[go: up one dir, main page]

WO2022117493A1 - Puce de détection pcr, appareil de test associé et système d'analyse de mise en œuvre - Google Patents

Puce de détection pcr, appareil de test associé et système d'analyse de mise en œuvre Download PDF

Info

Publication number
WO2022117493A1
WO2022117493A1 PCT/EP2021/083320 EP2021083320W WO2022117493A1 WO 2022117493 A1 WO2022117493 A1 WO 2022117493A1 EP 2021083320 W EP2021083320 W EP 2021083320W WO 2022117493 A1 WO2022117493 A1 WO 2022117493A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
chip
sample
wall
chamber
block
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2021/083320
Other languages
English (en)
Inventor
Maël LE BERRE
Claire LEBOUTEILLER
Bilal HADJI
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bforcure
Original Assignee
Bforcure
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bforcure filed Critical Bforcure
Priority to US18/039,707 priority Critical patent/US20240033730A1/en
Priority to CN202180080310.7A priority patent/CN116528981A/zh
Priority to EP21811104.5A priority patent/EP4255629A1/fr
Publication of WO2022117493A1 publication Critical patent/WO2022117493A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502715—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by interfacing components, e.g. fluidic, electrical, optical or mechanical interfaces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
    • B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/02—Adapting objects or devices to another
    • B01L2200/025—Align devices or objects to ensure defined positions relative to each other
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/18—Transport of container or devices
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/02—Identification, exchange or storage of information
    • B01L2300/021—Identification, e.g. bar codes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0609—Holders integrated in container to position an object
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
    • B01L2300/0654—Lenses; Optical fibres
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0822—Slides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0848—Specific forms of parts of containers
    • B01L2300/0854—Double walls
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/0877—Flow chambers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/16—Surface properties and coatings
    • B01L2300/168—Specific optical properties, e.g. reflective coatings
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/18—Means for temperature control
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
    • B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics
    • B01L2400/049—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics vacuum
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N2021/6482—Sample cells, cuvettes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G01N21/03—Cuvette constructions
    • G01N21/0332—Cuvette constructions with temperature control
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6408—Fluorescence; Phosphorescence with measurement of decay time, time resolved fluorescence

