WO2019065979A1 - 抗ヒトα９インテグリン抗体含有医薬組成物 - Google Patents
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Definitions
- stable means stable to, for example, heat, light, temperature, humidity, shaking, and / or freeze-thaw.
- the total amount of multimers or degradants contained in the pharmaceutical composition or the increased amount thereof is equal to or less than a specific amount.
- the charge analog is below a certain amount.
- the insoluble foreign matter is not visually observed after storage of the pharmaceutical composition under predetermined conditions, or the number of insoluble fine particles is equal to or less than a specific number as measured by the light blocking particle counting method described later. Specify.
- polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester or polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ether and in one embodiment polysorbate 20, 21, 40, 60, 65, 80, 81, or 85, and a pluronic surfactant It is polysorbate 20 and 80 in one embodiment, or poloxamer (poloxamer 188), polysorbate 80 in one embodiment, and poloxamer (poloxamer 188) in one embodiment.
- each of the formulations was sterile filtered with a 0.22 ⁇ m filter, then filled into glass vials (10 mL capacity) in 4.4 mL portions, stoppered with a rubber stopper, and physical stability against shaking, freeze-thaw stress was evaluated. Shaking test, a horizontally placed glass vial was shaken at 150 rpm for 24 hours. In the freeze-thaw stress test, the sample was stored in a freezer at ⁇ 80 ° C. in the upright state and frozen, and then the sample was removed from the freezer, stored in the fridge in the refrigerator at 5 ° C., and thawed. The freeze-thaw cycle was repeated three times.
- the evaluation results by the light shielding particle counting method are shown in FIG. 15 and FIG.
- the light shielding particle counting method was measured using a submerged particle counter (HIAC laboratory type submerged particle counter).
- the concentration of the measurement sample was 10 mg / mL, and after degassing at 75 Torr and 25 ° C. for 2 hours under standing conditions, analysis was performed under the condition of 0.2 mL injection amount.
- the number of insoluble fine particles having a particle diameter of 1.2 ⁇ m or more detected by the light shielding particle counting method was measured and calculated as a 1 mL conversion value. It has been shown that the anti-human ⁇ 9 integrin antibody suppresses the formation of insoluble microparticles by freeze-thaw and shaking in the nonionic surfactant polysorbate 80-containing preparation.
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Abstract
多量体、分解物、不溶性異物、又は不溶性微粒子の生成を抑制してなる、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる、安定な医薬組成物を提供する。前記医薬組成物は、製薬学的に許容される緩衝剤を含有してなり、ｐＨが５．０～７．０である。
Description
本発明は、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる、安定な医薬組成物に関する。
インテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）は細胞表面糖タンパク質のひとつで、主に細胞外マトリックス（コラーゲン、ラミニンなど）への細胞の接着やイムノグロブリンファミリーのメンバー（ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ－１など）の受容体として機能し、細胞外マトリックスからの情報伝達に関与する接着分子である。それにより、細胞は細胞外マトリックスよりシグナルを受け取り、分化、増殖、細胞死などが誘導される。インテグリンはα鎖とβ鎖の２つのサブユニットからなるヘテロダイマーであり、異なるα鎖、β鎖が存在し、多様な組み合わせがあり、インテグリンスーパーファミリーは２４種類存在する。インテグリンノックアウトマウスは、全てのサブユニットで致死的あるいは病的で、生命の維持に個々のインテグリンが必要であることが示唆されている。この事から、周辺の環境を細胞に伝え対応を促すインテグリンは、生命現象のあらゆる場面で機能しており、様々な病態に関与していると考えられる。
本出願人により、抗ヒトα９インテグリン抗体が、病態形成に関与する各種疾患の診断、予防又は治療（例えば、関節リウマチ等の自己免疫疾患、アレルギーや移植片拒絶反応等の免疫疾患等）に有用であることが公表されている（特許文献１）。
他方、近年様々な抗体等のタンパク質を含む医薬品が開発され、実際に医療の現場に提供されている。これらの医薬品の多くは、静脈内投与や皮下投与等により投薬されるため、医療の現場には、液体製剤、あるいは凍結乾燥製剤等の非経口医薬組成物の形態として提供される。とりわけ、非経口医薬組成物は、直接体内に投与されることを前提とされるため、安定な医薬品製剤であることが望ましい。
抗体等のタンパク質を含有する溶液では、不溶性微粒子の生成等を抑制することが望ましく、また、有効性の観点から、分解物等の生成を抑制することが望ましい。
特許文献１には、本発明で用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体自体は熱に安定であることが開示されている。しかし、医療の現場に提供される安定な医薬組成物に関する開示はない。また、特許文献２には、抗ＩｇＥ抗体Ｅ２５等を含む医薬組成物は開示されている。しかし、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる、医療の現場に提供される安定な医薬組成物に関する開示はない。
抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる、更なる安定な医薬組成物を開発するには、さらに改善の余地がある。本発明の目的は、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる、安定な医薬組成物を提供することにある。
詳細には、本発明の目的は、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有し、例えば、熱、光等のストレスにより増大する、分解物、又は多量体の生成を抑制してなる、安定な医薬組成物を提供することにある。また、本発明の別の目的は、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有し、例えば、凍結融解、物理的振動等により増大する、不溶性異物、又は不溶性微粒子の生成を抑制してなる、安定な医薬組成物を提供することにある。
本発明者らは、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する溶液のｐＨを特定の範囲に調整し、製剤化することにより、安定な医薬組成物を調製することができること（後記実施例１等）、また、特定の緩衝剤を添加すること（後記実施例２等）、特定のアミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類を添加すること（後記実施例３等）、非イオン性界面活性剤を添加すること（後記実施例４等）等により、更なる安定な医薬組成物を提供することができること等を知見して、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、
［１］抗ヒトα９インテグリン抗体、製薬学的に許容される緩衝剤を含有し、ｐＨが５．０～７．０である、医薬組成物であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、医薬組成物、
［２］製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１］の医薬組成物、
［３］製薬学的に許容される緩衝剤が、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩である、［１］又は［２］の医薬組成物、
［４］製薬学的に許容される緩衝剤の濃度が、１ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌである、［１］～［３］のいずれかの医薬組成物、
［５］更にアミノ酸類、塩類、糖及び糖アルコール類からなる群より選択される１種又は２種以上を含む、［１］～［４］のいずれかの医薬組成物、
［６］アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類が、メチオニン、アルギニン、グリシン、リシン、及びオルニチン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩、塩化ナトリウム、スクロース、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、イノシトール、ズルシトール、アラビトール、イソマルト、ラクチトール、並びにマルチトールからなる群より選択される１種又は２種以上である、［５］の医薬組成物、
［７］アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類がアルギニンである、［５］又は［６］の医薬組成物、
［８］アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の濃度が、１ｍｍｏｌ／Ｌ～４００ｍｍｏｌ／Ｌである、［５］～［７］のいずれかの医薬組成物、
