[go: up one dir, main page]

WO2024143263A1 - 蛍光強度増強剤、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、蛍光検出用キット - Google Patents

蛍光強度増強剤、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、蛍光検出用キット Download PDF

Info

Publication number
WO2024143263A1
WO2024143263A1 PCT/JP2023/046400 JP2023046400W WO2024143263A1 WO 2024143263 A1 WO2024143263 A1 WO 2024143263A1 JP 2023046400 W JP2023046400 W JP 2023046400W WO 2024143263 A1 WO2024143263 A1 WO 2024143263A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
compound
fluorescence intensity
fluorescent dye
groups
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2023/046400
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
研史 白兼
飛翼 中田
淳 中林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujifilm Corp
Original Assignee
Fujifilm Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujifilm Corp filed Critical Fujifilm Corp
Priority to EP23912043.9A priority Critical patent/EP4644874A1/en
Priority to JP2024567792A priority patent/JPWO2024143263A1/ja
Priority to CN202380086972.4A priority patent/CN120380327A/zh
Publication of WO2024143263A1 publication Critical patent/WO2024143263A1/ja
Priority to US19/243,663 priority patent/US20250314658A1/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1074—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing more than three nitrogen atoms as heteroatoms
    • C09K2211/1081—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing more than three nitrogen atoms as heteroatoms with sulfur

Definitions

  • the present invention relates to a fluorescence intensity enhancer, a method for enhancing the fluorescence intensity of a fluorescently labeled target biological material, and a fluorescence detection kit.
  • Bioimaging techniques are known that analyze the dynamics or functions of substances that constitute living organisms, such as biomolecules, cells, or tissues.
  • fluorescent imaging is often used to obtain information by visualizing the target substance through fluorescent labeling using fluorescent dye-labeled biomolecules (such as fluorescent dye-labeled antibodies) that are biomolecules (such as antibodies) that bind to the target substance.
  • fluorescent imaging using the above-mentioned fluorescent dye-labeled biomolecules is used in Western blotting, in which a sample derived from a living organism is transferred onto a membrane and a specific protein is detected from a protein mixture, and in cell staining, in which the dynamics of a target substance within a cell is observed while the cell is in its cellular state.
  • organic fluorescent dye molecules are generally used.
  • the brightness (fluorescence intensity) is increased to a desired level by using fluorescent dye-labeled biomolecules in which multiple organic fluorescent dye molecules are bound to one biomolecule.
  • organic dyes that exhibit fluorescence such as cyanine dyes and rhodamine dyes, have aromatic chromophores with high planarity, which makes them prone to interactions between dyes, and as a result, the fluorescence intensity is likely to decrease due to interactions such as self-association between the dyes after labeling.
  • DOL fluorescence labeling rate
  • the fluorescence intensity tends to decrease further due to self-association, etc.
  • Patent Document 1 describes the use of a conjugate compound of a chlorotoxin peptide and a cyanine dye for tumor imaging applications, and the inclusion of mannitol in a composition used for tableting the conjugate compound.
  • Patent Document 2 describes the use of a method of administering a 89Zr -labeled antigen-binding construct to a subject for tumor imaging applications, and describes the inclusion of sucrose in a composition used for tableting the antigen-binding construct.
  • Patent Document 3 describes dried mammalian cells useful as a control or standard in immunoassays, which are obtained by fixing the cells with a fixative, reducing them with a Schiff base reducing agent, and drying them in the presence of trehalose as a membrane stabilizing compound.
  • a method for enhancing the fluorescence intensity of a fluorescently labeled target biological material comprising allowing the fluorescence intensity enhancer according to any one of [1] to [8] to act on the fluorescently labeled target biological material.
  • a method for enhancing the fluorescence intensity of a fluorescently labeled target biological material comprising: allowing the fluorescence intensity enhancer according to any one of [1] to [8] to act on the fluorescently labeled target biological material, thereby enhancing the fluorescence intensity from the fluorescent label.
  • substituents when there are a plurality of substituents, linking groups or structural units, etc., represented by a specific code or formula (hereinafter referred to as substituents, etc.), or when a plurality of substituents, etc., are specified at the same time, unless otherwise specified, the respective substituents, etc. may be the same or different from each other. This also applies to the definition of the number of substituents, etc.
  • substituents, etc. when a plurality of substituents, etc., are adjacent to each other (particularly, when adjacent), they may be linked to each other to form a ring, unless otherwise specified.
  • a structure grouped by ( ) s may be the same or different from each other
  • the structures present in a quantity of t may be the same or different from each other
  • the structures present in a quantity of u may be the same or different from each other
  • the structures present in a quantity of m may be the same or different from each other
  • the structures present in a quantity of n1 may be the same or different from each other
  • the structures present in a quantity of na may be the same or different from each other
  • the structures present in a quantity of nb may be the same or different from each other.
  • the monovalent or polyvalent cation in forming the above salt structure is not particularly limited, and examples thereof include inorganic cations, organic cations, etc., and specific examples thereof include cations of alkali metals such as Na + , Li + , and K + , cations of alkaline earth metals such as Mg 2+ , Ca 2+ , and Ba 2+ , and organic ammonium cations such as trialkylammonium cations and tetraalkylammonium cations.
  • the type of salt may be one type or two or more types may be mixed, the salt type and the free acid structure group may be mixed in the compound, and further, a compound of a salt structure and a compound of a free acid structure may be mixed.
  • the compounds of the present invention and described herein are all neutral compounds.
  • a compound being neutral means that it is electrically neutral. Specifically, the charge of the compound as a whole is adjusted to be 0 by a group or counter ion having a charge in the compound.
  • the formal charge of the nitrogen atom to which R 42 is bonded is +1, and a dissociative group such as a sulfo group in the cyanine dye or in other structures in the fluorescent dye (F) has an ionic structure such as a sulfonate ion in order to pair with this formal charge, so that the fluorescent dye (F) as a whole is a compound with a charge of 0.
  • the positive charge of the compound is specifically shown as the structure of a specific nitrogen atom for convenience.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention acts on a fluorescently labeled target biological material, and the water-soluble compound with a melting point of 50°C or higher functions as an active ingredient, enhancing the fluorescence intensity of the fluorescently labeled target biological material.
  • the water-soluble compound with a melting point of 50°C or higher contained in the fluorescence intensity enhancer of the present invention is interposed between fluorescent dye-labeled biomolecules and/or between fluorescent dyes in the fluorescently labeled target biological material, suppressing the interaction between the fluorescent dyes, thereby suppressing quenching due to the association of the fluorescent dyes and enhancing the fluorescence intensity.
  • a water-soluble compound with a melting point of less than 50°C cannot interpose in the form of a film to suppress the interaction between the fluorescent dyes, and therefore cannot obtain the effect of enhancing the fluorescence intensity.
  • a compound that is not a water-soluble compound, such as an oil-soluble compound causes phase separation when acting on a fluorescently labeled target biological material, and cannot interpose between the fluorescent dyes to suppress the interaction between the fluorescent dyes, and therefore cannot obtain the effect of enhancing the fluorescence intensity.
  • the content of the water-soluble compound (W) is not particularly limited as long as the effects of the present invention are exhibited, and can be, for example, 1% by mass or more, preferably 2.5% by mass or more, and from the viewpoint of further enhancing the fluorescence intensity, more preferably 4.5% by mass or more, even more preferably 9% by mass or more, even more preferably 12% by mass or more, even more preferably 15% by mass or more, particularly preferably 20% by mass or more, and most preferably 25% by mass or more. There is no particular limit to the upper limit, and it can be 100% by mass or less.
  • the content of the water-soluble compound (W) means the content of the water-soluble compound (W) in the fluorescence intensity enhancer of the present invention.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention may be in either a solid form or a solution form.
  • Examples of the fluorescence intensity enhancer of the present invention in a solid form include fine particle powder and freeze-dried powder of the fluorescence intensity enhancer of the present invention.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention may further contain components such as a buffer agent constituting a buffer solution described below, a surfactant, etc., in a solid form.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention may be present in an aqueous medium such as a buffer solution described below, with a part of the agent in solution and the rest in a solid form.
  • An example of the fluorescence intensity enhancer of the present invention in the form of a solution is a solution in which the fluorescence intensity enhancer of the present invention is dissolved in an aqueous medium.
  • the aqueous medium may contain an organic solvent other than water within the scope of the effects of the present invention.
  • the organic solvent that may be contained include organic solvents miscible with water, such as methanol, ethanol, dimethylsulfoxide, dimethylformamide, tetrahydrofuran, acetonitrile, and acetic acid.
  • the aqueous medium may contain additives within the range in which the effects of the present invention are achieved.
  • additives examples include buffers such as TBS (Tris-buffered saline), PBS (phosphate-buffered saline), TAE (Tris-acetate EDTA), TB (Tris-borate EDTA) E, TE (Tris EDTA), and Good's Buffer (available, for example, from Nippon Gene Co., Ltd.
  • buffers such as TBS (Tris-buffered saline), PBS (phosphate-buffered saline), TAE (Tris-acetate EDTA), TB (Tris-borate EDTA) E, TE (Tris EDTA), and Good's Buffer (available, for example, from Nippon Gene Co., Ltd.
  • examples of the water-soluble compound (W) include buffer solutions such as TBS, PBS, TBS-T (TBS containing Tween-20), PBS-T (PBS containing Tween-20), TAE, TBE, TE, and Good's Buffer, which contain the water-soluble compound (W).
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention is preferably in the form of a solution, more preferably in the form of a buffer solution containing the above-mentioned water-soluble compound (W).
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention is preferably used for fluorescence imaging purposes.
  • Fluorescence imaging refers to bioimaging in which a target biological material (also referred to as “target biological material” in the present invention) is visualized and observed by fluorescent labeling using a fluorescent dye-labeled biomolecule. Specifically, the fluorescence of a target biological material (also referred to as “fluorescently labeled target biological material” in the present invention) labeled with a fluorescent dye-labeled biomolecule is observed. Details of the fluorescent dyes used in the fluorescent dye-labeled biomolecules, the fluorescent dye-labeled biomolecules, and the fluorescence detection using the fluorescent dye-labeled biomolecules are described below.
  • the fluorescent imaging application is not particularly limited, and the fluorescent imaging agent can be applied to commonly used fluorescent imaging applications, such as western blotting (hereinafter also abbreviated as WB), multicolor WB, cell staining, dot blotting, and the like.
  • WB can detect protein bands by separating target biological substances (proteins) based on differences in molecular mass using SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis), transferring the proteins to a membrane, and then specifically binding a fluorescent dye-labeled antibody to the protein transferred to the membrane to obtain a fluorescently labeled target biological substance, which is then evaluated.
  • SDS-PAGE sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis
  • the membrane is dried and evaluated, which can further increase the fluorescence intensity, making it possible to detect protein bands even when the amount of protein is smaller.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention by acting the fluorescence intensity enhancer of the present invention on a fluorescently labeled target biological material, the quenching effect due to interactions between fluorescent dyes in the fluorescently labeled target biological material can be suppressed when the membrane is dried, and the fluorescence intensity can be enhanced, making it possible to detect bands with even lower protein amounts with higher sensitivity than with conventional WB.
  • the effect of enhancing the fluorescence intensity by the fluorescence intensity enhancer of the present invention is not limited to the case where the membrane is dried, but can also be obtained when the membrane is observed without being dried.
  • the method of the present invention for enhancing the fluorescence intensity of a fluorescently labeled target biological material is a method comprising allowing the fluorescence intensity enhancing agent of the present invention to act on the fluorescently labeled target biological material.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention be allowed to act on a fluorescently labeled target biological material, thereby enhancing the fluorescence intensity from the fluorescent label.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention is allowed to act on a fluorescently labeled target biological substance, it is preferable to allow it to act in the form of the above-mentioned solution.
  • the fluorescence intensity enhancer of the present invention may be allowed to act between obtaining the fluorescently labeled target biological material and detecting the fluorescence so as to exhibit the function of suppressing the interaction between the fluorescent dyes in the fluorescently labeled target biological material.
  • the washing conditions such as the washing time (shaking time) and the content of the water-soluble compound (W) in the buffer solution are not particularly limited as long as the effect of enhancing the fluorescence intensity can be obtained.
  • the washing time (shaking time) can be 5 to 15 minutes
  • the content of the water-soluble compound (W) in the buffer solution can be the same as that described above for the content of the water-soluble compound (W) in the fluorescence intensity enhancer of the present invention.
  • Substituents that the alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, acyl group, aryl group and heteroaryl group in R 1 to R 3 may have include the substituents in the substituent group T described below, and for example, a halogen atom or an anionic group is preferable.
  • the alkyl group may be an alkyl group having an anionic group
  • the acyl group may be an acyl group containing an anionic group (preferably an acyl group having an anionic group, or an acyl group substituted with an alkoxy group having an anionic group).
  • the above alkyl group and acyl group may have a substituent other than the anionic group, and examples of the substituent include the substituents in the substituent group T described below, and for example, a carbamoyl group or an acylamino group are preferable.
  • at least one is preferably >CR 2 R 3
  • more preferably at least two are >CR 2 R 3 and the remaining one is --O--, --S-- or >CR 2 R 3 .
  • the alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, acyl group, amino group, alkoxy group, aryl group and heteroaryl group which can be taken as R4 or R5 have the same meaning as the alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, acyl group, amino group, alkoxy group, aryl group and heteroaryl group in the substituent group T described later, and the preferred ranges are also the same.
  • the alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, acyl group, amino group, alkoxy group, aryl group and heteroaryl group which can be taken as R4 or R5 may be unsubstituted or may have a substituent.
  • R 6 or R 7 contains a structure represented by -(L-O) g R E , and it is more preferable that R 7 contains a structure represented by -(L-O) g R E.
  • the heteroarylene group which can constitute L 1 to L 7 has the same meaning as the group in which one hydrogen atom has been removed from a heteroaryl group selected from the substituent group T described later, and the preferred examples are also the same.
  • the alkylene group, alkenylene group, alkynylene group, arylene group and heteroarylene group which can constitute L 1 to L 7 may be an unsubstituted group or a group having a substituent.
  • R A is preferably a hydrogen atom, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, a heteroaryl group, or an anionic group, more preferably a hydrogen atom or an alkyl group, and even more preferably a hydrogen atom.
  • L1 , L6 L 1 is more preferably >C ⁇ O, >NR A , an arylene group, an alkylene group, -O- or -S-, further preferably >C ⁇ O, >NR A , an arylene group or an alkylene group, and particularly preferably >C ⁇ O or >NR A.
  • L x is a heteroarylene group, or a group consisting of a group consisting of one or more of an alkylene group, an alkenylene group, an alkynylene group, and an arylene group located on the * side, and a heteroarylene group located on the ** side.
  • adjacent groups may be bonded to each other to form a ring.
  • Examples of the combination of adjacent groups that may be bonded to each other to form a ring include the combination of L1 and L2 , the combination of L1 and L3 , the combination of L2 and R4 , the combination of L4 and L5 , the combination of L4 and L6 , or the combination of L5 and R5 .
  • the ring which may be formed by bonding adjacent groups to each other may be either an aromatic ring or an aliphatic ring, or either a hydrocarbon ring or a hetero ring, and is preferably a 5- or 6-membered ring.
  • the aromatic ring is preferably a benzene ring or a nitrogen-containing aromatic heterocycle, more preferably a benzene ring or a nitrogen-containing aromatic heterocycle whose ring constituent atoms are carbon atoms and nitrogen atoms, and further preferably a benzene ring or a pyridine ring.
  • These rings may have a substituent, and the substituent that they may have is selected from the substituent group T without any particular limitation.
  • the ring formed by the combination of L2 and R4 or the combination of L5 and R5 may be either the above-mentioned aliphatic ring or aromatic ring, and is preferably the above-mentioned aliphatic ring.
  • the ring formed by the combination of L1 and L2 , the combination of L1 and L3 , the combination of L4 and L5 , or the combination of L4 and L6 may be any of the above-mentioned aliphatic rings and aromatic rings, and is preferably a 5-membered ring having a carbon atom, a nitrogen atom, and X1 to X3 as ring-constituting atoms, or a benzene ring, as described in the structure represented by the above-mentioned general formula (I).
  • the following structure enclosed by the dashed line in general formula (II) is
  • the structure may include the following structure.
  • * indicates a linking portion.
  • n is an integer of 1 or more. There is no particular upper limit, and for example, it can be an integer of 30 or less, preferably an integer of 20 or less, more preferably an integer of 15 or less, and even more preferably an integer of 10 or less. In other words, m can be an integer from 1 to 30, preferably an integer of 1 to 20, more preferably an integer of 1 to 15, and even more preferably an integer of 1 to 10.
  • M represents a fluorescent moiety, a biologically active substance moiety, a prodrug moiety, or a radioisotope-containing moiety, with the proviso that at least two of M represent fluorescent moieties having equivalent light absorption properties.
  • the phosphor part (hereinafter also referred to as phosphor part M) that can be taken as M can be used without any particular limitation as long as it is a structural part made of an organic compound that exhibits fluorescence.
  • the phosphor part M may also be a structural part in which the structural part made of an organic compound that exhibits fluorescence further has a linking group.
  • a linking group is not particularly limited, but may be, for example, the linking group ZZZ described below.
  • a compound in which the phosphor part M is bonded to L2 or L5 by this linking group ZZZ is preferably exemplified.
  • Preferred examples of the phosphor portion M include structural portions made of at least one dye selected from the group consisting of xanthene dyes, rhodamine dyes, coumarin dyes, cyanine dyes, pyrene dyes, oxazine dyes, squarylium dyes, pyridyloxazole dyes, and pyrromethene dyes.
  • xanthene dyes As the above-mentioned xanthene dyes, rhodamine dyes, coumarin dyes, cyanine dyes, pyrene dyes, oxazine dyes, squarylium dyes, pyridyloxazole dyes and pyrromethene dyes, dyes that are commonly known as these dyes can be used without any particular limitation.
  • the phosphor portion M is preferably a structural portion made of a pyrromethene dye.
  • pyrromethene dyes include dipyrromethene boron complexes.
  • dipyrromethene boron complex a fluorescent compound represented by the general formula (1) or (4) described in WO 2019/230963 (dipyrromethene boron complex) and a compound represented by the general formula (1) described in WO 2021/100814 (dipyrromethene boron complex) can be used, and these descriptions can be incorporated by citation into this specification.
  • the dye constituting the phosphor portion M is incorporated so as not to have any substituent group capable of binding to a biological substance.
  • the phosphor portion M is preferably a structural portion made of a cyanine dye, and more preferably a structural portion made of a cyanine dye represented by the following general formula ( ⁇ ):
  • R 1 to R 4 each represent an alkyl group or —(CH 2 —CH 2 —O) b —R 21 , where b is an integer of 1 to 50, and R 21 represents an alkyl group.
  • R 11 to R 13 each represent a hydrogen atom, an alkyl group, an alkoxy group, an aryloxy group, an alkylthio group, an arylthio group, an amino group or a halogen atom, and adjacent groups may be bonded to each other to form a 5- or 6-membered ring.
  • R 22 to R 25 and R 32 to R 35 each represent a hydrogen atom, an alkyl group, an alkoxy group, an aryl group, a sulfo group, a sulfamoyl group, a carboxy group, an alkoxycarbonyl group, an aryloxycarbonyl group, an acyloxy group, a carbamoyl group, an acylamino group, a nitro group, or a halogen atom.
  • R 41 and R 42 each represent an alkyl group or -(CH 2 -CH 2 -O) b -R 21.
  • R 21 and b have the same meanings as R 21 and b above.
  • R 41 and R 42 may be bonded to each other to form a ring.
  • a is an integer from 1 to 3.
  • the fluorescent dye (F) having a structural part consisting of the cyanine dye represented by the general formula ( ⁇ ) as the fluorescent part M can be used as a compound that shows excellent fluorescence intensity in fluorescent labels that use an excitation light source with any wavelength (for example, near 600 nm, 700 nm, 800 nm) in the wavelength region of approximately 500 to 800 nm corresponding to the absorption excitation wavelength of the compound.
  • Fluorescence detection by near-infrared light excitation can suppress the autofluorescence of the membrane, i.e., background fluorescence, compared to detection by visible light excitation, so that the signal-to-noise ratio (S/N ratio) can be easily increased and the target protein can be detected with high sensitivity. Therefore, in recent years, the need for fluorescence detection WBs that utilize emission in the near-infrared region has been increasing in the analysis and research of trace proteins. However, in the near infrared region, the fluorescence quantum yield of fluorescent dyes is generally low, making it difficult to obtain a high signal amount.
  • R 1 to R 4 R 1 to R 4 each represent an alkyl group or —(CH 2 —CH 2 —O) b —R 21 .
  • the alkyl group which can be taken as R 1 to R 4 has the same meaning as the alkyl group in the substituent group T described later.
  • the unsubstituted alkyl group preferably has 1 to 6 carbon atoms, more preferably 1 to 4 carbon atoms, and even more preferably 1 or 2 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms in the alkyl group portion of the substituted alkyl group is preferably 1 to 10, more preferably 1 to 8, still more preferably 2 to 6, and particularly preferably 2 to 5.
  • the number of atoms constituting the longest chain of the substituted alkyl group is preferably 3 to 35, more preferably 3 to 25, still more preferably 3 to 15, and particularly preferably 3 to 11.
  • the "number of carbon atoms in the alkyl group moiety of a substituted alkyl group” means the number of carbon atoms excluding the substituent moiety of the alkyl group.
  • the "number of atoms constituting the longest chain of an alkyl group having a substituent” means the number of atoms including the substituent portion (i.e., the number of atoms obtained by subtracting the number of atoms in the molecular chain that does not constitute the longest chain from the total number of atoms).
  • Examples of the substituent that the alkyl group which can be represented by R 1 to R 4 may have include an alkoxy group, a carboxy group, an alkoxycarbonyl group, an acyloxy group, a carbamoyl group, an acylamino group, a sulfo group, a phosphono group, -(CH 2 -CH 2 -O) b -R 21 , and groups consisting of combinations of these substituents.
  • the alkyl group having a substituent that can be taken as R 1 to R 4 is not particularly limited as long as it is an alkyl group having the above-mentioned substituent.
  • the alkyl group which can be taken as R 1 to R 4 is preferably an unsubstituted alkyl group.
  • b means the average number of repetitions (also simply referred to as the number of repetitions), and is preferably 1 to 24, more preferably 1 to 12, further preferably 1 to 10, particularly preferably 4 to 10, and most preferably 4 to 8.
  • the average repeat number can be calculated from the average integral value by performing 1H -NMR measurement on the compound.
  • the average repeat number specified in the present invention means a number obtained by rounding off the average repeat number calculated by the above method to the first decimal place.
  • the alkyl group in R 21 may be any of the alkyl groups described above for R 1 to R 4 .
  • At least one of R 1 to R 4 contains a structure represented by -(CH 2 -CH 2 -O) b -, and it is more preferable that at least one of R 1 and R 2 and at least one of R 3 and R 4 contain a structure represented by -(CH 2 -CH 2 -O) b -. It is further preferred that all of the phosphor moieties M in the fluorescent dye (F) are structural moieties consisting of a cyanine dye represented by general formula ( ⁇ ), and that at least one of R 1 and R 2 and at least one of R 3 and R 4 contain a structure represented by -(CH 2 -CH 2 -O) b -.
  • the structure represented by the above-mentioned --(CH 2 --CH 2 --O) b -- is preferably introduced by taking --(CH 2 --CH 2 --O) b --R 21 as R 1 to R 4 .
  • the b in the above-mentioned —(CH 2 —CH 2 —O) b — has the same meaning as the b in the above-mentioned —(CH 2 —CH 2 —O) b —R 21 .
  • R 11 to R 13 each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group, an alkoxy group, an aryloxy group, an alkylthio group, an arylthio group, an amino group, or a halogen atom. Adjacent groups may be bonded to each other to form a 5- or 6-membered ring.
  • the alkyl group, alkoxy group, aryloxy group, alkylthio group, arylthio group, amino group and halogen atom which can be taken as R 11 to R 13 have the same meaning as the alkyl group, alkoxy group, aryloxy group, alkylthio group, arylthio group, amino group and halogen atom in the substituent group T described later, and the preferred ranges are also the same.
  • Examples of the substituent that the alkyl group, alkoxy group, aryloxy group, alkylthio group, arylthio group and amino group in R 11 to R 13 may have include the substituents in the substituent group T described below.
  • R 11 and R 13 carried by the carbon atom bonded to the indolenine ring are preferably a hydrogen atom.
  • R 12 and other R 13 are preferably a hydrogen atom or an alkyl group.
  • adjacent groups among R 12 to R 13 other than R 13 possessed by the carbon atom bonded to the indolenine ring i.e., adjacent groups among R 13 and R 12 other than R 13 possessed by the carbon atom bonded to the indolenine ring
  • the above 5- or 6-membered ring is formed at the center of the bond connecting the indoline ring and the indolenine ring.
  • the ring formed at the center of the bond connecting the indoline ring and the indolenine ring means a ring containing carbon atoms having the same number of bonding atoms from the indoline ring and the indolenine ring as ring-constituting atoms.
  • the phosphor moiety M becomes a monovalent structural moiety by removing one hydrogen atom from any one of R 1 to R 4 , R 11 to R 13 , R 22 to R 25 , R 32 to R 35 , R 41 or R 42 .
  • a monovalent structural moiety is formed by removing one hydrogen atom from a substituent which can be taken as R 1 to R 4 , R 11 to R 13 , R 22 to R 25 , R 32 to R 35 , R 41 or R 42
  • a monovalent structural moiety is formed by removing a hydrogen atom which can be taken as R 11 to R 13 , R 22 to R 25 or R 32 to R 35, and having a bond on the carbon atom to which R 11 to R 13 , R 22 to R 25 or R 32 to R 35 was bonded.
  • the phosphor moiety M preferably becomes a monovalent structural moiety by removing one hydrogen atom from the ring formed by the bonding of the R 41 and R 42 , or by removing one hydrogen atom from a substituent that can be R 12 (preferably R 12 on a carbon atom having the same number of bonding atoms from the indoline ring and the indolenine ring).
  • the alkyl group , alkoxy group, aryl group, sulfo group, sulfamoyl group, carboxy group, alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group, acyloxy group, carbamoyl group, acylamino group, nitro group and halogen atom which can be taken as R 22 to R 25 and R 32 to R 35 are respectively synonymous with the alkyl group, alkoxy group, aryl group, sulfo group, sulfamoyl group, carboxy group, alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group, acyloxy group, carbamoyl group, acylamino group, nitro group and halogen atom in the substituent group T described later.
  • the fused ring formed by adjacent groups among R 22 to R 25 and R 32 to R 35 bonding to each other is not particularly limited, and examples thereof include a naphthalene ring (a naphthalene ring formed together with the benzene ring to which R 22 to R 25 are bonded or the benzene ring to which R 32 to R 35 are bonded, by adjacent groups bonding to each other to form a benzene ring). From the viewpoint of suppressing association, it is preferable that adjacent groups among R 22 to R 25 and R 32 to R 35 are not bonded to each other and do not form a fused ring.
  • At least one of R 22 to R 25 and at least one of R 32 to R 35 have a hydrophilic group, and it is more preferable that at least one hydrophilic group is present for each of the rings to which R 22 to R 25 are bonded and the rings to which R 32 to R 35 are bonded.
  • the number of rings to which R 22 to R 25 are bonded is two, and the number of rings to which R 32 to R 35 are bonded is two, which means that it is more preferable that at least two of R 22 to R 25 and at least two of R 32 to R 35 have a hydrophilic group.
  • the upper limit is not particularly limited as far as possible in terms of structure, and can be appropriately adjusted according to the number of hydrophilic groups in the entire compound described later.
  • the hydrophilic group is not particularly limited, but examples thereof include an alkoxy group, a carboxy group, a sulfo group, and a phosphono group each having a substituent, with a sulfo group being preferred.
  • R 22 to R 25 and R 32 to R 35 are preferably a hydrogen atom, an alkyl group, a sulfo group, a nitro group or a halogen atom, more preferably a hydrogen atom, an alkyl group, a sulfo group or a halogen atom, and further preferably a hydrogen atom, an alkyl group or a sulfo group.
  • R 41 and R 42 each represent an alkyl group or -(CH 2 -CH 2 -O) b -R 21.
  • R 21 and b have the same meanings as R 21 and b above.
  • substituents that the alkyl group in R 41 and R 42 may have include an alkoxy group, a carboxy group, an alkoxycarbonyl group, an acyloxy group, a carbamoyl group, an acylamino group, a sulfo group, and a phosphono group, as well as groups consisting of combinations of these substituents.
  • the alkyl group which can be represented by R 41 and R 42 has the same meaning as the alkyl group in the substituent group T described later.
  • the unsubstituted alkyl group preferably has 1 to 6 carbon atoms, more preferably 1 to 4 carbon atoms, and even more preferably 1 to 3 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms in the alkyl group portion of the substituted alkyl group is preferably 1 to 10, more preferably 1 to 8, still more preferably 1 to 7, still more preferably 1 to 6, and still more preferably 1 to 5.
  • the number of atoms constituting the longest chain of the substituted alkyl group is preferably 3 to 14, more preferably 3 to 12, and still more preferably 3 to 10.
  • L x and Ly each represent an alkylene group or —(CH 2 —CH 2 —O) b -alkylene-*.
  • * represents the bonding position with U.
  • the linking group U represents a divalent linking group having 1 to 100 atoms.
  • R 1 to R 4 , R 11 to R 13 , R 22 to R 25 , R 32 to R 35 , b and a have the same meanings as R 1 to R 4 , R 11 to R 13 , R 22 to R 25 , R 32 to R 35 , b and a in general formula ( ⁇ ) above, and unless otherwise specified, the preferred ranges are also the same.
  • b is preferably 1 to 10, more preferably 1 to 8, and the number of carbon atoms in the alkylene group portion can be preferably the same as the number of carbon atoms in the alkyl group portion of the alkyl group having a substituent in R 41 and R 42 .
  • the alkylene moiety of the alkylene group which can be used as the linking group U preferably has 1 to 10 carbon atoms, more preferably 1 to 8 carbon atoms, further preferably 1 to 7 carbon atoms, particularly preferably 1 to 6 carbon atoms, and most preferably 1 to 5 carbon atoms.
  • the "number of carbon atoms in the alkylene moiety of the alkylene group” means the number of carbon atoms excluding any substituent moiety that the alkylene group has.
  • R 50 is preferably a hydrogen atom.
  • the linking group U is preferably bonded to the alkylene groups of L x and L y via -O-, -NR 50 -, -COO-, -CONR 50 - or -SO 2 NR 50 - constituting the linking group U.
  • the linking group U is more preferably such that the linking portion between L x and L y is -O-, -NR 50 -, -COO-, -CONR 50 - or -SO 2 NR 50 -, and the linking portions are each linked to a divalent linking group by an alkylene group.
  • the linking group U preferably becomes a monovalent structural moiety, i.e., a phosphor moiety M, by removing one hydrogen atom.
  • one hydrogen atom may be removed from any of the substituents to form a monovalent structural portion (phosphor portion M).
  • one hydrogen atom is removed from the linking group U to form a monovalent structural portion, or that one hydrogen atom is removed from a substituent that can be R 12 (preferably R 12 on a carbon atom having the same number of bonding atoms from the indoline ring and the indolenine ring) to form a monovalent structural portion.
  • R 12 preferably R 12 on a carbon atom having the same number of bonding atoms from the indoline ring and the indolenine ring
  • the description of the substituents in the general formulae ( ⁇ ) and ( ⁇ ) refers to the substituents that apply only to the general formulae ( ⁇ ) and ( ⁇ ).
  • the physiologically active substance portion that can be used as M can be any structural portion consisting of a physiologically active substance, without any particular limitation.
  • physiologically active substances include vitamins, coenzymes, hormones, antibiotics, neurotransmitters, cytokines, and the like.
  • the prodrug moiety that can be used as M can be any structural part consisting of a compound that is metabolized in vivo and converted into a physiologically active substance.
  • the description in paragraph [0003] of JP-A-2020-105187 (prodrug form of 2-pyrrolinodoxorubicin) can be applied as the prodrug.
  • the radioisotope-containing moiety that can be used as M can be any structural part containing a radioisotope that can be used in the medical field, without any particular limitation. Examples of radioisotopes include, but are not limited to, iodine-131, indium-111, yttrium-90, lutetium-177, and copper-64.
  • substituents which the alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, acyl group, amino group, alkoxy group, aryl group and heteroaryl group which can constitute Y 1 to Y 3 , Z 1 to Z 3 or W 1 to W 3 may have may be further substituted with a substituent selected from the substituent group T described later, for example, an anionic group.
  • Condition (Z2) the above t is an integer of 1 or more, and the above Z2 is a group containing an anionic group.
  • "at least one of Z 1 to Z 3 is an alkyl group containing an anionic group” means that at least one of the above conditions (Z1) to (Z3) is satisfied after replacing "a group containing an anionic group” in the above conditions (Z1) to (Z3) with "an alkyl group containing an anionic group”.
  • s, t and u are integers of 0 or more. There is no particular limit to the upper limit of s, t, and u, and they can be, for example, 20 or less, preferably 10 or less, and more preferably 5 or less. In particular, s, t, and u are preferably integers of 0 or 1. In addition, when a structure can be classified into both a structure grouped by t and a structure grouped by u, the structure is classified preferentially into a structure grouped by u.
  • R 6A and R 7A represent a hydrogen atom, a hydroxy group, a sulfanyl group, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, an alkoxy group, a heteroaryl group, an amino group, an acyl group, an anionic group, a cationic group, or Q, provided that at least one of R 6A and R 7A represents Q.
  • L8 and L9 each represent a linking group.
  • R A represents a hydrogen atom or a substituent.
  • At least one of the above R 6A and R 7A is Q, and the shortest number of atoms in the linking group linking this Q to >C ⁇ O or > NY4 (the shortest number of atoms linking > NY4 and R 6A when R 6A is Q, and the shortest number of atoms linking >C ⁇ O and R 7A when R 7A is Q) is preferably 3 to 60, more preferably 12 to 40, and more preferably 15 to 40.
  • R 101 to R 103 which are not -L 10 -M or -L 11 -M each represent a hydrogen atom, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, a heteroaryl group, an acyl group, -NR 8 R 9 , -OR 10 or an anionic group.
  • L 10 and L 11 each represent a single bond or a divalent linking group.
  • n1 is an integer of 2 or more.
  • R 6 to R 10 , X 1 to X 3 , M and m have the same meanings as R 6 to R 10 , X 1 to X 3 , M and m in the above-mentioned formula (II).
  • R 101 is preferably an alkyl group
  • R 102 and R 103 are preferably hydrogen atoms.
  • at least one is >CR 102 R 103
  • more preferably at least one is >CR 102 R 103 and the remaining one is -O-, -S- or >CR 102 R 103
  • further preferably both are >CR 102 R 103 .
  • > NR101 or >CR102R103 having -L10 -M as any one of R101 to R103 is preferably a group in which R103 is -L10 -M and is represented by > CR102R103 , and more preferably a group in which R102 is a hydrogen atom, R103 is -L10 - M and is represented by > CR102R103 .
  • >NR 101 or >CR 102 R 103 having -L 11 -M as any one of R 101 to R 103 is preferably a group in which R 103 is -L 11 -M and is represented by >CR 102 R 103 , and more preferably a group in which R 102 is a hydrogen atom, R 103 is -L 11 -M and is represented by >CR 102 R 103 .
  • the group having -L 10 -M is not particularly limited, but is preferably X 5 .
  • the group having -L 11 -M is not particularly limited, but is preferably X 8 .
  • the alkylene group, alkenylene group, alkynylene group, arylene group, heteroarylene group, and >NR A which can constitute L10 and L11 can be the same as the alkylene group, alkenylene group, alkynylene group, arylene group, heteroarylene group, and >NR A which can constitute L2 and L5 described above.
  • L x1 is a single bond or a group consisting of one or a combination of two or more of an alkylene group, an alkenylene group, an alkynylene group, an arylene group and a heteroarylene group
  • n1 is an integer of 2 or more.
  • the linker main chain connecting the two phosphor moieties is more rigid than that of any of the compounds represented by the above general formulas (III) to (V), and dye association can be more effectively suppressed, so that the lower limit of n1 is preferably an integer of 3 or more, and more preferably an integer of 5 or more in terms of obtaining a sufficient effect of improving the fluorescence intensity.
  • the upper limit of n1 is, for example, preferably an integer of 36 or less, more preferably an integer of 24 or less, and even more preferably an integer of 18 or less. That is, n1 is preferably an integer of 3 to 36, and more preferably an integer of 5 to 24.
  • R 6A and R 7A represent a hydrogen atom, a hydroxy group, a sulfanyl group, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, an alkoxy group, a heteroaryl group, an amino group, an acyl group, an anionic group, a cationic group, or Q, provided that at least one of R 6A and R 7A represents Q.
  • L 12 and L 13 each represent a linking group.
  • Each of na and nb is an integer of 0 or more.
  • the "shortest number of linked atoms of L13" means, when na is an integer of 1 or more, the number of atoms constituting the shortest chain connecting N directly bonded to L13 and R6A among Ns shown in the structure grouped by ( ) na , and when na is 0, means the number of atoms constituting the shortest chain connecting N directly bonded to L13 and R6A among Ns shown in the structure grouped by ( ) m .
  • L 12 is --NHC 2 H 4 -- and R 7A is --COOH, so that the shortest number of connecting atoms in L 12 is 3.
  • R 6A and R 7A is Q.
  • the shortest number of linked atoms in L 12 and the shortest number of linked atoms in L 13 are preferably 1-5, and more preferably 1-4.
  • na and nb are an integer of 0 or more.
  • na is preferably an integer of 0 to 20, more preferably an integer of 2 to 20, and further preferably an integer of 4 to 18.
  • nb is preferably an integer of 0 to 20, more preferably an integer of 2 to 20, and further preferably an integer of 4 to 18.
  • the lower limit of nb may be 0, and in this case, nb is preferably an integer of 0 to 20, and more preferably an integer of 0 to 18.
  • na is preferably an integer of 0 to 20, more preferably an integer of 0 to 10, and even more preferably an integer of 0 to 5.
  • nb is preferably an integer of 0 to 20, more preferably an integer of 0 to 10, and even more preferably an integer of 0 to 5.
  • the fluorescent dye (F) preferably contains at least one of the substituents represented by Q above, that is, a carboxy group, a substituent capable of binding to a biological substance, or a substituent capable of binding to a solid support.
  • a fluorescent dye such as the fluorescent dye (F) can be bound to a biological substance via a carboxy group or a substituent capable of binding to a biological substance, as described below, to obtain a desired fluorescent dye-labeled biomolecule.
  • the carboxy group can be easily induced to a substituent capable of binding to a biological substance by a conventional method.
  • the fluorescent dye can be bound to a solid support such as a microparticle by a carboxy group or a substituent capable of binding to a solid support described below, to obtain the desired labeled microparticles, etc.
  • the microparticles are not particularly limited, but include small particles useful for binding to the fluorescent dye, including non-polymer beads such as glass beads and magnetic beads, and polymer beads.
  • the microparticles include polystyrene beads.
  • the small particles are not particularly limited as long as they are of a size commonly used in fluorescent labeling, but typically have an average particle size of 10 nm to 10 ⁇ m.
  • the carboxy group can be easily induced to a substituent capable of binding to a solid support by a conventional method.
  • fluorescent dyes F
  • the present invention is not limited to these compounds.
  • the sulfo group and the phosphonooxy group may have a salt structure due to dissociation of hydrogen ions.
  • Dye represents the fluorescent portion.
  • a fluorescent dye such as the fluorescent dye (F) can be bound to a biological substance such as a protein (including a peptide), an amino acid, a nucleic acid, a nucleotide, a sugar chain, or a lipid via at least one substituent that is capable of binding to a biological substance possessed by the compound, and can be used as a fluorescent dye-labeled biological molecule.
  • the substituent capable of binding to a biological material can be used without any particular limitation as long as it is a group that acts (including attachment) or binds to a biological material, and examples thereof include the substituents described in WO 2002/026891, etc.
  • the fluorescent dye (F) having at least one substituent capable of binding to a biological substance include the above-mentioned exemplary compounds of the fluorescent dye (F) in which the carboxy group is appropriately replaced with the above-mentioned substituent capable of binding to a biological substance.
  • the present invention is not limited to these compounds.
  • groups having a dissociable hydrogen atom such as a carboxy group and a sulfo group, the hydrogen atom may dissociate to form a salt structure.
  • a fluorescent dye such as the fluorescent dye (F) can be bound to a solid support such as the above-mentioned microparticles via at least one substituent of the compound that can be bound to a solid support, and can be used as a solid support reagent.
  • the substituent capable of binding to a solid support can be used without any particular limitation as long as it is a group that acts (including attachment) or binds to a solid support, and preferred examples thereof include the substituents exemplified above as the substituent capable of binding to a biological substance, etc.
  • preferred examples thereof include an NHS ester structure (N-hydroxysuccinimide ester), a succinimide structure, and a maleimide structure.
  • the fluorescent dye (F) having at least one substituent capable of binding to a solid support include the above-mentioned exemplary compounds of the fluorescent dye (F) in which the carboxy group is appropriately replaced with a substituent capable of binding to the solid support. Note that the present invention is not limited to these compounds. For example, in these specific examples, for groups having a dissociable hydrogen atom such as a carboxy group and a sulfo group, the hydrogen atom may dissociate to form a salt structure.
  • the fluorescent dye (F) can be synthesized by a conventional method. For example, it can be synthesized based on peptide synthesis such as solid-phase peptide synthesis, and a method using an automatic peptide synthesizer described in International Publication No. 2018/174078 can also be preferably applied.
  • the fluorescent body portion, the physiologically active substance portion, the prodrug portion, and the radioisotope-containing portion can also be synthesized based on a conventional method and introduced into the fluorescent dye (F).
  • Compounds having a substituent capable of binding to a biological substance can also be synthesized by a conventional method, for example, Bioconjugate Techniques (Third Edition, by Greg T. Hermanson).
  • a fluorescent dye-labeled biomolecule is a substance in which a fluorescent dye and a biological material are bound together.
  • a fluorescent dye (F) has fluorescence due to the fluorescent body part and exhibits excellent fluorescence intensity, and therefore can be preferably used for a fluorescent dye-labeled biomolecule.
  • the binding between the fluorescent dye and the biological material may be in the form of a direct binding between the fluorescent dye and the biological material, or may be in the form of a linkage between the fluorescent dye and the biological material via a linking group.
  • the fluorescent dye-labeled biomolecules obtained from the fluorescent dye (F) can exhibit excellent fluorescence intensity, and the fluorescence emitted from the fluorescent dye-labeled biomolecules excited by light irradiation can be stably detected. For this reason, the fluorescent dye-labeled biomolecules obtained from the fluorescent dye (F) can be suitably used in combination with the fluorescence intensity enhancer of the present invention.
  • the target biological material may be a virus, and the antigen of this virus is not particularly limited, but examples include hepatitis virus antigens such as antigens of hepatitis C and B viruses, p24 protein antigen of HIV virus, pp65 protein antigen of CMV (cytomegalovirus), E6 and E7 protein antigens of HPV (human papillomavirus), etc.
  • hepatitis virus antigens such as antigens of hepatitis C and B viruses, p24 protein antigen of HIV virus, pp65 protein antigen of CMV (cytomegalovirus), E6 and E7 protein antigens of HPV (human papillomavirus), etc.
  • the target biological material and the primary biological material may be directly bound to each other, or may be bound to each other via another biological material different from the target biological material and the primary biological material.
  • the primary biological material in the conjugate b and the secondary biological material in the fluorescent dye-labeled biological molecule B may be directly bound to each other, or may be bound to each other via another biological material different from the primary biological material and the secondary biological material.
  • a fluorescent dye-labeled biomolecule obtained from the fluorescent dye (F) can be used as a fluorescent dye-labeled antibody in either the direct method or the indirect method, and is preferably used as a fluorescent dye-labeled antibody in the indirect method.
  • the binding between the fluorescent dye-labeled biomolecule or the like and the target biological substance is not particularly limited and can be carried out according to a conventional method.
  • the wavelength of the light irradiated to excite the fluorescent dye-labeled biomolecule is not particularly limited as long as it is a wavelength capable of exciting the fluorescent dye-labeled biomolecule. In general, a wavelength of 300 to 1000 nm is preferred, and a wavelength of 400 to 800 nm is more preferred.
  • the light source used in (iii) or (vii) above is not particularly limited as long as it emits light with a wavelength capable of exciting the fluorescent dye-labeled biomolecule, and for example, various laser light sources can be used.
  • various optical filters can be used to adjust the emission wavelength from the light source to one having a preferred wavelength range, or to one that can detect only the fluorescence from the fluorescent dye-labeled biomolecule.
  • groups alkoxy groups, alkylthio groups, alkenyloxy groups, etc.
  • groups that can have a cyclic structure alkyl groups, alkenyl groups, alkynyl groups, etc.
  • compounds that contain groups that can have a cyclic structure.
  • the lower limit of the number of atoms of the group that forms the cyclic skeleton is 3 or more, and preferably 5 or more, regardless of the lower limit of the number of atoms specifically described below for groups that can have this structure.
  • substituent group T a group having a linear or branched structure and a group having a cyclic structure are sometimes described separately, for example, an alkyl group and a cycloalkyl group, in order to clarify the difference.
  • the aryl group has 6 to 40 carbon atoms, more preferably 6 to 30 carbon atoms, even more preferably 6 to 26 carbon atoms, and particularly preferably 6 to 10 carbon atoms), a cycloalkyl group (preferably 3 to 20 carbon atoms), a cycloalkenyl group (preferably 5 to 20 carbon atoms), an aryl group (which may be a monocyclic group or a condensed ring group (preferably a condensed ring group of 2 to 6 rings). If the condensed ring group, it is composed of a 5- to 7-membered ring, etc.
  • the aryl group preferably has 6 to 40 carbon atoms, more preferably 6 to 30 carbon atoms, even more preferably 6 to 26 carbon atoms, and particularly preferably 6 to 10 carbon atoms), a heterocyclic group (a It has at least one nitrogen atom, oxygen atom, sulfur atom, phosphorus atom, silicon atom or selenium atom as a constituent atom, and may be a monocyclic group or a condensed ring group (preferably a condensed ring group of 2 to 6 rings). In the case of a monocyclic group, the number of ring members is preferably 5 to 7, more preferably 5 or 6. The number of carbon atoms in the heterocyclic group is preferably 2 to 40, more preferably 2 to 20.
  • Heterocyclic groups include aromatic heterocyclic groups (heteroaryl groups) and aliphatic heterocyclic groups (aliphatic heterocyclic groups). ), alkoxy group (preferably having 1 to 20 carbon atoms, more preferably having 1 to 12 carbon atoms), alkenyloxy group (preferably having 2 to 20 carbon atoms, more preferably having 2 to 12 carbon atoms), alkynyloxy group (preferably having 2 to 20 carbon atoms, more preferably having 2 to 12 carbon atoms), cycloalkyloxy group (preferably having 3 to 20 carbon atoms), aryloxy group (preferably having 6 to 40 carbon atoms, more preferably having 6 to 26 carbon atoms, even more preferably having 6 to 14 carbon atoms), heterocyclic oxy group (preferably having 2 to 20 carbon atoms), polyalkyleneoxy group,
  • the anionic group may be any group having an anion.
  • examples of such anionic group include a carboxy group, a phosphono group (phosphonic acid group, -PO(OH) 2 ), a phosphonooxy group (phosphate group, -OPO(OH) 2 ), and a sulfo group, with the phosphono group, phosphonooxy group, and sulfo group being preferred, and the phosphonooxy group and sulfo group being more preferred.
  • the anionic group may have an ionic structure in which a hydrogen ion is dissociated, or may have a salt structure.
  • EO p The following structure, where p in EO p is the average number of repetitions, provided that EO p is bonded to a nitrogen atom or an oxygen atom on the carbon atom side, and * indicates a bond.
  • Example 1 The above compounds (1-NHS) to (4-NHS) were evaluated for their fluorescent labeling rate and Western blotting fluorescence intensity.
  • the fluorescence labeling rate was calculated using a general method as shown below. The description in brackets [ ] indicates a unit, and [-] means that there is no unit. In this test, the protein refers to anti-rabbit IgG antibody for compounds (1) to (4).
  • Fluorescent labeling rate fluorescent dye concentration / protein concentration
  • the fluorescent dye concentration means the total molar concentration [M] of the labeled fluorescent dyes
  • the protein concentration means the molar concentration [M] of the fluorescently labeled protein, and each is calculated by the following formula.
  • Dye max Absorption at the maximum absorption wavelength of the fluorescent dye [-] ⁇ dye : Molar extinction coefficient of the fluorescent dye [M ⁇ 1 cm ⁇ 1 ] IgG 280 : Absorption of fluorescently labeled protein at 280 nm [-] Dye 280 : Fluorescent dye absorption at 280 nm [-] ⁇ protein : Molar extinction coefficient of protein [M ⁇ 1 cm ⁇ 1 ] CF (Correction Factor); Dye 280 / Dye max [-]
  • the gel after electrophoresis was overlaid on a nitrocellulose membrane (Cytiva), and protein transfer was performed at a constant voltage of 12 V for 1 hour.
  • the membrane was then immersed in Western Blot Blocking Buffer (Fish Gelatin) (TAKARA Bio) and allowed to stand at 4 ° C. for 12 hours.
  • TBS-T buffer manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • TBS-T buffer diluted 5000 times
  • the integral value of the fluorescence intensity in the range of 810-840 nm in the fluorescence wavelength of a 3.24 mm 2 fraction was measured in the region where the protein band was not detected in the lower part of the measurement region of the signal fluorescence intensity (the low mass side relative to the measurement region of the signal fluorescence intensity), and this was taken as the "noise fluorescence intensity".
  • compound (4)-IgG or Alexa Fluor Plus 800 (both diluted 25,000 times) was used as the fluorescent dye-labeled antibody, the measurement was performed in the same manner as when compound (1)-IgG (diluted 25,000 times) was used.
  • the integral value of the fluorescence intensity in the range of fluorescence wavelengths of 710 to 730 nm of a 3.24 mm2 fraction in the region where the protein band was detected was measured and defined as the "signal fluorescence intensity.”
  • the integrated value of the fluorescence intensity in the fluorescence wavelength range of 710 to 730 nm of a 3.24 mm2 fraction was measured and used as the "noise fluorescence intensity.”
  • c11, c21, c31, c41, c51, or c61 in which TBS containing no water-soluble compound was used for washing instead of TBS in which a water-soluble compound was dissolved, was set as a reference value, and the ratio to this reference value (noise fluorescence intensity of fluorescent dye-labeled antibody/reference value) was calculated and evaluated based on the following evaluation criteria.
  • all evaluations were performed by comparing transferrin (Merck) at the same dilution concentration (1 ng/10 ⁇ L, 0.3 ng/10 ⁇ L, or 0.1 ng/10 ⁇ L). No difference was observed in the ratio value to the above-mentioned standard value depending on the dilution concentration of transferrin (Merck).
  • G The ratio of signal fluorescence intensity to the reference value is 1.4 times or more and less than 1.5 times.
  • H The ratio of signal fluorescence intensity to the reference value is 1.3 times or more and less than 1.4 times.
  • I The ratio of signal fluorescence intensity to the reference value is 1.2 times or more and less than 1.3 times.
  • J The ratio of signal fluorescence intensity to the reference value is 1.1 times or more and less than 1.2 times.
  • B The ratio of noise fluorescence intensity to the reference value is 1.2 times or more and less than 1.3 times.
  • C The ratio of noise fluorescence intensity to the reference value is 1.3 times or more and less than 1.4 times.
  • D The ratio of noise fluorescence intensity to the reference value is 1.4 times or more and less than 1.5 times.
  • E The ratio of noise fluorescence intensity to the reference value is 1.5 times or more and less than 1.6 times.
  • F The ratio of noise fluorescence intensity to the reference value is 1.6 times or more and less than 1.7 times.
  • thermogravimetry and differential thermal analysis TG-DTA
  • TG-DTA simultaneous thermogravimetry and differential thermal analysis
  • the melting point was determined as the temperature at the intersection of a straight line extending from the low-temperature baseline of the DTA curve to the high-temperature side and a tangent drawn at the point where the gradient of the curve of the stepwise change in melting point is maximum.
  • the values measured by changing the upper heating temperature setting from 200°C to a temperature at which the melting point can be measured are recorded.
  • the signal fluorescence intensity can be increased (see Nos. 101 to 113 and 116 in relation to Nos. 114 and 115), when the water-soluble compound has a melting point of 80° C. or higher, the signal fluorescence intensity can be further increased (see Nos. 103 to 113 and 116 in relation to Nos. 101 and 102), and when the water-soluble compound is a polyol compound or a betaine compound, the noise fluorescence intensity can be suppressed (see Nos.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