Definitions

  • TITLE PCR detection chip, associated test device and implementation analysis system
  • the invention relates to a microfluidic sample chip for testing biological samples, in particular for a PCR and/or fluorescence type analysis, associated test apparatus as well as a biological sample analysis system using such a chip.
  • the PCR reaction is generally implemented in a disposable container because at the end of the reaction, the large-scale amplification of the DNA target to be detected contaminates the surface of the container with the target to be amplified, which prevents its reuse.
  • the PCR reaction containers are therefore so-called consumable containers.
  • a specific implementation of PCR is real-time PCR where DNA amplification is measured during the reaction by a fluorescence signal from a probe whose fluorescence depends on the progress of the amplification reaction.
  • an important issue of rapid cycling technologies is the design of a consumable receiving the PCR reagent which allows good thermal transmission to the sample so that the temperature of the sample quickly equilibrates with the temperature of the sample. the thermal cycling device (or thermal cycler) while ensuring optical accessibility to the sample.
  • WO 2018/1 14625 describes in particular a microfluidic sample chip containing a chamber, preferably flat and/or thin, formed between an at least partially transparent face and a heat-conducting face, for example made of aluminium, the transparent side allowing the PCR reaction to be monitored using an optical means, for example a fluorescence probe, while allowing a very rapid variation in the temperature of the sample thanks to its heat-conducting side.
  • This chip can be used for example in combination with a microfluidic temperature control system as described in this application WO2018/1 14625, making it possible to very quickly modify the temperature of the sample between its two extreme values typical of PCR technology , in a time of the order of a second.
  • the object of the present invention is to make the structure and the use of the chip described in WO 2018/1 14625 even simpler, more reliable and more efficient so as in particular to facilitate its industrialization, and in particular to meet even better to current needs for rapid diagnostic orientation tests or to respond in emergency contexts which require the ability to perform reactions such as PCR in a few minutes.
  • the invention relates to a system for testing a microfluidic sample chip for the PCR-type test of biological samples, this chip having the shape of a preferably parallelepiped block comprising at least one hollow chamber for receiving a sample, delimited in particular by a first wall (or lower wall) made of a material with high thermal conductivity, preferably metallic, and a second wall (or upper wall) made at least partially of a transparent material, this block having at least two openings allowing the introduction of the sample into at least one of the chambers and the evacuation of the atmosphere present in the chamber during the introduction of the sample, the first and second walls being parallel to each other, the chip further comprising a tab, preferably at least partially opaque and/or rigid or semi-rigid, arranged in the extension and preferably in the same plane as the walls s, the chip also comprising a sealing device, arranged in contact with the second wall or upper wall, characterized in that it comprises a side wall provided with an opening allowing the passage of the chip towards thermalization means, complementary foolproofing means
  • the chip test system according to the invention will include fluorescence imaging means.
  • the test system according to the invention has the shape of a rectangular lamella preferably comprising near one of its ends an opening surrounded by a frame preferably one of which at least of the sides is opaque, in particular the side of the frame which is on the side of the tongue, opening in which is housed on one side a plate of material with high conductivity, preferably metal, forming the first wall and the on the other side the means for holding the chip forming the second wall, the plate of high conductivity material, the block of transparent material and the frame forming the active part of the chip.
  • the system according to the invention will include keying means consisting of a notch located on the chip, preferably located on the tab.
  • the chamber has grooves to facilitate the flow of the sample in the chamber.
  • the system according to the invention will comprise an adhesive sealing film located on the side of the block secured to the tongue, extending in the direction of the opening without being secured to the block, the latter comprising at least two openings communicating with the chamber, said sealing film being designed to adhere to said block and seal the openings after filling the chamber with the sample.
  • the system according to the invention will comprise a protective film which can be removed before use of the chip, this film being placed on the openings of the transparent block so as to avoid any contamination of the front chamber introduction of the sample.
  • the system according to the invention will comprise an identification label at the tongue.
  • the second wall has a groove arranged at its periphery on the side of the chamber in which an adhesive is arranged to firmly secure the second wall to the first wall.
  • the system according to the invention will comprise at least four chambers arranged side by side and forming a square.
  • it will include an opaque wall placed between each of the rooms to reduce light transmission between the different rooms and with the outside environment.
  • the tab will be at least partially opaque in order to prevent the passage of external light to the sample once the chip has been inserted into the associated test device.
  • the tab will preferably be rigid or semi-rigid, arranged in the extension and preferably in the same plane as the walls.
  • the chip according to the invention comprises a sealing means integral with the chip, arranged in contact with the upper wall in order to confine the sample inside the chamber or chambers once it inserted into the chip, which makes it possible to avoid any contamination of the environment by leakage of the sample.
  • the sealing device integral with the chip will preferably be a sealing film.
  • the sealing film will preferably be placed at least on each of the openings so as to avoid any contamination from the outside by the sample to be analyzed and therefore to avoid distorting the following results.
  • This sealing film can be prepositioned on the plate during the manufacturing stage (see below). This sealing film makes it possible to seal the openings when the chambers have been filled with their sample to be analyzed.
  • the sealing film will preferably be self-adhesive located on the side of the block, integral with the tongue, extending in the direction of the opening without being integral with the block, the latter comprising at least two openings communicating with the chamber, said sealing film being designed to adhere to said block and seal the openings after filling the chamber with the sample.
  • the chip will also comprise a protective film.
  • the protective film can be removed before use of the chip, this film being placed on the openings of the transparent block so as to avoid any contamination of the chamber, in particular between the manufacture and the transport of the chip, an external contamination being able to distort the result of the analysis.
  • the protective film will be in contact with the upper wall of the chip and will be removed during the filling of the chamber or chambers.
  • the sealing film is immediately positioned over the openings, in a sealed manner, in order in particular to allow a rise in pressure in the chambers, as explained below.
  • the protective cover of the sealing film which acts as a protective barrier between the potentially contaminating exterior and the interior of the chamber before the chip is used.
  • the chip according to the invention has the shape of a rectangular lamella preferably comprising near one of its ends an opening surrounded by a frame preferably of which at least one of the sides is opaque, in particular the side of the tongue allowing its insertion into the associated test device, opening in which is housed on one side a plate of high conductivity material, preferably metal, forming the first wall and the other side the block forming the second wall, the plate of high conductivity material, the block (preferably made of transparent material) and the frame forming the active part of the chip.
  • the frame is opaque (or partially opaque at least on the tab side) this prevents external light from entering the chamber and causing noise in the fluorescence measurement signal.
  • the tab may have an opaque portion adjacent to the active part of the chip, of sufficient length to be visible outside the test device after introduction of the chip into the PCR analysis device.
  • the sample chip can comprise at least 2 chambers, that is to say more generally n chambers (with n being an integer greater than or equal to 2).
  • n being an integer greater than or equal to 2.
  • the sample chip according to the invention comprises keying means intended to cooperate with complementary keying means located in the test device to analyze the sample contained in the chamber in order in particular to start the Sample analysis sequence automatically when the chip is inserted into the PCR analyzer and to identify if the chip has been inserted upside down.
  • These keying means consist for example of a notch located on the chip, preferably located on the tab.
  • the rectangular slat has a notch on one of its sides having a keying function.
  • the chip may also include an identification label at the tab.
  • the latter will preferably include grooves.
  • the sample chip according to the invention will preferably include a groove arranged at its periphery on the side of the chamber in which an adhesive will be deposited.
  • the sample chip according to the invention will comprise four chambers arranged side by side and forming a square.
  • the sample chip according to the invention is a rectangular wafer of length equal to at least twice, preferably at least three times, the width of this wafer in which there is a rectangular opening (or square ) near one of its ends, thus defining a frame around the opening.
  • a window in transparent material in a transparent material compatible with the PCR such as for example polypropylene, polymers and copolymers of cycloolefins (COC, COP ) and in general amorphous polymers, in transparent material, resistant to a temperature of at least 110C, with a flat outer surface reaching the level of the surface of the wafer and the inner surface of which comprises a hollow part forming the chamber to receive the sample to be analyzed.
  • an aluminum lamella (or any other material compatible with PCR and having a suitable thermal conductivity-see below) whose thickness will preferably be comprised between 100 and 500 microns, said slat resting on the outer edges of the window made of transparent material, the window and/or the slat being provided with grooves, preferably at their periphery, making it possible to seal the window and the metal lamella, for example using a bonding means such as a glue compatible with PCR (of the silicone type or equivalent).
  • the metal strip will (slightly) protrude from the (lower) surface of the wafer to improve the thermal contact with the heating means of the test apparatus.
  • the rectangular wafer thus has a portion in the extension (preferably) of the frame, acting as a tongue for handling the chip (its active part consisting in particular of the window and the metal plate assembled using glue) and to insert and/or remove it from the test device in a simple way through a slot of complementary size to the cross section of the rectangular wafer and position it in a reproducible way in the test device.
  • foolproofing means preferably on the wafer, for example a notch on one of the sides of the strip
  • these coding means being associated with complementary means placed in the test device so as to indicate to the user that the wafer is correctly positioned in the device when the coding means engage in the complementary means (it is possible to associate sound or light means for example indicating this engagement to the user who can thus trigger the analysis of the sample (either manually or automatically).
  • These keying means can also be used to automatically detect whether the chip has been inserted upside down in the device and warn the user by means of a light or sound signal or by means of the man-machine interface.
  • the rectangular plate (which includes both the frame and the tongue) will preferably be at least partially at the level of the frame, made of an opaque material (as defined below), for example an opaque black plastic material. compatible with PCR. It has in fact been observed that this opacity, in particular at the level of the frame and in particular when the chip has several chambers, it was possible to obtain a better reading of the fluorescence by allowing better insulation of the light between the various chambers and better insulation of the external light.