［９］更に非イオン性界面活性剤を含む、［１］～［８］のいずれかの医薬組成物、
［１０］非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート８０及び／又はポロキサマー１８８である、［９］の医薬組成物、
［１１］非イオン性界面活性剤の濃度が、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）である、［９］又は［１０］の医薬組成物、
［１２］抗ヒトα９インテグリン抗体の濃度が１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬである、［１］～［１１］のいずれかの医薬組成物、
［１３］医薬組成物が液体製剤又は凍結乾燥製剤である、［１］～［１２］のいずれかの医薬組成物、
［１４］医薬組成物が液体製剤である、［１］～［１３］のいずれかの医薬組成物、
［１５］抗ヒトα９インテグリン抗体、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩を含有し、ｐＨが５．０～７．０である、医薬組成物であって
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、医薬組成物、
［１６］抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾が重鎖Ｎ末端のピログルタミル化及び重鎖Ｃ末端のリジン欠失である、［１］又は［１５］の医薬組成物、
［１７］抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する安定な医薬組成物の製造のための、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の、光安定化剤としての使用であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、使用、
［１８］製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１７］の使用、
［１９］抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物において、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類により、曝光による抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる方法であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、方法、
［２０］製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１９］の方法、
に関する。
［１］抗ヒトα９インテグリン抗体、製薬学的に許容される緩衝剤を含有し、ｐＨが５．０～７．０である、医薬組成物であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、医薬組成物、
［２］製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１］の医薬組成物、
［３］製薬学的に許容される緩衝剤が、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩である、［１］又は［２］の医薬組成物、
［４］製薬学的に許容される緩衝剤の濃度が、１ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌである、［１］～［３］のいずれかの医薬組成物、
［５］更にアミノ酸類、塩類、糖及び糖アルコール類からなる群より選択される１種又は２種以上を含む、［１］～［４］のいずれかの医薬組成物、
［６］アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類が、メチオニン、アルギニン、グリシン、リシン、及びオルニチン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩、塩化ナトリウム、スクロース、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、イノシトール、ズルシトール、アラビトール、イソマルト、ラクチトール、並びにマルチトールからなる群より選択される１種又は２種以上である、［５］の医薬組成物、
［７］アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類がアルギニンである、［５］又は［６］の医薬組成物、
［８］アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の濃度が、１ｍｍｏｌ／Ｌ～４００ｍｍｏｌ／Ｌである、［５］～［７］のいずれかの医薬組成物、
［９］更に非イオン性界面活性剤を含む、［１］～［８］のいずれかの医薬組成物、
［１０］非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート８０及び／又はポロキサマー１８８である、［９］の医薬組成物、
［１１］非イオン性界面活性剤の濃度が、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）である、［９］又は［１０］の医薬組成物、
［１２］抗ヒトα９インテグリン抗体の濃度が１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬである、［１］～［１１］のいずれかの医薬組成物、
［１３］医薬組成物が液体製剤又は凍結乾燥製剤である、［１］～［１２］のいずれかの医薬組成物、
［１４］医薬組成物が液体製剤である、［１］～［１３］のいずれかの医薬組成物、
［１５］抗ヒトα９インテグリン抗体、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩を含有し、ｐＨが５．０～７．０である、医薬組成物であって
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、医薬組成物、
［１６］抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾が重鎖Ｎ末端のピログルタミル化及び重鎖Ｃ末端のリジン欠失である、［１］又は［１５］の医薬組成物、
［１７］抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する安定な医薬組成物の製造のための、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の、光安定化剤としての使用であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、使用、
［１８］製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１７］の使用、
［１９］抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物において、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類により、曝光による抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる方法であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、方法、
［２０］製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、［１９］の方法、
に関する。
本発明によれば、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる安定な医薬組成物、詳細には、多量体、分解物、不溶性異物、又は不溶性微粒子の生成を抑制してなる、安定な医薬組成物を提供することができる。
本明細書において「安定」とは、例えば、熱、光、温度、湿度、振盪、及び／又は凍結融解に対して安定であることを意味する。例えば、医薬組成物を所定条件下に保存後、前記医薬組成物中に含まれる、多量体や分解物の総量、あるいはそれらの増加量がある特定量以下であることと規定する。ある態様として、電荷類縁体がある特定量以下であることと規定する。また、ある態様として、医薬組成物を所定条件下に保存後、不溶性異物が、目視により観察されないこと、又は、不溶性微粒子が後述の光遮断粒子計数法による測定で、特定数以下であることと規定する。
前記「多量体」は、抗ヒトα９インテグリン抗体が集まって生成する複合体である。多量体を測定する方法としては、特に制限されないが、例えば、サイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥ－ＨＰＬＣ法）、ゲル電気泳動法、キャピラリー電気泳動法、動的光散乱法、光遮断粒子計数法、マイクロフローイメージング法等が含まれ、ある態様としては、ＳＥ－ＨＰＬＣ法である。ＳＥ－ＨＰＬＣ法においては、検出されたピークの面積を自動分析法により測定し、メインピークを含む全ピーク面積の総和で除することにより、百分率（％）として計算し、それぞれの多量体の量とする。なお、メインピークとは、活性本体のピークを意味する。ＳＥ－ＨＰＬＣのメインピークより保持時間が短いピークを合わせて多量体の総量（以下、多量体量と称する）とする。多量体量としては、ある態様として１０％以下、ある態様として５％以下、ある態様として３％以下である。また、多量体量の増加量（特定の条件で、特定の期間保存後における多量体量と、試験（保存）開始時における多量体量の差分）については、ある態様として５％以下、ある態様として２％以下、ある態様として１％以下、ある態様として０．５％以下である。なお、前記の多量体量、又は多量体量の増加量については、後述の「安定な医薬組成物」の定義に記載した各保存条件と、所望により、任意に組み合わせることができる。
前記「分解物」は、抗ヒトα９インテグリン抗体の一部が脱離して生成する断片体である。分解物を測定する方法としては、特に制限されないが、例えば、ＳＥ－ＨＰＬＣ法、ゲル電気泳動法、キャピラリー電気泳動法等が含まれ、ある態様としては、ＳＥ－ＨＰＬＣ法である。ＳＥ－ＨＰＬＣ法による分解物の測定方法は、前記したＳＥ－ＨＰＬＣ法による多量体の測定と同様にして行う。なお、ＳＥ－ＨＰＬＣのメインピークより保持時間が長いピークを合わせて分解物の総量（以下、分解物量と称する）とする。分解物量としては、ある態様として１０％以下、ある態様として５％以下、ある態様として３％以下である。また、分解物量の増加量（特定の条件で、特定の期間保存後における分解物量と、試験（保存）開始時における分解物量の差分）については、ある態様として１０％以下、ある態様として５％以下、ある態様として３％以下である。なお、前記の分解物量、又は分解物量の増加量については、後述の「安定な医薬組成物」の定義に記載した各保存条件と、所望により、任意に組み合わせることができる。
前記「電荷類縁体」は、陽イオン交換クロマトグラフ法、又はイメージングキャピラリー等電点電気泳動法による分析でメインピークの他に認められる類縁体である。電荷類縁体を測定する方法としては、特に制限されないが、例えば、陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥ－ＨＰＬＣ法）、イメージングキャピラリー等電点電気泳動法（ｉｃＩＥＦ法）等が含まれ、ある態様としては、ＣＥ－ＨＰＬＣ法、又はｉｃＩＥＦ法である。ＣＥ－ＨＰＬＣ法及びｉｃＩＥＦ法は、前記したＳＥ－ＨＰＬＣ法と同様にしてピークの百分率（％）を計算し、それぞれの電荷類縁体の量とする。電荷類縁体の総量としては、ある様態として０～７０％、ある様態として０～５０％、ある様態として０～３０％、ある様態として０～１０％である。
前記「不溶性異物」は、日本薬局方の注射剤の不溶性異物検査法に従い、目視により確認することができる。
前記「不溶性微粒子」は、抗ヒトα９インテグリン抗体や医薬品添加物等が集まって生成する不溶性の複合体である。不溶性微粒子の数は光遮断粒子計数法により、不溶性微粒子の数が特定数以下であると規定できる。ある態様としては、１．２μｍ以上の不溶性微粒子の数が１０００個／ｍＬ以下である。
「安定な医薬組成物」とは、冷蔵温度（２℃～８℃）で例えば、３箇月間、ある態様として６箇月間、ある態様として１年間、ある態様として２年間；又は室温（２２℃～２８℃）で、ある態様として２週間、ある態様として１箇月間、ある態様として３箇月間、ある態様として６箇月間、ある態様として１年間；又は加速条件（３７℃～４３℃）で、ある態様として２週間、ある態様として４週間；又はＤ６５ランプ１０００ｌｕｘ照射下で、例えば、４８時間、ある態様として１６８時間曝光後、多量体量又は分解物量の増加量、あるいは多量体量又は分解物量が、ある特定量以下である医薬組成物を意味する。
