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WO2021132697A1 - ステビオールの新規用途 - Google Patents

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Publication number
WO2021132697A1
WO2021132697A1 PCT/JP2020/049039 JP2020049039W WO2021132697A1 WO 2021132697 A1 WO2021132697 A1 WO 2021132697A1 JP 2020049039 W JP2020049039 W JP 2020049039W WO 2021132697 A1 WO2021132697 A1 WO 2021132697A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
steviol
composition
present
fat
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2020/049039
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
惇紀 吉田
弾宏 大栗
浩二 長尾
芳明 横尾
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suntory Holdings Ltd
Original Assignee
Suntory Holdings Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suntory Holdings Ltd filed Critical Suntory Holdings Ltd
Priority to AU2020411468A priority Critical patent/AU2020411468A1/en
Priority to EP20907334.5A priority patent/EP4082540A1/en
Priority to US17/788,933 priority patent/US20230057359A1/en
Priority to JP2021567751A priority patent/JPWO2021132697A1/ja
Publication of WO2021132697A1 publication Critical patent/WO2021132697A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
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    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/60—Sweeteners
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    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
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    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
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    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
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    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics

Definitions

  • the present invention relates to new uses of steviol, in particular, to promote lipolysis and suppress fat accumulation, reduce blood glucose level, promote sugar uptake and / or improve glucose metabolism, and alcoholic liver disease or non-alcoholic fatty acid. Regarding uses related to the treatment of liver disease.
  • Non-Patent Document 1 Non-Patent Document 1
  • Non-Patent Document 2 a Non-Patent Document 2
  • One aspect of the invention provides: [1] A composition for suppressing fat accumulation and / or promoting lipolysis, which comprises steviol and / or steviol glycosides. [1-1] A composition for suppressing fat accumulation and / or promoting lipolysis, which comprises steviol and / or steviol glycoside as an active ingredient. [2] The composition according to [1] or [1-1] for preventing obesity, improving obesity and / or reducing body fat. [3] The composition according to [1], [1-1] or [2] for a subject who does not have diabetes in response to insulin treatment.
  • the present invention provides additional means for promoting lipolysis, suppressing fat accumulation and improving sugar uptake, expanding options for maintaining and promoting health and preventing and improving conditions involving fat accumulation. Furthermore, steviol is also useful for reducing already accumulated fat due to its lipolytic promoting action. Furthermore, since steviol promotes glucose uptake in cells, it can also be used for applications such as reducing blood glucose levels and improving glucose metabolism. In addition, steviol can be orally administered as a steviol glycoside, which is sometimes used as a sweetener and has a high affinity with foods, so it can be taken more easily than conventional drugs and promotes health for a wider range of people. Can contribute to.
  • the values on the horizontal axis indicate the steviol concentration ( ⁇ g / mL), and ISP indicates the positive control group.
  • the vertical axis shows the relative amount of lipolysis when the negative control (No addition for ISP, DMSO for steviol) is 100%. *** indicates P ⁇ 0.001 by Student's t-test.
  • the values on the horizontal axis indicate the steviol concentration ( ⁇ g / mL), and LiCl indicates the positive control group.
  • the vertical axis shows the relative fat accumulation amount when the negative control (DMSO) is 100.
  • ### indicates P ⁇ 0.001 according to Student's t-test, *** and ** indicate P ⁇ 0.001 and P ⁇ 0.005 according to Dunnett's test, respectively.
  • the values on the horizontal axis indicate the steviol concentration ( ⁇ g / mL), and Metformin indicates the positive control group.
  • the vertical axis shows the relative fat accumulation amount when the negative control (DMSO) is 100%.
  • ### indicates P ⁇ 0.001, ***, ** and * by Student's t-test, respectively, and P ⁇ 0.001, P ⁇ 0.01, P ⁇ 0.05 by Dunnett's test.
  • the values on the horizontal axis indicate the steviol concentration ( ⁇ g / mL), and Metformin indicates the positive control group.
  • the vertical axis shows the relative TG amount when the negative control (DMSO) is 100%.
  • ### indicates P ⁇ 0.001 according to Student's t-test, *** and * indicate P ⁇ 0.001 and P ⁇ 0.05 according to Dunnett's test, respectively.
  • composition for suppressing lipolysis and / or promoting lipolysis which comprises a steviol and / or a source of steviol (for example, a steviol glycoside) (hereinafter, "promoting lipolysis of the present invention.” It may be referred to as “composition for suppressing fat accumulation” or “composition A of the present invention”).
  • composition for suppressing fat accumulation or “composition A of the present invention”
  • the present inventors have found for the first time that steviol has a fat accumulation inhibitory action and a lipolysis promoting action, and completed the composition A of the present invention. Therefore, steviol and its source can act as an active ingredient in the composition A of the present invention.
  • Acting as an active ingredient in the composition A of the present invention is, for example, a composition A of the present invention and a control composition having the same composition as the composition A of the present invention except that it does not contain steviol and / or a source thereof.
  • a composition A of the present invention suppresses fat accumulation and / or promotes fat decomposition as compared with the case of using the control composition. ..
  • Steviol is an aglycone of steviol glycosides contained in Stevia rebaudiana.
  • the source of steviol includes a substance that can provide steviol by the action of an enzyme in the living body (including an enzyme produced by bacteria in the living body) or the like when administered to the living body.
  • the source of steviol is not limited, and examples thereof include steviol glycosides and glucuronic acid conjugates of steviol (steviol glucuronide).
  • a steviol glycoside is a glycoside in which one or more sugars (for example, glucose, rhamnose, xylose, etc.) are bound to steviol.
  • Non-limiting examples of steviol glycosides include, for example, rebaudioside A, rebaugioside B, rebaudioside D, rebaudioside E, rebaudioside F, rebaudioside I, rebaudioside J, rebaudioside K, rebaudioside M, rebaudioside Q, rebaudioside O, rebaudioside O Examples thereof include R, zulcoside A, rubusoside, steviol monoside, steviol bioside and stevioside.
  • the steviol glycoside comprises a tasty one, such as rebaugioside D and rebaugioside M.
  • rebaugioside may be abbreviated as “Reb”, “Reb.” Or “R”.
  • rebaudioside A may be referred to herein as “RebA”, “Reb.A” or “RA”.
  • steviol and steviol glycoside As the source of steviol and steviol (for example, steviol glycoside), a commercially available product may be used, or a product extracted or purified from stevia may be used. Techniques for extracting and purifying steviol and steviol glycosides from Stevia are known. For example, steviol and steviol glycosides can be extracted from fresh or dried leaves of steviol with an appropriate solvent (an aqueous solvent such as water or an organic solvent such as alcohol, ether and acetone) (extraction conditions and the like can be set. For example, see the method described in Ohta et al., J. Appl. Glycosci. 2010; 57 (3): 199-209 or WO 2010/038911, etc.).
  • an appropriate solvent an aqueous solvent such as water or an organic solvent such as alcohol, ether and acetone
  • ethyl acetate and other organic solvents water gradient, high performance liquid chromatography (HPLC), gas chromatography, time-of-flight mass analysis (TOF-MS), ultra-high.
  • Performance Steviol and various steviol glycosolves can be purified by using known methods such as liquid chromatography (UPLC).
  • UPLC liquid chromatography
  • Steviol can be obtained by deglycosylation of steviol glycosides (for example, Shibata et al., Plant Physiol. 1991; 95 (1): 152-6, etc.).
  • steviol glycosides especially those having a low content in stevia, are subjected to bioconversion in which a glycosyltransferase (for example, UDP sugar-dependent glycosyltransferase (UGT)) is allowed to act on a stevia extract containing a steviol glycoside. , It is possible to increase its concentration.
  • a glycosyltransferase for example, UDP sugar-dependent glycosyltransferase (UGT)
  • UDP sugar-dependent glycosyltransferase UDP sugar-dependent glycosyltransferase
  • the steviol glycoside used in the composition A of the present invention is extracted and purified from Stevia without bioconversion. In another embodiment, the steviol glycoside used in the composition A of the present invention is extracted and purified from Stevia by a method including bioconversion.
  • the steviol and the steviol source (for example, steviol glycoside) used in the composition A of the present invention are preferably those having a higher purity.
  • the purity of steviol or the source of steviol (for example, steviol glycoside) used in the present invention is, for example, 90% or more, 90.5% or more, 91% or more, 91.5% or more, 92% or more.
  • the purity of steviol or a source of steviol may be indexed by, for example, a peak area ratio in chromatography such as HPLC or GC.
  • the composition A of the present invention may contain steviol, a source of steviol (eg, steviol glycoside), or a combination of steviol and a source of steviol (eg, steviol glycoside).
  • the blending ratio of steviol, a steviol source (for example, steviol glycoside), or a combination of steviol and a steviol source (for example, steviol glycoside) in the composition A of the present invention is based on the mass of the entire composition A.
  • Lipolysis means that cells having the ability to accumulate fat (for example, adipocytes, hepatocytes, muscle cells, etc.) decompose the accumulated fat and release it extracellularly (sometimes called lipolysis). ).
  • the promotion of lipolysis by the composition A of the present invention causes, for example, the composition A of the present invention to act when the composition A of the present invention is allowed to act on cells having a fat storage ability cultured under fat accumulation conditions. It can be evaluated by the fact that the amount of lipolytic products released into the medium is larger than that in the case where the mixture is not allowed to be used.
  • the promotion of lipolysis is carried out by adding a fatty acid such as a fatty acid precursor cell differentiation medium or a fatty acid to a cell having a fat storage ability under fat storage conditions as described in Examples described later. After culturing in (under the medium), it is incubated with the composition A of the present invention, and the lipolytic products (fatty acids, glycerol, etc.) released into the medium after a predetermined time (for example, after 24 hours) are detected by a detection reagent or the like and quantified. It can be evaluated by converting it to.
  • a fatty acid such as a fatty acid precursor cell differentiation medium or a fatty acid
  • the degree of promotion of lipolysis was treated with the composition A of the present invention, for example, when the amount of the lipolytic product released under the same conditions was 100% except that the composition A of the present invention was not used.
  • the amount of lipolysis in cells is 102% or more, 105% or more, 108% or more, 110% or more, 112% or more, 115% or more, 118% or more, 120% or more, 122% or more, 125% or more, 128. % Or more, or 130% or more, and the higher the value, the more preferable.
  • Fat accumulation means that cells having the ability to accumulate fat take up extracellular free fatty acids and the like, synthesize fat, and accumulate it inside the cell.
  • the amount of intracellular fat is smaller than that in the case where the composition A of the present invention is not used. It can be evaluated by.
  • the suppression of fat accumulation is performed by culturing cells having a fat accumulation ability together with the composition A of the present invention under fat accumulation conditions as described in Examples described later, and after a predetermined time (for example, 10 days later).
  • Fat mass is 95% or less, 90% or less, 85% or less, 80% or less, 75% or less, 70% or less, 65% or less, 60% or less, 55% or less, 50% or less, 45% or less, or 40 It may be less than%, and the lower the value, the more preferable.
  • composition A of the present invention can be used for treating various conditions in which fat accumulation is involved. Accordingly, the present invention also relates to compositions for the treatment of conditions involving fat accumulation, including steviol and / or sources of steviol (eg, steviol glycosides).
  • the condition includes a disease and a condition that is not diagnosed as a disease but is unhealthy.
