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WO2022202853A1 - 抗ｃｄ２６抗体の奏効性バイオマーカー - Google Patents

抗ｃｄ２６抗体の奏効性バイオマーカー Download PDF

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WO2022202853A1
WO2022202853A1 PCT/JP2022/013309 JP2022013309W WO2022202853A1 WO 2022202853 A1 WO2022202853 A1 WO 2022202853A1 JP 2022013309 W JP2022013309 W JP 2022013309W WO 2022202853 A1 WO2022202853 A1 WO 2022202853A1
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WO
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patient
soluble
serum
antibody
level
Prior art date
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Ceased
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PCT/JP2022/013309
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English (en)
French (fr)
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幾夫 森本
良 波多野
直人 弘田
エリック アンジュビン
ファニー バレックス
ナム ダン
有太郎 金子
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Y's Ac Co Ltd
Original Assignee
Y's Ac Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Y's Ac Co Ltd filed Critical Y's Ac Co Ltd
Priority to US18/551,984 priority Critical patent/US20250270346A1/en
Publication of WO2022202853A1 publication Critical patent/WO2022202853A1/ja
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Ceased legal-status Critical Current

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
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    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Definitions

  • the present invention relates to biomarkers for determining the efficacy of anti-CD26 antibodies.
  • CD26 is a 110 kDa, type II transmembrane glycoprotein with dipeptidyl peptidase 4 (DPP4) activity in its extracellular domain, and the N-terminal dipeptide is L-proline or L-alanine at the pre-terminal position (Non-Patent Document 1). , 2). CD26 has multiple biological functions and is expressed on a variety of normal cell types and tumors. CD26 is also found as a conserved soluble form with DPP4 activity in serum and other body fluids. In vitro and in vivo administration of anti-CD26 monoclonal antibodies inhibits tumor growth, migration, and invasion through multiple mechanisms of action and inhibits various cancers, including renal cell carcinoma (RCC) and malignant mesothelioma (MM). prolongs the survival period of a mouse xenograft model inoculated with (Non-Patent Documents 3-7).
  • RCC renal cell carcinoma
  • MM malignant mesothelioma
  • Biomarkers in cancer management can be used for prevention, diagnosis, and treatment selection, and potentially treatment monitoring. Markers such as EGFR or ALK fusion genes (lung cancer), HER2 (breast or stomach cancer), or RAS (colon cancer) are used to select the optimal therapy by identifying selected genetic alterations. However, no serum biomarkers with predictive outcome during the course of cancer therapy have been identified so far.
  • Soluble CD26 serum levels have been evaluated as a possible biomarker. Correlations between baseline serum soluble CD26 titers and clinical efficacy of treatment have been reported in patients with urothelial, gastric, pancreatic, thyroid, and lung cancers (9-14). Serum soluble CD26 titer variation after colon cancer surgery was also reported to be a predictive biomarker for risk of recurrence or metastasis (15-17). Furthermore, treatment with the DPP4 inhibitor sitagliptin after surgery for colorectal or lung cancer in diabetic patients is associated with longer overall survival than treatment with other antidiabetic agents (Non-Patent Document 18), indicating that soluble CD26/DPP4 may play a role in regulating antitumor activity. However, there are no reports that serum soluble CD26 titer fluctuations during the course of treatment are prognostic markers of treatment outcome.
  • Fig. 2 shows changes in serum soluble CD26 levels after administration of YS110 by boxplot analysis. Each figure shows the serum soluble CD26 titer variation from baseline (pre-dose on day 1, 100%) to pre/post-YS110 on days 1, 15 and 29.
  • the analyzed data are (A) a total of 26 cases, (B) Q2W administration 18 cases, (C) Q2W administration 14 men, (D) Q1W administration 8 cases, (E) MM 19 cases, (F) Q2W administration MM 12 cases, (G) Stratified into 9 Q2W male MMs and (H) 6 RCCs. Data are shown as mean ⁇ standard deviation for each group. Correlation between serum soluble CD26 levels and DPP4 enzymatic activity is shown.
  • FIG. 4 shows the difference in serum soluble CD26 titer variation between SD and PD cohorts by bar graph analysis.
  • the analyzed data are (A) 23 cases in total, (B) 17 cases of Q2W administration, (C) 14 male cases of Q2W administration, (D) 8 cases of Q1W administration, (E) 17 cases of MM, (F) 11 cases of Q2W administration MM (F) MM, 9 men receiving Q2W, (H) 6 RCC receiving Q2W. Data are shown as mean ⁇ standard deviation for each group. Cell surface protein expression of CD26 on human tumor and non-tumor cells.
  • the indicated malignant mesothelioma cell lines (A) or non-tumor cells (B) were treated with PE-labeled mouse IgG1, kappa isotype control (BioLegend, clone MOPC-21(i)) or PE-labeled mouse anti-human CD26 mAb (BD Stained with Biosciences, clone M-A261 (ii)).
  • Cell surface expression of CD26 was analyzed by flow cytometry. 2D dot plot (horizontal axis: CD26, vertical axis: unstained) (upper panel) and histogram of CD26 intensity (red line) and isotype control (gray area) gated for live cells (lower panel).
  • CD26 was clearly expressed on the cell surface of MSTO-CD26, JMNctrl-shRNA, H226, TIG-1, and HDMVEC.
  • CD26 was hardly expressed in the MSTO parent strain, JMN CD26-shRNA, MCF10A, and HUVEC, but was partially expressed in MeT-5A.
  • Addition of YS110 reduced soluble CD26 production from CD26-positive tumor and non-tumor cells.
  • A, B MM cell lines (MSTO parental, MSTO-CD26, JMNctrl-shRNA, JMNCD26-shRNA or H226 cells (3.5 x 10 each)) (A) or non-tumor cells (MCF10A (1.0 x 10 ), HUVEC (9.0 ⁇ 104), MeT-5A (6.0 ⁇ 104), TIG-1 (5.0 ⁇ 104) or HDMVEC cells (9.0 ⁇ 104)) (B) were treated with control human IgG (hIgG) or humanized anti-CD26 monoclonal antibody YS110 (10 ⁇ g/ml each) for 72 hours. (C) MSTO-CD26 or TIG-1 cells were incubated with the indicated concentrations of YS110 for 3 days.
  • treatment is an approach for obtaining beneficial or desired clinical results.
  • a beneficial or desired clinical result is one or more relief of symptoms, reduction in extent of disease, stabilization of disease (i.e., worsening of disease) slowing or slowing disease progression, amelioration or remission of disease state, and remission (partial or total).
  • Treatment can also mean prolonging life as compared to expected life expectancy if not treated.
  • an effective amount is an amount sufficient to achieve beneficial or desired clinical results, including clinical results.
  • An effective amount can be administered in one or more doses.
  • an effective amount of a pharmaceutical composition described herein is an amount sufficient to slow progression of a condition associated with tumor growth.
  • an effective amount of a pharmaceutical composition will vary or depend on other factors such as patient history and the type (and/or amount) of pharmaceutical composition used, among others. may
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain a pharmaceutically acceptable carrier.
  • a pharmaceutically acceptable carrier or “pharmaceutically acceptable excipient” means an active ingredient capable of maintaining biological activity when combined with the active ingredient. , includes any material that is non-reactive with the subject's immune system and non-toxic to the subject when delivered. Examples include, but are not limited to, all standard pharmaceutical carriers such as phosphate buffered saline, water, emulsions such as oil/water emulsion, and various types of wetting agents. Preferred diluents for nebulized or parenteral administration are phosphate-buffered saline or saline (0.9%).
  • compositions containing such carriers are formulated by well-known conventional methods (e.g., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990 and Remington's , The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000).
  • an "anti-CD26 antibody” as used herein specifically binds to human CD26.
  • the anti-CD26 antibodies described herein bind to the same epitope as YS110.
  • the anti-CD26 antibodies described herein are capable of blocking binding of YS110 to CD26 (compete with YS110) in a competition assay.
  • a competition assay involves contacting a test antibody against an immobilized epitope or antigen, removing unbound antibody by washing, and then contacting a labeled YS110 antibody with the epitope or antigen to remove unbound antibody. This can be done by detecting the bound YS110 antibody after removing the antibody by washing.
  • the binding of the YS110 antibody to the epitope or antigen when contacted with the test antibody is reduced compared to the binding of the YS110 antibody to the epitope or antigen to a control that is not contacted with the test antibody, It can be determined that it has the ability to block the binding of the YS110 antibody (compete with the YS110 antibody) in a competition assay.
  • the binding affinities of anti-CD26 antibodies to human CD26 are less than 10 ⁇ 5 M, less than 5 ⁇ 10 ⁇ 5 M, less than 10 ⁇ 6 M, less than 5 ⁇ 10 ⁇ 7 M, 10 ⁇ 7 M, less than 5 ⁇ 10 ⁇ 8 M, less than 10 ⁇ 8 M, less than 5 ⁇ 10 ⁇ 9 M, less than 10 ⁇ 9 M, less than 5 ⁇ 10 ⁇ 10 M, less than 10 ⁇ 10 M, 5 ⁇ 10 Affinities with dissociation constants (ie, Kd) of less than ⁇ 11 M or less than 10 ⁇ 11 M are included.
  • the dissociation constant is also greater than 10 ⁇ 15 M, greater than 5 ⁇ 10 ⁇ 15 M, greater than 10 ⁇ 14 M, greater than 5 ⁇ 10 ⁇ 14 M, greater than 10 ⁇ 13 M, greater than 5 ⁇ 10 ⁇ 13 M, 10 ⁇ 12 M or more, 5 ⁇ 10 ⁇ 12 M or more, 10 ⁇ 11 M or more, 5 ⁇ 10 ⁇ 11 M or more, 10 ⁇ 10 M or more, or 5 ⁇ 10 ⁇ 10 M or more.
  • Methods for determining affinity are known in the art.
  • binding affinity may be determined using BIAcore biosensors, KinExA biosensors, scintillation proximity assays, ELISA, ORIGEN immunoassays (IGEN), fluorescence quenching, fluorescence transfer, and/or yeast display. . Affinity can also be screened using a suitable bioassay.
  • One method for determining the binding affinity of an antibody to CD26 is to measure the affinity of monofunctional Fab fragments of the antibody.
  • antibodies eg, IgG
  • Affinities of anti-CD26 Fab fragments of monoclonal antibodies can be determined by the Surface Plasmon Resonance (SPR) system (BIAcore 3000TM, BIAcore, Inc., Piscaway, NJ).
  • SA chips streptavidin are used according to the supplier's instructions.
  • Biotinylated CD26 can be diluted in HBS-EP (100 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% P20) and injected over the chip at a concentration of 0.005 mg/mL. .
  • HBS-EP 100 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% P20
  • two ranges of antigen density are achieved: 10-20 response units (RU) for detailed kinetic studies; is 500-600 RU.
  • a mixture of Pierce elution buffer and 4M NaCl (2:1) efficiently removes bound Fab while preserving CD26 activity on the chip for over 200 injections.
  • HBS-EP buffer can be used for all BIAcore assays as running buffer.
  • compositions of the present invention are useful for treating conditions (such as diseases or disorders) associated with CD26 expression, such as malignant mesothelioma.
  • the compositions of the invention may have one or more of the following characteristics: (a) binds CD26, (b) modulates CD26 activity, (c) G1/S (d) inhibit the proliferation of cells expressing CD26 (e.g., malignant mesothelioma); (e) inhibit the binding of CD26 to the extracellular matrix; and/ or (f) useful for treating conditions associated with CD26 expression.
  • the condition associated with expression of CD26 is a disease or disorder associated with overexpression of CD26.
  • condition associated with expression of CD26 is mediated, at least in part, by CD26.
  • condition associated with expression of CD26 is a condition associated with proliferation of cells expressing CD26.
  • the disease or disorder is cancer (eg, malignant mesothelioma, lung cancer, renal cancer, liver cancer, or other malignancies with expression of CD26).
  • the anti-CD26 antibody has a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence having at least about 80% identity to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:8-14, and SEQ ID NOs:1-7 both light chain variable regions comprising an amino acid sequence having at least about 80% identity to an amino acid sequence selected from the group consisting of:
  • the anti-CD26 antibody contained in the pharmaceutical compositions of the invention comprises an amino acid sequence having at least about 80% identity to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS:8-14. and a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence having at least about 80% identity to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1-7.
  • the anti-CD26 antibody comprises at least 5 contiguous amino acids, at least 8 contiguous amino acids, at least about 10 contiguous amino acids, at least Contains about 15 contiguous amino acids, at least about 20 contiguous amino acids, at least about 30 contiguous amino acids, or at least about 50 contiguous amino acids.
  • the anti-CD26 antibody can be a fragment of the antibody sequence as described herein and is at least about 50 amino acids, at least about 75 amino acids, or at least about 100 amino acids in length. Contains fragments. SEQ ID NO: 15 EVQLVX1SGX2X3X4X5QPGX6X7LRLX8CX9ASGX10X11LX12TYGVHWVRQAPGKGLEWX13GVIWGX14GRTDYDX15X16FMSRVTISX17DX18SKX19TX20YLQX21NSLVTHGDXWGTAVYYCX22 X1 is E or Q, X2 is A or G, X3 is G or E, X4 is L or V, X5 is V, K, or E, X6 is G or E, X7 is T or S, X8 is T or S, X9 is T or K, X10 is F or Y, X11 is S or T, X12 is T, N , or S
  • Table 1 shows X376 (SEQ ID NO: 1), X377 (SEQ ID NO: 2), X378 (SEQ ID NO: 3), X379 (SEQ ID NO: 4), X380 (SEQ ID NO: 5), X381 (SEQ ID NO: 6). ), and the amino acid sequence of the humanized VL variant, which is X394 (SEQ ID NO:7). Schemes with Kabat numbers and SEQ ID NOs match the light chain variable regions.
  • Table 2 shows X384 (SEQ ID NO:8), X385 (SEQ ID NO:9), X386 (SEQ ID NO:10), X387 (SEQ ID NO:11) and X388 (SEQ ID NO:12), X399 (SEQ ID NO:13). ) and X420 (SEQ ID NO: 14). Both the SEQ ID NO and Kabat numbering scheme are given.
  • the Kabat numbering scheme includes 82a, 82b, and 82c.
  • the anti-CD26 antibody may further comprise SEQ ID NO: 17 or fragments or variants thereof.
  • the anti-CD26 antibody comprises SEQ ID NO:17.
  • the anti-CD26 antibody comprises SEQ ID NO: 17 excluding the signal sequence (those skilled in the art will readily appreciate that in some embodiments, the signal sequence of the antibody is cleaved from the antibody). deaf).
  • the anti-CD26 antibody comprises the variable region of SEQ ID NO:17.
  • the anti-CD26 antibody has at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 95%, or at least about 98% identity to SEQ ID NO: 17 (or fragments thereof).
  • the anti-CD26 antibody comprises a fragment of SEQ ID NO: 17 that is at least about 10 amino acids, at least about 25 amino acids, at least about 50 amino acids, at least about 75 amino acids, at least about 100 amino acids in length. . In some embodiments, the anti-CD26 antibody binds to human CD26.
  • the anti-CD26 antibody comprises SEQ ID NO:18. In some embodiments, the anti-CD26 antibody comprises SEQ ID NO: 18 without the signal sequence. (Those skilled in the art will readily appreciate that in certain embodiments, the signal sequence of the antibody is cleaved from the antibody.) In certain embodiments, the anti-CD26 antibody comprises the variable region of SEQ ID NO:18. including. In some embodiments, the anti-CD26 antibody has at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 95%, or at least about 98% identity to SEQ ID NO: 18 (or fragments thereof).
  • the anti-CD26 antibody comprises a fragment of SEQ ID NO: 18 that is at least about 10 amino acids, at least about 25 amino acids, at least about 50 amino acids, at least about 75 amino acids, at least about 100 amino acids in length. .
  • the anti-CD26 antibody further comprises SEQ ID NO: 18, or a fragment or variant thereof.
  • the anti-CD26 antibody binds to human CD26.
  • the anti-CD26 antibody has at least one heavy chain (e.g., two heavy chains) each comprising SEQ ID NO: 17 without a signal sequence and SEQ ID NO: 18 each without a signal sequence.
  • an antibody comprising at least one light chain (eg, two light chains) comprising light chain (SEQ ID NO: 18) MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDILLTQSPSSLSATPGERATITCRASQGIRNNLNWYQQKPGQAPRLLIYYSSNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISRLQPEDVAAYYCQQSIKLPFTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
  • the humanized anti-CD26 antibody “YS110” has a heavy chain constant region consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, and a light chain constant region consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18.
  • YS110 is taken up into cells when it binds to CD26 on the malignant tumor cell membrane, and further translocates into the nucleus (Yamada K et al, Plos One, 2013 Apr 29;8(4):e62304). . More specifically, YS110 is considered to be taken up into the cytoplasm by Caveolin-dependent endocytosis and transported into the nucleus by early endocytic vesicles. That is, the anti-CD26 antibody of the present invention may be an antibody that, upon binding to CD26 on the cell membrane of a malignant tumor, is taken up into the cell and translocated into the nucleus.
  • the antibody When the antibody binds to CD26 on the malignant tumor cell membrane, it is taken up into the cell, and whether or not it translocates into the nucleus is determined based on the position of the antibody after the labeled antibody is brought into contact with the cell. can be detected using a microscope or the like, and the positional relationship between the position and intracellular tissue can be determined.
  • the anti-CD26 antibody is YSLRWISDHEYLY (SEQ ID NO: 19; peptide 6), LEYNYVKQWRHSY (SEQ ID NO: 20; peptide 35), TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; peptide 55), LWWSPNGTFLAYA (SEQ ID NO: 22; peptide 84), RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO:23; peptide 132), YVKQWRHSYTASY (SEQ ID NO:24; peptide 37), EEEVFSAYSALWW (SEQ ID NO:25; peptide 79), DYSISPDGQFILL (SEQ ID NO:26; peptide 29), SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO:27; peptide 30), and IYVKIEPNLPSYR (SEQ ID NO: 28; peptide 63).
  • the anti-CD26 antibody specifically binds to one or more of said peptides. These peptides are regions of human CD26.
  • the anti-CD26 antibody comprises YSLRWISDHEYLY (SEQ ID NO: 19; peptide 6), LEYNYVKQWRHSY (SEQ ID NO: 20; peptide 35), TWSPVGHKLAYVW ( SEQ ID NO: 21; peptide 55), LWWSPNGTFLAYA (SEQ ID NO: 22; peptide 84), RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO: 23; peptide 132), YVKQWRHSYTASY (SEQ ID NO: 24; peptide 37), EEEVFSAYSALWW (SEQ ID NO: 25; peptide 79), DYSISPDGQFILL ( SEQ ID NO:26; peptide 29), SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO:27; peptide 30), and IYVKIEP
  • the anti-CD26 antibody binds to each of the following peptides: YSLRWISDHEYLY (SEQ ID NO: 19; peptide 6); LEYNYVKQWRHSY (SEQ ID NO: 20; peptide 35); TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; peptide 55); (SEQ ID NO:22; peptide 84); and RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO:23; peptide 132).
  • the anti-CD26 antibody comprises each of the following peptides: YSLRWISDHEYLY (SEQ ID NO: 19; peptide 6); TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; peptide 55); RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO: 23; peptide 132); SEQ ID NO: 24; peptide 37); and EEEVFSAYSALWW (SEQ ID NO: 25; peptide 79).
  • the anti-CD26 antibody binds to each of the following peptides: DYSISPDGQFILL (SEQ ID NO:26; peptide 29); SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO:27; peptide 30); and TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO:21; peptide 55).
  • the anti-CD26 antibody binds to each of the following peptides: DYSISPDGQFILL (SEQ ID NO:26; peptide 29); SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO:27; peptide 30); TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO:21; peptide 55). and IYVKIEPNLPSYR (SEQ ID NO: 28; peptide 63).
  • a competition assay can be used to determine whether two antibodies bind to the same epitope by recognizing identical or sterically overlapping epitopes.
  • antigens are immobilized on multiwell plates and the ability of unlabeled antibodies to block the binding of labeled antibodies is measured.
  • Common labels for such competitive assays are radioactive or enzymatic labels.
  • the epitope bound by the antibody can be determined by using epitope mapping techniques known to those of skill in the art.
  • the anti-CD26 antibody comprises one or more constant regions.
  • the anti-CD26 antibody comprises a human constant region.
  • the constant region is a heavy chain constant region.
  • the constant region is that of a light chain.
  • the anti-CD26 antibody has at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or 100% identity to a human constant region. Contains the constant region.
  • the anti-CD26 antibody comprises an Fc region.
  • the anti-CD26 antibody comprises a human Fc region.
  • the anti-CD26 antibody has at least about 80%, at least about 85%, at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or 100% identity to a human Fc region. Contains the Fc region.
  • the anti-CD26 antibody is an IgG antibody. In some embodiments, the anti-CD26 antibody is an IgG1 antibody. In another embodiment, the anti-CD26 antibody is an IgG2 antibody. In some embodiments, the anti-CD26 antibody is a human IgG antibody.
  • the anti-CD26 antibody may be in the form of monomers, dimers, and multimers.
  • bispecific antibodies monoclonal antibodies that have binding specificities for at least two different antigens, can be prepared using the antibodies disclosed herein (see, eg, Suresh et al., Methods in Enzymology, 1986, 121, 210).
  • Traditionally recombinant production of bispecific antibodies has been based on the co-expression of two immunoglobulin heavy-light chain pairs, containing two heavy chains with different specificities (Millstein, Cuello, et al. Nature, 1983, 305, 537-539).
  • antibody variable regions with the desired binding specificities are fused to immunoglobulin constant regions.
  • the fusion portion is with an immunoglobulin heavy chain constant region, comprising at least part of the hinge, CH2 and CH3 regions. It is preferred to have in at least one fusion the first heavy-chain constant region (CH1) containing the site essential for light-chain binding.
  • DNAs encoding immunoglobulin heavy chain fusions and, if desired, immunoglobulin light chains are inserted separately into expression vectors, and are co-transfected into a suitable host organism.
  • the mutual proportions of these three antibodies can be prepared with great flexibility. Equal ratio expression of at least two antibodies results in high yields, or the coding sequences for two or all three antibodies can be inserted into one expression vector if the ratio is not particularly important. good.
  • One approach consists of a hybrid immunoglobulin heavy chain with a first binding specificity on one arm and a hybrid heavy-light chain pair (with a second binding specificity) on the other arm. and bispecific antibodies.
  • This asymmetric structure (having immunoglobulin light chains in only half of the bispecific antibody molecule) facilitates the separation of the desired bispecific compound from unwanted immunoglobulin chain combinations. This approach is described in WO 94/04690 published March 3,1994.
  • Heteroconjugate antibodies comprising two covalently joined antibodies, are also within the scope of anti-CD26 antibodies. Such antibodies have been used to target immune system cells to unwanted cells (U.S. Pat. No. 4,676,980) or to treat HIV infection (WO91/ 00,360 and 92/200,373; EP 03089). Heteroconjugate antibodies may be made using any convenient cross-linking methods. Suitable cross-linking agents and cross-linking techniques are well known in the art and described in US Pat. No. 4,676,980.
  • anti-CD26 antibody can include antigen-binding fragments of anti-CD26 antibodies.
  • the antibody is selected from the group consisting of Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv, and F(ab') 2 .
  • the antibody is a Fab.
  • Various techniques have been developed for the production of antibody fragments. These fragments can be obtained via proteolytic digestion of whole antibodies (see, eg, Morimoto et al., 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-117 and Brennan et al., 1985, Science 229:81). see), or can be produced directly by recombinant host cells.
  • Fab'-SH fragments can be directly recovered from E. coli and chemically coupled to form F(ab')2 fragments (Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167).
  • F(ab')2 is formed using the leucine zipper GCN4, which facilitates assembly of the F(ab')2 molecule.
  • Fv, Fab, or F(ab')2 fragments are isolated directly from recombinant host cell culture.
  • the anti-CD26 antibody is a single chain (ScFv) thereof, variants, fusion proteins comprising antibody portions, humanized antibodies, chimeric antibodies, diabodies, linear antibodies, single chain antibodies, and any other is a modified conformational immunoglobulin molecule.
  • Single chain variable region fragments are made by linking light and/or heavy chain variable regions using a short connecting peptide.
  • An example of a connecting peptide is (GGGGS)3 (SEQ ID NO:29), which bridges approximately 3.5 nm between the carboxy terminus of one variable region and the amino terminus of the other variable region.
  • Linkers of other sequences have also been designed and used. Bird et al. (1988). The linker can then be modified for additional functions such as immobilization of drugs or immobilization to solid supports.
  • Single-stranded variants may be produced by either recombinant or synthetic techniques. When producing scFv by synthetic techniques, an automated synthesizer can be used.
  • a suitable plasmid containing a polynucleotide encoding the scFv is introduced into a suitable host cell, eukaryotic cell such as yeast, plant, insect or mammalian cell. , or into prokaryotes such as E. coli.
  • a suitable host cell eukaryotic cell such as yeast, plant, insect or mammalian cell.
  • prokaryotes such as E. coli.
  • Polynucleotides encoding the scFv of interest can be made by routine manipulations such as ligation of polynucleotides.
  • the resulting scFv can be isolated using standard protein purification techniques known in the art.
  • Diabodies are bivalent, bispecific antibodies in which the VH and VL domains are expressed on a single antibody chain, but use linkers that are too short to pair these two domains on the same chain. , which forces these domains to pair with complementary domains of another chain, creating two antigen-binding sites (e.g., Holliger, P. et al.). 1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; see Poljak, R. J. et al.
  • Anti-CD26 antibodies encompass modifications to the antibodies described herein, but examples of such modifications include functionally equivalent antibodies and enhanced or modified antibodies that do not significantly affect the properties of the antibody. Mutants with attenuated activity are included. Modification of antibodies is routine practice in the art and need not be described in detail herein. Examples of modified antibodies include antibodies with conservative substitutions of amino acid residues, deletions or additions of one or more amino acids that do not significantly impair functional activity, or use of chemical analogs.
  • Amino acid sequence insertions or additions may be amino- and/or carboxyl-terminal fusions and intrasequence single or multiple amino acid residues ranging in length from one residue to antibodies containing a hundred or more residues.
  • Examples of terminal insertions include antibodies with N-terminal methionyl residues or antibodies fused to epitope tags.
  • Other insertional variants of antibody molecules include fusions of enzymes or antibodies that extend the serum half-life of the antibody at the N-terminus or C-terminus of the antibody.