本発明の医薬組成物に含有される抗ヒトα９インテグリン抗体（「本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体」とも称する）として、以下の（１）及び／又は（２）の抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する：
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体（国際公開第２００９／０８８０６４号）、
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体。
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体（国際公開第２００９／０８８０６４号）、
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体。
抗体を細胞で発現させる場合、抗体が翻訳後に修飾を受けることが知られている。翻訳後修飾の例としては、重鎖Ｃ末端のリジンのカルボキシペプチダーゼによる切断、重鎖及び軽鎖Ｎ末端のグルタミン又はグルタミン酸のピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾等が挙げられ、種々の抗体において、重鎖Ｃ末端のリジンが欠失することや重鎖Ｎ末端のグルタミンの大部分がピログルタミン酸への修飾を受けることが知られている（Journal of Pharmaceutical Sciences, 2008, Vol. 97, p. 2426-2447）。また、このような翻訳後修飾が抗体の活性に影響を及ぼすものではないことも当該分野で知られている（Analytical Biochemistry, 2006, Vol. 348, p. 24-39）。
１つの実施形態において、前記（２）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾は、重鎖のＮ末端のピログルタミル化である。１つの実施形態において、前記（２）の抗ヒトα９インテグリン抗体は、アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体である。
１つの実施形態において、前記（２）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾は、重鎖のＣ末端のリジンの欠失である。１つの実施形態において、前記（２）の抗ヒトα９インテグリン抗体は、配列番号１のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体である。
１つの実施形態において、前記（２）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾は、重鎖のＮ末端のピログルタミル化、且つ、重鎖のＣ末端のリジンの欠失である。１つの実施形態において、前記（２）の抗ヒトα９インテグリン抗体は、アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体である。
本発明に用いられるヒト化抗ヒトα９インテグリン抗体としてはまた、以下の宿主細胞を培養することで生産される抗ヒトα９インテグリン抗体が挙げられる：
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、又は、
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、又は、
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体は、本明細書に開示される抗ヒトα９インテグリン抗体の配列情報に基づいて、当該分野で公知の方法を使用して、当業者に容易に作製され得る。本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の作製方法としては、国際公開第２００９／０８８０６４号に開示された方法が挙げられる。
一単位医薬組成物（製剤）中の本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の量としては、例えば、１ｍｇ～１０００ｍｇが挙げられ、ある態様として１ｍｇ～５００ｍｇ、ある態様として１ｍｇ～３０ｍｇ、ある態様として１０ｍｇ～２００ｍｇ、ある態様として１００ｍｇ～２５０ｍｇ、ある態様として５０ｍｇ～２５０ｍｇ、ある態様として１００ｍｇ～２００ｍｇである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
医薬組成物が固体状態（例えば、凍結乾燥製剤、噴霧乾燥製剤など）の場合、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の量としては、例えば、１ｍｇ～１０００ｍｇが挙げられ、ある態様として１ｍｇ～５００ｍｇ、ある態様として１ｍｇ～３０ｍｇ、ある態様として１０ｍｇ～２００ｍｇ、ある態様として１００ｍｇ～２５０ｍｇ、ある態様として５０ｍｇ～２５０ｍｇ、ある態様として１００ｍｇ～２００ｍｇである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
医薬組成物を用時溶解する場合、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の濃度としては、例えば、１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬが挙げられ、ある態様として１ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１００ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ、ある態様として５０ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
医薬組成物が溶液状態（液体製剤）の場合、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の濃度としては、例えば、１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬが挙げられ、ある態様として１ｍｇ／ｍＬ～５００ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１００ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ、ある態様として５０ｍｇ／ｍＬ～２５０ｍｇ／ｍＬ、ある態様として１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
用量としては、例えば、０．００２ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、ある態様として０．０１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、ある態様として１ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
適応症としては、インテグリンが関与する各種疾患の予防及び／又は治療、例えば、関節リウマチ等の自己免疫疾患、アレルギーや移植片拒絶反応等の免疫疾患等を挙げることができる。
本発明に用いられる「製薬学的に許容される緩衝剤」としては、製薬学的に許容され、溶液状態において、所望のｐＨ範囲内で緩衝能を有し、又は安定化効果を有するものであれば、特に制限されない。
具体的には、次のｐＨ範囲内で緩衝能を有するものである。例えば、５．０～７．０、ある態様として５．５～６．５、ある態様として５．６～６．２、ある態様として６．０、ある態様として５．８である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
なお、本明細書において、医薬組成物のｐＨとは、液体製剤の場合には、溶液状態におけるｐＨを意味し、非液体製剤（例えば、凍結乾燥製剤、噴霧乾燥製剤等）の場合には、溶媒（例えば、注射用水）に溶解され溶液状態におけるｐＨを意味する。
具体的には、次のｐＨ範囲内で緩衝能を有するものである。例えば、５．０～７．０、ある態様として５．５～６．５、ある態様として５．６～６．２、ある態様として６．０、ある態様として５．８である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
なお、本明細書において、医薬組成物のｐＨとは、液体製剤の場合には、溶液状態におけるｐＨを意味し、非液体製剤（例えば、凍結乾燥製剤、噴霧乾燥製剤等）の場合には、溶媒（例えば、注射用水）に溶解され溶液状態におけるｐＨを意味する。
緩衝剤成分としては、例えば、酢酸、クエン酸、リン酸、ヒスチジン、又はそれらの製薬学的に許容される塩等を挙げることができる。ある態様としてヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩等であり、ある態様としてヒスチジンである。
酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩は緩衝剤成分としてのみならず、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性に影響を及ぼさない、又は安定性を向上させる効果を示す。
また、酢酸、クエン酸、リン酸、ヒスチジン、又はそれらの製薬学的に許容される塩は、特に曝光による本発明に用いられるヒト化抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる光安定化に効果を示す。
酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩は緩衝剤成分としてのみならず、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性に影響を及ぼさない、又は安定性を向上させる効果を示す。
また、酢酸、クエン酸、リン酸、ヒスチジン、又はそれらの製薬学的に許容される塩は、特に曝光による本発明に用いられるヒト化抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる光安定化に効果を示す。
緩衝剤成分は、１種又は２種以上適宜適量使用することができる。
緩衝剤の濃度は、ｐＨを所望のｐＨ範囲内に調整できる量であれば、特に制限されない。緩衝剤の濃度は、溶媒（例えば、注射用水）により溶解され溶液状態（液体製剤）の場合、例えば、１ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１０ｍｍｏｌ／Ｌ～１５０ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１ｍｍｏｌ／Ｌ～５０ｍｍｏｌ／Ｌが挙げられ、ある態様として５ｍｍｏｌ／Ｌ～１７５ｍｍｏｌ／Ｌである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
緩衝剤の濃度は、ｐＨを所望のｐＨ範囲内に調整できる量であれば、特に制限されない。緩衝剤の濃度は、溶媒（例えば、注射用水）により溶解され溶液状態（液体製剤）の場合、例えば、１ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１０ｍｍｏｌ／Ｌ～１５０ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１ｍｍｏｌ／Ｌ～５０ｍｍｏｌ／Ｌが挙げられ、ある態様として５ｍｍｏｌ／Ｌ～１７５ｍｍｏｌ／Ｌである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
本発明に用いられるアミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類としては、製薬学的に許容され、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性に影響を及ぼさない、又は安定性を向上させるものであれば、特に制限されない。
アミノ酸類としては、例えば、メチオニン、アルギニン、グリシン、リシン、オルニチン、又はそれらの製薬学的に許容される塩等を挙げることができる。ある態様としてメチオニン、アルギニン、グリシンであり、ある態様としてアルギニンである。
塩類としては、例えば、塩化ナトリウム等を挙げることができる。
