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WO2020138486A1 - ＶＥＧＦ－Ａ／ＶＥＧＦＲ２経路のｄｕａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ療法、及びこれに使用する医薬組成物 - Google Patents

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WO2020138486A1
WO2020138486A1 PCT/JP2019/051593 JP2019051593W WO2020138486A1 WO 2020138486 A1 WO2020138486 A1 WO 2020138486A1 JP 2019051593 W JP2019051593 W JP 2019051593W WO 2020138486 A1 WO2020138486 A1 WO 2020138486A1
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WO
WIPO (PCT)
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vegf
antibody
drug
vegfr2
antibody drug
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2019/051593
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English (en)
French (fr)
Inventor
哲夫 馬島
尊 若槻
啓之 清宮
研成 山口
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Japanese Foundation for Cancer Research
Original Assignee
Japanese Foundation for Cancer Research
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Japanese Foundation for Cancer Research filed Critical Japanese Foundation for Cancer Research
Publication of WO2020138486A1 publication Critical patent/WO2020138486A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor

Definitions

  • the present invention combines anti-VEGFR2 (vascular endothermic factor receptor 2 and vascular endothelial growth factor receptor 2) antibodies with anti-VEGF-A (vascular endothel growth factor-A) neutralizing antibody treatment method.
  • anti-VEGFR2 vascular endothermic factor receptor 2 and vascular endothelial growth factor receptor 2
  • anti-VEGF-A vascular endothel growth factor-A neutralizing antibody treatment method.
  • VEGF Vascular endothelial growth factor
  • VEGFR Vascular endothelial growth factor
  • VEGFR which is a VEGF receptor
  • VEGFR2 is a type of receptor tyrosine kinase, and there are three types of proteins, VEGFR1 to VEGFR3.
  • VEGFR2 has a weaker binding ability to a ligand than VEGFR1, but has a strong tyrosine kinase activity, and has a large contribution to intracellular signal transduction as a whole, and is considered to be greatly involved in the process of angiogenesis.
  • VEGFR2 is capable of binding to VEGF-A, C, D and E and is one of the three VEGFRs that is said to be most closely associated with tumor angiogenesis induced by VEGF. ..
  • Ramucirumab specifically binds to VEGFR2, thereby inhibiting the binding with the ligands VEGF-A, VEGF-C, and VEGF-D, and inhibiting the activation of VEGFR2 and its downstream signal transduction system. As a result, it inhibits the proliferation and migration of vascular endothelial cells, inhibits the formation of tumor blood vessels, and exerts an antitumor effect.
  • ramucirumab is used as a second-line treatment for advanced gastric cancer.
  • Systemic chemotherapy has been performed for patients with unresectable advanced gastric cancer, but the prognosis is unsatisfactory, with an average of around one year.
  • Ramucirumab was found to have significantly prolonged overall survival in the second-line treatment of advanced gastric cancer, was approved for gastric cancer in Japan in June 2015, and has been widely used for colon cancer and lung cancer since then.
  • Ramucirumab a human anti-VEGFR2 antibody
  • Ramucirumab showed a significant prolongation of overall survival in combination with paclitaxel in the RAINBOW trial, which is a global phase III trial targeting second-line treatment of gastric cancer, and has become the standard treatment.
  • MOS median overall survival, median overall survival: 9.6 months vs 7.4 months
  • Non-Patent Document 1 Non-Patent Document 1
  • its therapeutic effect was not sufficient, and a subset analysis of Japanese in the previous RAINBOW trial showed that the response rate of the combination therapy with ramucirumab/paclitaxel was about 40%, and the median survival time was around 11.4 months.
  • Ramucirumab has many side effects with few side effects, but there are some patients who are not so effective. For patients with little therapeutic benefit, if it is possible to predict the therapeutic effect before the start of treatment with ramucirumab or at the early stage of the treatment, without unnecessary treatment for patients who are not expected to have the therapeutic effect, Alternative treatments can be given. Also, from the viewpoint of proper use of pharmaceuticals, it would be of great benefit to develop an appropriate biomarker for predicting the therapeutic effect that makes this possible. Furthermore, understanding the mechanism of resistance to ramucirumab will lead to the development of new therapeutic strategies. Therefore, the present inventors analyzed biomarkers that correlate with the therapeutic effect of ramucirumab.
  • FIG. 1 shows VEGF-A levels in plasma of patients 8 days after the start of ramucirumab in patients treated with ramucirumab alone and co-administered with paclitaxel in other cases.
  • PFS gression Free Survival, progression-free
  • the plasma VEGF-A concentration was divided into two groups, a high value group and a low value group, based on the optimal cutoff value (424 pg/ml), and PFS and OS were analyzed.
  • the VEGF-A high value group showed a significant prognosis. Was defective (FIG. 1(B)). Since a negative correlation between VEGF-A concentration in plasma and PFS or OS is not observed in paclitaxel administration, it is considered to be a phenomenon characteristic of ramucirumab administration. The following phenomena are observed by the administration of ramucirumab. (1) Plasma VEGF-A is markedly increased early after administration, and a negative correlation is observed between the VEGF-A value and the survival period.
  • VEGF-A vascular endothelial growth
  • Non-patent Document 8 VEGF-A has also been reported to suppress tumor immunity through the proliferation/infiltration of regulatory T cells (Non-patent Document 8), which may adversely affect the mechanism via immunosuppression. There is.
  • the efficacy of anti-VEGFR2 antibody administration represented by ramucirumab can be determined by the blood VEGF-A concentration at the early stage of the treatment.
  • An object of the present invention is to provide a therapeutic agent and a therapeutic method that exert an effect on a patient group whose efficacy is not recognized by administration of ramucirumab. It is another object of the present invention to provide a therapeutic agent and a therapeutic method that eliminate the adverse effects of excessive VEGF-A produced by administration of anti-VEGFR2 antibody on the treatment.
  • the present invention relates to a novel therapeutic method and therapeutic agent for improving the therapeutic effect on patients who are not therapeutically effective by administering anti-VEGFR2 antibody including ramucirumab.
  • a concomitant drug which is used in combination with an anti-VEGFR2 antibody drug in a disease in which angiogenesis is an exacerbation, and which comprises an anti-VEGF antibody as an active ingredient.
  • the concomitant drug according to (1), wherein the anti-VEGF antibody is an anti-VEGF-A antibody.
  • the concomitant drug according to (1) or (2), wherein the disease is a tumor.
  • the concomitant drug according to (3), wherein the tumor is gastric cancer, colon cancer, or non-small cell lung cancer.
  • the concomitant drug according to any one of (1) to (4) which is used simultaneously or separately with the anti-VEGFR2 antibody drug.
  • a kit for testing a patient who responds effectively by using an anti-VEGFR2 antibody drug and an anti-VEGF antibody drug in combination which comprises a reagent for measuring the VEGF-A concentration in a patient sample kit.
  • Blood VEGF concentration is measured before and after administration of anti-VEGFR2 antibody drug, and when a significant increase in blood VEGF concentration is observed after administration of anti-VEGFR2 antibody drug, anti-VEGFR2 antibody drug.
