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WO2018131924A1 - 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 및 이를 유효성분으로 함유하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 및 이를 유효성분으로 함유하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

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Publication number
WO2018131924A1
WO2018131924A1 PCT/KR2018/000602 KR2018000602W WO2018131924A1 WO 2018131924 A1 WO2018131924 A1 WO 2018131924A1 KR 2018000602 W KR2018000602 W KR 2018000602W WO 2018131924 A1 WO2018131924 A1 WO 2018131924A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
formula
carbon atoms
compound
substituted
mmol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2018/000602
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
정병선
김정애
장재훈
남태규
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Research Cooperation Foundation of Yeungnam University
Original Assignee
Research Cooperation Foundation of Yeungnam University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Research Cooperation Foundation of Yeungnam University filed Critical Research Cooperation Foundation of Yeungnam University
Publication of WO2018131924A1 publication Critical patent/WO2018131924A1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4402—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 2, e.g. pheniramine, bisacodyl

Definitions

  • the present invention relates to a pyridineol derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases containing the same as an active ingredient.
  • T cells are one of the cell populations that play a central role in the immune system, a biological defense system against various pathogens.
  • T cells are produced by the human thymus and undergo a series of differentiation processes to differentiate into unique T cells.
  • T cells that have completed differentiation are classified into CD8 T cells and CD4 T cells according to their function.
  • CD4 T cells are differentiated in detail according to environmental factors. The most representative ones are Th1, Th2, Th17 and Treg cells.
  • Th1 cells are involved in cell mediated immunity
  • Th2 cells are involved in humoral immunity
  • Th17 cells are involved in infectious and inflammatory diseases
  • Treg cells suppress immunity to maintain homeostasis.
  • these cell populations are balanced against each other so that they are not activated with each other.
  • immune diseases can be attributed to the imbalance between these immune cells.
  • abnormally increased activity of Th1 and Th17 cells may cause autoimmune diseases
  • abnormally increased activity of Th2 cells is known to cause immune diseases due to hypersensitivity.
  • Excessive immune suppression of Treg cells can also cause cancer.
  • Treg cells have the property of controlling the inflammatory response by inhibiting the function of abnormally activated immune cells. Many experiments have been reported to treat immune diseases through the action of increasing the activity of Treg cells.
  • Th1 cells and Th17 cells have been found to be involved in the forefront of the inflammatory response seen in immune diseases, maximizing the signal of the inflammatory response and accelerating disease progression. Therefore, in the case of autoimmune diseases that are not controlled by Treg cells among autoimmune diseases, development of therapeutic agents for autoimmune diseases that target inhibition of Th1 and Th17 cell activities has been highlighted.
  • immunosuppressive agents are immunosuppressants that block the signal transduction pathways in T cells. These immunosuppressive agents are toxic, infection, lymphoma, diabetes, tremor, headache, diarrhea, high blood pressure, nausea. Or side effects such as renal failure occurs.
  • the present inventors have completed the present invention by confirming that a pyridinol derivative of a specific structure or a pharmaceutically acceptable salt thereof has an excellent autoimmune disease treatment effect.
  • an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of autoimmune diseases containing pyridinol derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of autoimmune diseases comprising a compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl having 1 to 8 carbons
  • R 5 is hydrogen; halogen; Alkyl having 1 to 8 carbon atoms; -Si (R 6 ) 3 ; And it is any one selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms,
  • alkyl of 1 to 8 carbon atoms or aryl of 6 to 18 carbon atoms of R 5 are each independently substituted or unsubstituted with alkyl of 1 to 8 carbon atoms or aryl of 6 to 18 carbon atoms,
  • R 6 is hydrogen, alkyl having 1 to 8 carbons; And it is any one selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms,
  • R 1 is hydrogen; Sulfonyl; Carbonyl; Alkyl having 1 to 12 carbon atoms; And it is any one selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms,
  • the sulfonyl or carbonyl of R 1 may be each independently substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 8 carbon atoms; And one or more substituents selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms unsubstituted or substituted with alkyl or halogen having 1 to 8 carbon atoms,
  • the alkyl of 1 to 12 carbon atoms or aryl of 6 to 18 carbon atoms of R 1 are each independently halogen; -NO 2 ; Alkyl having 1 to 8 carbon atoms which is unsubstituted or substituted with halogen; Alkoxy having 1 to 8 carbon atoms which is unsubstituted or substituted with halogen; And substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms unsubstituted or substituted with alkyl or halogen of 1 to 8 carbon atoms,
  • L represents -O- or a linking group represented by the following Chemical Formula 2 or 3,
  • Q is O or S
  • P is -NH- or -O-
  • Z is a single bond or -NH-.
  • the present invention provides a method for preventing or treating autoimmune diseases, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and preventing autoimmune diseases.
  • a novel use of a compound represented by formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of a pharmaceutical composition for treatment comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and preventing autoimmune diseases.
  • a novel use of a compound represented by formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of a pharmaceutical composition for treatment comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and preventing autoimmune diseases.
  • a novel use of a compound represented by formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of a pharmaceutical composition for treatment comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of
  • the pyridinol derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof according to the present invention can inhibit the secretion of cytokines that exacerbate autoimmune diseases, and inhibit the autoimmune disease-induced cell differentiation that produces the cytokines.
  • the derivative may be usefully used as a medicament for the prevention or treatment of autoimmune diseases.
  • Figure 1 shows inhibition of Th1 and Th17 differentiation, inhibition of inflammatory cytokines secreted from T cells, IFN-g, IL-17, IL-4, IL-5 and IL-13, and no effect on Treg, an immunosuppressive T cell.
  • FACS data showing no giving and CBA result data for cytokine measurements.
  • FIG. 2 is a graph showing the results of testing the degree of cell division and cytotoxicity by decreasing the concentration of CFSE color by stimulating TSE-colored T cells.
  • Figure 3 is a graph confirming the effect of the drug in the process of inducing neurological autoimmune disease, and the Th1 and Th17 cells isolated from each organ of the mouse (spleen, lymph nodes, central nervous system) is a graph analyzed by FACS flow cytometry.
  • Figure 4 is a graph of the effect and cytotoxicity of the drug on the initial activity and division of T cells in vitro T cell stimulation test using antibodies.
  • Figure 6 is a graph of the results of confirming the effect of the drug in an animal model inducing autoimmune diseases using MOG antigen and the Th1 and Th17 cells isolated from each organ (brain, spinal cord, lymph nodes) of the mouse by FACS flow cytometry. .
  • T cell transplanted animal which is isolated from the T-cells induced autoimmune disease using MOG antigen and amplified in vitro, and transplanted into normal mice to induce inflammatory T cells to induce autoimmune diseases.
  • the result of confirming the effect of the drug to suppress the progression of the disease the graph of the analysis of the increase of Th1 and Th17 cells by flow cytometry.
  • the present invention provides a compound represented by Formula 1 below (compound 1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl having 1 to 8 carbons
  • R 5 is hydrogen; halogen; Alkyl having 1 to 8 carbon atoms; -Si (R 6 ) 3 ; And it is any one selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms,
  • alkyl of 1 to 8 carbon atoms or aryl of 6 to 18 carbon atoms of R 5 are each independently substituted or unsubstituted with alkyl of 1 to 8 carbon atoms or aryl of 6 to 18 carbon atoms,
  • R 6 is hydrogen, alkyl having 1 to 8 carbons; And it is any one selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms,
  • R 1 is hydrogen; Sulfonyl; Carbonyl; Alkyl having 1 to 12 carbon atoms; And it is any one selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms,
  • the sulfonyl or carbonyl of R 1 may be each independently substituted or unsubstituted alkyl having 1 to 8 carbon atoms; And one or more substituents selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms unsubstituted or substituted with alkyl or halogen having 1 to 8 carbon atoms,
  • the alkyl of 1 to 12 carbon atoms or aryl of 6 to 18 carbon atoms of R 1 are each independently halogen; -NO 2 ; Alkyl having 1 to 8 carbon atoms which is unsubstituted or substituted with halogen; Alkoxy having 1 to 8 carbon atoms which is unsubstituted or substituted with halogen; And substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from the group consisting of aryl having 6 to 18 carbon atoms unsubstituted or substituted with alkyl or halogen of 1 to 8 carbon atoms,
  • L represents -O- or a linking group represented by the following Chemical Formula 2 or 3,
  • Q is O or S
  • P is -NH- or -O-
  • Z may be a single bond or -NH-.
  • the compound of Formula 1 may be referred to as a pyridinol derivative.
  • Alkyl refers to a straight, branched or cyclic saturated hydrocarbon having the specified number of carbon atoms unless otherwise indicated.
  • Halogen refers to fluoro (F), chloro (Cl), bromo (Br) or iodo (I).
  • Aryl means monovalent and divalent aromatic groups each containing a 5-membered and 6-membered monocyclic aromatic group, unless otherwise noted.
  • a “pharmaceutical composition” is a compound according to the present invention or a mixture of physiological / pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof, together with other chemical components such as physiologically / pharmaceutically acceptable carriers and excipients.
  • a pharmaceutical composition is to facilitate administration of a compound to an organism.
  • Prodrugs may act as prodrugs.
  • Prodrug refers to a substance that is converted into the parent drug in the body. Prodrugs are often useful because, in some cases, they are easier to administer than the parent drug. For example, prodrugs may be bioavailable upon oral administration, even if the parent drug is not bioavailable upon oral administration. Prodrugs may also exhibit improved solubility over the parent drug in pharmaceutical compositions.
  • a “physiologically / pharmaceutically acceptable carrier” refers to a carrier or diluent that does not cause significant irritation to the organism and does not eliminate the biological activity and properties of the administered compound.
  • Physiologically / pharmaceutically acceptable excipient refers to a stable substance added to make administration of the compound easier.
  • excipients include calcium carbonate, calcium phosphate, various sugar and starch varieties, cellulose derivatives, gelatin, vegetable oils and polyethylene glycols.
  • Treating refers to a method of alleviating or eliminating a disease or accompanying symptoms in accordance with the present invention.
  • Organism or “subject” means all living beings composed of at least one cell. Living organisms can be as simple as eukaryotic single cells, but complex to mammals, including humans.
  • a “therapeutically effective amount” means the amount of an active ingredient or pharmaceutical composition that induces a biological or medical response in a tissue system, animal or human, as contemplated by a researcher, veterinarian, physician or other clinician, which may be Amounts that induce alleviation of the symptoms of the disorder.
  • R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl having 1 to 4 carbon atoms
  • R 5 is hydrogen; Alkyl having 1 to 4 carbon atoms unsubstituted or substituted with aryl having 6 to 12 carbon atoms; And -Si (R 6 ) 3 , which is selected from the group consisting of
  • R 6 is alkyl having 1 to 6 carbon atoms or aryl having 6 to 12 carbon atoms
  • L is -O-, -NH-C (O) -NH-, -NH-C (S) -NH-, -NH-C (O) -O-, -NH-S (O) 2 -NH- Or -NH-S (O) 2- .
  • R 2 , R 3 and R 4 are each independently methyl
  • R 5 is hydrogen; Methyl unsubstituted or substituted with phenyl; And -Si (R 6 ) 3 , which is selected from the group consisting of
  • R 6 may be butyl or phenyl.
  • R 1 is hydrogen; Sulfonyl; Carbonyl; Alkyl having 1 to 10 carbon atoms; And it is any one selected from the group consisting of aryl having 6 to 12 carbon atoms,
  • the sulfonyl or carbonyl is each independently alkyl having 1 to 4 carbon atoms; And it is substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from the group consisting of aryl having 6 to 12 carbon atoms,
  • the alkyl having 1 to 10 carbon atoms is halogen; Alkoxy having 1 to 4 carbon atoms; And one or more substituents selected from the group consisting of aryl having 6 to 12 carbon atoms or unsubstituted or substituted with alkyl or halogen having 1 to 6 carbon atoms,
  • the aryl having 6 to 12 carbon atoms is halogen; -NO 2 ; Alkyl of 1 to 4 carbon atoms unsubstituted or substituted with halogen; And it may be substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkoxy having 1 to 4 carbon atoms unsubstituted or substituted with halogen.
  • the sulfonyl or carbonyl is substituted with phenyl
  • the alkyl having 1 to 8 carbon atoms is halogen; Methoxy; Ethoxy; Propoxy; And unsubstituted or substituted with one or more substituents selected from the group consisting of phenyl unsubstituted or substituted with alkyl or halogen having 1 to 4 carbon atoms,
  • the aryl having 6 to 10 carbon atoms is halogen; -NO 2 ; Alkyl of 1 to 4 carbon atoms unsubstituted or substituted with halogen; And it may be substituted or unsubstituted with one or more substituents selected from the group consisting of alkoxy having 1 to 4 carbon atoms which is unsubstituted or substituted with halogen.
  • R 2 , R 3 and R 4 are each independently methyl
  • R 5 is hydrogen; Methyl unsubstituted or substituted with phenyl; Or silyl substituted with phenyl and butyl,
  • R 1 is hydrogen; Carbonyl substituted with phenyl; Sulfonyl substituted with phenyl; Alkyl having 1 to 8 carbon atoms unsubstituted or substituted with one or more substituents selected from the group consisting of chloro, methoxy, phenyl, chlorophenyl, and butylphenyl; Or phenyl or naphthyl which may be unsubstituted or substituted with one or more substituents selected from the group consisting of chloro, fluoro, bromo, methyl, ethyl, propyl, butyl, trifluoromethyl, nitro, methoxy and trifluoromethoxy have.
  • the compound according to the present invention may be any one selected from the group consisting of compounds represented by the following formula.
  • Pyridinol-urea derivatives may be represented by the following formula.
  • Pyridinol-thiourea derivatives may be represented by the following formula.
  • Pyridinol-carbamate derivatives may be represented by the following formula.
  • Pyridinol-sulfonamide derivatives may be represented by the following formula.
  • Pyridinol-sulfamide derivatives may be represented by the following formula.
  • pyridinol-alkoxide derivatives may be represented by the following formula.
  • the pharmaceutically acceptable salt in the present invention is an organic acid selected from the group consisting of oxalic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, citric acid and benzoic acid, or is formed by an inorganic acid selected from the group consisting of hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and hydrobromic acid. It may be in the form of acid addition salts.
  • the present invention also provides a method for preparing the compound of formula (1).
  • the preparation is for example,
  • the present invention is to react the compound of formula 4 with a compound of formula 5 or a compound of formula 6;
  • the compound of formula 4 may be converted to a compound of formula 10, and the compound of formula 10 may be prepared by reacting the compound of formula 10 with the compound of formula 11.
  • R 1 to R 5 , Q, and L may use the aforementioned compounds, R may represent carbonyl or sulfonyl, and X may be halogen.
  • the compound of Formula 1 may be prepared by a preparation method such as Scheme 1 or 2.
  • the compound of Scheme 1 or 2 may be prepared by the preparation method according to Examples 1 to 16.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating autoimmune diseases comprising the above-described compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • autoimmune diseases include Behcet's disease, multiple myositis / skin myositis, autoimmune cytopenia, autoimmune myocarditis, atopic dermatitis, asthma, primary cirrhosis, dermatitis, fibromyalgia, Goodfiction syndrome, autoimmune meningitis, Sjogren Syndrome, systemic lupus erythematosus, Addison's disease, alopecia areata, ankylosing myelitis, autoimmune hepatitis, autoimmune mumps, insulin dependent diabetes mellitus, dystrophic epidermal detachment, epididymitis, glomerulonephritis, Graves' disease, celiac disease, Guillain-Barré syndrome, Hashimoto's disease, hemolytic anemia, multiple sclerosis, myasthenia gravis, myotrophic lateral sclerosis, vulgaris ulcer, psoriasis, rheumatic fever, rhe
  • the compound of formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention may be administered to a patient by itself or in a pharmaceutical composition mixed with a suitable carrier or excipient.
  • a suitable carrier or excipient suitable carrier or excipient.
  • administering means the delivery of a pharmaceutical composition comprising a compound of formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a compound of formula 1 to the organism for the treatment or prevention of the above-mentioned diseases. I say that.
  • Suitable routes of administration may be oral, rectal, mucosal or enteral administration or intramuscular, subcutaneous, intramedullary, intravesical, direct intraventricular, intravascular, intraocular intravitreal, intraperitoneal, intranasal, or eye, etc. have.
  • Preferred routes of administration may be oral and parenteral administration.
  • compositions of the present invention are well known processes such as conventional mixing, dissolving, granulating, dragging-making, levigating, emulsifying, encapsulating, entrapping and lyophilizing processes in the art. It can be prepared by.
  • the pharmaceutical composition according to the invention may be formulated with an active compound into a formulation which can be used pharmaceutically. Suitable formulations may vary depending on the choice of route of administration.
  • the compounds of the present invention may be formulated in aqueous solutions, preferably in physiologically suitable buffers such as Hanks' solution, Ringer's solution or physiological saline.
  • a surface penetrant may be used in the formulation that allows penetration of the barrier.
  • Such surface penetrants may use those generally known in the art.
  • the compounds may be formulated in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Carriers are formulated into tablets, pills, lozenges, dragees, capsules, liquids, gels, syrups, slurries, suspensions, and the like, so that the patient can take them orally. can do.
  • Pharmaceutical formulations for oral administration can be prepared using solid excipients, with the addition of other suitable auxiliaries as necessary, to make the tablets or the core of the tablets containing. At this time, optionally, the resulting mixture may be ground and the mixture may be granulated.
  • Useful excipients include sugars, including lactose, sucrose, mannitol or sorbbitol; Fibrous preparations such as corn starch, wheat starch, rice starch and potato starch; Fillers such as gelatin, gum, gum sap, methylcellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, and / or polyvinyl-pyrrolidone (PVP). If necessary, disintegrating agents such as crosslinked polyvinyl-pyrrolidone, agar or alginic acid may be added. It is also possible to add salts such as sodium alginate.
  • sugars including lactose, sucrose, mannitol or sorbbitol
  • Fibrous preparations such as corn starch, wheat starch, rice starch and potato starch
  • Fillers such as gelatin, gum, gum sap, methylcellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, and / or polyvinyl-pyrrolidone (PVP).
  • disintegrating agents such as crosslinked polyvinyl-pyr
  • the central part of the dragee can be made by appropriate coating.
  • concentrated sugar solutions may optionally be used containing Arabian gum, polyvinyl pyrrolidone, carbopol gel, polyethylene glycol and / or titanium dioxide, lacquer solutions.
  • compositions that can be used orally may include push-fit capsules made of gelatin, as well as soft sealing capsules made of gelatin and plasticizers such as glycerol or sorbitol.
  • soft capsules the active compounds may be dissolved or suspended in suitable solutions, such as fatty oils, liquid paraffin or liquid polyethylene glycols.
  • stabilizers may be added to the composition.
  • compositions that can be used can include hard gelatin capsules.
  • Capsules can be filled in brown glass or plastic bottles to protect the active compound from light.
  • Containers containing the active compound capsule formulation can be stored at controlled room temperature (15-30 ° C.).
  • the compounds according to the present invention may be compressed into compression vessels, nebulizers and suitable propellants such as dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetra-fluoroethane and carbon dioxide. It can be easily administered in the form of a used aerosol spray.
  • the compounds may be formulated for parenteral administration, for example, by bolus injection or continuous intravenous infusion.
