[go: up one dir, main page]

WO2017065213A1 - イムノクロマト試験片 - Google Patents

イムノクロマト試験片 Download PDF

Info

Publication number
WO2017065213A1
WO2017065213A1 PCT/JP2016/080369 JP2016080369W WO2017065213A1 WO 2017065213 A1 WO2017065213 A1 WO 2017065213A1 JP 2016080369 W JP2016080369 W JP 2016080369W WO 2017065213 A1 WO2017065213 A1 WO 2017065213A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
immunochromatographic test
test piece
control line
antibody
detection reagent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2016/080369
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
裕 川南
裕二 辻
圭三 米田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Toyobo Co Ltd
Original Assignee
Toyobo Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toyobo Co Ltd filed Critical Toyobo Co Ltd
Priority to EP16855466.5A priority Critical patent/EP3364189B1/en
Priority to KR1020187013381A priority patent/KR102142901B1/ko
Priority to CN202310313515.6A priority patent/CN116136533A/zh
Priority to PL16855466T priority patent/PL3364189T3/pl
Priority to JP2017545455A priority patent/JP6741013B2/ja
Priority to DK16855466.5T priority patent/DK3364189T3/da
Priority to CN201680060111.9A priority patent/CN108139395A/zh
Priority to US15/767,468 priority patent/US11852630B2/en
Priority to ES16855466T priority patent/ES2865500T3/es
Publication of WO2017065213A1 publication Critical patent/WO2017065213A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5023—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures with a sample being transported to, and subsequently stored in an absorbent for analysis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0825—Test strips
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/575—Hormones
    • G01N2333/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors

