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WO2021005189A1 - Nouveaux composés inhibiteurs de la pfar - Google Patents

Nouveaux composés inhibiteurs de la pfar Download PDF

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Publication number
WO2021005189A1
WO2021005189A1 PCT/EP2020/069466 EP2020069466W WO2021005189A1 WO 2021005189 A1 WO2021005189 A1 WO 2021005189A1 EP 2020069466 W EP2020069466 W EP 2020069466W WO 2021005189 A1 WO2021005189 A1 WO 2021005189A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
composition
disease
pharmaceutically acceptable
ebastine
azelastine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2020/069466
Other languages
English (en)
Inventor
Martine SIMONELIG
Frédéric Bihel
Cécile VOISSET
Capucine Trollet
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Association Francaise Contre les Myopathies
Etablissement Francais du Sang
Universite de Strasbourg
Centre Hospitalier Regional et Universitaire de Brest
Univerdite de Bretagne Occidentale
Universite de Montpellier
Association Institut de Myologie
Sorbonne Universite
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Association Francaise Contre les Myopathies
Etablissement Francais du Sang
Universite de Strasbourg
Centre Hospitalier Regional et Universitaire de Brest
Univerdite de Bretagne Occidentale
Universite de Montpellier
Association Institut de Myologie
Sorbonne Universite
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM, Association Francaise Contre les Myopathies, Etablissement Francais du Sang, Universite de Strasbourg, Centre Hospitalier Regional et Universitaire de Brest, Univerdite de Bretagne Occidentale, Universite de Montpellier, Association Institut de Myologie, Sorbonne Universite filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
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Priority to EP20736387.0A priority patent/EP3996697A1/fr
Priority to CA3145343A priority patent/CA3145343A1/fr
Publication of WO2021005189A1 publication Critical patent/WO2021005189A1/fr
Priority to IL289627A priority patent/IL289627A/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention belongs to the technical field of inhibitors of the chaperone activity of ribosome proteins (“protein folding activity of the ribosome” or “PFAR”). More particularly, the invention relates to PFAR inhibitors for their use in the treatment of diseases related to misfolding and / or aggregation of proteins.
  • a common feature of most neurodegenerative diseases is the presence of misfolded proteins that form intracellular or extracellular amyloid aggregates. They are then qualified as aggregopathies, proteinopathies, foldopathies, conformational diseases or protein misfolding. They include, for example, Creutzfeldt-Jakob disease, Alzheimer's disease or even Parkinson's disease. The presence of proteins that aggregate due to their structural conformation has since been identified in targets other than the central nervous system. The number of diseases which are discovered to correspond to proteinopathies is constantly increasing.
  • PrP prion protein in mammals with transmissible subacute spongiform encephalopathy.
  • PrP res differs from PrP c by its three-dimensional structure and its propensity to form amyloid fibers.
  • the prion protein In its PrP res conformation, the prion protein accumulates in the form of amyloid fibers which propagate spontaneously in the absence of prion-specific nucleic acid. This accumulation leads to degeneration of the central nervous system associated in particular with dementia and spongiosis.
  • prion diseases are scrapie, bovine spongiform encephalopathy and chronic wasting in deer.
  • Creutzfeldt-Jakob disease fatal familial insomnia and Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome.
  • Other proteins are known to accumulate as aggregates in neurodegenerative diseases.
  • Alzheimer's disease accumulation of tau and beta amyloid proteins
  • Parkinson's disease accumulation of alpha-synuclein
  • amyotrophic lateral sclerosis accumulation of Fus and TDP43
  • oculo muscular dystrophy -pharyngeal accumulation of PABPN1
  • these proteins Different on several levels, however, these proteins have in common their propensity to change conformation and to form amyloid fibers.
  • PFAR protein folding activity of the ribosome
  • PFAR inhibitors 6-aminophenanthridine and guanabenz have also shown efficacy in other models of proteinopathy, such as Huntington's disease (EP2066312B1) and oculopharyngeal muscular dystrophy (Barbezier et al. 2011; Malerba et al. 2019). Guanabenz has also been shown to be effective in decreasing the toxicity of TDP43 protein aggregation in a model for amyotrophic lateral sclerosis (Vaccaro et al. 2013).
  • the invention responds to this need by providing one or more PFAR inhibitor compounds for use in the treatment of proteinopathy.
  • the invention also relates to the use of a composition comprising one or more PFAR inhibitor compounds, for the manufacture of a medicament for treating a proteinopathy.
  • the invention also relates to a method of treating proteinopathy, comprising the administration of an effective amount of one or more PFAR inhibitor compounds, to a subject in need thereof.
  • an object according to the invention relates to a composition
  • a composition comprising at least one compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, for use in the treatment of proteinopathy.
  • the invention also relates to combinations of these compounds.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising ebastine or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate, isomer and racemate, for its use in the treatment of proteinopathy.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising azelastine or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate, isomer and racemate, for its use in the treatment of proteinopathy.
  • the invention relates to a composition comprising duloxetine or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate, isomer and racemate, for its use in the treatment of proteinopathy.
  • the composition according to the invention for its use in the treatment of proteinopathy further comprises at least one distinct compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene, guanabenz , 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, la desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, alimemazine (trimeprazine
  • the composition for its use in the treatment of proteinopathy according to the invention can be chosen from the following combinations: ebastine and flunarizine, ebastine and azelastine, ebastine and loperamide, azelastine and flunarizine, azelastine and loperamide, and flunarizine and loperamide, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the compounds to be used in combination according to the present invention can be administered simultaneously, separately or sequentially.
  • proteinopathy may be chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru, VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculopharyngeal muscular dystrophy, bovine spongiform encephalopathy, scrapie, sheep chronic wasting disease of cervids, feline spongiform encephalopathy, camel spongiform encephalopathy and exotic ungulate encephalopathy.
  • said proteinopathy is linked to the accumulation of PrP prion proteins in the form of aggregates.
  • said proteinopathy is chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru and VPSPr disease.
  • the invention also relates to a composition according to the invention for its use in the treatment of Creutzfeldt-Jakob disease.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising at least one compound chosen as ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one distinct compound selected from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, di
  • the invention aims at a composition comprising ebastine in combination with at least one distinct compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, la dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, triflupromazine alimemazine (trimepra
  • the invention is aimed at a composition
  • a composition comprising at least one compound chosen azelastine in combination with at least one distinct compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene, guanabenz, 6- aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine , desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, la trifluoperazine, triflupromazine, alimemazine (tri
  • the invention relates to a composition or a composition for its use as described above, further comprising pharmaceutically acceptable vehicles or excipients.
  • the compounds according to the invention which are useful for the treatment of proteinopathy are inhibitors of PFAR. Consequently, the invention also relates to at least one compound chosen from ebastine, alimémazine (trimeprazine), amitriptyline, astemizole, atomoxetine, azelastine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, loperamide, nefopam, orphenadrine, prenylamine , reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, chlorpromazine, quinacrine (mepacrine) and zimelidine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, or any of their combinations
  • the term “approximately” is used to indicate that a value includes the variations inherent in the margin of error linked to the use of a measuring device, to the method used to determine the value. value, or variations that may exist between cells within the study population and between populations. So, in one embodiment, the term “approximately”, placed in front of a value, corresponds to plus or minus 10% of this value.
  • proteinopathy or “proteinopathies” denotes a disease or a set of diseases also known under the terms or “protein misfolding disease” or “conformational diseases” or “aggregopathy”. or “foldopathy”. These diseases are characterized by the accumulation of proteins which have a three-dimensional structure different from that observed for the same protein in a healthy subject, in particular enriched in beta sheets and which form amyloid fibers, leading to the accumulation of protein aggregates. This accumulation can take place inside or outside the cell nuclei, inside or outside the cell. It can occur in all types of cells, including central nervous system cells, neurons in general, muscle cells, islet b cells, and leads to cell death.
  • a “neurological proteinopathy” more specifically designates a disease or a set of diseases characterized by the accumulation of protein aggregates in the central nervous system.
  • the expression “inhibit PFAR” means the ability to reduce or completely prevent the action of the ribosome on the folding of proteins, in particular by inhibiting the activity of assisted folding carried by the ribosome, such as by example renaturation of hCA or BCA II proteins assisted by whole ribosomes (70S) of E. coli or the V domain of the large ribosome subunit large rRNA transcribed in vitro (Tribouillard-Tanvier et al. 2008b; Blondel et al. 2016).
  • the inhibition of PFAR can be evaluated according to the protocol described in the Examples below (e.g. FIG. 1).
  • the designation of a particular drug or compound is considered to include not only the named molecule, but also its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, derivatives, isomers, racemates, conjugates, prodrugs. and derivatives of prodrugs of any chemical purity.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to organic or inorganic salts, which retain the activity and biological properties of the compounds of the invention and which are relatively non-toxic.
  • Pharmaceutical salt formation consists of the pairing of an acidic, basic or zwitterion molecule with a counterion to create the salt of the drug.
  • Examples of pharmaceutically acceptable salts according to the invention include those obtained by reacting the main compound, functioning as a base, with an organic or inorganic acid to form a salt, for example, salts of acetic acid, nitric acid, tartaric acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, camphorsulfonic acid, oxalic acid, maleic acid, succinic acid or citric acid.
  • Pharmaceutically acceptable salts according to the invention also include those in which the main compound functions as an acid and reacts with a suitable base to form, for example, sodium, potassium, calcium, magnesium, ammonium or choline salts.
  • hydrate is meant a form of association or combination of a compound with one or more molecules of water.
  • hemihydrate dihydrate and trihydrate forms of a compound.
  • derivative when referring to a compound, includes any molecule which is functionally or structurally related to said compound, such as an acid, an amide, an ester, an ether, an acetylated variant, a hydroxylated variant, an alkyl variant of such a compound.
  • derivative also includes compounds which have one or more of the substituents which do not modify, at least substantially, the function of said compound (here, the inhibition of PFAR).
  • racemate denotes here a mixture in equal proportions of the levorotatory and dextrorotatory enantiomers of a chiral compound.
  • conjugated compound is intended to denote a compound comprising a succession of alternating single and double bonds, which interact with one another and allow delocalization of electrons.
  • a so-called conjugated compound may be in several so-called Lewis forms (called mesomeric, resonant or canonical forms).
  • prodrug is used in the present description to denote any functional derivative or (precursor) of a compound according to the invention which, when administered to a patient, provides said compound following a chemical reaction. spontaneous, a chemical catalysis reaction, and / or a chemical metabolic reaction.
  • Prodrugs typically have an X-drug structure, where X is an inert carrier group and the drug is the active compound.
  • the technical information for selecting a suitable prodrug is general knowledge (Ettmayer et al. 2004; Beaumont et al. 2003; Heimbach et al.
  • prodrugs can be carried out by conventional methods known to those skilled in the art. Methods that can be used to synthesize prodrugs are described in the literature (Ettmayer et al. 2004; Stella 2007; Wermuth 2003; Pezron et al. 2002; Stella
  • the designation of a compound corresponds to the designation of the compound as such, as well as of any pharmaceutically acceptable salt, hydrate, isomer and racemate of said compound.
  • treatment includes therapy, prevention, prophylaxis, delay or reduction of symptoms caused by protein misfolding disease.
  • treatment refers to reducing the amount of misfolded protein or keeping it at a relatively constant level.
  • treatment refers to reducing the amount of protein aggregates or maintaining it at a constant level.
  • treatment particularly includes monitoring the progression of proteinopathy. More specifically, the term “treatment” includes inhibition of PFAR in treated subjects.
  • the treatment is administered to subjects which are animals or humans. In particular, the subjects treated are humans, bovids, camels, deer, felines, ungulates or sheep.
  • a "combination of compounds for its use in the treatment of proteinopathy” means a treatment in which at least two drugs are administered together or separately, at the same time or sequentially. These at least two drugs can be administered by different routes or protocols, so they can be formulated together or separately.
  • the term “therapeutically effective amount” is understood to mean the amount of a compound alone or in combination according to the invention which is effective in the treatment of proteinopathy. The therapeutically effective amount can be determined by the practitioner or the person skilled in the art depending on the size, age, general state of health of the patient, the disease specifically involved and its severity, the mode of administration and other relevant circumstances.
  • Figure 1 Schematic representation of the experimental protocol used to identify compounds capable of inhibiting PFAR in yeast cells.
  • the Itvlàhspl04à [psi-] yeast yeasts (Blondel et al. 2016) are pretreated with different concentrations of compounds that inhibit PFAR or with dimethyl sulfoxide (DMSO, control treatment) for 2 hours. They then undergo a heat shock at 43.5 ° C for one hour, which leads to the denaturation of the proteins. Protein synthesis is then inhibited by the addition of cycloheximide. In the presence of DMSO alone, luciferase regains correct folding thanks to the PFAR activity of the ribosome.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • Figure 2 Effects of ebastine, astemizole, clemastine, metixene, triflupromazine, azelastine, duloxetine, loperamide, thioridazine and flunarizine on PFAR in the yeast model.
  • Antazoline and diazepam two molecules inactive against prions, are not able to inhibit PFAR and were used as controls.
  • the measurements were taken at times 0 minutes, 90 minutes and 150 minutes. In each of the tests, the use of DMSO shows that the luciferase activity evolves from less than 40% of its initial value at 0 minutes, to at least 70% at 90 minutes then to approximately 100% after 150 minutes.
  • the PFAR activity of the ribosome makes it possible to restore the functional conformation of the proteins.
  • Diazepam and antazoline do not inhibit PFAR at relatively high concentrations (200 mM).
  • the compounds tested all made it possible to inhibit PFAR: ebastine from 25 pM; astemizole and thioridazine from 50 pM; flunarizine, clemastine, metixene and triflupromazine from 100 pM; azelastine, duloxetine and loperamide from 150 pM.
  • the experiments were repeated twice.
  • the histograms represent the average percentages including three technical replicates; the error bars are the standard deviation from the mean.
