[go: up one dir, main page]

WO2022201775A1 - 腸内細菌数低減剤 - Google Patents

腸内細菌数低減剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2022201775A1
WO2022201775A1 PCT/JP2022/001299 JP2022001299W WO2022201775A1 WO 2022201775 A1 WO2022201775 A1 WO 2022201775A1 JP 2022001299 W JP2022001299 W JP 2022001299W WO 2022201775 A1 WO2022201775 A1 WO 2022201775A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
intestinal bacteria
silicon
reducing agent
bacteria
intestinal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2022/001299
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
尚子 香山
潔 竹田
光 小林
悠輝 小林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Osaka NUC
Original Assignee
Osaka University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Osaka University NUC filed Critical Osaka University NUC
Priority to EP22773397.9A priority Critical patent/EP4316496A4/en
Priority to US18/550,844 priority patent/US20240189345A1/en
Priority to JP2023508670A priority patent/JPWO2022201775A1/ja
Priority to CN202280022172.1A priority patent/CN116997344A/zh
Publication of WO2022201775A1 publication Critical patent/WO2022201775A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/46—Ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. skin, bone, milk, cotton fibre, eggshell, oxgall or plant extracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/0056—Mouth soluble or dispersible forms; Suckable, eatable, chewable coherent forms; Forms rapidly disintegrating in the mouth; Lozenges; Lollipops; Bite capsules; Baked products; Baits or other oral forms for animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/145—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/146—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/28—Dragees; Coated pills or tablets, e.g. with film or compression coating
    • A61K9/2806—Coating materials
    • A61K9/2833—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/284—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/28—Dragees; Coated pills or tablets, e.g. with film or compression coating
    • A61K9/2806—Coating materials
    • A61K9/2833—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/286—Polysaccharides, e.g. gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2866—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose

Definitions

  • the present invention relates to an intestinal bacteria count inhibitor, a pharmaceutical containing an intestinal bacteria count reducing agent, and a food or beverage containing an intestinal bacteria count reducing agent.
  • Silicon microparticles are orally ingested by animals, and the hydrogen generated by reacting with water in a certain environment in the body can eliminate active oxygen represented by hydroxyl radicals. It has been disclosed that it can be a preventive or therapeutic agent for (Patent Documents 1 to 12).
  • the present invention provides an intestinal containing silicon particles or silicon microparticles, which can be at least a part of medicines, foods or beverages for adjusting the intestinal environment, or medicines for various diseases related to abnormal intestinal bacteria.
  • An object of the present invention is to provide an agent for reducing the number of internal bacteria.
  • the present inventors have investigated the effectiveness of silicon microparticles for intestinal diseases using animals (mice). , unexpectedly large changes before and after ingestion of silicon particles or silicon microparticles, which will be described later. More specifically, the number of intestinal bacteria in feces after ingestion of the silicon particles or the silicon microparticles by mice is significantly reduced compared to before the ingestion, and the abundance ratio of the intestinal bacteria is reduced. However, it was found that the abundance ratio (cited from Non-Patent Document 2) when ingesting hydrogen water is significantly different.
  • Non-Patent Document 1 for example, in terms of anaerobic bacteria, anaerobic bacteria do not have an enzyme that eliminates "hydroxyl radicals" generated by the reduction of oxygen. It is disclosed that "DNA damage and protein damage” are caused by these. Therefore, Non-Patent Document 1 suggests that hydroxyl radicals threaten the survival of anaerobic bacteria. In other words, in an environment where hydroxyl radicals are removed or reduced, an environment in which anaerobic bacteria can easily survive is formed, so at least the possibility of a decrease in the number of anaerobic bacteria is extremely low. , Non-Patent Document 1 suggests.
  • the present inventors ingested silicon particles, silicon microparticles, or aggregates thereof to normal animals (mice) or enteritis model animals (mice), and examined the number of bacteria in the intestine. By the way, a very interesting phenomenon was confirmed with good reproducibility that the number of bacteria was remarkably reduced regardless of whether it was aerobic or anaerobic.
  • the present inventors further studied and analyzed the effect on intestinal bacteria, the existence ratio of intestinal bacteria, especially the abundance ratio of anaerobic bacteria, was higher than that of hydrogen water. I learned that the ratio is very different.
  • silicon microparticles As a result, by ingesting silicon particles, silicon microparticles, or agglomerates thereof (hereinafter also collectively referred to as "silicon microparticles"), their conventionally known hydrogen generating ability, that is, The present invention was created by the inventors of the present invention ascertaining that there is a new action that cannot be explained by the ability to extinguish hydroxyl radicals.
  • One intestinal bacteria count-reducing agent of the present invention is a reducing agent that contains silicon particles or silicon microparticles and reduces the number of intestinal bacteria.
  • the new action includes adsorption action, adhesion action, trapping action, or cell membrane destruction action of intestinal bacteria by silicon microparticles, or reduction action by silicon microparticles. Not limited.
  • the pharmaceutical containing the above-mentioned intestinal bacteria count-reducing agent is a pharmaceutical that can change the balance of intestinal bacteria in addition to reducing the number of intestinal bacteria.
  • diseases targeted by the drug include obesity, diabetes, inflammatory bowel disease, anorexia, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, multiple sclerosis, autism, allergies, arthritis, eczema, asthma, non-alcoholic sexual hepatitis, atherosclerosis, hypertension, bacterial food poisoning, and multidrug-resistant bacterial infections.
  • the food or beverage containing the above-mentioned intestinal bacteria count-reducing agent is a food or beverage that can change the intestinal bacterial balance in addition to reducing the number of intestinal bacteria.
  • the kind of said food or said drink is not limited.
  • the food or beverage is a health food, a food with function claims, a food for specified health uses, or the like, which is a preferred embodiment.
  • the form of the food or beverage is not limited.
  • a form of a mixture in which the above-described agent for reducing the number of intestinal bacteria is mixed with an existing food, or a form of formulation is one aspect that can be adopted. Examples of such formulated forms are tablets, capsules, powders, granules, or jelly.
  • silicon fine particles in the present application are mainly particles having an average crystallite diameter of 1 nm or more and less than 1 ⁇ m.
  • silicon fine particles in the present application are mainly silicon nanoparticles having an average crystallite size of nano-level, specifically, a crystallite size of 1 nm or more and 500 nm or less.
  • the “silicon particles” in the present application are mainly particles having an average crystallite diameter of more than 500 nm (more narrowly, 1 ⁇ m or more) and 500 ⁇ m or less.
  • silicon fine particles are not limited to those in which each silicon fine particle is dispersed, but also a plurality of silicon fine particles aggregated to a size of ⁇ m order (generally 0.1 ⁇ m or more). Including those in the state of forming aggregates.
  • silicon particles can be agglomerates by agglomerating.
  • the above-described numerical range of “silicon fine particles” is a representative example, and the numerical range may be more limitedly varied.
  • the crystallite size is appropriately selected according to the application, method of use, required functions, etc. of the “silicon fine particles” or “silicon particles”.
  • crystallite diameter is adopted as an expression indicating the crystallite size of silicon fine particles
  • crystallite diameter is a term that represents the overall diameter of the aggregate of silicon particles. is distinguished from the “aggregate diameter”.
  • the particle size distribution of the aggregate size is not particularly limited.
  • the “pH adjuster” in the present application is an agent (hereinafter referred to as “alkaline agent”) that can adjust the pH value to an alkaline range of more than 7 (typically, more than 7.4), and the material is particularly limited. not.
  • alkaline agents are sodium hydrogen carbonate, sodium carbonate, sodium dihydrogen phosphate, disodium hydrogen phosphate, potassium hydrogen carbonate, potassium carbonate, and other pharmaceutical pH adjusters.
  • sodium bicarbonate which is the most general-purpose product, has multiple advantages such as excellent safety and versatility as well as pH value adjustment function. It should be noted that it is a preferred embodiment for any pH adjuster to be in a form that is not decomposed by acid.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent of the present application is orally ingested, it is preferably in a form that does not decompose or is not easily decomposed by gastric acid.
  • a new action that cannot be explained by the conventionally known hydrogen generating ability of silicon particles or silicon fine particles, that is, the ability to eliminate hydroxyl radicals. , can reduce the number of bacteria in the gut.
  • FIG. 1 is an implementation plan (protocol) for confirming various indicators of the number of intestinal bacteria by the agent for reducing the number of intestinal bacteria (feed) of the first embodiment using a mouse model.
  • a mouse model for confirming various indicators of the number of intestinal bacteria by the agent for reducing the number of intestinal bacteria (feed) of the first embodiment using a mouse model.
  • Fig. 10 is a bar graph comparing live intestinal bacteria counts of various species.
  • the abundance ratio of various intestinal bacteria contained in the excreta when animals (mice) ingested the feed of the first embodiment (Example 2) and the excrement when animals ingested the normal feed (comparative example) 1 is a pie chart comparing abundance ratios of various intestinal bacteria contained in When an animal (mouse) ingests the feed of the first comparative embodiment (Example 2) and a representative Gram-negative bacterium when ingesting a normal feed (Comparative Example) It is a graph which shows a relative number. 2 is a pie chart showing abundance ratios of various intestinal bacteria contained in excreta before and after ingestion of hydrogen water by an animal (mouse), cited from Non-Patent Document 2.
  • FIG. 1 is a pie chart comparing abundance ratios of various intestinal bacteria contained in When an animal (mouse) ingests the feed of the first comparative embodiment (Example 2) and a representative Gram-negative bacterium when ingesting a normal feed (Comparative Example) It is a graph
  • Example 4 is an image showing the results of staining the large intestine tissue of each animal (mouse) of Example 2 and Comparative Example using an immunohistochemical staining method.
  • a gene-deficient mouse that encodes IL-10 which is an enteritis model animal (mouse)
  • ingests the feed of the first embodiment is a bar graph comparing the number of various intestinal bacteria contained in the excrement when ingesting (comparative example).
  • Fig. 10 is SEM (scanning electron microscope) photographs showing the results of observing the silicon microparticles and the intestinal bacteria contained in the intestinal bacteria count-reducing agent in Example 4 and the results of a comparative example.
  • FIG. 10 is a further enlarged SEM photograph showing the results of observation of intestinal bacteria and silicon microparticles contained in the agent for reducing the number of intestinal bacteria in Example 4.
  • FIG. 10 is one SEM photograph magnified 40,000 times showing the results of observing intestinal bacteria in the cecum in Example 5.
  • FIG. 10 is another SEM photograph magnified 35,000 times showing the results of observation of intestinal bacteria in the cecum in Example 5.
  • FIG. 10 is a further enlarged SEM photograph showing the results of observation of intestinal bacteria and silicon microparticles contained in the agent for reducing the number of intestinal bacteria in Example 4.
  • FIG. 10 is one SEM photograph magnified 40,000 times showing the results of observing intestinal bacteria in the cecum in Example 5.
  • FIG. 10 is another SEM photograph magnified 35,000 times showing the results of observation of intestinal bacteria in the cecum in Example 5.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment and the method for producing the intestinal bacteria count-reducing agent are as follows.
  • Intestinal bacteria count-reducing agent is a normal feed (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd., model number AIN93M) as a base material, and by contacting with water, By performing a step (kneading step) of kneading silicon microparticles capable of generating hydrogen in a neutral to alkaline environment, that is, silicon microparticles having the ability to generate hydrogen, and an aqueous citric acid solution using a known kneading apparatus. It is molded into a solid dosage form.
  • the silicon microparticles of the present embodiment can have the ability to generate hydrogen and/or the ability to disrupt cell membranes to form pores in bacterial cell membranes, which can reduce the number of intestinal bacteria.
  • silicon fine particle powder for example, particle size of 300 ⁇ m or less, purity of 4N (that is, 99.99% or more), i-type silicon
  • a fine silicon particle powder having a purity higher or lower than the purity described above can be employed.
  • the silicon fine particle powder of the present embodiment is crystalline silicon powder, but even if the silicon fine particle powder is amorphous silicon or porous silicon, at least a part of the effects of the present embodiment can be obtained.
  • a classification step (first classification step) of classifying the silicon fine particle powder described above is performed. Specifically, using a sieve, the ratio of the silicon fine particles having a crystallite diameter of 45 ⁇ m or more (as described above, including silicon fine particles or aggregates thereof) to all the silicon fine particles is 5% by mass or less (more preferably 3% by mass or less, more preferably 1% by mass or less, even more preferably 0.5% by mass or less, further preferably 0.2% by mass or less), A first classification step is performed.
  • silicon microparticles having a crystallite diameter of less than 45 ⁇ m are obtained, and the silicon microparticles having a crystallite diameter of 45 ⁇ m or more are substantially removed.
  • a classification step (second classification step) of removing most of the silicon fine particles with a crystallite diameter of less than 1 ⁇ m is also adopted.
  • the method for producing an intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment does not necessarily require the above-described first classification step and/or second classification step.
  • the viewpoint that more stable hydrogen generation ability can be exhibited the viewpoint that deterioration of human texture can be suppressed in the case of oral intake, and / or the silicon fine particles are directly absorbed into blood vessels.
  • the above-described first classification step and/or the second classification step is performed from the viewpoint of being able to prevent with high accuracy the intrusion into the .
  • the silicon microparticles (silicon particles, silicon microparticles, or aggregates thereof) or intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment can be produced. Therefore, the intestinal bacteria count-reducing agent of one example of the present embodiment can be produced without going through the kneading step described below.
  • the silicon microparticles of the present embodiment are accidentally or spontaneously molded with a physiologically acceptable adhesive (including water; hereinafter the same) or a thickening agent, or a physiologically acceptable
  • a physiologically acceptable adhesive including water; hereinafter the same
  • a thickening agent or a physiologically acceptable
  • One that is intentionally molded using a known tableting machine or the like together with a possible adhesive or thickener is also an example of the intestinal bacteria count-reducing agent.
  • the shape of the fine silicon particles is not limited. For example, amorphous, polygonal, spherical, elliptical, disk, or columnar shapes are examples of the fine silicon particles.
  • Silicon microparticles having a representative crystallite diameter of less than 500 nm, which have undergone the above-described first classification step and pulverization step, are an aqueous solution (pH value 8.2), the amount of hydrogen generated from the start of the immersion to 24 hours was about 300 mL/g.
  • the silicon microparticles of the present embodiment having the ability to generate hydrogen, and the aqueous citric acid solution are kneaded in a known manner.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent of the example can be produced by kneading using a device.
  • the type of base material described above is not limited as long as it is a physiologically acceptable material.
  • the ratio (mass ratio) of the silicon microparticles to the normal feed is 2.5 when the normal feed is 100.
  • the amount of the citric acid aqueous solution is not particularly limited, but for example, an amount of about 0.5% by weight can be selected with respect to the total amount of the silicon microparticles and the normal feed.
  • the pH value of the aqueous solution of citric acid is about 4.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment contains citric acid together with the above-described normal feed and silicon microparticles. This is another aspect that can also be adopted.