  • Substantial modifications in the biological properties of the antibody are due to (a) the structure of the antibody backbone at the replacement region, eg, sheet or helical conformation, (b) the charge or hydrophobicity of the molecule at the target site, or (c) by choosing substitutions that significantly alter the effect of the modification on maintaining side chain volume; Residues occurring in the natural state are classified into the following groups based on common side chain properties: (1) Hydrophobic: Norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) Neutral hydrophilicity: Cys, Ser, Thr; (3) acidic: Asp, Glu; (4) basic: Asn, Gln, His, Lys, Arg; (5) residues that influence chain orientation: Gly, Pro; and (6) aromatics: Trp, Tyr, Phe.
  • Amino acid modifications range from changing or modifying one or more amino acids to complete redesign of a region such as the variable region. Changes in the variable region can alter binding affinity and/or specificity. In some embodiments, no more than 1-5 conservative amino acid substitutions are made within a CDR domain. In other embodiments, no more than 1-3 conservative amino acid substitutions are made within the CDR3 domain. In yet another embodiment, the CDR domains are CDRH3 and/or CDR L3.
  • Monoclonal antibodies may be prepared using hybridoma methods, such as those described by Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495.
  • a mouse, hamster, or other suitable host animal is usually immunized with an immunizing agent to produce, or induce lymphocytes capable of producing, antibodies that specifically bind to the immunizing agent. be done.
  • lymphocytes may be immunized in vitro.
  • Monoclonal antibodies may also be made by recombinant DNA methods, as described in US Pat. No. 4,816,567.
  • DNA encoding the monoclonal antibody is isolated and sequenced using conventional methods, such as using oligonucleotide probes capable of specifically binding to the gene encoding the heavy or light chain of the monoclonal antibody. .
  • the DNA is incorporated into an expression vector and transfected into host cells such as E. coli cells, monkey COS cells, Chinese hamster ovary cells (CHO), or myeloma cells that do not produce immunoglobulin protein unless the expression vector is introduced. Injection results in the synthesis of monoclonal antibodies in said recombinant host cells.
  • GS glutamine synthetase
  • the anti-CD26 antibody is preferably a humanized antibody.
  • Therapeutic antibodies often induce side effects due in part to the induction of an immune response against the administered antibody. The result can be decreased drug efficacy, fewer cells bearing the target antigen, and an undesirable inflammatory response.
  • recombinant anti-CD26 humanized antibodies may be generated.
  • the general principle of antibody humanization involves maintaining the basic sequence of the antigen-binding portion of the antibody, while replacing at least a portion of the non-human remainder of the antibody with human antibody sequences.
  • a number of "humanized” antibody molecules have been described that contain antigen-binding sites derived from non-human immunoglobulins, examples of which include rodent V regions and their associated complementarity determining regions (CDRs). fused to human constant domains. See, eg, Winter et al., Nature 349:293-299 (1991); Lobuglio et al., Proc. Nat. Acad. ScI USA 86:4220-4224 (1989); Shaw et al., J Immunol. 138:4534-4538 (1987); and Brown et al., Cancer Res. 47:3577-3583 (1987). Other references describe rodent CDRs incorporated into human supporting framework regions (FRs) prior to fusion with appropriate human antibody constant domains.
  • FRs human supporting framework regions
  • the anti-CD26 antibody may be conjugated to a water-soluble polymer moiety.
  • Anti-CD26 antibodies may be conjugated to polyethylene glycol (PEG), monomethoxy-PEG, ethylene glycol/propylene glycol copolymers, carboxymethylcellulose, dextran, polyvinyl alcohol, and the like.
  • Anti-CD26 antibodies may be modified at random locations on the molecule, or at predetermined locations on the molecule, and may contain one, two, three or more binding moieties.
  • the polymers may be of any molecular weight and may be branched or unbranched.
  • the moiety is attached to the antibody via a linker.
  • the binding moiety increases the circulating half-life of the antibody in the animal.
  • the anti-CD26 antibody is a PEGylated antibody, such as a PEGylated antibody.
  • the anti-CD26 antibody may also be further conjugated to other agents such as different chemotherapeutic agents, radionuclides, immunotherapeutic agents, cytokines, chemokines, imaging agents, toxins, biological agents, enzyme inhibitors, or antibodies. may be
  • the pharmaceutical composition herein is a pharmaceutical composition for treating malignant mesothelioma containing the anti-CD26 antibody described above as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition for treating cancer containing an anti-CD26 antibody as an active ingredient, wherein the anti-CD26 antibody standard administration day is day 1, and malignant cancer 1 to 60 days after the standard administration.
  • a pharmaceutical composition for administration to a patient whose serum level of soluble CD26 in a mesothelioma patient is less than 85% of the level of soluble CD26 in said patient's serum prior to the baseline dose.
  • a pharmaceutical composition according to claim 29 For administration to a patient whose level of soluble CD26 in the serum of said patient 1-30 days after the baseline dose of anti-CD26 antibody is less than 60% of the level of soluble CD26 in said patient's serum prior to the baseline dose is a pharmaceutical composition according to claim 29.
  • the level of soluble CD26 in the patient's serum 22 to 30 days after the baseline administration of anti-CD26 antibody is 60% of the level of soluble CD26 in the patient's serum before the baseline administration
  • a pharmaceutical composition for administration to a patient whose level of soluble CD26 in the patient's serum 2-8 days after the baseline dose of anti-CD26 antibody is less than the soluble CD26 in the patient's serum before the baseline dose A pharmaceutical composition for administration to a patient whose level of CD26 is less than 50%; a pharmaceutical composition for administration once every two weeks and serum of said patient on days 22-30 after baseline administration.
  • a pharmaceutical composition for administration to a patient whose level of soluble CD26 in the serum of said patient on days 2-8 after the baseline administration is 49% or less of the level of soluble CD26 in said patient's serum prior to the baseline administration;
  • a pharmaceutical composition for administration to a patient whose serum soluble CD26 level after 15 days from the baseline dose is 30% or less of the patient's serum soluble CD26 level before the baseline dose.
  • a pharmaceutical composition for administration to a patient whose serum soluble CD26 level after 15 days from the baseline administration is 26% or less of the patient's serum soluble CD26 level prior to the baseline administration.
  • a pharmaceutical composition for administration at 6 mg / kg as the amount of anti-CD26 antibody A pharmaceutical composition in which the reference administration is the first administration; a pharmaceutical composition for administration once every two weeks or once a week; a pharmaceutical composition wherein the anti-CD26 antibody is YS110.
  • cancer may be, for example, malignant mesothelioma, lung cancer, kidney cancer, liver cancer, or other malignant tumors associated with CD26 expression.
  • the methods (including treatment methods) described herein may be performed by a single direct injection at a single time point or at multiple time points to a single site or multiple sites. Administration may also occur at multiple sites at approximately the same time. Dosing frequency is determined and adjusted over the course of treatment and is based on the result desired to be achieved. In some cases, pharmaceutical compositions of the invention, and sustained release formulations of pharmaceutical compositions may be appropriate. Various formulations and devices for achieving sustained release are well known in the art.
  • the target of treatment or prevention is humans.
  • a pharmaceutical composition is preferably administered to a mammal while being contained in a carrier (preferably a pharmaceutically acceptable carrier).
  • a carrier preferably a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Suitable carriers and their formulation are described in Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Edited by Gennaro, Mac Publishing Co. , Easton, PA, 1990 and Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, Mack Publishing, 2000.
  • an appropriate amount of pharmaceutically acceptable salt is used in the formulation to render the formulation isotonic.
  • carriers include saline, Ringer's solution, and dextrose solution.
  • the pH of these solutions is preferably from about 5 to about 8, more preferably from about 7 to about 7.5.
  • carriers include sustained release formulations such as semipermeable matrices made of solid hydrophobic polymers containing the antibody, which matrices are in the form of shaped articles, e.g. films, liposomes or microparticles. .
  • sustained release formulations such as semipermeable matrices made of solid hydrophobic polymers containing the antibody, which matrices are in the form of shaped articles, e.g. films, liposomes or microparticles.
  • compositions may be administered to a mammal by injection (e.g., systemically, intravenously, intraperitoneally, subcutaneously, intramuscularly, intraportally) or to ensure delivery to the bloodstream in an effective form. It may also be administered by other methods such as injection. Pharmaceutical compositions may also be administered by isolated perfusion techniques, such as intra-tissue isolated perfusion, for local therapeutic effect. Intravenous injection is preferred.
  • Effective doses and schedules for administering the pharmaceutical composition of the present invention are empirically determined, and such determination methods are within the common general knowledge in the art. For example, once a week for 5 doses, or once every 2 weeks for 3 doses.
  • dose of a pharmaceutical composition to be administered depends, for example, on the mammal inoculated with the pharmaceutical composition, the route of administration, the specific type of antibody used and other agents administered to said mammal. You will understand that it will depend and change.
  • a typical daily dosage of the pharmaceutical composition used alone may range from about 1 ⁇ g/kg body weight to 100 mg/kg body weight or more of active ingredient per day, depending on the factors mentioned above. There may be.
  • any of the following doses may be used: at least about 50 mg/kg body weight; at least about 10 mg/kg body weight; at least about 3 mg/kg body weight; at least about 1 mg/kg body weight; at least about 750 ⁇ g/kg body weight; at least about 500 ⁇ g/kg body weight; at least about 250 ⁇ g/kg body weight; at least about 100 ⁇ g/kg body weight; at least about 50 ⁇ g/kg body weight; at least about 10 ⁇ g/kg body weight; dose is administered.
  • the amount of the anti-CD26 antibody is 0.1 to 2 mg/kg, which is administered once every two weeks for three times, or 2 to 6 mg/kg, which is administered once a week for five times. .
  • the method of the present invention is based on the fact that anti-CD26 antibody administration has a higher anti-tumor effect in patients with increased serum soluble CD26 levels. That is, the method of the present invention compares the level of soluble CD26 in the serum of a cancer patient before administration of an anti-CD26 antibody with the level of soluble CD26 in the serum of the patient after one day after administration of an anti-CD26 antibody. It utilizes the ability to predict the effectiveness of the CD26 antibody. Thus, the methods of the invention require at least one administration of an anti-CD26 antibody to a subject. Such an anti-CD26 antibody administration that serves as a reference for comparison of serum soluble CD26 levels before and after administration is referred to as a reference administration.
  • the reference dose is preferably the first dose in the patient, but need not necessarily be the first dose received in the patient.
  • the administration may be used as the reference administration.
  • the level of soluble CD26 in the serum of cancer patients prior to administration of the anti-CD26 antibody serving as the baseline for comparison (100%) is measured prior to the baseline administration.
  • the level of soluble CD26 in the serum of the patient measured before the administration of the anti-CD26 antibody to be the reference is defined as "the level of soluble CD26 in the serum of the patient before the reference administration. ”.
  • the level of soluble CD26 in the patient's serum from day 1 onwards after the baseline dose that is compared to the baseline level (100%) is referred to as the "level of soluble CD26 in the patient's serum on the day of measurement.”
  • the number of days after the first day after the reference administration is the number of days calculated with the reference administration as the first day.
  • the day on which the level of soluble CD26 in the serum of the patient to be compared is measured is called the day of measurement.
  • Administration of the anti-CD26 antibody received by the measurement date may be performed only once as the reference administration, or may be multiple times.
  • the anti-CD26 antibody when the anti-CD26 antibody is administered once a week, the anti-CD26 antibody is administered on the 8th day, the 15th day, the 22nd day, the 29th day, and so on. If the measurement date is from 1st to 8th day (before administration), only the reference dose is given, but from the 8th day (after administration), it means that the patient has received 2 or more doses. If the day of measurement is the day of administration, measuring the level of soluble CD26 in the patient's serum can be before administration or after administration.
  • the anti-CD26 antibody is administered as a pharmaceutical composition containing the anti-CD26 antibody as an active ingredient according to the administration of the pharmaceutical composition described above.
  • the present invention provides a method for selecting a cancer patient who may benefit from treatment with an anti-CD26 antibody, comprising: comparing the level with the level of soluble CD26 in the patient's serum on the day of measurement, and the level of soluble CD26 in the patient's serum on the day of measurement is equal to the level of soluble CD26 in the patient's serum before the baseline dose; If the level is less than 85%, the patient is selected as likely to be therapeutically effective with the anti-CD26 antibody, wherein the measurement date is 1 day with the reference administration date as day 1 ⁇ 60 days, and the patient is a patient who is administered an anti-CD26 antibody at least once as a reference dose, and when the measurement date corresponds to the administration date of the anti-CD26 antibody, the The method, wherein the level of soluble CD26 in the serum of the patient on the date of measurement is the level of soluble CD26 in the serum of the patient prior to administration of the anti-CD26 antibody on the date of measurement. Regarding.
  • reference administration refers to the level of soluble CD26 in the patient's serum before the administration as a reference, and it is determined whether the level of soluble CD26 in the patient's serum after administration has decreased. It does not have to be the first administration for the patient. Preferably, however, the reference dose is the first dose, since efficacy of a drug is usually determined early in the initiation of treatment.
  • the term "level” means a quantified index regarding abundance, and includes, for example, concentration, amount, or an index that can be used instead. Therefore, the level may be a measured value such as fluorescence intensity itself, or may be a value converted to concentration or the like. In addition, the level may be an absolute numerical value (abundance, amount per unit area, etc.), or a relative numerical value (percentage (%) , multiples, etc.).
  • the present invention provides a method for predicting the therapeutic effect of an anti-CD26 antibody in a cancer patient, comprising: the level of soluble CD26 in the serum of the patient before baseline administration of the anti-CD26 antibody; Comparing the level of soluble CD26 in the patient's serum and the level of soluble CD26 in the patient's serum on the date of measurement is less than 85% of the level of soluble CD26 in the patient's serum prior to the baseline dose
  • a method of predicting that the anti-CD26 antibody may have a therapeutic effect in the patient, wherein the measurement date is 1 to 60 days after the reference administration, with the reference administration date being day 1.
  • the patient is a patient who is administered an anti-CD26 antibody at least once as a reference dose, and when the measurement date corresponds to the administration date of the anti-CD26 antibody, the patient on the measurement date
  • the level of soluble CD26 in serum is the level of soluble CD26 in the serum of said patient prior to administration of anti-CD26 antibody on said measurement day.
  • the "measurement day” can be 1 to 60 days from the reference administration date as day 1, for example, 1 to 30 days, 2 to 8 days, 2 to 15 days, 2 -21 days, 2-29 days, 8-15 days, 8-21 days, 8-29 days, 15-22 days, 15-29 days, or 22-29 days, or 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25, It may be the 26th, 27th, 28th, or 29th day, or any day contained in the period between any two of these points.
  • the patient on the measurement date the level of soluble CD26 in the serum is 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 62.3%, 60%, 55% of the level of soluble CD26 in the patient's serum prior to the baseline dose; 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 26%, or less than 25%.
  • the measurement date is 2 to 8 days after the reference administration, and the serum of the patient on the measurement date If the level of soluble CD26 is less than 50% (or less than 49%) of the level of soluble CD26 in the patient's serum prior to the baseline dose, then the anti-CD26 antibody may be therapeutically effective, or It is determined that anti-CD26 antibodies may be therapeutically effective in the patient.
  • the measurement date is after 15 days from the reference administration (e.g., 15 to 22 days, 15 to 29 days , or days 22-29), and the level of soluble CD26 in the patient's serum on the day of measurement is less than 30% of the level of soluble CD26 in the patient's serum before the reference dose (or less than 26%), it is determined that the anti-CD26 antibody may have a therapeutic effect, or that the anti-CD26 antibody may have a therapeutic effect in the patient.
  • the reference administration e.g., 15 to 22 days, 15 to 29 days , or days 22-29
  • the method described above further comprises administering an anti-CD26 antibody to the patient, collecting the patient's serum prior to the baseline dose, and collecting the patient's serum after the above-specified time period from the baseline dose. and measuring soluble CD26 in the patient's serum before a reference dose and measuring soluble CD26 in the patient's serum after a reference dose.
  • You can Soluble CD26 can be measured using commercially available kits such as ELISA kits, or by methods well known to those skilled in the art.
  • the present invention relates to the level of soluble CD26 in the serum of a cancer patient before administration of an anti-CD26 antibody, and 1 to 60 days (preferably 5 to 45 days, 15 to 30 days after said administration). day, days 25-30) of measuring the level of soluble CD26 in the serum of said patient.
  • the level of soluble CD26 may be replaced with DPPIV activity (or its measurement).
  • DPPIV activity can be measured by using a commercially available kit.
  • patients selected by the method as having the possibility of obtaining therapeutic effects from anti-CD26 antibodies, or patients predicted that anti-CD26 antibodies may have therapeutic effects may include administering a pharmaceutical composition for treating malignant mesothelioma containing an anti-CD26 antibody as an active ingredient.
  • Serum soluble CD26/DPP4 titers were measured immediately before and after YS110 administration on days 1, 15, and 29.
  • (2) Statistical Analysis Boxplot analysis was used to observe serum soluble CD26/DPP4 titer changes before/after YS110 injection on days 1, 15, and 29. Variation in serum soluble CD26 titers pre/post YS110 administration on days 1, 15, and 29, and 43 The relationship between day-to-day tumor volume change from baseline was observed.
  • These two observational analyzes included changes in serum soluble CD26 titers pre/post YS110 administration on Days 1 and 29 from baseline and RECIST criteria on Day 43 using PPMC or SRDC analyses.
  • MSTO-211H MSTO parent
  • NCI-H226 were obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, Md.).
  • MSTO parental cells were stably transfected with full-length human CD26 (MSTO-CD26) (Yamamoto J, et al., Br J Cancer.
  • Non-tumor human cells include immortalized pleural mesothelial cell line MeT-5A, mammary epithelial cell line MCF10A, fetal lung fibroblast cell line TIG-1, human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), and human dermal microvascular endothelial cells.
  • HDMVEC High Mobility Vehicle
  • MeT-5A and MCF10A were obtained from ATCC
  • TIG-1 was obtained from JCRB cell bank (Osaka, Japan).
  • HUVEC, HDMVEC, and media for MCF10A, HUVEC, HDMVEC (MEGM, EGM-2, EGM-2MV, respectively) were purchased from LONZA (Walkersville, Md.).
  • MSTO parent, MSTO-CD26, JMNctrl-shRNA, JMNCD26-shRNA, H226, and MeT-5A were grown in RPMI1640 medium supplemented with 10% FBS.
  • TIG-1 was grown in DMEM medium supplemented with 10% FBS. All cells were cultured in a humidified 5% CO2 incubator at 37°C.
  • Humanized anti-CD26 monoclonal antibody YS110 was obtained from Y's AC Co. , Ltd. (Tokyo, Japan).
  • a human IgG1 isotype control monoclonal antibody (clone QA16A12) purchased from BioLegend (San Diego, Calif.) was used as a control.
  • MSTO-CD26 (1.5 ⁇ 10 5 , 4 ⁇ 10 4 or 4 ⁇ 10 3 ) was added to YS110 (1, 3, 10 ⁇ g/ mL) at 37° C. for 1, 3, or 7 days, respectively. After incubation, supernatants were collected from confluent cultures.
  • YS110 (1, 3, 10 ⁇ g/ mL)
  • supernatants were collected from confluent cultures.
  • Mouse anti-human CD26 monoclonal antibodies (clones 5F8 and 9C11) that show no cross-reactivity with the therapeutic humanized anti-CD26 monoclonal antibody YS110 were used to measure soluble CD26 and DPP4 activity. assay was developed in our laboratory. Related experimental methods have been previously detailed (Ohnuma K, et al., J Clin Lab Anal.
  • Serum soluble CD26 titers were significantly reduced in both the SD and PD cohorts immediately after YS110 infusion on days 1, 15, and 29 (FIGS. 3A, C, and E).
  • a significant difference between the SD and PD groups in serum soluble CD26 titer variation was observed before day 29 of infusion.
  • Pre-infusion serum soluble CD26 titer variation on day 29 in the SD cohort was at a lower level compared to the PD group (Fig. 3D).
  • this phenomenon was subdivided into 17 Q2W, 14 Q2W males, 18 MMs, 11 Q2W MMs, 9 Q2W male MMs, or 6 RCCs (Fig. 3Ff-K, respectively). was clearly observed in the group.
  • day 29 predose serum soluble CD26/DPP4 titers of SD cohort (significantly lower than PD cohort) by bar graph analysis
  • a bar graph analysis of predose serum soluble CD26 titer variation on days 1, 15, and 29 in SD and PD cases was performed based on scattergram and PPMC/SRDC studies.
  • serum soluble CD26 titers in the SD and PD cohorts decreased from day 1 pre-dose to day 29 pre-dose.
  • This timing represents the same sample collection timing assessing pre-dose serum soluble CD26 titers on day 29 on the Q2W treatment schedule (Fig. 4D).
  • (11) Predictive ability of serum soluble CD26/DPP4 titer variation on SD or PFS outcome by ROC analysis in stratified groups. The cut-off titer (index) of serum soluble CD26/DPP4 titer variation before/after administration of YS110 on day 29 was examined. Probabilities were assessed with Fisher's exact test (Table 11).
  • Soluble CD26 could be quantified in culture supernatants of CD26-positive MSTO-CD26, JMNctrl-shRNA, and H226 cells, whereas soluble CD26 was quantitated in cultures of CD26-negative MSTO parental and JMNCD26-shRNA cells, regardless of YS110 treatment. It was not detectable in the supernatant (Fig. 6A). Treatment with YS110 clearly decreased the amount of MSTO-CD26, JMNctrl-shRNA and soluble CD26 in the culture supernatant of H226 cells compared to cells incubated with vehicle or control human IgG (Fig. 6A). . Next, we investigated the production of soluble CD26 from non-tumor (normal) cells.
  • CD26 was clearly expressed on the cell surface of HDMVEC and TIG-1, but CD26 was poorly expressed on HUVEC and MCF10A and partially expressed on MeT-5A (Fig. 5B). Soluble CD26 could be quantified in the culture supernatants of CD26-positive TIG-1 and HDMVEC cells, whereas soluble CD26 could not be detected in the culture supernatants of CD26-negative or MCF10A-low, HUVEC and MeT-5A cells (Fig. 6B). Similar to the results shown in FIG. 6A, YS110 treatment clearly reduced the amount of soluble CD26 in the culture supernatants of TIG-1 and HDMVEC cells compared to cells incubated with vehicle or control human IgG. (Fig. 6B).
  • the serum soluble CD26/DPP4 titer on Day29pre was 25.10% for SD and 31.74% for PD when the CD26/DPP4 titer before the first administration was taken as 100%.
  • the serum soluble CD26/DPP4 titer on Day 15 post was 24.06% for SD and 30.56% for PD when the CD26/DPP4 titer before the first administration was taken as 100%.
  • the serum soluble CD26/DPP4 titer on Day 29 post (after administration) was 25.64% for SD and 30.93% for PD when the CD26/DPP4 titer before the first administration was taken as 100%.
  • the ROC analysis defined the cut-off titer of pre/post-dose serum soluble CD26/DPP4 titer variation on day 29 as the index for the outcome of cases with SD or PFS longer than 90 or 180 days; yielded significantly feasible predictions under Specifically, a ROC analysis of 14 men treated on the Q2W schedule defined a cutoff value of p ⁇ 0.001 (Table 11). Similar results were obtained in 9 male MMs treated with the Q2W dosing schedule (Table 11). The results were statistically significant despite the small number of cases in the stratified group, indicating that serum soluble CD26/DPP4 titer variation is a definitive prognostic biomarker for cancer patients treated with YS110.
  • YS110 in addition to inducing its direct anti-tumor effects via induction of cell cycle arrest at the S/G1 phase (Inamoto T, et al. 2007; 13(14): 4191-200., Hayashi M, et al., Cancer Cell Int. 2016; 16: 35.), MM via antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) induced cytolysis of the cells.
  • ADCC antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
  • Another important mechanism of action of YS110 is the intercalation of the CD26-YS110 complex from the cell surface to inhibit MM cell proliferation through suppression of the expression of the POLR2A gene, a component of RNA polymerase II.
  • CD26-expressing non-neoplastic cells such as human embryonic kidney HEK293 cells and normal T lymphocytes
  • the CD26-YS110 complex did not translocate into the nucleus (Yamada K, et al., PLoS One. 2013; 8 ( 4): e62304., Hayashi M, et al., Cancers (Basel). 2019; 11(8): 1138.).
  • the internalization of CD26-antibody complexes was dependent on epitopes of CD26 recognized by specific monoclonal antibodies.
  • Residues 201-211, 730, and 740 of CD26 are essential for DPP4 enzymatic activity, along with the serine catalytic site at residue 630, which constitutes the CD26/DPPIV pocket structure [26].
  • YS110 recognizes the 248th to 358th aa region of CD26, which is different from the catalytic site (Hatano R, et al., (2014) supra, Dong RP, et al., Mol Immunol. 1998; 35(1): 13-11 21.), binding of YS110 does not directly affect DPP4 enzymatic activity (Y's Therapeutics Inc. USA IND. 2008; 100657: Section 8, 8.2.1.5: 289. ).
  • YS110 treatment reduced the production of soluble CD26 from both CD26-expressing MM cell lines and non-tumor cells (Fig. 6).
  • the soluble form of CD26 begins at the 39th aa residue and lacks the cytoplasmic and transmembrane regions (Iwaki-Egawa S, et al., J Biochem. 14 1998; 124(2):428-33), but is soluble.
  • the exact mechanisms involved in the production and release of CD26 from the cell surface have not yet been fully elucidated.
  • the decrease in soluble CD26 production after YS110 treatment may be due to antibody-mediated internalization of cell surface CD26 molecules (Yamada K, et al., (2013) supra).