  • the conditions in which fat accumulation is involved are not limited to, for example, obesity, fatty liver, type 2 diabetes, coronary cardiac disease, arteriosclerosis, arrhythmia, myocardial angiopathy (triglyceride accumulation type myocardial angiopathy (TGCV), etc.) ), Sudden cardiac death, respiratory sleep disorders (sleep apnea syndrome, etc.), osteoarthritis, hypertension, insulin resistance, leptin resistance, dyslipidemia, efferent cardiac hypertrophy, concentric hypertrophy, heart failure, Metabolic syndrome, etc. (Kopelman, Nature. 2000; 404 (6778): 635-43, Izquierdo et al., Nutrients. 2019; 11 (11).
  • Fatty liver includes alcoholic fatty liver (one of alcoholic liver diseases) and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and NAFLD includes simple fatty liver and non-alcoholic steatohepatitis (NASH).
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • the condition involving fat accumulation is a disease other than diabetes or its complications.
  • a condition involving fat accumulation is a disease in which insulin treatment is less effective.
  • the composition A of the present invention is used for subjects who do not have diabetes in response to insulin treatment (eg, type 1 diabetes).
  • the composition A of the present invention is used for subjects exhibiting insulin resistance.
  • the composition A of the present invention is used for a method of treating a condition in which fat accumulation is involved without controlling the amount of energy intake. Not controlling the amount of energy intake includes, for example, not restricting the diet and continuing the conventional diet (for example, before the start of treatment). Since the lipolysis promoting action and the fat accumulation suppressing action of steviol revealed this time are not mediated by insulin, the composition A of the present invention can exert its effect independently of insulin. Therefore, it can be used for the above-mentioned diseases in which the therapeutic effect of insulin cannot be expected. Furthermore, the composition A of the present invention does not suppress appetite like many anti-obesity drugs, but acts directly on cells having a fat storage ability, so that fat accumulation is involved without impairing the enjoyment of eating and drinking. The condition can be treated.
  • composition A of the present invention can also be used for reducing body fat for the purpose of promoting health, weight loss, prevention of obesity, maintenance or improvement of body shape, and the like.
  • This application includes not only medical applications but also non-medical applications such as beauty applications, sports applications, and fitness applications.
  • composition for promoting sugar uptake Another aspect of the present invention is a composition comprising steviol and / or a source of steviol (eg, steviol glycoside) for promoting sugar uptake, reducing blood glucose and / or improving glucose metabolism (hereinafter, "" It may be referred to as "the composition for promoting sugar uptake of the present invention” or “the composition B of the present invention”).
  • steviol eg, steviol glycoside
  • the composition for promoting sugar uptake of the present invention or “the composition B of the present invention”
  • the present inventors have discovered for the first time that steviol has a sugar uptake promoting action, and completed the composition B of the present invention. Therefore, steviol and its source can act as an active ingredient in composition B of the present invention.
  • Acting as an active ingredient in the composition B of the present invention is, for example, a composition B of the present invention and a control composition having the same composition as the composition B of the present invention except that it does not contain steviol and / or a source thereof.
  • a composition B of the present invention and a control composition having the same composition as the composition B of the present invention except that it does not contain steviol and / or a source thereof.
  • the source, purity, blending amount and the like of steviol and the source of steviol (for example, steviol glycoside) in the composition B of the present invention are as described above for the composition A of the present invention.
  • Sugar uptake means that cells having the ability to take up sugar (for example, adipocytes) take up sugar (glucose) into the cells.
  • the promotion of sugar uptake by the composition B of the present invention can be evaluated by changing the index regarding sugar uptake as compared with the case where the composition B of the present invention is not used.
  • glucose-related substances that are not metabolized by glycolysis for example, 2-deoxyglucose (2DG), 2-deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-) Benzoxadiazol-4-yl) amino] -D-glucose (2-NBDG), etc.
  • the intracellular glucose-related substance or a derivative thereof for example, 2-deoxyglucose-6-phosphate (2DG6P)) after administration. Etc.), etc.
  • the promotion of sugar uptake is carried out by treating cells (eg, adipocytes, etc.) with the composition B of the present invention, administering 2DG for a predetermined time (eg, about), as described in Examples below.
  • 2DG6P present in the cells can be detected by a detection reagent and quantified.
  • the rate of change of the index is 5 with respect to the index obtained under the same conditions except that the composition B of the present invention was not used.
  • % Or more 10% or more, 15% or more, 20% or more, 25% or more, 30% or more, 35% or more, 40% or more, 45% or more, 50% or more, 55% or more, 60% or more, 65% or more , 70% or more, 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, or 100% or more, and the larger the value, the more preferable.
  • the composition B of the present invention can also be used to treat a condition improved by promoting sugar uptake. Accordingly, the present invention also relates to compositions for the treatment of conditions that are ameliorated by enhanced glucose uptake, including steviol and / or sources of steviol (eg, steviol glycosides). Conditions that are improved by promoting glucose uptake include, but are not limited to, diabetes, abnormal glucose metabolism, hyperglycemia, and the like. In one aspect, the condition improved by promoting glucose uptake is a condition in which insulin responsiveness is low. In another embodiment, the composition B of the present invention is used for subjects who do not have diabetes in response to insulin treatment (eg, type 1 diabetes). In another embodiment, the composition B of the present invention is used for subjects exhibiting insulin resistance. Since the sugar uptake promoting action of steviol revealed this time is not mediated by insulin, the composition B of the present invention can exert its effect independently of insulin. Therefore, it can be used even in a state where the therapeutic effect of insulin cannot be expected as described above.
  • steviol
  • compositions A and B of the present invention may have any shape, for example, solid (for example, powder, granular), paste. It may be in the form of a gel, gel or liquid.
  • composition of the present invention can take various forms.
  • the composition of the present invention can take the form of foods, food additives, pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, etc., or can be used as a raw material for producing these products.
  • the present invention comprises suppressing steviol and / or a source of steviol (eg, steviol glycoside), suppressing fat accumulation, promoting lipolysis, treating conditions involving fat accumulation, reducing body fat, promoting sugar uptake, Foods, food additives, pharmaceuticals, non-pharmaceutical products or cosmetics, or raw materials for the products, for use in applications selected from treatments for conditions that are improved by reducing blood glucose levels, improving glucose metabolism and promoting sugar uptake.
  • a source of steviol eg, steviol glycoside
  • food is a general term for edible products, and includes foods specified in each country / region.
  • the foods in the present invention include, for example, general foods in Japan (including health foods such as functional foods, nutritional supplements, health supplements, and natural foods), health functional foods (foods for specified health use, foods with functional claims, nutrition). Includes functional foods), special-purpose foods (foods for specified health use, foods for the sick, pregnant women, powdered milk for lactating women, prepared milk for infants, foods for people with swallowing difficulties, etc.).
  • the food in the present invention also includes foods for infants, prepared milks for premature babies, foods for the elderly, foods for nursing care, foods for medical use and the like.
  • Dietary supplements are foods that are fortified with specific nutritional components.
  • Health foods are foods that are healthy or good for health, and include dietary supplements, natural foods, diet foods, and the like.
  • Functional foods are foods for supplementing nutritional components that perform the regulation function of the body.
  • Infant food refers to food to be given to children up to about 6 years old.
  • Foods for the elderly are foods that have been processed so that they are easier to digest and absorb than untreated foods.
  • Infant formula refers to formula for feeding to children up to about 1 year old.
  • Premature infant formula refers to formula for premature infants to be fed until about 6 months of age.
  • the form of the food is not particularly limited and may be in various forms. Examples of such forms include beverages, supplements, non-beverage foods and the like.
  • the beverage may be either an alcoholic beverage or a non-alcoholic beverage.
  • Non-alcoholic beverages include, for example, non-alcoholic beer, malt beverage, lactic acid bacterium beverage, fermented beverage, cocoa beverage, sports drink, nutritional drink, tea-based beverage (for example, green tea, oolong tea, brown rice tea, tea and other tea beverages, wheat tea).
  • soy milk or soy drinks, etc. flavored water and the like.
  • the alcoholic beverage refers to a beverage containing an alcoholic raw material, and may be chu-hi.
  • the alcohol raw material include brewed liquor, distilled liquor, and mixed liquor.
  • brewed liquor include wine and beer.
  • distilled liquor include spirits (for example, gin, wokka, lamb, tequila, new spirits (liquor in which less than 10% of undiluted whiskey is mixed), alcohol for raw materials, etc.), liqueurs, whiskey (for example). For example, whiskey, brandy, etc.), spirit, etc. can be mentioned.
  • the alcoholic beverage may contain a detectable amount of alcohol, for example, 1% by volume or more, 2% by volume or more, 3% by volume or more, 4% by volume or more, and 5% by volume or more of alcohol. .. Beverages include those of various calories. Preferred beverages are low-calorie beverages (less than 20 kcal / 100 mL) or non-caloric beverages (less than 5 kcal / 100 mL).
  • Non-beverage foods include, but are not limited to, for example, noodles (soba, udon, Chinese noodles, instant noodles, etc.), tofu, confectionery (candy, gum, chocolate, snacks, biscuits, cookies, gummy, cakes, wafers, etc.
  • Sweet bread, chocolate, Japanese sweets, etc.), breads, marine or livestock processed foods kamaboko, ham, sausage, etc.
  • dairy products Fermented milk, butter, cheese, yogurt, guys, etc.
  • fats and oils and processed fats and oils (salad oil, tempura)
  • Examples include chilled confectionery (ice cream, sherbet, shaved ice, etc.), powdered foods (powdered beverages, powdered soups, etc.), and enteric liquid foods.
  • Preferred foods in the present invention include beverages, supplements and the like.
  • Food additives are products that are added to food raw materials when producing foods, and can take the form of, for example, powders, granules, liquids, pastes, and the like.
  • Examples of pharmaceuticals include various dosage forms.
  • dosage forms suitable for oral administration include, without limitation, powders, granules, tablets, capsules, liquids, suspensions, emulsions, gels, chewables, syrups, and the like.
  • Dosage forms suitable for oral administration include injections (eg, solution injections, suspension injections, emulsion injections, time-prepared injections, etc.), ointments, creams, lotions, wetclothes, etc. Examples thereof include patches, eye drops, nasal drops, inhalants, and sprays.
  • Quasi-drugs include, but are not limited to, dentifrices, mouth refreshers, antiperspirants, medicated cosmetics, hair colors, sanitary napkins, and the like.
  • cosmetics include, but are not limited to, facial cleansers, makeup removers, lotions, beauty essences, facial masks, sunscreens, and the like.
  • composition of the present invention may contain components other than steviol and a source of steviol (for example, steviol glycoside).
  • a source of steviol for example, steviol glycoside
  • Such components may vary depending on the form, use, usage, etc. of the composition of the present invention, but non-limiting examples thereof include, for example, sweeteners, excipients, binders, disintegrants, coating agents, and lubricants. , Colorants, flavoring agents, stabilizers, absorption promoters, pH adjusters, preservatives, antioxidants, fragrances, vitamins, trace metal components and the like.
  • sweeteners include natural sweeteners, sugar alcohols, artificial sweeteners, high-sweetness sweeteners, low-calorie sweeteners, and the like. More specifically, for example, glucose, D-fructose, galactose, mannose, ribose, xylose, maltose, sucrose, lactose, arabinose, rare sugars (eg, D-tagatos, D-sorbose, D-psicose).
  • L-fructose L-allulose (L-psicose), L-tagatos, L-sorbose, altrose, D-allose, tarose, glucose, growth, etc.
  • peptide-based sweeteners eg, aspartame, neotheme, alitame) Etc.
  • sucrose derivatives eg, sucrose, etc.
  • synthetic sweeteners eg, assesulfam K, saccharin, advantage, ticulo, zultin, etc.
  • sugar alcohols eg, erythritol, xylitol, sorbitol, martitol, mannitol, etc.
  • Monerin Curculin, Brazein, Somatin, Taumarin, Mabinlin, Brazein, Pentazine, Hernanzultin, 4 ⁇ -Hydroxyhernanzultin, Miraclin, Glycyrrhizin, Philo
  • a food additive may be included as another component.
