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WO2021117754A1 - Ｄｎａ損傷の抑制又は修復剤 - Google Patents

Ｄｎａ損傷の抑制又は修復剤 Download PDF

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Publication number
WO2021117754A1
WO2021117754A1 PCT/JP2020/045783 JP2020045783W WO2021117754A1 WO 2021117754 A1 WO2021117754 A1 WO 2021117754A1 JP 2020045783 W JP2020045783 W JP 2020045783W WO 2021117754 A1 WO2021117754 A1 WO 2021117754A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
peptide
substituted
unsubstituted
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2020/045783
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
細田　洋司
寒川　賢治
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Cerebral and Cardiovascular Center
Original Assignee
National Cerebral and Cardiovascular Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Cerebral and Cardiovascular Center filed Critical National Cerebral and Cardiovascular Center
Priority to JP2021563993A priority Critical patent/JP7693211B2/ja
Publication of WO2021117754A1 publication Critical patent/WO2021117754A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones

Definitions

  • the present invention relates to an agent for suppressing or repairing DNA damage in cells for suppressing or repairing DNA damage caused by various factors in vivo or in vitro.
  • Adrenomedullin (hereinafter also referred to as "AMD") is a bioactive peptide isolated and identified from brown cell tissue in 1993 (Non-Patent Document 1). Initially, AMD was found to exert a strong vasodilatory antihypertensive effect. For example, Patent Document 1 describes a peptide having a blood pressure lowering effect, which comprises an amino acid sequence of human AM. Subsequent studies have revealed that AMD exerts pharmacological actions such as anti-inflammatory action, antioxidant stress action, and anti-apoptotic action.
  • DNA damage occurs even in nuclear DNA replication during normal cell division, and the repair mechanism is activated.
  • many anticancer agents target nuclear DNA in cells and act in a damaging manner, resulting in cell death when the damage exceeds the DNA repair ability of the cell. Since the action of anticancer drugs is low in cell specificity, not only cancer cells but also normal cells cause cell death.
  • anticancer drugs in addition to DNA damage caused by ultraviolet rays, radiation, chemical substances, etc., in various pathological conditions such as ischemia-reperfusion of tissues, high oxygen environment, lifestyle-related diseases such as obesity and diabetes, and chronic inflammation. Oxidative DNA damage is also known to cause cell death, apoptosis, cell senescence, and canceration.
  • Adrenomedullin a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromocytoma. , Pp. 553-60
  • DNA damage in cells caused by various causes not only causes changes and loss of genetic information of biological cells, but also has a serious and long-term effect on transcriptional regulation and intracellular function. It is considered to be beneficial in medicine if DNA damage can be suppressed or repaired, but conventionally, no effective component for suppressing or repairing DNA damage in cells has been found.
  • the present invention aims to solve the problem of suppressing or repairing DNA damage caused by various factors in cells in vivo or in vitro.
  • analogs of cAMP an intracellular messenger produced by activation of adrenomedulin or adrenomedulin receptors, suppress DNA damage in normal cells due to anticancer agents or oxidative stress, or the like. It has been found that it has an action of promoting repair, and the following invention has been completed.
  • Adrenomedullin or its modified product having adrenomedulin activity (I) A peptide consisting of the amino acid sequence of adrenomedulin, (II) A peptide consisting of the amino acid sequence of adrenomedulin and in which two cysteine residues in the amino acid sequence form a disulfide bond. (III) In the peptide of (II), a peptide in which the disulfide bond is substituted with an ethylene group and has adrenomedulin activity. (IV) A peptide in which 1 to 15 amino acid residues are deleted, substituted or added in any of the peptides (I) to (III) and has adrenomedulin activity.
  • the C-terminal is amidated, and (VI) in any of the peptides (I) to (IV), the C-terminal is used.
  • the agent for suppressing or repairing DNA damage in cells according to (1) which is a peptide selected from the group consisting of peptides to which a glycine residue is added.
  • Adrenomedullin or its modified product having adrenomedulin activity A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 in which the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond;
  • B A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 and in which the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond;
  • C A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 and in which the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond;
  • D A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, or a
  • Adrenomedullin or a modified product thereof having adrenomedulin activity or a salt thereof, or Agonist of adrenomedulin receptor For use in the prevention or treatment of diseases or conditions caused by DNA damage Adrenomedullin or a modified product thereof having adrenomedulin activity or a salt thereof, or Agonist of adrenomedulin receptor.
  • the modified product having adrenomedulin or adrenomedulin activity is preferably selected from the group consisting of the above (I) to (VI) according to the above (2). It is a peptide.
  • the modified product having adrenomedulin or adrenomedulin activity is preferably selected from the group consisting of the above (a) to (j) according to the above (3). It is a peptide.
  • the cell is preferably a mammalian cell, particularly preferably a human cell.
  • the disease or condition caused by the DNA damage is preferably a disease or condition in mammals, and particularly preferably a disease or condition in humans.
  • the subject is preferably a mammal, particularly preferably a human.
  • the cell is preferably a cell derived from a blood vessel, for example, a vascular endothelial cell.
  • the cells are preferably kidney-derived cells, such as tubular cells.
  • the disease or condition caused by the DNA damage is preferably a disease or condition in a blood vessel or an organ including a blood vessel, for example, a dysfunction of a blood vessel.
  • the disease or condition caused by the DNA damage is preferably a disease or condition in the kidney, for example, renal tubular dysfunction.
  • FIG. 1 is a diagram for explaining an outline of the in vivo experiment of Example 1.
  • FIG. 2 shows the anti-pH 2A. The result of immunohistological analysis using X antibody is shown.
  • FIG. 3 shows the measurement results of urinary albumin / creatinine in Example 1.
  • FIG. 4 shows the results of the expression analysis of the inflammatory cytokine gene in Example 1.
  • FIG. 5 is a diagram for explaining an outline of the in vitro experiment of Example 2 Experiment 1.
  • FIG. 6 shows the anti-pH 2A. The result of fluorescent immunostaining using X antibody is shown.
  • the upper row 8-Br-cAMP (-) of FIG. 6 shows the results of immunostaining of cultured cells treated with PBS 30 minutes before the addition of cisplatin.
  • FIG. 6 shows the results of immunostaining of cultured cells treated with 8-Br-cAMP 30 minutes before the addition of cisplatin.
  • FIG. 7 shows the results of the expression analysis of the genes of the DNA repair factors BRCA1 and TP53BP1 in Example 2 Experiment 1.
  • FIG. 8 shows the measurement results of the cell viability of the cells after culturing in Example 2 Experiment 1.
  • FIG. 9 is a diagram for explaining an outline of the in vitro experiment of Example 2 Experiment 2.
  • FIG. 10 shows the anti-pH 2A. The result of fluorescent immunostaining using X antibody is shown.
  • FIG. 10 shows the results of immunostaining of cultured cells treated with PBS to 30 minutes before H 2 O 2 addition.
  • Lower 8-Br-cAMP in FIG 10 (+) shows the results of immunostaining of cultured cells treated with 8-Br-cAMP, 30 minutes prior to H 2 O 2 addition.
  • FIG. 11 is a diagram for explaining an outline of the in vitro experiment of Example 3.
  • FIG. 12 shows the anti-pH 2A. The result of fluorescent immunostaining using X antibody is shown.
  • Upper 8-Br-cAMP in FIG 12 (-) shows the results of immunostaining of cultured cells treated with PBS to 30 minutes before H 2 O 2 addition.
  • Lower 8-Br-cAMP in FIG 12 (+) shows the results of immunostaining of cultured cells treated with 8-Br-cAMP, 30 minutes prior to H 2 O 2 addition.
  • the active ingredient includes adrenomedulin or a modified product thereof having adrenomedulin activity or a salt thereof.
  • adrenomedullin is not only a human-derived peptide (SEQ ID NO: 1) isolated and identified from human brown cell tissue, but also pig (SEQ ID NO: 3), dog (SEQ ID NO: 5), and bovine (SEQ ID NO: 5). It may be a peptide (ortholog) derived from other non-human mammals (eg, warm-blooded animals) such as No. 7), rat (SEQ ID NO: 9) or mouse (SEQ ID NO: 11). In vivo, these peptides have two cysteine residues in the amino acid sequence forming a disulfide bond and the C-terminal being amidated. In the present specification, the peptide having a disulfide bond and a C-terminal amide group may be simply referred to as "adrenomedullin". The present invention can be applied to any of the above peptides.
  • C-terminal amidation means an aspect of post-translational modification of a peptide in vivo, and specifically, the main chain carboxyl group of the C-terminal amino acid residue of the peptide is an amide group. It means a reaction that is transformed into a form.
  • formation of a disulfide bond of a cysteine residue or “disulfide formation of a cysteine residue” means one aspect of post-translational modification of a peptide in vivo, and specifically, of the peptide. It means a reaction in which two cysteine residues in an amino acid sequence form a disulfide bond (—S—S—).
  • bioactive peptides produced in vivo are initially biosynthesized as higher molecular weight precursor proteins, such as C-terminal amidation and / or cysteine residue disulfide during intracellular translocation. After translation, it undergoes a modification reaction to become a mature physiologically active peptide.
  • C-terminal amyloidization usually proceeds by the action of C-terminal amyloid enzyme on precursor protein.
  • a physiologically active peptide having a C-terminal amide group in the precursor protein, a Gly residue is bound to the C-terminal carboxyl group to be amidated, and the Gly residue is C-terminal by a C-terminal amidating enzyme. Converted to an amide group.
  • the C-terminal propeptide of precursor protein contains a repeating sequence of a combination of basic amino acid residues such as Lys-Arg or Arg-Arg (Mizuno, Biochemistry Vol. 61, No. 12, No. 12). Pp. 1435-1461 (1989)).
  • Disulfide formation of cysteine residues can proceed under oxidative conditions. In vivo, disulfide formation of cysteine residues usually proceeds by the action of protein disulfide isomerase on precursor protein.
  • the modified adrenomedullin contained as an active ingredient is a modified adrenomedullin having adrenomedulin activity, specifically, an activity of suppressing or repairing DNA damage in cells.
  • adrenomedullin or a modified form thereof having adrenomedullin activity means that it is adrenomedulin or a modified form of adrenomedullin that retains at least a part of adrenomedulin activity, and "modified form of adrenomedullin” is defined as.
  • One to several amino acids contained in the adrenomedullin described above mean a peptide modified by a chemical reaction with another chemical substance.
  • the adrenomedullin or its modified product having adrenomedulin activity is (I) A peptide consisting of the amino acid sequence of adrenomedulin, (II) A peptide consisting of the amino acid sequence of adrenomedulin and in which two cysteine residues in the amino acid sequence form a disulfide bond. (III) In the peptide of (II), a peptide in which the disulfide bond is substituted with an ethylene group and has adrenomedulin activity. (IV) A peptide in which 1 to 15 amino acid residues are deleted, substituted or added in any of the peptides (I) to (III) and has adrenomedulin activity.
  • the C-terminal is amidated, and (VI) in any of the peptides (I) to (IV), the C-terminal is used. It is preferably a peptide selected from the group consisting of peptides to which a glycine residue is added.
  • adrenomedullin activity specifically refers to an activity of suppressing or repairing DNA damage in cells.
  • the peptide comprises the amino acid sequence of adrenomedulin included in (V), the C-terminal is amidated, and two cysteine residues in the amino acid sequence are present.
  • the peptide forming the disulfide bond corresponds to the mature native adrenomedulin.
  • the peptide consisting of the amino acid sequence of adrenomedulin of (I) corresponds to the natural form of adrenomedullin before (ie, immature) form undergoing post-translational modification of C-terminal amidation and disulfide formation of cysteine residues.
  • the peptides other than the peptides described above correspond to modified adrenomedullin.
  • the peptide (II) is formed by air-oxidizing the thiol groups of the two cysteine residues of the peptide (I) or by oxidizing the peptide with an appropriate oxidizing agent to convert it into a disulfide bond. Can be made to.
  • the three-dimensional structure of the peptide (II) is substantially equivalent to that of the natural adrenomedullin. Thereby, the adrenomedullin activity of the modified adrenomedullin can be made substantially equivalent to that of the natural adrenomedullin.
  • the peptide (III) can be formed by converting the disulfide bond of the peptide (II) into an ethylene group. Substitution of a disulfide bond into an ethylene group can be carried out by a method well known in the art (O. Keller et al., Helv. Chim. Acta, 1974, Vol. 57, p. 1253).
  • a method well known in the art O. Keller et al., Helv. Chim. Acta, 1974, Vol. 57, p. 1253.
  • the number of amino acid residues deleted, substituted or added is preferably in the range of 1 to 12, more preferably in the range of 1 to 10, and 1 to 8.
  • the range of 1 is more preferable, the range of 1 to 5 is particularly preferable, the range of 1 to 3 is particularly preferable, and the range of 1 or 2 is particularly preferable.
  • a suitable peptide of (IV) is, in any of the peptides (I) to (III), 1 to 15 positions, 1 to 12 positions, 1 to 10 positions, 1 to 8 positions, 1 from the N-terminal side. It is a peptide in which the amino acids at positions 5 to 5 or 1 to 3 are deleted and has adrenomedulin activity.
  • one or more amino acids may be further deleted, substituted or added.
  • the adrenomedullin activity of the peptide can be made substantially equivalent to that of the natural adrenomedullin.
  • the peptide of (VI) can be converted into the peptide of (V) by converting the C-terminal glycine residue into a C-terminal amide group by the action of the C-terminal amidating enzyme. Therefore, by administering the peptide of (VI) to a subject, a C-terminal amidated peptide can be formed in the living body of the subject after a lapse of a certain period of time. As a result, the modified adrenomedullin composed of the peptide of (VI) can continuously express the adrenomedullin activity in vivo.
  • the adrenomedullin or a modified product thereof A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 in which the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond;
  • B A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 and in which the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond;
  • C A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, or a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 and in which the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 form a disulfide bond;
  • D A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, or a peptide consist
  • the number of amino acid residues deleted, substituted or added is preferably in the range of 1 to 12, more preferably in the range of 1 to 10, and 1 to 8.
  • the range of 1 is more preferable, the range of 1 to 5 is particularly preferable, the range of 1 to 3 is particularly preferable, and the range of 1 or 2 is particularly preferable.
  • a suitable peptide of (h) is, in any of the peptides (a) to (g), 1 to 15 positions, 1 to 12 positions, 1 to 10 positions, 1 to 8 positions, 1 from the N-terminal side. It is a peptide in which the amino acids at positions 5 to 5 or 1 to 3 are deleted and has adrenomedulin activity.
  • one or more amino acids may be further deleted, substituted or added.
  • the adrenomedullin activity of the peptide can be made substantially equivalent to that of the natural adrenomedullin.
  • A is a modifying group L is a divalent linking group n is an integer of 0 or 1
  • B is a peptide, which is an adrenomedulin or a modified form of adrenomedulin that retains at least a portion of the adrenomedulin activity.
  • peptide B is bound to modifying group A or linking group L via its N-terminal amino group.
  • Examples thereof include peptide complexes represented by, salts thereof, and hydrates thereof.
  • the modifying group A may be an organic group containing a palmitoyl group, a polyethylene glycol group, a myristoyl group, a peptide group, a sugar group and at least one polyethylene glycol group (hereinafter, may be referred to as "organic group A PEG"). There is), and can be selected from the group consisting of the Fc region of immunoglobulin.
  • the sugar group can be a monovalent group (eg, a glycosyl group) derived from a monosaccharide, disaccharide, oligosaccharide or polysaccharide.
  • the peptide group is a monovalent group (for example, a monovalent group that forms a bond via an N-terminal amino group, a C-terminal carboxyl group, or a side chain group) derived from polyglycine, polyglutamic acid, polylysine, polyasparagine, or the like. Can be a group).