Definitions

  • the present invention relates to a method for detecting a detection target substance contained in a biological sample by immunochromatography, a kit for detection, and a method for producing the kit.
  • a biological sample is developed from one end of a porous support on which an antibody that specifically binds to the detection target substance is immobilized, moving through the porous support by capillary action, and is labeled in the process.
  • This is an immunoassay method for determining the presence or absence of a substance to be detected in a biological sample by accumulating with the passage of time by binding the substance to be detected and an antibody by an immune reaction and locally developing color.
  • POCT refers to a clinical test performed by a health care worker beside the subject. Unlike clinical tests performed in central laboratories of large-scale hospitals, POCT has a growing need in the medical field because test results can be obtained instantaneously on the spot.
  • the sandwich method is a typical quantification method.
  • two types of antibodies having different epitopes in the detection target substance are used.
  • the first antibody is used as a detection reagent sensitized with detection particles such as colloidal gold, colored latex, and fluorescent particles.
  • the second antibody is used for measurement of the test line as a capture antibody fixed to one end of the porous support.
  • an antibody that specifically binds to the detection antibody is immobilized on the other end of the porous support and used for control line measurement.
  • the detection target substance contained in the biological sample develops from one end of the porous support, moves while forming an immune complex with the detection antibody, and is captured and colored by contacting the capture antibody on the test line.
  • the free detection reagent that has not formed an immune complex with the detection target substance passes through the test line, and is captured by the control line antibody and develops color.
  • the concentration of the detection target substance can be quantified by using these color development intensities by using a device such as a chromatographic reader.
  • control line may be used to measure the amount of detection reagent flowing into the porous support. Therefore, when a certain amount of detection reagent develops on the porous support, color development occurs. It is desired that the strength is always constant. As described above, if the color intensity of the control line changes due to the concentration of the detection target substance, the measurement accuracy may be greatly affected.
  • an object of the present invention is to provide a control line detection reagent as a detection reagent that is not affected by the concentration of the detection target substance, thereby providing an immunochromatography analysis method and analysis method that are more accurate than before.
  • the present invention provides an immunochromatographic test piece and kit using the above, and a method for producing the kit.
  • the present invention uses a detection reagent containing a control line detection reagent as a detection reagent for detecting a control line. It was found that the color intensity of the control line can be stabilized without being influenced by the above. Based on this knowledge, the inventor further invented an immunochromatographic test piece containing a control line detection reagent, a method for producing the test piece, a method for quantifying a detection target substance in a biological sample using the immunochromatographic test piece, and the like. Completed.
  • An immunochromatographic test piece for quantifying a detection target substance in a biological sample a) a conjugation pad impregnated with a detection reagent that specifically binds to the detection target substance and a control line detection reagent, and b) an antibody for capturing the detection target substance is immobilized on the upstream side, and An immunochromatographic test strip having a porous membrane pad on which an antibody for specifically capturing a control line detection reagent is immobilized on the downstream side.
  • the immunochromatographic test piece according to (2) wherein the protein is a protein derived from a microorganism or an animal.
  • the immunochromatographic test piece according to (3) wherein the protein derived from the microorganism is Blocking Peptide Fragment.
  • the immunochromatographic test piece according to (3) wherein the animal-derived protein is bovine serum albumin or casein.
  • An immunochromatographic analysis kit comprising the immunochromatographic test strip according to any one of (1) to (6), a sample diluent, and an analyzer. (9) The method for producing an immunochromatographic test piece according to any one of (1) to (6).
  • the color intensity of the control line can be stabilized without depending on the concentration of the substance to be detected in the biological sample, and therefore an immunochromatographic test strip with high measurement accuracy can be provided. it can.
  • An embodiment of the immunochromatographic test piece of the present invention is an immunochromatographic test strip including a detection reagent that specifically binds to a detection target substance and a control line detection reagent.
  • the control line detection reagent used in the present invention is a detection particle to which a biotin-labeled protein is bound.
  • the biotin labeling method is not particularly limited, and examples include a method of binding by the N-hydroxysuccinimide method. Although it does not restrict
  • the method for binding the biotin-labeled protein and the detection particle is not particularly limited, and examples include a physical adsorption by a hydrophobic bond or a binding method via a covalent bond.
  • the type of protein used for the biotin-labeled protein is not particularly limited, but microorganism-derived protein and animal-derived protein are preferable. More preferably, the microorganism-derived protein is Blocking Peptide Fragment, and the animal-derived protein is bovine serum albumin or casein. If these proteins are commercially available, they may be used, or may be produced by separately known methods.
  • the molecular size is not particularly limited, the average molecular weight is preferably 100 kDa or less. Generally, as the molecular size of the protein is smaller, the amount of protein binding to one detection particle increases, so the performance such as sensitivity becomes higher.
  • the type of the detection particles is not particularly limited, and color developing particles or fluorescent particles can be used.
  • the color developing particles include metal particles and latex particles.
  • the metal particles include gold colloid, silver colloid, and platinum colloid.
  • the particle size of the metal particles is not particularly limited but is preferably 1 to 100 nm. More preferably, it is 20 to 80 nm, and still more preferably 40 to 60 nm.
  • latex particles include those made of materials such as polystyrene, polymethyl methacrylate, and acrylic acid polymer.
  • the particle size of the latex particles is not particularly limited, but is preferably 25 to 500 nm. More preferably, it is 50 to 250 nm, and still more preferably 80 to 200 nm.
  • a fluorescent particle What consists of materials, such as a polystyrene, polymethyl methacrylate, polyvinyl toluene, a silica, can be illustrated. Although it does not restrict
  • N-hydroxysuccinimide method A method for labeling biotin of the biotin-labeled protein is not particularly limited, and an N-hydroxysuccinimide method can be exemplified.
  • the carboxyl group of biotin is condensed in the presence of an N-hydroxyamine compound in the presence of a dehydrating condensing agent, selectively activated, and labeled via the amino group and amide bond of the protein. Can do.
  • N-hydroxyamine compounds The N-hydroxyamine compound used in the condensation reaction is not particularly limited.
  • N-hydroxysuccinimide hereinafter sometimes referred to as NHS
  • NHS is more preferable because it is relatively inexpensive, easily available, and has a track record in the field of peptide synthesis.
  • the dehydrating condensing agent used in the condensation reaction is not particularly limited.
  • 1-ethyl-3-dimethylaminopropylcarbodiimide hydrochloride, 1-cyclohexyl- (2-morpholin-4-ethyl) -carbodiimide meso p- And toluene sulfonate is more preferable because it has a track record as a general-purpose water-soluble condensing agent in the field of peptide synthesis. .
  • the amount of biotin introduced into the biotin-labeled protein can be controlled by adjusting the molar ratio of protein to biotin. In order to enhance performance such as sensitivity, it is desirable that the amount of biotin introduced is large. More specifically, the number of moles of biotin relative to the number of moles of protein is preferably 1.0 mole times or more, more preferably 5.0 mole times or more, and 10.0 mole times or more. More preferably. Since the molar ratio is an example, it may be appropriately increased or decreased depending on the type of protein and the actual sensitivity.
  • the method for binding the biotin-labeled protein and the detection particles is not particularly limited, and examples include a physical adsorption by a hydrophobic bond or a binding method via a covalent bond.
  • hydrophobic binding the biotin-labeled protein is directly bound to the surface layer of the detection particle, and therefore, it is preferable to treat at a pH near the isoelectric point of the biotin-labeled protein.
  • Covalent bonding differs depending on the functional group on the surface of the detection particle. For example, when the functional group present on the surface of the detection particle is an amino group, the above-described N-hydroxysuccinimide method is used for binding. be able to.
  • the reaction temperature is not particularly limited.
  • a preferred lower limit is 10 ° C, more preferably 20 ° C or more.
  • a preferable upper limit is 50 ° C., more preferably 40 ° C. or less.
  • the reaction time varies depending on the reaction temperature, it is preferably 1 hour or longer and 24 hours or shorter, more preferably 2 hours or longer and 12 hours or shorter.
  • the unreacted N-hydroxyamine compound and the dehydrating condensing agent contained in the reaction solution can be easily separated from the aqueous solvent by filtration or centrifugation.
  • the detection reagent that specifically binds to the detection target substance is obtained by binding an antibody that may bind to the detection target substance in the biological sample (hereinafter, also referred to as a detection antibody) to the detection particles.
  • the detection antibody varies depending on the type of the substance to be detected, but if it is commercially available, it may be used, or may be produced by a known method.
  • the molecular size is not particularly limited.
  • Antibodies for capturing detection target substances As for an antibody for capturing the detection target substance (hereinafter sometimes referred to as a capture antibody), any commercially available one may be used, or it may be produced by a known method. It is preferable to use an antibody that recognizes a site different from the detection antibody as the recognition site of the capture antibody for the detection target substance.
  • the molecular size is not particularly limited.
