[go: up one dir, main page]

WO2017169311A1 - ネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物 - Google Patents

ネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物 Download PDF

Info

Publication number
WO2017169311A1
WO2017169311A1 PCT/JP2017/006435 JP2017006435W WO2017169311A1 WO 2017169311 A1 WO2017169311 A1 WO 2017169311A1 JP 2017006435 W JP2017006435 W JP 2017006435W WO 2017169311 A1 WO2017169311 A1 WO 2017169311A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extract
nepodin
nepogin
treatment
producing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2017/006435
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
済泰 禹
勇人 照屋
梢 佐々木
俊明 照屋
亜紀 山野
康佑 末吉
美希 山田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Okinawa Research Center Co Ltd
University of the Ryukyus NUC
Original Assignee
Okinawa Research Center Co Ltd
University of the Ryukyus NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Okinawa Research Center Co Ltd, University of the Ryukyus NUC filed Critical Okinawa Research Center Co Ltd
Priority to US16/089,370 priority Critical patent/US10500242B2/en
Priority to CN201780020679.2A priority patent/CN108883144A/zh
Priority to JP2018508585A priority patent/JP6876679B2/ja
Priority to EP17773859.8A priority patent/EP3437648A4/en
Publication of WO2017169311A1 publication Critical patent/WO2017169311A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/70—Polygonaceae (Buckwheat family), e.g. spineflower or dock
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a Nepodin-rich Gishigishi extract using Gishigishi and a Nepodin-rich Gishigishi extract.
  • Nepodin (CAS registration number: 3785-24-8) is also called mucidin or dianeridine, and has a structure represented by the following formula (1). Nepodin has pharmacological actions that improve various symptoms by activating 5 'adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK), such as glucose tolerance improving action, blood lipid level improving action, and metabolic syndrome improving action.
  • AMPK 5 'adenosine monophosphate-activated protein kinase
  • Gishigishi which is a perennial plant of the genus Sorbusaceae ( Rumex ).
  • sorrel sorrel (R.japonicus), Nagabagishigishi (R.crispus), Rumex obtusifolius (R.obtusifolius), such as Scarabaeidae sorrel (R.maritimus) are known.
  • Non-patent Documents 1 and 2 As a method for obtaining apargin from Gishigishi, there is known a method in which rhizomes such as the roots and stems of Gishigishi are subjected to an extraction treatment using a nepodin-soluble organic solvent such as ethanol or ethyl acetate (Non-patent Documents 1 and 2 below). The entire description of which is incorporated herein by reference).
  • Nepodin contained in Gishigishi has several pharmacological actions as described in Patent Document 1, and therefore, the demand as an active ingredient for pharmaceuticals and quasi drugs is increasing. Therefore, if there is a method for efficiently producing an extract of a natural product containing nepodin (hereinafter referred to as nepodin-containing extract), the strigdin-containing extract can be used as an active ingredient or additive such as a pharmaceutical product. Expect more.
  • Non-Patent Documents 1 and 2 are methods that can obtain a romancedin-containing extract
  • the obtained nepodin-containing extract contains a large amount of contaminants such as fatty acids derived from Gishigishi. There is a problem that it is contained.
  • the obtained nepodin-containing extract in order to obtain a high content of nepodin, the obtained strigdin-containing extract must be subjected to a concentration treatment. Such a concentration treatment requires enormous facilities and time depending on the amount of the extraction solvent. Therefore, there is a problem that it is difficult to implement industrially.
  • the present invention is a method for producing a apardin-containing extract containing apardin at a high concentration and containing less contaminants, while being easy to implement on an industrial scale as compared with the prior art. It is a problem to be solved by the invention.
  • the inventors of the present invention contain nepogin by subjecting a crude extract obtained by subjecting a squeezed swordfish to an extraction treatment to a hydration treatment and / or a concentration treatment. It was found that a solid was obtained. Further, the solid is subjected to a weak alkali treatment and further subjected to a strong alkali treatment to obtain a nepogin-containing aqueous solution. Further, the nepodin-containing aqueous solution is subjected to a neutralization treatment, so that nepogin is finally contained in an amount of 20 to 40 wt%. It has succeeded in producing a apardin-containing squeeze extract that contains a high concentration of glycine but reduced contamination of fatty acid-derived impurities such as fatty acids. The present invention has been completed based on such knowledge and success.
  • a method for producing a romancedin-containing scouring extract comprising the following steps (1) to (5).
  • a step of obtaining a crude extract of borage by subjecting it to an extraction treatment using a nepogin-soluble solvent (2)
  • Step (3) of obtaining an extract solid content (3)
  • Step of obtaining a strongly alkaline lysate by providing (5)
  • Step of obtaining a nepogin-containing squeezed extract by subjecting the strong alkali lysate to neutralization treatment
  • the socialdin-soluble solvent is 20 to 100% (v / v) ethanol.
  • the weak alkali treatment is a weak alkali treatment using a weak alkaline aqueous solution having a pH of 8 to 10.
  • the weak alkali treatment is a weak alkali treatment obtained by mixing sodium hydrogen carbonate and water and using a weak alkaline aqueous solution having a pH of 8 to 10. is there.
  • the strong alkali treatment is a strong alkali treatment using a strong alkaline aqueous solution having a pH of 12 to 14.
  • the strong alkali treatment is a strong alkali treatment obtained by mixing sodium hydroxide and water and using a strong alkaline aqueous solution having a pH of 12 to 14. is there.
  • the neutralization treatment is a neutralization treatment using an acidic aqueous solution having a pH of 1 to 3.
  • the neutralization treatment is obtained by mixing an acid component selected from the group consisting of acetic acid and hydrochloric acid and water, and is an acidic aqueous solution having a pH of 1 to 3.
  • the socialdin-containing scallop extract is a constructivedin-containing swordfish extract containing 20 to 40 wt% constructivegin.
  • a nepodin-containing scouring extract containing 20-40 wt% nepodin and 60 wt% or less fatty acid.
  • the nepodin-containing scouring extract of one aspect of the present invention is a constructivedin-containing squeaking extract obtained by the production method of one aspect of the present invention.
  • the production method of one embodiment of the present invention in principle, it is a method consisting of addition of a solution and solid-liquid separation, and a simple process. Therefore, it can be easily carried out on an industrial scale as compared with the prior art.
  • As a method it is possible to produce a constructivegin-containing scallop extract containing apardin at a high concentration and containing a small amount of contaminants derived from swordfish.
  • the nepodin-containing scouring extract of one aspect of the present invention a wide variety of pharmaceuticals and quasi-drugs containing, as an active ingredient, nepozin-containing scouring extract itself or purified constructivedin obtained by purification from a neposin-containing squeaking extract.
  • Product can be manufactured.
  • the constructivegin-containing squeeze extract or purified constructivedin of one embodiment of the present invention is used alone or in combination with other additives, powders, granules, tablets, liquids, pastes for pharmaceuticals or quasi-drugs, It can be provided in various forms such as capsules and gels.
  • FIG. 1 is a flowchart schematically illustrating a manufacturing method according to an embodiment of the present invention.
  • the manufacturing method of 1 aspect of this invention is related with the method of manufacturing the bark extract which contains a high amount of nepogin by using the solid content of a bark extract for a weak alkali process, a strong alkali process, and a neutralization process.
  • the first aspect of the present invention includes at least the following steps (1) to (5). (1) A step of obtaining a crude extract of borage by subjecting it to an extraction treatment using a nepogin-soluble solvent (2) A step of crumpling of the burrow by subjecting the crude extract to hydration and / or concentration.
  • Step (3) of obtaining an extract solid content (3) Step of obtaining a weak alkali insoluble material by subjecting the crude extract solid content to a weak alkali treatment (4) Step of obtaining a strongly alkaline lysate by providing (5) Step of obtaining a constructivegin-containing squeezed extract by subjecting the strong alkali lysate to neutralization treatment
  • Gishigishi is a kind of the family Taceae as is known in the art. For example, it is a perennial that is distributed throughout Japan, and is known as a weed that is often found on roadsides and the paddy fields. Gishigishi is also known as a plant that stretches about 1 m of stem in early summer and attaches a flower similar to buckwheat to a bell.
  • Sorrel is not particularly limited as long as it contains the Nepojin, for example, sorrel (Rumex japonicus), Nagabagishigishi (R.crispus), Rumex obtusifolius (R.obtusifolius), Great Gray Bruno rhubarb (R.gmelini), Kibunedaiou (R .nepalensis), R. hastatus, R. alpinus , sorrel ( R. acetosa ), R. cripus, R. stenophyllus , R.A. patientia, R. chalepensis, R. orientalis and the like.
  • a swordfish includes plants closely related to swordfish.
  • the closely related plant Rumex for example, Polygonaceae family plant and bellflower run is closely related plants (Dianella ensifolia), D. revoluta, D. callicarpa, D. nigra; Hosobakisuge (Hemerocallis minor); a agave plant of the family Simethis bicolor Kunth; plumbaginaceae a Limonium plant Limonium myrianthum; rhamnaceae plants in which Rhamnus prinoides, R. wightii, R. procumbens; a myrsinaceae Tsuruman Ryo Genus Myrsine africana; other but such Maesopsis eminii the like a plant, without limitation.
  • the borage may be one kind or two or more kinds of the above-mentioned laceaceae plants or close-up plants, and may be a hybrid of the plants mentioned as the above specific examples.
  • the burrowing site is not particularly limited as long as it contains nepogin, but it is preferably a root because the content per unit mass of nepogin is large.
  • other parts such as stems, leaves, and flowers may be mixed.
  • burrows include burrows, yellow-tailed daisies, Nagabagi-shigishi, yellow-tailed daisies, Ezonogishigishi, R. hastatus, D. ensifolia , D.M. callicarpa (Liliaceae), D. nigra, the roots of Hosobakisuge and Myrsine africana; R. Leaves of prinoides; R. such as the bark of wightii .
  • the root of Gigi is preferred because it has been used as a herbal medicine in the name of sheep's hoof.
  • the root of borage contains chrysophanol, emodin, chrysophane noanthrone, oxalic acid, etc., and is known to have antibacterial action and blood clot action.
  • the squeegee immediately after harvesting in the production method of one embodiment of the present invention.
  • it is preferably stored by a storage means usually used by those skilled in the art such as low-temperature storage in order to prevent the burrow of the burrow.
  • the borage may be subjected to a pretreatment such as a drying treatment, a pulverization treatment, a fragmentation treatment, or a combination of these after harvesting.
  • a pretreatment such as a drying treatment, a pulverization treatment, a fragmentation treatment, or a combination of these after harvesting.
  • the squeeze can be made into a dry powder.
  • the drying process and the pulverization process may be performed at the same time, or any of them may be performed first, but it is preferable to perform the pulverization process after the drying process is performed first for the convenience of work.
  • a drying process is not specifically limited, For example, the process which dries so that the water content of a borage will be 10 mass% (wt%) or less, Preferably it is 5 wt% or less is mentioned.