  • the pH adjuster and the silicon microparticles are contained in known enteric capsules. Ingestion in a filled or contained state is a preferred embodiment.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent containing the silicon microparticles of the present embodiment may be molded using a commercially available pelleter in consideration of the suitability of the dosage form when ingested. is. After molding, moisture is removed using a dryer heated to about 90°C, and the product is classified using a sieve to produce an intestinal bacteria count-reducing agent as a solid formulation (feed).
  • the agent for reducing the number of intestinal bacteria be packaged in a known water-impermeable covering material and stored. This is one aspect.
  • the ratio (mass ratio) of the fine silicon particles to the normal feed is not limited. A typical ratio of the fine silicon particles is 0.02 to 70 when the normal feed is 100.
  • the citric acid contained in the intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment reduces the pH value of the water when the intestinal bacteria count-reducing agent is disintegrated in pure water to 4 or more and less than 7 (more narrowly can play a role in reducing the
  • citric acid which makes the water-containing liquid acidic, can prevent or suppress the generation of hydrogen due to contact of the agent for reducing the number of intestinal bacteria with moisture in the outside air. Therefore, it is a preferred aspect of the present embodiment that the agent for reducing the number of intestinal bacteria contains citric acid. Even when the intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment does not contain citric acid, at least a part of the effects of the present embodiment can be obtained.
  • the surface of the silicon fine particles is oxidized naturally formed by contact with air or moisture, or artificially formed by a known film formation method (including hydrogen peroxide water treatment).
  • a film of silicon including silicon suboxide
  • the film thickness of the silicon oxide is not limited as long as the silicon fine particles have the ability to generate hydrogen.
  • FIG. 1 shows various types of intestinal bacteria counts by the intestinal bacteria count reducing agent (feed) of the present embodiment using C57BL/6J mice (hereinafter referred to as “mouse”) obtained from Japan SLC Co., Ltd. This is an implementation plan (protocol) for confirming the indicators.
  • Example 1 Seven week old normal C57BL/6J mice were employed in the confirmatory study of this example.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent having a mass ratio of 2.5 to the normal feed as 100 which is manufactured according to the above-described manufacturing method, is added to the mouse feed (hereinafter , "Feed of Example 1").
  • “Number of days” in FIG. 1 of this embodiment is 5 days. Therefore, in this example, the mice in the intestinal bacteria count-reducing agent-administered group were allowed to freely ingest the feed and water of Example 1 for 5 days before using the mice in the confirmatory test, A control group (comparative example) was allowed to ingest the above-mentioned normal feed (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd., model number AIN93M) and water ad libitum.
  • FIG. 2 shows the number of various live intestinal bacteria contained in excreta when mice ingested the feed of Example 1 (Example 1) and the excrement when mice ingested normal feed (Comparative Example). It is a bar graph comparing the number of various live intestinal bacteria contained.
  • the present inventors measured the number of bacteria (colony forming unit/g (feces) (CFU)) in the excrement (in other words, feces) of the mice. ) were cultured using the static culture method and then analyzed.
  • CFU colony forming unit/g
  • Example 2 ⁇ Confirmation test for the abundance ratio of intestinal bacteria> (Example 2)
  • a confirmatory test was conducted to investigate the increase and decrease in the numbers of aerobic and anaerobic intestinal bacteria and their abundance ratios.
  • "Number of days" in FIG. 1 of this embodiment is seven days. Therefore, in this example, the feed of Example 1 and the 7-week-old mice employed in Example 1 were used to confirm the increase and decrease of each intestinal bacteria count and the abundance ratio of each of the aforementioned intestinal bacteria. was done.
  • mice in the intestinal bacteria count-reducing agent-administered group were allowed to freely ingest the feed and water of Example 1 for 7 days before using the mice in the confirmatory test, while the control group (Comparative example) was given the above-mentioned normal feed and water ad libitum.
  • FIG. 3 shows the abundance ratio of various intestinal bacteria contained in excreta when mice ingested the feed of the present embodiment (Example 2), and the excreta when mice ingested normal feed (comparative example).
  • 2 is a pie chart comparing abundance ratios of various intestinal bacteria contained.
  • the abundance ratio of intestinal bacteria in Example 2 and Comparative Example was determined by the polymerase chain reaction (PCR) method using the deoxyribonucleic acid (DNA) recovered from the excrement of each example to determine the 16S rRNA gene possessed by all bacteria. After amplification, it was obtained by a method of identifying the type of the intestinal bacterium by examining the nucleotide sequence of each variable region of the 16S rRNA gene fragment contained in the PCR amplification product obtained by the amplification.
  • PCR polymerase chain reaction
  • the abundance ratio (%) of intestinal bacteria in Example 2 and the comparative example is calculated using the total number of 16S rRNA gene fragments contained in the PCR amplification product as the denominator, and various intestinal bacteria having a specific nucleotide sequence in the variable region. It is the number obtained by multiplying the value by 100 when the number of gene fragments of the endobacterium is taken as the numerator.
  • the aforementioned "total number of 16S rRNA gene fragments" is synonymous with "whole bacteria”.
  • specific examples of abundance ratios (%) of each intestinal bacterium are shown in Table 1 below.
  • FIG. 4 shows the number of representative Gram-negative bacteria and the number of Gram-positive bacteria when the mice ingested the feed of the present embodiment (Example 2) and when the mice ingested the normal feed (Comparative Example).
  • Fig. 3 is a graph showing the relative ratio of numbers;
  • FIG. 5 is a pie chart (reference material) showing the abundance ratio of various intestinal bacteria contained in excrement before and after ingestion of hydrogen water by mice cited from Non-Patent Document 2 above. be.
  • Example 2 The number of Gram-negative anaerobic bacteria, Bacteroidaceae, which can be said to be harmful to humans, in Example 2 is dramatically reduced relative to the number in the control group (comparative example).
  • Example 2 The abundance ratio of the Bacteroidaceae in Example 2 with respect to the total number of intestinal bacteria is lower than the abundance ratio of the Bacteroidaceae in the comparative example.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment reduces the ratio of the number of anaerobic bacteria (especially Gram-negative anaerobic bacteria) to the total number of each intestinal bacteria shown in at least FIG. It was confirmed that it has the following characteristics.
  • DAPI host cell nuclei
  • mucus antigen specific mammas
  • intestinal bacteria eubacterial probe EUB3378
  • FIG. 6 is an image showing the results of staining the large intestine tissue of each mouse of Example 2 and Comparative Example using an immunohistochemical staining method.
  • the area of FIG. 6 "A” is the lumen area
  • the area of FIG. 6 “B” is the epithelial and lamina intestinal areas.
  • White dots in the luminal region (“A” region) represent intestinal bacteria
  • white dots in the epithelium and lamina limba region (“B” region) represent cell nuclei.
  • Fig. 6 also confirms that the feed of Example 1 significantly reduces the number of intestinal bacteria.
  • Example 3 ⁇ Confirmation test for the number of intestinal bacteria (2)> (Example 3)
  • enteritis model animals enteritis model animals
  • enteritis model animals spontaneously develop intestinal inflammation dependent on intestinal bacteria by deleting the gene encoding the anti-inflammatory cytokine IL-10.
  • "Number of days” in FIG. 1 of this embodiment is 23 weeks (161 days). Therefore, in this example, using the feed of Example 1 and the 7-week-old mice employed in Example 1, a confirmation test was conducted to investigate changes in the number of intestinal bacteria, including aerobic and anaerobic bacteria. It was conducted.
  • mice in the intestinal bacteria count-reducing agent-administered group were given the feed and water of Example 1 ad libitum for 23 weeks (161 days) before using the mice in the confirmatory test.
  • the control group comparativative example
  • wild-type animals were allowed to ingest normal feed and water ad libitum.
  • FIG. 7 shows the number of various intestinal bacteria contained in excreta when mice ingested the feed of this example (Example 3), and the number of various intestinal bacteria contained in excreta when mice ingested normal feed (Comparative Example). It is a bar graph comparing various intestinal bacteria counts. The results of wild-type animals are shown as reference examples in FIG. Intestinal bacteria count was measured in the same manner as in Example 1.
  • the number of bacteria in the comparative example increased sharply after 23 weeks (161 days) regardless of whether it was aerobic or anaerobic.
  • the number of bacteria in this example was significantly reduced compared to the number of bacteria in the comparative example, and if a more positive expression is used, it was significantly reduced.
  • the number of bacteria in this example decreased to a level comparable to that of the reference example, which is the result of wild-type animals.
  • Example 2 it is worth noting that unlike Example 1, not only a significant decrease in the number of anaerobic bacteria but also a significant decrease in the number of aerobic bacteria was confirmed in this example. Therefore, it was confirmed that ingestion of the agent for reducing the number of intestinal bacteria can reduce the numbers of aerobic and anaerobic bacteria that significantly increase in enteritis model animals.
  • Example 4 ⁇ Confirmation test of adhesion, adsorption, or capture action of intestinal bacteria by intestinal bacteria count reducing agent> (Example 4)
  • a test was conducted to confirm the action of the agent for reducing the number of intestinal bacteria on adhesion, adsorption, or trapping of intestinal bacteria.
  • enteric bacteria collected from the cecal contents of an 8-week-old mouse the agent for reducing the number of enteric bacteria of the first embodiment was added to the culture medium, and under anaerobic conditions, Cultivation was carried out for 24 hours by the stationary culture method.
  • 0.1 g of the intestinal bacteria count-reducing agent was added to 2 mL (milliliter) of the bacterial culture solution.
  • the intestinal bacteria recovered from the contents of the cecum were cultured for 24 hours by a static culture method under anaerobic conditions without the addition of the intestinal bacteria count-reducing agent. It was adopted as a comparative example.
  • FIG. 8 is a SEM (scanning electron microscope) photograph showing the results of observing the silicon microparticles and the intestinal bacteria contained in the intestinal bacteria count-reducing agent in Example 4 and the results of the comparative example.
  • SEM scanning electron microscope
  • intestinal bacteria are directly on the surface of the silicon microparticles and/or indirectly on the surface of the silicon microparticles through the oxide film formed on the surface of the silicon microparticles. , can be attached, adsorbed or trapped.
  • Non-Patent Document 1 the confirmation of the action of adhesion, adsorption, or capture of intestinal bacteria, which is different from the hydrogen generation ability that can be expressed by silicon fine particles, can be explained according to the technical content disclosed in Non-Patent Document 1, for example. This indicates that the silicon microparticles have a unique action that was not possible in the prior art.
  • FIG. 9 is an SEM photograph magnified 45,000 times showing the results of observation of the silicon microparticles contained in the agent for reducing the number of intestinal bacteria in this example and intestinal bacteria. The locations indicated by the arrows in the figure are thought to be pores in the cell membrane. Therefore, the induction phenomenon seen in some antimicrobial peptides was confirmed even when the intestinal bacteria count-reducing agent of the first embodiment, which is unrelated to the antimicrobial peptides, was used. Destruction of bacterial cell membranes by the agent for reducing the number of bacteria may also contribute to the effect of reducing the number of intestinal bacteria. Therefore, it was confirmed that the action of adsorbing, adhering, or trapping intestinal bacteria by silicon microparticles can cause cell membrane disruption.
  • Example 5 ⁇ Additional confirmation test of adhesion, adsorption, or trapping action of intestinal bacteria by intestinal bacteria count-reducing agent> (Example 5)
  • Example 5 ⁇ Additional confirmation test of adhesion, adsorption, or trapping action of intestinal bacteria by intestinal bacteria count-reducing agent> (Example 5)
  • the present inventors found that the 8-week-old mice of Example 4 We confirmed the action and effect of the intestinal bacteria count-reducing agent in
  • silicon microparticles containing a physiologically acceptable adhesive or thickener is contained in physiological saline at a rate of 150 mg/mL. Afterwards, the mice were gavaged to a total of 1600 ⁇ L in 4 divided doses at approximately the same time intervals with the same volume.
  • FIG. 10 is one SEM photograph magnified 40,000 times showing the results of observing enterobacteria in the cecum in this example.
  • FIG. 11 is another SEM photograph magnified 35,000 times showing the result of observing enterobacteria in the cecum in this example.
  • a solid formulation in which normal feed, silicon fine particles, and citric acid are kneaded is adopted.
  • the number reducing agent is not limited to such embodiments.
  • a solid preparation using saccharides or starch instead of citric acid described above is another aspect that can be employed in this embodiment.
  • various known dosage forms that can be taken orally can be appropriately adopted according to the conditions of the individual (living body) who takes the agent for reducing the number of intestinal bacteria.
  • An example of the above dosage form is a capsule made of a known gelatin component or the like filled or containing the silicon microparticles of the present embodiment.
  • another example of the dosage form is a film made of known enteric coated cellulose acetate phthalate, hydroxypropyl methylcellulose phthalate, polyvinyl acetate phthalate, or the like, or a film made of a known saccharide, containing silicon fine particles. It is a film-coated tablet that covers.
  • granules, powders, syrups (dry syrups), or jelly can be adopted.
  • the ratio of the above-described silicon fine particles mixed with the above-described normal feed as 100 was 2.5 in terms of mass ratio.
  • the mixing ratio of fine particles is not limited to this value.
  • the intestinal bacteria count-reducing agent of the present embodiment does not require the normal feed.
  • the agent for reducing the number of intestinal bacteria of the present invention can be widely used as at least a part of drugs, foods or beverages for adjusting the intestinal environment, or drugs for various diseases associated with abnormalities of intestinal bacteria.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本発明の１つの腸内細菌数低減剤は、シリコン粒子又はシリコン微細粒子を含有し、腸内の細菌の数を低減させる低減剤である。この腸内細菌数低減剤によれば、従来から知られているシリコン粒子又はシリコン微細粒子の水素発生能、すなわち、ヒドロキシルラジカルを消滅させる性能では説明することができない新たな作用により、腸内の細菌の数を低減させ得る。

