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WO2024005055A1 - 検査方法、検査試薬、及び検査キット - Google Patents

検査方法、検査試薬、及び検査キット Download PDF

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Publication number
WO2024005055A1
WO2024005055A1 PCT/JP2023/023931 JP2023023931W WO2024005055A1 WO 2024005055 A1 WO2024005055 A1 WO 2024005055A1 JP 2023023931 W JP2023023931 W JP 2023023931W WO 2024005055 A1 WO2024005055 A1 WO 2024005055A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
substance
reagent
sample
cationic
test
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2023/023931
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
景吾 河野
翔平 家治
静夏 伊藤
慎也 奥山
穣二 川▲崎▼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sekisui Medical Co Ltd
Original Assignee
Sekisui Medical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sekisui Medical Co Ltd filed Critical Sekisui Medical Co Ltd
Priority to EP23831495.9A priority Critical patent/EP4549939A1/en
Priority to US18/862,623 priority patent/US20250283883A1/en
Publication of WO2024005055A1 publication Critical patent/WO2024005055A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Definitions

  • the present invention relates to a test method, a test reagent, and a test kit.
  • This application claims priority based on Japanese Patent Application No. 2022-105494 filed in Japan on June 30, 2022, the contents of which are incorporated herein.
  • SARS-CoV-2 is the virus that causes coronavirus disease 2019 (COVID-19).
  • COVID-19 is prevalent all over the world, and many people are infected. Since the symptoms of COVID-19 are similar to those of respiratory infections caused by influenza, adenovirus, respiratory syncytial virus, etc., it is difficult to determine the causative virus of the infection from the symptoms.
  • Reagents such as rapid diagnostic reagents based on immunochromatography are widely used in the diagnosis of respiratory infections. When using a diagnostic agent, it is necessary to collect a sample from the patient's nasopharynx using a cotton swab. In situations where infectious diseases are prevalent, it is difficult for medical professionals to collect specimens from the nasal cavity and pharynx for each pathogen to be tested in order to identify the virus that causes the infectious disease. Increase risk of exposure.
  • Patent Document 1 discloses that a test sample suitable for multiple respiratory infection tests is prepared by treating a sample selected from a nasal aspirate, a nasal swab, and a throat swab with a sample processing liquid. A part of the sample is tested using a first test device using an immunochromatography method for testing for a first respiratory infection, and a part of the test sample is tested for a second respiratory infection different from the first respiratory infection. A respiratory infection testing method using a second test device using immunochromatography for infectious disease testing, preparing test samples suitable for testing for multiple respiratory infections, and testing for multiple types of viruses. The method is described.
  • Patent Document 1 It was not clear whether the testing method described in Patent Document 1 could be applied to testing for a new virus such as SARS-CoV-2.
  • the present inventors have determined that the isoelectric point of the nucleocapsid protein to be detected in the SARS-CoV-2 immunoassay is 10 or more, that the substance has an isoelectric point of 10.0 or more, and that a sample filtration filter or It was discovered that when a reagent is brought into contact with a glass member, a substance with an isoelectric point of 10.0 or more is adsorbed to the glass member, resulting in a decrease in measurement sensitivity (Analysis Examples 1 to 3). Until now, there has been no discussion on a method for detecting two or more target substances, including substances with an isoelectric point of 10.0 or higher, with high sensitivity using the same sample while suppressing such a decrease in measurement sensitivity. Ta.
  • An object of the present invention is to provide a testing method that can detect two or more substances to be detected, including substances with an isoelectric point of 10.0 or more, with high sensitivity while suppressing a decrease in measurement sensitivity using the same specimen. Make it one.
  • a qualitative or quantitative testing method for a substance to be detected contained in a specimen a preparation step of preparing a test sample from the specimen; a testing step of testing at least a portion of the test sample with a reagent for detecting each of the first detection target substance and the second detection target substance,
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more, In either or both of the preparation step and the inspection step, an inspection in which the first detection substance is brought into contact with either or both of the glass member and the nitrocellulose member in the presence of a cationic substance.
  • a qualitative or quantitative testing method for a substance to be detected contained in a sample a preparation step of preparing a test sample from the specimen; a first testing step of testing at least a portion of the test sample with a first reagent for detecting each of the first detection target substance and the second detection target substance; a second testing step of testing a portion of the test sample with a second reagent for detecting a second substance to be detected; including;
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more, In either or both of the preparation step and the first testing step, the first detection substance is brought into contact with either or both of the glass member and the nitrocellulose member in the presence of a cationic substance.
  • the first reagent has a sample supply section and a labeled reagent holding section, and either or both of the sample supply section and the labeled reagent holding section include the glass member. inspection method.
  • the preparation step includes a step of suspending the specimen in a specimen diluent.
  • the preparation step includes a step of filtering the test sample with a filter.
  • a first labeling reagent in which a first binding substance capable of binding to a first analyte is labeled with a labeling substance; a second labeling reagent in which a second binding substance capable of binding to a second detection substance is labeled with a labeling substance; a first detection section on which a first solid phase reagent capable of binding to a first detection substance is immobilized; a second detection part on which a second solid phase reagent capable of binding to a second detection substance is immobilized; A reagent comprising either one or both of a glass member and a nitrocellulose member disposed upstream of the first detection unit in the direction of development of a developing solution containing the specimen,
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more,
  • a reagent, wherein a developing solution that contacts either or both of the glass member and the nitrocellulose member contains a cationic substance.
  • the reagent according to [17], wherein the coronavirus is SARS-CoV-2.
  • cationic substance according to any one of [13] to [18], wherein the cationic substance is at least one selected from the group consisting of a metal salt, a cationic polymer, a cationic peptide, and a cationic surfactant.
  • reagent A method for qualitatively or quantitatively testing a substance to be detected contained in a specimen, using the reagent according to any one of [13] to [19].
  • a test kit containing a reagent is a first labeling reagent in which a first binding substance capable of binding to a first analyte is labeled with a labeling substance; a second labeling reagent in which a second binding substance capable of binding to a second detection substance is labeled with a labeling substance; a first detection section on which a first solid phase reagent capable of binding to a first detection substance is immobilized; a second detection part on which a second solid phase reagent capable of binding to a second detection substance is immobilized; having one or both of a glass member and a nitrocellulose member disposed upstream of the first detection unit in the direction of development of a developing solution containing the specimen;
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more,
  • a test kit, wherein a developing solution that contacts either or both of the glass member and the nitrocellulose member contains a cationic substance.
  • a test kit including a sample filtration filter and a reagent,
  • the reagent is a first labeling reagent in which a first binding substance capable of binding to a first analyte is labeled with a labeling substance; a second labeling reagent in which a second binding substance capable of binding to a second detection substance is labeled with a labeling substance; a first detection section on which a first solid phase reagent capable of binding to a first detection substance is immobilized; a second detection part on which a second solid phase reagent capable of binding to a second detection substance is immobilized; Either a glass member or a nitrocellulose member disposed upstream of the first detection unit in the direction of development of a developing solution containing either one or both of the sample of the sample filtration filter and the sample of the reagent.
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more, A kit, wherein a developing solution that contacts either or both of the glass member and the nitrocellulose member contains a cationic substance.
  • the reagent includes a sample supply section and a labeled reagent holding section, and either or both of the sample supply section and the labeled reagent holding section include the glass member.
  • Test kit as described.
  • the test kit according to any one of [21] to [23], wherein the glass member is a sample filtration filter containing glass fibers.
  • cationic substance according to any one of [21] to [29], wherein the cationic substance is at least one selected from the group consisting of metal salts, cationic polymers, cationic peptides, and cationic surfactants.
  • Test kit [31] A method for qualitatively or quantitatively testing a substance to be detected contained in a specimen, using the test kit according to any one of [21] to [30].
  • a qualitative or quantitative testing method for a substance to be detected contained in a specimen a preparation step of preparing a test sample from the specimen; a testing step of testing at least a portion of the test sample with a reagent for detecting each of the first detection target substance and the second detection target substance,
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more, and the substance with an isoelectric point of 10.0 or more is derived from a respiratory infection virus, and the respiratory infection virus is It is a coronavirus,
  • a cationic polymer having a metal salt of sodium citrate or magnesium sulfate, hexadimethrine bromide or 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine as a constituent unit; At least one member selected from the group consisting of a cationic peptide that is cocodimonium hydroxypropyl hydrolyzed keratin and a cationic surfactant
  • An inspection method comprising bringing the first detection substance into contact with either or both of a glass member and a nitrocellulose member in the presence of a cationic substance.
  • a qualitative or quantitative testing method for a substance to be detected contained in a specimen a preparation step of preparing a test sample from the specimen; a first testing step of testing at least a portion of the test sample with a first reagent for detecting each of the first detection target substance and the second detection target substance; a second testing step of testing a portion of the test sample with a second reagent for detecting a second substance to be detected; including;
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more, and the substance with an isoelectric point of 10.0 or more is derived from a respiratory infection virus, and the respiratory infection virus is It is a coronavirus,
  • a cationic polymer having a metal salt of sodium citrate or magnesium sulfate, hexadimethrine bromide or 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine as a constituent unit; at least one selected from the group consisting of
  • a test method comprising bringing the first detection substance into contact with either or both of a glass member and a nitrocellulose member in the presence of a cationic substance as a seed.
  • the test method according to [36] wherein the cationic substance is contained in the specimen diluent.
  • the glass member is a sample filtration filter containing glass fibers.
  • the coronavirus is SARS-CoV-2.
  • a first labeling reagent in which a first binding substance capable of binding to a first analyte is labeled with a labeling substance; a second labeling reagent in which a second binding substance capable of binding to a second detection substance is labeled with a labeling substance; A first detection part on which a first solid phase reagent capable of binding to a first analyte is immobilized, and a second detection part on which a second solid phase reagent capable of binding to a second analyte is immobilized.
  • a membrane in which a detection part is arranged A reagent comprising either one or both of a glass member and a nitrocellulose member disposed upstream of the first detection unit in the direction of development of a developing solution containing the specimen,
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more and derived from a coronavirus, which is a respiratory infection virus,
  • a reagent comprising at least one cationic substance, wherein the cationic substance is retained in a constituent material of the reagent.
  • a test kit comprising a reagent and a specimen diluent containing a cationic substance
  • the reagent is a first labeling reagent in which a first binding substance capable of binding to a first analyte is labeled with a labeling substance; a second labeling reagent in which a second binding substance capable of binding to a second detection substance is labeled with a labeling substance; A first detection part on which a first solid phase reagent capable of binding to a first analyte is immobilized, and a second detection part on which a second solid phase reagent capable of binding to a second analyte is immobilized.
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more and derived from a coronavirus, which is a respiratory infection virus,
  • a developing solution that contacts either or both of the glass member and the nitrocellulose member contains a cationic substance
  • the cationic substance is a metal salt such as sodium citrate or magnesium sulfate, a cationic polymer having as a constituent unit hexadimethrine bromide or 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine, and cocodimonium hydroxypropyl hydrolyzed keratin.
  • test kit comprising a specimen filtration filter, a specimen diluent containing a cationic substance, and a reagent,
  • the reagent is a first labeling reagent in which a first binding substance capable of binding to a first analyte is labeled with a labeling substance; a second labeling reagent in which a second binding substance capable of binding to a second detection substance is labeled with a labeling substance;
  • a membrane in which a detection part is arranged Either a glass member or a nitrocellulose member disposed upstream of the first detection section in the direction of development of a developing solution containing either one or both of the sample of the sample filtration filter and the sample of the reagent.
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more and derived from a coronavirus, which is a respiratory infection virus,
  • a developing solution that contacts either or both of the glass member and the nitrocellulose member contains a cationic substance
  • the cationic substance is a metal salt such as sodium citrate or magnesium sulfate, a cationic polymer having as a constituent unit hexadimethrine bromide or 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine, and cocodimonium hydroxypropyl hydrolyzed keratin.
  • a test kit comprising at least one selected from the group consisting of a cationic peptide and a cationic surfactant that is an alkylamine salt type surfactant or a quaternary ammonium salt type surfactant.
  • the reagent includes a sample supply section and a labeled reagent holding section, and either or both of the sample supply section and the labeled reagent holding section include the glass member.
  • Test kit as described.
  • the coronavirus is SARS-CoV-2.
  • a method for qualitatively or quantitatively testing a substance to be detected contained in a specimen using the test kit according to any one of [46] to [50].
  • a testing method that can detect two or more substances to be detected, including a substance with an isoelectric point of 10.0 or more, with high sensitivity using the same specimen while suppressing a decrease in measurement sensitivity.
  • FIG. 2 is a schematic diagram of an example of an embodiment of a reagent.
  • FIG. 2 is a schematic diagram of the configuration of reagents used in Examples.
  • the present inventors have repeatedly studied to achieve the above-mentioned object, and in the presence of a cationic substance, a substance with an isoelectric point of 10.0 or more is applied to either or both of a glass member and a nitrocellulose member. It has been found that by bringing them into contact, two or more substances to be detected, including substances with an isoelectric point of 10.0 or more, can be tested with high sensitivity.
  • the substance to be detected in the present invention includes pathogens such as viruses and physiologically active substances such as proteins.
  • the substances to be detected in the present invention include, for example, markers related to various diseases, such as respiratory infection virus, norovirus, HIV (human immunodeficiency virus), HBV (hepatitis B virus), and HCV (hepatitis C virus).
  • the substance to be detected in the present invention is preferably a respiratory infection virus.
  • a respiratory infection virus is a virus that causes respiratory diseases.
  • the respiratory infection viruses in the present invention are not particularly limited as long as they can be detected using antigen-antibody reactions, including SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, HCoV-229E.
  • influenza viruses such as influenza A virus, influenza B virus, and influenza C virus
  • parainfluenza virus 1 parainfluenza virus 2 examples include parainfluenza viruses such as virus 3; RS viruses such as RS virus type A and RS virus type B; adenovirus; rhinovirus; metapneumovirus; cytomegalovirus; and bocavirus.
  • SARS-CoV-2 influenza viruses such as influenza A virus and influenza B virus, RS viruses such as RS virus type A and RS virus type B, and/or adenovirus as the substance to be detected.
  • respiratory organ is a general term for organs related to breathing, and includes organs from the nasal vestibule to the alveoli (lungs) via the nasal cavity, pharynx, larynx, trachea, bronchi, and bronchioles. say.
  • the first substance to be detected is a substance having an isoelectric point of 10.0 or more.
