WO2024085166A1

WO2024085166A1 - がん治療におけるｐｄ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７二重特異性抗体の使用

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Publication number: WO2024085166A1
Application number: PCT/JP2023/037616
Authority: WO
Inventors: 雅人佐藤; 恵多廣内; 綾菊地
Original assignee: Astellas Pharma Inc
Current assignee: Astellas Pharma Inc
Priority date: 2022-10-19
Filing date: 2023-10-18
Publication date: 2024-04-25
Anticipated expiration: 2025-04-19
Also published as: JP7730432B2; IL319946A; JPWO2024085166A1; CN119997975A; KR20250089513A; AU2023365438A1; EP4606384A1; TW202426503A; CL2025001156A1; MX2025004457A

Abstract

本発明の課題は、対象のがん治療のためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体若しくは当該二重特異性抗体を含む医薬組成物の提供、又は抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を組み合わせて対象に投与することを含むがんの治療方法の提供である。　ＣＬＤＮ４発現がん細胞及びＴ細胞の共培養条件下にて、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤の併用はそれぞれの単独投与に比べて、Ｔ細胞によるインターフェロン－γ産生促進作用及び細胞傷害作用を示し、ＣＬＤＮ４発現がん細胞移植マウスにおいて有意な抗腫瘍作用を示した。この結果より、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤の組み合わせは、ＣＬＤＮ４発現がんの治療に有用であることが示唆された。

Description

がん治療におけるＰＤ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用

　本発明は、がん治療におけるＰＤ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用に関する。

　Ｃｌａｕｄｉｎ－４（ＣＬＤＮ４）はクローディンファミリーに属する４回膜貫通タンパク質である。上皮細胞や内皮細胞に発現しており、タイトジャンクションを構成する主要分子として重要な役割を果たしている。ＣＬＤＮ４は大腸がん、膀胱がん、卵巣がん等のがん組織でも高発現が認められており、抗ＣＬＤＮ４抗体はがんの治療又は診断に応用できる可能性が示唆されている（特許文献１、非特許文献１）。さらに、動物モデルにおいて、抗ＣＬＤＮ４抗体と抗Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）抗体の併用による抗腫瘍効果が示されている（非特許文献２）。

　Ｃｌｕｓｔｅｒ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　１３７（ＣＤ１３７、別名４－１ＢＢ）は、Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ（ＴＮＦＲＳＦ）に属する分子であり、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）細胞、樹状細胞、好酸球、マスト細胞等の免疫細胞表面に発現していることが報告されている。特に、Ｔ細胞上のＣＤ１３７は抗原提示細胞上のＣＤ１３７リガンドと結合し、共刺激分子としてＴ細胞の活性化と生存に関与していることが知られている（非特許文献３）。抗ＣＤ１３７アゴニスト抗体は、動物モデルにおいて腫瘍微小環境内の免疫細胞の活性化を介した抗腫瘍効果を示している（非特許文献４）。抗ＣＤ１３７アゴニスト抗体であるウレルマブは臨床試験で治療効果を示したが、肝障害の副作用を引き起こすことも報告されている（非特許文献５）。

　低い抗体濃度でがん細胞選択的な細胞傷害活性を得ることができる画期的な方法として、種々の抗体フォーマットの二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｔ－ｃｅｌｌ－ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）が報告されている。二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体は、がん細胞表面に発現する腫瘍関連抗原（Ｔｕｍｏｒ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ；ＴＡＡ）に対する抗体と、Ｔ細胞に結合する抗体を含む二重特異性抗体であり、Ｔ細胞媒介性免疫療法に対するそれらの抗体の効果が検討されつつある（非特許文献６）。Ｔ細胞に結合する抗体として抗ＣＤ３抗体が多く用いられており、現在も種々のＴＡＡに対する二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体の研究開発がなされている。

　さらに、近年では、ＣＤ１３７及びＴＡＡに対する二重特異性Ｔ細胞リクルート抗体の研究も盛んに行われている。ＴＡＡであるＧｌｙｐｉｃａｎ３（ＧＰＣ３）、Ｈｕｍａｎ　Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｔｙｐｅ２（ＨＥＲ２）、Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　Ｃｅｌｌ　Ｄｅａｔｈ－Ｌｉｇａｎｄ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＦＡＰ）を認識する抗ＧＰＣ３－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、抗ＨＥＲ２－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、抗ＰＤ―Ｌ１－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、抗ＦＡＰ－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体等の研究がなされている（特許文献２及び３、非特許文献７～９）。

　Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ－１（ＰＤ－１；ＰＤＣＤ１又はＣＤ２７９とも呼ばれる）はイムノグロブリンスーパーファミリーに属する５０～５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である（非特許文献１０）。ＰＤ－１はＴ細胞において活性化持続に伴い発現誘導されるが、リガンドであるＰｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ　１（ＰＤ－Ｌ１；ＰＤＣＤ１ＬＧ１、Ｂ７－Ｈ１又はＣＤ２７４とも呼ばれる）又はＰｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ　２（ＰＤ－Ｌ２；ＰＤＣＤ１ＬＧ２、Ｂ７－ＤＣ又はＣＤ２７３とも呼ばれる）に結合することにより、Ｔ細胞の活性化を抑制性に制御する（非特許文献１１）。一般的に、このようなＴ細胞活性化制御機構は、免疫チェックポイントと呼ばれており、過剰な免疫応答を引き起こさないためのネガティブフィードバック機構の一つとして知られている。

　がん発生初期において、Ｔ細胞等の免疫細胞は免疫監視機構による抗腫瘍免疫応答によってがんを排除する。一方、がんは、がん微小環境において直接的又は間接的に免疫細胞を抑制することにより免疫逃避機構を獲得している。直接的な活性化Ｔ細胞抑制機構として、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２（以下「ＰＤ－１シグナル」）経路、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ８０又はＣＤ８６経路等の免疫チェックポイント機構が知られている。がんの腫瘍微小環境内において、Ｔ細胞でのＰＤ－１の発現及び腫瘍でのＰＤ－Ｌ１の発現が確認されており（非特許文献１２）、このＰＤ－１シグナルの活性化によりがんは免疫逃避を示すと考えられている。ＰＤ－１シグナルの阻害により、免疫逃避機構解除により抗腫瘍活性をもたらすことが複数のマウス担癌モデルで報告されている（非特許文献１３～１５）。さらに、ＰＤ－１シグナル阻害剤として、ニボルマブ、ペンブロリズマブ等の抗ＰＤ－１抗体等のＰＤ－１シグナル阻害剤の開発が精力的に行われ、メラノーマ、肺がん、リンパ腫等で大きな成果をあげている。また、ＰＤ－１シグナル阻害剤としては、抗体以外にも核酸医薬・低分子薬等の研究も実施されている（非特許文献１６）。

　がん患者における治療の有効性を高めるために、複数のがん免疫薬の併用療法や、がん免疫薬と既存抗癌剤との併用試験が精力的に進められている（非特許文献１７及び１８）。例えば、抗ＰＤ－１抗体と他の免疫チェックポイント阻害抗体、抗がん剤、分子標的薬、放射線治療、がんワクチン、腫瘍溶解性ウイルスとの併用試験が実施されている。
　しかしながら、現在までに、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤の併用によるがんの治療方法は報告されていない。

国際公開第２００８／１１４７３３号国際公開第２０１５／１５６２６８号国際公開第２０１６／１７７８０２号

Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００９：１００（９）：ｐ．１６２３－１６３０Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１８：９（１００）：ｐ．３７３６７－３７３７８Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０２０：１１１（５）：ｐ．１４６１－１４６７Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、２０１２：６１（５）：ｐ．１７２１－１７３３Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１７：２３（８）：ｐ．１９２９－１９３６ＭＡｂｓ、２０１７：９（２）：ｐ．１８２－２１２Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１９：２５（１９）：ｐ．５８７８－５８８９Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０２０：２６（１５）：ｐ．４１５４－４１６７Ｊｏｕｒｎａｌ　ｆｏｒ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ、２０２０：８（２）：ｅ０００２３８Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９６：Ｖｏｌ．８：ｐ．７６５－７７２Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００８：Ｖｏｌ．２６：ｐ．６７７－７０４Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００２：８：ｐ．７９３－８００Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０２１：１１：ｐ．２１０８７－２１０９９Ｎａｔｕｒｅ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２０１７：８：ｐ．１４５７２－１４５８２Ｊｏｕｒｎａｌ　ｆｏｒ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ、２０１９：７：３７：ｐ．１－１６Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、２０１９：２４：ｐ．２０７１－２１００Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２０２１：１１：ｐ．１３６８－１３９７Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０２１：２３：ｐ．３６２－３７７

　本発明の課題は、対象のがん治療のためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体若しくは当該二重特異性抗体を含む医薬組成物の提供、又は抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を対象に投与することを含むがんの治療方法の提供である。

