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WO2023274251A1 - 一类抑制rna解旋酶dhx33的多环化合物及其应用 - Google Patents

一类抑制rna解旋酶dhx33的多环化合物及其应用 Download PDF

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WO2023274251A1
WO2023274251A1 PCT/CN2022/102010 CN2022102010W WO2023274251A1 WO 2023274251 A1 WO2023274251 A1 WO 2023274251A1 CN 2022102010 W CN2022102010 W CN 2022102010W WO 2023274251 A1 WO2023274251 A1 WO 2023274251A1
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WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
alkyl
formula
halogen
pharmaceutically acceptable
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/CN2022/102010
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
张严冬
李相鲁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Keye Life Technologies Co Ltd
Original Assignee
Shenzhen Keye Life Technologies Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Keye Life Technologies Co Ltd filed Critical Shenzhen Keye Life Technologies Co Ltd
Priority to US18/278,234 priority Critical patent/US20240182454A1/en
Priority to JP2024522590A priority patent/JP7741981B2/ja
Priority to EP22832064.4A priority patent/EP4378940A4/en
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    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the invention belongs to the field of medicinal chemistry, and relates to a small molecule inhibitor of DHX33, a pharmaceutical composition containing it, a preparation method thereof, and a medical application for preventing and/or treating DHX33-related diseases.
  • the present invention relates to compounds that inhibit the RNA helicase activity of DHX33.
  • DHX33 belongs to the DEAD/H box-containing RNA helicase protein family. Among them, DEAD/H stands for the abbreviation of amino acid Asp-Glu-Ala-Asp/His. This sequence, together with other conservative amino acid sequences, appears in the protein sequence of RNA helicase family members and is highly involved in nucleic acid substrates. Binding and ATP hydrolysis. Although these family members share these same sequences, each RNA helicase has its own specific specificity and unique biological function. The molecular weight of human DHX33 protein is about 72kDa, and it has the function of unwinding nucleic acid.
  • RNA uses the bioenergy released by ATP hydrolysis to drive and change the conformation of RNA and protein complexes, and then participates in the metabolic activities of various RNAs.
  • RNA A series of biological processes such as transcription, splicing, editing, translation and degradation.
  • the function of DHX33 is not limited to the modification of RNA molecules. Studies have shown that in addition to unwinding RNA double strands, DHX33 protein is also involved in DNA metabolism. Specifically, the DHX33 protein can unwind the double-strand structure of DNA and play an important role in the process of gene expression.
  • DHX33 affects the methylation status of DNA by binding to the promoters of various cancer-related genes, and then regulates the expression of various cancer genes and the signaling pathways related to tumor development at the genome level, and has a significant effect on cell growth, proliferation, It plays a vital role in various cellular activities such as migration, apoptosis, and glucose metabolism.
  • DHX33 can sense the invasion of foreign double-stranded RNA molecules and play an important role in the innate immunity of cells.
  • DHX33 is highly expressed in various cancers, such as lung cancer, lymphoma, glioblastoma, breast cancer, colon cancer, liver cancer and so on.
  • DHX33 protein The genetic knockout of DHX33 can significantly inhibit the occurrence and development of lung cancer driven by RAS oncogene; in vivo and in vitro experiments have confirmed that after inhibiting DHX33 protein, the occurrence and development of various cancers such as breast cancer, colon cancer, glioma, lymphoma, etc. were significantly suppressed.
  • the present invention provides structures and synthesis methods of various compounds with enzyme activity inhibiting DHX33, and these compounds are used in the preparation of medicines for treating diseases or diseases at least partially mediated by DHX33.
  • the present invention has discovered a series of small molecular compounds that can inhibit the RNA helicase activity of DHX33, and have potential value in preventing and/or treating DHX33-related diseases.
  • the present invention provides a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable form thereof:
  • X 1 is selected from N or CR 1
  • X 2 is selected from N or CR 2
  • X 3 is selected from N or CR 3
  • X 4 is selected from N or CR 4 ;
  • Each R 6 is independently selected from hydrogen, C 1-6 alkyl, C 3-8 cycloalkyl or C 6-10 aryl;
  • Ring A is selected from 5-10 membered heteroaryl or 3-8 membered heterocyclic group, ring A is optionally substituted by one or more R 7 ;
  • Each R 7 is independently selected from halogen, C 1-6 alkyl or C 1-6 haloalkyl;
  • L 2 is selected from single bond, O, S or CR 8 R 9 ;
  • R 8 and R 9 are each independently selected from hydrogen, halogen or C 1-6 alkyl
  • Ring B is selected from C 6-10 aryl, 5-12 membered heteroaryl or 3-8 membered heterocyclic group, ring B is optionally substituted by one or more R 10 ;
  • the pharmaceutically acceptable form is selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable salts, esters, stereoisomers, tautomers, solvates, nitroxides, isotopic labels, metabolites and prodrugs.
  • each of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof is independently selected from hydrogen, halogen, amino, nitro, hydroxyl, C 1- 6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxy, C 1-6 haloalkoxy, -NH(C 1-6 alkyl), -N(C 1-6 alkyl) 2 or C 1-6 hydroxyalkyl.
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof are each independently selected from hydrogen, halogen, amino, nitro, hydroxyl, C 1-4 alkyl, C 1-4 haloalkyl, C 1-4 alkoxy or C 1-4 haloalkoxy.
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof are each independently selected from hydrogen, halogen, amino, nitro, hydroxyl, Methyl, methoxy or trifluoromethoxy.
  • R in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof is selected from hydrogen, halogen or methyl.
  • ring A in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof is selected from 5-10 membered heteroaryl, ring A is optionally substituted by one or more R 7 , each R 7 independently selected from halogen, C 1-4 alkyl or C 1-4 haloalkyl.
  • ring A in the above-mentioned compound of formula I or its pharmaceutically acceptable form is selected from pyrrolyl, pyrazolyl, imidazolyl, thiazolyl or oxazolyl, and ring A is optionally replaced by one or a plurality of R 7 substituted, each R 7 independently selected from halogen, methyl, ethyl or trifluoromethyl.
  • ring A in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof is selected from pyrrolyl or imidazolyl, ring A is optionally substituted by one or more R 7 , each R 7 is independently selected from halogen or methyl.
  • ring A in the above-mentioned compound of formula I or a pharmaceutically acceptable form thereof is selected from
  • L 2 in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof is selected from a single bond or CR 8 R 9 ;
  • R 8 and R 9 are each independently selected from hydrogen, halogen or C 1-4 alkyl.
  • L 2 in the compound of formula I above or a pharmaceutically acceptable form thereof is selected from a single bond, -CH 2 - or -CH(CH 3 )-.
  • ring B in the above-mentioned compound of formula I or a pharmaceutically acceptable form thereof is selected from
  • the above-mentioned compound of formula I or a pharmaceutically acceptable form thereof has formula I-1, formula I-2, formula I-3, formula I-4, formula I-5, formula I-6, A compound of formula I-19 or formula I-20 or a pharmaceutically acceptable form thereof:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , L 1 , L 2 and ring B are as defined in formula I.
  • the above-mentioned compound of formula I or its pharmaceutically acceptable form has formula I-7, formula I-8, formula I-9, formula I-10, formula I-11, formula I- 12.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 and ring B are as defined in formula I.
  • the present invention also provides the following compounds or pharmaceutically acceptable salts, esters, stereoisomers, tautomers, solvates, nitrogen oxides, isotope labels, metabolites or prodrugs thereof:
  • the present invention provides a pharmaceutical composition, which comprises at least one compound or a pharmaceutically acceptable form thereof, and one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • the present invention provides the above-mentioned compound or its pharmaceutically acceptable form, or the above-mentioned pharmaceutical composition, which is used as a DHX33 inhibitor for preventing and/or treating diseases or conditions at least partially mediated by DHX33.
  • the present invention provides the use of the above-mentioned compound or its pharmaceutically acceptable form or the above-mentioned pharmaceutical composition in the preparation of a medicament for preventing and/or treating a disease or condition at least partially mediated by DHX33.
  • the present invention provides a method for preventing and/or treating a disease or condition mediated at least in part by DHX33, which comprises the following steps: administering a preventive and/or therapeutically effective amount of the above-mentioned compound or its pharmaceutical An acceptable form or pharmaceutical composition as described above is administered to an individual in need thereof.
  • compositions, methods, or device comprising a list of elements is not necessarily limited to the elements explicitly listed, but may also include other elements not explicitly listed or inherent to the composition, method, or device described above.
  • 5-10 yuan should be understood as covering any sub-range and every point value, such as 5-6 yuan, 5-7 yuan, 5-8 yuan, 5-9 yuan, 6-7 yuan, 6-8 yuan, etc., and 5, 6, 7, 8, 9, 10 yuan, etc.
  • composition refers to a composition that can be used as a medicine, which comprises a pharmaceutically active ingredient (or therapeutic agent) and optionally one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • pharmaceutically acceptable carrier refers to an excipient that is administered with a therapeutic agent and that is suitable within the scope of sound medical judgment for contacting human and/or other animal tissues without undue toxicity, irritation, Anaphylaxis or other problems or complications with a reasonable benefit/risk ratio.
  • the pharmaceutically acceptable carrier that can be used in the present invention includes but not limited to: a) diluent; b) lubricant; c) binder; d) disintegrating agent; and/or sweeteners; f) emulsifying or dispersing agents; and/or g) substances which enhance the absorption of the compound, etc.
  • compositions may act systemically and/or locally.
  • they can be administered by suitable routes, for example by parenteral, topical, intravenous, oral, subcutaneous, intraarterial, intradermal, transdermal, rectal, intracranial, intraperitoneal, intranasal, intramuscular route or administered as an inhalant.
  • Dosage forms that can be used in the present invention include, but are not limited to: tablets, capsules, lozenges, hard lozenges, powders, sprays, creams, ointments, suppositories, gels, pastes, lotions, ointments elixirs, aqueous suspensions, injectable solutions, elixirs, syrups, etc.
  • the above pharmaceutical composition can be made into any orally acceptable preparation form, including but not limited to tablets, capsules, aqueous solutions, aqueous suspensions and the like.
  • the above pharmaceutical composition can also be administered in the form of sterile injection, including sterile injectable water or oil suspension, or sterile injectable water or oil solution.
  • the carrier that can be used includes but not limited to: water, Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution.
  • sterile, fixed oils such as mono- or diglycerides, can be employed as a solvent or suspending medium.
  • the above-mentioned pharmaceutical composition may contain 0.01 mg to 1000 mg of at least one of the above-mentioned compounds or a pharmaceutically acceptable form thereof.
  • disease or disorder at least partially mediated by DHX33 refers to a disease whose pathogenesis at least partially includes factors related to DHX33, such as cancer, viral infection, and inflammation.
  • an effective amount refers to a dose capable of inducing biological or medical responses in cells, tissues, organs or organisms (eg, individuals) and sufficient to achieve desired preventive and/or therapeutic effects.
  • Dosage regimens may be adjusted to provide the optimum desired response. For example, it can be administered as a single dose, divided doses can be administered over time, or the dose can be proportionally reduced or increased according to the actual situation. It will be appreciated that for any particular individual, the specific dosing regimen will be adjusted according to the needs and professional judgment of the person administering the composition or supervising the administration of the composition.
  • needle for refers to a physician's or other caregiver's judgment that an individual needs or will benefit from prophylactic and/or therapeutic procedures, based on the physician's or other caregiver's various factors.
  • the term "individual" refers to a human or non-human animal.
  • Individuals of the present invention include individuals with diseases and/or conditions (patients) and normal individuals.
  • Non-human animals of the present invention include all vertebrates, such as non-mammals, such as birds, amphibians, reptiles, etc., and mammals, such as non-human primates, livestock and/or domesticated animals (such as sheep, dogs, cats, cows, pigs, etc.).
  • treating means alleviating or eliminating the targeted disease or condition. If the subject receives a therapeutic amount of a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable form thereof or a pharmaceutical composition of the present invention, at least one indicator and symptom of the subject exhibits observable and/or detectable Detected remission and/or improvement indicates that the subject has been successfully "treated". It is understood that treatment includes not only complete cure, but also not complete cure but achievement of some biologically or medically relevant result. Specifically, “treatment” means that the compound of the present invention or its pharmaceutically acceptable form or the pharmaceutical composition of the present invention can achieve at least one of the following effects, for example: prevent disease in animals experiencing or exhibiting disease pathology or symptomatology; (2) inhibit disease (i.e.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt of a compound of the present invention that is substantially non-toxic to an organism.
  • Pharmaceutically acceptable salts generally include, but are not limited to, salts formed by reacting compounds of the present invention with pharmaceutically acceptable inorganic/organic acids or inorganic/organic bases. Such salts are also called acid addition salts or base addition salts.
  • a salt For a review of suitable salts see, e.g., Jusiak, Soczewinski, et al., Remington's Pharmaceutical Sciences [M], Mack Publishing Company, 2005 and Stahl, Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use [M], Wiley -VCH, 2002. Methods for preparing pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the invention are known to those skilled in the art.
  • esters refers to an ester that is substantially non-toxic to the living body and hydrolyzed into the compound of the present invention or a salt thereof in the living body.
  • Pharmaceutically acceptable esters generally include, but are not limited to, esters of compounds of the present invention with pharmaceutically acceptable carboxylic or sulfonic acids, such esters are also known as carboxylic acid esters or sulfonic acid esters.
  • isomer refers to compounds that have the same molecular weight due to the same number and type of atoms, but differ in the arrangement or configuration of the atoms in space.
  • stereoisomer means having at least one chiral element (including a chiral center, chiral axis, chiral plane, etc.) that has a perpendicular plane of asymmetry, Stable isomers that can thus rotate plane-polarized light. Due to the presence of asymmetric centers and other chemical structures which may give rise to stereoisomerism in the compounds of the present invention, the present invention also includes these stereoisomers and mixtures thereof. Unless otherwise indicated, all stereoisomeric forms of the compounds of the invention are within the scope of the invention.
  • tautomer refers to structural isomers having different energies that are interconvertible through a low energy barrier. If tautomerism is possible (eg, in solution), then a chemical equilibrium of the tautomers can be achieved.
  • proton tautomers include, but are not limited to, interconversions via migration of a proton, such as keto-enol isomerization, imine-enamine isomerization, Amide-iminoalcohol isomerization, etc. Unless otherwise indicated, all tautomeric forms of the compounds of the invention are within the scope of the invention.
  • solvate refers to a substance formed by the combination of a compound of the present invention (or a pharmaceutically acceptable salt thereof) and at least one solvent molecule through non-covalent intermolecular forces.
  • solvates include, but are not limited to, hydrates (including hemihydrates, monohydrates, dihydrates, trihydrates, etc.), ethanolates, acetonates, and the like.
  • nitrogen oxide refers to a compound formed by oxidation of a nitrogen atom in the structure of a tertiary amine or a nitrogen-containing (aromatic) heterocyclic compound.
  • nitrogen atoms in the nucleus of the above compounds can form the corresponding nitrogen oxides.
  • isotopic label refers to a derivative compound formed by replacing a specific atom in the compound of the present invention with its isotopic atom.
  • the compounds of the present invention include various isotopes of H, C, N, O, F, P, S, Cl, such as but not limited to 2 H(D), 3 H(T), 13 C, 14 C , 15 N, 17 O, 18 O, 18 F, 31 P, 32 P, 35 S, 36 S and 37 Cl.
  • the term "metabolite” refers to derivative compounds formed after metabolism of the compounds of the present invention. Further information on metabolism can be found in Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics (9 th ed.) [M], McGraw-Hill International Editions, 1996.
