional molecule other than the anti-RGMa neutralizing antibody of the present application, such as a non-peptide polymer such as polyethylene glycol (PEG), a radioactive substance, a toxin, a low molecular weight compound, a cytokine, a growth factor (TGF- ⁇ , NGF, Neurotrophin, etc.), albumin, an enzyme, or another antibody, to the anti-RGMa neutralizing antibody.
  • PEG polyethylene glycol
  • the PEG When PEG is attached as a functional molecule, the PEG can have a molecular weight of, but not limited to, 2,000 to 100,000 Da, more preferably 10,000 to 50,000 Da, and can be either linear or branched. PEG can be attached to the N-terminal amino group of an amino acid in an anti-RGMa neutralizing antibody, for example, by using an NHS active group.
  • radioactive substance When a radioactive substance is used as the functional molecule, 131 I, 125 I, 90 Y, 64 Cu, 99 Tc, 77 Lu, 211 At, etc. are used.
  • the radioactive substance can be directly bound to the anti-RGMa neutralizing antibody by the chloramine T method or the like.
  • bacterial toxins e.g., diphtheria toxin
  • plant toxins e.g., ricin
  • low molecular weight toxins e.g., geldanamycin
  • maytansinoids calicheamicin, etc.
  • examples include daunomycin, doxorubicin, metronexate, mitomycin, neocarzinostatin, vindesine, and fluorescent dyes such as FITC.
  • luciferase e.g., firefly luciferase and bacterial luciferase; U.S. Pat. No. 4,737,456
  • malate dehydrogenase urease, peroxidase (e.g., horseradish peroxidase (HRPO)), alkaline phosphatase, ⁇ -galactosidase, glucoamylase, lysozyme, saccharide oxidase (e.g., glucose oxidase, galactose oxidase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase), heterocyclic oxidase (e.g., uricase and xanthine oxidase), lactoperoxidase, microperoxidase, etc.
  • HRPO horseradish peroxidase
  • alkaline phosphatase e.g., ⁇ -galactosidase
  • glucoamylase
  • Linkers used to chemically bind toxins, small molecules, or enzymes include divalent radicals (e.g., alkylene, arylene, heteroarylene), linkers represented by -( CR2 ) nO ( CR2 ) n- (R is any substituent, n is a positive integer), repeating units of alkoxy (e.g., polyethyleneoxy, PEG, polymethyleneoxy, etc.) and alkylamino (e.g., polyethyleneamino, Jeffamine (trademark)), as well as diacid esters and amides (including succinate, succinamide, diglycolate, malonate, caproamide, etc.).
  • divalent radicals e.g., alkylene, arylene, heteroarylene
  • alkoxy e.g., polyethyleneoxy, PEG, polymethyleneoxy
  • an "antigen-binding fragment" of an antibody means a partial region of an antibody as described above that has antigen-binding ability, and specifically includes F(ab') 2 , Fab', Fab, Fv (variable fragment of antibody), disulfide-linked Fv, single-chain antibody (scFv), and polymers thereof.
  • antigen-binding fragments include conjugate fragments to which functional molecules other than the anti-RGMa neutralizing antibody of the present application are chemically or genetically bound, such as non-peptide polymers such as polyethylene glycol (PEG), radioactive substances, toxins, low molecular weight compounds, cytokines, growth factors (TGF- ⁇ , NGF, Neurotrophin, etc.), albumin, enzymes, and other antibodies.
  • non-peptide polymers such as polyethylene glycol (PEG), radioactive substances, toxins, low molecular weight compounds, cytokines, growth factors (TGF- ⁇ , NGF, Neurotrophin, etc.), albumin, enzymes, and other antibodies.
  • F(ab') 2 " and "Fab” refer to antibody fragments produced by treating immunoglobulin with protease such as pepsin or papain, and digesting the antibody fragments before and after the disulfide bond between the two heavy chains in the hinge region.
  • protease such as pepsin or papain
  • IgG is treated with papain, it is cleaved upstream of the disulfide bond between the two heavy chains in the hinge region to produce two homologous antibody fragments in which a light chain consisting of VL (light chain variable region) and CL (light chain constant region) and a heavy chain fragment consisting of VH (heavy chain variable region) and CH ⁇ 1 ( ⁇ 1 region in the heavy chain constant region) are linked by a disulfide bond at the C-terminal region.
  • VL light chain variable region
  • CL light chain constant region
  • VH heavy chain variable region
  • CH ⁇ 1 ⁇ 1 region in the heavy chain constant region
  • Each of these two homologous antibody fragments is called Fab.
  • IgG When IgG is treated with pepsin, it is cleaved downstream of the disulfide bond between the two heavy chains in the hinge region to produce an antibody fragment that is slightly larger than the one in which the two Fabs are linked by the hinge region. This antibody fragment is called F(ab') 2 .
  • a preferred embodiment of the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention is a chimeric antibody.
  • An example of a "chimeric antibody” is a chimeric antibody whose variable region is derived from the immunoglobulin of a non-human animal (mouse, rat, hamster, chicken, etc.) and whose constant region is derived from human immunoglobulin.
  • a chimeric antibody can be produced by immunizing a mouse with an antigen, cutting out a variable region that binds to the antigen from the gene of the mouse monoclonal antibody, and combining it with an antibody constant region derived from human bone marrow.
  • the constant region derived from human immunoglobulin has a unique amino acid sequence depending on the isotype, such as IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA (IgA1, IgA2), IgD, and IgE, but the constant region of the recombinant chimeric antibody of the present invention may be the constant region of human immunoglobulin belonging to any isotype. Preferably, it is the constant region of human IgG.
  • An expression vector can be produced using the gene of the chimeric antibody produced in this way.
  • a host cell is transformed with the expression vector to obtain a transformed cell producing a chimeric antibody, and the transformed cell is cultured to obtain the desired chimeric antibody from the culture supernatant.
  • the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention is a humanized antibody.
  • the "humanized antibody” of the present invention is an antibody in which only the DNA sequence of the antigen-binding site (CDR; complementarity determining region) of a non-human animal antibody such as a mouse is grafted (CDR grafting) onto a human antibody gene.
  • CDR antigen-binding site
  • a non-human animal antibody such as a mouse
  • CDR grafting grafted onto a human antibody gene.
  • it can be prepared by referring to the methods described in JP-A-4-506458 and JP-A-2912618.
  • a humanized antibody characterized in that a part or all of its CDRs are CDRs derived from a monoclonal antibody of a non-human mammal (mouse, rat, hamster, etc.), the framework region of its variable region is a framework region of the variable region derived from human immunoglobulin, and the constant region is a constant region derived from human immunoglobulin.
  • the humanized antibody of the present invention can be produced, for example, as follows. However, it goes without saying that the production method is not limited to this.
  • recombinant humanized antibodies derived from mouse monoclonal antibodies can be produced by genetic engineering with reference to JP-A-4-506458 and JP-A-62-296890. That is, DNA of the mouse heavy chain CDR portion and DNA of the mouse light chain CDR portion are isolated from a hybridoma that produces a mouse monoclonal antibody, and the entire region of the human heavy chain gene other than the human heavy chain CDR and the entire region of the human light chain gene other than the human light chain CDR are isolated from the human immunoglobulin gene.
  • the human heavy chain gene with the isolated mouse heavy chain CDR DNA transplanted is introduced into an appropriate expression vector so that it can be expressed, and similarly, the human light chain gene with the mouse light chain CDR DNA transplanted is introduced into another appropriate expression vector so that it can be expressed.
  • the human heavy chain and light chain genes with mouse CDRs transplanted can be introduced into the same expression vector so that they can be expressed.
  • a humanized antibody-producing transformed cell is obtained by transforming a host cell with the expression vector prepared in this way, and the desired humanized antibody is obtained from the culture supernatant by culturing the transformed cell.
  • a human antibody is an antibody in which all regions, including the heavy chain variable region, heavy chain constant region, and light chain variable region, light chain constant region, constituting an immunoglobulin, are immunoglobulins derived from a gene encoding human immunoglobulin, and can be produced by introducing a human antibody gene into a mouse.
  • a transgenic animal produced by incorporating at least a human immunoglobulin gene into a gene locus of a mammal other than a human, such as a mouse can be produced in the same manner as the above-mentioned method for producing a polyclonal antibody or a monoclonal antibody by immunizing the animal with an antigen.
  • transgenic mice producing human antibodies can be prepared according to the methods described in Nature Genetics, Vol. 7, p. 13-21, 1994; Nature Genetics, Vol. 15, p. 146-156, 1997; Published Japanese Translation of PCT International Publication No. H4-504365; Published Japanese Translation of PCT International Publication No. H7-509137; International Publication WO94/25585; Nature, Vol. 368, p. 856-859, 1994; and Published Japanese Translation of PCT International Publication No. H6-500233. More specifically, examples of such mice include HuMab (registered trademark) mice (Medarex, Princeton NJ), KM mice (Kirin Pharma Company, Japan), and KM (FC ⁇ RIIb-KO) mice.
  • anti-RGMa neutralizing antibodies of the present invention include those having a CDR containing a specific amino acid sequence in the heavy chain variable region and a CDR containing a specific amino acid sequence in the light chain variable region (preferably the anti-RGMa neutralizing antibodies (a) to (l) and (a') to (i') above).
  • the amino acid sequence of the anti-RGMa neutralizing antibody may include substitution, deletion, addition or insertion of one or several amino acids (1 to 20, 1 to 10 or 1 to 5, preferably 1 or 2). Such substitution, deletion or addition may be introduced into the CDR, but is preferably introduced into a region other than the CDR. Furthermore, it is preferable that the amino acid substitution is a conservative substitution in order to maintain the properties of the present invention.
  • the amino acid sequence of the anti-RGMa neutralizing antibody of the present invention (preferably the anti-RGMa neutralizing antibodies (a) to (l) and (a') to (i') above) containing substitutions, deletions, etc. in the amino acid sequence is, for example, an amino acid sequence in which the heavy chain variable region after amino acid sequence modification has a % identity of 90% or more (more preferably 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more) with the amino acid sequence before modification, and an amino acid sequence in which the light chain variable region after amino acid sequence modification has a % identity of 90% or more (more preferably 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more) with the amino acid sequence before modification.
  • siRNA is a short double-stranded RNA capable of suppressing the expression of a target gene (RGMa gene in the present invention).
  • the base sequence and length are not particularly limited, but are preferably less than about 30 bases, more preferably about 19 to 27 bases, and even more preferably about 21 to 25 bases.
  • shRNA refers to a single-stranded RNA that contains a partially palindromic base sequence, forming a double-stranded structure within the molecule, and a molecule of about 20 base pairs or more consisting of a short hairpin structure with an overhang at the 3' end.
  • shRNA After being introduced into a cell, such shRNA is degraded to a length of about 20 bases (typically, for example, 21 bases, 22 bases, or 23 bases) within the cell, and can suppress the expression of a target gene in the same way as siRNA.
  • the above-mentioned siRNA and shRNA may be in any form as long as they are capable of suppressing the expression of the RGMa gene.
  • siRNA or shRNA can be artificially chemically synthesized.
  • Antisense and sense RNA can also be synthesized in vitro from template DNA using, for example, T7 RNA polymerase and T7 promoter.
  • the antisense oligonucleotide may be either DNA or RNA, as long as it is a nucleotide that is complementary to or hybridizes with a continuous 5 to 100 base sequence in the DNA sequence of the RGMa gene. It may also be modified as long as it does not interfere with its function.
  • Antisense oligonucleotides can be synthesized by conventional methods, for example, easily synthesized by a commercially available DNA synthesizer. Preferred sequences can be selected using conventional selection methods and, as siRNA or shRNA in the present invention, can be confirmed by assessing inhibition of expression of functional RGMa.
  • the abnormal protein aggregate accumulation inhibitor refers to a drug or pharmaceutical composition that has the effect of inhibiting the aggregation of abnormal proteins (misfolded proteins or mutant proteins such as TDP-43, Tau, ⁇ -synuclein, and SOD1) and the accumulation of the aggregates in cells such as nerve cells.
  • abnormal proteins misfolded proteins or mutant proteins such as TDP-43, Tau, ⁇ -synuclein, and SOD1
  • Neurodegenerative diseases to be treated by the inhibitory effect of the present invention on the accumulation of abnormal protein aggregates are diseases involving the accumulation of abnormal protein aggregates, specifically including spinocerebellar degeneration, spinocerebellar ataxia, dentatorubral-pallidoluysian atrophy, fragile X-associated tremor/ataxia syndrome, spinal-bulbar muscular atrophy, fragile X syndrome, fragile XE syndrome, myotonic dystrophy (type 1), fatal insomnia, frontotemporal dementia or frontotemporal lobar degeneration, Pick's disease, primary progressive aphasia, primary progressive non-fluent aphasia, progressive supranuclear palsy, corticobasal degeneration, argyrophilic grain dementia, glial cell globular inclusion tauopathy, or dementia with Lewy bodies. Of these, preferred is frontotemporal dementia (FTD) or frontotemporal lobar degeneration (FTLD).
  • FDD frontotemporal dementia
  • FTLD frontotemporal
  • the inhibitor of abnormal protein uptake into nerve cells means a drug or pharmaceutical composition having an effect of inhibiting the uptake of abnormal protein (same meaning as above) outside nerve cells into nerve cells.
  • abnormal protein taken up into nerve cells accumulates as aggregates in the cells, causing neurodegenerative diseases. Therefore, by inhibiting the uptake of abnormal protein, accumulation of abnormal protein aggregates in nerve cells can be suppressed.
  • neurodegenerative diseases to be treated by the inhibitory effect of abnormal protein uptake into nerve cells include diseases associated with the accumulation of abnormal protein aggregates as described above, and among them, frontotemporal dementia (FTD) or frontotemporal lobar degeneration (FTLD) are preferable.
  • FDD frontotemporal dementia
  • FTLD frontotemporal lobar degeneration
  • RGMa induces the dephosphorylation of cofilin and promotes the depolymerization of filamentous actin (F-actin) to globular actin (G-actin, also called monomeric actin), thereby increasing the uptake of abnormal proteins (such as Tau) from outside the nerve cell into the cell.
  • the RGMa inhibitor of the present invention particularly the anti-RGMa neutralizing antibody, has the effect of suppressing the depolymerization of filamentous actin to globular actin.
  • the RGMa inhibitor of the present invention, particularly the anti-RGMa neutralizing antibody has the effect of inhibiting the uptake of abnormal proteins increased by RGMa into nerve cells by changing such actin dynamics.
  • the RGMa inhibitor of the present invention exhibits an effect of suppressing the accumulation of abnormal protein aggregates, and can be a preventive or therapeutic agent for diseases involving the accumulation of abnormal protein aggregates.
  • the present invention includes an abnormal protein aggregate accumulation inhibitor containing an RGMa inhibitor, particularly an anti-RGMa neutralizing antibody, as an active ingredient.