  • % LA luciferase activity expressed as a percentage
  • DMSO dimethylsulfoxide.
  • Figure 3 Effects of astemizole, azelastine, duloxetine, ebastine, flunarizine, loperamide, metixene and triflupromazine against prions in a cellular model (MovS6 cells). Flunarizine as well as astemizole, azelastine, duloxetine, ebastine, loperamide, triflupromazine and metixene have shown good anti-PrP Sc activity allowing to reduce the PrP Sc load with IC50 ⁇ 4 mM . None of the compounds affected the loading of PrP tot . These results demonstrate that the PFAR inhibitor compounds are capable of reducing the propagation of the PrP Sc prion. The blots presented are representative of two independent tests which gave similar results.
  • Figure 4 Effects of azelastine, duloxetine, ebastine, flunarizine, loperamide, metixene and astemizole against prions in an organotypic model. Flunarizine as well as astemizole, azelastine, duloxetine, ebastine, loperamide and metixene showed good anti-PrP Sc activity allowing a reduction to 64% (azelastine at 20 pM), 59% (duloxetine at 30 pM), 50% (ebastine at 30 pM), up to even 28% (loperamide at 30 pM) the loading of PrP Sc . None of the compounds affected the loading of PrP tot . These results demonstrate that PFAR inhibitor compounds are good candidates for the treatment of proteinopathies. The blots presented are representative of two independent tests which gave similar results.
  • Figure 5 Effects of combinations of azelastine and flunarizine, ebastine and flunarizine, and ebastine and loperamide against prions in a cell model of proteinopathy.
  • the rate of accumulation of PrP Sc is estimated by the percentage ratio of the load of PrP Sc to the load of tubulin.
  • Dimethylsulfoxide alone (DMSO) is used to set the reference value (100%) in the absence of the compounds to be tested.
  • Azelastine, flunarizine, ebastine and loperamide were used at particularly low concentrations (respectively, 1.5 pM, 3.5 pM, 3.5 pM and 0.75 pM), for which they do not show little or no efficacy taken separately (the PrP Sc / tubulin ratio is 104%, 85%, 118% and 114% respectively).
  • flunarizine combined with azelastine or ebastine makes it possible to lower the rate of accumulation of PrP Sc to 43%; the combination of ebastine and loperamide makes it possible to reduce this rate to 65%.
  • AZE azelastine
  • FLU flunarizine
  • EBA ebastine
  • LOP loperamide
  • DMSO dimethylsulfoxide.
  • Figure 6 Effects of flunarizine, metixene, thioridazine, astemizole, loperamide, duloxetine, triflupromazine, clemastine, dezelastine and ebastine in a cellular model of oculopharyngeal muscular dystrophy (OPDM) ).
  • DMSO oculopharyngeal muscular dystrophy
  • Figure 7 Effects of flunarizine, metixene, guanabenz and ebastine in an animal model of oculopharyngeal muscular dystrophy (OPDM).
  • OPDM oculopharyngeal muscular dystrophy
  • the invention relates to novel inhibitors of PFAR, in particular their use for inhibiting PFAR, but also for their use in the treatment of proteinopathies.
  • flunarizine has the capacity to inhibit PFAR and that it is effective against prions (Nguyen 2013).
  • the inventors carried out a screening of compounds according to a structure-activity approach on the basis of flunarizine. The compounds thus screened were then evaluated for their anti-prion potential and their capacity to inhibit PFAR.
  • the inventors have been able to identify compounds useful for inhibiting PFAR and which could be repositioned in the treatment of proteinopathies.
  • PFAR protein folding activity carried by the ribosome
  • RRNA large ribosomal RNA
  • Ribosome-assisted folding was then described for ribosomes from all living kingdoms and for all classes and protein sources tested (Das et al. 2008; Barbezier et al. 2011), which is in line with the high conservation of the sequence and secondary structure of the V domain of rRNA (Ben-Shem et al. 2011).
  • PFAR involves the V domain of the large ribosomal RNA (rRNA) of the large 60S subunit of the ribosome, as demonstrated by a reverse screening approach for the identification of one of the cellular targets of 6AP and GA (Tribouillard-Tanvier et al. 2008a and 2008b).
  • the V domain of the large rRNA (23S in E. coli, 25S in S. cerevisiae, 28S in metazoans) is a ribozyme carrying 2 enzymatic activities: (i) peptidyl transferase activity, and (ii) PFAR (Das et al. 2008; Voisset et al. 2008).
  • the binding of 6AP and GA to 23S rRNA specifically inhibits PFAR, without interfering with the translational activity of the ribosome (Tribouillard-Tanvier et al. 2008a and 2008b).
  • An object according to the invention is a pharmaceutical composition comprising at least one compound which inhibits PFAR for its use in the treatment of proteinopathy.
  • the invention also relates to the use of a composition comprising at least one compound that inhibits PFAR, for the manufacture of a medicament for treating proteinopathy.
  • the invention also relates to a method of treating a proteinopathy, comprising the administration of an effective amount of at least one compound inhibiting PFAR, to a subject in need thereof.
  • PFAR inhibitors have shown beneficial activity in models for prion diseases and oculopharyngeal muscular dystrophy.
  • composition for its use in the treatment of proteinopathy comprises at least one compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, la dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use in the treatment of proteinopathy comprises at least one compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, in combination with at least one distinct compound selected from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene, guanabenz , the 6- aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine , dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxe
  • composition for its use in the treatment of proteinopathy comprises at least one compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, la dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, in combination with flunarizine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, la dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine in combination with flunarizine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises ebastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, azelastine, metixene, guanabenz, 6- aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridzine, trifluoperaazine , triflupromazine, alimemazine (trime
  • the composition comprises azelastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepine, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, alimemazine
  • the composition comprises duloxetine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene , guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, la clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, alimemaz
  • the composition for its use in the treatment of proteinopathy comprises at least two compounds chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine , thioridazine and triflupromazine, preferably from ebastine, flunarizine, loperamide and azelastine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use comprises ebastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole , duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use comprises azelastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, flunarizine, loperamide, astemizole , duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use comprises flunarizine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, loperamide, astemizole , duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use comprises loperamide, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate, isomer and racemate thereof.
  • the composition for its use comprises astemizole, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide , duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use comprises duloxetine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use comprises metixene, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate, isomers and racemate thereof.
  • the composition for its use comprises clemastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition for its use comprises thioridazine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine, and triflupromazine, or a pharmaceutically acceptable salt, hydrate, isomer and racemate thereof.
  • the composition for its use comprises triflupromazine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine and thioridazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • composition for its use comprises a combination chosen from:
  • Compounds that can cross the blood-brain barrier including alimemazine (trimeprazine), atomoxetine, azelastine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, diphenhydramine, duloxetine, ebastine, nefopam, orphenadrine, triflupromazine, zimelidine, are more particularly relevant for use in the treatment of neurological proteinopathies.
  • Compounds which do not cross the blood-brain barrier such as benzydamine, loperamide and prenylamine, are more particularly relevant for use in the treatment of non-neurological proteinopathies. It may be advantageous to combine compounds capable of crossing the blood-brain barrier with compounds which cannot in order to reduce the presence of prions in a more generalized manner.
  • proteins can only perform their function when they assume a suitable spatial conformation called a functional conformation.
  • a bad conformation causes many pathologies, in animals including humans. Examples of human proteinopathies are given below.
  • Prion diseases within the meaning of the invention, include all diseases due to a prion in a mammal, such as for example bovine spongiform encephalopathy, Creutzfeldt-Jakob disease (CJD), Gerstmann-Straussler syndrome. Scheinker (SGSS), Fatal familial insomnia (IFF), Kuru, VPSPr disease, Sheep scrapie, Chronic wasting disease (CWD), Feline spongiform encephalopathy, Camelid spongiform encephalopathy ( CSE) and exotic ungulate encephalopathy.
  • bovine spongiform encephalopathy Creutzfeldt-Jakob disease (CJD), Gerstmann-Straussler syndrome.
  • Scheinker SGSS
  • IFF Fatal familial insomnia
  • Kuru VPSPr disease
  • Sheep scrapie Sheep scrapie
  • Chronic wasting disease CWD
  • Feline spongiform encephalopathy Camelid spongiform
  • CJD exists in several forms: the sporadic form (sCJD), the hereditary form (fCJD), the acquired or iatrogenic form (iCJD).
  • the novel variant CJD (vCJD) is considered to be an example of an iatrogenic form of CJD.
  • CJD is a rare transmissible encephalopathy (1 case per million people per year) prevalent especially between 50 and 70 years. Death usually occurs within a year of onset of symptoms, which are: sleep disturbance, personality changes, ataxia, aphasia, vision loss, general weakness, muscle atrophy, myoclonus and progressive dementia.
  • VPSPr disease for "Variably protease sensitive prionopathy" is a sporadic prion disease caused by spontaneous conversion of PrP c to PrP res or by somatic mutation. It has similarities with CJD, but the protein in the pathological form PrP res is less resistant to digestion by proteases. Patients present with psychiatric symptoms, speech deficits (aphasia and / or dysarthria), and also cognitive impairments. This disease is very rare with an incidence varying from 2 to B per 100 million people. Fatal familial insomnia is a transmissible spongiform encephalopathy linked to an abnormality in the PRNP gene encoding the prion protein PrP c . It concerns around forty families around the world.
  • Proteins other than the PrP prion protein may be associated with proteinopathies.
  • Lewy body disease or Lewy body dementia is a neurodegenerative disease characterized by the deposition of the protein alpha-synuclein (which makes it synucleinopathy) inside neurons. Symptoms are mainly the development of dementia, parkinsonism, changes in cognitive performance and visual hallucinations. It is the second most common neurodegenerative dementia after Alzheimer's disease.
  • Parkinson's disease is also a synucleinopathy. It is associated with tremors, hypokinesia and unstable posture. Globally, the disease is diagnosed in more than 300,000 people each year. Alzheimer's disease is a progressive neurological disease affecting the brain and which is characterized essentially by the presence of neuritic plaques composed of aggregates of beta-amyloid peptides, resulting from the cleavage of the precursor of the amyloid protein (APP), and of aggregates of the Tau protein. This disease is one of the most common neuropathologies and has a worldwide impact.
  • APP amyloid protein
  • Huntington's disease or Huntington's chorea is a rare genetic dominant disease caused by the synthesis of the huntingtin protein resulting from a gene alteration (increase in the number of Q residues encoded by exon 1 of the HTT gene) on the chromosome 4.
  • Symptoms can be motor (especially speech and swallowing disorders), cognitive and psychiatric.
  • Amyotrophic lateral sclerosis (ALS), or Charcot's disease is characterized by progressive degeneration of motor neurons in the cerebral cortex with subsequent destruction of the pyramidal tract.
  • the motor skills that are affected in the disease therefore concern both facial mobility (smile, speech, movement of the tongue, ability to swallow or speak) and that of the arms and legs.
  • FUS FUS
  • TDP43 SOD1
  • C90rf72 KIF5A
  • amyloid polypeptides also called amylin
  • IAPP amyloid polypeptides
  • Oculopharyngeal muscular dystrophy is a rare autosomal dominant genetic disorder that affects approximately 1 person per 100,000 in Europe. It is caused by an expansion of the poly-alanine domain in the PABPN1 protein encoded by the PABPN1 gene (poly (A) -bi nding protein nuclear 1; 14qll.2), which leads to the synthesis of a mutant protein that s 'accumulates in the form of nuclear aggregates in muscle cells.
  • DMOP is assimilated to a proteinopathy (Harish et al. 2018).
  • Frontotemporal dementias are half hereditary; the most frequent mutations involve chromosome 17q21-22 causing abnormalities in the microtubule-binding tau protein, which classifies them as tauopathies.
  • Supranuclear palsy and corticobasal degeneration can be considered forms of frontotemporal dementia, as they share common neuropathological bases and similar gene mutations affecting the tau protein.
  • the other pathogenic proteins which have been described are FUS, TDP43 and SOD1.
  • the proteinopathy is selected from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru, VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculopharyngeal muscular dystrophy, bovine spongiform encephalopathy, scrapie in sheep, chronic wasting disease deer, feline spongiform encephalopathy, camelid spongiform encephalopathy and exotic ungulate encephalopathy.
  • proteinopathy is a human proteinopathy selected from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru, VPSPr disease, Lewy body disease, Lewy body disease, Parkinson's, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculopharyngeal muscular dystrophy.
  • proteinopathy is a proteinopathy affecting non-human mammals, selected from bovine spongiform encephalopathy, sheep scrapie, chronic wasting disease of cervids, feline spongiform encephalopathy, camelid spongiform encephalopathy and exotic encephalopathy of ungulates.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising at least one compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, for use in the treatment of proteinopathy selected from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru, VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculo muscular dystrophy pharyngeal, bovine spongiform encephalopathy, scrapie in sheep, chronic wasting disease of cervids, feline spongiform encephalopathy, spongiform
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising ebastine for its use in the treatment of a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru, VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculopharyngeal muscular dystrophy , bovine spongiform encephalopathy, scrapie, chronic cervid wasting disease, feline spongiform encephalopathy, camelid spongiform encephalopathy and exotic ungulate encephalopathy.
  • a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru, VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington
  • the invention relates to a composition comprising azelastine for its use in the treatment of a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru , VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculopharyngeal muscular dystrophy, bovine spongiform encephalopathy, scrapie, chronic wasting disease of cervids, feline spongiform encephalopathy, spongiform encephalopathy of camelids and exotic encephalopathy of ungulates.
  • a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru , VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease
  • the invention relates to a composition comprising duloxetine for its use in the treatment of a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru , VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculo- muscular dystrophy pharyngeal, bovine spongiform encephalopathy, scrapie in sheep, chronic wasting disease of cervids, feline spongiform encephalopathy, spongiform encephalopathy of camels and exotic ungulate encephalopathy.