  • the present invention encompasses all possible metabolite forms of the compounds of the present invention, ie substances formed in the body of the individual administered the compounds of the present invention. Metabolites of compounds can be identified by techniques known in the art, and their activity can be characterized by assays.
  • prodrug refers to a derivative compound capable of providing, directly or indirectly, a compound of the invention upon administration to an individual.
  • Particularly preferred derivative compounds or prodrugs are compounds that, when administered to a subject, increase the bioavailability of the compounds of the invention (e.g., better absorption into the blood), or facilitate delivery of the parent compound to the site of action (e.g., the lymphatic system) compound of.
  • all prodrug forms of the compounds of the invention are within the scope of the invention and various prodrug forms are known in the art, see for example T. Higuchi, V. Stella, Pro-drugs as Novel Drug Delivery Systems[J],American Chemical Society,Vol.14,1975.
  • the invention also encompasses compounds of the invention which contain protecting groups.
  • protecting groups such as those described in T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis [M], John Wiley & Sons, 2006. These protecting groups can be removed at an appropriate subsequent stage using methods known in the art.
  • the term "independently" means that at least two groups (or ring systems) present in the structure with the same or similar value range may have the same or different meanings under specific circumstances.
  • the substituent X and the substituent Y are each independently hydrogen, halogen, hydroxyl, cyano, alkyl or aryl, then when the substituent X is hydrogen, the substituent Y can be either hydrogen or halogen, Hydroxyl, cyano, alkyl or aryl; Similarly, when the substituent Y is hydrogen, the substituent X can be either hydrogen or halogen, hydroxyl, cyano, alkyl or aryl.
  • halogen as used herein alone or in combination with other groups refers to fluorine (F), chlorine (Cl), bromine (Br) and iodine (I).
  • alkyl refers to a straight or branched chain aliphatic hydrocarbon group.
  • C 1-6 alkyl used in the present invention refers to an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • alkyl includes, but is not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, isobutyl, or t-butyl, and the like.
  • Alkyl groups can be optionally substituted or unsubstituted.
  • alkylene refers to a straight-chain or branched divalent saturated aliphatic hydrocarbon group, and the two groups (or fragments) connected by it can be connected with the same A carbon atom can be connected to different carbon atoms.
  • C 1-6 alkylene refers to an alkylene group having 1-6 carbon atoms (such as methylene, 1,1-ethylene, 1,2-ethylene group, 1,2-propylene, 1,3-butylene, etc.). Alkylene groups can be optionally substituted or unsubstituted.
  • haloalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more (such as 1 to 3) same or different halogen atoms.
  • C 1-6 haloalkyl used in the present invention refers to a haloalkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • haloalkyl includes, but is not limited to, -CH2F , -CHF2 , -CF3 , -CH2CF3 , -CF2CF3 , -CH2CH2CF3 , -CH2Cl , and the like.
  • a haloalkyl group can be optionally substituted or unsubstituted.
  • hydroxyalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more (such as 1 to 3) hydroxy groups.
  • C 1-6 hydroxyalkyl used in the present invention refers to a hydroxyalkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • hydroxyalkyl includes, but is not limited to Wait.
  • a hydroxyalkyl group can be optionally substituted or unsubstituted.
  • alkoxy refers to an alkyl group attached to the remainder of the molecule through an oxygen atom.
  • alkoxy includes, but is not limited to, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, tert-butoxy, and the like.
  • Alkoxy groups can be optionally substituted or unsubstituted.
  • haloalkoxy refers to a monovalent straight or branched chain haloalkyl-O- group which is replaced by at least one member selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine and The iodine atom is substituted, may contain unsaturation, and is attached to another group through a single bond to the oxygen atom, such as a C1-6 haloalkoxy group.
  • haloalkoxy includes, but is not limited to, fluoromethoxy (-OCH 2 F), difluoromethoxy (-OCHF 2 ), trifluoromethoxy (-OCF 3 ), 1-fluoroethoxy (- OCHFCH 3 ), 2-fluoroethoxy (-OCH 2 CH 2 F), 1,2-difluoroethoxy (-OCHFCH 2 F), 2,2-difluoroethoxy (-OCH 2 CHF 2 ), 1,2,2-trifluoroethoxy (-OCHFCHF 2 ), 2,2,2-trifluoroethoxy (-OCH 2 CF 3 ), etc.
  • cycloalkyl refers to a saturated or partially saturated, monocyclic or polycyclic (such as bicyclic) non-aromatic hydrocarbon group.
  • C 3-6 cycloalkyl used in the present invention refers to a cycloalkyl group having 3 to 6 carbon atoms.
  • cycloalkyl includes, but is not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, or cyclohexyl, and the like. Cycloalkyl groups can be optionally substituted or unsubstituted.
  • a heterocyclyl group can be attached to the rest of the molecule through any ring atom, provided the valence requirements are met.
  • heterocyclic group refers to a heterocyclic group having 3 to 8 ring atoms.
  • Common heterocyclyl groups include (but are not limited to) oxiranyl, aziridinyl, azetidinyl, oxetanyl, tetrahydrofuranyl, dioxolyl, pyrrolidine , pyrrolidinyl, imidazolidinyl, pyrazolidinyl, tetrahydropyranyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, dithianyl or trithianyl.
  • the heterocyclyl group in the present invention is optionally substituted with one or more substituents described herein.
  • aryl refers to a monocyclic or fused polycyclic aromatic hydrocarbon group having a conjugated ⁇ -electron system.
  • C 6-10 aryl used in the present invention refers to an aryl group having 6 to 10 carbon atoms.
  • Common aryl groups include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, anthracenyl, phenanthrenyl, acenaphthyl, azulenyl, fluorenyl, indenyl, pyrenyl, and the like.
  • Aryl groups in the present invention are optionally substituted with one or more substituents described herein.
  • heteroaryl refers to a monocyclic or fused polycyclic aromatic group having a conjugated ⁇ -electron system, the ring atoms of which consist of carbon atoms and at least one It consists of heteroatoms selected from N, O and S.
  • a heteroaryl group can be attached to the rest of the molecule through any ring atom, provided the valence requirements are met.
  • the term “5-10 membered heteroaryl” used in the present invention refers to a heteroaryl group having 5 to 10 ring atoms.
  • heteroaryl groups include, but are not limited to, thienyl, furyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, triazole Base, thiadiazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, triazinyl and its benzo derivatives, pyrrolopyridyl, pyrrolopyrazinyl, pyrazolopyridyl, imidazo Pyridyl, pyrrolopyrimidinyl, pyrazolopyrimidinyl, purinyl, etc.
  • the heteroaryl group in the present invention is optionally substituted by one or more substituents described in the present invention (such as halogen, C 1-6 alkyl, etc.).
  • cyano as used herein alone or in combination with other groups refers to -CN.
  • amino as used herein alone or in combination with other groups refers to -NH2 .
  • nitro as used herein alone or in combination with other groups refers to -NO2 .
  • Figure 1 shows the result analysis of the recombinant DHX33 protein prepared by the method of the present invention after SDS-PAGE separation and staining with Coomassie Brilliant Blue.
  • the reagents or instruments used in the examples are all commercially available conventional products. Those without specific conditions shall be carried out in accordance with the conventional conditions or the conditions suggested by the manufacturer.
  • the term "room temperature” used in the present invention refers to 20°C ⁇ 5°C.
  • the term “about” used in the present invention refers to the error range acceptable to those skilled in the art including the numerical value or numerical range and the numerical value or numerical range, such as the error The range is ⁇ 10%, ⁇ 5%, ⁇ 4%, ⁇ 3%, ⁇ 2%, ⁇ 1%, ⁇ 0.5%, etc.
  • the measuring instrument of nuclear magnetic resonance uses Bruker 400MHz nuclear magnetic resonance instrument, and measuring solvent is deuterated methanol (CD 3 OD), deuterated chloroform (CDCl 3 ), hexadeuterio dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6 ), The internal standard substance is tetramethylsilane (TMS). In 1 H NMR, some hydrogens may not appear as peaks due to interference from salts or solvents.
  • Mass spectrometry was performed using an Agilent 6120B mass spectrometer, and the ion source was an electrospray ionization source (ESI).
  • MS mass spectrometry
  • ESI electrospray ionization source
  • HPLC HPLC-based analytical chromatography
  • Agilent 1200DAD high pressure liquid chromatograph (Sunfirc C18, 150X 4.6mm, 5 ⁇ m chromatographic column) and Waters 2695-2996 high pressure liquid chromatograph (Gimini C18, 150X 4.6mm, 5 ⁇ m chromatographic column).
  • the thin-layer chromatography silica gel plate uses Qingdao Haiyang GF254 silica gel plate, the specification of the silica gel plate used for thin-layer chromatography (TLC) is 0.15mm-0.2mm, and the specification of the thin-layer chromatography separation and purification product is 0.4mm-0.5mm silicone board.
  • the monitoring of the reaction process in the embodiment adopts thin-layer chromatography (TLC), and the system of developing agent used in the reaction has A: methylene chloride and methanol system; B: sherwood oil and ethyl acetate system, and the volume ratio of solvent is according to The polarity of the compound is adjusted accordingly.
  • TLC thin-layer chromatography
  • the eluent system of column chromatography and the developing agent system of thin-layer chromatography used in the purification compound include A: dichloromethane and methanol system; B: petroleum ether and ethyl acetate system, and the volume ratio of the solvent is based on the compound It can be adjusted according to the polarity, and can also be adjusted by adding a small amount of triethylamine and acidic or alkaline reagents.
  • Example 1 Compound AB29502 (1-(4-cyano-2-methylthiazol-5-yl)-N-(6-methoxy-3H-imidazo[4,5-c]pyridine-2- base)-2,5-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide) synthesis
  • Phosphorus oxychloride (2.48 g, 16.2 mmol, 2.0 eq) was added dropwise to dimethylformamide (30 mL) at 0 °C under nitrogen protection. The mixture was stirred at 0°C for 30 minutes and then allowed to warm to room temperature.
  • Example 2 Compound AB29509 (1-(4-cyano-2-methylthiazol-5-yl)-N-(6-methoxy-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2 , the preparation method of 5-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide)
  • the mixture was cooled to room temperature, quenched with methanol (10 mL), and then adjusted to pH 3 with 3M hydrochloric acid.
  • the mixture was diluted with water (30 mL), then extracted three times with 20 mL each of ethyl acetate.
  • the organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated.
  • Example 4 Compound AB24387 (1-(3-carbamoyl-5-methylthiophen-2-yl)-N-(6-methoxy-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)- 2,5-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide) preparation method
  • Example 5 Compound AB29505 (1-(2,4-dimethylthiazol-5-yl)-N-(6-methoxy-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2,5 -Synthesis of dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide)
  • Example 7 Compound AB29513 (N-(6-methoxy-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2,5-dimethyl-1-((1-methyl-1H-pyridine Synthesis of azole-4-yl)methyl)-1H-pyrrole-3-carboxamide)
  • Embodiment 8 the synthesis of compound AB29522
  • Embodiment 9 the synthesis of compound AB29553
  • reaction solution was directly concentrated, water (100mL) was added to the concentrated residue, extracted three times with ethyl acetate (100mL*3), the combined organic phase was backwashed once with saturated brine (50.0mL), the organic phase was separated and washed with anhydrous After drying over sodium sulfate, it was concentrated by filtration.
  • Embodiment 10 the synthesis of compound AB29556
  • Embodiment 11 the synthesis of compound AB29557
  • reaction solution was concentrated under the oil pump.
  • the crude product was separated and purified by high performance liquid chromatography (column: Welch Xtimate C18 150*25mm*5um; mobile phase: [water(NH 4 HCO 3 )-ACN]; B%: 43%-73%, 2min) to obtain compound AB29557 (0.022g, 50.9umol, yield 26.5%, purity 94.9%) was a yellow solid.
  • Embodiment 12 the synthesis of compound AB29558
  • the first purification was performed by high performance liquid chromatography (column: Welch Xtimate C18 150*25mm*5um; mobile phase: [water(NH 3 H 2 O)-ACN]; B%: 25%-55%, 8min).
  • the second purification was performed by high performance liquid chromatography (column: Welch Xtimate C18 150*25mm*5um; mobile phase: [water(HCl)-ACN]; B%: 16%-46%, 8min).
  • Compound AB29558 (8.68 mg, 19.4 umol, 7.28% yield, 99% purity, hydrochloride) was obtained as a white solid.
  • Embodiment 13 the synthesis of compound AB29559
  • Embodiment 14 the synthesis of compound AB29560
  • Methylamine hydrochloride (1.44g, 21.4mmol, 5.00eq, HCl) was dissolved in N-methylpyrrolidone (10.0mL), compound 1 (780mg, 4.27mmol, 1.00eq) and potassium carbonate (2.95g, 21.4 mmol, 5.00 eq). The mixture was stirred and reacted at 150° C. for 24 hours. LCMS showed that compound 1 was consumed and the desired molecular weight of the compound was detected.
  • Embodiment 15 the synthesis of compound AB29561
  • Tetrahydrofuran (0.5mL) and dimethyl sulfoxide (0.5mL) were added to compound 1 (100mg, 246umol, 1.00eq), potassium tert-butoxide (55.2mg, 493umol, 2.00eq) was added to the reaction solution, and then Chloromethyl methyl ether (29.8mg, 369umol, 28.1uL, 1.50eq) was added dropwise to the reaction solution, and the reaction solution was stirred and reacted at 20°C for 2 hours. LCMS showed that the starting material was consumed, and the formation of the target product peak was detected.
  • Embodiment 19 Synthesis of compound AB29540
  • RNA helicase gene (mouse DHX33 gene) is cloned between the BamH I/Not I restriction sites of the pET32M-3C vector. Then the plasmid was transformed into Escherichia coli strain BL-21pLysS(DE3), and 0.5 mM isopropyl 1-thio- ⁇ -D-galactopyranoside (IPTG) was added to induce the expression of the recombinant protein at 16°C for 16 hours.
  • IPTG isopropyl 1-thio- ⁇ -D-galactopyranoside
  • Cells were pelleted and resuspended in cell lysis buffer [50 mM Tris-HCl (pH 7.2), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100 and 50 mM imidazole supplemented with protease inhibitors]. Cells were then sonicated and centrifuged at 13000 rpm for 25 minutes. The supernatant was incubated with Tris-buffer-equilibrated nickel-nitrilotriacetic acid beads followed by extensive washing. The purified protein was then eluted with 300 mM imidazole in Tris buffer and then dialyzed against imidazole-free Tris buffer overnight at 4 °C.
  • Figure 1 shows the result analysis of the recombinant DHX33 protein prepared by the above method after separation by SDS-PAGE and stained with Coomassie Brilliant Blue.
  • the arrow in the figure indicates the target recombinant DHX33 protein (containing thioredoxin tag), and the molecular weight of the target band is 90kDa.
  • the helicase reaction was started after addition of 90 ⁇ L of reaction mixture [0.25 ⁇ g of purified full-length DHX33 protein dissolved in 25 mM 4-MOPS (pH 7.0), 5 mM ATP, 2 mM DTT, 3 mM MnCl 2 and 100 ⁇ g/mL BSA]. React at 37°C for 60 minutes. After washing, each well was incubated with blocking solution [10% (w/v) BSA in 0.1M maleic acid and 0.15M NaCl (pH7.5)] for 30 minutes, and then incubated with 20 ⁇ L of antibody solution (anti- DIG-AP, Roche, in blocking buffer) for 30 minutes.
  • blocking solution [10% (w/v) BSA in 0.1M maleic acid and 0.15M NaCl (pH7.5)] for 30 minutes, and then incubated with 20 ⁇ L of antibody solution (anti- DIG-AP, Roche, in blocking buffer) for 30 minutes.
