[go: up one dir, main page]

WO2019203694A1 - Стабильные высококонцентрированные водные композиции ранибизумаба с пролонгированным действием - Google Patents

Стабильные высококонцентрированные водные композиции ранибизумаба с пролонгированным действием Download PDF

Info

Publication number
WO2019203694A1
WO2019203694A1 PCT/RU2019/050039 RU2019050039W WO2019203694A1 WO 2019203694 A1 WO2019203694 A1 WO 2019203694A1 RU 2019050039 W RU2019050039 W RU 2019050039W WO 2019203694 A1 WO2019203694 A1 WO 2019203694A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
pharmaceutical composition
composition according
concentration
ranibizumab
sodium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2019/050039
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Николай Алексеевич ШАМОНОВ
Светлана Георгиевна АББАСОВА
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
"international Biotechnology Center "generium" (llc "ibc "generium") LLC
Original Assignee
"international Biotechnology Center "generium" (llc "ibc "generium") LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by "international Biotechnology Center "generium" (llc "ibc "generium") LLC filed Critical "international Biotechnology Center "generium" (llc "ibc "generium") LLC
Publication of WO2019203694A1 publication Critical patent/WO2019203694A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Definitions

  • the invention relates to the field of biotechnology, and in particular to the problem of creating stable highly concentrated aqueous drug compositions having a prolonged effect.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition comprising ranibizumab at a concentration of 100-300 mg / ml and a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or excipient.
  • the invention can be used in the pharmaceutical industry, namely, when creating a medicinal product for the treatment of the wet form of age-related macular degeneration in adults (AMD); decreased visual acuity with diabetic macular edema; decrease in visual acuity due to macular edema caused by occlusion of the retinal veins (central retinal vein or its branches); decrease in visual acuity caused by choroidal neovascularization due to pathological myopia.
  • AMD age-related macular degeneration in adults
  • AMD age-related macular degeneration in adults
  • decreased visual acuity with diabetic macular edema decrease in visual acuity due to macular edema caused by occlusion of the retinal veins (central retinal vein or its branches); decrease in visual acuity caused by choroidal neovascularization due to pathological myopia.
  • ranibizumab a drug based on the recombinant ranibizumab "Lucentis®" is used.
  • the recommended dose of this drug is 0.5 mg (0.05 ml) once a month as an injection into the vitreous humor, the minimum course is 3 injections per year, then as prescribed by the doctor.
  • the inventors proposed to use a drug containing a more concentrated form of ranibizumab, which will reduce the frequency of injections.
  • the AUC pharmacokinetic parameter characterizing the total concentration of the drug in the vitreous body during the entire observation period was chosen as a key criterion for the acceptability of the developed pharmaceutical composition.
  • the value (AUC) is associated with other pharmacokinetic parameters — volume of distribution, general clearance.
  • the AUC value should be at a certain level (more precisely, exceed it). The higher the AUC of the active substance, the less often the drug can be administered to the patient. At the same time, the AUC should be limited to some maximum value, as when it is exceeded, the drug can have a systemic effect. It is also unknown whether the protein will remain viable for the expected long term of its exposure in the vitreous.
  • Determining the concentration of the active substance necessary to increase the duration of the drug, while maintaining its safety and effectiveness is a non-trivial task based on the current level of knowledge.
  • An additional problem is the preservation of the stability of a highly concentrated drug, due to the tendency of protein compounds to form various complexes with each other and with additional substances in the composition, go into an aggregated state, etc.
  • Fig. 1 The concentration of ranibizumab in the vitreous of the rabbits with the introduction of various doses of protein (concentration of ranibizumab in the vitreous, nM / L on the vertical axis; observation duration, days on the horizontal axis).
  • Fig. 2 Pharmacokinetic curve of ranibizumab preparations with different protein concentrations (plasma ranibizumab concentration, nM / L on the vertical axis; observation duration, hours on the horizontal axis)