  • a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru , VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer'
  • the invention relates to a composition comprising triflupromazine for its use in the treatment of a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru , VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral sclerosis, frontotemporal dementia, type 2 diabetes, oculo- muscular dystrophy pharyngeal, bovine spongiform encephalopathy, scrapie in sheep, chronic wasting disease of cervids, feline spongiform encephalopathy, spongiform encephalopathy of camels and exotic ungulate encephalopathy.
  • a proteinopathy chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru , VPSPr disease, Lewy body disease, Parkinson's disease, Alzheimer
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising at least one compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, preferably from ebastine, azelastine, duloxetine and triflupromazine, for its use in the treatment of proteinopathy linked to the prion protein PrP, preferably human, of preference chosen from Creutzfeldt-Jakob disease, Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome, fatal familial insomnia, kuru and VPSPr disease.
  • compositions for the treatment of proteinopathies according to the invention can be administered in combination with the treatments currently under development for this indication, in particular immunotherapy.
  • - Ebastine (trade name e.g. “Kestin”): from about 1 to about 30 mg per day, preferably from about 10 to about 20 mg per day, in one, two or three doses.
  • - azelastine (trade name eg “Allergodil”): from approximately 0.30 to approximately 2.00 mg per day, preferably between approximately 0.50 and approximately 1.00 mg per day, in particular 0.56 mg per day. day, in one, two or three doses.
  • - duloxetine (trade name eg "Cymbalta”, “Yentreve”, “Xeristar” or “AriClaim”): from approximately 15 to approximately 150 mg per day, preferably approximately 30, approximately 60, approximately 90 or approximately 120 mg per day , in one, two or three doses, more preferably about 60 mg per day in one dose.
  • - atomoxetine (trade name eg “Strattera”) in the form of tablets at a dose of approximately 0.5 mg / kg / day to approximately 1.8 mg / kg / day, preferably approximately 1.2 mg / kg /day.
  • Benzydamine in particular in the form of benzydamine hydrochloride (trade name eg "Opalgyne”), for example in lozenges at a dose of approximately 9 mg / day, or in solution at a dose of approximately 300 mg / day, of preferably about 200 mg / day.
  • benzydamine hydrochloride trade name eg "Opalgyne”
  • - Biperiden (trade name eg “Akineton”) in the form of tablets at a dose of approximately 1 mg / day to approximately 12 mg / day, preferably approximately 4 mg / day.
  • - Chloropyramine (trade name eg “Suprastin”) in the form of tablets, at a dose of approximately 75 mg / day to approximately 150 mg / day, preferably approximately 100 mg / day.
  • - citalopram in particular in the form of citalopram hydrobromide (trade name eg “Celapram”, “Celexa”, “Cipram”, “Cipramil”, “Ecosol”, Mepha, “Récital”, “Seropram” etc.) in the form of tablets at a dose of from about 20 mg / day to about 40 mg / day, preferably about 20 mg / day.
  • citalopram hydrobromide trade name eg “Celapram”, “Celexa”, “Cipram”, “Cipramil”, “Ecosol”, Mepha, “Récital”, “Seropram” etc.
  • - dicyclomine (trade name e.g. “Bentyl”, “Dibent”, “Dicyclocot”) in the form of tablets at a dose of about 4 mg / day to about 40 mg / day, preferably about 4 mg / day.
  • - nefopam (trade name e.g. “Acupan”) in the form of an injectable solution at a dose of approximately 20 mg / day to approximately 120 mg / day, preferably approximately 20 to approximately 80 mg / day.
  • - orphenadrine (trade name eg “Norflex”), in particular orphenadrine citrate or orphenadrine hydrochloride, in the form of an injectable solution or tablets, at a dose of approximately 60 mg / day to approximately 120 mg / day, preferably about 60 mg / day
  • prenylamine (trade name e.g. “Segontin”), in particular prenylamine lactate, in the form of tablets at a dose of approximately 60 mg / day to approximately 180 mg / day, preferably approximately 60 mg / day.
  • triflupromazine (trade name e.g. "Vesprin") in tablet form at a dose of about 2 mg / day to about 40 mg / day, preferably about 10 mg / day
  • - zimelidine (trade name eg "Normud” or “Zelmid”) in tablet form at a dose of about 10 to about 200 mg per day, preferably about 25 to about 100 mg per day, preferably about 50 mg per day, in one or two doses.
  • compositions as stinks such as
  • the invention also relates to compositions as such, comprising a combination of compounds as described above. Indeed, the inventors have shown that such combinations could exhibit a synergistic effect in improving the anti-prion activity, in particular in cell culture models. (Figure 5). In fact, the reduction in the rate of accumulation of PrP Sc obtained by virtue of the combinations of compounds is markedly greater than the sum of the effects obtained by the use of the compounds alone. At 1.5 mM and 3.5 mM, azelastine and flunarizine do not modify the level of PrP Sc (104% and 85%, respectively).
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising at least one compound chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, triflupromazine and zimelidine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, said compound being in combination with at least one distinct compound selected from flunarizine, loperamide, ebastine, l ' azelastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperidene, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipra
  • the composition comprises ebastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, azelastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, the clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, al
  • the composition comprises azelastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine , desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, la trifluoperazine, triflupromazine, alimemaz
  • the composition comprises duloxetine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene , guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, la clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, alimemaz
  • the composition comprises at least two compounds chosen from ebastine, azelastine, duloxetine, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, dicyclomine, nefopam, l ' orphenadrine prenylamine, triflupromazine and zimelidine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises at least two compounds chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, preferably from ebastine, flunarizine, loperamide and azelastine, or their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises ebastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine , metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises flunarizine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, loperamide, astemizole, duloxetine , metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises loperamide, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from ebastine, azelastine, flunarizine, astemizole , duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises azelastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen from among ebastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine , metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises astemizole, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound selected from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, duloxetine, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises metixene, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound selected from ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole , duloxetine, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises duloxetine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen: ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, metixene, clemastine, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises clemastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen: ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, thioridazine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises thioridazine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen: ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine and triflupromazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises triflupromazine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with a compound chosen: ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine and thioridazine, or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • a compound chosen: ebastine, azelastine, flunarizine, loperamide, astemizole, duloxetine, metixene, clemastine and thioridazine or one of their pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates.
  • the composition comprises a combination chosen from:
  • compositions according to the invention typically comprise one or more acceptable excipients or vehicles.
  • compositions according to the invention as such or for their use in the treatment of proteinopathy are generally mixed with pharmaceutically acceptable vehicles or excipients.
  • pharmaceutically acceptable carrier or excipient denotes a compound of pharmaceutical grade which improves the administration, stability or bioavailability of a compound and can be metabolized by a subject to which it is administered and is not toxic to said subject .
  • Preferred excipients according to the invention include any of the excipients commonly used in pharmaceuticals, such as, for example, microcrystalline cellulose, lactose, starch and soybean powder.
  • Another object according to the invention relates to a process for the manufacture of pharmaceutical compositions comprising the mixture of the compounds or combinations described above with at least one or more pharmaceutically acceptable vehicles or excipients.
  • An object according to the invention consists of the use of compounds as novel inhibitors of PFAR.
  • PFAR protein phosphatidylcholine
  • alimemazine trimeprazine
  • amitriptyline astemizole
  • atomoxetine azelastine
  • benzydamine biperiden
  • chloropyramine citalopram
  • clemastine clomipramine
  • desipramine desloratadine
  • dicyclomine diphenhydramine
  • doxepin duloxetine
  • ebastine fluoxetine
  • haloperidol imipramine
  • loperamide nefopam
  • orphenadrine prenylamine, reboxetine
  • la thioridazine trifluoperazine
  • triflupromazine chlorpromazine
  • quinacrine quinacrine
  • zimelidine zimelidine
  • the invention relates to the use, preferably in vitro or ex vivo, of at least one compound chosen from alimemazine (trimeprazine), amitriptyline, astemizole, atomoxetine, azelastine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepine, duloxetine, ebastine, fluoxetine, haloperidol imipramine, loperamide, nefopam, orphenadrine, prenylamine, reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, chlorpromazine, quinacrine (mepacrine) and zimelidine, preferably at least one compound selected from l ebastine, azelastine, loperamide, duloxetine and triflupromazine,
  • the use of these compounds to inhibit PFAR can be combined with the use, preferably in vitro or ex vivo, of at least one distinct compound selected from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene , guanabenz, 6- aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, la clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepin, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine, thioridazine, trifluoperazine, triflupromazine, alimemazine (tri
  • the invention relates to the use, preferably in vitro or ex vivo, of a composition comprising ebastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound selected from flunarizine, loperamide, azelastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, l ' atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepine, duloxetine, fluoxetine, haloperidol imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine),
  • the invention relates to the use, preferably in vitro or ex vivo, of a composition comprising azelastine, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepine, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine,
  • the invention relates to the use, preferably in vitro or ex vivo, of a composition comprising duloxetine, or a of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with at least one compound chosen from flunarizine, loperamide, ebastine, azelastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomhydramine, diphenene , doxepin, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxe
  • the invention relates to the use, preferably in vitro or ex vivo, of a composition comprising loperamide, or one of its pharmaceutically acceptable salts, hydrates, isomers and racemates, in combination with au minus one compound selected from flunarizine, ebastine, azelastine, metixene, guanabenz, 6-aminophenanthridine, imiquimod, tacrolimus, astemizole, doxycycline, amitriptyline, atomoxetine, benzydamine, biperiden, chloropyramine, chlorpromazine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, dicyclomine, diphenhydramine, doxepine, duloxetine, fluoxetine, haloperidol, imipramine, nefopam, orphenadrine, prenylamine, quinacrine (mepacrine), reboxetine,
  • the compounds When using the compounds present in combination to inhibit PFAR, the compounds can be used simultaneously, separately or sequentially.
  • the uses of the compounds according to the invention are in vitro and / or ex vivo uses.
  • the use of the compounds for inhibiting the PFAR activity is a use in vitro on cells, such as animal or plant cells, eukaryotes or prokaryotes, isolated or collected, for example in organoids.
  • cells such as animal or plant cells, eukaryotes or prokaryotes, isolated or collected, for example in organoids.
  • the use of the compounds for inhibiting the activity of PFAR is carried out in yeasts.
  • the use of the compounds to inhibit PFAR activity is an ex vivo use on organs or organ fragments isolated from an animal or a plant and which are not intended to be reintroduced into animals or plants.
  • the use of compounds to inhibit the activity of PFAR is carried out in mouse cerebellum slices.
  • the inventors have opted for the SOSA approach (Selective optimization of side activities) which allows therapeutic repositioning.
  • This approach proposes to preferably screen drugs already in the clinic or undergoing clinical trials in order to determine whether they are likely to have additional pharmacological targets (Wermuth 2004). Since their toxicity, safety and bioavailability in humans have already been evaluated, drugs from chemical libraries based on the SOSA approach could quickly be administered as a compassionate treatment to people with prion diseases for which no treatment is currently available.
  • the Prestwick chemical library had been screened, allowing the identification of flunarizine, which possesses anti-prion activity and which is an inhibitor of PFAR (Nguyen 2013).
  • ROCS search (“Rapid Overlay of Chemical Structures”) makes it possible to identify compounds by similarity in the superposition of forms and / or pharmacophores, in using only the heavy atoms of a ligand and ignoring the hydrogens.
  • the degree of similarity in form and / or pharmacophore is illustrated by a score called “ComboScore”.
  • This ROCS research was conducted on the basis of flunarizine. Flunarizine exhibits a pharmacophore structure composed of three aromatic groups, and two nitrogen atoms, which can interact with the target through interactions with electrostatic or hydrogen bond acceptors.
  • the experimentally crystallized structure of flunarizine was obtained from The Cambridge Crystallographic Data Center (www.ccdc.cam.ac.uk/structures, compound identifier: "JOBSIE”).
  • 45 compounds were chosen: amitriptyline, antazoline, astemizole, atomoxetine, azelastine, benzydamine, biperiden, cetirizine, chloropyramine, chlorpromazine, cinnarizine, citalopram, clemastine, clomipramine, desipramine, desloratadine, diazepam, dicyclomine, diphenhydramine, diphenidol, doxepin, duloxetine, ebastine, epinastine, ethosoxetimide, fluoro , haloperidol, imipramine, isradipine, ketotifen, loperamide, metixene, mirtazapine, n
  • the compounds were tested for their activity against the PrP Sc prion in cell culture, as described below.
  • the experimental protocol allowing the identification of compounds capable of inhibiting PFAR activity in vivo was taken from Blondel et al. (2016) and is shown schematically in Figure 1.
  • the strain [psi-] ltvlA / hspl04A 74-D694 (D ⁇ DH, Blondel et al. 2016), deleted from the HSP104 gene and enriched in PFAR thanks to the deletion of the LTV1 gene , was transformed by the plasmid pDCM90 (Hasin et al. 2014; Parsell et al. 1994) allowing the constitutive expression of the LuxAB polypeptide (heat-sensitive bacterial luciferase).
  • the transformed yeasts were grown exponentially at 29 ° C.
  • the LuxAB activity was measured 60 minutes after the heat shock (corresponding to the time 0 minutes in Figure 1), and the cells were placed in culture conditions at 29 ° C for the times indicated, the luciferase activity being measured at 30 minute intervals by adding 10 ⁇ L of n-decylaldehyde (Decanal, Sigma Aldrich) to 120 ⁇ L of yeast culture. Luminescence was measured using a Varioscan microplate reader (ThermoFisher). The luciferase activity was then expressed as a percentage of the activity measured before the heat shock treatment for each strain.
  • Chlorpromazine, quinacrine, azelastine, thioridazine, triflupromazine and guanabenz chloride were purchased from Sigma Aldrich (USA); astemizole, duloxetine, clemastine and ebastine were purchased from CarboSynth (UK); the metixene was purchased from LGC (Laboratory of Chemical Engineering in Toulouse, France).