　本発明者らは、ＣＬＤＮ４発現がんの治療に用いる抗体又は医薬組成物の創成を目的とし、公知の抗ＣＬＤＮ４抗体であるＫＭ３９００抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の配列に基づき、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を作製した（実施例１）。取得した抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体との併用は、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体単独の場合と比較して、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいてＴ細胞のインターフェロンγ産生を促進した（実施例２及び３）。さらに、ヒトＣＬＤＮ４発現マウスがん細胞を担癌したマウスにおいて、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体との併用は、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体又は抗ＰＤ－１抗体を単独投与した場合に比べて有意な抗腫瘍効果を示した（実施例４）。この結果より、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤の組み合わせは、ＣＬＤＮ４発現がんの治療に有用であることが示唆された。

　すなわち、本発明は、これらに限定されるものではないが、以下の［１］～［８４］に関する。
［１］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
［２］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［１］に記載の医薬組成物。
［３］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からからなり、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる、［１］又は［２］に記載の医薬組成物。
［４］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域を含む重鎖及び抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む軽鎖からなるＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）を含む、［１］～［３］のいずれかに記載の医薬組成物。
［５］抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）若しくはＰ３３１Ｇ変異（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である）のいずれか又は両方を含む、［４］に記載の医薬組成物。
［６］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［１］～［５］のいずれかに記載の医薬組成物。
［７］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる、［１］～［６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［８］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７一本鎖可変領域フラグメント（抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を含む、［６］又は［７］に記載の医薬組成物。
［９］抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる、［８］に記載の医薬組成物。
［１０］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、［８］又は［９］に記載の医薬組成物。
［１１］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
［１２］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が、配列番号２のアミノ酸番号１から４５３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
［１３］リンカーがＧＳリンカーである、［１０］～［１２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１４］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
［１５］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が翻訳後修飾されたものである、［１］～［１４］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１６］ＰＤ－１シグナル阻害剤と同時に、連続的に又は逐次的に組み合わせて使用される、［１］～［１５］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１７］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が（ｉ）同一の医薬組成物に含まれており同時に投与される、又は（ｉｉ）別々の医薬組成物に含まれており、同時に、連続的に若しくは逐次的に組み合わせて使用される、［１］～［１６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１８］がんが、大腸がん、膀胱がん及び肺がんからなる群から選択される、［１］～［１７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１９］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２からなる群から選択される１以上のタンパク質に結合する抗体又はこれらの抗原結合フラグメントである、［１］～［１８］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２０］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、スパルタリズマブ及びセミプリマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である、［１］～［１９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２１］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、［１］～［１９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２２］対象のがんを治療するための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、該二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、二重特異性抗体。
［２３］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［２２］に記載の二重特異性抗体。
［２４］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる、［２２］又は［２３］に記載の二重特異性抗体。
［２５］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域を含む重鎖及び抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む軽鎖からなるＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）を含む、［２２］～［２４］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［２６］抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）若しくはＰ３３１Ｇ変異（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である）のいずれか又は両方を含む、［２５］に記載の二重特異性抗体。
［２７］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［２２］～［２６］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［２８］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる、［２２］～［２７］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［２９］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７一本鎖可変領域フラグメント（抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を含む、［２７］又は［２８］に記載の二重特異性抗体。
［３０］抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる、[２９]に記載の二重特異性抗体。
［３１］抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、［２９］又は［３０］に記載の二重特異性抗体。
［３２］対象のがんを治療するための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、二重特異性抗体。
［３３］対象のがんを治療するための抗ＣＬＤＮ４―抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、該二重特異性抗体が、配列番号２のアミノ酸番号１から４５３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、二重特異性抗体。
［３４］リンカーがＧＳリンカーである、［３１］～［３３］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［３５］対象のがんを治療するために使用される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、二重特異性抗体。
［３６］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が翻訳後修飾されたものである、［２２］～［３５］のいずれかに記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体。
［３７］ＰＤ－１シグナル阻害剤と同時に、連続的に又は逐次的に組み合わせて使用される、［２２］～［３６］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［３８］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が（ｉ）同一の医薬組成物に含まれており同時に投与される、又は（ｉｉ）別々の医薬組成物であり、同時に、連続的に若しくは逐次的に組み合わせて使用される、［２２］～［３７］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［３９］がんが、大腸がん、膀胱がん及び肺がんからなる群から選択される、［２２］～［３８］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［４０］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２からなる群から選択される１以上のタンパク質に結合する抗体又はこれらの抗原結合フラグメントである、［２２］～［３９］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［４１］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、スパルタリズマブ及びセミプリマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である、［２２］～［４０］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［４２］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、［２２］～［４０］のいずれかに記載の二重特異性抗体。
［４３］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を組み合わせて対象に投与することを含むがんの治療方法であって、該二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、治療方法。
［４４］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［４３］に記載の治療方法。
［４５］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる、［４３］又は［４４］に記載の治療方法。
［４６］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域を含む重鎖及び抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む軽鎖からなるＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）を含む、［４３］～［４５］のいずれかに記載の治療方法。
［４７］抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）若しくはＰ３３１Ｇ変異（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である）のいずれか又は両方を含む、［４６］に記載の治療方法。
［４８］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［４３］～［４７］のいずれかに記載の治療方法。
［４９］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる、［４３］～［４８］のいずれかに記載の治療方法。
［５０］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７一本鎖可変領域フラグメント（抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を含む、［４８］又は［４９］に記載の治療方法。
［５１］抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる、［５０］に記載の治療方法。
［５２］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、［５０］又は［５１］に記載の治療方法。
［５３］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を組み合わせて対象に投与することを含むがんの治療方法であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、治療方法。
［５４］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を組み合わせて対象に投与することを含むがんの治療方法であって、該二重特異性抗体が、配列番号２のアミノ酸番号１から４５３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、治療方法。
［５５］リンカーがＧＳリンカーである、［５２］～［５４］のいずれかに記載の治療方法。
［５６］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を組み合わせて対象に投与することを含むがんの治療方法であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む、治療方法。
［５７］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が翻訳後修飾されたものである、［４３］～［５６］のいずれか一項に記載の治療方法。
［５８］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が同時に、連続的に又は逐次的に組み合わせて使用される、［４３］～［５７］のいずれかに記載の治療方法。
［５９］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が（ｉ）同一の医薬組成物に含まれており同時に投与される、又は（ｉｉ）別々の医薬組成物であり、同時に、連続的に若しくは逐次的に組み合わせて使用される、［４３］～［５８］のいずれかに記載の治療方法。
［６０］がんが、大腸がん、膀胱がん及び肺がんからなる群から選択される、［４３］～［５８］のいずれかに記載の治療方法。
［６１］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２からなる群から選択される１以上のタンパク質に結合する抗体又はこれらの抗原結合フラグメントである、［４３］～［６０］のいずれか一項に記載の治療方法。
［６２］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、スパルタリズマブ及びセミプリマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である、［４３］～［６１］のいずれかに記載の治療方法。
［６３］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、［４３］～［６１］のいずれかに記載の治療方法。
［６４］対象のがんを治療するためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される医薬組成物の製造のための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用であって、該二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、使用。
［６５］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［６４］に記載の使用。
［６６］抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる、［６４］又は［６５］に記載の使用。
［６７］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域を含む重鎖及び抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む軽鎖からなるＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）を含む、［６４］～［６６］のいずれかに記載の使用。
［６８］抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）若しくはＰ３３１Ｇ変異（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である）のいずれか又は両方を含む、［６７］に記載の使用。
［６９］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、［６４］～［６８］のいずれかに記載の使用。
［７０］抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる、［６４］～［６９］のいずれかに記載の使用。
［７１］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７一本鎖可変領域フラグメント（抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を含む、［６９］又は［７０］に記載の使用。
［７２］抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる、［７１］に記載の使用。
［７３］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、［７１］又は［７２］に記載の使用。
［７４］対象のがんを治療するためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される医薬組成物の製造のための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、使用。
［７５］対象のがんを治療するためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される医薬組成物の製造のための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用であって、該二重特異性抗体が、配列番号２のアミノ酸番号１から４５３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、使用。
［７６］リンカーがＧＳリンカーである、［７３］～［７５］のいずれかに記載の使用。
［７７］対象のがんを治療するためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される医薬組成物の製造のための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む、使用。
［７８］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が翻訳後修飾されたものである、［６４］～［７７］のいずれかに記載の使用。
［７９］医薬組成物が、ＰＤ－１シグナル阻害剤と同時に、連続的に又は逐次的に組み合わせて使用される、［６４］～［７８］のいずれか一項に記載の使用。
［８０］抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が（ｉ）同一の医薬組成物に含まれており同時に投与される、又は（ｉｉ）別々の医薬組成物であり、同時に、連続的に若しくは逐次的に組み合わせて使用される、［６４］～［７９］のいずれかに記載の使用。
［８１］がんが、大腸がん、膀胱がん及び肺がんからなる群から選択される、［６４］～［８０］のいずれかに記載の使用。
［８２］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２からなる群から選択される１以上のタンパク質に結合する抗体又はこれらの抗原結合フラグメントである、［６４］～［８１］のいずれかに記載の使用。
［８３］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、スパルタリズマブ及びセミプリマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である、［６４］～［８２］のいずれかに記載の使用。
［８４］ＰＤ－１シグナル阻害剤が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、［６４］～［８２］のいずれかに記載の使用。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、がんにおいて高発現しているＣＬＤＮ４とＴ細胞表面分子であるＣＤ１３７の両方に結合し、がん細胞周辺の免疫細胞を活性化することによりがん細胞に対する殺傷作用を増強させるものである。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤の組み合わせは、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体又はＰＤ－１シグナル阻害剤の単独投与に比べて有意な抗腫瘍効果をもたらす。よって、本発明は、がん治療におけるＰＤ－１シグナル阻害剤との組み合わせによる抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用を提供する。