  • Solution 1 [Rainer Sigl. Pharmaceutical composition of an anti-VEGF antibody. US20160297877A1], protecting a pharmaceutical composition for intraocular administration containing a buffering component, a nonionic surfactant, an anti-VEGF antibody or Fab fragment thereof, and an inorganic salt.
  • the concentration of ranibizumab is indicated in the claims of 10 mg / ml; the pharmaceutical composition with a concentration of ranibizumab from 1 to 100 mg / ml is mentioned in the description.
  • the indicated concentrations of antibodies to VEGF do not provide sufficient prolongation of the action of the drug, which leads to the need to increase the frequency of taking the drug, which leads to the manifestation of undesirable local effects, and also worsens the quality of life of patients.
  • Solution 3 [Rainer Sigl. Liquid formulation of a vegf antagonist. WO2017129685A1], protecting pharmaceutical compositions containing VEGF antagonists in concentrations up to 45 mg / ml. As in the case of decision 1, this concentration of the antagonist does not provide sufficient prolongation of the action of the drug.
  • Solution 4 Eric Furfine, Daniel Dix, Kenneth S. Graham, Kelly Frye. AU2012202859, which protects pharmaceutical compositions containing VEGF antagonists used for intraocular administration in concentrations up to 100 mg / ml. As in the case of solutions 1, 3, this concentration of the antagonist does not provide sufficient prolongation of the action of the drug.
  • a patent includes a composition comprising ranibizumab and one or more amino acids to stabilize it, and one or more amino acids to reduce the viscosity of the protein solution.
  • ranibizumab As an example, the authors consider the effect of various amino acids on the stability of ranibizumab at a concentration of 5 mg / ml; 7.5 mg / ml; 12.5 mg / ml.
  • the above analysis of prior art data indicates the absence of stable pharmaceutical compositions, containing ranibizumab in a concentration of more than 100 mg / ml and thereby providing the best pharmacokinetic parameters of the drug.
  • the technical result to which the claimed invention is directed is to obtain a drug, the introduction of which provides a longer, compared with known drugs, maintaining the current concentration of the drug in the vitreous body (AUC), in the absence of visible toxic side effects.
  • An additional technical result is the selection of the optimal composition of the pharmaceutical composition, ensuring the stability of the composition during its long-term storage.
  • the concentration of ranibizumab in the pharmaceutical composition should be in the range from 100 to 300 mg / ml.
  • High stability of the composition during long-term storage can be ensured by introducing additional components into the buffer composition: antioxidants, tonicity regulators, pH level, stabilizing and buffering agents.
  • the components of the composition do not chemically interact with each other and can be used in combination with a pharmaceutically acceptable excipient, carrier and excipient.
  • pharmaceutically acceptable carrier, excipient or excipient is meant a carrier, excipient or excipient that does not cause any undesirable side effects in the patient to whom it is administered.
  • the inventive pharmaceutical composition is intended for intravitreal administration and can be produced in the form of a solution for injection in vials or prefilled syringes.
  • ranibizumab The development of a stable highly concentrated composition of recombinant ranibizumab was carried out taking into account the following criteria:
  • ranibizumab The inventors have shown that the stability of a highly concentrated ranibizumab solution is highly dependent on the pH of the buffer solution.
  • a citrate-phosphate buffer system was selected that provides a buffer capacity in a significant pH range.
  • Samples of recombinant ranibizumab were obtained (concentration of 100, 200, 300 mg / ml) in the following buffer solutions:
  • the best stability of the target protein was demonstrated at a pH value of from 5.0 to 7.5 units. For this reason, sodium phosphate, sodium acetate, sodium citrate, trishydroxymethylaminomethane, L-histidine, or combinations thereof may be recommended as buffering agents.
  • the concentration of buffering agents varied from 1 to 250 mM (at a protein concentration of 100, 200, 300 mg / ml).
  • the recommended range of concentrations of buffering agents is from 1 to 250 mm.
  • amino acids or combinations thereof that provide a complex stabilizing effect on protein molecules can be used as a stabilizer.
  • the concentration of amino acids does not significantly affect the stability of the target protein at various pH values.
