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WO2024143514A1 - 環状ペプチドの精製法及び製造法 - Google Patents

環状ペプチドの精製法及び製造法 Download PDF

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WO2024143514A1
WO2024143514A1 PCT/JP2023/047127 JP2023047127W WO2024143514A1 WO 2024143514 A1 WO2024143514 A1 WO 2024143514A1 JP 2023047127 W JP2023047127 W JP 2023047127W WO 2024143514 A1 WO2024143514 A1 WO 2024143514A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
solvent
solution
cyclic peptide
compound
solid
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2023/047127
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
実 田宮
啓司 新居
仁 飯倉
玲 海老原
祐貴 猪俣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
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Priority to JP2024567964A priority patent/JPWO2024143514A1/ja
Priority to CN202380089424.7A priority patent/CN120418263A/zh
Priority to EP23912291.4A priority patent/EP4631955A1/en
Publication of WO2024143514A1 publication Critical patent/WO2024143514A1/ja
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/12—Cyclic peptides with only normal peptide bonds in the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
    • C07K1/32—Extraction; Separation; Purification by precipitation as complexes

Definitions

  • the present invention relates to a method for purifying a cyclic peptide and a method for producing a cyclic peptide using the same.
  • Non-Patent Document 1 purification by column chromatography (Non-Patent Document 1) has been known as a method for purifying cyclic peptides.
  • Patent Document 1 describes that "a cyclic peptide compound produced without isolating and purifying an intermediate can be isolated and purified by crystallization without relying on column chromatography to obtain crystals of the cyclic peptide compound.”
  • the present invention relates to, for example, each of the following inventions [1] to [150].
  • [1] 1.
  • the purification method includes the following separation step (i) or (ii): (i) separating the cyclic peptide to be purified from a mixture containing the cyclic peptide to be purified as a complex with a metal atom or a metal ion; (ii) separating the cyclic peptide to be purified or the peptide to be an impurity from a mixture containing the cyclic peptide to be purified and a peptide to be an impurity as a complex with a metal atom or a metal ion, wherein the metal atom is at least one selected from the group consisting of an alkali metal atom, an alkaline earth metal atom, a transition metal atom, a poor metal atom, and a rare earth metal atom;
  • the method for purifying wherein the metal atom is at least one selected from the group consist
  • a method for purifying a cyclic peptide comprising the steps of: (1)' comprising a step of mixing a mixture containing a cyclic peptide to be purified, or a mixture containing a cyclic peptide to be purified and a peptide as an impurity, with a metal atom or a metal ion in a first solvent;
  • the metal atom is at least one selected from the group consisting of an alkali metal atom, an alkaline earth metal atom, a transition metal atom, a poor metal atom, and a rare earth metal atom;
  • the method for purifying, wherein the metal ion is at least one selected from the group consisting of an alkali metal ion, an alkaline earth metal ion, a transition metal ion, a poor metal ion and a rare earth metal ion.
  • a method for purifying a cyclic peptide comprising the steps of: (4) mixing the cyclic peptide to be purified or the peptide as an impurity with a complex of a metal atom or a metal ion, and a second solvent; the metal atom is at least one selected from the group consisting of an alkali metal atom, an alkaline earth metal atom, a transition metal atom, a poor metal atom, and a rare earth metal atom; The method for purifying, wherein the metal ion is at least one selected from the group consisting of an alkali metal ion, an alkaline earth metal ion, a transition metal ion, a poor metal ion and a rare earth metal ion.
  • step (6) further comprises a step of removing the third solvent from the organic phase to obtain the cyclic peptide as the purification target.
  • step (6) further comprises a step of removing the third solvent from the organic phase to obtain the cyclic peptide as the purification target.
  • the removal of the third solvent from the organic phase is carried out by vacuum distillation.
  • step (6) further comprises a step of mixing the separated complex, a fourth solvent, and a ligand or a compound that generates a ligand, or an anion or a compound that generates an anion, to form a first complex or a first metal salt between the metal atom or the metal ion and the ligand or the anion.
  • the complex is a complex obtained by contacting the cyclic peptide as a purification target or the peptide as an impurity with the metal atom or the metal ion.
  • the poor metal is at least one selected from the group consisting of bismuth and indium.
  • the metal atom is at least one selected from the group consisting of magnesium atoms, scandium atoms, and samarium atoms, The purification method according to any one of [1] to [57], wherein the metal ion is at least one selected from the group consisting of magnesium ions, scandium ions, and samarium ions.
  • the metal atoms include magnesium atoms, The purification method according to any one of [1] to [57], wherein the metal ion includes a magnesium ion.
  • metal salt is at least one selected from the group consisting of iodide salts, bromide salts, chloride salts, perchlorate salts, oxide salts, trifluoromethanesulfonate salts, toluenesulfonate salts, isopropylsulfonate salts, methanesulfonate salts, carbonate salts, acetate salts, bis(trifluoromethanesulfonic acid)imide salts, ethylmalonate salts, and nitrite salts.
  • the metal salt is at least one selected from the group consisting of iodide salts, bromide salts, chloride salts, perchlorate salts, oxide salts, trifluoromethanesulfonate salts, toluenesulfonate salts, isopropylsulfonate salts, methanesulfonate salts, carbonate salts, acetate salts, bis(tri
  • the bis(trifluoromethanesulfonyl)imide salt is at least one selected from the group consisting of magnesium bis(trifluoromethanesulfonyl)imide, zinc bis(trifluoromethanesulfonyl)imide, and iron(II) bis(trifluoromethanesulfonyl)imide.
  • the ethyl malonate is magnesium ethyl malonate.
  • the metal atom or the metal ion is selected from the group consisting of lithium iodide, lithium perchlorate, lithium tetrafluoroborate, lithium bromide, lithium chloride, potassium iodide, lithium fluoride, potassium carbonate, potassium nitrite, potassium acetate, potassium tetrafluoroborate, potassium hexafluorophosphate, barium iodide, barium perchlorate, magnesium ethylmalonate, magnesium bis(trifluoromethanesulfonic acid)imide, magnesium oxide, magnesium bromide, magnesium perchlorate, magnesium iodide, magnesium trifluoromethanesulfonate, magnesium sulfate, magnesium acetate, magnesium chloride, magnesium fluoride, calcium iodide, calcium perchlorate, calcium bromide, calcium trifluoromethanesulfonate, calcium carbonate, strontium iodide, scandium trifluoromethanesulfon
  • [112] The purification method according to any one of [73] and [109] to [111], wherein the second complex is at least one selected from the group consisting of iron(III) tris(acetylacetonate), ferrocene, zinc(II) acetylacetonate zinc(II) and tungsten hexacarbonyl.
  • the first solvent is a solvent capable of forming a complex between the cyclic peptide as a purification target or the peptide as an impurity and the metal atom or the metal ion.
  • the third solvent is at least one selected from the group consisting of 2-methyltetrahydrofuran, tetrahydrofuran, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, ethyl acetate, MTBE (tert-butyl methyl ether), diethyl ether, dichloromethane, chloroform, DME (dimethyl ether), CPME (cyclopentyl methyl ether), 4-methyltetrahydropyran, heptane, and toluene.
  • the third solvent is at least one selected from the group consisting of 2-methyltetrahydrofuran, tetrahydrofuran, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, ethyl acetate, MTBE (tert-butyl methyl ether), diethyl ether, dichloromethane, chloroform, DME (dimethyl ether), CPME (cyclopentyl methyl ether), 4-
  • mixing may mean the “operation” of mixing a substance with another substance, and does not necessarily mean only bringing a substance into a mixed state with another substance.
  • mixing (i) and (ii) includes any of the following: adding (i) to (ii), adding (ii) to (i), and adding (i) and (ii) simultaneously.
  • the term “to” indicating a range includes both ends of the range, for example, “A to B” means a range equal to or greater than A and equal to or less than B.
  • the term “about” when used in combination with a numerical value means a range of +10% and -10% of the numerical value.
  • A, B, and/or C includes the following seven variations: (i) A, (ii) B, (iii) C, (iv) A and B, (v) A and C, (vi) B and C, and (vii) A, B, and C.
  • the metal atom or the metal ion is preferably 0.2 molar equivalents to 12 molar equivalents, more preferably 0.5 molar equivalents to 4 molar equivalents, and most preferably 0.8 molar equivalents to 1.2 molar equivalents.
  • the first complex may mean a complex (complex) between the cyclic peptide to be purified or the peptide that is an impurity and a metal atom or a metal ion, and a complex different from the second complex, and may be the same complex as the complex between the cyclic peptide to be purified or the peptide that is an impurity and a metal atom or a metal ion, and the second complex.
  • a solution in which the compound to be measured is dissolved in a solvent suitable for NMR measurement can be added to an NMR measurement sample tube and set in a measurement device for measurement.
  • the solvent suitable for NMR measurement is preferably a solvent capable of dissolving the compound to be measured, and a commercially available deuterated solvent can also be used.
  • the NMR measurement conditions can be conditions known to those skilled in the art or conditions described in the manual of the measurement device.
  • the measurement conditions are not particularly limited as long as the target peak component can be measured, but for example, the measurement temperature can be in the range of 273 K to 320 K, the integration time can be in the range of 1 second to 7 days, and the rotation speed of the sample tube can be in the range of 0 to 20 Hz.
  • Each may have a substituent, and the substituents are not limited, and may be independently selected from any substituents including, for example, a halogen atom, an oxygen atom, a nitrogen atom, a sulfur atom, a boron atom, a silicon atom, or a phosphorus atom. That is, examples include alkyl groups, alkoxy groups, alkoxyalkyl groups, alkenyl groups, alkynyl groups, aryl groups, heteroaryl groups, aralkyl groups, cycloalkyl groups, etc., which may be substituted, or oxo, aminocarbonyl, halogen atoms, etc.
  • side chain of an amino acid means, in the case of an ⁇ -amino acid, the atomic group attached to the carbon to which the amino group and carboxyl group are attached ( ⁇ -carbon).
  • ⁇ -amino acid the atomic group attached to the carbon to which the amino group and carboxyl group are attached
  • the methyl group of Ala is the side chain of an amino acid.
  • the atomic group attached to the ⁇ -carbon and/or ⁇ -carbon can be the side chain of the amino acid
  • the atomic group attached to the ⁇ -carbon, ⁇ -carbon, and/or ⁇ -carbon can be the side chain of the amino acid.
  • the "main chain of an amino acid” refers to the chain portion consisting of an amino group, an ⁇ -carbon, and a carboxyl group in the case of an ⁇ -amino acid, the chain portion consisting of an amino group, a ⁇ -carbon, an ⁇ -carbon, and a carboxyl group in the case of a ⁇ -amino acid, and the chain portion consisting of an amino group, a ⁇ -carbon, a ⁇ -carbon, an ⁇ -carbon, and a carboxyl group in the case of a ⁇ -amino acid.
  • the main chain amino group of an amino acid may be unsubstituted (-NH 2 ) or substituted (i.e., -NHR, where R is, for example, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, a heteroaryl group, an aralkyl group, a cycloalkyl group, or the like, which may have a substituent, and the carbon chain bonded to the N atom and the carbon atom at the ⁇ -position may form a ring, as in proline).
  • R is, for example, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, a heteroaryl group, an aralkyl group, a cycloalkyl group, or the like, which may have a substituent, and the carbon chain bonded to the N atom and the carbon atom at the ⁇ -position may form a ring, as in proline).
  • substituteduents containing halogen atoms include fluoro (-F), chloro (-Cl), bromo (-Br), and iodine (-I).
  • examples of a "substituent containing a phosphorus atom” include phosphoryl (-P(O)-R 1 R 2 ), phosphonyl (-O-P(O)-R 1 R 2 ) and phospho (-PO 3 H 2 ).
  • the cyclic peptide to be purified may contain at least one or more unnatural amino acids.
  • the cyclic peptide to be purified may contain an N-substituted amino acid.
  • the cyclic peptide to be purified may contain 3 or more, 4 or more, 5 or more, or 6 or more N-substituted amino acids, and may contain 15 or less, 13 or less, or 10 or less.
  • the number of N-substituted amino acid residues in the cyclic peptide to be purified may be 45% or more, 50% or more, 55% or more, or 60% or more of the number of amino acid residues in the cyclic portion of the cyclic peptide, and may be 80% or less, 75% or less, 70% or less, or 65% or less, with 45% to 80% being preferred.
  • an amino acid whose main chain amino group is unsubstituted is referred to as an "N-unsubstituted amino acid".
  • the cyclic peptide to be purified may contain an N-unsubstituted amino acid.
  • the N-unsubstituted amino acid may be a non-natural amino acid.
  • the ratio of the number of the N-unsubstituted amino acids in the cyclic peptide to be purified to the total number of amino acid residues in the cyclic peptide to be purified may be 55% or less, 50% or less, 45% or less, or 40% or less, and may be 20% or more, 25% or more, 30% or more, or 35% or more, with 20% to 55% being preferred.
  • the compounds described herein may contain non-natural isotope atoms in one or more atoms constituting such compounds.
  • the present invention also includes compounds in which any atom in a compound is replaced with another isotope atom having the same atomic number (proton number) and a different mass number (sum of the number of protons and neutrons), thereby replacing the isotope with an abundance ratio different from that of the natural isotope, that is, a compound labeled with an isotope atom.
  • Examples of isotope elements contained in the compounds of the present specification include hydrogen atoms, carbon atoms, nitrogen atoms, oxygen atoms, phosphorus atoms, sulfur atoms, fluorine atoms, and chlorine atoms, and each of these includes 2 H, 3 H, 13 C, 14 C, 15 N, 17 O, 18 O, 32 P, 35 S, 18 F, and 36 Cl.
  • Compounds labeled with isotope atoms are useful as therapeutic agents, preventive agents, research reagents (e.g., assay reagents), or diagnostic agents (e.g., in vivo imaging diagnostic agents).
  • Compounds herein containing radioactive or non-radioactive isotopes in all proportions are within the scope of the present invention.
  • Compounds labeled with isotope atoms can be prepared in a similar manner to the preparation of unlabeled compounds, using reagents and solvents containing the corresponding isotope atoms.
  • the peptide that is an impurity may be a peptide produced during the synthesis process of the cyclic peptide that is the target of purification.
  • the peptide that is an impurity may be a cyclic peptide different from the cyclic peptide that is the target of purification.
  • the peptide that is an impurity may be a cyclic peptide having twice the number of amino acids as the cyclic peptide that is the target of purification, a cyclic peptide having three times the number of amino acids as the cyclic peptide that is the target of purification, or an isomer of the cyclic peptide that is the target of purification.
  • a preferred example of an isomer is a diastereomer.
  • the metal atom or metal ion may be an atom or ion of an alkali metal, alkaline earth metal, transition metal, rare earth metal, or poor metal.
  • the alkali metal is preferably at least one selected from the group consisting of lithium, sodium, potassium, rubidium and cesium, and more preferably lithium or potassium.
  • the alkaline earth metal is preferably at least one selected from the group consisting of magnesium, calcium, strontium, and barium, and more preferably at least one selected from the group consisting of magnesium, calcium, and barium.
  • the metal atom or metal ion may be an atom or ion resulting from a metal salt or a solvate thereof, or a second complex, or may be an atom or ion resulting from a metal salt or a solvate thereof.
  • the second complex may mean a complex (complex) between the cyclic peptide to be purified or the peptide to be an impurity and a metal atom or a metal ion, or a complex different from the first complex, or a complex between the cyclic peptide to be purified or the peptide to be an impurity and a metal atom or a metal ion, or the same complex as the first complex may be used.
  • the metal salt may mean a metal salt different from the first metal salt, or may be the same metal salt as the first metal salt.
  • the bromide salt may be at least one selected from the group consisting of lithium bromide, magnesium bromide, calcium bromide, samarium(III) bromide, zinc bromide, and indium bromide.
  • the trifluoromethanesulfonate may be at least one selected from the group consisting of magnesium trifluoromethanesulfonate, calcium trifluoromethanesulfonate, scandium trifluoromethanesulfonate, samarium (III) trifluoromethanesulfonate, cerium trifluoromethanesulfonate, ytterbium trifluoromethanesulfonate, zinc trifluoromethanesulfonate, manganese trifluoromethanesulfonate, indium trifluoromethanesulfonate, iron (III) trifluoromethanesulfonate, and copper trifluoromethanesulfonate.
  • the toluenesulfonate may be zinc(II) toluenesulfonate.
  • the isopropyl sulfonate may be zinc(II) isopropyl sulfonate.
  • the methanesulfonate may be at least one selected from the group consisting of cerium(III) methanesulfonate and zinc difluoromethanesulfonate.
  • the carbonate may be at least one selected from the group consisting of potassium carbonate, calcium carbonate, and zinc carbonate.
  • the bis(trifluoromethanesulfonyl)imide salt may be at least one selected from the group consisting of magnesium bis(trifluoromethanesulfonyl)imide, zinc bis(trifluoromethanesulfonyl)imide, and iron(II) bis(trifluoromethanesulfonyl)imide.
  • the ethyl malonate may be magnesium ethyl malonate.
  • Metal atoms or metal ions include lithium iodide, lithium perchlorate, lithium tetrafluoroborate, lithium bromide, lithium chloride, potassium iodide, lithium fluoride, potassium carbonate, potassium nitrite, potassium acetate, potassium tetrafluoroborate, potassium hexafluorophosphate, barium iodide, barium perchlorate, magnesium ethylmalonate, magnesium bis(trifluoromethanesulfonic acid)imide, magnesium oxide, magnesium bromide, magnesium perchlorate, magnesium iodide, magnesium trifluoromethanesulfonate, magnesium sulfate, magnesium acetate, magnesium chloride, magnesium fluoride, calcium iodide, calcium perchlorate, calcium bromide, calcium trifluoromethanesulfonate, calcium carbonate, strontium iodide, scandium trifluoromethanesulfonate, scandium chloride, sama
  • the metal atom or metal ion is preferably an atom or ion derived from at least one metal salt or a solvate thereof selected from the group consisting of lithium iodide, lithium perchlorate, potassium iodide, barium iodide, barium perchlorate, magnesium bromide, magnesium perchlorate, magnesium iodide, magnesium trifluoromethanesulfonate, calcium bromide, scandium trifluoromethanesulfonate, samarium trifluoromethanesulfonate, cerium trifluoromethanesulfonate, ytterbium trifluoromethanesulfonate, zinc trifluoromethanesulfonate, manganese trifluoromethanesulfonate, indium trifluoromethanesulfonate, magnesium sulfate, magnesium acetate, and magnesium chloride.
  • the first solvent may be a solvent capable of forming a complex between the cyclic peptide to be purified or the peptide to be an impurity and the metal atom or the metal ion, and may include at least one solvent selected from the group consisting of alcohol-based solvents, nitrile-based solvents, benzene-based solvents, ether-based solvents, ketone-based solvents, halogen-based solvents, ester-based solvents, sulfoxide-based solvents, and amide-based solvents.
  • the first solvent is a solvent described in this paragraph, a complex between the cyclic peptide to be purified or the peptide to be an impurity and the metal atom or metal ion is easily formed.
  • alcohol-based solvents include methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, tert-butanol, 2,2,2-trifluoroethanol, ethylene glycol, etc.
  • nitrile-based solvents include chain nitriles such as acetonitrile, propionitrile, and acrylonitrile; and cyclic nitriles such as benzonitrile.
  • benzene-based solvents include toluene, o-dichlorobenzene, 1,2,4-trichlorobenzene, and xylene.
  • the ether-based solvent as the first solvent is preferably at least one selected from the group consisting of tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, 2-methyltetrahydrofuran, MTBE (tert-butyl methyl ether), DME (dimethyl ether), and CPME (cyclopentyl methyl ether).
  • the ketone-based solvent as the first solvent is preferably acetone or methyl ethyl ketone.
  • the halogen-based solvent as the first solvent is preferably dichloromethane.
  • the sulfoxide-based solvent as the first solvent is preferably dimethyl sulfoxide.
  • the amide-based solvent as the first solvent is preferably dimethylformamide or dimethylacetamide.
  • the second solvent may include at least one selected from the group consisting of ether-based solvents, benzene-based solvents, ketone-based solvents, halogen-based solvents, ester-based solvents, nitrile-based solvents, hydrocarbon-based solvents, alcohol-based solvents, sulfoxide-based solvents, and amide-based solvents.
  • the ether-based solvent as the second solvent is preferably at least one selected from the group consisting of 2-methyltetrahydrofuran, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, MTBE (tert-butyl methyl ether), DME (dimethyl ether), and CPME (cyclopentyl methyl ether).
  • the benzene-based solvent as the second solvent is preferably toluene or xylene.
  • the ketone-based solvent as the second solvent is preferably acetone or methyl ethyl ketone.
  • the halogen-based solvent as the second solvent is preferably dichloromethane.
  • the hydrocarbon-based solvent as the second solvent is preferably at least one selected from the group consisting of hexane, heptane, cyclohexane, methylcyclohexane, and isooctane.
  • the ester-based solvent as the second solvent is preferably isopropyl acetate or ethyl acetate.
  • the nitrile-based solvent as the second solvent is preferably acetonitrile.
  • the alcohol-based solvent as the second solvent is preferably at least one selected from the group consisting of methanol, ethanol, butanol, or benzyl alcohol.
  • the sulfoxide-based solvent as the second solvent is preferably dimethyl sulfoxide.
  • the amide solvent used as the second solvent is preferably dimethylformamide.
  • the second solvent is preferably a combination of isopropyl acetate or methyl ethyl ketone and heptane, a combination of dichloromethane and hexane, or a combination of acetonitrile and MTBE.
  • the third solvent may be a solvent that is immiscible with water (e.g., a solvent that has low solubility in water, a solvent that has a high octanol/water partition coefficient (log Kow), or a solvent that has a high predicted octanol/water partition coefficient).
  • a solvent that is immiscible with water e.g., a solvent that has low solubility in water, a solvent that has a high octanol/water partition coefficient (log Kow), or a solvent that has a high predicted octanol/water partition coefficient).
  • the octanol/water partition coefficient may be determined by any method known in the art or described herein.
  • the predicted octanol/water partition coefficient (Log Kow) may be determined by known means in separate explicit measurements, such as, but not limited to, a database search or literature search.
  • the method for measuring the octanol/water partition coefficient includes, but is not limited to, a method in accordance with Japanese Industrial Standard JIS 7260-107:2000 Determination of partition coefficient (1-octanol/water) - Shake flask method (https://kikakurui.com/z7/Z7260-107-2000-01.html [Accessed: December 25, 2023]).
  • the water-immiscible organic solvent includes, but is not limited to, an organic solvent having low water solubility (e.g., solubility in water of 200 g/L or less, preferably 150 g/L or less).
  • the water-immiscible organic solvent may contain other water-miscible organic solvents in trace amounts, e.g., 0.01 wt % or less.
  • the water solubility may be determined by any method known in the art or described herein. Exemplary methods for determining the solubility include, but are not limited to, gas chromatography, which may be determined by measuring the concentration of the organic solvent in water prepared by mixing equal volumes of the organic solvent and water at room temperature (e.g., 15° C. to 40° C., preferably 20° C. to 30° C.).
  • the water immiscible solvent can be characterized as an ester having 3 to 10 carbon atoms, examples of which include ethyl acetate, isopropyl acetate, n-propyl acetate, t-butyl acetate, methyl propionate, or ethyl propionate.
  • NMR measurements were performed at absolute temperatures of 298K or 278K using a Bruker AVANCE III 600 Cryo-TCI, AVANCE III HD 600 SMART-BBFO, AVANCE NEO 600 iProbeTBO, or AVANCE NEO 600 Cryo-TCI-H&F.
  • N-alkylamino acid An amino acid having an alkylated N-terminus (N-alkylamino acid) can be produced by reacting an amino acid having a non-alkylated N-terminus with an aldehyde in accordance with the method of Freidinger et al. (J. Org. Chem., 1983, 48(1), 77-81) to obtain an oxazolidinone having a cyclic protecting group introduced therein, and then carrying out a ring-opening reaction of the cyclic protecting group.
  • compound aa01 was purchased from a commercial supplier.
  • the synthesis method of compound aa02 will be described in detail.
  • EDCI.HCl (67.1 g, 350 mmol)
  • HOBt (43.4 g, 321 mmol)
  • Fmoc-Asp(OtBu)-OH (compound aa01, CAS: 71989-14-5) (120 g, 292 mmol) were mixed in order in DMF (600 mL) at 0° C.
  • the resulting mixture was stirred at 0° C. for 1 hour.
  • Pyrrolidine (26.3 mL, 321 mmol) was slowly added to the resulting reaction solution, and the mixture was stirred at 0° C.
  • dichloromethane 350 mL was added and the reaction vessel was shaken for 5 minutes. After applying nitrogen pressure to remove the liquid components in the reaction vessel, dichloromethane (350 mL) was added and the reaction vessel was shaken for 5 minutes. In this way, washing of the resin with dichloromethane was repeated five times.
  • compound aa05 Fmoc-Ile-OH, CAS: 71989-23-6
  • Fmoc-Pro-OH CAS: 71989-31-6
  • Fmoc-Asp(OAl)-OH CAS: 146982-24-3
  • peptide elongation was performed by the basic synthesis method of a cyclic peptide shown in Figure 1.
  • the basic synthesis method of a cyclic peptide shown in Figure 1 is as follows: 1) A peptide elongation reaction from the N-terminus of an amino acid by the Fmoc method using a carboxyl group of the Asp side chain or a carboxyl group of a peptide main chain supported on a 2-chlorotrityl resin (a peptide chain elongation reaction using an amino acid protected with an Fmoc group as a raw material); 2) Cleavage process of peptide from 2-chlorotrityl resin; 3) Amide cyclization by condensation of the carboxyl group of the Asp side chain or the carboxyl group of the peptide main chain generated by the cleavage process from the 2-chlorotrityl resin with the amino group of the N-terminus of the peptide chain (triangle unit).
  • Peptide compounds containing N-alkylamino acids can be synthesized using the N-alkylamino acids protected by Fmoc groups shown in Tables 2 to 4 as starting materials according to " ⁇ General peptide synthesis method>" described in the present Examples and Reference Examples.
  • the number of molar equivalents was calculated based on the amino acid loading rate (mmol/g) of the resin used as the raw material multiplied by the amount of resin used (usually 100 mg).
  • the resin was washed 4 times with DMF (0.7 mL per reaction vessel) and 4 times with DCM (0.7 mL per reaction vessel), and dried to obtain Fmoc-MeAla-Pro-MeAla-Cha-Leu-Pro-MePhe(34-F2)-Ala(cPent)-MePhe(4-F)-MeVal-Asp(O-Trt(2-Cl)-resin)-pyrro (compound 3).
  • the number of molar equivalents was calculated based on the amino acid loading rate (mmol/g) of the resin used as the raw material multiplied by the amount of resin used (usually 100 mg).
  • the production of the desired cyclic peptide was confirmed by LC/MS measurement (Waters SQ Detector2), and the reaction solution was distilled under reduced pressure using a Genevac high-throughput centrifugal evaporator (HT-12).
  • the compound was extracted with 1,2-dimethyl-2,5-dihydro-1,2,3-tetrahydrofuran-2,6-dihydro-2,7-trimethyl-4-(2-fluorophenyl)methyl-3-isobutyl-25-isopropyl-9,10,18,19,26,29,35-heptamethyl-22-(pyrrolidine-1-carbonyl)-1,4,7,10,16,19,23,26,29,32,35-undecazatricyclo[35.3.0.012,16]tetracontane-2,5,8,11,17,20,24,27,30,33,36-undecaone) (2.3 g, 68%, purity 84% [peak area percentage]).
  • isomer 1 and isomer 2, which are isomers of compound 6 were confirmed from the results of accurate mass analysis before and after the retention time of compound 6 (around 11.1 minutes) (around retention time 10.8 minutes and around retention time 11.4 minutes).
  • isomer 1 of compound 6 observed around retention time 10.8 minutes was present at a peak area percentage of 2.0%
  • isomer 2 of compound 6 observed around retention time 11.4 minutes was present at a peak area percentage of 6.8%.
  • isomer 1 and/or isomer 2 are presumed to be diastereomers of compound 6.
  • the relative retention time refers to the value obtained by dividing the retention time of each peak by the retention time of the target product (compound 6 in this case).
  • the 1 H-NMR spectrum of compound 6 without the addition of magnesium perchlorate was compared with the 1 H-NMR spectrum of compound 6 with the addition of about 1 molar equivalent of magnesium perchlorate relative to compound 6.
  • the spectrum was marked as "not formed” if this did not suggest the formation of a complex.
  • Example 1-1 The sample for HPLC measurement in Example 1-1 was prepared to have an initial concentration of about 0.3 mg/mL.
  • HPLC was performed on a sample prepared under the same conditions (purity analysis conditions A) as the purity confirmation conditions for compound 6 in Reference Example 1-2.
  • purity analysis conditions A purity analysis conditions
  • an accurately prepared sample of about 0.3 mg/mL was subjected to HPLC measurement under the above conditions, and the purity and recovery rate were calculated based on the peak area percentage and peak area (measured at 220 nm).
  • the ratio of isomer 1 and isomer 2 to compound 6 and the purification efficiency were calculated.
  • Recovery rate calculation method 1 For example, if an experiment was conducted using about a mg of raw material, the solid and solution were centrifuged, the solvent was removed by vacuum reduction or nitrogen spraying, and the supernatant was vacuum dried. b mL of acetonitrile was added to the solid, and (150 b/a) ⁇ L of the resulting solution was sampled, and then a sample was prepared so that the entire solution was 0.5 mL of 50% v/v acetonitrile aqueous solution. The HPLC of the prepared sample and an accurately prepared 0.30 mg/mL standard were measured, and if the peak areas (220 nm) of the target substance were c, d, and d, respectively, the recovery rate was expressed by the following formula. In addition, correction was performed based on the weighed value in consideration of the case where the actual weighed value (e mg) does not match the assumed weight a mg.
  • Recovery rate calculation method 3 In addition, if an experiment was performed using a mg of raw material, the supernatant and solid were centrifuged, the solvent contained in the supernatant or solid was removed by vacuum distillation and dried, and then 0.5 mL (or 1.0 mL) of acetonitrile was added, and 5 ⁇ L (or 10 ⁇ L) of the resulting solution was mixed with 495 ⁇ L (or 490 ⁇ L) of acetonitrile to prepare a sample. Meanwhile, d mg of raw material was weighed and a standard was prepared in a 10 mL measuring flask. The HPLC of the prepared sample and standard were measured, and if the peak areas (220 nm) of the target product were f and e, respectively, the recovery rate was expressed by the following formula.
