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WO2019070061A1 - 腸内環境改善用食品 - Google Patents

腸内環境改善用食品 Download PDF

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WO2019070061A1
WO2019070061A1 PCT/JP2018/037395 JP2018037395W WO2019070061A1 WO 2019070061 A1 WO2019070061 A1 WO 2019070061A1 JP 2018037395 W JP2018037395 W JP 2018037395W WO 2019070061 A1 WO2019070061 A1 WO 2019070061A1
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WO
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food
oligosaccharide
polyglutamic acid
composition containing
present
Prior art date
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PCT/JP2018/037395
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French (fr)
Inventor
恵司 亀山
桃香 恒吉
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Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
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Publication date
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a food that promotes the growth of lactic acid bacteria, bifidobacteria in the intestine, and improves the intestinal environment.
  • Patent Document 1 describes the stool improvement effect of ⁇ -polyglutamic acid.
  • Non-Patent Document 1 describes the lactic acid bacteria increasing effect of ⁇ -polyglutamic acid. Oligosaccharides are difficult to be digested and absorbed in the stomach and small intestine, and are known to reach the large intestine and be a food for good bacteria such as lactic acid bacteria and bifidobacteria. However, it is not known that the combined use of ⁇ -polyglutamic acid and an oligosaccharide significantly increases the number of lactic acid bacteria and bifidobacteria compared to single use.
  • An object of the present invention is to provide a food which promotes the growth of lactic acid bacteria and bifidobacteria in the intestine to improve the intestinal environment.
  • the present inventors conducted intensive studies to solve the above problems, and found that the combined use of ⁇ -polyglutamic acid and an oligosaccharide significantly increases lactic acid bacteria and bifidobacteria compared to single use.
  • the present inventors have further studied based on the above findings and completed the present invention.
  • a food for improving intestinal environment which is a combination of (1) ⁇ -polyglutamic acid or a composition containing ⁇ -polyglutamic acid, and (2) an oligosaccharide or a composition containing an oligosaccharide.
  • the food according to the above-mentioned [2], wherein the composition containing oligosaccharide in liquid form is a liquid preparation containing oligosaccharide.
  • the food according to the above-mentioned [2], wherein the composition containing oligosaccharide in liquid form is a beverage containing oligosaccharide.
  • the present invention by supplying ⁇ -polyglutamic acid and an oligosaccharide in combination, it has a growth promoting effect of lactic acid bacteria and bifidobacteria remarkably superior to the case of using each alone, and intestinal environment Can provide food having the function of improving
  • the food for improving intestinal environment of the present invention is formed by combining (1) a composition containing ⁇ -polyglutamic acid or ⁇ -polyglutamic acid, and (2) an oligosaccharide or a composition containing an oligosaccharide.
  • the food of the present invention is a combined food of (1) and (2) which uses (1) and (2) in combination.
  • (1) and (2) may be formulated at the same time and may be contained in the same preparation (food), and (1) and (2) may be formulated separately, or simultaneously or separately. Alternatively, they may be taken separately, by the same route or another route. That is, the food of the present invention includes a food containing (1) and (2) in one preparation, and a food using (1) and (2) separately formulated and combined.
  • food is a concept broadly including those that can be taken orally (excluding medicines), and not only so-called “food” but also beverages, health supplements, health functional foods (for example, food for specified health use) , Functional display food), including supplements.
  • “improvement of the intestinal environment” refers to relatively increasing lactic acid bacteria and / or bifidobacteria present in the lower digestive tract. Relatively increasing means promoting the dominance of lactic acid bacteria and / or bifidobacteria in the intestinal flora. The dominance of lactic acid bacteria and bifidobacteria in the intestinal flora can be confirmed by measuring the amount of lactic acid bacteria in the feces and the amount of bifidobacteria using quantitative PCR or the like.
  • “lower gastrointestinal tract” means ileum, cecum, colon, rectum.
  • ⁇ -polyglutamic acid may be used as it is or as a composition containing ⁇ -polyglutamic acid it can.
  • ⁇ -polyglutamic acid is a polymer (polymer) in which about 30 to about 5,000 D-glutamic acid and L-glutamic acid are mixed and mixed at a ratio of about 8: 2.