  • the substance having an isoelectric point of 10.0 or more is not particularly limited as long as it can be detected using an antigen-antibody reaction, and includes exogenous substances (viruses, bacteria, administered drugs, etc.), and exogenous substances. These include proteins originating from the body (metabolites of exogenous substances, secretions by bacteria, etc.), and endogenous substances (antibodies, hormones, etc. produced within the body).
  • Substances with an isoelectric point of 10.0 or higher include proteins, peptides, or nucleic acids, and proteins with an isoelectric point of 10.0 or higher are preferred.
  • the first substance to be detected can be a protein with an isoelectric point of 10.0 or more, 10.1 or more, 10.2 or more, 10.3 or more, 10.4 or more, or 10.5 or more.
  • the isoelectric point is the pH at which the average charge of the entire compound after ionization becomes 0 in a compound that has both a functional group that becomes an anion and a functional group that becomes a cation.
  • the substance with an isoelectric point of 10.0 or higher in the testing method of the present invention is preferably a protein derived from a virus, more preferably a protein derived from a respiratory infection virus, and even more preferably a protein derived from a coronavirus. most preferably a protein derived from SARS-CoV-2.
  • the substance having an isoelectric point of 10.0 or more may be the virus itself, which is composed of multiple proteins, or may be a part of the protein constituting the virus or a fragment thereof.
  • the substance having an isoelectric point of 10.0 or more is preferably a coronavirus nucleocapsid protein, more preferably a SARS-CoV-2 nucleocapsid protein.
  • a first embodiment of the testing method of the present invention includes a preparation step of preparing a test sample from a specimen, and detecting each of a first detection substance and a second detection substance in at least a part of the test sample. and a testing step of testing with a reagent for the test.
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more.
  • the first detection substance is mixed with a glass member and a nitrocellulose member in the presence of a cationic substance. contact either one or both.
  • the preparation step may include, for example, a step of separating the specimen, a step of suspending the specimen in a specimen diluent, a step of diluting the specimen with the specimen diluent, a step of filtering the test sample with a filter, etc. good.
  • the sample diluent preferably contains a cationic substance. The cationic substance will be described later.
  • the detection method according to the first embodiment uses a reagent configured so that a single reagent can test two or more target substances so that multiple types of target substances can be tested in one test. .
  • the specimen that may contain the substance to be detected mainly includes a biological sample derived from a living organism, an extract obtained by extracting the substance to be detected from the biological sample, and the like.
  • Food samples such as liquid beverages, semi-solid foods, and solid foods, sampling samples from the natural world such as soil, rivers, and seawater, as well as swabbing samples from factory production lines or clean rooms, also contain the target substance. It is possible to use it as a possible sample.
  • the specimen that may contain the substance to be detected is preferably a biological sample.
  • the biological samples include, but are not limited to, blood, serum, plasma, urine, lachrymal fluid, otorrhea, prostatic fluid, and respiratory secretions.
  • the biological sample is preferably at least one selected from the group consisting of blood, serum, plasma, urine, lacrimal fluid, otorrhea, prostatic fluid, and respiratory secretion, and respiratory secretion is more preferred.
  • respiratory secretion refers to body fluids secreted within or on the respiratory tissues. Examples of the respiratory secretions include, but are not limited to, body fluids secreted from the nostrils, nasal cavities, pharynx, nasopharynx, or oral cavity.
  • the respiratory secretions are preferably nasopharyngeal swabs, nasal swabs, saliva, or sputum.
  • the subject from which the biological sample is collected includes, but is not limited to, humans or mammals (eg, monkeys, dogs, or cats).
  • the subject is preferably a human.
  • the person who collects or prepares the biological sample may be the same person as the person who performs the testing method according to the first embodiment, or may be a different person.
  • the biological sample used in the testing method according to the first embodiment may be one that is collected or prepared during implementation of the testing method of the present invention, or may be one that has been collected or prepared and stored in advance.
  • the specimen diluent is a solution for suspending or diluting the biological sample.
  • the specimen diluent contains a cationic substance, which will be described later. If the specimen diluent contains a cationic substance, it is preferable that the specimen diluent contains the cationic substance at the time of sale, but if the test kit contains the specimen diluent, the cationic substance is added separately from the specimen diluent. May contain. In this case, it is preferable that the person performing the preparation step mixes the cationic substance and the sample diluent.
  • the sample diluent contains a buffer.
  • Buffer means a solution that buffers the pH.
  • Examples of the buffer used in the test method according to the first embodiment include PBS (phosphate buffered saline), MES (2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid), and PIPES (pipeazine-N,N'-bi s( 2-ethanesulfonic acid), ACES (N-(2-acetamide)-2-aminoethanesulfonic acid), ADA (N-(2-acetamide) iminodiacetic acid), Bis-Tr is(2,2-Bis(hydroxyethyl)-(iminotris )-(hydroxymethyl)-methane), Tris (tris(hydroxymethyl)aminomethane), MOPS (3-Morpholinopropanesulfonic acid), HEPES (4-(2-hydrox yetyl)-1-piperazineethanesulfonic acid), citrate buffer, gly
  • the step of separating a specimen is a step of dividing a portion of the collected specimen to be used for testing.
  • the step of suspending the specimen in the specimen diluent will be exemplified as follows.
  • the specimen is a swab collected from the nasopharynx or nasal cavity with a cotton swab
  • the specimen can be suspended in the specimen diluent by inserting the cotton swab into the specimen diluent and rotating it.
  • the container holding the specimen diluent is made of a plastic material
  • the specimen can also be suspended in the specimen diluent by crushing the cotton swab from which the specimen was collected together with the container.
  • the necessary amount of the specimen can be collected using a pipette, etc., and suspended in the specimen diluent, or in the case of a swabbing liquid.
  • the specimen can also be suspended in the specimen diluent by inserting a cotton swab soaked in the specimen into the specimen diluent.
  • the step of diluting a specimen with a specimen diluent is a step in which the specimen is diluted with a specimen diluent in advance when it is assumed that the specimen contains an analyte exceeding the measurement upper limit of the reagent.
  • the step of filtering with a filter is a step of removing solid matter that may be contained in the specimen or test sample using a filter.
  • the step of filtering with a filter can be performed as follows.
  • a sample filtration filter consisting of a filter and a support for holding the filter is inserted into a container holding the sample or a sample diluted solution containing the sample.
  • the sample inflow side of the sample filtration filter and the opening side of the container are formed so that one side is tightly fitted into the other.
  • the sample is filtered from the tip side of the sample filtration filter, which is located on the opposite side to the sample inflow side.
  • obtain a specimen dilution solution containing the specimen can be dropped directly into the reagent, or the filtrate can be held in a separate container.
  • the testing step in the testing method according to the first embodiment includes a step of bringing the reagent into contact with the test sample, and a step of reading the test result from the reagent after a predetermined period of time has elapsed.
  • the first to-be-detected substance which is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more, is added in the presence of a cationic substance.
  • the method includes the step of contacting either or both of the glass member and the nitrocellulose member.
  • the order in which the sample containing the cationic substance and the to-be-detected substance is brought into contact with one or both of the glass member and the nitrocellulose member is such that the sample containing the to-be-detected substance comes into contact with the glass member or the nitrocellulose member.
  • a cationic substance can be brought into contact with either or both of the glass member and the nitrocellulose member before the specimen containing the substance to be detected, or the cationic substance can be brought into contact with the glass member and the nitrocellulose member at the same time as the specimen containing the substance to be detected. It can also be brought into contact with either or both of the manufactured member and the nitrocellulose member.
  • the sample containing the substance to be detected may be brought into contact with either or both of the glass member and the nitrocellulose member.
  • the cationic substance may be contained in the specimen diluent, or in the constituent materials of the test kit, such as the specimen filtration filter, sample pad, conjugate pad, antibody-immobilized membrane, or sample supply part and membrane carrier. It may be held at any location between the sample pad and the conjugate pad. If a cationic substance is retained in the constituent materials of the test kit, when the specimen or test sample comes into contact with the constituent materials, the cationic substance will elute or flow into the specimen or test sample, causing a development containing the cationic substance. It becomes a liquid.
  • a cationic substance is a substance that has a cationic functional group and becomes positively charged when it comes into contact with water. When the cationic substance has both a cationic functional group and an anionic functional group, it is sufficient that the entire molecule is positively charged.
  • cationic functional groups include amino groups such as primary amino groups, secondary amino groups, and tertiary amino groups; onium bases such as quaternary ammonium groups and phosphonium groups; arginyl groups, lysyl groups, histidyl groups, Amino acid residues such as a guanidyl group; heterocyclic groups such as an imidazole group, etc. can be mentioned.
  • the cationic substance can include at least one selected from the group consisting of metal salts, cationic polymers, cationic surfactants, and cationic peptides.
  • the cationic substance is preferably a metal salt, a cationic polymer, or a cationic surfactant, more preferably a cationic polymer, even more preferably containing both a cationic polymer and a metal salt, and a cationic polymer and sodium chloride. It is even more preferable to include both.
  • any metal salt that generates metal ions when ionized in an aqueous solution can be used without limitation. Even if a metal salt does not have a cationic functional group as described above, the metal ion becomes cationic in a metal salt that ionizes when it comes into contact with water.
  • metal ions include alkali metal ions, alkaline earth metal ions, and other metal ions, with alkali metal ions and alkaline earth metal ions being preferred.
  • alkali metal ions include lithium ions, sodium ions, and potassium ions; examples of alkaline earth metal ions include magnesium ions and calcium ions; and examples of other metal ions such as copper ions. etc. can be mentioned.
  • Sodium ions are preferred as alkali metal ions, and magnesium ions are preferred as alkaline earth metal ions.
  • alkali metal salt sodium chloride or sodium citrate is preferred, and as the alkaline earth metal salt, magnesium sulfate is preferred.
  • the term "cationic polymer” refers to a polymer having a cationic functional group in its side chain.
  • the cationic functional group serving as a side chain is preferably a quaternary ammonium group.
  • an aqueous solution of hexadimethrine bromide (CAS RN28728-55-4) or a cationic polymer having 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine as a constituent unit dissolved in water at a concentration of 0.5% by mass is 25%.
  • An aqueous solution having a kinematic viscosity of 20 to 60 m 2 /s at 25°C and dissolved in water at a concentration of 0.1% by mass has a surface tension of 70 x 10 -3 to 80 x 10 -3 N/m at 25°C.
  • a cationic polymer having a weight average molecular weight (Mw) of 50 to 600 kDa is preferred. Note that the cationic polymer having 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine as a constituent unit is commercially available as Lipidure (registered trademark)-BL502.
  • the kinematic viscosity ⁇ [m 2 /s] at 25°C of a 0.5% concentration aqueous solution of the cationic polymer is the kinematic viscosity ⁇ [m 2 /s] of an aqueous solution of the cationic polymer dissolved in water at a concentration of 0.5% by mass at 25°C. It can be obtained by dividing the viscosity ⁇ [Pa ⁇ s] obtained by measurement with an Ubbelohde viscometer by the density ⁇ [kg/m 3 ] of the aqueous solution at 25°C.
  • the surface tension ⁇ [mN/m] of a 0.1% by mass aqueous solution of the cationic polymer at 25°C is the surface tension ⁇ [mN/m] of a 0.1% by mass aqueous solution of the cationic polymer in water at 25°C. It can be obtained by measurement using the ring method, Wilhelmy plate method, or drop weight method.
  • the weight average molecular weight (Mw) of the cationic polymer can be determined by gel permeation chromatography (GPC). Polyethylene glycol is used as a standard substance.
  • the term "cationic surfactant” refers to a surfactant in which a portion of the surfactant to which a hydrophobic group is bonded is positively charged when dissolved in an aqueous solution.
  • the cationic surfactant include alkylamine salt type surfactants and quaternary ammonium salt type surfactants.
  • alkylamine salt type surfactants include amines containing 1 to 3 alkyl groups having 8 to 22 carbon atoms, such as monododecylamine, monooctadecylamine, dioctadecylamine, and triotadecylamine, and hydrochloric acid, sulfuric acid, etc.
  • Examples include salts with inorganic acids or lower carboxylic acids such as acetic acid, lactic acid, and citric acid.
  • Specific examples include stearylamine acetate [CAS number: 2190-04-7, product name: Acetamine 86, manufactured by Kao Corporation].
  • Quaternary ammonium salt type surfactants include 1 to 3 alkyl groups having 8 to 22 carbon atoms, such as dodecyltrimethylammonium, octadecyltrimethylammonium, hexadecyltrimethylammonium, didecyldimethylammonium, and benzylmethyltetradecylammonium. Examples include salts of ammonium containing chlorine, bromine, etc.
  • lauryltrimethylammonium chloride [CAS number: 112-00-5, product name: Cortamine (registered trademark) 24P, manufactured by Kao Corporation]
  • dodecyltrimethylammonium bromide [CAS number: 1119-94-4, manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.].
  • Cationic peptide means a peptide that exhibits cationic properties when dissolved or dispersed in water.
  • the cationic peptide may contain many basic amino acid residues (arginine (Arg), lysine (Lys), or histidine (His)) among the amino acid residues constituting the peptide.
  • the cationic peptide is not particularly limited as long as it exhibits cationic properties when dissolved or dispersed in water, and for example, polyarginine, polylysine, polyhistidine, etc., which are polymers of the above-mentioned basic amino acid residues, are used. be able to.
  • cocodimonium hydroxypropyl hydrolyzed keratin As the cationic peptide, it is preferable to use cocodimonium hydroxypropyl hydrolyzed keratin (CAS RN68915-25-3). Cocodimonium hydroxypropyl hydrolyzed keratin is commercially available from Seiwa Kasei Co., Ltd. under the trade name Promois® WK-HCAQ.
  • the concentration of the cationic substance can be modified as appropriate depending on the type of substance to be detected, the type of sample, and the type of immunoassay method.
  • concentration of the cationic substance refers to the concentration when the cationic substance is included in the specimen diluent or the concentration when the cationic substance is included in the developing solution.
  • the concentration of the cationic substance is 0.1-1,000mM, 1-750mM, or 2-750mM.
  • the concentration of the cationic substance is 0.1-1,000mM, 1-750mM, 2-750mM, 50-750mM, or 200-750mM.
  • the concentration of the cationic substance is 0.1-1,000mM, 1-500mM, 1-250mM, or 1-100mM.
  • the concentration of the cationic substance is 0.0001 to 20% by mass, 0.0005 to 10% by mass, 0.001 to 5% by mass. % by weight, 0.01-1% by weight, or 0.01-0.5% by weight. Even when the specimen diluent or developing solution contains multiple types of cationic substances, the concentration of each component can be within the above range.