糖又は糖アルコール類としては、例えば、スクロース、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、イノシトール、ズルシトール、アラビトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール等を挙げることができる。ある態様としてスクロース、ソルビトールであり、ある態様としてソルビトールである。
アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類としては、ある態様としてアルギニン、メチオニン、又はそれらの製薬学的に許容される塩、ソルビトール、スクロース、塩化ナトリウムであり、ある態様としてアルギニンである。
塩類としては、例えば、塩化ナトリウム等を挙げることができる。
糖又は糖アルコール類としては、例えば、スクロース、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、イノシトール、ズルシトール、アラビトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール等を挙げることができる。ある態様としてスクロース、ソルビトールであり、ある態様としてソルビトールである。
アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類としては、ある態様としてアルギニン、メチオニン、又はそれらの製薬学的に許容される塩、ソルビトール、スクロース、塩化ナトリウムであり、ある態様としてアルギニンである。
アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類は、１種又は２種以上適宜使用することができる。
なお、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の種類及び組み合わせは、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性に影響を及ぼさない、又は安定性を向上させるものであれば、特に制限されない。
本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体には、アルギニン、メチオニン、ソルビトール、スクロース、塩化ナトリウムが、特に光安定化に効果を示す。
アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の量は、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性に影響を及ぼさない、又は安定性を向上させる量であれば、特に制限されない。
例えば、溶媒により溶解され溶液状態（液体製剤）の場合の濃度として、１ｍｍｏｌ／Ｌ～４００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１００ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１００ｍｍｏｌ／Ｌ～２００ｍｍｏｌ／Ｌである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
なお、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の種類及び組み合わせは、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性に影響を及ぼさない、又は安定性を向上させるものであれば、特に制限されない。
本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体には、アルギニン、メチオニン、ソルビトール、スクロース、塩化ナトリウムが、特に光安定化に効果を示す。
アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の量は、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性に影響を及ぼさない、又は安定性を向上させる量であれば、特に制限されない。
例えば、溶媒により溶解され溶液状態（液体製剤）の場合の濃度として、１ｍｍｏｌ／Ｌ～４００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１００ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌ、ある態様として１００ｍｍｏｌ／Ｌ～２００ｍｍｏｌ／Ｌである。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の光安定化剤としては、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類が使用される。例えば、酢酸、クエン酸、リン酸、ヒスチジン、アルギニン、メチオニン、又はそれらの製薬学的に許容される塩、ソルビトール、スクロース、塩化ナトリウム等を挙げることができる。
本発明に用いられる非イオン性界面活性剤としては、製薬学的に許容され、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定化作用を有するものであれば、特に制限されない。
具体的には、前記非イオン性界面活性剤は、例えば、モノカプリル酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、及びモノパルミチン酸ソルビタンなどのソルビタン脂肪酸エステル；モノカプリル酸グリセロール、モノミリスチン酸グリセロール、及びモノステアリン酸グリセロールなどのグリセリン脂肪酸エステル；モノステアリン酸デカグリセリル、ジステアリン酸デカグリセリル、及びモノリノール酸デカグリセリルなどのポリグリセロール脂肪酸エステル；モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、及びトリステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル；テトラステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトール及びテトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトールなどのポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル；モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリルなどのポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル；ジステアリン酸ポリエチレングリコールなどのポリエチレングリコール脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンラウリルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル；ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンプロピルエーテル、及びポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテルなどのポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル；ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル；ポリオキシエチレンヒマシ油、及びポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油）などのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油；ポリオキシエチレンソルビトールミツロウなどのポリオキシエチレンミツロウ誘導体；ポリオキシエチレンラノリンなどのポリオキシエチレンラノリン誘導体；ポリオキシエチレン脂肪酸アミド、例えば、ポリオキシエチレンオクタデカンアミドなどの６～１８のHydrophilic-Lipophilic Balance（ＨＬＢ）を有する界面活性剤を含む。
非イオン性界面活性剤は、１種又は２種以上適宜使用することができる。
ある態様としてポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、又はポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルであり、ある態様としてポリソルベート２０、２１、４０、６０、６５、８０、８１、又は８５、並びにプルロニック型界面活性剤であり、ある態様としてポリソルベート２０及び８０、又はポロキサマー（ポロキサマー１８８）であり、ある態様としてポリソルベート８０であり、ある態様としてポロキサマー（ポロキサマー１８８）である。
なお、非イオン性界面活性剤は、不溶性異物又は／及び不溶性微粒子等の形成を抑制する作用を有しており、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を安定化する範囲内及び／又は安定化に影響を及ぼさない範囲内において、医薬組成物中に含まれる。
非イオン性界面活性剤の量は、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定化作用を有する量であれば、特に制限されない。
溶媒（例えば、注射用水）により溶解され溶液状態（液体製剤）の場合、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）、ある態様として０．０１％（ｗ／ｖ）～０．５％（ｗ／ｖ）、ある態様として０．０１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）であり、ある態様として０．０１％（ｗ／ｖ）～０．０３％（ｗ／ｖ）である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
非イオン性界面活性剤の量は、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の安定化作用を有する量であれば、特に制限されない。
溶媒（例えば、注射用水）により溶解され溶液状態（液体製剤）の場合、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）、ある態様として０．０１％（ｗ／ｖ）～０．５％（ｗ／ｖ）、ある態様として０．０１％（ｗ／ｖ）～０．１％（ｗ／ｖ）であり、ある態様として０．０１％（ｗ／ｖ）～０．０３％（ｗ／ｖ）である。なお、前記の上限と下限は、所望により、任意に組み合わせることができる。
本発明の医薬組成物は、溶液を容器に充填して、液体製剤として、また、溶液を凍結乾燥法や噴霧乾燥法により、凍結乾燥製剤又は噴霧乾燥製剤等の非経口医薬組成物として、提供することができる。好ましくは、液体製剤である。
本発明の医薬組成物には、所望により、懸濁剤、溶解補助剤、保存剤、吸着防止剤、含硫還元剤、酸化防止剤等の医薬品添加物を適宜添加することができる。
懸濁剤としては、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート等を挙げることができる。
溶解補助剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マグロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステル等を挙げることができる。
保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾール等を挙げることができる。
吸着防止剤としては、例えば、ヒト血清アルブミン、レシチン、デキストラン、エチレンオキサイド・プロピレンオキサイド共重合体、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール等を挙げることができる。
含硫還元剤としては、例えば、Ｎ－アセチルシステイン、Ｎ－アセチルホモシステイン、チオクト酸、チオジグリコール、チオエタノールアミン、チオグリセロール、チオソルビトール、チオグリコール酸及びその塩、チオ硫酸ナトリウム、グルタチオン、炭素原子数１～７のチオアルカン酸等のスルフヒドリル基を有するもの等を挙げることができる。
酸化防止剤としては、例えば、メチオニン、エリソルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、α－トコフェロール、酢酸トコフェロール、Ｌ－アスコルビン酸及びその塩、Ｌ－アスコルビン酸パルミテート、Ｌ－アスコルビン酸ステアレート、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリアミル、没食子酸プロピル、あるいはエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、ピロリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム等のキレート剤等を挙げることができる。