  • Polyglutamic acid is mentioned.
  • ⁇ -polyglutamic acid is also referred to as polyglutamic acid.
  • Commercially available ⁇ -polyglutamic acid eg, Caltake (trade name) manufactured by Ajinomoto Co., Ltd.
  • Caltake trade name
  • composition containing ⁇ -polyglutamic acid in the present invention is not particularly limited in form, for example, powder, granules (including fine granules), tablets, hard capsules, soft capsules, solutions (eg, solution, suspension, Milk, beverages, jellies, puddings, yogurts, candies, chewing gum and the like.
  • ⁇ -polyglutamic acid is mixed with a carrier (eg, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a solvent), and powders, granules, tablets, in a manner known in the field of food preparation or pharmaceutical preparation.
  • a carrier eg, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a solvent
  • ⁇ -polyglutamic acid can be added to and mixed with food and beverages (eg, water, soft drinks) to produce.
  • an oligosaccharide can be used as it is or can be used as a composition containing an oligosaccharide.
  • examples of oligosaccharides include coffee bean mannooligosaccharides, milk fruit oligosaccharides, galactooligosaccharides, fructooligosaccharides, soybean oligosaccharides, xylooligosaccharides, isomaltooligosaccharides, fructooligosaccharides, coffee bean mannooligosaccharides, iso Maltooligosaccharides and galactooligosaccharides are preferred.
  • the oligosaccharide can be used alone or in combination of two or more.
  • composition containing an oligosaccharide in the present invention is not particularly limited in form, for example, powders, granules (including fine granules), tablets, hard capsules, soft capsules, solutions (eg, solution, suspension, emulsion, Liquid seasonings (eg, liquid sweeteners), beverages, jellies, puddings, yogurts, candies, chewing gum and the like.
  • a liquid form eg, solution (eg, solution, suspension, emulsion, liquid seasoning (eg, liquid sweetener), beverage
  • solutions eg, solution, suspension, emulsion, liquid seasoning (eg, liquid sweetener), beverage
  • solutions eg, solution, suspension, emulsion, liquid seasoning (eg, liquid sweetener), beverage
  • an oligosaccharide is mixed with a carrier (eg, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a solvent), and powders, granules, tablets, capsules are obtained by a method known in the field of food preparation or pharmaceutical preparation. , Liquid preparation etc. can be produced.
  • oligosaccharides can be added to and mixed with foods and beverages (eg, water, soft drinks).
  • liquid sweeteners containing oligosaccharides can be added to and mixed with foods and beverages.
  • the food of the present invention includes a food containing the above (1) and (2) in one preparation, and a food using the above (1) and (2) separately formulated and combined. included.
  • (1) and (2) for example, in the form of granules, tablets, hard capsules or soft capsules, wherein (1) contains ⁇ -polyglutamic acid, (2) Is a form of a beverage containing an oligosaccharide, and a food used in combination thereof may be mentioned.
  • (1) and (2) may be ingested simultaneously or separately with the same route or different routes separately.
  • capsules eg, hard capsules, soft capsules
  • granules, tablets and the like containing ⁇ -polyglutamic acid may be taken together with the oligosaccharide-containing beverage.
  • Foods containing (1) and (2) in one preparation may be in any form, for example, powders, granules (including fine granules), tablets, hard capsules, soft capsules, solutions (eg, solutions, Suspensions, emulsions, liquid seasonings (eg, liquid sweeteners), beverages, jellies, puddings, yogurts, candies, chewing gum and the like. These can be produced by known methods.
  • the intake amount of ⁇ -polyglutamic acid in the food for improving intestinal environment of the present invention is usually 0.1 to 100 g, preferably 0.1 to 50 g, more preferably 1 to 20 g per adult (body weight 60 kg) per day is there.
  • the intake amount of oligosaccharide in the food for improving intestinal environment of the present invention is usually 0.1 to 100 g, preferably 0.1 to 50 g, more preferably 1 to 20 g per adult (body weight 60 kg) per day.
