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WO2022166866A1 - 二氢吡嗪并吡嗪类大环化合物 - Google Patents

二氢吡嗪并吡嗪类大环化合物 Download PDF

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Publication number
WO2022166866A1
WO2022166866A1 PCT/CN2022/074894 CN2022074894W WO2022166866A1 WO 2022166866 A1 WO2022166866 A1 WO 2022166866A1 CN 2022074894 W CN2022074894 W CN 2022074894W WO 2022166866 A1 WO2022166866 A1 WO 2022166866A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
mmol
ethyl acetate
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/CN2022/074894
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
陈新海
胡伯羽
于衍新
陈兆国
肖敏亮
李霜训
陈曙辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Medshine Discovery Inc
Original Assignee
Medshine Discovery Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medshine Discovery Inc filed Critical Medshine Discovery Inc
Publication of WO2022166866A1 publication Critical patent/WO2022166866A1/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/06—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/06—Peri-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to a class of macrocyclic compounds comprising a dihydropyrazinopyrazine structure, and specifically discloses a compound represented by formula (I) and a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the present invention relates to two signaling pathways that play a key role in tumor proliferation, invasion and metastasis and anti-apoptosis, namely phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K)-AKT-mammalian rapamycin protease mTOR signaling pathway and tumor cells Strongly dependent non-homologous DNA double-strand end joining (NHEJ) repairs DNA double-strand breaks (DSBs).
  • PI3K phosphatidylinositol 3 kinase
  • NHEJ non-homologous DNA double-strand end joining
  • mTOR is a highly conserved protein belonging to the serine/threonine protein kinase PIKK family, which also includes ATM (ataxia-telangiectasia-mutated), ATR (ataxia-telangiectasia and Rad3-related) and DNA-PKcs ( DNA-dependent protein kinase).
  • mTOR is a protein that can affect the ability of cell volume expansion. There are at least two different complexes of mTOR in the cell.
  • mTOR rapamycin-sensitive complex
  • mTORC1 rapamycin-sensitive complex
  • the main function of mTORC1 is to regulate protein synthesis and cell cycle progression, while mTORC2 plays an important role in actin cytoskeleton organization and cell survival.
  • the progress of tumor research has made us realize that different tumors have different genetic alterations and signaling pathway alterations.
  • An effective tumor treatment strategy will require genetic alterations and signaling pathway alterations tailored to individual characteristics.
  • mTOR signaling pathway In a variety of solid tumors, such as breast, prostate, lung, colon, pancreas, liver, stomach, colorectal, kidney, thyroid, meningitis and acute and chronic lymphocytic leukemia, Merkel cell tumor Wait. And it is closely related to treatment tolerance and poor prognosis, and can be used as a therapeutic target for these tumors.
  • DNA-PK is a nuclear serine/threonine protein kinase and a member of the phosphatidylinositol-3-kinase family. It consists of a complex composed of the large catalytic subunit DNA-PKcs and a Ku protein heterodimer (Ku70/80) as a regulatory factor. It plays an important role in cell signal transduction and cell cycle functions after DNA damage. In DNA damage, DNA double strand break (DNA double strand break, DSB) is the most deadly, and DSB is repaired mainly through non-homologous end joining (DNA-PK) dominated by DNA-dependent protein kinase (DNA-PK). joining, NHEJ).
  • Radiation and a number of anticancer drugs can directly or indirectly act on DNA or DNA metabolism, resulting in DNA damage and triggering a series of cellular reactions such as damaged DNA repair.
  • the result of repair is to improve cell survival, which is also a tumor.
  • DNA-PK is highly expressed in tumor tissues after radiotherapy, and the continuous repair of radiotherapy-damaged tumor cells has become one of the main reasons for radiotherapy and chemotherapy resistance.
  • DNA-PK signaling pathway By inhibiting the DNA-PK signaling pathway, it is expected to increase the effect of chemoradiotherapy. Therefore, DNA-PK is expected to become another target for the treatment of tumors.
  • DNA-PK not only contributes to the survival of tumor cells, but also activates and phosphorylates AKT protein kinase, which indirectly activates the mTOR signaling pathway, which may be involved in the clinical drug resistance of mTOR inhibitors.
  • the present invention aims to invent a class of pyrazinone macrocyclic small molecules to target mTOR and DNA-PK, and to treat various hematological tumors including non-Hodgkin's lymphoma by single drug or in combination with chemotherapeutic drugs.
  • Treatment of malignant solid tumors including lung cancer, prostate cancer, colorectal cancer, head and neck cancer, pancreatic cancer, stem cell cancer and brain cancer.
  • Such compounds have very excellent inhibitory activities against DNA-PK and mTOR, and exhibit excellent effects and effects, and have broad application prospects.
  • Celgene WO2010/062571A1 discloses compound CC-115, which belongs to mTOR/DNA-PK dual kinase target inhibitor, and its structural formula is as follows:
  • the present invention provides a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • X is selected from N and CH;
  • L is selected from -(CR 6 R 7 ) 4 -, -(CR 6 R 7 ) 5 -, -(CR 6 R 7 ) 6 -, -(CR 6 R 7 ) 7 -, -(CR 6 R 7 ) 8 - and -CH 2 -CH 2 -O-CH 2 -CH 2 -;
  • L 1 and L 3 are each independently selected from -(CR 8 R 9 )-, -(CR 8 R 9 ) 2 -, -(CR 8 R 9 ) 3 -, -(CR 8 R 9 ) 4 -, - (CR 8 R 9 ) 5 -, -(CR 8 R 9 ) 6 -;
  • R 1 is selected from the group consisting of C 1-6 alkyl and 5-6 membered heteroaryl, each of which is independently optionally surrounded by 1, 2 or 3 R b replace;
  • R 2 and R 3 are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, CN, C 1-4 alkyl and C 3-6 cycloalkyl, said C 1-4 alkyl and C 3-6
  • the cycloalkyl groups are each independently optionally substituted with 1, 2 or 3 R c ;
  • R 4 and R 5 are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 , CH 3 , OCH 3 , CH 2 CH 3 and CF 3 ;
  • R 6 and R 7 are each independently selected from H, F, Cl, Br, I and C 1-3 alkyl optionally substituted with 1 , 2 or 3 R d ;
  • R 6 and R 7 attached to the same carbon atom are each independently optionally attached to form a C 3-6 cycloalkyl optionally substituted with 1, 2 or 3 Rs;
  • R is selected from H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 , C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy and C 1-6 alkylamino, the C 1-6 alkyl , C 1-6 alkoxy and C 1-6 alkylamino are optionally substituted by 1, 2 or 3 R e ;
  • R 8 and R 9 are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 , C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy and C 1-6 alkylamino, so Said C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy and C 1-6 alkylamino are optionally substituted with 1, 2 or 3 R f ;
  • Ra , Rb , Rc , Rd , Re , and Rf are each independently selected from F, Cl , Br, I, OH, CN, NH2 , CH3 , OCH3 , CH2CH3 , and CF3 ;
  • the 5-6 membered heteroaryl groups respectively comprise 1, 2, 3 or 4 heteroatoms or heteroatomic groups independently selected from -O-, -NH-, -S- and N.
  • R 8 and R 9 are independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 , C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy and C 1-3 alkylamino, the C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy and C 1-3 alkylamino are optionally substituted with 1, 2 or 3 R f , R f and other variables such as as defined in the present invention.
  • R 8 and R 9 are independently selected from H, F, Cl , Br, I, OH, CN, NH 2 and CH 3 , and other The variables are as defined in the present invention.
  • the above L 1 and L 3 are each independently selected from -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -(CH 2 ) 4 -, -(CH 2 ) 5 - , -(CH 2 ) 6 -, -(CH 2 ) 2 -CF 2 -, -(CH 2 ) 2 -CHF-, -(CH 2 ) 3 -C(CH 3 ) 2 - and -(CH 2 ) 3 -CF 2 -, other variables are as defined in the present invention.
  • the above R 1 is selected from methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, pyrazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1,2, 4-Triazolyl, the methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, pyrazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1,2,4-triazolyl
  • the oxazolyl groups are each independently optionally substituted with 1, 2 or 3 R b , R b and other variables as defined herein.
  • R 1 is selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • R 2 and formula R 3 are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, CN, C 1-3 alkyl, and the C 1-3 alkyl is optionally 1, 2 or 3 R c substitutions, R c and other variables are as defined herein.
  • R 2 and R 3 are independently selected from H and F, respectively, and other variables are as defined herein.
  • R 1 is selected from pyrazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1,2,4-triazolyl
  • the pyrazolyl, 1H -1,2,4-triazolyl and 4H-1,2,4-triazolyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 R a , R a and other variables as defined in the present invention.
  • R 1 is selected from Other variables are as defined in the present invention.
  • R 6 and R 7 are independently selected from H, F, Cl, Br, I and CH 3 , and other variables are as defined in the present invention.
  • R are independently selected from H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 , CH 3 , OCH 3 , CH 2 CH 3 and CF 3 , and other variables are as in invention is defined.
  • the above-mentioned R 6 and R 7 attached to the same carbon atom are each independently optionally attached to form a cyclopropyl optionally substituted with 1, 2 or 3 R, R and other variables as defined in the present invention.
  • the above-mentioned R 6 and R 7 attached to the same carbon atom are each independently optionally linked to form a cyclopropyl group, and other variables are as defined in the present invention.
  • the above L is selected from -(CH 2 ) 4 -, -(CH 2 ) 5 -, -(CH 2 ) 6 -, -(CH 2 ) 7 -, -(CH 2 ) 8 -, -CH 2 -CH 2 -O-CH 2 -CH 2 -and
  • Other variables are as defined in the present invention.
  • the compound represented by the above formula (I) is selected from
  • X, R 2 , R 3 , L 1 , L 2 and L 3 are as defined in the present invention.
  • the compound represented by the above formula (I) is selected from
  • R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and L are as defined in the present invention.
  • the present invention also provides a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is selected from
  • the present invention also provides the use of the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the preparation of a medicament for treating mTOR and DNA-PK related diseases.
  • the present invention also provides the crystal form A of compound W1 hydrochloride
  • the X-ray powder diffraction pattern of Form A of the above-mentioned compound W1 hydrochloride salt has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 4.60 ⁇ 0.20°, 9.12 ⁇ 0.20°, 17.78 ⁇ 0.20°, 21.56 ⁇ 0.20°, 27.00 ⁇ 0.20°.
  • the X-ray powder diffraction pattern of Form A of the above-mentioned compound W1 hydrochloride salt has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 4.60 ⁇ 0.20°, 9.12 ⁇ 0.20°, 17.78 ⁇ 0.20°, 21.56 ⁇ 0.20°, 23.92 ⁇ 0.20°, 26.12 ⁇ 0.20°, 27.00 ⁇ 0.20°, 27.84 ⁇ 0.20°.
  • the X-ray powder diffraction pattern of Form A of Compound W1 hydrochloride above has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 4.60 ⁇ 0.20°, 9.12 ⁇ 0.20°, 17.78 ⁇ 0.20°, and /or 8.00 ⁇ 0.20°, and/or 10.32 ⁇ 0.20°, and/or 13.56 ⁇ 0.20°, and/or 15.28 ⁇ 0.20°, and/or 16.02 ⁇ 0.20°, and/or 18.16 ⁇ 0.20°, and/or 19.94 ⁇ 0.20°, and/or 20.72 ⁇ 0.20°, and/or 21.08 ⁇ 0.20°, and/or 21.56 ⁇ 0.20°, and/or 22.34 ⁇ 0.20°, and/or 23.58 ⁇ 0.20°, and/or 23.92 ⁇ 0.20°, and/or 25.30 ⁇ 0.20°, and/or 26.12 ⁇ 0.20°, and/or 27.00 ⁇ 0.20°, and/or 27.84 ⁇ 0.20°, and/or 28.90 ⁇
  • the X-ray powder diffraction pattern of Form A of the above-mentioned compound W1 hydrochloride salt has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 4.60 ⁇ 0.20°, and/or 8.00 ⁇ 0.20°, and/or 9.12 ⁇ 0.20°, and/or 10.32 ⁇ 0.20°, and/or 13.56 ⁇ 0.20°, and/or 15.28 ⁇ 0.20°, and/or 16.02 ⁇ 0.20°, and/or 17.78 ⁇ 0.20°, and/or 18.16 ⁇ 0.20°, and/or 19.94 ⁇ 0.20°, and/or 20.72 ⁇ 0.20°, and/or 21.08 ⁇ 0.20°, and/or 21.56 ⁇ 0.20°, and/or 22.34 ⁇ 0.20°, and/or 23.58 ⁇ 0.20° , and/or 23.92 ⁇ 0.20°, and/or 25.30 ⁇ 0.20°, and/or 26.12 ⁇ 0.20°, and/or 27.00 ⁇ 0.20°, and/or 27.84
  • the X-ray powder diffraction pattern of the crystal form A of the above-mentioned compound W1 hydrochloride has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 4.598°, 7.999°, 9.115°, 10.321°, 13.561°, 15.282 degrees 30.046°, 30.711°, 31.361°, 32.201°, 32.961°, 33.574°, 36.080° and 38.320°.
  • the X-ray powder diffraction spectrum of the crystal form A of the above-mentioned compound W1 hydrochloride is shown in FIG. 1 .
  • the above-mentioned compound W1 hydrochloride has the following structure:
  • x is selected from 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9 and 2.0.
  • the above x is selected from 1.8.
  • the present invention also provides compounds of formula (II)
  • x is selected from 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9 and 2.0.
  • the above x is selected from 1.8.
  • the present invention also provides compound W1 crystal form B
  • the X-ray powder diffraction pattern of the above compound W1 crystal form B has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 9.02 ⁇ 0.20°, 13.96 ⁇ 0.20°, 19.24 ⁇ 0.20°, 20.76 ⁇ 0.20°, 23.32 ⁇ 0.20°, 24.72 ⁇ 0.20°, 25.76 ⁇ 0.20°, 30.12 ⁇ 0.20°.
  • the X-ray powder diffraction pattern of the above-mentioned Compound W1 Form B has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 9.02 ⁇ 0.20°, 13.96 ⁇ 0.20°, 19.24 ⁇ 0.20°, and/or 4.72 ⁇ 0.20°, and/or 10.80 ⁇ 0.20°, and/or 11.80 ⁇ 0.20°, and/or 15.20 ⁇ 0.20°, and/or 17.88 ⁇ 0.20°, and/or 18.60 ⁇ 0.20°, and/or 20.12 ⁇ 0.20° , and/or 20.76 ⁇ 0.20°, and/or 21.66 ⁇ 0.20°, and/or 22.02 ⁇ 0.20°, and/or 23.32 ⁇ 0.20°, and/or 24.72 ⁇ 0.20°, and/or 25.76 ⁇ 0.20°, and /or 26.44 ⁇ 0.20°, and/or 26.96 ⁇ 0.20°, and/or 27.98 ⁇ 0.20°, and/or 29.14 ⁇ 0.20°, and/or
  • the X-ray powder diffraction pattern of the above compound W1 crystal form B has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 9.02 ⁇ 0.20°, and/or 4.72 ⁇ 0.20°, and/or 10.80 ⁇ 0.20° , and/or 11.80 ⁇ 0.20°, and/or 13.96 ⁇ 0.20°, and/or 15.20 ⁇ 0.20°, and/or 17.88 ⁇ 0.20°, and/or 18.60 ⁇ 0.20°, and/or 19.24 ⁇ 0.20°, and /or 20.12 ⁇ 0.20°, and/or 20.76 ⁇ 0.20°, and/or 21.66 ⁇ 0.20°, and/or 22.02 ⁇ 0.20°, and/or 23.32 ⁇ 0.20°, and/or 24.72 ⁇ 0.20°, and/or 25.76 ⁇ 0.20°, and/or 26.44 ⁇ 0.20°, and/or 26.96 ⁇ 0.20°, and/or 27.98 ⁇ 0.20°, and/or 29.14 ⁇ 0.20°, and/
  • the X-ray powder diffraction pattern of the above compound W1 crystal form B has diffraction peaks at the following 2 ⁇ angles: 4.719°, 9.019°, 10.801°, 11.799°, 13.960°, 15.202°, 17.880° , 18.600°, 19.241°, 20.121°, 20.761°, 21.657°, 22.022°, 23.321°, 24.719°, 25.760°, 26.440°, 26.960°, 27.980°, 29.141°, 30.118°, 31.002°, 31.624° °, 35.678° and 37.920°.
  • the X-ray powder diffraction pattern of the above-mentioned compound W1 crystal form B is shown in FIG. 2 .
  • the present invention also provides the application of the above-mentioned compound W1 hydrochloride crystal form A and/or compound W1 crystal form B in the preparation of a medicament for the treatment of mTOR and DNA-PK-related diseases.
  • the mTOR and DNA-PK-related disease described above is human glioma, esophageal cancer (esophageal cancer), or gastric cancer.
  • the compounds of the present invention have good inhibitory activities on mTOR and DNA-PK.
  • the term "pharmaceutically acceptable” refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms that, within the scope of sound medical judgment, are suitable for use in contact with human and animal tissue , without excessive toxicity, irritation, allergic reactions or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • salts refers to salts of the compounds of the present invention, prepared from compounds with specific substituents discovered by the present invention and relatively non-toxic acids or bases.
  • base addition salts can be obtained by contacting such compounds with a sufficient amount of base in neat solution or in a suitable inert solvent.
  • Pharmaceutically acceptable base addition salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amine or magnesium salts or similar salts.
  • acid addition salts can be obtained by contacting such compounds with a sufficient amount of acid in neat solution or in a suitable inert solvent.
  • Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts include inorganic acid salts including, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, bicarbonate, phosphoric acid, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, sulfuric acid, Hydrogen sulfate, hydroiodic acid, phosphorous acid, etc.; and organic acid salts including, for example, acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, maleic acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, suberic acid, Similar acids such as fumaric, lactic, mandelic, phthalic, benzenesulfonic, p-toluenesulfonic, citric, tartaric, and methanesulfonic acids; also include salts of amino acids such as arginine, etc. , and salts of organic acids such as glucuronic acid. Certain specific compounds of the present invention contain both basic and acidic functional groups and thus can be converted into either base
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present invention can be synthesized from the acid or base containing parent compound by conventional chemical methods. Generally, such salts are prepared by reacting the free acid or base form of these compounds with a stoichiometric amount of the appropriate base or acid in water or an organic solvent or a mixture of the two.
  • the compounds of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes at one or more of the atoms that constitute the compound.
  • compounds can be labeled with radioisotopes, such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I) or C-14 ( 14 C).
  • deuterated drugs can be formed by replacing hydrogen with deuterium, and the bonds formed by deuterium and carbon are stronger than those formed by ordinary hydrogen and carbon. Compared with non-deuterated drugs, deuterated drugs can reduce toxic side effects and increase drug stability. , enhance the efficacy, prolong the biological half-life of drugs and other advantages. All transformations of the isotopic composition of the compounds of the present invention, whether radioactive or not, are included within the scope of the present invention.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a specified atom are replaced by a substituent, which may include deuterium and hydrogen variants, as long as the valence of the specified atom is normal and the substituted compound is stable.
  • oxygen it means that two hydrogen atoms are substituted. Oxygen substitution does not occur on aromatic groups.
  • optionally substituted means that it may or may not be substituted, and unless otherwise specified, the type and number of substituents may be arbitrary on a chemically achievable basis.
  • any variable eg, R
  • its definition in each case is independent.
  • the group may optionally be substituted with up to two Rs, with independent options for R in each case.
  • combinations of substituents and/or variants thereof are permissible only if such combinations result in stable compounds.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CRR) 0 -, it means that the linking group is a single bond.
  • substituents When a substituent is vacant, it means that the substituent does not exist. For example, when X in A-X is vacant, it means that the structure is actually A. When the listed substituents do not indicate through which atom it is attached to the substituted group, such substituents may be bonded through any of its atoms, for example, pyridyl as a substituent may be through any one of the pyridine ring The carbon atom is attached to the substituted group.
  • the direction of attachment is arbitrary, for example,
  • the linking group L in the middle is -MW-, at this time -MW- can connect ring A and ring B in the same direction as the reading order from left to right. It is also possible to connect ring A and ring B in the opposite direction to the reading order from left to right.
  • Combinations of the linking groups, substituents and/or variants thereof are permissible only if such combinations result in stable compounds.
  • any one or more sites in the group can be linked to other groups by chemical bonds.
  • connection method of the chemical bond is not located, and there is an H atom at the linkable site, when the chemical bond is connected, the number of H atoms at the site will be correspondingly reduced with the number of chemical bonds connected to the corresponding valence. the group.
  • the chemical bond connecting the site to other groups can be represented by straight solid line bonds straight dotted key or wavy lines express.
  • a straight solid bond in -OCH 3 indicates that it is connected to other groups through the oxygen atom in this group;
  • the straight dashed bond in the group indicates that it is connected to other groups through the two ends of the nitrogen atom in the group;
  • the wavy line in the phenyl group indicates that it is connected to other groups through the 1 and 2 carbon atoms in the phenyl group;
  • the number of atoms in a ring is generally defined as the number of ring members, eg, "5-7 membered ring” refers to a “ring” of 5-7 atoms arranged around it.
  • Cn-n+m or Cn - Cn+m includes any particular instance of n to n+ m carbons, eg C1-12 includes C1 , C2 , C3, C 4 , C 5 , C 6 , C 7 , C 8 , C 9 , C 10 , C 11 , and C 12 , also including any one range from n to n+m, eg C 1-12 includes C 1-3 , C 1-6 , C 1-9 , C 3-6 , C 3-9 , C 3-12 , C 6-9 , C 6-12 , and C 9-12 , etc.; in the same way, n yuan to n +m-membered means that the number of atoms in the ring is from n to n+m, for example, 3-12-membered ring includes 3-membered ring, 4-membered ring, 5-membered ring, 6-membered ring, 7-membered ring, 8-membered
  • C 1-6 alkyl is used to denote a straight or branched chain saturated hydrocarbon group consisting of 1 to 6 carbon atoms.
  • the C 1-6 alkyl includes C 1-5 , C 1-4 , C 1-3 , C 1-2 , C 2-6 , C 2-4 , C 6 and C 5 alkyl and the like; it can be Is monovalent (eg methyl), divalent (eg methylene) or polyvalent (eg methine).
  • C 1-6 alkyl examples include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n-propyl and isopropyl), butyl (including n-butyl, isobutyl , s-butyl and t-butyl), pentyl (including n-pentyl, isopentyl and neopentyl), hexyl, etc.
  • C 1-4 alkyl is used to denote a straight or branched chain saturated hydrocarbon group consisting of 1 to 4 carbon atoms.
  • the C 1-4 alkyl includes C 1-2 , C 1-3 and C 2-3 alkyl, etc.; it can be monovalent (such as methyl), divalent (such as methylene) or polyvalent (such as methine).
  • Examples of C 1-4 alkyl include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n-propyl and isopropyl), butyl (including n-butyl, isobutyl , s-butyl and t-butyl) and so on.
  • C 1-3 alkyl is used to denote a straight or branched chain saturated hydrocarbon group consisting of 1 to 3 carbon atoms.
  • the C 1-3 alkyl group includes C 1-2 and C 2-3 alkyl groups, etc.; it can be monovalent (such as methyl ), divalent (such as methylene) or polyvalent (such as methine) .
  • Examples of C1-3 alkyl groups include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n-propyl and isopropyl), and the like.
  • the terms “5-6 membered heteroaryl ring” and “5-6 membered heteroaryl” are used interchangeably in the present invention, and the term “5-6 membered heteroaryl” means from 5 to 6 ring atoms It is composed of a monocyclic group with a conjugated ⁇ electron system, wherein 1, 2, 3 or 4 ring atoms are heteroatoms independently selected from O, S and N, and the rest are carbon atoms. Where the nitrogen atom is optionally quaternized, the nitrogen and sulfur heteroatoms may be optionally oxidized (ie, NO and S(O) p , p is 1 or 2).
  • a 5-6 membered heteroaryl group can be attached to the remainder of the molecule through a heteroatom or a carbon atom.
  • the 5-6 membered heteroaryl groups include 5- and 6-membered heteroaryl groups.
  • Examples of the 5-6 membered heteroaryl include, but are not limited to, pyrrolyl (including N-pyrrolyl, 2-pyrrolyl and 3-pyrrolyl, etc.), pyrazolyl (including 2-pyrazolyl and 3-pyrrolyl, etc.) azolyl, etc.), imidazolyl (including N-imidazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl and 5-imidazolyl, etc.), oxazolyl (including 2-oxazolyl, 4-oxazolyl and 5- oxazolyl, etc.), triazolyl (1H-1,2,3-triazolyl, 2H-1,2,3-triazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1, 2,4
  • C1-6alkoxy refers to those alkyl groups containing 1 to 6 carbon atoms attached to the remainder of the molecule through an oxygen atom.
  • the C 1-6 alkoxy groups include C 1-4 , C 1-3 , C 1-2 , C 2-6 , C 2-4 , C 6 , C 5 , C 4 and C 3 alkoxy groups, etc. .
  • C 1-6 alkoxy groups include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy (including n - propoxy and isopropoxy), butoxy (including n-butoxy, isobutoxy) oxy, s-butoxy and t-butoxy), pentyloxy (including n-pentyloxy, isopentyloxy and neopentyloxy), hexyloxy and the like.
  • C1-3alkoxy refers to those alkyl groups containing 1 to 3 carbon atoms attached to the remainder of the molecule through an oxygen atom.
  • the C 1-3 alkoxy group includes C 1-2 , C 2-3 , C 3 and C 2 alkoxy and the like.
  • Examples of C 1-3 alkoxy groups include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy (including n-propoxy and isopropoxy), and the like.
  • C 1-6 alkylamino refers to those alkyl groups containing 1 to 6 carbon atoms attached to the remainder of the molecule through an amino group.
  • the C 1-6 alkylamino includes C 1-4 , C 1-3 , C 1-2 , C 2-6 , C 2-4 , C 6 , C 5 , C 4 , C 3 and C 2 alkylamino Wait.
  • C 1-6 alkylamino examples include, but are not limited to, -NHCH 3 , -N(CH 3 ) 2 , -NHCH 2 CH 3 , -N(CH 3 )CH 2 CH 3 , -N(CH 2 CH 3 )( CH2CH3 ) , -NHCH2CH2CH3 , -NHCH2 ( CH3 ) 2 , -NHCH2CH2CH2CH3 , etc.
  • C 1-3 alkylamino refers to those alkyl groups containing 1 to 3 carbon atoms attached to the remainder of the molecule through an amino group.
  • the C 1-3 alkylamino groups include C 1-2 , C 3 and C 2 alkylamino groups and the like.
  • Examples of C 1-3 alkylamino include, but are not limited to, -NHCH 3 , -N(CH 3 ) 2 , -NHCH 2 CH 3 , -N(CH 3 )CH 2 CH 3 , -NHCH 2 CH 2 CH 3 , - NHCH 2 (CH 3 ) 2 and the like.