図１－１は、ヒト大細胞肺がん細胞株のＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の共培養系における被験抗体添加によるインターフェロン－γ産生量を示す。図の縦軸は抗体添加４日後におけるインターフェロン－γ産生量を、横軸は抗体濃度を示す。シンボルは各抗体の各濃度におけるインターフェロン－γ産生量の平均値を示す。エラーバーは標準偏差を示す。図１－２は、ヒト大細胞肺がん細胞株のＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞の共培養系における被験抗体添加によるインターフェロン－γ産生量を示す。図の縦軸は抗体添加５日後におけるインターフェロン－γ産生量を、横軸は抗体濃度を示す。シンボルは抗体の各濃度におけるインターフェロン－γ産生量の平均値を示す。エラーバーは標準偏差を示す。図２は、Ｂ－ｈ４－１ＢＢマウスに担癌されたヒトＣＬＤＮ４発現Ｂ１６－Ｆ１０細胞の増殖抑制効果を示す。図２は抗体投与開始後の各日数における腫瘍体積の平均値（ｎ＝１０）を示す。エラーバーは腫瘍体積の標準誤差を示す。図の縦軸は腫瘍体積を示し、横軸は抗体初回投与日からの日数を示す。有意確率Ｐ値は、ｕｎｐａｉｒｅｄ　Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ検定により、併用群の腫瘍体積を被験抗体単剤投与群の腫瘍体積と比較することにより求めた。図中の＊＊は、Ｐ値が有意水準０．０１より小さいことを示す。

　以下に、本発明について詳述する。

　本明細書の用語は、以下で特に定義されない限り、当該技術分野で当業者に一般に使用されている意味にて使用される。

　抗体（又は免疫グロブリン）とは単一の配列を有する重鎖２本と、単一の配列を有する軽鎖２本からなる左右対称Ｙ字型の構造を有する４本鎖構造を基本構造とする糖タンパク質をいう。抗体にはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥの５つのクラスが存在する。抗体分子の基本構造は各クラス共通であり、分子量５万～７万の重鎖２本と２万～３万の軽鎖２本がジスルフィド結合及び非共有結合によって結合し、分子量１５万～１９万のＹ字型の４本鎖構造からなる抗体分子を形成する。重鎖は、通常約４４０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、クラスごとに特徴的な構造をもち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥに対応してそれぞれ、Ｉｇγ、Ｉｇμ、Ｉｇα、Ｉｇδ、Ｉｇεとよばれる。さらにＩｇＧには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のサブクラスが存在し、それぞれに対応する重鎖はＩｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３、Ｉｇγ４とよばれる。軽鎖は、通常約２２０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、λ型とκ型の２種が知られており、それぞれＩｇλ、Ｉｇκという。前記２種の軽鎖は、いずれの種類の重鎖とも対をなすことができる。

　抗体分子の鎖内ジスルフィド結合は、重鎖には４つ（Ｉｇμ、Ｉｇεには５つ）、軽鎖には２つ存在し、アミノ酸１００～１１０残基ごとに１つのループを成している。それらの立体構造は各ループ間で類似していて、構造単位又はドメインとよばれる。重鎖、軽鎖ともにアミノ末端（本明細書において「Ｎ末端」とも称する）に位置するドメインは可変領域とよばれ、同種動物の同一クラス（又はサブクラス）から産生された抗体であっても多様なアミノ酸配列を有し、抗体と抗原との結合特異性結合に関与することが知られている。可変領域よりも下流のＣ末端側のドメインのアミノ酸配列は、各クラス又はサブクラスごとにほぼ一定であり、定常領域とよばれている。重鎖は、Ｎ末端からカルボキシ末端（本明細書において「Ｃ末端」とも称する）に向かって重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）を有する。ＣＨはさらにＮ末端側からＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインの３つのドメインに分けられる。軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）を有する。

　ＶＨ及びＶＬに存在する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列は変化が非常に大きく、可変領域の可変性に寄与している。ＣＤＲは、重鎖と軽鎖のＮ末端それぞれにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の順番で存在するおよそ５～１０アミノ酸残基からなる領域であって、抗原結合部位を形成する。一方、可変領域のＣＤＲ以外の部分はフレームワーク領域（ＦＲ）とよばれ、ＦＲ１～４からなり、アミノ酸配列の変化は比較的少ない。

　抗体をタンパク質分解酵素のパパインで処理すると、３つの抗体断片が得られる。Ｎ末端側の２つの断片はＦａｂ（抗原結合断片、Ｆｒａｇｍｅｎｔ，ａｎｔｉｇｅｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ）領域と呼ばれている。本明細書において、「Ｆａｂ領域」とは、重鎖のＶＨとＣＨ１ドメイン及び軽鎖（ＶＬとＣＬ）からなる領域を指し、当該Ｆａｂ領域が構成する先端部分の抗原結合部位で抗原と結合する。本明細書において、「重鎖フラグメント」とは、Ｆａｂ領域を構成する重鎖のＶＨとＣＨ１ドメインからなるフラグメントを指す。また、Ｃ末端側の断片を「Ｆｃ（結晶化可能断片、Ｆｒａｇｍｅｎｔ，ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）領域」とよぶ。

　本明細書において、「抗原」とは一般的に用いられている意味で用いられ、特に、抗体や抗原結合フラグメント等の抗原結合タンパク質が特異的に結合し得る分子又は分子の一部を表す用語として用いられる。抗原はタンパク質、核酸等の分子であり得る。１つの抗原は、異なる抗体等と相互作用することができる１つ又はそれ以上のエピトープを有する場合もある。

　本明細書において「ＩｇＧ抗体」とは、２つのＦａｂ領域とＦｃ領域からなるＹ字型の構造を有する抗体をいう。１つの実施形態において、ＩｇＧ抗体の２つのＦａｂ領域は、同一のＶＨ及びＶＬ配列を含む。

　本明細書において、「抗原結合フラグメント」とは抗体に由来する抗原結合活性を有する少なくとも１つのポリペプチド鎖を含む分子である。代表的な抗原結合フラグメントとしては、一本鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントが挙げられる。ｓｃＦｖは、リンカーで連結されたＶＨとＶＬから構成される、一価の抗原結合フラグメントである。Ｆａｂフラグメントは、軽鎖と、重鎖のＶＨ、ＣＨ１ドメインを含むフラグメントから構成される、一価の抗原結合フラグメントである。Ｆａｂ’フラグメントは、軽鎖と、重鎖のＶＨ、ＣＨ１ドメインとヒンジ領域の一部とを含むフラグメントから構成される、一価の抗原結合フラグメントであり、このヒンジ領域の部分には重鎖間Ｓ－Ｓ結合を構成していたシステイン残基が含まれる。Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、Ｆａｂ’フラグメントがジスルフィド結合で繋がっている二価の分子である。一価とは、抗原結合部位を１つ含むことを、二価とは、抗原結合部位を２つ含むことを意味する。

　本明細書において、「二重特異性抗体」とは２つの異なる抗原に特異的に結合することができる抗体をいう。「抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体」とは、ＣＬＤＮ４に対する結合活性及びＣＤ１３７に対する結合活性を有する二重特異性抗体を意味する。

　本明細書において、「抗体」とは文脈上特に限定されない限り、完全長の抗体、抗原結合フラグメント、及びあらゆる構造の二重特異性抗体を含む用語として使用される。

　本明細書において「ヒト抗体」とはヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を有する抗体を表す。本明細書において「ヒト化抗体」は、ＣＤＲ以外のアミノ酸残基の一部、大部分、又は全部がヒト免疫グロブリン分子に由来するアミノ酸残基で置換された抗体を表す。ヒト化の方法は特に制限されないが、例えば、米国特許第５２２５５３９号、米国特許第６１８０３７０号等を参照してヒト化抗体を作製することができる。