  • Examples of capture antibodies for measuring human chorionic gonadotropin include, for example, Anti hCG — 1646157 (V-24), Human (Rabbit) (manufactured by Santa Cruz Biotechnology, Inc.), Anti hCG / Chorionic Gold (Monodatropin) LifeSpan Biosciences, Inc.), Anti CGB / hCG ⁇ , Human (Mouse) (LifeSpan Biosciences, Inc.), Anti-Corionic Gonadotropin, Human (Rabbit) -Era. HCG, Human (Mouse) (Boster Immunoleader), Ant CG ⁇ ( ⁇ HCG), Human (Rabbit) (R & D Systems Inc. Co., Ltd.).
  • the antibody that captures the control line detection reagent is specifically an antibody that captures biotin (hereinafter sometimes referred to as an anti-biotin antibody). Any commercially available anti-biotin antibody may be used, or it may be produced by a known method. The molecular size is not particularly limited.
  • Anti-biotin antibodies include, for example, Anti-Biotin antibody (Genetex, Inc.), Anti-Biotin, Goat-Poly (Bethyl Laboratories, Inc.), and IgG Fractional Monoclonal Chemical Bio-Mouse Bio-Money Bio-Mouse Company-made).
  • porous membrane pad By immobilizing the capture antibody on the upstream side (test line) of the porous membrane pad and the anti-biotin antibody on the downstream side (control line), a porous membrane pad usable for immunochromatography or the like can be produced. It can. These antibodies can be easily immobilized on a porous membrane pad generally used in immunochromatography and the like.
  • the material of the porous membrane pad is not particularly limited, and examples thereof include cellulose, cellulose derivatives, nitrocellulose, cellulose acetate, polyurethane, polyester, polyethylene, polyvinyl chloride, polyvinylidene fluoride, and nylon. Membranes, fabrics, fibrous or non-woven matrices made of these materials are suitable. A cellulose derivative membrane is preferably used, and a nitrocellulose membrane is more preferably used.
  • FIG. 1 is a porous membrane pad
  • 2 is a sample pad
  • 3 is a conjugation pad
  • 4 is an absorption pad
  • 5 is a capture antibody immobilization site (test line)
  • 6 is an anti-biotin antibody immobilization site ( Control line)
  • 7 indicates an adhesive sheet.
  • the porous membrane pad is made of an elongated test piece-like nitrocellulose membrane having a width of 4 mm and a length of 60 mm.
  • the conjugation pad of the immunochromatographic test strip is impregnated with a detection reagent that specifically binds to the detection target substance and a control line detection reagent.
  • a test line 5 in which the capture antibody is immobilized is formed at a position of about 10 mm from the end of the nitrocellulose membrane on the chromatographic start point side.
  • a control line 6 in which an anti-biotin antibody is immobilized at a position of about 15 mm is formed.
  • the porous membrane pad 1 is attached to the middle position of the adhesive sheet 7, and the sample pad 2 and the conjugation pad 3 are placed on the end of the porous membrane pad 1.
  • the absorbent pads 4 can be manufactured by overlapping and connecting them on the end on the opposite side of the porous membrane pad 1.
  • the sample pad 2 is not particularly limited as long as it is made of a material that can quickly absorb and spread a biological sample, and examples thereof include cellulose filter paper, nonwoven fabric, polyethylene, polypropylene made of porous synthetic resin, and the like. Among these, filter paper is preferable.
  • the conjugation pad 3 is not particularly limited as long as it is made of a material that can hold the detection reagent in a dry state and can quickly release the detection reagent as the biological sample is developed. Examples thereof include cellulose filter paper and polyester non-woven fabric. Of these, glass fiber is preferred.
  • the absorbent pad 4 is not particularly limited as long as it is made of a material that can quickly absorb and hold a biological sample, and examples thereof include cellulose filter paper, nonwoven fabric, polyethylene made of porous synthetic resin, and polypropylene. Among these, cellulose filter paper is preferable.
  • the immunochromatographic test piece is an appropriate plastic having an opening for injecting a biological sample above the sample pad 2, the test line 5 and the control line 6, respectively, and an opening for quantifying the amount of detected particles. You may accommodate in the case made from.
  • the method for producing the immunochromatographic test piece of the present invention is not particularly limited.
  • a conjugation pad can be prepared by uniformly applying a certain amount of a detection reagent to a band-shaped glass fiber and then drying it at a suitable temperature in a thermostat for a certain period of time.
  • a certain amount of the capture antibody and the anti-biotin antibody may be applied in a line on the porous membrane pad.
  • a commercially available immunochromatographic dispenser can be used.
  • the coating amount of the capture antibody and the anti-biotin antibody is not particularly limited, but is preferably 10 ⁇ l or less, more preferably 8 ⁇ l or less, and even more preferably 6 ⁇ l or less per 10 cm line length.
  • the lower limit is preferably 4 ⁇ l or more.
  • the concentration of the capture antibody and the anti-biotin antibody is not particularly limited, but is preferably 2.0 to 0.1 mg / ml, more preferably 1.8 to 0.2 mg / ml, still more preferably 1.6 to 0.3 mg. / Ml.
  • the capture antibody and anti-biotin antibody applied on the membrane pad can be immobilized very easily simply by drying.
  • the drying temperature is not particularly limited, but is preferably 20 ° C. to 80 ° C., more preferably 30 to 70 ° C., and still more preferably 40 to 60 ° C.
  • the drying time varies depending on the drying temperature, but is usually 5 to 120 minutes, preferably 10 to 60 minutes.
  • the immunochromatographic analysis kit includes a specimen diluent for the purpose of pretreatment and dilution of a biological sample, an immunochromatographic test strip, and an analyzer.
  • a method for performing measurement using the immunochromatographic test piece as described above is not particularly limited.
  • the following method is exemplified.
  • a biological sample is mixed with a suitable developing solvent as necessary to obtain a developable mixed solution, and then the mixed solution is injected (dropped) onto the sample pad 2.
  • the liquid mixture passes through the sample pad 2 and develops on the conjugation pad 3.
  • the biological sample dissolves the detection reagent impregnated in the conjugation pad 3 and the control line reagent, and the detection target substance and the detection reagent form an immune complex and develop on the porous membrane pad. Then, it flows to the absorption pad 4 side by capillary action.
  • the immune complex is captured and collected by the capture antibody, and the test line 5 develops color.
  • the developing solvent containing the control line detection reagent passes through the test line 5 and reaches the control line 6.
  • the control line detection reagent is captured and accumulated by the anti-biotin antibody, and the control line 6 develops color.
  • Other developing solvents are finally absorbed by the absorbent pad.
  • the concentration of the detection target substance can be measured by measuring the color intensity of the test line 5 and the control line 6 using an immunochromatography reader or the like.
  • the color intensity of the control line is not particularly limited, but may be any color intensity that can be detected visually or with an immunochromatographic reader. It is preferably 10 mAbs to 500 mAbs, more preferably 50 mAbs to 450 mAbs, and still more preferably 100 mAbs to 400 mAbs. Further, it is preferable that the color intensity is constant regardless of the concentration of the detection target substance. Specifically, the coefficient of variation of the color intensity is preferably 20% or less, more preferably 10% or less, and still more preferably. Indicates 5% or less. Note that the coefficient of variation can be obtained by the following Equation 1 and Equation 2.
  • Example 1 Preparation of hCG detection reagent
  • WRGH1 colloidal gold solution
  • 10 mM Tris-HCl pH 9.2 50 ⁇ l of 10 mM Tris-HCl pH 9.2 was added and vortexed.
  • a commercially available anti-hCG monoclonal antibody product name: Anti CGB / hCG ⁇ , Human (Mouse), product number: LS-C196902-100, manufactured by LifeSpan Biosciences, Inc.
  • control line detection reagent 3.15 mg of D-biotin (manufactured by Nacalai Tesque) was dissolved in 72 ⁇ l of distilled water. Further, 10 mg of 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (manufactured by Nacalai Tesque) and 10 mg of N-hydroxysuccinimide (manufactured by Nacalai Tesque) were dissolved in 100 ⁇ l of distilled water. To this was added D-biotin solution, and the mixture was gently stirred at room temperature for 1 hour.
  • 1.0 mg / ml anti-biotin monoclonal antibody product name: Anti-Biotin antibody, product number: GTX44344, GENETEX, Inc.
  • solution 50 mM KH 2 PO 4 , pH 7.0 + 5 wt% sucrose
  • an immunochromatographic dispenser 50 mM KH 2 PO 4 , pH 7.0 + 5 wt% sucrose
  • test piece for hCG measurement was prepared in a slide configuration generally used in an immunochromatograph. Specifically, sample pad (trade name: Sure wick (manufactured by Merck Millipore)), conjugation pad (trade name: Sure wick (manufactured by Merck Millipore)), nitrocellulose membrane (trade name: Hi-Flow Plus) A type HF120 (manufactured by Merck Millipore) and an absorption pad (trade name: Surewick (manufactured by Merck Millipore)) were connected in series to produce. Next, the sample was cut into a test piece having a width of about 4 mm and a length of about 60 mm using a cutter.
  • the prepared hCG measurement specimen was placed on a horizontal base. Next, the prepared four levels of hCG samples were taken with a 40 ⁇ l pipette and dropped on a sample pad. A photograph taken 10 minutes after the sample was dropped is shown in FIG.
  • the test line had high color intensity depending on the hCG concentration. The control line was not affected by the hCG concentration, and the coefficient of variation in color intensity was 2.15%.
  • the color intensity of the hCG measurement specimen was measured using an immunochromatographic reader.
  • C10060-10 manufactured by Hamamatsu Photonics
  • the results are shown in FIG.
  • the test line was able to confirm linear reflection absorbance depending on the hCG concentration. It was confirmed that the control line was not affected by the hCG concentration and the reflected absorbance was about 300 mAbs.
  • HCG was measured in the same manner as in Example 1 using the hCG measurement specimen prepared using the prepared porous membrane pad and conjugation pad. A photograph taken 10 minutes after the sample was dropped is shown in FIG.
  • the test line had high color intensity depending on the hCG concentration.
  • the color intensity of the control line decreased with increasing hCG concentration.
  • the color intensity of the hCG measurement specimen was measured in the same manner as in Example 1 using an immunochromatographic reader. The results are shown in FIG.
  • the test line had high color intensity depending on the hCG concentration.
  • the reflection absorbance decreased from about 200 mAbs to 80 mAbs with increasing hCG concentration, and the coefficient of variation in color intensity was 30.3%.
  • an immunochromatographic test piece that is simple and has high measurement accuracy can be provided.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