  • C 3-6 cycloalkyl means a saturated cyclic hydrocarbon group consisting of 3 to 6 carbon atoms, which are monocyclic and bicyclic ring systems, said C 3-6 cycloalkyl including C 3-5 , C 4-5 and C 5-6 cycloalkyl and the like; it may be monovalent, divalent or polyvalent.
  • Examples of C3-6 cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, and the like.
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, embodiments formed in combination with other chemical synthesis methods, and those well known to those skilled in the art Equivalent to alternatives, preferred embodiments include, but are not limited to, the embodiments of the present invention.
  • the structure of the compound of the present invention can be confirmed by conventional methods well known to those skilled in the art. If the present invention relates to the absolute configuration of the compound, the absolute configuration can be confirmed by conventional technical means in the art. For example, single crystal X-ray diffraction method (SXRD), the cultured single crystal is collected by Bruker D8 venture diffractometer, the light source is CuK ⁇ radiation, and the scanning mode is: After scanning and collecting relevant data, the crystal structure was further analyzed by the direct method (Shelxs97), and the absolute configuration could be confirmed.
  • SXRD single crystal X-ray diffraction method
  • the cultured single crystal is collected by Bruker D8 venture diffractometer
  • the light source is CuK ⁇ radiation
  • the scanning mode is: After scanning and collecting relevant data, the crystal structure was further analyzed by the direct method (Shelxs97), and the absolute configuration could be confirmed.
  • the solvent used in the present invention is commercially available.
  • the solvent ratios used in the silica gel column and thin layer chromatography of the present invention are all volume ratios.
  • BOC stands for tert-butoxycarbonyl, which is an amine protecting group
  • Boc 2 O stands for di-tert-butyl dicarbonate
  • DMAP stands for 4-N,N-lutidine
  • HATU stands for 2-(7-benzotriazole oxide)-N,N,N',N'-tetramethylurea hexafluorophosphate
  • DMA stands for N,N-dimethylacetamide
  • DMF stands for N,N - dimethylformamide
  • 4M represents 4 mol/liter
  • Pd(PPh 3 ) 4 represents catalyst tetrakistriphenylphosphine palladium
  • m-CPBA represents 3-chloroperoxybenzoic acid
  • DHP represents 2,3-dihydropyridine pyran
  • THP stands for tetrahydropyran
  • DMF-DMA stands for N,N-dimethyldimethylacetal
  • DCE stands for dichloroethane
  • Test Method Approximately 20 mg of sample was used for XRPD detection.
  • Fig. 1 is the XRPD pattern of the crystal form A of compound W1 hydrochloride.
  • Figure 2 is the XRPD pattern of compound W1 crystal form B.
  • the present invention will be described in detail by the following examples, but it does not mean any unfavorable limitation of the present invention.
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, embodiments formed in combination with other chemical synthesis methods, and those well known to those skilled in the art Equivalent to alternatives, preferred embodiments include, but are not limited to, the embodiments of the present invention. It will be apparent to those skilled in the art that various changes and modifications can be made to the specific embodiments of the present invention without departing from the spirit and scope of the invention.
  • the reaction solution was cooled to 25°C, the mixture was washed three times with 1500 mL of water each time, the aqueous phase was extracted once with dichloromethane (1000 mL), the organic phases were combined, washed once with saturated brine (2000 mL), and dried over anhydrous sodium sulfate. , filtered and concentrated.
  • Phthalimide potassium salt (11.51 g, 62.12 mmol), WB-8 (10 g, 56.47 mmol) was added to 100 mL of DMF and stirred at 70°C for 18 hours. Filter, pour the filtrate into 100 mL of water, and extract three times with ethyl acetate (30 mL), combine the organic phases, wash once with 50 mL of saturated brine, dry over anhydrous sodium sulfate, filter, and concentrate to obtain crude product WB- 9. (M+H: 244.2)
  • WB-9 (10 g, 41.10 mmol) was dissolved in 150 mL of absolute ethanol, hydrazine monohydrate (6.30 g, 123.30 mmol, 6.12 mL, purity 98%) was added, and then the mixture was heated to 60° C. Stir at 60°C for 18 hours.
  • the hydrochloride salt WB-10 (5.30 g, 35.40 mmol) was dissolved in 100 mL of N-methylpyrrolidone, N,N-diisopropylethylamine (15.25 g, 118.80 mmol) was added, and the solution was heated at 25°C. After stirring for 10 minutes, B-7 (10 g, 29.50 mmol) was added, heated to 130°C and stirring continued for 18 hours.
  • WB-12 (7.0 g, 21.52 mmol), hexamethyldistanane (10.58 g, 32.29 mmol, 6.7 mL), Pd( PPh3 ) 4 (2.49 g, 2.15 mmol) were dissolved in 100 mL of In dioxane and replaced with nitrogen three times, the mixture was heated to 120 °C and stirred for 4 hours.
  • 1 H NMR 400 MHz, CDCl 3 -d
  • WB-23 (10.00 g, 73.46 mmol) was dissolved in glacial acetic acid (160 mL) and N-iodosuccinimide (16.53 g, 73.46 mmol) was added portionwise at 0°C. The reaction mixture was stirred at 25°C for 16 hours. The reaction solution was concentrated under reduced pressure to half the volume, filtered, and the filter cake was washed twice with petroleum ether (60 mL), and then the solid was removed in vacuo to remove the solvent to obtain WB-24, which was directly used in the next step.
  • the reaction solution was cooled to 25°C, water (60 mL) was added, extracted three times with ethyl acetate (100 mL), the organic phases were combined, washed once with saturated brine (50 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and pumped with a Buchner funnel. After filtration, the filtrate was concentrated in vacuo.
  • cuprous bromide (6.21 g, 43.29 mmol) and potassium bromide (206.06 g, 2.66 mol) were dissolved in water (60 ml), and the above reaction solution was slowly added to cuprous bromide and bromine The potassium chloride suspension was added dropwise for about 30 minutes. After the addition, the reaction solution was continued to react at 0° C. for 1.5 hours.
  • reaction solution was poured into saturated aqueous ammonium chloride solution (200 mL), extracted twice with 100 mL of ethyl acetate each time, the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated.
  • BB-3 (2.75 g, 9.25 mmol), hexamethyldistanane (4.42 g, 13.50 mmol) and Pd( PPh3 ) 4 (470 mg, 406.73 mmol) were added to 1,4-dichlorohexanol In a ring (30 mL), the reaction mixture was sparged with nitrogen and heated to 120°C with stirring for 2 hours.
  • reaction solution was slowly poured into 50 mL of saturated ammonium chloride solution, extracted three times with 20 mL of ethyl acetate, and concentrated.
  • reaction solution was concentrated, diluted with 10 milliliters of ethyl acetate, filtered, and the filtrate was concentrated, and the filtrate and the filter cake were respectively subjected to preparative high performance liquid chromatography (separating column model: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4 ⁇ m; mobile phase: [water ( 0.05% hydrochloric acid)-acetonitrile]; acetonitrile%: 13%-33%, 12 minutes) after purification, combined and concentrated to obtain the hydrochloride salt of compound 7.
  • the crude product was purified by prep-HPLC (column: Waters Xbridge 150*25mm*5 ⁇ m; mobile phase: [water (0.05% ammonia water, volume ratio)-acetonitrile]; acetonitrile%: 32%-58%, 10 minutes) to obtain compound 9.
  • Step ten
  • Step ten
  • 1 H NMR 400 MHz, CDCl 3 -d
  • BB-2 (700 mg, 1.91 mmol) and 14-6 (703.42 mg, 1.95 mmol), tris(o-methylphenyl)phosphine (116.10 mg, 381.44 ⁇ mol), Pd 2 (dba) 3 ( 174.64 mg, 190.72 ⁇ mol), triethylamine (578.96 mg, 5.72 mmol) was suspended in 1,4-dioxane (10 mL), replaced with nitrogen three times, and the reaction mixture was stirred at 90-100 °C At 4 hours, LCMS showed that the reaction was essentially complete, with only a small amount of BB-2 not being consumed.
  • Step ten
  • the number of chloride ions molecular weight of free alkali/ ⁇ (1-chloride ion content) ⁇ chloride ion content ⁇ chloride ion molecular weight, the calculated chloride ion number is 1.8.
  • reaction solution was cooled to 25°C, water (5 mL) and ethyl acetate (10 mL) were added, the organic phase was washed with saturated brine (5 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to remove the solvent.
  • Step ten
  • reaction solution was stirred under nitrogen protection at 0-25°C for 13 hours.
  • Step ten
  • reaction solution was cooled to 0°C, water (3.5 mL), 15% sodium hydroxide solution (3.5 mL), water (10.5 mL) were slowly added dropwise in sequence, filtered, and the filtrate was extracted twice with ethyl acetate (50 mL each) , the organic phases were combined, the pH was adjusted to 2-3 with ethyl acetate hydrochloride (4M), and concentrated to obtain compound W11-3.
  • Step ten
  • ligand beads were blocked with excess biotin and washed with buffer (seablock, 1% bovine serum albumin, 0.05% Tween 20, 1 mM DTT (dithiothreitol)) to wash away unbound ligand. ligands and non-specifically bound ligands;
  • test compound is dissolved in pure dimethyl sulfoxide
  • Affinity beads were resuspended in buffer (IX PBS, 0.05% Tween 20, 0.5 ⁇ m of non-biotin affinity ligand) and incubated for 30 minutes at room temperature.
  • the compounds of the present invention have significant mTOR kinase inhibitory activity.
  • HTRF homogeneous time-resolved fluorescence
  • the compounds of the present invention have significant DNA-PK kinase inhibitory activity.
  • Promega's Luminescent Cell Viability Assay is a quantitative method that reflects the number of viable cells by detecting ATP content.
  • the number of cells is proportional to the fluorescence value. The higher the fluorescence reading, the higher the intracellular ATP content, and the more the number of living cells.
  • the assay plate was analyzed using PerkinElmer's Envision, the assay mode was fluorescence detection, and the data was represented by the reading of the chemiluminescent signal at 400-700 nm. Therefore, we can monitor the degree of inhibition of cell proliferation by the compound by the fluorescence value.
  • Test method Digest the cells in the isolated culture flask, resuspend with medium, count, and adjust the cell concentration to 1.25 ⁇ 10 4 cells with medium (500 mL RPMI1640, 55 mL fetal bovine serum, 5.5 mL penicillin/streptomycin) /mL, add 100 ⁇ L of phosphate buffer to the peripheral wells of the 384-well plate, add 40 ⁇ L of cell suspension to other wells, let stand for 10 min at room temperature, and then incubate in a 37°C, 5% CO 2 incubator for 24 h; compounds with 10-point 3-fold serial dilution of DMSO on ECHO, and transfer 100nL compound to 384-well plate respectively, transfer 100nL DMSO for positive control and negative control, centrifuge at 1000rpm for 10s, and incubate in 37°C 5% CO2 incubator 5 days; then add 20 ⁇ L of Cell Titer-Glo to each well of a 384-well plate, centrifuge at 1000
  • Inhibition rate (%) 100 ⁇ (compound signal value-negative control average signal value)/(positive control average signal value-negative control average signal value)
  • the calculated inhibition rate will be analyzed by curve fitting using GraphPad Prism software to obtain a dose-response curve, and the IC50 of the compound's inhibition of cell proliferation will be calculated.
  • the compound of the present invention can effectively inhibit the proliferation of U87MG cells.
  • OBJECTIVE In this experiment, the EC9706 cell subcutaneous xenograft tumor BALB/c nude mouse model was used to evaluate the antitumor effect of the compounds.
  • mice Female BALB/c nude mice, 6-8 weeks old, weighing 18-22 grams: Supplier: Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd.
  • Human esophageal cancer EC9706 cells (BNCC, 39892) were cultured in vitro in monolayer, cultured in EMEM medium and 10% fetal bovine serum, 100U/mL penicillin and 100 ⁇ g/mL streptomycin, 37°C, 5% CO2 incubator . Conventional digestion with trypsin-EDTA was performed twice a week for passage. When the cell saturation is 80%-90% and the number reaches the requirement, the cells are collected, counted, and seeded.
  • EC9706 cells 0.1 mL (5 ⁇ 10 6 cells) of EC9706 cells were subcutaneously inoculated into the right back of each mouse, and the pharmacodynamics experiment started when the average tumor volume reached 156 mm 3 .
  • the vehicle was 10% DMSO plus 10% Solutol plus 80% water, and the test compound was formulated into a clear solution.
  • Solutol is polyethylene glycol-15 hydroxystearate
  • Tumor diameters were measured with vernier calipers twice a week.
  • TGI percent or relative tumor proliferation rate T/C (%).
  • Relative tumor proliferation rate T/C (%) T RTV /C RTV ⁇ 100% (T RTV : the average RTV of the treatment group; C RTV : the average RTV of the negative control group).
  • TGI (%) reflecting tumor growth inhibition rate.
  • TGI(%) [1-(average tumor volume at the end of administration of a certain treatment group-average tumor volume at the beginning of administration of this treatment group)/(average tumor volume at the end of treatment in the solvent control group-average at the beginning of treatment in the solvent control group tumor volume)] ⁇ 100%.
  • the compounds of the present invention have significant antitumor activity.
  • ligand beads were blocked with excess biotin and washed with buffer (seablock, 1% bovine serum albumin, 0.05% Tween 20, 1 mM DTT (dithiothreitol)) to wash away unbound ligand. ligands and non-specifically bound ligands;
  • test compound is dissolved in pure dimethyl sulfoxide
  • Affinity beads were resuspended in buffer (IX PBS, 0.05% Tween 20, 0.5 ⁇ m of non-biotin affinity ligand) and incubated for 30 minutes at room temperature.
  • the compounds of the present invention have significant mTOR kinase inhibitory activity.
  • DNA-PK (h) was incubated in assay buffer containing 50 nM GST-cMyc-p53 and Mg/ATP (concentration as required). The reaction was initiated by the addition of a Mg/ATP mixture. After 30 minutes of incubation at room temperature, the reaction was stopped by the addition of a stop solution containing EDTA. Finally, detection buffer (containing labeled anti-GST monoclonal antibody and europium-labeled anti-phospho-Ser15 antibody against phosphorylated p53) was added.
  • HTRF homogeneous time-resolved fluorescence
  • the compounds of the present invention have significant DNA-PK kinase inhibitory activity.
  • test compound was mixed with 10% DMSO/10% Solutol/80% water, stirred and vortexed to prepare a homogeneous suspension at 1 mg/ml. Take 400 ⁇ L of 1mg/ml test compound solution and add 600 ⁇ L of 10% DMSO/10% polyethylene glycol stearyl acetic acid/80% water to obtain a 0.4mg/ml clear solution for IV group administration, microporous membrane Use after filtering. Test compounds were mixed with 5% DMSO/95% (10% HP-[beta]-CD), stirred and vortexed to prepare a clear solution at 1 mg/ml for PO administration. (Solutol is polyethylene glycol-15 hydroxystearate)
  • mice Four male CD-1 mice were divided into two groups. Group 1 animals were given a single intravenous dose of 2 mg/kg in a vehicle of 10% DMSO/10% Solutol/80% water in a volume of 5 ml/kg. The animals in the second group were given a single oral gavage of 10 mg/kg of the test compound, the oral vehicle was 5% DMSO/95% (10% HP- ⁇ -CD), and the oral volume was 10 mL/kg.
  • Whole blood was collected at 0.083 (iv injection only), 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8 and 24 hours post-dose. Whole blood was centrifuged at 3200 g for 10 min at 4°C to obtain plasma. The concentrations of the test compounds in the plasma were determined by LC/MS/MS, and the pharmacokinetic parameters were calculated by Phoenix WinNonlin software.
  • the tested compounds exhibit excellent pharmacokinetic data, and the compounds of the present invention have high oral bioavailability and are well developed molecules for oral administration.
  • test compound was mixed with 5% DMSO + 95% (10% HP-[beta]-CD in water), stirred and vortexed to prepare a 0.4 mg/ml homogeneous suspension for PO administration.
  • 5% DMSO + 95% 10% HP-[beta]-CD in water
  • stirred and vortexed a 0.4 mg/ml homogeneous suspension for PO administration.
  • the microporous membrane filter is used for later use.
  • the tested compounds exhibit excellent pharmacokinetic data, and the compounds of the present invention have high oral bioavailability and are well developed molecules for oral administration.
  • OBJECTIVE This experiment used EC9706 cell subcutaneous xenograft tumor BALB/c nude mouse model to evaluate the antitumor effect of WuXi series compounds.
  • mice Female BALB/c nude mice, 6-8 weeks old, weighing 18-22 grams: Supplier: Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd.
  • Human esophageal cancer EC9706 cells (BNCC, 39892) were cultured in vitro in monolayer, cultured in EMEM medium and 10% fetal bovine serum, 100U/mL penicillin and 100 ⁇ g/mL streptomycin, 37°C, 5% CO2 incubator . Conventional digestion with trypsin-EDTA was performed twice a week for passage. When the cell saturation is 80%-90% and the number reaches the requirement, the cells are collected, counted, and seeded.
  • EC9706 cells 0.1 mL (5 ⁇ 10 6 cells) of EC9706 cells were subcutaneously inoculated into the right back of each mouse, and the pharmacodynamics experiment started when the average tumor volume reached 156 mm 3 .
  • the vehicle was 10% DMSO plus 10% Solutol plus 80% water, and the test compound was formulated into a clear solution.
  • Tumor diameters were measured with vernier calipers twice a week.
  • TGI percent or relative tumor proliferation rate T/C (%).
  • Relative tumor proliferation rate T/C (%) T RTV /C RTV ⁇ 100% (T RTV : the average RTV of the treatment group; C RTV : the average RTV of the negative control group).
  • TGI (%) reflecting tumor growth inhibition rate.
  • TGI(%) [1-(average tumor volume at the end of administration of a certain treatment group-average tumor volume at the beginning of administration of this treatment group)/(average tumor volume at the end of treatment in the solvent control group-average at the beginning of treatment in the solvent control group tumor volume)] ⁇ 100%.
  • the compounds of the present invention have good tumor-inhibiting effect.
  • RPMI-1640 medium fetal bovine serum, penicillin/streptomycin antibiotics were purchased from Vicente.
  • the NCI-N87 cell line was purchased from Nanjing Kebai Biotechnology Co., Ltd. Nivo Multi-Label Analyzer (PerkinElmer).
  • NCI-N87 cells were seeded in a white 96-well plate, 80 ⁇ L of cell suspension per well, which contained 8000 NCI-N87 cells. Cell plates were incubated overnight in a carbon dioxide incubator.
  • the compounds to be tested were diluted 3-fold to the 8th concentration with a row gun, that is, from 200 ⁇ M to 92 nM, and a double-well experiment was set up. Add 78 ⁇ L of medium to the middle plate, and then transfer 2 ⁇ L of each well of the compound to the middle plate according to the corresponding position. After mixing, transfer 20 ⁇ L of each well to the cell plate.
  • the cell plates were placed in a carbon dioxide incubator for 3 days.
  • the IC 50 value can be obtained by curve fitting with four parameters ("log(inhibitor) vs. response--Variable slope" mode).
  • the following table provides the inhibitory activity of the compounds of the present invention on NCI-N87 cell proliferation.
  • the compound of the present invention has very excellent anti-proliferation activity of gastric cancer cell N87.
  • FBS fetal bovine serum
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • EC9706 cells were seeded in Greiner CELLSTAR 96-well plate (flat black plate with lid and transparent bottom), 90 ⁇ L of cell suspension per well, which contained 6000 EC9706 cells. Cell plates were incubated overnight in a carbon dioxide incubator.
  • the compound to be tested was diluted 3.5 times to the ninth concentration, that is, from 4000 ⁇ M to 0.17764 nM, and a double-well experiment was set up.
  • the culture plate was placed at room temperature for 10 minutes to stabilize the luminescence signal.
  • IR(%) (1 ⁇ (RLU compound ⁇ RLU blank control)/(RLU vehicle control ⁇ RLU blank control)*100%.
  • the inhibition rates of different concentrations of compounds were calculated in Excel, and then the GraphPad Prism software was used to plot the inhibition curves and calculate the relevant parameters.
  • the following table provides the IC 50 of the compounds in the examples.
  • the example compounds have significant anti-proliferative activity against esophageal cancer cells EC9706, which is significantly better than CC-115.