　本明細書中で使用される抗体のアミノ酸残基番号はＫａｂａｔナンバリング又はＥＵインデックス（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ　Ｅｄ.、１９９１：ＮＩＨ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ：Ｎｏ．９１－３２４２）を指定することで、それらのナンバリングシステムに従って規定することができる。

　本明細書において、「連結」、「連結体」又は「連結された」とは、複数の成分（例えば、ＩｇＧ抗体及びｓｃＦｖ）が、直接又は仲介物（例えば、ペプチドリンカー）を介して結合していることを意味する。本明細書において「ペプチドリンカー」とは、複数の成分を連結するために用いられる、遺伝子工学的手法により導入され得る１以上の任意のアミノ酸配列を意味する。本発明で使用されるペプチドリンカーの長さは特に限定されず、目的に応じて当業者が適宜選択することが可能である。

　本明細書において、「対象」とは疾患の予防又は治療を必要とするヒト又はその他の動物を意味する。１つの実施形態において、対象は疾患の予防又は治療を必要とするヒトである。１つの実施形態において、対象はがんを有するヒトである。

　本明細書において、「治療」とは疾患の症状、病状、疾患と関連する生化学的徴候の進行、発症、重篤化又は再発を、回復、緩和、改善、抑制又は遅延させる目的で対象に対して行われる何らかの治療介入（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ）、処置、又は対象への有効成分の投与を意味する。

　本明細書において、「有効成分」とは疾患の予防又は治療に用いる医薬組成物、医薬品等に含まれる物質のうち、何らかの生理活性を示すものを意味する。１つの実施形態において、有効成分は抗体、低分子化合物、核酸、融合タンパク質、ペプチドである。１つの実施形態において、有効成分は抗体である。１つの実施形態において、有効成分は二重特異性抗体である。

　本明細書において、「医薬組成物」とは、有効成分及び薬学的に許容される賦形剤（例えば薬剤用賦形剤や薬剤用担体等が含まれるがこれに限らない）を含み、対象の治療を目的として処方される薬剤である。

　本明細書において、「併用」、「組み合わせ」又は「組み合わせて使用」とは疾患の予防又は治療のために、同一の対象に、複数種の有効成分を同時に、連続的に又は逐次的に投与することを意味する。当該複数種の有効成分は、同一の医薬組成物中に含まれていてもよく、異なる医薬組成物中に別々に含まれていてもよい。本明細書において、「同時」とは複数種の有効成分を一方の投与期間内に並行して投与することを意味し、「連続的」とは一方の有効成分の投与が終了した後に期間を置かずして他方の有効成分の投与を行うことを意味し、「逐次的」とは複数種の有効成分を投与スケジュールに準じて順に投与することを意味する。

　本明細書において、薬剤の「有効量」とはそれが投与される細胞又は組織に生理学的変化をもたらすために必要な薬剤の量を指す。

　本明細書において、「ＰＤ－１シグナル阻害剤」とはＰＤ－１による免疫細胞活性化抑制を解除する薬剤を意味する。ＰＤ－１シグナル阻害剤は、ＰＤ－１又はそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に結合して免疫抑制シグナルを阻害することにより、ＰＤ－１による免疫チェックポイントの機能を阻害し得る。ＰＤ－１シグナル阻害剤としては、ＰＤ－１シグナルを遮断する効果を有する限り、どのような物質であっても良く、例えば、抗体、低分子化合物、核酸（ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、又は、天然若しくは人工の核酸を含んでいてもよい）、融合タンパク質、ペプチド等であってよい。例えば、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ２抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２との結合を阻害することにより、ＰＤ－１シグナルを阻害することができる（Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｏｎ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ｐａｔｅｎｔｓ、２０１６：Ｖｏｌ．２６：ｐ．５５５－５６４）。

　本発明は、以下の（１）～（４）に関する：
（１）抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物（本明細書中、「本発明の医薬組成物」とも称する）；
（２）対象のがんを治療するために、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体；
（３）抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を対象に投与することを含むがんの治療方法（本明細書中、「本発明の治療方法」とも称する）；又は
（４）対象のがんを治療するためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される医薬組成物の製造のための、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用。

＜本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体＞
　本発明で使用されるＣＬＤＮ４及びＣＤ１３７に結合する二重特異性抗体（「本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体」とも称する）は、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。

　本明細書において、「抗ＣＬＤＮ４抗体」はヒトＣＬＤＮ４に結合可能な抗体であり、「抗ＣＤ１３７抗体」はヒトＣＤ１３７に結合可能な抗体である。ヒトＣＬＤＮ４又はヒトＣＤ１３７に結合するか否かは、公知の結合活性測定方法を用いて確認することができる。結合活性を測定する方法としては、例えば、Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ　ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ　Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）法、フローサイトメトリー法等の方法が挙げられる。ＥＬＩＳＡ法又はフローサイトメトリー法は、当業者が通常用いる方法にて実施することができる。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ＣＬＤＮ４及びＣＤ１３７に結合する限りにおいてどのような構造であってもよく、例えば、非特許文献６に記載されている構造を有する二重特異性抗体が挙げられる。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体のＦａｂ領域と抗ＣＤ１３７抗体のＦａｂ領域が連結された連結体、ＩｇＧ抗体型の抗ＣＬＤＮ４抗体（「抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体」とも称する）及びＩｇＧ抗体型の抗ＣＤ１３７抗体（「抗ＣＤ１３７　ＩｇＧ抗体」とも称する）の連結体、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントの連結体、抗ＣＬＤＮ４抗体の抗原結合フラグメント及び抗ＣＤ１３７　ＩｇＧ抗体の連結体、又は抗ＣＬＤＮ４抗体の抗原結合フラグメント及び抗ＣＤ１３７抗体の抗原結合フラグメントの連結体であってよい。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域、並びに、配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４抗体はＩｇＧ抗体であってよい。抗ＣＬＤＮ４抗体に含まれる重鎖定常領域としては、Ｉｇγ、Ｉｇμ、Ｉｇα、Ｉｇδ又はＩｇεのいずれの定常領域も選択可能である。Ｉｇγとしては、例えば、Ｉｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３又はＩｇγ４から選択することが可能である。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４抗体に含まれる軽鎖定常領域としては、Ｉｇλ又はＩｇκのいずれの定常領域も選択可能である。１つの実施形態において、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び軽鎖は、それぞれ、ヒトＩｇγ１及びＩｇκである。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は完全長の抗ＣＬＤＮ４抗体を含む。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４抗体は、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）である。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体がＦｃ領域を含む場合、該二重特異性抗体におけるＦｃ領域は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）や補体依存性傷害活性（ＣＤＣ）を低下させる変異を含んでもよい。Ｌ２３４Ａとは、ヒトＩｇγ１定常領域のアミノ酸２３４位のロイシンのアラニンへの置換である。Ｌ２３５Ａとは、ヒトＩｇγ１定常領域のアミノ酸２３５位のロイシンのアラニンへの置換である。ヒトＩｇγ１定常領域Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａのアミノ酸変異を「ＬＡＬＡ変異」という。当該変異は、抗体のＡＤＣＣやＣＤＣを低下させることが知られている（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９２：Ｖｏｌ．２９：ｐ．６３３－６３９、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００：Ｖｏｌ．１６４（８）：ｐ．４１７８－４１８４）。Ｐ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓとは、ヒトＩｇγ１定常領域のアミノ酸３３１位のプロリンのグリシン又はセリンへの置換である。当該変異は、抗体のＣＤＣを低下させることが知られている（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００：Ｖｏｌ．１６４（８）：ｐ．４１７８－４１８４）。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａのアミノ酸変異（ＬＡＬＡ変異）を含むＦｃ領域を含む。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体はＰ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓ変異のいずれかを含むＦｃ領域を含む。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体は、ＬＡＬＡ変異及びＰ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓ変異のいずれかの変異を含むＦｃ領域を含む。１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体は、ＬＡＬＡ変異及びＰ３３１Ｇ変異のいずれか又は両方の変異を含むＦｃ領域を含む。

　なお、本明細書において、ＬＡＬＡ変異、Ｐ３３１Ｇ又はＰ３３１Ｓ変異等のアミノ酸変異の記載は、ヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置に基づくものである。例えば、前述の通り、Ｌ２３４Ａとは、ヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸２３４位のロイシンのアラニンへの置換である。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸番号１から４５３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖からなるＩｇＧ抗体である。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域は配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域は配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む。

　１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体に含まれる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域は配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域は配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＤ１３７抗体のｓｃＦｖ（本明細書中、「抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ」とも称する）を含む。

　抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖにおいて、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結するリンカーの種類及び長さは特に限定されず、当業者が適宜選択することが可能である。リンカーとしては、ペプチドリンカーを用いてもよい。好ましい長さは５アミノ酸以上（上限は特に限定されないが、通常、３０アミノ酸以下、好ましくは２０アミノ酸以下）であり、特に好ましくは１５アミノ酸である。リンカーとして、例えば、グリシン－セリンリンカー（ＧＳリンカー）や、グリシン－リジン－プロリン－グリシン－セリンリンカー（ＧＫＰＧＳリンカー）を使用することができる。本発明におけるリンカーとしては、例えば、以下が挙げられる。
Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号６）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号７）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号８）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号９）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号１０）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号１１）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号１２）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号１３）
（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）ｎ
Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号１４）
（Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
　上記のｎは１以上の整数を示す。また、ある態様では、上記のｎは１～１０、２～８、又は２～６である。リンカーの長さや配列は目的に応じて当業者が適宜選択することができる。

　１つの実施形態において、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖにおいて使用されるリンカーは、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎのＧＳリンカーである。

　１つの実施形態において、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖにおいて使用されるリンカーは、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）４のＧＳリンカーである。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域がＧＳリンカーを介して連結された抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含む。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含む。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体と抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含む。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体において、抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントと抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）はリンカーで連結されていてもよい。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体と抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖがリンカーを介して連結されている。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている。抗ＣＬＤＮ４抗体又はその抗原結合フラグメントと抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメントを連結するリンカーの種類及び長さは特に限定されず、当業者が適宜選択することが可能である。リンカーとしては、ペプチドリンカーを用いてもよい。好ましい長さは５アミノ酸以上（上限は特に限定されないが、通常、３０アミノ酸以下、好ましくは２０アミノ酸以下）であり、特に好ましくは１０アミノ酸である。ペプチドリンカーとして、例えば、グリシン－セリンリンカー（ＧＳリンカー）や、グリシン－リジン－プロリン－グリシン－セリンリンカー（ＧＫＰＧＳリンカー）を使用することができる。本発明におけるリンカーとしては、例えば、以下が挙げられる。
Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号５）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号６）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号７）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号８）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号９）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号１０）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号１１）
Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ　（配列番号１２）
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号１３）
（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）ｎ
Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ　（配列番号１４）
（Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ
　上記のｎは１以上の整数を示す。また、ある態様では、上記のｎは１～１０、２～８、又は２～６である。ペプチドリンカーの長さや配列は目的に応じて当業者が適宜選択することができる。

　１つの実施形態において、抗ＣＬＤＮ４抗体又その抗原結合フラグメントと抗ＣＤ１３７抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を連結するペプチドリンカーとして使用されるリンカーは、配列番号１３のアミノ酸配列からなるリンカーである。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖、並びに配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに、配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域、並びに配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、二重特異性抗体である。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、二重特異性抗体である。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸番号１から４５３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、二重特異性抗体である。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む、二重特異性抗体である。

　本明細書において「翻訳後修飾」とは、抗体を細胞内で発現させた場合に抗体が翻訳後に修飾を受けることをいう。翻訳後修飾の例として、重鎖Ｎ末端のグルタミン又はグルタミン酸のピログルタミル化、グリコシル化、酸化、脱アミド化、糖化等の修飾や、重鎖Ｃ末端のリジンのカルボキシペプチダーゼによる切断によるリジン欠失が挙げられる。種々の抗体において、このような翻訳後修飾が生じることが知られている（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、２００８：Ｖｏｌ．９７：ｐ．２４２６－２４４７）。

　１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、翻訳後修飾されていてもよい。１つの実施形態において、翻訳後修飾は重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端リジン欠失である。Ｎ末端のピログルタミル化又はＣ末端リジン欠失による翻訳後修飾が抗体の活性に影響を及ぼすものではないことは当該分野で知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００６：Ｖｏｌ．３４８：ｐ．２４－３９）。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ヒトＣＬＤＮ４及びヒトＣＤ１３７に結合する。ヒトＣＬＤＮ４又はヒトＣＤ１３７に結合するか否かは、公知の結合活性測定方法を用いて確認することができる。結合活性を測定する方法としては、例えば、Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ　ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ　Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）法、フローサイトメトリー法等の方法が挙げられる。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、当業者であれば、本明細書に開示される抗ＣＬＤＮ４抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列情報等に基づき、当該分野で公知の方法にて作製することができる。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体において、抗ＣＬＤＮ４抗体及び抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、ヒト抗体由来、ヒト化抗体由来、又はそれらの組み合わせであってよい。ヒト化抗体の作製にあたっては、当業者に周知の方法を用いて、適宜バックミューテーションを導入してもよい（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２０１５：Ｖｏｌ．３１：ｐ．４３４－４３５）。本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、特に限定されるものではないが、例えば、ＰＣＴ／ＪＰ２０２２／１８３５０に記載の方法に従い製造することができる。ＰＣＴ／ＪＰ２０２２／１８３５０に記載の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の作製方法（＜本発明の二重特異性抗体のポリヌクレオチド＞、＜本発明の二重特異性抗体の発現ベクター＞、＜本発明の宿主細胞＞、＜本発明の二重特異性抗体を生産する方法＞及び実施例を含むがこれに限らない）は、本明細書において参照により援用される（Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）。

＜本発明の医薬組成物＞
　本発明の医薬組成物は、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を使用して製造され、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含む。本発明の医薬組成物は、当該分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用される方法によって調製することができる。これら医薬組成物の剤型の例としては、例えば、注射剤、点滴用剤等の非経口剤が挙げられ、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与等により投与することができる。製剤化にあたっては、薬学的に許容される範囲で、これら剤型に応じた賦形剤、担体、添加剤等を使用することができる。また、本発明の医薬組成物は、前述の通り、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び薬学的に許容される賦形剤を含むが、１つの実施形態において、ＰＤ－１シグナル阻害剤をさらに含み得る。

　本発明の医薬組成物には、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の翻訳後修飾体を含み得る。例えば、Ｃ末端リジンの欠失やＮ末端のピログルタミル化の両方又は一方を受けた抗体等を含有する医薬組成物も本発明に含まれる。

　１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域、配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域、並びに、配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該二重特異性抗体の翻訳後修飾体を含有する医薬組成物である。

　１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該二重特異性抗体の翻訳後修飾体を含有する医薬組成物である。

　１つの実施形態において、本発明の医薬組成物は、配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体及び／又は当該二重特異性抗体の翻訳後修飾体を含有する医薬組成物である。

　製剤化における本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の添加量は、患者の症状の程度や年齢、使用する製剤の剤型、あるいは抗体の結合力価等により異なるが、例えば、ヒトへの投与量換算で０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇ程度の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を製剤に用いることができる。１つの実施形態において、製剤化における本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の添加量は、ヒトへの投与量換算で０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇの範囲である。１つの実施形態において、製剤化における本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の添加量は、ヒトへの投与量換算で０．００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。１つの実施形態において、製剤化における本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の添加量は、ヒトへの投与量換算で０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。１つの実施形態において、製剤化における本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の添加量は、好ましくは、ヒトへの投与量換算で０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。

＜ＰＤ－１シグナル阻害剤＞
　本発明において、ＰＤ－１シグナル阻害剤は、対象のがんの治療のために、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体又は本発明の医薬組成物と組み合わせて使用される。
　当該ＰＤ－１シグナル阻害剤の作用機序及び治療モダリティは、ＰＤ－１シグナルを遮断する限りにおいて特に限定されない。作用機序としては、例えば、ＰＤ－１シグナルに関与する分子間の結合阻害、ＰＤ－１シグナル分子の発現量低下（例えば、タンパク質の生成阻害又は分解誘導等）等の作用機序であってよい。治療モダリティとしては、例えば、抗体、低分子化合物、核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ、天然又は人工の核酸を含んでいてもよい）、融合タンパク質、ペプチド、その他の治療モダリティであってよい。

　ＰＤ－１シグナル阻害剤は、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２からなる群から選択される１以上のタンパク質の結合阻害作用、ＰＤ－１シグナル分子の発現量等を指標にした発現低下作用等を測定する方法により取得することができる。例えば、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２との結合阻害剤は、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に結合する阻害剤を得た後に、得られた阻害剤をＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２との結合を阻害する能力で選別することができる。阻害剤のタンパク質への結合は、例えば、フローサイトメトリー法（ＦＣＭ）、ＥＬＩＳＡ法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）、サーマルシフトアッセイ法（ＴＳＡ）、等温滴定カロリメトリー法（ＩＴＣ）等の当業者に周知の方法を用いて評価することができる。また、例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２等のＰＤ－１シグナル分子の発現量を低下させる阻害剤は、細胞におけるＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２等のタンパク質量を指標にして取得できる。ＰＤ－１シグナルの阻害作用は、Ｔ細胞増殖ＩＦＮ－γ放出又はレポーターアッセイ等の作用により確認することができる。あるタンパク質の発現量を低下させる阻害剤の作用は、例えば、ＥＬＩＳＡ法、定量ＰＣＲ法、ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ法、生細胞イメージング法等の当業者に周知の方法を用いて確認することができる。

