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WO2018029762A1 - 経皮吸収素材、並びに、経皮吸収式化粧品、及び、経皮吸収式薬剤 - Google Patents

経皮吸収素材、並びに、経皮吸収式化粧品、及び、経皮吸収式薬剤 Download PDF

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WO2018029762A1
WO2018029762A1 PCT/JP2016/073350 JP2016073350W WO2018029762A1 WO 2018029762 A1 WO2018029762 A1 WO 2018029762A1 JP 2016073350 W JP2016073350 W JP 2016073350W WO 2018029762 A1 WO2018029762 A1 WO 2018029762A1
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WO
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peptide
skin
transdermally absorbable
solution
gly
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PCT/JP2016/073350
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English (en)
French (fr)
Inventor
衣織 前田
知広 引間
健 野瀬
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E&c Health Care Inc
Kyushu Institute of Technology NUC
Original Assignee
E&c Health Care Inc
Kyushu Institute of Technology NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by E&c Health Care Inc, Kyushu Institute of Technology NUC filed Critical E&c Health Care Inc
Priority to PCT/JP2016/073350 priority Critical patent/WO2018029762A1/ja
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    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids

Definitions

  • the present invention relates to a percutaneous absorption material comprising a specific peptide, a percutaneous absorption cosmetic and a transdermal drug containing the same.
  • elastin is known as a protein constituting animal tissue. Elastin is secreted from cells as a protein called tropoelastin, and then self-assembles around and around the microfibrils and crosslinks between molecules to form insoluble elastic fibers. This is due to self-assembling ability of elastin, so-called coacervation, and a peptide based on the amino acid sequence of elastin is considered to have coacervation (see Patent Document 1).
  • the present invention has been made in view of such circumstances, and consists of a peptide based on the amino acid sequence of elastin, a transdermal material having skin permeability and substance inclusion, and a transdermal absorption type comprising the same. It aims at providing cosmetics and a transdermal drug.
  • the percutaneous absorption material according to the first invention in accordance with the above object is a first peptide having an amino acid sequence in which the sequence of Phe-Pro-Gly-Val-Gly is repeated 2 to 10 times, or the first peptide On the other hand, it consists of a second peptide in which 40% or less of amino acids have been deleted, substituted, or added. It was verified that the first and second peptides have skin permeability and substance inclusion.
  • the percutaneous absorption cosmetic according to the second invention that meets the above-mentioned object is a first peptide having an amino acid sequence in which the sequence of Phe-Pro-Gly-Val-Gly is repeated 2 to 10 times, or the first peptide
  • a transdermal absorption material comprising a second peptide in which 40% or less of amino acids have been deleted, substituted, or added to the peptide is provided.
  • the transdermally absorbable drug according to the third invention that meets the above-mentioned object is a first peptide having an amino acid sequence in which the sequence of Phe-Pro-Gly-Val-Gly is repeated 2 to 10 times, or the first peptide
  • a transdermal absorption material comprising a second peptide in which 40% or less of amino acids have been deleted, substituted, or added to the peptide is provided.
  • the transdermally absorbable material according to the first invention is effective as a material that allows the substance to penetrate from the skin into the body because the first and second peptides have skin permeability and inclusion of the substance. From this, the transdermal absorption cosmetic according to the second invention provided with the transdermal absorption material according to the first invention and the third invention provided with the transdermal absorption material according to the first invention are also provided.
  • the percutaneous absorption type medicine according to the above can penetrate the active ingredient into the body through the skin.
  • the transdermally absorbable material has a sequence of SEQ ID NO: 1, that is, a sequence of Phe-Pro-Gly-Val-Gly (hereinafter sometimes expressed as “FPGVG”) 2 to 10
  • a transdermally absorbable material comprising a first peptide having an amino acid sequence repeated twice or a second peptide comprising 40% or less of the amino acid deleted, substituted, or added to the first peptide. It is a skin absorbing material.
  • “Phe”, “Pro”, “Gly”, and “Val” are phenylalanine, proline, glycine, and valine, respectively. Deletion of an amino acid means that no amino acid is present.
  • the second peptide has X1 as tryptophan, tyrosine, valine, isoleucine or cyclohexylalanine, X2 as alanine, X3 as phenylalanine, leucine or isoleucine, X4 as alanine, X1-Pro-X2-X3-X4 And a peptide in which 40% or less of amino acids are substituted with respect to the first peptide.