【課題】検出対象物質の濃度に影響を受けないコントロールライン検出試薬を含むイムノクロマト試験片を提供する。 【解決手段】生体試料中の検出対象物質を定量するためのイムノクロマト試験片であって、ａ）前記検出対象物質と特異的に結合する検出試薬及びコントロールライン検出試薬が含浸されたコンジュゲーションパッド、およびｂ）上流側に検出対象物質を捕捉するための抗体が固定化されており、かつ下流側にコントロールライン検出試薬を特異的に捕捉するための抗体が固定化されている多孔性メンブレンパッドを有することを特徴とするイムノクロマト試験片。

Description

イムノクロマト試験片
　本発明は、イムノクロマト法による生体試料中に含まれる検出対象物質の検出方法、検出のためのキット、当該キットの製造方法に関する。
　イムノクロマト法とは、検出対象物質と特異的に結合する抗体が固定化された多孔質支持体の一端から、生体試料が毛細管現象によって多孔質支持体内を移動しながら展開し、その過程で標識された検出対象物質と抗体が免疫反応によって結合することによって、時間経過に伴って集積し、局所的に発色することで生体試料中の検出対象物質の有無を判定する免疫測定法である。
　イムノクロマト法の利点としては、操作が簡便であることや目視判定が可能であること等が挙げられる。これらの利点を利用した妊娠検査薬やインフルエンザ診断薬等の体外診断薬が世界的に普及しており、ＰＯＣＴ（Ｐｏｉｎｔ Ｏｆ Ｃａｒｅ Ｔｅｓｔｉｎｇ）として注目を集めている（特許文献１）。
　ＰＯＣＴとは医療従事者が被験者の傍らで行う臨床検査のことをいう。ＰＯＣＴは大規模病院の中央検査室等で行う臨床検査とは異なり、その場で瞬時に検査結果が得られることから医療現場でニーズが高まっている。
　従来のイムノクロマト法は、目視判定（定性評価）が一般的であったが近年、発色強度を測定するクロマトリーダー等の装置を利用することで、生体試料中に含まれる検出対象物質の濃度を定量化する技術が開発されつつある。
　前記定量化の手法としては、サンドイッチ法が代表的である。サンドイッチ法では検出対象物質におけるエピトープの異なる２種類の抗体を利用する。第一の抗体は、金コロイド、着色ラテックス、蛍光粒子等の検出粒子と感作した検出試薬として使用する。第二の抗体は、多孔質支持体の一端に固定した捕捉抗体としてテストラインの測定に使用する。加えて、検出抗体と特異的に結合する抗体を多孔質支持体の他端に固定化しコントロールラインの測定に使用する。生体試料中に含まれる検出対象物質は、多孔質支持体の一端から展開し、検出抗体と免疫複合体を形成しながら移動し、テストライン上で捕捉抗体と接触して捕捉され発色する。検出対象物質と免疫複合体を形成しなかった遊離の検出試薬は、テストライン上を通過し、コントロールラインの抗体に捕捉され発色する。これらの発色強度をクロマトリーダー等の装置を利用することで検出対象物質の濃度を定量することができる。
　従来のイムノクロマト法では、テストラインとコントロールラインを検出する際に共通の検出試薬を使用していたので、検出対象物質の濃度に影響を受けてコントロールラインの発色強度が変化する問題があった。生体試料中に高濃度の検出対象物質が存在した場合、多量の検出粒子が検出対象物質と免疫複合体を形成し、上流側のテストラインで捕捉されテストラインの発色強度は高くなる。一方で、遊離の検出試薬は少量になるのでコントロールラインの発色強度は低くなるといった問題があった。生体試料中に検出対象物質が低濃度に存在した場合、検出対象物質と免疫複合体を形成した検出粒子が少量になるため、遊離の検出粒子がコントロールラインで多量に捕捉された結果、コントロールラインの発色強度は高くなるといった問題があった。
　イムノクロマト法の定量化においては、コントロールラインは検出試薬の多孔質支持体への流入量を測定するために使用する場合が有るため、一定量の検出試薬が多孔質支持体に展開した場合、発色強度は常に一定であることが望まれる。前記のように検出対象物質の濃度に影響を受けてコントロールラインの発色強度が変化すると測定精度に大きな影響を及ぼすことがある。
特開２００６－６７９７９号公報
　本発明の課題は、上記の問題点に鑑みて、検出対象物質の濃度に影響を受けない検出試薬としてコントロールライン検出試薬を提供することにより、従来よりも高精度なイムノクロマト分析方法、当該分析方法を用いたイムノクロマト試験片およびキット、キットの製造方法を提供することである。
　本発明は、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、コントロールラインを検出するための検出試薬として、コントロールライン検出試薬を含む検出試薬を使用することで、生体試料中の検出対象物質の濃度の影響を受けず、コントロールラインの発色強度を安定化できることを見出した。本発明者は、さらにこの知見を基に、コントロールライン検出試薬を含むイムノクロマト試験片、当該試験片の製造方法、当該イムノクロマト試験片を使用した生体試料中の検出対象物質の定量法などの発明を完成させた。
　すなわち代表的な本願発明は以下の通りである。
（１）生体試料中の検出対象物質を定量するためのイムノクロマト試験片であって、
ａ）前記検出対象物質と特異的に結合する検出試薬及びコントロールライン検出試薬が含浸されたコンジュゲーションパッド、および
ｂ）上流側に検出対象物質を捕捉するための抗体が固定化されており、かつ下流側にコントロールライン検出試薬を特異的に捕捉するための抗体が固定化されている多孔性メンブレンパッド
を有することを特徴とするイムノクロマト試験片。
（２）前記コントロールライン検出試薬は、ビオチン標識タンパク質が結合した検出粒子を含むことを特徴とする（１）に記載のイムノクロマト試験片。
（３）前記タンパク質は、微生物由来または動物由来のタンパク質であること特徴とする（２）に記載のイムノクロマト試験片。
（４）前記微生物由来のタンパク質は、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔであることを特徴とする（３）に記載のイムノクロマト試験片。
（５）前記動物由来のタンパク質は、ウシ血清アルブミンまたはカゼインであることを特徴とする（３）に記載のイムノクロマト試験片。
（６）前記コントロールライン検出試薬を特異的に捕捉するための抗体は、抗ビオチン抗体であることを特徴とする（１）～（５）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片。
（７）（１）～（６）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片を用いる、生体試料中の検出対象物質の定量方法。
（８）（１）～（６）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片、検体希釈液および分析装置を含むイムノクロマト分析キット。
（９）（１）～（６）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片の製造方法。
　本発明のイムノクロマト試験片によれば、生体試料中の検出対象物質の濃度に依存せず、コントロールラインの発色強度を安定化することができるため、測定精度の高いイムノクロマト試験片を提供することができる。
本発明で使用するイムノクロマト試験片の一例を示す上面図である。 本発明で使用するイムノクロマト試験片の一例を示す側面図である。 本発明のイムノクロマト試験片を用いて、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を測定した際の写真を示す。 本発明のイムノクロマト試験片を用いて、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を測定した際の希釈直線性を示す。 従来のイムノクロマト試験片を用いて、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を測定した際の写真を示す。 従来のイムノクロマト試験片を用いて、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を測定した際の希釈直線性を示す。
　本発明のイムノクロマト試験片の一つの実施形態を説明する。本発明の実施形態としては、検出対象物質と特異的に結合する検出試薬とコントロールライン検出試薬を含むイムノクロマト試験片である。
（コントロールライン検出試薬）
　本発明で用いるコントロールライン検出試薬は、ビオチン標識タンパク質が結合した検出粒子である。ビオチンの標識方法は特に制限されないが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド法で結合する方法が例示される。検出粒子としては特に制限されないが、金コロイド、ラテックス粒子、蛍光粒子などを例示することができる。ビオチン標識タンパク質と検出粒子の結合方法としては特に制限されないが、疎水結合による物理吸着、または共有結合を介した結合方法が例示される。
（タンパク質）
　前記ビオチン標識タンパク質に用いるタンパク質の種類としては特に制限されないが、微生物由来タンパク質や動物由来タンパク質などが好ましい。より好ましくは微生物由来タンパク質としては、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔ、動物由来タンパク質としてはウシ血清アルブミンまたはカゼインが好ましい。これらのタンパク質は市販されているものがあればそれを用いても良いし、別途公知の方法で製造しても良い。分子サイズも特に制限されないが、平均分子量で１００ｋＤａ以下が好ましい。一般的にタンパク質の分子サイズが小さいほど検出粒子１粒子に対するタンパク質の結合量は増加するので、感度などの性能が高くなる。
（検出粒子）
　前記検出粒子の種類としては特に制限されないが、発色粒子や蛍光粒子を用いることができる。発色粒子としては、金属粒子、ラテックス粒子などを例示することができる。金属粒子としては、金コロイド、銀コロイド、白金コロイドなどを例示することができる。金属粒子の粒径は、特に制限されないが１～１００ｎｍのものが好ましい。より好ましくは２０～８０ｎｍ、さらに好ましくは４０～６０ｎｍである。ラテックス粒子としては、ポリスチレン、ポリメタクリル酸メチル、アクリル酸重合体などの材質からなるものを例示することができる。ラテックス粒子の粒径は、特に制限されないが２５～５００ｎｍが好ましい。より好ましくは５０～２５０ｎｍ、さらに好ましくは８０～２００ｎｍである。蛍光粒子としては、特に制限されないが、ポリスチレン、ポリメタクリル酸メチル、ポリビニルトルエン、シリカなどの材質からなるものを例示することができる。蛍光色素としては、特に制限されないがＦＩＴＣ（フルオレセインイソチオシアネート）、ローダミンＢ誘導体、ヒドロキシクマリンなどを例示することができる。これらの中でも、汎用性が高く、視認性に優れた金コロイドやラテックス粒子を用いることが好ましい。
（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド法）
　前記ビオチン標識タンパク質のビオチンの標識方法は特に限定されないが、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド法を例示できる。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド法を用いることでビオチンのカルボキシル基をＮ－ヒドロキシアミン系化合物と脱水縮合剤存在下で縮合反応し、選択的に活性化し、タンパク質のアミノ基とアミド結合を介して標識することができる。
（Ｎ－ヒドロキシアミン系化合物）