融点が５０℃以上である水溶性化合物を含む蛍光強度増強剤、この蛍光強度増強剤を用いた蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、並びに、この蛍光強度増強剤を含む蛍光検出用キット。

Description

蛍光強度増強剤、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、蛍光検出用キット
　本発明は、蛍光強度増強剤、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、蛍光検出用キットに関する。
　生体分子、細胞又は組織等の生体を構成する物質の動態又は機能等を解析するバイオイメージング技術が知られている。タンパク質、核酸もしくは低分子等の物質、又は、それらの複合体の動態、相互作用、濃度変化又は機能変化等を観察ないし解析する目的で、検出対象物質に対して結合性の生体分子（抗体等）を蛍光色素で標識した蛍光色素標識生体分子（蛍光色素標識抗体等）を用い、蛍光標識により可視化して情報を得る蛍光イメージングが多用されている。例えば、生体由来の試料をメンブレン上に転写し、タンパク質混合物から特定のタンパク質を検出するウエスタンブロッティング、細胞内の目的物質の動態を細胞の状態のまま観察する細胞染色等でも、上記蛍光色素標識生体分子を用いた蛍光イメージングが利用されている。
　上記蛍光イメージングにおいては、一般的には有機蛍光色素分子が用いられる。通常、複数の有機蛍光色素分子を生体分子１分子に結合させた蛍光色素標識生体分子を用いることにより、輝度（蛍光強度）を所望のレベルへと高めている。しかし、シアニン色素、ローダミン色素等の蛍光性を示す有機色素の大部分は、高い平面性を有する芳香族発色団を有するため、色素間での相互作用を生じやすく、その結果、標識後の色素間における自己会合等の相互作用による蛍光強度の低下が生じやすい。また、生体分子１分子あたりの有機蛍光色素の分子数（蛍光標識率：ＤＯＬ）が増加するにつれて、自己会合等によって蛍光強度がより低下する傾向にある。
　また、蛍光色素標識生体分子と他の分子とを共存させて蛍光イメージングする技術が知られている。例えば、特許文献１には、クロロトキシンペプチドとシアニン色素のコンジュゲート化合物を腫瘍のイメージング用途に用いること、このコンジュゲート化合物の製錠に用いる組成物中に、マンニトールを含有させることが記載されている。特許文献２には、８９Ｚｒ標識された抗原結合コンストラクトを対象に投与する方法が腫瘍のイメージング用途に用いられることが記載されており、この抗原結合コンストラクトの製錠に用いる組成物中に、スクロースを含有させることが記載されている。特許文献３には、細胞を固定剤で固定し、シッフ塩基還元剤で還元し、膜の安定化化合物としてのトレハロースの存在下で乾燥させてなる、イムノアッセイにおける対照または標準として有用な乾燥哺乳動物細胞が記載されている。
特表２０１６－５３４１４７号公報 特表２０２２－５０１４０２号公報 特開平０５－１３３９５７号公報
　本発明者らは、これまで、蛍光色素標識生体分子中の蛍光色素間の自己会合を抑制する技術として、蛍光色素標識生体分子に導入する有機蛍光色素分子の化学構造を調節することによって自己会合を抑制する技術の検討を重ねてきた。しかし、この技術では、特定の化学構造を有する有機蛍光色素分子では自己会合を抑制できるが汎用性がない。そのため、蛍光イメージングおいて、より汎用的に使用可能な技術として、蛍光色素標識生体分子によって蛍光標識された標的生体物質に作用させて自己会合を抑制し、蛍光強度を増強させる技術の開発が求められている。
　すなわち、本発明は、蛍光標識された標的生体物質に作用させることにより、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度を増強させることができる、蛍光強度増強剤を提供することを課題とする。また本発明は、この蛍光強度増強剤を用いた、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、この蛍光強度増強剤を含む蛍光検出用キットを提供することを課題とする。
　本発明者らが検討を重ねた結果、マンニトール、スクロース、トレハロース等の融点が５０℃以上である水溶性化合物を、蛍光標識された標的生体物質に作用させることにより、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度を増強させることができることがわかってきた。
　すなわち、本発明の上記課題は、下記の手段によって解決された。
〔１〕
　融点が５０℃以上である水溶性化合物を含む、蛍光強度増強剤。
〔２〕
　上記水溶性化合物の含有量が４．５質量％以上である、〔１〕に記載の蛍光強度増強剤。
〔３〕
　上記水溶性化合物が塩構造を含まない、〔１〕又は〔２〕に記載の蛍光強度増強剤。
〔４〕
　上記水溶性化合物がポリオール化合物又はベタイン化合物である、〔１〕～〔３〕のいずれか１つに記載の蛍光強度増強剤。
〔５〕
　上記水溶性化合物の含有量が２０質量％以上である、〔１〕～〔４〕のいずれか１つに記載の蛍光強度増強剤。
〔６〕
　上記融点が８０℃以上である、〔１〕～〔５〕のいずれか１つに記載の蛍光強度増強剤。
〔７〕
　溶液状である、〔１〕～〔６〕のいずれか１つに記載の蛍光強度増強剤。
〔８〕
　蛍光イメージング用である、〔１〕～〔７〕のいずれか１つに記載の蛍光強度増強剤。
〔９〕
　〔１〕～〔８〕のいずれか１つに記載の蛍光強度増強剤を、蛍光標識された標的生体物質に作用させることを含む、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法。
〔１０〕
　〔１〕～〔８〕のいずれか１つに記載の蛍光強度増強剤を、蛍光標識された標的生体物質に作用させて、この蛍光標識からの蛍光強度を増強させることを含む、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法。
〔１１〕
　下記（ａ）及び（ｂ）を含む、蛍光検出用キット。
（ａ）融点が５０℃以上である水溶性化合物を含む、蛍光強度増強剤。
（ｂ）蛍光色素を含む蛍光色素標識生体分子作製用試薬、又は、蛍光色素標識生体分子。
　本発明において、特定の符号又は式で表示された置換基、連結基もしくは構造単位等（以下、置換基等という）が複数あるとき、又は、複数の置換基等を同時に規定するときには、特段の断りがない限り、それぞれの置換基等は互いに同一でも異なっていてもよい。このことは、置換基等の数の規定についても同様である。また、複数の置換基等が近接するとき（特に、隣接するとき）には、特段の断りがない限り、それらが互いに連結して環を形成していてもよい。また、特段の断りがない限り、環、例えば脂環、芳香族環及びヘテロ環は、さらに縮環して縮合環を形成していてもよい。
　例えば、本発明において、後記一般式（Ｉ）で表される構造は、下記一般式（ｉ）で表される構造がｎ個（ｎは２以上の整数）連なっていることを意味する。この場合、ｎ個の一般式（ｉ）で表される構造は、互いに同一でも異なっていてもよい。なお、下記一般式（ｉ）中におけるＸ１～Ｘ３は、後記一般式（Ｉ）におけるＸ１～Ｘ３と同義である。このことは、（　）ｓで括られる構造、（　）ｔで括られる構造、（　）ｕで括られる構造、（　）ｍで括られる構造、（　）ｎ１で括られる構造、（　）ｎａで括られる構造、及び、（　）ｎｂで括られる構造についても同様であり、ｓ個存在する構造は互いに同一でも異なっていてもよく、ｔ個存在する構造は互いに同一でも異なっていてもよく、ｕ個存在する構造は互いに同一でも異なっていてもよく、ｍ個存在する構造は互いに同一でも異なっていてもよく、ｎ１個存在する構造は互いに同一でも異なっていてもよく、ｎａ個存在する構造は互いに同一でも異なっていてもよく、ｎｂ個存在する構造は互いに同一でも異なっていてもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　本発明において、特段の断りがない限り、二重結合については、分子内にＥ型及びＺ型が存在する場合、そのいずれであっても、またこれらの混合物であってもよい。また、特段の断りがない限り、化合物中に不斉炭素原子又は不斉中心が存在する場合、立体配置はＲ，Ｓ表記におけるＲ及びＳのいずれであってもよく、また、それらの混合物であってもよい。
　本発明において、化合物及び置換基の表示については、化合物そのもの及び置換基そのもののほか、その塩、そのイオンを含む意味に用いる。例えば、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基（－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２）等の解離性アニオン性基は、水素イオンが解離してイオン構造を取っていてもよく、塩構造を取っていてもよい。すなわち、本発明において、「カルボキシ基」はカルボン酸イオン又はその塩の基を、「スルホ基」はスルホン酸イオン又はその塩の基を、「ホスホノ基」はホスホン酸イオン又はその塩の基を、それぞれ含む意味で使用する。上記塩構造を構成する際の１価若しくは多価のカチオンとしては、特に制限されず、無機カチオン、有機カチオン等が挙げられ、具体的には、Ｎａ＋、Ｌｉ＋及びＫ＋等のアルカリ金属のカチオン、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋及びＢａ２＋等のアルカリ土類金属のカチオン、並びに、トリアルキルアンモニウムカチオン、テトラアルキルアンモニウムカチオン等の有機アンモニウムカチオンが挙げられる。
　塩構造の場合、その塩の種類は１種類でもよく、２種類以上混在していてもよく、化合物中で塩型と遊離酸構造の基が混在していてもよく、また、塩構造の化合物と遊離酸構造化合物が混在していてもよい。
　本発明及び本明細書に記載の化合物は、いずれも中性の化合物である。本発明及び本明細書において、化合物が中性であるとは、電気的に中性であることを意味する。具体的には、化合物内の電荷を有する基又は対イオンによって、化合物全体として電荷が０となるように調整されている。例えば、蛍光体部を構成する色素の一例として挙げる一般式（α）で表されるシアニン色素は、Ｒ４２が結合する窒素原子の形式電荷は＋１であり、この形式電荷と対となるようにして、シアニン色素中又は蛍光色素（Ｆ）におけるその他の構造中のスルホ基等の解離性基がスルホン酸イオン等のイオン構造を有することによって、蛍光色素（Ｆ）は、化合物全体として電荷０の化合物となる。
　本発明で規定するシアニン色素に係る各一般式においては、化合物が有する正電荷を、特定の窒素原子が有する構造として便宜上特定して示している。ただし、本発明で規定するシアニン色素は共役系を有するため、実際には、上記窒素原子以外の他の原子が正電荷を採りうることもあり、化学構造の１つとして各一般式で表される構造を取りうるシアニン色素であれば、各一般式で表されるシアニン色素に包含される。このことは負電荷についても同様である。
　また、本発明の効果を損なわない範囲で、構造の一部を変化させたものを含む意味である。更に、置換又は無置換を明記していない化合物については、本発明の効果を損なわない範囲で、任意の置換基を有していてもよい意味である。このことは、置換基（例えば、「アルキル基」、「メチル基」、「メチル」などのように表現される基）及び連結基（例えば、「アルキレン基」、「メチレン基」、「メチレン」などのように表現される基）についても同様である。このような任意の置換基のうち、本発明において好ましい置換基は、後述の置換基群Ｔから選択される置換基である。
　本発明において、ある基の炭素数を規定する場合、この炭素数は、本発明ないし本明細書において特段の断りのない限りは、基全体の炭素数を意味する。つまり、この基がさらに置換基を有する形態である場合、この置換基を含めた全体の炭素数を意味する。
　また、本発明において「～」を用いて表される数値範囲は、「～」前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
　本発明の蛍光強度増強剤は、蛍光標識された標的生体物質に作用させることにより、上記蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度を増強することができる。
　また本発明の蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法は、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度を増強することができる。
　また本発明の蛍光検出用キットは、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度を増強することができる。
＜＜蛍光強度増強剤＞＞
　本発明の蛍光強度増強剤は、融点が５０℃以上である水溶性化合物を含む。以降、融点が５０℃以上である水溶性化合物を「水溶性化合物（Ｗ）」とも称す。
　本発明において「水溶性化合物」とは、２５℃において水に対する溶解度が１ｇ／１００ｍＬ－Ｈ２Ｏ以上である化合物、すなわち、２５℃において水１００ｍＬに対し１ｇ以上溶解する化合物を意味する。ここで、「溶解する」とは、液が均一透明になることを意味する。
　上記水溶性化合物（Ｗ）の２５℃における水に対する溶解度は、５～５００ｇ／１００ｍＬ－Ｈ２Ｏが好ましく、１０～４００ｇ／１００ｍＬ－Ｈ２Ｏがより好ましく、３０～３００ｇ／１００ｍＬ－Ｈ２Ｏが更に好ましい。
　本発明において、化合物の融点は、熱重量・示差熱同時測定装置を用い、後述の実施例に記載の方法により求められる値である。なお、化合物の融点が測定される限り、水溶性化合物（Ｗ）の分解が水溶性化合物（Ｗ）の融解に比べて低温で生じていてもよい。
　上記水溶性化合物（Ｗ）の融点は、５０℃以上であり、蛍光強度をより増強させる観点から、８０℃以上が好ましく、９０℃以上がより好ましい。本発明の効果を奏する限り上限値に特に制限はなく、例えば、６００℃以下とすることができ、５００℃以下が好ましく、４００℃以下がより好ましい。すなわち、水溶性化合物（Ｗ）の融点は、５０～６００℃が好ましく、８０～５００℃がより好ましく、９０～４００℃が更に好ましい。
　なお、本発明の蛍光強度増強剤が２種以上の水溶性化合物（Ｗ）を含有する場合には、上記水溶性化合物（Ｗ）の融点とは、本発明の蛍光強度増強剤に含有される各水溶性化合物（Ｗ）の単独での融点のうち、最も低い値とする。
　本発明の蛍光強度増強剤は、蛍光標識された標的生体物質に作用させることにより、融点が５０℃以上である水溶性化合物が有効成分として機能し、上記蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度を増強させることができる。この理由は定かではないが、本発明の蛍光強度増強剤に含有される融点が５０℃以上である水溶性化合物が、蛍光標識された標的生体物質中の蛍光色素標識生体分子間及び／又は蛍光色素間に介在することで、蛍光色素間の相互作用を抑制することにより、蛍光色素の会合による消光を抑制し、蛍光強度を増強させることができると考えられる。これに対して、融点が５０℃未満の水溶性化合物では、蛍光色素間の相互作用を抑制するよう、膜の形態で介在することができず、蛍光強度の増強効果が得られない。また、油溶性化合物等の水溶性化合物でない化合物では、蛍光標識された標的生体物質へ作用させる際に相分離が生じてしまい、蛍光色素間の相互作用を抑制するように蛍光色素間に介在することができず、蛍光強度の増強効果が得られない。
　上記水溶性化合物（Ｗ）は、水溶性基を含有することが好ましく、例えば、ヒドロキシ基、カルボキシ基、スルホ基、ホスホノ基、ホスホノオキシ基、アミノ基、アンモニオ基、ホスホニオ基等の１価の水溶性基、及び、エーテル結合、アミド結合等の２価の水溶性基のうちの少なくとも１種を含有することが好ましい。
　カルボキシ基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホノオキシ基は、前述の通り、水素イオンが解離してイオン構造を取っていてもよく、塩構造を取っていてもよい。
　上記水溶性化合物（Ｗ）としては、カルボキシ基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホノオキシ基のうちの少なくとも１種のアニオン性基とアンモニオ基及びホスホニオ基のうちの少なくとも１種のカチオン性基とを含む、ベタイン構造を有する化合物であるか、又は、ヒドロキシ基を含有する化合物であることがより好ましい。
　上記水溶性化合物（Ｗ）は、低分子化合物であってもよく、高分子化合物であってもよい。上記水溶性化合物（Ｗ）の分子量は、１０～３０万であることが好ましく、２０～２０万であることがより好ましく、３０～１０万であることが更に好ましい。なお、水溶性化合物が高分子化合物等の繰り返し構造を有する化合物である場合、上記分子量は、重量平均分子量を意味する。
　上記水溶性化合物（Ｗ）は、蛍光強度をより増強させる観点から、塩構造を含まないことが好ましい。塩構造とは、アニオン性基とカチオン性基とからなる化合物であって、アニオン性基とカチオン性基とが別の分子として存在している構造を意味する。具体的には、冒頭の塩構造に係る記載を適用することができる。
　なお、同一分子中にアニオン性基とカチオン性基とを有するベタイン構造は、上記塩構造には該当しない。
　本発明の蛍光強度増強剤を使用することによって、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度が増強されると共に、蛍光標識された標的生体物質が示す蛍光領域以外の領域における蛍光強度が高められてしまう場合がある。上記水溶性化合物（Ｗ）は、蛍光標識された標的生体物質が示す蛍光領域以外の領域における蛍光強度が高められることを抑制する観点から、ポリオール化合物又はベタイン化合物であることが好ましい。
　ポリオール化合物とは、分子中に２つ以上のヒドロキシ基を有する化合物を意味する。ポリオール化合物としては、例えば、グルコース、スクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、リビトール、ソルビトール、マンニトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、果糖（フルクトース）、１－ケストース、ニストース三水和物、フコース、ズルシトール、ガラクトオリゴ糖、４’－ガラクトシルラクトース、イソマルトオリゴ糖、ラクツロース、パラチニット、パラチノース一水和物、ラフィノース五水和物、アラビノース、ジヒドロキシアセトン二量体、ガラクトース、グリセルアルデヒド二量体、マンノース、リボース、キシロース、ラクトシルフルクトシド、エリトリトール、ズルコシドＡ、イソステビオール、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＦ、ルブソシド、ステビオシド、１－デオキシノジリマイシン、フコイダン、ラムノース、トレオース、アラビノース、リキソース、アロース、アルトロース、グロース、イドース、タロース、１，３－ジヒドロキシアセトン、エリトロース、キシルロース、リブロース、プシコース、ソルボース、タガトース、ポリスクロース、フルクトオリゴ糖等の糖化合物、ポリオキシアルキレングリコールが挙げられる。なお、糖化合物は、単糖類及び２つ以上の糖が結合した多糖類、糖アルコール、糖にエピクロロヒドリン等を共重合させた化学修飾糖等のいずれであってもよい。
　ベタイン化合物とは、ベタイン構造を有する化合物を意味し、カルボキシ基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホノオキシ基のうちの少なくとも１種のアニオン性基とアンモニオ基及びホスホニオ基のうちの少なくとも１種のカチオン性基とを含む、ベタイン構造を有する化合物が好ましく挙げられ、アニオン性基としてのカルボキシ基とカチオン性基としてのアンモニオ基とを含む、ベタイン構造を有する化合物がより好ましい。
　ベタイン化合物としては、例えば、トリメチルグリシンが挙げられる。
　また、上記水溶性化合物（Ｗ）としては、上述のポリオール化合物及びベタイン化合物以外に、ポリビニルピロリドン等の水溶性高分子も好ましく挙げられる。
　上記水溶性化合物（Ｗ）の含有量は、本発明の効果を奏する限り特に制限されず、例えば、１質量％以上とすることができ、２．５質量％以上が好ましく、蛍光強度をより増強させる観点から、４．５質量％以上がより好ましく、９質量％以上が更に好ましく、１２質量％以上が更に好ましく、１５質量％以上が更に好ましく、２０質量％以上が特に好ましく、２５質量％以上が最も好ましい。上限値に特に制限はなく、１００質量％以下とすることができる。
　なお、水溶性化合物（Ｗ）の含有量とは、本発明の蛍光強度増強剤中における水溶性化合物（Ｗ）の含有量を意味する。なお、蛍光標識された標的生体物質に、溶液状の本発明の蛍光強度増強剤を作用させる際に、本発明の蛍光強度増強剤（溶液状）中の水溶性化合物（Ｗ）の含有量が、上記水溶性化合物（Ｗ）の含有量を満たすことが、蛍光強度をより増強させる観点から好ましい。
　また、本発明で用いる水溶性化合物（Ｗ）は無色のものが好ましく、蛍光色素の励起光を吸収しないものがさらに好ましい。
　本発明の蛍光強度増強剤は、固形状又は溶液状のいずれであってもよい。
　本発明の蛍光強度増強剤が固形状である例としては、本発明の蛍光強度増強剤の微粒子状粉末及び凍結乾燥粉末等が挙げられる。
　本発明の蛍光強度増強剤が固形状である場合に、後述の緩衝液を構成する緩衝剤、界面活性剤などの成分を固形状として更に含んでいてもよい。なお、本発明の蛍光強度増強剤の一部が溶液状として、残部が固形状として、後述の緩衝液等の水系媒体中に存在していてもよい。
　本発明の蛍光強度増強剤が溶液状である例としては、例えば、本発明の蛍光強度増強剤を水系媒体に溶解した溶液が挙げられる。
　水系媒体は、本発明の効果を奏する範囲内で、水以外に有機溶媒を含有していてもよい。含有していてもよい有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、酢酸等の水と混和可能な有機溶媒が挙げられる。
　また、水系媒体は、本発明の効果を奏する範囲内で、添加剤を含有していてもよい。含有していてもよい添加剤としては、例えば、ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ）、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ）、ＴＡＥ（Ｔｒｉｓ－ａｃｅｔａｔｅ　ＥＤＴＡ）、ＴＢ（Ｔｒｉｓ－ｂｏｒａｔｅ　ＥＤＴＡ）Ｅ、ＴＥ（Ｔｒｉｓ　ＥＤＴＡ）、Ｇｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ（例えば、ニッポンジーン社、同仁化学研究所社より入手可能）等の緩衝剤、ドデシル硫酸ナトリウム、ＴｒｉｔｏｎＸ（商品名、Ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ（１０）　ｏｃｔｙｌｐｈｅｎｙｌ　ｅｔｈｅｒ、例えばＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社より入手可能）、Ｔｗｅｅｎ－２０（商品名、Ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ　Ｓｏｒｂｉｔａｎ　Ｍｏｎｏｌａｕｒａｔｅ、例えば富士フイルム和光純薬社より入手可能）等の界面活性剤等の、緩衝液に含有される化合物が挙げられる。また、ＢＳＡ（牛血清アルブミン）等のブロッキング剤を含んでいてもよい。すなわち、本発明の蛍光強度増強剤が溶液状である場合、上記水溶性化合物（Ｗ）を含有する、ＴＢＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳ－Ｔ（Ｔｗｅｅｎ－２０含有ＴＢＳ）、ＰＢＳ－Ｔ（Ｔｗｅｅｎ－２０含有ＰＢＳ）、ＴＡＥ、ＴＢＥ、ＴＥ又はＧｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ等の緩衝液が挙げられる。
　本発明の蛍光強度増強剤の形態としては、溶液状であることが好ましく、上記水溶性化合物（Ｗ）を含有する緩衝液の形態がより好ましい。
　本発明の蛍光強度増強剤は、蛍光イメージング用途に用いられることが好ましい。
　蛍光イメージングとは、標的とする生体物質（本発明において、「標的生体物質」とも称す。）を、蛍光色素標識生体分子を用いた蛍光標識により可視化し、観察するバイオイメージングを意味する。具体的には、蛍光色素標識生体分子によって標識された標的生体物質（本発明において、「蛍光標識された標的生体物質」とも称す。）の蛍光を観察する。蛍光色素標識生体分子に用いられる蛍光色素、蛍光色素標識生体分子、及び、蛍光色素標識生体分子を用いた蛍光検出の詳細については、後述の通りである。
　蛍光イメージング用途としては特に制限することなく、通常用いられる蛍光イメージング用途に適用することができ、例えば、ウエスタンブロッティング（以下、ＷＢとも略す。）、多色ＷＢ、細胞染色、ドットブロッティング等の用途に用いることができる。
　特に、ＷＢは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法（ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動法）により標的生体物質（タンパク質）を分子の質量の違いによって分離した後、メンブレンにタンパク質を転写し、メンブレンに転写されたタンパク質に蛍光色素標識抗体を特定的に結合させて蛍光標識された標的生体物質を得た後、評価することにより、タンパク質のバンドを検出することができる。ＷＢでは、上記の蛍光標識された標的生体物質を得た後、メンブレンを乾燥させて評価することにより蛍光強度をより高めることができるため、よりタンパク質の量が少ない場合にも、タンパク質のバンドを検出することができる。
　ＷＢにおいて、本発明の蛍光強度増強剤を蛍光標識された標的生体物質に作用させることによって、メンブレンを乾燥させた際に、蛍光標識された標的生体物質中の蛍光色素間の相互作用による消光効果を抑制し、蛍光強度を増強することができるため、通常のＷＢに比べてさらに低タンパク質量のバンドを高感度で検出することができると考えられる。
　なお、本発明の蛍光強度増強剤による蛍光強度の増強効果は、メンブレンを乾燥させた場合に限定されず、メンブレンを乾燥せずに観察した場合にも得られる。
＜＜蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法＞＞
　本発明の蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法は、本発明の蛍光強度増強剤を、蛍光標識された標的生体物質に作用させることを含む方法である。
　本発明の蛍光強度増強剤を蛍光標識された標的生体物質に作用させるとは、具体的には、本発明の蛍光強度増強剤を、蛍光標識された標的生体物質に作用させて、この蛍光標識からの蛍光強度を増強させることが好ましい。
　なお、本発明の蛍光強度増強剤は、蛍光標識された標的生体物質に作用させる際には、上述の溶液として作用させることが好ましい。
　本発明の蛍光強度増強剤を、蛍光標識された標的生体物質に作用させて蛍光強度を増強させるためには、蛍光標識された標的生体物質中の蛍光色素間の相互作用を抑制する機能を発現するように、蛍光標識された標的生体物質を得た後、蛍光検出を行うまでの間に、本発明の蛍光強度増強剤を作用させればよい。例えば、蛍光標識された標的生体物質の洗浄工程で本発明の蛍光強度増強剤を作用させることが好ましく、蛍光標識された標的生体物質を、上述の水溶性化合物（Ｗ）を含有する緩衝液により洗浄することがより好ましい。
　例えば、ＷＢにおいては、メンブレンに転写されたタンパク質に蛍光色素標識抗体を抗体反応により結合させて蛍光標識された標的生体物質を得た後、この蛍光標識された標的生体物質を洗浄用緩衝液で洗浄する工程で、上述の水溶性化合物（Ｗ）を含有する緩衝液により洗浄することが好ましい。
　上記洗浄用緩衝液としては、ＷＢに通常用いられる洗浄用緩衝液を特に制限することなく用いることができ、例えば、ＴＢＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳ－Ｔ、ＰＢＳ－Ｔ、ＴＡＥ、ＴＢＥ、ＴＥ又はＧｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ等の洗浄用緩衝液が挙げられる。
　また、上記水溶性化合物（Ｗ）を含有する緩衝液としては、上記水溶性化合物（Ｗ）を含有する、ＴＢＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳ－Ｔ、ＰＢＳ－Ｔ、ＴＡＥ、ＴＢＥ、ＴＥ又はＧｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ等の緩衝液が挙げられる。
　なお、蛍光標識された標的生体物質の洗浄は、通常、洗浄用緩衝液を取り替えた洗浄を複数回行うところ、上記水溶性化合物（Ｗ）を含有する緩衝液による洗浄を、少なくとも最後の洗浄として行うことによって、蛍光標識からの蛍光強度を増強させることができる。
　上記水溶性化合物（Ｗ）を含有する緩衝液による洗浄工程における、洗浄時間（振とう時間）、緩衝液中の水溶性化合物（Ｗ）の含有量等の洗浄条件については、蛍光強度の増強効果が得られる限り特に制限されない。例えば、洗浄時間（振とう時間）については、５～１５分とすることができ、緩衝液中の水溶性化合物（Ｗ）の含有量については、上述の本発明の蛍光強度増強剤中における水溶性化合物（Ｗ）の含有量の記載を適用することができる。
＜＜蛍光検出用キット＞＞
　本発明の蛍光検出用キットは、下記（ａ）及び（ｂ）を含むキットである。
（ａ）本発明の蛍光強度増強剤。
（ｂ）蛍光色素を含む蛍光色素標識生体分子作製用試薬、又は、蛍光色素標識生体分子。
 