  • an opaque material as defined below
  • the material(s) used must give it sufficient rigidity (rigid or semi-rigid material - see definition below) to allow its introduction into the slot. provided for this purpose in the test device.
  • the transparent material window will have at least two openings making it possible to reach the chamber into which the sample to be analyzed is introduced (preferably at each end of the chamber).
  • the chamber will include grooves to facilitate the flow of the liquid sample to be analyzed and to avoid the formation of bubbles so as to promote, during the filling of the chamber, the evacuation of the gaseous atmosphere contained therein. .
  • the openings are sealed, for example using a transparent film compatible with the PCR and with the associated fluorescence measurement, a film which preferably covers the whole of the window. .
  • This sealing film is preferably pre-positioned on the wafer during the manufacture of the chip according to the invention.
  • the tab according to another aspect of the invention can receive on one (or more) of its faces a QR Code or a bar code (or any other means of identification) making it possible to identify the chip. It is also possible, given the space available on the tab, to provide a label on which the user can note information.
  • a variant of the invention consists in providing a tongue having for example the shape of a protuberance, preferably arranged in the extension of the walls, allowing a better grip of the chip to introduce it into the test device.
  • an opaque wall will be placed between each of the chambers (for a chip with multiple chambers) making it possible to reduce the light transmission between the various chambers and with the external environment.
  • the sample test device may, according to a variant, comprise a side wall having an opening allowing the passage of the chip towards thermalization means, complementary keying means intended to cooperate with the keying means present on the chip, a block of glass which can move vertically in the direction of the chip after introduction of the latter through the opening and come to press the chip on the thermalization means on receipt of a command generated by the cooperation of keying means and complementary keying means.
  • the test device will include means for measuring fluorescence and in particular means for imaging by fluorescence arranged so as to allow the passage of light from and to the imaging means.
  • PCR compatible material means a material which does not contain PCR inhibitors, does not degrade enzymes, fluorescent probes, dNTPs, oligo nuclides and does not absorb oligonucleotides and other RNA or DNA sequences and does not release molecules that could interact with the functioning of enzymes or change the characteristics of the PCR reaction.
  • opaque material means a material whose optical transmission in the visible range in particular, i.e. between 300 nm and 800 nm, is less than 20%, preferably less than 1%, for a thickness of material one millimeter.
  • transparent material means a material whose optical transmission in the visible range, in particular, is greater than 80%.
  • high thermal conductivity material means a material whose thermal conductivity is greater than 15 wm-1 .K-1 .
  • rigid or semi-rigid material means a material whose Young's modulus is greater than 10 MPa.
  • test device test device
  • sample test device PCR analysis device
  • FIG. 1 Figure 1, a top view of the sample chip according to the invention.
  • FIG. 2 Figure 2, a bottom view of the sample chip from Figure 1.
  • FIG. 3 Figure 3, a sectional view of the active part of the chip along the axis A-A of Figure 1.
  • FIG. 4 Figure 4, a sectional view of the active part of the chip along the B-B axis of Figure 1.
  • FIG. 5 Figure 5, a schematic view of the chip in combination with the test device.
  • FIG. 6 Figure 6 an exploded view of the chip according to the invention before bonding of the elements of the active part of the chip.
  • FIG. 7 Figure 7, the different steps of bonding the window and the metal part to make the active part of the chip.
  • Figure 8 is a schematic top and bottom view of a multi-chamber sample chip, without the metal pad.
  • FIG. 9 Figure 9, a sectional view of the multi-chamber chip of Figure 8 along the C-C axis in this figure.
  • FIG. 10 curves representing the fluorescence signal of different samples (RFU on the ordinate) as a function of the number of cycles (on the abscissa).
  • FIG.1 1 Figure 11, the various stages of removal and bonding of the protective and sealing films.
  • FIG. 1 the sample chip according to the invention is shown according to a preferred embodiment in the form of a rectangular wafer 10.
  • This parallelepiped-shaped wafer 10 made of opaque material has a length approximately five times its width on the figure (preferably between 50x10mm (and a thickness of at least 1mm) and 200x100mm (and a thickness of at most 10mm)). It is provided in its active part 13, (left part of the figure) with a substantially square opening 16 (see FIG. 6) surrounded by an opaque frame 1 in which is housed a transparent window 2. This is provided with two openings 5 located on a diagonal of the window 2 and communicating with the chamber 4 (see FIGS.
  • the tongue 9 provided on one of its sides with a notch 8 serving as foolproofing means during the introduction of the rectangular plate 10 in the test device, not shown in the figure.
  • a metal plate 3 is housed in the opening 16, thus closing the active part 13 of the sample chip. This metal plate 3, in the extension of the tongue 9, will be slightly raised (above) relative to the tongue 9 in order to achieve good thermal and mechanical contact with the thermalization element 21 (figure 5).
  • FIG. 3 shows a sectional view along the axis AA (diagonal of the active part 13) defined by the two openings 5 (or injection holes).
  • the transparent window 2 rests using its peripheral end 17 on a flange 18 integral with the frame 1, leaving a groove 7 into which an adhesive (silicone or other) will be injected all around the window 2 making it possible to fix sealingly the metal plate 3 to the window 2 and to the frame 1 .
  • the metal plate 3 thus delimits the chamber 4 into which the sample is introduced through the injection holes 5.
  • a sealing film 6 covers the openings 5 either as a seal to seal the openings 5 after injection of the sample to be analyzed in chamber 4.
  • FIG. 4 represents a view in section along the axis BB of the active part of the sample chip. In the chamber 4 are represented several grooves 12 which facilitate the circulation of the liquid sample as well as its distribution in the chamber.
  • Figure 6 shows an exploded view of the sample chip of Figure 1, before the assembly of the window 2 and the metal plate 3 inside the opening 16 in the rectangular wafer 10.
  • Figure 7 illustrates the assembly of the window 2 and the metal plate 3.
  • the semi-liquid adhesive 14 such as a silicone or other material compatible with PCR
  • the metal plate 3 (FIG. 7c) is applied to the window 2 so as to seal the chamber 4 thus created.
  • the adhesive is polymerized (hardened) using a suitable UV 15 source.
  • the sample chip being thus prepared, it is possible to introduce the sample to be analyzed into the chip, then seal the openings 5 with the aid of an adhesive PCR film and proceed with the analysis of the sample as shown in the figure. figure 5.
  • test device left part of Figure 5 (inside).
  • This comprises holding means, for example, a mobile transparent block 20 (preferably made of glass) through which the fluorescence measurement can be made and a sample thermalization element; (for more details on a thermalization element, reference may be made to application WC201 8/114625 in the name of the Applicant).
  • a mobile transparent block 20 preferably made of glass
  • sample thermalization element for more details on a thermalization element, reference may be made to application WC201 8/114625 in the name of the Applicant.
  • the wall 23 of the test device on the right in FIG. 5: exterior
  • the rectangular plate 10 thanks to the tongue 9, so as to bring the active part 13 of the chip above and into contact: the adequate positioning of the chip on the thermalization element 21 is achieved thanks to the keying notch 8 cooperating with complementary keying means located in the testing device.
  • the chip is handled from outside the device and its insertion does not require the device to be opened. No access panels, drawers or doors are required on the test device, hence its simplicity and speed of use.
  • the chip is inserted through a fixed slot, then removed in the same way once the detection operation is complete.
  • the correct positioning of the chip is determined by the notch on the edge of the chip. Once in position, it engages a contactor (not shown in Figure 5) which allows the locking of the system.
  • the holding and thermalization means form in this variant a mobile jaw which makes it possible to hold the chip in position, it is composed of: a glass block mounted on a motorized platform allowing its vertical movement for the upper part, a thermalization element (metallic for example), allowing rapid temperature change during PCR thermal cycles for the lower part.
  • a thermalization element metallic for example
  • the pressure applied to the chip is preferably between 100g and 10kg (ideally distributed evenly over the entire surface of the chamber),
  • the jaw opens automatically (under the control of an automaton programmed for this purpose, in a manner known per se) releasing the chip, which can be removed by the user (FIG. 5c) .
  • the locked position under pressure (FIG. 5b) makes it possible to ensure maximum contact between the metal plate of the chip and the thermalization element, on the one hand, and to prevent the boiling of the sample liquid contained in the chip when the temperature is around 100°C on the other hand. But it also makes it possible to avoid any leakage of PCR products into the device which could contaminate it.
  • FIG. 8 represents a variant embodiment of the invention in which the chip according to the invention comprises 4 chambers, each being provided on one side with a metal surface for the rapid transfer of heat via the thermalizing element and on the other a transparent window to allow the excitation and the optical detection of the fluorophores. Each chamber can receive a different sample to be analyzed.
  • a protective film is positioned on the window, covering the injection holes, in order to avoid contamination of the chamber during transport of the chip. This film is removed and discarded just before injecting the sample into the chip.
  • the sealing film 6 sticker cut to size, is prepositioned on the tab of the chip. Only part of the sealing film is stuck on the tab, the other part, covering the window, remains protected by the protective cap until the sample is injected. Thus, the user can easily remove the protective cap and stick the sealing film to obstruct the injection holes after the insertion of the sample in the chamber, without having to worry about positioning the film correctly or cut.
  • FIG. 11 describes the variant of the configuration with two films: the sealing film 6 and the protective film 27.
  • the protective film 27, making it possible to avoid contamination of the chamber before its use , during transport for example, is removed before inserting the sample into the chip, fig 11a.
  • the protective cover 26 of the sealing film 6 is removed at the time of sealing the chip, after injection of the sample and, in FIG. 11b, the sealing film 6 is folded over the upper wall of the chip in order to hermetically cover the openings used to fill the chip, fig 1 1 c.
  • a label presenting a QR code makes it possible to automatically reference each of the chips, which makes it possible to have patient monitoring and a connection with the Laboratory Information Management System (LIMS) of the hospitals for medical applications.
  • the label can also present information concerning the volume and the number of chambers available on the chip.
  • FIG. 9 is a sectional view of the chip of Figure 8 along the (diagonal) axis CC. As before the grooves 7 must be filled with glue to fix and seal the assembly.
  • FIG. 10 represents the RFU fluorescence signal as a function of the number of cycles to which the samples are subjected.
  • the TARGET 1 and TARGET 2 curves correspond to two DNA targets of the SARS-COV-2 coronavirus while the CTRL curve corresponds to the internal control.
  • the amplification is clearly detectable from the 35th cycle, which corresponds to rapid detection in less than 20 minutes.
  • Such a structure of the chip with its sealing film, its tab and its keying system makes it possible in particular to introduce the chip into the test device through the slot 22 without having to open the device.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Optical Measuring Cells (AREA)