  • Food additives include, for example, excipients (eg, wheat starch, corn starch, cellulose, lactose, sucrose, mannitol, sorbitol, xylitol, pregelatinized starch, casein, magnesium silicate aluminate, calcium silicate, etc.).
  • Binding agents eg, pregelatinized starch, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, etc.
  • disintegrants eg, cellulose, hydroxypropylcellulose, corn starch, etc.
  • fluidizers eg, light anhydrous silicic acid, etc.
  • fats and oils eg, light anhydrous silicic acid, etc.
  • vegetable oils such as soybean oil, sesame oil, olive oil, flaxseed oil, sesame oil, rapeseed oil, coconut oil, corn oil or oils derived from animals and fish
  • nutrients for example, various minerals, various vitamins, amino acids
  • fragrances Sweeteners, flavoring agents, colorants, solvents (eg ethanol), salts, pH adjusters, buffers, antioxidants, stabilizers, cellulosists, thickeners, lubricants, encapsulants, suspensions
  • examples include turbidants, coating agents, preservatives, emulsifiers and the like.
  • composition of the present invention is a pharmaceutical product or a quasi-drug
  • pharmaceutically acceptable additives for example, surfactants, carriers, diluents, excipients, etc.
  • Pharmaceutically acceptable additives are well known in the pharmaceutical field, such as Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990), which is incorporated herein by reference in its entirety. Are listed.
  • the composition of the present invention is produced by mixing a steviol and / or a source of steviol (for example, a steviol glycoside) with other components as described above, if necessary, and processing the mixture into a desired form. be able to.
  • composition of the present invention can be used in a mode suitable for each form.
  • food can be ingested orally or by parenteral nutritional routes such as nasal and intestinal.
  • the food additive can be used in the same route as the food in the state of being contained in the food.
  • the drug is administered according to the dosage form, for example, oral, buccal, intraoral, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, topical, rectal, intra-articular, intra-arterial, intra-arterial, without limitation.
  • Quasi-drugs and cosmetics can also be used by a method of use according to the form, for example, application to the skin or gargling.
  • the intake (dose, dose) of steviol and / or the source of steviol is not particularly limited and can be appropriately selected according to the age, weight, health condition, etc. of the subject to be ingested.
  • the daily intake is 0.001 mg or more (for example, 0.001 to 10,000 mg), 0.01 mg or more (for example, 0.05 to 5,000 mg), 0.1 mg or more (for example, 0). It may be .5 to 1,000 mg), 1 mg or more (for example, 5 to 500 mg), and the like.
  • the timing of use of the composition of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, before meals, during meals, after meals, between meals, before bedtime, and the like.
  • Such indications are improved by, for example, suppression of fat accumulation, promotion of lipolysis, treatment of conditions involving fat accumulation, reduction of body fat, promotion of sugar uptake, reduction of blood glucose level, improvement of glucose metabolism and promotion of sugar uptake. There are treatments for these conditions, or indications that can be equated with these.
  • the state in which fat accumulation is involved and the state in which sugar uptake is promoted are as described above for the composition of the present invention.
  • the term "subject” means any biological individual, preferably an animal, more preferably a mammal, even more preferably a human, in which the compositions of the invention can exert the desired effect.
  • the subject may be healthy (eg, not having a specific or arbitrary disease) or suffer from any disease, but typically when treatment of the disease or the like is intended. Means a subject who has or is at risk of developing the disease.
  • treatment shall include all types of medically acceptable prophylactic and / or therapeutic interventions aimed at the cure, temporary remission or prevention of a disease.
  • treatment includes medically acceptable interventions for a variety of purposes, including delaying or stopping the progression of a disease, regressing or eliminating lesions, preventing the onset or recurrence of the disease, and the like. Therefore, the compositions of the present invention can be used for the treatment and / or prevention of diseases.
  • Another aspect of the invention comprises administering to a subject in need of an effective amount of steviol and / or a source of steviol (eg, steviol glycoside), which suppresses lipolysis in the subject, fat. Promotes degradation, treats conditions involving lipolysis, reduces body fat, promotes sugar uptake, reduces blood sugar levels, improves glucose metabolism, or is improved by promoting sugar uptake Regarding how to treat the condition.
  • An effective amount of a steviol and / or steviol source (eg, steviol glycoside) in the method of the invention is that of a steviol and / or steviol source (eg, steviol glycoside) capable of achieving the effect according to the method.
  • the effective amount of steviol and / or steviol source (eg, steviol glycoside) in the methods of the invention is 0.001 mg or more (eg, 0.001 to 10,000 mg) per day, 0. It may be 01 mg or more (for example, 0.05 to 5,000 mg), 0.1 mg or more (for example, 0.5 to 1,000 mg), 1 mg or more (for example, 5 to 500 mg), and the like.
  • other components in the method of the present invention such as steviol and sources of steviol (eg, steviol glycosides), target diseases and conditions, etc., are as described above for the compositions of the present invention.
  • Another aspect of the present invention is improved by suppressing fat accumulation, promoting lipolysis, treating a condition involving fat accumulation, reducing body fat, promoting sugar uptake, reducing blood glucose level, improving glucose metabolism and promoting sugar uptake.
  • steviol and / or sources of steviol for use in the treatment of conditions eg, steviol glycosides.
  • Each component in this embodiment is as described above for the composition of the present invention.
  • Another aspect of the present invention is improved by suppressing fat accumulation, promoting lipolysis, treating a condition involving fat accumulation, reducing body fat, promoting sugar uptake, reducing blood glucose level, improving glucose metabolism and promoting sugar uptake.
  • steviol and / or sources of steviol eg, steviol glycosides
  • Each component in this embodiment is as described above for the composition of the present invention.
  • Example 1 Examination of cytotoxicity of steviol on adipocytes Steviol was obtained by the following method. Sodium periodate was added to a container containing stevioside (Cat. No. S0594, Tokyo Chemical Industry or Cat. No. S623, AK Scientific) and purified water, and the mixture was stirred overnight at room temperature. Potassium hydroxide was added at an internal temperature of 5 to 10 ° C. under ice cooling, and the mixture was heated at an internal temperature of 100 to 102 ° C. for 2 hours. After confirming the completion of the reaction by HPLC, acetic acid was added under ice-cooling at an internal temperature of 10 to 13 ° C.
  • stevioside Cat. No. S0594, Tokyo Chemical Industry or Cat. No. S623, AK Scientific
  • the mixture was extracted three times with ethyl acetate, and the obtained organic layer was washed with 10% aqueous sodium sulfite solution and then with brine. After drying over anhydrous magnesium sulfate, the mixture was concentrated under reduced pressure at 40 ° C. to obtain a crude product of a yellow solid. Methanol was added thereto, and the mixture was stirred for about 15 minutes, purified water was added, and the solid was collected by filtration. The solid collected by filtration was dried at 50 ° C. overnight to obtain a white solid. This was dissolved in acetone at 50 ° C. and clarified and filtered. The filtrate was concentrated and the obtained solid was dried under reduced pressure at 50 ° C. overnight to obtain the desired steviol (purity 98% (HPLC), acetone 0.5 wt%). The steviol thus obtained was used in the following experiments.
  • Normal human subcutaneous preadipocytes (Cat. No. PT-5020, Lonza) 5 ⁇ 10 5 pieces of at T75 flasks, the growth medium (10% FBS, 2mM L- glutamine, 50 [mu] g / mL gentamicin, 37 ng / mL amphotericin -B-added PBM-2 medium, Cat. No. PT-8002, Lonza) was used and pre-cultured in a CO 2 incubator (37 ° C., 5% CO 2 , the same applies hereinafter) for 6 days.
  • the growth medium (10% FBS, 2mM L- glutamine, 50 [mu] g / mL gentamicin, 37 ng / mL amphotericin -B-added PBM-2 medium, Cat. No. PT-8002, Lonza
  • Cells were detached with 0.25% trypsin-EDTA, seeded on 96-well plates at 10,000 cells / 100 ⁇ L / well using growth medium and cultured overnight in a CO 2 incubator. The next day, the medium was a differentiation medium (10% FBS) to which various concentrations of steviol (0.001, 0.01, 0.1, 1, 10 or 100 ⁇ g / mL, dissolved in DMSO at a final concentration of 0.1%) were added.
  • a differentiation medium (10% FBS) to which various concentrations of steviol (0.001, 0.01, 0.1, 1, 10 or 100 ⁇ g / mL, dissolved in DMSO at a final concentration of 0.1%) were added.
  • a solvent control in which DMSO having a final concentration of 0.1% was added to the differentiation medium was used.
  • Example 2 Examination of lipolysis promoting effect of steviol on adipocytes
  • normal human subcutaneous preadipocytes were pre-cultured using a growth medium.
  • Cells were detached with 0.25% trypsin-EDTA, seeded on 96-well plates at 10,000 cells / 100 ⁇ L / well using growth medium and cultured overnight in a CO 2 incubator.
  • the next day the cells were replaced with a differentiation medium (100 ⁇ L) and cultured in a CO 2 incubator for 10 days to induce differentiation into adipocytes.
  • the medium was replaced with fresh differentiation medium (100 ⁇ L).
  • the medium was replaced with a differentiation medium supplemented with various concentrations of steviol (10, 30 or 100 ⁇ g / mL, dissolved in DMSO at a final concentration of 0.1%), cultured in a CO 2 incubator for 24 hours, and then cultured.
  • the amount of free glycerol in the supernatant was measured using the Adipolysis Assay Kit (Cat. No. 10009381, Cayman) according to the manufacturer's protocol.
  • a plate reader VARIOSKAN FLASH, Thermo Fisher Scientific was used to measure the absorbance (540 nm), and the relative free glycerol concentration was calculated.
  • a differentiation medium supplemented with 10 ⁇ M isoproterenol (ISP), as a negative control, a solvent control (DMSO) in which DMSO having a final concentration of 0.1% was added to the differentiation medium, and a non-addition control containing only the differentiation medium (No). addition) was used.
  • a significant difference test was performed between the comparative test groups (non-addition group vs. positive control group, solvent control group vs. steviol-added group) by Student's t-test. A two-sided test was performed, and P ⁇ 0.05 was considered significant.
  • Table 2 and FIG. 2 show, steviol promoted lipolysis in adipocytes in a concentration-dependent manner.
  • Example 3 Examination of fat accumulation inhibitory effect of steviol on adipocytes
  • normal human subcutaneous preadipocytes were pre-cultured using a growth medium.
  • Cells were detached with 0.25% trypsin-EDTA, seeded on 96-well plates at 10,000 cells / 100 ⁇ L / well using growth medium and cultured overnight in a CO 2 incubator.
  • the medium was replaced with 100 ⁇ L of differentiation medium supplemented with various concentrations of steviol (12.5, 25, 50, 100 or 200 ⁇ g / mL, dissolved in DMSO at a final concentration of 0.1%) and 10 in a CO 2 incubator.
  • the cells were cultured for one day to induce differentiation into adipocytes.
  • the medium was replaced with fresh medium (100 ⁇ L) having the same composition as above.
  • a differentiation medium to which 25 mM LiCl (Cat. No. SML0559, Sigma-Aldrich) was added
  • a differentiation medium to which DMSO having a final concentration of 0.1% was added was used.
  • cells cultured in the growth medium were used as an untreated fat accumulation control. After culturing, oil red staining was performed. Specifically, the cells were washed twice with 100 ⁇ L DPBS (Cat. No. 14190250, Thermo Fisher Scientific) and then fixed with 100 ⁇ L of 10% formalin solution (Cat. No.