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Abstract

ＣＤ２６発現腫瘍に対するヒト化抗ＣＤ２６モノクローナル抗体ＹＳ１１０の第Ｉ相試験データに基づいてＣＤ２６標的療法のための潜在的予後バイオマーカーを同定した。箱ひげ図解析、散布図解析、ピアソンの積率相関／スピアマンの順位差相関、棒グラフ解析、及び受信者操作特性（ＲＯＣ）を用いて、ＹＳ１１０投与による可溶性ＣＤ２６力価変動と腫瘍体積変化との相関、ＲＥＣＩＳＴ基準評価、及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）について検討した。また、血清可溶性ＣＤ２６力価変動の機構をインビトロ実験で確認した。その結果、ＹＳ１１０治療の初期段階における血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動を、治療効果を評価するための予測バイオマーカーとして初めて見出した。

Description

抗ＣＤ２６抗体の奏効性バイオマーカー 関連出願の相互参照
　本国際出願は、２０２１年３月２２日に日本国特許庁に出願された日本国特許出願第２０２１－０４７９５４号に基づく優先権を主張するものであり、日本国特許出願第２０２１－０４７９５４号の全内容を本国際出願に参照により援用する。
　本発明は抗ＣＤ２６抗体の奏効性を判定するためのバイオマーカーに関する。
　ＣＤ２６は、１１０ｋＤａの、その細胞外ドメインにジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）活性を持つＩＩ型膜貫通糖タンパク質であり、Ｎ末端ジペプチドをＬ－プロリン又はＬ－アラニンで前末端位置（非特許文献１、２）において切断することができる。ＣＤ２６は、複数の生物学的機能を有し、様々な正常細胞型及び腫瘍に発現する。ＣＤ２６はまた、血清及び他の体液中に保存されたＤＰＰ４活性を有する可溶性形態として見出される。抗ＣＤ２６モノクローナル抗体のインビトロ及びインビボ投与は、複数の作用機序を介して腫瘍の増殖、遊走、及び浸潤を阻止し、腎細胞癌（ＲＣＣ）及び悪性中皮腫（ＭＭ）を含む種々の癌を接種したマウス異種移植モデルの生存期間を延ばす（非特許文献３－７）。
　最近、ＣＤ２６を発現する固形腫瘍（ＭＭ２３人、ＲＣＣ９人、尿路上皮癌（ＵＴＣ）１人）を対象としたＹＳ１１０の第Ｉ相ファースト・イン・ヒューマン（ＦＩＨ）臨床試験（ＦＩＨ）が実施され（非特許文献８）、ＹＳ１１０療法が良好な安全性プロファイルを発揮し、進行性／難治性腫瘍患者の疾患コントロールを促進することが実証された。
　癌の治療において、治療効果を奏するかどうかを判定することは治療戦略において非常に重要である。固形がんの場合、例えば治療薬投与から４週間後にＲＥＣＩＳＴなどに基づき、その効果を確認することで当該固形がんにおいて効果を奏するか否かを判定している。しかし、より早く簡便な奏効性評価の方法として、バイオマーカーの利用が期待されている。癌管理におけるバイオマーカーは、予防、診断、及び治療法の選択、並びに潜在的に治療モニタリングのために使用され得る。ＥＧＦＲ又はＡＬＫ融合遺伝子（肺癌）、ＨＥＲ２（乳癌又は胃癌）、又はＲＡＳ（結腸癌）などのマーカーは、選択された遺伝子変化を特定することによって最適な治療法を選択するために使用される。しかしながら、癌治療過程中の予測結果を示す血清バイオマーカーは、これまで特定されていない。
　可溶性ＣＤ２６の血清レベルはこれまで可能性のあるバイオマーカーとして評価されてきた。尿路上皮癌、胃癌、膵癌、甲状腺癌、肺癌の患者では、ベースラインの血清可溶性ＣＤ２６力価と治療の臨床的有効性との相関が報告されている（非特許文献９～１４）。結腸癌手術後の血清可溶性ＣＤ２６力価変動も、再発又は転移のリスクの予測バイオマーカーであることが報告された（非特許文献１５～１７）。さらに、糖尿病患者の大腸癌又は肺癌手術後のＤＰＰ４阻害剤シタグリプチンによる治療は、他の糖尿病治療薬による治療よりも全生存期間の延長と関連しており（非特許文献１８）、可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４が抗腫瘍活性の調節に何らかの役割を果たしている可能性が示唆された。しかし、治療経過中の血清可溶性ＣＤ２６力価変動が、治療転帰の予後マーカーであるという報告はない。
国際公開ＷＯ０２／１４４６２号 国際公開ＷＯ２００７／０１４１６９号 国際公開ＷＯ２００８／１１４８７６号
Ｏｈｎｕｍａ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｔｒｅｎｄｓ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２００８；２９（６）：２９５－３０１． Ｏｈｎｕｍａ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｆｒｏｎｔ　Ｂｉｏｓｃｉ　（Ｌａｎｄｍａｒｋ　Ｅｄ）．　２０１８；２３：１７５４－７９． Ｈｏ　Ｌ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　２００１；７（７）：２０３１－４０． Ｉｎａｍｏｔｏ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　２００６；１２（１１　Ｐｔ　１）：３４７０－７． Ｉｎａｍｏｔｏ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　２００７；１３（１４）：４１９１－２００． Ｙａｍａｍｏｔｏ　Ｊ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ．　２０１４；１１０（９）：２２３２－４５． Ｎｉｓｈｉｄａ　Ｈ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｌｏｏｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｊ．　２０１８；８（１１）：９９． Ａｎｇｅｖｉｎ　Ｅ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ．　２０１７；１１６（９）：１１２６－３４． Ｌｉａｎｇ　ＰＩ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．　２０１７；８（２）：２９９５－３００８． Ｂｏｃｃａｒｄｉ　Ｖ，　ｅｔ　ａｌ．，　ＢＭＣ　Ｃａｎｃｅｒ．　２０１５；１５：７０３． Ａｂｏｏｓｈａｈａｂ　Ｒ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｅｘｐ　Ｏｎｃｏｌ．　２０１８；４０（４）：２９９－３０２． Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｏｔｅｒｏ　Ｎ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｓｃｉ　Ｒｅｐ．　２０１４；４：３９９９． Ｙｅ　Ｃ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｔｒａｎｓｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　２０１６；５：５１２－５１９． Ｅｎｚ　Ｎ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｔｈｅｒ．　２０１９；１９８：１３５－５９． Ｄｅ　Ｃｈｉａｒａ　Ｌ，　ｅｔ　ａｌ．，　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．　２０１４；９（９）：ｅ１０７４７０． Ｄｅ　Ｃｈｉａｒａ　Ｌ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｄｉｓ　Ｍａｒｋｅｒｓ．　２０２０；２０２０：４３４７９３６． Ｌａｒｒｉｎａｇａ　Ｇ，　ｅｔ　ａｌ．，　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．　２０１５；１０（３）：ｅ０１１９４３６． Ａｌｉ　Ａ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｍｏｌ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎｃｏｌ．　２０１９；１０（１）：１１８－２４．
　ＣＤ２６発現腫瘍患者を対象としたヒト化抗体ＹＳ１１０を用いた第Ｉ相ＦＩＨ臨床試験において、血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価の一過性の減少とその後の回復を、ＹＳ１１０投与の最初のサイクルの４週間の間に観察された。この研究では、可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価の変動とＲＥＣＩＳＴ基準による反応又は無増悪生存（ＰＦＳ）により判定された有効性測定項目との間の相関を、計２６人の評価可能な症例又は層別化した群で解析して、ＹＳ１１０治療に対する可能性のある予後バイオマーカーを特定した。
箱ひげ図解析によるＹＳ１１０投与後の血清可溶性ＣＤ２６レベルの変化を示す。各図は、ベースライン（１日目投与前、１００％）から１、１５、及び２９日目のＹＳ１１０投与前／後までの血清可溶性ＣＤ２６力価変動を示した。解析したデータを（Ａ）合計２６例、（Ｂ）Ｑ２Ｗ投与１８例、（Ｃ）Ｑ２Ｗ投与男性１４例、（Ｄ）Ｑ１Ｗ投与８例、（Ｅ）ＭＭ１９例、（Ｆ）Ｑ２Ｗ投与ＭＭ１２例、（Ｇ）Ｑ２Ｗ投与男性ＭＭ９例、（Ｈ）ＲＣＣ６例に層別化した。データは各群の平均値±標準偏差で示す。 血清可溶性ＣＤ２６レベルとＤＰＰ４酵素活性との間の相関を示す。（Ａ）血清可溶性ＣＤ２６レベル（ｎｇ／ｍｌ）と血清ＤＰＰ４酵素活性（μＭ／ｍｉｎ）の間の相関を示す。（Ｂ）ベースラインからの血清可溶性ＣＤ２６力価変動（％）と血清ＤＰＰ４力価との相関ベースラインからの変動（％）を示す。両方とも非ゼロ相関によって調べた。 散布図解析による血清可溶性ＣＤ２６力価変動と腫瘍体積変動の間の関係を示す。合計２５症例のＹＳ１１０投与ベースライン（１日目投与前、１００％）からの（Ａ）１日目投与後、（Ｂ）１５日目投与前、（Ｃ）１５日目投与後、（Ｄ）２９日目投与前、（Ｅ）２９日目投与後における血清可溶性ＣＤ２６力価の変動、及び４３日目のＲＥＣＩＳＴ反応基準による腫瘍体積変動を図にした。データをＳＤ（灰色丸）コホートとＰＤ（白丸）コホートに分けた。（Ｆ）Ｑ２Ｗ投与１７例、（Ｇ）Ｑ２Ｗ投与男性１４例、（Ｈ）ＭＭ１８例、（Ｉ）Ｑ２Ｗ投与ＭＭ１１例、（Ｊ）ＭＭ、Ｑ２Ｗ投与男性９例、（Ｋ）Ｑ２Ｗ投与ＲＣＣ６例の、２９日目のＹＳ１１０投与前の血清可溶性ＣＤ２６力価のベースラインからの変動、及び４３日目のＲＥＣＩＳＴ反応基準による腫瘍体積変動を図にした。 棒グラフ解析によるＳＤコホートとＰＤコホートとの間の血清可溶性ＣＤ２６力価変動の差を示す。１日目、１５日目、及び２９日目のＹＳ１１０投与前のベースライン（１日目投与前、１００％）からの血清可溶性ＣＤ２６力価変動のＳＤコホートとＰＤコホートとの間の違いを解析した。解析したデータを、（Ａ）合計２３例、（Ｂ）Ｑ２Ｗ投与１７例、（Ｃ）Ｑ２Ｗ投与男性１４例、（Ｄ）Ｑ１Ｗ投与８例、（Ｅ）ＭＭ１７例、（Ｆ）Ｑ２Ｗ投与ＭＭ１１例、（Ｆ）ＭＭ、Ｑ２Ｗ投与男性９例、（Ｈ）Ｑ２Ｗ投与ＲＣＣ６例に層別化した。データは各群の平均値±標準偏差で示す。 ヒト腫瘍及び非腫瘍細胞におけるＣＤ２６の細胞表面タンパク質発現を示す。示された悪性中皮腫細胞株（Ａ）または非腫瘍細胞（Ｂ）は、ＰＥ標識マウスＩｇＧ１、κアイソタイプコントロール（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローンＭＯＰＣ－２１（ｉ））またはＰＥ標識マウス抗ヒトＣＤ２６　ｍＡｂ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、クローンＭ－Ａ２６１（ｉｉ））で染色した。ＣＤ２６の細胞表面発現をフローサイトメトリーによって分析した。２次元ドットプロット（横軸：ＣＤ２６、縦軸：非染色）（上のパネル）およびＣＤ２６強度のヒストグラム（赤い線）および生細胞用にゲートされたアイソタイプコントロール（灰色の領域）（下のパネル）を示す。３回の独立した実験の代表的なプロットとヒストグラムが示され、各実験で同様の結果が得られた。この実験で使用された細胞株の中で、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６、ＪＭＮｃｔｒｌ－ｓｈＲＮＡ、Ｈ２２６、ＴＩＧ－１、及びＨＤＭＶＥＣの細胞表面にＣＤ２６が明確に発現した。一方で、ＭＳＴＯの親株、ＪＭＮ　ＣＤ２６－ｓｈＲＮＡ、ＭＣＦ１０Ａ、ＨＵＶＥＣではＣＤ２６はほとんど発現せず、ＭｅＴ－５Ａで部分的に発現した。 ＹＳ１１０の添加は、ＣＤ２６陽性腫瘍及び非腫瘍細胞からの可溶性ＣＤ２６産生を低下させた。（Ａ、Ｂ）ＭＭ細胞株（ＭＳＴＯ親、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６、ＪＭＮｃｔｒｌ－ｓｈＲＮＡ、ＪＭＮＣＤ２６－ｓｈＲＮＡ又はＨ２２６細胞（各３．５×１０４））（Ａ）又は非腫瘍細胞（ＭＣＦ１０Ａ（１．０×１０５）、ＨＵＶＥＣ（９．０×１０４）、ＭｅＴ－５Ａ（６．０×１０４）、ＴＩＧ－１（５．０×１０４）又はＨＤＭＶＥＣ細胞（９．０×１０４））（Ｂ）を対照ヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ）又はヒト化抗ＣＤ２６モノクローナル抗体ＹＳ１１０（各１０μｇ／ｍｌ）と７２時間インキュベートした。（Ｃ）ＭＳＴＯ－ＣＤ２６又はＴＩＧ－１細胞を、指定濃度のＹＳ１１０と共に３日間インキュベートした。（Ｄ）ＭＳＴＯ－ＣＤ２６細胞を、指定濃度のＹＳ１１０と共に１日間、３日間又は７日間インキュベートした。培養上清中の可溶性ＣＤ２６濃度をＥＬＩＳＡ法により測定した。破線は検出限界（０．４８８ｎｇ／ｍｌ）、ＮＤは「未検出」（検出限界未満）を示す。３つの独立した実験の代表的データを４サンプルの平均±ＳＤ（標準偏差）として示し、ＹＳ１１０とビヒクル又は対照ヒトＩｇＧ（*ｐ＜０．０１）の値を比較したところ、各実験で同様の結果が得られた。
　本明細書で使用する場合、「治療」は、有益な、または所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的において、有益な、または所望の臨床結果は、検出可能または検出不可能のいずれにせよ、１つ以上の症状の軽減、疾患の範囲の縮小、疾患の安定化した（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の回復または寛解、および緩解(部分的または全体)を含むが、これらに限定されるものではない。「治療」は、仮に治療を受けなかった場合の見込まれた余命に対して、余命を延ばすことも意味している。
　「有効量」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の臨床結果を達成するのに十分な量である。有効量は、１回または複数回の投与で投与することができる。本発明の目的において、本明細書中に記載される医薬組成物の有効量は、腫瘍増殖に関連する状態の進行を遅延させるのに十分な量である。当該技術分野で理解されるように、例えば、医薬組成物の有効量は、とりわけ、患者病歴、ならびに使用される医薬組成物の種類（および／または量）などの他の要因に変動または依存してもよい。
　本発明の医薬組成物は医薬的に許容される担体を含んでいてもよい。本明細書で使用する場合、「医薬的に許容される担体」または「医薬的に許容される賦形剤」は、有効成分と組み合わせた場合に、その有効成分が生物活性を維持可能であり、送達された際に被験体の免疫系と非反応性であり、被験体に対して無毒性である任意の材料を含む。例として、リン酸緩衝食塩水、水、油／水エマルジョン等のエマルジョン、および様々な種類の湿潤剤などのあらゆる標準的な医薬の担体が含まれるが、これらに限定されるものではない。噴霧投与または非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝食塩水または生理食塩水（０．９％）である。そのような担体を含む組成物は、よく知られている従来法により、処方される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、　１８ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ、　Ａ．　Ｇｅｎｎａｒｏ編、　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．、　Ｅａｓｔｏｎ、　ＰＡ、　１９９０およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、　Ｔｈｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２０ｔｈ　Ｅｄ．　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、　２０００を参照のこと）。
　ある実施態様において、本明細書において用いられる「抗ＣＤ２６抗体」は、ヒトＣＤ２６に特異的に結合する。ある実施態様において、本明細書において記載される抗ＣＤ２６抗体は、ＹＳ１１０と同じエピトープに結合する。ある実施態様において、本明細書において記載される抗ＣＤ２６抗体は、競合アッセイにおいて、ＹＳ１１０とＣＤ２６との結合を遮断する能力がある（ＹＳ１１０と競合する）。競合アッセイは、固定化したエピトープ又は抗原に対して被験抗体を接触させた後、未結合の抗体を洗浄により除去し、次いで、標識化したＹＳ１１０抗体と該エピトープ又は抗原と接触させ、未結合の抗体を洗浄により除去した後に結合したＹＳ１１０抗体を検出することにより行うことができる。被験抗体と接触させていないコントロールへのＹＳ１１０抗体とエピトープ又は抗原との結合と比較して、被験抗体を接触させた場合におけるＹＳ１１０抗体とエピトープ又は抗原への結合が減少している場合には、競合アッセイにおいて、ＹＳ１１０抗体の結合を遮断する能力がある（ＹＳ１１０抗体と競合する）と判定することができる。
　本明細書において用いられる抗ＣＤ２６抗体のヒトＣＤ２６への結合親和性としては、１０－５Ｍ未満、５×１０－５Ｍ未満、１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１０－９Ｍ未満、５×１０－１０Ｍ未満、１０－１０Ｍ未満、５×１０－１１Ｍ未満または１０－１１Ｍ未満の解離定数（即ち、Ｋｄ）を有する親和性が挙げられる。解離定数はまた、１０－１５Ｍ以上、５×１０－１５Ｍ以上、１０－１４Ｍ以上、５×１０－１４Ｍ以上、１０－１３Ｍ以上、５×１０－１３Ｍ以上、１０－１２Ｍ以上、５×１０－１２Ｍ以上、１０－１１Ｍ以上、５×１０－１１Ｍ以上、１０－１０Ｍ以上または５×１０－１０Ｍ以上であってもよい。親和性を決定するための方法は、当該技術分野で知られている。例えば、結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅバイオセンサー、ＫｉｎＥｘＡバイオセンサー、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＯＲＩＧＥＮ免疫測定法（ＩＧＥＮ社）、蛍光消光、蛍光転移、および／または酵母ディスプレイを使用して決定してもよい。親和性は、適切なバイオアッセイを用いてスクリーニングされることもありうる。
　ＣＤ２６に対する抗体の結合親和性を決定するための１つの方法は、抗体の単官能性Ｆａｂ断片の親和性を測定することである。単官能性Ｆａｂ断片を得るために、抗体、例えば、ＩｇＧは、パパインで切断されるか、または組換え技術によって発現させることができる。モノクローナル抗体の抗ＣＤ２６Ｆａｂ断片の親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ　３０００（商標）、ＢＩＡｃｏｒｅ社、Ｐｉｓｃａｗａｙ、ＮＪ）により決定することができる。供給業者の取扱説明書に従って、ＳＡチップ（ストレプトアビジン）は使用される。ビオチン化されたＣＤ２６を、ＨＢＳ－ＥＰ（１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　ｐＨ７．４、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、３ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．００５％　Ｐ２０）中に希釈し、０．００５ｍｇ／ｍＬの濃度でチップ上に注入することができる。個々のチップチャネルを横切る可変的な流動時間を使用して、抗原密度の２つの範囲が達成される：詳細な動力学的試験のためには１０～２０応答ユニット（ＲＵ）、濃度のためには５００～６００ＲＵ。Ｐｉｅｒｃｅ溶出緩衝液および４Ｍ　ＮａＣｌ（２：１）の混合物は、結合したＦａｂを効率的に除去する一方で、２００回以上の注入に対してチップ上のＣＤ２６の活性を保つ。ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液は、ランニング緩衝液として全てのＢＩＡｃｏｒｅアッセイに使用することができる。精製したＦａｂ試料の階段希釈溶液（０．１～１０×見積もられたＫＤ）を１００μＬ／分で２分間注入し、３０分までの解離時間が通常許容される。Ｆａｂタンパク質の濃度は、既知濃度（アミノ酸分析により決定された）の標準的なＦａｂを使用して、ＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳働により決定することができる。反応速度の結合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを使用して、１：１　Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルにデータをフィットさせることにより（Ｌｏｆａｓ　＆　Ｊｏｈｎｓｓｏｎ、　１９９０）同時に得られる。平衡解離定数（ＫＤ）値はｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出される。
　本発明の組成物は、ＣＤ２６発現に関連する状態（疾患または障害等）、例えば悪性中皮腫の治療に有用である。ある実施態様では、本発明の組成物は、１つ以上の次の特徴を有していてもよい：（ａ）ＣＤ２６に結合する、（ｂ）ＣＤ２６活性を調節する、（ｃ）Ｇ１／ＳチェックポイントでＣＤ２６＋細胞の細胞周期を停止させる、（ｄ）ＣＤ２６を発現する細胞（例えば、悪性中皮腫）の増殖を阻害する、（ｅ）ＣＤ２６の細胞外マトリックスに対する結合を阻害する、および／または（ｆ）ＣＤ２６発現に関連する状態の治療に有用である。ある実施態様において、ＣＤ２６の発現に関連する状態は、ＣＤ２６の過剰発現に関連する疾患または障害である。ある実施態様においては、ＣＤ２６の発現に関連する状態は、少なくとも部分的には、ＣＤ２６により媒介されるものである。ある実施態様において、ＣＤ２６の発現に関連する状態は、ＣＤ２６が発現している細胞の増殖に関連する状態である。ある実施態様において、前記疾患または障害は、癌（例えば、悪性中皮腫、肺癌、腎臓癌、肝臓癌またはＣＤ２６の発現を伴うその他の悪性腫瘍）である。
　ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号８－１４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１－７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の両方を含む。ある実施態様では、本発明の医薬組成物が含有する抗ＣＤ２６抗体は、配列番号８－１４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１－７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
　ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１－１４のうちいずれか１つのアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸、少なくとも８個の連続するアミノ酸、少なくとも約１０個の連続するアミノ酸、少なくとも約１５個の連続するアミノ酸、少なくとも約２０個の連続するアミノ酸、少なくとも約３０個の連続するアミノ酸、または少なくとも約５０個の連続するアミノ酸を含む。
　抗ＣＤ２６抗体は、本明細書においてに記載されるようなされる抗体配列の断片であってもよく、少なくとも約５０個のアミノ酸、少なくとも約７５個のアミノ酸、または少なくとも約１００個のアミノ酸の長さの断片を含む。
配列番号：１５
ＥＶＱＬＶＸ１ＳＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＱＰＧＸ６Ｘ７ＬＲＬＸ８ＣＸ９ＡＳＧＸ１０Ｘ１１ＬＸ１２ＴＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＸ１３ＧＶＩＷＧＸ１４ＧＲＴＤＹＤＸ１５Ｘ１６ＦＭＳＲＶＴＩＳＸ１７ＤＸ１８ＳＫＸ１９ＴＸ２０ＹＬＱＸ２１ＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＸ２２ＲＸ２３ＲＨＤＷＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
　上記配列中、Ｘ１はＥまたはＱであり、Ｘ２はＡまたはＧであり、Ｘ３はＧまたはＥであり、Ｘ４はＬまたはＶであり、Ｘ５はＶ、Ｋ、またはＥであり、Ｘ６はＧまたはＥであり、Ｘ７はＴまたはＳであり、Ｘ８はＴまたはＳであり、Ｘ９はＴまたはＫであり、Ｘ１０はＦまたはＹであり、Ｘ１１はＳまたはＴであり、Ｘ１２はＴ、Ｎ、またはＳであり、Ｘ１３はＶまたはＭ、Ｘ１４はＧまたはＤ、Ｘ１５はＡまたはＳであり、Ｘ１６はＡまたはＳであり、Ｘ１７はＫまたはＲであり、Ｘ１８はＮまたはＴであり、Ｘ１９はＳまたはＮであり、Ｘ２０はＶまたはＡであり、Ｘ２１はＭまたはＬであり、Ｘ２２はＶ、Ｍ、またはＴであり、そしてＸ２３はＮまたはＳである。
配列番号１６
ＸＩＩＸ２Ｘ３ＴＱＳＰＳＳＬＳＸ４Ｘ５Ｘ６ＧＸ７ＲＸ８ＴＩＸ９ＣＸ１０ＡＳＱＸ１１ＩＲＮＸ１２ＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＳＳＮＬＸＩ３Ｘ１４ＧＶＰＸ１５ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＸ１６Ｘ１７ＥＤＸ１８ＡＸ１９ＹＹＣＱＱＳＸ２０ＫＬＰＸ２１ＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫ
　上記配列中、Ｘ１はＤまたはＥであり、Ｘ２はＬまたはＥであり、Ｘ３はＭまたはＬであり、Ｘ４はＡまたはＶであり、Ｘ５はＳまたはＴであり、Ｘ６はＬ、Ｐ、またはＡであり、Ｘ７はＤまたはＥであり、Ｘ８はＶまたはＡであり、Ｘ９はＴまたはＳであり、Ｘ１０はＳまたはＲであり、Ｘ１１はＧまたはＤであり、Ｘ１２はＳまたはＮであり、Ｘ１３はＨまたはＱであり、Ｘ１４はＳまたはＴであり、Ｘ１５はＳ、Ｄ、またはＡであり、Ｘ１６はＥまたはＱであり、Ｘ１７はＰまたはＡであり、Ｘ１８はＦまたはＶであり、Ｘ１９はＴ、Ａ、またはＩであり、Ｘ２０はＩまたはＮであり、そしてＸ２１はＦまたはＬである。
　表１は、Ｘ３７６（配列番号：１）、Ｘ３７７（配列番号：２）、Ｘ３７８（配列番号：３）、Ｘ３７９（配列番号：４）、Ｘ３８０（配列番号：５）、Ｘ３８１（配列番号：６）、およびＸ３９４（配列番号：７）であるヒト化ＶＬ変異体のアミノ酸配列を示す。Ｋａｂａｔ番号および配列番号を付したスキームは、軽鎖可変領域が一致する。
　表２は、Ｘ３８４（配列番号：８）、Ｘ３８５（配列番号：９）、Ｘ３８６（配列番号：１０）、Ｘ３８７（配列番号：１１）およびＸ３８８（配列番号：１２）、Ｘ３９９（配列番号：１３）およびＸ４２０（配列番号：１４）であるヒト化ＶＨ変異体のアミノ酸配列を示す。配列番号およびＫａｂａｔ番号スキームの両方を示す。Ｋａｂａｔ番号スキームは、８２ａ、８２ｂ、および８２ｃを含む。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
  