  • FIG. 1 A diagram showing the relationship between VEGF-A concentration in patient plasma and PFS (left) and OS (right) on day 8 after administration of ramucirumab.
  • B PFS (left) and OS (right) of plasma VEGF-A high value group and low value group on day 8 of administration of ramucirumab.
  • A A diagram showing a DC101 antibody administration schedule that is a mouse surrogate antibody for ramucirumab.
  • B Changes in mouse VEGF-A in plasma after administration of DC101 antibody.
  • FIG. 1 A photograph showing a state 14 days after the start of antibody administration of a tumor transplanted in a mouse upon administration of each antibody. The histological observation of the kidney image
  • A An example in which an infarcted site is observed in each group is shown.
  • B shows an example in which there is no infarct site in each group.
  • the histological findings of the kidney photographed by PAS staining and an objective lens of 40 times are shown.
  • a therapeutic effect can be obtained even in a patient group where anti-VEGFR antibody alone does not produce an effect.
  • bevacizumab is used as an anti-VEGF-A antibody in clinical use
  • aflibercept which is a biopharmaceutical capable of binding to VEGF-A, B, and PlGF
  • ramucirumab is used as an anti-VEGFR2 antibody.
  • the anti-VEGFR antibody drug and the anti-VEGF antibody drug to be developed in the future are not limited thereto.
  • a drug containing an antibody fragment such as ranibizumab, which is a Fab fragment against VEGF-A, as an active ingredient can be used.
  • a drug containing a bispecific antibody targeting both VEGFR2 and VEGF-A as an active ingredient may be used.
  • the diseases targeted by the therapeutic agents and treatment methods shown in this Example are diseases in which angiogenesis is involved in the onset and exacerbation of the disease.
  • Tumors are examples of such diseases, and typical examples thereof include gastric cancer, colon cancer, and non-small cell lung cancer, which are known to be effective by administration of ramucirumab.
  • the timing of administration of the therapeutic agents may be the same, or it is possible to administer the therapeutic agents individually on different schedules in consideration of the half-life of each therapeutic agent.
  • each antibody may be administered in combination on the first day (D1) and again after 2 weeks (D15).
  • the dose may be a dose that has been confirmed to be effective for each antibody.
  • 8 mg/kg for ramucirumab and 5 mg/kg for bevacizumab may be administered at D1 and D15.
  • the dose and administration schedule may be determined for each antibody based on the results of future clinical studies.
  • Ramucirumab is the standard treatment in combination with paclitaxel, but it is not administered in combination with other antibody drugs.
  • An anti-VEGFR antibody drug alone does not show any effect as an antibody drug, but a group of patients who show an effect by co-administration with an anti-VEGF antibody drug is treated with anti-VEGFR antibody and blood VEGF-A Is a group of patients with an increase in Therefore, in addition to the combined administration of ramucirumab and paclitaxel, which is currently the standard treatment, the combined administration of bevacizumab may be performed.
  • the blood VEGF-A concentration is measured early, and if the value is high, the anti-VEGF antibody drug is used as a concomitant drug, and if the value is low, the antibody drug is The anti-VEGFR antibody drug alone may be administered for treatment.
  • the blood VEGF-A concentration is measured here on the 8th day, but it may be measured early after the start of administration of the anti-VEGFR2 antibody, and the samples on the 4th to 10th days may be measured. Further, blood, plasma, or serum can be used as the sample. In the case of blood, plasma, or serum, it is possible not only to obtain a sample from a patient and perform an examination even for unresectable advanced/recurrent cancer, but also to reduce the physical burden on the patient.
  • the present inventors believe that the excess VEGF-A increased after administration of ramucirumab adversely affects the subsequent survival period, and that neutralizing this excess VEGF-A may improve the therapeutic effect. It was however, as described above, the treatment method that suppresses the activation of VEGFR by the kinase inhibitor sorafenib and inhibits the binding of VEGF to VEGFR by bevacizumab is a treatment method that suppresses both the ligand and the receptor. , Although some effects have been obtained, the combination therapy has been abandoned due to the increased toxicity. Furthermore, there is no case where treatment is performed by simultaneously inhibiting the ligand and the receptor with an antibody drug.
  • a human gastric cancer cell line was transplanted into a nude mouse, and a model mouse showing a similar reaction to an anti-VEGFR antibody as a human gastric cancer patient was constructed.
  • VEGF-A secretion per 10,000 cells in the culture supernatant was calculated. As shown in FIG. 2, since VEGF-A secreted from MKN45 cells was the highest among the analyzed cells, it was decided to construct a mouse model using MKN45 cells.
  • Nude mouse, CAnN. 2,000,000 human gastric cancer cell lines MKN45 or MKN74 were subcutaneously transplanted into Cg-Foxn1nu/CrlCrlj (6 weeks old, female, obtained from Charles River Japan, Inc.), and the tumor size was determined 14 days after the transplantation. It measured and was divided into groups at random. The tumor volume at the time of grouping was 80 to 150 mm 3 .
  • Ramucirumab mouse surrogate antibody DC101 Bio X Cell
  • MKN45 cells are cells whose tumor regression effect has already been examined by the DC101 antibody.
  • DC101 antibody was intraperitoneally administered at 5, 10 and 20 mg/kg twice a week for 2 weeks (FIG. 3(A)). Blood was collected 14 days after the administration to measure human and mouse VEGF-A in plasma. For the measurement, a human VEGF-A measurement kit and a mouse VEGF-A measurement kit (both manufactured by R&D) were used. It has been previously confirmed that the human VEGF-A measurement kit detects only human VEGF-A and the mouse VEGF-A measurement kit detects only mouse VEGF-A. As a result, induction of mouse VEGF-A was confirmed when the DC101 antibody was administered at a dose of 10 or 20 mg/kg (FIG. 3(B)). On the other hand, no increase in human VEGF-A was observed (Fig. 3(C)).
  • the notation “tumor(+)” indicates a mouse transplanted with MKN45 or MKN74, which is a gastric cancer cell line.
  • the notation “tumor( ⁇ )” indicates the result of analysis of the effect of the DC101 antibody in a mouse not transplanted with a cancer cell line as a control.
  • mouse PlGF was significantly increased by DC101 administration, and weak induction was observed for mouse VEGF-C and mouse VEGF-D. This result was similar to the result of plasma of patients administered ramucirumab (Patent Document 1, Non-Patent Document 3). Further, with respect to any of the cytokines, the induction was of mouse origin, and not of human origin.
  • mice constructed by subcutaneously transplanting MKN45 cells into nude mice the behavior of vascular growth factor produced after administration of the DC101 antibody is very similar to that of ramucirumab administered to patients. , Considered a good model.
  • nude mice were subcutaneously transplanted with MKN45 cells, and 14 days later, the tumor size was measured, and 80 to 150 mm 3 tumors were grouped.
  • bevacizumab Since bevacizumab has relatively few serious side effects, it is considered that toxicity is slight even when used in combination. In fact, no significant weight loss was observed even in the mouse model, and no serious side effects were observed.