  • Example 4 Examination of sugar uptake promoting effect of steviol on adipocytes
  • normal human subcutaneous preadipocytes were pre-cultured using a growth medium.
  • Cells were detached with 0.25% trypsin-EDTA, seeded on 96-well plates at 10,000 cells / 100 ⁇ L / well using growth medium and cultured overnight in a CO 2 incubator.
  • the next day the cells were replaced with a differentiation medium (100 ⁇ L) and cultured in a CO 2 incubator for 10 days to induce differentiation into adipocytes.
  • the medium was replaced with fresh differentiation medium (100 ⁇ L).
  • the medium was replaced with 100 ⁇ L of serum-free medium (2 mM L-glutamine, 50 ⁇ g / mL gentamicin, 37 ng / mL amphotericin-B-added PBM-2 medium, Cat. No. PT-8002, Lonza), and 18 in a CO 2 incubator. Cultured for hours. The medium was then dissolved in various concentrations of steviol (10, 30 or 100 ⁇ g / mL, dissolved in DMSO at a final concentration of 0.1%) in glucose-free serum-free medium (DMEM, no glucose, Cat. No. 11966025). , Thermo Fisher Scientific) 100 ⁇ L and cultured in a CO 2 incubator for 4 hours.
  • serum-free medium 2 mM L-glutamine, 50 ⁇ g / mL gentamicin, 37 ng / mL amphotericin-B-added PBM-2 medium, Cat. No. PT-8002, Lonza
  • steviol 10
  • a glucose-free serum-free medium to which 100 ⁇ M acadesine (AICAR, Cat. No. A9978, Sigma-Aldrich) was added
  • AICAR 100 ⁇ M acadesine
  • a glucose-free serum-free medium with a final concentration of 0.1% DMSO The solvent control to which the above was added and the non-additional control containing only the serum-free medium without glucose were used.
  • Glucose Uptake-Glo Assay kit (Cat.No.J1341, Promega) according to the following procedure. was measured.
  • Example 5 steviol by cytotoxicity studies HepG2 cells to liver cells (Cat. No. JCRB1054, JCRB) 5 ⁇ 10 5 pieces of at T75 flasks, the growth medium (10% FBS (Cat. No. 172012, Precultured in CO 2 incubator for 5 days using DMEM (high glucose, Cat. No. D5796, Sigma-Aldrich) supplemented with Sigma-Aldrich) and 1% penicillin-streptomycin (Cat. No. 09367-34, Nacalai tesque). did.
  • FBS high glucose, Cat. No. D5796, Sigma-Aldrich
  • DMEM high glucose, Cat. No. D5796, Sigma-Aldrich
  • penicillin-streptomycin Cat. No. 09367-34, Nacalai tesque
  • Cells were detached with 0.25% trypsin-EDTA, seeded on 96-well plates with growth medium at 10,000 cells / 100 ⁇ L / well and cultured overnight in a CO 2 incubator. The next day, the medium was replaced with 100 ⁇ L of growth medium supplemented with various concentrations of steviol (0.001, 0.01, 0.1, 1, 10 or 100 ⁇ g / mL, dissolved in DMSO at a final concentration of 0.1%). The cells were cultured in a CO 2 incubator for 24 hours. As a negative control, a solvent control in which DMSO having a final concentration of 0.1% was added to the growth medium was used. The number of living cells was measured by the WST-8 method.
  • the medium of each well after culturing is replaced with 100 ⁇ L of growth medium supplemented with 1/10 amount of the viable cell number measuring reagent SF , incubated in a CO 2 incubator, and after 30 minutes and 90 minutes, a plate is used.
  • Absorbance 450 nm, reference wavelength 630 nm
  • VARIOSKAN FLASH Thermo Fisher Scientific
  • the difference in absorbance per 60 minutes was taken as the relative viable cell number.
  • no particular cytotoxicity was observed even when 100 ⁇ g / mL steviol was added.
  • Example 6 Examination of the inhibitory effect of steviol on the accumulation of fat and triglyceride in hepatocytes HepG2 cells were pre-cultured using a growth medium in the same manner as in Example 5. Cells were detached with 0.25% trypsin-EDTA, seeded in 96-well plates at 30,000 cells / 100 ⁇ L / well with growth medium and cultured overnight in a CO 2 incubator. The next day, the medium was added with various concentrations of steviol (dissolved in 12.5, 25, 50, 100 or 200 ⁇ g / mL, final concentration 0.1% DMSO) (0.2 mM oleic acid (Cat. No)).
  • TG triglyceride

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Abstract

本発明によれば、ステビオール及び／又はステビオール配糖体を含む、脂肪蓄積抑制、脂肪分解促進、血糖値低減、糖取込促進、糖代謝改善、又はアルコール性肝疾患もしくは非アルコール性脂肪性肝疾患の処置のための組成物が提供される。

Description

ステビオールの新規用途
　本発明は、ステビオールの新規用途、特に、ステビオールの、脂肪分解促進及び脂肪蓄積抑制、血糖値低減、糖取込の促進及び／又は糖代謝改善、及び、アルコール性肝疾患又は非アルコール性脂肪性肝疾患の処置に係る用途等に関する。
　交通インフラが整備され、高カロリーの嗜好性の高い食品が容易に入手でき、さらに、デスクワーク中心の職業に従事する人の割合が多くなった現代社会では、エネルギーの摂取量が消費量を上回る状態が多くなる傾向にあり、体内に脂肪が蓄積しやすい条件が揃っている。脂肪の過剰蓄積は肥満や脂肪肝等の原因となるうえ、肥満については、２型糖尿病、冠動脈性心疾患、睡眠時無呼吸症候群などの呼吸性睡眠障害、変形性関節炎の発症との関連も指摘されており、大きな社会問題となっている（非特許文献１）。脂肪の過剰蓄積に対しては、食事内容の工夫や運動の奨励など生活習慣の改善で対応することも可能だが、このような自助努力は万人が実行できるものではなく、病的な脂肪の蓄積に対しては医学的処置が行われることもある。例えば、肥満症患者の多い米国では、フェンテルミン、ジエチルプロピオンなどの食欲抑制剤や、腸管からの脂肪吸収を抑制するオルリスタットなどが肥満症の治療に使用されている（非特許文献２）。
Kopelman, Nature. 2000;404(6778):635-43 Gadde et al., Clin Chem. 201864(1):118-129
　脂肪の過剰蓄積を改善するさらなる手法の開発が期待されている。
　本発明の一態様は、以下を提供する。
［１］
　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を含む、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪分解促進のための組成物。
［１－１］
　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を有効成分として含む、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪分解促進のための組成物。
［２］
　肥満の予防、肥満の改善及び／又は体脂肪の低減のための、［１］又は［１－１］に記載の組成物。
［３］
　インスリン治療に反応する糖尿病を有しない対象のための、［１］、［１－１］又は［２］に記載の組成物。
［４］
　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を含む、インスリン抵抗性を有する対象における、血糖値低減、糖取込促進及び／又は糖代謝改善のための組成物。
［４－１］
　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を有効成分として含む、インスリン抵抗性を有する対象における、血糖値低減、糖取込促進及び／又は糖代謝改善のための組成物。
［５］
　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を含む、アルコール性肝疾患又は非アルコール性脂肪性肝疾患の処置のための組成物。
［５－１］
　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を有効成分として含む、アルコール性肝疾患又は非アルコール性脂肪性肝疾患の処置のための組成物。
［６］
　経口摂取用である、［１］～［５］のいずれか一項に記載の組成物。
［７］
　飲料である、［１］～［６］のいずれか一項に記載の組成物。
　本発明により、脂肪分解促進、脂肪蓄積抑制及び糖取込改善のためのさらなる手段が提供され、健康の維持、増進や、脂肪蓄積が関与する状態の予防、改善のための選択肢が拡大する。さらに、ステビオールは、その脂肪分解促進作用のため、既に蓄積された脂肪の低減にも有用である。さらにまた、ステビオールは、細胞における糖取込を促進するため、血糖値低減、糖代謝改善などの用途にも使用できる。また、ステビオールは、甘味料として使用されることもある、食品との親和性が高いステビオール配糖体として経口投与できるため、従来の薬物に比べより手軽に摂取でき、より広い層に対する健康の増進に寄与することができる。