　抗ＣＤ２６抗体は、さらに、配列番号１７またはそれらの断片もしくは変異体を含んでもよい。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１７を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、シグナル配列を除く配列番号１７を含む（当業者は、ある実施態様において、抗体のシグナル配列が抗体から切断されるものであることを容易に理解するであろう）。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１７の可変領域を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は配列番号１７に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％の同一性を有する、抗体（またはそれらの断片）を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１７の断片であって、少なくとも約１０アミノ酸、少なくとも約２５アミノ酸、少なくとも約５０アミノ酸、少なくとも約７５アミノ酸、少なくとも約１００アミノ酸の長さの断片を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトＣＤ２６に結合する。
重鎖（配列番号１７）
ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳＥＶＱＬＶＥＳＧＡＧＶＫＱＰＧＧＴＬＲＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＴＴＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＷＧＤＧＲＴＤＹＤＡＡＦＭＳＲＶＴＩＳＫＤＴＳＫＳＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＭＲＮＲＨＤＷＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
　抗ＣＤ２６抗体は、さらに、配列番号１８、またはそれらの断片もしくは変異体を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１８を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、シグナル配列を除く配列番号１８を含む。（当業者は、ある実施態様において、抗体のシグナル配列が抗体から切断されるものであることを容易に理解するであろう。）ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１８の可変領域を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は配列番号１８に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９８％の同一性を有する、抗体（またはそれらの断片）を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１８の断片であって、少なくとも約１０アミノ酸、少なくとも約２５アミノ酸、少なくとも約５０アミノ酸、少なくとも約７５アミノ酸、少なくとも約１００アミノ酸の長さの断片を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、配列番号１８、またはそのフラグメントもしくは変異体をさらに含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトＣＤ２６に結合する。例えば、ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、それぞれがシグナル配列の無い配列番号１７を含む少なくとも１本の重鎖（例えば、２本の重鎖）、およびそれぞれがシグナル配列の無い配列番号１８を含む少なくとも１本の軽鎖（例えば、２本の軽鎖）を含む抗体である。
軽鎖（配列番号１８）
ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣＤＩＬＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＴＰＧＥＲＡＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＮＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＳＳＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＱＰＥＤＶＡＡＹＹＣＱＱＳＩＫＬＰＦＴＦＧＳＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
　本明細書において、ヒト化抗ＣＤ２６抗体である「ＹＳ１１０」とは、重鎖定常領域が配列番号１７に記載されたアミノ酸配列からなり、軽鎖定常領域が配列番号１８に記載されたアミノ酸配列からなる抗体を意味する。ＹＳ１１０は悪性腫瘍細胞膜上のＣＤ２６と結合すると細胞内に取り込まれ、さらに核内にまで移行することが報告されている（Ｙａｍａｄａ　Ｋ　ｅｔ　ａｌ、Ｐｌｏｓ　Ｏｎｅ、２０１３　Ａｐｒ　２９；８（４）：ｅ６２３０４）。より具体的には、ＹＳ１１０はＣａｖｅｏｌｉｎ依存性のｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓにより細胞質内に取り込まれ、ｅａｒｌｙ　ｅｎｄｏｃｙｔｉｃ　ｖｅｓｉｃｌｅｓによって核内に輸送されると考えられる。即ち、本発明の抗ＣＤ２６抗体は、悪性腫瘍細胞膜上のＣＤ２６と結合すると細胞内に取り込まれ、さらに核内にまで移行する抗体であってもよい。抗体が悪性腫瘍細胞膜上のＣＤ２６と結合すると細胞内に取り込まれ、さらに核内にまで移行するか否かは、標識化した抗体と細胞を接触させた後、標識を基に抗体が存在する位置を顕微鏡等を用いて検出し、当該位置と細胞内の組織との位置関係を決定することにより行うことができる。
　別の側面において、抗ＣＤ２６抗体は、ＹＳＬＲＷＩＳＤＨＥＹＬＹ（配列番号１９；ペプチド６）、ＬＥＹＮＹＶＫＱＷＲＨＳＹ（配列番号２０；ペプチド３５）、ＴＷＳＰＶＧＨＫＬＡＹＶＷ（配列番号２１；ペプチド５５）、ＬＷＷＳＰＮＧＴＦＬＡＹＡ（配列番号２２；ペプチド８４）、ＲＩＳＬＱＷＬＲＲＩＱＮＹ（配列番号２３；ペプチド１３２）、ＹＶＫＱＷＲＨＳＹＴＡＳＹ（配列番号２４；ペプチド３７）、ＥＥＥＶＦＳＡＹＳＡＬＷＷ（配列番号２５；ペプチド７９）、ＤＹＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬ（配列番号２６；ペプチド２９）、ＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬＥＹ（配列番号２７；ペプチド３０）、およびＩＹＶＫＩＥＰＮＬＰＳＹＲ（配列番号２８；ペプチド６３）からなる群から選択される１つ以上のペプチドに結合する。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、前記ペプチドの１つ以上に特異的に結合する。これらのペプチドは、ヒトＣＤ２６の領域である。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトＣＤ２６の他の領域に対応する１つ以上のペプチドと比べて、ＹＳＬＲＷＩＳＤＨＥＹＬＹ（配列番号１９；ペプチド６）、ＬＥＹＮＹＶＫＱＷＲＨＳＹ（配列番号２０；ペプチド３５）、ＴＷＳＰＶＧＨＫＬＡＹＶＷ（配列番号２１；ペプチド５５）、ＬＷＷＳＰＮＧＴＦＬＡＹＡ（配列番号２２；ペプチド８４）、ＲＩＳＬＱＷＬＲＲＩＱＮＹ（配列番号２３；ペプチド１３２）、ＹＶＫＱＷＲＨＳＹＴＡＳＹ（配列番号２４；ペプチド３７）、ＥＥＥＶＦＳＡＹＳＡＬＷＷ（配列番号２５；ペプチド７９）、ＤＹＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬ（配列番号２６；ペプチド２９）、ＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬＥＹ（配列番号２７；ペプチド３０）、およびＩＹＶＫＩＥＰＮＬＰＳＹＲ（配列番号２８；ペプチド６３）からなる群から選択される、１つ以上のペプチドに特異的に結合する。
　ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、次のそれぞれのペプチドに結合する：ＹＳＬＲＷＩＳＤＨＥＹＬＹ（配列番号１９；ペプチド６）；ＬＥＹＮＹＶＫＱＷＲＨＳＹ（配列番号２０；ペプチド３５）；ＴＷＳＰＶＧＨＫＬＡＹＶＷ（配列番号２１；ペプチド５５）；ＬＷＷＳＰＮＧＴＦＬＡＹＡ（配列番号２２；ペプチド８４）；およびＲＩＳＬＱＷＬＲＲＩＱＮＹ（配列番号２３；ペプチド１３２）に結合する。ある他の実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、次のそれぞれのペプチド：ＹＳＬＲＷＩＳＤＨＥＹＬＹ（配列番号１９；ペプチド６）；ＴＷＳＰＶＧＨＫＬＡＹＶＷ（配列番号２１；ペプチド５５）；ＲＩＳＬＱＷＬＲＲＩＱＮＹ（配列番号２３；ペプチド１３２）；ＹＶＫＱＷＲＨＳＹＴＡＳＹ（配列番号２４；ペプチド３７）；およびＥＥＥＶＦＳＡＹＳＡＬＷＷ（配列番号２５；ペプチド７９）。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、次のそれぞれのペプチドに結合する：ＤＹＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬ（配列番号２６；ペプチド２９）；ＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬＥＹ（配列番号２７；ペプチド３０）；およびＴＷＳＰＶＧＨＫＬＡＹＶＷ（配列番号２１；ペプチド５５）。ある他の実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、次のそれぞれのペプチドに結合する：ＤＹＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬ（配列番号２６；ペプチド２９）；ＳＩＳＰＤＧＱＦＩＬＬＥＹ（配列番号２７；ペプチド３０）；ＴＷＳＰＶＧＨＫＬＡＹＶＷ（配列番号２１；ペプチド５５）；およびＩＹＶＫＩＥＰＮＬＰＳＹＲ（配列番号２８；ペプチド６３）。
　競合アッセイを用いて、２つの抗体が同一または立体的に重複するエピトープを認識することにより同じエピトープに結合するかどうか決定することができる。通常、抗原は、マルチウェルプレート上に固定され、非標識抗体が標識抗体の結合を遮断する性能が測定される。そのような競合アッセイのための一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。さらに、当業者に知られているエピトープマッピング技術を用いることにより、抗体が結合するエピトープを決定することができる。
　ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、１つ以上の定常領域を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトの定常領域を含む。ある実施態様において、定常領域は、重鎖の定常領域である。別の実施態様においては、定常領域は、軽鎖の定常領域である。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトの定常領域に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または１００％の同一性を有する定常領域を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、Ｆｃ領域を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトのＦｃ領域を含む。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトのＦｃ領域に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または１００％の同一性を有するＦｃ領域を含む。
　ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ＩｇＧ１抗体である。別の実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ＩｇＧ２抗体である。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、ヒトＩｇＧ抗体である。
　抗ＣＤ２６抗体は、単量体、二量体、および多量体の形態の抗体であってよい。例えば、二重特異性抗体、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体は、本明細書において開示された抗体を使用して調製することができる（例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　１９８６、　１２１、　２１０参照のこと）。従来より、二重特異性抗体の組換え生産は、異なる特異性を有する２つの重鎖を含む、２組の免疫グロブリンの重鎖－軽鎖ペアの共発現に基づいていた（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ、Ｃｕｅｌｌｏ、　Ｎａｔｕｒｅ、　１９８３、　３０５、　５３７－５３９）。
　二重特異性抗体を作製するための１つのアプローチによれば、所望の結合特異性を有する抗体可変領域（抗体‐抗原結合部位）は、免疫グロブリンの定常領域に融合している。好ましくは、前記融合部分は、少なくともヒンジ部、ＣＨ２およびＣＨ３領域の部分を含む、免疫グロブリンの重鎖定常領域を伴う。軽鎖の結合に必須な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を少なくとも１つの融合部分に有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードするＤＮＡおよび所望の場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時形質移入される。構築において使用される３つの抗体鎖の不等比が最適収量を提供する実施態様において、これら３つの抗体の相互比（ｍｕｔｕａｌ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ）を高い柔軟性で調製することが可能になる。少なくとも２つの抗体の等比での発現が高収率をもたらすか、または比率が特に重要ではない場合には、１つの発現ベクターに２つまたは３つ全ての抗体のコード配列を挿入してもよい。
　１つのアプローチとして、一方のアームの第１の結合特異性を有するハイブリッド型免疫グロブリン重鎖、ならびに他方のアームのハイブリッド型重鎖－軽鎖ペア（第２の結合特異性を有する）から構成される二重特異性抗体が挙げられる。この非対称の構造（二重特異性抗体分子の半分の部分だけに免疫グロブリン軽鎖を有する）により、所望でない免疫グロブリン鎖の組み合わせから所望の二重特異性化合物を分離することが容易になる。
このアプローチは、１９９４年３月３日に公開された国際公開公報第９４／０４６９０号に記載されている。
　２つの共有結合した抗体を含む、ヘテロ結合抗体もまた、抗ＣＤ２６抗体の範囲内である。このような抗体は、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため（米国特許第４、６７６、９８０号）、またはＨＩＶ感染の治療のために使用されている（国際公開公報第９１／００、３６０号および第９２／２００、３７３号；欧州特許第０３０８９号）。ヘテロ結合抗体は、任意の好都合な架橋法を使用して作製されてもよい。適切な架橋剤および架橋技術は、当該技術分野でよく知られており、米国特許第４、６７６、９８０号に記載されている。
　「抗ＣＤ２６抗体」の用語は、抗ＣＤ２６抗体の抗原結合性断片を含み得る。例えば、ある実施態様において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’‐ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、およびＦ（ａｂ’）２からなる群から選択される。ある実施態様において、抗体は、Ｆａｂである。様々な技術が抗体断片の生産のために開発されている。これらの断片は、完全体の抗体のタンパク質消化を介して得ることができ（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、　１９９２、　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　２４：１０７－１１７およびＢｒｅｎｎａｎら、　１９８５、　Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２９：８１を参照のこと）、または組換宿主細胞により直接生産することもできる。例えば、Ｆａｂ’‐ＳＨ断片を大腸菌から直接回収し、化学的に結合させることによってＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、　１９９２、　Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　１０：１６３－１６７）。別の実施態様において、Ｆ（ａｂ’）２は、Ｆ（ａｂ’）２分子の組み立てを促進するロイシンジッパーＧＣＮ４を使用して形成される。他のアプローチによれば、Ｆｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ’）２の断片は、組換え宿主細胞培養から直接単離される。
　ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体は、その一本鎖（ＳｃＦｖ）、変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、ｄｉａｂｏｄｙ、線状抗体、一本鎖抗体、および任意の他の修飾された立体配置の免疫グロブリン分子である。
　一本鎖可変領域断片は、短い連結ペプチドを使用して、軽鎖および／または重鎖可変領域を連結することにより作製される。Ｂｉｒｄら（１９８８）　Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４２：４２３－４２６。連結ペプチドの例は、一方の可変領域のカルボキシ末端および他方の可変領域のアミノ末端との間約３．５ｎｍを架橋する、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号２９）である。他の配列のリンカーも設計および使用されている。Ｂｉｒｄら（１９８８）。リンカーは、次に薬物の固定または固体担体に対する固定などの付加的機能のために修飾することができる。一本鎖変異体は、組換技術または合成技術のいずれによっても生産することができる。ｓｃＦｖを合成技術で生産する場合には、自動合成機を使用することができる。ｓｃＦｖを組換え技術で生産する場合には、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含む適切なプラスミドを、適切な宿主細胞、酵母（ｙｅａｓｔ）細胞、植物細胞、昆虫細胞もしくは哺乳動物細胞などの真核生物、または大腸菌などの原核生物に導入することができる。目的のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどのルーチン操作により作製することができる。その結果生じるｓｃＦｖは、当該技術分野で知られている標準的なタンパク質精製技術を使用して単離することができる。
　ｄｉａｂｏｄｙなどの他の形態の一本鎖抗体もまた抗ＣＤ２６抗体に包含される。ｄｉａｂｏｄｙは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが単一の抗体鎖上で発現する二価の二重特異性抗体であるが、同一鎖上でこれら２つのドメインが対形成するのには短すぎるリンカーを使用しており、そのために、強制的に、これらのドメインは、別の鎖の相補的なドメインと対形成せざるを得ず、２つの抗原結合部位が作り出される（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ、　Ｐ．ら（１９９３）　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ、　Ｒ．　Ｊ．ら（１９９４）　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　２：１１２１－１１２３を参照のこと）。
　抗ＣＤ２６抗体は、本明細書中に記載される抗体に対する修飾を包含するが、このような修飾の例としては、該抗体の特性に著しく影響を与えない、機能的に等価な抗体および増強もしくは減弱された活性を有する変異体が挙げられる。抗体の修飾は、当該技術分野においてルーチン操作であり、本明細書中に詳細に記載される必要はない。修飾された抗体の例は、アミノ酸残基の保存的置換、著しく機能活性を悪化させない１以上のアミノ酸の欠失もしくは付加、または化学的類似体の使用を伴う抗体を含む。
　アミノ酸配列の挿入または付加は、長さが１個の残基から１００個以上の残基を含む抗体までのアミノ末端および／またはカルボキシル末端での融合ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内の挿入を含む。末端の挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体またはエピトープタグに融合した抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体のＮ末端またはＣ末端への、抗体の血清半減期を延長させる酵素もしくは抗体の融合を含む。
　抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）例えばシートもしくはヘリックスコンホメーションなどの、置換領域における抗体主鎖の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の容積の維持に対する修飾の効果を著しく変化させる置換を選択することにより達成される。天然状態で存在する残基は、一般的な側鎖特性に基づく次のグループに分類される：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
　抗体の適切な立体構造を維持するのに関与しない任意のシステイン残基を置換することにより（通常はセリンと置換）、分子の酸化安定性を向上させ、異常な架橋形成を妨ぐことができる。反対に、特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、システイン結合を抗体に付加することにより、抗体の安定性を向上させることができる。
　アミノ酸修飾は、１つ以上のアミノ酸の変化または修飾から可変領域等の領域の完全な再設計にわたる。可変領域における変化は、結合親和性および／または特異性を変化させることができる。ある実施態様において、１～５個以下の保存的なアミノ酸置換がＣＤＲドメイン内でなされる。他の実施態様において、１～３個以下の保存的アミノ酸置換がＣＤＲ３ドメイン内でなされる。さらなる別の実施態様において、ＣＤＲドメインはＣＤＲＨ３および／またはＣＤＲ　Ｌ３である。
　モノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、　１９７５、　Ｎａｔｕｒｅ　２５６：４９５により記載されているような、ハイブリドーマ法を使用して調製してもよい。ハイブリドーマ法において、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物は、通常、免疫剤で免疫することにより、該免疫剤に特異的に結合する抗体を生産するか、または生産可能なリンパ球が誘発される。あるいは、リンパ球はｉｎ　ｖｉｔｒｏで免疫してもよい。
　モノクローナル抗体（および他の抗体）もまた、米国特許第４、８１６、５６７号に記載されるような、組換えＤＮＡ法により作製されてもよい。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、モノクローナル抗体の重鎖もしくは軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用といった、従来方法を使用して単離および配列決定がなされる。単離後に、ＤＮＡは発現ベクターに組み込まれ、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、または該発現ベクターが導入されない限り免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクションされることにより、該組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成が達成される。
　抗体の生産に有用な様々なタンパク質発現系、ベクター、および細胞培地は、当業者に知られている。例えば、以下を参照：国際公開公報第０３／０５４１７２号、第０４／００９８２３号、および第０３／０６４６３０号（これらの全文は参照によって本明細書中に組み込まれる）。ある実施態様において、グルタミン合成酵素（ＧＳ）発現系は、抗ＣＤ２６抗体の発現に使用される。
　抗ＣＤ２６抗体は、好ましくはヒト化抗体である。治療抗体は、投与された抗体に対する免疫応答を誘発することが部分的な原因となって、副作用をしばしば誘発する。その結果、薬効の低下、標的抗原を有する細胞の減少、および望ましくない炎症反応が起こりうる。上記を回避するために、組換え抗ＣＤ２６ヒト化抗体を作製してもよい。抗体のヒト化の一般原理は、抗体の抗原結合部分の基本的な配列を維持すること含み、一方、抗体の非ヒト残部の少なくとも一部分をヒト抗体配列と交換することを含む。モノクローナル抗体をヒト化するための４つの従来からの一般的なステップは、（１）出発抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列ならびに推定アミノ酸配列を決定すること、（２）ヒト化抗体を設計する、つまり、ヒト化する工程において、いずれの抗体フレームワーク領域もしくは残基および／またはＣＤＲ残基を使用するのかを決定すること、（３）実際のヒト化する方法論／技術、ならびに（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現を含むが、これらに限定されるものではない。抗体がヒトにおける臨床試験および治療において使用される場合、免疫応答を回避するために、定常領域も組換え技術によってヒト定常領域により近づけることができる。例えば、米国特許第５、９９７、８６７号および第５、８６６、６９２号を参照のこと。
　組換えヒト化抗体において、Ｆｃγ部分を修飾することにより、Ｆｃγ受容体および補体免疫系との相互作用を回避することができる。そのような抗体の調製技術は、国際公開公報第９９／５８５７２号に記載される。
　非ヒト免疫グロブリン由来の抗原結合部位を含む、多くの「ヒト化」抗体分子が報告されており、それらの例としては、げっ歯類Ｖ領域とそれらに関連した相補性決定領域（ＣＤＲ）とがヒト定常ドメインに融合したものが挙げられる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ　３４９：２９３－２９９（１９９１）　；　Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔ．　Ａｃａｄ．　ＳｃＩ　ＵＳＡ　８６：４２２０－４２２４（１９８９）；　Ｓｈａｗら、Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１３８：４５３４－４５３８（１９８７）；およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　４７：３５７７－３５８３（１９８７）を参照のこと。他の参考文献には、適切なヒト抗体定常ドメインとの融合前にヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）に組み込まれたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ　３３２：３２３－３２７（１９８８）；　Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３９：１５３４－１５３６（１９８８）；およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ　３２１　：５２２－５２５（１９８６）参照のこと。もう１つの参考文献には、組換えベニアリングされたげっ歯類フレームワーク領域に支持されたげっ歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許公開第５１９、５９６号を参照のこと。これらの種類の「ヒト化」分子は、ヒト移植患者におけるそれらの部分の治療適用の期間および有効性を制限するげっ歯類抗ヒト抗体分子に対する不要な免疫学的応答を最小限にするために設計されている。他の利用可能な抗体のヒト化方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、　１９：２４７１－２４７６（１９９１）ならびに米国特許第６、１８０、　３７７号；第６、０５４、２９７号；第５、９９７、８６７号；第５、８６６、６９２号；第６、２１０、６７１号；第６、３５０、８６１号；および国際公開公報第０１／２７１６０号中に開示されている。