Description

腸内細菌数低減剤
　本発明は、腸内細菌数抑制剤、及び腸内細菌数低減剤を含有する医薬品、並びに、腸内細菌数低減剤を含有する食品又は飲料に関する。
　健康志向が高まる中、免疫細胞の約７割が腸内に集まっていると言われていることから、免疫細胞に影響を与える腸内フローラと呼ばれる腸内の多種多様な細菌のバランスについても注目度が高まっている。しかしながら、現代人が直面する食生活を含む生活環境の変化、あるいはストレス等により、腸内細菌のバランスを整えることは以前にも増して容易でなくなっている。
　シリコン微細粒子が動物に経口摂取され、体内のある環境下において水と反応することによって生成される水素が、ヒドロキシルラジカルに代表される活性酸素を消滅し得るため、シリコン微細粒子が幾つかの疾患に対する予防又は治療剤となり得ることが開示されている（特許文献１～１２）。
国際公開ＷＯ２０１９／０２１７６９号公報 特開２０１９－２１４５５６号公報 特開２０２０－７３００号公報 特開２０２０－７９２４０号公報 特開２０２０－７９２２８号公報 特開２０２０－１１７４８０号公報 特開２０２０－１１７４８１号公報 特開２０２０－１１７４８２号公報 特開２０２０－１１７４８３号公報 特開２０２０－１１７４８４号公報 特開２０２０－１１７４８５号公報 特開２０２０－１１７４８６号公報
安藤，腸内細菌叢に影響を及ぼす因子，モダンメディア，第６５巻，２０１９年，７２－７９ Hydrogen-Rich Saline Regulates Intestinal Barrier Dysfunction, Dysbiosis, and Bacterial Translocation in a Murine Model of Sepsis,Mitsunori Ikeda et al.,SHOCK Vol.50,No.6,2018,640-647
　本発明は、腸内環境を整えるための薬剤、食品又は飲料、あるいは腸内細菌の異常が関連する各種の疾患のための薬剤の少なくとも一部となり得る、シリコン粒子又はシリコン微細粒子を含有する腸内細菌数低減剤を提供することを目的とする。
　本発明者らは、動物（マウス）を用いて腸のある疾患についてシリコン微細粒子の有効性を調べていたところ、該疾患の経緯とは別に調査した腸内細菌数及びその細菌の存在比率が、後述するシリコン粒子又はシリコン微細粒子の摂取前後で意外にも大きく変動していることに気づいた。より具体的には、マウスが該シリコン粒子又は該シリコン微細粒子を摂取した後の便中の腸内細菌の数が、その摂取前と比べて顕著に低下するとともに、該腸内細菌の存在比率が、水素水を摂取したときの該存在比率（非特許文献２から引用）とは大きく異なることを知得した。
　ところが、これまでに知られているシリコン微細粒子による、特に中性～アルカリ性において発現する水素発生能、すなわちヒドロキシルラジカル消滅能の作用からすれば、上記の各事象が確認されたことは想定外の結果である。というのも、上述の知見は、２０１９年に開示された非特許文献１に示されているように、少なくとも２０１９年時点における技術常識とは逆の結果だからである。
　具体的には、非特許文献１によれば、例えば嫌気性の細菌について言えば、嫌気性の細菌は、「酸素の還元によって生じた」ヒドロキシルラジカル等「を消去する酵素を備えていないため、これらによるＤＮＡ損傷、蛋白損傷」が生じることが開示されている。従って、この非特許文献１は、嫌気性の細菌にとっては、ヒドロキシルラジカルが自身の生存を脅かす存在であることを示唆している。換言すれば、ヒドロキシルラジカルが除去又は低減される環境下においては、嫌気性の細菌にとっては生存し易い環境が形成されるため、少なくとも嫌気性の細菌数が減少する可能性は極めて低くなることが、非特許文献１において示唆されている。
　しかしながら、上述のとおり、本発明者らが、シリコン粒子、シリコン微細粒子、又はそれらの凝集体を正常の動物（マウス）又は腸炎モデル動物（マウス）に摂取させ、腸内の細菌数を調べたところ、好気性、嫌気性を問わず、細菌数が顕著に減少するという大変興味深い現象が再現性良く確認された。また、本発明者らが腸内の細菌に対する影響についてさらに研究と分析を進めると、腸内細菌の存在比率、特に、嫌気性の細菌数の存在比率が、水素水を摂取したときの該存在比率とは大きく異なることを知得した。
　その結果、シリコン粒子、シリコン微細粒子、又はそれらの凝集体（以下、総称して「シリコン微細粒子」ともいう。）を摂取することにより、従来から知られているそれらの水素発生能、すなわち、ヒドロキシルラジカルを消滅させる性能では説明することができない新たな作用が働いていることを本発明者らが知得することにより、本発明が創出された。
　本発明の１つの腸内細菌数低減剤は、シリコン粒子又はシリコン微細粒子を含有し、腸内の細菌の数を低減させる低減剤である。
　この腸内細菌数低減剤によれば、従来から知られているシリコン微細粒子の水素発生能、すなわち、ヒドロキシルラジカルを消滅させる性能では説明することができない新たな作用により、腸内の細菌の数を低減させ得る。なお、新たな該作用には、シリコン微細粒子による腸内細菌の吸着作用、付着作用、捕獲作用、又は細胞膜破壊作用、あるいはシリコン微細粒子による還元作用が挙げられるが、該作用はこれらの作用に限定されない。
　なお、上述の腸内細菌数低減剤を含有する医薬品は、腸内の細菌数を低減させることに加えて、腸内の細菌バランスを変化させることができる医薬品である。なお、該医薬品が対象とする疾患の例は、肥満、糖尿病、炎症性腸疾患、食欲障害、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、自閉症、アレルギー、関節炎、湿疹、喘息、非アルコール性肝炎、アテローム動脈硬化症、高血圧、細菌性食中毒、及び多剤耐性菌感染症である。
　また、上述の腸内細菌数低減剤を含有する食品又は飲料は、腸内の細菌数を低減させることに加えて、腸内の細菌バランスを変化させ得る食品又は飲料である。なお、該食品又は該飲料の種類は限定されない。例えば、該食品又は該飲料は、健康食品、機能性表示食品、特定保健用食品等は好適な一態様である。また、該食品又は該飲料の形態は制限されない。例えば、既存の食品に上述の腸内細菌数低減剤を混合した混合物の形態、又は製剤化した形態は採用し得る一態様である。製剤化した該形態の例は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、又はゼリー等である。
　ところで、本願における「シリコン微細粒子」は、平均の結晶子径が１ｎｍ以上１μｍ未満の粒子を主たる粒子とする。より狭義には、本願における「シリコン微細粒子」は、平均の結晶子径がナノレベル、具体的には結晶子径が、１ｎｍ以上５００ｎｍ以下のシリコンナノ粒子を主たる粒子とする。また、本願における「シリコン粒子」は、平均の結晶子径が５００ｎｍ超（より、狭義には、１μｍ以上）５００μｍ以下の粒子を主たる粒子とする。
　また、本願において「シリコン微細粒子」は、各シリコン微細粒子が分散している状態のもののみならず、複数のシリコン微細粒子が凝集してμｍオーダー（概ね、０．１μｍ以上）の大きさの凝集体を構成した状態のものを含む。加えて、「シリコン粒子」は、凝集することによって凝集体となり得る。なお、「シリコン微細粒子」の上述の数値範囲は代表例であり、その数値範囲はより限定的に変動し得る。また、「シリコン微細粒子」又は「シリコン粒子」の用途、使用方法、必要とする機能等に応じて、適宜、結晶子径が選定される。加えて、シリコン微細粒子の結晶子のサイズを示す表現として「結晶子径」という用語が採用されるが、該「結晶子径」という用語は、シリコン粒子の凝集体の全体の径を表す用語である「凝集体径」と区別される。該凝集体径の粒度分布は、特に限定されない。
　また、本願における「ｐＨ調整剤」は、ｐＨ値を７超（代表的には、７．４超）のアルカリ域に調整できる薬剤（以下、「アルカリ剤」）であれば、特に材料は限定されない。また、アルカリ剤の例は、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、その他の医薬用のｐＨ調整剤である。その中でも最も汎用品である炭酸水素ナトリウムは、ｐＨ値調整機能とともに、安全性及び汎用性に優れるという複数の長所を兼ね揃える。なお、何れのｐＨ調整剤においても、酸によって分解されない形態とすることは好適な一態様である。また、本願の腸内細菌数低減剤を経口摂取する場合、胃酸で分解しない、又は分解され難い形態にすることが好ましい。
　本発明の１つの腸内細菌数低減剤によれば、従来から知られているシリコン粒子又はシリコン微細粒子の水素発生能、すなわち、ヒドロキシルラジカルを消滅させる性能では説明することができない新たな作用により、腸内の細菌の数を低減させ得る。
マウスモデルを用いた、第１の実施形態の腸内細菌数低減剤（飼料）による腸内細菌数の各種の指標について確認するための実施計画（プロトコール）である。 動物（マウス）が本実施形態の飼料を摂取した場合（実施例１）の排泄物に含まれる各種の生きた腸内細菌数と、通常飼料を摂取した場合（比較例）の排泄物に含まれる各種の生きた腸内細菌数とを比較した棒グラフである。 動物（マウス）が第１の実施形態の飼料を摂取した場合（実施例２）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌の存在比率と、通常飼料を摂取した場合（比較例）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌の存在比率とを比較した円グラフである。 動物（マウス）が第１の比較実施形態の飼料を摂取した場合（実施例２）の代表的なグラム陰性菌と、通常飼料を摂取した場合（比較例）の代表的なグラム陰性菌との相対数を示すグラフである。 非特許文献２から引用された、動物（マウス）が水素水を摂取する前後の、排泄物に含まれる各種の腸内細菌の存在比率を示す円グラフである。 免疫組織染色法を用いて実施例２及び比較例の各動物（マウス）の大腸組織を染色した結果を示す画像である。 腸炎モデル動物（マウス）であるＩＬ－１０をコードする遺伝子欠損マウスが第１の実施形態の飼料を摂取した場合（実施例３）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌数と、通常飼料を摂取した場合（比較例）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌数とを比較した棒グラフである。 実施例４における腸内細菌数低減剤に含まれるシリコン微細粒子と、腸内細菌とを観察した結果と、比較例の結果とを示すＳＥＭ（走査電子顕微鏡）写真である。 実施例４における腸内細菌数低減剤に含まれるシリコン微細粒子と、腸内細菌とを観察した結果を示す、更に拡大されたＳＥＭ写真である。 実施例５における盲腸内の腸内細菌を観察した結果を示す、４万倍に拡大された一つのＳＥＭ写真である。 実施例５における盲腸内の腸内細菌を観察した結果を示す、３万５千倍に拡大されたもう一つのＳＥＭ写真である。
　本発明の実施形態を、添付する図面に基づいて詳細に述べる。
　＜第１の実施形態＞
　本実施形態の腸内細菌数低減剤、及び該腸内細菌数低減剤の製造方法は次のとおりである。
［１］腸内細菌数低減剤
　本実施形態の腸内細菌数低減剤の一例は、母材としての通常飼料（オリエンタル酵母工業株式会社製、型番ＡＩＮ９３Ｍ）と、水と接することにより、特に中性～アルカリ性において水素を発生し得るシリコン微細粒子、すなわち水素発生能を有するシリコン微細粒子と、クエン酸水溶液とを公知の混錬装置を用いて混錬する工程（混錬工程）を行うことによって固形製剤となるように成形される。なお、後述のとおり、本実施形態のシリコン微細粒子は、腸内細菌数の低減を実現し得る、水素発生能及び／又は細菌の細胞膜の孔を形成し得る細胞膜破壊能を有し得る。
［２］腸内細菌数低減剤の製造方法