図１はステビオールの脂肪細胞に対する細胞毒性試験の結果を示した図である（ｎ＝３）。縦軸は吸光度差（相対生細胞数（Control＝１００％））を、横軸の数値はステビオールの濃度（μｇ／ｍＬ）をそれぞれ示す。 図２はステビオールの脂肪細胞における脂肪分解試験の結果を示した図である（ｎ＝５）。横軸の数値はステビオールの濃度（μｇ／ｍＬ）を、ＩＳＰは陽性対照群をそれぞれ示す。縦軸は陰性対照（ＩＳＰに対してはNo addition、ステビオールに対してはＤＭＳＯ）を１００％としたときの相対脂肪分解量を示す。***はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によるＰ＜０．００１を示す。 図３はステビオールの脂肪細胞における脂肪蓄積試験の結果を示した図である（ｎ＝５）。横軸の数値はステビオールの濃度（μｇ／ｍＬ）を、ＬｉＣｌは陽性対照群をそれぞれ示す。縦軸は陰性対照（ＤＭＳＯ）を１００としたときの相対脂肪蓄積量を示す。###はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によるＰ＜０．００１、***及び**は、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定によるＰ＜０．００１、Ｐ＜０．００５をそれぞれ示す。 図４はステビオールの脂肪細胞における糖取込試験の結果を示した図である（ｎ＝５）。横軸の数値はステビオールの濃度（μｇ／ｍＬ）を、ＡＩＣＡＲは陽性対照群をそれぞれ示す。縦軸は陰性対照（ＡＩＣＡＲに対してはNo addition、ステビオールに対してはＤＭＳＯ）を１００としたときの相対発光強度（相対細胞内２ＤＧ６Ｐ量）を示す。***は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定によるＰ＜０．００１を示す。 図５はステビオールの肝細胞に対する細胞毒性試験の結果を示した図である（ｎ＝３）。縦軸は吸光度差（相対生細胞数（Control＝１００％））を、横軸の数値はステビオールの濃度（μｇ／ｍＬ）をそれぞれ示す。 図６はステビオールの肝細胞における脂肪蓄積試験の結果を示した図である（ｎ＝５）。横軸の数値はステビオールの濃度（μｇ／ｍＬ）を、Metforminは陽性対照群をそれぞれ示す。縦軸は陰性対照（ＤＭＳＯ）を１００％としたときの相対脂肪蓄積量を示す。###はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によるＰ＜０．００１、***、**及び*は、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定によるＰ＜０．００１、Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５をそれぞれ示す。 図７はステビオールの肝細胞におけるＴＧ蓄積試験の結果を示した図である（ｎ＝５）。横軸の数値はステビオールの濃度（μｇ／ｍＬ）を、Metforminは陽性対照群をそれぞれ示す。縦軸は陰性対照（DMSO）を１００％としたときの相対ＴＧ量を示す。###はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によるＰ＜０．００１、***及び*は、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定によるＰ＜０．００１、Ｐ＜０．０５をそれぞれ示す。
　以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をそのような実施の形態のみに限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施をすることができる。
　なお、本明細書において引用した全ての文献、及び公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、２０１９年１２月２７日に出願された本願優先権主張の基礎となる日本国特許出願（特願２０１９－２３８９６８号）の明細書および図面に記載の内容を包含する。
＜脂肪分解促進・脂肪蓄積抑制用組成物＞
　本発明の一態様は、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）を含む、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪分解促進のための組成物（以下、「本発明の脂肪分解促進・脂肪蓄積抑制用組成物」又は「本発明の組成物Ａ」と称することがある）に関する。
　本発明者らは、ステビオールが脂肪蓄積抑制作用及び脂肪分解促進作用を有することを初めて見出し、本発明の組成物Ａを完成させた。したがって、ステビオールおよびその給源は、本発明の組成物Ａにおいて有効成分として作用することができる。本発明の組成物Ａにおいて有効成分として作用することは、例えば、本発明の組成物Ａと、ステビオール及び／又はその給源を含まない以外は本発明の組成物Ａと同じ組成の対照組成物を比較したときに、本発明の組成物Ａを用いた方が対照組成物を用いたときよりも脂肪蓄積が抑制されること、及び／又は、脂肪分解が促進されることにより確認することができる。
　ステビオールは、ステビア（Stevia rebaudiana）に含まれるステビオール配糖体のアグリコンである。
　ステビオールの給源は、生体に投与されたときに、生体内の酵素（生体内の細菌等が産生する酵素を含む）等の作用によりステビオールを提供し得る物質を含む。ステビオールの給源としては、限定されずに、例えば、ステビオール配糖体及びステビオールのグルクロン酸抱合体（ステビオールグルクロニド）等が挙げられる。ステビオール配糖体は、ステビオールに１以上の糖（例えば、グルコース、ラムノース、キシロースなど）が結合した配糖体である。ステビオール配糖体の非限定例としては、例えば、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＲ、ズルコシドＡ、ルブソシド、ステビオールモノシド、ステビオールビオシド及びステビオシド等が挙げられる。好ましい態様において、ステビオール配糖体は、良味質のもの、例えば、レバウジオシドＤ及びレバウジオシドＭ等を含む。なお、本明細書中、レバウジオシドは「Ｒｅｂ」、「Ｒｅｂ．」又は「Ｒ」と略すことがある。例えばレバウジオシドＡは、本明細書中「ＲｅｂＡ」、「Ｒｅｂ．Ａ」又は「ＲＡ」と表記されることがある。ステビオール配糖体は、経口摂取されると、大腸の細菌によりステビオールに分解され、体内に吸収される。したがって、ステビオール配糖体は大腸を経由することで、ステビオールの給源となる。
　ステビオール及びステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）は、市販のものを使用してもよいし、ステビアから抽出、精製等したものを使用してもよい。ステビアからステビオール及びステビオール配糖体を抽出、精製する手法は知られている。例えば、ステビオール及びステビオール配糖体は、ステビアの新鮮葉又は乾燥葉から適切な溶媒（水等の水性溶媒又はアルコール、エーテル及びアセトン等の有機溶媒）により抽出することができる（抽出条件等は、例えば、Ohta et al., J. Appl. Glycosci. 2010;57(3):199-209又はWO 2010/038911等に記載の方法を参照）。さらに、このようにして得られた抽出物に対し、酢酸エチルその他の有機溶媒：水の勾配、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー、飛行時間型質量分析（ＴＯＦ－ＭＳ）、超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）等の公知の方法を用いることによりステビオール及び各種ステビオール配糖体を精製することができる。ステビオールは、ステビオール配糖体を脱グリコシル化することなどにより得ることができる（例えば、Shibata et al., Plant Physiol. 1991;95(1):152-6など）。また、ステビオール配糖体、特にステビアにおける含量の少ないものは、ステビオール配糖体を含むステビア抽出物に糖転移酵素（例えば、ＵＤＰ糖依存的糖転移酵素（ＵＧＴ）など）を作用させるバイオコンバージョンにより、その濃度を高めることが可能である。
　一態様において、本発明の組成物Ａに使用されるステビオール配糖体は、ステビアから、バイオコンバージョンなしに抽出、精製されたものである。別の態様において、本発明の組成物Ａに使用されるステビオール配糖体は、ステビアから、バイオコンバージョンを含む手法により抽出、精製されたものである。
　本発明の組成物Ａに使用されるステビオール及びステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）は、純度の高いものほど好ましい。本発明に使用されるステビオール又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の純度としては、例えば、９０％以上、９０．５％以上、９１％以上、９１．５％以上、９２％以上、９２．５％以上、９３％以上、９３．５％以上、９４％以上、９４．５％以上、９５％以上、９５．５％以上、９６％以上、９６．５％以上、９７％以上、９７．５％以上、９８％以上、９８．５％以上、９９％以上、９９．５％以上等が挙げられる。ステビオール又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の純度は、例えば、ＨＰＬＣ、ＧＣ等のクロマトグラフィーにおけるピーク面積比を指標としてもよい。
　本発明の組成物Ａは、ステビオール、ステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）、又はステビオールとステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）との組合せを含んでもよい。本発明の組成物Ａにおけるステビオール、ステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）、又はステビオールとステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）との組合せの配合割合は、組成物Ａ全体に対する質量基準で、例えば、１～５００，０００、１～４００，０００、１～３００，０００、１～２００，０００、１～１００，０００、１～８０，０００、１～６０，０００、１～４０，０００、１～２０，０００、１～１０，０００、１～８，０００、１～６，０００、１～４，０００、１～２，０００、１～１５００、１～１２００、５～１２００、１～１０００、５～１０００、１０～１０００、１～９００、５～９００、１０～９００、１５～９００、２０～９００、２５～９００、３０～９００、３５～９００、４０～９００、４５～９００、５０～９００、５５～９００、１～８００、５～８００、１０～８００、１５～８００、２０～８００、２５～８００、３０～８００、３５～８００、４０～８００、４５～８００、５０～８００、５５～８００、１～７００、５～７００、１０～７００、１５～７００、２０～７００、２５～７００、３０～７００、３５～７００、４０～７００、４５～７００、５０～７００、５５～７００、１～６００、５～６００、１０～６００、１５～６００、２０～６００、２５～６００、３０～６００、３５～６００、４０～６００、４５～６００、５０～６００、５５～６００、１～５００、５～５００、１０～５００、１５～５００、２０～５００、２５～５００、３０～５００、３５～５００、４０～５００、４５～５００、５０～５００、５５～５００、１～４００、５～４００、１０～４００、１５～４００、２０～４００、２５～４００、３０～４００、３５～４００、４０～４００、４５～４００、５０～４００、５５～４００、１～３００、５～３００、１０～３００、１５～３００、２０～３００、２５～３００、３０～３００、３５～３００、４０～３００、４５～３００、５０～３００、５５～３００、１～２５０、５～２５０、１０～２５０、１５～２５０、２０～２５０、２５～２５０、３０～２５０、３５～２５０、４０～２５０、４５～２５０、５０～２５０、５５～２５０、１～２００、５～２００、１０～２００、１５～２００、２０～２００、２５～２００、３０～２００、３５～２００、４０～２００、４５～２００、５０～２００、５５～２００、１～１８０、５～１８０、１０～１８０、１５～１８０、２０～１８０、２５～１８０、３０～１８０、３５～１８０、４０～１８０、４５～１８０、５０～１８０、５５～１８０、１～５５０、１～５４０、１～５３０、１～５２０、１～５１０、１～５０５、１～４９５、１～４９０、５～５５０、５～５４０、５～５３０、５～５２０、５～５１０、５～５０５、５～５００、５～４９５、５～４９０、１０～５５０、１０～５４０、１０～５３０、１０～５２０、１０～５１０、１０～５０５、１０～４９５、１０～４９０、１５～５５０、１５～５４０、１５～５３０、１５～５２０、１５～５１０、１５～５０５、１５～４９５又は１５～４９０ｐｐｍ等であってよい。
　脂肪分解は、脂肪蓄積能を有する細胞（例えば、脂肪細胞、肝細胞、筋細胞等）が、蓄積された脂肪を分解して細胞外に放出することを意味する（脂肪動員と呼ぶこともある）。本発明の組成物Ａによる脂肪分解の促進は、例えば、脂肪蓄積条件下で培養した脂肪蓄積能を有する細胞に本発明の組成物Ａを作用させたときに、本発明の組成物Ａを作用させなかった場合に比べ、培地中に放出される脂肪分解物の量が多いことにより評価することができる。特定の態様において、脂肪分解の促進は、後述の実施例に記載のとおり、脂肪蓄積能を有する細胞を脂肪蓄積条件下（例えば、脂肪前駆細胞分化用培地や、オレイン酸などの脂肪酸を添加した培地下）で培養後、本発明の組成物Ａと共にインキュベートし、所定時間後（例えば２４時間後）に培地に放出された脂肪分解物（脂肪酸、グリセロールなど）を検出試薬などにより検出し、定量化することで評価することができる。脂肪分解促進の程度は、例えば、本発明の組成物Ａを使用しなかった以外は同じ条件で放出された脂肪分解物の量を１００％としたときに、本発明の組成物Ａで処理した細胞における脂肪分解物の量が、１０２％以上、１０５％以上、１０８％以上、１１０％以上、１１２％以上、１１５％以上、１１８％以上、１２０％以上、１２２％以上、１２５％以上、１２８％以上、又は１３０％以上であってもよく、高いほど好ましい。