　上記（ａ）の本発明の蛍光強度増強剤については、上述の固形状又は溶液状のいずれであってもよい。
　固形状である場合には、上記（ａ）の他に、ＴＢＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳ－Ｔ、ＰＢＳ－Ｔ、ＴＡＥ、ＴＢＥ、ＴＥ又はＧｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ等の緩衝液を含有してもよく、ＴＢＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳ－Ｔ、ＰＢＳ－Ｔ、ＴＡＥ、ＴＢＥ、ＴＥ又はＧｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ等の緩衝液を構成する水系媒体以外の成分（緩衝剤、界面活性剤等）を含有していてもよい。ＴＢＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳ－Ｔ、ＰＢＳ－Ｔ、ＴＡＥ、ＴＢＥ、ＴＥ、Ｇｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ等の緩衝液を構成する水系媒体以外の成分（緩衝剤、界面活性剤等）を含有する場合には、蛍光標識された標的生体物質に作用させる際には、水系媒体を添加することによって、溶液状として作用させることが好ましい。
　溶液状である場合には、ＴＢＳ、ＰＢＳ、ＴＢＳ－Ｔ、ＰＢＳ－Ｔ、ＴＡＥ、ＴＢＥ、ＴＥ又はＧｏｏｄ’ｓ　Ｂｕｆｆｅｒ等の緩衝液であることが好ましく、Ｔｗｅｅｎ－２０を別途添加してもよい。
　上記（ｂ）が蛍光色素を含む蛍光色素標識生体分子作製用試薬である場合には、蛍光色素の他に、蛍光色素標識生体分子を作製するために用いられるその他の成分を含有していてもよく、例えば、蛍光色素と結合して蛍光色素標識生体分子を作製する生体物質（好ましくは抗体）が挙げられる。
　上記（ｂ）が蛍光色素標識生体分子である場合、この蛍光色素標識生体分子は、適用する標的生体物質に対して、一次抗体及び二次抗体のいずれとして機能してもよい。なお、蛍光色素標識生体分子が二次抗体として機能する場合には、適用する標的生体物質に対する一次抗体を更に含有していてもよい。
　本発明の蛍光検出用キットは、蛍光標識された標的生体物質の蛍光検出に用いられるキットであればよく、蛍光イメージング用途での蛍光検出に用いられることが好ましい。
　本発明の蛍光検出用キットは、上記（ａ）及び（ｂ）の他に、蛍光標識された標的生体物質の作製に通常用いられる、タンパク質抽出及び処理液、ゲル、電極液、ブロッティング剤、ブロッキング剤、処理液、洗浄液、緩衝液等を更に含んでいてもよい。
　以下に、蛍光色素標識生体分子に用いられる蛍光色素、蛍光色素標識生体分子、及び、蛍光色素標識生体分子を用いた蛍光検出について、詳述する。
＜蛍光色素＞
　本発明の蛍光強度増強剤を作用させる蛍光色素標識生体分子は、蛍光色素によって標識された生体物質であればよい。
　上記蛍光色素としては、生体物質の標識に通常用いられる蛍光色素を、特に制限することなく用いることができる。例えば、キサンテン色素、ローダミン色素、クマリン色素、シアニン色素、ピレン色素、オキサジン色素、スクアリリウム色素、フタロシアニン色素、ポルフィリン色素、ピリジルオキサゾール色素及びピロメテン色素を挙げることができる。
　具体的には、例えば、国際公開第２０１９／２３０９６３号、国際公開第２０２１／１００８１４号、国際公開第２０２１／１２５２９５号、国際公開第２０２１／２１５５１４号、国際公開第２０２２／０２５２１０号、国際公開第２０２２／１９１１２３号、特開２０１９－１７２８２６号公報、再表２０１９／２３０９６３号公報、特開２０２２－１３１３５７号公報等に記載の蛍光性化合物（蛍光を示す化合物）を挙げることができる。
　また、市販の蛍光色素についても、特に制限することなく用いることができる。例えば、いずれもＴｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製の商品名で、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　３５０、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　４０５、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　４３０，Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　４８８、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　５１４、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　５３２、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　５４６，Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　５５５、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　５６８、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　５９４、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　６３３、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　６３５、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　６４７、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　６６０、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　６８０、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　７００、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　７５０、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　７９０、ＤｙＬｉｇｈｔ　３５０、ＤｙＬｉｇｈｔ　４０５、ＤｙＬｉｇｈｔ　４２５Ｑ、ＤｙＬｉｇｈｔ　４８８、ＤｙＬｉｇｈｔ　５１０－ＬＳ、ＤｙＬｉｇｈｔ　５１５－ＬＳ、ＤｙＬｉｇｈｔ　５５０、ＤｙＬｉｇｈｔ　５９４、ＤｙＬｉｇｈｔ　６３３、ＤｙＬｉｇｈｔ　６５０、ＤｙＬｉｇｈｔ　６８０、ＤｙＬｉｇｈｔ　７３０－Ｂ１、ＤｙＬｉｇｈｔ　７４７－Ｂ４、ＤｙＬｉｇｈｔ　８００、ＤｙＬｉｇｈｔ　６５０－４ｘＰＥＧ、ＤｙＬｉｇｈｔ　８００―４ｘＰＥＧ等、いずれもＡＴＴＯ－ＴＥＣ社製の商品名で、ＡＴＴＯ　３９０、ＡＴＴＯ　４２５、ＡＴＴＯ　４６５、ＡＴＴＯ　４８８、ＡＴＴＯ　４９５、ＡＴＴＯ　５１４，ＡＴＴＯ　５２０、ＡＴＴＯ　５３２，ＡＴＴＯ　ＲＨＯ６Ｇ、ＡＴＴＯ　５４０Ｑ、ＡＴＴＯ　５５０、ＡＴＴＯ　５６５、ＡＴＴＯ　ＲＨＯ１１、ＡＴＴＯ　５８０Ｑ、ＡＴＴＯ　５９０、ＡＴＴＯ　５９４、ＡＴＴＯ　６１０、ＡＴＴＯ　６１２Ｑ、ＡＴＴＯ　６２０、ＡＴＴＯ　６３３、ＡＴＴＯ　ＲＨＯ１４、ＡＴＴＯ　６４７、ＡＴＴＯ　６４７Ｎ、ＡＴＴＯ　６５５、ＡＴＴＯ　６６５、ＡＴＴＯ　６８０、ＡＴＴＯ　７００、ＡＴＴＯ　７２５、ＡＴＴＯ　７４０等、いずれもグローバルライフサイエンステクノロジーズジャパン社製の商品名で、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７等、いずれもＢｉｏｔｉｕｍ社製の商品名で、ＣＦ　３５０、ＣＦ　４０５Ｓ、ＣＦ　４０５Ｍ、ＣＦ　４０５Ｌ、ＣＦ　４３０、ＣＦ　４４０、ＣＦ　４５０、ＣＦ　４８８Ａ、ＣＦ　５０３Ｒ、ＣＦ　５１４、ＣＦ　５３２、ＣＦ　５３５ＳＴ、ＣＦ　５４３、ＣＦ　５５０Ｒ、ＣＦ　５５５、ＣＦ　５６８、ＣＦ　５７０、ＣＦ　５８３、ＣＦ　５８３Ｒ、ＣＦ　５９４、ＣＦ　５９４ＳＴ、ＣＦ　５９７Ｒ、ＣＦ　６２０Ｒ、ＣＦ　６３３，ＣＦ　６４０Ｒ、ＣＦ　６４７、ＣＦ　６６０Ｃ、ＣＦ　６６０Ｒ、ＣＦ　６８０、ＣＦ　６８０Ｒ、ＣＦ　７００、ＣＦ　７５０、ＣＦ　７７０、ＣＦ　７９０、ＣＦ　８００、ＣＦ　８２０、ＣＦ　８５０、ＣＦ　８７０等が挙げられる。
　本発明の蛍光強度増強剤は、１分子中に２つ以上の蛍光体部を有する蛍光色素によって標識された生体物質の蛍光強度を、より効果的に増強させることができる。１分子中に２つ以上の蛍光体部を有する蛍光色素としては、好ましく、例えば、下記蛍光色素（Ｆ）が挙げられる。
＜蛍光色素（Ｆ）＞
　蛍光色素（Ｆ）は、光吸収特性が互いに等価な蛍光体部を２つ以上有する化合物であって、互いに隣り合う各蛍光体部が、後記一般式（Ｉ）で表される構造を含む基を介して連結された化合物である。この一般式（Ｉ）で表される構造は、プロリン由来の環構造等の含窒素飽和５員環を含む繰り返し単位（繰り返し数は２以上）を有し、一般式（Ｉ）で表される構造を含む基により連結された２つの蛍光体部に対して剛直なリンカーとして機能するため、分子間ないし分子内での蛍光体部の会合による消光を効果的に抑制することができる。このため、蛍光色素（Ｆ）を用いて得られる蛍光色素標識生体分子は、優れた蛍光強度を示すことができると考えられる。
　蛍光色素（Ｆ）は、ポリマー又はオリゴマーに分類される化合物であってもよい。
　本発明において、「光吸収特性が互いに等価な蛍光体部」とは、各蛍光体部の吸収スペクトルにおける最大吸収波長の差が１５ｎｍ以内の関係を満たすものを意味する。
　本発明においては、蛍光色素（Ｆ）が有する全ての蛍光体部が、各蛍光体部の吸収スペクトルにおける最大吸収波長のうち、最も低波長側の最大吸収波長と最も高波長側の最大吸収波長との差が１５ｎｍ以内の関係を満たす化合物であることが好ましい。
　蛍光色素中に２つの蛍光体部を有する化合物としては、ＦＲＥＴ現象（Fluorescence Resonance Energy Transfer）を生じる化合物が知られている。この化合物中における、励起光で励起される蛍光体部Ｉ（エネルギー供与体）と、蛍光体部Ｉからエネルギーを受け取り発光又は消光する他の蛍光体部II（エネルギー受容体）の各吸収スペクトルにおける最大吸収波長の差は、通常１５ｎｍを越える。このような化合物では、蛍光体部Ｉから蛍光が発せられる代わりに蛍光体部IIにエネルギーが受け渡されるため、化合物としての蛍光強度は低くなってしまう。
　これに対して、蛍光色素（Ｆ）は上述するように、光吸収特性が互いに等価な蛍光体部を有するため、ＦＲＥＴ現象が生じず、蛍光体部の数に比例した蛍光強度を示すことができる。
　上記の光吸収特性が互いに等価な蛍光体部の化学構造としては、上記の最大吸収波長の差を満たす限り特に制限はなく、好ましくは、蛍光体部の主骨格の構造が同じである。ただし、置換基の立体配置及び鎖長等は異なっていてもよく、また、アニオン性基又はカチオン性基を有する場合は、カウンターイオンが異なっていてもよい。上記最大吸収波長の差は、好ましくは１０ｎｍ以内であり、５ｎｍ以内がより好ましい。
　なお、蛍光体部の吸収スペクトルとは、ＰＢＳ緩衝液で希釈した蛍光体部を構成する蛍光体単体を、分光光度計を用いて測定されるスペクトルである。
　また、「互いに隣り合う各蛍光体部が、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む基を介して連結された化合物」とは、蛍光体部を置換基として有する２つの構造が、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む基を介して連結された化合物であることが好ましい。
　なお、互いに隣り合う各蛍光体部が、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む基を介して連結されている限り、上記の蛍光体部を置換基として有する構造は特に制限されない。例えば、後述の一般式（II）において詳述するように、Ｌ１とＬ２の組み合わせ、Ｌ１とＬ３の組み合わせ、Ｌ４とＬ５の組み合わせ、又は、Ｌ４とＬ６の組み合わせによって、下記一般式（Ｉ）で表される構造に記載する、炭素原子、窒素原子及びＸ１～Ｘ３を環構成原子とする５員環を形成し、この５員環が蛍光体部を含む基を置換基として有していてもよい。すなわち、蛍光体部を置換基として有する構造としては、互いに隣り合う各蛍光体部が、下記一般式（Ｉ）で表される構造を含む基を介して連結されている限り、下記一般式（Ｉ）で表される構造に記載の、炭素原子、窒素原子及びＸ１～Ｘ３を環構成原子とする５員環が、蛍光体部を含む基を置換基として有する構造であってもよい。このような化合物としては、例えば、後述の一般式（VI）又は（VII）で表される化合物が挙げられる。
　蛍光色素（Ｆ）において、上記蛍光体部の数は２個以上である。上限値に特に制限はなく、例えば、３０個以下とすることができ、２０個以下が好ましく、１５個以下がより好ましい。
　蛍光色素（Ｆ）が有する蛍光体部については、上記の他、後述の一般式（II）における蛍光体部の記載及び具体例等を適用することができる。
（一般式（Ｉ）で表される構造）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　式中、Ｘ１～Ｘ３は、－Ｏ－、－Ｓ－、＞ＮＲ１又は＞ＣＲ２Ｒ３を示す。
　Ｒ１～Ｒ３は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アシル基、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基を示す。
　Ｒ８～Ｒ１０は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基又はアニオン性基を示す。
　ｎは２以上の整数である。
　＊は結合手を示す。
　上記一般式（Ｉ）で表される構造は、立体異性体を考慮すると、下記一般式（ＩＡ）又は（ＩＢ）のいずれかで表される構造であることが好ましい。なお、下記一般式中におけるＸ１～Ｘ３及びｎは上記一般式（Ｉ）におけるＸ１～Ｘ３及びｎと同義である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　Ｘ１～Ｘ３は、－Ｏ－、－Ｓ－、＞ＮＲ１又は＞ＣＲ２Ｒ３を示し、Ｒ１～Ｒ３は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基を示す。
　Ｒ１～Ｒ３として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基と同義であり、好ましい範囲も同じである。
　Ｒ１～Ｒ３として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基及びヘテロアリール基は、無置換であってもよく、置換基を有していてもよい。
　Ｒ１～Ｒ３におけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基及びヘテロアリール基が有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、例えば、ハロゲン原子又はアニオン性基が好ましい。
　Ｒ１～Ｒ３として採り得る－ＮＲ８Ｒ９及び－ＯＲ１０において、Ｒ８～Ｒ１０は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基又はアニオン性基を示す。
　Ｒ８～Ｒ１０として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基と同義であり、好ましい範囲も同じである。
　Ｒ８～Ｒ１０として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基及びヘテロアリール基は、無置換であってもよく、置換基を有していてもよい。
　Ｒ８～Ｒ１０におけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基及びヘテロアリール基が有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、例えば、ハロゲン原子、カルバモイル基、アシルアミノ基、アルコキシ基（好ましくはアニオン性基を有するアルコキシ基）又はアニオン性基が好ましく、カルバモイル基、アシルアミノ基、アルコキシ基（好ましくはアニオン性基を有するアルコキシ基）又はアニオン性基がより好ましい。
　Ｒ１としては、水素原子、アルキル基、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基が好ましい。
　Ｒ２及びＲ３としては、水素原子、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基が好ましく、Ｒ２が水素原子、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基であって、Ｒ３が水素原子であることがより好ましい。
　Ｒ８～Ｒ１０としては、水素原子、アルキル基又はアシル基が好ましい。アルキル基はアニオン性基を有するアルキル基であってもよく、アシル基はアニオン性基を含むアシル基（好ましくは、アニオン性基を有するアシル基、もしくは、アニオン性基を有するアルコキシ基で置換されたアシル基）であってもよい。上記のアルキル基及びアシル基は、アニオン性基以外の置換基を有していてもよく、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、例えば、カルバモイル基又はアシルアミノ基が好ましい。
　上記Ｘ１～Ｘ３としては、少なくともいずれか１つは＞ＣＲ２Ｒ３であることが好ましく、少なくとも２つが＞ＣＲ２Ｒ３であって、残りの１つが－Ｏ－、－Ｓ－又は＞ＣＲ２Ｒ３であることがより好ましい。
　一般式（Ｉ）で表される構造をより剛直な構造とする観点から、上記一般式（Ｉ）で表される構造は、Ｘ１～Ｘ３が＞ＣＲ２Ｒ３である構造を含むことが好ましい。「一般式（Ｉ）で表される構造が、Ｘ１～Ｘ３が＞ＣＲ２Ｒ３である構造を含む」とは、すなわち、ｎ個連なっている前述の一般式（ｉ）で表される構造のうち、少なくとも１つの一般式（ｉ）で表される構造におけるＸ１～Ｘ３がいずれも＞ＣＲ２Ｒ３であることを意味する。
　一般式（Ｉ）で表される構造のうち、上記のＸ１～Ｘ３が＞ＣＲ２Ｒ３である構造の個数の割合は、３０％以上が好ましく、６０％以上がより好ましく、８０％以上がさらに好ましい。上限値に特に制限はなく、１００％以下とすることができる。なお、一般式（Ｉ）で表される構造の全てが、上記のＸ１～Ｘ３が＞ＣＲ２Ｒ３である構造であることも好ましい。
　上記のＸ１～Ｘ３が＞ＣＲ２Ｒ３である構造における少なくとも１つのＲ２は、分子間、更には複数存在する場合には分子内での一般式（Ｉ）で表される構造間の相互作用を抑制する観点から、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基であることが好ましく、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基であって、かつ、Ｒ８～Ｒ１０の少なくとも１つがアニオン性基を含む基であることがより好ましい。
　なお、上記の「Ｘ１～Ｘ３が＞ＣＲ２Ｒ３である構造における少なくとも１つのＲ２が、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基であって、かつ、Ｒ８～Ｒ１０の少なくとも１つがアニオン性基を含む基である」とは、すなわち、Ｒ２が－ＮＲ８Ｒ９である場合には、Ｒ８及びＲ９の少なくとも１つがアニオン性基を含む基であり、Ｒ２が－ＯＲ１０である場合には、Ｒ１０がアニオン性基を含む基であることを意味する。
　また、Ｒ１０がアニオン性基を含む基であるとは、Ｒ１０が、アニオン性基であるか、アニオン性基を置換基として有する基であることを意味する。このことは、Ｒ８及びＲ９の少なくとも１つがアニオン性基を含む基であることにおいても同様である。
　ｎは２以上の整数である。蛍光色素（Ｆ）は、ｎが２以上の整数であることにより、色素（蛍光体部）の会合抑制に有効な剛直性を一般式（Ｉ）で表される構造に付与することができ、蛍光強度の低下を抑制することができる。
　上記蛍光体部の数が２である場合、ｎの下限値は、蛍光強度をより向上させる観点からは、３以上の整数が好ましく、７以上の整数がより好ましく、９以上の整数がさらに好ましく、１２以上の整数が特に好ましい。上限値に特に制限はなく、例えば、７２以下の整数とすることができ、３６以下の整数が好ましく、２４以下の整数がより好ましく、１８以下の整数がさらに好ましい。すなわち、ｎは３～７２の整数が好ましく、７～３６の整数がより好ましく、９～２４の整数が更に好ましく、１２～１８の整数が特に好ましい。
　一方で、上記蛍光体部の数が３以上である場合には、蛍光体部の数が２である場合と比べると１分子あたりの蛍光体部数（色素数）が多いため、一定の色素会合を許容でき、３以上の整数であれば、蛍光強度をより向上させることができるため好ましい。なかでも、ｎが６の整数である場合には、一定の会合抑制効果があるものの不十分であるため、ｎは、７以上の整数であることがより好ましい。上記蛍光体部の数が３以上である場合には、ｎの上限値は例えば、７２以下の整数が好ましく、３６以下の整数がより好ましく、２４以下の整数がさらに好ましい。すなわち、蛍光体部の数が３以上である場合には、ｎは３～７２の整数が好ましく、７～３６の整数がより好ましく、７～２４の整数が更に好ましい。
＜一般式（II）で表される化合物＞
　蛍光色素（Ｆ）は下記一般式（II）で表されることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　式中、Ｒ４及びＲ５は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、スルファニル基、アリール基又はヘテロアリール基を示す。
　Ｒ６及びＲ７は、水素原子、ヒドロキシ基、スルファニル基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アミノ基、アシル基、ヘテロアリール基、アニオン性基、カチオン性基又はＱを示す。
　Ｑは、カルボキシ基、生体物質に結合可能な置換基又は固体支持体に結合可能な置換基を示す。
　Ｌ１～Ｌ７は、単結合又は２価の連結基を示す。
　Ｍは蛍光体部、生理活性物質部、プロドラッグ部又は放射性同位体含有部を示す。
　Ｙは上述の一般式（Ｉ）で表される構造を示す。
　ｍは１以上の整数である。
　ただし、Ｍの少なくとも２つは上記の光吸収特性が互いに等価な蛍光体部を示す。このことは、言い換えると、Ｍの少なくとも２つは蛍光体部であって、互いに隣り合う各蛍光体部は、上記の光吸収特性が互いに等価な蛍光体部であることを意味する。
　Ｒ４及びＲ５は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、スルファニル基、アリール基又はヘテロアリール基を示す。
　Ｒ４又はＲ５として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基及びヘテロアリール基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基及びヘテロアリール基と同義であり、好ましい範囲も同じである。
　Ｒ４又はＲ５として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基及びヘテロアリール基は、無置換であってもよく、置換基を有していてもよく、有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、例えば、ハロゲン原子が好ましい。
　Ｒ４及びＲ５としては、合成の簡便さの観点からは、水素原子が好ましい。アミノ酸を原料として用いた場合にはＲ４及びＲ５は水素原子になることが多いものの、蛍光色素（Ｆ）が優れた蛍光強度を示すことに対してＲ４及びＲ５における置換基は大きく寄与しないため、Ｒ４及びＲ５は水素原子以外のその他の置換基（アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、スルファニル基、アリール基又はヘテロアリール基）であってもよい。
　Ｒ６及びＲ７は、水素原子、ヒドロキシ基、スルファニル基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アミノ基、アシル基、ヘテロアリール基、アニオン性基、カチオン性基又はＱを示す。
　Ｒ６又はＲ７として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アミノ基、アシル基、ヘテロアリール基、アニオン性基及びカチオン性基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アミノ基、アシル基、ヘテロアリール基、アニオン性基及びカチオン性基と同義であり、好ましい範囲も同じである。
　Ｒ６又はＲ７として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アミノ基、アシル基及びヘテロアリール基は、無置換であってもよく、置換基を有していてもよい。
　Ｒ６又はＲ７におけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アミノ基、アシル基及びヘテロアリール基が有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、アルキル基、アシル基、アルコキシ基、アミノ基、アニオン性基、カチオン性基、－（Ｌ－Ｏ）ｇＲＥもしくはＱ、又はこれらを２種以上組み合わせた置換基が好ましく、アルキル基、アシル基、アルコキシ基、アミノ基、－（Ｌ－Ｏ）ｇＲＥもしくはＱ、又は、これらの置換基を２種以上組み合わせた置換基がより好ましい。
　Ｒ６又はＲ７として採り得るＱは、カルボキシ基、生体物質に結合可能な置換基又は固体支持体に結合可能な置換基を示す。
　生体物質に結合可能な置換基としては後述の生体物質に結合可能な置換基の記載を適用することができ、固体支持体に結合可能な置換基としては後述の固体支持体に結合可能な置換基の記載を適用することができる。
　Ｒ６としては、後述の－Ｌ９Ｒ６Ａ又は－Ｌ１３Ｒ６Ａで表される置換基の記載が、Ｒ７としては、後述の－Ｌ８Ｒ７Ａ又は－Ｌ１２Ｒ７Ａで表される置換基の記載が好ましく挙げられる。具体的には、－Ｌ９Ｒ６Ａで表される置換基の記載とは、Ｌ９として採り得る基とＲ６Ａとして採り得る基の組み合わせによって得られる置換基を意味する。このことは、－Ｌ１３Ｒ６Ａ、－Ｌ８Ｒ７Ａ及び－Ｌ１２Ｒ７Ａについても同様である。
　本発明においては、適度な親水性と、適度な排除体積効果を有することができ、優れた蛍光強度が得られる観点から、Ｒ６及びＲ７のいずれか一方は、－（Ｌ－Ｏ）ｇＲＥで表される構造を含むことが好ましく、Ｒ７が－（Ｌ－Ｏ）ｇＲＥで表される構造を含むことがより好ましい。
　Ｌ２～Ｌ５及びＬ７は、単結合又は２価の連結基を示し、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、＞Ｓ＝Ｏ、＞Ｓ（＝Ｏ）２及び＞Ｐ（＝Ｏ）ＯＲＢのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることが好ましい。ＲＡ及びＲＢは後述のＲＡ及びＲＢと同義であり、水素原子又は置換基を示す。
　Ｌ１及びＬ６は、単結合又は２価の連結基を示し、単結合、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、＞Ｓ＝Ｏ、＞Ｓ（＝Ｏ）２又は＞Ｐ（＝Ｏ）ＯＲＢであることが好ましい。ＲＡ及びＲＢは後述のＲＡ及びＲＢと同義であり、水素原子又は置換基を示す。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうるアルキレン基は、後述する置換基群Ｔから選択されるアルキル基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうるアルケニレン基は、後述する置換基群Ｔから選択されるアルケニル基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうるアルキニレン基は、後述する置換基群Ｔから選択されるアルキニル基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうるアリーレン基は、後述する置換基群Ｔから選択されるアリール基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうるヘテロアリーレン基は、後述する置換基群Ｔから選択されるヘテロアリール基から更に水素原子を１つ除去した基と同義であり、好ましいものも同じである。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうるアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基は、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうる上記アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択され、より好ましくは、ハロゲン原子、アルキル基、アシルアミノ基又はカルバモイル基が挙げられる。また、Ｌ１～Ｌ７を構成しうる上記アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基が有していてもよい置換基は、さらに後述する置換基群Ｔから選択される置換基で置換されていてもよく、例えば、アミノ基が好ましい。
　また、Ｌ１～Ｌ７を構成しうる上記アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基が有していてもよい置換基の数は、構造として採り得る限り特に制限されず、少なくとも１個以上とすることができ、上限値としては、特に制限されず、例えば、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基における全ての水素原子が置換基で置換されていてもよい。
　Ｌ１～Ｌ７を構成しうる＞ＮＲＡにおけるＲＡ及び＞Ｐ（＝Ｏ）ＯＲＢにおけるＲＢとして採りうる置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択される。ＲＡとしては、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基又はアニオン性基が好ましく、水素原子又はアルキル基がより好ましく、水素原子がさらに好ましい。ＲＢとしては、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基又はヘテロアリール基が好ましく、水素原子又はアルキル基がより好ましく、水素原子がさらに好ましい。
　なお、ＲＡ及びＲＢとして採り得る上記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基及びヘテロアリール基は、いずれも、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。
　Ｌ２～Ｌ５及びＬ７を構成しうる、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、＞Ｓ＝Ｏ、＞Ｓ（＝Ｏ）２及び＞Ｐ（＝Ｏ）ＯＲＢのうちの２種以上を組み合わせた連結基において、組み合わせる基の種類は、妥当な化学構造となる限り特に制限されないが、例えば、２～６種が好ましく、２～４種がより好ましい。なお、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、＞Ｓ＝Ｏ、＞Ｓ（＝Ｏ）２及び＞Ｐ（＝Ｏ）ＯＲＢをそれぞれ１種と数え、最大で１２種類である。
　なお、Ｌ２～Ｌ５及びＬ７を構成しうる、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、＞Ｓ＝Ｏ、＞Ｓ（＝Ｏ）２及び＞Ｐ（＝Ｏ）ＯＲＢのうちの２種以上を組み合わせた連結基において、組み合わせる基の数は、特に制限されないが、例えば、２～１０個が好ましく挙げられ、２～６個がより好ましく、２～４個がさらに好ましい。
（ｉ）Ｌ１、Ｌ６
　Ｌ１は、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、アリーレン基、アルキレン基、－Ｏ－又は－Ｓ－がより好ましく、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、アリーレン基又はアルキレン基がさらに好ましく、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡが特に好ましい。
　Ｌ６は、単結合、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ又はアリーレン基がより好ましく、単結合、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡがさらに好ましい。
（ii）Ｌ３、Ｌ４、Ｌ７
　Ｌ３、Ｌ４及びＬ７は、単結合、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基又はヘテロアリーレン基であるか、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基の少なくとも１種と、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡとの組み合わせがより好ましく、単結合、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基又はヘテロアリーレン基であるか、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＡ－と＞Ｃ＝Ｏとの間、又は、－ＮＲＡＣ（＝Ｏ）－と＞ＮＲＡとの間を、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基の少なくとも１種により連結する基がさらに好ましい。
（iii）Ｌ２、Ｌ５
　Ｌ２及びＬ５は、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種もしくは２種以上を組み合わせた基であることがより好ましく、＊－Ｌｘ－Ｌｙ－＊＊で表される基であることがさらに好ましい。
　Ｌｘは、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基のうちの１種もしくは２種以上を組み合わせた基であって、Ｌｙは、単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである。＊はＬ１及びＬ３が結合する炭素原子、又は、Ｌ４及びＬ６が結合する炭素原子への結合手を示し、＊＊はＭとの結合手を示す。ただし、Ｌｙが単結合である場合、Ｌｘは、ヘテロアリーレン基であるか、又は、＊側に位置するアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基及びアリーレン基のうちの１種もしくは２種以上を組み合わせた基と、＊＊側に位置するヘテロアリーレン基とからなる基である。
　Ｌ２及びＬ５は、上記の＊－Ｌｘ－Ｌｙ－＊＊で表される基のなかでも、Ｌｙが単結合、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである基が好ましく、Ｌｙが＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである基がより好ましく、Ｌｘがアルキレン基であって、Ｌｙが＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである基がさらに好ましい。
　なお、上記一般式（II）で表される化合物においては、Ｍと、Ｌ１及びＬ３が結合する炭素原子、又は、Ｌ４及びＬ６が結合する炭素原子とを結ぶ連結鎖（Ｌ２を含む連結鎖及びＬ５を含む連結鎖の各連結鎖）における最短原子数は、例えば、１～６０であればよく、１～４０が好ましい。Ｍが蛍光体部である場合には、上記最短原子数は、蛍光体部Ｍのうち、蛍光を示すための共役構造部分と、Ｌ１及びＬ３が結合する炭素原子、又は、Ｌ４及びＬ６が結合する炭素原子とを結ぶ連結鎖のうち最短鎖を構成する原子数を意味する。
　なお、上記一般式（II）で表される化合物においては、Ｍの共役構造部分－後述の連結基ＺＺＺ－Ｌ２－で表される構造のうち「－連結基ＺＺＺ－Ｌ２－」で表される連結鎖のいずれかの部分、及び、Ｍの共役構造部分－後述の連結基ＺＺＺ－Ｌ５－で表される構造のうち「－連結基ＺＺＺ－Ｌ５－」で表される連結鎖のいずれかの部分に後述の－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造（ｂも、後述の通りである。）を有することも好ましい。
　一般式（II）で表される化合物において、隣接する基同士が互いに結合して環を形成していてもよい。互いに結合して環を形成していてもよい隣接する基の組み合わせとしては、例えば、Ｌ１とＬ２の組み合わせ、Ｌ１とＬ３の組み合わせ、Ｌ２とＲ４の組み合わせ、Ｌ４とＬ５の組み合わせ、Ｌ４とＬ６の組み合わせ、又は、Ｌ５とＲ５の組み合わせが挙げられる。
　上記の隣接する基同士が互いに結合して形成していてもよい環は、芳香族環及び脂肪族環のいずれでもよく、炭化水素環及びヘテロ環のいずれでもよく、５又は６員環であることが好ましい。
　上記脂肪族環としては、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、又は、上述の一般式（Ｉ）で表される構造に記載する、炭素原子、窒素原子及びＸ１～Ｘ３を環構成原子とする５員環が好ましく挙げられ、上述の一般式（Ｉ）で表される構造に記載する、炭素原子、窒素原子及びＸ１～Ｘ３を環構成原子とする５員環がより好ましい。
　上記芳香族環としては、ベンゼン環、又は、含窒素芳香族複素環が好ましく、ベンゼン環、又は、環構成原子が炭素原子及び窒素原子から構成される含窒素芳香族複素環がより好ましく、ベンゼン環又はピリジン環がさらに好ましい。
　これらの環は置換基を有していてもよく、有していてもよい置換基としては、特に制限することなく、置換基群Ｔから選択される。
　Ｌ２とＲ４との組み合わせ、又は、Ｌ５とＲ５との組み合わせにより形成される環としては、上記の脂肪族環及び芳香族環のいずれでもよく、上記の脂肪族環が好ましい。
　Ｌ１とＬ２の組み合わせ、Ｌ１とＬ３の組み合わせ、Ｌ４とＬ５の組み合わせ、又は、Ｌ４とＬ６の組み合わせにより形成される環としては、上記の脂肪族環及び芳香族環のいずれでもよく、上述の一般式（Ｉ）で表される構造に記載する、炭素原子、窒素原子及びＸ１～Ｘ３を環構成原子とする５員環、又は、ベンゼン環が好ましい。
　例えば、一般式（ＩＩ）の破線で囲んだ下記構造は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
　以下の構造を含む構造とすることができる。以下の構造において、＊は連結部を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
　ｍは１以上の整数である。上限値に特に制限はなく、例えば、３０以下の整数とすることができ、２０以下の整数が好ましく、１５以下の整数がより好ましく、１０以下の整数がさらに好ましい。すなわち、ｍは１～３０の整数とすることができ、１～２０の整数が好ましく、１～１５の整数がより好ましく、１～１０の整数が更に好ましい。
　Ｍは蛍光体部、生理活性物質部、プロドラッグ部又は放射性同位体含有部を示す。ただし、Ｍの少なくとも２つは光吸収特性が互いに等価な蛍光体部を示す。
　Ｍとして採り得る蛍光体部（以下、蛍光体部Ｍとも称す。）としては、蛍光を示す有機化合物からなる構造部である限り、特に制限することなく用いることができる。また、蛍光体部Ｍは、蛍光を示す有機化合物からなる構造部がさらに連結基を有する構造部であってもよい。このような連結基としては、特に制限されないが、例えば後述の連結基ＺＺＺを挙げることができる。例えば、一般式（II）で表される化合物においては、蛍光体部Ｍはこの連結基ＺＺＺによってＬ２又はＬ５と結合している化合物が好ましく挙げられる。
　蛍光体部Ｍとしては、例えば、キサンテン色素、ローダミン色素、クマリン色素、シアニン色素、ピレン色素、オキサジン色素、スクアリリウム色素、ピリジルオキサゾール色素及びピロメテン色素のうちの少なくとも１種の色素からなる構造部が好ましく挙げられる。