  • the concentration of amino acids ranged from 1 to 250 mm (at a protein concentration of 100, 200, 300 mg / ml).
  • the recommended range of concentrations of stabilizing agents is from 1 to 250 mm. Tonality control
  • the value of the tonicity of the solution is extremely important.
  • These types of drugs should be isotonic. When using hypo- / hypertonic solutions, patients may experience side effects.
  • salts sodium chloride, ammonium chloride, sodium lactate, calcium chloride, arginine hydrochloride, magnesium chloride or a combination thereof in a concentration of from 10 to 200 mm;
  • - sugars or polyhydric alcohols sorbitol, mannitol, sucrose, trehalose, glycerin, maltose, lactose, or a combination thereof in a concentration of from 0.1 to 10%.
  • surfactants To prevent sorption of the drug on the surface of the primary packaging, as well as aggregation of the target protein, surfactants must be introduced into the composition of highly concentrated ranibizumab compositions.
  • surfactants from the list is proposed: Polysorbate 20, Polysorbate 40, Polysorbate 60, Polysorbate 80, Poloxamer 407, or a combination thereof in a concentration of 0.0001 to 0.5%.
  • antioxidants from the list is proposed: methionine, reduced glutathione, cysteine, ascorbic acid, EDTA, EDTA sodium salt, taurine, or a combination thereof in a concentration of 0.0001 to 5%.
  • Example 1 The stability of the aqueous pharmaceutical composition of ranibizumab
  • ranibizumab In order to confirm the stability of the developed ranibizumab compositions, we ran a series of ranibizumab with a target protein concentration of 100 mg / ml in the following buffer composition:
  • Example 2 The stability of the aqueous pharmaceutical composition of ranibizumab (protein concentration 300 mg / ml)
  • ranibizumab In order to confirm the stability of the developed ranibizumab compositions, we ran a series of ranibizumab with a target protein concentration of 300 mg / ml in the following buffer composition:
  • the group receiving the drug Lucentis® a single injection of 50 ⁇ l of ranibizumab solution with a concentration of 10 mg / ml, injection into the vitreous body
  • - the group receiving ranibizumab with a concentration of 100 mg / ml a single injection of 50 ⁇ l of a solution of ranibizumab with a concentration of 100 mg / ml, injection into the vitreous body
  • ranibizumab with a concentration of 200 mg / ml (a single injection of 50 ⁇ l of a solution of ranibizumab with a concentration of 200 mg / ml, injection into the vitreous body);
  • ranibizumab with a concentration of 300 mg / ml (a single injection of 50 ⁇ l of a solution of ranibizumab with a concentration of 300 mg / ml, injection into the vitreous body).
  • ranibizumab samples of the vitreous body to study the content of ranibizumab were taken on 1, 3, 9, 12, 15, 21, 27, 30, 33, and 36 days after a single intravitreal injection of drugs in both eyes.
  • the concentration of ranibizumab was determined by enzyme immunoassay.
  • Figure 1 shows graphs of the dependence of the average concentration of ranibizumab in the vitreous body on the time of sampling in groups of rabbits treated with different doses of ranibizumab.
  • Table 10 shows the AUC data for each animal group.
  • the data obtained indicate an increase in AUC in proportion to an increase in the intravitreal dose of ranibizumab, which indicates the linearity of pharmacokinetics.
  • ranibizumab compositions with a concentration of 100 mg / ml to 300 mg / ml theoretically will reduce the frequency of administration of the drug by 2-3 times.
  • Figure 2 shows the dependence of the ranibizumab content in plasma as a function of the concentration of ranibizumab in an aqueous solution.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к проблеме создания стабильных высококонцентрированных водных композиций лекарственного препарата для интравитреальных инъекций, имеющих пролонгированное действие. Предложена стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая ранибизумаб в концентрации 100-300 мг/мл, что обеспечивает улучшенные фармакокинетические свойства препарата при интравитреальном введении. Препарат сохраняет стабильность в течение 5 лет при температуре +2-8ºС. Изобретение может быть использовано в фармацевтической промышленности, а именно, при создании лекарственного препарата для терапии влажной формы возрастной макулярной дегенерации у взрослых (ВМД); снижения остроты зрения с диабетическим отеком макулы; снижения остроты зрения вследствие отека макулы, вызванного окклюзией вен сетчатки (центральной вены сетчатки или ее ветвей); снижения остроты зрения, вызванного хориоидальной неоваскуляризацией, обусловленной патологической миопией.