　脂肪蓄積は、脂肪蓄積能を有する細胞が、細胞外の遊離脂肪酸等を取り込み、脂肪を合成して細胞内に蓄積することを意味する。本発明の組成物Ａによる脂肪蓄積の抑制は、例えば、脂肪蓄積条件下における細胞において、本発明の組成物Ａを使用しなかった場合に比べ、細胞内の脂肪量（特にトリグリセリド量）が少ないことにより評価することができる。特定の態様において、脂肪蓄積の抑制は、後述の実施例に記載のとおり、脂肪蓄積能を有する細胞を脂肪蓄積条件下で本発明の組成物Ａと共に培養し、所定時間後（例えば１０日後）に細胞内に蓄積した脂肪をオイルレッド染色や他の検出試薬などにより検出し、画像解析などにより定量化することで評価することができる。脂肪蓄積の抑制の程度は、例えば、本発明の組成物Ａを使用しなかった以外は同じ条件で得られた脂肪量を１００％としたときに、本発明の組成物Ａで処理した細胞における脂肪量が、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、又は４０％以下であってもよく、低いほど好ましい。
　本発明の組成物Ａは、脂肪蓄積が関与する種々の状態の処置に使用することができる。したがって本発明は、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）を含む、脂肪蓄積が関与する状態の処置のための組成物にも関する。ここで、状態は、疾患及び、疾患として診断されるには至らないが、健康ではない状態を含む。脂肪蓄積が関与する状態としては、限定されずに、例えば、肥満、脂肪肝、２型糖尿病、冠動脈性心疾患、動脈硬化症、不整脈、心筋血管症（トリグリセリド蓄積型心筋血管症（ＴＧＣＶ）など）、心臓突然死、呼吸性睡眠障害（睡眠時無呼吸症候群など）、変形性関節症、高血圧、インスリン抵抗性、レプチン抵抗性、脂質異常症、遠心性心肥大、求心性心肥大、心不全、メタボリックシンドローム等が挙げられる（Kopelman, Nature. 2000;404(6778):635-43、Izquierdo et al., Nutrients. 2019;11(11). pii: E2704、Hirano, J Atheroscler Thromb. 2009;16(5):702-5、Csige et al., J Diabetes Res. 2018 Nov 4;2018）。脂肪肝には、アルコール性脂肪肝（アルコール性肝疾患の１つ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が含まれ、ＮＡＦＬＤには単純性脂肪肝及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が含まれる。一態様において、脂肪蓄積が関与する状態は、糖尿病又はその合併症以外の疾患である。別の態様において、脂肪蓄積が関与する状態は、インスリン治療の有効性が低い疾患である。別の態様において、本発明の組成物Ａは、インスリン治療に反応する糖尿病（例えば、１型糖尿病）に罹患していない対象に使用される。別の態様において、本発明の組成物Ａは、インスリン抵抗性を示す対象に使用される。別の態様において、本発明の組成物Ａは、摂取エネルギー量を制御せずに脂肪蓄積が関与する状態を処置する方法のために使用される。摂取エネルギー量を制御しないとは、例えば、食餌制限などを行わないことや、従来通り（例えば、処置開始前）の食生活続けることなどを含む。今回明らかとなったステビオールの脂肪分解促進作用及び脂肪蓄積抑制作用は、インスリンを介したものではないため、本発明の組成物Ａは、インスリン非依存的にその効果を発揮することができる。したがって、上記のような、インスリンによる治療効果が期待できない疾患にも使用することが可能となる。さらに、本発明の組成物Ａは、多くの抗肥満薬のように食欲を抑制するのではなく、脂肪蓄積能を有する細胞に直接作用するため、飲食の楽しみを損なわずに脂肪蓄積が関与する状態を処置することができる。
　本発明の組成物Ａはまた、健康の増進、減量、肥満の予防、体形の維持又は改善等を目的とした体脂肪の低減のために使用することができる。この用途は、医学的な用途のみならず、美容用途やスポーツ用途、フィットネス用途などの非医学的用途を含む。
＜糖取込促進用組成物＞
　本発明の別の態様は、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）を含む、糖取込の促進、血糖値低減及び／又は糖代謝改善のための組成物（以下、「本発明の糖取込促進用組成物」又は「本発明の組成物Ｂ」と称することがある）に関する。
　本発明者らは、ステビオールが糖取込促進作用を有することを初めて見出し、本発明の組成物Ｂを完成させた。したがって、ステビオールおよびその給源は、本発明の組成物Ｂにおいて有効成分として作用することができる。本発明の組成物Ｂにおいて有効成分として作用することは、例えば、本発明の組成物Ｂと、ステビオール及び／又はその給源を含まない以外は本発明の組成物Ｂと同じ組成の対照組成物を比較したときに、本発明の組成物Ｂを用いた方が対照組成物を用いたときよりも糖取込が促進されることにより確認することができる。
　本発明の組成物Ｂにおけるステビオール及びステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）のソース、純度、配合量等については、本発明の組成物Ａについて上記したとおりである。
　糖取込は、糖取込能を有する細胞（例えば、脂肪細胞など）が糖（ブドウ糖）を細胞内に取り込むことを意味する。本発明の組成物Ｂによる糖取込の促進は、本発明の組成物Ｂを使用しなかった場合に比べ、糖取込に関する指標が変化していることにより評価することができる。糖取込に関する指標としては、例えば、解糖系による代謝を受けないグルコース関連物質（例えば、２－デオキシグルコース（２ＤＧ）、２－デオキシ－２－［（７－ニトロ－２，１，３－ベンズオキサジアゾール－４－イル）アミノ］－Ｄ－グルコース（２－ＮＢＤＧ）など）投与後における細胞内の前記グルコース関連物質又はその誘導体（例えば、２－デオキシグルコース－６－リン酸（２ＤＧ６Ｐ）など）の量等が挙げられる。特定の態様において、糖取込の促進は、後述の実施例に記載のとおり、細胞（例えば、脂肪細胞など）を本発明の組成物Ｂで処理後、２ＤＧを投与し、所定時間（例えば約５～約１５分、好ましくは約１０分）インキュベートした後、細胞内に存在する２ＤＧ６Ｐを検出試薬で検出し、定量化することにより確認することができる。指標の変化率は（上記の２ＤＧを用いた方法では、細胞内２ＤＧ６Ｐの増加率）、例えば、本発明の組成物Ｂを使用しなかった以外は同じ条件で得られた指標に対して、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、又は１００％以上であってもよく、大きいほど好ましい。
　本発明の組成物Ｂはまた、糖取込促進により改善される状態の処置に使用することができる。したがって本発明は、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）を含む、糖取込促進により改善される状態の処置のための組成物にも関する。糖取込促進により改善される状態としては、限定されずに、例えば、糖尿病、糖代謝異常、高血糖症等が挙げられる。一態様において、糖取込促進により改善される状態は、インスリンによる反応性が低い状態である。別の態様において、本発明の組成物Ｂは、インスリン治療に反応する糖尿病（例えば、１型糖尿病）に罹患していない対象に使用される。別の態様において、本発明の組成物Ｂは、インスリン抵抗性を示す対象に使用される。今回明らかとなったステビオールの糖取込促進作用は、インスリンを介したものではないため、本発明の組成物Ｂは、インスリン非依存的にその効果を発揮することができる。したがって、上記のような、インスリンによる治療効果が期待できない状態にも使用することが可能となる。
　本発明の組成物Ａ及びＢ（以下、「本発明の組成物」と総称することがある）は、任意の形状であってよく、例えば、固体状（例えば、粉末状、顆粒状）、ペースト状、ゲル状又は液状であってもよい。また、本発明の組成物は、様々な形態をとることができる。例えば、本発明の組成物は、食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品、化粧品などの形態をとること、又は、これら製品を製造するための原料として使用することができる。したがって、本発明は、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）を含む、脂肪蓄積抑制、脂肪分解促進、脂肪蓄積が関与する状態の処置、体脂肪低減、糖取込促進、血糖値低減、糖代謝改善及び糖取込促進により改善される状態の処置から選択される用途に使用するための食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品又は化粧品、あるいは、前記製品の原料に関する。
　本発明において、食品は摂食可能な製品の総称であり、各国・地域で規定されている食品を含む。本発明における食品は、例えば、日本における一般食品（機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、自然食品などの健康食品を含む）、保健機能食品（特定保健用食品、機能性表示食品、栄養機能食品など）、特別用途食品（特定保健用食品、病者用食品、妊産婦、授乳婦用粉乳、乳児用調製乳、嚥下困難者用食品など）を含む。本発明における食品はまた、幼児用食品、未熟児用調製乳、老人用食品、介護用食品、医療用食品等を含む。
　栄養補助食品とは、特定の栄養成分が強化されている食品をいう。健康食品とは、健康的な又は健康によいとされる食品をいい、栄養補助食品、自然食品、ダイエット食品等を含む。機能性食品とは、体の調節機能を果たす栄養成分を補給するための食品をいう。幼児用食品とは、約６歳までの子供に与えるための食品をいう。老人用食品とは、無処理の食品と比較して消化及び吸収が容易であるように処理された食品をいう。乳児用調製乳とは、約１歳までの子供に与えるための調製乳をいう。未熟児用調製乳とは、未熟児が生後約６ヶ月になるまで与えるための調製乳をいう。
　食品の形態は特に限定されず、種々の形態とすることができる。このような形態の例としては、例えば、飲料、サプリメント、非飲料食品等が挙げられる。飲料は、アルコール飲料又はノンアルコール飲料のいずれであってもよい。
　ノンアルコール飲料としては、例えば、ノンアルコールビール、麦芽飲料、乳酸菌飲料、発酵飲料、ココア飲料、スポーツドリンク、栄養ドリンク、茶系飲料（例えば、緑茶、ウーロン茶、玄米茶、紅茶等の茶飲料、麦茶、ハト麦茶、ゴマ麦茶、そば茶、さくら茶、甘茶、ハーブティー等の茶外茶飲料など）、清涼飲料、コーヒー飲料（容器詰コーヒー、リキッドコーヒーなど）、炭酸飲料（例えば、コーラフレーバー飲料、透明炭酸飲料、ジンジャエール、果汁系炭酸飲料、乳類入炭酸飲料又は無糖炭酸飲料など）、機能性飲料（例えば、スポーツドリンク、エナジードリンク、健康サポート飲料及びパウチゼリー飲料など）、果実・野菜系飲料（例えば、１００％果汁飲料、果実入り飲料、低果汁入清涼飲料、果粒含有果実飲料又は果肉飲料など）、乳性飲料（例えば、牛乳、ドリンクヨーグルト、乳酸菌飲料又は乳類入清涼飲料など）、豆乳飲料（例えば、豆乳又は大豆飲料など）、フレーバーウォーター等が挙げられる。
　アルコール飲料は、アルコール原料を含有する飲料をさし、チューハイであってもよい。アルコール原料としては、例えば、醸造酒、蒸留酒、及び混成酒等が挙げられる。醸造酒としては、例えば、ワイン及びビール等が挙げられる。蒸留酒としては、例えば、スピリッツ類（例えばジン、ウオツカ、ラム、テキーラ、ニュースピリッツ（ウイスキー類の原酒が１０％未満混和された酒類）等、及び原料用アルコール等）、リキュール類、ウイスキー類（例えばウイスキー、ブランデー等）、焼酎、等が挙げられる。ここでアルコール飲料は、検出可能な程度のアルコールを含むものであればよく、例えば、１体積％以上、２体積％以上、３体積％以上、４体積％以上、５体積％以上のアルコールを含む。
　飲料は、種々のカロリーのものを含む。好ましい飲料は、低カロリー飲料（２０ｋｃａｌ／１００ｍＬ未満）、又はノンカロリー飲料（５ｋｃａｌ／１００ｍＬ未満）である。
　非飲料食品としては、限定されずに、例えば、麺類（そば、うどん、中華麺、即席麺など）、豆腐、菓子類（飴、ガム、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、クッキー、グミ、ケーキ、ウェハース、菓子パン、チョコレート、和菓子など）、パン類、水産又は畜産加工食品（かまぼこ、ハム、ソーセージなど）、乳製品（発酵乳、バター、チーズ、ヨーグルト、ギイなど）、油脂及び油脂加工食品（サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング、ファットスプレッドなど）、調味料（ソース、たれなど）、調理品又は半調理品（チャンプルなど）、レトルト食品（カレー、シチュー、丼、お粥、雑炊など）、冷菓（アイスクリーム、シャーベット、かき氷など）、粉末食品（粉末飲料、粉末スープ等）、経腸流動食などが挙げられる。
　本発明における好ましい食品としては、飲料、サプリメントなどが挙げられる。
　食品添加物は、食品を製造する際に食品原料に添加する製品であり、例えば、パウダー、顆粒、液体、ペースト等の形態をとり得る。
　医薬品としては、種々の剤形のものが挙げられる。例えば、経口投与に適した剤形としては、限定することなく、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤、ゲル剤、チュアブル剤、シロップ剤などが挙げられ、また非経口投与に適した剤形としては、注射剤（例えば、溶液性注射剤、懸濁性注射剤、乳濁性注射剤、用時調製型注射剤等）、軟膏、クリーム剤、ローション、湿布、パッチ剤、点眼剤、点鼻剤、吸入剤、噴霧剤等が挙げられる。
　医薬部外品としては、限定されずに、例えば、歯磨、口中清涼剤、制汗剤、薬用化粧品、ヘアカラー、生理用ナプキン等の形態が挙げられる。
　化粧品としては、限定されずに、例えば、洗顔料、メーク落とし、化粧水、美容液、パック、日焼け止め等が挙げられる。
　本発明の組成物は、ステビオール及びステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）以外の成分を含んでよい。かかる成分は、本発明の組成物の形態、用途、用法などに応じて異なり得るが、その非限定例としては、例えば甘味料、賦形剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、吸収促進剤、ｐＨ調製剤、防腐剤、抗酸化剤、香料、ビタミン類、微量金属成分などが挙げられる。