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Abstract

一类包含二氢吡嗪并吡嗪结构的大环化合物，具体公开了式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐。

Description

二氢吡嗪并吡嗪类大环化合物
本申请主张如下优先权：
CN202110186862.8，申请日2021年02月08日。
技术领域
本发明涉及一类包含二氢吡嗪并吡嗪结构的大环化合物，具体公开了式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐。
背景技术
最新数据显示，全球每年新增肿瘤病例为1407万人，中国占22％。随着科学技术的进步和人们对肿瘤治疗研究的深入，科学家们在肿瘤的发生、发展机制和治疗上取得了飞速的发展。很多新的生物机制和生物标记物也随之被发现，这有助于在肿瘤或者癌症的治疗上取得更多进展。本发明涉及到了两条对肿瘤增殖，浸润转移和抗凋亡起到关键作用的信号通路，即磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-AKT-哺乳动物雷帕霉素蛋白酶mTOR信号通路和肿瘤细胞强依赖性非同源DNA双链末端连接(NHEJ)对DNA双链断裂(DSBs)进行修复通路。
mTOR是一种高度保守的蛋白质，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PIKK家族，这一家族还包括有ATM(ataxia-telangiectasia-mutated)、ATR(ataxia-telangiectasia and Rad3-related)和DNA-PKcs(DNA-dependent protein kinase)。mTOR是一种能够影响细胞体积扩张能力的蛋白质，在细胞体内mTOR至少存在两种不同的复合体，一是mTOR与raptor(regulatory-associated protein of mTOR)蛋白结合形成雷帕霉素敏感的复合体mTORC1；二是mTOR与rictor(rapamycin-insensitive companion of mTOR)蛋白结合形成不敏感的复合体mTORC2。mTORC1的主要功能是调节蛋白质的合成和细胞周期进程，而mTORC2则在肌动蛋白细胞骨架组织和细胞存活方面发挥重要作用。肿瘤研究的进展使我们认识到不同的肿瘤基因改变和信号通路改变有很大不同，有效的肿瘤治疗战略将要求针对个体特征的基因改变和信号通路改变，已有不少研究表明，mTOR信号通路在多种实体瘤，如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、肾癌、甲状腺癌、脑膜炎癌和急慢性淋巴细胞白血病，梅克尔细胞瘤等。并且与治疗耐受和不良预后紧密相关，可以作为这些肿瘤的治疗靶点。
DNA-PK是一种核丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是磷脂酰肌醇-3-激酶家族成员之一。它由大型催化亚基DNA-PKcs和一个作为调节因子的Ku蛋白异二聚体(Ku70/80)组成的复合物。它在DNA受损后的细胞信号转导和细胞周期等功能上起到很重要的作用。在DNA损伤中，DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB)是最致命的，而DSB得修复方式主要是通过DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)主导的非同源末端连接(nonhomologous end joining,NHEJ)进行。放射线和相当多的抗癌药均可以直接或者间接作用于DNA或者DNA代谢过程，从而导致DNA损伤，引发受损DNA修复等一系列细胞反应，而修复的结果就是提高细胞的存活，这也是肿瘤细胞对放化疗产生抵抗的机制之一。
目前，通过放疗和化疗(博来霉素、阿霉素、依托泊苷等)等方式来诱导DNA损伤是控制肿瘤生长的主要手段之一。但研究表明，经过放疗之后的肿瘤组织中DNA-PK高表达，不断修复放疗损伤的 肿瘤细胞，成为放化疗耐药的主要原因之一。通过抑制DNA-PK信号通路，有望增加放化疗的效果。因此，DNA-PK有望成为治疗肿瘤的又一个靶点。
研究表明，DNA-PK高表达除了会有助于肿瘤细胞的存活之外，还会激活并磷酸化AKT蛋白激酶，间接激活mTOR信号通路，可能参与了mTOR抑制剂在临床上的耐药。有研究发现，在体外同时抑制mTOR和DNA-PK可以导致caspase依赖性细胞死亡，如果能够同时抑制DNA-PK和mTOR两条信号通路，除了自身对肿瘤生长的抑制之外，可能能够彼此协同，有望提高肿瘤的治疗效果。
本发明旨在发明一类吡嗪酮类大环小分子靶向抑制mTOR和DNA-PK，通过单药或者与化疗药物联用对包括非霍奇金淋巴瘤等在内的各种血液瘤，肺癌，前列腺癌、结直肠癌、头颈癌、胰腺癌、干细胞癌和脑癌等在内的恶性实体瘤进行治疗。此类化合物具有非常优异的针对DNA-PK和mTOR的抑制活性，并表现出优异的效果和作用，具有广阔的应用前景。
新基公司(Celgene)WO2010/062571A1公开化合物CC-115，属于mTOR/DNA-PK双激酶靶点抑制剂，其结构式如下：
Figure PCTCN2022074894-appb-000001
发明内容
本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2022074894-appb-000002
其中，
Figure PCTCN2022074894-appb-000003
为单键或双键；
E选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000004
X选自N和CH；
L选自-(CR 6R 7) 4-、-(CR 6R 7) 5-、-(CR 6R 7) 6-、-(CR 6R 7) 7-、-(CR 6R 7) 8-和-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-；
L 1和L 3分别独立地选自-(CR 8R 9)-、-(CR 8R 9) 2-、-(CR 8R 9) 3-、-(CR 8R 9) 4-、-(CR 8R 9) 5-、-(CR 8R 9) 6-；
L 2选自单键、-CH＝CH-、-O-、-NHC(＝O)-、C 3-6环烷基、苯基和5-6元杂芳基，所述C 3-6环烷基、苯基、5-6元杂芳基分别独立地任选被1、2或3个R a取代；
R 1选自选自C 1-6烷基和5-6元杂芳基，所述C 1-6烷基和5-6元杂芳基分别独立地任选被1、2或3个R b取代；
R 2和R 3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C 1-4烷基和C 3-6环烷基，所述C 1-4烷基和C 3-6环烷基分别独立地任选被1、2或3个R c取代；
R 4和R 5分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、CH 3、OCH 3、CH 2CH 3和CF 3；
R 6和R 7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R d取代；
或者，连接在同一个碳原子上的R 6与R 7分别独立地任选连接形成一个任选被1、2或3个R取代的C 3- 6环烷基；
R选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基任选被1、2或3个R e取代；
R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基任选被1、2或3个R f取代；
R a、R b、R c、R d、R e和R f分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、CH 3、OCH 3、CH 2CH 3和CF 3；所述5-6元杂芳基分别包含1、2、3或4个独立选自-O-、-NH-、-S-和N的杂原子或杂原子团。
在本发明的一些方案中，上述E选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000005
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述E选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000006
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2022074894-appb-000007
选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000008
Figure PCTCN2022074894-appb-000009
Figure PCTCN2022074894-appb-000010
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基任选被1、2或3个R f取代，R f及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 8和R 9分别独立地选自R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2和CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述L 1和L 3分别独立地选自-(CH 2) 2-、-(CH 2) 3-、-(CH 2) 4-、-(CH 2) 5-、-(CH 2) 6-、-(CH 2) 2-CF 2-、-(CH 2) 2-CHF-、-(CH 2) 3-C(CH 3) 2-和-(CH 2) 3-CF 2-，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述L 2选自单键、-CH＝CH-、-O-、-NHC(＝O)-、
Figure PCTCN2022074894-appb-000011
Figure PCTCN2022074894-appb-000012
所述
Figure PCTCN2022074894-appb-000013
分别独立地任选被1、2或3个R a取代，R a及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述L 2选自单键、-CH＝CH-、-O-和-NHC(＝O)-，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基，所述甲基、乙基、正丙基、异丙基、吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基分别独立地任选被1、2或3个R b取代，R b及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000014
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2和式R 3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R c取代，R c及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2和R 3分别独立地选自H和F，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2022074894-appb-000015
选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000016
Figure PCTCN2022074894-appb-000017
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基，所述吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基任选被1、2或3个R a取代，R a及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000018
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 6和R 7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、CH 3、OCH 3、CH 2CH 3和CF 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述连接在同一个碳原子上的R 6与R 7分别独立地任选连接形成一个任选被1、2或3个R取代的环丙基，R及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述连接在同一个碳原子上的R 6与R 7分别独立地任选连接形成一个环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述L选自-(CH 2) 4-、-(CH 2) 5-、-(CH 2) 6-、-(CH 2) 7-、-(CH 2) 8-、
Figure PCTCN2022074894-appb-000019
-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-和
Figure PCTCN2022074894-appb-000020
其他变量如本发明所定义。
本发明还有一些变量是由上述各变量任意组合而来。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示化合物选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000021
其中，X、R 2、R 3、L 1、L 2和L 3如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示化合物选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000022
其中，
Figure PCTCN2022074894-appb-000023
R 2、R 3、R 4、R 5和L如本发明所定义。
本发明还提供化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
Figure PCTCN2022074894-appb-000024
Figure PCTCN2022074894-appb-000025
Figure PCTCN2022074894-appb-000026
本发明还提供化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与mTOR和DNA-PK相关疾病的药物中的应用。
本发明还提供化合物W1盐酸盐的晶型A
Figure PCTCN2022074894-appb-000027
其特征在于，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：21.56±0.20°、27.00±0.20°、27.84±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐的晶型A的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.60±0.20°、9.12±0.20°、17.78±0.20°、21.56±0.20°、27.00±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐的晶型A的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.60±0.20°、9.12±0.20°、17.78±0.20°、21.56±0.20°、23.92±0.20°、26.12±0.20°、27.00±0.20°、27.84±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐的晶型A的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.60±0.20°、9.12±0.20°、17.78±0.20°、和/或8.00±0.20°、和/或10.32±0.20°、和/或13.56±0.20°、和/或15.28±0.20°、和/或16.02±0.20°、和/或18.16±0.20°、和/或19.94±0.20°、和/或20.72±0.20°、和/或21.08±0.20°、和/或21.56±0.20°、和/或22.34±0.20°、和/或23.58±0.20°、和/或23.92±0.20°、和/或25.30±0.20°、和/或26.12±0.20°、和/或27.00±0.20°、和/或27.84±0.20°、和/或28.90±0.20°、和/或29.41±0.20°、和/或30.05±0.20°、和/或30.71±0.20°、和/或31.36±0.20°、和/或32.20±0.20°、和/或32.96±0.20°、和/或33.57±0.20°、和/或36.08±0.20°、和/或38.32±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐的晶型A的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.60±0.20°、和/或8.00±0.20°、和/或9.12±0.20°、和/或10.32±0.20°、和/或13.56±0.20°、和/或15.28±0.20°、和/或16.02±0.20°、和/或17.78±0.20°、和/或18.16±0.20°、和/或19.94±0.20°、和/或20.72±0.20°、和/或21.08±0.20°、和/或21.56±0.20°、和/或22.34±0.20°、和/或23.58±0.20°、和/或23.92±0.20°、和/或25.30±0.20°、和/或26.12±0.20°、和/或27.00±0.20°、和/或27.84±0.20°、和/或28.90±0.20°、和/或29.41±0.20°、和/或30.05±0.20°、和/或30.71±0.20°、和/或31.36±0.20°、和/或32.20±0.20°、和/或32.96±0.20°、和/或33.57±0.20°、和/或36.08±0.20°、和/或38.32±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐的晶型A的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.598°、7.999°、9.115°、10.321°、13.561°、15.282°、16.022°、17.782°、18.163°、19.940°、20.721°、21.081°、21.560°、22.339°、23.581°、23.920°、25.300°、26.120°、27.001°、27.840°、28.897°、29.413°、30.046°、30.711°、31.361°、32.201°、32.961°、33.574°、36.080°和38.320°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐的晶型A的X射线粉末衍射谱图如图1所示。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐的晶型A的Cu Kα辐射的XRPD谱图解析数据如表1表示：
表1化合物W1盐酸盐的晶型A的XRPD衍射峰数据
Figure PCTCN2022074894-appb-000028
Figure PCTCN2022074894-appb-000029
在本发明的一些方案中，上述化合物W1盐酸盐具有如下结构：
Figure PCTCN2022074894-appb-000030
其中，x选自1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9和2.0。
在本发明的一些方案中，上述x选自1.8。
本发明还提供式(II)化合物
Figure PCTCN2022074894-appb-000031
其中，x选自1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9和2.0。
在本发明的一些方案中，上述式(II)化合物中，上述x选自1.8。
本发明还提供化合物W1晶型B
Figure PCTCN2022074894-appb-000032
其特征在于，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：9.02±0.20°、19.24±0.20°、23.32±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1晶型B的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：9.02±0.20°、13.96±0.20°、19.24±0.20°、20.76±0.20°、23.32±0.20°、24.72±0.20°、25.76±0.20°、30.12±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1晶型B的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：9.02±0.20°、13.96±0.20°、19.24±0.20°、和/或4.72±0.20°、和/或10.80±0.20°、和/或11.80±0.20°、和/或15.20±0.20°、和/或17.88±0.20°、和/或18.60±0.20°、和/或20.12±0.20°、和/或20.76±0.20°、和/或21.66±0.20°、和/或22.02±0.20°、和/或23.32±0.20°、和/或24.72±0.20°、和/或25.76±0.20°、和/或26.44±0.20°、和/或26.96±0.20°、和/或27.98±0.20°、和/或29.14±0.20°、和/或30.12±0.20°、和/或31.00±0.20°、和/或31.62±0.20°、和/或32.82±0.20°、和/或35.68±0.20°、和/或37.92±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1晶型B的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：9.02±0.20°、和/或4.72±0.20°、和/或10.80±0.20°、和/或11.80±0.20°、和/或13.96±0.20°、和/或15.20±0.20°、和/或17.88±0.20°、和/或18.60±0.20°、和/或19.24±0.20°、和/或20.12±0.20°、和/或20.76±0.20°、和/或21.66±0.20°、和/或22.02±0.20°、和/或23.32±0.20°、和/或24.72±0.20°、和/或25.76±0.20°、和/或26.44±0.20°、和/或26.96±0.20°、和/或27.98±0.20°、和/或29.14±0.20°、和/或30.12±0.20°、和/或31.00±0.20°、和/或31.62±0.20°、和/或32.82±0.20°、和/或35.68±0.20°、和/或37.92±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1晶型B的X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.719°、9.019°、10.801°、11.799°、13.960°、15.202°、17.880°、18.600°、19.241°、20.121°、20.761°、21.657°、22.022°、23.321°、24.719°、25.760°、26.440°、26.960°、27.980°、29.141°、30.118°、31.002°、31.624°、32.820°、35.678°和37.920°。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1晶型B的X射线粉末衍射谱图如图2所示。
在本发明的一些方案中，上述化合物W1晶型B的Cu Kα辐射的XRPD谱图解析数据如表2表示：
表2化合物W1晶型B的XRPD衍射峰数据
Figure PCTCN2022074894-appb-000033
Figure PCTCN2022074894-appb-000034
本发明还提供上述化合物W1盐酸盐的晶型A和/或化合物W1晶型B在制备治疗与mTOR和DNA-PK相关疾病的药物中的应用。
在本发明的一些方案中，上述与mTOR和DNA-PK相关疾病为人脑胶质瘤、食管癌(食道癌)或胃癌。
技术效果
本发明化合物对mTOR和DNA-PK具有良好的抑制活性。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述 事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，取代基可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR) 0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure PCTCN2022074894-appb-000035
中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2022074894-appb-000036
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2022074894-appb-000037
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。当该化学键的连接方式是不定位的，且可连接位点存在H原子时，则连接化学键时，该位点的H原子的个数会随所连接化学键的个数而对应减少变成相应价数的基团。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键
Figure PCTCN2022074894-appb-000038
直形虚线键
Figure PCTCN2022074894-appb-000039
或波浪线
Figure PCTCN2022074894-appb-000040
表示。例如-OCH 3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2022074894-appb-000041
中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连；
Figure PCTCN2022074894-appb-000042
中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2022074894-appb-000043
表示该哌啶基上的任意可连接位点可以通过1个化学键与其他基团 相连，至少包括
Figure PCTCN2022074894-appb-000044
这4种连接方式，即使-N-上画出了H原子，但是
Figure PCTCN2022074894-appb-000045
仍包括
Figure PCTCN2022074894-appb-000046
这种连接方式的基团，只是在连接1个化学键时，该位点的的H会对应减少1个变成相应的一价哌啶基。
除非另有规定，环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5-7元环”是指环绕排列5-7个原子的“环”。
除非另有规定，C n-n+m或C n-C n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C 1-12包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、和C 12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C 1-12包括C 1-3、C 1-6、C 1-9、C 3-6、C 3-9、C 3-12、C 6-9、C 6-12、和C 9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
除非另有规定，术语“C 1-6烷基”用于表示直链或支链的由1至6个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1-6烷基包括C 1-5、C 1-4、C 1-3、C 1-2、C 2-6、C 2-4、C 6和C 5烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1-6烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)、丁基(包括n-丁基，异丁基，s-丁基和t-丁基)、戊基(包括n-戊基，异戊基和新戊基)、己基等。
除非另有规定，术语“C 1-4烷基”用于表示直链或支链的由1至4个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1-4烷基包括C 1-2、C 1-3和C 2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1-4烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)、丁基(包括n-丁基，异丁基，s-丁基和t-丁基)等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1- 3烷基包括C 1-2和C 2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1- 3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，本发明术语“5-6元杂芳环”和“5-6元杂芳基”可以互换使用，术语“5-6元杂芳基”表示由5至6个环原子组成的具有共轭π电子体系的单环基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O) p，p是1或2)。5-6元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。所述5-6元杂芳基包括5元和6元杂芳基。所述5-6元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基或嘧啶基(包 括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)。
除非另有规定，术语“C 1-6烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至6个碳原子的烷基基团。所述C 1-6烷氧基包括C 1-4、C 1-3、C 1-2、C 2-6、C 2-4、C 6、C 5、C 4和C 3烷氧基等。C 1- 6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)、丁氧基(包括n-丁氧基、异丁氧基、s-丁氧基和t-丁氧基)、戊氧基(包括n-戊氧基、异戊氧基和新戊氧基)、己氧基等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C 1-3烷氧基包括C 1-2、C 2-3、C 3和C 2烷氧基等。C 1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定，术语“C 1-6烷氨基”表示通过氨基连接到分子的其余部分的那些包含1至6个碳原子的烷基基团。所述C 1-6烷氨基包括C 1-4、C 1-3、C 1-2、C 2-6、C 2-4、C 6、C 5、C 4、C 3和C 2烷氨基等。C 1-6烷氨基的实例包括但不限于-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-NHCH 2CH 3、-N(CH 3)CH 2CH 3、-N(CH 2CH 3)(CH 2CH 3)、-NHCH 2CH 2CH 3、-NHCH 2(CH 3) 2、-NHCH 2CH 2CH 2CH 3等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷氨基”表示通过氨基连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C 1-3烷氨基包括C 1-2、C 3和C 2烷氨基等。C 1-3烷氨基的实例包括但不限于-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-NHCH 2CH 3、-N(CH 3)CH 2CH 3、-NHCH 2CH 2CH 3、-NHCH 2(CH 3) 2等。
除非另有规定，“C 3-6环烷基”表示由3至6个碳原子组成的饱和环状碳氢基团，其为单环和双环体系，所述C 3-6环烷基包括C 3-5、C 4-5和C 5-6环烷基等；其可以是一价、二价或者多价。C 3-6环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：
Figure PCTCN2022074894-appb-000047
扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
如无特殊说明，本发明硅胶柱、薄层色谱所用溶剂配比均为体积比。
本发明采用下述缩略词：BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；Boc 2O代表二-叔丁基二碳酸酯；DMAP代表4-N,N-二甲基吡啶；HATU代表2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；DMA代表N,N-二甲基乙酰胺；DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；4M代表4摩尔/升；Pd(PPh 3) 4代表催化剂四三苯基膦钯；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；DHP代表2,3-二氢吡喃；THP代表四氢吡喃；DMF-DMA代表N,N-二甲基二甲缩醛；DCE代表二氯乙烷；Solutol代表聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯；Zhan 1B催化剂代表詹氏催化剂(1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-4,5-二氢咪唑-2-基[2-(异丙氧-5-(N,N-二甲胺磺酰)苯基]甲基二氯化钌)。
化合物依据本领域常规命名原则或者使用
Figure PCTCN2022074894-appb-000048
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
本发明粉末X-射线衍射(X-ray powder diffractometer,XRPD)方法
仪器型号：丹东浩元DX-2700BH X-射线衍射仪
测试方法：大约20mg样品用于XRPD检测。
详细的XRPD参数如下：
光管(X-ray Ggenrator)：Cu,kα,
Figure PCTCN2022074894-appb-000049
光管电压(Tube Voltage)：40kV
光管电流(Tube Current)：30mA
发散狭缝(Divergence Slit)：1mm
第一拉索狭缝(Primary Soller Slit)：28mm
第二拉索狭缝(Secondary Slit)：28mm
探测器狭缝(Detector Slit)：0.3mm
反散射狭缝(Antiscattering Silt)：1mm
扫描范围(scanning Scope)：3-40deg
扫描轴(Scan axis)：θs-θd
步径(Step size)：0.02deg
步长(Sanning Time)：0.5s
附图说明
图1为化合物W1盐酸盐的晶型A的XRPD图谱。
图2为化合物W1晶型B的XRPD图谱。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
中间体的合成
Figure PCTCN2022074894-appb-000050
Figure PCTCN2022074894-appb-000051
步骤一：
将B-1(200.00克，1.04摩尔)，m-CPBA(316.49克，1.56摩尔，85％含量)溶于1,2-二氯乙烷(2500毫升)中，反应混合物在氮气保护下90℃搅拌18小时。薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝1:1(体积比，以下关于溶剂的描述均为体积比)，R f＝0.17)点板显示原料反应完全。冷却到25℃，过滤，将滤液倒入饱和亚硫酸钠溶液(2000毫升)中，分液，水相用二氯甲烷萃取两次，每次1000毫升，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。粗品经硅胶柱(300-400目，石油醚:乙酸乙酯＝1:0到0:1)纯化得B-2。
步骤二：
将化合物B-2(125.00克，599.69毫摩尔)，三甲基硅烷氰(118.99克，1.20摩尔，150.05毫升)和三乙胺(166.94毫升，1.20摩尔)溶于二氯甲烷(1500毫升)中，再将苯甲酰氯(139.33毫升，1.20摩尔)用二氯甲烷(300毫升)稀释后滴加到反应液中。滴完后，将反应液加热到42℃，在氮气保护下搅拌18小时。薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10:1，R f＝0.54)点板显示原料反应完全。冷却反应液到25℃，混合物用水洗三次，每次1500毫升，水相用二氯甲烷(1000毫升)萃取一次，有机相合并，用饱和食盐水(2000毫升)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1:0到30:1)纯化得B-3。
步骤三：
将化合物B-3(110.00克，505.86毫摩尔)溶于二甲亚砜(1000毫升)中，加入碳酸钾(139.83克，1.01摩尔)，在0℃下缓慢滴加过氧化氢(194.43毫升，2.02摩尔，30％含量)，加毕，反应混合物在25℃下搅拌4小时。薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝3:1，R f＝0.35)点板显示原料反应完全。将反应液缓慢倒入水(2000毫升)中，过滤，滤饼减压干燥得粗品B-4直接用于下一步。
步骤四：
将化合物B-4(56.00克，237.83毫摩尔)溶于N，N-二甲基二甲缩醛(200毫升，1.51摩尔)中，在85℃下搅拌3小时，然后浓缩干，再将残余物溶于冰醋酸(300毫升，5.25摩尔)中，向其中滴加一水合肼(74.41克，1.19mol,72.24毫升，80％含量)，反应混合物在25℃下搅拌18小时。将反应液缓慢倒入水(2000毫升)中，过滤，滤饼减压干燥得粗品B-5直接用于下一步。
步骤五：
将化合物B-5(50.00克，192.69毫摩尔)和一水合对甲苯磺酸(3.67克，19.27毫摩尔)溶于三氯甲烷(300毫升)中，冷却到0℃，将DHP(162.08克，1.93摩尔，176.17毫升)滴加到反应液中，加毕，将反应混合物加热到75℃并搅拌18小时。薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.45)将反应液倒入水 (500mL)中，用二氯甲烷萃取两次，每次100毫升，有机相合并，用饱和食盐水(200毫升)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗品经硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝1/0-1/1)纯化得化合物BB-1(M+2+H＝345.0；2M+2+H＝687.0；M-84+2+H＝260.9)。
Figure PCTCN2022074894-appb-000052
步骤一：
将B-6(100克，395.42毫摩尔)，碳酸铯(167.49克，514.05毫摩尔)加入DMA(1500毫升)中，25℃下缓慢加入2-溴乙酸乙酯(83.21克，498.23毫摩尔，55.10毫升)，反应混合物在70℃搅拌18小时。冷却到25℃,过滤，滤液倒入冰水(2000毫升)中，过滤，滤饼干燥后用石油醚25℃打浆10分钟，过滤，干燥得到B-7。
步骤二：
往B-7(23.00克，67.85毫摩尔)的N-甲基吡咯烷酮(100毫升)溶液中，加入3-丁烯-1-胺盐酸盐(10.95克，101.77毫摩尔)，N,N-二异丙基乙基胺(35毫升，200.94毫摩尔)。混合物加热到130℃搅拌16小时。把反应混合物冷却到室温，然后倒入水(300毫升)中，用乙酸乙酯萃取两次，每次200毫升,有机相合并，依次用水(200毫升),饱和氯化钠水溶液(200毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得粗品B-8。
步骤三：
将B-8(23.00克，69.87毫摩尔)的冰醋酸(200毫升)溶液，在氮气保护下加热到80℃搅拌2小时。冷却反应液，然后浓缩除去溶剂，得到的残余物用水(100毫升)洗涤，过滤，真空干燥，再用石油醚/乙酸乙酯(20:1)打浆得到化合物B-9。
步骤四：
将B-9(17.00克，60.04毫摩尔)，六甲基二锡烷(28.44克，86.81毫摩尔)和Pd(PPh 3) 4(3.00克，2.60 毫摩尔)的1,4-二氧六环(200毫升)的混合物用氮气鼓吹后加热到120℃并搅拌3小时。把反应液冷却到室温，用水(200毫升)和乙酸乙酯(200毫升)稀释，再加入饱和氟化钾水溶液(200毫升)并搅拌1小时。分液，乙酸乙酯层依次用水(200毫升)，饱和氯化钠水溶液(200毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯4:1至2:1)纯化得BB-2(M+H＝369.0)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.62(s,1H),5.83-5.87(m,1H),5.01-5.10(m,2H),4.86(brs,1H),4.25(s,2H),4.20(t,J＝7.6Hz,2H),2.41-2.47(q,J 1＝7.6Hz,J 2＝14.8Hz,2H),0.25-0.39(m,9H).
Figure PCTCN2022074894-appb-000053
步骤一：
氮气氛围下，将邻苯二甲酰亚胺钾(54.69克，295.24毫摩尔)溶于DMF(500毫升)中，向其中缓慢加入B-10(40克，268.40毫摩尔)。反应混合物在60℃下搅拌14小时。冷却到室温，倒入饱和氯化钠和水(1000毫升，3:1)中，混合物用乙酸乙酯(500毫升)萃取一次，有机层依次用水(200毫升)，饱和氯化钠(200毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到B-11，粗品未经纯化直接用于下一步反应。
步骤二：
将B-11(60.00克，278.75毫摩尔)加入乙醇(1000毫升)中，加热到50℃，缓慢加入一水合肼(29.5毫升，606.97毫摩尔，纯度98％)，混合物加热回流反应1小时，反应过程中有越来越多的固体析出，薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯5:1，R f＝0.01)显示原料反应完全，冷却到室温，过滤，固体用乙醇淋洗三次，每次50毫升，搅拌下向滤液中加入4M氯化氢二氧六环溶液(140毫升)，有固体析出，过滤，固体用乙醇(40毫升)淋洗，滤液减压浓缩至干，剩余物用石油醚/乙酸乙酯(5:1,200毫升)打浆得到B-12。
步骤三：
将B-7(10.00克，29.50毫摩尔)加入N-甲基吡咯烷酮(60毫升)中，加入B-12(5.38克，44.25 毫摩尔)和N,N-二异丙基乙基胺(15毫升，86.12毫摩尔)，混合物加热到130℃搅拌26小时，薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1，R f＝0.2)显示反应完全。冷却，倒入水(150毫升)中，用乙酸乙酯萃取两次，每次100毫升，有机层合并，依次用水(100毫升)，饱和氯化钠水溶液(100毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得B-13，粗品未经纯化直接用于下一步反应。
步骤四：
将B-13(11.00克，32.05毫摩尔)加入冰醋酸(80毫升)中，在氮气保护下混合物加热到100℃搅拌2小时。冷却到室温，倒入水(150毫升)中，用乙酸乙酯萃取两次，每次100毫升，乙酸乙酯层合并，依次用水(150毫升)，饱和碳酸氢钠水溶液(150毫升)，饱和氯化钠水溶液(150毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物在石油醚/乙酸乙酯(10:1,300毫升)中打浆，过滤，固体经硅胶柱(100-200目,淋洗剂石油醚:乙酸乙酯4:1至1:1)纯化得BB-3(M+H＝297.1)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.72(s,1H),5.84-5.92(m,1H),4.96-5.12(m,3H),4.29(s,2H),4.07-4.11(m,2H),2.13-2.19(m,2H),1.75-1.83(m,2H).
Figure PCTCN2022074894-appb-000054
步骤一：
将B-7(15克，44.25毫摩尔)，N-Boc-丙二胺(11.57克，66.37毫摩尔)，N,N-二异丙基乙胺(17.16克，132.75毫摩尔)溶于100毫升的N-甲基吡咯烷酮中，加热到130℃并在130℃下搅拌18小时。将反应液冷却到室温，倒入500毫升水中，并用乙酸乙酯200毫升萃取三次，合并有机相，浓缩，得粗品B-14直接用于下一步。(M+H+2＝434.2)
步骤二：
将B-14(15克，34.70毫摩尔)溶于150毫升的冰醋酸中，加热到85℃并在85℃下搅拌18小时。将混合物浓缩，倒入200毫升水，并用乙酸乙酯100毫升萃取三次，合并有机相浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得B-15。(M+Na＝408.1)
步骤三：
将B-15(4.5克，11.65毫摩尔)，Pd(PPh 3) 4(2.69克，2.33毫摩尔)溶于100毫升1,4-二氧六环中，加入六甲基二锡烷(4.58克，13.98毫摩尔，2.90毫升)。混合液用氮气置换三次，然后加热到110℃，在110℃下搅拌18小时。将反应液冷却到25℃，加入饱和氟化钾溶液50毫升，在25℃下搅拌0.5小时。过滤，用乙酸乙酯50毫升萃取三次，合并有机相，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得化合物BB-4。(M+H＝472.2)
Figure PCTCN2022074894-appb-000055
步骤一：
将B-7(15克，44.25毫摩尔)，N-Boc-乙二胺(10.63克，66.37毫摩尔)，N,N-二异丙基乙基胺(17.16克，23.12毫摩尔)溶于100毫升的N-甲基吡咯烷酮中，加热到130℃，在130℃下搅拌18小时。将反应液冷却，倒入600毫升的水中，并用乙酸乙酯萃取三次每次200毫升，合并有机相浓缩得化合物B-16。(M+H＝418.2)
步骤二：
将B-16(16克，38.25毫摩尔)溶于100毫升的冰醋酸中，加热到85℃，在85℃下搅拌18小时。将反应液浓缩，倒入200毫升的水中，并用乙酸乙酯萃取三次每次100毫升，合并有机相浓缩。粗品经硅胶柱纯化(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得化合物B-17。(M+H+2＝374.1)
步骤三：
将B-17(8克，21.49毫摩尔)，Pd(PPh 3) 4(2.48克，2.15毫摩尔)溶于100毫升的1,4-二氧六环中，加入六甲基二锡烷(8.45克，25.79毫摩尔)，并用氮气置换三次，将反应液加热到110℃，并在100℃下搅拌4小时。将反应液冷却到25℃，倒入200毫升的饱和氟化钾溶液，在25℃下搅拌0.5小时，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取两次每次200毫升，合并有机相，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得化合物BB-5。(M+H＝457.9)
Figure PCTCN2022074894-appb-000056
步骤一：
将B-18(10克，46.29毫摩尔)，尿素过氧化氢(9.14克，97.21毫摩尔)溶于120毫升的二氯甲烷中，冷却到0℃后将三氟乙酸酐(19.44克，92.58毫摩尔)滴加到反应液中，逐渐恢复到25℃，并在25℃下搅拌4小时。将反应液倒入200毫升的饱和亚硫酸钠溶液中，分液，水相用二氯甲烷萃取三次，每次100毫升，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得化合物B-19.(M+H+2＝233.9)
步骤二：
将三氯氧磷(41.25克，269.02毫摩尔)冷却到0℃，将化合物B-19(9.5克，40.94毫摩尔)经半小时滴加到反应液中，然后将反应液加热到95℃，在95℃下搅拌2小时。将反应液浓缩，并用30毫升的水稀释，过滤，滤饼经真空干燥得化合物B-20。(M+H+2＝252.0)
步骤三：
将化合物B-20(5.6克，22.36毫摩尔)溶于25毫升的四氢呋喃溶液中，冷却到0℃，甲基溴化镁(3M，18.63毫升)滴加到反应液中，恢复至25℃，并在25℃下搅拌3小时。将反应液缓慢的倒入100毫升饱和氯化铵溶液中，并用乙酸乙酯萃取三次，每次30毫升，合并有机相浓缩。粗品经硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝1/0到20/1)纯化得化合物B-21。(M+H+2＝252.0).