  • the weight ratio of oligosaccharide to ⁇ -polyglutamic acid is preferably 1: 0.05 to 20, more preferably 1: 0 1 to 10, more preferably 1: 0.1 to 5, still more preferably 1: 0.1 to 3, and particularly preferably 1: 0.2 to 2.
  • the food of the present invention can be safely consumed by humans and non-human animals (e.g. mammals, birds such as domestic animals, poultry and laboratory animals).
  • non-human animals e.g. mammals, birds such as domestic animals, poultry and laboratory animals.
  • the form to be taken by animals other than human may be addition to feed.
  • Another aspect of the present invention is a food comprising a combination of (1) a composition containing ⁇ -polyglutamic acid or ⁇ -polyglutamic acid, and (2) an oligosaccharide or a composition containing oligosaccharides, and A commercial package containing a statement describing the use for improving the intestinal environment.
  • a food product comprising a combination of the composition according to claim 1, wherein the food product is labeled to be used for improving the intestinal environment, "(1) a composition containing ⁇ -polyglutamic acid or ⁇ -polyglutamic acid, and (2) "A food for enhancing intestinal environment improving action, which is a combination of an oligosaccharide or a composition containing an oligosaccharide” and " ⁇ -polyglutamic acid or ⁇ -polygluta “A food for enhancing the intestinal environment improving effect of an oligosaccharide or a composition containing an oligosaccharide, which is a composition containing a minic acid”.
  • composition containing ⁇ -polyglutamic acid or ⁇ -polyglutamic acid “a composition containing an oligosaccharide or an oligosaccharide”, “improvement of intestinal environment”, “intake of ⁇ -polyglutamic acid”, “oligosaccharide”
  • the “intake of” is the same as the example and definition described for the food for intestinal environment improvement.
  • ⁇ -PGA ⁇ -Polyglutamic acid (Poly- ⁇ -Glutamic Acid)
  • FOS fructo-oligosaccharide
  • PBS phosphate buffered saline
  • CMOS coffee bean manno-oligosaccharide
  • IMOS isomaltooligosaccharide
  • GOS galacto-oligosaccharide
  • Test Example 1 Addition Test of ⁇ -PGA and Fructooligosaccharide to Human Fecal Suspension
  • the PBS solutions of Examples and Comparative Examples shown in Table 1 were prepared and used as a culture medium for fecal culture. The case of PBS alone was a negative control.
  • ⁇ -PGA polyglutamic acid “Caltake” manufactured by Ajinomoto Co., Ltd.
  • FOS fructooligosaccharide manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd. were used. Thereafter, 10 ml of each was dispensed into a glass vial, autoclave sterilization and anabolism were performed, and the container was sealed with a butyl rubber stopper.
  • the fecal suspension was prepared by collecting about 10 g of feces from 6 healthy subjects (3 males, 3 females) in their 20s and 40s and suspending in 80 ml of anaerobic PBS. The fecal suspension was added to each vial in 0.5 ml portions, placed in an incubator at 37 ° C., and anaerobically cultured for 4 days while inverting once a day. After completion of the culture, enteric bacterial pellets were obtained by centrifugation (8,000 ⁇ g, 5 minutes) from the whole culture solution.
  • the pellet was subjected to DNA extraction using ISOFECAL for BeadsBeat (manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), and quantitative PCR was performed using GeneAce SYBR qPCR Mix ⁇ (manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.). Quantitative PCR was carried out under the conditions of 95 ° C. for 10 minutes and then 45 cycles of 95 ° C. for 30 seconds and 60 ° C. for 60 seconds.
  • the primers for quantitative PCR used for detection of the lactic acid bacteria group (mainly Lactobacillus spp.) are as follows.
  • LAB-F 5'-AGCAGTAGGGAATCTTTCCA-3 '(SEQ ID NO: 1) (Appl Environ Microbiol. 67 (6): 2578-2585, 2001)
  • LAB-R 5'-CACCGCTACACATGGAG-3 '(SEQ ID NO: 2) (Appl Environ Microbiol. 68 (1): 114-123, 2002)
  • Test Example 2 Addition Test of ⁇ -PGA and Various Oligosaccharides to Human Fecal Suspension
  • the PBS solutions of the examples and comparative examples shown in Table 2 were prepared and used as a culture medium for fecal culture.