  • the drying process is known to those skilled in the art such as a method of drying in the sun, hot air drying, hot air drying, high pressure steam drying, spray drying, reduced pressure drying, fluidized drying, electromagnetic wave drying, freeze drying using a dryer. This can be done by any method. Drying by heating can be carried out at a temperature and time that does not alter stigmatism or constructivedin by heating at, for example, 30 to 140 ° C., preferably 40 to 100 ° C.
  • the pulverization process is not particularly limited, and examples thereof include a process of pulverizing a plant body by an arbitrary method commonly used by those skilled in the art using a crusher, a mill, a blender, a millstone, or the like.
  • the fragmentation process is not particularly limited, for example, a method commonly used by a person skilled in the art, such as slicing, crushing, and shredding, to fragment a plant can be used.
  • a scallop crude extract is obtained by subjecting a swordfish stored or pretreated immediately after harvesting or after harvesting to an extraction treatment using a nepodin-soluble solvent.
  • the solvent that is soluble in romancedin is not particularly limited as long as it is a solvent that can dissolve nepogin.
  • a solvent that is readily soluble in nepodin specifically, an organic solvent such as ethanol or ethyl acetate, and these organic solvents.
  • examples thereof include a mixed solvent with water.
  • a mixed solvent of ethanol and water is used as the nepodin-soluble solvent, for example, it is preferably 20 to 100% (v / v) ethanol. If the ethanol concentration is less than 20% (v / v), the extraction efficiency may be poor.
  • the romancedin-soluble solvent is more preferably 20 to 80% (v / v) ethanol, more preferably 20 to 60% (v / v) ethanol. .
  • the conditions for the extraction treatment are not particularly limited as long as nepodin in borage is suitable for dissolving in a solvent, and can be appropriately set according to the state and amount of burrow and the type and amount of nepodin-soluble solvent.
  • the conditions for the extraction treatment can be determined by confirming the concentration of nepogin in the treatment solution by, for example, appropriately sampling a treatment solution obtained from borage and constructivegin soluble solvent.
  • the recovery rate of constructivedin in the constructivegin extract is not particularly limited, but it is preferably 50% or more based on the assumed content of constructivegin contained in the raw material Gishigishi.
  • the scallop crude extract obtained by the step (1) contains a certain amount of solid content derived from scouring. Therefore, from the viewpoint of the processing efficiency of the subsequent step (2), the crude extract obtained by the step (1) is subjected to a commonly known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration, and the residue of It is preferable to obtain it as a liquid component from which is removed.
  • a commonly known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration
  • the scallop crude extract obtained by the step (1) is subjected to a hydration treatment, a concentration treatment, or a hydration treatment and a concentration treatment.
  • a solid is obtained.
  • the water treatment is not particularly limited as long as water is added to the rough extract, and the solid content in the rough extract is precipitated.
  • the hydrolysis treatment is 0.1 to 5 times that of the rough extract.
  • the concentration treatment is not particularly limited as long as the solid content in the rough extract is precipitated by a commonly known concentration means, for example, the rough extract is, for example, under reduced pressure or low temperature, By leaving it to stand for several minutes to several hours to several days, it can be carried out by volatilizing the liquid component in the rough extract.
  • the degree of concentration is not particularly limited. For example, the volume may be reduced to about 1/2 to 1/10, and the liquid component may be volatilized until it becomes dry.
  • Either one or both of the hydration treatment and the concentration treatment can be performed.
  • count of a hydration process and a concentration process are not specifically limited,
  • a concentration process can be implemented after a hydration process.
  • the crude extract solid content obtained by the hydrolysis and / or concentration treatment is used as it is or as a solid content obtained by subjecting it to a commonly known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration. Used for.
  • the scouring crude extract solid content may be subjected to the above-described drying treatment or pulverization treatment.
  • the concentration of nepodin (content) in the solid content of the rough extract is not particularly limited, and is, for example, 10 wt% or more, preferably 15 wt% or more, based on the wet mass of the solid extract.
  • the crude extract solid matter obtained in the step (2) is subjected to a weak alkali treatment, whereby a weak alkali insoluble as an insoluble nepodin-containing component is obtained. Get things.
  • the weak alkali is not particularly limited as long as it decomposes impurities in the solid content of the rough extract and does not dissolve nepogin.
  • sodium hydrogen carbonate, aqueous ammonia, sodium carbonate, calcium carbonate, magnesium carbonate A solution in which a weak alkali component such as magnesium oxide is dissolved in a nepodin-insoluble solvent such as water and the pH is set to 7.5 to 11, preferably 8 to 10, is preferable. More preferably, the aqueous solution is a sodium hydrogen carbonate aqueous solution.
  • the use concentration of the weak alkali component is not particularly limited as long as it is a concentration that gives a predetermined pH.
  • an aqueous sodium hydrogen carbonate solution is preferably an aqueous solution of 0.01% to 10% (w / v) sodium hydrogen carbonate, more preferably an aqueous solution of 0.05% to 0.5% (w / v).
  • Sodium aqueous solution is preferably an aqueous solution of 0.01% to 10% (w / v) sodium hydrogen carbonate, more preferably an aqueous solution of 0.05% to 0.5% (w / v).
  • the weak alkali treatment is not particularly limited as long as it is carried out under the condition that it can decompose impurities in the solid content of the rough extract and precipitate constructivegin as an insoluble component, for example, the solid extract of the rough extract and the weak alkaline solution And at a temperature of 10 to 30 ° C., preferably at room temperature, for several minutes to several hours to several days until a suspension is obtained.
  • the mixture of the solid extract solid content and the weak alkali may be subjected to a commonly known suspending means such as stirring and ultrasonic waves.
  • the weak alkali-insoluble matter obtained by the weak alkali treatment is in a state where the liquid component is removed, for example, as a solid content obtained by subjecting to a commonly known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration, in the subsequent step. used.
  • the weak alkali-insoluble material may be subjected to the above-described drying treatment or pulverization treatment.
  • the weak alkali-insoluble material obtained in the step (3) is subjected to a strong alkali treatment, whereby a strong alkali-soluble material is obtained as a soluble nepodin-containing component. obtain.
  • the strong alkali is not particularly limited as long as it can dissolve nepodin in a weak alkali-insoluble material.
  • a strong alkali component such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, or calcium hydroxide is dissolved in a solvent such as water.
  • a solution having a pH set to 11.5 to 14, preferably 12 to 14, is preferable, and an aqueous sodium hydroxide solution having a pH set to 12 to 14 is more preferable.
  • the use concentration of the strong alkali component is not particularly limited as long as it is a concentration that gives a predetermined pH.
  • a sodium hydroxide aqueous solution is preferably 0.01% to 10% (w / v) sodium hydroxide aqueous solution, more preferably 0.05% to 0.5% (w / v) hydroxide.
  • Sodium aqueous solution is preferably 0.01% to 10% (w / v) sodium hydroxide aqueous solution, more preferably 0.05% to 0.5% (w / v) hydroxide.
  • the strong alkali treatment is not particularly limited as long as it is carried out under the condition of dissolving nepodin in a weak alkali insoluble material to obtain a strong alkali dissolved material as a nepodin-containing component, for example, a weak alkali insoluble material and a strong alkaline solution For 10 minutes at a temperature of 10 to 30 ° C., preferably at room temperature, for a few minutes to a few hours.
  • a mixture of a weak alkali insoluble material and a strong alkali may be subjected to a commonly known dissolution means such as stirring or ultrasonic waves.
  • Strong alkaline lysate obtained by the strong alkali treatment is used in the subsequent steps as a liquid component obtained by removing the solids, for example, by being subjected to a commonly known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration. Is done.
  • the strong alkali solution obtained in the step (4) is subjected to a neutralization treatment to neutralize the strong alkali solution, and the neutrality.
  • a constructivegin-containing scouring extract is obtained as a solid insoluble in the solution.
  • the neutralization treatment can be carried out, for example, using an acid capable of bringing the strong alkaline solution into a vicinity of neutrality, preferably a pH of about 6 to 8.
  • the acid is not particularly limited as long as it is an acid that is usually used for neutralization treatment. Examples thereof include inorganic acids and organic acids such as acetic acid, hydrochloric acid, formic acid, sulfuric acid, and phosphoric acid. 3 acetic acid and hydrochloric acid.
  • the acid may be a mixture with a nepodin insoluble solvent such as water.
  • the neutralization treatment is not particularly limited as long as it is carried out under conditions that neutralize the strong alkaline solution and precipitate apardin as an insoluble component.
  • the strong alkaline solution and acid are brought into contact with the suspension. Can be carried out at 10 to 30 ° C., preferably at room temperature, for several minutes to several hours to several days.
  • the mixture of the strongly alkaline solution and the acid may be subjected to a commonly known suspending means such as stirring and ultrasonic waves.
  • the volleyballgin-containing squeezed extract obtained by the neutralization treatment is preferably obtained as a solid content obtained by subjecting it to a generally known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration in a state where the liquid component is removed.
  • the nepodin-containing extract when used as a raw material for an oral composition or an external composition, it is preferably washed with water or the like.
  • the constructivegin-containing scouring extract may be subjected to a purification step.
  • a constructivedin-containing scouring extract with reduced impurities as a liquid component can be obtained by solid-liquid separation of a mixture of a constructivedin-containing squeaky extract collected and washed with water and a volleyballdin-soluble solvent.
  • the volleyballgin-containing stigmata extract obtained by the production method of one embodiment of the present invention is a sigmig-derived composition containing nepodin at a high concentration as compared with the prior art.
  • the nepodin concentration (content) in the nepodin-containing scouring extract is not particularly limited, and is, for example, 20 wt% or more, preferably 30 wt% or more, more preferably 40 wt% or more, based on the dry mass of the nepogin-containing scouring extract.
  • the recovery rate of constructivegin in the constructivegin-containing Gishigishi extract is, for example, 40% or more, preferably 50% or more, more preferably 60% or more, relative to the amount of constructivedin in the solid content of Gishigishi crude extract.
  • the amount of the fatty acid or the complex thereof in the romancegin-containing extract is, for example, preferably 60 wt% or less, more preferably 40 wt% or less, and further preferably about 30 wt%.