  • Formulations for infusion may be provided in the form of unit doses with preservatives added, such as, for example, ampoules or multidose containers.
  • the compositions take the form of suspensions, solutions or emulsions as carriers that are oily or aqueous and may comprise formulating materials such as suspending, stabilizing and / or dispersing agents.
  • compositions for parenteral administration include water-soluble aqueous solutions, for example, water-soluble aqueous solutions of active compounds such as salts.
  • suspensions of the active compounds may be formulated with lipophilic carriers.
  • Suitable lipophilic carriers can include substances such as liposomes, synthetic fatty acid esters such as fatty oils, ethyl oleate and triglycerides.
  • Aqueous injection suspensions may contain substances which increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxy methyl cellulose, sorbitol or dextran.
  • the suspension may optionally contain a suitable stabilizer and / or material that increases the solubility of the compound to allow for the preparation of high concentration solutions.
  • the compounds may also be formulated in rectal dosage compounds, such as suppositories or retention enemas, using bases of conventional suppositories, such as cocoa butter or other glycerides.
  • the compounds may be formulated in the form of depot preparations. Such long acting formulations are administered by implantation (eg subcutaneously or intramuscularly) or by intramuscular injection.
  • the compounds of the present invention are very insoluble in water, such as, but not limited to, suitable polymeric or hydrophobic materials (e.g., emulsions made from pharmaceutically acceptable oils), ion exchange resins, or salts that are not very soluble in water. Derivatives may be formulated for administration of this route.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention the above-described diseases, for example, Behcet's disease, multiple myositis / skin myositis, autoimmune hematopoiesis, autoimmune myocarditis, atopic dermatitis, asthma, primary cirrhosis, dermatitis, fibromyalgia, gut Future syndrome, autoimmune meningitis, Sjogren's syndrome, systemic lupus erythematosus, Addison's disease, alopecia areata, ankylosing myelitis, autoimmune hepatitis, autoimmune mumps, insulin dependent diabetes mellitus, dystrophic epidermal detachment, epididymitis, glomerulonephritis, Graves Illness, celiac disease, Guillain-Barré syndrome, Hashimoto's disease, hemolytic anemia, multiple sclerosis, myasthenia gravis, amyotrophic lateral sclerosis, vulgaris ulcer,
  • the therapeutically effective amount means a dose that can prevent, alleviate or ameliorate the symptoms of the disease, or prolong the survival of the prescribed patient.
  • the pyridinol derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof according to the present invention can inhibit the secretion of cytokines that exacerbate autoimmune diseases in an autoimmune disease model, and inhibit the differentiation of autoimmune disease-causing cells that produce these cytokines. have. Therefore, the derivative may be usefully used as a medicament for the prevention or treatment of autoimmune diseases.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may comprise 0.1 to 50% by weight of the pyridinol derivative or pharmaceutically acceptable salt thereof based on the total weight of the composition.
  • the amount of pyridinol derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof according to the present invention may vary depending on the age, sex and weight of the patient, but the amount of 0.001 to 100 mg / kg, preferably 0.01 to 10 mg / kg per day It may be administered several times to several times.
  • the dosage of the pyridinol derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof may be increased or decreased depending on the route of administration, the severity of the disease, sex, weight, age and the like. Therefore, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any aspect.
  • the pharmaceutical composition may be administered to mammals such as mice, mice, livestock, humans, and the like by various routes. All modes of administration can be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.
  • the pyridinol derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof according to the present invention have a 50% lethal amount (LC 50 ) of 2 g / kg or more and can be used in the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the present invention also provides a method for preventing or treating an autoimmune disease comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the optimal dosage to be administered can be readily determined by one skilled in the art and includes the type of disease, the severity of the disease, the amount of active ingredients and other ingredients contained in the composition, the type of formulation, and the age, weight, general health of the patient. It may be adjusted according to various factors including the condition, sex and diet, time of administration, route of administration and the rate of secretion of the composition, the duration of treatment, and the drugs used simultaneously.
  • the compound of Formula 1 is administered at a dose of 0.001 to 100 mg / kg, preferably 0.01 to 10 mg / kg, once or several times a day. It is preferable.
  • the composition comprising the compound of formula 1 of the present invention as an active ingredient is administered in a conventional manner through oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection. can do.
  • the present invention also provides the use of a compound of formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of autoimmune diseases.
  • Phenyl isocyanate (47.5 ⁇ l, 0.289 mmol) was added to a suspension of compound 7a (70 mg, 0.289 mmol) in CH 2 Cl 2 (3 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 7 hours.
  • Example 17-4> 1- (5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) -3- phenylurea (16-2) manufacturing
  • Example 17-5> 1- (5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl Manufacture) -3- (4-chlorophenyl) urea (15-3)
  • Example 17-7> 1- (5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) -3- (2- tert -butyl-6-methylphenyl) urea (15-4) manufacturer
  • Methanesulfonyl chloride (47.8 ⁇ l, 0.618 mmol) was added to a suspension of pyridine (2 mL) of compound 7a (50 mg, 0.206 mmol), followed by stirring at room temperature for 24 hours.
  • the reaction solution was concentrated and the residue was diluted with CH 2 Cl 2 and washed with water and saturated brine.
  • the CH 2 Cl 2 solution was dried over anhydrous MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure.
  • the aqueous layer was extracted with CH 2 Cl 2 , the CH 2 Cl 2 solution was washed with saturated brine, dried over anhydrous MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give the target compound 26 (1.95 g, 98%) as a yellow solid.
  • CD4 T cells were isolated from the spleen of B57BL / 6 mice using a magnetic instrument called MACS. In order to stimulate CD4 T cells, CD3 antibody (5 mg / ml) was coated on the plate where the cells were grown, CD4 T cells were added and another stimulant CD28 antibody (1 mg / ml) was added.
  • T cells There are several types of inflammatory cells in T cells, the most representative of which are Th1, Th2 or Th17 cells. These inflammatory cells differ in their methods of differentiation.
  • Th1 cells 10% FBS and 1% penicillin / streptomycin (PS) were included in RPMI-1640 medium, and the isolated CD4 T cells were incubated under 37 ° C. and 5% CO 2 conditions. When cultured, the cell stimulant CD3 antibody and CD28 antibody were added as before. To differentiate into Th1 cells, IL-12 (10 ng / ml) was added to the cytokine and grown for 4 days. At this time, pyridinol derivative compounds (10 ⁇ M) (treatment group) were included to confirm the inhibitory ability of the drug.
  • IL-12 10 ng / ml
  • tofacitinib 10 ⁇ M
  • T cell inhibitor of rheumatoid arthritis disease was used.
  • Th17 cells which are other inflammatory cells
  • IL-12 as a cytokine
  • anti- IFN- ⁇ antibody 5 mg / ml
  • anti-IL-4 antibody 5 mg / ml
  • IL-4 (10 ng / ml) was added to the cytokine.
  • Regulatory T cells which are inflammation inhibitory cells, were prepared in the same manner as above, but IL-2 (10 ng / ml) and TGF- ⁇ (10 ng / ml) were added as cytokines.
  • Table 7 shows Th1 differentiation inhibitory effect (10 uM compound concentration), and Table 8 shows Th17 differentiation inhibitory effect (10 uM compound concentration).
  • 18-1, 18-3, 18-13, 20-5, 22-4, and 28 showed that the pyridinol derivative compounds inhibited the in vitro differentiation of Th1 and Th17 cells.
  • -6 showed over 40% inhibition of differentiation in both Th1 and Th17 cells.
  • the compounds with high inhibition rate and no cytotoxicity under the conditions of stimulating T cell differentiation were 18-13 and 28-6.
  • Th1 cell differentiation was measured by flow cytometry 3 days after cytokine treatment. Th1 differentiation by cytokines was about 50% (FIG. 1). The degree of cytokine-induced Th1 cell differentiation by the administration of the compound was found to be 30% or less for the compound 28-6, and tofacitinib used as the positive control group was about 20% (FIG. 1A). In addition, Compound 28-6 and tofacitinib showed similar inhibitory effects on the differentiation of Th17 cells (FIG. 1B).
  • tofacitinib also inhibited the differentiation of immunosuppressive cells (FoxP3 +, Treg cells), whereas compound 28-6 inhibited the differentiation of Th1 and Th17 cells and did not affect the differentiation of Treg cells, which are immunosuppressive cells.
  • Compound 28-6 specifically reacts to inflammatory cells (FIG. 1C).
  • compound 28-6 and tofacitinib showed excellent inhibitory ability against Th2 inflammatory cells causing atopy or allergy (FIGS. 1D, E and F).
  • CD4 T cells were isolated from the spleen of B57BL / 6 mice as in Experiment 1. The isolated cells were stained with CFSE stain, and stimulated with the differentiation conditions of Th1 (adding IL-12 to cytokines) or Th17 (adding IL-6 and TGF- ⁇ to cytokines) by the above-described method, The concentration of compound 28-6 was added to confirm that the staining concentration was released from the T cells to confirm cell division. (When the cells divide and divide, the dye concentration decreases in half.)
  • the cells were stimulated for 3 days under inflammatory cell stimulation conditions, and then stained with PI and Annexin V to confirm the cytotoxicity by distinguishing between dying or dead cells.
  • toxicity tests were conducted at various concentrations and the results are shown in FIG. 2.
  • Compound 28-6 had a minimal ( ⁇ 5%) effect on T cell division at high concentrations (20 ⁇ M) (FIGS. 2A and B).
  • Tofacitinib a positive control drug, is well known to inhibit cell division itself, affecting both differentiation and division, resulting in poor drug specificity.
  • compound 28-6 shows only inhibitory ability to T cell differentiation and does not affect T cell division, and thus is evaluated as a drug having high specificity for T cell differentiation.
  • compound 28-6 showed no cytotoxicity even at high concentrations (FIG. 2C).
  • Animals were 8-12 weeks old B57BL / 6 mice. Feed and water were freely fed during the breeding period, and the room temperature was 25 ⁇ 1 °C and relative humidity was maintained at 50 ⁇ 10%. Lighting control was controlled by a 12 hour contrast cycle by an automatic light controller.
  • the experimental group was divided into 2 groups (control group, drug administration group) by randomized block design with 5 animals in each group.
  • EAE experimentalal autoimmune encephalomyelitis
  • the spleen, lymph node (LN), brain and spinal cord (CNS) were extracted from the mouse to calculate the number of immune cells, and the immune cells obtained from each organ to check the distribution of Th1 and Th17 cells.
  • LN lymph node
  • CNS spinal cord
  • CD4 T cells were isolated from the spleen of B57BL / 6 mice as in Experiment 1. The isolated cells were stimulated with compound 18-13 for 24 hours under inflammatory cell stimulation conditions, and stained PI and Annexin V to distinguish between dying cells or dead cells to confirm cytotoxicity.
  • the markers were stained with CD44 and CD69 to confirm the expression level by flow cytometry.
  • the cells were stimulated with the differentiation conditions of Th1 (adding IL-12 as a cytokine) or Th17 (adding IL-6 and TGF-b as a cytokine) to various concentrations. Compound 18-13 was added to confirm that the staining concentration was released from T cells to confirm cell division.
  • the cells were stimulated with Th1 differentiation conditions, and stained with BrdU and Ki-67, which are markers, on T cells to which Compound 18-13 was added, and confirmed by flow cytometry.
  • the results are shown in FIG.
  • CD4 T cells were isolated from the spleen of B57BL / 6 mice as in Experiment 1. The isolated cells were stimulated under the differentiation conditions of Th1 (adding IL-12 to cytokines) or Th17 (adding IL-6 and TGF- ⁇ to cytokines) in the same manner as above, and treated with Compound 18-13 for 3 days. After growing for a while, the ability of the drug to inhibit T cell differentiation was confirmed. After 3 days, restimulated with PMA / ionomycin and golgi stop for 4 hours as in Experiment 1, washed twice with PBS, and then punctured the cell surface using Fix / Perm buffer. To identify Th1 cells secreting IFN- ⁇ and Th17 cells secreting IL-17, PE-anti-IFN- ⁇ antibody and APC-anti-IL-17 antibody were stained and confirmed by flow cytometry.
  • CD1 T cells were isolated from the spleen of transgenic OT-II mice as in Experiment 1 and then Th1 (addition of IL-12 cytokine) or Th17 ( Addition of IL-6 and TGF-b cytokines) was stimulated under differentiation conditions, and the compound 18-13 was grown for 3 days to confirm the drug's ability to inhibit differentiation.
  • Th1 differentiation Three days after the differentiation of Th1 was induced by flow cytometry, the cytokine addition resulted in more than 30% of Th1 differentiated cells, whereas Th1 differentiation when treated with compounds 18-13 was 10%. To a significant extent (FIG. 5A). In addition, Th17 differentiation was similarly reduced by more than 20% when cytokine was added, but decreased to about 12% when Compounds 18-13 were treated (FIG. 5B). When antigen-specific differentiation was measured using OT-II mice, the differentiation of Th1 (FIG. 5C) and Th17 (FIG. 5D) was reduced when Compound 18-13 was treated. Comparing compound 18-13 and compound 28-6, it was confirmed that inhibiting differentiation to a similar level.
  • the control group was intraperitoneally injected with PBS every other day, and the drug administration group was injected with compound 18-13 intraperitoneally every other day in an amount of 3 mg / kg.
  • the spleen, lymph node, brain and spinal cord were removed from the mouse as in Experiment 3 to calculate the number of immune cells.
  • the immune cells obtained from each organ were stimulated with PMA / Ionomycin and golgi stop, and then anti-IFN- ⁇ antibodies capable of identifying Th1 and anti-IL capable of identifying Th17. Staining was performed using -17 antibody and flow cytometry was used to determine the specific gravity of inflammatory cells in the whole immune cells. The results are shown in FIG.
  • spleen and lymph nodes were extracted 10 days after EAE-induced mice, as in Experiment 3, and then Th1 (MOG 35 -55 (25 ⁇ g / ml), IL-12 (10 ng). / ml)) or Th17 (MOG 35 -55 (25 ⁇ g / ml), IL-23 (10 ng / ml)) differentiation conditions were stimulated and raised for 3 days.
  • Th1 MOG 35 -55 (25 ⁇ g / ml), IL-12 (10 ng). / ml)
  • Th17 MOG 35 -55 (25 ⁇ g / ml), IL-23 (10 ng / ml)
  • compounds 18-13 do not affect the differentiation of other T cells and only affect the activity of Th1 and Th17 cells that cause autoimmune diseases.
  • Another indicator, the T cell activator factor CD62L low CD44 hi was also significantly reduced, reaffirming that it had an inhibitory effect on T cell activity (FIGS. 7A and B).
  • autoimmune diseases such as EAE occur, which represents the progression of the disease, not the initial model of the disease, as shown in FIG. It is a model that can be Treatment of compounds 18-13 at this time can be shown to be able to mitigate ongoing EAE (FIGS. 7C and D).
  • the spleen and central nerve were also analyzed and the results of the compound 18-13 administration group showed a decrease in CD4 and CD8 cells and Th1 and Th17 cells significantly decreased (Fig. 7E and F). Therefore, it was confirmed that Compound 18-13 may have a drug effect even in an advanced state of autoimmune disease.
  • the pyridinol derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof according to the present invention can inhibit the secretion of cytokines that exacerbate autoimmune diseases, and inhibit the autoimmune disease-induced cell differentiation that produces the cytokines.
  • the derivative may be usefully used as a medicament for the prevention or treatment of autoimmune diseases.

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Abstract

본 발명은 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것다. 화학식 1로 표시되는 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 염증 T 세포인 Th1 및 Th17 세포의 분화를 억제하고, 그 세포들의 염증 사이토카인 분비를 탁월하게 억제하여 질환의 진행을 완화시킬 수 있다. 또한, 면역을 억제하는 Treg 세포에는 영향을 주지 않고 염증 T 세포에만 특이적으로 작용함으로, 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약제로서 유용하게 사용할 수 있다.

Description

피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 및 이를 유효성분으로 함유하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
본 발명은 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 및 이를 유효성분으로 함유하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
각종 병원체에 대한 생체 방어 시스템인 면역계에서 중심적 역할을 담당하는 세포군의 하나로 T 세포가 있다. T 세포는 인체의 흉선에서 생성되며, 일련의 분화 과정을 거치면서 고유의 특성을 지닌 T 세포로 분화한다. 분화를 완료한 T 세포는 그 기능에 따라 크게 CD8 T 세포 및 CD4 T 세포로 구분된다. 이 중 CD4 T 세포는 환경적인 요인에 따라 세부적으로 분화가 되는데, 가장 대표적인 것이 Th1, Th2, Th17 및 Treg 세포이다. Th1 세포는 세포 매개성 면역에 관여하고, Th2 세포는 체액성 면역에 관여하며, Th17 세포는 감염 및 염증 질환에 관여하고, Treg 세포는 면역을 억제하여 항상성을 유지하게 만들어 준다. 면역계에서 이러한 세포 집단들은 서로 과 활성화되지 않도록 서로 견제를 통해 면역계의 균형을 유지하고 있다.
면역질환의 대부분은 이러한 면역 세포간의 불균형에 기인하는 것으로 볼 수 있다. 예를 들어, Th1 세포와 Th17 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 자가면역 질환이 발생할 수 있고, Th2 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 과민반응에 의한 면역질환이 발생하는 것으로 알려져 있다. 또한 Treg 세포의 과도한 면역 억제는 암을 유발할 수 있다.
최근, Th1 세포와 Th17 세포에 의한 자가면역 질환 연구 결과에 따르면, 이들 세포의 활성을 조절할 수 있는 면역조절 T 세포(Treg)의 기능의 기작이 알려지면서 이를 이용한 면역질환의 치료에 대한 연구가 대두되고 있다. Treg 세포는 비정상적으로 활성화된 면역세포의 기능을 억제하여 염증 반응을 제어하는 특성을 가진다. Treg 세포의 활성을 증가시키는 작용을 통해 면역질환을 치료하는 실험들이 많이 보고되고 있다.
Th1 세포 및 Th17 세포는 면역질환에서 보이는 염증반응의 최전방에서 관여하여 염증 반응의 신호를 최대화시켜 질병의 진행을 가속화시키는 것이 밝혀지고 있다. 그러므로, 자가면역 질환 중 Treg 세포에 의해 제어되지 않는 자가면역 질환의 경우, Th1 및 Th17 세포 활성의 억제를 표적으로 한 자가면역 질환의 치료제 개발이 크게 부각되고 있다.
현재 사용되고 있는 면역질환 치료제로는 T 세포에서의 신호변환 경로를 차단하는 면역 억제제가 가장 많이 사용되고 있는데, 이러한 면역억제제들은 독성, 감염, 임파종, 당뇨병, 진전(tremor), 두통, 설사, 고혈압, 오심 또는 신기능 장애 등의 부작용이 발생하는 문제점이 있다.
또한, T 세포의 활성화를 억제하는 방법을 통해 면역질환을 치료하는 방법 이외에도, 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인의 양을 조절하는 치료법, 및 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인을 표적으로 하는 항체를 이용한 치료법이 개발 중에 있다. 그러나 이러한 방법은 실제적으로 임상실험을 거쳐 환자들에게 적용하기까지 많은 시간이 소요되어야 한다. 또한 항체를 이용하는 방법은 항체 제작 과정에서 너무 많은 비용이 든다는 문제점이 있다. 따라서 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 새로운 면역질환 치료제의 개발이 필요한 실정이다.