各種医薬品添加物は、本発明の所望の効果を達成できる量の範囲で、適宜適量使用することができる。例えば、液体製剤の浸透圧が、ヒトの血液と本質的に同じである２５０～３５０ｍОｓｍになるように調節することを目的として適宜適量使用することができる。また、例えば、医薬組成物が溶液状態（液体製剤）の場合、投与可能な粘度にすることを目的として適宜適量使用することができる。具体的には、後述の実施例１０に記載された測定方法に基づいて粘度測定をしたとき、１００ｃｐｓ又はそれ以下の粘度とすることを目的として適宜適量使用することができる。
本発明の医薬組成物の製造方法は、自体公知の製造方法により、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体、製薬学的に許容される緩衝剤を含有し、好ましくはアミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類、及び／又は非イオン性界面活性剤を更に含有し、ｐＨを５．０～７．０に調整する方法を含む。
また、本発明の医薬組成物の製造方法は、自体公知の製造方法により、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩を含有し、ｐＨを５．０～７．０に調整する方法を含む。
また、本発明の医薬組成物の製造方法は、自体公知の製造方法により、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩を含有し、ｐＨを５．０～７．０に調整する方法を含む。
本発明には、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する安定な医薬組成物の製造のための、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の、光安定化剤としての使用を含む。
また、本発明には、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する安定な医薬組成物の製造のための、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びに、アルギニン、メチオニン、スクロース、塩化ナトリウムの、光安定化剤としての使用を含む。
本発明の、光安定化剤としての使用で用いられる「安定」、「安定な医薬組成物」、「製薬学的に許容される緩衝剤」、「アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類」については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
本発明の、光安定化剤としての使用における各成分の配合量、配合方法等については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
本発明の、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩、アルギニン、メチオニン、スクロース、塩化ナトリウムの、光安定化剤としての使用では、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物を提供するにあたり、曝光による該抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物、又は多量体の生成を抑制することができる。
また、本発明には、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する安定な医薬組成物の製造のための、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びに、アルギニン、メチオニン、スクロース、塩化ナトリウムの、光安定化剤としての使用を含む。
本発明の、光安定化剤としての使用で用いられる「安定」、「安定な医薬組成物」、「製薬学的に許容される緩衝剤」、「アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類」については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
本発明の、光安定化剤としての使用における各成分の配合量、配合方法等については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
本発明の、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩、アルギニン、メチオニン、スクロース、塩化ナトリウムの、光安定化剤としての使用では、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物を提供するにあたり、曝光による該抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物、又は多量体の生成を抑制することができる。
本発明には、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物において、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類により、曝光による該抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる方法を含む。
また、本発明には、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物において、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩、アルギニン、メチオニン、スクロース、塩化ナトリウムにより、曝光による該抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる方法を含む。
曝光による本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる本発明の方法で用いられる「製薬学的に許容される緩衝剤」、「アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類」、「分解物」、「多量体」については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
曝光による本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる本発明の方法における各成分の配合量、配合方法等については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
また、本発明には、本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物において、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩、アルギニン、メチオニン、スクロース、塩化ナトリウムにより、曝光による該抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる方法を含む。
曝光による本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる本発明の方法で用いられる「製薬学的に許容される緩衝剤」、「アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類」、「分解物」、「多量体」については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
曝光による本発明に用いられる抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる本発明の方法における各成分の配合量、配合方法等については、本発明の医薬組成物における当該説明をそのまま適用することができる。
本発明の医薬組成物を充填する容器は、使用目的に応じて選択することができる。例えば、バイアル、アンプル、注射器のような規定容量の形状のもの、瓶のような大容量の形状のものを含む。ある態様として注射器（ディスポーザブル注射器を含む）を含む。該注射器に予め溶液を充填して、プレフィルドシリンジ液体製剤として提供することにより、医療現場において、溶解操作等の操作が不要となり、迅速な対応が可能となる。
容器の材質については、ガラス、プラスチック等が挙げられる。また、容器内の表面処理としては、シリカコート処理、シリコーンコート処理、サルファー処理、各種低アルカリ処理等が施されてもよい。
以下、参考例、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定解釈されるものではない。
《参考例：抗ヒトα９インテグリン抗体の作製》
本実施例で用いた抗ヒトα９インテグリン抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドの塩基配列を配列番号２に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号１に、抗ヒトα９インテグリン抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチドの塩基配列を配列番号４に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号３にそれぞれ示す。
本実施例で用いた抗ヒトα９インテグリン抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドの塩基配列を配列番号２に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号１に、抗ヒトα９インテグリン抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチドの塩基配列を配列番号４に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号３にそれぞれ示す。
国際公開第２００９／０８８０６４号に従い、該抗ヒトα９インテグリン抗体の重鎖が挿入されたＡＧ－γ１（ＷＯ９４／２０６３２）及び該抗ヒトα９インテグリン抗体の軽鎖が挿入されたＡＧ－κ（ＷＯ９４／２０６３２）を構築し、これらを連結した発現プラスミドを作製した。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを用いて該発現プラスミドを発現させ、プロテインＡカラムを用いて培養上清から精製抗体を取得した。なお、精製した抗ヒトα９インテグリン抗体のアミノ酸修飾を分析した結果、その大部分において重鎖Ｎ末端のピログルタミル化及び重鎖Ｃ末端側のリジンの欠失が生じていた。
《実施例１：至適ｐＨ選定による安定化効果》
参考例で製造した抗ヒトα９インテグリン抗体濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように、表１に示す緩衝液で希釈調製した処方液（試料Ｎｏ．Ａ－１～Ａ－７）を、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、正置状態で４０℃１箇月間の保存、及び、表１に示す緩衝液で希釈調製した処方液のうち、試料Ｎｏ．Ａ－１、２、３、６、７についてＤ６５ランプ１０００ｌｕｘ・４８時間の曝光を実施した。なお、Ｄ６５ランプで曝光したサンプルは対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
参考例で製造した抗ヒトα９インテグリン抗体濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように、表１に示す緩衝液で希釈調製した処方液（試料Ｎｏ．Ａ－１～Ａ－７）を、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、正置状態で４０℃１箇月間の保存、及び、表１に示す緩衝液で希釈調製した処方液のうち、試料Ｎｏ．Ａ－１、２、３、６、７についてＤ６５ランプ１０００ｌｕｘ・４８時間の曝光を実施した。なお、Ｄ６５ランプで曝光したサンプルは対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ測定は、ＨＰＬＣシステムに、ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（５μｍ；７．８ｍｍ×３００ｍｍ、東ソー製）を接続し、５０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸／３００ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム（ｐＨ６．８）の組成の移動相を０．５ｍＬ／分の流速で流した。測定サンプルの濃度は１０ｍｇ／ｍＬとし、注入量４００μｇの条件にて分析した。カラム温度は２５℃に設定し、ＵＶ測定の波長は２８０ｎｍを用いた。