  • the second peptide examples include those having a repeating sequence of Ile-Pro-Gly-Val-Gly.
  • a peptide that repeats the sequence of Ile-Pro-Gly-Val-Gly 5 times and a peptide that repeats the same sequence 10 times include and releases a substance (a dye in the experiment).
  • the C-terminus of the first peptide may be any of a carboxy group (—COOH), a carboxylate (—COO ⁇ ), an amide (—CONH 2 ), and an ester (—COOR).
  • R is a C 1-6 alkyl group such as methyl, ethyl or n-propyl, a C 3-8 cycloalkyl group such as cyclopentyl or cyclohexyl, or a C 3 such as phenyl. Examples thereof include 6-12 aryl groups and aromatic alkyl groups such as benzyl.
  • the N terminal of the 1st peptide may be protected by protecting groups, such as an acetyl group, a formyl group, and a fatty acid, for example.
  • the first peptide has the inclusion property of the substance, the skin permeability, and the release property for releasing the included substance. Therefore, the first peptide can be employed as a percutaneous absorption material that allows an active ingredient to penetrate the human body through the skin and be released in the body.
  • a peptide having one FPGVG sequence cannot contain a substance.
  • the peptide having 11 or more repetitions of FPGVG has reduced water solubility and cannot secure the stability of penetration from the skin into the human body.
  • the first peptide specifically, a second peptide in which 40% or less of amino acids are deleted, substituted, or added to the first peptide (for deletion, 30% or less is preferable, and 20% or less is more preferable), it has been confirmed by verification that the substance has inclusiveness, release and skin permeability.
  • the inclusion and release of substances are considered to be performed by the coacervation ability of the peptide.
  • Numerous publicly known documents eg, “Woohyun Kim, Elliot L.
  • the second peptide can also be employed as a percutaneous absorption material that allows the active ingredient to penetrate into the human body through the skin and be released in the body, like the first peptide. Furthermore, it was confirmed that the first and second peptides also have the property of moisturizing the skin (skin moisturizing property).
  • the transdermal absorption material composed of the first peptide or the transdermal absorption composed of the second peptide Since the first and second peptides have skin permeability, substance inclusion and release properties, the transdermal absorption material composed of the first peptide or the transdermal absorption composed of the second peptide.
  • Cosmetics and drugs containing (ie, comprising) materials can stably deliver active ingredients from the skin to the body. Therefore, the percutaneous absorption material consisting of the first peptide or the percutaneous absorption material consisting of the second peptide is contained in the percutaneous absorption cosmetics and percutaneous absorption medicines according to other examples of the present invention. It is effective to be used.
  • the percutaneous absorption type cosmetic contains one or both of the first and second peptides and an active ingredient of the cosmetic (for example, whitening ingredient), and is a type that penetrates the active ingredient of the cosmetic from the skin.
  • a transdermal drug includes one or both of the first and second peptides and an active ingredient (for example, an analgesic ingredient), and means a drug of a type that sends an active ingredient of a drug from the skin into the body. To do.
  • ⁇ Skin moisture retention test In the skin moisturizing test, first, based on a peptide in which the sequence of FPGVG was repeated 5 times (hereinafter also referred to as “peptide of F5”), distilled water (hereinafter referred to as “DW”) as a solvent.
  • 0.1 w / w% solution solution containing 0.1 g of the peptide of the experimental example with respect to 100 g of solution, hereinafter, also simply referred to as “0.1% solution”
  • 1.0 w / W% solution a solution containing 1.0 g of the peptide of the experimental example with respect to 100 g of the solution, hereinafter, also simply referred to as “1.0% solution”.
  • the cultured skin on which 200 ⁇ L each of 0.1% solution and 1.0% solution was applied (supplied) to the surface was kept at 32 ° C. with a constant temperature shaker and shaken for 30 minutes.
  • the solution on the cultured skin was wiped off with a paper waste and dried in an environment of 32 ° C. for 1 hour.
  • the above-described cycle from application of the solution to the surface of the cultured skin until the completion of drying for 1 hour was repeated three times (total 3 cycles were performed), and then the weight of the cultured skin after the drying treatment (hereinafter referred to as “the dried skin”).
  • the cultured skin was dried for 24 hours with a dryer, and the weight of the cultured skin (hereinafter also referred to as “dry weight”) was measured.