  • the obtained solid was dried for 6 hours and then dissolved in acetonitrile (0.5 mL), and the purity and recovery rate were confirmed by HPLC, showing that the purity was 90% and the recovery rate was 76%. It was confirmed that the precipitated solid was purified by these operations.
  • Methyl ethyl ketone (0.33 mL) was further added and stirred for 6 hours, and the resulting solid and solution were centrifuged. After distilling off the solvent, the vacuum-dried supernatant and solid were redissolved in acetonitrile (1.0 mL). From the obtained supernatant and acetonitrile solution of the solid (1.0 mL), 15 ⁇ L was sampled, and the whole solution was adjusted to 0.5 mL of 50% v/v acetonitrile aqueous solution. The purity and recovery rate were confirmed by HPLC, and it was confirmed that the solid was purified.
  • the masses of the inorganic salts in Runs 27 to 31 were calculated from the volume of the solution obtained by preparing an acetonitrile solution of each inorganic salt, dispensing it, and mixing it with compound 6.
  • the obtained solid was washed with a mixed solution of dichloromethane (1 mL) and hexane (0.5 mL), and the solid obtained by centrifugation was vacuum dried overnight, and 13.64 mg of compound 6-Mg(ClO 4 ) 2 complex was obtained as a solid.
  • the purity and recovery rate of the obtained complex were confirmed by HPLC, and it was found that the purity was 90% and the recovery rate was 82%. It was confirmed that the precipitated solid was purified by these operations.
  • Table 11 shows the calculation results of the purity of the supernatant and solid, the recovery rate, the ratio of compound 6 to isomer 1 or isomer 2 given by the following formula, and the purification efficiency for confirming the degree to which compound 6, isomer 1, and isomer 2 were separated from compound 6.
  • Ratio of isomer 1 to compound 6 x 100 (Peak area of isomer 1) ⁇ (Peak area of compound 6) ⁇ 100
  • Runs 27-31 ethanol (or 60% ethanol in water) was used as the solvent for complex formation, and a purification effect was confirmed in the supernatant in Runs 27 and 28, and in the solid in Runs 30 and 31. Although no significant improvement in purity was observed in Run 29, the purification efficiency was calculated by focusing on the peak at relative retention time 0.71 as shown in Figure 8, and the purification efficiency in the solid was -131%, while in the supernatant it was 100% (not observed), confirming the purification effect.
  • the reason why a purification effect was observed in Runs 27-31 is thought to be that the metal salt and compound 6 (or impurities) were dissolved and mixed together in ethanol (or 60% ethanol in water), allowing the formation of a complex.
  • Hexane (0.5 mL) was added to each solution and stirred for 1 minute, after which the resulting solid and liquid were quickly centrifuged, and 15 ⁇ L was sampled from the supernatant.
  • the solution was stirred again, and 10 minutes after the addition of hexane, centrifuged again, and the supernatant was sampled (15 ⁇ L).
  • 30 minutes, 1 hour, 2 hours, 6 hours, and 2 days after the addition of hexane each solution was centrifuged and the supernatant was sampled (15 ⁇ L).
  • the solvent was removed from the samples at each stage, and the entire solution was prepared to be 50 ⁇ L of 50% v/v acetonitrile aqueous solution.
  • the solvent was removed from the samples sampled at each stage, and the entire solution was prepared to be 0.5 mL of 50% v/v acetonitrile aqueous solution.
  • the purity and recovery rate of the supernatant were confirmed by HPLC, and the purity of the standard was 80%, while the purity of the supernatant was 62% and the recovery rate was 21%, indicating that there was a purification effect.
  • the solvent was removed from the samples sampled at each stage, and the samples were prepared so that the total solution was 250 ⁇ L and 1.5 mL of 50% v/v acetonitrile aqueous solution, respectively, to match the concentration.
  • the purity of the supernatant decreased in both cases, and a purification effect was observed.
  • Ratio of Impurity 1 to Compound 9 x 100 (Peak area of impurity 1) ⁇ (Peak area of compound 9) ⁇ 100
  • Ratio of impurity 2 to compound 9 x 100 (Peak area of impurity 2) ⁇ (Peak area of compound 9) ⁇ 100
  • FIG. 2-a is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) without the addition of magnesium perchlorate (Mg(ClO 4 ) 2 ).
  • FIG. 2-b is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when magnesium perchlorate (Mg(ClO 4 ) 2 ) was added in an amount of 1 molar equivalent to compound 6.
  • FIG. 2-d is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when magnesium perchlorate (Mg(ClO 4 ) 2 ) was added in an amount of 6 molar equivalents relative to compound 6.
  • Figure 3 shows 1H-NMR spectra obtained by measuring 1H-NMR at 298K for a solution obtained by dissolving compound 6 in acetonitrile-d3 ( CD3CN ) (cyclic peptide concentration: 1.4 mM) and for solutions obtained by adding 1, 3, and 6 molar equivalents of magnesium iodide ( MgI2 ) to the cyclic peptide (cyclic peptide concentration: 1.4 mM, metal salt addition experiment).
  • CD3CN acetonitrile-d3
  • MgI2 magnesium iodide
  • FIG. 4 shows 1H-NMR spectra obtained by measuring 1H-NMR at 298K for a solution obtained by dissolving compound 6 in acetonitrile-d3 ( CD3CN ) (cyclic peptide concentration: 1.4 mM) and for solutions obtained by adding 1, 3, and 6 molar equivalents of magnesium trifluorosulfonate (Mg(OTf) 2 ) to the cyclic peptide (cyclic peptide concentration: 1.4 mM, metal salt addition experiment).
  • CD3CN acetonitrile-d3
  • Mg(OTf) 2 magnesium trifluorosulfonate
  • FIG. 4-b is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when magnesium trifluorosulfonate (Mg(OTf) 2 ) was added in an amount of 1 molar equivalent to compound 6.
  • FIG. 5-b is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when calcium iodide (CaI 2 ) was added in an amount of 1 molar equivalent relative to compound 6.
  • FIG. 6 shows 1H-NMR spectra obtained by measuring 1H-NMR at 298K for a solution obtained by dissolving compound 6 in acetonitrile-d3 (CD 3 CN) (cyclic peptide concentration: 1.4 mM) and for solutions obtained by adding 1, 3, and 6 molar equivalents of scandium(III) trifluorosulfonate (Sc(OTf) 3 ) to the cyclic peptide (cyclic peptide concentration: 1.4 mM, metal salt addition experiment) .
  • CD 3 CN acetonitrile-d3
  • Sc(OTf) 3 scandium(OTf) trifluorosulfonate
  • FIG. 6-a is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) without the addition of scandium (III) trifluorosulfonate (Sc(OTf) 3 ).
  • FIG. 6-b is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when scandium(III) trifluorosulfonate (Sc(OTf) 3 ) was added in an amount of 1 molar equivalent to compound 6.
  • FIG. 6-d is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when 6 molar equivalents of scandium(III) trifluorosulfonate (Sc(OTf) 3 ) were added to compound 6.
  • FIG. 7 shows 1H-NMR spectra obtained by measuring 1H-NMR at 298K for a solution obtained by dissolving compound 6 in acetonitrile-d3 ( CD3CN ) (cyclic peptide concentration: 1.4 mM) and for solutions obtained by adding 1, 3, and 6 molar equivalents of silver trifluorosulfonate (AgOTf) to the cyclic peptide (cyclic peptide concentration: 1.4 mM, metal salt addition experiment).
  • CD3CN acetonitrile-d3
  • AgOTf silver trifluorosulfonate
  • FIG. 7-b is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when 1 molar equivalent of silver trifluorosulfonate (AgOTf) was added to compound 6.
  • FIG. 7-c) is a diagram of the 1 H-NMR spectrum of compound 6 in an acetonitrile-d3 (CD 3 CN) solution (1.4 mM) when 3 molar equivalents of silver trifluorosulfonate (AgOTf) were added to compound 6.
  • FIG. 8 shows the LC chart measured in Run 29 of Example 2-1.
  • Figure 9 shows the LC chart measured in Run 2 of Example 2-3-1.
  • FIG. 10-a shows a 1 H-NMR spectrum obtained by adding deuterated acetonitrile (CD 3 CN, 0.6 mL) to 1.13 mg of the solid obtained in Experimental Procedure 1, and measuring 1 H-NMR using 0.5 mL of the resulting solution.
  • FIG. 10-b shows the 1 H-NMR spectrum obtained by adding 1 mL of dichloromethane to 1.02 mg of the solid obtained in Experimental Procedure 1, leaving it overnight, drying it, and then adding deuterated acetonitrile (CD 3 CN, 0.5 mL) and measuring the 1 H-NMR.
  • FIG. 10-c shows a 1H-NMR spectrum obtained by adding 1 mL of dichloromethane to 1.14 mg of the solid obtained in Experimental Procedure 1 , and then performing a separation operation according to Experimental Procedure 3, to the solid obtained, and adding deuterated acetonitrile (CD 3 CN, 0.5 mL) to measure H-NMR.

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Abstract

環状ペプチドの精製法であって、前記精製法は、下記（ｉ）又は（ｉｉ）の分離工程を含み、 （ｉ）精製目的物である環状ペプチドを含む混合物から、精製目的物である環状ペプチドを金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する （ｉｉ）精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物から、精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドを、金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する　金属原子及び金属イオンは、アルカリ金属の原子及びイオン、アルカリ土類金属の原子及びイオン、遷移金属の原子及びイオン、貧金属の原子及びイオン並びに希土類金属の原子及びイオンからなる群より選択される少なくとも一種である、精製法。

Description

環状ペプチドの精製法及び製造法
　本発明は環状ペプチドの精製法及びそれを用いた環状ペプチドの製造法に関する。
　従来、環状ペプチドを精製する方法として、カラムクロマトグラフィーによる精製（非特許文献１）が知られていた。一方で、特許文献１には、「中間体を単離、精製せずに製造された環状ペプチド化合物を、カラムクロマトグラフィーに依らず、晶析により単離、精製することで、環状ペプチド化合物の結晶を得ることができること」が記載されている。
国際公開第２０２２／２３４８６４号
　しかしながら、特に、工業的スケールでのペプチド合成の場合には、カラムクロマトグラフィーでの精製は非効率になる傾向がある。また、環状ペプチドは、結晶化が困難な物性を有するものが多く、晶析法による精製が困難な環状ペプチドも存在する。
　本発明は、結晶化が困難な環状ペプチドにも適用できる可能性がある、環状ペプチドを簡便に精製及び製造する方法を提供することを目的とする。
　本発明は、例えば、下記〔１〕～〔１５０〕の各発明に関する。
〔１〕
　環状ペプチドの精製法であって、
　前記精製法は、下記（ｉ）又は（ｉｉ）の分離工程を含み、
（ｉ）精製目的物である環状ペプチドを含む混合物から、精製目的物である前記環状ペプチドを金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する
（ｉｉ）精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物から、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドを、金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する
　前記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であり、
　前記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種である、精製法。
〔２〕
　（１）精製目的物である前記環状ペプチドを含む混合物、又は精製目的物である前記環状ペプチド及び不純物である前記ペプチドを含む混合物と、前記金属原子又は前記金属イオンを混合する工程を前記分離工程の前工程として含む、〔１〕に記載の精製法。
〔３〕
　前記（１）工程は、第一の溶媒中で行われる、〔２〕に記載の精製法。
〔４〕
　環状ペプチドの精製法であって、
　（１）’第一の溶媒中で、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物、又は精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物と、金属原子又は金属イオンを混合する工程を含み、
　前記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であり、
　前記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種である、精製法。
〔５〕
　前記（１）’工程において、前記第一の溶媒中で、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと、前記金属原子又は前記金属イオンとの複合体を形成させる、〔４〕に記載の精製法。
〔６〕
　（２）前記（１）又は前記（１）’工程において得られた混合物と、第二の溶媒を混合する工程を更に含み、
　前記第一の溶媒及び前記第二の溶媒は、互いに異なる溶媒である、〔３〕～〔５〕のいずれかに記載の精製法。
〔７〕
　（２）’前記第一の溶媒の少なくとも一部を除去する工程を前記（２）工程の前工程として含む、〔６〕に記載の精製法。
〔８〕
　前記（１）工程又は前記（１）’工程において、前記金属原子又は前記金属イオンが、精製目的物である前記環状ペプチドに対し、０．２モル当量～１２モル当量である、〔２〕～〔７〕のいずれかに記載の精製法。
〔９〕
　前記（１）工程又は前記（１）’工程において、前記金属原子又は前記金属イオンが、精製目的物である前記環状ペプチドに対し、０．５モル当量～４モル当量である、〔２〕～〔８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０〕
　前記（１）工程又は前記（１）’工程において、前記金属原子又は前記金属イオンが、精製目的物である前記環状ペプチドに対し、０．８モル当量～１．２モル当量である、〔２〕～〔９〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０－１〕
　前記（１）工程又は前記（１）’工程において、前記精製目的物である前記環状ペプチドが、第一の溶媒に対し、０．１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬである、〔２〕～〔９〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０－２〕
　前記（１）工程又は前記（１）’工程において、前記精製目的物である前記環状ペプチドが、第一の溶媒に対し、１．０ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬである、〔２〕～〔９〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０－３〕
　前記（１）工程又は前記（１）’工程において、前記精製目的物である前記環状ペプチドが、第一の溶媒に対し、２．７ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬである、〔２〕～〔９〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１〕
　前記（２）工程において、前記（１）又は前記（１）’工程において得られた混合物と、前記第二の溶媒を、液温－２０～１００℃で混合する、〔６〕～〔１０〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２〕
　前記（２）工程において、前記（１）又は前記（１）’工程において得られた混合物と、前記第二の溶媒を、液温２０～３０℃で混合する、〔６〕～〔１１〕のいずれかに記載の精製法。
〔１３〕
　前記（２）工程において、前記（１）又は前記（１）’工程において得られた混合物と、前記第二の溶媒を、０．５～７２時間混合する、〔６〕～〔１２〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４〕
　前記（２）工程において、前記（１）又は前記（１）’工程において得られた混合物と、前記第二の溶媒を、１～２時間混合する、〔６〕～〔１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１５〕
　前記（２）工程において、前記第二の溶媒中の前記複合体の濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬである、〔６〕～〔１４〕のいずれかに記載の精製法。
〔１５－１〕
　前記（２）工程において、前記第二の溶媒中の前記複合体の濃度が、０．５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬである、〔６〕～〔１４〕のいずれかに記載の精製法。
〔１６〕
　前記（２）工程において、前記第二の溶媒中の前記複合体の濃度が、１．０ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬである、〔６〕～〔１５〕のいずれかに記載の精製法。
〔１７〕
　（３）前記（１）又は前記（１）’工程において得られた混合物と前記第二の溶媒の混合液から、前記複合体を分離する工程を更に含む、〔６〕～〔１６〕のいずれかに記載の精製法。
〔１８〕
　環状ペプチドの精製法であって、
　（４）精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと、金属原子又は金属イオンとの複合体、及び、第二の溶媒を混合する工程を含み、
　前記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であり、
　前記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種である、精製法。
〔１９〕
　（５）前記複合体及び前記第二の溶媒の混合液から、前記複合体を分離する工程を更に含む、〔１８〕に記載の精製法。
〔２０〕
　前記複合体の分離が固液分離、又は液液分配により行われる、〔１〕、〔２〕、〔３〕、〔１７〕又は〔１９〕に記載の精製法。
〔２０－１〕
　前記複合体の分離が固液分離により行われる、〔１〕、〔２〕、〔３〕、〔１７〕又は〔１９〕に記載の精製法。
〔２０－２〕
　前記複合体の分離が液液分配により行われる、〔１〕、〔２〕、〔３〕、〔１７〕又は〔１９〕に記載の精製法。
〔２１〕
　前記固液分離が、遠心分離又は濾過である、〔２０〕に記載の精製法。
〔２２〕
　（６）分離した前記複合体から、前記金属原子又は前記金属イオンを除去する工程を更に含む、〔１〕、〔２〕、〔３〕、〔１７〕、〔１９〕、〔２０〕又は〔２１〕に記載の精製法。
〔２３〕
　前記（６）工程は、分離した前記複合体、第三の溶媒及び水を混合し、水相及び有機相に分液することにより、前記水相中に存在する前記金属原子又は前記金属イオンを除去する工程を含む、〔２２〕に記載の精製法。
〔２４〕
　前記（６）工程は、前記有機相から前記第三の溶媒を除去し、精製目的物である前記環状ペプチドを取得する工程を更に含む、〔２３〕に記載の精製法。
〔２５〕
　前記有機相からの前記第三の溶媒の除去が減圧蒸留により行われる、〔２４〕に記載の精製法。
〔２６〕
　前記（６）工程は、分離した前記複合体、第四の溶媒、及び、配位子若しくは配位子を生じさせる化合物又は陰イオン若しくは陰イオンを生じさせる化合物を混合し、前記金属原子又は前記金属イオンと前記配位子又は前記陰イオンとで第一の錯体又は第一の金属塩を形成させる工程を更に含む、〔２２〕に記載の精製法。
〔２７〕
　前記（６）工程は、前記第一の錯体又は前記第一の金属塩を除去する工程を更に含む、〔２６〕に記載の方法。
〔２８〕
　（７）精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと、前記金属原子又は前記金属イオンが前記複合体を形成していることを確認する工程を更に含む、〔１〕～〔４〕及び〔６〕～〔２７〕のいずれかに記載の精製法。
〔２９〕
　前記（７）工程が、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドのＮＭＲピークと、前記精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチド、及び、前記金属原子又は前記金属イオンを混合した混合物のＮＭＲピークと、を比較することにより行われる、〔２８〕に記載の精製法。
〔３０〕
　前記複合体が、精製目的物である前記環状ペプチドと前記金属原子又は前記金属イオンの複合体である、〔１〕～〔４〕及び〔６〕～〔２９〕のいずれかに記載の精製法。
〔３１〕
　前記複合体が、不純物である前記ペプチドと前記金属原子又は前記金属イオンの複合体である、〔１〕～〔４〕及び〔６〕～〔２９〕のいずれかに記載の精製法。
〔３２〕
　前記複合体は、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと前記金属原子又は前記金属イオンの接触で得られる複合体である、〔１〕～〔４〕及び〔６〕～〔３１〕のいずれかに記載の精製法。
〔３３〕
　前記複合体は錯体である、〔１〕～〔４〕及び〔６〕～〔３２〕のいずれかに記載の精製法。
〔３４〕
　前記錯体が、固体、結晶、液体又はアモルファスを含む、〔３３〕に記載の精製法。
〔３５〕
　前記錯体が、結晶を含む〔３３〕又は〔３４〕に記載の精製法。
〔３６〕
前記錯体が、アモルファスを含む〔３３〕又は〔３４〕に記載の精製法。
〔３７〕
　前記精製目的物である環状ペプチドを含む混合物、又は精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物が、精製目的物である前記環状ペプチドを製造することによって得られた粗生成物である、〔１〕～〔１７〕のいずれかに記載の精製法。
〔３８〕
　精製目的物である前記環状ペプチドのアミノ酸残基数が５～２０である、〔１〕～〔３７〕のいずれかに記載の精製法。
〔３９〕
　精製目的物である前記環状ペプチドのアミノ酸残基数が１０～１４である、〔１〕～〔３８〕のいずれかに記載の精製法。
〔４０〕
　精製目的物である前記環状ペプチドの環状部のアミノ酸残基数が５～１５である、〔１〕～〔３９〕のいずれかに記載の精製法。
〔４１〕
　精製目的物である前記環状ペプチドの環状部のアミノ酸残基数が８～１４である、〔１〕～〔４０〕のいずれかに記載の精製法。
〔４２〕
　精製目的物である前記環状ペプチドの環状部のアミノ酸残基数が、８、１１、１３又は１４である、〔１〕～〔４１〕のいずれかに記載の精製法。
〔４３〕
　精製目的物である前記環状ペプチドの環状部のアミノ酸残基数が１１である、〔１〕～〔４２〕のいずれかに記載の精製法。
〔４４〕
　精製目的物である前記環状ペプチドが非天然アミノ酸を含む、〔１〕～〔４３〕のいずれかに記載の精製法。
〔４４－１〕
　精製目的物である前記環状ペプチドがＮ－置換アミノ酸を含む、〔１〕～〔４３〕のいずれかに記載の精製法。
〔４５〕
　精製目的物である前記環状ペプチドが、Ｎ－置換アミノ酸を３つ以上含む、〔１〕～〔４４〕のいずれかに記載の精製法。
〔４６〕
　精製目的物である前記環状ペプチドが、Ｎ－置換アミノ酸を５つ以上含む、〔１〕～〔４５〕のいずれかに記載の精製法。
〔４７〕
　精製目的物である前記環状ペプチドが、Ｎ－置換アミノ酸を６つ以上含む、〔１〕～〔４６〕のいずれかに記載の精製法。
〔４８〕
　精製目的物である前記環状ペプチドの前記Ｎ－置換アミノ酸残基数が、前記環状ペプチドの前記環状部のアミノ酸残基数に対して４５％以上である、〔１〕～〔４７〕のいずれかに記載の精製法。
〔４９〕
　前記Ｎ－置換アミノ酸がＮ－メチルアミノ酸、Ｎ－エチルアミノ酸及びＮ－プロピルアミノ酸からなる群より選択される少なくとも一種である、〔４４〕～〔４８〕のいずれかに記載の精製法。
〔５０〕
　前記Ｎ－置換アミノ酸がＮ－メチルアミノ酸である、〔４４〕～〔４９〕のいずれかに記載の精製法。
〔５１〕
　精製目的物である前記環状ペプチドが、Ｎ－非置換アミノ酸を含む、〔１〕～〔５０〕のいずれかに記載の精製法。
〔５２〕
　前記Ｎ－非置換アミノ酸が非天然アミノ酸である、〔５１〕に記載の精製法。
〔５３〕
　精製目的物である前記環状ペプチド中の全アミノ酸残基数に対する、精製目的物である前記環状ペプチド中の前記Ｎ－非置換アミノ酸数の割合が５５％以下である、〔５０〕又は〔５１〕に記載の精製法。
〔５４〕
　精製目的物である前記環状ペプチドのＣｌｏｇＰ／アミノ酸残基数が１．０以上１．８以下である、〔１〕～〔５３〕のいずれかに記載の精製法。
〔５５〕
　不純物である前記ペプチドが、精製目的物である前記環状ペプチドの合成過程で生じたペプチドである、〔１〕～〔５４〕のいずれかに記載の精製法。
〔５６〕
　不純物である前記ペプチドが、精製目的物である前記環状ペプチドとは異なる環状ペプチドである、〔１〕～〔５５〕のいずれかに記載の精製法。
〔５７〕
　不純物である前記ペプチドが、精製目的物である前記環状ペプチドが有するアミノ酸数の２倍のアミノ酸数を有する環状ペプチド、精製目的物である前記環状ペプチドが有するアミノ酸数の３倍のアミノ酸数を有する環状ペプチド又は精製目的物である前記環状ペプチドの異性体である、〔１〕～〔５６〕のいずれかに記載の精製法。
〔５８〕
　前記金属原子又は前記金属イオンがアルカリ金属の原子又はイオンである、〔１〕～〔５７〕のいずれかに記載の精製法。
〔５９〕
　前記アルカリ金属が、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム及びセシウムからなる群より選択される少なくとも一種である、〔５８〕に記載の精製法。
〔６０〕
　前記アルカリ金属が、リチウム又はカリウムである、〔５８〕又は〔５９〕に記載の精製法。
〔６１〕
　前記金属原子又は前記金属イオンがアルカリ土類金属の原子又はイオンである、〔１〕～〔５７〕のいずれかに記載の精製法。
〔６２〕
　前記アルカリ土類金属が、マグネシウム、カルシウム、ストロンチウム及びバリウムからなる群より選択される少なくとも一種である、〔６１〕に記載の精製法。
〔６３〕
　前記アルカリ土類金属が、マグネシウム、カルシウム及びバリウムからなる群より選択される少なくとも一種である、〔６０〕又は〔６１〕に記載の精製法。
〔６４〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが遷移金属の原子又はイオンである、〔１〕～〔５７〕のいずれかに記載の精製法。
〔６５〕
　前記遷移金属が、スカンジウム、マンガン、鉄、亜鉛及びタングステンからなる群より選択される少なくとも一種である、〔６４〕に記載の精製法。
〔６６〕
　前記遷移金属が、スカンジウム、マンガン及び亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種である、〔６４〕又は〔６５〕に記載の精製法。
〔６７〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが希土類金属の原子又はイオンである、〔１〕～〔５７〕のいずれかに記載の精製法。
〔６８〕
　前記希土類金属が、セリウム、サマリウム及びイッテルビウムからなる群より選択される少なくとも一種である、〔６７〕に記載の精製法。
〔６９〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが貧金属の原子又はイオンである、〔１〕～〔５７〕のいずれかに記載の精製法。
〔７０〕
　前記貧金属が、ビスマス及びインジウムからなる群より選択される少なくとも一種である、〔６９〕に記載の精製法。
〔７１〕
　前記金属原子が、マグネシウム原子、スカンジウム原子及びサマリウム原子からなる群より選択される少なくとも一種であり、
　前記金属イオンが、マグネシウムイオン、スカンジウムイオン及びサマリウムイオンからなる群より選択される少なくとも一種である、〔１〕～〔５７〕のいずれかに記載の精製法。
〔７２〕
　前記金属原子がマグネシウム原子を含み、
　前記金属イオンがマグネシウムイオンを含む、〔１〕～〔５７〕のいずれかに記載の精製法。
〔７３〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが、金属塩若しくはその溶媒和物又は第二の錯体から生じた原子又はイオンである、〔１〕～〔７２〕のいずれかに記載の精製法。
〔７４〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが、金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンである、〔１〕～〔７３〕のいずれかに記載の精製法。
〔７５〕
　前記金属塩が、ヨウ化物塩、臭化物塩、塩化物塩、過塩素酸塩、酸化物塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イソプロピルスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド塩、エチルマロン酸塩、亜硝酸塩及び硫酸塩からなる群より選択される少なくとも一種である、〔７３〕又は〔７４〕に記載の精製法。
〔７５－１〕
　前記金属塩が、ヨウ化物塩、臭化物塩、塩化物塩、過塩素酸塩、酸化物塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イソプロピルスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド塩、エチルマロン酸塩及び亜硝酸塩からなる群より選択される少なくとも一種である、〔７３〕又は〔７４〕に記載の精製法。
〔７６〕
　前記金属塩が、ヨウ化物塩、臭化物塩、過塩素酸塩及びトリフルオロメタンスルホン酸塩からなる群より選択される少なくとも一種である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔７７〕
　前記金属塩が、過塩素酸塩又はトリフルオロメタンスルホン酸塩である、〔７３〕～〔７６〕のいずれかに記載の精製法。
〔７８〕
　前記金属塩がヨウ化物塩である、〔７３〕～〔７６〕のいずれかに記載の精製法。
〔７９〕
　前記ヨウ化物塩が、ヨウ化リチウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化バリウム、ヨウ化マグネシウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化ストロンチウム、ヨウ化サマリウム（ＩＩＩ）、ヨウ化亜鉛及びヨウ化インジウムからなる群からなる群より選択される少なくとも一種である、〔７８〕に記載の精製法。
〔８０〕
　前記金属塩が臭化物塩である、〔７３〕～〔７６〕のいずれかに記載の精製法。
〔８１〕
　前記臭化物塩が、臭化リチウム、臭化マグネシウム、臭化カルシウム、臭化サマリウム（ＩＩＩ）、臭化亜鉛及び臭化インジウムからなる群より選択される少なくとも一種である、〔８０〕に記載の精製法。
〔８２〕
　前記金属塩が塩化物塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔８３〕
　前記塩化物塩が、塩化サマリウム、塩化セリウム又は塩化マグネシウムである、〔８２〕に記載の精製法。
〔８３－１〕
　前記塩化物塩が、塩化サマリウム又は塩化セリウムである、〔８２〕に記載の精製法。
〔８４〕
　前記金属塩が過塩素酸塩である、〔７３〕～〔７７〕のいずれかに記載の精製法。
〔８５〕
　前記過塩素酸塩が、過塩素酸リチウム、過塩素酸バリウム、過塩素酸マグネシウム、過塩素酸カルシウム及び過塩素酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種である、〔８４〕に記載の精製法。
〔８６〕
　前記金属塩が酸化物塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔８７〕
　前記酸化物塩が、酸化マグネシウムである、〔８６〕に記載の精製法。
〔８８〕
　前記金属塩がトリフルオロメタンスルホン酸塩である、〔７３〕～〔７７〕のいずれかに記載の精製法。
〔８９〕
　前記トリフルオロメタンスルホン酸塩が、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム、トリフルオロメタンスルホン酸カルシウム、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム（ＩＩＩ）、トリフルオロメタンスルホン酸セリウム、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム、トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛、トリフルオロメタンスルホン酸マンガン、トリフルオロメタンスルホン酸インジウム、トリフルオロメタンスルホン酸鉄（ＩＩＩ）及びトリフルオロメタンスルホン酸銅からなる群より選択される少なくとも一種である、〔８８〕に記載の精製法。