  • One of the negative controls is the comparison under the condition that all other conditions are the same except ATP, and the other negative control refers to the comparison under the condition that the other conditions are the same except that DHX33 protein is not added.
  • Positive controls are comparisons to wild-type DHX33 protein standards. Compared with the DHX33 protein standard, the results showed that the DHX33 protein prepared by the above method had helicase activity.
  • the helicase activity of the DHX33 protein in vitro was determined using a series of concentrations of the compound (the concentration range was set at 1 nM, 5 nM, 10 nM, 20 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM, 500 nM, 1000 nM).
  • Table 1 shows the half-inhibitory concentrations of the compounds of the present invention on the helicase activity of DHX33 protein. It can be seen from Table 1 that the compound of the present invention has significant inhibitory effect on the helicase activity of DHX33 protein.
  • **** represents the half-inhibitory concentration ⁇ 20nM.
  • U251-MG cells were purchased from the Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences. Cultured in MEM medium containing 10% fetal bovine serum (FBS), 2mM L-glutamine, streptomycin and penicillin, the growth conditions were set at 37°C, 5% CO 2 in a cell culture incubator with humidity. Cells were passaged every 3 days and discarded after 10 passages.
  • FBS fetal bovine serum
  • 2mM L-glutamine 2mM L-glutamine
  • streptomycin streptomycin
  • penicillin penicillin
  • DHX33 overexpressed cancer cell line U251-MG cells on a 96-well plate at 1 ⁇ 10 4 /100ul/well. Wait for the cells to adhere completely, add the compound to the cell culture medium at a concentration of 5nM, 10nM, 25nM, 50nM, 100nM, 250nM, 500nM, 1000nM, 2000nM, 5000nM, 10 ⁇ M, 20 ⁇ M, and mix evenly with a multi-channel exhaust gun.
  • CCK-8 reagent (Yisheng Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.) to the medium of the 96-well plate according to the standard procedure, and after incubation for 2 hours, use the enzyme
  • **** represents the half inhibitory concentration ⁇ 100nM.

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Abstract

本发明涉及一类抑制RNA解旋酶DHX33的多环化合物及其应用。特别地，本发明涉及式I所示的化合物或其药学上可接受的形式、包含其的药物组合物、其制备方法、及其用于预防和/或治疗DHX33相关疾病的医药用途。

Description

一类抑制RNA解旋酶DHX33的多环化合物及其应用 技术领域
本发明属于药物化学领域，涉及DHX33的小分子抑制剂、包含其的药物组合物、其制备方法、及其用于预防和/或治疗DHX33相关疾病的医药用途。
背景技术
本发明涉及抑制DHX33的RNA解旋酶活性的化合物。DHX33属于含有DEAD/H盒的RNA解旋酶蛋白家族。其中的DEAD/H代表氨基酸的缩写Asp-Glu-Ala-Asp/His，这一序列连同其他多个保守性的氨基酸序列，出现在RNA解旋酶家族成员的蛋白序列中，高度参与核酸底物结合以及ATP水解。虽然这些家族成员共有这些相同的序列，但是每个RNA解旋酶都有各自特定的专一性和独特的生物功能。人DHX33蛋白的分子量大约是72kDa，具有解旋核酸的功能，它利用ATP水解所释放的生物能来驱动改变RNA和蛋白质复合物的构象，进而参与多种RNA的代谢活动，具体地，从RNA转录、剪切、编辑、翻译到降解等一系列生物过程。DHX33的功能并不仅仅局限于对RNA分子的修饰，研究表明，除了解旋RNA双链之外，DHX33蛋白也参与到DNA的代谢。具体，DHX33蛋白可以解开DNA的双链结构，并在基因表达过程中起重要作用。
研究表明，DHX33通过结合在多种癌症相关的基因启动子，影响了DNA的甲基化状态，进而在基因组水平调控多种癌症基因的表达和肿瘤发展相关的信号通路，对细胞生长、增殖、迁移、凋亡、糖代谢等多种细胞活动有至关重要的作用。此外，发现DHX33可以感受外来双链RNA分子的侵入并在细胞的先天免疫中发挥重要作用。DHX33作为十分重要的细胞生长调控基因，在多种癌症中高度表达，比如肺癌、淋巴瘤、神经胶质母细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、肝癌等。多种癌症的发生发展依赖于DHX33蛋白的高度表达。DHX33的遗传敲除可以显著抑制RAS癌基因驱动的肺癌发生发展；体内和体外实验证实，抑制DHX33蛋白后，多种癌症如乳腺癌、结肠癌、脑胶质瘤、淋巴瘤等癌症的发生发展都受到明显抑制。
研究表明，DHX33的蛋白功能依赖于其解旋酶活力。DHX33的解旋酶活力缺失突变体不具有DHX33蛋白的功能，无法替代野生型DHX33基因的功能。本发明提供了多种具有抑制DHX33的酶活力的化合物结构及合成方法，这些化合物具有在制备用于治疗至少部分由DHX33介导的疾病或病症的药物中的用途。
发明内容
本发明通过大量的研究，发现了一系列具有抑制DHX33的RNA解旋酶活性的小分子化合物，具有预防和/或治疗DHX33相关疾病的潜在价值。
第一方面，本发明提供了一种具有式I结构的化合物或其药学上可接受的形式：
Figure PCTCN2022102010-appb-000001
其中，
X 1选自N或CR 1，X 2选自N或CR 2，X 3选自N或CR 3，X 4选自N或CR 4；
R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、-NH(C 1-6烷基)、-N(C 1-6烷基) 2、C 1-6羟基烷基、-O-(C 1-6亚烷基)-O-(C 1-6烷基)、-C(＝O)-NH-(C 1-6烷基)、-C(＝O)-NH-(C 1-6亚烷基)-N(C 1-6烷基) 2或-C(＝O)-O-(C 1-6烷基)；
X 5选自N或CR 5，R 5选自氢、卤素或C 1-6烷基，所述C 1-6烷基任选地被一个或多个选自卤素、C 1-6烷基、-(C 1-6亚烷基)-O-(C 1-6烷基)或-(C 1-6亚烷基)-O-C(＝O)-(C 1-6烷基)的取代基取代；
L 1选自-NR 6C(＝O)-、-NR 6S(＝O) 2-、-NR 6S(＝O)-、-C(＝O)NR 6-、-S(＝O) 2NR 6-或-S(＝O)NR 6-；
每个R 6独立地选自氢、C 1-6烷基、C 3-8环烷基或C 6-10芳基；
环A选自5-10元杂芳基或3-8元杂环基，环A任选地被一个或多个R 7取代；
每个R 7独立地选自卤素、C 1-6烷基或C 1-6卤代烷基；
L 2选自单键、O、S或CR 8R 9；
R 8和R 9各自独立地选自氢、卤素或C 1-6烷基；
环B选自C 6-10芳基、5-12元杂芳基或3-8元杂环基，环B任选地被一个或多个R 10取代；
每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 3-6环烷基、-C(＝O)-O-(C 1-6烷基)、苯基、苄基、吡啶基、-C(＝O)-NH 2、或-NH-C(＝O)-(C 1-6烷基)，所述苯基、苄基、吡啶基任选地被一个或多个选自氢、卤素、氰基、氨基、羟基、C 1-6烷基或C 1-6烷氧基的取代基取代；
所述药学上可接受的形式选自药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、氮氧化物、同位素标记物、代谢物和前药。
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、-NH(C 1-6烷基)、-N(C 1-6烷基) 2或C 1-6羟基烷基。
在一些优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 1-4烷氧基或C 1-4卤代烷氧基。
在一些更优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的R 5选自氢、卤素或C 1-4烷基，所述C 1-4烷基任选地被一个或多个选自卤素、C 1-4烷基、-(C 1-4亚烷基)-O-(C 1-4烷基)或-(C 1-4亚烷基)-O-C(＝O)-(C 1-4烷基)的取代基取代。
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的R 5选自氢、卤素或C 1-4烷基，所述C 1-4烷基任选地被一个或多个选自卤素、C 1-4烷基、-CH 2-O-CH 3或-CH 2-O-C(＝O)-CH 3的取代基取代。
在一些优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的R 5选自氢、卤素或甲基。
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的L 1选自-NR 6C(＝O)-、-NR 6S(＝O) 2-、-C(＝O)NR 6-或-S(＝O) 2NR 6-，每个R 6独立地选自氢、C 1-4烷基或C 3-6环烷基。
在一些优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的L 1选自-NR 6C(＝O)-、-NR 6S(＝O) 2-、-C(＝O)NR 6-或-S(＝O) 2NR 6-，每个R 6独立地选自氢或C 1-4烷基。
在一些更优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的L 1选自-NHC(＝O)-、-N(CH 3)-C(＝O)-、-NHS(＝O) 2-、-C(＝O)NH-或-S(＝O) 2NH-。
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环A选自5-10元杂芳基，环A任选地被一个或多个R 7取代，每个R 7独立地选自卤素、C 1-4烷基或C 1-4卤代烷基。
在一些优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环A选自吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基或噁唑基，环A任选地被一个或多个R 7取代，每个R 7独立地选自卤素、甲基、乙基或三氟甲基。
在一些更优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环A选自吡咯基或咪唑基，环A任选地被一个或多个R 7取代，每个R 7独立地选自卤素或甲基。
在一些特别优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环A选自
Figure PCTCN2022102010-appb-000002
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的L 2选自单键或CR 8R 9；R 8和R 9各自独立地选自氢、卤素或C 1-4烷基。
在一些优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的L 2选自单键、-CH 2-或-CH(CH 3)-。
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环B选自C 6-10芳基或5-12元杂芳基，环B任选地被一个或多个R 10取代，每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 3-6环烷基或-C(＝O)-NH 2。
在一些优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环B选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基，环B任选地被一个或多个R 10取代，每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或-C(＝O)-NH 2。
在一些更优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环B选自苯基、吡嗪基、吡啶基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、噻吩基、噻唑基、吡唑基或咪唑基，环B任选地被一个或多个R 10取代，每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、甲基或-C(＝O)-NH 2。
在一些特别优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式中的环B选自
Figure PCTCN2022102010-appb-000003
Figure PCTCN2022102010-appb-000004
在一些实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式为具有式I-1、式I-2、式I-3、式I-4、式I-5、式I-6、式I-19或式I-20结构的化合物或其药学上可接受的形式：
Figure PCTCN2022102010-appb-000005
其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 6、L 1、L 2和环B如式I中所定义。
在一些优选的实施方案中，上述式I化合物或其药学上可接受的形式为具有式I-7、式I-8、式I-9、式I-10、式I-11、式I-12、式I-13、式I-14、式I-15、式I-16、式I-17、式I-18、式I-21或式I-22结构的化合物或其药学上可接受的形式：
Figure PCTCN2022102010-appb-000006
其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 6和环B如式I中所定义。
本领域技术人员应当理解，本发明涵盖针对各个实施方案进行任意组合所得的化合物。由一个实施方案中的技术特征或优选技术特征与另外的实施方案中的技术特征或优选技术特征组合得到的实施方案也包括在本发明的范围内。
第二方面，本发明还提供了如下化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、氮氧化物、同位素标记物、代谢物或前药：
Figure PCTCN2022102010-appb-000007
Figure PCTCN2022102010-appb-000008
Figure PCTCN2022102010-appb-000009
Figure PCTCN2022102010-appb-000010
第三方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含至少一种上述化合物或其药学上可接受的形式，以及一种或多种药学上可接受的载体。
第四方面，本发明提供了上述化合物或其药学上可接受的形式、或者上述药物组合物，其用作DHX33抑制剂，用于预防和/或治疗至少部分由DHX33介导的疾病或病症。
第五方面，本发明提供了上述化合物或其药学上可接受的形式或者上述药物组合物在制备用于预防和/或治疗至少部分由DHX33介导的疾病或病症的药物中的用途。
第六方面，本发明提供了一种用于预防和/或治疗至少部分由DHX33介导的疾病或病症的方法，其包括以下步骤：将预防和/或治疗有效量的上述化合物或其药学上可接受的形式或者上述药物组合物施用于对其有需求的个体。
本发明不限于文中所述的特定实施方案；还应该理解，文中所使用的术语仅用于描述而非限制特定实施方案。
术语定义
除非另有说明，下列术语在本发明中的含义如下。
术语“包含”、“包括”、“具有”或“含有”或其任何其它变体旨在涵盖非排他性或开放式的包含内容。例如，包含一系列元素的组合物、方法或装置不一定仅限于已明确列出的元素，而是可能还包含其它未明确列出的元素或上述组合物、方法或装置所固有的元素。
当数值范围的下限和上限被公开时，落入该范围中的任何数值或任何亚范围都表示被具体公开。特别地，本文中所公开的参数的每一个数值范围(例如，以“约a至b”，或同等的“大约a至b”，或同等的“约a-b”的形式)均应理解为涵盖其中的每一个数值和亚范围。例如，“C 1-4”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及每一个点值，如C 2-4、C 3-4、C 1-2、C 1-3、C 1-4等，以及C 1、C 2、C 3、C 4等。又例如，“5-10元”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及每一个点值，例如5-6元、5-7元、5-8元、5-9元、6-7元、6-8元等，以及5、6、7、8、9、10元等。
术语“药物组合物”是指可以用作药物的组合物，其包含药物活性成分(或治疗剂)以及可选的一种或多种药学上可接受载体。术语“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的辅料，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。在本发明中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于：a)稀释剂；b)润滑剂；c)粘合剂；d)崩解剂；e)吸收剂、着色剂、调味剂和/或甜味剂；f)乳化剂或分散剂；和/或g)增强化合物的吸收的物质等。
上述药物组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以通过适合的途径给药，例如通过胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂给药。
上述给药途径可以通过适合的剂型来实现。在本发明中可使用的剂型包括但不限于：片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂等。
当口服给药时，可将上述药物组合物制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊剂、水溶液剂、水混悬剂等。
上述药物组合物还可以无菌注射剂的形式给药，包括无菌注射水或油混悬剂，或者无菌注射水或油溶液剂。其中，可使用的载体包括但不限于：水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。
上述药物组合物可以包含0.01mg至1000mg的至少一种上述化合物或其药学上可接受的形式。
术语“至少部分由DHX33介导的疾病或病症”是指发病机理中至少包含一部分与DHX33有关的因素的疾病，例如癌症、病毒感染及炎症等。
术语“有效量”是指能够诱发细胞、组织、器官或生物体(例如个体)产生生物或医学反应，并且足以实现所需预防和/或治疗效果的剂量。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可单次给药，可随时间分剂量给药，或可根据实际情况按比例减少或增加剂量后给药。可以理解的是，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据需要以及给药组合物或监督组合物的给药人员的专业判断而调整。
术语“对其有需求”是指医生或其它护理人员对个体需要或者将要从预防和/或治疗过程中获益的判断，该判断的得出基于医生或其它护理人员在其专长领域中的各种因素。
术语“个体”(或称受试者)是指人类或非人动物。本发明的个体包括患有疾病和/或病症的个体(患者)和正常的个体。本发明的非人动物包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物，例如鸟类、两栖类、爬行类等，和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
术语“治疗”是指减轻或消除所针对的疾病或病症。如果受试者接受了治疗量的本发明的化合物或其药学上可接受的形式或者本发明的药物组合物，该受试者的至少一种指标和症状表现出可观察到的和/或可检测出的缓解和/或改善，则表明该受试者已被成功地“治疗”。可以理解的是，治疗不仅包括完全地治疗，还包括未达到完全地治疗，但实现了一些生物学或医学相关的结果。具体而言，“治疗”表示本发明的化合物或其药学上可接受的形式或者本发明的药物组合物可以实现下列效果中的至少一种，例如：(1)在可能有疾病倾向，但尚未经历或显示疾病病理学或症状学的动物中防止疾病发生；(2)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中抑制疾病(即阻止病理学和/或症状学的进一步发展)；(3)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中改善疾病(即逆转病理学和/或症状学)。
术语“药学上可接受的盐”是指对生物体基本上无毒性的，本发明的化合物的盐。药学上可接受的盐通常包括但不限于本发明的化合物与药学上可接受的无机/有机酸或无机/有机碱反应而形成的盐，此类盐又被称为酸加成盐或碱加成盐。适合的盐的综述参见，例如，Jusiak,Soczewinski,et al.,Remington’s Pharmaceutical Sciences[M],Mack Publishing Company,2005和Stahl,Wermuth,Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use[M],Wiley-VCH,2002。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法是本领域技术人员已知的。