  • the case of PBS alone was a negative control.
  • the CMOS is a coffee bean mannooligosaccharide manufactured by Ajinomoto General Foods Co., Ltd.
  • the IMOS is an isomaltooligosaccharide manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • the GOS is a galactooligosaccharide manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • Fecal culture and detection of lactic acid bacteria were performed in the same manner as in Test Example 1.
  • Test Example 4 The administration test of ⁇ -PGA and FOS to pigs Purchased 24 male pigs (Hycorp SPF pig LWD) of 2-3 months old from National Association of Agricultural Cooperatives so that the average weight becomes uniform. Six animals were divided into four test areas and bred for four weeks with three animals / pen. Each test area was fed twice a day with 400 g / head of pig mirai CEX (National Agricultural Cooperative Association). The test substance was administered to each test area by the dose method shown in Table 4.
  • ⁇ -PGA polyglutamic acid “Caltake” manufactured by Ajinomoto Co., Ltd.
  • FOS fructooligosaccharide “Mayoligo P granules” manufactured by Meiji Food Materia Co., Ltd.
  • Quantitative PCR was carried out under the conditions of 95 ° C. for 10 minutes and then 45 cycles of 95 ° C. for 30 seconds and 60 ° C. for 60 seconds.
  • the primers for quantitative PCR used for detection of Bifidobacterium are as follows.
  • g-Bifid-F 5'-CTCCTGGAAACGGGTGG-3 '(SEQ ID NO: 3)
  • g-Bifid-R 5'-GGTGTTCTTCCCCGATATCTACA-3 '(SEQ ID NO: 4)

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Abstract

本発明は、腸内の乳酸菌等の増殖を促進して、腸内環境を改善する食品の提供を課題とする。本発明は、（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善用食品を提供する。

Description

腸内環境改善用食品
　本発明は、腸内の乳酸菌、ビフィズス菌の増殖を促進して、腸内環境を改善する食品に関する。
　腸内の乳酸菌、ビフィズス菌などの善玉菌の増殖を促進して、腸内環境を改善すること（腸内細菌叢の正常化）は、各種疾病の予防や健康維持増進のために重要である。
　特許文献１には、γ－ポリグルタミン酸の便通改善効果が記載されている。非特許文献１には、γ－ポリグルタミン酸の乳酸菌増加効果が記載されている。オリゴ糖は、胃や小腸で消化・吸収されにくく、大腸まで届いて乳酸菌、ビフィズス菌などの善玉菌の餌になることが知られている。しかし、γ－ポリグルタミン酸とオリゴ糖の併用により、単独の使用と比べて乳酸菌、ビフィズス菌が顕著に増加する事は知られていない。
特開２００７－２２９８２号公報
J. Microbiol. Biotechnol. (2017), 27(2), 412-415
　本発明は、腸内の乳酸菌、ビフィズス菌の増殖を促進して、腸内環境を改善する食品の提供を課題とする。
