WO2017115914A1 - PPARγ 인산화 저해제 및 이를 포함하는 약학적 조성물 - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a PPAR ⁇ phosphorylation inhibitor and a pharmaceutical composition comprising the same.
- Peroxysomes are one of the organelles that cause these metabolic disorders, and have been considered to play a minor role in cellular function for many years. It has been found to play an important role in metabolism. In addition, peroxysomes have been reported to have a wide range of effects on regulation of cell proliferation / differentiation and regulation of inflammatory mediators.
- peroxisome proliferator-activated receptors also called "PPARs”
- PPARs There are three types of PPARs, PPAR ⁇ , PPAR ⁇ / ⁇ , and PPAR ⁇ , of which PPAR ⁇ is most frequently found in adipose tissue and is found in vascular endothelial cells, macrophages, and pancreatic ⁇ -cells.
- PPAR ⁇ regulates the differentiation of fat cells and plays a critical role in systemic lipid homeostasis. Furthermore, since PPAR ⁇ is closely related to insulin sensitivity, PPAR ⁇ has been a major target in the development of therapeutics such as obesity and diabetes.
- Non-Patent Documents 1 and 2 In relation to the relationship between PPAR ⁇ and obese diabetes, the study found that obesity increased the inflammatory factors TNF- ⁇ , IL-6 and free fatty acids (FFAs), resulting in phosphorylation of Ser273 of PPAR ⁇ in adipocytes.
- TNF- ⁇ , IL-6 and free fatty acids (FFAs) inflammatory factors
- FFAs free fatty acids
- the present invention provides a PPAR ⁇ phosphorylation inhibitor that can effectively inhibit PPAR ⁇ phosphorylation (specifically, inhibits Ser273 phosphorylation of PPAR ⁇ ) without causing transactivation of PPAR ⁇ , and a pharmaceutical composition containing the same as an active ingredient. It aims to provide.
- the present invention provides a PPAR ⁇ phosphorylation inhibitor comprising at least one selected from the group consisting of compounds represented by the following formula (1) to compound represented by 3.
- R 1 is-(CH 2 ) nA 1 -X- (CH 2 ) mA 2 -R 6 ,
- a 1 is a cycloalkyl compound or an aromatic compound having 5 to 6 carbon atoms
- X is an oxygen atom, a sulfur atom or a nitrogen atom
- a 2 is an aromatic compound, or a heteroaromatic compound
- N is an integer of 0 or 1
- M is an integer of 0 to 10
- R 6 is a hydrogen atom, or — (CH 2 ) oA 3 — (CH- 2 ) pR 7 ,
- a 3 is an oxygen atom, —NH—, —NH—C ( ⁇ O) —, or —C ( ⁇ O) —NH—,
- R 7 is a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted heteroaromatic group,
- O and p are each an integer of 0 to 5
- R 2 is hydrogen, an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, a substituted or unsubstituted phenyl group, or -NR 8 R 9 , wherein R 8 and R 9 may be the same as or different from each other, and each hydrogen An atom or an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms,
- R 3 and R 4 may be the same as or different from each other, and each is a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 5 carbon atoms, or a substituted or unsubstituted phenyl group,
- R 5 may be a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 5 carbon atoms, a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted heteroaromatic group.
- a 1 and A 2 are an aromatic compound
- X is an oxygen atom
- n is O
- m may be 1.
- R 1 is or It may be
- R 6 is a hydrogen atom, , , , . , , , , , or Is,
- R 7 is -A 4 -R 10 , wherein A 4 is a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted heteroaromatic group,
- R 10 is a hydrogen atom, a methyl group, , , or ego,
- R 11 may be a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms.
- Another embodiment may include one or more selected from the group consisting of a compound represented by Formula 4 to a compound represented by 19.
- the present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of obesity, metabolic disease or cardiovascular disease, characterized in that it contains the PPAR ⁇ phosphorylation inhibitor as an active ingredient.
- the metabolic disease is diabetes, hyperlipidemia, hyperinsulinemia, hyperuricemia, hypercholesterolemia, hypertriglyceridemia, metabolic syndrome (syndrome X) or endothelial dysfunction, wherein the cardiovascular disease is a cardiovascular disease Hypertension, precoagulant state, dyslipidemia or atherosclerosis disease.
- Another embodiment may further comprise a pharmacologically acceptable medicament, diluent or excipient.
- the PPAR ⁇ -phosphorylation inhibitor effectively inhibits only phosphorylation of Ser273 without transactivation, and is characterized by strong binding with PPAR ⁇ .
- FIG. 1 shows the structures of SB1405, SB1406, GW9662 and SB1404 according to Example 1.
- FIG. 1 shows the structures of SB1405, SB1406, GW9662 and SB1404 according to Example 1.
- Figure 2 shows the results of confirming the phosphorylation inhibitory effect of the PPAR ⁇ Ser273 residue according to Experimental Example 1.
- FIG. 3 shows X-ray crystal structures of SB1405 and SB1406 according to Experimental Example 1.
- FIG. 4 shows the chemical structures of A to F according to Example 2.
- FIG. 6 shows a design process of SB1405, SB1451 and SB1453 according to the third embodiment.
- Figure 7 shows the results confirm the phosphorylation inhibitory effect of the PPAR ⁇ Ser273 residue according to Experimental Example 3.
- Figure 9 shows the results of confirming the phosphorylation inhibitory effect of the PPAR ⁇ Ser273 residue according to Experimental Example 5.
- Figure 10 shows the results confirming the phosphorylation inhibitory effect of the PPAR ⁇ Ser273 residue according to Experimental Example 6.
- Figure 11 shows the results of confirming the phosphorylation inhibitory effect of PPAR ⁇ Ser273 residue on the cell according to Experimental Example 7.
- Figure 13 shows the result of confirming the lipid accumulated through Oil Red O staining according to Experimental Example 9.
- FIG. 14 shows the results of confirming the effect of inhibiting phosphorylation of PPAR ⁇ Ser273 residues in vivo according to Experimental Example 10.
- FIG. 15 shows expression evaluation results of 17 genes regulated by PPAR ⁇ phosphorylation according to Experimental Example 11.
- Figure 17 shows the sugar load test results according to Experimental Example 13.
- the present invention relates to a PPAR ⁇ phosphorylation inhibitor and a pharmaceutical composition comprising the same.
- the present invention provides a PPAR ⁇ phosphorylation inhibitor comprising at least one member selected from the group consisting of compounds represented by Formula 1 to compounds represented by 3.
- R 1 is-(CH 2 ) nA 1 -X- (CH 2 ) mA 2 -R 6 ,
- a 1 is a cycloalkyl compound or an aromatic compound having 5 to 6 carbon atoms
- X is an oxygen atom, a sulfur atom or a nitrogen atom
- a 2 is an aromatic compound, or a heteroaromatic compound
- N is an integer of 0 or 1
- M is an integer of 0 to 10
- R 6 is a hydrogen atom or — (CH 2 ) oA 3 — (CH 2 ) pR 7 ,
- a 3 is an oxygen atom, —NH—, —NH—C ( ⁇ O) —, or —C ( ⁇ O) —NH—,
- R 7 is a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted heteroaromatic group,
- O and p are each an integer of 0 to 5
- R 2 is hydrogen, an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, a substituted or unsubstituted phenyl group, or -NR 8 R 9 , wherein R 8 and R 9 may be the same as or different from each other, and each hydrogen An atom or an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms,
- R 3 and R 4 may be the same as or different from each other, and each is a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 5 carbon atoms, or a substituted or unsubstituted phenyl group,
- R 5 is a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 5 carbon atoms, a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted heteroaromatic group.