  • Figure 2 shows that all of the compounds tested inhibit the PFAR activity: from 25 pM for ebastine, 50 pM for astemizole and thioridazine, 100 pM for clemastine, metixene, flunarizine and la triflupromazine, and from 150 pM for azelastine, duloxetine and loperamide.
  • Table 3 gives details of the doses tested and the values of Cl 50 obtained, except for chlorpromazine and quinacrine for which the IC 50 values are taken from the literature. Western blots are shown in Figure 3. The most effective compounds in vitro are those for which the C o is minimal. It emerges from Tables 2 and B that the anti-PrP Sc activity does not correlate with the similarity of the compound with flunarizine (the lower the ComboScore, the closer the compound is to flunarizine). Table 3
  • compositions according to the invention are effective as anti-prions in an orqonotypic model.
  • the antiprion activity of the compounds against the PrP Sc prion was evaluated in an organotypic test in which slices of mouse cerebellum are infected with the prion (strain 127S) in culture, as described previously (Nguyen et ql. 2014a and b; Falsig et ql. 2008) using transgenic mice tg338 which overexpress the VRQ allele of the ovine prion protein (Vilotte et ql. 2001). Preparation and cultivation of slices was performed as described elsewhere (Nguyen et ql. 2014a and b; Falsig et ql.
  • Cerebellar slices (at least 7 slices per condition) were lysed and homogenized in 350 ⁇ L of lysis buffer (0.5% sodium deoxycholate, 0.5% Triton-X100, 5 mM Tris-HCI pH 7.5 ) using a homogenizer (Beadbug, Benchmark Scientific, United States) in the presence of glass beads (reference # 079053, Dutscher, France) as described in the literature (Nguyen et ql. 2014a and b; Falsig et ql. 2008 ).
  • lysis buffer 0.5% sodium deoxycholate, 0.5% Triton-X100, 5 mM Tris-HCI pH 7.5
  • a homogenizer Beadbug, Benchmark Scientific, United States
  • PrP tot The effects of flunarizine on the stable state level of PrP (PrP tot ) was determined on the same MovS6 cell lysates treated in the absence of treatment with proteinase K. After cell lysis, the samples were digested with proteinase. K in order to reveal the PrP Sc content by immunoblotting. Compounds in combinations are more effective than compounds alone.
  • Figure 5 shows that the combinations of compounds have a much greater effect on the rate of accumulation of PrP Sc than the addition of the effects of compounds alone. This surprising result demonstrates the existence of a synergy between the compounds. All these results show that the compounds reduce the load of PrP Sc and demonstrate their therapeutic potential.
  • compositions according to the invention are effective in the treatment of oculopharyngeal muscular dystrophy (PDD) in vitro
  • the murine H2K D7e myoblasts (Raz et al. 2011) were inoculated at 80% confluence in 8-well plates (Ibidi) whose wells were covered with a layer of matrigel (1/10) and contained proliferation medium. Composed of DMEM, decomplemented fetal calf serum, penicillin, streptomycin, geneticin, chicken embryo extract and gamma interferon. Twenty-four hours after seeding, the cells were differentiated for 4 days in a differentiation medium composed of DMEM, horse serum (10%) and a mixture of penicillin / streptomycin (1%).
  • Guanabenz was used as a positive control.
  • the results are presented in Figure 6 and demonstrate that flunarizine, metixene, thioridazine, astemizole, loperamide, duloxetine, azelastine and ebastine reduce the amount of muscle cell nuclei containing aggregates of PABPN1. Flunarizine, metixene and ebastine are more active than guanabenz.
  • Triflupromazine and clemastine are negative, like the negative control used (diazepam).
  • the compositions according to the invention are effective in the treatment of oculopharyngeal muscular dystrophy (OPDM) in vivo in a Drosophila model
  • the model used is a Drosophila model for DMOP in which the mammalian protein PABPN1 with a repeat of 17 alanines (PABPN1-17 ala) is specifically expressed in the muscles of Drosophila (Chartier et al. 2006; Chartier et al. 2015) .
  • These models mimic the characteristics of the disease, i.e., progressive muscle weakness and degeneration, as well as the formation of nuclear PABPN1 aggregates.
  • expression of PABPNl-17ala in indirect wing muscles leads to abnormal wing posture, resulting in impaired muscle function and muscle degeneration (Chartier et al. 2006).
  • DMOP Drosophila (Act-88F-PABPNl-17ala / +) derived from the cross Females w 1118 ; Act-88F-PABPNl-17ala / TM3, Sb X Males w 1118 ) were brought into contact with a nutrient agar medium containing either 1.5% DMSO or 1.5 mM flunarizine, or 2% DMSO, 2 mM metixene or 2 mM guanabenz (positive control), i.e. 1.5% DMSO or 1.5 mM ebastine. Guanabenz was used as a positive control because its activity has already been described for DMOP (Barbezier et al. 2011; Malerba et al.
  • FIG. 7 shows that treatment with flunarizine (top panel) and with metixene (middle panel) and ebastine (bottom panel) makes it possible to reduce the number of Drosophila having an abnormal phenotype of the position of the wings.
  • the compounds were administered in the food, prepared as follows: Instant medium for Drosophila (Carolina Biological Supply Company) was reconstituted in each tube with a 1% solution of yeast in water, supplemented with the compounds solubilized in the DMSO with increasing concentration, or with DMSO alone. Each tube contained 2 mL of reconstituted medium. The compounds were administered orally in fresh food offered to adult flies each day from day 2 to day 5.
  • Guanabenz Guanabenz, whose activity has already been described for DMOP (Barbezier et o /. 2011; Malerba et al. 2019), was used as a control at a concentration of 2 mM. Flunarizine was administered at 1.5 mM. Metixene was administered at a concentration of 2 mM. Ebastine was tested at 1.5 mM.
  • the effect of the compounds was quantified by daily measurement of the number of flies exhibiting abnormal wing posture, corresponding to flies expressing PABPNl-17ala, from day B to day 6 of adulthood: groups of five males per conditions are placed in an empty tube and the number of males with abnormal wing position is recorded by direct observation of the flies in the tube without anesthesia. The total number of flies analyzed for each condition is shown in Figure 7.
  • the compounds according to the invention are effective in an in vivo model of DMOP. Flunarizine, metixene and ebastine have shown beneficial effects by allowing the significant reduction (chi-square statistical test) in the number of flies with abnormal wing posture reported to control flies (administration of DMSO alone) (figure 7) .
  • RNA aptamer R12 disrupts the Alzheimer's disease-related complex between prion and amyloid b.
  • Mahoudeau A., Ythier, V., Lainé, J., Negroni, E., Abgueguen, E., Simonelig, M., Guedat, P., Mouly, V., Butler-Browne, G., Voisset, C ., Dickson, G., Trollet, C. (2019).

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Abstract

L'invention a trait à de nouveaux composés inhibiteurs de l'activité chaperon de protéines du ribosome (« protein folding activity of the ribosome » ou « PFAR »). Plus particulièrement, l'invention concerne leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de la PFAR, les compositions les comprenant, et des méthodes de traitement des protéinopathies.

Description

Nouveaux composés inhibiteurs de la PFAR Domaine technique
La présente invention appartient au domaine technique des inhibiteurs de l'activité chaperon de protéines du ribosome (« protein folding activity of the ribosome » ou « PFAR »). Plus particulièrement, l'invention concerne des inhibiteurs de PFAR pour leur utilisation dans le traitement de maladies liées au mauvais repliement et/ou à l'agrégation de protéines.
Etat de la technique
La plupart des maladies neurodégénératives partagent comme caractéristique commune la présence de protéines mal repliées qui forment des agrégats amyloïdes intra- ou extra cellulaires. Elles sont alors qualifiées d'agrégopathies, de protéinopathies, de foldopathies, de maladies de la conformation ou du mauvais repliement des protéines. Elles englobent par exemple la maladie de Creutzfeldt-Jakob, la maladie d'Alzheimer ou encore la maladie de Parkinson. La présence de protéines qui s'agrègent en raison de leur conformation structurelle a depuis été identifiée dans d'autres cibles que le système nerveux central. Le nombre de maladies dont on découvre qu'elles correspondraient à des protéinopathies est en constante augmentation.
Le concept de protéines infectieuses a été établi initialement pour la protéine prion PrP chez les mammifères avec l'encéphalopathie subaiguë spongiforme transmissible. La protéine prion PrP se retrouve sous deux isoformes : la PrPc et la PrPres. La PrPres diffère de la PrPc par sa structure tridimensionnelle et sa propension à former des fibres amyloïdes. Dans sa conformation PrPres, la protéine prion s'accumule sous la forme de fibres amyloïdes qui se propagent spontanément en l'absence d'acide nucléique spécifique au prion. Cette accumulation entraîne une dégénérescence du système nerveux central associée notamment à la démence et à de la spongiose. Chez les animaux, des exemples bien connus de maladies à prions sont la tremblante du mouton (ou scrapie), l'encéphalopathie spongiforme bovine et le dépérissement chronique des cervidés. Chez l'humain, on peut citer la maladie de Creutzfeldt-Jakob, l'insomnie familiale fatale et le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker. D'autres protéines sont connues pour s'accumuler sous forme d'agrégats dans des maladies neurodégénératives. Chez l'humain, la maladie d'Alzheimer (accumulation des protéines tau et bêta amyloïde), la maladie de Parkinson (accumulation de l'alpha- synucléine), la sclérose amyotrophique latérale (accumulation de Fus et TDP43), la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (accumulation de PABPN1) en sont quelques exemples. Différentes à plusieurs niveaux, ces protéines ont toutefois en commun leur propension à changer de conformation et à former des fibres amyloïdes.
Les recherches initiées sur les maladies à prions ont montré l'implication du ribosome dans la propagation de la conformation pathologique de protéines prions. Le ribosome, en plus de son activité dans la synthèse protéique, intervient aussi dans le repliement des protéines. Cette seconde activité, dite chaperon de protéines (« protein folding activity of the ribosome » ou « PFAR »), a été associée aux maladies à prions pour la première fois en 2008, avec deux molécules anti-prions : la 6-aminophénanthridine et le guanabenz (Tribouillard-Tanvier et al. 2008). Plus tard, l'imiquimod (Oumata et al. 2013), la flunarizine et le métixène (Nguyen 2013) ont été décrits comme des composés inhibiteurs de la PFAR et actifs dans des modèles de maladies à prions. La 6-aminophenanthridine et le guanabenz, inhibiteurs de la PFAR, ont également montré une efficacité dans d'autres modèles de protéinopathies, telles que pour la maladie d'Huntington (EP2066312B1) et pour la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (Barbezier et al. 2011 ; Malerba et al. 2019). Le guanabenz a aussi été montré comme étant efficace pour diminuer la toxicité de l'agrégation de la protéine TDP43 dans un modèle pour la sclérose amyotrophique latérale (Vaccaro et al. 2013).
Ainsi, l'inhibition de la PFAR apparaît comme une cible thérapeutique de choix pour le traitement des protéinopathies. En l'absence de traitement de ces maladies, il existe donc un besoin urgent à identifier de nouveaux composés médicaments.
Résumé de l'invention
L'invention répond à ce besoin en proposant un ou plusieurs composés inhibiteurs de la PFAR pour leur utilisation dans traitement d'une protéinopathie. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant un ou plusieurs composés inhibiteurs de la PFAR, pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter une protéinopathie. L'invention vise aussi une méthode de traitement d'une protéinopathie, comprenant l'administration d'une quantité efficace d'un ou plusieurs composés inhibiteurs de la PFAR, à un sujet en ayant besoin. Ces composés, dont la propriété inhibitrice de la PFAR est mise en évidence pour la première fois par les Inventeurs, sont décrits ci-après.
Ainsi, un objet selon l'invention porte sur une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie. L'invention porte également sur les combinaisons de ces composés.
En particulier, l'invention porte sur une composition comprenant l'ébastine ou un sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.
En alternative, l'invention vise une composition comprenant l'azélastine ou un sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.
En alternative, l'invention vise une composition comprenant la duloxétine ou un sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.
Selon une implémentation préférée, la composition selon l'invention pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend en outre au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie selon l'invention peut être choisie parmi les combinaisons suivantes : l'ébastine et la flunarizine, l'ébastine et l'azélastine, l'ébastine et le lopéramide, l'azélastine et la flunarizine, l'azélastine et le lopéramide, et la flunarizine et le lopéramide, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
De manière préférée, les composés destinés à être utilisés en combinaison selon la présente invention peuvent être administrés simultanément, séparément ou séquentiellement.
D'autre part, la protéinopathie peut-être choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.
Selon une implémentation préférée, ladite protéinopathie est liée à l'accumulation de protéines prion PrP sous forme d'agrégats.
Alternativement, ladite protéinopathie est choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru et la maladie VPSPr.
En conséquence, l'invention vise aussi une composition selon l'invention pour son utilisation dans le traitement de la maladie de Creutzfeldt-Jakob.
D'autre part, l'invention vise une composition comprenant au moins un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
D'autre part, l'invention vise une composition comprenant l'ébastine en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
D'autre part, l'invention vise une composition comprenant au moins un composé choisi l'azélastine en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, D'autre part, l'invention vise une composition comprenant la duloxétine en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, l'invention vise une composition ou une composition pour son utilisation telle que décrite ci-avant, comprenant en outre des véhicules ou excipients pharmaceutiquement acceptables.
D'autre part, les composés selon l'invention qui sont utiles pour le traitement d'une protéinopathie sont des inhibiteurs de la PFAR. En conséquence, l'invention vise aussi au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'alimémazine (triméprazine), l'amitriptyline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le lopéramide, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, la chlorpromazine, la quinacrine (mépacrine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, pour inhiber la PFAR, en d'autres termes, pour inhiber l'activité chaperon de protéines. De manière préférée, ladite utilisation est une utilisation in vitro ou ex vivo.
Définitions
Dans le contexte de l'invention, le terme « environ » est utilisé pour indiquer qu'une valeur comprend les variations inhérentes à la marge d'erreur liée à l'utilisation d'un appareil de mesure, à la méthode employée pour déterminer la valeur, ou les variations pouvant exister entre les cellules au sein de la population étudiée et entre les populations. Ainsi, dans un mode de réalisation, le terme « environ », placé devant une valeur, correspond à plus ou moins 10% de cette valeur.