Description

СТАБИЛЬНЫЕ ВЫСОКОКОНЦЕНТРИРОВАННЫЕ ВОДНЫЕ
КОМПОЗИЦИИ РАНИБИЗУМАБА С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ ДЕЙСТВИЕМ
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к проблеме создания стабильных высококонцентрированных водных композиций лекарственного препарата, имеющих пролонгированное действие. В частности, изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей ранибизумаб в концентрации 100-300 мг\мл и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или эксципиент. Изобретение может быть использовано в фармацевтической промышленности, а именно, при создании лекарственного препарата для терапии влажной формы возрастной макулярной дегенерации у взрослых (ВМД); снижения остроты зрения с диабетическим отеком макулы; снижения остроты зрения вследствие отека макулы, вызванного окклюзией вен сетчатки (центральной вены сетчатки или ее ветвей); снижения остроты зрения, вызванного хориоидальной неоваскуляризацией, обусловленной патологической миопией.
В настоящее время при терапии вышеперечисленных заболеваний применяется препарат на основе рекомбинантного ранибизумаба «Луцентис®». Рекомендуемая доза данного препарата составляет 0,5 мг (0,05 мл) 1 раз в месяц в виде инъекции в стекловидное тело, минимальный курс составляет 3 инъекции в год, далее - по назначению врача. С целью улучшения качества жизни пациентов, снижения частоты проявления нежелательных явлений, связанных, в основном, с техникой проведения инъекции, авторы изобретения предложили для лечения использовать препарат, содержащий более концентрированную форму ранибизумаба, которая позволит снизить частоту инъекций. В качестве ключевого критерия приемлемости разрабатываемой фармацевтической композиции был избран AUC фармакокинетический параметр, характеризующий суммарную концентрацию лекарственного препарата в стекловидном теле в течение всего времени наблюдения. AUC представляет собой площадь под кривой "концентрация— время" - площадь фигуры, ограниченной фармакокинетической кривой и осями координат ( AUC = СО/Ке1). Величина ( AUC) связана с другими фармакокинетическими параметрами— объемом распределения, общим клиренсом. Для достижения необходимой эффективности препарата значение AUC должно находиться на определенном уровне (точнее, превышать его). Чем выше AUC действующего вещества, тем реже можно вводить препарат пациенту. В то же время, AUC должно ограничиваться и каким-то максимальным значением, т.к. при его превышении препарат может оказывать системное влияние. Неизвестно также, сохранит ли белок жизнеспособность в течение предполагаемого длительного срока его экспозиции в стекловидном теле. Определение концентрации действующего вещества, необходимой для увеличения длительности действия препарата, при сохранении его безопасности и эффективности является нетривиальной задачей, исходя из современного уровня знаний. Дополнительной проблемой является сохранение стабильности высококонцентрированного препарата, в связи со склонностью белковых соединений образовывать различные комплексы между собой и с дополнительными веществами в составе композиции, переходить в агрегированное состояние и т.д.
Описание чертежей
Рис. 1. Концентрация ранибизумаба в стекловидном теле кроликов при введении различных доз белка (концентрация ранибизумаба в стекловидном теле, нМ/л по вертикальной оси; продолжительность наблюдения, дней по горизонтальной оси).
Рис. 2. Фармакокинетическая кривая препаратов ранибизумаба с различной концентрацией белка (концентрация ранибизумаба в плазме, нМ/л по вертикальной оси; продолжительность наблюдения, часов по горизонтальной оси)
Из уровня техники известны следующие решения для состава фармацевтической композиции ранибизумаба.
Решение 1 [Rainer Sigl. Pharmaceutical composition of an anti-VEGF antibody. US20160297877A1], защищающее фармацевтическую композицию для внутриглазного введения, содержащую буферообразующий компонент, неионный сурфактант, антитело против VEGF или его Fab-фрагмент, а также неорганическую соль. В формуле изобретения указывается концентрация ранибизумаба 10 мг/мл, в описании упоминается фармацевтическая композиция с концентрацией ранибизумаба от 1 до 100 мг/мл. Указанные концентрации антитела к VEGF не обеспечивают достаточной пролонгации действия лекарственного препарата, что приводит к необходимости увеличения частоты приема препарата, что приводит к проявлению нежелательных местных эффектов, а также ухудшает качество жизни пациентов.