  • the nepodin-containing extract may contain by-products, and may contain about 1 to 15 wt%, preferably 10 wt% or less of nakahalene, which is a nepodin analog, and an anthraquinone such as emodin, chrysophanol, physcion and the like may be contained in an amount of about 1 to 10 wt%, preferably 8 wt% or less.
  • Extraction treatment 30 is performed by adding 2 to 10 times by mass of ethanol to the stigma root and adding 5 to 15 times the ethanol to the squeeze root after pulverizing the dried stigma root 10 and weighing a predetermined amount.
  • borage residue 20 is removed by solid-liquid separation means to obtain the burrow crude extract 11.
  • water and a concentration treatment 31 are carried out by adding 0.2 to 0.5 times as much water to the obtained crude extract 11, and then subjecting it to vacuum concentration.
  • the solid extract 12 is obtained by removing the rough extract liquid component 21 by the solid-liquid separation means.
  • only the hydration treatment or only the concentration treatment may be performed.
  • the obtained rough extract crude solid content 12 was subjected to weak alkali treatment 32 using 0.05 to 1% (w / v) weak alkaline aqueous solution (pH 8 to 10), and solid-liquid separation means was used. By removing the weak alkaline solution 22, the weak alkali insoluble material 13 is obtained.
  • the obtained weak alkali-insoluble matter 13 was subjected to a strong alkali treatment 33 using 0.05 to 1% (w / v) strong alkaline aqueous solution (pH 12 to 14), and strong by solid-liquid separation means. By removing the alkali insoluble matter 23, a strong alkali soluble matter 14 is obtained.
  • the obtained strong alkaline solution 14 is subjected to neutralization treatment 34 using an acid (pH 1 to 3) so that the pH of the solution becomes 7 to 8, and neutralized solution is obtained by solid-liquid separation means.
  • an acid pH 1 to 3
  • neutralized solution is obtained by solid-liquid separation means.
  • the volleyballgin-containing scouring extract produced by the production method of one aspect of the present invention can be included in the present invention as another aspect.
  • the constructivegin-containing squeeze extract of one aspect of the present invention is not particularly limited as long as it is a composition that is produced by the production method of one aspect of the present invention and contains constructivegin at a higher concentration than the conventional technique.
  • the content of constructivegin per dry mass of the constructivegin-containing scouring extract is preferably 20 wt% or more from the viewpoint of the cost of producing a product by applying it as a raw material for an oral composition or an external composition, for example. More preferably, it is 30 wt% or more, and more preferably 40 wt% or more.
  • the use of the socialdin-containing scouring extract of one embodiment of the present invention is not particularly limited.
  • various effects can be obtained by activating AMPK such as glucose tolerance improving action, blood lipid concentration improving action, and metabolic syndrome improving action of romancedin.
  • the composition can be used as a raw material for each composition such as an oral composition such as a food or drink or a pharmaceutical, or an external composition such as a cosmetic, or the composition itself.
  • the content of constructivegin in the nepodin-containing scouring extract of one embodiment of the present invention can be measured by the method described in the examples described later.
  • Example 1 Method for measuring apargin
  • Nepogin-rich Gishigishi raw root extract production method (1) 500 g of fresh root of R. japonicus was added to 2.5 L of ethanol, and left at room temperature for 9 hours to obtain a rough extract of Gishigishi root. The obtained scouring root extract was suction filtered using a filter paper to obtain a scouring root extract. The nepogin concentration in the Gishigishi root extract concentrate obtained by concentrating a part of the crude Gishigishi root extract under reduced pressure was 2.8 wt%.
  • a supernatant (2) containing an alkaline lysate and a precipitate (2) containing a strong alkali insoluble were obtained.
  • the resulting supernatant (2) is mixed with 1 ml of acetic acid and gently shaken to precipitate the solid, and then separated by centrifugation (40 ⁇ 100 rpm, 20 minutes), and the supernatant containing acid lysate (3) and a precipitate (3) containing acid insolubles were obtained.
  • the content of nepodin in the obtained precipitate (3) 25.8 mg was 13.1 mg, and the dry mass concentration of constructivedin in the precipitate (3) was 50.8 wt%.
  • Nepogin-rich Gishigishi raw root extract production method (2) In 1 L of ethanol, 500 g of fresh root of R. japonicus was added and allowed to stand at room temperature for 8 hours to obtain a rough extract of Gishigishi root. The obtained scouring root crude extract was suction filtered using a diaphragm pump and a filter bottle to obtain a scouring root extract.
  • the obtained solid content was added to 150 ml of a 0.1% (w / v) aqueous sodium hydrogen carbonate solution and stirred to obtain a suspension.
  • the resulting suspension was separated by centrifugation (4,000 rpm, 10 minutes) to obtain a supernatant (1) and a precipitate (1).
  • the obtained precipitate (1) was added to 150 ml of 0.1% (w / v) aqueous sodium hydroxide solution, stirred, and then separated by centrifugation (4,000 rpm, 30 minutes). 2) and a precipitate (2) were obtained.
  • the resulting supernatant (2) is neutralized by adding an appropriate amount of acetic acid to precipitate a solid, and then separated by centrifugation (4,000 rpm, 10 minutes), and the supernatant (3) and the precipitate are separated.
  • a product (3) was obtained.
  • the amount of the dried precipitate (3) was 556 mg. Further, the concentration of nepogin in the dried precipitate (3) was 41.4 wt%.
  • Example 4 Method for producing Nepodin-rich Goshigishi raw root extract (3)
  • 500 g of fresh root of R. obtusifolius was added and allowed to stand at room temperature for 8 hours to obtain a rough extract of stigmatism .
  • the obtained scouring root crude extract was suction filtered using a diaphragm pump and a filter bottle to obtain a scouring root extract.
  • the obtained solid content was added to 100 ml of 0.1% (w / v) aqueous sodium hydrogen carbonate solution and stirred to obtain a suspension.
  • the resulting suspension was separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes) to obtain a supernatant (1) and a precipitate (1).
  • the obtained precipitate (1) was added to 200 ml of 0.1% (w / v) aqueous sodium hydroxide solution, stirred, and then separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes). 2) and a precipitate (2) were obtained.
  • the resulting supernatant (2) is neutralized by adding an appropriate amount of acetic acid to precipitate a solid, and then separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes), and the supernatant (3) is precipitated.
  • a product (3) was obtained.
  • the amount of the dried precipitate (3) was 241.3 mg.
  • the concentration of nepodin in the dried precipitate (3) was 40.5 wt%. The results are shown in Table 1.
  • the weight of the Ezonogishigishi root extract is calculated by concentrating part of the solution.
  • Example 5 Method for producing Nepodin-rich Gishigishi dried root extract (1)
  • the roots of R. obtusifolius were dried with hot air at 40 ° C. for 8 hours to obtain dried roots of R. obtusifolius.
  • 170 g of dried root of Ezonogishigishi was added to 1 L of ethanol, and allowed to stand at room temperature for 8 hours to obtain a crude extract of Gishigishi root.
  • the obtained scouring root crude extract was suction filtered using a diaphragm pump and a filter bottle to obtain a scouring root extract.
  • the obtained solid content was added to 100 ml of 0.1% (w / v) aqueous sodium hydrogen carbonate solution and stirred to obtain a suspension.
  • the resulting suspension was separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes) to obtain a supernatant (1) and a precipitate (1).
  • the obtained precipitate (1) was added to 200 ml of 0.1% (w / v) aqueous sodium hydroxide solution, stirred, and then separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes). 2) and a precipitate (2) were obtained.
  • the resulting supernatant (2) is neutralized by adding an appropriate amount of acetic acid to precipitate a solid, and then separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes), and the supernatant (3) is precipitated.
  • a product (3) was obtained.
  • the amount of the dried precipitate (3) was 128.4 mg.
  • the concentration of nepodin in the dried precipitate (3) was 22.7 wt%. The results are shown in Table 2.
  • the weight of the Ezonogishigishi root extract is calculated by concentrating part of the solution.
  • Rigid root (wet) 50 g was extracted with 100% ethanol at room temperature, 40 ° C., 60 ° C. or 80 ° C. Table 4 below shows the extract weight, content and content.
  • Example 7 Production method of dried root extract with high content of nepodin (2)] 500 g of the root of R. obtusifolius was cut with a garden shredder (“GS-2010”, RYOBI), and then dried with hot air at 40 ° C. for 24 hours to obtain 100 g of dried stigma root. Next, dried borage root was added to 1 L of ethanol, and allowed to stand at room temperature for 8 hours to obtain a burrow root crude extract. The obtained scouring root crude extract was suction filtered using a diaphragm pump and a filter bottle to obtain a scouring root extract.
  • GS-2010 garden shredder
  • RYOBI RYOBI
  • the obtained solid content was added to 100 ml of 0.1% (w / v) aqueous sodium hydrogen carbonate solution and stirred to obtain a suspension.
  • the resulting suspension was separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes) to obtain a supernatant (1) and a precipitate (1).
  • the obtained precipitate (1) was added to 200 ml of 0.1% (w / v) aqueous sodium hydroxide solution, stirred, and then separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes). 2) and a precipitate (2) were obtained.
  • the resulting supernatant (2) is neutralized by adding an appropriate amount of acetic acid to precipitate a solid, and then separated by centrifugation (7,500 rpm, 10 minutes), and the supernatant (3) is precipitated.
  • a product (3) was obtained.
  • the amount of the dried precipitate (3) was 52 mg.
  • the concentration of nepodin in the dried precipitate (3) was 39.6 wt%. The results are shown in Table 5.
  • the weight of the Ezonogishigishi root extract is calculated by concentrating part of the solution.
  • the fatty acid complex was contained in about 30%, among which the nepodin analog (8%; nakahalene) and anthraquinone represented by the following formula (2) (5%; emodin, chrysophanol, physcion).
  • the solid content of the crude extract of borage root ethanol extracted with ethanol is further treated with water, a weak alkali, a strong alkali and an acid, so that a high concentration of narcissus root containing nepodin at a high concentration is obtained.
  • An extract was obtained.
  • the obtained Nepodin-rich burrow root extract contains constructivedin at a concentration several times higher than the previous burrow root ethanol crude extract, and is therefore useful as a nepodin-containing material derived from natural products. It is useful in producing economically advantageous.
  • the present invention is useful in the field of pharmaceuticals and quasi-drugs.
  • the present invention provides symptoms by activating AMPK such as a glucose tolerance improving agent, a blood lipid level reducing agent, and a preventive and / or therapeutic agent for metabolic syndrome. This is useful in that it can produce an active ingredient that can be incorporated into drugs and quasi drugs for diseases that can be improved.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本発明の目的は、従来技術と比較して、工業的規模での実施が容易でありながら、ネポジンを高濃度で含有し、かつ、夾雑物の混入量が少ないネポジン含有抽出物を製造する方法を提供することにある。 上記目的は、以下の工程（１）～（５）を含む、ネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法により解決される。 （１）ギシギシの根を、ネポジン可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物を得る工程 （２）前記ギシギシ粗抽出物を、加水処理及び／又は濃縮処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物固形分を得る工程 （３）前記ギシギシ粗抽出物固形分を、弱アルカリ処理に供することにより、弱アルカリ不溶解物を得る工程 （４）前記弱アルカリ不溶解物を、強アルカリ処理に供することにより、強アルカリ溶解物を得る工程 （５）前記強アルカリ溶解物を、中和処理に供することにより、ネポジン含有ギシギシ抽出物を得る工程