  • VEGF is constantly produced from podocytes in the kidney, and it has been revealed that it binds to VEGFR2 of endothelial cells and maintains the morphology and function of endothelial cells by the paracrine action, and filtration of glomerular blood vessels.
  • Non-Patent Document 9 The importance of VEGF in the constant maintenance of barriers has been shown (Non-Patent Document 9). Therefore, glomerular abnormalities and other renal disorders may occur as side effects.
  • liver damage since it is generally highly likely that liver damage will occur as a side effect of the drug, pathological analysis of the kidney and liver was performed.
  • a group Abnormalities of kidneys and liver tissues of individual animals of non-administration group (A group), DC101 administration group (B group), DC101 and mVEGF antibody combination administration group (C group), mVEGF antibody administration group (D group) I examined if there were any findings.
  • the kidney was subjected to HE staining and PAS staining, and the liver was subjected to HE staining by a conventional method, and microscopic observation was performed (FIGS. 6 to 8).
  • the results of abnormal findings are shown in Table 1. Mild infarcts were observed in the kidneys in all groups. In group C to which the antibody was co-administered, only mild atrophic tubules were observed.
  • FIG. 6(A) shows an infarct focus of an individual in which an infarct site was observed in each group
  • FIG. 6(B) shows a histological image of an individual in which the infarction site was not observed.
  • atrophic tubules and interstitial fibrosis were localized (wedge-shaped) in the infarct lesion, and tubule casts were also observed.
  • the fibrosis site was less noticeable in A12 than in other cases, and the fibrosis site was observed in D29 in a wider area than in other cases.
  • FIG. 7 shows an image of an individual with an observed infarction. No changes in glomeruli or renal tubules were observed in any of the cases.
  • anti-VEGF-A antibody It is considered that the ligand-receptor dual inhibition therapy, which uses both and anti-VEGFR2 antibody in combination, to simultaneously suppress ligand and receptor is a highly safe treatment method.
  • both the antibody drugs targeting the VEGF ligand and the receptor have an action of suppressing angiogenesis via VEGF-VEGFR2 which is a target pathway.
  • both antibody drugs show contradictory effects in the actions mediated by receptors other than VEGFR2. That is, when an anti-VEGF antibody is used, the ligand itself is suppressed by the antibody, so that it cannot act on receptors other than VEGFR2. As a result, responses mediated by receptors other than VEGFR2 are also suppressed.
  • the anti-VEGFR2 antibody when used, the ligand VEGF-A is present and the level of VEGF-A derived from the host in the blood is increased, so that the response mediated by receptors other than VEGFR2 is enhanced. It is thought to be done. Therefore, when each of the antibodies is used alone, it is considered that there is a phenomenon in which the effects of the antibody drug are diminished due to these contradictory side reactions, or side effects occur, which have a negative effect on the therapeutic effect. It is considered that by using both antibody drugs in combination, such side reaction can be canceled, the target pathway VEGF-VEGFR2 pathway can be reliably suppressed, and the tumor can be regressed.
  • the treatment method using the anti-VEGFR2 antibody and the anti-VEGF-A neutralizing antibody in combination is the VEGF-A in the blood early after the administration of the anti-VEGFR antibody. Shows a response to a group of patients with markedly increased or a group of high values when the VEGF-A value is divided into two groups by the optimum cutoff.
  • dual inhibition therapy of the VEGF-A/VEGFR2 pathway is not considered to have serious side effects, the combined administration from the beginning without studying the increase in VEGF-A level in patients due to anti-VEGFR antibody administration. You can go.
  • the ligand-receptor dual blockade therapy in which a ligand and a receptor are simultaneously suppressed by an antibody drug to obtain a therapeutic effect, is not a therapeutic method that has been attempted until now, but a completely new therapeutic method. Is.

