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WO2018150073A1 - Composición farmacéutica que comprende inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina y galanina (1-15) - Google Patents

Composición farmacéutica que comprende inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina y galanina (1-15) Download PDF

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WO2018150073A1
WO2018150073A1 PCT/ES2018/070121 ES2018070121W WO2018150073A1 WO 2018150073 A1 WO2018150073 A1 WO 2018150073A1 ES 2018070121 W ES2018070121 W ES 2018070121W WO 2018150073 A1 WO2018150073 A1 WO 2018150073A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
pharmaceutical composition
gal
flx
composition according
administration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/ES2018/070121
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Antonio FLORES BURGESS
Carmelo MILLÓN PEÑUELA
Belén GAGO CALDERÓN
Manuel Alejandro NARVÁEZ PELÁEZ
José Ángel NARVÁEZ BUENO
Luis Javier Santín Núñez
Zaida DÍAZ CABIALE
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universidad de Malaga
Original Assignee
Universidad de Malaga
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universidad de Malaga filed Critical Universidad de Malaga
Publication of WO2018150073A1 publication Critical patent/WO2018150073A1/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids

Definitions

  • composition comprising selective serotonin and galanin reuptake inhibitors (1-15)
  • the present invention is framed in the medical field, in particular to a therapeutic use of the combination of selective serotonin and galanin reuptake inhibitors (1-15) for the treatment of depression and related disorders.
  • IS S Selective serotonin reuptake inhibitors
  • the potentiation of antidepressant therapy can be achieved by co-administration of mood stabilizers such as lithium carbonate or triiodothyronine or by the use of electric shock.
  • HT1B Microdialysis experiments in rats have shown, in fact, that the increase in 5-HT in the hippocampus induced by citalopram is enhanced by GMC 2-29, an experimental 5-HT1B receptor antagonist.
  • GAL galanin
  • GAL (1-15) which has the general formula Gly-Trp-Thr-Leu-Asn-Ser-Ala-Gly-Tyr-Leu- Leu-Gly-Pro-His-Ala or GWTLNSAGYLLGPHA, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, is capable of increasing and providing a faster onset of the therapeutic effect of serotonin reuptake inhibitors, in particular fluoxetine (FLX) .
  • the present invention relates to the use of GAL (1-15) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in combination with a serotonin reuptake inhibitor or any other compound that causes an increase in the level of serotonin. extracellular
  • the present invention relates to the use of GAL (1-15), or of a pharmaceutically acceptable salt of said fragment, useful for increasing and / or providing a further start. rapid therapeutic effect of a serotonin reuptake inhibitor or any other compound that causes an increase in the level of extracellular serotonin.
  • the present invention relates to the aforementioned use of GAL (1-15), or a pharmaceutically acceptable salt of said fragment, for the treatment of depression, anxiety disorders and other affective disorders, of eating disorders such as bulimia, anorexia and obesity, phobias, dysthymia, premenstrual syndrome, cognitive disorders, impulse control disorders, attention deficit hyperactivity disorder and drug abuse, particularly depression, with a serotonin reuptake inhibitor or any other compound that causes an increase in the level of extracellular serotonin.
  • GAL (1-15 a pharmaceutically acceptable salt of said fragment
  • Fig. 1 Behavioral effects of co-administration of an ineffective dose of FLX (2.5mg / Kg) and a subthreshold dose of GAL (1-15) (lmol) in the forced swim test (in English, forceáswimming test or FST).
  • FLX was administered subcutaneously (se) 23, 5 and 1 hour before the test and GAL (1-15) was injected intracerebroventricularly (icv) 15 minutes before the test.
  • * p ⁇ 0.05 compared to the other groups, a p ⁇ 0.05 compared to the control group and GAL (l-15) (lnmol) according to a one-way ANOVA test followed by the Newman multiple comparisons test Keuls
  • Fig. 2 Behavioral effects of co-administration of the effective dose of FLX (10mg / Kg) and GAL (1-15) (lnmol) or GAL (lnmol) in the FST.
  • FLX was administered by route 23, 5 and 1 hour before the test.
  • Artificial cerebrospinal fluid (LC a), GAL (1-15) and GAL were administered icv 15 minutes before the test.
  • Fig. 3A Behavioral effects of co-administration of the effective dose of FLX (10mg / Kg) and subthreshold doses of GAL (1-15) (lnmol) in Sprague-Dawley rats to which it was also administered
  • M871 (3nmol), GALR2 antagonist.
  • the FLX or the vehicle (carrier) were administered by route 23, 5 and 1 hour before the test.
  • the CSF, LAG (1-15) and LAG (1-15) + M871 were administered icv 15 min before the test.
  • the CSF and LAG (1-15) were administered icv 15 min before the test.
  • Fig. 4 GALR1 protein expression eight days after a single injection of the GALR1 siRNA (siRNA) or carrier vehicle in the rat's brain. The data are represented as mean ⁇ SEM of the percentages with respect to the control value (100 &) of the optical density (D.O) * p ⁇ 0.05 according to the t-Student test.
  • B Behavioral effects of the co-administration of the effective dose of FLX (10mg / Kg) and the sub-threshold dose of GAL (1-15) (lnmol) in Knocdown GALR1 (siGalRl) rats. The FLX or carrier were administered via route 23, 5 and 1 hour before the test.
  • the CSF and LAG (1-15) were administered icv 15 min before the test.
  • Fig. 5 Behavioral effects of co-administration of the effective dose of FLX (10mg / Kg) and Wayl00635 (6nmol), 5-HT1A antagonist, and co-administration of the effective dose of FLX (10mg / Kg) with GAL (1-15) (lnmol) and Wayl00635 (6nmol) in the FST.
  • the FLX or carrier was administered via route 23, 5 and 1 hour before the test.
  • GAL (1-15), Wayl00635 and GAL (1-15) + Wayl00635 was administered icv 15 min before the test.
  • Fig. 6A Effects of co-administration of FLX (10mg / Kg) and GAL (1-15) (lnmol) on mRNA levels of
  • 5-HT1AR in the dorsal hippocampus (CAI region and dentate gyrus -DG-). FLX was administered 23, 5 and 1.25 hours before sacrifice and GAL (1-15) was injected 30 min before sacrifice. Density values Optics (OD), mean ⁇ SEM, are expressed as a percentage of the control value (100%). * p ⁇ 0.05 compared to other groups.
  • B Representative autoradiograms of the dorsal hippocampus showing mRNA levels of 5-HT1AR determined by in situ hybridization in the analyzed areas.
  • Fig. 6B Representative autoradiograms of the dorsal hippocampus showing mRNA levels of 5- HT1AR determined by in situ hybridization in the analyzed areas.
  • Fig. 7A Effects on the binding characteristics of [3H] -8-OH-DPAT, 5-HT1AR agonist, in the dentate gyrus of the hippocampus (GD) after co-administration of FLX ((10mg / Kg) and LCRa or GAL (1 - 15) (lmol) FLX was administered 23, 5 and 1.25 hours before slaughter and GAL (1-15) was injected 30 min before slaughter Saturation experiments were performed with 10 concentrations of [3H] -8- OH- DPAT (0.26-10nM) in coronal sections of the hippocampus. Non-specific binding was defined in the presence of 10 ⁇ serotonin.
  • Fig. 7B Representative autoradiograms of rat hippocampus sections with a radioligand concentration similar to Kd (In M) showing the affinity increase of the 5-HT1AR agonist.
  • GAL (1-15) improves FLX-induced antidepressant effects in FST. These effects are specific since GAL has no effect. Indications were also obtained of the involvement of the GALR1 / GALR2 complex in the actions mediated by GAL (1-15) based on the use M871, specific antagonist of GALR2, and icv injections of the GALR1 or the GALR2 siRNA producing a reduction of GALR1 or GALR2, respectively.
  • GAL (1-15) / FLX affected binding characteristics, as well as 5-HT1AR mRNA levels specifically in the dorsal hippocampus.
  • FST is used as a behavioral test to predict the efficacy of antidepressant treatments.
  • the FST is an attractive behavioral test for the search for antidepressant drugs because it is quick to run, reliable between laboratories, and sensitive to effects. of all major classes of antidepressant medications.
  • the main indication of an antidepressant effect of a given compound is a decrease in immobility behavior.
  • the recording of active behaviors: swimming and climbing provide additional information on the mechanism of action that mediates the antidepressant effect.
  • selective serotonin reuptake inhibitors decrease immobility and increase swimming behavior.
  • GAL (1-15) significantly improves the antidepressant effects of FLX on FST.
  • a decrease in immobility and an increase in swimming were observed after co-administration of the subthreshold dose of GAL (1-15) and FLX.
  • none of these treatments affected the behaviors analyzed in the trial, indicating that GAL (1-15) and FLX interact to elicit antidepressant responses.
  • GAL (1-15) at an effective dose induces a pro-depressive effect (Millón, C, Flores-Burgess, A., Narváez, M., Borroto-Escuela, DO, Santin, L., Parrado, C. , Narvaez, JA, Fuxe, K., Diaz-Cabiale, Z., 2015. Int J Neuropsychopharmacol 18), the antidepressant effect can only be due to the improvement of the FLX action.
  • the strong enhancement induced by GAL (1-15) on the antidepressant action of FLX was validated using an effective dose of FLX.
  • GAL (1-15) has been shown to involve GALR1-GALR2 receptors to improve the antidepressant effect of FLX in FST.
  • GALR2 participates in the effects of GAL (1-15) since M871, antagonist GALR2, blocked the potentiation of the antidepressant effects of FLX induced by GAL (1-15).
  • the behavioral effects of GAL (1-15) on FLX in GALR1 and GALR2 knockdown rats were also blocked, confirming that the effects of GAL (1-15) depend on the existence of GALR1-GALR2.
  • results with respect to the present invention confirm that the effects of GAL (1-15) through heteroreceptor GALR1-GALR2 complexes could be a key mechanism in depression.
  • the effects of GAL (1-15) on FLX-mediated actions in the FST are specific, since GAL does not induce effects.
  • the fact that the improvement of the FLX antidepressant action by GAL (1-15) is blocked by WAY100365, 5-HT1A antagonist, also indicates that 5-HT1AR has a significant participation in this interaction.
  • WAY100635 together with an effective dose of FLX, induces the inhibition of the action of this SSRI (Serres et al., 2000, Estrada-Camarena et al., 2006).