Description

ネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物 関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年３月３１日出願の日本特願２０１６－０７１１６５号の優先権を主張し、その全記載は、ここに開示として援用される。
本発明は、ギシギシを用いたネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物に関する。
ネポジン（ＣＡＳ登録番号：３７８５－２４－８）は、ムシジンやジアネリジンとも呼ばれており、下記式（１）で表わされる構造を有している。ネポジンは、耐糖能改善作用、血中脂質濃度改善作用、メタボリックシンドローム改善作用といった、５’アデノシン１リン酸活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）を活性化することにより諸症状を改善する薬理作用を有することが知られている（下記特許文献１を参照、該文献の全記載はここに開示として援用される）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
 　（１）
ネポジンを含有する天然物として、タデ科スイバ属（Ｒｕｍｅｘ）の多年草である、ギシギシが知られている。このようなギシギシとしては、ギシギシ（Ｒ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、ナガバギシギシ（Ｒ．ｃｒｉｓｐｕｓ）、エゾノギシギシ（Ｒ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｕｓ）、コガネギシギシ（Ｒ．ｍａｒｉｔｉｍｕｓ）などが知られている。
ギシギシからネポジンを得る方法としては、ギシギシの根や茎といった根茎を、エタノールや酢酸エチルといったネポジン可溶性である有機溶媒を用いた抽出処理に供する方法が知られている（下記非特許文献１及び２を参照、該文献の全記載はここに開示として援用される）。
特許第５７２７４８１号
Lee, Keyong Ho et al., Archives of Pharmacal Research, 2013, 36(4), pp.430-435 Zhang, Lan-serng et al., Zhongchengyao, 2012, 34(5), pp.892-895
ギシギシに含まれているネポジンは、特許文献１に記載されているような幾つもの薬理作用を有することから、医薬品や医薬部外品の有効成分としての需要が高まりつつある。そこで、ネポジンを含有する天然物の抽出物（以下、ネポジン含有抽出物という。）を効率的に製造する方法があれば、ネポジン含有抽出物を医薬品などの有効成分や添加物として利用することが一層期待される。
しかし、非特許文献１及び２に記載の方法は、例えネポジン含有抽出物を得ることができる方法であったとしても、得られるネポジン含有抽出物はギシギシに由来する脂肪酸などの夾雑物を多量に含有するものであるという問題がある。また、ネポジンの高含有物とするためには、得られたネポジン含有抽出物を濃縮処理に供しなければならないところ、このような濃縮処理は抽出溶媒の量に応じて巨大な設備及び時間を要することから、工業的に実施することが困難であるという問題がある。
そこで、本発明は、従来技術と比較して、工業的規模での実施が容易でありながら、ネポジンを高濃度で含有し、かつ、夾雑物の混入量が少ないネポジン含有抽出物を製造する方法を提供することを、発明が解決しようとする課題とする。
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ギシギシを抽出処理に供することにより得たギシギシ粗抽出物を、加水処理及び／又は濃縮処理に供することにより、ネポジンを含有する固形物が得られることを見出した。また、この固形物を弱アルカリ処理し、さらに強アルカリ処理に供することで、ネポジン含有水溶液が得られ、さらにこのネポジン含有水溶液を中和処理に供することにより、最終的にネポジンを２０～４０ｗｔ％という高濃度で含有しながら、脂肪酸といったギシギシ由来の夾雑物の混入が低減されたネポジン含有ギシギシ抽出物を製造することに成功した。本発明はこのような知見や成功例に基づいて完成された発明である。
したがって、本発明の一態様によれば、以下の工程（１）～（５）を含む、ネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法が提供される。
（１）ギシギシを、ネポジン可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物を得る工程
（２）前記ギシギシ粗抽出物を、加水処理及び／又は濃縮処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物固形分を得る工程
（３）前記ギシギシ粗抽出物固形分を、弱アルカリ処理に供することにより、弱アルカリ不溶解物を得る工程
（４）前記弱アルカリ不溶解物を、強アルカリ処理に供することにより、強アルカリ溶解物を得る工程
（５）前記強アルカリ溶解物を、中和処理に供することにより、ネポジン含有ギシギシ抽出物を得る工程
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記ネポジン可溶性溶媒が、２０～１００％（ｖ／ｖ）エタノールである。
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記弱アルカリ処理は、ｐＨ　８～１０である弱アルカリ性水溶液を用いた弱アルカリ処理である。
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記弱アルカリ処理は、炭酸水素ナトリウムと水とを混合して得られ、かつ、ｐＨ　８～１０である弱アルカリ性水溶液を用いた弱アルカリ処理である。
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記強アルカリ処理は、ｐＨ　１２～１４である強アルカリ性水溶液を用いた強アルカリ処理である。
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記強アルカリ処理は、水酸化ナトリウムと水とを混合して得られ、かつ、ｐＨ　１２～１４である強アルカリ性水溶液を用いた強アルカリ処理である。
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記中和処理は、ｐＨ　１～３である酸性水溶液を用いた中和処理である。
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記中和処理は、酢酸及び塩酸からなる群から選ばれる酸成分と水とを混合して得られ、かつ、ｐＨ　１～３である酸性水溶液を用いた中和処理である。
好ましくは、本発明の一態様の製造方法において、前記ネポジン含有ギシギシ抽出物は、２０～４０ｗｔ％のネポジンを含有するネポジン含有ギシギシ抽出物である。
本発明の別の側面によれば、２０～４０ｗｔ％のネポジンを含有し、かつ、６０ｗｔ％以下の脂肪酸を含有する、ネポジン含有ギシギシ抽出物が提供される。
好ましくは、本発明の一態様のネポジン含有ギシギシ抽出物は、本発明の一態様の製造方法によって得られるネポジン含有ギシギシ抽出物である。
本発明の一態様の製造方法によれば、原則として溶液添加と固液分離とによってなされ、簡便な工程からなる方法であることから、従来技術に比して、工業的規模での実施が容易である方法として、ネポジンを高濃度で含有し、かつ、ギシギシ由来の夾雑物の混入量が少ないネポジン含有ギシギシ抽出物を製造することが可能である。
本発明の一態様のネポジン含有ギシギシ抽出物によれば、ネポジン含有ギシギシ抽出物それ自体又はネポジン含有ギシギシ抽出物から精製して得られる精製ネポジンを有効成分とした、多種多様な医薬品や医薬部外品を製造することができる。その際、本発明の一態様のネポジン含有ギシギシ抽出物又は精製ネポジンは、単独又は他の添加物と共に、医薬品用又は医薬部外品用の粉沫剤、顆粒剤、錠剤、液剤、ペースト剤、カプセル剤、ゲル剤などの種々の形態で提供され得る。
図１は、本発明の一実施態様の製造方法を模式化したフローチャートである。
以下に、本発明についてさらに詳細に説明する。
本発明の一態様の製造方法は、ギシギシ粗抽出物の固形分を弱アルカリ処理、強アルカリ処理及び中和処理に供することにより、ネポジンを高含有するギシギシ抽出物を製造する方法に関する。本発明の第１の態様は、少なくとも以下の工程（１）～（５）を含む。
（１）ギシギシを、ネポジン可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物を得る工程
（２）前記ギシギシ粗抽出物を、加水処理及び／又は濃縮処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物固形分を得る工程
（３）前記ギシギシ粗抽出物固形分を、弱アルカリ処理に供することにより、弱アルカリ不溶解物を得る工程
（４）前記弱アルカリ不溶解物を、強アルカリ処理に供することにより、強アルカリ溶解物を得る工程
（５）前記強アルカリ溶解物を、中和処理に供することにより、ネポジン含有ギシギシ抽出物を得る工程
ギシギシは、通常知られているとおりのタデ科植物の一種であるギシギシであり、例えば、日本全土に分布する多年草であり、路傍や水田の畔などによく見られる雑草として知られている。ギシギシは、初夏に約１ｍの茎を伸ばして、ソバに似た花を鈴なりにつける植物としても知られている。ギシギシは、ネポジンを含有するものであれば特に限定されず、例えば、ギシギシ（Ｒｕｍｅｘ　ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、ナガバギシギシ（Ｒ．ｃｒｉｓｐｕｓ）、エゾノギシギシ（Ｒ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｕｓ）、カラフトノダイオウ（Ｒ．ｇｍｅｌｉｎｉ）、キブネダイオウ（Ｒ．ｎｅｐａｌｅｎｓｉｓ）、Ｒ．ｈａｓｔａｔｕｓ、Ｒ．ａｌｐｉｎｕｓ、スイバ（Ｒ．ａｃｅｔｏｓａ）、Ｒ．ｃｒｉｐｕｓ、Ｒ．ｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌｕｓ、Ｒ．ｐａｔｉｅｎｔｉａ、Ｒ．ｃｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ、Ｒ．ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓなどが挙げられる。