　ＰＤ－１シグナル阻害剤として、例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体等のＰＤ－１シグナルを阻害する抗体が挙げられる。そのような抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体、並びにそれらの抗原結合フラグメントであってよい。公知の抗ＰＤ－１抗体としては、限定されるものではないが、例えば、米国特許第８００８４４９号、米国特許第６８０８７１０号、米国特許第７４８８８０２号、米国特許第８１６８７５７号及び米国特許第８３５４５０９号、並びに国際公開第２００６／１２１１６８号及び国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載されている抗体がある。公知の抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、限定されるものではないが、例えば、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、国際公開第２０１１／０６６３８９号、国際公開第２０１３／０７９１７４号及び米国特許第８２１７１４９号に記載されている抗体がある。１つの実施形態において、本発明において使用されるＰＤ－１シグナル阻害剤は抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ２抗体、又はこれらの抗原結合フラグメントである。１つの実施形態において、本発明において使用されるＰＤ－１シグナル阻害剤は抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体である。１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、スパルタリズマブ、セミプリマブ等の抗ＰＤ－１抗体であってよい。１つの実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ等の抗ＰＤ－Ｌ１抗体であってよい。

　ＰＤ－１シグナル阻害剤として、例えば、ＡＭＰ－２２４（国際公開第２０１０／０２７８２７号及び国際公開第２０１１／０６６３４２号）、ＢＭＳ－１１６６（Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１７：Ｖｏｌ．８：ｐ．７２１６７－７２１８１）等の、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を阻害する融合タンパク質や低分子化合物も挙げられる。様々なＰＤ－１シグナル阻害剤が当該技術分野で公知である（非特許文献８）。

＜本発明の治療方法＞
　本発明の治療方法は、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を対象に投与することを含む、がんの治療方法（「本発明の治療方法」と称する）である。

　１つの実施形態において、本発明の治療方法は、対象に本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体をＰＤ－１シグナル阻害剤と同時に、連続的に又は逐次的に組み合わせて使用（投与）されることを特徴とする。

　１つの実施形態において、本発明の治療方法は、対象に本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が（ｉ）同一の医薬組成物に含まれており同時に投与される、又は（ｉｉ）別々の医薬組成物であり、同時に、連続的に若しくは逐次的に組み合わせて使用されることを特徴とする。

　１つの実施形態において、本発明の治療方法は、対象に本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が（ｉ）同一の医薬組成物に含まれており同時に投与される、又は（ｉｉ）別々の医薬組成物であり同日に投与されることを特徴とする。

　１つの実施形態において、本発明の治療方法は、（ａ）対象に本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の投与完了後にＰＤ－１シグナル阻害剤の投与を開始する、又は（ｂ）対象にＰＤ－１シグナル阻害剤の投与完了後に本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の投与を開始する連続的な使用であることを特徴とする。

　１つの実施形態において、本発明の治療方法は、対象に対して投与サイクルを含む投与計画に従って本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤の投与が行わる逐次的な使用であることを特徴とする。１つの実施形態において、本発明の治療方法は、少なくとも１つの投与サイクル又は全ての投与サイクルにおいて、対象への抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体又は本発明の医薬組成物の投与を開始し、その後にＰＤ－１シグナル阻害剤の投与を開始することができることを特徴とする。１つの実施形態において、本発明の治療方法は、少なくとも１つの投与サイクル又は全ての投与サイクルにおいて、対象へＰＤ－１シグナル阻害剤の投与を開始し、その後に抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体又は本発明の医薬組成物の投与を開始することができることを特徴とする。

＜治療用途＞
　本発明の医薬組成物及び治療方法等により治療されるがんは、固形がん又は血液がんのいずれでもよい。本発明により治療されるがんは、原発性又は転移性のいずれかでも良い。本発明により治療されるがんは、特に限定されないが、例えば、種々の腹膜播種がん、胃がん、肺がん、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ細胞リンパ腫等の血液がん、骨髄異形成症候群、腺がん、扁平上皮がん、腺扁平上皮がん、未分化がん、大細胞がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、中皮腫、皮膚がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、乳がん、前立腺がん、膀胱がん、膣がん、頸部がん、頭頸部がん、子宮がん、子宮頸がん、肝臓がん、胆のうがん、胆管がん、腎臓がん、膵臓がん、結腸がん、大腸がん、直腸がん、小腸がん、胃がん、食道がん、精巣がん、卵巣がん、脳腫瘍等の固形がん、並びに骨組織、軟骨組織、脂肪組織、筋組織、血管組織及び造血組織のがんの他、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、軟部組織肉腫等の肉腫や、膠芽腫、多形性膠芽腫、肝芽腫、髄芽腫、腎芽腫、神経芽腫、膵芽腫、胸膜肺芽腫、網膜芽腫などの芽腫等が挙げられる。

　１つの実施形態において、本発明による治療の対象となるがんは、大腸がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、卵巣がん、乳がん、前立腺がんである。１つの実施形態において、本発明による治療の対象となるがんは、正常組織と比較してＣＬＤＮ４が高発現しているがんである。本発明による治療の対象となるがんは、好ましくは、正常組織と比較してＣＬＤＮ４が高発現しているがん、又は大腸がん、直腸がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、卵巣がん、乳がん、前立腺がんからなる群から選択されるがんである。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体又はＰＤ－１シグナル阻害剤の対象への投与量は、対象の症状の程度や年齢、使用する抗体、医薬組成物、阻害剤等の剤型、あるいは有効成分の活性強度等により異なるが、例えば、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇ程度を用いることができる。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の対象への投与量は０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇである。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の対象への投与量は０．００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇである。１つの実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の対象への投与量は０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。

　本発明についてさらに理解を得るために参照する特定の実施例をここに提供するが、これらは例示目的とするものであって、本発明を限定するものではない。

［実施例１：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の作製］
［実施例１－１：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体をコードするベクターの作製］
　抗ＣＬＤＮ４抗体であるＫＭ３９００は他のクローディンファミリー分子であるＣＬＤＮ６等に比べてＣＬＤＮ４に選択的に結合することが報告されている（特許文献１）。そこで、報告に基づきＫＭ３９００のヒト化抗体の作製を行った。
　具体的には、ＫＭ３９００の可変領域のヒト化アミノ酸配列に基づき、ヒトＩｇγ１の定常領域及びヒトＩｇκの定常領域の配列からヒト化抗体の設計を行なった。ヒトＩｇγ１定常領域には、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｇのアミノ酸変異を導入し抗ＣＬＤＮ４抗体配列を設計した。設計したヒト化抗ＣＬＤＮ４抗体を「ｈＫＭ３９００」と称する。
　ＡｌｉｖａＭａｂマウス（Ａｂｌｅｘｉｓ社、米国特許９３４６８７３号）に、ＰＣＴ／ＪＰ２０２２／１８３５０の実施例３に記載のヒトＣＤ１３７－ヒトＦｃ融合タンパク質と免疫アジュバントを数回投与して免疫を行った。常法に従い、免疫したマウスのリンパ節からリンパ球を回収し、マウスミエローマ細胞ＳＰ２／０と細胞融合することでハイブリドーマを作製した。自動ピッキング装置にてハイブリドーマの単コロニーを単離し、モノクローン化ハイブリドーマ細胞（以下「クローン」と称する）を取得した。ヒトＣＤ１３７に結合する抗体を産生するクローンのスクリーニングを行い、抗ＣＤ１３７抗体（以下「Ａ２－３２」と称する）を産生するクローンを取得した。さらにこのクローンの細胞溶解液からｃＤＮＡを合成し、抗体塩基配列を同定した。取得したＡ２－３２の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列に基づき抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを設計した。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を、ｈＫＭ３９００のアミノ酸配列及び設計した抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ酸配列に基づき設計した。抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、ＩｇＧ１型のｈＫＭ３９００の重鎖Ｃ末端にＧＳリンカーが連結されており、ＧＳリンカーのＣ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのＮ末端が結合している。設計した抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体は、配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド及び配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖からなる。設計した抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを作製し、それぞれ常法に従いｐｃＤＮＡ３．４　ＴＯＰＯベクター（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）へ挿入した。作製した２つのベクターを「抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体発現ベクター」と称する。

［実施例１－２：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の作製］
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体発現ベクターを用いて、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を作製した。具体的には、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ　ＣＨＯ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ２９１２９）を用いてＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａ２９１２７）に抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体発現ベクターを導入し、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を培養上清中に分泌させた。得られた培養上清からＭａｂＳｅｌｅｃｔ　ＳｕＲｅ（Ｃｙｔｉｖａ社、１７－５４３８－０２）を用いたアフィニティ精製法、更に、ＨｉＬｏａｄ　２６／６００　ｓｕｐｅｒｄｅｘ　２００　ｐｇ（ＧＥヘルスケア社、２８－９８９３－３６）を用いたサイズ排除クロマトグラフィー精製法により、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であるｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを精製した。
　実施例１にて作製した抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であるｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを「抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体」と称することもある。