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ＝7.84(d,J＝8.2Hz,1H),7.19(d,J＝8.4Hz,1H),3.55(s,1H),1.48(s,6H)
步骤四：
将3-丁烯-1-醇(1.21克，16.77毫摩尔)溶于20毫升的四氢呋喃溶液中加入叔丁醇钾(2.51克，22.35 毫摩尔)，在10到15℃下搅拌10分钟，然后将化合物B-21(1.4克，5.59毫摩尔)溶于3毫升的四氢呋喃溶液中加入到反应液中，在10到15℃下搅拌2小时。将反应液倒入50毫升的饱和氯化铵溶液中，并用乙酸乙酯萃取三次，每次20毫升，合并有机相浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到20/1)纯化得化合物BB-6。(M+H+2-18＝269.8)
Figure PCTCN2022074894-appb-000057
步骤一：
将化合物B-22(10克，77.79毫摩尔)溶于120毫升的DMF中，加入N-碘代丁二酰亚胺(17.50克，77.79毫摩尔)，然后加热到80℃并搅拌3小时。将反应液冷却到25℃，倒入200毫升的水中，过滤，滤饼干燥得化合物B-23。(M+H＝255.0)
步骤二：
将化合物B-23(5克，19.65毫摩尔)悬浮于溴化氢(29.80克，176.79毫摩尔，纯度：48％)水溶液中，冷却到0℃，然后液溴(8.16克，51.09毫摩尔)滴加到反应液中，并在0℃下搅拌10分钟，然后将亚硝酸钠(3.39克，49.12毫摩尔)溶于10毫升的水中滴加到反应液中，在0℃下搅拌1小时。将反应液过滤，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0)纯化得化合物BB-7。(M+H+2＝319.9)
Figure PCTCN2022074894-appb-000058
Figure PCTCN2022074894-appb-000059
步骤一：
将B-6(100克，395.42毫摩尔)，碳酸铯(167.49克，514.05毫摩尔)加入DMA(1500毫升)中，25℃下缓慢加入2-溴乙酸乙酯(83.21克，498.23毫摩尔，55.10毫升)，反应混合物在70℃搅拌18小时，。冷却到25℃,过滤，滤液倒入冰水(2000毫升)中，过滤，滤饼干燥后用石油醚25℃打浆10分钟，过滤，干燥得到B-7。
步骤二：
将邻苯二甲酰亚胺钾盐(11.51克，62.12毫摩尔)，WB-8(10克，56.47毫摩尔)加入到100毫升的DMF中，在70℃下搅拌18小时。过滤，滤液倒入100毫升的水中，并用乙酸乙酯(30毫升)萃取三次，合并有机相，用50毫升的饱和食盐水洗一次，再用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗品WB-9。(M+H:244.2)
步骤三：
将WB-9(10克,41.10毫摩尔)溶于150毫升的无水乙醇中，加入一水合肼(6.30克，123.30毫摩尔，6.12毫升，纯度98％)，然后混合物加热到60℃，在60℃下搅拌18小时。薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝3:1，R f＝0.48)显示WB-9被消耗完全，冷却至25℃，过滤，滤液加入4M的氯化氢二氧六环30.83毫升，25℃搅拌0.5小时，过滤，浓缩，得盐酸盐WB-10。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.26-7.89(m,3H),5.91-5.68(m,1H),5.12-4.81(m,2H),2.73(br s,2H),2.13-1.91(m,2H),1.57(q,J＝7.4Hz,2H),1.33(br t,J＝10.4Hz,4H)。
步骤四：
将盐酸盐WB-10(5.30克，35.40毫摩尔)溶于100毫升的N-甲基吡咯烷酮中，加入N,N-二异丙基乙胺(15.25克，118.80毫摩尔)，在25℃下搅拌10分钟，然后加入B-7(10克，29.50毫摩尔)，加热到130℃并持续搅拌18小时。冷却至25℃，倒入300毫升水中，用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，合并有机相并用100毫升的饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得WB-11。(M+H＝373.1)
步骤五：
将WB-11(10克，26.93毫摩尔)溶于冰醋酸(100毫升)中，加热到80℃，在80℃下搅拌18小时。浓缩，并用100毫升的水稀释，再用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到3/1)纯化得WB-12。(M+H＝325.1)
步骤六：
将WB-12(7.0克，21.52毫摩尔)，六甲基二锡烷(10.58克，32.29毫摩尔，6.7毫升)，Pd(PPh 3) 4(2.49克，2.15毫摩尔)溶于100毫升的二氧六环中，并用氮气置换三次，将混合物加热到120℃在搅拌4小时。冷却至25℃，加入饱和氟化钾溶液100毫升，25℃搅拌20分钟，过滤，滤液用乙酸乙酯(50毫升)萃取三次，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得WBB-2。(M+H＝410.9)
Figure PCTCN2022074894-appb-000060
步骤一：
将单质碘(53.07克，209.08毫摩尔)溶于无水乙醇(300毫升)中，再加入硫酸银(65.19克，209.08毫摩尔)和WB-13(24.70克，209.08毫摩尔)。反应混合物在25℃下搅拌1小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1(体积比，以下关于溶剂的描述均为体积比)，R f＝0.19)点板显示原料反应完全。将反应液过滤，滤液减压浓缩旋干，加入二氯甲烷(1升)稀释，有机相用饱和亚硫酸钠溶液(400毫升)洗涤一次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩旋干得到WB-14直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.91(d,J＝1.6Hz,1H),7.39-7.43(dd,J 1＝2.0Hz,J 2＝8.0Hz,1H),6.71(d,J＝8.0Hz,1H),4.64(brs,2H)
步骤二：
将化合物WB-14(47.00克，192.60毫摩尔)和三丁基乙烯基锡(152.68克，481.49毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(500毫升)中，氮气保护下加入Pd(PPh 3) 4(44.51克，38.52毫摩尔)。反应液加热到90–100℃，在氮气保护下搅拌4小时。反应液冷却到25℃，加入饱和氟化钾水溶液(300毫升)淬灭反应，并搅拌30分钟，将反应液过滤，滤液分别用乙酸乙酯(300毫升)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水(200毫升)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1:0到3:1)纯化得WB-15。
M+H＝145.2； 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.51(s,1H),7.32(dd,J 1＝1.6Hz,J 2＝8.0Hz,1H),6.68–6.61(m,2H),5.68–5.64(m,1H),5.45–5.43(m,1H),4.27(brs,2H)。
步骤三：
将亚硝酸钠(4.59克，66.59毫摩尔)溶于水(10毫升)，于0℃下缓慢滴加到WB-15(8克，55.49毫摩尔)，冰醋酸(176.61克，2.49摩尔)和2摩尔每升硫酸(25.03克，255.25毫摩尔)的混合溶液中，滴加过程持续30分钟，加完后，在0℃下反应1.5小时。脲(33.32克，554.89毫摩尔)加入到反应液中。加完后，将溴化亚铜(9.55克，66.59毫摩尔)和溴化钾(316.96克，2.66摩尔)溶于水(80毫升)，并将上述反应液缓慢加入到溴化亚铜和溴化钾的悬浮液中，滴加过程大约30分钟，加完后，反应液在0℃下继续反应1.5小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1，R f＝0.80)点板显示原料反应完全。将反应液过滤，滤饼用水(50毫升)洗涤，滤液用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(50毫升)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩旋干，粗品经硅胶柱(100-200目硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1/0-5/1)纯化得到WB-16.
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.73(s,1H),7.72–7.60(m,1H),7.32–7.30(m,1H),6.97–6.90(m,1H),5.72–5.66(m,1H),5.46–5.43(m,1H)
步骤四：
将化合物WB-16(8.60克，41.34毫摩尔)溶于二甲亚砜(80毫升)中，加入碳酸钾(11.43克，82.67毫摩尔)，在0℃下缓慢滴加过氧化氢(18.75克，165.34毫摩尔，30％含量)，加毕，反应混合物在25℃下搅拌2小时。将反应液缓慢倒入水(200毫升)中，过滤，滤饼减压干燥得粗品WB-17直接用于下一步。(M+H＝225.9；M+H+2＝227.9)
步骤五：
将化合物WB-17(9.20克，40.70毫摩尔)溶于DMF-DMA(50毫升)中，在80℃下搅拌2小时，然后浓缩干，再将残余物溶于冰醋酸(50毫升)中，向其中滴加一水合肼(2.44克，48.83毫摩尔)，反应混合物在10-15℃下搅拌2小时。将反应液缓慢倒入水(300毫升)中，过滤，滤饼减压干燥得粗品WBB-3直接用于下一步。
M+H＝250.0；M+H+2＝252.0. 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ8.51(s,1H),8.27(s,1H),7.86–7.84(m,1H),7.81–7.74(m,1H),7.05–6.98(m,1H),5.94–5.90(m,1H),5.55–5.50(m,1H)
Figure PCTCN2022074894-appb-000061
Figure PCTCN2022074894-appb-000062
步骤一：
将化合物WB-18(45克，213.85毫摩尔)溶于无水二氯甲烷(500毫升)，再向反应液中加入尿素过氧化氢(40.23克，427.67毫摩尔)，将反应液降温至0℃，逐滴加入三氟乙酸酐(89.83克，427.69毫摩尔)，反应液在25℃下搅拌反应2小时。将反应液缓慢倒入饱和亚硫酸钠水溶液(1000毫升)，在15-20℃搅拌0.5小时，用二氯甲烷(300毫升)萃取三次，用水(500毫升)洗涤两次，用饱和食盐水(500毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂得到化合物WB-19。M+H＝228.0
步骤二：
将化合物WB-19(10克，44.16毫摩尔)和硫酸二甲酯(16.71克，132.49毫摩尔)混合，用氮气置换反应瓶中的空气三次，然后加热到100℃搅拌反应0.5小时。将反应液冷却至0℃，用水(150毫升)稀释，再向反应瓶中加入氰化钠(3.68克，75.08毫摩尔)，反应温度缓慢升温至15-20℃搅拌反应10小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1,R f:0.5)点板显示反应完全。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8左右，用乙酸乙酯(50毫升)萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水(50毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化得到化合物WB-20。 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ＝7.96(d,J＝6.4Hz,1H).
步骤三：
将化合物WB-20(2克,8.49毫摩尔)悬浮于水中(2.6毫升)然后在冰浴下慢慢加入浓硫酸(15毫升)，然后加热到70℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至25℃，然后加入水(30毫升)和乙酸乙酯(100毫升)，水相用氢氧化钠固体调节pH到7～8,然后用乙酸乙酯萃取(100毫升)两次，合并有机相并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去溶剂得到化合物WB-21。M+H+2＝255.0. 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ＝7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(brs,1H),5.67(brs,1H).
步骤四：
将化合物WB-21(2克,7.89毫摩尔)悬浮于DMF-DMA(17.94克,150.55毫摩尔)中，并加热到90℃反应2小时。减压浓缩除去溶剂得到黄色固体，将此黄色固体溶于醋酸(20毫升)，然后将一水合肼(1.07克，21.31毫摩尔)慢慢滴加到反应体系中，并在25℃下反应2小时，向反应液中加入乙酸乙酯(20毫升)并搅拌10分钟，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤得到化合物WB-22。M+H+2＝279.0. 1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ＝8.49(s,1H),8.28(d,J＝8.8Hz,1H).
步骤五：
将化合物WB-22(880毫克,3.17毫摩尔)和DHP(1.07克,12.69毫摩尔)溶于氯仿(10毫升)中， 然后加入对甲苯磺酸(54.61毫克，317.14微摩尔)，加热到60～65℃下搅拌3小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1,R f＝0.5)点板显示反应完全。反应液冷却到25℃，加入水(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升)，分离有机相并用饱和食盐水洗涤(30毫升)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1到1:2)纯化得到化合物WBB-4。 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ＝8.44(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),5.59-5.62(dd,J＝2.8Hz,8.8Hz,1H),4.10-4.14(m,1H),3.74-3.75(m,1H),2.23-2.27(m,1H),2.04-2.07(m,1H),1.60-1.74(m,3H),1.69(brs,1H).
Figure PCTCN2022074894-appb-000063
步骤一：
将WB-23(10.00克，73.46毫摩尔)溶于冰醋酸(160毫升)中，于0℃下分批加入N-碘代丁二酰亚胺(16.53克，73.46毫摩尔)。反应混合物在25℃下搅拌16小时。将反应液减压浓缩至一半体积，过滤，滤饼用石油醚(60毫升)洗涤两次，然后固体真空减压除去溶剂直接得到WB-24直接用于下一步。 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.84(d,J＝6.8Hz,1H),6.49(d,J＝10.8Hz,1H),4.79(brs,2H)
步骤二：
将化合物WB-24(12.64克，48.24毫摩尔),乙烯基三氟硼酸钾盐(7.11克，53.06毫摩尔)和碳酸铯(47.15克，144.72毫摩尔)溶于无水四氢呋喃(120毫升)和水(12毫升)中，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(3.94克，4.82毫摩尔)。反应液加热到85℃，在氮气保护下搅拌16小时。反应液冷却到25℃，加入水(60毫升)，用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水(50毫升)洗一次，无水硫酸钠干燥，布氏漏斗抽滤滤之后滤液真空浓缩浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1:0到3:1)纯化得WB-25。
M+H＝163.0； 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.42(d,J＝7.2Hz,1H),6.53–6.61(m,1H),6.40–6.43(m,1H),5.59–5.64(m,1H),5.40–5.45(m,1H),4.40(brs,2H)
步骤三：
将亚硝酸钠(2.99克，43.29毫摩尔)溶于水(12毫升)，于0℃下缓慢滴加到WB-25(5.85克，36.07毫摩尔)，冰醋酸(114.81克，1.91摩尔)和2摩尔/升硫酸(16.28克，165.94毫摩尔)的 混合溶液中，滴加过程持续30分钟，加完后，在0℃下反应1.5小时。脲(21.67克，360.75毫摩尔)加入到反应液中。加完后，将溴化亚铜(6.21克，43.29毫摩尔)和溴化钾(206.06克，2.66摩尔)溶于水(60毫升)，并将上述反应液缓慢加入到溴化亚铜和溴化钾的悬浮液中，滴加过程大约30分钟，加完后，反应液在0℃下继续反应1.5小时。薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝5:1，R f＝0.80)点板和将反应液过滤，滤饼用水(50毫升)洗涤，滤液用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(50毫升)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩旋干，粗品经硅胶柱(100-200目硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1/0-5/1)纯化得到WB-26.
M+H＝130.3； 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.76(d,J＝6.8Hz,1H),7.48–7.50(m,1H),6.90–6.97(m,1H),5.69–5.74(m,1H),5.47–5.53(m,1H)
步骤四：
将化合物WB-26(4.00克，17.70毫摩尔)溶于二甲亚砜(40毫升)中，加入碳酸钾(4.89克，35.39毫摩尔)，在0℃下缓慢滴加过氧化氢(8.02克，70.78毫摩尔，30％含量)。加毕，反应混合物在25℃下搅拌2小时。将反应液缓慢倒入水(100毫升)中，过滤，滤饼减压干燥得WB-27直接用于下一步。(M+H＝244.1；M+H+2＝246.1)
步骤五：
将化合物WB-27(3.00克，12.29毫摩尔)溶于N，N-二甲基二甲缩醛(30毫升)中，在80℃下搅拌2小时，然后浓缩干，再将残余物溶于冰醋酸(30毫升)中，向其中滴加一水合肼(738.41毫克，14.75毫摩尔)，反应混合物在10-15℃下搅拌2小时。将反应液缓慢倒入水(300毫升)中，过滤，滤饼减压干燥得WBB-5直接用于下一步。(M+H＝268.0；M+H+2＝270.0)
实施例1
Figure PCTCN2022074894-appb-000064
Figure PCTCN2022074894-appb-000065
步骤一：
将3-丁烯-1-醇(1.26克，17.46毫摩尔)溶于无水四氢呋喃(25毫升)中，加入叔丁醇钾(3.92克，34.92毫摩尔)，在25℃搅拌10分钟，然后将化合物BB-1(4.00克，11.64毫摩尔)的四氢呋喃(10毫升)溶液加到反应液中，反应混合物在25℃搅拌2小时。薄层色谱(石油醚/乙酸乙酯＝1:1，R f＝0.40)显示反应完成。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(200毫升)中，用乙酸乙酯萃取两次，每次100毫升，有机相合并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到3/1)纯化得化合物1-1。
步骤二：
将BB-2(4.00克，10.90毫摩尔)，1-1(4.10克，10.81毫摩尔)和双(三苯基膦)二氯化钯(0.5克，712.36微摩尔)加入DMA(40毫升)中，混合物用氮气鼓吹后，密封，加热到90℃并搅拌12小时。冷却反应液，加乙酸乙酯(200毫升)稀释,依次用水(100毫升)洗涤两次，饱和氯化钠水溶液(100毫升)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，滤液浓缩，剩余物经薄层硅胶(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)过滤得到化合物1-2，粗品直接用于下一步反应。
步骤三：
往1-2(5.7克,11.34毫摩尔)的1,2-二氯乙烷(30毫升)中，加入Boc 2O(3.20克,14.66毫摩尔)和DMAP(0.25克,2.05毫摩尔)，反应混合物加热到70℃并搅拌14小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，R f＝0.15)显示反应完成。冷却反应液，用二氯甲烷(20毫升)稀释，水洗(10毫升)洗涤两次，饱和氯化钠水溶液(10毫升)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，剩余物用硅胶柱(300-400目，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得到中间体1-3。
步骤四：
将1-3(1.75克，2.90毫摩尔)和詹氏催化剂(0.168克，228.96微摩尔)加入1,2-二氯乙烷(300毫升)中，混合物用氮气鼓吹，加热到100℃(油浴温度)并搅拌12小时。反应液冷却到25℃，补加詹氏催化剂(0.185克，252.13微摩尔)，混合物氮气鼓吹后继续加热到100℃(油浴温度)搅拌12小时。冷却，混合物浓缩至干，剩余物经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:2至乙酸乙酯)得到化合物1-4。
步骤五：
将1-4(0.60克，756.31微摩尔)溶于四氢呋喃(20毫升)中，氮气保护下加入50％湿钯碳(0.05克，10％含量),混合物经氢气(球)换气数次后在25℃搅拌18小时。过滤，滤液减压浓缩至干，剩余物经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化得到1-5。
步骤六：
将1-5(0.50克，613.84微摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)中，冷却至0℃，缓慢滴加三氟乙酸(2.00毫升)，加毕，移除冷却浴，反应混合物在20℃搅拌14小时，在低于30℃水浴中将混合物浓缩至干，加乙酸乙酯(10毫升)，再浓缩至干，向剩余固体中加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至7-8，过滤，固体用水(3毫升)淋洗，干燥。将固体悬浮于乙腈(12毫升)中，在70℃搅拌30分钟，过滤，滤液浓缩后经高效液相色谱分离{分离条件为柱:Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:24％-44％,10分钟}得到化合物1。
M+H＝393.2； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.51(brs,1H),8.20(brs,1H),7.94(d,J＝7.6Hz,1H),7.83(s,1H),7.68(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(brs,1H),4.39(brs,2H),4.20(s,2H),3.98(t,J＝6.8Hz,2H),1.73-1.61(m,6H),1.40-1.38(m,2H).
实施例2
Figure PCTCN2022074894-appb-000066
Figure PCTCN2022074894-appb-000067
步骤一：
将BB-3(2.75克，9.25毫摩尔)，六甲基二锡烷(4.42克，13.50毫摩尔)和Pd(PPh 3) 4(470毫克，406.73微摩尔)加入1,4-二氯六环(30毫升)中，反应混合物经氮气鼓吹后加热到120℃搅拌2小时。冷却到室温，加饱和氟化钾水溶液(50毫升)搅拌1小时，用水(50毫升)和乙酸乙酯(100毫升)稀释，经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(50毫升)淋洗，分液，乙酸乙酯层合并，用水(100毫升)，饱和氯化钠水溶液(100毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得2-1。
步骤二：
将化合物2-1(1.00克，2.62毫摩尔)，1-1(1.00克，2.64毫摩尔)和双(三苯基膦)二氯化钯(100毫克，142.47微摩尔)加入DMA(10毫升)中，混合物氮气置换后加热到100℃搅拌12小时。冷却，加乙酸乙酯(100毫升)稀释，依次用水(100毫升)，饱和氯化钠水溶液(100毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，剩余物经短硅胶柱(100-200目，乙酸乙酯)快速纯化得到2-2。
步骤三：
将化合物2-2(0.85克，1.65毫摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(10毫升)中，加入Boc 2O(0.60克，2.75毫摩尔)和DMAP(60毫克，491.13微摩尔)。氮气保护下，反应混合物加热到70℃下搅拌4小时。冷却，加二氯甲烷(50毫升)稀释，用水洗两次，每次50毫升，饱和氯化钠水溶液(50毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物经硅胶柱(100-200目,石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得到2-3。
步骤四：
将2-3(0.3克，486.45微摩尔)和詹氏催化剂(50毫克，68.14微摩尔)加入1,2-二氯乙烷(60毫升)中，混合物经氮气鼓吹后加热到100℃搅拌14小时。冷却，浓缩，剩余物经硅胶柱(100-200目，石 油醚:乙酸乙酯＝1:1至0:1)纯化得2-4。
步骤五：
将化合物2-4(0.10克，169.88微摩尔)溶于四氢呋喃(5毫升)中，氮气保护下，加入50％湿钯碳(0.1克，10％含量)，混合物用氢气置换数次，在氢气球下，25℃下搅拌14小时。过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗两次，每次3毫升，滤液减压浓缩至干，得2-5，未经纯化直接用于下一步反应。
步骤六：
将2-5(105毫克，160.36微摩尔)溶于二氯甲烷(3毫升)中，0℃下缓慢滴加三氟乙酸(924.00毫克，8.10毫摩尔，0.6毫升)，混合物在20℃下搅拌14小时，在低于35℃下减压浓缩，剩余物加乙酸乙酯(5毫升)再浓缩一次，搅拌下固体用饱和碳酸氢钠水溶液处理至pH＝7-8，过滤，用水(3毫升)淋洗，固体干燥，用乙腈(5毫升)打浆，过滤，并用乙腈(2毫升)淋洗；固体经制备板纯化两次(甲醇/二氯甲烷/乙酸乙酯1:10:11)得产物；滤液浓缩后经制备高效液相色谱纯化(色谱条件Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:25％-52％,10分钟)，目标馏分合并浓缩后用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH为7-8，过滤之后然后用水(1毫升)洗涤，真空干燥得产物，两批产物合并得到化合物2。
(M+1):407.0； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝14.54(brs,1H),8.22(brs,1H),7.95(d,J＝7.6Hz,1H),7.86(s,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.66(s,1H),4.69(s,2H),4.22(s,2H),4.04(t,J＝7.6Hz,2H),1.82-1.75(m,4H),1.60-1.38(m,6H).
实施例3
Figure PCTCN2022074894-appb-000068
Figure PCTCN2022074894-appb-000069
步骤一：
将化合物3-1(3.00克，35.66毫摩尔)溶于四氢呋喃(50毫升)中，氮气保护下加入林德拉催化剂(Pd/CaCO 3，1.00克，5％含量)。反应混合物经氢气置换数次后在氢气球(15psi)25℃搅拌16小时，薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯3:1，R f＝0.2)显示反应完全，混合物经硅藻土过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗两次，每次10毫升，滤液在低于30℃下浓缩至干，得化合物3-2。
步骤二：
将化合物3-2(2.2克，25.54毫摩尔)溶于四氢呋喃(30毫升)中，氮气保护下加入叔丁醇钾(5.88克)，混合物在25℃下搅拌15分钟，加入BB-1(6.00克，17.46毫摩尔)的四氢呋喃(50毫升)溶液，反应混合物在25℃下搅拌2小时，薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝2:1，R f＝0.25)点板显示反应完全，将混合物倒入饱和氯化铵水溶液(200毫升)中，用乙酸乙酯(200mL)萃取，有机层依次用水(100毫升)，饱和氯化钠水溶液(100毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物经硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝4:1至2:1)得化合物3-3。
步骤三：
将化合物2-1(1.80克，4.72毫摩尔)，化合物3-3(2.00克，4.82毫摩尔)加入DMA(20毫升)中，氮气保护下加入双(三苯基膦)二氯化钯(180.00毫克，256.25微摩尔)，混合物用氮气鼓吹后再氮气氛围下加热到100℃搅拌2小时。冷却，倒入水(50毫升)中，用乙酸乙酯萃取两次，每次60毫升，乙酸乙酯层依次用水(100毫升)，饱和氯化钠水溶液(100毫升)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物用石油醚/乙酸乙酯(50毫升,1:1)打浆得化合物3-4直接用于下一步反应。
步骤四：
将化合物3-4(2.30克，4.33毫摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(25毫升)中，加入Boc 2O(1.42克，6.50 毫摩尔)和DMAP(160毫克，1.31毫摩尔),混合物在氮气保护下，于70℃搅拌14小时，冷却，用二氯甲烷(100毫升)稀释，用水洗两次，每次50毫升；饱和氯化钠水溶液(50毫升)洗，无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩，剩余物经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得化合物3-5。
步骤五：
将化合物3-5(1.80克，2.85毫摩尔)加入1,2-二氯乙烷(300毫升)中，氮气保护下加入詹氏催化剂(300毫克，408.86微摩尔)，混合物经氮气鼓吹后加热到100℃搅拌14小时。冷却，减压浓缩至干，剩余物经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1:1至1:2)纯化得化合物3-6。
步骤六：
将化合物3-6(300.00毫克，497.77微摩尔)溶于四氢呋喃(5毫升)中，氮气保护下加入50％湿钯碳(100毫克，10％含量)，混合物经氢气置换后在25℃，氢气球(15psi)搅拌12小时。过滤，滤饼用二氯甲烷(4毫升)淋洗，滤液减压浓缩得化合物3-7，未经纯化直接用于下一步反应。
步骤七：
将化合物3-7(310毫克，512.65微摩尔)溶于二氯甲烷(5毫升)中，缓慢滴加三氟乙酸(1毫升，13.51毫摩尔)。混合物在25℃下搅拌18小时。混合物减压浓缩至干，剩余物用饱和碳酸氢钠水溶液调至pH＝7-8，收集析出的产品并用水(2毫升)洗，干燥，经制备板(甲醇:二氯甲烷:乙酸乙酯＝1:10:11)分离纯化得到化合物3。
M+H＝421.3； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.45(brs,1H),8.17(brs,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(s,1H),7.57(s,1H),4.50(s,2H),4.20(s,2H),3.88(t,J＝7.6Hz,2H),1.87-1.75(m,2H),1.72-1.62(m,2H),1.50-1.38(m,8H).
实施例4
Figure PCTCN2022074894-appb-000070
步骤一：
将化合物3-6(300.00毫克，497.77微摩尔)溶于二氯甲烷(5毫升)，氮气保护下滴加三氟乙酸(1毫升，13.51毫摩尔)，混合物在25℃下搅拌14小时，减压浓缩，加乙酸乙酯(5毫升)再浓缩一次，剩余物用饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝7-8，收集析出的产品，用水(3毫升)洗，干燥，经两次制备板(甲 醇:二氯甲烷:乙酸乙酯＝1:10:11)分离纯化得化合物4。
M+H＝419.2； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.53(brs,1H),8.10(brs,1H),7.87(s,1H),7.77-7.69(m,2H),7.59(s,1H),5.66-5.59(m,1H),5.49-5.40(m,1H),4.75-4.40(m,2H),4.24-4.15(m,2H),4.07-3.92(m,2H),2.21-2.15(m,2H),2.04-1.97(m,2H),1.80-1.74(m,4H).
