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WO2020002436A1 - Conditions de stockage d'une composition de proteines comprenant du tensioactif et evolution de la teneur en tensioactif - Google Patents

Conditions de stockage d'une composition de proteines comprenant du tensioactif et evolution de la teneur en tensioactif Download PDF

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Publication number
WO2020002436A1
WO2020002436A1 PCT/EP2019/067016 EP2019067016W WO2020002436A1 WO 2020002436 A1 WO2020002436 A1 WO 2020002436A1 EP 2019067016 W EP2019067016 W EP 2019067016W WO 2020002436 A1 WO2020002436 A1 WO 2020002436A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
surfactant
protein
composition
copolymer
stopper
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2019/067016
Other languages
English (en)
Inventor
Cecile Jaume
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LFB SA
Original Assignee
LFB SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LFB SA filed Critical LFB SA
Publication of WO2020002436A1 publication Critical patent/WO2020002436A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J7/00—Chemical treatment or coating of shaped articles made of macromolecular substances
    • C08J7/04—Coating
    • C08J7/0427—Coating with only one layer of a composition containing a polymer binder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2327/00—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Derivatives of such polymers
    • C08J2327/02—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment
    • C08J2327/12—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment containing fluorine atoms
    • C08J2327/14—Homopolymers or copolymers of vinyl fluoride

Definitions

  • the present invention relates to the field of therapeutic compositions of proteins, in particular of immunoglobulins. It relates more particularly to the stability of such therapeutic compositions as a function of the storage conditions and more particularly of the container in which they are stored.
  • the present invention therefore relates to the use of a stopper coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer for sealing a container containing a composition comprising at least one protein and at least one surfactant.
  • Normal human immunoglobulins are used in the treatment of an increasing number of pathologies. They are used in particular as a replacement treatment in primary immune deficiencies (congenital deficits) or secondary (chronic lymphocytic leukemia, myeloma, infections after bone marrow transplant, recurrent bacterial infections in children infected with HIV) with lack of production of 'antibody.
  • ITP idiopathic thrombocytopenic purpura
  • NMM multifocal motor neuropathy
  • IPDC inflammatory chronic demyelinating polyradiculoneuropathies
  • Proteins in particular immunoglobulins, are formulated in liquid compositions comprising surfactants making it possible in particular to reduce / avoid their aggregation.
  • surfactants such as polysorbate
  • a decrease in the concentration of said surfactant is observed over time.
  • SPC Summary of Product Characteristics
  • the inventors have surprisingly discovered that the decrease in the concentration of surfactant in a composition comprising at least one protein and at least one surfactant, was mainly due to its adsorption by the cap of the container containing said composition.
  • the stopper used to close the container containing said composition is generally made of gum or rubber. This material adsorbs the surfactant, thereby reducing the concentration of surfactant in the composition itself.
  • a stopper coated with a tetrafluoroethylene polymer or copolymer made it possible to avoid or at least limit the loss of surfactant concentration in a composition comprising at least one protein and at least one surfactant.
  • the present invention therefore relates to the use of a stopper (2) coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer for sealing a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least one surfactant, characterized in that the film of polymer or copolymer of tetrafluoroethylene avoids or limits the decrease in the concentration of surfactant in said composition.
  • the invention also relates to the use of a stopper (2) coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer for sealing a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least one surfactant, characterized in that the film of polymer or copolymer of tetrafluoroethylene avoids or limits the adsorption of the surfactant by said plug (2).
  • the invention relates to the use of a tetrafluoroethylene polymer or copolymer for coating the cap (2) of a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least one surfactant, characterized in that the film of polymer or copolymer of tetrafluoroethylene avoids or limits the decrease in the concentration of surfactant in said composition.
  • the invention also relates to the use of a tetrafluoroethylene polymer or copolymer for coating the cap (2) of a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least a surfactant, characterized in that the tetrafluoroethylene polymer or copolymer film avoids or limits the adsorption of the surfactant by said plug (2).
  • the invention also relates to the use of a plug (2) coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer to avoid or limit the adsorption of at least one surfactant on said plug, characterized in that said stopper seals a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and said at least one surfactant.
  • the invention also relates to the use of a tetrafluoroethylene polymer or copolymer to avoid or limit the adsorption of at least one surfactant on the stopper (2) of a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and said at least one surfactant.
  • the invention further relates to a container (1) closed by a stopper coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer, characterized in that it contains a composition comprising at least one protein and at least one surfactant.
  • Figure 1 shows a container (1) closed by a cap (2) and containing a composition (3) comprising at least one protein and at least one surfactant.
  • Two separate parts (2a) and (2b) can be identified on the stopper (2): the part (2a) is outside the bottle while the part (2b) is inside the bottle. The part (2b) can therefore come into contact with the solution stored in the closed bottle; part (2a) no.
  • the part (2b) of the plug can be divided into two parts (2b1) and (2b2).
  • the part (2b1) is in direct contact with the walls of the bottle.
  • the part (2b1) is therefore less in contact with the composition (3) than the part (2b2).
  • Part (2b2) corresponds to the lower part of the plug (2), it can be in direct contact with the composition (3).
  • Figure 1A shows said container in a standing position.
  • Figure 1B shows said container in the inverted position, the composition (3) is then in contact with the stopper (2), in particular at the level of the part (2b2).
  • Figure 2 shows an enlarged view of the plug (2) and its parts (2a) (hatched part), (2b1) and (2b2).
  • TFE Tetrafluoroethylene
  • TFE is produced from chloroform. Chloroform is fluorinated by reaction with hydrogen fluoride to produce chlorodifluoromethane (R22). Pyrolysis of chlorodifluoromethane then produces TFE (cf. D.J. Sung et al., International Journal of Chemical Reactor Engineering, Vol. 2, Issue 1):
  • a “tetrafluoroethylene polymer” can be the tetrafluoroethylene homopolymer of formula (I) (TFE) or a polymer obtained by polymerization of at least one monomer derived from TFE, that is to say say of a monomer represented by the following formula (II):
  • a "tetrafluoroethylene copolymer” is obtained by polymerization of at least one monomer derived from TFE, that is to say a monomer of formula (II) above with another carbon monomer.
  • the carbon-based monomer may for example be the ethylenic monomer of formula (III) below:
  • ETFE ethylene tetrafluoroethylene
  • Ethylene tetrafluoroethylene or more precisely poly (ethylene-co-tetrafluoroethylene) is a thermoplastic fluoropolymer.
  • the tetrafluoroethylene polymer or copolymer may or may not have undergone modifications such as functionalization, grafting, crosslinking, etc.
  • the tetrafluoroethylene polymer or copolymers can be prepared by usual methods known to those skilled in the art.
  • protein is meant, within the meaning of the present invention, a macromolecule composed by one or more chain (s) (or sequence (s)) of amino acids linked together by peptide bonds. In general, we speak of protein when the chain contains more than 50 amino acids.
  • the protein can be plasma or recombinant.
  • plasma protein is meant, within the meaning of the present invention, a protein of industrial or therapeutic interest purified from blood plasma or from any fraction of blood plasma.
  • Blood plasma proteins include albumin, alpha-macroglobulin, antichymotrypsin, antithrombin, alpha 1 antitrypsin, apolipoproteins (including Apo A, Apo B, Apo C, Apo D, Apo E, Apo F, Apo G), beta XI la, C 1 -inhibitor, C-reactive protein, components of the complement system (notably C7, C1 r, C1 s, C2 C3, C4, C4bP, C5, C6, C1 q, C8, C9), carboxypeptidase N, ceruloplasmin, coagulation factors (including factor B, factor D, factor H, factor I, factor IX, factor V, factor VII, factor VI Ia, factor VIII, factor X , factor XI, factor XIII, factor XIII), fibrinogen,
  • recombinant protein is meant a protein produced by cells (eukaryotes or prokaryotes) whose DNA (deoxyribonucleic acid) has been modified by genetic recombination.
  • the use of an expression vector in general a plasmid or a virus for eukaryotic vectors), playing the role of genetic transporter of the gene of interest coding for the protein sought is the means most often used to modify the DNA of cells used in the production of the recombinant protein.
  • the “recombinant protein” can also be produced by animal transgenesis, that is to say by the insertion of the gene of interest coding into the DNA of an animal, preferably of an animal of the non-human mammal type, for example a rabbit, a goat, a cow. Examples of a recombinant protein include Factor VII, antithrombin.
  • antibody or “immunoglobulin” is meant a molecule comprising at least one binding domain to a given antigen and a constant domain comprising an Fc fragment capable of binding to FcR receptors.
  • an antibody is composed of 4 polypeptide chains: 2 heavy chains and 2 light chains linked together by a variable number of disulfide bridges ensuring flexibility in the molecule.
  • Each light chain consists of a constant domain (CL) and a variable domain (VL); the heavy chains being composed of a variable domain (VH) and of 3 or 4 constant domains (CH1 to CH3 or CH1 to CH4) depending on the isotype of the antibody.
  • VH variable domain
  • CH1 to CH3 or CH1 to CH4 constant domain
  • antibodies are made up of only two heavy chains, each heavy chain comprising a variable domain (VH) and a constant region.
  • Variable domains are involved in the recognition of the antigen, while constant domains are involved in the biological, pharmacokinetic and effector properties of the antibody.
  • variable region differs from one antibody to another.
  • the genes coding for the heavy and light chains of the antibodies are generated by recombination of respectively three and two distinct gene segments called VH, DH and JH-CH for the heavy chain and VL and JL-CL for the light chain.
  • the CH and CL segments do not participate in recombination and form the constant regions of the heavy and light chains respectively.
  • the recombinations of the VH-DH-JH and VL-JL segments form the variable regions of the heavy and light chains respectively.
  • the VH and VL regions each have 3 hyper-variable zones or regions determining complementarity (CDR), called CDR1, CDR2 and CDR3, the CDR3 region being the most variable, since it is located at the level of the recombination zone.
  • CDR complementarity
  • These three CDR regions, and particularly the CDR3 region, are found in the part of the antibody which will be in contact with the antigen and are therefore very important for the recognition of the antigen.
  • the antibodies conserving the three CDR regions and each of the heavy and light chains of an antibody retain the vast majority of the antigenic specificity of the original antibody. In a certain number of cases, an antibody retaining only one of the CDRs, and in particular CDR3, also retains the specificity of the original antibody.
