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WO2017006962A1 - 血液検査キット及び血液分析方法 - Google Patents

血液検査キット及び血液分析方法 Download PDF

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WO2017006962A1
WO2017006962A1 PCT/JP2016/070007 JP2016070007W WO2017006962A1 WO 2017006962 A1 WO2017006962 A1 WO 2017006962A1 JP 2016070007 W JP2016070007 W JP 2016070007W WO 2017006962 A1 WO2017006962 A1 WO 2017006962A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
blood
component
test kit
sample
diluent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2016/070007
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
山下　清司
中津川　晴康
進 大澤
晋哉 杉本
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Leisure Inc Japan
Fujifilm Corp
Original Assignee
Leisure Inc Japan
Fujifilm Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Leisure Inc Japan, Fujifilm Corp filed Critical Leisure Inc Japan
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Priority to EP16821431.0A priority patent/EP3321676B1/en
Priority to KR1020187000468A priority patent/KR102080417B1/ko
Priority claimed from JP2016133961A external-priority patent/JP6518629B2/ja
Publication of WO2017006962A1 publication Critical patent/WO2017006962A1/ja
Priority to US15/862,700 priority patent/US10823745B2/en
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Ceased legal-status Critical Current

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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/02—Devices for withdrawing samples
    • G01N1/10—Devices for withdrawing samples in the liquid or fluent state
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard

Definitions

  • the present invention relates to a blood test kit and a blood analysis method for analyzing a target component in a blood sample.
  • a general qualified blood sample is collected by a doctor or other qualified person using a syringe to collect blood from the vein, and the subject is self-collected by inserting a blood collection needle into his / her finger or the like. There is blood sampling.
  • Blood collected by general blood collection is transported to a medical institution or inspection in a state of being sealed in a collection container, where it is inspected.
  • a test is performed after blood is separated into blood cells and plasma by a centrifuge at a medical institution or inspection institution.
  • the collected blood is separated into blood cells and plasma by a separation membrane and transported to the examination site in this separated state, where the examination is performed.
  • Patent Document 1 the amount of a component to be analyzed in a sample is measured, and further, the amount of a standard component originally present in the sample other than the above is measured.
  • a quantitative analysis method is described in which the amount of a sample is determined from the known concentrations of the standard components, and the concentration of the analysis target component in the sample is determined from the sample amount and the analysis target component amount.
  • Patent Document 2 describes a method for examining a blood sample collected by self blood collection. Specifically, 1) Prepare a sample for quantification consisting of an unknown volume of a biological sample containing a component to be quantified collected without quantifying the volume and a fixed amount of an aqueous solution containing a fixed amount of an indicator substance.
  • Patent Document 3 describes that a small amount of blood is collected from a human or animal using a blood dilution quantification instrument and is supplied as it is or after dilution to supply a constant amount to another device, container or reagent.
  • Patent Document 4 describes a method of quantifying the concentration of a component to be quantified in a biological sample using the absorbance of an indicator substance in an aqueous solution for dilution.
  • JP 2001-330603 A JP 2003-161729 A JP 2009-128202 A JP 2009-109196 A
  • blood collection is an invasive action that damages the skin, and it may be uncomfortable to stare at the red color of the blood. It is common to want to stop the blood. For these reasons, the amount of blood collected is not always constant and often varies. If the variation in the amount of blood collected is large, the accuracy of the dilution rate will be reduced, so visualization and stabilization of the amount of blood collected is desired.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a blood test kit and a blood analysis method capable of performing a blood test with a small amount of blood with high accuracy by visualizing and stabilizing the blood collection volume.
  • the present inventors include a diluent for diluting the components of the blood sample and at least one transparent container for containing the components of the blood sample and the diluent.
  • the present invention has found that the above-mentioned problems can be solved by providing a scale for measuring the components of the blood sample and the amount of the diluted solution to at least one component included in the blood test kit. It came to complete. That is, according to the present invention, the following inventions are provided.
  • a diluent for diluting the components of the blood sample At least one transparent container for containing a blood sample component and a diluent;
  • a blood test kit comprising: A blood test kit in which a scale for measuring the components of a blood sample and the amount of a diluent is added to at least one component included in the blood test kit.
  • the scale includes at least a scale for measuring the amount of a diluted solution without a blood sample component.
  • the constituent element is at least one transparent container for containing a blood sample component and a diluent.
  • the blood test kit is a blood test kit for analyzing the concentration of a target component in a blood sample component using a standard component that is constantly present in the blood, and the diluent contains the standard component
  • the blood test kit according to any one of (1) to (6).
  • the blood test kit is a blood test kit for analyzing the concentration of a target component in a component of a blood sample using a standard component that is constantly present in blood and verifying the analysis, The blood test kit according to any one of (1) to (6), wherein the diluent does not contain the standard component.
  • the blood test kit according to (7) or (8), wherein the standard component is a component selected from the group consisting of sodium ion, chloride ion, total protein, and albumin.
  • a blood test kit for analyzing a concentration of a target component in a component of a blood sample using a standard component that is not present in blood includes a standard component that is not present in blood
  • the blood test kit according to (10), wherein the standard component not present in blood is glycerol triphosphate or lithium.
  • an amino alcohol compound wherein the diluent is selected from the group consisting of 2-amino-2-methyl-1-propanol, 2-ethylaminoethanol, N-methyl-D-glucamine, diethanolamine, and triethanolamine; 2- [4- (2-hydroxyethyl-1-piperazinyl) ethanesulfonic acid), also referred to as HEPES, N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid, also referred to as TES, 3-morpholinopropane, also referred to as MOPS (1) to (12), which is a diluent containing a buffer selected from the group consisting of sulfonic acid and BES (N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid)
  • a buffer selected from the group consisting of sulfonic acid and BES (N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethane
  • a blood analysis method using a blood test kit comprising a diluent for diluting a component of a blood sample and at least one transparent container for containing the component of the blood sample and the diluent, A step of selecting a component-containing sample of a blood sample of a predetermined amount or more as a sample to be analyzed, and excluding a component-containing sample of a blood sample of less than a predetermined amount from the sample to be analyzed, and a component-containing sample of the selected blood sample
  • a blood analysis method comprising a step of analyzing blood using
  • the blood test kit is the blood test kit according to any one of (1) to (13), and using a scale, a component-containing sample of a blood sample of a predetermined amount or more determined in advance is selected.
  • (17) The dilution rate of the blood sample component is calculated by the following equation 1, and the concentration of the analysis target component in the diluted solution is multiplied by the dilution rate to analyze the concentration of the target component in the blood sample component.
  • Formula 1 (A + C) / (B + D)
  • A represents the measured absorbance of the diluted solution containing the internal standard substance
  • B represents the absorbance obtained by subtracting the absorbance of the diluted solution obtained by diluting the blood sample component from A
  • C represents sodium ion as a homeostatic substance.
  • the measured absorbance at a concentration of 142 mmol / L is shown
  • D is the absorbance of sodium ions in a diluted solution obtained by diluting a blood sample component.
  • the blood analysis method according to any one of (14) to (17), wherein analysis is performed using blood of 10 ⁇ L or more and 70 ⁇ L or less.
  • a blood test with a very small amount of blood can be performed with high accuracy by visualizing and stabilizing the amount of blood collected.
  • FIG. 1 shows an example of the configuration of a container for containing a plasma component collected from a diluted blood sample.
  • FIG. 2 shows a conceptual diagram of the bottle and cylinder scales during plasma separation and sealing.
  • FIG. 3 shows an example of the shape of the container and the position of the scale.
  • FIG. 4 shows an example of the shape of the container and the position of the scale.
  • FIG. 5 shows an example of the shape of the container and the position of the scale.
  • FIG. 6 shows the linearity of the sodium enzymatic assay.
  • a standard component that is constantly present in blood is called an external standard substance or external standard.
  • a standard component that does not exist in blood is called an internal standard substance or internal standard.
  • blood from patients or examiners is collected from veins and examined at medical institutions or examination sites.
  • it is necessary to wait for a long time, and it may be a burden for a child to collect blood from a vein.
  • including movement for examination requires more than half a day, which may be inconvenient for the patient or examiner.
  • a patient or an examiner collects a small amount of blood at home or in a laboratory, and stably stores and transports it.
  • Patent Document 1 has a problem in that the amount of collected blood varies, and when the collected blood has a high dilution rate, there is a problem in that the analysis accuracy decreases and results vary, and the blood is agglomerated. There is also a problem that the stability of the analysis target component is not guaranteed due to solidification. In addition, it is necessary to add NaOH, NaCl or HCl to the buffer solution for extracting the analysis target component from the dried sample in order to adjust the pH or stabilize the analysis target component. There is a problem that the concentration of sodium ions and chloride ions, which are homeostatic and have little difference between individuals, cannot be used as an external standard for correcting the concentration of the target component.
  • Patent Document 2 discloses a method for diluting a collected trace blood with an internal standard-containing buffer and quantifying the amount of components present in diluted plasma from the dilution factor of the internal standard substance.
  • N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt (HSDA) or Acid Blue 9 (Brilliant Blue FCF) is used as an internal standard substance.
  • HSDA N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline sodium salt
  • Acid Blue 9 Brilliant Blue FCF
  • a method for determining the dilution factor from the absorbance of the HEPES buffer is disclosed.
  • buffering agents and preservatives for stably holding blood are used.
  • Such a formulation has achieved the stability of its components by not coagulating blood, but if the blood collection volume varies and the collection volume is small, the dilution rate of the internal standard substance after dilution The problem is that the reliability of the test accuracy is lowered due to the decrease in the amount of blood and the blood component amount itself.
  • the method of diluting with a buffer solution is a biological component stored in a buffer solution with physiological conditions of pH 7.4 and is excellent in stability during transportation. There was a problem that measurement errors were likely to occur when the dilution rate was small and a small amount of sample was added.
  • Patent Document 1 there is a description of an external standard, but there is no description regarding visualization and stabilization of a blood collection amount.
  • Patent Document 2 describes the internal standard, but does not describe the combined use with the external standard.
  • Patent Document 2 there is no description about removing a highly constant substance such as sodium or potassium, which is preferable as an external standard substance, from a buffer solution used as a diluting solution, and a specific means for achieving this is not described. There is no description.
  • Patent Documents 1 and 2 do not disclose means for quantitatively collecting a very small amount of blood with self-collection with high accuracy.
  • the blood test kit and the blood analysis method of the present invention even when the amount of blood collected is not always constant, the amount of blood collected can be grasped in a container in which blood is diluted and plasma is collected.
  • the accuracy can be further improved by using a method for obtaining a dilution ratio using an internal standard.
  • high-accuracy measurement can be performed by determining the dilution factor and analyzing the measurement target component in a state in which the blood collection amount is within a certain range and the variation in the blood collection amount is small. It was completely unexpected that the structure of the present invention enabled highly accurate blood analysis.
  • the blood test kit and the blood analysis method of the present invention when a patient collects blood by himself / herself, the amount of blood collected from the container in which the blood is diluted and separated into plasma even if the amount of blood collected is not always constant. By knowing, it becomes possible for blood collectors and analysts to predict the result of the dilution ratio within a narrow range, to realize a dilution rate with good reproducibility, and to accurately analyze the measurement target component.
  • the collection of micro blood using the blood test kit of the present invention is not limited in time and place, so it can be applied to cases that do not have time to go to medical institutions, disasters, telemedicine, health care, etc. Because it can be detected early, it can contribute to the reduction of medical costs.
  • test data can be used in a system for daily health management or early detection of disease by, for example, converting it to electronic data and transmitting it to a smartphone.
  • many tests such as 13 biochemical tests, tumor markers, and hepatitis tests can be performed using a very small amount of blood (65 ⁇ L).
  • the blood test kit of the present invention includes a diluent for diluting the components of the blood sample and at least one transparent container for containing the components of the blood sample and the diluent.
  • the scale for measuring the components of the blood sample and the amount of the diluted solution is attached to at least one component included in the blood test kit.
  • the blood test kit of the present invention is for diluting blood collected by a patient and transporting it to a medical institution or testing institution to analyze a component to be measured. Therefore, there is a possibility of being left for a long time from blood collection to analysis. During. It is preferable to prevent decomposition and denaturation of the target component in the diluted blood.
  • the pH of blood is usually kept constant at about pH 7.30 to 7.40 in healthy individuals.
  • the diluent is preferably pH 6.5 to pH 8.0, more preferably pH 7.0 to pH 7.5, and still more preferably pH 7.3 to A buffer solution having a pH of 7.4 and containing a buffer component that suppresses fluctuations in pH is preferable.
  • the types of buffer include acetate buffer (Na), phosphate buffer (Na), citrate buffer (Na), borate buffer (Na), tartrate buffer (Na), Tris (Tris (hydroxy Methyl) aminoethane) buffer (Cl), HEPES ([2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid]) buffer, phosphate buffered saline (Na), etc. are known ing.
  • phosphate buffers, Tris buffers, and HEPES buffers are representative examples of buffers around pH 7.0 to pH 8.0.
  • the phosphate buffer contains a sodium salt of phosphate.
  • the Tris buffer Since the Tris buffer has a dissociated pKa (Ka is an acid dissociation constant) of 8.08, it is usually used in combination with hydrochloric acid in order to have a buffering ability in the vicinity of pH 7.0 to pH 8.0.
  • the pKa of sulfonic acid dissociation of HEPES is 7.55, and a mixture of sodium hydroxide, sodium chloride and HEPES is usually used to prepare a buffer solution with a constant ionic strength.
  • these are useful as buffers having the action of keeping the pH constant, they contain sodium ions or chloride ions, which are preferably used as external standard substances in the present invention. It is not preferable. Therefore, the present inventors have intensively studied and found a new buffer solution that does not contain sodium ions or chloride ions.
  • the diluent containing no sodium ion and chloride ion that can be used in the present invention is preferably 2-amino-2-methyl-1-propanol (AMP), 2-ethylaminoethanol, N-methyl-D-glucamine. , Diethanolamine, and at least one amino alcohol compound selected from the group consisting of triethanolamine, and Good's buffer (Good buffer), which is also referred to as HEPES, which is a buffer having a pKa of around 7.4.
  • AMP 2-amino-2-methyl-1-propanol
  • 2-ethylaminoethanol N-methyl-D-glucamine
  • Diethanolamine and at least one amino alcohol compound selected from the group consisting of triethanolamine
  • Good buffer Good buffer
  • HEPES Good buffer having a pKa of around 7.4.
  • the concentration ratio of amino alcohol and Good's buffer solution is 1: 2 to 2: 1, preferably 1: 1.5 to 1.5: 1, more preferably 1: 1.
  • the concentration of the buffer is not limited, but the concentration of amino alcohol or Good's buffer is 0.1 to 1000 mM / L, preferably 1 to 500 mM / L, and more preferably 10 to 100 mM / L.
  • chelating agents In the buffer solution, chelating agents, surfactants, antibacterial agents, preservatives, coenzymes, saccharides and the like may be contained for the purpose of keeping the components to be analyzed stable.
  • chelating agents include ethylenediaminetetraacetate (EDTA), citrate, and oxalate.
  • surfactant include a cationic surfactant, an anionic surfactant, an amphoteric surfactant, and a nonionic surfactant.
  • the preservative include sodium azide and antibiotics.
  • coenzyme include pyridoxal phosphate, magnesium, zinc and the like.
  • saccharide of the erythrocyte stabilizer examples include mannitol, dextrose, oligosaccharide and the like.
  • by adding antibiotics it is possible to suppress the growth of bacteria partially mixed from the finger surface at the time of hand blood collection, to suppress the degradation of the biological components by bacteria, and to stabilize the biological components.
  • Components diluted with these buffer solutions do not interfere with measurement even when using various biochemical / immunoanalytical analyzers. Furthermore, blood cells do not undergo hemolysis and biological components are as stable as possible even at 37 ° C. It is preferable that it can be stored.