〔９０〕
　前記金属塩がトルエンスルホン酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔９１〕
　前記トルエンスルホン酸塩がトルエンスルホン酸亜鉛（ＩＩ）である、〔９０〕に記載の精製法。
〔９２〕
　前記金属塩がイソプロピルスルホン酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔９３〕
　前記イソプロピルスルホン酸塩がイソプロピルスルホン酸亜鉛（ＩＩ）である、〔９２〕に記載の精製法。
〔９４〕
　前記金属塩がメタンスルホン酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔９５〕
　前記メタンスルホン酸塩がメタンスルホン酸セリウム（ＩＩＩ）及びジフルオロメタンスルホン酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種である、〔９４〕に記載の精製法。
〔９６〕
　前記金属塩が炭酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔９７〕
　前記炭酸塩が、炭酸カリウム、炭酸カルシウム及び炭酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種である、〔９６〕に記載の精製法。
〔９８〕
　前記金属塩が酢酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔９９〕
　前記酢酸塩が、酢酸カリウム及び酢酸マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一種である、〔９８〕に記載の精製法。
〔１００〕
　前記金属塩がビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０１〕
　前記ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド塩が、マグネシウムビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、亜鉛ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド及び鉄（ＩＩ）ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミドからなる群より選択される少なくとも一種である、〔１００〕に記載の精製法。
〔１０２〕
　前記金属塩がエチルマロン酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０３〕
　前記エチルマロン酸塩がエチルマロン酸マグネシウムである、〔１０２〕に記載の精製法。
〔１０４〕
　前記金属塩が亜硝酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０５〕
　前記亜硝酸塩が、亜硝酸カリウムである、〔１０４〕に記載の精製法。
〔１０５－１〕
　前記金属塩が硫酸塩である、〔７３〕～〔７５〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０５－２〕
　前記硫酸塩が、硫酸マグネシウムである、〔１０５－１〕に記載の精製法。
〔１０６〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが、ヨウ化リチウム、過塩素酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、臭化リチウム、塩化リチウム、ヨウ化カリウム、フッ化リチウム、炭酸カリウム、亜硝酸カリウム、酢酸カリウム、テトラフルオロホウ酸カリウム、ヘキサフルオロリン酸カリウム、ヨウ化バリウム、過塩素酸バリウム、エチルマロン酸マグネシウム、マグネシウムビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、酸化マグネシウム、臭化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、塩化マグネシウム、フッ化マグネシウム、ヨウ化カルシウム、過塩素酸カルシウム、臭化カルシウム、トリフルオロメタンスルホン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ヨウ化ストロンチウム、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、塩化スカンジウム、トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム（ＩＩＩ）、ヨウ化サマリウム（ＩＩＩ）、臭化サマリウム（ＩＩＩ）、塩化サマリウム（ＩＩＩ）、メタンスルホン酸セリウム（ＩＩＩ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）・七水和物、トリフルオロメタンスルホン酸セリウム、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム、トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛、テトラフルオロホウ酸亜鉛（ＩＩ）、過塩素酸亜鉛、ジフルオロメタンスルホン酸亜鉛、イソプロピルスルホン酸亜鉛（ＩＩ）、トルエンスルホン酸亜鉛（ＩＩ）、亜鉛ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、臭化亜鉛、塩化亜鉛、炭酸亜鉛、フッ化亜鉛、ヨウ化亜鉛、トリフルオロメタンスルホン酸マンガン、塩化マンガン、トリフルオロメタンスルホン酸インジウム、臭化インジウム、塩化インジウム、ヨウ化インジウム、トリフルオロメタンスルホン酸鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、フッ化タングステン（ＶＩ）、塩化タングステン（ＶＩ）、トリフルオロメタンスルホン酸銅からなる群より選択される少なくとも一種から生じた原子又はイオンである、〔１〕～〔７４〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０７〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが、ヨウ化リチウム、過塩素酸リチウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化バリウム、過塩素酸バリウム、臭化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム、臭化カルシウム、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム、トリフルオロメタンスルホン酸セリウム、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム、トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛、トリフルオロメタンスルホン酸マンガントリフルオロメタンスルホン酸インジウム、硫酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、及び塩化マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一つの金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンである、〔１〕～〔７４〕及び〔１０６〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０７－１〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが、ヨウ化リチウム、過塩素酸リチウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化バリウム、過塩素酸バリウム、臭化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム、臭化カルシウム、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム、トリフルオロメタンスルホン酸セリウム、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム、トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛、トリフルオロメタンスルホン酸マンガン及びトリフルオロメタンスルホン酸インジウムからなる群より選択される少なくとも一つの金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンである、〔１〕～〔７４〕及び〔１０６〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０８〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが、過塩素酸リチウム、ヨウ化カリウム、臭化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム及びトリフルオロメタンスルホン酸マンガンからなる群より選択される少なくとも一つの金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンである、〔１〕～〔７４〕、〔１０６〕及び〔１０７〕のいずれかに記載の精製法。
〔１０９〕
　前記金属原子又は前記金属イオンが、前記第二の錯体から生じた原子又はイオンである、〔１〕～〔７３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１０〕
　前記第二の錯体の配位子が、オレフィン系化合物、カルボニル系化合物、ホスフィン系化合物及び一酸化炭素からなる群より選択される少なくとも一種である、〔７３〕又は〔１０９〕に記載の精製法。
〔１１１〕
　前記第二の錯体の配位子が、エチレン、ジベンジリデンアセトン、アセチルアセトナート、トリフェニルホスフィン及び一酸化炭素からなる群より選択される少なくとも一種である、〔７３〕、〔１０９〕又は〔１１０〕に記載の精製法。
〔１１２〕
　前記第二の錯体が、鉄（ＩＩＩ）トリス（アセチルアセトナート）、フェロセン、亜鉛（ＩＩ）アセチルアセトナート亜鉛（ＩＩ）及びタングステンヘキサカルボニルからなる群より選択される少なくとも一種である、〔７３〕及び〔１０９〕～〔１１１〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１３〕
　前記第一の溶媒が、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと、前記金属原子又は前記金属イオンとの複合体を形成させることができる溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１２〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１３－１〕
　前記第一の溶媒が、アルコール系溶媒、ニトリル系溶媒、ベンゼン系溶媒、エーテル系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、スルホキシド系溶媒、及びアミド系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種を含む、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１２〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１３－２〕
　前記第一の溶媒が、アルコール系溶媒、ニトリル系溶媒、ベンゼン系溶媒、エーテル系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒及びエステル系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種を含む、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１２〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１４〕
前記第一の溶媒がアルコール系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１５〕
　前記アルコール系溶媒が、２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、エタノール及びメタノールからなる群より選択される少なくとも一種である、〔１１３－１〕、〔１１３－２〕及び〔１１４〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１５－１〕
　前記アルコール系溶媒が、２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール及び２，２，２－トリフルオロエタノールからなる群より選択される少なくとも一種である、〔１１３－１〕、〔１１３－２〕及び〔１１４〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１６〕
　前記第一の溶媒がニトリル系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１７〕
　前記ニトリル系溶媒がアセトニトリルである、〔１１６〕に記載の精製法。
〔１１８〕
　前記第一の溶媒がベンゼン系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１１９〕
　前記ベンゼン系溶媒が、トルエン又はキシレンである、〔１１８〕に記載の精製法。
〔１２０〕
　前記第一の溶媒がエーテル系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２１〕
　前記エーテル系溶媒が、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ＤＭＥ（ジメチルエーテル）及びＣＰＭＥ（シクロペンチルペンチルエーテル）からなる群より選択される少なくとも一種である、〔１２０〕に記載の精製法。
〔１２２〕
　前記第一の溶媒がケトン系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２３〕
　前記ケトン系溶媒が、アセトン又はメチルエチルケトンである、〔１２２〕に記載の精製法。
〔１２４〕
　前記第一の溶媒がハロゲン系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２５〕
　前記ハロゲン系溶媒がジクロロメタンである、〔１２４〕に記載の精製法。
〔１２５－１〕
　前記第一の溶媒がスルホキシド系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２５－２〕
　前記スルホキシド系溶媒がジメチルスルホキシドである、〔１２５－１〕に記載の精製法。
〔１２５－３〕
　前記第一の溶媒がアミド系溶媒である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２５－４〕
　前記アミド系溶媒がジメチルホルムアミド、又はジメチルアセトアミドである、〔１２５－３〕に記載の精製法。〔１２６〕
　前記第一の溶媒が、２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、トルエン、１，４－ジオキサン、アセトン、ジクロロメタン、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド及びジメチルアセトアミドからなる群より選択される少なくとも一種である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２６－１〕
　前記第一の溶媒が、２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、トルエン、１，４－ジオキサン、アセトン及びジクロロメタンからなる群より選択される少なくとも一種である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２７〕
　前記第一の溶媒が、２，２，２－トリフルオロエタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン及びアセトンからなる群より選択される少なくとも一種である、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕及び〔１２６〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２８〕
　前記第二の溶媒が、エーテル系溶媒、ベンゼン系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、ニトリル系溶媒、炭化水素系溶媒、アルコール系溶媒、スルホキシド系溶媒、及びアミド系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種を含む、〔６〕～〔１２７〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２８－１〕
　前記第二の溶媒が、エーテル系溶媒、ベンゼン系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、ニトリル系溶媒及び炭化水素系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種を含む、〔６〕～〔１２７〕のいずれかに記載の精製法。
〔１２９〕
　前記第二の溶媒が、エーテル系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１３０〕
　前記エーテル系溶媒が、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ＤＭＥ（ジメチルエーテル）及びＣＰＭＥ（シクロペンチルメチルエーテル）からなる群より選択される少なくとも一種である、〔１２９〕に記載の精製法。
〔１３１〕
　前記第二の溶媒が、ベンゼン系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１３２〕
　前記ベンゼン系溶媒が、トルエン又はキシレンである、〔１２８〕又は〔１３１〕に記載の精製法。
〔１３３〕
　前記第二の溶媒が、ケトン系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１３４〕
　前記ケトン系溶媒が、アセトン又はメチルエチルケトンである、〔１２８〕又は〔１３３〕に記載の精製法。
〔１３５〕
　前記第二の溶媒が、ハロゲン系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１３６〕
　前記ハロゲン系溶媒が、ジクロロメタンである、〔１２８〕又は〔１３５〕に記載の精製法。
〔１３７〕
　前記第二の溶媒が、炭化水素系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１３８〕
　前記炭化水素系溶媒が、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、又はイソオクタンからなる群より選択される少なくとも一種である、〔１２８〕又は〔１３７〕に記載の精製法。
〔１３９〕
　前記第二の溶媒が、エステル系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１３９－１〕
　前記エステル系溶媒が、酢酸イソプロピル又は酢酸エチルである、〔１２８〕又は〔１３９〕に記載の精製法。
〔１４０〕
　前記第二の溶媒が、ニトリル系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４０－１〕
　前記ニトリル系溶媒が、アセトニトリルである、〔１２８〕又は〔１４０〕に記載の精製法。
〔１４０－２〕
　前記第二の溶媒が、アルコール系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４０－３〕
　前記アルコール系溶媒が、メタノール、エタノール、ブタノール、又はベンジルアルコールからなる群より選択される少なくとも一種である、〔１２８〕又は〔１４０－２〕に記載の精製法。
〔１４０－４〕
　前記第二の溶媒が、スルホキシド系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４０－５〕
　前記スルホキシド系溶媒が、ジメチルスルホキシドである、〔１４０－４〕に記載の精製法。
〔１４０－６〕
　前記第二の溶媒が、アミド系溶媒である、〔６〕～〔１２８〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４０－７〕
　前記アミド系溶媒が、ジメチルホルムアミドである、〔１４０－６〕に記載の精製法。
〔１４０－８〕
　前記第二の溶媒が、酢酸イソプロピルもしくはメチルエチルケトン、及びヘプタンの組み合わせ、又はアセトニトリル及びＭＴＢＥの組み合わせである、〔３〕～〔１７〕及び〔２０〕～〔１１３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４１〕
　前記第三の溶媒が、水と混和しない溶媒である、〔２３〕～〔１４０〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４２〕
　前記第三の溶媒が、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、酢酸エチル、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、ＤＭＥ（ジメチルエーテル）、ＣＰＭＥ（シクロペンチルメチルエーテル）、４－メチルテトラヒドロピラン、ヘプタン、及びトルエンからなる群より選択される少なくとも一種である、〔２３〕～〔１４１〕に記載の精製法。
〔１４３〕
　前記第四の溶媒がメタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、ｔ－ブタノール、エチレングリコール、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ヘプタン、イソオクタン、トルエン、キシレン、ジメチルスルホキシド及びアセトニトリルからなる群より選択される少なくとも一種である、〔２６〕～〔１４２〕に記載の精製法。
〔１４４〕
　前記精製法は、精製目的物である前記環状ペプチドの純度が８５％以上になるように精製する方法であり、精製目的物である前記環状ペプチドの純度（％）は、精製目的物である環状ペプチドを含んだ混合物のＵＶスペクトルを、ＨＰＬＣ及びＰＤＡ（フォトダイオードアレイ検出器）を用いて測定し、２２０ｎｍにおける精製目的物である環状ペプチドを含む混合物全体の各ピーク面積の総和に対し、精製目的物である環状ペプチドのピーク面積が占める割合である、〔１〕～〔１４３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４４－１〕
　前記精製法は、精製目的物である前記環状ペプチドの純度が８５％以上になるように精製する方法であり、精製目的物である前記環状ペプチドの純度（％）は、精製目的物である環状ペプチドを含んだ混合物のＵＶスペクトルを、ＨＰＬＣ及びＰＤＡ（フォトダイオードアレイ検出器）を用いて測定し、２２５ｎｍにおける精製目的物である環状ペプチドを含む混合物全体の各ピーク面積の総和に対し、精製目的物である環状ペプチドのピーク面積が占める割合である、〔１〕～〔１４３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４４－２〕
　前記精製法は、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物に含まれる不純物の精製効率が、正の値である、〔１〕～〔１４３〕のいずれかに記載の精製法。
〔１４４－３〕
　上記不純物の精製効率が、下記の式によって求められる〔１４４－２〕に記載の方法
不純物の精製効率（％）＝｛１－（精製操作後の精製目的物である環状ペプチドと不純物の比率）÷（精製操作前の精製目的物である環状ペプチドと不純物の比率）｝×１００
〔１４５〕
　〔１〕～〔１４４〕のいずれかに記載の精製法を含む、環状ペプチドの製造法。
〔１４６〕
　液相合成法により精製目的物である前記環状ペプチドを得る工程を更に含む、〔１４５〕に記載の製造法。
〔１４７〕
　固相合成法により精製目的物である前記環状ペプチドを得る工程を更に含む、〔１４５〕に記載の製造法。
〔１４８〕
　培養法により精製目的物である前記環状ペプチドを得る工程を更に含む、〔１４５〕に記載の製造法。
〔１４９〕
　環状ペプチドの精製法において、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物から、精製目的物である前記環状ペプチドを金属原子又は金属イオンとの複合体として分離することを特徴とする、金属原子又は金属イオンとの複合体を形成させない場合と比較して、環状ペプチドの純度を向上させる方法。
〔１５０〕
　環状ペプチドの精製法において、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物から、精製目的物である前記環状ペプチドを金属原子又は金属イオンとの複合体として分離することを特徴とする、金属原子又は金属イオンとの複合体を形成させない場合と比較して、不純物の含有量を低減させる方法。
　上記番号付けにおいて、従属項が引用する番号は、特に言及がない限りその番号の枝番号が異なる番号をも含む。例えば、従属項において引用する［２０］は、［２０］とともに、［２０－１］を含むことを示す。他の番号付けにおいても同様である。
　本発明によれば、結晶化が困難な環状ペプチドにも適用できる可能性がある、環状ペプチドを簡便に精製及び製造する方法を提供することができる。環状ペプチドには結晶化が困難なものが存在するが、そのような環状ペプチドであっても、金属原子又は金属イオンと複合体を形成させることで、簡便に精製することができることが見いだされた。
図１は、環状ペプチドの基本的な合成方法を示す模式図である。 図２は、参考例２で測定したＲＵＮ１の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す図である。 図３は、参考例２で測定したＲＵＮ２の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す図である。 図４は、参考例２で測定したＲＵＮ３の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す図である。 図５は、参考例２で測定したＲＵＮ４の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す図である。 図６は、参考例２で測定したＲＵＮ５の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す図である。 図７は、参考例２で測定したＲＵＮ６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す図である。 図８は、実施例２－１で測定したＲＵＮ２９のＬＣチャートを示す図である。 図９は、実施例２－３－１で測定したＲＵＮ２のＬＣチャートを示す図である。 図１０は、実施例３－１で測定した１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す図である。
　以下、本発明の方法について詳細に説明する。
　本発明において、「混合する」とは、ある物質と他の物質を混ぜる「操作」を意味する場合があり、必ずしもある物質と他の物質とが混和した状態にさせることだけを意味するのではない。本明細書において、「（ｉ）と（ｉｉ）を混合する」とは、（ｉ）を（ｉｉ）に添加する行為、（ｉｉ）を（ｉ）に添加する行為、及び（ｉ）と（ｉｉ）を同時に添加する行為のいずれの態様も含む。本明細書において、範囲を示す「～」とはその両端の値を含み、例えば、「Ａ～Ｂ」は、Ａ以上であり、かつＢ以下である範囲を意味する。本明細書において、「約」という用語は、数値と組み合わせて使用される場合、その数値の＋１０％及び－１０％の範囲を意味する。本発明において、「及び／又は」との用語の意義は、「及び」と「又は」が適宜組み合わされたあらゆる組合せを含む。具体的には、例えば、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」には、以下の７通りのバリエーションが含まれる；（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、（ｉｉｉ）Ｃ、（ｉｖ）Ａ及びＢ、（ｖ）Ａ及びＣ、（ｖｉ）Ｂ及びＣ、（ｖｉｉ）Ａ、Ｂ、及びＣ。
　本明細書において、「環状ペプチドの精製」とは、例えば、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物全体のうち、精製目的物である環状ペプチドの占める割合（純度）を、向上させることを意味する。
　本発明の一実施形態は、環状ペプチドの精製法に関し、上記精製法は、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物から、精製目的物である前記環状ペプチドを金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する工程、又は精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物から、精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドを、金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する分離工程を含んでよく、上記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であってよく、上記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　上記分離工程は、（１）精製目的物である環状ペプチドを含む混合物、又は精製目的物である上記環状ペプチド及び不純物である上記ペプチドを含む上記混合物と、上記金属原子又は上記金属イオンを混合する工程を前工程として含んでよい。（１）工程は、第一の溶媒中で行われてよい。
　本発明の別の一実施形態に係る精製法は、環状ペプチドの精製法に関し、上記精製法は、（１）’第一の溶媒中で、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物、又は、精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物と、金属原子又は金属イオンとを混合する工程を含んでよく、上記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であってよく、上記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　（１）’工程において、第一の溶媒中で、精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドと、上記金属原子又は上記金属イオンとの複合体を形成させてよい。
　本発明の別の一実施形態に係る精製法は、（２）上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物と、第二の溶媒を混合する工程を更に含んでいてよい。上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物中では、第二の溶媒を混合する前に、精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと、金属原子又は金属イオンとの複合体が形成されていてよい。上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物とは、「精製目的物である環状ペプチドを含む混合物、又は精製目的物である上記環状ペプチド及び不純物である上記ペプチドを含む上記混合物と、上記金属原子又は上記金属イオンとの混合物」である。第一の溶媒及び第二の溶媒は、互いに異なる溶媒である。例えば、第一の溶媒が複合体に対する富溶媒である場合、第二の溶媒は複合体に対する貧溶媒であり得る。逆に、第一の溶媒が複合体に対する貧溶媒である場合、第二の溶媒は複合体に対する富溶媒であり得る。上記（２）工程は、（２）’前記第一の溶媒の少なくとも一部を除去する工程を上記（２）工程の前工程として含んでよい。
　上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記金属原子又は上記金属イオンは、精製目的物である上記環状ペプチドに対し、０．２モル当量以上、０．３モル当量以上、０．４モル当量以上、０．５モル当量以上、０．６モル当量以上、０．７モル当量以上、０．８モル当量以上、０．９モル当量以上又は１モル当量以上であってよく、１２モル当量以下、１０モル当量以下、８モル当量以下、６モル当量以下、４モル当量以下、２モル当量以下又は１．２モル当量以下であってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記金属原子又は上記金属イオンは、精製目的物である上記環状ペプチドに対し、０．２モル当量～１２モル当量、０．２モル当量～４モル当量、０．２モル当量～１．２モル当量、０．５モル当量～１２モル当量、０．５モル当量～４モル当量、０．５モル当量～１．２モル当量、０．８モル当量～１２モル当量、０．８モル当量～４モル当量又は０．８モル当量～１．２モル当量であってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記金属原子又は上記金属イオンは、０．２モル当量～１２モル当量が好ましく、０．５モル当量～４モル当量がより好ましく、０．８モル当量～１．２モル当量が最も好ましい。
　上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒の液温は、－２０℃以上、－１０℃以上、０℃以上、４℃以上、８℃以上、１２℃以上、１６℃以上又は２０℃以上であってよく、１００℃以下、８０℃以下、５０℃以下、４０℃以下、３５℃以下、３０℃以下、２５℃以下であってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒の液温は、－２０～１００℃、４～３０℃、２０～４０℃又は２０～３０℃であってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒の液温は、－２０～１００℃が好ましく、２０～４０℃がより好ましく、２０～３０℃が最も好ましい。
　上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒中で、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物又は精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物と、金属原子又は金属イオンを混合する時間は、０．５時間以上、１時間以上、１．５時間以上又は２時間以上であってよく、７２時間以下、４８時間以下、３６時間以下、２４時間以下、１２時間以下、６時間以下又は５時間以下であってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒中で、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物又は精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物と、金属原子又は金属イオンを混合する時間は、０．５～７２時間、０．５～４８時間、０．５～５時間、２～４８時間、２～５時間であってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒中で、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物又は精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物と、金属原子又は金属イオンを混合する時間は、０．５～７２時間が好ましく、０．５～４８時間がより好ましく、２～５時間が最も好ましい。
　上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒中の上記精製目的物である環状ペプチドの濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．５ｍｇ／ｍＬ以上、１．０ｍｇ／ｍＬ以上、２．０ｍｇ／ｍＬ以上又は２．７ｍｇ／ｍＬ以上であってよく、１０００ｍｇ／ｍＬ以下、８００ｍｇ／ｍＬ以下、５００ｍｇ／ｍＬ以下、３００ｍｇ／ｍＬ以下又は１５０ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒中の上記精製目的物である環状ペプチドの濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ～８００ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ～３００ｍｇ／ｍＬ又は２．７ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記（１）工程又は上記（１）’工程において、上記第一の溶媒中の上記精製目的物である環状ペプチドの濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬが好ましく、１．０ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬがより好ましく、２．７ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬが最も好ましい。
　上記（２）工程において、上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物と、上記第二の溶媒を混合する際の液温は、－２０℃以上、－１０℃以上、０℃以上、４℃以上、８℃以上、１２℃以上、１６℃以上又は２０℃以上であってよく、１００℃以下、８０℃以下、５０℃以下、４０℃以下、３５℃以下、３０℃以下、２５℃以下であってよい。上記（２）工程において、上記残部と、上記第二の溶媒を混合する際の液温は、－２０～１００℃、４～３０℃、２０～４０℃又は２０～３０℃であってよい。上記（２）工程において、上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物と、上記第二の溶媒を混合する際の液温は、－２０～１００℃が好ましく、２０～４０℃がより好ましく、２０～３０℃が最も好ましい。
　上記（２）工程において、上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物と、上記第二の溶媒を混合する時間は、０．５時間以上、１時間以上、１．５時間以上又は２時間以上であってよく、７２時間以下、４８時間以下、３６時間以下、２４時間以下、１２時間以下、６時間以下又は５時間以下であってよい。上記（２）工程において、上記残部と、上記第二の溶媒を混合する時間は、０．５～７２時間、０．５～４８時間、０．５～５時間、２～４８時間、２～５時間であってよい。上記（２）工程において、上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物と、上記第二の溶媒を混合する時間は、０．５～７２時間が好ましく、０．５～４８時間がより好ましく、１～２時間が最も好ましい。
　上記（２）工程において、上記第二の溶媒中の上記複合体の濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．３ｍｇ／ｍＬ以上、０．５ｍｇ／ｍＬ以上、０．８ｍｇ／ｍＬ以上又は１．０ｍｇ／ｍＬ以上であってよく、２００ｍｇ／ｍＬ以下、１００ｍｇ／ｍＬ以下、５０ｍｇ／ｍＬ以下、４５ｍｇ／ｍＬ以下、又は３０ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。上記（２）工程において、上記第二の溶媒中の上記複合体の濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ～４５ｍｇ／ｍＬ、又は１．０ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬであってよい。上記（２）工程において、上記第二の溶媒中の上記複合体の濃度は、０．１ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬが好ましく、０．５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬがより好ましく、１．０ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬが最も好ましい。
　本発明の一実施形態に係る精製法は、（３）上記（１）又は上記（１）’工程において得られた混合物と、及び上記第二の溶媒の混合液から、上記複合体を分離する工程を更に含んでよい。
　本発明の更に別の一実施形態に係る精製法は、環状ペプチドの精製法に関し、上記精製法は、（４）精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと、金属原子又は金属イオンとの複合体、及び、第二の溶媒を混合する工程を含んでよく、上記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であってよく、上記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　本発明の更に別の一実施形態に係る精製法は、（５）上記複合体及び上記第二の溶媒の混合液から、上記複合体を分離する工程を更に含んでよい。
　本明細書において、複合体の分離は固液分離又は液液分配により行われてよい。固液分離の方法としては、遠心分離、濾過等が挙げられる。液液分配の方法としては、遠心分離、デカンテーション等が挙げられる。
　本明細書において、環状ペプチドの精製法は、（６）分離した上記複合体から、上記金属原子若しくは上記金属イオンを除去する工程を含んでよい。上記（６）工程は、分離した上記複合体、第三の溶媒及び水を混合し、水相及び有機相に分液することにより、上記水相中に存在する上記金属原子又は上記金属イオンを除去する工程を含んでよい。（６）工程は、前記有機相から前記第三の溶媒を除去し、精製目的物である前記環状ペプチドを取得する工程を更に含んでよい。上記有機相からの上記第三の溶媒を除去する方法の具体例として、常圧による蒸留、加温による蒸留、減圧による蒸留が挙げられる。上記有機相からの上記第三の溶媒の除去は、減圧蒸留により行われてよい。