　本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討を行ったところ、γ－ポリグルタミン酸とオリゴ糖の併用により、単独の使用と比べて乳酸菌およびビフィズス菌が顕著に増加することを見出した。本発明者らは、上記知見に基づき、さらに検討を行って本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は、下記を提供する。
［１］（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善用食品。
［２］オリゴ糖を含有する組成物が、液状の形態である、上記［１］に記載の食品。
［３］液状の形態であるオリゴ糖を含有する組成物が、オリゴ糖を含有する液剤である、上記［２］に記載の食品。
［４］液状の形態であるオリゴ糖を含有する組成物が、オリゴ糖を含有する飲料である、上記［２］に記載の食品。
　本発明によれば、γ－ポリグルタミン酸およびオリゴ糖を組み合わせて供給することによって、それぞれ単独で用いた場合に比べて、顕著に優れた乳酸菌、ビフィズス菌の増殖促進効果を有し、腸内環境を改善する機能を有する食品を提供することができる。
図１は試験例１（ヒト糞便懸濁液へのγ－ポリグルタミン酸およびフラクトオリゴ糖添加試験）の結果（平均値±標準誤差、ｎ＝６）を示す。 図２は試験例２（ヒト糞便懸濁液へのγ－ポリグルタミン酸および各種オリゴ糖添加試験）の結果（平均値±標準誤差、ｎ＝３）を示す。 図３は試験例３（ブタへのγ－ポリグルタミン酸およびフラクトオリゴ糖投与試験）の結果（平均値±標準偏差、ｎ＝３）を示す。 図４は試験例４（ブタへのγ－ポリグルタミン酸およびフラクトオリゴ糖投与試験）の結果（平均値±標準偏差、ｎ＝６、*：P＜0.05、Student’s t-test）を示す。
　以下に、本発明を詳細に説明する。
　本発明の腸内環境改善用食品は、（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる。
　本発明の食品は、（１）および（２）を組み合わせて用いる、（１）および（２）の併用食品である。
　本発明の食品において、（１）および（２）は、同時に製剤化し、同一の製剤（食品）中に含有してもよく、（１）および（２）を別々に製剤化し、同時にあるいは時間差をおいて別々に、同一経路あるいは別経路にて、摂取されてもよい。すなわち、本発明の食品には、（１）および（２）を一つの製剤中に含有する食品、（１）および（２）を別々に製剤化して組み合わせて用いる食品が含まれる。
　本明細書において、食品とは、経口摂取し得るもの（医薬品を除く）を広く包含する概念であり、いわゆる「食べ物」のみならず飲料、健康補助食品、保健機能食品（例えば、特定保健用食品、機能性表示食品）、サプリメントなどを含む。
　本明細書において、「腸内環境改善」とは、下部消化管に存在する乳酸菌および／またはビフィズス菌を相対的に増加させることをいう。相対的に増加させるとは、腸内細菌叢における乳酸菌および／またはビフィズス菌の優占化を促進することを意味する。腸内細菌叢における乳酸菌、ビフィズス菌の優占化は、糞便中の乳酸菌量、ビフィズス菌量を、定量ＰＣＲなどを用いて測定する事により確認できる。
　本明細書において、「下部消化管」とは、回腸、盲腸、結腸、直腸を意味する。
（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物
　本発明において、（１）としては、γ－ポリグルタミン酸をそのまま用いること、またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物として用いることができる。
　本発明において、γ－ポリグルタミン酸としては、好ましくは、Ｄ－グルタミン酸とＬ－グルタミン酸が約８：２の割合で混在して約３０～約５０００個結合したポリマー（高分子体）であるγ－ポリグルタミン酸が挙げられる。
　γ－ポリグルタミン酸は、ポリグルタミン酸とも称される。
　γ－ポリグルタミン酸は市販品（例えば、カルテイク（商品名）味の素社製）を用いることもできる。
　本発明におけるγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物は、形態は特に問わず、例えば、散剤、顆粒剤（細粒剤を含む）、錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、液剤（例、溶液、懸濁液、乳液）、飲料、ゼリー、プリン、ヨーグルト、キャンディー、チューイングガムなどが挙げられる。これらは公知の方法で製造することができる。例えば、γ－ポリグルタミン酸を担体（例、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶剤）と混合し、食品製剤または医薬製剤の分野で公知の方法で散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤等を製造することができる。また、γ－ポリグルタミン酸を、食品、飲料（例、水、ソフトドリンク）に添加、混合して製造することもできる。