Abstract

Système de test d'une puce échantillon micro fluidique pour le test d'échantillons biologiques, notamment pour une analyse de type PCR et/ou de fluorescence, ayant la forme d'un bloc creux comportant au moins une chambre délimitée par une paroi supérieure une paroi inférieure, dans laquelle peut être introduit un échantillon à tester, associée à des moyens de thermalisation et des moyens de mesure par fluorescence. Selon l'invention, le système comporte en outre une languette de préférence opaque et/ou rigide ou semi rigide, disposée dans le prolongement et de préférence dans le même plan que les parois.

Description

DESCRIPTION
TITRE : Puce de détection PCR, appareil de test associé et système d’analyse de mise en œuvre
[0001] L’invention concerne une puce échantillon micro fluidique pour le test d’échantillons biologiques, notamment pour une analyse de type PCR et/ou de fluorescence, appareil de test associé ainsi qu’un système d’analyse d’échantillons biologiques utilisant une telle puce.
[0002] Pour réaliser une réaction de PCR (Polymerase Chain Reaction en anglais) en temps réel rapide, il est nécessaire de modifier le plus rapidement possible la température de l’échantillon mélangé à son réactif tout en mesurant de préférence sa fluorescence, (ci-après le « cyclage » rapide de l’échantillon). Un procédé et un dispositif de ce type sont décrits par exemple dans la demande de brevet WO201 1/138748.
[0003] La réaction de PCR est généralement mise en œuvre dans un récipient jetable car à l’issue de la réaction, l’amplification à grande échelle de la cible ADN à détecter contamine la surface du récipient avec la cible à amplifier ce qui empêche sa réutilisation. Les récipients des réactions de PCR sont donc des récipients dits consommables.
[0004] Ces consommables de PCR doivent pouvoir être manipulés et insérés dans l’appareil de test des échantillons de manière simple, évidente et rapide pour en faciliter l’usage, notamment dans un contexte où l’efficacité opérationnelle est importante.
[0005] Une mise en œuvre spécifique de la PCR est la PCR en temps réel où l’amplification de l’ADN est mesurée au cours de la réaction par un signal de fluorescence issu d’une sonde dont la fluorescence dépend de l’avancement de la réaction d’amplification. Dans ce cas, un enjeu important des technologies de cyclage rapide est la conception d’un consommable recevant le réactif de PCR qui permette une bonne transmission thermique à l’échantillon afin que la température de l’échantillon s’équilibre rapidement avec la température de l’appareil de cyclage thermique (ou cycleur thermique) tout en assurant l’accessibilité optique à l’échantillon. [0006] WO 2018/1 14625 décrit notamment une puce échantillon micro fluidique contenant une chambre , de préférence plate et/ou de faible épaisseur formée entre une face au moins partiellement transparente et une face conductrice de la chaleur, par exemple en aluminium, la face transparente permettant de suivre la réaction de PCR à l’aide d’un moyen optique par exemple une sonde de fluorescence, tout en permettant une variation très rapide de la température de l’échantillon grâce à sa face conductrice de chaleur. Cette puce peut être utilisée par exemple en combinaison avec un système de contrôle de température micro fluidique tel que décrit dans cette demande WO2018/1 14625, permettant de modifier très rapidement la température de l’échantillon entre ses deux valeurs extrêmes typiques de la technologie PCR, en un temps de l’ordre de la seconde.
[0007] L’objet de la présente invention est de rendre la structure et l’utilisation de la puce décrite dans WO 2018/1 14625 encore plus simple, plus fiable et plus efficace de manière notamment à faciliter son industrialisation, et notamment de répondre encore mieux aux besoins actuels de tests rapides d’orientation du diagnostic ou de répondre dans les contextes d’urgence qui nécessitent de pouvoir réaliser des réactions telles que la PCR en quelques minutes.
[0008] L’invention concerne un système de test d’une puce échantillon micro fluidique pour le test de type PCR d’échantillons biologiques, cette puce ayant la forme d’un bloc de préférence parallélépipédique comportant au moins une chambre creuse pour recevoir un échantillon, délimitée notamment par une première paroi (ou paroi inférieure) constituée d’un matériau à forte conductivité thermique, de préférence métallique et une seconde paroi (ou paroi supérieure) constituée au moins partiellement d’un matériau transparent, ce bloc possédant au moins deux ouvertures permettant l’introduction de l’échantillon dans l’une au moins des chambres et l’évacuation de l’atmosphère présente dans la chambre lors de l’introduction de l’échantillon, les première et deuxième parois étant parallèles entre elles, la puce comportant en outre une languette de préférence au moins partiellement opaque et/ou rigide ou semi rigide, disposée dans le prolongement et de préférence dans le même plan que les parois, la puce comportant également un dispositif de scellement, disposé au contact de la seconde paroi ou paroi supérieure, caractérisé en ce qu’il comporte une paroi latérale munie d’une ouverture permettant le passage de la puce vers des moyens de thermalisation, des moyens de détrompage complémentaires destinés à coopérer avec des moyens de détrompage présents sur la puce, des moyens de maintien de la puce au contact des moyens de thermalisation après introduction de celle-ci à travers l’ouverture qui viennent maintenir la puce au contact des moyens de thermalisation, contact de préférence engendré par la coopération de moyens de détrompage situés sur la puce et des moyens de détrompage complémentaires, afin notamment de démarrer la séquence d’analyse de l’échantillon, ce système comportant en outre des moyens de mesure de la fluorescence de I’ échantillon.
[0009] Selon un mode préférentiel, le système de test d’une puce selon l’invention, comportera des moyens d’imagerie par fluorescence.
[0010] Selon un mode de réalisation, le système de test selon l’invention a la forme d’une lamelle rectangulaire comportant de préférence à proximité de l’une de ses extrémités une ouverture entourée d’un cadre de préférence dont l’un au moins des cotés est opaque, notamment le coté du cadre qui est du côté de la languette, ouverture dans laquelle vient se loger d’un côté une plaque de matériau à forte conductivité, de préférence en métal, formant la première paroi et de l’autre côté les moyens de maintien de la puce formant la seconde paroi, la plaque de matériau à forte conductivité, le bloc de matériau transparent et le cadre formant la partie active de la puce.
[0011] Selon un mode préférentiel de réalisation, le système selon l’invention comportera des moyens de détrompage constitués par une encoche située sur la puce, de préférence située sur la languette.
[0012] Selon un mode de réalisation, la chambre comporte des rainures pour faciliter l’écoulement de l’échantillon dans la chambre.
[0013] Selon un mode préférentiel de réalisation, le système selon l’invention comportera un film de scellement adhésif situé du côté du bloc solidaire de la languette, se prolongeant en direction de l’ouverture sans être solidaire du bloc, celui-ci comportant au moins deux ouvertures communiquant avec la chambre, ledit film de scellement étant conçu pour adhérer audit bloc et fermer les ouvertures de façon étanche après remplissage de la chambre avec l’échantillon.
[0014] Selon un mode de réalisation, le système selon l’invention comportera un film de protection qui peut être retiré avant utilisation de la puce, ce film étant disposé sur les ouvertures du bloc transparent de manière à éviter toute contamination de la chambre avant introduction de l’échantillon.
[0015] Selon une alternative, le système selon l’invention comportera une étiquette d’identification au niveau de la languette. [0016] Dans une variante préférentielle, la seconde paroi comporte une gorge disposée à sa périphérie du côté de la chambre dans laquelle est disposé un adhésif pour solidariser de manière étanche la seconde paroi à la première paroi.
[0017] Dans une variante de l’invention, le système selon l’invention comportera au moins quatre chambres disposées côte à côte et formant un carré. Dans ce cas, il comportera une paroi opaque disposée entre chacune des chambres permettant de réduire la transmission lumineuse entre les différentes chambres et avec l’environnement extérieur.
[0018] De préférence, la languette sera au moins partiellement opaque afin d’éviter le passage de la lumière extérieure jusqu’à l’échantillon une fois la puce insérée dans l’appareil de test associé. De plus, la languette sera de préférence rigide ou semi rigide, disposée dans le prolongement et de préférence dans le même plan que les parois.