Решение 2 [Yatin R. Gokarn, Timothy J. Kamerzell, Megan Li, Mary Cromwell, Hong Liu. Antibody formulation. US9226961B2], защищающее широкий спектр фармацевтических композиций, содержащих в своем составе антитело в различных концентрациях (в том числе ранибизумаба), в качестве буферообразующего агента используется аргинин-ацетатный буферный раствор. Указанные фармацевтические композиции часто используются при производстве биофармацевтических препаратов, однако ключевым недостатком данных композиций является необходимость использования большого количества аргинина, обладающего высокой стоимостью, что приводит к снижению рентабельности процесса в целом.
Решение 3 [Rainer Sigl. Liquid formulation of a vegf antagonist. WO2017129685A1], защищающее фармацевтические композиции, содержащие в своем составе антагонисты VEGF в концентрации вплоть до 45 мг/мл. Как и в случае с решением 1, данная концентрация антагониста не обеспечивает достаточной пролонгации действия лекарственного препарата.
Решение 4 [Eric Furfine, Daniel Dix, Kenneth S. Graham, Kelly Frye. AU2012202859], защищающее фармацевтические композиции, содержащие в своем составе антагонисты VEGF, применяемые для внутриглазного введения, в концентрации вплоть до 100 мг/мл. Как и в случае с решениями 1, 3 данная концентрация антагониста не обеспечивает достаточной пролонгации действия лекарственного препарата.
Решение 5 [Byeong Seon Chang. Protein formulations containing amino acids. US20140127227A1], защищающее любые белковые композиции, содержащие аминокислоты. Патент включает композицию, содержащую ранибизумаб и одну или несколько аминокислот для его стабилизации, и одну или несколько аминокислот для снижения вязкости белкового раствора. В качестве примера авторы рассматривают влияние различных аминокислот на стабильность ранибизумаба при его концентрации 5 мг/мл; 7,5 мг/мл; 12,5 мг/мл. Приведенный анализ данных уровня техники указывает на отсутствие стабильных фармацевтических композиций, содержащих ранибизумаб в концентрации более 100 мг/мл и обеспечивающих за счет этого лучшие фармакокинетические параметры лекарственного препарата.
Основными недостатками известных фармацевтических композиций ранибизумаба являются:
- недостаточная концентрация целевого белка, приводящая к необходимости частого применения препарата;
- сложность предлагаемых подходов для получения готовой лекарственной формы препарата ранибизумаба (лиофолизация), что усложняет процесс, а также приводит к его удорожанию;
- невозможность обеспечения долгосрочной стабильности препарата при номинальных температурах при использовании предлагаемых компонентных составов.
Технический результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в получении препарата, введение которого обеспечивает более длительное, по сравнению с известными препаратами, поддержание действующей концентрации лекарственного препарата в стекловидном теле (AUC), при отсутствии видимых побочных токсических явлений. Дополнительным техническим результатом является выбор оптимального состава фармацевтической композиции, обеспечивающей стабильность композиции при ее длительном хранении.
Для достижения указанных технических результатов концентрация ранибизумаба в составе фармацевтической композиции должна находиться в пределах от 100 до 300 мг/мл. Высокая стабильность композиции при длительном хранении может быть обеспечена за счет введения в состав буфера дополнительных компонентов: антиоксидантов, регуляторов тоничности, уровня pH, стабилизирующих и буферообразующих агентов. Компоненты композиции не вступают в химическое взаимодействие друг с другом и могут быть использованы в комбинации с фармацевтически приемлемым эксципиентом, носителем и наполнителем. Под «фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем или эксципиентом» понимается такой носитель, наполнитель или эксципиент, который не вызывает никаких нежелательных побочных эффектов у пациента, которому он вводится. Заявляемая фармацевтическая композиция предназначена для интравитреального введения и может выпускаться в форме раствора для инъекций во флаконах или преднаполненных шприцах.
Разработка стабильного высококонцентрированного состава рекомбинантного ранибизумаба осуществлялась с учетом следующих критериев:
1) влияние на сохранность ключевых характеристик качества целевого белка;
2) совместимость компонентов ГЛФ между собой и первичной упаковкой;
3) технологичность приготовления.
Осуществление изобретения
Оптимальные значения pH