  • the present invention also includes an inhibitor of abnormal protein uptake into nerve cells, containing an RGMa inhibitor, particularly an anti-RGMa neutralizing antibody, as an active ingredient.
  • the present invention also includes an inhibitor of depolymerization of filamentous actin to globular actin (preferably an inhibitor of depolymerization of filamentous actin to globular actin in nerve cells), containing an RGMa inhibitor, particularly an anti-RGMa neutralizing antibody, as an active ingredient.
  • an inhibitor of depolymerization of filamentous actin to globular actin preferably an inhibitor of depolymerization of filamentous actin to globular actin in nerve cells
  • an RGMa inhibitor particularly an anti-RGMa neutralizing antibody
  • the disease associated with accumulation of abnormal protein aggregates is synonymous with the above-mentioned disease, and specifically refers to diseases such as spinocerebellar degeneration, spinocerebellar ataxia, dentatorubral-pallidoluysian atrophy, fragile X-associated tremor/ataxia syndrome, spinal-bulbar muscular atrophy, fragile X syndrome, fragile XE syndrome, myotonic dystrophy (type 1), fatal insomnia, frontotemporal dementia or frontotemporal lobar degeneration, Pick's disease, primary progressive aphasia, primary progressive non-fluent aphasia, progressive supranuclear palsy, corticobasal degeneration, argyrophilic grain dementia, glial cell globular inclusion tauopathy, or dementia with Lewy bodies.
  • diseases such as spinocerebellar degeneration, spinocerebellar ataxia, dentatorubral-pallidoluysian atrophy, fragile X-associated tremor/ataxia
  • the present invention includes a preventive or therapeutic agent for a disease involving the accumulation of abnormal protein aggregates, which contains an RGMa inhibitor, particularly an anti-RGMa neutralizing antibody, as an active ingredient.
  • the present invention also includes a preventive or therapeutic agent for frontotemporal dementia (FTD) or frontotemporal lobar degeneration (FTLD), which contains an RGMa inhibitor, particularly an anti-RGMa neutralizing antibody, as an active ingredient.
  • the agent for suppressing the accumulation of abnormal protein aggregates or the agent for inhibiting the uptake of abnormal proteins into nerve cells of the present invention is usually administered systemically or locally, either orally or parenterally.
  • the abnormal protein aggregate accumulation inhibitor or abnormal protein uptake inhibitor into nerve cells in the present invention can be formulated by appropriately mixing a pharma- ceutical acceptable carrier or additive with an RGMa inhibitor as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition thus formulated can be administered orally or parenterally. Specifically, it can be an oral preparation such as a tablet, coated tablet, pill, powder, granule, capsule, liquid, suspension, or emulsion, or a parenteral preparation such as an injection, infusion, suppository, ointment, or patch.
  • the mixing ratio of the carrier or additive may be appropriately set based on the range normally adopted in the pharmaceutical field.
  • the carrier or additive that can be mixed is not particularly limited, and examples thereof include various carriers such as water, physiological saline, other aqueous solvents, and aqueous or oily bases, and various additives such as excipients, binders, pH adjusters, disintegrants, absorption promoters, lubricants, colorants, flavorings, and flavors.
  • the RGMa inhibitor is an anti-RGMa neutralizing antibody, a functionally modified antibody thereof, a conjugated antibody thereof, or an antigen-binding fragment thereof
  • it is preferable to administer it as an injection or infusion formulated together with a pharma- ceutically acceptable carrier via a parenteral route, for example, intravenously, intramuscularly, intradermally, intraperitoneally, subcutaneously, or topically.
  • a parenteral route for example, intravenously, intramuscularly, intradermally, intraperitoneally, subcutaneously, or topically.
  • an injection or infusion containing an anti-RGMa neutralizing antibody can be used as a solution, suspension, or emulsion.
  • the solvent examples include distilled water for injection, physiological saline, glucose solution, and isotonic solutions (e.g., solutions of sodium chloride, potassium chloride, glycerin, mannitol, sorbitol, boric acid, borax, propylene glycol, etc.).
  • injections or infusions containing such anti-RGMa neutralizing antibodies may contain stabilizers, solubilizing agents, suspending agents, emulsifying agents, soothing agents, buffers, preservatives, antiseptics, pH adjusters, and the like.
  • stabilizers examples include albumin, globulin, gelatin, mannitol, glucose, dextran, ethylene glycol, propylene glycol, ascorbic acid, sodium hydrogen sulfite, sodium thiosulfate, sodium EDTA, sodium citrate, and dibutylhydroxytoluene.
  • solubilizing agents examples include alcohols (e.g., ethanol, etc.), polyalcohols (e.g., propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), and nonionic surfactants (e.g., Polysorbate 80 (registered trademark), HCO-50, etc.).
  • suspending agent for example, glyceryl monostearate, aluminum monostearate, methylcellulose, carboxymethylcellulose, hydroxymethylcellulose, sodium lauryl sulfate, etc.
  • emulsifier for example, gum arabic, sodium alginate, tragacanth, etc.
  • soothing agent for example, benzyl alcohol, chlorobutanol, sorbitol, etc.
  • buffer examples include phosphate buffer, acetate buffer, borate buffer, carbonate buffer, citrate buffer, and Tris buffer.
  • preservatives examples include methyl parahydroxybenzoate, ethyl parahydroxybenzoate, propyl parahydroxybenzoate, butyl parahydroxybenzoate, chlorobutanol, benzyl alcohol, benzalkonium chloride, sodium dehydroacetate, sodium edetate, boric acid, and borax.
  • benzalkonium chloride, paraoxybenzoic acid, chlorobutanol, etc. can be used.
  • pH adjuster for example, hydrochloric acid, sodium hydroxide, phosphoric acid, acetic acid, etc. can be used.
  • the RGMa inhibitor is a nucleic acid (siRNA, shRNA, antisense oligonucleotide, etc.)
  • it can be administered in the form of a non-viral vector or a viral vector.
  • a method of introducing a nucleic acid molecule using liposomes liposome method, HVJ-liposome method, cationic liposome method, lipofection method, lipofectamine method, etc.
  • a microinjection method a method of transferring a nucleic acid molecule into a cell together with a carrier (metal particles) using a gene gun, etc.
  • a viral vector such as a recombinant adenovirus or retrovirus
  • a DNA expressing siRNA or shRNA can be introduced into a DNA or RNA virus such as a detoxified retrovirus, adenovirus, adeno-associated virus, herpes virus, vaccinia virus, pox virus, polio virus, Sindbis virus, Sendai virus, SV40, etc., and the recombinant virus can be used to infect a cell or tissue, thereby introducing a gene into the cell or tissue.
  • the preparation thus obtained can be administered in an effective amount to, for example, humans or other mammals (e.g., rats, mice, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc.) to prevent or treat diseases associated with the accumulation of abnormal protein aggregates.
  • the dosage is set appropriately taking into consideration the purpose, severity of the disease, age, weight, sex, medical history, and type of active ingredient of the patient.
  • the active ingredient is an anti-RGMa neutralizing antibody
  • the dosage is preferably about 0.02 mg to 4000 mg per day for an average human weighing about 65 to 70 kg.
  • the total daily dosage may be a single dose or divided doses.
  • an anti-RGMa neutralizing antibody comprising the amino acid sequence of (b) described herein (SEQ ID NOs: 11 to 15, and the amino acid sequence of AGS as HCDR3) was used in Example 4, and an anti-RGMa neutralizing antibody comprising the amino acid sequence of (a) (SEQ ID NOs: 5 to 10) was used in the other Examples.
  • Palivizumab was used as a control antibody in each Example.
  • Example 1 Immunohistochemistry of paraffin-embedded sections of spinal cord of mSOD1 (mutant SOD1) mice
  • mSOD1 mice Female G93A mutant transgenic mice (mSOD1 mice) were intraperitoneally administered 250 ⁇ g of anti-RGMa neutralizing antibody or control antibody per mouse twice a week from 6 weeks of age until the mice showed complete physical paralysis.
  • mSOD1 mice were euthanized and perfused with PBS containing 4% paraformaldehyde (PFA), and the spinal cord was removed, dehydrated, and embedded in paraffin.
  • PFA paraformaldehyde
  • the number of ubiquitinated aggregated proteins was significantly reduced in the mSOD1 mice treated with anti-RGMa neutralizing antibodies compared to the control antibody group ( Figure 2).
  • Example 2 Effect on actin dynamics RGMa signaling regulates small GTPases, resulting in changes in actin dynamics. Cofilin also induces actin depolymerization, but this effect disappears when it is phosphorylated.
  • the culture method was as follows. Primary cultures of cortical neurons were prepared from 16-day-old Wistar rat embryos. These cells were seeded on poly-L-lysine (Sigma, P1274-25MG)-coated chamber slides and cultured in high-glucose DMEM supplemented with 5% fetal bovine serum and 100 IU/ml penicillin at 37°C under 5% CO2 . The medium was replaced with differentiation medium (Neuro Stem Cell Basal Medium (Merck, SCM003)) supplemented with B-27 (Invitrogen, 12587010), with half of the medium replaced every 2-3 days. Cells were used for evaluation after 7 days of culture.
  • differentiation medium Neuro Stem Cell Basal Medium (Merck, SCM003)
  • B-27 Invitrogen, 12587010
  • RGMa neuronal filamentous actin
  • G-actin globular actin
  • F-actin was labeled with rhodamine-conjugated phalloidin (PHDR1) for 40 min, and G-actin was labeled with Alexa FluorTM 488-conjugated Dnase1 (D12371) for 20 min after permeabilization with 0.1% TritonX-100 for 5 min. Images were acquired using a confocal microscope ZEISS LSM 880 with Airyscan (Az science). The F-actin/G-actin ratio (F/G ratio) was measured by quantifying the fluorescence intensity of rhodamine and AlexaFluorTM 488 in 36 neurons from three independent wells using ImageJ from images acquired with an all-in-one fluorescence microscope (BZ-X800, Keyence). The results are shown in Figure 4 (A).
  • Example 3 Effect on uptake of aggregated proteins from outside the cell into the cell.
  • a study was carried out using primary cultured rat nerve cells in the same manner as described above.
  • (1) Intracellular uptake of mutant proteins via actin signaling by RGMa We investigated the effect of Jasplakinolide (AdipoGen Life Sciences, AG-CN2-0037), an inhibitor of actin depolymerization, on the uptake of mutant proteins by RGMa.
  • Jasplakinolide AdipoGen Life Sciences, AG-CN2-0037
  • FLAG-tagged recombinant SOD1 proteins G93A, A4V
  • Recombinant human RGMa (2 ⁇ g/ml) or DDW (double distilled water) and Jasplakinolide (250 nM) or DMSO were added to primary rat cortical neurons for 30 minutes, and then mutant SOD1 proteins (G93A, A4V) were added at 250 ng/ml. After 1 hour, the cells were fixed with methanol-acetone and labeled with FITC-conjugated mouse monoclonal anti-FLAG M2 antibody (Sigma-Aldrich, F4049). The average FITC fluorescence intensity of 36 neurons from three independent wells was calculated using ImageJ from images acquired with a confocal laser scanning microscope FV3000 inverted type (Olympus). The results are shown in Figure 4 (B).
  • the cells were labeled with FITC-conjugated mouse monoclonal anti-FLAG M2 antibody (Sigma-Aldrich, F4049).
  • the average fluorescence intensity of FITC in 36 neurons from three independent wells was calculated using ImageJ from images acquired with a confocal laser scanning microscope FV3000 inverted type (Olympus). The results are shown in Figure 5.
  • a similar study was carried out using dextran (pHrodo (trademark) Red Dextran, Invitrogen, P10361) instead of the mutant protein.
  • the cells were reacted with dextran for 10 minutes. The results are shown in FIG. 6.
  • rat primary cortical neurons were treated with recombinant human RGMa (2 ⁇ g/ml) and anti-RGMa neutralizing or control antibodies (20 ⁇ g/ml), then incubated with recombinant human Tau protein (AnaSpec, AS-55556-50) for 60 min, and then fixed with methanol and acetone at -20°C for 20 min.
  • Cells were labeled with mouse monoclonal anti-phosphorylated Tau antibody (Invitrogen MN1020 1:100) overnight at 4°C, and then stained with Alexa FluorTM 594.
  • the specimens were mounted with mounting medium containing DAPI (Vector Laboratories, VECTASHIELD Mounting Medium H-1200) and images were acquired with a confocal laser scanning microscope FV3000 inverted (Olympus). The average fluorescence intensity of 36 neurons from two independent wells was calculated using ImageJ. The results are shown in Figure 7.
  • DAPI Vector Laboratories, VECTASHIELD Mounting Medium H-1200
  • Example 4 Effect of anti-RGMa neutralizing antibody on TDP-43 aggregation in mPFN1 (mutated PFN1) mice G118V mutant profilin1-introduced mice (mPFN1 mice) were used as a mouse model of TDP-43 aggregation.
  • mPFN1 mice are known to have abnormal aggregation of TDP-43 in neurons.
  • Anti-RGMa neutralizing antibody or negative control antibody was intraperitoneally administered to mPFN1 mice at a dose of 10 mg/kg twice a week from 100 days of age.
  • Terminal mPFN1 mice were euthanized and perfused with PBS containing 4% paraformaldehyde (PFA), and the spinal cord was removed, dehydrated, and embedded in paraffin.
  • PFA paraformaldehyde
  • the spinal cord was sectioned at a thickness of 3 ⁇ m using a microtome. Since TDP-43 accumulates in the cytoplasm following phosphorylation, TDP-43 aggregation in neurons was detected by immunohistochemical staining of phosphorylated TDP-43. Deparaffinized sections were subjected to microwave irradiation in 10 mM citrate buffer for antigen retrieval. The sections were then incubated with 0.3% hydrogen peroxide for 30 minutes to quench endogenous peroxidase activity, and washed with phosphate-buffered saline (PBS).
  • PBS phosphate-buffered saline
  • the primary antibody used was rabbit antibody against phosphorylated TDP-43 (Proteintech), and the secondary antibody used was goat anti-rabbit immunoglobulin conjugated to peroxidase-labeled dextran polymer (Dako Envision+, Dako). After 3,3'-diaminobenzidine (DAB) color reaction, the sections were dehydrated, cleared, and mounted.
  • blinded evaluators visually counted the percentage of spinal cord anterior horn cells positive for phosphorylated TDP-43 in the cytoplasm and compared the percentages between the anti-RGMa neutralizing antibody-administered mPFN1 mice (2 mice) and the control antibody-administered mPFN1 mice (3 mice). The results are shown in Figure 8.
  • TDP-43 The number of cells positive for cytoplasmic phosphorylated TDP-43 was significantly reduced in the spinal cord ventral horn of m PFN1 mice administered anti-RGMa neutralizing antibodies compared to the group administered control antibodies ( Figure 8). These results demonstrated that anti-RGMa neutralizing antibody therapy inhibits TDP-43 aggregation. The appearance of TDP-43 aggregated proteins in FTD also indicates that anti-RGMa neutralizing antibodies are effective in the same way as in m PFN1 mice.