[0019] Selon un mode préférentiel la puce selon l’invention comporte un moyen de scellement solidaire de la puce, disposé au contact de la paroi supérieure afin de confiner l’échantillon à l’intérieur de la ou les chambres une fois celui-ci inséré dans la puce, ce qui permet d’éviter toute contamination de l’environnement par fuite de l’échantillon.
[0020] Le dispositif de scellement solidaire de la puce sera de préférence un film de scellement. Le film de scellement sera disposé de préférence au moins sur chacune des ouvertures de manière à éviter toute contamination de l’extérieur par l’échantillon à analyser et donc d’éviter de fausser les résultats suivants. Ce film de scellement pourra être prépositionné sur la plaquette lors de l’étape de fabrication (voir ci-après). Ce film de scellement permet de fermer les ouvertures de manière étanche lorsque les chambres ont été remplies avec leur échantillon à analyser.
[0021] Le film de scellement sera de préférence autocollant situé du côté du bloc, solidaire de la languette, se prolongeant en direction de l’ouverture sans être solidaire du bloc, celui-ci comportant au moins deux ouvertures communiquant avec la chambre, ledit film de scellement étant conçu pour adhérer audit bloc et fermer les ouvertures de façon étanche après remplissage de la chambre avec l’échantillon.
[0022] Selon une variante, la puce comportera également un film de protection. Le film de protection peut être retiré avant utilisation de la puce, ce film étant disposé sur les ouvertures du bloc transparent de manière à éviter toute contamination de la chambre, notamment entre la fabrication et le transport de la puce, une contamination extérieure pouvant fausser le résultat de l’analyse.
[0023] Ainsi le film de protection sera au contact de la paroi supérieure de la puce et sera retiré lors du remplissage de la ou les chambres. Dès que le remplissage est terminé, le film de scellement est immédiatement positionné sur les ouvertures, de manière étanche, afin de permettre notamment une montée en pression dans les chambres, comme expliqué ci-après.
[0024] De cette manière on évite l’utilisation d’un emballage stérile de la puce après sa fabrication jusqu’à son utilisation (comme cela est habituellement le cas pour ce type de dispositifs)
[0025] Selon une autre variante, c’est l’opercule protecteur du film de scellement qui assure le rôle de barrière protectrice entre l’extérieur, potentiellement contaminant, et l’intérieur de la chambre avant l’utilisation de la puce.
[0026] Selon une forme préférentielle, la puce selon l’invention a la forme d’une lamelle rectangulaire comportant de préférence à proximité de l’une de ses extrémités une ouverture entourée d’un cadre de préférence dont l’un au moins des cotés est opaque, notamment le coté de la languette permettant son insertion dans l’appareil de test associé, ouverture dans laquelle vient se loger d’un côté une plaque de matériau à forte conductivité ,de préférence en métal, formant la première paroi et de l’autre côté le bloc formant la seconde paroi, la plaque de matériau à forte conductivité, le bloc (de préférence en matériau transparent) et le cadre formant la partie active de la puce. Lorsque le cadre est opaque (ou partiellement opaque au moins du côté de la languette) cela permet d’éviter que la lumière extérieure ne pénètre dans la chambre et engendre du bruit dans le signal de mesure de la fluorescence. Cela prend encore plus d’importance dans le cas de puces à plusieurs chambres, où la fluorescence issue de chaque chambre doit être détectable indépendamment. Les parois opaques permettent alors « d’isoler optiquement >> les chambres les unes des autres et de l’environnement extérieur. Ainsi la languette peut avoir une portion opaque adjacente à la partie active de la puce, d’une longueur suffisante pour être visible à l’extérieur de l’appareil de test après introduction de la puce dans l’appareil d’analyse par PCR.
[0027] La puce échantillon peut comporter au moins 2 chambres c’est à dire plus généralement n chambres (avec n entier supérieur ou égal à 2). Dans un cas particulier, les n=i*j (avec i et j deux entiers supérieur ou égal à 1 ) chambres sont disposées côte à côte et forment un carré (si i=j) ou un rectangle (si i différent de j).
[0028] Selon une variante préférentielle, la puce échantillon selon l’invention comporte des moyens de détrompage destinés à coopérer avec des moyens de détrompage complémentaires situés dans l’appareil de test pour analyser l’échantillon contenu dans la chambre afin notamment de démarrer la séquence d’analyse de l’échantillon automatiquement lorsque la puce est insérée dans l’appareil d’analyse par PCR et de repérer si la puce a été insérée à l’envers.
[0029] Ces moyens de détrompage sont constitués par exemple par une encoche située sur la puce, de préférence située sur la languette.
[0030] De préférence, la lamelle rectangulaire comporte une encoche sur l’un de ses cotés ayant une fonction de détrompage.
[0031] La puce pourra également comporter une étiquette d’identification au niveau de la languette.
[0032] Afin de faciliter l’écoulement de l’échantillon dans la chambre celle-ci comportera de préférence des rainures.
[0033] Pour solidariser de manière étanche la seconde paroi à la première paroi la puce échantillon selon l’invention comportera de préférence une gorge disposée à sa périphérie du côté de la chambre dans laquelle sera déposé un adhésif.
[0034] Selon une variante de réalisation la puce échantillon selon l’invention comportera quatre chambres disposées côte à côte et formant un carré.
[0035] Selon un mode préférentiel de réalisation, la puce échantillon selon l’invention est une plaquette rectangulaire de longueur égale à au moins deux fois de préférence au moins trois fois la largeur de cette plaquette dans laquelle se trouve une ouverture rectangulaire (ou carrée) à proximité de l’une de ses extrémités, définissant ainsi un cadre autour de l’ouverture. Dans cette ouverture sont logés d’un côté, (par exemple au-dessus), une fenêtre en matériau transparent (en un matériau transparent compatible avec la PCR tel que par exemple le polypropylène, les polymères et copolymères de cyclo oléfines (COC,COP) et d’une manière générale les polymères amorphes, en matériau transparent, résistant à une température d’au moins 110C), de surface extérieure plane arrivant au niveau de la surface de la plaquette et dont la surface intérieure comporte une partie creuse formant la chambre pour recevoir l’échantillon à analyser. De l’autre côté de l’ouverture (par exemple en dessous) est disposée une lamelle en aluminium (ou tout autre matériau compatible avec la PCR et ayant une conductivité thermique adaptée-voir ci-après) dont l’épaisseur sera de préférence comprise entre 100 et 500 microns, ladite lamelle venant s’appuyer sur les bords extérieurs de la fenêtre en matériau transparent, la fenêtre et/ou la lamelle étant munies de gorges de préférence à leur périphérie, permettant de sceller de manière étanche la fenêtre et la lamelle métallique, par exemple à l’aide d’un moyen de collage tel qu’une colle compatible avec la PCR (du type silicones ou équivalent). De préférence la lamelle métallique sera (légèrement) en saillie par rapport à la surface (inférieure) de la plaquette pour améliorer le contact thermique avec les moyens de chauffage de l’appareil de test.
[0036] La plaquette rectangulaire dispose ainsi d’une portion dans le prolongement (de préférence) du cadre, faisant office de languette permettant de manipuler la puce (sa partie active consistant notamment en la fenêtre et la plaque métallique assemblées à l’aide de la colle) et de l’insérer et/ou la retirer de l’appareil de test de manière simple à travers une fente de taille complémentaire à la section droite de la plaquette rectangulaire et la positionner de manière reproductible dans l’appareil de test. Pour faciliter le positionnement de la plaquette portant la partie active de la puce échantillon dans l’appareil de test on prévoira de préférence des moyens de détrompage de préférence sur la plaquette, par exemple une encoche sur l’un des côtés de la lamelle, ces moyens de détrompage étant associés à des moyens complémentaires placés dans l’appareil de test de manière à indiquer à l’utilisateur que la plaquette est bien positionnée dans l’appareil lorsque les moyens de détrompage s’enclenchent dans les moyens complémentaires (on peut associer des moyens sonores ou lumineux par exemple indiquant cet enclenchement à l’utilisateur qui peut déclencher ainsi l’analyse de l’échantillon(soit manuellement soit automatiquement).
[0037] Ces moyens de détrompage peuvent également être utilisés pour détecter automatiquement si la puce a été insérée à l’envers dans l’appareil et prévenir l’utilisateur par l’intermédiaire d’un signal lumineux, sonore ou par l’intermédiaire de l’interface homme machine.