  • a glass member is a member containing glass, and also includes a composite member of glass and other materials.
  • Glass means glass that uses silicon dioxide ( SiO2 ) as a constituent. Glass using silicon dioxide (SiO 2 ) as a constituent has a network structure based on SiO 4 tetrahedra at a temperature lower than the glass transition point. In this network structure, oxygen atoms bonded to silicon atoms are negatively charged.
  • the glass member examples include a reagent sample pad, a conjugate pad, or any pad (third pad) located between the sample supply section and the membrane that is different from the sample pad and the conjugate pad, and a sample filtration filter. Can be mentioned.
  • a nitrocellulose member is a member containing nitrocellulose, and also includes a composite material of nitrocellulose and other materials. Like glass fiber, nitrocellulose is also negatively charged. Nitrocellulose materials include nitrocellulose membranes and specimen filtration filters.
  • the reagent used in the testing method according to the first embodiment is preferably a reagent that performs testing by expanding the specimen within the reagent using capillary action or the like.
  • Reagents used in the testing method according to the first embodiment include immunochromatography test strips, nucleic acid chromatography test strips, and microfluidic devices.
  • An example of an immunochromatography test strip and a nucleic acid chromatography test strip is one in which a sample pad, a membrane, and an absorption pad are arranged in order from upstream to downstream in the flow direction of the test sample. Each member is arranged so as to at least partially overlap the upstream and downstream pads.
  • a sample supply section and a labeled reagent holding section can be formed on the sample pad.
  • a detection section is arranged on the membrane.
  • microfluidic device is one in which a sample supply section, a labeled reagent holding section, and a detection section are connected through a microchannel.
  • the microfluidic device may include a pump or connections for connection to a pump, such as for control of flow rate.
  • the sample supply section and the labeled reagent holding section includes a glass member.
  • the sample is filtered using a sample filtration filter that includes a glass member before supplying the sample to the sample supply unit, neither the sample supply unit nor the labeled reagent holding unit may contain a glass member. good.
  • the sample supply section is a section that supplies the test sample to the reagent.
  • the sample supply portion of the immunochromatography test strip and the nucleic acid chromatography test strip can be formed as a part of the sample pad.
  • Materials constituting the sample pad include pads made of materials such as paper, cellulose mixtures, nitrocellulose, polyester, acrylonitrile copolymers, glass fibers, and rayon.
  • the sample pad is preferably a pad made of glass fiber or polyester, and more preferably a pad made of glass fiber.
  • the sample supply section of the microfluidic device can be formed at the opening of the microchannel.
  • the labeled reagent holding part is a part that holds a labeled reagent, which will be described later.
  • the labeled reagent holding portion of the immunochromatography test strip and the nucleic acid chromatography test strip can be placed on a portion of the sample pad, or can be formed as a conjugate pad separate from the sample pad.
  • the labeled reagent holding portion is formed as a conjugate pad, the labeled reagent may be disposed on the entire conjugate pad, or may be disposed on a part of the conjugate pad. It is also possible to form a labeled reagent holding portion on the membrane described below without arranging the conjugate pad.
  • the labeled reagent holding section is preferably arranged in a line in a part of the sample pad or conjugate pad.
  • the labeled reagent holding section of the microfluidic device can be formed between the opening of the microchannel and the detection section.
  • a labeling reagent is a binding substance that can bind to a target substance and is labeled with a labeling substance.
  • Examples of methods for labeling a binding substance capable of binding to a target substance with a labeling substance include physical adsorption, chemical bonding, and the like.
  • labeling substance examples include metal complexes, enzymes, insoluble particles, fluorescent substances, chemiluminescent substances, biotin, avidin, radioisotopes, colloidal gold particles, and colored latex. It is preferable to use colloidal gold particles as the labeling substance.
  • a binding substance capable of binding to a detected substance means a substance that binds to a detected substance through an antigen-antibody reaction or the like.
  • the binding substance is preferably an antibody or an antibody fragment.
  • the antibody may be either a monoclonal antibody or a polyclonal antibody, and both can be produced according to known methods.
  • the binding substance capable of binding to the analyte of the present invention is preferably a monoclonal antibody.
  • the detection unit is a part that detects a substance to be detected.
  • the detection portion of an immunochromatography test strip and a nucleic acid chromatography test strip is formed by immobilizing a binding substance capable of binding to a target substance on a membrane.
  • a number of detection units corresponding to the number of substances to be detected are arranged on the membrane.
  • a first detection section and a second detection section are arranged, and either of the first detection section and the second detection section may be located upstream.
  • a first detection part on which a first solid phase reagent capable of binding to the first detection target substance is immobilized, and A second detection section on which a second solid phase reagent capable of binding to a second analyte is immobilized is placed on the membrane.
  • the first detection section or the second detection section may be arranged on the upstream side in the test sample deployment direction.
  • the membrane may be provided with controls to confirm proper progress of the test.
  • the membrane is made of nitrocellulose.
  • the detection section of the microfluidic device is formed by immobilizing a binding substance capable of binding to a detection target substance on a part of the microchannel.
  • An absorbent pad is a member that absorbs the test sample that has moved and passed through the membrane.
  • a material made of cellulose or the like can be used as the absorbent pad.
  • a second embodiment of the testing method of the present invention includes a preparation step of preparing a test sample from a specimen, and testing at least a portion of the test sample with a first reagent for detecting a first substance to be detected. and a second testing step of testing a part of the test sample with a second reagent for detecting a second substance to be detected.
  • the first substance to be detected is a substance with an isoelectric point of 10.0 or more.
  • the first to-be-detected substance is mixed with a glass member and nitric oxide in the presence of a cationic substance. Contact one or both of the cellulose members.
  • the steps of testing with a reagent in the first test step and second test step in the detection method according to the second embodiment include a step of bringing the reagent into contact with a test sample, and reading a test result from the reagent after a predetermined period of time has passed. Includes processes.
  • a first substance having an isoelectric point of 10.0 or more is added in the presence of a cationic substance.
  • the method includes a step of bringing the substance to be detected into contact with one or both of the glass member and the nitrocellulose member.
  • the detection method according to the second embodiment is the same as the detection method according to the first embodiment, except that each of the substances to be detected is tested using a separate reagent, so the description thereof will be omitted.
  • Test kit and reagent ⁇ First embodiment> A test kit and reagent for carrying out the test method according to the first embodiment of the present invention will be explained.
  • the reagent according to the first embodiment will be explained using an immunochromatography test strip as an example.
  • the immunochromatography test strip may be simply referred to as a test strip.
  • the test strip according to the first embodiment includes a glass member that comes into contact with a test sample containing a protein having an isoelectric point of 10.0 or more. It is preferable that the glass member is at least one selected from the group consisting of a sample filtration filter, a sample pad, a conjugate pad, and a third pad.
  • the test strip according to the first embodiment includes a cationic substance that comes into contact with a test sample containing a protein with an isoelectric point of 10.0 or higher.
  • the cationic substance is contained in at least one selected from the group consisting of a sample diluent, a filter for sample filtration, and a test strip, and the cationic substance is included in at least one selected from the group consisting of a sample diluent, a filter for sample filtration, a sample pad, and a conjugate. It is preferably included in at least one selected from the group consisting of a pad and a third pad, and more preferably included in a specimen diluent. However, the cationic substance is included at the point where the glass material and the sample come into contact or upstream therefrom.
  • FIG. 1 shows the configuration of an embodiment of the test strip according to the first embodiment.
  • a sample pad 8, a third pad 9, a conjugate pad 2, an insoluble membrane carrier 4, and an absorbent pad 3 are arranged in this order from upstream to downstream in the flow direction of the test sample. .
  • Each pad is arranged so as to at least partially overlap the pads above and below.
  • a test line (detection section) 6 and a control line 7 are arranged on the insoluble membrane carrier 4.
  • the test line (detection section) 6 includes a first test line (first detection section) 6a for detecting a first substance to be detected and a second test line for detecting a second substance to be detected. (Second detection unit) 6b is included.
  • the number of test lines can be increased depending on the number of substances to be detected.
  • a cationic substance is added to at least one of the sample pad 8, the third pad 9, and the conjugate pad 2.
  • FIG. 2 The configuration of a modified example of the test strip according to the first embodiment is shown in FIG. 2.
  • the test strip shown in FIG. 2 is obtained by omitting the conjugate pad 2 and third pad 9 from the basic test strip of the first embodiment shown in FIG. It is something.
  • test sample sample diluent, and cationic substance are the same as the test method described above.
  • the test strip according to the first embodiment is configured such that a single immunochromatography test strip can test two or more types of detection substances, so that multiple types of detection substances can be tested in one test.
  • the conjugate pad contains antibodies corresponding to each of the plurality of analyte substances
  • the test line detection section is arranged with antibodies corresponding to each of the plurality of analyte substances.
  • test strip Preferably, the test strip is placed on a solid support (backing sheet 1), such as a plastic adhesive sheet.
  • the solid support is comprised of a material that does not impede capillary flow of sample and conjugate.
  • the test strip may be immobilized on a solid support using an adhesive or the like.
  • the test strip includes a sample pad and an insoluble membrane carrier, and may further include other configurations depending on the measurement conditions and sample. Other configurations include, for example, conjugate pads, third pads, or absorbent pads.
  • at least one of the sample pad, conjugate pad, and third pad of the test strip includes glass fibers.
  • test sample is filtered with a sample filtration filter containing glass fiber in the presence of a cationic substance before contacting the test sample with the sample pad, the sample pad of the test strip, the conjugate pad , and the third pad may not contain glass fibers.
  • a sample filtration filter containing glass fiber in the presence of a cationic substance before contacting the test sample with the sample pad, the sample pad of the test strip, the conjugate pad , and the third pad may not contain glass fibers.
  • it is the same as the reagent used in the testing method according to the first embodiment described above.
  • test kit A test kit for carrying out the test method of the first embodiment includes the above-mentioned reagents.
  • a test kit for carrying out the test method of the first embodiment includes, in addition to the above-mentioned reagents, a sample filtration filter containing glass fiber, a cotton swab for sample collection, a standard antigen substance, an antigen sample for quality control, or It can also include instructions, etc.
  • the kit of the present invention preferably includes a specimen filtration filter containing glass fiber. The specimen filtration filter is as explained in the testing method of the present invention.
  • a reagent for carrying out the testing method according to the second embodiment of the present invention is configured so that one detection substance can be tested with one reagent.
  • the conjugate pad contains an antibody corresponding to one substance to be detected, and the test lines (detection parts) corresponding to one substance to be detected are arranged.
  • a test kit for implementing the test method according to the second embodiment of the present invention uses the above-mentioned one reagent to perform one detection target, instead of the reagent for implementing the test method according to the first embodiment. They are similar except that they use reagents designed to test substances.
  • Preparation Example 1 Preparation of immunochromatography test strip for SARS-CoV-2 measurement (1) Preparation of anti-SARS-CoV-2 monoclonal antibody The anti-SARS-CoV-2 monoclonal antibody used in the following test uses recombinant SARS as an antigen. - CoV-2 nuclear protein was used to immunize mice and obtained using methods commonly used by those skilled in the art to produce monoclonal antibodies.
  • conjugate pad The colloidal gold-labeled anti-SARS-CoV-2 monoclonal antibody solution prepared in (2) above was diluted to 4OD/mL with a 1.33% casein, 4% sucrose solution (pH 7.5). A labeled reagent solution was prepared. A labeled reagent solution was applied in a line on a glass fiber pad, and the labeled reagent solution was dried to obtain a conjugate pad.
  • test strip An immunochromatography test strip for measuring SARS-CoV-2 was obtained by attaching the antibody-immobilized membrane, conjugate pad, and absorption pad to a plastic adhesive sheet and cutting it into 5 mm width. .
  • a part of the sample was filtered using a sample filtration filter attached to the Rapid Tester FLU NEXT to obtain a filtered sample.
  • the samples and filtered samples were measured under the conditions shown in Table 1, and the absorbance of the test line was measured using a densitometry analyzer (Rapid Tester (registered trademark) reader, Sekisui Medical Co., Ltd.).
  • Recovery rate (%) Absorbance at the time of filtered sample measurement/Absorbance at the time of sample measurement (without filtration) x 100
  • the filtration recovery rate of each antigen is shown in Table 2.
  • the filtration recovery rate was within 100 ⁇ 15%, and no influence on the measured values was observed when the sample was filtered through the sample filtration filter. Ta.
  • the filtration recovery rate for the SARS-CoV-2 antigen was 47%, which was significantly lower than for other antigens, and the measured value decreased when the sample was filtered using a filter for specimen filtration.
  • the sample diluent and sample filtration filter for influenza virus measurement reagents can often be used in the same series of RS virus and adenovirus measurement reagents. However, it was suggested that when these sample diluents and filters for sample filtration were applied to SARS-CoV-2 measurement, the highest sensitivity of the measurement reagent may not be obtained.
  • the antigen recovery rate when a PVA filter holding material was immersed in the sample was about 70%, whereas the recovery rate when a glass fiber filter member was immersed in the sample was about 10%. Therefore, it was suggested that when a diluent for influenza virus measurement reagent and a glass fiber filter are used in SARS-CoV-2 measurement, the highest sensitivity of the measurement reagent may not be obtained. In addition, the reason why the filtration recovery rate of the SARS-CoV-2 antigen was significantly low in Analysis Example 1 was considered to be that the SARS-CoV-2 antigen was adsorbed to the glass fiber.
  • the antigen recovery rate was within 100% ⁇ 15%, which was good no matter which pad member was immersed in the sample.
  • the antigen recovery rate was significantly reduced when a glass fiber pad was immersed in the sample.
  • Table 5 shows the isoelectric points of proteins contained in each antigen used in Analysis Example 3 and antigens similar thereto and detected by each measurement reagent.
  • the isoelectric point of each protein was calculated by inputting UniProtKB into Expaxy Compute pI/Mw (https://www.expasy.org/resources/compute-pi-mw).
  • nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 is as high as 10.0 or higher. Glass fibers have a negative charge when they come into contact with a neutral sample diluent, whereas the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2, which has an isoelectric point of 10.07, has a positive charge. Therefore, the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2 is considered to be more easily adsorbed to glass fibers than other antigenic proteins with an isoelectric point of less than 10.
