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WO2015133122A1 - 鎮静用の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤 - Google Patents

鎮静用の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤 Download PDF

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WO2015133122A1
WO2015133122A1 PCT/JP2015/001098 JP2015001098W WO2015133122A1 WO 2015133122 A1 WO2015133122 A1 WO 2015133122A1 JP 2015001098 W JP2015001098 W JP 2015001098W WO 2015133122 A1 WO2015133122 A1 WO 2015133122A1
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WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
milk
yeast
lactic acid
fermented
acid bacteria
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2015/001098
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English (en)
French (fr)
Inventor
恭輔 川口
恵 小谷
征一 水野
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Asahi Soft Drinks Co Ltd
Original Assignee
Calpis Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Calpis Co Ltd filed Critical Calpis Co Ltd
Priority to JP2016506135A priority Critical patent/JP6471145B2/ja
Publication of WO2015133122A1 publication Critical patent/WO2015133122A1/ja
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Ceased legal-status Critical Current

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    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment

Definitions

  • the present invention relates to a sedative autonomic nerve regulator and a diurnal rhythm improving agent. More specifically, a fermented milk-derived component obtained by fermenting milk with lactic acid bacteria and yeast is used as an active ingredient, and the active ingredient is allowed to act on the sense of smell. It relates to an improving agent.
  • Patent Document 1 an aroma composition obtained by fermenting a plant material using yeast acts on the sense of smell and has an autonomic nerve regulating action.
  • Patent Document 1 The effect of the aromatic composition obtained by fermentation and the diurnal rhythm improving action of the aromatic composition have not been reported.
  • nonpatent literature 1 the effect given to the disorder of an autonomic nerve or a circadian rhythm is not reported.
  • Astaxanthin and arachidonic acid have been reported as excellent compounds that have a safe and effective diurnal rhythm-improving effect, but in order to obtain the effect, it is necessary to ingest the ingredients (in the body), and the usage is limited (Patent Documents 3 and 4).
  • the problem of the present invention is that it does not require ingestion (administration), and acts on the olfaction, thereby providing an agent that has an autonomic nerve adjustment effect, a diurnal rhythm improvement effect, and a scented product (fragrance, cosmetic, food, Pharmaceuticals, feed additives, textile detergents, textiles, etc.).
  • the inventors have intensively studied to solve the above problems, and have found that the odor of a fermented milk-derived component obtained by fermentation with lactic acid bacteria and yeast has an autonomic nerve adjusting action and a diurnal rhythm improving action.
  • the present invention relates to the following [1] to [15].
  • a sedative autonomic nervous regulator characterized by using as an active ingredient a component derived from fermented milk obtained by fermenting milk with lactic acid bacteria and yeast;
  • the diurnal rhythm improving agent according to any one of [7] to [11], wherein the milk is skim milk; [13] A method for producing a sedative autonomic nerve regulator that acts on the olfactory sense, wherein the milk is fermented with lactic acid bacteria and then fermented with yeast; [14] A method for producing a diurnal rhythm improving agent that acts on the sense of smell, wherein the milk is fermented with lactic acid bacteria and then fermented with yeast; [15] A scented composition containing a fermented milk-derived component obtained by fermenting milk with lactic acid bacteria and yeast.
  • the balance of autonomic nerves due to stress or the like (autonomous ataxia), and the disturbance of diurnal rhythm are improved, or sleep, body temperature, blood pressure, hormone secretion, feeding, metabolism, resulting from these, It is possible to alleviate, prevent, or treat disorders of physiological activities such as mental activity or various symptoms and diseases such as obesity and depression.
  • the autonomic nerve adjusting agent and the diurnal rhythm improving agent of the present invention do not need to be ingested (administered) into the body, and have an effect by acting on the olfaction, and thus are highly safe. Therefore, it can be used widely and can be used by adding to various products such as fragrances, cosmetics, foods, pharmaceuticals, feed additives, detergents for textiles, textiles and the like.
  • FIG. 1 shows changes in rat adrenal sympathetic nerve activity (rate of change (%) when the start time is 100) due to odor stimulation of fermented milk A fermented with lactic acid bacteria and yeast.
  • FIG. 2 shows changes in rat gastric parasympathetic nerve activity (rate of change (%) when the start time is 100) due to odor stimulation of fermented milk A fermented with lactic acid bacteria and yeast.
  • FIG. 3 shows the total activity of rats after odor stimulation of fermented milk A fermented with lactic acid bacteria and yeast.
  • FIG. 4 shows the light activity rate of rats after odor stimulation of fermented milk A fermented with lactic acid bacteria and yeast.
  • FIG. 5 shows the total activity of rats after odor stimulation of fermented milk B fermented with lactic acid bacteria.
  • FIG. 6 shows the total activity of rats after odor stimulation of fermented milk C fermented with yeast.
  • FIG. 7 shows the total activity of rats after odor stimulation of skim milk.
  • FIG. 8 shows the light activity rate of rats after odor stimulation of fermented milk B fermented with lactic acid bacteria.
  • FIG. 9 shows the light activity rate of rats after odor stimulation of fermented milk C fermented with yeast.
  • FIG. 10 shows the light activity rate of rats after odor stimulation of skim milk.
  • FIG. 11 shows the light period activity ratio of the fermented milk A, fermented milk B, fermented milk C, and skim milk to the control after odor stimulation.
