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WO2024185775A1 - 長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体、及び該誘導体を用いたオリゴヌクレオチド合成方法 - Google Patents

長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体、及び該誘導体を用いたオリゴヌクレオチド合成方法 Download PDF

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WO2024185775A1
WO2024185775A1 PCT/JP2024/008311 JP2024008311W WO2024185775A1 WO 2024185775 A1 WO2024185775 A1 WO 2024185775A1 JP 2024008311 W JP2024008311 W JP 2024008311W WO 2024185775 A1 WO2024185775 A1 WO 2024185775A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
carbon atoms
integer
substituent
formula
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
PCT/JP2024/008311
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
洋平 岡田
風人 稲永
幸矢 庄司
秀哉 水船
達也 須藤
創太 安達
和志 細井
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Spera Pharma Inc
Tokyo University of Agriculture and Technology NUC
Original Assignee
Spera Pharma Inc
Tokyo University of Agriculture and Technology NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Spera Pharma Inc, Tokyo University of Agriculture and Technology NUC filed Critical Spera Pharma Inc
Priority to CN202480015543.2A priority Critical patent/CN120813558A/zh
Priority to JP2025505349A priority patent/JPWO2024185775A1/ja
Publication of WO2024185775A1 publication Critical patent/WO2024185775A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Pending legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/42—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/44—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C235/52—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07C65/32—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing keto groups
    • C07C65/40—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing keto groups containing singly bound oxygen-containing groups
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    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/76—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/84—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/92—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring with etherified hydroxyl groups
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    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
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    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
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    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/073—Pyrimidine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids

Definitions

  • the present invention relates to long-chain alkenyloxy-substituted benzoyl derivatives, which are pseudo-solid-phase protecting groups used in the synthesis of oligonucleotides by liquid-phase synthesis, oligonucleotides to which the derivatives are bound, and a method for synthesizing oligonucleotides using the derivatives.
  • oligonucleotides such as DNA probes, siRNA, antisense DNA, and antisense RNA have been widely used in bio-related fields.
  • Known methods for chemically synthesizing oligonucleotides include the phosphoramidite method and H-phosphonate method, but currently the solid-phase method using the phosphoramidite method is widely used.
  • the solid-phase method has been optimized and automated, and is advantageous in terms of speed, but has the disadvantage of being limited in terms of scale-up.
  • methods for producing oligonucleotides using the liquid-phase method have also been investigated, but the liquid-phase method requires complicated operations and has a low yield, making it difficult to synthesize oligonucleotides quickly and in large quantities.
  • Patent Document 1 JP 2010-275254 A
  • liquid-phase methods that use pseudo-solid-phase protecting groups, in which nucleosides or oligonucleotides in which the hydroxyl group at the 3' position is protected with a specific organic group
  • Patent Documents 2 to 10 WO 2012/157723 (Ajinomoto), WO 2013/122236 (Ajinomoto), WO 2017/104836 (Ajinomoto), WO 2013/179412 (Ajinomoto) (Hokkaido System Science), WO 2014/077292 (Takeda Pharmaceutical), WO 2017/086397 (Nissan Chemical), WO 2018/203574 (Nissan Chemical), JP 2020-11932 (Fujimoto Chemical Products), WO 2020/227618 (Biogen Ajinomoto) have been proposed, but in the
  • JP 2010-275254 A International Publication No. 2012/157723 International Publication No. 2013/122236 International Publication No. 2017/104836 International Publication No. 2013/179412 International Publication No. 2014/077292 International Publication No. 2017/086397 International Publication No. 2018/203574 JP 2020-11932 A International Publication No. 2020/227618
  • the present invention includes the following.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 10 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents an integer of 1 to 5 (preferably an integer of 1 to 3); X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or a C1-6 alkyl group.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1, or 2); Ring A represents an optionally substituted 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring; X represents C or N.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1, or 2); w represents 0, 1 or 2; Ring B represents a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a substituent; X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or CH 3 .
  • Ra each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms), and a plurality of ORa may be the same or different.
  • the Ra independently represent any one of myristoleic acid (C14), palmitoleic acid (C16), sapienic acid (C16), oleic acid (C18), elaidic acid (C18), vaccenic acid (C18), gadoleic acid (C20), eicosenoic acid (C20), erucic acid (C22), nervonic acid (C24), linoleic acid (C18), eicosadienoic acid (C20), docosadienoic acid (C22), ⁇ - and ⁇ -linolenic acid (C18), pino
  • C20 homo-gamma-linolenic acid
  • C20 eicosatrienoic acid
  • stearidonic acid C18
  • arachidonic acid C20
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified; each of o+1 D independently represents a hydrogen atom, a halogen atom, or a hydroxyl group which may be protected, or may form a bridge with the 4′-carbon (preferably a bridge of a locked nucleic acid (LNA), an amide-bridged nucleic acid, a guanidine-bridged nucleic acid, or a spirocyclopropylene-bridged nucleic acid); each of o Q 1 's independently represents a C1-4 alkyl group having an electron-withdrawing group (e.g., a cyano group, a nitro group, a 2-pyridyl group, a 4-pyridyl group, etc.), an allyl group, a cyano group, a nitro group, a C2-6 alkenyl group having a hal
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified;
  • each of o V's independently represents a C1-6 alkoxy group, a di(C1-6 alkyl)amino group, or a piperazino group in which the nitrogen at position 4 is protected with a protecting group and which may be further substituted;
  • W′ represents a hydrogen atom or a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion;
  • o R2s each independently represent O or S;
  • Tg is represented by the following formula (5):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • Tg in formula (I) or formula (II) is expressed by the following formula (6):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 10 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents an integer of 1 to 5 (preferably an integer of 1 to 3); X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or a C1-6 alkyl group; ** represents a bond to O.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1, or 2); Ring A represents an optionally substituted 5- to 7-membered ring; X represents C or N; ** represents a bond to O.) or The following formula (8):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1 or 2); w represents 0, 1 or 2; Ring B represents a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a substituent; X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or CH 3 ; ** represents a bond to O.)
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified; each of o+1 D independently represents a hydrogen atom, a halogen atom, or a hydroxyl group which may be protected, or may form a bridge with the 4′-carbon (preferably a bridge of a locked nucleic acid (LNA), an amide-bridged nucleic acid, a guanidine-bridged nucleic acid, or a spirocyclopropylene-bridged nucleic acid); each of o Q 1 's independently represents a C1-4 alkyl group having an electron-withdrawing group (e.g., a cyano group, a nitro group, a 2-pyridyl group, a 4-pyridyl group, etc.), an allyl group, a cyano group, a nitro group, a C2-6 alkenyl group having a hal
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified;
  • each of o V's independently represents a C1-6 alkoxy group, a di(C1-6 alkyl)amino group, or a piperazino group in which the nitrogen at position 4 is protected with a protecting group and which may be further substituted;
  • Each W' independently represents a hydrogen atom or a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion;
  • o R2s each independently represent O or S;
  • Tg is represented by the following formula (5):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • Tg in formula (V), formula (VI), formula (VII) or formula (VIII) is represented by the following formula (6):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 10 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents an integer of 1 to 5 (preferably an integer of 1 to 3); X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or a C1-6 alkyl group; ** represents a bond to a base.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1, or 2); Ring A represents an optionally substituted 5- to 7-membered ring; X represents C or N; ** represents a bond to a base.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1 or 2); w represents 0, 1 or 2; Ring B represents a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a substituent; X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or CH 3 ; ** represents a bond to Base.
  • Base in formula (I), (II), (V), (VI), (VII) or (VIII) is a pyrimidine base or a purine base which may be substituted by 1 to 3 substituents selected from the group consisting of a halogen atom, an alkyl group, an aralkyl group, an alkoxy group, an acyl group, an alkoxyalkyl group, a hydroxyl group, an amino group, a monoalkylamino group, a dialkylamino group, a carboxy group, a cyano group and a nitro group.
  • (A1) A step of reacting an n-mer oligonucleotide (n being any integer of 1 or more) in which the 3'- or 5'-hydroxyl group is protected with a carrier-protecting group and the 5'- or 3'-hydroxyl group is protected with a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion, with an acid and a cation scavenger, or with a reagent containing a fluorine anion (preferably pyridine hydrofluoride or tetrabutylammonium fluoride), in a nonpolar or polar solvent, to remove the temporary protecting group at the 5'- or 3'-hydroxyl group, and then separating the n-mer oligonucleotide from impurities in the reaction solution; (A2) A step of reacting a solution of the n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group at the 5'
  • a p-mer oligonucleotide (p is an arbitrary integer of 1 or more, preferably 1) in which the 5'-hydroxyl group has been phosphoramidite-converted and the 3'-hydroxyl group has been protected with a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion, to condense the n-mer oligonucleotide and the p-mer oligonucleotide via the 5'-hydroxyl group or the 3'-hydroxyl group through a phosphite triester bond; and (A3) using an oxidizing agent or a sulfurizing agent, converting the phosphite triester bond of the n+p-mer oligonucleotide obtained in step (A2) into a phosphate triester bond or a thiophosphate triester bond.
  • the carrier protecting group is represented by the following formula (5):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • the carrier protecting group is represented by the following formula (6):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 10 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents an integer of 1 to 5 (preferably an integer of 1 to 3); X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or a C1-6 alkyl group; ** represents a bond to the 3'- or 5'-hydroxyl group, The following formula (7):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer from 1 to 5 (preferably 0 or an integer from 1 to 3, more preferably 0, 1, or 2); Ring A represents an optionally substituted 5- to 7-membered ring; X represents C or N; ** represents a bond to the 3'- or 5'-hydroxyl group, or The following formula (8):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1 or 2); w represents 0, 1 or 2; Ring B represents a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a substituent; X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or CH 3 ; ** represents a bond to the 3'- or 5'-hydroxyl group.
  • the step of separating the n-mer oligonucleotide from impurities in the reaction solution after removing the temporary protecting group comprises neutralizing the reaction solution with a base, (i) isolating the n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting groups have been removed, or (ii) washing the neutralized reaction solution with water to recover an organic layer;
  • the method for producing the oligonucleotide according to the above [26] or [27], [29] The method according to [26] or [27] above, further comprising the following step (A4): (A4) A step of adding a polar solvent to the reaction solution obtained in the step (A1) and/or (A3) to precipitate the n+p-mer oligonucleotide, and obtaining it by solid-liquid separation.
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified; each of o+1 D independently represents a hydrogen atom, a halogen atom, or a hydroxyl group which may be protected, or may form a bridge with the 4'-position carbon (preferably a bridge of a locked nucleic acid (LNA), an amide-bridged nucleic acid, a guanidine-bridged nucleic acid, or a spirocyclopropylene-bridged nucleic acid); each of o Q 1 's independently represents a C1-4 alkyl group having an electron-withdrawing group (e.g., a cyano group, a nitro group, a 2-pyridyl group, a 4-pyridyl group, etc.), an allyl group, a cyano group, a nitro group, a C2-6 alkenyl group having a
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified;
  • each of o V's independently represents an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, a di(C 1-6 alkyl)amino group, or a piperazino group in which the nitrogen at the 4-position is protected with a protecting group and which may be further substituted;
  • W′ represents a hydrogen atom or a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion;
  • o R2s each independently represent O or S;
  • Tg is represented by the following formula (5):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • a method for producing a nucleotide represented by the formula: [32] The production method according to the above [31], wherein the reduction treatment uses a boron-containing reducing agent (preferably lithium borohydride, sodium borohydride, lithium triethylborohydride, or tetrabutylammonium borohydride), or both a boron-containing reducing agent and an amine.
  • a boron-containing reducing agent preferably lithium borohydride, sodium borohydride, lithium triethylborohydride, or tetrabutylammonium borohydride
  • (B1) A step of reacting an n-mer oligonucleotide (n is any integer of 1 or more) in which a carrier protecting group is bound to a nucleic acid base at the 3'-end or a nucleic acid base at the 5'-end and the 3'-position hydroxyl group and the 5'-position hydroxyl group are protected with temporary protecting groups removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion, with an acid and a cation scavenger, or with a reagent containing a fluorine anion (preferably pyridine hydrofluoride, tetrabutylammonium fluoride), in a non-polar or polar solvent, to remove the temporary protecting group of only one of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group, and then separating the n-mer oligonucleotide from impurities in the reaction solution (B2).
  • n is any integer of 1 or more
  • n-mer oligonucleotide solution from which the temporary protecting group of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group has been removed obtained in step (B1) is reacted with an acid and a cation scavenger, or with a reagent containing a fluorine anion (preferably pyridine hydrofluoride, tetrabutylammonium fluoride), to remove the temporary protecting group of only one of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group, and then separating the n-mer oligonucleotide from impurities in the reaction solution.
  • a fluorine anion preferably pyridine hydrofluoride, tetrabutylammonium fluoride
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • the carrier protecting group is represented by the following formula (6):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 10 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents an integer of 1 to 5 (preferably an integer of 1 to 3); X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or a C1-6 alkyl group; ** represents a bond to a nucleic acid base.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer from 1 to 5 (preferably 0 or an integer from 1 to 3, more preferably 0, 1, or 2); Ring A represents an optionally substituted 5- to 7-membered ring; X represents C or N; ** represents a bond to a nucleic acid base, The following formula (8):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1 or 2); w represents 0, 1 or 2; Ring B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a substituent; X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or CH 3 ; ** represents a bond to a nucleic acid base.
  • the step of separating the n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting groups have been removed from impurities in the reaction solution comprises neutralizing the reaction solution with a base, and then (i) isolating the n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting groups have been removed, or (ii) washing the neutralized reaction solution with water to recover an organic layer;
  • the method for producing the oligonucleotide according to the above [33] or [34], [36] The method according to [33] or [34] above, further comprising the following step (B4): (B4) A step of adding a polar solvent to the reaction solution obtained in the step (B1) and/or (B3) to precipitate the n+p-mer oligonucleotide, and obtaining it by solid-liquid separation.
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified; each of o+1 D independently represents a hydrogen atom, a halogen atom, or a hydroxyl group which may be protected, or may form a bridge with the 4'-position carbon (preferably a bridge of a locked nucleic acid (LNA), an amide-bridged nucleic acid, a guanidine-bridged nucleic acid, or a spirocyclopropylene-bridged nucleic acid); each of o Q 1 's independently represents a C1-4 alkyl group having an electron-withdrawing group (e.g., a cyano group, a nitro group, a 2-pyridyl group, a 4-pyridyl group, etc.), an allyl group, a cyano group, a nitro group, a C2-6 alkenyl group having a
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • o represents an integer of 0 or more (preferably an integer of 1 to 50);
  • Each of the o+1 Bases independently represents a nucleobase which may be modified;
  • each of o V's independently represents an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, a di(C 1-6 alkyl)amino group, or a piperazino group in which the nitrogen at the 4-position is protected with a protecting group and which may be further substituted;
  • Each W' independently represents a hydrogen atom or a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion;
  • o R2s each independently represent O or S;
  • Tg is represented by the following formula (5):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • steps (C1) to (C4) (C1) A step of obtaining an n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group at the 5'-position hydroxyl group has been removed and a p-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group at the 3'-position hydroxyl group has been removed by carrying out the following steps (a) and (b), respectively: (a) reacting an n-mer oligonucleotide (n is any integer of 1 or more) in which the 3'-position hydroxyl group is protected with a carrier-protecting group and the 5'-position hydroxyl group is protected with a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion, with an acid and a cation scavenger, or with a reagent containing a fluorine anion (preferably pyridine hydrofluoride or tetrabutylammonium fluoride), in a nonpolar or polar
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; X is C, N, O or S, and when X is C, it represents CH2 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent, and when X is N, it represents NR1 or may be combined with Y to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent, where R1 is H or a C1-6 alkyl group; Y may be a single bond, B(CH 2 ) t * (wherein B is a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a
  • the carrier protecting group is represented by the following formula (6):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 10 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents an integer of 1 to 5 (preferably an integer of 1 to 3); X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or a C1-6 alkyl group; ** represents a bond to the 3'-position hydroxyl group or the 3'-terminal nucleic acid base, The following formula (7):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer from 1 to 5 (preferably 0 or an integer from 1 to 3, more preferably 0, 1, or 2); Ring A represents an optionally substituted 5- to 7-membered ring; X represents C or N; ** represents a bond to the 3'-position hydroxyl group or the 3'-terminal nucleic acid base, The following formula (8):
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms (preferably having 14 to 50 carbon atoms, more preferably having 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably having 14 to 30 carbon atoms); n represents 2 or 3, and a plurality of ORs may be the same or different; m represents 0 or 1; p represents 1 or 2; u represents 0 or an integer of 1 to 5 (preferably 0 or an integer of 1 to 3, more preferably 0, 1 or 2); w represents 0, 1 or 2; Ring B represents a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a substituent; X represents NR 1 , O or S, where R 1 is H or CH 3 ; ** represents a bond to the 3'-position hydroxyl group or the 3'-terminal nucleic acid base.
  • a step of separating the n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting groups have been removed from impurities in the reaction solution or a step of separating the p-mer oligonucleotide from which the temporary protecting groups have been removed from impurities in the reaction solution comprises neutralizing the reaction solution with a base, and then (i) isolating the n-mer oligonucleotide or p-mer oligonucleotide from which the temporary protecting groups have been removed, or (ii) washing the neutralized reaction solution with water to recover an organic layer;
  • the method for producing the oligonucleotide according to the above [39] or [40], [42] The method according to [39] or [40] above, further comprising the following step (C5): (C5) A step of adding a polar solvent to the reaction solution obtained in step (C1) and/or (C2) and/or (C4) to precipitate the n+p-mer oligon
  • the present invention provides a novel pseudo-solid-phase protecting group that can be used in the production of oligonucleotides, and enables a novel method for producing polyoligonucleotides by liquid-phase synthesis using the protecting group.
  • R each independently represents an optionally substituted alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms, preferably 14 to 50 carbon atoms, more preferably 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably 14 to 30 carbon atoms.
  • alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms refers to a linear or branched hydrocarbon group having one double bond at any position and having 14 to 60 carbon atoms.
  • alkyl group examples include, but are not limited to, myristoleyl group (C14), palmitoleyl group (C16), sapiel group (C16), oleyl group (C18), elaidyl group (C18), baxel group (C18), gadoleyl group (C20), eicosel group (C20), erucyl group (C22), nervol group (C24), linoleyl group (C18), eicosadiel group (C20), docosadiel group (C22), ⁇ - and ⁇ -linoleyl groups (C18), pinorel group (C18), and eleostearyl group.
  • C18 mideyl group (C20), dihomo- ⁇ -linoleyl group (C20), eicosatriyl group (C20), stearyl group (C18), arachidol group (C20), eicosatetrayl group (C20), adryl group (C22), bosopentayl group (C18), eicosapentayl group (C20), osbondol group (C22), isocosayl group (C22), tetracosapentayl group (C24), docosahexayl group (C22), and aperturenyl group (C24).
  • alkenyl groups may be naturally derived or may be obtained by synthesis using known synthesis techniques. These alkenyl groups include, but are not limited to, myristoleic acid (C14), palmitoleic acid (C16), sapienic acid (C16), oleic acid (C18), elaidic acid (C18), vaccenic acid (C18), gadoleic acid (C20), eicosenoic acid (C20), erucic acid (C22), nervonic acid (C24), linoleic acid (C18), eicosadienoic acid (C20), docosadienoic acid (C22), ⁇ - and ⁇ -linolenic acid (C18), pinoleic acid (C18), eleostearic acid (C18), mead acid (C20), dihomo- ⁇ -linolenic acid (C20), eicosatrienoic acid (C20), ), stearidonic acid (C18),
  • n 2 or 3
  • the two or three ORs may be the same or different, but are preferably the same.
  • the arrangement of the OR groups is not particularly limited, but is preferably 3,4,5-substituted, 2,4-substituted, or 2,3,4-substituted.
  • m 0 or 1.
  • p represents 1 or 2.
  • X is C, N, O or S, preferably C, N or O, more preferably C or N.
  • X is C, it is CH2 or, together with Y, represents a 5- to 7-membered carbocyclic ring which may have a substituent or a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent.
  • examples of “optionally substituted 5- to 7-membered carbocyclic rings” include, but are not limited to, cyclopentane, cyclopentene, cyclohexane, cyclohexene, benzene, cycloheptane, cycloheptene, and naphthalene, each of which may have a substituent, and preferably cyclohexane, benzene, or naphthalene, each of which may have a substituent.
  • examples of “optionally substituted 5- to 7-membered heterocycles” include, but are not limited to, pyrrolidine, piperidine, pyrrole, pyridine, pyrazole, imidazole, pyrimidine, pyrazine, pyridazine, and triazine, each of which may have a substituent, and preferably pyrrolidine or piperidine, each of which may have a substituent.
  • Examples of the substituents that the 5- to 7-membered carbocyclic ring or 5- to 7-membered heterocyclic ring may have include an optionally substituted hydroxyl group, an optionally substituted amino group, an optionally substituted alkyl group, a halogen, a nitro group, and an optionally substituted carbonyl group, and preferably an optionally substituted hydroxyl group, an optionally substituted amino group, or an optionally substituted alkyl group.
  • substituents may be substituted with one or any number of substituents, preferably 1 to 3. When it is substituted with multiple substituents, the substituents may be the same or different.
  • substituteduents include halogen atoms, C1-6 alkyl groups, C2-6 alkenyl groups, C2-6 alkynyl groups, C1-6 alkoxy groups, C7-16 aralkyl groups, C3-6 cycloalkyl groups, C6-14 aryl groups, 6-14 membered heteroaryl groups, aryloxy groups, acyl groups, amino groups, hydroxyl groups, oxo groups, thioxo groups, and trifluoromethyl groups.
  • C1-6 alkyl group examples include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, hexyl, isohexyl, 1,1-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, and 2-ethylbutyl.
  • C2-6 alkenyl group examples include ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 2-methyl-1-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4-pentenyl, 4-methyl-3-pentenyl, 1-hexenyl, 3-hexenyl, and 5-hexenyl.
  • C2-6 alkynyl group examples include ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-butynyl, 2-butynyl, 3-butynyl, 1-pentynyl, 2-pentynyl, 3-pentynyl, 4-pentynyl, 1-hexynyl, 2-hexynyl, 3-hexynyl, 4-hexynyl, 5-hexynyl, and 4-methyl-2-pentynyl.
  • C1-6 alkoxy group examples include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, pentyloxy, and hexyloxy.
  • C7-16 aralkyl group examples include benzyl, phenethyl, naphthylmethyl, and phenylpropyl.
  • C3-6 cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, bicyclo[2.2.1]heptyl, bicyclo[2.2.2]octyl, bicyclo[3.2.1]octyl, and adamantyl.
  • C6-14 aryl group examples include phenyl, biphenyl, naphthyl (e.g., 1-naphthyl, 2-naphthyl), and anthracenyl (e.g., 1-anthryl, 2-anthryl, 9-anthryl).
  • examples of "6-14 membered heteroaryl group” include pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrrolyl, isoquinolyl, quinolyl, indolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, triazolyl, furyl, and thienyl.
  • optionally substituted alkyl group includes any linear alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, more preferably 1 to 4 carbon atoms, any branched alkyl group having the same or different branched chains and having 3 to 6 carbon atoms, and any cyclic alkyl group having 3 to 6 carbon atoms, which may be substituted with a substituent.
  • any linear alkyl group having 1 to 6 carbon atoms include methyl, ethyl, n-propyl, n-butyl, n-pentyl, and n-hexyl groups
  • specific examples of any branched alkyl group having 3 to 6 carbon atoms and having the same or different branched chains include isopropyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, neopentyl, and isopentyl groups
  • preferred cyclic alkyl groups having 3 to 6 carbon atoms are 3- to 6-membered monocyclic cycloalkyl groups, and specific examples include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, and cyclohexyl groups.
  • halogen atom includes, for example, a fluorine atom (fluoro), a chlorine atom (chloro), a bromine atom (bromo), or an iodine atom (iodo).
  • X when X is N, it is NR1 or, together with Y, represents a 5- to 7-membered heterocycle which may have a substituent.
  • R1 is H or a C1-6 alkyl group, preferably H or methyl. Examples of the 5- to 7-membered heterocycle which may have a substituent are the same as those described above.
  • Y represents a single bond, B(CH 2 ) t *, or a 5-7 membered ring which may be substituted together with X.
  • B represents a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may be substituted, t is 0, 1 or 2, and * indicates a bond to X.
  • Examples of the carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may be substituted include, but are not limited to, cyclopentane, cyclopentene, cyclohexane, cyclohexene, benzene, cycloheptane, cycloheptane, and naphthalene which may be substituted, and preferably cyclohexane, benzene, or naphthalene which may be substituted.
  • Examples of the substituent of the carbon ring having 5 to 7 carbon atoms include an optionally substituted hydroxyl group, an optionally substituted amino group, an optionally substituted alkyl group, a halogen, a nitro group, and a carbonyl group, and preferably an optionally substituted hydroxyl group, an optionally substituted amino group, or an optionally substituted alkyl group.
  • Z represents a single bond or (CH 2 ) S. s is an integer of 1 to 5, preferably an integer of 1 to 3. However, both Y and Z cannot be single bonds.
  • Another embodiment of the compound and salts thereof of the present invention is a compound and salts thereof represented by formula (2) (hereinafter, sometimes referred to as compound (2) in this specification).
  • R each independently represents an alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms, preferably 14 to 50 carbon atoms, more preferably 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably 14 to 30 carbon atoms, which may be substituted. Examples of R are the same as those exemplified in compound (1).
  • n 2 or 3
  • the two or three ORs may be the same or different, but are preferably the same.
  • the arrangement of the OR groups is not particularly limited, but is preferably 3,4,5-substituted, 2,4-substituted, or 2,3,4-substituted.
  • m 0 or 1.
  • p represents 1 or 2.
  • u represents an integer of 1 to 5, and preferably an integer of 1 to 3.
  • X represents NR 1 , O or S, and is preferably NR 1 or O.
  • R 1 is H or a C1-6 alkyl group, and is preferably H or methyl.
  • Another embodiment of the compound and salts thereof of the present invention is a compound and salts thereof represented by formula (3) (hereinafter, sometimes referred to as compound (3) in this specification).
  • R each independently represents an alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms, preferably 14 to 50 carbon atoms, more preferably 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably 14 to 30 carbon atoms, which may be substituted. Examples of R are the same as those exemplified in compound (1).
  • n 2 or 3
  • the two or three ORs may be the same or different, but are preferably the same.
  • the arrangement of the OR groups is not particularly limited, but is preferably 3,4,5-substituted, 2,4-substituted, or 2,3,4-substituted.
  • m 0 or 1, and is preferably 0.
  • p represents 1 or 2.
  • u represents 0 or an integer of 1 to 5, preferably 0 or an integer of 1 to 3, and more preferably 0, 1 or 2.
  • X represents C or N.
  • ring A represents a 5- to 7-membered carbocyclic or heterocyclic ring which may have a substituent
  • ring A represents a 5- to 7-membered heterocyclic ring which may have a substituent.
  • Another embodiment of the compound and salts thereof of the present invention is a compound and salts thereof represented by formula (4) (hereinafter, sometimes referred to as compound (4) in this specification).
  • R each independently represents an alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms, preferably 14 to 50 carbon atoms, more preferably 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably 14 to 30 carbon atoms, which may be substituted. Examples of R are the same as those exemplified in compound (1).
  • n 2 or 3
  • the two or three ORs may be the same or different, but are preferably the same.
  • the arrangement of the OR groups is not particularly limited, but is preferably 3,4,5-substituted, 2,4-substituted, or 2,3,4-substituted.
  • m 0 or 1, and is preferably 0.
  • p represents 1 or 2.
  • u represents 0 or an integer of 1 to 5, preferably 0 or an integer of 1 to 3, and more preferably 0, 1 or 2.
  • w represents 0, 1 or 2.
  • ring B represents a carbon ring having 5 to 7 carbon atoms which may have a substituent.
  • Examples of compound (1) of the present invention include the compounds shown below.
  • Ra each independently represents an alkenyl group having 14 to 60 carbon atoms, preferably 14 to 50 carbon atoms, more preferably 14 to 40 carbon atoms, and even more preferably 14 to 30 carbon atoms, which may be substituted.
  • Examples of R are the same as those exemplified in compound (1).
  • nucleotides having pseudo solid-phase protecting groups bound thereto One embodiment of the present invention is a nucleotide having the above-mentioned pseudo solid-phase protecting group, a long-chain alkenyloxy-substituted benzoyl derivative, bound thereto.
  • nucleotide having a pseudo solid-phase protecting group bound thereto according to the present invention is represented by the following formula (I) (hereinafter, sometimes referred to as oligonucleotide (I) in this specification).
  • o represents any integer of 0 or more, preferably an integer of 1 to 50.
  • the o+1 Bases each independently represent a nucleic acid base which may be modified.
  • nucleobase includes natural nucleobases and unnatural nucleobases, and is not particularly limited as long as it is used in the synthesis of nucleic acids.
  • examples of the nucleobase include, but are not limited to, purine bases such as adenine and guanine, and pyrimidine bases such as uracil, cytosine, and thymine.
  • the nucleobase may also be modified.
  • nucleobases modified with 1 to 3 optional substituents e.g., halogen atoms, alkyl groups, aralkyl groups, alkoxy groups, acyl groups, alkoxyalkyl groups, hydroxyl groups, amino groups, monoalkylamino groups, dialkylamino groups, carboxy groups, cyano groups, nitro groups, alkylthio groups, etc.
  • substituents e.g., halogen atoms, alkyl groups, aralkyl groups, alkoxy groups, acyl groups, alkoxyalkyl groups, hydroxyl groups, amino groups, monoalkylamino groups, dialkylamino groups, carboxy groups, cyano groups, nitro groups, alkylthio groups, etc.
  • examples of the nucleobase that may be modified include, but are not limited to, 8-bromoadenine, 8-bromoguanine, 5-bromocytosine, 5-iodocytosine, 5-bromour
  • Preferred nucleic acid bases include, for example, adenine, guanine, 2,6-diaminopurine, thymine, 2-thiothymine, cytosine, 5-methylcytosine, uracil, 5-fluorocytosine, xanthine, 6-aminopurine, 2-aminopurine, 6-chloro-2-amino-purine, and 6-chloropurine, and particularly preferred nucleic acid bases include, for example, adenine, guanine, cytosine, 5-methylcytosine, thymine, or uracil.
  • the multiple nucleic acid bases present in a nucleotide may be different nucleic acid bases or may be the same type of nucleic acid base. In addition, the nucleic acid base may be protected.
  • nucleobase means that any functional group of the nucleobase may be protected with a protecting group, for example, the amino group in a nucleobase having an amino group (e.g., an adenyl group, a guanyl group, or a cytosyl group) may be protected, the hydroxyl group in a nucleobase having a hydroxyl group may be protected, the thiol group in a nucleobase having a thiol group may be protected, or the carbonyl group in a nucleobase having a carbonyl group may be protected in the form of a hydroxyl group by conjugating with the amino group or hydroxyl group substituted on the ring.
  • the protecting groups bound to these nucleobases are preferably capable of withstanding the deprotection conditions of the temporary protecting group at the 3' or 5' position of the oligonucleotide.
  • the "protecting group for the amino group" in the nucleic acid base is not particularly limited, but examples thereof include pivaloyl group, pivaloyloxymethyl group, trifluoroacetyl group, phenoxyacetyl group, 4-isopropylphenoxyacetyl group, 4-tert-butylphenoxyacetyl group, acetyl group, benzyl (Bn) group, benzoyl (Bz) group, 4,4'-dimethoxytrityl (DMTr) group, 4-methoxytrityl group, triphenylmethyl group, 2-naphthylmethyl group, cyanoethoxycarbonyl group, tetrahydropyranyl group, trimethylsilyl group, triethylsilyl group, triisopropylsilyl group, t-butyldimethylsilyl group, t-butyldiphenyl
  • Such groups include silyl groups, 4-methoxybenzy
  • the "hydroxyl protecting group" in the nucleic acid base is not particularly limited, but examples thereof include alkyl groups (e.g., methyl and tert-butyl groups), arylmethyl groups (e.g., benzyl and p-methoxybenzyl groups), alkoxyalkyl groups (e.g., methoxymethyl, methoxyethyl, cyanoethoxymethyl and ethoxyethyl groups), 2-tetrahydropyranyl groups, cyanoethyl groups, carbamoyl groups (e.g., phenylcarbamoyl and 1,1-dioxothiomorpholine-4-thiocarbamoyl groups), acyl groups (e.g., acetyl and pivaloyl groups), and the like.
  • alkyl groups e.g., methyl and tert-butyl groups
  • arylmethyl groups e.g., benzyl and p
  • silyl group examples include an isobutyryl group, a benzoyl group, a phenoxyacetyl group, a levulinyl group, and a 3-benzoylpropionyl group), a silyl group (e.g., a trimethylsilyl group, a triethylsilyl group, a triisopropylsilyl group, a tert-butyldimethylsilyl group, and a tert-butyldiphenylsilyl group), a [(triisopropylsilyl)oxy]methyl group (Tom group), and a 1-(4-chlorophenyl)-4-ethoxypiperidin-4-yl group (Cpep group), with an acetyl group, a benzoyl group, a benzyl group, and a p-methoxybenzyl group being preferred.
  • a silyl group e.g., a trimethyls
  • the “thiol group protecting group” in the nucleic acid base is not particularly limited, but examples thereof include protecting groups similar to the above-mentioned “hydroxyl group protecting group” and protecting groups that form disulfide bonds.
  • the carbonyl group of the nucleic acid base is conjugated and protected in the form of a hydroxyl group
  • the carbonyl group can be protected by reacting with, for example, phenol, 2,5-dichlorophenol, 3-chlorophenol, 3,5-dichlorophenol, 2-formylphenol, 2-naphthol, 4-methoxyphenol, 4-chlorophenol, 2-nitrophenol, 4-nitrophenol, 4-acetylaminophenol, pentafluorophenol, 4-pivaloyloxybenzyl alcohol, 4-nitrophenethyl alcohol, 2-(methylsulfonyl)ethanol, 2-(phenylsulfonyl)ethanol, 2-cyanoethanol, 2-(trimethylsilyl)ethanol, dimethylcarbamic acid chloride, diethylcarbamic acid chloride, ethylphenylcarbamic acid chloride, 1-pyrrolidinecarboxylic acid chloride, 4-morpholinecarboxylic acid chloride, diphenylcarbamic acid chloride
  • D in the oligonucleotide (I) represents a hydrogen atom, a halogen atom, or a hydroxyl group which may be protected, and may also form a bridge with the 4' carbon of ribose.
  • the protecting group for the "hydroxyl group which may be protected” is the same as the "protecting group for the hydroxyl group" described above.
  • bridged nucleic acids include, but are not limited to, bridged nucleic acids such as locked nucleic acids (LNA), amide bridged nucleic acids, guanidine bridged nucleic acids (GuNA), or spirocyclopropylene bridged nucleic acids.
  • LNA locked nucleic acids
  • GuNA guanidine bridged nucleic acids
  • spirocyclopropylene bridged nucleic acids spirocyclopropylene bridged nucleic acids.
  • BNAs examples include, but are not limited to, methyleneoxy (4'-CH 2 -O-2') BNA (also known as LNA, 2',4'-BNA), ethyleneoxy (4'-(CH 2 ) 2 -O-2') BNA (also known as ENA), ⁇ -D-thio (4'-CH 2 -S-2') BNA, aminooxy (4'-CH 2 -O-N(R 3 )-2') BNA (R is H or Me), oxyamino (4'-CH 2 -N(R 3 )-O-2') BNA (R is H or Me), 2',4'-BNAcoc, 3'-amino-2',4'-BNA, 5'-methyl BNA, (4'-CH(CH 3 )-O-2') BNA (also known as cEt BNA), (4'-CH(CH 2 OCH 3 )-O-2') BNAs (also known as cMOE BNAs), amide BNAs, (4
  • examples of amide-bridged nucleic acids and their production methods can be, for example, those described in WO2014/109384
  • examples of guanidine-bridged nucleic acids and their production methods can be, for example, those described in WO2014/046212, WO2017/047816, and JP2022-033869.
  • Q 1 in oligonucleotide (I) represents a C1-4 alkyl group having an electron-withdrawing group, an allyl group, a cyano group, a nitro group, a C2-6 alkenyl group having a halogen group, or a C6-10 aryl group, or a hydrogen atom.
  • the multiple Qs may be the same or different.
  • C1-4 alkyl group examples include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, and tert-butyl.
  • the term "electron-withdrawing group” refers to a substituent that is commonly used in organic chemistry and has the property of reducing electron density. Examples include, but are not limited to, a carboxy group, a halogen, a nitro group, an ester group, a cyano group, a nitro group, a 2-pyridyl group, a 4-pyridyl group, and an aryl group or an arylsulfonyl group that may have a substituent, with a cyano group being preferred.
  • W/Tg or Tg/W represents W or Tg, and when the 5' side is W, the 3' side is Tg, whereas when the 5' side is Tg, the 3' side is W, but preferably the 3' side is Tg and the 5' side is W.
  • W is a hydrogen atom or a temporary protecting group that can be removed under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion.
  • the term "general protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion” refers to a protecting group commonly used in the field of organic synthetic chemistry (particularly nucleic acid synthesis) as a protecting group for a hydroxyl group, and is not particularly limited as long as it is a protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion.
  • Examples include an aliphatic acyl group; an aromatic acyl group; an aminocarbonyl group which may be substituted; an alkoxycarbonyl group which may be substituted; an aliphatic sulfonyl group; an aromatic sulfonyl group; a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups; a methyl group substituted with 1 to 3 aryl groups which are substituted with an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, a halogen atom and/or a cyano group; or a silyl group.
  • Benzyl (Bn) group a diphenylcarbonyl (DPC) group, a 4,4'-dimethoxytriphenylmethyl group (commonly known as a 4,4'-dimethoxytrityl (DMTr) group), a 4-methoxytriphenylmethyl group (commonly known as a 4-methoxytrityl group), a triphenylmethyl (commonly known as a trityl (Tr) group), a 9-(9-phenyl)xanthenyl group, a 9-phenylthioxanthenyl group, a di(C1-6 alkoxy)trityl group, a mono(C1-18 alkoxy)trityl group, a 2-naphthylmethyl group, a cyanoethoxycarbonyl group, a tetrahydropyranyl group, a silyl group substituted with an alkyl group or an allyl group
  • benzyl (Bn) group 4,4'-dimethoxytrityl (DMTr) group, 4-methoxytrityl group, t-butyldimethylsilyl group, t-butyldiphenylsilyl group, trimethylsilyl (TMS) group, diphenylaminocarbonyl (DPC) group, methanesulfonyl group, and trifluoromethanesulfonyl group
  • TMS trimethylsilyl
  • DPC diphenylaminocarbonyl
  • methanesulfonyl group methanesulfonyl group
  • trifluoromethanesulfonyl group and particularly preferred are 4,4'-dimethoxytrityl group and 4-methoxytrityl group.