　次に、本実施形態の腸内細菌数低減剤の製造方法を説明する。
　本実施形態においては、例えば、シリコン微細粒子粉末（例えば、粒径３００μｍ以下，純度が４Ｎ（すなわち、９９．９９％以上），ｉ型シリコン）を、該腸内細菌数低減剤の原料の一部として用いる。なお、本実施形態の他の一態様においては、前述の純度よりも高純度、又は低純度のシリコン微細粒子粉末を採用することができる。なお、本実施形態のシリコン微細粒子粉末は結晶シリコンの粉末であるが、該シリコン微細粒子粉末がアモルファスシリコン又はポーラスシリコンであっても、本実施形態の少なくとも一部の効果が奏され得る。
＜分級工程＞
　まず、本実施形態の一例においては、上述のシリコン微細粒子粉末を分級する、分級工程（第１分級工程）が行われる。具体的には、篩を用いて、結晶子径が４５μｍ以上の該シリコン微細粒子（上述のとおり、シリコン微細粒子、又はそれらの凝集体を含む）の、全ての該シリコン微細粒子に対する割合が、５質量％以下（より好適には３質量％以下、さらに好適には１質量％以下、さらに好適には０．５質量％以下、さらに好適には０．２質量％以下）となるように、第１分級工程が行われる。その結果、本実施形態においては、４５μｍ未満の結晶子径を有する該シリコン微細粒子が得られるとともに、４５μｍ以上の結晶子径の該シリコン微細粒子はほぼ除去される。(シリコン粒子及びシリコン微細粒子の製造工程の一例)
　特に中性～アルカリ性において水素発生能を有する限り、本実施形態のシリコン微細粒子の結晶子径の上限又は下限は限定されない。但し、上述の第１分級工程に加えて、又は該第１分級工程に代えて、１μｍ未満の結晶子径の該シリコン微細粒子をほぼ除去する分級工程（第２分級工程）を行うことも採用され得る。(シリコン粒子及びシリコン微細粒子の製造工程の一例)
　ここで、本実施形態の腸内細菌数低減剤の製造方法においては、必ずしも上述の第１分級工程及び／又は第２分級工程を要しない。但し、上述のとおり、より安定的な水素発生能が発揮され得る観点、経口摂取の場合にヒトの食感の悪化を抑制し得る観点、及び／又は、シリコン微細粒子が直接的に吸収され血管に浸入することを確度高く防止し得る観点から、上述の第１分級工程及び／又は第２分級工程が行われることは、好適な一態様である。
＜粉砕工程＞
　次に、分級工程を経た又は分級工程を経ていない上述のシリコン微細粒子粉末を、ビーズミル法により、９９．５ｗｔ％のエタノール溶液中、０．５ｍｍφのジルコニアビーズを用いた粉砕処理する、粉砕工程が行われる。その結果、分級工程を経たシリコン微細粒子についてはより確度高く、代表的な結晶子径が１００ｎｍ未満となるシリコン微細粒子（シリコンナノ粒子）を得ることができる。(シリコン微細粒子の製造工程)
　ところで、上述の粉砕工程の代わりに、他の公知の粉砕法（ローラーミル法等）を用いて、結晶子径が５００ｎｍ未満となるシリコン微細粒子（シリコンナノ粒子）を得ることも、採用し得る一態様である。但し、金属汚染の防止の観点から、粉砕工程としてビーズミル法を採用することは好適な一態様である。また、該ビーズミル法を採用する場合において、所望の結晶子径のシリコン微細粒子（シリコン微細粒子を含む）を得るために、ビーズの大きさ及び／又は種類は適宜選定され得る。
　上述の工程を行うことにより、本実施形態のシリコン微細粒子（シリコン粒子、シリコン微細粒子、又はそれらの凝集体）又は腸内細菌数低減剤を製造することができる。従って、本実施形態の一例の腸内細菌数低減剤は、後述する混練工程を経ずに製造され得る。例えば、本実施形態のシリコン微細粒子を、生理学的に許容可能な粘着剤（水を含む。以下、同じ。）又は増粘剤等により偶発的又は自然に成形されたもの、あるいは生理学的に許容可能な粘着剤又は増粘剤等とともに公知の打錠機等を用いて意図的に成形されたものも、該腸内細菌数低減剤の一例である。なお、該シリコン微細粒子の形は限定されない。例えば、不定形、多角形、球、楕円形、円盤、又は円柱状等は、該シリコン微細粒子の一態様である。
　本実施形態のシリコン微細粒子の水素発生能の一例は、次のとおりである。
　上述の第１分級工程及び粉砕工程を経た、代表的な結晶子径が５００ｎｍ未満となるシリコン微細粒子は、ヒトの体温相当の温度（３７℃）の炭酸水素ナトリウムを溶質とする水溶液（ｐＨ値は８．２）に浸漬させることにより、その浸漬開始から２４時間経過するまでの水素発生量が、約３００ｍＬ／ｇであった。
＜混練工程＞
　また、本実施形態の一例においては、該粉砕工程の後、上述のとおり、母材としての通常飼料と、水素発生能を有する本実施形態のシリコン微細粒子と、クエン酸水溶液とを公知の混練装置を用いて混練することによって、該一例の腸内細菌数低減剤を製造することができる。
　なお、上述の母材の種類は、生理学的に許容可能な材料である限り、限定されない。
　また、該通常飼料に対する該シリコン微細粒子の割合（質量比）の一例は、該通常飼料を１００としたときに、該シリコン微細粒子が２．５である。また、クエン酸の水溶液の量は特に限定されないが、例えば、該シリコン微細粒子と該通常飼料との総量に対して約０．５ｗｔ％の量を選択することができる。加えて、クエン酸の水溶液のｐＨ値は約４である。
　ところで、本実施形態の腸内細菌数低減剤は、上述の通常飼料及びシリコン微細粒子とともにクエン酸を含んでいるが、例えば、該クエン酸の代わりに、上述のｐＨ調整剤、すなわちアルカリ剤を用いることも採用し得る他の一態様である。但し、ヒト又は非ヒトの腸内において本実施形態のシリコン微細粒子の少なくとも水素発生能を確度高く発現させる観点から言えば、該ｐＨ調整剤と該シリコン微細粒子とが公知の腸溶性カプセル内に充填又は収容された状態で摂取されることは、好適な一態様である。
＜成型工程＞
　また、本実施形態の該シリコン微細粒子を含有する腸内細菌数低減剤は、摂取の際の剤形の適性を考慮して、市販のペレッターを用いて成型されることも採用し得る一態様である。成型後、約９０℃に加熱した乾燥機を用いて水分を除去し、篩を用いて分級することによって、固形製剤（飼料）としての腸内細菌数低減剤が製造され得る。また、該腸内細菌数低減剤が水分と接触することを防止又は抑制する観点から、該腸内細菌数低減剤が公知の不透水性の被覆材によって包装されて保管されることは好適な一態様である。加えて、該通常飼料に対する該シリコン微細粒子の割合（質量比）は、限定されない。該通常飼料を１００としたときに、代表的な該シリコン微細粒子の割合は、０．０２～７０である。
　また、本実施形態の腸内細菌数低減剤が含有するクエン酸は、純水中で該腸内細菌数低減剤を崩壊させたときの該水のｐＨ値を４以上７未満（より狭義には、６以下）にする役割を果たし得る。その結果、水含有液を酸性状態にするクエン酸によるｐＨ値の調整作用によって、該腸内細菌数低減剤が外気の水分等と接触することによる水素の発生を防止又は抑制し得る。従って、該腸内細菌数低減剤がクエン酸を含むことは、本実施形態の好適な一態様である。なお、本実施形態の該腸内細菌数低減剤がクエン酸を含まない場合であっても、本実施形態の少なくとも一部の効果が奏され得る。
　また、該シリコン微細粒子の表面の少なくとも一部は、空気又は水分に触れることによって自然に形成された、又は人為的に公知の成膜方法（過酸化水素水処理を含む）によって形成された酸化シリコン（シリコンサブオキサイドを含む）の膜を備え得る。なお、該シリコン微細粒子が水素発生能を有する限り、該酸化シリコンの膜厚は限定されない。
＜腸内細菌数の確認試験＞
　図１は、日本エスエルシー株式会社から入手したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（以下、「マウス」という。）を用いた、本実施形態の腸内細菌数低減剤（飼料）による腸内細菌数の各種の指標について確認するための実施計画（プロトコール）である。
（実施例１）
　本実施例の該確認試験においては、７週齢の正常なＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスが採用された。
　また、上述の製造方法に基づいて製造された、該通常飼料を１００としたときに該シリコン微細粒子が質量比において２．５である該腸内細菌数低減剤を、該マウスの飼料（以下、「実施例１の飼料」という）とした。
　本実施例の図１における「日数」は５日である。従って、本実施例においては、該確認試験に該マウスを使用する前の５日間に、腸内細菌数低減剤投与群の該マウスには、実施例１の飼料及び水を自由摂取させる一方、コントロール群（比較例）には、上述の通常飼料（オリエンタル酵母工業株式会社製、型番ＡＩＮ９３Ｍ）及び水を自由摂取させた。
　図２は、マウスが実施例１の飼料を摂取した場合（実施例１）の排泄物に含まれる各種の生きた腸内細菌数と、通常飼料を摂取した場合（比較例）の排泄物に含まれる各種の生きた腸内細菌数とを比較した棒グラフである。なお、腸内細菌数の測定については、本発明者らは、該マウスの排泄物中（換言すれば、便中）における細菌の数（コロニー形成単位（ＣＦＵ，colony forming unit/g (feces)）を、静置培養法を用いて培養したうえで解析した。
　図２に示すように、少なくとも本実施例の嫌気性の細菌数は、比較例の細菌数に比べて有意に減少していることが確認された。特に、本実施例の嫌気性の細菌数が比較例の該細菌数に対して１０分の１以下にまで減少していることは、特筆に値する。
＜腸内細菌の存在比率の確認試験＞
（実施例２）
　本実施例においては、好気性及び嫌気性の各腸内細菌数の増減、及び存在比率を調査するための確認試験が行われた。本実施例の図１における「日数」は７日である。従って、本実施例においては、実施例１の飼料、及び実施例１において採用した７週齢のマウスを用いて、前述の各腸内細菌数の増減、及び存在比率を調査するための確認試験が行われた。
　本実施例においては、該確認試験に該マウスを使用する前の７日間に、腸内細菌数低減剤投与群の該マウスには、実施例１の飼料及び水を自由摂取させる一方、コントロール群（比較例）には、上述の通常飼料及び水を自由摂取させた。
　図３は、マウスが本実施形態の飼料を摂取した場合（実施例２）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌の存在比率と、通常飼料を摂取した場合（比較例）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌の存在比率とを比較した円グラフである。
　なお、実施例２及び比較例における腸内細菌の存在比率は、各々の例の排泄物から回収したデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を用いて全ての細菌が有する１６ＳｒＲＮＡ遺伝子をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法により増幅した後、その増幅によって得られたＰＣＲ増幅産物に含まれる１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片の１つずつの可変領域の塩基配列を調べることによって該腸内細菌の種類を同定する方法により得られた。従って、実施例２及び該比較例における腸内細菌の存在比率（％）は、該ＰＣＲ増幅産物に含まれる１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片の総数を分母とし、該可変領域に特定の塩基配列を有する各種の腸内細菌の遺伝子断片の数を分子としたときの値に１００を乗じた数である。本願においては、前述の「１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片の総数」は、「細菌全体」と同義である。また、具体的な各腸内細菌の存在比率（％）の例は、次の表１のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　また、図４は、マウスが本実施形態の飼料を摂取した場合（実施例２）と、通常飼料を摂取した場合（比較例）との、代表的なグラム陰性菌の数及びグラム陽性菌の数の相対比を示すグラフである。加えて、図５は、上述の非特許文献２から引用された、マウスが水素水を摂取する前後の、排泄物に含まれる各種の腸内細菌の存在比率を示す円グラフ（参考資料）である。