  • the autonomic nerve consists of two nervous systems, the sympathetic nerve and the parasympathetic nerve. It is generally known that when sympathetic nerve activity is enhanced or parasympathetic nerve activity is suppressed, it is in a stress state (excitement). In addition, it is generally known that the state is relaxed (sedated) when sympathetic nerve activity is suppressed or parasympathetic nerve activity is increased.
  • the “autonomic nerve regulator” of the present invention uses fermented milk-derived components obtained by fermenting milk with lactic acid bacteria and yeast as active ingredients, and adjusts the autonomic nerves by causing the active ingredients to act on the sense of smell, thereby reducing the sedative effect. Demonstrate.
  • the “autonomic nerve modulating agent” of the present invention suppresses sympathetic nerve activity such as adrenal sympathetic nerve and exerts effects such as stress relaxation / reduction, blood pressure lowering and blood sugar lowering action. It also enhances parasympathetic nerves such as gastric parasympathetic nerves, and improves gastrointestinal tract function and accompanying relaxation.
  • Daily rhythm improving agent “daily rhythm” is a daily rhythm that appears as a cycle of day and night, and is also referred to as a daily rhythm.
  • the bright period is the active period
  • the dark period is the dormant period (in the rat, the light period is the dormant period and the dark period is the active period, which is the opposite of humans).
  • the daily rhythm is disturbed.
  • the “daily rhythm improving agent” of the present invention improves the daily rhythm by using as an active ingredient a fermented milk-derived component obtained by fermenting milk with lactic acid bacteria and yeast, and causing the effective component to act on the sense of smell (normal) ).
  • the “daily rhythm improving agent” of the present invention reduces the stress state and improves the daily rhythm, resulting in sleep, body temperature, blood pressure, hormone secretion, feeding, metabolism, mental activity, etc. It exhibits the effect of improving various physiological activities such as obesity, depression, and other symptoms and diseases.
  • Fermented milk-derived component which is the "active ingredient” of the autonomic nervous regulator and diurnal rhythm improving agent of the present invention, is the odor component of the fermented milk, that is, usually used at around room temperature or higher. It is a volatile component at a certain temperature.
  • the fermented milk-derived component exerts an effect (function) as an autonomic nerve regulator and a diurnal rhythm improving agent by acting on the olfaction. That is, “acting on olfaction” means that the odor component of fermented milk, which is an active ingredient, volatilizes and stimulates the olfaction. In this way, the smell of fermented milk stimulates the sense of smell and is transmitted to the brain as a signal, thereby adjusting the disturbance of the autonomic nerve and the disturbance of the daily rhythm.
  • the action on the sense of smell is included in the scope of the present invention whether it is an orthonasal route through which the odor is inhaled or a retronasal route through which the odor contained in the oral cavity enters the nasal cavity.
  • Fermented milk “Fermented milk” used in the present invention is acidic milk obtained by fermenting milk using lactic acid bacteria and yeast into a liquid or pasty form, and includes fermented milk, lactic acid bacteria beverages, and the like specified by a ministerial ordinance.
  • Milk is preferred, and skim milk made from milk is particularly preferred.
  • Non-fat milk means milk from which fat (generally fat and fat-soluble vitamins) has been completely removed (less than 0.5% milk fat) or partially.
  • the skim milk may be reduced milk obtained by reducing skim milk powder.
  • Examples of the “lactic acid bacterium” used in the present invention include microorganisms belonging to the genus Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Enterococcus, Leuconostoc, Lactococcus, Pediococcus, and Weissella. In particular, Lactobacillus is preferable.
  • Lactobacillus '' Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrukki Subspecies Bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus amyloborus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus paracasei, lacto Bacillus zeae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus gallinarum, Lactobacillus brevis, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus johnsonii etc.
  • Lactobacillus helveticus L. helveticus
  • Lactobacillus helveticus can be preferably used.
  • yeast used in the present invention include microorganisms belonging to the genus Saccharomyces, Schizosaccharomyces, Tigosaccharomyces, and Krivellomyces, and the genus Saccharomyces is particularly preferable.
  • Saccharomyces microorganisms include, but are not limited to S. cerevisiae can be preferably used.
  • the present invention is a method for producing a sedative autonomic nerve regulator or a diurnal rhythm improving agent that acts on the olfactory sensation as described above, wherein the milk is fermented with lactic acid bacteria and then fermented with yeast. Also provided is a method for producing an autonomic nerve regulator or a diurnal rhythm improving agent.
  • the above-mentioned production method is a sterilization process, a formulation process, such as propylene glycol, glycerin, and fats and oils that are used as a kind of retention agent in order to enhance the action on olfaction.
  • a formulation process such as propylene glycol, glycerin, and fats and oils that are used as a kind of retention agent in order to enhance the action on olfaction.
  • additives and substances, and a step of adding additives and substances such as vitamin E and various plant extracts that reduce odor deterioration and loss in the heat treatment step and the like may be included.
  • the process of attaching to the exterior of a product the indication to the effect that it acts on an olfactory sense that it is an autonomic nerve regulator for sedation or a diurnal rhythm improving agent may be included.
  • the fermentation process may be performed by a fermentation method used for normal fermented milk production, and examples thereof include stationary fermentation, stirring fermentation, shake fermentation, and aeration fermentation. Since the production method of the present invention is characterized by passing through a step of fermenting milk with lactic acid bacteria and then a step of fermenting with yeast, it is possible to appropriately set a fermentation temperature, a fermentation time, and a fermentation promotion product, which will be described later. preferable.