- the part except R 1 is a structure for covalently binding PPAR ⁇ , and the part except R 6 in R 1 occupies a hydrophobic specific binding site to inhibit phosphorylation of PPAR ⁇ Ser273 residue.
- R 6 is-(CH 2 ) oA 3- (CH 2 ) pR 7 instead of a hydrogen atom, R 6 is a structure having in order to further increase the PPAR ⁇ phosphorylation inhibitory effect.
- Formula 2 is a modification of the structure for covalently binding PPAR ⁇ in Formula 1 to improve solubility
- Formula 3 is a non-specific binding while maintaining the high potency of the covalent inhibitor (Covalent inhibitor)
- the structure for covalent bonding is modified in Chemical Formula 1.
- the formula (3) is characterized in that it can act as a reversible inhibitor.
- cycloalkyl compounds include, but are not limited to, cyclopentyl, cyclohexyl, and the like.
- the heteroaromatic group or heteroaromatic compound includes at least one oxygen atom, sulfur atom or nitrogen atom, and is not limited to the position of the oxygen atom, sulfur atom or nitrogen atom.
- the heteroaromatic compound includes, but is not limited to, furan, thiophene, pyrrole, imidazole, and the like.
- An alkyl group having 1 to 3 carbon atoms means a straight or branched alkyl group and includes, for example, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl.
- An alkyl group having 1 to 5 carbon atoms means a straight or branched alkyl group, and examples include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, t-butyl, and the like. It doesn't work.
- the position of X linked to A 1 is not limited, but when A 1 is an aromatic compound, ortho or meta is preferable, and most preferably, ortho may be ortho.
- R 6 connected to A 2 is not limited, but when A 2 is an aromatic compound, ortho or meta is preferable.
- a 1 and A 2 are an aromatic compound, X is an oxygen atom, n is O, and m may be 1.
- R 1 is or It may be
- R 6 may have a structure of forming a part having hydrophobicity and a part having hydrophilicity on the basis of A 2 .
- R 6 is a hydrogen atom, , , , . , , , , , or Is,
- R 7 is -A 4 -R 10 , wherein A 4 is a substituted or unsubstituted aromatic group, or a substituted or unsubstituted heteroaromatic group,
- R 10 is a hydrogen atom, a methyl group, , , or ego,
- R 11 may be a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms.
- the inhibitor may include one or more selected from the group consisting of compounds represented by Formula 4 to compounds represented by 19.
- the present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of obesity, metabolic diseases or cardiovascular diseases, characterized in that it contains a PPAR ⁇ phosphorylation inhibitor as an active ingredient.
- the composition inhibits PPAR ⁇ phosphorylation to prevent or treat diabetes, obesity, metabolic diseases or cardiovascular diseases. It is characterized in that, more specifically inhibits the phosphorylation of PPAR ⁇ Ser273 exhibits the prevention or treatment of the diabetes, obesity, metabolic disease or cardiovascular disease.
- hypercholesterolemia among the metabolic diseases is low HDL-cholesterolemia, high LDL-cholesterolemia or hypertriglyceridemia, and the cardiovascular disease is hypertension, precoagulant state, dyslipidemia or atherosclerosis. It may be a sclerotic disease, but is not particularly limited thereto.
- the amount of the inhibitor including at least one selected from the group consisting of the compound represented by Formula 1 to the compound represented by Formula 3 is in the form and purpose of use, patient condition It may be appropriately adjusted according to the kind and severity of symptoms, and may be 0.001 to 99.9% by weight, 0.1 to 99% by weight, or 1 to 50% by weight based on the weight of the composition, but is not limited thereto.
- the dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention can be determined in consideration of the method of administration, the age, sex of the patient, the severity, the condition of the patient, the absorption of the active ingredient in the body, the inactivation rate and the drug used in combination, 0.1 mg / kg (body weight) to 500 mg / kg (body weight), 0.1 mg / kg (body weight) to 400 mg / kg (body weight) or 1 mg / kg (body weight) to 300 mg / kg based on ingredients It may be administered in (body weight), it may be administered once or divided into several, but is not limited thereto.
- the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a mammal including a human by various routes.
- the mode of administration can be any of the routinely used methods and can be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine epidural or intracerebroventricular injection.
- the pharmaceutical compositions of the present invention may be prepared in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, oral dosage forms, transdermals, suppositories, and sterile injectable solutions in accordance with conventional methods. Can be formulated and used.
- the pharmaceutical composition of the present invention may further contain an adjuvant such as a pharmaceutically suitable and physiologically acceptable carrier, excipient and diluent in addition to the active ingredient.
- Carriers, excipients and diluents which may be included in the pharmaceutical compositions of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium Silicates, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
- Solid form preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, and such solid form forms at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or It may be prepared by mixing lactose, gelatin and the like.
- lubricants such as magnesium styrate talc are also used.
- Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups.
- Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, transdermal agents and the like.
- non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used.
- base of the suppository Whitepsol, macrogol, Tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
- SB1405 (Formula 4) and SB1406 (Formula 5) are selected from the covalent inhibitors expected to occupy the specific binding sites as described in Scheme 1 below based on the GW9662 and PPAR ⁇ crystal structure, which are known covalent ligands.
- SB1404 (Formula 21), which is expected to not be occupied at all, was also manufactured, and the structure thereof is shown in FIG. 1.
- phosphorylation was performed by reacting 0.5 ⁇ g of purified PPAR ⁇ LBD (Ligand Binding Domain) at 30 ° C. for 30 minutes with active Cdk5 / p35 (Millipore, USA), and the assay was performed under the following conditions:
- PPAR ⁇ LBD and the inhibitor were first reacted at 30 ° C. 30 minutes before the assay, and the substrate was Rb peptide (residues 773) to confirm that the inhibitor did not directly act on Cdk5. -928, Millipore) followed by the same assay (Rb peptide is one of the well known substrates of Cdk5).
- the degree of phosphorylation of the substrate was confirmed by Western blotting using aniti-phospho-Ser Cdk substrate antibody (Cell Signaling Technology, USA), and the results are shown in FIG. 2.
- Rosiglitazone (Rosi) and SR1664, which are known as antidiabetic PPAR ⁇ ligands were assayed in the same manner.
- SB1451 (Scheme 11) and SB1453 (Scheme 12) were prepared as shown in Scheme 3 based on the crystal structure as described in FIG. 6.
- SB1451 and SB1453 was found to effectively inhibit the phosphorylation of PPAR ⁇ Ser273 residues in a concentration-dependent manner.
- SB1450 and SB1452 effectively inhibited PPAR ⁇ phosphorylation, but the degree of inhibition was slightly lower than that of SB1451 and SB1453.
- BH273 (Formula 19) was modified in which the structure of the covalent binding site was modified.
- the assay was performed in the same manner as in Experiment 1 with different concentrations (0.1 uM, 1 uM, 10 uM) of BH273 prepared in Example 5, and the results are shown in FIG. 10.
- BH273 showed Ser273 phosphorylation inhibition similar to that of rosiglitazone, an antidiabetic PPAR ⁇ ligand.