Авторы изобретения показали, что стабильность высококонцентрированного раствора ранибизумаба сильно зависит от значения pH буферного раствора. Для исследований была выбрана цитрат-фосфатная буферная система, обеспечивающая буферную емкость в значительном диапазоне pH. Были получены образцы рекомбинантного ранибизумаба (концентрация 100, 200, 300 мг/мл) в следующих буферных растворах:
25 мМ цитрата натрия, 25 мМ фосфата натрия, значение pH варьировало от 3,5 до 8,0 с интервалом 0,5 единиц.
Стабильность полученных образцов изучали методом ускоренного старения при 37°С в течение 28 дней (точки для анализа 0, 7, 14, 28 дней), анализировали содержание целевой мономерной формы методом ГФ ВЭЖХ. Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1. Результаты анализа образцов целевого белка при различном значении pH
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000008_0001
Наилучшую стабильность целевой белок продемонстрировал при значении pH от 5,0 до 7,5 ед. По этой причине в качестве буферообразующих агентов могут быть рекомендованы: фосфат натрия, ацетат натрия, цитрат натрия, трисгидроксиметиламинометан, L-гистидин или их сочетания.
Концентрация буферообразующих агентов
Вещества, которые добавляют для стабилизации pH (кислотности) продукта.
Авторами было показано, что концентрация буферообразующих агентов не оказывает значительного влияния на стабильность целевого белка. Концентрацию буферообразующих агентов варьировали от 1 до 250 мМ (при концентрации белка 100, 200, 300 мг/мл).
Стабильность полученных образцов изучали методом ускоренного старения при 37°С в течение 28 дней (временные точки для анализа - 0 и 28 дней), анализировали содержание целевой мономерной формы методом ГФ ВЭЖХ. Результаты представлены в таблицах 2, 3, 4, 5. Таблица 2. Результаты анализа образцов целевого белка при различной концентрации фосфат- ионов (pH 7,0)
Figure imgf000009_0001
Таблица 3. Результаты анализа образцов целевого белка при различной концентрации ацетат-ионов (pH 5,0).
Figure imgf000009_0002
Таблица 4. Результаты анализа образцов целевого белка при различной концентрации цитрат- ионов (pH 5,5)
Figure imgf000009_0003
Figure imgf000010_0001
Таблица 5. Результаты анализа образцов целевого белка при различной концентрации гистидина (pH 5,5).
Figure imgf000010_0002
Рекомендованный диапазон концентраций буферообразующих агентов составляет от 1 до 250 мМ.
Выбор стабилизирующего агента
В качестве стабилизатора могут быть использованы аминокислоты или их комбинации, оказывающие комплексное стабилизирующее воздействие на белковые молекулы. Авторами было показано, что аминокислоты оказывают стабилизирующее действие на высококонцентрированный препарат ранибизумаба. Концентрация аминокислот не оказывает значительного влияния на стабильность целевого белка при различных значениях pH. Концентрацию аминокислот варьировали от 1 до 250 мМ (при концентрации белка 100, 200, 300 мг/мл).
Стабильность полученных образцов изучали методом ускоренного старения при 37°С в течение 28 дней (точки для анализа 0, 28 дней), анализировали содержание целевой мономерной формы методом ГФ ВЭЖХ. Результаты представлены в таблицах 6, 7.
Таблица 6. Результаты анализа образцов целевого белка при использовании различных аминокислот (значение pH 5,5 ед.)
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
Таблица 7. Результаты анализа образцов целевого белка при использовании различных аминокислот (значение pH 7,0 ед.)
Figure imgf000012_0002
Рекомендованный диапазон концентраций стабилизирующих агентов составляет от 1 до 250 мМ. Регулятор тоничности
Для препаратов с интравитреальным введением крайне важно значение тоничности раствора. Данные виды препаратов должны быть изотоничными. При применении гипо-/гипертоничных растворов у пациентов могут проявляться побочные эффекты.
Для регуляции тоничности могут быть использованы следующие компоненты:
- соли: хлорид натрия, хлорида аммония, лактата натрия, хлорида кальция, аргинина гидрохлорида, хлорида магния или их сочетания в концентрации от 10 до 200 мМ;
- сахара или многоатомные спирты: сорбитол, маннитол, сахароза, трегалоза, глицерин, мальтозы, лактоза или их сочетания в концентрации от 0,1 до 10 %.
Поверхностно-активные вещества
Для предотвращения сорбции препарата на поверхности первичной упаковки, а также агрегации целевого белка в состав высококонцентрированных композиций ранибизумаба необходимо вводить поверхностно-активные вещества.
Предлагается использование поверхностно-активных веществ из списка: полисорбат 20, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 80, полоксамер 407 или их сочетания в концентрации 0,0001 до 0,5 %.
Антиоксиданты