  • the lactic acid bacteria or yeast cell cultures or dried cell bodies such as dried cells are added to the milk as a starter, and the fermentation is performed under known fermentation conditions.
  • a mixed starter may be used, or individual starters may be used.
  • the timing which inoculates a starter in milk is not specifically limited, You may inoculate simultaneously and may inoculate individually.
  • the obtained fermented milk can be subjected to known sterilization treatments such as filtration sterilization, radioactive sterilization, heating sterilization, and pressure sterilization.
  • sterilization treatments such as filtration sterilization, radioactive sterilization, heating sterilization, and pressure sterilization.
  • high-temperature treatment for example, 80 to 150 ° C.
  • a certain time for example, about 1 second to 1 hour.
  • the fermentation temperature is 20 ° C. to 50 ° C. for lactic acid bacteria, preferably 25 ° C. to 45 ° C., more preferably 30 ° C. to 40 ° C., and for yeast, 5 ° C. to 40 ° C., preferably 8 ° C. 30 ° C, more preferably 10 ° C to 25 ° C.
  • the temperature condition can be adjusted by a thermostatic bath, a mantle heater, a jacket, or the like.
  • Fermentation time is not particularly limited, but lactic acid bacteria fermentation is 3 hours to 96 hours, preferably 6 hours to 72 hours, more preferably 12 hours to 48 hours, yeast fermentation is 3 hours to 192 hours, preferably 6 hours to 96 hours, more preferably 12 to 72 hours.
  • the milk may contain additives that promote fermentation of lactic acid bacteria and yeast, for example, amino acids such as glutamic acid, sugars such as glucose and sucrose, minerals, vitamins, yeast extract and the like.
  • the addition amount of the lactic acid bacteria is not particularly limited, and when adding the bacterial cell culture as a starter, the bacterial cell culture containing 1 ⁇ 10 7 (cells / mL) or more of the lactic acid bacteria is preferably 1 to 10% by mass, preferably Is added in an amount of 1.5 to 7% by mass, more preferably 2 to 5% by mass.
  • the amount of yeast to be added is not particularly limited, and 1 to 10% by mass, preferably 1.5 to 7% by mass, more preferably 2 to 5% of a cell culture containing 1 ⁇ 10 5 (units / mL) or more of yeast. Add mass%.
  • the autonomic nervous regulator and diurnal rhythm improving agent of the present invention may be used as it is in the form of a suspension of the fermented milk obtained after the fermentation, as long as the object of the present invention is not impaired. Etc. may be performed.
  • the dosage form may be in the form of capsules, granules, powders, powders, dry syrups, etc. used by dissolving or adding at the time of use in addition to liquids.
  • the autonomic nervous regulator and diurnal rhythm improving agent of the present invention include excipients, disintegrants, binders, wetting agents, stabilizers, buffering agents, lubricants, preservatives commonly used in medicines, foods and drinks, etc.
  • additives such as surfactants, sweeteners, flavoring agents, fragrances, acidulants, and coloring agents may be blended.
  • collagen polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxyvinyl polymer, sodium alginate, water-soluble dextran, water-soluble dextrin, carboxymethyl starch sodium, pectin, xanthan gum, gum arabic, casein, gelatin, agar, glycerin, propylene glycol, polyethylene glycol Vaseline, paraffin, stearyl alcohol, stearic acid, human serum albumin, mannitol, sorbitol, lactose, a surfactant acceptable as a pharmaceutical additive, and the like can be blended.
  • the autonomic nervous regulator and the diurnal rhythm improving agent of the present invention include various oils and fats (for example, vegetable oils such as soybean oil, corn oil, safflower oil, olive oil, animal oils such as beef tallow and sardine oil), crude drugs ( For example, royal jelly, carrots, etc.), amino acids (eg, glutamine, cysteine, leucine, arginine, etc.), polyhydric alcohols (eg, ethylene glycol, polyethylene glycol, propylene glycol, glycerin, sugar alcohols such as sorbitol, erythritol, xylitol, maltitol) , Mannitol, etc.), natural polymers (such as gum arabic, agar, water-soluble corn fiber, gelatin, xanthan gum, casein, gluten or gluten hydrolyzate, lecithin, starch, dextrin, etc.), vitamins (such as vitamin C, Tamine group B), minerals (eg calcium, magnesium, magnesium
  • the present invention is a method for producing a sedative autonomic nerve regulator or a diurnal rhythm improving agent that acts on the olfactory sensation described above, and is characterized in that after fermenting milk with lactic acid bacteria, it is fermented with yeast.
  • a method for producing a nerve modifier is also provided.
  • the above-mentioned production method is a sterilization process, a formulation process, such as propylene glycol, glycerin, and fats and oils that are used as a kind of retention agent in order to enhance the action on olfaction.
  • a formulation process such as propylene glycol, glycerin, and fats and oils that are used as a kind of retention agent in order to enhance the action on olfaction.
  • additives and substances, and a step of adding additives and substances such as vitamin E and various plant extracts that reduce odor deterioration and loss in the heat treatment step and the like may be included.
  • the process of attaching to the exterior of a product the indication to the effect that it acts on an olfactory sense that it is an autonomic nerve regulator for sedation or a diurnal rhythm improving agent may be included.