  • R2 in the oligonucleotide (I) is O or S.
  • nucleotide bound to the pseudo solid-phase protecting group of the present invention is represented by the following formula (II) (hereinafter, in this specification, it may be referred to as oligonucleotide (II). Formula).
  • o represents any integer of 0 or more, preferably an integer of 1 to 50.
  • the o+1 Bases each independently represent a nucleic acid base which may be modified.
  • W' is a hydrogen atom or a temporary protecting group which can be removed under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion.
  • R2 in the above oligonucleotide (II) is O or S.
  • V represents a C1-6 alkoxy group, a di(C1-6 alkyl)amino group, or a piperazino group in which the nitrogen atom at position 4 is protected with a protecting group and may be further substituted.
  • the multiple Vs may be the same or different.
  • nucleotide having a pseudo solid-phase protecting group bound thereto is represented by the following formula (V) (hereinafter, sometimes referred to as oligonucleotide (V) in this specification).
  • V oligonucleotide
  • o, Base, W, R 2 and D are the same as those in the oligonucleotide (I), provided that two Ws may be the same or different.
  • nucleotide having a pseudo solid-phase protecting group bound thereto is represented by the following formula (VI) (hereinafter, in this specification, this may be referred to as oligonucleotide (VI)).
  • oligonucleotide (VI) o, Base, W, R 2 and D are the same as those in the oligonucleotide (I), provided that two Ws may be the same or different.
  • nucleotide having a pseudo solid-phase protecting group bound thereto is represented by the following formula (VII) (hereinafter, sometimes referred to as oligonucleotide (VII) in this specification).
  • oligonucleotide (VII) o, Base, W', R 2 and V are the same as those in the oligonucleotide (II), provided that the two W' may be the same or different.
  • nucleotide having a pseudo solid-phase protecting group bound thereto is represented by the following formula (VIII) (hereinafter, sometimes referred to as oligonucleotide (VIII) in this specification).
  • oligonucleotide (VIII) o, Base, W', R 2 and V are the same as those in the oligonucleotide (II), provided that the two W' may be the same or different.
  • the Tg of the oligonucleotide (I), (II), (V), (VI), (VII) or (VIII) is: The following formula (5):
  • ** represents a bond of the oligonucleotide to O or Base.
  • the definitions of the other symbols are the same as those in formula (1).
  • the binding of Tg to O can be performed by a bond (e.g., an ester bond) between the hydroxyl group at the 3' or 5' position of the nucleotide and the terminal carboxylic acid of Tg, but is not limited to this.
  • the binding of Tg to Base can be performed by a bonding reaction between a reactive substituent of Base and the terminal carboxylic acid of Tg, for example, by a bond (e.g., an amide bond) between the amino group of the base adenine, guanine, or cytosine and the terminal carboxylic acid of Tg.
  • Tg of the oligonucleotide (I), (II), (V), (VI), (VII) or (VIII) may also be The following formula (6):
  • ** represents a bond of the oligonucleotide to O or Base.
  • the definitions of the other symbols are the same as those in formula (2).
  • Tg of the oligonucleotide (I), (II), (V), (VI), (VII) or (VIII) is also The following formula (7):
  • ** represents a bond of the oligonucleotide to O or Base.
  • the definitions of the other symbols are the same as those in formula (3).
  • Tg of said oligonucleotide (I), (II), (V), (VI), (VII) or (VIII) or oligonucleotide (II) may also be The following formula (8):
  • ** represents a bond of the oligonucleotide to O or Base.
  • the definitions of the other symbols are the same as those in formula (4).
  • the pseudo-solid-phase protecting group of the present invention represented by the above formula (I) or formula (II) can be deprotected by subjecting the nucleotide to a reduction treatment, a reaction with hydrazine or an alkylhydrazine, or hydrolysis.
  • the reduction treatment can be carried out using, but is not limited to, a boron-containing reducing agent, preferably lithium borohydride, sodium borohydride, lithium triethylborohydride, tetrabutylammonium borohydride, or both a boron-containing reducing agent and an amine.
  • the pseudo-solid-phase protecting group of the present invention represented by the above formula (V), (VI), (VII) or (VIII) can be deprotected by hydrolysis or ammolysis of the nucleotide to which the pseudo-solid-phase protecting group of the present invention is bound.
  • Ammolysis can be carried out using, but is not limited to, an alcoholic solution of ammonia, for example, a methanolic solution of ammonia.
  • One aspect of the present invention is a method for producing an oligonucleotide, comprising the following steps (B1) to (B3) (hereinafter, in this specification, this may be referred to as a method for producing an oligonucleotide or simply as a production method of the present invention).
  • (B1) A step of reacting an n-mer oligonucleotide (n is any integer of 1 or more) in which a carrier protecting group is bound to a nucleic acid base at the 3'-end or a nucleic acid base at the 5'-end and the 3'-position hydroxyl group and the 5'-position hydroxyl group are protected with temporary protecting groups removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion, with an acid and a cation scavenger, or with a reagent containing a fluorine anion (preferably pyridine hydrofluoride, tetrabutylammonium fluoride), in a non-polar or polar solvent, to remove the temporary protecting group of only one of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group, and then separating the n-mer oligonucleotide from impurities in the reaction solution (B2).
  • n is any integer of 1 or more
  • n-mer oligonucleotide solution from which the temporary protecting group of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group has been removed obtained in step (B1) is reacted with an acid and a cation scavenger, or with a reagent containing a fluorine anion (preferably pyridine hydrofluoride, tetrabutylammonium fluoride), to remove the temporary protecting group of only one of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group, and then separating the n-mer oligonucleotide from impurities in the reaction solution.
  • a fluorine anion preferably pyridine hydrofluoride, tetrabutylammonium fluoride
  • Step (A1) includes a step of removing a temporary protecting group from an n-unit polymer (oligo)nucleotide in which one of the 3'- or 5'-hydroxyl group is protected with a carrier protecting group and the other is protected with a removable temporary protecting group (also referred to herein as a "deprotection step"), and a step of separating the n-unit polymer (oligo)nucleotide from which the temporary protecting group has been removed from impurities in the reaction solution (also referred to herein as a "separation step").
  • Step (B1) includes a step of removing the temporary protecting group at only one of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group from an n-membered oligonucleotide in which a carrier protecting group is bound to the 3'-terminal nucleic acid base or the 5'-terminal nucleic acid base and the 3'-position hydroxyl group and the 5'-position hydroxyl group are protected with temporary protecting groups that can be removed under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion (sometimes referred to as a "deprotection step” in this specification), and a step of separating the n-membered oligonucleotide from which the temporary protecting group has been removed from impurities in the reaction solution (sometimes referred to as a "separation step" in this specification).
  • a carrier protecting group is bound to the 3'-terminal nucleic acid base or the 5'-terminal nucleic acid base and the 3'-position
  • n represents any integer of 1 or more.
  • the upper limit of n is not particularly limited, but is preferably 50 or less, more preferably 40 or less, and even more preferably 30 or less.
  • step (1) The reaction for removing the temporary protecting group in step (1) (A1 or B1, hereinafter sometimes simply referred to as step (1)) can be carried out with reference to a method known per se.
  • a method known per se for example, the reaction conditions described in WO2012/157723 or WO2019/131719 can be used.
  • the reaction can be carried out as follows.
  • the solvent (non-polar or polar solvent) in step (1) of the production method of the present invention is not particularly limited as long as it does not affect the reaction, but since the higher the solubility in the solvent, the better the reactivity can be expected, it is preferable to select a solvent that has a high solubility for the nucleotide to which the pseudo solid-phase protecting group is bound.
  • the solvent used in step (1) include aromatic solvents, ester solvents, aliphatic solvents, ether solvents, amide solvents, sulfoxide solvents, nitrile solvents, halogen solvents, and combinations thereof.
  • Preferred examples include benzene, toluene, xylene, mesitylene, hexane, pentane, heptane, nonane, cyclohexane, ethyl acetate, isopropyl acetate, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, tert-butyl methyl ether, cyclopentyl methyl ether, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide, acetonitrile, propionitrile, dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane, and combinations thereof.
  • More preferred examples include toluene, xylene, hexane, heptane, cyclohexane, ethyl acetate, isopropyl acetate, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, tert-butyl methyl ether, cyclopentyl methyl ether, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide, and combinations thereof.
  • the concentration of the n-mer (oligo)nucleotide in the solvent in the deprotection step of step (1) is not particularly limited as long as it is dissolved, but is preferably 1 to 30% by weight.
  • the acid used in step (1) is not particularly limited, but examples thereof include trifluoroacetic acid, dichloroacetic acid, trifluoromethanesulfonic acid, trichloroacetic acid, methanesulfonic acid, hydrochloric acid, acetic acid, and p-toluenesulfonic acid. Trifluoroacetic acid, dichloroacetic acid, and trichloroacetic acid are preferred.
  • the amount of acid used may be 1 to 100 moles, and preferably 1 to 40 moles, per mole of n-polymerized nucleotide.
  • the acid may be used alone or in the presence of a cation scavenger.
  • the cation scavenger are not particularly limited as long as they do not substantially cause reprotection of the removed temporary protecting group or side reactions with the deprotected functional group.
  • the cation scavenger used in step (1) is not particularly limited as long as it can be used in deprotecting a protecting group removable under acidic conditions, and examples thereof include optionally substituted alkylthiol derivatives, optionally substituted pyrrole derivatives, optionally substituted indole derivatives, and optionally substituted furan derivatives.
  • substituents include, but are not limited to, halogen atoms, C1-6 alkyl groups, C2-6 alkenyl groups, C2-6 alkynyl groups, C1-6 alkoxy groups, hydroxyl groups, aryloxy groups, amino groups, nitro groups, trifluoromethyl groups, phenyl groups, carboxy groups, and the like. Substitution with two or more of these groups may be used.
  • Preferred examples of the cation scavenger include thiomalic acid, acetylcysteine, pyrrole, 3-methylpyrrole, 2,4-dimethylpyrrole, indole, 4-methylindole, 5-methylindole, 6-methylindole, 7-methylindole, 5,6-dimethylindole, and 6,7-dimethylindole, furan, 2-methylfuran, 3-methylfuran, 2-pyrrolecarboxylic acid, 3-pyrrolecarboxylic acid, indole-2-carboxylic acid, indole-3-carboxylic acid, indole-5-carboxylic acid, 2-furancarboxylic acid, and 3-furancarboxylic acid.
  • the amount of the cation scavenger used is 1 to 50 moles, preferably 5 to 20 moles, per mole of n-polymerized (oligo)nucleotide.
  • the reagent containing fluorine anion used in step (1) is not particularly limited, but examples thereof include pyridine hydrofluoride and tetrabutylammonium fluoride.
  • the amount of the reagent containing fluorine anion used is 1 to 10 moles, preferably 1 to 5 moles, per mole of n-mer (oligo)nucleotide.
  • the carrier protecting group bonded to the 3' or 5' hydroxyl group of the n-mer (oligo)nucleotide used in step (A1), or the carrier protecting group bonded to the 3' or 5' terminal nucleic acid base of the n-mer (oligo)nucleotide used in step (B1) is a pseudo solid-phase protecting group of the present invention, specifically, a long-chain alkenyloxy-substituted benzoyl derivative represented by compounds (1)-(4) in this specification.
  • the reaction temperature in the deprotection step of step (1) is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but is preferably 10 to 50°C, and more preferably 0 to 40°C.
  • the reaction time can vary depending on the reaction conditions, such as the type of n-mer (oligo)nucleotide as the reaction substrate, the type of acid, the type of solvent, the reaction temperature, etc., but can be, for example, 5 minutes to 5 hours.
  • step (B1) the temporary protecting group of only one of the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group is removed. Removal of only one of the temporary protecting groups can be performed by appropriately selecting the type of temporary protecting group bonded to the 5'-position hydroxyl group or the 3'-position hydroxyl group. For example, when the temporary protecting group of the 5'-position hydroxyl group is removed but the temporary protecting group of the 3'-position hydroxyl group is not removed, a combination of temporary protecting groups that breaks the bond of the temporary protecting group of the 5'-position hydroxyl group under appropriate reaction conditions but does not break the bond of the temporary protecting group of the 3'-position hydroxyl group can be used.
  • Such a combination of temporary protecting groups and reaction conditions for the breaking reaction can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • a silyl-type protecting group with high chemical stability that is not deprotected by acid can be used on one side
  • a trityl-type protecting group that is not deprotected by a reagent containing a fluorine anion can be used on the other side
  • a combination of a TBDPS group and a DMTr group can be used.
  • Step (1) includes a step of separating the compound containing the pseudo solid-phase protecting group after removing the temporary protecting group (sometimes referred to as the "separation step”).
  • the separation can be performed by (i) a step of isolating the n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group has been removed from the reaction solution (sometimes referred to as the "isolation step"), or (ii) a step of washing the reaction solution with water and recovering the organic layer (sometimes referred to as the "washing step”).
  • step (1) it is preferable to neutralize the reaction solution with a base before the isolation step or recovery step.
  • Neutralizing the reaction solution with a base can, for example, suppress a decrease in purity, and may also make it possible to remove the protecting group after deprotection into the aqueous layer.
  • the base used as long as it can neutralize the reaction solution, but examples of the base include pyridine, 2,4,6-trimethylpyridine, benzimidazole, 1,2,4-triazole, N-phenylimidazole, 2-amino-4,6-dimethylpyrimidine, 1,10-phenanthroline, imidazole, N-methylimidazole, 2-chlorobenzimidazole, 2-bromobenzimidazole, 2-methylimidazole, 2-phenylbenzimidazole, N-phenylbenzimidazole, and 5-nitrobenzimidazole, and two or more of these may be used in combination.
  • the isolation step in step (1) can be carried out by crystallizing and recovering the (oligo)nucleotide to which the pseudo-solid-phase protecting group is bound from the reaction solution as is or after neutralization using a polar solvent. This allows the (oligo)nucleotide containing the pseudo-solid-phase protecting group to be isolated from the reaction solution containing impurities.
  • polar solvents examples include alcohol-based solvents such as methanol and ethanol, nitrile-based solvents such as acetonitrile, ketone-based solvents such as acetone, ether-based solvents such as tetrahydrofuran, amide-based solvents such as dimethylformamide, sulfoxide-based solvents such as dimethyl sulfoxide, water, and mixtures of two or more of these. Alcohol-based solvents and nitrile-based solvents are preferred, and specifically, methanol or acetonitrile are preferred.
  • the polar solvent may contain water to minimize loss of the product into the polar solvent.
  • the content of water in the polar solvent is, for example, 0 to 10% (v/v), preferably 0 to 8% (v/v). Solid-liquid separation can be carried out with reference to a method known per se.
  • the washing step in step (1) can be carried out by washing the reaction solution as is or after neutralization with water and recovering the organic layer. This allows impurities to be removed.
  • Step (2) Step (A2) or (B2) is a step of condensing an n-mer (oligo)nucleotide prepared in the above step (A1) or (B1), in which the 3'- or 5'-hydroxyl group is protected with a carrier-protecting group or a temporary protecting group and the temporary protecting group of the other hydroxyl group has been removed, with a p-mer (oligo)nucleotide in which the 3'- or 5'-hydroxyl group is protected with a temporary protecting group and the other hydroxyl group has been phosphoramidite-modified, to prepare an n+p-mer oligonucleotide linked by a phosphite triester bond.
  • p represents any integer of 1 or more.
  • p is preferably 1
  • p is any integer, with no particular upper limit, but preferably 20 or less, more preferably 10 or less, and even more preferably 5 or less.
  • step (2) The condensation reaction in step (2) (A2 or B2, hereinafter sometimes simply referred to as step (2)) can be carried out with reference to a method known per se.
  • a method known per se for example, the reaction conditions described in WO2012/157723 or WO2019/131719 can be used.
  • the reaction can be carried out as follows.
  • n-mer oligonucleotide deprotected in step (1) When the n-mer oligonucleotide deprotected in step (1) is recovered by crystallization, it can be dissolved in the solvent used in step (2) to carry out the condensation reaction. When the n-mer oligonucleotide deprotected in step (1) is separated and recovered in the solvent, it can be carried out in the same solvent or, if necessary, by changing the solvent.
  • a weak acid or an acidic neutral salt can be added as an activator to improve the reaction efficiency.
  • weak acids or acidic neutral salts include pyridine trifluoroacetate, 1H-tetrazole, 5-benzylthio-1H-tetrazole, and 4,5-dicyanoimidazole.
  • the amount of weak acid or acidic neutral salt used can be 0.1 to 50 molar equivalents, for example 1 to 5 molar equivalents, per mole of the n-unit oligonucleotide from which the temporary hydroxyl protecting groups have been removed, obtained in step (1) as the reaction substrate.
  • step (2) if the acidity of the reaction solution becomes high, a side reaction in which the temporary protecting group is removed may occur, so it is preferable to add N-methylimidazole to suppress the acidification of the reaction solution.
  • the amount of N-methylimidazole used can be 0.1 to 10 molar equivalents, for example 0.1 to 1 molar equivalent, per mole of the n-mer (oligo)nucleotide from which the temporary protecting groups of the hydroxyl groups have been removed, obtained in step (1).
  • Step (2) can be carried out in a solvent that does not affect the condensation reaction.
  • the solvent include, but are not limited to, the same non-polar and polar solvents as those in step (1), such as aromatic solvents, ester solvents, aliphatic solvents, ether solvents, amide solvents, sulfoxide solvents, halogen solvents, nitrile solvents, and combinations thereof.
  • the reaction temperature in step (2) is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but is preferably -20 to 100°C, more preferably 20 to 50°C.
  • the reaction time may vary depending on the type of n-mer (oligo)nucleotide to be condensed, the reaction temperature, etc., but can be, for example, 5 minutes to 24 hours.
  • Step (3) Step (A3) or (B3) is a step (oxidation or sulfurization reaction step) of converting the phosphite triester bond of the n+p-mer oligonucleotide obtained by the above step (A2) or (B2) into a phosphate triester bond or a thiophosphate triester bond, respectively, using an oxidizing agent or a sulfurizing agent.
  • step (3) The oxidation or sulfurization reaction step in step (3) (A3 or B3, hereinafter sometimes simply referred to as step (3)) can be carried out with reference to a method known per se.
  • a method known per se for example, the reaction conditions described in WO2012/157723 or WO2019/131719 can be used.
  • the reaction can be carried out as follows.
  • step (3) the reaction can be carried out by simply adding an oxidizing agent or a sulfurizing agent directly to the reaction solution in step (2) without isolating the n+p oligonucleotide obtained in step (2).
  • the oxidation reaction using an oxidizing agent in step (3) can be carried out according to a method generally known in oligonucleotide synthesis.
  • oxidizing agents include, but are not limited to, iodine, (1S)-(+)-(10-camphorsulfonyl)oxaziridine, tert-butyl hydroperoxide (TBHP), 2-butanone peroxide, 1,1-dihydroperoxycyclododecane, bis(trimethylsilyl)peroxide, cumene hydroperoxide, hydrogen peroxide, and m-chloroperbenzoic acid, with iodine, (1S)-(+)-(10-camphorsulfonyl)oxazolidine, tert-butyl hydroperoxide (TBHP), 2-butanone peroxide, and 1,1-dihydroperoxycyclododecane being preferred.
  • the sulfurization reaction using a sulfurizing agent in step (3) can be carried out according to a method generally known in oligonucleotide synthesis.
  • sulfurizing agents include, but are not limited to, N,N-dimethyl-N'-(3-thioxo-3H-1,2,4-dithiazol-5-yl)imidoformamide (DDTT), 3H-1,2-benzodithiol-3-one-1,1-dioxide (Beaucage reagent), 3H-1,2-benzodithiol-3-one, phenylacetyl disulfide (PADS), tetraethylthiuram disulfide (TETD), 3-amino-1,2,4-dithiazol-5-thione (ADTT), or sulfur, with N,N-dimethyl-N'-(3-thioxo-3H-1,2,4-dithiazol-5-yl)imidoformamide being preferred.
  • DDTT N,N-d
  • the phosphite triester bond of an oligonucleotide can be converted to a thiophosphate triester bond by a sulfurization reaction.
  • Thiophosphate has an asymmetric center at the phosphorus atom, giving an optically active substance. Even if a deprotection reaction is performed in the manufacturing process of an oligonucleotide thiophosphate, the asymmetric center at the phosphorus atom remains, giving an optically active substance.
  • the reaction in step (3) is usually carried out in a solvent.
  • the solvent used in the reaction is preferably anhydrous, and examples of the solvent include halogenated solvents (e.g., chloroform), aliphatic solvents (e.g., cyclohexane), aromatic solvents (e.g., toluene), ester solvents (e.g., ethyl acetate), ether solvents (e.g., tert-butyl methyl ether), nitrile solvents (e.g., acetonitrile), and mixed solvents of two or more selected from these.
  • halogenated solvents e.g., chloroform
  • aliphatic solvents e.g., cyclohexane
  • aromatic solvents e.g., toluene
  • ester solvents e.g., ethyl acetate
  • ether solvents e.g., tert-butyl methyl
  • the amount of the oxidizing agent or sulfurizing agent added can be about 1.0 to about 5.0 molar equivalents, preferably about 1.0 to about 1.5 molar equivalents, per mole of the phosphoramidite obtained in step (2).
  • the amount of the oxidizing agent or sulfurizing agent added can be, for example, 1 to 50 molar equivalents, preferably 1 to 5 molar equivalents, per mole of the (oligo)nucleotide obtained in step (2).
  • the reaction temperature is not particularly limited as long as the reaction proceeds, but may be 0 to 100°C, preferably 20 to 50°C.
  • the reaction time may vary depending on the type of n+p oligonucleotide, the type of oxidizing agent or sulfurizing agent used, and the reaction temperature, but may be, for example, 1 minute to 3 hours.
  • Step (4) The production method of the present invention may further include a step of recovering the n+p-mer oligonucleotide obtained in step (3) (sometimes referred to as a "recovery step").
  • the recovery step can be carried out in the same manner as the separation step (isolation step or water washing step) described in step (1).
  • it is an isolation step in which the (oligo)nucleotide bound to the pseudo solid-phase protecting group is crystallized and recovered using a polar solvent.
  • one embodiment of the production method of the present invention further includes a step of adding a polar solvent to the reaction solution obtained in step (3) to precipitate the n+p-mer oligonucleotide, and obtaining it by solid-liquid separation. Also, step (4) (recovery step) can be carried out after step (1).
  • Step (5) (Deprotection of all protecting groups)
  • the production method of the present invention may further include a step of removing all of the protecting groups of the n+p-polymerized oligonucleotide recovered in step (4) (sometimes referred to as a "total protecting group removal step").
  • the step of removing all of the protecting groups can be carried out with reference to a method known per se. Examples of the method known per se include the deprotection method described in Protective Group In Organic Synthesis, 3rd Edition, John Willy & Sons (1999), etc., and the conditions described in WO2012/157723 and WO2019/131719. Therefore, one embodiment of the production method of the present invention further comprises a step of removing all of the protecting groups of the n+p-mer oligonucleotide obtained in the step (4).
  • the progress of the reaction in each step of the above-mentioned oligonucleotide production method can be monitored and confirmed by the same method as in the case of a general liquid-phase organic synthesis reaction, for example, thin layer silica gel chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC).
  • TLC thin layer silica gel chromatography
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • Another aspect of the present invention is a method for producing (oligo)nucleotides that does not use halogenated solvents.
  • halogenated solvents are used extensively in the extension reaction.
  • the solubility of the pseudo solid-phase protecting group is excellent, so that the extension reaction can be carried out without using halogenated solvents.
  • One embodiment of the present invention is a method for producing an oligonucleotide by coupling of oligonucleotides, comprising the following steps (C1)-(C4): (C1) A step of obtaining an n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group at the 5'-position hydroxyl group has been removed and a p-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group at the 3'-position hydroxyl group has been removed by carrying out the following steps (a) and (b), respectively: (a) reacting an n-mer oligonucleotide (n is any integer of 1 or more) in which the 3'-position hydroxyl group is protected with a carrier-protecting group and the 5'-position hydroxyl group is protected with a temporary protecting group removable under acidic conditions or with a reagent containing a fluorine anion, with an acid and a cation scavenger, or with
  • Step (C1) is a step of obtaining an n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group of the 5'-position hydroxyl group has been removed, and a p-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group of the 3'-position hydroxyl group has been removed.
  • n in the n-mer oligonucleotide represents any integer of 1 or more.
  • the lower limit of n is not particularly limited, but is preferably 2 or more, more preferably 5 or more, and even more preferably 10 or more
  • the upper limit of n is not particularly limited, but is preferably 40 or less, more preferably 30 or less, and even more preferably 20 or less.
  • p in the p-mer oligonucleotide represents any integer of 1 or more.
  • the lower limit of p is not particularly limited, but is preferably 2 or more, more preferably 5 or more, and even more preferably 10 or more, and the upper limit of p is not particularly limited, but is preferably 40 or less, more preferably 30 or less, and even more preferably 20 or less.
  • the deprotection step and the separation step in step C1 can be carried out with reference to a method known per se. Examples of methods known per se include reaction conditions described in WO2012/157723 and WO2019/131719. Although not limited thereto, the deprotection step and the separation step can be carried out, for example, in the same manner as described in step (1) above.
  • Step (C2) is a step of phosphoramidite-forming the 5'-position hydroxyl group of the n-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group of the 5'-position hydroxyl group obtained in step (C1) has been removed, or a step of phosphoramidite-forming the 3'-position hydroxyl group of the p-mer oligonucleotide from which the temporary protecting group of the 3'-position hydroxyl group obtained in step (C1) has been removed.
  • the step of phosphoramidite-forming the hydroxyl group can be carried out with reference to a method known per se. As a method known per se, for example, it can be carried out using the reaction conditions described in Patent Document 10.
  • Step (C3) is a step of condensing an n-mer oligonucleotide, one of which has been phosphoramidite-modified, and a p-mer oligonucleotide through a phosphite triester bond.
  • the condensation step can be carried out with reference to a method known per se. It is not limited to this, but can be carried out, for example, in the same manner as described in step (2) above.
  • Step (C4) is a step of converting the phosphite triester bond of the n+p oligonucleotide obtained in step (C3) into a phosphate triester bond or a thiophosphate triester bond.
  • the oxidation or sulfurization reaction step can be carried out with reference to a method known per se. As a method known per se, for example, it can be carried out using the reaction conditions described in WO2012/157723 or WO2019/131719. Although not limited thereto, it can be carried out, for example, in the same manner as described in step (3) above.
  • a recovery step and a step of removing all of the protecting groups of the recovered n+p-mer oligonucleotide can be performed. Although not limited thereto, for example, these steps can be performed in the same manner as described in steps (4) and (5) above.
  • the recovery step can be carried out after step (C1) or after step (C2), or after any two of steps (C1), (C2), and (C4), or even after all of steps (C1), (C2), and (C4).
  • the separated aqueous layer was extracted with a mixed solution of n-heptane (10 mL) and ethyl acetate (10 mL).
  • the mixed organic layer was washed with water (20 mL) and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product of compound 1.
  • the obtained crude product was purified by silica gel column chromatography (n-hexane/ethyl acetate) to obtain compound 1 as an oil (yield 2.48 g, 2.65 mmol, yield 94%).
  • Triethylamine (219 mg, 2.17 mmol) and tert-butyl bromoacetate (423 mg, 2.17 mmol) were added to the reaction solution, and stirred at 60 ° C. for 2 hours. After confirming the completion of the reaction, the mixture was allowed to cool to room temperature, and ethyl acetate (20 mL), n-hexane (20 mL), and water (20 mL) were added, and the aqueous layer was separated. The organic layer was washed with water (20 mL) and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product. The resulting crude product was purified by silica gel column chromatography (n-hexane/ethyl acetate).
  • Example 2 Preparation of polyoligonucleotide bound to compound 4 A 3mer polyoligonucleotide was prepared using compound 4 as a pseudo solid-phase protecting group as follows. Synthesis of Compound 5
  • reaction solution was washed four times with a 5% NaHCO 3 (25 mL) aqueous solution and once with 10% saline (25 mL), and concentrated under reduced pressure to obtain compound 6 as a colorless amorphous solid (1.97 g, 100% yield).
  • the aqueous layer was separated from the organic layer.
  • the obtained organic layer was washed with 5% NaHCO 3 aqueous solution (3.0 mL) and 5% saline (3.0 mL), and then dehydrated with sodium sulfate (4.0 g).
  • the obtained crude product was purified by silica gel column chromatography (ethyl acetate/methanol) to obtain compound 8 as a pale yellow amorphous solid (256 mg, yield 86%).
  • ethyl sarcosine hydrochloride (0.54 g, 3.5 mmol) and triethylamine (375 mg, 3.7 mmol) were added to a solution of compound 2 (1.57 g, 1.7 mmol), EDCI (0.42 g, 2.2 mmol) and 1-hydroxybenzotriazole (0.29 g, 2.2 mmol) in N,N-dimethylformamide (13.9 mL) and toluene (3.3 mL) at room temperature, and the mixture was stirred for 14 hours. EDCI (85 mg, 0.44 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • EDCI 85 mg, 0.44 mmol
  • n-Heptane (16.3 mL) and 1 M hydrochloric acid (14.7 mL) were added to the reaction solution, and the mixture was stirred, and then the organic layer and the aqueous layer were separated.
  • the obtained organic layer was washed with 1 M hydrochloric acid (8.1 mL) and then with 5% saline (8.1 mL).
  • the aqueous layers used in the washing were mixed and extracted with a solution of heptane (8.1 mL) and a small amount of ethyl acetate.
  • Example 5 Preparation of Polyoligonucleotide Conjugated with Compound 11
  • a 3mer polyoligonucleotide was prepared using compound 11 as a pseudo solid-phase protecting group as follows.
  • 0.1 M iodine (THF/pyridine/aqueous solution, 3.93 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes.
  • 0.1 M iodine (THF/pyridine/aqueous solution, 0.393 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred for 10 minutes.
  • 1M sodium thiosulfate aqueous solution (4.32 mL) and ethyl acetate (about 3 mL) and stirring, the organic layer and the aqueous layer were separated. The organic layer was washed with saturated sodium bicarbonate solution (3 mL) and 5% saline solution (3 mL), and then concentrated.
  • trifluoroacetic acid (0.082 mL, 1.07 mmol) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred for 15 minutes.
  • Trifluoroacetic acid (0.082 mL, 1.07 mmol) and pyrrole (0.173 mL, 2.49 mmol) were added to the reaction solution and stirred for 30 minutes.
  • Saturated sodium bicarbonate water (4.6 mL) was added to the reaction solution and stirred, and then the solution was separated into an organic layer and an aqueous layer. The organic layer was washed with 5% saline (4.6 mL) and then concentrated.
  • Azeotropy was performed three times with ethyl acetate for compound 14 (147 mg, 0.0934 mmol). Under a nitrogen atmosphere, ethyl acetate (1.5 mL) was added to compound 14 to form a solution, and then DMTr-dC-CE phosphoramidite (159 mg, 0.191 mmol) and molecular sieves 3A (150 mg) were added and stirred at room temperature for 1 hour. DCI (37 mg, 0.317 mmol) was added and stirred at room temperature for 3 hours. 0.2 M iodine (ethyl acetate/pyridine/aqueous solution, 1.43 mL) was added to the reaction solution and stirred for 30 minutes.
  • 0.2 M iodine (ethyl acetate/pyridine/aqueous solution, 0.48 mL) was added to the reaction solution and stirred for 70 minutes.
  • Example 6 Deprotection of Pseudo Solid-Phase Protecting Group
  • the pseudo solid-phase protecting group, Compound 11 was removed from the oligonucleotide as follows.
  • Example 8 Preparation of polyoligonucleotide bound to compound 20 A 3mer polyoligonucleotide was prepared using compound 20 as a pseudo solid-phase protecting group as follows.
  • 0.2 M iodine (ethyl acetate/pyridine/aqueous solution, 2.4 mL) was added to the reaction solution and stirred at room temperature for 30 minutes. After adding 1 M aqueous sodium thiosulfate solution (3.2 mL) and stirring, the molecular sieves were filtered while being washed with ethyl acetate. The filtrate was separated, and the obtained organic layer was washed three times with saturated sodium bicarbonate water (3.2 mL) and then with 5% saline (3.2 mL).
  • Example 9 Deprotection of Pseudo Solid Phase Protecting Group
  • the pseudo solid phase protecting group, Compound 20 was removed from the oligonucleotide as follows.
  • Example 9 Preparation of Polyoligonucleotides An 8-mer polyoligonucleotide was prepared using compound 20 as a pseudo solid-phase protecting group as follows.
  • EDCI (2.52 g, 13.1 mmol) was added to a solution of compound 32 (4.30 g, 6.56 mmol), L-proline methyl hydrochloride (2.17 g, 13.1 mmol), DMAP (160 mg, 1.31 mmol), and DIPEA (4.57 mL, 26.3 mmol) in DMF (43 mL) at 0° C. under a nitrogen atmosphere, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Ethyl acetate (43 mL), n-hexane (43 mL), and water (43 mL) were added and stirred, and the aqueous layer was separated.
  • DMT-dT (2.88 g, 5.29 mmol) was added to a solution of compound 34 (1.99 g, 2.64 mmol), EDCI (2.03 g, 5.29 mmol), 1-hydroxybenzotriazole monohydrate (1.62 g, 5.29 mmol), and DIPEA (3.68 mL, 10.6 mmol) in DMF (20 mL) at 0° C., and the mixture was heated to room temperature and stirred for 15 hours.
  • EDCI (253 mg, 1.32 mmol
  • DIPEA (691 ⁇ L, 3.97 mmol)
  • DMT-dT 720 mg, 1.32 mmol
  • levulinic acid (6.16 mL, 60 mmol) and methanol (80 mL) were mixed, heated to 70° C., and stirred for 10 minutes.
  • dichloromethane 40 mL
  • water (20 mL) were added, and the aqueous layer was separated. The organic layer was washed with water (20 mL) and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • TBDPSCl 0.529 mL was added dropwise at room temperature to a mixture of compound 1 (N 4 -Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxycytidine) (0.868 g, 1.37 mmol) and imidazole (0.466 g, 6.85 mmol) in acetonitrile (7 mL).
  • methanol 0.277 mL
  • MTBE 7. mL
  • saturated sodium bicarbonate water 7 mL were added and stirred, and the precipitated solid was removed by filtration using MTBE as a washing solution.
  • Azeotropy was performed twice with ethyl acetate (2 mL) for compound 61 (198 mg, 0.125 mmol). Under a nitrogen atmosphere, ethyl acetate (2.4 mL) was added to compound 61 to form a solution, and then molecular sieves 3A (200 mg) was added and stirred for 30 minutes. DMTr-dC-CE phosphoramidite (157 mg, 0.188 mmol) and DCI (34 mg, 0.288 mmol) were added to the resulting solution and stirred at room temperature for 1 hour and 30 minutes.
  • Azeotropy was performed twice with compound 62 (238.7 mg, 0.119 mmol) using ethyl acetate (1.7 mL). Under a nitrogen atmosphere, ethyl acetate (2.4 mL) was added to compound 7 to form a solution, and molecular sieves 3A (240 mg) was added and stirred for 40 minutes.
  • DMTr-dA-CE phosphoramidite (153.6 mg, 0.179 mmol) and DCI (35.2 mg, 0.298 mmol) were added to the resulting reaction solution and stirred at room temperature for 2 hours. DCI (14.1 mg, 0.119 mmol) was further added and stirred at room temperature for 30 minutes.
  • Boc-Ser-OH (17.1 mg, 0.0833 mmmmol) was added and stirred for 18 minutes.
  • 0.2 M iodine ethyl acetate/pyridine/aqueous solution, 1.61 mL was added and stirred for 19 minutes while warming to room temperature.
  • the reaction solution was cooled to 0°C, 1M sodium thiosulfate aqueous solution (2.4mL) was added and stirred, and the molecular sieves were filtered while washing with ethyl acetate. The filtrate was separated, and the obtained organic layer was washed with saturated sodium bicarbonate water (2mL) and then with saturated saline (1mL).
  • EDCI (253 mg, 1.32 mmol), DIPEA (691 ⁇ L, 3.97 mmol), 5'-O-(4,4'-Dimethoxytrityl)thymidine (6.40 g, 11.75 mmol) were added to the reaction mixture, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. After the reaction was completed, ethyl acetate (90 mL), n-hexane (45 mL) and water (45 mL) were added and stirred, and the aqueous layer was separated. The obtained organic layer was washed three times with saturated sodium bicarbonate water (20 mL), washed with water (20 mL), and then concentrated.
  • the organic layer was concentrated under reduced pressure, and azeotropy was performed three times using ethyl acetate (5 mL). The residue was dissolved in ethyl acetate (5 mL), and mercaptosuccinic acid (379 mg, 2.52 mmol) was added and cooled to 0° C. Trifluoroacetic acid (0.39 mL, 5.05 mmol) was added and stirred at the same temperature for 3 hours. After confirming the completion of the reaction, water (7.5 mmL) was added and the organic layer was separated. The obtained organic layer was washed three times with saturated sodium bicarbonate water (7.5 mL) and once with 10% NaCl aqueous solution (7.5 mL).
  • DMT-dA-CE phosphoramidite 138 mg, 0.160 mmol
  • DCI 31.5 mg, 0.270 mmol
  • DMT-dA-CE phosphoramidite 275 mg, 0.321 mmol
  • DCI 31.5 mg, 0.270 mmol
  • 0.2M iodine ethyl acetate/pyridine/aqueous solution, 4.2mL
  • 1M Na 2 S 2 O 3 aqueous solution (7.5mL) and THF (4.5mL) were added and stirred.
  • DMT-dT-CE phosphoramidite 115 mg, 0.155 mmol
  • DCI 73.0 mg, 0.618 mmol
  • DMT-dT-CE phosphoramidite 115 mg, 0.155 mmol
  • DCI 73.0 mg, 0.618 mmol
  • DMT-dT-CE phosphoramidite 76.7 mg, 0.103 mmol
  • DCI 110 mg, 0.927 mmol
  • Compound 85 (700 mg, 0.59 mmol) was subjected to azeotropy with ethyl acetate (9 mL) three times. Compound 85 was added with molecular sieves 3A (700 mg), DMT-dC-CE phosphoramidite (552 mg, 0.66 mmol), and ethyl acetate (7 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. DCI (156 mg, 1.32 mmol) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • reaction solution was purified by silica gel column chromatography (spherical neutral silica gel, eluent: ethyl acetate) to obtain compound 108 as a white solid with a yield of 83.6% (yield 94.4 mg, 0.0613 mmol).
  • the obtained organic layer was washed with saturated aqueous sodium bicarbonate (3 mL) and saturated saline (3 mL), and then dried over magnesium sulfate.
  • the obtained solution was concentrated under reduced pressure and further crudely purified using silica gel to obtain a crude product of compound 111 (yield 356 mg) as a highly viscous colorless oil.