Для предотвращения процессов окисления целевого белка в состав высококонцентрированных композиций ранибизумаба необходимо вводить антиоксиданты.
Предлагается использование антиоксидантов из списка: метионин, глутатион восстановленный, цистеин, аскорбиновая кислота, ЭДТА, ЭДТА натриевая соль, таурин или их сочетания в концентрации 0,0001 до 5 %.
Пример 1. Стабильность водной фармацевтической композиции ранибизумаба
С целью подтверждения стабильности разработанных композиций ранибизумаба была проведена наработка серий ранибизумаба с концентрацией целевого белка 100 мг/мл в следующем буферном составе:
10 мМ L-His, 60 мМ NaCl, 0,01% polysorbate 20, pH 5.5 Стабильность полученного препарата изучали при температуре +2-8°С в течение 5 лет (60 мес). Результаты изучения стабильности представлены в таблице 8.
Таблица 8. Результаты исследования стабильности раствора ранибизумаба
(концентрация белка 100 мг/мл)
Figure imgf000014_0001
Приведенные данные свидетельствуют о стабильности указанной фармацевтической композиции в течение 60 месяцев от даты производства.
Пример 2. Стабильность водной фармацевтической композиции ранибизумаба (концентрация белка 300 мг/мл)
С целью подтверждения стабильности разработанных композиций ранибизумаба была проведена наработка серий ранибизумаба с концентрацией целевого белка 300 мг/мл в следующем буферном составе:
25 мМ L-His, 100 мМ NaCl, 5 мМ GSH, 0,1% polysorbate 80, pH 6.0
Стабильность полученного препарата изучали при температуре +2-8°С в течение 5 лет (60 мес). Результаты изучения стабильности представлены в таблице 9. Таблица 9. Результаты исследования стабильности раствора ранибизумаба (концентрация белка 300 мг/мл)
Figure imgf000015_0001
Приведенные данные свидетельствуют о стабильности указанной фармацевтической композиции в течение 60 месяцев от даты производства.
Пример 3. Оценка фармакокинетических параметров высококонцентрированных препаратов ранибизумаба при интравитреальном введении кроликам породы Советская шиншилла
Для исследования фармакокинетических параметров использовали три препарата с концентрацией 100, 200, 300 мг/мл в следующем буферном составе:
50 мМ NaP, 80 mM NaCl, 0,01 % polysorbate 20, pH 7,0
Фармакокинетические свойства заявляемой композиции были изучены с использованием лабораторных животных (кроликов). Было исследовано 4 группы по 33 животных в каждой группе:
- группа, получавшая препарат Луцентис® (однократное введение 50 мкл раствора ранибизумаба с концентрацией 10 мг/мл, инъекция в стекловидное тело); - группа, получавшая ранибизумаб с концентрацией 100 мг/мл (однократное введение 50 мкл раствора ранибизумаба с концентрацией 100 мг/мл, инъекция в стекловидное тело);
- группа, получавшая ранибизумаб с концентрацией 200 мг/мл (однократное введение 50 мкл раствора ранибизумаба с концентрацией 200 мг/мл, инъекция в стекловидное тело);
- группа, получавшая ранибизумаб с концентрацией 300 мг/мл (однократное введение 50 мкл раствора ранибизумаба с концентрацией 300 мг/мл, инъекция в стекловидное тело).
Образцы стекловидного тела для изучения содержания ранибизумаба отбирали на 1, 3, 9, 12, 15, 21, 27, 30, 33 и 36 дни после однократной интравитреальной инъекции препаратов в оба глаза. Концентрацию ранибизумаба определяли методом иммуноферментного анализа.
На рисунке 1 представлены графики зависимости средней концентрации ранибизумаба в стекловидном теле от времени забора образцов в группах кроликов, получавших разные дозы ранибизумаба.
В таблице 10 приведены данные по AUC для каждой из групп животных.
Таблица 10. Результаты по AUC
Figure imgf000016_0001
Полученные данные указывают на увеличение AUC пропорционально повышению интравитреальной дозы ранибизумаба, что говорит о линейности фармакокинетики.
С учетом периода полувыведения ранибизумаба из стекловидного тела человека (9 дней), использование композиций ранибизумаба с концентрацией от 100 мг/мл до 300 мг/мл теоретически позволит уменьшить частоту приема препарата в 2-3 раза.
На рисунке 2 представлена зависимость содержания ранибизумаба в плазме в зависимости от концентрации ранибизумаба в водимом растворе.
Полученные результаты демонстрируют возможность применения высококонцентрированных композиций ранибизумаба в медицинской практике с целью снижения частоты применения препарата вследствие улучшения фармакокинетических свойств препарата по сравнению с известными аналогами.
Приведенные на рисунке 2 данные указывают на незначительное увеличение концентрации препарата в плазме, что свидетельствует о сопоставимости его профиля системной безопасности в сравнении с известными аналогами.