  • the antagonist is administered at a different time, as in the present study, the activity of FLX antidepressant type is maintained in the FST (Serres et al., 2000, Estrada-Camarena et al., 2006).
  • This injection pattern in which WAY100365 could not cancel the antidepressant activity shown by FLX alone in the FST supports the idea that GAL (1-15), through GALR1 / GALR2, can interact with 5-HT1AR to facilitate the action of the FLX.
  • the present invention thus provides:
  • the present invention relates to the use of GAL (1-15) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to be used in combination with a serotonin reuptake inhibitor or any other compound that causes an increase in the level of extracellular serotonin.
  • the present invention relates to the use of GAL (1-15), or a useful pharmaceutically acceptable salt, to increase and / or provide a faster onset of the therapeutic effect of a serotonin reuptake inhibitor or any other compound that causes an increase in extracellular serotonin levels.
  • the present invention relates to the aforementioned use of GAL (1-15), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the treatment of depression, anxiety disorders and other affective disorders, eating disorders such as bulimia, anorexia and obesity, phobias, dysthymia, premenstrual syndrome, cognitive disorders, impulse control disorders, attention deficit hyperactivity disorder and drug abuse, in particular depression, with a serotonin reuptake inhibitor or any other compound that causes elevation of the extracellular serotonin level.
  • the pharmaceutically acceptable salt of GAL (1-15) is a trifluoroacetate salt.
  • the anxiety disorders mentioned above include general anxiety disorder, panic anxiety, obsessive compulsive disorder, acute stress disorder, post-traumatic stress disorder or social anxiety disorder.
  • the term "increase” means to improve the therapeutic effect and / or enhance the therapeutic effect of an IS or a compound that causes an elevation in the extracellular level of 5-HT.
  • the invention relates to the use of GAL (1-15), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a compound that is a serotonin reuptake inhibitor, or a compound that causes a level elevation. of extracellular serotonin, for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of diseases or disorders that respond to the therapeutic effect of a serotonin reuptake inhibitor, or any other compound that causes an increase in the level of extracellular serotonin.
  • Diseases that respond to a serotonin reuptake inhibitor include depression, anxiety disorders and other affective disorders, eating disorders such as bulimia, anorexia and obesity, phobias, dysthymia, premenstrual syndrome, cognitive disorders, impulse control disorders, in particular depression
  • this refers to the use of GAL (1-15), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the preparation of a pharmaceutical composition as indicated above, adapted for simultaneous administration of the active ingredients.
  • said pharmaceutical compositions may contain the active ingredients within the same unit dosage form, for example in the same capsule or tablet.
  • Said unit dosage forms may contain the active ingredients as a homogeneous mixture or in separate compartments of the unit dosage form.
  • the present invention relates to the use of GAL (1-15) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the preparation of a pharmaceutical composition such as the one above, adapted for the sequential administration of the active ingredients.
  • said pharmaceutical compositions may contain the active ingredients in individual unit dosage forms (pharmaceutical kit), for example individual tablets or capsules containing any of the active ingredients. These individual unit dosage forms may be contained in the same container or package, for example a blister pack.
  • pharmaceutical kit used in the document means a pharmaceutical composition containing each of the active ingredients, but in individual unit dosage forms, and said active ingredients being able to be packaged together, for example in a blister pack, or not, in in which case the composition results from the combined use of said active ingredients, meaning "combined use” the administration of the active ingredients associated with each other but not necessarily simultaneously.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition that includes GAL (1-15), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a compound that is a serotonin reuptake inhibitor, or any other compound that causes an elevation in 5 -HT extracellular, and optionally pharmaceutically acceptable carriers or diluents.
  • the pharmaceutical composition of the invention may be adapted for the simultaneous administration of the active ingredients or for the sequential administration of the active ingredients, as described above, preferably for the sequential administration of the active ingredients as illustrated in the examples provided in the present specification, in particular by the administration of a serotonin reuptake inhibitor, such as FLX, subcutaneously at a different time from the administration of GAL (1-15), which is preferably administered parenterally, such as an intraarterial or intravenous route.
  • a serotonin reuptake inhibitor such as FLX
  • the present invention relates to a method for the treatment of diseases or disorders that respond to a serotonin reuptake inhibitor, or to any other compound that causes an increase in the level of extracellular serotonin, which comprises administering to an individual. that needs it, GAL (1-15), or a pharmaceutically acceptable salt, and a serotonin reuptake inhibitor, or a compound that causes an increase in the level of extracellular serotonin.
  • the present invention relates to a method for increasing and / or providing a faster onset of the therapeutic effect of a serotonin reuptake inhibitor, or any other compound that causes an increase in the level of extracellular serotonin, said method involving administering GAL (1-15), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, to an individual to be treated, or under treatment, with a serotonin reuptake inhibitor or any other compound that causes an elevation of the level of extracellular serotonin.
  • Individuals susceptible to benefit from treatment with a combination like the previous one may suffer from depression, anxiety disorders and other affective disorders, eating disorders such as bulimia, anorexia and obesity, phobias, premenstrual syndrome, dysthymia, cognitive disorders, deficit disorder of attention with hyperactivity, and drug abuse; in particular depression.
  • eating disorders such as bulimia, anorexia and obesity, phobias, premenstrual syndrome, dysthymia, cognitive disorders, deficit disorder of attention with hyperactivity, and drug abuse; in particular depression.
  • anxiety disorders include general anxiety disorder, panic anxiety, obsessive compulsive disorder, acute stress disorder, post-traumatic stress disorder or social anxiety disorder.
  • GAL (1-15) and the serotonin reuptake inhibitor can be administered simultaneously as described above.
  • GAL (1-15) and its pharmaceutically acceptable salts have the general formula Gly-Trp-Thr-Leu- Asn-Ser-Ala-Gly-Tyr-Leu-Leu-Gly-Pro-His-Ala or GWTLNSAGYLLGPHA.
  • GAL (1-15) can provide a rapid onset of the therapeutic effect of serotonin reuptake inhibitors.
  • the use of a combination of GAL (1-15) and a serotonin reuptake inhibitor can greatly reduce the amount of serotonin reuptake inhibitor needed to treat depression and other affective disorders, and can thus reduce the effects side effects caused by the serotonin reuptake inhibitor.
  • the combination of a reduced amount of SRI and LAG (1-15) may reduce the risk of sexual dysfunction induced by SSRIs and sleep disorders.
  • LAG (1-15) can be used as a complementary therapy to increase the response to SSRIs in patients in whom at least a 40-60% reduction in symptoms has not been achieved during the first 6 weeks of treatment with an SSRI.
  • SSRIs that are particularly preferred according to the present invention include citalopram, escitalopram, FLX, sertraline, paroxetine, fluvoxamine, venlafaxine, dapoxetine, nefazodone, imipramine, femoxetine and clomipramine.
  • FLX or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof is preferred.
  • SSRI selective serotonin reuptake inhibitor
  • SSRIs selective serotonin reuptake inhibitors
  • Particularly preferred SSRIs according to the invention are citalopram, escitalopram, FLX, fluvoxamine, sertraline or paroxetine.
  • the active ingredients according to the invention that is, GAL (1-15) and the SSRI or a compound that causes an increase in extracellular serotonin levels, can be used in the free basic form or in the form of a salt of pharmaceutically acceptable acid addition thereof, the latter being obtainable by reacting the basic form with an appropriate acid.
  • Citalopram is preferably used in the form of hydrobromide or as a base; escitalopram, in the form of oxalate; FLX, sertraline and paroxetine, in the form of hydrochloride; and fluvoxamine, in the form of maleate.
  • the combination of GAL (1-15) with a serotonin reuptake inhibitor unexpectedly shows a synergistic effect on the CNS.
  • combination therapy using GAL (1-15) and a lower dose of the serotonin reuptake inhibitor than those normally used alone can be effective, and the side effects associated with larger amounts of serotonin reuptake inhibitor used alone or prevent them completely.
  • combination therapy with GAL (1-15) using a normal dose of serotonin reuptake inhibitor has the advantage that an effective CNS effect can be obtained in a number of patients, often large, who do not respond to conventional monotherapy with SSRIs.
  • Serotonin reuptake inhibitors including the ISSs specifically mentioned above, differ in both molecular weight and activity.
  • the amount of serotonin reuptake inhibitor used in combination therapy depends on the nature of said serotonin reuptake inhibitor.
  • the serotonin reuptake inhibitor or the compound that causes an increase in the level of extracellular 5-HT is administered at lower doses than those required when the compound is used alone.
  • the serotonin reuptake inhibitor or the compound that causes an increase in the level of extracellular 5-HT is administered in normal doses.
  • compositions of this invention an appropriate amount of the active ingredient or ingredients, in salt or base form, is combined, the mixing is carried out with a pharmaceutically acceptable carrier, which can take a wide variety of forms depending on the desired form of preparation for administration.
  • a pharmaceutically acceptable carrier which can take a wide variety of forms depending on the desired form of preparation for administration.
  • These pharmaceutical compositions are ideally in unit dosage form suitable for oral, rectal, percutaneous or parenteral injection administration.
  • any of the usual pharmaceutical means can be employed, such as, for example, water, glycols, oils, alcohols and the like in the case of oral liquid preparations such as suspensions, syrups, elixirs and solutions; or solid carriers such as starches, sugars, kaolin, lubricants, binders, disintegrating agents and the like in the case of powders, pills, capsules and tablets. Due to their ease of administration, tablets and capsules represent the most advantageous oral dosage unit form, in which case solid pharmaceutical carriers are obviously employed.
  • the unit dosage form refers to physically discrete units suitable as unit doses, each unit containing a predetermined amount of active ingredient calculated to produce the desired therapeutic effect, in association with The required pharmaceutical carrier.
  • unit dosage forms are tablets (including labeled or coated tablets), capsules, pills, packets of powder, wafers, injectable solutions or suspensions, teaspoons, tablespoons and the like, and multiple segregates thereof.
  • GAL (1-15) may be administered before, during or after administration of the serotonin reuptake inhibitor, preferably after administration of the serotonin reuptake inhibitor, provided the time between administration of GAL (1 -15) and the administration of the serotonin reuptake inhibitor is such that the ingredients are allowed to act synergistically in the CNS.
  • a composition that contains both a serotonin reuptake inhibitor and GAL (1-15) may be particularly convenient.