- HEK-293 cells expressing PPAR ⁇ were treated with PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate) for 30 minutes and then incubated in FLAG M2 agarose (Sigma Aldrich, USA) at 4 ° C. Immunoprecipitate was analyzed using phosphor-specific or anti-PPAR ⁇ antibodies of PPAR ⁇ Ser273 and the results are shown in FIG. 11.
- PMA phorbol 12-myristate 13-acetate
- HEK-293T cells were seeded in 96-well plates at a density of 7000 cells / well before transfection. Then, the cells were transfected with pDR-1 luciferase reporter plasmid, PPAR ⁇ RXR ⁇ and pRL-renillin using calcium phosphate transfection. After transfection, rosiglitazone, SR1664, SB1451, and SB1453 were treated for 24 hours, and after culturing the cells, a reporter gene assay (Promega, USA) was performed using the Dual-luciferase kit.
- Luciferase activity was measured using a Bio-Tek microplate reader (ELx800TM, Bio-Tek Instruments Inc., USA) and normalized to Renilla activity, resulting in Fold based on DMSO-treated cells. The change is shown in FIG. 12.
- SB1451 and SB1453 had little effect on the transcriptional activity of PPAR ⁇ , unlike Rosiglitazone.
- 3T3L1 adipocytes were grown to 100% confluency in 6-well plates, followed by 1 uM dexamethasone, 850 nM insulin and 10 uM inhibitor (in DMEM containing 10% FBS) for 2 days. Treated. Since then, 10% FBS containing DMEM and 850 nM insulin was continuously cultured while treating and replacing. On day 8 of the culture, lipids accumulated in 3T3L1 cells were confirmed by Oil Red O staining, and the results are shown in FIG. 13.
- Figure 13 shows the result of confirming the lipid accumulated through the Oil Red O staining.
- SB1451 and SB1453 did not show the result of promoting lipid formation, whereas Rosiglitazone promoted adiogenesis and differentiated 3T3L1 cells into mature adipocytes.
- SB1451 and SB14533 were administered at 10 mg / kg / day for 7 days in obese-induced obese mice (DIO mice) to confirm the effect of inhibiting the phosphorylation of PPAR ⁇ Ser273 residues in the same manner as in Experiment 1, and the results 14 is shown.
- SB1451 and SB1453 was confirmed to inhibit PPAR ⁇ phosphorylation in DIO mice.
- SB1453 was found to inhibit PPAR ⁇ phosphorylation at a level similar to Rosiglitazone in DIO mice.
- rosiglitazone, SB1453, and vehicle were intraperitoneally injected at 10 mg / kg daily in DIO mice. Thereafter, 1.5 g / kg of D-glucose was administered to fasting mice, and blood was drawn at regular intervals from the tail vein to measure glucose concentration using a Truetrack glucometer (Nipro Diagnostics, Japan). Shown in
- mice administered SB1453 or rosiglitazone effectively reduced blood glucose levels as compared to vehicle control.
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Abstract
본 발명은 PPARγ 인산화 저해제 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 PPARγ 인산화 저해제는 종래 PPARγ를 타켓으로 하는 약제들과 달리 전사활성(transactivation)을 보이지 않으면서 선택적으로 Ser273의 인산화만을 효과적으로 저해하며, 공유결합에 따라 PPARγ과 강한 결합을 하는 것이 특징이다. 따라서, PPARγ 관련 질환의 약제 등 관련 분야에서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 보인다.
Description
본 발명은 PPARγ 인산화 저해제 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
생물체는 내적/외적 여러 요인으로 인해 생체 기능이 저하되어 세포내의 항상성을 잃게 되면서, 당과 지방의 대사효율 또한 떨어지게 된다. 또한, 식습관의 변화로 인한 과잉영양공급은 비만, 고지혈증, 당뇨병 등의 대사기능 이상, 및 고혈압, 아테롬성 경화증 등의 심혈관계 질환을 증가시키고 있으며, 이러한 병들은 유전적인 요소와 영양학적인 요소를 포함한 복잡한 원인들을 가지고 있다.
퍼옥시좀(Peroxisome)은 이러한 대사기능 이상의 원인이 되는 세포 내 소기관 중 하나로, 오랫동안 세포 기능상에 있어 마이너(minor)한 역할을 하는 것으로 여겨져 왔으나 최근의 많은 연구를 통해 산소, 포도당, 지질, 호르몬의 대사 등에 있어 중요한 역할을 담당하는 것으로 밝혀졌다. 또한, 퍼옥시좀은 세포증식/분화의 조절 및 염증 매개체들의 조절에도 폭 넓은 영향을 가지는 것으로 보고되고 있다.
이러한 부분에 대해 지속적인 연구를 통해 퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체(peroxisome proliferator-activated receptors, 이하 "PPAR" 이라고도 한다)라는 핵 호르몬 수용체가 이들 병들의 약리학적 접근의 좋은 표적(target)이 될 것이라는 증거들을 내어 놓았다.
PPAR는 PPARα, PPARβ/δ, 및 PPARγ의 3가지 타입이 있는데, 이 중 PPARγ는 지방조직에 가장 많이 나타나며, 혈관내피, 대식세포, 췌장 β-세포에서 발견된다. PPARγ은 지방 세포의 분화를 조절하고 전신 지질 항상성에 결정적인 역할을 한다. 나아가, PPARγ가 인슐린 민감성에 밀접하게 연관되어 있기 때문에, 비만, 당뇨병 등의 치료제 개발에 있어 PPARγ은 주요 타켓이 되어 왔다.
최근 Cdk5(Cyclin dependent kinase 5)에 의해 PPARγ의 Ser273 잔기가 인산화 되는 것을 막는 것이 인슐린 저항성을 줄여 당뇨병 치료의 가능성이 있다는 연구가 제시되었다 (비특허문헌 1 및 2). 상기 연구는 PPARγ과 비만성 당뇨와의 관계와 관련하여, 비만이 발생하면 염증인자인 TNF-α, IL-6 및 유리지방산(FFAs, Free fatty acids)가 증가하여 지방세포에 PPARγ의 Ser273의 인산화가 활성화되고 아디포넥틴(adiponectin)과 아디프신(adipsin)과 같은 인슐린 저항성을 개선할 수 있는 유전자의 발현을 감소시키는 기작을 설명하고 있어, PPARγ 인산화 활성화와 관련된 연구가 활발히 진행 중에 있다.
한편, PPARγ을 타켓으로 하는 약제로는 당뇨병 치료제로서 치아졸리딘디온(TDZ, thiazolidinediones)계열 약제가 개발되었으나, 체증증가, 부종, 골밀도 감소 등 부작용을 나타내는 문제점이 보고 되었다. 이중 1997년 1월 미 FDA에서 승인된 트로글리타존(troglitazone)은 간독성 때문에 시장에서 회수된 상태이다. 이러한 부작용은 PPARγ의 전사활성(transactivation)에 의해 야기되는 결과임을 나타내는 학회 보고가 나오고 있어, PPARγ의 전사활성(transactivation)을 야기시키지 않고 PPARγ의 인산화만을 선택적으로 저해하는 치료제 개발 연구에 대한 필요성이 대두되고 있다.