  • Example 1 ⁇ Influence of cationic substances on SARS-CoV-2 antigen measurement sensitivity
  • SARS-CoV-2 Nucleocapsid Recombinant Protein Icosagen
  • 120 ⁇ L of each sample was dropped onto an immunochromatography test strip for measuring SARS-CoV-2 prepared by the method described in Preparation Example 1.
  • the absorbance of the test line was measured using a Rapid Tester Reader (Sekisui Medical Co., Ltd.).
  • the configuration of the immunochromatography test strip used was the same as in FIG. 2. The results are shown in Table 6.
  • the absorbance during SARS-CoV-2 antigen measurement increased compared to conditions in which no additive was added. Since the immunochromatography test strip for measuring SARS-CoV-2 includes a glass fiber pad, it is thought that the adsorption of the SARS-CoV-2 antigen to the glass fiber was suppressed by the cationic substance.
  • the absorbance of the test line was calculated using a Rapid Tester Reader (Sekisui Medical Co., Ltd.). Each sample was measured three times.
  • the configuration of the immunochromatography test strip used was the same as in FIG. 2.
  • Recovery rate (%) Absorbance when measuring filtered sample / Absorbance when measuring sample (without filtration) x 100
  • the antigen recovery rate was improved by performing filtration using a glass fiber filter in the presence of a cationic substance.
  • test strip By attaching the antibody-immobilized membrane, conjugate pad, and absorption pad to a plastic adhesive sheet and cutting it into 5 mm width, an immunochromatography test strip for SARS-CoV-2/FLU measurement is made. Obtained.
  • Example 2 ⁇ Influence of cationic substances on each antigen measurement sensitivity ⁇ 1> A SARS-CoV-2 positive specimen was added to the specimen diluent supplied with the Rapid Tester FLU/NEXT, and the cationic substances listed in Tables 7 to 9 were added to the specimen diluent supplied with the Rapid Tester FLU/NEXT. A FLU A positive specimen and a FLU B positive specimen were each suspended and used as a sample. The tip of the conjugate pad side of an immunochromatography test strip for SARS-CoV-2/FLU measurement was immersed in the sample, and 10 minutes later, the absorbance of the test line was measured using a Rapid Tester Reader (Sekisui Medical Co., Ltd.). The results are shown in Tables 8, 9, and 10.
  • Judgment was made as follows according to the absorbance of the test line. -: Less than 5 mAbs (negative) +: Less than 20 mAbs (positive) 2+: 20 mAbs or more but less than 100 mAbs (positive) 3+: 100 mAbs or more and less than 200 mAbs (positive) 4+: 200 mAbs or more but less than 400 mAbs (positive) 5+: 400 mAbs or more (positive)
  • Judgment was made as follows according to the absorbance of the test line. -: Less than 5 mAbs (negative) +: Less than 20 mAbs (positive) 2+: 20 mAbs or more but less than 100 mAbs (positive) 3+: 100 mAbs or more and less than 200 mAbs (positive) 4+: 200 mAbs or more but less than 400 mAbs (positive) 5+: 400 mAbs or more (positive)
  • Judgment was made as follows according to the absorbance of the test line. -: Less than 5 mAbs (negative) +: Less than 20 mAbs (positive) 2+: 20 mAbs or more but less than 100 mAbs (positive) 3+: 100 mAbs or more and less than 200 mAbs (positive) 4+: 200 mAbs or more but less than 400 mAbs (positive) 5+: 400 mAbs or more (positive)
  • Example 3 ⁇ Influence of cationic substances on each antigen measurement sensitivity ⁇ 2>
  • the RS virus described in Analysis Example 1 was added to the specimen diluent supplied with Rapid Tester FLU/NEXT and the solution in which the cationic substances listed in Tables 11 and 12 were added to the specimen diluted solution supplied with Rapid Tester FLU/NEXT.
  • Antigen, adenovirus antigen, and SARS-CoV-2 antigen were each added to prepare samples.
  • the prepared sample was measured using an immunochromatography test strip for measuring SARS-CoV-2 prepared as in Preparation Example 1 and Rapid Tester RSV-Adeno NEXT (Sekisui Medical Co., Ltd.).
  • the absorbance of the test line of each reagent was measured using a Rapid Tester Reader (Sekisui Medical Co., Ltd.). The test was conducted three times for each antigen, and the measurement results were expressed in absorbance (unit: mAbs). In addition, the case where the absorbance was 5.0 mAbs or less, which is the lower measurement limit of the rapid tester reader, was determined to be negative, and it was written as " ⁇ 5.0" in the table. The results are shown in Tables 11 and 12.
  • test method and test kit of the present invention do not require collecting specimens from the nasal cavity or pharynx for each pathogen to be tested, so it is possible to reduce the risk of medical personnel being exposed to droplets from a patient's cough or sneeze. Therefore, tests for identifying the virus causing the infectious disease can be performed more safely.

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Abstract

検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法であって、前記検体から検査試料を調製する調製工程と、前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための試薬で検査する検査工程と、を含み、前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、前記調製工程及び前記検査工程のいずれか一方又は両方において、カチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる、検査方法。この検査方法は、測定感度低下を抑制しつつ、等電点が１０．０以上の物質を含む２以上の被検出物質を同一検体を用いて高感度に検出できる。

Description

検査方法、検査試薬、及び検査キット
　本発明は、検査方法、検査試薬、及び検査キットに関する。
　本願は、２０２２年６月３０日に、日本に出願された特願２０２２－１０５４９４号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こすウイルスである。現在、ＣＯＶＩＤ－１９が世界中で流行し、多くの感染者が発生している。ＣＯＶＩＤ－１９の症状は、インフルエンザ、アデノウイルス、ＲＳウイルス等を原因とする呼吸器感染症の症状と似通っているために、症状から感染症の原因ウイルスを判別することは困難である。
　呼吸器感染症の診断には、イムノクロマトグラフィーを原理とする迅速診断試薬に代表される試薬が広く用いられている。診断薬を使用する上で、患者の鼻咽頭等から綿棒で検体を採取する必要がある。感染症が流行している状況下において、感染症の原因ウイルスの特定のために、検査対象の病原体毎に、鼻腔や咽頭から検体を採取することは、医療者が患者の咳やくしゃみで飛沫曝露するリスクを高める。
　特許文献１には、鼻腔吸引液、鼻腔拭い液および咽頭ぬぐい液から選択される検体を、検体処理液で処理することにより複数の呼吸器感染症検査に適した検査試料を調製し、この検査試料の一部を、第１呼吸器感染症検査用のイムノクロマトグラフィー法による第１試験具を用いて検査し、前記検査試料の一部を、第１呼吸器感染症とは異なる第２呼吸器感染症検査用のイムノクロマトグラフィー法による第２試験具を用いて検査する呼吸器感染症の検査方法、複数の呼吸器感染症検査に適した検査試料を調製し、複数種類のウイルスの検査を行う方法が記載されている。
日本国特開２００８－１６４４０３号公報
　特許文献１に記載された検査方法が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のような新規のウイルス検査に適用できるかについては明らかではなかった。
　本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定において検出対象となるヌクレオカプシドタンパク質の等電点が１０以上であること、等電点が１０．０以上の物質と、検体濾過用のフィルター又は試薬中のガラス製部材とを接触させると、等電点が１０．０以上の物質がガラス製部材に吸着し、測定感度が低下することを発見した（分析例１～３）。これまで、そのような測定感度低下を抑制しつつ、等電点が１０．０以上の物質を含む２以上の被検出物質を同一検体を用いて高感度に検出する方法については議論されてこなかった。
　本発明は、測定感度低下を抑制しつつ、等電点が１０．０以上の物質を含む２以上の被検出物質を同一検体を用いて高感度に検出できる検査方法を提供することを目的の一つとする。
　本発明は以下の態様を含む。
［１］　検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法であって、
　前記検体から検査試料を調製する調製工程と、
　前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための試薬で検査する検査工程と、を含み、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
　前記調製工程及び前記検査工程のいずれか一方又は両方において、カチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる、検査方法。
［２］　前記試薬が試料供給部及び標識試薬保持部を有し、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［１］に記載の検査方法。
［３］　検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法であって、
　前記検体から検査試料を調製する調製工程と、
　前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための第１の試薬で検査する第１の検査工程と、
　前記検査試料の一部を、第２の被検出物質を検出するための第２の試薬で検査する第２の検査工程と、
を含み、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
　前記調製工程及び前記第１の検査工程のいずれか一方又は両方において、カチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる、検査方法。
［４］　前記第１の試薬が試料供給部及び標識試薬保持部を有し、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［３］に記載の検査方法。
［５］　前記調製工程が前記検体を検体希釈液に懸濁する工程を含む、［１］～［４］のいずれかに記載の検査方法。
［６］　前記カチオン性物質が前記検体希釈液に含まれる、［５］に記載の検査方法。［７］　前記調製工程が前記検査試料をフィルターで濾過する工程を含む、［１］～［６］のいずれかに記載の検査方法。
［８］　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、［１］～［７］のいずれかに記載の検査方法。
［９］　前記カチオン性物質が金属塩、カチオン性ポリマー、カチオン性ペプチド及びカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、［１］～［８］のいずれかに記載の検査方法。
［１０］　前記等電点が１０．０以上の物質が呼吸器感染症ウイルスに由来する、［１］～［９］のいずれかに記載の検査方法。
［１１］　前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスである、［１０］に記載の検査方法。
［１２］　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、［１１］に記載の検査方法。
［１３］　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部と、
第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部と、
　検体を含む展開液の展開方向において、前記第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方と
を含む試薬であって、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含む、試薬。
［１４］　前記試薬が、試料供給部及び標識試薬保持部を含み、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［１３］に記載の試薬。
［１５］　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、［１３］又は［１４］に記載の試薬。
［１６］　前記等電点が１０．０以上の物質が呼吸器感染症ウイルスに由来する、［１３］～［１５］のいずれかに記載の試薬。
［１７］　前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスである、［１６］に記載の試薬。
［１８］　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、［１７］に記載の試薬。
［１９］　前記カチオン性物質が金属塩、カチオン性ポリマー、カチオン性ペプチド及びカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、［１３］～［１８］のいずれかに記載の試薬。
［２０］　［１３］～［１９］のいずれかに記載の試薬を用いる、検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法。
［２１］　試薬を含む検査キットであって、
　前記試薬は、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部と
を含み、
　検体を含む展開液の展開方向において、前記第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方を有し、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含む、検査キット。
［２２］　検体濾過フィルターと試薬とを含む検査キットであって、
　前記試薬は、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部と
を含み、
　前記検体濾過フィルターの検体及び前記試薬の検体のいずれか一方又は両方を含む展開液の展開方向において、前記第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方を有し、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含む、キット。