术语“药学上可接受的酯”是指对生物体基本上无毒性的，在生物体体内水解成本发明的化合物或其盐的酯。药学上可接受的酯通常包括但不限于本发明的化合物与药学上可接受的羧酸或磺酸形成的酯，此类酯又被称为羧酸酯或磺酸酯。
术语“异构体”是指因具有相同的原子数和原子类型而具有相同的分子量，但原子的空间排列或构型不同的化合物。
术语“立体异构体”(或称“旋光异构体”)是指由于具有至少一个手性因素(包括手性中心、手性轴、手性面等)而导致具有垂直的不对称平面，从而能够使平面偏振光旋转的稳定异构体。由于本发明的化合物存在可能导致立体异构的不对称中心以及其它化学结构，因此本发明也包括这些立体异构体及其混合物。除非另外指出，本发明的化合物的所有立体异构体形式都在本发明的范围之内。
术语“互变异构体”(或称“互变异构形式”)是指具有不同能量的，可通过低能垒互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(或称质子转移互变异构体)包括但不限于通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化、亚胺-烯胺异构化、酰胺-亚胺醇异构化等。除非另外指出，本发明的化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。
术语“溶剂化物”是指由本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)与至少一种溶剂分子通过非共价分子间作用力结合而形成的物质。例如，溶剂化物包括但不限于水合物(包括半水合物、一水合物、 二水合物、三水合物等)、乙醇合物、丙酮合物等。
术语“氮氧化物”是指叔胺类或含氮(芳)杂环类化合物结构中的氮原子经氧化而形成的化合物。例如，上述化合物母核中的氮原子可以形成相应的氮氧化物。
术语“同位素标记物”是指将本发明的化合物中的特定原子替换为其同位素原子而形成的衍生化合物。除非另外指出，本发明的化合物包括H、C、N、O、F、P、S、Cl的各种同位素，例如但不限于 2H(D)、 3H(T)、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 18F、 31P、 32P、 35S、 36S和 37Cl。
术语“代谢物”是指本发明的化合物经代谢后形成的衍生化合物。关于代谢的进一步信息可参见Goodman and Gilman's:The Pharmacological Basis of Therapeutics(9 th ed.)[M],McGraw-Hill International Editions,1996。本发明涵盖本发明的化合物的所有可能的代谢物形式，即在施用本发明的化合物的个体体内形成的物质。化合物的代谢物可以通过所属领域的公知技术来鉴定，其活性可以通过试验来表征。
术语“前药”是指在施用于个体后能够直接或间接地提供本发明的化合物的衍生化合物。特别优选的衍生化合物或前药是在施用于个体时可以提高本发明的化合物的生物利用度的化合物(例如，更易吸收入血)，或者促进母体化合物向作用位点(例如，淋巴系统)递送的化合物。除非另外指出，本发明的化合物的所有前药形式都在本发明的范围之内，且各种前药形式是本领域已知的，例如参见T.Higuchi,V.Stella,Pro-drugs as Novel Drug Delivery Systems[J],American Chemical Society,Vol.14,1975。此外，本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如在T.W.Greene,P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis[M],John Wiley&Sons,2006中描述的保护基。使用本领域已知的方法，在适当的后续阶段可以移除这些保护基。
术语“各自独立地”是指结构中存在的取值范围相同或相近的至少两个基团(或环系)可以在特定情形下具有相同或不同的含义。例如，取代基X和取代基Y各自独立地为氢、卤素、羟基、氰基、烷基或芳基，则当取代基X为氢时，取代基Y既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基；同理，当取代基Y为氢时，取代基X既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“烷基”是指直链或支链的脂肪族烃基。例如，本发明中所使用的术语“C 1-6烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基。例如，烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、或叔丁基等。烷基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中单独或与其他基团组合使用时，术语“亚烷基”是指直链或支链的二价饱和脂肪族烃基，其所连接的两个基团(或片段)既可以连接同一个碳原子，又可以连接不同的碳原子。例如，本文中所使用的术语“C 1-6亚烷基”是指具有1-6个碳原子的亚烷基(如亚甲基、1,1-亚乙基、1,2-亚乙基、1,2-亚丙基、1,3-亚丁基等)。亚烷基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“卤代烷基”是指被一或多个(诸如1至3个)相同或不同的卤素原子取代的烷基。例如，本发明中所使用的术语“C 1-6卤代烷基”是指具有1至6个碳原子的卤代烷基。例如，卤代烷基包括但不限于-CH 2F、-CHF 2、-CF 3、-CH 2CF 3、-CF 2CF 3、-CH 2CH 2CF 3、-CH 2Cl等。卤代烷基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“羟基烷基”是指被一或多个(诸如1至3个)羟基取代的烷基。例如，本发明中所使用的术语“C 1-6羟基烷基”是指具有1至6个碳原子的羟基烷基。例如，羟基烷基包括但不限于
Figure PCTCN2022102010-appb-000011
等。羟基烷基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“烷氧基”是指通过氧原子与分子的其余部分连接的烷基。例如，烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。烷氧基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“卤代烷氧基”是指一价的直链或支链的卤代烷基-O-基团，其被至少一个选自氟、氯、溴和碘的原子取代，可以含有不饱和度，并且通过一个与氧原子相连的单键连接至其它基团，例如C 1-6卤代烷氧基。例如，卤代烷氧基包括但不限于氟甲氧基(-OCH 2F)、二氟甲氧基(-OCHF 2)、三氟甲氧基(-OCF 3)、1-氟乙氧基(-OCHFCH 3)、2-氟乙氧基(-OCH 2CH 2F)、1,2-二氟乙氧基(-OCHFCH 2F)、2,2-二氟乙氧基(-OCH 2CHF 2)、1,2,2-三氟乙氧基(-OCHFCHF 2)、2,2,2-三氟乙氧基(-OCH 2CF 3)等。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“环烷基”是指饱和或部分饱和的、单环或多环(诸如双环)的非芳香族烃基。例如，本发明中所使用的术语“C 3-6环烷基”是指具有3至6个碳原子的环烷基。例如，环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。环烷基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“杂环基”是指饱和或部分饱和的、单环或多环(诸如双环，例如：并环、桥环或螺环)的非芳香族基团，其环原子由碳原子以及至少一个选自N、O和S的杂原子构成，其中S原子任选地被取代以形成S(＝O)、S(＝O) 2或S(＝O)(＝NR x)，R x独立地选自H或C 1-4烷基。如果满足价键要求，杂环基可以通过任意一个环原子与分子的其余部分连接。例如，本发明中所使用的术语“3-8元杂环基”是指具有3至8个环原子的杂环基。常见的杂环基包括(但不限于)环氧乙烷基、氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、二噻烷基或三噻烷基。本发明中的杂环基任选地被一个或多个本发明所描述的取代基取代。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“芳基”是指具有共轭π电子系统的单环或稠合多环的芳香族烃基。例如，本发明中所使用的术语“C 6-10芳基”是指具有6至10个碳原子的芳基。常见的芳基包括(但不限于)苯基、萘基、蒽基、菲基、苊基、薁基、芴基、茚基、芘基等。本发明中的芳基任选地被一个或多个本发明所描述的取代基取代。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“杂芳基”是指具有共轭π电子系统的单环或稠合多环的芳香族基团，其环原子由碳原子以及至少一个选自N、O和S的杂原子构成。如果满足价键要求，杂芳基可以通过任意一个环原子与分子的其余部分连接。例如，本发明中所使用的术语“5-10元杂芳基”是指具有5至10个环原子的杂芳基。常见的杂芳基包括(但不限于)噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基及其苯并衍生物、吡咯并吡啶基、吡咯并吡嗪基、吡唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、嘌呤基等。本发明中的杂芳基任选地被一个或多个本发明所描述的取代基(如卤素、C 1-6烷基等)取代。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“羟基”是指-OH。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“氰基”是指-CN。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“氨基”是指-NH 2。
在本文中单独或与其它基团组合使用时，术语“硝基”是指-NO 2。
附图说明
图1示出用本发明的方法制备的重组DHX33蛋白经SDS-PAGE分离后，用考马斯亮蓝染色后的结果分析。
具体实施方式
为了使本发明的目的和技术方案更加清楚，以下结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例中所使用的试剂或仪器均为可以通过市购获得的常规产品。未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。本发明中所使用的术语“室温”是指20℃±5℃。在用于修饰某一数值或数值范围时，本发明中所使用的术语“约”是指包括该数值或数值范围以及该数值或数值范围的本领域技术人员可接受的误差范围，例如该误差范围为±10％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％等。
以下实施例中记载的化合物的结构通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定。
核磁共振(NMR)的测定仪器使用Bruker 400MHz核磁共振仪，测定溶剂为氘代甲醇(CD 3OD)、氘代氯仿(CDCl 3)、六氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，内标物质为四甲基硅烷(TMS)。在 1H NMR中，部分氢可能由于受到盐或溶剂的干扰而未出峰。
以下实施例中的核磁共振(NMR)数据中的缩写代表的含义如下：
s：单峰、d：二重峰、t：三重峰、q：四重峰、dd：双二重峰、qd：四二重峰、ddd：双双二重峰、ddt：双双三重峰、dddd：双双双二重峰、m：多重峰、br：宽峰、J：偶合常数、Hz：赫兹、δ：化学位移。
全部化学位移(δ)值以百万分之一(ppm)的单位给出。
质谱(MS)的测定仪器使用Agilent 6120B质谱仪，离子源为电喷雾离子源(ESI)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfirc C18，150X 4.6mm，5μm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18，150X 4.6mm，5μm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用青岛海洋GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm硅胶板。
柱层析一般使用青岛海洋200-300目硅胶为载体。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有A：二氯甲烷和甲醇体系；B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括A：二氯甲烷和甲醇体系；B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。
化合物的合成
实施例1：化合物AB29502(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的合成
(1)化合物3(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-羧酸乙酯)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000012
将化合物1(5-氨基-2-甲基-1,3-噻唑-4-羧酸乙酯)(5g,26.84mmol,1.0eq)溶解于甲苯(100mL)中，加入化合物2(2,5-己二酮)(4.6g,40.26mmol,1.5eq)、3A分子筛(10g)和对甲苯磺酸(1.8g,10.73mmol,0.4eq)。将混合物加热回流搅拌过夜。将固体物过滤浓缩，残余物用快速柱色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)获得白色固体化合物3(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-羧酸乙酯)(3g,产率:42.8％)。MS(ESI)m/z:265[M+H]+。TLC：石油醚/乙酸乙酯(5/1)；R f(化合物1)＝0.2；R f(化合物3)＝0.5。
(2)化合物4(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000013
将化合物3(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-羧酸乙酯)(3.0g,11.4mmol,1.0eq)溶解于氨/甲醇混合液(40mL)中，将混合物封闭在反应管中，于80℃加热搅拌16个小时。过滤固体物获得白色固体化合物4(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-羧酰胺)(1.9g,产率:71.2％)。MS(ESI)m/z:236[M+H]+。TLC：石油醚/乙酸乙酯(3/1)；R f(化合物3)＝0.6；R f(化合物4)＝0.4。
(3)化合物5(5-(3-甲酰基-2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-腈)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000014
在有氮气保护的条件下，于0℃将三氯氧磷(2.48g,16.2mmol,2.0eq)逐滴加入到二甲基甲酰胺(30mL)。将混合物于0℃搅拌30分钟，然后升到室温。将溶解于二甲基甲酰胺(4mL)的化合物4(5-(2,5- 二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-羧酰胺)(1.9g,8.09mmol,1.0eq)加入上述反应体系中。然后在有氮气保护的条件下，将上述反应液加热至100℃搅拌一个小时。待反应液冷却，将混合物倒入冰水，然后用30％NaOH水溶液调节pH＝10。将混合物用乙酸乙酯萃取，并用盐水洗后，将有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物用快速柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)获得化合物白色固体化合物5(5-(3-甲酰基-2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-腈)(1.3g,产率:65.6％)。MS(ESI)m/z:246[M+H]+。TLC：石油醚/乙酸乙酯(2/1)；R f(化合物4)＝0.3；R f(化合物5)＝0.5。
(4)化合物6(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000015
将化合物5(5-(3-甲酰基-2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-2-甲基噻唑-4-腈)(1.7g,6.93mmol,1.0eq)溶解于四氢呋喃/叔丁醇/水(1/1/1,45mL)，于0℃条件下，加入磷酸二氢钾(4.71g,34.65mmol,5.0eq)、2-甲基-1-丁烯(4.86g,69.3mmol,10.0eq)和亚氯酸钠(3.76g,41.58mmol,6.0eq)。将反应物于室温搅拌回流16个小时，但反应完成后，将混合物浓缩，然后用制备型高压液相纯化获得白色固体化合物6(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)(450mg,产率:25％)。MS(ESI)m/z:262[M+H +]。
(5)化合物AB29502(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000016
将化合物6(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)(55mg,0.21mmol,1.0eq)溶解于乙腈(2.0mL)中，加入化合物8(6-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-胺)(46mg,0.273mmol,1.3eq)、2-甲基咪唑NMI(69mg,0.84mmol,4.0eq)和四甲基氯代脲六氟磷酸酯TCFH(71mg,0.25mmol,1.2eq)。将混合物于室温搅拌1个小时。待反应完成后，将混合物浓缩，然后用制备型高压液相分离纯化获得黄色固体化合物AB29502(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)(2.5mg,产率:2.9％)。MS(ESI)m/z:408.3[M+H +]。 1H NMR(400MHz,CD 3OD-d4)δ8.33(s,1H),7.21(s,1H),6.70(s,1H),4.09(s,3H),2.78(s,3H),2.48(s,3H),2.15(s,3H)。
实施例2：化合物AB29509(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000017
将化合物6(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)(100mg,0.38mmol,1.0eq)溶解于乙腈中(5.0mL)，加入化合物9(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺)(81mg,0.50mmol,1.3eq)、2-甲基咪唑NMI(126mg,1.53mmol,4.0eq)和四甲基氯代脲六氟磷酸酯TCFH(129mg,0.46mmol,1.2eq)。将混合物于 室温搅拌1个小时。待反应完成后，将混合物浓缩，用制备型高压液相纯化获得黄色固体化合物AB29509(1-(4-氰基-2-甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)(3.0mg,产率:1.9％)。MS(ESI)m/z:407.10[M+H +]。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.45(d,J＝10Hz,1H),7.10(s,1H),6.88(d,J＝8.8Hz,1H),6.81(s,1H),3.76(s,3H),2.76(s,3H),2.42(s,3H),2.09(s,3H)。
实施例3：化合物AB24386(1-(3-氰基-5-甲基噻吩-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的合成
(1)化合物3(2-乙酰基-4-戊酮酸乙酯)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000018
将化合物1(乙酰乙酸乙酯)(5g,38.42mmol,1.0eq)溶解于三乙胺(75mL)中，加入化合物2(氯丙酮)(3.5g,38.42mmol,1.0eq)。在有氮气保护的条件下，将反应物于110℃反应2个小时。浓缩之后，将残余物溶解于水(100mL)，然后用二氯甲烷提取两次(每次50mL)。将有机层用盐水洗后，用无水硫酸钠干燥，过滤然后浓缩。将残余物用快速柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至50/1至20/1)纯化后获得作为无色油状物的化合物3(2-乙酰基-4-戊酮酸乙酯)(1.3g,产率:18.3％)。MS(ESI)m/z:187[M+H +]。TLC：PE/EA(2/1)；R f(化合物1)＝0.6；R f(化合物3)＝0.4。
(2)化合物5(1-(3-氰基-5-甲基噻吩-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000019
将化合物3(2-乙酰基-4-戊酮酸乙酯)(1g,7.23mmol,1.0eq)溶解于甲苯(20mL)中，加入化合物4(2-氨基-3-氰基-5-甲基噻吩)(1.6g,8.68mmol,1.2eq)和对甲苯磺酸(249mg,1.45mmol,0.2eq)。将反应物于110℃搅拌16小时。将固体物过滤后浓缩。将残余物用快速柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至30/1)获得黄色油状化合物5(1-(3-氰基-5-甲基噻吩-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯)(860mg,产率:41％)。MS(ESI)m/z:289[M+H +]。TLC：石油醚/乙酸乙酯(10/1)；R f(化合物3)＝0.2；R f(化合物5)＝0.4。
(3)化合物AB24386(1-(3-氰基-5-甲基噻吩-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000020