　上記のキサンテン色素、ローダミン色素、クマリン色素、シアニン色素、ピレン色素、オキサジン色素、スクアリリウム色素、ピリジルオキサゾール色素及びピロメテン色素としては、これらの色素として通常知られている色素を特に制限することなく用いることができる。
　上記蛍光体部Ｍは、一態様としては、ピロメテン色素からなる構造部であることが好ましい。ピロメテン色素としては、ジピロメテンホウ素錯体をあげることができる。ジピロメテンホウ素錯体としては、国際公開第２０１９／２３０９６３号に記載の一般式（１）又は（４）で表される蛍光性化合物（ジピロメテンホウ素錯体）、国際公開第２０２１／１００８１４号に記載の一般式（１）で表される化合物（ジピロメテンホウ素錯体）を使用でき、これらの記載を本明細書に引用して取り込むことができる。
　なお、上記蛍光体部Ｍを構成する色素については、生体物質に結合可能な置換基を有しないようにして取り込む。
　上記蛍光体部Ｍは、別の態様としては、シアニン色素からなる構造部であることが好ましく、下記一般式（α）で表されるシアニン色素からなる構造部であることがより好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　式中、Ｒ１～Ｒ４は、アルキル基又は－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１を示す。ｂは１～５０であり、Ｒ２１はアルキル基を示す。
　Ｒ１１～Ｒ１３は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して５又は６員環を形成していてもよい。
　Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルファモイル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、ニトロ基又はハロゲン原子を示す。
　Ｒ４１及びＲ４２は、アルキル基又は－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１を示す。Ｒ２１及びｂは、上記のＲ２１及びｂと同義である。Ｒ４１及びＲ４２は互いに結合して環を形成していてもよい。
　ａは、１～３の整数である。
　上記のＲ１～Ｒ４、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５、Ｒ３２～Ｒ３５、Ｒ４１又はＲ４２のうちのいずれかから水素原子が１つ除かれることにより、１価の構造部となる。
　ただし、式（α）で表されるシアニン色素は、中性である。
　上記一般式（α）で表されるシアニン色素は、共役二重結合によって結ばれた繰り返し数２ａ＋３のメチン鎖の長さに依存して、ａ＝１の場合に５２０～６００ｎｍの波長領域（５８５ｎｍ付近）に、ａ＝２の場合に６２０～７００ｎｍの波長領域（６８５ｎｍ付近）に、ａ＝３の場合に７４０～８３０ｎｍの波長領域（７８５ｎｍ付近）に、それぞれ励起吸収波長を有する。そのため、一般式（α）で表されるシアニン色素からなる構造部を蛍光体部Ｍとして有する蛍光色素（Ｆ）は、それぞれ、励起光源として化合物の吸収励起波長に対応したおよそ５００～８００ｎｍの波長領域の任意の波長（例えば、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ付近）のものを使用する蛍光標識において、優れた蛍光強度を示す化合物として使用できる。
　多色ＷＢでは、可視領域から近赤外領域までの範囲内において、複数の発光色を検出する。そのため、色素を励起発光させた際に互いに干渉してクロストークが起こらないように、複数の色素の吸収波形及び発光波形が適切な波長関係となるように選択する必要がある。ある励起光では１つの色素だけが光り、他の色素が光らないように調整されるのが理想的である。この観点で、例えば、多色ＷＢの近赤外領域の発光には、７００ｎｍ付近と８００ｎｍ付近という、ある程度波長の離れた２種類の励起光源が用いられている。
　近赤外光励起による蛍光検出は、可視光励起による検出に比べてメンブレンの自家蛍光、すなわちバックグラウンド蛍光を抑制できるため、シグナルノイズ比（Ｓ／Ｎ比）を高めやすく、目的のタンパク質を高感度に検出することが可能となる。そのため、近年、微量タンパク質の解析研究において、近赤外領域の発光を利用した蛍光検出ＷＢの必要性が増してきている。
　しかし、近赤外領域では、一般的に蛍光色素の蛍光量子収率が低く、高いシグナル量を得ることが難しい。一般式（α）で表されるシアニン色素からなる構造部を蛍光体部Ｍとして有する蛍光色素（Ｆ）のうちａ＝２又は３である化合物は、上記の７００ｎｍ付近と８００ｎｍ付近の２種類のものを有する多色ＷＢにおいても、優れた蛍光強度を示す化合物として使用でき、特に、タンパク質をより高感度に観察、検出するという要望に対しても、従来のシアニン色素を用いた蛍光標識と比較して、優れた蛍光強度を示すことができる。
（ｉ）Ｒ１～Ｒ４
　Ｒ１～Ｒ４は、アルキル基又は－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１を示す。
　Ｒ１～Ｒ４として採りうるアルキル基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基と同義である。
　無置換のアルキル基の炭素数は、１～６が好ましく、１～４がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
　アルキル基が置換基を有する場合、置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数としては、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、２～６がさらに好ましく、２～５が特に好ましい。また、置換基を有するアルキル基の最長鎖を構成する原子数としては、３～３５が好ましく、３～２５がより好ましく、３～１５がさらに好ましく、３～１１が特に好ましい。
　本発明において、「置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数」とは、アルキル基が有する置換基部分を除く炭素数を意味する。
　本発明において、「置換基を有するアルキル基の最長鎖を構成する原子数」とは、置換基部分を含む原子数（すなわち、全原子数から、最長鎖を構成しない分子鎖の原子数を引いた原子数）を意味する。なお、スルホ基、カルボキシ基等の解離性の水素原子を有する置換基が最長鎖を構成する場合、解離の有無にかかわらず、水素原子を含めて計算する。また、後述する生体物質に結合可能な置換基部分における原子数は含めない。
　Ｒ１～Ｒ４として採りうるアルキル基が有していてもよい置換基としては、アルコキシ基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホ基、ホスホノ基及び－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１、並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基が挙げられる。
　Ｒ１～Ｒ４として採りうる置換基を有するアルキル基としては、上記置換基を有するアルキル基であれば特に制限はない。
　Ｒ１～Ｒ４として採りうるアルキル基としては、無置換のアルキル基が好ましい。
（－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１）
　Ｒ１～Ｒ４として採りうる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１において、ｂは１～５０であり、Ｒ２１はアルキル基を示す。
　ｂは平均繰り返し数（単に、繰り返し数とも称す。）を意味し、１～２４が好ましく、１～１２がより好ましく、１～１０がさらに好ましく、４～１０が特に好ましく、４～８が最も好ましい。
　上記平均繰り返し数は、化合物について１Ｈ－ＮＭＲ測定を行い、平均積分値より算出することができる。本発明において規定する平均繰り返し数は、上記方法により算出される平均繰り返し数の小数第一位を四捨五入して得られる数を意味する。
　Ｒ２１におけるアルキル基は、上記Ｒ１～Ｒ４として採りうるアルキル基の記載を適用することができる。
　Ｒ１～Ｒ４として採りうる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１及びＲ１～Ｒ４としてのアルキル基が置換基として有しうる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１としては、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－無置換のアルキル基が好ましい。
　蛍光色素そのものの蛍光強度を向上させる観点からは、Ｒ１～Ｒ４の少なくとも１つが、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造を含むことが好ましく、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つとＲ３及びＲ４の少なくとも１つとが、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造を含むことがより好ましい。
　蛍光色素（Ｆ）中における全ての蛍光体部Ｍが一般式（α）で表されるシアニン色素からなる構造部であって、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つとＲ３及びＲ４の少なくとも１つとが、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造を含むことがさらに好ましい。
　上記－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造は、Ｒ１～Ｒ４として－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１を採ることにより導入されていることが好ましい。
　上記－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－におけるｂは、上記－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１におけるｂと同義である。
　Ｒ１～Ｒ４の置換基はシアニン色素骨格（平面）に対し垂直方向へ張り出すため、この置換基として－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造を含むことにより、縮環部分がπ－π相互作用しにくくなり（会合抑制効果が強まり）、会合による蛍光強度の低下を抑制できると推定している。
（ii）Ｒ１１～Ｒ１３
　Ｒ１１～Ｒ１３は、各々独立に、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基又はハロゲン原子を示す。隣接する基同士が互いに結合して５又は６員環を形成していてもよい。
　Ｒ１１～Ｒ１３として採りうるアルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基及びハロゲン原子は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基及びハロゲン原子と同義であり、好ましい範囲も同じである。
　Ｒ１１～Ｒ１３におけるアルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基及びアミノ基が有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられる。
　Ｒ１１～Ｒ１３のうち、隣接する基同士が互いに結合して形成される５又は６員環は、芳香族性又は脂肪族性のいずれであってもよく、脂肪族性であることが好ましい。また、６員環を形成することが好ましい。化合物中における上記の５又は６員環の数は特に制限されないが、１又は２個が好ましく、１個がより好ましい。
　例えば、ａ＝３の場合を例にすると、Ｒ１１～Ｒ１３のうち隣接する基同士が結合して形成される環を有する構造としては、下記構造が好ましく挙げられる。なお、下記例においては、環構造を形成していないＲ１１～Ｒ１３は水素原子であり、環構造は置換基を有しない構造を記載しているが、これらに限定されるものではない。また、下記において、波線の先の構造は省略して記載する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　Ｒ１１及びインドレニン環に結合する炭素原子が有するＲ１３は、水素原子が好ましい。
　Ｒ１２及び上記以外のＲ１３は、水素原子又はアルキル基が好ましい。
　Ｒ１１～Ｒ１３のうち、Ｒ１１及びインドレニン環に結合する炭素原子が有するＲ１３以外のＲ１２～Ｒ１３における隣接する基同士（すなわち、インドレニン環に結合する炭素原子が有するＲ１３以外のＲ１３とＲ１２のうちの隣接する基同士）が、互いに結合して５又は６員環を形成していることが好ましく、６員環を形成していることがより好ましい。また、インドリン環及びインドレニン環を結ぶ結合の中心部分に上記５又は６員環を形成していることが好ましい。インドリン環及びインドレニン環を結ぶ結合の中心部分に形成される環とは、インドリン環及びインドレニン環からの結合原子数が等しくなる炭素原子を環構成原子として含む環を意味する。
　上記蛍光体部Ｍは、上記のＲ１～Ｒ４、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５、Ｒ３２～Ｒ３５、Ｒ４１又はＲ４２のうちのいずれかから水素原子が１つ除かれることにより、１価の構造部となる。
　具体的には、Ｒ１～Ｒ４、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５、Ｒ３２～Ｒ３５、Ｒ４１又はＲ４２として採り得る置換基から水素原子が１つ除かれることにより１価の構造部となるか、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５又はＲ３２～Ｒ３５として採り得る水素原子が除かれ、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５又はＲ３２～Ｒ３５が結合していた炭素原子上に結合手を有する１価の構造部となる。
　なかでも、上記蛍光体部Ｍは、上記Ｒ４１及びＲ４２が結合して形成した環上から水素原子が１つ除かれることにより１価の構造部となるか、又は、Ｒ１２（好ましくはインドリン環及びインドレニン環からの結合原子数が等しくなる炭素原子上のＲ１２）として採り得る置換基から水素原子が１つ除かれることにより１価の構造部となることが好ましい。
（iii）Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５
　Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルファモイル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、ニトロ基又はハロゲン原子を示す。これらＲ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５は、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していてもよい。
　Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５として採りうるアルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルファモイル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、ニトロ基及びハロゲン原子は、それぞれ、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルファモイル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、ニトロ基及びハロゲン原子と同義である。
　Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５のうち隣接する基同士が互いに結合して形成される縮合環としては、特に制限はないが、例えば、ナフタレン環（隣接する基同士が互いに結合してベンゼン環を形成することによって、Ｒ２２～Ｒ２５が結合するベンゼン環又はＲ３２～Ｒ３５が結合するベンゼン環と共に形成されるナフタレン環）が挙げられる。なお、会合抑制の観点から、Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５のうち隣接する基同士が互いに結合しておらず、縮合環を形成していないことが好ましい。
　水溶性の向上および会合抑制の観点から、Ｒ２２～Ｒ２５の少なくとも１つとＲ３２～Ｒ３５の少なくとも１つとが親水性基を有することが好ましく、Ｒ２２～Ｒ２５が結合する環及びＲ３２～Ｒ３５が結合する環の数１つに付き少なくとも１つの親水性基を有することがより好ましい。例えば、Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５うち隣接する基同士が互いに結合して縮合環としてナフタレン環をそれぞれ形成している場合、Ｒ２２～Ｒ２５が結合する環の数は２つ、Ｒ３２～Ｒ３５が結合する環の数は２つとなり、Ｒ２２～Ｒ２５の少なくとも２つ及びＲ３２～Ｒ３５の少なくとも２つが親水性基を有することがより好ましいことを意味する。上限値は、構造として可能な限り特に制限されず、後述する化合物全体としての親水性基の数にあわせて、適宜調整することができる。
　親水性基としては、特に制限されないが、例えば、置換基を有するアルコキシ基、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基が挙げられ、スルホ基が好ましい。
　Ｒ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５は、水素原子、アルキル基、スルホ基、ニトロ基又はハロゲン原子が好ましく、水素原子、アルキル基、スルホ基又はハロゲン原子がより好ましく、水素原子、アルキル基又はスルホ基がさらに好ましい。
（iv）Ｒ４１及びＲ４２
　Ｒ４１及びＲ４２は、アルキル基又は－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１を示す。Ｒ２１及びｂは、上記のＲ２１及びｂと同義である。
　Ｒ４１及びＲ４２におけるアルキル基が有していてもよい置換基としては、アルコキシ基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホ基及びホスホノ基並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基が挙げられる。
　Ｒ４１及びＲ４２として採りうるアルキル基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基と同義である。
　無置換のアルキル基の炭素数は、１～６が好ましく、１～４がより好ましく、１～３がさらに好ましい。
　置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数は、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、１～７がさらに好ましく、１～６がさらに好ましく、１～５がさらに好ましい。また、置換基を有するアルキル基の最長鎖を構成する原子数は、３～１４が好ましく、３～１２がより好ましく、３～１０がさらに好ましい。
　Ｒ４１及びＲ４２として採り得る置換基を有するアルキル基としては、水溶性をより向上させる観点からは、アルコキシ基、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基の少なくとも１つを置換基として有するアルキル基が好ましく、カルボキシ基及びスルホ基の少なくとも１つを置換基として有するアルキル基がより好ましい。なお、上記の好ましい置換基（アルコキシ基、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基）と、これらの置換基以外の基との組合わせからなる置換基を有するアルキル基であってもよい。
　また、上記Ｒ１～Ｒ４が採り得る、置換基を有するアルキル基の形態も好ましく適用できる。
　Ｒ４１及びＲ４２として採りうる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１は、上記Ｒ１～Ｒ４における－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１の記載を好ましく適用することができる。
　Ｒ４１及びＲ４２は互いに結合して環を形成していてもよい。
　上記一般式（α）で表されるシアニン色素のうち、Ｒ４１及びＲ４２が互いに結合して環を形成した構造としては、下記一般式（β）で表されるシアニン色素が好ましく挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　式中、Ｌｘ及びＬｙはアルキレン基又は－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－アルキレン－＊を示す。＊はＵとの結合位置を示す。
　連結基Ｕは原子数１～１００の２価の連結基を示す。
　Ｒ１～Ｒ４、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５、Ｒ３２～Ｒ３５、ｂ及びａは上記一般式（α）におけるＲ１～Ｒ４、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５、Ｒ３２～Ｒ３５、ｂ及びａと同義であり、特段の断りのない限り、好ましい範囲も同じである。
　Ｒ１～Ｒ４、Ｌｘ、Ｌｙ及びＵの少なくとも１つは－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造を含む。ｂは、上記ｂと同義である。
　ただし、式（β）で表されるシアニン色素は、中性である。
　Ｌｘ及びＬｙとして採りうるアルキレン基は、Ｒ４１及びＲ４２として採りうる置換基を有するアルキル基から水素原子又は置換基を１つ除いて得られるアルキレン基に相当する。
　Ｌｘ及びＬｙとして採りうるアルキレン基のアルキレン基部分の炭素数は、Ｒ４１及びＲ４２における置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数の記載を好ましく適用することができる。
　Ｌｘ及びＬｙとして採りうる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－アルキレン－＊は、Ｒ４１及びＲ４２として採りうる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－Ｒ２１（Ｒ２１は置換基を有するアルキル基を示す。）のうち、Ｒ２１としてのアルキル基から水素原子又は置換基を１つ除いて得られる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－アルキレン－に相当する。
　Ｌｘ及びＬｙとして採りうる－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－アルキレン－＊において、ｂは１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、アルキレン基部分の炭素数は、Ｒ４１及びＲ４２における置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数の記載を好ましく適用することができる。
　蛍光強度をより向上させる観点から、Ｌｘ及びＬｙはいずれも、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造を含むことが好ましい。
　連結基Ｕを構成する原子数は、１～１００であり、１０～９０が好ましく、２０～９０がより好ましく、３０～８０がさらに好ましい。
　連結基Ｕは、アルキレン基、－Ｏ－、－ＮＲ５０－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ５０－及び－ＳＯ２ＮＲ５０－から選ばれる３つ以上が結合して形成される２価の連結基であることが好ましい。Ｒ５０は、水素原子又はアルキル基を示す。
　連結基Ｕとして採り得るアルキレン基のアルキレン部分の炭素数は、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、１～７がさらに好ましく、１～６が特に好ましく、１～５が最も好ましい。
　本発明において、「アルキレン基のアルキレン部分の炭素数」とは、アルキレン基が有する置換基部分を除く炭素数を意味する。
　Ｒ５０として採り得るアルキル基は、上記Ｒ１～Ｒ４におけるアルキル基の記載を好ましく適用することができる。
　Ｒ５０としては水素原子が好ましい。
　連結基Ｕを構成する上記のアルキレン基、－Ｏ－、－ＮＲ５０－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ５０－及び－ＳＯ２ＮＲ５０－の数は、３～１１が好ましく、３～７がより好ましく、３～５がさらに好ましく、３が特に好ましい。
　連結基Ｕは、Ｌｘ及びＬｙとの連結部が－Ｏ－、－ＮＲ５０－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ５０－又は－ＳＯ２ＮＲ５０－であることが好ましい。すなわち、連結基Ｕは、連結基Ｕを構成する、－Ｏ－、－ＮＲ５０－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ５０－又は－ＳＯ２ＮＲ５０－を介して、Ｌｘ及びＬｙのアルキレン基に対して結合していることが好ましい。連結基Ｕは、Ｌｘ及びＬｙとの連結部が－Ｏ－、－ＮＲ５０－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ５０－又は－ＳＯ２ＮＲ５０－であって、上記の連結部同士がアルキレン基で結ばれた２価の連結基であることがより好ましい。
　連結基Ｕは、水素原子が１つ除かれることにより１価の構造部、すなわち、蛍光体部Ｍとなることが好ましい。連結基Ｕにおいて、水素原子が１つ除かれる箇所としては、アルキレン基又はＲ５０としてのアルキル基が挙げられ、アルキレン基が好ましい。
　連結基Ｕにおいて、アルキレン基又はＲ５０としてのアルキル基における水素原子が１つ除かれる際には、アルキレン基又はＲ５０としてのアルキル基から直接水素原子が１つ除かれてもよく、アルキレン基又はＲ５０としてのアルキル基に対して連結基ＺＺＺが結合し、この連結基ＺＺＺが結合手となっていてもよい。
　上記連結基ＺＺＺとしては、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲ６０、＞Ｓ＝Ｏ、＞Ｓ（＝Ｏ）２、＞Ｐ（＝Ｏ）ＯＲ７０、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ６０－及び－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｐ－、並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基が挙げられる。組み合わせる数は、特に制限はないが、例えば、２～２０とすることができ、２～７が好ましく、２～５がより好ましい。
　Ｒ６０及びＲ７０は水素原子又はアルキル基であり、水素原子が好ましい。Ｒ６０又はＲ７０として採り得るアルキル基としては、上記Ｒ５０におけるアルキル基の記載を好ましく適用することができる。
　ｐは繰り返し数を表し、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、１～４がさらに好ましい。
（ｖ）ａ
　ａは、１～３の整数であって、２又は３の整数が好ましい。
　上記一般式（α）で表されるシアニン色素において、Ｒ１～Ｒ４、Ｒ４１及びＲ４２の少なくとも１つは、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造を含むことが好ましい。ｂは上記ｂと同義である。これにより、一般式（α）で表されるシアニン色素からなる構造部を有する蛍光色素（Ｆ）は適度な親水性と、適度な排除体積効果を有することができ、得られる蛍光色素標識生体分子は優れた蛍光強度を示すことができると考えられる。
　また、上記一般式（α）で表されるシアニン色素は、蛍光色素（Ｆ）として十分な親水性を付与する観点から、一般式（α）で表されるシアニン色素１分子あたりの親水性基の数は、２個以上であることが好ましく、２～８個であることがより好ましく、２～６個であることがさらに好ましく、３～６個であることが特に好ましい。
　親水性基としては、前述のＲ２２～Ｒ２５及びＲ３２～Ｒ３５が採りうる親水性基の記載を適用することができる。
　親水性基の位置は、特段の断りがない限り特に制限されず、上記親水性基を有する基としては、例えば、Ｒ１１～Ｒ１３、Ｒ２２～Ｒ２５、Ｒ３２～Ｒ３５、Ｒ４１又はＲ４２が好ましく挙げられる。
　なお、上記一般式（α）又は（β）で表される構造中において、いずれの置換基から水素原子が１つ除かれて１価の構造部（蛍光体部Ｍ）となってもよいが、例えば、連結基Ｕから水素原子が１つ除かれて１価の構造部となるか、又は、Ｒ１２（好ましくはインドリン環及びインドレニン環からの結合原子数が等しくなる炭素原子上のＲ１２）として採り得る置換基から水素原子が１つ除かれることにより１価の構造部となることが好ましい。
　なお、特段の断りのない限り、一般式（α）及び（β）における置換基の記載は、一般式（α）及び（β）においてのみ適用する置換基の記載とする。
　Ｍとして採りうる生理活性物質部としては、生理活性物質からなる構造部である限り、特に制限することなく用いることができる。生理活性物質としては、例えば、ビタミン、補酵素、ホルモン、抗生物質、神経伝達物質、サイトカイン等が挙げられ、より具体的には、特開２０２１－０２０９５６の段落［００９５］に記載の、カリチアマイシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、シクロシチジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキセート、シスプラチンもしくはその誘導体、オーリスタチンもしくはその誘導体、メイタンシンもしくはその誘導体、タキソールもしくはその誘導体、カンプトテシンもしくはその誘導体などであり、特開２０２１―０２０９５６の段落［００９５］～［００９９］の記載を適用することができる。
　Ｍとして採りうるプロドラッグ部としては、生体内で代謝されて生理活性物質に変化する化合物からなる構造部である限り、特に制限することなく用いることができる。プロドラッグとしては、例えば、特開２０２０－１０５１８７の段落[０００３]の記載（２－ピロリノドキソルビシンのプロドラッグ形態）を適用することができる。
　Ｍとして採りうる放射性同位体含有部としては、医療分野で利用可能な放射性同位体を含む構造部である限り、特に制限することなく用いることができる。放射性同位体としては、例えば、ヨウ素１３１、インジウム１１１、イットリウム９０、およびルテチウム１７７、銅６４が挙げられるが、これらに制限されない。特開２０２１－１１４８３の段落［０２２５］の記載を適用することができる。放射性同位体を含む構造部としては、上記放射性同位体がアミノ基もしくは第三級アミンの窒素原子、スルファニル基、アリール基又はヘテロアリール基等に結合又は配位した構造部が挙げられる。上記放射性同位体に第三級アミンの窒素原子が配位した構造部としては、上記放射性同位体にＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸）などが配位し錯体を形成した構造部が挙げられ、上記放射性同位体にスルファニル基が配位した構造部としては、ジアセチルビス（Ｎ（４）－メチルチオセミカルバゾン）銅（ＩＩ）などの錯体からなる構造部が挙げられる。
＜一般式（III）で表される化合物＞
　上記一般式（II）で表される化合物は、下記一般式（III）で表されることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　式中、Ｙ１～Ｙ３、Ｚ１～Ｚ３及びＷ１～Ｗ３は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、スルファニル基、アリール基、ヘテロアリール基又はアニオン性基を示す。
　ＬＬ３及びＬＬ４は、２価の連結基を示す。
　ｓ、ｔ及びｕは０以上の整数である。
　Ｒ４～Ｒ７、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ５、Ｌ６、Ｘ１～Ｘ３、Ｍ、ｎ及びｍは上述の一般式（II）におけるＲ４～Ｒ７、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ５、Ｌ６、Ｘ１～Ｘ３、Ｍ、ｎ及びｍと同義である。
　ただし、ｓ、ｔ又はｕで括られる構造は上述の一般式（Ｉ）で表される構造であることはない。すなわち、Ｙ１がＷ１もしくはＺ１と結合するか、Ｙ２がＷ２もしくはＺ２と結合するか、又は、Ｙ３がＷ３もしくはＺ３と結合して、一般式（Ｉ）で表される構造を形成することはない。
　Ｙ１～Ｙ３、Ｚ１～Ｚ３及びＷ１～Ｗ３は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、スルファニル基、アリール基、ヘテロアリール基又はアニオン性基を示す。
　Ｙ１～Ｙ３、Ｚ１～Ｚ３又はＷ１～Ｗ３として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基と同義であり、好ましい範囲も同じである。
　Ｙ１～Ｙ３、Ｚ１～Ｚ３又はＷ１～Ｗ３として採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基及びヘテロアリール基は、無置換であってもよく、置換基を有していてもよく、有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、例えば、アリール基、ハロゲン原子又はアニオン性基が好ましい。
　また、Ｙ１～Ｙ３、Ｚ１～Ｚ３又はＷ１～Ｗ３を構成しうる上記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基及びヘテロアリール基が有していてもよい置換基は、さらに後述する置換基群Ｔから選択される置換基で置換されていてもよく、例えば、アニオン性基が好ましい。
　Ｙ１～Ｙ３は、水素原子、アルキル基、アリール基又はヘテロアリール基が好ましく、水素原子又はアルキル基がより好ましい。
　Ｗ１～Ｗ３は、水素原子、アルキル基、アリール基又はヘテロアリール基が好ましく、水素原子がより好ましい。
　Ｚ１～Ｚ３は、アルキル基、アリール基又はヘテロアリール基が好ましく、アルキル基がより好ましい。
　一般式（III）で表される化合物においては、一般式（Ｉ）で表される構造間の相互作用を抑制するため、荷電反発作用を有する基を有することが好ましく、この観点から、Ｚ１～Ｚ３の少なくとも１つは、アニオン性基を含む基であることが好ましく、アニオン性基を含むアルキル基であることがより好ましい。
　ここで、「Ｚ１～Ｚ３の少なくとも１つは、アニオン性基を含む基である」とは、下記条件（Ｚ１）～（Ｚ３）の少なくとも１つを満たすことを意味する。
条件（Ｚ１）：上記ｓが１以上の整数であって上記Ｚ１がアニオン性基を含む基である。
条件（Ｚ２）：上記ｔが１以上の整数であって上記Ｚ２がアニオン性基を含む基である。
条件（Ｚ３）：上記ｕが１以上の整数であって上記Ｚ３がアニオン性基を含む基である。
　また、「Ｚ１～Ｚ３の少なくとも１つは、アニオン性基を含むアルキル基である」とは、上記条件（Ｚ１）～（Ｚ３）における「アニオン性基を含む基」を「アニオン性基を含むアルキル基」に読み替えた上で、上記条件（Ｚ１）～（Ｚ３）の少なくとも１つを満たすことを意味する。
　ＬＬ３及びＬＬ４は、２価の連結基を示し、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることが好ましい。ＲＡは水素原子又は置換基を示す。
　ＬＬ３及びＬＬ４を構成しうる、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡとしては、上述のＬ１～Ｌ７を構成しうる、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡの記載を好ましく適用することができる。
　ＬＬ３は、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、アルキレン基、アリーレン基又はヘテロアリーレン基が好ましく、＞Ｃ＝Ｏ又はＮＲＡがより好ましい。なお、ＲＡは水素原子が好ましい。
　ＬＬ４は、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、アルキレン基、アリーレン基又はヘテロアリーレン基が好ましく、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡがより好ましい。なお、ＲＡは水素原子が好ましい。
　ｓ、ｔ及びｕは０以上の整数である。
　ｓ、ｔ及びｕの上限値に特に制限はなく、例えば、２０以下とすることができ、１０以下が好ましく、５以下がより好ましい。なかでも、ｓ、ｔ及びｕは０又は１の整数であることが好ましい。
　なお、ｔで括られる構造とｕで括られる構造のどちらにも分類できる場合には、ｕで括られる構造に優先的に分類するものとする。
＜一般式（IV）で表される化合物＞
　上記一般式（III）で表される化合物は、下記一般式（IV）で表されることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
　式中、Ｙ４及びＹ５は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、スルファニル基、アリール基、ヘテロアリール基又はアニオン性基を示す。
　Ｒ４～Ｒ７、Ｌ２、Ｌ５、Ｘ１～Ｘ３、Ｙ１～Ｙ３、Ｚ１～Ｚ３及びＷ１～Ｗ３、Ｍ、ｎ、ｍ、ｓ、ｔ及びｕは前述の一般式（III）におけるＲ４～Ｒ７、Ｌ２、Ｌ５、Ｘ１～Ｘ３、Ｙ１～Ｙ３、Ｚ１～Ｚ３及びＷ１～Ｗ３、Ｍ、ｎ、ｍ、ｓ、ｔ及びｕと同義である。
　なお、化合物のＲ７側の末端が、カルボキシ基であるか、又は、カルボニルで結合するタイプの生体物質に結合可能な置換基もしくはカルボニルで結合するタイプの固体支持体に結合可能な置換基である場合、式中における「－Ｃ＝Ｏ－Ｒ７」の表記全体で、カルボキシ基、カルボニルで結合するタイプの生体物質に結合可能な置換基、又は、カルボニルで結合するタイプの固体支持体に結合可能な置換基として解釈してもよい。
　Ｙ４及びＹ５は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、スルファニル基、アリール基、ヘテロアリール基又はアニオン性基を示す。
　Ｙ４又はＹ５として採り得る、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基、ヘテロアリール基及びアニオン性基と同義であり、好ましい範囲も同じである
　なお、Ｙ４又はＹ５として採り得る上記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アミノ基、アルコキシ基、アリール基及びヘテロアリール基は、いずれも、無置換の基であってもよく、置換基を有する基であってもよい。
　Ｙ４及びＹ５は、水素原子又はアルキル基が好ましく、水素原子がより好ましい。
＜一般式（Ｖ）で表される化合物＞
　上記一般式（IV）で表される化合物は、下記一般式（Ｖ）で表されることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
　式中、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａは、水素原子、ヒドロキシ基、スルファニル基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、ヘテロアリール基、アミノ基、アシル基、アニオン性基、カチオン性基又はＱを示す。ただし、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａの少なくとも１つはＱを示す。