  • the CDR1, CDR2 and CDR3 regions are each preceded by the FR1, FR2 and FR3 regions respectively, corresponding to the framework regions (FR region framework) which vary the least from one VH or VL segment to another.
  • the CDR3 region is also followed by a FR4 framework region.
  • the CDRs of an antibody are defined from the amino acid sequence of its heavy and light chains with respect to criteria known to those skilled in the art. Different methods for determining CDRs have been proposed, and the portion of the amino acid sequence of a variable heavy or light chain region of an antibody defined as a CDR varies depending on the method chosen.
  • the first method of determination is that proposed by Kabat et al (Kabat et al-1991).
  • the CDRs are defined by looking for the amino acids responsible for the binding to the antigen of the antibody.
  • Another method has been proposed by IMGT, this time based on the determination of hypervariable regions. In this method, a unique numbering has been defined to compare the variable regions regardless of the antigen receptor, the type of chain or the species (Lefranc et al. 2003).
  • This numbering provides a standardized delimitation of the framework regions ((FR1-IMGT: positions 1 to 26, FR2-IMGT: 39 to 55, FR3-IMGT: 66 to 104 and FR4-IMGT: 1 18 to 128) and regions determining the complementarity (CDR1-IMGT: positions 27 to 38, CDR2-IMGT: positions 56 to 65 and CDR3-IMGT: positions 105 to 1 17)
  • CDR1-IMGT positions 27 to 38
  • CDR2-IMGT positions 56 to 65
  • CDR3-IMGT positions 105 to 1 17
  • common in which the sequence of a particular CDR corresponds to the common sequence between Kabat numbering and IMGT numbering.Other definitions of CDRs exist, such as those of Chothia, Abm or Contact.In IMGT numbering, CDRs can be determined using the IMGT / V program -QUEST available on http: //www.imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/ and described in
  • CDRs can be determined using the Key_annotations software from the abYis database, available available at the following address: http://www.bioinf.ors.Uk/abysis2.7/sequence_input/key_annotation/key_annotation. html.
  • constant domains are characterized by an amino acid sequence very close to one antibody to another, characteristic of the species and the isotype, possibly with some somatic mutations.
  • the Fc fragment is naturally composed of the constant region of the heavy chain excluding the CH1 domain, that is to say of the lower hinge region and of the constant domains CH2 and CH3 or CH2 to CH4 (depending on the isotype ).
  • the complete Fc fragment is composed of the C-terminal part of the heavy chain starting from the cysteine residue in position 226 (C226), the numbering of the amino acid residues in the Fc fragment being throughout description that of the EU index described in Edelman et al-1969 and Kabat et al- 1991.
  • the corresponding Fc fragments of other types of immunoglobulins can be easily identified by a person skilled in the art by sequence alignments.
  • the Fc fragment is glycosylated at the CH2 domain with the presence, on each of the 2 heavy chains, of an N-glycan linked to the asparagine residue in position 297 (Asn 297).
  • the following binding domains, located in Fc, are important for the biological properties of the antibody:
  • C1 q complement protein binding domain, involved in the CDC response (for "complement dependent cytotoxicity"): located in the CH2 domain;
  • FcR receptor binding domain involved in phagocytosis or ADCC type responses (for "antibody-dependent cell cytotoxicity): located in the CH2 domain.
  • the Fc fragment of an antibody may be natural, as defined above, or may have been modified in various ways.
  • the modifications may include the deletion of certain parts of the Fc fragment, and / or different amino acid substitutions, these modifications being capable of modulating the biological properties of the antibody, depending on the properties which it is desired to increase or, conversely, decrease .
  • “monoclonal antibody” or “monoclonal antibody composition” is meant a composition comprising antibody molecules having an identical and unique antigen specificity.
  • the antibody molecules present in the composition are liable to vary in terms of their post-translational modifications, and in particular in terms of their glycosylation structures or their isoelectric point, but have all been encoded by the same heavy chain sequences and light and therefore have, before any post-translational modification, the same protein sequence.
  • a monoclonal antibody will most of the time be produced recombinantly, and purified from a clone transformed by an expression vector for the heavy and light chains of the antibody.
  • monoclonal antibodies used in therapy include monoclonal antibodies directed against the factor Rhesus D, to prevent the alloimmunization of pregnant women Rhesus D negative carrying a child Rhesus D positive, against CD20, TNFalpha.
  • polyclonal antibody or “polyclonal immunoglobulin” is meant a mixture of antibodies recognizing different epitopes of a given antigen.
  • a polyclonal antibody to a given antigen is usually obtained by immunizing an animal or individual with the antigen of interest. The B lymphocytes recognizing different epitopes of the antigen are then stimulated and differentiate into plasma cells secreting different antibodies directed against the same antigen of interest.
  • Antibodies in an individual's plasma include a set of polyclonal antibodies to different antigens.
  • human polyclonal antibodies used in therapy include polyclonal antibodies against common pathogens (e.g., tetanus, hepatitis B, rabies, chickenpox or CMV cytomegalovirus) or against Rhesus D factor, to prevent the alloimmunization of negative Rhesus D pregnant women carrying a Rhesus D positive child.
  • a polyclonal antibody is not produced recombinantly, but purified from a sample obtained from the animal or subject immunized.
  • normal human immunoglobulin “therapeutic human immunoglobulin” or “IglV” is meant a medicinal preparation comprising a mixture of purified human polyclonal antibodies (essentially IgG) from plasma pools originating from a minimum of 1000 donations . Again, these are non-recombinant proteins.
  • “functional fragment” of an antibody is meant an antibody fragment retaining the antigen binding domain and therefore having the same antigenic specificity as the original antibody, such as the Fv, ScFv, Fab fragments. , F (ab ') 2, Fab', scFv-Fc or diantibodies ("diabodies").
  • derivative of an antibody means a binding protein formed from a support peptide and from at least one of the CDRs of the original antibody which makes it possible to preserve its capacity to recognize the antigen.
  • fusion protein between the Fc fragment of an antibody and a second polypeptide is meant a protein comprising an Fc fragment of antibody operably linked to a second polypeptide.
  • Such an Fc fusion protein comprises an Fc fragment conferring on it the effector and pharmacological properties of an antibody (as well as the ability to bind to protein A), and a second polypeptide (fusion partner) conferring on it other properties.
  • Fc fusion proteins include, like monoclonal antibodies, an Fc fragment binding to protein A. Therefore, the technical lessons obtained by the inventors on monoclonal antibodies apply directly to Fc fusion proteins.
  • the second polypeptide or fusion partner can in particular be chosen from a receptor (or the binding domain of a receptor to its ligand), a ligand (or the binding domain of a ligand to its receptor), a molecule of adhesion, a cytokine, a chemokine, or any other protein or domain of a protein.
  • the fusion between the Fc fragment and the second polypeptide can be direct or indirect via a linker, which can in particular consist of one or more amino acids of glycine or serine type.
  • Fc fusion proteins have been developed for various therapeutic applications.
  • Fc fusion proteins can be used according to the invention:
  • abatacept and belatacept fusion proteins between the CTLA-4 ectodomain and the Fc of an lgG1, used in immunosuppression in rheumatoid arthritis (abatacept) and transplantation (belatacept)
  • etanercept fusion protein between the ectodomain of the TNF-RII receptor and the Fc of an lgG1, used in the treatment of rheumatoid arthritis and psoriasis
  • alefacept fusion protein between the ectodomain of LFA-3 (CD58) and the Fc of an lgG1, used in therapy in the treatment of psoriasis, or
  • rilonacept dimeric fusion protein consisting of the binding domains of the extracellular parts of the type I receptor for interleukin-1 (IL-1 RI) and an accessory protein for the IL-1 receptor (IL-1 RAcP) linearly linked to the Fc portion of human immunoglobulin lgG1, used in the treatment of severe forms of periodic syndromes associated with cryopyrin (CAPS), including familial auto-inflammatory cold syndrome (FCAS) and Muckle syndrome - Wells (MWS).
  • CCAPS familial auto-inflammatory cold syndrome
  • MWS Muckle syndrome - Wells
  • Atacicept a recombinant fusion that contains the soluble TACI receptor associated with the Fc fragment of a human lgG1, used in the treatment of rheumatoid arthritis, systemic lupus and multiple sclerosis.
  • briobacept fusion protein consisting of the BAFF receptor and a constant fragment of IgGI, used in the treatment of rheumatoid arthritis.
  • Fc fusion proteins are produced recombinantly, by any suitable technology chosen in particular from those described above for the production of recombinant monoclonal antibodies (transformed cell clone, transgenic non-human animal, transgenic plant in particular).
  • surfactant or “surfactant” or “surfactant” or “nonionic detergent” is meant, within the meaning of the present invention, a compound which modifies the surface tension between two surfaces.
  • the surfactant compounds are amphiphilic molecules, that is to say that they have two parts of different polarity, one lipophilic (which retains fat) and non-polar, the other hydrophilic (miscible in water) and polar. They thus make it possible to dissolve two immiscible phases, by interacting with the one apolar phase (that is to say lipophilic therefore hydrophobic), by its hydrophobic part; while with the other phase which is polar, it will interact through its hydrophilic part.
  • the surfactant used in the composition according to the invention is advantageously chosen from polysorbates and in particular from polysorbate 80 (or Tween®80, or polyoxyethylenesorbitan monooleate), and polysorbate 20 (or Tween®20, or also monolaurate polyoyéthylènesorbitanne-).
  • the surfactant can also be chosen from Triton® X 100 (octoxinol 10 or t-
  • Octylphenoxypolyethoxyethanol poloxamers
  • polyoxyethylene alkyl ethers polyoxyethylene alkyl ethers
  • co-polymer block of ethylene / polypropylene and Pluronic®F68 (polyethylenepolypropylene glycol).
  • polysorbates is meant, within the meaning of the present invention, the esters of fatty acids and of polyoxyethylene sorbitan (ethoxylated derivative of sorbitan). They consist of a hydrophobic aliphatic chain (acid or fatty acids) and a hydrophilic ethoxylated "head”.
  • polysorbitan monolaurate polysorbate 20
  • polysorbate 80 polyoxyethylene sorbitan monooleate
  • polysorbate 80 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate
  • polysorbate 40 polyoxyethylene sorbitan monostearate
  • polysorbate 65 polyoxyethylene sorbitan tristearate
  • Polysorbates can be commonly found commercially.
  • a first object of the present invention is the use of a stopper (2) coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer to seal a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least a surfactant, characterized in that the polymer or copolymer film of tetrafluoroethylene avoids or limits the decrease in the concentration of surfactant in said composition.