  • the osmotic pressure of the buffer solution is equivalent to that of blood (285 mOsm / kg (mOsm / kg: 1 kg of solution water has By setting the osmotic pressure to the number of millimoles of ions)) or more, hemolysis of blood cells can be prevented.
  • the osmotic pressure can be adjusted to be isotonic with salts, sugars, buffers, etc. that do not affect the measurement of the target component and the measurement of the standard component that is constantly present in the blood.
  • a diluent that does not contain a substance that is constantly present in blood (hereinafter also referred to as a homeostatic substance) used when determining the dilution factor is used. is there.
  • a homeostatic substance a substance that is constantly present in blood
  • does not contain means “does not contain substantially”.
  • substantially free means that the homeostatic substance used when determining the dilution factor is not included at all, or even if it is included, the homeostatic substance in the diluted solution after the blood sample is diluted It means the case where it is contained at a very small concentration that does not affect the measurement of the above.
  • sodium ions or chloride ions are used as the homeostatic substance
  • a diluent that does not substantially contain sodium ions or chloride ions is used as the diluent.
  • the blood test kit of the present invention is a blood test kit for analyzing the concentration of a target component in a blood sample using a standard component that is constantly present in blood, the diluent is the standard component. It is a diluted solution that does not contain.
  • a second example of a diluent for diluting a blood sample component is a diluent containing an internal standard substance.
  • the internal standard substance can be added to a diluent used for diluting a biological sample so as to have a predetermined concentration.
  • the internal standard substance a substance which is not contained in the blood sample at all or is contained in a trace amount even if it is contained can be used.
  • Internal standards include substances that do not interfere with the measurement of target components in blood samples, substances that do not decompose under the action of biological enzymes in blood samples, substances that are stable in dilute solutions, and do not permeate blood cell membranes. It is preferable to use a substance that is not contained in blood cells, a substance that is not adsorbed in the storage container for the diluted solution, or a substance that can use a detection system that can measure with high accuracy.
  • the internal standard substance a substance that is stable even if stored for a long time in a state of being added to a diluent that is a buffer solution is preferable.
  • Examples of internal standards include glycerol triphosphate, Li, Rb, Cs, or Fr as alkali metals, and Sr, Ba, or Ra as alkaline earth metals, among which glycerol triphosphate Or Li is preferable.
  • These internal standard samples are colored by adding a second reagent at the time of concentration measurement after blood dilution, and the concentration in diluted blood can be determined from the color density.
  • the measurement of the internal standard substance of lithium added to the buffer solution uses a chelate colorimetric method (halogenated porphyrin chelate method: perfluoro-5,10,15,20-tetraphenyl-21H, 23H-porphyrin).
  • a biochemical automatic analyzer a lot of samples can be easily measured.
  • the blood test kit of the present invention is a blood test kit for analyzing the concentration of a target component in a blood sample using a standard component that is not present in blood, the diluent is present in the blood. This is a diluted solution containing standard components that do not.
  • a third example of a diluent for diluting a blood sample is a diluent that does not contain a standard component that is constantly present in the blood used when determining the dilution factor, and that contains an internal standard substance. .
  • Transparent container for storing blood sample components and diluent and other components The shape and size of the transparent container for storing blood sample components and diluent are not particularly limited.
  • the term “transparent” as used in the present invention is not limited as long as the observer can confirm the amount of liquid inside, and is a concept including translucency.
  • the material of the container is preferably a synthetic resin from the viewpoint of resistance to breakage, hygiene, and price.
  • polyethylene polypropylene, polyvinyl chloride, polyvinylidene chloride, polystyrene, polyvinyl acetate, polyurethane, polyethylene terephthalate, polylactic acid, acrylonitrile butadiene styrene resin (ABS resin), acrylonitrile styrene resin (AS resin), acrylic resin (PMMA) , Polycarbonate, silicone resin, silicone rubber and the like.
  • ABS resin acrylonitrile butadiene styrene resin
  • AS resin acrylonitrile styrene resin
  • PMMA acrylic resin
  • Polycarbonate silicone resin, silicone rubber and the like.
  • a diluent for diluting a component of a blood sample a first storage device containing the diluent, and plasma for separating and collecting plasma from a blood sample diluted with the diluent Separation device as a separation means, a holding device for holding the separation device, a second storage device for storing the collected plasma, and a seal for maintaining the stored plasma in the second storage device Instruments, needles that hurt the skin and allow blood to bleed out of the skin, lancets, adhesive bandages or disinfecting materials (eg, non-woven fabric impregnated with isopropanol (70% by mass isopropanol) or ethanol), handling Instructions etc. can be provided.
  • a separation means for recovering plasma components from a diluted blood sample an embodiment that is a separation membrane is preferable, and a filter having pores that can separate blood cell components is more preferable.
  • an embodiment in which a plasma component separated from a blood sample by a separation means is used as the blood sample component is preferable.
  • the first storage device and the second storage device may be used as a first storage device and a second storage device, or may be provided with separate devices.
  • the first storage device and the second storage device The instrument is preferably made of a transparent material.
  • the holding device for holding the separation device is a gasket
  • the sealing device when the storage device is a tube-shaped device, a cap that can cover the opening, a cover having a spiral groove, or a rubber plug is used. can do.
  • the blood component stability and the fluctuation of the component due to hemolysis from the blood cell are reduced by providing the blood and diluent mixture container with the function of immediately separating plasma blood cells after diluting the blood with the diluent.
  • the influence can be eliminated and the stability of the sample after blood collection can be imparted.
  • a first storage device containing a diluent containing a blood sample diluted with the diluent
  • a holding device for holding the separation device for holding the separation device
  • a first device for containing the collected plasma are described, for example, in FIGS. 1 to 13 of Japanese Patent No. 3597827. Can be used.
  • FIG. 1 of Japanese Patent No. 3597827 is incorporated as FIG. 1 of the present application.
  • the blood separation instrument 1 includes a blood collection container 2 (first accommodation instrument in which a diluent is accommodated), a cylinder 3 (second accommodation instrument for accommodating the collected plasma) that can be inserted into the blood collection container 2, and
  • the cap piston 4 that can be attached to the cylindrical body 3 and a sealing lid 5 (sealing device) provided at the lower end of the cap piston 4, and before use, as shown in FIG.
  • the upper end opening is sealed with a cap 6 via a packing 7.
  • the container for storing the diluted blood sample in the present invention corresponds to the combination of the blood collection container 2 and the cylinder 3 in the configuration of FIG. That is, the container for storing the diluted blood sample may be one or a combination of two or more.
  • the blood collection container 2 is made of a transparent material and has a cylindrical shape.
  • a screw portion 8 is formed on the outer surface of the blood collection container 2 and an engaging portion 9 is projected on the inner surface.
  • an inverted conical bottom portion 10 is formed at the lower end portion of the blood collection container 2, and a cylindrical leg portion 11 is formed around the bottom portion 10.
  • the legs 11 have the same outer diameter as the sample cup used at the time of blood analysis and testing, and preferably, slit grooves 12 are formed in the vertical direction at positions opposite to the lower ends thereof. Further, as shown in FIG. 1, a required amount, for example, a diluted solution 13 of 500 mm 3 may be placed in the blood collection container 2 in advance.
  • the cylindrical body 3 is made of a transparent material and has a cylindrical shape, and an enlarged diameter portion 14 is formed at an upper end portion thereof.
  • the enlarged diameter portion 14 is connected to the main body portion 16 through a thin portion 15.
  • a reduced diameter portion 18 is formed at the lower end of the cylindrical body 3, and a locking projection 19 is formed on the inner surface of the reduced diameter portion 18.
  • the outer flange portion 20 (holding device) is formed at the lower end portion of the reduced diameter portion 18, the lower end opening portion of the outer flange portion 20 is covered with a filtration membrane 21 (separation device), and the filtration membrane 21 is in the blood. It allows passage of plasma and prevents passage of blood cells.
  • a silicon rubber cover 22 is attached to the outer periphery of the reduced diameter portion 18 (FIG. 1).
  • the cap piston 4 includes a substantially cylindrical knob 26 and a mandrel 27 that is concentric with the knob 26 and extends downward.
  • a cylindrical space 28 into which the enlarged diameter portion 14 of the cylindrical body 3 can be fitted is formed at the inner upper end portion of the knob portion 26, and the lower portion thereof is screwed and can be screwed into the screw.
  • the lower end portion 29 of the mandrel portion 27 is formed in a pin shape, and the sealing lid 5 is detachably provided on the lower end portion 29 (see FIG. 1).
  • the sealing lid 5 is made of silicon rubber.
  • a scale for measuring the components of the blood sample and the amount of the diluted solution is given to at least one component included in the blood test kit. From the scale, the blood sampler or the examiner can confirm that the blood collection amount is a certain amount or more.
  • the number of scales may be one, or two or more. For example, when a single scale indicating a certain minimum amount is provided, when two scales indicating a lower limit amount and an upper limit amount are provided, and a lower limit amount, an upper limit amount, and an intermediate standard amount therebetween. For example, it is possible to provide three scales indicating the above. Furthermore, the scales can be given meaning by distinguishing the colors.
  • the scale may include at least a scale for measuring the volume of the diluted solution without the blood sample component.
  • a suitable blood volume and dilution liquid volume can be designed with good reproducibility with respect to the dilution liquid component design.
  • the scale can be applied to any component of the blood test kit as long as the blood sampler or the examiner can confirm that the blood collection amount is a certain amount or more, but the scale is preferably blood. It can be applied to at least one transparent container for containing the components of the specimen and the diluent. When a scale is attached to the transparent container, the scale can be attached so as to sandwich the liquid, and the amount of the liquid can be easily grasped, which is preferable.
  • Examples of the above-described constituent elements in the case where a scale is given to the constituent elements other than the transparent container for storing the blood sample components and the diluent include a mandrel portion of a sealing cap for preventing backflow.
  • the blood test kit stores a bottle (container) containing a diluent for diluting blood, a separation membrane that separates blood into blood cell components and plasma components, a gasket that holds the separation membrane, and a plasma component after separation.
  • a bottle container
  • a configuration having a cylinder will be described. In this configuration, the cylinder is inserted into the bottle without blood sampling and separated, and the increase in liquid volume from the liquid surface is measured with the sealing cap mandrel inserted to prevent backflow of the separated liquid.
  • the scale may be on either.
  • the cylinder when the cylinder is inserted into the bottle, the cylinder will be pushed in until it comes into contact with the bottom of the bottle, but the reference line is marked on both the bottle and the cylinder, and when the cylinder is fully pushed in, each reference By making the line positions coincide, it is possible to prevent the amount of plasma component from being accurately measured due to insufficient push-in.
  • the inner diameter of the transparent container for containing the blood sample components and the diluent is such that the amount of diluted plasma liquid separated after the dilution coincides with the scale position.
  • the inner diameter of the container is preferably 5 mm or less and more preferably about 3 mm in order to increase detection sensitivity.
  • a difference of ⁇ about 14 ⁇ L can be detected if the position of the scale ⁇ 0.5 mm can be visually recognized in the case of 3 mm, and a difference of ⁇ about 40 ⁇ L can be detected in the case of 5 mm.
  • the position accuracy of the scale is ⁇ 1. Even at 0.0 mm, the difference in liquid volume can be detected with an accuracy of about ⁇ 12 ⁇ L due to the volume reduction effect in the cylinder by the mandrel. In such a case, by inserting three or more scale lines with a target liquid volume of ⁇ 1.0 mm, the degree of insufficient liquid volume can be reduced to 12 ⁇ L or less. This is shown in FIG.
  • Fig. 2 shows a conceptual diagram of the bottle and cylinder scales during plasma separation and sealing.
  • one scale 109 is provided for the transparent bottle and three for the transparent cylinder.
  • the scale of the transparent bottle and the middle scale of the transparent cylinder indicate standard amounts.
  • the scale below and the scale above the transparent cylinder indicate the lower limit and the upper limit, respectively.
  • the scale 110 of a dilution liquid shows the scale in the case of only the dilution liquid which is not diluted with plasma. The volume volume increased from this scale corresponds to the volume of the plasma component before dilution.
  • the transparent container When a scale is applied to at least one transparent container for containing a blood sample component and a mixture of diluents, the transparent container has a portion whose internal cross-sectional area is smaller than other portions, and the internal cross-sectional area is the other. It is preferable that a scale is applied to the part smaller than the part. It is more preferable that a scale is given to a portion where the internal cross-sectional area of the transparent container is the smallest.
  • the internal cross-sectional area means a cross-sectional area when the space inside the transparent container is cut along a horizontal plane.
  • the portion having the scale is a portion for accurately measuring the amount of liquid, as described above, the measurement can be performed with high accuracy by providing the scale with the portion having a small internal cross-sectional area.
  • a portion having a small internal cross-sectional area can be provided by providing a portion having a small inner diameter.
  • a part of the cylinder is narrowed and the plasma component amount can be accurately measured by giving a scale to the narrowed part.
  • the constricted part of the cylinder is thick enough to allow the mandrel part to be inserted, and the capacity of the mandrel part is also taken into consideration.
  • it is preferable that a scale is added to the constricted portion so that the plasma component amount can be accurately measured.
  • the inner cross-sectional area is smaller than other parts, and the inner diameter of the thinner part is less than half of the inner diameter that is not thinner. Is preferably provided.
  • FIGS. 3 and 4 A form in which a part of the cylinder is narrowed is shown in FIGS.
  • a scale 202 is given to the thin portion at the top of the cylinder 201.
  • a scale 206 of dilution liquid is provided.
  • FIG. 3 shows a form in which the thickness of the container is smaller than other parts (the thickness of the outer wall of the container is the same)
  • FIG. 3 (a) shows a form in which the thickness of the container changes at a certain part.
  • 3 (b) shows a form in which the thickness of the container changes continuously.
  • FIG. 4 shows a form in which the inner diameter of the container is smaller than other parts (the thickness of the container is the same)
  • FIG. 4 (a) shows a form in which the inner diameter of the container changes at a certain part
  • FIG. ) Shows a form in which the inner diameter of the container continuously changes.
  • a portion having a small internal cross-sectional area can be provided by providing a thick portion in the thickness of the mandrel (FIG. 5).
  • a scale 202 is provided on the upper portion of the cylinder 201.
  • a scale 206 of dilution liquid is provided.
  • the mandrel portion having the backflow prevention valve 203 has a thin portion 204 and a thick portion 205, and a scale is provided at a position corresponding to the thick portion 205.
  • the number of each element included in the blood test kit of the present invention is not particularly limited, and may be one or two or more.
  • the blood test kit of the present invention comprises a diluent for diluting the components of the blood sample, at least one transparent container for containing the components of the blood sample and the diluent, and optionally other components. It can provide as a form accommodated in the storage container which accommodates.
  • the blood analysis method of the present invention includes a diluent for diluting a component of a blood sample, and at least one transparent container for containing the component of the blood sample and the diluent.
  • a blood analysis method using a kit the step of selecting a component-containing sample of a blood sample of a predetermined amount or more determined in advance as a sample to be analyzed and excluding a component-containing sample of a blood sample less than a predetermined amount from the sample to be analyzed And a step of analyzing blood using a component-containing sample of the selected blood sample.
  • the configuration of the blood test kit used in the blood analysis method of the present invention is as described in the above [1] of the present specification, except that the scale for measuring the components of the blood sample and the liquid volume of the diluent is as follows: It may be given to at least one component included in the blood test kit, or may not be given. Preferably, a blood test kit in which a scale is attached to at least one component included in the blood test kit can be used.
  • a blood test kit in which a scale is attached to at least one component included in the blood test kit can be used.