본 발명은, PPARγ의 전사활성(transactivation)을 야기시키지 않으면서 PPARγ 인산화를 효과적으로 저해할 수 있는(구체적으로, PPARγ의 Ser273의 인산화를 저해) PPARγ 인산화 저해제 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 과제를 해결하고자, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 내지 3으로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 PPARγ 인산화 저해제를 제공한다.
[화학식 1]
[화학식 2]
[화학식 3]
상기 화학식 1 내지 3에 있어서,
상기 R1은 -(CH2)n-A1-X-(CH2)m-A2-R6이며,
상기 A1는 탄소수 5 내지 6의 시클로 알킬 화합물 또는 아로메틱 화합물이고,
상기 X는 산소 원자, 황 원자 또는 질소 원자 이며,
상기 A2는 아로메틱 화합물, 또는 헤테로아로메틱 화합물이고,
상기 n은 0 또는 1의 정수이며,
상기 m은 0 내지 10의 정수이고,
상기 R6은 수소 원자, 또는 -(CH2)o-A3-(CH-2)p-R7이며,
상기 A3는 산소 원자, -NH-, -NH-C(=O)-, 또는 -C(=O)-NH- 이고,
상기 R7는 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이며,
상기 o와 p는 각각 0 내지 5의 정수이고,
상기 화학식 2에 있어서, 상기 R2는 수소, 탄소수 1 내지 3의 알킬기, 치환 또는 비치환된 페닐기, 또는 -NR8R9이며, 상기 R8 및 R9는 서로 같거나 다를 수 있고, 각각 수소 원자 또는 탄소수 1 내지 3의 알킬기이며,
상기 R3 및 R4는 서로 같거나 다를 수 있고, 각각 수소 원자, 탄소수 1 내지 5의 알킬기, 또는 치환 또는 비치환된 페닐기이며,
상기 화학식 3에 있어서, 상기 R5는 수소 원자, 탄소수 1 내지 5의 알킬기, 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기일 수 있다.
일 구현예는 상기 A1 및 A2이 아로메틱 화합물이고, 상기 X는 산소 원자이며, 상기 n은 O이고, 상기 m은 1인 것일 수 있다.
다른 일 구현예는 R1이 
또는 
인 것일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 상기 R6이 수소 원자, 
, 
, 
, 
. 
, 
, 
, 
, ,
, 
, 또는 
이며,
상기 R7은 -A4-R10이고, 상기 A4는 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이며,
상기 R10은 수소 원자, 메틸기, 
, 
, 또는 
이고,
상기 R11은 수소 원자 또는 탄소수 1 내지 3의 알킬기 일 수 있다.
또 다른 일 구현예는 화학식 4로 표시되는 화합물 내지 19로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다.
[화학식 4]
[화학식 5]
[화학식 6]
[화학식 7]
[화학식 8]
[화학식 9]
[화학식 10]
[화학식 11]
[화학식 12]
[화학식 13]
[화학식 14]
[화학식 15]
[화학식 16]
[화학식 17]
[화학식 18]
[화학식 19]
또한, 본 발명은 상기 PPARγ 인산화 저해제를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 비만, 대사성 질환 또는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
일 구현예는 대사성 질환이 당뇨, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(syndrome X) 또는 내피기능장애이며, 상기 심혈관계 질환은 심혈관계 질환은 고혈압, 응집전 상태(precoagulant state), 이상 지질혈증 또는 아테롬성 경화증성 질환인 것일 수 있다.
다른 일 구현예는 약리학적으로 허용 가능한 약제, 담제 또는 부형제를 더 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 PPARγ 인산화 저해제는 종래 PPARγ를 타켓으로 하는 약제들과 달리 전사활성(transactivation)을 보이지 않으면서 선택적으로 Ser273의 인산화만을 효과적으로 저해하며, 공유결합에 따라 PPARγ과 강한 결합을 하는 것이 특징이다.
도 1은 실시예 1에 따른 SB1405, SB1406, GW9662 및 SB1404의 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 실험예 1에 따른 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 실험예 1에 따른 SB1405 및 SB1406의 X-ray crystal structure를 나타낸 것이다.
도 4는 실시예 2에 따른 A 내지 F의 화학 구조를 나타낸 것이다.
도 5는 실험예 2에 따른 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 실시예 3에 따른 SB1405, SB1451 및 SB1453의 설계과정을 나타낸 것이다.
도 7은 실험예 3에 따른 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 실험예 4에 따른 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 실험예 5에 따른 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 실험예 6에 따른 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 실험예 7에 따른 세포상에서의 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 12는 실험예 8에 따른 전사 활성 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 13은 실험예 9에 따른 Oil Red O staining을 통해 축적된 지질을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 14는 실험예 10에 따른 In vivo상에서의 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 15는 실험예 11에 따른 PPARγ 인산화에 의해서 조절되는 17개의 유전자들의 발현 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 16은 실험예 12에 따른 전사 활성에 의해서 조절되는 17개의 유전자들의 발현 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 17은 실험예 13에 따른 당부하 검사 결과를 나타낸 것이다.
본 발명은 PPARγ 인산화 저해제 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 내지 3으로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 PPARγ 인산화 저해제를 제공한다.
상기 화학식 1 내지 3에 있어서,
상기 R1은 -(CH2)n-A1-X-(CH2)m-A2-R6이며,
상기 A1는 탄소수 5 내지 6의 시클로 알킬 화합물 또는 아로메틱 화합물이고,
상기 X는 산소 원자, 황 원자 또는 질소 원자 이며,
상기 A2는 아로메틱 화합물, 또는 헤테로아로메틱 화합물이고,
상기 n은 0 또는 1의 정수이며,
상기 m은 0 내지 10의 정수이고,
상기 R6은 수소 원자, 또는 -(CH2)o-A3-(CH2)p-R7이며,
상기 A3는 산소 원자, -NH-, -NH-C(=O)-, 또는 -C(=O)-NH- 이고,
상기 R7는 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이며,
상기 o와 p는 각각 0 내지 5의 정수이고,
상기 화학식 2에 있어서, 상기 R2는 수소, 탄소수 1 내지 3의 알킬기, 치환 또는 비치환된 페닐기, 또는 -NR8R9이며, 상기 R8 및 R9는 서로 같거나 다를 수 있고, 각각 수소 원자 또는 탄소수 1 내지 3의 알킬기이며,
상기 R3 및 R4는 서로 같거나 다를 수 있고, 각각 수소 원자, 탄소수 1 내지 5의 알킬기, 또는 치환 또는 비치환된 페닐기이며,
상기 화학식 3에 있어서, 상기 R5는 수소 원자, 탄소수 1 내지 5의 알킬기, 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이다.
상기 화학식 1에서, R1을 제외한 부분은 PPARγ 공유 결합하기 위한 구조이며, R1에 있어서 R6을 제외한 부분은 PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 저해하기 위해 소수성의 특정 결합 자리(specific binding site)를 차지하기 위한 구조이고, R6이 수소 원자가 아닌 -(CH2)o-A3-(CH2)p-R7일 경우에는 PPARγ 인산화 저해 효과를 더 증대시키기 위하여 갖는 구조이다.
화학식 2는 용해도(solubility)를 개선시키기 위하여 PPARγ 공유 결합하기 위한 구조를 화학식 1에서 변형한 것이며, 화학식 3은 공유결합성 저해제(Covalent inhibitor)의 장점인 높은 효력(potency)을 유지하면서 비특이적인 결합이 일어나지 않게 하기 위하여 공유 결합하기 위한 구조를 화학식 1에서 변형한 것이다. 특히, 화학식 3의 경우 가역적 저해제로서 작용할 수 있는 것이 특징이다.