  • 87.2 mg was separated, and further compound 108 (94.4 mg, 0.0613 mmol) was added, and then azeotropy was performed twice with ethyl acetate (2 mL).
  • the present invention provides a novel pseudo-solid-phase protecting group that can be used in the synthesis of oligonucleotides by liquid phase synthesis, and a (poly)oligonucleotide to which the protecting group is bound.
  • the present invention is useful for the synthesis of polyoligonucleotides.

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Abstract

本発明は、液相法によるオリゴヌクレオチド合成に用いることができる新たな擬似固相保護基を提供することを目的とする。本発明はまた、新たな擬似固相保護基を用いたオリゴヌクレオチドの合成方法を提供することを目的とする。　本発明により、以下の式（１）で表される化合物： （式中、Ｒは、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、ｎは２又は３を表し、ｍは０又は１を表し、ｐは１又は２を表し、Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳを表し、Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊を表すかＸと一緒になって環を形成しても良い、Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）ｓ（ｓは１～５の整数である）を表す）が提供される。本発明によりまた、当該化合物を用いたオリゴヌクレオチドの製造方法が提供される。

Description

長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体、及び該誘導体を用いたオリゴヌクレオチド合成方法
　本発明は、液相合成法によるオリゴヌクレオチドの合成に用いる擬似固相保護基である長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体、その誘導体が結合したオリゴヌクレオチド、ならびに、その誘導体を用いたオリゴヌクレオチドの合成方法に関する。
　近年、ＤＮＡプローブ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡなどのオリゴヌクレオチドがバイオ関連分野において盛んに利用されている。オリゴヌクレオチドの化学合成方法として、ホスホロアミダイト法、Ｈ－ホスホネート法などが知られているが、現在、ホスホロアミダイト法を用いた固相法が汎用されている。固相法はプロセス最適化がなされ自動化も進んでおり、スピード面で有利であるが、スケールアップに制限があるという欠点がある。また、液相法によるオリゴヌクレオチドの製造方法も検討されてきたが、液相法は、操作が煩雑であり、収率も低いため、オリゴヌクレオチドを大量且つ迅速に合成することは困難である。
　そこで、固相法と液相法のそれぞれの欠点を解消しようとして、疎水性基結合ヌクレオシドを用いる方法（特許文献１：特開２０１０－２７５２５４号公報）や、３’位の水酸基が特定の有機基で保護されたヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドを用いる、擬似固相保護基を使用した液相法（特許文献２～１０：国際公開第２０１２／１５７７２３号（味の素）、国際公開第２０１３／１２２２３６号（味の素）、国際公開第２０１７／１０４８３６号（味の素）、国際公開第２０１３／１７９４１２号（北海道システムサイエンス）、国際公開第２０１４／０７７２９２号（武田薬品工業）、国際公開第２０１７／０８６３９７号（日産化学）、国際公開第２０１８／２０３５７４号（日産化学）、特開２０２０－１１９３２号公報（藤本化学製品）、国際公開第２０２０／２２７６１８号（バイオジェン・味の素））などが提案されているが、擬似固相保護基を用いた液相法において、各伸長反応工程における精製工程を可能な限り省略して次の伸長反応を迅速に行うことについては課題が残されている。
特開２０１０－２７５２５４号公報 国際公開第２０１２／１５７７２３号 国際公開第２０１３／１２２２３６号 国際公開第２０１７／１０４８３６号 国際公開第２０１３／１７９４１２号 国際公開第２０１４／０７７２９２号 国際公開第２０１７／０８６３９７号 国際公開第２０１８／２０３５７４号 特開２０２０－１１９３２号公報 国際公開第２０２０／２２７６１８号
　本発明の目的は、液相法によるオリゴヌクレオチド合成に用いることができる新たな擬似固相保護基を提供することである。本発明の目的はまた、その新たな擬似固相保護基を用いたオリゴヌクレオチドの合成方法を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ベンゼン環がアルケニルオキシ基で置換されたベンゾイル基を有し、かつ、末端にカルボキシ基を有することを特徴とする擬似固相保護基を見出し、本発明を完成した。本発明は以下のものを含む。
［１］以下の式（１）で表される化合物又はその塩：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成してもよく、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成してもよく、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sである（ここで、ｓは１～５の整数、好ましくは１～３の整数である）。但し、Ｙが単結合の場合は、Ｚは単結合ではない。）。
［２］以下の式（２）で表される、上記［１］に記載の化合物又はその塩：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基である。）。
［３］前記式（２）において、ｍは０であり、Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表す（ここで、Ｒ１は、Ｈ、又はＣ１－６アルキル基である。）、上記［２］に記載の化合物又はその塩。
［４］前記式（２）において、ｍは１であり、ＸはＮＲ１、Ｏ又はＳを表す（ここで、Ｒ１は、Ｈ、又はＣ１－６アルキル基である。）、上記［２］に記載の化合物又はその塩。
［５］前記式（２）において、ベンゼン環におけるＯＲ基の配置が、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換である、上記［２］～［４］のいずれか一つに記載の化合物又はその塩。
［６］以下の式（３）で表される、上記［１］に記載の化合物又はその塩：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１～５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
環Ａは、置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を表し、
Ｘは、Ｃ又はＮを表す。）。
［７］前記式（３）において、ｍは０であり、ｕは０、又は１～３の整数（好ましくは０、１又は２）であり、ＸはＣを表す、上記［６］に記載の化合物又はその塩。
［８］前記式（３）において、環Ａは、置換基を有してもよいベンゼン又はシクロヘキサンであり、前記置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基及びカルボニル基からなる群より選ばれる基である、上記［７］に記載の化合物又はその塩。
［９］前記式（３）において、ｕは０、１又は２であり、ＸはＮを表し、Ｘを含む環Ａは、置換基を有してもよい窒素原子を一つ含む５～７員の複素環を表し、前記置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基及び置換されてよいカルボニル基からなる群より選ばれる基である、上記［６］に記載の化合物又はその塩。
［１０］前記式（３）において、ｍは０である、上記［９］に記載の化合物又はその塩。
［１１］前記式（３）において、環Ａは、置換基を有してもよいピロリジン又はピペリジンであり、前記置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアルキル基及び置換されてもよいカルボニル基からなる群より選ばれる基である、上記［９］に記載の化合物又はその塩。
［１２］前記式（３）において、ベンゼン環におけるＯＲ基の配置が、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換である、上記［６］～［１１］のいずれか一つに記載の化合物又はその塩。
［１３］以下の式（４）で表される、上記［１］に記載の化合物又はその塩。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１～５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１又は２）を表し、
ｗは、０、１又は２を表し、
環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３である。）。
［１４］前記式（４）において、ｍは０である、上記［１３］に記載の化合物又はその塩。
［１５］前記式（４）において、環Ｂは、置換基を有してもよいベンゼン又はシクロヘキサンであり、前記置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基及び置換されていてもよいカルボニル基からなる群より選ばれる基である、上記［１３］に記載の化合物又はその塩。
［１６］前記式（３）において、ベンゼン環におけるＯＲ基の配置が、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換である、上記［１３］～［１５］のいずれか一つに記載の化合物又はその塩。
［１７］前記式（１）で表される化合物は、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 （ここで、Ｒａは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、複数存在するＯＲａは同一又は異なってもよい。）で表される化合物からなる群より選ばれる化合物である、上記［１］に記載の化合物又はその塩。
［１８］前記Ｒａは、独立してそれぞれ、ミリストレイン酸（Ｃ１４）、パルミトレイン酸（Ｃ１６）、サピエン酸（Ｃ１６）、オレイン酸（Ｃ１８）、エライジン酸（Ｃ１８）、バクセン酸（Ｃ１８）、ガドレイン酸（Ｃ２０）、エイコセン酸（Ｃ２０）、エルカ酸（Ｃ２２）、ネルボン酸（Ｃ２４）、リノール酸（Ｃ１８）、エイコサジエン酸（Ｃ２０）、ドコサジエン酸（Ｃ２２）、α－及びγ－リノレン酸（Ｃ１８）、ピノレン酸（Ｃ１８）、エレオステアリン酸（Ｃ１８）、ミード酸（Ｃ２０）、ジホモ－γ－リノレン酸（Ｃ２０）、エイコサトリエン酸（Ｃ２０）、ステアリドン酸（Ｃ１８）、アラキドン酸（Ｃ２０）、エイコサテトラエン酸（Ｃ２０）、アドレン酸（Ｃ２２）、ボセオペンタエン酸（Ｃ１８）、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０）、オズボンド酸（Ｃ２２）、イワシ酸（Ｃ２２）、テトラコサペンタエン酸（Ｃ２４）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２）、及びニシン酸（Ｃ２４）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である、上記［１７］に記載の化合物又はその塩。
［１９］以下の式（Ｉ）で表されるヌクレオチド：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
 ［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋（好ましくは、ロック核酸（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、アミド架橋型核酸、グアニジン架橋型核酸又はスピロシクロプロピレン架橋型核酸の架橋）を形成してもよく、
ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基（例えば、シアノ基、ニトロ基、２－ピリジル基もしくは４－ピリジル基など）を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
Ｗ／Ｔｇ又はＴｇ／Ｗは、Ｗ又はＴｇを表し、５’側がＷの場合、３’側はＴｇであり、一方、５’側がＴｇの場合、３’側はＷであり、ここで、
Ｗは、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］、又は
以下の式（ＩＩ）で表されるヌクレオチド：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
 ［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、Ｃ１－６アルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
Ｗ’は、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７員の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］。
［２０］式（Ｉ）又は式（ＩＩ）におけるＴｇは、以下の式（６）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基、
以下の式（７）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１又は２）を表し、
環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基、又は、
以下の式（８）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
ｗは、０、１又は２を表し、
環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す、上記［１９］に記載のヌクレオチド。
［２１］以下の式（Ｖ）或いは式（ＶＩ）で表されるヌクレオチド：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋（好ましくは、ロック核酸（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、アミド架橋型核酸、グアニジン架橋型核酸又はスピロシクロプロピレン架橋型核酸の架橋）を形成してもよく、
ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基（例えば、シアノ基、ニトロ基、２－ピリジル基もしくは４－ピリジル基など）を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
Ｗは、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
 （式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す。］、又は
以下の式（ＶＩＩ）或いは式（ＶＩＩＩ）で表されるヌクレオチド：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
 ［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、Ｃ１－６アルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
Ｗ’は、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７員の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す。］。
［２２］式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）又は式（ＶＩＩＩ）におけるＴｇは、以下の式（６）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基、
以下の式（７）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１又は２）を表し、
環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基、又は、
以下の式（８）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
ｗは、０、１又は２を表し、
環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す、上記［２１］に記載のヌクレオチド。
［２３］式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）又は式（ＶＩＩＩ）における酸性条件下で除去可能な一時保護基は、トリチル基、９－（９－フェニル）キサンテニル基、９－フェニルチオキサンテニル基、ジ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基、モノ（Ｃ１－１８アルコキシ）トリチル基、及びアルキルもしくはアリル基で置換されたシリル基からなる群より選ばれる基であって、フッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基は、アルキルもしくはアリル基で置換されたシリル基であり、式（ＩＩ）における酸性条件下で除去可能な一時保護基は、トリチル基、９－（９－フェニル）キサンテニル基、９－フェニルチオキサンテニル基、ジ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基、モノ（Ｃ１－１８アルコキシ）トリチル基、及びアルキルもしくはアリル基で置換されたシリル基からなる群より選ばれる基である、上記［１９］～［２２］のいずれか一つに記載のヌクレオチド、
ここで、前記アルキルもしくはアリル基で置換されたシリル基として、例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルテキシルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ（ＴＢＤＭＳ））、ｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ－ｐ－キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ－ｔ－ブチルメチルシリルトリ（トリメチルシリル）シリル、ｔ－ブチルメトキシフェニルシリル、ｔ－ブトキシジフェニルシリル、ＴＢｏＤＰＳ、及びＴＢＤＡＳを例示できる。
［２４］式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）又は式（ＶＩＩＩ）におけるＢａｓｅは、ハロゲン原子、アルキル基、アラルキル基、アルコキシ基、アシル基、アルコキシアルキル基、水酸基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボキシ基、シアノ基及びニトロ基からなる群から選ばれる１－３個の置換基で置換されてもよい、ピリミジン塩基又はプリン塩基である、上記［２３］に記載のヌクレオチド。
［２５］式（Ｉ）、式（Ｖ）又は式（ＶＩ）におけるＤは、メチル基、ベンジル基、ｐ－メトキシベンジル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、メトキシメチル基、メトキシエチル基、２－テトラヒドロピラニル基、エトキシエチル基、シアノエチル基、シアノエトキシメチル基、フェニルカルバモイル基、１，１－ジオキソチオモルホリン－４－チオカルバモイル基、アセチル基、ピバロイル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基（ＴＢＳ）、［（トリイソプロピルシリル）オキシ］メチル基、又は１－（４－クロロフェニル）－４－エトキシピペリジン－４－イル基で保護されていてもよい水酸基である、上記［１９］～［２２］のいずれか一つに記載のヌクレオチド。
［２６］以下の工程（Ａ１）－（Ａ３）：
（Ａ１）非極性又は極性溶媒中において、３’位水酸基又は５’位水酸基が担体保護基で保護され、かつ５’位水酸基又は３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程
（Ａ２）工程（Ａ１）で得られた５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護された、又は５’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示し、好ましくは１である。）を添加して、５’位水酸基又は３’位水酸基を介してｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
（Ａ３）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ａ２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程、
を含み、
　前記担体保護基が、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基である、オリゴヌクレオチドの製造方法。
［２７］前記担体保護基は、以下の式（６）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基、
以下の式（７）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１，又は２）を表し、
環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基、又は、
以下の式（８）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000068
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
ｗは、０、１又は２を表し、
環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基である、上記［２６］に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
［２８］工程（Ａ１）における、一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程が、反応液を塩基で中和した後、
（ｉ）一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを単離する工程、又は（ｉｉ）中和した反応液を水洗し有機層を回収する工程、
である上記［２６］又は［２７］に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
［２９］さらに、下記工程（Ａ４）を含む上記［２６］又は［２７］に記載の方法。
（Ａ４）工程（A１）及び／又は（Ａ３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
［３０］さらに、下記工程（Ａ５）を含む上記［２９］に記載の方法。
（Ａ５）工程（Ａ４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
［３１］以下の式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
 ［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋（好ましくは、ロック核酸（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、アミド架橋型核酸、グアニジン架橋型核酸又はスピロシクロプロピレン架橋型核酸の架橋）を形成してもよく、
ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基（例えば、シアノ基、ニトロ基、２－ピリジル基もしくは４－ピリジル基など）を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
Ｗ／Ｔｇ又はＴｇ／Ｗは、Ｗ又はＴｇを表し、５’側がＷの場合、３’側はＴｇであり、一方、５’側がＴｇの場合、３’側はＷであり、ここで、
Ｗは、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000070
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合でなく、
＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］
で表されるヌクレオチド、又は
以下の式（ＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000071
 ［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、炭素数１～６個のアルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
Ｗ’は、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000072
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］
で表されるヌクレオチド、
を還元処理、ヒドラジンもしくはアルキルヒドラジンとの反応、又は加水分解することにより、上記式（５）で表される保護基を除去する工程を含む、
以下の式（ＩＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000073
 （式中、Ｂａｓｅ、Ｄ、Ｒ２、Ｑ１、及びＷの定義は式（Ｉ）と同様であり、Ｗ／Ｈは、Ｗ又は水素を表し、５’側がＷの場合、３’側は水素であり、一方、５’側が水素の場合、３’側はＷである。）
、又は以下の式（ＩＶ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
 （式中、Ｂａｓｅ、Ｒ２、Ｖ、及びＷ’の定義は式（ＩＩ）と同様である。）
で表されるヌクレオチドの製造方法。
［３２］前記還元処理が、ホウ素含有還元剤（好ましくは、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、水素化ホウ素テトラブチルアンモニウム）、又は、ホウ素含有還元剤とアミンの両者、を用いる、上記［３１］に記載の製造方法。
［３３］以下の工程（Ｂ１）－（Ｂ３）：
（Ｂ１）非極性又は極性溶媒中において、担体保護基が３’末端の核酸塩基又は５’末端の核酸塩基に結合し、３’位水酸基及び５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、５’位水酸基又は３’位水酸基の一方のみの一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程
（Ｂ２）工程（Ｂ１）で得られた５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護された、又は５’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を添加して、５’位水酸基又は３’位水酸基を介してｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
（Ｂ３）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ｂ２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程、
を含み、
　前記担体保護基が、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、オリゴヌクレオチドの製造方法。
［３４］前記担体保護基は、以下の式（６）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基、
以下の式（７）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１，又は２）を表し、
環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基、又は、
以下の式（８）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000078
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
ｗは、０、１又は２を表し、
環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、上記［３３］に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
［３５］工程（Ｂ１）における、一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程が、反応液を塩基で中和した後、
（ｉ）一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを単離する工程、又は（ｉｉ）中和した反応液を水洗し有機層を回収する工程、
である上記［３３］又は［３４］に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
［３６］さらに、下記工程（Ｂ４）を含む上記［３３］又は［３４］に記載の方法。
（Ｂ４）工程（Ｂ１）及び／又は（Ｂ３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
［３７］さらに、下記工程（Ｂ５）を含む上記［３６］に記載の方法。
（Ｂ５）工程（Ｂ４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
［３８］以下の式（Ｖ）或いは式（ＶＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
 ［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋（好ましくは、ロック核酸（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、アミド架橋型核酸、グアニジン架橋型核酸又はスピロシクロプロピレン架橋型核酸の架橋）を形成してもよく、
ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基（例えば、シアノ基、ニトロ基、２－ピリジル基もしくは４－ピリジル基など）を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
Ｗは、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合でなく、
＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］
で表されるヌクレオチド、又は
以下の式（ＶＩＩ）或いは式（ＶＩＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000081
 ［式中、
ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、炭素数１～６個のアルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
Ｗ’は、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
Ｔｇは、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000082
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す。］
で表されるヌクレオチド、
を加水分解又はアンモリシスすることにより、上記式（５）で表される保護基を除去する工程を含む、
以下の式（ＩＸ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
 （式中、Ｂａｓｅ、Ｄ、Ｒ２、Ｗ及びｏの定義は式（Ｖ）或いは式（ＶＩ）と同様である。）
、又は以下の式（Ｘ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000084
 （式中、Ｂａｓｅ、Ｒ２、Ｖ、Ｗ’及びｏの定義は式（ＶＩＩ）或いは式（ＶＩＩＩ）と同様である。）
で表されるヌクレオチドの製造方法。
［３９］以下の工程（Ｃ１）－（Ｃ４）：
（Ｃ１）以下の（ａ）及び（ｂ）の工程をそれぞれ行い、５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド、及び３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを得る工程：
（ａ）非極性又は極性溶媒中において、３’位水酸基が担体保護基で保護され、かつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、５’位水酸基の一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程、及び
（ｂ）非極性又は極性溶媒中において、担体保護基が３’末端の核酸塩基に結合し、３’位水酸基及び５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、３’位水酸基の一時保護基のみを除去した後、ｐ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程、
ここで、（ａ）及び（ｂ）の担体保護基は、同じであっても異なってもよい、
（Ｃ２）工程（Ｃ１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの５’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程、又は、工程（Ｃ１）で得られた３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの３’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程、
（Ｃ３）工程（Ｃ１）で得られた３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、工程（Ｃ２）で得られた５’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを添加して、又は、工程（Ｃ１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、工程（Ｃ２）で得られた３’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを添加して、ｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
（Ｃ４）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ｃ３）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程、
を含み、
　前記担体保護基が、以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000085
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、オリゴヌクレオチドの製造方法。
［４０］前記担体保護基は、以下の式（６）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基、
以下の式（７）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000087
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１，又は２）を表し、
環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基、又は、
以下の式（８）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000088
（式中、
Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
ｍは、０又は１を表し、
ｐは、１又は２を表し、
ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
ｗは、０、１又は２を表し、
環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、上記［３９］に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
［４１］工程（Ｃ１）における、一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程又は一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程が、反応液を塩基で中和した後、
（ｉ）一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド又はｐ個重合オリゴヌクレオチドを単離する工程、又は（ｉｉ）中和した反応液を水洗し有機層を回収する工程、
である上記［３９］又は［４０］に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
［４２］さらに、下記工程（Ｃ５）を含む上記［３９］又は［４０］に記載の方法。
（Ｃ５）工程（Ｃ１）及び／又は（Ｃ２）及び／又は（Ｃ４）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
［４３］さらに、下記工程（Ｃ６）を含む上記［４２］に記載の方法。
（Ｃ６）工程（Ｃ５）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
　本発明により、オリゴヌクレオチドの製造において用いることができる新規な疑似固相保護基が提供され、該保護基を用いる液相合成法による新規なポリオリゴヌクレオチドの製造方法が可能となる。
　以下、本発明を、例示的な実施態様を例として、本発明の実施において使用することができる好ましい方法及び材料とともに説明するが、本発明は以下に記載の態様に限定されるものではない。なお、文中で特に断らない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味をもつ。また、本明細書に記載されたものと同等又は同様の任意の材料及び方法は、本発明の実施において同様に使用することができる。また、本発明に関連して本明細書中で引用されるすべての刊行物及び特許は、例えば、本発明で使用できる方法や材料その他を示すものとして、本明細書中に引用されそして本明細書の一部を構成するものである。
　本明細書において、数値範囲を示す「Ａ～Ｂ」の記載は、端点であるＡ及びＢを含む数値範囲を意味する。また、「ＡないしＢ」についても同様である。また本明細書において、「約」とは、±１０％を許容する意味で用いる。
Ｉ．擬似固相保護基である長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体
　本発明の一つの態様は、オリゴヌクレオチドの製造に用いることができる擬似固相保護基である長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体である。
　本発明の化合物及びその塩の一つの態様は、以下の式（１）（以下、本明細書において、化合物（１）と呼ぶ場合がある。また、他の式で表される化合物も同様である。）で表される化合物及びその塩である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000089
　上記式（１）において、Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０、好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０のアルケニル基を表す。
　本明細書において「炭素数１４～６０のアルケニル基」とは、任意の位置に１つの二重結合を有する、炭素数が１４から６０の直鎖又は分枝状の炭化水素基を意味する。これに限定されないが、例えば、ミリストレイル基（Ｃ１４）、パルミトレイル基（Ｃ１６）、サピエル基（Ｃ１６）、オレイル基（Ｃ１８）、エライジル基（Ｃ１８）、バクセル基（Ｃ１８）、ガドレイル基（Ｃ２０）、エイコセル基（Ｃ２０）、エルカル基（Ｃ２２）、ネルボル基（Ｃ２４）、リノレイル基（Ｃ１８）、エイコサジエル基（Ｃ２０）、ドコサジエル基（Ｃ２２）、α－及びγ－リノレイル基（Ｃ１８）、ピノレル基（Ｃ１８）、エレオステアリル基（Ｃ１８）、ミードル基（Ｃ２０）、ジホモ－γ－リノレイル基（Ｃ２０）、エイコサトリエル基（Ｃ２０）、ステアリドル基（Ｃ１８）、アラキドル基（Ｃ２０）、エイコサテトラエル基（Ｃ２０）、アドレル基（Ｃ２２）、ボセオペンタエル基（Ｃ１８）、エイコサペンタエル基（Ｃ２０）、オズボンドル基（Ｃ２２）、イワシル基（Ｃ２２）、テトラコサペンタエル基（Ｃ２４）、ドコサヘキサエル基（Ｃ２２）、及びニシニル基（Ｃ２４）を挙げることができる。これらのアルケニル基は、天然由来であっても、また公知の合成技術を用いて合成して得てもよい。これに限定されないが、これらのアルケニル基は、ミリストレイン酸（Ｃ１４）、パルミトレイン酸（Ｃ１６）、サピエン酸（Ｃ１６）、オレイン酸（Ｃ１８）、エライジン酸（Ｃ１８）、バクセン酸（Ｃ１８）、ガドレイン酸（Ｃ２０）、エイコセン酸（Ｃ２０）、エルカ酸（Ｃ２２）、ネルボン酸（Ｃ２４）、リノール酸（Ｃ１８）、エイコサジエン酸（Ｃ２０）、ドコサジエン酸（Ｃ２２）、α－及びγ－リノレン酸（Ｃ１８）、ピノレン酸（Ｃ１８）、エレオステアリン酸（Ｃ１８）、ミード酸（Ｃ２０）、ジホモ－γ－リノレン酸（Ｃ２０）、エイコサトリエン酸（Ｃ２０）、ステアリドン酸（Ｃ１８）、アラキドン酸（Ｃ２０）、エイコサテトラエン酸（Ｃ２０）、アドレン酸（Ｃ２２）、ボセオペンタエン酸（Ｃ１８）、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０）、オズボンド酸（Ｃ２２）、イワシ酸（Ｃ２２）、テトラコサペンタエン酸（Ｃ２４）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２）、及びニシン酸（Ｃ２４）から選択される脂肪酸から得ることができる不飽和炭化水素基であり、例えば、上記化合物の末端のカルボキシ基がメチレン基に置きかわった不飽和炭化水素基であり、本明細書では、上記「化合物に由来する不飽和炭化水素基」という場合がある。
　上記式（１）において、ｎは、２又は３を表し、２又は３個存在するＯＲは同一であっても異なってもよいが、好ましくは、同一である。ＯＲ基の配置は、特に限定されないが、好ましくは、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換を挙げることができる。
　上記式（１）において、ｍは、０又は１を表す。
　上記式（１）において、ｐは、１又は２を表す。
　上記式（１）において、Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであり、好ましくは、Ｃ、Ｎ又はＯであり、より好ましくは、Ｃ又はＮである。ＸがＣの場合は、ＣＨ2であるか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は置換基を有してもよい５～７員の複素環を表す。
　本明細書において「置換基を有してもよい５～７員の炭素環」としては、例えば、これに限定されないが、置換基を有してもよい、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキセン、ベンゼン、シクロヘプタン、シクロヘプテン、及びナフタレンを挙げることができ、好ましくは、置換基を有してもよいシクロヘキサン、ベンゼン又はナフタレンである。
　本明細書において「置換基を有してもよい５～７員の複素環」としては、例えば、これに限定されないが、置換基を有してもよい、ピロリジン、ピペリジン、ピロール、ピリジン、ピラゾール、イミダゾール、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアジンを挙げることができ、好ましくは置換基を有してもよいピロリジン又はピペリジンである。
　５～７員の炭素環又は５～７員の複素環が有してもよい置換基としては、例えば、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基、及び置換されてもよいカルボニル基を挙げあることができ、好ましくは、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、又は置換されてもよいアルキル基である。
　本明細書において「置換されてもよい」とは、１又は任意の数の、好ましくは１～３個の置換基で置換されうることを意味する。複数の置換基で置換される場合は、置換基は、同一であっても異なってもよい。
　本明細書において「置換基」としては、例えば、ハロゲン原子、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ２－６アルキニル基、Ｃ１－６アルコキシ基、Ｃ７－１６アラルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ６－１４アリール基、６－１４員環のヘテロアリール基、アリールオキシ基、アシル基、アミノ基、水酸基、オキソ基、チオキソ基、及びトリフルオロメチル基を挙げることができる。
　本明細書において「Ｃ１－６アルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１－エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、２－エチルブチルが挙げられる。
　本明細書において「Ｃ２－６アルケニル基」としては、例えば、エテニル、１－プロペニル、２－プロペニル、２－メチル－１－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル、３－ブテニル、３－メチル－２－ブテニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－ペンテニル、４－ペンテニル、４－メチル－３－ペンテニル、１－ヘキセニル、３－ヘキセニル、５－ヘキセニルが挙げられる。
　本明細書において「Ｃ２－６アルキニル基」としては、例えば、エチニル、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、３－ブチニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル、３－ペンチニル、４－ペンチニル、１－ヘキシニル、２－ヘキシニル、３－ヘキシニル、４－ヘキシニル、５－ヘキシニル、４－メチル－２－ペンチニルが挙げられる。
　本明細書において「Ｃ１－６アルコキシ基」としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシが挙げられる。
　本明細書において「Ｃ７－１６アラルキル基」としては、例えば、ベンジル、フェネチル、ナフチルメチル、フェニルプロピルが挙げられる。
　本明細書において「Ｃ３－６シクロアルキル基」としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、アダマンチルが挙げられる。
　本明細書において「Ｃ６－１４アリール基」としては、例えば、フェニル、ビフェニル、ナフチル（例えば、１－ナフチル、２－ナフチル）、アントラセニル（例えば、１－アントリル、２－アントリル、９－アントリル）が挙げられる。
　本明細書において「６－１４員環のヘテロアリール基」としては、例えば、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリル、イソキノリル、キノリル、インドリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、トリアゾリル、フリル、チエニルが挙げられる。
　本明細書において「置換されてもよいアルキル基」とは、置換基で置換されてもよい、炭素数１から６、より好ましくは炭素数１から４の任意の直鎖アルキル基、同一の又は異なる分岐鎖を有する炭素数３から６の任意の分岐鎖アルキル基、炭素数３から６の任意の環状アルキル基を含む。例えば、炭素数１から６の任意の直鎖アルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｎ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基などが挙げられ、同一の又は異なる分岐鎖を有する炭素数３から６の任意の分岐鎖アルキル基の具体例としては、イソプロピル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ネオペンチル基、イソペンチル基などが挙げられ、そして炭素数３から６の任意の環状アルキル基としては、３～６員単環式シクロアルキル基が好ましく、具体例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などが挙げられるが、これらに限定されない。
　本明細書において「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子（フルオロ）、塩素原子（クロロ）、臭素原子（ブロモ）、又はヨウ素原子（ヨード）が挙げられる。
　上記式（１）において、ＸがＮの場合は、ＮＲ１であるか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を表す。Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、好ましくは、Ｈ又はメチルである。置換基を有してもよい５～７員の複素環の例は前記と同様である。
　上記式（１）において、Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員環を表す。Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環は、例えば、これに限定されないが、置換基を有してもよい、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキセン、ベンゼン、シクロヘプタン、シクロヘプタテン及びナフタレンを挙げることができ、好ましくは、置換基を有してもよいシクロヘキサン又はベンゼン、ナフタレンである。炭素数５～７の炭素環が有する置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基、及びカルボニル基を挙げあることができ、好ましくは、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基である。
　Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sを表す。ｓは１～５の整数、好ましくは１～３の整数である。但し、ＹとＺがともに単結合となることはない。
　本明細書において、その「塩」とは、カルボン酸部分の構造において生成される塩を意味し、例えば、カルボン酸金属塩、カルボン酸のアンモニウム塩などを挙げることができるが、カルボン酸金属塩が好ましい。カルボン酸金属塩の金属種としては、特に制限がないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、セシウム、ニッケル、コバルト、カドミウム、バリウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、マンガン、銅、セリウム、ジルコニウム、鉄、鉛、ゲルマニウム、アンチモン、アルミニウム、チタン、ビスマス等が挙げられるが、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属が好ましい。
　本発明の化合物及びその塩の別の一つの態様は、式（２）（以下、本明細書において、化合物（２）と呼ぶ場合がある。）で表される化合物及びその塩である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000090
　上記式（２）において、Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０、好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０のアルケニル基を表す。Ｒの例は、化合物（１）において例示されたものと同様である。
　上記式（２）において、ｎは、２又は３を表し、２又は３個存在するＯＲは同一であっても異なってもよいが、好ましくは、同一である。ＯＲ基の配置は、特に限定されないが、好ましくは、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換を挙げることができる。
　上記式（２）において、ｍは、０又は１を表す。
　上記式（２）において、ｐは、１又は２を表す。
　上記式（２）において、ｕは、１から５の整数、好ましくは１～３の整数を表す。
　上記式（２）において、Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、好ましくは、ＮＲ１又はＯである。Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、好ましくは、Ｈ又はメチルである。
　本発明の化合物及びその塩の他の一つの態様は、式（３）（以下、本明細書において、化合物（３）と呼ぶ場合がある。）で表される化合物及びその塩である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000091
　上記式（３）において、Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０、好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０のアルケニル基を表す。Ｒの例は、化合物（１）において例示されたものと同様である。
　上記式（３）において、ｎは、２又は３を表し、２又は３個存在するＯＲは同一であっても異なってもよいが、好ましくは、同一である。ＯＲ基の配置は、特に限定されないが、好ましくは、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換を挙げることができる。
　上記式（３）において、ｍは、０又は１を表し、好ましくは０である。
　上記式（３）において、ｐは、１又は２を表す。
　上記式（３）において、ｕは、０又は１から５の整数、好ましくは、０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２を表す。
　上記式（３）において、Ｘは、Ｃ又はＮを表す。ＸがＣの場合は、環Ａは、置換基を有してもよい５～７員の炭素環もしくは複素環を表し、ＸがＮの場合は、環Ａは、置換基を有してもよい５～７員の複素環を表す。
　本発明の化合物及びその塩の他の一つの態様は、式（４）（以下、本明細書において、化合物（４）と呼ぶ場合がある。）で表される化合物及びその塩である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000092
　上記式（４）において、Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０、好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０のアルケニル基を表す。Ｒの例は、化合物（１）において例示されたものと同様である。
　上記式（４）において、ｎは、２又は３を表し、２又は３個存在するＯＲは同一であっても異なってもよいが、好ましくは、同一である。ＯＲ基の配置は、特に限定されないが、好ましくは、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換を挙げることができる。
　上記式（４）において、ｍは、０又は１を表し、好ましくは０である。
　上記式（４）において、ｐは、１又は２を表す。
　上記式（４）において、ｕは、０又は１から５の整数、好ましくは、０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２を表す。
　上記式（４）において、ｗは、０、１又は２を表す。
　上記式（４）において、環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表す。　
　本発明の化合物（１）の例示として、例えば、以下に記載の化合物を挙げることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000093
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000094
　上記式中、Ｒａは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０、好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０のアルケニル基を表す。Ｒの例は、化合物（１）において例示されたものと同様である。
ＩＩ．擬似固相保護基が結合したヌクレオチド
　本発明の一つの態様は、上記した擬似固相保護基である長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体が結合したヌクレオチドである。
　本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドの一つの態様は、以下の式（Ｉ）（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチド（Ｉ）と呼ぶ場合がある。）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
　上記オリゴヌクレオチド（Ｉ）において、ｏは、０以上の任意に整数、好ましくは、１～５０の整数を表す。
　上記オリゴヌクレオチド（Ｉ）において、ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表す。
　本明細書において「核酸塩基」は、天然の核酸塩基、非天然の核酸塩基を含み、核酸の合成に使用されるものであれば特に制限されない。これに限定されないが、例えば、アデニン、グアニン等のプリン塩基、ウラシル、シトシン、チミン等のピリミジン塩基が挙げられる。核酸塩基はまた、修飾されていてもよい。「修飾されていてもよい核酸塩基」としては、例えば、プリン環又はピリミジン環の任意の位置に１～３個の任意の置換基（例えば、ハロゲン原子、アルキル基、アラルキル基、アルコキシ基、アシル基、アルコキシアルキル基、水酸基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボキシ基、シアノ基、ニトロ基、アルキルチオ基等）で修飾された核酸塩基を挙げることができ、これに限定されないが、例えば、８－ブロモアデニン、８－ブロモグアニン、５－ブロモシトシン５－ヨードシトシン、５－ブロモウラシル、５－ヨードウラシル、５－フルオロウラシル、５－メチルシトシン、８－オキソグアニン、ヒポキサンチンを挙げることができる。好ましい核酸塩基としては、例えば、アデニン、グアニニン、２，６－ジアミノプリン、チミン、２－チオチミン、シトシン、５－メチルシトシン、ウラシル、５－フルオロシトシン、キサンチン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、６－クロロ－２－アミノ－プリン、及び６－クロロプリンが挙げられ、特に好ましい核酸塩基としては、例えば、アデニン、グアニン、シトシン、５－メチルシトシン、チミン又はウラシルが挙げられる。ヌクレオチドに存在する複数の核酸塩基は異種の核酸塩基であってもよく、同種の核酸塩基であってもよい。また、核酸塩基は保護されていてもよい。
　本明細書において「保護されていてもよい核酸塩基」とは、核酸塩基の任意の官能性基が保護基で保護されていてもよいことを意味し、例えば、アミノ基を有する核酸塩基（例えば、アデニル基、グアニル基、又はシトシル基）においてアミノ基が保護されていてもよいこと、水酸基を有する核酸塩基において水酸基が保護されていてもよいこと、チオール基を有する核酸塩基においてチオール基が保護されていてもよいこと、又はカルボニル基を有する核酸塩基においてその環に置換されているアミノ基又は水酸基と共役してカルボニル基が水酸基の形になって保護されていてもよいこと等を意味する。これらの核酸塩基に結合した保護基は、オリゴヌクレオチドの３’位又は５’位における一時保護基の脱保護条件に耐え得るのが好ましい。
　前記核酸塩基における「アミノ基の保護基」は、特に限定されないが、例えば、ピバロイル基、ピバロイロキシメチル基、トリフルオロアセチル基、フェノキシアセチル基、４－イソプロピルフェノキシアセチル基、４－ｔｅｒｔ－ブチルフェノキシアセチル基、アセチル基、ベンジル（Ｂｎ）基、ベンゾイル（Ｂｚ）基、４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）基、４－メトキシトリチル基、トリフェニルメチル基、２－ナフチルメチル基、シアノエトキシカルボニル基、テトラヒドロピラニル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔ－ブチルジメチルシリル基、ｔ－ブチルジフェニルシリル基、４－メトキシベンジル基、３，４－ジメトキシベンジル基、イソブチリル基、ジメチルホルムアミジニル基、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、アルコキシカルボニル基（例えば、ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジロキシカルボニル（Ｃｂｚ）基、ジフェニルアミノカルボニル（ＤＰＣ）基、シアノエトキシカルボニル（Ｃｅｏｃ）基）、スルホニル基（例えば、メタンスルホニル基、及びｐ－トルエンスルホニル基）を挙げることができ、フェノキシアセチル基、４－イソプロピルフェノキシアセチル基、アセチル基、イソブチリル基、及びジメチルホルムアミジニル基が好ましい。
　前記核酸塩基における「水酸基の保護基」は、特に限定されないが、例えば、アルキル基（例えば、メチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基）、アリールメチル基（例えば、ベンジル基、ｐ－メトキシベンジル基）、アルコキシアルキル基（例えば、メトキシメチル基、メトキシエチル基、シアノエトキシメチル基、エトキシエチル基）、２－テトラヒドロピラニル基、シアノエチル基、カルバモイル基（例えば、フェニルカルバモイル基、１，１－ジオキソチオモルホリン－４－チオカルバモイル基）、アシル基（例えば、アセチル基、ピバロイル基、イソブチリル基、ベンゾイル基、フェノキシアセチル基、レブリニル基、３－ベンゾイルプロピオニル基）、シリル基（例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基）、［（トリイソプロピルシリル）オキシ］メチル基（Ｔｏｍ基）、１－（４－クロロフェニル）－４－エトキシピペリジン－４－イル基（Ｃｐｅｐ基）を挙げることができ、アセチル基、ベンゾイル基、ベンジル基又はｐ－メトキシベンジル基が好ましい。