  • GAL (1-15) and the serotonin reuptake inhibitor can be administered separately in the form of suitable compositions.
  • the compositions can be prepared as described above.
  • the present invention also comprises products containing GAL (1-15) and a serotonin reuptake inhibitor as a combination preparation for simultaneous, separate or sequential use in psychiatric pharmacological therapy.
  • Such products may comprise, for example, a pharmaceutical kit comprising discrete unit dosage forms containing GAL (1-15) and discrete unit dosage forms containing a serotonin reuptake inhibitor, all contained in the same package, e.g. a blister
  • a dose-response curve of the FLX was performed.
  • the groups of rats received three injections of FLX at doses of 10 mg / Kg or 2.5 mg / Kg, or carrier at 23, 5 and 1 hour before the tests, in addition to an icv injection of CSF 15 min before the proof.
  • the groups of rats received three injections of FLX (2.5 mg / Kg) or FLX (10 mg / Kg) and one Single ICV injection of GAL (1-15) (lnmol) 15 minutes before the test.
  • the effects between the co-administration of FLX (10mg / Kg) and GAL (1-15) (lnmol) or GAL (lnmol) were also compared in the FST.
  • the participation of GALRl and GALR2 in mediating the effect of GAL (1-15) on FLX was determined.
  • the groups of rats received three injections of FLX (10mg / kg), a single icv injection of GAL (1-15) (lnmol) and M871 (3nmol), GALR2 antagonist, alone or in combination.
  • FLX (10mg / Kg) and GAL (1-15) (lnmol) ARNpi-knockdown GALRl or GALR2 rats were co-administered in order to analyze the participation of GALRl and GALR2 receptors in the GAL-mediated effect (1- fifteen).
  • Rats (n 6 per group) received all three injections of FLX or carrier, and a single icv injection of GAL (1-15) or CSF and were sacrificed 30 min later. Coronal sections were obtained at the level of the dorsal hippocampus and dorsal raphe (DR).
  • the hybridization was performed in a humid chamber with the prehybridization buffer for 2 h at 37 9 C, the sections were hybridized under coverslips with probes of AN at 1x10 s cpm / ⁇ of the hybridization mixture for 16 h at 55 9 C. After hybridization, the sections were rinsed 4 times for 20min in SSC at 55 9 C. Finally, the sections were rinsed in sterile water for 10 seconds, dehydrated in alcohol and air dried. The exposure time of the film for the sections was 2 weeks
  • the measurements were made in the Dentate Turn (DG) and in the CAI region of the hippocampus (0.15mm 2 square). The ventral part of the midline area of the DR was analyzed using a square as the sample field (0.09mm 2 ).
  • FLX 10mg / Kg induced effects similar to antidepressants in FST in rats (Table 1).
  • FLX (10mg / Kg) reduced immobility (post hoc, p ⁇ 0.05) and swimming time (post hoc, p ⁇ 0.01) compared to controls and FLX (2.5mg / Kg).
  • the potent improvement of GAL (1-15) in FLX-mediated antidepressant effects was validated with an effective dose of FLX (10mg / kg).
  • GALR2 participates in this interaction since M871 (3nmol), antagonist of GALR2, significantly blocked immobility p ⁇ 0.001, post hoc, p ⁇ 0.05) and swimming
  • GAL (1-15) (inmol) injected alone has no effect on FST in knockdown animals
  • GALR2 compared to the control group in immobility (14.7 ⁇ 3s), swimming (81.7 ⁇ 3s) or climbing (60 ⁇ 4s).
  • GALR1 knockdown rats were also used to determine the participation of GALR1 in the GAL-induced effect (1-15) in FLX in the FST.
  • co-administration of three injections was from FLX and a single icv injection of WAY100635 (6nmol) did not induce any difference compared to the effect of FLX alone ( Figure 5).
  • GAL (1-15) + FLX modifies mRNA levels and binding characteristics of 5-HTlAR in the dorsal hippocampus

Landscapes

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Abstract

Composición farmacéutica que comprende inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina y galanina (1-15). La presente invención se refiere al uso de galanina (1-15) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para ser utilizado en combinación con un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque un aumento significativo de la síntesis de receptores 5HT1A postsinápticos en áreas terminales. En particular, la presente invención se refiere al uso de GAL(1-15) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo útil para aumentar y/o proporcionar un inicio más rápido del efecto terapéutico de un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que un aumento significativo de la síntesis de receptores 5HT1A postsinápticos en áreas terminales.

Description

Composición farmacéutica que comprende inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina y galanina (1-15)
Sector técnico
La presente invención se enmarca en el campo de la medicina, en particular a un uso terapéutico de la combinación de inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina y galanina (1-15) para el tratamiento de la depresión y desordenes relacionados.
Técnica anterior
Los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (en lo sucesivo denominados como IS S) se han convertido en la principal elección en el tratamiento de la depresión, de ciertas formas de ansiedad y de fobias sociales, debido a su efectividad, buena tolerancia y a que tienen un perfil de seguridad favorable en comparación con los antidepresivos tricíclicos clásicos.
No obstante, estudios clínicos sobre la depresión y desórdenes de ansiedad indican una no respuesta sustancial de los ISRS de hasta un 30%. Un factor a considerar, a menudo descuidado, en el tratamiento con antidepresivos es el cumplimiento del mismo, el cual tiene un profundo efecto en la motivación del paciente para continuar con la farmacoterapia.
En primer lugar, existe el retraso en el efecto terapéutico de los ISRS. A veces los síntomas empeoran incluso durante las primeras semanas de tratamiento. En segundo lugar, la disfunción sexual es un efecto secundario común a todos los ISRS. Sin abordar estos problemas, no es probable que se dé un progreso real en la farmacoterapia de la depresión y los trastornos de ansiedad.
Con el fin de hacer frente a la falta de respuesta, los psiquiatras a veces hacen uso de estrategias de potenciación. La potenciación de la terapia antidepresiva puede lograrse mediante la coadministración de estabilizadores del estado de ánimo tales como carbonato de litio o la triyodotironina o mediante el uso de electrochoque.
En 1993, Artigas y colaboradores describieron una estrategia de potenciación con pindolol en Trends Pharmacol. Sci. 1993, 14, p 262 - 263. La idea de Artigas se basa en experimentos de microdiálisis intracerebral en animales. De hecho, estudios neuroquímicos posteriores basados en la hipótesis de desensibilización de Blier y colaboradores indicaron que el retraso en el efecto terapéutico de los antidepresivos está relacionado con una desensibilización gradual de los autorreceptores 5-HT (Blier et al. J. Psycipharmacol. 1987. 7 suppl. 6, 24S-35S). Un punto clave en su hipótesis es que los efectos de los ISRS en los autorreceptores somatodendríticos controladores de liberación (5-HT1A) limitan la liberación de 5-HT en las áreas terminales y, por tanto, el efecto de la inhibición de la captación de 5-HT en esas regiones. Esto es apoyado por experimentos de microdiálisis en ratas, mostrando que el aumento de 5- HT extracelular provocado por una sola dosis de un IS S se incrementa por la coadministración de un antagonista de autorreceptor 5-HT1A (Invernizzi et al. Brain Res, 1992, 584, p 322-324 and Hjorth, S., J. Neurochem, 1993, 60, p 776-779).
El efecto de la administración combinada de un compuesto que inhibe la recaptación de serotonina y un antagonista del receptor 5-HT1A ha sido evaluado en varios estudios (Innis, R. B. et al. Eur. J. Pharmacol. 1987, 143, p. 1095-204 and Gartside, S. E., Br. J. Pharmacol, 1995, 115, p 1064-1070, Blier, P. et al. Trends in Pharmacol. Science 1994, 15, 220). En estos estudios se encontró que los antagonistas del receptor 5-HT1A suprimirían el freno inicial en la neurotransmision 5-HT inducida por los inhibidores de la recaptación de serotonina y producirían así un impulso inmediato de la transmisión 5-HT y un inicio rápido de la acción terapéutica.
Se han registrado varias solicitudes de patente que cubren el uso de una combinación de un antagonista de 5-HT1A y un inhibidor de la recaptación de serotonina para el tratamiento de la depresión (ver por ejemplo EP-A2-687472 y EP-A2-714663).
Otro enfoque para aumentar el 5-HT terminal sería mediante el bloqueo del autorreceptor 5-
HT1B. Los experimentos de microdiálisis en ratas han demostrado, de hecho, que el aumento de 5-HT en hipocampo inducido por el citalopram es potenciado por GMC 2-29, un antagonista experimental del receptor 5-HT1B.
También se han registrado varias solicitudes de patente que cubren la combinación de un ISRS y un antagonista o agonista parcial de 5-HT1B (WO 97/28141, WO 96/03400, EP-A-701819 and WO 99/13877).
Se ha descubierto ahora que, sorprendentemente, un fragmento de galanina (GAL), en particular GAL (1- 15), que tiene la fórmula general Gly-Trp-Thr-Leu-Asn-Ser-Ala-Gly-Tyr-Leu-Leu-Gly-Pro-His-Ala o GWTLNSAGYLLGPHA, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, es capaz de aumentar y proporcionar un inicio más rápido del efecto terapéutico de los inhibidores de la recaptación de serotonina, en particular de la fluoxetina (FLX).
Divulgación de la invención La presente invención se refiere al uso de GAL (1-15) o de una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en combinación con un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque una elevación en el nivel de serotonina extracelular.
En particular, la presente invención se refiere al uso de GAL (1-15), o de una sal farmacéuticamente aceptable de dicho fragmento, útil para aumentar y/o proporcionar un inicio más rápido del efecto terapéutico de un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque una elevación en el nivel de serotonina extracelular.
Más particularmente, la presente invención se refiere al uso anteriormente indicado de GAL (1- 15), o de una sal farmacéuticamente aceptable de dicho fragmento, para el tratamiento de la depresión, de trastornos de ansiedad y otros trastornos afectivos, de trastornos alimentarios tales como la bulimia, la anorexia y la obesidad, de fobias, de distimia, del síndrome premenstrual, de trastornos cognitivos, de trastornos de control de impulsos, del trastorno por déficit de atención con hiperactividad y abuso de fármacos, en particular de la depresión, con un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque una elevación del nivel de serotonina extracelular.