  • a second object of the present invention is to use a stopper (2) coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer to seal a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least a surfactant, characterized in that the tetrafluoroethylene polymer or copolymer film avoids or limits the adsorption of the surfactant by said plug (2).
  • the invention relates to the use of a tetrafluoroethylene polymer or copolymer for coating the cap (2) of a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least one surfactant , characterized in that the tetrafluoroethylene polymer or copolymer film avoids or limits the decrease in the concentration of surfactant in said composition.
  • the invention also relates to the use of a tetrafluoroethylene polymer or copolymer for coating the cap (2) of a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and at least a surfactant, characterized in that the tetrafluoroethylene polymer or copolymer film avoids or limits the adsorption of the surfactant by said plug (2).
  • the invention also relates to the use of a stopper (2) coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer to avoid or limit the adsorption of at least one surfactant on said stopper (2 ), characterized in that said stopper (2) seals a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and said at least one surfactant.
  • the invention also relates to the use of a tetrafluoroethylene polymer or copolymer to avoid or limit the adsorption of at least one surfactant on the stopper (2) of a container (1) containing a composition (3) comprising at least one protein and said at least one surfactant.
  • the invention further relates to a container (1) closed by a stopper coated with a film of polymer or copolymer of tetrafluoroethylene, characterized in that it contains a composition comprising at least one protein and at least one surfactant.
  • the surfactant is advantageously chosen from polysorbates, Triton® X 100 (octoxinol 10), poloxamers, polyoxyethylene alkyl ethers, a co-polymer block of ethylene / polypropylene and Pluronic®F68 (polyethylene polypropylene glycol). More advantageously, the surfactant is chosen from polysorbates.
  • the surfactant is advantageously a polysorbate chosen from polyoxyethylene sorbitan monolaurate (polysorbate 20), polyoxyethylene sorbitan monooleate (polysorbate 80), polyoxyethylene sorbitan monopalmitate (polysorbate 40), polyoxyethylene sinebitate (polysorbate 60) or polyoxyethylene sorbitan tristearate (polysorbate 65). More advantageously, the polysorbate is the polyoxyethylene sorbitan monooleate (polysorbate 80).
  • the decrease in the concentration of surfactant in said composition is avoided when said concentration does not show a significant difference after storage for 6 months, that is to say that the level of loss as defined below is less than 10%.
  • concentration measured after a storage of 6 months higher than the initial concentration, it will be considered that the concentration is identical, the upward variation of the concentration corresponding only to the precision of the measurement method.
  • the decrease in the concentration of surfactant in said composition is limited when the rate of loss of surfactant does not exceed a certain maximum threshold determined according to the type of surfactant used and according to the storage conditions of said composition.
  • This surfactant loss rate is calculated as follows:
  • the initial concentration and the final concentration of surfactant in composition (3) are measured by the same method, chosen from the methods known to those skilled in the art.
  • polysorbate 80 it is possible to use the method consisting of a step of saponification of the polysorbate 80 in the presence of a methanolic solution of potassium hydroxide.
  • the oleic acid released during saponification and the internal standard (heptadecanoic acid) are then esterified with methanol in the presence of hydrotrofluoric acid.
  • the methyl oleate released by saponification and the methyl heptadecanoate thus formed are extracted into hexane and assayed by gas chromatography on a capillary column.
  • the analysis of the samples is carried out under helium flow using a temperature gradient.
  • the injection is carried out in splitless mode and the detection is carried out by flame ionization.
  • the decrease in the concentration of surfactant in the composition is limited when the rate of loss of surfactant is less than 10%, advantageously less than 9%, more advantageously less than or equal to 8%, preferably less than or equal at 7%, more preferably less than or equal to 6%, after storage for 6 months at a temperature of 5 ⁇ 2 ° C, or less than 20%, more advantageously less than or equal to 15%, preferably less than or equal at 10%, more preferably less than or equal to 9%, less than or equal to 8%, less than or equal to 7%, in particular less than or equal to 6%, less than or equal to 5%, less than or equal to 4%, less than or equal to 3%, less than or equal to 2%, less than or equal to 1%, after a storage period of 24 months at a temperature of 25 ⁇ 5 ° C.
  • adsorption the surface phenomenon by which molecules (adsorbates) are fixed on a solid surface (adsorbent) from a liquid phase or a solution. This phenomenon is very distinct from leaching where the solution comes to wash out the solid surface, but where the molecules only come into contact without clinging and leave again taking with it particles from the solid surface (impurities washed by the solution ).
  • adsorption consists of the attachment of the surfactant molecules initially contained in the therapeutic solution to the stopper. This phenomenon leads to a decrease in the amount of residual surfactant in the therapeutic solution. Adsorption takes place during storage of the therapeutic solution in its container (1) closed by the stopper (2) in contact with the solution.
  • the rate of adsorption of the surfactant by the plug is calculated as follows:
  • surfactant initial concentration and the final concentration of surfactant in the composition (3) are measured as described above.
  • the adsorption of the surfactant by the plug is avoided when the concentration of surfactant in the composition (3) does not show any significant difference after storage for 6 months, that is to say say that the adsorption rate as defined above is less than 10%.
  • concentration measured after a storage of 6 months higher than the initial concentration it will be considered that the concentration is identical, the upward variation of the concentration corresponding only to the precision of the measurement method.
  • the reduction in the adsorption of the surfactant by the cap is limited when the rate of adsorption of the surfactant by the cap does not exceed a certain maximum threshold determined according to the type of surfactant used and according to the storage conditions. of said composition.
  • the adsorption of the surfactant in the composition (3) is limited when the adsorption rate of surfactant is less than 10%, advantageously less than 9%, more advantageously less than or equal to 8%, preferably less or equal to 7%, more preferably less than or equal to 6%, after storage for 6 months at a temperature of 5 ⁇ 2 ° C, or less than 20%, more advantageously less than or equal to 15%, preferably less or equal to 10%, more preferably less than or equal to 9%, less than or equal to 8%, less than or equal to 7%, in particular less than or equal to 6%, less than or equal to 5%, less than or equal to 4 %, less than or equal to 3%, less than or equal to 2%, less than or equal to 1%, after a storage period of 24 months at a temperature of 25 ⁇ 5 ° C.
  • the surfactant is advantageously included in the composition in an initial concentration of between 5 and 1000 ppm, advantageously between 10 and 800 ppm, or even between 20 and 700 ppm.
  • the initial concentration of surfactant may depend on the protein present, in addition to the surfactant, in composition (3).
  • the surfactant when the composition (3) comprises, in addition to the surfactant, a normal human immunoglobulin, the surfactant is advantageously included in the composition in an initial concentration of between 5 and 100 ppm, advantageously between 10 and 60 ppm, or even between 20 and 50 ppm.
  • the composition (3) comprises, in addition to the surfactant, a monoclonal antibody (or a functional fragment or a derivative thereof), the surfactant is advantageously included in the composition in an initial concentration of between 100 and 1000 ppm, advantageously between 200 and 800 ppm, or even between 300 and 700 ppm.
  • the surfactant is advantageously included in the composition in an initial concentration of between 10 and 200 ppm, advantageously between 50 and 150 ppm, or even between 80 and 100 ppm.
  • the composition comprises, in addition to at least one surfactant, at least one protein.
  • the composition comprises the protein in an initial content of between 0.1 and 200 g / L.
  • the protein is advantageously a plasma or recombinant therapeutic protein, and more particularly an immunoglobulin, in particular a polyclonal immunoglobulin, a normal human immunoglobulin, or a monoclonal antibody (or a functional fragment or a derivative thereof. this) ; or an Fc fusion protein; or a plasma or recombinant coagulation factor.
  • an immunoglobulin in particular a polyclonal immunoglobulin, a normal human immunoglobulin, or a monoclonal antibody (or a functional fragment or a derivative thereof. this) ; or an Fc fusion protein; or a plasma or recombinant coagulation factor.
  • the composition (3) comprises at least one monoclonal antibody or a fragment or a derivative thereof or at least one polyclonal antibody, the latter may be of any antigenic specificity of interest.
  • the composition (3) comprises a normal human immunoglobulin.
  • the initial protein content may vary depending on the protein present in the composition (3).
  • normal human immunoglobulin is present in composition (3) at a concentration of at least 50 g / L, and preferably between 50 and 200 g / L.
  • the monoclonal antibody (or a functional fragment or a derivative thereof) is advantageously present in the composition (3) at a concentration of at least 0.1 g / L, and preferably between 0.1 and 10 g / L.
  • the coagulation factor (especially recombinant) is advantageously present in the composition (3) at a concentration of at least 0.1 g / L, and preferably between 0.1 and 10 g / L.
  • the optimal protein and surfactant concentrations, and in particular polysorbate can vary depending on the protein included in the composition (3) and can be determined by a person skilled in the art on the basis of its general knowledge and routine experiences.
  • the protein concentration will preferably be between 50 g / L and 200 g / L and the surfactant concentration, and in particular polysorbate (in particular polysorbate 80), will be preferably between 5 ppm and 100 ppm.
  • the composition comprising at least one protein and at least one surfactant is a therapeutic composition of proteins.
  • composition can also comprise any pharmaceutically acceptable excipient advantageously usable for the formulation of human proteins, in particular chosen from salts, amino acids, sugars, surfactants or any other excipient.
  • the composition can thus comprise an amino acid such as glycine, arginine, lysine, isoleucine and / or a sugar such as mannitol, a salt of sodium acetate, sodium citrate or sodium chloride.
  • the composition (3) comprising at least one protein and at least one surfactant is contained in a container (1) closed by a stopper (2).
  • the stopper (2) closes the container, that is to say that it hermetically closes the container.
  • the plug (2) is generally made of rubber, gum, bromobutyl, or chlorobutyl.
  • the three elements are shown in Figure 1.
  • Two separate parts (2a) and (2b) can be identified on the stopper (2): the part (2a ) on the outside of the bottle and the part (2b) on the inside of the bottle.
  • the part (2b) can therefore come into contact with the solution stored in the closed bottle; part (2a) no.
  • the part (2b) of the plug can be divided into two parts (2b1) and (2b2).
  • the part (2b1) is in direct contact with the walls of the bottle.
  • the part (2b1) is therefore less in contact with the composition (3) than the part (2b2).
  • the part (2b2) corresponds to the lower part of the plug (2), it can be in direct contact with the composition (3).
  • Figure 1A shows said container in a standing position.