　Ｌ８及びＬ９は、連結基を示す。ただし、Ｒ６ＡがＱである場合のＬ９は、＞ＮＹ４とＲ６Ａとを結ぶ最短原子数が３以上の連結基であり、Ｒ７ＡがＱである場合のＬ８は、＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短原子数が３以上の連結基である。
　Ｒ４、Ｒ５、Ｌ２、Ｌ５、Ｘ１～Ｘ３、Ｙ１～Ｙ５、Ｚ１～Ｚ３、Ｗ１～Ｗ３、Ｍ、Ｑ、ｎ、ｍ、ｓ、ｔ及びｕは前述の一般式（IV）におけるＲ４、Ｒ５、Ｌ２、Ｌ５、Ｘ１～Ｘ３、Ｙ１～Ｙ５、Ｚ１～Ｚ３、Ｗ１～Ｗ３、Ｍ、Ｑ、ｎ、ｍ、ｓ、ｔ及びｕと同義である。
　Ｒ６Ａ又はＲ７Ａ及びＬ９又はＬ８は、それぞれ、Ｒ６Ａ又はＲ７Ａが無置換の基であって、Ｌ９又はＬ８が最長の基となるようにして決定する。ただし、－Ｌ９Ｒ６Ａ又は－Ｌ８Ｒ７Ａで表される基が、アニオン性基、カチオン性基又はＱを有する場合には、最も末端側（－Ｌ９Ｒ６ＡにおけるＲ６Ａ側、－Ｌ８Ｒ７ＡにおけるＲ７Ａ側）に位置するアニオン性基、カチオン性基又はＱがＲ６Ａ又はＲ７Ａとなるようにして決定する。
　Ｒ６Ａ及びＲ７Ａは、水素原子、ヒドロキシ基、スルファニル基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、ヘテロアリール基、アミノ基、アシル基、アニオン性基、カチオン性基又はＱを示す。ただし、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａの少なくとも１つはＱを示す。
　Ｒ６Ａ及びＲ７Ａとして採りうるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、ヘテロアリール基、アミノ基、アシル基、アニオン性基及びカチオン性基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、ヘテロアリール基、アミノ基、アシル基、アニオン性基及びカチオン性基と同義であり、好ましい範囲も同じである。ただし、いずれも無置換の基である。
　Ｒ６Ａ及びＲ７Ａとして採り得るＱは、前述のＱと同義であり、好ましい範囲も同じである。
　Ｒ６Ａは、アルキル基、スルファニル基、アリール基、ヘテロアリール基又はＱが好ましく、アルキル基又はＱがより好ましい。
　Ｒ７Ａは、アルキル基、スルファニル基、アリール基、ヘテロアリール基又はＱが好ましく、アルキル基又はＱがより好ましい。
　Ｌ８及びＬ９は、連結基を示す。
　Ｌ８及びＬ９として採り得る連結基としては、例えば、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることが好ましい。ＲＡは水素原子又は置換基を示す。
　Ｌ８及びＬ９を構成しうるアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡは、前述のＬ１～Ｌ７を構成しうるアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡの記載を好ましく適用することができる。
　Ｌ８及びＬ９を構成しうる上記アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基が有していてもよい置換基としては、特に限定されず、好ましくは、後述する置換基群Ｔから選択され、より好ましくは、ハロゲン原子、アリール基又はアルキル基が挙げられる。また、Ｌ８又はＬ９を構成しうる上記アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基が有していてもよい置換基は、さらに後述する置換基群Ｔから選択される置換基で置換されていてもよく、例えば、アニオン性基が好ましい。
　また、Ｌ８又はＬ９を構成しうる上記アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基が有していてもよい置換基の数は、構造として採り得る限り特に制限されず、少なくとも１個以上とすることができ、上限値としては、特に制限されず、例えば、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基における全ての水素原子が置換基で置換されていてもよい。
　ただし、Ｒ６ＡがＱである場合のＬ９は、＞ＮＹ４とＲ６Ａとを結ぶ最短原子数が３以上の連結基であり、Ｒ７ＡがＱである場合のＬ８は、＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短原子数が３以上の連結基である。
　上記の２価の連結基Ｌ９について、「＞ＮＹ４とＲ６Ａとを結ぶ最短原子数」とは、＞ＮＹ４とＲ６Ａとを結ぶ最短鎖を構成する原子数を意味し、上記の２価の連結基Ｌ８について、「＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短原子数」とは、＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短鎖を構成する原子数を意味する。なお、＞ＮＹ４とはＬ９に直接結合している＞ＮＹ４を意味し、＞Ｃ＝ＯとはＬ８に直接結合している＞Ｃ＝Ｏを意味する。例えば、後述の実施例で使用する化合物（４）においては、Ｌ８が－ＮＨ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）４Ｃ２Ｈ４－であり、Ｒ７Ａが－ＣＯＯＨであるため、＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短鎖を構成する原子数は１５である。
　上記一般式（Ｖ）で表される化合物は、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａの少なくとも１つがＱである。このＱが最短原子数３以上の連結基により＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＹ４と連結されていることにより、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａを結ぶ主鎖とＭとの結合点（すなわち、Ｌ５とＲ５が結合する炭素原子、又は、Ｌ２とＲ４が結合する炭素原子）からの距離が遠くなり、Ｑ周辺の立体障害が減少することにより、化合物中の蛍光体部Ｍの数が２以上である色素多量体の抗体に対する反応性が向上し、蛍光標識率（ＤＯＬ）を向上させることができる。
　上記のＲ６Ａ及びＲ７Ａの少なくとも１つがＱであって、このＱと、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＹ４とを連結する連結基の最短原子数（Ｒ６ＡがＱである場合の＞ＮＹ４とＲ６Ａとを結ぶ最短原子数及びＲ７ＡがＱである場合の＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短原子数）は、３～６０が好ましく、１２～４０がより好ましく、１５～４０がより好ましい。
　本発明においては、合成の簡便さの観点から、Ｌ８及びＬ９のいずれか一方は、－（Ｌ－Ｏ）ｇ－を含む基であることが好ましく、Ｌ８が－（Ｌ－Ｏ）ｇ－を含む基であることがより好ましい。
　Ｌ８は、アルキレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることがより好ましく、アルキレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、－［ＮＲＡ－アルキレン－Ｃ（＝Ｏ）］－で表される繰り返し単位（繰り返し数は１～２０が好ましい）の右側に－ＮＲＡ－アルキレン基が結合した基、－ＮＲＡ－（Ｌ－Ｏ）ｇ－アルキレン又は－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｌ－Ｏ）ｇ－アルキレンがさらに好ましい。
　Ｌ９は、アルキレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることがより好ましく、アルキレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ、＞ＮＲＡ、－［ＮＲＡ－アルキレン－Ｃ（＝Ｏ）］－で表される繰り返し単位（繰り返し数は１～２０が好ましい）の右側に－ＮＲＡ－アルキレン基が結合した基、－ＮＲＡ－（Ｌ－Ｏ）ｇ－アルキレン又は－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｌ－Ｏ）ｇ－アルキレンがさらに好ましい。
＜一般式（VI）で表される化合物＞
　上記一般式（II）で表される化合物は、下記一般式（VI）で表されることも好ましい。下記一般式（VI）で表される化合物は、上記一般式（II）で表される化合物において、Ｌ１及びＬ４が＞ＮＨであって、Ｌ３及びＬ６が＞Ｃ＝Ｏであり、Ｌ７が単結合であり、Ｒ４及びＲ５が水素原子であり、Ｌ１とＬ２、並びに、Ｌ４とＬ５が、それぞれ互いに結合して特定の５員環を形成している化合物に相当する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
　式中、Ｘ４～Ｘ９は、－Ｏ－、－Ｓ－、＞ＮＲ１０１又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３を示す。
　ただし、Ｘ４～Ｘ６のうちの１つは＞ＮＲ１０１又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であり、かつ、Ｘ４～Ｘ６のうちの１つが＞ＮＲ１０１の場合はＲ１０１が－Ｌ１０－Ｍであり、Ｘ４～Ｘ６のうちの１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３の場合はＲ１０２又はＲ１０３が－Ｌ１０－Ｍである。Ｘ７～Ｘ９のうちの１つは＞ＮＲ１０１又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であり、かつ、Ｘ７～Ｘ９のうちの１つが＞ＮＲ１０１の場合はＲ１０１が－Ｌ１１－Ｍであり、Ｘ７～Ｘ９のうちの１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３の場合はＲ１０２又はＲ１０３が－Ｌ１１－Ｍである。
　－Ｌ１０－Ｍ及び－Ｌ１１－ＭのいずれでもないＲ１０１～Ｒ１０３は、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アシル基、－ＮＲ８Ｒ９、－ＯＲ１０又はアニオン性基を示す。
　Ｌ１０及びＬ１１は、単結合又は２価の連結基を示す。
　ｎ１は２以上の整数である。
　Ｒ６～Ｒ１０、Ｘ１～Ｘ３、Ｍ及びｍは前述の一般式（II）におけるＲ６～Ｒ１０、Ｘ１～Ｘ３、Ｍ及びｍと同義である。
　なお、化合物のＲ７側の末端が、カルボキシ基であるか、又は、カルボニルで結合するタイプの生体物質に結合可能な置換基もしくはカルボニルで結合するタイプの固体支持体に結合可能な置換基である場合、式中における「－Ｃ＝Ｏ－Ｒ７」の表記全体で、カルボキシ基、カルボニルで結合するタイプの生体物質に結合可能な置換基、又は、カルボニルで結合するタイプの固体支持体に結合可能な置換基として解釈してもよい。
　Ｘ４～Ｘ６としては、Ｘ４～Ｘ６のうちの１つが＞ＮＲ１０１又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であり、かつ、Ｘ４～Ｘ６のうちの１つが＞ＮＲ１０１の場合はＲ１０１が－Ｌ１０－Ｍであり、Ｘ４～Ｘ６のうちの１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３の場合はＲ１０２又はＲ１０３が－Ｌ１０－Ｍであること以外は、特段の断りのない限り、前述の一般式（Ｉ）におけるＸ１～Ｘ３の記載を適用することができる。
　また、Ｘ７～Ｘ９としては、Ｘ７～Ｘ９のうちの１つが＞ＮＲ１０１又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であり、かつ、Ｘ７～Ｘ９のうちの１つが＞ＮＲ１０１の場合はＲ１０１が－Ｌ１１－Ｍであり、Ｘ７～Ｘ９のうちの１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３の場合はＲ１０２又はＲ１０３が－Ｌ１１－Ｍであること以外は、特段の断りのない限り、前述の一般式（Ｉ）におけるＸ１～Ｘ３の記載を適用することができる。
　すなわち、Ｘ４及びＸ７としては前述のＸ１の記載を、Ｘ５及びＸ８としては前述のＸ２の記載を、Ｘ６及びＸ９としては前述のＸ３の記載をそれぞれ適用することができ、－Ｌ１０－Ｍ及び－Ｌ１１－ＭのいずれでもないＲ１０１、Ｒ１０２及びＲ１０３としては、前述の一般式（Ｉ）におけるＲ１、Ｒ２及びＲ３の記載をそれぞれ適用することができる。
　Ｘ４～Ｘ９のうち、－Ｌ１０－Ｍ及び－Ｌ１１－Ｍのいずれも有しない＞ＮＲ１０１及び＞ＣＲ１０２Ｒ１０３において、Ｒ１０１はアルキル基が好ましく、Ｒ１０２及びＲ１０３は水素原子であることが好ましい。
　Ｘ４～Ｘ６のうち、上記の－Ｌ１０－Ｍを有しない２つの基としては、少なくとも１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であることが好ましく、少なくとも１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であって、残りの１つが－Ｏ－、－Ｓ－又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であることがより好ましく、２つとも＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であることがさらに好ましい。
　Ｘ７～Ｘ９のうち、上記の－Ｌ１１－Ｍを有しない２つの基としては、少なくとも１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であることが好ましく、少なくとも１つが＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であって、残りの１つが－Ｏ－、－Ｓ－又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であることがより好ましく、２つとも＞ＣＲ１０２Ｒ１０３であることがさらに好ましい。
　Ｘ４～Ｘ６のうち、Ｒ１０１～Ｒ１０３のいずれか１つとして－Ｌ１０－Ｍを有する＞ＮＲ１０１又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３としては、Ｒ１０３が－Ｌ１０－Ｍであって、＞ＣＲ１０２Ｒ１０３で表される基が好ましく、Ｒ１０２が水素原子であり、Ｒ１０３が－Ｌ１０－Ｍであって、＞ＣＲ１０２Ｒ１０３で表される基がより好ましい。
　Ｘ７～Ｘ９のうち、Ｒ１０１～Ｒ１０３のいずれか１つとして－Ｌ１１－Ｍを有する＞ＮＲ１０１又は＞ＣＲ１０２Ｒ１０３としては、Ｒ１０３が－Ｌ１１－Ｍであって、＞ＣＲ１０２Ｒ１０３で表される基が好ましく、Ｒ１０２が水素原子であり、Ｒ１０３が－Ｌ１１－Ｍであって、＞ＣＲ１０２Ｒ１０３で表される基がより好ましい。
　Ｘ４～Ｘ６のうち、－Ｌ１０－Ｍを有する基は特に制限されないが、Ｘ５であることが好ましい。
　Ｘ７～Ｘ９のうち、－Ｌ１１－Ｍを有する基は特に制限されないが、Ｘ８であることが好ましい。
　Ｌ１０及びＬ１１は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種もしくは２種以上を組み合わせた基であることが好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種もしくは２種以上を組み合わせた基であることがより好ましく、＊－Ｌｘ１－Ｌｙ１－＊＊で表される基であることがさらに好ましい。
　Ｌ１０及びＬ１１を構成し得るアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡについては、特段の断りのない限り、前述のＬ２及びＬ５を構成し得るアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡの記載を適用することができる。
　Ｌｘ１は、単結合、又は、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基及びヘテロアリーレン基のうちの１種もしくは２種以上を組み合わせた基であって、Ｌｙ１は、単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである。なお、＊－Ｌｘ１－Ｌｙ１－＊＊において、＊はＸ４～Ｘ９への結合手を示し、＊＊はＭとの結合手を示す。
　Ｌ１０及びＬ１１は、上記の＊－Ｌｘ１－Ｌｙ１－＊＊で表される基のなかでも、Ｌｙ１が単結合、－Ｓ－、＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである基が好ましく、Ｌｙ１が＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである基がより好ましく、Ｌｘ１が単結合であって、Ｌｙ１が＞Ｃ＝Ｏ又は＞ＮＲＡである基がさらに好ましい。
　なお、上記一般式（VI）で表される化合物においては、Ｍと、Ｘ４～Ｘ９のいずれかとを結ぶ連結鎖（Ｌ１０を含む連結鎖及びＬ１１を含む連結鎖の各連結鎖）における最短原子数は、例えば、１～６０であればよく、１～４０が好ましい。Ｍが蛍光体部である場合には、上記最短原子数は、蛍光体部Ｍのうち、蛍光を示すための共役構造部分と、Ｘ４～Ｘ９のいずれかとを結ぶ連結鎖のうち最短鎖を構成する原子数を意味する。
　なお、上記一般式（VI）で表される化合物においては、Ｍの共役構造部分－前述の連結基ＺＺＺ－Ｌ１０－で表される構造のうち「－連結基ＺＺＺ－Ｌ１０－」で表される連結鎖のいずれかの部分、及び、Ｍの共役構造部分－前述の連結基ＺＺＺ－Ｌ１１－で表される構造のうち「－連結基ＺＺＺ－Ｌ１１－」で表される連結鎖のいずれかの部分に前述の－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－で表される構造（ｂも、前述の通りである。）を有することも好ましい。
　ｎ１は２以上の整数である。
　上記一般式（VI）で表される化合物は、前述の一般式（III）～（Ｖ）のいずれかで表される化合物に比べて、２つの蛍光体部間を結ぶリンカー主鎖が剛直であり、色素会合をより抑制できるため、ｎ１の下限値としては、３以上の整数が好ましく、５以上の整数であれば、蛍光強度を向上させる十分な効果が得られる点でより好ましい。このことは、上記蛍光体部の数が２である場合であっても、２以上である場合であっても同様である。
　ｎ１の上限値は例えば、３６以下の整数が好ましく、２４以下の整数がより好ましく、１８以下の整数がさらに好ましい。すなわち、ｎ１は３～３６の整数が好ましく、５～２４の整数がより好ましい。
＜一般式（VII）で表される化合物＞
　上記一般式（VI）で表される化合物は、下記一般式（VII）で表されることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
　式中、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａは、水素原子、ヒドロキシ基、スルファニル基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、ヘテロアリール基、アミノ基、アシル基、アニオン性基、カチオン性基又はＱを示す。ただし、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａの少なくとも１つはＱを示す。
　Ｌ１２及びＬ１３は、連結基を示す。
　ｎａ及びｎｂは０以上の整数である。
　Ｌ１０、Ｌ１１、Ｘ１～Ｘ９、Ｍ、Ｑ、ｎ１及びｍは前述の一般式（VI）におけるＬ１０、Ｌ１１、Ｘ１～Ｘ９、Ｍ、Ｑ、ｎ１及びｍと同義である。
　なお、化合物のＲ７Ａ側の末端が、カルボキシ基であるか、又は、カルボニルで結合するタイプの生体物質に結合可能な置換基もしくはカルボニルで結合するタイプの固体支持体に結合可能な置換基である場合、式中における「－Ｃ＝Ｏ－Ｌ１２－Ｒ７Ａ」の表記全体で、カルボキシ基、カルボニルで結合するタイプの生体物質に結合可能な置換基、又は、カルボニルで結合するタイプの固体支持体に結合可能な置換基として解釈してもよい。
　Ｒ６Ａ及びＲ７Ａは、特段の断りのない限り、前述の一般式（Ｖ）におけるＲ６Ａ及びＲ７Ａと同義である。すなわち、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａとしては前述の一般式（Ｖ）におけるＲ６Ａ及びＲ７Ａの記載を適用することができる。
　Ｒ６Ａ又はＲ７Ａ及びＬ１２又はＬ１３は、それぞれ、Ｒ６Ａ又はＲ７Ａが無置換の基であって、Ｌ１２又はＬ１３が最長の基となるようにして決定する。ただし、－Ｌ１３Ｒ６Ａ又は－Ｌ１２Ｒ７Ａで表される基が、アニオン性基、カチオン性基又はＱを有する場合には、最も末端側（－Ｌ１３Ｒ６ＡにおけるＲ６Ａ側、－Ｌ１２Ｒ７ＡにおけるＲ７Ａ側）に位置するアニオン性基、カチオン性基又はＱがＲ６Ａ又はＲ７Ａとなるようにして決定する。
　Ｌ１２及びＬ１３は、連結基を示す。
　Ｌ１２及びＬ１３として採り得る連結基としては、例えば、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることが好ましい。ＲＡは水素原子又は置換基を示す。
　Ｌ１２及びＬ１３を構成し得るアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡとしては、前述の一般式（Ｖ）のＬ８又はＬ９を構成し得るアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、アリーレン基、ヘテロアリーレン基及び＞ＮＲＡの記載を適用することができる。
　上記一般式（VII）で表される化合物は、（Ａ）ｎａが１以上の整数であって、かつＲ６ＡがＱであり、及び／又は、（Ｂ）ｎｂが１以上の整数であって、かつＲ７ＡがＱであることが好ましい。
　ただし、上記（Ａ）である場合、Ｌ１３の最短連結原子数は７以下であり、上記（Ｂ）である場合、Ｌ１２の最短連結原子数は７以下である。
　上記の２価の連結基Ｌ１３について、「Ｌ１３の最短連結原子数」とは、ｎａが１以上の整数である場合は、（　）ｎａで括られる構造に示されたＮのうちＬ１３に直接結合しているＮとＲ６Ａとを結ぶ最短鎖を構成する原子数を意味し、ｎａが０である場合は、（　）ｍで括られる構造に示されたＮのうちＬ１３に直接結合しているＮとＲ６Ａとを結ぶ最短鎖を構成する原子数を意味する。
　また、上記の２価の連結基Ｌ１２について、「Ｌ１２の最短連結原子数」とは、ｎｂが１以上の整数である場合は、（　）ｎｂで括られる構造に示された＞Ｃ＝ＯのうちＬ１２に直接結合している＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短鎖を構成する原子数を意味し、ｎｂが０である場合は、一般式（VII）において（　）ｎｂで括られる構造の左側に示された＞Ｃ＝ＯとＲ７Ａとを結ぶ最短鎖を構成する原子数を意味する。
　例えば、後述の実施例で使用する化合物（１）～（３）においては、Ｌ１２が－ＮＨＣ２Ｈ４－であり、Ｒ７Ａが－ＣＯＯＨであるため、Ｌ１２の最短連結原子数は３である。
　上記一般式（VII）で表される化合物は、Ｒ６Ａ及びＲ７Ａの少なくとも１つがＱである。特に、上記の（Ａ）及び／又は（Ｂ）を満たすことにより、リンカー主鎖の運動性が低下することで、色素会合をより抑制できると考えられる。
　上記のＬ１２の最短連結原子数及びＬ１３の最短連結原子数は、１～５が好ましく、１～４がより好ましい。
　本発明においては、合成の簡便さの観点から、Ｌ１２及びＬ１３のいずれか一方は、－（Ｌ－Ｏ）ｇ－を含む基であることも好ましく、Ｌ１２が－（Ｌ－Ｏ）ｇ－を含む基であることもより好ましい。
　Ｌ１２は、アルキレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることがより好ましく、－ＮＲＡ－アルキレン基又は－ＮＲＡ－（Ｌ－Ｏ）ｇ－アルキレン基がより好ましく、－ＮＲＡ－アルキレン基がさらに好ましい。
　Ｌ１３は、アルキレン基、－Ｏ－、＞Ｃ＝Ｏ及び＞ＮＲＡのうちの１種又は２種以上を組み合わせた連結基であることがより好ましく、＞ＮＲＡ又は＞Ｃ＝Ｏがより好ましい。
　ｎａ及びｎｂは０以上の整数である。
　Ｒ６ＡがＱの場合、ｎａは０～２０の整数が好ましく、２～２０の整数がより好ましく、４～１８の整数がさらに好ましい。
　Ｒ７ＡがＱの場合、ｎｂは０～２０の整数が好ましく、２～２０の整数がより好ましく、４～１８の整数がさらに好ましい。なお、ｎｂの下限値は０であってもよく、この場合、ｎｂは０～２０の整数が好ましく、０～１８の整数がより好ましい。
　Ｒ６ＡがＱでない場合、ｎａは０～２０の整数が好ましく、０～１０の整数がより好ましく、０～５の整数であることがさらに好ましい。
　Ｒ７ＡがＱでない場合、ｎｂは０～２０の整数が好ましく、０～１０の整数がより好ましく、０～５の整数であることがさらに好ましい。
　蛍光色素（Ｆ）のうち、一般式（II）～（VII）のいずれかで表される化合物をペプチド合成法を利用して得る場合、通常、紙面上右側がＣ末端構造、紙面上左側がＮ末端構造となる。
　蛍光色素（Ｆ）は、上記Ｑで表される置換基、すなわち、カルボキシ基、生体物質に結合可能な置換基又は固体支持体に結合可能な置換基を少なくとも１つ含むことが好ましい。
　蛍光色素（Ｆ）等の蛍光色素は、カルボキシ基又は後述の生体物質に結合可能な置換基により、生体物質と結合し、目的とする蛍光色素標識生体分子を得ることができる。なお、カルボキシ基は、生体物質に結合可能な置換基を常法により容易に誘導することができる。
　また、蛍光色素は、カルボキシ基又は後述の固体支持体に結合可能な置換基により、マイクロ粒子等の固体支持体と結合し、目的とする標識マイクロ粒子などを得ることができる。マイクロ粒子とは、特に限定されないが、ガラス製ビーズ、磁気ビーズ等の非ポリマー製ビーズ、ポリマー製ビーズなどを含めた、蛍光色素への結合に有用な小型粒子を挙げることができる。ある種の実施形態では、マイクロ粒子はポリスチレン製ビーズを含む。小型粒子とは、蛍光標識において常用されるサイズであれば特に制限されないが、通常、平均粒子径は１０ｎｍ～１０μｍである。なお、カルボキシ基は、固体支持体に結合可能な置換基を常法により容易に誘導することができる。
　本発明において、便宜上、生体物質に結合可能な置換基及び固体支持体に結合可能な置換基にはカルボキシ基は含まれず、「生体物質に結合可能な置換基」は、カルボキシ基から誘導される生体物質に結合可能な置換基を含み、「固体支持体に結合可能な置換基」は、カルボキシ基から誘導される固体支持体に結合可能な置換基を含む。ただし、上述の通り、カルボキシ基によって生体物質又は固体支持体に結合することも可能である。
　蛍光色素（Ｆ）において、上記Ｑで表される置換基を有する位置に特に制限はないが、一般式（Ｉ）で表される構造及び蛍光体部以外の構造中に有することが好ましく、一般式（II）で表される化合物においては、Ｒ６及びＲ７の少なくとも一方に有することが好ましい。
　蛍光色素（Ｆ）中における上記Ｑで表される置換基の数は、合計で、少なくとも１つ以上であればよく、検出対象物質の定量の観点から、１～３つが好ましく、１つ又は２つがより好ましく、１つがさらに好ましい。
　また、蛍光色素（Ｆ）は、化合物として十分な親水性を付与する観点から、蛍光体部以外の位置に、後述のアニオン性基を有することも好ましく、例えば、１個以上有することが好ましく、１～８個有することがより好ましく、１～６個有することがさらに好ましい。
　アニオン性基の位置は、特段の断りがない限り特に制限されず、上記アニオン性基を有する基としては、例えば、一般式（III）で表される化合物においては、Ｚ１～Ｚ３又はＸ１～Ｘ３が好ましく挙げられる。
　以下に、蛍光色素（Ｆ）の具体例を示すが、本発明はこれらの化合物に限定されない。下記具体例において、スルホ基及びホスホノオキシ基は、水素イオンが解離して塩構造を採っていてもよい。下記具体例において、Ｄｙｅは蛍光体部を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
　蛍光色素（Ｆ）等の蛍光色素は、化合物が有する少なくとも１つの生体物質に結合可能な置換基によって、タンパク質（ペプチドを含む）、アミノ酸、核酸、ヌクレオチド、糖鎖及び脂質などの生体物質に結合させることができ、蛍光色素標識生体分子として用いることができる。
　生体物質に結合可能な置換基としては、生体物質に作用（付着を含む）もしくは結合するための基であれば、特に制限することなく用いることができ、例えば、国際公開第２００２／０２６８９１号等に記載の置換基を挙げることができる。具体的には、国際公開第２００２／０２６８９１号のＴａｂｌｅ２に記載の求電子性基及び求核性基、並びに国際公開第２００２／０２６８９１号１８頁１６行目～１９頁１３行目に記載の反応性基Ｒｘの記載を本発明に適用することができる。
　「生体物質に結合可能な置換基」としては、具体的には、下記の構造を挙げることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
　Ｘは、ヨウ素原子、臭素原子などのハロゲン原子を意味する。＊は結合手を示す。
　上記の他にも、「生体物質に結合可能な置換基」として、ペプチド構造（ポリアミノ酸構造）、長鎖アルキル基等を用いることができる。
　なかでも、ＮＨＳエステル構造（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル構造）、スクシンイミド構造、マレイミド構造、アジド基、アセチレン基、ペプチド構造（ポリアミノ酸構造）、長鎖アルキル基（好ましくは、炭素数１２～３０）、４級アンモニウム基が好ましく挙げられる。
　蛍光色素（Ｆ）のうち、生体物質に結合可能な置換基を少なくとも１つ有する化合物の具体例としては、例えば、上述の蛍光色素（Ｆ）の例示化合物において、カルボキシ基を上記の生体物質に結合可能な置換基に適宜置き換えた形態も、具体例として挙げられる。なお、本発明はこれらの化合物に限定されない。例えば、これらの具体例において、カルボキシ基及びスルホ基等の解離性の水素原子を有する基については、水素原子が解離して塩構造を採っていてもよい。
　蛍光色素（Ｆ）等の蛍光色素は、化合物が有する少なくとも１つの固体支持体に結合可能な置換基によって、上述のマイクロ粒子などの固体支持体に結合させることができ、固体支持体試薬として用いることができる。
　固体支持体に結合可能な置換基としては、固体支持体に作用（付着を含む）もしくは結合するための基であれば、特に制限することなく用いることができ、上述の生体物質に結合可能な置換基として挙げた置換基等を好ましく挙げることができる。なかでも、ＮＨＳエステル構造（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、スクシンイミド構造又はマレイミド構造が好ましく挙げられる。
　蛍光色素（Ｆ）のうち、固体支持体に結合可能な置換基を少なくとも１つ有する化合物の具体例としては、例えば、上述の蛍光色素（Ｆ）の例示化合物において、カルボキシ基を上記の固体支持体に結合可能な置換基に適宜置き換えた形態も、具体例として挙げられる。なお、本発明はこれらの化合物に限定されない。例えば、これらの具体例において、カルボキシ基及びスルホ基等の解離性の水素原子を有する基については、水素原子が解離して塩構造を採っていてもよい。
　蛍光色素（Ｆ）は、常法により合成できる。例えば、ペプチド固相合成等のペプチド合成に基づき合成することができ、国際公開第２０１８／１７４０７８号に記載のペプチド自動合成装置を用いた方法も好ましく適用することができる。蛍光体部、生理活性物質部、プロドラッグ部及び放射性同位体含有部についても、常法に基づき合成し、蛍光色素（Ｆ）中に導入することができる。
　生体物質に結合可能な置換基を有する化合物についても、常法により合成できる。例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｔｈｉｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｇｒｅｇ　Ｔ．　Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ著）を参照することができる。
＜蛍光色素標識生体分子＞
　蛍光色素標識生体分子とは、蛍光色素と生体物質とが結合した物質である。特に、蛍光色素（Ｆ）は蛍光体部に起因した蛍光性を有し、優れた蛍光強度を示すため、蛍光色素標識生体分子に好ましく用いることができる。蛍光色素と生体物質との結合は、蛍光色素と生体物質とが直接結合した形態でもよいし、連結基を介して連結した形態でもよい。
　上記生体物質としては、タンパク質（ペプチドを含む）、アミノ酸、核酸、ヌクレオチド、糖鎖及び脂質が好ましく挙げられる。タンパク質としては抗体が好ましく挙げられ、脂質としてはリン脂質、脂肪酸及びステロールが好ましく挙げられ、リン脂質がより好ましい。
　上記生体物質のうち、臨床病理的に有用な物質としては、特に制限されるものではないが、例えば、Ｉｇ（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ等の免疫グロブリン、補体、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、フェリチン、α１マイクログロブリン、β２マイクログロブリン等の血漿タンパク及びそれらの抗体、α－フェトプロテイン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、ＣＡ（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ）１９－９、ＣＡ‐１２５等の腫瘍マーカー及びそれらの抗体、黄体化ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト繊毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、エストロゲン、インスリン等のホルモン類及びそれらの抗体、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）関連抗原（ＨＢｓ、ＨＢｅ、ＨＢｃ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）等のウイルス感染関連物質及びそれらの抗体、等が挙げられる。
　さらに、ジフテリア菌、ボツリヌス菌、マイコプラズマ、梅毒トレポネーマ等のバクテリア及びそれらの抗体、トキソプラズマ、トリコモナス、リーシュマニア、トリパノソーマ、マラリア原虫等の原虫類及びそれらの抗体、ＥＬＭ３、ＨＭ１、ＫＨ２、ｖ６．５、ｖ１７．２、ｖ２６．２（由来マウス１２９、１２９／ＳＶ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ）等のＥＳ細胞（Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ）及びそれらの抗体、フェニトイン、フェノバルビタール等の抗てんかん薬、キニジン、ジゴキシン等の心血管薬、テオフィリン等の抗喘息薬、クロラムフェニコール、ゲンタマイシン等の抗生物質等の薬物類及びそれらの抗体、その他の酵素、菌体外毒素（スチレリジンＯ等）及びそれらの抗体等も挙げられる。また、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ、Ｆｖ等の抗体断片も用いる事ができる。
　蛍光色素と生体物質が相互作用して結合した具体的な形態としては、例えば、下記に記載する形態が挙げられる。
ｉ）蛍光色素中のペプチドと生体物質中のペプチドとの非共有結合（例えば、水素結合、キレート形成を含むイオン結合）又は共有結合、
ｉｉ）蛍光色素中の長鎖アルキル基と生体物質中の脂質二重膜及び脂質などとのファンデルワールス力、
ｉｉｉ）蛍光色素中のＮＨＳエステル（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）と生体物質中のアミノ基との反応によるアミド結合、
ｉｖ）蛍光色素中のマレイミド基と生体物質中のスルファニル基（－ＳＨ）との反応によるチオエーテル結合、
ｖ）蛍光色素中のアジド基と生体物質中のアセチレン基とのＣｌｉｃｋ反応又は蛍光色素中のアセチレン基と生体物質中のアジド基とのＣｌｉｃｋ反応によるトリアゾール環の形成、
が挙げられる。
　ただし、上記ｉ）の形態において、蛍光色素中におけるペプチドは、生体物質中のペプチドと非共有結合又は共有結合を形成可能なペプチドであれば特に制限されない。このようなペプチドを有する位置としては、例えば、前述の一般式（ＩＩ）におけるＲ６又はＲ７が好ましく挙げられる。
　上記ｉ）～ｖ）の形態以外にも、例えば、Ｌｕｃａｓ　Ｃ．　Ｄ．　ｄｅ　Ｒｅｚｅｎｄｅ　ａｎｄ　Ｆｌａｖｉｏ　ｄａ　Ｓｉｌｖａ　Ｅｍｅｒｙ，．　Ａ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ＢＯＤＩＰＹ　Ｄｙｅｓ　ｆｏｒ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，　Ｏｒｂｉｔａｌ：　Ｔｈｅ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　２０１３，　Ｖｏｌ　５，　Ｎｏ．　１，　ｐ．６２－８３に記載の形態により結合することができる。また、蛍光色素標識生体分子の作製においても、同文献に記載の方法等を適宜参照することができる。
　蛍光色素（Ｆ）等の蛍光色素のうち、生体物質に結合可能な置換基を有する蛍光色素と、これと相互作用により結合する生体物質とから得られる蛍光色素標識生体分子については、特開２０１９－１７２８２６号公報の段落［００３８］の化合物例及び生成物の記載において、生体物質に結合可能な置換基以外の部分を蛍光色素（Ｆ）に置き換えた化合物ならびにその生成物が挙げられる。ただし、これらの蛍光色素標識生体分子等に限定されるものではない。
　蛍光色素（Ｆ）から得られる蛍光色素標識生体分子は、優れた蛍光強度を示すことができ、光照射により励起された蛍光色素標識生体分子から放出される蛍光を安定的に検出することができる。このため、蛍光色素（Ｆ）から得られる蛍光色素標識生体分子は、本発明の蛍光強度増強剤と組み合わせて好適に用いることができる。
　また、市販の一次抗体及び二次抗体についても、蛍光色素標識生体分子として特に制限することなく用いることができる。例えば、いずれもＴｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製の商品名で、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　４０５、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　４８８、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　５５５、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　５９４、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　６４７、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　６８０、Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　８００が挙げられる。
　また、市販の蛍光色素から得られる蛍光色素標識生体分子についても、特に制限することなく用いることができる。
＜蛍光色素標識生体分子を用いた蛍光検出＞
　蛍光色素標識生体分子を用いて行う蛍光検出は、通常、以下（ｉ）～（ｉｉｉ）または（ｉｖ）～（ｖｉｉ）の工程を含む。（ｉ）～（ｉｉｉ）の工程を含む蛍光検出は、蛍光色素で蛍光標識した一次抗体を用いる直接法に該当し、（ｉｖ）～（ｖｉｉ）の工程を含む蛍光検出は、蛍光色素で蛍光標識した二次抗体を用いる間接法に該当する。
（ｉ）下記（ａ）及び（ｂ）をそれぞれ用意する工程
　（ａ）標的とする生体物質（以下、「標的生体物質」とも称す。）を含む試料
　（ｂ）上記（ａ）における標的生体物質と結合可能な生体物質（以下、「一次生体物質」とも称す。）と、蛍光色素と、が結合した蛍光色素標識生体分子（以下、「蛍光色素標識生体分子Ａ」とも称す。）
（ｉｉ）上記（ａ）における標的生体物質と、上記（ｂ）の蛍光色素標識生体分子Ａにおける一次生体物質と、が結合した結合体（以下、「蛍光標識された結合体Ａ」とも称す。）を用意する工程
（ｉｉｉ）上記の蛍光標識された結合体Ａに、蛍光色素標識生体分子Ａが吸収する波長域の光を照射し、蛍光色素標識生体分子Ａが発する蛍光を検出する工程
 