  • Moisture content (%) ⁇ (wet weight ⁇ dry weight) / wet weight ⁇ ⁇ 100 (Formula 1) Moreover, since it compares with a 0.1% solution and a 1.0% solution, it does not contain a peptide. W. Also, the same treatment as in the case of 0.1% solution and 1.0% solution cultured skin was performed, and the moisture content in the cultured skin was measured.
  • p ⁇ 0.05 in FIG. 1 means p value of t test. Since the moisture content of the cultured skin not subjected to any treatment including drying treatment was 76.3 ⁇ 1.8%, the cultured skin to which the 1.0% solution was applied was not subjected to any treatment. It was found that the water content recovered to the same level. Therefore, it was revealed that the solution containing the peptide of F5 has a skin moisturizing property that maintains or increases the moisture content of the cultured skin.
  • the solution containing the peptide is also referred to as “peptide solution”.
  • ⁇ Skin permeability test In the skin permeability test, first, 200 ⁇ L of the peptide solution was placed on the cultured skin placed in the culture cup, and the cultured skin was housed in a constant temperature shaker set at 32 ° C. In this test, an F5 peptide solution (concentration: 0.1%) and a peptide (hereinafter also referred to as “F10 peptide”) solution (concentration: 0.05%) in which the FPGVG sequence was repeated 10 times were used as subjects. did.
  • the cultured skin from which the peptide solution has been wiped off with a waste cloth is washed with a 0.1% TFA + 50% CH 3 CN solution, wiped well, and then placed in a sample tube together with a 0.1% TFA + 50% CH 3 CN solution. , Stirred. And the density
  • the peptide extracted from the cultured skin did not penetrate into the cultured skin, and the peptide extracted from the cultured skin could be said to have penetrated into the cultured skin, the peptide extracted from the cultured skin The amount can be treated as the amount of peptide that has penetrated into the cultured skin. It is confirmed that the total amount of the peptide extracted from the waste and the amount of the peptide extracted from the cultured skin is first equal to the amount of the peptide given on the cultured skin. . In addition, the procedure described above is performed even when the time for accommodating the cultured skin in a constant temperature shaker set at 32 ° C. is extended to 15 minutes, 30 minutes, and 60 minutes after placing the peptide solution. Was used to derive the amount of peptide that had penetrated into the cultured skin.
  • FIG. 2 shows that both the peptide solution of F5 and the peptide solution of F10 tend to increase the amount of penetration of the peptide into the cultured skin with the passage of time, and the peptide of F5 is cultured skin compared to the peptide of F10. It was found that there was a lot of penetration. Therefore, it was confirmed that the peptide penetrated into the skin in both the F5 peptide solution and the F10 peptide solution.
  • the target of the inclusion release test of the dye was a solution containing a peptide having an amino acid sequence of FPGVG (hereinafter also referred to as “F1 peptide”), a peptide in which the FPGVG sequence was repeated twice (hereinafter referred to as “F2 peptide”).
  • Solution containing FPGVG sequence hereinafter also referred to as “F3 peptide”
  • F4 peptide peptide repeating FPGVG sequence four times
  • a peptide in a liquid state and a dye in a liquid state were mixed to prepare a peptide solution containing a predetermined amount of each of the peptide and the dye.
  • the prepared peptide solution was allowed to stand for 24 hours in an environment of 4 ° C., and then allowed to stand at 37 ° C. for 24 hours, thereby including the dye in the peptide in the peptide solution. Centrifugation was performed at 10,000 rpm for 3 minutes in an environment at 0 ° C., and the supernatant was collected.
  • the absorbance at a predetermined wavelength was measured for the collected supernatant, and the amount of dye contained in the peptide was determined based on the measurement result. Then, 1 ml of water was added to the residue of the peptide solution from which the supernatant was recovered, and the mixture was allowed to stand at 37 ° C. for 24 hours, and then the supernatant was recovered again, and the absorbance at a predetermined wavelength was measured for the recovered supernatant. The procedure of calculating the amount of dye released from the peptide was repeated every day to determine the cumulative amount of dye released.