  • the blood analysis method of the present invention may be performed by self-collection in which the subject himself collects blood, or may be performed in general blood collection in which a qualified person such as a doctor collects blood using a syringe. Good.
  • the biological sample to be analyzed is blood
  • blood is a concept including serum or plasma.
  • plasma or serum obtained by collecting a small amount of blood from a subject, diluting with a diluent, and then separating blood cells by a filter or centrifugation can be used.
  • the component of the blood sample is preferably a plasma component separated from the blood sample by the separation means.
  • the origin of the blood sample is not limited to humans, but may be animals other than humans (mammals, birds, fishes, etc.). Examples of animals other than humans include horses, cows, pigs, sheep, goats, dogs, cats, mice, bears, pandas, and the like.
  • the source of the biological sample is human.
  • the patient himself / herself collects the blood that has come out of the skin by damaging a fingertip or the like using an instrument with a knife such as a lancet.
  • the amount of blood collected from the patient used in the analysis method of the present invention is preferably 100 ⁇ L or less, more preferably 10 ⁇ L or more and 70 ⁇ L or less. Even in such a small amount of blood collection region, the present invention allows the blood sampler to recognize that the amount of blood collected is small and compensate / compensate. Even if the amount of blood collected is small, it is possible to know the shortage of blood collected from the blood-diluted and plasma-separated container, and blood can be collected again. Therefore, it is possible to provide a method for measuring an analysis object with high measurement accuracy.
  • a component that is constantly contained in a blood sample is used as a standard component.
  • Specific examples include sodium ion (Na +), chloride ion (Cl ⁇ ), potassium ion (K +), magnesium ion (Mg2 +), calcium ion (Ca2 +), total protein (“TP”), albumin and the like.
  • the concentration of these standard components contained in the blood sample is such that the Na concentration is 134 to 146 mmol / liter (average value: 142 mmol / liter), the Cl concentration is 97 to 107 mmol / liter (average value: 102 mmol / liter), K concentration is 3.2 to 4.8 mmol / liter (average value: 4.0 mmol / liter), Mg concentration is 0.75 to 1.0 mmol / liter (average value: 0.9 mmol / liter), Ca concentration Is 4.2 to 5.1 mmol / liter (average value: 4.65 mmol / liter), the total protein concentration is 6.7 to 8.3 g / 100 mL (average value: 7.5 g / 100 mL), and the albumin concentration is 4.1 to 5.1 g / 100 mL (average value: 4.6 g / 100 mL).
  • a standard present in a high concentration in blood It is preferable to measure the substance, and the standard substance present at a high concentration in the blood is resistant to the influence of contamination even if an unintended component other than blood is mixed into the diluted solution. It is high and it is thought that the fall of inspection accuracy can be controlled.
  • a standard component sodium ion or chloride ion is preferable, and among the standard components that are constantly present in blood, sodium ion having the highest amount in blood is most preferable. Na ion accounts for 90% or more of the total cation in plasma at a standard value (normal value) of 142 mmol / liter.
  • plasma is collected from a blood sample using a blood test kit containing a diluent that does not contain standard components that are constantly present in blood, and the collected plasma is diluted. It is possible to analyze the concentration of the target component in the blood sample by diluting with a liquid, determining the dilution ratio of plasma using the standard component in the diluted plasma that is constantly present in the blood.
  • Sodium ion concentration and chloride ion concentration can be measured, for example, by flame photometry, atomic absorption, glass electrode, titration, ion selective electrode, enzyme activity, and the like.
  • a small amount of blood collected from a finger and diluted with a diluent is only about 150 ⁇ L, and more than 10 items of biochemical components and immunological test items are measured. It is preferable that it can be measured by. In addition, since it is necessary to analyze a large number of samples, it is preferable to be able to adapt to a commercially available biochemical / immunological automatic analyzer.
  • the preferred standard substance is sodium ion.
  • concentration X concentration of sodium ion in the diluted solution after blood dilution and the known concentration value (concentration Y; 142 mmol / liter), the dilution rate (Y / X) of the blood sample is calculated.
  • concentration Z concentration of the analyte in the diluted blood sample
  • the dilution ratio is independently determined from different standard components that are constantly contained in two or more plasmas. It is preferable to confirm that the values match.
  • the coincidence means that in two measured values (a, b), the ratio of their difference to their average value, that is,
  • the analysis of the concentration of the target component in the blood sample using the dilution factor determined from the measured value of the diluted solution of sodium ion and the known concentration value in plasma (142 mmol / liter) is sodium
  • the standard component used for the analysis of the concentration of the target component is preferably selected from sodium ions or chloride ions
  • the standard component used for verifying the analysis is selected from total protein or albumin. Preferably, it is selected from total proteins.
  • Methods for measuring total protein include known methods such as the Burette method, the ultraviolet absorption method, the Breadford method, the Raleigh method, the bicinchoninic acid (BCA) method, and the fluorescence method.
  • a method to be used as appropriate can be selected according to the amount and the like.
  • the dilution concentration is determined using standard components that are not present in the blood.
  • a blood test kit containing a diluent containing a standard component that is not present in blood plasma is collected from the blood sample, the collected plasma is diluted with the diluent, and the diluted plasma is diluted with blood.
  • the dilution factor of plasma is determined using the standard component that is not present, and the concentration of the target component in the blood sample can be analyzed.
  • plasma is collected from a blood sample using a blood test kit containing a diluent containing standard components not present in blood, and the collected plasma is diluted with the diluent.
  • the above-mentioned standard component that is constantly present in the blood and the standard component that is not present in the blood are used to determine the dilution ratio of the plasma and analyze the concentration of the target component in the blood sample. be able to.
  • the dilution rate of the blood sample component is calculated by any one of the following formulas 1 to 4, and the concentration of the target component in the blood sample component is calculated by multiplying the concentration of the analysis target component in the diluted solution by the dilution rate. Is preferably analyzed.
  • A, B, C, D, B ′ and X are defined as follows.
  • the blood sample component is calculated by calculating with Equation 5 using the root-mean-square method, and multiplying the concentration of the analysis target component in the diluted solution by the dilution rate calculated with Equation 5.
  • An embodiment in which the concentration of the target component is analyzed is also preferable.
  • ALT aminotransferase
  • AST aminotransferase
  • ⁇ -GTP ⁇ glutamyl transpeptidase
  • ALP alkaline phosphatase
  • total bilirubin The concentration in the blood of several or more substances such as total protein and albumin is measured.
  • the amount of diluted blood is required to some extent in consideration of the possibility of remeasurement. Therefore, it is important to secure a certain amount of the diluent for diluting the collected blood.
  • the amount of collected blood is 100 ⁇ L or less is preferable.
  • the dilution rate of plasma, which is a component of the blood sample is about 7 times or more.
  • the present invention relates to a blood test kit for collecting blood by a patient, transporting the collected blood to a medical institution or testing institution, and performing a test, and a blood analysis method using the blood test kit. Therefore, there is a possibility of being left in a diluted state for a long time after blood collection until the test. If, for example, hemolysis of erythrocytes occurs during that time, substances or enzymes with high concentrations in the blood cells will become plasma or serum. If the sample is eluted and affects the test result, or the analysis target component is measured by color tone, hemoglobin may affect the test. Therefore, it is necessary to prevent hemolysis, blood coagulation, and the like during transportation. In the present invention, it is preferable to include a step of separating blood cells from blood after diluting the blood collected by the patient with a diluent.
  • plasma separation after blood collection is preferably performed immediately after the blood is diluted with a diluent.
  • the blood is separated into blood cells and plasma components by centrifugation, and transported in a separated state, or the blood components are pressurized and passed through a separation membrane such as a filtration membrane.
  • a separation membrane such as a filtration membrane.
  • a method of separating a blood cell component from blood by capturing the blood cell component on a separation membrane is used.
  • backflow prevention described in JP-A-2003-270239 is preferred. It is preferable to use a biological sample separation instrument having means.
  • analyzing the concentration of the target component in the components of the blood sample determines the concentration of the target component (that is, quantifies the target component), or the concentration of the target component is equal to or higher than a predetermined reference value.
  • the form of analysis is not particularly limited, including determining whether it is present or less than a predetermined reference value, performing qualitative detection that includes a certain level of concentration, and the like.
  • the analysis target component is not limited, and any substance contained in a biological sample is targeted. Examples include biochemical test items in blood used for clinical diagnosis, markers for various diseases such as tumor markers and hepatitis markers, and include proteins, sugars, lipids, low molecular weight compounds, and the like. Further, the measurement includes not only the substance concentration but also the activity of substances having an activity such as an enzyme. Each target component can be measured by a known method.
  • a method for efficiently analyzing a large number of samples with a commercially available biochemical / immunological autoanalyzer for quantitative determination of enzyme components of diluted plasma biological sample of unknown concentration in collected blood and enzyme activity It is.
  • Lithium is used as an external standard that uses plasma sodium, etc. that maintain a constant concentration in the biological sample, and as an internal standard that does not pass through the blood cell membrane. Prepare and add to buffer.
  • an organic compound is used as an internal standard, depending on the type of organic compound, it may be affected by the action of biological enzymes and affected by storage stability. When this lithium is used as an internal standard substance, it is stable for a long time in a diluted solution and can be easily quantified.
  • sodium which is the external standard of the measurement sample, is stable because it is an element.
  • a flame photometer for measuring plasma sodium diluted with a diluent as an external standard.
  • a small amount of blood is collected from a finger or sputum, diluted with a diluent, and the plasma sample after separation of blood plasma and blood cells is only about 300 ⁇ L, and the biochemical components and immunological test items are measured from 10 items or more.
  • standard sodium measurement it is necessary to measure with a few microliters.
  • biochemical / immunological automatic analyzer since it is necessary to analyze a large amount of sample, it is necessary to be adaptable to a commercially available biochemical / immunological automatic analyzer.
  • a sample of very low concentration sodium (24 mmol / L or less) diluted with a diluent is used by utilizing the enzyme activity of the enzyme galactosidase activated by sodium ions. It is preferred to use an enzymatic assay that can be measured in a few ⁇ L. This method is a particularly preferable measurement method because it can be applied to a biochemical / immunological automatic analyzer and is highly efficient and economical in that it does not require a separate measuring instrument for sodium measurement.
  • Lithium internal standard substance added to the diluent can be measured by using a chelate colorimetric method (halogenated porphyrin chelate method: perfluoro-5,10,15,20-tetraphenyl-21H, 23H -porphyrin) Using a biochemical automatic analyzer, a lot of samples can be easily measured.
  • a chelate colorimetric method halogenated porphyrin chelate method: perfluoro-5,10,15,20-tetraphenyl-21H, 23H -porphyrin
  • the diluted solution does not contain substances similar to these components or similar alkali metals. It is preferable that the pH can be adjusted to around 7pH7.4. For this reason, 2-amino-2-methyl-1-propanol, 2-ethylaminoethanol, N-methyl-D-glucamine, diethanolamine, triethanol are compounds that show alkalinity without containing alkali metals (such as NaOH). It is preferable to use an amino alcohol compound such as an amine.
  • HEPES [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid
  • TES N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid
  • MOPS 3-morpholinopropanesulfonic acid
  • BES N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid
  • diluents do not contain alkali metals or alkaline metal earths such as external standard sodium or internal standard lithium, and do not interfere with the measurement system for sodium or lithium to be measured. It is preferable to use it.
  • components diluted with these diluents do not interfere with various measurement methods using biochemical / immunoimmunological analyzers, and blood cells do not undergo hemolysis, and biological components can be stored stably even at 37 ° C. This is a preferred embodiment as a diluent.
  • the component in the diluent does not denature the biological component in plasma or substantially affect the stability.
  • a diluted solution with buffer performance adjusted to pH 7.4 by mixing 2-amino-2-methyl-1-propanol (AMP) and HEPES does not denature biological components and dilutes plasma components
  • AMP 2-amino-2-methyl-1-propanol
  • HEPES 2-amino-2-methyl-1-propanol
  • a blood cell component in blood is filtered by filtration after the collected blood sample is diluted with a diluent
  • the osmotic pressure of the diluent is equivalent to that of blood (285 mOsm / kg (mOsm / kg: solution). It is possible to prevent hemolysis of blood cells by setting the osmotic pressure of 1 kg of water to the number of millimoles of ions)) or more.
  • mannitol or pyridoxal phosphate is added to the diluted solution in order to stabilize the blood cell membrane and the enzyme.
  • the measurement of trace sodium in diluted plasma is based on the fact that ⁇ -galactosidase is activated by sodium, and is performed by an enzymatic measurement method utilizing the proportional relationship between sodium concentration and galactosidase activity in the sample diluted with the diluent. Is preferred.
  • Example 1 Except for the cylinder and the sponge-like chip for collecting blood, blood collection, plasma separation, and blood analysis were performed using a Demecal (registered trademark) blood test kit (Regier Co., Ltd.). A comparison was made between the case where a scale serving as a guide for the amount of liquid after blood separation was placed in the cylinder (the present invention) and the case where no scale was placed (a comparative example).
  • Scaled cylinder Specification 1: The thickness of the inner wall and the width of the scale were adjusted so that the difference in the amount of the separated blood award could be detected by 30 ⁇ L.
  • the dilution volume set for the scale application was 300 ⁇ L, and the blood collection volume was 65 ⁇ L.
  • Method 1 When a cylinder without a scale is used, it is assumed that the blood volume is 65 ⁇ L, the hematocrit value (a numerical value indicating the volume ratio of blood cells in the blood) is constant at 40%, and the diluent is 300 ⁇ L. The dilution factor was calculated. When a cylinder with a scale was used, the amount of plasma was estimated from the scale, and the dilution rate was determined using that value.
  • Non-Patent Document 1 The diluent described in Non-Patent Document 1 was used except that the diluent was designed noting that a substance containing Na including impurities was used.
  • OSMOATAT OM-6040 manufactured by ARKRAY, Inc.
  • Example 2 A diluted plasma solution was prepared in the same manner as in Example 1. In addition to Method 1, the dilution rate was determined according to the following Method 2, Method 3, and Method 4.
  • Method 2 Prepare a mixed solution of the collected blood plasma component and the diluted solution, measure the sodium ion concentration in the mixed solution, and with respect to the sodium ion concentration 142 mmol / L normally evaluated as a homeostatic substance
  • the dilution factor was determined from the concentration value. Specifically, a part of the mixture of the plasma component and the diluted solution was diluted 5-fold with purified water, and 3 ⁇ L was weighed. On the other hand, the first sodium ion measuring reagent shown in Table 3 below was weighed. 52 ⁇ L of the reagent was added, and kept at 27 ° C. for 5 minutes.
  • FIG. 6 shows a calibration curve showing the sodium concentration and the amount of change in absorbance. Linearity passing through the origin up to 24 mmol / L was obtained, confirming the quantitativeness of sodium.
  • the diluted solution shown in Table 1 and the first reagent and the second reagent of the sodium measurement reagent shown in Table 3 below were prepared noting that they contained sodium ions.
  • Non-patent Document 1 Absorbance serving as an index of the concentration of glycerol triphosphate added to the diluent according to the method described in “Clinical Pathology Vol. 56, No. 7 (July 2008), Supplement 577-583” (Non-patent Document 1) was used to determine the blood dilution rate according to the method described in (Non-patent Document 1).
  • the reagent used for color development of glycerol triphosphate was designed in consideration of the fact that it does not contain sodium ions from the solution described in Non-Patent Document 1, as in Method 2.
  • Method 4 Using the values obtained using Method 2 and Method 3, the dilution ratio of plasma with a diluent was determined by the following equation (1).