　前記核酸塩基における「チオール基の保護基」は、特に限定されないが、例えば、上記した「水酸基の保護基」と同様の保護基、及びジスルフィド結合を形成する保護基を挙げることができる。
　前記の核酸塩基のカルボニル基が共役して水酸基の形になって保護される場合は、例えば、フェノール、２，５－ジクロロフェノール、３－クロロフェノール、３，５－ジクロロフェノール、２－ホルミルフェノール、２－ナフトール、４－メトキシフェノール、４－クロロフェノール、２－ニトロフェノール、４－ニトロフェノール、４－アセチルアミノフェノール、ペンタフルオロフェノール、４－ピバロイロキシベンジルアルコール、４－ニトロフェネチルアルコール、２－（メチルスルフォニル）エタノール、２－（フェニルスルフォニル）エタノール、２－シアノエタノール、２－（トリメチルシリル）エタノール、ジメチルカルバミン酸クロライド、ジエチルカルバミン酸クロライド、エチルフェニルカルバミン酸クロライド、１－ピロリジンカルボン酸クロライド、４－モルホリンカルボン酸クロライド、ジフェニルカルバミン酸クロライドなどを反応させて、カルボニル基を保護することが出来る。
　前記オリゴヌクレオチド（Ｉ）におけるＤは、水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すほか、リボースの４’位の炭素との間で架橋を形成してもよい。「保護されてもよい水酸基における」保護基は、前記「水酸基の保護基」と同様である。
　「架橋型核酸（ＢＮＡ）」としては、これに限定されないが、例えば、ロック核酸（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、アミド架橋型核酸、グアニジン架橋型核酸（ＧｕＮＡ）又はスピロシクロプロピレン架橋型核酸の架橋核酸を挙げることができる。このようなＢＮＡとしては、これに限定されないが、例えば、メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ（ＬＮＡ、２’，４’－ＢＮＡとしても知られている）、エチレンオキシ（４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’）ＢＮＡ（ＥＮＡとしても知られている）、β－Ｄ－チオ（４’－ＣＨ２－Ｓ－２’）ＢＮＡ、アミノオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ３）－２’）ＢＮＡ（Ｒは、Ｈ又はＭｅ）、オキシアミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（Ｒは、Ｈ又はＭｅ）、２’，４’－ＢＮＡｃｏｃ、３’－アミノ－２’，４’－ＢＮＡ、５’－メチルＢＮＡ、（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（ｃＥｔ　ＢＮＡとしても知られている）、（４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（ｃＭＯＥ　ＢＮＡとしても知られている）、アミドＢＮＡ、（４’－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ（Ｒは、Ｈ又はＭｅ）（ＡｍＮＡとしても知られている）、グアニジン架橋型ＢＮＡ（ＧｕＮＡ、アミンＢＮＡ（２’－Ａｍｉｎｏ－ＬＮＡとしても知られている）、２’－Ｏ，４’－Ｃ－スピロシクロプロピレン架橋型核酸（ｓｃｐＢＮＡとしても知られている）、及び当業者に公知の他のＢＮＡが挙げられる。
　さらに、アミド架橋型核酸の例及びその製造方法は、例えばＷＯ２０１４／１０９３８４に記載のものを挙げることができ、グアニジン架橋型核酸の例及びその製造方法は、例えばＷＯ２０１４／０４６２１２、ＷＯ２０１７／０４７８１６、特開２０２２－０３３８６９に記載のものを挙げることができる。
　オリゴヌクレオチド（Ｉ）におけるＱ１は、電子吸引性基を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を示す。Ｑが２以上存在する場合には、複数存在するＱは同じであっても又は異なっていてもよい。
　本明細書において「Ｃ１－４アルキル基」とは、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチルが挙げられる。
本明細書において「電子吸引性基」とは、有機化学上一般的に使用される、電子密度を減弱させる効果を持つ性質を有する置換基を意味する。これに限定されないが、例えば、カルボキシ基、ハロゲン、ニトロ基、エステル基、シアノ基、ニトロ基、２－ピリジル基、４－ピリジル基、及び置換基を有してもよいアリール基やアリールスルホニル基挙げることができ、好ましくはシアノ基である。
　オリゴヌクレオチド（Ｉ）におけるＷ／Ｔｇ又はＴｇ／Ｗは、Ｗ又はＴｇを表し、５’側がＷの場合、３’側はＴｇであり、一方、５’側がＴｇの場合、３’側はＷであるが、好ましくは、３’側はＴｇ、５’側がＷである。ここで、Ｗは、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基である。
　本明細書において「酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一般保護基」とは、水酸基の保護基として有機合成化学（特に、核酸合成）分野において通常用いる保護基であって、酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で、除去可能な保護基であれば特に制限されない。例えば、脂肪族アシル基；芳香族アシル基；置換されていてよいアミノカルボニル基；置換されていてよいアルコキシカルボニル基；脂肪族スルホニル基；芳香族スルホニル基；１から３個のアリール基で置換されたメチル基；炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ハロゲン原子及び／又はシアノ基で置換された１から３個のアリール基で置換されたメチル基；又はシリル基が挙げられる。具体例としては、ベンジル（Ｂｎ）基、ジフェニルカルボニル（ＤＰＣ）基、４，４’－ジメトキシトリフェニルメチル基（通称、４，４'－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）基）、４－メトキシトリフェニルメチル基（通称、４－メトキシトリチル基）、トリフェニルメチル（通称、トリチル基（Ｔｒ）基）、９－（９－フェニル）キサンテニル基、９－フェニルチオキサンテニル基、ジ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基、モノ（Ｃ１－１８アルコキシ）トリチル基、２－ナフチルメチル基、シアノエトキシカルボニル基、テトラヒドロピラニル基、アルキル基もしくはアリル基等で置換されたシリル基（例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルテキシルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ（ＴＢＤＭＳ））、ｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ－ｐ－キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ－ｔ－ブチルメチルシリルトリ（トリメチルシリル）シリル、ｔ－ブチルメトキシフェニルシリル、ｔ－ブトキシジフェニルシリル、ＴＢｏＤＰＳ、及びＴＢＤＡＳなど）、４－メトキシベンジル（p-メトキシベンジル）基、３，４－ジメトキシベンジル基、ベンゾイル（Ｂｚ）基、２，６－ジメトキシベンジル基、ｐ－フェニルベンジル基、メタンスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニル基、メトキシメチル基、及びアセチル基等が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、例えば、ベンジル（Ｂｎ）基、４，４'－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）基、４－メトキシトリチル基、ｔ－ブチルジメチルシリル基、ｔ－ブチルジフェニルシリル基、トリメチルシリル（ＴＭＳ）基、ジフェニルアミノカルボニル（ＤＰＣ）基、メタンスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニル基であり、特に好ましくは、４，４'－ジメトキシトリチル基又は４－メトキシトリチル基である。
　前記オリゴヌクレオチド（Ｉ）におけるＲ２は、Ｏ又はＳである。
　本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドの一つの態様は、以下の式（ＩＩ）（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチド（ＩＩ）と呼ぶ場合がある。式）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000096
　上記オリゴヌクレオチド（ＩＩ）において、ｏは、０以上の任意の整数、好ましくは、１～５０の整数を表す。
　上記オリゴヌクレオチド（ＩＩ）において、ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表す。
　上記オリゴヌクレオチド（ＩＩ）において、Ｗ’は、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基である。
　上記オリゴヌクレオチド（ＩＩ）におけるＲ２は、Ｏ又はＳである。
　上記オリゴヌクレオチド（ＩＩ）において、Ｖは、Ｃ１－６のアルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は、４位窒素原子が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表す。Ｖが２以上存在する場合には、複数存在するＶは同じであっても又は異なっていてもよい。
　本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドの一つの態様は、以下の式（Ｖ）（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチド（Ｖ）と呼ぶ場合がある。）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000097
　上記オリゴヌクレオチド（Ｖ）における、ｏ、Ｂａｓｅ、Ｗ、Ｒ２、及びＤは、オリゴヌクレオチド（Ｉ）における定義と同じである。ただし、２つのＷは、同じであっても異なってもよい。
　本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドの一つの態様は、以下の式（ＶＩ）（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチド（ＶＩ）と呼ぶ場合がある。）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000098
　上記オリゴヌクレオチド（ＶＩ）における、ｏ、Ｂａｓｅ、Ｗ、Ｒ２、及びＤは、オリゴヌクレオチド（Ｉ）における定義と同じである。ただし、２つのＷは、同じであっても異なってもよい。
　本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドの一つの態様は、以下の式（ＶＩＩ）（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチド（ＶＩＩ）と呼ぶ場合がある。）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000099
　上記オリゴヌクレオチド（ＶＩＩ）における、ｏ、Ｂａｓｅ、Ｗ’、Ｒ２、及びＶは、オリゴヌクレオチド（ＩＩ）における定義と同じである。ただし、２つのＷ’は、同じであっても異なってもよい。
　本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドの一つの態様は、以下の式（ＶＩＩＩ）（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチド（ＶＩＩＩ）と呼ぶ場合がある。）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000100
　上記オリゴヌクレオチド（ＶＩＩＩ）における、ｏ、Ｂａｓｅ、Ｗ’、Ｒ２、及びＶは、オリゴヌクレオチド（ＩＩ）における定義と同じである。ただし、２つのＷ’は、同じであっても異なってもよい。
　本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドにおいて、オリゴヌクレオチド（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）におけるＴｇは、
以下の式（５）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000101
である。
　式（５）において、＊＊は、オリゴヌクレオチドのＯ又はＢａｓｅへの結合を表す。
　式（５）において、その他の各記号の定義は、式（１）における定義と同じである。
　ＴｇのＯへの結合は、ヌクレオチドの３’位又は５’位の水酸基とＴｇの末端カルボン酸との間での結合（例えば、エステル結合）により行うことができるが、これに限定されない。ＴｇのＢａｓｅへの結合は、Ｂａｓｅの反応性置換基とＴｇの末端カルボン酸との間での結合反応により行うことができ、例えば、Ｂａｓｅであるアデニン、グアニン、シトシンのアミノ基とＴｇの末端カルボン酸との間での結合（例えば、アミド結合）により　
　前記オリゴヌクレオチド（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）におけるＴｇはまた、
以下の式（６）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000102
である。
　式（６）において、＊＊は、オリゴヌクレオチドのＯ又はＢａｓｅへの結合を表す。
　式（６）において、その他の各記号の定義は、式（２）における定義と同じである。
　前記オリゴヌクレオチド（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）におけるＴｇはまた、
以下の式（７）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000103
である。
　式（７）において、＊＊は、オリゴヌクレオチドのＯ又はＢａｓｅへの結合を表す。
　式（７）において、その他の各記号の定義は、式（３）における定義と同じである。
　前記オリゴヌクレオチド（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）又はオリゴヌクレオチド（ＩＩ）におけるＴｇはまた、
以下の式（８）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000104
である。
　式（８）において、＊＊は、オリゴヌクレオチドのＯ又はＢａｓｅへの結合を表す。
　式（８）において、その他の各記号の定義は、式（４）における定義と同じである。
　上記の式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表される本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドを還元処理、ヒドラジンもしくはアルキルヒドラジンとの反応、又は加水分解することにより、本発明の擬似固相保護基を脱保護することができる。還元処理は、これに限定されないが、ホウ素含有還元剤、好ましくは、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、水素化ホウ素テトラブチルアンモニウム、又は、ホウ素含有還元剤とアミンの両者、を用いることにより行うことができる。
　上記の式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）で表される本発明の擬似固相保護基が結合したヌクレオチドを加水分解又はアンモリシスすることにより、本発明の擬似固相保護基を脱保護することができる。アンモリシスは、これに限定されないが、アンモニアのアルコール溶液、例えばアンモニアのメタノール溶液、を用いることにより行うことができる。
ＩＩＩ．ヌクレオチドの製造方法
　本発明の一つの態様は、以下の工程（Ａ１）－（Ａ３）を含むオリゴヌクレオチドの製造方法（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチドの製造方法、又は単に本発明の製造方法と呼ぶ場合がある。）である。
工程（Ａ１）：非極性又は極性溶媒中において、３’位水酸基又は５’位水酸基が担体保護基で保護され、かつ５’位水酸基又は３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬とを反応させて、５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基を除去した後、ｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程（本明細書中で、「脱保護工程及び分離工程」という場合がある。）、
工程（Ａ２）：工程（Ａ１）で得られた５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの溶液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護された、又は５’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合（オリゴ）ヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す）を添加して、５’位水酸基又は３’位水酸基を介してｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドとｐ個重合（オリゴ）ヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程（本明細書中で、「縮合工程」という場合がある。）、及び
工程（Ａ３）：酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ａ２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程（本明細書中で、「酸化又は硫化反応工程」という場合がある。）。
　本発明の一つの態様は、以下の工程（Ｂ１）－（Ｂ３）を含むオリゴヌクレオチドの製造方法（以下、本明細書において、オリゴヌクレオチドの製造方法、又は単に本発明の製造方法と呼ぶ場合がある。）である。
（Ｂ１）非極性又は極性溶媒中において、担体保護基が３’末端の核酸塩基又は５’末端の核酸塩基に結合し、３’位水酸基及び５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、５’位水酸基又は３’位水酸基の一方のみの一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程
（Ｂ２）工程（Ｂ１）で得られた５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護された、又は５’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を添加して、５’位水酸基又は３’位水酸基を介してｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
（Ｂ３）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ｂ２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程。
工程（１）
　工程（Ａ１）は、３’位又は５’位の水酸基の一方が担体保護基で保護され、他方が除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドから、一時保護基を除去する工程（本明細書中で、「脱保護工程」という場合がある。）、及び、一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程（本明細書中で、「分離工程」という場合がある。）を含む。
　工程（Ｂ１）は、担体保護基が３’末端の核酸塩基又は５’末端の核酸塩基に結合し、３’位水酸基及び５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドから、５’位水酸基又は３’位水酸基の一方のみの一時保護基を除去する工程（本明細書中で、「脱保護工程」という場合がある。）、及び、一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程（本明細書中で、「分離工程」という場合がある。）を含む。
　ｎは、１以上の任意の整数を示す。ｎの上限値は、特に限定されないが、好ましくは５０以下、より好ましくは４０以下、さらに好ましくは３０以下を挙げることができる。　　
　工程（１）（Ａ１又はＢ１、以下、単に工程（１）という場合がある。）における一時保護基の除去反応は、自体公知の方法を参照して行うことができる。自体公知の方法としては、例えば、ＷＯ２０１２／１５７７２３やＷＯ２０１９／１３１７１９に記載の反応条件を用いて行うことができる。これに限定される訳ではないが、例えば、以下のようにして行うことができる。
　本発明の製造方法の工程（１）における溶媒（非極性又は極性溶媒）は、反応に影響を及ぼさなければ特に限定されないが、当該溶媒における溶解度が高い程、優れた反応性が期待できるため、疑似固相保護基が結合したヌクレオチドの溶解度の高い溶媒を選択することが好ましい。工程（１）で用いる溶媒としては、例えば、芳香族系溶媒、エステル系溶媒、脂肪族系溶媒、エーテル系溶媒、アミド系溶媒、スルホキシド系溶媒、ニトリル系溶媒、ハロゲン系溶媒、及びこれらの組合せを挙げることができる。好ましくは、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、ノナン、シクロヘキサン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、２－メチルテトラヒドロフラン、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、プロピオニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２－ジクロロエタン、及びこれらの組合せを挙げることができる。より好ましくは、トルエン、キシレン、ヘキサン、へプタン、シクロヘキサン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、2－メチルテトラヒドロフラン、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、及びこれらの組合せを挙げることができる。
　工程（１）の脱保護工程におけるｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの溶媒中の濃度は、溶解していれば特に限定されるものではないが、好ましくは１～３０重量％である。
　工程（１）で用いる酸は、特に限定されないが、例えば、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリクロロ酢酸、メタンスルホン酸、塩酸、酢酸、及びｐ－トルエンスルホン酸を挙げることができる。好ましくは、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸である。酸の使用量は、ｎ個重合ヌクレオチド１モルに対して、１～１００モル使用することができ、好ましくは１～４０モルが挙げられる。
　酸は単独で使用することができるが、カチオン捕捉剤との共存下で使用してもよい。カチオン捕捉剤の例としては、除去された一時保護基による再保護や脱保護された官能基への副反応が実質的に起こらなければ特に限定されない。
　工程（１）で用いるカチオン補足剤は、酸性条件下で除去可能な保護基を脱保護する際に用いることができるものであれば特に限定されないが、例えば、置換されてもよいアルキルチオール誘導体、置換されてもよいピロール誘導体、置換されてもよいインドール誘導体、置換されていてもよいフラン誘導体を挙げることができる。置換基としては、これに限定されないが、ハロゲン原子、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ２－６アルケニル基、Ｃ２－６アルキニル基、Ｃ１－６アルコキシ基、水酸基、アリールオキシ基、アミノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、フェニル基、カルボキシ基、等が挙げられる。これらの２種以上の基によって置換されてもよい。好ましくは、チオリンゴ酸、アセチルシステイン、ピロール、３－メチルピロール、２，４－ジメチルピロール、インドール、４－メチルインドール、５－メチルインドール、６－メチルインドール、７－メチルインドール、５，６－ジメチルインドール、及び６，７－ジメチルインドール、フラン、２－メチルフラン、３－メチルフラン、２－ピロールカルボン酸、３－ピロールカルボン酸、インドール―２－カルボン酸、インドール－３－カルボン酸、インドール―５―カルボン酸、２－フランカルボン酸、３－フランカルボン酸を挙げることができる。カチオン捕捉剤の使用量は、ｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチド１モルに対し、１～５０モルを使用することができ、好ましくは５～２０モルが挙げられる。
　工程（１）で用いるフッ素アニオンを含む試薬は、特に限定されないが、例えば、フッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライドを挙げることができる。フッ素アニオンを含む試薬の使用量は、ｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチド１モルに対し、１～１０モルを使用することができ、好ましくは１～５モルが挙げられる。
　工程（Ａ１）で用いるｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの３’位又は５’位の水酸基に結合する担体保護基、又は工程（Ｂ１）で用いるｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの３’末端の核酸塩基又は５’末端の核酸塩基に結合する担体保護基は、本発明の擬似固相保護基であり、具体的には、本明細書において化合物（１）－（４）で表される長鎖アルケニルオキシ置換ベンゾイル誘導体である。
　工程（１）の脱保護工程における反応温度は、反応が進行すれば特に限定されるものではないが、例えば、１０～５０℃が好ましく、０～４０℃がより好ましい。反応時間は、反応条件、例えば、反応基質としてのｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの種類、酸の種類、溶媒の種類、反応温度等により変わり得るが、例えば５分～５時間が挙げられる。
　工程（Ｂ１）においては、５’位水酸基又は３’位水酸基の一方のみの一時保護基を除去する。一方のみの一時保護基の除去は、５’位水酸基又は３’位水酸基に結合する一時保護基の種類を適宜選別することにより行うことができる。例えば、５’位水酸基の一時保護基を除去するが３’位水酸基の一時保護基を除去しない場合は、適当な反応条件において、５’位水酸基の一時保護基の結合は切断するが、３’位水酸基の一時保護基の結合は切断しないような一時保護基の組合せを用いればよい。このような一時保護基の組合せ及び切断反応の反応条件は、当業者において適宜選択できる。例えば、これに限定されないが、一方に、酸では脱保護されない化学安定性が高いシリル型保護基を用い、一方に、フッ素アニオンを含む試薬では脱保護されないトリチル型保護基を用いることができ、例えば、ＴＢＤＰＳ基とＤＭＴｒ基の組合せをあげることができる。
　工程（１）においては、一時保護基の除去後、擬似固相保護基を含有する化合物を分離する工程（「分離工程」という場合がある。）を含む。分離は、（ｉ）反応液から一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを単離する工程（「単離工程」をいう場合がある。）、又は（ｉｉ）反応液を水洗し有機層を回収する工程（「水洗工程」という場合がある。）、により行うことができる。
　工程（１）の分離工程においては、反応液を塩基により中和する工程を、上記単離工程又は回収工程の前に行うのが好ましい。反応液を塩基により中和することにより、例えば、純度の低下を抑制することができ、さらに脱保護後された保護基を水層に除去可能な場合もある。用いる塩基は、反応液を中和できるものであれば特に制限がないが、例えば、ピリジン、２，４，６－トリメチルピリジン、ベンズイミダゾール、１，２，４－トリアゾール、Ｎ－フェニルイミダゾール、２－アミノ－４，６－ジメチルピリミジン、１，１０－フェナントロリン、イミダゾール、Ｎ－メチルイミダゾール、２－クロロベンズイミダゾール、２－ブロモベンズイミダゾール、２－メチルイミダゾール、２－フェニルベンズイミダゾール、Ｎ－フェニルベンズイミダゾール及び５－ニトロベンズイミダゾールを挙げることができる、これらの２種以上を組み合わせて用いてもよい。
　工程（１）における単離工程は、そのままのあるいは中和した反応溶液を、極性溶媒を用いて擬似固相保護基が結合した（オリゴ）ヌクレオチドを晶析して回収することにより行うことができる。これにより不純物を含む反応液から擬似固相保護基を含有する（オリゴ）ヌクレオチドを単離できる。極性溶媒の例としては、メタノール、エタノールなどのアルコール系溶媒、アセトニトリルなどのニトリル系溶媒、アセトンなどのケトン系溶媒、テトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミドなどのアミド系溶媒、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド系溶媒、水等、及びこれらの２種以上の混合溶媒が挙げられる。アルコール系溶媒、ニトリル系溶媒が好ましく、具体的にはメタノール又はアセトニトリルが好ましい。極性溶媒は、生成物の極性溶媒中へのロスを最小限とするために、水を含んでいてもよい。極性溶媒に対する水の含量は、例えば０～１０％（ｖ／ｖ）、好ましくは０～８％（ｖ／ｖ）が挙げられる。固液分離は、自体公知の方法を参照して行うことができる。
　工程（１）における水洗工程は、そのままのあるいは中和した反応溶液を水洗し、有機層を回収することにより行うことができる。これにより不純物を除去できる。
工程（２）
　工程（Ａ２）又は（Ｂ２）は、上記工程（Ａ１）又は（Ｂ１）により調製した、３’位又は５’位の水酸基が担体保護基又は一時保護基で保護され、他方の水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドと、３’位又は５’位水酸基が一時保護基で保護され、他方の水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合（オリゴ）ヌクレオチドと、を縮合させて、ホスファイトトリエステル結合により結合したｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを調製する工程である。
　ｐは、１以上の任意の整数を示す。ヌクレオチドの伸長反応を行う場合は、ｐは好ましくは１であり、オリゴヌクレオチドのカップリング反応を行う場合、ｐは任意の整数であり、その上限値は、特に限定されないが、好ましくは２０以下、より好ましくは１０以下、さらに好ましくは５以下である。
　工程（２）（Ａ２又はＢ２、以下、単に工程（２）という場合がある。）における縮合反応は、自体公知の方法を参照して行うことができる。自体公知の方法としては、例えば、ＷＯ２０１２／１５７７２３やＷＯ２０１９／１３１７１９に記載の反応条件を用いて行うことができる。これに限定される訳ではないが、例えば、以下のようにして行うことができる。
　工程（１）により脱保護したｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドを晶析により回収した場合は、工程（２）で用いる溶媒に溶解して、縮合反応を行うことができる。また、工程（１）により脱保護したｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドを溶媒中にて分離回収した場合は、そのままの溶媒にて、あるいは、必要に応じて溶媒の変更を行い、縮合反応を行うことができる。
　工程（２）においては、アクチベータとして弱酸もしくは酸性中和塩を添加して反応効率を向上させることもできる。弱酸もしくは酸性中和塩の例としては、ピリジン・トリフルオロ酢酸塩、１Ｈ－テトラゾール、５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール、４，５－ジシアノイミダゾール等が挙げられる。弱酸もしくは酸性中和塩の使用量は、反応基質としての、工程（１）で得られた水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの１モルに対し、０．１～５０モル当量使用することができ、例えば１～５モル当量が挙げられる。
　また、工程（２）の縮合工程においては、反応液の酸性度が高くなると、一時保護基が脱離する副反応が生じるおそれがあるので、反応液の酸性化を抑制する目的でＮ－メチルイミダゾールを添加することが好ましい。Ｎ－メチルイミダゾールの使用量は、工程（１）で得られた水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの１モルに対し、０．１～１０モル当量使用することができ、例えば０．１～１モル当量が挙げられる。
　５’位又は３’位水酸基が一時保護基で保護され、他方の水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合（オリゴ）ヌクレオチドと、工程（Ａ１）で得られた３’位又は５’位の水酸基が担体保護基で保護され、他方の水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドとの配合量比は、ｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの１モルに対して、ｐ個重合（オリゴ）ヌクレオチドを１～１０モル当量、好ましくは１～５モル当量で使用することができる。
　５’位又は３’位水酸基が一時保護基で保護され、他方の水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合（オリゴ）ヌクレオチドと、工程（Ｂ１）で得られた３’位又は５’位水酸基の一方のみが一時保護基基で保護され、他方の水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドとの配合量比は、ｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの１モルに対して、ｐ個重合（オリゴ）ヌクレオチドを１～１０モル当量、好ましくは１～５モル当量で使用することができる。
　工程（２）は、縮合反応に影響を及ぼさない溶媒中で行うことができる。これに限定されないが、例えば、前記工程（１）と同様の非極性及び極性溶媒が挙げられ、例えば、芳香族系溶媒、エステル系溶媒、脂肪族系溶媒、エーテル系溶媒、アミド系溶媒、スルホキシド系溶媒、ハロゲン系溶媒、ニトリル系溶媒及びこれらの組合せを挙げることができる。
　工程（２）の反応温度は、反応が進行すれば特に限定されないが、例えば－２０～１００℃が好ましく、２０～５０℃より好ましい。反応時間は、縮合させるｎ個重合（オリゴ）ヌクレオチドの種類、反応温度等によって変わり得るが、例えば５分～２４時間を挙げられる。
工程（３）
　工程（Ａ３）又は（Ｂ３）は、酸化剤又は硫化剤を用いて、上記工程（Ａ２）又は（Ｂ２）により得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合にそれぞれ変換する工程（酸化又は硫化反応の工程）である。
　工程（３）（Ａ３又はＢ３、以下、単に工程（３）という場合がある。）における酸化又は硫化反応工程は、自体公知の方法を参照して行うことができる。自体公知の方法としては、例えば、ＷＯ２０１２／１５７７２３やＷＯ２０１９／１３１７１９に記載の反応条件を用いて行うことができる。これに限定される訳ではないが、例えば、以下のようにして行うことができる。
　工程（３）は、前記工程（２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを単離することなく、工程（２）の反応液に、酸化剤又は硫化剤を直接に添加するだけで反応を行うこともできる。
　工程（３）における酸化剤を用いる酸化反応は、通常オリゴヌクレオチド合成において知られる方法に準じて行うことができる。酸化剤の例としては、特に限定されるものではないが、例えば、ヨウ素、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファニルスルフォニル）オキサジリジン、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）、２－ブタノンペルオキシド、１，１－ジヒドロペルオキシシクロドデカン、ビス（トリメチルシリル）ペルオキシド、クメンヒドロペルオキシド、過酸化水素水、又はｍ－クロロ過安息香酸を挙げることができ、ヨウ素、（１Ｓ）－（＋）－（１０－カンファスルホニル）オキサゾリジン、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）、２－ブタノンペルオキシド、１,１－ジヒドロペルオキシシクロドデカンが好ましい。
　工程（３）における硫化剤を用いる硫化反応は、通常オリゴヌクレオチド合成において知られる方法に準じて行うことができる。硫化剤の例としては、特に限定されるものではないが、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ’－（３－チオキソ－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－イル）イミドホルムアミド（ＤＤＴＴ）、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン－１，１－ジオキシド（Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬）、３Ｈ－１，２－ベンゾジチオール－３－オン、フェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）、テトラエチルチウラムジスルフィド（ＴＥＴＤ）、３－アミノ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン（ＡＤＴＴ）、又は硫黄を挙げることができ、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ’－（３－チオキソ－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－イル）イミドホルムアミドが好ましい。
　オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合は、硫化反応により、チオホスフェートトリエステル結合に変換することができる。チオホスフェートはリン原子上で不斉中心を有するため、光学活性体を与える。また、オリゴヌクレオチドチオホスフェートの製造工程において脱保護反応を行っても、リン原子上の不斉中心は残存し、光学活性体を与える。
　工程（３）の反応は、通常溶媒中で行われる。反応に用いられる溶媒としては、無水溶媒が好ましく、例えば、ハロゲン系溶媒（例えば、クロロホルム）、脂肪族系溶媒（例えば、シクロヘキサン）、芳香族系溶媒（例えば、トルエン）、エステル系溶媒（例えば、酢酸エチル）、エーテル系溶媒（例えば、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ニトリル系溶媒（例えば、アセトニトリル）、及びこれらから選ばれる２つ以上の混合溶媒を挙げられる。
　酸化剤又は硫化剤の添加量は、工程（２）で得られたホスホラミダイトの１モルに対して、約１．０～約５．０モル当量、好ましくは約１．０～約１．５モル当量の割合で使用することができる。あるいは、酸化剤又は硫化剤の添加量は、例えば、工程（２）で得た(オリゴ)ヌクレオチドの１モルに対し、１～５０モル当量、好ましくは１～５モル当量を使用することができる。
　反応温度は、反応が進行すれば特に限定されるものではないが、０～１００℃、好ましくは２０～５０℃が挙げられる。反応時間は、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの種類、使用する酸化剤又は硫化剤の種類、及び反応温度等によって変わり得るが、例えば１分～３時間が挙げられる。
工程（４）（回収工程）
　本発明の製造方法は、さらに、工程（３）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを回収する工程（「回収工程」という場合がある。）を含んでもよい。回収工程は、工程（１）で記載した分離工程（単離工程又は水洗工程）と同様の方法により行うことができる。好ましくは、極性溶媒を用いて擬似固相保護基が結合した（オリゴ）ヌクレオチドを晶析して回収する単離工程である。
　よって本発明の製造方法の一態様は、さらに、工程（３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程、を含む。
　また、工程（４）（回収工程）は、工程（１）の後に行うこともできる。
工程（５）（全保護基の脱保護）
　本発明の製造方法は、さらに、工程（４）で回収したｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程（「全保護基除去工程」をいう場合がある。）を含んでもよい。全保護基の除去工程は、自体公知の方法を参照して行うことができる。自体公知の方法としては、例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐ　Ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｌｙ　＆　Ｓｏｎｓ出版（１９９９年）等の記載されている脱保護方法、ＷＯ２０１２／１５７７２３やＷＯ２０１９／１３１７１９に記載の条件を用いて行うことができる。
　よって本発明の製造方法の一態様は、さらに、工程（４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程を含む。
（反応の進行の確認）
　上記オリゴヌクレオチド製造方法の各工程の反応の進行は、一般的な液相有機合成反応の場合と同様の手法により、追跡・確認することができる。例えば、薄層シリカゲルクロマトグラフィー（ＴＬＣ）及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等によって行うことができる。
　本発明の別の一つの態様は、ハロゲン溶媒を用いない（オリゴ）ヌクレオチド製造方法である。従来の（オリゴ）ヌクレオチド製造方法においては、その伸長反応においてハロゲン溶媒を多用している。一方、本発明の（オリゴ）ヌクレオチド製造方法においては、疑似固相保護基の溶解性が優れているので、その伸長反応において、ハロゲン溶媒を使用しなくとも行うことができる。
ＩＶ．オリゴヌクレオチド同士のカップリング
　本発明の一つの態様は、以下の工程（Ｃ１）－（Ｃ４）を含む、オリゴヌクレオチド同士のカップリングによるオリゴヌクレオチドの製造方法である。
（Ｃ１）以下の（ａ）及び（ｂ）の工程をそれぞれ行い、５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド、及び３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを得る工程：
（ａ）非極性又は極性溶媒中において、３’位水酸基が担体保護基で保護され、かつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、５’位水酸基の一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程、及び
（ｂ）非極性又は極性溶媒中において、担体保護基が３’末端の核酸塩基に結合し、３’位水酸基及び５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、３’位水酸基の一時保護基のみを除去した後、ｐ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程、
ここで、（ａ）及び（ｂ）の担体保護基は、同じであっても異なってもよい、
（Ｃ２）工程（Ｃ１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの５’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程、又は、工程（Ｃ１）で得られた３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの３’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程、
（Ｃ３）工程（Ｃ１）で得られた３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、工程（Ｃ２）で得られた５’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを添加して、又は、工程（Ｃ１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、工程（Ｃ２）で得られた３’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを添加して、ｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
（Ｃ４）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ｃ３）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程。
　工程（Ｃ１）は、５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド、及び３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを得る工程である。ｎ個重合オリゴヌクレオチドにおけるｎは、１以上の任意の整数を示す。ｎの下限値は、特に限定されないが、好ましくは２以上、より好ましくは５以上、さらに好ましくは１０以上であり、ｎの上限値は、特に限定されないが、好ましくは４０以下、より好ましくは３０以下、さらに好ましくは２０以下である。ｐ個重合オリゴヌクレオチドにおけるｐは、１以上の任意の整数を示す。ｐの下限値は、特に限定されないが、好ましくは２以上、より好ましくは５以上、さらに好ましくは１０以上であり、ｐの上限値は、特に限定されないが、好ましくは４０以下、より好ましくは３０以下、さらに好ましくは２０以下である。
　工程Ｃ１における脱保護工程及び分離工程は、自体公知の方法を参照して行うことができる。自体公知の方法としては、例えば、ＷＯ２０１２／１５７７２３やＷＯ２０１９／１３１７１９に記載の反応条件を用いて行うことができる。これに限定される訳ではないが、例えば、上記工程（１）において記載した内容と同様にして行える。
　工程（Ｃ２）は、工程（Ｃ１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの５’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程、又は、工程（Ｃ１）で得られた３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの３’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程である。水酸基をホスホロアミダイト化する工程は、自体公知の方法を参照して行うことができる。自体公知の方法としては、例えば、特許文献１０に記載の反応条件を用いて行うことができる。
　工程（Ｃ３）は、一方のオリゴヌクレオチドがホスホロアミダイト化された、ｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程である。縮合工程は、自体公知の方法を参照して行うことができる。これに限定される訳ではないが、例えば、上記工程（２）において記載した内容と同様にして行える。
　工程（Ｃ４）は、工程（Ｃ３）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程である。酸化又は硫化反応工程は、自体公知の方法を参照して行うことができる。自体公知の方法としては、例えば、ＷＯ２０１２／１５７７２３やＷＯ２０１９／１３１７１９に記載の反応条件を用いて行うことができる。これに限定される訳ではないが、例えば、上記工程（３）において記載した内容と同様にして行える。
　工程（Ｃ４）の後に、さらに回収工程や、回収したｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程を行うことができる。これに限定される訳ではないが、例えば、上記工程（４）及び工程（５）において記載した内容と同様にして行える。
　また、回収工程は、工程（Ｃ１）の後や工程（Ｃ２）の後に行うことに行うこともでき、工程（Ｃ１）、（Ｃ２）、（Ｃ４）の何れか２つの工程の後、さらには、（Ｃ１）、（Ｃ２）及び（Ｃ４）の全ての工程の後に行うこともできる。
　以下、実施例により、本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
（実施例１）化合物４（2-((3,4,5-Tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoyl)oxy)acetic acid ）の合成
　以下のようにして、疑似固相保護基である化合物４を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000105
化合物１（Methyl 3,4,5-Tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoate）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000106
　窒素雰囲気下、没食子酸メチル（０．５２ｇ、２．８２ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．３４ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０．４ｍＬ）及びオレイルブロミド（２．９９ｇ、９．０４ｍｍｏｌ）を室温にて混合し、１０分間攪拌した。その後、７０℃に昇温した後、３．５時間攪拌した。反応終了後、室温まで放冷し、トルエン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ，３８ｖ）及び酢酸エチル（１０ｍＬ）を添加し水層を分離した。分離した水層をｎ－ヘプタン（１０ｍＬ）と酢酸エチル（１０ｍＬ）の混合溶液にて抽出した。混合した有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物１の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物１を油状物として得た（収量２．４８ｇ、２．６５ｍｍｏｌ、収率９４％）。
　1H NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 7.27 - 7.24 (m, 2H), 5.37 - 5.32 (m, 6H), 4.03 - 3.98 (m, 6H), 3.89 (s, 3H), 2.05 - 1.98 (m, 12H), 1.81 (quin, J =7.1 Hz, 4H), 1.77 - 1.71 (m, 2H), 1.51 - 1.38 (m, 6H), 1.37 - 1.23 (m, 60H), 0.90 - 0.85 (m, 9H)
化合物２（3,4,5-Tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000107
　２．３３ｇの化合物１（２．４９ｍｍｏｌ）、エタノール（２３．３ｍＬ）及び１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（５．６０ｍＬ、３．７４ｍｍｏｌ）を室温で混合し、８０℃に昇温して５時間攪拌した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（４．６６ｍＬ）を添加し、７０℃で３時間攪拌した。反応終了後、０℃に冷却し、２Ｍ　ＨＣｌ水溶液（２．５ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）を滴下し、ｐＨを３～４に調整した。反応溶液に酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘプタン（４０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を添加し、水層を分離した。有機層を減圧濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物２を無色の油状物として取得した（２．１９ｇ、収率９５％）。
　1H NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 7.33 - 7.28 (m, 2H), 5.38 - 5.32 (m, 6H), 4.06 - 3.99 (m, 6H), 2.05 - 1.98 (m, 12H), 1.85 - 1.77 (m, 4H), 1.77 -1.71 (m, 2H), 1.52 - 1.42 (m, 6H), 1.37 - 1.23 (m, 60H), 0.90 - 0.85 (m, 9H)
化合物３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000108
　窒素雰囲気下、２．００ｇの化合物２（２．１７ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１２ｍＬ）、トリエチルアミン（４３９ｍｇ、４．３４ｍｍｏｌ）及びブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（８４７ｍｇ、４．３４ｍｍｏｌ）を混合し、６０℃に昇温して２時間攪拌した。反応溶液にトリエチルアミン（２１９ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）及びブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（４２３ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で１時間攪拌した。反応溶液にトリエチルアミン（２１９ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）及びブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（４２３ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で２時間攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製した。トルエン（１００ｍＬ）による共沸を３回実施し、化合物３を無色の油状物として取得した（２．２１ｇ、収率９５％）。
　1H NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 7.30 (s, 2H), 5.38 - 5.31 (m, 6H), 4.74 - 4.66 (m, 2H), 4.01 (q, J = 6.7 Hz, 6H), 2.05 - 1.97 (m, 12H), 1.83 - 1.76 (m, 4H), 1.76 - 1.69 (m, 2H), 1.50 - 1.43 (m, 15H), 1.36 - 1.23 (m, 60H), 0.91 - 0.85 (m, 9H)
化合物４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000109
　窒素雰囲気下、２．００ｇの化合物３（１．９３ｍｍｏｌ）、クロロホルム（８ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（２．９６ｍＬ、３８．６ｍｍｏｌ）を混合し、５０℃で２時間攪拌した。反応の終了を確認後、０℃に冷却した反応溶液に５％ＮａＨＣＯ３水溶液（４０ｍＬ）をゆっくりと滴下し、ｐＨ＝４～５に調整した。酢酸エチル（３０ｍＬ）を加えて分液した。酢酸エチル（３０ｍＬ）で水層から抽出し、前記有機層と合わせ、２０％ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した後、減圧濃縮を行うことで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物４を粘性のある黄色の油状物として取得した（１．８１ｇ、収率９６％）。
　1H NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 7.30 (s, 2H), 5.38 - 5.32 (m, 6H), 4.87 (s, 2H), 4.05 - 3.97 (m, 6H), 2.04 - 1.99 (m, 12H), 1.81 (quin, J = 7.1 Hz, 4H), 1.77 - 1.71 (m, 2H), 1.47 (quin, J = 7.4 Hz, 6H), 1.36 - 1.24 (m, 60H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H)
（実施例２）化合物４を結合したポリオリゴヌクレオチドの製造
　以下のようにして、疑似固相保護基として化合物４を用いて、３ｍｅｒのポリオリゴヌクレオチドを製造した。
化合物５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000110
　窒素雰囲気下、化合物４（１．１０ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）、５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリチル）チミジン（ＤＭＴ－ｄＴ）（１．２３ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２７．５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１４ｍＬ）溶液に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）（４３２ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）を室温下添加し、同温度で２１時間攪拌した。反応の終了を確認後、酢酸エチル（３０ｍＬ）及び５％ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）を反応溶液に加え、有機層と水層を分離した。酢酸エチル（１５ｍＬ）を用いて水層から抽出し、前記有機層と合わせ、２０％ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧濃縮することで得られた粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで化合物５を粘性のある無色の油状物として取得した（１．４３ｇ、収率８４％）。
　1H NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 7.96 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.39 - 7.34 (m, 2H), 7.31 - 7.22 (m, 9H), 6.83 (d, J = 8.7 Hz, 4H), 6.46 - 6.41 (m, 1H), 5.58 - 5.53 (m, 1H), 5.37 - 5.32 (m, 6H), 4.84 - 4.79 (m, 2H), 4.18 (s, 1H), 4.03 - 3.98 (m, 6H), 3.78 (d, J = 1.1 Hz, 6H), 3.53 - 3.43 (m, 2H), 2.56 - 2.43 (m, 2H), 2.05 - 1.99 (m, 11H), 1.83 - 1.77 (m, 4H), 1.77 - 1.71 (m, 2H), 1.50 - 1.43 (m, 6H), 1.36 - 1.23 (m, 63H), 0.87 (t, J = 7.0 Hz, 9H)
化合物６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000111
　窒素雰囲気下、化合物５（２．４６ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（２４．６ｍＬ）溶液にメルカプトコハク酸（１．２３ｇ、８．１７ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（１．２５ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）を添加し、氷冷下で１時間攪拌した。さらに、室温に昇温後、１．５時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応溶液を５％ＮａＨＣＯ３（２５ｍＬ）水溶液で４回、１０％食塩水（２５ｍＬ）で１回洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物６を無色のアモルフォス状固体として取得した（１．９７ｇ、収率１００％）。
　1H NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 8.08 - 7.97 (m, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.29 (s, 2H), 6.23 - 6.15 (m, 1H), 5.51 - 5.44 (m, 1H), 5.38 - 5.32 (m, 6H), 4.83 (s, 2H), 4.18 - 4.13 (m, 1H), 4.06 - 3.98 (m, 6H), 3.98 - 3.89 (m, 2H), 2.55 - 2.47 (m, 1H), 2.46 - 2.38 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 1H), 2.04 - 1.98 (m, 11H), 1.95 - 1.91 (m, 3H), 1.84 - 1.77 (m, 4H), 1.77 - 1.71 (m, 2H), 1.51 - 1.38 (m, 6H), 1.37 - 1.23 (m, 60H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H)
化合物７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000112