본 명세서에서, 시클로 알킬 화합물로는 시클로 펜틸, 시클로 헥실 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
헤테로아로메틱기 또는 헤테로아로메틱 화합물는 산소 원자, 황 원자 또는 질소원자를 하나 이상 포함하며, 상기 산소 원자, 황 원자 또는 질소 원자의 위치에 대해서는 한정되지 않는다. 예컨대, 상기 헤테로아로메틱 화합물로는 퓨란, 티오펜, 피롤, 이미다졸 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
탄소수 1 내지 3의 알킬기는 직쇄형 또는 분지형 알킬기를 의미하며, 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필이 포함된다.
탄소수 1 내지 5의 알킬기는 직쇄형 또는 분지형 알킬기를 의미하며, 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, t-부틸 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
상기 A1에 연결되는 X의 위치는 한정되지 않으나, A1이 아로메틱 화합물인 경우 오쏘(ortho) 또는 메타(meta)가 바람직하며, 가장 바람직하게는 오쏘(ortho)일 수 있다.
상기 A2에 연결되는 R6의 위치 역시 한정되지 않으나, A2가 아로메틱 화합물인 경우 오쏘(ortho) 또는 메타(meta)가 바람직하다.
상기 화학식 1 내지 3의 R1에 있어서, 상기 A1 및 A2는 아로메틱 화합물이고, 상기 X는 산소 원자이며, 상기 n은 O이고, 상기 m은 1인 것일 수 있다.
예컨대, R1이 
또는 
인 것일 수 있다.
상기 R6는 PPARγ 인산화 저해 효과를 더 증대시키기 위하여 도 6에 나타난 바와 같이, A2를 기준으로 하여 소수성(hydrophobic)을 가지는 부분 및 친수성(hydrophilic)을 가지는 부분이 되도록 하는 구조를 가질 수 있다.
예컨대, R6은 수소 원자, 
, 
, 
, 
. , 
, 
, 
, ,
, 
, 또는 
이며,
상기 R7은 -A4-R10이고, 상기 A4는 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이며,
상기 R10은 수소 원자, 메틸기, 
, 
, 또는 
이고,
상기 R11은 수소 원자 또는 탄소수 1 내지 3의 알킬기 일 수 있다.
보다 구체적으로는, 상기 저해제는 화학식 4로 표시되는 화합물 내지 19로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다.
[화학식 4]
[화학식 5]
[화학식 6]
[화학식 7]
[화학식 8]
[화학식 9]
[화학식 10]
[화학식 11]
[화학식 12]
[화학식 13]
[화학식 14]
[화학식 15]
[화학식 16]
[화학식 17]
[화학식 18]
[화학식 19]
또한, 본 발명은 PPARγ 인산화 저해제를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 비만, 대사성 질환 또는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 PPARγ 활성화 여부에 따라 비만, 대사성 질환, 심혈관계 질환 등에 영향을 주는 것은 당해 기술분야에 잘 알려져 있으므로, 상기 조성물은 PPARγ 인산화를 저해하여 당뇨병, 비만, 대사성 질환 또는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료효과를 나타내는 것을 특징으로 하며, 보다 구체적으로는 PPARγ Ser273의 인산화를 저해하여 상기 당뇨병, 비만, 대사성 질환 또는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료효과를 나타낸다.
구체적으로는, 상기 대사성 질환 중 고콜레스테롤혈증은 저 HDL-콜레스테롤증, 고 LDL-콜레스테롤증 또는 고트리글리세라이드혈증이며, 상기 심혈관계 질환은 고혈압, 응집전 상태(precoagulant state), 이상 지질혈증 또는 아테롬성 경화증성 질환일 수 있으나, 특별히 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 약학적 조성물 내의 유효성분으로서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 내지 상기 화학식 3으로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 저해제의 함량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 조성물 중량 기준으로 0.001 내지 99.9 중량%, 0.1 내지 99 중량%, 또는 1 내지 50중량% 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때 0.1 mg/kg(체중) 내지 500 mg/kg(체중), 0.1 mg/kg(체중) 내지 400 mg/kg(체중) 또는 1 mg/kg(체중) 내지 300 mg/kg(체중)으로 투여할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (Intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제 등의 보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (Calcium carbonate), 수크로스 (Sucrose) 또는 락토오스 (Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 경피제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (Witepsol), 마크로골, 트윈 (Tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예를 이용하여 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되지 않고 다양하게 수정 및 변경될 수 있다.
실시예 1. PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 억제하는 저해제(비가역적, Irreversible)의 제작 1
PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 억제하는 리간드가 소수성의 특정한 결합 자리(specific binding site)를 공통적으로 차지하고 있다는 것을 확인하였다. 상기 특정한 결합 자리를 효과적으로 차지할 것으로 기대되는 공유결합성 저해제를 종래 공지된 공유결합성 리간드인 GW9662와 PPARγ 결정구조를 기반으로 하기 반응식 1에 기재된 바와 같이 SB1405(화학식 4) 및 SB1406(화학식 5)을 제작하였고, 점유를 전혀 하지 않을 것으로 예상되는 SB1404(화학식 21)도 제작하였으며, 이에 대한 구조는 도 1에 나타내었다.
[반응식 1]
[화학식 20](GW9662)
[화학식 21](SB1404, 2-chloro-N-methyl-5-nitrobenzamide)
[화학식 4](SB1405, N-(2-(benzyloxy)phenyl)-2-chloro-5-nitrobenzamide)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.78 (brs, 1H), 8.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.48 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.41-7.34 (m, 5H), 7.10 (d, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.05-7.00 (m, 2H), 5.11 (s, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.5, 147.8, 146.7, 137.5, 136.2, 136.0, 131.7, 128.8, 128.6, 128.0, 127.3, 126.1, 125.9, 125.0, 121.6, 120.6, 111.8, 71.2; LRMS (ESI) m/z calcd for C20H16ClN2O4 [M+H]+: 383.08; Found: 382.91.
[화학식 5](SB1406, N-(3-(benzyloxy)phenyl)-2-chloro-5-nitrobenzamide)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.52 (s, 1H), 8.20 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.60 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.45-7.24 (m, 7H), 7.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.81 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 5.07 (s, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.4, 159.5, 146.7, 138.2, 137.7, 136.8, 136.6, 131.7, 130.1, 128.7, 128.2, 127.7, 126.1, 125.3, 112.8, 112.2, 107.2 70.2; LRMS (ESI) m/z calcd for C20H16ClN2O4 [M+H]+: 383.08; Found: 382.87.
실험예 1. PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 1
상기 실시예 1에서 제작한 저해제의 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과는 제조사의 지침에 따라 in vitro Cdk5 assay(Cell Signaling Technology, USA)를 이용하여 확인하였다.
구체적으로, 0.5 ㎍의 정제된 PPARγ LBD (Ligand Binding Domain)를 active Cdk5/p35 (Millipore, USA)와 같이 30분 동안 30℃에서 반응시켜서 인산화를 시켰으며, 하기 조건으로 어세이를 수행하였다:
25 uM ATP, 25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 5 mM β-glycerophosphate, 2 mM DTT, 0.1 mM Na3VO4, 10 mM MgCl2.