Dans le contexte de l'invention, le terme « protéinopathie » ou « protéinopathies » désigne une maladie ou un ensemble de maladies également connues sous les termes ou « maladie du mauvais repliement des protéines » ou « maladies de la conformation » ou « agrégopathie » ou « foldopathie ». Ces maladies se caractérisent par l'accumulation de protéines qui présentent une structure tridimensionnelle différente de celle observée pour une même protéine chez un sujet sain, notamment enrichies en feuillets bêta et qui forment des fibres amyloïdes, conduisant à l'accumulation d'agrégats protéiques. Cette accumulation peut avoir lieu à l'intérieur ou à l'extérieur des noyaux cellulaires, à l'intérieur ou à l'extérieur de la cellule. Elle peut survenir dans tous types de cellules, notamment les cellules du système nerveux central, les neurones en général, les cellules musculaires, les cellules b des îlots de Langerhans, et conduit à la mort cellulaire. Une « protéinopathie neurologique » désigne plus spécifiquement une maladie ou un ensemble de maladies caractérisées par l'accumulation des agrégats protéiques dans le système nerveux central.
Au sens de l'invention, l'expression « inhiber la PFAR » signifie la capacité à réduire ou empêcher complètement l'action du ribosome sur le repliement des protéines, notamment en inhibant l'activité de repliement assisté portée par le ribosome, comme par exemple la renaturation des protéines hCA ou BCA II assistée par des ribosomes entiers (70S) d'E. coli ou le domaine V du grand ARNr de la grande sous-unité du ribosome transcrit in vitro (Tribouillard-Tanvier et al. 2008b ; Blondel et al. 2016). L'inhibition de la PFAR peut être évaluée selon le protocole décrit dans les Exemples ci-après (e.g. Figure 1).
Dans le contexte de l'invention, la désignation d'un médicament ou d'un composé particulier est considérée comme n'incluant pas uniquement la molécule nommée, mais aussi ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, dérivés, isomères, racémates, conjugués, prodrogues et dérivés de prodrogues de toute pureté chimique.
L'expression « sel pharmaceutiquement acceptable » fait référence aux sels organiques ou inorganiques, qui conservent l'activité et les propriétés biologiques des composés de l'invention et qui sont relativement non-toxiques. La formation pharmaceutique de sel consiste en l'appariement d'une molécule acide, basique ou sous forme de zwitterion avec un contre-ion pour créer le sel du médicament. Des exemples de sels pharmaceutiquement acceptables selon l'invention incluent ceux obtenus par réaction du composé principal, fonctionnant comme base, avec un acide organique ou inorganique pour former un sel, par exemple, des sels d'acide acétique, acide nitrique, acide tartrique, acide chlorhydrique, acide sulfurique, acide phosphorique, acide méthane sulfonique, acide camphosulfonique, acide oxalique, acide maléique, acide succinique ou acide citrique. Les sels pharmaceutiquement acceptables selon l'invention incluent également ceux pour lesquels le composé principal fonctionne comme un acide et réagit avec une base appropriée pour former, par exemple, des sels de sodium, potassium, calcium, magnésium, ammonium ou choline.
Par « hydrate », on entend une forme d'association ou de combinaison d'un composé avec une ou plusieurs molécules d'eau. Par exemple, on peut nommer les formes hémihydrate, dihydrate et trihydrate d'un composé.
Le terme « dérivé », lorsqu'il fait référence à un composé, inclut toute molécule qui est fonctionnellement ou structurellement liée audit composé, tel qu'un acide, un amide, un ester, un éther, un variant acétylé, un variant hydroxylé, un variant alcyl d'un tel composé. Le terme « dérivé » inclut également les composés qui ont un ou plusieurs des substituants ne modifiant pas, tout du moins de manière substantielle, la fonction dudit composé (ici, l'inhibition de PFAR). Le terme « isomère » désigne ici les stéréoisomères, tels que les énantiomères (e.g. lévogyre, dextrogyre), diastéréoisomères et épimères ainsi que les isomères de conformation. Dans le cadre de la présente invention, il est entendu que l'isomère d'un composé conserve tout ou partie de la fonction dudit composé (ici, l'inhibition de PFAR).
L'expression « racémate », « racémique » ou « mélange racémique » désigne ici un mélange en proportions égales des énantiomères lévogyre et dextrogyre d'un composé chiral.
Par « conjugué », on entend désigner un composé comprenant une succession de simples et de doubles liaisons alternées, qui interagissent entre elles et permettent la délocalisation d'électrons. De ce fait, un composé dit conjugué peut se présenter sous plusieurs formes dites de Lewis (appelées formes mésomères, résonantes ou canoniques). Le terme « prodrogue » est employé dans la présente description pour désigner n'importe quel dérivé fonctionnel ou (précurseur) d'un composé selon l'invention qui, lorsqu'il est administré à un patient, fournit ledit composé suite à une réaction chimique spontanée, une réaction de catalyse chimique, et/ou une réaction métabolique chimique. Les prodrogues ont typiquement une structure X-médicament, dans laquelle X est un groupement porteur inerte et le médicament est le composé actif. Les informations techniques permettant de sélectionner une prodrogue convenable appartiennent aux connaissances générales (Ettmayer et al. 2004 ; Beaumont et al. 2003 ; Heimbach et al.
2003 ; Yang et al. 1999 ; Steffansen et al. 2004). De plus, la préparation de prodrogues peut être réalisée par des méthodes conventionnelles connues de l'homme de l'art. Des méthodes qui peuvent être utilisées pour synthétiser des prodrogues sont décrites dans la littérature (Ettmayer et al. 2004 ; Stella 2007 ; Wermuth 2003 ; Pezron et al. 2002 ; Stella
2004 ; Stella & Nti-Addae 2007 ; Higuchi & Stella 1975).
Selon un mode de réalisation préféré, la désignation d'un composé correspond à la désignation du composé en tant que tel, aussi bien que de n'importe quel sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate dudit composé.
Au sens de l'invention, « traitement » inclut la thérapie, la prévention, la prophylaxie, le retardement ou la réduction des symptômes provoqués par une maladie du mauvais repliement des protéines. Le terme « traitement » désigne la réduction de la quantité de protéines mal repliées ou son maintien à un niveau relativement constant. Ainsi, le terme « traitement » désigne la réduction de la quantité d'agrégats protéiques ou son maintien à un niveau constant. Le terme « traitement » inclut en particulier le contrôle de la progression de la protéinopathie. Plus précisément, le terme « traitement » inclut l'inhibition de la PFAR chez les sujets traités. De préférence, le traitement est administré à des sujets qui sont des animaux ou des humains. En particuliers, les sujets traités sont des humains, bovidés, camélidés, cervidés, félins, ongulés ou ovins.
Selon l'invention, une « combinaison de composés pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie » désigne un traitement dans lequel au moins deux médicaments sont administrés ensemble ou séparément, au même moment ou séquentiellement. Ces au moins deux médicaments peuvent être administrés par différentes voies ou protocoles, ainsi ils peuvent être formulés ensemble ou séparément. II est entendu par « quantité thérapeutiquement efficace » la quantité d'un composé seul ou en combinaison selon l'invention qui est efficace dans le traitement de la protéinopathie. La quantité thérapeutiquement efficace peut être déterminée par le praticien ou l'homme du métier en fonction de la taille, de l'âge, de l'état de santé général du patient, la maladie spécifiquement impliquée et sa sévérité, le mode d'administration et autres circonstances pertinentes.
Brève description des figures
Figure 1 : Représentation schématique du protocole expérimental utilisé pour identifier les composés capables d'inhiber la PFAR dans des cellules de levures. Les levures de levure Itvlàhspl04à [psi-] (Blondel et al. 2016) sont prétraitées avec différentes concentrations de composés inhibiteurs de la PFAR ou avec du diméthylsulfoxyde (DMSO, traitement témoin) pendant 2 heures. Elles subissent ensuite un choc thermique à 43,5°C pendant une heure, qui conduit à la dénaturation des protéines. La synthèse protéique est alors inhibée par l'ajout de cycloheximide. En présence de DMSO seul, la luciférase retrouve un repliement correct grâce à l'activité PFAR du ribosome. En revanche, lorsque les composés ont la capacité d'inhiber la PFAR, la luciférase ne peut recouvrer son repliement initial. De cette façon, la mesure de l'activité de la luciférase permet d'identifier l'activité inhibitrice de la PFAR des composés testés. DMSO : diméthylsulfoxyde.
Figure 2 : Effets de l'ébastine, l'astémizole, la clémastine, le métixène, la triflupromazine, l'azélastine, la duloxétine, du lopéramide, la thioridazine et de la flunarizine sur la PFAR dans le modèle de levures. L'antazoline et le diazépam, deux molécules inactives contre les prions, ne sont pas capables d'inhiber la PFAR et ont été utilisées comme contrôles. Les mesures ont été réalisées aux temps 0 minute, 90 minutes et 150 minutes. Dans chacun des essais, l'utilisation du DMSO montre que l'activité luciférase évolue de moins de 40% de sa valeur initiale à 0 minute, vers au moins 70% à 90 minutes puis à environ 100% après 150 minutes. Ainsi, en 150 minutes et en l'absence de composés inhibiteurs, l'activité PFAR du ribosome permet de rétablir la conformation fonctionnelle des protéines. Le diazépam et l'antazoline n'inhibent pas la PFAR à concentrations relativement élevées (200 mM). En revanche, les composés testés ont tous permis d'inhiber la PFAR : l'ébastine dès 25 pM ; l'astémizole et la thioridazine dès 50 pM ; la flunarizine, la clémastine, le métixène et la triflupromazine dès 100 pM ; l'azélastine, la duloxétine et le lopéramide dès 150 pM. Les expérimentations ont été répétées deux fois. Les histogrammes représentent les pourcentages moyens incluant trois répétitions techniques ; les barres d'erreur figurent l'écart-type à la moyenne. %LA : activité luciférase exprimée en pourcentage ; DMSO : diméthylsulfoxyde. Figure 3 : Effets de l'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, la flunarizine, du lopéramide, du métixène et de la triflupromazine contre les prions dans un modèle cellulaire (cellules MovS6). La flunarizine ainsi que l'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, le lopéramide, la triflupromazine et le métixène ont montré une bonne activité anti-PrPSc permettant de réduire la charge de PrPSc avec des IC50 < 4 mM. Aucun des composés n'a influé sur la charge de PrPtot. Ces résultats démontrent que les composés inhibiteurs de la PFAR sont capables de réduire la propagation du prion PrPSc. Les blots présentés sont représentatifs de deux essais indépendants qui ont donné des résultats similaires.
Figure 4 : Effets de l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, la flunarizine, du lopéramide, du métixène et de l'astémizole contre les prions dans un modèle organotypique. La flunarizine ainsi que l'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, le lopéramide et le métixène ont montré une bonne activité anti-PrPSc permettant de réduire à 64% (azelastine à 20 pM), 59% (duloxétine à 30 pM), 50% (ebastine à 30 pM), jusqu'à même 28% (lopéramide à 30 pM) la charge de PrPSc. Aucun des composés n'a influé sur la charge de PrPtot. Ces résultats démontrent que les composés inhibiteurs de la PFAR sont de bons candidats pour le traitement des protéinopathies. Les blots présentés sont représentatifs de deux essais indépendants qui ont donné des résultats similaires.
Figure 5 : Effets des combinaisons azélastine et flunarizine, ébastine et flunarizine, et ébastine et lopéramide contre les prions dans un modèle cellulaire de protéinopathie. Sur les immunoblots, le taux d'accumulation de la PrPSc est estimé par le rapport en pourcentage de la charge de PrPSc sur la charge de tubuline. Le diméthylsulfoxyde seul (DMSO) est utilisé pour fixer la valeur de référence (100%) en l'absence des composés à tester. L'azélastine, la flunarizine, l'ébastine et le lopéramide ont été utilisés à des concentrations particulièrement faibles (respectivement, 1,5 pM, 3,5 pM, 3,5 pM et 0,75 pM), pour lesquelles ils ne montrent pas ou peu d'efficacité pris séparément (respectivement, le rapport PrPSc/tubuline est de 104%, 85%, 118% et 114%). Aux mêmes concentrations, la flunarizine combinée avec l'azélastine ou l'ébastine permet d'abaisser le taux d'accumulation de la PrPSc à 43% ; la combinaison de l'ébastine et du lopéramide permet d'abaisser ce taux à 65%. Ces valeurs sont surprenantes en ce qu'elles sont supérieures à la somme des effets individuels. La photographie de l'immunoblot présenté 5 est représentative des résultats obtenus lors de trois expérimentations indépendantes.
AZE : azélastine ; FLU : flunarizine ; EBA : ébastine ; LOP : lopéramide ; DMSO : diméthylsulfoxyde.
Figure 6 : Effets de la flunarizine, du métixène, de la thioridazine, de l'astémizole, de la lopéramide, duloxetine, triflupromazine, clémastine, dezélastine et de l'ébastine dans un 10 modèle cellulaire de la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (DMOP). En l'absence de traitement (DMSO), plus de 40% de noyaux présentant des agrégats de la protéine PABPN1 nucléaire sont énumérés. Tous les composés ont été testés à une concentration de 10 mM. Le guanabenz a été utilisé comme contrôle positif, tandis que et le diazépam comme contrôle négatif. Le pourcentage de noyaux présentant des agrégats de la protéine PABPN1 15 était significativement réduit par les composés testés, de façon dépendante à la dose. Ces résultats démontrent que les composés inhibiteurs de la PFAR sont efficaces dans le traitement de protéinopathies telle que la DMOP. Les différences avec le traitement au DMSO sont statistiquement significatives avec une valeur de **p<0,01 ; ***p<0,001 ; ****p<0,0001 ; DMSO : diméthylsulfoxyde.