　化合物６（５００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（１０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物６に対し、モレキュラーシーブス３Ａ（５００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥ－ホスホロアミダイト（４６４ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（５．０ｍＬ）を加え、室温下で１時間攪拌した。反応溶液に４，５－ジシアノイミダゾール（ＤＣＩ）（１２１ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を加え、室温下で２時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル：ピリジン：水＝９５：４：１水溶液（４．６７ｍＬ）に溶解させたヨウ素（２３７ｍｇ，０．９３ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ　Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７．５ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物をろ去した後、分液した。有機層を５％食塩水（７．５ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（１０ｇ）を加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（５ｍＬ）を用いて２回共沸した。残渣に酢酸エチル（５ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（３１２ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（３１８μＬ，４．１５ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１時間、さらに、室温に昇温し１時間攪拌した。反応の終了を確認後、水（７．５ｍＬ）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）で６回及び５％ＮａＣｌ水溶液（１５ｍＬ）で６回洗浄した。得られた有機層を濃縮し、化合物７を白色のアモルフォス状固体として取得した（５６４ｍｇ、収率８７％）。
化合物８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000113
　化合物７（２００ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（２ｍＬ）を用いた共沸を４回実施した。得られた化合物７に対し、モレキュラーシーブス３Ａ（２００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＣ－ＣＥ－ホスホロアミダイト（２１４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（２．０ｍＬ）を加え、室温下で１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（４９．９ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加え、室温下で２時間攪拌した。さらに、ＤＭＴ－ｄＣ－ＣＥ－ホスホロアミダイト（１０６ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）とＤＣＩ（２５．０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を加え室温下で２時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル：ピリジン：水＝９５：４：１（２．７ｍＬ）に溶解させたヨウ素（１４６ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ　Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（３．０ｍＬ）及び酢酸エチル（３．０ｍＬ）を加えた。不溶物をろ去した後、水層を有機層から分離した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（３．０ｍＬ）、５％食塩水（３．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（４．０ｇ）で脱水した。減圧濃縮後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで、化合物８を淡黄色のアモルフォス状固体として取得した（２５６ｍｇ、収率８６％）。
（実施例３）疑似固相保護基の脱保護
　以下のようにして、疑似固相保護基である化合物４をオリゴヌクレオチドから除去した。
化合物９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000114
　窒素雰囲気下、化合物８（１００ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２．０ｍＬ）及びイソプロパノール（０．５ｍＬ）溶液に、０℃で４Ｍ水素化ホウ素リチウムのＴＨＦ溶液（５４．１μＬ，０．２２ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間攪拌後、２０％塩化アンモニウム水溶液（２．０ｍＬ）、１０％食塩水（１．０ｍＬ）及び酢酸エチル（４．０ｍＬ）を加えて攪拌し分液した。水層から酢酸エチル（４．０ｍＬ）で抽出後、前記有機層と合わせ、１０％食塩水（２．０ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで、化合物９を白色のアモルフォス状固体として取得した（２６．９ｍｇ、４６％）。
（実施例４）化合物１１（2-((3,4,5-Tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoyl)-N-methylamino)acetic acid）の合成
　以下のようにして、疑似固相保護基である化合物１１を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000115
化合物１０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000116
　窒素雰囲気下、化合物２（１．５７ｇ、１．７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０．４２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．２９ｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１３．９ｍＬ）及びトルエン（３．３ｍＬ）の溶液に、サルコシンエチル塩酸塩（０．５４ｇ、３．５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３７５ｍｇ，３．７ｍｍｏｌ）を室温で加え、１４時間攪拌した。ＥＤＣＩ（８５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間攪拌した。更に、ＥＤＣＩ（８５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間攪拌した。反応液にｎ－ヘプタン（１６．３ｍＬ）及び１Ｍ塩酸（１４．７ｍＬ）を加えて攪拌後、有機層と水層を分液した。得られた有機層を１Ｍ塩酸（８．１ｍＬ）、続いて、５％食塩水（８．１ｍＬ）で洗浄した。洗浄で使用した水層を混合し、ヘプタン（８．１ｍＬ）と少量の酢酸エチルを加えた溶液で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、油状の化合物１０（１．６１ｇ、収率９３％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3)： δ 0.83-0.93 (m, 12H), 1.19-1.39 (m, 60H), 1.40-1.50 (m, 6H), 1.68-1.84 (m, 6H), 1.96-2.06 (m, 12H), 2.99-3.16 (m, 3H), 3.84-4.32 (m, 10H), 5.30-5.40 (m, 6H), 6.56-6.70 (m, 2H)
化合物１１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000117
　窒素雰囲気下、化合物１０（１．４７ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２．０ｍＬ）溶液へ１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液（１．７６ｍＬ）を加えて、室温で１時間攪拌した。エタノール（６．０ｍＬ）及び２Ｍ水酸化ナトリウム（０．６ｍＬ）を加えて室温で、４０分攪拌した。エタノール（６．０ｍＬ）を加えて室温で、１時間攪拌した。２Ｍ塩酸（１．８ｍＬ）を加えて酸性とした後、反応混合物を減圧下濃縮した。濃縮物へ酢酸エチル（１５ｍＬ）及び水（１２ｍＬ）を加えて攪拌後、有機層と水層に分液した。水層から酢酸エチル（１２ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を５％食塩水（１２ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、油状の化合物１１（１．３９ｇ、収率９７．０％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.85-0.90 (m, 9H), 1.19-1.39 (m, 60H), 1.40-1.51 (m, 6H), 1.68-1.84 (m, 6H), 1.96-2.06 (m, 12H), 3.10 (s, 3H), 3.85-4.30 (m, 8H), 5.30-5.40 (m, 6H), 6.56-6.70 (m, 2H)
（実施例５）化合物１１を結合したポリオリゴヌクレオチドの製造
　以下のようにして、疑似固相保護基として化合物１１を用いて、３ｍｅｒのポリオリゴヌクレオチドを製造した。
化合物１２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000118
　窒素雰囲気下、化合物１１（３８０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及びＤＭＴ－ｄＴ（３３６ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４．１ｍＬ）溶液へ、ＤＭＡＰ（１０．０ｍｇ）及びＥＤＣＩ（１１８ｍｇ，０．６２ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間攪拌した。ＥＤＣＩ（３９ｍｇ）を加えて、室温で３時間攪拌した。水（４．１ｍＬ）及び酢酸エチル（４．１ｍＬ）を加えて攪拌後、有機層と水層を分液した。有機層を濃縮後、アセトニトリル及び酢酸エチルで共沸し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、アモルファス状の白色固体として化合物１２（５１８ｍｇ、収率８９．０％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.83-0.93 (m, 9H), 1.17-1.39 (m, 60H), 1.40-1.52 (m, 6H), 1.60 (s, 3H), 1.68-1.84 (m, 6H), 1.94-2.08 (m, 12H), 2.38-2.59 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 3.45-3.55 (m, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.85-4.00 (m, 6H), 4.05-4.35 (m, 3H), 5.30-5.40 (m, 6H), 5.49-5.61 (m, 1H), 6.34-6.50 (m, 1H), 6.65 (s, 2H), 6.84 (d, 4H, J = 12.0 Hz), 7.20-7.40 (m, 9H), 7.62 (s, 1H), 8.12 (s, 1H)
化合物１３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000119
　窒素雰囲気下、化合物１２（４６８ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４．７ｍＬ）の溶液に、ピロール（０．１０７ｍＬ、１．５４ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸（０．２９５ｍＬ、０．３８５ｍｍｏｌ）を室温で加え、１時間攪拌した。メタノール（４．７ｍＬ）を加えた後濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ｎ－ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、アモルファス状の白色固体として化合物１３（３５３ｍｇ、収率９４％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.81-0.96 (m, 9H), 1.17-1.39 (m, 60H), 1.40-1.53 (m, 6H), 1.68-1.86 (m, 6H), 1.93 (s, 3H), 1.98-2.10 (m, 12H), 2.35-2.59 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 3.86-4.05 (m, 8H), 4.05-4.35 (m, 3H), 5.40-5.26 (m, 6H), 5.48 (brs, 1H), 6.00-6.28 (brs, 1H), 6.53-6.75 (brs, 2H), 7.48 (brs, 1H), 8.16 (brs, 1H)
化合物１４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000120
　窒素雰囲気下、化合物１３（１７４．５ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）及びＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（２１３ｍｇ、０．２８６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．６ｍＬ）溶液へ、５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール（５５ｍｇ，０．２８６ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間攪拌した。反応液へＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（５３ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）及び５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール（１３．８ｍｇ，０．０７２ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３０分攪拌した。反応液へ０．１Ｍヨウ素（ＴＨＦ／ピリジン／水溶液、３．９３ｍＬ）を加えて室温で３０分攪拌した。反応液へ０．１Ｍヨウ素（ＴＨＦ／ピリジン／水溶液，０．３９３ｍＬ）を追加し１０分攪拌した。１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（４．３２ｍＬ）及び酢酸エチル（約３ｍＬ）を加えて攪拌後、有機層と水層を分液した。有機層を飽和重曹水（３ｍＬ）及び５％食塩水（３ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィーで粗精製した（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール）。得られた粗精製物（３２５ｍｇ）から３１１ｍｇを抜き取り、酢酸エチル（４．６ｍＬ）を加えて溶液とした。続いて、トリフルオロ酢酸（０．０８１ｍＬ、１．０６ｍｍｏｌ）及びピロール（０．０９２ｍＬ、１．３３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で４５分攪拌した。さらに、反応液へトリフルオロ酢酸（０．０８２ｍＬ，１．０７ｍｍｏｌ）を追加し、１５分攪拌した。反応液へトリフルオロ酢酸（０．０８２ｍＬ、１．０７ｍｍｏｌ）及びピロール（０．１７３ｍＬ、２．４９ｍｍｏｌ）を追加し３０分間攪拌した。反応液へ飽和重曹水（４．６ｍＬ）を加えて攪拌後、有機層と水層に分液した。有機層を５％食塩水（４．６ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、アモルファス状の白色固体として化合物１４（１８９ｍｇ、収率８８．１％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.82-0.92 (m, 9H), 1.20-1.39 (m, 60H), 1.40-1.52 (m, 6H), 1.70-1.83 (m, 6H), 1.91 (s, 3H), 2.0 (s, 3H), 1.98-2.06 (m, 12H), 2.37-2.63 (m, 4H), 2.77-2.86 (m, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.79-4.04 (m, 8H), 4.08-4.50 (m, 8H), 5.20 (brs, 1H), 5.30-5.50 (m, 7H), 6.08-6.20 (m, 2H), 6.28 (brs, 1H), 6.64 (brs, 2H), 7.29-7.50 (m, 2H), 8.38-9.07 (m, 2H)
化合物１５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000121
　化合物１４（１４７ｍｇ、０．０９３４ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチルを用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物１４に対して、酢酸エチル（１．５ｍＬ）溶液を加えて溶液とした後、ＤＭＴｒ－ｄＣ－ＣＥホスホロアミダイト（１５９ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ）及びモレキュラーシーブス３Ａ（１５０ｍｇ）を加えて室温で１時間攪拌した。ＤＣＩ（３７ｍｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３時間攪拌した。反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液，１．４３ｍＬ）を加え、３０分攪拌した。反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液，０．４８ｍＬ）を追加し、７０分攪拌した。１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２．２５ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を５％食塩水（１．５ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、白色固体として化合物１５（２１０ｍｇ、収率９７％）を得た。
（実施例６）疑似固相保護基の脱保護
　以下のようにして、疑似固相保護基である化合物１１をオリゴヌクレオチドから除去した。
化合物１６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000122
　窒素雰囲気下、化合物１５（９８ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４．７ｍＬ）及びイソプロパノール（０．５２ｍＬ）溶液へ、０℃で０．５Ｍ水素化ホウ素リチウムのＴＨＦ溶液（０．４２ｍＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間２０分攪拌後、１０％塩化アンモニウム水溶液（１．５ｍＬ）及び酢酸エチルを加えて攪拌し有機層と水層を分液した。水層から酢酸エチルで抽出後、合わせた有機層を濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、白色固体の化合物１６（３６ｍｇ、６３％）を得た。
（実施例７）化合物２０（2-(2,4-Di-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoyl)benzoic acid）の合成
　以下のようにして、疑似固相保護基である化合物２０を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000123
化合物１８（Ethyl 2-(2,4-dihydroxybenzoyl)benzoate）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000124
　窒素雰囲気下、レゾルシノール（３．００ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）及び無水フタル酸（４．０３ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）のニトロベンゼン（４５ｍＬ）の溶液に、塩化アルミニウム（８．３４ｇ、６２．５６ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１３．５時間攪拌した。激しく攪拌したヘキサン（９０ｍＬ）及び０．５Ｍ塩酸（９０ｍＬ）の混合液へ反応液を室温で滴下した。室温で５時間攪拌した後、析出した固体をろ取した。得られた黄色固体を室温で放置し、化合物１７（2-(2,4-Dihydroxy benzoyl)benzoic acid）を粗生成物として７．７５ｇ得た。得られた粗生成物（化合物１７）に対して、エタノールを用い共沸操作を３回実施後、エタノール（１２ｍＬ）を加えて溶解した。０℃へ冷却後、塩化チオニル（２．９６ｍＬ，４０．８ｍｍｏｌ）を滴下した。反応液を８０℃まで昇温し、２時間攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、塩化チオニル（１ｍＬ）を追加し８０℃まで昇温後、１時間攪拌した。反応液を室温へ冷却後濃縮し、酢酸エチル（７７ｍＬ）及び水（６２ｍＬ）を加え攪拌後、分液した。有機層を濃縮後、酢酸エチル（６ｍＬ）及びヘキサン（３０ｍＬ）を投入し、室温で１時間攪拌した。析出した茶色固体を回収し、化合物１８（４．００ｇ、収率５１％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 1.15 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.17 (q, 2H, J = 7.2 Hz), 6.21 (dd, 1H, J = 9.0 Hz, 2.4 Hz), 6.40 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.97 (d, 1H, J = 9.0 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 7.58 (t, 1H, J = 7.2 Hz), 7.65 (t, 1H, J = 7.2 Hz), 8.09 (d, 1H, J = 7.2Hz), 12.35 (brs, 1H)
　13C-NMR (150MHz, CDCl3): δ 13.56, 61.79, 103.48, 107.81, 114.76, 127.47, 128.79, 129.69, 130.43, 132.44, 134.91, 139.98, 162.82, 165.25, 165.97, 200.98
化合物１９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000125
　窒素雰囲気下、化合物１８（０．８０ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．５５ｇ、１１．２ｍｏｌ）のＤＭＦ（１６ｍＬ）の懸濁液へ８０℃でオレイルトシレート（２．９５ｇ，６．９９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液を滴下した。８０℃で２時間１５分攪拌後、９０℃へ昇温した。９０℃で２時間１５分攪拌後、オレイルトシレート（０．２４ｇ）を滴下した。９０℃で１時間１５分攪拌後、室温へ冷却した。反応液へ酢酸エチル（４０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加えた後、攪拌し分液した。有機層を５％食塩水（１０ｍＬ）で３回洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、油状の化合物１９（２．１３ｇ、収率９７％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.85-0.95 (m, 9H), 1.06-1.39 (m, 44H), 1.41-1.50 (m, 2H), 1.74-1.85 (m, 2H), 1.95-2.11 (m, 8H), 3.65 (t, 2H, J = 6.6Hz), 3.99 (t, 2H, J = 6.0Hz), 4.11 (q, 2H, J = 7.2Hz), 5.35 (m, 4H), 6.31 (d, 1H, J = 2.4Hz), 6.55 (dd, 1H, J = 2.4, 8.4Hz), 7.26 (d, 1H, J = 7.8Hz), 7.43 (t, 1H, J = 7.8Hz), 7.51 (t, 1H, J = 7.8Hz), 7.93 (d, 1H, J = 7.8Hz), 8.00 (d, 1H, J = 8.4Hz)
化合物２０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000126
　窒素雰囲気下、化合物１９（２．０５ｇ、２．６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．９ｍＬ）溶液へ、エタノール（１９．３ｍＬ）及び２Ｍ水酸化ナトリウム（１．８４ｍＬ）を加えた。８５℃に加温した後、２時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却後濃縮し、１Ｍ塩酸（１９ｍＬ）及び酢酸エチル（１９ｍＬ）を加えて攪拌後、分液した。得られた有機層を５％食塩水（１９ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、無色油状の化合物２０（１．９４ｇ、収率９９％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.78-1.40 (m, 50H), 1.40-1.49 (m, 2H), 1.71-1.84 (m, 2H), 1.93-2.11 (m, 8H), 3.65 (brs, 2H), 3.91-4.04 (m, 2H), 5.29-5.41 (m, 4H), 6.32 (brs, 1H), 6.54 (brs, 1H), 7.25-7.67 (m, 3H), 7.80-8.08 (m, 2H)
（実施例８）化合物２０を結合したポリオリゴヌクレオチドの製造
　以下のようにして、疑似固相保護基として化合物２０を用いて、３ｍeｒのポリオリゴヌクレオチドを製造した。
化合物２１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000127
　窒素雰囲気下、０℃で、ＤＭＴ－ｄＴ（５９４ｍｇ，１．０９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２２６ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２２．２ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）のトルエン（１０ｍＬ）懸濁液へ、化合物２０（６８９ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）のトルエン（３．５ｍＬ）溶液を滴下した。０℃で１６時間攪拌した。ＥＤＣＩ（３５ｍｇ）を加えて、０℃で２時間攪拌した。さらに、ＥＤＣＩ（８７ｍｇ）を加えて、０℃で３時間攪拌した。酢酸エチル（５．５ｍＬ）及び飽和重曹水（１０ｍＬ）を加えて攪拌後、分液した。得られた有機層を５％食塩水（３ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、粘性のある無色油状の化合物２１（９９７ｍｇ、収率８６％）を得た。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.88 (t, 6H, J = 7.0Hz), 1.19-1.47 (m, 44H), 1.39-1.47 (m, 2H), 1.58 (s, 3H), 1.70-1.80 (m, 2H), 1.96-2.07 (m, 8H), 2.27 (dd, 1H, J = 14.4, 6.0Hz), 2.32-2.40 (m, 1H), 3.34-3.45 (m, 2H), 3.63-3.73 (m, 2H), 3.78 (s, 6H), 3.93-4.00 (m, 2H), 4.01-4.05 (m, 1H), 5.38-5.30 (m, 4H), 5.54 (d, 1H, J = 6.0Hz), 6.02-6.15 (m, 1H), 6.35 (d, 1H, J = 2.4Hz), 6.56 (dd, 1H, J = 8.4, 2.4Hz), 6.81 (d, 4H, J = 9.0Hz), 7.30-7.20 (m, 8H), 7.35 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 7.42-7.48 (m, 1H), 7.51-7.57 (m, 2H), 7.94 (d, 1H, J = 7.2Hz), 8.0-7.94 (m, 1H), 7.99 (d, 1H, J = 9.0 Hz)
化合物２２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000128
　窒素雰囲気下、化合物２１（２９２ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（２．９ｍＬ）の溶液に、メルカプトコハク酸（１７０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸（０．１０４ｍＬ，１．３６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温へ昇温しながら１．５時間攪拌した。反応液へ飽和重曹水（３ｍＬ）を加え、攪拌・分液した。得られた有機層を飽和重曹水（３ｍＬ）で更に２回洗浄後、５％食塩水（３ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮し、粘性の高い無色油状物として化合物２２（２２３ｍｇ、収率１００％）を得た。得られた化合物２２は特に精製することなく、次の反応に用いた。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.85-0.93 (m, 6H), 1.05-1.39 (m, 44H), 1.41-1.49 (m, 2H), 1.75-1.83 (m, 2H), 1.90 (s, 3H), 1.98-2.06 (m, 8H), 2.14 (dd, 1H, J = 13.8, 1.8Hz), 2.43-2.57 (m, 1H), 2.75 (brs, 1H), 3.70 (t, 2H, J = 6.3Hz), 3.76-3.87 (m, 2H), 3.90-3.96 (m, 1H), 4.00 (t, 2H, J = 6.3Hz), 5.31-5.40 (m, 4H), 5.43 (m, 1H), 5.65 (dd, 1H, J = 8.4, 6.0Hz), 6.37 (d, 1H, J = 1.8Hz), 6.60 (dd, 1H, J = 8.4, 2.4Hz), 7.20 (brs, 1H), 7.25 (d, 1H, J = 7.8Hz), 7.47 (t, 1H, J = 7.2Hz), 7.54 (t, 1H, J = 7.2Hz), 7.97 (d, 1H, J = 7.8Hz), 8.01 (d, 1H, J = 8.4Hz), 8.10 (brs, 1H)
化合物２３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000129
　化合物２２（１３６．５ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１．４ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物２２に対して酢酸エチル（１．４ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（１３７ｍｇ）及びＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（２０７ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間攪拌した。ＤＣＩ（５５ｍｇ、０．４６３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３時間攪拌した。反応液へ０．１Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液，２．１ｍＬ）を加え、１０分攪拌した。１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２．０５ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を５％食塩水（２．０５ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。得られた残渣に酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、酢酸エチル（１．４ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（１０４ｍｇ、０．６９５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．１０１ｍＬ、１．３２ｍｍｏｌ）を加えた後、室温へ昇温しながら１時間３０分攪拌した。反応液へ水（２ｍＬ）を加えて攪拌後、分液した。得られた有機層を飽和重曹水（２ｍＬ）で３回洗浄後、５％食塩水（２ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮乾固し、白色固体の化合物２３（１７９ｍｇ、収率９６％）を得た。得られた化合物２３は特に精製することなく、次の反応に用いた。
　1H-NMR (600MHz, CDCl3): δ 0.81-0.93 (m, 6H), 1.04-1.39 (m, 44H), 1.40-1.50 (m, 2H), 1.76-1.83 (m, 2H), 1.87-1.91 (m, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.97-2.06 (m, 8H), 2.20-2.29 (m, 1H), 2.32-2.58 (m, 3H), 2.72 - 2.85 (m, 2 H), 3.03-3.34 (brm, 1H), 3.67-3.75 (m, 2H), 3.81-3.90 (m, 2H), 4.01 (t, 2H, J = 6.6Hz), 4.04-4.08 (brm, 1H), 4.21-4.24 (m, 1H), 4.24-4.37 (m, 4H), 5.13-5.21 (m, 1H), 5.31-5.40 (m, 4H), 5.41-5.49 (m, 1H), 5.86-6.01 (m, 1H), 6.17 (q, 1H, J = 7.2Hz), 6.38 (d, 1H, J = 2.4Hz), 6.60 (d, 1H, J = 9.0Hz), 7.17-7.20 (m, 1H), 7.24-7.27 (m, 1H), 7.45 (d, 1H, J = 7.2Hz), 7.46-7.51 (m, 1H), 7.55 (t, 1H, J = 7.2Hz), 7.92-7.98 (m, 2H), 8.31-8.61 (brm, 2H)
化合物２４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000130
　化合物２３（２１５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（２．２ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物２３に対して酢酸エチル（２．１５ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（２１５ｍｇ）、ＤＭＴｒ－ｄＣ－ＣＥホスホロアミダイト（２６７ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。ＤＣＩ（６３ｍｇ、０．５３３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間３０分攪拌した。反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液，２．４ｍＬ）を加えて室温で３０分攪拌した。１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（３．２ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和重曹水（３．２ｍＬ）で３回洗浄後、５％食塩水（３．２ｍＬ）で洗浄した。有機層を２分割後、一方を濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、白色固体の化合物２４（１５８ｍｇ、収率９５％）を得た。
MS(ESI+):[M+H]+ 2088.9655.
（実施例９）疑似固相保護基の脱保護
　以下のようにして、疑似固相保護基である化合物２０をオリゴヌクレオチドから除去した。
化合物２５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000131
　窒素雰囲気下、化合物２４（８４ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２．０ｍＬ）及びイソプロパノール（０．５２ｍＬ）溶液へ、０℃で０．５Ｍ水素化ホウ素リチウムのＴＨＦ溶液（０．４ｍＬ、０．２ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で５０分攪拌後、１０％塩化アンモニウム水溶液（１．２５ｍＬ）及び酢酸エチルを加えて攪拌し分液した。水層から酢酸エチルで抽出後、合わせた有機層を濃縮し水を除去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、白色固体の化合物２５（４２ｍｇ、収率７９％）を得た。
（実施例９）ポリオリゴヌクレオチドの製造
　以下のようにして、疑似固相保護基として化合物２０を用いて、８ｍｅｒのポリオリゴヌクレオチドを製造した。
化合物２６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000132
　化合物２３（３３８ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（３．４ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物２３に対して、モレキュラーシーブス３Ａ（３４０ｍｇ）及びＤＭＴｒ－ｄＣ－ＣＥホスホロアミダイト（３１５ｍｇ、０．３７８ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（３．４ｍＬ）を加えて室温で５０分攪拌した。ＤＣＩ（７７．４ｍｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で８０分攪拌した。反応の終了を確認後、反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、３．５ｍＬ）を加え、２０分攪拌した。１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（３．４ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を５％食塩水（１．７ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。得られた残渣に酢酸エチルを加えて濃縮し水を除去した後、酢酸エチル（３．４ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（１８９．２ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．２８９ｍＬ、３．７８ｍｍｏｌ）を加えた。室温に昇温しながら、３７分攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（５．１ｍＬ）を加えて攪拌し分液した。得られた有機層を飽和重曹水、１０％塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮乾固し、淡黄色固体の化合物２６（４１９ｍｇ、９３％）を得た。得られた化合物２６は特に精製することなく、次の反応に用いた。
MS(ESI+):[M]+ 1785.8345.
化合物２７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000133
化合物２６（１７７ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１．８ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物２６に対して酢酸エチル（１．８ｍＬ）を加えて溶解後、モレキュラーシーブス３Ａ（１７７ｍｇ）を加えて室温で３０分攪拌した。ＤＭＴｒ－ｄＧ－ＣＥホスホロアミダイト（１２５ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）を加えて室温で１０分攪拌した。ＤＣＩ（３０．４ｍｇ、０．２５７ｍｍｏｌ）を加えて約１時間攪拌した。ＤＭＴｒ－ｄＧ－ＣＥホスホロアミダイト（合計４１．７ｍｇ、０．０４９７ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（合計６０．８ｍｇ、０．５１５ｍｍｏｌ）を追加し、反応を完結させた。反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、１．９８ｍＬ）を加え、２０分攪拌した。１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２．７ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和食塩水（１．８ｍＬ）で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣に、酢酸エチル（２．７ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（７４．３ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．０８２６ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を加えた。室温に昇温しながら、約１時間攪拌した。原料が確認された場合は、トリフルオロ酢酸を追加した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（２．７ｍＬ）を加えて攪拌し分液した。不溶物が確認された場合は少量のＴＨＦを加えて溶解させた。得られた有機層を飽和食塩水（１．８ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮乾固し、淡黄色固体の化合物２７（２４６ｍｇ）を得た。得られた化合物２７は特に精製することなく、次の反応に用いた。
MS(ESI+):[M+1]+ 2238.9575.
化合物２８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000134
化合物２７（２４６ｍｇ）に対して対応するホスホロアミダイトを用いて化合物２７の合成と同様の操作を行い、淡黄色固体の化合物２８（２７２ｍｇ）を得た。得られた化合物２８は特に精製することなく、次の反応に用いた。
MS(ESI+):[M+1]+ 2709.6452.
化合物２９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000135
化合物２８（２７２ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（２ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物２８に対して酢酸エチル（１ｍＬ）及びＴＨＦ（１ｍＬ）を加えて溶解後、モレキュラーシーブス３Ａ（２６６ｍｇ）を加えて室温で約３０分攪拌した。ＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（１１１ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）を加えて室温で１５分攪拌した。ＤＣＩ（５２．７ｍｇ、０．４４６ｍｍｏｌ）を加えて約１時間攪拌した。ＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（３７ｍｇ、０．０４９７ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（１７．６ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）を追加し、反応を完結させた。反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、１．９８ｍＬ）を加え、２０分攪拌した。１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２．７ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチル及びＴＨＦで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し得られた有機層を飽和食塩水（１．８ｍＬ）で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣に、酢酸エチル（２．７ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（７４．３ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．１１４ｍＬ、１．４９ｍｍｏｌ）を加えた。室温に昇温しながら、約１時間攪拌した。原料が確認された場合は、トリフルオロ酢酸を追加した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（３．５ｍＬ）を加えて攪拌し分液した。不溶物が確認された場合はＴＨＦを加えて溶解させた。得られた有機層を飽和食塩水（１．８ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮乾固し、淡黄色固体の化合物２９（３０３ｍｇ）を得た。得られた化合物２９は特に精製することなく、次の反応に用いた。
MS(ESI+):[M+2H]2+ 1533.5718.
化合物３０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000136
化合物２９（３０３ｍｇ）に対して対応するホスホロアミダイトを用いて化合物２９の合成と同様の操作を２回繰り返し、淡黄色固体の化合物３０（２８０ｍｇ）を得た。
MS(ESI+):[M+2H]2+ 1935.1655.
（実施例１０）化合物３４の合成
　以下のようにして、疑似固相保護基である化合物３４を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000137
化合物３１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000138
窒素雰囲気下、Methyl 2,4-Dihydroxybenzoate（１．２０ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３．９５ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡｃ（２４ｍＬ）及びオレイルブロミド（５．２０ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）を室温にて混合し、８０℃に昇温した後３時間攪拌した。オレイルブロミド（２．３６ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）を８０℃にて混合し、２時間攪拌した。反応終了後、０℃に氷冷し、ｎ－ヘキサン（２４ｍＬ）、水（２４ｍＬ）及び酢酸エチル（２４ｍＬ）を添加し水層を分離した。分離した有機層を水（２４ｍＬ）で３回洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物３１の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物３１を油状物として収率９８％（収量４．６６ｇ、６．９６ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 7.88 - 7.77 (m, 1H), 6.45 (s, 2H), 5.38 - 5.32 (m, 4H), 3.98 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 3.84 (s, 3H), 2.05 - 1.97 (m, 8H), 1.87 - 1.75 (m, 4H), 1.53 - 1.41 (m, 4H), 1.33 - 1.24 (m, 40H), 0.91 - 0.84 (m, 6H)
13C-NMR (150MHz, CDCl3)： δ 166.4, 163.7, 160.9, 133.8, 129.9, 112.4, 105.1, 100.3, 68.9, 68.2, 51.5, 31.9, 29.8, 29.8, 29.5, 29.5, 29.5, 29.3, 29.2, 29.3, 27.2, 27.2, 26.0, 26.0, 22.7, 14.1
化合物３２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000139
窒素雰囲気下、化合物３１（４．５２ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２２．６ｍＬ）溶液へ、エタノール（２２．６ｍＬ）及び４Ｍ　水酸化ナトリウム（６．７５ｍＬ）を加えた。その後７０℃に加温した後、２時間攪拌した。反応終了後、０℃に氷冷し、２Ｍ　塩酸（１５ｍＬ）、酢酸エチル（９０ｍＬ）、水（９０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（９０ｍＬ）を加えて水層を分離した。分離した有機層を水（９０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物３２の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物３２を油状物として収率９８％（収量４．３５ｇ、６．６４ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 10.75 (br s, 1H), 8.11 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.38 - 5.32 (m, 4H), 4.19 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.01 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.02 (br s, 8H), 1.90 (quin, J = 6.9 Hz, 2H), 1.80 (quin, J = 6.8 Hz, 2H), 1.51 - 1.38 (m, 4H), 1.34 - 1.24 (m, 40H), 0.88 (br t, J = 6.6 Hz, 6H)
13C-NMR (150MHz, CDCl3)： δ 165.3, 164.6, 159.0, 135.5, 130.0, 130.0, 129.8, 129.7, 110.3, 107.1, 99.8, 70.2, 68.6, 31.9, 29.8, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 29.5, 29.1, 28.9, 27.2, 27.2, 27.2, 26.0, 25.9, 22.7, 14.1
化合物３３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000140
窒素雰囲気下、０℃で化合物３２（４．３０ｇ、６．５６ｍｍｏｌ）、Ｌ－プロリンメチル塩酸塩（２．１７ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１６０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．５７ｍＬ、２６．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４３ｍＬ）溶液へ、ＥＤＣＩ（２．５２ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下２時間攪拌した。酢酸エチル（４３ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（４３ｍＬ）及び水（４３ｍＬ）を加えて攪拌後、水層を分離した。得られた有機層を水（４３ｍＬ）で３回洗浄後、濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物３３を油状物として収率８６％（収量４．３５ｇ、５．６７ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 7.24 (d, J = 8.3 Hz, 0.7H), 7.11 (br d, J = 8.3 Hz, 0.3H), 6.47 (br d, J = 8.3 Hz, 0.7H), 6.45 - 6.36 (m, 1.3H), 5.35 (br s, 4H), 4.64 (br s, 0.7H), 4.36 - 4.27 (m, 0.3H), 3.97 - 3.90 (m, 4H), 3.76 (s, 2.7H), 3.49 (s, 1H), 3.48 - 3.34 (m, 1.3H), 2.29 - 2.17 (m, 1H), 2.07 - 1.93 (m, 10.3H), 1.88 - 1.81 (m, 0.7H), 1.79 - 1.68 (m, 4H), 1.44 (s, 4H), 1.37 - 1.24 (m, 40H), 0.88 (br t, J = 6.8 Hz, 6H) with rotamer
13C-NMR (150MHz, CDCl3)： δ 172.8, 168.1, 161.3, 156.4, 130.0, 129.8, 129.8, 129.4, 105.4, 100.0, 68.6, 68.2, 58.7, 52.1, 52.0, 47.9, 46.2, 31.9, 31.2, 29.8, 29.8, 29.7, 29.5, 29.5, 29.4, 29.4, 29.3, 29.3, 29.3, 29.2, 27.2, 27.2, 27.2, 26.1, 26.0, 26.0, 24.8, 23.2, 22.7, 14.1
化合物３４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000141
窒素雰囲気下、化合物３３（４．２５ｇ、５．５４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２１ｍＬ）溶液へ、４Ｍ　水酸化ナトリウム（５．５ｍＬ）を加え、室温下１時間攪拌した。その後、エタノール（２１ｍＬ）を加え、７０℃に昇温し２時間攪拌した。反応終了後、０℃に氷冷し、２Ｍ　塩酸（１２ｍＬ）、酢酸エチル（２１ｍＬ）、水（２１ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２１ｍＬ）を加えて水層を分離した。分離した有機層を水（２１ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物３４の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物３４を油状物として収率９８％（収量４．０９ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 8.92 (s, 1H), 7.24 (br d, J = 8.3 Hz, 0.9H), 7.17 - 7.12 (m, 0.1H), 6.50 (br d, J = 8.3 Hz, 0.9H), 6.45 (s, 1H), 6.39 (s, 0.1H), 5.35 (s, 4H), 4.75 (d, J = 7.6 Hz, 0.9H), 4.35 - 4.27 (m, 0.1H), 3.99 - 3.91 (m, 4H), 3.80 - 3.68 (m, 0.2H), 3.45 (q, J = 8.1 Hz, 0.9H), 3.34 (br s, 0.9H), 2.56 - 2.50 (m, 0.9H), 2.26 - 1.93 (m, 10.1H), 1.90 - 1.83 (m, 1H), 1.81 - 1.71 (m, 4H), 1.47 - 1.37 (m, 4H), 1.34 - 1.25 (m, 40H), 0.88 (br t, J = 6.6 Hz, 6H) with rotamer
13C-NMR (150MHz, CDCl3)： δ 172.0, 171.5, 162.1, 156.3, 130.0, 129.8, 129.8, 129.3, 117.7, 105.6, 100.0, 68.6, 68.3, 60.3, 48.8, 31.9, 29.8, 29.8, 29.5, 29.5, 29.5, 29.4, 29.3, 29.3, 29.2, 29.2, 29.1, 27.7, 27.2, 27.2, 27.2, 26.0, 26.0, 24.6, 22.7, 14.1
（実施例１１）化合物３４を結合したオリゴヌクレオチドの製造
　以下のようにして、疑似固相保護基として化合物３４を用いてオリゴヌクレオチドを製造した。
化合物３５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000142
窒素雰囲気下、０℃で化合物３４（１．９９ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２．０３ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１．６２ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．６８ｍＬ、１０．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液へ、ＤＭＴ－ｄＴ（２．８８ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温し１５時間攪拌した。反応混合物にＥＤＣＩ（２５３ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（６９１μＬ、３．９７ｍｍｏｌ）、ＤＭＴ－ｄＴ（７２０ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を加え、室温下２０時間攪拌した。その後４０℃に昇温し２時間攪拌した。反応混合物にＥＤＣＩ（２５３ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（２０３ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）、ＤＭＴ－ｄＴ（７２０ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。酢酸エチル（４０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）を加えて攪拌後、水層を分離した。得られた有機層を飽和重曹水（２０ｍＬ）で３回洗浄し、水（２０ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物３５を油状物として収率７８％（収量２．６６ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (600 MHz, CDCl3)： δ 8.61 (s, 0.2H), 8.55 (s, 0.8H), 7.61 (s, 0.8H), 7.51 (m, 0.2H), 7.41 - 7.33 (m, 2H), 7.31 - 7.09 (m, 6H), 7.14 - 7.07 (m, 1H), 6.84 (br d, J = 8.3 Hz, 4H), 6.50 - 6.20 (m, 3H), 5.63 (br d, J = 5.3 Hz, 0.8H), 5.37 - 5.33 (m, 4H), 5.20 - 5.11 (m, 0.2H), 4.59 - 4.56 (m, 0.8H), 4.43 - 4.33 (m, 0.2H), 4.16 (br s, 0.7H), 3.96 - 3.64 (m, 10.8H), 3.53 - 3.36 (m, 3.5H), 2.63 - 2.46 (m, 1.5H), 2.33 - 2.21 (m, 1.2H), 2.08 - 1.92 (m, 10.5H), 1.91 - 1.82 (m, 0.8H), 1.81 - 1.67 (m, 5H), 1.51 - 1.13 (m, 47H), 0.88 (br t, J = 6.6 Hz, 6H) with rotamer
13C-NMR (150MHz, CDCl3)： δ 172.0, 171.5, 162.1, 156.3, 130.0, 129.8, 129.8, 129.3, 117.7, 105.6, 100.0, 68.6, 68.3, 60.3, 48.8, 31.9, 29.8, 29.8, 29.5, 29.5, 29.5, 29.4, 29.3, 29.3, 29.2, 29.2, 29.1, 27.7, 27.2, 27.2, 27.2, 26.0, 26.0, 24.6, 22.7, 14.