  • the autonomic nervous regulator and diurnal rhythm improving agent of the present invention is an extract obtained by extracting a volatile odor component from fermented milk at a temperature near or above normal temperature using a steam distillation method, a vacuum distillation method, a solvent extraction method, or the like.
  • the concentrate which concentrated fermented milk and the extract using the evaporation method, the membrane concentration method, etc., and the form which formulated those extracts and concentrates may be sufficient. Further, it may be used by adding to fragrances, cosmetics, pharmaceuticals, foods, feed additives, textile detergents, textiles and the like.
  • a beverage or food that stays in the oral cavity for a certain period of time may act on the olfactory sense through the retronasal route.
  • the present invention also provides a “scented composition” containing a fermented milk-derived component obtained by fermenting milk with lactic acid bacteria and yeast.
  • the scented composition of the present invention is an extract obtained by extracting a volatile odor component from a fermented milk at a temperature near or above normal temperature using a steam distillation method, a vacuum distillation method, a solvent extraction method, etc.
  • a concentrate obtained by concentrating the product using an evaporation method, a membrane concentration method, etc., and a fragrance etc. in which the extract or concentrate is formulated, a fragrance, a cosmetic, a pharmaceutical, a food, a feed additive, Used by adding to detergents for textiles, textiles, etc.
  • Example 1 Autonomic nerve adjustment action by fermented milk fermented with lactic acid bacteria and yeast Material / Method 1.1 Preparation of Fermented Milk A (Lactic Acid Bacteria + Yeast) 100% by mass of sterilized skim milk is inoculated with 3% by mass of a mixed starter containing lactic acid bacteria (L. helveticus) and yeast (S. cerevisiae). Fermentation was carried out at 24 ° C. for 24 hours. Thereafter, sucrose was added and fermentation was performed at 25 ° C. for 24 hours, followed by heat sterilization treatment to prepare fermented milk A.
  • Fermented Milk A Fermented Milk A (Lactic Acid Bacteria + Yeast) 100% by mass of sterilized skim milk is inoculated with 3% by mass of a mixed starter containing lactic acid bacteria (L. helveticus) and yeast (S. cerevisiae). Fermentation was carried out at 24 ° C. for 24 hours. Thereafter, sucrose was added and fermentation was
  • Test sample Fermented milk A, water (control)
  • Test method On the day of the test, after fasting for 3 hours, the rats were laparotomized under urethane anesthesia (1 g / kg urethane aqueous solution was intraperitoneally administered), and the change in electrical activity was measured for the distal branch of each autonomic nerve.
  • centrifugal branches of each autonomic nerve of an opened rat were picked up with a silver recording electrode under a stereomicroscope.
  • the electrode was previously sufficiently immersed in a mixture of liquid paraffin and petroleum jelly.
  • the obtained nerve electrical activity was amplified with a condenser-type differential amplifier, monitored with an oscilloscope, and recorded on a magnetic tape. All neural activity was analyzed after converting the raw data into standard pulses using a slicer and window discriminator to separate it from background noise.
  • the discharge frequency was displayed on the pen recorder by a late meter with a reset time of 5 seconds.
  • a tube was inserted into the trachea from the start of surgery to the end of the experiment to secure the airway, and the body temperature (rat rectal temperature) was maintained at 35 ° C. ⁇ 0.5 ° C. with a heat retaining device.
  • Scent stimulation is cut by injecting 4 mL of 100-fold diluted water or water of fermented milk A into pharmaceutical cut cotton (4 cm x 4 cm x 0.5 cm) in the bottom of a plastic container (diameter 4.5 cm, height 5 cm) It was soaked in cotton, and the mouth of the container was applied to the nostril of the rat for 10 minutes.
  • the data was analyzed by the average value of the firing frequency (pulse / 5s) per 5 seconds every 5 minutes, and the value immediately before the odor stimulation (0 minute value) was shown as a percentage of 100%.
  • Statistical test for significant difference was performed by analysis of variance (ANOVA) with repeated measures.
  • Example 2 Diurnal rhythm improvement effect by fermented milk fermented with lactic acid bacteria and yeast Materials / Method 1.1 Preparation of Fermented Milk A (Lactic Acid Bacteria + Yeast) Fermented milk A was prepared by the method described in Example 1.
  • Test sample Fermented milk A, water (control)
  • Test method The animals were raised under constant temperature conditions of 24 ° C. under a light / dark cycle every 12 hours (lighted for 12 hours from 8 o'clock), and food and water were freely ingested. The first week was a period of odor stimulation for water as a control, and the next week was a period of odor stimulation for fermented milk A.
  • Odor stimulation was performed for 30 minutes every day from 14:00, and the amount of spontaneous activity was measured by measuring the number of times the animal crossed infrared rays. Spontaneous activity was measured over time, and daily activity, light (daytime) activity, dark activity, etc. were calculated. From these values, the light activity rate [light activity amount ⁇ 100 / daily activity amount] and the dark activity rate [dark activity amount ⁇ 100 / daily activity amount] were calculated.
  • water or 50 mL of 1000-fold diluted solution of fermented milk A was bubbled using a pump, and a wind containing the odor of the liquid was blown into each animal breeding cage. Statistical test for significant difference was performed by Wilcoxon signed-rank test.
  • the bright period is the active period and the dark period (dark period) is the dormant period, but in the rat, the light period is the dormant period and the dark period is the active period, which is the opposite of humans. .