  • Figure 1B shows said container in the inverted position, the composition (3) is then in contact with the stopper (2), in particular at the level of the part (2b2).
  • the container (1) is generally a vial or syringe, made of pharmaceutical grade glass or plastic.
  • the container (1) is a glass vial or syringe.
  • the container (1) is a plastic vial or syringe, for example made of cyclic polymers of olefins such as Daikyo Cristal Zenith® syringes, said plastic possibly being also coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer according to the invention.
  • the shape of the part (2b2) can vary but is generally of curved shape (for example spherical, conical, cubic, cylindrical, tetrahedral ...), and can have a variable contact surface with the therapeutic solution. It is at this level contact surface that takes place the adsorption of the surfactant, which will be higher the larger the exchange surface.
  • stopper coated with a tetrafluoroethylene polymer or copolymer film is meant a stopper (advantageously made of gum, rubber, bromobutyl, or chlorobutyl) of which at least the surface of the part (2b2) is completely coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer.
  • at least part (2b) i.e. (2b1) + (2b2) is completely coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer.
  • the tetrafluoroethylene polymer or copolymer film can also coat the parts (2a) and (2b2), or the stopper according to the invention can also be completely coated with a tetrafluoroethylene polymer or copolymer film, that is to say say the set of parts (2a) and (2b).
  • the tetrafluoroethylene polymer or copolymer is advantageously chosen from ethylene tetrafluoroethylene (ETFE) and polytetrafluoroethylene (PTFE).
  • the tetrafluoroethylene polymer or copolymer is the ethylene tetrafluoroethylene (ETFE) polymer.
  • the tetrafluoroethylene polymer or copolymer is polytetrafluoroethylene (PTFE).
  • Tetrafluoroethylene polymers or copolymers are known and marketed under the name of FluroTec® or Omniflex®.
  • plugs (2) suitable for closing a container (1) and coated with a tetrafluoroethylene polymer or copolymer according to the invention are commercially available and are therefore accessible to those skilled in the art.
  • plugs can be cited:
  • a person skilled in the art can also use a plug initially not coated with a tetrafluoroethylene polymer or copolymer and coat it with a film of a tetrafluoroethylene polymer or copolymer.
  • the process for applying the coating to the cap is a process known to those skilled in the art, who will be able to carry it out using their general knowledge in the field.
  • the coating of the plug (at least of the part (2b2) with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer can be produced by any method known to those skilled in the art, for example as described in patent application EP 0 294,127, in particular on page 4, lines 7 to 48 and in example 1 page 5.
  • composition (3) comprising a normal human immunoglobulin and Polysorbate 80;
  • chlorobutyl or bromobutyl plug (2) coated, at least on part (2b2), with a film of ETFE, modified or not.
  • composition (3) comprising a monoclonal antibody and Polysorbate 80; and chlorobutyl or bromobutyl plug (2) coated, at least on the part (2b2), with a film of ETFE, modified or not.
  • composition (3) comprising a recombinant coagulation factor and Polysorbate 80;
  • chlorobutyl or bromobutyl plug (2) coated, at least on part (2b2), with a film of ETFE, modified or not.
  • a film of ETFE modified or not.
  • the invention also relates to a container (1) closed by a stopper coated with a film of tetrafluoroethylene polymer or copolymer, characterized in that it contains a composition comprising at least one protein and at least one surfactant.
  • Example 1 Evolution of the concentration of polysorbate 80 in compositions comprising immunoglobulins.
  • the bottles are stored upside down (stopper in contact with the composition) or upright under different temperature conditions:
  • Polysorbate 80 (ppm) and protein levels are measured and the results are as follows:

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Abstract

La présente invention porte sur l'utilisation d'un bouchon revêtu d'une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour obturer un récipient contenant une composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition, ou évite ou limite l'adsorption du tensioactif par ledit bouchon (2).

Description

CONDITIONS DE STOCKAGE D’UNE COMPOSITION DE PROTEINES COMPRENANT DU TENSIOACTIF ET EVOLUTION DE LA TENEUR EN TENSIOACTIF
DOMAINE DE L’INVENTION La présente invention se situe dans le domaine des compositions thérapeutiques de protéines, notamment d’immunoglobulines. Elle concerne plus particulièrement la stabilité de telles compositions thérapeutiques en fonction des conditions de stockage et plus particulièrement du récipient dans lequel elles sont stockées. La présente invention porte donc sur l’utilisation d’un bouchon revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour obturer un récipient contenant une composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif.
ART ANTERIEUR
Les immunoglobulines humaines normales (immunoglobulines humaines polyvalentes purifiées à partir de pools de plasma d’au moins 1000 donneurs) sont utilisées dans le traitement de pathologies de plus en plus nombreuses. Elles sont notamment utilisées comme traitement de substitution dans les déficits immunitaires primaires (déficits congénitaux) ou secondaires (leucémie lymphoïde chronique, myélome, infections après greffe de moelle osseuse, infections bactériennes récidivantes chez l'enfant infecté par le VIH) avec défaut de production d’anticorps. Elles sont également utilisées en tant que traitement immunomodulateur dans différentes pathologies autoimmunes, telles que le purpura thrombopénique idiopathique (PTI), la rétinochoroïdite de Birdshot, le syndrome de Guillain-Barré, la neuropathie motrice multifocale (NMM), les polyradiculonévrites inflammatoires démyélinisantes chroniques (PIDC), ou dans la maladie de Kawasaki.
Cette utilisation grandissante nécessite un approvisionnement toujours plus important en immunoglobulines humaines normales. Les conditions et la durée de leur stockage sont donc maintenant des paramètres clés qui doivent être améliorés. Les protéines, en particulier les immunoglobulines, sont formulées en compositions liquides comprenant des tensioactifs permettant notamment de réduire/éviter leur agrégation. Lorsque les protéines sont formulées en compositions liquides comprenant au moins un tensioactif tel que du polysorbate, il est observé une diminution de la concentration dudit tensioactif au fil du temps. Une telle diminution n’est pas souhaitable dans un cadre pharmaceutique et pourrait entraîner un non-respect des caractéristiques de la composition de protéines telles que décrites dans le Résumé des Caractéristiques Produits (RCP), et éventuellement impacter négativement la qualité de la protéine et la stabilité de la composition liquide dans le temps.
RESUME DE L’INVENTION
Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont découvert de manière surprenante que la diminution de la concentration en tensioactif dans une composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, était principalement due à son adsorption par le bouchon du récipient contenant ladite composition. En effet, le bouchon utilisé pour obturer le récipient contenant ladite composition est généralement en gomme ou en caoutchouc. Cette matière adsorbe le tensioactif, diminuant ainsi la concentration en tensioactif dans la composition en elle-même.
Les inventeurs ont alors découvert qu’un bouchon revêtu d’un polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène permettait d’éviter ou au moins de limiter la perte de concentration en tensioactif dans une composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif.
Dans un premier aspect, la présente invention concerne donc l’utilisation d’un bouchon (2) revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour obturer un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition.
Dans un second aspect, l’invention concerne également l’utilisation d’un bouchon (2) revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour obturer un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite l’adsorption du tensioactif par ledit bouchon (2).
Dans un troisième aspect, l’invention concerne l’utilisation d’un polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour pelliculer le bouchon (2) d’un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition.
Dans un quatrième aspect, l’invention concerne en outre l’utilisation d’un polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour pelliculer le bouchon (2) d’un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite l’adsorption du tensioactif par ledit bouchon (2).
Dans un cinquième aspect, l’invention concerne en outre l’utilisation d’un bouchon (2) revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour éviter ou limiter l’adsorption d’au moins un tensioactif sur ledit bouchon, caractérisée en ce que ledit bouchon obture un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et ledit au moins un tensioactif.
Dans un sixième aspect, l’invention concerne en outre l’utilisation d’un polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour éviter ou limiter l’adsorption d’au moins un tensioactif sur le bouchon (2) d’un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et ledit au moins un tensioactif.
Dans un septième aspect, l’invention concerne en outre un récipient (1 ) obturé par un bouchon revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène, caractérisé en ce qu’il contient une composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif.
DESCRIPTION DES FIGURES
Figure 1 . La Figure 1 représente un récipient (1 ) fermé par un bouchon (2) et contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif. Deux parties distinctes (2a) et (2b) peuvent être identifiées sur le bouchon (2) : la partie (2a) est à l’extérieur du flacon alors que la partie (2b) est à l’intérieur du flacon. La partie (2b) peut donc entrer en contact avec la solution stockée dans le flacon fermé ; la partie (2a) non. La partie (2b) du bouchon peut être divisée en deux parties (2b1 ) et (2b2). La partie (2b1 ) est en contact direct avec les parois du flacon. La partie (2b1 ) est donc moins en contact avec la composition (3) que la partie (2b2). La partie (2b2) correspond à la partie inférieure du bouchon (2), elle peut être en contact direct avec la composition (3). La Figure 1A représente ledit récipient en position debout. La Figure 1 B représente ledit récipient en position retourné, la composition (3) est alors en contact avec le bouchon (2), notamment au niveau de la partie (2b2).
Figure 2. La Figure 2 représente de manière agrandie le bouchon (2) et ses parties (2a) (partie hachurée), (2b1 ) et (2b2).
DEFINITIONS
Le tétrafluoroéthylène (TFE) est représenté par la formule suivante (I) :
F2C=CF2 (I).
Le TFE est produit à partir du chloroforme. Le chloroforme est fluoré par réaction avec le fluorure d'hydrogène pour produire du chlorodifluorométhane (R22). La pyrolyse du chlorodifluorométhane produit ensuite le TFE (cf. D.J. Sung et al., International Journal of Chemical Reactor Engineering, Vol. 2, Issue 1) :
CHCU + 2 HF CHCIF2 + 2 HCl2
CHCIF2 C2F4 + 2 HCl.
Dans le cadre de l’invention, un « polymère de tétrafluoroéthylène » peut être l’homopolymère tétrafluoroéthylène de formule (I) (TFE) ou un polymère obtenu par polymérisation d’au moins un monomère issu du TFE, c’est-à-dire d’un monomère représenté par la formule (II) suivante :
-(F2C-CF2)- (II).