　図３及び図４に示すように、少なくとも実施例２における細菌全体に対する嫌気性の細菌の存在比率は、比較例の細菌の存在比率よりも有意に、より積極的な表現を用いれば顕著に減少するとともに、各種の腸内細菌の存在比率が変化していることが確認された。
　大変興味深いことに、本発明者らは、実施例１を含めて図２乃至図４から、少なくとも次の２つの特徴（（ａ）及び（ｂ））を確認することができた。
　（ａ）ヒトに対して有害な細菌と言える、グラム陰性の嫌気性細菌であるBacteroidaceaeの、実施例２における数が、コントロール群（比較例）の該数に対して劇的に減少していること
　（ｂ）腸内の細菌の総数に対する、実施例２における該Bacteroidaceaeの存在比率が、比較例における該Bacteroidaceaeの存在比率よりも低いこと
　従って、本実施形態の腸内細菌数低減剤は、少なくとも図３に示されている腸内の各細菌の総数に対する嫌気性細菌（特に、グラム陰性の嫌気性細菌）の数の比率を低減させるという特徴を備えていることが確認された。
　ここで、非特許文献２において開示されている、マウスが水素水を摂取する前後の排泄物に含まれる各種の腸内細菌の存在比率を示す円グラフ（図５）を確認することにより、水素水を摂取した場合と本実施例（実施例２）との違いがより明確になる。
　具体的には、非特許文献２が開示するデータと実施例２とを比較すると、図５に示すように、嫌気性細菌（特に、グラム陰性の嫌気性細菌、さらに特徴的にはBacteroidaceae）の、腸内の細菌全体に対する存在比率が減少することに対して、水素水を摂取した場合では、嫌気性細菌の該全体に対する存在比率が増加するという、真逆とも言える興味深い知見が得られた。
　さらに、本実施例においては、該マウスの大腸を回収し、免疫組織化学染色法を用いて宿主細胞の核（DAPI）、粘液（antimouse MUC2抗体）、及び腸内細菌（真正細菌プローブEUB338）の染色を行った。
　図６は、免疫組織染色法を用いて実施例２及び比較例の各マウスの大腸組織を染色した結果を示す画像である。なお、図６「Ａ」の領域は管腔領域であり、図６「Ｂ」の領域は上皮及び粘膜固有層の領域である。また、管腔領域（「Ａ」の領域）における白点は腸内細菌を表し、上皮及び粘膜固有層の領域（「Ｂ」の領域）における白点は細胞核を表している。
　その結果、図６に示すように、マウス大腸の管腔ではＥＵＢ３３８プローブによりラベルされる腸内細菌が有意に、より積極的な表現を用いれば顕著に減少していることが明らかとなった。
　従って、図６からも、実施例１の飼料は、腸内細菌の数を顕著に低減させることが確認される。
＜腸内細菌数の確認試験（２）＞
（実施例３）
　また、抗炎症性サイトカインＩＬ－１０をコードする遺伝子を欠損させることによって腸内細菌依存的な腸管炎症を自然発症する腸炎モデル動物（以下、「腸炎モデル動物」という。）における腸内細菌数低減効果を調べるため、実施例１における日数（５日）よりも長い期間、実施例１の飼料を摂取させ続けた場合の効果を、正常動物（マウス）と腸炎モデル動物とを用いて確認する試験が行われた。本実施例の図１における「日数」は２３週（１６１日）である。従って、本実施例においては、実施例１の飼料及び実施例１において採用した７週齢のマウスを用いて、好気性及び嫌気性を含む腸内細菌数の変化を調査するための確認試験が行われた。
　本実施例においては、該確認試験に該マウスを使用する前の２３週間（１６１日間）に、腸内細菌数低減剤投与群の該マウスには、実施例１の飼料及び水を自由摂取させる一方、コントロール群（比較例）には、上述の通常飼料及び水を自由摂取させた。また、正常動物における腸内細菌数と腸炎モデル動物における腸内細菌数との比較を行うため、野生型動物（マウス）に通常飼料及び水を自由摂取させた。
　図７は、マウスが本実施例の飼料を摂取した場合（実施例３）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌数と、通常飼料を摂取した場合（比較例）の排泄物に含まれる各種の腸内細菌数とを比較した棒グラフである。なお、野生型動物の結果は、図７の参考例として示した。また、腸内細菌数の測定は、実施例１と同様に行われた。
　図７に示すように、好気性、嫌気性を問わず、２３週（１６１日）経過すると、比較例の細菌数が激増していた。一方、本実施例の細菌数は、比較例の細菌数に比べて有意に、より積極的な表現を用いれば顕著に減少していることが確認された。また、本実施例の細菌数は、野生型動物の結果である参考例とも遜色ない程度の数にまで減少していることが確認された。
　なお、実施例１とは異なり、本実施例においては、嫌気性の細菌数の大幅な減少のみならず、好気性の細菌数の大幅な減少も確認されたことは特筆に値する。従って、該腸内細菌数低減剤を摂取することにより、腸炎モデル動物において顕著に増加する好気性及び嫌気性の細菌数の低減が実現され得ることが確認された。
＜腸内細菌数低減剤による腸内細菌の付着、吸着、又は捕獲作用の確認試験＞
（実施例４）
　本実施例においては、腸内細菌数低減剤による腸内細菌の付着、吸着、又は捕獲作用の確認試験が行われた。具体的には、８週齢のマウスの盲腸内容物から回収した腸内細菌を用いて、第１の実施形態の腸内細菌数低減剤を培養液中に添加した状態で、嫌気条件下において静置培養法による２４時間の培養を行った。具体的には、細菌培養液２ｍＬ（ミリリットル）の中に該腸内細菌数低減剤０．１ｇを添加した。その後、該シリコン微細粒子の腸内細菌への付着、吸着、又は捕獲作用の確認試験が行われた。なお、該盲腸内容物から回収した腸内細菌を、該腸内細菌数低減剤を添加せずに、嫌気条件下において静置培養法による２４時間の培養を行ったものを、本実施例の比較例として採用した。
　図８は、実施例４における腸内細菌数低減剤に含まれるシリコン微細粒子と、腸内細菌とを観察した結果、及び比較例の結果を示すＳＥＭ（走査電子顕微鏡）写真である。図８においては、３枚のＳＥＭ写真の左側から順に、１万３千倍（比較例）、１万３千倍（実施例４）、及び２万倍（実施例４）に拡大されたＳＥＭ写真が示されている。なお、図８中の「Ｓ」はシリコン微細粒子を表し、図８における矢印は腸内細菌がシリコン微細粒子に付着又は吸着（別の捉え方をすれば、捕獲）している様子を表している。
　図８に示すように、腸内細菌が、シリコン微細粒子の表面に直接的に、及び／又は該シリコン微細粒子の表面に形成された酸化膜を介して該シリコン微細粒子の表面に間接的に、付着、吸着、又は捕獲し得るという大変興味深い事実が確認された。
　従って、腸内細菌の付着、吸着、又は捕獲という、シリコン微細粒子が発現し得る水素発生能とは異なる作用が確認されたことは、例えば非特許文献１の開示する技術内容によっては説明することができなかった特有の作用を該シリコン微細粒子が備えていることを示している。
　さらに詳しく調べると、図８におけるアステリスクに示すように、本実施例における腸内細菌の一部において、細胞膜に孔（pore formation）が認められた。図９は、本実施例における腸内細菌数低減剤に含まれるシリコン微細粒子と、腸内細菌とを観察した結果を示す、４万５千倍に拡大されたＳＥＭ写真である。図の矢印が示す箇所が細胞膜の孔であると考えられる。従って、一部の抗菌ペプチドにおいても見られるような誘導現象が、該抗菌ペプチドとは無関係の第１の実施形態の腸内細菌数低減剤を用いた場合でも確認されたことにより、該腸内細菌数低減剤による細菌の細胞膜破壊も、腸内細菌数低減効果に寄与し得ると考えられる。従って、シリコン微細粒子による腸内細菌の吸着作用、付着作用、又は捕獲作用が、細胞膜破壊作用を生じさせ得ることが確認された。
＜腸内細菌数低減剤による腸内細菌の付着、吸着、又は捕獲作用の追加確認試験＞
（実施例５）
　上述の実施例４において確認された、細菌培養液を用いた腸内細菌数低減剤の作用効果の分析結果に加えて、本発明者らは、実施例４の８週齢のマウスの生体内における腸内細菌数低減剤の作用効果を確認した。
　具体的には、まず、第１の実施形態における第１分級工程、粉砕工程、及び第２分級工程を経た、生理学的に許容可能な粘着剤又は増粘剤等を含むシリコン微細粒子（腸内細菌数低減剤）を、生理食塩水中に１５０ｍｇ／ｍＬの割合で含有させる。その後、４度に分けて、ほぼ同じ時間間隔、同じ量により、計１６００μＬを強制的に該マウスに投与した。
　該シリコン微細粒子の最初の投与から２６時間経過後であり、最後の投与から１４時間経過後に、該マウスの盲腸の内容物を取り出した後、シリコン微細粒子と、腸内細菌とを走査電子顕微鏡を用いて観察した。
　図１０は、本実施例における盲腸内の腸内細菌を観察した結果を示す、４万倍に拡大された一つのＳＥＭ写真である。また、図１１は、本実施例における盲腸内の腸内細菌を観察した結果を示す、３万５千倍に拡大されたもう一つのＳＥＭ写真である。
　図１０及び図１１の各矢印に示すように、腸内細菌の一部に、細胞膜の孔と考えられる形状が形成されていることが分かった。従って、生体内においても、腸内細菌数低減剤としての役割を担う該シリコン微細粒子が、腸内細菌の細胞膜の破壊を生じさせ得ることが改めて確認された。従って、シリコン微細粒子による腸内細菌の吸着作用、付着作用、又は捕獲作用が、細胞膜破壊作用を生じさせ得ることが改めて確認された。
＜その他の実施形態＞
　ところで、本実施形態の腸内細菌数低減剤においては、上述のとおり、通常飼料、シリコン微細粒子、及びクエン酸が混錬された固形製剤が採用されているが、本実施形態の腸内細菌数低減剤は、そのような態様に限定されない。例えば、前述のクエン酸の代わりに糖類又はデンプンを用いた固形製剤は、本実施形態において採用し得る他の一態様である。また、他の態様の例として、経口摂取による摂取が可能な種々の公知の剤形が、腸内細菌数低減剤を摂取する個体（生体）の条件に応じて適宜採用され得る。
　上述の剤形の一例は、本実施形態のシリコン微細粒子を充填又は収容した公知のゼラチン成分等からなるカプセル剤である。なお、該カプセル剤は、公知の腸溶性カプセルを用いることも好適な一態様である。また、他の該剤形の一例は、公知の腸溶性の酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はフタル酸ポリ酢酸ビニル等からなるフィルム、あるいは公知の糖類からなるフィルムによってシリコン微細粒子を覆うフィルムコーティング錠剤である。なお、該フィルムコーティング錠剤として公知の胃難溶性腸溶性コーティング剤を採用することは、好適な一態様である。また、その他の該剤形の例として、顆粒剤、散剤、シロップ剤（ドライシロップ剤）、又はゼリー剤を採用することができる。
　また、本実施形態の腸内細菌数低減剤においては、上述の通常飼料を１００としたときの上述のシリコン微細粒子が混合される割合が、質量比において２．５であったが、該シリコン微細粒子が混合される割合はこの数値に限定されない。例えば、上述のとおり、カプセル剤又はフィルムコーティング錠剤を剤形として採用した場合は、本実施形態の腸内細菌数低減剤は該通常飼料を要しない。
　以上述べたとおり、上述の各実施形態及び各実施例の開示は、該実施形態及び該実施例の説明のために記載したものであって、本発明を限定するために記載したものではない。加えて、該実施形態及び該実施例の他の組合せを含む本発明の範囲内に存在する他の変形例もまた、特許請求の範囲に含まれるものである。
　本発明の腸内細菌数低減剤は、腸内環境を整えるための薬剤、食品又は飲料、あるいは腸内細菌の異常が関連する各種の疾患のための薬剤の少なくとも一部として広く利用され得る。