　前記縮合反応に使用するＮ－ヒドロキシアミン系化合物は、特に制限されないが、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ－ヒドロキシノルボルネン－２，３－ジカルボン酸イミド、２－ヒドロキシイミノ－２－シアノ酢酸エチルエステル、２－ヒドロキシイミノ－２－シアノ酢酸アミド、Ｎ－ヒドロキシピペリジン、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド、Ｎ－ヒドロキシイミダゾール、Ｎ－ヒドロキシマレイミド等が挙げられる。これら化合物を２種以上用いてもよい。中でも、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（以下、ＮＨＳと表記する場合がある）が、比較的安価で、入手し易いことやペプチド合成分野等で実績があることから、より好適である。
（脱水縮合剤）
　前記縮合反応に使用する脱水縮合剤としては、特に制限されないが、例えば１－エチル－３－ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩、１－シクロヘキシル－（２－モルホニル－４－エチル）－カルボジイミド・メソｐ－トルエンスルホネート等が挙げられる。中でも１－エチル－３－ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（以下、ＥＤＣ・ＨＣｌと表記する場合がある）がペプチド合成分野等で汎用的な水溶性縮合剤として実績があることから、より好適である。
（ビオチンの導入量）
　前記ビオチン標識タンパク質におけるビオチンの導入量は、タンパク質とビオチンのモル比を調整することで制御することができる。感度などの性能を高めるために、ビオチンの導入量は多い方が望ましい。より具体的には、タンパク質のモル数に対してビオチンのモル数が、１．０モル倍以上であることが好ましく、５．０モル倍以上であることがより好ましく、１０．０モル倍以上であることがさらに好ましい。前記モル比は一例であるためタンパク質の種類や現実の感度に応じて適宜増減しても良い。
（ビオチン標識タンパク質と検出粒子の結合）
　前記ビオチン標識タンパク質と検出粒子の結合方法としては、特に制限されないが、疎水結合による物理吸着、または共有結合を介した結合方法が例示できる。疎水結合においてはビオチン標識タンパク質と検出粒子の表面層で直接的に結合するので、ビオチン標識タンパク質の等電点付近のｐＨで処理することが好ましい。共有結合においては、検出粒子表面の官能基によって結合方法は異なるが、一例を挙げると検出粒子の表面に存在する官能基がアミノ基の場合は、前述したＮ－ヒドロキシスクシンイミド法を用いて結合することができる。
　反応温度は、特に限定されない。好ましい下限は１０℃、より好ましくは２０℃以上である。好ましい上限は５０℃、より好ましくは４０℃以下である。反応時間は反応温度によって異なるが、好ましくは１時間以上２４時間以下、より好ましくは２時間以上１２時間以下である。
　反応液中に含まれる未反応のＮ－ヒドロキシアミン系化合物や脱水縮合剤は濾過や遠心分離などにより水溶媒から容易に分離することができる。
（検出対象物質と特異的に結合する検出試薬）
　前記検出対象物質と特異的に結合する検出試薬は、生体試料中の検出対象物質と結合できる抗体（以下、検出抗体と表記する場合がある）が検出粒子と結合したものである。検出抗体は、検出対象物質の種類によって異なるが、市販されているものがあればそれを用いても良いし、別途公知の方法で製造しても良い。分子サイズも特に制限されない。
（検出対象物質を捕捉するための抗体）
　検出対象物質を捕捉するための抗体（以下、捕捉抗体と表記する場合がある）は、市販されているものがあればそれを用いても良いし、別途公知の方法で製造しても良い。検出対象物質に対する捕捉抗体の認識部位は検出抗体とは異なる部位を認識する抗体を用いる方が好ましい。分子サイズも特に制限されない。ヒト絨毛性ゴナドトロピンを測定するための捕捉抗体としては、例えば、Ａｎｔｉ ｈＣＧ_１６４６１５７(Ｖ－２４)，Ｈｕｍａｎ(Ｒａｂｂｉｔ)（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．社製）、Ａｎｔｉ ｈＣＧ / Ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ，Ｈｕｍａｎ(Ｍｏｕｓｅ)（ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ．社製）、Ａｎｔｉ ＣＧＢ / ｈＣＧ β ，Ｈｕｍａｎ(Ｍｏｕｓｅ)（ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ．社製）、Ａｎｔｉ Ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ，Ｈｕｍａｎ(Ｒａｂｂｉｔ)（ＥＹ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．社製）、Ａｎｔｉ β－ＨＣＧ，Ｈｕｍａｎ(Ｍｏｕｓｅ)（Ｂｏｓｔｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｅａｄｅｒ社製）、Ａｎｔｉ ＣＧ α (α ＨＣＧ)，Ｈｕｍａｎ(Ｒａｂｂｉｔ)（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．社製）等が挙げられる。
（コントロールライン検出試薬を捕捉する抗体）
　前記コントロールライン検出試薬を捕捉する抗体は、具体的にはビオチンを捕捉する抗体である（以下、抗ビオチン抗体と表記する場合がある）。抗ビオチン抗体としては市販されているものがあればそれを用いても良いし、別途公知の方法で製造しても良い。分子サイズも特に制限されない。抗ビオチン抗体としては、例えば、Ａｎｔｉ－Ｂｉｏｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＧＥＮＥＴＥＸ，ｉｎｃ．社製）、Ａｎｔｉ－Ｂｉｏｔｉｎ， Ｇｏａｔ－Ｐｏｌｙ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）、ＩｇＧ Ｆｒａｃｔｉｏｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｂｉｏｔｉｎ（岩井化学薬品株式会社製）等が挙げられる。
（多孔性メンブレンパッド）
　前記捕捉抗体を多孔性メンブレンパッドの上流側（テストライン）に、抗ビオチン抗体を下流側（コントロールライン）に固定化することで、イムノクロマトグラフ等で使用可能な多孔性メンブレンパッドを作製することができる。これらの抗体は、イムノクロマトグラフ等で一般的に使用される多孔性メンブレンパッドに容易に固定化することができる。多孔性メンブレンパッドの材質としては、特に限定されないが、セルロース、セルロース誘導体、ニトロセルロース、酢酸セルロース、ポリウレタン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ナイロンが挙げられる。これらの材質で構成された膜、布帛、繊維状又は不織布状マトリックス等が好適である。好ましくはセルロース誘導体の膜が用いられ、より好ましくはニトロセルロース膜が用いられる。
　続いて、本発明のイムノクロマト試験片の一例を図面を参照して説明する。図１において、１は多孔性メンブレンパッド、２はサンプルパッド、３はコンジュゲーションパッド、４は吸収パッド、５は捕捉抗体の固定化部位（テストライン）、６は抗ビオチン抗体の固定化部位（コントロールライン）、７は粘着シートを示す。
　図１の例では、多孔性メンブレンパッドは、幅４ｍｍ、長さ６０ｍｍの細長い試験片状のニトロセルロース製メンブレンで作製されている。イムノクロマト試験片のコンジュゲーションパッドには検出対象物質と特異的に結合する検出試薬とコントロールライン検出試薬が含浸されている。ニトロセルロースメンブレンのクロマト展開始点側の末端から約１０ｍｍの位置に捕捉抗体が固定化されたテストライン５が形成される。約１５ｍｍの位置に抗ビオチン抗体が固定化されたコントロールライン６が形成される。
　図１に示すようなイムノクロマト試験片は、多孔性メンブレンパッド１を粘着シート７の中程の位置に貼着し、サンプルパッド２とコンジュゲーションパッド３を多孔性メンブレンパッド１の末端の上に一部重ね合わせて連接するとともに、吸収パッド４を多孔性メンブレンパッド１の逆側の末端上に重ね合わせて連接することで作製することができる。
　サンプルパッド２としては、生体試料を速やかに吸収、展開できる材質のものであれば良く、特に制限されないが、セルロース製の濾紙、不織布や、多孔質合成樹脂製のポリエチレン、ポリプロピレンなどが挙げられる。この中でも濾紙が好適である。
　コンジュゲーションパッド３としては、検出試薬を乾燥状態で保持することができ、生体試料の展開と共に検出試薬を速やかに放出することができる材質のものであれば良く、特に制限されないが、ガラスファイバー、セルロース製の濾紙、ポリエステル製の不織布などが挙げられる。このなかでもガラスファイバーが好適である。
　吸収パッド４としては、生体試料を速やかに吸収、保持できる材質のものであればよく、特に限定されないが、セルロース製の濾紙、不織布や、多孔質合成樹脂製のポリエチレン、ポリプロピレンなどが挙げられる。この中でもセルロース製の濾紙が好適である。
　さらに、イムノクロマト試験片は、サンプルパッド２、テストライン５とコントロールライン６の上方にそれぞれ生体試料を注入するための開口部、捕捉された検出粒子量を定量するための開口部を有する適当なプラスチック製のケースに収容しても良い。
（イムノクロマト試験片の製造方法）
　本発明のイムノクロマト試験片の製造方法は特に限定されない。例えば、コンジュゲーションパッドにおいては、帯状のガラスファイバーに一定量の検出試薬を均一に塗布した後、恒温槽内で適当な温度で一定時間乾燥することで作製することが出来る。捕捉抗体と抗ビオチン抗体は多孔性メンブレンパッド上にそれぞれ一定量をライン状に塗布すればよい。メンブレンパッド上に塗布する方法として、特に限定されないが、市販のイムノクロマトディスペンサーを使用することができる。捕捉抗体と抗ビオチン抗体の塗布量は特に限定されないが、好ましくはライン長１０ｃｍ辺り１０μｌ以下、より好ましくは８μｌ以下、さらに好ましくは６μｌ以下である。下限は、好ましくは４μｌ以上である。捕捉抗体と抗ビオチン抗体の濃度としては特に限定されないが、好ましくは２．０～０．１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．８～０．２ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは１．６～０．３ｍｇ／ｍｌである。
　メンブレンパッド上に塗布した捕捉抗体と抗ビオチン抗体は、乾燥するのみで極めて容易に固定化することが出来る。乾燥温度は特に限定されないが、好ましくは２０℃～８０℃、より好ましくは、３０～７０℃、さらに好ましくは４０～６０℃である。乾燥時間は乾燥温度によって異なるが、通常は５～１２０分、好ましくは１０～６０分である。
　本発明において、イムノクロマト分析キットは、生体試料の前処理や希釈を目的とした検体希釈液、イムノクロマト試験片及び分析装置を含む。
（イムノクロマト試験片を使用した検出対象物質の測定方法）