实施例5
Figure PCTCN2022074894-appb-000071
步骤一：
将化合物1-4(50.00毫克，487.01微摩尔)溶于二氯甲烷(1毫升)，缓慢滴加三氟乙酸(0.2毫升，2.70毫摩尔)，混合物在25℃下搅拌14小时，减压浓缩，剩余物用N,N-二甲基甲酰胺(1毫升)溶解，加0.3毫升饱和碳酸氢钠水溶液处理，经制备高效液相色谱(柱:Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:20％-40％,12分钟)分离纯化并用碳酸氢钠水溶液中和处理得化合物5。(M+H:391.2)； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.22(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(s,1H),5.50(s,2H),4.31-4.17(m,6H),2.38-2.304(m,4H).
实施例6
Figure PCTCN2022074894-appb-000072
Figure PCTCN2022074894-appb-000073
步骤一：
将烯丙基羟乙基醚(1.78克，17.46毫摩尔)溶于30毫升的四氢呋喃溶液中，冷却到0℃，加入钠氢(1.40克，34.92毫摩尔，纯度：60％)，在0℃下搅拌10分钟，再将BB-1(3克，8.73毫摩尔)加入到反应液中，在25℃下搅拌2小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，R f:0.24)显示BB-1反应完全，一个主要的新点生成。将反应液缓慢倒入50毫升的饱和氯化铵溶液中，并用20毫升的乙酸乙酯萃取3次，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得化合物6-1。
步骤二：
将BB-2(2g，5.45毫摩尔),化合物6-1(2.45克，5.99毫摩尔)，二(三苯基膦)二氯化钯(764.94毫克，1.06毫摩尔)溶于30毫升的DMA中，并用氮气置换3次，加热到100℃，并在100℃下反应18小时。将反应液冷却到25℃，倒入100毫升的水中，乙酸乙酯20毫升萃取三次，合并有机相浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化得化合物6-2。(M+H＝533.3)
步骤三：
将化合物6-2(1.1g，2.07毫摩尔)，DMAP(50.46毫克，413.07微摩尔)，Boc 2O(901.52毫克，4.13毫摩尔)溶于20毫升的1,2-二氯乙烷中，加热到85℃，在85℃下搅拌18小时。将反应液冷却到25℃，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化得化合物6-3。(M+H＝633.4)
步骤四：
将化合物6-3(700毫克，1.11毫摩尔)，詹式催化剂(162.36毫克，221.27微摩尔)溶于20毫升的1,2-二氯乙烷中，并用氮气置换3次，将混合物加热到90℃并在90℃下搅拌18小时。将反应液冷却到25℃，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化得化合物6-4。(M+H＝605.4)
步骤五：
将化合物6-4(140毫克，231.54微摩尔)溶于10毫升的四氢呋喃中，在氮气保护下加入钯/碳(200毫克，纯度：10％)，悬浮液并用氢气置换几次，反应液在氢气球(15psi)环境中25℃下搅拌18小时。过滤，浓缩得化合物6-5直接用于下一步反应。(M+H＝607.4)
步骤六：
将化合物6-5(180毫克，296.70微摩尔)溶于10毫升的二氯甲烷中，加入三氟乙酸(3.08g，27.01毫摩尔，2毫升)，在25℃下搅拌18小时。反应液经浓缩得粗品，经制备高效液相色谱(分离柱型号:Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:12％-42％,10分钟)纯化得化合物6的盐酸盐。(M+H＝423.2) 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.45(br s,1H),7.86(d,J＝7.6Hz,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(s,1H),4.56(br d,J＝4.4Hz,2H),4.22(s,2H),3.88-3.81(m,2H),3.71(br d,J＝4.4Hz,2H),3.50(br t,J＝5.2Hz,2H),1.79(br d,J＝4.6Hz,2H),1.58(br s,2H),1.43(br d,J＝4.4Hz,2H).
实施例7
Figure PCTCN2022074894-appb-000074
步骤一：
将羟基乙酸叔丁酯(1.54克，11.64毫摩尔)溶于20毫升的四氢呋喃中，冷却到0℃，在0℃下加入钠氢(931.21毫克，23.28毫摩尔，纯度：60％)，并在0℃下搅拌15分钟，然后把化合物BB-1(2克，5.82毫摩尔)加入到反应液中，反应温度逐渐升至25℃搅拌18小时。将反应液缓慢倒入100毫升饱和氯化铵溶液中，并用乙酸乙酯50毫升萃取三次。合并有机相，浓缩。粗品7-1直接用于下一步。(M+H+2＝440.9)
步骤二：
将化合物BB-4(2.5克，5.32毫摩尔)，化合物7-1(2.34克，5.32毫摩尔)，二(三苯基膦)二氯化钯(746.46毫克，1.06毫摩尔)溶于40毫升的DMA中，并用氮气置换三次，然后加热到100℃，在100℃下搅拌18小时。将反应液冷却到25℃，倒入100毫升的水中，并用乙酸乙酯50毫升萃取三次，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化得7-2。(M+H＝666.3)
步骤三：
将化合物7-2(500毫克，751.05微摩尔)溶于25毫升的1,2-二氯乙烷中，加入三氟乙酸(7.70克，67.53毫摩尔，5毫升)，在25℃下搅拌18小时。将混合物浓缩，得化合物7-3不经纯化直接用于下一步。(M+H＝426.2)
步骤四：
将化合物7-3(350毫克，822.75微摩尔)溶于10毫升的DMF中，加入三乙胺(249.76毫克，2.47毫摩尔)，HATU(312.84毫克，822.75微摩尔)。然后混合物在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩，用10毫升的乙酸乙酯稀释，过滤，滤液浓缩，滤液和滤饼分别经制备高效液相色谱(分离柱型号:Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:13％-33％,12分钟)纯化后合并浓缩得化合物7的盐酸盐。(M+H＝408.2) 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.73-8.68(m,1H),8.53(s,1H),8.07(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(s,1H),7.84(d,J＝7.6Hz,1H),5.14(br s,2H),4.24(br s,2H),4.01(br t,J＝6.2Hz,2H),3.24(br d,J＝5.4Hz,2H),1.92(br s,2H).
实施例8
Figure PCTCN2022074894-appb-000075
Figure PCTCN2022074894-appb-000076
步骤一：
将BB-5(4.1克，8.99毫摩尔)，7-1(3.95克，8.99毫摩尔)，双(三苯基膦)二氯化钯(1.26克，1.80毫摩尔)溶于100毫升的DMF中，并用氮气置换三次，将反应液加热到100℃，在100℃下搅拌18小时。将反应液冷却到25℃，倒入200毫升的水中，并用乙酸乙酯萃取两次每次100毫升，合并有机相浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化得化合物8-1。(M+H＝652.3)
步骤二：
将8-1(1.4克，2.15毫摩尔)溶于25毫升的二氯甲烷中，加入三氟乙酸(7.7克，67.53毫摩尔)，并在25℃下搅拌18小时。浓缩，粗品用15毫升的乙酸乙酯打浆得化合物8-2。(M+H＝412.2)
步骤三：
将8-2(1克，2.43毫摩尔)溶于20毫升的DMF中，加入三乙胺(737.94毫克，7.29毫摩尔)，HATU(924.29毫克，2.43毫摩尔)，并在25℃下搅拌18小时。浓缩，粗品用乙酸乙酯打浆，过滤，滤饼经制备高效液相色谱(分离柱型号:Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相:[水(0.1％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:12％-32％,10分钟)纯化得化合物8的三氟乙酸盐。(M+H＝394.2)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.78(br s,1H),8.11(d,J＝7.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.86-7.79(m,2H),4.26(br s,2H),3.45-3.55(m,6H)
实施例9
Figure PCTCN2022074894-appb-000077
Figure PCTCN2022074894-appb-000078
步骤一：
将BB-2(2.00克，5.45毫摩尔)，化合物BB-6(1.3克，4.54毫摩尔)，二(三苯基膦)二氯化钯(637.72毫克，908.57微摩尔)溶于20毫升的DMA中，并用氮气置换三次，将反应液加热到100℃，在100℃下搅拌2小时。将反应液冷却到25℃，倒入20毫升的水中，并用乙酸乙酯萃取三次，每次20毫升，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得化合物9-1。(M+H＝410.2)
步骤二：
将9-1(1克，2.44毫摩尔)，Boc 2O(1.07克，4.88毫摩尔)，DMAP(59.67毫克，488.42微摩尔)溶于15毫升的1,2-二氯乙烷中，加热到90℃并在90℃下搅拌2小时。将反应液冷却到25℃，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到3/1)纯化得化合物9-2和化合物9-5。化合物9-2(M+H＝510.3)，化合物9-5(M+H＝610.3)
步骤三：
将9-2(500毫克，981.17微摩尔)，詹式催化剂(143.99毫克，196.23微摩尔)溶于28毫升的1,2-二氯乙烷中，并用氮气置换三次，将反应液加热到90℃，并在氮气保护下在90℃搅拌18小时。将反应液浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到2/1)纯化得化合物9-3。(M+H＝482.3)
步骤四：
将9-5(280毫克，459.23微摩尔)，詹式催化剂(67.39毫克，91.58微摩尔)溶于28毫升的1,2-二氯乙烷中，不用氮气置换三次，然后加热到90℃，并在90℃下搅拌18小时。浓缩，粗品经制备薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得化合物9-6。(M+H＝582.3)
步骤五：
将9-3(100毫克，207.67微摩尔)溶于2毫升的四氢呋喃溶液中，钯/碳(20毫克，含量10％)在氮气保护下加入到反应液中，并用氢气置换三次，反应液在氢气(15psi)氛围中25℃下搅拌18小时。将反应液过滤，浓缩得化合物9-4。(M+H＝484.3)
步骤六：
将9-6(50毫克，85.96微摩尔)溶于2毫升的四氢呋喃溶液中，在氮气氛围下加入钯/碳(10毫克，含量10％)，并用氢气置换三次，然后在氢气球氛围(15psi)25℃下搅拌18小时。过滤，浓缩得化合物9-7。(M+H＝584.3)
步骤七：
将9-4(81毫克，167.51微摩尔)，9-7(36毫克，61.68微摩尔)溶于9毫升的二氯甲烷中加入三氟乙酸(1.39克，12.16毫摩尔)，混合物在25℃下搅拌0.5小时。用10毫升的二氯甲烷稀释，并用饱和的碳酸氢钠溶液调节pH到8左右，分液，水相用二氯甲烷萃取两次，每次10毫升，浓缩。粗品经prep-HPLC(column:Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相:[水(0.05％氨水，体积比)-乙腈]；乙腈％:32％-58％,10分钟)纯化得化合物9。
(M+H＝384.4), 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.76(d,J＝7.6Hz,1H),7.74(s,1H),7.51(s,1H),7.23(d,J＝7.6Hz,1H),5.15(s,1H),4.21(br d,J＝4.4Hz,2H),4.19(d,J＝1.2Hz,2H),3.97(br t,J＝6.8Hz,2H),1.69(br d,J＝4.8Hz,2H),1.62(br s,4H),1.45(s,6H),1.41(br d,J＝5.6Hz,2H)
实施例10
Figure PCTCN2022074894-appb-000079
Figure PCTCN2022074894-appb-000080
步骤一：
将化合物12-5(10毫克，19.91微摩尔)，4-吡唑硼酸频哪醇酯(11.59毫克，59.72微摩尔)，1,1-二(叔丁基)二茂铁二氯化钯(2.59毫克，3.98微摩尔)，醋酸钠(4.90毫克，59.72微摩尔)溶于2毫升二氧六环和0.4毫升水的混合溶液中，并用氮气置换三次。在90摄氏度下搅拌12个小时。过滤，浓缩，粗品经制备板(石油醚:乙酸乙酯＝2:1，R f＝0.45)纯化得到化合物10-1。(M+H：490.2)
步骤二：
将化合物10-1(10毫克，20.43微摩尔)溶于1毫升四氢呋喃溶液中，在氮气保护下加入钯/碳(10毫克，纯度：10％)，并用氢气置换三次，在10-20摄氏度下氢气(15psi)氛围搅拌12个小时。过滤，浓缩后得到化合物10-2。(M+H：492.3)
步骤三：
将化合物10-2(10毫克，20.34微摩尔)溶于1毫升二氯甲烷溶液，加入三氟乙酸(0.4毫升)。在25摄氏度下搅拌12个小时。浓缩，粗品经制备高效液相色谱(盐酸乙腈体系)纯化得到化合物10。
(M+H：392.2) 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.34-8.23(m,2H),7.78(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.34(d,J＝7.6Hz,1H),4.56-4.29(m,4H),4.20-4.14(m,2H),1.93-1.86(m,2H),1.80-1.69(m,4H),1.62-1.50(m,2H)
实施例11
Figure PCTCN2022074894-appb-000081
Figure PCTCN2022074894-appb-000082
步骤一：
将化合物11-1(20克，94.32毫摩尔)溶于无水二氯甲烷(150毫升)中，用氮气置换反应瓶中的空气三次，然后将反应体系降温至-30℃。三溴化硼(70.89克,282.96毫摩尔,27.26毫升)用无水二氯甲烷(50毫升)稀释后逐滴滴加到反应瓶中。待滴加完成后，反应液温度缓慢升温至25℃搅拌反应10小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1，R f＝0.3)点板显示反应完成。将反应液缓慢倒入冰水(600毫升)中，然后减压浓缩除去二氯甲烷。过滤，用水(200毫升)洗涤滤饼，减压浓缩滤饼得到化合物11-2.
步骤二：
将化合物11-2(18克,90.90毫摩尔)溶于无水二氯甲烷(200毫升)，在0℃下向反应瓶中加入咪唑(12.38克,181.80毫摩尔)和叔丁基二甲基氯硅烷(15.07克,99.99毫摩尔)，反应液在10-15℃下搅拌反应3小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1，R f＝0.6)点板显示有少量原料剩余，并且有新点产生。减压浓缩反应液除去二氯甲烷，剩余物用水(300毫升)和乙酸乙酯(200毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取(200毫升)两次，用饱和食盐水洗涤(200毫升)两次，用无水硫酸钠干燥。过滤减压浓缩除去溶剂。剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1:0到10:1)纯化得到化合物11-3.
步骤三：
将化合物11-3(10克,32.02毫摩尔)溶于DMSO(100毫升)，向反应液中加入碳酸钾(8.85克，64.05毫摩尔)和双氧水(14.52克,128.09毫摩尔,12.31毫升,30％纯度)，反应液在10-15℃下搅拌反应2小时。反应液用饱和亚硫酸钠水溶液(50毫升)淬灭，减压浓缩除去水，得到化合物11-4.M+H＝218.0.
步骤四：
将化合物11-4(7克,32.40毫摩尔)溶于DMF-DMA(70毫升)，反应液在80℃搅拌反应2小时后减压浓缩除去溶剂。剩余物用冰乙酸(70毫升)溶解，向反应液中缓慢加入一水合肼(1.95克,38.88毫摩尔)，反应液在10-15℃下搅拌反应2小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用水(400毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取(60毫升)六次，用饱和食盐水洗涤(200毫升)两次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去溶剂。剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝3:1到0:1)得到化合物11-5.M+H＝242.2.
步骤五：
将化合物11-5(2.3克,9.58毫摩尔)溶于无水二氯甲烷(25毫升)，再向反应液中加入咪唑(1.30克,19.16毫摩尔)，在0℃下向反应液中加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.59克,10.54毫摩尔)，反应液在10-15℃下搅拌反应2小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，R f＝0.3)点板显示反应完全。反应液用水(30毫升)淬灭，用二氯甲烷萃取(20毫升)三次，用饱和食盐水洗涤(20毫升)两次，用无水硫酸钠干燥。过滤减压浓缩除去溶剂。剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝5:1到2:1)纯化得到化合物11-6.
步骤六：
将化合物11-6(3.2克,9.03毫摩尔)溶于氯仿(30毫升)，向反应液中加入DHP(3.80克,45.16毫摩尔)和一水合对甲苯磺酸(171.80毫克,903.15微摩尔)，反应液在60℃下搅拌反应3小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，R f＝0.5)显示反应完全。冷却反应液至15-20℃，用水(40毫升)稀释，用二氯甲烷萃取(30毫升)三次，饱和食盐水洗涤(30毫升)两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂。剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝8:1到4:1)纯化得到化合物11-7。
步骤七：
将化合物11-7(2.55克，5.82毫摩尔)溶于2-甲基四氢呋喃(25毫升)中，再向反应液中加入中间体BB-2(2.78克，7.56毫摩尔)和二氯二三苯基膦钯(408.24毫克，581.62微摩尔)，用氮气置换反应瓶中的空气3次，反应液在80℃下氮气保护搅拌反应5小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，R f＝0.4)点板显示反应完全。将反应液冷却至10-15℃，减压浓缩除去溶剂，剩余物用水(50毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取(30毫升)三次，饱和食盐水洗涤(30毫升)两次，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩滤液，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝8:1到0:1)得到化合物11-8。
步骤八：
将化合物11-8(1.85克，3.29毫摩尔)溶于无水四氢呋喃(20毫升)，向反应液中加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(1M，4.94毫升)，反应液在10-15℃下搅拌反应0.5小时。减压浓缩反应液除去溶剂，剩余物用水(50毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取(30毫升)三次，用饱和食盐水洗涤(50毫升)两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝3:1到 乙酸乙酯:甲醇＝20:1)得到化合物11-9。M+H＝448.4.
步骤九：
将化合物11-9(940毫克，2.10毫摩尔)溶于乙腈(10毫升)，向反应液中加入碳酸钾(870.95毫克，6.30毫摩尔)和4-溴-1-丁烯(1.13克，8.40毫摩尔)。用氮气置换反应瓶中的空气三次，反应液在80℃下搅拌反应5小时。冷却反应液温度到10-15℃，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝5:1到0:1)纯化得到化合物11-10。M+H＝502.5
步骤十：
将化合物11-10(400毫克，797.48微摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(10毫升)，向反应液中加入DMAP(19.49毫克，159.50微摩尔)和Boc 2O(261.07毫克，1.20毫摩尔)，反应液在80℃搅拌反应2小时。冷却反应液至10-15℃，减压浓缩除去溶剂，剩余物用制备板纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物11-11。M+H＝602.5.
步骤十一：
将化合物11-11(81毫克，134.62微摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(40毫升)，向反应液中加入詹式催化剂(19.76毫克，26.92微摩尔)，用氮气置换反应瓶中的空气3次，反应液在100℃下氮气保护反应10小时。减压浓缩反应液除去溶剂，剩余物用制备板纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得到化合物11-12。M+H＝574.5.
步骤十二：
将化合物11-12(80毫克，139.46微摩尔)溶于四氢呋喃(20毫升)，向反应液中加入湿钯碳(20毫克，10％含量)，用氢气置换反应瓶中的空气3次，反应液在15-20℃氢气球氛围(15psi)下搅拌反应10小时。过滤反应液，浓缩滤液得到粗品化合物11-13。M+H＝576.5.
步骤十三：
将化合物11-13(25毫克，43.43微摩尔)溶于无水二氯甲烷(5毫升)，再向反应液中加入三氟乙酸(1毫升)，反应液再15-20℃搅拌反应4小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物通过制备高效液相色谱:column:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.1％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:19％-49％,10分钟.得到化合物11的三氟乙酸盐.M+H＝392.1, 1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ＝8.49-8.45(m,1H),7.68-7.61(m,3H),7.49-7.44(m,1H),4.28-4.25(m,2H),4.16-4.09(m,4H),1.84-1.77(m,2H),1.76-1.65(m,4H),1.52-1.43(m,2H).
实施例12
Figure PCTCN2022074894-appb-000083
Figure PCTCN2022074894-appb-000084
步骤一：
将化合物3-丁烯-1-醇(249.16毫克，3.46毫摩尔)溶于12毫升四氢呋喃溶液，加入叔丁醇钾(1.06克，9.42毫摩尔)，冷却到0摄氏度，将化合物12-1(1.00克，3.14毫摩尔)加入到反应液中。在25摄氏度下搅拌4个小时。将反应液倒入20毫升水中，水相用乙酸乙酯萃取(每次20毫升)2次，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0)纯化得到化合物12-2。(M+H：353.8)
步骤二：
将化合物BB-2(0.60克，1.63毫摩尔)，化合物12-2(0.70克，1.98毫摩尔)溶于15毫升二氧六环中，加入二(三苯基膦)二氯化钯(114.74毫克，163.47微摩尔)，并用氮气置换三次。在90摄氏度下搅拌2个小时。浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到3/1)纯化得到化合物12-3。(M+H：432.0)
步骤三：
将化合物12-3(0.30克，697.19微摩尔)，(Boc) 2O(304.32毫克，1.39毫摩尔)，DMAP(17.03毫克，139.44微摩尔)溶于8毫升1,2-二氯乙烷中，在80摄氏度下搅拌1个小时。浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到10/1)纯化得到化合物12-4。(M+H：532.1)
步骤四：
将化合物12-4(0.12毫克，226.24微摩尔)，zhan 1B催化剂(33.20毫克，45.25微摩尔)溶于20毫升1,2二氯乙烷中，氮气置换三次，在90℃下反应5个小时。浓缩，粗品经制备板(石油醚:乙酸乙酯＝3:1,R f＝0.59)纯化得到化合物12-5。(M+H：502.1)
步骤五：
将化合物12-5(40毫克，79.62微摩尔)，吡唑-3-硼酸频哪醇酯(46.35毫克，238.87微摩尔)，碳酸钾(33.01毫克，238.87微摩尔)，1,1’-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(11.65毫克，15.92微摩尔)溶于2毫升二氧六环和0.4毫升水的混合溶液中，并用氮气置换三次，在90℃下搅拌12个小时。浓缩，粗品经制备板(石油醚:乙酸乙酯＝2:1,R f＝0.29)板纯化得到化合物12-6。(M+H：490.2)
步骤六：
将化合物12-6(20毫克，40.86微摩尔)溶于1.5毫升四氢呋喃溶液中，在氮气保护下加入钯/碳(10毫克，纯度：10％)，在氢气(15psi)氛围下于25℃搅拌12个小时。过滤，浓缩得到化合物12-7。
(M+H：492.2)
步骤七：
将化合物12-7(20毫克，40.69微摩尔)加入到盐酸/甲醇溶液(4M，2毫升)中，在25℃下搅拌4个小时。浓缩，粗品加入1毫升乙酸乙酯，在25℃℃下搅拌10分钟打浆纯化，过滤，干燥得到化合物12的盐酸盐。(M+H：392.2)
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.00(s,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(s,1H),7.63(d,J＝7.6Hz,1H),7.13(s,1H),4.54-4.46(m,2H),4.43(s,2H),4.17(t,J＝7.4Hz,2H),1.92-1.84(m,2H),1.82-1.73(m,4H),1.60-1.53(m,2H)
实施例13
Figure PCTCN2022074894-appb-000085
Figure PCTCN2022074894-appb-000086
步骤一：
将化合物13-1(15克，96.09毫摩尔)溶于冰乙酸(120毫升)，将液溴(23.03克，144.13毫摩尔)溶于冰乙酸(30毫升)后在0℃下缓慢加入到反应液中，反应液在10-15℃下搅拌反应6小时。薄层色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1，R f＝0.2)显示原料剩余，有新点生成。反应液用饱和亚硫酸钠水溶液(180毫升)淬灭。用水(100毫升)洗涤三次，用饱和食盐水(100毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂得到化合物13-2。
步骤二：
将化合物13-2(16.5克，70.21毫摩尔)溶于无水四氢呋喃(170毫升)，用氮气置换反应瓶中的空气3次，将反应液冷却至0℃，向反应液中依次加入草酰氯(17.82克，140.42毫摩尔)和N,N-二甲基甲酰胺(513.20毫克，7.02毫摩尔)，反应液在10-15℃下搅拌反应2小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用无水四氢呋喃(170毫升)溶解，向反应液中加入氨水(43.94克，351.05毫摩尔)，反应液在10-15℃搅拌反应1小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用乙酸乙酯(150毫升)分散，在10-15℃下搅拌15分钟，减压抽滤，用乙酸乙酯(50毫升)洗涤滤饼，浓缩滤液除去溶剂得到化合物13-3。M+H＝236.0.
步骤三：
将化合物13-3(17.5克，74.78毫摩尔)悬浮于DMF-DMA(180毫升)中，反应液在80℃下搅拌反应2小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用冰乙酸(180毫升)溶解，向反应液中缓慢加入一水合肼(4.49克，89.74毫摩尔)，反应液在15-20℃下搅拌反应2小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用水(200毫升)稀释，用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，用饱和食盐水(100毫升)洗涤2次，用无水硫酸钠干燥。 过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1到0:1)得到化合物13-4。M+H＝257.9.
步骤四：
将化合物13-4(6克，23.25毫摩尔)悬浮在无水二氯甲烷(60毫升)中，依次向反应液中加入咪唑(3.17克，46.50毫摩尔)和叔丁基二甲基氯硅烷(3.85克，25.58毫摩尔)，反应液在15-20℃下搅拌反应3小时。反应液用水(100毫升)淬灭，用二氯甲烷(50毫升)萃取3次，用饱和食盐水(50毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝4:1到1:1)纯化得到化合物13-5。M+H＝372.2.
步骤五：
将化合物13-5(8.75克，23.50毫摩尔)溶于氯仿(90毫升)，向反应液中依次加入DHP(9.88克，117.51毫摩尔)和一水合对甲苯磺酸(447.05毫克，2.35毫摩尔)，反应液在60℃搅拌反应3小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用水(70毫升)稀释，用乙酸乙酯(50毫升)萃取3次，用饱和食盐水(50毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝4:1到2:1)纯化得到化合物13-6。M+H＝456.2.
步骤六：
将化合物13-6(11克，24.10毫摩尔)溶于2-甲基四氢呋喃(110毫升)，依次向反应液中加入BB-2(7.08克，19.28毫摩尔)和二氯双(三苯基膦)钯(1.69克，2.41毫摩尔)，反应瓶中的空气用氮气置换3次，反应液在80℃搅拌反应5小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝4:1到0:1)纯化得到化合物13-7。M+H＝580.5.
步骤七：
将化合物13-7(1.00克，1.72毫摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(10毫升)，依次向反应液中加入Boc 2O(564.68毫克，2.59毫摩尔)和DMAP(42.15毫克，344.98微摩尔)，反应液在80℃搅拌反应5小时。减压浓缩反应液除去溶剂，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝6:1到4:1)纯化得到化合物13-8。M+H＝680.4.
步骤八：
将化合物13-8(620毫克，911.96微摩尔)溶于无水四氢呋喃(10毫升)，向反应液中加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(1M，1.37毫升)，反应液在15-20℃下搅拌反应0.5小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，R f＝0.2)点板显示原料反应完全，有新点产生。减压浓缩除去溶剂，剩余物用水(30毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升)萃取3次，用水(20毫升)洗涤两次，用饱和食盐水(20毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝3:1到石油醚:乙酸乙酯＝0:1)得到化合物13-9。
步骤九：
将化合物13-9(410毫克，724.90微摩尔)溶于乙腈(10毫升)，向反应液中加入碳酸钾(300.56毫克，2.17毫摩尔)和4-溴-1-丁烯(391.45毫克，2.9毫摩尔)。反应液在80℃下搅拌反应5小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升)萃取三次，用饱和食盐水(20毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除溶剂，剩余物用硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸 乙酯＝4:1到1:1)纯化得到化合物13-10。M+H＝620.4.