저해제의 인산화 저해 효과를 확인하기 위해서 어세이를 수행하기 30분 전에 PPARγ LBD와 저해제를 먼저 30℃에서 반응시켜 놓았으며, 저해제가 Cdk5에 직접 작용하지 않는다는 것을 확인하기 위해서 기질을 Rb peptide (residues 773-928, Millipore)로 바꾸어서 같은 어세이를 진행하였다 (Rb peptide는 Cdk5의 잘 알려진 기질 중의 하나이다). 기질이 인산화된 정도는 aniti-phospho-Ser Cdk substrate antibody(Cell Signaling Technology, USA)를 사용한 웨스턴 블롯팅을 통하여 확인하였고, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 이때 항당뇨성 PPARγ 리간드로 알려진 Rosiglitazone(Rosi)와 SR1664도 동일한 방법으로 어세이를 수행하였다.
[화학식 22](Rosiglitazone)
[화학식 23](SR1664)
도 2에 나타난 바와 같이, 공유 결합성 저해제 중 유일하게 SB1405만이 항당뇨성 PPARγ 리간드인 Rosiglitazone 및 SR1664와 같은 활성을 보임을 확인하였다.
또한, X-ray crystallography를 통해 결합 부위를 확인하였는데, SB1406과 다르게 SB1405는 상기 특정한 결합 자리를 정확하게 차지하고 있으며, 이에 따라 PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 효과적으로 저해하고 있음을 확인하였다 (도 3 참조).
실시예 2. PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 억제하는 저해제(비가역적, Irreversible)의 제작 2
상기 실험예 1의 결과에 따라, SB1405의 구조를 기반으로 하기 반응식 2에 기재된 바와 같이 다양한 저해제를 제작하였으며, 제작한 저해제는 도 4에 기재된 바와 같이 A(화학식 6), C(화학식 7), D(화학식 8), E(화학식 9) 및 F(화학식 10)로 나타내었다.
[반응식 2]
[화학식 6](A, 2-chloro-5-nitro-N-(2-phenoxyphenyl)benzamide)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.59 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.23 (dd, J = 7.2, 2.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 7.17-7.10 (m, 3H), 7.02 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 6.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.8, 156.3, 146.7, 146.1, 137.4, 136.3, 131.6, 130.0, 129.0, 125.9, 125.7, 125.2, 124.2, 124.1, 121.3, 118.5, 118.0; LRMS (ESI) m/z calcd for C19H14ClN2O4 [M+H]+: 369.06; Found: 369.05.
[화학식 7](C, 2-chloro-5-nitro-N-(2-phenethoxyphenyl)benzamide)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.54 (s, 1H), 8.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.26 (dd, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.18-7.10 (m, 6H), 7.04 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.10 (t, J = 6.6 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.7, 147.4, 146.8, 137.8, 137.7, 136.9, 131.7, 128.8, 128.6, 127.3, 126.7, 125.6, 125.5, 125.0, 121.6, 120.4, 111.6, 69.1, 35.6; LRMS (ESI) m/z calcd for C21H18ClN2O4 [M+H]+: 397.10; Found: 397.15.
[화학식 8](D, 2-chloro-N-(2-ethoxyphenyl)-5-nitrobenzamide)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.77 (brs, 1H), 8.72 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.50 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 8.25 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.14 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.45 (t, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.5, 147.7, 146.9, 137.5, 136.5, 131.9, 127.1, 126.2, 126.0, 125.0, 121.2, 120.3, 111.1, 64.4, 15.0; LRMS (ESI) m/z calcd for C15H14ClN2O4 [M+H]+: 321.06; Found: 321.15.
[화학식 9](E, 2-chloro-N-(2-(hexyloxy)phenyl)-5-nitrobenzamide)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.76 (brs, 1H), 8.72 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.50 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 8.25 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8.0, 1H), 7.02 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.06 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.32 (m, 4H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.5, 147.9, 146.9, 137.5, 136.5, 131.8, 127.1, 126.2, 126.0, 125.0, 121.2, 120.3, 111.1, 68.9, 31.6, 29.3, 25.9, 22.7, 14.1; LRMS (ESI) m/z calcd for C19H22ClN2O4 [M+H]+: 377.13; Found: 377.20.
[화학식 10](F, 2-chloro-N-(2-(2-(4-methylpiperazin-1-yl)ethoxy)phenyl)-5-nitrobenzamide)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.31 (brs, 1H), 8.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 8.26 (dd, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 4.19 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.72 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.50-2.43 (m, 8H), 2.16 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.1, 148.1, 146.7, 138.0, 137.2, 131.7, 128.2, 125.9, 125.7, 125.3, 122.1, 121.2, 113.4, 66.9, 57.2, 54.8, 53.3, 46.0; LRMS (ESI) m/z calcd for C20H24ClN4O4 [M+H]+: 419.15; Found: 419.06.
실험예 2. PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 2
상기 실시예 1 및 2에 제작한 A, B, C, D, E 및 F를 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 어세이를 수행하였고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타난 바와 같이, R기에 친수성 작용기를 가진 F의 경우 PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 전혀 저해하지 못했지만, R기에 소수성 작용기를 가진 화합물들은 전반적으로 인산화를 잘 저해함을 확인하였다. 특히 R기로 벤질기를 가지고 있는 B(SB1405)가 인산화 저해에 가장 효과적인 구조라는 것을 확인하였다.
실시예 3. PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 억제하는 저해제(비가역적, Irreversible)의 제작 3
저해제로서 물성을 개선시키기 위하여 도 6에 기재된 바와 같이 결정 구조를 기반으로 하여 하기 반응식 3과 같이 SB1451(화학식 11) 및 SB1453(화학식 12)을 제작하였다.
[반응식 3]
[화학식 11](SB1451, 2-chloro-N-(2-((2-((4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl) benzamido)methyl)benzyl)oxy)phenyl)-5-nitrobenzamide)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.09 (s, 1H), 8,99 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.26 (dd, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.39-7.24 (m, 6H), 7.20 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.58 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.48 (s, 2H), 2.34 (brs, 8H), 2.15 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d
6 ) δ 166.1, 163.1, 150.5, 146.0, 141.8, 137.9, 137.7, 137.2, 134.2, 132.8, 131.3, 128.5, 128.2, 128.1, 127.1, 126.8, 126.29, 126.26, 125.5, 124.7, 124.0, 120.5, 113.1, 67.9, 61.6, 54.7, 52.5, 45.7; LRMS (ESI) m/z calcd for C34H35ClN5O5 [M+H]+: 628.23; Found: 628.30.
[화학식 12](SB1453, 2-chloro-N-(2-((3-((4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl) benzamido)methyl)benzyl)oxy)phenyl)-5-nitrobenzamide)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.07 (s, 1H), 8.98 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 7.43-7.31 (m, 5H), 7.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.17-7.14 (m, 2H), 7.01-6.97 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.49 (s, 2H), 2.34 (brs, 8H), 2.14 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d
6 ) δ 166.0, 163.0, 150.6, 146.0, 141.8, 139.9, 137.7, 137.2, 137.0, 133.0, 131.3, 128.6, 128.4, 127.2, 126.6. 126.33, 126.28, 125.9, 125.6, 124.7, 124.1, 120.5, 113.2, 69.8, 61.6, 54.7, 52.6, 45.7, 42.5; LRMS (ESI) m/z calcd for C34H35ClN5O5 [M+H]+: 628.23; Found: 628.41.