（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物
　本発明において、（２）としては、オリゴ糖をそのまま用いること、またはオリゴ糖を含有する組成物として用いることができる。
　本発明において、オリゴ糖としては、例えば、コーヒー豆マンノオリゴ糖、乳果オリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖が挙げられ、フラクトオリゴ糖、コーヒー豆マンノオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖が好ましい。オリゴ糖は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
　本発明におけるオリゴ糖を含有する組成物は、形態は特に問わず、例えば、散剤、顆粒剤（細粒剤を含む）、錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、液剤（例、溶液、懸濁液、乳液、液体調味料（例、液体甘味料））、飲料、ゼリー、プリン、ヨーグルト、キャンディー、チューイングガムなどが挙げられる。中でも、液状の形態（例、液剤（例、溶液、懸濁液、乳液、液体調味料（例、液体甘味料））、飲料）が好ましい。
　これらは公知の方法で製造することができる。例えば、オリゴ糖を担体（例、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶剤）と混合し、食品製剤または医薬製剤の分野で公知の方法で散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤等を製造することができる。また、オリゴ糖を、食品、飲料（例、水、ソフトドリンク）に添加、混合して製造することもできる。また、オリゴ糖を含有する液体甘味料を食品、飲料に添加、混合して製造することもできる。
　上述の通り、本発明の食品には、上記（１）および（２）を一つの製剤中に含有する食品、および、上記（１）および（２）を別々に製剤化して組み合わせて用いる食品が含まれる。
　（１）および（２）を別々に製剤化して組み合わせて用いる食品として、例えば、（１）がγ－ポリグルタミン酸を含有する、顆粒剤、錠剤、ハードカプセル、またはソフトカプセルの形態であり、（２）がオリゴ糖を含有する飲料の形態であり、これらを組み合わせて用いる食品が挙げられる。
　本発明において、（１）および（２）は、同時にあるいは時間差をおいて別々に、同一経路あるいは別経路にて、摂取されてもよい。具体的には例えば、γ－ポリグルタミン酸を含有するカプセル（例、ハードカプセル、ソフトカプセル）、顆粒剤、錠剤などを、オリゴ糖含有飲料と共に摂取されてもよい。
　（１）および（２）を一つの製剤中に含有する食品は、形態は特に問わず、例えば、散剤、顆粒剤（細粒剤を含む）、錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、液剤（例、溶液、懸濁液、乳液、液体調味料（例、液体甘味料））、飲料、ゼリー、プリン、ヨーグルト、キャンディー、チューイングガムなどが挙げられる。これらは公知の方法で製造することができる。
　本発明の腸内環境改善用食品におけるγ－ポリグルタミン酸の摂取量は、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり、通常０．１～１００ｇ、好ましくは０．１～５０ｇ、より好ましくは１～２０ｇである。
　本発明の腸内環境改善用食品におけるオリゴ糖の摂取量は、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり、通常０．１～１００ｇ、好ましくは０．１～５０ｇ、より好ましくは１～２０ｇである。
　本発明の腸内環境改善用食品において、オリゴ糖とγ－ポリグルタミン酸の重量比率（オリゴ糖：γ－ポリグルタミン酸）は、好ましくは、１：０．０５～２０、より好ましくは、１：０．１～１０、さらに好ましくは、１：０．１～５、よりさらに好ましくは、１：０．１～３、特に好ましくは、１：０．２～２である。
　本発明の食品は、ヒト、ヒト以外の動物（例えば、家畜、家禽、実験動物などの、哺乳動物、鳥類）が安全に摂取することができる。ヒト以外の動物に摂取させる形態としては、飼料中への添加であってもよい。