将化合物5(1-(3-氰基-5-甲基噻吩-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯)(50mg,0.306mmol,1.0eq)和溶解于1mL甲苯的化合物7(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-胺)(88mg,0.306mmol,1.0eq)中加入三甲基铝(0.15mL,0.306mmol,1.0eq,2M溶于甲苯)。反应物于100℃搅拌16小时。将混合物冷却到室温，用甲醇(10mL)淬冷，然后用3M盐酸调节pH到3。将混合物用水(30mL)稀释，然后用乙酸乙酯萃取三次，每次20ml。将有机层用盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩。残余物用制备型高压液相Prep-HPLC(乙腈/水(含0.1％甲酸))获得白色固体化合物AB24386(1-(3-氰基-5-甲基噻吩-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)(5mg,产率:4％)。MS(ESI)m/z:406[M+H +]。 1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6):δ12.04(s,1H),11.20(s,1H),7.32(s,1H),7.29(s,1H),6.98(s,1H),6.89(s,1H),6.69(d,J＝7.2Hz,1H),3.73(s,3H),2.47(s,3H)，2.38(s,3H)，2.04(s,3H)。
实施例4：化合物AB24387(1-(3-氨基甲酰基-5-甲基噻吩-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000021
将化合物AB24386(1-(3-氰基-5-甲基噻吩-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)(15mg,0.037mmol,1.0eq)溶解于乙醇(4mL)中，加入氢氧化钠(0.5mL,4M在H 2O中)。将混合物于80℃搅拌2个小时。待反应冷却后，将混合物用水稀释(10mL)，然后用3N的盐酸调节pH＝6-7。将混合物用乙酸乙酯萃取三次(20mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残余物用制备型高压液相纯化(乙腈/水/0.1％甲酸)后获得白色固体化合物AB24387(1-(3-氨基甲酰基-5-甲基噻吩-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)(6mg,产率:38.4％)。MS(ESI)m/z:424[M+H +]。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.98(s,1H),11.02(s,1H),7.27(s,2H),7.23(s,1H),6.95(s,1H),6.76(s,1H),6.66(d,J＝8.4Hz,1H),3.71(s,3H),3.31(s,3H)，2.31(s,3H)，1.94(s,3H)。
实施例5：化合物AB29505(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的合成
(1)化合物2((2,4-二甲基噻唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯)的合成方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000022
将化合物1(2,4-二甲基-1,3-噻唑-5-羧酸)(2g,12.72mmol,1.0eq)溶解于叔丁醇中(40mL)，加入叠氮磷酸二苯酯DPPA(4.5g,16.53mmol,1.3eq)、和三乙胺(TEA)(3.2g,31.8mmol,2.5eq)。将混合物在有氮气保护的条件下，于85℃搅拌3小时。然后将反应物浓缩，残余物用水(80mL)溶解，然后用乙酸乙酯萃取三次(80mL×3)。然后将有机层合并，用无水Na 2SO 4干燥，过滤然后浓缩。残余物用快速柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝200/1至150/1)后获得黄色固体化合物2((2,4-二甲基噻唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯)(2.7g,产率:93.1％)。MS(ESI)m/z:229.0[M+H]+。TLC：二氯甲烷/甲醇(20:1)；R f(化合物1)＝0.2；R f(化合物2)＝0.7。
(2)化合物3(2,4-二甲基噻唑-5-胺盐酸盐)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000023
将化合物2((2,4-二甲基噻唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯)(1.7g,7.44mmol,1.0eq)溶解于乙酸乙酯/盐酸混合液HCl/EA(20mL,4M)中，于室温搅拌3个小时。然后将固体物过滤，用乙醚洗两次(5mL×2)，之后浓缩获得黄色固体化合物3(2,4-二甲基噻唑-5-胺盐酸盐)(1.1g,产率:91.6％)。MS(ESI)m/z:129.0[M+H]+。TLC：石油醚/乙酸乙酯(1:1)；R f(化合物2)＝0.5；R f(化合物3)＝0.2。
(3)化合物5(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸甲酯)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000024
将化合物3(2,4-二甲基噻唑-5-胺盐酸盐)(1.1g,6.68mmol,1.0eq)溶解于甲苯(20mL)中，加入化合物4(2-乙酰基-4-戊酮酸甲酯)(1.7g,10.02mmol,1.5eq)、3A分子筛(2g)和对甲苯磺酸(459mg,2.67mmol,0.4eq)。将混合物于85℃搅拌4个小时。然后将固体物过滤浓缩。残余物用快速柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)后获得黄色固体化合物5(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸甲酯)(1.6g,产率:90.9％)。MS(ESI)m/z:265[M+H]+。TLC：石油醚/乙酸乙酯(5:1)；R f(化合物3)＝0.1；R f(化合物5)＝0.7。
(4)化合物6(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000025
将化合物5(1.6g,6.05mmol,1eq)溶解于甲醇/水溶液MeOH/H 2O(10mL/10mL)中，然后加入氢氧化锂LiOH(579mg,24.2mmol,4eq)。将混合物于50℃搅拌1个小时。待反应完成后，将产物浓缩，然后用水稀释(50mL)，之后用3N盐酸调节pH＝5。将固体物过滤浓缩后获得黄色固体化合物6(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)(950mg,产率:62.7％)。MS(ESI)m/z:251[M+H]+。TLC：石油醚/乙酸乙酯(5:1)；R f(化合物5)＝0.7；R f(化合物6)＝0.2。
(5)化合物AB29505(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000026
将化合物6(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)(100mg,0.399mmol,1.0eq)溶解于二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入化合物7(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺)(65mg,0.399mmol,1.0eq)、N,N-二异丙基乙胺DIEA(206mg,1.596mmol,4.0eq)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲HATU(167mg,0.439mmol,1.1eq)。将混合物于室温搅拌16个小时。待反应完成后，将反应物用乙酸乙酯稀释(30mL)，用饱和氯化钠水溶液洗三次(20mL×3)。将有机层干燥过滤浓缩。残余物用制备型高压液相纯化后获得黄色固体化合物AB29505(1-(2,4-二甲基噻唑-5-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)(10.8mg,产率:6.8％)。MS(ESI)m/z:395[M+H]+。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.30(d,J＝8.8Hz,1H),6.98(s,1H),6.83(s,1H),6.70-6.68(m,1H),3.73(s,3H),2.64(s,3H),2.31(s,3H),2.01(s,3H),1.96(s,3H)。
实施例6：化合物AB29510(1-(3-氰基-4,5-二甲基呋喃-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的合成
(1)化合物2(1-(3-氰基-4,5-二甲基呋喃-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000027
将化合物1(2-(3-甲酰基-2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4,5-二甲基呋喃-3-甲腈)(1.2g,4.9mmol,1.0eq)溶解于四氢呋喃、叔丁醇和水的混合液THF/t-BuOH/H 2O(1/1/1,30mL)中，于0℃条件下，加入磷酸二氢钾KH 2PO 4(2.9g,24.7mmol,5.0eq)、2-甲基-1-丁烯(3.0g,49.5mmol,10.0eq)和亚氯酸钠(2.4g,29.7mmol,6.0eq)。将混合物于室温搅拌16个小时。待反应完成后，将混合物浓缩，然后用制备型高压液相色谱纯化，获得白色固体化合物6(1-(3-氰基-4,5-二甲基呋喃-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)(1.0g,产率:78.1％)。MS(ESI)m/z:259[M+H +]。
(2)化合物AB29510(1-(3-氰基-4,5-二甲基呋喃-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000028
将化合物2(1-(3-氰基-4,5-二甲基呋喃-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸)(60mg,0.23mmol,1.0eq)溶解于乙腈(2.0mL)中，加入化合物3(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺盐酸盐)(50mg,0.30mmol,1.3eq)、N-甲基咪唑NMI(77mg,0.94mmol,4.0eq)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐TCFH(79mg,0.28mmol,1.2eq)。将混合物于室温搅拌16小时。待反应完成后，将混合物浓缩，然后制备型高压液相色谱纯化后获得黄色固体化合物AB29510(1-(3-氰基-4,5-二甲基呋喃-2-基)-N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-羧酰胺)(2.4mg,产率:78.1％)。MS(ESI)m/z:404.30[M+H +]。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.11(s,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,1H),6.74(s,1H),3.77(s,3H),2.41(s,3H),2.29(s,3H),2.10(s,3H),2.07(s,3H)。
实施例7：化合物AB29513(N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酰胺)的合成
(1)化合物3(2,5-二甲基-1-(((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯)的合成方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000029
将化合物1(4-(氨基甲基)-1-甲基吡唑)(500mg,4.5mmol,1.0eq)溶解于甲苯(20mL)中，加入化合物2(2-乙酰基-4-戊酮酸甲酯)(1.16g,6.75mmol,1.5eq)、3A分子筛(1g)和对甲苯磺酸(310mg,1.8mmol,0.4eq)。将混合物于100℃搅拌8个小时。将固体物过滤浓缩，残余物用快速柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)后获得黄色固体化合物3(2,5-二甲基-1-(((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯)(650mg,产率:58.4％)。MS(ESI)m/z:248[M+H]+。TLC：石油醚/乙酸乙酯(2:1)；R f(化合物1)＝0.1；R f(化合物3)＝0.6。
(2)化合物4(2,5-二甲基-1-(((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酸)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000030
将化合物3(2,5-二甲基-1-(((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯)(300mg,1.21mmol,1eq)溶解于甲醇/水溶液(10mL/10mL)中，然后加入氢氧化锂(43mg,1.81mmol,1.5eq)。将混合物加热到85℃之后搅拌3个小时。将反应物浓缩后，用水稀释(20mL)，之后用3N盐酸调节pH＝5。将固体物过滤浓缩获得黄色固体化合物4(2,5-二甲基-1-(((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酸)(110mg,产率:39％)。MS(ESI)m/z:234[M+H]+。TLC：二氯甲烷/甲醇(20:1)；R f(化合物3)＝0.7；R f(化合物4)＝0.3。
(3)化合物AB29513(N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酰胺)的制备方法
Figure PCTCN2022102010-appb-000031
将化合物4(2,5-二甲基-1-(((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酸)(110mg,0.47mmol,1.0eq)溶解于乙腈(5mL)中，加入化合物5(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-胺)(100mg,0.61mmol,1.0eq)、N-甲基咪唑NMI(154mg,1.88mmol,4.0eq)和四甲基氯代脲六氟磷酸酯TCFH(158mg,0.56mmol,1.2eq)。将混合物于室温搅拌16小时。待反应完成后，将混合物用乙酸乙酯稀释(30mL)，用饱和氯化钠水溶液洗三次(20mL×3)。将有机层干燥，过滤浓缩。残余物用制备型高压液相色谱纯化后获得黄色固体化合物AB29513(N-(6-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2,5-二甲基-1-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-羧酰胺)(35mg,产率:19.6％)。MS(ESI)m/z:379[M+H]+。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.55(s,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.25(s,1H),7.13(s,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,1H),6.52(s,1H),4.90(s,2H),3.76(d,J＝10.8Hz,6H),2.59(s,3H),2.23(s,3H)。
实施例8：化合物AB29522的合成
(1)化合物5的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000032
化合物4(5.00g,31.6mmol,5.24mL,1.00eq)中加入四氢呋喃(25.0mL)，反应液降温至0℃，在0℃下加入氢化钠(1.52g,37.9mmol,632uL,60％purity,1.20eq)，反应液在0℃反应30分钟。氯丙酮(2.95g,31.9mmol,1.01eq)中加入四氢呋喃(10.0mL)后慢慢在0℃下滴加至上述反应液中，滴加完后加入碘化钠(473mg,3.16mmol,0.100eq)，反应液在20℃下搅拌反应16个小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝3:1,R f＝0.25)显示有部分原料剩余，有极性变大的新点生成。反应结束后，反应液慢慢倒入饱和氯化铵水溶液中淬灭，乙酸乙酯萃取三次(50.0mL*3)，合并有机相用饱和食盐水反洗一次(30.0mL)，分出的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品通过柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)，得到化合物5(4.00g,16.8mmol,收率53.16％,纯度90％)为浅黄色油。
(2)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000033
化合物1(3.00g,11.8mmol,1.00eq)中加入1-甲基-2-吡咯烷酮(10mL)，乙酰氯(1.12g,14.2mmol,1.01mL,1.20eq)加入到反应液中，反应液在20℃下搅拌反应16个小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)检测到强紫外点生成。LCMS显示检测到目标产物峰生成。反应液中加入水(30.0mL)，加入饱和碳酸氢钠水溶液调Ph＝7-8，乙酸乙酯萃取两次(50.0mL*2)，合并有机相用饱和食盐水反洗一次(20.0mL)，分出有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩。得到化合物2(1.66g,crude)为黄色固体(LCMS:Ms:M+H +＝124.5)，直接用于下一步反应。
(3)化合物3的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000034
化合物2(500mg,4.06mmol,1.00eq)中加入甲苯(5.00mL)，化合物5(870mg,4.06mmol,1.00eq)和无水对甲苯磺酸(140mg,812umol,0.200eq)加入到反应液中，反应液在110℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应液中直接加入水(30.0mL)，乙酸乙酯萃取两次(50.0mL*2)，合并有机相用饱和食盐水反洗一次(20.0mL)，分出有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品中加入乙酸乙酯(20.0mL)搅拌20分钟后过滤，收集滤饼得到300mg。滤液通过柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)得到140mg。得到化合物3(440mg,1.70mmol,收率41.97％,纯度95％)为灰色固体。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 6.47(s,1H),2.58(s,3H),2.47(s,3H),2.15(s,3H)。
(4)化合物AB29522的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000035
化合物3(50.0mg,204umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，化合物A014(33.3mg,204umol,1.00eq)、N,N-二异丙基乙胺(105mg,815umol,142uL,4.00eq)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(117mg,224umol,1.10eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物峰生成。反应液直接浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(ammonia hydroxide v/v)-ACN]；B％:27％-57％,2min)，得到化合物AB29522(20.0mg,48.05umol,收率23.57％,纯度93.8％)为棕色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 11.83-12.34(m,1H),10.96-11.64(m,1H),7.33(d,J＝8.63Hz,1H),7.01(br s,1H),6.92(s,1H),6.73(dd,J＝8.63,2.38Hz,1H),3.76(s,3H),2.57(s,3H),2.50(s,3H),2.17(s,3H)。LCMS:Ms:M+H +＝391。
实施例9：化合物AB29553的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000036
化合物1(25.0g,215mmol,23.1mL,1.00eq)中加入丙酮(140mL)，碳酸钾(59.5g,430mmol,2.00eq)和氟化钾(12.5g,215mmol,1.00eq)加入到反应液中，反应混合物在60℃下搅拌反应1个小时，反应液冷却至20℃，将氯丙酮(25.7g,278mmol,1.29eq)溶于丙酮(35.0mL)中的溶液慢慢滴加到上述反应混合物中，滴加完后，反应混合物升温至60℃下搅拌反应7个小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5:1,R f＝0.38)显示化合物1反应完全，检测到极性变大的新点生成。反应液冷却至室温后过滤，收集滤液慢慢倒入水(500mL)中，乙酸乙酯萃取(500mL*3)，合并有机相用饱和食盐水洗涤(200mL)，分出有机相用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩。粗品通过柱层析分离纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝20/1to 1/1)，得到化合物2(21.0g,122mmol,收率56.6％)为浅黄色液体。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 4.03(dd,J＝8.19,5.69Hz,1H),3.74(s,3H),3.09-3.22(m,1H),2.89-3.02(m,1H),2.36(s,3H),2.19(s,3H).