  • X (A + C) / (B + D) (1)
  • a C Sodium ion concentration of 142 mmol / L as a homeostatic substance
  • the measured absorbance D of the solution is: Absorbance of sodium ion concentration of the diluted solution obtained by diluting the plasma component
  • X Plasma dilution rate
  • the AST present in plasma was determined by multiplying the concentration of AST in diluted plasma determined using JCA-BM6050 manufactured by JEOL Ltd. by the dilution factor determined as described above. The same measurement was repeated 10 times, and the AST measurement maximum value (U / L), the AST measurement minimum value (U / L), and the difference between the measurement maximum value and the measurement minimum value (U / L) were determined.
  • U / L represents the amount of enzyme capable of changing 1 ⁇ mol of substrate per minute at a temperature of 30 ° C. in 1 L of sample under optimum conditions. The results are shown in Table 2.
  • Example 3 The mark (scale), which is a measure of the liquid volume after blood separation, is omitted from the cylinder used in the specification-2 of Example 1. Instead, the specification- The same effect as in Example 1 was confirmed by performing measurement in the same manner as in Example 1 except that a scale that can measure the increase in the liquid amount was added, as in 2.
  • Example 4 In addition to the measurement of sodium ion concentration, the total protein concentration was measured for the mixed solution with the diluted plasma component solution collected in Method 2 of Example 2 by the following method.
  • a blood sample obtained from a measured value (concentration X) of sodium ion concentration in a diluted solution after blood dilution and a known concentration value (concentration Y; 142 mmol / L) of sodium ion as a standard component in the blood sample For the dilution ratio (Y / X) of the blood, the measured value of total protein in the diluted solution after blood dilution, and the known concentration value (concentration; 7.5 g / 100 mL) of the total protein as the standard component in the blood sample ) And the dilution ratio determined from the results were the same. Thereby, it turned out that it can verify that the measurement of the dilution rate calculated
  • Example 5 In the same manner as in Example 1, the features of the present invention with little variation were confirmed for the following blood test items.
  • ⁇ Inspection item> Total protein, albumin, ⁇ -glutamyltransferase, total cholesterol, neutral fat, good cholesterol, urea nitrogen, creatine, uric acid, blood glucose, glycohemoglobin, p53 antibody (tumor marker), CEA (carcinoembryonic antigen), CA125 ( Antigen 125: ovarian cancer tumor marker), pepsinogen, AFP ( ⁇ -fetoprotein: liver cancer tumor marker), CA19-9 (carbohydrate antigen 19-9; pancreatic / gallbladder cancer marker), H. pylori, HIV (human immunodeficiency virus) antibody , HBs antigen (protein outside hepatitis B virus), HCV (hepatitis C virus) antigen.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • HBs antigen protein outside hepatitis B virus
  • HCV hepatit
  • Example 6 In the composition shown in Table 1, an internal standard addition dilution solution containing no sodium ion in which glucerol triphosphate was changed to lithium chloride 1 mmol / L was prepared. The internal standard substance of lithium added to the buffer was measured using chelate colorimetry (halogenated porphyrin chelate method: perfluoro-5,10,15,20-tetraphenyl-21H, 23H-porphyrin). It can be obtained by measuring.
  • chelate colorimetry halogenated porphyrin chelate method: perfluoro-5,10,15,20-tetraphenyl-21H, 23H-porphyrin
  • EDTA was added to blood collected from multiple patients to prevent blood clotting.
  • a small amount of blood collected using the cylinder of specification-2 and sponge tip used in Example 1 was diluted with a diluent.
  • biochemical components in diluted plasma obtained by separating blood cells with a separation membrane were measured.
  • A is the absorbance of the lithium buffer
  • B is the amount of change in the absorbance of lithium after mixing the plasma and the diluent
  • the rest of the plasma is the same as in Method 4 of Example 1.
  • the value (A) of the biochemical component present in the original plasma was obtained by determining the dilution factor and multiplying it by the separately determined biochemical component value in the diluted plasma.
  • the value (B) of the biochemical component of undiluted plasma obtained by separating blood cells by centrifugation of the same blood sample collected by adding EDTA was obtained.
  • the correlation coefficient between the two values obtained from each patient was calculated using the following formula:
  • Correlation coefficient (covariance of value (A) and value (B)) / ⁇ (standard deviation of value (A)) ⁇ (standard deviation of value (B)) ⁇ (2)

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Abstract

本発明の課題は、採血量の可視化及び一定化を図ることによって微量血液での血液検査を高精度で行うことができる、血液検査キット及び血液分析方法を提供することである。本発明によれば、血液検体の成分を希釈するための希釈液と、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器とを含む血液検査キットであって、血液検体の成分及び希釈液の液量を測定するための目盛りが、血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与された、血液検査キットが提供される。

Description

血液検査キット及び血液分析方法
　本発明は、血液検体中の対象成分を分析するための血液検査キット及び血液分析方法に関する。
　一般に、採血には、医師等一定の有資格者が注射器を用いて静脈から血液を採取する一般採血と、検査対象者が、自分の手の指等に採血針を刺して血液を採取する自己採血とがある。
　一般採血により採取された血液は、採取容器に密閉された状態で医療機関又は検査機関に搬送され、そこで検査が行われている。血液を血球と血漿とに分離せずに搬送する場合には、医療機関又は検査機関にて遠心分離機により血液を血球と血漿とに分離した後に検査が行われる。また、検査対象者が行う自己採血では、採血後の血液は分離膜により血球と血漿とに分離され、この分離された状態で検査場所に輸送され、そこで検査が行われる。
　特許文献１には、検体中の分析対象成分量を測定し、さらに、これ以外の恒常的に検体中に元来存在する標準成分の量を測定し、この標準成分の量と、検体中での標準成分の既知濃度とから検体の量を決定し、この検体量と、分析対象成分量とから、検体中の分析対象成分の濃度を決定する定量分析法が記載されている。
　特許文献２には、自己採血により採取された血液検体の検査方法が記載されている。具体的には、１）容量を定量することなしに採取した定量すべき成分を含有する未知容量の生体試料と一定量の指示物質を含有する一定量の水性溶液とからなる定量用試料を調製する工程、２）一定量の指示物質を含有する一定量の水性溶液中の指示物質の濃度（Ｃ1）
と定量用試料中の指示物質の濃度（Ｃ2）とから生体試料の希釈倍率（ａ）を求める工程
、３）定量用試料中の定量すべき成分の濃度（Ｙ）を求める工程、４）上記２）で求めた生体試料希釈倍率（ａ）と上記３）で求めた定量用試料中の定量すべき物質の濃度（Ｙ）とから生体試料中の定量すべき成分を決定する工程を含む生体試料中の定量すべき成分の定量方法が記載されている。
　また、特許文献３には、血液希釈定量器具を用いてヒトや動物から微量血液を採取しそのまま又は希釈したのち一定量を他の機器や容器又は直接試薬に供給することが記載されている。さらに特許文献４には、希釈用水溶液中の指示物質の吸光度を利用して、生物学的試料中の定量すべき成分の濃度を定量する方法が記載されている。
　一方、血液検体を検査対象者が採取する際には、小型ナイフが具備されたランセットにて採取し、血液中の任意成分の濃度の定量に使用されているが、通常１００μＬ以上の血液検体を採取することが必要とされている。
特開２００１－３３０６０３号公報 特開２００３－１６１７２９号公報 特開２００９－１２２０８２号公報 特開２００９－１０９１９６号公報
　特許文献１に記載の方法では、分析精度が低下し、結果がばらつき、分析対象成分の安定性の保証が不十分になることがあり、また、ナトリウムイオンや塩化物イオンの濃度を外部標準として利用できない問題もあった。
　特許文献２の方法においても、血液採取量にばらつきがあり、採取量が少ない場合には、希釈後の標準物質の希釈率が小さくなることや、血液成分量そのものが低下するために、検査精度の信頼性が低下するという問題があった。また、緩衝液で希釈する方法は生体成分がpH7.4の生理的条件の緩衝液で保存され、輸送中の安定性にも優れているが、標準物質を添加した緩衝液への試料の添加による標準物質の希釈率が小さく、少ない試料添加では測定誤差が生じ易いという問題がある。
　上記の通り、微量血液での血液検査を高精度で行うためには、特許文献１又は特許文献２に記載の方法でも検査精度の確保が充分でなかった。
　一方、採血者にとっては、血液採取は皮膚を傷つける侵襲的な行為であり、また血液の赤色を凝視することに不快を感じる場合もあることから、できるだけ早く採血して、傷部から流出している血液を止めたいと考えることが一般的である。このような事情から、採血量は必ずしも常に一定量であるとは限らず、ばらつく場合が多い。血液採取量のばらつきが大きいと希釈倍率の精度低下を招くことから、採血量の可視化及び一定化が望まれている。
　本発明が解決しようとする課題は、採血量の可視化及び一定化を図ることによって微量血液での血液検査を高精度で行うことができる、血液検査キット及び血液分析方法を提供することである。
　本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、血液検体の成分を希釈するための希釈液と、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器とを含む血液検査キットにおいて、血液検体の成分及び希釈液の液量を測定するための目盛りを、血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与することによって、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明によれば以下の発明が提供される。
（１）　血液検体の成分を希釈するための希釈液と、
　血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器と、
を含む血液検査キットであって、
　血液検体の成分及び希釈液の液量を測定するための目盛りが、血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与された、血液検査キット。
（２）　目盛りが、少なくとも、血液検体の成分のない希釈液の液量を測定するための目盛りを含む、（１）に記載の血液検査キット。
（３）　構成要素が、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器である、（１）又は（２）に記載の血液検査キット。
（４）　透明容器が、内部断面積が他の部位より小さい部位を有し、内部断面積が他の部位より小さい部位に、目盛りが付与されている、（３）に記載の血液検査キット。
（５）　透明容器の内部断面積が最も小さい部位に、目盛が付与されている、（４）に記載の血液検査キット。