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Abstract

リガンド、及びその受容体の両方を抗体でブロックすることによる新しい治療法を提供する。具体的には、抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品とともに、抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用薬として投与することにより、抗ＶＥＧＦＲ２抗体単独では効果を奏さなかった腫瘍に対しても効果を有する。

Description

ＶＥＧＦ－Ａ／ＶＥＧＦＲ２経路のｄｕａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ療法、及びこれに使用する医薬組成物
　本発明は抗ＶＥＧＦＲ２（ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　２、血管内皮増殖因子受容体２）抗体と、抗ＶＥＧＦ－Ａ（ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ－Ａ、血管内皮増殖因子）中和抗体を併用する新しい治療方法に関する。
　がんが増殖、転移する際には、増殖能を維持するための栄養補給経路として血管新生と言われる栄養血管の新生が起こる。血管新生は間質および腫瘍細胞より産生される血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）とその受容体（ＶＥＧＦＲ）が主要な役割を果たしており、血管新生を制御する目的でこれらの分子を標的とする薬剤の開発が広く行われてきた。
　ＶＥＧＦの受容体であるＶＥＧＦＲは、受容体型チロシンキナーゼの一種でありＶＥＧＦＲ１からＶＥＧＦＲ３の３種のタンパク質が存在する。特に、ＶＥＧＦＲ２はＶＥＧＦＲ１と比較してリガンドに対する結合能は弱いものの、チロシンキナーゼ活性は強く、総合的に見て細胞内シグナル伝達に対する寄与が大きく、血管新生の過程に大きく関与していると考えられている。ＶＥＧＦＲ２はＶＥＧＦ－Ａ、Ｃ、ＤおよびＥとの結合能を有しており、３種のＶＥＧＦＲのうち、ＶＥＧＦによって誘発される腫瘍血管新生と最も密接に関連しているといわれる受容体である。
　がんの増殖、及び転移に関わる血管新生において重要な作用をするＶＥＧＦＲ２に対する抗体医薬品が開発されつつあり、その代表的な抗体医薬品であるラムシルマブ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ、商品名「サイラムザ」、イーライ・リリー社製）は、ＶＥＧＦＲ２に対する遺伝子組換えヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１ｂ）のヒト型モノクローナル抗体である。
　ラムシルマブはＶＥＧＦＲ２に特異的に結合することによって、リガンドであるＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄとの結合を阻害し、ＶＥＧＦＲ２とその下流のシグナル伝達系の活性化を阻害する。その結果、血管内皮細胞の増殖、遊走を阻害し、腫瘍血管の新生を阻害して抗腫瘍効果を発揮する。
　近年、胃がんにおいても血管新生阻害剤の有用性が示され、ラムシルマブは進行胃がんの２次治療に用いられている。根治切除不能な進行胃がん症例に対しては全身化学療法が施行されているが、その予後は平均１年前後と満足できるものではない。ラムシルマブは、進行胃がんの２次治療において全生存期間の有意な延長を認め、２０１５年６月に本邦で胃がんにおける承認が得られ、以降、大腸がん、肺がんにおいても広く用いられている。
　ヒト抗ＶＥＧＦＲ２抗体であるラムシルマブは、胃がん２次治療症例を対象としたＧｌｏｂａｌ第三相試験であるＲＡＩＮＢＯＷ試験において、パクリタキセルとの併用において全生存期間の有意な延長が示され、標準治療となっている（ｍＯＳ（ｍｅｄｉａｎ　ｏｖｅｒａｌｌ　ｓｕｒｖｉｖａｌ、全生存期間中央値）：９．６カ月ｖｓ７．４カ月、ＨＲ（Ｈａｚａｒｄ　Ｒａｔｉｏ、ハザード比）０．８１　９５％ＣＩ０．６８－０．９６、ｐ＝０．０１７）（非特許文献１）。しかしながらその治療効果は十分ではなく、先のＲＡＩＮＢＯＷ試験の日本人におけるサブセット解析では、２次治療におけるラムシルマブ／パクリタキセル併用療法の奏効率は約４０％、生存期間中央値は１１．４カ月前後であった（非特許文献２）。
　ラムシルマブは、副作用も少なく胃がんで効果が認められる患者が多い一方で、さほど治療効果が得られない患者もいる。こうした治療上のベネフィットが少ない患者に対しては、ラムシルマブの治療開始前、あるいは治療開始早期に治療効果予測を行うことができれば、治療効果が期待できない患者に対して無駄な治療を行うことなく、代替の治療を行うことができる。また、医薬品の適正使用の観点からもこれを可能とする適切な治療効果予測のバイオマーカーを開発すればメリットが大きい。さらに、ラムシルマブに対する耐性機序が分かれば、新たな治療戦略の開発につながる。そこで、本発明者らはラムシルマブ治療効果と相関のあるバイオマーカーの解析を行った。
　その結果、ラムシルマブが投与された胃がん症例において、血漿中のＶＥＧＦ－Ａが特徴的な挙動を示し、予後と相関することを明らかにした。図１は、２例はラムシルマブ単独投与、他はパクリタキセルとの併用投与を行った患者において、ラムシルマブ投与開始８日後の患者血漿中のＶＥＧＦ－Ａ値を測定し、ＰＦＳ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　Ｆｒｅｅ　Ｓｕｒｖｉｖａｌ、無増悪生存期間）、ＯＳとの相関を解析した結果である。血漿中のＶＥＧＦ－Ａ濃度とＰＦＳ、ＯＳはどちらも負の相関が見られた（図１（Ａ））。また、血漿中のＶＥＧＦ－Ａ濃度を至適カットオフ値（４２４ｐｇ／ｍｌ）により高値群、低値群の２群に分けてＰＦＳ、ＯＳを解析したところ、ＶＥＧＦ-Ａ高値群では有意に予後が不良であった（図１（Ｂ））。血漿中のＶＥＧＦ－Ａ濃度とＰＦＳ、ＯＳとの負の相関は、パクリタキセル投与においては観察されないことから、ラムシルマブ投与に特徴的な現象と考えられる。ラムシルマブ投与によって、以下の現象が認められる。（１）投与後早期に血漿ＶＥＧＦ－Ａは著明に上昇し、このＶＥＧＦ－Ａ値と生存期間には負の相関が認められる。（２）至適カットオフにより２群に分け高値群と低値群で比較したところ高値群の予後が有意に不良であった。（３）投与後早期のＶＥＧＦ－Ａの上昇は一過性ではなく、増悪時まで高値が維持される（特許文献１、非特許文献３）。
　上記結果によれば、ラムシルマブ投与によって、血中ＶＥＧＦ－Ａ濃度が上昇する患者群で、ラムシルマブの効果が得られないことから、ＶＥＧＦの上昇を抑制することによって、奏効が得られる可能性がある。しかしながら、すでに報告されているＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ双方を抑制する治療法からは望ましい結果が得られていない（非特許文献４～７）。これらの治療法は、具体的にはキナーゼ阻害剤ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）とＶＥＧＦに対するモノクローナル抗体であるベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）によって、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ双方を抑制しようという治療法である。しかし、上記報告によれば、ソラフェニブ、ベバシズマブの併用療法はさほど効果を示さない、あるいは、副作用が強く、治療を継続できず、確立した治療法となるには至っていない。
　さらに、ラムシルマブ投与後の過剰なＶＥＧＦ－Ａはその後の治療経過に悪影響を与える可能性がある。その理由として過剰なＶＥＧＦ－ＡがＶＥＧＦＲ１を介した経路で血管新生・腫瘍増殖をきたすからである。また近年、ＶＥＧＦ－Ａは制御性Ｔ細胞の増殖・浸潤などを介して腫瘍免疫への抑制効果も報告されており（非特許文献８）、免疫抑制を介した機序により悪影響を及ぼす可能性がある。
国際公開第２０１８／１２４１５３号
Wilke, H. et al.,2014, Lancet Oncol., Vol.15, p.1224-1235. Shitara, K. et al., 2016, Gastric Cancer, Vol.19(3), pp.927-938, doi: 10.1007/s10120-015-0559-z. Takahari, D. et al., 2018, https://meetinglibrary.asco.org/record/156166/abstract Castellano D. et  al.,2013, Eur. J. Cancer. Vol.49(18), pp.3780-3787. Galanis, E. et al., 2013, Clin. Cancer Res., Vol.19(17),pp.4816-4823. Lee, J.M., et al., 2010, Br. J. Cancer, Vol.102(3),  pp.495-459. Azad, N.S. et al., 2008, J. Clin. Oncol., Vol.26(22),pp.3709-3714. Khan, K.A. and Kerbel, R.S.,2018, Nat. Rev. Clin. Oncol.,Vol.15(5), pp. 310-324. Advani, A. 2014, Curr.Opin. Nephrol. Hypertens., Vol.23, pp.87-92.