20 Figure 7 : Effets de la flunarizine, du métixène, du guanabenz et de l'ébastine dans un modèle animal de la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (DMOP). En présence de DMSO utilisé comme témoin (1,5% ou 2% selon les indications), le nombre de mouches présentant une position anormale des ailes augmente après le jour 3. La flunarizine (panel du haut), le métixène (panel du milieu), ainsi que l'ébastine (panel du bas) permettent de 25 réduire de façon statistiquement significative le pourcentage de mouches qui présentent une position anormale des ailes. Ces résultats confirment que les composés inhibiteurs de la PFAR sont efficaces dans le traitement de protéinopathies telle que la DMOP. Les différences avec le traitement au DMSO sont statistiquement significatives avec une valeur de p : *p<0,l ; **p<0,01 ; ***p<0,001 ; DMSO : diméthylsulfoxyde.
BO Description détaillée
L'invention se rapporte à de nouveaux inhibiteurs de la PFAR, notamment leur utilisation pour inhiber la PFAR, mais aussi pour leur utilisation dans le traitement de protéinopathies.
Il a été préalablement montré que la flunarizine a des capacités à inhiber la PFAR et qu'elle est efficace contre les prions (Nguyen 2013). Ainsi, dans une première étude, les inventeurs ont effectué un criblage de composés selon une approche structure-activité sur la base de la flunarizine. Les composés ainsi criblés ont ensuite été évalués pour leur potentiel anti- prion et leur capacité à inhiber la PFAR.
Grâce à cette méthode, les inventeurs ont pu identifier des composés utiles pour inhiber la PFAR et qui pourraient être repositionnés dans le traitement des protéinopathies.
La PFAR, activité de repliement des protéines portée par le ribosome, a été décrite pour la 1ère fois in vitro par le groupe de C. Das Gupta qui a montré que les protéines dénaturées peuvent retrouver leur conformation fonctionnelle grâce au domaine V du grand ARN ribosomal (ARNr) de la grande sous-unité du ribosome (Das et al. 2008). Le repliement assisté par le ribosome a ensuite été décrit pour les ribosomes de tous les règnes du vivant et pour toutes les classes et les sources de protéines testées (Das et al. 2008 ; Barbezier et al. 2011), ce qui est en adéquation avec la grande conservation de la séquence et de la structure secondaire du domaine V de l'ARNr (Ben-Shem et al. 2011). La PFAR met en jeu le domaine V du grand ARN ribosomique (ARNr) de la grande sous-unité 60S du ribosome, comme cela a été démontré grâce à une approche de criblage inverse pour l'identification d'une des cibles cellulaires de la 6AP et du GA (Tribouillard-Tanvier et al. 2008a et 2008b). Le domaine V du grand ARNr (23S chez E. coli, 25S chez S. cerevisiae, 28S chez les métazoaires) est un ribozyme portant 2 activités enzymatiques : (i) une activité peptidyl transférase, et (ii) la PFAR (Das et al. 2008 ; Voisset et al. 2008). La liaison de la 6AP et du GA à l'ARNr 23S inhibe spécifiquement la PFAR, sans interférer avec l'activité traductionnelle du ribosome (Tribouillard-Tanvier et al. 2008a et 2008b).
Les nucléotides des domaines V des ARNr 23S d'E. coli et 25S de S. cerevisiae qui sont essentiels à l'activité chaperon de protéines du ribosome in vitro ont été identifiés (Pang et al. 2013). Ces travaux ont démontré que la plupart des nucléotides impliqués dans la PFAR sont conservés chez la bactérie (23S) et chez la levure (25S) (Pang et al. 2013), et que la 6AP et le GA sont des inhibiteurs compétitifs de la PFAR (Reis et al. 2011).
Il a récemment été montré que la PFAR est impliquée dans la propagation du prion [ PSI+ ] chez la levure (Blondel ét al. 2016). Composés et compositions pour leur utilisation dans le traitement de protéinopathies
Un objet selon l'invention est une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé inhibiteur de la PFAR pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant au moins un composé inhibiteur de la PFAR, pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter une protéinopathie. L'invention vise aussi une méthode de traitement d'une protéinopathie, comprenant l'administration d'une quantité efficace d'au moins un composé inhibiteur de la PFAR, à un sujet en ayant besoin.
En effet, comme divulgué dans les exemples, les inhibiteurs de la PFAR ont montré une activité bénéfique dans des modèles pour les maladies à prions et la dystrophie musculaire oculo-pharyngée.
Les composés utilisés selon l'invention sont décrits ci-après. Leur propriété inhibitrice de la PFAR est mise en évidence ici pour la première fois.
En particulier, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
En particulier, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, en combinaison avec la flunarizine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates. De préférence, la composition comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.
Selon une variante, la composition comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.
Selon une autre variante, la composition comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie. De façon plus préférée, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins deux composés choisis parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, de préférence parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide et l'azélastine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates. Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la flunarizine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
En particulier, selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend le lopéramide, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend l'astémizole, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend le métixène, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la clémastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la thioridazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la triflupromazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine et la thioridazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
De façon préférée, la composition pour son utilisation comprend une combinaison choisie parmi :
- l'ébastine et la flunarizine,
- l'ébastine et l'azélastine,
- l'ébastine et le lopéramide,
- l'azélastine et la flunarizine,
- l'azélastine et le lopéramide, et
- la flunarizine et le lopéramide,
ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Les composés qui peuvent franchir la barrière hémato-encéphalique, notamment l'alimémazine (triméprazine), l'atomoxétine, l'azélastine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, la diphénhydramine, la duloxétine, l'ébastine, le néfopam, l'orphénadrine, la triflupromazine, la zimélidine, sont plus particulièrement pertinents pour une utilisation dans le traitement des protéinopathies neurologiques. Les composés ne passant pas la barrière hémato-encéphalique tels que la benzydamine, le lopéramide et la prénylamine, sont plus particulièrement pertinents pour une utilisation dans le traitement des protéinopathies non neurologiques. Il peut être avantageux de combiner des composés capables de passer la barrière hémato-encéphalique avec des composés qui ne le peuvent pas afin de réduire la présence de prions de façon plus généralisée.
Il est entendu que les composés destinés à être utilisés en combinaison selon la présente invention peuvent être administrés simultanément, séparément ou séquentiellement. Le tableau 1 ci-après donne des exemples de numéros d'identification CAS des composés pour une utilisation selon l'invention, et éventuellement le numéro CAS ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Tableau 1
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De façon générale, les protéines ne peuvent exercer leur fonction que lorsqu'elles revêtent une conformation spatiale convenable appelée conformation fonctionnelle. Une mauvaise conformation entraîne de nombreuses pathologies, chez les animaux dont l'humain. Des exemples de protéinopathies humaines sont donnés ci-après.
Les maladies à prions, au sens de l'invention, regroupent toutes les maladies dues à un prion chez un mammifère, comme par exemple l'encéphalopathie spongiforme bovine, la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ), le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker (SGSS), l'insomnie fatale familiale (IFF), le kuru, la maladie VPSPr, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés (CWD), l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés (CSE) et l'encéphalopathie exotique des ongulés. La MCJ existe sous plusieurs formes : la forme sporadique (sMCJ), la forme héréditaire (fMCJ), la forme acquise ou iatrogène (iMCJ). Le nouveau variant de la MCJ (vMCJ) est considéré comme un exemple de forme iatrogène de la MCJ. La MCJ est une encéphalopathie transmissible rare (1 cas par million d'individus par an) prévalente surtout entre 50 et 70 ans. La mort survient généralement dans l'année suivant l'apparition des symptômes, qui sont : des troubles du sommeil, des modifications de la personnalité, une ataxie, une aphasie, une perte de la vision, une faiblesse générale, une atrophie musculaire, une myoclonie et une démence évolutive.
La maladie VPSPr (pour « Variably protease sensitive prionopathy ») est une maladie à prions sporadique due à la conversion spontanée de PrPc en PrPres ou à une mutation somatique. Elle présente des similitudes avec la MCJ mais la protéine sous forme pathologique PrPres est moins résistante à la digestion par les protéases. Les patients présentent des symptômes psychiatriques, des déficits de la parole (aphasie et/ou dysarthrie), et aussi des déficiences cognitives. Cette maladie est très rare avec une incidence variant de 2 à B pour 100 millions de personnes. L'insomnie fatale familiale est une encéphalopathie spongiforme transmissible liée à une anomalie du gène PRNP codant la protéine prion PrPc. Elle concerne une quarantaine de familles dans le monde.
D'autres protéines que la protéine prion PrP peuvent être associées aux protéinopathies. Par exemple, la maladie à corps de Lewy ou démence à corps de Lewy est une maladie neurodégénérative caractérisée par le dépôt de la protéine alpha-synucléine (ce qui en fait une synucléinopathie) à l'intérieur des neurones. Les symptômes sont principalement le développement d'une démence, un syndrome parkinsonien, des variations des performances cognitives et des hallucinations visuelles. Il s'agit de la seconde démence neurodégénérative la plus fréquente après la maladie d'Alzheimer.
La maladie de Parkinson est également une synucléinopathie. Elle s'associe à des tremblements, de l'hypokinésie et une instabilité de la posture. A l'échelle mondiale, la maladie est diagnostiquée chez plus de 300 000 personnes chaque année. La maladie d'Alzheimer est une maladie neurologique progressive touchant le cerveau et qui est caractérisée essentiellement par la présence de plaques neuritiques composées d'agrégats de peptides bêta-amyloïdes, issus du clivage du précurseur de la protéine amyloïde (APP), et d'agrégats de la protéine Tau. Cette maladie est l'une des neuropathologies les plus fréquentes et a une incidence mondiale. La maladie d'Huntington ou chorée d'Huntington est une maladie rare génétique dominante causée par la synthèse de la protéine huntingtine résultant d'une altération génique (augmentation du nombre de résidus Q codés par l'exon 1 du gène HTT) sur le chromosome 4. Les symptômes peuvent être moteurs (notamment troubles de l'élocution et de la déglutition), cognitifs et psychiatriques. La sclérose latérale amyotrophique (SLA), ou maladie de Charcot, est caractérisée par une dégénérescence progressive des neurones moteurs du cortex cérébral avec destruction consécutive du faisceau pyramidal. La motricité qui est touchée dans la maladie concerne donc aussi bien la mobilité du visage (sourire, parole, mouvement de la langue, faculté d'avaler ou de parler) que celle des bras et des jambes. Parmi les protéines en cause, il y a FUS, TDP43, SOD1, C90rf72, KIF5A.
Dans le diabète de type 2, une accumulation de polypeptides amyloïdes (IAPP, aussi appelée amyline) a été observée dans les cellules b des îlots de Langerhans des pancréas de plus de 80% des patients, qui provoquerait la destruction des cellules bêta- pancréatiques chez les diabétiques. Il a été observé un risque deux fois plus important de développer la maladie d'Alzheimer chez les patients atteints de diabète de type 2, suggérant un mécanisme d'ensemencement croisé de protéines amyloïdes infectieuses entre le cerveau et le pancréas, qui confirmerait un fonctionnement de type prion dans ces deux pathologies.
La dystrophie musculaire oculo-pharyngée (« DMOP ») est une maladie génétique autosomale dominante rare qui affecte environ 1 personne pour 100 000 en Europe. Elle est causée par une expansion du domaine poly-alanine dans la protéine PABPN1 codée par le gène PABPN1 (poly(A)-bi nding protein nuclear 1 ; 14qll.2), ce qui conduit à la synthèse d'une protéine mutante qui s'accumule sous forme d'agrégats nucléaires dans les cellules musculaires. Ainsi, la DMOP est assimilée à une protéinopathie (Harish et al. 2018). Les démences frontotemporales sont héréditaires pour moitié ; les mutations les plus fréquentes impliquent le chromosome 17q21-22 à l'origine d'anomalies de la microtubule- binding tau protein, ce qui les classe parmi les tauopathies. La paralysie supranucléaire et la dégénérescence corticobasale peuvent être considérées comme des formes de démence frontotemporale, car elles partagent des bases neuropathologiques communes et des mutations de gènes similaires affectant la protéine tau. Les autres protéines pathogènes qui ont été décrites sont FUS, TDP43 et SOD1.
De préférence, la protéinopathie est choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. En particulier, la protéinopathie est une protéinopathie humaine choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo- pharyngée. Selon une alternative, la protéinopathie est une protéinopathie touchant des mammifères non-humains, choisie parmi l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.
Selon un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.
De préférence, l'invention concerne une composition comprenant l'ébastine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt- Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.
Selon une alternative, l'invention concerne une composition comprenant l'azélastine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo- pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. Selon une autre alternative, l'invention concerne une composition comprenant la duloxétine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. Selon une autre alternative, l'invention concerne une composition comprenant le triflupromazine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, de préférence parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine et la triflupromazine, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie liée à la protéine prion PrP, de préférence humaine, de préférence choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann- Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru et la maladie VPSPr.
Les compositions pour le traitement de protéinopathies selon l'invention peuvent être administrées en combinaison avec les traitements actuellement en développement pour cette indication, notamment une immunothérapie.
Administration
Les composés selon l'invention sont connus de l'homme du métier pour leur utilisation dans d'autres applications thérapeutiques. Le dosage et la posologie connus peuvent bien entendu être adaptés dans le cadre de la présente invention par le praticien selon ses connaissances générales. Des exemples de noms commerciaux et de doses pouvant être administrées sont donnés ci-après, aux seules fins d'illustration :
- l'ébastine (nom commercial e.g. « Kestin ») : d'environ 1 à environ 30 mg par jour, de préférence d'environ 10 à environ 20 mg par jour, en une, deux ou trois prises.
- l'azélastine (nom commercial e.g. «Allergodil ») : d'environ 0,30 à environ 2,00 mg par jour, de préférence entre environ 0,50 et environ 1,00 mg par jour, notamment 0,56 mg par jour, en une, deux ou trois prises.