  • Comparative Example 1 Diurnal rhythm improving action by fermented milk of lactic acid bacteria, fermented milk of yeast, and skim milk Materials / Methods 1.1 Preparation of Fermented Milk B (Lactic Acid Bacteria), Fermented Milk C (Yeast), Nonfat Milk 100% by mass of sterilized skim milk is inoculated with 3% by mass of L. helveticus starter at 37 ° C, After fermentation for 24 hours, heat sterilization was performed to prepare fermented milk B. Sterilized skim milk 100% by mass was inoculated with 3% by mass of a yeast (S. cerevisiae) starter, sucrose was added, and fermentation was performed at 25 ° C. for 24 hours. Then, the heat sterilization process was performed and the fermented milk C was prepared. A commercially available skim milk powder was dissolved in 9% (w / w) and then heat sterilized to prepare skim milk.
  • Fermented Milk B Lactic Acid Bacteria
  • Fermented Milk C Yeast
  • Test sample fermented milk B, fermented milk C, skim milk, water (control)
  • Test method According to Example 2, the diurnal rhythm improving effect by odor stimulation to rats was evaluated.
  • Example 3 Relaxation effect by fermented milk fermented with lactic acid bacteria and yeast (sensory evaluation) 1.
  • Materials / Methods 1.1 Preparation of Fermented Milk A (Lactic Acid Bacteria + Yeast), Fermented Milk B (Lactic Acid Bacteria), and Nonfat Milk Fermented milk A, fermented milk B, and nonfat milk were prepared according to the above Examples and Comparative Examples.
  • a ′ (Lactic Acid Bacteria + Yeast) 100% by mass of sterilized skim milk is inoculated with 3% by mass of a starter of lactic acid bacteria (L. helveticus CM4 accession number: FERM BP-6060) at 37 ° C., 24 Lactic acid fermentation was performed to prepare lactic acid bacteria fermented milk. Next, 3% by mass of yeast (S. cerevisiae strain JCM7255) starter was inoculated into the obtained lactic acid bacteria fermented milk, sucrose was added, and fermentation was performed at 25 ° C for 24 hours, followed by heat sterilization treatment. A ′ was prepared.
  • Test sample fermented milk A, fermented milk A ', fermented milk B, skim milk
  • Subjects 10 trained analytical panelists
  • Test method 30 mL of each test sample was placed in a 50 mL plastic cup and presented to the subject, and sensory evaluation was performed on the naturally exposed odor.
  • the Visual Analogue Scale (VAS) method was used for odor evaluation.
  • the smell of fermented milk obtained by fermenting with lactic acid bacteria and yeast has an autonomic nerve adjusting action (sedation action), a diurnal rhythm improving action, and a human relaxing effect.
  • the said effect is not recognized in lactic-acid-bacteria fermented milk, yeast fermented milk, and skim milk, and is unique to fermented milk obtained by fermenting with lactic acid bacteria and yeast.