［実施例２：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体のｉｎ　ｖｉｔｒｏ併用効果］
　ヒトＯＫＴ３ｓｃＦｖ発現ＬＣＬＣ－１０３Ｈ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞を用いた共培養系において、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体のｉｎ　ｖｉｔｒｏ併用効果の検討を行った。

［実施例２－１：Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の調製］
　ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ社、Ｒ８７５８）に終濃度１０％のＦＢＳ（Ｃｙｔｉｖａ社、ＳＨ３００８４．０３）と、終濃度１％のペニシリンストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１５０７０－０６３）を加えたものを「培養培地」と称する。終濃度１μｇ／ｍＬとなるように抗ＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３１７３２５）を１５０ｍｍ／Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｄｉｓｈ（ＩＷＡＫＩ社、３０３０－１５０）（以下「ディッシュ」と称する）に添加し、抗ＣＤ３抗体を固相化した。ＰａｎＴ　Ｃｅｌｌ　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ，ｈｕｍａｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ　Ｂｉｏｔｅｃ社、１３０－０９６－５３５）を用い、メーカー推奨プロトコルに従ってヒト末梢血単核細胞（ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ）（ＬＯＮＺＡ社、ＣＣ－２７０２）からＰａｎＴ細胞（ＣＤ４陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞の両方を含む、以下「ＰａｎＴ細胞」と称する）を単離した。単離したＰａｎＴ細胞を遠心分離し、上清を取り除いた後に培養培地に懸濁した。前述の抗ＣＤ３抗体を固相化したディッシュに、培養培地に懸濁したＰａｎＴ細胞を全量播種した。更に終濃度２００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ－２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ社、２００－２）及び終濃度４μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、３０２９３４）を添加し、３７℃、５％　ＣＯ_２インキュベーターにて培養を行った。培養開始から３日後にＰａｎＴ細胞を回収し、回収したＰａｎＴ細胞を培養培地に懸濁してディッシュに播種した。更に終濃度２００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ－２を添加し、３７℃、５％　ＣＯ_２インキュベーターにて培養を行った。その４日後、ＰａｎＴ細胞を全量回収して遠心分離し、上清を取り除いた後にセルバンカー（Ｔａｋａｒａ社、ＣＢ０１１）に再懸濁し、チューブに分取して－８０℃で凍結保存した。ここで凍結保存したＰａｎＴ細胞を、本明細書において「Ｅｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞」と称する。

［実施例２－２：ヒトＣＤ３抗体単鎖可変領域フラグメント（ＯＫＴ３ｓｃＦｖ）発現ＬＣＬＣ－１０３Ｈ細胞の取得］
　ヒトＣＬＤＮ４を発現するヒト大細胞肺がん細胞株のＬＣＬＣ－１０３Ｈ細胞は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ　Ｓａｍｍｌｕｎｇ　ｖｏｎ　Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ　ｕｎｄ　Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（ＤＳＭＺ、ＡＣＣ３８４）から入手した。ヒト大細胞肺がん細胞株のＬＣＬＣ－１０３Ｈ細胞を培養培地にて３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。常法に従い遺伝子合成により作製したヒトＯＫＴ３ｓｃＦｖ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１０：３６２：ｐ．１３１－１４１）をコードするポリヌクレオチドをｐｃＤＮＡ３．４－ＴＯＰＯベクターにサブクローニングした。作製したヒトＯＫＴ３ｓｃＦｖ発現ベクターをＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１５３３８－１００）を用いてメーカー推奨のプロトコルに従いＬＣＬＣ－１０３Ｈ細胞にリポフェクションした。終濃度６００μｇ／ｍＬのＧｅｎｅｔｉｃｉｎ　Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、１０１３１－０２７）を添加した培養培地での選択培養及び限界希釈法によりヒトＯＫＴ３ｓｃＦｖを安定発現するＬＣＬＣ－１０３Ｈ細胞クローン（以下「ＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞」と称する）を取得した。

［実施例２－３：がん細胞とＴ細胞の共培養系での抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体のｉｎ　ｖｉｔｒｏインターフェロン－γ産生促進作用における併用効果］
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体のＴ細胞活性増強作用をＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系にてインターフェロンγ産生促進機能を指標に評価した。ＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞を培養培地にて２×１０^５個／ｍＬに調製し、平底９６ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ社、４０２０－０１０）に５０μＬずつ播種し、３７℃、５％　ＣＯ_２インキュベーターにて培養した。翌日、培養培地にて１．３２×１０^６個／ｍＬに調製したＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞を、培養中の平底９６ウェルプレートに３０μＬずつ播種した。被験抗体として実施例１で取得したｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ及び抗ヒトＰＤ－１抗体であるニボルマブを用いた。ニボルマブのアミノ酸配列設計は、国際公開第２０１４／０５５６４８号に記載のニボルマブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をもとに行った。設計したアミノ酸配列から国際公開第２０２１／２４１６１６号の実施例１１に記載の方法に準じてニボルマブを取得した。アイソタイプコントロール（図１－１中では「アイソタイプ」と称する）として抗リゾチーム抗体を調製して使用した。単剤条件として、培養培地で最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから約３倍公比で段階希釈したｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ、又は培養培地で最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから約３倍公比で段階希釈したニボルマブを添加した。また併用条件として、濃度５００００ｎｇ／ｍＬのニボルマブを含む培養培地で最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから約３倍公比で段階希釈したｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを２０μＬずつ添加した。添加後のニボルマブの最終濃度は１０μｇ／ｍＬである。添加後、３７℃、５％　ＣＯ_２インキュベーター培養で培養した。４日後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ　インターフェロン－γ測定キット（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ社、ＡＬ２１７Ｃ）を用いてメーカー推奨のプロトコルに従って培養上清中のインターフェロン－γ産生量を測定した。図１－１にインターフェロン－γ産生量を示す。各条件について平均値及び標準偏差を算出した。ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ及びニボルマブはヒトＣＬＤＮ４発現がん細胞株とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系においてインターフェロン－γ産生促進作用を示した。ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨとニボルマブの併用によるインターフェロン－γ産生促進作用は、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ又はニボルマブ単剤より強かった。

［実施例３：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体のｉｎ　ｖｉｔｒｏ併用効果］
　国際公開第２０１２／１５５０１９号（配列番号２２及び２３）に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアテゾリズマブ抗体の配列に基づき、Ｆｃ領域に変異が入ったヒトＩｇγ１定常領域の配列を用いた抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアテゾリズマブアナログ（以下、「アテゾリズマブアナログ」と称する）を設計し、ＰＣＴ／ＪＰ２０２２／１８３５０の実施例４－２に記載の方法に準じて抗体を取得した。実施例２で取得したＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ｐａｎＴ細胞を用いた共培養系において、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨとアテゾリズマブアナログのｉｎ　ｖｉｔｒｏ併用効果の検討を行った。具体的にはｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨとアテゾリズマブアナログのＴ細胞活性増強作用をＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系にてインターフェロンγ産生量を指標に評価した。ＬＣＬＣ－ＯＫＴ３ｓｃＦｖ細胞を培養培地にて２×１０^５個／ｍＬに調製し、平底９６ウェルプレートに５０μＬずつ播種し、３７℃、５％　ＣＯ_２インキュベーターにて培養した。翌日、培養培地にて１．３３×１０^６個／ｍＬに調製したＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞を、培養中の平底９６ウェルプレートに３０μＬずつ播種した。被験抗体として実施例１で取得したｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ及びアテゾリズマブアナログを用いた。アイソタイプコントロール（図１－２中では「アイソタイプ」と称する）として抗リゾチーム抗体を調製して使用した。単剤条件として、培養培地に最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから約３倍公比で段階希釈したｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ、又は培養培地に最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから約３倍公比で段階希釈したアテゾリズマブアナログを添加した。また併用条件として、濃度５００００ｎｇ／ｍＬのアテゾリズマブアナログを含む培養培地に最高濃度５００００ｎｇ／ｍＬから約３倍公比で段階希釈したｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを２０μＬずつ添加した。添加後のアテゾリズマブアナログの最終濃度は１０μｇ／ｍＬである。添加後、３７℃、５％　ＣＯ_２インキュベーター培養で培養した。５日後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ　インターフェロン－γ測定キット（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ社、ＡＬ２１７Ｃ）を用いてメーカー推奨のプロトコルに従って培養上清中のインターフェロン－γ産生量を測定した。図１－２にインターフェロン－γ産生量を示す。各条件について平均値及び標準偏差を算出した。ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ及びアテゾリズマブアナログはヒトＣＬＤＮ４発現がん細胞株とＥｘｐａｎｄｅｄ　ＰａｎＴ細胞の共培養系においてインターフェロン－γ産生促進作用を示した。ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨとアテゾリズマブアナログの併用によるインターフェロン－γ産生促進作用は、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ又はアテゾリズマブアナログの単剤より強かった。