　上記（６）工程は、分離した上記複合体、第四の溶媒、及び、配位子若しくは配位子を生じさせる化合物又は陰イオン若しくは陰イオンを生じさせる化合物を混合し、上記金属原子又は上記金属イオンと配位子又は陰イオンとで第一の錯体又は第一の金属塩を形成させる工程を更に含んでよい。上記（６）工程は、上記第一の金属錯体又は第一の金属塩を除去する工程を更に含んでよい。第一の錯体は、精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと、金属原子又は金属イオンとの複合体（錯体）、及び、第二の錯体とは異なる錯体を意味してよく、精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと金属原子又は金属イオンとの錯体、及び、第二の錯体と同じ錯体を用いてもよい。
　本明細書において、環状ペプチドの精製法は、（７）精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドと、上記金属原子又は上記金属イオンが上記複合体を形成していることを確認する工程を更に含んでよい。上記（７）工程は、精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドのＮＭＲピークと、精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチド、及び、上記金属原子又は上記金属イオンを混合した混合物のＮＭＲピークと、を比較することにより行われてよい。ＮＭＲの測定は当業者が周知の方法で行うことができる。例えば測定対象の化合物がＮＭＲの測定に適した溶媒に溶解した溶液をＮＭＲ測定用サンプルチューブに加え、測定装置にセットして測定することができる。ＮＭＲの測定に適した溶媒は、測定対象の化合物を溶解させることが可能な溶媒が好ましく、市販の重水素化溶媒を用いることもできる。ＮＭＲの測定条件は当業者が周知の条件や測定装置のマニュアルに記載の条件を採用することができる。測定条件は目的のピーク成分が測定できれば特に限定されないが、たとえば、測定温度は２７３Ｋから３２０Ｋの範囲、積算時間は１秒から７日間の範囲、サンプルチューブの回転数は０から２０Ｈｚの範囲で行うことができる。上記（７）工程は、具体的には、（Ａ）上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドをアセトニトリル－ｄ３（重アセトニトリル，ＣＤ３ＣＮ，ＣＡＳ：２２０６－２６－０）に溶解し得られる溶液（上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドの濃度：１．４ｍＭ）と、（Ｂ）上記金属原子又は上記金属イオンと上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドを、上記金属原子又は上記金属イオンが上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドに対して１～６モル当量となるようにアセトニトリル－ｄ３（重アセトニトリル，ＣＤ３ＣＮ，ＣＡＳ：２２０６－２６－０）中で混合して得られる溶液（上記環状ペプチドの濃度又は不純物である上記ペプチド：１．４ｍＭ）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２７８Ｋ若しくは２９８Ｋで測定し、（Ａ）のピーク成分と比較して（Ｂ）のピーク成分に精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドに関する新たなピークが観測された場合、（Ａ）のピーク成分と（Ｂ）のピーク成分を比較し、ピーク強度比の変化が観測された場合、又は、（Ａ）のピーク成分と比較して（Ｂ）のピーク成分にピークの先鋭化又は広幅化が観測された場合に、精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドと、上記金属原子又は上記金属イオンが上記複合体を形成していると判定してもよい。
　本明細書において、複合体は、精製目的物である上記環状ペプチドと上記金属原子又は上記金属イオンの複合体であってよく、不純物である上記ペプチドと上記金属原子又は上記金属イオンの複合体であってもよい。複合体は、上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドと上記金属の接触で得られる複合体であってよい。本明細書において、複合体とは、精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記環状ペプチドが、上記金属原子又は上記金属イオンと相互作用している状態の化合物である。上記複合体は、固体、結晶、液体、又はアモルファスを含んでよい。
　上記複合体は錯体であってよい。本明細書において、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと、金属原子又は金属イオンとの錯体とは、上記金属原子又は上記金属イオンに精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドが配位している状態の化合物である。上記金属原子又は上記金属イオンに精製目的物である上記環状ペプチド又は不純物である上記ペプチドが配位している状態は、例えば、Ｘ線結晶構造解析、吸収スペクトルの変化（基礎錯体工学研究会編「錯体化学－基礎と最新の話題」、講談社サイエンティフィック、１９９４年、ｐ．３９～４９参照）により判定される。上記錯体は、固体、結晶、液体、又はアモルファスを含んでよい。
　本明細書において、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物又は精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物は、精製目的物である上記環状ペプチドを製造することによって得られた粗生成物であってよい。
　本明細書において、精製目的物である上記環状ペプチドのアミノ酸残基数は、５以上、７以上、９以上又は１０以上であってよく、２０以下、１８以下、１６以下又は１４以下であってよい。精製目的物である上記環状ペプチドのアミノ酸残基数は、５～２０、５～１４、１０～２０又は１０～１４であってよい。
　本明細書において、精製目的物である上記環状ペプチドの環状部のアミノ酸残基数は、５以上、７以上、８以上又は１０以上であってよく、１５以下、１４以下、１３以下、１２以下又は１１以下であってよい。精製目的物である上記環状ペプチドの環状部のアミノ酸残基数は、５～１５、５～１４、１０～１５又は８～１４であってよく、８、１１、１３又は１４であってよい。
　本明細書における「アミノ酸」には、天然アミノ酸、及び非天然アミノ酸が含まれる。また本明細書において「アミノ酸」はアミノ酸残基を意味することがある。本明細書における「天然アミノ酸」とは、Ｇｌｙ、Ｌ－Ａｌａ、Ｌ－Ｓｅｒ、Ｌ－Ｔｈｒ、Ｌ－Ｖａｌ、Ｌ－Ｌｅｕ、Ｌ－Ｉｌｅ、Ｌ－Ｐｈｅ、Ｌ－Ｔｙｒ、Ｌ－Ｔｒｐ、Ｌ－Ｈｉｓ、Ｌ－Ｇｌｕ、Ｌ－Ａｓｐ、Ｌ－Ｇｌｎ、Ｌ－Ａｓｎ、Ｌ－Ｃｙｓ、Ｌ－Ｍｅｔ、Ｌ－Ｌｙｓ、Ｌ－Ａｒｇ、Ｌ－Ｐｒｏを指す。「非天然アミノ酸」は特に限定されないが、β－アミノ酸、γ－アミノ酸、Ｄ型アミノ酸、Ｎ－置換アミノ酸、α，α－二置換アミノ酸、側鎖が天然と異なるアミノ酸などが例示される。本明細書におけるアミノ酸としては、任意の立体配置が許容される。アミノ酸の側鎖の選択は特に制限を設けないが、水素原子の他にも例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、ヘテロアラルキル基、シクロアルキル基、スピロ結合したシクロアルキル基から自由に選択される。それぞれには置換基が付与されていてもよく、それら置換基も制限されず、例えば、ハロゲン原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、ホウ素原子、ケイ素原子、又はリン原子を含む任意の置換基の中から独立して１つ又は２つ以上自由に選択されてよい。すなわち、置換されていてもよいアルキル基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、シクロアルキル基など、又は、オキソ、アミノカルボニル、ハロゲン原子などが例示される。
　本明細書における「アミノ酸の側鎖」とは、α－アミノ酸の場合、アミノ基とカルボキシル基が結合した炭素（α－炭素）に結合した原子団を意味する。例えば、Ａｌａのメチル基はアミノ酸の側鎖である。β－アミノ酸の場合、α－炭素、及び／又はβ－炭素に結合した原子団がアミノ酸の側鎖となり、γ－アミノ酸の場合、α－炭素、β－炭素、及び／又はγ－炭素に結合した原子団がアミノ酸の側鎖となり得る。
　本明細書における「アミノ酸の主鎖」とは、α－アミノ酸の場合は、アミノ基、α－炭素、及びカルボキシル基から構成される鎖状部分、β－アミノ酸の場合は、アミノ基、β－炭素、α－炭素、及びカルボキシル基から構成される鎖状部分、及びγ－アミノ酸の場合は、アミノ基、γ－炭素、β－炭素、α－炭素、及びカルボキシル基から構成される鎖状部分をそれぞれ意味する。
　アミノ酸の主鎖アミノ基は、非置換（－ＮＨ２）でも、置換されていてもよい（すなわち、－ＮＨＲ。Ｒは、例えば、置換基を有していてもよいアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、シクロアルキル基等を示し、またプロリンのようにＮ原子に結合した炭素鎖とα位の炭素原子とが環を形成していてもよい。）。
　本明細書における「ハロゲン原子を含む置換基」とは、フルオロ（－Ｆ）、クロロ（－Ｃｌ）、ブロモ（－Ｂｒ）、ヨウド（－Ｉ）などが挙げられる。
　本明細書における「酸素原子を含む置換基」として、ヒドロキシ（－ＯＨ）、オキシ（－ＯＲ）、カルボニル（－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ）、カルボキシル（－ＣＯ２Ｈ）、オキシカルボニル（－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ）、カルボニルオキシ（－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ）、チオカルボニル（－Ｃ（＝Ｏ）－ＳＲ）、カルボニルチオ基（－Ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ）、アミノカルボニル（－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＲ）、カルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ）、オキシカルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ）、スルホニルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ２－Ｒ）、アミノスルホニル（－ＳＯ２－ＮＨＲ）、スルファモイルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ２－ＮＨＲ）、チオカルボキシル（－Ｃ（＝Ｏ）－ＳＨ）、カルボキシルカルボニル（－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＯ２Ｈ）が例示される。
　本明細書における「窒素原子を含む置換基」として、アジド（－Ｎ３、「アジド基」ともいう）、シアノ（－ＣＮ）、１級アミノ（－ＮＨ２）、２級アミノ（－ＮＨ－Ｒ）、３級アミノ（－ＮＲ（Ｒ’））、アミジノ（－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２）、置換アミジノ（－Ｃ（＝ＮＲ）－ＮＲ’Ｒ’’）、グアニジノ（－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２）、置換グアニジノ（－ＮＲ－Ｃ（＝ＮＲ’’’）－ＮＲ’Ｒ’’）、アミノカルボニルアミノ（－ＮＲ－ＣＯ－ＮＲ’Ｒ’’）が例示される。
　本明細書における「硫黄原子を含む置換基」として、チオール（－ＳＨ）、チオ（－Ｓ－Ｒ）、スルフィニル（－Ｓ＝Ｏ－Ｒ）、スルホニル（－Ｓ（Ｏ）２－Ｒ）、スルホ（－ＳＯ３Ｈ）、ペンタフルオロスルファニル（－ＳＦ５）が例示される。
　本明細書における「ホウ素原子を含む置換基」は、ボリル（－ＢＲ（Ｒ’））、ジオキシボリル（－Ｂ（ＯＲ）（ＯＲ’））、及びトリフルオロボレート塩（－ＢＦ３ －）などが例示される。具体的には、これらの２つの置換基Ｒ及びＲ’が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルなどの中からそれぞれ独立して選択される置換基である「ホウ素原子由来の置換基」であるか、あるいはこれら２つの置換基Ｒ及びＲ’が、Ｒ及びＲ’がそれぞれ結合している原子と一緒になって環を形成した「ホウ素原子由来の置換基」、即ち環状ボリル基が例示される。
　本明細書における「リン原子を含む置換基」として、ホスホリル（－Ｐ（Ｏ）－Ｒ１Ｒ２）、ホスホニル（－Ｏ－Ｐ（Ｏ）－Ｒ１Ｒ２）、ホスホ（－ＰＯ３Ｈ２）が例示される。
　本明細書において、主鎖アミノ基が置換されているアミノ酸を「Ｎ－置換アミノ酸」と称する。Ｎ－置換アミノ酸は、炭素数が１～６のアルキル基（Ｃ１～Ｃ６アルキル基）で置換されたＮ－Ｃ１～Ｃ６アルキルアミノ酸、好ましくはＮ－Ｃ１～Ｃ４アルキルアミノ酸が例示される。Ｎ－置換アミノ酸の具体例として、Ｎ－メチルアミノ酸、Ｎ－エチルアミノ酸、Ｎ－プロピルアミノ酸が挙げられる。Ｎ－プロピルアミノ酸は、Ｎ－イソプロピルアミノ酸、Ｎ－ノルマルプロピルアミノ酸を含む。本明細書において、精製目的物である上記環状ペプチドは非天然アミノ酸を少なくとも１つ以上含んでよい。本明細書において、精製目的物である上記環状ペプチドはＮ－置換アミノ酸を含んでよい。精製目的物である上記環状ペプチドは、Ｎ－置換アミノ酸を３つ以上、４つ以上、５つ以上又は６つ以上含んでよく、１５個以下、１３個以下又は１０個以下含んでよい。精製目的物である上記環状ペプチドのＮ－置換アミノ酸残基数は、上記環状ペプチドの上記環状部のアミノ酸残基数に対して４５％以上、５０％以上、５５％以上又は６０％以上であってよく、８０％以下、７５％以下、７０％以下又は６５％以下であってよく、４５％～８０％が好ましい。
　本明細書において、Ｎ－置換アミノ酸は、Ｎ－メチルアミノ酸、Ｎ－エチルアミノ酸及びＮ－プロピルアミノ酸からなる群より選択される一種であってよく、Ｎ－メチルアミノ酸であってよい。
　本明細書において、主鎖アミノ基が非置換であるアミノ酸を「Ｎ－非置換アミノ酸」と称する。本明細書において、精製目的物である上記環状ペプチドは、Ｎ－非置換アミノ酸を含んでよい。Ｎ－非置換アミノ酸は非天然アミノ酸であってよい。精製目的物である上記環状ペプチド中の全アミノ酸残基数に対する、精製目的物である上記環状ペプチド中の上記Ｎ－非置換アミノ酸数の割合は、５５％以下、５０％以下、４５％以下又は４０％以下であってよく、２０％以上、２５％以上、３０％以上又は３５％以上であってよく、２０％～５５％が好ましい。
　本明細書に記載された化合物は、このような化合物を構成する１個以上の原子に、非天然割合の同位体原子を含みうる。化合物中の任意の原子を、原子番号（陽子数）が同じで、質量数（陽子と中性子の数の和）が異なる別の同位体原子で置換することにより、天然中の同位体の存在比とは異なる存在比の同位体で置換した化合物、すなわち同位体原子で標識された化合物も本発明に含まれる。本明細書の化合物に含まれる同位体元素の例としては、水素原子、炭素原子、窒素原子、酸素原子、リン原子、硫黄原子、フッ素原子、塩素原子などがあり、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ等が含まれる。同位体原子で標識された化合物は、治療剤、予防剤、研究試薬（例えば、アッセイ試薬）、又は診断剤（例えば、インビボ画像診断剤）として有用である。全ての割合の放射性又は非放射性の同位体元素を含有する本明細書の化合物は、本発明の範囲に包含される。同位体原子で標識された化合物は、非標識化合物の製造方法と同様の手法で、対応する同位体原子を含む試薬や溶媒を用いることで製造することができる。
　本明細書において、精製目的物である上記環状ペプチドのＣｌｏｇＰ／アミノ酸残基数は１．０以上、１．１以上、１．２以上又は１．３以上であってよく、１．８以下、１．７以下、１．６以下又は１．５以下であってよい。精製目的物である上記環状ペプチドのＣｌｏｇＰ／アミノ酸残基数は、１．０以上１．８以下であってよい。ＣｌｏｇＰは、コンピューターで計算した分配係数であり、「CLOGP Reference Manual DaylightVersion 4.9（リリース日：２０１１年８月１日、https://www.daylight.com/dayhtml/doc/clogp/）[アクセス日：２０２３年１２月２５日]」に記載の原則に則って求めることができる。ＣｌｏｇＰを計算する方法の一例として、Daylight Chemical Information Systems, Inc.のDaylight Version 4.95(リリース日:2011年8月1日、ＣｌｏｇＰアルゴリズムversion5.4、データベースversion28、https://www.daylight.com/dayhtml/doc/release_notes/index.html）を用いて計算することが挙られる。
　本明細書において、不純物である上記ペプチドは、精製目的物である上記環状ペプチドの合成過程で生じたペプチドであってよい。不純物である上記ペプチドは、精製目的物である上記環状ペプチドとは異なる環状ペプチドであってよい。不純物である上記ペプチドは、精製目的物である上記環状ペプチドが有するアミノ酸数の２倍のアミノ酸数を有する環状ペプチド、精製目的物である上記環状ペプチドが有するアミノ酸数の３倍のアミノ酸数を有する環状ペプチド又は精製目的物である上記環状ペプチドの異性体であってよい。異性体としては、ジアステレオマーが好ましく例示される。
　本明細書において、金属原子又は金属イオンは、アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属、希土類金属若しくは貧金属の原子又はイオンであってよい。
　アルカリ金属は、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム及びセシウムからなる群より選択される少なくとも一種が好ましく、リチウム又はカリウムがより好ましい。
　アルカリ土類金属は、マグネシウム、カルシウム、ストロンチウム及びバリウムからなる群より選択される少なくとも一種が好ましく、マグネシウム、カルシウム及びバリウムからなる群より選択される少なくとも一種がより好ましい。
　遷移金属は、スカンジウム、マンガン、鉄、亜鉛及びタングステンからなる群より選択される少なくとも一種が好ましく、スカンジウム、マンガン及び亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種がより好ましい。
　希土類金属は、セリウム、サマリウム及びイッテルビウムからなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。
　貧金属は、ビスマス及びインジウムからなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。
　金属原子は、マグネシウム原子、スカンジウム原子及びサマリウム原子からなる群より選択される少なくとも一種が好ましく、マグネシウム原子がより好ましい。金属イオンは、マグネシウムイオン、スカンジウムイオン及びサマリウムイオンからなる群より選択される少なくとも一種が好ましく、マグネシウムイオンがより好ましい。
　金属原子又は金属イオンは、金属塩若しくはその溶媒和物又は第二の錯体から生じた原子又はイオンであってよく、金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンであってよい。第二の錯体は、精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと、金属原子又は金属イオンとの複合体（錯体）、及び、第一の錯体とは異なる錯体を意味してよく、精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと金属原子又は金属イオンとの錯体、及び、第一の錯体と同じ錯体を用いてもよい。金属塩は、第一の金属塩とは異なる金属塩を意味してよく、第一の金属塩と同じ金属塩を用いてもよい。
　金属塩は、ヨウ化物塩、臭化物塩、塩化物塩、過塩素酸塩、酸化物塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イソプロピルスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド塩、エチルマロン酸塩、亜硝酸塩及び硫酸塩からなる群より選択される少なくとも一種が好ましく、ヨウ化物塩、臭化物塩、過塩素酸塩及びトリフルオロメタンスルホン酸塩からなる群より選択される少なくとも一種がより好ましく、過塩素酸塩又はトリフルオロメタンスルホン酸塩が最も好ましい。
　ヨウ化物塩は、ヨウ化リチウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化バリウム、ヨウ化マグネシウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化ストロンチウム、ヨウ化サマリウム（ＩＩＩ）、ヨウ化亜鉛及びヨウ化インジウムからなる群からなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　臭化物塩は、臭化リチウム、臭化マグネシウム、臭化カルシウム、臭化サマリウム（ＩＩＩ）、臭化亜鉛及び臭化インジウムからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　塩化物塩は、塩化サマリウム、塩化セリウム又は塩化マグネシウムであってよく、塩化サマリウム又は塩化セリウムであってよい。
　過塩素酸塩は、過塩素酸リチウム、過塩素酸バリウム、過塩素酸マグネシウム、過塩素酸カルシウム及び過塩素酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　酸化物塩は、酸化マグネシウムであってよい。
　トリフルオロメタンスルホン酸塩は、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム、トリフルオロメタンスルホン酸カルシウム、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム（ＩＩＩ）、トリフルオロメタンスルホン酸セリウム、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム、トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛、トリフルオロメタンスルホン酸マンガン、トリフルオロメタンスルホン酸インジウム、トリフルオロメタンスルホン酸鉄（ＩＩＩ）及びトリフルオロメタンスルホン酸銅からなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　トルエンスルホン酸塩は、トルエンスルホン酸亜鉛（ＩＩ）であってよい。
　イソプロピルスルホン酸塩は、イソプロピルスルホン酸亜鉛（ＩＩ）であってよい。
　メタンスルホン酸塩は、メタンスルホン酸セリウム（ＩＩＩ）及びジフルオロメタンスルホン酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　炭酸塩は、炭酸カリウム、炭酸カルシウム及び炭酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　酢酸塩は、酢酸カリウム及び酢酸マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド塩は、マグネシウムビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、亜鉛ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド及び鉄（ＩＩ）ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミドからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　エチルマロン酸塩は、エチルマロン酸マグネシウムであってよい。
　亜硝酸塩は、亜硝酸カリウムであってよい。
　硫酸塩は、硫酸マグネシウムであってよい。
　金属原子又は金属イオンは、ヨウ化リチウム、過塩素酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、臭化リチウム、塩化リチウム、ヨウ化カリウム、フッ化リチウム、炭酸カリウム、亜硝酸カリウム、酢酸カリウム、テトラフルオロホウ酸カリウム、ヘキサフルオロリン酸カリウム、ヨウ化バリウム、過塩素酸バリウム、エチルマロン酸マグネシウム、マグネシウムビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、酸化マグネシウム、臭化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、塩化マグネシウム、フッ化マグネシウム、ヨウ化カルシウム、過塩素酸カルシウム、臭化カルシウム、トリフルオロメタンスルホン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ヨウ化ストロンチウム、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、塩化スカンジウム、トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム（ＩＩＩ）、ヨウ化サマリウム（ＩＩＩ）、臭化サマリウム（ＩＩＩ）、塩化サマリウム（ＩＩＩ）、メタンスルホン酸セリウム（ＩＩＩ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）、塩化セリウム（ＩＩＩ）・七水和物、トリフルオロメタンスルホン酸セリウム、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム、トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛、テトラフルオロホウ酸亜鉛（ＩＩ）、過塩素酸亜鉛、ジフルオロメタンスルホン酸亜鉛、イソプロピルスルホン酸亜鉛（ＩＩ）、トルエンスルホン酸亜鉛（ＩＩ）、亜鉛ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、臭化亜鉛、塩化亜鉛、炭酸亜鉛、フッ化亜鉛、ヨウ化亜鉛、トリフルオロメタンスルホン酸マンガン、塩化マンガン、トリフルオロメタンスルホン酸インジウム、臭化インジウム、塩化インジウム、ヨウ化インジウム、トリフルオロメタンスルホン酸鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド、フッ化タングステン（ＶＩ）、塩化タングステン（ＶＩ）、トリフルオロメタンスルホン酸銅からなる群より選択される少なくとも一種から生じた原子又はイオンであってよい。
　金属原子又は金属イオンは、ヨウ化リチウム、過塩素酸リチウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化バリウム、過塩素酸バリウム、臭化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム、臭化カルシウム、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム、トリフルオロメタンスルホン酸セリウム、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム、トリフルオロメタンスルホン酸亜鉛、トリフルオロメタンスルホン酸マンガン、トリフルオロメタンスルホン酸インジウム、硫酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、及び塩化マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一つの金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンが好ましい。
　金属原子又は金属イオンは、過塩素酸リチウム、ヨウ化カリウム、臭化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム及びトリフルオロメタンスルホン酸マンガンからなる群より選択される少なくとも一つの金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンであってよい。金属原子又は金属イオンが本段落に記載した金属塩又はその溶媒和物から生じた原子又はイオンである場合、精製後の環状ペプチドの純度をより向上させることができる。
　第二の錯体の配位子は、オレフィン系化合物、カルボニル系化合物、ホスフィン系化合物及び一酸化炭素からなる群より選択される少なくとも一種であってよく、エチレン、ジベンジリデンアセトン、アセチルアセトナート、トリフェニルホスフィン及び一酸化炭素からなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　第二の錯体は、鉄（ＩＩＩ）トリス（アセチルアセトナート）、フェロセン、亜鉛（ＩＩ）アセチルアセトナート亜鉛（ＩＩ）及びタングステンヘキサカルボニルからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　第一の溶媒は、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと、前記金属原子又は前記金属イオンとの複合体を形成させることができる溶媒であってよく、アルコール系溶媒、ニトリル系溶媒、ベンゼン系溶媒、エーテル系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、スルホキシド系溶媒、及びアミド系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種を含んでよい。第一の溶媒が本段落に記載された溶媒である場合、精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと、金属原子又は金属イオンとの錯体が形成されやすくなる。
　本明細書において、アルコール系溶媒の具体例としては、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール及び２，２，２－トリフルオロエタノール、エチレングリコール等を挙げることができる。ニトリル系溶媒の具体例としては、アセトニトリル、プロピオニトリル、アクリロニトリル等の鎖状ニトリル；ベンゾニトリル等の環状ニトリルを挙げることができる。ベンゼン系溶媒の具体例としては、トルエン、ｏ－ジクロロベンゼン、１，２，４－トリクロロベンゼン、キシレン等を挙げることができる。エーテル系溶媒の具体例としては、ジエチルエーテル、ＤＭＥ（ジメチルエーテル）、テトラヒドロフラン、グライム、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、２－メトキシ－２－メチルプロパン、ＣＡＳ：１６３４－０４－４）、ＣＰＭＥ（シクロペンチルメチルエーテル）、テトラヒドロピラン及びジメトキシエタン等を挙げることができる。ケトン系溶媒の具体例としては、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等を挙げることができる。ハロゲン系溶媒の具体例としては、ジクロロメタン、ジクロロエタン等のハロアルカン、クロロベンゼン等のハロアレーンを挙げることができる。エステル系溶媒の具体例としては、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、γ－ブチロラクトン（ＧＢＬ）、エチレンカーボネート（ＥＣ）、プロピレンカーボネート、ブチレンカーボネート、ジメチルカーボネート、ジエチルカーボネート（ＤＥＣ）、ジ－ｎ－プロピルカーボネート、エチルメチルカーボネート（ＥＭＣ）、メチル－ｎ－プロピルカーボネート、エチル－ｎ－プロピルカーボネート等を挙げることができる。
　第一の溶媒としてのアルコール系溶媒は、２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、エタノール及びメタノールからなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。第一の溶媒としてのニトリル系溶媒は、アセトニトリルが好ましい。第一の溶媒としてのベンゼン系溶媒は、トルエン又はキシレンが好ましい。第一の溶媒としてのエーテル系溶媒は、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、２－メチルテトラヒドロフラン、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ＤＭＥ（ジメチルエーテル）及びＣＰＭＥ（シクロペンチルメチルエーテル）からなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。第一の溶媒としてのケトン系溶媒は、アセトン又はメチルエチルケトンが好ましい。第一の溶媒としてのハロゲン系溶媒は、ジクロロメタンが好ましい。第一の溶媒としてのスルホキシド系溶媒は、ジメチルスルホキシドが好ましい。第一の溶媒としてのアミド系溶媒は、ジメチルホルムアミド又はジメチルアセトアミドが好ましい。
　第一の溶媒は、２－プロパノール、ｔｅｒｔ－ブタノール、２，２，２－トリフルオロエタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、トルエン、１，４－ジオキサン、アセトン、ジクロロメタン、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド及びジメチルアセトアミドからなる群より選択される少なくとも一種が好ましく、２，２，２－トリフルオロエタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン及びアセトンからなる群より選択される少なくとも一種がより好ましい。
　第二の溶媒は、エーテル系溶媒、ベンゼン系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、ニトリル系溶媒、炭化水素系溶媒、アルコール系溶媒、スルホキシド系溶媒、及びアミド系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種を含んでよい。
　第二の溶媒としてのエーテル系溶媒は、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ＤＭＥ（ジメチルエーテル）、ＣＰＭＥ（シクロペンチルメチルエーテル）からなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。第二の溶媒としてのベンゼン系溶媒は、トルエン又はキシレンが好ましい。第二の溶媒としてのケトン系溶媒は、アセトン又はメチルエチルケトンが好ましい。第二の溶媒としてのハロゲン系溶媒は、ジクロロメタンが好ましい。第二の溶媒としての炭化水素系溶媒は、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン及びイソオクタンからなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。第二の溶媒としてのエステル系溶媒は、酢酸イソプロピル又は酢酸エチルが好ましい。第二の溶媒としてのニトリル系溶媒は、アセトニトリルが好ましい。第二の溶媒としてのアルコール系溶媒は、メタノール、エタノール、ブタノール、又はベンジルアルコールからなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。第二の溶媒としてのスルホキシド系溶媒は、ジメチルスルホキシドが好ましい。第二の溶媒としてのアミド系溶媒は、ジメチルホルムアミドが好ましい。
　第二の溶媒は、酢酸イソプロピルもしくはメチルエチルケトン、及びヘプタンの組み合わせ、ジクロロメタン及びヘキサンの組み合わせ、又はアセトニトリル及びＭＴＢＥの組み合わせであることが好ましい。
　本明細書において、第三の溶媒は、水と混和しない溶媒（例えば、水に対する溶解度が低い溶媒、オクタノール／水分配係数（ｌｏｇ　Ｋｏｗ）の大きい溶媒、またはオクタノール／水分配係数予測値の大きい溶媒）であってよい。
　オクタノール／水分配係数（ｌｏｇ　Ｋｏｗ）は、当該技術分野で知られているか、本明細書に記載されている任意の方法によって決定され得る。オクタノール／水分配係数（Ｌｏｇ　Ｋｏｗ）予測値は、特に限定しないが、例えばデータベース検索又は文献検索により、別々の明示的測定において公知の手段によって決定され得る。オクタノール／水分配係数の測定方法としては、例えば日本工業規格ＪＩＳ７２６０－１０７：２０００　分配係数（１－オクタノール／水）の測定－フラスコ振とう法（（https://kikakurui.com/z7/Z7260-107-2000-01.html）[アクセス日：２０２３年１２月２５日]）に沿った方法で測定できるが、これに限定されない。
　ある実施態様において、水と混和しない有機溶媒は、特に限定を意図しないが、低い水溶性（例えば２００ｇ／Ｌ以下、好ましくは１５０ｇ／Ｌ以下の水に対する溶解度を有する）を有する有機溶媒を含む。水と混和しない有機溶媒中には、水と混和する他の有機溶媒を、例えば０．０１ｗｔ％以下の微量に含んでいてもよい。水に対する溶解度は、当技術分野で知られているか、本明細書に記載されている任意の方法によって決定され得る。溶解度を決定するための例示的な方法には、特に限定を意図するものではないが、ガスクロマトグラフィーが含まれ、室温（例えば、１５℃～４０℃、好ましくは２０℃～３０℃）で同容量の有機溶媒と水を混和することによって調製された、水中の前記有機溶媒の濃度を測定することで決定することができる。
　ある実施態様において、有機溶媒の水との混和性の決定について、例えば、室温（例えば１５℃～４０℃、好ましくは２０℃～３０℃）で、同容量の溶媒と水を容器中で混和した時に、溶媒と水とが二層に分離することで示されうる。溶媒と水が二層に分離するかどうかは、例えば目視で確認すること、容器中の上層部と下層部の液体を採取して確認することにより行うことができる。このような方法で溶媒と水が二層に分離したことが確認できた場合、該溶媒を水と混和しない溶媒と指す場合もある。ただし、水と混和する溶媒でも、溶媒中の溶質や水中の塩濃度によっては、水と界面を形成し二層に分離する可能性もある。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、３以上１０以下の炭素原子を有するエステルとして特徴付けることができ、具体的には、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ－プロピル、酢酸ｔ－ブチル、プロピオン酸メチルまたはプロピオン酸エチルなどが例示される。
ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、４以上および１０以下の炭素原子を有する環状エーテルとして特徴付けることができ、具体的には、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、４－メチルテトラヒドロピランまたは１，４－ジオキサンなどが例示される。ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、４以上および１０以下の炭素原子を有する非環状エーテルとして特徴付けることができ、具体的には、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ジイソプロピルエーテルまたはジエチルエーテルなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、６以上および１０以下の炭素原子を有する環状および非環状アルキル基の両方を有するエーテルとして特徴付けることができ、具体的には、ＣＰＭＥなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、３以上および１０以下の炭素原子を有する炭酸エステルとして特徴付けることができ、具体的には、炭酸ジメチル、炭酸ジエチルまたは炭酸ジイソプロピルなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、５以上および１０以下の炭素原子を有する炭化水素として特徴付けることができ、具体的には、ペンタン、ヘキサンまたはヘプタンなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、６以上および１０以下の炭素原子を有する芳香族炭化水素環として特徴付けることができ、具体的には、トルエン、キシレンまたはベンゼンなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、周囲圧力（約１気圧）で低い沸点を有することを特徴付けることができる。ある実施態様において、常圧（１気圧付近）での低沸点とは、３５℃以上１４０℃未満として例示される。
　水と混和しない溶媒は、２－メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、酢酸エチル、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、ＤＭＥ（ジメチルエーテル、）、ＣＰＭＥ（シクロペンチルメチルエーテル）、４－メチルテトラヒドロピラン、ヘプタン及びトルエンからなる群より選択される少なくとも一種が好ましい。
　本明細書において、第四の溶媒は、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、ｔ－ブタノール、エチレングリコール、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ヘプタン、イソオクタン、トルエン、キシレン、ジメチルスルホキシド、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、４－メチルテトラヒドロピラン、２－メチルテトラヒドロフラン、１，４－ジオキサン、ＭＴＢＥ（ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル）、ＤＭＥ（ジメチルエーテル）、ＣＰＭＥ（シクロペンチルメチルエーテル）、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン及びアセトニトリルからなる群より選択される少なくとも一種であってよい。
　配位子若しくは配位子を生じさせる化合物の具体例としては、オレフィン系化合物、カルボニル系化合物、ホスフィン系化合物及び一酸化炭素等が挙げられる。陰イオン若しくは陰イオンを生じさせる化合物の具体例としては、ヨウ化物塩、臭化物塩、塩化物塩、過塩素酸塩、酸化物塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イソプロピルスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、ビス（トリフルオロメタンスルホン酸）イミド塩、エチルマロン酸塩、１，５－シクロオクタジエン、ジベンジリデンアセトン、トリフェニルホスフィン、及び亜硝酸塩等が挙げられる。