[0038] La plaquette rectangulaire (qui comporte à la fois le cadre et la languette) sera de préférence au moins partiellement au niveau du cadre, réalisée en un matériau opaque (tel que défini ci-après), par exemple un matériau plastique noir opaque compatible avec la PCR. On a en effet constaté que cette opacité, notamment au niveau du cadre et en particulier lorsque la puce comporte plusieurs chambres permettait d’obtenir une meilleure lecture de la fluorescence en permettant une meilleure isolation de la lumière entre les différentes chambres et une meilleure isolation de la lumière extérieure.
[0039] Bien entendu afin de pouvoir manipuler aisément cette plaquette, le (ou les) matériau utilisé devra donner à celle-ci une rigidité suffisante (matériau rigide ou semi-rigide-voir définition ci-après) pour permettre son introduction dans la fente prévue à cet effet dans l’appareil de test.
[0040] La fenêtre en matériau transparent comportera au moins deux ouvertures permettant d’atteindre la chambre dans laquelle on introduit l’échantillon à analyser (de préférence à chaque extrémité de la chambre). De préférence, la chambre comportera des rainures pour faciliter l’écoulement de l’échantillon liquide à analyser et éviter la formation de bulles de manière à favoriser durant le remplissage de la chambre, l’évacuation de l’atmosphère gazeuse contenue dans celle-ci.
[0041] Lorsque le remplissage de la chambre est terminé, les ouvertures sont scellées par exemple à l’aide d’un film transparent compatible avec la PCR et avec la mesure de fluorescence associée, film qui recouvre de préférence l’ensemble de la fenêtre. Ce film de scellement est de préférence pré-positionné sur la plaquette lors de la fabrication de la puce selon l’invention.
[0042] La languette selon un autre aspect de l’invention peut recevoir sur l’une (ou plusieurs) de ses faces un QR Code ou un code barre (ou tout autre moyen d’identification) permettant d’identifier la puce. Il est également possible compte tenu de la place disponible sur la languette de prévoir une étiquette sur laquelle l’utilisateur peut noter des informations.
[0043] Afin de protéger la chambre de la puce de toute contamination, notamment entre la fabrication et l’utilisation de la puce (transport), il est prévu de recouvrir les ouvertures avec un film de protection ne laissant pas de résidus susceptibles d’inhiber la réaction PCR.
[0044] Si la languette est de préférence plane et disposée dans le même plan que les parois, une variante de l’invention consiste à prévoir une languette ayant par exemple la forme d’une protubérance, disposée de préférence dans le prolongement des parois, permettant une meilleure préhension de la puce pour l’introduire dans l’appareil de test. [0045] De préférence, une paroi opaque sera disposée entre chacune des chambres (pour une puce à chambres multiples) permettant de réduire la transmission lumineuse entre les différentes chambres et avec l’environnement extérieur.
[0046] L’appareil de test d’échantillons selon l’invention pourra selon une variante comporter une paroi latérale disposant d’une ouverture permettant le passage de la puce vers des moyens de thermalisation, des moyens de détrompage complémentaires destinés à coopérer avec les moyens de détrompage présents sur la puce, un bloc de verre qui peut se déplacer verticalement en direction de la puce après introduction de celle-ci à travers l’ouverture et venir presser la puce sur les moyens de thermalisation à réception d’un signal de commande engendré par la coopération des moyens de détrompage et des moyens de détrompage complémentaires.
[0047] De préférence l’appareil de test comportera des moyens de mesure de la fluorescence et notamment des moyens d’imagerie par fluorescence disposés de manière à permettre le passage de la lumière depuis et vers les moyens d’imagerie.
[0048] Dans la présente demande de brevet, les termes suivants auront la signification suivante :
[0049] Le terme « matériau compatible avec la PCR >> signifie un matériau qui ne contient pas d’inhibiteurs de PCR, ne dégrade pas les enzymes, les sondes fluorescentes, les dNTP, les oligo nucléides et n’absorbe pas les oligonucléotides et autres séquences d’ARN ou d’ADN et ne diffuse pas de molécules pouvant interagir avec le fonctionnement des enzymes ou changer les caractéristiques de la réaction de PCR.
[0050] Le terme « matériau opaque >> signifie un matériau dont la transmission optique dans le domaine notamment du visible, soit entre 300 nm et 800 nm, est inférieure à 20%, de préférence inférieur à 1 %, pour une épaisseur de matériau d’un millimètre.
[0051] Le terme « matériau transparent >> signifie un matériau dont la transmission optique dans le domaine notamment du visible, est supérieure à 80%.
[0052] Le terme « matériau à forte conductivité thermique >> signifie un matériau dont la conductivité thermique est supérieure à 15 w.m-1 .K-1 . [0053] Le terme « matériau rigide ou semi-rigide >> signifie un matériau dont le module de Young est supérieur à 10 MPa.
[0054] Les termes appareil, appareil de test, appareil de test d’échantillon, appareil d’analyse par PCR sont utilisés indifféremment pour désigner l’appareil d’analyse d’échantillon par PCR.
[0055] L’invention sera mieux comprise à l’aide des exemples de réalisation suivants, donnés à titre non limitatif, conjointement avec les figures qui représentent:
[0056] [Fig. 1 ] La figure 1 , une vue de dessus de la puce échantillon selon l’invention.
[0057] [Fig. 2] La figure 2, une vue de dessous de la puce échantillon de la figure 1.
[0058] [Fig. 3] La figure 3, une vue en coupe de la partie active de la puce selon l’axe A-A de la figure 1 .
[0059] [Fig. 4] La figure 4, une vue en coupe de la partie active de la puce selon l’axe B-B de la figure 1 .
[0060] [Fig. 5] La figure 5, une vue schématique de la puce en combinaison avec l’appareil de test.
[0061] [Fig. 6] La figure 6 une vue éclatée de la puce selon l’invention avant collage des éléments de la partie active de la puce.
[0062] [Fig. 7] La figure 7, les différentes étapes de collage de la fenêtre et de la partie métallique pour réaliser la partie active de la puce.
[0063] [Fig. 8] La figure 8 une vue schématique de dessous et de dessus d’une puce échantillon multi-chambres, sans la plaquette métallique.
[0064] [Fig. 9] La figure 9, une vue en coupe de puce multi chambres de la figure 8 selon l’axe C-C sur cette figure.
[0065] [Fig. 10] La figure 10, des courbes représentant le signal de fluorescence de différents échantillons (RFU en ordonnées) en fonction du nombre de cycles (en abscisses). [0066] [Fig.1 1 ] La figure 11 , les différentes étapes de retrait et de collage des films de protection et de scellement.
[0067] Sur ces figures les mêmes éléments portent les mêmes références.
[0068] Sur la figure 1 la puce échantillon selon l’invention est représentée selon un mode préférentiel de réalisation sous la forme d’une plaquette rectangulaire 10. Cette plaquette de forme parallélépipédique 10 en matériau opaque a une longueur environ cinq fois sa largeur sur la figure (de préférence entre 50x10 mm (et une épaisseur d’au moins 1 mm) et 200x100 mm (et une épaisseur d’au plus 10mm)). Elle est pourvue dans sa partie active 13, (partie gauche de la figure) d’une ouverture 16 (voir figure 6) sensiblement carrée entourée d’un cadre opaque 1 dans laquelle est logée une fenêtre transparente 2. Celle-ci est pourvue de deux ouvertures 5 situées sur une diagonale de la fenêtre 2 et communiquant avec la chambre 4 (voir figures 3 et 4) pourvue de rainures 12, lesdites ouvertures 5 permettant pour l’une d’entre elles, d’introduire l’échantillon à analyser et pour l’autre l’évacuation de l’atmosphère présente dans la chambre 4. Dans le prolongement et dans le même plan que le cadre 1 se trouve la languette 9 munie sur l’un de ses cotés d’une encoche 8 servant de moyen de détrompage lors de l’introduction de la plaquette rectangulaire 10 dans l’appareil de test, non représenté sur la figure. Sur cette figure 1 , est représentée une vue de dessus de la puce échantillon, tandis que la figure 2 représente une vue de dessous de la même puce échantillon. Sur cette figure 2, une plaque métallique 3 est logée dans l’ouverture 16, fermant ainsi la partie active 13 de la puce échantillon. Cette plaque métallique 3, dans le prolongement de la languette 9, sera légèrement en relief (au-dessus) par rapport à la languette 9 afin de réaliser un bon contact thermique et mécanique avec l’élément de thermalisation 21 (figure 5).