[선행기술문헌]
[비특허문헌]
1. Amy E. Lovett-Racke, Yuhong Yang, Michael K. Racke, "Th1 versus Th17: Are T cell cytokines relevant in multiple sclerosis?" Biochimica et Biophysica Acta, 2011, 1812, 246-251.
이에, 본 발명자들은 특정 구조의 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염이 우수한 자가면역 질환 치료 효과를 가짐을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 포함하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000001
상기 화학식 1에서,
R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 8의 알킬이고,
R5는 수소; 할로겐; 탄소수 1 내지 8의 알킬; -Si(R6)3; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이며,
상기 R5의 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴은 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴로 치환 또는 비치환되고,
상기 R6은 수소, 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이며,
R1은 수소; 설포닐; 카보닐; 탄소수 1 내지 12의 알킬; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이고,
상기 R1의 설포닐 또는 카보닐은 각각 독립적으로 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되며,
상기 R1의 탄소수 1 내지 12의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴은 각각 독립적으로 할로겐; -NO2; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알콕시; 및 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되고,
L은 -O- 또는 하기 화학식 2 또는 3으로 표시되는 연결기를 나타내며,
[화학식 2]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000002
[화학식 3]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000003
상기 화학식 2에서 Q는 O 또는 S이고, P는 -NH- 또는 -O-이며,
상기 화학식 3에서 Z는 단일결합 또는 -NH-이다.
또한, 본 발명은 치료상 유효량의 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을, 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료 방법, 및 자가면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물의 제조를 위한 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 신규 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염은 자가면역 질환을 악화시키는 사이토카인의 분비를 억제하고, 그 사이토카인을 내는 자가면역 질환 유발 세포 분화를 억제할 수 있다.
따라서, 상기 유도체는 자가면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 Th1 및 Th17 분화 억제, T 세포로부터 분비되는 염증 사이토카인인 IFN-g, IL-17, IL-4, IL-5 및 IL-13 분비 억제, 및 면역억제 T 세포인 Treg에는 아무런 영향을 주지 않는 것을 보여주는 FACS 데이터와 사이토카인 측정을 위한 CBA 결과 데이터이다.
도 2는 CFSE 색을 입힌 T 세포에 자극을 주어 CFSE 색의 농도감소를 통한 세포 분열 정도 및 세포독성을 테스트한 결과 그래프이다.
도 3은 신경계 자가면역 질환을 유발하는 과정에서 약물의 효과를 확인하고, 마우스의 각 장기(비장, 림프절, 중추신경계)에서 분리한 Th1 및 Th17 세포를 FACS 유세포 분석기를 통해 분석한 그래프이다.
도 4는 항체를 이용한 in vitro T세포 자극시험에서 T 세포의 초기 활성과 분열에 미치는 약물의 효과와 세포 독성 결과 그래프이다.
도 5는 Th1 및 Th17 세포의 in vitro 분화 유도과정에서 약물의 억제 효과를 FACS 유세포 분석기를 이용하여 측정한 결과이다.
도 6은 MOG 항원을 이용해 자가 면역 질환을 유발한 동물 모델에서 약물의 효과를 확인한 결과와 마우스 각 장기(뇌, 척수, 림프절)에서 분리한 Th1 및 Th17 세포를 FACS 유세포 분석기를 통해 분석한 그래프이다.
도 7은 MOG항원을 이용하여 자가면역 질환을 유발 한 마우스에서 염증 T세포를 분리하여 in vitro에서 증폭시킨 후, 정상 마우스에 이식하여 염증 T세포가 자가면역 질환을 유도하게 하는 염증 T 세포 이식 동물모델을 이용한 경우로, 질환의 진행을 억제하는 약물의 효과를 확인한 결과이며, 이 때 Th1 및 Th17 세포의 증가 정도를 유세포 분석기를 통해 분석한 그래프이다.
이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물(이하, 화학식 1의 화합물) 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000004
상기 화학식 1에서,
R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 8의 알킬이고,
R5는 수소; 할로겐; 탄소수 1 내지 8의 알킬; -Si(R6)3; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이며,
상기 R5의 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴은 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴로 치환 또는 비치환되고,
상기 R6은 수소, 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이며,
R1은 수소; 설포닐; 카보닐; 탄소수 1 내지 12의 알킬; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이고,
상기 R1의 설포닐 또는 카보닐은 각각 독립적으로 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되며,
상기 R1의 탄소수 1 내지 12의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴은 각각 독립적으로 할로겐; -NO2; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알콕시; 및 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되고,
L은 -O- 또는 하기 화학식 2 또는 3으로 표시되는 연결기를 나타내며,
[화학식 2]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000005
[화학식 3]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000006
상기 화학식 2에서 Q는 O 또는 S이고, P는 -NH- 또는 -O-이며,
상기 화학식 3에서 Z는 단일결합 또는 -NH-일 수 있다.
본 발명에서 화학식 1의 화합물은 피리딘올 유도체라 명명할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물의 치환체 정의에 사용된 용어는 하기와 같다.
"알킬"은 다른 기재가 없는 한 명시된 수의 탄소원자를 갖는 직쇄, 분지쇄 또는 고리형의 포화 탄화수소를 가리킨다.
“할로겐”은 플루오로(F), 클로로(Cl), 브로모(Br) 또는 요오도(I)를 나타낸다.
“아릴”은 다른 기재가 없는 한, 각각 5원 및 6원의 일환의 방향족 기를 포함하는 일가 및 이가 방향족기를 나타낸다.
또한, 화학식에서 "Bn"은 벤질을 나타내며, "TBDPS"는 터트-부틸디페닐실릴을 나타내고, Me는 메틸을 나타낸다.
"약학 조성물(pharmaceutical composition)"은 생리학적/약학적으로 허용가능한 운반체 및 부형제와 같은 다른 화학 성분과 함께, 본 발명에 따른 화합물 또는 생리학적/약학적으로 허용가능한 염들 또는 이들의 전구약물의 혼합물을 말한다. 약학 조성물의 목적은 화합물을 생물체에 용이하게 투여하는 것이다.
화학식 1의 화합물은 전구약물로 작용할 수 있다. "전구약물"은 체내에서 모 약물(parent drug)로 전환되는 물질을 말한다. 전구약물은 몇 가지 경우 모 약물보다 투여하기가 쉽기 때문에, 종종 유용하다. 예를 들면, 모 약물이 경구 투여시 생체이용가능(bioavailable)하지 아니하더라도, 전구약물은 경구 투여시 생체이용 가능할 수 있다. 또한, 전구약물은 약학 조성물에서 모 약물보다 개선된 용해도를 나타낼 수 있다.
"생리적/약학적으로 허용가능한 운반체"는 생물에 유의성 있는 자극을 야기하지 아니하고, 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 제거하지 아니하는 운반체 또는 희석제를 말한다.
"생리적/약학적으로 허용가능한 부형제"는 화합물의 투여를 보다 용이하게 하기 위하여 첨가되는 안정한 물질을 말한다. 부형제의 예로는 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당 및 전분 종류들, 셀룰로스 유도체들, 젤라틴, 식물성 기름 및 폴리에틸렌 글리콜을 등을 들 수 있다.
"치료하다(treat)", "치료하는 것(treating)" 및 "치료(treatment)"는 본 발명에 따른 질환 또는 이에 수반되는 증상들을 경감 또는 제거하는 방법을 말한다.
"생물체(Organism)" 또는 "대상체"는 적어도 하나 이상의 세포로 이루어진 모든 살아있는 것을 의미한다. 살아 있는 생물체는 진핵 단세포 정도로 간단한 것이나, 인간을 포함한 포유동물로 복잡한 것일 수 있다.
"치료상 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서 R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 4의 알킬이고,
R5는 수소; 탄소수 6 내지 12의 아릴로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 -Si(R6)3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이며,
R6은 탄소수 1 내지 6의 알킬 또는 탄소수 6 내지 12의 아릴이고,
L은 -O-, -NH-C(O)-NH-, -NH-C(S)-NH-, -NH-C(O)-O-, -NH-S(O)2-NH- 또는 -NH-S(O)2-일 수 있다.
또한, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 메틸이고,
R5는 수소; 페닐로 치환되거나 비치환된 메틸; 및 -Si(R6)3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이며,
R6은 부틸 또는 페닐일 수 있다.
또한, 일 구체예에서 R1은 수소; 설포닐; 카보닐; 탄소수 1 내지 10의 알킬; 및 탄소수 6 내지 12의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이고,
상기 설포닐 또는 카보닐은 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 탄소수 6 내지 12의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되며,
상기 탄소수 1 내지 10의 알킬은 할로겐; 탄소수 1 내지 4의 알콕시; 및 탄소수 1 내지 6의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 12의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되고,
상기 탄소수 6 내지 12의 아릴은 할로겐; -NO2; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알콕시로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환될 수 있다.
또한, 수소; 설포닐; 카보닐; 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 6 내지 10의 아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이고,
상기 설포닐 또는 카보닐은 페닐로 치환되며,
상기 탄소수 1 내지 8의 알킬은 할로겐; 메톡시; 에톡시; 프로폭시; 및 탄소수 1 내지 4의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 페닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환되고,
상기 탄소수 6 내지 10의 아릴은 할로겐; -NO2; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알콕시로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환될 수 있다.
또한, 일 구체예에서 R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 메틸이고,
R5는 수소; 페닐로 치환되거나 비치환된 메틸; 또는 페닐 및 부틸로 치환된 실릴이며,
R1은 수소; 페닐로 치환된 카보닐; 페닐로 치환된 설포닐; 클로로, 메톡시, 페닐, 클로로페닐, 및 부틸페닐로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 또는 클로로, 플루오로, 브로모, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 트리플루오로메틸, 니트로, 메톡시 및 트리플루오로메톡시로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환된 페닐 또는 나프틸일 수 있다.
보다 구체적으로, 본 발명에 따른 화합물은 하기 화학식으로 표시되는 화합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
피리딘올-우레아(pyridinol-urea) 유도체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다.
Figure PCTKR2018000602-appb-T000001
Figure PCTKR2018000602-appb-I000007
Figure PCTKR2018000602-appb-I000008
Figure PCTKR2018000602-appb-I000009
피리딘올-티오우레아(pyridinol-thiourea) 유도체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다.
Figure PCTKR2018000602-appb-T000002
Figure PCTKR2018000602-appb-I000010
Figure PCTKR2018000602-appb-I000011
Figure PCTKR2018000602-appb-I000012
피리딘올-카바메이트(pyridinol-carbamate) 유도체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다.
Figure PCTKR2018000602-appb-T000003
피리딘올-술폰아미드(pyridinol-sulfonamide) 유도체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다.
Figure PCTKR2018000602-appb-T000004
피리딘올-술파미드(pyridinol-sulfamide) 유도체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다.
Figure PCTKR2018000602-appb-T000005
또한, 피리딘올-알콕사이드(pyridinol-alkoxide) 유도체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다.
Figure PCTKR2018000602-appb-T000006
Figure PCTKR2018000602-appb-I000013
본 발명에서 약제학적 허용가능한 염은 옥살산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산 및 벤조산으로 이루어진 군에서 선택된 유기산이거나, 또는 염산, 황산, 인산 및 브롬화수소산으로 이루어진 군에서 선택된 무기산에 의해 형성되는 산부가염의 형태일 수 있다.
또한, 본 발명은 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 제조는 예를 들어,
또한, 본 발명은 하기 화학식 4의 화합물을 하기 화학식 5의 화합물 또는 하기 화학식 6의 화합물과 반응시키거나;
하기 화학식 4의 화합물을 하기 화학식 7의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 8의 화합물을 얻고, 상기 화학식 8의 화합물과 하기 화학식 9의 화합물을 반응시키거나; 또는
하기 화학식 4의 화합물을 하기 화학식 10의 화합물로 변환하고, 상기 화학식 10의 화합물과 화학식 11의 화합물을 반응시켜 하기 화학식 1의 화합물을 제조할 수 있다.
[화학식 4]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000014
[화학식 5]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000015
[화학식 6]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000016
[화학식 7]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000017
[화학식 8]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000018
[화학식 9]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000019
[화학식 10]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000020
[화학식 11]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000021
[화학식 1]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000022
상기 화학식 1 내지 9에서, R1 내지 R5, Q 및 L은 전술한 화합물을 사용할 수 있고, R은 카보닐 또는 설포닐을 나타내며, X는 할로겐일 수 있다.
일 구체예에서 상기 화학식 1의 화합물은 하기 반응식 1 또는 2와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000023
[반응식 2]
Figure PCTKR2018000602-appb-I000024
상기 반응식 1 또는 2의 화합물은 실시예 1 내지 16에 따른 제조 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 본 발명은 전술한 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 자가면역 질환은 베체트병, 다발성 근육염/피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 섬유근육통, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 셀리악병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근위축성측색경화증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 류마티스 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 항인지질증후군, 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증 및 이식편대숙주질환으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다..
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 환자에게 그 자체로 투여될 수 있거나, 적당한 담체 또는 부형제와 혼합된 약학 조성물로 투여될 수 있다. 약물의 제형과 투여의 기술들은 "Remington's Pharmacological Science," Mack Publishing Co., Easton, PA, 최신판에서 찾을 수 있다.
상기 문헌에 따르면, "투여" 또는 "투여한다"는 전술한 질환의 치료 또는 예방을 위하여, 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 화학식 1의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 생물체에 전달하는 것을 말한다.
투여의 적당한 경로는 구강, 직장, 점막 또는 장관 투여 또는 근육 내, 피하, 수질 내, 포막 내, 직접적인 심실 내, 혈관 내, 안구의 유리체내, 복막 내, 비강 내, 또는 눈으로의 주입 등일 수 있다. 상기 투여의 바람직한 경로는 구강 및 비경구 투여일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 이 분야의 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정화(dragee-making), 분말화(levigating), 유제화, 캡슐화, 인트래핑(entrapping)과 동결건조 공정 등의 잘 알려진 공정으로 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 악학 조성물은 활성 화합물을 약학적으로 사용될 수 있는 제제로 제형화할 수 있다. 적합한 제제는 투여 경로의 선택에 따라 달라질 수 있다.
주사로 사용하기 위하여, 본 발명의 화합물은 수용액, 바람직하게는 행크스 용액(Hank's solution), 링거 용액이나 생리 식염수 같은 생리학적으로 적합한 완충액으로 제제화될 수 있다.
비점막을 통하여 투여하기 위해서, 장벽을 투과할 수 있게 하는 표면투과제가 제제 내에 사용될 수 있다. 이러한 표면투과제는 이 분야에서 일반적으로 알려진 것을 사용할 수 있다.
경구 투여를 위해서, 화합물은 약학으로 허용되는 담체와 결합하여 제제화할 수 있다. 담체는 환자가 구강을 통하여 복용할 수 있도록, 본 발명의 화합물을 정제, 필(pills), 함당정제(lozenge), 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리(slurries), 현탁액 등으로 제제화할 수 있다. 경구투여를 위한 약학 제제는 정제 또는 함당 정제의 중심부를 만들기 위하여, 필요하다면 다른 적당한 보조제를 첨가한 후, 고형 부형제를 사용하여 제조할 수 있다. 이때, 선택적으로는 만들어진 혼합물을 분쇄하고 혼합물을 과립으로 만들 수도 있다. 유용한 부형제로는 젖당(lactose), 설탕(sucrose), 만니톨(mannitol)이나 솔비톨(solbitol)을 포함하는 당류; 옥수수 전분, 밀전분, 쌀전분과 감자전분 같은 섬유질 제제; 젤라틴, 검류, 고무수액, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 및/또는 폴리비닐-피롤리돈(PVP)과 같은 충진제들를 들 수 있다. 필요하다면, 가교결합한 폴리비닐-피롤리돈, 한천 혹은 알긴산 같은 분해제를 첨가할 수도 있다. 또한, 알긴산 나트륨같은 염을 첨가할 수도 있다.
당의정의 중심 부위는 적절히 코팅하여 만들 수 있다. 이를 위해, 선택적으로 아라비안 검, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 티타늄 디옥시드, 라커 용액을 함유하는 농축한 당용액을 사용할 수 있다.
경구적으로 사용할 수 있는 약학 조성물은 젤라틴과 글리세롤아나 솔비톨 같은 가소제로 만든 연질 밀봉캡슐뿐만 아니라, 젤라틴으로 만든 푸쉬-피트(push-fit)캡슐을 포함할 수 있다. 연질 캡슐에서 활성 화합물은 패티 오일(fatty oil), 액체 파라핀이나 액체 폴리에틸렌 글리콜 같은 적절한 용액에 용해되거나 현탁될 수 있다. 또한, 안정제가 조성물에 첨가될 수 있다.
사용될 수 있는 약학 조성물은 경질 젤라틴 캡슐을 포함할 수 있다.
캡슐들은 광선으로부터 활성 화합물을 보호하기 위하여, 갈색 유리 또는 플라스틱 병에 충진될 수 있다. 활성 화합물 캡슐 제제를 담은 용기는 조절된 실온(15-30℃)에서 보관될 수 있다.
흡입으로 투여되기 위하여, 본 발명에 따른 화합물은 압축 용기, 네뷸라이저(nebulizer) 및 디클로로디플루오로메탄, 트리크로로플루오로메탄, 디클로로테트라-플루오로에탄과 이산화탄소와 같은 적절한 추진제(propellant)를 사용한 에어로졸 스프레이의 형태로 용이하게 투여될 수 있다.
또한, 화합물은 예를 들어, 일시 주입(bolus injection) 또는 연속적 정맥 주입에 의하여 비경구적으로 투여되도록 제제화 될 수 있다. 주입하기 위한 제제는, 예를 들면 앰플(ampoules) 또는 다용량 용기와 같은 보존제가 첨가된 단위 투여 용량의 형태로 제공될 수 있다. 조성물은 유상이나 수상인 담체(vehicles)로서 현탁액, 용액 또는 애멀젼의 형태를 취하고, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제제화 물질을 포함할 수 있다.
비경구 투여를 위한 약학 조성물은 수용성의 수용액 형태를 포함하는데, 예를 들어 염과 같은 활성 화합물의 수용성의 수용액 형태를 포함할 수 있다. 또한, 활성 화합물의 현탁액은 친유성 담체로 조제될 수 있다. 적절한 친유성 담체는 패티 오일(fatty oil), 에틸 올레이트 및 트리글세라이드와 같은 합성 지방산 에스테르, 리포좀과 같은 물질을 포함할 수 있다. 수용성 주사 현탁액은 소디움 카르복시 메틸 셀룰로스, 솔비톨 혹은 덱스트란 같은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 또한, 선택적으로, 현탁액은 적절한 안정제 및/또는 화합물의 용해도를 증가시켜 고농도의 용액을 조제할 수 있도록 하는 물질을 함유할 수 있다.
또한, 화합물은 코코아 버터나 다른 글리세리드와 같이 통상적인 좌약의 베이스를 사용한 좌약 또는 보유 관장제와 같은 직장 투여 화합물로 제제화될 수 있다.