  • FPGAA Phe-Pro-Gly-Ala-Ala
  • FPAVA Peptides and amino acids obtained by repeating 5 times the sequence of Phe-Pro-Ala-Val-Ala
  • FIG. 7A shows the experimental results for a peptide solution in which FPGAAA was repeated 5 times (the concentration of the peptide was 100 mg / mL) and the experimental results for the peptide solution in which FPVA was repeated 5 times (the concentration of the peptide was 5 mg / mL).
  • B respectively. From the results shown in FIGS. 7A and 7B, both of the two types of peptides have a phenomenon in which the turbidity on the vertical axis rapidly increases at a predetermined temperature at a predetermined wavelength of light (coacervation). Mean), and it was found that there was at least an inclusion effect of the substance. In addition, since it is not common that the contained substance is not released, it is considered that the two types of peptides also have an action of releasing the contained substance.
  • the active ingredient is delivered into the body through the skin, for example, in medicine, beauty, etc. Expected to be used in industry.

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Abstract

Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチド、又は、前記第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなる経皮吸収素材、経皮吸収素材を備える経皮吸収式化粧品及び経皮吸収式薬剤を提供する。

Description

経皮吸収素材、並びに、経皮吸収式化粧品、及び、経皮吸収式薬剤
本発明は、特定のペプチドからなる経皮吸収素材と、それを含有する経皮吸収式化粧品及び経皮吸収式薬剤に関する。
皮膚から人体に浸透可能な素材（以下、「経皮吸収素材」とも言う）が、他の物質を包含できれば、化粧品素材や薬品素材を人体に送り込むことが可能となり、化粧品での利用が有用であり、薬品においても、経皮薬物送達システムへの利用が期待される。
ところで、動物組織を構成する蛋白質として、エラスチンが知られている。エラスチンは、細胞からトロポエラスチンという蛋白質として分泌された後、ミクロフィブリルの周囲や間隙に自己集合し、分子間が架橋されて不溶性の弾性繊維となる。これは、エラスチンが有する自己集合能、所謂、コアセルベーションによるものであり、エラスチンのアミノ酸配列を基盤としたペプチドは、コアセルベーションを備えるものと考えられる（特許文献１参照）。
特開２０１２－１２６７１３号公報
本発明者らは、コアセルベーションが物質の包含性に関連することを期待し、エラスチンのアミノ酸配列を基盤としたペプチドの経皮吸収素材としての利用可能性を検討した。
しかしながら、コアセルベーションにより、実際に物質を包含するか否かは未知数である。更に、エラスチンのアミノ酸配列を基盤としたペプチドは、アミノ酸配列の繰り返し数が小さいと、コアセルベーションを発現しないことが知られており、逆に、アミノ酸配列の繰り返し数が大きいと、高分子となって、皮膚浸透性が低下することが考えられる。
また、エラスチンのアミノ酸配列を基としたペプチドにおいて、物質の包含性と共に、皮膚浸透性を備えるものを調査する試みはなされていなかった。
本発明は、かかる事情に鑑みてなされたもので、エラスチンのアミノ酸配列を基としたペプチドからなり、皮膚浸透性及び物質の包含性を有する経皮吸収素材、並びに、それを備える経皮吸収式化粧品及び経皮吸収式薬剤を提供することを目的とする。