  • Example 5 Evaluation using clinical samples (measurement of RGMa in CSF) CSF samples were collected from 9 FTD patients and 32 control subjects (other neurodegenerative disease (OND) and 24 non-neurodegenerative disease (ND)) and immediately centrifuged at 400g for 10 min at 4°C. CSF supernatants were stored at -80°C until use.
  • OND subjects included patients with multiple sclerosis, neuromyelitis optica, Parkinson's disease, chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, and cervical spondylosis.
  • ND subjects included patients with normal pressure hydrocephalus, muscle disease, peripheral nerve disease, and dissociative disorders.
  • the concentration of soluble RGMa in CSF was measured using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (R & D systems), and the results are shown in Figure 9. Soluble RGMa was significantly increased in the CSF of FTD patients compared with non-neurodegenerative disease (ND) and other neurodegenerative disease (OND) patients. These data indicate that RGMa is increased in the CSF of FTD patients and contributes to the pathology of FTD.
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • SEQ ID NO: 1 Amino acid sequence of human RGMa precursor protein
  • SEQ ID NO: 2 Amino acid sequence of mouse RGMa precursor protein
  • SEQ ID NO: 3 Amino acid sequence of rat RGMa precursor protein
  • SEQ ID NO: 4 DNA sequence of human RGMa gene
  • SEQ ID NO: 5 Amino acid sequence of LCDR1 of anti-RGMa neutralizing antibody r116A3
  • SEQ ID NO: 6 Amino acid sequence of LCDR2 of anti-RGMa neutralizing antibody r116A3
  • SEQ ID NO: 7 Amino acid sequence of LCDR3 of anti-RGMa neutralizing antibody r116A3
  • SEQ ID NO: 8 Amino acid sequence of HCDR1 of anti-RGMa neutralizing antibody r116A3
  • SEQ ID NO: 9 Amino acid sequence of HCDR2 of anti-RGMa neutralizing antibody r116A3
  • SEQ ID NO: 10 Amino acid sequence of HCDR3 of anti-R
  • the present invention is expected to be useful in preventing or treating diseases involving the accumulation of abnormal protein aggregates, since the RGMa inhibitor has the effect of suppressing the accumulation of abnormal protein aggregates or inhibiting the uptake of abnormal proteins into nerve cells, and is of great utility in the pharmaceutical industry.

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Abstract

ＲＧＭａ阻害物質を含む、異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤又は異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤、特に、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤を提供する。

Description

異常タンパク質の凝集体蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤
　本発明は、ＲＧＭａ阻害物質を含む、異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤、特に前頭側頭葉変性症の予防又は治療剤に関する。
　細胞内ではミスフォールドタンパク質（正しい立体構造をもたなかったタンパク質）が速やかに分解し取り除かれることにより、タンパク質の品質が管理されている。しかし、遺伝的要因や環境的要因（加齢、炎症、酸化ストレスなど）によりタンパク質品質管理システムに歪みが生じると、有害なタンパク質凝集体が細胞内に蓄積し、様々な神経変性疾患の病因となる（非特許文献１）。また、ミスフォールドタンパク質凝集体は、隣接する細胞間や、脳脊髄液などを介して脳の離れた領域にも伝播し、凝集病変が拡大する（非特許文献２）。
　ユビキチンはミスフォールドタンパク質のタグのひとつであり、神経変性の原因となる有害なタンパク質凝集体（TDP-43、Tau、α-Synuclein、SOD1の凝集体など）もユビキチン化される（非特許文献１）。患者脳剖検によるユビキチン陽性のタンパク質凝集体、封入体の検出は、様々な神経変性疾患で報告されている（非特許文献３）。
　前頭側頭型認知症（Frontotemporal Dementia, FTD）は、脳の前頭葉及び前側頭葉の進行性、限局性の神経変性・萎縮により、顕著な行動異常、精神症状、言語障害などを呈する神経変性疾患群である（非特許文献４）。FTD は臨床症状に基づき、行動障害型FTD（behavioral variant FTD, bvFTD），非流暢性原発性進行性失語（nonfluent-variant primary progressive aphasia, nfvPPA; progressive nonfluent aphasia, PNFA），意味性原発性進行性失語（semantic-variant PPA, svPPA; semantic dementia, SD）に大分される(非特許文献４)。運動ニューロン病を伴うものはFTD-MNDといわれる。bvFTDは最も多いサブタイプであり、FTD症例の約50%を占める。典型的には65歳未満の成人に発症し、行動、人格、及び認知の重度の障害を特徴とする。
　FTDは病理学的には、神経細胞やグリア細胞に特定のタンパク質が凝集して封入体が蓄積する前頭側頭葉変性症（Frontotemporal lobar degeneration, FTLD）である。封入体の主要構成成分として、tau蛋白、transactive response DNA binding protein of 43 kDa（TDP-43）蛋白、fused in sarcoma（FUS）蛋白が同定されており、病理学的分類として用いられている（非特許文献５）。細胞内封入体に蓄積されている蛋白質にtau蛋白を認める群はFTLD-tauに分類される。FTLD-tau患者脳に蓄積したtau蛋白は、過剰リン酸化、断片化、ユビキチン化などの様々な翻訳後修飾を受けていることが知られている（非特許文献６）。tau蛋白陰性タイプはさらに細分化され、TDP-43蛋白陽性のFTLD-TDPやFUS蛋白陽性のFTLD-FUSなどではユビキチン陽性であることも分類基準に含まれる（非特許文献５）。臨床診断されたbvFTDの半数以上がFTLD-TDP、nfvPPA(PNFA)の約70%がFTLD-tau、svPPA(SD)の約80%がFTLD-TDPであったとの臨床病理相関報告がされている（非特許文献７）。臨床診断がFTDであれば背景病理にユビキチン化蛋白凝集体をもつ可能性は極めて高い。
　ＲＧＭ（repulsive guidance molecule）は、当初、視覚系の軸索誘導分子として同定された膜タンパク質である（非特許文献８）。ＲＧＭファミリーには、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ及びＲＧＭｃと呼ばれる３種類のメンバーが含まれ（非特許文献９）、少なくともＲＧＭａとＲＧＭｂは同じシグナル伝達機構で働くことが知られている（非特許文献１０）。ＲＧＭcは鉄代謝において重要な役割を発揮する。
　その後の研究により、ＲＧＭは、ゼノパス及びニワトリ胚における軸索誘導及びラミナ形成、並びに、マウス胚における頭部神経管の閉鎖の制御等の機能を有することが明らかとなっている（非特許文献１１）。特許文献１には抗ＲＧＭ中和抗体を有効成分として含有する軸索再生促進剤が開示されている。
　発生段階の機能に加えて、成人ヒト及びラットの中枢神経系損傷後に再発現すること、ラットにおいてＲＧＭａ阻害が脊髄損傷後の軸索成長を亢進し、機能回復を促進することから（非特許文献１２）、ＲＧＭａは中枢神経系損傷後の軸索再生阻害物質であると考えられている。ＲＧＭａを中和する具体的な抗体としては、例えば、特許文献２（例えば、５Ｆ９、８Ｄ１）、特許文献３（例えば、ＡＥ１２－１、ＡＥ１２－１Ｙ）および特許文献４（例えば、ｒ１１６Ａ３、ｒ７０Ｅ４、ｒ１１６Ａ３Ｃ、ｒＨ１１６Ａ３）に記載されている。
　このように中枢神経系損傷ではＲＧＭａの役割が明らかにされているが、特に、ユビキチン化凝集体（陽性封入体）の形成抑制においてＲＧＭａの関与は同定されておらず、そのような治療薬は知られていない。
国際公開　ＷＯ２００５／０８７２６８号 国際公開　ＷＯ２００９／１０６３５６号 国際公開　ＷＯ２０１３／１１２９２２号 国際公開　ＷＯ２０１６／１７５２３６号
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　本発明は、異常タンパク質凝集体蓄積抑制作用を有し、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患に対する有効な薬剤を提供することを課題とする。
　本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体が、異常タンパク質凝集体蓄積抑制作用を有し、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患に対する治療効果が期待できることを見出し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は以下の通りである。
１．ＲＧＭａ阻害物質を有効成分とする、異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤。
２．ＲＧＭａ阻害物質を有効成分とする、異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤。
３．異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤または異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤が、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防または治療剤である前記１または２に記載の剤。
４．異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患が、脊髄小脳変性症、脊髄小脳失調症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、脆弱X関連振戦／運動失調症候群、球脊髄性筋萎縮症、脆弱X症候群、脆弱XE症候群、筋強直性ジストロフィー(1型)、致死性不眠症、前頭側頭型認知症又は前頭側頭葉変性症、ピック病、原発性進行性失語、原発性進行性非流暢性失語、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性認知症、グリア細胞球状封入体タウオパチー及びレビー小体型認知症から選ばれる疾患である、前記３に記載の剤。
５．異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患が、前頭側頭型認知症（FTD）または前頭側頭葉変性症（FTLD）である、前記３または４に記載の剤。
６．ＲＧＭａ阻害物質が抗ＲＧＭａ中和抗体である、前記１～５のいずれか一項に記載の剤。
７．抗ＲＧＭａ中和抗体がヒト化抗体である、前記６に記載の剤。
８．抗ＲＧＭａ中和抗体が配列番号１６、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８及び配列番号３９から選択されるアミノ酸配列を認識する抗体である、前記６又は７に記載の剤。
９．抗ＲＧＭａ中和抗体が、下記（ａ）～（ｌ）：
（ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及びSFGをアミノ酸配列に含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｃ）配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｄ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｅ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｆ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｇ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｈ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｉ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｊ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
（ｋ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、及び
（ｌ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　から選択される抗体である、前記６～８のいずれか一項に記載の剤。
１０．治療を要する哺乳動物に対して有効量のＲＧＭａ阻害物質を投与することを含む、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防または治療方法。
１１．ＲＧＭａ阻害物質が抗ＲＧＭａ中和抗体である、前記１０に記載の予防又は治療方法。
１２．ＲＧＭａ阻害物質の、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤の製造のための使用。
１３．ＲＧＭａ阻害物質が抗ＲＧＭａ中和抗体である、前記１２に記載の使用。
　本発明によれば、ＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体が、異常タンパク質凝集体蓄積抑制作用または異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害作用を有し、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患、例えば、脊髄小脳変性症、脊髄小脳失調症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、脆弱X関連振戦／運動失調症候群、球脊髄性筋萎縮症、脆弱X症候群、脆弱XE症候群、筋強直性ジストロフィー(1型)、致死性不眠症、前頭側頭型認知症又は前頭側頭葉変性症、ピック病、原発性進行性失語、原発性進行性非流暢性失語、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性認知症、グリア細胞球状封入体タウオパチー若しくはレビー小体型認知症の予防又は治療剤として有用である。
図1は、ｍSOD1マウスにおいて、抗RGMa中和抗体（Anti-RGMa Ab、以下、図面中の表記は同義である）が、正常な形態の運動ニューロンの数を保存することを示した免疫染色画像（図面代用写真）および図である。（A）画像はNissl染色により検出されたｍSOD1マウスの脊髄の運動ニューロンの代表画像である。対照抗体（Control Ab、以下、図面中の表記は同義である）を投与されたｍSOD1マウスの前角細胞の数は抗RGMa中和抗体を投与されたｍSOD1マウスに比較して少なく、対照抗体を投与されたｍSOD1マウスでは前角細胞が萎縮しているのが観察される。（B）定量解析は、各個体1５枚の切片から、面積が300μm 2を超える細胞体を含むニューロンを運動ニューロンとみなして計数した。個別値のプロットとともに、平均値 ± 標準誤差で示す。（対照抗体投与群n=5、抗RGMa中和抗体投与群n=5）統計解析はStudentのt検定を用いた。 図２は、ｍSOD1マウスの試験で、抗RGMa中和抗体投与によりユビキチン陽性タンパク質凝集体が減少することを示した脊髄病理免疫染色画像（図面代用写真）および図である。（A）画像はユビキチン染色により検出されたｍSOD1マウスの脊髄の運動ニューロンの代表画像である（スケールバーは300 μm）。（B）定量解析の結果は脊髄前角面積に対するユビキチン陽性面積の比で示し、個別値のプロットともに、平均値 ± 標準誤差で示す。（対照抗体投与群ではn=3、抗RGMa中和抗体投与群n=7）統計解析はマン・ホイットニーU(MWU)の検定を用いた。 図３の（A)および(B)は、ｍSOD1マウスの脊髄ではコフィリンの脱リン酸化が上昇し、抗RGMa中和抗体により阻害されることを示したウェスタンブロッティング画像（図面代用写真）および図である。定量解析により、リン酸化コフィリンのコフィリンに対する比率を求めた。個別値のプロットともに平均値 ± 標準誤差で示す。（野生型WT n=4、対照抗体投与群n=5、抗RGMa中和抗体投与群n=5）統計解析はone-way ANOVAとTukey's multiple comparisons testを用いた。（P-cofilin：リン酸化コフィリン）図３の(C)は、ｍSOD1マウスの脊髄でアクチン重合が低下しており、抗RGMa中和抗体によりアクチン重合の低下が抑制されていることを示す図である。Fアクチンの検出にはファロイジン染色を用い、ファロイジン陽性の運動ニューロンを計数した。個別プロットとともに平均値 ± 標準誤差で示す。（野生型n=3、対照抗体群n=4、抗RGMa中和抗体投与群n=4）統計解析はone-way ANOVAとTukey's multiple comparisons testを用いた。 図４の(A)は、ラット初代皮質神経細胞において、RGMaがアクチン重合を減少させること、そのRGMaによるアクチン重合の低下作用が抗RGMa中和抗体により抑制されることを示した図である。FアクチンおよびGアクチンの二重免疫染色の画像から、それぞれの染色強度を細胞毎に定量して比をもとめ、アクチン重合の指標とした。各評価条件に関して、３つのウェルから合計36の細胞について解析した。平均値 ± 標準誤差を示す。統計解析はone-way ANOVAとTukey's multiple comparisons testを用いた。図４の(B)は、ラット初代皮質神経細胞において、RGMaが変異SOD1タンパク質の細胞への侵入を増強することを示す図である。FITC結合した抗FLAG抗体を用いてSOD1タンパクを描出した免疫染色画像を用いてFITC陽性細胞を選択し平均シグナル強度を定量解析した。それぞれの条件について３つのウェルから選択した合計36の細胞について定量を行った。各細胞の個別プロットとともに、平均値 ± 標準誤差で示す。統計解析はone-way ANOVAとTukey's multiple comparisons testを用いた。（Jasp： Jasplakinolide） 図５は、ラット初代皮質神経細胞において、RGMaにより増強した変異SOD1タンパク質の細胞への侵入が、抗RGMa中和抗体により抑制されることを示す図である。FITC結合した抗FLAG抗体を用いてSOD1タンパクを描出した免疫染色画像を用いて、FITC陽性細胞を選択し平均シグナル強度を定量解析した。それぞれの条件について３つのウェルから選択した合計36の細胞について定量を行った。各細胞の個別プロットとともに、平均値 ± 標準誤差で示す。統計解析はone-way ANOVAとTukey's multiple comparisons testを用いた。 図６は、ラット初代皮質神経細胞において、RGMaがデキストランの細胞内への侵入を増強し、抗RGMa中和抗体により抑制されることを示す図である。それぞれの条件について３つのウェルから合計36の細胞を選択しデキストランの細胞内の取り込みを示す平均蛍光強度を定量解析した、各細胞の個別プロットとともに、平均値 ± 標準誤差で示す。統計解析はone-way ANOVAとTukey's multiple comparisons testを用いた。 図７は、ラット初代皮質神経細胞において、RGMaがヒトTauタンパク質の細胞内への侵入を増強し、抗RGMa中和抗体により抑制されることを示す図である。Tau抗体とAlexaFluor(商標)594でTauタンパクを描出した免疫染色画像を用いて、平均シグナル強度を定量解析した。それぞれの条件について独立した２つのウェルから合計36の細胞を選択し、各細胞の個別プロットとともに、平均値 ± 標準誤差で示す。統計解析はone-way ANOVAとTukey's multiple comparisons testを用いた。 図８は、ｍPFN1マウスの試験で、抗RGMa中和抗体投与によりリン酸化TDP-43凝集が減少することを示している。定量解析の結果（縦軸）は脊髄前角細胞の全細胞数に対する細胞質リン酸化TDP-43陽性前角細胞数の比で示し、平均値 ± 標準誤差で示す（対照抗体群ではn=3、抗RGMa中和抗体投与群n=2）。統計解析はWelchのt検定を用いた。 図９は、FTD患者の脳脊髄液中でRGMa濃度が上昇していることを示す図である。統計解析にはANCOVAを用いた。図中、NDは非神経変性疾患患者を、ONDはその他の神経変性疾患患者をそれぞれ示す。