［２３］　前記試薬が、試料供給部及び標識試薬保持部を含み、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［２１］又は［２２］に記載の検査キット。［２４］　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、［２１］～［２３］のいずれかに記載の検査キット。
［２５］　前記等電点が１０．０以上の物質が呼吸器感染症ウイルスに由来する、［２１］～［２４］のいずれかに記載の検査キット。
［２６］　前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスである、［２５］に記載の検査キット。
［２７］　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、［２６］に記載の検査キット。
［２８］　検体希釈液をさらに含む、［２１］～［２７］のいずれかに記載の検査キット。
［２９］　前記カチオン性物質が前記検体希釈液に含まれる、［２８］に記載の検査キット。
［３０］　前記カチオン性物質が金属塩、カチオン性ポリマー、カチオン性ペプチド及びカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、［２１］～［２９］のいずれかに記載の検査キット。
［３１］　［２１］～［３０］のいずれかに記載の検査キットを用いる、検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法。
［３２］　検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法であって、
　前記検体から検査試料を調製する調製工程と、
　前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための試薬で検査する検査工程と、を含み、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、前記等電点が１０．０以上の物質は呼吸器感染症ウイルスに由来し、かつ前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスであり、
　前記調製工程及び前記検査工程のいずれか一方又は両方において、クエン酸ナトリウム又は硫酸マグネシウムである金属塩、臭化ヘキサジメトリン又は２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを構成単位として有するカチオン性ポリマーであるカチオン性ポリマー、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチンであるカチオン性ペプチド及びアルキルアミン塩型界面活性剤又は第四級アンモニウム塩型界面活性剤であるカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種であるカチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる、検査方法。
［３３］　前記試薬が試料供給部及び標識試薬保持部を有し、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［３２］に記載の検査方法。
［３４］　検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法であって、
　前記検体から検査試料を調製する調製工程と、
　前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための第１の試薬で検査する第１の検査工程と、
　前記検査試料の一部を、第２の被検出物質を検出するための第２の試薬で検査する第２の検査工程と、
を含み、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、前記等電点が１０．０以上の物質は呼吸器感染症ウイルスに由来し、かつ前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスであり、
　前記調製工程及び前記第１の検査工程のいずれか一方又は両方において、クエン酸ナトリウム又は硫酸マグネシウムである金属塩、臭化ヘキサジメトリン又は２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを構成単位として有するカチオン性ポリマーであるカチオン性ポリマー、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチンであるカチオン性ペプチド及びアルキルアミン塩型界面活性剤又は第四級アンモニウム塩型界面活性剤であるカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種であるカチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる、検査方法。
［３５］　前記第１の試薬が試料供給部及び標識試薬保持部を含み、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［３４］に記載の検査方法。
［３６］　前記調製工程が前記検体を検体希釈液に懸濁する工程を含む、［３２］～［３５］のいずれかに記載の検査方法。
［３７］　前記カチオン性物質が前記検体希釈液に含まれる、［３６］に記載の検査方法。
［３８］　前記調製工程が前記検査試料をフィルターで濾過する工程を含む、［３２］～［３５］のいずれかに記載の検査方法。
［３９］　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、［３２］～［３５］のいずれか１項に記載の検査方法。
［４０］　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、［３２］～［３５］のいずれか１項に記載の検査方法。
［４１］　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部、及び、第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部を配置したメンブレンと、
　検体を含む展開液の展開方向において、前記第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方と
を含む試薬であって、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上かつ呼吸器感染症ウイルスであるコロナウイルスに由来する物質であり、
　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がクエン酸ナトリウム又は硫酸マグネシウムである金属塩、臭化ヘキサジメトリン又は２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを構成単位として有するカチオン性ポリマーであるカチオン性ポリマー、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチンであるカチオン性ペプチド及びアルキルアミン塩型界面活性剤又は第四級アンモニウム塩型界面活性剤であるカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種であるカチオン性物質を含み、前記カチオン性物質が試薬の構成材料中に保持されている、試薬。
［４２］　前記試薬が、試料供給部及び標識試薬保持部を含み、試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［４１］に記載の試薬。
［４３］　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、［４１］又は［４２］に記載の試薬。
［４４］　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、［４１］～［４４］のいずれかに記載の試薬。
［４５］　［４１］～［４４］のいずれかに記載の試薬を用いる、検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法。
［４６］　試薬と、カチオン性物質を含む検体希釈液と、を含む検査キットであって、
　前記試薬は、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部、及び、第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部を配置したメンブレンと
を含み、
　検体を含む展開液の展開方向において、第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方を有し、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上かつ呼吸器感染症ウイルスであるコロナウイルスに由来する物質であり、
　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含み、
　前記カチオン性物質がクエン酸ナトリウム又は硫酸マグネシウムである金属塩、臭化ヘキサジメトリン又は２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを構成単位として有するカチオン性ポリマーであるカチオン性ポリマー、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチンであるカチオン性ペプチド及びアルキルアミン塩型界面活性剤又は第四級アンモニウム塩型界面活性剤であるカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、
検査キット。
［４７］　検体濾過フィルター、カチオン性物質を含む検体希釈液、及び試薬を含む検査キットであって、
　前記試薬は、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部、及び、第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部を配置したメンブレンと
を含み、
　前記検体濾過フィルターの検体及び前記試薬の検体のいずれか一方又は両方を含む展開液の展開方向において、第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方を有し、
　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上かつ呼吸器感染症ウイルスであるコロナウイルスに由来する物質であり、
　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含み、
　前記カチオン性物質がクエン酸ナトリウム又は硫酸マグネシウムである金属塩、臭化ヘキサジメトリン又は２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを構成単位として有するカチオン性ポリマーであるカチオン性ポリマー、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチンであるカチオン性ペプチド及びアルキルアミン塩型界面活性剤又は第四級アンモニウム塩型界面活性剤であるカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、検査キット。
［４８］　前記試薬が、試料供給部及び標識試薬保持部を含み、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、［４６］又は［４７］に記載の検査キット。
［４９］　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、［４６］～［４８］のいずれかに記載の検査キット。
［５０］　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、［４６］～［４９］のいずれかに記載の検査キット。
［５１］　［４６］～［５０］のいずれかに記載の検査キットを用いる、検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法。
　本発明によれば、測定感度低下を抑制しつつ、等電点が１０．０以上の物質を含む２以上の被検出物質を同一検体を用いて高感度に検出できる検査方法が提供される。
試薬の実施形態の一例の模式図である。 実施例で用いた試薬の構成の模式図である。
　本発明者らは上述した目的を達成すべく検討を重ね、カチオン性物質の存在下で、等電点が１０．０以上の物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させることで、等電点が１０．０以上の物質を含む２以上の被検出物質をいずれも高感度で検査できることを見出した。
［被検出物質］
　本発明における被検出物質としては、ウイルスなどの病原体、タンパク質などの生理活性物質が挙げられる。本発明における被検出物質は、例えば各種疾患に関連するマーカーが挙げられ、呼吸器感染症ウイルス、ノロウイルス、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、マイコプラズマ、トキソプラズマ、クラミジア、梅毒、黄色ブドウ球菌、大腸菌などの感染症関連マーカー；ＣＫ－ＭＢ、Ｈ－ＦＡＢＰ、トロポニン、ミオグロビン等の心筋マーカー；フィブリン分解産物（例えばＤダイマー）、可溶性フィブリン、ＴＡＴ（トロンビン－アンチトロンビン複合体）、ＰＩＣ（プラスミン－プラスミンインヒビター複合体）などの凝固・線溶マーカー；酸化ＬＤＬ、ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）などの循環関連マーカー；アディポネクチンなどの代謝関連マーカー；ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＡＦＰ（α－フェトプロテイン）、ＣＡ１９－９、ＣＡ１２５、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）などの腫瘍マーカー；ＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白）、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭなどの炎症関係マーカーである。
　本発明における被検出物質としては呼吸器感染症ウイルスが好ましい。本明細書において呼吸器感染症ウイルスとは、呼吸器系疾患の原因となるウイルスである。本発明における呼吸器感染症ウイルスとしては、抗原抗体反応を利用して検出され得るウイルスであれば特に限定されることはなく、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、及びＨＣｏＶ－ＨＫＵ１等のコロナウイルス；Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス等のインフルエンザウイルス；、パラインフルエンザウイルス１パラインフルエンザウイルス２、及びパラインフルエンザウイルス３等のパラインフルエンザウイルス；ＲＳウイルスＡ型及びＲＳウイルスＢ型等のＲＳウイルス；アデノウイルス；ライノウイルス；メタニューモウイルス；サイトメガロウイルス；並びにボカウイルス等を挙げることができる。中でも、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、インフルエンザＡ型ウイルス及びインフルエンザＢ型ウイルスなどのインフルエンザウイルス、ＲＳウイルスＡ型及びＲＳウイルスＢ型等のＲＳウイルス、及び／又はアデノウイルスを被検出物質とするのが好ましい。なお、本明細書において「呼吸器」とは、呼吸に関係する器官の総称であり、鼻前庭から、鼻腔、咽頭、喉頭、気管、気管支、細気管支を経た肺胞（肺）までの器官をいう。
　本発明の検査方法においては、少なくとも第１の被検出物質と第２の被検出物質とを定性的又は定量的に検査する。
　前記第１の被検出物質は、等電点が１０．０以上の物質である。
　前記等電点が１０．０以上の物質としては、抗原抗体反応を用いて検出できるものであれは特に限定されず、外因性物質（ウイルス、細菌、投与された薬剤など）、前記外因性物質に起因するタンパク質（外因性物質の代謝物、細菌による分泌物など）、及び内因性物質（体内で生産される抗体、ホルモンなど）が挙げられる。等電点が１０．０以上の物質には、タンパク質、ペプチド、又は核酸が含まれるが、等電点が１０．０以上のタンパク質が好ましい。
　前記第１の被検出物質は、等電点が１０．０以上、１０．１以上、１０．２以上、１０．３以上、１０．４以上、又は１０．５以上のタンパク質であることができる。
　なお、等電点は、アニオンになる官能基とカチオンになる官能基の両方を持つ化合物において、電離後の化合物全体の電荷平均が０となるｐＨである。
　本発明の検査方法における等電点が１０．０以上の物質は、好ましくはウイルス由来のタンパク質であり、より好ましくは呼吸器感染症ウイルス由来のタンパク質であり、さらに好ましくはコロナウイルス由来のタンパク質であり、最も好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来のタンパク質である。等電点が１０．０以上の物質は、複数のタンパク質で構成されるウイルスそのものであってもよいし、ウイルスを構成するタンパク質の一部及びその断片であってもよい。等電点が１０．０以上の物質は、コロナウイルスのヌクレオカプシドタンパク質であることが好ましく、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質であることがより好ましい。
［検査方法］
＜第１の実施形態＞
　本発明の検査方法の第１の実施形態は、検体から検査試料を調製する調製工程と、前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための試薬で検査する検査工程と、を含む。
　前記第１の被検出物質は、上述したとおり、等電点が１０．０以上の物質である。
　第１の実施形態に係る検査方法では、前記調製工程及び前記検査工程のいずれか一方又は両方において、カチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる。
　前記調製工程は、例えば、検体を分取する工程、検体を検体希釈液に懸濁する工程、検体を検体希釈液で希釈する工程、及び検査試料をフィルターで濾過する工程等が含まれてもよい。なお、前記検体希釈液には、カチオン性物質が含まれることが好ましい。前記カチオン性物質については後述する。
　第１の実施形態に係る検出方法では、１回の検査で複数種類の被検出物質を検査できるように、単一の試薬で２以上の被検出物質を検査できるように構成された試薬を用いる。
　第１の実施形態に係る検査方法において、被検出物質を含有する可能性のある検体としては、主に生物由来の生体試料、又は生体試料から被検出物質を抽出した抽出液等が挙げられる。液体飲料、半固形食品、及び固形食品等に代表される食品検体、土壌、河川、及び海水等の自然界からのサンプリング検体、並びに工場内の生産ライン又はクリーンルームのふき取り検体も、被検出物質を含有する可能性のある試料として使用することが可能である。
　前記被検出物質を含有する可能性のある検体としては、生体試料が好ましい。
　前記生体試料としては、例えば、血液、血清、血漿、尿、涙液、耳漏、前立腺液、及び呼吸器分泌液が挙げられるが、これらに限定されない。前記生体試料としては、血液、血清、血漿、尿、涙液、耳漏、前立腺液、及び呼吸器分泌液からなる群から選択される少なくとも１種が好ましく、呼吸器分泌液がより好ましい。前記呼吸器分泌液とは、呼吸器の組織内又は表面において分泌される体液を意味する。前記呼吸器分泌液としては、例えば、鼻孔、鼻腔、咽頭、鼻咽頭、又は口腔などにおいて分泌される体液が挙げられるが、これらに限定されない。前記呼吸器分泌液としては、鼻咽頭ぬぐい液、鼻腔ぬぐい液、唾液、又は喀痰が好ましい。
　前記生体試料を採取する対象は、ヒト又は哺乳動物（例えば、サル、イヌ、又はネコ）を含むが、これらに限定されない。前記対象としては、ヒトが好ましい。なお、前記生体試料の採取又は調製を行う者は、第１の実施形態に係る検査方法を行う者と同一人物でもよく、別人物であってもよい。また、第１の実施形態に係る検査方法に用いられる生体試料は、本発明の検査方法の実施時に採取又は調製されたものでもよく、予め採取又は調製され保存されたものであってもよい。
　検体希釈液は、前記生体試料を懸濁又は希釈するための溶液である。前記検体希釈液は、後述するカチオン性物質を含むことが好ましい。前記検体希釈液がカチオン性物質を含む場合、販売時に検体希釈液がカチオン性物質を含んでいることが好ましいが、検査キットが検体希釈液を含む場合、前記検体希釈液とは別にカチオン性物質を含んでいてもよい。この場合、調製工程を行う者が、カチオン性物質と検体希釈液とを混合することが好ましい。