Un « copolymère de tétrafluoroéthylène » est obtenu par polymérisation d’au moins un monomère issu du TFE, c’est-à-dire d’un monomère de formule (II) ci-dessus avec un autre monomère carboné. Le monomère carboné peut-être par exemple le monomère éthylénique de formule (III) suivante :
-(H2C-CH2)- (III),
donnant ainsi l’éthylène tétrafluoroéthylène (ETFE).
L'éthylène tétrafluoroéthylène (ETFE), ou plus précisément le poly(éthylène-co- tétrafluoroéthylène) est un fluoropolymère thermoplastique.
Dans le cadre de l’invention, le polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène peut ou non avoir subi des modifications telles qu’une fonctionnalisation, un greffage, une réticulation, etc.
Le polymère ou copolymères de tétrafluoroéthylène peut être préparé par des méthodes usuelles connues de l’homme du métier. Par « protéine » on entend, au sens de la présente invention, une macromolécule composée par une ou plusieurs chaîne(s) (ou séquence(s)) d'acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques. En général, on parle de protéine lorsque la chaîne contient plus de 50 acides aminés. La protéine peut être plasmatique ou recombinante.
Par « protéine plasmatique » on entend, au sens de la présente invention, une protéine d’intérêt industriel ou thérapeutique purifiée à partir du plasma sanguin ou de toute fraction de plasma sanguin. Les protéines du plasma sanguin englobent l’albumine, l’alpha-macroglobuline, l’antichymotrypsine, l’antithrombine, l’alpha 1 antitrypsine, les apolipoprotéines (notamment Apo A, Apo B, Apo C, Apo D, Apo E, Apo F, Apo G), beta XI la, le C 1 -inhibiteur, la protéine C-réactive, les composants du système du complément (notamment C7, C1 r, C1 s, C2 C3, C4, C4bP, C5, C6, C1 q, C8, C9), la carboxypeptidase N, céruloplasmine, les facteurs de la coagulation (notamment facteur B, facteur D, facteur H, facteur I, facteur IX, facteur V, facteur VII, facteur VI la, facteur VIII, facteur X, facteur XI, facteur XIl, facteur XIII), le fibrinogène, la fibronectine, l’haptoglobine, l’hemopexine, l’héparine cofacteur II, la glycoprotéine riche en histidine (HRG), les immunoglobulines (notamment IgA, IgD, IgE, IgG, et IgM), l’inter-alpha trypsine inhibiteur (ITI), la kininase II, le kininogène de haut poids moléculaire (kirinogène HPM), le lysozyme, l’inhibiteur de l'activateur du plasminogène 2 (PAI 2), , l’inhibiteur de l'activateur du plasminogène 1 (PAI 1 ), l’inhibiteur de protéine C (PCI), la plasmine, k l’inhibiteur de la plasmine, le plasminogène, la préalbumine, la prékallicréine, la properdine, la protéase nexine, la protéine C, la protéine S, la protéine Z, la prothrombine, la sérum amyloïde protéine (SAP), l’inhibiteur de la voie du facteur tissulaire (TFPI), la thiol-protéinase, la thrombomoduline, le facteur tissulaire (TF), l’activateur tissulaire du plasminogène (TPA), la transcolabamine II, la transcortine, la transferrine, la vitronectine, et le facteur de Willebrand (FvW).
Par « protéine recombinante », on entend une protéine produite par des cellules (eucaryotes ou procaryotes) dont l'ADN (acide désoxyribonucléique) a été modifié par recombinaison génétique. L'emploi d'un vecteur d'expression (en général un plasmide ou un virus pour les vecteurs eucaryotes), jouant le rôle de transporteur génétique du gène d'intérêt codant pour la protéine recherchée est le moyen le plus souvent utilisé pour modifier l'ADN des cellules servant à la production de la protéine recombinante. La « protéine recombinante » peut également être produite par transgenèse animale, c’est- à-dire par l’insertion du gène d’intérêt codant dans l’ADN d’un animal, de préférence d’un animal de type mammifère non humain, par exemple une lapine, une chèvre, une vache. Des exemples de protéine recombinante incluent le Facteur VII, l’antithrombine.
Par « anticorps » ou « immunoglobuline », on entend une molécule comprenant au moins un domaine de liaison à un antigène donné et un domaine constant comprenant un fragment Fc capable de se lier aux récepteurs FcR. Chez la plupart des mammifères, comme l’homme et la souris, un anticorps est composé de 4 chaînes polypeptidiques : 2 chaînes lourdes et 2 chaînes légères reliées entre elles par un nombre variable de ponts disulfures assurant une flexibilité à la molécule. Chaque chaîne légère est constituée d'un domaine constant (CL) et d'un domaine variable (VL); les chaînes lourdes étant composées d'un domaine variable (VH) et de 3 ou 4 domaines constants (CH1 à CH3 ou CH1 à CH4) selon l’isotype de l'anticorps. Chez quelques rares mammifères, comme les chameaux et les lamas, les anticorps sont constitués de seulement deux chaînes lourdes, chaque chaîne lourde comprenant un domaine variable (VH) et une région constante.
Les domaines variables sont impliqués dans la reconnaissance de l’antigène, tandis que les domaines constants sont impliqués dans les propriétés biologiques, pharmacocinétiques et effectrices, de l’anticorps.
La région variable diffère d’un anticorps à un autre. En effet, les gènes codant pour les chaînes lourdes et légères des anticorps sont générés par recombinaison de respectivement trois et deux segments de gènes distincts appelés VH, DH et JH-CH pour la chaîne lourde et VL et JL-CL pour la chaîne légère. Les segments CH et CL ne participent pas à la recombinaison et forment les régions constantes des chaînes lourdes et légères respectivement. Les recombinaisons des segments VH-DH-JH et VL-JL forment les régions variables des chaînes lourdes et légères respectivement. Les régions VH et VL possèdent chacune 3 zones hyper variables ou régions déterminant la complémentarité (CDR), appelées CDR1 , CDR2 et CDR3, la région CDR3 étant la plus variable, puisqu’elle se situe au niveau de la zone de recombinaison. Ces trois régions CDR, et particulièrement la région CDR3, se trouvent dans la partie de l’anticorps qui sera en contact avec l’antigène et sont donc très importantes pour la reconnaissance de l’antigène. Ainsi, les anticorps conservant les trois régions CDR et chacune des chaînes lourde et légère d’un anticorps conservent en grande majorité la spécificité antigénique de l’anticorps d’origine. Dans un certain nombre de cas, un anticorps ne conservant que l’un des CDR, et notamment le CDR3, conserve également la spécificité de l’anticorps d’origine. Les régions CDR1 , CDR2 et CDR3 sont chacune précédées des régions FR1 , FR2 et FR3 respectivement, correspondant aux régions charpentes (framework région FR) qui varient le moins d’un segment VH ou VL à un autre. La région CDR3 est également suivie d’une région charpente FR4. Les CDR d’un anticorps sont définis à partir de la séquence d’acides aminés de ses chaînes lourdes et légères par rapport à des critères connus de l’homme du métier. Différentes méthodes de détermination des CDR ont été proposées, et la portion de la séquence d’acides aminés d’une région variable de chaîne lourde ou légère d’un anticorps définie comme un CDR varie en fonction de la méthode choisie. La première méthode de détermination est celle proposée par Kabat et al (Kabat et al-1991 ). Dans cette méthode, les CDR sont définis en recherchant les acides aminés responsables de la liaison à l’antigène de l’anticorps. Une autre méthode a été proposée par l’IMGT, fondée cette fois sur la détermination des régions hypervariables. Dans cette méthode, une numérotation unique a été définie pour comparer les régions variables quels que soient le récepteur à l’antigène, le type de chaîne ou l’espèce (Lefranc et al. 2003). Cette numérotation fournit une délimitation standardisée des régions charpentes ((FR1 -IMGT : positions 1 à 26, FR2-IMGT : 39 à 55, FR3-IMGT : 66 à 104 et FR4-IMGT : 1 18 à 128) et des régions déterminant la complémentarité (CDR1 -IMGT : positions 27 à 38, CDR2-IMGT : positions 56 à 65 and CDR3-IMGT : positions 105 à 1 17). Il existe également une numérotation dite « commune », dans laquelle la séquence d’un CDR particulier correspond à la séquence commune entre la numérotation de Kabat et la numérotation IMGT. D’autres définitions des CDRs existent, telles que celles de Chothia, Abm ou Contact. Dans la numérotation IMGT, les CDR peuvent être déterminés en utilisant le programme IMGT/V-QUEST disponible sur http: //www.imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/ et décrit dans Brochet et al-2008. Dans les numérotations de Chothia, Abm, Kabat, et Contact, les CDRs peuvent être déterminés en utilisant le logiciel Key_annotations de la base de données abYis, disponible à l’adresse suivante : http://www.bioinf.ors.Uk/abysis2.7/sequence_input/key_annotation/key_annotation. html.
Contrairement aux domaines variables dont la séquence varie fortement d’un anticorps à un autre, les domaines constants sont caractérisés par une séquence en acides aminés très proche d'un anticorps à l'autre, caractéristique de l'espèce et de l'isotype, avec éventuellement quelques mutations somatiques. Le fragment Fc est naturellement composé de la région constante de la chaîne lourde à l’exclusion du domaine CH1 , c’est- à-dire de la région charnière inférieure et des domaines constants CH2 et CH3 ou CH2 à CH4 (selon l’isotype). Chez les lgG1 humaines, le fragment Fc complet est composé de la partie C-terminale de la chaîne lourde à partir du résidu cystéine en position 226 (C226), la numérotation des résidus d’acides aminés dans le fragment Fc étant dans toute la présente description celle de l’index EU décrit dans Edelman et al-1969 et Kabat et al- 1991. Les fragments Fc correspondants d’autres types d’immunoglobulines peuvent être identifiés aisément par l’homme du métier par des alignements de séquences.
Le fragment Fc est glycosylé au niveau du domaine CH2 avec la présence, sur chacune des 2 chaînes lourdes, d'un N-glycanne lié au résidu asparagine en position 297 (Asn 297). Les domaines de liaison suivants, situés dans le Fc, sont importants pour les propriétés biologiques de l’anticorps :
domaine de liaison au récepteur FcRn, impliqué dans les propriétés pharmacocinétiques (demi-vie in vivo) de l’anticorps :
Différentes données suggèrent que certains résidus situés à l’interface des domaines CH2 et CH3 sont impliqués dans la liaison au récepteur FcRn.
domaine de liaison à la protéine du complément C1 q, impliqué dans la réponse CDC (pour « cytotoxicité dépendante du complément ») : situé dans le domaine CH2;
domaine de liaison aux récepteurs FcR, impliqué dans les réponses de type phagocytose ou ADCC (pour « cytotoxicité cellulaire dépendante de l’anticorps) : situé dans le domaine CH2.