  • the divalent linking group L can be a linking group consisting of a hydrocarbon group or a peptide having an arbitrary amino acid sequence.
  • peptide B in the formula (AI) include a peptide according to any one of (I) to (VI) or a peptide consisting of any of the peptides (a) to (h).
  • the peptide B is bound to the modifying group A or the linking group L via the ⁇ -amino group at its N-terminal. Due to the above-mentioned binding form, the peptide complex represented by the formula (AI) exhibits an activity equivalent to that of the natural adrenomedullin in vivo, and the activity can be continuously expressed.
  • the modifying group A is selected from the group consisting of a palmitoyl group, a polyethylene glycol group, a polyethylene glycol group, and an organic group containing at least one polyethylene glycol group, where L is a hydrocarbon. It is a group.
  • the hydrocarbon group may be selected from a substituted or unsubstituted divalent aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted divalent alicyclic group, or a substituted or unsubstituted divalent aromatic group.
  • the aliphatic hydrocarbon group may be a C 1 to C 10 alkylene group, a C 2 to C 10 alkaneylene group, or a C 2 to C 10 alkynylene group.
  • the hydrocarbon group is an aliphatic hydrocarbon group having a substituent, an alicyclic group having a substituent, or an aromatic group having a substituent
  • the substituent is an oxo (carbonyl) group, a thiocarbonyl group
  • It can be a divalent group containing a hetero atom, such as a carbamate group or a carboxylicimideyl group.
  • a divalent group containing a heteroatom may be located at one end or both ends of the divalent linking group L.
  • A can be a polyethylene glycol group and L can be a hydrocarbon group.
  • the average molecular weight of the polyethylene glycol groups can range from, for example, about 200 to 40,000, about 500 to 20,000, and about 500 to 10,000.
  • the peptide complex represented by the formula (AI) can continuously express adrenomedulin activity for a long period of time in vivo.
  • the polyethylene glycol group is usually a polyethylene glycol group protected by a protecting group such as a methoxypolyethylene glycol group or an ethoxypolyethylene glycol group, but it may be a hydroxypolyethylene glycol group.
  • the hydrocarbon group is the same as above, with a substituted or unsubstituted divalent aliphatic hydrocarbon group, a substituted or unsubstituted divalent alicyclic group, or a substituted or unsubstituted divalent aromatic group.
  • a substituted or unsubstituted divalent aliphatic hydrocarbon group a substituted or unsubstituted divalent alicyclic group, or a substituted or unsubstituted divalent aromatic group.
  • A is an organic group containing one or more polyethylene glycol groups (organic group A PEG ), L is a methylene group, and n is an integer 1.
  • the nitrogen atom of the N-terminal ⁇ -amino group of peptide B is covalently bonded to the carbon atom of the methylene group.
  • the peptide complex represented by the formula (AI) in which the organic group A PEG and the peptide B are linked in the above-mentioned linking mode via a methylene group may be referred to as an "alkylamine linked adrenomedullin derivative".
  • Alkylamine-linked adrenomedulin derivatives have high adrenomedulin activity.
  • the embodiment containing one or more PEG groups is not particularly limited.
  • one or more PEG groups may be located at the distal end of the organic group A PEG, may be disposed in the interior of the organic group A PEG.
  • the organic group A PEG may be various groups known in the art as a linear or branched chain group containing a PEG group.
  • Suitable groups that can be used as the modifying group A include, but are not limited to, for example, WO1995 / 11924, WO2006 / 084089, WO98 / 41562, WO2005 / 079838, WO2002 / 060978, WO2001 / 048552, WO1998 / 0555500, Examples can be mentioned of the groups disclosed in WO 1996/021469, WO 2003/040211, JP-A-04-108827 and the like.
  • the organic group A PEG has the following formula (II): It can be a modifying group represented by.
  • a is an integer greater than or equal to 1 and m is an integer greater than or equal to 1 and L 1 is a m + 1-valent linear or branched linking group, provided that when L 1 is plural, L 1 the plurality of may be the same or different from each other, L 2 and L 2 'are each independently a bond or a divalent linking group, provided that, L 2' when there are a plurality, L 2 of the plurality of 'may be the same or different from each other, M 1 is a PEG group, provided that when M 1 is a multiple, M 1 the plurality of may be the same or different from each other, M 2 is a bond or PEG groups, provided that when M 2 is a plurality, M 2 of the plurality of which may be the same or different from each other, R 1 is a hydrogen or monovalent group and * Is the connection position with L n in the formula (AI).
  • m is the number of branches of the linking group L 1.
  • L 1 is a divalent linking group, which is non-branched with respect to the terminal direction, that is, a linear group.
  • L 1 is a linking group having a valence of 3 or more, and a group having 2 or more branches in the terminal direction.
  • m is usually an integer of 1 or more and an integer of 5 or less.
  • m can be, for example, a range of 1 to 5, a range of 1 to 4, or a range of 1 to 3. If the branch number m of the linking group L 1 is within the above range, organic group A PEG may have a linear or branched structure.
  • a is the number of repetitions of the units of the PEG groups M 1 and M 2 and the linking groups L 1 and L 2'.
  • the unit does not have a repeating structure.
  • the unit has a linear repeating structure.
  • the unit has a dendritic branched chain-like repeating structure.
  • a is usually an integer of 1 or more and an integer of 5 or less, and may be, for example, a range of 1 to 5 and a range of 1 to 2. If PEG groups M 1 and M 2, and the number of repetitions a unit linking groups L 1 and L 2 'is of the range, the organic group A PEG may have a linear or branched structure.
  • the PEG group is usually of formula (III) :. # -(CH 2 CH 2 O) n - ** (III) It is a group represented by.
  • ** is the binding position with L 1
  • # is the binding position with O or L 2' .
  • the weight average molecular weight of the PEG group represented by the formula (III) can be usually 1 kDa or more, for example, 5 kDa or more, 10 kDa or more, and 20 kDa or more as the total in the modifying group A. Usually, it can be 2000 kDa or less, for example, 1000 kDa or less, 100 kDa or less, 80 kDa or less, and 60 kDa or less.
  • the PEG group represented by the formula (III) usually has a weight average molecular weight in the range of 1 to 2000 kDa, for example, in the range of 1 to 1000 kDa, and for example, in the range of 1 to 100 kDa, as a total in the organic group A PEG. It may have a weight average molecular weight in the range of 5-80 kDa, in the range of 10-60 kDa, in the range of 20-60 kDa.
  • n is the number of repetitions of ethylene oxide units defined based on the weight average molecular weight.
  • the lower limit values can usually be about 20, about 110, about 230, and about 460.
  • the upper limit can usually be about 45,000, about 22,000, about 2200 or less, about 1820, about 1360 or less.
  • n in formula (III) is defined based on the preferred range of weight average molecular weight, it is usually in the range of about 20 to 45,000, for example, in the range of about 20 to 22000, in the range of about 20 to 2200, and in the range of about 110 to 1820.
  • R 1 is hydrogen, substituted or unsubstituted C 1-2 to C 20 alkyl, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkenyl, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkynyl, substituted or unsubstituted C 3 to C 20 cycloalkyl, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 cycloalkenyl, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 cycloalkynyl, substituted or unsubstituted 3- to 6-membered heterocycloalkyl, substituted or unsubstituted.
  • C 7 to C 20 cycloalkylalkyl substituted or unsubstituted 3 to 6-membered heterocycloalkyl-C 1 to C 20 alkyl, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 aryl, substituted or unsubstituted C 5 to It can be a C 20 arylalkyl, a substituted or unsubstituted 5- to 15-membered heteroaryl, a substituted or unsubstituted 5- to 15-membered heteroaryl-C 1 to C 20 alkyl, or a substituted or unsubstituted acyl.
  • the substituents are independently halogen (fluorine, chlorine, bromine or iodine), cyano, nitro, substituted or unsubstituted C 1 to C 5 alkyl, substituted or unsubstituted.
  • C 2 to C 5 alkenyl, substituted or unsubstituted C 2 to C 5 alkynyl, substituted or unsubstituted C 3 to C 6 cycloalkyl, substituted or unsubstituted C 3 to C 6 cycloalkenyl, substituted or unsubstituted Can be a monovalent group selected from the group consisting of C 3 to C 6 cycloalkynyls, substituted or unsubstituted amino, and substituted or unsubstituted C 1 to C 5 alkoxy.
  • L 1 is an m + 1 valent linear or branched chain linking group.
  • L 1 can be a substituted or unsubstituted m + 1 valent linear or branched chain hydrocarbon group.
  • the group is one or more complex atoms, an alicyclic group, an aromatic group, an amide group (-CO-NH-), an ester group (-CO-O-), or a urethane group (-O-CO-).
  • NH-) may be included.
  • the substituents are independently halogen (fluorine, chlorine, bromine or iodine), cyano, nitro, and substituted or unsubstituted linear or branched hydrocarbons. It can be a monovalent group selected from the group consisting of groups.
  • L 2 and L 2 ' are, independently of one another, is a bond or a divalent linking group.
  • a divalent linking group L 2 and L 2' L 2 and L 2 independently of one another, a substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group, an amide group (-CO-NH-), It can be an ester group (-CO-O-) or a urethane group (-O-CO-NH-).
  • the substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group includes substituted or unsubstituted C 1 to C 20 alkylene, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkenylene, and substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkynylene.
  • the substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group is one or more complex atoms, an amide group (-CO-NH-), an ester group (-CO-O-), or a urethane group (-O-CO-).
  • NH- may be included.
  • the substituents are independently halogen (fluorine, chlorine, bromine or iodine), cyano, nitro, and substituted or unsubstituted linear or branched hydrocarbons. It can be a monovalent group selected from the group consisting of groups.
  • the organic group A PEG has the following formulas (V), (VI), (VII) or (VIII): It can be a modifying group represented by.
  • a is an integer greater than or equal to 1 and M 3 , M 3' , M 3'' , M 3''' and M 3''' are independent of each other and are bound or PEG groups, except that M 3 , M 3' , M 3'.
  • M 3'' and M 3''' are the same or the same as each other.
  • M 3 , M 3' , M 3'' , M 3''' and M 3''' is a PEG group.
  • R 1 , R 1' , R 1 " and R 1'" are independent of each other and are hydrogen or monovalent groups.
  • R 2 is a binding or divalent group R 3, R 3 'and R 3''independently of one another, a bond or a divalent group, provided that, R 3, if R 3' and R 3 '' is plural, the plurality of R 3 , R 3'and R 3'' may be the same or different from each other.
  • a is the number of repetitions of the unit including the PEG groups M 3 , M 3' , M 3'' , M 3''' and M 3'''. For example, when a is 1, the unit does not have a repeating structure. In the formula (V), when a is 2 or more, the unit has a linear repeating structure. In formulas (VI), (VII) and (VIII), when a is 2 or more, the unit has a dendritic branched chain-like repeating structure. a is usually an integer of 1 or more and an integer of 5 or less, and may be in the range of 1 to 5, for example, 1 to 2.
  • the modifying group A containing the PEG group is linear. Alternatively, it can have a branched chain structure.
  • the PEG group is usually a group represented by the formula (III).
  • the PEG group represented by the formula (III) has the same meaning as described above.
  • R 1 has the same meaning as above and R 1 of formula (II). Further, R 1' , R 1 " and R 1'” have the same meanings as R 1 described above.
  • R 2 is a bond, a substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group, an amide group (-CO-NH-), ester group (-CO-O-), or urethane groups (-O-CO-NH-) Can be.
  • the substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group includes substituted or unsubstituted C 1 to C 20 alkylene, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkenylene, and substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkynylene.
  • the divalent hydrocarbon group contains one or more complex atoms, an amide group (-CO-NH-), an ester group (-CO-O-), or a urethane group (-O-CO-NH-). But it may be.
  • the substituents are independently halogen (fluorine, chlorine, bromine or iodine), cyano, nitro, substituted or unsubstituted C 1 to C 5 alkyl, substituted or unsubstituted.
  • C 2 to C 5 alkenyl, substituted or unsubstituted C 2 to C 5 alkynyl, substituted or unsubstituted C 3 to C 6 cycloalkyl, substituted or unsubstituted C 3 to C 6 cycloalkenyl, substituted or unsubstituted Can be a monovalent group selected from the group consisting of C 3 to C 6 cycloalkynyls, substituted or unsubstituted amino, and substituted or unsubstituted C 1 to C 5 alkoxy.
  • R 3, R 3 'and R 3'' are independently of each other, a bond, a substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group, an amide group (-CO-NH-), ester group (-CO-O- ), Or a urethane group (-O-CO-NH-).
  • the substituted or unsubstituted divalent hydrocarbon group includes substituted or unsubstituted C 1 to C 20 alkylene, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkenylene, and substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkynylene.
  • the divalent hydrocarbon group contains one or more complex atoms, an amide group (-CO-NH-), an ester group (-CO-O-), or a urethane group (-O-CO-NH-). But it may be.
  • the substituents are independently halogen (fluorine, chlorine, bromine or iodine), cyano, nitro, substituted or unsubstituted C 1 to C 5 alkyl, substituted or unsubstituted.
  • C 2 to C 5 alkenyl, substituted or unsubstituted C 2 to C 5 alkynyl, substituted or unsubstituted C 3 to C 6 cycloalkyl, substituted or unsubstituted C 3 to C 6 cycloalkenyl, substituted or unsubstituted Can be a monovalent group selected from the group consisting of C 3 to C 6 cycloalkynyls, substituted or unsubstituted amino, and substituted or unsubstituted C 1 to C 5 alkoxy.
  • the organic group A PEG has the following formulas (V-1-1), (VI-1-1), (VII-1-1), (VII-1-2), (VII-2- 1) or (VIII-1-1): [During the ceremony, n has the same meaning as the definition of n in formula (III). n'has the same meaning as the above definition for n in formula (III). * Is the connection position with L n in the formula (AI). ] It can be a modifying group represented by.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 60 kDa or 80 kDa.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 40 kDa.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 60 kDa or 80 kDa.
  • the PEG group has a total weight average molecular weight of 50 kDa.
  • (CH 2 CH 2 O) n ethylene oxide units may have a weight average molecular weight of 40kDa in total, of ethylene oxide units (CH 2 CH 2 O) n ' , the weight average of 10kDa in total Has a molecular weight.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 40 kDa.
  • (CH 2 CH 2 O) n ethylene oxide units may have a weight average molecular weight of 30kDa in total, of ethylene oxide units (CH 2 CH 2 O) n ' , the weight average of 10kDa in total Can have a molecular weight.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 60 kDa.
  • (CH 2 CH 2 O) n ethylene oxide units may have a weight average molecular weight of 50kDa in total, of ethylene oxide units (CH 2 CH 2 O) n ' , the weight average of 10kDa in total Can have a molecular weight.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 80 kDa.
  • (CH 2 CH 2 O) n ethylene oxide units may have a weight average molecular weight of 70kDa in total, of ethylene oxide units (CH 2 CH 2 O) n ' , the weight average of 10kDa in total Can have a molecular weight.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 40 kDa.
  • n is an integer 1.
  • the nitrogen atom of the ⁇ -amino group of peptide B forms a covalent bond with the carbon atom of the carbonyl group.
  • n is an integer greater than or equal to 1 and ** is the bonding position of the R 3, R 3 'or CH, # Is the connection position with O.
  • Heterocycloalkyl substituted or unsubstituted C 7 to C 20 cycloalkyl alkyl, substituted or unsubstituted 3 to 6-membered heterocycloalkyl-C 1 to C 20 alkyl, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 aryl , Substituted or unsubstituted C 5 to C 20 arylalkyl, substituted or unsubstituted 5 to 15 membered heteroaryl, or substituted or unsubstituted 5 to 15 membered heteroaryl-C 1 to C 20 alkyl, or substituted.