Breve descripción de los dibujos
Fig. 1. Efectos a nivel de comportamiento de la coadministración de una dosis no efectiva de FLX (2,5mg/Kg) y una dosis subumbral de GAL(1-15) (lnmol) en el test de nado forzada (en ingles, forceáswimming test o FST). La FLX se administró por vía subcutánea (se) 23, 5 y 1 hora antes del test y GAL(1- 15) fue inyectado por vía intracerebroventricular (icv) 15 minutos antes del test. Los datos se representan como la media ± EEM del tiempo de inmovilidad, escalada y nado en el FST durante los 5 min del periodo de test (n=8-9 ratas por grupo). *p<0.05 comparado con el resto de grupos, a = p<0.05 comparado con el grupo de control y GAL(l-15)(lnmol) de acuerdo con un test ANOVA de una vía seguido del test de comparaciones múltiples de Newman-Keuls.
Fig. 2. Efectos a nivel de comportamiento de la coadministración de la dosis efectiva de FLX (10mg/Kg) y GAL(1-15) (lnmol) o GAL (lnmol) en el FST. La FLX se administró por vía se 23, 5 y 1 hora antes del test. El líquido cefalorraquídeo artificial (LC a), el GAL(1-15) y la GAL se administraron por vía icv 15 minutos antes del test. Los datos se representan como la media ± EEM del tiempo de inmovilidad, escalada y nado en el FST durante los 5 min del periodo de test (n=7-8 ratas por grupo). *p<0.05, **p<0.01 comparado con el resto de grupos; #p<0.05 comparado con el grupo control de acuerdo con un test ANOVA de una vía seguido del test de comparaciones múltiples de Newman-Keuls. Fig. 3A. Efectos a nivel de comportamiento de la coadministración de la dosis efectiva de FLX (10mg/Kg) y dosis subumbrales de GAL(1-15) (lnmol) en ratas Sprague-Dawley a las cuales también se administró
M871 (3nmol), antagonista de GALR2. La FLX o el vehículo (carrier) se administraron por vía se 23, 5 y 1 hora antes del test. El LCRa, el GAL(1-15) y la GAL(1-15)+M871 se administraron por vía icv 15 min antes del test. Los datos se representan como la media ± EEM del tiempo de inmovilidad, escalada y natación en el FST durante los 5 min del periodo de prueba (n=7-9 ratas por grupo). #p<0.05, ##p<0.01 comparado con FLX10mg(sc)+LCRa(icv) y FLX10mg(sc)+GAL(l-15) lnmol+M871 3nmol (icv); *p<0.05, **p<0.01 comparado con el grupo control de acuerdo con un test ANOVA de una vía seguido del test de comparaciones múltiples de Newman-Keuls. Fig. 3B. Efectos a nivel de comportamiento de la coadministración de la dosis efectiva de FLX (10mg/Kg) y dosis subumbrales de GAL(1-15) (lnmol) en ratas knockdown GALR2 (siGalR2). La FLX o el carrier se administraron por vía se 23, 5 y 1 hora antes del test. El LCRa y el GAL(1-15) se administraron por vía icv 15 min antes del test. Los datos se representan como la media ± EEM del tiempo de inmovilidad, escalada y natación en el FST durante los 5 min del periodo de test (n=7-9 ratas por grupo). #p<0.05, ##p<0.01 comparado con FLX10mg(sc)+LCRa(icv) y con FLX10mg(sc)+GAL(l-15) lnmol (icv); *p<0.05, **p<0.01 frente al grupo de control de acuerdo con un test ANOVA de una vía seguido del test de comparaciones múltiples de Newman-Keuls.
Fig. 4. (A) Expresión de proteína GALR1 ocho días después de una inyección única del ARNpi (siRNA en inglés) de GALR1 o del carrier vehículo en el cerebro de la rata. Los datos se representan como media ± EEM de los porcentajes respecto al valor control (100&) de la densidad óptica (D.O) *p<0.05 según test t-Student . (B) Efectos a nivel de comportamiento de la coadministración de la dosis efectiva de FLX (10mg/Kg) y la dosis subumbral de GAL(1-15) (lnmol) en ratas Knocdown GALR1 (siGalRl). La FLX o el carrier se administraron por vía se 23, 5 y 1 hora antes del test. El LCRa y el GAL(1-15) se administraron por vía icv 15 min antes del test. Los datos se representan como la media ± EEM del tiempo de inmovilidad, escalada y natación en el FST durante los 5 min del periodo de prueba (n=7-9 ratas por grupo) *p<0.05 según test t-Student.
Fig. 5. Efectos a nivel de comportamiento de la coadministración de la dosis efectiva de FLX (10mg/Kg) y de Wayl00635 (6nmol), antagonista de 5-HT1A, y la coadministración de la dosis efectiva de FLX (10mg/Kg) con GAL(1-15) (lnmol) y Wayl00635 (6nmol) en el FST. La FLX o el carrier se administraton por vía se 23, 5 y 1 hora antes del test. GAL(1-15), Wayl00635 y GAL(1-15)+Wayl00635 se administró por vía icv 15 min antes del test. Los datos se representan como la media ± EEM del tiempo de inmovilidad, escalada y natación en el FST durante los 5 min del periodo de prueba (n=5-10 ratas por grupo). *p<0.05, **p<0.01 comparado con el grupo control de acuerdo con un test ANOVA de una vía seguido del test de comparaciones múltiples de Newman-Keuls.
Fig. 6A. Efectos de la coadministración de FLX (10mg/Kg) y GAL(1-15) (lnmol) en los niveles de ARNm de
5-HT1AR en el hipocampo dorsal (región CAI y giro dentado -DG-). La FLX se administró 23, 5 y 1,25 horas antes del sacrificio y GAL(1-15) se inyectó 30 min antes del sacrificio. Los valores de densidad óptica (D.O), media ± EEM, están expresados en porcentaje respecto del valor control (100%). *p<0.05 comparado con el resto de grupos. (B) Autorradiogramas representativos del hipocampo dorsal mostrando los niveles de ARNm de 5-HT1AR determinados por hibridación in situ en la áreas analizadas. Fig. 6B. Autorradiogramas representativos del hipocampo dorsal mostrando los niveles de ARNm de 5- HT1AR determinados por hibridación in situ en la áreas analizadas.
Fig. 7A. Efectos sobre las características de unión de [3H]-8-OH-DPAT, agonista de 5-HT1AR, en el giro dentado del hipocampo (GD) después de la coadministración de FLX((10mg/Kg) y LCRa o GAL(1- 15)(lnmol). La FLX se administró 23, 5 y 1,25 horas antes del sacrificio y GAL(1-15) se inyectó 30 min antes del sacrificio. Los experimentos de saturación se realizaron con 10 concentraciones de [3H]-8- OH- DPAT (0.26-10nM) en secciones coronales del hipocampo. La unión no especifica se definió en presencia de 10μΜ de serotonina. Los valores de Kd y Bmax se muestran como media±EEM (n=6 ratas por grupo), el valor de la Kd(nM) para el grupo de FLX es de 1.2±0.1 y el de Bmax(fmol/mg prot) es de 545±37. *p<0.05; **p<0.01 comparado con el grupo control según test t-Student.
Fig. 7B. Autorradiogramas representativos de secciones de hipocampo de rata con una concentración de radioligando similar a la Kd (In M) mostrando el incremento de afinidad del agonista 5-HT1AR. Divulgación detallada de la invención
En la presente invención se describe por primera vez como GAL(1-15) mejora los efectos antidepresivos inducidos por FLX en el FST. Estos efectos son específicos ya que GAL carece de efecto. También se obtuvieron indicios de la implicación del complejo GALR1/GALR2 en las acciones mediadas por GAL(1- 15) basadas en el uso M871, antagonista específico de GALR2, e inyecciones icv del ARNpi de GALR1 o del ARNpi de GALR2 produciendo una reducción de GALR1 o GALR2, respectivamente.
Es importante destacar la participación de 5HT1AR en las interacciones GAL(1-15)/FLX ya que WAY100635, antagonista 5HT1AR, bloqueó los efectos inducidos por la coadministración de GAL(1-15) y FLX. Además, el mecanismo de las interacciones GAL(1-15)/FLX implicó cambios en el 5HT1AR a nivel de membrana plasmática con cambios también a nivel transcripcional. Por lo tanto, las interacciones
GAL(1-15)/FLX afectaron las características de unión, así como los niveles de ARNm de 5-HT1AR específicamente en el hipocampo dorsal.
El FST se utiliza como una prueba de comportamiento para predecir la eficacia de los tratamientos antidepresivos. El FST es una prueba de comportamiento atractiva para la búsqueda de los fármacos antidepresivos porque es rápida de ejecutar, fiable entre laboratorios, y sensible a los efectos de todas las clases principales de medicamentos antidepresivos. En este ensayo, el principal indicativo de un efecto antidepresivo de un compuesto determinado es una disminución en el comportamiento de la inmovilidad. El registro de los comportamientos activos: natación y escalada proporcionan información adicional sobre el mecanismo de acción que media el efecto antidepresivo. De hecho, los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina disminuyen la inmovilidad y aumentan el comportamiento de la natación.
En la presente invención, la inyección de FLXIOmg 23, 5 y 1 hora antes de la prueba de 5 min reduce significativamente la inmovilidad e incrementa el tiempo de natación en el FST. Los resultados obtenidos coinciden con estudios previos y validan el modelo conductual utilizado (Estrada-Camarena, E., Fernandez-Guasti, A., Lopez- ubalcava, C, 2003. Neuropsychopharmacology 28, 830-838). Además, FLX a la dosis de 2.5mg no produjo ningún efecto, corraborando de nuevo resultados previos de otros autores (Detke, M. J., Wieland, S., Lucki, I., 1995b. Psychopharmacology (Berl) 119, 47-54)
En esta invención, sin embargo, se ha demostrado que la GAL(1-15) mejora significativamente los efectos antidepresivos de la FLX en el FST. Se observó una disminución en la inmovilidad y un aumento de la natación después de la coadministración de la dosis subumbral de GAL(1-15) y FLX. Cuando se administraron por separado, ninguno de estos tratamientos afectaron a los comportamientos analizados en el ensayo, lo que indica que GAL(1-15) y FLX interactúan para provocar las respuestas antidepresivas.