- duloxétine (nom commercial e.g. « Cymbalta », « Yentreve », « Xeristar » ou « AriClaim ») : d'environ 15 à environ 150 mg par jour, de préférence environ 30, environ 60, environ 90 ou environ 120 mg par jour, en une, deux ou trois prises, de façon plus préférée environ 60 mg par jour en une prise.
- l'atomoxétine (nom commercial e.g. « Strattera ») sous forme de comprimés à la dose d'environ 0,5 mg/kg/jour à environ 1,8 mg/kg/jour, de préférence environ 1,2 mg/kg/jour.
- Le benzydamine notamment sous la forme de chlorhydrate de benzydamine (nom commercial e.g. « Opalgyne »), par exemple en pastilles à la dose d'environ 9 mg/jour, ou en solution à la dose d'environ 300 mg/jour, de préférence d'environ 200 mg/jour.
- Le bipéridène (nom commercial e.g. « Akineton ») sous forme de comprimés à la dose d'environ 1 mg/jour à environ 12 mg/jour, de préférence environ 4 mg/jour. - La chloropyramine (nom commercial e.g. « Suprastin ») sous forme de comprimés, à la dose d'environ 75 mg/jour à environ 150 mg/jour, de préférence environ 100 mg/jour.
- citalopram, notamment sous la forme de bromhydrate de citalopram (nom commercial e.g. « Celapram », « Celexa », « Cipram », « Cipramil », « Ecosol », Mepha, « Récital », « Seropram » etc.) sous forme de comprimés à la dose d'environ 20 mg/jour à environ 40 mg/jour, de préférence environ 20 mg/jour.
- dicyclomine (nom commercial e.g. « Bentyl », « Dibent », « Dicyclocot ») sous forme de comprimés à la dose d'environ 4 mg/jour à environ 40 mg/jour, de préférence environ 4 mg/jour.
- néfopam (nom commercial e.g. « Acupan ») sous forme de solution injectable à la dose d'environ 20 mg/jour à environ 120 mg/jour, de préférence d'environ 20 à environ 80 mg/jour.
- l'orphénadrine (nom commercial e.g. « Norflex »), notamment citrate d'orphénadrine ou hydrochloride d'orphénadrine, sous forme de solution injectable ou de comprimés, à la dose d'environ 60 mg/jour à environ 120 mg/jour, de préférence environ 60 mg/jour
- prénylamine (nom commercial e.g. « Segontin »), notamment le lactate de prénylamine, sous forme de comprimés à la dose d'environ 60 mg/jour à environ 180 mg/ jour, de préférence environ 60 mg/jour.
- triflupromazine (nom commercial e.g. « Vesprin ») sous forme de comprimé à la dose d'environ 2 mg/jour à environ 40 mg/jour, de préférence environ 10 mg/jour
- zimélidine (nom commercial e.g. « Normud » ou « Zelmid ») sous forme de comprimé à la dose d'environ 10 à environ 200 mg par jour, de préférence d'environ 25 à environ 100 mg par jour, de préférence environ 50 mg par jour, en une ou deux prises.
Compositions en tant pue telles
L'invention porte également sur des compositions en tant que telles, comprenant une combinaison de composés telle que décrite précédemment. En effet, les inventeurs ont montré que de telles combinaisons pouvaient présenter un effet synergique dans l'amélioration de l'activité anti-prion, notamment dans des modèles de cultures cellulaires (Figure 5). En effet, la réduction du taux d'accumulation de la PrPSc obtenue grâce aux combinaisons de composés est nettement plus importante que la somme des effets obtenus par l'utilisation des composés seuls. A 1,5 mM et 3,5 mM, l'azélastine et la flunarizine ne modifient pas le taux de PrPSc (104% et 85%, respectivement). Or le traitement simultané des cellules par 1,5 pM d'azélastine et 3,5 pM de flunarizine réduit le taux de PrPSc à 43%, ce qui est nettement supérieur à l'addition des effets des deux molécules individuelles (15%). L'azélastine utilisée seule à 1,5 pM n'a pas non plus d'effet sur le taux de PrPSc (104%), tandis que sa combinaison avec la flunarizine à 3,5 pM (qui seule résultait en un taux de PrPSc de 85%) permet de réduire ce chiffre à 43%. Le lopéramide, utilisé seul à 0,75 pM n'a pas d'effets sur le taux de PrPSc tandis que sa combinaison avec l'ébastine à 3,5 pM abaisse le taux de PrPSc à 65%.
Ainsi, l'invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, ledit composé étant en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Par exemple, selon un mode de réalisation, la composition comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon une variante, la composition comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon une autre variante, la composition comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend au moins deux composés choisis parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend au moins deux composés choisis parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, de préférence parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide et l'azélastine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend la flunarizine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
En particulier, selon un mode de réalisation, la composition comprend le lopéramide, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend l'astémizole, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend le métixène, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend la clémastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend la thioridazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Selon un mode de réalisation, la composition comprend la triflupromazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine et la thioridazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates. De préférence, la composition comprend une combinaison choisie parmi :
- l'ébastine et la flunarizine,
- l'ébastine et l'azélastine,
- l'ébastine et le lopéramide,
- l'azélastine et la flunarizine,
- l'azélastine et le lopéramide, et
- la flunarizine et le lopéramide,
ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Les compositions selon l'invention comprennent typiquement un ou plusieurs excipients ou véhicules acceptables. Ainsi, les compositions selon l'invention en tant que telles ou pour leur utilisation dans le traitement d'une protéinopathie sont généralement mélangées à des véhicules ou des excipients pharmaceutiquement acceptables.
Le terme "véhicule ou excipient pharmaceutiquement acceptable" désigne ici un composé de grade pharmaceutique qui améliore l'administration, la stabilité ou biodisponibilité d'un composé et peut être métabolisé par un sujet auquel il est administré et n'est pas toxique pour ledit sujet. Les excipients préférés selon l'invention comprennent l'un quelconque des excipients couramment utilisés dans les produits pharmaceutiques, tels que, par exemple, la cellulose microcristalline, le lactose, l'amidon et la poudre de soja.
Ainsi, un autre objet selon l'invention concerne un procédé de fabrication de compositions pharmaceutiques comprenant le mélange des composés ou combinaisons décrites ci- dessus avec au moins un ou plusieurs véhicules ou excipients pharmaceutiquement acceptables.
Utilisation d'inhibiteurs de la PFAR
Un objet selon l'invention consiste en l'utilisation de composés comme nouveaux inhibiteurs de la PFAR. Pour mieux comprendre le rôle de la PFAR dans les mécanismes physiopathologiques, les inventeurs ont découvert que des médicaments connus pour leur activité sur d'autres cibles cellulaires étaient également efficaces dans l'inhibition de la
PFAR. - BB -
L'utilisation de ces composés pour inhiber la PFAR est particulièrement utile dans la compréhension du rôle du ribosome et de l'étiologie des maladies du mauvais repliement des protéines.
Les inventeurs ont ainsi découvert de façon surprenante que l'alimémazine (triméprazine), l'amitriptyline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, l'ébastine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le lopéramide, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, la chlorpromazine, la quinacrine (mépacrine) et la zimélidine pouvaient être utilisés comme candidats inhibiteurs de l'activité PFAR.
Selon un mode de réalisation préféré, l'invention concerne l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'au moins un composé choisi parmi l'alimémazine (triméprazine), l'amitriptyline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, l'ébastine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le lopéramide, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, la chlorpromazine, la quinacrine (mépacrine) et la zimélidine, de préférence au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, le lopéramide, la duloxétine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR. Les combinaisons de ces composés sont également envisagées.
L'utilisation de ces composés pour inhiber la PFAR peut être combinée à l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
Par exemple, selon un mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant de l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant de l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR. Selon un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant de la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant du lopéramide, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR.
Lors de l'utilisation des composés présents en combinaison pour inhiber la PFAR, les composés peuvent être utilisés simultanément, séparément ou séquentiellement. De façon préférée, les utilisations des composés selon l'invention sont des utilisations in vitro et/ou ex vivo.
Selon un mode de réalisation particulier, l'utilisation des composés pour inhiber l'activité PFAR est une utilisation in vitro sur des cellules, telles que des cellules animales ou végétales, eucaryotes ou procaryotes, isolées ou amassées, par exemple en organoïdes. De façon particulière, l'utilisation des composés pour inhiber l'activité de la PFAR est mise en œuvre dans des levures.
Selon un autre mode de réalisation, l'utilisation des composés pour inhiber l'activité PFAR est une utilisation ex vivo sur des organes ou des fragments d'organes isolés à partir d'un animal ou d'une plante et qui ne sont pas destinés à être réintroduits dans les animaux ou les plantes. De façon particulière, l'utilisation de composés pour inhiber l'activité de la PFAR est mise en œuvre dans des tranches de cervelets de souris.
Exemples
L'invention sera mieux comprise grâce aux exemples donnés ci-après à titre illustratif et non limitatif.
Criblage des banques de molécules
Les inventeurs ont opté pour l'approche SOSA (Sélective optimization of side activities) qui permet de faire du repositionnement thérapeutique. Cette approche propose de cribler de préférence les médicaments déjà en clinique ou en cours d'essais cliniques afin de déterminer s'ils sont susceptibles d'avoir des cibles pharmacologiques supplémentaires (Wermuth 2004). Étant donné que leur toxicité, leur sécurité et leur biodisponibilité chez l'homme ont déjà été évaluées, les médicaments issus de chimiothèques basées sur l'approche SOSA pourraient rapidement être administrés en tant que traitement compassionnel aux personnes atteintes de maladies à prions pour lesquelles aucun traitement n'est actuellement disponible. Dans ce cadre, la chimiothèque de Prestwick avait été criblée, permettant l'identification de la flunarizine, possédant une activité anti- prion et qui est un inhibiteur de la PFAR (Nguyen 2013).
La dernière version de DrugBank (version 5.1.0 en date du 02.04.2018) a été téléchargée directement à partir du site internet https://www.drugbank.ca et filtrée de manière à conserver les composés approuvés par la FDA et ceux abandonnés, soit 1887 composés. Ces composés ont été extraits en fichiers multiconformationnels au format oeb.gz en utilisant OMEGA v2.5.1.4. (OpenEye Scientific Software, http://www.eyesopen.com/).
Une recherche ROCS (« Rapid Overlay of Chemical Structures ») permet d'identifier des composés par similarité dans la superposition des formes et/ou des pharmacophores, en utilisant seulement les atomes lourds d'un ligand et en ignorant les hydrogènes. Le degré de similarité de forme et/ou de pharmacophore est illustré par un score dit « ComboScore ». Cette recherche ROCS a été conduite sur la base de la flunarizine. La flunarizine présente une structure pharmacophore composée de trois groupements aromatiques, et de deux atomes d'azote, qui peuvent interagir avec la cible grâce à des interactions avec électrostatiques ou des accepteurs de liaison hydrogène. La structure expérimentalement cristallisée de la flunarizine a été obtenue à partir de The Cambridge Crystallographic Data Centre (www.ccdc.cam.ac.uk/structures, identifiant du composé : « JOBSIE »). Parmi les 1887 composés sélectionnés par cette méthode, 45 composés ont été choisis : l'amitriptyline, l'antazoline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la cétirizine, la chloropyramine, la chlorpromazine, la cinnarizine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, le diazépam, la dicyclomine, la diphénhydramine, le diphénidol, la doxépine, la duloxétine, l'ébastine, l'épinastine, l'éthosuximide, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, l'isradipine, le kétotifène, le lopéramide, le métixène, la mirtazapine, le néfopam, l'orphénadrine, la paraméthadione, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine), la zimélidine et le zonisamide. Le tableau 2 ci-dessous donne le ComboScore obtenu pour ces composés, excepté l'ébastine pour laquelle la valeur n'a pas pu être calculée (« nd » dans le tableau). Tableau 2
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Les composés ont été testés pour leur activité contre le prion PrPSc en culture ce lulaire, comme décrit ci-après.
Les composés selon l'invention sont efficaces pour inhiber la PFAR
Le protocole expérimental permettant d'identifier les composés capables d'inhiber l'activité PFAR in vivo a été repris de Blondel et al. (2016) et est schématisé en figure 1. En détail, la souche [psi-] ltvlA/hspl04A 74-D694 (DίDH, Blondel et al. 2016), délétée du gène HSP104 et enrichie en PFAR grâce à la délétion du gène LTV1, a été transformée par le plasmide pDCM90 (Hasin et al. 2014 ; Parsell et al. 1994) permettant l'expression constitutive du polypeptide LuxAB (luciférase bactérienne thermosensible). Les levures transformées ont été mis en culture exponentielle à 29°C. Les cellules ont été traitées avec les concentrations indiquées de composés ou du DMSO pendant 2 heures avant le choc thermique. La LuxAB a alors été inactivée par la chaleur lors d'une incubation à 43,5°C pendant 60 minutes. Pour empêcher la synthèse de nouvelle luciférase, 10 pg/mL de cycloheximide (Sigma Aldrich) ont été ajoutés après 45 minutes à 43,5°C. Ce qui est mesuré est donc le rétablissement de la conformation fonctionnelle dans le temps, par la PFAR des ribosomes levuriens, des enzymes LuxAB présentes au moment du choc thermique. L'activité de la LuxAB a été mesurée 60 minutes après le choc thermique (correspondant au temps 0 minute sur la figure 1), et les cellules ont été placées en conditions de culture à 29°C pendant les durées indiquées, l'activité luciférase étant mesurée à intervalles de 30 minutes par l'ajout de 10 pL de n-décylaldéhyde (Decanal, Sigma Aldrich) à 120 pL de culture de levure. La luminescence a été mesurée en utilisant un lecteur de microplaques Varioscan (ThermoFisher). L'activité luciférase a alors été exprimée en pourcentage de l'activité mesurée avant le traitement par choc thermique pour chaque souche. La chlorpromazine, la quinacrine, l'azélastine, la thioridazine, la triflupromazine et le chlorure de guanabenz ont été acquis auprès de Sigma Aldrich (Etats-Unis) ; l'astémizole, la duloxétine, la clémastine et l'ébastine ont été acquis auprès de CarboSynth (Royaume- Uni) ; le métixène a été acheté auprès de LGC (Laboratoire de Génie Chimique à Toulouse, France).