　以下、本発明に用いられる用語を説明する。
［中和］
　本願において中和とは目的の標的に結合し、かつ、その標的のいずれかの機能を阻害することができる作用のことをいう。例えば、ＲＧＭａ阻害物質は、ＲＧＭａへの結合の結果、ＲＧＭａの生物活性を阻害する作用を示す物質をいう。
[エピトープ]
　本願においてエピトープとは、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体に対して特異的に結合し得るポリペプチド決定基を含む。ある実施形態では、エピトープは分子の化学的に活性な表面基（例えば、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル）を含み、ある実施形態では特定の３次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有し得る。エピトープは抗体により結合される抗原の領域である。
［単離された］
　本願において単離されたＲＧＭａ阻害物質（例えば抗体等）等の「単離された」とは、同定され、かつ、分離された、及び／又は、自然状態での成分から回収された、という意味である。自然状態での不純物は、その抗体の診断的又は治療的使用を妨害し得る物質であり、酵素、ホルモン及びその他のタンパク質性の又は非タンパク質性の溶質が挙げられる。一般的に、ＲＧＭａ阻害物質等を単離するには、少なくとも１つの精製工程によって精製すればよく、少なくとも１つの精製工程により精製されたＲＧＭａ阻害物質を「単離されたＲＧＭａ阻害物質」ということができる。
[抗体]
　本願において抗体とは、広義には免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の実質的にエピトープに結合する特徴を保持している２本の重鎖（Ｈ鎖）と２本の軽鎖（Ｌ鎖）の４本のポリペプチド鎖からなるＩｇ分子を指す。
［ヒト抗体］
　本願においてヒト抗体とは、軽鎖、重鎖ともにヒト免疫グロブリン由来の抗体をいう。ヒト抗体は、重鎖の定常領域の違いにより、γ鎖の重鎖を有するＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む）、μ鎖の重鎖を有するＩｇＭ、α鎖の重鎖を有するＩｇＡ（ＩｇＡ１，ＩｇＡ２を含む）、δ鎖の重鎖を有するＩｇＤ、又はε鎖の重鎖を有するＩｇＥを含む。また原則として軽鎖は、κ鎖とλ鎖のどちらか一方を含む。
［ヒト化抗体］
　本願においてヒト化抗体は、非ヒト動物由来抗体の相補性決定領域と、ヒト抗体由来のフレームワーク領域とからなる可変領域、及びヒト抗体由来の定常領域からなる抗体をいう。
［キメラ抗体］
　本願においてキメラ抗体とは、軽鎖、重鎖、又はその両方が、非ヒト由来の可変領域と、ヒト由来の定常領域からなる抗体をいう。
[モノスペシフィック抗体]
　本願においてモノスペシフィック抗体とは、単一の抗原特異性を有する、単一の独立した抗原認識部位を持ち合わせた抗体である。本明細書中においては、例えば、ＲＧＭａを認識するモノスペシフィック抗体をＲＧＭａモノスペシフィック抗体と呼称することがある。
［マルチスペシフィック抗体］
　本願においてマルチスペシフィック抗体とは、２つ以上の異なる抗原特異性を有する２つ以上の独立した抗原認識部位を持ち合わせた抗体であり、２つの抗原特異性を有するバイスペシフィック抗体、３つの抗原特異性を有するトリスペシフィック抗体などが挙げられる。
［相補性決定領域（CDR）］
　相補性決定領域（ＣＤＲ）とは免疫グロブリン分子の可変領域のうち、抗原結合部位を形成する領域をいい、超可変領域とも呼ばれ、免疫グロブリン分子ごとに特にアミノ酸配列の変化が大きい部分をいう。ＣＤＲには軽鎖及び重鎖それぞれに３つのＣＤＲがある。軽鎖に含まれる３つのＣＤＲをそれぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに重鎖に含まれる３つのＣＤＲをＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と呼称することがある。例えば免疫グロブリン分子のＣＤＲはカバット（Kabat）の番号付けシステム（Ｋａｂａｔら、１９８７および１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＨｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ、ＵＳＡ）に従って決定される。本明細書では、特に明記しない限り、カバットの番号付けシステムにしたがって定義されたＣＤＲ配列を用いる。
　また、配列番号５～１５のＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ（Lefranc M. -P., Immunology Today 18,509 (1997)、 Lefranc M. -P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999)、 Lefranc, M.-P., Pommie, C, Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V.およびLefranc, Dev. Comp. Immunol, 27, 55-77 (2003)）の番号付けシステムに従って定義されるＣＤＲ配列を用いる。当業者にとって、ＩＭＧＴ番号付けシステムによって記載されるＣＤＲ配列を、例えば、カバット番号付けシステムなどの他のいずれかのナンバリングシステムに置き換えることは自明である。したがって、ＩＭＧＴ番号付けシステムによって記載されるＣＤＲ配列をカバット番号付けシステムで置き換えた発明は、本発明の実施態様に含まれる。また、カバット番号付けシステムによって記載されるＣＤＲ配列をＩＭＧＴ番号付けシステムで置き換えた発明も、本発明の実施態様に含まれる。
[有効量]
　有効量とは、障害又はその１つ以上の症状の重症度及び／又は期間を軽減又は改善させる、障害の進行を予防する、障害を後退させる、障害に関連する１つ以上の症状の再発、発生、発症又は進行を予防する、障害を検出する、或いは別の治療（例えば、予防薬又は治療薬）の１つ以上の予防又は治療効果を強化又は向上させるのに十分な予防又は治療剤の量を指す。
［アミノ酸配列のパーセント(％)同一性］
　可変領域等の候補ポリペプチド配列のアミノ酸配列の、参照ポリペプチド配列のアミノ酸配列に関する「パーセント(％)同一性」とは、配列を整列させ、最大の％同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした後の、特定の参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。％同一性を測定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ(ＤＮＡＳＴＡＲ)ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％同一性値は、ペアワイズアラインメントにおいて、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを使用することによって得られる。
　アミノ酸配列比較にＢＬＡＳＴが用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの％同一性は次のように計算される：
　分率Ｘ／Ｙの１００倍
　ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＢＬＡＳＴのＡ及びＢのプログラムアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％同一性は、ＢのＡに対する％同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限りは、ここでの全ての％同一性値は、直ぐ上のパラグラフに示したようにＢＬＡＳＴコンピュータプログラムを用いて得られる。
[保存的置換]
　保存的置換とは、ペプチドの活性を実質的に改変しないように、アミノ酸残基を、別の化学的に類似したアミノ酸残基で置換えることを意味する。例えば、ある疎水性残基を別の疎水性残基によって置換する場合、ある極性残基を同じ電荷を有する別の極性残基によって置換する場合等が挙げられる。このような置換を行うことができる機能的に類似のアミノ酸の例として、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン等が挙げられる。極性（中性）アミノ酸としては、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システイン等が挙げられる。陽電荷をもつ（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジン、リジン等が挙げられる。また、負電荷をもつ（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸等が挙げられる。
［治療］
　治療とは、治療対象、好ましくは哺乳動物、特にヒトの疾患の任意の治療を含み、疾患及び症状の進行を阻止し、そのような疾患及び症状を消滅、治癒、軽減又は緩和させることを含む。
［予防］
　予防とは、治療対象、好ましくは哺乳動物、特にヒトにおいて、上記疾患の発症を防止または抑制することを含む。さらに、本発明における「予防」には、治療対象、好ましくは哺乳動物、特にヒトにおいて、寛解、再発を繰り返す上記疾患の再発を防止する「再発予防」が含まれる。
　以下、本発明の実施形態について、詳細に説明する。
　本発明は、ＲＧＭａ阻害物質の新規な用途である異常タンパク質の凝集体蓄積抑制作用を有し、異常タンパク質の凝集体蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤を提供する。
　また、本発明は、治療を要する哺乳動物に対して、有効量のＲＧＭａ阻害物質を含む予防又は治療剤を投与するステップを含む、異常タンパク質の凝集体蓄積が関与する疾患の予防又は治療方法を提供する。
＜ＲＧＭａ阻害物質＞
　本発明のＲＧＭａ阻害物質は、ＲＧＭａそのものに作用して、ＲＧＭａの活性（以下、本明細書中において、単に「ＲＧＭａ活性」ということがある。）を阻害又は減弱する物質であればよく、例えば、ＲＧＭａに結合して直接的にＲＧＭａ活性を阻害（減弱）する活性、あるいはＲＧＭａと受容体の結合を阻害して間接的にＲＧＭａ活性を阻害（減弱）する活性を有する物質（例えば、後述の化合物や抗体等）を本発明のＲＧＭａ阻害物質と称する。
　また、本発明のＲＧＭａ阻害物質は、ＲＧＭａの発現を抑制する物質であってもよく、例えば、ＲＧＭａの発現を阻害し、ＲＧＭａ活性を阻害（減弱）する物質（例えば、後述の核酸分子等）も本発明のＲＧＭａ阻害物質に含まれる。
　ＲＧＭａは中枢神経系における神経突起成長阻害タンパク質として同定され、ヒトＲＧＭａタンパク質は配列番号１に示すように４５０アミノ酸からなる前駆タンパク質として生合成される。Ｎ末端に存在するシグナルペプチドＭｅｔ１～Ｐｒｏ４７（Ｎ末端側から1番目のメチオニン残基から４７番目のプロリン残基までのペプチドを指す、以後同様に記載）が除去され、Ａｓｐ１６８とＰｒｏ１６９の間のペプチド結合が切断されてＮ末端ドメインが生成し、さらにＰｒｏ１６９よりＣ末側のフラグメントのＣ末端ペプチドＡｌａ４２５～Ｃｙｓ４５０が除去されるとともに、Ｃ末端となったＡｌａ４２４のＣ末端カルボキシル基にＧＰＩアンカーが付加され、Ｃ末側ドメインが生成する。ヒトＲＧＭａタンパク質は、上記Ｎ末側ドメイン（Ｃｙｓ４８～Ａｓｐ１６８）とＣ末側ドメイン（Ｐｒｏ１６９～Ａｌａ４２４）がジスルフィド結合により繋がった成熟タンパク質として、ＧＰＩアンカーを介して細胞膜上に発現する。
　本発明においてＲＧＭａは、いずれの動物由来のものでもよいが、好ましくはヒトＲＧＭａである。ヒトのＲＧＭａの前駆タンパク質は配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列からなる。マウスのＲＧＭａの前駆タンパク質は配列表の配列番号２に示すアミノ酸配列、ラットのＲＧＭａの前駆タンパク質は配列表の配列番号３に示すアミノ酸配列からなるが、Ｃ末端ペプチドが除去されるため、成熟タンパク質としては同一のアミノ酸配列となる。
　ＲＧＭａ遺伝子としては、例えば配列番号４に示される塩基配列からなるヒトＲＧＭａ遺伝子等が挙げられるが、これに限定されるものではない。種々の生物由来のＲＧＭ遺伝子の塩基配列は公知のデータベース（ＧｅｎＢａｎｋ等）から容易に取得することができる。
　本発明のＲＧＭａ阻害物質としては、具体的には、低分子化合物、抗ＲＧＭａ中和抗体、その機能改変抗体、そのコンジュゲート抗体又はそれら抗原結合断片等が挙げられ、また、ＲＧＭａの核酸分子であるｓｉＲＮＡ（short interfering RNA）、ｓｈＲＮＡ（short hairpin RNA）又はアンチセンスオリゴヌクレオチド等が挙げられる。これらのＲＧＭａ阻害物質のうち、好ましくは抗ＲＧＭａ中和抗体、その機能改変抗体、そのコンジュゲート抗体およびそれらの抗原結合断片であり、より好ましくは抗ＲＧＭａ中和抗体又はその抗原結合断片であり、とりわけ抗ＲＧＭａ中和抗体が好ましい。
＜抗ＲＧＭａ中和抗体＞
　本発明において、抗ＲＧＭａ中和抗体とは、ＲＧＭａに結合して、ＲＧＭａ活性を中和する抗体であればよく、ポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でも良い。本発明において好ましくはモノクローナル抗体である。また、本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体はＲＧＭａモノスペシフィック抗体でもＲＧＭａ及び他の抗原を複数認識するマルチスペシフィック抗体でもよいが、好ましくはＲＧＭａモノスペシフィック抗体である。
　また、具体的なエピトープとしては、ヒトＲＧＭａにおいて、配列番号１６（配列番号１のアミノ酸番号４７－６９）、配列番号３６（配列番号１のアミノ酸番号２９８－３１１）、配列番号３７（配列番号１のアミノ酸番号３２２－３３５）、配列番号３８（配列番号１のアミノ酸番号３４９－３５９）、配列番号３９（配列番号１のアミノ酸番号３６７－３７７）のうち、1つ以上であることが好ましく、配列番号３６及び３７の組み合わせがより好ましく、配列番号３６、３７及び３９の組み合わせがとりわけ好ましい。
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体は、ＲＧＭａタンパク質又はその部分断片（例えば、上記したエピトープ断片）を抗原として、該抗原をマウス等の哺乳動物に免疫して得られるポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体、遺伝子組換え技術を用いて製造されるキメラ抗体及びヒト化抗体、並びにヒト抗体産生トランスジェニック動物等を用いて製造されるヒト抗体などが含まれる。本発明の抗体を医薬としてヒトに投与する場合は、副作用の観点から、ヒト化抗体又はヒト抗体が望ましい。
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体として、具体的には、下記（a）～（l）の抗体が挙げられ、それぞれ製造方法は特許文献２－４に記載された方法を用いることができる。
（ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号３６、３７及び３９をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号５：QDISSY
　配列番号６：YTS (qualifier: mol_type = protein; organism = Mus musculus)
　配列番号７：QQLNTLPWT
　配列番号８：GFTFSDAW
　配列番号９：IRSKANNHAT
　配列番号１０：TRRDGAY
（ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及びAGSをアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号３６、３７及び３８をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号１１：QSLVHSNGNTY
　配列番号１２：KVS (qualifier: mol_type = protein; organism = Mus musculus)
　配列番号１３：SQSTHVPYT
　配列番号１４：GYSITTSYY
　配列番号１５：ISYDGTN
（ｃ）配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号１７：RSSQSLEYSDGYTFLE
　配列番号１８：EVSNRFS
　配列番号１９：FQATHDPLT
　配列番号２０：NYGMN
　配列番号２１：MIYYDSSEKHYADSVKG
　配列番号２２：GTTPDY
（ｄ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号２３：QASQDIDNYLA
　配列番号２４：GATNLAD
　配列番号２５：LQGYIPPRT
　配列番号２６：SYVMH
　配列番号２７：YIIPYNDNTKYNEKFKG
　配列番号２８：ARRNEYYGSSFFDY
（ｅ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号３１：CSYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
（ｆ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号３５：YSYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
（ｇ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号４０：FSYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