Claims

Формула изобретения
1. Фармацевтическая композиция, содержащая, по меньшей мере, ранибизумаб в концентрации от 100 мг/мл до 300 мг/мл и фармацевтически приемлемый эксципиент.
2. Фармацевтическая композиция по и. 1, включающая буферообразующий агент.
3. Фармацевтическая композиция по и. 2, где буферообразующий агент выбран из следующих веществ: фосфат натрия, ацетат натрия, цитрат натрия, трисгидроксиметиламинометан, L-гистидин или их сочетания.
4. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-3, где концентрация буферообразующего компонента составляет от 1 до 250 мМ.
5. Фармацевтическая композиция любому из пи. 1-4, включающая стабилизирующий агент.
6. Фармацевтическая композиция по и. 5, где в качестве стабилизирующего агента выбрана по меньшей мере одна аминокислота из списка: аргинин, аланин, аспарагин, аспарагиновая кислота, глутамин, глутаминовая кислота, цистеин, цистин, глицин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан, тирозин, валин.
7. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-6, где концентрация стабилизирующего агента составляет от 1 до 250 мМ.
8. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-7, включающая антиоксидант.
9. Фармацевтическая композиция по и. 8, где в качестве антиоксиданта используется: метионин, глутатион восстановленный, цистеин, аскорбиновая кислота, ЭДТА, ЭДТА натриевая соль, таурин или их сочетания.
10. Фармацевтическая композиция по и. 9, где концентрация антиокидантов составляет от 0,0001 до 5 %.
11. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-10, включающая регулятор тоничности.
- 17 -
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
12. Фармацевтическая композиция по и. 11, где в качестве регулятора тоничности выбрана по меньшей мере одна соль из списка: хлорид натрия, хлорид аммония, лактат натрия, хлорид кальция, аргинина гидрохлорид, хлорид магния.
13. Фармацевтическая композиция по и. 12, где концентрация регулятора тоничности составляет 10-200 мМ.
14. Фармацевтическая композиция по и. 11, где регулятор тоничности выбран из списка: сорбитол, маннитол, сахароза, трегалоза, глицерин, мальтозы, лактоза.
15. Фармацевтическая композиция по и.14, где концентрация агентов, обеспечивающих тоничность раствора, составляет от 0,1 до 10 %.
16. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-15, включающая поверхностно активное вещество.
17. Фармацевтическая композиция по и. 16, где в качестве поверхностно- активного вещества используется: полисорбат 20, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 80, полоксамер 407 или их сочетания.
18. Фармацевтическая композиция по и. 17, где концентрация поверхностно-активного вещества составляет от 0,0001% до 0,5 %.
19. Фармацевтическая композиция по любому из пи. 1-18, где значение pH раствора белка составляет от 3,5 до 8 ед., предпочтительно от 5,0 до 7,5 ед.
- 18 -
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
PCT/RU2019/050039 2018-04-16 2019-03-29 Стабильные высококонцентрированные водные композиции ранибизумаба с пролонгированным действием Ceased WO2019203694A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018113706 2018-04-16
RU2018113706A RU2018113706A (ru) 2018-04-16 2018-04-16 Стабильные высококонцентрированные водные композиции ранибизумаба с пролонгированным действием при интравитреальном введении для медицинского применения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019203694A1 true WO2019203694A1 (ru) 2019-10-24

Family

ID=68239158

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2019/050039 Ceased WO2019203694A1 (ru) 2018-04-16 2019-03-29 Стабильные высококонцентрированные водные композиции ранибизумаба с пролонгированным действием

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2018113706A (ru)
WO (1) WO2019203694A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023031478A1 (en) * 2021-09-06 2023-03-09 Lek Pharmaceuticals D.D. Formulations for vegf receptor fusion proteins

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150157709A1 (en) * 2012-06-01 2015-06-11 Ophthotech Corporation Compositions Comprising an Anti-PDGF Aptamer and a VEGF Antagonist
US20160129112A1 (en) * 2013-05-28 2016-05-12 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical Compositions Comprising Pyrophosphate

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150157709A1 (en) * 2012-06-01 2015-06-11 Ophthotech Corporation Compositions Comprising an Anti-PDGF Aptamer and a VEGF Antagonist
US20160129112A1 (en) * 2013-05-28 2016-05-12 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical Compositions Comprising Pyrophosphate

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023031478A1 (en) * 2021-09-06 2023-03-09 Lek Pharmaceuticals D.D. Formulations for vegf receptor fusion proteins

Also Published As

Publication number Publication date
RU2018113706A (ru) 2019-10-16
RU2018113706A3 (ru) 2019-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7473603B2 (ja) 液体医薬組成物
JP7208302B2 (ja) 抗ヒトｔｓｌｐ受容体抗体含有医薬組成物
JP2021073187A (ja) 即効型インスリン組成物
CN106999581A (zh) 含有高浓度抗vegf抗体的稳定蛋白质溶液剂型
EP3156071A1 (en) Stable aqueous adalimumab preparation
US20200222508A1 (en) Glucagon-like peptide 1 (glp-1) receptor agonist compositions
TWI857996B (zh) 含高濃度抗ｖｅｇｆ抗體之蛋白質溶液配製物
WO2019203694A1 (ru) Стабильные высококонцентрированные водные композиции ранибизумаба с пролонгированным действием
KR20240053633A (ko) Vegf 수용체 융합 단백질을 위한 제제
KR102692727B1 (ko) 수성 제제 및 주사기 내 수성 제제, 및 항체 단백질 탈응집제 및 항체 단백질 탈응집 방법
AU2020328218A1 (en) Novel composition comprising antibodies
TWI771335B (zh) 穩定藥學調配物
AU2022223669A1 (en) Aqueous composition of an engineered protein construct comprising an fc domain

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19788504

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 01/03/2021)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19788504

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1