（ｉｖ）下記（ｃ）～（ｅ）をそれぞれ用意する工程
　（ｃ）標的生体物質を含む試料
　（ｄ）上記（ｃ）における標的生体物質と結合可能な生体物質（以下、「一次生体物質」とも称す。）
　（ｅ）上記（ｄ）の一次生体物質と結合可能な生体物質（以下、「二次生体物質」とも称す。）と、蛍光色素と、が結合した蛍光色素標識生体分子（以下、「蛍光色素標識生体分子Ｂ」とも称す。）
（ｖ）上記（ｃ）における標的生体物質と、上記（ｄ）の一次生体物質と、が結合した結合体（以下、「結合体ｂ」とも称す。）を用意する工程
（ｖｉ）上記結合体ｂにおける一次生体物質と、蛍光色素標識生体分子Ｂにおける二次生体物質と、が結合した結合体（以下、「蛍光標識された結合体Ｂ２」とも称す。）を用意する工程
（ｖｉｉ）上記の蛍光標識された結合体Ｂ２に、蛍光色素標識生体分子Ｂが吸収する波長域の光を照射し、蛍光色素標識生体分子Ｂが発する蛍光を検出する工程
　上記の標的生体物質と結合可能な生体物質（一次生体物質）、及び、一次生体物質と結合可能な生体物質（二次生体物質）としては、上記蛍光色素標識生体分子における生体物質が挙げられる。標的生体物質（被検体中の生体物質）又は一次生体物質にあわせて適宜選択することができ、被検体中の生体物質又は一次生体物質に対して特異的に結合可能な生体物質を選択することができる。
　上記標的生体物質のうち、タンパク質としては、いわゆる疾患マーカーが挙げられる。疾患マーカーとしては、特に制限はされるものではないが、例えば、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ（ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｋ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｒ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　ＩＩ）、ＢＣＡ（ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ）２２５、塩基性フェトプロテイン（ＢＦＰ）、ＣＡ（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ）１５－３、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡ１２５、ＣＡ１３０、ＣＡ６０２、ＣＡ５４／６１（ＣＡ５４６）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＤＵＰＡＮ－２、エラスターゼ１、免疫抑制酸性タンパク（ＩＡＰ）、ＮＣＣ－ＳＴ－４３９、γ－セミノプロテイン（γ－Ｓｍ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、神経特異エノラーゼ（ＮＳＥ）、Ｉｂａ１、アミロイドβ、タウ、フロチリン、扁平上皮癌関連抗原（ＳＣＣ抗原）、シアリルＬｅＸ－ｉ抗原（ＳＬＸ）、ＳＰａｎ－１、組織ポリペプタイド抗原（ＴＰＡ）、シアリルＴｎ抗原（ＳＴＮ）、シフラ（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ：ＣＹＦＲＡ）ペプシノゲン（ＰＧ）、Ｃ－反応性タンパク（ＣＲＰ）、血清アミロイドＡタンパク（ＳＡＡ）、ミオグロビン、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、トロポニンＴ、心室筋ミオシン軽鎖Ｉ等が挙げられる。
　上記標的生体物質は細菌でもよく、この細菌としては、細胞微生物学的検査の対象とされる細菌が挙げられ、特に制限されるものではないが、例えば、大腸菌、サルモネラ菌、レジオネラ菌、公衆衛生上の問題を生じる菌等が挙げられる。
　上記標的生体物質はウイルスでもよく、このウイルスの抗原としては、特に制限されるものではないが、例えば、Ｃ型、Ｂ型肝炎ウイルスの抗原等の肝炎ウイルス抗原、ＨＩＶウイルスのｐ２４タンパク抗原、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）のｐｐ６５タンパク抗原、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）のＥ６及びＥ７タンパク抗原等が挙げられる。
　上記（ｉ）または（ｉｖ）において、標的生体物質を含む試料は、特に制限されることなく、常法に従って調製することができる。
　また、蛍光色素標識生体分子も、特に制限されることなく、標的生体物質と結合可能な生体物質と蛍光色素とを常法に従って結合させて調製することができる。結合の形態及び結合を形成する反応は、上記蛍光色素標識生体分子で説明した通りである。
　上記（ｖ）において、標的生体物質と一次生体物質とは、直接結合させてもよく、標的生体物質及び一次生体物質とは異なるその他の生体物質を介して結合させてもよい。また、上記（ｖｉ）において、結合体ｂにおける一次生体物質と、蛍光色素標識生体分子Ｂにおける二次生体物質とは、直接結合させてもよく、一次生体物質及び二次生体物質とは異なるその他の生体物質を介して結合させてもよい。
　蛍光色素（Ｆ）から得られる蛍光色素標識生体分子は、直接法及び間接法のいずれにおける蛍光色素標識抗体としても用いることができ、間接法における蛍光色素標識抗体として用いることが好ましい。
　上記（ｉｉ）または（ｖ）及び（ｖｉ）において、蛍光色素標識生体分子等と標的生体物質との結合は、特に制限されることなく、常法に従って行うことができる。
　上記（ｉｉｉ）または（ｖｉｉ）において、蛍光色素標識生体分子を励起するために照射する光の波長は、蛍光色素標識生体分子を励起可能な波長であれば特に限定されない。通常、３００～１０００ｎｍが好ましく、４００～８００ｎｍがより好ましい。
　上記（ｉｉｉ）または（ｖｉｉ）において用いられる光源としては、蛍光色素標識生体分子を励起可能な波長を発光するものであれば特に限定されず、例えば、各種レーザー光源を用いることができる。また、各種光学フィルターを用いて、光源からの発光波長を好ましい波長域を有するものに調整したり、蛍光色素標識生体分子からの蛍光のみを検出できるものへと調整したりする事ができる。
　上記（ｉ）～（ｖｉｉ）におけるその他の事項については、特に制限されることなく、蛍光標識を用いる蛍光検出において通常用いられる手法、試薬、装置等の条件を適宜選択することができる。
　また、上記（ｉ）～（ｖｉｉ）以外の工程についても、蛍光標識を用いる種々の手法にあわせて、通常用いられる手法、試薬、装置等の条件を適宜選択することができる。
　例えば、蛍光色素標識生体分子を用いた多色ＷＢは、標的生体物質として通常用いられる手法（電気泳動によるタンパク質の分離、メンブレンへのブロッティング、メンブレンのブロッキング）によりブロットメンブレンを作製し、蛍光色素標識生体分子を蛍光色素標識抗体（蛍光色素（Ｆ）から得られる蛍光色素標識抗体においては、好ましくは、二次抗体）として用いることにより、優れた蛍光強度で標的生体物質を検出することができる。蛍光色素標識生体分子を用いたドットブロッティングについても、多色ＷＢと同様、標的生体物質として通常用いられる手法によりブロットニトロセルロース膜又はブロットＰＶＤＦ（ポリフッ化ビニリデン）膜等を作製し、蛍光色素標識生体分子を蛍光色素標識抗体（蛍光色素（Ｆ）から得られる蛍光色素標識抗体においては、好ましくは、二次抗体）として用いることにより、優れた蛍光強度で標的生体物質を検出することができる。
－　置換基群Ｔ　－
　本発明において、好ましい置換基としては、下記置換基群Ｔから選ばれる置換基が挙げられる。
　また、本発明において、単に置換基としてしか記載されていない場合は、この置換基群Ｔにおける対応する置換基の記載を参照し、適用することができる。例えば、「アルキル基」が記載されているのみの場合は、この置換基群Ｔにおける「アルキル基」の記載を参照し、適用することができる。このことは、「アルキル基」以外のその他の置換基についても同様である。
　また、本発明において、「アルキル基」等のある置換基が有していてもよい置換基については、下記置換基群Ｔから選ばれる置換基が挙げられる。また、「アルキル基」等のある置換基が置換基を有しており、さらに置換基を有している場合には、ある置換基が有する置換基としては、下記置換基群Ｔから選ばれる置換基を２つ以上組み合わせてなる置換基が挙げられる。
　さらに、本発明において、アルキル基を環状（シクロ）アルキル基と区別して記載している場合、アルキル基は、直鎖アルキル基及び分岐アルキル基を包含する意味で用いる。一方、アルキル基を環状アルキル基と区別して記載していない場合、及び、特段の断りがない場合、アルキル基は、直鎖アルキル基、分岐アルキル基及びシクロアルキル基を包含する意味で用いる。このことは、環状構造を採りうる基（アルキル基、アルケニル基、アルキニル基等）を含む基（アルコキシ基、アルキルチオ基、アルケニルオキシ基等）、環状構造を採りうる基を含む化合物についても同様である。基が環状骨格を形成しうる場合、環状骨格を形成する基の原子数の下限は、この構造を採りうる基について下記に具体的に記載した原子数の下限にかかわらず、３以上であり、５以上が好ましい。
　下記置換基群Ｔの説明においては、例えば、アルキル基とシクロアルキル基のように、直鎖又は分岐構造の基と環状構造の基とを明確にするため、これらを分けて記載していることもある。
　置換基群Ｔに含まれる基としては、下記の基を含む。
　アルキル基（好ましくは炭素数１～３０、より好ましくは炭素数１～２０、さらに好ましくは炭素数１～１２、さらに好ましくは炭素数１～８、さらに好ましくは炭素数１～６、特に好ましくは炭素数１～３）、アルケニル基（好ましくは炭素数２～３０、より好ましくは炭素数２～２０、さらに好ましくは炭素数２～１２、さらに好ましくは炭素数２～６、さらに好ましくは炭素数２～４）、アルキニル基（好ましくは炭素数２～３０、より好ましくは炭素数２～２０、さらに好ましくは炭素数２～１２、さらに好ましくは炭素数２～６、さらに好ましくは炭素数２～４）、シクロアルキル基（好ましくは炭素数３～２０）、シクロアルケニル基（好ましくは炭素数５～２０）、アリール基（単環の基であってもよく、縮環の基（好ましくは２～６環の縮環の基）であってもよい。縮環の基である場合、５～７員環等からなる。アリール基は好ましくは炭素数６～４０、より好ましくは炭素数６～３０、さらに好ましくは炭素数６～２６、特に好ましくは炭素数６～１０）、ヘテロ環基（環構成原子として少なくとも１つの窒素原子、酸素原子、硫黄原子、リン原子、ケイ素原子又はセレン原子を有し、単環の基であってもよく、縮環の基（好ましくは２～６環の縮環の基）であってもよい。単環の基である場合、その環員数は５～７員が好ましく、５員又は６員がより好ましい。ヘテロ環基の炭素数は好ましくは２～４０、より好ましくは２～２０である。ヘテロ環基は芳香族ヘテロ環基（ヘテロアリール基）及び脂肪族ヘテロ環基（脂肪族複素環基）が包含される。）、アルコキシ基（好ましくは炭素数１～２０、より好ましくは炭素数１～１２）、アルケニルオキシ基（好ましくは炭素数２～２０、より好ましくは炭素数２～１２）、アルキニルオキシ基（好ましくは炭素数２～２０、より好ましくは炭素数２～１２）、シクロアルキルオキシ基（好ましくは炭素数３～２０）、アリールオキシ基（好ましくは炭素数６～４０、より好ましくは炭素数６～２６、さらに好ましくは炭素数６～１４）、ヘテロ環オキシ基（好ましくは炭素数２～２０）、ポリアルキレンオキシ基、
アルコキシカルボニル基（好ましくは炭素数２～２０）、シクロアルコキシカルボニル基（好ましくは炭素数４～２０）、アリールオキシカルボニル基（好ましくは炭素数６～２０）、アミノ基（好ましくは炭素数０～２０で、無置換アミノ基（－ＮＨ２）、（モノ－又はジ－）アルキルアミノ基、（モノ－又はジ－）アルケニルアミノ基、（モノ－又はジ－）アルキニルアミノ基、（モノ－又はジ－）シクロアルキルアミノ基、（モノ－又はジ－）シクロアルケニルアミノ基、（モノ－又はジ－）アリールアミノ基、（モノ－又はジ－）ヘテロ環アミノ基を含む。無置換アミノ基を置換する上記各基は置換基群Ｔの対応する基と同義である。）、スルファモイル基（好ましくは炭素数０～２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのスルファモイル基が好ましい。）、アシル基（好ましくは炭素数１～２０、より好ましくは炭素数２～１５で、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、アルキルカルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、ヘテロ環カルボニル基を含む。）、アシルオキシ基（好ましくは炭素数１～２０）、カルバモイル基（好ましくは炭素数１～２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのカルバモイル基が好ましい。）、
アシルアミノ基（好ましくは炭素数１～２０）、スルホンアミド基（好ましくは炭素数０～２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのスルホンアミド基が好ましい。）、アルキルチオ基（好ましくは炭素数１～２０、より好ましくは炭素数１～１２）、シクロアルキルチオ基（好ましくは炭素数３～２０）、アリールチオ基（好ましくは炭素数６～４０、より好ましくは炭素数６～２６、さらに好ましくは炭素数６～１４）、ヘテロ環チオ基（好ましくは炭素数２～２０）、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールスルホニル基（好ましくは炭素数１～２０）、
シリル基（好ましくは炭素数１～３０、より好ましくは炭素数１～２０で、アルキル、アリール、アルコキシもしくはアリールオキシが置換したシリル基が好ましい。）、シリルオキシ基（好ましくは炭素数１～２０で、アルキル、アリール、アルコキシもしくはアリールオキシが置換したシリルオキシ基が好ましい。）、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子（例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）、酸素原子（具体的には、環を構成する＞ＣＨ２を＞Ｃ＝Ｏに置き換える）、カルボキシ基（－ＣＯ２Ｈ）、ホスホノ基〔－ＰＯ（ＯＨ）２〕、ホスホノオキシ基〔－Ｏ－ＰＯ（ＯＨ）２〕、スルホ基（－ＳＯ３Ｈ）、ホウ酸基〔－Ｂ（ＯＨ）２〕、オニオ基（カチオン性基とも称す。環状アンモニオを含むアンモニオ基、スルホニオ基、ホスホニオ基を含み、好ましくは炭素数０～３０、より好ましくは１～２０）、スルファニル基（－ＳＨ）、グアニジノ基（－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２）、アミノ酸残基、又は、ポリアミノ酸残基が挙げられる。
（アニオン性基）
　本発明において、アニオン性基とは、アニオンを有する基であればよい。このようなアニオン性基としては、カルボキシ基、ホスホノ基（ホスホン酸基、－ＰＯ（ＯＨ）２）、ホスホノオキシ基（リン酸基、－ＯＰＯ（ＯＨ）２）及びスルホ基などが挙げられ、ホスホノ基、ホスホノオキシ基又はスルホ基が好ましく、ホスホノオキシ基又はスルホ基がより好ましい。
　アニオン性基は、水素イオンが解離してイオン構造を取っていてもよく、塩構造を取っていてもよい。アニオン性基が塩構造を有する際の１価又は多価のカチオンとしては、前述の塩構造の記載における１価又は多価のカチオンの記載を好ましく適用することができる。
（カチオン性基）
　本発明において、カチオン性基とは、カチオンを有する基であればよい。このようなカチオン性基としては、第四級アンモニウムイオンを有する基（第四級アンモニオ基）及び第四級ホスホニウムイオンを有する基（第四級ホスホニオ基）などが挙げられ、第四級アンモニウムイオンを有する基が好ましい。なお、第四級アンモニウムイオンを有する基におけるＮ＋が有する置換基及び第四級ホスホニウムイオンを有する基におけるＰ＋が有する置換基としては、アルキル基及びアリール基が好ましく挙げられ、Ｎ＋及びＰ＋が有する全ての置換基がアルキル基であることがより好ましい。
　カチオン性基はイオン構造の他に、塩構造を取っていてもよい。カチオン性基が塩構造を有する際の１価又は多価のアニオンとしては、例えば、Ｆ－、Ｃｌ－等のハロゲン化物イオン、ＢＦ４ －、ＰＦ６ －、ビス（トリフルオロメチルスルホニル）イミドイオン等の１価又は多価の有機アニオンが挙げられる。
（ポリアルキレンオキシ基）
　本発明において、上記ポリアルキレンオキシ基とは、－（Ｌ－Ｏ）ｇＲＥで表される基であればよい。
　上記Ｌは上記置換基群Ｔにおけるアルキル基から水素原子を１つ除いて得られるアルキレン基を示し、炭素数は２～４が好ましく、２又は３がより好ましく、２が更に好ましく、アルキレン基の結合手である２つの炭素原子を連結する最短鎖中に含まれる炭素原子数は、０～２が好ましく、０又は１がより好ましく、０が更に好ましい。すなわち、Ｌはエチレン基であることが最も好ましい。
　上記ｇは平均繰り返し数（単に、繰り返し数とも称す。）を意味し、１～２４が好ましく、１～１２がより好ましく、４～１２がさらに好ましい。ｇが１のように繰り返し数が小さい場合にも、適度な親水性と、適度な排除体積効果を示すことができる。
　上記ＲＥは水素原子又はアルキル基を示す。ＲＥとして採り得るアルキル基は、上記置換基群Ｔにおけるアルキル基の記載を好ましく適用することができ、なかでも炭素数１～３のアルキル基が好ましい。ＲＥとして採り得るアルキル基は置換基を有していてもよい。
　また、置換基群Ｔから選ばれる置換基を複数組み合わせてなる基としては、例えば、アニオン性基（カルボキシ基、ホスホノ基、スルホ基）、カチオン性基（オニオ基）、アミノ酸残基、ポリアミノ酸残基又は－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｂ－アルキル基（ｂは上述の一般式（α）中のＲ１～Ｒ４におけるｂと同義である。）を置換基として有する上記のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、シクロアルキルオキシ基、アリールオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アルコキシカルボニル基、シクロアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アミノ基、スルファモイル基、アシル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホンアミド基、アルキルチオ基、シクロアルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、アルキル、シクロアルキル又はアリールスルホニル基が挙げられる。
　置換基群Ｔから選ばれる置換基は、より好ましくは、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、アリールオキシ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、シクロアルコキシカルボニル基、アミノ基、アシルアミノ基、カルバモイル基、シアノ基、ハロゲン原子、アニオン性基又はカチオン性基であり、特に好ましくは、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アシルアミノ基、カルバモイル基、シアノ基、アニオン性基又はカチオン性基である。
　置換基群Ｔから選ばれる置換基は、上述の置換基群Ｔから選ばれる置換基を複数組み合わせてなる基以外にも、特段の断りがない限り、上記の基を複数組み合わせてなる基をも含む。例えば、化合物又は置換基等がアルキル基、アルケニル基等を含むとき、これらは置換されていても置換されていなくてもよい。また、アリール基、ヘテロ環基等を含むとき、それらは単環でも縮環でもよく、置換されていても置換されていなくてもよい。
　以下に実施例に基づき、本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されない。なお、室温とは２５℃を意味する。
　蛍光色素（Ｆ）に該当する化合物（１）～（４）を、以下に示す。
　なお、各化合物において、特に記載しない場合にも、スルホ基、ホスホノオキシ基は塩構造（例えば、カリウム塩、ナトリウム塩、ＴＥＡ（トリエチルアンモニウム）塩あるいはＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアンモニウム）塩）を含んでいてもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
　以下に、各化合物の合成方法を詳しく説明するが、出発物質、色素中間体及び合成ルートはこれらに限定されるものではない。
　なお、以下に示す各化合物の合成に用いた略語は下記の通りである。
　ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン
　ＰｙＡＯＰ：（７－アザベンゾトリアゾールー１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロりん酸塩
　ＤＩＣ：ジイソプロピルカルボジイミド
　ＥＤＣＩ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
　ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
　Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２：［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド
　Ｐｄ（Ａｍｐｈｏｓ）Ｃｌ２：ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４－ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（II）
　ＤＭＴ－ＭＭ：４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド
　ＮＭＰ：Ｎ－メチル－２－ピロリドン
　ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
　ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
　ＤＩＰＥＡ：Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
　ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
　ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
　ＴＦＥ：２，２，２－トリフルオロエタノール
　Ｍｅ：メチル基
　Ｍｓ：メシル基
　Ｅｔ：エチル基
　Ａｃ：アセチル基
　Ｔｓ：ｐ－トルエンスルホニル基
　Ｔｒｔ：トリチル基（トリフェニルメチル基）
　Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基
　Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基
　Ａｌａ：アラニン
　Ｌｙｓ：リシン
　Ｐｒｏ：プロリン
　Ｒｅｓｉｎ：樹脂
　ｍＰＥＧｐ：以下の構造を示し、ＰＥＧｐにおけるｐは平均繰り返し数である。＊は結合手を示す。
　ＥＯｐ：以下の構造を示し、ＥＯｐにおけるｐは平均繰り返し数である。ただし、ＥＯｐは、窒素原子もしくは酸素原子に対して炭素原子側で結合する。＊は結合手を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
　また、％ｖ／ｖは容量パーセントを意味する。
　ＭＳスペクトルは、ＡＣＱＵＩＴＹ　ＳＱＤ　ＬＣ／ＭＳ　Ｓｙｓｔｅｍ〔商品名、Ｗａｔｅｒｓ社製、イオン化法：ＥＳＩ（ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ　Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、エレクトロスプレーイオン化）〕又はＬＣＭＳ－２０１０ＥＶ〔商品名、島津製作所社製、イオン化法：ＥＳＩ及びＡＰＣＩ（Ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ　Ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ＣｈｅｍｉｃａｌＩｏｎｉｚａｔｉｏｎ、大気圧化学イオン化）を同時に行うイオン化法〕を用いて測定した。
　なお、各化合物の合成にあたり、ペプチド鎖の合成は、国際公開第２０１８／１７４０７８号に記載のペプチド固相法の一般法に準じて行った。
［ペプチド自動合成装置によるペプチド固相合成の一般法］
　ペプチド自動合成装置（ｂｉｏｔａｇｅ社製、商品名：ＳｙｒｏＩ）を用いてペプチド固相合成を行なった。合成装置にＲｉｎｋ　Ａｍｉｄｅ－ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ（登録商標、バイオタージ社製）、Ｆｍｏｃアミノ酸（０．５ｍｏｌ／Ｌ）のＮ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）溶液、シアノ－ヒドロキシイミノ－酢酸エチルエステル（１．０ｍｏｌ／Ｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液、ジイソプロピルカルボジイミド（１．０ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液、ピペリジン（２０％ｖ／ｖ）のＮＭＰ溶液、および無水酢酸（２０％ｖ／ｖ）のＮＭＰ溶液をセットし、マニュアルに従い合成を行った。Ｆｍｏｃ脱保護（２０分）、ＮＭＰによる洗浄、Ｆｍｏｃアミノ酸の縮合（１時間）、ＮＭＰによる洗浄を１サイクルとし、このサイクルを繰り返すことで、ペプチド鎖を伸長させた。
［化合物（Ｍ２－１）の合成］
　下記のスキームに基づき、化合物（Ｍ２－１）を合成した。化合物（Ｍ２－１３）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝１３８４、（Ｍ－Ｈ＋）－＝１３８２
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
＜化合物（１）及び（１－ＮＨＳ）の合成＞
１）化合物（１－８）の合成
　下記スキームに従い化合物（１－８）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
（ｉ）化合物（１－１）の合成
　Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業社製、０．９３ｍｍｏｌ／ｇ、５３．８ｍｇ）を出発原料として用いて、ペプチド固相合成を行った。Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｌ－プロリン（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ）、（２Ｓ，４Ｓ）－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－アミノ－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｐｒｏ（４－ＮＨＢｏｃ）－ＯＨ（２Ｓ，４Ｓ））を伸長し、Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｌ－プロリン（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ）を用いた伸長を３サイクル繰り返した。（２Ｓ，４Ｓ）－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－アミノ－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｐｒｏ（４－ＮＨＢｏｃ）－ＯＨ（２Ｓ，４Ｓ））を伸長し、Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｌ－プロリン（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ）を用いた伸長を３サイクル繰り返した。（２Ｓ，４Ｓ）－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－アミノ－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｐｒｏ（４－ＮＨＢｏｃ）－ＯＨ（２Ｓ，４Ｓ））、Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｌ－プロリン（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ）を伸長した。伸長終了後、レジンをジクロロメタンで洗浄したのち、減圧下溶媒を留去した。ＴＦＡ：トリイソプロピルシラン：水＝９５：２．５：２．５の混合液２．０ｍＬを加え、ペプチドの切り出しと脱保護を行った。２時間後、レジンをろ別し、ろ液にメチル－ｔ－ブチルエーテル（１２ｍＬ）を加え、固体を生じさせた。遠心分離を行い固体を沈殿させた後、上澄みを除去した。メチル－ｔ－ブチルエーテルで固体を洗浄後、減圧下溶媒を留去し、白色固体の化合物（１－１）を５１．２ｍｇ得た。
（ii）化合物（１－２）の合成
　５０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（１－１）３５２ｍｇ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）３．５ｍＬ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）４２３μＬ、無水酢酸（Ａｃ２Ｏ）１１５μＬを入れ、室温にて１時間撹拌した。その後、反応液を濃縮して分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（１－２）３１４ｍｇを得た。
（iii）化合物（１－３）の合成
　５０ｍＬ容のナスフラスコに、化合物（２－１）として国際公開第２０２０／１７５４７３号記載の化合物（４－１）を５００ｍｇ、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）５ｍＬ、Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］－β－アラニン（Ｆｍｏｃ－βＡｌａ－ＯＨ）３３９．３ｍｇ、ジイソプロピルカルボジイミド１７１ｍＬ、４－ジメチルアミノピリジン１３．３ｍｇ入れ、室温にて２時間撹拌した。アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加することで析出した固体をろ過、減圧乾燥させることで化合物（１－３）を５９３ｍｇ得た。
（iv）化合物（１－４）の合成
　５０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（１－３）１０８ｍｇ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）２．２ｍＬ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）２６．８μＬを入れ、３５℃にて１時間撹拌した。メタンスルホン酸（ＭｓＯＨ）１１．７μＬ、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）９３．３μＬ、化合物（１－２）１６９ｍｇ、（７－アザベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロりん酸塩（ＰｙＡＯＰ）１４１ｍｇを入れ、３５℃にて３時間撹拌した。アセトニトリル（１０ｍＬ）を添加することで析出した固体をろ過、減圧乾燥させることで化合物（１－４）を２１９ｍｇ得た。
（ｖ）化合物（１－５）の合成
　上記の化合物（１－４）の合成において、化合物（１－２）に代えて（２Ｓ，４Ｓ）－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－アミノ－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル）－ピロリジン－２－カルボン酸（Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｐｒｏ（４－ＮＨＢｏｃ）－ＯＨ（２Ｓ，４Ｓ））を用い、化合物（１－３）に代えて化合物（１－４）を用いた以外は同様にして、化合物（１－４）２１９ｍｇから上述の化合物（１－５）２３３ｍｇを合成した。
（vi）化合物（１－６）の合成
　上記の化合物（１－４）および化合物（１－５）の合成と同様の操作を２度繰り返し、化合物（１－５）１００ｍｇから化合物（１－６）１９０ｍｇを合成した。
（vii）化合物（１－７）の合成
　１００ｍＬ容のナスフラスコに化合物（１－６）４０．２ｍｇ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）５ｍＬ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）３．１μＬを入れ、３５℃にて１時間撹拌した。メタンスルホン酸（ＭｓＯＨ）１．３５μＬ、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）７．２μＬ、無水酢酸（Ａｃ２Ｏ）１．９μＬ、を入れ、３５℃にて１時間撹拌した。アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加することで析出した固体をろ過、減圧乾燥させることで化合物（１－７）を３３．７ｍｇ得た。
（viii）化合物（１－８）の合成
　１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（１－７）３０．１ｍｇ、ＴＦＡ：トリイソプロピルシラン：水＝９５：２．５：２．５の混合液１．０ｍＬを加えて室温にて１時間撹拌した。メタノール（ＭｅＯＨ）１０ｍＬ反応液を加えて固体を生じさせ後、ろ過で固体を除去した。ろ液を濃縮して分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（１－８）１０．６ｍｇを得た。
２）化合物（１）及び（１－ＮＨＳ）の合成
　下記のスキームに基づき、化合物（１）及び（１－ＮＨＳ）を合成した。
　なお、化合物（１－８）と、化合物（１）及び（１－ＮＨＳ）とは、ポリペプチド鎖の繰り返し構造の表記形式が異なるものの、ポリペプチド鎖の繰り返し構造としては同じ構造を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
（ｉ）化合物（１）の合成
　１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（１－８）２．３３ｍｇ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１１０μＬ、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）７．３μＬ、化合物（Ｍ２－１）３．１ｍｇを入れ、室温にて１時間撹拌した。その後、反応液を濃縮して分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（１）０．８６ｍｇを得た。化合物（１）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝８５７１、（Ｍ－Ｈ＋）－＝８５６９
（ii）化合物（１－ＮＨＳ）の合成
　化合物（１）１．２６ｍｇに、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１２６μＬ、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート　２．６４ｍｇ、及びトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）２．１μＬを加えて１時間撹拌させた。その後、溶媒を減圧留去し、酢酸エチルを加えて上澄みを除去、真空乾燥を施すことで化合物（１－ＮＨＳ）を得た。
＜化合物（２）の合成＞
１）化合物（Ｍ３－１）の合成
　下記スキームに従い化合物（Ｍ３－１）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
（ｉ）化合物（２－２）の合成
　１００ｍＬ容のナスフラスコに化合物（２－１）２．９ｇ、エタノール１５ｍＬを入れ、アニリン２．１ｍＬを溶解させたエタノール１５ｍＬを０℃にて滴下した後、窒素雰囲気下６０℃にて４時間撹拌した。溶媒を減圧留去して溶媒量を１５ｍＬとし、０℃に空冷した。析出した黄色結晶をろ過し化合物（２－２）２．６ｇを得た。
（ii）化合物（２－４）の合成
　１００ｍＬ容の三ツ口ナスフラスコに化合物（２－３）１００ｍｇ、酢酸（ＡｃＯＨ）０．３ｍＬ、化合物（１－Ｃ）１２４ｍｇ及び酢酸カリウム（ＡｃＯＫ）３１ｍｇを入れ、窒素雰囲気下１３０℃にて１時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００から２０／８０へ）で精製し、化合物（２－４）５８ｍｇを得た。
（iii）化合物（２－５）の合成
　化合物（２－４）４７０ｍｇ、１，３－プロパンスルトンを０．１５ｍＬ、スルホラン２ｍＬ、酢酸カリウム（ＡｃＯＫ）２５４ｍｇを５０ｍＬ容のナスフラスコに入れ、１１０℃にて１時間加熱撹拌した。反応液へ、酢酸エチル２０ｍＬを加え、沈殿を生じさせた。沈殿物を逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００から３０／７０へ）にて精製し、化合物（２－５）４７５ｍｇを得た。
（iv）化合物（２－６）の合成
　試験管に化合物（２－５）１７１ｍｇ、化合物（２－２）４８ｍｇ、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）７１μＬ、メタノール（ＭｅＯＨ）５μＬ及び無水酢酸（Ａｃ２Ｏ）０．４８ｍＬを加え、窒素雰囲気下、５０℃で２時間撹拌した。反応収束後、蒸留水を加え、逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００から２５／７５へ）にて精製し、化合物（２－６）１５０ｍｇを得た。
（ｖ）化合物（２－８）の合成
　試験管に化合物（２－６）１０ｍｇ、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）１０ｍｇ、エタノール（ＥｔＯＨ）３００μＬ及び蒸留水１００μＬを加え、５０℃で撹拌した。この溶液へ、化合物（２－７）６ｍｇと［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）を蒸留水２００μＬに混合した溶液を滴下して、５０℃で３０分撹拌した。反応液を室温に冷却し、分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（２－８）３．６ｍｇを得た。化合物（２－８）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝１４９１、（Ｍ－Ｈ＋）－＝１４８９
（vi）化合物（２－９）の合成
　上記の化合物（Ｍ２－１）の合成と同様にして、化合物（２－８）３．６ｍｇから化合物（２－９）を３．５ｍｇ合成した。化合物（２－９）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝１５８８、（Ｍ－Ｈ＋）－＝１５８６
（vii）化合物（２－１０）の合成
　試験管に化合物（２－９）７．５３ｍｇ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２６１μＬ、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）３．６μＬ、β－アラニン１１．３ｍｇを入れ、室温にて３時間撹拌した。その後、反応液を濃縮して分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（２－１０）４．４９ｍｇを得た。化合物（２－１０）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝１５６２、（Ｍ－Ｈ＋）－＝１５６０
（viii）化合物（Ｍ３－１）の合成
　上記の化合物（Ｍ２－１）の合成と同様にして、化合物（２－１０）４．４９ｍｇから化合物（Ｍ３－１）を４．２１ｍｇ合成した。化合物（Ｍ３－１）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝１６５９、（Ｍ－Ｈ＋）－＝１６５７
２）化合物（２）の合成
　下記スキームに従い、化合物（１）と同様に化合物（１－８）３．０ｍｇから化合物（２）１．６４ｍｇを合成した。化合物（２）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝９１１２、（Ｍ－Ｈ＋）－＝９１１０
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
＜化合物（３）の合成＞
１）化合物（Ｍ４－１）の合成
　下記スキームに従い、上記の化合物（Ｍ３－１）の合成と同様にして化合物（Ｍ４－１）を合成した。化合物（Ｍ４－１）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝１６８８、（Ｍ－Ｈ＋）－＝１６８６
 