（ｈ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号４１：HSYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
（ｉ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号４２：LSYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
（ｊ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号４３：VSYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
（ｋ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、及び
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号４４：ISYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
（ｌ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体（当該抗ＲＧＭａ中和抗体は、さらに配列番号１６をエピトープとする抗体も含む）、
　配列番号２９：TGTSSSVGDSIYVS
　配列番号３０：DVTKRPS
　配列番号４５：KSYAGTDTL
　配列番号３２：SHGIS
　配列番号３３：WISPYSGNTNYAQKLQG
　配列番号３４：VGSGPYYYMDV
　から選択される抗体が挙げられる。
　これらのうち、特に好ましくは(ａ)に記載される抗体が挙げられる。
　また、本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体として、例えば、WO2016/175236号公報、WO2009/106356号公報及びWO2013/112922号公報に記載の抗体が挙げられ、これら公報に記載の抗体も本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体に含まれる。具体的には、本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体として、下記（a’）～（i’）から選択される抗体が挙げられる。
（a’） 配列番号４６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号４６：DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYFCQQLNTLPWTFGGGTKVEME
　配列番号４７：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFSDAWMDWVRQAPGKGLEWVAEIRSKANNHATYYAESVKGRFTISRDDSKSIVYLQMNSLRTEDTALYYCTRRDGAYWGKGTTVTVSS
（b’） 配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖及び配列番号４９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号４８：DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFASYFCQQLNTLPWTFGGGTKVEMERTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
　配列番号４９：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFSDAWMDWVRQAPGKGLEWVAEIRSKANNHATYYAESVKGRFTISRDDSKSIVYLQMNSLRTEDTALYYCTRRDGAYWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（c’） 配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号５０：DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
　配列番号５１：DVKLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITTSYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGTNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLRLNSVTTEDTATYYCAGSFGYSQGTLVTVSA
（d’） 配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖及び配列番号５３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号５２：DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
　配列番号５３：DVKLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITTSYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGTNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLRLNSVTTEDTATYYCAGSFGYSQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPESVTVTWNSGSLSSSVHTFPALLQSGLYTMSSSVTVPSSTWPSQTVTCSVAHPASSTTVDKKLEPSGPISTINPCPPCKECHKCPAPNLEGGPSVFIFPPNIKDVLMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTIRVVSTLPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPSPIERTISKIKGLVRAPQVYILPPPAEQLSRKDVSLTCLVVGFNPGDISVEWTSNGHTEENYKDTAPVLDSDGSYFIYSKLNMKTSKWEKTDSFSCNVRHEGLKNYYLKKTISRSPGK
（e’） 配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号５４：DVVLTQTPVSLSVTLGDQASMSCRSSQSLEYSDGYTFLEWFLQKPGQSPQLLIYEVSNRFSGVPDRFIGSGSGTDFTLKISRVEPEDLGVYYCFQATHDPLTFGSGTKLEIKR
　配列番号５５：EVQLVESGGGLVQPGSSLKLSCVASGFTFSNYGMNWIRQAPKKGLEWIGMIYYDSSEKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLEMNSLRSEDTAIYYCAKGTTPDYWGQGVMVTVSS
（f’） 配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号５６：DIQMTQSPASLSASLEEIVTITCQASQDIDNYLAWYHQKPGKSPRLLIYGATNLADGVPSRFSGSRSGTQFSLKINRLQIEDLGIYYCLQGYIPPRTFGGGTKLELKR
　配列番号５７：EVQLQQSGPELVKPGTSVKMSCKTSGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYIIPYNDNTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARRNEYYGSSFFDYWGQGTTLTVSS
（g’） 配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ラムダ鎖）及び配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
　配列番号５８：QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSSVGDSIYVSWYQQHPGKAPKLMLYDVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGTDTLFGGGTKVTVL
　配列番号５９：EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHGISWVRQAPGQGLDWMGWISPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR VGSGPYYYMDVWGQGTLVTVSS
（h’） 配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、及び
　配列番号６０：QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSSVGDSIYVSWYQQHPGKAPKLMLYDVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCYSYAGTDTLFGGGTKVTVL
　配列番号５９：EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHGISWVRQAPGQGLDWMGWISPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR VGSGPYYYMDVWGQGTLVTVSS
（i’） 配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖及び配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗ＲＧＭａ中和抗体。
　配列番号６１：QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSSVGDSIYVSWYQQHPGKAPKLMLYDVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCYSYAGTDTLFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
　配列番号６２：EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHGISWVRQAPGQGLDWMGWISPYSGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVGSGPYYYMDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSPGK
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体の製造方法は、既存の一般に用いられる製造方法を用いることができる。抗原はそのまま免疫に使用してもよいし、キャリアタンパク質との複合体として用いてもよい。抗原とキャリアタンパク質の複合体の調製にはグルタルアルデヒド、カルボジイミド、マレイミド活性エステル等の縮合剤を用いることができる。キャリアタンパク質は牛血清アルブミン、サイログロブリン、ヘモシアニン、ＫＬＨ等が例示される。
　免疫される哺乳動物としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ヤギ、ウマあるいはウシ等が挙げられ、接種方法は皮下、筋肉あるいは腹腔内の投与が挙げられる。投与に際しては完全フロイントアジュバンドや不完全フロイントアジュバンドと混和して投与してもよく、投与は通常２～５週毎に１回ずつ行われる。免疫された動物の脾臓あるいはリンパ節から得られた抗体産生細胞は骨髄腫（ミエローマ）細胞と細胞融合させ、ハイブリドーマとして単離される。骨髄腫細胞としては哺乳動物由来、例えばマウス、ラット、ヒト等由来のものが使用される。
＜ポリクローナル抗体＞
　ポリクローナル抗体は、例えば、前述のような抗原を、必要に応じてフロイントアジュバント（Freund's Adjuvant）とともに、上記のような哺乳動物に免疫することで該免疫感作動物から得た血清から取得することができる。
＜モノクローナル抗体＞
　モノクローナル抗体は、具体的には下記のようにして取得することができる。即ち、前述のような抗原を免疫原とし、該免疫原を、必要に応じてフロイントアジュバント（Freund's Adjuvant）とともに、上記のような哺乳動物の皮下、筋肉内、静脈内、フッドパッド内あるいは腹腔内に１～数回注射するかあるいは移植することにより免疫感作を施す。通常、初回免疫から約１～１４日毎に１～４回免疫を行って、最終免疫より約１～５日後に免疫感作された該哺乳動物から抗体産生細胞が取得される。
　モノクローナル抗体は、当業者に周知方法を用いて得ることができる（例えば、『Current Protocols in Molecular Biology』(John Wiley & Sons(1987))、Antibodies:A Laboratory Manual, Ed.Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory(1988)）。
　モノクローナル抗体を分泌する「ハイブリドーマ」の調製は、ケーラー及びミルシュタインらの方法（ネイチャー(Nature) , 256,495, 1975）及びそれに準じる修飾方法に従って行うことができる。即ち、免疫感作された哺乳動物から取得される脾臓等に含まれる抗体産生細胞と、哺乳動物、好ましくはマウス、ラットまたはヒト由来の自己抗体産生能のないミエローマ細胞を細胞融合させることにより調製される。
　細胞融合に用いられるミエローマ細胞としては、例えばマウス由来ミエローマＰ３／Ｘ６３－ＡＧ８．６５３（６５３）、Ｐ３／ＮＳＩ／１－Ａｇ４－１（ＮＳ－１）、Ｐ３／Ｘ６３－Ａｇ８．Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）、ＳＰ２／０－Ａｇ１４（Ｓｐ２／Ｏ、Ｓｐ２）、ＰＡＩ、Ｆ０あるいはＢＷ５１４７、ラット由来ミエローマ２１０ＲＣＹ３－Ａｇ．２．３．、ヒト由来ミエローマＵ－２６６ＡＲ１、ＧＭ１５００－６ＴＧ－Ａ１－２、ＵＣ７２９－６、ＣＥＭ－ＡＧＲ、Ｄ１Ｒ１１あるいはＣＥＭ－Ｔ１５等を使用することができる。
　融合促進剤としてはポリエチレングリコール等が挙げられ、通常には、２０～５０％程度の濃度のポリエチレングリコール（平均分子量１０００～４０００）を用いて２０～４０℃、好ましくは３０～３７℃の温度下、抗体産生細胞数と骨髄腫細胞数の比は通常１：１～１０：１程度とし、約１～１０分間程度反応させることにより細胞融合を実施することができる。
　モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマクローンのスクリーニングは、ハイブリドーマを、例えばマイクロタイタープレート中で培養し、ウェルの培養上清の免疫抗原に対する反応性をＥＬＩＳＡ等の免疫化学的方法によって測定することにより行うことができる。
　抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングにおいては、ＲＧＭａタンパク質との結合アッセイに加えて、該抗体が本発明のＲＧＭａ活性を阻害するかの評価も行う。これらのスクリーニング方法により、本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体を選択することができる。
　目的の抗体を産生するハイブリドーマを含むウェルから更に、限界希釈法によってクローニングを行い、クローンを得ることができる。ハイブリドーマの選別、育種は、通常、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加して、１０～２０％牛胎児血清を含む動物細胞用培地で行われる。
　ハイブリドーマからのモノクローナル抗体の製造は、ハイブリドーマをインビトロで培養するか、又はマウス、ラット等の哺乳動物の腹水中等のインビボで増殖させ、得られた培養上清、又は哺乳動物の腹水から単離することにより行うことができる。
　インビトロで培養する場合には、培養する細胞種の特性及び培養方法等の種々条件に合わせて、ハイブリドーマを増殖、維持及び保存させ、培養上清中にモノクローナル抗体を産生させるのに適した栄養培地を用いることが可能である。栄養培地は、公知の栄養培地又は基本培地から調製される栄養培地等を上げることができる。
　基本培地としては、例えば、Ｈａｍ’Ｆ１２培地、ＭＣＤＢ１５３培地あるいは低カルシウムＭＥＭ培地等の低カルシウム培地及びＭＣＤＢ１０４培地、ＭＥＭ培地、Ｄ－ＭＥＭ培地、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＡＳＦ１０４培地あるいはＲＤ培地等の高カルシウム培地等が挙げられ、該基本培地は、目的に応じて、例えば血清、ホルモン、サイトカイン及び／又は種々の無機あるいは有機物質等を含有させることができる。
　モノクローナル抗体の単離、精製は、上述の培養上清あるいは腹水を、飽和硫酸アンモニウム、ユーグロブリン沈澱法、カプロイン酸法、カプリル酸法、イオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ又はＤＥ５２等）、抗イムノグロブリンカラムあるいはプロテインＡカラム等のアフィニティカラムクロマトグラフィーに供すること等により行うことができる。具体的には、モノクローナル抗体の精製は免疫グロブリンの精製法として既知の方法を用いればよく、たとえば、硫安分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分画法、陰イオン交換体の利用、さらにＲＧＭａタンパク質を用いるアフィニティークロマトグラフィー等の手段により容易に達成することができる。
　モノクローナル抗体はファージディスプレイ法により取得することもできる。ファージディスプレイ法では、任意のファージ抗体ライブラリより選別したファージを、目的の免疫原を用いてスクリーニングを行い、免疫原に対する所望の結合性を有するファージを選択する。次に、ファージ内に含まれる抗体対応配列を単離又は配列決定し、単離された配列又は決定された配列情報に基づき、抗体又は抗原結合ドメインをコードする核酸分子を含む発現ベクターを構築する。そしてかかる発現ベクターをトランスフェクションされた細胞株を培養することにより、モノクローナル抗体を産生させることができる。ファージ抗体ライブラリとして、ヒト抗体ライブラリを用いることにより、所望の結合性を有するヒト抗体を生成することができる。
＜核酸分子＞
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子は例えば、以下の方法によって得ることができる。まず、ハイブリドーマ等の細胞から、市販のＲＮＡ抽出キットを用いて全ＲＮＡを調製し、ランダムプライマー等を用い、逆転写酵素によりｃＤＮＡを合成する。次いで、既知のヒト抗体重鎖遺伝子、軽鎖遺伝子の可変領域において、それぞれ保存されている配列のオリゴヌクレオチドをプライマーに用いたＰＣＲ法によって、抗体をコードするｃＤＮＡを増幅させる。定常領域をコードする配列については、既知の配列をＰＣＲ法で増幅することによって得ることができる。ＤＮＡの塩基配列は、配列決定用プラスミドに組み込むなどして、常法により決定することができる。
　あるいは、可変領域又はその一部の配列を化学合成し、定常領域を含む配列に結合することによっても本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを得ることができる。
　当該核酸分子は重鎖と軽鎖の定常領域と可変領域の全てをコードするものであってもよいが、重鎖と軽鎖の可変領域のみをコードするものであってもよい。定常領域と可変領域の全てをコードする場合における重鎖及び軽鎖の定常領域の塩基配列は、Nucleic Acids Research vol.14, p1779, 1986、The Journal of Biological Chemistry vol.257, p1516, 1982 及びCell vol.22, p197, 1980 に記載のものが好ましい。
＜機能改変抗体＞