步骤十：
将化合物13-10(380毫克，613.21微摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(150毫升)，向反应液中加入詹式催化剂(89.99毫克，122.64微摩尔)，反应瓶中的空气用氮气置换三次，反应液在100℃氮气保护下搅拌反应15小时。减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1到1:1)纯化得到化合物13-11。M+H＝592.4.
步骤十一：
将化合物13-11(264毫克，446.22微摩尔)溶于无水四氢呋喃(30毫升)，向反应瓶中加入湿钯碳(40毫克，10％纯度)，用氢气置换反应瓶中的空气三次，反应液在15-20℃氢气氛围下搅拌反应12小时。向反应瓶中补加湿钯碳(40毫克，10％纯度)，反应液在15-20℃氢气氛围下搅拌反应12小时。过滤反应液，减压浓缩滤液除去溶剂得到化合物13-12。M+H＝594.4.
步骤十二：
将化合物13-12(150毫克，252.68微摩尔)溶于甲醇(15毫升)，再向反应液中加入浓盐酸(1毫升，37％含量)，反应液在40℃搅拌反应0.5小时。反应液用氨水调节pH到8左右，减压浓缩除去溶剂，剩余物用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升)萃取三次，用饱和食盐水(20毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂。剩余物通过高效液相色谱(分离柱型号:Xtimate C18 250mm*80mm*10μm；流动相:[水(0.05％氨水，体积比)-乙腈]；乙腈％:18％-38％,10分钟)纯化得到化合物13。M+H＝410.1.
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ＝8.40-8.33(m,1H),7.76-7.73(m,1H),7.64-7.60(m,1H),7.37-7.32(m,1H),4.31-4.26(m,2H),4.19-4.08(m,4H),1.86-1.68(m,6H),1.55-1.46(m,2H)
实施例14
Figure PCTCN2022074894-appb-000087
Figure PCTCN2022074894-appb-000088
步骤一：
将化合物14-1(45克，213.85毫摩尔)溶于无水二氯甲烷(500毫升)，再向反应液中加入尿素过氧化氢(40.23克，427.67毫摩尔)，将反应液降温至0℃，逐滴加入三氟乙酸酐(89.83克，427.69毫摩尔)，反应液在25℃下搅拌反应2小时。将反应液缓慢倒入饱和亚硫酸钠水溶液(1000毫升)，在15-20℃搅拌0.5小时，用二氯甲烷(300毫升)萃取三次，用水(500毫升)洗涤两次，用饱和食盐水(500毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂得到化合物14-2。M+H＝228.0
步骤二：
将化合物14-2(10克，44.16毫摩尔)和硫酸二甲酯(16.71克，132.49毫摩尔)混合，用氮气置换反应瓶中的空气三次，然后加热到100℃搅拌反应0.5小时。将反应液冷却至0℃，用水(150毫升)稀释，再向反应瓶中加入氰化钠(3.68克，75.08毫摩尔)，反应温度缓慢升温至15-20℃搅拌反应10小 时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1,R f:0.5)点板显示反应完全。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8左右，用乙酸乙酯(50毫升)萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水(50毫升)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)纯化得到化合物14-3。 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ＝7.96(d,J＝6.4Hz,1H).
步骤三：
将化合物14-3(2克,8.49毫摩尔)悬浮于水中(2.6毫升)然后在冰浴下慢慢加入浓硫酸(15毫升)，然后加热到70℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至25℃，然后加入水(30毫升)和乙酸乙酯(100毫升)，水相用氢氧化钠固体调节pH到7～8,然后用乙酸乙酯萃取(100毫升)两次，合并有机相并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去溶剂得到化合物14-4。(M+H+2＝255.0)， 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ＝7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(brs,1H),5.67(brs,1H).
步骤四：
将化合物14-4(2克,7.89毫摩尔)悬浮于DMF-DMA(17.94克,150.55毫摩尔)中，并加热到90℃反应2小时。减压浓缩除去溶剂得到黄色固体，将此黄色固体溶于醋酸(20毫升)，然后将一水合肼(1.07克，21.31毫摩尔)慢慢滴加到反应体系中，并在25℃下反应2小时，向反应液中加入乙酸乙酯(20毫升)并搅拌10分钟，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤得到化合物14-5。
(M+H+2＝279.0). 1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ＝8.49(s,1H),8.28(d,J＝8.8Hz,1H).
步骤五：
将化合物14-5(880毫克,3.17毫摩尔)和DHP(1.07克,12.69毫摩尔)溶于氯仿(10毫升)中，然后加入对甲苯磺酸(54.61毫克，317.14微摩尔)，加热到60～65℃下搅拌3小时。薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1,R f＝0.5)点板显示反应完全。反应液冷却到25℃左右，加入水(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升)，分离有机相并用饱和食盐水洗涤(30毫升)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1到1:2)纯化得到化合物14-6。 1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ＝8.44(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),5.59-5.62(dd,J＝2.8Hz,8.8Hz,1H),4.10-4.14(m,1H),3.74-3.75(m,1H),2.23-2.27(m,1H),2.04-2.07(m,1H),1.60-1.74(m,3H),1.69(brs,1H).
步骤六：
将BB-2(700毫克，1.91毫摩尔)和14-6(703.42毫克，1.95毫摩尔)，三(邻甲基苯基)膦(116.10毫克，381.44微摩尔)，Pd 2(dba) 3(174.64毫克，190.72微摩尔)，三乙胺(578.96毫克，5.72毫摩尔)悬浮于1,4-二氧六环(10毫升)中，用氮气置换三次，反应液混合物在90～100℃下搅拌4小时，LCMS显示反应基本完成，仅有少量BB-2未消耗完。反应冷却到25℃左右，向反应液中加入50毫升水，用乙酸乙酯(50毫升)萃取两次，合并有机相，并用饱和食盐水(50毫升)洗涤一次，用无水硫酸钠干燥，然后过滤并减压浓缩得到粗品。粗品用少量石油醚/乙酸乙酯＝1:1打浆得到干净的产品14-7。(M+H＝485.1，M+H-THP＝401.0)
步骤七：
14-7(800毫克，1.65毫摩尔)，Boc 2O(720.12毫克，3.30毫摩尔)溶于DCE(15毫升)中，然后加入DMAP(40.31毫克，329.96微摩尔)，反应液升温到60℃并搅拌2小时。薄层色谱检测(石油醚/乙酸乙酯＝2:3，Rf:0.54)显示14-7消耗完，有新点生成。浓缩反应也得到粗品，粗品用硅胶柱(100-200目， 石油醚/乙酸乙酯＝2:1～1:2)得到纯品14-8。(M+H＝585.2，M+H-THP＝501.2)
步骤八：
向化合物14-8(1.32克,2.26毫摩尔)中加入四丁基氟化铵(1M四氢呋喃溶液，60mL)，反应液在50～60℃下搅拌144小时。LCMS显示反应完全。反应液冷却至25℃左右，向反应液中加入水(60mL)和乙酸乙酯(100mL)，分离有机相并用饱和食盐水(60毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到的粗品14-9直接用于下一步。(M+H-THP＝429.1)
步骤九：
将化合物14-9(800毫克,1.71毫摩尔)，溶于乙酸乙酯(60毫升)中，然后在冰浴下加入二碳酸二叔丁酯(7.45克,34.15毫摩尔),DMAP(208.63毫克,1.71毫摩尔)，反应液在0～60℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完全。反应液冷却至25℃，向反应液中加入水(50毫升)，分离出有机相，并用饱和食盐水(50毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物14-10。(M+H-THP＝485.2)
步骤十：
将化合物14-10(130毫克，107.46微摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(3毫升)中，然后加入3-丁烯-1醇(77.49毫克，1.07毫摩尔)和碳酸铯(350.13毫克,1.07毫摩尔)，反应液在80～90℃下搅拌10小时。LCMS显示反应完全。反应液冷却至25℃，向反应液中加入乙酸乙酯(30毫升)和水(30毫升)，分离出有机相，并用饱和食盐水(20毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用反相柱(5％～95％ACN in water)纯化得到化合物14-11。(M+H＝621.4)
1H NMR(CD 3OD,400M Hz)δ8.96(s,1H),8.81(s,1H),8.40(d,J＝11.2Hz,1H),5.83-6.05(m,2H),5.69(dd,J＝9.6Hz,2.8Hz,1H),5.17-5.25(m,1H),5.08-5.15(m,1H),4.99-5.07(m,1H),4.65-4.70(m,4H),4.07-4.20(m,2H),3.77-3.85(m,1H),2.61-2.70(m,4H),2.05-2.30(m,4H),1.62-1.90(m,4H),1.49(s,9H).
步骤十一：
将化合物14-11(70毫克,104.89微摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(8毫升)中，用氮气置换反应体系三次，然后在搅拌下缓慢加入溶于2mL 1,2-二氯乙烷的詹式催化剂(38.48毫克,52.44微摩尔)，反应液在50℃下搅拌反应10小时。LCMS监测反应完全。反应液浓缩得到的粗品用用硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝1:2)纯化得到化合物14-12。(M+H＝593.2)
步骤十二：
将化合物14-12(40毫克,67.50微摩尔)溶解在四氢呋喃(15毫升)中，反应体系用氮气置换三次，然后加入催化剂Pd/C(20毫克,67.50微摩尔，10％含量)，反应体系用氢气置换三次。反应液在氢气氛围(15psi)下25℃搅拌反应18小时。LCMS检测显示反应完全。反应液过滤，滤液经减压浓缩除去溶剂，得到化合物14-13直接用于下一步。(M+H-THP＝595.3)
步骤十三：
将化合物14-13(35毫克，58.86微摩尔)溶于甲醇(5毫升)，然后加入浓盐酸(摩尔浓度12摩尔/升，0.2毫升)，反应液在50℃下搅拌反应0.5小时，LCMS检测显示反应完全。反应液浓缩得到化合物14-14直接用于下一步。(M+H＝511.3)
步骤十四：
将化合物14-14(15毫克，29.38微摩尔)溶于甲醇(1.5毫升)，然后加入浓盐酸(摩尔浓度12摩尔/升，0.3毫升)，反应液在50℃下搅拌反应10小时，LCMS检测显示反应完全。反应液浓缩得到化合物14-15直接用于下一步。(M+H＝469.1)
步骤十五：
将化合物14-15(25毫克，53.37微摩尔)溶于四氢呋喃(1.5毫升)中，然后加入溶于0.4mL水的氢氧化钠(6.40毫克,160.11微摩尔)，反应液在25℃下剧烈搅拌10小时。LCMS检测显示反应完全。反应液在25℃下减压浓缩除去大部分溶剂四氢呋喃，然后加入乙酸乙酯(5mL)和水(4mL)，水相用6N盐酸调至pH＝3左右，然后用乙酸乙酯(5mL×2)萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到化合物14-16。(注：水相中经LCMS([M+H] +＝411.1)检测含有最终化合物14，水相用滤膜过滤并送制备高效液相色谱分离纯化(纯化条件为：分离柱型号:Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相:[水(10毫摩尔碳酸氢铵)-乙腈]；乙腈％:12％-42％,10分钟))。([M+H] +＝455.2)
步骤十六：
将化合物14-16(10毫克，17.16微摩尔)溶于四氢呋喃(1.5毫升)中，然后加入溶于0.5mL水的氢氧化钠(3.43毫克,85.82微摩尔)，反应液在25℃下剧烈搅拌10小时。反应液用6N盐酸调至pH至3左右，然后加入乙酸乙酯(5mL)和水(4mL)，水相经LCMS检测有目标产物，水相用滤膜(0.45微米)过滤并送高效液相色谱纯化(纯化条件为：分离柱型号:Waters X bridge 150*25mm*5μm；流动相:[水(0.05％氨水，体积比)-乙腈]；乙腈％:15％-45％,10分钟)，得到化合物化合物14。(M+H＝411.1)
1H NMR(CD 3OD,400M Hz)δ8.32(s,1H),7.82(s,1H),7.82(d,J＝10.4Hz,1H),4.40-4.46(m,2H),4.29(s,2H),4.12(t,J＝6.4Hz,2H),1.76-1.85(m,2H),1.65-1.76(m,4H),1.45-1.55(m,2H).
实施例15
Figure PCTCN2022074894-appb-000089
Figure PCTCN2022074894-appb-000090
步骤一：
将化合物WBB-2(7.6克，18.58毫摩尔)，化合物BB-1(7.02克，20.43毫摩尔)，三(二亚苄基丙酮)二钯(1.70克，1.86毫摩尔)，三(邻甲苯基)膦(1.31克，3.72毫摩尔)，三乙胺(5.64克，55.73毫摩尔)溶于120毫升的二氧六环中，并用氮气置换三次，然后在100℃下搅拌18小时。L浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化得化合物W1-1。(M+H＝509.2)
步骤二：
将化合物W1-1(2.5克，4.91毫摩尔)，DMAP(120.01毫克，982.31微摩尔)，Boc 2O(2.14克，9.82毫摩尔)溶于40毫升的1,2-二氯乙烷中，并加热到80℃，在80℃下搅拌4小时。浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝0/1到1/1)纯化得化合物W1-2。(M+H＝609.3)
步骤三：
将化合物W1-2(19克，31.19毫摩尔)，乙烯基三氟硼酸钾(8.36克，62.39毫摩尔)，[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(1.27克，1.56毫摩尔)，碳酸铯(30.49克，93.58毫摩尔)溶于200毫升的四氢呋喃和40毫升的水中，并用氮气置换三次，然后在75℃下搅拌12小时。液质联用色谱显示化合物W1-3被检测到，将反应液冷却到25℃，倒入50毫升的水中，并用乙酸乙酯萃取两次，每次50毫升，合并有机相浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝1/0-1/1)W1-3。(M+H＝601.4)
步骤四：
将化合物W1-3(4.0克，6.66毫摩尔)溶于1200毫升的二氯甲烷中，加入Zhan 1B催化剂(977.18毫克，1.33毫摩尔)并用氮气置换三次，然后在45℃下搅拌12小时，补加Zhan 1B催化剂(977.18毫克，1.33毫摩尔)，在45℃下搅拌12小时。液质联用色谱显示化合物W1-4被检测到，将反应液浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝1/0-1/1)纯化后再经高效液相色谱制备纯化(纯化条件为：分离柱型号:Kromasil Eternity XT 250*80mm*10um；流动相:[水(10mM碳酸氢铵)-乙腈]；B％:50％-80％,20分钟)纯化得化合物W1-4。(M+H＝573.4)
步骤五：
将W1-4(3.7克，6.46毫摩尔)溶于20毫升的乙酸乙酯中，加入4摩尔/升的盐酸乙酸乙酯(80毫升)，反应混合物升温至40℃下搅拌24小时。液质联用色谱显示反应完全，将反应液冷却到25℃，过 滤，滤饼用10毫升的乙酸乙酯在25℃下打浆30分钟，重复打浆三次，每次用10毫升。再用10毫升的乙醇在25℃下打浆30分钟，过滤，真空干燥得化合物W1的盐酸盐(约1.8个)，经XRPD检测为晶型A，其XRPD谱图如图1所示。LC-MS:m/z＝389.0[M+H] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.65(s,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),8.00(d,J＝8.0,1H),7.92(s,1H),6.70-6.62(m,1H),6.58(d,J＝14.8,1H),4.26(s,2H),3.76(br s,2H),2.33-2.28(m,2H),1.58(br s,4H),1.39(br d,2H))。
取W1的盐酸盐(3.5克，8.24毫摩尔)悬浮于10毫升的水中，加入碳酸氢钠溶液(2摩尔/升，12毫升)，在25摄氏度下搅拌1小时。将反应液过滤，滤饼用10毫升的水洗涤，真空干燥得化合物W1，经XRPD检测为晶型B，其XRPD谱图如图2所示。(M+H＝389.2)； 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝9.19(s,1H),8.41-8.28(m,2H),7.96(s,1H),6.85-6.74(m,1H),6.73-6.66(m,1H),4.43(s,2H),3.94(br s,2H),2.55-2.44(m,2H),1.78-1.68(m,4H),1.51(br d,J＝4.8Hz,2H))。
氯离子色谱检测：
精密称取式化合物W1的盐酸盐晶型A两份约20mg样品至20mL容量瓶中，加溶剂溶解稀释定容至刻度；再分别精密移取上述溶液1mL至20mL容量瓶中，加溶剂溶解稀释至定容刻度，分别标记。然后通过氯离子色谱仪进行氯离子的含量检测，检测结果见表3。
表3
Figure PCTCN2022074894-appb-000091
根据公式：氯离子个数＝游离碱分子量/{(1-氯离子含量)÷氯离子含量}÷氯离子分子量，计算得到氯离子个数为1.8。
实施例16
Figure PCTCN2022074894-appb-000092
步骤一：
将W1-4(120毫克，209.55微摩尔)溶于5毫升的四氢呋喃中，在氮气保护下加入钯/碳(100毫克，10％含量)，悬浮液用氢气置换三次，在氢气球(15psi)下25℃搅拌18小时。过滤，浓缩，得化合物W2-1。(M+H＝575.3)
步骤二：
将W2-1(135毫克，234.92微摩尔)溶于5毫升的二氯甲烷中，加入三氟乙酸(3.08克，27.01毫摩尔，2毫升)，在25℃下搅拌18小时。浓缩，用20毫升的饱和碳酸氢钠稀释，并用二氯甲烷(10毫升)萃取三次，合并有机相浓缩，粗品经制备高效液相色谱(纯化条件为：分离柱型号:Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:19％-39％,11分钟)纯化得化合物W2的盐酸盐。
(M+H＝391.2)；1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.97-8.88(m,1H),8.68-8.57(m,1H),8.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.96(d,J＝4.0Hz,1H),4.40-4.35(m,2H),4.17(t,J＝7.2Hz,2H),3.41(brs,2H),2.03-1.93(m,2H),1.81-1.72(m,2H),1.65(td,J＝6.4,13.6Hz,4H),1.53-1.44(m,2H)。
实施例17
Figure PCTCN2022074894-appb-000093
步骤一：
将化合物WBB-3(4.00克，15.99毫摩尔)，双联嚬哪醇硼酸酯(4.87克，19.19毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(40毫升)中，加入醋酸钾(4.71克，47.98毫摩尔)和 [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(1.17克，1.60毫摩尔)，加完后，混合物用氮气置换三次，再在氮气氛围下加热到100℃搅拌16小时。冷却，倒入水(100毫升)中，分别用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(50毫升)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩旋干，粗品经硅胶柱(100-200目硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1/0-1/2)纯化得到W3-1。(M+H＝298.2)
步骤二：
将化合物W3-1(502.57毫克，1.69毫摩尔)，WBB-2(0.50克，1.54毫摩尔)溶于水(4毫升)，异丙醇(2毫升)和1,4-二氧六环(4毫升)中，加入碳酸钠(488.87毫克，4.61毫摩尔)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(125.56毫克，153.75微摩尔)，加完后，混合物用氮气置换三次，再在氮气氛围下加热到100℃搅拌3.5小时。冷却，反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯(30毫升)洗涤一次，滤液浓缩旋干，粗品经硅胶柱(100-200目硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1/0-0/1)纯化得到W3-2。(M+H＝416.3)
步骤三：
将化合物W3-2(0.18克，4.33毫摩尔)和Boc 2O(236.37毫克，1.08毫摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(3毫升)中，加入三乙胺(131.51毫克，6.50毫摩尔)和DMAP(10.59毫克，86.64微摩尔)。反应液于80℃下搅拌16小时。反应液减压浓缩旋干，粗品经制备板分离(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)纯化得到W3-3。(M+H＝616.6；M+H-56＝560.6)
步骤四：
将化合物W3-3(83.00毫克，134.80微摩尔)加入1,2-二氯乙烷(880毫升)中，氮气保护下加入詹氏催化剂(24.73毫克，33.70微摩尔)，混合物经氮气鼓吹后加热到100℃搅拌16小时。冷却，减压浓缩至干，剩余物经制备板分离(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得到W3-4。(M+H＝588.4；M+H-56＝532.4)步骤五：
将化合物W3-4(15.00毫克，25.52微摩尔)溶于无水甲醇(1毫升)中，在25℃下加入浓盐酸(50.00微升，600.00微摩尔)。混合物在50℃下搅拌0.5小时。反应液冷却，过滤，滤饼用MeOH(1毫升)打浆，搅拌5分钟后，过滤，得到化合物W3。M+H＝388.2； 1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.98(s,1H),8.23(s,1H),7.96(d,J＝7.2Hz,1H),7.78(s,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),6.51(dd,J 1＝32.00Hz,J 2＝47.60Hz,1H),6.12-6.08(m,1H),4.41(s,2H),3.92(s,2H),2.37-2.36(m,2H),1.66-1.28(m,6H).
实施例18
Figure PCTCN2022074894-appb-000094
步骤一：
将化合物W3-4(15.00毫克，22.52微摩尔)溶于无水四氢呋喃(10毫升)中，氮气保护下加入湿钯/碳(5.01毫克，8.51微摩尔，10％含量)，加完后，混合物用氢气置换三次，再在氢气球氛围(15psi)和25℃下搅拌16小时。反应液过滤，滤液浓缩旋干，得到化合物W4-1。(M+H＝590.5)
步骤二：
将化合物W4-1(20.00毫克，33.92微摩尔)溶于无水甲醇(2毫升)中，在25℃下加入浓盐酸(132.88微升，1.59毫摩尔)。混合物在50℃下搅拌0.5小时。反应液冷却，加水(1mL)溶解，送制备高效液相色谱分离(纯化条件为：分离柱型号:Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相:[水(0.1％三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:25％-55％,10分钟)，得到化合物W4。M+H＝390.2； 1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.50(s,1H),7.94(s,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.74(s,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),4.26(s,2H),4.14(t,J＝7.2Hz,2H)2.89(m,2H),1.76-1.68(m,4H),1.55-1.41(m,6H).
实施例19
Figure PCTCN2022074894-appb-000095
步骤一：
将化合物WBB-2(415.79毫克,1.02毫摩尔)，化合物WBB-4(350毫克,967.93微摩尔)溶于1,4-二氧六环(15毫升)中，然后依次加入三(邻甲基苯基)磷(58.92毫克,193.59微摩尔)，三(二亚苄基丙酮)二钯(88.63毫克,96.79微摩尔)和三乙胺(293.83毫克，2.90毫摩尔)，用氮气置换反应瓶中的空气三次，反应液在90℃氮气保护下搅拌10小时。反应液冷却至20℃，向反应液中加入水(50毫 升)和乙酸乙酯(50毫升)，分离出有机相，并用饱和食盐水(50毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝3:1到0:1)纯化得到化合物W5-1.M+H-THP＝442.2.
步骤二：
将化合物W5-1(180毫克，341.56微摩尔)，(Boc) 2O(149.09毫克，683.12微摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(3毫升)中，然后加入DMAP(8.35毫克,68.31微摩尔)，反应液在80℃下搅拌2小时。反应液浓缩得到的粗品用制备薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得到化合物W5-2.M+H＝627.3.
步骤三：
将化合物W5-2(70毫克,132.83微摩尔)，乙烯基三氟硼酸钾(26.69毫克,199.24微摩尔)，碳酸铯(129.83毫克，398.4微摩尔)悬浮于四氢呋喃(2毫升)和水(0.4毫升)中，然后加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(21.69毫克,26.57微摩尔)，反应液在80℃下搅拌反应4小时。反应液冷却至25℃，加入水(5毫升)和乙酸乙酯(10毫升)，有机相用饱和食盐水洗涤(5毫升)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去溶剂。浓缩得到的粗品用制备薄层色谱(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得到化合物W5-3.M+H＝619.4.
步骤四：
将化合物W5-3(50毫克,75.16微摩尔)溶解在1,2二氯乙烷(15毫升)中，然后将詹式催化剂(22.06毫克,30.06微摩尔)溶解在1,2二氯乙烷(5毫升)中并缓慢滴加至反应体系。反应液在50℃下搅拌反应4小时。反应液减压浓缩除去溶剂，加入水(5毫升)和乙酸乙酯(8毫升)，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去溶剂，得到的粗品用用硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝2:1)纯化得到化合物W5-4.M+H＝591.4.
步骤五：
将化合物W5-4(38毫克，64.34微摩尔)溶于甲醇(1.5毫升)，然后加入浓盐酸(12摩尔/升，0.15毫升)，反应液在50℃下搅拌反应1小时。反应液冷却至20℃，将反应液用0.45微米滤膜过滤并送高效液相制备色谱纯化(分离柱型号:Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相A:水(10mM碳酸氢铵)；流动相B:乙腈％,梯度:12％-42％,10分钟)，得到化合物化合物W5.M+H＝407.2.
1H NMR(MeOD-d 4,400MHz)δ7.95(s,1H),7.85(d,J＝10.8Hz,1H),6.57-6.65(m,1H),6.50-6.56(m,1H),4.32(s,2H),3.82-3.98(m,2H),2.37(q,J＝7.2Hz,13.2Hz,2H),1.62-1.75(m,4H),1.45-1.54(m,2H).
实施例20
Figure PCTCN2022074894-appb-000096
Figure PCTCN2022074894-appb-000097
步骤一：
将化合物WBB-5(2.80克，10.44毫摩尔)，双联嚬哪醇硼酸酯(3.18克，12.53毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(30毫升)中，加入醋酸钾(3.08克，31.33毫摩尔)和 [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(852.93毫克，1.04毫摩尔)，加完后，混合物用氮气置换三次，再在氮气氛围下加热到100℃下搅拌16小时。冷却至室温，倒入水(100毫升)中，分别用乙酸乙酯(100毫升)萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(50毫升)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩旋干，粗品经硅胶柱(100-200目硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1/0-1/2)纯化得到产品W6-1。(M+H＝316.2)
步骤二：
将化合物W6-1(0.45克，1.43毫摩尔)和DHP(600.54毫克，7.14毫摩尔)溶于三氯甲烷(5毫升)中，冷却到0℃，将一水合对甲苯磺酸(54.32毫克，285.58微摩尔)加入到反应液中，加毕，将反应混合物加热到80℃并搅拌5小时。将反应液直接浓缩旋干，粗品经硅胶柱(石油醚:乙酸乙酯＝1/0-2/1)纯化得产品W6-2(M+H＝400.2；M+H+2＝402.2)
步骤三：
将化合物W6-2(0.56克，1.40毫摩尔)，WBB-2(501.73毫克，1.54毫摩尔)溶于水(4.2毫升)，异丙醇(1.4毫升)和1,4-二氧六环(4.2毫升)中，加入碳酸钠(445.98毫克，4.21毫摩尔)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(114.54毫克，104.26微摩尔)，加完后，混合物用氮气置换三次，再在氮气氛围下加热到100℃搅拌3.5小时。冷却，反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯(10毫升)洗涤一次，滤液浓缩旋干，粗品经制备板分离纯化得到产品W6-3。(M+H＝518.2)
步骤四：
将化合物W6-3(0.73克，1.41毫摩尔)和Boc 2O(769.52毫克，3.53毫摩尔)溶于1,2-二氯乙烷10毫升)中，加入DMAP(34.46毫克，282.07微摩尔)。反应液于80℃下搅拌16小时。反应液减压浓缩旋干，粗品经高效液相色谱分离{分离柱型:Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相:[水(10mM碳酸氢铵)-乙腈]；乙腈％:62％-92％,10分钟}纯化得到产品W6-4。(M+H＝618.3；M+H-56＝562.2)
步骤五：
将化合物W6-4(110.00毫克，178.08微摩尔)加入1,2-二氯乙烷(50毫升)中，氮气保护下加入詹氏催化剂(32.67毫克，44.52微摩尔)，混合物经氮气鼓吹30分钟后加热到100℃搅拌16小时。冷却，减压浓缩至干，剩余物经制备板分离(石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷＝1:2:1)纯化得到关环产品W6-5。(M+H＝590.3)
步骤六：
将化合物W6-5(45.00毫克，25.52微摩尔)溶于无水甲醇(1毫升)中，在25℃下加入浓盐酸(50.00微升，600.00微摩尔)。混合物在45℃下搅拌0.5小时。反应液直接浓缩旋干，经高效液相色谱分离{分离柱型号:Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:32％-52％,9分钟}，得到化合物W6。
M+H＝406.2； 1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.97–8.98(m,1H),8.16–8.21(m,1H),7.80(s,1H),7.47(d,J＝11.2Hz,1H),6.44(d,J＝15.6Hz,1H),5.99–6.05(m,1H),4.42(s,2H),3.91(s,2H),2.32–2.37(m,2H),1.28–1.65(m,6H).