실험예 3. PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 3
상기 실시예 3에 제작한 SB1451 및 SB1453을 농도(0.1 uM, 1 uM, 10 uM)를 달리하여 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 어세이를 수행하였고, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타난 바와 같이, SB1451 및 SB1453은 농도의존적으로 PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 효과적으로 저해함을 확인하였다.
실시예 4. PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 억제하는 저해제(비가역적, Irreversible)의 제작 4
반응식 3과 유사한 방법으로 SB1450 및 SB1452를 제작하였다.
[화학식 13](SB1450)
[화학식 14](SB1452)
실험예 4. PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 4
상기 실시예 1 내지 4에서 제작된 저해제를 비교를 위해 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 어세이를 수행하였고, 그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8에 나타난 바와 같이, SB1450과 SB1452는 PPARγ 인산화를 효과적으로 저해하였지만, 그 저해 정도는 SB1451과 SB1453에 비해 약간 떨어진다는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 5. PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 억제하는 저해제(비가역적, Irreversible)의 제작 5
용해도(solubility)를 개선시키기 위하여, 공유 결합하는 부위의 구조를 변형한 Compound A(화학식 15), Compound B(화학식 16), Compound C(화학식 17) 및 Compound D(화학식 18)를 반응식 4와 같이 제작하였다.
[반응식 4]
[화학식 15](Compound A)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 1H), 7.87 (brs, 1H), 6.76 (brs, 1H), 3.02 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 3,01 (d, J = 5.6 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 165.3, 162.3, 157.8, 155.0, 108.1, 28.2, 26.6; LRMS (ESI) m/z calcd for C7H9ClN4O [M+H]+: 201.05; Found: 201.10.
[화학식 16](Compound B)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.45 (brs, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.62 (brs, 1H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.04 (d, J = 4.8 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.9, 162.2, 158.0, 155.0, 136.7, 129.2, 125.5, 120.6, 108.8, 28.3; LRMS (ESI) m/z calcd for C12H11ClN4O [M+H]+: 263.06; Found: 263.10.
[화학식 17](Compound C)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.12 (brs, 1H), 8.43 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.09 (brs, 1H), 7.40-7.34 (m, 5H), 7.12 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 5.12 (s, 2H), 3.03 (d, J = 4.8 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.8, 162.7, 157.9, 155.3, 147.8, 135.7, 128.8, 128.6, 128.0, 127.1, 124.9, 121.3, 120.5, 111.6, 108.3, 71.2, 28.3; LRMS (ESI) m/z calcd for C19H17ClN4O2 [M+H]+: 369.10; Found: 369.20.
[화학식 18](Compound D)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.34 (s, 1H), 8.32 (brs, 1H), 7.63 (brs, 1H), 7.45-7.28 (m, 7H), 7.09 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.08 (s, 2H), 3.04 (d, J = 4.8 Hz, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162.9, 162.3, 159.4, 158.1, 155.1, 137.9, 136.6, 129.9, 128.6, 128.0, 127.5, 112.9, 111.9, 108.6, 107.3, 70.1, 28.3; LRMS (ESI) m/z calcd for C19H17ClN4O2 [M+H]+: 369.10; Found: 369.10.
실험예 5. PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 5
상기 실시예 4에 제작한 Compound A, Compound B, Compound C 및 Compound를 농도 10 uM로 하여 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 어세이를 수행하였고, 그 결과를 도 9에 나타내었다.
도 9에 나타난 바와 같이, compound C(화학식 17)가 효과적으로 PPARγ 인산화를 저해한다는 것을 확인할 수 있었다. 이 결과를 통해서 같은 R1을 갖는 화학식 1과 화학식 2은 PPARγ 인산화 저해에 있어서 같은 활성을 나타낸다는 것을 알 수 있다.
실시예 6. PPARγ Ser273 잔기의 인산화를 억제하는 저해제(가역적, reversible)의 제작 6
공유결합성 저해제(Covalent inhibitor)의 장점인 높은 효력(potency)을 유지하면서 비특이적인 결합이 일어나지 않는 가역적 저해제로서, 공유 결합하는 부위의 구조를 변형한 BH273(화학식 19)을 제작하였다.
[화학식 19](BH273)
실험예 6. PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인 6
상기 실시예 5에 제작한 BH273을 농도(0.1 uM, 1 uM, 10 uM)를 달리하여 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 어세이를 수행하였고, 그 결과를 도 10에 나타내었다.
도 10에 나타난 바와 같이, BH273은 항당뇨성 PPARγ 리간드인 rosiglitazone과 비슷한 수준의 Ser273 인산화 저해를 나타내었다.
실험예 7. 세포상에서의 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인
상기 실시예 3에서 제작한 SB1451 및 SB1453의 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과를 HEK-293 세포상에서 확인하였다.
구체적으로, PPARγ를 발현하는 HEK-293 세포를 PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)에 30분간 처리하였고, 이후 4℃ 조건에서 FLAG M2 agarose (Sigma Aldrich, USA)에서 인큐베이트 하였다. Immunoprecipitate는 PPARγ Ser273의 포스포-특이적(phosphor-specific) 항체 또는 항-PPARγ 항체를 사용하여 분석하였고, 그 결과를 도 11에 나타내었다.
도 11에 나타난 바와 같이, SB1451 및 SB1453 모두 세포상에서도 PPARγ의 인산화를 효과적으로 저해함을 확인하였다.
실험예 8. 전사 활성 효과 확인
상기 실시예 3에서 제작한 SB1451 및 SB1453이 전사 활성(transactivation)을 야기시키는 여부를 실험하였다.
구체적으로, 형질주입(transfection) 전 7000 cells/well의 밀도수로 HEK-293T 세포를 96-well 플레이트에 접종하였다. 이후 인산칼슘 형질주입법을 이용하여 상기 세포에 pDR-1 루시퍼라아제 리포터 플라스미드(luciferase reporter plasmid), PPARγ RXRα 및 pRL-renillin를 형질주입 하였다. 형질주입 후, 각각 rosiglitazone, SR1664, SB1451 및 SB1453를 24시간 처리하였으며, 세포를 배양 후 Dual-luciferase kit를 이용하여 reporter gene assay (Promega, USA)를 수행하였다. 루시퍼라아제의 활성은 Bio-Tek microplate reader(ELx800TM, Bio-Tek Instruments Inc., USA)를 이용하여 측정하였고 레닐라(Renilla) 활성으로 정규화하였고, 그 결과인 DMSO-처리 세포를 기준으로 한 Fold change를 도 12에 나타내었다.
도 12에 나타난 바와 같이, SB1451과 SB1453은 Rosiglitazone과 달리 PPARγ의 전사 활성에 거의 영향을 주지 않음을 확인하였다.
실험예 9. 3T3L1 지방 세포 분화 촉진 시험
3T3L1 지방전구세포를 6-웰 플레이트에 100% 컨플루언시(confluency)가 되도록 성장시킨 후, 1 uM 덱사메타손, 850 nM 인슐린 및 10 uM 저해제 (10% FBS를 포함하는 DMEM에 포함)를 2일간 처리하였다. 이후 10% FBS를 포함하는 DMEM 및 850 nM 인슐린을 처리 및 교체해주면서 지속적으로 배양하였다. 배양 8일째에, 3T3L1 세포에 축적된 지질을 Oil Red O staining으로 확인하였으며, 그 결과를 도 13에 나타내었다.