前記目的に沿う第１の発明に係る経皮吸収素材は、Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチド、又は、前記第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなるものである。
第１、第２のペプチドは、皮膚浸透性と物質の包含性とを有することが検証された。
前記目的に沿う第２の発明に係る経皮吸収式化粧品は、Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチド、又は、前記第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなる経皮吸収素材を備える。
前記目的に沿う第３の発明に係る経皮吸収式薬剤は、Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチド、又は、前記第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなる経皮吸収素材を備える。
第１の発明に係る経皮吸収素材は、第１、第２のペプチドが、皮膚浸透性と物質の包含性とを有することから、物質を皮膚から体内に浸透させるものとして、有効である。
また、このことから、第１の発明に係る経皮吸収素材を備える第２の発明に係る経皮吸収式化粧品、及び、同じく、第１の発明に係る経皮吸収素材を備える第３の発明に係る経皮吸収式薬剤は、有効成分を皮膚を介して体内に浸透させることが可能である。
本発明の一実施例に係る経皮吸収素材の皮膚保湿性試験の実験結果を示すグラフである。 同経皮吸収素材の皮膚浸透性試験の実験結果を示すグラフである。 同経皮吸収素材の色素包含放出性試験の実験結果を示すグラフである。 同経皮吸収素材の色素包含放出性試験の実験結果を示すグラフである。 同経皮吸収素材の色素包含放出性試験の実験結果を示すグラフである。 同経皮吸収素材の色素包含放出性試験の実験結果を示すグラフである。 （Ａ）、（Ｂ）はそれぞれ、ＦＰＧＡＡ及びＦＰＡＶＡの繰り返しを有するペプチドのコアセルベーション試験の実験結果を示すグラフである。
続いて、添付した図面を参照しつつ、本発明を具体化した実施例につき説明し、本発明の理解に供する。
本発明の一実施例に係る経皮吸収素材は、配列番号１の配列、即ち、Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ（以下、「ＦＰＧＶＧ」として表現することもある）の配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチドからなる経皮吸収素材、もしくは、第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなる経皮吸収素材である。
なお、「Ｐｈｅ」、「Ｐｒｏ」、「Ｇｌｙ」及び「Ｖａｌ」はそれぞれ、フェニルアラニン、プロリン、グリシン及びバリンであり、アミノ酸の欠失とは、アミノ酸が存在しないことを意味する。
例えば、第２のペプチドは、Ｘ１をトリプトファン、チロシン、バリン、イソロイシン又はシクロヘキシルアラニンとし、Ｘ２をアラニンとし、Ｘ３をフェニルアラニン、ロイシン又はイソロイシンとし、Ｘ４をアラニンとして、Ｘ１－Ｐｒｏ－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４の配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有し、かつ、第１のペプチドに対して４０％以下のアミノ酸が置換されたペプチドである。第２のペプチドの具体的として、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの繰り返し配列を有するものが挙げられる。なお、Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を５回繰り返すペプチド並びに同配列を１０回繰り返すペプチドが、物質（実験では色素）を包含及び放出する点は、実際の実験によって確認している。
また、第１のペプチドのＣ末端は、カルボキシ基（－ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（－ＣＯＯ－）、アミド（－ＣＯＮＨ２）、及び、エステル（－ＣＯＯＲ）のいずれかであってもよい。ここで、Ｃ末端がエステルである場合のＲとしては、メチル、エチル、ｎ－プロピル等のＣ１－６アルキル基や、シクロペンチル、シクロヘキシル等のＣ３－８シクロアルキル基や、フェニル等のＣ６－１２アリール基、ベンジル等の芳香族アルキル基等が挙げられる。
そして、第１のペプチドのＮ末端は、例えば、アセチル基、ホルミル基、脂肪酸等の保護基で保護されていてもよい。
第１のペプチドは、検証の結果、物質の包含性、及び、皮膚浸透性を有し、更に、包含した物質を放出する放出性を有することが確認された。従って、第１のペプチドは、有効成分を、皮膚から人体に浸透させて体内で放出することができる経皮吸収素材として採用可能である。