Tel que montré en figure 2, pour le DMSO (ensemble des panels), le choc thermique a réduit l'activité de LuxAB à environ 30% de son activité initiale. En présence de DMSO, l'activité LuxAB a augmenté avec le temps, ce qui indique qu'elle a retrouvé sa conformation active. Les composés selon l'invention inhibent la PFAR in vivo chez la levure. L'imiquimod, le guanabenz et la 6AP ont été utilisés comme contrôles positifs (Oumata et al. 2013 ; Tribouillard-Tanvier et al. 2008a). Aux concentrations de 150 mM et 200 pM d'imiquimod, l'activité de la LuxAB ne parvient pas à retrouver son niveau initial.
La figure 2 montre que l'ensemble des composés testés inhibent l'activité PFAR : à partir de 25 pM pour l'ébastine, 50 pM pour l'astémizole et le thioridazine, 100 pM pour la clémastine, le métixène, la flunarizine et la triflupromazine, et à partir de 150 pM pour l'azélastine, la duloxétine et le lopéramide.
Les compositions selon l'invention sont efficaces comme anti-prions in vitro
Les expérimentations in vitro ont été réalisées comme décrit dans la littérature (Nguyen et al. 2014a ; Oumata et al. 2013 ; Archer et al. 2004). Les cellules MovS6 infectées de façon chronique avec la souche ovine de prion 127S ont été traitées pendant 6 jours avec les concentrations indiquées de composés. Elles ont ensuite été lysées, et 250 pg de lysats cellulaires ont été digérés par la protéinase K. La détection de PrPtot a été réalisée sur 25 pg de lysats cellulaires bruts. Les protéines PrP ont alors été immunomarquées en utilisant un anticorps anti-PrP (Sha31, Bertin Pharma). Il a ainsi été possible de définir la concentration inhibitrice médiane CI50.
Le tableau 3 donne le détail des doses testées et les valeurs obtenues de Cl 50, sauf pour la chlorpromazine et la quinacrine pour lesquelles les valeurs de CI50 sont issues de la littérature. Les western blots sont présentés Figure 3. Les composés les plus efficaces in vitro sont ceux pour lesquels la C o est minimale. Il ressort des tableaux 2 et B que l'activité anti-PrPSc n'est pas corrélée à la similarité du composé avec la flunarizine (plus le ComboScore est bas, plus le composé est proche de la flunarizine). Tableau 3
Figure imgf000041_0001
Les compositions selon l'invention sont efficaces comme anti-prions dans un modèle orqonotypique
Les expérimentations sur les animaux ont été conduites en stricte conformité avec les Directives européennes EU 2010/63 et ont été approuvées par le ministère français de l'enseignement supérieur, de la recherche et de l'innovation (autorisation OGM n°4292). Tous les efforts ont été mis en oeuvre pour minimiser la souffrance des animaux.
L'activité antiprion des composés contre le prion PrPSc a été évaluée dans un test organotypique dans lequel des tranches de cervelets de souris sont infectées par le prion (souche 127S) en culture, comme décrit précédemment (Nguyen et ql. 2014a et b ; Falsig et ql. 2008) en utilisant des souris transgéniques tg338 qui surexpriment l'allèle VRQ de la protéine prion ovine (Vilotte et ql. 2001). La préparation et la culture de tranches ont été effectuées comme décrit ailleurs (Nguyen et ql. 2014a et b ; Falsig et ql. 2008) sauf pour l'infection par le prion qui a été effectuée le jour de la découpe des cervelets pendant 1 heure dans la glace avec 2 pg/mL d'un broyât cerveau préparé à partir de souris tg338 au stade terminal de la maladie expérimentalement infectées avec la souche de prion 127S. Sept jours après l'infection, les composés ont été ajoutés aux tranches de cervelets à la concentration de 20 à 30 mM. Le contrôle a été réalisé en n'ajoutant que du DMSO (0,7%). Les tranches de cervelets ont alors été cultivées pour 21 jours supplémentaires avant les prélèvements. Des composés frais étaient ajoutés à chaque changement de milieu (3 fois par semaine) de culture aux concentrations indiquées.
Les tranches de cervelets (au moins 7 tranches par condition) ont été lysées et homogénéisées dans 350 pL de tampon de lyse (0,5 % déoxycholate de sodium, 0,5 % Triton-X100, 5 mM Tris-HCI pH 7,5) grâce à un homogénéiseur (Beadbug, Benchmark Scientific, Etats-Unis) en présence de billes de verre (référence #079053, Dutscher, France) tel que décrit dans la littérature (Nguyen et ql. 2014a et b ; Falsig et ql. 2008).
L'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide et le métixène ont été testés selon ce protocole expérimental et ont donné de bons résultats d'activité anti-PrPSc ex vivo (figure 4).
Combingisons et synergie Les composés ont alors été testés en combinaisons. Les cellules MovS6 infectées chroniquement par la souche 127S de prion ovin (scrapie) PrPSc ont été traitées avec les composés seuls ou en combinaison pendant 6 jours. Les concentrations de composés utilisées étaient 3,5 mM pour la flunarizine, 1,5 mM pour l'azélastine, 1,5 pM pour l'ébastine et 0,75 pM pour le lopéramide. Le DMSO était utilisé comme contrôle (0,7%). Les lysats cellulaires ont été alors soumis à la digestion par la protéinase K pour révéler spécifiquement les protéines prions PrPSc par immunoblot. Les effets de la flunarizine sur le niveau d'état stable de PrP (PrPtot) a été déterminé sur les mêmes lysats de cellules MovS6 traitées en absence de traitement par la protéinase K. Après lyse cellulaire, les échantillons ont été digérés par la protéinase K afin de révéler le contenu en PrPSc par immunoblot. Les composés en combinaisons sont plus efficaces que les composés seuls.
La figure 5 montre que les combinaisons de composés ont un effet nettement plus important sur le taux d'accumulation de la PrPSc que l'addition des effets des composés seuls. Ce résultat surprenant démontre l'existence d'une synergie entre les composés. Tous ces résultats montrent que les composés réduisent la charge de PrPSc et démontrent leur potentiel thérapeutique.
Les compositions selon l'invention sont efficaces dans le traitement de de la dystrophie musculaire oculo-pharynqée (DMOP) in vitro
Les myoblastes murins H2K D7e (Raz et al. 2011) ont été ensemencés à 80% de confluence dans des plaques 8 puits (Ibidi) dont les puits étaient recouverts d'une couche de matrigel (l/10ième) et contenaient du milieu de prolifération composé de DMEM, de sérum de veau foetal décomplémenté, de pénicilline, streptomycine, généticine, d'extrait d'embryon de poulet et d'interféron gamma. Vingt-quatre heures après ensemencement, les cellules ont été mises en différenciation pendant 4 jours dans un milieu de différenciation composé de DMEM, sérum de cheval (10%) et d'un mélange de penicilline/streptomycine (1%). A 2 jours de différenciation, la moitié du milieu est remplacée par du milieu frais contenant le composé testé solubilisé dans du DMSO pour atteindre une concentration finale de 10 mM dans le puits (3 puits par conditions). Le puits contrôle contient du DMSO dilué au l/100ième. A 4 jours de différenciation, les myotubes ont été fixés à la paraformaldéhyde à 4% pendant 15 minutes puis perméabilisées au Triton X-100 (CAS n° 9002-93-1) 0,1%. PABPN1 a été marqué par immunofluorescence (anticorps ab75855, Abcam, 1/200) et l'actine F a été marquée par de la Phalloïdine couplée à l'Alexa fluor 555 (1/400). Des photographies ont été prises au grossissement 40X. Entre 500 et 700 noyaux ont été dénombrés par puits. Le guanabenz a été utilisé comme contrôle positif. Les résultats sont présentés en figure 6 et mettent en évidence que la flunarizine, le métixène, la thioridazine, l'astémizole, la lopéramide, la duloxétine, l'azélastine et l'ébastine réduisent la quantité de noyaux de cellules musculaires contenant des agrégats de PABPN1. La flunarizine, le métixène et l'ébastine sont plus actifs que le guanabenz. La triflupromazine et la clémastine sont négatives, comme le contrôle négatif utilisé (diazépam). Les compositions selon l'invention sont efficaces dans le traitement de la dystrophie musculaire oculo-pharynqée (DMOP) in vivo dans un modèle Drosophila
Le modèle utilisé est un modèle drosophile pour la DMOP dans lequel la protéine PABPN1 de mammifère avec une répétition de 17 alanines (PABPN1-17 ala) est spécifiquement exprimé dans les muscles de Drosophila (Chartier et al. 2006 ; Chartier et al. 2015). Ces modèles reproduisent les caractéristiques de la maladie, c'est-à-dire une faiblesse et une dégénération musculaires progressives, ainsi que la formation d'agrégats de PABPN1 nucléaire. Ainsi, l'expression de PABPNl-17ala dans les muscles alaires indirects conduit à une posture alaire anormale, résultant de l'affection de la fonction musculaire et de la dégénération des muscles (Chartier et al. 2006). Des drosophiles DMOP mâles ( Act-88F-PABPNl-17ala/+ ) issus du croisement Females w1118; Act-88F-PABPNl-17ala/TM3, Sb X Males w1118) ont été mis en contact avec un milieu gélosé nutritif contenant soit 1.5% de DMSO ou 1.5 mM de flunarizine, soit 2% de DMSO, 2 mM de métixène ou 2 mM de guanabenz (contrôle positif), soit 1,5% de DMSO ou 1,5 mM d'ébastine. Le guanabenz a été utilisé comme contrôle positif car son activité a déjà été décrite pour la DMOP (Barbezier et al. 2011 ; Malerba et al. 2019). Le milieu nutritif contenant les composés médicaments a été changé tous les jours pendant 6 jours. La figure 7 montre que le traitement par la flunarizine (panel du haut) et par le métixène (panel du milieu) et l'ébastine (panel du bas) permet de réduire le nombre de drosophiles ayant un phénotype anormal de la position des ailes. Les composés ont été administrés dans la nourriture, préparée comme suit : un milieu instantané pour Drosophila (Carolina Biological Supply Company) a été reconstitué dans chaque tube avec une solution à 1% de levure dans l'eau, complété par les composés solubilisés dans le DMSO avec une concentration croissante, ou avec du DMSO seul. Chaque tube contenait 2 mL de milieu reconstitué. Les composés étaient administrés oralement dans de la nourriture fraîche proposée à des mouches adultes chaque jour du jour 2 au jour 5. Le guanabenz Le guanabenz, dont l'activité a déjà été décrite pour la DMOP (Barbezier et o/. 2011 ; Malerba ét al. 2019), a été utilisé comme contrôle à la concentration de 2 mM. La flunarizine a été administrée à 1,5 mM. Le métixène a été administré à la concentration de 2 mM. L'ébastine a été testée à 1,5 mM. L'effet des composés a été quantifié par la mesure quotidienne du nombre de mouches présentant une posture anormale des ailes, correspondant aux mouches exprimant le PABPNl-17ala, du jour B au jour 6 de l'âge adulte : des groupes de cinq mâles par conditions sont placés dans un tube vide et le nombre de mâles présentant une position anormale des ailes est enregistré par observation directe des mouches dans le tube, sans anesthésie. Le nombre total de mouches analysées pour chaque condition est indiqué dans la figure 7.
Les composés selon l'invention sont efficaces dans un modèle in vivo de la DMOP. La flunarizine, le métixène et l'ébastine ont montré des effets bénéfiques en permettant la réduction significative (test statistique chi-carré) du nombre de mouches présentant une posture des ailes anormales rapporté aux mouches contrôles (administration de DMSO seul) (figure 7).
Ensemble, ces résultats confirment que les composés identifiés par les inventeurs sont de bons candidats pour une utilisation pour inhiber la PFAR, mais également pour leur utilisation, seuls ou en combinaisons, dans le traitement des protéinopathies, par exemple les maladies à prions. Références
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Claims

REVENDICATIONS
1. Composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.
2. Composition pour son utilisation selon la revendication 1, comprenant l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
3. Composition pour son utilisation selon la revendication 1, comprenant l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
4. Composition pour son utilisation selon la revendication 1, comprenant la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
5. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant en outre au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
6. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant l'une des combinaisons suivantes : l'ébastine et la flunarizine, l'ébastine et l'azélastine, l'ébastine et le lopéramide, l'azélastine et la flunarizine, l'azélastine et le lopéramide, et la flunarizine et le lopéramide, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.
7. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite protéinopathie est choisie parmi la maladie de
Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo- pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.
8. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite protéinopathie est liée à l'accumulation de protéines prion PrP sous forme d'agrégats.
9. Composition pour son utilisation selon la revendication 8, dans laquelle ladite protéinopathie est choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru et la maladie VPSPr.
10. Composition pour son utilisation selon la revendication 6, pour traiter la maladie de Creutzfeldt-Jakob.
11. Composition comprenant au moins deux composés distincts choisis parmi ceux définis dans la revendication 5 ou 6, en tant que préparation combinée pour son utilisation simultanée, combinée ou séparée dans le traitement d'une protéinopathie.
12. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le traitement est effectif par inhibition de la PFAR.
13. Composition comprenant au moins deux composés distincts choisis parmi ceux définis dans la revendication 5 ou 6.
14. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, ou composition selon la revendication 13, comprenant en outre un ou des véhicules ou excipients pharmaceutiquement acceptables.
15. Utilisation in vitro ou ex vivo d'au moins un composé choisi parmi ceux définis dans la revendication 1 et l'alimémazine (triméprazine), l'amitriptyline, l'astémizole, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la diphénhydramine, la doxépine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le lopéramide, la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la chlorpromazine, et la quinacrine (mépacrine), un leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, pour inhiber la PFAR.
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