  • R 2 is bonded, substituted or unsubstituted C 1 to C 20 alkylene, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkenylene, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkynylene, substituted or unsubstituted C 3 to C 20 cycloalkylene, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 cycloalkenylene, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 cycloalkynylene, substituted or unsubstituted 3- to 6-membered heterocycloalkylene, substituted or unsubstituted.
  • C 7 to C 20 cycloalkylalkylenes substituted or unsubstituted 3- to 6-membered heterocycloalkyl-C 1 to C 20 alkylenes, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 arylene, substituted or unsubstituted C 5 ⁇ C 20 arylalkylene, substituted or unsubstituted 5-15 membered heteroarylene, or a substituted or unsubstituted 5-15 membered heteroaryl -C 1 ⁇ C 20 alkylene (wherein the group is one or more hetero Atomic, amide group (-CO-NH-), ester group (-CO-O-), or urethane group (-O-CO-NH-) may be included), amide group (-CO-NH-), It is an ester group (-CO-O-) or a urethane group (-O-CO-NH-).
  • R 3 , R 3'and R 3'' are independently coupled, substituted or unsubstituted C 1 to C 20 alkylene, substituted or unsubstituted C 2 to C 20 alkenylene, substituted or unsubstituted C. 2 to C 20 alkynylene, substituted or unsubstituted C 3 to C 20 cycloalkylene, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 cycloalkenylene, substituted or unsubstituted C 4 to C 20 cycloalkynylene, substituted or unsubstituted.
  • A may be referred to as an organic group containing one or more polyethylene glycols and having an ether group at the end binding side with the linking group L (hereinafter referred to as "organic group A PEVO").
  • n is an integer 1.
  • the nitrogen atom of the ⁇ -amino group of peptide B is covalently bonded to the carbon atom of the carbonyl group.
  • a urethane bond is formed by an oxygen atom derived from the ether group of the organic group A PEVO , a carbonyl group, and an ⁇ -amino group at the N-terminal of peptide B.
  • the above-mentioned peptide complex having a urethane bond may be referred to as a "urethane-linked adrenomedulin derivative".
  • the organic group A PEPO can be a group represented by the following formula (XI-1-1), (XII-1-1) or (XII-2-1). CH 3 O- (CH 2 CH 2 O) n- * (XI-1-1) [During the ceremony, n has the same meaning as the definition of n in formula (III). n'has the same meaning as the definition for n, and has the same meaning. * Is the connection position with L n in the formula (AI). ] It is a modifying group represented by.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 60 kDa or 80 kDa.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 60 kDa or 80 kDa.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 40 kDa.
  • (CH 2 CH 2 O) n ethylene oxide units may have a weight average molecular weight of 30kDa in total, of ethylene oxide units (CH 2 CH 2 O) n ' , the weight average of 10kDa in total Can have a molecular weight.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 60 kDa.
  • (CH 2 CH 2 O) n ethylene oxide units may have a weight average molecular weight of 50kDa in total, of ethylene oxide units (CH 2 CH 2 O) n ' , the weight average of 10kDa in total Can have a molecular weight.
  • the PEG group can have a total weight average molecular weight of 80 kDa.
  • (CH 2 CH 2 O) n ethylene oxide units may have a weight average molecular weight of 70kDa in total, of ethylene oxide units (CH 2 CH 2 O) n ' , the weight average of 10kDa in total Can have a molecular weight.
  • A is selected from the group consisting of a palmitoyl group, a polyethylene glycol group, a polyethylene glycol group, and an organic group containing at least one polyethylene glycol group, where L comprises a complex atom. It is a divalent hydrocarbon group, and n is an integer 1.
  • the divalent hydrocarbon group containing the complex atom includes a hydrocarbon group having a nitrogen atom or an oxygen atom such as an oxo (carbonyl) group, a thiocarbonyl group, a carbamate group or a carboxylicimideyl group in the structure. included.
  • the peptide complex represented by the formula (AI) is subjected to a metabolic reaction in vivo such as hydrolysis. It can be cleaved at the portion of the linking group L of valence to release adrenomedulin or a modified version thereof having adrenomedulin activity.
  • a linking group L that can be used in a release adrenomedullin derivative is 1-oxo-1,6-hexanediyl.
  • the modifying group A is the Fc region of an immunoglobulin (hereinafter sometimes referred to as "modifying group A Fc ”) and L is a linking group consisting of a peptide having an arbitrary amino acid sequence.
  • n is an integer 1.
  • the Fc region of the immunoglobulin used as the modifying group A Fc can be the Fc region of immunoglobulin G1 (IgG1) or the Fc region of immunoglobulin G4 (IgG4).
  • a fusion protein in which the Fc region of an immunoglobulin is linked to a specific protein or peptide has a longer half-life in the subject's body when administered to the subject than the parent compound protein or peptide. It is known that it can be done.
  • the Fc region of the immunoglobulin is derived from human or non-human mammals (eg, warm-blooded animals such as pigs, dogs, cows, rats, mice, guinea pigs, rabbits, chickens, sheep, cats, monkeys, hamadryas baboons or chimpanzees). It can be the Fc region of an immunoglobulin. Fc regions of immunoglobulins derived from the same human or non-human mammals to which the inhibitory or restorative agents of the invention are applied can be used.
  • L is not limited, but, with p as the number of repetitions, (GGGS) p (p is an integer in the range of 2 to 10 or an integer in the range of 4 to 6), (GGGGS) p ( p is an integer in the range 2-6, or 3), (GGGS) p + GGGK (p is an integer in the range 1-9, or an integer in the range 3-5), or (GGGGS)
  • a linking group consisting of a peptide having an amino acid sequence of p + GGGGGK (p is an integer in the range of 1 to 5, or 2) can be used. In the amino acid sequence, the number of G and the number of repetitions p in the repeating unit can be appropriately changed.
  • L can be a linking group consisting of a peptide having the amino acid sequence of GGGGGSGGGGGS or GGGGGSGGGGGSGGGGGK.
  • the C-terminal carboxyl group of modifying group A Fc forms a peptide bond with the N-terminal ⁇ -amino group of linking group L, and the N-terminal ⁇ -amino group of peptide B and the linking group.
  • the C-terminal carboxyl group of L forms a peptide bond.
  • the Fc-linked adrenomedulin derivative has a protein or polypeptide structure as a whole.
  • the counterion of the salt of the peptide complex represented by the formula (AI) is not limited, but is, for example, sodium ion, potassium ion, calcium ion, magnesium ion, or substituted or unsubstituted ammonium ion.
  • the solvent capable of forming a solvent mixture with the peptide complex represented by the formula (AI) or a salt thereof is not limited, but for example, water, methanol, ethanol, 2-propanol (isopropyl alcohol), and the like. It can be an organic solvent such as dimethyl sulfoxide (DMSO), acetic acid, ethanolamine, acetonitrile or ethyl acetate.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • acetic acid acetic acid
  • ethanolamine acetonitrile
  • ethyl acetate ethyl acetate
  • the peptide complex represented by the formula (AI) includes not only the peptide complex itself described above or below, but also a protected form thereof.
  • protected form means a form in which a protecting group is introduced into one or more functional groups (for example, a side chain amino group of a lysine residue).
  • the "protecting group” is a group introduced into a specific functional group in order to prevent the undesired progress of the reaction, and is quantitatively removed under the specific reaction conditions. It means a group that is substantially stable under the reaction conditions other than the above, that is, the reaction is inactive.
  • the protecting group capable of forming the protected form of the peptide complex is, but is not limited to, for example, t-butoxycarbonyl (Boc), 2-bromobenzyloxycarbonyl (BrZ), 9-fluorenylmethoxycarbonyl.
  • Biphenyl isopropyloxycarbonyl, 2- (3,5-dimethoxyphenyl) isopropyloxycarbonyl, p-phenylazobenzyloxycarbonyl, triphenylphosphonoethyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethyloxycarbonyl, t-amyloxyoxy Carbonyl, diisopropylmethyloxycarbonyl, isopropyloxycarbonyl, ethyloxycarbonyl, allyloxycarbonyl, 2-methylsulfonylethyloxycarbonyl, 2,2,2-trichloroethyloxycarbonyl, cyclopentyloxycarbonyl, cyclohexyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, Isobornyloxycarbonyl, benzenesulfonyl, mesityrensulfonyl, methoxytrimethylphenylsulfonyl, 2-nitrobenzenesul
  • the peptide complex represented by the formula (AI) also includes individual enantiomers and diastereomers of the peptide complex, as well as mixtures of stereoisomers of the peptide complex, such as racemates.
  • adrenomedullin or a modified product thereof can be used not only in the form of adrenomedullin or its modified product itself, but also in the form of a salt. If the adrenomedullin or a modification thereof is in the form of a salt, it can be a pharmaceutically acceptable salt.
  • the counter ion of the salt of adrenomedulin or a modified product thereof is not limited, but is, for example, a cation such as a sodium ion, a potassium ion, a calcium ion, a magnesium ion, or a substituted or unsubstituted ammonium ion, or a chloride.
  • adrenomedullin, a modified product thereof or a salt thereof may be in the form of a solvate.
  • the solvent that can form the solvate is, but is not limited to, water, or, for example, methanol, ethanol, 2-propanol (isopropyl alcohol), dimethyl sulfoxide (DMSO), acetic acid, ethanolamine, acetonitrile or ethyl acetate.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • acetic acid ethanolamine
  • acetonitrile or ethyl acetate can be an organic solvent such as
  • Adrenomedullin, a modified product thereof or a salt thereof used in the present invention can be produced by means usually used in the art.
  • the production of adrenomedullin, a modified product thereof or a salt thereof may be carried out using, for example, a solid-phase or liquid phase peptide synthesis method, and a natural peptide is obtained from a human or non-human mammalian tissue or cell capable of producing adrenomedullin. You may use the method of purifying.
  • a transformation system such as Escherichia coli or Saccharomyces cerevisiae using DNA encoding adrenomedulin in human or non-human mammals capable of producing adrenomedulin (eg, SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10 or 12). You may use the method of expressing a large amount of recombinant protein in. Alternatively, a peptide prepared in advance may be purchased and used.
  • the two cysteine residues in the amino acid sequence form a disulfide bond.
  • Peptides can be obtained.
  • the disulfide bond formed between two cysteine residues in the amino acid sequence was replaced with an ethylene group, whereby the disulfide bond was replaced with an ethylene group.
  • the disulfide reaction and the substitution reaction with an ethylene group can be carried out under the conditions usually used in the art.
  • the active ingredient may include an agonist of the adrenomedulin receptor.
  • adrenomedulin but also analogs of cAMP, an intracellular messenger produced by activation of adrenomedulin receptors, cause DNA damage in normal cells due to anticancer agents or oxidative stress. It has been found to have an action of promoting suppression or its repair. From this, the suppression or repair of intracellular DNA damage by adrenomedulin is caused by the activation of the adrenomedullin by binding to the adrenomedulin receptor in the cell, and the resulting intracellular signal transduction. was shown. This supports that not only adrenomedulin but also adrenomedulin receptor agonists have an activity of promoting suppression or repair of DNA damage in cells.
  • CRLR calcium receptor-like receptor
  • RAMP-2 receptor activity regulatory protein-2
  • adrenomedulin receptors CRLR (calcitonin receptor-like receptor), RAMP-2 (receptor activity regulatory protein-2) and the like are known as adrenomedulin receptors.
  • the agonist of the adrenomedulin receptor that can be used in the present invention is not particularly limited as long as it is a substance that binds to the adrenomedulin receptor and produces an intracellular signal transmitter such as cAMP in the cell.
  • the agent for suppressing or repairing DNA damage can suppress or repair DNA damage in cells existing in vivo or cells existing outside the living body.
  • the cells are not particularly limited, and are in vivo of animals such as humans and non-human mammals (eg, mice, rats, guinea pigs, rabbits, chickens, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, hamadryas baboons, chimpanzees, etc.). It may be a cell present in or a cultured cell derived from these animals.
  • the cell may be a cell derived from a blood vessel or a cell derived from a kidney. Examples of cells derived from blood vessels include vascular endothelial cells. Tubular cells can be exemplified as cells derived from the kidney.
  • DNA damage in the cells targeted by the present invention is not particularly limited.
  • DNA damage includes DNA damage caused by intrinsic factors such as nuclear DNA replication during cell division and damage caused by active oxygen produced as a by-product of cell metabolism, and DNA damage caused by environment-derived factors.
  • DNA damage caused by environmental factors includes irradiation with ultraviolet rays and electromagnetic waves, DNA damage caused by DNA mutagenic substances such as biotoxins, tobacco, and chemical substances, cancer chemotherapy and radiotherapy, and deficiency in cells and tissues. Examples include blood hypoxia, hyperoxygen environment, lifestyle diseases, excessive exercise and lack of exercise, and DNA damage due to chronic inflammation. According to the present invention, it is possible to suppress or repair DNA damage in cells caused by these various factors.
  • DNA damage In addition to cell death, apoptosis, cell division arrest, cell senescence, and canceration, DNA damage also affects cell functions such as changes in genetic information and transcriptional dysregulation. According to the present invention, it is expected that cell function and homeostasis are maintained by preventing or suppressing DNA damage or promoting the repair system thereof.
  • the agent for suppressing or repairing DNA damage in cells according to the present invention may contain at least the above active ingredient and may further contain other components as appropriate.
  • the ingredients other than the active ingredient include pharmaceutically acceptable carriers, flavoring agents, excipients, vehicles, preservatives, stabilizers, binders and the like.
  • the active ingredient in the embodiment in which the agent for suppressing or repairing DNA damage in cells according to the present invention is administered to a living body and used for suppressing or repairing DNA damage in cells in the living body, the active ingredient. It can be formulated into an orally administrable form such as a sugar-coated tablet, a capsule, an elixir, a microcapsule, etc., or the active ingredient is pharmaceutically other than water. It can be formulated into a parenterally administrable form (eg, an injection), such as a sterile solution or suspension in combination with an acceptable solution. Such a preparation can be produced by mixing the active ingredient with other ingredients in a generally accepted unit dose form required for pharmaceutical practice.
  • an orally administrable form such as a sugar-coated tablet, a capsule, an elixir, a microcapsule, etc.
  • the active ingredient is pharmaceutically other than water.
  • a parenterally administrable form eg, an injection
  • Such a preparation can be produced by mixing the active
  • the amount of the active ingredient in these formulations is such that an appropriate volume in the indicated range can be obtained. Further, it may further contain other components useful as a medicine.
  • the dose of the active ingredient when administered to humans varies depending on the symptoms and the like, but is typically 0.1 to 100 mg / 60 kg / day when administered intravenously.
  • the adrenomedulin used in the following experiments is derived from human and has the amino acid primary sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • the cysteine residue at position 16 and the cysteine residue at position 21 are disulfide bonds.
  • Cisplatin is a DNA cross-linking drug that is reabsorbed in the renal tubules after renal glomerular filtration and directly damages tubular cells.
  • an osmotic pump filled with saline (Cont) was placed subcutaneously in the mice.
  • cisplatin 16 mg / kg body weight was intraperitoneally administered to three groups of mice to prepare a tubular disorder model.
  • physiological saline was intraperitoneally administered as a negative control group (NC).
  • NC negative control group
  • a part of the kidney was fixed with 4% paraformaldehyde, embedded in paraffin, and then sliced to prepare a tissue specimen.
  • the tissue specimen was prepared with anti-Phospho-Histone H2A.
  • Immunohistochemical staining was performed with an X (Ser139) antibody (pH 2AX, Cell Signaling Technology), and DNA damage due to double-strand breaks in tubular cells was examined.