一方、ＦＰＧＶＧの配列が１つのペプチドは、物質を包含できないことが確認された。そして、ＦＰＧＶＧの繰り返し回数が１１以上のペプチドは、水溶性が低下して、皮膚から人体への浸透の安定性が確保できなくなることが検証によって確認された。
また、第１のペプチドに対し差異のある、具体的には、第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチド（欠失については、３０％以下が好ましく、２０％以下がより好ましい）についても、物質の包含性、放出性、及び、皮膚浸透性があることが検証によって確認されている。
なお、物質の包含及び放出は、ペプチドのコアセルベーション能によってなされていると考えられ、ペプチドにアミノ酸の欠失、置換、又は付加があっても、コアセルベーション能を有する点については、既に公知となっている多数の文献（例えば、「Ｗｏｏｋｈｙｕｎ　Ｋｉｍ、Ｅｌｌｉｏｔ　Ｌ．　Ｃｈａｉｋｏｆ、　”Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｅｌａｓｔｉｎ－ｍｉｍｅｔｉｃ　ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ：　Ｅｍｅｒｇｉｎｇ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ”、　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　６２　（２０１０）　１４６８－１４７８」、「Ｈａｒａｌｄ　Ｎｕｈｎ　ａｎｄ　Ｈａｒｍ－Ａｎｔｏｎ　Ｋｌｏｋ、　”Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＬＣＳＴ　Ｂｅｈａｖｉｏｒ　ｏｆ　Ｓｈｏｒｔ　Ｅｌａｓｔｉｎ－Ｌｉｋｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”、　Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　２００８、９、２７５５－２７６３」）より明らかである。
従って、第２のペプチドも、第１のペプチドと同様に、有効成分を、皮膚から人体に浸透させて体内で放出可能な経皮吸収素材として採用することができる。
更に、第１、第２のペプチドに、皮膚を保湿する性質（皮膚保湿性）も存在することが確認された。
第１、第２のペプチドは、皮膚浸透性と、物質の包含性及び放出性を備えていることから、第１のペプチドからなる経皮吸収素材、又は、第２のペプチドからなる経皮吸収素材を含有する（即ち、備える）化粧品及び薬剤は、有効成分を皮膚から体内に安定的に送りこむことができる。よって、第１のペプチドからなる経皮吸収素材、又は、第２のペプチドからなる経皮吸収素材は、本発明の他の実施例に係る経皮吸収式化粧品及び経皮吸収式薬剤に含有して用いられるのが有効である。
ここで、経皮吸収式化粧品とは、第１、第２のペプチドの一方又は両方と化粧品の有効成分（例えば、美白成分）とを含有するもので、皮膚から化粧品の有効成分を浸透させるタイプの化粧品を意味する。経皮吸収式薬剤とは、第１、第２のペプチドの一方又は両方と有効成分（例えば、鎮痛成分）とを包含するもので、皮膚から体内に薬品の有効成分を送り込むタイプの薬剤を意味する。
実験例
次に、本発明の作用効果を確認するために行った実験について説明する。
化学合成したＨ－（ＦＰＧＶＧ）ｎ－ＮＨ２（１≦ｎ≦１０）、即ち、ＦＰＧＶＧの配列がｎ回繰り返されたアミノ酸配列を有するペプチドを対象に、皮膚保湿性、皮膚浸透性、及び、色素の包含放出性を試験した結果を以下に示す。
皮膚保湿性試験及び皮膚浸透性試験では、株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリングのＬａｂＣｙｔｅ（登録商標）　ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ　１２のヒト３次元培養皮膚（以下、単に「培養皮膚」とも言う）を用いた。
≪皮膚保湿性試験≫
皮膚保湿性試験においては、まず、ＦＰＧＶＧの配列が５回繰り返されたペプチド（以下、「Ｆ５のペプチド」とも言う）を基に、溶媒に蒸留水（以下、「Ｄ．Ｗ．」として記す）を用いて、０．１ｗ／ｗ％溶液（１００ｇの溶液に対して実験例のペプチドが０．１ｇ含有された溶液、以下、単に「０．１％溶液」とも言う）、及び、１．０ｗ／ｗ％溶液（１００ｇの溶液に対して実験例のペプチドが１．０ｇ含有された溶液、以下、単に、「１．０％溶液」とも言う）を調製した。