　なお、化合物（３－２）は次のようにして合成した。５０ｍＬ容の三ツ口ナスフラスコに化合物（３－１）３００ｍｇ、テトラヒドロキシジボロン１８５ｍｇ、ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４－ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（II）１．９ｍｇ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）４５７μＬ、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）３ｍＬおよびメタノール（ＭｅＯＨ）１．５ｍＬを入れ、窒素雰囲気下５５℃にて３時間撹拌した。溶媒を減圧蒸留し、逆相カラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（３－２）２５４ｍｇを得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
２）化合物（３）の合成
　下記スキームに従い、上記の化合物（１）の合成と同様にして、化合物（１－８）３．０ｍｇから化合物（３）１．５７ｍｇを合成した。化合物（３）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝９１９４、（Ｍ－Ｈ＋）－＝９１９６
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
＜化合物（４）の合成＞
１）化合物（４－７）の合成
　下記スキームに従い化合物（４－７）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
（ｉ）化合物（４－２）の合成
　５０ｍＬ容のナスフラスコに、化合物（４－１）として国際公開第２０２０／１７５４７３号記載の化合物（４－１）を３００ｍｇ、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）３ｍＬ、Ｎε－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｎα－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル）］－Ｌ－リジン（Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ）２２９．８ｍｇ、ジイソプロピルカルボジイミド７６．８μＬ、４－ジメチルアミノピリジン８．０ｍｇ入れ、室温にて２時間撹拌した。アセトニトリル（３０ｍＬ）を添加することで析出した固体をろ過、減圧乾燥させることで化合物（４－２）を３５０ｍｇ得た。
（ii）化合物（４－３）の合成
　Ｈ－Ｐｒｏ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業社製、０．９４ｍｍｏｌ／ｇ、５３．２ｍｇ）出発原料として用いて、ペプチド固相合成を行った。Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｌ－プロリン（Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ）を用いた伸長を１１サイクル繰り返し、Ｎε－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｎα－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル）］－Ｌ－リジン（Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ）を伸長した。続いて、ピペリジン（２０％ｖ／ｖ）のＮＭＰ溶液を加え、２０分反応させることで、Ｆｍｏｃ基の脱保護を行い、無水酢酸（２０％ｖ／ｖ）のＮＭＰ溶液を加えて１０分反応させることで、Ｎ末端のアミノ基をアセチル化した。伸長終了後、レジンをジクロロメタンで洗浄したのち、減圧下溶媒を留去した。ヘキサフルオロ－２－プロパノール（ＨＦＩＰ）：ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）＝１：４の混合液を２．０ｍＬ加え、ペプチドの切り出しを行った。３０分後、レジンをろ別してろ液を濃縮し、逆相カラムクロマトグラフィーにて精製して白色固体の化合物（４－３）を５９．３ｍｇ得た。
（iii）化合物（４－４）の合成
　１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（４－２）２０ｍｇ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）４００μＬ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）４．４μＬを入れ、３５℃にて１時間撹拌した。メタンスルホン酸（ＭｓＯＨ）１．９μＬ、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）１５．３μＬ、化合物（４－３）２５．５ｍｇ、（７－アザベンゾトリアゾールー１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロりん酸塩（ＰｙＡＯＰ）２３．１ｍｇを入れ、３５℃にて１時間撹拌した。アセトニトリル（４ｍＬ）を添加することで析出した固体をろ過、減圧乾燥させることで化合物（４－４）を３４．０ｍｇ得た。
（iv）化合物（４－５）の合成
　１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（４－４）３０．０ｍｇ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）６００μＬ、２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）６０μＬ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）６μＬを入れ、室温にて４時間撹拌した。その後、反応液をろ過し、ろ液にメタノール（ＭｅＯＨ）６ｍＬを加えることで生じた沈殿物を遠心分離した。回収した化合物を分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（４－５）１６．５ｍｇを得た。
（ｖ）化合物（４－６）の合成
　１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（４－５）１０ｍｇ、水２００μＬ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２００μＬ、１－アミノ－３、６、９、１２－テトラオキサペンタデカン－１５－酸ｔｅｒｔ－ブチル３．９ｍｇ、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ－ＭＭ）６．７ｍｇを入れ、室温にて２時間撹拌した。その後、反応液を濃縮して分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（４－６）８．９ｍｇを得た。
（vi）化合物（４－７）の合成
　１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（４－６）７．０ｍｇ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）２００μＬを入れ、室温にて１時間撹拌した。その後、反応液を濃縮して分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（４－７）５．９ｍｇを得た。
２）化合物（Ｍ１－１）の合成
　下記のスキームに基づき、化合物（Ｍ１－１）を合成した。なお、化合物（１－Ｃ）は、前述の化合物（Ｍ２－１）の合成における化合物（１－Ｃ）と同じである。化合物（Ｍ１－８）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝１７２３、（Ｍ－Ｈ＋）－＝１７２１
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
３）化合物（４）の合成
　下記スキームに従い、上記の化合物（１）の合成と同様にして、化合物（４－７）　２．０ｍｇから化合物（４）　３．２ｍｇを合成した。化合物（４）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ　ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ＋）＋＝５１３６、（Ｍ－Ｈ＋）－＝５１３４
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
＜化合物（２－ＮＨＳ）、（３－ＮＨＳ）及び（４－ＮＨＳ）の合成＞
　上記の化合物（１－ＮＨＳ）の合成において、化合物（１）に代えて化合物（２）、（３）又は（４）を用いた以外は同様にして、化合物（２）、（３）又は（４）のペプチド鎖における末端カルボキシ基をＮＨＳエステル構造に変換した、化合物（２－ＮＨＳ）、（３－ＮＨＳ）及び（４－ＮＨＳ）をそれぞれ合成した。
＜実施例１＞
　上記の各化合物（１－ＮＨＳ）～（４－ＮＨＳ）について、蛍光標識率、ウエスタンブロッティング蛍光強度を評価した。
［１］蛍光色素標識抗体の作製
　マイクロチューブに、抗ウサギＩｇＧ抗体（２．３ｍｇ／ｍＬ）１０４μＬ及び炭酸塩バッファー１０．４μＬを入れ、振とう撹拌を施した後、化合物（１－ＮＨＳ）のジメチルスルホキシド溶液を、抗体１当量に対して表Ａに示すモル当量比（３０当量比）になるように加え、さらに振とう撹拌を行った。４℃にて２４時間静置させ、反応液を遠心限外ろ過フィルター（商品名：アミコンウルトラＵＦＣ５１００９６、Ｍｅｒｃｋ社製）とＰＢＳ溶液（リン酸緩衝食塩水）を用いて精製を施し、化合物（１）のＩｇＧ標識抗体（２．０ｍｇ／ｍＬ）を得た。化合物（２）～（４）も、化合物（１－ＮＨＳ）に代えて化合物（２－ＮＨＳ）～（４－ＮＨＳ）を表Ａに示すモル当量比（２０、３０又は４０当量比）になるように加えた以外は同様にして、標識抗体を得た。得られた蛍光色素標識抗体について、下記に示す方法により蛍光標識率（ＤＯＬ）を算出した。表Ａに結果をまとめて示す。
　蛍光標識率の算出方法は、下記に示すような一般的な手法を用いた。［　］の中の記載は単位を示し、［－］は単位がないことを意味する。本試験においては、タンパク質は化合物（１）～（４）においては抗ウサギＩｇＧ抗体を意味する。
　　蛍光標識率＝蛍光色素の濃度／タンパク質の濃度
　蛍光色素の濃度とは、標識されている蛍光色素の総モル濃度［Ｍ］を意味し、タンパク質の濃度とは、蛍光標識したタンパク質のモル濃度［Ｍ］を意味し、それぞれ、下記式により算出される。
　　蛍光色素の濃度＝Ｄｙｅｍａｘ／εｄｙｅ
　　タンパク質の濃度＝（ＩｇＧ２８０－（Ｄｙｅｍａｘ×ＣＦ））／εｐｒｏｔｅｉｎ
　上記式中の各符号は、下記の通りである。
　　Ｄｙｅｍａｘ；蛍光色素の最大吸収波長における吸収［－］
　　εｄｙｅ；蛍光色素のモル吸光係数［Ｍ－１ｃｍ－１］
　　ＩｇＧ２８０；蛍光標識タンパク質の２８０ｎｍにおける吸収［－］
　　Ｄｙｅ２８０；蛍光色素の２８０ｎｍにおける吸収［－］
　　εｐｒｏｔｅｉｎ；タンパク質のモル吸光係数［Ｍ－１ｃｍ－１］
　　ＣＦ（Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ）；Ｄｙｅ２８０／Ｄｙｅｍａｘ［－］
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000032
（表の注）
　蛍光色素標識抗体の欄において、化合物（Ｚ）－ＩｇＧの表記は、化合物（Ｚ－ＮＨＳ）のＩｇＧ標識抗体を意味する。Ｚは、各化合物の番号を意味する。以降の表においても同義である。
　上記表Ａの結果から、以下のことがわかる。
　化合物（１）及び（２）は、抗体１当量に対して３０当量のモル当量比で添加した場合の蛍光標識率がそれぞれ４．３及び５．５であり、化合物（３）は、抗体１当量に対して４０当量のモル当量比で添加した場合の蛍光標識率が５．７であり、化合物（４）は、抗体１当量に対して２０当量のモル当量比で添加した場合の蛍光標識率が５．８であり、抗体への結合性としては、実用上問題のない十分なレベルを示していた。
［２］ウエスタンブロッティング蛍光強度評価
（１）乾燥メンブレンの作製
　トランスフェリン（Ｍｅｒｃｋ社製、質量約７６ｋＤａ）をＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　Ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　Ｓａｍｐｌｅ　Ｂｕｆｆｅｒ　（４Ｘ，　ｎｏｎ－ｒｅｄｕｃｉｎｇ）（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）で希釈して１ｎｇ／μＬ、０．３ｎｇ／μＬ、０．１ｎｇ／μＬとし、９５℃で５分加熱処理した。Ｎｏｖｅｘ　４－２０％　Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅ　Ｍｉｎｉ　Ｇｅｌｓ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）に対し、前述のトランスフェリンサンプルとＰａｇｅＲｕｌｅｒＰｒｅｓｔａｉｎｅｄ　ＮＩＲ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌａｄｄｅｒ　（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）をロードした後、定電圧２２５Ｖで４５分電気泳動を実施した。電気泳動後のゲルとニトロセルロースメンブレン（Ｃｙｔｉｖａ社製）を重ね、定電圧１２Ｖ１時間でタンパク質転写を実行した後、メンブレンをＷｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ　Ｂｌｏｃｋｉｎｇ　Ｂｕｆｆｅｒ（Ｆｉｓｈ　Ｇｅｌａｔｉｎ）（ＴＡＫＡＲＡ　Ｂｉｏ社製）に浸して４℃にて１２時間静置した。メンブレンをＴＢＳ－Ｔ　ｂｕｆｆｅｒ（富士フイルム和光純薬社製）で洗浄した後、Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ用１次抗体（Ａｂｃａｍ社製）（５０００倍希釈）を入れた液に浸し、１時間振とうし、１次抗体を入れた液を捨てたのち、メンブレンをＴＢＳ－Ｔ　ｂｕｆｆｅｒ（富士フイルム和光純薬社製）で洗浄した。上記で調製した蛍光色素標識抗体の２５０００倍希釈の液又は後述の市販の蛍光二次抗体の２５０００倍希釈の液を調整し、調整した液にメンブレンを浸して１時間遮光状態で振とうし、蛍光色素標識抗体の液を捨てた。その後、ＴＢＳ－Ｔ（富士フイルム和光純薬社製、Ｔｗｅｅｎ　２０の含有量０．１（Ｗ／Ｖ）％）２０ｍＬで１０分間の振とうを３回繰り返し洗浄した後、表１～５に記載の水溶性化合物を表１～５に記載の添加量で溶解させたＴＢＳ２０ｍＬで１０分間の振とうを１回行い洗浄した。洗浄後、メンブレンを４０℃恒温槽で１時間遮光して乾燥させた。
　なお、（Ｗ／Ｖ）％は、質量対体積百分率を意味する。
（２）蛍光強度の測定
（ｉ）蛍光色素標識抗体として化合物（１）－ＩｇＧ（２５０００倍希釈）を用いた場合
　上記で作製した乾燥メンブレンについて、Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｔｙｐｈｏｏｎ　ｓｃａｎｎｅｒ（商品名、Ｃｙｔｉｖａ社製）を用いて画像化し、７８５ｎｍの励起光で測定条件を統一して、タンパク質のバンドが検出される領域に対し３．２４ｍｍ２の画分の蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を測定し、「シグナル蛍光強度」とした。また、上記シグナル蛍光強度の測定領域下部（上記シグナル蛍光強度の測定領域に対して低質量側）におけるタンパク質のバンドが検出されない領域において３．２４ｍｍ２の画分の蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を測定し、「ノイズ蛍光強度」とした。
　蛍光色素標識抗体として、化合物（４）－ＩｇＧ又はＡｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　８００（商品名、Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、蛍光二次抗体）（いずれも２５０００倍希釈）を用いた場合についても、化合物（１）－ＩｇＧ（２５０００倍希釈）を用いた場合と同様にして測定した。
（ii）蛍光色素標識抗体として化合物（２）－ＩｇＧ、化合物（３）－ＩｇＧ又はＡｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　６８０（商品名、Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、蛍光二次抗体）（いずれも２５０００倍希釈）を用いた場合
　上記で作製した乾燥メンブレンについて、Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｔｙｐｈｏｏｎ　ｓｃａｎｎｅｒ（商品名、Ｃｙｔｉｖａ社製）を用いて画像化し、６８５ｎｍの励起光で測定条件を統一して、タンパク質のバンドが検出される領域に対し３．２４ｍｍ２の画分の蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を測定し、「シグナル蛍光強度」とした。また、上記シグナル蛍光強度の測定領域下部（上記シグナル蛍光強度の測定領域に対して低質量側）におけるタンパク質のバンドが検出されない領域において３．２４ｍｍ２の画分の蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を測定し、「ノイズ蛍光強度」とした。
（３）蛍光強度の評価
　各蛍光色素標識抗体において、水溶性化合物を溶解させたＴＢＳに代えて、水溶性化合物を含有しないＴＢＳを洗浄に用いたＮｏ．ｃ１１、ｃ２１、ｃ３１、ｃ４１、ｃ５１又はｃ６１のシグナル蛍光強度をそれぞれ基準値とし、この基準値に対する比（蛍光色素標識抗体のシグナル蛍光強度／基準値）を算出し、以下の評価基準に基づき評価した。
　また、各蛍光色素標識抗体において、水溶性化合物を溶解させたＴＢＳに代えて、水溶性化合物を含有しないＴＢＳを洗浄に用いたＮｏ．ｃ１１、ｃ２１、ｃ３１、ｃ４１、ｃ５１又はｃ６１のノイズ蛍光強度をそれぞれ基準値とし、この基準値に対する比（蛍光色素標識抗体のノイズ蛍光強度／基準値）を算出し、以下の評価基準に基づき評価した。
　なお、いずれの評価も、トランスフェリン（Ｍｅｒｃｋ社製）の希釈濃度（１ｎｇ／１０μＬ、０．３ｎｇ／１０μＬ又は０．１ｎｇ／１０μＬ）を揃えた状態のものを比較して行った。トランスフェリン（Ｍｅｒｃｋ社製）の希釈濃度によって、上記の基準値に対する比の値に差はみられなかった。
　表１～６に結果をまとめて示す。
 