Au sens de l’invention, le fragment Fc d’un anticorps peut être naturel, tel que défini ci- dessus, ou bien avoir été modifié de diverses façons. Les modifications peuvent inclure la délétion de certaines parties du fragment Fc, et/ou différentes substitutions d’acides aminés, ces modifications étant susceptibles de moduler les propriétés biologiques de l’anticorps, selon les propriétés que l’on souhaite augmenter ou au contraire diminuer.
Par « anticorps monoclonal » ou « composition d’anticorps monoclonal », on entend une composition comprenant des molécules d’anticorps possédant une spécificité antigénique identique et unique. Les molécules d’anticorps présentes dans la composition sont susceptibles de varier au niveau de leurs modifications post-traductionnelles, et notamment au niveau de leurs structures de glycosylation ou de leur point isoélectrique, mais ont toutes été codées par les mêmes séquences de chaînes lourde et légère et ont donc, avant toute modification post-traductionnelle, la même séquence protéique. Certaines différences de séquences protéique, liées à des modifications post- traductionnelles (comme par exemple le clivage de la lysine C-terminale de la chaîne lourde, la déamidation de résidus asparagine et/ou l’isomérisation de résidus aspartate), peuvent néanmoins exister entre les différentes molécules d’anticorps présentes dans la composition. Un anticorps monoclonal sera la plupart du temps produit de manière recombinante, et purifié à partir d’un clone transformé par un vecteur d’expression des chaînes lourdes et légères de l’anticorps. Des exemples d’anticorps monoclonaux utilisés en thérapie incluent les anticorps monoclonaux dirigés contre le facteur Rhésus D, pour prévenir l’alloimmunisation des femmes enceintes Rhésus D négatives porteuses d’un enfant Rhésus D positif, contre le CD20, le TNFalpha.
Par « anticorps polyclonal » ou « immunoglobuline polyclonale », on entend un mélange d'anticorps reconnaissant différents épitopes d’un antigène donné. Un anticorps polyclonal dirigé contre un antigène donné est généralement obtenu en immunisant un animal ou un individu à l’aide de l’antigène d’intérêt. Les lymphocytes B reconnaissant différents épitopes de l’antigène sont alors stimulés et se différencient en plasmocytes sécrétant différents anticorps dirigés contre le même antigène d’intérêt. Les anticorps présents dans le plasma d’un individu comprend un ensemble d’anticorps polyclonaux dirigés contre différents antigènes. Des exemples d’anticorps polyclonaux humains utilisés en thérapie incluent les anticorps polyclonaux dirigés contre des pathogènes usuels (par exemple, le tétanos, l’hépatite B, la rage, la varicelle ou le cytomégalovirus CMV) ou contre le facteur Rhésus D, pour prévenir l’alloimmunisation des femmes enceintes Rhésus D négatives porteuses d’un enfant Rhésus D positif. Un anticorps polyclonal n’est pas produit de manière recombinante, mais purifié à partir d’un échantillon obtenu de l’animal ou sujet immunisé.
Par « immunoglobuline humaine normale », « immunoglobuline humaine thérapeutique » ou « IglV », on entend une préparation médicinale comprenant un mélange d’anticorps polyclonaux humains purifié (essentiellement des IgG) à partir de pools de plasma provenant d'un minimum de 1000 dons. Là encore, il s’agit de protéines non recombinantes.
Par « fragment fonctionnel » d’un anticorps, on entend un fragment d’anticorps conservant le domaine de liaison à l’antigène et ayant donc la même spécificité antigènique que l’anticorps d’origine, tels que les fragments Fv, ScFv, Fab, F(ab’)2, Fab’, scFv-Fc ou les dianticorps (« diabodies »).
Par « dérivé » d’un anticorps, on entend une protéine de liaison formée d’un peptide support et d’au moins un des CDR de l’anticorps d’origine permettant de préserver sa capacité à reconnaître l’antigène.
Par « protéine de fusion entre le fragment Fc d’un anticorps et un second polypeptide » ou « protéine de fusion Fc », on entend une protéine comprenant un fragment Fc d’anticorps lié de manière opérationnelle à un second polypeptide. Une telle protéine de fusion Fc comprend un fragment Fc lui conférant les propriétés effectrices et pharmacologiques d’un anticorps (ainsi que la capacité à se lier à la protéine A), et un second polypeptide (partenaire de fusion) lui conférant d’autres propriétés biologiques. Les protéines de fusion Fc comprennent, tout comme les anticorps monoclonaux, un fragment Fc se liant à la protéine A. Par conséquent, les enseignements techniques obtenus par les inventeurs sur des anticorps monoclonaux s’appliquent directement aux protéines de fusion Fc.
Le second polypeptide ou partenaire de fusion peut notamment être choisi parmi un récepteur (ou le domaine de liaison d’un récepteur à son ligand), un ligand (ou le domaine de liaison d’un ligand à son récepteur), une molécule d’adhésion, une cytokine, une chémokine, ou tout autre protéine ou domaine d’une protéine.
La fusion entre le fragment Fc et le second polypeptide peut être directe ou indirecte via un linker, qui peut notamment être constitué d’un ou plusieurs acides aminés de type glycine ou serine.
De telles protéines de fusion Fc ont été développées pour différentes applications thérapeutiques. Notamment, les protéines de fusion Fc suivantes sont susceptibles d’être utilisées selon l’invention :
• abatacept et bélatacept: protéines de fusion entre l’ectodomaine de CTLA-4 et le Fc d’une lgG1 , utilisées dans l’immunosuppresssion dans la polyarthrite rhumatoïde (abatacept) et transplantation (bélatacept)
• etanercept : protéine de fusion entre l’ectodomaine du récepteur TNF-RII et le Fc d’une lgG1 , utlisé dans le traitement de la polyarthrite rhumatoïde et du psoriasis,
• alefacept : protéine de fusion entre l’ectodomaine de LFA-3 (CD58) et le Fc d’une lgG1 , utilisé en thérapeutique dans le traitement du psoriasis, ou
• rilonacept : protéine de fusion dimérique constituée des domaines de liaison des parties extracellulaires du récepteur de type I de l’interleukine-1 (IL-1 RI) et d’une protéine accessoire du récepteur de l'IL-1 (IL-1 RAcP) liés linéairement à la portion Fc de l’immunoglobuline humaine lgG1 , utilisée dans le traitement des formes sévères des syndromes périodiques associés à la cryopyrine (CAPS), incluant le syndrome familial auto-inflammatoire au froid (FCAS) et le syndrome de Muckle- Wells (MWS).
• atacicept : de fusion recombinante qui contient le récepteur soluble TACI associé au fragment Fc d’une lgG1 humaine, utilisé dans le traitement de la polyarthrite rhumatoïde, le lupus systémique et la sclérose en plaques.
• briobacept : protéine de fusion constituée du récepteur BAFF et d’un fragment constant d’IgGI , utilisé dans le traitement de la polyarthrite rhumatoïde.
De telles protéines de fusion Fc sont produites de façon recombinante, par toute technologie appropriée choisie notamment parmi celles décrites ci-dessus pour la production d’anticorps monoclonaux recombinants (clone cellulaire transformé, animal non-humain transgénique, plante transgénique notamment).
Par « tensioactif » ou « agent de surface » ou « surfactant » ou « détergent non ionique » on entend, au sens de la présente invention, un composé qui modifie la tension superficielle entre deux surfaces. Les composés tensioactifs sont des molécules amphiphiles, c'est-à-dire qu'elles présentent deux parties de polarité différente, l'une lipophile (qui retient les matières grasses) et apolaire, l'autre hydrophile (miscible dans l'eau) et polaire. Ils permettent ainsi de solubiliser deux phases non miscibles, en interagissant avec l'une phase apolaire (c'est-à-dire lipophile donc hydrophobe), par sa partie hydrophobe ; tandis qu'avec l'autre phase qui est polaire, il interagira par sa partie hydrophile. Le tensioactif utilisé dans la composition selon l’invention est avantageusement choisi parmi les polysorbates et notamment parmi le polysorbate 80 (ou Tween®80, ou encore -monooléate de polyoxyéthylènesorbitanne), et le polysorbate 20 (ou Tween®20, ou encore monolaurate de polyoyéthylènesorbitanne-). Le tensioactif peut être également être choisi parmi le Triton® X 100 (octoxinol 10 ou t-
Octylphenoxypolyethoxyethanol), poloxamères, polyoxyéthylène alkyl éthers, un bloc co polymères d’éthylène/polypropylène et le Pluronic®F68 (polyéthylènepolypropylène glycol).
Par « polysorbates » on entend, au sens de la présente invention, les esters d'acides gras et de polyoxyéthylène sorbitane (dérivé éthoxylé du sorbitane). Ils sont constitués d'une chaîne aliphatique hydrophobe (l'acide ou les acides gras) et d'une « tête » éthoxylée hydrophile. On peut citer comme exemple, le monolaurate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 20) ou Tween® 20, le monooléate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 80) ou Tween® 80, le monopalmitate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 40), le monostéarate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 60) ou le tristéarate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 65). Les polysorbates peuvent se trouver communément dans le commerce.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L’INVENTION
La présente invention a pour premier objet, l’utilisation d’un bouchon (2) revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour obturer un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition.
La présente invention a pour second objet, l’utilisation d’un bouchon (2) revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour obturer un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite l’adsorption du tensioactif par ledit bouchon (2).
Dans un troisième aspect, l’invention concerne l’utilisation d’un polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour pelliculer le bouchon (2) d’un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition.
Dans un quatrième aspect, l’invention concerne en outre l’utilisation d’un polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour pelliculer le bouchon (2) d’un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, caractérisée en ce que la pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène évite ou limite l’adsorption du tensioactif par ledit bouchon (2).
Dans un cinquième aspect, l’invention concerne en outre l’utilisation d’un bouchon (2) revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour éviter ou limiter l’adsorption d’au moins un tensioactif sur ledit bouchon (2), caractérisée en ce que ledit bouchon (2) obture un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et ledit au moins un tensioactif.
Dans un sixième aspect, l’invention concerne en outre l’utilisation d’un polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène pour éviter ou limiter l’adsorption d’au moins un tensioactif sur le bouchon (2) d’un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et ledit au moins un tensioactif.