ＳＥ－ＨＰＬＣ測定で検出されたピークの面積を測定し、メインピークを含む全ピーク面積の総和で除することにより、百分率（％）として計算した。なお、メインピークとは、活性本体ピークを意味する。
ＳＥ－ＨＰＬＣのメインピークより保持時間が短いピークを合わせて多量体量、保持時間が長いピークを合わせて分解物量とした。また、多量体及び分解物の総称を不純物と規定したとき、多量体量及び分解物量の総和を不純物量とした。結果を図１～図４に示す。
本抗ヒトα９インテグリン抗体はｐＨ５．０～７．０付近で製剤化することで、多量体、分解物の生成が抑制されることが示された。
ＳＥ－ＨＰＬＣ測定で検出されたピークの面積を測定し、メインピークを含む全ピーク面積の総和で除することにより、百分率（％）として計算した。なお、メインピークとは、活性本体ピークを意味する。
ＳＥ－ＨＰＬＣのメインピークより保持時間が短いピークを合わせて多量体量、保持時間が長いピークを合わせて分解物量とした。また、多量体及び分解物の総称を不純物と規定したとき、多量体量及び分解物量の総和を不純物量とした。結果を図１～図４に示す。
本抗ヒトα９インテグリン抗体はｐＨ５．０～７．０付近で製剤化することで、多量体、分解物の生成が抑制されることが示された。
《実施例２：緩衝剤成分の選定による安定化効果》
表２に、参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸（ｐＨ６．０）、又は２０ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン（ｐＨ６．０））を含む処方（試料Ｎｏ．Ｂ－１～Ｂ－３）を示す。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。当該緩衝液で希釈調製した処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、正置状態で４０℃１箇月間、及びＤ６５ランプ１０００ｌｕｘ・４８時間の曝光を実施した。なお、Ｄ６５ランプで曝光したサンプルは対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
表２に、参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸（ｐＨ６．０）、又は２０ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン（ｐＨ６．０））を含む処方（試料Ｎｏ．Ｂ－１～Ｂ－３）を示す。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。当該緩衝液で希釈調製した処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、正置状態で４０℃１箇月間、及びＤ６５ランプ１０００ｌｕｘ・４８時間の曝光を実施した。なお、Ｄ６５ランプで曝光したサンプルは対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性（多量体量、分解物量）を評価した。結果を図５～図７に示す。
多量体量、分解物量はＳＥ－ＨＰＬＣ法により、実施例１と同様にして分析した。
４０℃１箇月間及びＤ６５ランプ照射下で保存したサンプルの中では、ヒスチジンが最も多量体の生成を抑制した。また、クエン酸及びリン酸を含むサンプルはいずれも安定であった。
多量体量、分解物量はＳＥ－ＨＰＬＣ法により、実施例１と同様にして分析した。
４０℃１箇月間及びＤ６５ランプ照射下で保存したサンプルの中では、ヒスチジンが最も多量体の生成を抑制した。また、クエン酸及びリン酸を含むサンプルはいずれも安定であった。
《実施例３：緩衝剤成分の選定による長期曝光後の安定化効果》
表３に、参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、緩
衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン（ｐＨ６．０）、１００ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌコハク酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌ ２－モルホリノエタンスルホン酸（以下、ＭＥＳと称する）（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酒石酸（ｐＨ６．０））を含む処方（試料Ｎｏ．Ｂ－４～Ｂ－１０）を示す。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。当該緩衝液で希釈調製した処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、０．５ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、Ｄ６５ランプ１０００ｌｕｘ・１６８時間の曝光を実施した。なお、対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
表３に、参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、緩
衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン（ｐＨ６．０）、１００ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌコハク酸（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌ ２－モルホリノエタンスルホン酸（以下、ＭＥＳと称する）（ｐＨ６．０）、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酒石酸（ｐＨ６．０））を含む処方（試料Ｎｏ．Ｂ－４～Ｂ－１０）を示す。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。当該緩衝液で希釈調製した処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、０．５ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、Ｄ６５ランプ１０００ｌｕｘ・１６８時間の曝光を実施した。なお、対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体の安定性（多量体量）を評価した。結果を図８に示す。多量体量はＳＥ－ＨＰＬＣ法により、実施例１と同様にして分析した。
検証した緩衝剤種のうち、ヒスチジンが最も多量体の生成を抑制した。また、ヒスチジンの濃度が高い程、より多量体の生成を抑制した。
検証した緩衝剤種のうち、ヒスチジンが最も多量体の生成を抑制した。また、ヒスチジンの濃度が高い程、より多量体の生成を抑制した。
《実施例４：アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の選定による安定化効果》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、クエン酸を２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）含む処方に、添加剤無しあるいはアルギニン（２０ｍｍｏｌ／Ｌ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ、又は２００ｍｍｏｌ／Ｌ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／Ｌ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ、又は２００ｍｍｏｌ／Ｌ）、メチオニン（１０ｍｍｏｌ／Ｌ、２０ｍｍｏｌ／Ｌ、又は１００ｍｍｏｌ／Ｌ）、ソルビトール（２００ｍｍｏｌ／Ｌ）、又はスクロース（２００ｍｍｏｌ／Ｌ）を添加した。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、正置状態で４０℃１箇月間の保存を実施した。
また、アルギニン、メチオニン、塩化ナトリウム、ソルビトール、又はスクロースを含むサンプルについては、Ｄ６５ランプ１０００ｌｕｘ・４８時間の曝光を実施した。なお、Ｄ６５ランプで保存したサンプルは対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、クエン酸を２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）含む処方に、添加剤無しあるいはアルギニン（２０ｍｍｏｌ／Ｌ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ、又は２００ｍｍｏｌ／Ｌ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ、２０ｍｍｏｌ／Ｌ、１００ｍｍｏｌ／Ｌ、又は２００ｍｍｏｌ／Ｌ）、メチオニン（１０ｍｍｏｌ／Ｌ、２０ｍｍｏｌ／Ｌ、又は１００ｍｍｏｌ／Ｌ）、ソルビトール（２００ｍｍｏｌ／Ｌ）、又はスクロース（２００ｍｍｏｌ／Ｌ）を添加した。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつガラスバイアル（３ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、正置状態で４０℃１箇月間の保存を実施した。
また、アルギニン、メチオニン、塩化ナトリウム、ソルビトール、又はスクロースを含むサンプルについては、Ｄ６５ランプ１０００ｌｕｘ・４８時間の曝光を実施した。なお、Ｄ６５ランプで保存したサンプルは対照サンプルとして、アルミホイルで包む方法により遮光したサンプルも保存し、安定性を評価した。
多量体量はＳＥ－ＨＰＬＣ法により、実施例１と同様にして分析した。
結果を図９～図１４に示す。
検討したアルギニン、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、メチオニン、ソルビトール、又はスクロースは、抗ヒトα９インテグリン抗体を４０℃保存条件において安定化させるか、又は安定性に影響を及ぼさなかった。
アルギニン、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、メチオニン、ソルビトール、又はスクロースについては、光に対しても安定化効果を示すか、又は光に対して安定であった。
結果を図９～図１４に示す。
検討したアルギニン、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、メチオニン、ソルビトール、又はスクロースは、抗ヒトα９インテグリン抗体を４０℃保存条件において安定化させるか、又は安定性に影響を及ぼさなかった。
アルギニン、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、メチオニン、ソルビトール、又はスクロースについては、光に対しても安定化効果を示すか、又は光に対して安定であった。
《実施例５：非イオン性界面活性剤の添加による安定化効果》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ含む処方に、非イオン性界面活性剤であるポリソルベート８０を０、０．００５、０．０１、０．０２、０．０５、又は０．１ｗ／ｖ％でそれぞれ添加した。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、４．４ｍＬずつガラスバイアル（１０ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、振盪、凍結融解ストレスに対する物理的安定性を評価した。
振盪試験は、水平に置いたガラスバイアルを１５０ｒｐｍで２４時間振盪した。