[0069] La figure 3 représente une vue en coupe selon l’axe A-A (diagonale de la partie active 13) défini par les deux ouvertures 5 (ou trous d’injection). La fenêtre transparente 2 s’appuie à l’aide de son extrémité périphérique 17 sur un rebord 18 solidaire du cadre 1 , ménageant une gorge 7 dans laquelle sera injectée un adhésif (silicones ou autres) tout autour de la fenêtre 2 permettant de fixer de manière étanche la plaque métallique 3 à la fenêtre 2 et au cadre 1 . La plaque métallique 3 délimite ainsi la chambre 4 dans laquelle on introduit l’échantillon par les trous d’injection 5. Un film de scellement 6 recouvre les ouvertures 5 soit à titre pour sceller de façon étanche les ouvertures 5 après injection de l’échantillon à analyser dans la chambre 4. [0070] La figure 4 représente une vue en coupe selon l’axe B-B de la partie active de la puce échantillon. Dans la chambre 4 sont représentées plusieurs rainures 12 qui facilitent la circulation de l’échantillon liquide ainsi que sa répartition dans la chambre.
[0071] La figure 6 représente une vue éclatée de la puce échantillon de la figure 1 , avant l’assemblage de la fenêtre 2 et de la plaque métallique 3 à l’intérieur de l’ouverture 16 dans la plaquette rectangulaire 10.
[0072] La figure 7 illustre l’assemblage de la fenêtre 2 et de la plaque métallique 3. A l’aide d’un moyen d’injection 19 d’adhésif semi-liquide, on vient remplir la gorge 7 disposée tout autour de la fenêtre 2 avec l’adhésif semi-liquide 14 tel qu’un silicone ou autre matériau compatible avec la PCR (figure 7b) puis on vient appliquer la plaque métallique 3 (figure 7c) sur la fenêtre 2 de manière à étanchéifier la chambre 4 ainsi créée. Puis on polymérise (durcit) l’adhésif à l’aide d’un source UV 15 adaptée. La puce échantillon étant ainsi préparée, on peut introduire l’échantillon à analyser dans la puce, puis sceller les ouvertures 5 a l’aide d’un film adhésif PCR et procéder à l’analyse de l’échantillon comme cela est représenté sur la figure 5.
[0073] Pour cela on dispose d’un appareil de test, partie gauche de la figure 5 (intérieur). Celui-ci comporte des moyens de maintien, par exemple, un bloc mobile 20 transparent (de préférence en verre) à travers lequel on pourra faire la mesure de fluorescence et un élément de thermalisation de l’échantillon ;(pour plus de détails sur un élément de thermalisation, on pourra se reporter à la demande WC201 8/114625 au nom de la Demanderesse). De l’autre côté de la paroi 23 de l’appareil de test (à droite sur la figure 5 : extérieur) on introduit à travers l’ouverture 22 dans cette paroi, la plaquette rectangulaire 10 grâce à la languette 9, de manière à amener la partie active 13 de la puce au-dessus et au contact : le positionnement adéquat de la puce sur l’élément de thermalisation 21 est réalisé grâce à l’encoche de détrompage 8 venant coopérer avec des moyens de détrompage complémentaires situés dans l’appareil de test. Cette coopération enclenche alors un mouvement (vers le bas sur la figure 5a) du bloc de verre 20 qui vient presser la partie active 13 de la puce échantillon (figure 5b) assurant un bon contact thermique de la puce (dont la partie métallique est au contact de l’élément de thermalisation) ce qui permet de démarrer le cyclage thermique de l’échantillon. Lors de ce cyclage, le signal optique 25 issu de la fluorescence de l’échantillon est collecté sur le capteur 24, permettant le suivi en temps réel de la fluorescence dans la puce. Après une durée prédéterminée (environ 40 cycles) le cyclage thermique est stoppé et l’on fait remonter le bloc de verre 20 (figure 5c) dans sa position de repos, la puce étant tirée vers l’extérieur grâce à la languette 9.
[0074] La puce est manipulée depuis l’extérieur de l’appareil et son insertion ne nécessite pas d’ouverture de l’appareil. Aucun panneau, tiroir ou porte d’accès n’est nécessaire sur l’appareil de test, d’où sa simplicité et sa rapidité d’utilisation.
[0075] La puce est insérée par une fente fixe, puis retirée de la même manière une fois l’opération de détection achevée.
[0076] Le bon positionnement de la puce est déterminé par l’encoche sur le bord de la puce. Une fois en position, celle-ci enclenche un contacteur (non représenté sur la figure 5) qui permet le verrouillage du système.
[0077] Les moyens de maintien et de thermalisation forment dans cette variante une mâchoire mobile qui permet de maintenir la puce en position, elle est composée : d’un bloc en verre monté sur une plateforme motorisée permettant son déplacement vertical pour la partie supérieure, d’un élément de thermalisation (métallique par exemple), permettant le changement rapide de température lors des cycles thermiques de PCR pour la partie inférieure.
[0078] La pression appliquée sur la puce est de préférence comprise entre 100g et 10kg (idéalement réparti de manière homogène sur l’ensemble de la surface de la chambre),
[0079] Une fois la PCR terminée, la mâchoire s’ouvre automatiquement (sous la commande d’un automate programmé à cet effet, de manière connue en soi) libérant la puce, qui peut être retirée par l’utilisateur (figure 5c).
[0080] La position verrouillée sous pression (figure 5b) permet d’assurer un contact maximum entre la plaque métallique de la puce et l’élément de thermalisation, d’une part et d’empêcher l’ébullition du liquide échantillon contenu dans la puce lorsque la température avoisine les 100°C d’autre part. Mais elle permet en outre d’éviter d’éventuelles fuites de produits de PCR dans l’appareil qui risqueraient de le contaminer.
[0081] Le bloc transparent de préférence en verre, permet de collecter le signal de fluorescence issu de l’échantillon lors de l’amplification PCR. [0082] La figure 8 représente une variante de réalisation de l’invention dans laquelle la puce selon l’invention comporte 4 chambres, chacune étant munie d’un côté d’une surface métallique pour le transfert rapide de chaleur via l’élément thermalisant et de l’autre d’une fenêtre transparente pour permettre l’excitation et la détection optique des fluorophores. Chaque chambre peut recevoir un échantillon différent à analyser.
[0083] Pour la variante une chambre ou la variante quatre chambres, un film protecteur est positionné sur la fenêtre, couvrant les trous d’injection, afin d’éviter la contamination de la chambre lors du transport de la puce. Ce film est retiré et jeté juste avant l’injection de l’échantillon dans la puce.
[0084] Sur la figure 1 1 , le film de scellement 6 autocollant, découpé aux bonnes dimensions, est prépositionné sur la languette de la puce. Seulement une partie du film de scellement est collée sur la languette, l’autre partie, recouvrant la fenêtre, reste protégée par l’opercule protecteur jusqu’à l’injection de l’échantillon. Ainsi, l’utilisateur peut facilement retirer l’opercule protecteur et coller le film de scellement pour obstruer les trous d’injection après l’insertion de l’échantillon dans la chambre, sans avoir à se préoccuper de positionner correctement le film ou de le découper.
[0085] Plus précisément, la figure 1 1 décrit la variante de la configuration avec deux films : le film de scellement 6 et le film de protection 27. Le film de protection 27, permettant d’éviter la contamination de la chambre avant son utilisation, lors du transport par exemple, est retiré avant insertion de l’échantillon dans la puce, fig 11a. L’opercule protecteur 26 du film de scellement 6 est retiré au moment du scellement de la puce, après injection de l’échantillon et, sur la fig 11 b, le film de scellement 6 est rabattu sur la paroi supérieure de la puce afin de recouvrir hermétiquement les ouvertures ayant servi au remplissage de la puce, fig 1 1 c.
[0086] Une étiquette présentant un QR code, par exemple, permet de référencer de manière automatisée chacune des puces, ce qui permet d’avoir un suivi patient et une connexion avec le Système de gestion de l’information du laboratoire (LIMS) des hôpitaux pour les applications médicales. L’étiquette peut présenter également les informations concernant le volume et le nombre de chambres disponibles sur la puce.
[0087] La figure 9 est une vue en coupe de puce de la figure 8 selon l’axe (diagonale) C-C. Comme précédemment les gorges 7 doivent être remplies de colle pour fixer et étanchéifier l’ensemble. [0088] La figure 10 représente le signal de fluorescence RFU en fonction du nombre de cycles auxquels les échantillons sont soumis. Les courbes TARGET 1 et TARGET 2 correspondent à deux cibles de l’ADN du coronavirus SARS-COV-2 tandis que la courbe CTRL correspond au contrôle interne. L’amplification est clairement détectable dès le 35ème cycle, ce qui correspond à une détection rapide en moins de 20 minutes.
[0089] Une telle structure de la puce avec son film de scellement, sa languette et son système de détrompage permet notamment d’introduire la puce dans l’appareil de test par la fente 22 sans avoir besoin d’ouvrir l’appareil.