次に、０．１％溶液、及び、１．０％溶液のそれぞれ２００μＬ溶液を表面に適用（供給）した培養皮膚を、恒温振盪器によって、３２℃で保温して３０分間、振盪させ、その後、培養皮膚上の溶液を紙製のウエスでふき取り、３２℃の環境下で１時間、乾燥した。上述した培養皮膚の表面に溶液を適用してから１時間の乾燥を終えるまでのサイクルを、３回、繰り返した（合計、３サイクル行った）後、乾燥処理を終えた培養皮膚の重量（以下、「湿重量」とも言う）を測定し、次に、乾燥器によって、培養皮膚を２４時間、乾燥させ、培養皮膚の重量（以下、「乾燥重量」とも言う）を計測した。
そして、以下の式１によって、培養皮膚内の含水率を求めた。
含水率（％）＝｛（湿重量－乾燥重量）／湿重量｝×１００　・・・（式１）
また、０．１％溶液、及び、１．０％溶液と比較するため、ペプチドを含有しないＤ．Ｗ．についても、０．１％溶液、及び、１．０％溶液の培養皮膚に対するのと同様の処理を行い、培養皮膚内の含水率を計測した。
培養皮膚内の含水率は、図１に示すように、Ｄ．Ｗ．、０．１％溶液、及び、１．０％溶液を適用したそれぞれの場合において、６４．８±４．９％、６９．９±５．６％、及び、７４．６±４．０％となった。なお、図１中のｐ＜０．０５はｔ検定のｐ値を意味する。
乾燥処理を含め、いかなる処理も行っていない培養皮膚の含水率は、７６．３±１．８％であったため、１．０％溶液を適用した培養皮膚は、いかなる処理も行っていない培養皮膚と同レベルの含水率まで回復したことが判明した。従って、Ｆ５のペプチドを含有する溶液は、培養皮膚の含水率を維持、又は、増加させる皮膚保湿性があることが明らかになった。なお、ペプチドを含有した溶液を、以下、「ペプチド溶液」とも言う。
≪皮膚浸透性試験≫
皮膚浸透性試験では、まず、培養カップ内に入れられた培養皮膚上に、２００μＬのペプチド溶液を載せ、３２℃に設定された恒温振盪器内に培養皮膚を収容した。本試験では、Ｆ５のペプチド溶液（濃度：０．１％）とＦＰＧＶＧの配列が１０回繰り返されたペプチド（以下、「Ｆ１０のペプチド」とも言う）溶液（濃度：０．０５％）を対象とした。
次に、恒温振盪器に収容してから５分後に、ウエスで培養皮膚上のペプチド溶液を取り除き、そのウエスをサンプルチューブに入れ、サンプルチューブに０．１％ＴＦＡ＋５０％ＣＨ３ＣＮ溶液を入れ攪拌した。なお、「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸を示す。
ウエスでペプチド溶液が拭き取られた培養皮膚は、０．１％ＴＦＡ＋５０％ＣＨ３ＣＮ溶液によって洗浄され、表面をよく拭いた後に、サンプルチューブに０．１％ＴＦＡ＋５０％ＣＨ３ＣＮ溶液と共に入れられ、攪拌された。
そして、ウエスが入れられたサンプルチューブ内の溶液と、培養皮膚が入れられたサンプルチューブ内の溶液に含まれているペプチドの濃度を、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）によって求めた。
ウエスから抽出されたペプチドは、培養皮膚内に浸透しなかったものであり、培養皮膚から抽出されたペプチドは、培養皮膚内に浸透したものであると言えるため、培養皮膚から抽出されたペプチドの量を、培養皮膚内に浸透したペプチドの量として扱うことができる。
なお、ウエスから抽出されたペプチドの量と、培養皮膚から抽出されたペプチドの量とを合算した量が、最初に、培養皮膚上に与えられたペプチドの量と等しくなることを確認している。
また、ペプチド溶液を載せた後、培養皮膚を３２℃に設定された恒温振盪器内に収容する時間を、１５分間、３０分間、６０分間にそれぞれ延長した場合についても、上述した手順を行うことによって、培養皮膚内に浸透したペプチドの量を導出した。
これらの実験で得た結果を基に、培養皮膚内に浸透するペプチドの量の時間経過による推移を求めた。その推移を図２に示す。図２において、Ｆ５及びＦ１０は、Ｆ５のペプチド溶液及びＦ１０のペプチド溶液の試験結果をそれぞれ示す。
図２より、Ｆ５のペプチド溶液及びＦ１０のペプチド溶液共に、時間の経過に伴い、ペプチドの培養皮膚への浸透量が増加する傾向があること、並びに、Ｆ５のペプチドはＦ１０のペプチドに比べ培養皮膚への浸透量が多いことが分かった。
よって、Ｆ５のペプチド溶液及びＦ１０のペプチド溶液共に、ペプチドが皮膚に浸透することが確認できた。
≪色素の包含放出性試験≫
色素の包含放出性試験の対象は、ＦＰＧＶＧのアミノ酸配列が１つのペプチド（以下、「Ｆ１のペプチド」とも言う）を含有した溶液、ＦＰＧＶＧの配列を２回繰り返したペプチド（以下、「Ｆ２のペプチド」とも言う）を含有した溶液、ＦＰＧＶＧの配列を３回繰り返したペプチド（以下、「Ｆ３のペプチド」とも言う）を含有した溶液、ＦＰＧＶＧの配列を４回繰り返したペプチド（以下、「Ｆ４のペプチド」とも言う）を含有した溶液、Ｆ５のペプチドを含有した溶液及びＦ１０のペプチドを含有した溶液とした。
本試験においては、まず、液体状態のペプチド及び液体状態の色素を混合して、ペプチド及び色素それぞれが所定量含有されたペプチド溶液を作製した。
そして、作製したペプチド溶液を４℃の環境下で２４時間静置させた後、３７℃で２４時間静置することによって、ペプチド溶液中のペプチドに色素を包含させ、次に、ペプチド溶液を３７℃の環境下で、３分間、１万ｒｐｍで遠心分離し、上清を回収した。