　上記のようなイムノクロマト試験片を用いて測定を行う方法は特に限定されない。例えば、以下の方法が例示される。まず、生体試料を必要に応じて適当な展開溶媒と混合して展開可能な混合液を得た後、当該混合液をサンプルパッド２上に注入（滴下）する。当該混合液は、サンプルパッド２を通過してコンジュゲーションパッド３に展開する。生体試料はコンジュゲーションパッド３に含浸された検出試薬とコントロールライン試薬を溶解しながら、検出対象物質と検出試薬が免疫複合体を形成し多孔性メンブレンパッドに展開する。その後、毛細管現象によって吸収パッド４側に流れる。前記混合液が多孔性メンブレンパッド上のテストライン５に到達すると、前記免疫複合体は、捕捉抗体で捕捉され集積し、テストライン５が発色する。コントロールライン検出試薬を含む展開溶媒はテストライン５を通過してコントロールライン６に到達する。ここでコントロールライン検出試薬は抗ビオチン抗体で捕捉され集積し、コントロールライン６が発色する。他の展開溶媒は最終的に吸収パッドで吸収される。テストライン５とコントロールライン６の発色強度をイムノクロマトリーダー等を使用して測定することで検出対象物質の濃度を測定することができる。
（コントロールラインの発色強度）
　コントロールラインの発色強度は特に制限されないが、目視あるいはイムノクロマトリーダーで検出することが出来る範囲の発色強度であれば良い。好ましくは１０ｍＡｂｓ～５００ｍＡｂｓ、より好ましくは５０ｍＡｂｓ～４５０ｍＡｂｓ、さらに好ましくは１００ｍＡｂｓ～４００ｍＡｂｓである。また、検出対象物質の濃度によらず発色強度が一定であることが好ましく、具体的には発色強度の変動係数（Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ）が好ましくは２０％以下、より好ましくは１０％以下、さらに好ましくは５％以下を示す。
　なお、変動係数（Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ）は、下記式１および式２により求めることができる。
式１
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000001
式２
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000002
　以下、本発明を実施例に基づいて詳細に説明する。本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。
［実施例１］
（ｈＣＧ検出試薬の調製）
　１２５μｌの金コロイド液（ＯＤ５２０＝１２）（ＷＲＧＨ１、株式会社ワインレッドケミカル社製）に５０μｌの１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ９．２を加え、ボルテックスで撹拌した。市販の抗ｈＣＧモノクローナル抗体（製品名：Ａｎｔｉ ＣＧＢ / ｈＣＧ β，Ｈｕｍａｎ （Ｍｏｕｓｅ）、品番：ＬＳ－Ｃ１９６９０２－１００、ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ．社製）を１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌで０．１ｍｇ／ｍｌに調製した。１００μｌの抗ｈＣＧモノクローナル抗体溶液を金コロイド液に加え、ボルテックスで撹拌した後、室温で１５分間静置した。２００μｌの０．３ｗｔ％Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔ（東洋紡株式会社製）（以下、ＢＰＦと表記する場合がある）＋１．０ｗｔ％ＰＥＧ２００００水溶液（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｃ製）（以下、ＰＥＧと表記する場合がある）を加え、ボルテックスで撹拌した後、１５分間室温で静置した。その後、７０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を除去した。２００μｌの０．３ｗｔ％ＢＰＦ＋１．０ｗｔ％ＰＥＧ水溶液を加え、ボルテックスで撹拌した後、１５分間室温で静置した。７０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を除去した。１ｍｌの０．３ｗｔ％ＢＰＦ＋５．０ｗｔ％Ｄ（＋）－トレハロース（ナカライテスク株式会社製）水溶液を加えボルテックスで撹拌した後、１５分間室温で静置した。
（コントロールライン検出試薬の調製）
　３．１５ｍｇのＤ－ビオチン（ナカライテスク株式会社製）を７２μｌの蒸留水で溶解した。また、１０ｍｇの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ナカライテスク株式会社製）と１０ｍｇのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ナカライテスク株式会社製）を１００μｌの蒸留水に溶解した。これにＤ－ビオチン溶液を加え、室温で１時間緩やかに攪拌した。前記溶液に８０μｌの３ｗｔ％ＢＰＦ溶液を加え３０分間室温で静置し、ビオチン標識ＢＰＦ溶液を調製した。次に、５０μｌの金コロイド液（ＯＤ５２０＝１２）に４５０μｌの１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ　ｐＨ９．２を加え、ボルテックスで撹拌した。さらに、１５μｌのビオチン標識ＢＰＦ溶液を金コロイド液に加え、ボルテックスで撹拌した後、１５分間室温で静置した。２００μｌの０．３ｗｔ％ＢＰＦ＋１．０ｗｔ％ＰＥＧ２００００水溶液（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｃ製）（以下、ＰＥＧと表記する場合がある）を加え、ボルテックスで撹拌した後、１５分間室温で静置した。その後、７０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を除去した。２００μｌの０．３ｗｔ％ＢＳＡ＋１．０ｗｔ％ＰＥＧ水溶液を加え、ボルテックスで撹拌した後、１５分間室温で静置した。７０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を除去した。１ｍｌの０．３ｗｔ％ＢＰＦ＋５ｗｔ％Ｄ（＋）－トレハロース（ナカライテスク株式会社製）水溶液を加えボルテックスで撹拌した後、１５分間室温で静置した。
（ｈＣＧ検出用多孔性メンブレンパッドの調製）
　２５ｍｍ×１５０ｍｍのニトロセルロースメンブレン（商品名：Ｈｉ－Ｆｌｏｗ　ＰｌｕｓタイプＨＦ１２０（メルクミリポア株式会社製））の一端（上流側）から約１０ｍｍの位置にライン幅約１ｍｍのテストラインとして、０．５ｍｇ／ｍｌの抗ｈＣＧモノクローナル抗体（製品名：Ａｎｔｉ Ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ，Ｈｕｍａｎ(Ｒａｂｂｉｔ)、品番：ＡＴ－２６０１－２、ＥＹ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）溶液（５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４，ｐＨ７．０＋５ｗｔ％スクロース）をイムノクロマトディスペンサーを用いて約１．０μｌ／ｃｍの塗布量で塗布した。次に、ニトロセルロースメンブレンの一端（上流側）から約１５ｍｍの位置にライン幅約１ｍｍのコントロールラインとして、１．０ｍｇ／ｍｌの抗ビオチンモノクローナル抗体（製品名：Ａｎｔｉ－Ｂｉｏｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、品番：ＧＴＸ４４３４４、ＧＥＮＥＴＥＸ，ｉｎｃ．社製）溶液（５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４，ｐＨ７．０＋５ｗｔ％スクロース）をイムノクロマトディスペンサーを用いて約１．０μｌ／ｃｍの塗布量で塗布した。その後５０℃で３０分乾燥した。
（ｈＣＧ測定用コンジュゲーションパッドの作製）
　１０ｍｍ×１５０ｍｍのコンジュゲーションパッド（商品名：シュアウィック（メルクミリポア株式会社製））に前記ｈＣＧ検出試薬とコントロールライン検出試薬の混合液（混合比１：１）１．０ｍｌを均一に塗布した。その後、デシケーター内で一晩、室温で減圧乾燥し、ｈＣＧ検出試薬とコントロールライン検出試薬を含浸したｈＣＧ測定用コンジュゲーションパッドを作製した。
（ｈＣＧ測定用試験片の作製）
　ｈＣＧ測定用試験片はイムノクロマトグラフで一般的に使用されるスライド構成で作製した。具体的にはサンプルパッド（商品名：シュアウィック（メルクミリポア株式会社製））、コンジュゲーションパッド（商品名：シュアウィック（メルクミリポア株式会社製））、ニトロセルロースメンブレン（商品名：Ｈｉ－Ｆｌｏｗ　ＰｌｕｓタイプＨＦ１２０（メルクミリポア株式会社製））、吸収パッド（商品名：シュアウィック（メルクミリポア株式会社製））を直列連結し作製した。次に横幅約４ｍｍ、縦幅約６０ｍｍの試験片状に裁断機を用いてカットした。
（ｈＣＧ試料の調製）
　市販のｈＣＧ抗原を５０ｍＭＫＨ２ＰＯ４，ｐＨ７．２＋１．０ｗｔ％ＢＳＡ＋０．１ｗｔ％ＮａＮ３で希釈し、１ＩＵ／Ｌ、１０ＩＵ／Ｌ、１００ＩＵ／Ｌ、１,０００ＩＵ／Ｌの各ｈＣＧ試料を調製した。
（ｈＣＧの測定）
　作製したｈＣＧ測定用試験片を水平な台に設置した。次に、調製した４水準のｈＣＧ試料を４０μｌピペットで取り、サンプルパッドに滴下した。検体を滴下してから１０分後に撮影した写真を図２に示す。テストラインはｈＣＧ濃度に依存して発色強度が高くなった。コントロールラインはｈＣＧ濃度に影響されず、発色強度の変動係数は２．１５％であった。
（ｈＣＧの定量）
　ｈＣＧ測定用試験片の発色強度をイムノクロマトリーダーを用いて測定した。イムノクロマトリーダーはＣ１００６０－１０（浜松ホトニクス社製）を使用した。結果を図３に示す。テストラインはｈＣＧ濃度に依存して直線的な反射吸光度を確認することができた。コントロールラインはｈＣＧ濃度に影響されず反射吸光度は約３００ｍＡｂｓであることを確認できた。
［比較例１］
（ｈＣＧ検出用多孔性メンブレンパッドの調製）
　実施例１と同様の方法でコントロールラインとして、１．０ｍｇ／ｍｌの抗ＩｇＧポリクローナル抗体溶液（５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４，ｐＨ７．２）をディスペンサーを用いて約１．０μｌ／ｃｍの塗布量で塗布した。その後５０℃で３０分乾燥しｈＣＧ検出用多孔性メンブレンパッドを作製した。
（ｈＣＧ測定用コンジュゲーションパッドの作製）
　実施例１と同様の方法で検出試薬としてｈＣＧ検出試薬のみを均一に塗布し（すなわち、コントロールライン検出試薬の塗布なし）、ｈＣＧ測定用コンジュゲーションパッドを作製した。
（ｈＣＧ試験片を用いたｈＣＧの測定）
　前記調製した多孔性メンブレンパッドおよびコンジュゲーションパッドを用いて作製したｈＣＧ測定用試験片を用いて実施例１と同様の方法でｈＣＧを測定した。検体を滴下してから１０分後に撮影した写真を図４に示す。テストラインはｈＣＧ濃度に依存して発色強度が高くなった。コントロールラインはｈＣＧ濃度の増加に伴って発色強度は低下した。
（ｈＣＧ試験片を用いたｈＣＧの定量）
　ｈＣＧ測定用試験片の発色強度をイムノクロマトリーダーを用いて実施例１と同様の方法で測定した。結果を図５に示す。テストラインはｈＣＧ濃度に依存して発色強度が高くなった。コントロールラインはｈＣＧ濃度の増加に伴って反射吸光度は約２００ｍＡｂｓから８０ｍＡｂｓまで低下し、発色強度の変動係数は３０．３％であった。
　本発明により、簡便で測定精度の高いイムノクロマト試験片を提供することができる。
１．多孔性メンブレンパッド
２．サンプルパッド
３．コンジュゲーションパッド
４．吸収パッド
５．テストライン
６．コントロールライン
７．粘着シート
 