　本明細書における環状ペプチドの精製法は、精製目的物である環状ペプチドを、その純度が８５％以上、９０％以上又は９５％以上になるように精製する方法であってよく、純度が１００％、９８％以上又は９７％以上になるように精製する方法であってもよい。本明細書における環状ペプチドの精製法は、精製目的物である環状ペプチドの純度が本明細書に記載された精製操作により上昇すればよく、例えば純度８０％の精製目的物である環状ペプチドが８３％、８６％、８９％、９２％、９６％、又は１００％になること、精製目的物である環状ペプチドの純度が純度１００％を上限として、精製操作前の純度の１．０３倍、１．０８倍、１．１１倍、１．１５倍、又は１．２０倍になること、が例示される。本明細書における環状ペプチドの精製法は、精製目的物である環状ペプチド及び不純物を含む混合物中の不純物の含有量を減少させる方法、精製目的物である環状ペプチドに対する不純物の比率を、本明細書に記載された精製操作により減少させる方法、又は、本明細書に記載された精製操作の前後で不純物の除去の指標となりうる不純物の精製効率が正の値である方法ということもできる。精製目的物である前記環状ペプチドの純度（％）は、例えば、精製目的物である環状ペプチドを含んだ混合物のＵＶスペクトルを、ＨＰＬＣ及びＰＤＡ（フォトダイオードアレイ検出器）を用いて測定し、２２０ｎｍ又は２２５ｎｍにおける精製目的物である環状ペプチドを含む混合物全体の各ピーク面積の総和に対し、精製目的物である環状ペプチドのピーク面積が占める割合から求めることができる。不純物であるペプチド（例えば精製目的物である環状ペプチドの異性体）の混合割合（％）は、例えば、精製目的物である環状ペプチドを含んだ混合物のＵＶスペクトルを、ＨＰＬＣ及びＰＤＡ（フォトダイオードアレイ検出器）を用いて測定し、２２０ｎｍ又は２２５ｎｍにおける精製目的物である環状ペプチドを含んだ混合物全体の各ピーク面積の総和に対し、不純物であるペプチドのピーク面積が占める割合から求めることができる。
　不純物の精製効率は、例えば、精製目的物である環状ペプチドを含んだ混合物のＵＶスペクトルを、ＨＰＬＣ及びＰＤＡ（フォトダイオードアレイ検出器）を用いて測定し、２２０ｎｍ又は２２５ｎｍにおける精製目的物である環状ペプチドのピーク面積に対する不純物（例えば、異性体）のピーク面積の比率を算出し、それらを本明細書に記載された精製操作の前後で比較することで求めることができる。例えば、不純物の精製効率（％）は、以下の式で求めることができる。
　不純物の精製効率（％）＝｛１－（精製操作後の精製目的物である環状ペプチドと不純物の比率）÷（精製操作前の精製目的物である環状ペプチドと不純物の比率）｝×１００｛１－（精製操作前の精製目的物である環状ペプチドと不純物の比率）÷（精製操作後の精製目的物である環状ペプチドと不純物の比率）｝×１００
　本発明の更に別の一実施形態は、本発明に係る環状ペプチドの精製法を含む、環状ペプチドの製造方法に関する。本明細書において、環状ペプチドの製造方法は、液相合成法により精製目的物である上記環状ペプチドを得る工程を更に含んでもよく、固相合成法により精製目的物である上記環状ペプチドを得る工程を更に含んでもよく、培養法により精製目的物である上記環状ペプチドを得る工程を更に含んでもよい。液相合成法により精製目的物である上記環状ペプチドを得る工程とは、精製目的物である上記環状ペプチドを得る工程に液相合成が含まれることを意味する。固相合成法により精製目的物である上記環状ペプチドを得る工程とは、精製目的物である上記環状ペプチドを得る工程に固相合成が含まれることを意味する。本明細書における液相合成法には、有機タグ（疎水性タグとも呼ばれる）を用いたペプチドの合成方法が含まれる。有機タグを用いたペプチドの合成方法としては、特に限定されるものではないが、国際公開第２０１２／０２９７９４号、国際公開第２００７／１２２８４７号、及び国際公開第２０１９／００９３１７号に記載の方法が例示される。
　本出願は、２０２２年１２月２８日出願の日本特許出願である特願２０２２－２１２４６８の優先権を主張し、この内容はその全体が参照として本明細書中に援用される。また、以下の文献を含む、本明細書中で引用される参照文献は、特許出願及び公報も含めて、全て、それらの全体が参照として本明細書中に援用される：国際公開第２０１３／１００１３２号、国際公開第２０１８／２２５８５１号、国際公開第２０１８／２２５８６４号、国際公開第２０１９／１１７２７４号、国際公開第２０２０／１１１２３８号、国際公開第２０２０／１２２１８２号、国際公開第２０２１／０７５４７８号、国際公開第２０２１／０９０８５６号、国際公開第２０２１／１３２５４５号、国際公開第２０２／１２４６４７１号、国際公開第２０２２／０９７５４０号、国際公開第２０２２／１３８８９１号、国際公開第２０２２／１４５４４４号、国際公開第２０２２／２３４８６４号、国際公開第２０２３／１２７８６９号。
　本発明の内容を以下の実施例及び参考例でさらに説明するが、本発明はその内容に限定されるものではない。全ての出発物質及び試薬は商業的供給業者から入手、若しくは公知の方法を用いて合成した。ＬＣ／ＭＳの分析条件は表１に記載した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　実施例及び参考例中では以下の略号を使用した。
　ＡＡ：酢酸アンモニウム
　ＣＯＭＵ：（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩
　ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン
　ＤＣＭ：ジクロロメタン
　ＤＣＥ：１，２－ジクロロエタン
　ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
　ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド
　ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
　ＤＶＢ：ジビニルベンゼン
　ｔＢｕ基：ｔｅｒｔ－ブチル基
　ＦＡ：ギ酸（メタン酸）
　Ｆｍｏｃ基：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基
　ＮＭＰ：Ｎ－メチル－２－ピロリドン
　ＮＭＲ：核磁気共鳴分光法
　ｍＭ：ｍｍｏｌ／Ｌ
　ＰＤＡ：フォトダイオードアレイ検出器
　ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
　ＴＦＥ：２，２，２－トリフルオロエタノール
　ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
　ＴＨＰ：テトラヒドロピラニル
　ＭＴＢＥ：ｔｅｒｔ-ブチルメチルエーテル
　ＨＯＡｔ：１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
　ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
　ＩＰＡＣ：酢酸イソプロピル
　ＭＥＫ：メチルエチルケトン
　ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
　ｏｘｙｍａ：シアノ（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル
　ＥＤＣＩ・ＨＣｌ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
　ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
　ＭｅＣＮ：アセトニトリル，ＣＨ３ＣＮ
　１Ｈ：プロトン
　ｖ／ｖ：体積／体積
　ＮＭＲ測定はＢｒｕｋｅｒ社製のＡＶＡＮＣＥ　ＩＩＩ　６００　Ｃｒｙｏ－ＴＣＩ、ＡＶＡＮＣＥ　ＩＩＩ　ＨＤ　６００　ＳＭＡＲＴ－ＢＢＦＯ、ＡＶＡＮＣＥ　ＮＥＯ　６００　ｉＰｒｏｂｅＴＢＯ又はＡＶＡＮＣＥ　ＮＥＯ　６００　Ｃｒｙｏ－ＴＣＩ－Ｈ＆Ｆを用いて、絶対温度２９８Ｋ又は２７８Ｋにて行った。
［参考例１：環状ペプチドの合成］
＜アミノ酸の一般的な合成方法＞
　本実施例及び参考例で用いられた、Ｆｍｏｃ基で保護されたアミノ酸（Ｆｍｏｃ－アミノ酸）は、一般的なアミノ酸合成法により製造することができ、例えば、国際公開第２０２１／０９０８５５号に記載の方法により製造することができる。また、Ｆｍｏｃ基で保護されたアミノ酸は、商業的供給業者から入手可能である。本実施例及び参考例では、市販されているアミノ酸のＮ末端にＦｍｏｃ基を導入したアミノ酸、又は市販されているアミノ酸のＣ末端を脱保護したアミノ酸を、目的とするペプチドの伸長反応に用いることもできる。保護基の脱着反応は、例えば、「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（第５版，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ　２０１４）」に記載の方法により行うことができる。天然に存在するアミノ酸の側鎖（アミノ酸のα炭素上の官能基）とは異なる側鎖を有するアミノ酸は、商業的供給業者から入手可能なアミノ酸（天然に存在するアミノ酸）の側鎖を、目的とする側鎖に適宜変換することで製造可能である。側鎖の変換は、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｇｒｏｕｐ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，　３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｒ．　Ｃ．　Ｌａｒｏｃｋ著、又は、Ｍａｒｃｈ’ｓ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：　Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，　ａｎｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、７ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｍ．　Ｂ．　Ｍａｒｃｈ著等に記載の方法により行うことができる。Ｎ末端がアルキル化されたアミノ酸（Ｎ－アルキルアミノ酸）は、Ｎ末端がアルキル化されていないアミノ酸を、Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒらの方法（Ｊ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．，　１９８３，　４８（１），　７７－８１）に準じてアルデヒドと反応させることで環状保護基が導入されたオキサゾリジノン体を得、次いで、当該環状保護基の開環反応を行うことで製造することができる。
　本実施例及び参考例で用いられたＦｍｏｃ－アミノ酸を、表２～４に示す。表２～４に記載のＦｍｏｃ－アミノ酸は、商業的供給業者から購入するか、国際公開第２０２１／０９０８５５号に記載の方法を参照して合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
＜Ｆｍｏｃ－アミノ酸担持レジンの合成方法＞
　下記式（１）に示すとおり、Ｆｍｏｃ－アミノ酸である化合物ａａ０１、化合物ａａ０２及び化合物ａａ０３を合成し、得られた化合物ａａ０３を用いて、化合物ａａ０３をレジンに担持させた化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎ（（３Ｓ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－４－ピロリジン－１－イルブタン酸－２－クロロトリチルレジン（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ））を合成した。化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎをペプチド合成機によるペプチド合成に用いた。Ｆｍｏｃ－アミノ酸のレジンへの担持反応は、国際公開第２０１３／１００１３２号又は国際公開第２０１８／２２５８６４号に記載の方法で行った。２－クロロトリチルクロライドレジン（１００－２００ｍｅｓｈ、１％ＤＶＢ）は渡辺化学工業株式会社及びＣｈｅｍ－Ｉｍｐｅｘ社から購入した。なお、ｐｙｒｒｏとはピロリジンを意味する。例えば化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎでは、Ｃ末端のカルボキシル基がピロリジンとアミド結合を形成している。
　本明細書では、ポリマー又はレジンと、アミノ酸又はペプチド化合物とが結合して得られた化合物の化学式において、ポリマー又はレジンの一部又は全部を丸（〇）と表記する場合がある。また、レジンとアミノ酸又はペプチド化合物との結合部位の構造を明確にさせる目的で、当該結合部位の化学構造を表記する場合がある。例えば、上記式（１）の化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎにおいては、レジンの一部が〇で示され、レジンの２－クロロトリチル基とＡｓｐの側鎖カルボキシル基とが、エステル結合を介して結合していることが示されている。
　上記式（１）において、化合物ａａ０１は商業的供給業者から購入した。化合物ａａ０２の合成方法について詳述する。窒素雰囲気下、０℃で、ＤＭＦ（６００ｍＬ）に、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（６７．１ｇ，３５０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（４３．４ｇ，３２１ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（化合物ａａ０１，ＣＡＳ：７１９８９－１４－５）（１２０ｇ，２９２ｍｍｏｌ）を順に混合した。得られた混合物を、０℃で１時間撹拌した。得られた反応液に、ピロリジン（２６．３ｍＬ，３２１ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、０℃で１時間３０分撹拌した。この反応液に、酢酸エチル（１０ｖ／ｗ）及び０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水（２ｖ／ｗ）を０℃で加え、有機相を分離した。得られた有機相を、０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液／水（１／１（ｖ／ｖ））、及び、飽和塩化ナトリウム水溶液／水（１／１（ｖ／ｖ））で順に洗浄した。洗浄後の有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒留去して化合物ａａ０２を粗生成物として得た（１３７．１ｇ，ｑｕａｎｔ．）。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４６５（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：１．０５分（分析条件：ＳＱＤＡＡ０５）
　化合物ａａ０３の合成方法について詳述する。氷冷下にて、化合物ａａ０２（１３７ｇ，３９５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１３７ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（２７１ｍＬ）を内温が１０℃を超えないようにゆっくり加えた。得られた混合液を室温で１時間撹拌し、ジイソプロピルエーテル（３．４Ｌ）を４回に分けて加えた。析出した固体をろ取し、乾燥させて化合物ａａ０３（（３Ｓ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－４－ピロリジン－１－イルブタン酸，Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ）を得た（１０８．４ｇ，９０％）。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４０９（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：０．８３分（分析条件：ＳＱＤＡＡ０５）
　化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎの合成方法について詳述する。フィルター付き反応容器に、２－クロロトリチルクロライドレジン（１．６０ｍｍｏ／ｇ，１００－２００ｍｅｓｈ，１％ＤＶＢ、４８．７ｇ）と脱水ジクロロメタン（５００ｍＬ）を入れ、反応容器を室温で２０分間振とうした。フィルター付き反応容器内に窒素圧をかけて脱水ジクロロメタンを除いた後、化合物ａａ０３（１５．９１ｇ）、脱水ジクロロメタン（３５０ｍＬ）、脱水メタノール（１２．６３ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤｌＰＥＡ）（３２．６ｍＬ）の混合液を反応容器に添加し、反応容器を６０分間振とうした。反応容器内に窒素圧をかけて液体成分を除いた後、脱水ジクロロメタン（３５０ｍＬ）、脱水メタノール（９７．３ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３２．６ｍＬ）の混合液を反応容器に加え、反応容器を１時間３０分振とうした。窒素圧をかけて液体成分を除いた後、ジクロロメタン（３５０ｍＬ）を入れ５分間振とうした。反応容器内に窒素圧をかけて液体成分を除いた後、ジクロロメタン（３５０ｍＬ）を入れ５分間振とうした。このように、ジクロロメタンでのレジンの洗浄を５回繰り返した。洗浄後のレジンを減圧下で一晩乾燥させ、（３Ｓ）－３－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－４－ピロリジン－１－イルブタン酸－２－クロロトリチルレジン（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ、化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎ，５９．７９ｇ）を得た。
　担持率の確認のため、得られた化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎ（１２．６ｍｇ）を反応容器に入れ、ＤＭＦ（２ｍＬ）を加えて、反応容器を室温で１時間振とうした。反応容器内にＤＢＵ（４０μＬ）を加えて、反応容器を３０℃で３０分間振とうした。その後、反応容器内にＤＭＦ（８ｍＬ）を混合し、反応容器内から反応液１ｍＬを採取した。採取した１ｍＬの反応液をＤＭＦ（１１．５ｍＬ）で希釈した。得られた希釈溶液の吸光度（２９４ｎｍ）を測定（Ｓｈｉｍａｄｚｕ、ＵＶ－１６００ＰＣ（セル長１．０ｃｍ）を用いて測定）した。レジンに担持されているＦｍｏｃ－アミノ酸の、Ｆｍｏｃ基に由来するジベンゾフルベンの吸光度を測定することで、化合物ａａ０３の担持量を０．４６４ｍｍｏｌ／ｇと算出した。同様に合成した、担持量が異なる別ロットについてもペプチド合成、検討等に使用した。
　化合物ａａ０４－ｒｅｓｉｎは、国際公開第２０１３／１００１３２号の記載に準じて合成した。
＜Ｆｍｏｃ－ペプチド担持レジンの合成方法＞
　上記式（３）において、化合物ａａ０５（Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ、ＣＡＳ：７１９８９－２３－６）、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ（ＣＡＳ：７１９８９－３１－６）、及びＦｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯＡｌ）－ＯＨ（ＣＡＳ：１４６９８２－２４－３）は、商業的供給業者から購入した。化合物ａａ０６（Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）の合成方法について詳述する。窒素雰囲気下、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（３．２５ｇ，１７．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）と混合し、１０分間室温で撹拌した後、０℃に冷却した。ＨＯＢｔ（２．１０ｇ，３．２５ｍｍｏｌ）及び化合物ａａ０５（Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ，ＣＡＳ：７１９８９－２３－６）（１５．００ｇ，１４．１５ｍｍｏｌ）を順に混合し、０℃で１時間撹拌した。得られた反応液に、ピペリジン（１．２７ｇ，１４．９ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、０℃で１時間撹拌した。この反応液に、酢酸エチル（１０ｖ／ｗ）及び０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水（１０ｖ／ｗ）を加え、有機相を分離した。得られた有機相を、０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水、水、５％炭酸ナトリウム水溶液、及び、飽和塩化ナトリウム水溶液／水（１／１（ｖ／ｖ））で順に洗浄した。洗浄後の有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒留去して化合物ａａ０６（Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）を粗生成物として得た（６．１１ｇ）。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４２１（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：０．９８分（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５）
　化合物ａａ０７（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）の合成方法について詳述する。化合物ａａ０６（Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）のＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）に対し１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ，２．２１ｇ，１４．５３ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で１０分撹拌した。この反応溶液に、トリエチルアミン塩酸塩（２．００ｇ，１４．５３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ，２．５４ｍＬ，１４．５３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ（ＣＡＳ：７１９８９－３１－６）（４．９０，１４．５３ｍｍｏＬ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（３．９０ｇ，２０．３５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（２．３７ｇ，１７．４３ｍｍｏｌ）を順次加え室温で１時間撹拌した。この反応液に、酢酸エチル（１０ｖ／ｗ）及び０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水（１０ｖ／ｗ）を加え、有機相を分離した。得られた有機相を、０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水、水、５％炭酸ナトリウム水溶液、及び、飽和塩化ナトリウム水溶液／水（１／１（ｖ／ｖ））で順に洗浄した。洗浄後の有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒留去して化合物ａａ０７を粗生成物として得た。得られた粗生成物にＤＭＳＯ（５ｍＬ）と酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え得られた溶液をろ過した後、酢酸エチルをある程度減圧留去した。得られた残渣を逆相中圧カラムクロマトグラフィー（０．１％のギ酸を含むアセトニトリル／水）により精製し、化合物ａａ０７（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）（２．４１ｇ，３２％，純度９７％［ピーク面積百分率］）を得た。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５１８（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：０．９４分（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５）
　化合物ａａ０８（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯＡｌ）－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）の合成方法について詳述する。化合物ａａ０７（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）（２．４１ｇ，４．６６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２３ｍＬ）に対し１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ，０．７０２ｍＬ，４．６６ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で１０分撹拌した。この反応溶液に、トリエチルアミン塩酸塩（０．６４１ｇ，４．６６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ，０．８１３ｍＬ，４．６６ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯＡｌ）－ＯＨ（ＣＡＳ：１４６９８２－２４－３）（２．４１ｇ，４．６６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１．２５ｇ，６．５２ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．７６０ｇ，５．５９ｍｍｏｌ）を順次加え室温で１時間３０分撹拌した。この反応液に、酢酸エチル（１０ｖ／ｗ）及び０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水（１０ｖ／ｗ）を加え、有機相を分離した。得られた有機相を、０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水、水、５％炭酸ナトリウム水溶液、及び、飽和塩化ナトリウム水溶液／水（１／１（ｖ／ｖ））で順に洗浄した。洗浄後の有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒留去して化合物ａａ０８を粗生成物として得た。得られた粗生成物にＤＭＳＯに溶かし逆相中圧カラムクロマトグラフィー（０．１％のギ酸を含むアセトニトリル／水）により精製し、化合物ａａ０８（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯＡｌ）－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）（１．７１ｇ，５５％，純度８４％［ピーク面積百分率］）を得た。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝６７４（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：２．９４分（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５ｌｏｎｇ）
　化合物ａａ０９の合成方法について詳述する。化合物ａａ０８（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯＡｌ）－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）（１．７１ｇ，純度８４％）のジクロロメタン溶液（５．０８ｍＬ）に対して、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（ＣＡＳ：１４２２１－０１－３、ｔｅｔｒａｋｉｓ（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）ｐａｌｌａｄｉｕｍｕ（０）、Ｐｄ（ＰＰｈｅ３）４、０．２９４ｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）とフェニルシラン（ＣＡＳ：６９４－５３－１、ｐｈｅｎｙｌｓｉｌａｎｅ、０．３１３ｍＬ、２．５４ｍｍｏｌ）を加え０℃で１５分間撹拌した。得られた反応液の溶媒を減圧留去し逆相中圧カラムクロマトグラフィー（０．１％のギ酸を含むアセトニトリル／水）により精製し、化合物ａａ０９（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）（１．１１ｇ、６９％、純度９９％［ピーク面積百分率］）を得た。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝６３３（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：０．８０分（分析条件：ＳＱＤＦＡ０５）
　化合物ａａ０９－ｒｅｓｉｎ（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）は、国際公開２０１３／１００１３２号の記載に準じて合成した。
＜ペプチドの一般的な合成方法＞
　本実施例及び参考例で用いられたペプチド化合物は、固相合成法により合成した。固相合成法としては、例えば、Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄｓ，　２０１８，　５０，　３９－６８、又はＳｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　（Ｂａｃｈｅｍ社発行）［２０２２年１２月２０日検索］、インターネット＜ＵＲＬ：　ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｂａｃｈｅｍ．ｃｏｍ／ｗｐｆｄ＿ｆｉｌｅ／ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ－ｐｅｐｔｉｄｅ－ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ／＞を挙げることができる。本実施例及び参考例においては、国際公開第２０１３／１００１３２号又は国際公開第２０１８／２２５８６４号に記載の、Ｆｍｏｃ法によるペプチド合成法を参照した。本実施例及び参考例においては、図１に示す、環状ペプチドの基本的な合成方法によりペプチドの伸長を行った。図１に示す環状ペプチドの基本的な合成方法は、
　１）Ａｓｐ側鎖のカルボキシル基若しくはペプチド主鎖カルボキシル基を２－クロロトリチルレジンに担持させたものを用い、アミノ酸のＮ末端からのＦｍｏｃ法によるペプチドの伸長反応（Ｆｍｏｃ基で保護されたアミノ酸を原料としたペプチド鎖伸長反応）、
　２）２－クロロトリチルレジンからのペプチドの切り出し過程、
　３）切り出し過程によって２－クロロトリチルレジンから外れて生じたＡｓｐ側鎖のカルボキシル基若しくはペプチド主鎖カルボキシル基と、ペプチド鎖Ｎ末端（三角ユニット）のアミノ基との縮合によるアミド環化、
　４）必要に応じたペプチド鎖に含まれる側鎖官能基の保護基の脱保護、
　５）ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅＨＰＬＣによる化合物の精製
の５段階の工程を備える。本実施例及び参考例においては、特に記述がない限り、図１に示す環状ペプチドの基本的な合成方法によって環状ペプチドの合成を行った。
＜Ｎ－アルキルアミノ酸を含むペプチド化合物の合成方法＞
　Ｎ－アルキルアミノ酸を含むペプチド化合物は、表２～４に示したＦｍｏｃ基によって保護されたＮ－アルキルアミノ酸を原料として用いて、本実施例及び参考例に記載した「＜ペプチドの一般的な合成方法＞」に従って合成することができる。
＜１．自動合成機によるペプチド固相合成＞
　国際公開第２０１３／１００１３２号又は国際公開第２０１８／２２５８６４号に記載の方法で、化合物１を合成した。ペプチド合成機（Ｍｕｌｔｉｐｅｐ　ＲＳ；ＣＥＭ（旧Ｉｎｔａｖｉｓ）社製）の詳細な操作手順については、合成機に付属されたマニュアルに従った。化合物１（環状ペプチド）及び化合物６（環状ペプチド）を構成する各アミノ酸残基の略称、アミノ酸構造式及び正式名称を下記表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
＜１－１．アミノ酸のＮ末端からのＦｍｏｃ法によるペプチド伸長反応＞
　精製目的物である環状ペプチドを構成するＦｍｏｃ－アミノ酸（溶液１中の濃度：０．３－０．６ｍｏｌ／Ｌ）と、カルボキシル基の活性化剤である、ＨＯＡｔ、ｏｘｙｍａ又はＨＯＯＢｔ（溶液１中の濃度：０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）を、ＮＭＰ又はＮＭＰ／ＤＭＦ（１／１）に溶解させて溶液１を調製した。Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（１０％ｖ／ｖ）とＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を混合し、溶液２を調製した。
　側鎖にＴＨＰ基を有するＦｍｏｃ－アミノ酸として、Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ＴＨＰ）－ＯＨまたはＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（ＴＨＰ）－ＯＨを用いた場合は、カルボキシル基の活性化剤としてｏｘｙｍａを用いて溶液１を調製し、モレキュラシーブス４Ａ１／８（和光純薬工業）又はモレキュラシーブス４Ａ１／１６（和光純薬工業）を添加してペプチド合成に用いた。
　Ｎ末端がＦｍｏｃ基で保護されたアスパラギン酸の側鎖カルボキシル基で結合した２－クロロトリチルレジン（１００ｍｇ）をフィルター付き反応容器に加え、ペプチド合成機にセットした。このレジン（１００ｍｇ）にジクロロメタン（ＤＣＭ）（０．８ｍＬ）を加えて１時間静置することでレジンの膨潤を行った。その後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。溶液１及び溶液２をペプチド合成機にセットし、ペプチド合成機による自動合成を開始した。
＜脱Ｆｍｏｃ工程＞
　膨潤したレジンを含むフィルター付き反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２％ｖ／ｖ、０．７ｍＬ）を添加し、室温にてＮ末端のＦｍｏｃ基の脱保護を行った。１残基目の脱保護においては４．５分間反応させ、２残基目以降の脱保護においては１０分間反応させた後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。そこにＤＭＦ（０．７ｍＬ）を加えてレジンを洗浄し、５分静置後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。このレジンの洗浄工程を更に３回繰り返すことで、レジン上に結合したアミノ酸又はペプチドのＮ末端のＦｍｏｃ基が除去されてアミノ基となったレジンを得た。
＜伸長工程＞
　続いて、溶液１（１つの反応容器あたり０．３ｍＬ）と溶液２（１つの反応容器あたり０．３６ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に、上記脱保護処理後のレジンに添加し、フィルター付き反応容器を４０℃に加温した。レジン上のアミノ基とＦｍｏｃ－アミノ酸との縮合反応は、２．５時間行った。反応後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。次いで反応後のレジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で３回洗浄した。このＦｍｏｃ基の脱保護反応に次ぐＦｍｏｃ－アミノ酸の縮合反応を１サイクルとし、このサイクルを繰り返すことでレジン表面上にペプチドを伸長させた。最後のアミノ酸伸長後は脱Ｆｍｏｃ工程を行わずに、さらにＤＣＭ（１反応容器あたり１．０ｍＬ）で４回洗浄した。
＜Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＭｅＡｌａ－Ｃｈａ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－ＭｅＰｈｅ（３４－Ｆ２）－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＭｅＰｈｅ（４－Ｆ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１）の合成＞
　原料としてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物ａａ０３－ｒｅｓｉｎ、０．４９７ｍｍｏｌ／ｇ、１００ｍｇ、０．０４９７ｍｍｏｌが入ったフィルター付き反応容器×４８個）、Ｆｍｏｃ－ＭｅＶａｌ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－ＭｅＰｈｅ（４－Ｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－ＭｅＰｈｅ（３４－Ｆ２）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｃｈａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ－ＯＨ、及びＦｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨを用いた。上述のＦｍｏｃ法によるペプチド伸長反応により化合物１を調製した。
＜１－２．化合物６（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１８Ｓ，２２Ｓ，２５Ｓ，２８Ｓ，３１Ｓ，３４Ｓ，３７Ｓ）－６－（シクロヘキシルメチル）－３１－（シクロペンチルメチル）－３４－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチル］－２８－［（４－フルオロフェニル）メチル］－３－イソブチル－２５－イソプロピル－９，１０，１８，１９，２６，２９，３５－ヘプタメチル－２２－（ピロリジン－１－カルボニル）－１，４，７，１０，１６，１９，２３，２６，２９，３２，３５－ウンデカザトリシクロ［３５．３．０．０１２，１６］テトラコンタン－２，５，８，１１，１７，２０，２４，２７，３０，３３，３６－ウンデカオンの合成＞
＜脱Ｆｍｏｃ工程＞
　Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＭｅＡｌａ－Ｃｈａ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－ＭｅＰｈｅ（３４－Ｆ２）－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＭｅＰｈｅ（４－Ｆ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物１）にトルエン（１反応容器につき１ｍＬ）を加えて洗浄し、５分静置後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返すことで、トルエンで膨潤されたレジンを得た。
　トルエンで膨潤されたレジンを含む固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のトルエン溶液（２％ｖ／ｖ、１反応容器につき０．７ｍＬ）を添加し、室温にてＮ末端のＦｍｏｃ基の脱保護を行った。１０分間反応させた後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。そこにトルエン（１反応容器につき０．７ｍＬ）を加えて洗浄し、５分静置後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。トルエンによるレジンの洗浄工程を更に１回繰り返した後、そこにＤＣＭ（１反応容器につき０．７ｍＬ）を加えて洗浄し、５分静置後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。ＤＣＭによるレジンの洗浄工程を更に１回繰り返すことでレジン上に結合したペプチドのＮ末端のＦｍｏｃ基が除去されてアミノ基となったＨ－Ｐｒｏ－ＭｅＡｌａ－Ｃｈａ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－ＭｅＰｈｅ（３４－Ｆ２）－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＭｅＰｈｅ（４－Ｆ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物２）を得た。
＜伸長工程＞
　上記により得られたレジンに対し、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ－ＯＨ（４モル当量）のＤＣＭ溶液（０．２５ｍＬ）と［エチルシアノ（ヒドロキシイミノ）アセタト－Ｏ２］トリ１－ピロリジニルホスホニウムヘキサフルオロリン酸（ＰｙＯｘｉｍ，１５３４３３－２１－７，４モル当量）のＤＣＭ溶液（０．２５ｍＬ）とＤＩＰＥＡ（６モル当量）を混合して１～２分程静置した溶液を添加し、室温で３時間振盪した。モル当量数は原料として用いたレジンのアミノ酸担持率（ｍｍｏｌ／ｇ）に使用したレジン量（通常は１００ｍｇ）を乗算したものを基準に計算した。溶液をフィルター付き反応容器から排出した後、レジンをＤＭＦ（１反応容器につき０．７ｍＬ）で４回、ＤＣＭ（１反応容器につき０．７ｍＬ）で４回洗浄し、乾燥させＦｍｏｃ－ＭｅＡｌａ－Ｐｒｏ－ＭｅＡｌａ－Ｃｈａ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－ＭｅＰｈｅ（３４－Ｆ２）－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＭｅＰｈｅ（４－Ｆ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物３）を得た。ペプチド伸長完了後、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２％ｖ／ｖ、１反応容器につき０．７ｍＬ）をレジンに添加し、１５分反応させてＦｍｏｃ基の脱保護反応を行った後、溶液をフィルター付き反応容器から排出した。得られたレジンをＤＭＦ（０．７ｍＬ）で４回洗浄後、ＤＣＭ（０．７ｍＬ）で４回洗浄しＨ－ＭｅＡｌａ－Ｐｒｏ－ＭｅＡｌａ－Ｃｈａ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－ＭｅＰｈｅ（３４－Ｆ２）－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＭｅＰｈｅ（４－Ｆ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｙｒｒｏ（化合物４）を得た。
＜伸長したペプチドのレジンからの切り出し工程＞