回収した上清に対し、所定波長の吸光度を測定し、測定結果を基に、ペプチドに包含された色素量を求めた。
そして、上清が回収されたペプチド溶液の残渣に１ｍｌの水を加え、３７℃で２４時間静置させた後、再び上清を回収し、回収した上清に対し所定波長の吸光度を測定してペプチドから放出された色素量を算出するという手順を毎日繰り返して、放出された色素の累積量を求めた。
以上の色素の包含放出性試験を、以下の表１に示す各条件で行った結果を、図３～図６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
図３～図６に示す結果より、Ｆ１のペプチド溶液（条件（１）、（７））を除き、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ１０のペプチド溶液（条件（２）～（６）、条件（８）～（１２））は、時間の経過と共に色素を放出することが確認できた。
また、Ｆ５のペプチドと、その他の蛋白質との比較を行うため、比較例であるウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を担体として、上述した手順と同様の手順により、色素の包含放出性の試験を行ったところ、ウシ血清アルブミンは、色素を包含しないことが確認された。従って、色素の包含放出性は、蛋白質に共通して備わっているものでないことが明らかである。
また、ＦＰＧＶＧの配列に対して４０％のアミノ酸が置換されているＰｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ａｌａ（以下、「ＦＰＧＡＡ」として表現することもある）の配列を５回繰り返したアミノ酸配列を有するペプチド、及び、同じくＦＰＧＶＧの配列に対して４０％のアミノ酸が置換されているＰｈｅ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ａｌａ（以下、「ＦＰＡＶＡ」として表現することもある）の配列を５回繰り返したアミノ酸配列を有するペプチドについて、温度上昇に伴いコアセルベーションするか否かを、濁度の計測によって判定した。温度上昇速度は０．５℃／分とした。
ＦＰＧＡＡを５回繰り返したペプチド溶液（ペプチドの濃度は１００ｍｇ／ｍＬ）に対する実験結果及びＦＰＡＶＡを５回繰り返したペプチド溶液（ペプチドの濃度は５ｍｇ／ｍＬ）に対する実験結果を、図７（Ａ）、（Ｂ）にそれぞれ示す。
図７（Ａ）、（Ｂ）に示す結果より、当該２種類のペプチドは共に、光の所定波長において、所定の温度で、縦軸の濁度が急激に上昇する現象（コアセルベーションしたことを意味する）が確認され、少なくとも物質の包含作用があることが分かった。なお、包含された物質を放出しないとのことは、一般的でないことから、当該２種類のペプチドは、包含した物質の放出作用も有しているものと考えられる。
≪安全性試験≫
第１のペプチドの人体に対する安全性を確認するため、人にＦ５のペプチドを塗布し、塗布した部分に変化が見られるか否かの実験（スクラッチテスト）を行った。実験においては、被験者の片方の腕の前腕内側に生理食塩水を塗布した部分と、同被験者の他方の腕の前腕内側にＦ５のペプチドを塗布した部分とに、２５分間、皮膚に変化が現れるか否かを観察した。いずれの部分にも変化は見られなかった。よって、今回の実験では、Ｆ５のペプチドが安全であることが確認された。
以上、本発明の実施例を説明したが、本発明は、上記した形態に限定されるものでなく、要旨を逸脱しない条件の変更等は全て本発明の適用範囲である。
本発明に係る第１、第２のペプチドは、含有した物質を放出でき、更に、肌に浸透させることができるので、肌を介して有効成分を体内に送達する、例えば、医薬、美容等の産業での利用が期待できる。

Claims (3)

  1. Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチド、又は、前記第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなる経皮吸収素材。
  2. Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチド、又は、前記第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなる経皮吸収素材を備えることを特徴とする経皮吸収式化粧品。
  3. Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｇｌｙの配列を２～１０回繰り返したアミノ酸配列を有する第１のペプチド、又は、前記第１のペプチドに対して、４０％以下のアミノ酸が欠失、置換、又は付加された第２のペプチドからなる経皮吸収素材を備えることを特徴とする経皮吸収式薬剤。
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