  • Urine albumin / creatinine was measured and renal tubular dysfunction was examined.
  • RNA is extracted from a part of the kidney, and using quantitative PCR analysis, typical inflammatory cytokines Mcp1 / Ccl2 (monocite chemotactive protein-1 / CC motif chemokine led 2), Tumor necrosis Changes in gene expression of ⁇ ) and Il1b (Interleukin-1 ⁇ ) were examined.
  • FIG. 2 shows the results of immunohistological analysis (immunohistochemical staining of pH2AX).
  • Tubular cells were given pH 2A by administration of cisplatin.
  • ADM adrenomedulin
  • Figure 3 shows the measurement results of urinary albumin / creatinine.
  • the amount of urinary albumin / creatinine increased significantly, and renal tubular function decreased.
  • the administration of adrenomedullin decreased the amount of urinary albumin / creatinine, and the administration group of adrenomedullin 5 ⁇ g / kg / min showed a significant decrease in the amount of urinary albumin / creatinine.
  • Figure 4 shows the results of expression analysis of the inflammatory cytokine gene.
  • the gene expression of Mcp1 / Ccl2, Tnfa, and Il1b was increased, and the induction of tissue inflammation was observed.
  • the adrenomedulin-administered group a significant decrease in the expression of these genes was observed at the time of administration of 5 ⁇ g / kg / min or in a dose-dependent manner.
  • adrenomedullin suppresses DNA damage in renal tubular cells, and subsequently reduces functional deterioration and inflammation. Became clear.
  • Example 2 Reduction effect of renal tubular cell DNA damage by adrenomedulin (in vitro) (Experiment 1) Effect of reducing DNA damage by cisplatin The effect of ADM on the DNA damage response and its mechanism of action were investigated using mouse tubular-derived (MCT) cell lines. Since adrenomedulin is easily decomposed and adsorbed in a container in a cell culture solution, and there are restrictions on long-term experiments, cAMP analog 8-Bromodenocine 3 which is an intracellular signal transmitter (second messenger) of adrenomedullin 3 The study was carried out using', 5'-cyclic monophosphate (8-Br-cAMP).
  • MCT cells were seeded in cell culture dishes, cultured in a CO 2 incubator for 24 hours under normal culture conditions, and then cisplatin was added at a final concentration of 3 ⁇ M. Thirty minutes prior to cisplatin addition, pretreatment was performed with 8-Br-cAMP (final concentration 0.3 mM) or phosphate-buffered saline (PBS). After the addition of cisplatin, the cells were further cultured in a CO 2 incubator for 24 hours before analysis.
  • 8-Br-cAMP final concentration 0.3 mM
  • PBS phosphate-buffered saline
  • FIG. 6 shows the result of fluorescent immunostaining (image converted to black and white display).
  • the lower cAMP (+) in FIG. 6 shows the results of immunostaining of cultured cells treated with 8-Br-cAMP 30 minutes before the addition of cisplatin, and the upper 8-Br-cAMP (-) in FIG. 6 shows the results of immunostaining of cultured cells with the addition of cisplatin.
  • the results of immunostaining of cultured cells treated with PBS 30 minutes before are shown.
  • the final concentration of cisplatin (CDDP) addition was set to 3 ⁇ M or 10 ⁇ M under the same MCT cell culture conditions as described above, and the final concentration was set to 3 ⁇ M or 10 ⁇ M for cisplatin-induced DNA damage.
  • the action of 8-Br-cAMP (final concentration 0.3 mM) was examined. MCT cells were cultured under the same conditions except that cisplatin and 8-Br-cAMP were not added as negative controls.
  • FIG. 8 shows the measurement results of the cell viability of the cells after culturing. Cisplatin (10 ⁇ M) reduced cell viability. In contrast, pretreatment with 8-Br-cAMP was found to significantly improve their cell viability.
  • adrenomedullin activates the DNA repair function at least via cAMP and reduces cell death against cisplatin-induced DNA damage and cytotoxicity.
  • Example 2 Effect of reducing oxidative stress DNA damage
  • hydrogen peroxide solution H 2 O 2
  • CDDP cisplatin
  • MCT cells were cultured under the same conditions except that they were added as described above (Fig. 9). Specifically, 8-Br-cAMP (final concentration 0.3 mM) or phosphate buffered saline (phospate-) 30 minutes before the addition of hydrogen peroxide solution (H 2 O 2) (final concentration 0.3 mM).
  • FIG. 10 shows the result of fluorescent immunostaining (image converted to black and white display).
  • the lower 8-Br-cAMP (+) in FIG. 10 shows the results of immunostaining of cultured cells treated with 8-Br-cAMP 30 minutes before the addition of H 2 O 2
  • the upper 8-Br-cAMP in FIG. 10 shows the results.
  • (-) Shows the results of immunostaining of cultured cells treated with PBS 30 minutes before the addition of H 2 O 2.
  • the results of 8-Br-cAMP (+) indicates that the H 2 O 2 induced cell number of DNA damage was reduced in pretreatment 8-Br-cAMP.
  • Example 3 Reduction effect of adrenomedullin on human cell DNA damage (in vitro) (Experiment 1) Effect of reducing DNA damage by H 2 O 2 Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) are used instead of the MCT cells of Example 2 above for the DNA damage response in human cells. The effect of adrenomedulin and its mechanism of action were investigated.
  • 8-Br-cAMP was used to examine the effect of adrenomedullin.
  • HUVEC was seeded in a cell culture dish, cultured in a CO 2 incubator for 24 hours under normal culture conditions, and then H 2 O 2 was added to a final concentration of 1.0 mM.
  • 8-Br-cAMP final concentration 0.3 mM
  • FIG. 12 shows the result of fluorescent immunostaining (image converted to black and white display).
  • the lower 8-Br-cAMP (+) in FIG. 12 shows the results of immunostaining of cultured cells treated with 8-Br-cAMP 30 minutes before the addition of H 2 O 2
  • the upper 8-Br-cAMP in FIG. 12 shows the results.
  • (-) Shows the results of immunostaining of cultured cells treated with PBS 30 minutes before the addition of H 2 O 2.
  • the results of 8-Br-cAMP (-) showed that HUVEC cells were given pH 2 A. by the addition of H 2 O 2. It indicates that X-positive DNA damage was observed.
  • the results of 8-Br-cAMP (+) indicates that the H 2 O 2 induced cell number of DNA damage was reduced in pretreatment 8-Br-cAMP.

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Abstract

本発明は、生体内又は生体外の各種因子により生じる細胞のＤＮＡ損傷を抑制又は修復することを解決すべき課題とする。　本発明は、アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、アドレノメデュリン受容体のアゴニストを含有する、細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤に関する。

Description

ＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤
　本発明は、生体内又は生体外の各種因子により生じる細胞のＤＮＡ損傷を抑制又は修復するための、ＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤に関する。
　アドレノメデュリン（ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ、以下「ＡＭＤ」とも記載する）は、１９９３年に褐色細胞組織より単離及び同定された生理活性ペプチドである（非特許文献１）。発見当初、ＡＭＤは強力な血管拡張性の降圧作用を発揮することが判明した。例えば、特許文献１は、ヒトＡＭのアミノ酸配列を含む血圧降下作用を有するペプチドを記載する。その後の研究により、ＡＭＤは抗炎症作用、抗酸化ストレス作用、抗アポトーシス作用等の薬理作用を発揮することが明らかになっている。
　生体において、通常の細胞分裂時の核ＤＮＡ複製においてもＤＮＡ損傷は起こり、修復機構が起動する。一方、抗がん剤の多くは細胞中の核ＤＮＡを標的として傷害性に作用し、細胞が有するＤＮＡ修復能力を超える損傷を来したときに細胞死がもたらされる。抗がん剤の作用は細胞特異性が低いため、がん細胞のみならず正常細胞も細胞死をもたらす。抗がん剤だけでなく、紫外線や放射線、化学物質等によるＤＮＡ損傷に加え、様々な病態、例えば組織の虚血再灌流や高酸素環境、肥満や糖尿病等の生活習慣病や慢性炎症等における酸化的ＤＮＡ損傷も、細胞死やアポトーシス、あるいは細胞老化、がん化を引き起こすことが知られている。
特許第２７７４７６９号公報
Kitamura K, Kangawa K, Kawamoto M, Ichiki Y, Nakamura S, Matsuo H, Eto T. Adrenomedullin: a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromocytoma. Biochem Biophys Res Commun, 1993年4月30日, 第192(2)巻, pp. 553-60
　様々な原因により生じる細胞でのＤＮＡ損傷は、生物細胞の遺伝情報の変化や損失をもたらすだけでなく、転写制御や細胞内機能等に対しても重大かつ長期間にわたって影響を与える。ＤＮＡ損傷を抑制又は修復することができれば医療において有益であると考えられるが、従来、細胞中でのＤＮＡ損傷を抑制又は修復するために有効な成分は見出されていない。
　そこで、本発明は、生体内又は生体外の細胞において各種因子により生じるＤＮＡ損傷を抑制又は修復することを解決すべき課題とする。
　本発明者らは、驚くべきことに、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン受容体の活性化により生じる細胞内情報伝達物質であるｃＡＭＰのアナログが、抗がん剤又は酸化ストレスによる正常細胞のＤＮＡ損傷を抑制またはその修復を促進する作用を有することを見出し、以下の本発明を完成するに至った。
（１）アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト
を含有する、細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤。
（２）アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体が、
（Ｉ）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチド、
（ＩＩ）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、且つ該アミノ酸配列中の２個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチド、
（ＩＩＩ）前記（ＩＩ）のペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（ＩＶ）前記（Ｉ）～（ＩＩＩ）のいずれかのペプチドにおいて、１～１５個のアミノ酸残基が欠失、置換もしくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（Ｖ）前記（Ｉ）～（ＩＶ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端がアミド化されているペプチド、及び
（ＶＩ）前記（Ｉ）～（ＩＶ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端にグリシン残基が付加されているペプチド
からなる群より選択されるペプチドである（１）に記載の細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤。
（３）アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体が、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号１のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号３のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号５のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号７のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号９のアミノ酸配列からなり、且つ１４位のシステイン残基と１９位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号１１のアミノ酸配列からなり、且つ１４位のシステイン残基と１９位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｇ）前記（ａ）～（ｆ）のいずれかのペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（ｈ）前記（ａ）～（ｇ）のいずれかのペプチドにおいて、１～１５個のアミノ酸残基が欠失、置換もしくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（ｉ）前記（ａ）～（ｈ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端がアミド化されているペプチド；及び
（ｊ）前記（ａ）～（ｈ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端にグリシン残基が付加されているペプチド；
からなる群より選択されるペプチドである、（１）又は（２）に記載の細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤。
（４）生体内又は生体外の細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復に用いるための、
　アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト。
（５）ＤＮＡ損傷により生じる疾患又は状態の、予防又は治療に用いるための、
　アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト。
（６）アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト
の、生体内又は生体外の細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復に用いる薬剤の製造のための使用。
（７）アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト
の、ＤＮＡ損傷により生じる疾患又は状態の、予防又は治療に用いる薬剤の製造のための使用。
（８）生体内又は生体外の細胞に、ＤＮＡ損傷を抑制又は修復する有効量の、
　アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト
を投与すること、及び、
　前記細胞においてＤＮＡ損傷を抑制又は修復すること、
を含む、生体内又は生体外の細胞中のＤＮＡ損傷を抑制又は修復する方法。