　抗ＲＧＭａ中和抗体の機能改変抗体は、以下のような方法で調製される。例えば、本願抗ＲＧＭａ中和抗体を、宿主細胞としてα１，６―フコース転移酵素（ＦＵＴ８）遺伝子を破壊したＣＨＯ細胞を用いて製造すると、糖鎖のフコース含量が低下して細胞殺傷機能が高まった抗体が得られ、ＦＵＴ８遺伝子を導入したＣＨＯ細胞を宿主細胞として製造すると、細胞殺傷機能が低い抗体が得られる（国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００２／３１１４０号、国際公開第００／６１７３９号）。また、Ｆｃ領域のアミノ酸残基を改変することで補体活性化機能を調節することができる（米国特許第６７３７０５６号、米国特許第７２９７７７５号、米国特許第７３１７０９１号）。さらに、Ｆｃ受容体の１つであるＦｃＲｎへの結合を高めたＦｃ領域の変異体を使用することにより、血中半減期の延長を図ることができる（橋口周平ら、生化学、２０１０、Vol.82(8), p710）。これらの機能改変抗体は、遺伝子工学的に製造することができる。Ｆｃ受容体の１つであるＦｃＲｎへの結合を高めたＦｃ領域の変異体を使用することにより、血中半減期の延長を図ることができる（橋口周平ら、生化学、２０１０、Vol.82(8), p710）。これらの機能改変抗体は、遺伝子工学的に製造することができる。
＜コンジュゲート抗体＞
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体の改変分子として、コンジュゲート抗体が挙げられる。コンジュゲート抗体としては、抗ＲＧＭａ中和抗体にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非ペプチド性ポリマー、放射性物質、毒素、低分子化合物、サイトカイン、成長因子（ＴＧＦ－β、ＮＧＦ、Ｎeurotrophinなど）、アルブミン、酵素、他の抗体などの本願の抗ＲＧＭａ中和抗体以外の機能分子を化学的又は遺伝子工学的に結合したコンジュゲート抗体があげられる。
　機能分子としてＰＥＧを結合する場合、ＰＥＧは非限定的に分子量２０００から１０００００Ｄａ、より好ましくは１００００から５００００Ｄａのものが使用でき、直鎖型でもよく、ブランチ型のものでもよい。ＰＥＧは、例えばＮＨＳ活性基を用いることにより、抗ＲＧＭａ中和抗体のアミノ酸のＮ末端アミノ基等に結合することができる。
　機能分子として放射性物質を用いる場合、131Ｉ、125Ｉ、90Ｙ、64Ｃｕ、99Ｔｃ、77Ｌｕ又は211Ａｔなどが用いられる。放射性物質は、ク口ラミンＴ法などによって抗ＲＧＭａ中和抗体に直接結合させることができる。
　機能分子として毒素を用いる場合、細菌毒素（例えば、ジフテリア毒素）、植物毒素（例えば、リシン）、低分子毒素（例えば、ゲルダナマイシン）、メイタンシノイド、及びカリケアマイシン等が用いられる。
　機能分子として低分子化合物を用いる場合、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトロレキサート、マイトマイシン、ネオカルチノスタチン、ビンデシン及びＦＩＴＣ等の蛍光色素等が挙げられる。
　機能分子として、酵素を用いる場合、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ；米国特許第４７３７４５６号）、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ））、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－ホスフェートデヒドロゲナーゼ）、複素環式オキシダーゼ（例えば、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ等）、ラクトペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼ等が用いられる。
　毒素、低分子化合物又は酵素を化学的に結合する時に使用するリンカーとしては、二価ラジカル（例えば、アルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン）、－（ＣＲ2）ｎＯ（ＣＲ2）ｎ－（Ｒは任意の置換基、ｎは正の整数）で表されるリンカーやアルコキシの反復単位（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ等）及びアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））、並びに、二酸エステル及びアミド（スクシネート、スクシンアミド、ジグリコレート、マロネート及びカプロアミド等が挙げられる）が挙げられる。機能分子を結合させる化学的修飾方法はこの分野において既に確立されている (D.J.King., Applications and Engineering of Monoclonal antibodies., 1998 T.J. International Ltd, Monoclonal Antibody-Based Therapy of Cancer., 1998 Marcel Dekker Inc; Chari et al., Cancer Res., 1992 Vol152:127; Liu et al., Proc Natl Acad Sci USA., 1996 Vol 93:8681)。
＜抗原結合断片＞
　本発明の実施形態において、抗体の「抗原結合断片」とは、前述のような抗体の、抗原結合性を有する一部分の領域を意味し、具体的にはF(ab')2 、Fab'、Fab 、Ｆｖ（variable fragment ofantibody）、ジスルフィド結合Ｆｖ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、及びこれらの重合体等が挙げられ、さらに、抗原結合断片にはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非ペプチド性ポリマー、放射性物質、毒素、低分子化合物、サイトカイン、成長因子（ＴＧＦ－β、ＮＧＦ、Ｎeurotrophinなど）、アルブミン、酵素、他の抗体などの本願の抗ＲＧＭａ中和抗体以外の機能分子を化学的又は遺伝子工学的に結合しているコンジュゲートフラグメントが含まれる。
　「F(ab')2」及び「Fab」は、イムノグロブリンを、タンパク質分解酵素であるペプシンあるいはパパイン等で処理することにより製造され、ヒンジ領域中の２本の重鎖間に存在するジスルフィド結合の前後で消化されて生成される抗体フラグメントを意味する。例えば、ＩｇＧをパパインで処理すると、ヒンジ領域中の２本の重鎖間に存在するジスルフィド結合の上流で切断されてＶＬ（軽鎖可変領域）とＣＬ（軽鎖定常領域）からなる軽鎖、及びＶＨ（重鎖可変領域）とＣＨγ1（重鎖定常領域中のγ1領域）とからなる重鎖フラグメントがＣ末端領域でジスルフィド結合により結合した相同な２つの抗体フラグメントを製造することができる。これら２つの相同な抗体フラグメントを各々Fabという。またＩｇＧをペプシンで処理すると、ヒンジ領域中の２本の重鎖間に存在するジスルフィド結合の下流で切断されて前記２つのFabがヒンジ領域でつながったものよりやや大きい抗体フラグメントを製造することができる。この抗体フラグメントをF(ab')2という。
＜キメラ抗体＞
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体の好ましい態様としてキメラ抗体が挙げられる。「キメラ抗体」としては、可変領域が、非ヒト動物（マウス、ラット、ハムスター、ニワトリ等）のイムノグロブリン由来の可変領域であり、定常領域がヒトイムノグロブリン由来の定常領域である、キメラ抗体が例示される。例えば、抗原をマウスに免疫し、そのマウスモノクローナル抗体の遺伝子から抗原と結合する可変領域を切り出し、ヒト骨髄由来の抗体定常領域と結合して作製することができる。ヒトイムノグロブリン由来の定常領域は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ及びＩｇＥ等のアイソタイプにより各々固有のアミノ酸配列を有するが、本発明における組換キメラ抗体の定常領域はいずれのアイソタイプに属するヒトイムノグログリンの定常領域であってもよい。好ましくは、ヒトＩｇＧの定常領域である。このように作製したキメラ抗体の遺伝子を用いて発現ベクターを作製することができる。該発現ベクターで宿主細胞を形質転換することによりキメラ抗体産生形質転換細胞を得、該形質転換細胞を培養することにより培養上清中から目的のキメラ化抗体を得る。
＜ヒト化抗体＞
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体の別の好ましい態様としてヒト化抗体が挙げられる。本発明における「ヒト化抗体」は、マウスなどの非ヒト動物抗体の抗原結合部位（ＣＤＲ；相補性決定領域）のＤＮＡ配列だけをヒト抗体遺伝子に移植（ＣＤＲグラフティング）した抗体である。例えば、特表平４－５０６４５８号公報及び特許２９１２６１８号明細書等に記載の方法を参照して作製することができる。具体的には、そのＣＤＲの一部又は全部が非ヒト哺乳動物（マウス、ラット、ハムスター等）のモノクローナル抗体に由来するＣＤＲであり、その可変領域のフレームワーク領域がヒトイムノグロブリン由来の可変領域のフレームワーク領域であり、かつその定常領域がヒトイムノグロブリン由来の定常領域であることを特徴とするヒト化抗体を意味する。
　本発明におけるヒト化抗体は、例えば以下のようにして製造することができる。しかしながら、そのような製造方法に限定されるものでないことは言うまでもない。
　例えば、マウスモノクローナル抗体に由来する組換えヒト化抗体は、特表平４－５０６４５８号公報及び特開昭６２－２９６８９０号公報等を参照して、遺伝子工学的に作製することができる。即ち、マウスモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマから、マウス重鎖ＣＤＲ部分のＤＮＡとマウス軽鎖ＣＤＲ部分のＤＮＡを単離し、ヒトイムノグロブリン遺伝子からヒト重鎖ＣＤＲ以外の全領域のヒト重鎖遺伝子と、ヒト軽鎖ＣＤＲ以外の全領域のヒト軽鎖遺伝子を単離する。
　単離したマウス重鎖ＣＤＲ部分のＤＮＡを移植したヒト重鎖遺伝子を発現可能なように適当な発現ベクターに導入し、同様にマウス軽鎖ＣＤＲ部分のＤＮＡを移植したヒト軽鎖遺伝子を発現可能なように適当なもう１つの発現ベクターに導入する。又は、マウスのＣＤＲを移植したヒトの重鎖及び軽鎖遺伝子を同一の発現ベクターに発現可能なように導入することもできる。このようにして作製された発現ベクターで宿主細胞を形質転換することによりヒト化抗体産生形質転換細胞を得、該形質転換細胞を培養することにより培養上清中から目的のヒト化抗体を得る。
＜ヒト抗体＞
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体の別の好ましい態様としてヒト抗体が挙げられる。ヒト抗体とは、イムノグロブリンを構成する重鎖の可変領域及び重鎖の定常領域並びに軽鎖の可変領域及び軽鎖の定常領域を含むすべての領域がヒトイムノグロブリンをコードする遺伝子に由来するイムノグロブリンとなっている抗体であって、ヒト抗体遺伝子をマウスに導入して作製することができる。具体的には、例えば、少なくともヒトイムノグロブリン遺伝子をマウス等のヒト以外の哺乳動物の遺伝子座中に組込むことにより作製されたトランスジェニック動物を、抗原で免疫感作することにより、前述したポリクローナル抗体あるいはモノクローナル抗体の作製法と同様にして製造することができる。
　例えば、ヒト抗体を産生するトランスジェニックマウスは、Nature Genetics, Vol.7, p.13-21, 1994；Nature Genetics, Vol.15, p.146-156, 1997；特表平4-504365号公報；特表平7-509137号公報；国際公開ＷＯ９４／２５５８５号パンフレット；Nature, Vol.368,p.856-859, 1994；及び特表平６－５００２３３号公報等に記載の方法に従って作製することができる。より具体的には、ＨｕＭａｂ(登録商標)マウス(Medarex, Princeton NJ)、ＫＭＴＭマウス (Kirin Pharma Company, Japan)、ＫＭ(ＦＣγＲＩＩｂ-ＫＯ)マウス等が挙げられる。
　本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体として、具体的には、重鎖可変領域に特定のアミノ酸配列を含むCDRを有し、軽鎖可変領域に特定のアミノ酸配列を含むCDRを有するもの（好ましくは、上述の（a）～（ｌ）及び上述の（a’）～（i’）の抗ＲＧＭａ中和抗体）が挙げられる。
　なお、ＲＧＭａとの結合能を有し、ＲＧＭａの活性を阻害（中和）するという本発明の抗体の特性が維持される限り、抗ＲＧＭａ中和抗体（好ましくは、上述の（a）～（ｌ）及び上述の（a’）～（i’）の抗ＲＧＭａ中和抗体）のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸（１～２０個、１～１０個又は１～５個、好ましくは１ないし２個）の置換、欠失、付加又は挿入があってもよい。このような置換、欠失、付加はCDRに導入されてもよいが、CDR以外の領域に導入されることが好ましい。また、該アミノ酸置換は本発明の特性を維持するために保存的置換であることが好ましい。
　アミノ酸配列において置換、欠失等が含まれた本発明の抗ＲＧＭａ中和抗体（好ましくは、上述の（a）～（ｌ）及び上述の（a’）～（i’）の抗ＲＧＭａ中和抗体）のアミノ酸配列は、例えば、アミノ酸配列改変後の重鎖可変領域が改変前のアミノ酸配列と９０％以上（より好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の％同一性を有するアミノ酸配列であり、アミノ酸配列改変後の軽鎖可変領域が改変前のアミノ酸配列と９０％以上（より好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の％同一性を有するアミノ酸配列である。
　本発明において、ｓｉＲＮＡとは標的となる遺伝子（本発明においてはＲＧＭａ遺伝子）の発現を抑制することができる短い二本鎖ＲＮＡである。本発明のＲＧＭａ活性を阻害するｓｉＲＮＡとして機能する限りにおいて、塩基配列や長さ（塩基長）は特に限定されないが、好ましくは約３０塩基未満、より好ましくは約１９～２７塩基、さらに好ましくは約２１～２５塩基である。
　本発明において、ｓｈＲＮＡとは一本鎖ＲＮＡで部分的に回文状の塩基配列を含むことにより、分子内で二本鎖構造をとり、３'末端に突出部を有する短いヘアピン構造からなる約２０塩基対以上の分子のことをいう。そのようなｓｈＲＮＡは、細胞内に導入された後、細胞内で約２０塩基（代表的には例えば、２１塩基、２２塩基、２３塩基）の長さに分解され、ｓｉＲＮＡと同様に標的となる遺伝子の発現を抑制することができる。
　本発明においては、上述のｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡは、ＲＧＭａ遺伝子の発現を抑制できるものであればどのような形態であってもよい。
　本発明において、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡは、人工的に化学合成することができる。また、例えばＴ７ＲＮＡポリメラーゼ及びＴ７プロモーターを用いて、鋳型ＤＮＡからアンチセンス及びセンスのＲＮＡをインビトロで合成することができる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＧＭａ遺伝子のＤＮＡ配列中の連続する５から１００の塩基配列に対して相補的な、又はハイブリダイズするヌクレオチドであればよく、ＤＮＡ又はＲＮＡのいずれであってもよい。また、機能に支障がない限り修飾されたものであってもよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドは常法によって合成することができ、例えば、市販のＤＮＡ合成装置によって容易に合成することができる。
　好ましい配列は通常の選択方法を用いて選択することができ、本発明におけるｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡとしては、機能性ＲＧＭａの発現阻害を評価することで確認することが出来る。
＜異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤＞
　本発明の実施形態において、異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤とは、異常タンパク質（TDP-43、Tau、α-シヌクレイン、SOD1等のミスフォールドタンパク質や変異タンパク質）が凝集し、その凝集体の神経細胞等の細胞内への蓄積を抑制する作用を有する薬剤または医薬組成物を意味する。本発明の異常タンパク質凝集体蓄積抑制作用により治療対象となる神経変性疾患としては、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患であって、具体的には、脊髄小脳変性症、脊髄小脳失調症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、脆弱X関連振戦／運動失調症候群、球脊髄性筋萎縮症、脆弱X症候群、脆弱XE症候群、筋強直性ジストロフィー(1型)、致死性不眠症、前頭側頭型認知症又は前頭側頭葉変性症、ピック病、原発性進行性失語、原発性進行性非流暢性失語、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性認知症、グリア細胞球状封入体タウオパチー又はレビー小体型認知症等の疾患を意味する。このうち、好ましくは、前頭側頭型認知症（FTD）又は前頭側頭葉変性症（FTLD）があげられる。
＜異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤＞
　本発明の実施形態において、異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤とは、神経細胞外にある異常タンパク質（前記と同義）の神経細胞内への取り込みを阻害する作用を有する薬剤または医薬組成物を意味する。ここで、神経細胞内に取り込まれた異常タンパク質は、細胞内で凝集体となって蓄積することにより、神経変性疾患を発症する。そのため、異常タンパク質の取り込みを阻害することにより、神経細胞内で異常タンパク質の凝集体の蓄積を抑制することができる。本発明において、異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害作用により治療対象となる神経変性疾患としては、前述の異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患があげられ、なかでも、前頭側頭型認知症（FTD）又は前頭側頭葉変性症（FTLD）が好ましい。
　また、後述の実施例で示されるように、ＲＧＭａがコフィリンの脱リン酸化を誘導し、繊維状アクチン（Ｆ－アクチン）から球状アクチン（Ｇ－アクチン、単量体アクチンともいう）への脱重合を促進することにより、異常タンパク質（Tau等）の神経細胞外から細胞内への取り込みが増加する。本発明におけるＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体は、繊維状アクチンから球状アクチンへの脱重合を抑制する作用を有する。また、本発明におけるＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体は、このようなアクチン動態を変化させることにより、ＲＧＭａにより増加した異常タンパク質の神経細胞内への取り込みを阻害する作用を有する。これらの作用によって、本発明におけるＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体は、異常タンパク質凝集体蓄積抑制作用を示し、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤になりうる。
　このように、本発明では、ＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体を有効成分として含有する、異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤が含まれる。また、本発明では、ＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体を有効成分として含有する、異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤が含まれる。さらには、本発明では、ＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体を有効成分として含有する、繊維状アクチンから球状アクチンへの脱重合抑制剤（好ましくは、神経細胞内における繊維状アクチンから球状アクチンへの脱重合抑制剤）も含まれる。