　前記検体希釈液は、緩衝液を含むことが好ましい。「緩衝液」は、ｐＨの緩衝作用を有する溶液を意味する。第１の実施形態に係る検査方法において用いられる緩衝液としては、例えば、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ）、ＭＥＳ（２－（Ｎ－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、ＰＩＰＥＳ（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ－Ｎ，Ｎ’－ｂｉｓ（２－ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、ＡＣＥＳ（Ｎ－（２－Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）－２－ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、ＡＤＡ（Ｎ－（２－Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎｏｄｉａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ）、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ（２，２－Ｂｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）－（ｉｍｉｎｏｔｒｉｓ）－（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－ｍｅｔｈａｎｅ）、Ｔｒｉｓ（ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ）、ＭＯＰＳ（３－Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、ＨＥＰＥＳ（４－（２－ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）－１－ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、クエン酸緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液、及びリン酸緩衝液などの従来公知の緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない。第１の実施形態に係る検査方法において用いる緩衝液としては、ＰＢＳ、ＭＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＡＤＡ、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ（２，２－Ｂｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）－（ｉｍｉｎｏｔｒｉｓ）－（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）－ｍｅｔｈａｎｅ）、ｑＴｒｉｓ（ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ）、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳ、クエン酸緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液及びリン酸緩衝液からなる群から選択される少なくとも１種が好ましく、リン酸緩衝液がより好ましい。
　検体を分取する工程とは、採取した検体から、検査に供する一部を分け取る工程である。
　前記検体希釈液に前記検体を懸濁する工程について以下の通り例示する。
　前記検体が鼻咽頭又は鼻腔等から綿棒で採取した拭い液である場合は、前記検体希釈液に綿棒を挿入し、回転させることにより前記検体を前記検体希釈液に懸濁できる。前記検体希釈液を保持する容器が可塑性の素材で形成されている場合には、前記検体を採取した綿棒を前記容器と共に押しつぶすことによっても前記検体を前記検体希釈液に懸濁することができる。前記検体が鼻腔吸引液、唾液又は血液等の液体である場合には、前記検体をピペット等を用いて必要量を採取し、前記検体希釈液に懸濁することもできるし、拭い液の場合と同様に前記検体に浸漬した綿棒を前記検体希釈液に挿入することによっても前記検体を前記検体希釈液に懸濁できる。
　検体希釈液で検体を希釈する工程とは、検体中に試薬の測定上限を上回る被検出物質が含まれること等が想定される場合に、予め検体希釈液で検体を希釈する工程である。
　フィルターで濾過する工程とは、フィルターを用いて前記検体又は検査試料に含まれる可能性のある固形物を除去する工程である。例えば、フィルターで濾過する工程は次のように実施できる。
　フィルターと、前記フィルターを保持するための支持体とからなる検体濾過フィルターを、前記検体、又は前記検体を含む検体希釈液を保持する容器に挿入する。このとき、検体濾過フィルターの検体流入側と、容器の開口側は一方が他方に密着して嵌め込まれるように形成される。前記検体濾過フィルターが下方に位置するように前記検体濾過フィルターを挿入した容器を持ち替え、容器を押しつぶすことにより、前記検体濾過フィルターの検体流入側とは反対側に位置する先端側から濾過された検体又は検体を含む検体希釈液を得る。この時、得られた濾液を直接試薬に滴下することもできるし、別の容器に濾液を保持させることもできる。
　第１の実施形態に係る検査方法における検査工程には、試薬と検査試料とを接触させる工程、所定時間経過後に試薬から検査結果を読み取る工程が含まれる。
　第１の実施形態に係る検査方法における調製工程及び検査工程のいずれか一方又は両方には、カチオン性物質の存在下で、等電点が１０．０以上の物質である第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる工程が含まれる。検査試料中で正に帯電している等電点１０．０以上の物質を、負に帯電しているガラス製部材又はニトロセルロース製部材に接触させる際に、カチオン性物質を共存させることで、等電点１０．０以上の物質がガラス製部材又はニトロセルロース製部材に吸着することを抑制できると考えられる。なお、上記メカニズムは、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
　カチオン性物質と被検出物質を含む検体とをガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる順序は、被検出物質を含む試料とガラス製部材又はニトロセルロース製部材とが接触する際にカチオン性物質が共存していれば特に限定されない。すなわち、カチオン性物質を被検出物質を含む検体より先にガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させることもできるし、カチオン性物質を被検出物質を含む検体と同時にガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させることもできる。被検出物質を含む検体とカチオン性物質とを混合した後で、又は混合するのと同時に、被検出物質を含む検体をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させることが好ましく、被検出物質を含む試料とカチオン性物質とを混合した後で、被検出物質を含む試料をガラス製部材及び／又はニトロセルロース製部材に接触させることがより好ましい。
　カチオン性物質は検体希釈液中に含まれていてもよいし、検査キットの構成材料中、すなわち、検体濾過フィルター、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、抗体固相化メンブレン、又はサンプル供給部とメンブレン担体の間に位置しサンプルパッド及びコンジュゲートパッドとは異なる任意の部位に保持されていてもよい。カチオン性物質が検査キットの構成材料中に保持される場合は、検体又は検査試料が構成材料と接触した際に検体又は検査試料中にカチオン性物質が溶出又は流入し、カチオン性物質を含む展開液となる。
　カチオン性物質とは、カチオン性の官能基を有することにより、水と接触したときに正電荷を帯びる物質をいう。カチオン性物質が、カチオン性の官能基とアニオン性の官能基の両方を有する場合には、分子全体で正電荷を帯びていればよい。
　カチオン性の官能基としては、例えば、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基等のアミノ基；４級アンモニウム基、ホスホニウム基等のオニウム塩基；アルギニル基、リシル基、ヒスチジル基、グアニジル基等のアミノ酸残基；イミダゾール基等の複素環基等を挙げることができる。カチオン性物質としては、金属塩、カチオン性ポリマー、カチオン性界面活性剤、及びカチオン性ペプチドから成る群から選択される少なくとも一つを上げることができる。カチオン性物質としては、金属塩、カチオン性ポリマー、又はカチオン性界面活性剤が好ましく、カチオン性ポリマーがより好ましく、カチオン性ポリマー及び金属塩の両方を含むことがさらに好ましく、カチオン性ポリマー及び塩化ナトリウムの両方を含むことがいっそう好ましい。
　金属塩としては、水溶液内で電離して金属イオンを生じるものを、制限なく使用することができる。上記のようなカチオン性の官能基を有しなくとも、水と接触したときに電離する金属塩は、金属イオンがカチオン性となる。金属イオンとしては、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、その他の金属イオンが挙げられ、アルカリ金属イオン又はアルカリ土類金属イオンが好ましい。アルカリ金属イオンとしては、例えば、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオンなどを挙げることができ、アルカリ土類金属イオンとしてはマグネシウムイオン又はカルシウムイオンなどを挙げることができ、その他の金属イオンとしては銅イオンなどを挙げることができる。アルカリ金属イオンとしてはナトリウムイオンが好ましく、アルカリ土類金属イオンとしてはマグネシウムイオンが好ましい。アルカリ金属塩としては、塩化ナトリウム又はクエン酸ナトリウムが好ましく、アルカリ土類金属塩としては硫酸マグネシウムが好ましい。
　本発明において、「カチオン性ポリマー」とは、側鎖にカチオン性の官能基を側鎖として有するポリマーを意味する。側鎖となるカチオン性の官能基は、第四級アンモニウム基であることが好ましい。カチオン性ポリマーとしては、臭化ヘキサジメトリン（ＣＡＳ　ＲＮ２８７２８－５５－４）、又は、２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを構成単位として有するカチオン性ポリマーで水に０．５質量％濃度で溶解した水溶液が、２５℃において２０～６０ｍ２／ｓの動粘度を呈し、かつ、水に０．１質量％濃度で溶解した水溶液が、２５℃において７０×１０－３～８０×１０－３Ｎ／ｍの表面張力を呈し、質量平均分子量（Ｍｗ）が５０～６００ｋＤａであるカチオン性ポリマーが好ましい。なお、２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを構成単位として有するカチオン性ポリマーは、Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標）－ＢＬ５０２として市販されている。
　前記カチオン性ポリマーの水溶液の０．５質量％濃度水溶液の２５℃における動粘度η［ｍ２／ｓ］は、前記カチオン性ポリマーを水に０．５質量％濃度で溶解した水溶液を２５℃においてウベローデ粘度計で測定して得られる粘度μ［Ｐａ・ｓ］を前記水溶液の２５℃における密度ρ［ｋｇ／ｍ３］で除して得ることができる。
　前記カチオン性ポリマーの０．１質量％濃度水溶液の２５℃における表面張力γ［ｍＮ／ｍ］は、前記カチオン性ポリマーを水に０．１質量％濃度で溶解した水溶液を２５℃においてデュ・ニュイリング法、ウィルヘルミープレート法、又は滴重法で測定して得ることができる。
　前記カチオン性ポリマーの質量平均分子量（Ｍｗ）は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ：Ｇｅｌ　Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）法によって求めることができる。標準物質としてポリエチレングリコールを用いる。
　本発明において、「カチオン性界面活性剤」とは、水溶液に溶解したときに、界面活性剤において疎水基が結合している部分が、正に帯電している界面活性剤を意味する。カチオン性界面活性剤としては、アルキルアミン塩型界面活性剤又は第四級アンモニウム塩型界面活性剤が挙げられる。
　アルキルアミン塩型界面活性剤としては、例えばモノドデシルアミン、モノオクタデシルアミン、ジオクタデシルアミン、トリオクタデシルアミン等の炭素数８～２２のアルキル基を１～３つ含むアミンと、塩酸、硫酸等の無機酸あるいは酢酸、乳酸、クエン酸等の低級カルボン酸等との塩等が挙げられる。具体的には例えば、ステアリルアミンアセテート［ＣＡＳ番号：２１９０－０４－７、製品名：アセタミン８６、花王株式会社製］などが挙げられる。
　第四級アンモニウム塩型界面活性剤としては、ドデシルトリメチルアンモニウム、オクタデシルトリメチルアンモニウム、ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、ジデシルジメチルアンモニウム、ベンジルメチルテトラデシルアンモニウム等の炭素数８～２２のアルキル基を１～３つ含むアンモニウムと塩素、臭素等との塩等が挙げられる。具体的には例えば、ラウリルトリメチルアンモニウムクロリド［ＣＡＳ番号：１１２－００－５、製品名：コータミン（登録商標）２４Ｐ、花王株式会社製］、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド［ＣＡＳ番号：１１１９－９４－４、東京化成工業株式会社製］が挙げられる。
　カチオン性ペプチドは、水に溶解又は分散させた時にカチオン性を示すペプチドを意味する。カチオン性ペプチドは、ペプチドを構成するアミノ酸残基に塩基性アミノ酸残基（アルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、又はヒスチジン（Ｈｉｓ））を多く含むものであることができる。カチオン性ペプチドは、水に溶解又は分散させた時にカチオン性を示す限り特に限定されることはなく、例えば、前記塩基性アミノ酸残基のポリマーであるポリアルギニン、ポリリシン、又はポリヒスチジン等を使用することができる。カチオン性ペプチドとしては、ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチン（ＣＡＳ　ＲＮ６８９１５－２５－３）を使用することが好ましい。ココジモニウムヒドロキシプロピル加水分解ケラチンは、商品名Ｐｒｏｍｏｉｓ（登録商標）ＷＫ－ＨＣＡＱとして成和化成株式会社から市販されている。
　カチオン性物質の濃度は、被検出物質の種類、試料の種類、及び免疫測定方法の種類に応じて、適宜修正することができる。なお、カチオン性物質の濃度とは、カチオン性物質が検体希釈液に含まれる際の濃度、又はカチオン性物質が展開液に含まれる際の濃度を示す。例えば、カチオン性物質が金属塩の場合、カチオン性物質の濃度は０．１～１，０００ｍＭ、１～７５０ｍＭ、又は２～７５０ｍＭである。カチオン性物質がアルカリ金属塩の場合、カチオン性物質の濃度は０．１～１，０００ｍＭ、１～７５０ｍＭ、２～７５０ｍＭ、５０～７５０ｍＭ、又は２００～７５０ｍＭである。カチオン性物質がアルカリ土類金属塩の場合、カチオン性物質の濃度は０．１～１，０００ｍＭ、１～５００ｍＭ、１～２５０ｍＭ、又は１～１００ｍＭである。また、カチオン性物質がカチオン性ポリマー、カチオン性界面活性剤、又はカチオン性ペプチドの場合、カチオン性物質の濃度は０．０００１～２０質量％、０．０００５～１０質量％、０．００１～５質量％、０．０１～１質量％、又は０．０１～０．５質量％である。検体希釈液又は展開液が、複数種類のカチオン性物質を含む場合も、それぞれの成分の濃度は上記の範囲を採用できる。
　ガラス製部材とは、ガラスを含む部材のことであり、ガラスと他の素材との複合部材もガラス製部材に含まれる。「ガラス」とは、二酸化ケイ素（ＳｉＯ２）を構成成分として用いているガラスを意味する。二酸化ケイ素（ＳｉＯ２）を構成成分として用いているガラスは、ガラス転移点よりも低温側では、ＳｉＯ４の四面体を基本としたネットワーク構造を持っている。このネットワーク構造において、ケイ素原子に結合している酸素原子は、負に帯電している。
　ガラス製部材としては、例えば、試薬のサンプルパッド、コンジュゲートパッド、又はサンプル供給部とメンブレンの間に位置し、サンプルパッド及びコンジュゲートパッドとは異なる任意のパッド（サードパッド）、検体濾過フィルターが挙げられる。
　ニトロセルロース製部材とは、ニトロセルロースを含む部材のことであり、ニトロセルロースと他の素材との複合材料もニトロセルロース製部材に含まれる。ニトロセルロースもガラス繊維と同様に負に帯電している。ニトロセルロース材料としては、ニトロセルロースメンブレン、検体濾過フィルターが挙げられる。
　第１の実施形態に係る検査方法で使用する試薬としては、毛細管現象等を利用して試薬内で検体を展開させることで検査をする試薬が望ましい。第１の実施形態に係る検査方法で使用する試薬としては、イムノクロマトグラフィーテストストリップ、核酸クロマトグラフィーテストストリップ、マイクロ流体デバイスが挙げられる。イムノクロマトグラフィーテストストリップ及び核酸クロマトグラフィーテストストリップの一例としては、検査試料の流れ方向の上流より下流に向かって、サンプルパッド、メンブレン、吸収パッドが順に配置されているものが挙げられる。それぞれの部材は、上流、下流のパッドと少なくとも一部が重なるように配置される。サンプルパッド上には、試料供給部と標識試薬保持部を形成することができる。メンブレン上には検出部が配置される。マイクロ流体デバイスの一例としては、試料供給部、標識試薬保持部、及び検出部が、マイクロ流路で接続しているものが挙げられる。マイクロ流体デバイスは、流速の制御等のためにポンプまたはポンプに接続するための接続部を具備しても良い。
　第１の実施形態に係る検査方法で使用する試薬は、試料供給部及び標識試薬保持部のうち少なくとも１つがガラス製部材を含むことが好ましい。ただし、試料供給部に試料を供給する前に、ガラス製部材を含む検体濾過フィルターで試料の濾過をする場合においては、試料供給部、標識試薬保持部のいずれもがガラス製部材を含まなくともよい。
　試料供給部とは、試薬に検査試料を供給する部分である。イムノクロマトグラフィーテストストリップ及び核酸クロマトグラフィーテストストリップの試料供給部は、サンプルパッドの一部に形成することができる。サンプルパッドを構成する材料としては、紙、セルロース混合物、ニトロセルロース、ポリエステル、アクリロニトリルコポリマー、ガラス繊維、レーヨン等の材料からなるパッドが挙げられる。サンプルパッドは、ガラス繊維又はポリエステルからなるパッドが好ましく、ガラス繊維からなるパッドがより好ましい。マイクロ流体デバイスの試料供給部は、マイクロ流路の開口部に形成することができる。
　標識試薬保持部とは、後述する標識試薬を保持する部分である。イムノクロマトグラフィーテストストリップ及び核酸クロマトグラフィーテストストリップの標識試薬保持部は、サンプルパッド上の一部に配置することもできるし、サンプルパッドとは別体のコンジュゲートパッドとして形成することもできる。標識試薬保持部をコンジュゲートパッドとして形成する場合は、標識試薬はコンジュゲートパッドの全体に配置されていてもよく、コンジュゲートパッドの一部に配置されていてもよい。コンジュゲートパッドを配置せずに、後述するメンブレン上に標識試薬保持部を形成することもできる。標識試薬保持部は、サンプルパッド又はコンジュゲートパッドの一部にライン状に配置されることが好ましい。マイクロ流体デバイスの標識試薬保持部は、マイクロ流路の開口部と検出部の間に形成することができる。
　標識試薬とは、被検出物質に結合可能な結合物質を標識物質で標識したものである。被検出物質に結合可能な結合物質を標識物質で標識する方法としては、物理吸着、化学結合等が挙げられる。
　標識物質としては、例えば、金属錯体、酵素、不溶性粒子、蛍光物質、化学発光物質、ビオチン、アビジン、放射性同位体、金コロイド粒子、又は着色ラテックスが挙げられる。金コロイド粒子を標識物質として用いるのが好ましい。
　被検出物質に結合可能な結合物質とは、抗原抗体反応等により、被検出物質に結合する物質を意味する。被検出物質がタンパク質である場合、結合物質は抗体又は抗体の断片であることが好ましい。抗体はモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体のいずれでもよく、いずれも公知の方法に従って作製することができる。本発明の被検出物質に結合可能な結合物質はモノクローナル抗体であることが好ましい。