（９）ＤＮＡ損傷により生じる疾患又は状態の予防又は治療を必要とする対象に、ＤＮＡ損傷を抑制又は修復する有効量の、
　アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト
を投与すること、及び、
　前記対象においてＤＮＡ損傷を抑制又は修復すること、
を含む、ＤＮＡ損傷により生じる疾患又は状態を予防又は治療する方法。
　前記（４）～（９）のいずれか１つにおいて、アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体は、好ましくは、前記（２）に記載の前記（Ｉ）～（ＶＩ）からなる群より選択されるペプチドである。
　前記（４）～（９）のいずれか１つにおいて、アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体は、好ましくは、前記（３）に記載の前記（ａ）～（ｊ）からなる群より選択されるペプチドである。
　前記（４）、（６）又は（８）において、前記細胞は、好ましくは哺乳動物細胞であり、特に好ましくはヒト細胞である。
　前記（５）、（７）又は（９）において、前記ＤＮＡ損傷により生じる疾患又は状態は、好ましくは哺乳動物における疾患又は状態であり、特に好ましくはヒトにおける疾患又は状態である。
　前記（５）、（７）又は（９）において、前記対象は、好ましくは哺乳動物であり、特に好ましくはヒトである。
　前記（４）、（６）又は（８）において、前記細胞は、好ましくは血管に由来する細胞、例えば血管内皮細胞、である。
　前記（４）、（６）又は（８）において、前記細胞は、好ましくは腎臓に由来する細胞、例えば、尿細管細胞、である。
　前記（５）、（７）又は（９）において、前記ＤＮＡ損傷により生じる疾患又は状態は、好ましくは血管又は血管を含む臓器における疾患又は状態であり、例えば、血管の機能障害である。
　前記（５）、（７）又は（９）において、前記ＤＮＡ損傷により生じる疾患又は状態は、好ましくは腎臓における疾患又は状態であり、例えば、尿細管の機能障害である。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０１９－２２２０５０号の開示内容を包含する。
　本発明によれば、生体内又は生体外の細胞において各種因子により生じるＤＮＡ損傷を抑制又は修復することが可能である。
図１は、実施例１のイン・ビボ実験の概要を説明するための図である。 図２は、実施例１での抗ｐＨ２Ａ．Ｘ抗体を用いた免疫組織学的解析の結果を示す。 図３は、実施例１での尿アルブミン／クレアチニンの測定結果を示す。 図４は、実施例１での炎症性サイトカイン遺伝子の発現解析の結果を示す。 図５は、実施例２実験１のイン・ビトロ実験の概要を説明するための図である。 図６は、実施例２実験１での抗ｐＨ２Ａ．Ｘ抗体を用いた蛍光免疫染色の結果を示す。図６の上段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）はシスプラチン添加の３０分前にＰＢＳで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。図６の下段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）はシスプラチン添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。 図７は、実施例２実験１での、ＤＮＡ修復因子ＢＲＣＡ１、ＴＰ５３ＢＰ１の遺伝子の発現解析の結果を示す。 図８は、実施例２実験１での、培養後の細胞の細胞生存率の測定結果を示す。 図９は、実施例２実験２のイン・ビトロ実験の概要を説明するための図である。 図１０は、実施例２実験２での抗ｐＨ２Ａ．Ｘ抗体を用いた蛍光免疫染色の結果を示す。図１０の上段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）はＨ２Ｏ２添加の３０分前にＰＢＳで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。図１０の下段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）はＨ２Ｏ２添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。 図１１は、実施例３のイン・ビトロ実験の概要を説明するための図である。 図１２は、実施例３での抗ｐＨ２Ａ．Ｘ抗体を用いた蛍光免疫染色の結果を示す。図１２の上段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）はＨ２Ｏ２添加の３０分前にＰＢＳで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。図１２の下段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）はＨ２Ｏ２添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。
　以下、本発明を実施するための形態について具体的に説明する。
＜アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩＞
　本発明に係る、細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤の１以上の実施形態では、有効成分として、アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩を含む。
　本発明においてアドレノメデュリン（ＡＭＤ）は、ヒト褐色細胞組織より単離及び同定されたヒト由来のペプチド（配列番号１）だけでなく、ブタ（配列番号３）、イヌ（配列番号５）、ウシ（配列番号７）、ラット（配列番号９）又はマウス（配列番号１１）等の他の非ヒト哺乳動物（例えば温血動物）由来のペプチド（オーソログ）であってもよい。生体内において、これらのペプチドは、そのアミノ酸配列中の２個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しており、且つＣ末端がアミド化されている。本明細書において、前記ペプチドであってジスルフィド結合及びＣ末端アミド基を有するものを、単に「アドレノメデュリン」と記載する場合がある。本発明は、前記のいずれのペプチドに対しても適用することができる。
　本明細書において、「Ｃ末端のアミド化」は、生体内におけるペプチドの翻訳後修飾の一態様を意味し、具体的には、ペプチドのＣ末端アミノ酸残基の主鎖カルボキシル基がアミド基の形態へ変換される反応を意味する。また、本明細書において、「システイン残基のジスルフィド結合の形成」又は「システイン残基のジスルフィド化」は、生体内におけるペプチドの翻訳後修飾の一態様を意味し、具体的には、ペプチドのアミノ酸配列中の２個のシステイン残基がジスルフィド結合（－Ｓ－Ｓ－）を形成する反応を意味する。生体内で産生される多くの生理活性ペプチドは、はじめ分子量のより大きな前駆体タンパク質として生合成され、これが細胞内移行の過程で、Ｃ末端アミド化及び／又はシステイン残基のジスルフィド化のような翻訳後修飾反応を受けて、成熟した生理活性ペプチドとなる。Ｃ末端のアミド化は、通常は、前駆体タンパク質に対し、Ｃ末端アミド化酵素が作用することによって進行する。Ｃ末端アミド基を有する生理活性ペプチドの場合、その前駆体タンパク質においては、アミド化されるＣ末端カルボキシル基にＧｌｙ残基が結合しており、該Ｇｌｙ残基がＣ末端アミド化酵素によってＣ末端アミド基に変換される。また、前駆体タンパク質のＣ末端側プロペプチドには、例えばＬｙｓ－Ａｒｇ又はＡｒｇ－Ａｒｇ等の塩基性アミノ酸残基の組合せの繰返し配列が存在する（水野、生化学第６１巻、第１２号、１４３５～１４６１頁（１９８９））。システイン残基のジスルフィド化は、酸化的条件下で進行し得る。生体内においては、システイン残基のジスルフィド化は、通常は、前駆体タンパク質に対し、タンパク質ジスルフィド異性化酵素が作用することによって進行する。
　本発明において、有効成分として含有されるアドレノメデュリンの修飾体は、アドレノメデュリン活性、具体的には細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復活性、を有するアドレノメデュリンの修飾体である。本発明において、「アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体」は、アドレノメデュリンであるか、アドレノメデュリン活性の少なくとも一部を保持するアドレノメデュリンの修飾体であることを意味し、「アドレノメデュリンの修飾体」は、前記で説明したアドレノメデュリンに含まれるアミノ酸の１箇所から数箇所が、別の化学物質との化学反応により修飾されたペプチドを意味する。
　前記アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体は、
（Ｉ）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチド、
（ＩＩ）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、且つ該アミノ酸配列中の２個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチド、
（ＩＩＩ）前記（ＩＩ）のペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（ＩＶ）前記（Ｉ）～（ＩＩＩ）のいずれかのペプチドにおいて、１～１５個のアミノ酸残基が欠失、置換もしくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
（Ｖ）前記（Ｉ）～（ＩＶ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端がアミド化されているペプチド、及び
（ＶＩ）前記（Ｉ）～（ＩＶ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端にグリシン残基が付加されているペプチド
からなる群より選択されるペプチドであることが好ましい。
　本明細書において「アドレノメデュリン活性」とは、具体的には、細胞中のＤＮＡ損傷を抑制又は修復する活性を指す。
　前記（Ｉ）～（ＶＩ）のペプチドにおいて、前記（Ｖ）に包含される、アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、Ｃ末端がアミド化されており、且つ該アミノ酸配列中の２個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチドは、成熟した天然型アドレノメデュリンに相当する。前記（Ｉ）のアドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチドは、Ｃ末端アミド化及びシステイン残基のジスルフィド化の翻訳後修飾を受ける前の（すなわち未成熟な）形態の天然型アドレノメデュリンに相当する。前記（Ｉ）～（ＶＩ）のペプチドにおいて、前記で説明したペプチドを除く他のペプチドは、アドレノメデュリンの修飾体に相当する。
　前記（ＩＩ）のペプチドは、前記（Ｉ）のペプチドの２個のシステイン残基のチオール基を空気酸化するか、又は適切な酸化剤を用いて酸化してジスルフィド結合に変換することにより、形成させることができる。前記（ＩＩ）のペプチドの立体構造は、天然型アドレノメデュリンの立体構造と実質的に略同等となる。これにより、アドレノメデュリンの修飾体のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　前記（ＩＩＩ）のペプチドは、前記（ＩＩ）のペプチドのジスルフィド結合をエチレン基に変換することにより、形成させることができる。ジスルフィド結合からエチレン基への置換は、当該技術分野で周知の方法により、行うことができる（Ｏ．　Ｋｅｌｌｅｒら，　Ｈｅｌｖ．　Ｃｈｉｍ．　Ａｃｔａ，　１９７４年，　第５７巻，　ｐ．　１２５３）。前記（ＩＩＩ）のペプチドを用いることにより、該ペプチドの立体構造を安定化させることができる。それ故、前記（ＩＩＩ）のペプチドからなるアドレノメデュリンの修飾体は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　前記（ＩＶ）のペプチドにおいて、欠失、置換もしくは付加されているアミノ酸残基は、１～１２個の範囲であることが好ましく、１～１０個の範囲であることがより好ましく、１～８個の範囲であることが更に好ましく、１～５個の範囲であることが特に好ましく、１～３個の範囲であることが特に好ましく、１又は２個であることが特に好ましく、１個であることが最も好ましい。好適な前記（ＩＶ）のペプチドは、前記（Ｉ）～（ＩＩＩ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｎ末端側から１～１５位、１～１２位、１～１０位、１～８位、１～５位又は１～３位のアミノ酸が欠失されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチドである。前記好適なペプチドにおいて、１又は複数個（例えば、１～５個、１～３個、又は１もしくは２個）のアミノ酸が更に欠失、置換もしくは付加されていてもよい。前記（ＩＶ）のペプチドを用いることにより、該ペプチドのアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　前記（ＶＩ）のペプチドは、Ｃ末端アミド化酵素の作用によってＣ末端のグリシン残基がＣ末端アミド基に変換されて、前記（Ｖ）のペプチドに変換されることができる。それ故、前記（ＶＩ）のペプチドを対象に投与することにより、該対象の生体内において、一定時間経過後に、Ｃ末端アミド化されたペプチドを形成させることができる。これにより、前記（ＶＩ）のペプチドからなるアドレノメデュリンの修飾体は、生体内において、持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。
　前記アドレノメデュリン又はその修飾体は、より具体的には、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号１のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号３のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号５のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号７のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号９のアミノ酸配列からなり、且つ１４位のシステイン残基と１９位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号１１のアミノ酸配列からなり、且つ１４位のシステイン残基と１９位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
（ｇ）前記（ａ）～（ｆ）のいずれかのペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（ｈ）前記（ａ）～（ｇ）のいずれかのペプチドにおいて、１～１５個のアミノ酸残基が欠失、置換もしくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
（ｉ）前記（ａ）～（ｈ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端がアミド化されているペプチド；及び
（ｊ）前記（ａ）～（ｈ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端にグリシン残基が付加されているペプチド；
からなる群より選択されるペプチドであることができる。
　前記（ｈ）のペプチドにおいて、欠失、置換もしくは付加されているアミノ酸残基は、１～１２個の範囲であることが好ましく、１～１０個の範囲であることがより好ましく、１～８個の範囲であることが更に好ましく、１～５個の範囲であることが特に好ましく、１～３個の範囲であることが特に好ましく、１又は２個であることが特に好ましく、１個であることが最も好ましい。好適な前記（ｈ）のペプチドは、前記（ａ）～（ｇ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｎ末端側から１～１５位、１～１２位、１～１０位、１～８位、１～５位又は１～３位のアミノ酸が欠失されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチドである。前記好適なペプチドにおいて、１又は複数個（例えば、１～５個、１～３個、又は１もしくは２個）のアミノ酸が更に欠失、置換もしくは付加されていてもよい。前記（ｈ）のペプチドを用いることにより、該ペプチドのアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　アドレノメデュリン又はその修飾体の更なる形態としては、
式（ＡＩ）：
Ａ－Ｌｎ－Ｂ　（ＡＩ）
［式中、
　Ａは、修飾基であり、
　Ｌは、２価の連結基であり、
　ｎは、０又は１の整数であり、
　Ｂは、ペプチドであり、ペプチドＢは、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性の少なくとも一部を保持するアドレノメデュリンの修飾体であり、
　但し、ペプチドＢは、そのＮ末端アミノ基を介して修飾基Ａ又は連結基Ｌと結合している。］
で表されるペプチド複合体若しくはその塩、又はそれらの水和物が挙げられる。
　式（ＡＩ）において、修飾基Ａは、パルミトイル基、ポリエチレングリコール基、ミリストイル基、ペプチド基、糖基、少なくとも１個のポリエチレングリコール基を含む有機基（以下「有機基ＡＰＥＧ」と称する場合がある。）、及び免疫グロブリンのＦｃ領域からなる群より選択され得る。前記糖基は、単糖、二糖、オリゴ糖又は多糖から誘導される一価の基（例えば、グリコシル基）であり得る。前記ペプチド基は、ポリグリシン、ポリグルタミン酸、ポリリジン又はポリアスパラギン等から誘導される一価の基（例えば、Ｎ末端アミノ基、Ｃ末端カルボキシル基又は側鎖基を介して結合を形成する一価の基）であり得る。
　式（ＡＩ）において、２価の連結基Ｌは、炭化水素基又は任意のアミノ酸配列を有するペプチドからなる連結基であり得る。
　式（ＡＩ）中のペプチドＢの具体例としては、前記（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれかのペプチド或いは前記（ａ）～（ｈ）のいずれかのペプチドからなるペプチドが挙げられる。
　式（ＡＩ）において、ペプチドＢは、そのＮ末端の、α-アミノ基を介して修飾基Ａ又は連結基Ｌと結合している。前記の結合形態であることにより、式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体は、生体内において、天然型アドレノメデュリンと同等の活性を示し、当該活性を持続的に発現することができる。
　ある態様において、式（ＡＩ）中、修飾基Ａは、パルミトイル基、ポリエチレングリコール基、ポリエチレングリコール基、及び、少なくとも１個のポリエチレングリコール基を含む有機基からなる群より選択され、Ｌは炭化水素基である。前記炭化水素基は、置換又は非置換の２価の脂肪族炭化水素基、置換又は非置換の２価の脂環式基、若しくは置換又は非置換の２価の芳香族基から選択され得る。上記脂肪族炭化水素基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン基、Ｃ２～Ｃ１０アルケニレン基又はＣ２～Ｃ１０アルキニレン基であり得る。前記炭化水素基が、置換基を有する脂肪族炭化水素基、置換基を有する脂環式基、置換基を有する芳香族基である場合、置換基は、オキソ（カルボニル）基、チオカルボニル基、カルバメート基又はカルボンイミドイル基等の、ヘテロ原子を含む２価の基であり得る。ヘテロ原子を含む２価の基は、２価の連結基Ｌの一端又は両端に配置され得る。Ｌとして用い得る炭化水素基の具体例には、メチレン基（－ＣＨ２－）、オキソ（カルボニル）基（－Ｃ(＝Ｏ)－）、及び１－オキソ－１，６－ヘキサンジイル基が含まれる。
　ある態様において、式（ＡＩ）中、Ａはポリエチレングリコール基であり、Ｌは炭化水素基であり得る。前記ポリエチレングリコール基の平均分子量は、例えば約２００～４０，０００、約５００～２０，０００、約５００～１０，０００の範囲のであり得る。ポリエチレングリコール基の平均分子量が２００以上の場合、式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体は、生体内において、長時間に亘って持続的にアドレノメデュリン活性を発現することができる。ポリエチレングリコール基は、通常、メトキシポリエチレングリコール基、エトキシポリエチレングリコール基等の、保護基により保護されたポリエチレングリコール基であるが、ヒドロキシポリエチレングリコール基であってもよい。前記炭化水素基は、上記と同様であり、置換又は非置換の２価の脂肪族炭化水素基、置換又は非置換の２価の脂環式基、若しくは置換又は非置換の２価の芳香族基から選択され得る。
［アルキルアミン連結型アドレノメデュリン誘導体］
　ある態様において、式（ＡＩ）中、Ａは、１個以上のポリエチレングリコール基を含む有機基（有機基ＡＰＥＧ）であり、Ｌはメチレン基であり、ｎは整数１である。本態様において、ペプチドＢのＮ末端のαアミノ基の窒素原子は、メチレン基の炭素原子と共有結合によって結合している。有機基ＡＰＥＧとペプチドＢとが、メチレン基を介する前記連結様式で連結されている式（ＡＩ）で示すペプチド複合体を、「アルキルアミン連結型アドレノメデュリン誘導体」と称する場合がある。アルキルアミン連結型アドレノメデュリン誘導体は、高いアドレノメデュリン活性を有する。
　有機基ＡＰＥＧにおいて、１個以上のＰＥＧ基を含む態様は特に限定されない。例えば、１個以上のＰＥＧ基が有機基ＡＰＥＧの末端部に配置されていてもよく、有機基ＡＰＥＧの内部に配置されていてもよい。また、有機基ＡＰＥＧは、ＰＥＧ基を含む直鎖状又は分岐鎖状の基として当該技術分野で公知の各種の基であってもよい。修飾基Ａとして使用し得る公知の基としては、限定するものではないが、例えば、ＷＯ１９９５／１１９２４、ＷＯ２００６／０８４０８９、ＷＯ９８／４１５６２、ＷＯ２００５／０７９８３８、ＷＯ２００２／０６０９７８、ＷＯ２００１／０４８０５２、ＷＯ１９９８／０５５５００、ＷＯ１９９６／０２１４６９、ＷＯ２００３／０４０２１１、及び特開平０４－１０８８２７等に開示される基を挙げることができる。
　有機基ＡＰＥＧは、以下の式（ＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
 で表される修飾基であり得る。
　式（ＩＩ）において、
　ａは、１以上の整数であり、
　ｍは、１以上の整数であり、
　Ｌ１は、ｍ＋１価の直鎖状又は分岐鎖状の連結基であり、但し、Ｌ１が複数の場合、該複数のＬ１は互いに同一又は異なっていてもよく、
　Ｌ２及びＬ２’は、互いに独立して、結合又は２価の連結基であり、但し、Ｌ２’が複数の場合、該複数のＬ２’は互いに同一又は異なっていてもよく、