또한, 전술한 제제에 추가하여, 화합물은 데포(depot)제제의 형태로 제제화될 수 있다. 이러한 장시간 작용하는 제제는 이식(예를 들어, 피하나 근육내로) 또는 근육 주사로 투여한다. 본 발명의 화합물은 적절한 중합성 또는 소수성 물질(예를 들어, 약학적으로 허용가능한 오일로 만든 에멀젼), 이온 교환 수지 또는 물에 아주 녹지 않는 염(이에 한정되지는 아니함)과 같은 물에 아주 녹지 않은 유도체로 이러한 경로의 투여를 위하여 제제화할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 전술한 질환, 예를 들면, 베체트병, 다발성 근육염/피부 근육염, 자가면역 혈구감소증, 자가면역 심근염, 아토피피부염, 천식, 일차성간경변, 피부근염, 섬유근육통, 굿파이처 증후군, 자가면역 뇌수막염, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루프스, 애디슨병, 원형 탈모증, 강직성 척수염, 자가면역성 간염, 자가면역성 이하선염, 인슐린 의존성 당뇨병, 이영양성 수포성 표피박리증, 부고환염, 사구체 신염, 그레이브스병, 셀리악병, 길랑바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근위축성측색경화증, 심상천포창, 건선, 류마티스열, 류마티스 관절염, 유육종증, 피부 경화증, 척추관절증, 갑상선염, 혈관염, 백반증, 점액수종, 악성빈혈, 항인지질증후군, 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증 및 이식편대숙주질환 으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 질환의 예방 또는 치료와 같은 의도한 목적을 달성하기에 충분한 양의 활성 화합물이 포함된 조성물을 의미한다.
이때, 치료 유효량이란 질병의 증후를 예방, 완화 또는 개선하거나, 처방된 환자의 생존을 연장할 수 있는 용량을 의미한다.
본 발명에 따른 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 자가면역 질환 모델에서 자가면역 질환을 악화시키는 사이토카인의 분비를 억제하고, 상기 사이토카인을 내는 자가면역 질환 유발 세포의 분화를 억제할 수 있다. 따라서, 상기 유도체는 자가 면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 0.1 내지 50 중량%로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.001 내지 100 mg/㎏, 바람직하게는 0.01 내지 10 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한, 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 50% 치사량(LC50)이 2 g/kg 이상으로 안정성이 확보된 것으로서, 본 발명의 약학 조성물에 사용할 수 있다.
본 발명은 또한, 치료상 유효량의 전술한 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 유효 성분에 대한 치료상 유효량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 치료방법에 있어서, 성인의 경우, 본 발명의 화학식 1의 화합물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 0.001 내지 100 mg/㎏, 바람직하게는 0.01 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 치료방법에서 본 발명의 화학식 1의 화합물을 유효 성분으로 포함하는 조성물을 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사 등을 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 자가면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물의 제조를 위한 전술한 화학식 1의 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
< 실시예 1> 4,5- Bis ( chloromethyl )-2- methylpyridin -3- ol hydrochloride ( 2)의 제조
피리독신염산염 (1) (PyridoxineHCl, 5 g, 24.31 mmol)에 thionyl chloride (30 mL)와 DMF (0.2 mL, 2.583 mmol)를 가한 후 80℃에서 3시간 환류 교반하였다. 반응액을 상온으로 냉각한 후 Et2O (70 mL)를 가하고 빙냉 하에서 1시간 교반하였다. 석출된 고체를 감압 여과하고 걸러진 고체를 Et2O로 세척한 후 건조시켜 목적화합물 2 (5.5 g, 93%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.42 (s, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 2.63 (s, 3H) ppm.
<실시예 2> 2,4,5-Trimethylpyridin-3-ol (3)의 제조
화합물 2 (10 g, 41.23 mmol)의 AcOH (50 mL) 현탁액에 아연(Zn)분말 (8.08 g, 123.69 mmol)을 소량씩 나누어 가하고 130℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 상온으로 식힌 뒤 반응액을 감압 여과하고, 10 M NaOH 수용액을 사용하여 여액의 pH를 6으로 조절하였다. 이 액을 소금으로 포화시킨 후 EtOAc (6×100 mL)로 추출하였다. EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 3 (5.2 g, 92%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.49 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 2,31 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.08 (s, 3H) ppm.
<실시예 3> 6-Bromo-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol (4)의 제조
화합물 3 (2.5 g, 18.22 mmol)의 THF (30 mL) 현탁액에 1,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin (DBDMH, 2.5 g, 9.11 mmol)을 가한 뒤 상온에서 3시간 교반하였다. 반응액을 농축시킨 후 잔사를 EtOAc (500 mL)과 물 (20 mL)로 희석하고 수층을 EtOAc (3×100 mL)로 추출하였다. EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 4 (3.22 g, 80%)를 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 5.56 (br s, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H) ppm.
<실시예 4> 3-Benzyloxy-6-bromo-2,4,5-trimethylpyridine (5)의 제조
화합물 4 (6.5 g, 30.08 mmol)의 DMF (15 mL) 용액에 K2CO3 (20.78 g, 150.04 mmol), benzyl chloride (5.2 mL, 45.12 mmol)를 차례로 가한 후 상온에서 12시간 교반하였다. 반응액을 EtOAc (700 mL)로 희석하고 물 (10×20 mL)로 세척하였다. EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAC:Hex=1:20)로 정제하여 목적화합물 5 (8.9 g, 97%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.38-7.43 (m, 5H), 4.77 (s, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.24 (s, 3H) ppm.
< 실시예 5> 5- Benzyloxy -N-( diphenylmethylene )-3,4,6- trimethylpyridin -2-amine (6)의 제조
화합물 5 (3 g, 9.80 mmol), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium(0) (Pd2(DBA)3, 203mg, 0.20mmol), 2,2'-bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphthyl (BINAP, 249 mg, 0.39 mmol), NaOtBu (1.36 g, 13.71 mmol)의 toluene (30 mL) 용액에 benzophenone imine (1.73 mL, 9.80 mmol)을 가한 후 120℃에서 12시간 환류 교반하였다. 반응액을 상온으로 식힌 뒤 EtOAc (700 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (5×30 mL)로 세척하였다. 무수 MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 6 (3.28 g, 83%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.80 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.17-7.48 (m, 13H), 4.69 (s, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.91 (s, 3H) ppm.
<실시예 6> 5-Benzyloxy-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine (7a)의 제조
차가운 methanol (50 mL)에 acetyl chloride (2 mL)를 조금씩 가한 용액을 화합물 6 (2 g, 4.920 mmol)의 MeOH(50 mL)-THF(5 mL) 혼합 용액에 가한 다음 상온에서 12시간 교반하였다. 반응액을 감압 농축한 후 반응액을 EtOAc (300 mL)로 희석시키고 포화 NaHCO3 용액 (4×20 mL)으로 세척하였다. EtOAc 용액을 포화소금물(20 mL)로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 7a (992 mg, 83%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.31-7.45 (m, 5H), 4.68 (s, 2H), 4.25 (br s, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.99 (s, 3H) ppm.
<실시예 7> 3-Benzyloxy-2,4,5-trimethylpyridine (8)의 제조
화합물 3 (500 mg, 3.644 mmol)의 DMF (10 mL) 현탁액에 K2CO3 (2.5 g, 18.224 mmol)과 benzyl chloride (0.63 mL, 5.467 mmol)를 가하고 상온에서 12시간 교반하였다. 반응액을 농축시킨 후 잔사를 EtOAc (300 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 물 (3×30 mL)로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:20)로 정제하여 목적화합물 8 (593 mg, 71%)을 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 7.33-7.46 (m, 5H), 4.77 (s, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.17 (s, 3H) ppm.
<실시예 8> 3-Benzyloxy-2,4,5-trimethylpyridine 1-oxide (9)의 제조
화합물 8 (460 mg, 2.023 mmol)의 CH2Cl2 (10 mL) 현탁액에 m-chloroperbenzonic acid (m-CPBA, 549 mg, 2.226 mmol)을 가하고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화 NaHCO3 수용액을 가하고 CH2Cl2 (3×30 mL)으로 추출하였다. CH2Cl2 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=30:1)로 정제하여 목적화합물 9 (463 mg, 94%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 8.00 (s, 1H), 7.36-7.41 (m, 5H), 4.77 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.13 (s, 3H) ppm.
< 실시예 9> 2-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) isoindoline -1,3-dione (10)의 제조
화합물 9 (113 mg, 0.464 mmol) 의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 phthalimide (82 mg, 0.557 mmol), p-toluenesulfonyl chloride (133 mg, 0.696 mmol), N,N-diisopropylethylamine (242.5 μL, 1.392 mmol)을 가하고 상온에서 15시간 교반하였다. 반응액을 CH2Cl2으로 희석시킨 후 포화 NaHCO3 수용액과 포화소금물로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:5)로 정제하여 목적화합물 10 (136 mg, 79%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.90-7.95 (m, 2H), 7.74-7.81 (m, 2H), 7.36-7.50 (m, 5H), 4.83 (s, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.10 (s, 3H) ppm.
<실시예 10> 5-Benzyloxy-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine (7a)의 제조
화합물 10 (454 mg, 1.222 mmol)의 THF-EtOH (1:1, 12 mL) 현탁액에 hydrazine hydrate (0.84 mL)을 가한 후 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 농축시킨 후 CH2Cl2과 포화 NaHCO3 수용액으로 희석시킨 후, 수층을 CH2Cl2 (3×100 mL)으로 추출하였다. CH2Cl2 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:5)로 정제하여 목적화합물 7a (249 mg, 84%)를 흰색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.31-7.45 (m, 5H), 4.68 (s, 2H), 4.25 (br s, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.99 (s, 3H) ppm.
<실시예 11> 2-Bromo-5-methoxy-3,4,6-trimethylpyridine (11)의 제조
화합물 4 (213 mg, 1.0 mmol)을 CH3CN (10 mL)에 용해하고 iodomethane (0.12 mL, 2.0 mmol)과 K2CO3 (207 mg, 1.5 mmol)을 가한 후 50 ℃에서 16시간 교반하였다. 반응액을 EtOAc (100 mL)로 희석하고 1 N HCl 수용액, 물 및 포화소금물로 차례대로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 11 (154 mg, 67%)을 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 3.67 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H) ppm.
< 실시예 12> N-( Diphenylmethylene )-5- methoxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-amine (12)의 제조
화합물 11 (155 mg, 0.67 mmol)의 toluene (5 mL) 현탁액에 BINAP (42 mg, 0.067 mmol), Pd2(dba)3 (31 mg, 0.034 mmol), NaOtBu (71 mg, 0.74 mmol) 및 benzophenone imine (0.11 mL, 0.67 mmol)을 가한 후 16시간 환류 교반하였다. 반응액을 EtOAc (50 mL)로 희석하고 물과 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 12 (170 mg, 77%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.80-7.36 (m, 10H), 3.66 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.10 (s, 3H) ppm.
<실시예 13> 5-Methoxy-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine (7b)의 제조
화합물 12 (168 mg, 0.51 mmol)의 THF-MeOH (1:10, 5.5 mL) 용액을 0℃로 냉각한 후, CH3COCl-MeOH 혼합 용액 (1:10, 1.0 mL)을 천천히 적가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고 잔사를 물 (100 mL)과 EtOAc (100 mL)로 희석하였다. 수층과 유기층을 분리한 후, 유기층을 물 (50 mL)로 추출하였다. 수용액들을 모으고 여기에 1 N NaOH 수용액을 가해 pH 10으로 맞춘 후 EtOAc (3×50 mL)로 추출하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=30:1)로 정제하여 목적화합물 7b (54 mg, 64%)를 회색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 5.22 (s, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.91 (s, 3H) ppm.
< 실시예 14> 2- Bromo -5-( tert - butyldiphenylsilyloxy )-3,4,6-trimethylpyridine (13)의 제조
화합물 4 (964 mg, 4.46 mmol)의 DMF (9 mL) 용액에 imidazole (759 mg, 11.15 mmol)을 가한 후 20분 동안 교반하였다. 여기에 tert-butyldiphenylchlorosilane (TBDPSCl, 1.4 mL, 5.35 mmol)을 가한 후 상온에서 24시간 교반하였다. 반응물을 Et2O (100 mL)로 희석하고 물로 세척하였다. Et2O 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:45)로 정제하여 목적화합물 13 (1.75 g, 87%)을 무색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.68-7.60 (m, 4H), 7.44-7.38 (m, 2H), 7.36-7.31 (m, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.10 (s, 9H) ppm.
< 실시예 15> 5-( tert - Butyldiphenylsilyloxy )-N-( diphenylmethylene )-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine (14)의 제조
화합물 13 (1.74 g, 3.84 mmol), NaOtBu (389 mg, 4.23 mmol), Pd2(dba)3 (176 mg, 0.19 mmol) 및 BINAP (239 mg, 0.39 mmol)의 toluene (19 mL)현탁액에 benzophenone imine (0.65 mL, 3.84 mmol)을 가한 후 5시간 환류 교반하였다. 반응물을 상온으로 식힌 후 EtOAc (100 mL)로 희석하고 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:45)로 정제하여 목적화합물 14 (1.88 g, 89%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 7.70-7.64 (m, 2H), 7.60-7.55 (m, 4H), 7.55-7.51 (m, 1H), 7.50-7.44 (m, 4H), 7.41-7.27 (m, 7H), 7.07-7.02 (m, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.02 (s, 9H) ppm.
< 실시예 16> 5-( tert - Butyldiphenylsilyloxy )-3,4,6- trimethylpyridin -2-amine (7c)의 제조
화합물 14 (2.29 g, 4.14 mmol)의 THF-MeOH (1:10, 22 mL) 용액을 0℃로 냉각한 후, CH3COCl-MeOH 혼합 용액 (1:10, 1.0 mL) 을 천천히 적가하고 상온에서 24시간 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고 잔사를 EtOAc (200 mL)로 희석한 후 포화 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=45:1)로 정제하여 목적화합물 7c (1.49 g, 93%)를 갈색 액체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 7.66-7.61 (m, 4H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.43-7.37 (m, 4H), 5.03 (s, 2H), 1.92 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.04 (s, 9H) ppm.
실시예 17. 피리딘올 - 우레아 ( pyridinol -urea) 유도체 제조
< 실시예 17-1> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3- propylurea (15-1) 제조
화합물 7a (100 mg, 0.413 mmol)의 CH2Cl2 (5 mL) 현탁액에 propyl isocyanate (46.4 ㎕를 가하고 상온에서 40시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하여 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=50:1→20:1)로 정제하여 목적화합물 15-1 (125 mg, 92%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 9.77 (s, 1H), 7.48-7.30 (m, 5H), 6.67 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.33 (td, J = 6.9, 5.6 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.62 (dd, J = 14.3, 7.1 Hz, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 17-2> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3- propylurea (16-1) 제조
화합물 15-1 (105 mg, 0.321 mmol)의 CH2Cl2 (4 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (21 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 16-1 (58 mg, 75%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.88 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.14 (dd, J = 12.4, 6.7 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.56-1.40 (m, 2H), 0.91 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 17-3> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3- phenylurea (15-2) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 CH2Cl2 (3 mL) 현탁액에 phenyl isocyanate (47.5 ㎕, 0.289 mmol)를 가하고 상온에서 7시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하여 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 15-2 (99 mg, 95%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.64 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.56-7.35 (m, 7H), 7.34-7.25 (m, 2H), 7.05-6.96 (m. 1H), 4.78 (s, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.15 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-4> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3- phenylurea (16-2) 제조
화합물 15-2 (79 mg, 0.219 mmol)의 MeOH- CH2Cl2 (4 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (15.8 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 3시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-2 (58 mg, 97%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.38-11.33 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.29 (t, J=7.9 Hz, 2H), 6.98 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-5> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-chlorophenyl)urea (15-3) 제조
화합물 7a (100 mg, 0.413 mmol)의 CH2Cl2 (5 mL) 현탁액에 4-chlorophenyl isocyanate (63.4 mg, 0.413 mmol)을 가하고 상온에서 7시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하고 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=50:1→20:1)로 정제하여 목적화합물 15-3 (64 mg, 79%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.47 (s, 1H), 7.57-7.48 (m, 2H), 7.47-7.34 (m, 5H), 7.30-7.24 (m, 2H), 6.87 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.14 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-6> 1-(4- Chlorophenyl )-3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)urea (16-3) 제조
화합물 15-3 (64 mg, 0.162 mmol)의 CH2Cl2 (4 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (72 mg, 0.486 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.32 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 3시간 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 1 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=30:1)로 정제하여 목적화합물 16-3 (28 mg, 57%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 10.75 (s, 1H), 10.03 (s, 2H), 7.57-7.49 (m, 2H), 7.41-7.33 (m, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-7> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(2- tert -butyl-6-methylphenyl)urea (15-4) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 2-tert-butyl-6-methylphenyl isocyanate (58.2 ㎕, 0.289 mmol)을 가하고 상온에서 26시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하고 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=50:1→30:1)로 정제하여 목적화합물 15-4 (118 mg, 82%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 11.48 (s, 1H), 7.47-7.27 (m, 6H), 7.18-7.12 (m, 2H), 6.83 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.43 (s, 9H) ppm.
< 실시예 17-8> 1-(2- tert -butyl-6- methylphenyl )-3-(5- hydroxy -3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)urea (16-4) 제조
화합물 15-4 (50 mg, 0.116 mmol)의 MeOH-CH2Cl2 (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (10 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-4 (35 mg, 88%)를 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 10.91 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.23 (dd, J = 8.7, 4.5 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 7.4, 5.7 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.18-2.12 (m, 9H), 1.35 (s, 9H) ppm.
< 실시예 17-9> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(naphthalen-1-yl)urea (15-5) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 CH2Cl2 (3 mL) 현탁액에 1-naphthyl isocyanate (42.7 ㎕, 0.289 mmol)을 가하고 상온에서 12시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하고 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=30:1)로 정제하여 목적화합물 15-5 (99 mg, 83%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.68 (s, 1H), 8.35-8.19 (m, 2H), 7.89-7.84 (m, 1H), 7.65-7.34 (m, 9H), 6.91 (s, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.19 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-10> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-( naphthalen -1-yl)urea (16-5) 제조
화합물 15-5 (49 mg, 0.119 mmol)의 MeOH-THF-CH2Cl2 (4 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (10 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 16-5 (31mg, 82%)를 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.08 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.22 (dd, J = 11.2, 8.0 Hz, 2H), 7.96 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.68-7.45 (m, 4H), 2.50 (s, 3H), 2.20 (s, 6H) ppm.