Dado que GAL (1-15) a una dosis efectiva induce un efecto pro-depresivo (Millón, C, Flores- Burgess, A., Narváez, M., Borroto-Escuela, DO, Santin, L., Parrado, C. , Narvaez, JA, Fuxe, K., Diaz-Cabiale, Z., 2015. Int J Neuropsychopharmacol 18), el efecto antidepresivo sólo puede ser debido a la mejora de la acción FLX. Además, se validó la fuerte potenciación inducida por GAL(1-15) sobre la acción antidepresiva de FLX utilizando una dosis efectiva de FLX. Se ha demostrado que GAL(1-15) implica a los receptores GALR1-GALR2 para mejorar el efecto antidepresivo de la FLX en el FST. GALR2 participa en los efectos de GAL(1-15) ya que M871, antagonista GALR2, bloqueó la potenciación de los efectos antidepresivos de la FLX inducida por GAL(1-15). También se bloquearon los efectos de comportamiento de la GAL(1-15) sobre FLX en ratas knockdown GALR1 y GALR2, lo que confirma que los efectos de GAL(1-15) dependen de la existencia de GALR1-GALR2.
Por otra lado, en las ratas knockdown GALR1 y GALR2, la FLX sólo redujo la inmovilidad y el tiempo de natación en el FST, confirmando que el efecto de la FLX no esta afectado por la reducción de los niveles de GALR1 o GALR2.
Además, los resultados con respecto a la presente invención confirman que los efectos de GAL(1-15) a través de complejos GALR1-GALR2 heterorreceptores podrían ser un mecanismo clave en la depresión. Además, los efectos de GAL(1-15) en las acciones mediadas por FLX en el FST son específicos, ya que GAL no induce efectos. El hecho de que la mejora de la acción antidepresiva de FLX por GAL(1-15) sea bloqueado por WAY100365, antagonista de 5-HT1A , también indica que 5-HT1AR tiene una participación significativa en esta interacción.
Según varios autores, la administración de WAY100635 junto con una dosis eficaz de FLX, induce la inhibición de la acción de este ISRS (Serres et al., 2000, Estrada-Camarena et al., 2006). Sin embargo, si se administra el antagonista en un momento diferente, como en el presente estudio, se mantiene la actividad de tipo antidepresivo de FLX en el FST (Serres et al., 2000, Estrada-Camarena et al., 2006). Este patrón de inyección en el que WAY100365 no pudo anular la actividad antidepresiva mostrada por FLX por sí sola en el FST, apoya la idea de que GAL(1-15), a través de GALR1/GALR2, puede interaccionar con 5-HT1AR para facilitar la acción de la FLX.
En conclusión, los resultados indican que GAL(1-15) aumenta los efectos antidepresivos inducidos por FLX probablemente actuando sobre el complejo heterorreceptor 5-HT1AR - GALR1 - GALR2. Los resultados abren la posibilidad de utilizar terapéuticamente GAL(1-15) en combinación con FLX como una estrategia novedosa para el tratamiento de la depresión.
La presente invención proporciona así:
La presente invención se refiere al uso de GAL(1-15) o de una de sus sales farmacéuticamente aceptables para ser usadas en combinación con un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque una elevación en el nivel de serotonina extracelular.
En particular, la presente invención se refiere al uso de GAL(1-15), o de una sal farmacéuticamente aceptable útil, para aumentar y/o proporcionar un inicio más rápido del efecto terapéutico de un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque una elevación de los niveles de serotonina extracelular.
Más particularmente, la presente invención se refiere al uso anteriormente indicado de GAL(1- 15), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de depresión, trastornos de ansiedad y otros trastornos afectivos, trastornos alimentarios tales como bulimia, anorexia y obesidad , fobias, distimia, síndrome premenstrual, trastornos cognitivos, trastornos de control de impulsos, trastorno por déficit de atención con hiperactividad y abuso de fármacos, en particular depresión, con un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque elevación del nivel de serotonina extracelular. Más particularmente, la sal farmacéuticamente aceptable de GAL (1- 15) es una sal de trifluoroacetato.
Los trastornos de ansiedad mencionados anteriormente incluyen trastorno de ansiedad general, ansiedad de pánico, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno de estrés agudo, trastorno de estrés postraumático o trastorno de ansiedad social. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "aumentar" significa mejorar el efecto terapéutico y/o potenciar el efecto terapéutico de un I S o un compuesto que provoca una elevación en el nivel extracelular de 5-HT.
En una realización adicional, la invención se refiere al uso de GAL(1-15), o de una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un compuesto que es un inhibidor de la recaptación de serotonina, o un compuesto que causa una elevación del nivel de serotonina extracelular, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades o trastornos que responden al efecto terapéutico de un inhibidor de la recaptación de serotonina, o cualquier otro compuesto que provoque una elevación del nivel de serotonina extracelular.
Las enfermedades que responden a un inhibidor de la recaptación de serotonina incluyen depresión, trastornos de ansiedad y otros trastornos afectivos, trastornos alimentarios tales como bulimia, anorexia y obesidad, fobias, distimia, síndrome premenstrual, trastornos cognitivos, trastornos de control de impulso, en particular depresión.
El término "trastornos de ansiedad" se ha definido anteriormente.
En una realización de la invención, ésta se refiere al uso de GAL(1-15), o de una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para la preparación de una composición farmacéutica como se ha indicado anteriormente, adaptada para la administración simultánea de los ingredientes activos. En particular, dichas composiciones farmacéuticas pueden contener los ingredientes activos dentro de la misma forma de dosificación unitaria, por ejemplo en la misma cápsula o comprimido. Dichas formas de dosificación unitarias pueden contener los ingredientes activos como una mezcla homogénea o en compartimentos separados de la forma de dosificación unitaria.
En otra realización, la presente invención se refiere al uso de GAL(1-15) o de una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para la preparación de una composición farmacéutica como la anterior, adaptada para la administración secuencial de los ingredientes activos. En particular, dichas composiciones farmacéuticas pueden contener los ingredientes activos en formas de dosificación unitarias individuales (kit farmacéutico), por ejemplo comprimidos o cápsulas individuales que contengan cualquiera de los ingredientes activos. Estas formas de dosificación unitarias individuales pueden estar contenidas en el mismo recipiente o paquete, por ejemplo un blister.
La expresión "kit farmacéutico" empleada en el documento significa una composición farmacéutica que contiene cada uno de los ingredientes activos, pero en formas de dosificación unitarias individuales, y pudiendo estar dichos ingredientes activos empaquetados conjuntamente, por ejemplo en un blister, o no, en cuyo caso la composición resulta del uso combinado de dichos ingredientes activos, entendiéndose por "uso combinado" la administración de los ingredientes activos de forma asociada entre sí pero no necesariamente de forma simultánea. La invención también se refiere a una composición farmacéutica que incluye GAL(1-15), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y un compuesto que es un inhibidor de la recaptación de serotonina, o cualquier otro compuesto que provoque una elevación en 5-HT extracelular, y opcionalmente carriers o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
La composición farmacéutica de la invención puede ser adaptada para la administración simultánea de los ingredientes activos o para la administración secuencial de los ingredientes activos, como se ha descrito anteriormente, preferiblemente para la administración secuencial de los ingredientes activos como se ilustra en los ejemplos proporcionados en la presente memoria, en particular mediante la administración de un inhibidor de la recaptación de serotonina, tal como la FLX, por vía subcutánea en un momento diferente de la administración de GAL(1-15), que se administra preferiblemente por vía parenteral, tal como una vía intraarterial o intravenosa.
Por último, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de enfermedades o trastornos que responden a un inhibidor de la recaptación de serotonina, o a cualquier otro compuesto que provoca una elevación del nivel de serotonina extracelular, que comprende administrar, a un individuo que lo necesite, GAL(1-15), o una sal farmacéuticamente aceptable, y un inhibidor de la recaptación de serotonina, o un compuesto que provoca una elevación del nivel de serotonina extracelular.
En particular, la presente invención se refiere a un método para aumentar y/o proporcionar un inicio más rápido del efecto terapéutico de un inhibidor de la recaptación de serotonina, o de cualquier otro compuesto que provoque un aumento en la nivel de serotonina extracelular, dicho método implicando administrar GAL(1-15), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, a un individuo que vaya a ser tratado, o que esté bajo tratamiento, con un inhibidor de la recaptación de serotonina o cualquier otro compuesto que provoque una elevación del nivel de serotonina extracelular. Los individuos susceptibles de beneficiarse del tratamiento con una combinación como la anterior, pueden padecer depresión, trastornos de ansiedad y otros trastornos afectivos, trastornos alimentarios tales como bulimia, anorexia y obesidad, fobias, síndrome premenstrual, distimia, trastornos cognitivos, el trastorno por déficit de atención con hiperactividad, y el abuso de drogas; en particular, depresión.
Como se ha mencionado anteriormente, los trastorno de ansiedad incluyen trastorno de ansiedad general, ansiedad de pánico, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno de estrés agudo, trastorno de estrés postraumático o trastorno de ansiedad social.
GAL(1-15) y el inhibidor de la recaptación de serotonina pueden administrarse simultáneamente como se ha descrito anteriormente.
Alternativamente, los ingredientes activos pueden ser administrados secuencialmente, por ejemplo en dos formas de dosificación unitaria individuales, como se ha descrito anteriormente. GAL(1-15) y sus sales farmacéuticamente aceptables tienen la fórmula general Gly-Trp-Thr-Leu- Asn-Ser-Ala-Gly-Tyr-Leu-Leu-Gly-Pro-His-Ala o GWTLNSAGYLLGPHA.
Sorprendentemente, se ha descubierto que la coadministración de GAL(1-15) y un inhibidor de la recaptación de serotonina produce un aumento significativo de la síntesis de receptores 5HT1A postsinápticos en áreas terminales ((con efectos equivalentes a los esperados en caso de un aumento de los niveles de serotonina extracelular) en comparación con la administración únicamente del inhibidor de la recaptación de serotonina. La administración por sí sola de una dosis efectiva de GAL(1-15) causa un efecto prodepresivo.
Como se ha mencionado anteriormente, los inhibidores de la recaptación de serotonina muestran un retraso en el inicio de la acción. Incluso en la respuesta a los IS S, varias semanas de tratamiento son necesarias para lograr un alivio en los síntomas. GAL(1-15) puede proporcionar un inicio rápido del efecto terapéutico de los inhibidores de la recaptación de serotonina.