　上記の方法によって得られたレジン（化合物４）に対し０．７５％（ｖ／ｖ）のＤＩＰＥＡを含む２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）／ＤＣＭ（１／１，ｖ／ｖ，２ｍＬ）を加え、室温で２時間反応させてレジンからのペプチド鎖の切り出し反応を行った。反応後、チューブ内の溶液をフィルター付き反応容器から回収した。残ったレジンに２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）／ＤＣＭ（１／１，ｖ／ｖ，１ｍＬ）を加え、溶液をフィルター付き反応容器から回収する操作を２回行った。得られた全ての切り出し溶液を混合し、ＤＭＦ（４ｍＬ）又は１，２－ジクロロエタン（４ｍＬ）を混合した後、Ｇｅｎｅｖａｃ社製ハイスループット遠心エバポレーター（ＨＴ－１２）により減圧下溶媒留去しＨ－ＭｅＡｌａ－Ｐｒｏ－ＭｅＡｌａ－Ｃｈａ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－ＭｅＰｈｅ（３４－Ｆ２）－Ａｌａ（ｃＰｅｎｔ）－ＭｅＰｈｅ（４－Ｆ）－ＭｅＶａｌ－Ａｓｐ－ｐｙｒｒｏ（化合物５）を得た。
＜切り出したペプチドの環化法＞
　上記の方法により得られた残渣をＤＭＦ（８ｍＬ）及びＤＣＭ（８ｍＬ）の混合液に溶解し、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ－モルホリノ－カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）のＤＭＦ溶液（０．５Ｍ、１．５モル当量）及びＤＩＰＥＡ（１．８モル当量）を加え、室温にて３０分撹拌することで、Ｎ末端のアミノ基とＣ末端のカルボキシル基との縮合環化反応を行った。モル当量数は原料として用いたレジンのアミノ酸担持率（ｍｍｏｌ／ｇ）に使用したレジン量（通常は１００ｍｇ）を乗算したものを基準に計算した。目的の環状ペプチドの生成はＬＣ／ＭＳ測定（Ｗａｔｅｒｓ社製ＳＱ　Ｄｅｔｅｃｔｏｒ２）によって確認した後、反応液をＧｅｎｅｖａｃ社製ハイスループット遠心エバポレーター（ＨＴ－１２）により減圧下溶媒留去した。
＜環状ペプチドの精製方法＞
　上記の方法により得られた残渣（フィルター付き反応容器×４８個）にＤＭＳＯを加え、１つのロットにまとめて逆相中圧カラムクロマトグラフィー（０．１％のギ酸を含むアセトニトリル／水）により精製し、化合物６（（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１８Ｓ，２２Ｓ，２５Ｓ，２８Ｓ，３１Ｓ，３４Ｓ，３７Ｓ）－６－（シクロヘキシルメチル）－３１－（シクロペンチルメチル）－３４－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチル］－２８－［（４－フルオロフェニル）メチル］－３－イソブチル－２５－イソプロピル－９，１０，１８，１９，２６，２９，３５－ヘプタメチル－２２－（ピロリジン－１－カルボニル）－１，４，７，１０，１６，１９，２３，２６，２９，３２，３５－ウンデカザトリシクロ［３５．３．０．０１２，１６］テトラコンタン－２，５，８，１１，１７，２０，２４，２７，３０，３３，３６－ウンデカオン）（２．３ｇ，６８％，純度８４％［ピーク面積百分率］）を得た。なお、純度解析用に用いたＬＣの条件（純度分析条件Ａ）では化合物６の保持時間（１１．１分付近）の前後（保持時間１０．８分付近及び保持時間１１．４分付近）に化合物６の異性体（アイソマー）である異性体１及び異性体２がそれぞれ精密質量解析の結果から確認できた。またＬＣのピーク面積の解析から、保持時間１０．８分付近（相対保持時間：０．９７２）に観測される化合物６の異性体１はピーク面積百分率で２．０％、保持時間１１．４分付近（相対保持時間：１．０３）に観測される化合物６の異性体２はピーク面積百分率で６．８％存在することが確認された。異性体１及び／又は異性体２は合成プロセスや精密質量解析の結果から判断すると化合物６のジアステレオマーであると推定される。なお、相対保持時間とは各ピークの保持時間を目的物（今回の場合は化合物６）の保持時間で割った値のことを言う。
　収量，収率：２．３ｇ，６８％
　純度：８４．０％
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１４２６（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．８５分（分析条件ＳＱＤＡＡ５０）
純度解析用ＨＰＬＣ条件(純度分析条件Ａ)
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　ＣＳＨ　Ｃ１８，２．１ｘ１５０ｍｍ，１．７μｍ
溶媒：Ａ）０．１％ＦＡ　ｉｎ　Ｈ２Ｏ　Ｂ）０．１％ＦＡ　ｉｎ　ＣＨ３ＣＮ
勾配プログラム：５０％→１００％Ｂ（１５分）→１００％Ｂ（２０分）→５０％Ｂ（２０．１分）
カラム温度：５０℃
流速：０．３ｍＬ／分
オートサンプラー温度：２０℃
サンプル濃度：約０．３ｍｇ／ｍＬ　ｉｎ　ＣＨ３ＣＮ
注入量：５μＬ
ＵＶ検出：２２０ｎｍ
システム：Ｎｅｘｅｒａ　Ｘ２（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）
＜１－３．化合物９（Ｓ）-1-（（２Ｓ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ，２０Ｓ，２３Ｓ）－１４,２０－ジベンジル－８－（（Ｓ）－ｓｅｃ－ブチル）－５,１７－ジイソブチル－１１－イソプロピル－２,７,１３,１９－テトラメチル－３,６,９,１２,１５,１８,２１,２５－オクタオキシ－１,４,７,１０,１３,１６,１９,２２－オクタアザシクロペンタコサン－２３－カルボニル）－Ｎ－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－メチル－１－オキソ－１－（ピペリジン－１－イル）ペンタン－２－イル)ピロリジン－２－カルボキサミド）の合成＞
　化合物９は、化合物ａａ０９－ｒｅｓｉｎ（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－ｐｉｐ）を用い、下記式（７）に示した通り、化合物６と同様の方法で合成及び精製を行うことで得た（２４６ｍｇ，４７％，純度９３．０％［ピーク面積百分率］）。
　収量，収率：２４６ｍｇ，４７％
　純度：９３．０％
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１２３７（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．８１分（分析条件ＳＱＤＦＡ５０）
　純度解析用ＨＰＬＣ条件：純度分析条件Ｃ
＜１－４．化合物１１（（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ，２７Ｓ，３０Ｒ，３４Ｓ）－６,２７－ジベンジル－１８－（（Ｒ）－１－ヒロドキシエチル）－３,１２,２１,２４－テトライソブチル－３０－イソプロピル－４,７,１３,１６,２２,２８－ヘキサメチル－３４－（ピペリジン－１－カルボニル）－９－（プロポキシメチル）－１,４,７,１０,１３,１６,１９，２２，２５，２８，３１－ウンデカアザシクロテトラトリアコンタン－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２－ウンデカオン）の合成＞
　化合物１０（（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ，２７Ｓ，３０Ｒ，３４Ｓ）－６,２７－ジベンジル－３,１２,２１,２４－テトライソブチル－３０－イソプロピル－４,７,１３,１６,２２,２８－ヘキサメチル－３４－（ピペリジン－１－カルボニル）－９－（プロポキシメチル）－１８－（（１Ｒ）－１－（（テトラヒドロ－２Ｈ-ピラン－２－イル）オキシ）エチル）－１,４,７,１０,１３,１６,１９，２２，２５，２８，３１－ウンデカアザシクロテトラトリアコンタン－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２－ウンデカオン）は、化合物ａａ０４－ｒｅｓｉｎ（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ｒｅｓｉｎ）－ｐｉｐ）を用い、国際公開第２０２１／０９０８５５号の記載に準じて合成することで得た。
＜環状ペプチドが有する側鎖官能基の保護基の脱保護＞
　側鎖にＴＨＰで保護された水酸基を有するＦｍｏｃ保護アミノ酸、例えばＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（ＴＨＰ）－ＯＨおよびＦｍｏｃ－Ｓｅｒ（ＴＨＰ）－ＯＨを用いて合成した配列においては、上記で得られた残渣に硫酸水素テトラメチルアンモニウム（０．０５Ｍ）の１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロイソプロピルアルコール（ＨＦＩＰ）溶液（２％（ｖ／ｖ）のトリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）、１％（ｖ／ｖ）の１，２－ジクロロエタンを含む）を４ｍＬ加え（反応容器×１４個）、残渣を溶解させた後、室温にて４時間静置することでＴＨＰ基の脱保護を行った。反応完結をＬＣ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ社製ＳＱ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ２）で確認した後、反応液にジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（７０μＬ）を加え（反応容器×１４個）、Ｇｅｎｅｖａｃ社製ハイスループット遠心エバポレーター（ＨＴ－１２）により減圧下溶媒留去し精製操作を行うことで化合物１１（３７２ｍｇ，４４％，純度９２．３％［ピーク面積百分率］）を得た。
　収量，収率：３７２ｍｇ，４４％
　純度：９２．３％
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１３９８（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．８２分（分析条件ＳＱＤＦＡ５０）
　純度解析用ＨＰＬＣ条件：純度分析条件Ｃ
　化合物６の製造法に準じて合成した環状ペプチド化合物に（一化合物につき反応容器×１４個）、硫酸水素テトラメチルアンモニウム（０．０５Ｍ）の１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロイソプロピルアルコール（ＨＦＩＰ）溶液（２％（ｖ／ｖ）のトリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）、１％（ｖ／ｖ）の１，２－ジクロロエタンを含む）を４ｍＬ加え（一化合物につき反応容器×１４個）、残渣を溶解させた後、室温にて４時間静置することでＴＨＰ保護基の脱保護を行った。反応完結をＬＣ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ社製ＳＱ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ２）で確認した後、反応液にジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（７０μＬ）を加え、Ｇｅｎｅｖａｃ社製ハイスループット遠心エバポレーター（ＨＴ－１２）により減圧下溶媒留去した。得られた残渣をそれぞれの化合物毎に１つの容器に合わせて化合物毎に逆相中圧カラムクロマトグラフィー（０．１％のギ酸を含むアセトニトリル／水）により精製し、化合物１２～化合物１５を得た。
＜１－５．化合物１２（（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１６Ｓ，１９Ｓ，２５Ｓ，２８Ｓ，３１Ｓ，３６ａＳ）－２５，２８－ベンジル－１９－（（Ｒ）－１－ヒドリキシエチル）－３,３１－ジイソブチル－９－イソプロピル－２,６,８,１５,１６,２１,２４,２７,３０－ノナメチル－１２－（ピペリジン－１－カルボニル）テトラコサヒドロピロロ［２，１－ｌ］［１，４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５,２８,３１］ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン－１,４,７,１０,１４,１７,２０,２３,２６,２９,３２（１１Ｈ）-ウンデカノン）の合成＞
　収量，収率：２３３ｍｇ，３０％
　純度：８５．７％
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１２９６（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．５４分（分析条件ＳＱＤＦＡ５０）
　純度解析用ＨＰＬＣ条件：純度分析条件Ｃ
＜１－６．化合物１３（（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２７Ｓ，３０Ｓ，３３Ｓ，４１Ｓ）－６,９－ジベンジル－１５－（（Ｓ）－ｓｅｃ－ブチル）－２７－（（Ｒ）－１－ヒドロキシエチル)－１２,１８,２１,３０,３３－ペンタイソブチルブチル－３,７,１３,１９,２２,２５,３１,３８－オクタメチル－４１－（ピペリジン－１－カルボニル）－１,４,７,１０,１３,１６,１９,２２,２５,２８,３１,３４,３８－トリデカアザシクロヘンテトラコンタン－２,５,８,１１,１４,１７,２０,２３,２６,２９,３２,３５,３９－トリデカオン）の合成＞
　収量，収率：３８８ｍｇ，４２％
　純度：９２．３％
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１５５２（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．７４分（分析条件ＳＱＤＦＡ５０）
　純度解析用ＨＰＬＣ条件：純度分析条件Ｃ
＜１－７．化合物１４（（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ，２７Ｓ，３０Ｓ，３３Ｓ，４１Ｓ）－６，２４－ジベンジル－３３－（（Ｓ）－ｓｅｃ－ブチル）－２１－（（Ｒ）－１－ヒドリキシメチル）－３,９,１２,１８,３０－ペン対ソブチル－４,１０,１３,１５,１６,１９,２５,２７,２８,３１,３８－ウンデカメチル－４１－（ピペリジン－１－カルボニル）－１,４,７,１０,１３,１６,１９,２２,２５,２８,３１,３４,３８－トリデカアザシクロヘンテトラコンタン－２,５,８,１１,１４,１７,２０,２３,２６,２９,３２,３５,３９－トリデカオン）の合成＞
　収量，収率：２０３ｍｇ，２１％
　純度：８４．３％
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１５９４（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．８１分（分析条件ＳＱＤＦＡ５０）
　純度解析用ＨＰＬＣ条件：純度分析条件Ｃ
＜１－８．化合物１５（（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ，２７Ｓ，３０Ｓ，３３Ｓ，３６Ｓ，３９Ｒ，４３Ｓ）－２１,３６－ジベンジル－２７－（（Ｓ）－ｓｅｃ－ブチル）－６－（（Ｒ）－１－ヒドロキシエチル）－９－（ヒドロキシメチル）－３,１２,１８,２４,３０－ペンタイソブチル－４,１５,１６,１９,２５,３１,３３,３４,３７,３９,４０－ウンデカメチル－４３－（ピペリジン－１－カルボニル）－１,４,７,１０,１３,１６,１９,２２,２５,２８,３１,３４,３７,４０－テトラデカアザシクロトリテトラコンタン－２,５,８,１１,１４,１７,２０,２３,２６,２９,３２,３５,３８,４１－テトラデカオン）の合成＞
　収量，収率：３８８ｍｇ，４２％
　純度：８９．５％
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１６６７（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．７４分（分析条件ＳＱＤＦＡ５０）
　純度解析用ＨＰＬＣ条件：純度分析条件Ｃ
［参考例２：複合体形成可能金属塩探索］
＜基本操作＞
　化合物６をアセトニトリル－ｄ３（重アセトニトリル，ＣＤ３ＣＮ，ＣＡＳ：２２０６－２６－０）に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩非添加実験）と、下記表６に示す金属塩を、金属塩が環状ペプチドに対して、それぞれ１，３，６モル当量となるように混合して得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩添加実験）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２７８Ｋ若しくは２９８Ｋで測定した。得られた１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを比較した結果を表６にまとめた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
　１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの形状は化合物と金属の相互作用及びそれに伴う配座状態の変化を反映する。金属塩非添加の際に得られた１Ｈ－ＮＭＲスペクトルで観測されるピーク成分と、金属塩を添加した際の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルのピーク成分を比較することで複合体形成したかどうかを判断した。すなわち、金属塩非添加の際に得られたピーク成分を初期ピーク成分として、金属塩添加時の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルで観測されるピーク成分を比較し、初期ピーク成分以外に環状ペプチドに関する新たなピークが生じた場合、又はピーク強度比の変化が起こった場合、又は初期のピーク成分と比較して金属塩添加時のピーク成分が先鋭化、及び／又は広幅化が見られた場合に、複合体が形成したと判断した（図２～７）。なお、本明細書において使用された金属塩の正式名称及びＣＡＳ番号を表７に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
［参考例３：複合体形成可能溶媒確認］
＜基本操作＞
　化合物６を下記表８に示す各種重溶媒に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩非添加実験）と、過塩素酸マグネシウムを環状ペプチドに対して約１モル当量を添加し表８に示す各種重溶媒に溶解させて得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩非添加実験）との１Ｈ－ＮＭＲを２９８Ｋでそれぞれ測定し、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを得た。
　表８には、過塩素酸マグネシウム非添加での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルと、過塩素酸マグネシウムを化合物６に対して約１モル当量添加した際の化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを比較し、過塩素酸マグネシウム非添加の際の環状ペプチドに関するピーク成分が消失し環状ペプチドに関する新たなピーク成分が生じた場合若しくはピーク強度比の変化が起こった場合、又は過塩素酸マグネシウム非添加のピーク成分と比較して過塩素酸マグネシウム添加時のピーク成分に先鋭化、広幅化等が見られた場合等、溶液中で複合体形成が示唆されたものには「形成」と記載した。特に、２，２，２－トリフルオロエタノール－ｄ３、アセトニトリル－ｄ３、及びアセトン－ｄ６は、顕著にピーク成分の変化が見られた。過塩素酸マグネシウム非添加での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルと、過塩素酸マグネシウムを化合物６に対して約１モル当量添加した際の化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを比較し、過塩素酸マグネシウム非添加の際のピーク成分以外に環状ペプチドに関するピーク成分が全く生じなかった場合若しくはピーク強度比の変化が起こらなかった場合、又は過塩素酸マグネシウム非添加のピーク成分と比較して過塩素酸マグネシウム添加時のピーク成分の先鋭化及び広幅化が見られなかった場合等、複合体形成が示唆されなかったものには「形成されず」と記載した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
表８のＲｕｎ２，６，８～１３
　化合物６（３０．２４ｍｇ）のアセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ，ＣＡＳ：７５－０５－８，１０ｍＬ）溶液のうち０．３３３ｍＬ（化合物６，１．０１ｍｇ，０．７０５μｍｏｌ）を容器に分注し濃縮乾固させた後、過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，４．５２ｍｇ，８３ｗ％）のアセトニトリル（２．０ｍＬ）溶液０．１００ｍＬ（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，０．１８８ｍｇ，０．８４０μｍｏｌ）をそれぞれの容器に加え濃縮乾固させた。表８に示す重溶媒（トルエン－ｄ８，エタノール－ｄ６，テトラヒドロフラン－ｄ８，アセトン－ｄ６，ジクロロメタン－ｄ２，Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド－ｄ４，ジメチルスルホキシド－ｄ６，１，４－ジオキサン－ｄ８）０．５ｍＬに溶解し、１Ｈ－ＮＭＲを２９８Ｋで測定した。
表８のＲｕｎ１
　化合物６（２．７８ｍｇ）のメタノール－ｄ４（０．０７７９ｍＬ）溶液のうち０．０２８ｍＬ（化合物６，０．９９９ｍｇ，０．７００μｍｏｌ）と、過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，２．３１ｍｇ，８３ｗ％）のメタノール－ｄ４（０．２ｍＬ）溶液のうち０．０１３５ｍＬ（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，０．１２９ｍｇ，０．５８０μｍｏｌ）を混合させた後、メタノール－ｄ４（０．４５８５ｍＬ）を加え、１Ｈ－ＮＭＲを２９８Ｋで測定した。
表８のＲｕｎ３～５
　化合物６（６．６９ｍｇ）のアセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ，０．０６６９ｍＬ）溶液のうち０．０１０ｍＬ（化合物６，１．００ｍｇ，０．７００μｍｏｌ）と、過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，１０．９ｍｇ，８３ｗ％）のＣＨ３ＣＮ（２．０ｍＬ）溶液のうち０．０３５５ｍＬ（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，０．１６０ｍｇ，０．７１７μｍｏｌ）をそれぞれの容器に加え濃縮乾固させた。表８に示す重溶媒（２－プロパノール－ｄ８，ｔｅｒｔ－ブタノール－ｄ１０，２，２，２－トリフルオロエタノール－ｄ３）０．５ｍＬに溶解し、１Ｈ－ＮＭＲを２９８Ｋで測定した。
表８のＲｕｎ７
　化合物６（１３．０４ｍｇ）のアセトニトリル－ｄ３（０．３６５ｍＬ）溶液０．０２８ｍＬ（化合物６，１．００ｍｇ，０．７００μｍｏｌ）と、過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，９．２５ｍｇ，８３ｗ％）のアセトニトリル－ｄ３（１．５ｍＬ）溶液のうち０．０２５３ｍＬ（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，０．１２９ｍｇ，０．５８０μｍｏｌ）、アセトニトリル－ｄ３を０．４４６７ｍＬ混合させ、１Ｈ－ＮＭＲを２９８Ｋで測定した。
［実施例１：溶媒範囲確認］
［実施例１―１：複合体形成に使用可能な溶媒範囲確認］
＜基本操作＞
　化合物６（約１０ｍｇ）に約１モル当量の過塩素酸マグネシウムを混合し、下記表９に示す各種溶媒に溶解させた。溶液に直接ヘキサンを加える、あるいは溶媒を減圧または凍結乾燥にて留去し、ジクロロメタンとヘキサンを加え、室温で以下に従って撹拌した。生じた固体と上清を遠心分離し、溶媒を減圧または窒素吹き付けによって留去し、真空乾燥した上清、及び固体をそれぞれアセトニトリルに再溶解させ、それぞれのＨＰＬＣを測定した。化合物６のピーク面積百分率、ピーク面積の値を基に算出した純度、回収率、化合物６に対する異性体１及び異性体２の比率、並びに精製効率を表９に示した。
　実施例１―１のＨＰＬＣ測定用のサンプルは、初期濃度を基に約０．３ｍｇ／ｍＬになるように調製した。実施例１―１においては、参考例１－２の化合物６の純度確認条件と同じ条件(純度分析条件Ａ）で調製したサンプルのＨＰＬＣを測定した。特に言及がない場合には、正確に調製した約０．３ｍｇ／ｍＬの標品を上記条件にてＨＰＬＣ測定を行い、ピーク面積百分率及びピーク面積（２２０ｎｍで測定）を基準に純度及び回収率を計算した。また、化合物６に対する異性体１及び異性体２の比率と精製効率を算出した。原料として使用した化合物６は、参考例１－２で合成したロットであり、上記純度解析で使用したＨＰＬＣの条件でのピーク面積百分率からその純度は８４％であったことから、本操作後の化合物６の純度が８４％より向上した場合に、精製効果があると判断した。また、本操作後の化合物６の純度が８４％から向上していない場合においても、化合物６の異性体の精製効率が正の値であるものは精製効果があると判断した。
回収率の計算法１
　例えば、約ａ　ｍｇの原料を用いて実験したとすると、固体と溶液を遠心分離し、溶媒を減圧または窒素吹き付けによって留去し、真空乾燥した上清、固体にｂ　ｍＬのアセトニトリルを加えて得られた溶液のうち（１５０ｂ／ａ）μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。調製したサンプルと正確に調製した０．３０ｍｇ／ｍＬの標品のＨＰＬＣをそれぞれ測定し目的物のピーク面積（２２０ｎｍ）がそれぞれとｃとｄだとすると、回収率は下記の式で表される。なお、実際の秤量値(e　ｍｇ)が想定の重さであるａ　ｍｇと一致しないケースを考慮し、秤量値による補正を行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000021
　精製効率の計算法
また、化合物６と異性体１又は異性体２の比率、化合物６に対する化合物６と異性体１及び異性体２がどれだけ分離されたかを確認するための精製効率は以下の式で算出した。
・化合物６に対する異性体１の比率×１００：
（異性体１のピーク面積）÷（化合物６のピーク面積）×１００
・化合物６に対する異性体２の比率×１００：
（異性体２のピーク面積）÷（化合物６のピーク面積）×１００
・異性体１の精製効率（％）：
｛１－（化合物６と異性体１の比率）÷（標品の化合物６と異性体１の比率）｝×１００
・異性体２の精製効率（％）：
｛１－（化合物６と異性体２の比率）÷（標品の化合物６と異性体２の比率）｝×１００
　なお、実施例１－１ではＨＰＬＣの解析ソフトとして島津社製のＬａｂｓｏｌｕｔｉｏｎを用いて、回収率を上記記載の回収率の計算法１によって算出した(ａ＝１０)。異性体の精製効率は、上記記載の精製効率の計算法によって算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
表９のＲｕｎ１：ジメチルホルムアミド
　化合物６（１０．１ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（６．５ｍｇ）のジメチルホルムアミド溶液（０．３２５ｍL）を希釈して調製した３５ｍＭジメチルホルムアミド溶液（０．２００ｍL）を加えて凍結乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え３日間撹拌した。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えてさらに２日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（３．０ｍＬ）のうち、４５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体は純度９４％、回収率７５％であり、上清は純度７２％、回収率３２％であることが分かった。これらの操作により、沈殿した固体が精製されていることを確認した。上清において化合物６に対する異性体１、２の精製効率がそれぞれ－１２４％、－１２３％、固体においてはそれぞれ７２％、６４％であったことから、化合物６は金属添加条件において異性体１，２より優先して沈殿したために、固体に良好な精製効果が表れたと考えられる。
Ｒｕｎ１の回収率の計算
　標品０．３０ｍｇ／ｍＬの溶液のＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積（２９５０５１１，２２０ｎｍ）を測った。調製した５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液のＨＰＬＣを測定し、目的物のピーク面積（上清：９６２７５１、固体：２２４０３７１）を測り、下記の方法に従い計算し回収率を求めた。
上清：（９６２７５１×１０）÷（２９５０５１１×１０．１）×１００≒３２％
固体：（２２４０３７１×１０）÷（２９５０５１１×１０．１）×１００≒７５％
Ｒｕｎ１の精製効率の計算
　標品０．３０ｍｇ／ｍＬの溶液のＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積（２９５０５１１，２２０ｎｍ）を測った。同様に異性体のピーク面積（異性体１：７７１２５、異性体２：２２５７３２）を測った。調製した５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液のＨＰＬＣを測定し、目的物のピーク面積（上清：９６２７５１、固体：２２４０３７１）、異性体１のピーク面積（上清：５６４０２、固体：１６３５５）、異性体２のピーク面積（上清：１６４２５６、固体：６１３８３）を測り、下記の方法に従い計算し精製効率を求めた。
上清での異性体比１の比率：５６４０２÷９６２７５１×１００≒５．９％
上清での異性体比２の比率：１６４２５６÷９６２７５１×１００≒１７．１％
固体での異性体比１の比率：１６３５５÷２２４０３７１×１００≒０．７％
固体での異性体比２の比率：６１３８３÷２２４０３７１×１００≒２．７％
上清での異性体比１の精製効率：
｛１－（５６４０２÷９６２７５１）÷（７７１２５÷２９５０５１１）｝×１００≒―１２４％
上清での異性体比２の精製効率：
｛１－（１６４２５６÷９６２７５１）÷（２２５７３２÷２９５０５１１）｝×１００≒―１２３％
固体での異性体比１の精製効率：
｛１－（１６３５５÷２２４０３７１）÷（７７１２５÷２９５０５１１）｝×１００≒７２％
固体での異性体比２の精製効率：
｛１－（６１３８３÷２２４０３７１）÷（２２５７３２÷２９５０５１１）｝×１００≒６４％
表９のＲｕｎ２：ジメチルアセトアミド
　化合物６（１０．０ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（５．３ｍｇ）のジメチルアセトアミド溶液（０．２６５ｍＬ）を希釈して調製した３５ｍＭジメチルアセトアミド溶液（０．２００ｍＬ）を加えて凍結乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え３日間撹拌した。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えてさらに２日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（３．０ｍＬ）のうち、４５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表９のＲｕｎ３：ジメチルスルホキシド
　化合物６（１０．０ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（５．２ｍｇ）のジメチルスルホキシド溶液（０．２６０ｍＬ）を希釈して調製した３５ｍＭジメチルスルホキシド溶液（０．２００ｍＬ）を加えて凍結乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）、ヘキサン（０．３３ｍＬ）を順に加えて４日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（３．０ｍＬ）のうち、４５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表９のＲｕｎ４：メタノール
　化合物６（１０．０ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（６．１ｍｇ）のメタノール溶液（０．３０５ｍL）を希釈して調製した３５ｍＭメタノール溶液（０．２００ｍL）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え３日間撹拌した。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えてさらに２日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表９のＲｕｎ５：エタノール
　化合物６（９．９ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（８．２ｍｇ）のエタノール溶液（０．４１０ｍＬ）を希釈して調製した３５ｍＭエタノール溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え３日間撹拌した。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えてさらに２日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、上清が精製されていることを確認した。
表９のＲｕｎ６：ジクロロメタン
　化合物６（１０．１ｍｇ）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（２．１４ｍｇ，８３ｗ％）の混合物にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え３日間撹拌した。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えてさらに２日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
　以上の結果より、過塩素酸マグネシウムと環状ペプチドとの複合体形成において、参考例３で複合体形成が見られた溶媒に加え、複合体形成が見られなかった溶媒を用いた場合についても、環状ペプチドの精製法に用いることが可能であるとわかった。
［実施例１－２：精製可能な溶媒範囲確認］
　＜基本操作＞
　化合物６（約１５ｍｇ又は約１０ｍｇ）に約１モル当量の過塩素酸マグネシウムを混合しアセトニトリルに溶解させた。溶媒を減圧留去し、下記表１０に示した各種溶媒を加えて室温で以下に従って撹拌した。上清と生じた固体を遠心分離し、上清及び真空乾燥した固体のそれぞれのＨＰＬＣを測定した。化合物６のピーク面積百分率及びピーク面積の値を基に純度及び回収率を求め表１０に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
　実施例１－２及び２－１のＨＰＬＣ測定用のサンプルは、初期濃度を基に約０．３ｍｇ／ｍＬになるように調製した。実施例１－２及び２－１においては、参考例１－２の化合物６の純度確認条件と同じ条件(純度分析条件Ａ)で調製したサンプルのＨＰＬＣを測定した。特に言及がない場合には、正確に調製した約０．３ｍｇ／ｍＬの標品を上記条件にてＨＰＬＣ測定を行い、ピーク面積（２２０ｎｍで測定）を基準に、補正をかけて回収率を計算した。原料として使用した化合物６は、参考例１－２で合成したロットであり、上記純度解析で使用したＨＰＬＣの条件でのピーク面積百分率からその純度は８４％であったことから、純度８４％より向上した場合に、精製効果ありとした。
　Ｒｕｎ７～１８については、純度分析条件ＡによりＨＰＬＣを測定した。正確に調製した約０．３ｍｇ／ｍＬの標品を純度分析条件ＡによりＨＰＬＣ測定を行い、ピーク面積百分率及びピーク面積（２２０ｎｍで測定）を基準に、純度及び回収率を計算した。また、化合物６に対する異性体１及び異性体２の比率と精製効率を算出した。Ｒｕｎ７～１８については、本操作後の化合物６の純度が８４％から向上していない場合においても、化合物６の異性体の精製効率が正の値であるものは精製効果があると判断した。
回収率の計算法２
　例えば、ａ　ｍｇの原料を用いて実験したとし、使用した溶液量がｂ　ｍＬだとすると、上清のＨＰＬＣを測定する際には、まず、上清（ｂ／１００）ｍＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬになるようにアセトニトリルを加えてサンプルを調製した。一方、原料をｄ　ｍｇ秤量して１０ｍＬメスフラスコで標品を調製した。調製したサンプルと標品のＨＰＬＣをそれぞれ測定し目的物のピーク面積（２２０ｎｍ）がそれぞれｃとｅだとすると、回収率は下記の式で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000024
回収率の計算法３
　また、ａ　ｍｇの原料を用いて実験したとすると、上清と固体を遠心分離した後、上清または固体に含まれる溶媒を減圧留去し乾燥させたのちに０．５ｍＬ（又は１．０ｍＬ）のアセトニトリルを加えて得られた溶液のうち５μＬ（又は１０μＬ）を４９５μＬ（又は４９０μＬ）のアセトニトリルと混合しサンプルを調製した。一方、原料をｄ　ｍｇ秤量して１０ｍＬメスフラスコで標品を調製した。調製したサンプルと標品のＨＰＬＣをそれぞれ測定し目的物のピーク面積（２２０ｎｍ）がそれぞれｆとｅだとすると、回収率は下記の式で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000025
　Ｒｕｎ２～６ではＨＰＬＣの解析ソフトとしてＡｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社製のＡＣＤ／Ｓｐｅｃｔｒｕｓを用いて回収率を上記記載の回収率の計算法３によって算出した。Ｒｕｎ７～１８ではＨＰＬＣの解析ソフトとして島津社製のＬａｂｓｏｌｕｔｉｏｎを用いて上記記載の回収率の計算法１によって算出した(ａ＝１０)。異性体の精製効率は、上記記載の精製効率の計算法によって算出した。
表１０のＲｕｎ１：ジクロロメタン/ヘキサン
　化合物６（１５．００ｍｇ）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（３．０３ｍｇ，８３ｗ％）のＣＨ３ＣＮ溶液（１．０ｍＬ）を濃縮した後に得られる固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（０．５ｍＬ）を加え終夜撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離し、溶液は濃縮後６時間乾燥しアセトニトリル（０．５ｍＬ）を加えＨＰＬＣにて純度及び回収率の確認を行った。その結果、ピーク面積百分率から純度６８％、回収率１４％であることが分かった。得られた固体はジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（０．５ｍＬ）の混合溶液で洗浄後、遠心分離し得られた固体を終夜真空乾燥した結果、１３．６４ｍｇの化合物６－Ｍｇ（ＣｌＯ４）２複合体が固体として得られた。得られた複合体の純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、純度９０％、回収率８２％であることが分かった。これらの操作により、沈殿した固体が精製されていることを確認した。
ジクロロメタン/ヘキサン系の固体の回収率の計算
　標品０．２９７ｍｇ／ｍＬの溶液のＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積（５１５５５，２２０ｎｍ）を測った。
得られた固体１３．６４ｍｇのうち３．００ｍｇを１０ｍＬのアセトニトリルに溶かした後、ＨＰＬＣを測定し、目的物のピーク面積（４６８１８）を測り、下記の方法に従い計算し回収率を求めた。
（１３．６４／０．３００）×４６８１８÷｛（１５／０．２９７）×５１５５５｝×１００≒８２％
表１０のＲｕｎ２：アセトン/ヘキサン
　化合物６（１５．００ｍｇ）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（３．０１ｍｇ，８３ｗ％）のＣＨ３ＣＮ溶液（１．０ｍＬ）を濃縮した後に得られる固体にアセトン（１ｍＬ）とヘキサン（１ｍＬ）を加え終夜撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離し、溶液は濃縮後６時間乾燥しアセトニトリル（０．５ｍＬ）を加えＨＰＬＣにて純度及び回収率の確認を行った。その結果、ピーク面積百分率から純度６９％、回収率２２％であることが分かった。得られた固体は６時間乾燥後アセトニトリル（０．５ｍＬ）に溶かし、純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、純度９２％、回収率６８％であることが分かった。これらの操作により、沈殿した固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ３：１，４－ジオキサン
　化合物６（１４．９８ｍｇ）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（２．９６ｍｇ，８３ｗ％）のＣＨ３ＣＮ溶液（１．０ｍＬ）を濃縮した後に得られる固体に１，４－ジオキサン（１ｍＬ）を加え終夜撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離し、溶液は濃縮後６時間乾燥しアセトニトリル（０．５ｍＬ）を加えＨＰＬＣにて純度及び回収率の確認を行った。その結果、ピーク面積百分率から純度７２％、回収率１５％であることが分かった。得られた固体は６時間乾燥後アセトニトリル（０．５ｍＬ）に溶かし、純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、純度９０％、回収率７６％であることが分かった。これらの操作により、沈殿した固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ４，５，６
　化合物６（７５．１２ｍｇ）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（１４．６８ｍｇ，８３ｗ％）のＣＨ３ＣＮ溶液（５．０ｍＬ）を１ｍＬずつ分注し、それぞれを濃縮し得られた固体に下記のＲｕｎ４～６に示す溶媒を加え、週末撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離し、溶液は濃縮後真空乾燥しアセトニトリル（０．５ｍＬ）を加えＨＰＬＣにて純度及び回収率の確認を行った。
　得られた固体は真空乾燥後アセトニトリル（０．５ｍＬ）に溶かし、純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した。なお、純度及び回収率測定用のサンプルは、溶液及び固体を濃縮真空乾燥後に調製したそれぞれのアセトニトリル溶液１０μＬを９９０μＬのアセトニトリルで希釈して調製した。その結果いずれも固相が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ７：酢酸エチル