< 실시예 17-11> N-((5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamoyl)benzenesulfonamide (15-6) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (1.5 mL) 현탁액에 p-toluenesulfonyl isocyanate (31.5 ㎕, 0.206 mmol)을 가하고 상온에서 24시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하고 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=40:1)로 정제하여 목적화합물 15-6 (75 mg, 83%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.96 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.43-7.34 (m, 5H), 7.32-7.36 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.74 (s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.06 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-12> N-((5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamoyl)benzenesulfonamide (16-6) 제조
화합물 15-6 (251 mg, 0.571 mmol)의 MeOH-CH2Cl2 (10 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (50 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 3시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-6 (107 mg, 54%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.03 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-13> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-fluorophenyl)urea (15-7) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 4-fluorophenyl isocyanate (23 ㎕, 0.206 mmol)를 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하여 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=99:1)로 정제하여 목적화합물 15-7 (67 mg, 86%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.32 (s, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.49-7.37 (m, 5H), 7.05 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 6.81 (br s, 1H), 4.78 (s, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.18 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-14> 1-(4- Fluorophenyl )-3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)urea (16-7) 제조
화합물 15-7 (62 mg, 0.164 mmol)의 CH2Cl2 (3 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (79 mg, 0.530 mmol)과 BCl3 (0.35 mL, 0.353 mmol)을 가하고 아르곤 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 여과하여 목적화합물 16-7 (43 mg, 90%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CD3OD) δ 7.52-7.43 (m, 2H), 7.02 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.17 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-15> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-bromophenyl)urea (15-8) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 4-bromophenyl isocyanate (61.2 mg, 0.309 mmol)를 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하여 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=99:1)로 정제하여 목적화합물 15-8 (80 mg, 89%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.44 (s, 1H), 7.55-7.36 (m, 9H), 6.85 (br s, 1H), 4.78 (s, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.18 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-16> 1-(4- Bromophenyl )-3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)urea (16-8) 제조
화합물 15-8 (74 mg, 0.168 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (75 mg, 0.505 mmol)과 BCl3 (0.34 mL, 0.337 mmol)을 가하고 아르곤 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 여과하여 목적화합물 16-8 (30 mg, 50%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CD3OD) δ 7.43 (s, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.23 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-17> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(p-tolyl)urea (15-9) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 p-tolyl isocyanate (26 ㎕, 0.206 mmol)를 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액에 실리카겔을 가하여 농축한 후 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=99:1)로 정제하여 목적화합물 15-7 (76 mg, 98%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.23 (s, 1H), 7.53-7.37 (m, 7H), 7.14 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.86 (brs, 1H), 4.78 (s, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.17 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-18> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(p-tolyl)urea (16-9) 제조
화합물 15-9 (69 mg, 0.185 mmol)의 MeOH (2 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (15 mg)을 가하고 수소 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-9 (26 mg, 49%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CD3OD) δ 7.74 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.18 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-19> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-methoxyphenyl)urea (15-10) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 용액에 4-methoxyphenyl isocyanate (32 ㎕, 0.248 mmol)를 가하고 상온에서 10시간 교반하였다. 반응이 끝난 후 반응액 중 석출된 고체를 여과하여 목적화합물 15-10 (75 mg, 93%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 11.88 (s, 1H), 7.55-7.33 (m, 7H), 6.89 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.79 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.29 (s, 6H) ppm.
< 실시예 17-20> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-methoxyphenyl)urea (16-10) 제조
화합물 15-10 (63 mg, 0.161 mmol)의 MeOH (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (13 mg)을 가하고 수소 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-10 (47 mg, 97%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CD3OD) δ 7.42-7.35 (m, 2H), 6.93-6.85 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.18 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-21> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-(trifluoromethyl)phenyl)urea (15-11) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 용액에 4-trifluoromethylphenyl isocyanate (68 ㎕, 0.206 mmol)를 가하고 상온에서 10시간 교반하였다. 반응이 끝난 후 반응액 중 석출된 고체를 여과하여 목적화합물 15-11 (59 mg, 66%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.72 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.43 (ddd, J = 8.7, 4.8, 2.5 Hz, 5H), 6.81 (brs, 1H), 4.79 (s, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.19 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-22> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-(trifluoromethyl)phenyl)urea (16-11) 제조
화합물 15-11 (44 mg, 0.103 mmol)의 MeOH (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (9 mg)을 가하고 수소 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-11 (33 mg, 95%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CD3OD) δ 7.65 (dd, J = 27.5, 8.7 Hz, 4H), 2.45 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.19 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-23> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-nitrophenyl)urea (15-12) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 용액에 4-nitrophenyl isocyanate (40 ㎕, 0.247 mmol)를 가하고 상온에서 10시간 교반하였다. 반응이 끝난 후, 고체를 여과하여 목적화합물 15-12 (75 mg, 89%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.80 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.21 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.76 (t, J = 9.3 Hz, 2H), 7.46 (dd, J = 20.2, 7.4 Hz, 5H), 4.80 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.15 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-24> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-nitrophenyl)urea (16-12) 제조
화합물 15-12 (74 mg, 0.184 mmol)의 MeOH (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (15 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-12 (13.6 mg, 23%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.03 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.15 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.52 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.12 (d, J = 10.7 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 17-25> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)urea (15-13) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 용액에 4-trifluoromethoxyphenyl isocyanate (31 ㎕, 0.206 mmol)를 가하고 상온에서 10시간 교반하였다. 반응이 끝난 후 반응액 중 석출된 고체를 여과하여 목적화합물 15-13 (67 mg, 73%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CD3OD) δ 7.62 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.50-7.35 (m, 5H), 7.23 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 4.60 (s, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.20 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-26> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)urea (16-13) 제조
화합물 15-13 (67 mg, 0.150 mmol)의 MeOH (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (13 mg)을 가하고 수소 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-13 (50 mg, 95%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CD3OD) δ 7.60 (d, 2H), 7.24 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.24 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-27> 1-Benzyl-3-(5- benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )urea (15-14) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 용액에 benzyl isocyanate (43 ㎕, 0.351 mmol)를 가하고 상온에서 10시간 교반하였다. 반응이 끝난 후 반응액 중 석출된 고체를 여과하여 목적화합물 15-14 (38 mg, 50%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.49-7.28 (m, 10H), 4.75 (s, 2H), 4.59 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.32 (s, 6H), 2.26 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-28> 1-Benzyl-3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )urea (16-14) 제조
화합물 15-14 (31 mg, 0.082 mmol)의 MeOH (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (6 mg)을 가하고 수소 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-14 (23 mg, 100%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 9.16 (s, 1H), 8.27 (brs, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.37-7.23 (m, 5H), 4.40 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.06 (s, 3H) ppm.
< 실시예 17-29> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-isopropylphenyl)urea (15-15) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 용액에 4-isopropylphenyl isocyanate (40 ㎕, 0.248 mmol)를 가하고 상온에서 10시간 교반하였다. 반응이 끝난 후, 고체를 여과하여 목적화합물 15-15 (56 mg, 67%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.50 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.42 (s, 5H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.80 (s, 2H), 2.95-2.82 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.29 (s, 6H), 1.24 (d, J = 6.9 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 17-30> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-isopropylphenyl)urea (16-15) 제조
화합물 15-15 (49 mg, 0.121 mmol)의 MeOH (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (10 mg)을 가하고 수소 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-15 (38 mg, 100%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.25 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.41 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 2.93-2.74 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.13 (d, J = 10.1 Hz, 6H), 1.18 (d, J = 6.9 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 17-31> N-((5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamoyl)benzamide (15-16) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 용액에 benzoyl isocyanate (40 ㎕, 0.309 mmol)를 가하고 상온에서 10시간 교반하였다. 반응이 끝난 후 반응액 중 석출된 고체를 여과하여 목적화합물 15-16 (44 mg, 56%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 10.72 (brs, 1H), 8.87 (brs, 1H), 7.96 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 7.66-7.30 (m, 8H), 4.80 (s, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.27 (d, J = 5.5 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 17-32> N-((5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamoyl)benzamide (16-16) 제조
화합물 15-16 (42 mg, 0.109 mmol)의 MeOH (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (9 mg)을 가하고 수소 기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하여 목적화합물 16-16 (23 mg, 69%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.06 (s, 1H), 10.26 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.02 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.60 (dt, J = 29.5, 7.4 Hz, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.08 (s, 3H) ppm.
실시예 8. 피리딘올 - 티오우레아 ( pyridinol - thiourea ) 유도체 제조
< 실시예 18-1> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3- butylthiourea (17-1a) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 EtOH (1.5 mL) 현탁액에 butyl isothiocyanate (38.3 ㎕, 0.318 mmol)을 가하고 60℃로 가열하면서 5시간 교반하였다. 반응액을 상온으로 식히고 감압 농축한 후, 잔사를 관크로마토그래피 (EtAOc:Hex=1:5)로 정제하여 목적화합물 17-1 (81 mg, 78%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.06 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.44-7.36 (m, 5H), 4.74 (s, 2H), 3.73 (dd, J = 11.8, 6.7 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.77-1.63 (m, 2H), 1.55-1.41 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 18-2> 1-Butyl-3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) thiourea (18-1) 제조
화합물 17-1 (64 mg, 0.178 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (79 mg, 0.534 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.36 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 30분 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 2 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:3→1:1)로 정제하여 목적화합물 18-1 (28 mg, 61%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 11.89 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 3.72 (dd, J = 11.9, 6.8 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.73-1.67 (m. 2H), 1.56-1.39 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 18-3> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-isopropylthiourea (17-2a) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 CH3CN (1.5 mL) 현탁액에 isopropyl isothiocyanate (62 μL, 0.578 mmol)을 가하고 5시간 환류 교반하였다. 반응액을 상온으로 식히고 감압 농축한 후, 잔사를 관크로마토그래피 (EtAOc:Hex=1:5→1:4)로 정제하여 목적화합물 17-2 (88 mg, 89%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.06 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.46-7.36 (m, 5H), 4.75 (s, 2H), 4.53 (dq, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.35 (d, J = 6.5 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 18-4> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-isopropylthiourea (18-2) 제조
화합물 17-2 (88 mg, 0.257 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (114 mg, 0.771 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.52 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 12시간 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 2 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:3→2:1)로 정제한 후, 재결정하여 목적화합물 18-2 (61 mg, 94%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.23 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 4.35 (dq, J = 13.4, 6.6 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.24 (d, J = 6.5 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 18-5> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-cyclohexylthiourea (17-3a) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH3CN (0.5 mL) 현탁액에 cyclohexyl isothiocyanate (42 μL, 0.309 mmol)을 가하고 21시간 환류 교반하였다. 반응액을 상온으로 식히고 감압 농축한 후, 잔사를 관크로마토그래피 (EtAOc:Hex=1:4→1:3)로 정제하여 목적화합물 17-3 (56 mg, 70%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.14-12.11 (m, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.45-7.33 (m, 5H), 4.73 (s, 2H), 4.33-4.29 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.08-2.02 (m, 2H), 1.75-1.63 (m, 3H), 1.50-1.35 (m, 5H) ppm.
< 실시예 18-6> 1- Cyclohexyl -3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) thiourea (18-3) 제조
화합물 17-3 (37 mg, 0.096 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (43 mg, 0.288 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.19 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 3시간 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 1 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=50:1)로 정제한 후, 재결정하여 목적화합물 18-3 (15 mg, 54%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 11.49-11.45 (m, 1H), 8.47 (s, 2H), 4.20 (s, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.99-1.85 (m, 3H), 1.70-1.59 (m, 2H), 1.44-1.30 (m, 5H) ppm.
< 실시예 18-7> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-phenylthiourea (17-4a) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH3CN (1 mL) 현탁액에 cyclohexyl isothiocyanate phenyl isothiocyanate (37 μL, 0.309 mmol)을 가하고 10시간 환류 교반하였다. 반응액을 상온으로 식히고 감압 농축한 후, 잔사를 관크로마토그래피 (EtAOc:Hex=1:5→1:1)로 정제하여 목적화합물 17-4 (66 mg, 85%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 14.17 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.76 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47-7.35 (m, 7H), 7.25-7.19 (m, 1H), 4.79 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.22 (s, 3H) ppm.
< 실시예 18-8> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-phenylthiourea (18-4) 제조
화합물 17-4 (25 mg, 0.066 mmol)의 CH2Cl2 (1 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (29 mg, 0.198 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.13 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 1시간 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 1 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=40:1)로 정제하여 목적화합물 18-4 (13 mg, 66%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.12 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 7.73-7.65 (m, 2H), 7.41-7.32 (m, 2H), 7.21-7.12 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-9> 1-(5-(( tert - butyldiphenylsilyl )oxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)-3-(p-tolyl)thiourea (17-5c) 제조
화합물 7c (110 mg, 0.28 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 p-tolyl isothiocyanate (42 mg, 0.28 mmol)을 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔사를 EtOH로 재결정하여 목적화합물 17-5c (110 mg, 73%)를 흰색 고체로 얻었다.
MS m/z 540 [M+H]+.
< 실시예 18-10> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(p-tolyl)thiourea (18-5) 제조
화합물 17-5 (108 mg, 0.20 mmol)의 THF (2 mL) 용액에 tetrabutylammonium fluoride (TBAF, 1.0 M in THF, 0.22 mL) 용액을 가한 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화소금물 (1 mL)을 가한 후, EtOAc (50 mL)로 희석하고 수층을 분리한 후, EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=2:3)로 정제하여 목적화합물 18-5 (38 mg, 63%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.05 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-11> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-chlorophenyl)thiourea (17-6a) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 EtOH (1.5 mL) 현탁액에 4-chlorophenyl isothiocyanate (53.9 mg, 0.318 mmol)를 가하고 50℃에서 11시간 교반하였다. 반응액을 상온으로 식히고 감압 농축한 후, 잔사를 관크로마토그래피 (EtAOc:Hex=1:5)로 정제하여 목적화합물 17-6 (98 mg, 82%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 14.28 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.45-7.31 (m, 7H), 4.76 (s, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.19 (s, 3H) ppm.
< 실시예 18-12> 1-(4- Chlorophenyl )-3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)thiourea (18-6) 제조
화합물 17-6 (93 mg, 0.226 mmol)의 CH2Cl2 (1.5 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (101 mg, 0.678 mmol을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.45 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 1시간 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 2 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:2→2:1)로 정제한 후, 재결정하여 목적화합물 18-6 (54 mg, 74%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.99 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-13> 1-(4- Bromophenyl )-3-(5-(( tert - butyldiphenylsilyl )oxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)thiourea (17-7c) 제조
화합물 7c (104 mg, 0.27 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 4-bromophenyl isothiocyanate (57 mg, 0.27 mmol)을 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔사를 EtOH로 재결정하여 목적화합물 17-7c (126 mg, 77%)를 흰색 고체로 얻었다.
MS m/z 604 [M+H]+.
< 실시예 18-14> 1-(4- Bromophenyl )-3-(5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)thiourea (18-7) 제조
화합물 17-7 (126 mg, 0.21 mmol)의 THF (2 mL) 용액에 tetrabutylammonium fluoride (TBAF, 1.0 M in THF, 0.23 mL) 용액을 가한 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화소금물 (1 mL)을 가한 후, EtOAc (50 mL)로 희석하고 수층을 분리한 후, EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=2:3)로 정제하여 목적화합물 18-7 (45 mg, 59%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.96 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-15> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(3,4-dichlorophenyl)thiourea (17-8a) 제조
화합물 7a (121 mg, 0.50 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 3,4-dichlorophenyl isothiocyanate (70 ㎕, 0.50 mmol)를 가한 후 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 17-8 (152 mg, 68%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.00 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.64-7.60 (m, 1H), 7.57-7.54 (m, 1H), 7.51-7.48 (m, 2H), 7.46-7.36 (m, 4H), 4.80 (s, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H) ppm.
< 실시예 18-16> 1-(3,4- Dichlorophenyl )-3-(5- methoxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)thiourea (17-8b) 제조
화합물 7b (25 mg, 0.15 mmol)의 EtOH (2 mL) 용액에 3,4-dichlorophenyl isothiocyanate (24 μL, 0.16 mmol) 가하고 상온에서 48시간 교반하였다. 반응액을 감압 농축하고 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 17-8b (30 mg, 54%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.05 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55-7.47 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.19 (s, 3H) ppm.
< 실시예 18-17> 1-(5-(( tert - Butyldiphenylsilyl )oxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)-3-(3,4-dichlorophenyl)thiourea (17-8c) 제조
화합물 7c (196 mg, 0.50 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 3,4-dichlorophenyl isothiocyanate (70 μL, 0.50 mmol)을 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔사를 EtOH로 재결정하여 목적화합물 17-8c (238 mg, 80%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.77 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 8.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.69-7.62 (m, 4H), 7.68-7.40 (m, 8H), 2.11 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.07 (s, 9H) ppm.
< 실시예 18-18> 1-(3,4- Dichlorophenyl )-3-(5- hydroxy -3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)thiourea (18-8) 제조
화합물 17-8c (120 mg, 0.22 mmol)의 THF (2 mL) 용액에 tetrabutylammonium fluoride (TBAF, 1.0 M in THF, 0.24 mL) 용액을 가한 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화소금물 (1 mL)을 가한 후, EtOAc (50 mL)로 희석하고 수층을 분리한 후, EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 18-8 (44 mg, 63%)을 회색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.81 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.19 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.63-7.52 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.16 (m, 6H) ppm.
< 실시예 18-19> 1-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(3-(trifluoromethyl)phenyl)thiourea (17-9a) 제조
화합물 7a (121 mg, 0.5 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 3-(trifluoromethyl)phenyl isothiocyanate (76 ㎕, 0.5 mmol)를 가한 후 상온에서 18시간 교반하였다. 반응물을 감압 농축하고 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 17-9a (91 mg, 76%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.11 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.82 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.64-7.58 (m, 1H), 7.51 (m, 3H), 7.46-7.35 (m, 3H), 4.81 (s, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s, 3H) ppm.
< 실시예 18-20> 1-(5- Methoxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(3-(trifluoromethyl)phenyl)thiourea (17-9b) 제조
화합물 7b (25 mg, 0.15 mmol)의 EtOH (2 mL) 용액에 3-(trifluoromethyl)phenyl isothiocyanate (24 μL, 0.16 mmol)을 가하고 상온에서 48시간 교반하였다. 반응물을 감압 농축하고 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 17-9b (30 mg, 54%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.05 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55-7.47 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.19 (s, 3H) ppm.
< 실시예 18-21> 1-(5-(( tert - Butyldiphenylsilyl )oxy)-3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)-3-(3-(trifluoromethyl)phenyl)thiourea (17-9c) 제조
화합물 7c (196 mg, 0.50 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 3-(trifluoromethyl)phenyl isothiocyanate (76 μL, 0.50 mmol)을 가하고 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압농축하고, 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 17-9c (201 mg, 64%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.85 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.77-7.71 (m, 1H), 7.70-7.63 (m, 4H), 7.58-7.41 (m, 8H), 2.13 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.08 (s, 9H) ppm.
< 실시예 18-22> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(3-(trifluoromethyl)phenyl)thiourea (18-9) 제조
화합물 17-9c (109 mg, 0.18 mmol)의 THF (2 mL) 용액에 tetrabutylammonium fluoride (TBAF, 1.0 M in THF, 0.22 mL) 용액을 가한 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화소금물 (1 mL)을 가한 후, EtOAc (50 mL)로 희석하고 수층을 분리한 후, EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=3:7)로 정제하여 목적화합물 18-9 (42 mg, 66%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.85 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62-7.57 (m, 1H), 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-23> 1-(5-(( tert - Butyldiphenylsilyl )oxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)-3-(4-(trifluoromethyl)phenyl)thiourea (17-10c) 제조
화합물 7c (113 mg, 0.29 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 4-(trifluoromethyl)phenyl isothiocyanate (60 mg, 0.30 mmol)을 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔사를 EtOH로 재결정하여 목적화합물 17-10c (140 mg, 81%)를 흰색 고체로 얻었다.
MS m/z 594 [M + H]+.