El uso de una combinación de GAL(1-15) y un inhibidor de la recaptación de serotonina puede reducir en gran medida la cantidad de inhibidor de la recaptación de serotonina necesaria para tratar la depresión y otros trastornos afectivos, y puede así reducir los efectos secundarios causados por el inhibidor de la recaptación de serotonina. En particular, la combinación de una cantidad reducida de ISR y GAL(1-15) puede reducir el riesgo de disfunción sexual inducida por ISRS y trastornos del sueño.
La coadministración de GAL(1-15) y un inhibidor de la recaptación de serotonina también puede ser útil para el tratamiento de la depresión refractaria, es decir, la depresión que no puede tratarse apropiadamente empleando sólo la administración de un inhibidor de la recaptación de serotonina. Típicamente, GAL(1-15) puede usarse como terapia complementaria para el aumento de la respuesta a ISRS en pacientes en los que no se ha logrado al menos una reducción del 40-60% de los síntomas durante las primeras 6 semanas de tratamiento con un ISRS .
Se han descrito en la literatura muchos antidepresivos con efecto inhibidor de la recaptación de serotonina. Cualquier compuesto farmacológicamente activo que principalmente o parcialmente ejerza su efecto terapéutico a través de la inhibición de la recaptación de serotonina en el sistema nervioso central (SNC), puede beneficiarse del aumento con GAL(1-15).
La siguiente lista contiene una serie de inhibidores de la recaptación de serotonina que pueden beneficiarse de la potenciación con GAL (1-15): Citalopram, escitalopram, FLX, R-FLX, sertralina, paroxetina, fluvoxamina, venlafaxina, duloxetina, dapoxetina, nefazodona, imipramina, imipramina N- óxido, desipramina, pirandamina, dazepinil, nefopam, befuralina, fezolamina, femoxetina, clomipramina, cianoimipramina, litoxetina, Cericlamina, seproxetina, WY 27587, WY 27866, imeldina, ifoxetina, tiflucarbina, viqualina, milnacipran, bazinaprina, YM 922, S 33005, F 98214-TA, OPC 14523, alaproclato, cianodotepina, trimipramina, quinupramina, dotiepina, amoxapina, nitroxazepina , McN 5652, McN 5707, OI 77, Org 6582, Org 6997, Org 6906, amitriptilina, amitriptilina N-óxido, nortriptilina, CL 255.663, pirlindole, indatralina, LY 113.821, LY 214.281, CGP 6085 A, RU 25.591, napamezol, diclofensina, trazodona, EMD 68.843, BMY 42.569, NS 2389, sercloremina, nitroquipazina, ademetionina, sibutramina y clovoxamina. Los compuestos mencionados anteriormente se pueden usar en forma básica o de una sal de adición ácida farmacéuticamente aceptable de la misma. Son especialmente preferidas la FLX o una sal de ácida farmacéuticamente aceptable de la misma.
La lista anterior de inhibidores de la recaptación de serotonina y otros compuestos, que causan un aumento en el nivel extracelular de serotonina, no puede ser interpretada como limitante.
Los ISRS que son particularmente preferidos de acuerdo con la presente invención incluyen citalopram, escitalopram, FLX, sertralina, paroxetina, fluvoxamina, venlafaxina, dapoxetina, nefazodona, imipramina, femoxetina y clomipramina. En particular, de nuevo, se prefiere la FLX o una sal de adición ácida farmacéuticamente aceptable de la misma.
El término "inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina (ISRS)" significa un inhibidor de los transportadores de monoamina que tiene un efecto inhibidor más fuerte en el transportador de serotonina que los transportadores de dopamina y noradrenalina.
Los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS) están entre los inhibidores de la recaptación de serotonina más preferidos utilizados de acuerdo con la presente invención. Los ISRS particularmente preferidos de acuerdo con la invención son citalopram, escitalopram, FLX, fluvoxamina, sertralina o paroxetina.
Los ingredientes activos de acuerdo con la invención, es decir, GAL(1-15) y el ISRS o un compuesto que provoca un aumento de los niveles de serotonina extracelular, se pueden usar en la forma básica libre o en forma de una sal de adición ácida farmacéuticamente aceptable de la misma, siendo esta última obtenible por reacción de la forma básica con un ácido apropiado.
El citalopram se usa preferiblemente en forma de hidrobromuro o como base; escitalopram, en forma de oxalato; FLX, sertralina y paroxetina, en forma de hidrocloruro; y fluvoxamina, en forma de maleato.
Como se ha mencionado anteriormente, la combinación de GAL(1-15) con un inhibidor de la recaptación de serotonina muestra inesperadamente un efecto sinérgico sobre el SNC. Como consecuencia, puede ser eficaz la terapia de combinación usando GAL(1-15) y una dosis más bajas del inhibidor de la recaptación de serotonina que las normalmente se usan en monoterapia, y se pueden reducir los efectos secundarios asociados con las cantidades mayores de inhibidor de la recaptación de serotonina usadas en monoterapia o impedirlos por completo.
Además, la terapia de combinación con GAL(1-15) usando una dosis normal de inhibidor de la recaptación de serotonina tiene la ventaja de que se puede obtener un efecto eficaz del SNC en un número de pacientes, a menudo grande, que no responden a la monoterapia convencional con ISRS. Los inhibidores de la recaptación de serotonina, incluyendo los IS Ss específicamente mencionados anteriormente, difieren tanto en peso molecular como en actividad. Como consecuencia, la cantidad de inhibidor de la recaptación de serotonina usada en la terapia de combinación depende de la naturaleza de dicho inhibidor de la recaptación de serotonina. En una realización de la invención, el inhibidor de la recaptación de serotonina o el compuesto que causa un aumento en el nivel de 5-HT extracelular se administra a dosis menores de las requeridas cuando el compuesto se usa solo. En otra realización, el inhibidor de la recaptación de serotonina o el compuesto que causa un aumento en el nivel de 5-HT extracelular, se administra en dosis normales.
Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, se combina una cantidad apropiada del ingrediente o ingredientes activos, en forma de sal o en forma de base, la mezcla se realiza con un carrier farmacéuticamente aceptable, que puede adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas se encuentran idealmente en forma de dosificación unitaria adecuada para administración oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral. Por ejemplo, al preparar las composiciones en forma de dosificación oral, pueden emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos usuales, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o carriers sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pildoras, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma unitaria de dosificación oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente carriers farmacéuticos sólidos.
Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma de unidad de dosificación para facilidad de administración y uniformidad de dosificación. Tal como se utiliza en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, la forma de dosificación unitaria se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada unidad, una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con el carrier farmacéutico requerido. Ejemplos de tales formas unitarias de dosificación son comprimidos (incluyendo comprimidos marcados o recubiertos), cápsulas, pastillas, paquetes de polvo, obleas, soluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y similares, y múltiples segregados de los mismos.
El GAL(1-15) puede ser administrada antes, durante o después de la administración del inhibidor de la recaptación de serotonina, preferiblemente después de la administración del inhibidor de la recaptación de serotonina, siempre que el tiempo entre la administración de GAL(1-15) y la administración de el inhibidor de la recaptación de serotonina es tal que se permite que los ingredientes actúen sinérgicamente en el SNC. Cuando se prevé la administración simultánea de GAL(1-15) y un inhibidor de la recaptación de serotonina, una composición que contiene tanto un inhibidor de la recaptación de serotonina como GAL(1-15) puede ser particularmente conveniente. O GAL(1-15) y el inhibidor de la recaptación de serotonina pueden ser administrados por separado en forma de composiciones adecuadas. Las composiciones se pueden preparar como se ha descrito anteriormente.
La presente invención también comprende productos que contienen GAL(1-15) y un inhibidor de la recaptación de serotonina como una preparación de combinación para uso simultáneo, separado o secuencial en la terapia farmacológica psiquiátrica. Tales productos pueden comprender, por ejemplo, un kit farmacéutico que comprende formas de dosificación unitarias discretas que contienen GAL(1-15) y formas de dosificación unitarias discretas que contienen un inhibidor de la recaptación de serotonina, todas contenidas en el mismo envase, p.e. un blister.
La invención antes mencionada se detalla adicionalmente en los siguientes ejemplos no limitantes y meramente ilustrativos.
Mejor(es) manera(s) de realizar la invención
MATERIAL Y MÉTODOS Animales
Ratas macho Sprague-Dawley obtenidas a CRIFFA, Barcelona (200-250gr), se mantuvieron bajo un ciclo luz/oscuridad de 12h en condiciones controladas de temperatura y humedad (22±29C, 55-60%). Los animales tuvieron libre acceso a los pellets de comida y al agua del grifo. Las pruebas de comportamiento se realizaron durante la fase de luz del ciclo diario. Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité de Ética Animal Institucional de la Universidad de Málaga, España.
Ratas Knockdown GALR1 y GALR2.
Para generar ratas knockdown se utilizó un procedimiento ya descrito (Millón et al., 2015). En resumen, durante la cirugía estereotáxica una vez que la cánula se fija, los animales recibieron una inyección icv de 5 μg (0,35 nmol) de Accell Smart pool siRNA (Dharmacon) para el receptor 2 de galanina (GALR2) o para su receptor 1 (GALR1). Los animales tuvieron un periodo de recuperación de 8 días antes de la prueba de comportamiento, que es el tiempo requerido para reducir los niveles de receptores de GAL como ya se ha descrito (Millón et al., 2015).
Evaluación del comportamiento Los grupos de ratas se evaluaron en el FST. Las dosis, patrones y modos de administración de las sustancias se eligieron en base a trabajos previos (Estrada-Camarena et al., 2003, Kuteeva et al., 2006, Zhang et al., 2004, Yoshiyama et al., 2003).
En el primer conjunto de experimentos, se realizó una curva dosis-respuesta de la FLX. Los grupos de ratas recibieron tres inyecciones se de FLX a las dosis de 10 mg/Kg o 2.5 mg/Kg, o de carrier a las 23, 5 y 1 hora antes de las pruebas, además de una inyección icv de LCRa 15 min antes la prueba.
Se ha demostrado que este patrón de inyección produce efectos de FLX en el FST similares a aquellos por los que produce efectos después de tratamientos crónicos y a aquellas que produce sus efectos clínicos en seres humanos (Detke et al., 1997). Este patrón de inyección se usó en todos los experimentos relacionados con esta invención.