　－　シグナル蛍光強度（積分値）の評価基準　－　
　Ａ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が２．０倍以上
　Ｂ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．９倍以上２．０倍未満
　Ｃ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．８倍以上１．９倍未満
　Ｄ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．７倍以上１．８倍未満
　Ｅ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．６倍以上１．７倍未満
　Ｆ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．５倍以上１．６倍未満
　Ｇ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．４倍以上１．５倍未満
　Ｈ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．３倍以上１．４倍未満
　Ｉ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．２倍以上１．３倍未満
　Ｊ：基準値に対するシグナル蛍光強度の比が１．１倍以上１．２倍未満
 
　－　ノイズ蛍光強度（積分値）の評価基準　－　
　Ａ：基準値に対するノイズ蛍光強度の比が１．２倍未満
　Ｂ：基準値に対するノイズ蛍光強度の比が１．２倍以上１．３倍未満
　Ｃ：基準値に対するノイズ蛍光強度の比が１．３倍以上１．４倍未満
　Ｄ：基準値に対するノイズ蛍光強度の比が１．４倍以上１．５倍未満
　Ｅ：基準値に対するノイズ蛍光強度の比が１．５倍以上１．６倍未満
　Ｆ：基準値に対するノイズ蛍光強度の比が１．６倍以上１．７倍以下
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000033
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000034
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000035
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000036
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000037
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000038
＜表の注＞
（蛍光色素標識抗体）
　化合物（Ｚ）－ＩｇＧ：前述の化合物（Ｚ）－ＩｇＧの通りである。
　Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　６８０：商品名、Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、蛍光二次抗体
　Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　Ｐｌｕｓ　８００：商品名、Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、蛍光二次抗体
（水溶性化合物）
　ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール（１６０Ｅ．Ｏ．）（３０Ｐ．Ｏ．）：商品名、富士フイルム和光純薬社製
　レソルシノール：商品名、富士フイルム和光純薬社製、１，３－ジヒドロキシベンゼン
　ポリビニルピロリドンＫ３０：商品名、富士フイルム和光純薬社製
　ベタイン：商品名、富士フイルム和光純薬社製、トリメチルグリシン
　デキストラン４００００：商品名、富士フイルム和光純薬社製
　ポリスクロース４００：商品名、富士フイルム和光純薬社製、ショ糖とエピクロロヒドリンを共重合した水溶性ポリマー
　なお、水溶性化合物の欄に記載する化合物はいずれも、水１００ｍＬに対して２５℃の条件下で１ｇ以上溶ける化合物である。
　添加量：質量基準での、水溶性化合物添加前のＴＢＳ溶液に対する水溶性化合物の添加量の割合（１００％表示）を意味し、単位は質量％（ｗｔ％）である。
　含有量：質量基準での、水溶性化合物含有ＴＢＳ溶液中における水溶性化合物の含有量の割合（１００％表示）を意味し、単位は質量％（ｗｔ％）である。
　融点：熱重量・示差熱同時測定（ＴＧ－ＤＴＡ）により、以下のようにして測定した。
　なお、熱重量・示差熱同時測定装置としては、日立ハイテクサイエンス社製の示差熱熱重量同時測定装置（型番：ＳＴＡ７２００）を用いた。
　まず、予想される３０℃にて装置が安定するまで測定試料を保持した後、加熱速度：２０℃／分で、２００℃まで加熱し、ＴＧ曲線およびＤＴＡ曲線を作成した。
　ＤＴＡ曲線における低温側のベースラインを高温側に延長した直線と融点の階段状変化部分の曲線の勾配が最大になる点で引いた接線との交点の温度を、融点とした。
　なお、融点が２００℃を超える水溶性化合物のうち、ポリスクロース４００以外の水溶性化合物については、加熱上限温度の設定を２００℃から融点を測定可能な温度に変更して測定される値を記載する。
　上記表１～６の結果から、以下のことがわかる。
　融点４１℃の水溶性化合物である１，６－ヘキサンジオールを含有するＴＢＳをメンブレンの洗浄に用いたＮｏ．ｃ１２の比較例では、水溶性化合物を含有しないＴＢＳをメンブレンの洗浄に用いたＮｏ．ｃ１１（基準）に対して、シグナル蛍光強度及びノイズ蛍光強度はいずれも同じ値を示し、蛍光強度の増強効果は得られなかった。
　これに対して、融点５０℃以上の水溶性化合物を用いたＮｏ．１０１～１１６の実施例では、水溶性化合物を含有しないＴＢＳをメンブレンの洗浄に用いたＮｏ．ｃ１１（基準）に対して、シグナル蛍光強度は少なくとも１．２倍以上に増強され、ノイズ蛍光強度の増加も１．７倍以下に抑えられており、ノイズ蛍光強度の増加に対しシグナル蛍光強度の増加が大きく、蛍光強度の優れた増強効果を示していた。同様に、異なる蛍光色素標識抗体又は市販の蛍光二次抗体を用いた場合にも、融点５０℃以上の水溶性化合物を用いた実施例は、水溶性化合物を含有しないＴＢＳをメンブレンの洗浄に用いた基準に対して、蛍光強度の優れた増強効果を示していた（Ｎｏ．ｃ２１（基準）に対するＮｏ．２０１～２０７、Ｎｏ．ｃ３１（基準）に対するＮｏ．３０１、Ｎｏ．ｃ４１（基準）に対するＮｏ．４０１、Ｎｏ．ｃ５１（基準）に対するＮｏ．５０１、Ｎｏ．ｃ６１（基準）に対するＮｏ．６０１）。
　なかでも、水溶性化合物が塩構造を含まない場合にはシグナル蛍光強度をより高めることができ（Ｎｏ．１１４及び１１５に対するＮｏ．１０１～１１３及び１１６を参照）、水溶性化合物の融点が８０℃以上である場合にはシグナル蛍光強度を更に高めることができ（Ｎｏ．１０１及び１０２に対するＮｏ．１０３～１１３及び１１６を参照）、水溶性化合物がポリオール化合物又はベタイン化合物である場合にはノイズ蛍光強度を抑えることができることがわかる（Ｎｏ．１０７及び１１０に対するＮｏ．１０３～１０６、１０８、１０９、１１１～１１３及び１１６を参照）。
　また、水溶性化合物の含有量が４．５質量％以上である場合にはシグナル蛍光強度をより高めることができ（Ｎｏ．２０１に対するＮｏ．２０２～２０７を参照）、水溶性化合物の含有量が２０質量％以上である場合にはシグナル蛍光強度をさらに高めることができることがわかる（Ｎｏ．２０１～２０４に対するＮｏ．２０５～２０７を参照）。
　本発明をその実施態様とともに説明したが、我々は特に指定しない限り我々の発明を説明のどの細部においても限定しようとするものではなく、添付の請求の範囲に示した発明の精神と範囲に反することなく幅広く解釈されるべきであると考える。
　本願は、２０２２年１２月２６日に日本国で特許出願された特願２０２２－２０９０８３に基づく優先権を主張するものであり、これはここに参照してその内容を本明細書の記載の一部として取り込む。

Claims (11)

  1. 　融点が５０℃以上である水溶性化合物を含む、蛍光強度増強剤。
  2. 　前記水溶性化合物の含有量が４．５質量％以上である、請求項１に記載の蛍光強度増強剤。
  3. 　前記水溶性化合物が塩構造を含まない、請求項１に記載の蛍光強度増強剤。
  4. 　前記水溶性化合物がポリオール化合物又はベタイン化合物である、請求項１に記載の蛍光強度増強剤。
  5. 　前記水溶性化合物の含有量が２０質量％以上である、請求項２に記載の蛍光強度増強剤。
  6. 　前記融点が８０℃以上である、請求項１に記載の蛍光強度増強剤。
  7. 　溶液状である、請求項１に記載の蛍光強度増強剤。
  8. 　蛍光イメージング用である、請求項１に記載の蛍光強度増強剤。
  9. 　請求項１～８のいずれか１項に記載の蛍光強度増強剤を、蛍光標識された標的生体物質に作用させることを含む、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法。
  10. 　請求項１～８のいずれか１項に記載の蛍光強度増強剤を、蛍光標識された標的生体物質に作用させて、該蛍光標識からの蛍光強度を増強させることを含む、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法。
  11. 　下記（ａ）及び（ｂ）を含む、蛍光検出用キット。
    （ａ）融点が５０℃以上である水溶性化合物を含む、蛍光強度増強剤。
    （ｂ）蛍光色素を含む蛍光色素標識生体分子作製用試薬、又は、蛍光色素標識生体分子。
PCT/JP2023/046400 2022-12-26 2023-12-25 蛍光強度増強剤、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、蛍光検出用キット Ceased WO2024143263A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP23912043.9A EP4644874A1 (en) 2022-12-26 2023-12-25 Fluorescence intensity enhancing agent, method for enhancing fluorescence intensity of fluorescently labeled target biological material, and fluorescence detection kit
JP2024567792A JPWO2024143263A1 (ja) 2022-12-26 2023-12-25
CN202380086972.4A CN120380327A (zh) 2022-12-26 2023-12-25 荧光强度增强剂、经荧光标记的靶标生物物质的荧光强度增强方法及荧光检测用试剂盒
US19/243,663 US20250314658A1 (en) 2022-12-26 2025-06-19 Fluorescence intensity enhancer, fluorescence intensity enhancing method of fluorescently labeled target biological substance, and kit for fluorescence detection

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2022209083 2022-12-26
JP2022-209083 2022-12-26

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US19/243,663 Continuation US20250314658A1 (en) 2022-12-26 2025-06-19 Fluorescence intensity enhancer, fluorescence intensity enhancing method of fluorescently labeled target biological substance, and kit for fluorescence detection

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2024143263A1 true WO2024143263A1 (ja) 2024-07-04

Family

ID=91717891

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2023/046400 Ceased WO2024143263A1 (ja) 2022-12-26 2023-12-25 蛍光強度増強剤、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、蛍光検出用キット

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20250314658A1 (ja)
EP (1) EP4644874A1 (ja)
JP (1) JPWO2024143263A1 (ja)
CN (1) CN120380327A (ja)
WO (1) WO2024143263A1 (ja)

Citations (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05133957A (ja) 1990-07-23 1993-05-28 Becton Dickinson & Co 細胞分析における対照または標準としての細胞の保存
WO2002026891A1 (en) 2000-09-29 2002-04-04 Molecular Probes, Inc. Modified carbocyanine dyes and their conjugates
JP2012103014A (ja) * 2010-11-05 2012-05-31 Tokyo Metropolitan Institute Of Medical Science 蛍光増強剤および蛍光増強法並びにそれらの利用
JP2014231488A (ja) * 2013-05-28 2014-12-11 片山化学工業株式会社 バイオイメージング用蛍光標識剤
JP2016534147A (ja) 2013-09-17 2016-11-04 ブレイズ バイオサイエンス， インコーポレイテッド クロロトキシンコンジュゲート及びその使用方法
WO2017010152A1 (ja) * 2015-07-13 2017-01-19 ソニー株式会社 発光を増強させる方法、物質検出方法、物質検出装置及び発光増強剤
WO2018174078A1 (ja) 2017-03-21 2018-09-27 富士フイルム株式会社 ペプチド化合物およびその製造方法、スクリーニング用組成物、並びにペプチド化合物の選択方法
JP2019172826A (ja) 2018-03-28 2019-10-10 富士フイルム株式会社 蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
WO2019230963A1 (ja) 2018-06-01 2019-12-05 富士フイルム株式会社 蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
JP2020105187A (ja) 2014-10-07 2020-07-09 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． 抗体−薬物コンジュゲートのネオアジュバント使用
WO2020175473A1 (ja) 2019-02-28 2020-09-03 富士フイルム株式会社 ペプチド化合物の製造方法、保護基形成用試薬、及び、芳香族複素環化合物
JP2021011483A (ja) 2012-11-07 2021-02-04 オックスフォード バイオセラピューティックス リミテッドＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ 癌治療および判断ターゲットとしてのｌｙ７５
JP2021020956A (ja) 2015-06-29 2021-02-18 第一三共株式会社 抗体−薬物コンジュゲートの選択的製造方法
WO2021100814A1 (ja) 2019-11-21 2021-05-27 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
WO2021125295A1 (ja) 2019-12-19 2021-06-24 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
WO2021215514A1 (ja) 2020-04-24 2021-10-28 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた標識生体物質
JP2022501402A (ja) 2018-09-28 2022-01-06 イマジナブ・インコーポレーテッド Ｃｄ８イメージングコンストラクト及びその使用方法
WO2022025210A1 (ja) 2020-07-30 2022-02-03 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた標識生体物質
JP2022131357A (ja) 2021-02-26 2022-09-07 富士フイルム株式会社 蛍光色素及びこれを用いた標識生体物質
WO2022191123A1 (ja) 2021-03-08 2022-09-15 富士フイルム株式会社 蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質

Patent Citations (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05133957A (ja) 1990-07-23 1993-05-28 Becton Dickinson & Co 細胞分析における対照または標準としての細胞の保存
WO2002026891A1 (en) 2000-09-29 2002-04-04 Molecular Probes, Inc. Modified carbocyanine dyes and their conjugates
JP2012103014A (ja) * 2010-11-05 2012-05-31 Tokyo Metropolitan Institute Of Medical Science 蛍光増強剤および蛍光増強法並びにそれらの利用
JP2021011483A (ja) 2012-11-07 2021-02-04 オックスフォード バイオセラピューティックス リミテッドＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ 癌治療および判断ターゲットとしてのｌｙ７５
JP2014231488A (ja) * 2013-05-28 2014-12-11 片山化学工業株式会社 バイオイメージング用蛍光標識剤
JP2016534147A (ja) 2013-09-17 2016-11-04 ブレイズ バイオサイエンス， インコーポレイテッド クロロトキシンコンジュゲート及びその使用方法
JP2020105187A (ja) 2014-10-07 2020-07-09 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． 抗体−薬物コンジュゲートのネオアジュバント使用
JP2021020956A (ja) 2015-06-29 2021-02-18 第一三共株式会社 抗体−薬物コンジュゲートの選択的製造方法
WO2017010152A1 (ja) * 2015-07-13 2017-01-19 ソニー株式会社 発光を増強させる方法、物質検出方法、物質検出装置及び発光増強剤
WO2018174078A1 (ja) 2017-03-21 2018-09-27 富士フイルム株式会社 ペプチド化合物およびその製造方法、スクリーニング用組成物、並びにペプチド化合物の選択方法
JP2019172826A (ja) 2018-03-28 2019-10-10 富士フイルム株式会社 蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
WO2019230963A1 (ja) 2018-06-01 2019-12-05 富士フイルム株式会社 蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
JP2022501402A (ja) 2018-09-28 2022-01-06 イマジナブ・インコーポレーテッド Ｃｄ８イメージングコンストラクト及びその使用方法
WO2020175473A1 (ja) 2019-02-28 2020-09-03 富士フイルム株式会社 ペプチド化合物の製造方法、保護基形成用試薬、及び、芳香族複素環化合物
WO2021100814A1 (ja) 2019-11-21 2021-05-27 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
WO2021125295A1 (ja) 2019-12-19 2021-06-24 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
WO2021215514A1 (ja) 2020-04-24 2021-10-28 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた標識生体物質
WO2022025210A1 (ja) 2020-07-30 2022-02-03 富士フイルム株式会社 化合物及びこれを用いた標識生体物質
JP2022131357A (ja) 2021-02-26 2022-09-07 富士フイルム株式会社 蛍光色素及びこれを用いた標識生体物質
WO2022191123A1 (ja) 2021-03-08 2022-09-15 富士フイルム株式会社 蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LUCAS C. D. DE REZENDEFLAVIO DA SILVA EMERY: "A Review of the Synthetic Strategies for the Development of BODIPY Dyes for Conjugation with Proteins, Orbital", THE ELECTRONIC JOURNAL OF CHEMISTRY, vol. 5, no. 1, 2013, pages 62 - 83, XP055974577
See also references of EP4644874A1

Also Published As

Publication number Publication date
CN120380327A (zh) 2025-07-25
EP4644874A1 (en) 2025-11-05
JPWO2024143263A1 (ja) 2024-07-04
US20250314658A1 (en) 2025-10-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7550076B2 (ja) 蛍光色素及びこれを用いた標識生体物質
JP7344982B2 (ja) 化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
JP7359869B2 (ja) 化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
KR101663465B1 (ko) 생체 분자 표지를 위한 시아닌 염료 및 그 제조방법
JP7441306B2 (ja) 化合物及びこれを用いた標識生体物質
US20240173437A1 (en) Compound and labeled biological substance using the same
WO2024143263A1 (ja) 蛍光強度増強剤、蛍光標識された標的生体物質の蛍光強度増強方法、及び、蛍光検出用キット
JP7787670B2 (ja) 化合物及びこれを用いた標識生体物質
JP7423789B2 (ja) 化合物及びこれを用いた標識生体物質
WO2024181455A1 (ja) 化合物及びこれを用いた標識生体物質
WO2024181454A1 (ja) 化合物及びこれを用いた標識生体物質
US20250389724A1 (en) Compound and labeled biological substance using the same
CN117642414A (zh) 化合物及使用了该化合物的标记生物物质
WO2024181456A1 (ja) 化合物及びこれを用いた標識生体物質
US20250388811A1 (en) Compound and labeled biological substance using the same
CN117642413A (zh) 化合物及使用了该化合物的标记生物物质
EP4397673A1 (en) Compound and labeled biomaterial using same
CN117642412A (zh) 化合物及使用了该化合物的标记生物物质
JP2023035280A (ja) 化合物及びこれを用いた標識生体物質
WO2025197851A1 (ja) 蛍光性化合物
JP2025059908A (ja) 蛍光性化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質
EP4357437A1 (en) Compound and labeled biomaterial using same
CN117460790A (zh) 荧光性化合物及使用了该荧光性化合物的荧光标记生物物质

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 23912043

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2024567792

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202380086972.4

Country of ref document: CN

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 202380086972.4

Country of ref document: CN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2023912043

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2023912043

Country of ref document: EP