　抗体をヒト化するさらなる例示的な方法は、国際公開公報第０２／０８４２７７号および米国特許公開公報第２００４／０、１３３、３５７号中に記載され、それら両方の全文が本明細書中に参照により組み込まれる。
　更に、抗ＣＤ２６抗体は、水溶性のポリマー部分と結合していてもよい。抗ＣＤ２６抗体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、モノメトキシ－ＰＥＧ、エチレングリコール／プロピレングリコール共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール等と結合していてもよい。抗ＣＤ２６抗体は、分子上の無作為な位置、または分子上の予め決定した位置で修飾してもよく、そして１つ、２つ、または３つ以上の結合部分を含んでいてもよい。前記ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分枝状または非分枝状のものであってもよい。ある実施態様において、前記部分は、リンカーを介して抗体に結合される。ある実施態様において、前記結合部分は、動物体内での抗体の循環半減期を増加させる。抗体に対するＰＥＧなどのポリマーの結合方法は、当該技術分野でよく知られている。ある実施態様において、抗ＣＤ２６抗体はＰＥＧ化された抗体などのＰＥＧ化された抗体である。また、前記抗ＣＤ２６抗体は、更に異なる化学療法剤、放射性核種、免疫療法剤、サイトカイン、ケモカイン、造影剤、毒素、生物学的作用剤、酵素阻害剤、または抗体などの他の薬剤と結合していてもよい。
　本明細書における医薬組成物は、上述の抗ＣＤ２６抗体を有効成分として含有する悪性中皮腫治療用医薬組成物である。本発明の医薬組成物は、抗ＣＤ２６抗体を有効成分として含有する癌治療用医薬組成物であって、抗ＣＤ２６抗体の基準投与日を１日目として、基準投与から１～６０日目の悪性中皮腫患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの８５％未満である患者に投与するための、医薬組成物。抗ＣＤ２６抗体の基準投与から１～３０日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物である。本発明の医薬組成物は、抗ＣＤ２６抗体の基準投与から２２～３０日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である患者に投与するための、医薬組成物；抗ＣＤ２６抗体の基準投与から２～８日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満である患者に投与するための医薬組成物；２週に１回投与されるための医薬組成物であり、かつ、基準投与から２２～３０日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６５％以下である患者に投与するための医薬組成物；２週に１回投与されるための医薬組成物であり、かつ、基準投与から２９日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６２．３％以下であるである患者に投与するための医薬組成物；男性に投与されるための医薬組成物；週に１回投与されるための医薬組成物であり、かつ、
　基準投与から２～８日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％以下である患者に投与するための医薬組成物；基準投与から２～８日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの４９％以下である患者に投与するための医薬組成物；基準投与から１５日目以降の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの３０％以下である患者に投与するための医薬組成物；基準投与から１５日目以降の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの２６％以下である患者に投与するための医薬組成物；抗ＣＤ２６抗体量として、６ｍｇ／ｋｇで投与するための医薬組成物；前記基準投与が初回投与である医薬組成物；抗ＣＤ２６抗体量として、０．１～６ｍｇ／ｋｇで投与するための医薬組成物；２週に１回、又は週に１回投与するための医薬組成物；抗ＣＤ２６抗体がＹＳ１１０である
医薬組成物とすることができる。
　本明細書において、「癌」は、例えば、悪性中皮腫、肺癌、腎臓癌、肝臓癌またはＣＤ２６の発現を伴うその他の悪性腫瘍であってもよい。
　本明細書中に記載された方法（治療方法を含む）は、単一部位あるいは複数部位への単一の時点あるいは複数の時点における単回直接注射によってなされてもよい。投与はまた、複数部位へほぼ同時に行ってもよい。投与頻度は、治療過程の上で決定および調整され、達成が望まれる結果に基づく。場合によっては、本発明の医薬組成物、および医薬組成物の徐放持続製剤が適切であり得る。徐放を達成するための様々な製剤や装置は、当該分野で周知である。
　治療又は予防対象はヒトである。
　医薬組成物は、好ましくは、担体（好ましくは医薬的に許容される担体）に含まれた状態で哺乳動物に投与される。適切な担体およびそれらの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．、　Ｅａｓｔｏｎ、　ＰＡ、　１９９０年およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、　Ｔｈｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　第２０版　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、　２０００年に記載されている。通常、適切量の医薬的に許容される塩が製剤に用いることにより該製剤に等張性を有することになる。担体の例としては、生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液が挙げられる。これらの溶液のｐＨは、好ましくは約５～約８、より好ましくは約７～約７．５である。更に、担体としては、抗体を含有する固体の疎水性ポリマー製の半透性マトリクスなどの徐放製剤が挙げられ、そのマトリクスは、例えば、フィルム、リポソームまたはマイクロ粒子などの造形品の形態にある。例えば、投与される抗体の投与経路および濃度に依存して、ある異種の担体がより好ましくなる場合があることは、当業者には明らかであろう。
　医薬組成物は、哺乳動物に注射（例えば、全身、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、門脈内）によって投与されてもよく、または有効な形態での血流への送達を確実にするその他の方法（例えば、注入）によって投与されてもよい。医薬組成物は、局所で治療効果を得るために、組織内単離灌流などの単離灌流法でも投与してもよい。静脈注射が好ましい。
　本発明の医薬組成物を投与するための有効用量およびスケジュールは、経験的に決定され、そのような決定方法は当該技術分野の技術常識の範囲内である。例えば、週に１回を５回投与、又は２週に１回を３回投与することができる。当業者であれば、投与すべき医薬組成物の用量が、例えば、医薬組成物を接種する哺乳動物、投与経路、使用する抗体の具体的な種類および前記哺乳動物に投与される他の薬剤に依存して変わることを理解するであろう。単独で使用される医薬組成物１日当たりの典型的な投与量は、前述の要素にもよるが、１日当たり有効成分量として、約１μｇ／体重ｋｇから１００ｍｇ／体重ｋｇまたはそれ以上までの範囲であってもよい。一般に、以下のいずれの投与量が使用されてもよい：少なくとも約５０ｍｇ／体重ｋｇ；少なくとも約１０ｍｇ／体重ｋｇ；少なくとも約３ｍｇ／体重ｋｇ；少なくとも約１ｍｇ／体重ｋｇ；少なくとも約７５０μｇ／体重ｋｇ；少なくとも約５００μｇ／体重ｋｇ；少なくとも約２５０μｇ／体重ｋｇ；少なくとも約１００μｇ／体重ｋｇ；少なくとも約５０μｇ／体重ｋｇ；少なくとも約１０μｇ／体重ｋｇ；少なくとも約１μｇ／体重ｋｇの投与量、またはこれを上回る投与量が投与される。好ましくは、前記抗ＣＤ２６抗体の量として、０．１～２ｍｇ／ｋｇで２週に１回で３回投与されるか、又は、２～６ｍｇ／ｋｇで週に１回で５回投与される。
　本発明の方法は、抗ＣＤ２６抗体投与により、血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルがよりする患者において、より抗腫瘍効果が高いことに基づくものである。すなわち、本発明の方法は、抗ＣＤ２６抗体の投与前の癌患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルと、投与から１日後以降の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを比較することにより、抗ＣＤ２６抗体の奏効性を予測することができることを利用するものである。すなわち、本発明の方法は、少なくとも１回の抗ＣＤ２６抗体の被検者への投与が必要である。このような、投与開始前後の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを比較する基準となる抗ＣＤ２６抗体の投与を基準投与という。基準投与は好ましくは当該患者における初回投与であるが、当該患者において必ずしも初めて受ける投与である必要は無い。例えば、過去に抗ＣＤ２６抗体の糖を世受けた患者が、直近の投与を受けた後、任意の期間経過後に改めて抗ＣＤ２６抗体を投与される場合に、当該投与を基準投与としてもよい。比較の基準（１００％）となる抗ＣＤ２６抗体の投与前の癌患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルは、当該基準投与の前に測定される。本発明の方法において、基準とすべき抗ＣＤ２６抗体投与の前に測定された該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベル（基準レベル）を「基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベル」という。基準レベル（１００％）に対する比較対象となる、基準投与から１日目以降の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルは、「測定日における該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベル」という。ここで、基準投与から１日目以降とは、基準投与を１日目として計算される日数である。このような比較対象となる該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを測定する日を測定日という。測定日までに受ける抗ＣＤ２６抗体の投与は、基準投与の１回のみであってもよいし、複数回であってもよい。例えば、抗ＣＤ２６抗体が週に１回投与される場合、８日目、１５日目、２２日目、２９日目・・・において抗ＣＤ２６抗体が投与される。測定日が１～８日目（投与前）の場合には、基準投与のみであるが、８日目（投与後）以降は２回以上の投与を受けていることになる。測定日が投与日である場合、該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの測定は、投与の前、又は投与の後とすることができる。また、抗ＣＤ２６抗体は、抗ＣＤ２６抗体を有効成分として含有する医薬組成物として、上述の医薬組成物の投与に準じて投与される。
　よって、一態様において、本発明は、抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性のある癌患者を選択する方法であって、抗ＣＤ２６抗体の基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルと、測定日における該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを比較すること、及び測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの８５％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される方法であって、ここで、前記測定日は基準投与日を１日目として１～６０日目であり、かつ、該患者は少なくとも１回は基準投与として抗ＣＤ２６抗体を投与される患者であり、かつ、前記測定日が抗ＣＤ２６抗体の投与日に該当する場合には、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルは、当該測定日における抗ＣＤ２６抗体の投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルである、方法。に関する。
　本明細書において、「基準投与」とは、当該投与前の患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを基準として、投与後の患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが低下したか否かを判定するための投与を意味し、当該患者にとって初回投与である必要は無い。ただし、通常は薬剤の奏効性は治療開始の初期に行われることから、好ましくは、基準投与は初回投与である。
　本明細書全体において、「レベル」とは、数値化された存在量に関する指標を意味し、例えば、濃度、量あるいはその代わりとして用いることができる指標を含む。よって、レベルは蛍光強度等の測定値そのものであってもよいし、濃度等に換算された値であってもよい。また、レベルは、絶対的な数値（存在量、単位面積当たりの存在量など）であっても良いし、又は必要に応じて設定された比較対照と比較した相対的な数値（割合（％）、倍数など）であってもよい。
　別の態様において、本発明は、癌患者における抗ＣＤ２６抗体による治療効果を予測する方法であって、抗ＣＤ２６抗体の基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルと、測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを比較すること、及び測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの８５％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する方法であって、ここで、前記測定日は基準投与日を１日目として基準投与から１～６０日目であり、かつ、該患者は少なくとも１回は基準投与として抗ＣＤ２６抗体を投与される患者であり、かつ、前記測定日が抗ＣＤ２６抗体の投与日に該当する場合には、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルは、当該測定日における抗ＣＤ２６抗体の投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルである、方法に関する。
　上記方法において、「測定日」は、基準投与日を１日目として１～６０日目とすることができ、例えば、１～３０日目、２～８日目、２～１５日目、２～２１日目、２～２９日目、８～１５日目、８～２１日目、８～２９日目、１５～２２日目、１５～２９日目、又は２２～２９日目、あるいは、１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，若しくは２９日又はこれらの任意の二点の間の期間に含まれる日とすることができる。
　本発明の方法において、抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性がある、又は、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると判定されるケースは、測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６２．３％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２６％、若しくは２５％未満である場合、とすることができる。
　好ましくは、週に１回の頻度で６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２６抗体が投与された場合において、測定日が基準投与から２～８日目であり、かつ、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満（又は４９％未満）である場合、抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性がある、又は、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると判定される。
　あるいは、好ましくは、週に１回の頻度で６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２６抗体が投与された場合において、測定日が基準投与から１５日目以降（例えば、１５～２２日目、１５～２９日目、又は２２～２９日目）であり、かつ、　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの３０％未満（又は、２６％未満）である場合、抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性がある、又は、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると判定される。
　以上に記載された方法は、更に、抗ＣＤ２６抗体を患者に投与すること、基準投与前の該患者の血清を採取すること、及び基準投与から上述に指定の期間後の該患者の血清を採取すること、並びに、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６を測定すること、及び、基準投与後の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６を測定することから選択される任意の工程を含んでいてもよい。可溶性ＣＤ２６の測定は、ＥＬＩＳＡキットなどの市販キットを用いて、又は当業者周知の方法により測定することができる。
　また、一態様において、本発明は、抗ＣＤ２６抗体の投与前の癌患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベル、及び前記投与から１～６０日目（好ましくは、５～４５日目、１５～３０日目、２５～３０日目）の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを測定する方法に関する。
　また、本明細書に記載された方法において、可溶性ＣＤ２６のレベル（またはその測定）は、ＤＰＰＩＶ活性（またはその測定）と置き換えてもよい。ＤＰＰＩＶ活性は、市販のキットを使用することにより測定することができる。
　更に、本発明の方法は、前記方法により抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択された患者、又は抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測された患者に、抗ＣＤ２６抗体を有効成分として含有する悪性中皮腫治療用医薬組成物を投与することを含んでいてもよい。
　以下、本発明をより詳細に説明するため実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。
（１）ヒト被験者
　ＦＩＨ第Ｉ相臨床試験において、ＹＳ１１０が投与された３３人の患者（ＭＭ２３人、ＲＣＣ９人、ＵＴＣ１人）が安全性解析の対象とされ、３３人中２６人（ＭＭ１９人、ＲＣＣ６人、ＵＴＣ１人）が治療有効性を評価された（Ａｎｇｅｖｉｎ　Ｅ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ．　２０１７；１１６（９）：１１２６－３４．）。最大耐量を決定するために、患者は最初にＹＳ１１０注入を、０．１、０．４、１、及び２ｍｇ／ｋｇで、１、１５、及び２９日目（２週間に１回、Ｑ２Ｗ）に合計３回受けた。予備的薬物動態データに基づいて、その後プロトコルを改訂し、患者が１、８、１５、２２、及び２９日目に合計５回のＹＳ１１０注入（毎週１回、Ｑ１Ｗ）を２、４、及び６ｍｇ／ｋｇで受けられるようにした。３３人の患者の中で、２６人の患者（Ｑ２Ｗコホート１８例、Ｑ１Ｗコホート８例）が、ＲＥＣＩＳＴ基準又はＰＦＳモニタリングにより、ＹＳ１１０が仲介する抗腫瘍活性に関して評価可能であった。ベースラインからの腫瘍体積変動が、ＭＭに対する修正ＲＥＣＩＳＴ基準、又はＲＣＣ又はＵＴＣに対するＲＥＣＩＳＴ１．０基準により、２９日目のＹＳ１１０投与の第１のサイクル完了から２週間後の４３±４．２日目に評価された（Ａｎｇｅｖｉｎ　Ｅ，　ｅｔ　ａｌ．（２０１７）上掲）。血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価が、１、１５、及び２９日目のＹＳ１１０投与の直前及び直後に測定された。
（２）統計解析
　箱ひげ図解析を用いて、１、１５、及び２９日目のＹＳ１１０注入前／後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動を観察した。安定疾患（ＳＤ）と進行性疾患（ＰＤ）症例について層別化した散布図解析を用いて、１、１５、及び２９日目のＹＳ１１０投与前／後の血清可溶性ＣＤ２６力価の変動と、４３日目のベースラインからの腫瘍体積変動との間の関係を観察した。これら２つの観察解析には、ＰＰＭＣ解析又はＳＲＤＣ解析を使用して、ベースラインからの１日目及び２９日目のＹＳ１１０投与前／後の血清可溶性ＣＤ２６力価変動と、４３日目のＲＥＣＩＳＴ基準による腫瘍体積変動との間の潜在的相関性の統計学的調査を行った。ピアソンの積率相関／スピアマンの順位差相関（ＰＰＭＣ／ＳＲＤＣ）解析に基づき、１日目のＹＳ１１０投与前（ベースライン、１００％）、１５日目のＹＳ１１０投与前及び２９日目のＹＳ１１０投与前におけるＳＤ症例及びＰＤ症例により層別化した血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動の棒グラフ解析を行って、ウィルコクソンの順位和検定で血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４変動と、４３日目のＲＥＣＩＳＴ基準によるＳＤ症例又はＰＤ症例の発生率との間の相関性を調べた。ＰＰＭＣ／ＳＲＤＣ及び棒グラフ解析の結果に基づき、ＲＯＣ解析を用いて、フィッシャーの正確確率検定で、ＲＥＣＩＳＴ基準によるＳＤの結果とＰＦＳ≧９０日又は≧１８０日について、ベースラインからの血清可溶性ＣＤ２６力価変動のインデックス（カットオフ価）を調べた。ＳＤ症例とＰＤ症例の間の背景因子の差は、ＲＯＣ解析の前にフィッシャーの正確確率検定又はウィルコクソンの順位和検定により検査した。
（３）細胞株及び培養物
　ヒトＭＭ細胞株ＭＳＴＯ－２１１Ｈ（ＭＳＴＯ親）とＮＣＩ－Ｈ２２６は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、メリーランド州ロックビル）から入手した。ＭＳＴＯ親細胞は、全長ヒトＣＤ２６（ＭＳＴＯ－ＣＤ２６）で安定的にトランスフェクトした（Ｙａｍａｍｏｔｏ　Ｊ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ．　２０１４；１１０（９）：２２３２－４５．）。ヒトＭＭ細胞株ＪＭＮ細胞をショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）発現レンチウイルスで形質導入し、安定細胞株ＪＭＮＣＤ２６－ｓｈＲＮＡとＪＭＮｃｔｒｌ－ｓｈＲＮＡを生成した（Ｙａｍａｚａｋｉ　Ｈ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ．　２０１２；４１９（３）：５２９－３６．）。非腫瘍ヒト細胞には、不死化胸膜中皮細胞株ＭｅＴ－５Ａ、乳房上皮細胞株ＭＣＦ１０Ａ、胎児肺線維芽細胞株ＴＩＧ－１、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、及びヒト皮膚微小血管内皮細胞（ＨＤＭＶＥＣ）を用いた。ＭｅＴ－５ＡとＭＣＦ１０ＡはＡＴＣＣから、ＴＩＧ－１はＪＣＲＢ細胞バンク（日本、大阪）から入手した。ＨＵＶＥＣ、ＨＤＭＶＥＣ、及びＭＣＦ１０Ａ、ＨＵＶＥＣ、ＨＤＭＶＥＣ用の培地（それぞれＭＥＧＭ、ＥＧＭ－２、ＥＧＭ－２ＭＶ）を、ＬＯＮＺＡ（メリーランド州ウォーカーズビル）から購入した。ＭＳＴＯ親、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６、ＪＭＮｃｔｒｌ－ｓｈＲＮＡ、ＪＭＮＣＤ２６－ｓｈＲＮＡ、Ｈ２２６、及びＭｅＴ－５Ａは、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖させた。ＴＩＧ－１は、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地中で増殖させた。全細胞を３７℃の加湿５％ＣＯ２インキュベーター中で培養した。
（４）抗体及び試薬
　ヒト化抗ＣＤ２６モノクローナル抗体ＹＳ１１０は、Ｙ’ｓ　ＡＣ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（日本、東京）から提供された。ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（カリフォルニア州サンディエゴ）から購入したヒトＩｇＧ１イソタイプ対照モノクローナル抗体（クローンＱＡ１６Ａ１２）を対照として使用した。
（５）培養上清の調製
　細胞を、２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中の５００μｌの培地中、対照ヒトＩｇＧ又はＹＳ１１０の存在下又は非存在下で、３日間、３７℃で培養した。時間経過解析のために、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６（１．５×１０５、４×１０４、又は４×１０３）を、２４ウェルプレートの５００μｌのＲＰＭＩ１６４０培地中で、ＹＳ１１０（１、３、１０μｇ／ｍＬ）の存在下又は非存在下で、３７℃でそれぞれ、１、３、又は７日間培養した。インキュベーション後、上清をコンフルエント培養物から収集した。
（６）可溶性ＣＤ２６及びＤＰＰ４酵素活性の定量化
　治療用ヒト化抗ＣＤ２６モノクローナル抗体ＹＳ１１０と交差反応性を示さないマウス抗ヒトＣＤ２６モノクローナル抗体（クローン５Ｆ８及び９Ｃ１１）を用いて、可溶性ＣＤ２６及びＤＰＰ４活性用のアッセイを我々の研究室で開発した。関連する実験方法は以前に詳述されている（Ｏｈｎｕｍａ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｌａｂ　Ａｎａｌ．　２０１５；２９（２）：１０６－１１．）。データは、複数比較試験のためにテューキーの一方向ＡＮＯＶＡ検定により解析した。有意性は、ＧｒａｐｈＰａｄ　Ｐｒｉｓｍ　６（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて解析した。ｐ＜０．０１の値は有意であると考え、対応する図及び図の説明に示す。（７）ＹＳ１１０投与前／後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価の変化（箱ひげ図に示す）
　この第Ｉ相試験は、以下のようないくつかの重要なパラメータを含む。１）腫瘍の組織型：ＭＭ１９例、ＲＣＣ６例、ＵＴＣ１例；２）ＹＳ１１０投与量：０．１～６ｍｇ／ｋｇ；３）投与頻度：１８例において２週に１回（Ｑ２Ｗ）で３投与、８例において週に１回（Ｑ１Ｗ）で５投与加えて、ＳＤ症例とＰＤ症例との間の背景因子の試験では、性別を除き、年齢、ＢＭＩ、腫瘍体積の絶対値、又はＹＳ１１０投与前の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価にバイアスがないことが示された（データは非図示）。表３及び表４に示されるように、男性患者（ＭＭでＳＤ４例とＰＤ７例、ＲＣＣでＳＤ２例とＰＤ３例）とは対照的に、ＹＳ１１０は女性患者（ＭＭでＳＤ６例とＰＤ２例、ＲＣＣでＳＤ１例、ＵＴＣでＰＤ１例）においてより効果があるように思われた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
  