En el segundo grupo de experimentos, para evaluar las interacciones de FLX con GAL(1-15) en el FST, los grupos de ratas recibieron tres inyecciones se de FLX (2.5 mg/Kg) o FLX (10 mg/Kg) y una Inyección única icv de GAL(1-15) (lnmol) 15 minutos antes de la prueba. También se compararon los efectos entre la coadministración de FLX (10mg/Kg) y GAL(1-15) (lnmol) o GAL (lnmol) en el FST.
En el tercer conjunto de experimentos se determinó la participación de GALRl y GALR2 en la mediación del efecto de GAL(1-15) sobre la FLX. Los grupos de ratas recibieron tres inyecciones se de FLX (10mg/kg), una sola inyección icv de GAL(1-15) (lnmol) y de M871 (3nmol), antagonista de GALR2, solos o en combinación. Además, en ratas ARNpi-knockdown GALRl o GALR2 se coadministró FLX (10mg/Kg) y GAL(1-15) (lnmol) con el fin de analizar la participación de los receptores GALRl y GALR2 en el efecto mediado por GAL(1-15).
Para estudiar si los efectos de GAL(1-15) sobre la acción de FLX fueron mediados por el receptor 5HT1AR, grupos de ratas recibieron tres inyecciones se de FLX (10mg/kg), una sola inyección icv de GAL(1-15) (lnmol) y de WAY100635 (6nmol), antagonista de 5HT1AR, solos o en combinación. Autorradiografía e hibridación in situ
El procedimiento para realizar la autorradiografía del receptor y la hibridación in situ está descrito (Razani et al., 2000, Razani et al., 2001). Las ratas (n=6 por grupo) recibieron las tres inyecciones se de FLX o de carrier, y una sola inyección icv de GAL(1-15) o LCRa y se sacrificaron 30 min después. Se obtuvieron secciones coronales a nivel de hipocampo dorsal y de rafe dorsal (DR).
Autorradiografía cuantitativa
Los experimentos de saturación se realizaron usando [3H]-8-OH-DPAT. Las secciones se preincubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente en tampón Tris-HCI 50mM (pH 7,6), que contenía 4mM de CaCI2, 0,01% de ácido ascórbico y lOmM de pargilina. Las secciones se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente con [3H]-8-OH-DPAT en la misma solución que la anterior. El tiempo de exposición de la película para las secciones fue de 6 semanas.
Hibridación in situ:
Después de la prehibridación, la hibridación se realizó en una cámara húmeda con el tampón de prehibridación durante 2h a 379C, las secciones se hibridaron bajo cubreobjetos con sondas de A N a 1x10s cpm/ΙΟΌμΙ de la mezcla de hibridación durante 16h a 559C. Tras la hibridación, las secciones se enjuagaron 4 veces durante 20min en lxSSC a 559C. Finalmente, las secciones se enjuagaron en agua esterilizada durante 10s, se deshidrataron en alcohol y se secaron al aire. El tiempo de exposición de la película para las secciones fue de 2 semanas
Análisis de imágenes
Las mediciones se realizaron en el Giro Dentado (DG) y en la región CAI del hipocampo (cuadrado de 0.15mm2). La parte ventral del área de la línea media del DR se analizó utilizando un cuadrado como campo de muestra (0,09mm2).
Análisis Estadístico
Los datos se presentan como las medias±EEM y el número de muestras (n) se indica en las leyendas de las figuras. Todos los datos se analizaron utilizando GraphPad PRISM 4.0 (Graph Pad Software, La Jolla, CA). Para comparar dos condiciones experimentales, se realizó el análisis estadístico del test t-Student no pareado o, en caso contrario, ANOVA seguido por el test de comparaciones múltiples de Newman- Keuls después de la prueba. Las diferencias se consideraron significativas a P <0,05 (*P<0,05, **P<0,01, ***P<0,001). Los datos de los experimentos de saturación se analizaron mediante análisis de regresión no lineal para la determinación de la constante de disociación (Kd) y el número total de sitios de unión agonista (Bmax) usando GraphPad PRISM 4.0.
Ejemplo 1. Dosis-respuesta de FLX
Como se describió anteriormente, tres inyecciones se de FLX 10mg/Kg indujeron efectos similares a los antidepresivos en el FST en ratas (Tabla 1). El ANOVA total de una vía mostró un efecto significativo entre tratamientos en la inmovilidad
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p <0,05) y natación (F2,2o=7,044, p <0,01), mientras que no se observó diferencia significativa en la escalada
Figure imgf000016_0002
p=0,102). FLX (10mg/Kg) redujo la inmovilidad (post hoc, p <0.05) y el tiempo de natación (post hoc, p <0.01) en comparación con los controles y FLX (2.5mg/Kg). Las tres inyecciones de se FLX (2.5mg/Kg) se consideraron subumbrales en esta prueba ya que no produjeron efectos antidepresivos en comparación con los controles (Tabla 1). Tíerrí o de ircmovliidad Tiem o de íMado Tiempo de Escalada Corttroi 130±4 f9±9 66,8±8
FLX 2 , Smg/I g 122,6±10 101,9±10 56,8±9
FLX lOmg l 9ͱ14* 135,6110a 4i,3±?
Tabla 1. Efectos sobre el comportamiento de la administración de FLX a dosis de 2.5 ó 10mg/Kg o de LC a en el FST. La FLX o el carrier se administraron se 23, 5 y 1 hora antes de la prueba. El LCRa se inyectó icv 15 min antes de la prueba en todos los grupos. Los datos representan la mediaiEEM del tiempo de inmovilidad, escalada y natación en el FST durante el periodo de prueba de 5 min (n=6-9 ratas por grupo). *p<0,05 frente al resto de los grupos; ap<0.05 comparado con FLX (2.5mg/Kg) y p<0.01 en comparación con los controles según un ANOVA de una vía seguida del test de comparaciones múltiples de Newman-Keuls. Ejemplo 2. GAL(1-15) pero no GAL potencia los efecto antidepresivos de la FLX en el FST
La coadministración de las tres inyecciones se de la dosis subumbral de FLX (2.5mg/Kg) y una sola inyección icv de GAL(1-15) (Inmol) (Figura 1) indujo efectos antidepresivos, con una disminución significativa en la inmovilidad (F3 27= 3,973, p<0,05) en comparación con el resto de los grupos (Figura 1, post hoc, p<0,05). Además, se observó un aumento en la natación (F3 28= 4,137, p<0,05) comparado con GAL(1-15) y los controles (Figura 1, post hoc, p<0,05).
La potente mejora de la GAL(1-15) en los efectos antidepresivos mediados por FLX se validó con una dosis efectiva de FLX (10mg/kg). La dosis subumbral de GAL(1-15) (Inmol) mejoró los efectos de tipo antidepresivo mediados por las tres inyecciones se de FLX (10mg/kg), según un ANOVA de una vía, en la inmovilidad (F3 28=10,96, p<0,001 ) y la natación (F3 28=16,46, p<0,001) sin afectar la escalada (F3 27=0,7554, p=0,5289) (Fig. 1). La GAL(1-15) vía icv disminuyó significativamente el comportamiento de inmovilidad inducido por las tres inyecciones de la dosis efectiva de FLX (10mg/kg) en un 50% en el FST (Figura 2, post hoc, p <0,05). Además, también se observó un aumento del comportamiento de la natación de alrededor del 40% frente al grupo FLX (10mg/kg) (p<0,01).
La coadministración de tres inyecciones se de FLX (10mg/Kg) y una sola inyección icv de GAL (Inmol) careció de efecto en la inmovilidad y comportamiento de la natación en comparación con FLX (10mg/kg) en el FST (Figura 2). Ejemplo 3. Receptores de GAL implicados en la interacción GAL(1-15)-FLX
Se ha probado la participación de la GALR2 en la interacción GAL(l-15)-FLX(10mgkg) con el antagonista selectivo de GALR2 M871 y con un modelo in vivo de ratas knockdown GALR2.
GALR2 participa en esta interacción ya que M871 (3nmol), antagonista de GALR2, bloqueó significativamente la inmovilidad
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p<0,001, post hoc, p<0,05) y la natación
p<0,001; post hoc, p<0,01) inducidos por la coadministración de una única inyección icv de GAL(1-15) y las tres inyecciones se de FLX(10mg/kg) en el FST (Figura 3A).
M871, antagonista de GALR2, inyectado solo, a la dosis de 3nmol, careció de efectos con respecto a la inmovilidad (141 ± 12 seg) y la natación (68,7 ± 10 seg) en el FST.
Consecuentemente se usaron ratas knockdown GALR2 para confirmar la participación de GALR2 en la interacción entre GAL(1-15) (lnmol) y FLX (10mg/kg) (Figura 3B). Según el ANOVA de una vía se observan efectos significativos del tratamiento utilizado en la inmovilidad (F2,i7=5.932, p<0.05) y comportamiento de natación (F2,i7=5.932, p<0.01). Las tres inyecciones se de FLX (10mg/kg) produjeron efectos de tipo antidepresivo en los animales knockdown GALR2 con una disminución en el tiempo de inmovilidad (Figura 3B, post hoc, p<0,05) y un aumento en el tiempo de natación (Figura 3B, post hoc, p<0,01) en comparación con el grupo control de ratas knockdown GALR2. Por otra parte, la coadministración de las tres inyecciones se de FLX (10mg/kg) y una única inyección icv de GAL(1-15) en animales knockdown GALR2 no produjo ningún efecto en el tiempo de inmovilidad y natación en comparación con FLX (Figura 3B ).
GAL(1-15) (lnmol) inyectada por sí sola carece de efectos en el FST en animales knockdown
GALR2 en comparación con el grupo control en la inmovilidad (14,7±3s), natación (81,7±3s) o escalada (60±4s).
También se utilizaron ratas knockdown GALR1 para determinar la participación de GALR1 en el efecto inducido por GAL(1-15) en FLX en el FST. En este modelo se confirmó una reducción en un 30% de la expresión de GALR1 por ensayo inmunoquímico en la región CAI del hipocampo dorsal (Figura 4-A, t14=2.317, p<0.05) y y en el DG (Figura 4- A, t14=2.359, p<0.05).