　すでに本発明者らが示しているように、ラムシルマブで代表される抗ＶＥＧＦＲ２抗体投与による有効性は治療開始早期に血中のＶＥＧＦ－Ａ濃度によって見極めることができる。しかし、ラムシルマブ投与による治療の効果が認められない患者群に対し、ラムシルマブ治療を行わないという選択肢はあるものの、効果のある代替の治療法があるわけではない。本発明は、ラムシルマブ投与により有効性が認められない患者群に対し、効果を奏する治療薬、及び治療法を提供することを課題とする。また、抗ＶＥＧＦＲ２抗体投与により産生される過剰のＶＥＧＦ－Ａによる治療に対する悪影響を排除する治療薬、及び治療法を提供することを課題とする。
　本発明は、ラムシルマブをはじめとする抗ＶＥＧＦＲ２抗体投与によって、治療効果が得られない患者に対して治療効果を改善する新規治療法、治療薬に関する。
（１）血管新生が増悪の原因となる疾患において、抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と併用する医薬品であって、抗ＶＥＧＦ抗体を有効成分とすることを特徴とする併用薬。
（２）前記抗ＶＥＧＦ抗体が、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体であることを特徴とする（１）記載の併用薬。
（３）前記疾患が腫瘍であることを特徴とする（１）、又は（２）記載の併用薬。
（４）前記腫瘍が胃がん、大腸がん、又は非小細胞肺がんであることを特徴とする（３）記載の併用薬。
（５）前記抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と、同時に、又は個別に用いられることを特徴とする（１）～（４）いずれか１つ記載の併用薬。
（６）前記抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品がラムシルマブであって、前記抗ＶＥＧＦ抗体を有効成分とする併用薬がベバシズマブであることを特徴とする（１）～（５）いずれか１つ記載の併用薬。
（７）抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用することにより奏効する患者を検査する方法であって、患者より採取された抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品による治療開始前、及び治療開始後早期の試料中のＶＥＧＦ－Ａ濃度を測定し、比較することを特徴とする検査方法。
（８）（７）に記載の検査方法であって、前記試料が血液、血漿、又は血清であることを特徴とする検査方法。
（９）抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用することにより奏効する患者を検査するキットであって、患者試料中のＶＥＧＦ－Ａ濃度を測定するための試薬を含むことを特徴とする検査キット。
（１０）血管新生が増悪の原因となる疾患に対し、抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用投与する治療方法。
（１１）（１０）に記載の治療方法であって、抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品は、同時に、又は個別のタイミングで併用投与する治療方法。
（１２）抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品投与前、及び投与後早期に血中ＶＥＧＦ濃度を測定し、抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品投与後、血中ＶＥＧＦ濃度の有意な増加が認められた場合には、抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用投与する（１０）、又は（１１）に記載の治療方法。
血漿中のＶＥＧＦ－Ａ濃度と予後の相関を解析した図。（Ａ）ラムシルマブ投与後８日目の患者血漿中のＶＥＧＦ－Ａ濃度とＰＦＳ（左）、ＯＳ（右）の関係を示す図。（Ｂ）ラムシルマブ投与８日目の血漿中ＶＥＧＦ－Ａ高値群、低値群のＰＦＳ（左）、ＯＳ（右）を示す図。 ヒト胃がん細胞におけるＶＥＧＦ－Ａ産生量を示す図。 マウス移植腫瘍モデルにおける解析結果を示す図。（Ａ）ラムシルマブのマウス・サロゲート抗体であるＤＣ１０１抗体投与スケジュールを示す図。（Ｂ）ＤＣ１０１抗体投与後の血漿中のマウスＶＥＧＦ－Ａの変化。（Ｃ）ＤＣ１０１抗体投与後の血漿中のヒトＶＥＧＦ－Ａの変化。 マウス移植腫瘍モデルにおける解析結果を示す図。（Ａ）ＤＣ１０１抗体投与後の血漿中のヒト、あるいはマウスＰｌＧＦ（Ｐｌａｃｅｎｔａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ、胎盤増殖因子）の変化、（Ｂ）ＤＣ１０１抗体投与後の血漿中のヒト、あるいはマウスＶＥＧＦ－Ｃの変化、（Ｃ）ＤＣ１０１抗体投与後の血漿中のヒト、あるいはマウスＶＥＧＦ－Ｄの変化。 マウス移植腫瘍モデルにおける抗ＶＥＧＦＲ２抗体（ＤＣ１０１）、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体（ｍＶＥＧＦ）併用投与の効果を示す図。（Ａ）抗体投与スケジュールを示す図。（Ｂ）各抗体投与による腫瘍容積の変化を示す図。（Ｃ）各抗体投与におけるマウスに移植した腫瘍の抗体投与開始後１４日目の様子を示す写真。 ＨＥ染色、対物レンズ１０倍で撮影した腎臓の組織所見を示す。（Ａ）各群で梗塞部位の観察された例を示す。（Ｂ）各群で梗塞部位のない例を示す。(Ａ３，１２：非投与群、Ｂ５，９：ＤＣ１０１投与群、Ｃ３，４：ＤＣ１０１及びｍＶＥＧＦＡ抗体併用投与群、Ｄ７，２９：ｍＶＥＧＦＡ抗体投与群） ＰＡＳ染色、対物レンズ４０倍で撮影した腎臓の組織所見を示す。各群で梗塞部位の観察された例を示す。 ＨＥ染色、対物レンズ１０倍で撮影した肝臓の組織所見を示す。腎臓に梗塞が見られた個体の肝臓所見を示す。 （Ａ）抗ＶＥＧＦＲ２抗体（ＤＣ１０１）と、抗ＶＥＧＦ抗体（ＶＥＧＦ－Ａｂ）投与された胃がん腫瘍における遺伝子発現変化を示す。（Ｂ）抗ＶＥＧＦＲ２抗体と抗ＶＥＧＦ抗体の併用投与による推定される作用機序を模式的に示す図。
　図１に示すように、ラムシルマブ投与後、血漿ＶＥＧＦ－Ａの上昇がさほど見られない患者群では、ラムシルマブの治療効果が得られることから、上昇したＶＥＧＦ－Ａを中和することによって、奏効が得られる可能性が高いと考えた。前述のように、ＶＥＧＦＲを標的とする低分子医薬を用いた治療はその特有の副作用発症のため治療が妨げられるが、より副作用の少ない抗体医薬を用いて、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ双方を抑制することによって効果が得られる可能性があると考えられた。そこで、以下の解析を行った。
　以下の実施例で示すように、ＶＥＧＦ、あるいはＶＥＧＦＲに対する抗体を併用して使用することにより、抗ＶＥＧＦＲ抗体単独では効果を奏さない患者群に対しても治療効果を得ることができる。現在、臨床で用いられている抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体としては、ベバシズマブ、さらに、ＶＥＧＦ－Ａ、Ｂ、及びＰｌＧＦに対して結合能を持つバイオ医薬品であるアフリベルセプト、抗ＶＥＧＦＲ２抗体としてはラムシルマブがあるが、これに限らず今後開発される抗ＶＥＧＦＲ抗体医薬や抗ＶＥＧＦ抗体医薬を用いることができる。また、ＶＥＧＦ－Ａに対するＦａｂ断片であるラニビズマブのような抗体断片を有効成分とする医薬を用いることができる。さらに、ＶＥＧＦＲ２、及びＶＥＧＦ－Ａの両方を標的とする二重特異性抗体を有効成分とする医薬を用いてもよい。