 

Claims (9)

  1. 　生体試料中の検出対象物質を定量するためのイムノクロマト試験片であって、
    ａ）前記検出対象物質と特異的に結合する検出試薬及びコントロールライン検出試薬が含浸されたコンジュゲーションパッド、および
    ｂ）上流側に検出対象物質を捕捉するための抗体が固定化されており、かつ下流側にコントロールライン検出試薬を特異的に捕捉するための抗体が固定化されている多孔性メンブレンパッド
    を有することを特徴とするイムノクロマト試験片。
  2. 　前記コントロールライン検出試薬は、ビオチン標識タンパク質が結合した検出粒子を含むことを特徴とする請求項１に記載のイムノクロマト試験片。
  3. 　前記タンパク質は、微生物由来または動物由来のタンパク質であること特徴とする請求項２に記載のイムノクロマト試験片。
  4. 　前記微生物由来のタンパク質は、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔであることを特徴とする請求項３に記載のイムノクロマト試験片。
  5. 　前記動物由来のタンパク質は、ウシ血清アルブミンまたはカゼインであることを特徴とする請求項３に記載のイムノクロマト試験片。
  6. 　前記コントロールライン検出試薬を特異的に捕捉するための抗体は、抗ビオチン抗体であることを特徴とする請求項１～５のいずれかに記載のイムノクロマト試験片。
  7. 　請求項１～６のいずれかに記載のイムノクロマト試験片を用いる、生体試料中の検出対象物質の定量方法。
  8. 　請求項１～６のいずれかに記載のイムノクロマト試験片、検体希釈液および分析装置を含むイムノクロマト分析キット。
  9. 　請求項１～６のいずれかに記載のイムノクロマト試験片の製造方法。
     
     
PCT/JP2016/080369 2015-10-16 2016-10-13 イムノクロマト試験片 Ceased WO2017065213A1 (ja)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16855466.5A EP3364189B1 (en) 2015-10-16 2016-10-13 Immunochromatographic test piece
KR1020187013381A KR102142901B1 (ko) 2015-10-16 2016-10-13 면역 크로마토그래피 시험편
CN202310313515.6A CN116136533A (zh) 2015-10-16 2016-10-13 免疫层析试验片
PL16855466T PL3364189T3 (pl) 2015-10-16 2016-10-13 Element do testu immunochromatograficznego
JP2017545455A JP6741013B2 (ja) 2015-10-16 2016-10-13 イムノクロマト試験片
DK16855466.5T DK3364189T3 (da) 2015-10-16 2016-10-13 Immunkromatografisk teststykke
CN201680060111.9A CN108139395A (zh) 2015-10-16 2016-10-13 免疫层析试验片
US15/767,468 US11852630B2 (en) 2015-10-16 2016-10-13 Immunochromatographic test piece
ES16855466T ES2865500T3 (es) 2015-10-16 2016-10-13 Pieza de prueba inmunocromatográfica

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2015-204680 2015-10-16
JP2015204680 2015-10-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017065213A1 true WO2017065213A1 (ja) 2017-04-20

Family

ID=58518237

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2016/080369 Ceased WO2017065213A1 (ja) 2015-10-16 2016-10-13 イムノクロマト試験片

Country Status (11)

Country Link
US (1) US11852630B2 (ja)
EP (1) EP3364189B1 (ja)
JP (1) JP6741013B2 (ja)
KR (1) KR102142901B1 (ja)
CN (2) CN116136533A (ja)
DK (1) DK3364189T3 (ja)
ES (1) ES2865500T3 (ja)
HU (1) HUE054249T2 (ja)
PL (1) PL3364189T3 (ja)
PT (1) PT3364189T (ja)
WO (1) WO2017065213A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019138899A1 (ja) * 2018-01-11 2019-07-18 東洋紡株式会社 測定試料希釈液およびキットおよび測定方法
WO2019138898A1 (ja) * 2018-01-09 2019-07-18 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片および測定キットおよび測定方法
WO2020166698A1 (ja) * 2019-02-14 2020-08-20 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6834979B2 (ja) * 2015-12-02 2021-02-24 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片
JP7250538B2 (ja) * 2019-01-29 2023-04-03 デンカ株式会社 親水性素材に亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させることにより、検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
CN110244035A (zh) * 2019-05-09 2019-09-17 武汉优恩生物科技有限公司 免疫层析法连续定量可读检测装置
JP7274595B2 (ja) * 2019-09-30 2023-05-16 富士フイルム株式会社 イムノクロマトグラフィー
CN110736831A (zh) * 2019-11-28 2020-01-31 河南大学 一种多向联合检测试纸条
CN111474351B (zh) * 2020-04-28 2024-01-16 上海泰辉生物科技有限公司 一种可用于检测冠状病毒的免疫层析试纸条和试剂盒

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11118801A (ja) * 1997-10-20 1999-04-30 Dainabotto Kk 免疫分析装置
JP2008164300A (ja) * 2006-12-26 2008-07-17 Sysmex Corp 対照部を有するクロマトグラフィー用試験具
JP2008292270A (ja) * 2007-05-24 2008-12-04 Institute Of Physical & Chemical Research 物質検出方法
US20090246886A1 (en) * 2006-09-06 2009-10-01 Quantrx Biomedical Corporation Lateral flow test strip with migrating label
JP2010014631A (ja) * 2008-07-04 2010-01-21 Furukawa Electric Co Ltd:The 標識粒子として、蛍光粒子と着色粒子とを含有するイムノクロマト法用コンジュゲートパッド、それを用いたイムノクロマト法用テストストリップおよび検査方法
JP2010101673A (ja) * 2008-10-22 2010-05-06 Tanaka Holdings Kk イムノクロマトグラフ法による高感度測定キット
JP2010525356A (ja) * 2007-04-23 2010-07-22 セレクティブ アンティボディーズ リミテッド 検定デバイスおよび方法、並びに前記検定デバイスおよび方法に用いる構成要素。
JP2010256012A (ja) * 2007-08-31 2010-11-11 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd 免疫クロマトディバイス
CN102539755A (zh) * 2011-12-20 2012-07-04 广州万孚生物技术有限公司 一种检测分泌物中甲型流感病毒抗原的试纸条及其制备方法
JP2012251789A (ja) * 2011-05-31 2012-12-20 Sekisui Medical Co Ltd ＨｂＡ１ｃの免疫学的測定方法
JP2013205335A (ja) * 2012-03-29 2013-10-07 Mitsubishi Chemical Medience Corp アビジン−ビオチン連結標識試薬を用いたイムノクロマトグラフ用試験具及びその利用
WO2014197840A1 (en) * 2013-06-07 2014-12-11 Massachusetts Institute Of Technology Affinity-based detection of ligand-encoded synthetic biomarkers