ギシギシは、ネポジンを含有する植物であれば、ギシギシの近縁の植物を包含する。ギシギシの近縁の植物としては、例えば、タデ科植物と近縁の植物であるキキョウラン（Ｄｉａｎｅｌｌａ　ｅｎｓｉｆｏｌｉａ）、Ｄ．ｒｅｖｏｌｕｔａ、Ｄ．ｃａｌｌｉｃａｒｐａ、Ｄ．ｎｉｇｒａ；ホソバキスゲ（Ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｓ　ｍｉｎｏｒ）；リュウゼツラン科植物であるＳｉｍｅｔｈｉｓ　ｂｉｃｏｌｏｒ　Ｋｕｎｔｈ；イソマツ科イソマツ属植物であるＬｉｍｏｎｉｕｍ　ｍｙｒｉａｎｔｈｕｍ；クロウメモドキ科植物であるＲｈａｍｎｕｓ　ｐｒｉｎｏｉｄｅｓ、Ｒ．ｗｉｇｈｔｉｉ、Ｒ．ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ；ヤブコウジ科ツルマンリョウ属植物であるＭｙｒｓｉｎｅ　ａｆｒｉｃａｎａ；その他植物であるＭａｅｓｏｐｓｉｓ　ｅｍｉｎｉｉなどが挙げられるが、これらに限定されない。
ギシギシは、上記したタデ科植物又はタデ科植物と近縁の植物の１種又は２種以上であればよく、上記具体例として挙げた植物の交配種であってもよい。
ギシギシの部位は、ネポジンを含有する部位であれば特に限定されないが、ネポジンの単位質量あたりの含有量が多いことから根であることが好ましい。ギシギシは、根に加えて、茎、葉、花などの他の部位が混入したものであってもよい。
ギシギシの具体的な例は、ギシギシ、カラフトノダイオウ、ナガバギシギシ、キブネダイオウ、エゾノギシギシ、Ｒ．ｈａｓｔａｔｕｓ、Ｄ．ｅｎｓｉｆｏｌｉａ、Ｄ．ｃａｌｌｉｃａｒｐａ（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）、Ｄ．ｎｉｇｒａ、ホソバキスゲ及びＭｙｒｓｉｎｅ　ａｆｒｉｃａｎａの根；Ｒ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓの葉；Ｒ．ｗｉｇｈｔｉｉの樹皮などである。このうち、ギシギシの根は、羊蹄の名で、生薬として使用されてきた実績があることから好ましい。ギシギシの根には、ネポジンに加えて、クリソファノール、エモジン、クリソファノーアンスロン、シュウ酸などが含まれ、抗菌作用や凝血作用などがあることが知られている。
ギシギシは、収穫後直ちに本発明の一態様の製造方法に供することが好ましい。ギシギシを供するまでに時間を要する場合、ギシギシの変質を防ぐために低温貯蔵などの当業者が通常用いる貯蔵手段により貯蔵することが好ましい。
ギシギシは、収穫した後に乾燥処理、粉砕処理、細片化処理又はこれらを組み合わせた処理といった前処理に供したものであってもよい。
例えば、乾燥処理及び粉砕処理を組み合わせることにより、ギシギシを乾燥粉末化することができる。この際、乾燥処理及び粉砕処理は同時に行ってもよく、又はいずれを先に行ってもよいが、作業の簡便性から乾燥処理を先に行った後に粉砕処理を行うことが好ましい。
乾燥処理は特に限定されないが、例えば、ギシギシの水分含量が１０質量％（ｗｔ％）以下、好ましくは５ｗｔ％以下となるように乾燥する処理が挙げられる。乾燥処理は、例えば、天日で乾燥する方法、乾燥機を用いて熱風乾燥、温風乾燥、高圧蒸気乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥、流動乾燥、電磁波乾燥、凍結乾燥などの当業者に公知の任意の方法により行われ得る。加熱による乾燥は、例えば、３０℃～１４０℃、好ましくは４０～１００℃にて加温によりギシギシやネポジンが変質しない温度及び時間で行われ得る。
粉砕処理は特に限定されないが、例えば、クラッシャー、ミル、ブレンダー、石臼などの粉砕用の機器や器具などを用いて、当業者が通常使用する任意の方法により植物体を粉砕する処理が挙げられる。細片化処理は特に限定されないが、例えば、スライス、破砕、細断などの当業者が植物体を細片化する際に通常使用する方法を用いることができる。
本発明の一態様の製造方法では、工程（１）として、収穫直後又は収穫後に貯蔵若しくは前処理したギシギシを、ネポジン可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物を得る。
ネポジン可溶性である溶媒は、ネポジンを溶解することができる溶媒であれば特に限定されず、例えば、ネポジンに易溶性の溶媒、具体的にはエタノールや酢酸エチルなどの有機溶媒やこれらの有機溶媒と水との混合溶媒などが挙げられる。ネポジン可溶性である溶媒として、エタノールと水との混合溶媒を用いる場合、例えば、２０～１００％（ｖ／ｖ）エタノールとすることが好ましい。エタノール濃度が２０％（ｖ／ｖ）未満では抽出効率が悪い可能性がある。抽出効率に加えて、安全性及び工業化の観点からすれば、ネポジン可溶性である溶媒は、２０～８０％（ｖ／ｖ）エタノールがより好ましく、２０～６０％（ｖ／ｖ）エタノールがさらに好ましい。
抽出処理の条件は、ギシギシ中のネポジンが溶媒に溶解するのに適した条件であれば特に限定されず、ギシギシの状態や使用量、ネポジン可溶性溶媒の種類や使用量に応じて適宜設定できる。抽出処理の条件は、例えば、ギシギシとネポジン可溶性溶媒とから得られる処理溶液を適宜サンプリングすることにより、該処理溶液中のネポジンの濃度を確認することにより決定することができる。
抽出処理の具体的条件としては、ギシギシに対して２～２０質量倍の２０～１００％（ｖ／ｖ）エタノールを用いて、１０～８０℃、好ましくは室温～６０℃で、数時間～数日間の条件で実施できるが、これに限定されない。ネポジン抽出液中のネポジンの回収率は特に限定されないが、原料であるギシギシに含まれるネポジンの想定含有量を基準に、５０％以上であることが好ましい。
工程（１）によって得られるギシギシ粗抽出物は、ギシギシに由来する一定量の固形分を含む。そこで、後段の工程（２）の処理効率の観点から、工程（１）によって得たギシギシ粗抽出物を、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段に供して、ギシギシの残渣を取り除いた液体成分として取得することが好ましい。
本発明の一態様の製造方法では、工程（２）として、工程（１）によって得られたギシギシ粗抽出物を、加水処理、濃縮処理又は加水処理及び濃縮処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物固形分を得る。
加水処理は、ギシギシ粗抽出物に水を加えることによりギシギシ粗抽出物における固形分が析出するような条件であれば特に限定されず、例えば、ギシギシ粗抽出物に対して０．１～５倍、好ましくは０．２～０．８倍の水とギシギシ粗抽出物とを接触させて、１０～３０℃、好ましくは室温で、数分間～数時間～数日間、静置又は撹拌することにより実施できる。
濃縮処理は、ギシギシ粗抽出物を通常知られる濃縮手段によってギシギシ粗抽出物における固形分が析出するような条件であれば特に限定されず、例えば、ギシギシ粗抽出物を減圧下又は低温下において、数分間～数時間～数日間静置することにより、ギシギシ粗抽出物における液体成分を揮散させることにより実施できる。濃縮の程度は特に限定されないが、例えば、１／２～１／１０程度にまで減容化すればよく、乾固状態になるまで液体成分を揮散させてもよい。
加水処理及び濃縮処理はいずれか一方又は両方実施することができる。加水処理及び濃縮処理の順番や回数は特に限定されないが、例えば、加水処理の後に濃縮処理を実施することができる。加水処理及び／又は濃縮処理によって得られたギシギシ粗抽出物固形分は、そのままで、又は遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段に供して得られる固形分として、後段の工程に使用される。ギシギシ粗抽出物固形分は、上述した乾燥処理や粉砕処理などに供してもよい。
ギシギシ粗抽出物固形分におけるネポジン濃度（含有量）は特に限定されないが、例えば、ギシギシ粗抽出物固形分の湿質量あたり１０ｗｔ％以上、好ましくは１５ｗｔ％以上である。
本発明の一態様の製造方法では、工程（３）として、工程（２）によって得られたギシギシ粗抽出物固形分を、弱アルカリ処理に供することにより、不溶性のネポジン含有成分として弱アルカリ不溶解物を得る。
ギシギシ粗抽出物固形分を弱アルカリ処理することにより、ギシギシ粗抽出物固形分中の脂肪酸などの夾雑物成分を除去し、ネポジンを高濃度で含有する弱アルカリ不溶解物を得ることができる。
弱アルカリは、ギシギシ粗抽出物固形分中の夾雑物を分解し、かつ、ネポジンを溶解しないものであれば特に限定されず、例えば、炭酸水素ナトリウム、アンモニア水、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウムなどの弱アルカリ成分を水などのネポジン不溶性溶媒に溶解して、ｐＨを７．５～１１、好ましくは８～１０に設定した溶液であることが好ましく、ｐＨを８～１０の間に設定した炭酸水素ナトリウム水溶液であることがより好ましい。弱アルカリ成分の使用濃度は、所定のｐＨになるような濃度であれば、特に限定されない。例えば、炭酸水素ナトリウム水溶液であれば、好ましくは０．０１％～１０％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液であり、より好ましくは０．０５％～０．５％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液である。
弱アルカリ処理は、ギシギシ粗抽出物固形分中の夾雑物を分解して、ネポジンを不溶性成分として析出し得る条件で実施すれば特に限定されず、例えば、ギシギシ粗抽出物固形分と弱アルカリ溶液とを接触させて、懸濁液が得られる程度にまで、１０～３０℃、好ましくは室温で、数分間～数時間～数日間置くことにより実施できる。より短時間に懸濁液を得るために、ギシギシ粗抽出物固形分と弱アルカリとの混合物を撹拌や超音波などの通常知られている懸濁手段に供してもよい。
弱アルカリ処理によって得られる弱アルカリ不溶解物は、液体成分を取り除いた状態、例えば、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段に供して得られる固形分として、後段の工程に使用される。弱アルカリ不溶解物は、上述した乾燥処理や粉砕処理などに供してもよい。
本発明の一態様の製造方法では、工程（４）として、工程（３）によって得られた弱アルカリ不溶解物を、強アルカリ処理に供することにより、可溶性のネポジン含有成分として強アルカリ溶解物を得る。
弱アルカリ不溶解物を強アルカリ処理することにより、弱アルカリ不溶解物中のネポジンを溶解して、ネポジンを高濃度で含有する強アルカリ溶解物を得ることができる。なお、弱アルカリ不溶物中には脂肪酸やアントラキノン類が含まれる傾向にある。
強アルカリは、弱アルカリ不溶解物中のネポジンを溶解し得るものであれば特に限定されず、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムなどの強アルカリ成分を水などの溶媒に溶解して、ｐＨを１１．５～１４、好ましくは１２～１４に設定した溶液であることが好ましく、ｐＨを１２～１４の間に設定した水酸化ナトリウム水溶液であることがより好ましい。強アルカリ成分の使用濃度は、所定のｐＨになるような濃度であれば、特に限定されない。例えば、水酸化ナトリウム水溶液であれば、好ましくは０．０１％～１０％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液であり、より好ましくは０．０５％～０．５％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液である。