　本実施例で示す治療薬、治療方法の対象となる疾患は、血管新生が疾患の発症、増悪に関与する疾患である。このような疾患としては腫瘍があるが、特にラムシルマブ投与によって効果があることが認められている胃がん、大腸がん、非小細胞肺がんは代表的な疾患として挙げられる。特にラムシルマブの適応症として承認されている治癒切除不能な進行・再発胃がん、治癒切除不能な進行・再発結腸・直腸がん、治癒切除不能な進行・再発非小細胞肺がんが対象となる疾患として挙げられる。また、上記に限らず、抗ＶＥＧＦＲ抗体医薬の効果が認められる疾患であれば、併用薬として抗ＶＥＧＦ抗体医薬を使用することにより、より高い治療効果が得られる可能性がある。
　治療薬投与のタイミングは、同時でも良いし、各治療薬の半減期等を考慮して別々のスケジュールで個別に投与することも可能である。抗ＶＥＧＦ抗体、及び抗ＶＥＧＦＲ抗体を最初から併用して用いる場合には、各抗体を初日（Ｄ１）に併用投与し、２週間後（Ｄ１５）に再度投与すればよい。投与量は各抗体において有効性が認められている投与量とすればよい。例えばラムシルマブであれば８ｍｇ／ｋｇ、ベバシズマブであれば５ｍｇ／ｋｇをＤ１、Ｄ１５に投与すればよい。投与量、投与スケジュールに関しては、今後の臨床試験の結果をもとに、各抗体について決定すればよい。
　ラムシルマブはパクリタキセルとの併用投与が標準治療であるが、他の抗体医薬と併用して投与することはない。抗体医薬として、抗ＶＥＧＦＲ抗体医薬のみを投与した場合には効果を示さないが、抗ＶＥＧＦ抗体医薬を併用することによって効果を奏する患者群は、抗ＶＥＧＦＲ抗体投与後、早期に血中ＶＥＧＦ－Ａの上昇が見られる患者群である。したがって、現在標準治療となっているラムシルマブとパクリタキセルとの併用投与に加えて、ベバシズマブの併用投与を行えば良い。
　あるいは、標準治療であるパクリタキセルと抗ＶＥＧＦＲ抗体医薬治療後、早期に血中ＶＥＧＦ－Ａ濃度を測定し、高値であれば抗ＶＥＧＦ抗体医薬を併用薬として用い、低値であれば抗体医薬としては抗ＶＥＧＦＲ抗体医薬単独投与による治療を行えば良い。
　血中のＶＥＧＦ－Ａ濃度は、ここでは８日目に測定しているが、抗ＶＥＧＦＲ２抗体投与開始後、早期であれば良く、概ね４日目から１０日目の試料を測定すればよい。また、試料としては、血液、血漿、血清を使用することができる。血液、血漿、血清であれば、切除不能な進行・再発がんであっても患者から試料を得て検査を行うことができるだけではなく、患者の身体的負担も少なくてすむ。
　また、以下の実施例で示すように、抗ＶＥＧＦＲ抗体投与に対して効果が少ない場合であっても、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体を併用して投与することにより顕著な効果が得られることが明らかとなった。２つの抗体の作用機序を考えると、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体投与に対して効果が得られない患者に対して、抗ＶＥＧＦＲ抗体を併用して投与することによって効果が得られる可能性がある。
［実施例］
　本発明者らは、ラムシルマブ投与後に上昇した過剰なＶＥＧＦ－Ａがその後の生存期間に悪影響を及ぼし、この過剰なＶＥＧＦ－Ａを中和する事で治療効果の改善が得られるのではないかと考えた。しかしながら、上述のように、キナーゼ阻害剤であるソラフェニブによってＶＥＧＦＲの活性化を抑制し、ベバシズマブによってＶＥＧＦのＶＥＧＦＲへの結合を阻害する治療法は、リガンド、受容体の双方を抑制する治療法であり、ある程度の効果は得られているものの、毒性が強くなり併用療法は断念されている。さらに、リガンド、及びレセプターを同時に抗体医薬によって抑制することによって治療を行った例はない。
　そこで抗体製剤によるＶＥＧＦ－Ａ／ＶＥＧＦＲ２双方を抑制することによって治療効果が得られるか解析を行った。最初に、ヌードマウスにヒト胃がん細胞株を移植し、抗ＶＥＧＦＲ抗体に対してヒト胃がん患者と同様の反応を示すモデルマウスの構築を行った。
（１）マウスモデルの確立
　疾患モデルとして、抗ＶＥＧＦＲ２抗体投与後に、ＶＥＧＦ－Ａの上昇が観察されるモデルを作製する必要がある。マウスにヒト腫瘍細胞を移植してモデルを構築するにあたり、移植する腫瘍細胞に十分なＶＥＧＦ－Ａ分泌能があることが望ましい。まず、移植する腫瘍細胞を決定するために、ヒト胃がん細胞株のＶＥＧＦ－Ａ量をＥＬＩＳＡにより測定した（図２）。
　ヒト胃がん細胞Ｓｔ４、ＭＫＮ１、ＭＫＮ７、ＭＫＮ２８、ＭＫＮ４５、ＭＫＮ７４（Ｓｔ４は医用細胞資源センター・細胞バンク、他の細胞は、ＪＣＲＢ細胞バンクより入手。）を用いて解析を行った。
　各細胞をサブコンフルエントな条件でシャーレに播種し、３日後にＶＥＧＦ－Ａ量をヒトＶＥＧＦ－Ａ測定キット（Ｒ＆Ｄ社）により測定した。培養上清中の細胞１０，０００個あたりのＶＥＧＦ－Ａ分泌量を算出した。図２に示すように、解析した細胞の中では、ＭＫＮ４５細胞から分泌されるＶＥＧＦ－Ａが最も多かったことから、ＭＫＮ４５細胞を用いてマウスモデルを構築することとした。
　ヌードマウス、ＣＡｎＮ．Ｃｇ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊ（６週齢、メス、日本チャールズリバー株式会社より入手。）に、２，０００，０００個のヒト胃がん細胞株ＭＫＮ４５、又はＭＫＮ７４を皮下移植し、移植１４日後に腫瘍サイズを測定しランダムに群分けした。なお、群分け時の腫瘍容積は８０～１５０ｍｍ３であった。ラムシルマブのマウス・サロゲート抗体ＤＣ１０１（Ｂｉｏ　Ｘ　Ｃｅｌｌ社）を投与して、ＶＥＧＦ－Ａ分泌量の測定を行った。なお、ＭＫＮ４５細胞は、ＤＣ１０１抗体によって、腫瘍退縮効果がすでに検討された細胞であることが、サイラムザ添付文書に開示されている。
　ＤＣ１０１抗体を５、１０、２０ｍｇ/ｋｇで週２回、２週間腹腔内投与を行った（図３（Ａ））。投与１４日目で採血を行い、血漿中のヒト及びマウスＶＥＧＦ－Ａを測定した。測定は、ヒトＶＥＧＦ－Ａ測定キット、マウスＶＥＧＦ－Ａ測定キット（いずれもＲ＆Ｄ社製）を用いた。なお、ヒトＶＥＧＦ－Ａ測定キットは、ヒトのＶＥＧＦ－Ａのみ、マウスＶＥＧＦ－Ａ測定キットはマウスＶＥＧＦ－Ａのみを検出することを事前に確認している。その結果、投与量１０、２０ｍｇ/ｋｇでＤＣ１０１抗体を投与した場合には、マウスＶＥＧＦ－Ａの誘導が確認された（図３（Ｂ））。一方、ヒトＶＥＧＦ－Ａの上昇は見られなかった（図３（Ｃ））。
　なお、図３において、ｔｕｍｏｒ（＋）の表記は、胃がん細胞株であるＭＫＮ４５、またはＭＫＮ７４を移植したマウスを示す。また、ｔｕｍｏｒ（－）の表記は、コントロールとしてがん細胞株を移植していないマウスにおけるＤＣ１０１抗体の効果を解析した結果を示している。
　次に、血管新生に関係する他の因子ＰｌＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄについてもその変動を解析した。ＶＥＧＦ－Ａと同様に、ＤＣ１０１抗体投与開始１４日目の血漿中のヒト及びマウスのＰｌＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ量をＥＬＩＳＡにより測定を行った（図４）。
　その結果、マウスＰｌＧＦがＤＣ１０１投与により顕著に増加し、マウスＶＥＧＦ－Ｃ、マウスＶＥＧＦ－Ｄについては弱い誘導が見られた。この結果は、ラムシルマブ投与患者血漿の結果と同様であった（特許文献１、非特許文献３）。また、いずれのサイトカインについても、誘導はマウス由来であり、ヒト由来のものは誘導されなかった。