　本発明の別の態様としては、「（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる食品、並びに、腸内環境改善への使用に関する説明を記載した記載物を含む商業パッケージ。」、「（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善に用いられる旨の表示が付された食品。」、「（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善作用の増強用食品。」および「γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物である、オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物の腸内環境改善作用の増強用食品。」が挙げられる。「γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物」、「オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物」、「腸内環境改善」、「γ－ポリグルタミン酸の摂取量」、「オリゴ糖の摂取量」は、上記腸内環境改善用食品について説明した例示、定義と同じである。
　以下、試験例、実施例、比較例、参考例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
　略語は、以下を示す。
γ－ＰＧＡ：γ－ポリグルタミン酸（Poly-γ-Glutamic Acid）
ＦＯＳ：フラクトオリゴ糖
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＣＭＯＳ：コーヒー豆マンノオリゴ糖
ＩＭＯＳ：イソマルトオリゴ糖
ＧＯＳ：ガラクトオリゴ糖
［試験例１］ヒト糞便懸濁液へのγ－ＰＧＡおよびフラクトオリゴ糖添加試験
　表１に示す実施例および比較例のＰＢＳ溶液を調製し、糞便培養用の培地とした。ＰＢＳのみの場合を陰性対照とした。γ－ＰＧＡは味の素社製ポリグルタミン酸「カルテイク」、ＦＯＳは、和光純薬社製フラクトオリゴ糖を用いた。
　その後、ガラス製バイアル瓶にそれぞれ１０ｍｌずつ分注しオートクレーブ滅菌および嫌気化し、ブチルゴム栓で密閉した。糞便懸濁液は、２０～４０代の健常人６人（男３人、女３人）から糞便約１０ｇを採取し、８０ｍｌの嫌気化されたＰＢＳに懸濁することによって調製した。この糞便懸濁液をそれぞれのバイアル瓶に０．５ｍｌずつ添加し、３７℃のインキュベータ内に入れ１日１回転倒混和しながら４日間嫌気培養した。培養終了後、培養液の全量から遠心分離（８，０００×ｇ、５分）により腸内細菌ペレットを得た。このペレットからＩＳＯＦＥＣＡＬ　ｆｏｒ　ＢｅａｄｓＢｅａｔ（ニッポンジーン社製）を用いてＤＮＡ抽出を行い、ＧｅｎｅＡｃｅ　ＳＹＢＲ　ｑＰＣＲ　Ｍｉｘ　α（ニッポンジーン社製）を用いて定量ＰＣＲを行った。定量ＰＣＲは、９５℃１０分の後、９５℃３０秒と６０℃６０秒を４５サイクル実施する条件で行った。乳酸菌群（主に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐｐ．）の検出に用いた定量ＰＣＲ用プライマーは、下記の通りである。
ＬＡＢ－Ｆ：５’－ＡＧＣＡＧＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＴＣＣＡ－３’（配列番号：１）（Appl Environ Microbiol. 67(6):2578-2585, 2001）
ＬＡＢ－Ｒ：５’－ＣＡＣＣＧＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧＡＧ－３’（配列番号：２）（Appl Environ Microbiol. 68(1):114-123, 2002）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　定量ＰＣＲによって得られた結果は、ＰＢＳのみ（陰性対照）を１とした場合の相対量を算出し、その結果をｚ－ｓｃｏｒｅで標準化した。
　結果を図１に示す。データはｚ－ｓｃｏｒｅの平均値±標準誤差で示した（ｎ＝６）。有意差は陽性対照をコントロールとしDunnetの検定で求めた（＊：P＜0.05）。
　その結果、γ－ＰＧＡ単独の添加では、乳酸菌群の増殖は認められなかったが、０．５％ＦＯＳと共にγ－ＰＧＡを添加すると、ＦＯＳ単独よりも顕著な乳酸菌群の増殖が濃度依存的に認められた。
　このように、本発明においては、γ－ＰＧＡとオリゴ糖の組み合わせで、乳酸菌群の増殖について、相加効果を超える相乗効果が認められた。
［試験例２］ヒト糞便懸濁液へのγ－ＰＧＡおよび各種オリゴ糖添加試験
　表２に示す実施例および比較例のＰＢＳ溶液を調製し、糞便培養用の培地とした。ＰＢＳのみの場合を陰性対照とした。ＣＭＯＳは、味の素ゼネラルフーヅ社製コーヒー豆マンノオリゴ糖、ＩＭＯＳは、和光純薬社製イソマルトオリゴ糖、ＧＯＳは、和光純薬社製ガラクトオリゴ糖を用いた。