凍結融解ストレス試験は、サンプルを正置状態で－８０℃の冷凍庫内に保存し凍結させた後、サンプルを冷凍庫から取り出し、５℃の冷蔵庫内に正置状態で保存し、融解させた。この凍結融解サイクルを３回繰り返すことにより行った。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ含む処方に、非イオン性界面活性剤であるポリソルベート８０を０、０．００５、０．０１、０．０２、０．０５、又は０．１ｗ／ｖ％でそれぞれ添加した。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、４．４ｍＬずつガラスバイアル（１０ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、振盪、凍結融解ストレスに対する物理的安定性を評価した。
振盪試験は、水平に置いたガラスバイアルを１５０ｒｐｍで２４時間振盪した。
凍結融解ストレス試験は、サンプルを正置状態で－８０℃の冷凍庫内に保存し凍結させた後、サンプルを冷凍庫から取り出し、５℃の冷蔵庫内に正置状態で保存し、融解させた。この凍結融解サイクルを３回繰り返すことにより行った。
光遮蔽粒子計数法による評価結果を図１５及び図１６に示す。
光遮蔽粒子計数法は、液中パーティクルカウンター（ＨＩＡＣラボ型液中パーティクルカウンター）を用いて測定した。測定サンプルの濃度は１０ｍｇ／ｍＬとし、７５Ｔｏｒｒ、２５℃にて２時間静置条件にて脱気した後、注入量０．２ｍＬの条件にて分析した。
光遮蔽粒子計数法で検出された粒子径１．２μｍ以上の不溶性微粒子数を測定し、１ｍＬ換算値として計算した。
抗ヒトα９インテグリン抗体は非イオン性界面活性剤ポリソルベート８０含有製剤中において凍結融解、振盪による不溶性微粒子の生成が抑制されることが示された。
光遮蔽粒子計数法は、液中パーティクルカウンター（ＨＩＡＣラボ型液中パーティクルカウンター）を用いて測定した。測定サンプルの濃度は１０ｍｇ／ｍＬとし、７５Ｔｏｒｒ、２５℃にて２時間静置条件にて脱気した後、注入量０．２ｍＬの条件にて分析した。
光遮蔽粒子計数法で検出された粒子径１．２μｍ以上の不溶性微粒子数を測定し、１ｍＬ換算値として計算した。
抗ヒトα９インテグリン抗体は非イオン性界面活性剤ポリソルベート８０含有製剤中において凍結融解、振盪による不溶性微粒子の生成が抑制されることが示された。
《実施例６：ヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート８０を含む処方の安定性評価検討》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ、ポリソルベート８０を０．０２ｗ／ｖ％含む処方液を、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、４．４ｍＬずつガラスバイアル（１０ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、振盪、凍結融解、光、－２０℃、５℃及び２５℃保存時における安定性をＳＥ－ＨＰＬＣ法、陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥ－ＨＰＬＣ法）、光遮蔽粒子計数法で評価した。
振盪、凍結融解ストレス試験は実施例５と同様にして行った。
光安定性試験は実施例２と同様にして行った。
－２０℃、５℃及び２５℃保存時における安定性試験は実施例１と同様にして行った。
なお、所定のｐＨ（ｐＨ６．０）となるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１０ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ、ポリソルベート８０を０．０２ｗ／ｖ％含む処方液を、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、４．４ｍＬずつガラスバイアル（１０ｍＬ容量）に充填し、ゴム栓で打栓を行い、振盪、凍結融解、光、－２０℃、５℃及び２５℃保存時における安定性をＳＥ－ＨＰＬＣ法、陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥ－ＨＰＬＣ法）、光遮蔽粒子計数法で評価した。
振盪、凍結融解ストレス試験は実施例５と同様にして行った。
光安定性試験は実施例２と同様にして行った。
－２０℃、５℃及び２５℃保存時における安定性試験は実施例１と同様にして行った。
なお、所定のｐＨ（ｐＨ６．０）となるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして、光遮蔽粒子計数法は実施例５と同様にして測定した。
ＣＥ－ＨＰＬＣ測定は、ＨＰＬＣシステムに、ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ－１０カラム（１０μｍ；４ｍｍ×２５０ｍｍ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を接続し、移動相Ａ：２０ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ（２－（Ｎ－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）ｐＨ６．０、移動相Ｂ：２０ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ／５００ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムｐＨ６．０の組成の移動相を０．５ｍＬ／分の流速で表４に示すグラジエント条件にて流した。測定サンプルの濃度は１ｍｇ／ｍＬとし、注入量１０μｇの条件にて分析した。カラム温度は４０℃に設定し、ＵＶ測定の波長は２８０ｎｍを用いた。
ＣＥ－ＨＰＬＣ測定は、ＨＰＬＣシステムに、ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ－１０カラム（１０μｍ；４ｍｍ×２５０ｍｍ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を接続し、移動相Ａ：２０ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ（２－（Ｎ－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）ｐＨ６．０、移動相Ｂ：２０ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ／５００ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムｐＨ６．０の組成の移動相を０．５ｍＬ／分の流速で表４に示すグラジエント条件にて流した。測定サンプルの濃度は１ｍｇ／ｍＬとし、注入量１０μｇの条件にて分析した。カラム温度は４０℃に設定し、ＵＶ測定の波長は２８０ｎｍを用いた。
ＣＥ－ＨＰＬＣ測定で検出されたピークの面積を測定し、ピーク１（メインピーク）を含む全ピーク面積の総和で除することにより、百分率（％）として計算した。なお、メインピークとは、活性本体が示す最大面積のピークを意味する。
ＣＥ－ＨＰＬＣで検出されるピークの内、保存中の変動が大きいピークを特定しピーク２、ピーク３とした。
結果を表５及び表６に示す。
当該処方は安定であった。
ＣＥ－ＨＰＬＣで検出されるピークの内、保存中の変動が大きいピークを特定しピーク２、ピーク３とした。
結果を表５及び表６に示す。
当該処方は安定であった。
《実施例７：ヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート８０を含む高濃度液体製剤の安定性評価検討》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ、ポリソルベート８０を０．０２ｗ／ｖ％含む処方において、ｐＨを５．０、５．５、６．０の３水準に調節した。処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、０．４ｍＬあるいは０．３ｍＬずつマイクロチューブに充填した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ、ポリソルベート８０を０．０２ｗ／ｖ％含む処方において、ｐＨを５．０、５．５、６．０の３水準に調節した。処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、０．４ｍＬあるいは０．３ｍＬずつマイクロチューブに充填した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
２５℃１箇月間保存時における安定性をＳＥ－ＨＰＬＣ法で評価した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定した。
結果を図１７～図１９に示す。
いずれのｐＨにおいても安定であった。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定した。
結果を図１７～図１９に示す。
いずれのｐＨにおいても安定であった。
《実施例８：アミノ酸類、糖又は糖アルコール類の選定による高濃度液体製剤の安定化効果》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）含む処方に、メチオニンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ、ソルビトールを２８０ｍｍｏｌ／Ｌ、スクロースを２８０ｍｍｏｌ／Ｌ、又はアルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ添加したサンプルをそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、０．４ｍＬあるいは０．３ｍＬずつマイクロチューブに充填した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）含む処方に、メチオニンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ、ソルビトールを２８０ｍｍｏｌ／Ｌ、スクロースを２８０ｍｍｏｌ／Ｌ、又はアルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ添加したサンプルをそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、０．４ｍＬあるいは０．３ｍＬずつマイクロチューブに充填した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
２５℃１箇月間保存時における安定性をＳＥ－ＨＰＬＣ法で評価した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定した。
結果を図２０～図２２に示す。
いずれの医薬品添加物を含む製剤も、安定であった。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定した。
結果を図２０～図２２に示す。
いずれの医薬品添加物を含む製剤も、安定であった。
《実施例９：非イオン性界面活性剤の添加による高濃度液体製剤の安定化効果》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ含む処方に、非イオン性界面活性剤である、ポリソルベート８０又はポロキサマー１８８を０．０２ｗ／ｖ％を添加した処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．２ｍＬずつ３ｍＬのガラスバイアルに充填した。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ６．０）、アルギニンを１４０ｍｍｏｌ／Ｌ含む処方に、非イオン性界面活性剤である、ポリソルベート８０又はポロキサマー１８８を０．０２ｗ／ｖ％を添加した処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．２ｍＬずつ３ｍＬのガラスバイアルに充填した。なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
振盪、凍結融解ストレスに対する物理的安定性を評価した。
振盪試験および凍結融解ストレス試験は、実施例５と同様にして実施した。
光遮蔽粒子計数法による評価結果を図２３及び図２４に示す。
光遮蔽粒子計数法は、実施例５と同様にして測定した。
ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８ともに不溶性微粒子の生成を抑制した。
振盪試験および凍結融解ストレス試験は、実施例５と同様にして実施した。
光遮蔽粒子計数法による評価結果を図２３及び図２４に示す。
光遮蔽粒子計数法は、実施例５と同様にして測定した。
ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８ともに不溶性微粒子の生成を抑制した。