（６）　血液検体の成分が、分離手段により血液検体から分離された血漿成分である、（１）から（５）の何れかに記載の血液検査キット。
（７）　血液検査キットが、血液中に恒常的に存在する標準成分を用いて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析するための血液検査キットであり、希釈液が、標準成分を含有しない、（１）から（６）の何れかに記載の血液検査キット。
（８）　血液検査キットが、血液中に恒常的に存在する標準成分を用いて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析し、且つ上記分析を検証するための血液検査キットであり、上記希釈液が、上記標準成分を含有しない、（１）から（６）の何れかに記載の血液検査キット。
（９）　標準成分が、ナトリウムイオン、塩化物イオン、総タンパク、及びアルブミンからなる群から選択される成分である、（７）又は（８）に記載の血液検査キット。
（１０）　希釈液が、血液中に存在しない標準成分を含み、血液検査キットが、血液中に存在しない標準成分を用いて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析するための血液検査キットである、（１）から（９）の何れかに記載の血液検査キット。
（１１）　血液中に存在しない標準成分が、グリセロール三リン酸又はリチウムである、（１０）に記載の血液検査キット。
（１２）　希釈液が、pH6.5～pH8.0のpH域で緩衝作用を有する緩衝液である、（１）から（１１）の何れかに記載の血液検査キット。
（１３）　希釈液が、2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール、2-エチルアミノエタノール、N-メチル-D-グルカミン、ジエタノールアミン、及びトリエタノールアミンからなる群から選択されるアミノアルコール化合物、並びにHEPESとも称する2- [4- (2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジニル] エタンスルホン酸)、TESとも称するN-トリス(ヒドロキシメチル)メチル-2-アミノエタンスルホン酸、MOPSとも称する3-モルホリノプロパンスルホン酸、及びBESとも称する（N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸からなる群から選択される緩衝剤を含む希釈液である、（１）から（１２）の何れかに記載の血液検査キット。
（１４）　血液検体の成分を希釈するための希釈液と、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器とを含む、血液検査キットを用いる血液分析方法であって、予め決定された所定量以上の血液検体の成分含有試料を分析対象試料として選別し、所定量未満の血液検体の成分含有試料を分析対象試料から除外する工程、及び選別された血液検体の成分含有試料を用いて血液の分析を行う工程を含む、血液分析方法。
（１５）　血液検査キットが、（１）から（１３）の何れかに記載の血液検査キットであり、目盛を用いて、予め決定された所定量以上の血液検体の成分含有試料を選別する、（１４）に記載の血液分析方法。
（１６）　血液検体の成分が、分離手段により血液検体から分離された血漿成分である、（１４）又は（１５）に記載の血液分析方法。
（１７）　血液検体の成分の希釈率を、下記式１で算出し、希釈液中の分析対象成分の濃度に、希釈率を乗じて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析する、（１４）から（１６）の何れかに記載の血液分析方法。
式１：　（Ａ＋Ｃ）／（Ｂ＋Ｄ）
式中、Ａは、内部標準物質を含む希釈液の測定吸光度を示し、Ｂは、Ａから血液検体の成分を希釈した希釈液の吸光度を差し引いた吸光度を示し、Ｃは恒常性物質としてナトリウムイオン濃度が１４２ｍｍｏｌ／Ｌである測定された吸光度を示し、Ｄは、血液検体の成分を希釈した希釈液中のナトリウムイオンの吸光度を示す。
（１８）　１０μＬ以上７０μＬ以下の血液を用いて分析を行う、（１４）から（１７）の何れかに記載の血液分析方法。
　本発明の血液検査キット及び血液分析方法によれば、採血量の可視化及び一定化を図ることによって微量血液での血液検査を高精度で行うことができる。
図１は、希釈された血液検体から回収された血漿成分を収容するための容器の構成の一例を示す。 図２は、血漿分離及び密閉時のボトルとシリンダー目盛りの概念図を示す。 図３は、容器の形状と目盛の位置の一例を示す。 図４は、容器の形状と目盛の位置の一例を示す。 図５は、容器の形状と目盛の位置の一例を示す。 図６は、ナトリウム酵素的測定法の直線性を示す。
　以下、本発明の実施の形態を説明する。
　血液中に恒常的に存在する標準成分のことを、外部標準物質又は外部標準と言う。
　血液中に存在しない標準成分のことを、内部標準物質又は内部標準と言う。
　病気の治療又は診断あるいは健康管理のために、医療機関又は検診場所においては、患者又は検診者の血液を静脈から採取して検査することが行われている。しかし、検査結果を知るためには長時間待つ必要があり、小児にとっては静脈から血液を採血することが負荷となる場合がある。また検査のための移動を含めると半日以上の時間を必要とするために、患者又は検診者にとっては不都合を生じる場合があった。上記に鑑みて、患者又は検診者が、自宅や検査室等で微量の血液を自己採血し、それを安定に保管及び搬送することが知られている。
　微量の血液を採取する方法として濾紙を用いて血液分析を行う方法が特開平１０－１０４２２６号公報に記載され、また濾紙の代わりに血液保持性の高い多孔質材を用いる方法が特許文献１に開示されている。上記した方法においては、素材に吸収された血液成分を緩衝液などで抽出して測定することを目的として、血液を溶出する際に用いる緩衝液による希釈率を見積もるために、血液に恒常的に存在するナトリウムイオン、塩化物イオン、カルシウムイオン又はタンパク質などを基準物質として用いている。しかし、特許文献１の方法には、血液の採取量にばらつきがあり、採取した血液の希釈率が高い場合には分析精度が低下して結果がばらつくという問題があり、また血液を凝集させて固化するため分析対象成分の安定性が保証されないという問題もあった。また、乾燥した試料から分析対象成分を抽出する緩衝液には、pH調整や分析対象成分の安定化のためにＮａＯＨ、ＮａＣｌ又はＨＣｌを添加する必要があり、このため、血液中の成分で最も恒常性があり個体間差が少ないナトリウムイオンや塩化物イオンの濃度を、対象成分濃度の補正のための外部標準として利用できないという問題がある。
　一方、採取した微量血液を内部標準入り緩衝液で希釈し、内部標準物質の希釈倍率から希釈血漿中に存在する成分量を定量する方法が特許文献２に開示されている。特許文献２では、内部標準物質としてＮ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン・ナトリウム塩（ＨＳＤＡ）、あるいはアシッドブルー９（ブリリアントブルーＦＣＦ）が使用されており、ＨＳＤＡを用いた場合に、希釈後、第二試薬を用いて酵素反応により生成した色素の吸光度を調べることで希釈率を求める方法が、アシッドブルー９を用いた場合に、血清を添加する前後のＨＥＰＥＳ緩衝液の吸光度から希釈倍率を求める方法が、開示されている。また、血液を安定に保持するための緩衝剤や防腐剤が用いられている。このような処方は、血液を凝固させないことでその成分の安定性を維持することを実現したが、やはり血液採取量がバラツキ、採取量が少ない場合には、希釈後の内部標準物質の希釈率が小さくなることや、血液成分量そのものが低下する為に、検査精度の信頼性が低下することが問題であった。また、緩衝液で希釈する方法は生体成分がｐＨ７．４の生理的条件の緩衝液で保存され、輸送中の安定性にも優れているが、内部標準添加緩衝液への試料による内部標準の希釈率が小さく、少ない試料添加では測定誤差が生じ易い問題があった。
　上記の通り、微量血液での血液検査を行う場合には、特許文献１に記載されている外部標準物質の使用や、特許文献２に記載されている内部標準物質を含有する緩衝液の使用だけでは、検査精度の確保が十分ではなかった。
　血液中の恒常性物質であるナトリウムイオンにおいては、正常値１３４～１４６ｍｍｏｌ／リットルの分布の幅を有するため、より正確な希釈倍率を算出することが必要となってくる。希釈倍率の精度が低下すると検査精度に悪影響を与えて、検査の信頼性を損なってしまうリスクが高まる。また、血液採取は皮膚を傷つける侵襲的な行為であり、採血者にとっては採血行為を早く終わらせたいと考えることもあるため、採血量は必ずしも常に一定量であるとは限らず、ばらついてしまう要因を含んでいる。従って、血液採取量が多かったり少なかったりすると、上記のように希釈倍率の精度低下を招いてしまうため、採血量の可視化、一定化が望まれてきた。
　特許文献１には、外部標準の記載はあるが、採血量の可視化、一定化に関する記載はない。特許文献２には、内部標準に関する記載はあるが外部標準との併用の記載はない。特許文献２には、希釈液として使用する緩衝液から外部標準物質として好ましいナトリウムやカリウム等の恒常性が高い物質を除去することについての記載はなく、それを達成するための具体的な手段の記載もない。特許文献１及び２には、微量の血液を精度高く自己採血で定量的に採取する手段について開示されていない。
　本発明の血液検査キット及び血液分析方法によれば、採血量が常に一定量ではなくばらついている場合であっても、血液を希釈して血漿を回収した容器において採血量を把握することができ、これにより、特許文献１及び特許文献２に記載されている方法と比較してより高い精度で希釈倍率を求めて測定対象成分の分析を行うことが可能である。さらに内部標準を用いて希釈倍率を求める方法を併用することにより、さらに精度を高めることが可能である。上記の通り、採血量が一定の範囲内となるようにして採血量のばらつきの少ない状態で希釈倍率を求めて測定対象成分の分析を行うことによって高精度の測定を行うことができることは従来知られておらず、本発明の構成により精度の高い血液分析が可能となったことは全く予想外なことであった。
　本発明の血液検査キット及び血液分析方法によれば、患者自らが血液を採血する場合、　たとえ採血量が常に一定量ではなくばらついていたとしても、血液を希釈し血漿分離した容器から採血量が判ることで、採血者、分析者にとって、希釈倍率の結果を狭い範囲で予測することが可能となり、再現性良い希釈率が実現でき、測定対象成分の分析を精度よく行うことができる。本発明の血液検査キットを用いた微量血液採取は、時間と場所に制限がないため、医療機関に出向く時間がない事例、災害時、遠隔医療、健康管理などに応用でき、未病の人を早期発見できることから医療費の節減にも貢献できる。また大量の試料を効率的に市販の生化学自動分析装置で測定できる。測定した検査データは、例えば電子データ化してスマートフォンに送信することで日常的に健康管理や疾病の早期発見へのシステムに利用できる。また本発明によれば、微量の血液（65μL）を用いて生化学検査１３項目、腫瘍マーカー、肝炎検査など多くの検査ができる。
［１］血液検査キット
　本発明の血液検査キットは、血液検体の成分を希釈するための希釈液と、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器とを含む血液検査キットであって、血液検体の成分及び希釈液の液量を測定するための目盛りが、血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与された血液検査キットである。
（１）血液検体の成分を希釈するための希釈液
　本発明の血液検査キットは、患者が採血した血液を希釈して医療機関又は検査機関に輸送して測定対象成分の分析を行うためのものであり、採血から分析までには長時間放置される可能性がある。その間に。血液の希釈液中において対象成分の分解や変性を防止することが好ましい。血液のｐＨは、健常者では通常ｐＨ７．３０～７．４０程度で一定に保たれている。従って、対象成分の分解や変性を防止するために、希釈液は、好ましくはｐＨ６．５～ｐＨ８．０であり、より好ましくはｐＨ７．０～ｐＨ７．５であり、更に好ましくはｐＨ７．３～ｐＨ７．４であり、ｐＨの変動を抑える緩衝成分を含有する緩衝液であることが好ましい。
　緩衝液の種類としては、酢酸緩衝液（Ｎａ）、リン酸緩衝液（Ｎａ）、クエン酸緩衝液（Ｎａ）、ホウ酸緩衝液（Ｎａ）、酒石酸緩衝液（Ｎａ）、Ｔｒｉｓ（トリス（ヒドロキシメチル)アミノエタン）緩衝液（Ｃｌ）、ＨEPES（[2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]エタンスルホン酸]）緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水（Ｎａ）等が知られている。これらの中でｐＨ７．０～ｐＨ８．０付近の緩衝液としては、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＨEPES緩衝液が代表的なものである。しかし、リン酸緩衝液はリン酸のナトリウム塩が含まれている。Ｔｒｉｓ緩衝液は、解離ｐＫａ（Ｋａは酸解離定数）は８．０８であるため、ｐＨ７．０～ｐＨ８．０付近で緩衝能を持たせるためには通常は塩酸と組み合わせて使用される。ＨEPESのスルホン酸の解離のｐＫａは７．５５であり、イオン強度一定での緩衝溶液を調整するため、通常は水酸化ナトリウムと塩化ナトリウムとＨＥＰＥＳの混合物が用いられる。これらはｐＨを一定に保つ作用を有する緩衝液としては有用であるが、本発明において外部標準物質として用いることが好ましい物質であるナトリウムイオンあるいは塩化物イオンを含有するため、本発明への適用は好ましくない。そこで、本発明者らは鋭意検討し、ナトリウムイオンや塩化物イオンを含有しない新たな緩衝液を見出した。
　本発明で用いることができるナトリウムイオン及び塩化物イオンを含有しない希釈液は好ましくは、2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール（ＡＭＰ）、2-エチルアミノエタノール、N-メチル-D-グルカミン、ジエタノールアミン、及びトリエタノールアミンからなる群から選択される少なくとも１種のアミノアルコール化合物、並びにＧｏｏｄ'ｓ緩衝液（グッドバッファー）でｐＫａが７．４付近の緩衝剤であるHEPESとも称する2- [4- (2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジニル] エタンスルホン酸) （ｐＫａ＝７．５５）、TESとも称するN-トリス(ヒドロキシメチル)メチル-2-アミノエタンスルホン酸（ｐＫａ＝７．５０）、MOPSとも称する3-モルホリノプロパンスルホン酸（ｐＫａ＝７．２０）、及びBESとも称する（N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸（ｐＫａ＝７．１５）からなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤を含む希釈液である。上記の中でも、２－アミノー２－メチル－１－プロパノール（ＡＭＰ）とHEPES、TES、MOPS又はＢＥＳの組み合わせが好ましく、さらに、２－アミノー２－メチル－１－プロパノール（ＡＭＰ）とHEPESの組み合わせが最も好ましい。
　上記緩衝液を作製するためには、アミノアルコールとＧｏｏｄ‘ｓ緩衝液を１：２～２：１、好ましくは１：１．５～１．５：１、更に好ましくは１：１の濃度比で混合すればよい。緩衝液の濃度は限定されないが、アミノアルコール又はＧｏｏｄ‘ｓ緩衝液の濃度は、０．１～１０００ｍＭ／Ｌ、好ましくは、１～５００ｍＭ／Ｌ、さらに好ましくは１０～１００ｍＭ／Ｌである。
　緩衝液中には、分析対象成分を安定に保つことを目的にキレート剤、界面活性剤、抗菌剤、防腐剤、補酵素、糖類等が含有されても良い。キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸塩（ＥＤＴＡ）、クエン酸塩、シュウ酸塩等が挙げられる。界面活性剤としては、例えば、陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、両性界面活性剤又は非イオン界面活性剤が挙げられる。防腐剤としては、たとえば、アジ化ナトリウムや抗生物質等が挙げられる。補酵素としては、ピリドキサールリン酸、マグネシウム、亜鉛等が挙げられる。赤血球安定化剤の糖類としては、マンニトール、デキストロース、オリゴ糖等が挙げられる。特に、抗生物質の添加により、手指採血時に手指表面から一部混入する細菌の増殖を抑えることができ、細菌による生体成分の分解を抑制し、生体成分の安定化を図ることができる。
　これらの緩衝液で希釈された成分は生化学・免疫自動分析装置での種々の測定法を用いた場合でも測定に干渉しないこと、さらに血球が溶血をしないことや生体成分が37℃でもできるだけ安定に保存できることが好ましい。
　生体試料に全血を使用する場合には、希釈した血液中の血球成分をフィルター濾過する必要から、緩衝液の浸透圧を血液と同等（２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ（ｍＯｓｍ／ｋｇ：溶液の水１ｋｇが持つ浸透圧で、イオンのミリモル数））又はそれ以上とすることにより血球の溶血を防止することができる。浸透圧は、対象成分の測定、および血液中に恒常的に存在する標準成分の測定に影響しない塩類、糖類、緩衝剤等により、等張に調整することができる。