Claims (7)

  1. 　シリコン粒子又はシリコン微細粒子を含有し、
    　腸内の細菌の数を低減させる低減剤である、
    　腸内細菌数低減剤。
  2. 　前記細菌が、嫌気性細菌を含む、
    　請求項１に記載の腸内細菌数低減剤。
  3. 　ＰＣＲ法を用いて１６ＳｒＲＮＡ遺伝子を増幅することにより得られたＰＣＲ増幅産物に含まれる１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片の総数に対する、嫌気性細菌の前記１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片の数の比率を低減させる、
    　請求項１に記載の腸内細菌数低減剤。
  4. 　前記嫌気性細菌が、グラム陰性の嫌気性細菌である、
    　請求項２又は請求項３に記載の腸内細菌数低減剤。
  5. 　前記嫌気性細菌が、バクテロイデス科（Bacteroidaceae）を含む、
    　請求項２乃至請求項４のいずれか１項に記載の腸内細菌数低減剤。
  6. 　請求項１乃至請求項５のいずれか１項に記載の腸内細菌数低減剤を含有する、
    　前記腸内の前記細菌の数を低減するための医薬品。
  7. 　請求項１乃至請求項５のいずれか１項に記載の腸内細菌数低減剤を含有する、
    　前記腸内の前記細菌の数を低減するための食品又は飲料。
PCT/JP2022/001299 2021-03-24 2022-01-17 腸内細菌数低減剤 Ceased WO2022201775A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP22773397.9A EP4316496A4 (en) 2021-03-24 2022-01-17 AGENTS FOR REDUCING THE NUMBER OF INTESTINAL BACTERIA
US18/550,844 US20240189345A1 (en) 2021-03-24 2022-01-17 Intestinal bacteria reducing agent
JP2023508670A JPWO2022201775A1 (ja) 2021-03-24 2022-01-17
CN202280022172.1A CN116997344A (zh) 2021-03-24 2022-01-17 肠内细菌数降低剂