(2)化合物4的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000037
化合物2(10.0g,58.0mmol,1.00eq)中加入甲苯(70.0mL)，将化合物3(8.83g,63.9mmol,1.10eq)和无水对甲苯磺酸(2.00g,11.6mmol,0.2eq)加入到反应液中，反应液在110度下搅拌反应5个小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝10:1，R f＝0.43)显示化合物2反应完全，生成极性变小的新点。反应液直接浓缩，浓缩后的残渣中加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取三次(100mL*3)，合并有机相用饱和食盐水反洗一次(50.0mL)，分出有机相用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩。粗品通过柱层析分离纯化(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝20：1至1：1)，得到化合物4(11.2g,39.5mmol,收率67.9％)为黄色固体。
(3)化合物5的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000038
将化合物4(6.00g,21.9mmol,1.00eq)溶于四氢呋喃(20.0mL)和甲醇(20mL)中，将一水合氢氧化锂(2.29g,54.7mmol,2.50eq)溶于水(6.00mL)中的溶液加入到上述反应液中，反应混合物在60度下搅拌反应3个小时。LCMS显示约有25％化合物4剩余，检测到50％目标产物生成。反应液在水泵下浓缩除去溶剂，浓缩后的残渣中慢慢加入2N盐酸溶液至pH＝5-6，然后用乙酸乙酯萃取两次(80.0mL*2)，有机相用饱和食盐水反洗一次(50.0mL)，分出有机相无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品通过柱层析分离纯化(二氧化硅,石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)，得到化合物5(2.10g,8.07mmol,收率36.9％)为黄色固体(LCMS:Ms:M+H +＝261.3)。
(4)化合物AB29553的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000039
化合物5(50.0mg,192umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，将二异丙基乙基胺(99.3mg,768umol,134uL,4.00eq)、化合物A12(25.6mg,192umol,1.00eq)加入到反应液中，然后将六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(110mg,211umol,1.10eq)加入到反应液中，反应混合物在100℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料反应完，检测到目标产物峰生成。反应液直接浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Ultimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(TFA)-ACN]；B％:26％-56％,10min)，得到化合物AB29553(15.0mg,30.3umol,收率15.8％,纯度98.9％,三氟乙酸盐)为白色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 7.61(dd,J＝5.88,3.13Hz,2H),7.37(d,J＝1.13Hz,1H),7.29(br dd,J＝5.44,2.81Hz,2H),6.84(s,1H),2.56(br d,J＝1.00Hz,3H),2.44(s,3H),2.11(s,3H).LCMS:Ms：M+H +＝376。
实施例10：化合物AB29556的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000040
在实施例16中得到的化合物5(60.0mg,230umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，将N,N-二异丙基乙胺(119mg,922umol,160uL,4.00eq)加入到反应液中，将化合物A020(34.8mg,230umol,1.00eq)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(132mg,253umol,1.10eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应8个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物峰生成，反应液在油泵下浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Ultimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(TFA)-ACN]；B％:30％-60％,15min)，然后进行二次纯化(column:Waters xbridge 150*25mm10um；mobile phase:[water(NH 4HCO 3)-ACN]；B％:38％-68％,8min)，得到化合物AB29556(6.03mg,15.2umol,收率6.58％,纯度99％)为白色的固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.29(br s,1H),11.33(td,J＝6.13,1.63Hz,1H),7.38-7.51(m,1H),7.35(d,J＝1.13Hz,1H),7.14-7.31(m,1H),6.83-7.06(m,2H),2.55(br d,J＝0.88Hz,3H),2.41(s,3H),2.06(s,3H)。LCMS:Ms:M+H +＝394。
实施例11：化合物AB29557的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000041
在化合物1(500mg,3.51mmol,1.00eq)中加入水(1.00mL)和乙醇(5.00mL)，将溴氰(446mg,4.21mmol,309uL,1.20eq)在20度下加入到反应液中，反应液在70度下搅拌反应2个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应结束后，反应液直接浓缩，粗品中加入乙酸乙酯(30.0mL)并搅拌30分钟后过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤两次(5.00mL*2)，收集滤饼。得到化合物2(700mg,2.68 mmol,收率76.3％,纯度95％,氢溴酸盐)为黑色的固体。 1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.39(d,J＝1.38Hz,1H),7.32-7.36(m,1H),7.25-7.30(m,1H).LCMS:Ms:M+H +＝168。
(2)化合物AB29557的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000042
在化合物2(50.0mg,192umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，将化合物5(35.4mg,211umol,1.10eq)、N,N-二异丙基乙胺(99.3mg,768umol,134uL,4.00eq)加入到反应液中，然后将六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(110mg,211umol,1.10eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物峰生成。反应液在油泵下浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(NH 4HCO 3)-ACN]；B％:43％-73％,2min)，得到化合物AB29557(0.022g,50.9umol,收率26.5％,纯度94.9％)为黄色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.31-12.45(m,1H),11.38-11.45(m,1H),7.39-7.54(m,2H),7.36(d,J＝1.13Hz,1H),7.08-7.16(m,1H),6.95(s,1H),2.55(br s,3H),2.42(s,3H),2.07(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝410。
实施例12：化合物AB29558的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000043
将化合物1(350mg,2.52mmol,1.00eq)溶解到乙醇(2.00mL)和水(0.40mL)中，在20℃下将溴化氰(0.26g,2.45mmol,180uL,1.10eq)慢慢加入到上述混合液中。将反应液在70℃下搅拌2小时。LCMS显示出化合物1被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下浓缩。通过薄层色谱(二氯甲烷：甲醇＝5：1，2.00mL氨水)进行纯化。得到化合物2(80.0mg,487umol,19.3％yield)为褐色油。LCMS:Ms：M+H +＝165。
(2)化合物AB29558的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000044
将化合物2(69.3mg,266umol,1.00eq)溶解到N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中，加入化合物5(70.0mg)和N,N-二异丙基乙胺(137mg,1.07mmol,185uL,4.00eq)，将六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(152mg,293umol,1.10eq)加入到反应液中，将反应混合液在100℃下搅拌12小时。LCMS显示原料消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下浓缩。通过高效液相色谱进行第一次纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(NH 3H 2O)-ACN]；B％: 25％-55％,8min)。通过高效液相色谱进行第二次纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(HCl)-ACN]；B％:16％-46％,8min)。得到化合物AB29558(8.68mg,19.4umol,7.28％yield,99％purity,盐酸盐)为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.68-11.92(m,1.00H),8.27(br s,1.00H),7.25(d,J＝1.13Hz,1.00H),6.96-7.06(m,1.00H),6.86(s,1.00H),3.89(s,3.00H),2.44(d,J＝1.00Hz,3.00H),2.31(s,3.00H),1.97(s,3.00H).LCMS:Ms：M+H +＝407。
实施例13：化合物AB29559的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000045
在化合物1(500mg,3.62mmol,1.00eq)中加入乙醇(5.00mL)和水(1.00mL)，将溴化氰(460mg,4.34mmol,319uL,1.20eq)在20度下加入到反应液中，反应液在70度下搅拌反应3个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应结束后，反应液直接浓缩，粗品中加入乙酸乙酯(30mL)并搅拌半个小时，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤两次(5.00mL*2)，收集滤饼，得到化合物2(700mg,crude)为棕色固体(LCMS:Ms:M+H +＝164.2)。
(2)化合物AB29559的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000046
在化合物2(60.0mg,230umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，将N,N-二异丙基乙胺(119mg,922umol,160uL,4.00eq)、化合物5(37.6mg,230umol,1.00eq)加入到反应液中，然后将六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(132mg,253umol,1.10eq)加入到反应液中，反应混合物在100度下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应液直接浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Ultimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(FA)-ACN]；B％:32％-62％,10min)，得到化合物AB29559(20.0mg,43.8umol,收率19.0％,纯度98.9％,甲酸盐)为灰白色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.04-13.00(m,1H),11.04-11.86(m,1H),8.14(s,1H),7.36(d,J＝1.13Hz,1H),7.12-7.18(m,1H),7.02-7.09(m,1H),6.90(s,1H),6.73(d,J＝8.00Hz,1H),3.93(s,3H),2.55(d,J＝0.75Hz,3H),2.42(s,3H),2.08(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝406。
实施例14：化合物AB29560的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000047
将甲胺盐酸盐(1.44g,21.4mmol,5.00eq,HCl)溶解到N-甲基吡咯烷酮(10.0mL)中，加入化合物1(780mg,4.27mmol,1.00eq)和碳酸钾(2.95g,21.4mmol,5.00eq)。将混合液在150℃下搅拌反应24个小时。LCMS显示出化合物1被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液中加入水(50.0mL)， 然后加入乙酸乙酯(50mL*3)萃取三次，合并有机相用饱和食盐水(20.0mL)反洗一次，分出有机相用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到化合物2(1.00g,crude)是粗品(LCMS:Ms:M+H +＝178.2)，直接用于下一步。
(2)化合物AB29560的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000048
在化合物5(0.05g,192umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，将化合物2(34.04mg,192umol,1.00eq)、N,N-二异丙基乙胺(99.3mg,768umol,134uL,4.00eq)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(110mg,211umol,1.10eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应液直接浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Phenomenex C18 150*25mm*10um；mobile phase:[water(NH4HCO3)-ACN]；B％:36％-66％,10min)，得到化合物AB29560(23.0mg,52.9umol,收率13.8％,纯度96.5％)为灰白色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.20(br s,1H),7.29-7.44(m,2H),6.97-7.11(m,1H),6.76(dd,J＝8.69,2.19Hz,1H),5.98-6.11(m,1H),3.77(s,3H),3.56(br d,J＝11.76Hz,3H),2.54(s,3H),2.22(s,3H),1.99(br d,J＝4.75Hz,3H).LCMS:Ms:M+H +＝420。
实施例15：化合物AB29561的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000049
将化合物1(5.00g,29.2mmol,1.00eq)溶解到二氯甲烷(50.0mL)中，然后加入甲胺(3.95g,58.4mmol,2.00eq,盐酸盐)和碳酸钾(6.06g,43.8mmol,1.50eq)，将反应混合液在20℃下搅拌12小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)检测到到化合物1被消耗完，并检测到一个极性变大的新点。通过薄层色谱(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)进行纯化。得到化合物2(3.50g,82.3umol,70.0％收率)为黄色固体。
(2)化合物3的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000050
将化合物2(5.00g,27.4mmol,1.00eq)溶解到甲醇(500mL)中，加入Pd/C(2.00g,10％纯度)后用氢气置换3次。将混合液在25℃、15Psi下搅拌12小时。LCMS显示出化合物2被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下过滤，滤液收集后减压浓缩，得到化合物3(3.5g,粗品)为褐色油(LCMS:Ms:M+H +＝153.2)。
(3)化合物4的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000051
将化合物3(500mg,3.29mmol,1.00eq)溶解到水(1.00mL)和乙醇(5.00mL)中，然后在25℃下慢慢将溴化氰(417mg,3.94mmol,289uL,1.20eq)加入到上述混合液中。将反应体系在70℃下慢慢搅拌4小时。LCMS显示出化合物化合物3被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下浓缩，加入乙酸乙酯(20.0mL)打浆后真空下过滤，收集滤饼减压浓缩，得到化合物4(340mg,粗品)为白色固体(LCMS:Ms:M+H +＝178.1)。
(4)化合物AB29561的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000052
将化合物4(163mg,921umol,3.00eq)溶解到N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(238mg,1.84mmol,321uL,6.00eq)，将化合物5(80.0mg,307umol,1.00eq)和六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(175mg,338umol,1.10eq)加入到反应液中，将混合液在100度下搅拌12小时。LCMS显示出化合物原料被消耗完并检测到目标产物分子量。将反应液在真空下浓缩。粗品通过高效液相色谱进行纯化(column:Waters xbridge 150*25mm 10um；mobile phase:[water(NH 4HCO 3)-ACN]；B％:41％-71％,9min)，得到化合物AB29561(10.9mg,26.1umol,8.50％收率)为白色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.32-12.45(m,1H),7.27-7.34(m,2H),7.04(br d,J＝2.00Hz,1H),6.75(br dd,J＝8.76,2.13Hz,1H),6.51(s,1H),3.79(s,3H),3.59(s,3H),2.52(s,6H),1.98-2.09(m,3H).LCMS:Ms：M+H +＝420。
实施例16：化合物AB29562和AB29563的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000053
在化合物1(100mg,246umol,1.00eq)中加入四氢呋喃(0.5mL)和二甲基亚砜(0.5mL)，将叔丁醇钾(55.2mg,493umol,2.00eq)加入到反应液中，然后将氯甲基甲醚(29.8mg,369umol,28.1uL,1.50eq)滴加到反应液中，反应液在20℃下搅拌反应2个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物峰生成。反应结束后，反应液直接加入水(5.00mL)，用乙酸乙酯萃取两次(5.00mL*2)，合并有机相后干燥浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(NH4HCO3)-ACN]；B％:42％-72％,10min)，得到的产物再经过SFC分离(column:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10um)；mobile phase:[0.1％NH 3H 2O MEOH]；B％:35％-35％,C6.8；68min)，得到化合物AB29562(5.49mg,11.66umol,收率4.73％,纯度95.51％)为灰白色固体，并且得到化合物AB29563(7.44mg,15.9umol,收率6.47％,纯度96.38％)为灰白色固体。
化合物AB29562： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 7.40(br d,J＝8.25Hz,1H),7.26(s,1H),7.04(br s,1H),6.82(br d,J＝8.25Hz,1H),6.55(br s,1H),5.57(br s,2H),3.83(s,3H),3.37(s,3H),2.56(s,3H),2.50(br s,3H),2.08(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝450。
化合物AB29563： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.41-12.65(m,1H),7.27-7.41(m,2H),7.10(d,J＝2.38Hz,1H),6.82(dd,J＝8.76,2.38Hz,1H),6.54(s,1H),5.55(s,2H),3.69-3.84(m,3H),3.30(s,3H),2.54(s,3H),2.48(br s,3H),2.05(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝450。
实施例17：化合物AB29564和AB29565的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000054
在化合物1(100mg,246umol,1.00eq)中加入二甲基亚砜(1.00mL)，将叔丁醇钾(60.9mg,542umol,2.20eq)加入到反应液中，然后将三甲基氯乙酸氯甲酯(74.3mg,493umol,71.4uL,2.00eq)加入到反应液中，反应液在30℃下搅拌反应5个小时。LCMS显示有5％左右的原料剩余，检测到目标产物主峰生成。反应液中加入水(10.0mL)，用乙酸乙酯萃取两次(20.0mL*2)，合并有机相用饱和食盐水反洗一次(10.0mL)，分出有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(NH3H2O)-ACN]；B％:55％-85％,8min)，得到的产物再经SFC分离(column:DAICEL CHIRALCEL OD(250mm*30mm,10um)；mobile phase:[0.1％NH 3H 2O MeOH]；B％:35％-35％,C7.5；60min)，得到化合物AB29564(5.36mg,9.62umol,收率3.90％,纯度93.2％)为灰白色固体，并且得到化合物AB29565(5.39mg,9.81umol,收率3.98％,纯度94.6％)为灰白色固体。
化合物AB29564： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 7.38(br d,J＝8.63Hz,1H),7.25(s,1H),7.12(s,1H),6.79-6.94(m,1H),6.52(s,1H),6.06-6.30(m,2H),3.82(s,3H),2.55(s,3H),2.49(br s,3H),2.07(s,3H),1.14(s,9H).LCMS:Ms:M+H +＝520.