　Ｍ１は、ＰＥＧ基であり、但し、Ｍ１が複数の場合、該複数のＭ１は互いに同一又は異なっていてもよく、
　Ｍ２は、結合又はＰＥＧ基であり、但し、Ｍ２が複数の場合、該複数のＭ２は互いに同一又は異なっていてもよく、
　Ｒ１は、水素又は１価の基であり、
　＊は、式（ＡＩ）中のＬｎとの結合位置である。
　ｍは、連結基Ｌ１の分岐数である。例えば、ｍが１の場合、Ｌ１は２価の連結基であり、末端方向に対して非分岐、すなわち直鎖状の基である。ｍが２以上の場合、Ｌ１は３価以上の連結基であり、末端方向に対して２分岐以上の基である。ｍは、通常は、１以上の整数であり、５以下の整数である。ｍは、例えば、１～５の範囲、１～４の範囲、又は１～３の範囲であり得る。連結基Ｌ１の分岐数ｍが前記範囲の場合、有機基ＡＰＥＧは直鎖状又は分岐鎖状の構造を有することができる。
　ａは、ＰＥＧ基Ｍ１及びＭ２、並びに連結基Ｌ１及びＬ２’の単位の繰り返し数である。例えば、ａが１の場合、前記単位は繰り返し構造を有さない。ａが２以上であって、且つｍが１の場合、前記単位は直鎖状の繰り返し構造を有する。ａが２以上であって、且つｍが２以上の場合、前記単位は樹状分岐鎖状の繰り返し構造を有する。ａは、通常は、１以上の整数であり、５以下の整数であり、例えば、１～５の範囲、１～２の範囲でありうる。ＰＥＧ基Ｍ１及びＭ２、並びに連結基Ｌ１及びＬ２’の単位の繰り返し数ａが前記範囲の場合、有機基ＡＰＥＧは直鎖状又は分岐鎖状の構造を有することができる。
　Ｍ１及びＭ２において、ＰＥＧ基は、通常は、式（ＩＩＩ）：
　＃－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－＊＊　（ＩＩＩ）
で表される基である。式（ＩＩＩ）において、＊＊は、Ｌ１との結合位置であり、＃は、Ｏ又はＬ２’との結合位置である。式（ＩＩＩ）で表されるＰＥＧ基の重量平均分子量は、修飾基Ａにおける合計として、通常は１ｋＤａ以上、例えば、５ｋＤａ以上、１０ｋＤａ以上、２０ｋＤａ以上でありうる。通常は２０００ｋＤａ以下、例えば、１０００ｋＤａ以下、１００ｋＤａ以下、８０ｋＤａ以下、６０ｋＤａ以下であり得る。式（ＩＩＩ）で表されるＰＥＧ基は、有機基ＡＰＥＧにおける合計として、通常は１～２０００ｋＤａの範囲、例えば１～１０００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有し、例えば、１～１００ｋＤａの範囲、５～８０ｋＤａの範囲、１０～６０ｋＤａの範囲、２０～６０ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有し得る。
　式（ＩＩＩ）において、ｎは、前記重量平均分子量に基づいて定義されるエチレンオキシド単位の繰り返し数である。式（ＩＩＩ）中のｎは、前記重量平均分子量の好ましい範囲に基づき定義すると、下限値は通常は約２０、約１１０、約２３０、約４６０であり得る。上限値は通常約４５０００、約２２０００、約２２００以下、約１８２０、約１３６０以下であり得る。式（ＩＩＩ）中のｎは、前記重量平均分子量の好ましい範囲に基づき定義すると、通常は約２０～４５０００の範囲、例えば約２０～２２０００の範囲、約２０～２２００の範囲、約１１０～１８２０の範囲、約２３０～１３６０の範囲、約４６０～１３６０の範囲であり得る。式（ＩＩＩ）中の繰り返し数ｎが前記範囲の場合、式（ＩＩ）で表される修飾基に含まれるＰＥＧ基の合計の重量平均分子量が前記の範囲となる。
　Ｒ１は、水素、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルケニル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルキニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ２０シクロアルキル、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルケニル、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルキニル、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換のＣ７～Ｃ２０シクロアルキルアルキル、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル－Ｃ１～Ｃ２０アルキル、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０アリール、置換若しくは非置換のＣ５～Ｃ２０アリールアルキル、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール－Ｃ１～Ｃ２０アルキル、又は置換若しくは非置換のアシルであり得る。前記基が置換されている場合、該置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、シアノ、ニトロ、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ５アルキル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ５アルケニル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ５アルキニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルケニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキニル、置換若しくは非置換のアミノ、及び置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ５アルコキシからなる群より選択される１価基であり得る。
　Ｌ１は、ｍ＋１価の直鎖状又は分岐鎖状の連結基である。Ｌ１は、置換又は非置換のｍ＋１価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基であり得る。前記の基は、１個以上の複素原子、脂環式基、芳香族基、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）を含んでもよい。前記基が置換されている場合、該置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、シアノ、ニトロ、及び置換若しくは非置換の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基からなる群より選択される１価基であり得る。
　Ｌ２及びＬ２’は、互いに独立して、結合又は２価の連結基である。Ｌ２及びＬ２’が２価の連結基の場合、Ｌ２及びＬ２’は、互いに独立して、置換若しくは非置換の２価の炭化水素基、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）であり得る。前記置換若しくは非置換の２価の炭化水素基には、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルケニレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルキニレン、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ２０シクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルケニレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルキニレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ７～Ｃ２０シクロアルキルアルキレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル－Ｃ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０アリーレン、置換若しくは非置換のＣ５～Ｃ２０アリールアルキレン、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリーレン、又は置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール－Ｃ１～Ｃ２０アルキレンが含まれ得る。前記置換若しくは非置換の２価の炭化水素基は、１個以上の複素原子、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）を含んでもよい。前記基が置換されている場合、該置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、シアノ、ニトロ、及び置換若しくは非置換の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基からなる群より選択される１価基であり得る。
　アルキルアミン連結型アドレノメデュリン誘導体において有機基ＡＰＥＧは、以下の式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）又は（ＶＩＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
 で表される修飾基であり得る。
　式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）において、
　ａは、１以上の整数であり、
　Ｍ３、Ｍ３’、Ｍ３’’、Ｍ３’’’及びＭ３’’’’は、互いに独立して、結合又はＰＥＧ基であり、但し、Ｍ３、Ｍ３’、Ｍ３’’、Ｍ３’’’及びＭ３’’’’が複数の場合、該複数のＭ３、Ｍ３’、Ｍ３’’、Ｍ３’’’及びＭ３’’’’は互いに同一又は異なっていてもよく、且つＭ３、Ｍ３’、Ｍ３’’、Ｍ３’’’及びＭ３’’’’のうち少なくとも１個はＰＥＧ基であり、
　Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ１’’及びＲ１’’’は、互いに独立して、水素又は１価の基であり、
　Ｒ２は、結合又は２価の基であり、
　Ｒ３、Ｒ３’及びＲ３’’は、互いに独立して、結合又は２価の基であり、但し、Ｒ３、Ｒ３’及びＲ３’’が複数の場合、該複数のＲ３、Ｒ３’及びＲ３’’は互いに同一又は異なっていてもよく、
　＊は、式（ＡＩ）中のＬｎとの結合位置である。
　ａは、ＰＥＧ基Ｍ３、Ｍ３’、Ｍ３’’、Ｍ３’’’及びＭ３’’’’を含む単位の繰り返し数である。例えば、ａが１の場合、前記単位は繰り返し構造を有さない。式（Ｖ）において、ａが２以上の場合、前記単位は直鎖状の繰り返し構造を有する。式（ＶＩ）、（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）において、ａが２以上の場合、前記単位は樹状分岐鎖状の繰り返し構造を有する。ａは、通常は、１以上の整数であり、５以下の整数であり、例えば、１～５の範囲、１～２の範囲あり得る。ＰＥＧ基Ｍ３、Ｍ３’、Ｍ３’’、Ｍ３’’’及びＭ３’’’’を含む単位の繰り返し数ａが前記範囲の場合、ＰＥＧ基を含む修飾基Ａは直鎖状又は分岐鎖状の構造を有することができる。
　Ｍ３、Ｍ３’、Ｍ３’’、Ｍ３’’’及びＭ３’’’’がＰＥＧ基の場合、該ＰＥＧ基は、通常は、式（ＩＩＩ）で表される基である。式（ＩＩＩ）で表されるＰＥＧ基は、前記と同様の意味を有する。
　Ｒ１は、式（ＩＩ）のＲ１と前記と同様の意味を有する。また、Ｒ１’、Ｒ１’’及びＲ１’’’は、前記Ｒ１と同様の意味を有する。
　Ｒ２は、結合、置換若しくは非置換の２価の炭化水素基、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）であり得る。前記置換若しくは非置換の２価の炭化水素基には、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルケニレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルキニレン、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ２０シクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルケニレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルキニレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ７～Ｃ２０シクロアルキルアルキレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル－Ｃ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０アリーレン、置換若しくは非置換のＣ５～Ｃ２０アリールアルキレン、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリーレン、又は置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール－Ｃ１～Ｃ２０アルキレンが含まれ得る。前記２価の炭化水素基は、１個以上の複素原子、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）を含んでもよい。前記基が置換されている場合、該置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、シアノ、ニトロ、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ５アルキル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ５アルケニル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ５アルキニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルケニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキニル、置換若しくは非置換のアミノ、及び置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ５アルコキシからなる群より選択される１価基であり得る。
　Ｒ３、Ｒ３’及びＲ３’’は、互いに独立して、結合、置換若しくは非置換の２価の炭化水素基、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）であり得る。前記置換若しくは非置換の２価の炭化水素基には、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルケニレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルキニレン、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ２０シクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルケニレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルキニレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ７～Ｃ２０シクロアルキルアルキレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル－Ｃ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０アリーレン、置換若しくは非置換のＣ５～Ｃ２０アリールアルキレン、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリーレン、又は置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール－Ｃ１～Ｃ２０アルキレンが含まれ得る。前記２価の炭化水素基は、１個以上の複素原子、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）を含んでもよい。前記基が置換されている場合、該置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、シアノ、ニトロ、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ５アルキル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ５アルケニル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ５アルキニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルケニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ６シクロアルキニル、置換若しくは非置換のアミノ、及び置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ５アルコキシからなる群より選択される１価基であり得る。
　ある態様において、有機基ＡＰＥＧは、以下の式（Ｖ－１－１）、（ＶＩ－１－１）、（ＶＩＩ－１－１）、（ＶＩＩ－１－２）、（ＶＩＩ－２－１）、又は（ＶＩＩＩ－１－１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
 ［式中、
　ｎは、式（ＩＩＩ）のｎに関する定義と同様の意味を有し、
　ｎ’は、式（ＩＩＩ）のｎに関する前記定義と同様の意味を有し、
　＊は、式（ＡＩ）中のＬｎとの結合位置である。］
で表される修飾基であり得る。
　式（Ｖ－１－１）において、ＰＥＧ基は、合計で５ｋＤａ、１０ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、４０ｋＤａ、６０ｋＤａ又は８０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
　式（ＶＩ－１－１）において、ＰＥＧ基は、合計で４０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
　式（ＶＩＩ－１－１）において、ＰＥＧ基は、合計で５ｋＤａ、１０ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、４０ｋＤａ、６０ｋＤａ又は８０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
　式（ＶＩＩ－１－２）において、ＰＥＧ基は、合計で５０ｋＤａの重量平均分子量を有する。この場合、通常は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎのエチレンオキシド単位は、合計で４０ｋＤａの重量平均分子量を有し、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ’のエチレンオキシド単位は、合計で１０ｋＤａの重量平均分子量を有る。
　式（ＶＩＩ－２－１）において、ＰＥＧ基は、合計で４０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。この場合、通常は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎのエチレンオキシド単位は、合計で３０ｋＤａの重量平均分子量を有し、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ’のエチレンオキシド単位は、合計で１０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。或いは、ＰＥＧ基は、合計で６０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。この場合、通常は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎのエチレンオキシド単位は、合計で５０ｋＤａの重量平均分子量を有し、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ’のエチレンオキシド単位は、合計で１０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。或いは、ＰＥＧ基は、合計で８０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。この場合、通常は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎのエチレンオキシド単位は、合計で７０ｋＤａの重量平均分子量を有し、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ’のエチレンオキシド単位は、合計で１０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
　式（ＶＩＩＩ－１－１）において、ＰＥＧ基は、合計で４０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
［アミド連結型アドレノメデュリン誘導体］
　ある態様において、式（ＡＩ）中、Ａは、１個以上のポリエチレングリコール基を含む有機基（有機基ＡＰＥＧ）であり、Ｌはカルボニル（オキソ）基（－Ｃ(＝Ｏ)－）であり、ｎは整数１である。本態様において、ペプチドＢのαアミノ基の窒素原子は、カルボニル基の炭素原子と共有結合を形成している。有機基ＡＰＥＧは、
以下の式（ＸＩ）、（ＸＩ’）又は（ＸＩＩ）：
　Ｒ１－Ｏ－Ｍ１－＊　（ＸＩ）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 ［式中、
　ａは、１以上の整数であり、
　Ｍ１は、式（ＩＩＩ）：
　＃－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－＊＊　（ＩＩＩ）
［式中、
　ｎは、１以上の整数であり、
　＊＊は、＊との結合位置であり、
　＃は、Ｏとの結合位置である。］
で表されるポリエチレングリコール基であり、
　Ｍ３、Ｍ３’及びＭ３’’は、互いに独立して、結合又は式（ＩＩＩ）：
　＃－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－＊＊　（ＩＩＩ）
［式中、
　ｎは、１以上の整数であり、
　＊＊は、Ｒ３、Ｒ３’又はＣＨとの結合位置であり、
　＃は、Ｏとの結合位置である。］
で表されるポリエチレングリコール基であり、但し、Ｍ３、Ｍ３’及びＭ３’’が複数の場合、該複数のＭ３、Ｍ３’及びＭ３’’は互いに同一又は異なっていてもよく、且つＭ３、Ｍ３’及びＭ３’’のうち少なくとも１個は式（ＩＩＩ）で表されるポリエチレングリコール基であり、