《実施例１０：ヒスチジン、アルギニン、ポロキサマー１８８を含む高濃度液体製剤の安定性評価検討》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを９０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ５．８）、アルギニンを２４０ｍｍｏｌ／Ｌ、ポロキサマー１８８を０．０２ｗ／ｖ％含む処方において、処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつ３ｍＬのガラスバイアルに充填し、ゴム栓で打栓した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬ、ヒスチジンを９０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ５．８）、アルギニンを２４０ｍｍｏｌ／Ｌ、ポロキサマー１８８を０．０２ｗ／ｖ％含む処方において、処方液をそれぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつ３ｍＬのガラスバイアルに充填し、ゴム栓で打栓した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
５℃、２５℃３箇月間保存時における安定性をＳＥ－ＨＰＬＣ法で評価した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定した。
粘度測定は、落球式粘度計（Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｍｉｃｒｏ Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）にキャピラリー（内径１．２ｍｍ、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を接続し、金属製ボール（直径１．０ｍｍ、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を落球させることで測定した。キャピラリー温度は２０℃、測定角度は７０°、密度は１．０００００ｇ／ｃｍ３に設定し密度測定を行った。
結果を表７に示す。
いずれの抗体濃度においても当該処方は安定であった。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定した。
粘度測定は、落球式粘度計（Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｍｉｃｒｏ Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）にキャピラリー（内径１．２ｍｍ、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を接続し、金属製ボール（直径１．０ｍｍ、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ製）を落球させることで測定した。キャピラリー温度は２０℃、測定角度は７０°、密度は１．０００００ｇ／ｃｍ３に設定し密度測定を行った。
結果を表７に示す。
いずれの抗体濃度においても当該処方は安定であった。
《実施例１１：ヒスチジン、アルギニン、ポロキサマー１８８を含む高濃度液体製剤の安定性評価検討》
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を含む、表８に示す処方液を、それぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつ３ｍＬのガラスバイアルに充填し、ゴム栓で打栓した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
参考例で得た抗ヒトα９インテグリン抗体を含む、表８に示す処方液を、それぞれ、０．２２μｍフィルターで滅菌ろ過後、１．３ｍＬずつ３ｍＬのガラスバイアルに充填し、ゴム栓で打栓した。
なお、所定のｐＨとなるよう、必要に応じてｐＨ調節剤として、緩衝液調製時に塩酸及び／又は水酸化ナトリウムを添加した。
２５℃３箇月間保存時における安定性をＳＥ－ＨＰＬＣ法及びＣＥ－ＨＰＬＣ法で評価した。
統計解析はＪＭＰ－１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．製）を用いて解析を行った。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定し、多量体量及び分解物量を測定した。ＣＥ－ＨＰＬＣ法は実施例６と同様にして測定し、メインピークの量を測定した。
結果を図２５～図２７に示す。実線は得られたデータに基づいた統計解析により予測される値を、実線の上下の点線は統計解析により予測される値の幅を表す。
当該処方は抗体濃度２００ｍｇ／ｍＬにおいて、いずれのヒスチジン濃度、アルギニン濃度においても安定であった。
統計解析はＪＭＰ－１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．製）を用いて解析を行った。
ＳＥ－ＨＰＬＣ法は実施例１と同様にして測定し、多量体量及び分解物量を測定した。ＣＥ－ＨＰＬＣ法は実施例６と同様にして測定し、メインピークの量を測定した。
結果を図２５～図２７に示す。実線は得られたデータに基づいた統計解析により予測される値を、実線の上下の点線は統計解析により予測される値の幅を表す。
当該処方は抗体濃度２００ｍｇ／ｍＬにおいて、いずれのヒスチジン濃度、アルギニン濃度においても安定であった。
本発明によれば、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる、安定な医薬組成物、詳細には、多量体、分解物、不溶性異物、不溶性微粒子の生成を抑制してなる、抗ヒトα９インテグリン抗体を含有してなる、安定な医薬組成物を提供することができる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変法や改良は本発明の範囲に含まれる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変法や改良は本発明の範囲に含まれる。
配列表の配列番号１で表されるアミノ配列は、抗ヒトα９インテグリン抗体の重鎖のアミノ酸配列である。
同配列番号２で表される塩基配列は、抗ヒトα９インテグリン抗体の重鎖遺伝子の塩基配列である。
同配列番号３で表されるアミノ配列は、抗ヒトα９インテグリン抗体の軽鎖のアミノ酸配列である。
同配列番号４で表される塩基配列は、抗ヒトα９インテグリン抗体の軽鎖遺伝子の塩基配列である。
同配列番号２で表される塩基配列は、抗ヒトα９インテグリン抗体の重鎖遺伝子の塩基配列である。
同配列番号３で表されるアミノ配列は、抗ヒトα９インテグリン抗体の軽鎖のアミノ酸配列である。
同配列番号４で表される塩基配列は、抗ヒトα９インテグリン抗体の軽鎖遺伝子の塩基配列である。
Claims (20)
- 抗ヒトα９インテグリン抗体、製薬学的に許容される緩衝剤を含有し、ｐＨが５．０～７．０である、医薬組成物であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、医薬組成物。 - 製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
- 製薬学的に許容される緩衝剤が、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩である、請求項１又は２の医薬組成物。
- 製薬学的に許容される緩衝剤の濃度が、１ｍｍｏｌ／Ｌ～３００ｍｍｏｌ／Ｌである、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 更にアミノ酸類、塩類、糖及び糖アルコール類からなる群より選択される１種又は２種以上を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類が、メチオニン、アルギニン、グリシン、リシン、及びオルニチン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩、塩化ナトリウム、スクロース、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、イノシトール、ズルシトール、アラビトール、イソマルト、ラクチトール、並びにマルチトールからなる群より選択される１種又は２種以上である、請求項５に記載の医薬組成物。
- アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類がアルギニンである、請求項５又は６の医薬組成物。
- アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の濃度が、１ｍｍｏｌ／Ｌ～４００ｍｍｏｌ／Ｌである、請求項５～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 更に非イオン性界面活性剤を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート８０及び／又はポロキサマー１８８である、請求項９に記載の医薬組成物。
- 非イオン性界面活性剤の濃度が、０．００１％（ｗ／ｖ）～１％（ｗ／ｖ）である、請求項９又は１０の医薬組成物。
- 抗ヒトα９インテグリン抗体の濃度が１ｍｇ／ｍＬ～１０００ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 医薬組成物が液体製剤又は凍結乾燥製剤である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 医薬組成物が液体製剤である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 抗ヒトα９インテグリン抗体、ヒスチジン又はその製薬学的に許容される塩を含有し、ｐＨが５．０～７．０である、医薬組成物であって
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、医薬組成物。 - 抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾が重鎖Ｎ末端のピログルタミル化及び重鎖Ｃ末端のリジン欠失である、請求項１又は１５の医薬組成物。
- 抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する安定な医薬組成物の製造のための、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類の、光安定化剤としての使用であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、使用。 - 製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、請求項１７に記載の使用。
- 抗ヒトα９インテグリン抗体を含有する医薬組成物において、製薬学的に許容される緩衝剤、アミノ酸類、塩類、糖又は糖アルコール類により、曝光による抗ヒトα９インテグリン抗体の分解物又は多量体の生成を抑制させる方法であって、
該抗ヒトα９インテグリン抗体は、
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号３に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトα９インテグリン抗体、並びに
（２）（１）の抗ヒトα９インテグリン抗体の翻訳後修飾により生じた抗体
からなる群より選択される、方法。 - 製薬学的に許容される緩衝剤が、酢酸、クエン酸、リン酸、及びヒスチジン、並びにそれらの製薬学的に許容される塩からなる群より選択される１種又は２種以上である、請求項１９に記載の方法。
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-
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| JP2022526490A (ja) * | 2019-05-17 | 2022-05-25 | 通化▲東▼宝葯▲業▼股▲フン▼有限公司 | 安定なセクキヌマブ注射剤及びその製造方法 |
| JP7196333B2 (ja) | 2019-05-17 | 2022-12-26 | 通化▲東▼宝葯▲業▼股▲フン▼有限公司 | 安定なセクキヌマブ注射剤及びその製造方法 |
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