En el FST de las ratas knockdown GALR1, las tres inyecciones se de FLX (10mg/Kg) produjeron efectos antidepresivos con una disminución en el tiempo de inmovilidad (Tabla 2, ti6=2,778, p<0,05) y un incremento en el tiempo de natación (Tabla 2;
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p<0,05) en comparación con el grupo control de control de ratas knockdown GALR1. Tiempo ú$ mwiÍi tá so Escalad»
(siRNA GALR1J (sE KA @ALR1) ¾A GALRt)
101,5*7 93,2+11
FLX flümg /%j 70,3*8*
Tabla 2 Efectos sobre el comportamiento de la dosis efectiva de FLX (10mg/Kg) en ratas knockdown GALRl (siGalRl). La FLX y el carrier se administraron se 23, 5 y 1 hora antes de la prueba. El LCRa y GAL(1-15) se inyectaron icv 15 min antes de la prueba. Los datos se representan como la media±EEM de la inmovilidad, escalada y tiempo de natación en el FST durante el periodo de prueba de 5min (n=7-9 ratas por grupo) *p<0,05 de acuerdo con el test de t-Student.
Además, en otros experimentos, la coadministración de las tres inyecciones se de FLX (10mg/kg) y una única inyección icv de GAL(1-15) (lnmol) en animales knockdown GALRl no produjo diferencias estadísticamente significativas en comparación con FLX (10mg/kg) en el tiempo de inmovilidad (Figura 4-B, ni en el tiempo de natación (Figura 4-B; ti4=0,319).
Ejemplo 4. Implicación del 5HT1AR en la interacción GAL(1-15)-FLX
Para determinar el papel de 5HT1AR en la interacción entre GAL(1-15) y FLX se utilizó WAY100635, antagonista de 5HT1AR (Figura 5).
5HT1AR participa en esta interacción ya que WAY100635 (6nmol), antagonista de 5HT1AR, bloqueó significativamente la inmovilidad (F330=4,243, p<0,05, post hoc, p<0,05) y la natación (F3,29=16,83, p<0,001; post hoc, p<0,01) inducidos por la coadministración de icv GAL(1-15) y las tres inyecciones de se FLX (10mg/kg) en el FST (Figura 5).
WAY100635 (6nmol), antagonista de 5HT1AR, inyectado solo modificó el tiempo de inmovilidad (101±12seg) (ti3=2,617, p<0,01) y el tiempo de escalada (95±9seg) (ti3=2,200, p<0,05) en el FST. Sin embargo, la coadministración de tres inyecciones se de FLX y una única inyección icv de WAY100635 (6nmol) no indujo ninguna diferencia en comparación con el efecto de FLX solo (Figura 5).
Ejemplo 5. GAL(1-15)+FLX modifica los niveles de ARNm y las características de unión de 5-HTlAR en el hipocampo dorsal La coadministración de las tres inyecciones se de FLX (10mg/kg) y una única inyección icv de GAL(1-15) (lnmol) produjo un aumento en los niveles de A Nm de 5HT1AR en la región CAI (Figura 6A, F3 18=8.803 , p<0,001, post hoc, p<0,05) y DG (Figura 6A, F3 17=5,033, p<0,05, post hoc, p<0,05) del hipocampo dorsal en comparación con el resto de los tratamientos. Este efecto no se observó en el DR (Tabla 3, F3,i9=0,983, p=0,422).
Nítfeies ífe ARPi m de 100 i 4 95,7 ± S 98,2 ± 5 108,3 ± 7
SOTIAK {% respecta
control)
Tabla 3. Efectos de la coadministración de FLX (10mg/kg) y GAL(1-15) (lnmol) sobre los niveles de ARNm de 5-HT1AR en el DR. La FLX o el carrier se administraron se 23, 5 y 1,25 horas antes del sacrificio y la GAL(1-15) o el LCRa se inyectaron icv 30min antes del sacrificio. Los valores de los niveles de ARNm se representan como media±EEM (n=6 por grupo) de los porcentajes respecto de los valores de control (100%) de las medidas de densidad óptica (O.D.). No se observaron diferencias estadísticas entre los tratamientos según el ANOVA de una vía.
Los autorradiogramas representativos ilustran el aumento de los niveles de ARNm de 5HT1AR en ambas áreas, CAI y DG, después de la coadministración de las tres inyecciones se de FLX (10mg/kg) y la inyección única icv de GAL(1-15) (lnmol) (Figura 6B) .
En el experimento de autorradiografía, la coadministración de las tres inyecciones de se FLX (10mg/kg) y una única inyección icv de GAL(1-15) (lnmol) produjo una disminución significativa de la Kd (Figura 5; t9=2,916 , p<0,01) y la Bmax (Figura 7A, t9=2,277, p<0,05) del agonista [3H]-8-OH-DPAT en el DG del hipocampo dorsal comparado con FLX (10mg/kg) por separado.
Autoradiogramas representativos a una baja concentración de radioligandos (InM), ilustran el aumento del mareaje (disminución de los valores de Kd) en el DG 10 minutos después de la coadministración de las tres inyecciones se de FLX (10mg/Kg) y de la única inyección icv de GAL (1-15) (lnmol) (Figura 7B).
Estos efectos no se observaron en la región CAI del hipocampo en la Bmax (Tabla 4, t9=0,9420, p=0,1854) ni en la Kd (Tabla S3; t9=0,01385, p=0,4946), ni tampoco en el DR en la Bmax (Tabla 4; t9=0,8648, p=0,2048) o en la Kd (Tabla 4 t9=0,9941, p=0,173).
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Tabla 4. Efectos de la coadministración de FLX (10mg/kg) y GAL(1-15) (lnmol) en las características de unión de [3H]-8-OH-DPAT, agonista de 5-HT1AR en el DR y en la región CAI del hipocampo. La FLX o el carrier se administraton se 23, 5 y 1,25 horas antes del sacrificio y el GAL(1-15) o el LCRa se inyectaron icv 30min antes del sacrificio. Los experimentos de saturación se realizaron con diez concentraciones de [3H]-8-OH-DPAT (0,26-10 n M) en secciones del DR o en la región CAI del hipocampo. La unión no específica se definió como la unión en presencia de 10μΜ de serotonina. Los valores de Kd y Bmax se muestran como media±EEM (n=6 por grupo). No se observaron diferencias estadísticas entre los tratamientos según el test de t-Student.

Claims

Reivindicaciones
1. Composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de depresión, trastornos de ansiedad y trastornos alimentarios seleccionados de la lista que consiste en bulimia, anorexia y obesidad, fobias, distimia, síndrome premenstrual, trastornos cognitivos, trastornos del control de los impulsos, trastorno por déficit de atención e hiperactividad y abuso de drogas; que comprende galanina (1-15) o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho fragmento, y un compuesto, que es un inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina.
2. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación anterior caracterizada por que la sal farmacétuicamente aceptable de galanina (1-15) es una sal de trifluoroacetato.
3. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación anterior caracterizada por que el inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina se selecciona de la lista que consiste en citalopram, escitalopram, fluoxetina, fluvoxamina, sertralina y paroxetina o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.
4. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación anterior caracterizada por que el inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina es fluoxetina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
5. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende carriers o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
6. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizada por que los ingredientes activos están contenidos en la misma forma de dosificación unitaria.
7. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 caracterizada por que los ingredientes activos están contenidos en formas de dosificación unitarias discretas.
8. Uso de una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de depresión, trastornos de ansiedad y trastornos alimentarios seleccionados de la lista que consiste en bulimia, anorexia y obesidad, fobias, distimia, síndrome premenstrual, trastornos cognitivos, trastornos del control de los impulsos, trastorno por déficit de atención e hiperactividad y abuso de drogas.
9. Uso de una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de de trastornos de ansiedad seleccionados de la lista que consiste en ansiedad de pánico, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno de estrés agudo, o trastorno de ansiedad social.
10. Uso de una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la depresión.
11. Uso de una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8-10 caracterizado por que la administración del medicamento fabricado comprende la administración simultánea de los ingredientes activos de dicha composición farmacéutica.
12. Uso de una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8-10 caracterizado por que la administración del medicamento fabricado comprende la administración secuencial de los ingredientes activos de dicha composición farmacéutica.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20240325343A1 (en) * 2021-02-10 2024-10-03 David Alan Heldreth, JR. Methods of reducing symptoms of the ingestion of drugs such as cannabis or 5ht2 agonists via applications with 5ht1/2, CB1, GLP-1 allosteric modulators where the method of delivery/formulation selected from: Inhaler, nebulizer, intravenously, intramuscularly, injection, capsules, tablets, pills.

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FLORES-BURGESS, A. , MILLON, C., GAGO, B. ET AL.: "Galanin (1-15) enhancement of the behavioral effects of Fluoxetine in the forced swimming test gives a new therapeutic strategy against depression", NEUROPHARMACOLOGY, vol. 118, 3 November 2017 (2017-11-03), pages 233 - 241, XP029987606 *
LU , X. ET AL.: "A role for galanin in antidepressant actions with a focus on the dorsal raphe nucleus", PNAS, vol. 102, no. 3, 18 January 2005 (2005-01-18), pages 874 - 879, XP055536592 *
MILLON, C. , FLORES-BURGESS, A., NARVAEZ, M. ET AL.: "Galanin (1-15) enhances the antidepressant effects of the 5-HT1A receptor agonist 8-OH-DPAT: involvement of the raphe-hippocampal 5-HT neuron system", BRAIN STRUCTURE AND FUNCTION, vol. 221, no. 9, 20 January 2016 (2016-01-20), pages 4491 - 4504, XP036094544, ISSN: 1863-2653 *
MILLON, C. ET AL.: "The neuropeptides Galanin and Galanin(l-15) in depression-like behaviours Neuropeptides", vol. 64, 31 January 2017 (2017-01-31), pages 39 - 45, XP085133463 *
YOSHITAKE, T. ET AL.: "Galanin attenuates basal and antidepressant drug-induced increase of extracellular serotonin and noradrenaline levels in the rat hippocampus", NEUROSCIENCE LETTERS, vol. 339, 2003, pages 239 - 242, XP055536593 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20240325343A1 (en) * 2021-02-10 2024-10-03 David Alan Heldreth, JR. Methods of reducing symptoms of the ingestion of drugs such as cannabis or 5ht2 agonists via applications with 5ht1/2, CB1, GLP-1 allosteric modulators where the method of delivery/formulation selected from: Inhaler, nebulizer, intravenously, intramuscularly, injection, capsules, tablets, pills.

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