＜異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患＞
　本発明の実施形態において、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患とは、前述の疾患と同義であり、具体的には、脊髄小脳変性症、脊髄小脳失調症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、脆弱X関連振戦／運動失調症候群、球脊髄性筋萎縮症、脆弱X症候群、脆弱XE症候群、筋強直性ジストロフィー(1型)、致死性不眠症、前頭側頭型認知症又は前頭側頭葉変性症、ピック病、原発性進行性失語、原発性進行性非流暢性失語、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性認知症、グリア細胞球状封入体タウオパチー又はレビー小体型認知症等の疾患を意味する。このうち、好ましくは、前頭側頭型認知症（FTD）又は前頭側頭葉変性症（FTLD）があげられる。
　このように、本発明では、ＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体を有効成分として含有する、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防または治療剤が含まれる。また、本発明では、ＲＧＭａ阻害物質、とりわけ、抗ＲＧＭａ中和抗体を有効成分として含有する、前頭側頭型認知症（FTD）又は前頭側頭葉変性症（FTLD）の予防または治療剤が含まれる。
＜医薬組成物＞
　本発明における異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤または異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤は、通常、全身的又は局所的に、経口又は非経口の形で投与される。
　本発明における異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤または異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤は、ＲＧＭａ阻害物質を有効成分とし、薬学的に許容される担体又は添加剤を適宜配合して製剤化することができる。そのように製剤化した医薬組成物を経口又は非経口の形で投与することができる。具体的には、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤とすることができ、また、注射剤、輸液、坐剤、軟膏、パッチ剤等の非経口剤とすることができる。担体又は添加剤の配合割合については、医薬品分野において通常採用されている範囲に基づいて適宜設定すればよい。配合できる担体又は添加剤は特に制限されないが、例えば、水、生理食塩水、その他の水性溶媒、水性又は油性基剤等の各種担体、例えば、賦形剤、結合剤、ｐＨ調整剤、崩壊剤、吸収促進剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、香料等の各種添加剤が挙げられる。
　ＲＧＭａ阻害物質が抗ＲＧＭａ中和抗体、その機能改変抗体、そのコンジュゲート抗体又はそれらの抗原結合断片である場合、薬学的に許容される担体とともに製剤化された注射剤又は輸液として、非経口投与経路、例えば、静脈内、筋肉内、皮膚内、腹腔内、皮下又は局所に投与することが好ましい。
　例えば、抗ＲＧＭａ中和抗体を含む注射剤又は輸液は、溶液、懸濁液又は乳濁液として用いることができる。その溶剤として、例えば、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖溶液及び等張液（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ホウ砂、プロピレングリコール等の溶液）等を用いることができる。
　さらに、このような抗ＲＧＭａ中和抗体を含む注射剤又は輸液は、安定剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤、防腐剤、ｐＨ調整剤等を含んでいてもよい。
　安定剤としては、例えば、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、マンニトール、グルコース、デキストラン、エチレングリコール、プロピレングリコール、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡナトリウム、クエン酸ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン等を用いることができる。
　溶解補助剤としては、例えば、アルコール（例えば、エタノール等）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、非イオン性界面活性剤例えば、ポリソルベート８０（登録商標）、ＨＣＯ－５０等）等を用いることができる。
　懸濁化剤としては、例えば、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。
　乳化剤としては、例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。
　無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ソルビトール等を用いることができる。
　緩衝剤としては、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液等を用いることができる。
　保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂等を用いることができる。
　防腐剤としては、例えば、塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等を用いることができる。
　ｐＨ調整剤としては、例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸等を用いることができる。
　ＲＧＭａ阻害物質が核酸（ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドなど）である場合、非ウイルスベクター又はウイルスベクターの形態で投与することができる。非ウイルスベクター形態の場合、リポソームを用いて核酸分子を導入する方法（リポソーム法、ＨＶＪ－リポソーム法、カチオニックリポソーム法、リポフェクション法、リポフェクトアミン法など）、マイクロインジェクション法、遺伝子銃（Ｇｅｎｅ Ｇｕｎ）でキャリア（金属粒子）とともに核酸分子を細胞に移入する方法などを利用することができる。例えば、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡをウイルスベクターを用いて生体に投与する場合は、組換えアデノウイルス、レトロウイルスなどのウイルスベクターを利用することができる。無毒化したレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス、センダイウイルス、ＳＶ４０などのＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルスに、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを発現するＤＮＡを導入し、細胞又は組織にこの組換えウイルスを感染させることにより、細胞又は組織内に遺伝子を導入することができる。
　このようにして得られる製剤は、例えばヒトや他の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して、その有効量を投与することにより、異常タンパク質の凝集体蓄積が関与する疾患を予防又は治療することができる。投与量は、目的、疾患の重篤度、患者の年齢、体重、性別、既往歴、有効成分の種類などを考慮して、適宜設定される。例えば、有効成分が抗ＲＧＭａ中和抗体である場合、約６５～７０ｋｇの体重を有する平均的なヒトを対象とした場合、１日当たり０．０２ｍｇ～４０００ｍｇ程度が好ましい。１日当たりの総投与量は、単一投与量であっても分割投与量であってもよい。
　以下、本発明について実施例を挙げてより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　なお、抗RGMa中和抗体としては、本明細書に記載した（b）のアミノ酸配列（配列番号１１～１５、およびHCDR3としてAGSのアミノ酸配列）を含む抗RGMa中和抗体を実施例４で使用し、それ以外の実施例では(a)のアミノ酸配列（配列番号５～１０）を含む抗RGMa中和抗体を使用した。また、対照抗体としてはパリビズマブ（Palivizumab）を各実施例で用いた。
実施例１：mSOD1（変異SOD1）マウス脊髄のパラフィン包埋切片に対する免疫組織化学
　雌のG93A変異遺伝子導入マウス（ｍSOD1マウス）に、6週齢からマウスが完全な身体麻痺を示す時まで、抗RGMa中和抗体もしくは対照抗体を1匹あたり250 μg 週2回腹腔内投与した。105日齢でmSOD 1マウスを安楽死後、4%パラホルムアルデヒド（PFA）含有PBSで潅流し、脊髄を取り出して、脱水後にパラフィン包埋した。マイクロトームを用い脊髄を3μmの厚みで切片を作成した。
　脱パラフィン化とリン酸緩衝生理食塩水（PBS）での洗浄後、クレシルバイオレットでニッスル染色を行い1個体あたり15枚の切片を用いて脊髄前角に存在する運動ニューロンの数を顕微鏡で計測した。その結果を図１に示す。
　免疫染色については脱パラフィン化した切片を30分間0.3%過酸化水素水とインキュベートして内因性ペルオキシダーゼ活性をクエンチした後、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄した。免疫組織化学では、一次抗体はユビキチンに対するウサギ抗体（DAKO）を使用し、二次抗体はペルオキシダーゼ標識デキストランポリマー（Dako Envision+、Dako）に結合させたヤギ抗ウサギ免疫グロブリンを使用した。3,3'-ジアミノベンジジン(DAB)発色反応後、脱水、透徹、封入した。また、顕微鏡画像を撮影後Image-Jを用いて脊髄前角におけるユビキチン免疫活性を示す面積の割合を定量化して、抗RGMa中和抗体を投与したmSOD1マウス(7匹)と対照抗体を投与したmSOD1マウス(3匹)の各々を比較した。その結果を図２に示す。
　抗RGMa中和抗体を投与したmSOD 1マウス群(n=5)では対照抗体を投与したmSOD 1マウス群(n=5)に比較して、前角の運動ニューロン数は増加し、対照抗体を投与したｍSOD1マウス群の前角では萎縮した運動ニューロンが観察された（図１）。抗RGMa中和抗体を投与したmSOD 1マウス群では対照抗体を投与した群に比較して、ユビキチン化凝集タンパクが有意に減少した（図２）。この結果から、抗RGMa中和抗体療法はmSOD1マウスモデルにおいて異常タンパク凝集を阻害することによって運動神経保護効果を発揮することが明らかになった。FTDにおいてもユビキチン化凝集タンパクが出現することからmSOD1マウスと同様に抗RGMa中和抗体が効果を発揮することを示している。
実施例２　アクチン動態に対する作用
　RGMaシグナルはsmall GTPasesを制御し、アクチン動態の変化をもたらす。またコフィリンはアクチンの脱重合を引き起こすが、リン酸化されるとその作用が消失する。
　mSOD1マウスの脊髄におけるコフィリンのリン酸化状態を調べた。抗RGMa中和抗体または対照抗体を投与したmSOD1マウス（各群n=5）および野生型マウス（WT、n=4、105日齢）を、4℃のPBSで灌流し、全脊髄を解剖後、氷上でホモジナイズし、-80℃で保存した。これらの試料を、プロテアーゼ阻害剤およびホスファターゼ阻害剤を含むRIPA緩衝液（PBS、0.1% TritonX-100、0.5% デオキシコール酸ナトリウム、0.1% ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）、50 mM Tris-HCl および 150 mM NaCl, pH 8.0）で溶解した。等濃度のタンパク質を10% SDS-ポリアクリルアミドゲルで分離し、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）膜に転写した。一次抗体は、抗コフィリン抗体（1：80000、Proteintech；66057-1-Ig）、抗リン酸化コフィリン抗体（1：1000、Cell Signaling；＃3313）を使用し、4℃で一晩インキュベートした。続いてペルオキシダーゼ標識二次抗体とともに90分間インキュベートし、Super Signal West Femto Maximum Sensitivity Substrate (Thermo Fisher Scientific)を用いて視覚化した。各バンドの画像は Image Gauge (Fuji Film) を用いて撮影し、ImageJ を用いて解析した。結果を図３の（A）および（B）に示す。
　次に、脊髄のアクチン重合の状態について調べた。抗RGMa中和抗体を投与したmSOD1マウス（n=4）、対照抗体を投与したmSOD1マウス(n=4)及びWT（n=3）の凍結脊髄切片を4%PFAで固定し、0.5%のtritonに15分間処理した。PBSで3回洗浄後、ローダミンが結合したファロイジン（Cytoskelton、# PHDR1）（1:100）を4℃で一晩インキュベートした。サンプルはDAPIを含むVectashield Mounting Medium (Vector Laboratories, H-1200)でマウントした。両前角のファロイジン陽性細胞の数を、オールインワン顕微鏡（BZ-X810、Keｙence）倍率40倍でカウントした。結果を図3（C）に示す。
　ラットの初代神経細胞培養を用いた検討も行った。培養の方法は以下の通りである。
　Wistar Ratの16日目の胚から、皮質ニューロンの初代培養細胞を調製した。これらの細胞をポリ-L-リジン（Sigma, P1274-25MG）でコートしたチャンバースライドに播種し、5％ウシ胎児血清と100 IU/mlペニシリンを含む高グルコースDMEM中、37℃で5％CO2下で培養を行った。培地をB-27（Invitrogen、12587010）を添加した分化培地（Neuro Stem Cell Basal Medium（Merck、SCM003））に交換し、2-3日毎に培地交換を半分ずつ行い、培養した。7日間培養後に評価に用いた。
　RGMaが神経細胞のフィラメント状アクチン（F アクチン）と球状アクチン（G アクチン）に及ぼす影響について評価した。細胞はリコンビナントヒトRGMa（2μg/ml）(NovoPro, 500040)またはDDW（二回蒸留水）および抗RGMa中和抗体または対照抗体（20μg/ml）で30分間処置した後、メタノールとアセトンで-20℃で20分間固定した。ローダミンを結合させたファロイジン（PHDR1）で40分間、Fアクチンの標識を行い、0.1% TritonX-100で5分の透過処理後、Alexa Fluor(商標) 488を結合したDnase1（D12371）で20分間、Gアクチンを標識した。画像は共焦点顕微鏡ZEISS LSM 880 with Airyscan（Az science）を用いて取得した。Fアクチン/Gアクチン比（F/G比）は、オールインワン蛍光顕微鏡（BZ-X800、Keyence）で取得した画像からImageJを用いて、独立した３ウェルから得た３６個の神経細胞のローダミンとAlexaFluor(商標)488の蛍光強度を定量し計測した。結果を図４（A）に示す。
　mSOD1マウスの脊髄ではコフィリンの脱リン酸化が有意に上昇し、これは抗RGMa中和抗体により抑制された（図3の（A）および（B））。F-アクチン染色では、mSOD1マウスの脊髄でアクチン脱重合が増加しており、これは抗RGMa中和抗体によってキャンセルされた（図3の（C））。ラット初代神経細胞培養においてRGMa添加によりF/G比は低下し、この効果は抗RGMa中和抗体によって抑制された（図４の（A））。
　これらの結果から、RGMaのシグナルはコフィリンの脱リン酸化を介してアクチンの脱重合を促進することがわかり、またを抗RGMa中和抗体はこれらの効果をキャンセルすることが示された。
実施例3：凝集タンパク等の細胞外から細胞内に取り込みに対する作用
　前述の方法と同様にラットの初代神経細胞培養を用いて検討を行った。
（１）RGMaによるアクチンシグナルを介した変異タンパクの細胞内取り込み
　アクチン脱重合の阻害剤、Jasplakinolide （AdipoGen Life Sciences、AG-CN2-0037）を用いて、RGMaによる変異タンパク取り込みへの影響を調べた。最初にFLAGtag付きのリコンビナントSOD1タンパク質（G93A、A4V）を精製した。ラット初代皮質神経細胞に、リコンビナントヒトRGMa（2μg/ml）またはDDW（二回蒸留水）およびJasplakinolide（250nM）またはDMSOを添加し30分間反応させた後、変異SOD１タンパク（G93A、A4V）を250ng/mlで添加した。1時間後メタノール・アセトンで固定し、FITCを結合したマウスモノクローナル抗FLAG M2抗体（Sigma-Aldrich、F4049）で標識した。共焦点レーザー走査顕微鏡FV3000倒立型（Olympus）で取得した画像から、ImageJを用いて独立した3つのウェルから得た36個の神経細胞のFITCの平均蛍光強度を求めた。結果を図４の（B）に示す。
（２）変異タンパク等の細胞内取り込みに対する抗RGMa中和抗体の作用
　RGMaによる変異タンパクの細胞内への取り込みが抗RGMa中和抗体で抑制されるか調べた。リコンビナントヒトRGMa（2μg/ml）および抗RGMa中和抗体または対照抗体（20μg/ml）に、G93A変異SOD1、A4V変異 SOD1あるいは野生型SOD１のリコンビナントFLAG標識タンパク（250ng/ml）を混合したものをラット初代皮質神経細胞に加え、60分間インキュベートし、メタノールとアセトンで-20℃、20分間固定した。FITCを結合したマウスモノクローナル抗FLAG M2抗体（Sigma-Aldrich、F4049）で標識した。共焦点レーザー走査顕微鏡FV3000倒立型（Olympus）で取得した画像から、ImageJを用いて独立した3つのウェルから得た36個の神経細胞のFITCの平均蛍光強度を求めた。その結果を図５に示す。変異タンパク質に替えて、デキストラン（pHrodo(商標) Red Dextran、Invitrogen、 P10361）を用いて同様な検討を行った。細胞にデキストランは10分間反応させた。その結果を図６に示す。
　Tauについては、ラット初代皮質神経細胞をリコンビナントヒトRGMa（2μg/ml）および抗RGMa中和抗体または対照抗体（20μg/ml）で処理後に、リコンビナントヒトTauタンパク質（AnaSpec, AS-55556-50）を加えて60分間インキュベートした後、 -20℃で20分間メタノールとアセトンで固定した。細胞は4℃で一晩マウスモノクローナル抗リン酸化Tau抗体（Invitrogen MN1020 1:100）で標識し、その後Alexa Fluor(商標)594で染色した。標本は、DAPIを含有する封入剤（ベクターラボラトリーズ，VECTASHIELD Mounting Medium H-1200）を用いて封入し、共焦点レーザー走査顕微鏡FV3000倒立型（Olympus）で画像を取得した。ImageJを用いて独立した2つのウェルから得た36個の神経細胞の平均蛍光強度を求めた。その結果を図７に示す。
　G93A 変異及びA4V変異SOD1タンパクもRGMa添加により細胞内への取り込みが増加し、この効果はJasplakinolideにより抑制された。この結果からRGMaはアクチン脱重合による細胞内への変異タンパクの取り込みを促進することが示唆された。
　リコンビナントヒトRGMa存在下で、抗RGMa中和抗体を加えた細胞では、対照抗体を加えた細胞に比較してG93A 変異及びA4V変異SOD1タンパクの細胞内の取り込みが有意に減少した（図５）。野生型SOD1タンパクを用いた場合には、RGMa添加による細胞内への取り込み増加は観察されなかった。（図４（B））また、デキストランで10分間刺激した場合でも変異SOD1タンパクで見られた反応と同様の結果が得られた（図６）。リコンビナントヒトTauタンパクを用いた場合にも、リコンビナントヒトRGMa添加により細胞内へのTauタンパクの取り込みの増加がみられた。リコンビナントヒトRGMa存在下に抗RGMa中和抗体を加えた細胞では、対照抗体を加えた細胞に比較してTauタンパクの取り込みが有意に減少した（図７）。これらの結果からRGMaは細胞外に存在する異常タンパクの神経細胞内の取り込みを促進すること、さらに抗RGMa中和抗体は、この過程を阻害することで効果を発揮することが明らかになった。