　血液検体の成分を希釈するための希釈液の第一の例としては、希釈倍率を求める時に使用する血液中に恒常的に存在する物質（以下、恒常性物質ともいう）を含有しない希釈液である。本明細書において「含有しない」とは、「実質的に含有しない」ことを意味する。ここで、「実質的に含有しない」とは、希釈倍率を求める時に使用する恒常性物質をまったく含まないか、あるいは含まれていたとしても、血液検体を希釈した後の希釈液の恒常性物質の測定に影響を及ぼさない程度の極微量の濃度で含まれる場合を意味する。恒常性物質として、ナトリウムイオン又は塩化物イオンを用いる場合には、希釈液としては、ナトリウムイオン又は塩化物イオンを実質的に含有しない希釈液を使用する。
　本発明の血液検査キットが、血液中に恒常的に存在する標準成分を用いて血液検体中の対象成分の濃度を分析するための血液検査キットである場合には、希釈液は、上記標準成分を含有しない希釈液である。
　血液検体の成分を希釈するための希釈液の第二の例としては、内部標準物質を含有する希釈液である。内部標準物質は、生体試料の希釈に用いる希釈液に所定の濃度になるように添加して用いることができる。内部標準物質としては、血液検体中に全く含まれないか、若しくは含まれていたとしても極微量である物質を使用することができる。内部標準物質としては、血液検体中の対象成分の測定に干渉を与えない物質、血液検体中の生体酵素の作用を受けて分解しない物質、希釈液中で安定な物質、血球膜を透過せず血球中に含まれない物質、希釈液の保存容器に吸着しない物質、精度良く測定できる検出系が利用できる物質を用いることが好ましい。
　内部標準物質としては、緩衝液である希釈液に添加した状態で長期間保管しても安定な物質が好ましい。内部標準物質の例としては、グリセロール三リン酸、アルカリ金属としてＬｉ、Ｒｂ、Ｃｓ、又はＦｒ、そしてアルカリ土類金属としてはＳｒ、Ｂａ、又はＲａが挙げられ、この中では、グリセロール三リン酸又はＬｉが好ましい。これらの内部標準試料は、血液希釈後の濃度測定時に第二の試薬を添加することで発色させ、その発色濃度から希釈血液中の濃度を求めることができる。例えば、緩衝液に添加したリチウム内部標準物質の測定は、キレート比色法（ハロゲン化ポルフィリンキレート法：パーフルオロ-5,10,15,20-テトラフェニル-21H,23H-ポルフィリン）を利用して生化学自動分析装置を用いて、微量の試料を数多く容易に測定が可能である。
　本発明の血液検査キットが、血液中に存在しない標準成分を用いて血液検体中の対象成分の濃度を分析するための血液検査キットである場合には、希釈液は、上記の血液中に存在しない標準成分を含む希釈液である。
　血液検体を希釈するための希釈液の第三の例としては、希釈倍率を求める時に使用する血液中に恒常的に存在する標準成分を含有せず、かつ内部標準物質を含有する希釈液である。
（２）血液検体の成分及び希釈液を収容するための透明容器及びその他の構成要素
　血液検体の成分及び希釈液を収容するための透明容器の形状及び大きさは特に限定されない。なお、本発明で言う透明とは、観測者が内部の液量を確認できる程度に透明であればよく、半透明などを含む概念である。
　容器の材料は、破損しにくさ、衛生面、価格等の観点から、合成樹脂であることが好ましい。例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリスチレン、ポリ酢酸ビニル、ポリウレタン、ポリエチレンテレフタレート、ポリ乳酸、アクリロニトリルブタジエンスチレン樹脂（ABS樹脂）、アクリロニトリルスチレン樹脂（AS樹脂）、アクリル樹脂 (PMMA)、ポリカーボネート、シリコーン樹脂、シリコーンゴム等が挙げられる。
　本発明の血液検査キットの一例としては、血液検体の成分を希釈するための希釈液、希釈液が収容された第一の収容器具、希釈液で希釈された血液検体から血漿を分離回収するための分離手段としての分離器具、分離器具を保持するための保持器具、回収した血漿を収容するための第二の収容器具、及び収容した血漿を第二の収容器具内に維持するための封止器具、皮膚に傷をつけて血液を皮膚外に染み出させる針や、ランセット、傷に貼る絆創膏又は消毒部材（例えば、イソプロパノール（７０質量％イソプロパノールなど）又はエタノールなどを含浸させた不織布）、取扱説明書等、を備えることができる。
　希釈された血液検体から血漿成分を回収するための分離手段としては、分離膜である態様が好ましく、血球成分を分離可能な細孔を有するフィルタがより好ましい。本発明においては、血液検体の成分としては、分離手段により血液検体から分離された血漿成分を用いる態様が好ましい。
　第一の収容器具、及び第二の収容器具は、１つの器具を第一の収容器具及び第二の収容器具として兼用してもよいし、別々の器具を備える態様であってもよい。収容器具内にある血液を希釈した希釈液を、患者、あるいは、希釈倍率の測定や分析対象成分の分析を行う測定者に確認可能とするために、第一の収容器具、及び第二の収容器具は、透明な素材でできていることが好ましい。
　分離器具を保持する保持器具は、ガスケットである態様が好ましい。また、封止器具としては、収容器具が筒状の形状をした器具などの場合には、開口に蓋をすることが可能なキャップや、螺旋状の溝を有する蓋、あるいはゴム栓などを使用することができる。
　上記の構成により、希釈液により血液を希釈した後に、直ちに血漿血球分離する機能を血液と希釈液の混合容器に付与することにより、血液成分の安定性と　血球細胞からの溶血による成分の変動の影響を排除し、血液採取後の試料の安定性を付与できる。
　希釈液が収容された第一の収容器具、希釈液で希釈された血液検体から血漿を分離回収するための分離器具、分離器具を保持するための保持器具、回収した血漿を収容するための第二の収容器具、及び収容した血漿を第二の収容器具内に維持するための封止器具についての具体的な構成例としては、例えば、特許第３５９７８２７号公報の図１から図１３に記載された器具を使用することができる。特許第３５９７８２７号公報の図１を、本願の図１として援用する。
　血液分離器具１は採血容器２（希釈液が収容された第一の収容器具）と、採血容器２に嵌挿可能な筒体３（回収した血漿を収容するための第二の収容器具）と、筒体３に冠着可能なキャップピストン４と、キャップピストン４の下端に設けられた密閉蓋５（封止器具）とを備え、使用前は、図１に示すように、採血容器２の上端開口部はキャップ６によりパッキン７を介して密閉されている。本発明における希釈された血液検体を収容するための容器は、図１の構成においては、採血容器２と筒体３の組み合わせに対応する。即ち、希釈された血液検体を収容するための容器は１個でも２個以上の組み合わせでもよい。
　採血容器２は透明な材質製で円筒状を成し、その上端部には、外面に螺子部８が形成され、内面に係止部９が突設されている。また、採血容器２の下端部には、逆円錐状の底部１０が形成され、底部１０の周囲に円筒状の脚部１１が形成されている。脚部１１は、血液の分析検査時に使用するサンプルカップと同一外径を有しており、好ましくは、その下端の対向する位置にそれぞれ鉛直方向にスリット溝１２が形成されている。さらに、採血容器２内には、図１に示されているように、所要量、例えば、５００ｍｍ3の希釈液１３が予め入れられていてもよい。
　筒体３は透明な材質製で円筒状を成し、その上端部には拡径部１４が形成されている。拡径部１４は薄肉部１５を介して本体部１６と接続されている。筒体３の下端部には、縮径部１８が形成され、縮径部１８の内面には係止突起部１９が形成されている。さらに、縮径部１８の下端部には外鍔部２０（保持器具）が形成され、外鍔部２０の下端開口部は濾過膜２１（分離器具）により覆われ、濾過膜２１は血液中の血漿の通過を許容し、血球の通過を阻止するようになっている。
　縮径部１８の外周にはシリコンゴム製のカバー２２が装着されている（図１）。
　キャップピストン４は、略円筒状の摘み部２６と、摘み部２６と同心で下方に延びる心棒部２７とで構成されている。摘み部２６の内側上端部には筒体３の拡径部１４が嵌合可能な円筒状の空間２８が形成され、また、その下方は螺刻され、螺子に螺合可能となっている。心棒部２７はその下端部２９がピン状に形成され、下端部２９に密閉蓋５が着脱可能に設けられている（図１参照）。密閉蓋５はシリコンゴム製である。
　上記した器具による血液分離方法の詳細は、特許第３５９７８２７号公報の段落番号００２３～００２６並びに図１２及び図１３に記載されており、その内容は本明細書に引用される。
（３）目盛り
　本発明においては、血液検体の成分及び希釈液の液量を測定するための目盛りが、血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与されている。上記目盛りにより、採血者又は検査者は、採血量が一定量以上であることを確認することができる。目盛りの数は一本でもよいし、二本以上の複数でもよい。例えば、最低限必要とされる一定量を示す一本の目盛りを付与する場合、下限量と上限量とを示す二本の目盛りを付与する場合、並びに下限量と上限量とその中間の標準量とを示す三本の目盛りを付与する場合などが可能である。さらに目盛りには色を区別することで目盛りに意味を持たせることが可能である。また、目盛りは、少なくとも、血液検体の成分のない希釈液の液量を測定するための目盛りを含んでいてもよい。希釈液の計量時及び血液採取時に液量の目標値を目盛りにより示すことで、希釈液の成分設計に関し適切な血液量と希釈液量を再現良く設計できる。
　目盛りは、採血者又は検査者は、採血量が一定量以上であることを確認することができる限り、血液検査キットの任意の構成要素に付与することができるが、目盛りは、好ましくは、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器に付与することができる。上記透明容器に目盛りをつける場合、液を挟むように目盛りを付けることが可能であり、液量の把握が容易となるため、好ましい。
　血液検体の成分及び希釈液を収容するための透明容器以外の構成要素に目盛りを付与する場合の上記構成要素としては、逆流防止のための密閉キャップの心棒部、などが挙げられる。
　血液検査キットが、血液を希釈する希釈液を収納したボトル（容器）と、血液の血球成分と血漿成分とに分離する分離膜と、分離膜を保持するガスケットと分離後の血漿成分を収納するシリンダー（容器）を有する構成について説明する。この構成においては、血液採取なしの状態でボトルにシリンダーを差し込んで分離し、さらに分離液の逆流防止のための密閉キャップの心棒部が挿入された状態での液面からの液量増分が計測可能な目盛が付与されていることで、採血量の血漿成分量を把握することができる。ボトル及びシリンダーがともに透明であれば、目盛はいずれに有ってもよい。また、ボトルにシリンダーを差し込んだとき、ボトル底面に接触するまでシリンダーを押し込むことになるが、ボトル、シリンダのいずれにも基準線が記されていて、シリンダーを十分に押し込んだ時、各々の基準線位置が一致するようにすると、押し込み不足により血漿成分量を正確に計測できないといったことを防止できる。
　血液検体の成分及び希釈液を収容するための透明容器の内径は、希釈後に分離された希釈された血漿液量が、目盛り位置と一致していることが好ましい。その際の容器内径は、検出感度を上げるために５ｍｍ以下が好ましく、３ｍｍ程度がより好ましい。例えば原理的に３ｍｍの場合目盛りの位置±０．５ｍｍを視認できれば±約１４μＬの差異を検出でき、５ｍｍの場合±約４０μＬの差異を検出できる。
　さらに血漿分離後に逆流防止弁を押し込むための心棒部の直径を２ｍｍとし、液量検出領域を５ｍｍの幅として、その領域でのシリンダー内壁の径を３ｍｍとするならば目盛りの位置精度が±１．０ｍｍでも心棒部によるシリンダー内の容積低減効果により±１２μＬ程度の精度で液量差異を検出できる。この様な場合、目盛り線を目標の液量±１．０ｍｍの幅で３本以上入れること液量不足の程度は１２μＬ以下に低減可能である。この様子を図２に示す。
　図２は、血漿分離及び密閉時のボトルとシリンダー目盛りの概念図を示す。透明ボトル１０１の下部に設置された血液を、血漿分離膜を含むガスケット１０２中の血漿分離膜でろ過することにより、透明ボトル１０１の下部には血球１０３が主として存在し、透明ボトルの内部に装着された透明シリンダ１０４の内部には主として血漿１０５が存在するようになる。血球と血漿とを分離した後、一方の先端に逆流防止弁１０６を有し、他方の先端に封止キャップ１０７を有する心棒部１０８を、透明シリンダ１０４の内部に挿入し、逆流防止弁１０６を血漿分離膜を含むガスケット１０２中に装着する。これにより、透明シリンダ１０４内の血漿１０５が、透明ボトルの下部の血球が存在する場所に逆流しなくなる。図２において、目盛り１０９は、透明ボトルに一本、透明シリンダに三本付与されている。透明ボトルの目盛りと透明シリンダの真ん中の目盛りは標準量を示す。透明シリンダの下の目盛り及び上の目盛りはそれぞれ下限量と上限量を示す。また、希釈液の目盛り１１０は、血漿で希釈しない希釈液のみの場合の目盛りを示す。この目盛りから増加した体積分が、希釈される前の血漿成分の体積に相当する。
　血液検体の成分及び希釈液の混合液を収容するための少なくとも１つの透明容器に目盛りを付与する場合、透明容器は、内部断面積が他の部位より小さい部位を有し、内部断面積が他の部位より小さい上記部位に、目盛りが付与されていることが好ましい。透明容器の内部断面積が最も小さい部位に、目盛が付与されていることがさらに好ましい。内部断面積とは、透明容器の内側の空間を、一水平面で切断した際の断面積を意味する。目盛を有する部位は液体量を正確に計測する部分であるので、上記の通り、内部断面積が小さい部位に目盛りを付与することにより、高精度の計測が可能となる。
　容器が円柱状の場合には、内径が小さい部位を設けることにより、内部断面積が小さい部位を設けることができる。例えば、シリンダの一部が細くくびれていて、上記くびれた部分に目盛を付与することによって血漿成分量を正確に計測できる。但し、その後に、分離液の逆流防止のための密閉キャップの心棒部を挿入する場合には、シリンダのくびれた部分は心棒部が挿入できる程度の太さを有し、心棒部の容量も考慮して、血漿成分量が正確に計測できるようにくびれ部分に目盛が付与されていることが好ましい。
　内部断面積が他の部位より小さい部位としては、例えば、内径が細くなっている場合には、細くなった部位の内径が、細くなっていない内径に対して、２分の１以下となる部位を設けることが好ましい。
　シリンダの一部が細くくびれている形態を図３及び図４に示す。図３及び図４において、シリンダ２０１の上部の細い部分に目盛り２０２が付与されている。また、希釈液の目盛り２０６が付与されている。
　図３は、容器の太さが他の部位より小さい部位を有する形態（容器外壁の厚さは同じ）を示し、図３（ａ）はある部位で容器の太さが変わる形態を示し、図３（ｂ）は容器の太さが連続的に変わる形態を示す。図４は、容器の内径が他の部位より小さい部位を有する形態（容器の太さは同じ）を示し、図４（ａ）はある部位で容器の内径が変わる形態を示し、図４（ｂ）は容器の内径が連続的に変わる形態を示す。
　また、図２に示す構成のように逆流防止弁を有する心棒部を押し込む場合には、心棒部の太さに太い部分を設けることによって、内部断面積が小さい部位を設けることもできる（図５）。図５において、シリンダ２０１の上部に目盛り２０２が付与されている。また、希釈液の目盛り２０６が付与されている。逆流防止弁２０３を有する心棒部は、細い部分２０４と太い部分２０５とを有し、太い部分２０５に相当する位置に目盛が付与されている。
（４）血液検査キットの提供形態
　本発明の血液検査キットに含まれる各々の要素の個数は特に限定されず、各々１個でもよいし、２個以上の複数でもよい。
　本発明の血液検査キットは、血液検体の成分を希釈するための希釈液と、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器と、所望により他の構成要素とを、これらを収納する収納容器に収納した形態として提供することができる。
［２］血液分析方法
　本発明の血液分析方法は、血液検体の成分を希釈するための希釈液と、血液検体の成分及び希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器とを含む、血液検査キットを用いる血液分析方法であって、予め決定された所定量以上の血液検体の成分含有試料を分析対象試料として選別し、所定量未満の血液検体の成分含有試料を分析対象試料から除外する工程、及び選別された血液検体の成分含有試料を用いて血液の分析を行う工程を含む方法である。
　本発明の血液分析方法で用いる血液検査キットの構成は、本明細書の上記［１］に記載した通りであり、ただし、血液検体の成分及び希釈液の液量を測定するための目盛りは、血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与されていてもよいし、付与されていなくてもよい。好ましくは、目盛りが血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与されている血液検査キットを用いることができる。上記目盛りを使用することにより、予め決定された所定量以上の血液検体の成分含有試料を分析対象試料として選別し、所定量未満の血液検体の成分含有試料を分析対象試料から除外することが容易に可能となる。
　本発明の血液分析方法は、対象者自身が血液を採取する自己採血で実施してもよいし、医師等の有資格者が注射器を使用して血液を採取する一般採血においても実施してもよい。
　本発明において、分析対象となる生体試料は血液であり、血液とは血清又は血漿を含む概念である。好ましくは、被検者より微量の血液を採取し、希釈液で希釈した後、フィルタや遠心分離により血球を分離することにより得られた血漿又は血清を用いることができる。血液検体の成分としては、分離手段により血液検体から分離された血漿成分であることが好ましい。
　血液検体の起源はヒトに限定されず、ヒト以外の動物（哺乳類、鳥類、魚類など）などであっても良い。ヒト以外の動物としては、例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、クマ、パンダ等が挙げられる。好ましくは、生体試料の起源はヒトである。