  • the autonomic nerve adjusting agent and the diurnal rhythm improving agent of the present invention improve the balance of autonomic nerves due to stress and the disturbance of the diurnal rhythm, resulting in an increase in blood pressure and blood glucose, abnormal gastrointestinal function, sleep disorder It is useful for the alleviation, prevention and treatment of various symptoms and diseases.
  • the autonomic nerve adjusting agent and diurnal rhythm improving agent of the present invention do not need to be ingested (administered) into the body, and have an effect by acting on the olfaction, and thus have high safety, fragrance, cosmetics, It can be used as a fragrance composition added to various products such as foods, pharmaceuticals, feed additives, detergents for textile products, textile products and the like.

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Abstract

　本発明は、自律神経調整作用、日周リズム改善作用を有する剤及び付香製品を提供する。具体的には、乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることを特徴とする、鎮静用の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤が提供される。

Description

鎮静用の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤
　本発明は、鎮静用の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤に関する。より詳細には、乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることを特徴とする、鎮静用の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤に関する。
　地球上の生物は体内時計と呼ばれる２４時間の環境周期に同調する日周リズムを持っているが、ストレス下では、自律神経のバランスの乱れ(自律神経失調)により、日周リズムの乱れが生じるため、それに起因する種々の疾患に対する有効な治療対策が急がれている。
　従来、酵母を用いて植物性素材を発酵させて得た香気組成物が嗅覚に作用して自律神経調整作用を有することが報告されているが（特許文献１）、乳などの動物性素材を発酵させて得た香気組成物の効果や、本香気組成物の日周リズム改善作用については報告されていない。また、発酵乳の嗜好性向上に与える乳酸菌および酵母の役割に関する報告があるが（非特許文献１）、自律神経や日周リズムの乱れに与える効果は報告されていない。
　乳を主原料とした乳ペプチド及びハーブ含有飲料がリラックス効果に影響を与えることや、乳酸菌体が自律神経活動に影響を与えることが報告されている。しかし、これらの報告は（体内に）摂取して効果を発揮することを特徴としており、嗅覚に作用して効果を発揮するという報告はない。また、日周リズム改善作用においては、摂取形態を問わず報告事例はない（特許文献２及び非特許文献２）。
　安全で有効な日周リズム改善作用を持つ優れた化合物としてアスタキサンチンやアラキドン酸が報告されているが、その効果を得るためには成分を（体内に）摂取する必要があり、その利用形態に制限がある（特許文献３及び４）。
特開２００６－１０４０６７号公報 特開２００３－１０２３８０号公報 ＷＯ０１／０８７２９１号パンフレット 特表２００６－５２１３６９号公報
川口恭輔　他、発酵乳の嗜好性向上に与える乳酸菌および酵母の役割 Effect of lactic acid bacteria and yeast on the fermented milk taste、日本農芸化学会大会講演要旨集、Ｖｏｌ．２０１２、２０１２．０３．０５、２Ｊ１５Ｐ１１ 谷田守　他、肥満研究、２００６、Ｖｏｌ.１２、Ｎｏ.３、ｐ２４７－２５０
　本発明の課題は、摂取（投与）することを必要とせず、嗅覚に作用させることにより、自律神経調整作用、日周リズム改善作用を有する剤及び付香製品（芳香剤、香粧品、食品、医薬品、飼料添加物、繊維製品用洗剤、繊維製品等）を提供することである。
　発明者らは、上記課題解決のために鋭意検討し、乳酸菌と酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分の匂いに、自律神経調整作用、日周リズム改善作用があることを見出した。
　すなわち、本発明は以下の[１]～[１５]に関する。
[１] 乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることを特徴とする、鎮静用の自律神経調整剤；
[２] 乳酸菌がラクトバチルス属の微生物であることを特徴とする、[１]に記載の鎮静用の自律神経調整剤；
[３] 乳酸菌がラクトバチルス・ヘルベティカス（L. helveticus）であることを特徴とする、[２]に記載の鎮静用の自律神経調整剤；
[４] 酵母がサッカロマイセス属の微生物であることを特徴とする、[１]～[３]のいずれか１項に記載の鎮静用の自律神経調整剤；
[５] 酵母がサッカロマイセス・セレビシエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする、[１]～[４]のいずれか１項に記載の鎮静用の自律神経調整剤；
[６] 乳が脱脂乳であることを特徴とする、[１]～[５]のいずれか１項に記載の鎮静用の自律神経調整剤；
[７] 乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることを特徴とする、日周リズム改善剤；
[８] 乳酸菌がラクトバチルス属の微生物であることを特徴とする、[７]に記載の日周リズム改善剤；
[９] 乳酸菌がラクトバチルス・ヘルベティカス（L. helveticus）であることを特徴とする、[８]に記載の日周リズム改善剤；
[１０] 酵母がサッカロマイセス属の微生物であることを特徴とする、[７]～[９]のいずれか１項に記載の日周リズム改善剤；
[１１] 酵母がサッカロマイセス・セレビシエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする、[７]～[１０]に記載の日周リズム改善剤；