［実施例４：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗マウスＰＤ－１抗体のｉｎ　ｖｉｖｏ併用効果］
　ヒトＣＬＤＮ４発現Ｂ１６－Ｆ１０細胞を移植したＢ－ｈ４－１ＢＢマウス（ヒトＣＤ１３７ノックインマウス）を用いて抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ヒトＰＤ－１抗体のｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍効果の検討を行った。

［実施例４－１：ヒトＣＬＤＮ４発現Ｂ１６－Ｆ１０細胞の構築］
　マウスメラノーマ細胞株のＢ１６－Ｆ１０細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－６４７５）から入手した。終濃度１０％非働化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｃｙｔｉｖａ社、ＳＨ３００８４．０３）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＳＩＧＭＡ社、Ｄ６４２９）（調製後の培地を以下、「イーグル培養培地」と称する）にて３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。ＣＬＤＮ４　（Ｍｙｃ－ＤＤＫ－ｔａｇｇｅｄ）－Ｈｕｍａｎ　ｃｌａｕｄｉｎ　４　（ＣＬＤＮ４）（ＯＲＩＧＥＮＥ社、ＲＣ２００４９０）をｊｅｔＰＲＩＭＥ（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ、１１４－１５）を用いてＢ１６－Ｆ１０細胞に導入した。終濃度１ｍｇ／ｍＬのＧ４１８（ナカライテスク社、０９３８０－４４）を添加したイーグル培養培地での選択によりヒトＣＬＤＮ４を安定発現するＢ１６－Ｆ１０細胞クローン（以下「ヒトＣＬＤＮ４発現Ｂ１６－Ｆ１０細胞」と称する）を取得した。

［実施例４－２：抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗マウスＰＤ－１抗体のｉｎ　ｖｉｖｏ抗腫瘍作用における併用効果］
　Ｂ－ｈ４－１ＢＢ雄性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６－Ｔｎｆｒｓｆ９^{ｔｍ１（Ｔｎｆｒｓｆ９）}／Ｂｃｇｅｎ；Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ社、１１０００４）（以下「マウス」と称する）を入手して繁殖させた。ヒトＣＬＤＮ４発現Ｂ１６－Ｆ１０細胞をＰＢＳ（－）（ＷＡＫＯ社、０４５－２９７９５）に懸濁し、４×１０^６個／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。６週齢のマウスの背部の皮下に細胞懸濁液を２×１０^５細胞／５０μＬずつ接種した。細胞接種３日後にノギス（ミツトヨ社、ＣＤ－１５ＡＸＲ）を用いて腫瘍径を測定した。腫瘍体積［ｍｍ^３］の計算には次式を用いた。
［腫瘍体積（ｍｍ^３）］　＝　［腫瘍の長径（ｍｍ）］　×　［腫瘍の短径（ｍｍ）］^２　×　０．５

　腫瘍体積が各群均等になるように細胞接種したマウスを群分けし（ｎ＝１０）、被験抗体の投与を開始した。投与の初日を０日目と定義した。被験抗体として実施例１で取得した抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であるｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ、抗ＰＤ－１抗体として抗マウスＰＤ－１抗体（Ｂｉｏ　Ｘ　Ｃｅｌｌ、ＢＥ０１４６）を用いた。ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨのアイソタイプコントロール抗体として抗リゾチーム抗体を、抗マウスＰＤ－１抗体のアイソタイプコントロール抗体としてラットＩｇＧ２ａアイソタイプコントロール抗体（Ｂｉｏ　Ｘ　Ｃｅｌｌ、ＢＥ００８９）（図２では「コントロール」と称する）を用いた。試験を行った４グループに投与した被験抗体、投与量、投与スケジュール等の詳細を以下に示す。
（１）グループ１：コントロール群
　０日目と７日目に抗リゾチーム抗体を０．３ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与し、０、４、７、１１日目にラットＩｇＧ２ａアイソタイプコントロール抗体を１００μｇ／ｈｅａｄで腹腔内投与した。
（２）グループ２：ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ投与群
　０日目と７日目にｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを０．３ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与し、０、４、７、１１日目にラットＩｇＧ２ａアイソタイプコントロール抗体を１００μｇ／ｈｅａｄで腹腔内投与した。
（３）グループ３：抗マウスＰＤ－１抗体投与群
　０日目と７日目に抗リゾチーム抗体を０．３ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与し、０、４、７、１１日目に抗マウスＰＤ－１抗体を１００μｇ／ｈｅａｄで腹腔内投与した。
（４）グループ４：ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ及び抗マウスＰＤ－１抗体の併用投与群
　０日目と７日目にｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨを０．３ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与し、０、４、７、１１日目に抗マウスＰＤ－１抗体を１００μｇ／ｈｅａｄで腹腔内投与した。
　各グループの４、７、１１、１４日目に腫瘍体積を評価した。グループ２及びグループ３の１４日目の腫瘍体積をグループ４のそれとｕｎｐａｉｒｅｄ　Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ検定によって比較した（図２）。

　図２に示すように、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨと抗マウスＰＤ－１抗体の併用群の腫瘍体積は、ｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ単独投与群及び抗マウスＰＤ－１抗体単独投与群のそれよりも有意に小さかった。この結果は、ヒトのがんの治療において、抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体の併用は、それぞれの単独投与よりも高い抗腫瘍効果が得られる可能性があることを示唆している。

　本発明の抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤の併用によるがんの治療方法は、がんの治療に有用であると期待される。

　配列番号２はｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ　ＨＣのアミノ酸配列であり、配列番号１に示される塩基配列は、配列番号２に示されるｈＫＭ３９００＿ｔＡ２－３２ＬＨ重鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列である。配列番号４はｈＫＭ３９００　ＬＣのアミノ酸配列であり、配列番号３に示される塩基配列は、配列番号４に示されるｈＫＭ３９００軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列である。配列番号５～１４は発明の詳細な説明にて記載した各種リンカーのアミノ酸配列である。

Claims

　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１１２までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号２４から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５１から５７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号９０から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域を含む重鎖及び抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖可変領域を含む軽鎖からなるＩｇＧ抗体（抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体のＦｃ領域にＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）若しくはＰ３３１Ｇ変異（ここで、前記変異位置はヒトＩｇγ１定常領域におけるＥＵインデックスに従うアミノ酸位置である）のいずれか又は両方を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号６２５から６２９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号６４４から６５９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号６９２から７０１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４８６から４９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５１４から５２０までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号５５３から５６３までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなり、抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域が配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬組成物
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７一本鎖可変領域フラグメント（抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖ）を含む、請求項６又は７に記載の医薬組成物。
　抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖが配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる、請求項８に記載の医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、抗ＣＬＤＮ４　ＩｇＧ抗体の重鎖カルボキシ末端に抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、請求項８又は９に記載の医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸番号１から１２３までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から５７３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の軽鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸番号５９５から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が、配列番号２のアミノ酸番号１から４５３までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び配列番号４のアミノ酸番号１から２１５までのアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖、並びに配列番号２のアミノ酸番号４６４から７１２までのアミノ酸配列からなる抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含み、該抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖カルボキシ末端に該抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖのアミノ末端がリンカーを介して連結されている、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
　リンカーがＧＳリンカーである、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体を含む、対象のがんを治療するための医薬組成物であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が翻訳後修飾されたものである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　ＰＤ－１シグナル阻害剤と同時に、連続的に又は逐次的に組み合わせて使用される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤が（ｉ）同一の医薬組成物に含まれており同時に投与される、又は（ｉｉ）別々の医薬組成物に含まれており、同時に、連続的に若しくは逐次的に組み合わせて使用される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　がんが、大腸がん、膀胱がん及び肺がんからなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２からなる群から選択される１以上のタンパク質に結合する抗体又はこれらの抗原結合フラグメントである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　ＰＤ－１シグナル阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、スパルタリズマズ及びセミプリマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　ＰＤ－１シグナル阻害剤が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
　対象のがんを治療するために使用される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、該二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、二重特異性抗体。
　対象のがんを治療するために使用される抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖からなる二重特異性抗体を含み、ＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される、二重特異性抗体。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を対象に投与することを含むがんの治療方法であって、該抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、治療方法。
　抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体とＰＤ－１シグナル阻害剤を組み合わせて対象に投与することを含むがんの治療方法であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む、治療方法。
　対象のがんを治療するためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される医薬組成物の製造のための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用であって、該二重特異性抗体が抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに抗ＣＤ１３７抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、使用。
　対象のがんを治療するためにＰＤ－１シグナル阻害剤と組み合わせて使用される医薬組成物の製造のための抗ＣＬＤＮ４－抗ＣＤ１３７二重特異性抗体の使用であって、該二重特異性抗体が配列番号２のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の重鎖及び抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖを含むポリペプチド、並びに配列番号４のアミノ酸配列からなる抗ＣＬＤＮ４抗体の軽鎖を含む、使用。