　好ましい態様としては、患者本人が、ランセットなどのナイフ付の器具を用いて指先などを傷つけて皮膚外にでた血液を採取する。患者の負担を減らすために、侵襲性低く血液を採取することが好ましく血液を採取するときに無痛、あるいは、痛みが非常に少ない状態で採血できることが望ましく、その場合、傷の深さ、大きさは小さいことが望ましく、従って、本発明の分析方法に用いられる患者からの採血量は１００μＬ以下であることが好ましく、１０μＬ以上７０μＬ以下の血液を用いて分析を行うことがより好ましい。このように少ない採血量領域でも、本発明では、採血量が少ないことに採血者が気づき、補填・補償することがきできる。採血量が少なくなってしまっても血液を希釈し血漿分離した容器から採血量の不足を知ることや採血しなおすことができ、採血者、分析者にとって、希釈倍率の結果を狭い範囲で予測することが可能となり、測定精度よく分析対象物を測定するための方法を提供することが可能となる。
　本発明の血液分析方法の第一の態様としては、血液検体中に恒常的に含有されている成分を標準成分として使用する。具体的には、ナトリウムイオン（Ｎａ＋）、塩化物イオン（Ｃｌ－）、カリウムイオン（Ｋ＋）、マグネシウムイオン（Ｍｇ２＋）、カルシウムイオン（Ｃａ２＋）、総タンパク（「ＴＰ」）、アルブミン等が挙げられる。血液検体中に含まれるこれらの標準成分の濃度は、Ｎａ濃度は、１３４～１４６ｍｍｏｌ／リットル（平均値：１４２ｍｍｏｌ／リットル）、Ｃｌ濃度は、９７～１０７ｍｍｏｌ／リットル（平均値：１０２ｍｍｏｌ／リットル）、Ｋ濃度は、３．２～４．８ｍｍｏｌ／リットル（平均値：４．０ｍｍｏｌ／リットル）、Ｍｇ濃度は、０．７５～１．０ｍｍｏｌ／リットル（平均値：０．９ｍｍｏｌ／リットル）、Ｃａ濃度は、４．２～５．１ｍｍｏｌ／リットル（平均値：４．６５ｍｍｏｌ／リットル）、総タンパク濃度は、６．７～８．３ｇ／１００ｍＬ（平均値：７．５ｇ／１００ｍＬ）、アルブミン濃度は、４．１～５．１ｇ／１００ｍＬ（平均値：４．６ｇ／１００ｍＬ）である。これらの中で、微量な血液成分を5倍以上の高い希釈率で希釈したときにこれらの恒常性のある標準成分を十分に精度高く検出できるためには、血液中に高い濃度で存在する標準物質を測定することが好ましく、また、血液中に高い濃度で存在する標準物質は、血液以外からの意図しない成分が仮に希釈液中に混入してしまった場合においても、混入影響への耐性が高く、検査精度の低下を抑制できると考えられる。このような標準成分としては、ナトリウムイオン又は塩化物イオンが好ましく、さらには、血液中に恒常的に存在する標準成分の中でも血液中に存在する量が一番高いナトリウムイオンが最も好ましい。Ｎａイオンは、標準値（正常値）で１４２ｍｍｏｌ／リットルで血漿中の総陽イオンの９０％以上を占める。
　上記の第一の態様の血液分析方法においては、血液中に恒常的に存在する標準成分を含有しない希釈液を含む血液検査キットを用いて、血液検体から血漿を回収し、回収した血漿を希釈液で希釈し、希釈した血漿中の、血液中に恒常的に存在する上記標準成分を用いて血漿の希釈倍率を決定し、血液検体中の対象成分の濃度を分析することができる。
　ナトリウムイオン濃度、塩化物イオン濃度は、たとえば、炎光光度法、原子吸光法、ガラス電極法、滴定法、イオン選択電極法、酵素活性法等により測定することができる。
　本発明では微量な血液を手指から採取して希釈液で希釈した試料は僅か１５０μL程度であり、生化学成分や免疫検査項目を１０項目以上測定することから外部標準物質の測定は数μLの微量で測定できることが好ましい。また、多数の試料を分析する必要から、市販の生化学・免疫自動分析装置に適応できることが好ましい。
　本発明では、好ましい標準物質はナトリウムイオンであり、血液希釈後の希釈液中のナトリウムイオンの測定値（濃度Ｘ）と、血液検体中の標準成分であるナトリウムイオンの既知濃度値（濃度Ｙ；１４２ｍｍｏｌ／リットル）、とから、血液検体の希釈倍率（Ｙ／Ｘ）を算出する。この希釈倍率を、希釈した血液検体中の分析対象成分の測定値（濃度Ｚ）に乗ずることにより、実際に血液検体の血漿中に含まれる分析対象成分の濃度［Ｚ×（Ｙ／Ｘ）］を求めることが可能となる。
　また、血液の希釈と血漿の分離回収が正常に行われているか検証するために、２つ以上の血漿中に恒常的に含有されている異なる標準成分からそれぞれ独立に希釈倍率を求めて、その値が一致することを確認することが好ましい。一致するとは、２つの測定値（ａ，ｂ）において、それらの差のそれらの平均値に対する割合、すなわち｜ａ－ｂ｜／｛（ａ＋ｂ）／２｝×１００が、２０％以下であることであり、好ましくは１０％以下であることであり、より好ましくは５％以下であることである。好ましい一態様としては、ナトリウムイオン濃度の、希釈液の測定値及び血漿中の既知濃度値（１４２ｍｍｏｌ／リットル）とから求めた希釈倍率を使用した血液検体中の対象成分の濃度の分析が、ナトリウムイオン以外の血漿中に恒常的に含有されている標準成分から求めた希釈倍率が、ナトリウムイオン濃度から求めた希釈倍率と一致することを確認することで、血液検体の血漿中に含まれる成分の分析が正常に行われていることの検証が可能となる。ここで、対象成分の濃度の分析に用いる標準成分としては、ナトリウムイオン又は塩化物イオンから選択されることが好ましく、分析を検証するために用いる標準成分としては、総タンパク又はアルブミンから選択されることが好ましく、総タンパクから選択されることがより好ましい。総タンパクの測定法は、ビューレット法や、紫外吸収法、ブレッドフォード法、ローリー法、ビシンコニン酸（Ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ　Ａｃｉｄ：ＢＣＡ）法、蛍光法など公知の方法があり、測定試料の特性や感度、試料量などに応じて適宜使用する方法を選択することができる。
　本発明の血液分析方法の第二の態様としては、血液中に存在しない標準成分を用いて希釈濃度を決定する。この場合、血液中に存在しない標準成分を含む希釈液を含む血液検査キットを用いて、血液検体から血漿を回収し、回収した血漿を希釈液で希釈し、希釈した血漿中の、血液中に存在しない上記標準成分を用いて血漿の希釈倍率を決定し、血液検体中の対象成分の濃度を分析することができる。
　血液中のナトリウムは非常に高い恒常性があり、個体間の変動も小さいことが知られている。また、その中央値濃度も１４２ｍｍｏｌ／Ｌと生体濃度としては濃いため、希釈液で希釈しても、その濃度を精度良く測定できる。また、希釈用の希釈液中の内部標準は高い濃度に設定できるため、濃度を精度良く測定できる。
　本発明の血液分析方法の第三の態様としては、血液中に存在しない標準成分を含む希釈液を含む血液検査キットを用いて、血液検体から血漿を回収し、回収した血漿を希釈液で希釈し、希釈した血漿中の、血液中に恒常的に存在する上記標準成分及び血液中に存在しない標準成分を用いて、血漿の希釈倍率を決定し、血液検体中の対象成分の濃度を分析することができる。上記の通り内部標準液の測定吸光度と試料の恒常性の高い成分の外部標準の測定吸光度を組み合わせることで、測定精度の高い定量法として前述の２つの定量法の欠点を補完して信頼性の高い希釈成分定量法とすることができる。
　血液検体の成分の希釈率を、下記式１から４のいずれかの式で算出し、希釈液中の分析対象成分の濃度に、上記希釈率を乗じて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析することが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000001
 　上記式において、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｂ’及びＸは、以下のように定義される。
Ａ　：　内部標準物質を含む希釈液の測定吸光度
Ｂ　：　Ａから血液検体の成分を希釈した希釈液の吸光度を差し引いた吸光度
Ｃ　：　恒常性物質としてナトリウムイオン濃度が１４２ｍｍｏｌ／Ｌである、測定された吸光度
Ｄ　：　血液検体の成分を希釈した希釈液のナトリウムイオンの吸光度
Ｂ’　：　血漿ナトリウムの吸光度から算出した希釈倍率による、希釈血漿中の血液中に存在しない標準成分の吸光度の補正値
Ｘ　：　血漿希釈倍数
　希釈率を求める際のもう一つの算出方法として、二乗平均法を用いた式５で算出し、希釈液中の分析対象成分の濃度に、式５で算出した希釈率を乗じて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析する態様も好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000002
　血液検査として、肝機能、腎機能、メタボリズムなど、特定の臓器、特定の疾患を検査する場合には、臓器や疾患に特有の複数の測定対象成分の情報を入手して、臓器の状態、生活習慣の予測などを行うために、一般的には、複数の測定対象成分の分析が同時に行われる。例えば、肝臓の状態を検査するためには、一般的には、ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、γ―ＧＴＰ（γグルタミルトランスペプチダーゼ）、ＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）、総ビリルビン、総タンパク、アルブミン等、数種類以上もの物質の血液中の濃度が測定される。このように、複数の対象成分を一つの血液検体から測定するためには、再測定の可能性も考慮して、希釈された血液の量はある程度必要となる。従って、採取した血液を希釈する希釈液は、ある程度の量を確保することが重要である。侵襲性を少しでも低くした血液採取を考慮すると、採血量は１００μL以下である態様が好ましく、この場合、血液検体の成分である血漿の希釈倍率は７倍程度以上となる。
　本発明は、患者が採血し、医療機関又は検査機関に、採血した血液を搬送して、検査を行うための血液検査キット、及び上記血液検査キットを用いた血液分析方法に関する。従って、採血後、検査までには、希釈された状態で長時間放置される可能性があり、その間に、たとえば赤血球の溶血が起こると、血球内の濃度が高い物質や酵素などが血漿あるいは血清中に溶出し、検査結果に影響を与えたり、色調により分析対象成分を測定する場合には、ヘモグロビンが検査に影響を与える可能性がある。従って、搬送中に溶血、血液の凝固等を防止する必要があり、本発明においては、患者が採取した血液を希釈液で希釈後に、血液から血球を分離する工程を含むことが好ましい。
　血液から血球を分離して血漿を回収する方法は、特に制限はない。ただし採血後の血漿分離は、希釈液により血液を希釈した後に直ちに行うことが好ましい。抗凝固剤入り採血管で採血した後に遠心分離を行って血液を血球と血漿成分に分離し、分離した状態で搬送するか、血液成分に圧力を加えて濾過膜などの分離膜を通過させて、血球成分を分離膜に捕捉させて血液から血球成分を分離する方法、などが用いられる。この場合、抗凝固剤を用いることが好ましい。また、測定の精度を確保するために、血球成分を除いた血液の溶液部分と物理的に隔離することが好ましく、この場合、具体的には、特開２００３－２７０２３９号公報に記載の逆流防止手段を有する生体試料分離器具等を用いることが好ましい。
　本発明において、血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析するとは、対象成分の濃度を決定すること（即ち、対象成分を定量すること）、又は対象成分の濃度が所定の基準値以上であるか所定の基準値以下であるかを決定すること、ある程度の濃度を含むことを検出する定性を行うこと、などを包含し、分析の形態は特に限定されない。
　分析の対象成分は限定されず、生体試料中に含まれるあらゆる物質が対象となる。例えば臨床診断に用いられる血液中の生化学検査項目、腫瘍マーカーや肝炎のマーカー等各種疾患のマーカー等が挙げられ、タンパク質、糖、脂質、低分子化合物等が挙げられる。また、測定は物質濃度だけでなく、酵素等の活性を有する物質の活性も対象となる。各対象成分の測定は、公知の方法で行うことができる。
　本発明の血液分析方法の一例について、以下に説明する。
　微量血液試料６５μLを内部標準添加希釈液２８０μLに添加して混合し、フィルターで血球を濾過して、希釈血漿を試料として生化学自動分析装置で内部標準と外部標準及び生体成分の各濃度を測定する。
　本発明の一つの実施形態によれば、採取した血液中の未知濃度の希釈血漿生体試料成分の定量及び酵素活性を市販の生化学・免疫自動分析装置で効率的に多数の試料を分析する方法である。生体試料中に一定の濃度を維持している血漿ナトリウム等を用いる外部標準物質、また血漿中に全く含まれない若しくはほとんど含まれない成分であって、血球膜を通過しない内部標準物質としてリチウムを用意し、これを緩衝液中に添加する。一般的に、有機化合物を内部標準にした場合には、有機化合物の種類によっては生体酵素の作用を受けて保存安定性に影響を受ける場合があるため、安定性の確認が必要であるが、このリチウムを内部標準物質として使用する場合は希釈液中で長期間安定であり、容易に定量することができる。また測定試料の外部標準であるナトリウムも元素であるため安定である。
　希釈液で希釈された血漿ナトリウムを外部標準として測定する方法には炎光光度計、原子吸光法、そしてイオン選択電極法がある。本発明では微量な血液を手指、踵から採取して希釈液で希釈し血漿と血球分離後の血漿試料は僅か３００μL程度であり、生化学成分や免疫検査項目を10項目以上測定することから外部標準ナトリウム測定では数μLの微量で測定する必要がある。また、大量の試料を分析する必要から、市販の生化学・免疫自動分析装置に適応できる必要がある。
　本発明では、ナトリウム測定を行う場合には、ナトリウムイオンにより酵素ガラクトシダーゼは酵素活性が活性化することを利用して、希釈液で希釈された非常に低濃度ナトリウム（２４ｍｍｏｌ／Ｌ以下）の試料を数μLで測定することが可能な酵素的測定法を使用することが好ましい。この方法は生化学・免疫自動分析装置に適応でき、ナトリウム測定を目的とした別の測定機器を必要としない点で効率性が高く経済的であるため、特に好ましい測定方法である。
　希釈液に添加したリチウム内部標準物質の測定は、キレート比色法（ハロゲン化ポルフィリンキレート法：パーフルオロ-5,10,15,20-テトラフェニル-21H,23H -ポルフィリン）を利用することで、生化学自動分析装置を用いて、微量の試料を数多く容易に測定が可能である。
　血液中の血漿希釈率を求めるためにナトリウムとリチウムの濃度を測定することから、希釈液にはこれらの成分や類似したアルカリ金属類に近似した物質が含まれないことが好ましく、また、血漿のｐＨである７ｐＨ７．４付近に調整できることが好ましい。このため、アルカリ金属類（NaOHなど）を含まないアルカリ性を示す化合物としては、2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール、2-エチルアミノエタノール、N-メチル-D-グルカミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンなどのアミノアルコール化合物を利用することが好ましい。これらのアルカリ性を示す化合物を含む希釈液をpH7.4付近に調整するために、生化学用として優れた性能を持つGood's緩衝液でpKaがpH7.4付近の緩衝液である、HEPES (2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]エタンスルホン酸), TES（N-トリス(ヒドロキシメチル) メチル-2-アミノエタンスルホン酸）, MOPS（3-モルホリノプロパンスルホン酸）, BES（N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸）を酸として希釈液中に使用することが好ましい。
　これらの希釈液は外部標準のナトリウムや内部標準のリチウムなどのアルカリ金属やアルカリ金属土類を含まず、測定対象のナトリウムやリチウムの測定系に干渉を与えないことから、本発明の希釈液として使用することが好ましい。また、これらの希釈液で希釈された成分は生化学・免疫自動分析装置での種々の測定法でも干渉しないこと、さらに血球が溶血をしないことや生体成分が37℃でも安定に保存することが可能であり、希釈液として好ましい態様である。
　希釈液で希釈された血漿中の生体成分を測定するため、希釈液中の成分が血漿中の生体成分を変性させたり、安定性に実質的に影響を与えないことが好ましい。この一例として2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール（AMP）とHEPESを混合してpH7.4に調整した緩衝性能を有する希釈液は生体成分に変性を与えず、血漿成分を希釈した場合でも各成分は安定しており、これら生体成分の測定試薬にも干渉しない緩衝液である。
　採取した血液検体を希釈液で希釈した後に、血液中の血球成分をフィルター濾過する態様も本発明では好ましい態様であり、希釈液の浸透圧を血液と同等（２８５ｍＯｓｍ／ｋｇ（ｍＯｓｍ／ｋｇ：溶液の水１ｋｇが持つ浸透圧で、イオンのミリモル数））又はそれ以上とすることで血球の溶血を防ぐことが可能となる。さらに血球膜や酵素の安定化のために、マンニトールやピリドキサールリン酸を希釈液に添加することも好ましい態様である。また手指採血時に手指表面から一部混入する細菌の増殖による血液成分の分解を抑えるために３～４種類の抗生物質を添加して、生体成分の細菌による分解の安定化を図ることも好ましい態様である。
　希釈血漿の微量ナトリウム測定はβ-ガラクトシダーゼがナトリウムで活性化することを利用し、希釈液で希釈された試料のナトリウム濃度とガラクトシダーゼ活性が比例関係にあることを利用した酵素的測定法により行うことが好ましい。
　以下の実施例により本発明を説明するが、本発明は実施例の記載によって限定されるものではない。
（実施例１）