Dans un septième aspect, l’invention concerne en outre un récipient (1 ) obturé par un bouchon revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène, caractérisé en ce qu’il contient une composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif.
Selon un aspect particulier de l’un quelconque des objets de l’invention, le tensioactif est avantageusement choisi parmi les polysorbates, le Triton® X 100 (octoxinol 10), les poloxamères, les polyoxyéthylène alkyl éthers, un bloc co-polymères d’éthylène/polypropylène et le Pluronic®F68 (polyéthylènepolypropylène glycol). Plus avantageusement, le tensioactif est choisi parmi les polysorbates. Dans un mode de réalisation particulier, le tensioactif est avantageusement un polysorbate choisi parmi le monolaurate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 20), le monooléate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 80), le monopalmitate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 40), le monostéarate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 60) ou le tristéarate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 65). Plus avantageusement, le polysorbate est le monooléate de polyoxyéthylène sorbitane (polysorbate 80).
Dans le cadre de la présente invention, on dit que la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition est évitée lorsque ladite concentration ne présente pas de différence significative après un stockage de 6 mois, c’est-à-dire que le taux de perte tel que défini ci-dessous est inférieur à 10 %. En cas de concentration mesurée après un stockage de 6 mois supérieure à la concentration initiale, on considérera que la concentration est identique, la variation à la hausse de la concentration correspondant uniquement à la précision de la méthode de mesure.
En outre, on dit que la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition est limitée lorsque le taux de perte en tensioactif ne dépasse pas un certain seuil maximal déterminé selon le type de tensioactif utilisé et selon les conditions de stockage de ladite composition. Ce taux de perte en tensioactif se calcule comme suit :
[tensioactif]initiaIe- [tensioactif]finaIe
Taux de perte (%)
[tensioactif]initiale
La concentration initiale et la concentration finale en tensioactif dans la composition (3) sont mesurées par la même méthode, choisie parmi les méthodes connues de l’homme du métier. Notamment, pour la mesure du polysorbate 80 on pourra utiliser la méthode consistant en une étape de saponification du polysorbate 80 en présence d’une solution méthanolique d’hydroxyde de potassium. L’acide oléique libéré lors de la saponification et le standard interne (acide heptadécanoïque) sont ensuite estérifiés par le méthanol en présence d’acide borotrifluorhydrique. Le méthyl oléate libéré par la saponification et le méthyl heptadécanoate ainsi formés sont extraits dans l’hexane et dosés par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire. L’analyse des échantillons est réalisée sous flux d’hélium à l’aide d’un gradient de température. L’injection est réalisée en mode splitless et la détection est réalisée par ionisation de flamme.
Avantageusement, on dit que la diminution de la concentration en tensioactif dans la composition est limitée lorsque le taux de perte en tensioactif est inférieur à 10%, avantageusement inférieur à 9 %, plus avantageusement inférieur ou égal à 8 %, de préférence inférieur ou égal à 7 %, plus préférentiellement inférieur ou égal à 6%, après un stockage de 6 mois à une température de 5±2 °C, ou inférieur à 20 %, plus avantageusement inférieur ou égal à 15%, , de préférence inférieur ou égal à 10 %, plus préférentiellement inférieur ou égal à 9%, inférieur ou égal à 8%, inférieur ou égal à 7%, en particulier inférieur ou égale à 6 %, inférieur ou égal à 5%, inférieur ou égal à 4%, inférieur ou égal à 3%, inférieur ou égal à 2%, inférieur ou égal à 1%, après une période de stockage de 24 mois à une température de 25±5 °C.
Dans le cadre de l’invention, on entend par adsorption , le phénomène de surface par lequel des molécules (adsorbats) se fixent sur une surface solide (adsorbant) depuis une phase liquide ou une solution. Ce phénomène est bien distinct de la lixiviation où la solution vient lessiver la surface solide, mais où les molécules ne font que venir en contact sans s’accrocher et repartent en emmenant avec elle des particules issues de la surface solide (impuretés lavées par la solution). Dans le cadre de la présente invention, l’adsorption consiste en la fixation des molécules de tensioactif initialement contenu dans la solution thérapeutique sur le bouchon. Ce phénomène entraîne la diminution de la quantité de tensioactif résiduel dans la solution thérapeutique. L’adsorption se déroule au cours du stockage de la solution thérapeutique dans son récipient (1 ) fermé par le bouchon (2) en contact avec la solution. Dans le cadre de la présente invention, le taux d’adsorption du tensioactif par le bouchon se calcule comme suit :
[tensioactif] initiale- [tensioactif] finale
Taux d'adsoption du tensioactif (%)
[tensioactif] initiale La concentration initiale et la concentration finale en tensioactif dans la composition (3) sont mesurées comme décrit ci-dessus.
Dans le cadre de la présente invention, on dit que l’adsorption du tensioactif par le bouchon est évitée lorsque la concentration en tensioactif dans la composition (3) ne présente pas de différence significative après un stockage de 6 mois, c’est-à-dire que le taux d’adsorption tel que défini ci-dessus est inférieur à 10 %. En cas de concentration mesurée après un stockage de 6 mois supérieure à la concentration initiale, on considérera que la concentration est identique, la variation à la hausse de la concentration correspondant uniquement à la précision de la méthode de mesure.
En outre, on dit que la diminution de l’adsorption du tensioactif par le bouchon est limitée lorsque le taux d’adsorption du tensioactif par le bouchon ne dépasse pas un certain seuil maximal déterminé selon le type de tensioactif utilisé et selon les conditions de stockage de ladite composition. Avantageusement, on dit que l’adsorption du tensioactif dans la composition (3) est limitée lorsque le taux d’adsorption en tensioactif est inférieur à 10%, avantageusement inférieur à 9 %, plus avantageusement inférieur ou égal à 8 %, de préférence inférieur ou égal à 7 %, plus préférentiellement inférieur ou égal à 6%, après un stockage de 6 mois à une température de 5±2 °C, ou inférieur à 20 %, plus avantageusement inférieur ou égal à 15%, , de préférence inférieur ou égal à 10 %, plus préférentiellement inférieur ou égal à 9%, inférieur ou égal à 8%, inférieur ou égal à 7%, en particulier inférieur ou égale à 6 %, inférieur ou égal à 5%, inférieur ou égal à 4%, inférieur ou égal à 3%, inférieur ou égal à 2%, inférieur ou égal à 1%, après une période de stockage de 24 mois à une température de 25±5 °C.
Dans le cadre de la présente invention, le tensioactif est avantageusement compris dans la composition en une concentration initiale comprise entre 5 et 1000 ppm , avantageusement entre 10 et 800 ppm, voire entre 20 et 700 ppm.
La concentration initiale en tensioactif peut dépendre de la protéine présente, en sus du tensioactif, dans la composition (3). En particulier, lorsque la composition (3) comprend, outre le tensioactif, une immunoglobuline humaine normale, le tensioactif est avantageusement compris dans la composition en une concentration initiale comprise entre 5 et 100 ppm, avantageusement entre 10 et 60 ppm, voire entre 20 et 50 ppm. Lorsque la composition (3) comprend, outre le tensioactif, un anticorps monoclonal (ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci), le tensioactif est avantageusement compris dans la composition en une concentration initiale comprise entre 100 et 1000 ppm, avantageusement entre 200 et 800 ppm, voire entre 300 et 700 ppm. Lorsque la composition (3) comprend, outre le tensioactif, un facteur de coagulation (notamment recombinant), le tensioactif est avantageusement compris dans la composition en une concentration initiale comprise entre 10 et 200 ppm, avantageusement entre 50 et 150 ppm, voire entre 80 et 100 ppm.
Dans le cadre de la présente invention, la composition comprend, outre au moins un tensioactif, au moins une protéine.
Avantageusement, la composition comprend la protéine en une teneur initiale comprise entre 0,1 et 200 g/L.
Dans le cadre de la présente invention, la protéine est avantageusement une protéine thérapeutique plasmatique ou recombinante, et plus particulièrement une immunoglobuline, notamment une immunoglobuline polyclonale, une immunoglobuline humaine normale, ou un anticorps monoclonal (ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci) ; ou une protéine de fusion Fc ; ou un facteur de coagulation plasmatique ou recombinant. Dans le cas où la composition (3) comprend au moins un anticorps monoclonal ou un fragment ou un dérivé de celui-ci ou au moins un anticorps polyclonal, celui-ci peut être de toute spécificité antigénique d’intérêt. Dans un mode de réalisation préféré, la composition (3) comprend une immunoglobuline humaine normale.
La teneur initiale en protéine peut varier en fonction de la protéine présente dans la composition (3). L’immunoglobuline humaine normale est avantageusement présente dans la composition (3) à une concentration d’au moins 50 g/L, et de préférence comprise entre 50 et 200 g/L.
L’anticorps monoclonal (ou un fragment fonctionnel ou un dérivé de celui-ci) est avantageusement présent dans la composition (3) à une concentration d’au moins 0,1 g/L, et de préférence comprise entre 0,1 et 10 g/L.
Le facteur de coagulation (notamment recombinant) est avantageusement présent dans la composition (3) à une concentration d’au moins 0,1 g/L, et de préférence comprise entre 0,1 et 10 g/L.
Comme indiqué ci-dessus, les concentrations optimales en protéine et en tensioactif, et en particulier en polysorbate, peuvent varier en fonction de la protéine comprise dans la composition (3) et peuvent être déterminée par l’homme du métier sur la base de ses connaissances générales et d’expériences de routine. Dans le cas où la protéine est une immunoglobuline humaine normale, la concentration en protéine sera de préférence comprise entre 50 g/L et 200 g/L et la concentration en tensioactif, et notamment en polysorbate (en particulier en polysorbate 80), sera de préférence comprise entre 5 ppm et 100 ppm. Dans le cadre de la présente invention, la composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif est une composition thérapeutique de protéines. Cette composition peut également comprendre tout excipient pharmaceutiquement acceptable avantageusement utilisable pour la formulation de protéines humaines, notamment choisi parmi les sels, les acides aminés, les sucres, les tensioactifs ou tout autre excipient. La composition peut ainsi comprendre un acide aminé tel que la glycine, l’arginine, la lysine, l’isoleucine et/ou un sucre tel que le mannitol, un sel d’acétate de sodium, citrate de sodium ou chlorure de sodium.