　Ｒ１及びＲ１’は、互いに独立して、水素、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルケニル、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルキニル、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ２０シクロアルキル、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルケニル、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルキニル、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル、置換若しくは非置換のＣ７～Ｃ２０シクロアルキルアルキル、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル－Ｃ１～Ｃ２０アルキル、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０アリール、置換若しくは非置換のＣ５～Ｃ２０アリールアルキル、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール、又は置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール－Ｃ１～Ｃ２０アルキル、又は置換若しくは非置換のアシルであり、
　Ｒ２は、結合、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルケニレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルキニレン、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ２０シクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルケニレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルキニレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ７～Ｃ２０シクロアルキルアルキレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル－Ｃ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０アリーレン、置換若しくは非置換のＣ５～Ｃ２０アリールアルキレン、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリーレン、若しくは置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール－Ｃ１～Ｃ２０アルキレン（前記の基は、１個以上の複素原子、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）を含んでもよい）、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）であり、
　Ｒ３、Ｒ３’及びＲ３’’は、互いに独立して、結合、置換若しくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルケニレン、置換若しくは非置換のＣ２～Ｃ２０アルキニレン、置換若しくは非置換のＣ３～Ｃ２０シクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルケニレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０シクロアルキニレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキレン、置換若しくは非置換のＣ７～Ｃ２０シクロアルキルアルキレン、置換若しくは非置換の３～６員のヘテロシクロアルキル－Ｃ１～Ｃ２０アルキレン、置換若しくは非置換のＣ４～Ｃ２０アリーレン、置換若しくは非置換のＣ５～Ｃ２０アリールアルキレン、置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリーレン、若しくは置換若しくは非置換の５～１５員のヘテロアリール－Ｃ１～Ｃ２０アルキレン（前記の基は、１個以上の複素原子、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）を含んでもよい）、アミド基（－ＣＯ－ＮＨ－）、エステル基（－ＣＯ－Ｏ－）、又はウレタン基（－Ｏ－ＣＯ－ＮＨ－）であり、但し、Ｒ３、Ｒ３’及びＲ３’’が複数の場合、該複数のＲ３、Ｒ３’及びＲ３’’は互いに同一又は異なっていてもよく、
　＊は、式（ＡＩ）中のＬｎとの結合位置である。］
で表される修飾基である。］
で表される基であり得る。
［ウレタン連結型アドレノメデュリン誘導体］
　ある態様において、式（ＡＩ）中、Ａは、１個以上のポリエチレングリコールを含み、連結基Ｌとの結合側末端にエーテル基を有する有機基（以下、「有機基ＡＰＥＧＯ」と称する場合がある）であり、Ｌはカルボニル（オキソ）基（－Ｃ(＝Ｏ)－）であり、ｎは整数１である。ペプチドＢのαアミノ基の窒素原子は、カルボニル基の炭素原子と共有結合によって結合している。有機基ＡＰＥＧＯのエーテル基由来の酸素原子と、カルボニル基と、ペプチドＢのＮ末端のαアミノ基とにより、ウレタン結合が形成される。式（ＡＩ）において、前述のウレタン結合を有するペプチド複合体を、「ウレタン連結型アドレノメデュリン誘導体」と称する場合がある。
　有機基ＡＰＥＧＯは以下の式（ＸＩ－１－１）、（ＸＩＩ－１－１）又は（ＸＩＩ－２－１）で示される基であり得る。
　ＣＨ３Ｏ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－＊　（ＸＩ－１－１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 ［式中、
　ｎは、式（ＩＩＩ）のｎに関する定義と同様の意味を有し、
　ｎ’は、ｎに関する前記定義と同様の意味を有し、
　＊は、式（ＡＩ）中のＬｎとの結合位置である。］
で表される修飾基である。
　式（ＸＩ－１－１）において、ＰＥＧ基は、合計で５ｋＤａ、１０ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、４０ｋＤａ、６０ｋＤａ又は８０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
　式（ＸＩＩ－１－１）において、ＰＥＧ基は、合計で５ｋＤａ、１０ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、４０ｋＤａ、６０ｋＤａ又は８０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
　式（ＸＩＩ－２－１）において、ＰＥＧ基は、合計で４０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。この場合、通常は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎのエチレンオキシド単位は、合計で３０ｋＤａの重量平均分子量を有し、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ’のエチレンオキシド単位は、合計で１０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。或いは、ＰＥＧ基は、合計で６０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。この場合、通常は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎのエチレンオキシド単位は、合計で５０ｋＤａの重量平均分子量を有し、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ’のエチレンオキシド単位は、合計で１０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。或いは、ＰＥＧ基は、合計で８０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。この場合、通常は、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎのエチレンオキシド単位は、合計で７０ｋＤａの重量平均分子量を有し、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ’のエチレンオキシド単位は、合計で１０ｋＤａの重量平均分子量を有し得る。
［放出型アドレノメデュリン誘導体］
　ある態様において、式（ＡＩ）中、Ａは、パルミトイル基、ポリエチレングリコール基、ポリエチレングリコール基、及び、少なくとも１個のポリエチレングリコール基を含む有機基からなる群より選択され、Ｌは複素原子を含む２価の炭化水素基であり、ｎは整数１である。前記複素原子を含む２価の炭化水素基には、オキソ（カルボニル）基、チオカルボニル基、カルバメート基又はカルボンイミドイル基等の窒素原子又は酸素原子を構造中に含む基を有する炭化水素基が含まれる。窒素原子又は酸素原子を含む基がペプチドＢとの結合を形成する末端に配置されている場合、式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体は、加水分解等の生体内の代謝反応によって、２価の連結基Ｌの部分で切断されて、アドレノメデュリン又はアドレノメデュリン活性を有するその修飾体を放出し得る。放出型アドレノメデュリン誘導体に用い得る連結基Ｌの例は、１－オキソ－１，６－ヘキサンジイルである
［Ｆｃ連結型アドレノメデュリン誘導体］
　ある態様において、修飾基Ａは、免疫グロブリンのＦｃ領域であり（以下、「修飾基ＡＦｃ」と称する場合がある。）、Ｌは、任意のアミノ酸配列を有するペプチドからなる連結基であり、ｎは整数１である。
　修飾基ＡＦｃとして用いられる免疫グロブリンのＦｃ領域は、免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）のＦｃ領域、又は免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）のＦｃ領域であり得る。当該技術分野において、免疫グロブリンのＦｃ領域と特定のタンパク質又はペプチドとを連結した融合タンパク質は、対象に投与した場合、親化合物であるタンパク質又はペプチドと比較して、対象の体内における半減期を延長し得ることが知られている。
　前記免疫グロブリンのＦｃ領域は、ヒト又は非ヒト哺乳動物（例えば、ブタ、イヌ、ウシ、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ニワトリ、ヒツジ、ネコ、サル、マントヒヒ若しくはチンパンジー等の温血動物）由来の免疫グロブリンのＦｃ領域であり得る。本発明の抑制又は修復剤を適用する対象と同一のヒト又は非ヒト哺乳動物に由来する免疫グロブリンのＦｃ領域が用いられ得る。
　Ｌは、限定されるものではないが、ｐを繰り返し数として、（ＧＧＧＳ）ｐ（ｐは、２～１０の範囲の整数、又は４～６の範囲の整数である）、（ＧＧＧＧＳ）ｐ（ｐは、２～６の範囲の整数、又は３である）、（ＧＧＧＳ）ｐ＋ＧＧＧＫ（ｐは、１～９の範囲の整数、又は３～５の範囲の整数である）、又は（ＧＧＧＧＳ）ｐ＋ＧＧＧＧＫ（ｐは、１～５の範囲の整数、又は２である）のアミノ酸配列を有するペプチドからなる連結基を用いることができる。前記アミノ酸配列において、繰り返し単位中のＧの数及び繰り返し数ｐは、適宜変更可能である。Ｌは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、又は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＫのアミノ酸配列を有するペプチドからなる連結基であり得る。
　ある態様において、修飾基ＡＦｃのＣ末端のカルボキシル基は、連結基ＬのＮ末端のαアミノ基とペプチド結合を形成しており、且つ、ペプチドＢのＮ末端のαアミノ基と、連結基ＬのＣ末端のカルボキシル基は、ペプチド結合を形成している。Ｆｃ連結型アドレノメデュリン誘導体は、全体として、タンパク質又はポリペプチドの構造を有する。
　式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体の塩の対イオンとしては、限定するものではないが、例えば、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、若しくは置換若しくは非置換のアンモニウムイオンのようなカチオン、又は塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、炭酸イオン、炭酸水素イオン、過塩素酸イオン、ギ酸イオン、酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、プロピオン酸イオン、乳酸イオン、マレイン酸イオン、ヒドロキシマレイン酸イオン、メチルマレイン酸イオン、フマル酸イオン、アジピン酸イオン、安息香酸イオン、２－アセトキシ安息香酸イオン、ｐ－アミノ安息香酸イオン、ニコチン酸イオン、ケイ皮酸イオン、アスコルビン酸イオン、パモ酸イオン、コハク酸イオン、サリチル酸イオン、ビスメチレンサリチル酸イオン、シュウ酸イオン、酒石酸イオン、リンゴ酸イオン、クエン酸イオン、グルコン酸イオン、アスパラギン酸イオン、ステアリン酸イオン、パルミチン酸イオン、イタコン酸イオン、グリコール酸イオン、グルタミン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、シクロヘキシルスルファミン酸イオン、メタンスルホン酸イオン、エタンスルホン酸イオン、イセチオン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ－トルエンスルホン酸イオン、若しくはナフタレンスルホン酸イオンのようなアニオンであり得る。
　式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体又はその塩と溶媒和物を形成し得る溶媒としては、限定するものではないが、例えば、水、或いはメタノール、エタノール、２－プロパノール（イソプロピルアルコール）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸、エタノールアミン、アセトニトリル又は酢酸エチルのような有機溶媒であり得る。
　式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体は、前記又は下記のペプチド複合体自体だけでなく、その保護形態も包含する。本明細書において、「保護形態」は、１個又は複数個の官能基（例えばリジン残基の側鎖アミノ基）に保護基が導入された形態を意味する。また、本明細書において、「保護基」は、望ましくない反応の進行を防止するために、特定の官能基に導入される基であって、特定の反応条件において定量的に除去され、且つそれ以外の反応条件においては実質的に安定、即ち反応不活性である基を意味する。前記ペプチド複合体の保護形態を形成し得る保護基としては、限定するものではないが、例えば、ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２－ブロモベンジルオキシカルボニル（ＢｒＺ）、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｐ－トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、４－メチルベンジル（４－ＭｅＢｚｌ）、２－クロロベンジルオキシカルボニル（ＣｌＺ）、シクロヘキシル（ｃＨｅｘ）、及びフェナシル（Ｐａｃ）；アミノ基の他の保護基として、ベンジルオキシカルボニル、ｐ－クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ－ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ－ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ－メトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、２－（ｐ－ビフェニル）イソプロピルオキシカルボニル、２－（３，５－ジメトキシフェニル）イソプロピルオキシカルボニル、ｐ－フェニルアゾベンジルオキシカルボニル、トリフェニルホスホノエチルオキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、ｔ－アミルオキシオキシカルボニル、ジイソプロピルメチルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エチルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２－メチルスルホニルエチルオキシカルボニル、２，２，２－トリクロロエチルオキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、ベンゼンスルホニル、メシチレンスルフォニル、メトキシトリメチルフェニルスルホニル、２－ニトロベンゼンスルホニル、２－ニトロベンゼンスルフェニル、４－ニトロベンゼンスルホニル、及び４－ニトロベンゼンスルフェニル；カルボキシル基の他の保護基として、メチルエステル、エチルエステル、ｔ－ブチルエステル、ｐ－メトキシベンジルエステル、及びｐ－ニトロベンジルエステル；Ａｒｇの他の側鎖保護基として、２，２，４，６，７－ペンタメチル－２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル、４－メトキシ－２，３，６－トリメチルベンゼンスルホニル、２，２，５，７，８－ペンタメチルクロマン－６－スルホニル、及び２－メトキシベンゼンスルホニル；Ｔｙｒの他の保護基として、２，６－ジクロロベンジル、ｔ－ブチル、及びシクロヘキシル；Ｃｙｓの他の保護基として、４－メトキシベンジル、ｔ－ブチル、トリチル、アセトアミドメチル、及び３－ニトロ－２－ピリジンスルフェニル；Ｈｉｓの他の保護基として、ベンジルオキシメチル、ｐ－メトキシベンジルオキシメチル、ｔ－ブトキシメチル、トリチル、及び２，４－ジニトロフェニル；並びに、Ｓｅｒ及びＴｈｒの他の保護基として、ｔ－ブチル等を挙げることができる。式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体が前記の保護基による保護形態である場合、該ペプチド複合体のアドレノメデュリン活性を、天然型アドレノメデュリンと実質的に略同等のものとすることができる。
　また、式（ＡＩ）で表されるペプチド複合体は、該ペプチド複合体の個々のエナンチオマー及びジアステレオマー、並びにラセミ体のような、該ペプチド複合体の立体異性体の混合物も包含する。
　本発明において、アドレノメデュリン又はその修飾体は、アドレノメデュリン又はその修飾体自体だけでなく、塩の形態で用いることもできる。アドレノメデュリン又はその修飾体が塩の形態である場合、薬学的に許容し得る塩であり得る。アドレノメデュリン又はその修飾体の塩の対イオンとしては、限定するものではないが、例えば、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、もしくは置換もしくは非置換のアンモニウムイオンのようなカチオン、又は塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、炭酸イオン、炭酸水素イオン、過塩素酸イオン、ギ酸イオン、酢酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、プロピオン酸イオン、乳酸イオン、マレイン酸イオン、ヒドロキシマレイン酸イオン、メチルマレイン酸イオン、フマル酸イオン、アジピン酸イオン、安息香酸イオン、２－アセトキシ安息香酸イオン、ｐ－アミノ安息香酸イオン、ニコチン酸イオン、ケイ皮酸イオン、アスコルビン酸イオン、パモ酸イオン、コハク酸イオン、サリチル酸イオン、ビスメチレンサリチル酸イオン、シュウ酸イオン、酒石酸イオン、リンゴ酸イオン、クエン酸イオン、グルコン酸イオン、アスパラギン酸イオン、ステアリン酸イオン、パルミチン酸イオン、イタコン酸イオン、グリコール酸イオン、グルタミン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、シクロヘキシルスルファミン酸イオン、メタンスルホン酸イオン、エタンスルホン酸イオン、イセチオン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ－トルエンスルホン酸イオン、もしくはナフタレンスルホン酸イオンのようなアニオンであり得る。
　本発明において、アドレノメデュリン、その修飾体又はその塩は、溶媒和物の形態であってもよい。溶媒和物を形成し得る溶媒としては、限定するものではないが、例えば、水、或いはメタノール、エタノール、２－プロパノール（イソプロピルアルコール）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸、エタノールアミン、アセトニトリル又は酢酸エチルのような有機溶媒であり得る
　本発明で用いるアドレノメデュリン、その修飾体又はその塩は、当該技術分野で通常使用される手段により製造することができる。アドレノメデュリン、その修飾体又はその塩の製造は、例えば、固相系又は液相系のペプチド合成法を用いてもよく、アドレノメデュリンを産生し得るヒト又は非ヒト哺乳動物の組織又は細胞から、天然ペプチドを精製する方法を用いてもよい。或いは、アドレノメデュリンを産生し得るヒト又は非ヒト哺乳動物におけるアドレノメデュリンをコードするＤＮＡ（例えば、配列番号２、４、６、８、１０又は１２）を使用して、大腸菌又は出芽酵母等の形質転換系で組換えタンパク質を大量発現させる方法を用いてもよい。或いは、予め製造されたペプチドを購入等して用いてもよい。
　前記の手段によって製造されたペプチドにおいて、該アミノ酸配列中の２個のシステイン残基のチオール基をジスルフィド化することにより、該アミノ酸配列中の２個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチドを得ることができる。また、前記の手段によって製造されたペプチドにおいて、該アミノ酸配列中の２個のシステイン残基の間で形成されたジスルフィド結合をエチレン基によって置換することにより、該ジスルフィド結合がエチレン基によって置換されたペプチドを得ることができる。前記ジスルフィド化反応及びエチレン基による置換反応は、当該技術分野で通常使用される条件に基づき実施することができる。
＜アドレノメデュリン受容体のアゴニスト＞
　本発明に係る、細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤の１以上の実施形態では、有効成分として、アドレノメデュリン受容体のアゴニストを含み得る。