　各抗体用量コホートにおける症例数が統計解析に十分ではなかったため、本研究では、合計２６症例を１）腫瘍組織及び２）薬剤投与頻度に従ってさらに分類し、血清可溶性ＣＤ２６力価変動がＹＳ１１０治療の予後バイオマーカーになり得るか否かを検討した（これらの２６症例についての詳細な情報は、表３を参照）。
　最初に、箱ひげ図解析により、各群におけるＹＳ１１０治療中の血清可溶性ＣＤ２６力価変動を調べた。血清可溶性ＣＤ２６力価は、１、１５、２９日目のＹＳ１１０投与直後に一貫して低下し、次のＹＳ１１０注入まで徐々に回復したが、以前の投与前レベル（図１Ａ）には戻らなかった。このパターンは、Ｑ２Ｗ薬投与スケジュールで治療した１８例（図１Ｂ）で同様に観察された。対照的に、Ｑ１Ｗスケジュールで治療した８例では明らかな差が観察された。表３に示されるように、Ｑ２Ｗ症例（０．１～２ｍｇ／ｋｇ）と比較して、Ｑ１Ｗ症例では比較的高用量（２～６ｍｇ／ｋｇ）の抗体が投与された。抗体用量と投与頻度のこれらの違いは、１５日目と２９日目の投与前血清可溶性ＣＤ２６力価に大きく影響した（図１Ｄ）。ＹＳ１１０投与後の血清可溶性ＣＤ２６力価の回復は、薬物投与頻度がより高いＱ１Ｗ症例では明確ではなかった。Ｑ２Ｗ投与は男性１４例、女性４例、Ｑ１Ｗ投与は男性２例、女性６例であった（表４）。Ｑ２Ｗ投与とＱ１Ｗ投与の男性症例とＱ２Ｗ投与とＱ１Ｗ投与の女性症例との間の分布バイアスは有意であった（フィッシャーの正確確率検定によるｐ＝０．０２６）。さらに、Ｑ１Ｗコホートの症例数（８例）は、追加の統計解析には不十分であった。従って、我々は主に、追加解析のためにＱ２Ｗ症例と男性症例に焦点を当てた。血清可溶性ＣＤ２６力価の最初の低下とその後の回復は、Ｑ２Ｗ投与の男性１４例、Ｑ２Ｗ投与のＭＭ１２例、及びＱ２Ｗ投与の男性ＭＭ９例を含む上記コホートへの群の更なる層別（図１Ｃ、Ｆ及びＧ）を含め、ＭＭ１９例及びＲＣＣ６例の両方で同様に観察された（図１Ｅ及びＨ）。図２に示されるように、血清可溶性ＣＤ２６力価の絶対値又は力価変動は、血清ＤＰＰ４酵素活性のレベルと強い相関関係があった（r＝０．９０８、ｐ＜０．００１又はｒ＝０．９７４、ｐ＜０．００１）。ＹＳ１１０は、ＤＰＰ４酵素活性を直接阻害しないため（Ｙ’ｓ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　Ｉｎｃ．　ＵＳＡ　ＩＮＤ．　２００８；１００６５７：Ｓｅｃｔｉｏｎ　８，　８．２．１．５：２８９．）、ＹＳ１１０投与後の血清ＤＰＰ４酵素活性の低下は、血清可溶性ＣＤ２６タンパク質レベルの低下によるものである。
（８）散布図解析によるＳＤコホート及びＰＤコホートの２９日目の投与前の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動及び４３日目の腫瘍体積変動の差
　次に、ＹＳ１１０投与開始後の散布図解析により、ＳＤコホート及びＰＤコホートにより層別化した計２５例に対し、１、１５、及び２９日目の投与前／後血清可溶性ＣＤ２６力価変動と、４３日目の腫瘍体積変動との間の潜在的関係を調べた。ＳＤ群の腫瘍体積変動は、ＰＤ群よりも当然低いと予想される。血清可溶性ＣＤ２６力価は、１、１５、及び２９日目のＹＳ１１０注入直後、ＳＤコホート及びＰＤコホートの両方で顕著に減少した（図３Ａ、Ｃ、及びＥ）。一方、血清可溶性ＣＤ２６力価変動におけるＳＤ群とＰＤ群との間の顕著な差異は、２９日目の注入前に観察された。ＳＤコホートの２９日目の注入前の血清可溶性ＣＤ２６力価変動は、ＰＤ群と比較して低レベルであった（図３Ｄ）。さらに、この現象は、Ｑ２Ｗ投与の１７例、Ｑ２Ｗ投与の男性１４例、ＭＭ１８例、Ｑ２Ｗ投与のＭＭ１１例、Ｑ２Ｗ投与の男性ＭＭ９例、又はＲＣＣ６例（それぞれ図３Ｆｆ～Ｋ）のような各層別化群で明確に観察された。これらの散布図解析が示すように、ＹＳ１１０投与前に測定したとき、ＳＤコホートの血清可溶性ＣＤ２６力価変動は、ＰＤ例より低く、この差はＱ２Ｗ２９日目投与前で特に明らかである。
（９）ＰＰＭＣ／ＳＲＤＣ解析による２９日目の投与前／後血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動と腫瘍体積変動及び／又はＰＦＳとの相関
　ＰＰＭＣ解析及びＳＲＤＣ解析を行って、１、１５及び２９日目の投与前／後血清可溶性ＣＤ２６抗体価の変動と、ＹＳ１１０投与後４３日目にＲＥＣＩＳＴ基準により判定される腫瘍体積変動又はＰＦＳとの相関を調べた。ＦＩＨ第Ｉ相臨床試験において、ＲＥＣＩＳＴにより、１３例がＳＤと判定され、１３例がＰＤと判定され、１３のＳＤ症例のうち、７例にＹＳ１１０が特に有効であり、ＰＦＳが１８０日を超えた（表５）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
  