化合物３６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000143
　窒素雰囲気下、Levulinic acid（６．１６ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）及びメタノール（８０ｍＬ）を混合し、７０℃に昇温して１０分攪拌した。反応溶液に臭素（３．０８ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）及びメタノール（２０ｍＬ）の混合液を３０分かけてゆっくりと滴下し、７０℃に保ったまま２時間攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、ジクロロメタン（４０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物３６を淡黄色の油状物として取得した（４．５１ｇ、収率３６％）。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ3.96(s,2H),3.69(s,3H),2.97(t,J=7.5Hz,3H),2.67(t,J=7.5Hz,3H)
化合物３７の合成 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000144
　窒素雰囲気下、3,4,5-tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid（化合物３６、１０．０５ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１１０ｍＬ）、炭酸水素ナトリウム（１．８５ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）及び化合物３６（３．７６ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）を混合し、６０℃に昇温して一晩攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物３７を無色の油状物として取得した（９．８６ｇ、収率８５％）。 
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ7.30(s,2H),5.38-5.31(m,6H),4.90(s,2H), 4.02(q,J=6.7Hz,6H), 3.69(s, 3H), 2.81(t,J=6.3Hz,2H), 2.68(t,J=6.3HZ,2H), 2.04-1.99(m,12H), 1.84-1.70(m,6H), 1.49-1.43(m,6H), 1.40-1.20(m,60H), 0.88(t,J=7.0Hz,9H)
化合物３８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000145
　窒素雰囲気下、化合物３７（９．８６ｇ、９．４０ｍｍｏｌ）、クロロホルム（３５０ｍＬ）及び０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（３７.６ｍＬ）を混合し、室温で一晩攪拌した。反応の終了を確認後、６Ｍ塩酸（６ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物３８を白色のアモルファス状固体として取得した（１．２１ｇ、収率１８％）。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ7.30(s,2H),5.38-5.31(m,6H),4.90(s,2H),4.02(q,J=6.7Hz,6H),  2.81(t,J=6.3Hz,2H),2.68(t,J=6.3HZ,2H),2.04-1.99(m,12H),1.84-1.70(m,6H),1.49-1.43(m,6H), 1.40-1.20(m,60H), 0.88(t,J=7.0Hz,9H)
化合物３９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000146
　窒素雰囲気下、化合物３８（４３９ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ＤＭＴ－ｄＴ（３９２ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（８８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１１ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（１３８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を室温下添加し、同温度で３０時間攪拌した。反応の終了を確認後、溶媒を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで化合物３９を白色のアモルファス状固体として取得した（５４３ｍｇ、８３％）。 
1H-NMR(500MHz,CDCl3)： δ 8.74(s,1H),7.60(s,1H),7.39-7.35(m,2H),7.32-7.20(m,9H),6.83(d,J=9.5Hz,4H),6.46-6.42(m,1H),5.48-5.46(m,1H),5.38-.30(m,6H),4,90(s,2H),4.15-4.12(m,1H),4.04-3.97(m,6H),3.78(s,6H),3.50-3.42(m,2H),2.86-2.75(m,2H),2.68(t,J=6.3Hz,2H),2.50-2.40(m,2H),2.09-1.90(m,12H),1.84-1.70(m,6H),1.50-1.40(m,6H),1.40-1.20(m,67H),0.88(t,J=7.0Hz,3H)
化合物４０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000147
　窒素雰囲気下、化合物３９（５４３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（５．４ｍＬ）溶液にメルカプトコハク酸（２６３ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（０．４０ｍL、５．２５ｍｍｏｌ）を添加し、氷冷下１．５時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応液を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（８ｍＬ）で３回、１０％ＮａＣｌ水溶液（８ｍＬ）で１回洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物４０を白色のアモルファス状固体として取得した（４０１ｍｇ、収率９１％）。得られた化合物４０は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物４１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000148
　化合物４０（４０１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（４．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物４０にモレキュラーシーブス３Ａ（４００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（７１５ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（４．０ｍL）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１１３ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）を加え、室温下、２時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル／ピリジン／水溶液（４．８ｍＬ）に溶解させたヨウ素（２４４ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（６．０ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物をろ去した後、分液した。有機層を５％食塩水（６．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（５ｇ）を加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（５ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。残渣に酢酸エチル（４．０ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（２４０ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３７ｍＬ、４．８０ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１時間、更に、室温に昇温し１時間攪拌した。反応の終了を確認後、水（６ｍＬ）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（６ｍＬ）で３回、５％ＮａＣｌ水溶液（６ｍＬ）で１回洗浄した。得られた有機層を濃縮し、化合物４１を白色のアモルファス状固体として取得した（３１１ｍｇ、収率５９％）。得られた化合物４１は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物４２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000149
　「化合物４１（３１１ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を用い、化合物８の合成と同様にして、但し、試薬量は適宜変更して、化合物４２を淡黄色のアモルファス状固体として取得した（３０１ｍｇ、収率６８％）。
化合物４３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000150
　窒素雰囲気下、化合物４２（３０１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６．４ｍＬ）、ピリジン（３．２ｍＬ）及び酢酸（１．６ｍＬ）溶液に、ヒドラジン一水和物（１２．１μＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を滴下した。２．５時間攪拌後、ＴＨＦ（１ｍＬ）を加えてさらに４時間攪拌した。反応の終了を確認したのちに溶液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで、化合物４３を白色のアモルファス状固体として取得した。
化合物４４の合成 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000151
　窒素雰囲気下、3,4,5-tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid（化合物２、５．６８ｇ、６．１６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２７０ｍＬ）、ＴＨＦ（３０ｍＬ）、L-Proline Methyl Ester Hydrochloride（１．３４ｇ、８．０９ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ（３．４７ｇ、８．０９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３．４５ｍｌ、２０．５ｍｍｏｌ）を混合し、室温で昇温して一晩攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物４４を無色の油状物として取得した（９．８６ｇ、収率８５％）。 
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ6.77(s,2H),5.39-5.30(m,6H),4.65-4.60(m,1H),3.97(q,J=6.5MHz,6H),3.96-3.88(m,1H),3.78(s,3H),3.72-3.64(m,1H),3.63-3.55(m,1H),2.36-2.26(m,1H),2.01-2.95(m,13H),1.93-1.84(m,1H),1.83-1.68(m,6H),1.52-1.40(m,6H),1.38-1.20(m,60H),0.87(t,J=7.0MHz,9H)
化合物４５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000152
　窒素雰囲気下、化合物４４（４．９５ｇ、４．７９ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（０．４７ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２５ｍＬ）、メタノール（５ｍＬ）及びイオン交換水（１ｍＬ）を混合し、６０℃で一晩攪拌した。反応の終了を確認後、６Ｍ塩酸（２ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物４５を白色のアモルファス状固体として取得した（２．６９ｇ、収率５６％）。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ6.73(s,2H),5.39-5.30(m,6H),4.81-4.72(1H),3.98(q,J=6.3MHz,6H),3.70-3.62(m,1H),3.59-3.48(m,1H),2.60-2.50(m,1H),2.19-2.07(m,1H),2.06-1.95(m,13H),1.95-1.85(m,1H),1.84-1.69(m,6H),1.50-1.40(m,6H),1.38-1.20(m,60H),0.87(t,J=7.0MHz,9H)
化合物４６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000153
　化合物４５（５０１ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を用い、化合物３９の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更し、化合物４６を白色のアモルファス状固体として取得した（６４８ｍｇ、８６％）。得られた化合物４６は特に精製することなく、次の反応に用いた。
1H-NMR(500MHz,CDCl3): δ 8.94(s,1H),7.60(s,1H),7.40-7.35(m,2H),7.32-7.20(m,9H),6.83(d,J=9.5Hz,4H),6.78(s,2H),6.50(m,1H),5.62(m,1H),5.39-5.30(m,6H),4.60-4.55(m,1H),4.12(s,1H),4.00-3.90(m,6H),3.79(s,6H),3.71-3.55(m,2H),3.54-3.44(m,2H),2.63-2.46(m,1H),2.54-2.44(m,1H),2.40-2.30(m,1H),2.20-1.85(m,15H),1.84-1.60(m,6H), 1.65-1.20(m,69H),0.87(t,J=7.0MHz,9H)
化合物４７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000154
　化合物４６（６０４ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を用い、化合物４０の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更し、化合物４７を白色のアモルファス状固体として取得した（３５７ｍｇ、収率７４％）。得られた化合物４７は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物４８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000155
　化合物４７（３５７ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を用い、化合物４１の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更して、化合物４８を白色のアモルファス状固体として取得した（２５０ｍｇ、収率８６％）。得られた化合物４８は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物４９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000156
　化合物４８（３９７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を用い、化合物４２の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更して、化合物４９をを淡黄色のアモルファス状固体として取得した（４２３ｍｇ、収率７２％）。
化合物５０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000157
　窒素雰囲気下、化合物４９（４２３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（８．０ｍＬ）及びイソプロパノール（２．０ｍＬ）溶液へ、０℃で４Ｍ 水素化ホウ素リチウムのＴＨＦ溶液（０．２３ｍＬ、０．９０ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間攪拌後、１０％塩化アンモニウム水溶液（７．０ｍＬ）及び酢酸エチルを加えて攪拌し分液し、有機層を得た。水層から酢酸エチルで抽出後、前記有機層と合わせた有機層を濃縮し水を除去した後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで白色固体の化合物５０を得た。
化合物５１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000158
　窒素雰囲気下、3,4,5-tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid（化合物２、１．８８ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（９０ｍＬ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）、Methyl 4-Piperidinecarboxylate（３５１μＬ、２．６５ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ（１．１１ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．１２ｍL、２．６５ｍｍｏｌ）を混合し、室温で昇温して一晩攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物51を無色の油状物として取得した（１．５０ｇ、収率７１％）。 
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ6.56(s,2H),5.41-5.29(m,6H),4.15-4.09(m,1H),3.95(q,J=6.8MHz,6H),3.71(s,3H),3.11-2.91(m,2H),2.64-2.54(m,1H),2.07-1.88(m,13H),1.82-1.66(m,7H),1.51-1.41(m,6H),1.38-1.20(m,62H),0.88(t,J=6.8MHz,9H)
化合物５２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000159
　窒素雰囲気下、化合物51（１．５０ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（１４３ｍｇ、２５．４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）、メタノール（２．５ｍＬ）及びイオン交換水（５００μＬ）を混合し、６０℃で一晩攪拌した。反応の終了を確認後、６Ｍ塩酸（２ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物52を白色のアモルファス状固体として取得した（１．４５ｇ、収率９７％）。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ6.56(s,2H),5.41-5.29(m,6H),4.15-4.09(m,1H),3.95(q,J=6.5MHz,6H),3.71(s,3H),3.11-2.95(m,2H),2.69-2.60(m,1H),2.06-1.90(m,13H),1.82-1.70(m,8H),1.50-1.40(m,6H),1.39-1.20(m,60H),0.88(t,J=7.0MHz,9H)
化合物５３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000160
　窒素雰囲気下、化合物５２（４５０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、ＤＭＴ－ｄＴ（３９６ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（８９ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（１４０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を室温下添加し、同温度で３０時間攪拌した。反応の終了を確認後、溶媒を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで化合物５３を白色のアモルファス状固体として取得した（５７１ｍｇ、収率８５％）。 
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ7.99(s,1H),7.61(s,1H),7.39-7.36(m,2H),7.33-7.21(m,9H),6.84(d,J=8.5Hz,4H),6.56(s,2H),6.44-6.39(m,1H),5.50-5.45(m,1H),5.40-5.30(m,6H),4.06-4.10(m,1H),4.00-3.90(m,6J),3.79(m,6H),3.54-3.43(m,2H),3.10-2.90(m,2H),2.65-2.55(m,1H),2.50-2.40(m,2H),2.10-1.90(m,13H),1.84-1.69(m,6H),1.50-1.40(m,6H),1.40-1.20(m,66H),0.88(t,J=7.0MHz,9H)
化合物５４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000161
　化合物５３（５７１ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を用い、化合物４０の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更し、化合物５４を白色のアモルファス状固体として取得した（５２０ｍｇ、収率９９％）。化合物５４は特に精製することなく、次工程に使用した。
化合物５５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000162
　化合物５４（４６９ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を用い、化合物４１の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更して、化合物５５を白色のアモルファス状固体として取得した（５０１ｍｇ、収率７６％）。化合物５５は特に精製することなく、次工程に使用した。
化合物５６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000163
　化合物５５（５０１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を用い、化合物４２の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更して、化合物５６を淡黄色のアモルファス状固体として取得した（１４７ｍｇ、収率２０％）。
化合物９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000164
　化合物５６（１４７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を用い、化合物５０の合成と同様にして、但し、試薬や溶媒の量は適宜変更して、化合物９を得た。
化合物５８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000165
　窒素雰囲気下、化合物１（N4-Benzoyl-5’-O-(4,4’-dimethoxytrityl)-2’-deoxycytidine）（０．８６８ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（０．４６６ｇ，６．８５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７ｍＬ）混合液へ、ＴＢＤＰＳＣｌ（０．５２９ｍＬ）を室温で滴下した。室温で３．５時間攪拌した後、メタノール（０．２７７ｍＬ）を加えた。ＭＴＢＥ（７ｍＬ）及び飽和重曹水（７ｍＬ）を加えて攪拌後、ＭＴＢＥを洗浄液として用い析出した固体を濾去した。濾液を分液後、得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、白色固体の化合物５７を得た。化合物５７のＴＨＦ（９．７ｍＬ）溶液へ室温で７Ｍアンモニアのメタノール溶液（９．７ｍＬ）を加えた。室温で８８時間攪拌した。反応液を濃縮後、シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、白色固体の化合物５８（１．０６７ｇ、収率１０１％）を得た。
MS(ESI+):[M+H]+ 768.3470.
化合物５９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000166
　窒素雰囲気下、化合物２０（１２３ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）のトルエン（１．２３ｍＬ）溶液に、室温でピリジン（０．０１９６ｍＬ、０．２４３ｍｍｏｌ）及び塩化チオニル（０．０５８４ｍＬ、０．８１ｍｍｏｌ）を加えて、４５分攪拌した。反応液を濃縮後、トルエンで共沸を行い化合物２０の酸クロライドを調製した。
　窒素雰囲気下、別の反応容器に化合物５８（１３６．７ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）、トルエン（０．８６ｍＬ）及びピリジン（０．８６ｍＬ）を加え溶液とした。更にＤＩＰＥＡ（０．１４ｍＬ、０．８１ｍｍｏｌ）及びモレキュラーシーブス４Ａ（２００ｍｇ）を加えて、３０分攪拌した。上記で調製した化合物２０の酸クロライドを含む溶液を添加し、室温で４５分攪拌した。DMAP（２ｍｇ、０．０１６２ｍｍｏｌ）を加えて室温で更に２０分攪拌した後、４５℃へ昇温し１時間３０分攪拌した。反応液を室温付近へ冷却後、飽和重曹水及び酢酸エチルを加えて攪拌し、分液した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、粘性の高い無色油状物として化合物５９（１２４ｍｇ、収率５１％）を得た。
MS(ESI+):[M+H]+ 1508.9227.
化合物６１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000167
　窒素雰囲気下、化合物５９（２１２ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（２．５４ｍＬ）の溶液に、メルカプトコハク酸（１０５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸（０．０７８ｍＬ、１．０２ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温へ昇温しながら１時間１５分攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．０２０ｍＬ、０．２６１ｍｍｏｌ）を追加し、室温に昇温しながら３７分攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．０２０ｍＬ、０．２６１ｍｍｏｌ）を追加し、室温に昇温しながら３０分攪拌した。０℃に冷却後、反応液に飽和重曹水（３．１ｍＬ）を加え、室温に昇温しながら攪拌後、分液した。得られた有機層を飽和食塩水（２ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮し、粘性の高い無色油状物として６０（１８０．６ｍｇ）を得た。得られた化合物６０に対して、酢酸エチル（１．８ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。窒素雰囲気下、化合物６０に対して酢酸エチル（２．５ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（１８０ｍｇ）を加えて３０分攪拌した。得られた溶液にＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（１３０ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（３３．９ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で４５分攪拌した。ＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（２６．１ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（１６．５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えて、室温で４０分攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、１．８９ｍＬ）を加え、室温に昇温しながら４０分攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加えて室温へ昇温しながら攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和重曹水（２ｍL）及び飽和食塩水（２ｍＬ）で洗浄後、硫酸マグネシウムを用いて乾燥し濃縮した。得られた残渣に酢酸エチル（２．５ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（１０５ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．０９６ｍＬ、１．２６ｍｍｏｌ）を加えた後、室温へ昇温しながら１時間攪拌した。反応液を０℃へ冷却し、飽和重曹水（２．８ｍＬ）を加えて室温に昇温しながら攪拌後、分液した。得られた有機層を飽和食塩水（１ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮乾固し、白色固体の化合物６１（２０７ｍｇ、収率９３．６％）を得た。得られた化合物６１は特に精製することなく、次の反応に用いた。
MS(ESI+):[M+H]+ 1563.8636.
化合物６２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000168
　化合物６１（１９８ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（２ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。窒素雰囲気下、化合物６１に対して酢酸エチル（２．４ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（２００ｍｇ）を加えて３０分攪拌した。得られた溶液にＤＭＴｒ－ｄＣ－ＣＥホスホロアミダイト（１５７ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（３４ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間３０分攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、１．６９ｍＬ）を加えて室温に昇温しながら２３分攪拌した。反応液を０℃に冷却後し１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２．５ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和重曹水（２ｍＬ）で洗浄後、飽和食塩水（１ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣に酢酸エチル（２ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（９８ｍｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．０７６５ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を加えた後、室温へ昇温しながら１時間攪拌した。反応液を０℃へ冷却し、飽和重曹水（２．５ｍＬ）を加えて室温に昇温しながら攪拌後、分液した。得られた有機層を飽和食塩水（１ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮乾固し、白色固体の化合物６２（２４８．７ｍｇ、収率９４．７％）を得た。得られた化合物６２は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物６３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000169
　化合物６２（２３８．７ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１．７ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。窒素雰囲気下、化合物７に対して酢酸エチル（２．４ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（２４０ｍｇ）を加えて４０分攪拌した。得られた反応液にＤＭＴｒ－ｄA－ＣＥホスホロアミダイト（１５３．６ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（３５．２ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間攪拌した。更に、ＤＣＩ（１４．１ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３０分攪拌した。反応の完結を確認後、Boc-Ser-OH（１７．１ｍｇ、０．０８３３ｍｍｍｍｏｌ）を加えて１８分攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、１．６１ｍＬ）を加えて室温に昇温しながら１９分攪拌した。反応液を０℃へ冷却し、１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２．４ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和重曹水（２ｍＬ）で洗浄後、飽和食塩水（１ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣に酢酸エチル（２．９ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（８９．３ｍｇ、０．５９５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．１１１ｍＬ、１．４５ｍｍｏｌ）を加えた後、室温へ昇温しながら１時間攪拌した。反応液を０℃へ冷却し、飽和重曹水（２．８ｍＬ）を加えて室温に昇温しながら攪拌後、分液した。得られた有機層を飽和食塩水（２ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮乾固し、淡黄色固体の化合物６３（２７９．３ｍｇ、収率９４．６％）を得た。得られた化合物６３は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物６４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000170
　化合物６３（２６９．３ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１．５ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。窒素雰囲気下、化合物６３に対して酢酸エチル（２．４ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（２４０ｍｇ）、ＤＭＴｒ－ｄT－ＣＥホスホロアミダイト（１２４．４ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（３９．３ｍｇ、０．３３３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で５２分攪拌した。反応の完結を確認後、Ｂｏｃ－Ｓｅｒ－ＯＨ（１７．１ｍｇ、０．０８３３ｍｍｏｌ）を加えて２４分攪拌した。反応液を０℃へ冷却後、０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、１．５５ｍＬ）を加えて室温に昇温しながら１０分攪拌した。反応液を０℃へ冷却し、１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２．５ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和重曹水（２．４ｍＬ）で２回洗浄後、飽和食塩水（１．２ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／メタノール）で精製することにより、淡黄色の固体として化合物６４（３２５．４ｍｇ、収率９５．４％）を得た。
MS(ESI+):[M+H]+ 1570.1425.
化合物６４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000171
　化合物６４（１０．２ｍｇ、０．００３２５ｍｍｏｌ）に対して、７Ｍアンモニア・メタノール溶液（０．３ｍＬ）及びＴＨＦ（０．３ｍＬ）を加えて、室温で４０時間攪拌した。反応液のＬＣ―Ｍass分析を行い、化合物６５が主生成物であることを確認した。
MS(ESI+):[M+H]+ 1978.5303.
化合物６６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000172
　窒素雰囲気下、Methyl 2,4-Dihydroxybenzoate（１．２０ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３．９５ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡｃ（２４ｍＬ）及びオレイルブロミド（５．２０ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）を室温にて混合し、８０℃に昇温した後３時間攪拌した。オレイルブロミド（２．３６ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）を８０℃にて混合し、２時間攪拌した。反応終了後、０℃に氷冷し、ｎ－ヘキサン（２４ｍＬ）、水（２４ｍＬ）及び酢酸エチル（２４ｍＬ）を添加し水層を分離した。分離した有機層を水（２４ｍＬ）で３回洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物６６の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物６６を油状物として収率９６％（収量４．５９ｇ、６．８６ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.88 - 7.77 (m, 1H), 6.45 (s, 2H), 5.38 - 5.32 (m, 4H), 3.98 (q, J = 6.9 Hz, 4H), 3.84 (s, 3H), 2.05 - 1.97 (m, 8H), 1.87 - 1.75 (m, 4H), 1.53 - 1.41 (m, 4H), 1.33 - 1.24 (m, 40H), 0.91 - 0.84 (m, 6H)
13C-NMR (500MHz, CDCl3) δ 166.4, 163.7, 160.9, 133.8, 129.9, 112.4, 105.1, 100.3, 68.9, 68.2, 51.5, 31.9, 29.8, 29.8, 29.5, 29.5, 29.5, 29.3, 29.2, 29.3, 27.2, 27.2, 26.0, 26.0, 22.7, 14.1
化合物６７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000173
　窒素雰囲気下、化合物６６（４．５２ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２２．６ｍＬ）溶液へ、エタノール（２２．６ｍＬ）及び４Ｍ　水酸化ナトリウム（６．７５ｍＬ）を加えた。その後７０℃に加温した後、２時間攪拌した。反応終了後、０℃に氷冷し、２Ｍ　塩酸（１５ｍＬ）、酢酸エチル（９０ｍＬ）、水（９０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（９０ｍＬ）を加えて水層を分離した。分離した有機層を水（９０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物６７の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物６７を油状物として収率９８％（収量４．３５ｇ、６．６４ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.75 (br s, 1H), 8.11 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.38 - 5.32 (m, 4H), 4.19 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.01 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.02 (br s, 8H), 1.90 (quin, J = 6.9 Hz, 2H), 1.80 (quin, J = 6.8 Hz, 2H), 1.51 - 1.38 (m, 4H), 1.34 - 1.24 (m, 40H), 0.88 (br t, J = 6.6 Hz, 6H)
13C-NMR (500MHz, CDCl3) δ 165.3, 164.6, 159.0, 135.5, 130.0, 130.0, 129.8, 129.7, 110.3, 107.1, 99.8, 70.2, 68.6, 31.9, 29.8, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 29.5, 29.1, 28.9, 27.2, 27.2, 27.2, 26.0, 25.9, 22.7, 14.1
化合物６８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000174
　窒素雰囲気下、０℃で化合物６７（４．３０ｇ、６．５６ｍｍｏｌ）、４－ピペリジンカルボン酸メチル（１．８８ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１.７７ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．５７ｍＬ、２６．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４３ｍＬ）溶液へ、１－（３－Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）－３－ｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ　Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ［ＥＤＣＩ］（２．５２ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下４時間攪拌した。ＥＤＣＩ（１．２６ｇ、６．５６ｍｍｏl）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（０.８６ｇ、６．５６ｍｍｏｌ）を加え、更に２時間攪拌した。酢酸エチル（４３ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（４３ｍＬ）及び水（４３ｍＬ）を加えて攪拌後、水層を分離した。得られた有機層を水（４３ｍＬ）で３回洗浄後、濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物６８を油状物として収率９２％（収量４．６９ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.84-0.91 (m, 6H), 1.24-1.33 (m, 35H), 1.43 (s, 3H), 1.72-1.81 (m, 5H), 1.96-2.05 (m, 9H), 2.50-2.55 (m, 1H), 2.93 (br t, J = 12.14 Hz, 1H), 3.04 (br s, 1H), 3.49-3.57 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.90-3.99 (m, 3H), 4.59 (br t, J = 14.66 Hz, 1H), 5.31-5.38 (m, 4H), 6.40-6.48 (m, 2H), 7.11 (br d, J = 8.51 Hz, 0.3H) , 7.16 (br d, J = 8.20 Hz, 0.7H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.13, 22.69, 26.00, 26.05, 27.21, 27.24, 28.04, 29.17, 29.24, 29.34, 29.38, 29.48, 29.54, 29.78, 29.78, 30.33, 31.92, 41.04, 4.18, 51.83, 68.19, 68.34, 68.53, 99.82, 9.86 105.44, 05.44, 125.53, 129.81, 130.00, 168.00, 174.79.
化合物６９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000175
　窒素雰囲気下、化合物６８（４．６０ｇ、５．９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２１ｍＬ）溶液へ、４Ｍ　水酸化ナトリウム（５．９ｍＬ、２３．５８ｍｍｏｌ）を加え、室温下１時間攪拌した。その後、エタノール（２１ｍＬ）を加え、７０℃に昇温し２時間攪拌した。反応終了後、０℃に氷冷し、２Ｍ　塩酸　（１８．４ｍＬ）、酢酸エチル（２１ｍＬ）、水（２１ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２１ｍＬ）を加えて水層を分離した。分離した有機層を水（２１ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物６９の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物６９をアモルファス固体として収率９９％（収量４．６０ｇ、５．９０ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.87 (td, J = 7.01, 1.73 Hz, 6H), 1.22-1.35 (m, 42H), 1.39-1.45 (m, 2H), 1.49-1.60 (m, 1H), 1.83-1.93 (m, 1H), 1.97-2.04 (m, 8H), 2.23-2.33 (m, 1H), 2.65-2.76 (m, 1H), 2.87-2.98 (m, 1H), 3.42 (br d, J = 10.09Hz, 1H), 
3.85 (br s, 4H), 4.48 (br d, J = 8.83 Hz, 1H), 5.31-5.38 (m, 4H), 7.14 (br d, J = 7.88 Hz, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 22.69, 25.79, 26.19, 27.25, 29.04, 29.12, 29.33, 29.39, 29.59, 29.67, 29.70, 29.82, 29.93, 30.32, 31.92, 42.23, 44.19, 47.39, 68.14, 68.38, 99.61, 105.54, 118.16, 129.56, 129.75, 129.90, 129.95, 155.92, 161.28, 168.20, 182.53.
化合物７０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000176
　窒素雰囲気下、０℃で化合物６９（４．５０ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）、１－（３－Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）－３－ｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ　Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ［ＥＤＣＩ］（２．２５ｇ、１１．７５ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１．８０ｇ、１１．７５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．０４ｇ、２３．４９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４５ｍＬ）溶液へ、５’－Ｏ－（４，４’－Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（２．８８ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温し２４時間攪拌した。反応混合物にＥＤＣＩ（２５３ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（６９１μＬ、３．９７ｍｍｏｌ）、５’－Ｏ－（４，４’－Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（６．４０ｇ、１１．７５ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。反応終了後、酢酸エチル（９０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（４５ｍＬ）及び水（４５ｍＬ）を加えて攪拌後、水層を分離した。得られた有機層を飽和重曹水（２０ｍＬ）で３回洗浄し、水（２０ｍＬ）で洗浄後、濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物７０を油状物として収率９９％（収量８．１０ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）で得た。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.83-0.91 (m, 6H), 1.23-1.34 (m, 38H), 1.36 (br s, 7H), 1.37-1.52 (m, 5H), 1.65-1.81 (m, 7H), 1.97-2.05 (m, 9H), 2.39-2.48 (m, 2H), 2.50-2.58 (m, 1H), 2.85-2.94 (m, 1H), 3.43-3.52 (m, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.88-4.00 (m, 4H), 4.04-4.09 (m, 1H), 4.65 (br s, 1H), 5.31-5.38 (m, 4H), 5.47 (br s, 1H), 6.42 (br s, 2H), 6.47(br d, J = 8.20 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.51 Hz, 4H), 7.23-7.31 (m, 8H), 7.37 (br d, J = 7.57 Hz, 2H), 7.59-7.62 (m, 1H), 8.21-8.32 (m, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 11.59, 14.12, 22.68, 26.04, 27.20, 27.22, 29.24, 29.28, 29.32, 29.38, 29.47, 29.53, 29.77, 31.90, 55.26, 68.20, 76.90, 77.12, 84.30, 87.26, 105.50, 113.34, 27.28, 128.06, 128.13, 129.79, 129.80, 130.00, 130.09, 135.33, 158.82.
化合物７１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000177
　窒素雰囲気下、化合物７０（４．００ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（４０ｍＬ）溶液にメルカプトコハク酸（２．３２ｇ、１５．４７ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（２．３７ｍＬ、３０．９ｍｍｏｌ）を添加し、氷冷下４時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４０ｍＬ）で４回、１０％ＮａＣｌ水溶液（４０ｍＬ）で１回洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物７１をアモルファス状固体として取得した（３．０９ｇ、収率１００％）。得られた化合物７１は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.85-0.91 (m, 6H), 1.24-1.46 (m, 48H), 1.73-1.80 (m, 4H), 2.02 (br s, 10H), 2.31-2.46 (m, 2H), 2.57 (br s, J = 10.40 Hz, 1H), 2.89-2.98 (m, 1H), 3.57 (br s, 1H), 3.88-4.06 (br s, 4H), 4.60-4.69 (m, 1H), 5.32-5.39 (m, 5H), 6.22-6.26 (m, 1H), 6.42 (br s, 1H), 6.48 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.18 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.53-7.56 (m, 1H), 8.54-8.65 (m, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 12.58, 14.12, 22.68, 25.95, 26.04, 27.20, 27.22, 29.16, 29.24, 29.32, 29.38, 29.47, 29.52, 29.77, 31.90, 62.59, 68.20, 75.09, 85.20, 85.93, 105.51, 111.44, 129.79, 130.00, 150.31.
化合物７２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000178
　化合物７１（５００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（１０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物７１にモレキュラーシーブス３Ａ（５００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥ ホスホロアミダイト（７５２ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（５ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１９７ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を加え、室温下、２時間攪拌した。反応の完結を確認後、０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、７．６ｍＬ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７．５ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後、分液した。有機層を１０％食塩水（７．５ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（５ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（５ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（３７９ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３９ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）を加え、同温度で３時間攪拌した。反応の終了を確認後、水（７．５ｍｍＬ）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を飽和重曹水（７．５ｍＬ）で３回、１０％ＮａＣｌ水溶液（７．５ｍＬ）で１回洗浄した。得られた有機層を濃縮し、化合物７２をアモルファス状固体として取得した（４７０ｍｇ、収率６９％）。得られた化合物７２は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.88 (t, J = 6.78 Hz, 6H), 1.25-1.48 (m, 44H), 1.75-1.82 (m, 4H), 1.86-1.93 (m, 3H), 2.01 (br s, 8H), 2.38-2.43 (m, 2H), 2.43-2.62 (m, 3H), 2.82 (br t, J = 5.36 Hz, 2H), 2.87-2.97 (m, 1H), 3.50-3.64 (m, 1H), 3.84-4.01 (m, 6H), 4.14 (br s, 1H), 4.23 (br dd, J = 7.41, 2.36 Hz, 1H), 4.29-4.36 (m, 2H), 4.39 (br s, 2H), 4.62-4.70 (m, 1H), 5.18-5.24 (m, 1H), 5.30-5.40 (m, 5H), 6.12-6.21 (m, 1H), 6.25 (br d, J = 6.62 Hz, 1H), 6.42 (br s, 1H), 6.48 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.15-7.21 (m, 1H), 7.35 (br dd, J = 3.15, 1.89 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 6.18 Hz, 1H), 9.03 (br s, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 12.52, 14.12, 22.68 26.05, 2720, 27.22, 29.25, 29.28, 29.32, 29.38, 29.48, 29.52, 29.77, 31.91, 41.02, 68.23, 76.89, 76.90, 105.57, 129.89.
HRMS (ESI): m/z calculated for C72H111N6O16P: [M + H]+ : 1347.7794; found, 1347.7795
化合物７３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000179
　化合物７２（４５０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（９．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物７２に対して、モレキュラーシーブス３Ａ（４５０ｍｇ）及びＤＭＴ－ｄＣ－ＣＥ ホスホロアミダイト（４１８ｍｇ、０．５０１ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（４．５ｍＬ）を加えて室温で１時間攪拌した。ＤＣＩ（１３０ｍｇ、１．１０２ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、５．０ｍＬ）を加え、１時間攪拌した。１ＭＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７．０ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後。濾液を分液した。有機層を１０％食塩水（７．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。濃縮した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（９．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（４．５ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（２５１ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．３８３ｍＬ、５．０１ｍｍｏｌ）を加えた。同温度で３時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（７．５ｍＬ）を加えて攪拌し分液した。得られた有機層を飽和重曹水（７．５ｍＬ）で更に２回洗浄、１０％食塩水（７．５ｍＬ）でそれぞれ洗浄した。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固し、化合物７３を淡黄色固体として取得した（５６０ｍｇ、９４％）。得られた化合物７３は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.85-0.90 (m, 6H), 1.11-1.15 (m, 1H), 1.22-1.35 (m, 18H), 1.36-1.48 (m, 2H), 1.70-1.92 (m, 5H), 1.98-2.04 (m, 4H), 2.40 (bd dd, J = 6.94, 4.41 Hz, 1H), 2.52-2.60 (m, 1H), 2.83 (br s, 2H), 2.86-2.94 (m, 1H), 3.51-3.60 (m, 1H), 3.84-4.00 (m, 3H), 4.06-4.22 (m, 1H), 4.32 (br s, 4H), 4.59-4.67 (m, 1H), 5.22 (br s, 1H), 6.14-6.26 (m, 1H), 6.48 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.40-７.61 (m, 2H), 7.93 (br d, J= 7.57 Hz, 1H), 7.93 (br d, J = 7.57 Hz, 1H), 8.34 (br dd, J = 17.18, 8.04 Hz, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 12.41, 14.12, 19.25, 19.77, 19.77, 19.81, 22.68, 25.92, 26.06, 27.22, 27.22, 29.14, 29.26, 29.31, 29.40, 29.49, 29.52, 29.66, 29.77, 31.91, 40.99, 62.84, 68.25, 105.57, 127.38, 128.02, 128.02, 128.63, 128.83, 129.90, 168.18.
HRMS (ESI): m/z calculated for C91H130N10O23P2: [M + H]+ : 1793.8786; found, 1793.8833
化合物７４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000180
　化合物７３（５５０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１１．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物７３に対して、モレキュラーシーブス３Ａ（５５０ｍｇ）及びＤＭＴ－ｄＧ－ＣＥ ホスホロアミダイト（５１５ｍｇ、０．６１３ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（６．０ｍＬ）を加えて室温で１時間攪拌した。ＤＣＩ（１２３ｍｇ、０．６８７ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、４．０ｍＬ）を加え、１時間攪拌した。１ＭＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１１．０ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後。濾液を分液した。有機層を１０％食塩水（１１．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。濃縮した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（１１．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（６．０ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（２３０ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．２３５ｍＬ、３．０７ｍｍｏｌ）を加えた。その後室温に昇温し２時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（９．０ｍＬ）を加えて攪拌し分液した。得られた有機層を飽和重曹水（９．０ｍＬ）で更に２回洗浄、飽和食塩水（９．０ｍＬ）でそれぞれ洗浄した。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固し、化合物７４を淡黄色固体として取得した（５００ｍｇ、７３％）。得られた化合物７４は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.84-.90 (m, 6H), 1.16-1.24 (m, 5H), 1.24-1.33 (m, 21H), 1.34-1.47 (m, 6H), 1.98-2.04 (m, 5H), 2.08-2.26 (m, 3H), 2.33-2.41 (m, 1H), 2.49-2.61 (m, 1H), 2.73-2.96 8m, 5H), 3.50-3.62 (m, 1H), 3.74-3.84 (m, 1H), 3.88-3.95 (m, 2H), 3.98 (br s, 1H), 4.09-4.19 (m, 1H), 4.24 (br d, J = 5.36 Hz, 1H), 4.32 (br s, 3H), 4.41-4.51 (m, 1H), 4.62 (br dd, J = 3.31, 2.05 Hz, 1H), 5.15-5.30 (m, 1H), 5.30-5.39 (m, 3H), 6.12-6.26 (m, 1H), 6.42 (s, 1H), 6.47 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.40-7.58 (m, 2H), 7.89-7.94 (m, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 22.67, 26.06, 27.22, 29.25, 29.31, 29.41, 29.48, 29.51, 29.76, 30.33, 31.90, 129.76, 129.79, 130.00, 130.00.