　シリンダー、及び血液を採取するスポンジ状のチップ以外は、デメカル（登録商標）血液検査キット（株式会社リージャー社）を用いて血液採取と血漿分離並びに血液分析を行った。シリンダーに血奨分離後の液量の目安となる目盛を入れた場合（本発明）と目盛を入れない場合（比較例）との比較を行った。
目盛りを入れたシリンダー：
仕様－１：分離血奨の量変動が30μＬ差を検出できる様に内壁の厚みと目盛りの幅を調整した。
仕様－２：分離血奨の量変動が15μＬ差を検出できる様に内壁の厚みを仕様－１のシリンダーから変更して目盛りを付与する部分の断面積を小さくし、目盛りの幅を調整した。
　目盛を入れ血漿分離を行なった場合には、シリンダーが最後まで押し下げられて希釈された血漿が最大量取りだした時に、血液採取量が不足していないことが確認できる。血液採取量の不足に気づいた場合は、血液を再度採取した。目盛り付与のために設定した希釈液量は300μＬであり、血液採取量は65μＬを目標とした。
　ボランティアの患者から、インフォームドコンセントを行った後に静脈から注射器で採取した約１０ｍＬの血液を採血管に得た。希釈液３００μＬを入れた目盛りなしのシリンダー又は目盛りありのシリンダー（仕様－１、及び仕様－２）をそれぞれ１０個ずつ準備した。その後、スポンジ状のチップで６５μＬ程度の血液を採取し、それぞれのシリンダーの希釈液に採取した血液を混合させて希釈し、フィルタを用いて混合液から血球を分離して血漿の希釈液を採取した。目盛り有りのシリンダーから、希釈した血漿のおおよその量の情報を取得した。実験は各１０回繰り返すことで、測定値の繰り返し精度を求めた。希釈率は、以下の方法に従って決定した。
（方法１）　目盛りなしのシリンダーを用いた場合には、血液量を６５μＬ、へマトクリット値（血液中に占める血球の体積の割合を示す数値）を４０％で一定と仮定し、希釈液３００μＬとして希釈倍率を計算した。目盛りありのシリンダーを使用した場合には目盛りから血漿の量を推測し、その値を用いて希釈倍率を求めた。
　上述の実験に用いた希釈液の成分を以下に記す。希釈液は、不純物を含めNaを含有する物質を用いていないことに留意して設計する以外は、非特許文献１に記載のものを用いた。浸透圧は、ＯＳＭＯＡＴＡＴ　ＯＭ－６０４０（アークレイ（株）社製）を用いて測定した値を表示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　日本電子（株）社製ＪＣＡ－ＢＭ６０５０を用いて、採取した血漿の希釈液中のＡＬＴの濃度を求めた。この濃度に対して、上記の（方法１）に記載した方法により計算した希釈倍率を乗ずることで、もとの血漿中の値を求めた。このＡＬＴの測定最大値(U/Ｌ)、ＡＬＴの測定最小値(U/Ｌ)、並びに測定最大値と測定最小値の差(U/Ｌ)を表２に示す。ここで、U/Ｌは、至適条件下で、試料１Ｌ中に、温度30℃で１分間に１μｍｏｌの基質を変化させることができる酵素量を表す。結果を表２にまとめた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　表２の結果から、シリンダーに目盛りがあると、測定の最大値と測定の最小値との差が小さくなることがわかり、本発明の効果が確認された。
（実施例２）
　実施例１と同様にして希釈血漿液を調製し、方法１に加えて、以下の方法２、方法３、方法４に従って、希釈倍率を求めた。
（方法２）
　採取した血液の血漿成分と、の希釈液との混合液を調製し、その混合液中のナトリウムイオン濃度を測定し、その値と恒常性物質として通常評価されているナトリウムイオン濃度１４２ｍｍｏｌ／Ｌに対する濃度値から希釈倍率を割り出した。具体的には、血漿成分と希釈液との混合液の一部を精製水で５倍希釈した後に３μＬを秤量し、これに対して、下記の表３に示したナトリウムイオン測定試薬の第１試薬を５２μＬ加えて、５分間２７℃で保温し、次に、基質液であるナトリウムイオン測定試薬の第２試薬を２６μＬ加えた後、１分間にわたって吸光度の変化を主波長４１０ｎｍ、副波長６５８ｎｍにおいて日本電子（株）ＪＣＡ－ＢＭ６０５０型生化学自動分析装置で測定した。図６にナトリウム濃度と吸光度変化量を示した検量線を示す。２４ｍｍｏｌ／Ｌまで原点を通る直線性が得られナトリウムの定量性を確認した。この方法２では、表１で示した希釈液、及び以下の表３で示した、ナトリウム測定試薬の第１試薬、第２試薬ともに、ナトリウムイオンを含有しないことに留意して調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
（方法３）
　「臨床病理　第５６巻　第７号（平成２０年７月）別冊　５７７－５８３」（非特許文献１）に記載の方法に従い、希釈液中に添加したグルセロール三リン酸の濃度の指標となる吸光度を用いて、（非特許文献１）に記載の方法に従い血液の希釈倍率を求めた。グリセロール三リン酸を発色させるために用いた試薬も方法２と同様に、非特許文献１に記載の液からナトリウムイオンを含有しないことに留意して設計した。
（方法４）
　方法２及び方法３を用いて得られた値を使用して、以下の式（１）により、血漿の希釈液による希釈倍率を求めた。
Ｘ＝（Ａ＋Ｃ）／（Ｂ＋Ｄ）　　　　　（１）
Ａ：方法３において測定したグリセロール三リン酸を含む希釈液の測定吸光度
Ｂ：Ａの吸光度から血漿成分を希釈した希釈液の吸光度を差し引いた吸光度
Ｃ：恒常性物質としてナトリウムイオン濃度が１４２ｍｍｏｌ／Ｌである溶液の、測定された吸光度
Ｄ：血漿成分を希釈した希釈液のナトリウムイオン濃度の吸光度
Ｘ：血漿希釈倍率
　日本電子（株）社製ＪＣＡ－ＢＭ６０５０を用いて求めた希釈血漿中のＡＳＴの濃度に対して、上記の通り求めた希釈倍率を乗じることで、血漿中に存在するＡＳＴを求めた。１０回同じ測定を繰り返し行い、ＡＳＴの測定最大値(U/Ｌ)、ＡＳＴの測定最小値(U/Ｌ)、並びに測定最大値と測定最小値の差(U/Ｌ)を求めた。結果を表４に示す。ここで、U/Ｌは、至適条件下で、試料１Ｌ中に、温度30℃で１分間に１μｍｏｌの基質を変化させることができる酵素量を表す。結果を表２に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　この結果から、シリンダーに目盛りが有る場合に、測定最大値と測定最小値の差が小さくなることがわかり、本発明の効果が確認された。さらに、内部標準、外部標準を使用して希釈倍率を算出して測定値を補正した場合には、有意に最大値と最小値の差が小さくなることが確認された。また、方法４において、式２を用いて希釈倍率を求めて測定値を補正した場合でも、方法４と同等の結果が得られた。
（実施例３）
　実施例１の仕様-2で使用したシリンダーから血奨分離後の液量の目安となる目印（目盛り）を省略し、代わりに分離液の逆流防止のための密閉キャップの心棒部に、仕様-2と同様な、液量増分が計測可能な目盛りを付与した以外は、実施例１と同様に測定を行い、実施例１と同様の効果が確認できた。
（実施例４）
　実施例２の方法２において採取した血漿成分の希釈液との混合液に対して、ナトリウムイオン濃度測定に加えて、下記に示す方法により、総タンパクの濃度を測定した。
（血漿希釈混合液中の総タンパク濃度の測定）
　ビューレット法を測定原理とする測定を行った。ビウレット試薬：３．０ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸銅　４００μＬ、酒石酸カリウムナトリウム　２１．３ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮａＯＨ　０．７５ｍｏｌ／Ｌを準備し、希釈した血漿と混合した。混合後、３７℃で１０分間放置して、アルカリ性下で血漿中のタンパクと銅イオンによる５４０～５６０ｎｍの青紫色を呈する錯体が形成されるまで待ち、５４５ｎｍで吸光度を測定し、標準溶液の吸光度から得た検量線を用いて血漿希釈混合液中の総タンパク濃度を定量した。
　血液希釈後の希釈液中のナトリウムイオン濃度の測定値（濃度Ｘ）と、血液検体中の標準成分であるナトリウムイオンの既知濃度値（濃度Ｙ；１４２ｍｍｏｌ／Ｌ）、とから求めた、血液検体の希釈倍率（Ｙ／Ｘ）に対して、血液希釈後の希釈液中の、総タンパクの測定値と、血液検体中の標準成分である総タンパクの既知濃度値（濃度；７．５ｇ／１００ｍＬ）とから求めた希釈倍率が、同じ値であるとの結果が得られた。これにより、ナトリウムイオン濃度から求めた希釈倍率の測定が正常に行われていることの検証が可能であることが分かった。
（実施例５）
　実施例１と全く同様にして以下の血液検査項目に関し本発明のバラツキの少ない特徴が確認できた。
＜検査項目＞
　総タンパク、アルブミン、γ-グルタミルトランスフェラーゼ、総コレステロール、中性脂肪、善玉コレステロール、尿素窒素、クレアチン、尿酸、血糖、グリコヘモグロビン、ｐ５３抗体（腫瘍マーカー）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＣＡ１２５（がん抗原125：卵巣癌腫瘍マーカー）、ペプシノゲン、ＡＦＰ（αフェトプロテイン：肝癌腫瘍マーカー）、CA19-9（carbohydrate antigen 19-9；膵臓・胆嚢癌マーカー）、ピロリ菌、HIV（ヒト免疫不全ウイルス）抗体、HBｓ抗原（Ｂ型肝炎ウイルスの外側のタンパク質）、HCV（Ｃ型肝炎ウイルス）抗原。
（実施例６）
　表１の組成において、グルセロール三リン酸を塩化リチウム　1mmol／Ｌに変更したナトリウムイオンを含有しない内部標準添加希釈液を準備した。緩衝液に添加したリチウム内部標準物質の測定は、キレート比色法（ハロゲン化ポルフィリンキレート法：パーフルオロ-5,10,15,20-テトラフェニル-21H,23H-ポルフィリン）を利用して吸光度を測定することで求めることができる。
　複数の患者から採取した血液に対して、血液凝固を阻止するためにEDTAを添加した。実施例１で使用した仕様－２のシリンダーおよびスポンジ状チップを使用して採取した微量の血液を希釈液で希釈した。その後、分離膜で血球を分離して得られた希釈血漿中の生化学成分を測定した。別途、実施例１の方法４で、Aをリチウム緩衝液の吸光度、Bを血漿と希釈液を混合した後のリチウムの吸光度変化量とし、他は実施例１の方法４と同様にして血漿の希釈倍数を求め、別途求めた希釈血漿中の生化学成分の値に乗じることにより、もとの血漿中に存在する生化学成分の値（Ａ）を取得した。別途、EDTAを添加して採取した同じ血液試料を遠心分離により血球を分離して得た希釈していない血漿の生化学成分の値（Ｂ）を取得した。それぞれ患者から取得した２つの値の相関係数を以下の式を用いて計算した。
　相関係数＝（値（Ａ）と値（Ｂ）の共分散）／｛（値（Ａ）の標準偏差）×（値（Ｂ）の標準偏差）｝
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　・・・・・・・（２）
　相関係数は1.000に近いほど２つのデータが一致していることを示し、通常0.800以上は良好な相関性を示す。また、２つのデータから散布図を作成し、その分布から最小二乗法を用いて統計的な数式として回帰式(y = ax ± b)を求めた。ａは回帰式の傾きで、0.95～1.05の範囲内にあると、二つのデータの比例性が良好であることを示している。またbは回帰式の切片で、０に近い数値であると誤差が少ないことを示している。結果を表２に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　表５の結果より、本発明の血液検査キットを用いて希釈した血漿から得た値と、希釈しない血漿から得た値の相関性は良好な結果であることがわかった。
１　血液分離器具
２　採血容器
３　筒体
４　キャップピストン
５　密閉蓋
６　キャップ
７　パッキン
８　螺子部
９　係止部
１０　底部
１１　脚部
１２　スリット溝
１３　希釈液
１４　拡径部
１５　薄肉部
１６　本体部
１８　縮径部
１９　係止突起部
２０　外鍔部
２１　濾過膜
２２　カバー
２６　摘み部
２７　心棒部
２８　空間
２９　下端部
３１　段差部
３３　上端部
３４　頂部
１０１　透明シリンダ
１０２　ガスケット
１０３　血球
１０４　透明シリンダ
１０５　血漿
１０６　逆流防止弁
１０７　封止キャップ
１０８　心棒部
１０９　目盛り
１１０　希釈液の目盛り
２０１　シリンダ
２０２　目盛り
２０３　逆流防止弁
２０４　細い部分
２０５　太い部分
２０６　希釈液の目盛り

Claims (18)

  1. 　血液検体の成分を希釈するための希釈液と、
    　前記血液検体の成分及び前記希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器と、
    を含む血液検査キットであって、
    　前記血液検体の成分及び前記希釈液の液量を測定するための目盛りが、前記血液検査キットに含まれる少なくとも1つの構成要素に付与された、血液検査キット。
  2. 　前記目盛りが、少なくとも、前記血液検体の成分のない希釈液の液量を測定するための目盛りを含む、請求項１に記載の血液検査キット。
  3. 　前記構成要素が、前記血液検体の成分及び前記希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器である、請求項１又は２に記載の血液検査キット。
  4. 　前記透明容器が、内部断面積が他の部位より小さい部位を有し、内部断面積が他の部位より小さい前記部位に、前記目盛りが付与されている、請求項３に記載の血液検査キット。
  5. 　前記透明容器の内部断面積が最も小さい部位に、前記目盛が付与されている、請求項４に記載の血液検査キット。
  6. 　前記血液検体の成分が、分離手段により血液検体から分離された血漿成分である、請求項１から５の何れか１項に記載の血液検査キット。
  7. 　前記血液検査キットが、血液中に恒常的に存在する標準成分を用いて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析するための血液検査キットであり、前記希釈液が、前記標準成分を含有しない、請求項１から６の何れか１項に記載の血液検査キット。
  8. 　前記血液検査キットが、血液中に恒常的に存在する標準成分を用いて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析し、且つ前記分析を検証するための血液検査キットであり、前記希釈液が、前記標準成分を含有しない、請求項１から６の何れか１項に記載の血液検査キット。
  9. 　前記標準成分が、ナトリウムイオン、塩化物イオン、総タンパク、及びアルブミンからなる群から選択される成分である、請求項７又は８に記載の血液検査キット。
  10. 　前記希釈液が、血液中に存在しない標準成分を含み、前記血液検査キットが、前記血液中に存在しない標準成分を用いて血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析するための血液検査キットである、請求項１から９の何れか１項に記載の血液検査キット。
  11. 　前記血液中に存在しない標準成分が、グリセロール三リン酸又はリチウムである、請求項１０に記載の血液検査キット。
  12. 　前記希釈液が、pH6.5～pH8.0のpH域で緩衝作用を有する緩衝液である、請求項１から１１の何れか１項に記載の血液検査キット。
  13. 　前記希釈液が、2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール、2-エチルアミノエタノール、N-メチル-D-グルカミン、ジエタノールアミン、及びトリエタノールアミンからなる群から選択されるアミノアルコール化合物、並びにHEPESとも称する2- [4- (2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジニル] エタンスルホン酸)、TESとも称するN-トリス(ヒドロキシメチル)メチル-2-アミノエタンスルホン酸、MOPSとも称する3-モルホリノプロパンスルホン酸、及びBESとも称する（N,N１-ビス(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸からなる群から選択される緩衝剤を含む希釈液である、請求項１から１２の何れか１項に記載の血液検査キット。
  14. 　血液検体の成分を希釈するための希釈液と、前記血液検体の成分及び前記希釈液を収容するための少なくとも１つの透明容器とを含む、血液検査キットを用いる血液分析方法であって、予め決定された所定量以上の前記血液検体の成分含有試料を分析対象試料として選別し、前記所定量未満の前記血液検体の成分含有試料を分析対象試料から除外する工程、及び前記の選別された前記血液検体の成分含有試料を用いて血液の分析を行う工程を含む、血液分析方法。
  15. 　前記血液検査キットが、請求項１から１３の何れか１項に記載の血液検査キットであり、前記目盛を用いて、予め決定された所定量以上の前記血液検体の成分含有試料を選別する、請求項１４に記載の血液分析方法。
  16. 　前記血液検体の成分が、分離手段により血液検体から分離された血漿成分である、請求項１４又は１５に記載の血液分析方法。
  17. 　前記血液検体の成分の希釈率を、下記式１で算出し、希釈液中の分析対象成分の濃度に、前記希釈率を乗じて前記血液検体の成分中の対象成分の濃度を分析する、請求項１４から１６の何れか１項に記載の血液分析方法。
    式１：　（Ａ＋Ｃ）／（Ｂ＋Ｄ）
    式中、Ａは、内部標準物質を含む希釈液の測定吸光度を示し、Ｂは、Ａから血液検体の成分を希釈した希釈液の吸光度を差し引いた吸光度を示し、Ｃは恒常性物質としてナトリウムイオン濃度が１４２ｍｍｏｌ／Ｌである測定された吸光度を示し、Ｄは、血液検体の成分を希釈した希釈液中のナトリウムイオンの吸光度を示す。
  18. 　１０μｌ以上７０μｌ以下の血液を用いて分析を行う、請求項１４から１７の何れか１項に記載の血液分析方法。
     
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