化合物AB29565： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.32-12.70(m,1H),7.39(br d,J＝8.38Hz,1H),7.31(s,1H),7.08(br s,1H),6.84(br d,J＝8.38Hz,1H),6.50(br s,1H),6.16(br s,2H),3.77(s,3H),2.53(s,3H),2.46(br s,3H),2.05(s,3H),1.09(s,9H).LCMS:Ms:M+H +＝520。
实施例18：化合物AB29572的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000055
在化合物5(50.0mg,192umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1.00mL)，将化合物A007(41.7mg,192umol,1.00eq)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(110mg,211umol,1.10eq)、N,N-二异丙基乙胺(99.3mg,768umol,134uL,4.00eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应8个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物峰生成。反应液在油泵下浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(NH 4HCO 3)-ACN]；B％:48％-78％,2min)，得到化合物AB29572(6.39mg,12.7umol,收率6.61％,纯度91.3％)为黄色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.45(br s,1H),11.44(br s,1H),7.38-7.59(m,2H),7.35(s,1H),7.08(br d,J＝8.50Hz,1H),6.96(s,1H),2.55(s,3H),2.42(s,3H),2.07(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝460。
实施例19：化合物AB29540的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000056
在化合物1(0.7g,5.07mmol,1eq)中加入盐酸(15mL，5.5M)，将羟基乙酸(424mg,5.57mmol,339uL,1.10eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物峰生成。反应液中慢慢加入饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝7-8，用乙酸乙酯萃取两次(50mL*2)，合并有机相干燥浓缩。粗品通过柱层析纯化(乙酸乙酯：甲醇＝1:1)，得到化合物2(160mg,808umol,15.9％收率,90％纯度)为棕色固体(LCMS:Ms:M+H +＝179.4)。
(2)化合物3的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000057
在化合物2(160mg,898umol,1.00eq)中加入氢氧化钠(71.8mg,1.80mmol,2.00eq)和水(2mL)的混合溶液，反应液在100℃下搅拌反应2个小时，反应液在冷却至室温后加入高锰酸钾(150mg,949umol,1.06eq)，反应液继续加热至100℃然后搅拌反应2个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应结束后，反应液冷却至室温过滤，滤液用盐酸(2N)调至pH＝4-5，过滤，滤饼用水洗涤一次，收集滤饼在真空下干燥。得到化合物3(0.1g,crude)为红色固体(LCMS:Ms:M+H +＝193.3)。
(3)化合物6的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000058
在化合物5(500mg,1.92mmol,1.00eq)中加入甲苯(5mL)，将DPPA(1.48g,5.38mmol,1.17mL,2.80eq)和三乙胺(777mg,7.68mmol,1.07mL,4.00eq)加入到反应液中，反应液在110℃搅拌反应1个小时。将叔丁醇(5mL)加入到反应液中，反应液继续在110℃下搅拌反应2个小时。LCMS显示有目标产物生成。反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取两次(15mL*2)，合并有机相浓缩。粗品通过薄层色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物6(50.0mg,105umol,5.50％收率,70％纯度)为黄色油。
(4)化合物7的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000059
在化合物6(30.0mg,90.5umol,1.00eq)中加入三氟乙酸(0.1mL)和二氯甲烷(2mL)的混合液，反应液在20℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，并检测到目标产物主峰生成，反应液直接浓缩，得到化合物7(0.04g,crude,TFA)为浅黄色油，直接用于下一步反应。
(5)化合物AB29540的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000060
在化合物3(20.0mg,104umol,1.00eq)中加入吡啶(1mL)，将化合物7(35.9mg,104umol,1.00eq,TFA)和EDCI(21.9mg,114umol,1.10eq)加入到反应液中，反应液在20℃下搅拌反应16个小时。LCMS显示原料反应完，检测到目标产物峰生成。反应液直接浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Waters xbridge 150*25mm 10um；mobile phase:[water(NH 4HCO 3)-ACN]；B％:38％-68％,9min)，得到化合物AB29540(3.08mg,7.33umol,7.05％收率,96.53％纯度)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm13.17(dt,J＝4.41,2.11Hz,1H),10.06(s,1H),7.45-7.73(m,1H),7.29(s,1H),6.87-7.13(m,2H),6.26(s,1H),3.82(s,3H),2.53(br s,3H),2.08(s,3H),2.04(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝406。
实施例20：化合物AB29554的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000061
在化合物1(500mg,4.58mmol,1.00eq)中加入乙腈(20.0mL)，将三乙胺(463mg,4.58mmol,638uL,1.00eq)加入到反应液中，然后将乙氧羰基异硫氰酸酯(661mg,5.04mmol,1.10eq)滴加入反应液中，反应液在25度下搅拌反应15分钟，将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1.05g,5.50mmol,1.20eq)加入到反应液中，然后将三乙胺(695mg,6.87mmol,956uL,1.50eq)加入到反应液中，反应混合物在80度下搅拌反应3个小时。反应液过滤，滤饼用少量的乙腈洗涤一次(10.0mL)，收集滤饼。得到化合物2(900mg,crude)为灰色固体。
(2)化合物3的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000062
在化合物2(900mg,4.36mmol,1.00eq)中加入甲醇(4.00mL)，将氢氧化钠溶液(1M,8.73mL,2.00eq)加入到反应液中，反应液在100℃搅拌反应16个小时。LCMS显示原料消耗完，并检测到目标产物峰生成。反应液冷却后除去甲醇，慢慢加入2M HCl溶液至pH＝7-8，有固体析出，直接过滤，收集滤饼。得到化合物3(500mg,3.73mmol,85.4％收率)为灰色固体。
(3)化合物6的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000063
在化合物4(200mg,1.75mmol,205uL,1.00eq)中加入甲苯(2mL)，将化合物5(242mg,1.75mmol,1.00eq)和无水对甲苯磺酸(60.3mg,350umol,0.200eq)加入到反应液中，反应液在110℃下搅拌反应4个小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5：1，R f＝0.43)显示化合物5有少量剩余，有极性变小的主点生成。反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取两次(10mL*2)，合并有机相后浓缩。粗品通过薄层色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)，得到化合物6(215mg,994umol,56.7％收率)为棕色固体。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 6.88(d,J＝1.00Hz,1H),5.93(s,2H),2.52(d,J＝1.00Hz,3H),2.12(s,6H).LCMS:Ms:M+H +＝217。
(4)化合物7的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000064
在化合物6(100mg,462umol,1.00eq)中加入1,2-二氯乙烷(2mL)，将4-二甲氨基吡啶(56.5mg,462umol,1.00eq)加入到反应液中，将三氯乙酰氯(252mg,1.39mmol,154uL,3.00eq)滴加到反应液中，反应液在50℃下搅拌反应16个小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5:1,R f＝0.24)显示有20％左右原料未反应完，检测到极性变大的新点生成。反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取两次(10mL*2)，合并有机相后干燥浓缩。粗品通过薄层色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得到化合物7(80.0mg,221umol,47.8％收率)为浅黄色油。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 6.97(d,J＝0.75Hz,1H),6.73(s,1H),2.57(d,J＝0.75Hz,3H),2.47(s,3H),2.12(s,3H).
(5)化合物AB29554的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000065
在化合物7(60.0mg,166umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，将化合物3(26.7mg,199umol,1.20eq)、无水碳酸钠(35.2mg,332umol,2.00eq)加入到反应液中，反应液在85℃下搅拌反应2h。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应液直接浓缩干。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Waters xbridge 150*25mm 10um；mobile phase:[water(NH 4HCO 3)-ACN]；B％:27％-57％,9min)，得到化合物AB29554(20.0mg,52.4umol,31.6％收率,98.66％纯度)为白色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.27-12.45(m,1H),11.41-11.63(m,1H),8.16-8.28(m,1H),7.78(br d,J＝8.00Hz,1H),7.35(d,J＝1.13Hz,1H),7.09(br d,J＝4.38Hz,1H),6.91-7.01(m,1H),2.56(s,3H),2.42(s,3H),2.08(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝377。
实施例21：化合物AB29566的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000066
将化合物1(5.00g,28.9mmol,1.00eq)溶解到二氯甲烷(50.0mL)中，在混合液中加入氯甲酸乙酯(3.36g,30.9mmol,2.95mL,1.07eq)，然后将吡啶(6.86g,86.7mmol,7.00mL,3.00eq)慢慢滴加到上述反应液中，控制温度在25℃-30℃，将体系在25℃下搅拌1.5小时。LCMS显示出化合物1被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。反应完成后，将反应液缓慢倒入冰水(100mL)中并搅拌淬灭，淬灭后加入二氯甲烷(100mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水(50.0mL)洗涤后，经无水硫酸钠干燥然后减压浓缩，得到化合物2(5.00g,粗品)为黄色固体(LCMS:Ms:M+H +＝245.0)。
(2)化合物3的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000067
将发烟硝酸(1.08g,17.1mmol,771uL,1.00eq)溶解到硫酸(12.0mL)中，在0℃下将化合物2(4.20g,17.1mmol,1.00eq)慢慢加入上述混合液中。将反应液在0℃下搅拌0.1小时后，慢慢升温到25℃搅拌12小时。LCMS显示出化合物2被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液倒入冰水中，析出固体在真空下过滤，滤饼收集后减压浓缩，得到化合物3(4.30g,粗品)为白色固体(LCMS:Ms:M+H +＝291.9)。
(3)化合物4合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000068
将化合物3(2.50g,8.62mmol,1.00eq)溶解到甲醇(10.0mL)中，然后加入甲醇钠(6.21g,34.4mmol,30％纯度,4.00eq)。将混合液在65℃下搅拌12小时。LCMS显示出化合物3被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下浓缩，加入水(20.0mL)在真空下过滤，滤饼收集后减压浓缩，得到化合物4(900mg,粗品)为灰色固体(LCMS:Ms:M+H +＝170.1)。
(4)化合物5的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000069
将化合物4(1.19g,7.04mmol,1.00eq)溶解到乙酸乙酯(100mL)中，加入湿钯/碳(0.50g,10％纯度)后在氢气下置换三次。将反应液在25℃、15Psi下搅拌12小时。LCMS显示出化合物4被消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下过滤，滤液收集后减压浓缩，得到化合物5(800mg,粗品)为褐色油(LCMS:Ms:M+H +＝140.2)。
(5)化合物6的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000070
将化合物5(800mg,5.75mmol,1.00eq)溶解到水(2.00ml)中，加入乙醇(8.00mL)后降温到0℃，然后慢慢加入溴化氰(730mg,6.90mmol,507uL,1.20eq)。将混合液升温到70℃下反应12小时。LCMS显示出化合物5剩余20％，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下浓缩。通过TLC(乙酸乙酯：甲醇＝10：1)进行纯化，得到化合物6(400mg,2.44mmol,42.3％收率)为灰色固体(LCMS:Ms:M+H +＝165.2)。
(6)化合物AB29566合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000071
将化合物6(50.0mg,138umol,1.00eq)溶解到N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中，然后加入碳酸钠(43.96mg,414umol,3.00eq)和化合物7(22.7mg,138umol,1.00eq)。将混合液在80℃下搅拌2小时。LCMS显示出化合物原料消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下浓缩，通过高效液相色谱法(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(NH 3H 2O)-ACN]；B％:27％-57％,8min)进行纯化，得到化合物AB29566(10.7mg,26.4umol,19.1％收率)为黄色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.74-7.96(m,1H)7.32(br d,J＝1.13Hz,2H)6.72-6.90(m,1H)3.80(s,3H)2.53(s,3H)2.41(s,3H)2.05(s,3H)。LCMS:Ms：M+H +＝407。
实施例22：化合物AB29552的合成
(1)化合物4的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000072
在化合物2(100mg,467umol,1.00eq)中加入甲苯(2mL)，将化合物3(52.8mg,467umol,48.0uL,1.00eq)和无水对甲苯磺酸(16.0mg,93.3umol,0.200eq)加入到反应液中，反应液在110℃下搅拌反应2个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应液直接浓缩。粗品通过薄层色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)，得到化合物4(110mg,377umol,80.9％yield)为棕色固体。
(2)化合物5的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000073
在化合物4(110mg,377umol,1.00eq)中加入HCl/EtOAc(2mL,4M)，反应液在20℃下搅拌反应3个小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3:1,R f＝0.24)显示原料消耗完，生成极性变大的新点。反应液直接浓缩。得到化合物5(0.07g,crude)为棕色固体，直接用于下一步反应。
(3)化合物AB29552的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000074
在化合物5(60.0mg,255umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，将化合物A014(45.8mg,280umol,1.10eq)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(146mg,280umol,1.10eq)和N,N-二异丙基乙胺(132mg,1.02mmol,178uL,4.00eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应6个小时。LCMS显示原料反应完，检测到有目标产物生成。反应液直接浓缩。粗品通过高效液相色谱分离纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(HCl)-ACN]；B％:22％-52％,10min)，然后进行二次纯化(column:Waters xbridge 150*25mm 10um；mobile phase:[water(NH 4HCO 3)-ACN]；B％:40％-70％,9min)，得到化合物AB29552(2.34mg,6.15umol,2.41％收率)为白色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.00(br d,J＝0.75Hz,1H)，10.84-10.96(m,1H),7.46(dd,J＝5.07,1.19Hz,1H),7.24-7.37(m,1H),6.89-7.09(m,3H),6.62-6.80(m,2H),5.32(s,2H),3.75(s,3H),2.60(s,3H),2.22(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝381。