< 실시예 18-24> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-(trifluoromethyl)phenyl)thiourea (18-10) 제조
화합물 17-10c (140 mg, 0.24 mmol)의 THF (3 mL) 용액에 tetrabutylammonium fluoride (TBAF, 1.0 M in THF, 0.26 mL) 용액을 가한 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화소금물 (1 mL)을 가한 후, EtOAc (50 mL)로 희석하고 수층을 분리한 후, EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=2:3)로 정제하여 목적화합물 18-10 (54 mg, 64%)을 회색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.10 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-25> 1-(5-(( tert - Butyldiphenylsilyl )oxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)-3-(4-nitrophenyl)thiourea (17-11c) 제조
화합물 7c (105 mg, 0.27 mmol)의 EtOH (5 mL) 용액에 4-nitrophenyl isothiocyanate (49 mg, 0.27 mmol)을 가하고 상온에서 18시간 교반하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔사를 EtOH로 재결정하여 목적화합물 17-10c (106 mg, 69%)를 흰색 고체로 얻었다.
MS m/z 571 [M + H]+.
< 실시예 18-26> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-nitrophenyl)thiourea (18-11) 제조
화합물 17-11c (106 mg, 0.19 mmol)의 THF (2 mL) 용액에 tetrabutylammonium fluoride (TBAF, 1.0 M in THF, 0.20 mL) 용액을 가한 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화소금물 (1 mL)을 가한 후, EtOAc (50 mL)로 희석하고 수층을 분리한 후, EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=2:3)로 정제하여 목적화합물 18-11 (32 mg, 54%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 13.11 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.22 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.04 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-27> 1-(5-(( tert - Butyldiphenylsilyl )oxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)-3-(4-methoxyphenyl)thiourea (17-12c) 제조
화합물 7c (234 mg, 0.60 mmol)의 EtOH (6 mL) 용액에 4-methoxyphenyl isothiocyanate (83 μL, 0.60 mmol)을 가하고 70 oC에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압농축하고, 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 17-12c (132 mg, 43%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.79 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 7.69-7.63 (m, 4H), 7.51-7.40 (m, 8H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.04 (s, 6H), 1.07 (s, 9H) ppm.
< 실시예 18-28> 1-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-3-(4-methoxyphenyl)thiourea (18-12) 제조
화합물 17-12c (107 mg, 0.21 mmol)의 THF (2 mL) 용액에 tetrabutylammonium fluoride (TBAF, 1.0 M in THF, 0.25 mL) 용액을 가한 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액에 포화소금물 (1 mL)을 가한 후, EtOAc (50 mL)로 희석하고 수층을 분리한 후, EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=2:3)로 정제하여 목적화합물 18-12 (30 mg, 52%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.88 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.17 (s, 6H) ppm.
< 실시예 18-29> N-((5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamothioyl)benzamide (17-13a) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 EtOH (1 mL) 현탁액에 benzoyl isothiocyanate (42.7 μL, 0.318 mmol)를 가하고 50 oC에서 10시간 교반하였다. 반응액을 상온으로 식히고 감압 농축한 후, 잔사를 관크로마토그래피 (EtAOc:Hex=1:5→1:1)로 정제하여 목적화합물 17-13a (117 mg, 99%)를 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 12.17 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.68-7.60 (m, 1H), 7.58-7.51 (m, 2H), 7.48-7.37 (m, 5H), 4.85 (s, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.26 (s, 3H) ppm.
< 실시예 18-30> N-((5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamothioyl)benzamide (18-13) 제조
화합물 17-13a (107 mg, 0.264 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (117 mg, 0.792 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.53 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 2시간 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 2 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=40:1)로 정제하여 목적화합물 18-13 (53 mg, 64%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 12.12 (s, 1H), 11.52 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.99 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.67 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.11 (s, 3H) ppm.
실시예 19. 피리딘올 - 카바메이트 ( pyridinol - carbamate ) 유도체 제조
< 실시예 19-1> Methyl (5- benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) carbamate (19-1) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 acetone (1 mL) 현탁액에 K2CO3 (120 mg, 0.864 mmol)를 가한 후 반응액을 0℃로 냉각하였다. 반응액에 methyl chloroformate (112 ㎕, 1.445 mmol)를 천천히 가한 후, 상온에서 24시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후, 잔사를 CH2Cl2와 물로 희석하고 수층을 CH2Cl2 (3×30 mL)로 추출하였다. CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=30:1→20:1)로 정제하여 목적화합물 19-1 (63 mg, 73%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.55-7.30 (m, 5H), 6.96 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.16 (s, 3H) ppm.
< 실시예 19-2> Methyl (5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) carbamate (20-1) 제조
화합물 19-1 (55 mg, 0.184 mmol)의 MeOH-CHCl3 (3 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (12 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=20:1→5:1)로 정제하여 목적화합물 20-1 (37 mg, 96%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.99 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 5.74 (s, 1H), 3.55 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.97 (s, 3H) ppm.
< 실시예 19-3> Butyl (5- benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) carbamate (19-2) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 acetone (1 mL) 현탁액에 K2CO3 (200 mg, 1.445 mmol)를 가한 후 반응액을 0℃로 냉각하였다. 반응액에 butyl chloroformate (183.8 ㎕, 1.445 mmol)를 천천히 가한 후, 상온에서 24시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후, 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액, 물, 포화소금물로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=30:1→20:1)로 정제하여 목적화합물 19-2 (90 mg, 91%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.51-7.29 (m, 5H), 6.78 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.12 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.61 (dt, J = 8.3, 5.6 Hz, 2H), 1.38 (dd, J = 15.1, 7.4 Hz, 2H), 0.92 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 19-4> Butyl (5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) carbamate (20-2) 제조
화합물 19-2 (79 mg, 0.231 mmol)의 MeOH (5 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (16 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 20-2 (54 mg, 92%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.95 (s, 1H), 3.98 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.55 (dt, J = 14.5, 6.6 Hz, 2H), 1.34 (dq, J = 14.1, 7.1 Hz, 2H), 0.89 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 19-5> Isobutyl (5- benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamate (19-3) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 acetone (1 mL) 현탁액에 K2CO3 (200 mg, 1.445 mmol)를 가한 후 반응액을 0℃로 냉각하였다. 반응액에 isobutyl chloroformate (187 ㎕, 1.445 mmol)를 천천히 가했다. 반응액을 상온에서 23시간 교반한 후, 50℃에서 4시간 더 교반하였다. 반응액을 농축한 후, 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액, 6 M NaOH 수용액으로 세척하였다. 수층을 CH2Cl2 (2×30 mL)로 추출한 후, CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=40:1)로 정제하여 목적화합물 19-3 (94 mg, 93%)을 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.46-7.30 (m, 5H), 4.75 (s, 2H), 3.91 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.94 (dt, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 0.92 (d, J = 6.7 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 19-6> Isobutyl (5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl ) carbamate (20-3) 제조
화합물 19-3 (91 mg, 0.266 mmol)의 MeOH (5 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (18 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 6시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=30:1→20:1)로 정제하여 목적화합물 20-3 (34 mg, 50%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.87 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 3.76 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.85 (td, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H), 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 19-7> 2- Chloroethyl (5- benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamate (19-4) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 acetone (1 mL) 현탁액에 K2CO3 (200 mg, 1.445 mmol)를 가한 후 반응액을 0℃로 냉각하였다. 반응액에 2-chloroethyl chloroformate (149.2 ㎕, 1.445 mmol)을 천천히 가한 후 상온에서 9시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후, 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액, 포화소금물로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=50:1→30:1)로 정제하여 목적화합물 19-4 (84 mg, 84%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.48-7.33 (m, 5H), 6.88 (s, 1H), 4.76 (s, 2H), 4.38 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.70 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.15 (s, 3H) ppm.
< 실시예 19-8> 2- Chloroethyl (5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamate (20-4) 제조
화합물 19-4 (75 mg, 0.215 mmol)의 CH2Cl2 (2 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (96 mg, 0.645 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.32 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 30분 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 1 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=30:1→10:1)로 정제하여 목적화합물 20-4 (51 mg, 92%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 9.11 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 4.31-4.21 (m, 2H), 3.86-3.76 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.02 (s, 3H) ppm.
< 실시예 19-9> 2- Methoxyethyl (5- benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamate (19-5) 제조
화합물 7a (70 mg, 0.289 mmol)의 acetone (2 mL) 현탁액에 K2CO3 (200 mg, 1.445 mmol)를 가한 후 반응액을 0℃로 냉각하였다. 반응액에 2-methoxyethyl chloroformate (168 ㎕, 1.445 mmol)를 천천히 가한 후 상온에서 17시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후, 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액, 포화소금물로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고 무수 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=40:1)로 정제하여 목적화합물 19-5 (72mg, 72%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.49-7.35 (m, 5H), 6.94 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 4.35-4.26 (m, 2H), 3.67-3.58 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.16 (s, 3H) ppm.
< 실시예 19-10> 2- Methoxyethyl (5- hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)carbamate (20-5) 제조
화합물 19-5 (95 mg, 0.276 mmol)의 MeOH (5 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (19 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 20-5 (70 mg, 99%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 9.01 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 4.11 (dd, J = 5.4, 3.9 Hz, 2H), 3.52 (dd, J = 5.4, 4.0 Hz, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.00 (s, 3H) ppm.
실시예 20. 피리딘올 -술폰아미드( pyridinol -sulfonamide) 유도체 제조
< 실시예 20-1> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)methanesulfonamide (21-1) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 pyridine (2 mL) 현탁액에 methanesulfonyl chloride (47.8 ㎕, 0.618 mmol)을 가하고 상온에서 24시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=40:1→30:1)로 정제하여 목적화합물 21-1 (34 mg, 52%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.43-7.37 (m, 5H), 4.72 (s, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (s, 3H) ppm.
< 실시예 20-2> N-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2-yl)methanesulfonamide (22-1) 제조
화합물 21-1 (26 mg, 0.081 mmol)의 CH2Cl2-MeOH (5 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (5 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 22-1 (19 mg, 100%)를 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 9.00 (br s, 1H), 3.20 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.10 (d, J = 3.7 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 20-3> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-4-methylbenzenesulfonamide (21-2) 제조
화합물 7a (100 mg, 0.413 mmol)의 pyridine (2 mL) 현탁액에 tosyl chloride (86.5 mg, 0.454 mmol)을 가하고 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:3)로 정제하여 목적화합물 21-2 (82 mg, 50%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.81 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.39-7.35 (m, 5H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.70 (s, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.14 (s, 3H) ppm.
< 실시예 20-4> N-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-4-methylbenzenesulfonamide (22-2) 제조
화합물 21-2 (130 mg, 0.328 mmol)의 MeOH (10 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (26 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 22-2 (186 mg, 85%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 7.71 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.08 (s, 3H) ppm.
< 실시예 20-5> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-4-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (21-3) 제조
화합물 7a (150 mg, 0.619 mmol)의 pyridine (3 mL) 현탁액에 4-(trifluoromethyl)benzenesulfonyl chloride (227.1 mg, 0.929 mmol)을 가하고 상온에서 24시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 물, 포화 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. 수층을 CH2Cl2 (3×25 mL)로 추출한 후 CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:3)로 정제하여 목적화합물 21-3 (231 mg, 83%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 8.05 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.41-7.31 (m, 5H), 4.72 (s, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.14 (s, 3H) ppm.
< 실시예 20-6> N-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-4-(trifluoromethyl)benzenesulfonamide (22-3) 제조
화합물 21-3 (146 mg, 0.324 mmol)의 MeOH-THF (5 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (23 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 4시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 22-3 (182 mg, 98%)를 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.07 (s, 3H) ppm.
< 실시예 20-7> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-4-nitrobenzenesulfonamide (21-4) 제조
화합물 7a (200 mg, 0.825 mmol)의 pyridine (3 mL) 현탁액에 4-nitrobenzensulfonyl chloride (219.5 mg, 0.99 mmol)을 가하고 70℃에서 48시간 교반하였다. 반응액을 농축한 후 잔사를 CH2Cl2로 희석하고 물, 포화 NaHCO3 수용액, 포화소금물로 차례대로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 21-4 (233 mg, 66%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 11.94 (br s, 1H), 8.29-8.22 (m, 2H), 8.12-8.06 (m, 2H), 7.42-7.31 (m, 5H), 4.72 (s, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.13 (s, 3H) ppm.
< 실시예 20-8> N-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-4-nitrobenzenesulfonamide (22-4) 제조
화합물 21-4 (70 mg, 0.164 mmol)의 CH2Cl2 (1 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (72.8 mg, 0.491 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 0.33 mL)를 천천히 가한 후 0℃에서 30분 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 1 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=30:1)로 정제하여 목적화합물 22-4 (60 mg, 100%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 10.11 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.39 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 8.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.13-2.07 (m, 9H) ppm.
< 실시예 20-9> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )naphthalene-1-sulfonamide (21-5) 제조
화합물 7a (50 mg, 0.206 mmol)의 CH2Cl2 (1 mL) 현탁액에 triethylamine (57.4 μL, 0.412 mmol), 1-naphthalenesulfonyl chloride (70 mg, 0.309 mmol)를 가하고 상온에서 70시간 교반하였다. 반응액을 CH2Cl2와 포화 NaHCO3 수용액을 가하여 희석하고, 수층을 CH2Cl2 (3×30 mL)로 추출한 후, CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:15→1:2)로 정제하여 목적화합물 21-5 (54 mg, 61%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 11.87 (s, 1H), 9.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.68-7.58 (m, 1H), 7.52 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.48-7.40 (m, 1H), 7.38-7.27 (m, 5H), 4.65 (s, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (s, 3H) ppm.
< 실시예 20-10> N-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )naphthalene-1-sulfonamide (22-5) 제조
화합물 21-5 (109 mg, 0.252 mmol)의 MeOH (5 mL) 현탁액에 10% palladium on activated carbon (22 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 8시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:2→1:1)로 정제하여 목적화합물 22-5 (77 mg, 89%)을 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 8.75-8.65 (m, 1H), 8.22 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.06-8.01 (m, 1H), 7.63-7.57 (m, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.96 (s, 3H) ppm.
실시예 21. 피리딘올 - 술파미드 ( pyridinol - sulfamide ) 유도체 제조
< 실시예 21-1> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- yl )-2-oxooxazolidine-3-sulfonamide (23) 제조
Chlorosulfonyl isocyanate (360 μL, 4.127 mmol)의 CH2Cl2 용액 (2 mL)을 0℃로 냉각한 후 2-chloroethanol (277 μL, 4.127 mmol)을 가하고 0℃에서 2.5시간 교반하였다. 반응액에 triethylamine (575 μL, 4.127 mmol)을 가한 후, 화합물 7a (500 mg, 2.063 mmol)의 CH2Cl2 용액 (10 mL)을 0℃에서 적가하고 상온에서 12시간 교반하였다. 반응액을 CH2Cl2로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:2→1:1)로 정제하여 목적화합물 23 (592 mg, 73%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.38 (s, 5H), 4.75 (s, 2H), 4.29 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.61 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.16 (s, 3H) ppm.
< 실시예 21-2> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethyl -2- pyridinyl )-N'-(4-( tert -butyl)benzyl)sulfamide (24-1) 제조
화합물 23 (61 mg, 0.159 mmol)의 1,2-dichloroethane (2 mL) 용액에 triethylamine (65 μL, 0.488 mmol)과 tert-butylbenzylamine (55 μL, 0.312 mmol)를 가한 후, 반응액을 12시간 환류 교반하였다. 반응액을 CH2Cl2로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:5→1:3)로 정제하여 목적화합물 24-1 (26 mg, 35%)을 연노란색 카라멜로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.45-7.36 (m, 5H), 7.31-7.26 (m, 2H), 7.23-7.16 (m, 2H), 5.76 (s, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.20-4.18 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.26 (s, 9H) ppm.
< 실시예 21-3> N-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethyl -2- pyridinyl )-N'-(4-( tert -butyl)benzyl)sulfamide (25-1) 제조
화합물 24-1 (26 mg, 0.056 mmol)의 MeOH 용액 (3 mL)에 10% palladium on activated carbon (6 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 12시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:2)로 정제하여 목적화합물 25-1 (8 mg, 38%)을 연노란색 카라멜로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.35 (br s, 1H), 7.29-7.26 (m, 2H), 7.24-7.16 (m, 2H), 4.19 (s, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.27 (s, 9H) ppm.
< 실시예 21-4> N-(5- Benzyloxy -3,4,6- trimethyl -2- pyridinyl )-N'-(4-chlorophenethyl)sulfamide (24-2) 제조
화합물 23 (50 mg, 0.128 mmol)의 CH3CN (1 mL) 용액에 triethylamine (54 μL, 0.385 mmol)와 2-(4-chlorophenyl)ethylamine (36 μL, 0.257 mmol)을 차례로 가한 후, 반응액을 55℃에서 6시간 교반하였다. 반응액을 감압 농축한 후, 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:5)로 정제하여 목적화합물 24-2 (14 mg, 24%)를 연노란색 카라멜로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.49-7.39 (m, 5H), 7.29-7.27 (m, 2H), 7.16-7.12 (m, 2H), 4.73 (s, 2H), 3.39-3.29 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.11 (s, 3H) ppm.
< 실시예 21-5> N-(5- Hydroxy -3,4,6- trimethyl -2- pyridinyl )-N'-(4-chlorophenethyl)sulfamide (25-2) 제조
화합물 24-2 (13 mg, 0.028 mmol)의 CH2Cl2 (1 mL) 현탁액에 pentamethylbenzene (13 mg, 0.085 mmol)을 넣고 boron trichloride (1 M BCl3 in CH2Cl2, 56 μL)를 천천히 가한 후 0℃에서 30분 교반하였다. 반응액에 CHCl3-MeOH 용액 (9:1, 1 mL)을 가하여 30분간 교반한 후 반응액을 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (CHCl3:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 25-2 (7 mg, 69%)을 연노란색 카라멜로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 7.37-7.30 (m, 2H), 7.27-7.19 (m, 2H), 3.13 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H) ppm.
실시예 22. 피리딘올 - 알콕사이드 ( pyridinol - alkoxide ) 유도체 제조
< 실시예 22-1> 5- Benzyloxy -3,4,6- trimethylpyridin -2- ol (26) 제조
화합물 7a (2 g, 8.253 mmol)를 물 (100 mL)과 THF (3 mL)의 혼합 용매에 녹인 후, 10% H2SO4 수용액 (1.1 mL, 20.634 mmol)을 가하고 0℃로 냉각하였다. 여기에 sodium nitrite (NaNO2, 285 mg, 4.127 mmol)의 수용액 (15 mL)을 가한 후 상온으로 서서히 온도를 올리면서 2시간 교반하였다. 반응액을 CH2Cl2로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. 수층을 CH2Cl2로 추출한 후, CH2Cl2 용액을 포화소금물로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하여 목적화합물 26 (1.95 g, 98%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.43-7.32 (m, 5H), 4.69 (s, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.09 (s, 3H) ppm.
< 실시예 22-2> 2,5- Bis ( benzyloxy )-3,4,6- trimethylpyridine (27-1) 제조
화합물 26 (17 mg, 0.070 mmol)의 THF-DMF (1:1, 2 mL) 용액에 silver carbonate (Ag2CO3, 23 mg, 0.084 mmol)와 benzyl bromide (13 μL, 0.105 mmol)를 가한 후, 반응액을 상온에서 20시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 CH2Cl2와 물로 희석하고 수층을 CH2Cl2로 추출하였다. CH2Cl2 용액을 물, 포화소금물로 세척한 후, 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:20)로 정제하여 목적화합물 27-1 (15 mg, 65%)을 연노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.50-7.25 (m, 10H), 5.36 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.13 (s, 3H) ppm.