[１２] 乳が脱脂乳であることを特徴とする、[７]～[１１]のいずれか１項に記載の日周リズム改善剤；
[１３] 嗅覚に作用させる、鎮静用の自律神経調整剤の製造方法であって、乳を乳酸菌によって発酵した後に、酵母によって発酵することを特徴とする、自律神経調整剤の製造方法；
[１４] 嗅覚に作用させる、日周リズム改善剤の製造方法であって、乳を乳酸菌によって発酵した後に、酵母によって発酵することを特徴とする、日周リズム改善剤の製造方法；[１５] 乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を含有する付香組成物。
　本発明によれば、ストレス等による自律神経のバランスの乱れ(自律神経失調)、及び日周リズムの乱れを改善し、あるいはこれらに起因する睡眠、体温、血圧、ホルモン分泌、摂食、代謝、精神活動等の生理活動の障害、又は肥満、うつ病等の種々の症状や疾患を緩和、予防、又は治療することができる。
　本発明の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤は、体内に摂取（投与）することを必要とせず、嗅覚に作用することで効果を奏するため、安全性が高い。そのため、広範囲に使用でき、芳香剤、香粧品、食品、医薬品、飼料添加物、繊維製品用洗剤、繊維製品等、様々な製品に添加して使用することができる。
図１は、乳酸菌と酵母で発酵させた発酵乳Aの匂い刺激による、ラット副腎交感神経活動の変化（開始時を100とした場合の変化率(％)）を示す。 図2は、乳酸菌と酵母で発酵させた発酵乳Aの匂い刺激による、ラット胃副交感神経活動の変化（開始時を100とした場合の変化率(％)）を示す。 図3は、乳酸菌と酵母で発酵させた発酵乳Aの匂い刺激後のラットの総活動量を示す。 図4は、乳酸菌と酵母で発酵させた発酵乳Aの匂い刺激後のラットの明期活動率を示す。 図5は、乳酸菌発酵させた発酵乳Bの匂い刺激後のラットの総活動量を示す。 図6は、酵母発酵させた発酵乳Cの匂い刺激後のラットの総活動量を示す。 図7は、脱脂乳の匂い刺激後のラットの総活動量を示す。 図8は、乳酸菌発酵させた発酵乳Bの匂い刺激後のラットの明期活動率を示す。 図9は、酵母発酵させた発酵乳Cの匂い刺激後のラットの明期活動率を示す。 図10は、脱脂乳の匂い刺激後のラットの明期活動率を示す。 図11は、発酵乳A、発酵乳B、発酵乳C及び脱脂乳の匂い刺激後のコントロールに対する明期活動比率を示す。
　本明細書は、本願の優先権の基礎である特願２０１４－０４１７２８号の明細書に記載された内容を包含する。
　自律神経調整剤
　自律神経は、交感神経と副交感神経の２つの神経系からなる。交感神経活動の亢進時や副交感神経活動の抑制時には、ストレス状態（興奮）であることが一般的に知られている。また、交感神経活動の抑制時や副交感神経活動の亢進時には、リラックス状態（鎮静）であることが一般的に知られている。
　本発明の「自律神経調整剤」は、乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることで、自律神経を調整し、鎮静効果を発揮する。
　例えば、本発明の「自律神経調整剤」は、副腎交感神経等の交感神経活動を抑制させて、ストレスの緩和・低減、血圧低下や血糖低下作用などの効果を発揮する。また、胃副交感神経等の副交感神経を亢進させて、消化管機能の改善やそれに伴うリラックス様の効果を発揮する。
　日周リズム改善剤
　「日周リズム」とは、一昼夜を周期として表れる生活リズムで、日内リズムとも称される。ヒトでは明るい期間(明期)が活動期間であり、暗い期間（暗期）が休眠期間である（ラットでは明期が休眠期、暗期が活動期であり、ヒトと逆である）。自律神経の乱れ等に起因するストレス状態では、日周リズムに乱れが生じる。
　本発明の「日周リズム改善剤」は、乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることで、日周リズムを改善（正常化）する。
　例えば、本発明の「日周リズム改善剤」は、ストレス状態を緩和し、日周リズムを改善することで、これに起因する睡眠、体温、血圧、ホルモン分泌、摂食、代謝、精神活動等の生理活動の障害、又は肥満、うつ病等の種々の症状や疾患を改善する効果を発揮する。
　発酵乳由来成分
　本発明の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤の「有効成分」である「発酵乳由来成分」は、上記発酵乳の匂い成分、すなわち、常温付近又はそれ以上の通常使用される温度で揮発性の成分である。
　嗅覚に作用
　発酵乳由来成分は「嗅覚に作用」することで自律神経調整剤及び日周リズム改善剤としての効果（機能）を発揮する。すなわち、「嗅覚に作用」とは、有効成分である発酵乳の匂い成分が揮発し、嗅覚を刺激することを意味する。こうして、発酵乳由来の匂いが嗅覚を刺激し、信号となって脳に伝わることで、自律神経の乱れや日周リズムの乱れが調整される。なお、嗅覚への作用は、鼻先から匂いが吸い込まれるオルソネーザル経路であっても、口腔内に含んだ匂いが鼻腔内に入り込むレトロネーザル経路であっても本発明の範囲に含まれる。
　発酵乳
　本発明で用いられる「発酵乳」は、乳を乳酸菌と酵母を用いて発酵して液状または糊状にした酸性の乳であり、乳等省令で定める発酵乳や乳酸菌飲料等を含む。
　本発明で用いられる「乳」としては、ウシ、ラクダ、ロバ、ヤギ、ウマ、トナカイ、羊、水牛、及びヤクなどの哺乳動物の乳、並びにその加工乳が挙げられるが、特に牛乳又はその加工乳が好ましく、特に牛乳を原料とする脱脂乳が好ましい。脱脂乳とは、乳から脂肪分（一般には脂肪と脂溶性ビタミン）が全部(乳脂肪0.5％未満)又は一部除かれたものを意味する。また、脱脂乳は脱脂粉乳を還元した還元乳でもよい。
　本発明で用いられる「乳酸菌」としては、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス属、ビフィドバクテリウム属、エンテロコッカス属、ロイコノストック属、ラクトコッカス属、ペディオコッカス属、及びワイセラ属に属する微生物が挙げられ、特にラクトバチルス属が好ましい。
　「ラクトバチルス属の微生物」としては、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・デルブルッキ サブスピーシーズ ブルガリカス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・ゼアエ、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトバチルス・クリスパタス、ラクトバチルス・ガリナーラム、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・プランタラム、及びラクトバチルス・ジョンソニー等が挙げられ、特にラクトバチルス・ヘルベティカス（L. helveticus)が好適に使用できる。