实施例21
Figure PCTCN2022074894-appb-000098
Figure PCTCN2022074894-appb-000099
步骤一：
将化合物W7-1(200克，1240毫摩尔)溶于1000毫升的二氯甲烷中，然后在25℃下加入氢氧化钠水溶液(由248.12克氢氧化钠溶解于1000毫升水制得)，四丁基碘化铵(91.66克，248.14毫摩尔)和4-溴-1-丁烯(167.50克，1240毫摩尔)分别一次性加入。反应液在25℃下搅拌12个小时。然后用二氯甲烷萃取(每次500毫升)3次，有机相浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到20/1)纯化得到化合物W7-2。
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ5.90-5.73(m,1H),5.19-5.00(m,2H),3.57-3.42(m,4H),3.30(d,J＝4.4Hz,2H),2.40-2.27(m,2H),1.44(s,9H).
步骤二：
将化合物W7-2(3.3克，15.33毫摩尔)溶于6毫升二氯甲烷中，在0℃下一次性加入三氟乙酸(9.24克，81.04毫摩尔)，在0-20℃下搅拌1个小时。浓缩得到化合物W7-3的粗品三氟乙酸盐。
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.42-7.10(m,3H),5.88-5.70(m,1H),5.18-5.02(m,2H),3.76-3.65(m,2H),3.63-3.56(m,2H),3.36-3.24(m,2H),2.43-2.31(m,2H)
步骤三：
将化合物W7-3的三氟乙酸盐(11克，47.99毫摩尔)溶于200毫升N-甲基吡咯烷酮，然后在20-30℃下一次性加入二异丙基乙胺(37.22克，287.96毫摩尔)，搅拌0.5个小时，然后一次性加入化合物B-7(13.02克，38.40毫摩尔)，在130℃下搅拌16个小时。向反应液中加入1000毫升水，用乙酸乙酯 萃取(每次300毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到化合物W7-4和化合物W7-5的混合物。(M+H:373.0；M+H:326.9)
步骤四：
将步骤三得到的混合物W7-4和W7-5(共15克)溶于醋酸(157.50克)，在85-90℃下搅拌16个小时。将反应液浓缩得到粗品，加入石油醚和乙酸乙酯的混合溶液(石油醚/乙酸乙酯＝10:1，200毫升)，在20-30℃下搅拌2个小时，过滤，收集滤饼得到化合物W7-5。(M+H:326.9)
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.68(s,1H),5.85-5.70(m,1H),5.43(br s,1H),5.13-4.95(m,2H),4.37-4.26(m,4H),3.77-3.68(m,2H),3.60-3.53(m,2H),2.34–2.24(m,2H).
步骤五：
将化合物W7-5(2.0克，5.51毫摩尔)溶于40毫升二氧六环，在20-30℃下一次性加入六甲基二锡烷(2.18克，6.65毫摩尔)和四三苯基磷钯(1.28克，1.11毫摩尔)，然后氮气保护在100℃下搅拌3小时。将反应液加入到50毫升饱和氟化钾水溶液中，用乙酸乙酯萃取(每次60毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/2)纯化得到化合物W7-6。(M+H:413.0)
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ7.64-7.59(m,1H),5.85-5.71(m,1H),5.10-4.96(m,2H),4.80(br s,1H),4.42-4.34(m,2H),4.30-4.23(m,2H),3.76-3.67(m,2H),3.59-3.51(m,2H),2.34-2.23(m,2H),0.31(s,9H).
步骤六：
将化合物W7-6(1.0克，2.43毫摩尔)和化合物BB-1(919.44毫克，2.68毫摩尔)溶于35毫升二氧六环，然后在20-30℃下一次性加入三二亚苄基丙酮二钯(222.76毫克，243.26微摩尔)，三乙胺(738.46毫克，7.30毫摩尔)和三邻甲苯基膦(148.08毫克，486.52微摩尔)。氮气保护下在100℃搅拌反应12个小时，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/5)纯化得到化合物W7-7。(M+H:511.2)
步骤七：
将化合物W7-7(0.7克，1.37毫摩尔)溶于15毫升1,2-二氯乙烷，在20-30℃下一次性加入(Boc) 2O(597.97毫克，2.74毫摩尔)和DMAP(33.47毫克，273.99微摩尔)。在75-85℃下搅拌反应2个小时，浓缩，加入100毫升二氯甲烷，加入饱和酒石酸水溶液至pH＝6-7，溶液分层，水相用二氯甲烷萃取(每次30毫升)2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到化合物W7-8。(M+H:611.2)
步骤八：
将化合物W7-8(0.8克，1.31毫摩尔)溶解于四氢呋喃(25毫升)和水(5毫升)中，在20-30℃下一次性加入乙烯基三氟硼酸钾(350.72毫克，2.62毫摩尔)和碳酸铯(1.07克，3.27毫摩尔)。在20-30℃，氮气保护下加入1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(213.82毫克，261.83微摩尔)。氮气保护下在60-70℃搅拌12个小时，浓缩，加入50毫升水，水相用乙酸乙酯萃取(每次50毫升)3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/4)纯化得到化合物W7-9。(M+H:603.3)
步骤九：
将化合物W7-9(0.5克，829.62微摩尔)溶解于1,2-二氯乙烷(140毫升)，在20-30℃下一次性加入詹氏催化剂(121.75毫克，165.92微摩尔)。氮气在100℃保护下搅拌12个小时。浓缩，粗品经制备板(石油醚/乙酸乙酯＝0:1)纯化得到化合物W7-10。(M+H:575.2)
步骤十：
将化合物W7-10(130毫克，226.23微摩尔)溶解于二氯甲烷(5毫升)，在0℃下一次性加入三氟乙酸(4.62克，40.52毫摩尔)。在0-25℃下搅拌反应3个小时。浓缩，粗品经制备高效液相色谱(盐酸乙腈体系)纯化得到化合物W7的盐酸盐。(M+H:391.1)
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ9.19(s,1H),8.43-8.38(m,1H),8.36-8.31(m,1H),7.97(s,1H),6.81(s,2H),4.43(s,2H),4.33-4.24(m,2H),3.82-3.76(m,2H),3.76-3.71(m,2H),2.66-2.54(m,2H).
实施例22
Figure PCTCN2022074894-appb-000100
步骤一：
将化合物W7-6(4.8克，11.68毫摩尔)和化合物WBB-4(4.64克，12.84毫摩尔)溶解于80毫升1,4-二氧六环，在20-30℃下一次性加入三乙胺(3.54克，35.03毫摩尔)，三二亚苄基丙酮二钯(1.07克，1.17毫摩尔)，三邻甲苯基膦(710.79毫克，2.34毫摩尔)，反应在氮气保护下100℃搅拌12个小时。浓缩，加入100毫升水，用乙酸乙酯萃取(每次100毫升)3次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/3)纯化得到化合物W8-1。(M+H:529.2)
步骤二：
将化合物W8-1(4.85克，9.17毫摩尔)溶解于100毫升1,2-二氯乙烷，在20-30℃下一次性加入(Boc) 2O(4.00克，18.34毫摩尔)和DMAP(224.03毫克，1.83毫摩尔)，在75-85℃下搅拌反应2个小时。浓缩，加入200毫升二氯甲烷和60毫升水，搅拌1个小时，向混合液中加入饱和柠檬酸水溶液至pH＝6-7,混合液分层，水相用二氯甲烷萃取(每次100毫升)2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到化合物W8-2。
(M+H:629.3)
步骤三：
将化合物W8-2(5克，7.95毫摩尔)溶解于70毫升四氢呋喃和14毫升水，在20-30℃下一次性加入乙烯基三氟硼酸钾(2.13克，15.90毫摩尔)，碳酸铯(6.47克，19.87毫摩尔)。然后在20-30℃氮气保护下一次性加入1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(1.3克，1.59毫摩尔)。在氮气保护下60-70℃搅拌反应12个小时。浓缩，加入200毫升乙酸乙酯和80毫升水，混合液分层，水相用乙酸乙酯萃取(每次100毫升)2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/5)纯化得到化合物W8-3。(M+H:621.3)
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ8.40(s,1H),8.32(s,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.12-6.99(m,1H),6.72-6.64(m,1H),5.76-5.51(m,3H),5.02-4.89(m,1H),4.59(d,J＝2.4Hz,2H),4.45-4.34(m,2H),4.18-4.07(m,2H),3.80-3.66(m,3H),3.54-3.43(m,2H),2.30-2.05(m,4H),1.81-1.61(m,4H),1.58(s,9H).
步骤四：
将化合物W8-3(1.20克，1.93毫摩尔)溶解于400毫升1,2-二氯乙烷中，氮气保护下在20-30℃一次性加入詹氏催化剂(283.73毫克，386.68微摩尔)。在100℃下搅拌反应12个小时。浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝10/1到0/1)纯化得到化合物W8-4。(M+H:593.3)
步骤五：
将化合物W8-4(200毫克，337.48微摩尔)溶解于二氯甲烷(3毫升)，在0℃下一次性加入三氟乙酸(4.62克，40.52毫摩尔)。在0-25℃下搅拌反应3个小时。浓缩，粗品经制备高效液相色谱(盐酸乙腈体系)纯化得到化合物W8盐酸盐。(M+H:409.1)
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ9.36(s,1H),8.04(d,J＝10.8Hz,1H),7.95(s,1H),6.81-6.71(m,2H),4.43(s,2H),4.34-4.24(m,2H),3.80-3.67(m,4H),2.59-2.47(m,2H).
实施例23
Figure PCTCN2022074894-appb-000101
Figure PCTCN2022074894-appb-000102
步骤一：
将化合物二异丙基胺(805.36毫克，7.96毫摩尔)溶于10毫升四氢呋喃，然后在氮气保护下于0-5℃下滴加正丁基锂(3.33毫升，7.96毫摩尔)，反应液在0-5℃氮气保护下搅拌0.5个小时。在0-5℃氮气保护下，加入化合物异丁腈(500毫克，7.24毫摩尔)并搅拌1个小时。在0-5℃氮气保护下，滴加化合物W9-1(1.19克，7.96毫摩尔)的四氢呋喃溶液(10毫升)。反应液在0-25℃氮气保护下搅拌13个小时。将反应液加入到100毫升饱和氯化铵水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取(每次50毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝1/0到10/1)纯化后得到化合物W9-2。
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ5.87-5.73(m,1H),5.09-4.95(m,2H),2.16-2.06(m,2H),1.65-1.57(m,2H),1.56-1.49(m,2H),1.34(s,6H)
步骤二：
将化合物W9-2(5.0克，36.44毫摩尔)溶于100毫升四氢呋喃中，在0℃下加入四氢铝锂(2.77克，72.87毫摩尔)，在0-25℃氮气保护下搅拌12个小时。向反应液中依次加入100毫升水，100毫升15％氢氧化钠水溶液，100毫升水，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取(每次200毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到化合物W9-3。
1H NMR(400MHz,CDCl 3-d)δ5.91-5.72(m,1H),5.09-4.89(m,2H),2.45(s,2H),2.08-2.06(m,1H),2.05-2.00(m,1H),1.39-1.32(m,2H),1.24-1.18(m,2H),0.85(s,6H)
步骤三：
将化合物W9-3(6.00克，42.48毫摩尔)溶于100毫升N-甲基吡咯烷酮，然后在20-30℃下一次性加入DIEA(16.47克，127.43毫摩尔)，然后20-30℃下一次性加入化合物B-7(7.20克，21.24毫摩尔)，在120-130℃下搅拌12个小时。将反应液加入到1000毫升水中，用乙酸乙酯萃取(每次200毫升)4次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到化合物W9-4。(M+H:399.0)
步骤四：
将叔丁醇钾(702.51毫克，6.26毫摩尔)溶解于100毫升四氢呋喃，在20-30℃下加入化合物W9-4(10.0克，25.04毫摩尔)的四氢呋喃溶液(100毫升)，在20-30℃下搅拌4个小时。将反应液加入到200毫升饱和氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯萃取(每次100毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到粗品。向粗品中加入石油醚/乙酸乙酯(200毫升/5毫升，共205毫升)混合溶液，在20-30℃下搅拌12个小时，过滤，收集滤饼得到化合物W9-5。(M+H:353.0)
步骤五：
将化合物W9-5(2.5克，7.08毫摩尔)溶于60毫升二氧六环，在20-30℃下一次性加入六甲基二锡烷(2.78克，8.49毫摩尔)和四三苯基磷钯(1.64克，1.42毫摩尔)，然后氮气保护在100℃下搅拌3小时。将反应液加入到100毫升饱和氟化钾水溶液中，用乙酸乙酯萃取(每次80毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝10/1到1/2)纯化得到化合物W9-6。(M+H:439.0)
步骤六：
将化合物W9-6(0.9克，2.06毫摩尔)溶于25毫升二氧六环，然后在20-30℃下一次性加入化合物WBB-4(1.49克，4.12毫摩尔)，然后依次一次性加入三邻甲苯基膦(125.32毫克，412微摩尔)和三乙胺(624.96毫克，6.18毫摩尔)。然后在氮气保护下一次性加入三二亚苄基丙酮二钯(282.78毫克，309.00微摩尔)。在80-90℃氮气保护下搅拌反应10个小时。浓缩，加入80毫升水，用乙酸乙酯萃取(每次80毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝10/1到1/3)纯化得到化合物W9-7。(M+H:555.2)
步骤七：
将化合物W9-7(0.6克，1.08毫摩尔)溶于20毫升1,2-二氯乙烷，在20-30℃下一次性加入(Boc) 2O(471.85毫克，2.16毫摩尔)和DMAP(26.41毫克，216.20微摩尔)。在80℃下搅拌反应4个小时。浓缩得到化合物W9-8。(M+H:655.3)
步骤八：
将化合物W9-8(0.7克，1.07毫摩尔)溶解于四氢呋喃(24毫升)和水(6毫升)中，在20-25℃下一次性加入乙烯基三氟硼酸钾(214.68毫克，1.60毫摩尔)，碳酸铯(1.04克，3.21毫摩尔)和1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(174.51毫克，213.69微摩尔)。在60-70℃氮气保护下搅拌反应12个小时。浓缩，加入50毫升水，水相用乙酸乙酯萃取(每次50毫升)3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝10/1到1/4)纯化得到化合物W9-9。(M+H:647.3)
步骤九：
将化合物W9-9(0.4克，553.53微摩尔)溶解于1,2-二氯乙烷(120毫升)，在20-30℃下一次性加入詹氏催化剂(81.23毫克，110.71微摩尔)。在100℃氮气保护下搅拌反应12个小时。浓缩，粗品经制备板(石油醚：乙酸乙酯＝1:5)纯化得到化合物W9-10。(M+H:619.3)
步骤十：
将化合物W9-10(30毫克，48.49微摩尔)加入到盐酸/甲醇(4M，10毫升)中，在10-20℃下搅拌反应12个小时。浓缩，粗品经制备高效液相色谱(盐酸乙腈体系)纯化得到化合物W9的盐酸盐。(M+H:435.1)
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.89(s,1H),7.92-7.86(m,1H),7.82(s,1H),6.52-6.44(m,1H),6.41-6.30(m,1H),4.35(s,2H),4.01(s,2H),2.25-2.19(m,1H),2.08-2.02(m,1H),1.37-1.33(m,2H),1.32-1.30(m,2H),0.98(s,6H).
实施例24
Figure PCTCN2022074894-appb-000103
步骤一：
将化合物W9-6(0.9克，2.06毫摩尔)和化合物BB-1(1.41克，4.12毫摩尔)溶解于25毫升1,4-二氧六环，在20-30℃下一次性加入三乙胺(624.96毫克，6.18毫摩尔)和三邻甲苯基膦(125.32毫克，411.74微摩尔)。然后在氮气保护下一次性加入三二亚苄基丙酮二钯(282.78毫克，308.81微摩尔)，反应在80-90℃氮气保护下搅拌10个小时。浓缩，加入50毫升水，用乙酸乙酯萃取(每次60毫升)3次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝10/1到1/3)纯化得到化合物W10-1。(M+H:537.2)
步骤二：
将化合物W10-1(0.42克，782.04微摩尔)溶解于20毫升1,2-二氯乙烷，在20-30℃下一次性加入(Boc) 2O(341.36毫克，1.56毫摩尔)和DMAP(19.11毫克，156.41微摩尔)。然后在80℃下搅拌反应4个小时。浓缩，加入100毫升二氯甲烷，加入饱和柠檬酸水溶液至pH＝6-7,溶液分层，水相用二氯甲烷萃取(每次50毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到化合物W10-2。(M+H:637.2)
步骤三：
将化合物W10-2(0.5克，784.72微摩尔)溶解于四氢呋喃(24毫升)和水(6毫升)中，在20-25℃下一次性加入乙烯基三氟硼酸钾(157.67毫克，1.18毫摩尔)，碳酸铯(767.03毫克，2.35毫摩尔)和1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(128.17毫克，156.94微摩尔)。在60-70℃氮气保护下搅拌反应12个小时。浓缩，加入50毫升水，水相用乙酸乙酯萃取(每次50毫升)3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚：乙酸乙酯＝10/1到1/4)纯化得到化合物W10-3。(M+H:629.3)
步骤四：
将化合物W10-3(0.28克，445.32微摩尔)溶解于1,2-二氯乙烷(90毫升)，在20-30℃下一次性加入詹氏催化剂(65.35毫克，89.06微摩尔)。在100℃氮气保护下搅拌反应12个小时。浓缩，粗品经制备板(石油醚：乙酸乙酯＝1:2)纯化得到化合物W10-4。(M+H:601.3)
步骤五：
将化合物W10-4(10毫克，16.65微摩尔)加入到盐酸/甲醇(4M，10毫升)中。在10-20℃下搅拌反应12个小时。浓缩，粗品经制备高效液相色谱(盐酸乙腈体系)纯化得到化合物W10的盐酸盐。(M+H:417.1)
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.73(s,1H),8.27-8.18(m,2H),7.83(s,1H),6.60-6.53(m,1H),6.50-6.35(m,1H),4.33(s,2H),4.01(s,2H),2.33-2.20(m,2H),1.38-1.27(m,4H),0.99(s,6H).
实施例25
Figure PCTCN2022074894-appb-000104
Figure PCTCN2022074894-appb-000105
步骤一：
将化合物二异丙胺(33.18克，327.92毫摩尔)溶于150毫升的四氢呋喃溶液中，然后在氮气保护下于零下60℃滴加正丁基锂(2.5M，137.13毫升)到反应液中，在0℃下搅拌1个小时。在0℃下加入环丙基腈(20.00克，298.11毫摩尔)，搅拌1个小时。在0℃下将W11-1(44.43克，298.11毫摩尔)的四氢呋喃(120毫升)溶液滴加到反应液中。在25℃氮气保护下搅拌12个小时。将反应液缓慢倒入600毫升氯化铵溶液中，水相用乙酸乙酯萃取(每次2000毫升)两次，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到50/1)纯化后得到目标化合物W11-2。
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ5.94-5.74(m,1H),5.09-4.94(m,2H),2.16-2.04(m,2H),1.57-1.47(m,2H),1.47-1.39(m,2H),0.63-0.56(m,2H),0.56-0.50(m,2H)
步骤二：
将四氢铝锂(3.50克，92.22毫摩尔)溶于80毫升四氢呋喃溶液中。在0℃氮气保护下将化合物W11-2(6.00克，44.38毫摩尔)的四氢呋喃溶液(10毫升)滴加到反应液中。在25℃下搅拌12个小时。将反应液冷却到0℃，依次缓慢滴加水(3.5毫升)，15％氢氧化钠溶液(3.5毫升)，水(10.5毫升)，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取(每次50毫升)2次，合并有机相，用盐酸乙酸乙酯(4M)调节pH到2-3，浓缩得到化合物W11-3。
步骤三：
将化合物W11-3(4.00克，22.77毫摩尔)溶于50毫升的N-甲基吡咯烷酮中，依次加入N,N-二异丙基乙基胺(7.43克，57.52毫摩尔)和化合物B-7(6.50克，19.17毫摩尔)。在130℃下搅拌12个小时。将反应液冷却到25℃，倒入100毫升水中，并用乙酸乙酯萃取(每次50毫升)2次，合并有机相，浓缩后得到化合物W11-4。(M+H：399.1)
步骤四：
将化合物W11-4(8.00克，20.14毫摩尔)溶于30毫升醋酸溶液中。在85℃下搅拌12小时。将反应液冷却到25℃，缓慢倒入100毫升饱和碳酸氢钠溶液中，水相用乙酸乙酯萃取(每次30毫升)两次，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到5/1)纯化后得化合物W11-5。(M+H：353.0)
步骤五：
将化合物W11-5(3.00克，8.54毫摩尔)，六甲基二锡烷(3.36克，10.25毫摩尔)，四三苯基膦钯(493.49毫克，427.06微摩尔)依次加入到20毫升二氧六环溶液中并用氮气置换三次。在100℃下搅拌2小时。将反应液冷却到25℃，加入100毫升饱和氟化钾溶液，在25℃下搅拌1个小时，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取(每次50毫升)2次，合并有机相，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化后得到化合物W11-6。(M+H：437.1)
步骤六：
将化合物W11-6(0.70克，1.61毫摩尔)，BB-1(829.11毫克，2.41毫摩尔)，三二亚苄基丙酮二钯(147.31毫克，160.86微摩尔)，三乙胺(488.34毫克，4.83毫摩尔)，三邻甲苯基膦(97.92毫克，321.73微摩尔)溶于5毫升二氧六环溶液中，并用氮气置换三次。在100℃下搅拌4个小时。反应液冷却到25℃，过滤，浓缩后得到化合物W11-7。(M+H：535.2)
步骤七：
将化合物W11-7(1.50克，2.80毫摩尔)，(Boc)2O(1.22克，5.61毫摩尔)，DMAP(68.50毫克，560.71微摩尔)溶于20毫升1,2-二氯乙烷溶液。在80℃下搅拌1个小时。浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化后得到化合物W11-8。(M+H：635.5)
步骤八：
将化合物W11-8(0.70克，1.10毫摩尔)，乙烯基三氟硼酸钾盐(442.88毫克，3.31毫摩尔)，1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(90.00毫克，110.21微摩尔)，碳酸铯(1.08克，3.31毫摩尔)溶于15毫升四氢呋喃和3毫升水的混合溶液中，并用氮气置换三次。在75℃下搅拌12个小时。将反应液冷却到25℃，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取(每次20毫升)2次，合并有机相，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化后得化合物W11-9。(M+H：627.3)
步骤九：
将化合物W11-9(0.60克，957.32微摩尔)，Hoveyda-Grubbs二代催化剂(119.98毫克，191.46微摩尔)溶于50毫升二氯甲烷溶液中，并用氮气置换三次。在25℃下搅拌12个小时。浓缩，粗品经制备板(石油醚:乙酸乙酯＝0/1,R f＝0.5)纯化得到化合物W11-10。(M+H:599.3)
步骤十：
将化合物W11-10(30毫克，50.11微摩尔)溶于5毫升二氯甲烷溶液中，加入三氟乙酸(1.54克，13.51毫摩尔)。在10-20℃下搅拌12个小时。浓缩，粗品经制备高效液相色谱(盐酸乙腈体系)纯化得到化合物W11的盐酸盐。(M+H：415.2)
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ9.03(s,1H),8.54(d,J＝8.4Hz,1H),8.4(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(s,1H),7.24(d,J＝16.2Hz,1H),6.56-6.49(m,1H),4.34(m,2H),2.29(m,2H),1.63(m,4H),0.65-0.45(m,4H).
实施例26
Figure PCTCN2022074894-appb-000106
步骤一：
将化合物W11-6(0.60克，1.38毫摩尔)，化合物WBB-4(548.44毫克，1.52毫摩尔)，三二亚苄基丙酮二钯(126.26毫克，137.88微摩尔)，三乙胺(418.57毫克，4.14毫摩尔)，三邻甲苯基膦(83.94毫克，275.77微摩尔)溶于5毫升二氧六环中，并用氮气置换三次。在100℃下搅拌4个小时。将反应液冷却到25℃，过滤，浓缩得到化合物W12-1。(M+H：553.2)
步骤二：
将化合物W12-1(1.50克，2.71毫摩尔)，(Boc) 2O(1.18克，5.42毫摩尔)，DMAP(66.27毫克，542.47微摩尔)溶于20毫升1,2二氯乙烷。在85℃下搅拌1个小时。浓缩，粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得到化合物W12-2。(M+H：653.5)
步骤三：
将化合物W12-2(0.40克，612.42微摩尔)，乙烯基三氟硼酸钾(246.10毫克，1.84毫摩尔)，1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯二氯甲烷络合物(50.01毫克，61.24微摩尔)，碳酸铯(598.62毫克，1.84 毫摩尔)溶于15毫升四氢呋喃和3毫升水的混合溶液中，并用氮气置换三次。在75℃下搅拌12个小时。将反应液冷却到25℃，倒入15毫升水中，并用乙酸乙酯萃取(每次20毫升)2次，合并有机相，浓缩。粗品经硅胶柱(100-200目，石油醚:乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化得到化合物W12-3。(M+H：645.3)
步骤四：
将化合物W12-3(220.00毫克，341.22微摩尔)，Hoveyda-Grubbs二代催化剂(42.76毫克，68.24微摩尔)溶于25毫升二氯甲烷溶液中，并用氮气置换三次。在25℃下搅拌12个小时。浓缩，粗品经制备板(石油醚:乙酸乙酯＝0/1,R f＝0.53)纯化得到化合物W12-4。(M+H：617.3)
步骤五：
将化合物W12-4(25毫克，40.54微摩尔)溶于5毫升二氯甲烷中，加入三氟乙酸(1.54克，13.51毫摩尔)。在10-20℃下搅拌12个小时。浓缩，粗品经制备高效液相色谱(盐酸乙腈体系)纯化得到化合物W12的盐酸盐。(M+H：433.2)
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.90(s,1H),7.97(d,J＝10.8Hz,1H),7.94(s,1H),7.23(d,J＝15.8Hz,1H),6.46-6.35(m,1H),4.29(s,2H),3.37(s,2H),2.23-2.18(m,2H),1.65-1.50(m,4H),0.50-0.40(m,4H).