　甘味料としては、天然甘味料、糖アルコール、人工甘味料、高甘味度甘味料、低カロリー甘味料等が挙げられる。より具体的には、例えば、グルコース、Ｄ－フルクトース、ガラクトース、マンノース、リボース、キシロース、マルトース、スクロース、ラクトース、アラビノース、希少糖（例えば、Ｄ－タガトース、Ｄ－ソルボース、Ｄ－アルロース（Ｄ－プシコース）、Ｌ－フルクトース、Ｌ－アルロース（Ｌ－プシコース）、Ｌ－タガトース、Ｌ－ソルボース、アルトロース、Ｄ－アロース、タロース、イドース、グロース等）、ペプチド系甘味料（例えば、アスパルテーム、ネオテーム、アリテーム等）、ショ糖誘導体（例えば、スクラロース等）、合成甘味料（例えば、アセスルファムＫ、サッカリン、アドバンテーム、チクロ、ズルチン等）、糖アルコール（例えば、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、マンニトール等）、モネリン、クルクリン、ブラゼイン、ソーマチン、タウマリン、マビンリン、ブラゼイン、ペンタジン、ヘルナンズルチン、４β－ヒドロキシヘルナンズルチン、ミラクリン、グリチルリチン、フィロズルチン、Siraitia grosvenorii（羅漢果）抽出物、Glycyrrhiza glabra（ヨウカンゾウ）抽出物、Rubus suavissimus S. Lee（甜茶）抽出物、Hydrangea macrophylla var. thunbergii（甘茶）抽出物、Sclerochiton ilicifolius抽出物、Thaumataococcus daniellii Benth（シビレクズウコン）抽出物、Dioscoreophyllum volkensii（セレンディピティベリー）抽出物、Curculigo latifolia（クルクリゴ）抽出物、Richadella dulcifica（ミラクルフルーツ）抽出物、Pentadiplandra brazzeana（ニシアフリカイチゴ）抽出物、Capparis masaikai（マビンロウ）抽出物、Lippia dulcis（スイートハーブメキシカン）抽出物、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、パラチニット、高果糖液糖、果糖ブドウ糖液糖、ブドウ糖果糖液糖、オリゴ糖、はちみつ、サトウキビ搾汁液（黒糖蜜）、砂糖（白糖、三温糖、黒糖、和三盆等）、メープルシロップ、モラセス（糖蜜）、水飴などが挙げられる。
　本発明の組成物を食品とする場合、他の成分として食品添加物を含んでよい。食品添加物としては、例えば、賦形剤（例えば、コムギデンプン、トウモロコシデンプン、セルロース、乳糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、アルファー化デンプン、カゼイン、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、ケイ酸カルシウムなど）、結合剤（例えば、アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど）、崩壊剤（例えば、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、トウモロコシデンプンなど）、流動化剤（例えば、軽質無水ケイ酸など）、油脂（例えば、大豆油、ゴマ油、オリーブ油、亜麻仁油、エゴマ油、ナタネ油、ココナッツ油、トウモロコシ油などの植物油又は動物・魚由来の油）、栄養素（例えば、各種ミネラル、各種ビタミン、アミノ酸）、香料、甘味料、矯味剤、着色料、溶媒（例えば、エタノール）、塩類、ｐＨ調節剤、緩衝剤、抗酸化剤、安定化剤、ゲル化剤、増粘剤、滑沢剤、カプセル化剤、懸濁剤、コーティング剤、防腐剤、乳化剤などが挙げられる。食品添加物は、単独で又は２種以上組み合わせて含んでもよい。
　本発明の組成物を医薬品又は医薬部外品とする場合、他の成分として、薬学的に許容し得る添加物（例えば、界面活性剤、担体、希釈剤、賦形剤など）を含んでもよい。薬学的に許容し得る添加物は医薬分野でよく知られており、例えば、その全体を本明細書に援用するRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)などに記載されている。
　本発明の組成物は、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）を、必要に応じて上述したような他の成分と混合し、所望の形態に加工することなどにより製造することができる。
　本発明の組成物は、各形態に適した態様で使用することができる。例えば、食品は、経口的に摂取するほか、経鼻、経腸等の非経口的な栄養経路で摂取することができる。食品添加物は、食品に含有させた状態で、食品と同様の経路にて使用することができる。医薬品は、剤形に応じた投与経路、例えば、限定することなく、経口、頬側、口腔内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、局所、直腸、関節内、関節包内、動脈内、門脈内、心室内、経粘膜、経皮、鼻腔内、腹腔内、気道内、腫瘍内、脳内、くも膜下腔内、脳室内、肺内及び子宮内等の経路で投与することができる。医薬部外品及び化粧品も、その形態に応じた使用方法、例えば、皮膚への塗布や、うがいなどにより使用することができる。
　ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の摂取量（服用量、投与量）は特に限定されず、摂取する対象の年齢、体重、健康状態などに応じて適宜選択できるが、例えば、１日あたりの摂取量は、０．００１ｍｇ以上（例えば、０．００１～１０，０００ｍｇ）、０．０１ｍｇ以上（例えば、０．０５～５，０００ｍｇ）、０．１ｍｇ以上（例えば、０．５～１，０００ｍｇ）、１ｍｇ以上（例えば、５～５００ｍｇ）などであってもよい。
　本発明の組成物の使用のタイミングは、特に限定されるものではなく、例えば、食前、食中、食後、食間、就寝前などであってよい。
　本発明の組成物を含む製品には、各種用途や機能を表示してもよい。このような表示としては、例えば、脂肪蓄積抑制、脂肪分解促進、脂肪蓄積が関与する状態の処置、体脂肪低減、糖取込促進、血糖値低減、糖代謝改善及び糖取込促進により改善される状態の処置、あるいはこれらと同視できる表示などが挙げられる。脂肪蓄積が関与する状態及び糖取込促進により改善される状態については、本発明の組成物について上記したとおりである。
　本明細書において、用語「対象」は、本発明の組成物が所望の効果を発揮し得る任意の生物個体、好ましくは動物、さらに好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトの個体を意味する。対象は健常（例えば、特定の又は任意の疾患を有しない）であっても、何らかの疾患に罹患していてもよいものとするが、疾患の処置等が企図される場合には、典型的には当該疾患に罹患しているか、罹患するリスクを有する対象を意味する。
　本明細書において、用語「処置」は、疾患の治癒、一時的寛解又は予防などを目的とする医学的に許容される全ての種類の予防的及び／又は治療的介入を包含するものとする。例えば、「処置」は、疾患の進行の遅延又は停止、病変の退縮又は消失、当該疾患発症の予防又は再発の防止などを含む、種々の目的の医学的に許容される介入を包含する。したがって、本発明の組成物は、疾患の治療及び／又は予防に用いることができる。
　本発明の別の態様は、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む、前記対象において脂肪蓄積を抑制する、脂肪分解を促進する、脂肪蓄積が関与する状態を処置する、体脂肪を低減する、糖取込を促進する、血糖値を低減する、糖代謝を改善する、又は、糖取込促進により改善される状態を処置する方法に関する。
　本発明の方法におけるステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の有効量は、その方法に係る効果を達成し得るステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の量を含み、本発明の組成物について上記した評価手法や、対象とする疾患や状態に係る既知の動物モデルを用いた実験などにより決定することができる。特定の態様において、本発明の方法におけるステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の有効量は、一日当たり０．００１ｍｇ以上（例えば、０．００１～１０，０００ｍｇ）、０．０１ｍｇ以上（例えば、０．０５～５，０００ｍｇ）、０．１ｍｇ以上（例えば、０．５～１，０００ｍｇ）、１ｍｇ以上（例えば、５～５００ｍｇ）などであってよい。
　また、本発明の方法における他の構成要素、例えば、ステビオール及びステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）、対象とする疾患や状態などは、本発明の組成物について上記したとおりである。
　本発明の別の態様は、脂肪蓄積抑制、脂肪分解促進、脂肪蓄積が関与する状態の処置、体脂肪低減、糖取込促進、血糖値低減、糖代謝改善及び糖取込促進により改善される状態の処置に使用するためのステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）に関する。この態様における各構成要素は、本発明の組成物について上記したとおりである。
　本発明の別の態様は、脂肪蓄積抑制、脂肪分解促進、脂肪蓄積が関与する状態の処置、体脂肪低減、糖取込促進、血糖値低減、糖代謝改善及び糖取込促進により改善される状態の処置のための医薬品の製造における、ステビオール及び／又はステビオールの給源（例えば、ステビオール配糖体）の使用に関する。この態様における各構成要素は、本発明の組成物について上記したとおりである。
　以下に本発明に関する実施例等を記載するが、本発明はこれらの具体的な態様に限定されるものではない。
[実施例１]　ステビオールによる脂肪細胞に対する細胞毒性の検討
　ステビオールは次の手法により得た。ステビオシド（Cat. No. S0594、Tokyo Chemical Industry又はCat. No. S623、AK Scientific）と精製水を入れた容器に過ヨウ素酸ナトリウムを添加し、室温で一晩攪拌した。氷冷下、内温５～１０℃で水酸化カリウムを添加し、内温１００～１０２℃で２時間加熱した。ＨＰＬＣにて反応の終了を確認後、氷冷下、内温１０～１３℃で酢酸を添加した。次に、酢酸エチルで３回抽出し、得られた有機層を１０％亜硫酸ナトリウム水溶液、次いで塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、４０℃で減圧濃縮し黄色固体の粗生成物を得た。これにメタノールを添加して約１５分撹拌後、精製水を加え、固体をろ取した。ろ取した固体を５０℃にて一晩乾燥し、白色固体を得た。これを５０℃でアセトンに溶解し、清澄濾過した。濾液を濃縮し、得られた固体を５０℃で一晩減圧乾燥し、目的のステビオールを得た(純度９８％（ＨＰＬＣ）、アセトン０．５ｗｔ％)。こうして得たステビオールを以下の実験に使用した
　正常ヒト皮下前駆脂肪細胞（Cat. No. PT-5020、Lonza）５×１０５個を、Ｔ７５フラスコにて、増殖培地（１０％ＦＢＳ、２ｍＭ　Ｌ－グルタミン、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、３７ｎｇ／ｍＬアンホテリシン－Ｂ添加ＰＢＭ－２培地、Cat. No. PT-8002、Lonza）を用い、ＣＯ２インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、以下同じ）で６日間前培養した。０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、増殖培地を用いて９６ウェルプレートに１０，０００個／１００μＬ／ウェルで播種し、ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。翌日、培地を種々の濃度のステビオール（０．００１、０．０１、０．１、１、１０又は１００μｇ／ｍＬ、終濃度０．１％のＤＭＳＯに溶解）を添加した分化培地（１０％ＦＢＳ、２ｍＭ　Ｌ－グルタミン、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、３７ｎｇ／ｍＬアンホテリシン－Ｂ、インスリン、デキサメタゾン、インドメタシン、３－イソブチル－１－メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）添加ＰＢＭ－２培地、Cat. No. PT-8002、Lonza、以下同じ）１００μＬに交換し、ＣＯ２インキュベーターで１０日間培養し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導４日目及び７日目に、培地を上記と同じ組成の新鮮な培地（１００μＬ）に交換した。なお、陰性対照（control）として、分化培地に終濃度０．１％のＤＭＳＯを添加した溶媒対照を用いた。生細胞数測定はＷＳＴ－８法により行った。具体的には、培養後の各ウェルの培地を、生細胞数測定試薬ＳＦを１／１０量添加した分化培地（１００μＬ）に交換し、ＣＯ２インキュベーターでインキュベートし、３０分後及び９０分後に、プレートリーダー（VARIOSKAN FLASH、Thermo Fisher Scientific）を用いて吸光度（４５０ｎｍ、参照波長６３０ｎｍ）を測定し、６０分あたりの吸光度差を相対生細胞数（Control＝１００％）とした。表１及び図１の結果が示すとおり、１００μｇ／ｍＬのステビオールを添加しても、特に留意すべき細胞毒性は認められなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
[実施例２]　ステビオールによる脂肪細胞における脂肪分解促進作用の検討