　化合物６（９．９ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（２０．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４１４ｍＬ）を希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体に酢酸エチル（０．６６ｍＬ）を加えて３日間撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
Ｒｕｎ７の回収率の計算
　標品０．３０ｍｇ／ｍＬの溶液のＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積（２９５０５１１，２２０ｎｍ）を測った。調製した５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液のＨＰＬＣを測定し、目的物のピーク面積（上清：２５５０８４、固体：２３６９８９７）を測り、下記の方法に従い計算し回収率を求めた。
上清：（２５５０８４×１０）÷（２９５０５１１×９．９）×１００≒９％
固体：（２３６９８９７×１０）÷（２９５０５１１×９．９）×１００≒８１％
表１０のＲｕｎ８：エタノール/へプタン
　化合物６（１０．０ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（２０．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４１４ｍＬ）を希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にエタノール（０．６６ｍＬ）を加えて３日間撹拌した。へプタン（１．０ｍＬ）を加えて終夜撹拌した後、さらにへプタン（１．０ｍＬ）を加えて２日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ９：ブタノール/へプタン
　化合物６（９２．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９２５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬ、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２（２５．０ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５００ｍＬ）のうち０．０３８ｍＬを分注、希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体にブタノール（０．５ｍＬ）、へプタン（０．５ｍＬ）を加え、２日間撹拌した。さらにへプタン（０．２５ｍＬ）を加えて６時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ１０，１２
　化合物６（９２．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９２５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬずつ、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２（２５．０ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５００ｍＬ）のうち０．０３８ｍＬずつを分注、希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（各０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体に表１０のＲｕｎ１０、１２に示す溶媒を加え、３日間撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ１１：アセトニトリル/ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル
　化合物６（９２．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９２５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬ、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２（２５．０ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５００ｍＬ）のうち０．０３８ｍＬを分注、希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体にアセトニトリル（０．１３ｍＬ）、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（０．８７ｍＬ）を加え、２日間撹拌した。さらにアセトニトリル（０．１３ｍＬ）を加えて６時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ１３：酢酸イソプロピル/へプタン
　化合物６（９２．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９２５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬ、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２（２５．０ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５００ｍＬ）のうち０．０３８ｍＬを分注、希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体に酢酸イソプロピル（０．６６ｍＬ）、へプタン（０．３３ｍＬ）を加え、２日間撹拌した。さらに酢酸イソプロピル（０．６６ｍＬ）を加えて６時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ１４：メチルエチルケトン/へプタン
　化合物６（９２．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９２５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬ、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２（２５．０ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５００ｍＬ）のうち０．０３８ｍＬを分注、希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体にメチルエチルケトン（０．６６ｍＬ）、へプタン（０．６６ｍＬ）を加え、２日間撹拌した。さらにメチルエチルケトン（０．３３ｍＬ）を加えて６時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ１５：メタノール/トルエン
　化合物６（９２．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９２５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬ、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２（２５．０ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５００ｍＬ）のうち０．０３８ｍＬを分注、希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体にメタノール（３３．３μＬ）、トルエン（９６６．７μＬ）を加えて３日間撹拌した後、生じたオイル状沈殿と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、沈殿をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、沈殿のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、上清が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ１６：ジメチルスルホキシド/ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル
　化合物６（４８．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４８５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬ、Ｍｇ（ＣｌＯ４）２（５．３ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．２６５ｍＬ）のうち０．０９４ｍＬを分注、希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジメチルスルホキシド（９０μＬ）、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（９１０μＬ）を加えて３日間撹拌した後、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（３．０ｍＬ）のうち、４５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
表１０のＲｕｎ１７：ジメチルホルムアミド/ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル
　化合物６（１０．１ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（９．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４７５ｍＬ）を希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジメチルホルムアミド（０．１ｍＬ）、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（０．４ｍＬ）を加えて３日間撹拌した後、さらにｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（０．４ｍＬ）を加えて終夜撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（３．０ｍＬ）のうち、４５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、純度に顕著な向上は見られなかったが、固体において化合物６に対する異性体１の精製効率が４０％、異性体２の精製効率が１３％であることが示されたことから、固体が精製されていると判断した。
表１０のＲｕｎ１８：ベンジルアルコール/ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル
　化合物６（１０．１ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（９．５ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４７５ｍＬ）を希釈して調製した３５ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にベンジルアルコール（０．３ｍＬ）、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（０．７ｍＬ）を加えて４日間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（３．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（３．０ｍＬ）のうち、４５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、固体が精製されていることを確認した。
　以上の結果より、過塩素酸マグネシウムと環状ペプチドとの複合体形成において、参考例３で複合体形成が見られた溶媒に加え、複合体形成が見られなかった溶媒を用いた場合においても、環状ペプチドの精製が可能であることを確認した。
［実施例２－１：複合体調製・精製効果確認］
＜基本操作＞
　化合物６（約１５ｍｇまたは約１０ｍｇ）に下記の表１１に示した各種金属塩約１モル当量を混合しアセトニトリル、エタノール、又はエタノール水溶液に溶解させた後、溶媒を減圧留去し、下記の表１１に示した各種溶媒を加え室温で以下に従って撹拌後、上清と生じた固体を遠心分離し、上清及び真空乾燥した固体それぞれのＨＰＬＣを純度分析条件Ａにより測定し、化合物６のピーク面積百分率及びピーク面積の値を基に純度及び回収率を求め表１２に記載した。ＨＰＬＣの解析はＡｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社製のＡＣＤ／Ｓｐｅｃｔｒｕｓ（Ｒｕｎ１～２６）または島津社製のＬａｂｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｒｕｎ２７～３１）を用いて行った。回収率の計算は、実施例１の回収率算出法１、２、又は３によって算出した。原料として使用した化合物６は、参考例１－２で合成したロットであり、上記純度解析で使用したＨＰＬＣの条件（純度分析条件Ａ）でのピーク面積百分率からその純度は８４％であったことから、同一条件にて測定したＨＰＬＣの解析をもとに純度８４％より向上した場合に、精製効果ありとした。また、本操作後の化合物６の純度が８４％から向上していない場合においても、化合物６の異性体の精製効率が正の値であるものは精製効果があると判断した。実際に使用した金属塩の質量、モル当量及び化合物６の質量は表１３に記載した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
　なお、Ｒｕｎ２７～３１の無機塩の質量に関しては、各無機塩のアセトニトリル溶液を調整後、それらを分注し化合物６と混合させた溶液の体積から計算して求めた。
　表１１のＲｕｎ１０に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（１５．００ｍｇ）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（３．０３ｍｇ，８３ｗ％）のＣＨ３ＣＮ溶液（１．０ｍＬ）を濃縮した後に得られる固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（０．５ｍＬ）を加え終夜撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離し、溶液は濃縮後６時間乾燥しアセトニトリル（０．５ｍＬ）を加えＨＰＬＣにて純度及び回収率の確認を行った。その結果、ピーク面積百分率から純度６８％、回収率１４％であることが分かった。得られた固体はジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（０．５ｍＬ）の混合溶液で洗浄後、遠心分離し得られた固体を終夜真空乾燥した結果、１３．６４ｍｇの化合物６－Ｍｇ（ＣｌＯ４）２複合体が固体として得られた。得られた複合体の純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、純度９０％、回収率８２％であることが分かった。これらの操作により、沈殿した固体が精製されていることを確認した。
回収率の計算
　標品０．２９７ｍｇ／ｍＬの溶液のＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積（５１５５５，２２０ｎｍ）を測った。
得られた固体１３．６４ｍｇのうち３．００ｍｇを１０ｍＬのアセトニトリルに溶かした後、ＨＰＬＣを測定し、目的物のピーク面積（４６８１８）を測り、下記の方法に従い計算し回収率を求めた。
（１３．６４／０．３００）×４６８１８÷｛（１５／０．２９７）×５１５５５｝×１００≒８２％
　表１１のＲｕｎ２６に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（１５．０ｍｇ）とＡｇＯＴｆ（２．６５ｍｇ、０．９８モル当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．５ｍＬ）を真空乾燥して得られた固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（０．６ｍＬ，０．１ｍＬずつを２～５時間毎に合計６回に分けて）を加えた。沈殿が生じなかったため、溶液（上清）の純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した（計算法２）。
回収率の計算
　上記の実験の際にヘキサンを加える前後でＨＰＬＣを測定し、目的物のピーク面積（ヘキサンを加える前：５５１７６、ヘキサンを加えた後：４９１５０）を測り、下記の方法に従い計算し回収率を求めた。
（４９１５０÷５５１７６）×１００≒８９％
　表１１のＲｕｎ１１，１２，１３，１８，１９，２３に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（約１５ｍｇ）と各種金属塩（約１モル当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．２ｍＬ）又は懸濁液（０．２ｍＬ）を濃縮した後に得られる固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（１ｍＬ）を加え４．５時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。上清をデカンテーションした後、得られた固体は真空乾燥後０．５ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解しＨＰＬＣにて純度及び回収率を確認した（計算法３）。
　表１１のＲｕｎ９，１４，１５，１６に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（約１５ｍｇ）と各種金属塩（約１モル当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．４ｍＬ）又は懸濁液（０．４ｍＬ）を一晩開封状態にした後真空乾燥して得られた固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（１ｍＬ）を加え５時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。上清をデカンテーションした後、得られた固体は真空乾燥後に１．０ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解しＨＰＬＣにて純度及び回収率を確認した。
　表１１のＲｕｎ２，３，７，８，１７に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（約１５ｍｇ）と各種金属塩（約１モル当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．４ｍＬ）を一晩開封状態にした後真空乾燥して得られた固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（１ｍＬ）を加え５時間撹拌した後、さらにヘキサン（１ｍＬ）を加え１９時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。上清をデカンテーションした後、得られた固体は真空乾燥後１．０ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解しＨＰＬＣにて純度及び回収率を確認した（計算法３）。
　表１１のＲｕｎ２１，２４，２５に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（約１５ｍｇ）と各種金属塩（約１モル当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．２ｍＬ）を真空乾燥して得られた固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（１ｍＬ）を加え終夜撹拌した後、さらにヘキサン（１ｍＬ）を加え５時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。上清をデカンテーションした後、得られた固体は真空乾燥後１．０ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解しＨＰＬＣにて純度及び回収率を確認した（計算法３）。
　表１１のＲｕｎ５，６，２０，２２に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（約１５ｍｇ）と各種金属塩（約１モル当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．１ｍＬ）を真空乾燥して得られた固体にジクロロメタン（１ｍＬ）とヘキサン（１ｍＬ）を加え１７時間撹拌した後、さらにヘキサン（１ｍＬ）を加え６時間撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。上清をデカンテーションした後、得られた固体は真空乾燥後１．０ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解しＨＰＬＣにて純度及び回収率を確認した（計算法３）。
　表１１のＲｕｎ４に示す金属塩については下記の実験を行った。
　化合物６（１５．０２ｍｇ）とＫＩ（１．８２ｍｇ、１．０４モル当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．２ｍＬ）を超音波で撹拌し、生じた固体と溶液を遠心分離した。上清をデカンテーションした後、得られた固体は真空乾燥後１．０ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解しＨＰＬＣにて純度及び回収率を確認した。上清に関しては溶媒を減圧留去した後、真空乾燥し１．０ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解しＨＰＬＣにて純度及び回収率を確認した（計算法３）。
　表１１のＲｕｎ２７に示す金属塩については下記の実験を行った。化合物６（１０．０ｍｇ）に、ＭｇＳＯ４－７Ｈ２Ｏ（８．９ｍｇ）の６０％エタノール（０．４４５ｍL）溶液のうち０．０８７ｍＬを分注した後、０．１１３ｍＬの６０％エタノールで希釈して調製した溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にテトラヒドロフラン（０．２ｍＬ）とへプタン（０．８ｍＬ）を加え３日間撹拌した後、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体を６０％エタノール水（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体の６０％エタノール水溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリングして溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した。
　表１１のＲｕｎ２８に示す金属塩については下記の実験を行った。化合物６（４８．５ｍｇ）のエタノール溶液（０．４８５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬとＭｇ（ＯＡｃ）２－４Ｈ２Ｏ（１０．３ｍｇ）のエタノール溶液（０．５１５ｍＬ）のうち０．０７５ｍＬを分注した後、０．０２５ｍLのエタノールで希釈して調製した溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体にテトラヒドロフラン（０．２ｍＬ）とへプタン（０．８ｍＬ）を加え３日間撹拌した後、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をエタノール（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のエタノール溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリングして溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した。
　表１１のＲｕｎ２９に示す金属塩については下記の実験を行った。化合物６（４８．５ｍｇ）のエタノール溶液（０．４８５ｍＬ）のうち０．１００ｍＬ、ＭｇＣｌ２－６Ｈ２Ｏ（６．６ｍｇ）のエタノール溶液（０．３３０ｍＬ）のうち０．０７１ｍＬを分注して、０．０２９ｍLのエタノールで希釈して調製した溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥した。得られた固体にテトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）とへプタン（０．４ｍＬ）を加え３日間撹拌した後、生じた固体と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をエタノール（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のエタノール溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリングして溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した。
　表１１のＲｕｎ３０に示す金属塩については下記の実験を行った。化合物６（１０．０ｍｇ）にＭｇ（ＯＡｃ）２－４Ｈ２Ｏ（１３．５ｍｇ）のエタノール水溶液（０．４５０ｍL）のうち０．０５０ｍＬを分注したのちエタノール０．１５０ｍＬで希釈して調製した溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にアセトニトリル（０．３ｍＬ）と水（０．６ｍＬ）を加え４日間撹拌した後、生じたオイル状沈殿と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、沈殿をエタノール（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、沈殿のエタノール溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリングして溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した。
　表１１のＲｕｎ３１に示す金属塩については下記の実験を行った。化合物６（９．９ｍｇ）にＭｇＣｌ２－６Ｈ２Ｏ（９．５ｍｇ）のエタノール水溶液（０．４７５ｍL）を希釈して調製した３５ｍＭエタノール水溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にアセトニトリル（０．３ｍＬ）と水（０．６ｍＬ）を加え４日間撹拌した後、生じたオイル状沈殿と溶液を遠心分離した。溶媒を留去後、真空乾燥した上清、沈殿をエタノール（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、沈殿のエタノール溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリングして溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した。
　表１１には上清及び固体の純度、回収率、下記の式で与える化合物６と異性体１又は異性体２の比率、化合物６に対する化合物６と異性体１及び異性体２がどれだけ分離されたかを確認するための精製効率を計算し載せた。
・化合物６に対する異性体１の比率×１００：
（異性体１のピーク面積）÷（化合物６のピーク面積）×１００
・化合物６に対する異性体２の比率×１００：
（異性体２のピーク面積）÷（化合物６のピーク面積）×１００
・異性体１の精製効率（％）：
｛１－（化合物６に対する異性体１の比率）÷（標品中の化合物６に対する異性体１の比率）｝×１００
・異性体２の精製効率（％）：
｛１－（化合物６に対する異性体２の比率）÷（標品中の化合物６に対する異性体２の比率）｝×１００
　Ｒｕｎ２９については個別の不純物について、その比率と精製効率を算出した。化合物６と不純物（相対保持時間０．７１、分子量１７９７．０６、ＬＣ―ＭＳ／ＭＳから直鎖体類縁副生成物ペプチドと推定）の比率、化合物６に対する化合物６と不純物がどれだけ分離されたかを確認するための精製効率は以下の式で算出した。
・化合物６に対する不純物の比率×１００：
（不純物のピーク面積）÷（化合物６のピーク面積）×１００
・不純物の精製効率（％）：
｛１－（化合物６と不純物の比率）÷（基準の化合物６と不純物１の比率）｝×１００
　ヨウ化リチウム（ＬｉＩ，Ｒｕｎ２，上清の純度８８％，回収率７８％），過塩素酸リチウム（ＬｉＣｌＯ４，Ｒｕｎ３，上清の純度９１％，回収率６０％），又はトリフルオロメタンスルホン酸イッテリビウム（ＩＩＩ）（Ｙｂ（ＯＴｆ）３，Ｒｕｎ２１，上清の純度８７％，回収率３２％）を用いた場合には、上清の純度が標品の純度８４％と比べ３％以上高くなることが分かった。特に、ヨウ化リチウムと過塩素酸リチウムを用いると異性体１の精製効率はそれぞれ６０％及び７３％で、また、異性体２の精製効率はそれぞれ２３％及び４３％であり両異性体を一定量取り除くことに成功した。一方、トリフルオロメタンスルホン酸イッテリビウム（ＩＩＩ）を用いた場合には、異性体２の精製効率は－１０％と低くなってしまったものの、異性体１の精製効率が５８％と高く、結果として純度が８７％に向上した。
　トリフルオロメタンスルホン酸インジウム（Ｉｎ（ＯＴｆ）３，Ｒｕｎ２４，上清の純度８９％，回収率３７％）を用いた場合には、上清の純度が標品の純度８４％と比べ５％高くなることが分かったが、一方で化合物６，異性体１及び異性体２がそれぞれ異性化しており、標品中でのそれぞれの割合と精製操作後のそれぞれの割合が変化していることも分かった。
　ヨウ化カリウム（ＫＩ，Ｒｕｎ４，固体の純度９０％，回収率５７％），臭化マグネシウム（ＭｇＢｒ２，Ｒｕｎ９，固体の純度９８％，回収率４３％），過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２，Ｒｕｎ１０，固体の純度９０％、回収率８２％），ヨウ化マグネシウム（ＭｇＩ２，Ｒｕｎ１１，固体の純度９０％，回収率７３％），トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）２，Ｒｕｎ１２，固体の純度８９％，回収率４１％），トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム（ＩＩＩ）（Ｓｃ（ＯＴｆ）３，Ｒｕｎ１８，固体の純度８７％，回収率４０％），トリフルオロメタンスルホン酸サマリウム（ＩＩＩ）（Ｓｍ（ＯＴｆ）３，Ｒｕｎ１９，固体の純度８７％，回収率３３％），トリフルオロメタンスルホン酸セリウム（Ｃｅ（ＯＴｆ）３，Ｒｕｎ２０，固体の純度８８％，回収率６３％），又はマンガンビス（トリフルオロメタンスルホナート）（Ｍｎ（ＯＴｆ）２，Ｒｕｎ２３，固体の純度９０％、回収率５０％）を用いた場合には、析出した固体の純度が標品の純度８４％と比べ３％以上高くなることが分かった。特に、臭化マグネシウムを用いた際には、異性体１及び異性体２の精製効率がそれぞれ８８％及び８２％と高く、純度も９８％であった。一方、トリフルオロメタンスルホン酸マグネシウム又はトリフルオロメタンスルホン酸サマリウム（ＩＩＩ）を用いた場合には、異性体１の精製効率はそれぞれ２％と１２％で低かったが、異性体２の精製効率がそれぞれ５９％と５３％であったため、結果として純度がそれぞれ８９％又は８７％まで向上した。その他の金属塩に関しては、異性体１の精製効率は１９％以上、異性体２の精製効率は３４％以上と、両異性体をバランスよく取り除けていることが分かった（Ｒｕｎ４，１０，１１，１８，２０，２３）。
　テトラフルオロホウ酸カリウム（ＫＢＦ４，Ｒｕｎ５），又はヘキサフルオロリン酸カリウム（ＫＰＦ６，Ｒｕｎ６）を用いた場合には、ジクロロメタン及びヘキサンを加えた際に使用した金属塩が析出し、化合物６を含む固体は得られなかった。また、上清の純度と標品の純度を比べると変化は見られなかった。これは、実験の過程で金属塩が析出し化合物６と金属が複合体を形成することができなかったためと考えられる。
　硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４，Ｒｕｎ１３），酢酸マグネシウム・四水和物（Ｍｇ（ＯＡｃ）２・４Ｈ２Ｏ，Ｒｕｎ１４），塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２，Ｒｕｎ１５），フッ化マグネシウム（ＭｇＦ２，Ｒｕｎ１６）は、化合物６とそれぞれの金属塩を混合後、アセトニトリルを加えた際、金属塩が溶けず懸濁液となっていたが、そのまま、実験を続けた結果、化合物６を含む固体は得られなかった。また、上清の純度と標品の純度を比べると変化は見られなかった。これは、金属塩がアセトニトリルに溶解せず、化合物６と金属が複合体を形成することができなかったためと考えられる。
　一方で、Ｒｕｎ２７～３１において、複合体形成の溶媒としてエタノール（又は６０％エタノール水）を使用した結果、Ｒｕｎ２７、２８では上清に、Ｒｕｎ３０、３１では固体に精製効果を確認することができた。Ｒｕｎ２９では純度に顕著な向上は見られなかったものの、図８に示すように相対保持時間０．７１のピークに注目し、精製効率を算出したところ、固体における精製効率は－１３１％であり、上清では１００％（観測されなかった）であったことから、精製効果が確認された。Ｒｕｎ２７～３１で精製効果が見られたのは、エタノール（又は６０％エタノール水）においては金属塩と化合物６（又は不純物）が共に溶解し混ざり合ったことで、複合体を形成することができたためと考えられる。
　ヨウ化バリウム（ＢａＩ２，Ｒｕｎ７，固体の純度８５％，回収率５４％），過塩素酸バリウム（Ｂａ（ＣｌＯ４）２，Ｒｕｎ８，固体の純度８６％，回収率６５％，又はトリフルオロメタンスルホン酸亜鉛（ＩＩ）（Ｚｎ（ＯＴｆ）２，Ｒｕｎ２２，固体の純度８６％，回収率５８％）を用いた場合には、標品の純度と比べると析出した固体の純度の向上は１～２％だが異性体２の精製効率が２３～２７％であることが分かった。一方で、異性体１の精製効率はいずれも１０％以下であった。これらの結果より、これらの金属塩を用いた場合には、異性体２をある程度取り除けることを確認できた。
　臭化カルシウム（ＣａＢｒ２，Ｒｕｎ１７，上清の純度８６％，回収率４５％）を用いた場合には、標品の純度と比べると上清の純度の向上は２％だが異性体１の精製効率が５９％であることが分かった。一方で、異性体２の精製効率は－１９％と純度向上を妨げていた。これらの結果より、これらの金属塩を用いた場合には、異性体１をある程度取り除けることを確認できた。
　トリス（トリフルオロメタンスルホン酸）ビスマス（Ｂｉ（ＯＴｆ）３，Ｒｕｎ２５）を用いると、化合物６が分解するため精製効果を確かめることはできなかった。
　トリフルオロメタンスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ，Ｒｕｎ２６）を用いると、固体の沈殿は見られず、上清の純度と標品の純度を比べると変化は見られなかった。上清の純度が上がらなかった原因として、参考例２の１Ｈ－ＮＭＲのスペクトル解析から、化合物６とトリフルオロメタンスルホン酸銀が複合体を組まないことが考えられる。また、化合物６とトリフルオロメタンスルホン酸銀が複合体を組まないことから、金属無添加で同様に実験を行った場合、Ｒｕｎ２６と同じ結果が得られると考えられる。
標品のピーク面積をもとに算出（回収率の計算法３）
ｒｕｎ１１，１２，１３，１８，１９，２３の固体回収率の計算（例）
標品０．３０６ｍｇ／ｍＬの溶液のＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積（６０１２７）を測った。上記実験で得られた固体のアセトニトリル溶液４μＬを３９６μＬのアセトニトリルで希釈しＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積を測り標品の面積もとに、上清又は固体中の目的物の回収率を計算した。
ＭｇＩ２：（４２８９３÷１５．０５×５）÷（６０１２７÷３．０６）×１００≒７３％
Ｍｇ（ＯＴｆ）２：（２４１８３÷１５．０７×５）÷（６０１２７÷３．０６）×１００≒４１％
ＭｇＳＯ４：（２５７÷１５．０４×５）÷（６０１２７÷３．０６）×１００≒０％
Ｓｃ（ＯＴｆ）３：（２３８１５÷１４．９９×５）÷（６０１２７÷３．０６）×１００≒４０％
Ｓｍ（ＯＴｆ）３：（１９５０７÷１５．０５×５）÷（６０１２７÷３．０６）×１００≒３３％
Ｍｎ（ＯＴｆ）２：（２９７４７÷１５．００×５）÷（６０１２７÷３．０６）×１００≒５０％
Ｒｕｎ２７の回収率の計算
　Ｒｕｎ２７～３１では、上記記載の回収率の計算法１によって上清、固体の回収率を算出した。Ｒｕｎ２７の上清及び固体回収率計算を例として記す。
標品０．３０ｍｇ／ｍＬの溶液のＨＰＬＣを測定後、目的物のピーク面積（２９５０５１１，２２０ｎｍ）を測った。調製した５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液のＨＰＬＣを測定し、目的物のピーク面積（上清：２７０４５７７、固体：２３４３８３）を測り、下記の方法に従い計算し回収率を求めた。
上清：（２７０４５７７×１０）÷（２９５０５１１×１０．０）×１００≒９２％
固体：（２３４３８３×１０）÷（２９５０５１１×１０．０）×１００≒８％
　以上の結果より、環状ペプチドと複合体を形成させる金属塩の種類によって、精製目的物である環状ペプチドの精製効果をもたらす場合、もたらさない場合があることが確認できた。
　以上より、精製目的物である環状ペプチドと金属イオンを複合体形成させることで、複合体、及び複合体以外の不純物の相対的な溶解度が変化し、それらの溶解度の違いを利用することで、目的の環状ペプチドを精製できることを確認した。特に本手法では、一般的に分離しにくいと思われる、精製目的物である環状ペプチドの異性体を一定量取り除けることも分かった。
［実施例２－２：実験条件に対する依存性の確認］
＜基本操作＞
　化合物６に約１モル当量の過塩素酸マグネシウムを混合しアセトニトリルに溶解させた。溶媒を減圧留去し、ジクロロメタンとヘキサンを加えて室温で以下に従って撹拌した。生じた固体と液体を遠心分離し、上清をサンプリングしてＨＰＬＣを測定した。各化合物のピーク面積百分率、ピーク面積の値を基に算出した純度及び回収率を表１４、及び表１５に示した。
　ＨＰＬＣ測定用のサンプルは、初期濃度を基準に約０．３ｍｇ／ｍＬになるように調製した。実施例２―２においては、純度分析条件ＢによりＨＰＬＣを測定し、ＨＰＬＣの解析ソフトとしてＡｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社製のＡＣＤ／Ｓｐｅｃｔｒｕｓを用いて、各実験操作でジクロロメタンのみを加えた段階でのピーク面積百分率及びピーク面積を基準に純度及び回収率を計算した。なお、表８のＲｕｎ１で同様の実験を行っており、固体と上清の回収率の合計が１００％に近いこと、及び固体の純度が向上したことは確認済みであることから、本実験では固体回収実験は省略し、上清の純度が基準値より低下することをもって精製効果があると判断した。
回収率の計算法４
　例えば、ａ　ｍｇの原料を用いて実験したとし、使用した溶液量がｂ　ｍＬすると、上清のＨＰＬＣを測定する際には、固体と溶液を遠心分離し、上清（１５０ｂ／ａ）μＬをサンプリング後、溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。調製したサンプルのＨＰＬＣをそれぞれ測定し、基準サンプル、及び溶媒添加後の目的物のピーク面積（２２０ｎｍ）がそれぞれとｃとｄだとすると、回収率は下記の式で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000029
［実施例２－２―１：時間依存性確認］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000030
表１４のＲｕｎ１～３
　化合物６（Ｒｕｎ１：１５．０ｍｇ、Ｒｕｎ２：１５．１ｍｇ、Ｒｕｎ３：１５．１ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（１２．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４２３ｍＬ）を分注（Ｒｕｎ１：０．０９４ｍＬ、Ｒｕｎ２：０．０９５ｍＬ、Ｒｕｎ３：０．０９５ｍＬ）後、アセトニトリルで希釈して調製した５３ｍＭアセトニトリル溶液（各０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（１．０ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、溶液から１０μＬをサンプリングした。各溶液にヘキサン（０．５ｍＬ）を加え、１分撹拌した後、生じた固体と液体を素早く遠心分離し、上清から１５μＬをサンプリングした。再び撹拌し、ヘキサンの添加から１０分後、再度遠心分離、上清のサンプリング（１５μＬ）を行った。同様にして、ヘキサンの添加から３０分後、１時間後、２時間後、６時間後、２日後の段階で各溶液の遠心分離、上清のサンプリング（１５μＬ）を行った。各段階でサンプリングしたものについては溶媒を留去し、溶液全体が５０μＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、いずれの時間においても上清の純度が低下し、精製効果が見られた。また、ヘキサン添加後１時間後から純度と回収率はほとんど変化しなくなったことから、平衡化の目安は１時間程度であると考えられる。
上清の回収率の計算例
　Ｒｕｎ１にて、ジクロロメタンのみを加えた段階の目的物のピーク面積（３１５２６２３３６０，２２５ｎｍ）、及びヘキサンを添加してから１時間後の目的物のピーク面積（５２３５９８９７６，２２５ｎｍ）を測った。下記の方法に従い計算し回収率を求めた。
５２５３５９８９７６÷３１２５６２３３６０×１００≒１７％
　以上の結果より、過塩素酸マグネシウムと環状ペプチドの複合体に対し、第二の溶媒を添加した直後から十分に時間をおいた場合のいずれにおいても、環状ペプチドの精製効果があることを確認した。また、ある時間を経過すると、その精製効果は一定となることを確認した。
［実施例２－２―２：濃度依存性確認］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000031
表１５のＲｕｎ１
　化合物６（Ｒｕｎ１：１．５ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（１６．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５５０ｍＬ）のうち０．００８４ｍＬを０．１９１６ｍＬのアセトニトリルで希釈して調製した５．３ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（１．０ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、ヘキサン（０．５ｍＬ）を加えて７時間撹拌したが、沈殿は生じなかった。