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5132242A (en) * 1987-07-15 1992-07-21 Cheung Sau W Fluorescent microspheres and methods of using them
GB9326451D0 (en) * 1993-12-24 1994-02-23 Multilyte Ltd Binding assay
WO2000031538A1 (en) * 1998-11-23 2000-06-02 Praxsys Biosystems, Inc. Improved lateral flow assays
DE10127325A1 (de) * 2001-06-06 2003-02-06 Tesa Ag Selbstklebender Schutzartikel für mechanisch stark beanspruchte lackierte Autobilteile
EP1642904A4 (en) * 2003-07-03 2008-11-05 Toyo Boseki PROTEIN HAVING BETTER BLOCKING POWER
JP2006067979A (ja) 2004-09-06 2006-03-16 Bl:Kk インフルエンザａ型ウイルスの免疫検出法
EP1657550A1 (en) * 2004-11-10 2006-05-17 Coris Bioconcept SPRL Double-sided device for multiplex dipstick immunodiagnostic
JP5224477B2 (ja) * 2006-11-01 2013-07-03 ベックマン コールター， インコーポレイテッド 親和性アッセイのための結合表面
JP5431644B2 (ja) * 2006-12-28 2014-03-05 シスメックス株式会社 呼吸器感染症の検査方法
JP4912917B2 (ja) * 2007-02-22 2012-04-11 京セラ株式会社 回路基板、携帯電子機器及び回路基板の製造方法
CN102262158A (zh) * 2010-05-27 2011-11-30 戴国祯 重组融合蛋白质在快速诊断检测中的直接应用
JP5866291B2 (ja) * 2010-09-30 2016-02-17 積水メディカル株式会社 イムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびその製造方法
CN102192983B (zh) * 2011-05-19 2013-12-04 博阳生物科技（上海）有限公司 时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条及其制备方法和应用
CN103635804B (zh) * 2011-06-30 2015-11-25 积水医疗株式会社 用于免疫测定方法的缀合物
US8999728B2 (en) * 2011-12-21 2015-04-07 Church & Dwight Co., Inc. Diagnostic detection device
CN102680692B (zh) 2012-05-16 2014-10-29 北京润博福得生物科技发展有限公司 基于近红外荧光标记物的免疫层析定量检测试剂
EP2853894B1 (en) 2013-09-30 2017-08-30 Inmunologia Y Genetica Aplicada, S.A. Diagnostic kits and immunoassay methods for diagnosis and differentiation of African Swine Fever Virus (ASFV) and Classical Swine Fever Virus (CSFV)
CN203732547U (zh) 2014-03-06 2014-07-23 瑞莱生物工程（深圳）有限公司 一种快速定量检测半乳糖凝集素-3的胶体金试纸

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11118801A (ja) * 1997-10-20 1999-04-30 Dainabotto Kk 免疫分析装置
US20090246886A1 (en) * 2006-09-06 2009-10-01 Quantrx Biomedical Corporation Lateral flow test strip with migrating label
JP2008164300A (ja) * 2006-12-26 2008-07-17 Sysmex Corp 対照部を有するクロマトグラフィー用試験具
JP2010525356A (ja) * 2007-04-23 2010-07-22 セレクティブ アンティボディーズ リミテッド 検定デバイスおよび方法、並びに前記検定デバイスおよび方法に用いる構成要素。
JP2008292270A (ja) * 2007-05-24 2008-12-04 Institute Of Physical & Chemical Research 物質検出方法
JP2010256012A (ja) * 2007-08-31 2010-11-11 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd 免疫クロマトディバイス
JP2010014631A (ja) * 2008-07-04 2010-01-21 Furukawa Electric Co Ltd:The 標識粒子として、蛍光粒子と着色粒子とを含有するイムノクロマト法用コンジュゲートパッド、それを用いたイムノクロマト法用テストストリップおよび検査方法
JP2010101673A (ja) * 2008-10-22 2010-05-06 Tanaka Holdings Kk イムノクロマトグラフ法による高感度測定キット
JP2012251789A (ja) * 2011-05-31 2012-12-20 Sekisui Medical Co Ltd ＨｂＡ１ｃの免疫学的測定方法
CN102539755A (zh) * 2011-12-20 2012-07-04 广州万孚生物技术有限公司 一种检测分泌物中甲型流感病毒抗原的试纸条及其制备方法
JP2013205335A (ja) * 2012-03-29 2013-10-07 Mitsubishi Chemical Medience Corp アビジン−ビオチン連結標識試薬を用いたイムノクロマトグラフ用試験具及びその利用
WO2014197840A1 (en) * 2013-06-07 2014-12-11 Massachusetts Institute Of Technology Affinity-based detection of ligand-encoded synthetic biomarkers

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019138898A1 (ja) * 2018-01-09 2019-07-18 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片および測定キットおよび測定方法
JPWO2019138898A1 (ja) * 2018-01-09 2021-01-07 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片および測定キットおよび測定方法
JP7352831B2 (ja) 2018-01-09 2023-09-29 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片および測定キットおよび測定方法
WO2019138899A1 (ja) * 2018-01-11 2019-07-18 東洋紡株式会社 測定試料希釈液およびキットおよび測定方法
US11543419B2 (en) 2018-01-11 2023-01-03 Toyobo Co., Ltd. Measurement sample dilution liquid, kit, and measurement method
WO2020166698A1 (ja) * 2019-02-14 2020-08-20 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法
JPWO2020166698A1 (ja) * 2019-02-14 2021-12-16 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法
JP7533226B2 (ja) 2019-02-14 2024-08-14 東洋紡株式会社 イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3364189B1 (en) 2021-02-03
KR20180067629A (ko) 2018-06-20
DK3364189T3 (da) 2021-03-22
US20180299455A1 (en) 2018-10-18
ES2865500T3 (es) 2021-10-15
JPWO2017065213A1 (ja) 2018-08-02
CN116136533A (zh) 2023-05-19
CN108139395A (zh) 2018-06-08
PL3364189T3 (pl) 2021-07-12
US11852630B2 (en) 2023-12-26
JP6741013B2 (ja) 2020-08-19
EP3364189A1 (en) 2018-08-22
EP3364189A4 (en) 2019-05-15
PT3364189T (pt) 2021-03-17
KR102142901B1 (ko) 2020-08-10
HUE054249T2 (hu) 2021-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6741013B2 (ja) イムノクロマト試験片
AU2007319076B2 (en) Saturation assay
JP6834979B2 (ja) イムノクロマト試験片
WO2019245744A1 (en) Systems, devices, and methods for amplifying signals of a lateral flow assay
CA3142084A1 (en) Lateral flow test strips with competitive assay control
JP2002202310A (ja) 物質の検出試薬及び検出方法
JP2009264879A (ja) ラテラルフロー型のクロマトストリップ及び生体材料の固相化方法
CN101243320B (zh) 采用带侧向迁移的免疫层析法的分析物检测
CN105785041A (zh) 用于定量检测钙卫蛋白的试纸条及其制备方法和钙卫蛋白浓度的测定方法
JP2010032396A (ja) バイオセンサ
JP3920741B2 (ja) 物質の検出試薬及び検出方法
JPH11133023A (ja) 尿試料を使用する免疫クロマトグラフィー検定の尿素の影響を減らすための配合物
CN205538994U (zh) 一种高灵敏时间分辨荧光免疫层析检测试剂装置
JP7131546B2 (ja) イムノクロマト試験片およびキットおよび測定方法
JP2008197038A (ja) イムノクロマトグラフィー法
JP2019015583A (ja) イムノクロマト試験片
JP2001272405A (ja) 検査キット
JP2021162467A (ja) イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法
TWI878683B (zh) 糞便檢體之檢查方法及其免疫層析試驗片
JPWO2020166698A1 (ja) イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法
JP2015232467A (ja) ラテラルフロー用テストストリップ、分析システム、及びラテラルフロー用テストストリップの製造方法
JP2009294116A (ja) バイオセンサ
KR20250132884A (ko) 산란광 검출이 가능한 측방 유동 멤브레인 센서
JP2021071316A (ja) イムノクロマト試験片およびそれを用いた測定方法
AU2014200264A1 (en) Saturation assay

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16855466

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017545455

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15767468

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20187013381

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2016855466

Country of ref document: EP