強アルカリ処理は、弱アルカリ不溶解物中のネポジンを溶解して、ネポジン含有成分として強アルカリ溶解物を得る条件で実施すれば特に限定されず、例えば、弱アルカリ不溶解物と強アルカリ溶液とを接触させて、１０～３０℃、好ましくは室温で、数分間～数時間置くことにより実施できる。より短時間に強アルカリ溶解物を得るために、弱アルカリ不溶解物と強アルカリとの混合物を撹拌や超音波などの通常知られている溶解手段に供してもよい。
強アルカリ処理によって得られる強アルカリ溶解物は、固形分を取り除いた状態、例えば、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段に供して得られる液体成分として、後段の工程に使用される。
本発明の一態様の製造方法では、工程（５）として、工程（４）によって得られた強アルカリ溶解物を、中和処理に供することにより、強アルカリ溶解物を中和して、中性溶液に不溶性の固形分として、ネポジン含有ギシギシ抽出物を得る。
中和処理は、例えば、強アルカリ溶解物を中性付近、好ましくはｐＨ　６～８付近にし得る酸を用いて実施し得る。酸は、通常中和処理に用いられる酸であれば特に限定されず、例えば、酢酸、塩酸、ギ酸、硫酸、リン酸などの無機酸及び有機酸などが挙げられるが、好ましくはｐＨが１～３の酢酸及び塩酸である。酸は、水などのネポジン不溶性溶媒との混合物であってもよい。
中和処理は、強アルカリ溶解物を中和して、ネポジンを不溶性成分として析出し得る条件で実施すれば特に限定されず、例えば、強アルカリ溶解物と酸とを接触させて、懸濁液が得られる程度にまで、１０～３０℃、好ましくは室温で、数分間～数時間～数日間置くことにより実施できる。より短時間に懸濁液を得るために、強アルカリ溶解物と酸との混合物を撹拌や超音波などの通常知られている懸濁手段に供してもよい。
中和処理によって得られるネポジン含有ギシギシ抽出物は、液体成分を取り除いた状態、例えば、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段に供して得られる固形分として得ることが好ましい。
ネポジン含有ギシギシ抽出物は、例えば、経口用組成物又は外用組成物の原料として使用する場合には、水などで洗浄することが好ましい。ネポジン含有ギシギシ抽出物は、精製工程に供してもよい。例えば、採取及び水洗浄したネポジン含有ギシギシ抽出物とネポジン可溶性の溶媒とを混合したものを固液分離することによって、液体成分として不純物が低減されたネポジン含有ギシギシ抽出物を得ることができる。
本発明の一態様の製造方法によって得られるネポジン含有ギシギシ抽出物は、従来技術と比較してネポジンを高濃度で含有するギシギシ由来組成物である。ネポジン含有ギシギシ抽出物におけるネポジン濃度（含有量）は特に限定されないが、例えば、ネポジン含有ギシギシ抽出物の乾燥質量あたり２０ｗｔ％以上、好ましくは３０ｗｔ％以上、より好ましくは４０ｗｔ％以上である。また、ネポジン含有ギシギシ抽出物におけるネポジンの回収率は、例えば、ギシギシ粗抽出物固形分中のネポジン量に対して４０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは６０％以上である。
ネポジン含有抽出物における脂肪酸又はその複合体の量は、例えば、６０ｗｔ％以下が好ましく、４０ｗｔ％以下がより好ましく、約３０ｗｔ％であることがさらに好ましい。また、ネポジン含有抽出物には副生成物が含まれていてもよく、ネポジン類縁体であるｎａｋａｈａｌｅｎｅを１～１５ｗｔ％程度、好ましくは１０ｗｔ％以下で含んでもよく、アントラキノン類であるｅｍｏｄｉｎ、ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ、ｐｈｙｓｃｉｏｎなどを１～１０ｗｔ％程度、好ましくは８ｗｔ％以下で含んでもよい。
本発明の一態様の製造方法は、本発明の課題を解決し得る限り、上記した工程の前段若しくは後段又は工程中に、種々の工程や操作を加入することができる。
以下に、本発明の一態様の製造方法の具体的態様として、図１を参照して、ギシギシの根を原料として、ネポジンを高濃度で含有するギシギシ抽出物を製造する方法を説明するが、本発明の一態様の製造方法は以下のものに限定されない。
花茎が枯れる頃（７～９月）に掘り上げたギシギシの根から細根を取り除いて日干しにし、充分に乾燥させる。乾燥したギシギシの根１０を粉砕して、所定量を秤量したものに、ギシギシの根に対して２～１０質量倍のエタノールを加えて、室温で５～１５時間静置して、抽出処理３０を実施し、固液分離手段によりギシギシ残渣２０を取り除くことによって、ギシギシ粗抽出物１１を得る。
次いで、得られたギシギシ粗抽出物１１に、ギシギシ粗抽出物１１に対して０．２～０．５倍の水を加え、次いで減圧濃縮に供することにより、加水処理及び濃縮処理３１を実施し、固液分離手段によりギシギシ粗抽出物液体成分２１を取り除くことにより、ギシギシ粗抽出物固形分１２を得る。この際、加水処理及び濃縮処理３１に代えて、加水処理のみ又は濃縮処理のみを実施してもよい。
次いで、得られたギシギシ粗抽出物固形分１２について、０．０５～１％（ｗ／ｖ）弱アルカリ水溶液（ｐＨ　８～１０）を用いて弱アルカリ処理３２を実施し、固液分離手段により弱アルカリ溶解物２２を取り除くことにより、弱アルカリ不溶解物１３を得る。
次いで、得られた弱アルカリ不溶解物１３について、０．０５～１％（ｗ／ｖ）強アルカリ水溶液（ｐＨ　１２～１４）を用いて強アルカリ処理３３を実施し、固液分離手段により強アルカリ不溶解物２３を取り除くことにより、強アルカリ溶解物１４を得る。
次いで、得られた強アルカリ溶解物１４について、酸（ｐＨ　１～３）を用いて、溶液のｐＨが７～８になるように中和処理３４を実施し、固液分離手段により中和溶液溶解物２４を取り除くことにより、ネポジン含有ギシギシ抽出物１５を得る。
本発明の一態様の製造方法で製造されるネポジン含有ギシギシ抽出物は、別の態様として、本発明に包含され得る。本発明の一態様のネポジン含有ギシギシ抽出物は、本発明の一態様の製造方法で製造され、かつ、従来技術に比してネポジンを高濃度で含有するギシギシ由来組成物であれば特に限定されないが、例えば、経口用組成物又は外用組成物の原料として適用することによる製品製造の際のコストの点から、ネポジン含有ギシギシ抽出物の乾燥質量あたりのネポジンの含有量は、好ましくは２０ｗｔ％以上であり、より好ましくは３０ｗｔ％以上であり、さらに好ましくは４０ｗｔ％以上である。
本発明の一態様のネポジン含有ギシギシ抽出物の用途は特に限定されず、例えば、ネポジンが有する耐糖能改善作用、血中脂質濃度改善作用、メタボリックシンドローム改善作用といった、ＡＭＰＫを活性化することにより諸症状を改善する薬理作用を期待して、飲食品や医薬品といった経口用組成物、化粧品といった外用組成物などの各組成物の原料又は該組成物そのものとして利用され得る。本発明の一態様のネポジン含有ギシギシ抽出物におけるネポジンの含有量は、後述する実施例に記載の方法によって測定され得る。
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。
［例１．ネポジンの測定方法］
ネポジンの含有量（ｍｇ）は、カラムとしてＣＯＳＭＯＳＩＬ　５Ｃ１８－ＡＲ－２カラム及び移動相としてＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ＝７０：３０　０．１％ＴＦＡを用いて、流速１ｍｌ／ｍｉｎ、測定波長２２５．０ｎｍに設定して、約１１～１２分のリテンション・タイムを有するピークとして検量線法により測定した。
［例２．ネポジン高含有ギシギシ生根抽出物の製造方法（１）］
エタノール　２．５Ｌの中にギシギシ（Ｒ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）の生根　５００ｇを加え、室温で、９時間静置して、ギシギシ根粗抽出物を得た。得られたギシギシ根粗抽出物をろ紙を用いて吸引ろ過して、ギシギシ根粗抽出液を得た。ギシギシ根粗抽出液の一部を減圧濃縮して得られたギシギシ根抽出液濃縮物におけるネポジン濃度は２．８ｗｔ％であった。
ギシギシ根粗抽出液　２．５Ｌに水　１．０Ｌを加え、次いで減圧濃縮によりエタノールを除いたところ、ギシギシ根粗抽出液に含まれていた水不溶物が析出した。析出した水不溶物を遠心分離（４０×１００ｒｐｍ、１０分間）により分離及び回収したところ、水不溶物　３．０ｇ（湿質量）を得た。また、この湿潤状態の水不溶物におけるネポジン濃度は１８．８ｗｔ％であった。
湿潤状態の水不溶物　１０１．１ｍｇを、０．１％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液　１５ｍｌに加えて、超音波を用いて懸濁させた。得られた懸濁物を、遠心分離（４０×１００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、弱アルカリ溶解物を含む上清液（１）と、弱アルカリ不溶物を含む沈殿物（１）とを得た。得られた沈殿物（１）に、０．１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液　１５ｍｌを加えて１時間撹拌処理し、次いで遠心分離（４０×１００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、強アルカリ溶解物を含む上清液（２）と、強アルカリ不溶物を含む沈殿物（２）とを得た。得られた上清液（２）に酢酸　１ｍｌを加えて軽く振り混ぜることにより固形分を析出させ、次いで遠心分離（４０×１００ｒｐｍ、２０分間）により分離して、酸溶解物を含む上清液（３）と、酸不溶物を含む沈殿物（３）とを得た。得られた沈殿物（３）　２５．８ｍｇにおけるネポジンの含有量は１３．１ｍｇであり、沈殿物（３）におけるネポジンの乾燥質量濃度は５０．８ｗｔ％であった。
したがって、最終生成物として、５０．８ｗｔ％のネポジンを含有する、ネポジン高含有ギシギシ根抽出物を得ることができた。また、上記湿潤状態の水不溶物　１０１．１ｍｇ（ネポジン濃度は１８．８ｗｔ％）中のネポジン含有量は１９ｍｇであったことから、最終的に得られたネポジン高含有ギシギシ根抽出物について、中間生成物である上記湿潤状態の水不溶物に対して、６８．９％のネポジンを回収することができた。
［例３．ネポジン高含有ギシギシ生根抽出物の製造方法（２）］
エタノール　１Ｌの中にギシギシ（Ｒ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）の生根　５００ｇを加え、室温で、８時間静置して、ギシギシ根粗抽出物を得た。得られたギシギシ根粗抽出物をダイヤフラムポンプ及びろ過瓶を用いて吸引ろ過して、ギシギシ根粗抽出液を得た。
ギシギシ根粗抽出液が２００ｍＬ程度になるまで減圧濃縮したところ、固形分が析出した。析出した固形分を遠心分離（４，５００ｒｐｍ、３０分間）により分離及び回収した。