表１５のＲｕｎ２
　化合物６（Ｒｕｎ２：１．５ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（１６．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５５０ｍＬ）のうち０．００８４ｍＬを０．１９１６ｍＬのアセトニトリルで希釈して調製した５．３ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（１．０ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、溶液から１０μＬをサンプリングした。溶媒を留去、真空乾燥した後にジクロロメタン（０．７５ｍＬ）を加えて再溶解させ、ヘキサン（０．７５ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、生じた固体と液体を遠心分離し、上清から１５μＬをサンプリングした。各段階でサンプリングしたものについては溶媒を留去し、溶液全体が５０μＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、上清の純度が低下し、精製効果が見られた。
表１５のＲｕｎ３
　化合物６（Ｒｕｎ３：７．５ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（１６．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５５０ｍＬ）のうち０．０４７ｍＬを０．１５３ｍＬのアセトニトリルで希釈して調製した２６ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（１．０ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、各溶液からそれぞれ１０μＬをサンプリングした。各溶液にヘキサン（０．５ｍＬ）を加えて７時間撹拌後、遠心分離を行い、各溶液の上清から１５μＬをサンプリングした。各段階でサンプリングしたものについては溶媒を留去し、濃度を合わせるためにそれぞれ溶液全体が２５０μＬ、１．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、いずれの場合においても上清の純度が低下し、精製効果が見られた。
表１５のＲｕｎ４
　化合物６（１５．１ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（７．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．３８７ｍＬ）のうち０．１４３ｍＬを０．０５７ｍＬのアセトニトリルで希釈して調製した５３ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（１．０ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、溶液から１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．５ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、生じた固体と液体を遠心分離し、上清から１５μＬをサンプリングした。各段階でサンプリングしたものについて溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。上清の純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、基準の純度が８０％であったのに対し、上清は純度６２％、回収率２１％であったことから、精製効果があるとわかった。
表１５のＲｕｎ５
　化合物６（Ｒｕｎ５：４５．０ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（１６．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．５５０ｍＬ）のうち０．２８３ｍＬを０．２１７ｍＬのアセトニトリルで希釈して調製した６３ｍＭアセトニトリル溶液（０．５００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（１．０ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、各溶液からそれぞれ１０μＬをサンプリングした。各溶液にヘキサン（０．５ｍＬ）を加えて７時間撹拌後、遠心分離を行い、各溶液の上清から１５μＬをサンプリングした。各段階でサンプリングしたものについては溶媒を留去し、濃度を合わせるためにそれぞれ溶液全体が２５０μＬ、１．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、いずれの場合においても上清の純度が低下し、精製効果が見られた。
　Ｒｕｎ１で沈殿が生じなかったのは、環状ペプチドの量がＲｕｎ３～５と比べ少ないことから、生成する過塩素酸マグネシウムと環状ペプチドの複合体の量が少なかったためと考えられる。一方、Ｒｕｎ２では、環状ペプチドの量，濃度はＲｕｎ１と同じ（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）であるが、貧溶媒であるヘキサンの比率がＲｕｎ１に比べ高いことから、生成する過塩素酸マグネシウムと環状ペプチドの複合体に対する溶解度がＲｕｎ１に比べ低く、沈殿が生じたものと考えられる。
[実施例２－３:環状部のアミノ酸残基数が異なる環状ペプチドを用いた実施例]
[実施例２－３－１:Ｍｇ（ＣｌＯ ４ ） ２ とジクロロメタン/ヘキサンを用いた精製効果の基質一般性の確認]
＜基本操作＞
　環状ペプチドの環状部のアミノ酸残基数が異なる化合物９、１１、１２～１５（約１０ｍｇ）に約１モル当量の過塩素酸マグネシウムを混合しアセトニトリルに溶解させた。溶媒を減圧留去し、ジクロロメタンとヘキサンを加えて室温で以下に従って撹拌した。生じた固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去し、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリルに再溶解させ、それぞれのＨＰＬＣを測定した。ＨＰＬＣの解析はＡｄｖａｎｃｅｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社製のＡＣＤ／Ｓｐｅｃｔｒｕｓを用いて行った。各化合物のピーク面積百分率、ピーク面積（２２５ｎｍで測定）の値を基に算出した純度及び回収率を表１６および表１７に示した。原料として使用した化合物は参考例１－３～８で合成した化合物であり、上記純度解析で使用したＨＰＬＣと同一条件（純度分析条件Ｃ）にて測定したＨＰＬＣの解析を基に、純度が向上した場合に精製効果ありとした。なお、純度が操作前の値から向上していない場合においても、個別の不純物に注目し、その精製効率が正の値であるものは精製効果があると判断した。
　ＨＰＬＣ測定用のサンプルは、初期濃度を基に約０．３ｍｇ／ｍＬになるように調製した。実施例２―３においては、純度分析条件ＣによりＨＰＬＣを測定した。本実験においては、各実験操作でジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加えた段階でのピーク面積百分率及びピーク面積を基準に純度及び回収率を計算した。回収率の計算は、上記記載の回収率算出法４によって算出した。また、一部について個別の不純物に注目し、その比率と精製効率を算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000032
　化合物９については個別の不純物２つについて、その比率と精製効率を算出した。
化合物９と不純物１（相対保持時間０．８８、分子量２６０４．６９、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳから直鎖二量体類縁副生成物ペプチドと推定）又は不純物２（相対保持時間０．８９、分子量２６１８．７１、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳから直鎖二量体類縁副生成物ペプチドと推定）の比率、化合物９に対する化合物９と不純物１及び不純物２がどれだけ分離されたかを確認するための精製効率は以下の式で算出した。
・化合物９に対する不純物１の比率×１００：
（不純物１のピーク面積）÷（化合物９のピーク面積）×１００
・化合物９に対する不純物２の比率×１００：
（不純物２のピーク面積）÷（化合物９のピーク面積）×１００
・不純物１の精製効率（％）：
｛１－（化合物９と不純物１の比率）÷（基準の化合物９と不純物１の比率）｝×１００
・不純物２の精製効率（％）：
｛１－（化合物９と不純物２の比率）÷（基準の化合物９と不純物２の比率）｝×１００
表１６のＲｕｎ１
　化合物９（１０．０ｍｇ）に対し、アセトニトリル(０．２ｍＬ)を添加した溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、さらにヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて３．５時間撹拌後、遠心分離を行ったが沈殿は生じなかった。上清から２０μＬをサンプリングした。溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。
表１６のＲｕｎ２
　化合物９（１０．２ｍｇ）に対し、別途調整したＭｇ（ＣｌＯ４）２（９．９ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９９ｍＬ）の内０．２１７ｍＬを添加した溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、さらにヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて３．５時間撹拌後、遠心分離を行ったところ固体沈殿、上清から２０μＬをサンプリングした。固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去後、真空乾燥した固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させ、溶液から１５μＬをサンプリングした。溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果９２％であり、初期純度９２％に対して向上は見られなかった。一方、図９に示すように不純物１(相対保持時間０．８８)、及び不純物２（０．８９）の精製効率を算出したところ、上清において化合物９に対する不純物１の精製効率が６２％、不純物２の精製効率が６７％であることが示されたことから、上清が精製されたと判断した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000033
表１７のＲｕｎ１
　化合物１２（９．８ｍｇ）に対し、アセトニトリル(０．２ｍＬ)を添加した溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、さらにヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて３．５時間撹拌後、遠心分離を行ったが沈殿は生じなかった。上清から２０μＬをサンプリングした。溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。
表１７のＲｕｎ２
　化合物１２（１０．１ｍｇ）に対し、別途調整したＭｇ（ＣｌＯ４）２（９．９ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９９ｍＬ）０．２０７ｍＬを添加した溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、さらにヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて３．５時間撹拌後、遠心分離を行ったところ固体沈殿、上清から２０μＬをサンプリングした。固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去後、真空乾燥した固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させ、各溶液から１５μＬをサンプリングした。溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、いずれも上清が精製されていることを確認した。
表１７のＲｕｎ３
　化合物１４（１０．０ｍｇ）に対し、アセトニトリル(０．２ｍＬ)を添加した溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、さらにヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて３．５時間撹拌後、遠心分離を行ったが沈殿は生じなかった。上清から２０μＬをサンプリングした。溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。
表１７のＲｕｎ４
　化合物１４（１０．０ｍｇ）に対し、別途調整したＭｇ（ＣｌＯ４）２（９．９ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．９９ｍＬ）０．１６９ｍＬを添加した溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて終夜撹拌後、さらにヘキサン（０．３３ｍＬ）を加えて３．５時間撹拌後、遠心分離を行ったところ固体沈殿、上清から２０μＬをサンプリングした。固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去後、真空乾燥した固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させ、各溶液から１５μＬをサンプリングした。溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、いずれも上清が精製されていることを確認した。
表１７のＲｕｎ５
　化合物１１（９．９ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を濃縮、真空乾燥して得られた後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．６６ｍＬ）を加えて４．５時間撹拌後、遠心分離を行ったが沈殿は生じなかった。上清から２０μＬをサンプリングした。サンプリングした各溶液は溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。
表１７のＲｕｎ６
　化合物１１（１０．１ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（３．８ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．３８０ｍＬ）を希釈して調製した３６ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．６６ｍＬ）を加えて４．５時間撹拌後、遠心分離を行ったところ固体沈殿、上清から２０μＬをサンプリングした。固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去後、真空乾燥した固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させ、各溶液から１５μＬをサンプリングした。サンプリングした各溶液は溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、上清が精製されていることを確認した。
表１７のＲｕｎ７
　化合物１３（９．９ｍｇ）のアセトニトリル溶液(０．２００ｍＬ)を濃縮、真空乾燥して得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．６６ｍＬ）を加えて４．５時間撹拌後、遠心分離を行ったが沈殿は生じなかった。上清から２０μＬをサンプリングした。サンプリングした各溶液は溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。
表１７のＲｕｎ８
　化合物１３（９．９ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（４．１ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４１０ｍＬ）を希釈して調製した３２ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（０．６６ｍＬ）を加えて４．５時間撹拌後、遠心分離を行ったところ固体沈殿、上清から２０μＬをサンプリングした。固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去後、真空乾燥した固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させ、各溶液から１５μＬをサンプリングした。サンプリングした各溶液は溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、上清が精製されていることを確認した。
表１７のＲｕｎ９
　化合物１５（９．９ｍｇ）のアセトニトリル溶液(０．２００ｍＬ)を濃縮、真空乾燥して得られた溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングしたヘキサン（１．３２ｍＬ）を加えて４．５時間撹拌後、遠心分離を行ったが沈殿は生じなかった。上清から３０μＬをサンプリングした。サンプリングした各溶液は溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。
表１７のＲｕｎ１０
　化合物１５（９．９ｍｇ）にＭｇ（ＣｌＯ４）２（４．７ｍｇ）のアセトニトリル溶液（０．４７０ｍＬ）を希釈して調製した３０ｍＭアセトニトリル溶液（０．２００ｍＬ）を加えて濃縮、真空乾燥した。得られた固体にジクロロメタン（０．６６ｍＬ）を加え１５分撹拌した後、１０μＬをサンプリングした。ヘキサン（１．３２ｍＬ）を加えて４．５時間撹拌後、遠心分離を行ったところ固体沈殿、上清から３０μＬをサンプリングした固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去後、真空乾燥した固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させ、各溶液から１５μＬをサンプリングした。サンプリングした各溶液は溶媒を留去し、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した結果、上清が精製されていることを確認した。
　以上より、本発明の環状ペプチドの精製法は、環状部のアミノ酸残基数の異なる環状ペプチド、及び分岐鎖を持った環状ペプチドにも適用可能であると分かった。
[実施例２－３―２:ＭｇＩ ２ と各種溶媒を用いた基質一般性の確認]
＜基本操作＞
　環状部のアミノ酸残基数が異なる環状ペプチドである下記表１８に示す各化合物（約１０ｍｇ）に約１モル当量のヨウ化マグネシウムを混合しアセトニトリルに溶解させた。溶媒を減圧留去し、下記表１８に示した各種溶媒を加えて室温で以下に従って撹拌した。生じた固体と液体を遠心分離し、溶媒を留去し、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリルに再溶解させ、純度分析条件ＣにてそれぞれのＨＰＬＣを測定した。ＨＰＬＣの解析はＡｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社製のＡＣＤ／Ｓｐｅｃｔｒｕｓを用いて行った。各化合物のピーク面積百分率、ピーク面積（２２５ｎｍで測定）の値を基に算出した純度及び回収率を表１８に示した。
　ＨＰＬＣ測定用のサンプルは、初期濃度を基に約０．３ｍｇ／ｍＬになるように調製した。実施例２―３においては、純度分析条件ＣによりＨＰＬＣを測定した。本実験においては、実施例２－３－１にてジクロロメタン(０．６６ｍＬ)を加えた段階でのピーク面積百分率及びピーク面積を基準に純度及び回収率を計算した。回収率の計算は、上記記載の回収率算出法４によって算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000034
表１８のＲｕｎ１～６
　各化合物約１０ｍｇに対し、別途調整したＭｇI２（２６．２ｍｇ）のアセトニトリル溶液（２．６２ｍＬ）を１モル当量分注した溶液を濃縮、真空乾燥した後に得られた固体に表１８のＲｕｎ１～６に示す溶媒を加え、終夜撹拌した。生じた固体と溶液を遠心分離し、溶媒を留去後、真空乾燥した上清、固体をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に再溶解させた。得られた上清、固体のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）のうち、１５μＬをサンプリング後、溶液全体が０．５ｍＬの５０％ｖ／ｖアセトニトリル水溶液となるようにサンプルを調製した。純度及び回収率をＨＰＬＣにて確認した。Ｒｕｎ１，２，３，４，６では上清が精製されていることを確認した。Ｒｕｎ５では固体が精製されていることを確認した。
　以上より、本発明の環状ペプチドの精製法は、環状部のアミノ酸残基数の異なる環状ペプチド、及び分岐鎖を持った環状ペプチドについて、様々な金属塩や溶媒を用いて行うことができると分かった。
［実施例３：環状ペプチドの取り出し］
［実施例３－１：環状ペプチドと金属塩の分離検討］
＜実験操作１＞
　化合物６（３０．０ｍｇ，純度８４％［ピーク面積百分率］）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（５．８８ｍｇ）のＣＨ３ＣＮ溶液（１．０ｍＬ）を減圧濃縮後、得られる固体を２ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、さらに１ｍＬのヘキサンを加え３時間撹拌した。得られた懸濁液を遠心分離し、固体と液体に分けた後、固体をジクロロメタンーヘキサンの混合液（２ｍＬ／１ｍＬ）を加えさらに３時間撹拌した。得られた懸濁液を遠心分離し乾燥させ固体（４３．０７ｍｇ，純度９３％［ピーク面積百分率］）を得た。
＜実験操作２＞
　実験操作１で得られた固体のうち１．１３ｍｇに重アセトニトリル（ＣＤ３ＣＮ，０．６ｍＬ）を加えその溶液のうち０．５ｍＬを用いて１Ｈ－ＮＭＲを測定した（図１０－ａ）。
＜実験操作３＞
　実験操作１で得られた固体のうち１．０２ｍｇに１ｍＬのジクロロメタンを加え一晩放置し乾固させ重アセトニトリル（ＣＤ３ＣＮ，０．５ｍＬ）を加え１Ｈ－ＮＭＲを測定した（図１０－ｂ）。
＜実験操作４＞
　実験操作１で得られた固体のうち１．１４ｍｇにジクロロメタンを１ｍＬ加えた後、水を１ｍＬ加え分液操作を行った。得られた有機相と水相を分離し、有機相に対して水１ｍＬを加え分液操作を行う作業をさらに２回行った。得られた有機相を乾燥した結果、固体が０．７２ｍｇ得られた。得られた固体に対し重アセトニトリル（ＣＤ３ＣＮ，０．５ｍＬ）を加え１Ｈ－ＮＭＲを測定した（図１０－ｃ）。比較のため図１０－ｄには、原料の化合物６（純度８４％［ピーク面積百分率］）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを載せた。
　図１０－ａと図１０－ｄに示した１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを比較した結果、得られた固体の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（図１０－ａ）は原料の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（図１０－ｄ）とは異なることから、得られた固体が複合体であることを確認した。
図１０－ａと図１０－ｂに示した１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを比較した結果、両者が同じスペクトルを示したことより、実験操作１で得られた複合体はジクロロメタンを加えたとしても分解しないことを確認した。
　図１０－ａと図１０－ｃ及び図１０－ｄに示した１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを比較した結果、分液操作後に得られたＮＭＲスペクトル（図１０－ｃ）が実験操作１で得られた固体の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（図１０－ａ）とは異なる上、原料の１Ｈ－ＮＭＲスペクトル（図１０－ｄ）の主要ピークと一致していることから、分液操作により複合体が分解し、金属無添加の化合物６が得られることを確認した。
　以上のことより、実験操作１で得られた複合体を水とジクロロメタンを用いた分液操作をすることでＭｇ（ＣｌＯ４）２を取り除けることが分かった。
［実施例３－２：環状ペプチドの取り出し］
＜実験操作１（複合体の取り出し及び精製）＞
　化合物６（１５．１７ｍｇ，純度８４％［ピーク面積百分率］）とＭｇ（ＣｌＯ４）２（２．９５ｍｇ）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．５ｍＬ）を減圧濃縮後、得られる固体を１ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、さらに０．６ｍＬのヘキサンを加え２時間撹拌した。得られた懸濁液を遠心分離し、固体と液体に分けた後、固体をジクロロメタンーヘキサンの混合液（１ｍＬ／０．６ｍＬ）を加えさらに３０分撹拌した。得られた懸濁液を遠心分離し乾燥させ固体（１３．１６ｍｇ，純度８８％）を得た。
＜実験操作２（複合体から化合物６の取り出し）＞
　実験操作１で得られた固体にジクロロメタン（１ｍＬ）と水（１ｍＬ）加え分液操作を行った。水相と有機相を分離し、有機相に水（２ｍＬ）を加え分液操作を行った。この操作をさらに１回繰り返し行った。水相と有機相を分離後、有機相に水（２ｍＬ）とアセトニトリル（０．０５ｍＬ）加え分液操作を行った。水相と有機相を分離し、有機相に水（２ｍＬ）を加え分液操作を行った。水相と有機相を分離し、有機相にジクロロメタン（０．５ｍＬ）と水（１ｍＬ）を加え分液操作を行った。水相と有機相を分離し、水相にジクロロメタン（１ｍＬ）を加え分液操作を行い、有機相と水相を分離し、同じ操作をさらに２回行った。得られた有機相を集め溶媒を減圧留去し、固体（１０．５７ｍｇ，純度８８％，回収率７３％）を得た。
　回収率の計算は以下のように行い、また、得られた固体が複合体ではなく化合物６であることを１Ｈ－ＮＭＲを測定することで確認した。
回収率計算：１０．５７×０．８８÷（１５．１７×０．８４）×１００＝７３％
　以下、図２～１０について詳細に説明する。図２は化合物６をアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ）と、過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２）を環状ペプチドに対して、それぞれ１，３，６モル当量添加して得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩添加実験）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２９８Ｋで測定して得られる、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図２－ａ）は過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２）を非添加の際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図２－ｂ）は過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２）を化合物６に対して１モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図２－ｃ）は過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２）を化合物６に対して３モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図２－ｄ）は過塩素酸マグネシウム（Ｍｇ（ＣｌＯ４）２）を化合物６に対して６モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図３は化合物６をアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ）と、ヨウ化マグネシウム（ＭｇＩ２）を環状ペプチドに対して、それぞれ１，３，６モル当量添加して得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩添加実験）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２９８Ｋで測定して得られる、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図３－ａ）はヨウ化マグネシウム（ＭｇＩ２）を非添加の際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図３－ｂ）はヨウ化マグネシウム（ＭｇＩ２）を化合物６に対して１モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図３－ｃ）はヨウ化マグネシウム（ＭｇＩ２）を化合物６に対して３モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図３－ｄ）はヨウ化マグネシウム（ＭｇＩ２）を化合物６に対して６モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図４は化合物６をアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ）と、トリフルオロスルホン酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）２）を環状ペプチドに対して、それぞれ１，３，６モル当量添加して得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩添加実験）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２９８Ｋで測定して得られる、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図４－ａ）はトリフルオロスルホン酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）２）を非添加の際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図４－ｂ）はトリフルオロスルホン酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）２）を化合物６に対して１モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図４－ｃ）はトリフルオロスルホン酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）２）を化合物６に対して３モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図４－ｄ）はトリフルオロスルホン酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）２）を化合物６に対して６モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図５は化合物６をアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ）と、ヨウ化カルシウム（ＣａＩ２）を環状ペプチドに対して、それぞれ１，３，６モル当量添加して得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩添加実験）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２９８Ｋで測定して得られる、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図５－ａ）はヨウ化カルシウム（ＣａＩ２）を非添加の際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図５－ｂ）はヨウ化カルシウム（ＣａＩ２）を化合物６に対して１モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図５－ｃ）はヨウ化カルシウム（ＣａＩ２）を化合物６に対して３モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図５－ｄ）はヨウ化カルシウム（ＣａＩ２）を化合物６に対して６モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図６は化合物６をアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ）と、トリフルオロスルホン酸スカンジウム（ＩＩＩ）（Ｓｃ（ＯＴｆ）３）を環状ペプチドに対して、それぞれ１，３，６モル当量添加して得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩添加実験）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２９８Ｋで測定して得られる、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図６－ａ）はトリフルオロスルホン酸スカンジウム（ＩＩＩ）（Ｓｃ（ＯＴｆ）３）を非添加の際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図６－ｂ）はトリフルオロスルホン酸スカンジウム（ＩＩＩ）（Ｓｃ（ＯＴｆ）３）を化合物６に対して１モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図６－ｃ）はトリフルオロスルホン酸スカンジウム（ＩＩＩ）（Ｓｃ（ＯＴｆ）３）を化合物６に対して３モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図６－ｄ）はトリフルオロスルホン酸スカンジウム（ＩＩＩ）（Ｓｃ（ＯＴｆ）３）を化合物６に対して６モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図７は化合物６をアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）に溶解し得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ）と、トリフルオロスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ）を環状ペプチドに対して、それぞれ１，３，６モル当量添加して得られる溶液（環状ペプチドの濃度：１．４ｍＭ，金属塩添加実験）の１Ｈ－ＮＭＲをそれぞれ２９８Ｋで測定して得られる、１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図７－ａ）はトリフルオロスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ）を非添加の際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図７－ｂ）はトリフルオロスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ）を化合物６に対して１モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図７－ｃ）はトリフルオロスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ）を化合物６に対して３モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図７－ｄ）はトリフルオロスルホン酸銀（ＡｇＯＴｆ）を化合物６に対して６モル当量添加した際のアセトニトリル－ｄ３（ＣＤ３ＣＮ）溶液（１．４ｍＭ）中での化合物６の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図８は、実施例２－１のＲｕｎ２９で測定したＬＣチャートを示す図である。
　図９は、実施例２－３－１のＲｕｎ２で測定したＬＣチャートを示す図である
　図１０は、実施例３－１の各実験操作（実験操作１～４）で得られた固体それぞれをＣＤ３ＣＮに溶解させて１Ｈ－ＮＭＲを測定して得られるそれぞれの１Ｈ－ＮＭＲスペクトルと化合物６（純度８４％［ピーク面積百分率］）をＣＤ３ＣＮに溶解させて１Ｈ－ＮＭＲを測定して得られる１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図１０－ａ）は、実験操作１で得られた固体のうち１．１３ｍｇに重アセトニトリル（ＣＤ３ＣＮ，０．６ｍＬ）を加えその溶液のうち０．５ｍＬを用いて１Ｈ－ＮＭＲを測定して得られた１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図１０－ｂ）は、実験操作１で得られた固体のうち１．０２ｍｇに１ｍＬのジクロロメタンを加え一晩放置し乾固後重アセトニトリル（ＣＤ３ＣＮ，０．５ｍＬ）を加えＨ－ＮＭＲを測定して得られた１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図１０－ｃ）は、実験操作１で得られた固体のうち１．１４ｍｇにジクロロメタンを１ｍＬ加えた後、実験操作３に従い分液操作を行って得られた固体に重アセトニトリル（ＣＤ３ＣＮ，０．５ｍＬ）を加えＨ－ＮＭＲを測定して得られた１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。
　図１０－ｄ）は、金属塩無添加の状態の化合物６（純度８４％［ピーク面積百分率］）の重アセトニトリル（ＣＤ３ＣＮ）中での１Ｈ－ＮＭＲスペクトルの図である。

 

Claims (15)

  1. 　環状ペプチドの精製法であって、
    　前記精製法は、下記（ｉ）又は（ｉｉ）の分離工程を含み、
    （ｉ）精製目的物である環状ペプチドを含む混合物から、精製目的物である前記環状ペプチドを金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する
    （ｉｉ）精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物から、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドを、金属原子又は金属イオンとの複合体として分離する
    　前記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であり、
    　前記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種である、精製法。
  2. 　（１）精製目的物である前記環状ペプチドを含む混合物、又は、精製目的物である前記環状ペプチド及び不純物である前記ペプチドを含む混合物と、前記金属原子又は前記金属イオンを混合する工程を前記分離工程の前工程として含む、請求項１に記載の精製法。
  3. 　前記（１）工程は、第一の溶媒中で行われる、請求項２に記載の精製法。
  4. 　環状ペプチドの精製法であって、
    　（１）’第一の溶媒中で、精製目的物である環状ペプチドを含む混合物、又は、精製目的物である環状ペプチド及び不純物であるペプチドを含む混合物と、金属原子又は金属イオンを混合する工程を含み、
    　前記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であり、
    　前記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種である、精製法。
  5. 　前記（１）’工程において、前記第一の溶媒中で、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと、前記金属原子又は前記金属イオンとの複合体を形成させる、請求項４に記載の精製法。
  6. 　（２）前記（１）工程又は前記（１）’工程において得られた混合物と、第二の溶媒を混合する工程を更に含み、
    　前記第一の溶媒及び前記第二の溶媒は、互いに異なる溶媒である、請求項３～５のいずれか一項に記載の精製法。
  7. 　（２）’前記第一の溶媒の少なくとも一部を除去する工程を前記（２）工程の前工程として含む、請求項６に記載の精製法。
  8. 　（３）前記（１）工程又は前記（１）’工程において得られた混合物と前記第二の溶媒の混合液から、精製目的物である前記環状ペプチド又は不純物である前記ペプチドと前記金属原子又は前記金属イオンとの複合体を分離する工程を含む、請求項６又は７に記載の精製法。
  9. 　前記第一の溶媒が、アルコール系溶媒、ニトリル系溶媒、ベンゼン系溶媒、エーテル系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、スルホキシド系溶媒、及びアミド系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項３～８のいずれか一項に記載の精製法。
  10. 　環状ペプチドの精製法であって、
    　（４）精製目的物である環状ペプチド又は不純物であるペプチドと、金属原子又は金属イオンとの複合体、及び、第二の溶媒を混合する工程を含み、
    　前記金属原子は、アルカリ金属原子、アルカリ土類金属原子、遷移金属原子、貧金属原子及び希土類金属原子からなる群より選択される少なくとも一種であり、
    　前記金属イオンは、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、貧金属イオン及び希土類金属イオンからなる群より選択される少なくとも一種である、精製法。
  11. 　（５）前記複合体及び前記第二の溶媒の混合液から、前記複合体を分離する工程を更に含む、請求項１０に記載の精製法。
  12. 　前記第二の溶媒が、エーテル系溶媒、ベンゼン系溶媒、ケトン系溶媒、ハロゲン系溶媒、エステル系溶媒、ニトリル系溶媒、炭化水素系溶媒、アルコール系溶媒、スルホキシド系溶媒、及びアミド系溶媒からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項６～８，１０，１１のいずれか一項に記載の精製法。
  13. 　請求項１～１２のいずれか一項に記載の精製法を含む、環状ペプチドの製造法。
  14. 　液相合成法により精製目的物である前記環状ペプチドを得る工程を更に含む、請求項１３に記載の製造法。
  15. 　固相合成法により精製目的物である前記環状ペプチドを得る工程を更に含む、請求項１３に記載の製造法。

     
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