　上記示したように、ヌードマウスの皮下にＭＫＮ４５細胞を移植して構築したマウスにおいて、ＤＣ１０１抗体投与後に産生する血管増殖因子の挙動は、患者にラムシルマブを投与した場合の挙動と非常に似ており、良いモデルであると考えられる。
（２）抗ＶＥＧＦＲ２抗体と抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体との併用による効果
　胃がん細胞株ＭＫＮ４５を移植したマウスモデルにおいて、ＤＣ１０１抗体投与後に宿主であるマウス由来のＶＥＧＦ－Ａが上昇することが明らかになった。そこで、同マウスモデルにおいて、ＤＣ１０１抗体、抗マウスＶＥＧＦ－Ａ抗体を併用投与することによる腫瘍抑制効果の解析を行った。
　上記と同様にして、ヌードマウスにＭＫＮ４５細胞を皮下移植し、１４日後に腫瘍サイズを測定し、８０～１５０ｍｍ３のものを群分けした。ＤＣ１０１抗体単独投与（ｎ＝３、１０ｍｇ／ｋｇ）、マウスＶＥＧＦ－Ａ中和抗体である２Ｇ１１－２Ａ０５抗体単独投与（ｎ＝２、５ｍｇ／ｋｇ）、ＤＣ１０１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）及び２Ｇ１１－２Ａ０５抗体（５ｍｇ／ｋｇ）併用投与（ｎ＝３）を、週２回、２週間の腹腔内投与を行い、腫瘍サイズ、マウス体重を経時的に測定した。また、コントロールとしては、溶媒のみを投与した（ｎ＝３）（図５（Ａ））。
　ＤＣ１０１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）単独投与群、及びマウスＶＥＧＦ－Ａ中和抗体２Ｇ１１－２Ａ０５（５ｍｇ／ｋｇ）単独投与群において、弱い腫瘍増殖抑制効果が見られた。一方、ＤＣ１０１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）と２Ｇ１１－２Ａ０５抗体（５ｍｇ／ｋｇ）併用群では統計的に有意な腫瘍抑制効果が認められた（図５（Ｂ））。また、肉眼観察による腫瘍の様子においても、併用群では明らかな腫瘍の退縮が観察された（図５（Ｃ））。
　ベバシズマブは、重篤な副作用が起きることが比較的少ないことから、併用することによっても毒性が軽微であると考えられる。実際に、マウスモデルにおいても、顕著な体重減少は認められず、重篤な副作用は観察されなかった。
　さらに、詳細に毒性を確認するために、上記実験を行ったマウスから組織を単離し病理解析を行った。ＶＥＧＦは腎臓ではポドサイトから恒常的に産生されており、内皮細胞のＶＥＧＦＲ２と結合しパラクライン作用により内皮細胞の形態や機能を維持していることが明らかにされてきており、糸球体血管の濾過障壁の恒常維持におけるＶＥＧＦの重要性が示されている（非特許文献９）。そのため、副作用として糸球体の異常、その他腎障害が生じる可能性がある。また、一般的に薬物による副作用として肝障害が生じる可能性も高いことから、腎臓、肝臓の病理解析を行った。非投与群（Ａ群）、ＤＣ１０１投与群（Ｂ群）、ＤＣ１０１及びｍＶＥＧＦ抗体併用投与群（Ｃ群）、ｍＶＥＧＦ抗体投与群（Ｄ群）の各個体の腎臓、肝臓組織を顕微鏡観察し、異常所見がないか検討した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　腎臓はＨＥ染色及びＰＡＳ染色、肝臓はＨＥ染色を常法により行い、顕微鏡観察を行った（図６～８）。異常所見の結果を表１に示す。腎臓ではいずれの群においても軽度の梗塞巣が観察された。また、抗体を併用投与したＣ群において、ごく軽度の萎縮尿細管が認められた。
　図６（Ａ）は、各群で梗塞部位が認められた個体の梗塞巣を、図６（Ｂ）は梗塞部位が観察されなかった個体の組織像を示す。図６（Ａ）に示すように、梗塞巣では萎縮尿細管及び間質線維化が限局性（楔状）に認められ、他に尿細管円柱も観察された。Ａ１２は他例より線維化部位が目立たない、Ｄ２９は他例より線維化部位が広範囲に認められるなど、個体間により梗塞部位に差が認められた。しかしながら、抗体投与を行っていない対照群でも梗塞巣が認められること、また、Ｄ群では中等度の変性を１例認めるものの、他はごく軽度（±）、軽度（＋）の症例であり、薬剤投与との関連は明確ではない。また、Ｃ群でごく軽度の萎縮尿細管が認められた例では、他の変化が観察されず梗塞との関連性は明らかではない。
　さらに、ＰＡＳ染色により糸球体について解析を行った。図７は梗塞の観察された個体の像を示す。いずれの例においても糸球体、尿細管の変化は認められなかった。
　肝臓は全群とも明らかな変化は観察されなかった（図８）。腎臓で中等度の梗塞巣が認められたＤ群のＤ２９個体においてごく軽度の胆管増生が認められた。しかしながら、腎臓での変化との関連性は明らかではなかった。また、肝臓での変化はＤ２９のみの変化であり、偶発性の変化であると推察される。
　これらの結果から、抗体を併用投与した場合でも重篤な副作用は認められず、また、病理解析の結果についても対照群とほぼ同程度の変化しか認められなかったことから、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体と抗ＶＥＧＦＲ２抗体を併用し、リガンドと受容体を同時に抑制するｌｉｇａｎｄ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｄｕａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ療法は安全性の高い治療方法であると考えられる。
　次に、ＶＥＧＦ－Ａ／ＶＥＧＦＲ２経路のｄｕａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ療法の作用機序、特に、それぞれ単剤投与との作用の質的な違いを検討するために、遺伝子発現解析を行った。上記移植実験においてマウスに移植した腫瘍（ヒトＭＫＮ４５細胞）を各群２例ずつ薬剤投与後に採取し、これよりＲＮＡを調整し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ　Ｕ１３３　pｌｕｓ２．０　ａｒｒａyにより腫瘍細胞由来の遺伝子発現を解析した。ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ　Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて、クラスター解析及びＧｅｎｅ　Ｏｎｔｏｌｏｇｙ解析を行った（図９（Ａ））。なお、ＤＣ１０１（抗ＶＥＧＦＲ２抗体）投与によって、１．５倍以上の発現変動が認められた遺伝子群に関し、クラスタリング解析を行っている。抗ＶＥＧＦＲ２抗体投与により、発現上昇する遺伝子群のＧｅｎｅ　Ｏｎｔｏｌｏｇｙ解析の結果、ＲＮＡスプライシングなど、ＲＮＡのプロセシングに関わる遺伝子群が含まれることがわかった。このことは、抗ＶＥＧＦＲ２抗体の作用をＲＮＡスプライシングなどの過程を抑制する薬剤が増強する可能性を示唆した。
　抗ＶＥＧＦＲ２抗体投与により発現が増加する遺伝子群は、抗ＶＥＧＦ抗体投与では減少する傾向が認められた。血管新生経路関連の遺伝子群は、それぞれの抗体を単独で用いた場合でも発現抑制されるが、併用することにより明確な抑制傾向が認められた。また、両抗体で大きく異なる変動を示す遺伝子群が存在するが、これらの遺伝子発現は併用群では抑制傾向であった。