　検出部は、被検出物質を検出する部分である。イムノクロマトグラフィーテストストリップ及び核酸クロマトグラフィーテストストリップの検出部は、メンブレン上に被検出物質に結合可能な結合物質を固定化して形成される。メンブレンには、被検出物質の数に応じた数の検出部が配置される。被検出物質が２種類の場合は、第１の検出部と第２の検出部が配置され、この第1の検出部と第２の検出部はどちらが上流であってもよい。例えば、第１の被検出物質と第２の被検出物質を検査する場合には、第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部、及び、第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部をメンブレン上に配置する。この時、第１の検出部と第２の検出部のいずれを検査試料展開方向における上流側に配置してもよい。メンブレンには、検査の適切な進行を確認するための対照部を配置してもよい。メンブレンはニトロセルロース製部材からなるものが好ましい。マイクロ流体デバイスの検出部は、マイクロ流路の一部に被検出物質に結合可能な結合物質を固定化して形成される。
　吸収パッドとは、メンブレンを移動・通過した検査試料を吸収する部材である。吸収パッドとしては、セルロース製材料等を用いることができる。
＜第２の実施形態＞
　本発明の検査方法の第２の実施形態は、検体から検査試料を調製する調製工程と、前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質を検出するための第１の試薬で検査する第１の検査工程と、前記検査試料の一部を、第２の被検出物質を検出するための第２の試薬で検査する第２の検査工程と、を含む。
　前記第１の被検出物質は、上述したとおり、等電点が１０．０以上の物質である。
　第２の実施形態に係る検査方法では、前記調製工程及び前記第１の検査工程のいずれか一方又は両方において、カチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる。
　第２の実施形態に係る検出方法における第１の検査工程及び第２の検査工程の試薬で検査する工程には、試薬と検査試料とを接触させる工程、所定時間経過後に試薬から検査結果を読み取る工程が含まれる。
　第２の実施形態に係る検出方法における調製工程及び第１の検査工程のいずれか一方又は両方には、カチオン性物質の存在下で、等電点が１０．０以上の物質である第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる工程が含まれる。検査試料中で正に帯電している等電点１０．０以上の物質を、負に帯電しているガラス製部材やニトロセルロース製部材に接触させる際に、カチオン性物質を共存させることで、等電点１０．０以上の物質がガラス製部材やニトロセルロース製部材に吸着することを抑制できると考えられる。なお、上記メカニズムは、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
　第２の実施形態に係る検出方法では、被検出物質のそれぞれを個別の試薬を用いて検査する点が異なる他は、第１の実施形態に係る検出方法と同様であるので説明を省略する。
［検査キット及び試薬］＜第１の実施形態＞
　本発明の第１の実施形態に係る検査方法を実施するための検査キット及び試薬について、説明する。
（試薬）
　第１の実施形態に係る試薬についてイムノクロマトグラフィーテストストリップを例に挙げて説明する。以下、イムノクロマトグラフィーテストストリップを単にテストストリップと呼ぶことがある。
　第１の実施形態に係るテストストリップは、等電点１０．０以上のタンパク質を含む検査試料と接触するガラス製部材を含む。前記ガラス製部材は、検体濾過用のフィルター、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、及びサードパッドからなる群から選択される少なくとも一つであることが好ましい。
　第１の実施形態に係るテストストリップは、等電点１０．０以上のタンパク質を含む検査試料と接触するカチオン性物質を含む。前記カチオン性物質は、検体希釈液、検体濾過用のフィルター、及びテストストリップからなる群から選択される少なくとも一つに含まれており、検体希釈液、検体濾過用のフィルター、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、及びサードパッドからなる群から選択される少なくとも一つに含まれていることが好ましく、検体希釈液に含まれていることがより好ましい。ただし、前記カチオン性物質は、ガラス製材料と試料が接触する箇所又はそれよりも上流に含まれる。
　第１の実施形態に係るテストストリップの一実施形態の構成を図１に示す。図１に示されるテストストリップでは、検査試料の流れ方向の上流より下流に向かって、サンプルパッド８、サードパッド９、コンジュゲートパッド２、不溶性メンブレン担体４、吸収パッド３の順で配置されている。それぞれのパッドが、上下のパッドと少なくとも一部が重複するように配置される。不溶性メンブレン担体４上には、テストライン（検出部）６とコントロールライン７とが配置されている。テストライン（検出部）６は、第１の被検出物質を検出するための第１のテストライン（第１の検出部）６ａ及び第２の被検出物質を検出するための第２のテストライン（第２の検出部）６ｂを含む。被検出物質の数に応じて、テストラインを増加することができる。サンプルパッド８、サードパッド９、及びコンジュゲートパッド２の少なくとも１つに、カチオン性物質が添加されていることが好ましい。
　第１の実施形態に係るテストストリップの変形例の構成を図２に示す。図２に示されるテストストリップは、図１に示す第１の実施形態の基本形のテストストリップから、コンジュゲートパッド２及びサードパッド９を省略し、サンプルパッド８上に標識試薬保持部５を配置したものである。
　検査試料、検体希釈液、カチオン性物質は、上述した検査方法と同様である。
　第１の実施形態に係るテストストリップは、１回の検査で複数種類の被検出物質を検査できるように、単一のイムノクロマトグラフィーテストストリップで２以上の被検出物質を検査できるように構成されている。具体的には、コンジュゲートパッドには、複数の被検出物質のそれぞれに対応する抗体が含まれ、テストライン（検出部）は、複数の被検出物質のそれぞれに対応する抗体が配置されている。
（テストストリップ）
　テストストリップは、プラスチック製粘着シートのような固相支持体（バッキングシート１）上に配置させることが好ましい。前記固相支持体は、サンプル及びコンジュゲートの毛管流を妨げない物質で構成する。また、テストストリップを固相支持体上に接着剤等で固定化してもよい。
　テストストリップは、サンプルパッドと不溶性メンブレン担体とを含み、測定条件及びサンプルに応じて他の構成をさらに含んでもよい。他の構成とは、例えば、コンジュゲートパッド、サードパッド、又は吸収パッドなどである。テストストリップのサンプルパッド、コンジュゲートパッド、及びサードパッドのうち少なくとも１つがガラス繊維を含むことが好ましい。しかしながら、サンプルパッドに検査試料を接触させる前に、カチオン性物質の存在下でガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターで検査試料の濾過をしている場合は、テストストリップのサンプルパッド、コンジュゲートパッド、及びサードパッドのいずれもガラス繊維を含まなくともよい。
　詳細には、上述した第１の実施形態に係る検査方法で使用する試薬と同様である。
（検査キット）
　第１の実施形態の検査方法を実施するための検査キットは、上述した試薬を含む。
　第１の実施形態の検査方法を実施するための検査キットは、上述した試薬の他に、ガラス繊維を含む検体濾過フィルター、検体採取用の綿棒、標準抗原物質、精度管理用抗原試料、又は使用説明書などを含むこともできる。本発明のキットは、ガラス繊維を含む検体濾過フィルターを含むことが好ましい。前記検体濾過フィルターは本発明の検査方法において説明したとおりである。
＜第２の実施形態＞
　本発明の第２の実施形態に係る検査方法を実施するための試薬は、１つの試薬で１つの被検出物質を検査できるように構成されている。具体的には、コンジュゲートパッドには、１つの被検出物質に対応する抗体が含まれ、テストライン（検出部）は、１つの被検出物質に対応するものが配置されている。
　本発明の第２の実施形態に係る検査方法を実施するための検査キットは、第１の実施形態に係る検査方法を実施するための試薬に代えて、上述した１つの試薬で１つの被検出物質を検査できるように構成された試薬を用いる点が相違するが、その点を除けば同様である。
　以下では実施例によって本発明をより具体的に説明するが、後述する実施例は本発明を何ら限定するものではない。なお、特に説明のない限り、％は質量％を意味する。
［作製例１］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップの作製
（１）抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体の調製
　以下の試験に用いる抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体は、抗原としてリコンビナントＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質を用い、マウスに免疫し、当業者がモノクローナル抗体を製造するために通常行う方法を用いて得られた。
（２）金コロイド粒子標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体液の作製
　１ＯＤ／ｍＬの金コロイド溶液２０ｍＬに、２５μｇ／ｍＬの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体を含むリン酸バッファー１ｍＬを添加し、室温で１０分間攪拌した。続いて金コロイド溶液に１０％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）溶液２ｍＬを添加し、室温で５分間攪拌した。得られた溶液を、１０℃、１０，０００ｒｐｍで４５分間遠心し上清を除去した。残渣を、Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｄｉｌｕｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｃｒｉｐｐｓ社）で懸濁し、金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体液を得た。
（３）コンジュゲートパッドの作製
　上記（２）で調製した金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体液を、１．３３％カゼイン、４％スクロース溶液（ｐＨ７．５）で４ＯＤ／ｍＬに希釈し標識試薬液を調製した。標識試薬液をガラス繊維パッドにライン状に塗布し、標識試薬液を乾燥させてコンジュゲートパッドを得た。
（４）抗体固相化メンブレンの作製
　０．７５ｍｇ／ｍＬの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体及び２．５％スクロースを含むＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）を調製し、検出部塗布液を得た。１．０ｍｇ／ｍＬヤギ抗マウスＩｇＧモノクローナル抗体及び２．５％スクロースを含むＰＢＳを調製し、対照部塗布液を得た。イムノクロマト法用ディスペンサー（分注プラットホームＸＹＺ３０５０、ＢＩＯ　ＤＯＴ社）を用い、ニトロセルロースメンブレン上に、検出部塗布液及び対照部塗布液をそれぞれ１．０μＬ／ｃｍで塗布し、乾燥させることで、抗体固相化メンブレンを得た。
（５）テストストリップの作製
　プラスチック製粘着シートに抗体固相化メンブレン、コンジュゲートパッド、吸収パッドを貼付し、５ｍｍ幅に裁断することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップを得た。
［分析例１］抗原液のフィルター濾過による感度への影響評価
　以下の抗原を、インフルエンザウイルスキット（ラピッドテスタ（登録商標）ＦＬＵ・ＮＥＸＴ、積水メディカル社）に付属の検体希釈液にそれぞれ添加し、試料を調製した。・Ａ型インフルエンザウイルス（ＦＬＵ　Ａ）抗原：Ｋｉｔａｋｙｕｓｙｕ　１５９／９３株由来
・Ｂ型インフルエンザウイルス（ＦＬＵ　Ｂ）抗原：Ｌｅｅ　４０株由来
・ＲＳウイルス抗原：ＲＳＶ　Ａｎｔｉｇｅｎ，　Ｌｏｎｇ　ｓｔｒａｉｎ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ　（Ｍｅｒｉｄｉａｎ社）
・アデノウイルス抗原：Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　Ａｎｔｉｇｅｎ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社）
・ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２　Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｉｃｏｓａｇｅｎ社）
　試料の一部を、ラピッドテスタＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体濾過用のフィルターで濾過し、濾過済み試料を得た。試料及び濾過済み試料を、表１に示す条件で測定し、デンシトメトリー分析装置（ラピッドテスタ（登録商標）リーダー、積水メディカル社）でテストラインの吸光度を測定した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　検体濾過用のフィルターにより試料を濾過した際の濾過回収率を、下記式により算出した。
　回収率（％）＝濾過済み試料測定時吸光度／試料測定時（濾過なし）吸光度×１００　各抗原の濾過回収率を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　ＦＬＵ　Ａ抗原、ＦＬＵ　Ｂ抗原、ＲＳウイルス抗原、アデノウイルス抗原は、いずれも濾過回収率が１００±１５％以内と、試料を検体濾過用のフィルターで濾過した際の測定値への影響を認めなかった。一方、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原では濾過回収率が４７％と、他の抗原と比較して顕著に低くなり、試料を検体濾過用のフィルターを用いて濾過した際に測定値が低下した。一般的にインフルエンザウイルス測定試薬用の検体希釈液及び検体濾過用のフィルターは、同シリーズのＲＳウイルスおよびアデノウイルス測定試薬においても使用可能となっていることが多い。しかし、それらの検体希釈液及び検体濾過用のフィルターをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定に適用した場合には、測定試薬の最高感度が得られない可能性が示唆された。
［分析例２］フィルター部材への抗原吸着評価
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原を、ラピッドテスタＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体希釈液に添加し、試料を調製した。ラピッドテスタＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体濾過用のフィルターから、開口側フィルター保持材（ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）製）、フィルター部材（ガラス繊維製）、先端側フィルター保持材（ＰＶＡ製）を取り出し、それぞれを５００μＬの試料に１０分間浸漬し、フィルター部材浸漬試料を得た。試料及びフィルター部材浸漬試料１２０μＬをそれぞれＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップに滴下した。抗原液滴下から１５分後、ラピッドテスタリーダー（積水メディカル社）でテストラインの吸光度を測定した。
　検体濾過用のフィルター部材を試料に浸漬した際の抗原の回収率を、下記式により算出した。
　回収率（％）＝フィルター部材浸漬試料測定時吸光度／試料測定時吸光度（フィルター部材の浸漬なし）×１００
　各部材を試料に浸漬した際の抗原の回収率を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　ＰＶＡ製のフィルター保持材を試料に浸漬した場合の抗原回収率が７０％程度であったのに対し、ガラス繊維製のフィルター部材を試料に浸漬した場合の回収率は１０％程度であった。したがって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定において、インフルエンザウイルス測定試薬用の希釈液とガラス繊維製のフィルターを用いると、測定試薬の最高感度が得られない可能性が示唆された。また、分析例１においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の濾過回収率が顕著に低かった原因は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原がガラス繊維に吸着したためであると考えられた。
［分析例３］サンプルパッド用部材によるウイルス抗原測定感度への影響評価
　分析例１と同様に試料を調製した。試料１２０μＬ当たり１４０ｍｍ２のサンプルパッド用部材を１０分間浸漬し、パッド部材浸漬試料を得た。試料及びパッド部材浸漬試料を表１の条件で測定し、ラピッドテスタリーダー（積水メディカル社）でテストラインの吸光度を測定した。パッド部材を試料に浸漬した際の抗原の回収率を、下記式により算出した。
　回収率（％）＝パッド部材浸漬試料測定時吸光度／試料測定時吸光度×１００
　各部材を試料に浸漬した際の抗原の回収率を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　ＦＬＵ　Ａ、ＦＬＵ　Ｂ、ＲＳウイルス、及び、アデノウイルス抗原は、試料にいずれのパッド部材を浸漬した場合にも、抗原回収率が１００％±１５％以内と良好であった。一方ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原では、試料にガラス繊維パッドを浸漬した場合に抗原回収率が大きく低下した。
　分析例２及び分析例３の結果から、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２では抗原とガラス製部材とが接触することにより、その後のイムノクロマトグラフィーに供される抗原量が減少し、回収率が低下すると考えられた。
　ここで、分析例３に用いた各抗原及びそれに類似する抗原に含まれ、各測定試薬が検出するタンパク質の等電点を表５に示す。各タンパク質の等電点は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢをＥｘｐａｘｙ　Ｃｏｍｐｕｔｅ ｐＩ／Ｍｗ（https://www.expasy.org/resources/compute-pi-mw）に入力することにより算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　表５よりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｐｒｏｔｅｉｎの等電点のみが１０．０以上と高いことが分かる。ガラス繊維は中性の検体希釈液と接触すると負の電荷をもつのに対し、等電点が１０．０７のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｐｒｏｔｅｉｎは正の電荷をもつ。よって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｐｒｏｔｅｉｎは等電点が１０未満の他の抗原タンパク質と比較してガラス繊維に吸着し易いと考えられる。一方、ＰＶＡやポリエステルは中性の検体希釈液と接触した際に電荷をもたないため、抗原タンパク質の等電点によらず、抗原タンパク質のパッドへの吸着を認めなかったと考えられる。
［実施例１］
・カチオン性物質によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原測定感度への影響
　ラピッドテスタＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体希釈液に、表６に記載の各カチオン性物質及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２　Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｉｃｏｓａｇｅｎ社）を４５０　ＴＣＩＤ５０／ｍＬ相当の濃度で添加したものを試料とした。試料１２０μＬをそれぞれ作製例１に記載の方法で作製したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップに滴下した。抗原液添加から１０分後、ラピッドテスタリーダー（積水メディカル社）でテストラインの吸光度を測定した。使用したイムノクロマトグラフィーテストストリップの構成は、図２と同じである。