　この結果からRGMaは神経細胞においてアクチン動態を変化させることにより、細胞外に存在する異常タンパクの細胞内の取り込みを促進すること、さらに抗RGMa中和抗体は、この過程を阻害することで効果を発揮することが明らかになった。FTDにおいてもTau等が細胞間で播種することから、同様に抗RGMa中和抗体が効果を発揮することを示している。
実施例４：mPFN1（変異PFN1）マウスのTDP-43凝集に対する抗RGMa中和抗体の作用
　TDP-43凝集のマウスモデルとしてG118V変異profilin1導入マウス（mPFN1マウス）を使用した。mPFN1マウスは神経細胞にTDP-43が異常凝集することが知られている。mPFN1マウスに抗RGMa中和抗体もしくは陰性対照抗体を100日齢から10 mg/kgの用量で週2回腹腔内投与した。終末期のm PFN1マウスを安楽死後、4%パラホルムアルデヒド（PFA）含有PBSで潅流し、脊髄を取り出して、脱水後にパラフィン包埋した。マイクロトームを用い脊髄を3μmの厚みで切片を作成した。
　TDP-43はリン酸化を伴って細胞質に蓄積することから、リン酸化TDP-43を免疫組織化学染色することで神経細胞内のTDP-43凝集を検出した。脱パラフィン化した切片を10 mM クエン酸バッファー内でマイクロウェーブ照射をして抗原賦活を行った。その後30分間0.3%過酸化水素水とインキュベートして内因性ペルオキシダーゼ活性をクエンチした後、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄した。一次抗体はリン酸化TDP-43に対するウサギ抗体（proteintech）を使用し、二次抗体はペルオキシダーゼ標識デキストランポリマー（Dako Envision+、Dako）に結合させたヤギ抗ウサギ免疫グロブリンを使用した。3,3'-ジアミノベンジジン(DAB)発色反応後、脱水、透徹、封入した。また、顕微鏡画像を撮影後、盲検化された評価者が細胞質にリン酸化TDP-43陽性を示す脊髄前角細胞の割合を目視で計測して、抗RGMa中和抗体を投与したm PFN1マウス(２匹)と対照抗体を投与したmPFN1マウス(3匹)の各々を比較した。その結果を図８に示す。
　抗RGMa中和抗体を投与したm PFN1マウス群の脊髄前角では対照抗体を投与した群に比較して、細胞質リン酸化TDP-43陽性細胞数が有意に減少した（図８）。この結果から、抗RGMa中和抗体療法はTDP-43凝集を阻害することが明らかになった。FTDにおいてもTDP-43凝集タンパクが出現することからm PFN1マウスと同様に抗RGMa中和抗体が効果を発揮することを示している。
実施例５：臨床サンプルを用いた評価（CSF中のRGMaの測定）
　FTD患者9名、対照者（その他の神経変性疾患患者（OND）32名、非神経変性疾患患者（ND）24名）から髄液を採取し、直ちに400g、4℃で10分間遠心分離を行った。CSFの上清は、使用するまで-80℃で保存した。その他の神経変性疾患患者（OND）としては、多発性硬化症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎および頚椎症に罹患した患者を対象とし、非神経変性疾患患者（ND）としては、正常圧水頭症、筋疾患、末梢神経疾患および解離性障害に罹患した患者を対象とした。
　CSF中の可溶型RGMaの濃度を、酵素免疫吸着測定法（ELISA）キット（R & D systems）を用いて、測定した。その結果を図９に示す。
　FTD患者の髄液中の可溶型RGMaは、非神経変性疾患患者（ND）およびその他の神経変性疾患（OND）と比較して有意に増加していた。これらのデータは、RGMaがFTD患者の髄液で増加しておりFTDの病態に寄与していることを示している。
＜配列表の説明＞
　配列番号１　：ヒトＲＧＭａ前駆タンパク質のアミノ酸配列
　配列番号２　：マウスＲＧＭａ前駆タンパク質のアミノ酸配列
　配列番号３　：ラットＲＧＭａ前駆タンパク質のアミノ酸配列
　配列番号４　：ヒトＲＧＭａ遺伝子のDNA配列
　配列番号５　：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3のLCDR1のアミノ酸配列
　配列番号６　：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3のLCDR2のアミノ酸配列
　配列番号７　：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3のLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号８　：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3のHCDR1のアミノ酸配列
　配列番号９　：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3のHCDR2のアミノ酸配列
　配列番号１０：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3のHCDR3のアミノ酸配列
　配列番号１１：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4のLCDR1のアミノ酸配列
　配列番号１２：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4のLCDR2のアミノ酸配列
　配列番号１３：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4のLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号１４：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4のHCDR1のアミノ酸配列
　配列番号１５：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4のHCDR2のアミノ酸配列
　配列番号１６：ヒトＲＧＭａのエピトープのアミノ酸配列
　配列番号１７：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9のLCDR1のアミノ酸配列
　配列番号１８：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9のLCDR2のアミノ酸配列
　配列番号１９：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9のLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号２０：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9のHCDR1のアミノ酸配列
　配列番号２１：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9のHCDR2のアミノ酸配列
　配列番号２２：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9のHCDR3のアミノ酸配列
　配列番号２３：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1のLCDR1のアミノ酸配列
　配列番号２４：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1のLCDR2のアミノ酸配列
　配列番号２５：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1のLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号２６：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1のHCDR1のアミノ酸配列
　配列番号２７：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1のHCDR2のアミノ酸配列
　配列番号２８：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1のHCDR3のアミノ酸配列
　配列番号２９：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1のLCDR1のアミノ酸配列
　配列番号３０：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1のLCDR2のアミノ酸配列
　配列番号３１：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1のLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号３２：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1のHCDR1のアミノ酸配列
　配列番号３３：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1のHCDR2のアミノ酸配列
　配列番号３４：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1のHCDR3のアミノ酸配列
　配列番号３５：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1YのLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号３６：ヒトＲＧＭａのエピトープのアミノ酸配列
　配列番号３７：ヒトＲＧＭａのエピトープのアミノ酸配列
　配列番号３８：ヒトＲＧＭａのエピトープのアミノ酸配列
　配列番号３９：ヒトＲＧＭａのエピトープのアミノ酸配列
　配列番号４０：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1FのLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号４１：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1HのLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号４２：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1LのLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号４３：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1VのLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号４４：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1IのLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号４５：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1KのLCDR3のアミノ酸配列
　配列番号４６：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3（ヒト化抗体）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号４７：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3（ヒト化抗体）の重鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号４８：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3（ヒト化抗体）の軽鎖アミノ酸配列
　配列番号４９：抗ＲＧＭａ中和抗体r116A3（ヒト化抗体）の重鎖アミノ酸配列
　配列番号５０：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号５１：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4の重鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号５２：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4の軽鎖アミノ酸配列
　配列番号５３：抗ＲＧＭａ中和抗体r70E4の重鎖アミノ酸配列
　配列番号５４：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号５５：抗ＲＧＭａ中和抗体5F9の重鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号５６：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号５７：抗ＲＧＭａ中和抗体8D1の重鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号５８：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号５９：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1の重鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号６０：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1Yの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
　配列番号６１：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1Y-QLの軽鎖アミノ酸配列
　配列番号６２：抗ＲＧＭａ中和抗体AE12-1Y-QLの重鎖アミノ酸配列
　本発明は、ＲＧＭａ阻害物質が異常タンパク質凝集体蓄積抑制作用または異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害作用を有し、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防又は治療に有用であることが期待され、医薬品産業において高い利用価値を有する。

Claims (13)

  1. 　ＲＧＭａ阻害物質を有効成分とする、異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤。
  2. 　ＲＧＭａ阻害物質を有効成分とする、異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤。
  3. 　異常タンパク質凝集体蓄積抑制剤又は異常タンパク質の神経細胞内への取り込み阻害剤が、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤である、請求項１又は２に記載の剤。
  4. 　異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患が、脊髄小脳変性症、脊髄小脳失調症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、脆弱X関連振戦／運動失調症候群、球脊髄性筋萎縮症、脆弱X症候群、脆弱XE症候群、筋強直性ジストロフィー(1型)、致死性不眠症、前頭側頭型認知症又は前頭側頭葉変性症、ピック病、原発性進行性失語、原発性進行性非流暢性失語、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性認知症、グリア細胞球状封入体タウオパチー及びレビー小体型認知症から選ばれる疾患である、請求項３に記載の剤。
  5. 　異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患が、前頭側頭型認知症（FTD）又は前頭側頭葉変性症（FTLD）である、請求項３又は４に記載の剤。
  6. 　ＲＧＭａ阻害物質が抗ＲＧＭａ中和抗体である、請求項１～５のいずれか一項に記載の剤。
  7. 　抗ＲＧＭａ中和抗体がヒト化抗体である、請求項６に記載の剤。
  8. 　抗ＲＧＭａ中和抗体が配列番号１６、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８及び配列番号３９から選択されるアミノ酸配列を認識する抗体である、請求項６又は７に記載の剤。
  9. 　抗ＲＧＭａ中和抗体が、下記（ａ）～（ｌ）：
    （ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｂ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及びSFGをアミノ酸配列に含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｃ）配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｄ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｅ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｆ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR1、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR2及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR1、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR2及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR3を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｇ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｈ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｉ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｊ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    （ｋ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、及び
    （ｌ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むLCDR１、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むLCDR２及び配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むLCDR3を含む軽鎖可変領域、並びに配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むHCDR１、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むHCDR２及び配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むHCDR３を含む重鎖可変領域を含む抗ＲＧＭａ中和抗体、
    　から選択される抗体である、請求項６～８のいずれか一項に記載の剤。
  10. 　治療を要する哺乳動物に対して有効量のＲＧＭａ阻害物質を投与することを含む、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防又は治療方法。
  11. 　ＲＧＭａ阻害物質が抗ＲＧＭａ中和抗体である、請求項１０に記載の予防又は治療方法。
  12. 　ＲＧＭａ阻害物質の、異常タンパク質凝集体の蓄積が関与する疾患の予防又は治療剤の製造のための使用。
  13. 　ＲＧＭａ阻害物質が抗ＲＧＭａ中和抗体である、請求項１２に記載の使用。
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