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021-050445 2021-03-24
JP2021050445 2021-03-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022201775A1 true WO2022201775A1 (ja) 2022-09-29

Family

ID=83396779

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2022/001299 Ceased WO2022201775A1 (ja) 2021-03-24 2022-01-17 腸内細菌数低減剤

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20240189345A1 (ja)
EP (1) EP4316496A4 (ja)
JP (1) JPWO2022201775A1 (ja)
CN (1) CN116997344A (ja)
WO (1) WO2022201775A1 (ja)

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2214826C2 (ru) * 1999-07-27 2003-10-27 Семенова Надежда Алексеевна Способ комплексного оздоровления организма человека
WO2019021769A1 (ja) 2017-07-27 2019-01-31 国立大学法人大阪大学 薬剤及びその製造方法
JP2019214556A (ja) 2018-06-07 2019-12-19 国立大学法人大阪大学 酸化ストレスに起因する疾患の予防又は治療剤
JP2020007300A (ja) 2018-07-02 2020-01-16 国立大学法人大阪大学 うつ病又はうつ状態の予防又は治療剤
JP2020079228A (ja) 2018-11-13 2020-05-28 国立大学法人大阪大学 二日酔いの予防又は治療剤
JP2020079240A (ja) 2018-11-13 2020-05-28 国立大学法人大阪大学 パーキンソン病の予防又は治療剤
JP2020117483A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 内臓不快感の予防又は治療剤
JP2020117484A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 脊髄損傷後の障害もしくは症状の予防又は治療剤
JP2020117485A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 糖尿病の予防又は治療剤
JP2020117482A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 関節炎の予防又は治療剤
JP2020117480A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 記憶障害の予防又は治療剤
JP2020117486A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 難聴の予防又は治療剤
JP2020117481A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 自閉スペクトラム症の予防又は治療剤

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0515353D0 (en) * 2005-07-27 2005-08-31 Psimedica Ltd Food
GB0805279D0 (en) * 2008-03-20 2008-04-30 Univ Nottingham Trent Food supplement
US10398745B2 (en) * 2016-01-26 2019-09-03 Fujifilm Corporation Agent for reducing the number of intestinal bacteria, food, and pharmaceutical product
JP6467071B2 (ja) * 2016-01-29 2019-02-06 小林　光 固形製剤、固形製剤の製造方法及び水素発生方法
CN110191699A (zh) * 2016-08-23 2019-08-30 小林光 氢供给材料与其制造方法、及氢供给方法
US11707063B2 (en) * 2016-08-23 2023-07-25 Bosquet Silicon Corp. Compound, production method therefor, and hydrogen supply method
JP7325106B2 (ja) * 2018-02-09 2023-08-14 Ｎｏｓｔｅｒ株式会社 リポ多糖制御性腸内細菌及びその用途
WO2019211960A1 (ja) * 2018-04-29 2019-11-07 株式会社Ｋｉｔ 複合組成物

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2214826C2 (ru) * 1999-07-27 2003-10-27 Семенова Надежда Алексеевна Способ комплексного оздоровления организма человека
WO2019021769A1 (ja) 2017-07-27 2019-01-31 国立大学法人大阪大学 薬剤及びその製造方法
JP2019214556A (ja) 2018-06-07 2019-12-19 国立大学法人大阪大学 酸化ストレスに起因する疾患の予防又は治療剤
JP2020007300A (ja) 2018-07-02 2020-01-16 国立大学法人大阪大学 うつ病又はうつ状態の予防又は治療剤
JP2020079228A (ja) 2018-11-13 2020-05-28 国立大学法人大阪大学 二日酔いの予防又は治療剤
JP2020079240A (ja) 2018-11-13 2020-05-28 国立大学法人大阪大学 パーキンソン病の予防又は治療剤
JP2020117483A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 内臓不快感の予防又は治療剤
JP2020117484A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 脊髄損傷後の障害もしくは症状の予防又は治療剤
JP2020117485A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 糖尿病の予防又は治療剤
JP2020117482A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 関節炎の予防又は治療剤
JP2020117480A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 記憶障害の予防又は治療剤
JP2020117486A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 難聴の予防又は治療剤
JP2020117481A (ja) 2019-01-24 2020-08-06 国立大学法人大阪大学 自閉スペクトラム症の予防又は治療剤

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANDOH, FACTORS INFLUENCING THE GUT MICROBIOTA STRUCTURE, MODERN MEDIA, vol. 65, 2019, pages 72 - 79
BREDECK GERRIT, KÄMPFER ANGELA A. M., SOFRANKO ADRIANA, WAHLE TINA, LISON DOMINIQUE, AMBROISE JÉRÔME, STAHLMECKE BURKHARD, ALBRECH: "Effects of dietary exposure to the engineered nanomaterials CeO 2 , SiO 2 , Ag, and TiO 2 on the murine gut microbiome", NANOTOXICOLOGY, INFORMA HEALTHCARE, GB, GB , pages 1 - 17, XP055971011, ISSN: 1743-5390, DOI: 10.1080/17435390.2021.1940339 *
LESTARI SRI UTAMI, ANDRIAN ANDI, MUSTAFINA A S, RAKHMATULLIN S G, SIZOVA Е А: "IOP Conference Series: Earth and Environmental Science Improving the efficiency of poultry meat production by feeding ultrafine silicon You may also like Effects of Urin Cow Dosage on Growth and Production of Sorgum Plant (Sorghum Bicolor L) on Peat Land Improving the efficiency of poultry meat prod", EARTH ENVIRON. SCI. SERIES: EARTH AND ENVIRONMENTAL SCIENCE, IOP PUBLISHING, 7 January 2021 (2021-01-07), pages 12039, XP055971007, Retrieved from the Internet <URL:https://iopscience.iop.org/article/10.1088/1755-1315/624/1/012039/pdf> [retrieved on 20221013] *
MITSUNORI IKEDA ET AL.: "Hydrogen-Rich Saline Regulates Intestinal Barrier Dysfunction, Dysbiosis, and Bacterial Translocation in a Murine Model of Sepsis", SHOCK, vol. 50, no. 6, 2018, pages 640 - 647
RUDENKO PAVEL, VATNIKOV YURY, KULIKOV EVGENY, SACHIVKINA NADEZHDA, RUDENKO ANDREI, RUDENKO VICTORIA, GADZHIKURBANOV ANVAR, MURYLEV: "Experimental and Clinical Justification of the use of Probiotic-Sorption Drugs in Veterinary Surgery", SYSTEMATIC REVIEWS IN PHARMACY, vol. 11, no. 04, 1 June 2020 (2020-06-01), XP055971009, ISSN: 0976-2779, DOI: 10.31838/srp.2020.4.40 *
See also references of EP4316496A4

Also Published As

Publication number Publication date
EP4316496A1 (en) 2024-02-07
CN116997344A (zh) 2023-11-03
JPWO2022201775A1 (ja) 2022-09-29
US20240189345A1 (en) 2024-06-13
EP4316496A4 (en) 2024-09-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230048705A1 (en) Use of probiotics in the treatment and/or prevention of atopic dermatitis
CN102711778B (zh) 利用动物双歧杆菌细菌或含有这种细菌的发酵乳制品减轻胃肠炎症的方法
CN115551990B (zh) 瑞士乳杆菌菌株及含有其的用于预防或治疗炎性疾病的组合物
KR20210003138A (ko) 내습성 프로바이오틱 과립 및 그의 제조 방법
WO2010114425A2 (ru) Фармацевтическая композиция ингибитора протонной помпы и пребиотика для лечения язвенных поражений желудка и 12- перстной кишки
KR20240093392A (ko) 질병 치료를 위한 조성물 및 방법
WO2022201775A1 (ja) 腸内細菌数低減剤
EP3316892B1 (en) Novel dosage regimen of tiacumicin compound
TWI721549B (zh) 戈氏副擬桿菌用於治療慢性腎臟疾病之用途
JP2024539315A (ja) 腸内マイクロバイオーム調節のためのプロバイオティクス組成物
US11406674B2 (en) Composition comprising new Lactobacillus salivarius strains and method for the prevention and treatment of otitis and upper respiratory infections
CN117460515A (zh) 包含半乳糖的用于改善肠道微生物种群的组合物
JP7740652B2 (ja) 腸溶性固形製剤
Nie et al. A rational probiotics combination improves oral health in animal model
US20230149445A1 (en) Oxidative stress inhibitor and antioxidant agent
CN119745924A (zh) 氨基酸衍生的碳点在制备治疗肝损伤和/或肠道屏障损伤药物中的应用
WO2024209109A1 (en) Nutraceutical compositions for the treatment or prevention of trimethylaminuria
HK40009064B (en) Use of probiotics in the treatment and/or prevention of atopic dermatitis
HK40009064A (en) Use of probiotics in the treatment and/or prevention of atopic dermatitis
OA19179A (en) Use of probiotics in the treatment and/or prevention of atopic dermatitis.
BE498597A (ja)
JP2002241291A (ja) 抗生剤耐性菌感染予防治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22773397

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2023508670

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 18550844

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202280022172.1

Country of ref document: CN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2022773397

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022773397

Country of ref document: EP

Effective date: 20231024