　合計２５例において、２９日目の投与前血清可溶性ＣＤ２６力価変動と、４３日目の腫瘍体積変動との間に統計的に有意な相関が認められた（ＰＰＭＣ／ＳＲＤＣにより、ｐ＝０．００６又はｐ＝０．００９（表５））。血清可溶性ＣＤ２６力価変動とＰＦＳとの間にも統計学的に有意な相関がみられた（計２６例で、ＰＰＭＣによる２９日目投与後のｐ＝０．０１１、（表５））。加えて、ＤＰＰ４酵素活性の血清力価変動と腫瘍体積又はＰＦＳの間にも、血清可溶性ＣＤ２６力価の場合と同様に、統計学的に有意な相関があった（表５）。２９日目の投与前血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価と腫瘍体積との間、及び２９日目の投与前及び／又は投与後血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価とＰＦＳとの間には、Ｑ２Ｗ投与頻度の１８例とＱ２Ｗ投与頻度の男性１４例において、同様に統計学的に有意な相関が認められた（表６及び表７）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
  
　ＭＭ１９例では、ＳＲＤＣ解析により、２９日目の投与前／後の血清ＤＰＰ４力価変動と腫瘍体積との間に統計学的に有意な相関が観察され、ＰＰＭＣ解析により、２９日目投与前血清可溶性ＣＤ２６力価と腫瘍容量の間の相関はほぼ統計学的に有意に達した（ｐ＝０．０６５）。ＰＰＭＣ解析による２９日目投与後血清可溶性ＣＤ２６力価とＰＦＳとの間に統計学的に有意な相関があり、２９日目投与後血清ＤＰＰ４力価とＰＦＳとの間の相関はほぼ統計学的に有意に達した（ＰＰＭＣ解析ではｐ＝０．０５６、ＳＲＤＣ解析ではｐ＝０．０６９）（表８）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
  
　Ｑ２Ｗ投与頻度のＭＭ１２例では、血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価の変動と腫瘍体積との間には、統計学的に有意な相関は認められなかった。２９日目の投与後血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価とＰＦＳとの間の相関は、統計学的有意に達した（表９）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
  
　Ｑ２Ｗ投与で治療した男性ＭＭ９例では、血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価と腫瘍体積との間の変動に有意差は観察されなかったが、２９日目投与前／後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価とＰＦＳとの間には相関傾向があった（表１０）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
  
　Ｑ２Ｗ及びＱ１Ｗ投与で治療したＲＣＣ６例及び８例では、症例数がＰＰＭＣ／ＳＲＤＣ統計解析に十分ではなかった。以上より、２９日目投与前／後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価（３回目のＹＳ１１０投与前／後）と腫瘍体積又はＰＦＳとの間の変動には相関関係が認められた。層別化した各コホートでの症例数は限られていたものの、特に１８例及びＱ２Ｗ投与で治療した男性１４例で統計学的有意差が認められたことは重要であると考える。
（１０）棒グラフ解析による、ＳＤコホートの２９日目投与前血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価（ＰＤコホートより有意に低い）
　散乱図及びＰＰＭＣ／ＳＲＤＣ検査に基づいて、ＳＤ症例及びＰＤ症例における１、１５、及び２９日目の投与前血清可溶性ＣＤ２６力価変動の棒グラフ解析を行った。全２３例（１２例のＳＤ及び１１例のＰＤ）で、ＳＤコホート及びＰＤコホートの血清可溶性ＣＤ２６力価は、投与前１日目から投与前２９日まで減少した。注目すべきことに、ＳＤ症例の２９日目投与前血清可溶性ＣＤ２６力価変動は、ＰＤ症例より有意に低かった（ｐ＝０．０１６）（図４Ａ）。同様の結果が、Ｑ２Ｗ投与で治療した１７例（ｐ＝０．００７）、ＭＭ１７例（ｐ＝０．０６８）、Ｑ２Ｗ投与で治療したＭＭ１１例（ｐ＝０．０６８）、Ｑ２Ｗ投与で治療した男性ＭＭ９例（ｐ＝０．０２０）、又はＲＣＣ６例（ｐ＝０．０４９）（図４Ｂ及びＥ～Ｈ）のような各層化群で観察された。最小ｐ値を有するＳＤコホートとＰＤコホートとの間の統計学的有意差は、Ｑ２Ｗ投与で治療した男性１４例で観察された（ｐ＝０．００３）（図４Ｃ）。Ｑ１Ｗ投与で治療した８例では、ＳＤ症例の血清可溶性ＣＤ２６力価変動はＰＤ症例より低く、１５日目の３回目ＹＳ１１０投与前に統計的有意性に向かった（ｐ＝０．０５３）。このタイミングは、Ｑ２Ｗ治療スケジュールで２９日目の投与前血清可溶性ＣＤ２６力価を評価する同じサンプル収集タイミングを表す（図４Ｄ）。
（１１）層別化群におけるＲＯＣ解析によるＳＤ又はＰＦＳの結果に及ぼす血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動の予測能力
　ＲＯＣ解析を採用して、ＳＤ及びＰＦＳ≧９０日又は≧１８０日の結果に関して、２９日目のＹＳ１１０投与前／後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動のカットオフ力価（インデックス）を調べた。確率は、フィッシャーの正確確率検定（表１１）で評価した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
  