实验例1：体外评价mTOR酶学抑制活性
实验材料:
本实验测试于DiscoverX，所有材料和方法均来自DiscoverX。
实验操作:
激酶活性分析。
1.将标记的mTOR激酶稳定的表达于HEK-293细胞中。
2.室温条件下，用生物素化小分子配体处理链霉亲和素磁珠30分钟，产生用于激酶分析的亲和树脂；
3.配体珠用过量的生物素阻断并用缓冲液(seablock，1％牛血清白蛋白，0.05％吐温20,1毫米DTT(二硫苏糖醇))洗涤，清洗掉未结合的配体和非特异性结合的配体；
4.激酶配体亲和珠，组装，测试化合物三者的结合反应均在缓冲液(20％seablock缓冲溶液，0.17×PBS，0.05％吐温20,6毫米DTT)中实现；
5.测试化合物溶于纯的二甲基亚砜中；
6.所有用于测量的化合物都是溶解于DMSO，然后将化合物直接稀释到浓度为0.9％。
7.溶液置于384孔聚丙烯板，每个体积为0.02毫升；
8.室温条件下，摇晃1小时；
9.用缓冲液洗(1×PBS，0.05％吐温20)洗涤
10.亲和珠再次悬浮于缓冲液(1×PBS，0.05％吐温20，0.5μm的非生物素亲和配体)并在室温孵化30分钟。
11.用qPCR测量洗脱液中激酶的浓度。
实验结果：
表4 mTORC1和mTORC2激酶复合物活性测试结果
供试品 mTORC1和mTORC2激酶复合物IC 50(nM)
化合物1 4
化合物2 3
化合物3 8
化合物4 8
化合物6 16
化合物7 5
化合物8 8
化合物12 14
化合物13 6
化合物14 8
结论：本发明化合物具有显著的mTOR激酶抑制活性。
实验例2：DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)抑制活性筛选实验
实验材料及方法：
人源DNA-PK；Mg/ATP；GST-cMyc-p53；EDTA；Ser15抗体；ATP:10μM。
实验方法(Eurofins Pharma Discovery Service)：
将DNA-PK(h)在含有50nM GST-cMyc-p53和Mg/ATP(根据需要的浓度)的测定缓冲液中温育。通过添加Mg/ATP混合物引发反应。在室温下温育30分钟后，加入含有EDTA的终止溶液终止反应。最后，添加检测缓冲液(含有标记的抗GST单克隆抗体和针对磷酸化p53的铕标记的抗磷酸Ser15抗体)。然后以时间分辨荧光模式读板，并根据公式HTRF＝10000×(Em665nm/Em620nm)测定均匀时间分辨荧光(HTRF)信号。
实验结果：
表5 DNA-PK激酶活性测试结果
供试品 DNA-PK激酶IC 50(nM)
化合物1 1
化合物2 3
化合物3 8
化合物4 7
化合物6 10
化合物7 2
化合物8 3
化合物12 16
化合物13 12
化合物14 3
结论：本发明化合物具有显著的DNA-PK激酶抑制活性。
实验例3：细胞增殖抑制活性评价
实验原理：本次试验使用Promega公司的Luminescent Cell Viability Assay(Cell
Figure PCTCN2022074894-appb-000107
方法)进行细胞增殖检测。
Promega公司的
Figure PCTCN2022074894-appb-000108
Luminescent Cell Viability Assay(Cell
Figure PCTCN2022074894-appb-000109
方法)，是通过检测ATP含量反应活细胞数的定量方法。细胞数与荧光值大小呈正比，荧光读数越高，表明细胞内ATP含量越高，也代表活细胞数越多。检测板使用PerkinElmer公司的Envision进行分析，分析模式为荧光检测，数据用化学发光信号400-700nm的读数来表示。所以，我们可以通过荧光数值来监测化合物对细胞增殖的抑制程度。
实验材料：
名称 品牌
人脑胶质瘤U87MG细胞 ATCC
RPMI1640培养基 Life technology
胎牛血清 Hyclone
青霉素/链霉素 Millipore
磷酸盐缓冲液 Corning
0.05％胰酶 Life technology
384孔板 Greiner
Echo 384孔板 Labcyte
Cell Titer Glo Promega
试验方法：消化分离培养瓶中的细胞，用培养基重悬，计数，将细胞浓度用培养基(500mL RPMI1640，55mL胎牛血清，5.5mL青霉素/链霉素)调节至1.25×10 4个细胞/mL，向384孔板外围孔中加入100μL磷酸盐缓冲液，向其它孔中加入40μL细胞悬液，室温静置10min后，置于37℃，5％CO 2培养箱中孵育24h；化合物用DMSO在ECHO上进行10个点3倍梯度稀释，并分别转移100nL化合物到384孔板中，，阳性对照和阴性对照转移100nL DMSO，1000rpm离心10s，置于37℃5％CO 2培养箱中孵育5天；然后向384孔板的每孔中加入20μL Cell Titer-Glo，1000rpm离心10s，室温震荡15min后，用Envision读数。
抑制率计算：
抑制率(％)＝100×(化合物信号值–阴性对照平均信号值)/(阳性对照平均信号值–阴性对照平均信号值)
计算出的抑制率将用GraphPad Prism软件来做曲线拟合分析，得到剂量效应曲线，并计算出化合物对细胞增殖抑制的IC 50。
实验结果：本实验使用Cell Titer-Glo试剂盒分析了本发明化合物对人脑胶质瘤U87MG细胞增殖的影响，结果见表5。
表6化合物对UG87细胞的增殖抑制作用
供试品 IC 50(nM)
CC-115 443.3
化合物1 26.35
实验结论：本发明化合物能有效抑制U87MG细胞的增殖。
实验例4:人食管癌EC9706细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型的体内药效学研究
实验目的：本试验使用EC9706细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型评价化合物的抗肿瘤作用。
实验动物：雌性BALB/c裸小鼠，6-8周龄，体重18-22克：供应商：北京维通利华实验动物技术有限公司
实验方法与步骤：
1细胞培养
人食管癌EC9706细胞(BNCC，39892)体外单层培养，培养条件为EMEM培养基和10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素，37℃，5％CO 2孵箱培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞饱和度为80％-90％，数量到达要求时，收取细胞，计数，接种。
2肿瘤细胞接种(肿瘤接种)
将0.1mL(5×10 6个)EC9706细胞皮下接种于每只小鼠的右后背，肿瘤平均体积达到156mm 3时药效学实验开始分组给药。
3受试物的配制
溶媒为10％DMSO加10％Solutol加80％水，受试化合物配制成澄清溶液。(Solutol为聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯)
4肿瘤测量和实验指标
每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b 2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。
化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。相对肿瘤增殖率T/C(％)＝T RTV/C RTV×100％(T RTV：治疗组RTV平均值；C RTV：阴性对照组RTV平均值)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为RTV＝V t/V 0，其中V 0是分组给药时(即D0)测量所得肿瘤体积，V t为某一次测量时的肿瘤体积，T RTV与C RTV取同一天数据。
TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。
5统计分析
统计分析基于试验结束时RTV的数据运用SPSS软件进行分析。三组或多组间比较用one-way ANOVA进行分析，各组间方差存在差异性(F值有显著性差异)，应用Games-Howell法进行检验。p<0.05 认为有显著性差异。
6实验结果
在EC9706食管癌模型上，实施例化合物均表现出优异的抑瘤效果。
表7化合物对人食管癌EC9706细胞皮下异种移植瘤模型的抑瘤效果
Figure PCTCN2022074894-appb-000110
注：a.平均值±SEM。
b.用相对肿瘤体积(RTV)进行计算
c.分组后给药天数
7实验结论
本发明化合物具有显著的抑瘤活性。
实验例5：体外评价mTOR酶学抑制活性
实验材料:
本实验测试于DiscoverX，所有材料和方法均来自DiscoverX。
实验操作:
激酶活性分析。
1.将标记的mTOR激酶稳定的表达于HEK-293细胞中。
2.室温条件下，用生物素化小分子配体处理链霉亲和素磁珠30分钟，产生用于激酶分析的亲和树脂；
3.配体珠用过量的生物素阻断并用缓冲液(seablock，1％牛血清白蛋白，0.05％吐温20,1毫米DTT(二硫苏糖醇))洗涤，清洗掉未结合的配体和非特异性结合的配体；
4.激酶配体亲和珠，组装，测试化合物三者的结合反应均在缓冲液(20％seablock缓冲溶液，0.17×PBS，0.05％吐温20,6毫米DTT)中实现；
5.测试化合物溶于纯的二甲基亚砜中；
6.所有用于测量的化合物都是溶解于DMSO，然后将化合物直接稀释到浓度为0.9％。
7.溶液置于384孔聚丙烯板，每个体积为0.02毫升；
8.室温条件下，摇晃1小时；
9.用缓冲液洗(1×PBS，0.05％吐温20)洗涤
10.亲和珠再次悬浮于缓冲液(1×PBS，0.05％吐温20，0.5μm的非生物素亲和配体)并在室温孵化30分钟。
11.用qPCR测量洗脱液中激酶的浓度。
实验结果：
表8 mTORC1和mTORC2激酶复合物活性测试结果
供试品 mTORC1和mTORC2激酶复合物IC 50(nM)
化合物W1 3
化合物W2 13
化合物W3 6
化合物W5 4
化合物W6 15
化合物W7 19
化合物W11 2
结论：本发明化合物具有显著的mTOR激酶抑制活性。
实验例6：DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)抑制活性筛选实验
实验材料及方法：
人源DNA-PK；Mg/ATP；GST-cMyc-p53；EDTA；Ser15抗体；ATP:10μM。
实验方法(Eurofins Pharma Discovery Service)：
将DNA-PK(h)在含有50nM GST-cMyc-p53和Mg/ATP(根据需要的浓度)的测定缓冲液中温育。通过添加Mg/ATP混合物引发反应。在室温下温育30分钟后，加入含有EDTA的终止溶液终止反应。最后，添加检测缓冲液(含有标记的抗GST单克隆抗体和针对磷酸化p53的铕标记的抗磷酸Ser15抗体)。然后以时间分辨荧光模式读板，并根据公式HTRF＝10000×(Em665nm/Em620nm)测定均匀时间分辨荧光(HTRF)信号。
实验结果：
表9 DNA-PK激酶活性测试结果
供试品 DNA-PK激酶IC 50(nM)
化合物W1 4
化合物W2 31
化合物W3 24
化合物W5 7
化合物W6 16
化合物W7 68
化合物W11 64
结论：本发明化合物具有显著的DNA-PK激酶抑制活性。
实验例7：药代动力学评价
1.小鼠试验方法
受试化合物与10％DMSO/10％Solutol/80％水混合，搅拌并涡旋，制备得到1mg/ml的均匀混悬液。取400μL 1mg/ml的受试化合物溶液加入600μL 10％DMSO/10％聚乙二醇硬酯醋酸/80％水，得到0.4mg/ml 的澄清溶液，用于IV组给药，微孔滤膜过滤后备用。受试化合物与5％DMSO/95％(10％HP-β-CD)混合，搅拌并涡旋，制备得到1mg/ml的澄清溶液，用于PO给药。(Solutol为聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯)
将4只雄性CD-1小鼠分为2组。第1组动物单次静脉给药，剂量为2mg/kg，溶媒为10％DMSO/10％Solutol/80％水，给药体积为5ml/kg。第2组动物单次灌胃口服10mg/kg的受试化合物，口服溶媒为5％DMSO/95％(10％HP-β-CD)，口服体积为10mL/kg。在给药后0.083(仅静脉注射)、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时采集全血。全血3200g,4℃离心10min后得到血浆，用LC/MS/MS法测定血浆中受试化合物的浓度，并用Phoenix WinNonlin软件计算药代参数。
表10化合物血浆中的药物代谢动力学(PK)参数
Figure PCTCN2022074894-appb-000111
表11化合物血浆中的药物代谢动力学(PK)参数
Figure PCTCN2022074894-appb-000112
“--”是指未测试或未获得数据
结论：受试化合物展现了优秀的药代动力学数据，本发明化合物具有很高的口服生物利用度，是很好开发口服给药的分子。
2.大鼠试验方法
受试化合物与5％DMSO+95％(10％HP-β-CD水溶液)混合，搅拌并涡旋，制备得到0.4mg/ml的均匀混悬液，用于PO给药。用于IV组给药，微孔滤膜过滤后备用。
将4只雄性SD大鼠分为2组。将2只雄性SD大鼠进行单次口服给药，剂量为2mg/kg，给药体积为10ml/kg。第2组动物单次灌胃口服2mg/kg的受试化合物，在给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时采集全血。全血3200g,4℃离心10min后得到血浆，用LC/MS/MS法测定血浆中受试化合物的浓度，并用Phoenix WinNonlin软件计算药代参数。
表12化合物血浆中的药物代谢动力学(PK)参数
Figure PCTCN2022074894-appb-000113
“--”是指未测试或未获得数据
结论：受试化合物展现了优秀的药代动力学数据，本发明化合物具有很高的口服生物利用度，是很好开发口服给药的分子。
实验例8：人食管癌EC9706细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型的体内药效学研究
实验目的：本试验使用EC9706细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型评价WuXi系列化合物的抗肿瘤作用。
实验动物：雌性BALB/c裸小鼠，6-8周龄，体重18-22克：供应商：北京维通利华实验动物技术有限公司
实验方法与步骤：
1细胞培养
人食管癌EC9706细胞(BNCC，39892)体外单层培养，培养条件为EMEM培养基和10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素，37℃，5％CO 2孵箱培养。一周两次用胰酶-EDTA进行 常规消化处理传代。当细胞饱和度为80％-90％，数量到达要求时，收取细胞，计数，接种。
2肿瘤细胞接种(肿瘤接种)
将0.1mL(5×10 6个)EC9706细胞皮下接种于每只小鼠的右后背，肿瘤平均体积达到156mm 3时药效学实验开始分组给药。
3受试物的配制
溶媒为10％DMSO加10％Solutol加80％水，受试化合物配制成澄清溶液。
4肿瘤测量和实验指标
每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b 2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。
化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。相对肿瘤增殖率T/C(％)＝T RTV/C RTV×100％(T RTV：治疗组RTV平均值；C RTV：阴性对照组RTV平均值)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为RTV＝V t/V 0，其中V 0是分组给药时(即D0)测量所得肿瘤体积，V t为某一次测量时的肿瘤体积，T RTV与C RTV取同一天数据。
TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。
5统计分析
统计分析基于试验结束时RTV的数据运用SPSS软件进行分析。三组或多组间比较用one-way ANOVA进行分析，各组间方差存在差异性(F值有显著性差异)，应用Games-Howell法进行检验。p<0.05认为有显著性差异。
6实验结果
在EC9706食管癌模型上，实施例化合物均表现出优异的抑瘤效果。
表13化合物对人食管癌EC9706细胞皮下异种移植瘤模型的抑瘤效果
Figure PCTCN2022074894-appb-000114
注：a.平均值±SEM。
b.用相对肿瘤体积(RTV)进行计算
c.分组后给药天数
7实验结论
本发明化合物具有良好的抑制肿瘤效果。
实验例9：细胞增殖抑制活性评价(一)
实验材料：
RPMI-1640培养基，胎牛血清，盘尼西林/链霉素抗生素购自维森特。NCI-N87细胞系购自南京科佰生 物科技有限公司。Nivo多标记分析仪(PerkinElmer)。
实验方法：
将NCI-N87细胞种于白色96孔板中，80μL细胞悬液每孔，其中包含8000个NCI-N87细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。
将待测化合物用排枪进行3倍稀释至第8个浓度，即从200μM稀释至92nM，设置双复孔实验。向中间板中加入78μL培养基，再按照对应位置，转移2μL每孔的梯度稀释化合物至中间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养3天。
向孵育3天后的细胞板中加入每孔25uL的Promega CellTiter-Glo试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用PerkinElmer Nivo多标记分析仪读数。
数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC 50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中"log(inhibitor)vs.response--Variable slope"模式得出)。下表提供了本发明的化合物对NCI-N87细胞增殖的抑制活性。
表14化合物抗胃癌N87增殖活性
供试品 IC 50(nM)
CC-115 72.7
化合物W1 9.1
化合物1 4.9
试验结论：本发明化合物有非常卓越的抗胃癌细胞N87增殖的活性。
实验例10：细胞增殖抑制活性评价(二)
实验材料：
细胞系及培养方法：
细胞系 肿瘤类型 生长特点 培养方法
EC9706 食道癌 贴壁生长 1640+10％FBS
培养基及试剂：FBS(胎牛血清)、(DMSO)二甲基亚砜。
实验方法：
将EC9706细胞种于Greiner CELLSTAR 96孔板中(平地黑板，带盖及透明底)，90μL细胞悬液每孔，其中包含6000个EC9706细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。
将待测化合物用排枪进行3.5倍稀释至第9个浓度，即从4000μM稀释至0.17764nM，设置双复孔实验。
在V形底的96孔板中加入78μL细胞培养液，从400倍化合物存储板中吸取2μL化合物加入96孔板的细胞培养液中。在溶媒对照和空白对照中加入2μL DMSO。加入化合物或DMSO后用排枪吹打混匀。加药：取10μL的10倍化合物工作液按表1所示加入到细胞培养板中。在溶媒对照和空白对照中加入10μL DMSO-细胞培养液混合液。DMSO终浓度为0.25％。将96孔细胞板放回培养箱 中培养72h。
以下步骤按照Promega CellTiter-Glo发光法细胞活性检测试剂盒(Promega-G7573)的说明书来进行。
(1).将CellTiter-Glo缓冲液融化并放置至室温。
(2).将CellTiter-Glo底物放置至室温。
(3).在一瓶CellTiter-Glo底物中加入CellTiter-Glo缓冲液以溶解底物，从而配制CellTiter-Glo工作液。
(4).缓慢涡旋震荡使充分溶解。
(5).取出细胞培养板放置30分钟使其平衡至室温。
(6).在每孔中加入50μL(等于每孔中细胞培养液一半体积)的CellTiter-Glo工作液。用铝箔纸包裹细胞板以避光。
(7).将培养板在轨道摇床上振摇2分钟以诱导细胞裂解。
(8).培养板在室温放置10分钟以稳定发光信号。
(9).在MD-SpectraMax ID5读板器上检测发光信号。
数据分析：
用下列公式来计算检测化合物的抑制率(Inhibition rate，IR)：IR(％)＝(1–(RLU化合物–RLU空白对照)/(RLU溶媒对照–RLU空白对照))*100％。在Excel中计算不同浓度化合物的抑制率，然后用GraphPad Prism软件作抑制曲线图和计算相关参数，下表提供了实施例化合物的IC 50。
表15化合物抗食道癌细胞EC9706增殖活性
供试品 IC 50(nM)
CC-115 537.9
化合物W1 18.0
化合物1 23.1
结论：实施例化合物有着显著的抗食道癌细胞EC9706增殖活性，显著优于CC-115。

Claims (36)

  1. 式(I)化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2022074894-appb-100001
    其中，
    Figure PCTCN2022074894-appb-100002
    为单键或双键；
    E选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100003
    X选自N和CH；
    L选自-(CR 6R 7) 4-、-(CR 6R 7) 5-、-(CR 6R 7) 6-、-(CR 6R 7) 7-、-(CR 6R 7) 8-和-CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-；
    L 1和L 3分别独立地选自-(CR 8R 9)-、-(CR 8R 9) 2-、-(CR 8R 9) 3-、-(CR 8R 9) 4-、-(CR 8R 9) 5-、-(CR 8R 9) 6-；
    L 2选自单键、-CH＝CH-、-O-、-NHC(＝O)-、C 3-6环烷基、苯基和5-6元杂芳基，所述C 3-6环烷基、苯基、5-6元杂芳基分别独立地任选被1、2或3个R a取代；
    R 1选自选自C 1-6烷基和5-6元杂芳基，所述C 1-6烷基和5-6元杂芳基分别独立地任选被1、2或3个R b取代；
    R 2和R 3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C 1-4烷基和C 3-6环烷基，所述C 1-4烷基和C 3-6环烷基分别独立地任选被1、2或3个R c取代；
    R 4和R 5分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、CH 3、OCH 3、CH 2CH 3和CF 3；
    R 6和R 7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R d取代；
    或者，连接在同一个碳原子上的R 6与R 7分别独立地任选连接形成一个任选被1、2或3个R取代的C 3- 6环烷基；
    R选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基任选被1、2或3个R e取代；
    R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基，所述C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基任选被1、2或3个R f取代；
    R a、R b、R c、R d、R e和R f分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、CH 3、OCH 3、CH 2CH 3和CF 3；
    所述5-6元杂芳基分别包含1、2、3或4个独立选自-O-、-NH-、-S-和N的杂原子或杂原子团。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，E选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100004
  3. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，E选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100005
  4. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2022074894-appb-100006
    选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100007
  5. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3烷氨基任选被1、2或3个R f取代。
  6. 根据权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 8和R 9分别独立地选自R 8和R 9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2和CH 3。
  7. 根据权利要求1、2和6任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L 1和L 3分别独立地选自-(CH 2) 2-、-(CH 2) 3-、-(CH 2) 4-、-(CH 2) 5-、-(CH 2) 6-、-(CH 2) 2-CF 2-、-(CH 2) 2-CHF-、-(CH 2) 3-C(CH 3) 2-和-(CH 2) 3-CF 2-。
  8. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L 2选自单键、-CH＝CH-、-O-、-NHC(＝O)-、
    Figure PCTCN2022074894-appb-100008
    所述
    Figure PCTCN2022074894-appb-100009
    Figure PCTCN2022074894-appb-100010
    分别独立地任选被1、2或3个R a取代。
  9. 根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L 2选自单键、-CH＝CH-、-O-和-NHC(＝O)-。
  10. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基，所述甲基、乙基、正丙基、异丙基、吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基分别独立地任选被1、2或3个R b取代。
  11. 根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100011
    Figure PCTCN2022074894-appb-100012
  12. 根据权利要求1-3任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2和式R 3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、CN、C 1-3烷基，所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R c取代。
  13. 据权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2和R 3分别独立地选自H和F。
  14. 根据权利要求1或3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2022074894-appb-100013
    选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100014
  15. 根据权利要求1或3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基，所述吡唑基、1H-1,2,4-三氮唑基和4H-1,2,4-三氮唑基任选被1、2或3个R a取代。
  16. 根据权利要求1或3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100015
    Figure PCTCN2022074894-appb-100016
  17. 根据权利要求1或3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 6和R 7分别独立地选自H、F、Cl、Br、I和CH 3。
  18. 根据权利要求1或3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH 2、CH 3、OCH 3、CH 2CH 3和CF 3。
  19. 根据权利要求1、3和18任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述连接在同一个碳原子上的R 6与R 7分别独立地任选连接形成一个任选被1、2或3个R取代的环丙基。
  20. 根据权利要求20所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其中，所述连接在同一个碳原子上的R 6与R 7分别独立地任选连接形成一个环丙基。
  21. 根据权利要求1或3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L选自-(CH 2) 4-、-(CH 2) 5-、-(CH 2) 6-、-(CH 2) 7-、-(CH 2) 8-、
    Figure PCTCN2022074894-appb-100017
    -CH 2-CH 2-O-CH 2-CH 2-和
    Figure PCTCN2022074894-appb-100018
  22. 根据权利要求1、2和4-13任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，式(I)所示化合物选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100019
    其中，X、R 2、R 3、L 1、L 2和L 3如权利要求1、2和4-13任意一项所定义。
  23. 根据权利要求1、3和14-21任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，式(I)所示化合物选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100020
    其中，
    Figure PCTCN2022074894-appb-100021
    R 2、R 3、R 4、R 5和L如权利要求1、3和14-21任意一项所定义。
  24. 化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
    Figure PCTCN2022074894-appb-100022
    Figure PCTCN2022074894-appb-100023
    Figure PCTCN2022074894-appb-100024
    Figure PCTCN2022074894-appb-100025
  25. 根据权利要求1-24任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与mTOR和DNA-PK相关疾病的药物中的应用。
  26. 化合物W1盐酸盐的晶型A
    Figure PCTCN2022074894-appb-100026
    其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：21.56±0.20°、27.00±0.20°、27.84±0.20°。
  27. 根据权利要求26所述的化合物W1盐酸盐的晶型A，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.60±0.20°、9.12±0.20°、17.78±0.20°、21.56±0.20°、27.00±0.20°。
  28. 根据权利要求27所述的化合物W1盐酸盐的晶型A，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.60±0.20°、9.12±0.20°、17.78±0.20°、21.56±0.20°、23.92±0.20°、26.12±0.20°、27.00±0.20°、27.84±0.20°。
  29. 根据权利要求28所述的化合物W1盐酸盐的晶型A，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.598°、7.999°、9.115°、10.321°、13.561°、15.282°、16.022°、17.782°、18.163°、19.940°、20.721°、21.081°、21.560°、22.339°、23.581°、23.920°、25.300°、26.120°、27.001°、27.840°、28.897°、29.413°、30.046°、30.711°、31.361°、32.201°、32.961°、33.574°、36.080°和38.320°。
  30. 根据权利要求29所述的化合物W1盐酸盐的晶型A，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图如图1所示。
  31. 根据权利要求26-30任意一项所述的化合物W1盐酸盐的晶型A，其特征在于，所述化合物W1盐酸盐具有如下结构：
    Figure PCTCN2022074894-appb-100027
    其中，x选自1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9和2.0。
  32. 根据权利要求31所述的化合物W1盐酸盐的晶型A，其特征在于，所述x选自1.8。
  33. 化合物W1晶型B
    Figure PCTCN2022074894-appb-100028
    其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：9.02±0.20°、19.24±0.20°、23.32±0.20°。
  34. 根据权利要求33所述的化合物W1晶型B，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：9.02±0.20°、13.96±0.20°、19.24±0.20°、20.76±0.20°、23.32±0.20°、24.72±0.20°、25.76±0.20°、30.12±0.20°。
  35. 根据权利要求34所述的化合物W1晶型B，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图在下列2θ角处具有衍射峰：4.719°、9.019°、10.801°、11.799°、13.960°、15.202°、17.880°、18.600°、19.241°、20.121°、20.761°、21.657°、22.022°、23.321°、24.719°、25.760°、26.440°、26.960°、27.980°、29.141°、30.118°、31.002°、31.624°、32.820°、35.678°和37.920°。
  36. 根据权利要求35所述的化合物W1晶型B，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图如图2所示。
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