得られた固形分を、０．１％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液　１５０ｍｌに加えて撹拌処理をすることにより、懸濁物を得た。得られた懸濁物を遠心分離（４，０００ｒｐｍ、１０分間）して分離することにより、上清液（１）と沈殿物（１）とを得た。得られた沈殿物（１）を０．１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液　１５０ｍｌに加えて撹拌処理し、次いで遠心分離（４，０００ｒｐｍ、３０分間）により分離して、上清液（２）と沈殿物（２）とを得た。得られた上清液（２）に酢酸　適量を加えて中和することにより固形分を析出させ、次いで遠心分離（４，０００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、上清液（３）と沈殿物（３）とを得た。得られた沈殿物（３）を乾燥させたところ、沈殿物（３）の乾燥物の量は５５６ｍｇであった。また、沈殿物（３）の乾燥物のネポジンの濃度は４１．４ｗｔ％であった。
したがって、最終生成物として、４１．４ｗｔ％のネポジンを含有する、ネポジン高含有ギシギシ根抽出物を得ることができた。
［例４．ネポジン高含有ギシギシ生根抽出物の製造方法（３）］
エタノール　１Ｌの中にエゾノギシギシ（Ｒ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｕｓ）の生根　５００ｇを加え、室温で、８時間静置して、ギシギシ根粗抽出物を得た。得られたギシギシ根粗抽出物をダイヤフラムポンプ及びろ過瓶を用いて吸引ろ過して、ギシギシ根粗抽出液を得た。
ギシギシ根粗抽出液に水　５００ｍｌを加え、３００ｍＬ程度になるまで減圧濃縮したところ、固形分が析出した。析出した固形分を遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離及び回収した。
得られた固形分を、０．１％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液　１００ｍｌに加えて撹拌処理をすることにより、懸濁物を得た。得られた懸濁物を遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）して分離することにより、上清液（１）と沈殿物（１）とを得た。得られた沈殿物（１）を０．１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液　２００ｍｌに加えて撹拌処理し、次いで遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、上清液（２）と沈殿物（２）とを得た。得られた上清液（２）に酢酸　適量を加えて中和することにより固形分を析出させ、次いで遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、上清液（３）と沈殿物（３）とを得た。得られた沈殿物（３）を乾燥させたところ、沈殿物（３）の乾燥物の量は２４１．３ｍｇであった。また、沈殿物（３）の乾燥物のネポジンの濃度は４０．５ｗｔ％であった。結果を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
 ※エゾノギシギシ根粗抽出液の重量は溶液の一部を濃縮して算出。
したがって、最終生成物として、４０．５ｗｔ％のネポジンを含有する、ネポジン高含有ギシギシ根抽出物を得ることができた。
［例５．ネポジン高含有ギシギシ乾燥根抽出物の製造方法（１）］
エゾノギシギシ（Ｒ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｕｓ）の根を熱風により４０℃で８時間乾燥してエゾノギシギシ乾燥根を得た。次いで、エタノール　１Ｌの中にエゾノギシギシの乾燥根　１７０ｇを加え、室温で、８時間静置して、ギシギシ根粗抽出物を得た。得られたギシギシ根粗抽出物をダイヤフラムポンプ及びろ過瓶を用いて吸引ろ過して、ギシギシ根粗抽出液を得た。
ギシギシ根粗抽出液に水　５００ｍＬを加え、３００ｍＬ程度になるまで減圧濃縮したところ、固形分が析出した。析出した固形分を遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離及び回収した。
得られた固形分を、０．１％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液　１００ｍｌに加えて撹拌処理をすることにより、懸濁物を得た。得られた懸濁物を遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）して分離することにより、上清液（１）と沈殿物（１）とを得た。得られた沈殿物（１）を０．１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液　２００ｍｌに加えて撹拌処理し、次いで遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、上清液（２）と沈殿物（２）とを得た。得られた上清液（２）に酢酸　適量を加えて中和することにより固形分を析出させ、次いで遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、上清液（３）と沈殿物（３）とを得た。得られた沈殿物（３）を乾燥させたところ、沈殿物（３）の乾燥物の量は１２８．４ｍｇであった。また、沈殿物（３）の乾燥物のネポジンの濃度は２２．７ｗｔ％であった。結果を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 ※エゾノギシギシ根粗抽出液の重量は溶液の一部を濃縮して算出。
したがって、最終生成物として、２２．７ｗｔ％のネポジンを含有する、ネポジン高含有ギシギシ根抽出物を得ることができた。
［例６．ギシギシ乾燥物の抽出評価］
ギシギシ（Ｒ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）の低温真空乾燥物　５０ｇを１００％エタノール、８０％エタノール又は６０％エタノール　５００ｍｌのいずれかにより、室温で抽出した。下記表３に抽出物重量、含有率及び含有量を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
表３が示すとおり、エタノール濃度が高いほど、ギシギシ乾燥根抽出物におけるネポジン含有率が高かった。
ギシギシ根（湿潤）　５０ｇを１００％エタノールにより、室温、４０℃、６０℃又は８０℃で抽出した。下記表４に抽出物重量、含有率及び含有量を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
表４が示すとおり、室温～６０℃において、ギシギシ生根抽出物におけるネポジン含有率が高かった。
［例７．ネポジン高含有ギシギシ乾燥根抽出物の製造方法（２）］
エゾノギシギシ（Ｒ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｕｓ）の根　５００ｇを、ガーデンシュレッダ（「ＧＳ－２０１０」、ＲＹＯＢＩ社）で切断し、次いで４０℃で２４時間温風乾燥を行ない、１００ｇの乾燥ギシギシ根を得た。次いで、エタノール　１Ｌの中に乾燥ギシギシ根を加え、室温で、８時間静置して、ギシギシ根粗抽出物を得た。得られたギシギシ根粗抽出物をダイヤフラムポンプ及びろ過瓶を用いて吸引ろ過して、ギシギシ根粗抽出液を得た。
ギシギシ根粗抽出液に水　５００ｍＬを加え、３００ｍＬ程度になるまで減圧濃縮したところ、固形分が析出した。析出した固形分を遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離及び回収した。
得られた固形分を、０．１％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液　１００ｍｌに加えて撹拌処理をすることにより、懸濁物を得た。得られた懸濁物を遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）して分離することにより、上清液（１）と沈殿物（１）とを得た。得られた沈殿物（１）を０．１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液　２００ｍｌに加えて撹拌処理し、次いで遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、上清液（２）と沈殿物（２）とを得た。得られた上清液（２）に酢酸　適量を加えて中和することにより固形分を析出させ、次いで遠心分離（７，５００ｒｐｍ、１０分間）により分離して、上清液（３）と沈殿物（３）とを得た。得られた沈殿物（３）を乾燥させたところ、沈殿物（３）の乾燥物の量は５２ｍｇであった。また、沈殿物（３）の乾燥物のネポジンの濃度は３９．６ｗｔ％であった。結果を表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
 ※エゾノギシギシ根粗抽出液の重量は溶液の一部を濃縮して算出。
したがって、最終生成物として、３９．６ｗｔ％のネポジンを含有する、ネポジン高含有ギシギシ根抽出物を得ることができた。
ネポジン高含有ギシギシ根抽出物における副成分を同定したところ、脂肪酸複合体は約３０％含まれており、その中には下記式（２）に示すネポジンの類縁体（８％；ｎａｋａｈａｌｅｎｅ）及びアントラキノン類（５％；ｅｍｏｄｉｎ、ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ、ｐｈｙｓｃｉｏｎ）が含まれていた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
 （２）
以上のようにして、エタノールを用いて抽出したギシギシ根エタノール粗抽出物の固形分をさらに水、弱アルカリ、強アルカリ及び酸で処理することにより、ネポジンを高濃度に含有するネポジン高含有ギシギシ根抽出物を得た。得られたネポジン高含有ギシギシ根抽出物は、従前のギシギシ根エタノール粗抽出物よりも数倍高い濃度でネポジンを含有することから、天然物由来のネポジン含有物として有用であり、かつ、ネポジンを経済的有利に製造する際に有用である。
本発明は、医薬品及び医薬部外品の分野で有用であり、特に耐糖能改善剤、血中脂質濃度低下剤、メタボリックシンドロームの予防及び／又は治療剤といった、ＡＭＰＫを活性化することにより症状を改善することができる疾患に対する医薬品や医薬部外品に配合できる有効成分を製造できる点で有用である。
１０　ギシギシの根
１１　ギシギシ粗抽出物
１２　ギシギシ粗抽出物固形分
１３　弱アルカリ不溶解物
１４　強アルカリ溶解物
１５　ネポジン含有ギシギシ抽出物
２０　ギシギシ残渣
２１　ギシギシ粗抽出物液体成分
２２　弱アルカリ溶解物
２３　弱アルカリ不溶解物
２４　中和溶液溶解物
３０　抽出処理
３１　加水処理及び濃縮処理
３２　弱アルカリ処理
３３　強アルカリ処理
３４　中和処理