Dans le cadre de la présente invention, la composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif est contenue dans un récipient (1 ) obturé par un bouchon (2). Dans le cadre de la présente invention, le bouchon (2) obture le récipient, c’est-à-dire qu’il ferme de façon hermétique le récipient. Le bouchon (2) est généralement en caoutchouc, en gomme, en bromobutyle, ou en chlorobutyle.
Les trois éléments (récipient (1 ), bouchon (2) et composition (3)) sont représentés sur la Figure 1. Deux parties distinctes (2a) et (2b) peuvent être identifiées sur le bouchon (2) : la partie (2a) à l’extérieur du flacon et la partie (2b) à l’intérieur du flacon. La partie (2b) peut donc entrer en contact avec la solution stockée dans le flacon fermé ; la partie (2a) non. La partie (2b) du bouchon peut être divisée en deux parties (2b1 ) et (2b2). La partie (2b1 ) est en contact direct avec les parois du flacon. La partie (2b1 ) est donc moins en contact avec la composition (3) que la partie (2b2). La partie (2b2) correspond à la partie inférieure du bouchon (2), elle peut être en contact direct avec la composition (3). La Figure 1A représente ledit récipient en position debout. La Figure 1 B représente ledit récipient en position retourné, la composition (3) est alors en contact avec le bouchon (2), notamment au niveau de la partie (2b2).
Dans le cadre de la présente invention, le récipient (1 ) est généralement un flacon ou une seringue, en verre de grade pharmaceutique ou en plastique. Dans un mode de réalisation avantageux, le récipient (1 ) est un flacon ou une seringue en verre. Dans un autre mode de réalisation avantageux, le récipient (1 ) est un flacon ou une seringue en plastique, par exemple en polymères cycliques d’oléfines comme les seringues Daikyo Cristal Zenith®, ledit plastique pouvant être éventuellement également revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène selon l’invention.
La forme de la partie (2b2) peut varier mais est en général de forme incurvée (par exemple sphérique, conique, cubique, cylindrique, tétraédrique...), et peut présenter une surface de contact variable avec la solution thérapeutique. C’est au niveau de cette surface de contact qu’a lieu l’adsorption du tensioactif, qui sera d’autant plus élevée que la surface d’échange est grande.
Dans le cadre de la présente invention, par « bouchon revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène » on entend, un bouchon (avantageusement en gomme, en caoutchouc, en bromobutyle, ou en chlorobutyle) dont au moins la surface de la partie (2b2) est totalement revêtue par une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène. Avantageusement, au moins la partie (2b) (i.e. (2b1 )+(2b2)) est totalement revêtue par une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène. La pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène peut également revêtir les parties (2a) et (2b2), ou le bouchon selon l’invention peut également être totalement revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène, c’est-à-dire l’ensemble des parties (2a) et (2b).
Dans le cadre de la présente invention, le polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène est avantageusement choisi parmi l’éthylène tétrafluoroéthylène (ETFE) et le polytétrafluoroéthylène (PTFE). Dans un mode de réalisation avantageux, le polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène est le polymère d’éthylène tétrafluoroéthylène (ETFE). Dans un autre mode de réalisation particulier, le polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène est le polytétrafluoroéthylène (PTFE). Des polymères ou copolymères de tétrafluoroéthylène sont connus et commercialisés sous le nom de FluroTec® ou Omniflex®.
Différents bouchons (2) adaptés à l’obturation d’un récipient (1 ) et revêtus d’un polymère ou d’un copolymère de tétrafluoroéthylène selon l’invention sont disponibles dans le commerce et sont donc accessibles à l’homme du métier. A titre d’exemple, on peut citer les bouchons suivants :
Figure imgf000020_0001
Figure imgf000021_0001
L’homme du métier peut aussi utiliser un bouchon initialement non revêtu d’un polymère ou d’un copolymère de tétrafluoroéthylène et le revêtir d’une pellicule d’un polymère ou d’un copolymère de tétrafluoroéthylène. Le procédé d’application du revêtement sur le bouchon est un procédé connu de l’homme du métier, qui saura l’exécuter à l’aide de ses connaissances générales dans le domaine. En particulier, le revêtement du bouchon (au moins de la partie (2b2) par une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène peut être réalisé par toute méthode connue de l’homme du métier, par exemple comme décrit dans la demande de brevet EP 0 294 127, notamment à la page 4, lignes 7 à 48 et dans l’exemple 1 page 5.
Dans le cadre de la présente invention, chacune des caractéristiques préférées décrites ci-dessus peuvent être appliquée à chacune des utilisations selon l’invention. Ces caractéristiques préférées peuvent en outre être combinées pour former des modes de réalisation particulièrement préférés.
Une combinaison particulièrement préférée dans le cadre des différentes utilisations selon l’invention est présentée ci-dessous :
composition (3) comprenant une immunoglobuline humaine normale et du Polysorbate 80 ; et
bouchon (2) en chlorobutyle ou bromobutyle revêtu, au moins sur la partie (2b2), d’une pellicule d’ETFE modifié ou non.
Une seconde combinaison particulièrement préférée dans le cadre des différentes utilisations selon l’invention est présentée ci-dessous :
composition (3) comprenant un anticorps monoclonal et du Polysorbate 80 ; et bouchon (2) en chlorobutyle ou bromobutyle revêtu, au moins sur la partie (2b2), d’une pellicule d’ETFE modifié ou non.
Une troisième combinaison particulièrement préférée dans le cadre des différentes utilisations selon l’invention est présentée ci-dessous :
composition (3) comprenant un facteur de coagulation recombinant et du Polysorbate 80 ; et
bouchon (2) en chlorobutyle ou bromobutyle revêtu, au moins sur la partie (2b2), d’une pellicule d’ETFE modifié ou non. Dans toutes les combinaisons préférées ci-dessus, les concentrations préférées en protéines et/ou tensioactif décrites ci-dessus pourront être utilisées.
L’invention concerne également un récipient (1 ) obturé par un bouchon revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène, caractérisé en ce qu’il contient une composition comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif.
L’ensemble des caractéristiques (aussi bien générales que préférées) décrites ci- dessus pour les utilisations selon l’invention peuvent également s’appliquer, seules ou en combinaison, au récipient (1 ) selon l’invention.
Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention.
EXEMPLES
Exemple 1 : Evolution de la concentration en polysorbate 80 dans des compositions comprenant des immunoglobulines.
8 compositions d’immunoglobulines comprenant
- 100 g/L d’immunoglobulines
- 50 ppm de polysorbate 80
- 250 mM de glycine
à pH 4,6 ont été préparées et réparties en flacon verre de 70mL col 32 Type I BTA Asolvex. Les flacons sont bouchés soit :
- avec un bouchon non revêtu par de l’ETFE (Bouchon C5359 6720 GC 6 DH2 bromobutyle de Stelmi) ci-après dénommé « Stelmi »
- avec un bouchon revêtu par de l’ETFE (Bouchon Westar RS sérum stopper 4543 41 10/40 B2-40 chlorobutyle Flurotec® de West) ci-après dénommé « West C»
- avec un bouchon revêtu par de l’ETFE (Bouchon Westar RS sérum stopper 4543 4023/50 B2-40 bromobutyle Flurotec® de West) ci-après dénommé « West B»
Les flacons sont stockés à l’envers (bouchon en contact avec la composition) ou debout dans différentes conditions de température :
- +25° C ±2° C / RH 60% ± 5%
- +30° C ±2° C / RH 65% ± 5% - +40° C ±2° C
Les taux de polysorbate 80 (ppm) et de protéine sont mesurés et les résultats sont les suivants :
Figure imgf000023_0001
Conclusion : A partir de ces résultats, on peut conclure que la teneur en polysorbate 80 diminue dans la composition stockée dans un flacon fermé par un bouchon non revêtu par de l’ETFE, confirmant le phénomène d’adsorption du tensioactif (à l’inverse, si un phénomène de lixiviation avait lieu, la teneur en polysorbate 80 serait stable au cours du temps). Les résultats confirment que le l’utilisation d’un bouchon revêtu par de l’ETFE permet de diminuer l’adsorption du tensioactif de type polysorbate 80 par le bouchon.
Les résultats confirment également que la teneur en protéine est stable quel que soit le bouchon utilisé. Ainsi, la problématique d’adsorption par le bouchon ne concerne bien que le tensioactif.
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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Claims

REVENDICATIONS
1 . Utilisation d’un bouchon (2) obturant un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, afin d’éviter ou limiter la diminution de la concentration en tensioactif dans ladite composition, caractérisée en ce que ledit bouchon est revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène.
2. Utilisation d’un bouchon (2) obturant un récipient (1 ) contenant une composition (3) comprenant au moins une protéine et au moins un tensioactif, afin d’éviter ou limiter l’adsorption du tensioactif par ledit bouchon (2), caractérisée en ce que ledit bouchon est revêtu d’une pellicule de polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène.
3. Utilisation selon la revendication 1 , caractérisée en ce que le taux de perte en tensioactif est inférieur à 10 % après un stockage de 6 mois à une température de 5±2
° C ; ou inférieur à 20 % après une période de stockage de 6 mois à une température de 25±5 ° C.
4. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que le taux d’adsorption du tensioactif par le bouchon est inférieur à 10 % après un stockage de 6 mois à une température de 5±2 ° C ; ou inférieur à 20 % après une période de stockage de 6 mois à une température de 25±5 ° C.
5. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le tensioactif est choisi parmi les polysorbates et notamment parmi le polysorbate 80 et le polysorbate 20, octoxinol 10, poloxamères, polyoxyéthylène alkyl éthers, un bloc co polymères d’éthylène/polypropylène et le polyéthylènepolypropylène glycol.
6. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la composition (3) comprend le tensioactif en une teneur initiale comprise entre 5 et 1000
PPm.
7. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le tensioactif est un polysorbate, en particulier le polysorbate 80.
8. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que la composition comprend la protéine en une teneur initiale comprise entre 0,1 et 200 g/L.
9. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que la protéine est une protéine plasmatique en particulier une immunoglobuline humaine normale, une protéine recombinante, un anticorps, un anticorps polyclonal ou un anticorps monoclonal, plus particulièrement une immunoglobuline humaine normale.
10. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que le polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène est choisi parmi l’éthylène tétrafluoroéthylène (ETFE) et le polytétrafluoroéthylène (PTFE), avantageusement le polymère ou copolymère de tétrafluoroéthylène est l’éthylène tétrafluoroéthylène.
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