< 실시예 22-3> 3,4,6- Trimethylpyridine -2,5- diol (28-1) 제조
화합물 27-1 (55 mg, 0.164 mmol)의 MeOH 용액 (2 mL)에 10% palladium on activated carbon (13 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 28-1 (23 mg, 92%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR ((CD3)2SO) δ 2.08 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.90 (s, 3H) ppm.
< 실시예 22-4> 3- Benzyloxy -6- butoxy -2,4,5- trimethylpyridine (27-2) 제조
화합물 26 (100 mg, 0.411 mmol)의 DMF (4 mL) 용액에 silver carbonate (Ag2CO3, 136 mg, 0.493 mmol)와 1-iodobutane (70 μL, 0.617 mmol)를 가한 후, 반응액을 40℃에서 2시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:30)로 정제하여 목적화합물 27-2 (87 mg, 89%)을 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.49-7.29 (m, 5H), 4.71 (s, 2H), 4.26 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.73 (dt, J = 14.5, 6.7 Hz, 2H), 1.48 (dq, J = 14.2, 7.2 Hz, 5H), 0.96 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 22-5> 6- Butoxy -2,4,5- trimethylpyridin -3- ol (28-2) 제조
화합물 27-2 (57 mg, 0.190 mmol)의 MeOH 용액 (2 mL)에 10% palladium on activated carbon (11 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 여액을 감압 농축하여 목적화합물 28-2 (28 mg, 70%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 4.21 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.09 (s, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.71 (dt, J = 14.5, 6.6 Hz, 2H), 1.46 (dq, J = 14.2, 7.2 Hz, 2H), 0.95 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm.
< 실시예 22-6> 3- Benzyloxy -2,4,5- trimethyl -6-( octyloxy )pyridine (27-3) 제조
화합물 26 (100 mg, 0.411 mmol)의 DMF (4 mL) 용액에 silver carbonate (Ag2CO3, 136 mg, 0.493 mmol)와 1-iodooctane (111 μL, 0.617 mmol)를 가한 후, 반응액을 40℃에서 4시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:30)로 정제하여 목적화합물 27-3 (131 mg, 90%)을 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.48-7.29 (m, 5H), 4.71 (s, 2H), 4.25 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.79-1.63 (m, 2H), 1.47-1.25 (m, 10H), 0.88-0.83 (m, 3H) ppm.
< 실시예 22-7> 2,4,5- Trimethyl -6-( octyloxy ) pyridin -3- ol (28-3) 제조
화합물 27-3 (99 mg, 0.279 mmol)의 MeOH 용액 (2 mL)에 10% palladium on activated carbon (20 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 감압 농축하여 목적화합물 28-3 (70 mg, 95%)를 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 4.20 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.04 (s, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.76-1.68 (m, 2H), 1.44-1.25 (m, 10H), 0.92-0.85 (m, 3H) ppm.
< 실시예 22-8> 3- Benzyloxy -6- isopentyloxy -2,4,5- trimethylpyridine (27-4) 제조
화합물 26 (100 mg, 0.411 mmol)의 DMF (4 mL) 용액에 silver carbonate (Ag2CO3, 136 mg, 0.493 mmol)와 1-iodooctane (71 μL, 0.617 mmol)를 가한 후, 반응액을 50℃에서 20시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:30)로 정제하여 목적화합물 27-4 (33 mg, 27%)을 무색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.52-7.28 (m, 5H), 4.70 (s, 2H), 4.27 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.90-1.72 (m, 1H), 1.63 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 0.95 (d, J = 6.6 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 22-9> 6- Isopentyloxy -2,4,5- trimethylpyridin -3- ol (28-4) 제조
화합물 27-4 (72 mg, 0.230 mmol)의 MeOH 용액 (2 mL)에 10% palladium on activated carbon (14 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 감압 농축하여 목적화합물 28-4 (40 mg, 78%)를 회색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 4.24 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.08 (s, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.78 (td, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H), 1.61 (dd, J = 13.4, 6.7 Hz, 2H), 0.94 (d, J = 6.6 Hz, 6H) ppm.
< 실시예 22-10> 3- Benzyloxy -6- cyclopentyloxy -2,4,5- trimethylpyridine (27-5) 제조
화합물 26 (100 mg, 0.411 mmol)의 DMF (4 mL) 용액에 silver carbonate (Ag2CO3, 136 mg, 0.493 mmol)와 1-iodocyclopentane (71 μL, 0.617 mmol)를 가한 후, 반응액을 50℃에서 7시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:50)로 정제하여 목적화합물 27-5 (88 mg, 69%)을 무색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.48-7.28 (m, 5H), 5.49-5.37 (m, 1H), 4.72 (s, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.97-1.88 (m, 2H), 1.83-1.68 (m, 4H), 1.64-1.55 (m, 2H) ppm.
< 실시예 22-11> 6- Cyclopentyloxy -2,4,5- trimethylpyridin -3- ol (28-5) 제조
화합물 27-5 (63 mg, 0.202 mmol)의 MeOH 용액 (2 mL)에 10% palladium on activated carbon (13 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 감압 농축하여 목적화합물 28-5 (39 mg, 87%)를 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 5.39-5.35 (m, 1H), 4.05 (br s, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.96-1.46 (m, 10H) ppm.
< 실시예 22-12> 3- Benzyloxy -2,4,5- trimethyl -6-(3- phenylpropoxy )pyridine (27-6) 제조
화합물 26 (100 mg, 0.411 mmol)의 DMF (4 mL) 용액에 silver carbonate (Ag2CO3, 136 mg, 0.493 mmol)와 (3-iodopropyl)benzene (99 μL, 0.617 mmol)를 가한 후, 반응액을 50℃에서 4시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:50)로 정제하여 목적화합물 27-6 (101 mg, 68%)을 무색 액체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.49-7.26 (m, 6H), 7.24-7.11 (m, 4H), 4.72 (s, 2H), 4.32 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.85-2.73 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.13-2.01 (m, 5H) ppm.
< 실시예 22-13> 2,4,5- Trimethyl -6-(3- phenylpropoxy ) pyridin -3- ol (28-6) 제조
화합물 27-6 (77 mg, 0.202 mmol)의 MeOH 용액 (2 mL)에 10% palladium on activated carbon (15 mg)을 가하고 수소기류 하 상온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후, 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 MeOH에 녹인 후, 멤브레인 필터로 여과하고 감압 농축하여 목적화합물 28-6 (50 mg, 87%)를 무색 액체로 얻었다.
11H-NMR (CDCl3) δ 7.34-7.09 (m, 5H), 4.26 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 4.04 (s, 1H), 2.82-2.72 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.13-1.99 (m, 5H) ppm.
< 실시예 22-14> 3- Benzyloxy -6-((4-( tert -butyl)benzyl)oxy)-2,4,5-trimethylpyridine (27-7) 제조
화합물 26 (100 mg, 0.411 mmol)의 DMF (4 mL) 용액에 silver carbonate (Ag2CO3, 136 mg, 0.493 mmol)와 4-tert-butylbenzyl bromide (113 μL, 0.617 mmol)를 차례대로 가한 후, 반응액을 40℃에서 6시간 교반하였다. 반응액을 Celite를 이용하여 여과한 후 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고 물, 포화소금물로 세척하였다. EtOAc 용액을 무수 MgSO4로 건조, 여과하고 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피 (EtOAc:Hex=1:50)로 정제하여 목적화합물 27-7 (143 mg, 89%)을 흰색 고체로 얻었다.
1H-NMR (CDCl3) δ 7.48-7.30 (m, 9H), 5.34 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.32 (s, 9H) ppm.
< 실험예 1> 염증 T 세포 분화 억제 활성 시험 (in vitro)
B57BL/6 마우스의 비장(spleen)으로부터 CD4 microbead를 이용하여 MACS라는 자석 장비를 통해 CD4 T 세포를 분리했다. CD4 T 세포를 자극하기 위해 CD3 항체 (5 mg/ml)를 세포를 키울 플레이트에 코팅 한 후, CD4 T 세포를 넣고 다른 자극제인 CD28 항체 (1 mg/ml)를 넣었다.
T 세포에서 염증세포는 여러 종류가 있는데 가장 대표적인 염증 세포는 Th1, Th2 또는 Th17 세포이다. 이들 염증 세포는 분화 방법이 다르다.
Th1 세포를 만들기 위하여, RPMI-1640 배지에 10% FBS와 1% penicillin/streptomycin (PS)를 포함시킨 후, 분리한 CD4 T 세포를 37℃, 5% CO2 조건하에 배양하였다. 배양할 때 세포자극제인 CD3 항체와 CD28 항체를 앞에서와 같이 넣어주었다. Th1 세포로 분화시키기 위해 사이토카인으로 IL-12 (10 ng/ml)을 넣어주고 4일 동안 키웠다. 이 때 약물의 억제 능력을 확인하기 위해 피리딘올 유도체 화합물 (10 μM) (처리군)을 포함시켰다.
대조군으로 류마티스 관절염 질환의 T 세포 억제제인 토파시티닙(tofacitinib) (10 μM)을 사용하였다.
4일 후 세포를 PMA/ionomycin 및 golgi stop으로 4시간동안 재자극을 주고, PBS로 2번 세척하였다. 세척 후 Fix/Perm buffer를 이용하여 세포 표면에 구멍을 내고, PE-anti-IFN-γ 항체를 이용하여 유세포 분석기 (flow cytometry)를 툥해 IFN-γ를 분비하는 Th1 세포를 확인하였다.
다른 염증 세포인 Th17 세포의 분화를 위하여, Th1 세포의 분화 방법과 동일하되, 사이토카인으로 IL-12 대신에 IL-6 (10 ng/ml), TGF-β (1 ng/ml), anti-IFN-γ 항체 (5 mg/ml) 및 anti-IL-4 항체 (5 mg/ml)를 넣었다.
또한, Th2 세포의 분화의 경우, 상기와 같이 동일한 방법으로 하되, 사이토카인으로 IL-4 (10 ng/ml) 넣었다.
염증억제 세포인 조절T 세포 (regulatory T cells)는 상기와 같이 동일한 방법으로 하되, 사이토카인으로 IL-2 (10 ng/ml) 및 TGF-β (10 ng/ml)를 넣었다.
본 발명에 따른 피리딘올 유도체 화합물의 염증세포 분화 억제 효과를 하기 표 7 및 8에 나타내었다.
화합물 억제율(%) 화합물 억제율(%)
16-1 -10 20-2 63
16-2 29 20-4 55
16-3 48 20-5 47
16-4 0 22-1 13
16-5 -20 22-2 17
18-1 73 22-3 19
18-3 54 22-4 57
18-4 48 22-5 29
18-6 57 28-1 33
18-13 70 28-6 50
화합물 억제율(%) 화합물 억제율(%)
16-1 -5 20-2 46
16-2 40 20-4 38
16-3 -20 20-5 53
16-4 15 22-1 12
16-5 -8 22-2 20
18-1 61 22-3 48
18-3 54 22-4 57
18-4 24 22-5 48
18-6 20 28-1 40
18-13 41 28-6 40
상기 표 7은 Th1 분화 억제 효과 (10 uM 화합물 농도)를 표 8은 Th17 분화 억제 효과 (10 uM 화합물 농도)를 나타낸다.
표 7 및 표 8에 나타난 바와 같이, 피리딘올 유도체 화합물의 Th1 및 Th17 세포의 in vitro 분화 억제 정도를 조사한 결과, 18-1, 18-3, 18-13, 20-5, 22-4 및 28-6이 Th1 및 Th17 세포 모두에서 40% 이상의 분화 억제율을 나타내었다. T 세포 분화 자극 조건에서 억제율이 높으면서 세포독성을 보이지 않는 화합물은 18-13과 28-6이었다.
Th1 세포 분화 유도는 사이토카인 처리 3일 후 유세포분석기를 통하여 측정하였다. 사이토카인에 의한 Th1 분화 정도는 50% 정도 이루어졌다(도 1). 화합물의 투여에 의한 사이토카인-유도성 Th1 세포 분화 정도는 화합물 28-6의 경우 30% 이하로 나타났으며, 양성대조군으로 사용한 토파시티닙(tofacitinib)은 20% 정도로 나타났다(도 1A). 또한 Th17 세포의 분화에 대해서도 화합물 28-6과 토파시티닙(tofacitinib)이 비슷한 정도의 억제능력을 보였다(도 1B). 하지만 토파시티닙(tofacitinib)은 면역억제 세포(FoxP3+, Treg 세포)의 분화도 억제시키는 반면, 화합물 28-6은 Th1와 Th17 세포 분화는 억제하고 면역억제 세포인 Treg 세포의 분화에는 영향을 나타내지 않았다. 이로서 화합물 28-6은 염증 세포에만 특이적으로 반응하는 것을 알 수 있다(도 1C). 또한 아토피나 알러지를 유발하는 Th2 염증세포에 대해서 화합물 28-6과 토파시티닙(tofacitinib) 모두 우수한 억제능력을 보였다(도 1D, E 및 F).
< 실험예 2> 세포 분열 억제 및 독성 시험 (in vivo )
B57BL/6 마우스의 비장에서 실험예 1과 같이 CD4 T 세포를 분리하였다. 상기 분리된 세포를 CFSE 염색물질로 염색하고, 전술한 방법으로 Th1 (사이토카인으로 IL-12 첨가) 또는 Th17 (사이토카인으로 IL-6 및 TGF-β 첨가) 분화조건으로 자극을 준 다음, 다양한 농도로 화합물 28-6을 첨가하여 T 세포에서 염색 농도가 빠져나가는 것을 확인하여 세포 분열을 확인하였다(세포가 분열하여 나누어지면 염색 농도가 반으로 줄어든다.).
또한, 세포를 염증세포 자극 조건에서 3일 동안 자극한 후 PI와 Annexin V를 염색하여 죽어가는 세포 또는 죽은 세포를 구별하여 세포 독성을 확인하였다. 화합물 28-6의 세포독성을 정확하게 측정하기 위해 다양한 농도에서 독성 시험을 하고 그 결과를 도 2에 나타냈었다.
도 2의 세포 분열 그래프에서 나타나듯이, 화합물 28-6은 고농도 (20 μM)에서 T세포 분열억제 효과는 미미(5% 미만)하였다(도 2A 및 B). 양성 대조 약물인 토파시티닙(tofacitinib)은 세포 분열 자체도 억제하는 것이 잘 알려져 있어, 분화와 분열 모두에 영향을 미쳐 약물의 특이성이 떨어진다. 반면, 화합물 28-6은 오직 T세포 분화에만 억제 능력을 보이고, T세포 분열에는 영향을 미치지 않으므로 T세포 분화에 대한 특이성이 매우 높은 약물로 평가된다.
특히 화합물 28-6은 고농도에서도 세포독성이 나타나지 않았다(도 2C). 이러한 결과들은 실제 체내에서는 다양한 세포에 다양한 조건에서 영향을 주어 예측치 못한 부작용과 효과의 한계가 나타나는 양성대조 약물 토파시티닙(tofacitinib)과는 달리, 화합물 28-6은 T세포의 염증 분화에만 관여하기 때문에 다른 세포에 대한 영향이 적고 부작용이 작을 뿐만 아니라 효과를 극대화할 수 있는 가능성을 보여준다.
< 실험예 3> 다발성 경화증 동물 모델( EAE )에서 화합물 28-6의 in vivo 효능 시험
동물은 8-12주령 된 B57BL/6 마우스를 사용하였으며, 사육 기간 동안 사료와 물을 자유로이 공급하였고, 사욱실의 온도는 25±1 ℃, 상대습도는 50±10 %로 유지시켰다. 점등 관리는 자동조명조절기의 의해 12 시간 명암주기로 조절하였다. 실험군은 각 군당 5마리로 하여 난괴법(randomized block design)에 의하여 2군(대조군, 약물투여군)으로 나누어 실험하였다.
(1) Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) 유발
피하주사로 6 mg/ml의 합성 펩티드 myelin oligodendrocyte glycoprotein(MOG, 신경계 항원, MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK; 펩티드 시퀀스)를 complete fleuid adjuvant(CFA, 10 mg/ml heat-killed H37Ra, strain of Mycobacterium tuberculosis 포함된 면역증강제)와 섞여 주입하였다. 이틀 후 pertussis toxin 250 ng을 복강 주사로 주입하였다. 대조군은 PBS를 격일로 복강으로 주입하였고 약물투여군은 화합물 28-6을 3 mg/kg 양으로 격일로 복강에 주입하였다. 질환의 심각성 정도는 0-5까지로 나누었다.
0: 아무 증상이 없음
1: 꼬리가 축쳐진 상태
2: 말단의 일부 마비 증세
3: 양측 하지 마비
4: 네 다리 모두 마비
5: 죽음
보통 항원 주입 후 3주까지 관찰하며 그 이후에는 동물모델에서는 자생적으로 회복된다.
(2) 면역 세포 분석을 통한 약물 억제 효과 확인
항원 주입후 2주 뒤 마우스에서 비장(spleen), 림프절(LN), 뇌와 척수(CNS)를 적출하여 면역 세포 수를 계산하고, Th1 및 Th17 세포의 분포를 확인하기 위해 각 기관에서 얻은 면역 세포를 PMA/Ionomycin 및 golgi stop를 이용하여 자극하였다. 그 후, Th1 세포를 확인할 수 있는 anti-IFN-γ 항체와 Th17 세포를 확인할 수 있는 anti-IL-17 항체를 사용하여 염색한 후 유세포 분석기(flow cytometry)를 이용하여 전체 면역 세포중에서 염증 세포의 비중을 확인하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3의 그래프를 보면, 항원 주입후 일주일이 지나면 마우스의 행동패턴이 비정상적인 모습을 보이기 시작하는데, 대조군에서는 일주일부터 움직임이 적고 10 일부터 꼬리가 축 쳐지면서 꼬리 움직임이 확연히 줄며, 14 주가 되면 꼬리에 마비가 발생하고, 2-3 일 뒤에는 하반신 마비가 시작되었다. 하지만 격일로 화합물 28-6을 투여한 군에서는 행동패턴의 이상이 10 일 이후에 비로소 나타나면서 대조군보다 증상이 2-3 일 늦게 나타났다. 또한, 이상 증세 정도도 약하여 꼬리 마비까지만 나타나고 하반신 마비 증세를 볼 수 없었다(도 3A). 따라서 in vivo에서 본 발명에 따른 약물의 질환 억제 효과가 좋은 것을 확인할 수 있었다.
비장, 림프구, 뇌 및 척수에서 면역 세포를 분리하여 분석한 결과에서도 전체 면역세포 수 자체가 약물 투여군에서 모두 줄어들어 있었고(도 3B), 염증 세포인 Th1 및 Th17 세포 분석 결과도 비장, 림프구, 뇌와 척수에서 유의적으로 줄어들어 있는 것을 확인하였다(도 3C 및 D). 따라서 화합물 28-6이 in vivo 에서도 T 세포의 염증 분화 억제 능력이 우수함을 확인하였다.