　上記遺伝子発現解析結果から、ｄｕａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ療法は図９（Ｂ）に示す機構で作用しているものと考えられる。ＶＥＧＦリガンド、受容体それぞれを標的とした抗体医薬は、ともに目的とする標的経路であるＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ２を介した血管新生の抑制作用を有する。しかし、両抗体医薬は、ＶＥＧＦＲ２以外の受容体を介した作用においては相反する効果を示す。すなわち、抗ＶＥＧＦ抗体を用いた場合では、リガンドそのものが抗体によって抑制されることから、ＶＥＧＦＲ２以外の受容体にも作用できなくなる。その結果、ＶＥＧＦＲ２以外の受容体を介した応答も抑制される。一方、抗ＶＥＧＦＲ２抗体を用いた場合には、リガンドであるＶＥＧＦ－Ａは存在し、さらに血液中の宿主由来のＶＥＧＦ－Ａレベルは上昇することから、ＶＥＧＦＲ２以外の受容体を介した応答は増強されると考えられる。したがって、それぞれの抗体を単独使用した場合には、これら相反する副反応により抗体医薬による効果が減弱する、あるいは、副作用が生じるといった治療効果にマイナスとなる現象が生じるものと考えられる。両抗体医薬を併用することにより、こうした副反応をキャンセルし、標的経路であるＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ２経路を確実に抑制し、腫瘍を退縮させることができるものと考えられる。
　以上、マウスモデルを用いた前臨床試験において、抗マウスＶＥＧＦ－Ａ中和抗体と抗マウスＶＥＧＦＲ２抗体であるＤＣ１０１の併用療法は、それぞれ単剤療法と比べ有意な腫瘍縮小効果が認められた。
　上記の結果から、実臨床で治療に用いる場合には、ラムシルマブに限らず、作用機序が同様であると考えられるＶＥＧＦＲ２を標的とする抗体医薬品を広く適用することができると考えられる。また、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体についても、既存の抗体であるベバシズマブだけではなく、同様の作用機序を示す抗体であればどのような抗体医薬品を用いてもよい。
　上記実施例で示した、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＶＥＧＦ-Ａ中和抗体を併用する治療法、すなわちＶＥＧＦ－Ａ／ＶＥＧＦＲ２経路のｄｕａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ療法は、抗ＶＥＧＦＲ抗体投与後早期に血液中のＶＥＧＦ－Ａが著明に上昇する患者群、あるいはＶＥＧＦ－Ａ値が至適カットオフにより２群に分けた場合の高値群に対して奏効を示す。しかし、ＶＥＧＦ－Ａ／ＶＥＧＦＲ２経路のｄｕａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ療法は、重篤な副作用を示さないと考えられることから、抗ＶＥＧＦＲ抗体投与による患者のＶＥＧＦ-Ａ値の上昇を検討せずに最初から併用投与を行ってもよい。
　本発明により抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品、具体的にはラムシルマブ投与に奏効を示さなかった患者に対しても、有効な治療法を提供することができることから、治癒切除不能な進行・再発胃がんに対して有効な治療法を提供することができる。
　また、本実施例で示したように、リガンド、レセプターを同時に抗体医薬によって、抑制し治療効果を得るｌｉｇａｎｄ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｄｕａｌ　ｂｌｏｃｋａｄｅ療法は、今まで試みられた治療法ではなく、全く新しい発想の治療法である。

Claims (12)

  1. 　血管新生が増悪の原因となる疾患において、
    　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と併用する医薬品であって、
    　抗ＶＥＧＦ抗体を有効成分とすることを特徴とする併用薬。
  2. 　前記抗ＶＥＧＦ抗体が、
    　抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体であることを特徴とする請求項１記載の併用薬。
  3. 　前記疾患が腫瘍であることを特徴とする請求項１、又は２記載の併用薬。
  4. 　前記腫瘍が胃がん、大腸がん、又は非小細胞肺がんであることを特徴とする請求項３記載の併用薬。
  5. 　前記抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と、
    　同時に、又は個別に用いられることを特徴とする請求項１～４いずれか１項記載の併用薬。
  6. 　前記抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品がラムシルマブであって、
    　前記抗ＶＥＧＦ抗体を有効成分とする併用薬がベバシズマブであることを特徴とする請求項１～５いずれか１項記載の併用薬。
  7. 　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用することにより奏効する患者を検査する方法であって、
    　患者より採取された抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品による治療開始前、及び治療開始後早期の試料中のＶＥＧＦ－Ａ濃度を測定し、
    　比較することを特徴とする検査方法。
  8. 　請求項７に記載の検査方法であって、
    　前記試料が血液、血漿、又は血清であることを特徴とする検査方法。
  9. 　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用することにより奏効する患者を検査するキットであって、
    　患者試料中のＶＥＧＦ－Ａ濃度を測定するための試薬を含むことを特徴とする検査キット。
  10. 　血管新生が増悪の原因となる疾患に対し、
    　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用投与する治療方法。
  11. 　請求項１０に記載の治療方法であって、
    　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品は、同時に、又は個別のタイミングで併用投与する治療方法。
  12. 　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品投与前、及び投与後早期に血中ＶＥＧＦ濃度を測定し、
    　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品投与後、血中ＶＥＧＦ濃度の有意な増加が認められた場合には、
    　抗ＶＥＧＦＲ２抗体医薬品と抗ＶＥＧＦ抗体医薬品を併用投与する請求項１０、又は１１に記載の治療方法。
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WO2018124153A1 (ja) * 2016-12-28 2018-07-05 公益財団法人がん研究会 抗ｖｅｇｆｒ－２抗体医薬品の治療効果を予測するバイオマーカー、検査方法、及び検査キット

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2010538972A (ja) * 2007-08-20 2010-12-16 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 転移性癌の処置のためのｖｅｇｆｒ−２阻害剤の使用
WO2018124153A1 (ja) * 2016-12-28 2018-07-05 公益財団法人がん研究会 抗ｖｅｇｆｒ－２抗体医薬品の治療効果を予測するバイオマーカー、検査方法、及び検査キット

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