Claims

REVENDICATIONS Système de test d’une puce échantillon micro fluidique pour le test de type PCR d’échantillons biologiques cette puce ayant la forme d’un bloc (10) de préférence parallélépipédique comportant au moins une chambre creuse (4) pour recevoir un échantillon, délimitée notamment par une première paroi (3) (ou paroi inférieure) constituée d’un matériau à forte conductivité thermique, de préférence métallique et une seconde paroi (2) (ou paroi supérieure) constituée au moins partiellement d’un matériau transparent, ce bloc (10) possédant au moins deux ouvertures (5) permettant l’introduction de l’échantillon dans l’une au moins des chambres (4) et l’évacuation de l’atmosphère présente dans la chambre (4) lors de l’introduction de l’échantillon, les première et deuxième parois (3, 2) étant parallèles entre elles, la puce comportant en outre une languette (9) de préférence au moins partiellement opaque et/ou rigide ou semi rigide, disposée dans le prolongement et de préférence dans le même plan que les parois (2,3) , la puce comportant également un dispositif de scellement, disposé au contact de la seconde paroi ou paroi supérieure (2) , caractérisé en ce qu’il comporte une paroi latérale (23) munie d’une ouverture (22) permettant le passage de la puce vers des moyens de thermalisation (21 ), des moyens de détrompage complémentaires destinés à coopérer avec des moyens de détrompage (8) présents sur la puce, des moyens de maintien (20) de la puce au contact des moyens de thermalisation après introduction de celle-ci à travers l’ouverture (22) qui viennent maintenir la puce au contact des moyens de thermalisation (21 ) contact engendré par la coopération de moyens de détrompage (8) situés sur la puce et des moyens de détrompage complémentaires, afin notamment de démarrer la séquence d’analyse de l’échantillon, ce système comportant en outre des moyens de mesure de la fluorescence de l’échantillon. Système de test d’une puce selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu’il comporte des moyens d’imagerie par fluorescence. Système de test selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la puce a la forme d’une lamelle rectangulaire (10) comportant de préférence à proximité de l’une de ses extrémités une ouverture (16) entourée d’un cadre (1 ) de préférence dont l’un au moins des cotés est opaque, notamment le coté du cadre qui est du côté de la languette, ouverture dans laquelle vient se loger d’un côté une plaque de matériau à forte conductivité (3), de préférence en métal, formant la première paroi (3) et de l’autre côté les moyens de maintien de la puce formant la seconde paroi (2), la plaque de matériau à forte conductivité (3), le bloc de matériau transparent (2) et le cadre (1 ) formant la partie active de la puce. Système selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les moyens de détrompage (8) sont constitués par une encoche (8) située sur la puce, de préférence située sur la languette (9). Système selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la chambre (4) comporte des rainures (12) pour faciliter l’écoulement de l’échantillon dans la chambre (4). Système selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comporte un film de scellement (6) adhésif situé du côté du bloc (10) solidaire de la languette (9), se prolongeant en direction de l’ouverture (16) sans être solidaire du bloc, celui-ci comportant au moins deux ouvertures (5) communiquant avec la chambre (4), ledit film de scellement étant conçu pour adhérer audit bloc (2) et fermer les ouvertures (5) de façon étanche après remplissage de la chambre (4) avec l’échantillon. Système selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comporte un film de protection qui peut être retiré avant utilisation de la puce, ce film étant disposé sur les ouvertures (5) du bloc transparent de manière à éviter toute contamination de la chambre (4) avant introduction de l’échantillon. Système selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comporte une étiquette d’identification au niveau de la languette. Système selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la seconde paroi (2) comporte une gorge (7) disposée à sa périphérie du côté de la chambre (4) dans laquelle est disposé un adhésif (14) pour solidariser de manière étanche la seconde paroi (2) à la première paroi (3). Système selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comporte au moins quatre chambres (4) disposées côte à côte et formant un carré.
11. Système selon la revendication 10, caractérisé en ce qu’une paroi opaque est disposée entre chacune des chambres permettant de réduire la transmission lumineuse entre les différentes chambres et avec l’environnement extérieur.
PCT/EP2021/083320 2020-12-04 2021-11-29 Puce de détection pcr, appareil de test associé et système d'analyse de mise en œuvre Ceased WO2022117493A1 (fr)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18/039,707 US20240033730A1 (en) 2020-12-04 2021-11-29 Pcr detection chip, associated test device and implementation analysis system
CN202180080310.7A CN116528981A (zh) 2020-12-04 2021-11-29 Pcr检测芯片、关联测试装置及实现分析系统
EP21811104.5A EP4255629A1 (fr) 2020-12-04 2021-11-29 Puce de détection pcr, appareil de test associé et système d'analyse de mise en oeuvre

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR2012675A FR3117045A1 (fr) 2020-12-04 2020-12-04 Puce de détection PCR, appareil de test associé et système d’analyse de mise en œuvre
FR2012675 2020-12-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022117493A1 true WO2022117493A1 (fr) 2022-06-09

Family

ID=74554027

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2021/083320 Ceased WO2022117493A1 (fr) 2020-12-04 2021-11-29 Puce de détection pcr, appareil de test associé et système d'analyse de mise en œuvre

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20240033730A1 (fr)
EP (1) EP4255629A1 (fr)
CN (1) CN116528981A (fr)
FR (1) FR3117045A1 (fr)
WO (1) WO2022117493A1 (fr)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1998167A2 (fr) * 2007-06-01 2008-12-03 Samsung Electronics Co., Ltd. Module de détection de fluorescence pour microréaction et système de détection de fluorescence l'utilisant
WO2011138748A1 (fr) 2010-05-04 2011-11-10 Centre National De La Recherche Scientifique Support de puce microfluidique et systeme de regulation thermique d'un echantillon
US20110285990A1 (en) * 2010-05-21 2011-11-24 Tomoki Nakao Analysis tool and microanalysis system
WO2018114625A1 (fr) 2016-12-19 2018-06-28 Elvesys Puce échantillon micro fluidique, système d'analyse utilisant une telle puce et procédé pcr pour la détection de séquences adn
FR3074810A1 (fr) * 2017-12-13 2019-06-14 Bforcure Puce echantillon micro-fluidique, systeme d'analyse utilisant une telle puce et procede pcr pour la detection de sequences adn
DE102018210069A1 (de) * 2018-06-21 2019-12-24 Robert Bosch Gmbh Mikrofluidische Vorrichtung, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1998167A2 (fr) * 2007-06-01 2008-12-03 Samsung Electronics Co., Ltd. Module de détection de fluorescence pour microréaction et système de détection de fluorescence l'utilisant
WO2011138748A1 (fr) 2010-05-04 2011-11-10 Centre National De La Recherche Scientifique Support de puce microfluidique et systeme de regulation thermique d'un echantillon
US20110285990A1 (en) * 2010-05-21 2011-11-24 Tomoki Nakao Analysis tool and microanalysis system
WO2018114625A1 (fr) 2016-12-19 2018-06-28 Elvesys Puce échantillon micro fluidique, système d'analyse utilisant une telle puce et procédé pcr pour la détection de séquences adn
FR3074810A1 (fr) * 2017-12-13 2019-06-14 Bforcure Puce echantillon micro-fluidique, systeme d'analyse utilisant une telle puce et procede pcr pour la detection de sequences adn
DE102018210069A1 (de) * 2018-06-21 2019-12-24 Robert Bosch Gmbh Mikrofluidische Vorrichtung, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung

Also Published As

Publication number Publication date
US20240033730A1 (en) 2024-02-01
FR3117045A1 (fr) 2022-06-10
CN116528981A (zh) 2023-08-01
EP4255629A1 (fr) 2023-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CH492973A (fr) Dispositif de stockage et de transfert d'échantillons liquides
FR2601452A1 (fr) Appareil de mesure pour bio- et chimiluminescence ou pour des mesures d'extinction
EP2985595A1 (fr) Unité de diffusion raman à surface améliorée et procédé d'analyse spectroscopique raman
CA2176324A1 (fr) Procede d'identification bacterienne et de determination de la sensibilite de bacteries a des antibiotiques et appareil et supports de mesure pour la mise en oeuvre de ce procede
CZ296644B6 (cs) Úlozná schránka pro vyuzití v kompaktním mericím prístroji a zarízení pro ulození analytických prípravku
EP2443044B1 (fr) Poche à témoin de perte d'intégrité incorporé, procédé de réalisation d'une telle poche et procédé d'utilisation.
FR2540631A1 (fr) Installation de mesure, notamment pour mesures de concentration
EP2635378A2 (fr) Récipient à réaction
EP4255629A1 (fr) Puce de détection pcr, appareil de test associé et système d'analyse de mise en oeuvre
EP4164800A1 (fr) Dispositif de support de tubes utilisés pour l'analyse d'échantillons par des techniques d'amplification d'acides nucléiques et procédé d'utilisation d'un tel dispositif
EP3423840A1 (fr) Système d'analyse automatique pour diagnostic in vitro
EP4536400A1 (fr) Puce de détection pcr, appareil de test associé et système d'analyse de mise en oeuvre
WO2015079151A1 (fr) Porte échantillon et dispositif de perméation associé
FR2872288A1 (fr) Dispositif d'analyse integre, adaptable sur un conteneur d'un echantillon a analyser
EP2478085B1 (fr) Micro-plaque
EP3264984B1 (fr) Dispositif de prélèvement d'un échantillon liquide par capillarité
EP4142938A1 (fr) Plaquette de test et système de test biologique automatisé
EP1225437B1 (fr) Dispositif de maintien d'un solide dans un tube, et appareil de test utilisant un tel dispositif
FR2819523A1 (fr) Boite sterile pour la culture de micro-organismes, ensemble et distributeur de boites
FR2801660A1 (fr) Dispositif de manipulation d'un porte-support solide pour contaminants
WO2017006037A1 (fr) Appareil d'analyse d'un échantillon liquide comportant un dispositif de blocage et de désengagement
EP0779103A1 (fr) Dispositif de contrÔle visuel d'un liquide par mélange avec un liquide réactif
EP0742284B1 (fr) Procédé d'identification bactérienne et de détermination de la sensibilité de bactéries à des antibiotiques et appareil et supports de mesure pour la mise en oeuvre de ce procédé
EP4077161B1 (fr) Dispositif de stockage et de distribution de bandelettes
EP4031855B1 (fr) Méthode et lecteur portable d'analyse d'échantillon de liquide biologique

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 21811104

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 202180080310.7

Country of ref document: CN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 18039707

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2021811104

Country of ref document: EP

Effective date: 20230704