　本発明者らは、驚くべきことに、アドレノメデュリンだけでなく、アドレノメデュリン受容体の活性化により生じる細胞内情報伝達物質であるｃＡＭＰのアナログが、抗がん剤又は酸化ストレスによる正常細胞のＤＮＡ損傷を抑制またはその修復を促進する作用を有することを見出した。このことから、アドレノメデュリンによる細胞中でのＤＮＡ損傷の抑制又は修復は、アドレノメデュリンが細胞のアドレノメデュリン受容体に結合することにより該受容体が活性化され、その結果生じる細胞内のシグナル伝達により生じていることが示された。このことは、アドレノメデュリンのみならず、アドレノメデュリン受容体のアゴニストもまた、細胞中でのＤＮＡ損傷の抑制又は修復を促進する活性を有することを裏付ける。
　アドレノメデュリン受容体としてはＣＲＬＲ（カルシトニン受容体様受容体）、ＲＡＭＰ－２（受容体活性調節タンパク質－２）等が知られている。
　本発明に用いることのできるアドレノメデュリン受容体のアゴニストは、アドレノメデュリン受容体に結合して、細胞内でｃＡＭＰ等の細胞内情報伝達物質を生じさせる物質であれば特に限定されない。
＜ＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤＞
　本発明において、ＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤は、生体内に存在する細胞又は生体外に存在する細胞において、ＤＮＡ損傷を抑制又は修復することができる。
　細胞は特に限定されず、例えばヒト、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ニワトリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル、マントヒヒ、チンパンジーなど）等の動物の生体内に存在する細胞であっても良いし、これらの動物に由来する培養細胞であってもよい。、前記細胞は、血管に由来する細胞又は腎臓に由来する細胞であってよい。血管に由来する細胞としては血管内皮細胞が例示できる。腎臓に由来する細胞としては尿細管細胞が例示できる。
　本発明が対象とする細胞中でのＤＮＡ損傷の原因は特に限定されない。ＤＮＡの損傷としては、細胞分裂時の核ＤＮＡ複製時や細胞代謝に伴って副生する活性酸素による損傷といった内在性の因子に起因するＤＮＡ損傷や、環境由来の因子に起因するＤＮＡ損傷が挙げられる。環境由来の因子に起因するＤＮＡ損傷としては、紫外線や電磁波の照射、生物毒素、タバコ、化学物質等のＤＮＡ変異原性物質によるＤＮＡ損傷、がんの化学療法や放射線療法、細胞・組織における虚血低酸素状態や高酸素環境、生活習慣病、過度な運動や運動不足、慢性炎症等によるＤＮＡ損傷等が挙げられる。本発明によれば、これらの様々な因子に起因する細胞内でのＤＮＡ損傷を抑制又は修復することができる。ＤＮＡ損傷は、細胞死やアポトーシス、細胞分裂停止、細胞老化、がん化に加え、遺伝情報の変化や転写制御障害等の細胞機能にも影響する。本発明によれば、ＤＮＡ損傷の予防、抑制またはその修復系を促進することによって、細胞機能及び生体恒常性を維持することが期待される。
　本発明に係る、細胞中でのＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤は、少なくとも前記有効成分を含み、適宜他の成分を更に含むものであってよい。前記有効成分以外の他の成分としては、薬学的に許容し得る担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤等が挙げられる。
　例えば、本発明に係る、細胞中でのＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤が、生体に投与されて生体内の細胞中でのＤＮＡ損傷を抑制又は修復する用途に用いられる実施形態では、前記有効成分に糖衣や溶解性被膜を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などの経口投与可能な形態に製剤化することができ、或いは、前記有効成分を、水若しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液と組み合わせた無菌性溶液又は懸濁液剤等の、非経口的に投与可能な形態（例えば注射剤）に製剤化することができる。このような製剤は、前記有効成分を他の成分とともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における前記有効成分の量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。また医薬として有用な他の成分を更に含むものであっても良い。
　前記有効成分をヒトへ投与する場合の投与量は、症状などにより差異はあるが、典型的には、経静脈投与の場合０．１～１００ｍｇ／６０Ｋｇ／日である。
　以下の実験で用いたアドレノメデュリンはヒトに由来し、配列番号１に示すアミノ酸一次配列を有し、配列番号１のアミノ酸配列において、１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成し、Ｃ末端がアミド化されているペプチドである。
実施例１：アドレノメデュリンによるシスプラチン尿細管障害の軽減効果（ｉｎ　ｖｉｖｏ）
　シスプラチンはＤＮＡクロスリンク薬剤であり、投与されたシスプラチンは腎糸球体濾過後に尿細管で再吸収され、尿細管細胞を直接障害する。
　Ｃ５７ＢＬ／６、８週齢、雄マウスを任意に４群に分け、そのうちの３群にそれぞれ、ヒト・アドレノメデュリン（１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ（＝ＡＤＭ　１γ）または５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ（＝ＡＤＭ　５γ））または生理的食塩水（Ｃｏｎｔ）を充填した浸透圧ポンプをマウスの皮下に留置した。その翌日に、３群のマウスに対してシスプラチン１６ｍｇ／ｋｇ・体重を腹腔内投与し、尿細管障害モデルを作製した。残り１群は、ネガティブコントロール群（ＮＣ）として生理的食塩水を腹腔内に投与した。シスプラチン投与３日後に４群のマウスの尿及び腎組織を採取し、尿細管障害の程度を検討した（図１）。
　腎臓の一部を４％パラホルムアルデヒドで固定、パラフィン包埋後、薄切し組織標本を作製した。その組織標本を抗Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｈｉｓｔｏｎｅ　Ｈ２Ａ．Ｘ（Ｓｅｒ１３９）抗体（ｐＨ２Ａ．Ｘ、Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）にて免疫組織染色を行い、尿細管細胞の二重鎖切断によるＤＮＡ損傷性を検討した。尿アルブミン／クレアチニンを測定し、尿細管の機能障害性を検討した。腎臓の一部からｔｏｔａｌ　ＲＮＡを抽出し、定量ＰＣＲ解析を用いて代表的な炎症性サイトカインであるＭｃｐ１／Ｃｃｌ２（ｍｏｎｏｃｙｔｅ　ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ－１／Ｃ－Ｃ　ｍｏｔｉｆ　ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ　ｌｉｇａｎｄ　２）、Ｔｎｆａ（Ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ－α）、及び、Ｉｌ１ｂ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１β）の遺伝子発現変化を検討した。
　図２に免疫組織学的解析（ｐＨ２Ａ．Ｘの免疫組織染色）の結果を示す。シスプラチン投与によって尿細管細胞にはｐＨ２Ａ．Ｘ陽性のＤＮＡ損傷細胞が数多く認められたが、アドレノメデュリン（ＡＤＭ）用量依存的に、ｐＨ２Ａ．Ｘ陽性細胞が減少しＤＮＡ損傷細胞の抑制が認められた。
　図３に尿アルブミン／クレアチニンの測定結果を示す。シスプラチン投与群において尿アルブミン／クレアチニン量は著増し、尿細管機能の低下が認められた。アドレノメデュリンの投与により尿アルブミン／クレアチニン量が低下し、アドレノメデュリン５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ投与群で尿アルブミン／クレアチニン量の有意な低下が認められた。
　図４に炎症性サイトカイン遺伝子の発現解析の結果を示す。シスプラチン投与群の腎組織ではＭｃｐ１／Ｃｃｌ２、Ｔｎｆａ、Ｉｌ１ｂの遺伝子発現が上昇し、組織炎症の惹起が認められた。これに対してアドレノメデュリン投与群では５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ投与時にまたは用量依存的にこれらの遺伝子発現の有意な低下が認められた。
　以上より、シスプラチンはマウス腎尿細管細胞のＤＮＡ損傷及び細胞機能低下、組織炎症を来すものの、アドレノメデュリンの投与によって尿細管細胞のＤＮＡ損傷は抑制され、その後の機能低下や炎症発現も軽減することが明らかとなった。
実施例２：アドレノメデュリンによる尿細管細胞ＤＮＡ損傷の軽減効果（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）
（実験１）シスプラチンによるＤＮＡ損傷の軽減効果
　マウス尿細管由来（ｍｏｕｓｅ　ｐｒｏｘｉｍａｌ　ｔｕｂｕｌｅ：　ＭＣＴ）株化細胞を用いてＤＮＡ損傷応答に対するＡＤＭの効果とその作用機序を検討した。なお、細胞培養液中ではアドレノメデュリンは易分解性、容器吸着性があり長時間の実験には制約があるため、アドレノメデュリンの細胞内情報伝達物質（セカンド・メッセンジャー）であるｃＡＭＰのアナログ８－Ｂｒｏｍｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ　３’，５’－ｃｙｃｌｉｃ　ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ（８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ）を用いて検討を行った。
　図５に概要を示すように、ＭＣＴ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、通常培養条件にてＣＯ２インキュベーターで２４時間培養したのちシスプラチンを終濃度３μＭで添加した。シスプラチン添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（終濃度０．３ｍＭ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）にて前処置した。シスプラチン添加後さらにＣＯ２インキュベーターにて２４時間培養後に解析を行った。
　ＭＣＴ細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定後、抗ｐＨ２Ａ．Ｘ抗体にて蛍光免疫染色を行った。図６に蛍光免疫染色の結果（白黒表示に変換した画像）を示す。図６の下段ｃＡＭＰ（＋）はシスプラチン添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示し、図６の上段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）はシスプラチン添加の３０分前にＰＢＳで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）の結果は、シスプラチン添加によってＭＣＴ細胞にｐＨ２Ａ．Ｘ陽性のＤＮＡ損傷が認められたことを示す。一方、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）の結果は、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰの前処置においてシスプラチン誘導ＤＮＡ損傷の細胞数が低下したことを示す。
　シスプラチン誘導ＤＮＡ損傷に対するアドレノメデュリン／ｃＡＭＰ効果の機序を明らかにするために、上記と同様のＭＣＴ細胞の培養条件にて、シスプラチン（ＣＤＤＰ）添加の終濃度を３μＭまたは１０μＭとし、シスプラチン誘導ＤＮＡ損傷に対する８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（終濃度０．３ｍＭ）の作用を検討した。ネガティブコントロールとしてシスプラチンおよび８－Ｂｒ－ｃＡＭＰを添加しない以外は同様の条件でＭＣＴ細胞を培養した。
　図７に、シスプラチン添加後さらにＣＯ２インキュベーターにて２４時間培養後に、ＤＮＡ修復因子であるＢＲＣＡ１（ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｇｅｎｅ　１）とＴＰ５３ＢＰ１（ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｐ５３－ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１）の遺伝子発現の解析を行った結果を示す。シスプラチン（１０μＭ）によって、ＤＮＡ修復因子であるＢＲＣＡ１とＴＰ５３ＢＰ１の遺伝子発現が抑制されることが認められた。これに対して、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰの前処置によってそれらの遺伝子発現が有意に改善されることが認められた。
　図８に、培養後の細胞の細胞生存率の測定結果を示す。シスプラチン（１０μＭ）によって細胞生存率の低下が認められた。これに対して、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰの前処置によってそれらの細胞生存率が有意に改善されることが明らかとなった。
　以上の結果から、シスプラチン誘導ＤＮＡ損傷・細胞毒性に対して、アドレノメデュリンは少なくともｃＡＭＰを介してＤＮＡ修復機能を活性化し、細胞死を軽減していることが明らかとなった。
（実験２）酸化ストレスＤＮＡ損傷の軽減効果
　上記の実施例２実験１のＭＣＴ細胞の培養において、シスプラチン（ＣＤＤＰ）の代わりに過酸化水素水（Ｈ２Ｏ２）を終濃度０．３ｍＭとなるように添加した以外は同様の条件でＭＣＴ細胞の培養を行った（図９）。具体的には、過酸化水素水（Ｈ２Ｏ２）添加（終濃度０．３ｍＭ）の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（終濃度０．３ｍＭ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ：　ＰＢＳ）にて前処置し、その後ＣＯ２インキュベーターにて２４時間培養後に、ＭＣＴ細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定後、抗ｐＨ２Ａ．Ｘ抗体にて蛍光免疫染色を行った。
　図１０に蛍光免疫染色の結果（白黒表示に変換した画像）を示す。図１０の下段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）はＨ２Ｏ２添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示し、図１０の上段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）はＨ２Ｏ２添加の３０分前にＰＢＳで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）の結果は、Ｈ２Ｏ２添加によってＭＣＴ細胞にｐＨ２Ａ．Ｘ陽性のＤＮＡ損傷が認められたことを示す。一方、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）の結果は、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰの前処置においてＨ２Ｏ２誘導ＤＮＡ損傷の細胞数が低下したことを示す。
実施例３：アドレノメデュリンによるヒト細胞ＤＮＡ損傷の軽減効果（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）
（実験１）Ｈ２Ｏ２によるＤＮＡ損傷の軽減効果
　上記の実施例２のＭＣＴ細胞に代えて、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｖｅｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ：ＨＵＶＥＣ）を用いてヒト細胞におけるＤＮＡ損傷応答に対するアドレノメデュリンの効果とその作用機序を検討した。実施例２と同様にアドレノメデュリンの効果の検討には８－Ｂｒ－ｃＡＭＰを用いた。図１１に概要を示すようにＨＵＶＥＣを細胞培養ディッシュに播種し、通常培養条件にてＣＯ２インキュベーターで２４時間培養したのち、Ｈ２Ｏ２を終濃度１．０ｍＭとなるように添加した。Ｈ２Ｏ２の添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（終濃度０．３ｍＭ）またはＰＢＳにて前処置した。Ｈ２Ｏ２添加後、さらにＣＯ２インキュベーターで６時間培養した。
　ＨＵＶＥＣを４％パラホルムアルデヒドで固定後、抗ｐＨ２Ａ．Ｘ抗体にて蛍光免疫染色を行った。図１２に蛍光免疫染色の結果（白黒表示に変換した画像）を示す。図１２の下段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）はＨ２Ｏ２添加の３０分前に８－Ｂｒ－ｃＡＭＰで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示し、図１２の上段８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）はＨ２Ｏ２添加の３０分前にＰＢＳで処理した培養細胞の免疫染色の結果を示す。８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（－）の結果は、Ｈ２Ｏ２添加によってＨＵＶＥＣ細胞にｐＨ２Ａ．Ｘ陽性のＤＮＡ損傷が認められたことを示す。一方、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ（＋）の結果は、８－Ｂｒ－ｃＡＭＰの前処置においてＨ２Ｏ２誘導ＤＮＡ損傷の細胞数が低下したことを示す。
　以上の結果から、Ｈ２Ｏ２誘導ＤＮＡ損傷・細胞毒性に対する、アドレノメデュリン及びアドレノメデュリン受容体の活性化により生じるｃＡＭＰのアナログによるＤＮＡ損傷抑制・修復機能は、ヒト細胞においても効果を有することが明らかとなった。また、このＤＮＡ損傷抑制・修復機能は血管内皮細胞においても効果を有することが明らかとなった。すなわち、ヒトの全身の血管・全臓器における、アドレノメデュリンによるＤＮＡ損傷の抑制又は修復に係る効果が示唆された。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (3)

  1. 　アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体又はそれらの塩、或いは、
    　アドレノメデュリン受容体のアゴニスト
    を含有する、細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤。
  2. 　アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体が、
    （Ｉ）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなるペプチド、
    （ＩＩ）アドレノメデュリンのアミノ酸配列からなり、且つ該アミノ酸配列中の２個のシステイン残基がジスルフィド結合を形成しているペプチド、
    （ＩＩＩ）前記（ＩＩ）のペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
    （ＩＶ）前記（Ｉ）～（ＩＩＩ）のいずれかのペプチドにおいて、１～１５個のアミノ酸残基が欠失、置換もしくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド、
    （Ｖ）前記（Ｉ）～（ＩＶ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端がアミド化されているペプチド、及び
    （ＶＩ）前記（Ｉ）～（ＩＶ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端にグリシン残基が付加されているペプチド
    からなる群より選択されるペプチドである請求項１に記載の細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤。
  3. 　アドレノメデュリンもしくはアドレノメデュリン活性を有するその修飾体が、
    （ａ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号１のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （ｂ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号３のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （ｃ）配列番号５のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号５のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （ｄ）配列番号７のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号７のアミノ酸配列からなり、且つ１６位のシステイン残基と２１位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （ｅ）配列番号９のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号９のアミノ酸配列からなり、且つ１４位のシステイン残基と１９位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列番号１１のアミノ酸配列からなり、且つ１４位のシステイン残基と１９位のシステイン残基とがジスルフィド結合を形成しているペプチド；
    （ｇ）前記（ａ）～（ｆ）のいずれかのペプチドにおいて、前記ジスルフィド結合が、エチレン基によって置換されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
    （ｈ）前記（ａ）～（ｇ）のいずれかのペプチドにおいて、１～１５個のアミノ酸残基が欠失、置換もしくは付加されており、且つアドレノメデュリン活性を有するペプチド；
    （ｉ）前記（ａ）～（ｈ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端がアミド化されているペプチド；及び
    （ｊ）前記（ａ）～（ｈ）のいずれかのペプチドにおいて、Ｃ末端にグリシン残基が付加されているペプチド；
    からなる群より選択されるペプチドである、請求項１又は２に記載の細胞中のＤＮＡ損傷の抑制又は修復剤。
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