实施例23：化合物AB29555的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000075
将化合物1(1.00g,9.16mmol,1.00eq)溶解到乙醇(2.00mL)和水(10.0mL)中，慢慢加入溴化氰(1.16g,11.0mmol,808uL,1.20eq)。将反应混合液在70℃下搅拌12小时。LCMS显示出化合物1剩余30％，并检测到所需的化合物分子量。将混合液在真空下浓缩，得到化合物2(2.00g,粗品)为黄色固体(LCMS:Ms:M+H +＝130.4)。
(2)化合物AB29555的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000076
将化合物2(29.6mg,220umol,2.00eq)溶解到N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中，加入碳酸钠(35.1mg,331umol,3.00eq)和化合物3(40.0mg,110umol,1.00eq)。将混合液在80℃下搅拌12小时。LCMS显示出原料消耗完，并检测到所需的化合物分子量。将反应液在真空下浓缩。粗品通过高效液相色谱法进行纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(HCl)-ACN]；B％:14％-44％, 8min)，得到化合物化合物AB29555(10.0mg,24.2umol,21.9％收率,盐酸)为黄色固体。 1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.88(s,1H)8.32-8.49(m,1H)7.80-8.02(m,1H)7.16(d,J＝1.00Hz,1H)6.71(s,1H)2.59(s,3H)2.48(s,3H)2.15(s,3H)。LCMS:Ms：M+H +＝377。
实施例24：化合物AB29573的合成
(1)化合物2的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000077
在化合物1(500mg,2.54mmol,1.00eq)中加入叔丁醇(5mL)，将三乙胺(643mg,6.36mmol,885uL,2.50eq)和DPPA(910mg,3.31mmol,716uL,1.30eq)加入到反应液中，反应液在85℃下搅拌反应2个小时，LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物主峰生成。反应液直接浓缩。粗品通过硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1：1)，得到化合物2(100mg,374umol,14.7％收率)为白色固体。
(2)化合物3的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000078
在化合物2(75.0mg,285umol,1.00eq)中加入HCl/EtOAc(7mL)，反应液在20℃下搅拌反应2个小时。LCMS显示原料消耗完，检测到目标产物峰生成。反应液直接浓缩，得到化合物3(0.06g,crude,HCl)为黄色固体，直接用于下一步反应。
(3)化合物AB29573的合成
Figure PCTCN2022102010-appb-000079
在化合物4(50.0mg,138umol,1.00eq)中加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，将化合物3(55.2mg,276umol,2.00eq,HCl)和无水碳酸钠(58.6mg,553umol,4.00eq)加入到反应液中，反应液在100℃下搅拌反应2个小时。LCMS显示原料反应完，检测到少量目标产物生成。反应液浓缩后加入甲醇过滤，收集滤液浓缩。粗品通过薄层色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)后再进行高效液相色谱分离纯化(column:Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；mobile phase:[water(NH 3H 2O)-ACN]；B％:30％-60％,8min)，得到化合物AB29573(1mg,2.30umol,1.66％收率,93.06％纯度)为黄色固体。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 11.17-11.40(m,1H),10.58-10.74(m,1H),8.25(s,1H),7.34(d,J＝1.13Hz,1H),6.73(s,1H),6.65(s,1H),6.06(s,1H),3.79(s,3H),2.54(d,J＝0.63Hz,3H),2.38(s,3H),2.09(s,3H).LCMS:Ms:M+H +＝406。
药理活性测试以及结果分析
重组DHX33的制备
蛋白质的分离纯化参见Wang X,Ge W,and Zhang Y.Recombinant DHX33 Protein Possesses Dual DNA/RNA Helicase Activity.Biochemistry.2019；58(4):250-8。将RNA解旋酶基因(小鼠DHX33基因)克隆 到pET32M-3C载体的BamH I/Not I酶切位点之间。然后将质粒转化到大肠杆菌菌株BL-21pLysS(DE3)中，加入0.5mM异丙基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(IPTG)，在16℃诱导重组蛋白表达16小时。将细胞沉淀并重悬于细胞裂解缓冲液[50mM Tris-HCl(pH7.2)，150mM NaCl，1％Triton X-100和添加有蛋白酶抑制剂的50mM咪唑]中。然后将细胞超声处理并以13000rpm的转速离心25分钟。将上清液与Tris缓冲液平衡的镍-次氮基三乙酸珠温育，然后充分洗涤。然后用Tris缓冲液中的300mM咪唑洗脱提纯的蛋白质，然后在4℃下对不含咪唑的Tris缓冲液透析过夜。
图1示出用上述方法制备的重组DHX33蛋白经SDS-PAGE分离后，用考马斯亮蓝染色后的结果分析。图中箭头指示的是目的重组DHX33蛋白(含有硫氧还原蛋白标签)，目的条带的分子量在90kDa。
DHX33的解旋酶活力分析
将解旋酶活性反应成分添加到96孔不透明白色板中。方法概述如下：将中性抗生物素蛋白(neutravidin)以10μg/mL(100μL/孔)的终浓度在4℃下包被在96孔板上过夜。随后将中性抗生物素蛋白包被的板用100μL的0.1％(w/v)BSA(溶于常规PBS中)在22℃封闭2小时。洗涤后，加入由两条寡DNA单链(一条单链的序列为生物素标记的5'-GCTGACCCTGCTCCCAATCGTAATCTATAG-3'；另一条单链的序列为DIG标记的5'-CGATTGGGAGCAGGGTCAGC-3')所退火产生的DNA双链体[2.5ng，退火反应在含1M NaCl的浓度为1M的PBS(pH7.0)中进行]，并在22℃温育4小时。加入90μL反应混合物后开始解旋酶反应[纯化的全长DHX33蛋白0.25μg，溶解于25mM 4-MOPS(pH 7.0)，5mM ATP，2mM DTT，3mM MnCl 2和100μg/mL BSA]。在37℃下反应60分钟。洗涤后，每个孔用封闭溶液[10％(w/v)BSA在0.1M马来酸和0.15M NaCl(pH7.5)中]培育30分钟，然后与20μL抗体溶液一起温育(抗-DIG-AP，Roche，在封闭缓冲液中)30分钟。用100μL检测缓冲液[0.1M Tris-HCl和0.1M NaCl(pH9.5)]洗涤后，然后将1μL化学发光底物(CSPD-0.25mM)加入各孔，并将板在17℃温育5分钟。然后将板拍干并在37℃下温育30分钟。通过发光多孔板读数器(Enspire，PerkinElmer)对每个孔中剩余的DIG-AP标记物对照计数10分钟。读数越大，表示解旋酶活力越弱。该活力分析实验设有阳性对照和阴性对照。其中一个阴性对照是在不加ATP之外的其他所有条件一致情况下的比较，另外一个阴性对照是指在不加DHX33蛋白之外的其他所有条件一致情况下的比较。阳性对照是与野生型DHX33蛋白标准品的比较。通过与DHX33蛋白标准品进行比较，结果表明用上述方法制备的DHX33蛋白具有解旋酶活力。
解旋酶活力分析的具体方法参见Wang X,Ge W,and Zhang Y.Recombinant DHX33 Protein Possesses Dual DNA/RNA Helicase Activity.Biochemistry.2019；58(4):250-8。
化合物对DHX33的解旋酶活力的抑制
使用一系列浓度的化合物(浓度范围设定为1nM、5nM、10nM、20nM、50nM、100nM、250nM、500nM、1000nM)进行体外的DHX33蛋白的解旋酶活力测定。本发明的化合物对DHX33蛋白的解旋酶活力的半抑制浓度如表1所示。从表1可以看出，本发明的化合物对DHX33蛋白的解旋酶活力具有显著的抑制作用。
表1：化合物对DHX33蛋白的解旋酶活力抑制性分析
Figure PCTCN2022102010-appb-000080
Figure PCTCN2022102010-appb-000081
*代表半抑制浓度≥400nM；
**代表100nM≤半抑制浓度＜400nM；
***代表20nM≤半抑制浓度＜100nM；
****代表半抑制浓度＜20nM。
细胞培养及来源
U251-MG细胞购自中科院细胞库。用含有10％胎牛血清(FBS)，2mM L-谷氨酰胺以及链霉素和青霉素的MEM培养基培养，生长条件设定为37℃、5％CO 2带有湿度的细胞培养箱中。细胞每隔3天传代一次，传代10次之后丢弃不用。
细胞半抑制浓度(IC 50)测定
将DHX33过表达的癌症细胞株U251-MG细胞以1×10 4/100ul/孔铺到96孔板上。等待细胞贴壁完全，将化合物以5nM、10nM、25nM、50nM、100nM、250nM、500nM、1000nM、2000nM、5000nM、10μM、20μM的浓度添加到细胞培养基中，用多通道排枪混合均匀。等待化合物和细胞温育时间达到48小时后，用CCK-8试剂(翌圣生物科技(上海)股份有限公司)按照标准流程添加到96孔板的培养基中，培育2个小时后，用酶标仪读板(OD＝450nm)，将实验重复三次，并绘制化合物在不同浓度下的抑制曲线，计算化合物的半抑制浓度(IC 50)。
表2：化合物对U251-MG的半抑制浓度分析
Figure PCTCN2022102010-appb-000082
Figure PCTCN2022102010-appb-000083
Figure PCTCN2022102010-appb-000084
Figure PCTCN2022102010-appb-000085
*代表5μM≤半抑制浓度＜20μM；
**代表1μM≤半抑制浓度＜5μM；
***代表100nM≤半抑制浓度＜1000nM；
****代表半抑制浓度＜100nM。
由表2可以看出，本发明的化合物对DHX33过表达的癌症细胞株U251-MG细胞具有明显的抑制作用。

Claims (13)

  1. 一种具有式I结构的化合物或其药学上可接受的形式：
    Figure PCTCN2022102010-appb-100001
    其中，
    X 1选自N或CR 1，X 2选自N或CR 2，X 3选自N或CR 3，X 4选自N或CR 4；
    R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、-NH(C 1-6烷基)、-N(C 1-6烷基) 2、C 1-6羟基烷基、-O-(C 1-6亚烷基)-O-(C 1-6烷基)、-C(＝O)-NH-(C 1-6烷基)、-C(＝O)-NH-(C 1-6亚烷基)-N(C 1-6烷基) 2或-C(＝O)-O-(C 1-6烷基)；
    X 5选自N或CR 5，R 5选自氢、卤素或C 1-6烷基，所述C 1-6烷基任选地被一个或多个选自卤素、C 1-6烷基、-(C 1-6亚烷基)-O-(C 1-6烷基)或-(C 1-6亚烷基)-O-C(＝O)-(C 1-6烷基)的取代基取代；
    L 1选自-NR 6C(＝O)-、-NR 6S(＝O) 2-、-NR 6S(＝O)-、-C(＝O)NR 6-、-S(＝O) 2NR 6-或-S(＝O)NR 6-；
    每个R 6独立地选自氢、C 1-6烷基、C 3-8环烷基或C 6-10芳基；
    环A选自5-10元杂芳基或3-8元杂环基，环A任选地被一个或多个R 7取代；
    每个R 7独立地选自卤素、C 1-6烷基或C 1-6卤代烷基；
    L 2选自单键、O、S或CR 8R 9；
    R 8和R 9各自独立地选自氢、卤素或C 1-6烷基；
    环B选自C 6-10芳基、5-12元杂芳基或3-8元杂环基，环B任选地被一个或多个R 10取代；
    每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 3-6环烷基、-C(＝O)-O-(C 1-6烷基)、苯基、苄基、吡啶基、-C(＝O)-NH 2、或-NH-C(＝O)-(C 1-6烷基)，所述苯基、苄基、吡啶基任选地被一个或多个选自氢、卤素、氰基、氨基、羟基、C 1-6烷基或C 1-6烷氧基的取代基取代；
    所述药学上可接受的形式选自药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、氮氧化物、同位素标记物、代谢物和前药。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中
    R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、-NH(C 1-6烷基)、-N(C 1-6烷基) 2或C 1-6羟基烷基；
    优选地，R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 1-4烷氧基或C 1-4卤代烷氧基；
    更优选地，R 1、R 2、R 3和R 4各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、羟基、甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中
    R 5选自氢、卤素或C 1-4烷基，所述C 1-4烷基任选地被一个或多个选自卤素、C 1-4烷基、-(C 1-4亚烷基)-O-(C 1-4烷基)或-(C 1-4亚烷基)-O-C(＝O)-(C 1-4烷基)的取代基取代；
    R 5选自氢、卤素或C 1-4烷基，所述C 1-4烷基任选地被一个或多个选自卤素、C 1-4烷基、-CH 2-O-CH 3或-CH 2-O-C(＝O)-CH 3的取代基取代；
    优选地，R 5选自氢、卤素或甲基。
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中
    L 1选自-NR 6C(＝O)-、-NR 6S(＝O) 2-、-C(＝O)NR 6-或-S(＝O) 2NR 6-，每个R 6独立地选自氢、C 1-4烷基或C 3-6环烷基；
    优选地，L 1选自-NR 6C(＝O)-、-NR 6S(＝O) 2-、-C(＝O)NR 6-或-S(＝O) 2NR 6-，每个R 6独立地选自氢或C 1-4烷基；
    更优选地，L 1选自-NHC(＝O)-、-N(CH 3)-C(＝O)-、-NHS(＝O) 2-、-C(＝O)NH-或-S(＝O) 2NH-。
  5. 根据权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中
    环A选自5-10元杂芳基，环A任选地被一个或多个R 7取代，每个R 7独立地选自卤素、C 1-4烷基或C 1-4卤代烷基；
    优选地，环A选自吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基或噁唑基，环A任选地被一个或多个R 7取代，每个R 7独立地选自卤素、甲基、乙基或三氟甲基；
    更优选地，环A选自吡咯基或咪唑基，环A任选地被一个或多个R 7取代，每个R 7独立地选自卤素或甲基；
    特别优选地，环A选自
    Figure PCTCN2022102010-appb-100002
  6. 根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中
    L 2选自单键或CR 8R 9；R 8和R 9各自独立地选自氢、卤素或C 1-4烷基；
    优选地，L 2选自单键、-CH 2-或-CH(CH 3)-。
  7. 根据权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中
    环B选自C 6-10芳基或5-12元杂芳基，环B任选地被一个或多个R 10取代，
    每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6卤代烷氧基、C 3-6环烷基或-C(＝O)-NH 2；
    优选地，环B选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基，环B任选地被一个或多个R 10取代，每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基或-C(＝O)-NH 2；
    更优选地，环B选自苯基、吡嗪基、吡啶基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、噻吩基、噻唑基、吡唑基或咪唑基，环B任选地被一个或多个R 10取代，每个R 10独立地选自卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、甲基或-C(＝O)-NH 2；
    特别优选地，环B选自
    Figure PCTCN2022102010-appb-100003
    Figure PCTCN2022102010-appb-100004
  8. 根据权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其为具有式I-1、式I-2、式I-3、式I-4、式I-5、式I-6、式I-19或式I-20结构的化合物或其药学上可接受的形式：
    Figure PCTCN2022102010-appb-100005
    Figure PCTCN2022102010-appb-100006
    其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 6、L 1、L 2和环B如权利要求1-7中任一项所定义。
  9. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其为具有式I-7、式I-8、式I-9、式I-10、式I-11、式I-12、式I-13、式I-14、式I-15、式I-16、式I-17、式I-18、式I-21或式I-22结构的化合物或其药学上可接受的形式：
    Figure PCTCN2022102010-appb-100007
    其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 6和环B如权利要求1-8中任一项所定义。
  10. 化合物或其药学上可接受的形式，所述化合物选自如下化合物：
    Figure PCTCN2022102010-appb-100008
    Figure PCTCN2022102010-appb-100009
    Figure PCTCN2022102010-appb-100010
    所述药学上可接受的形式选自药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、氮氧化物、同位素标记物、代谢物和前药。
  11. 一种药物组合物，其包含根据权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，以及一种或多种药学上可接受的载体。
  12. 根据权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式、或者权利要求11所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗至少部分由DHX33介导的疾病或病症的药物中的用途。
  13. 根据权利要求12所述的用途，所述疾病选自由DHX33介导的癌症、病毒感染及炎症。
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