化合物７５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000181
　化合物７４（４８０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１０．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物７４に対して、モレキュラーシーブス３Ａ（４８０ｍｇ）及びＤＭＴ－ｄA－ＣＥ ホスホロアミダイト（４１３ｍｇ、０．４８１ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（５．０ｍＬ）、THF（５．０ｍL）を加えて室温で１時間攪拌した。ＤＣＩ（９４．６ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２時間攪拌した。ＤＭＴ－ｄA－ＣＥ ホスホロアミダイト（１３８ｍｇ、０．１６０ｍｍｏｌ）、ＤＣＩ（３１．５ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）を加えて、室温で更に３０時間攪拌した。ＤＭＴ－ｄA－ＣＥ ホスホロアミダイト（２７５ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）、ＤＣＩ（３１．５ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）を加えて、室温で更に６０時間攪拌した。反応後、反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、４．２ｍＬ）を加え、１４時間攪拌した。１ＭＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７．５ｍＬ）、THF（４．５ｍL）を加え、攪拌した。不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後。濾液を分液した。有機層を１０％食塩水（７．５ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。濃縮した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（１０．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（１０．０ｍＬ）及びメルカプトコハク酸（３２１ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．６５４ｍＬ、８．５４ｍｍｏｌ）を加えた。同温度で２時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（７．５ｍＬ）、THF（４．５ｍL）を加えて攪拌し分液した。得られた有機層を飽和重曹水（７．５ｍＬ）で更に２回洗浄、１０％食塩水（７．５ｍＬ）でそれぞれ洗浄した。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固し、化合物７５を淡黄色固体として取得した（７２０ｍｇ、９９％）。得られた化合物７５は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.86 (br d, J = 6.62 Hz, 12H), 1.18-1.40 (m, 78H), 1.43 (s, 14H), 1.78-1.93 (m, 6H), 2.01 (br s, 12H), 2.27 (s, 2H), 2.56-2.63 (m, 3H), 2.70-2.93 (m, 12H), 3.69-3.87 (m, 6H), 3.87-3.93 (m, 5H),4.30-4.45 (m, 8H), 4.46-4.68 (m, 4H), 5.28 (br s, 1H), 5.35 (br s, 6H), 6.98 (s, 1H), 7.12-7.25 (m, 2H), 7.39-7.54 (m, 6H), 7.56 (br s, 4H), 7.64-7.68 (m, 2H), 7.74-7.89 (m, 2H), 7.91-7.97 (m, 1H), 8.02 (br d, J = 6.94 Hz, 5H), 8.09 (br d, J = 8.83 Hz, 1H), 8.40 (br s, 2H), 8.78 (br s, 2H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 19.19, 21.19, 22.67, 26.08, 27.22, 27.22, 29.26, 29.31, 29.43, 29.51, 29.77, 30.33, 31.90, 34.24, 55.26, 67.98, 113.18, 113.57, 125.52, 127.78, 127.85, 128.26, 129.15, 129.75, 129.79, 129.99, 132.58, 135.80, 151.52.
HRMS (ESI): m/z calculated for C128H170N22O36P4: [M + 2H]2+ : 1358.5628; found, 1358.5629 
化合物７６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000182
　化合物７５（５６０ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１１．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。窒素雰囲気下、化合物７５に対して、モレキュラーシーブス３Ａ（５６０ｍｇ）及びＤＭＴ－ｄT－ＣＥ ホスホロアミダイト（２３０ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（１１．０ｍＬ）、THF（９．０ｍL）を加えて室温で１時間攪拌した。ＤＣＩ（７３.０ｍｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で６時間攪拌した。ＤＭＴ－ｄT－ＣＥ ホスホロアミダイト（１１５ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）、ＤＣＩ（７３.０ｍｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で更に１８時間攪拌した。ＤＭＴ－ｄT－ＣＥ ホスホロアミダイト（１１５ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）、ＤＣＩ（７３.０ｍｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で更に７時間攪拌した。ＤＭＴ－ｄT－ＣＥ ホスホロアミダイト（７６．７ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、ＤＣＩ（１１０ｍｇ、０．９２７ｍｍｏｌ）を加えて、室温で更に９０時間攪拌した。反応後、反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、４．1ｍＬ）を加え、２時間攪拌した。１ＭＮａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７．５ｍＬ）、THF（５．６ｍL）を加え、攪拌した。不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後。濾液を分液した。有機層を飽和食塩水（７．５ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（１１．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（１１．０ｍＬ）、THF（５．５ｍL）及びメルカプトコハク酸（３０９ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．３１５ｍＬ、４．１２ｍｍｏｌ）を加えた。同温度で３時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（７．５ｍＬ）を加えて攪拌し、分液した。得られた有機層を飽和重曹水（８．０ｍＬ）で更に２回洗浄、１０％食塩水（８．０ｍＬ）でそれぞれ洗浄した。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固し、化合物７６を淡黄色固体として取得した（５００ｍｇ、７９％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.86 (br d, J = 6.94 Hz, 6H), 1.19-1.38 (m, 40H), 1.41 (dt, J = 4.10, 2.05 Hz, 4H), 1.43 (s, 8H), 2.01 (br s, 4H), 2.27 (s, 4H), 2.48-2.70 (m, 12H), 2.75-2.83 (m, 4H), 3.80 (s, 4H), 3.83-3.99 (m, 1H), 4.09-4.14 (m, 1H), 5.32-5.36 (m, 1H), 6.36-6.44 (m, 1H), 6.68-6.85 (m, 1H), 6.93-6.98 (m, 1H), 7.09-7.32 (m, 4H), 7.34-7.57 (m, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 21.19, 22.68, 23.86, 26.08, 27.22, 27.22, 29.26, 29.31, 29.43, 29.52, 29.70, 29.77, 30.34, 31.90, 34.07, 34.24, 55.26, 70.65, 81.45, 113.18, 113.57, 125.52, 127.08, 127.78, 127.85, 128.19, 128.26, 129.15, 129.77, 129.80, 130.00, 135.80, 139.49, 147.35, 158.66.
HRMS (ESI): m/z calculated for C141H186N25O43P5: [M + 2H]2+ : 1537.0990; found, 1537.0990 
化合物７７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000183
　化合物７６（５００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（５ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物７６にモレキュラーシーブス３Ａ（５００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥ ホスホロアミダイト（５６４ｍｇ、０．７５７ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（５ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１９７ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を加え、室温下、１８時間攪拌した。反応終了を確認後、（（dimethylamino-methylidene）amino-3H-1,2,4-dithiazaoline）-3-thione（１３５ｍｇ、０．６５６mmol）を加え、室温下、２４時間攪拌した。反応の完結を確認後、２－プロパノール（１８．２ｍｇ、０．３０３mmol）を加えて同温度で３０分攪拌した。飽和重曹水（５ｍＬ）を加え、不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後、分液した。有機層を飽和食塩水（５．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（５ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（５ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（３７９ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３９ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温したのち７時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（７．５ｍｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を飽和重曹水（７．５ｍＬ）で更に３回、１０％ＮａＣｌ水溶液（７．５ｍＬ）で１回洗浄した。有機層に硫酸ナトリウムを加えて脱水したのち、減圧下にて濃縮乾固し、化合物７７を淡黄色固体として取得した（５９０ｍｇ、収率８６％）。得られた化合物７７は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.88 (t, J = 6.94 Hz, 6H), 1.24-1.47 (m, 45H), 1.50-1.57 (m, 1H), 1.71-1.84 (m, 9H), 1.88-1.95 (m, 4H), 2.01 (br s, 8H), 2.30-2.54 (m, 4H), 2.55-2.63 (m, 1H), 2.75-2.86 (m, 3H), 2.88-2.98 (m, 1H), 3.01-3.12 (m, 1H), 3.54-3.60 (m, 1H), 3.84-3.97 (m, 6H), 4.15 (br s, H), 4.24 (br s, 1H), 4.26-4.37 (m, 3H), 4.41 (br s, 1H), 4.65 (br s, H), 5.20-5.27 (m, H), 5.29-5.39 (m, 5H), 6.14-6.20 (m, 1H), 6.29 (br s, 1H), 6.42 (br s, 1H), 6.48 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.19 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.35 (br d, J = 7.57 Hz, 1H), 8.99 (br s, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 12.54, 14.11, 22.67, 26.05, 27.21, 27.21, 9.24, 29.28, 29.31, 29.38, 29.47, 29.52, 29.77, 31.90, 40.93, 41.00, 62.14, 62.79, 62.96, 68.23, 86.66, 105.56, 111.44, 111.83, 129.89, 136.59, 150.41, 156.12, 163.52, 63.60, 168.13.
HRMS (ESI): m/z calculated for C72H111N6O15PS: [M + H]+ : 1363.7566; found, 1363.7658
化合物７８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000184
　化合物７７（５８０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（５．８ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物７７にモレキュラーシーブス３Ａ（５８０ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＣ－ＣＥ ホスホロアミダイト（７０９ｍｇ、０．８５１ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（５．８ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（２００ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）を加え、室温下、１８時間攪拌した。（（dimethylamino-methylidene）amino-3H-1,2,4-dithiazaoline）-3-thione（１１４ｍｇ、０．５５３mmol）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、２－プロパノール（１８ｍｇ、０．２５５mmol）を加えて同温度で３０分攪拌した。飽和重曹水（５．８ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後、分液した。有機層を飽和食塩水（５．８ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（５．８ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（５．８ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（３１９ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３３ｍＬ、４．２５ｍｍｏｌ）を加え、室温にン昇温したのち２時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（５．８ｍＬ）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を飽和重曹水（５．８ｍＬ）で３回、飽和ＮａＣｌ水溶液（５．８ｍＬ）で１回洗浄した。有機層に硫酸ナトリウムを加えて脱水したのち、減圧下にて濃縮乾固し、化合物７８を淡黄色固体として取得した（７００ｍｇ、収率９０％）。得られた化合物７８は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.88 (br t, J = 6.46 Hz, 6H), 1.23-1.44 (m, 50H), 1.72-1.81 (m, 8H), 1.83-1.97 (m, 12H), 1.98-2.04 (m, 8H), 2.32-2.54 (m, 4H), 2.54-2.62 (m, 2H), 2.68-2.84 (m, 6H), 2.84-2.97 (m, 3H), 3.47-3.64 (m, 1H), 3.73-3.82 (m, 4H), 3.85-4.01 (m, 6H), 4.13-4.19 (m, 1H), 4.19-4.26 (m, 1H), 4.29-4.48 (m, 8H), 4.63 (br d, J = 3.78 Hz, 1H), 5.17 (br s, 1H), 5.19-5.24 (m, 1H), 5.31-5.38 (m, 4H), 6.15-6.18 (m, 1H), 6.19-6.28 (m, 2H), 6.42 (br s, 1H), 6.48 (br d, J = 8.20 Hz, 1H), 6.79-6.87 (m, 2H), 7.15-7.25 (m, 2H), 7.27-7.45 (m, 4H), 7.45-7.62 (m, 5H), 7.89-7.97 (m, 2H), 8.32 (br dd, J = 7.25, 3.78 Hz, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 12.48, 14.12, 19.56, 22.68, 26.06, 27.23, 29.40, 29.26, 29.26, 29.31, 29.49, 29.49, 29.52, 29.78, 31.91, 32.61, 55.26, 55.33, 68.25, 113.19, 113.53, 127.78, 127.85, 127.96, 127.98, 128.63, 128.70, 128.86, 129.00, 129.30, 129.90.
HRMS (ESI): m/z calculated for C91H130N10O21P2S2: [M + H]+ : 1825.8329; found, 1825.8406
化合物７９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000185
　化合物７８（６８０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（７ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物７８にモレキュラーシーブス３Ａ（６８０ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＧ－ＣＥ ホスホロアミダイト（６２６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（７ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１７６ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を加え、室温下、２時間攪拌した。反応の完結を確認後、（（dimethylamino-methylidene）amino-3H-1,2,4-dithiazaoline）-3-thione（９９．４ｍｇ、０．４８mmol）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応の完結を確認後、２－プロパノール（２０ｍｇ、０．２２mmol）を加えて同温度で３０分攪拌した。メルカプトコハク酸（２８０ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．２９ｍＬ、３．７２ｍｍｏｌ）を加え、その後室温に昇温し同１５時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（６．８ｍｍＬ）を加え、有機層を分離した。有機層を飽和重曹水（７．５ｍＬ）で更に３回、飽和ＮａＣｌ水溶液（６．８ｍＬ）で１回洗浄した。得られた有機層を濃縮乾固し、化合物７９をアモルファス状固体として取得した（８３０ｍｇ、収率９７％）。得られた化合物７９は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.84-0.91 (m, 6H), 1.17-1.35 (m, 40H), 1.37-1.46 (m, 2H), 1.71-1.82 (m, 5H), 1.88-1.98 (m, 8H), 1.98-2.03 (m, 6H), 2.06-2.14 (m, 1H), 2.32-2.53 (m, 3H), 2.55-2.62 (m, 1H), 2.70-2.80 (m, 2H), 2.81-2.90 (m, 5H), 2.95-3.01 (m, 1H), 3.25 (d, J = 14.50 Hz, 1H), 3.75-3.96 (m, 7H), .14-4.26 (m, 1H), 4.34 (br s, 5H), 4.39-4.44 (m, 1H), 4.46-4.54 (m, 1H), 4.62 (br dd, J 7.09, 5.20 Hz, 1H), 5.12-5.31 (m, 2H), 5.31-5.39 (m, 3H), 6.12-6.28 (m, 2H), 6.82-6.87 (m, 1H), 7.15-7.20 (m, 1H), 7.28-7.49 (m, 4H), 7.51-7.58 (m, 1H), 7.70-7.89 (m, 2H), 8.02 (br s, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 19.62, 22.68, 26.06, 27.23, 29.18, 29.26, 29.31, 29.41, 29.49, 29.52, 29.67, 29.77, 31.91, 32.61, 55.33, 76.58, 113.53, 127.38, 127.96, 127.98, 128.26, 128.64, 129.30, 129.90.
HRMS (ESI): m/z calculated for C108H151N16O27P3S3: [M + H]+ : 2293.9310; found, 2293.9310
化合物８０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000186
　化合物７９（８００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（８ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物７９にモレキュラーシーブス３Ａ（８００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄA－ＣＥ ホスホロアミダイト（５９８ｍｇ、0.７０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（８ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１６５ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を加え、室温下、２時間攪拌した。ＤＭＴ－ｄA－ＣＥ ホスホロアミダイト（１５０ｍｇ、0.１８ｍｍｏｌ）、ＤＣＩ（４１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加え、更に２時間攪拌した。反応の完結を確認後、（（dimethylamino-methylidene）amino-3H-1,2,4-dithiazaoline）-3-thione（９３．１ｍｇ、０．４５mmol）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応の完結を確認後、２－プロパノール（１８ｍｇ、０．２１mmol）を加えて同温度で３０分攪拌した。飽和重曹水（８．０ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物を酢酸エチルで洗い込みながら濾去した後、分液した。有機層を飽和重曹水（８．０ｍL）で更に３回、飽和食塩水（８．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。有機層を減圧下、濃縮した。残渣に酢酸エチル（８ｍL）を加えて共沸を３回実施した。残渣に酢酸エチル（７．０ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（１７０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．１７ｍＬ、２．２７ｍｍｏｌ）を加え、同温度で２時間攪拌した。反応の終了を確認後、飽和重曹水（７．０ｍＬ）、THF（３．５ｍL）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を飽和重曹水（５．８ｍＬ）で更に２回、飽和ＮａＣｌ水溶液（７．０ｍＬ）で１回洗浄した。有機層に硫酸ナトリウムを加えて脱水したのち、減圧下にて濃縮乾固した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒、酢酸エチル／メタノール）で精製し、化合物８０を淡黄色固体として取得した（４８０ｍｇ、収率５０％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.87 (br t, J = 6.46 Hz, 6H),1.10-1.33 (m, 54H), 1.34-1.46 (m, 6H), 1.7-1.80 (m, 2H), 1.81-1.99 (m,6H), 1.99-2.04 (m, 3H), 2.06 (s, 1H), 2.07-2.15 (m, 1H), 2.22-2.36 (m, 1H), 2.36-2.42 (m, 1H), 2.51-2.66 (m, 1H), 2.73-2.96 (m, 4H), 3.75-3.84 (m, 1H), 3.86-3.96 (m, 2H), 4.11-4.20 (m, 1H), 4.23 (br s, 1H), 4.26-4.47 (m, 6H), 4.49-4.60 (m, 1H), 4.60-4.67 (m, 1H), 5.11-5.30 (m, 1H), 5.31-5.39 (m, 2H), 6.05-6.26 (m, 1H), 6.42 (br s, 1H), 6.47 (br d, J = 8.51 Hz, 1H), 7.27-7.45 (m, 2H), 7.46-7.64 (m, 2H), 7.86 (br d, J = 5.99 Hz, 1H), 8.04 (br d, J = 7.25 Hz, 1H), 9.62-9.74 (m, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 19.63, 21.19, 22.68, 26.06, 27.22, 27.22, 29.13, 29.13, 29.26, 29.26, 29.31, 29.40, 29.48, 29.52, 29.66, 29.77, 30.33, 31.91, 34.23, 68.25, 113.19, 125.52, 127.85, 128.27, 128.72, 129.15, 129.90, 135.81.
HRMS (ESI): m/z calculated for C128H170N22O32P4S4: [M + 2H]2+ : 1390.5171; found, 1390.5170 
化合物８１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000187
　窒素雰囲気下、化合物８０（５０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（０．２ｍＬ）溶液へ、室温にて７Ｍ アンモニアのメタノール溶液（０．２ｍL）を添加した。５０℃で４８時間攪 した。反応後、反応液を減圧下にて濃縮乾固した。残渣にMTBEを添加して懸濁させた。懸濁物を濾過、MTBEで洗浄し、化合物８１（２６ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
化合物８２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000188
　窒素雰囲気下、Deoxycytidine（１．５０ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）、ＭｅＣＮ（１２ｍＬ）を仕込んだ。イミダゾール（０．８１ｇ、１１．８４ｍｍｏｌ）、ＴＢＤＰＳＣｌ（１．３０ｇ、４．７３mmol）を室温にて混合し、２時間攪拌した。反応終了後、０℃に氷冷し、飽和重曹水（１５ｍＬ）を添加し濾過、MTBE（３０ｍL）で洗い込んだ。ろ液を分液後、得られた有機層に硫酸ナトリウムを加えて脱水した。有機層を減圧濃縮して粗生成物を得、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物８２を油状物として得た（２．０４ｇ、収率１００％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 1.02 (s, 9H), 1.99-2.05 (m, 1H), 2.67-2.74 (m, 1H), 3.08 (dd, J = 10.56, 3.63 Hz, 1H), 3.29 (dd, J = 10.56, 2.68 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 2.21 Hz, 6H), 4.10-4.18 (m, 1H), 4.47-4.51 (m, 1H), 6.36 (t, J = 5.83 Hz, 1H), 6.75-6.79 (m, 4H), 7.12 (dd, J = 8.83, 1.26 Hz, 5H), 7.21 (m, 1H), 7.30 (t, J = 7.43 Hz, 2H), 7.34-7.38 (m, 2H), 7.40-7.45 (m, 2H), 7.51 (t, J = 7.49 Hz, 2H), 7.55-7,62 (m, 5H), 7.82-7.90 (m, 2H), 8.14 (br d, J= 6.94 Hz, 1H), 8.59 (br s, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 19.03, 26.83, 42.24, 55.23, 62.50, 72.64, 86.82, 86.95, 113.21, 127.04, 127.87, 12792, 128.16, 129.03, 129.97, 130.03, 130.06, 132.93, 133.02, 133.10, 135.18, 135.32, 135.70, 144.03, 158.61.
化合物８３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000189
　窒素雰囲気下、化合物８２（１．８０ｇ、２．０６mmol）の無水ＴＨＦ（１８ｍＬ）溶液に、室温にて７Ｍアンモニアのメタノール溶液（１８ｍＬ）を添加し、５０℃で１５時間攪拌した。反応終了を確認後、減圧下にて濃縮して粗生成物を得、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物８３を白色固体として得た（１．６０ｇ。収率１００％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 1.00 (s, 9H), 1.26 (t, J = 7.09 Hz, 1H), 1.85 (s, 1H), 1.96 (dt, J= 13.24, 5.99 Hz, 1H), 2.04 (s, 1H), 2.53-2.59 (m, 1H), 3.04 (dd, J = 10.56, 3.31 Hz, 1H), 3.28 (dd, J = 10.40, 2.84 Hz, 1H), 3.78 (s, 6H), 4.06-4.14 (m, 1H), 4.45-4.49 (m, 1H), 5.19 (d, J = 7.25 Hz, 1H), 6.36 (t, J = 5.99 Hz, 1H), 6.71-7\6.76 (m, 4H), 7.09-7.13 (m, 34H), 7.18-7.22 (m, 5H), 7.25-7.30 (m, 3H), 7.32-7.36 (m, 2H), 7.37-7.45 (m, 2H), 7.53-7.59 (m, 4H), 7.81 (d, J = 7.57 Hz, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 19.03,26.82, 42.08, 55.24, 62.48, 72.51, 6.23, 86.29,86.62, 93.27, 113.12, 126.90, 127.79, 127.82, 128.19, 129.87, 129.94, 130.06, 130.11, 133.05, 133.12, 135.34, 135.41, 135.70, 141.73, 144.32, 155.70, 158.52, 158.52, 165.30.
化合物８４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000190
　窒素雰囲気下、化合物６９（５５１ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、化合物８３（５００ｍｇ、１３．１ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３３７ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液へ、室温にて１－（３－Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）－３－ｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ　Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ［ＥＤＣＩ］（２５０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。反応終了を確認後０℃に冷却し、酢酸エチル（１０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）を加えて攪拌後、水層を分離した。得られた有機層を飽和重曹水（５ｍＬ）、水（４３ｍＬ）で順次洗浄後、得られた有機層に硫酸ナトリウムを添加し脱水した。有機層を減圧下にて濃縮して粗生成物を得、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで、化合物８４を固体として得た（９４０ｍｇ、収率９５％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.88 (bd t, J = 6.94 Hz, 6H), 1.01 (s, 9H), 1.24-1.34 (m, 37H), 1.42-1.46 (m, 2H), 1.70-1.82 (m, 7H), 1.92-2.05 (m, 10H), 2.49-2.58 (m, 1H), 2.63-2.70 (m, 1H), 2.83 (br d, J = 11.03 Hz, 1H), 3.06 (br d, J = 10.40 Hz, 1H), 3.28 (br d, J = 10.40Hz, 1H), 3.57-3.65 (m, 1H), 3.78 (s, 6H), 3.87-4.00 (m, 4H), 4.16 (br s, 1H), 4.45 (br s, 1H), 4.71-4.80 (m, 1H), 5.31-5.39 (m, 4H), 6.30 (t, J =5.83 Hz, 1H), 6.42 (br s, 1H), 6.46-6.50 (m, 1H), 6.75 (dd, J = 8.99, 3.00 Hz, 4H), 7.10 (br d, J = 7.88 Hz, 5H), 7.28-7.36 (m, 4H), 7.42 (q, J = 7.46 Hz, 2H), 7.54-7.60 (m, 4H), 8.09 (br d, J = 7.25 Hz, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 19.03, 22.68, 26.05, 26.81, 27.22 29.24, 29.27, 29.32, 29.38, 29.47, 29.52, 29.77, 31.90, 42.20, 55.21, 113.19, 127.86, 127.86, 127.90, 18.15, 129.80, 130.01, 135.67, 158.59.
化合物８５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000191
　化合物８４（９００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（９ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。化合物８４に酢酸エチル（９ｍＬ）、メルカプトコハク酸（４４６ｍｇ、２．９７mmol）を添加し、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．４６ｍＬ、２．９７mmol）を加え、室温に昇温したのち２時間攪拌した。反応終了を確認後、飽和食塩水（９ｍＬ）を加えて水層を分離した。有機層を飽和重曹水（９ｍＬ）で更に２回、飽和食塩水（９ｍＬ）でそれぞれ洗浄した。得られた有機層に硫酸ナトリウムを添加して脱水した。有機層を減圧下にて濃縮し、酢酸エチル（９ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。残渣にモレキュラーシーブス３Ａ（９００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥ ホスホロアミダイト（６６３ｍｇ、０．８９０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（９ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（２１０ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応終了を確認後、（（dimethylamino-methylidene）amino-3H-1,2,4-dithiazaoline）-3-thione（１５８ｍｇ、０．７７２mmol）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応の完結を確認後、２－プロパノール（２０ｍｇ、０．３６mmol）を加えて同温度で３０分攪拌した。メルカプトコハク酸（５３５ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．６８ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温したのち18時間攪拌した。反応終了を確認後、飽和重曹水（９．０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を飽和重曹水（９．０ｍＬ）で更に３回、飽和ＮａＣｌ水溶液（９．０ｍＬ）で１回洗浄した。有機層に硫酸ナトリウムを加えて脱水したのち、減圧下にて濃縮乾固し、化合物８５を淡黄色固体として取得した（９００ｍｇ、収率９５％）。得られた化合物化合物８５は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.87 (t, J = 6.62 Hz, 6H), 1.08 (s, 9H), 1.24-1.34 (m, 40H), 1.35-1.47 (m, 6H), 1.72-1.80 (m, 6H), 2.01 (br s, 8H), 2.19-2.34 (m 2H), 2.40-2.46 (m, 1H), 2.57-2.78 (m, 2H), 2.79-2.95 (m, 1H), 2.96 (s, 1H), 3.60 (br d, J = 12.61 Hz, 1H), 3.64-3.82 (m, 3H), 3.84-3.95 (m, 3H), 3.98-4.20 (m, 2H), 4.30-4.37 (m, 1H), 5.06-5.15 (m, 1H), 5.31-5.39 (m, 2H), 6.04-6.14 (m, 1H), 6.31 (br s, 1H), 6.46-.49 (m, 1H), 6.83 (d, J 8.75 Hz, 1H), 7.12-7.22 (m, 1H), 7.23-7.38 (m, 2H), 7.38-7.50 (m, 4H), 7.60-7.66 (m, 2H), 8.88-9.05 (m, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 19.00, 22.68, 26.05, 26.83, 27.20, 27.23, 29.25, 29.32, 29.39, 29.48, 29.52, 29.77, 31.90, 5.25, 68.20, 113.17, 127.07, 127.95, 128.12, 129.14, 129.80, 129.99, 130.27, 135.72.
HRMS (ESI): m/z calculated for C87H128N7O14PSSi: [M + H]+ : 1586.8747; found, 1586.8832
化合物８６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000192
　化合物８５（７００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（９ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。化合物８５にモレキュラーシーブス３Ａ（７００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄC－ＣＥ ホスホロアミダイト（５５２ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（７ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１５６ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応終了を確認後、（（dimethylamino-methylidene）amino-3H-1,2,4-dithiazaoline）-3-thione（１１８ｍｇ、０．５７mmol）を加え、室温下、２時間攪拌した。反応の完結を確認後、２－プロパノール（１６ｍｇ、０．２６mmol）を加えて同温度で３０分攪拌した。メルカプトコハク酸（３３１ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３４ｍＬ、４．４１ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温したのち２時間攪拌した。反応終了を確認後、飽和重曹水（７．０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで洗い込みを行いながら濾過し、水層を分離した。有機層を飽和重曹水（７．０ｍＬ）で更に４回、飽和ＮａＣｌ水溶液（７．０ｍＬ）で１回洗浄した。有機層に硫酸ナトリウムを加えて脱水したのち、減圧下にて濃縮乾固し、化合物８６を淡黄色固体として取得した（９３０ｍｇ、収率９９％）。得られた化合物８６は特に精製することなく、次の工程に用いた。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.87 (t, J = 6.46 Hz, 6H), 1.04-1.11 (m, 9H), 1.25-1.34 (m, 40H), 1.38 (br d, J = 6.62 Hz, H), 1.43 (s, 2H), 1.76 (br s, 6H), 1.83-1.84 (m, 1H), 1.86-1.93 (m, 4H), 1.95-2.03 (m, 9H), 2.27 (s, 1H), 2.35-2.55 (m, 2H), 2.63-2.86 (m, 8H), 2.96 (s, 1H), 2.96-3.03 (m, 1H), 3.21-3.32 (m, 1H), 3.53-3.66 (m, 1H), 3.72-3.81 m, 6H), 3.84-4.04 (m, 8H), 4.14-4.36 (m, 7H), 5.10 (br d, J = 5.99 Hz, 1H), 5.32-5.39 (m, 4H), 6.02-6.14 (m, 1H), 6.16-6.33 (m, 2H), 6.79-6.86 (m, 3H), 7.13-7.21 (m, 3H), 7.25-7.34 (m, 7H), 7.35-7.52 (m, 10H), 7.57-7.66 (m, 5H), 7.87-7.97 (m, 3H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 19.00, 22.67, 26.05, 26.83, 27.20, 27.23, 29.25, 29.31, 29.40, 29.48, 29.52, 29.77, 31.90, 55.25, 55.32, 113.18, 113.52, 127.07, 130.27, 135.71, 139.47, 158.64.
HRMS (ESI): m/z calculated for C106H147N11O20P2S2Si: [M + H]+ : 2048.9510; found, 2048.9567 
化合物８７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000193
　化合物８６（８００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（８ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。化合物８６にモレキュラーシーブス３Ａ（８００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄG－ＣＥホスホロアミダイト（４９２ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（８ｍL）を加え、室温下、1時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１３８ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。反応終了を確認後、（（dimethylamino-methylidene）amino-3H-1,2,4-dithiazaoline）-3-thione（１０４ｍｇ、０．５１mmol）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応終了を確認後、２－プロパノール（１６ｍｇ、０．２６mmol）を加えて同温度で３０分攪拌した。メルカプトコハク酸（２９３ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．３０ｍＬ、３．９０ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温したのち２時間攪拌した。反応終了を確認後、飽和重曹水（８．０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで洗い込みを行いながら濾過し、水層を分離した。有機層を飽和重曹水（８．０ｍＬ）で更に３回、飽和ＮａＣｌ水溶液（８．０ｍＬ）で１回洗浄した。有機層に硫酸ナトリウムを加えて脱水したのち、減圧下にて濃縮乾固し、化合物８７を淡黄色固体として取得した（７９０ｍｇ、収率７２％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 0.85-0.90 (m, 6H), 1.05-1.10 (m, 9H), 1.19-1.38 (m, 57H), 1.73-1.93 (m, 2H), 1.95-2.03 (m, 12H), 2.05 (s, 6H), 2.08 (br d, J = 6.94 Hz, 1H), 2.30-2.52 (m, 6H), 2.67-2.90 (m, 12H), 2.91-3.04 (m, 6H), 3.22-3.32 (m, 1H), 3.73-3.96 (m, 2H), 4.17-4.26 (m, 1H), 4.32 (br s, 1H), 4.37 (br s, 1H), 4.46-4.54 (m, 1H), 5.01-5.18 (m, 1H), 5.32-5.39 (m, 1H), 6.14-6.33 (m, 1H), 6.79-6.87 (m, 1H), 7.15-7.25 (m, 1H) , 7.27-7.45 (m, 1H), 7.45-7.50 (m, 1H), 7.55 (br dd, J = 16.39, 7.25 Hz, 1H), 7.63 (br d, J = 6.62 Hz, 1H), 7.75-7.91 (m, 1H).
13C-NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 14.12, 18.96, 19.01, 21.76, 22.67, 26.05, 26.84, 27.21, 27.22, 27.23, 29.25, 29.31, 29.40, 29.48, 29.51, 29.77, 31.90, 55.32, 77.41, 113.18, 113.52, 127.94, 127.98, 128.06, 128.25, 129.14, 129.28, 129.80, 129.98, 130.27, 135.62, 135.71.