　計２３症例を調査して、ＳＤ及びＰＦＳ≧９０日又は≧１８０日の結果に関するインデックス（４６．４％又は１８．２％）を検討した結果、統計的に有意な結果（ＳＤについてはｐ＝０．００３、ＰＦＳについては０．００５又は０．００３、曲線下面積（ＡＵＣ）はそれぞれ０．７９５、０．６９７又は０．７５９）が認められた（表１１；列の合計）。Ｑ２Ｗ（１７例又は１８例）、Ｑ２Ｗ、男性（１４例）、ＭＭ（１７例又は１８例）、ＭＭ、Ｑ２Ｗ（１１例又は１２例）、ＭＭ、Ｑ２Ｗ、男性（９例）の列に関しては、結果の各列のインデックスが統計的に有意である、又は有意な傾向があると判断された。特に、Ｑ２Ｗ、男性（１４例）の列では、結果ＳＤについての２９日目ＹＳ１１０投与前のインデックス３７．７％は、統計的に有意であった（ｐ＜０．００１、ＡＵＣ１．０００）。また、結果ＰＦＳ≧９０日又は≧１８０日についてのインデックス３７．７％は、統計的に有意であった（ｐ＜０．００１又はｐ＝０．０２７、ＡＵＣはそれぞれ０．９５０又は０．８７９）。総合すれば、ＹＳ１１０治療過程での血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動に関する我々の解析により、血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動は、特にＱ２Ｗ投与スケジュールの２９日目の３回目のＹＳ１１０注入の直前／直後の時点で、ＹＳ１１０抗腫瘍療法の潜在的予後バイオマーカーであることが実証された。
（１２）ヒト化抗ＣＤ２６モノクローナル抗体の添加による、ＣＤ２６発現ＭＭ細胞株及び非腫瘍細胞の培養上清中の可溶性ＣＤ２６レベルの低下
　第Ｉ相試験において、ＣＤ２６発現腫瘍患者において、ＹＳ１１０治療後に可溶性ＣＤ２６の血清中濃度が顕著に低下したため（図１）、我々は、ＭＭ細胞株からの可溶性ＣＤ２６産生に及ぼすＹＳ１１０のインビトロ作用について調査した。この目的のために、我々は、様々なヒトＣＤ２６陽性又は陰性ＭＭ細胞株を選択した。ＭＳＴＯ親は、内因性ヒトＣＤ２６欠損細胞株であったが、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６は完全長ヒトＣＤ２６を安定的に発現した。内因性ヒトＣＤ２６陽性細胞株であるＪＭＮにおけるＣＤ２６の安定したｓｈＲＮＡノックダウンは、ＪＭＮｃｔｒｌ－ｓｈＲＮＡ細胞と比較して、ＣＤ２６発現を著しく低下させた（Ｙａｍａｚａｋｉ　Ｈ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ．　２０１２；４１９（３）：５２９－３６．）。ＭＭ細胞株におけるＣＤ２６の細胞表面発現は、図５に示した。最初に、ＣＤ２６陽性又は陰性細胞の３日間培養からの培養上清に含まれる可溶性ＣＤ２６の量を測定した。可溶性ＣＤ２６はＣＤ２６陽性ＭＳＴＯ－ＣＤ２６、ＪＭＮｃｔｒｌ－ｓｈＲＮＡ、及びＨ２２６細胞の培養上清中で定量することができたが、ＹＳ１１０治療に関係なく、可溶性ＣＤ２６はＣＤ２６陰性ＭＳＴＯ親及びＪＭＮＣＤ２６－ｓｈＲＮＡ細胞の培養上清中では検出できなかった（図６Ａ）。ＹＳ１１０による治療は、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６、ＪＭＮｃｔｒｌ－ｓｈＲＮＡ及びＨ２２６細胞の培養上清中の可溶性ＣＤ２６の量を、ビヒクル又は対照ヒトＩｇＧ（図６Ａ）とインキュベートされた細胞と比較して明らかに減少させた。次に、非腫瘍（正常）細胞からの可溶性ＣＤ２６の産生を調べた。ＣＤ２６はＨＤＭＶＥＣとＴＩＧ－１の細胞表面に明確に発現したが、ＣＤ２６はＨＵＶＥＣとＭＣＦ１０Ａではほとんど発現せず、ＭｅＴ－５Ａで部分的に発現した（図５Ｂ）。可溶性ＣＤ２６はＣＤ２６陽性ＴＩＧ－１及びＨＤＭＶＥＣ細胞の培養上清で定量できたが、可溶性ＣＤ２６はＣＤ２６陰性又は低ＭＣＦ１０Ａ、ＨＵＶＥＣとＭｅＴ－５Ａ細胞（図６Ｂ）の培養上清では検出できなかった。図６Ａに示された結果と同様に、ＹＳ１１０治療は、ビヒクル又は対照ヒトＩｇＧとインキュベートされた細胞と比較して、ＴＩＧ－１及びＨＤＭＶＥＣ細胞の培養上清中の可溶性ＣＤ２６の量を明らかに減少させた（図６Ｂ）。ＹＳ１１０による治療は、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６とＴＩＧ－１細胞の両方からの可溶性ＣＤ２６の産生を用量に依存して減少させた（図６Ｃ）。その後の時間経過解析は、ＭＳＴＯ－ＣＤ２６細胞の３日間培養の上清中の可溶性ＣＤ２６レベルがＭＳＴＯ－ＣＤ２６細胞の１日間培養と比較してわずかに増加し、増加した可溶性ＣＤ２６レベルがＭＳＴＯ－ＣＤ２６細胞の７日間培養の上清中で観察されることを示した（図６Ｄ）。ＹＳ１１０治療後の可溶性ＣＤ２６レベルの減少は、どの培養期間においても一貫して観察された。まとめると、これらのデータは、可溶性ＣＤ２６がＣＤ２６陽性腫瘍細胞と非腫瘍細胞の両方から産生され、ＹＳ１１０の添加が抗体用量に依存してこれらの細胞からの可溶性ＣＤ２６産生を減少させたことを示す。我々は、これらのインビトロ効果が、ＹＳ１１０投与後のＣＤ２６発現腫瘍患者の血清中可溶性ＣＤ２６レベルの顕著な低下に反映されると考える。
　同様の実験を、週に１回６ｍｇ／ｋｇ投与することにより行った。その結果、Ｄａｙ２の時点におけるＹＳ１１０投与前／後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価は、初回（Ｄａｙ１、以下同様）投与前のＣＤ２６／ＤＰＰ４力価を１００％とすると、ＳＤは４８．６４％、ＰＤは５５．４６％であった（ｐ＝０．０２６）。また、Ｄａｙ１５ｐｒｅ（投与前）の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価は、初回投与前のＣＤ２６／ＤＰＰ４力価を１００％とすると、ＳＤは２５．５１％、ＰＤは３３．４７％であった。また、Ｄａｙ２９ｐｒｅ（投与前）の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価は、初回投与前のＣＤ２６／ＤＰＰ４力価を１００％とすると、ＳＤは２５．１０％、ＰＤは３１．７４％であった。また、Ｄａｙ１５ｐｏｓｔ（投与後）の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価は、初回投与前のＣＤ２６／ＤＰＰ４力価を１００％とすると、ＳＤは２４．０６％、ＰＤは３０．５６％であった。また、Ｄａｙ２９ｐｏｓｔ（投与後）の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価は、初回投与前のＣＤ２６／ＤＰＰ４力価を１００％とすると、ＳＤは２５．６４％、ＰＤは３０．９３％であった。
　本研究において、血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動とＲＥＣＩＳＴ反応基準による腫瘍容積変動との間の関係についての散布図解析で、ＹＳ１１０治療の経過中の予測可能期間が、ＳＤ症例とＰＤ症例を区別するために使用できることが示唆された。この予測可能期間は、Ｑ２Ｗ治療スケジュールにおける２９日目のＹＳ１１０投与３回目の前／後であり、結果はＰＰＭＣ／ＳＲＤＣ解析及び棒グラフ解析により統計学的に有意であることがわかった。ＲＯＣ解析は、２９日目投与前／後血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動のカットオフ力価を、ＳＤ又は９０又は１８０日より長いＰＦＳの症例の結果に対するインデックスとして規定し、得られたインデックスの下で有意に実行可能な予測を生じた。特に、Ｑ２Ｗスケジュールで治療した男性１４例のＲＯＣ解析は、ｐ＜０．００１（表１１）のカットオフ値を規定した。同様の結果が、Ｑ２Ｗ投与スケジュールで治療した男性ＭＭ９例（表１１）で得られた。結果は層別化群の症例数が少ないにもかかわらず統計的に有意であり、これは、血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動がＹＳ１１０で治療した癌患者に対する決定的な予後バイオマーカーであることを強く示唆するものである。Ｑ２Ｗスケジュールの状況とは異なり、Ｑ１Ｗスケジュールで治療した症例では、症例数が解析に十分ではなかった。しかしながら、２９日目投与前ではなく１５日目投与前の血清可溶性ＣＤ２６力価変動は、図４Ｄに示されるように、統計的有意性に向かう傾向（ｐ＝０．０５３）で、ＰＤ症例とＳＤ症例とを区別するために用いることができた。これらのデータは、薬剤投与頻度と投与量（ＹＳ１１０用量レベル２、４、６ｍｇ／ｋｇでＱ１Ｗ）の増加が、血清可溶性ＣＤ２６力価測定の最適タイミングに影響し、この最適タイミングは、ＹＳ１１０の投与頻度及び／又は投与量に依存して変化する可能性があることを示唆する。
　我々のロバストなインビトロ及びインビボデータが示すように、ＹＳ１１０は、さらにＳ／Ｇ１期での細胞周期停止の誘導を介してその直接抗腫瘍効果を誘導することに加えて（Ｉｎａｍｏｔｏ　Ｔ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．　２００７；１３（１４）：４１９１－２００．、Ｈａｙａｓｈｉ　Ｍ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌ　Ｉｎｔ．　２０１６；１６：３５．）、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）を介してＭＭ細胞の細胞溶解を誘導した。もう一つのＹＳ１１０の重要な作用機序は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの構成成分であるＰＯＬＲ２Ａ遺伝子の発現の抑制を介してＭＭ細胞の増殖を阻害するための、細胞表面からのＣＤ２６－ＹＳ１１０複合体のインターナリゼーションによる、ＣＤ２６分子の核移行であった。しかしながら、ヒト胎児腎ＨＥＫ２９３細胞や正常Ｔリンパ球などのＣＤ２６発現非腫瘍性細胞では、ＣＤ２６－ＹＳ１１０複合体は核内に移行しなかった（Ｙａｍａｄａ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ．，　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．　２０１３；８（４）：ｅ６２３０４．、Ｈａｙａｓｈｉ　Ｍ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃａｎｃｅｒｓ　（Ｂａｓｅｌ）．　２０１９；１１（８）：１１３８．）。さらに、ＣＤ２６－抗体複合体のインターナリゼーションは、特異的モノクローナル抗体によって認識されるＣＤ２６のエピトープに依存していた。ＣＤ２６のインターナリゼーションは、マウス抗ヒトＣＤ２６モノクローナル抗体５Ｆ８で処理したＭＭ細胞の細胞表面からは観察されず、ＹＳ１１０によって認識されるものとは異なるＣＤ２６のエピトープを認識し、抗腫瘍活性を示さなかった（Ｙａｍａｄａ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ．，　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．　２０１３；８（４）：ｅ６２３０４．、Ｈａｔａｎｏ　Ｒ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｄｉａｇｎ　Ｐａｔｈｏｌ．　２０１４；９：３０．）。
　ＣＤ２６の残基２０１～２１１、７３０、及び７４０は、ＣＤ２６／ＤＰＰＩＶポケット構造を構成する残基６３０のセリン触媒部位と共に、ＤＰＰ４酵素活性に必須である［２６］。対照的に、ＹＳ１１０は、触媒部位とは異なるＣＤ２６の２４８～３５８番目のａａ領域を認識し（Ｈａｔａｎｏ　Ｒ，　ｅｔ　ａｌ．，（２０１４）上掲、Ｄｏｎｇ　ＲＰ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｍｏｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１９９８；３５（１）：１３－１１　２１．）、ＹＳ１１０の結合はＤＰＰ４酵素活性に直接影響しない（Ｙ’ｓ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　Ｉｎｃ．　ＵＳＡ　ＩＮＤ．　２００８；１００６５７：Ｓｅｃｔｉｏｎ　８，　８．２．１．５：２８９．）。我々の今回のデータは、ＹＳ１１０治療が、ＣＤ２６発現ＭＭ細胞株及び非腫瘍細胞の両方からの可溶性ＣＤ２６の産生を低下させることを示した（図６）。ＣＤ２６の可溶性型は３９番目のａａ残基から始まり、細胞質及び膜貫通領域を欠くが（Ｉｗａｋｉ－Ｅｇａｗａ　Ｓ，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４　１９９８；１２４（２）：４２８－３３．）、可溶性ＣＤ２６の産生及び細胞表面からの放出に関与する正確な機序はまだ完全には解明されていない。ＹＳ１１０治療後の可溶性ＣＤ２６産生の低下は、細胞表面ＣＤ２６分子の抗体介在性インターナリゼーションによる可能性がある（Ｙａｍａｄａ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ．，（２０１３）上掲）。ＹＳ１１０を用いた第Ｉ相臨床試験において、１日目のＹＳ１１０投与直後の可溶性ＣＤ２６の血清中濃度（１日目投与後）は、ＹＳ１１０投与前の血清中濃度（１日目投与前）に比べて著しく低下した（図１）。食細胞による可溶性ＣＤ２６－ＹＳ１１０複合体のＦｃ受容体介在貪食は、おそらくＹＳ１１０投与後の血清可溶性ＣＤ２６の急速な減少に関与している可能性がある。本研究で我々は、ＹＳ１１０投与後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価の持続した低レベルがＰＤ症例と比較してＳＤ症例で共通して観察されるが、ＳＤ症例とＰＤ症例との間でＹＳ１１０投与直後の血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４レベル（１日目投与後、１５日目投与後、２９日目投与後）に有意差はないことを実証した（図１及び図３）。
　本結果は、ヒト化抗ＣＤ２６抗体ＹＳ１１０による治療の初期段階における血清可溶性ＣＤ２６／ＤＰＰ４力価変動が、ＭＭを含むＣＤ２６＋癌患者に対する抗腫瘍活性の予測バイオマーカーである可能性があることを示す最初の知見である。

Claims (46)

  1. 　抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性のある癌患者を選択する方法であって、
    　抗ＣＤ２６抗体の基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルと、測定日における該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを比較すること、及び
    　測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの８５％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される方法であって、
    　ここで、前記測定日は基準投与日を１日目として１～６０日目であり、かつ、
    　該患者は少なくとも１回は基準投与として抗ＣＤ２６抗体を投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が抗ＣＤ２６抗体の投与日に該当する場合には、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルは、当該測定日における抗ＣＤ２６抗体の投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルである、方法。
  2. 　前記測定日が基準投与から１～３０日目であり、かつ、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記測定日が基準投与から２２～３０日目であり、かつ、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１に記載の方法。
  4. 　前記測定日が基準投与から２～８日目であり、かつ、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１に記載の方法。
  5. 　前記患者が、２週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から２２～３０日目であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６５％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１に記載の方法。
  6. 　前記患者が、２週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から２９日目であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６２．３％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１に記載の方法。
  7. 　前記患者が男性である、請求項５又は請求項６に記載の方法。
  8. 　前記患者が、週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から２～８日目であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１に記載の方法。
  9. 　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの４９％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項８に記載の方法。
  10. 　前記患者が、週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から１５日目以降であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの３０％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１に記載の方法。
  11. 　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの２６％未満である場合、当該患者は抗ＣＤ２６抗体により治療効果が得られる可能性があるとして選択される、請求項１０に記載の方法。
  12. 　前記患者が、６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２６抗体が投与される患者である、請求項８～請求項１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 　癌患者における抗ＣＤ２６抗体による治療効果を予測する方法であって、
    　抗ＣＤ２６抗体の基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルと、測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルを比較すること、及び
    　測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの８５％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する方法であって、
    　ここで、前記測定日は基準投与日を１日目として基準投与から１～６０日目であり、かつ、
    　該患者は少なくとも１回は基準投与として抗ＣＤ２６抗体を投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が抗ＣＤ２６抗体の投与日に該当する場合には、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルは、当該測定日における抗ＣＤ２６抗体の投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルである、方法。
  14. 　前記測定日が基準投与から１～３０日目であり、かつ、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項１３に記載の方法。
  15. 　前記測定日が基準投与から２２～３０日目であり、かつ、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項１３に記載の方法。
  16. 　前記測定日が基準投与から２～８日目であり、かつ、該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項１３に記載の方法。
  17. 　前記患者が、２週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から２２～３０日目であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６５％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項１３に記載の方法。
  18. 　前記患者が、２週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から２９日目であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６２．３％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項１３に記載の方法。
  19. 　前記患者が男性である、請求項１７又は請求項１８に記載の方法。
  20. 　前記患者が、週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から２～８日目であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項１３に記載の方法。
  21. 　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの４９％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項２０に記載の方法。
  22. 　前記患者が、週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者であり、かつ、
    　前記測定日が基準投与から１５日目以降であり、かつ、
    　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの３０％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項１３に記載の方法。
  23. 　該測定日の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの２６％未満である場合、当該患者において抗ＣＤ２６抗体が治療効果がある可能性があると予測する、請求項２２に記載の方法。
  24. 　前記患者が、６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２６抗体が投与される患者である、請求項２０～請求項２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 　前記基準投与が初回投与である、請求項１～請求項２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 　前記患者が、０．１～６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２６抗体が投与される患者である、請求項１～請求項１９のいずれか１項に記載の方法。
  27. 　前記患者が、２週に１回、又は週に１回の頻度で抗ＣＤ２６抗体が投与される患者である、請求項１～請求項４及び請求項１３～請求項２３のいずれか１項に記載の方法。
  28. 　前記抗ＣＤ２６抗体がＹＳ１１０である、請求項１～請求項２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. 　抗ＣＤ２６抗体を有効成分として含有する癌治療用医薬組成物であって、
    　抗ＣＤ２６抗体の基準投与日を１日目として、基準投与から１～６０日目の癌患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの８５％未満である患者に投与するための、医薬組成物。
  30. 　抗ＣＤ２６抗体の基準投与から１～３０日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  31. 　抗ＣＤ２６抗体の基準投与から２２～３０日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６０％未満である患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  32. 　抗ＣＤ２６抗体の基準投与から２～８日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満である患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  33. 　２週に１回投与されるための医薬組成物であり、かつ、
    　基準投与から２２～３０日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６５％未満である患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  34. 　２週に１回投与されるための医薬組成物であり、かつ、
    　基準投与から２９日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの６２．３％未満であるである患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  35. 　男性に投与されるための、請求項３３又は請求項４０に記載の医薬組成物。
  36. 　週に１回投与されるための医薬組成物であり、かつ、
    　基準投与から２～８日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの５０％未満である患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  37. 　基準投与から２～８日目の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの４９％未満である患者に投与するための、請求項３６に記載の医薬組成物。
  38. 　基準投与から１５日目以降の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの３０％未満である患者に投与するための、請求項２９に記載の医薬組成物。
  39. 　準投与から１５日目以降の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルが、基準投与前の該患者の血清中の可溶性ＣＤ２６のレベルの２６％未満である患者に投与するための、請求項３８に記載の医薬組成物。
  40. 　抗ＣＤ２６抗体量として、６ｍｇ／ｋｇで投与するための、請求項３６～請求項３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  41. 　前記基準投与が初回投与である、請求項２９～請求項４０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  42. 　抗ＣＤ２６抗体量として、０．１～６ｍｇ／ｋｇで投与するための、請求項２９～請求項３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  43. 　２週に１回、又は週に１回投与するための、請求項２９～請求項４２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  44. 　抗ＣＤ２６抗体がＹＳ１１０である、請求項２９～請求項４３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  45. 　癌が悪性中皮腫である、請求項１～請求項２８のいずれか１項に記載の方法。
  46. 　癌が悪性中皮腫である、請求項２９～請求項４４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
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