　結果を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　カチオン性物質を添加したすべての条件で、添加剤を添加しなかった条件と比較して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原測定時の吸光度が上昇した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップは、ガラス繊維パッドを含むため、カチオン性物質によって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原のガラス繊維への吸着が抑制されたと考えられる。
・カチオン性物質によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原回収率への影響
　ラピッドテスタＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体希釈液に、表７に記載の各カチオン性物質及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２　Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｉｃｏｓａｇｅｎ社）を４５０　ＴＣＩＤ５０／ｍＬ相当の濃度で添加したものを試料とした。
　試料を、ラピッドテスタ　ＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体濾過用のフィルターで濾過し、濾過済み試料を得た。
　試料及び濾過済み試料１２０μＬをそれぞれ作製例１に記載の方法で作製したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップに滴下した。抗原液添加から１０分後、ラピッドテスタリーダー（積水メディカル社）でテストラインの吸光度を算出した。各試料をそれぞれ３回測定した。使用したイムノクロマトグラフィーテストストリップの構成は、図２と同じである。
　検体濾過用のフィルターにより試料を濾過した際の濾過回収率を、下記式により算出した。
　回収率（％）＝濾過済み試料測定時吸光度／試料測定時（濾過なし）吸光度×１００
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　カチオン性物質共存下でガラス繊維フィルターによる濾過を実施することで抗原の回収率が向上した。
［作製例２］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２・ＦＬＵ測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップの作製
（１）抗ＦＬＵモノクローナル抗体の調製
　以下の試験に用いた抗ＦＬＵ　Ａモノクローナル抗体及び抗ＦＬＵ　Ｂモノクローナル抗体は、ＦＬＵ　Ａ又はＦＬＵ　Ｂ抗原でマウスを免疫し、当業者がモノクローナル抗体を製造するために通常行う方法により得た。
（２）金コロイド標識抗ＦＬＵ抗体液の作製
　上記作製例１と同様の操作で、金コロイド標識抗ＦＬＵ　Ａ抗体液、及び、金コロイド標識抗ＦＬＵ　Ｂ抗体液を得た。
（３）コンジュゲートパッドの作製
　上記作製例１の通り調整した金コロイド標識抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体液、２）で調製した金コロイド標識抗ＦＬＵ　Ａ抗体液、及び、金コロイド標識抗ＦＬＵ　Ｂ抗体液を、それぞれ４ＯＤ／ｍＬの濃度で添加した、１．３３％カゼイン、４％スクロース溶液（ｐＨ７．５）を調製し標識試薬液とした。標識試薬液をガラス繊維パッドにライン状に塗布し、標識試薬液を乾燥させてコンジュゲートパッドを得た。
（４）抗体固相化メンブレンの作製
　０．７５ｍｇ／ｍＬの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体及び２．５％スクロースを含むＰＢＳを調製し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２テストライン塗布液とした。同様に、ＦＬＵ　Ａ検出部塗布液及びＦＬＵ　Ｂ検出部塗布液をそれぞれ調製した。１．０ｍｇ／ｍＬヤギ抗マウスＩｇＧモノクローナル抗体及び２．５％スクロースを含むＰＢＳを調製し、対照部塗布液とした。イムノクロマト法用ディスペンサー「ＸＹＺ３０５０」（ＢＩＯ　ＤＯＴ社）を用い、ニトロセルロースメンブレン上に、検出部塗布液及び対照部塗布液をそれぞれ１．０μＬ／ｃｍで塗布し、メンブレンを乾燥させることで、抗体固相化メンブレンを得た。各ラインは、検体展開方向の上流から、ＦＬＵ　Ａ検出部、ＦＬＵ　Ｂ検出部、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出部、対照部の順に配置した。
（５）テストストリップの作製
　プラスチック製粘着シートに抗体固相化メンブレン、コンジュゲートパッド、吸収パッドを貼付し、５ｍｍ幅に裁断することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２・ＦＬＵ測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップを得た。
［実施例２］
・カチオン性物質による各抗原測定感度への影響＜１＞
　ラピッドテスタ　ＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体希釈液、及び、ラピッドテスタ　ＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体希釈液に表７～９に記載のカチオン性物質を添加した溶液に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２陽性検体、ＦＬＵ　Ａ陽性検体、ＦＬＵ　Ｂ陽性検体をそれぞれ懸濁し試料とした。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２・ＦＬＵ測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップのコンジュゲートパッド側の先端を試料に浸漬し、１０分後にラピッドテスタリーダー（積水メディカル社）を用いてテストラインの吸光度を測定した。
　結果を表８、表９、及び表１０に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　テストラインの吸光度に応じて以下の通り判定した。
　－：５ｍＡｂｓ未満（陰性）
　＋：２０ｍＡｂｓ未満（陽性）
　２＋：２０ｍＡｂｓ以上１００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　３＋：１００ｍＡｂｓ以上２００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　４＋：２００ｍＡｂｓ以上４００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　５＋：４００ｍＡｂｓ以上（陽性）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　テストラインの吸光度に応じて以下の通り判定した。
　－：５ｍＡｂｓ未満（陰性）
　＋：２０ｍＡｂｓ未満（陽性）
　２＋：２０ｍＡｂｓ以上１００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　３＋：１００ｍＡｂｓ以上２００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　４＋：２００ｍＡｂｓ以上４００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　５＋：４００ｍＡｂｓ以上（陽性）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　テストラインの吸光度に応じて以下の通り判定した。
　－：５ｍＡｂｓ未満（陰性）
　＋：２０ｍＡｂｓ未満（陽性）
　２＋：２０ｍＡｂｓ以上１００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　３＋：１００ｍＡｂｓ以上２００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　４＋：２００ｍＡｂｓ以上４００ｍＡｂｓ未満（陽性）
　５＋：４００ｍＡｂｓ以上（陽性）
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２陽性検体の測定において、カチオン性物質によってすべての検体の測定値が上昇した。同じ判定の場合においても、全ての検体においてカチオン性物質を添加した条件の方が非添加の条件よりも吸光度が高かった。ＦＬＵ　Ａ陽性検体の測定においては、カチオン性物質の添加による測定値が上昇傾向を認めなかった。ＦＬＵ　Ｂ陽性検体では検体によってカチオン添加剤による測定値変動傾向が異なったが、すべての条件・検体で陽性判定となり、カチオン性物質による測定精度への悪影響は認めなかった。分析例３で示した通り、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原とＦＬＵ抗原とでガラス繊維への抗原吸着性が異なるため、カチオン性物質による効果に差が生じたと考えられる。複数のテストラインが陽性となる検体は認めなかった。
［実施例３］
・カチオン性物質による各抗原測定感度への影響＜２＞
　ラピッドテスタＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体希釈液、及び、ラピッドテスタＦＬＵ・ＮＥＸＴに付属の検体希釈液に表１１～１２に記載のカチオン性物質を添加した溶液に、分析例１に記載のＲＳウイルス抗原、アデノウイルス抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をそれぞれ添加し試料とした。調製した試料を作製例１の通り作製したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２測定用イムノクロマトグラフィーテストストリップ及びラピッドテスタＲＳＶ－アデノ・ＮＥＸＴ（積水メディカル社）で測定した。ラピッドテスタリーダー（積水メディカル社）を用いて各試薬のテストラインの吸光度を測定した。試験は各抗原毎に３回実施し、測定結果は吸光度（単位：ｍＡｂｓ）で示した。なお、ラピッドテスタリーダーの測定下限である５．０ｍＡｂｓ以下の吸光度を示した場合を陰性と判定し、表中に「＜５．０」と表記した。
　結果を表１１及び表１２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の測定ではカチオン添加剤によって吸光度が上昇した。一方、ＲＳウイルス及びアデノウイルスでは同様の吸光度変動を認めなかった。いずれの抗原についても、カチオン添加剤の追加によらず陰性試料、陽性試料を正しく判定しており、等電点が１０．０以上の抗原の測定感度を上昇させるカチオン添加剤は、等電点が１０未満の抗原の測定に共存させた場合に、測定結果に悪影響を及ぼさなかった。
　本発明の検査方法及び検査キットは、検査対象の病原体毎に、鼻腔や咽頭から検体を採取する必要が無いので、医療者が患者の咳やくしゃみで飛沫曝露するリスクを低減することができる。そのため、より安全に感染症の原因ウイルスの特定のための検査を行うことができる。
１…バッキングシート
２…コンジュゲートパッド
３…吸収パッド
４…不溶性メンブレン担体
５…標識試薬保持部
６…テストライン（検出部）
７…コントロールライン
８…サンプルパッド
９…サードパッド

Claims (31)

  1. 　検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法であって、
    　前記検体から検査試料を調製する調製工程と、
    　前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための試薬で検査する検査工程と、を含み、
    　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
    　前記調製工程及び前記検査工程のいずれか一方又は両方において、カチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる、検査方法。
  2. 　前記試薬が試料供給部及び標識試薬保持部を有し、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、請求項１に記載の検査方法。
  3. 　検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法であって、
    　前記検体から検査試料を調製する調製工程と、
    　前記検査試料の少なくとも一部を、第１の被検出物質及び第２の被検出物質のそれぞれを検出するための第１の試薬で検査する第１の検査工程と、
    　前記検査試料の一部を、第２の被検出物質を検出するための第２の試薬で検査する第２の検査工程と、
    を含み、
    　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
    　前記調製工程及び前記第１の検査工程のいずれか一方又は両方において、カチオン性物質の存在下で、前記第１の被検出物質をガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触させる、検査方法。
  4. 　前記第１の試薬が試料供給部及び標識試薬保持部を含み、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、請求項３に記載の検査方法。
  5. 　前記調製工程が前記検体を検体希釈液に懸濁する工程を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の検査方法。
  6. 　前記カチオン性物質が前記検体希釈液に含まれる、請求項５に記載の検査方法。
  7. 　前記調製工程が前記検査試料をフィルターで濾過する工程を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の検査方法。
  8. 　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、請求項１～４のいずれか１項に記載の検査方法。
  9. 　前記カチオン性物質が金属塩、カチオン性ポリマー、カチオン性ペプチド、及びカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１～４のいずれか１項に記載の検査方法。
  10. 　前記等電点が１０．０以上の物質が呼吸器感染症ウイルスに由来する請求項１～４のいずれか１項に記載の検査方法。
  11. 　前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスである、請求項１０に記載の検査方法。
  12. 　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項１１に記載の検査方法。
  13. 　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
    　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
    　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部と、第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部と、
    　検体を含む展開液の展開方向において、前記第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方と
    を含む試薬であって、
    　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
    　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含む、試薬。
  14. 　前記試薬が、試料供給部及び標識試薬保持部を含み、試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、請求項１３に記載の試薬。
  15. 　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、請求項１３又は１４に記載の試薬。
  16. 　前記等電点が１０．０以上の物質が呼吸器感染症ウイルスに由来する、請求項１３又は１４に記載の試薬。
  17. 　前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスである、請求項１６に記載の試薬。
  18. 　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項１７に記載の試薬。
  19. 　前記カチオン性物質が金属塩、カチオン性ポリマー、カチオン性ペプチド及びカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１３又は１４に記載の試薬。
  20. 　請求項１３又は１４に記載の試薬を用いる、検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法。
  21. 　試薬を含む検査キットであって、
    　前記試薬は、
    　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
    　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
    　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部と、
    　第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部と
    を含み、
    　検体を含む展開液の展開方向において、第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方を有し、
    　前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
    　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含む、検査キット。
  22. 　検体濾過フィルターと試薬とを含む検査キットであって、
    　前記試薬は、
    　第１の被検出物質に結合可能な第１の結合物質を標識物質で標識した第１の標識試薬と、
    　第２の被検出物質に結合可能な第２の結合物質を標識物質で標識した第２の標識試薬と、
    　第１の被検出物質に結合可能な第１の固相試薬を固定化した第１の検出部と、
    　第２の被検出物質に結合可能な第２の固相試薬を固定化した第２の検出部と
    を含み、
    　前記検体濾過フィルターの検体及び前記試薬の検体のいずれか一方又は両方を含む展開液の展開方向において、第１の検出部よりも上流に配置されるガラス製部材及びニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方を有し、前記第１の被検出物質は等電点が１０．０以上の物質であり、
    　前記ガラス製部材及び前記ニトロセルロース製部材のいずれか一方又は両方に接触する展開液がカチオン性物質を含む、検査キット。
  23. 　前記試薬が、試料供給部及び標識試薬保持部を含み、前記試料供給部及び前記標識試薬保持部のいずれか一方又は両方が前記ガラス製部材を含む、請求項２１又は２２に記載の検査キット。
  24. 　前記ガラス製部材がガラス繊維を含む検体濾過用のフィルターである、請求項２１又は２２に記載の検査キット。
  25. 　前記等電点が１０．０以上の物質が呼吸器感染症ウイルスに由来する、請求項２１又は２２に記載の検査キット。
  26. 　前記呼吸器感染症ウイルスがコロナウイルスである、請求項２５に記載の検査キット。
  27. 　前記コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項２６に記載の検査キット。
  28. 　検体希釈液をさらに含む、請求項２１又は２２に記載の検査キット。
  29. 　前記カチオン性物質が前記検体希釈液に含まれる、請求項２８に記載の検査キット。
  30. 　前記カチオン性物質が金属塩、カチオン性ポリマー及びカチオン性界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項２１又は２２に記載の検査キット。
  31. 　請求項２１又は２２に記載の検査キットを用いる、検体に含まれる被検出物質の定性的又は定量的な検査方法。
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