Claims (10)

  1. 以下の工程（１）～（５）を含む、ネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
    （１）ギシギシを、ネポジン可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物を得る工程
    （２）前記ギシギシ粗抽出物を、加水処理及び／又は濃縮処理に供することにより、ギシギシ粗抽出物固形分を得る工程
    （３）前記ギシギシ粗抽出物固形分を、弱アルカリ処理に供することにより、弱アルカリ不溶解物を得る工程
    （４）前記弱アルカリ不溶解物を、強アルカリ処理に供することにより、強アルカリ溶解物を得る工程
    （５）前記強アルカリ溶解物を、中和処理に供することにより、ネポジン含有ギシギシ抽出物を得る工程
  2. 前記ネポジン可溶性溶媒が、２０～１００％（ｖ／ｖ）エタノールである、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  3. 前記弱アルカリ処理は、ｐＨ　８～１０である弱アルカリ性水溶液を用いた弱アルカリ処理である、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  4. 前記弱アルカリ処理は、炭酸水素ナトリウムと水とを混合して得られ、かつ、ｐＨ　８～１０である弱アルカリ性水溶液を用いた弱アルカリ処理である、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  5. 前記強アルカリ処理は、ｐＨ　１２～１４である強アルカリ性水溶液を用いた強アルカリ処理である、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  6. 前記強アルカリ処理は、水酸化ナトリウムと水とを混合して得られ、かつ、ｐＨ　１２～１４である強アルカリ性水溶液を用いた強アルカリ処理である、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  7. 前記中和処理は、ｐＨ　１～３である酸性水溶液を用いた中和処理である、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  8. 前記中和処理は、酢酸及び塩酸からなる群から選ばれる酸成分と水とを混合して得られ、かつ、ｐＨ　１～３である酸性水溶液を用いた中和処理である、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  9. 前記ネポジン含有ギシギシ抽出物は、２０～４０ｗｔ％のネポジンを含有するネポジン含有ギシギシ抽出物である、請求項１に記載のネポジン含有ギシギシ抽出物の製造方法。
  10. 請求項１～９のいずれか１項に記載の製造方法によって得られる、２０～４０ｗｔ％のネポジンを含有し、かつ、６０ｗｔ％以下の脂肪酸を含有する、ネポジン含有ギシギシ抽出物。

     
PCT/JP2017/006435 2016-03-31 2017-02-21 ネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物 Ceased WO2017169311A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16/089,370 US10500242B2 (en) 2016-03-31 2017-02-21 Method of producing high-nepodin-containing rumex plant extract and high-nepodin-containing rumex plant extract
CN201780020679.2A CN108883144A (zh) 2016-03-31 2017-02-21 含有高浓度酸模素的酸模属植物提取物的制造方法和含有高浓度酸模素的酸模属植物提取物
JP2018508585A JP6876679B2 (ja) 2016-03-31 2017-02-21 ネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物
EP17773859.8A EP3437648A4 (en) 2016-03-31 2017-02-21 METHOD FOR PRODUCING A NEPODINOUS EXTRACT FROM AMPFER AND NEPODINE EXTRACT FROM AMP

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016-071165 2016-03-31
JP2016071165 2016-03-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017169311A1 true WO2017169311A1 (ja) 2017-10-05

Family

ID=59963066

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2017/006435 Ceased WO2017169311A1 (ja) 2016-03-31 2017-02-21 ネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物

Country Status (5)

Country Link
US (1) US10500242B2 (ja)
EP (1) EP3437648A4 (ja)
JP (1) JP6876679B2 (ja)
CN (1) CN108883144A (ja)
WO (1) WO2017169311A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019009354A1 (ja) * 2017-07-05 2019-01-10 株式会社沖縄リサーチセンター 排尿障害改善用組成物
JP2022127020A (ja) * 2021-02-19 2022-08-31 合同会社天然資源研究開発センター 高純度月桃抽出物及びその製造方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5356310A (en) * 1976-10-30 1978-05-22 Nippon Zoki Pharmaceutical Co Extraction of naphthalin derivative from polygonum and antibacterial medicine for external use of naphthalin derivative

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5166375A (en) * 1990-08-09 1992-11-24 Nippon Oil And Fats Company, Limited Antioxidant and an oxidation resistant polyunsaturated oil
CN101967088A (zh) * 2010-06-28 2011-02-09 南京泽朗医药科技有限公司 一种酸模素的提取纯化方法
WO2012014524A1 (ja) 2010-07-30 2012-02-02 株式会社エリナ 糖代謝改善用組成物及びその組成物を含有する医薬製剤

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5356310A (en) * 1976-10-30 1978-05-22 Nippon Zoki Pharmaceutical Co Extraction of naphthalin derivative from polygonum and antibacterial medicine for external use of naphthalin derivative

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP3437648A4 *
TSUTOMU ODANI ET AL.: "Studies on the Antifungal Substance of Crude Drug. I : The Root of Rumex japonicus HOUTT", THE JAPANESE JOURNAL OF PHARMACOGNOSY, vol. 31, no. 2, 1977, pages 151 - 154, XP009514837, ISSN: 0037-4377 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019009354A1 (ja) * 2017-07-05 2019-01-10 株式会社沖縄リサーチセンター 排尿障害改善用組成物
JP2022127020A (ja) * 2021-02-19 2022-08-31 合同会社天然資源研究開発センター 高純度月桃抽出物及びその製造方法
JP7727960B2 (ja) 2021-02-19 2025-08-22 合同会社天然資源研究開発センター 高純度月桃抽出物及びその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20190105363A1 (en) 2019-04-11
JPWO2017169311A1 (ja) 2019-02-07
JP6876679B2 (ja) 2021-05-26
US10500242B2 (en) 2019-12-10
EP3437648A1 (en) 2019-02-06
CN108883144A (zh) 2018-11-23
EP3437648A4 (en) 2019-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5795444B2 (ja) マイクロ波化学処理に基づく高等植物及び真菌の多糖類抽出方法
CN102405988B (zh) 从磷虾中提取高磷脂含量磷虾油的方法
JP5597136B2 (ja) サポゲニン高含有組成物の製造方法
JPS5852635B2 (ja) 菌が少なく、繊維不含のパンクレアチンを製造する方法
CN106176847B (zh) 一种具有增强抑菌作用的藜麦皂苷及其制备方法
JP2016028104A (ja) 人間およびバイオテクノロジー産業において、ｄｎａウイルスを予防、除去、治療するための、ピクロリザ・クロア抽出物
CN101497642A (zh) 直接从茶籽中提取茶皂素的方法
JP2011148715A (ja) タンパク質のカルボニル化抑制剤及び肌の透明感向上剤
JP5719581B2 (ja) 抗糖化作用剤
WO2017169311A1 (ja) ネポジン高含有ギシギシ抽出物の製造方法及びネポジン高含有ギシギシ抽出物
ES2843877T3 (es) Métodos para producir oligómero de quitina, N-acetilglucosamina, y 1-O-alquil-N-acetilglucosamina
JP2018184394A (ja) トマチジンの製造法
US9125921B2 (en) Picrorhiza extract for prevention, elimination and treatment of infection diseases
WO2017215313A1 (zh) 一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法
RU2283655C1 (ru) Способ получения биологически активных веществ
JP2001010963A (ja) プロポリス粉末組成物及びその製造方法
RU2613294C1 (ru) Способ получения меланина из лузги подсолнечника
WO2023190117A1 (ja) エラグ酸含有組成物の製造方法及びエラグ酸含有組成物
CN103125928B (zh) 一种天麻精的制备方法
JP2005336352A (ja) コンドロイチン硫酸の製造方法
JP2002017274A (ja) プロポリス抽出物の粉末及びその製造方法
RU2038090C1 (ru) Способ получения средства, обладающего антимикробным действием
JP7727960B2 (ja) 高純度月桃抽出物及びその製造方法
JP2019156746A (ja) トリテルペノイド高含有種子抽出物の製造方法及びトリテルペノイド高含有種子抽出物
RU2637646C1 (ru) Способ получения меланина из лузги подсолнечника

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2018508585

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2017773859

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017773859

Country of ref document: EP

Effective date: 20181031

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17773859

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1