　糞便培養および乳酸菌の検出は、試験例１と同様の方法で行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　定量ＰＣＲによって得られた結果は、ＰＢＳのみ（陰性対照）を１とした場合の相対量を算出し、その結果をｚ－ｓｃｏｒｅで標準化した。
　結果を図２に示す。データはｚ－ｓｃｏｒｅの平均値±標準誤差で示した（ｎ＝３）。有意差は陽性対照をコントロールとしDunnetの検定で求めた（＊：P＜0.05）。
　その結果、いずれのオリゴ糖においても、γ－ＰＧＡと組み合わせることによってオリゴ糖単独の場合よりも顕著な乳酸菌群の増殖が認められた。
　このように、本発明においては、オリゴ糖の種類によらずγ－ＰＧＡとの組み合わせで、乳酸菌群の増殖について、相加効果を超える相乗効果が認められた。
［試験例３］ブタへのγ－ＰＧＡおよびＦＯＳ投与試験
　全国農業協同組合連合会より２～３ヶ月齢の雄性ブタ（ハイコープＳＰＦ豚ＬＷＤ）６頭を購入し、平均体重が均一になる様に３頭ずつ２つの試験区に分け、３頭／ペンで４週間飼育した。それぞれの試験区には、１日２回、４００ｇ／頭のピグみらいＣＥＸ（全国農業協同組合連合会）を制限給餌した。それぞれの試験区には、表３に示す用量・方法で被験物質の投与を行った。γ－ＰＧＡは味の素社製ポリグルタミン酸「カルテイク」、ＦＯＳは、明治フードマテリア社製フラクトオリゴ糖「メイオリゴＰ顆粒」を用いた。投与開始から４週間経過後、盲腸を採材し、試験例１および２と同様の方法で、盲腸内容物中の乳酸菌を定量ＰＣＲで調べた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　結果を図３に示す。データは比較例６の乳酸菌由来ＤＮＡコピー数を１とした場合の相対量で示した（平均値±標準偏差、ｎ＝３）。
　その結果、γ－ＰＧＡとＦＯＳの組み合わせによって、ＦＯＳ単独の摂取よりもブタ腸内の乳酸菌を平均値で２倍程度増殖させる効果が確認できた。
［試験例４］ブタへのγ－ＰＧＡおよびＦＯＳ投与試験
　全国農業協同組合連合会より２～３ヶ月齢の雄性ブタ（ハイコープＳＰＦ豚ＬＷＤ）２４頭を購入し、平均体重が均一になる様に６頭ずつ４つの試験区に分け、３頭／ペンで４週間飼育した。それぞれの試験区には、１日２回、４００ｇ／頭のピグみらいＣＥＸ（全国農業協同組合連合会）を制限給餌した。それぞれの試験区には、表４に示す用量・方法で被験物質の投与を行った。γ－ＰＧＡは味の素社製ポリグルタミン酸「カルテイク」、ＦＯＳは、明治フードマテリア社製フラクトオリゴ糖「メイオリゴＰ顆粒」を用いた。投与開始から４週間経過後、盲腸を採材し、盲腸内容物中のビフィズス菌を定量ＰＣＲで調べた。定量ＰＣＲは、９５℃１０分の後、９５℃３０秒と６０℃６０秒を４５サイクル実施する条件で行った。ビフィズス菌の検出に用いた定量ＰＣＲ用プライマーは、下記の通りである。
ｇ－Ｂｉｆｉｄ－Ｆ：５’－ＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＣＧＧＧＴＧＧ－３’（配列番号：３）
ｇ－Ｂｉｆｉｄ－Ｒ：５’－ＧＧＴＧＴＴＣＴＴＣＣＣＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡ－３’（配列番号：４）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　結果を図４に示す。データは比較例７のビフィズス菌由来ＤＮＡコピー数を１とした場合の相対量で示した（平均値±標準偏差、ｎ＝６）。
　その結果、γ－ＰＧＡとＦＯＳの組み合わせによって、ＦＯＳ単独の摂取よりもブタ腸内のビフィズス菌を平均値で１０倍程度増殖させる効果が確認できた。特に、ＦＯＳの摂取量に対して半量のγ－ＰＧＡを追加摂取することによって、ＦＯＳ単独の摂取よりも顕著なビフィズス菌の増加効果が認められた。
　本出願は、日本で出願された特願２０１７－１９５３１１を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。

Claims (4)

  1. 　（１）γ－ポリグルタミン酸またはγ－ポリグルタミン酸を含有する組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善用食品。
  2. 　オリゴ糖を含有する組成物が、液状の形態である、請求項１に記載の食品。
  3. 　液状の形態であるオリゴ糖を含有する組成物が、オリゴ糖を含有する液剤である、請求項２に記載の食品。
  4. 　液状の形態であるオリゴ糖を含有する組成物が、オリゴ糖を含有する飲料である、請求項２に記載の食品。
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