　実施例１と同様に正常ヒト皮下前駆脂肪細胞を増殖培地を用いて前培養した。０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、増殖培地を用いて９６ウェルプレートに１０，０００個／１００μＬ／ウェルで播種し、ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。翌日、分化培地（１００μＬ）に交換し、ＣＯ２インキュベーターで１０日間培養し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導４日目及び７日目に新鮮な分化培地（１００μＬ）に交換した。次に、培地を種々の濃度のステビオール（１０、３０又は１００μｇ／ｍＬ、終濃度０．１％のＤＭＳＯに溶解）を添加した分化培地に交換し、ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した後、培養上清中の遊離グリセロール量をAdipolysis Assay Kit（Cat. No. 10009381、Cayman）を用い、製造者のプロトコルに従って測定した。測定はプレートリーダー（VARIOSKAN FLASH、Thermo Fisher Scientific）を用い、吸光度（５４０ｎｍ）を測定し、相対遊離グリセロール濃度を算出した。なお、陽性対照として１０μＭイソプロテレノール（ＩＳＰ）を添加した分化培地、陰性対照として分化培地に終濃度０．１％のＤＭＳＯを添加した溶媒対照（ＤＭＳＯ）及び分化培地のみの非添加対照（No addition）を用いた。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定により比較試験群間（非添加群対陽性対照群、溶媒対照群対ステビオール添加群）の有意差検定を行った。両側検定を行い、Ｐ＜０．０５を有意差有とした。表２及び図２の結果が示すとおり、ステビオールは濃度依存的に脂肪細胞における脂肪分解を促進した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
[実施例３]　ステビオールによる脂肪細胞における脂肪蓄積抑制作用の検討
　実施例１と同様に正常ヒト皮下前駆脂肪細胞を増殖培地を用いて前培養した。０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、増殖培地を用いて９６ウェルプレートに１０，０００個／１００μＬ／ウェルで播種し、ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。翌日、培地を種々の濃度のステビオール（１２．５、２５、５０、１００又は２００μｇ／ｍＬ、終濃度０．１％のＤＭＳＯに溶解）を添加した分化培地１００μＬに交換し、ＣＯ２インキュベーターで１０日間培養し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導４日目及び７日目に、培地を上記と同じ組成の新鮮な培地（１００μＬ）に交換した。なお、陽性対照として、２５ｍＭ　ＬｉＣｌ（Cat. No. SML0559、Sigma-Aldrich）を添加した分化培地、陰性対照として、終濃度０．１％のＤＭＳＯを添加した分化培地を用いた。また、増殖培地で培養した細胞を脂肪蓄積非誘導対照（Untreated）とした。培養後、オイルレッド染色を行った。具体的には、細胞を１００μＬのＤＰＢＳ（Cat. No. 14190250、Thermo Fisher Scientific）で２回洗浄した後、１００μＬの１０％ホルマリン溶液（Cat. No. 061-00416、Wako）で細胞を固定（室温、１０分）した。１００μＬのＤＰＢＳで２回洗浄した後１００μＬの６０％　２－プロパノール（Cat. No. 166-04836、Wako）に置換して１分インキュベートし、１００μＬのオイルレッド染色液（Cat. No. O0625、Sigma-Aldrich）に交換し、１５分間染色した。１００μＬの６０％２－プロパノールで１回洗浄、１００μＬのＤＰＢＳで２回洗浄した後、１００μＬのＤＰＢＳ中で細胞像を撮影した。次に１２０μＬの１００％２－プロパノールに交換後５分間インキュベートしてオイルレッドを抽出し、抽出液１００μＬを新たな９６ウェルプレートに移し、プレートリーダー（VARIOSKAN FLASH、Thermo Fisher Scientific）を用い、吸光度（５２０ｎｍ）を測定し、相対脂肪蓄積量を算出した。分化非誘導群対分化誘導群（陰性対照群）の有意差検定（両側）を行い、Ｐ＜０．０５を有意差有とした。また、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定により、陰性対照群対ステビオール添加群／陽性対照群の有意差検定（両側）を行い、Ｐ＜０．０５を有意差有とした。表３及び図３の結果が示すとおり、ステビオールは濃度依存的に脂肪細胞における脂肪蓄積を抑制した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
[実施例４]　ステビオールによる脂肪細胞における糖取込促進作用の検討
　実施例１と同様に正常ヒト皮下前駆脂肪細胞を増殖培地を用いて前培養した。０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、増殖培地を用いて９６ウェルプレートに１０，０００個／１００μＬ／ウェルで播種し、ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。翌日、分化培地（１００μＬ）に交換し、ＣＯ２インキュベーターで１０日間培養し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導４日目及び７日目に新鮮な分化培地（１００μＬ）に交換した。次に、血清非添加培地（２ｍＭ　Ｌ－グルタミン、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、３７ｎｇ／ｍＬアンホテリシン－Ｂ添加ＰＢＭ－２培地、Cat. No. PT-8002、Lonza）１００μＬに交換し、ＣＯ２インキュベーターで１８時間培養した。次いで、培地を種々の濃度のステビオール（１０、３０又は１００μｇ／ｍＬ、終濃度０．１％のＤＭＳＯに溶解）を添加したグルコース非添加血清非添加培地（ＤＭＥＭ、no glucose、Cat. No. 11966025、Thermo Fisher Scientific）１００μＬに交換し、４時間ＣＯ２インキュベーターで培養した。なお、陽性対照として１００μＭアカデシン（AICAR、Cat. No. A9978、Sigma-Aldrich）を添加したグルコース非添加血清非添加培地、陰性対照としてグルコース非添加血清非添加培地に終濃度０．１％のＤＭＳＯを添加した溶媒対照及びグルコース非添加血清非添加培地のみの非添加対照を用いた。培養後、Glucose Uptake-Glo Assay kit（Cat.No.J1341、Promega）を用いて下記手順で細胞内２－デオキシグルコース－６－リン酸（２ＤＧ６Ｐ、２－デオキシグルコース（２ＤＧ）リン酸化産物）量を測定した。各ウェルの培地を１ｍＭ　２ＤＧ添加ＤＰＢＳ溶液（５０μＬ）に交換し、１０分間室温でインキュベートした後、Stop buffer（２５μＬ）、Neutralization buffer（２５μＬ）、2DG6P detection reagent（１００μＬ）を添加し、室温で６０分インキュベートした後、プレートリーダー（VARIOSKAN FLASH、Thermo Fisher Scientific）を用い、発光強度を測定して相対発光強度を相対細胞内２ＤＧ６Ｐ量とした。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定により比較試験群間（非添加群対陽性対照群、溶媒対照群対ステビオール添加群）の有意差検定を行った。両側検定を行い、Ｐ＜０．０５を有意差有とした。表４及び図４の結果が示すとおり、ステビオールは濃度依存的に脂肪細胞における糖取込を促進した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
[実施例５]　ステビオールによる肝細胞に対する細胞毒性の検討
　ＨｅｐＧ２細胞（Cat. No. JCRB1054、JCRB）５×１０５個を、Ｔ７５フラスコにて、増殖培地（１０％ＦＢＳ（Cat. No. 172012、Sigma-Aldrich）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Cat. No. 09367-34、Nacalai tesque）添加ＤＭＥＭ（high glucose、Cat. No. D5796、Sigma-Aldrich））を用い、ＣＯ２インキュベーターで５日間前培養した。０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、増殖培地を用いて９６ウェルプレートに、１０，０００個／１００μＬ／ウェルで播種し、ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。翌日、培地を種々の濃度のステビオール（０．００１、０．０１、０．１、１、１０又は１００μｇ／ｍＬ、終濃度０．１％のＤＭＳＯに溶解）を添加した増殖培地１００μＬに交換、ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。なお、陰性対照（Control）として、増殖培地に終濃度０．１％のＤＭＳＯを添加した溶媒対照を用いた。生細胞数測定はＷＳＴ－８法により行った。具体的には、培養後の各ウェルの培地を、生細胞数測定試薬ＳＦを１／１０量添加した増殖培地１００μＬに交換し、ＣＯ２インキュベーターでインキュベートし、３０分後及び９０分後に、プレートリーダー（VARIOSKAN FLASH、Thermo Fisher Scientific）を用いて吸光度（４５０ｎｍ、参照波長６３０ｎｍ）を測定し、６０分あたりの吸光度差を相対生細胞数とした。表５及び図５の結果が示すとおり、１００μｇ／ｍＬのステビオールを添加しても、特に留意すべき細胞毒性は認められなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
[実施例６]　ステビオールによる肝細胞における脂肪・トリグリセリド蓄積抑制作用の検討
　実施例５と同様にＨｅｐＧ２細胞を増殖培地を用いて前培養した。０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、増殖培地を用いて９６ウェルプレートに３０，０００個／１００μＬ／ウェルで播種し、ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。翌日、培地を種々の濃度のステビオール（１２．５、２５、５０、１００又は２００μｇ／ｍＬ、終濃度０．１％のＤＭＳＯに溶解）を添加した試験培地（０．２ｍＭオレイン酸（Cat. No. O3008、Sigma-Aldrich）、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン添加ＤＭＥＭ（high glucose））１００μＬに交換し、ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。なお、陽性対照として、２ｍＭのメトホルミン（Cat. No. M2009、Tokyo Chemical Industry）を添加した試験培地（Metformin）、陰性対照として、試験培地に終濃度０．１％のＤＭＳＯを添加した溶媒対照（ＤＭＳＯ）を用いた。また、脂肪蓄積非誘導対照として、オレイン酸を含まない試験培地で培養した細胞を用いた（Untreated）。培養後、実施例３と同様にオイルレッド染色を行い、撮像及び相対脂肪蓄積量の算出を行った。また、前記オイルレッド染色に使用した細胞と同条件で別途培養した細胞について、細胞中のトリグリセリド（ＴＧ）量を、Adipogenesis Assay Kit（Biovision）を用い、製造者のプロトコルに従って定量した。プレートリーダー（VARIOSKAN FLASH、Thermo Fisher Scientific）を用い、吸光度（５７０ｎｍ）を測定し、相対ＴＧ量を算出した。相対脂肪蓄積量及び相対ＴＧ量に関し、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定により脂肪蓄積非誘導群対脂肪蓄積誘導群（陰性対照群）の有意差検定（両側）を行い、Ｐ＜０．０５を有意差有とした。また、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定により、陰性対照群対ステビオール添加群／陽性対照群の有意差検定（両側）を行い、Ｐ＜０．０５を有意差有とした。脂肪蓄積試験の結果を表６及び図６に、ＴＧ蓄積試験の結果を表７及び図７にそれぞれ示す。ステビオールは濃度依存的に脂肪細胞における脂肪蓄積を抑制した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　多数の様々な改変が、本発明の精神から逸脱せずになされ得ることを当業者は理解する。したがって、本明細書に記載された本発明の形態は例示にすぎず、本発明の範囲を制限する意図がないことを理解すべきである。
  

Claims (7)

  1. 　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を含む、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪分解促進のための組成物。
  2. 　肥満の予防、肥満の改善及び／又は体脂肪の低減のための、請求項１に記載の組成物。
  3. 　インスリン治療に反応する糖尿病を有しない対象のための、請求項１又は２に記載の組成物。
  4. 　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を含む、インスリン抵抗性を有する対象における、血糖値低減、糖取込促進及び／又は糖代謝改善のための組成物。
  5. 　ステビオール及び／又はステビオール配糖体を含む、アルコール性肝疾患又は非アルコール性脂肪性肝疾患の処置のための組成物。
  6. 　経口摂取用である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 　飲料である、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

      
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