< 실험예 4> 독성 및 세포 분열 억제 시험 (in vitro)
B57BL/6 마우스의 비장에서 실험예 1과 같이 CD4 T 세포를 분리하였다. 상기 분리된 세포를 염증세포 자극 조건에서 화합물 18-13과 함께 24시간 동안 자극하고, PI와 Annexin V를 염색하여 죽어가는 세포 또는 죽은 세포를 구별하여 세포 독성을 확인하였다.
같은 조건에서 T 세포 활성을 확인하기 위해 표지인자인 CD44와 CD69를 염색하여 유세포 분석기로 발현 정도를 확인하였다.
또한 세포를 CFSE 염색물질로 염색한 후 위와 같은 방법으로 Th1(사이토카인으로 IL-12 첨가) 또는 Th17(사이토카인으로 IL-6 및 TGF-b 첨가) 분화조건으로 자극을 준 다음, 다양한 농도로 화합물 18-13을 첨가하여 T 세포에서 염색 농도가 빠져나가는 것을 확인하여 세포 분열을 확인하였다.
세포 분열을 다른 방법으로 학인하기 위하여 Th1 분화조건으로 자극을 주고, 화합물 18-13을 첨가한 T세포에 표지인자인 BrdU와 Ki-67을 염색하여 유세포 분석기로 확인하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.
화합물 18-13은 고농도에서도 세포독성을 나타내지 않았으며(도 4A), 초기 활성 표지 인자인 CD44와 CD69 발현에도 변화가 없었다(도 4B). 분화 조건에 상관없이 세포 분열은 약간 감소하는 경향을 보이기는 하나 그 효과가 크지 않고(도 4C 및 D) 분화의 지표인 BrdU 삽입정도와 Ki-67발현을 확인했을 때도 유의적인 차이가 없었다(도 E 및 F). 따라서 화합물 18-13이 세포에 부작용이 없으며 T세포 초기 활성인 T세포 분열에 크게 작용하지 않음을 확인하였다.
< 실험예 5> 염증 T 세포 분화 억제 활성 시험 (in vitro)
B57BL/6 마우스의 비장에서 실험예 1과 같이 CD4 T 세포를 분리하였다. 상기 분리된 세포를 위와 같은 방법으로 Th1 (사이토카인으로 IL-12 첨가) 또는 Th17 (사이토카인으로 IL-6 및 TGF-β 첨가) 분화조건으로 자극을 주고, 화합물 18-13을 처리하여 3일 동안 키운 후 약물의 T 세포 분화 억제 능력을 확인하였다. 3일 후 실험예 1과 같이 PMA/ionomycin 및 golgi stop으로 4시간 동안 재자극을 주고 PBS로 2번 세척한 뒤에, Fix/Perm buffer를 이용하여 세포 표면에 구멍을 냈다. IFN-γ를 분비하는 Th1 세포와 IL-17를 분비하는 Th17 세포를 확인하기 위하여, PE-anti-IFN-γ 항체와 APC-anti-IL-17 항체를 염색하고 유세포분석기로 확인하였다.
또한 항원에 특이적인 염증 T 세포의 분화 억제 활성을 확인하기 위하여, 형질 전환 OT-II 마우스의 비장에서 실험예 1과 같이 CD4 T 세포를 분리한 후 Th1 (IL-12 사이토카인 첨가) 또는 Th17 (IL-6와 TGF-b 사이토카인 첨가) 분화조건으로 자극을 주고 화합물 18-13을 투여하여 3일 동안 키운 후 약물의 분화 억제 능력을 확인하였다.
OT-II 마우스는 OVA (ovalbumin A) 펩타이드에 특이적인 CD4 T 세포만이 만들어지는 마우스이기 대문에 세포 자극을 위하여 CD3와 CD28 대신 OVA 펩타이드 (OVA323-339)를 0.1 μM 첨가하였다. 그리고 화합물 18-13의 분화 억제 능력의 정도를 다른 약물과 비교하기 위하여 실험예 1과 같은 조건에서 화합물 28-6 처리군과 동시에 시험을 실시하였다(대조군, control). 그 결과를 도 5에 나타내었다.
Th1으로 분화를 유도한지 3일 후 유세포 분석기를 이용하여 세포의 분화정도를 측정한 결과, 사이토카인 첨가시 Th1 분화세포가 30% 이상 이루어진 반면 화합물 18-13을 처리 하였을 때의 Th1 분화는 10% 정도로 유의적으로 감소하였다(도 5A). 또한 Th17 분화도 마찬가지로 사이토카인 첨가시 20% 이상 분화가 이루어진 반면 화합물 18-13을 처리 하였을 때 12% 정도로 감소하였다(도 5B). OT-II 마우스를 이용하여 항원 특이적인 분화를 측정하였을 때에도 마찬가지로 화합물 18-13을 처리하게 되면 Th1(도 5C)과 Th17(도 5D)의 분화가 감소하였다. 화합물 18-13과 화합물 28-6을 비교하였을 때 비슷한 수준으로 분화를 억제하는 것을 확인하였다.
< 실험예 6> 다발성 경화증 동물 모델 ( EAE )에서 화합물 18-13의 in vivo 효능 시험
B57BL/6 마우스를 이용하여 실험예 3과 같이 EAE를 유발한 후 대조군은 PBS를 격일로 복강으로 주입하였고, 약물투여군은 화합물 18-13을 3 mg/kg 양으로 격일로 복강에 주입하였다. 항원 주입 후 2주 뒤 실험예 3과 같이 마우스에서 비장, 림프절(lymph node), 뇌(brain), 척수(spinal cord)를 적출하여 면역 세포 수를 계산하였다. Th1과 Th17 염증 세포의 분포를 확인하기 위해 각 기관에서 얻은 면역 세포를 PMA/Ionomycin 및 golgi stop를 이용하여 자극한 후 Th1를 확인할 수 있는 anti-IFN-γ 항체와 Th17를 확인할 수 있는 anti-IL-17 항체를 사용하여 염색하고, 유세포 분석기를 이용하여 전체 면역 세포 중에서 염증 세포의 비중을 확인하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6의 EAE를 유발한 마우스는 항원 주입 후 일주일이 지나면 행동패턴의 변화가 나타나기 시작하는 반면, 화합물 18-13을 투여한 마우스는 행동패턴의 변화가 늦게 나타나고 꼬리의 마비는 나타났으나 하반신 마비 증세는 나타나지 않았다(도 6A). 약물의 효과를 좀 더 정확하게 확인하기 위하여 비장과 림프절, 뇌, 척수에서 면역세포를 분리하여 분석한 결과 화합물 18-13을 투여한 마우스의 뇌(도 6B)와 척수(도 6C)로 침투된 CD4 세포, CD8 세포 그리고 대식세포 (CD11b)의 비중이 감소한 것을 확인하였다. 또한 림프절과 뇌, 척수에서 Th1과 Th17 세포를 분석한 결과 유의적으로 감소된 것을 확인 하였다(도 6D). 따라서 화합물 18-13이 in vitro 뿐만 아니라 in vivo에서도 T 세포의 염증 분화 억제 능력을 나타냄을 확인하였다.
< 실험예 7> 입양전달(adoptive transfer) 다발성 경화증 동물 모델 ( EAE )에서 화합물 18-13의 in vivo 효능 시험
B57BL/6 마우스에 MOG35 -55 (25 μg/ml)를 투여하고 8일 뒤 비장을 적출하여 Th1 (MOG35 -55 (25 μg/ml), IL-12 (10 ng/ml)) 또는 Th17 (MOG35 -55 (25 μg/ml), IL-23 (10 ng/ml)) 분화조건으로 자극을 준 후 화합물 18-13을 투여하여 3일 동안 키웠다. 3일 후 유세포 분석기를 이용하여 분화된 T 세포와 전사인자의 발현 그리고 활성 표지 인자들을 분석하여 화합물 18-13이 Th1 및 Th17 세포의 병원성에 미치는 영향을 확인하였다.
adoptive transfer EAE 모델을 만들기 위하여 실험예 3과 같이 EAE를 유도한 마우스로부터 10일 뒤 비장과 림프절(Lymph node)를 적출하여 Th1 (MOG35 -55 (25 μg/ml), IL-12 (10 ng/ml)) 또는 Th17 (MOG35 -55 (25 μg/ml), IL-23 (10 ng/ml)) 분화조건으로 자극을 주고 3일간 키웠다. in vitro에서 3일간 자극을 줄 때 화합물 18-13을 처지한 군과 그렇지 않은 대조군을 나눈 후 3일 후 세포를 수확하여 정상 B57BL/6 마우스에 한 마리당 Th1 세포 또는 Th17 세포를 5×107 만큼 정맥주사 하고 이틀 후 pertussis toxin 250 ng을 복강 주사로 주입하였다. 세포 주입후 2주 뒤 마우스에서 비장과 뇌, 척수를 적출하여 유세포 분석기로 CD4 세포와 CD8 세포의 비중을 분석하였다. 그 결과를 도 7에 나타내었다.
3일 동안 MOG와 함께 Th1 또는 Th17 분화조건으로 자극을 주었을 때 화합물 18-13을 처리한 경우 Th2를 나타내는 IL-4와 Treg을 나타내는 Foxp3는 큰 변화가 없는 반면에 IFN-γ와 IL-17을 분비하는 Th17 세포가 감소하였다. 마찬가지로 Treg의 전사인자인 Foxp3는 큰 변화가 없는 반면에 Th1의 전사인자인 T-bet과 Th17의 전사인자인 RORγt만 유의적으로 감소하였다.
즉 화합물 18-13은 다른 종류의 T세포 분화에는 영향을 주지 않고 자가면역 질환을 유발하는 Th1 세포와 Th17 세포의 활성에만 영향을 준다는 것을 알 수 있다. 또 다른 지표인 T 세포 활성 인자 CD62LlowCD44hi 역시 유의적으로 감소하여 T 세포의 활성에 억제적인 영향을 준다는 것을 재확인하였다(도 7A 및 B). EAE를 유발해서 이미 만들어진 Th1 및 Th17 세포를 꺼내어 in vitro 에서 재자극을 주어 다시 정상 마우스에 넣어주면 EAE와 같은 자가면역 질환이 발생하는데 이는 도 6처럼 질환의 초기모델이 아닌 질환의 진행중인 상태를 대변할 수 있는 모델이다. 이때 화합물 18-13을 처리하면 진행중인 EAE도 완화시킬 수 있는 것을 보여 줄 수 있다(도 7C 및 D). 비장과 중추신경을 적출하여 분석한 결과에서도 화합물 18-13을 투여한 군에서 CD4 세포와 CD8 세포가 감소하고 Th1과 Th17세포도 유의적으로 감소하였다(도 7E 및 F). 따라서 화합물 18-13은 자가면역 질환이 이미 진행된 상태에서도 약물 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
본 발명에 따른 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염은 자가면역 질환을 악화시키는 사이토카인의 분비를 억제하고, 그 사이토카인을 내는 자가면역 질환 유발 세포 분화를 억제할 수 있다.
따라서, 상기 유도체는 자가면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제로서 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (11)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 포함하는 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000025
    상기 화학식 1에서,
    R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 8의 알킬이고,
    R5는 수소; 할로겐; 탄소수 1 내지 8의 알킬; -Si(R6)3; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이며,
    상기 R5의 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴은 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴로 치환 또는 비치환되고,
    상기 R6은 수소, 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이며,
    R1은 수소; 설포닐; 카보닐; 탄소수 1 내지 12의 알킬; 및 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이고,
    상기 R1의 설포닐 또는 카보닐은 각각 독립적으로 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되며,
    상기 R1의 탄소수 1 내지 12의 알킬 또는 탄소수 6 내지 18의 아릴은 각각 독립적으로 할로겐; -NO2; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알콕시; 및 탄소수 1 내지 8의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 18의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되고,
    L은 -O- 또는 하기 화학식 2 또는 3으로 표시되는 연결기를 나타내며,
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000026
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000027
    상기 화학식 2에서 Q는 O 또는 S이고, P는 -NH- 또는 -O-이며,
    상기 화학식 3에서 Z는 단일결합 또는 -NH-이다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 4의 알킬이고,
    R5는 수소; 탄소수 6 내지 12의 아릴로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 -Si(R6)3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이며,
    R6은 탄소수 1 내지 6의 알킬 또는 탄소수 6 내지 12의 아릴이고,
    L은 -O-, -NH-C(O)-NH-, -NH-C(S)-NH-, -NH-C(O)-O-, -NH-S(O)2-NH- 또는 -NH-S(O)2-인 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 메틸이고,
    R5는 수소; 페닐로 치환되거나 비치환된 메틸; 및 -Si(R6)3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이며,
    R6은 부틸 또는 페닐인 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    R1은 수소; 설포닐; 카보닐; 탄소수 1 내지 10의 알킬; 및 탄소수 6 내지 12의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 어느 하나이고,
    상기 설포닐 또는 카보닐은 각각 독립적으로 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 탄소수 6 내지 12의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되며,
    상기 탄소수 1 내지 10의 알킬은 할로겐; 탄소수 1 내지 4의 알콕시; 및 탄소수 1 내지 6의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 6 내지 12의 아릴로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되고,
    상기 탄소수 6 내지 12의 아릴은 할로겐; -NO2; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알콕시로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환 또는 비치환되는 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    R1은 수소; 설포닐; 카보닐; 탄소수 1 내지 8의 알킬; 및 탄소수 6 내지 10의 아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나이고,
    상기 설포닐 또는 카보닐은 페닐로 치환되며,
    상기 탄소수 1 내지 8의 알킬은 할로겐; 메톡시; 에톡시; 프로폭시; 및 탄소수 1 내지 4의 알킬 또는 할로겐으로 치환되거나 비치환된 페닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환되고,
    상기 탄소수 6 내지 10의 아릴은 할로겐; -NO2; 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알킬; 및 할로겐으로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 4의 알콕시로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환되는 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 메틸이고,
    R5는 수소; 페닐로 치환되거나 비치환된 메틸; 또는 페닐 및 부틸로 치환된 실릴이며,
    R1은 수소; 페닐로 치환된 카보닐; 페닐로 치환된 설포닐; 클로로, 메톡시, 페닐, 클로로페닐, 및 부틸페닐로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환된 탄소수 1 내지 8의 알킬; 또는 클로로, 플루오로, 브로모, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 트리플루오로메틸, 니트로, 메톡시 및 트리플루오로메톡시로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환된 페닐 또는 나프틸인 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서,
    화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화학식으로 표시되는 화합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    [화학식 15-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000028
    [화학식 16-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000029
    [화학식 15-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000030
    [화학식 16-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000031
    [화학식 15-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000032
    [화학식 16-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000033
    [화학식 15-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000034
    [화학식 16-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000035
    [화학식 15-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000036
    [화학식 16-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000037
    [화학식 15-6]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000038
    [화학식 16-6]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000039
    [화학식 15-7]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000040
    [화학식 16-7]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000041
    [화학식 15-8]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000042
    [화학식 16-8]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000043
    [화학식 15-9]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000044
    [화학식 16-9]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000045
    [화학식 15-10]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000046
    [화학식 16-10]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000047
    [화학식 15-11]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000048
    [화학식 16-11]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000049
    [화학식 15-12]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000050
    [화학식 16-12]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000051
    [화학식 15-13]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000052
    [화학식 16-13]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000053
    [화학식 15-14]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000054
    [화학식 16-14]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000055
    [화학식 15-15]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000056
    [화학식 16-15]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000057
    [화학식 15-16]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000058
    [화학식 16-16]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000059
    [화학식 17-1a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000060
    [화학식 18-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000061
    [화학식 17-2a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000062
    [화학식 18-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000063
    [화학식 17-3a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000064
    [화학식 18-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000065
    [화학식 17-4a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000066
    [화학식 18-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000067
    [화학식 17-5c]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000068
    [화학식 18-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000069
    [화학식 17-6a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000070
    [화학식 18-6]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000071
    [화학식 17-7c]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000072
    [화학식 18-7]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000073
    [화학식 17-8a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000074
    [화학식 17-8b]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000075
    [화학식 17-8c]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000076
    [화학식 18-8]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000077
    [화학식 17-9a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000078
    [화학식 17-9b]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000079
    [화학식 17-9c]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000080
    [화학식 18-9]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000081
    [화학식 17-10c]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000082
    [화학식 18-10]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000083
    [화학식 17-11c]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000084
    [화학식 18-11]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000085
    [화학식 17-12c]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000086
    [화학식 18-12]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000087
    [화학식 17-13a]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000088
    [화학식 18-13]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000089
    [화학식 19-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000090
    [화학식 20-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000091
    [화학식 19-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000092
    [화학식 20-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000093
    [화학식 19-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000094
    [화학식 20-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000095
    [화학식 19-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000096
    [화학식 20-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000097
    [화학식 19-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000098
    [화학식 20-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000099
    [화학식 21-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000100
    [화학식 22-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000101
    [화학식 21-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000102
    [화학식 22-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000103
    [화학식 21-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000104
    [화학식 22-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000105
    [화학식 21-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000106
    [화학식 22-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000107
    [화학식 21-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000108
    [화학식 22-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000109
    [화학식 24-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000110
    [화학식 25-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000111
    [화학식 24-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000112
    [화학식 25-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000113
    [화학식 27-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000114
    [화학식 28-1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000115
    [화학식 27-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000116
    [화학식 28-2]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000117
    [화학식 27-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000118
    [화학식 28-3]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000119
    [화학식 27-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000120
    [화학식 28-4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000121
    [화학식 27-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000122
    [화학식 28-5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000123
    [화학식 27-6]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000124
    [화학식 28-6]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000125
  8. 제 1 항에 있어서,
    약제학적 허용가능한 염은 옥살산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산 및 벤조산으로 이루어진 군에서 선택된 유기산이거나, 또는 염산, 황산, 인산 및 브롬화수소산으로 이루어진 군에서 선택된 무기산에 의해 형성되는 산부가염의 형태인 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. 하기 화학식 4의 화합물을 하기 화학식 5의 화합물 또는 하기 화학식 6의 화합물과 반응시키거나;
    하기 화학식 4의 화합물을 하기 화학식 7의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 8의 화합물을 얻고, 상기 화학식 8의 화합물과 하기 화학식 9의 화합물을 반응시키거나; 또는
    하기 화학식 4의 화합물을 하기 화학식 10의 화합물로 변환하고, 상기 화학식 10의 화합물과 화학식 11의 화합물을 반응시켜 하기 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 자가면역 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조 방법:
    [화학식 4]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000126
    [화학식 5]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000127
    [화학식 6]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000128
    [화학식 7]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000129
    [화학식 8]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000130
    [화학식 9]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000131
    [화학식 10]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000132
    [화학식 11]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000133
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000134
    상기 화학식 1 및 4 내지 9에서,
    R1 내지 R5, Q 및 L은 제1항에서 정의한 바와 같고, R은 카보닐 또는 설포닐을 나타내며, X는 할로겐을 나타낸다.
  10. 치료상 유효량의 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을, 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료 방법:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000135
    상기 화학식 1에서,
    R1 내지 R5 및 L은 제1항에서 정의한 바와 같다.
  11. 자가면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물의 제조를 위한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 용도;
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018000602-appb-I000136
    상기 화학식 1에서,
    R1 내지 R5 및 L은 제1항에서 정의한 바와 같다.
PCT/KR2018/000602 2017-01-13 2018-01-12 피리딘올 유도체 또는 이의 약제학적 허용 가능한 염 및 이를 유효성분으로 함유하는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 Ceased WO2018131924A1 (ko)

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