化合物８８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000194
　窒素雰囲気下、3,4,5-tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid（化合物２、４．２６ｇ、４．６２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１８０ｍＬ）、ＴＨＦ（２０ｍＬ）、Methyl 2-Aminobenzoate（０．９１ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ（２．５７ｇ、６．００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２．５８ｍｌ、１５．２ｍｍｏｌ）を混合し、室温で昇温して一晩攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物８８を無色の油状物として取得した（２．５５ｇ、収率５２％）。 
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.12-8.04(m,2H),7.85-7.76(m,2H),7.47(t,J=8.0MHz,1H),7.05(s,2H),5.39-5.31(m,6H),4.07-3.99(m,6H),3.93(s,3H),2.05-1.98(m,12H),1.88-1.69(m,6H),1.58-1.20(m,66H),0.88(t,J=7.0MHz,9H)
化合物８９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000195
　窒素雰囲気下、化合物８８（２．５５ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（０．２４ｇ、４．２８ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１２．５ｍＬ）、メタノール（３．２ｍＬ）及びイオン交換水（０．６ｍＬ）を混合し、６０℃で一晩攪拌した。反応の終了を確認後、６Ｍ塩酸（２ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物８９を白色のアモルファス状固体として取得した（１．５４ｇ、収率６０％）。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.21-8.13(m,2H),7.93-7.86(m,2H),7.50(t,J=8.0MHz,1H),7.09(s,2H),5.39-5.31(m,6H),4.08-4.00(m,6H),2.07-1.96(m,12H),1.88-1.71(m,6H),1.58-1.20(m,63H),0.87(t,J=6.8MHz,9H)
化合物９０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000196
　窒素雰囲気下、化合物８９（６２４ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、ＤＭＴ－ｄＴ（５５５ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１２４ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（１９４ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を室温下添加し、同温度で３０時間攪拌した。反応の終了を確認後、溶媒を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製することで化合物９０を白色のアモルファス状固体として取得した（８４７ｍｇ、９０％）。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.18-8.13(m,1H),8.06-8.00(m,2H),7.91(s,1H),7.85-7.80(m,1H),7.67(s,1H),7.49(t,J=8.0MHz,1H),7.44-7.40(m,2H),7.35-7.20(m,9H),7.01(s,2H),6.85(d,J=8.0MHz,4H),6.55-6.50(m,1H),5.73-5.70(m,1H),5.40-5.31(m,6H),4.32-4.28(m,1H),4.08-3.99(m,6H),3.80(s,6H),3.60-3.52(m,2H),2.66-2.52(m,2H),2.08-1.95(m,12H),1.88-1.72(m,6H),1.57-1.20(m,67H),0.88(t,J=6.8MHz,9H)
化合物９１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000197
　窒素雰囲気下、化合物９０（６４７ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（６．０ｍＬ）溶液にメルカプトコハク酸（３０８ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（０．４７ｍL、６．１５ｍｍｏｌ）を添加し、氷冷下１．５時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応液を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（９ｍＬ）で３回、１０％ＮａＣｌ水溶液（９ｍＬ）で１回洗浄し、減圧濃縮を行うことで化合物９１を白色のアモルファス状固体として取得した（４１５ｍｇ、収率８０％）。得られた化合物９１は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物９２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000198
　化合物９１（４１５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（４．０ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物９１にモレキュラーシーブス３Ａ（４００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（４９２ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（４．０ｍL）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１１７ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル／ピリジン／水溶液（５．０ｍＬ）に溶解させたヨウ素（２５１ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（６．０ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物をろ去した後、分液した。有機層を５％食塩水（６．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（５ｇ）を加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（４．０ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。残渣に酢酸エチル（４．０ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（３１１ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．６３ｍＬ、８．２５ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１時間、更に、室温に昇温し１時間攪拌した。反応の終了を確認後、水（６ｍＬ）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（６ｍＬ）で３回、５％ＮａＣｌ水溶液（６ｍＬ）で１回洗浄した。得られた有機層を濃縮し、化合物９２を白色のアモルファス状固体として取得した（４６７ｍｇ、収率８９％）。得られた化合物９２は特に精製することなく、次の反応に用いた。
化合物９３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000199
　化合物９２（４７０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（４ｍＬ）を用いた共沸を４回実施した。モレキュラーシーブス３Ａ（４００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＣ－ＣＥホスホロアミダイト（４８４ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（４ｍＬ）を加え、室温下１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（１０３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を加え、室温下２時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル／ピリジン／水溶液（４．４ｍＬ）に溶解させたヨウ素（２２１ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（６．０ｍＬ）及び酢酸エチル（６．０ｍＬ）を加えた。不溶物をろ去した後、分液した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（６．０ｍＬ）、５％ＮａＣｌ水溶液（６．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（４．０ｇ）で脱水した。濃縮後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで化合物９３を淡黄色のアモルファス状固体として取得した（６５８ｍｇ、収率９７％）。
化合物５０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000200
　窒素雰囲気下、化合物９３（６５８ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１２ｍＬ）及びイソプロパノール（３．０ｍＬ）溶液へ、０℃で４Ｍ 水素化ホウ素リチウムのＴＨＦ溶液（０．３５ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間攪拌後、１０％塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）及び酢酸エチルを加えて攪拌し分液し、有機層を得た。水層から酢酸エチルで抽出後、前記有機層と合わせた有機層を濃縮し水を除去した後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで白色固体の化合物５０を得た。
化合物９４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000201
　窒素雰囲気下、3,4,5-tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid（２．７３ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（９０ｍＬ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）、Methyl 4-(Aminomethyl)cyclohexanecarboxylate Hydrochloride（０．６３ｇ、３．００ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ（１．２８ｇ、３．００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．２９ｍｌ、７．６０ｍｍｏｌ）を混合し、室温で昇温して一晩攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物９４を無色の油状物として取得した（２．１３ｇ、収率８７％）。 
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ6.94(s,2H),6.05(t,J=6MHz,1H),5.41-5.29(m,6H),3.66(s,3H),3.30(t,J=6.4MHz,2H),2.32-2.20(m,1H),2.08-1.94(m,14H),1.93-1.85(m,2H),1.84-1.67(m,6H),1.67-1.52(m,1H),1.53-1.17(74H),1.15-0.97(m,2H),0.88(t,J=6.8MHz,9H)
化合物９５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000202
　窒素雰囲気下、化合物９４（２．１２ｇ、２．００ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（０．２２ｇ、４．００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５．４ｍＬ）、メタノール（３．８ｍＬ）及びイオン交換水（０．８ｍＬ）を混合し、６０℃で一晩攪拌した。反応の終了を確認後、６Ｍ塩酸（２ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物９５を白色のアモルファス状固体として取得した（１．０１ｇ、収率４８％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ6.94(s,2H),6.06(t,J=6MHz,1H),5.40-5.28(m,6H),4.05-3.94(m,6H),3.31(t,J=6.4MHz,2H),2.35-2.24(m,1H),2.11-1.94(m,14H),1.93-1.84(m,2H),1.84-1.66(m,6H),1.65-1.61(m,1H),1.51-1.15(m,69H),1.94-0.94(m,2H),0.88(t,J=6.8MHz,3H)
化合物９６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000203
　窒素雰囲気下、化合物９５（１０６ｍｇ、０．1０ｍｍｏｌ）、ＤＭＴ－ｄＴ（９３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（３２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を室温下添加し、同温度で３０時間攪拌した。反応の終了を確認後、溶媒を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）で精製することで化合物９６を白色のアモルファス状固体の混合物として回収し、次の反応に用いた。
化合物９７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000204
　窒素雰囲気下、化合物９６を含む混合物（１９２ｍｇ）の酢酸エチル（１．５ｍＬ）溶液にメルカプトコハク酸（７５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（０．１１ｍL、１．５０ｍｍｏｌ）を添加し、氷冷下１．５時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応液を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍＬ）で３回、１０％ＮａＣｌ水溶液（２ｍＬ）で１回洗浄して減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）で精製し、化合物９７を白色のアモルファス状固体として取得した（１２６mｇ、収率quant）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33-8.15(m,1H),7.49(s,1H),6.93(s,2H),6.25-6.20(m,1H),6.01(t,J=3.8MHz,1H),5.39-5.29(m,9H),4.05-3.86(m,9H),3.30(t,J=4.4MHz,2H),2.49-2.24(m,4H),2.13-1.95(m,12H),1.95-1.87(m,4H),1.86-1.68(m,6H),1.64-1.55(m,3H),1.53-1.17(m,73H),1.16-1.10(m,2H),0.87(t,J=4.6MHz,3H)
化合物９８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000205
　化合物９７（１２６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（１．５ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物９７にモレキュラーシーブス３Ａ（１００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（１４９ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（１．５ｍL）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（３５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル／ピリジン／水溶液（１．５ｍＬ）に溶解させたヨウ素（７６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２．０ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物をろ去した後、分液した。有機層を５％食塩水（２．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（５ｇ）を加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（２．０ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。残渣に酢酸エチル（２．０ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（９４ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．１９ｍＬ、２．５０ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１時間、更に、室温に昇温し１時間攪拌した。反応の終了を確認後、水（２ｍＬ）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍＬ）で３回、５％ＮａＣｌ水溶液（２ｍＬ）で１回洗浄した。得られた有機層を濃縮し、化合物９８を白色のアモルファス状固体として取得した（１６１ｍｇ、収率９９％）。得られた化合物９８は特に精製することなく、次の工程に用いた。
化合物９９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000206
　化合物９８（１６１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１．５ｍＬ）を用いた共沸を４回実施した。モレキュラーシーブス３Ａ（１５０ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＣ－ＣＥホスホロアミダイト（１６７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（１．５ｍＬ）を加え、室温下１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（３６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、室温下２時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル／ピリジン／水溶液（１．５ｍＬ）に溶解させたヨウ素（７６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１．５ｍＬ）及び酢酸エチル（１．５ｍＬ）を加えた。不溶物をろ去した後、分液した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（１．５ｍＬ）、５％ＮａＣｌ水溶液（１．５ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（１．０ｇ）で脱水した。濃縮後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）で精製することで化合物９９を淡黄色のアモルファス状固体として取得した（３９４ｍｇ、収率quant）。
化合物５０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000207
　窒素雰囲気下、化合物９９（３９４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４ｍＬ）及びイソプロパノール（１．０ｍＬ）溶液へ、０℃で４Ｍ 水素化ホウ素リチウムのＴＨＦ溶液（０．１２ｍＬ、０．４８ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間攪拌後、１０％塩化アンモニウム水溶液（２ｍＬ）及び酢酸エチルを加えて攪拌し分液し、有機層を得た。水層から酢酸エチルで抽出後、前記有機層と合わせた有機層を濃縮し水を除去した後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで白色固体の化合物５０を得た。
化合物１００の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000208
　窒素雰囲気下、3,4,5-tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid（化合物２、２．７３ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（９０ｍＬ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）、Methyl 4-Aminocyclohexanecarboxylate Hydrochloride（０．６３ｇ、３．００ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ（１．２８ｇ、３．００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．２９ｍｌ、７．６０ｍｍｏｌ）を混合し、室温で昇温して一晩攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物１００を無色の油状物として取得した（１．３０ｇ、収率５２％）。 
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ6.91(s,2H),6.77(d,J=8MHz,1H),5.40-5.29(m,6H),4.06-3.87(m,7H),3.69(s,3H),2.34-2.22(m,1H),2.22-2.12(m,2H),2.12-1.93(m,14H),1.92-1.59(m,6H),1.53-1.40(m,6H),1.40-1.16(m,64H),0.88(t,J=7MHz,9H)
化合物１０１の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000209
　窒素雰囲気下、化合物１００（１．３０ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（０．２２ｇ、４．００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５．４ｍＬ）、メタノール（３．８ｍＬ）及びイオン交換水（０．８ｍＬ）を混合し、６０℃で一晩攪拌した。反応の終了を確認後、６Ｍ塩酸（２ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物１０１を白色のアモルファス状固体として取得した（０．２９ｇ、収率２３％）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ6.90(s,2H),5.78(d,J=8MHz,1H),5.40-5.26(m,6H),4.04-3.88(m,7H),2.38-2.24(m,1H),2.23-2.06(m,4H),2.06-1.90(m,12H),1.88-1.55(m,7H),1.54-1.39(m,6H),1.39-1.16(m,64H),0.87(t,J=7MHz,9H)
化合物１０２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000210
　窒素雰囲気下、化合物１０１（１０４ｍｇ、０．1０ｍｍｏｌ）、ＤＭＴ－ｄＴ（９３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（３２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を室温下添加し、同温度で３０時間攪拌した。反応の終了を確認後、溶媒を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）で精製することで化合物１０２を白色のアモルファス状固体の混合物として回収し、次の反応に用いた。
化合物１０３の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000211
　窒素雰囲気下、化合物１０２を含む混合物（１８４ｍｇ）の酢酸エチル（１．５ｍＬ）溶液にメルカプトコハク酸（７５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（０．１１ｍＬ、１．５０ｍｍｏｌ）を添加し、氷冷下１．５時間攪拌した。反応の終了を確認後、反応液を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍＬ）で３回、１０％ＮａＣｌ水溶液（２ｍＬ）で１回洗浄して減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）で精製し、化合物１０３を白色のアモルファス状固体として取得した（１２５mｇ、収率９９%）。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(m,1H),6.91(s,2H),6.30-6.25(m,1H),6.03-5.84(m,1H),5.42(m,7H),4.06-4.01(m,1H),4.01-3.85(m,9H),2.45-2.24(m,3H),2.21-2.11(m,2H),2.10-2.02(m,2H),2.02-1.93(m,12H),1.92-1.85(m,3H),1.83-1.67(m,6H),1.64-1.52(m,1H),1.50-1.38(m,4H),1.38-1.04(m,67H),0.86(t,J=4.8MHz,9H)
化合物１０４の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000212
　化合物１０３（１２６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に対して酢酸エチル（１．５ｍＬ）を用いた共沸を３回実施した。得られた化合物１０３にモレキュラーシーブス３Ａ（１００ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（１４９ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（１．５ｍL）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（３５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、室温下、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル／ピリジン／水溶液（１．５ｍＬ）に溶解させたヨウ素（７６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２．０ｍＬ）を加え、攪拌した。不溶物をろ去した後、分液した。有機層を５％食塩水（２．０ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（５ｇ）を加えて脱水した。有機層を減圧濃縮後、酢酸エチル（２．０ｍＬ）を用いた共沸を２回実施した。残渣に酢酸エチル（２．０ｍＬ）を加え溶解し、メルカプトコハク酸（９４ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸（０．１９ｍＬ、２．５０ｍｍｏｌ）を加え、同温度で１時間、更に、室温に昇温し１時間攪拌した。反応の終了を確認後、水（２ｍＬ）を加え、有機層を分離した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍＬ）で３回、５％ＮａＣｌ水溶液（２ｍＬ）で１回洗浄した。得られた有機層を濃縮し、化合物１０４を白色のアモルファス状固体として取得した（１６０ｍｇ、収率quant）。得られた化合物１０４は特に精製することなく、次の工程に用いた
化合物１０５の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000213
　化合物１０４（１６０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に対して、酢酸エチル（１．５ｍＬ）を用いた共沸を４回実施した。モレキュラーシーブス３Ａ（１５０ｍｇ）、ＤＭＴ－ｄＣ－ＣＥホスホロアミダイト（１６７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（１．５ｍＬ）を加え、室温下１時間攪拌した。反応溶液にＤＣＩ（３６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、室温下２時間攪拌した。反応の完結を確認後、アセトニトリル／ピリジン／水溶液（１．５ｍＬ）に溶解させたヨウ素（７６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を室温下で反応溶液に滴下し、１時間攪拌した。反応の完結を確認後、１Ｍ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１．５ｍＬ）及び酢酸エチル（１．５ｍＬ）を加えた。不溶物をろ去した後、分液した。得られた有機層を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（１．５ｍＬ）、５％ＮａＣｌ水溶液（１．５ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウム（１．０ｇ）で脱水した。濃縮後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）で精製することで化合物１０５を淡黄色のアモルファス状固体として取得した（３５３ｍｇ、収率quant）。
化合物５０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000214
　窒素雰囲気下、化合物１０５（３５３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４ｍＬ）及びイソプロパノール（１．０ｍＬ）溶液へ、０℃で４Ｍ 水素化ホウ素リチウムのＴＨＦ溶液（０．１２ｍＬ、０．４８ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１時間攪拌後、１０％塩化アンモニウム水溶液（２ｍＬ）及び酢酸エチルを加えて攪拌し分液し、有機層を得た。水層から酢酸エチルで抽出後、前記有機層と合わせた有機層を濃縮し水を除去した後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製することで白色固体の化合物５０を得た。
化合物１０６の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000215
　窒素雰囲気下、3,4,5-tri-((Z)-octadec-9-enyloxy)benzoic acid（化合物２、１．９９ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）、ＴＨＦ（９０ｍＬ）、Ethyl (R)-(-)-3-piperidinecarboxylate（０．４６２ｍＬ、３．００ｍｍｏｌ）、ＣＯＭＵ（１．２９ｇ、３．００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．２８ｍＬ、７．６０ｍｍｏｌ）を混合し、室温で昇温して一晩攪拌した。反応の終了を確認後、室温まで放冷し、酢酸エチル（２０ｍＬ）、ｎ－ヘキサン（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物１０６を無色の油状物として取得した（１．９９ｇ、収率８８％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.58 (2H, s), 5.40-5.30 (6H, m), 4.19-4.05 (2H, m), 3.96 (6H, t, J = 6.5 Hz), 3.21-2.92 (2H, m), 2.59-2.44 (1H, m), 2.14-1.98 (12H, m), 1.84-1.66 (8H, m), 1.61-1.08 (73H, m), 0.88 (9H, t, J = 6.9 Hz); 13C{1H} NMR (125 MHz, CDCl3) δ 176.4, 170.8, 153.3, 140.9, 139.5, 130.1, 130.0, 105.7, 73.6, 69.4, 60.9, 32.1, 30.0, 29.7, 29.6, 29.5, 27.4, 26.3, 22.9, 14.4, 14.3.
化合物１０７の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000216
　窒素雰囲気下、化合物１０６（１．９９ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）、水酸化カリウム（０．２２ｇ、３．９２ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５．４ｍＬ）、エタノール（３．８４ｍＬ）及びイオン交換水（０．７７ｍＬ）を混合し、７０℃で一晩攪拌した。反応の終了を確認後、６Ｍ塩酸（２ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、水層を分離した。有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮することで粗生成物を取得した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物１０７を白色のアモルファス状固体として取得した（１．４６ｇ、収率７６％）。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 6.58 (2H, s), 5.37-5.32 (6H, m), 3.97-3.94 (6H, m), 3.17-3.02 (2H, m), 2.62-2.49 (1H, m), 2.16-2.14 (1H, m), 2.03-2.00 (12H, m), 1.81-1.71 (8H, m), 1.50-1.43 (6H, m), 1.33-1.26 (64H, m), 0.88 (9H, t, J = 6.9 Hz); 13C{1H} NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.8, 171.0, 153.3, 139.6, 130.5, 130.1, 129.9, 105.8, 73.6, 69.4, 32.1, 30.5, 30.0, 29.9, 29.8, 29.7, 29.6, 29.5, 27.4, 26.3, 22.8, 14.3.
化合物１０８の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000217
窒素雰囲気下、化合物２３（９８．３ｍｇ、０．０７３３ｍｍｏｌ）及び２―シアノエチル Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトライソプロピルホスホロジアミダイト（７２．４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．８ｍＬ）溶液に、５―（ベンジルチオ）―１Ｈ―テトラゾール（４９．４ｍｇ、０．２５７ｍｍｏｌ）を加えて、室温で４０分攪拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル）で精製することで、化合物１０８を白色固体として収率８３．６％（収量９４．４ｍｇ、０．０６１３ｍｍｏｌ）で得た。
化合物１０９の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000218
　窒素雰囲気下、化合物３４（４１６ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）及び化合物５８（４６７ｍｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．２ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（２１２ｍｇ、１．１０６ｍｍｏｌ）及びＨＯＢＴ水和物（８４．７ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）を加えた後、ＤＩＰＥＡ（０．３８５ｍＬ、２．２１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。ＥＤＣＩ（１０６ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．１９３ｍＬ、１．１１ｍｍｏｌ）を追加し、室温で２時間攪拌した。反応液へ水（５ｍＬ）及び酢酸エチル（１０ｍＬ）を加え攪拌後分液した。得られた有機層を水（５ｍＬ）で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行うことで化合物１０９の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル／ヘキサン）で精製することで、化合物１０９を粘性のある無色油状物として収率６９．２％（収量５７５ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）で得た。
MS(ESI+):[M+1]+ 1501.9947.
化合物１１０の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000219
　窒素雰囲気下、化合物１０９（４８４ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（４．９ｍＬ）溶液に、メルカプトコハク酸（２４２ｍｇ、１．６１１ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸（０．２２５ｍＬ、２．９４ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温へ昇温しながら１時間攪拌した。０℃に冷却後、反応液に飽和重曹水（６．５ｍＬ）を加え、室温に昇温しながら攪拌後、分液した。得られた有機層を飽和食塩水（３．４ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣に、酢酸エチル（３．４ｍL）を用いた共沸を２回実施した。窒素雰囲気下、得られた残渣に酢酸エチル（３．４ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（４８４ｍｇ）を加えて３０分攪拌した。得られた溶液にＤＭＴｒ－ｄＴ－ＣＥホスホロアミダイト（３００ｍｇ、０．４０３ｍｍｏｌ）及びＤＣＩ（９９．０ｍｇ、０．８３８ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間攪拌した。更に、ＤＣＩ（３８．１ｍｇ、０．３２３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で４５分攪拌した。反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、４．６７ｍＬ）を加え、室温で３０分攪拌した。反応液へ１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（３．８ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和重曹水（３．４ｍL）で３回洗浄した。更に飽和食塩水（３．４ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムを用いて乾燥後、減圧濃縮を行うことで化合物１１０の粗生成物を得た。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（球状中性シリカゲル、展開溶媒：酢酸エチル）で精製することで、化合物１１０を白色固体として収率９２．５％（収量５５３ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ）で得た。
化合物１１２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000220
　窒素雰囲気下、化合物１１０（３０７ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（４４９ｍｇ、６．６ｍｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３．１ｍＬ）溶液へ、予め調製したフッ化水素ピリジン（０．０９２４ｍＬ、フッ化水素３．３ｍｍｏｌ相当）の酢酸エチル（３ｍＬ）溶液を０℃で滴下した。反応液を０℃で１時間４５分攪拌後、飽和重曹水（３ｍＬ）及び酢酸絵エチル（３ｍＬ）を加え、室温に昇温しながら攪拌後、分液した。得られた有機層を飽和重曹水（３ｍＬ）及び飽和食塩水（３ｍＬ）で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。得られた溶液を減圧濃縮し、更に、シリカゲルを用いて粗精製し、粘性の高い無色油状物として化合物１１１の粗生成物（収量３５６ｍｇ）を得た。得られた化合物１１１の粗生成物から８７．２ｍｇを分取し、更に、化合物１０８（９４．４ｍｇ、０．０６１３ｍｍｏｌ）を加えた後、酢酸エチル（２ｍＬ）で２回共沸を実施した。窒素雰囲気下、得られた残渣に酢酸エチル（１．６ｍＬ）を加えて溶液とした後、モレキュラーシーブス３Ａ（１００ｍｇ）を加えて３０分攪拌した。得られた溶液にＤＣＩ（１５．９ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３０分攪拌した。更に、ＤＣＩ（８ｍｇ、０．０６７７ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１８時間攪拌した。反応液へ０．２Ｍヨウ素（酢酸エチル／ピリジン／水溶液、０．６１３ｍＬ）を加え、室温で１０分攪拌した。反応液へ１Ｍチオ硫酸ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加えて攪拌後、モレキュラーシーブスを酢酸エチルで洗いこみながら濾別した。濾液を分液し、得られた有機層を飽和重曹水（２ｍL）で洗浄した。更に飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムを用いて乾燥後、減圧濃縮を行うことで粗生成物（１６８ｍｇ）を得た。得られた粗生成物にメルカプトコハク酸（４１．８ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）を加えた後、酢酸エチル（１．７ｍＬ）及びＴＨＦ（０．２ｍＬ）を加えて、懸濁液とした。反応液を０℃へ冷却後、トリフルオロ酢酸（０．１３５ｍＬ、１．７０ｍｍｏｌ）を加え、室温へ昇温しながら７０分攪拌した。反応液を０℃に冷却後、飽和重曹水（２．３７ｍＬ）を加え、室温に昇温しながら攪拌後、分液した。得られた有機層へＴＨＦを加えた後、飽和食塩水で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後濃縮し、化合物１１２を主生成物として含む淡黄色固体（収量１２７ｍｇ）を得た。
MS(ESI+):[M + 2H]2+ 1387.1904.
　上記の詳細な記載は、本発明の目的及び対象を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。添付の特許請求の範囲から離れることなしに、記載された実施態様に対しての、種々の変更及び置換は、本明細書に記載された教示より当業者にとって明らかである。
　本発明により、液相合成法によるオリゴヌクレオチドの合成に用いることができる新規な擬似固相保護基、及びその保護基が結合した（ポリ）オリゴヌクレオチドが提供された。本発明は、ポリオリゴヌクレオチドの合成に有用である。

Claims (43)

  1. 　以下の式（１）で表される化合物又はその塩：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成してもよく、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成してもよく、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sである（ここで、ｓは１～５の整数である）。但し、Ｙが単結合の場合は、Ｚは単結合ではない。）。
  2. 　以下の式（２）で表される、請求項１に記載の化合物又はその塩：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、１から５の整数を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基である。）。
  3. 　前記式（２）において、ｍは０であり、Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表す（ここで、Ｒ１は、Ｈ、又はＣ１－６アルキル基である。）、請求項２に記載の化合物又はその塩。
  4. 　前記式（２）において、ｍは１であり、ＸはＮＲ１、Ｏ又はＳを表す（ここで、Ｒ１は、Ｈ、又はＣ１－６アルキル基である。）、請求項２に記載の化合物又はその塩。
  5. 　前記式（２）において、ベンゼン環におけるＯＲ基の配置が、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換である、請求項２～４のいずれか一つに記載の化合物又はその塩。
  6. 　以下の式（３）で表される、請求項１に記載の化合物又はその塩：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１～５の整数を表し、
    環Ａは、置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を表し、
    Ｘは、Ｃ又はＮを表す。）。
  7. 　前記式（３）において、ｍは０であり、ｕは０、又は１～３の整数であり、ＸはＣを表す、請求項６に記載の化合物又はその塩。
  8. 　前記式（３）において、環Ａは、置換基を有してもよいベンゼン又はシクロヘキサンであり、前記置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基及びカルボニル基からなる群より選ばれる基である、請求項７に記載の化合物又はその塩。
  9. 　前記式（３）において、ｕは０、１又は２であり、ＸはＮを表し、Ｘを含む環Ａは置換基を有してもよい窒素原子を一つ含む５～７員の複素環を表し、前記置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基及び置換されてもよいカルボニル基からなる群より選ばれる基である、請求項６に記載の化合物又はその塩。
  10. 　前記式（３）において、ｍは０である、請求項９に記載の化合物又はその塩。
  11. 　前記式（３）において、環Ａは、置換基を有してもよいピロリジン又はピペリジンであり、置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアルキル基及びカルボニル基からなる群より選ばれる基である、請求項９に記載の化合物又はその塩。
  12. 　前記式（３）において、ベンゼン環におけるＯＲ基の配置が、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換である、請求項６～１１のいずれか一つに記載の化合物又はその塩。
  13. 　以下の式（４）で表される、請求項１に記載の化合物又はその塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１～５の整数を表し、
    ｗは、０、１又は２を表し、
    環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３である。）。
  14. 　前記式（４）において、ｍは０である、請求項１３に記載の化合物又はその塩。
  15. 　前記式（４）において、環Ｂは、置換基を有してもよいベンゼン又はシクロヘキサンであり、前記置換基は、置換されてもよい水酸基、置換されてもよいアミノ基、置換されてもよいアルキル基、ハロゲン、ニトロ基及び置換されてもよいカルボニル基からなる群より選ばれる基である、請求項１３に記載の化合物又はその塩。
  16. 　前記式（３）において、ベンゼン環におけるＯＲ基の配置が、３，４，５置換、２，４置換、又は２，３，４置換である、請求項１３～１５のいずれか一つに記載の化合物又はその塩。
  17. 　前記式（１）で表される化合物は、下記式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     （ここで、Ｒａは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、複数存在するＯＲａは同一又は異なってもよい。）で表される化合物からなる群より選ばれる化合物である、請求項１に記載の化合物又はその塩。
  18. 　前記Ｒａは、独立してそれぞれ、ミリストレイン酸（Ｃ１４）、パルミトレイン酸（Ｃ１６）、サピエン酸（Ｃ１６）、オレイン酸（Ｃ１８）、エライジン酸（Ｃ１８）、バクセン酸（Ｃ１８）、ガドレイン酸（Ｃ２０）、エイコセン酸（Ｃ２０）、エルカ酸（Ｃ２２）、ネルボン酸（Ｃ２４）、リノール酸（Ｃ１８）、エイコサジエン酸（Ｃ２０）、ドコサジエン酸（Ｃ２２）、α－及びγ－リノレン酸（Ｃ１８）、ピノレン酸（Ｃ１８）、エレオステアリン酸（Ｃ１８）、ミード酸（Ｃ２０）、ジホモ－γ－リノレン酸（Ｃ２０）、エイコサトリエン酸（Ｃ２０）、ステアリドン酸（Ｃ１８）、アラキドン酸（Ｃ２０）、エイコサテトラエン酸（Ｃ２０）、アドレン酸（Ｃ２２）、ボセオペンタエン酸（Ｃ１８）、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０）、オズボンド酸（Ｃ２２）、イワシ酸（Ｃ２２）、テトラコサペンタエン酸（Ｃ２４）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２）、及びニシン酸（Ｃ２４）からなる群より選ばれる化合物に由来する不飽和炭化水素基である、請求項１７に記載の化合物又はその塩。
  19. 　以下の式（Ｉ）で表されるヌクレオチド：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋を形成してもよく、
    ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
    Ｗ／Ｔｇ又はＴｇ／Ｗは、Ｗ又はＴｇを表し、５’側がＷの場合、３’側はＴｇであり、一方、５’側がＴｇの場合、３’側はＷであり、ここで、
    Ｗは、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］、又は
    以下の式（ＩＩ）で表されるヌクレオチド：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、Ｃ１－６アルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
    Ｗ’は、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７員の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］。
  20. 　式（Ｉ）又は式（ＩＩ）におけるＴｇは、以下の式（６）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、１から５の整数を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    ＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基、
    以下の式（７）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数を表し、
    環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
    Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
    ＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基、又は、
    以下の式（８）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数を表し、
    ｗは、０、１又は２を表し、
    環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
    ＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す、請求項１９に記載のヌクレオチド。
  21. 　以下の式（Ｖ）或いは式（ＶＩ）で表されるヌクレオチド：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋（好ましくは、ロック核酸（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、アミド架橋型核酸、グアニジン架橋型核酸又はスピロシクロプロピレン架橋型核酸の架橋）を形成してもよく、
    ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基（例えば、シアノ基、ニトロ基、２－ピリジル基もしくは４－ピリジル基など）を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
    Ｗは、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す。］、又は
    以下の式（ＶＩＩ）或いは式（ＶＩＩＩ）で表されるヌクレオチド：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、Ｃ１－６アルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
    Ｗ’は、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７員の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す。］。
  22. 　式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）又は式（ＶＩＩＩ）におけるＴｇは、以下の式（６）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    ＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基、
    以下の式（７）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１又は２）を表し、
    環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
    Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
    ＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基、又は、
    以下の式（８）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
    ｗは、０、１又は２を表し、
    環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
    ＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す、請求項２１に記載のヌクレオチド。
  23. 　式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）又は式（ＶＩＩＩ）における酸性条件下で除去可能な一時保護基は、トリチル基、９－（９－フェニル）キサンテニル基、９－フェニルチオキサンテニル基、ジ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基、モノ（Ｃ１－１８アルコキシ）トリチル基、及びアルキルもしくはアリル基で置換されたシリル基からなる群より選ばれる基であって、フッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基は、アルキルもしくはアリル基で置換されたシリル基であり、式（ＩＩ）における酸性条件下で除去可能な一時保護基は、トリチル基、９－（９－フェニル）キサンテニル基、９－フェニルチオキサンテニル基、ジ（Ｃ１－６アルコキシ）トリチル基、モノ（Ｃ１－１８アルコキシ）トリチル基、及びアルキルもしくはアリル基で置換されたシリル基からなる群より選ばれる基である、請求項１９～２２のいずれか一つに記載のヌクレオチド。
  24. 　式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）又は式（ＶＩＩＩ）におけるＢａｓｅは、ハロゲン原子、アルキル基、アラルキル基、アルコキシ基、アシル基、アルコキシアルキル基、水酸基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、カルボキシ基、シアノ基及びニトロ基からなる群から選ばれる１－３個の置換基で置換されてもよい、ピリミジン塩基又はプリン塩基である、請求項１９～２２のいずれか一つに記載のヌクレオチド。
  25. 　式（Ｉ）、式（Ｖ）又は式（ＶＩ）におけるＤは、メチル基、ベンジル基、ｐ－メトキシベンジル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、メトキシメチル基、メトキシエチル基、２－テトラヒドロピラニル基、エトキシエチル基、シアノエチル基、シアノエトキシメチル基、フェニルカルバモイル基、１，１－ジオキソチオモルホリン－４－チオカルバモイル基、アセチル基、ピバロイル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基（ＴＢＳ）、［（トリイソプロピルシリル）オキシ］メチル基、又は１－（４－クロロフェニル）－４－エトキシピペリジン－４－イル基で保護されていてもよい水酸基である、請求項１９～２２のいずれか一つに記載のヌクレオチド。
  26. 　以下の工程（Ａ１）－（Ａ３）：
    （Ａ１）非極性又は極性溶媒中において、３’位水酸基又は５’位水酸基が担体保護基で保護され、かつ５’位水酸基又は３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬とを反応させて、５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程
    （Ａ２）工程（Ａ１）で得られた５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護された、又は５’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を添加して、５’位水酸基又は３’位水酸基を介してｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
    （Ａ３）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ａ２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程、
    を含み、
    　前記担体保護基が、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基である、オリゴヌクレオチドの製造方法。
  27. 　前記担体保護基は、以下の式（６）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、１から５の整数を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    ＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基、
    以下の式（７）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数を表し、
    環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
    Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
    ＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基、又は、
    以下の式（８）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数を表し、
    ｗは、０、１又は２を表し、
    環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
    ＊＊は、３’位水酸基又は５’位水酸基への結合を表す。）で表される基である、請求項２６に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
  28. 　工程（Ａ１）における、一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程が、反応液を塩基で中和した後、
    （ｉ）一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを単離する工程、又は（ｉｉ）中和した反応液を水洗し有機層を回収する工程、
    である請求項２６又は２７に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
  29. 　さらに、下記工程（Ａ４）を含む請求項２６又は２７に記載の方法、
    （Ａ４）工程（A１）もしくは（Ａ３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
  30. 　さらに、下記工程（Ａ５）を含む、請求項２９に記載の方法、
    （Ａ５）工程（Ａ４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
  31. 　以下の式（Ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋を形成してもよく、
    ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
    Ｗ／Ｔｇ又はＴｇ／Ｗは、Ｗ又はＴｇを表し、５’側がＷの場合、３’側はＴｇであり、一方、５’側がＴｇの場合、３’側はＷであり、ここで、
    Ｗは、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０，１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合でなく、
    ＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］
    で表されるヌクレオチド、又は
    以下の式（ＩＩ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、炭素数１～６個のアルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
    Ｗ’は、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０，１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］
    で表されるヌクレオチド、
    を還元処理、ヒドラジンもしくはアルキルヒドラジンとの反応、又は加水分解することにより、上記式（５）で表される保護基を除去する工程を含む、
    以下の式（ＩＩＩ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
     （式中、Ｂａｓｅ、Ｄ、Ｒ２、Ｑ１、及びＷの定義は式（Ｉ）と同様であり、Ｗ／Ｈは、Ｗ又は水素を表し、５’側がＷの場合、３’側は水素であり、一方、５’側が水素の場合、３’側はＷである。）
    、又は以下の式（ＩＶ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
     （式中、Ｂａｓｅ、Ｒ２、Ｖ、及びＷ’の定義は式（ＩＩ）と同様である。）
    で表されるヌクレオチドの製造方法。
  32. 　前記還元処理が、ホウ素含有還元剤、又はホウ素含有還元剤とアミンの両者、を用いる、請求項３１に記載の製造方法。
  33. 　以下の工程（Ｂ１）－（Ｂ３）：
    （Ｂ１）非極性又は極性溶媒中において、担体保護基が３’末端の核酸塩基又は５’末端の核酸塩基に結合し、３’位水酸基及び５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、５’位水酸基又は３’位水酸基の一方のみの一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程
    （Ｂ２）工程（Ｂ１）で得られた５’位水酸基又は３’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、３’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護された、又は５’位水酸基がホスホロアミダイト化されかつ３’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）を添加して、５’位水酸基又は３’位水酸基を介してｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
    （Ｂ３）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ｂ２）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程、
    を含み、
    　前記担体保護基が、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、オリゴヌクレオチドの製造方法。
  34. 　前記担体保護基は、以下の式（６）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    ＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基、
    以下の式（７）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１，又は２）を表し、
    環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
    Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
    ＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基、又は、
    以下の式（８）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
    ｗは、０、１又は２を表し、
    環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
    ＊＊は、核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、請求項３３に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
  35. 　工程（Ｂ１）における、一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程が、反応液を塩基で中和した後、
    （ｉ）一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを単離する工程、又は（ｉｉ）中和した反応液を水洗し有機層を回収する工程、
    である請求項３３又は３４に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
  36. 　さらに、下記工程（Ｂ４）を含む請求項３３又は３４に記載の方法、
    （Ｂ４）工程（Ｂ１）及び／又は（Ｂ３）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
  37. 　さらに、下記工程（Ｂ５）を含む請求項３６に記載の方法、
    （Ｂ５）工程（Ｂ４）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
  38. 　以下の式（Ｖ）或いは式（ＶＩ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ＋１個のＤは、独立してそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、あるいは保護されてもよい水酸基を表すか、を表すか、又は、４’位の炭素との間で架橋（好ましくは、ロック核酸（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、アミド架橋型核酸、グアニジン架橋型核酸又はスピロシクロプロピレン架橋型核酸の架橋）を形成してもよく、
    ｏ個のＱ１は、独立してそれぞれ電子吸引性基（例えば、シアノ基、ニトロ基、２－ピリジル基もしくは４－ピリジル基など）を有するＣ１－４アルキル基、アリル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基を有するＣ２－６アルケニル基もしくはＣ６－１０アリール基、又は水素原子を表し、
    Ｗは、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合でなく、
    ＊＊は、Ｏへの結合を表す。）で表される基を示す。］
    で表されるヌクレオチド、又は
    以下の式（ＶＩＩ）或いは式（ＶＩＩＩ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
     ［式中、
    ｏは、０以上の任意に整数（好ましくは、１～５０の整数）を表し、
    ｏ＋１個のＢａｓｅは、独立してそれぞれ修飾されていてもよい核酸塩基を表し、
    ｏ個のＶは、独立してそれぞれ、炭素数１～６個のアルコキシ基、ジ（Ｃ１－６アルキル）アミノ基、又は４位の窒素が保護基で保護されさらに置換されてもよいピペラジノ基を表し、
    Ｗ’は、それぞれ独立して、水素原子、又は酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基を表し、
    ｏ個のＲ２は、独立してそれぞれＯ又はＳを表し、
    Ｔｇは、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６のアルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、Ｂａｓｅへの結合を表す。）で表される基を示す。］
    で表されるヌクレオチド、
    を加水分解もしくはアンモリシスすることにより、上記式（５）で表される保護基を除去する工程を含む、
    以下の式（ＩＸ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
     （式中、Ｂａｓｅ、Ｄ、Ｒ２、Ｗ及びｏの定義は式（Ｖ）或いは式（ＶＩ）と同様である。）
    、又は以下の式（Ｘ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
     （式中、Ｂａｓｅ、Ｒ２、Ｖ、Ｗ’及びｏの定義は式（ＶＩＩ）或いは式（ＶＩＩＩ）と同様である。）
    で表されるヌクレオチドの製造方法。
  39. 　以下の工程（Ｃ１）－（Ｃ４）：
    （Ｃ１）以下の（ａ）及び（ｂ）の工程をそれぞれ行い、５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド、及び３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを得る工程：
    （ａ）非極性又は極性溶媒中において、３’位水酸基が担体保護基で保護され、かつ５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｎ個重合オリゴヌクレオチド（ｎは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、５’位水酸基の一時保護基を除去した後、ｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程、及び
    （ｂ）非極性又は極性溶媒中において、担体保護基が３’末端の核酸塩基に結合し、３’位水酸基及び５’位水酸基が酸性条件下もしくはフッ素アニオンを含む試薬で除去可能な一時保護基で保護されたｐ個重合オリゴヌクレオチド（ｐは、１以上の任意の整数を示す。）と、酸及びカチオン補足剤とを、又はフッ素アニオンを含む試薬（好ましくはフッ化水素酸ピリジン塩、テトラブチルアンモニウムフルオライド）とを反応させて、３’位水酸基の一時保護基のみを除去した後、ｐ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程、
    ここで、（ａ）及び（ｂ）の担体保護基は、同じであっても異なってもよい、
    （Ｃ２）工程（Ｃ１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの５’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程、又は、工程（Ｃ１）で得られた３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの３’位水酸基をホスホロアミダイト化する工程、
    （Ｃ３）工程（Ｃ１）で得られた３’位水酸基の一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、工程（Ｃ２）で得られた５’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを添加して、又は、工程（Ｃ１）で得られた５’位水酸基の一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドの溶液に、工程（Ｃ２）で得られた３’位水酸基がホスホロアミダイト化されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを添加して、ｎ個重合オリゴヌクレオチドとｐ個重合オリゴヌクレオチドとを、ホスファイトトリエステル結合により縮合させる工程、及び
    （Ｃ４）酸化剤又は硫化剤を用いて、工程（Ｃ３）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドのホスファイトトリエステル結合を、ホスフェートトリエステル結合又はチオホスフェートトリエステル結合へと変換する工程、
    を含み、
    　前記担体保護基が、以下の式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    Ｘは、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳであって、ＸがＣの場合は、ＣＨ2を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、ＸがＮの場合は、ＮＲ１を表すか、又はＹと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の複素環を形成しても良く、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    Ｙは、単結合、Ｂ（ＣＨ２）ｔ＊（ここで、Ｂは置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、ｔは０、１又は２であり、＊はＸへの結合を示す。）、又はＸと一緒になって置換基を有してもよい５～７員の炭素環又は複素環を形成しても良く、
    Ｚは、単結合又は（ＣＨ２）Sであり、ここで、ｓは１から５の整数（好ましくは１～３の整数）である。但し、Ｙが単結合の場合、Ｚは単結合ではなく、
    ＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、オリゴヌクレオチドの製造方法。
  40. 　前記担体保護基は、以下の式（６）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１０～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、１から５の整数（好ましくは１～３の整数）を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１－６アルキル基であり、
    ＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基、
    以下の式（７）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０，１，又は２）を表し、
    環Ａは、置換基を有してもよい５～７員環を表し、
    Ｘは、Ｃ又はＮを表し、
    ＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基、又は、
    以下の式（８）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
    （式中、
    Ｒは、独立してそれぞれ、置換されてもよい、炭素数１４～６０（好ましくは炭素数１４～５０、より好ましくは炭素数１４～４０、さらに好ましは炭素数１４～３０）のアルケニル基を表し、
    ｎは、２又は３を表し、複数存在するＯＲは同一又は異なってもよく、
    ｍは、０又は１を表し、
    ｐは、１又は２を表し、
    ｕは、０又は１から５の整数（好ましくは０又は１～３の整数、より好ましくは０、１又は２）を表し、
    ｗは、０、１又は２を表し、
    環Ｂは、置換基を有してもよい炭素数５～７の炭素環を表し、
    Ｘは、ＮＲ１、Ｏ又はＳを表し、ここで、Ｒ１は、Ｈ又はＣＨ３であり、
    ＊＊は、３’位水酸基又は３’末端の核酸塩基への結合を表す。）で表される基である、請求項３９に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
  41. 　工程（Ｃ１）における、一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程又は一時保護基が除去されたｐ個重合オリゴヌクレオチドを反応液中の不純物から分離する工程が、反応液を塩基で中和した後、
    （ｉ）一時保護基が除去されたｎ個重合オリゴヌクレオチド又はｐ個重合オリゴヌクレオチドを単離する工程、又は（ｉｉ）中和した反応液を水洗し有機層を回収する工程、
    である請求項３９又は４０に記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
  42. 　さらに、下記工程（Ｃ５）を含む請求項３９又は４０に記載の方法、
    （Ｃ５）工程（Ｃ１）及び／又は（Ｃ２）及び／又は（Ｃ４）で得られた反応液に極性溶媒を添加して、ｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドを沈殿させて、固液分離により取得する工程。
  43. 　さらに、下記工程（Ｃ６）を含む請求項４２に記載の方法、
    （Ｃ６）工程（Ｃ５）で得られたｎ＋ｐ個重合オリゴヌクレオチドの保護基を全て除去する工程。
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