도 13은 상기 Oil Red O staining을 통해 축적된 지질을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 13에 나타난 바와 같이, Rosiglitazone이 지질생성(adipogenesis)을 촉진하여 3T3L1 세포를 성숙된 지방세포로 분화시킨 것에 반해 SB1451과 SB1453은 지질생성 촉진 결과를 보이지 않았다.
실험예 10. PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과 확인(In vivo)
고지방 식사를 통해 비만을 유발 시킨 쥐 (DIO mice)에 SB1451 및 SB14533을 10mg/kg/day로 7일간 투여하여 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 PPARγ Ser273 잔기의 인산화 억제 효과를 확인하였고, 그 결과를 도 14에 나타내었다.
도 14에 나타난 바와 같이, SB1451 및 SB1453는 DIO mice에서 PPARγ 인산화를 저해함을 확인하였다. 특히, SB1453은 DIO mice에서 Rosiglitazone과 비슷한 수준으로 PPARγ의 인산화를 저해하는 것으로 나타났다.
실험예 11. PPARγ의 인산화에 의해서 조절되는 유전자들의 발현 평가
상기 실험예 10에서 진행한 DIO mice를 이용하여, 종래 PPARγ 인산화에 의해 크게 영향을 받는 17개의 유전자들을 대상으로 하여 발현 평가를 하였다:
<대상 유전자>
Adipsin, Adiponectin, Cd24a, Txnip, Nr1d1, Peg10, Acyl, Cidec, Rarres2, Car3, Selenbp1, Aplp2, Nr3c1, Cyp2f2, Nr1d2, Ddx17, Rybp
구체적으로 지방조직에서 RNA를 분리하여 qPCR을 진행하였으며, 저해제 처리에 따른 상기 유전자들의 발현 정도를 도 15에 나타내었다.
도 15에 나타난 바와 같이, SB1453을 처리한 DIO mice의 경우 대상 유전자들의 발현이 확연하게 증가하는 것을 확인하였다.
실험예 12. 전사 활성에 의해서 조절되는 유전자들의 발현 평가
상기 실험예 10에서 진행한 DIO mice를 이용하여, 종래 PPARγ 활성화에 의한 전사 활성에 크게 영향을 받는 17개의 유전자들을 대상으로 하여 발현 평가를 하였다:
<대상 유전자>
aP2, Cycs, Idh3a, Ppcs, Fdx1, Fgfrl1, Pdk4, Cib2, Fmr1, Pim3, Las1l, Abhd12, Nadk, Arhgap5, Lass4, Plin2, Phospho1
구체적인 실험방법은 실험예 12와 동일하게 진행하였으며, 그 결과를 도 16에 나타내었다.
도 16에 나타난 바와 같이, Rosiglitazone을 처리한 DIO mice에서는 17개의 대상 유전자들의 발현 정도가 매우 크게 증가하였으나, SB1453을 처리한 경우에는 Control과 비교하였을 때, 통계적으로 유의미한 차이를 보이지 않았다.
실험예 13. 당부하 검사 (glucose tolerance test)
당부하검사를 위해 DIO mice에 10mg/kg으로 매일 각각 rosiglitazone, SB1453, 및 vehicle를 복강 주사로 투여 하였다. 이후, 공복 상태인 mice에 D-glucose 1.5g/kg을 투여한 후 꼬리 정맥에서 일정한 시간 간격으로 피를 뽑아서 glucose의 농도를 Truetrack glucometer (Nipro Diagnostics, Japan])로 측정하였고, 그 결과를 도 17에 나타내었다.
도 17에 나타난 바와 같이, SB1453 또는 rosiglitazone을 투여한 mice는 vehicle control에 비해 효과적으로 혈당 농도를 감소시키는 것을 확인할 수 있었다.
PPARγ 관련 질환의 약제 등 관련 분야에서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 보인다.
Claims (8)
- 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 내지 3으로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는, PPARγ 인산화 저해제:[화학식 1][화학식 2][화학식 3]상기 화학식 1 내지 3에 있어서,상기 R1은 -(CH2)n-A1-X-(CH2)m-A2-R6이며,상기 A1는 탄소수 5 내지 6의 시클로 알킬 화합물 또는 아로메틱 화합물이고,상기 X는 산소 원자, 황 원자 또는 질소 원자 이며,상기 A2는 아로메틱 화합물, 또는 헤테로아로메틱 화합물이고,상기 n은 0 또는 1의 정수이며,상기 m은 0 내지 10의 정수이고,상기 R6은 수소 원자, 또는 -(CH2)o-A3-(CH-2)p-R7이며,상기 A3는 산소 원자, -NH-, -NH-C(=O)-, 또는 -C(=O)-NH- 이고,상기 R7는 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이며,상기 o와 p는 각각 0 내지 5의 정수이고,상기 화학식 2에 있어서, 상기 R2는 수소, 탄소수 1 내지 3의 알킬기, 치환 또는 비치환된 페닐기, 또는 -NR8R9이며, 상기 R8 및 R9는 서로 같거나 다를 수 있고, 각각 수소 원자 또는 탄소수 1 내지 3의 알킬기이며,상기 R3 및 R4는 서로 같거나 다를 수 있고, 각각 수소 원자, 탄소수 1 내지 5의 알킬기, 또는 치환 또는 비치환된 페닐기이며,상기 화학식 3에 있어서, 상기 R5는 수소 원자, 탄소수 1 내지 5의 알킬기, 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이다.
- 청구항 1에 있어서,상기 A1 및 A2는 아로메틱 화합물이고,상기 X는 산소 원자이며,상기 n은 O이고,상기 m은 1인 것인, PPARγ 인산화 저해제.
- 청구항 1에 있어서,R1은또는인 것인, PPARγ 인산화 저해제.
- 청구항 1에 있어서,상기 R6는 수소 원자,,,,.,,,, ,,, 또는이며,상기 R7은 -A4-R10이고, 상기 A4는 치환 또는 비치환된 아로메틱기, 또는 치환 또는 비치환된 헤테로아로메틱기이며,상기 R10은 수소 원자, 메틸기,,, 또는이고,상기 R11은 수소 원자 또는 탄소수 1 내지 3의 알킬기인, PPARγ 인산화 저해제.
- 청구항 1에 있어서,하기 화학식 4로 표시되는 화합물 내지 19로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는, PPARγ 인산화 저해제.[화학식 4][화학식 5][화학식 6][화학식 7][화학식 8][화학식 9][화학식 10][화학식 11][화학식 12][화학식 13][화학식 14][화학식 15][화학식 16][화학식 17][화학식 18][화학식 19]
- 청구항 1의 PPARγ 인산화 저해제를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 비만, 대사성 질환 또는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 청구항 6에 있어서,상기 대사성 질환은 당뇨, 고지질혈증, 고인슐린혈증, 고요산혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 대사증후군(syndrome X) 또는 내피기능장애이며,상기 심혈관계 질환은 심혈관계 질환은 고혈압, 응집전 상태(precoagulant state), 이상 지질혈증 또는 아테롬성 경화증성 질환인 것인, 약학적 조성물.
- 청구항 6에 있어서,약리학적으로 허용 가능한 약제, 담제 또는 부형제를 더 포함하는 약학적 조성물.
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