　本発明で用いられる「酵母」としては、サッカロマイセス属、シゾサッカロマイセス属、チゴサッカロマイセス属、クリベロマイセス属に属する微生物が挙げられ、特にサッカロマイセス属が好ましい。
　「サッカロマイセス属の微生物」としては、サッカロマイセス・セレビシエ、サッカロマイセス・パストリアヌス、サッカロマイセス・マンジニ、サッカロマイセス・バヤヌス、クリベロマイセス・ラクチス、クリベロマイセス・マルキシアヌス、チゴサッカロマイセス・ルキシ、シゾサッカロマイセス・ポンベが挙げられ、特にサッカロマイセス・セレビシエ（S. cerevisiae）が好適に使用できる。
　発酵乳の製造方法
　本発明は、上記した嗅覚に作用させる、鎮静用の自律神経調整剤あるいは日周リズム改善剤の製造方法であって、乳を乳酸菌によって発酵した後に、酵母によって発酵することを特徴とする、自律神経調整剤あるいは日周リズム改善剤の製造方法も提供する。
　上記製法は、乳酸菌による発酵工程、酵母による発酵工程のほか、滅菌工程、製剤化工程、例えば嗅覚への作用を高めるために、一種の保留剤として使用される、プロピレングリコール、グリセリン、油脂類のような添加剤や物質、また、加熱処理工程等での匂いの劣化やロスを低減させるビタミンEや各種植物の抽出物のような添加剤や物質を添加する工程を含んでいてもよい。また、嗅覚に作用させることを特徴とする、鎮静用の自律神経調整剤又は日周リズム改善剤である旨の表示を製品の外装に付す工程を含んでいてもよい。
　発酵工程は、通常の発酵乳製造に使用される発酵方法で行えばよく、静置発酵、攪拌発酵、振とう発酵、通気発酵などが挙げられる。本発明の製造方法は、乳を乳酸菌によって発酵する工程を経た後に、酵母によって発酵する工程を経ることを特徴とするため、適宜、後述する発酵温度や発酵時間、発酵促進物を設定することが好ましい。
　上記乳に乳酸菌あるいは酵母の菌体培養物又は乾燥菌体等の菌体処理物をスターターとして添加し、公知の発酵条件にて行う。また、乳酸菌あるいは酵母は、混合スターターを使用してもよいし、個々のスターターを使用してもよい。また、乳にスターターを接種するタイミングは特に限定されず、同時に接種してもよいし、個々に接種してもよい。
　得られた発酵乳は、濾過滅菌、放射性殺菌、加熱式殺菌、加圧式殺菌などの公知の殺菌処理を施すことができる。また、加熱式殺菌の場合には、一定時間（例えば1秒～1時間程度）、高温処理（例えば80～150℃）してもよい。
　発酵温度は、乳酸菌の場合は、20℃から50℃、好ましくは25℃から45℃、より好ましくは30℃から40℃であり、酵母の場合は、5℃から40℃、好ましくは8℃から30℃、より好ましくは10℃から25℃である。温度条件は、恒温槽、マントルヒーター、ジャケットなどにより調整することができる。
　発酵時間は特に限定されないが、乳酸菌発酵は、3時間から96時間、好ましくは6時間から72時間、より好ましくは12時間から48時間、酵母発酵は、3時間から192時間、好ましくは6時間から96時間、より好ましくは12時間から72時間である。
　乳には、乳酸菌や酵母の発酵を促進するような添加物、例えばグルタミン酸などのアミノ酸、ブドウ糖やショ糖などの糖類、ミネラル類、ビタミン類、酵母エキス等を加えてもよい。
　乳酸菌の添加量は、特に限定されず、菌体培養物をスターターとして添加する際には、乳酸菌を1×107(個/mL)以上含む菌体培養物を、1～10質量％、好ましくは1.5～7質量％、より好ましくは2～5質量％添加する。酵母の添加量も、特に限定されず、酵母を1×105(個/mL)以上含む菌体培養物を、1～10質量％、好ましくは1.5～7質量％、より好ましくは2～5質量％添加する。
　製剤・処方
　本発明の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤は、上記発酵後に得られる発酵乳をそのまま懸濁液の形態で用いてもよいし、本発明の目的を損なわない範囲で、滅菌等の処理を施してもよい。剤形としては、液剤のほか、用時溶解あるいは添加して使用されるカプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、ドライシロップ剤などの形態であってもよい。
　本発明の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤には、医薬、飲食品等に通常用いられる賦形剤、崩壊剤、結合剤、湿潤剤、安定剤、緩衝剤、滑沢剤、保存剤、界面活性剤、甘味料、矯味剤、芳香剤、酸味料、着色剤などの添加剤を配合してもよい。例えば、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、水溶性デキストリン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、医薬添加物として許容される界面活性剤などを配合できる。
　さらに、本発明の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤には、各種油脂（例えば、大豆油、コーン油、サフラワー油、オリーブ油などの植物油、牛脂、イワシ油などの動物油脂）、生薬（例えばロイヤルゼリー、人参など）、アミノ酸（例えばグルタミン、システイン、ロイシン、アルギニンなど）、多価アルコール（例えばエチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、糖アルコール、例としてソルビトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、マンニトールなど）、天然高分子（例えばアラビアガム、寒天、水溶性コーンファイバー、ゼラチン、キサンタンガム、カゼイン、グルテン又はグルテン加水分解物、レシチン、澱粉、デキストリンなど）、ビタミン（例えばビタミンC、ビタミンB群など）、ミネラル（例えばカルシウム、マグネシウム、亜鉛、鉄など）、食物繊維（例えばマンナン、ペクチン、ヘミセルロースなど）、界面活性剤（例えばグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステルなど）、精製水、賦形剤（例えばブドウ糖、コーンスターチ、乳糖、デキストリンなど）、安定剤、pH調製剤、酸化防止剤、甘味料、呈味成分、酸味料、着色料及び香料などを添加してもよい。
　本発明は、上記した嗅覚に作用させる、鎮静用の自律神経調整剤あるいは日周リズム改善剤の製造方法であって、乳を乳酸菌によって発酵した後に、酵母によって発酵することを特徴とする、自律神経調整剤の製造方法も提供する。
　上記製法は、乳酸菌による発酵工程、酵母による発酵工程のほか、滅菌工程、製剤化工程、例えば嗅覚への作用を高めるために、一種の保留剤として使用される、プロピレングリコール、グリセリン、油脂類のような添加剤や物質、また、加熱処理工程等での匂いの劣化やロスを低減させるビタミンEや各種植物の抽出物のような添加剤や物質を添加する工程を含んでいてもよい。また、嗅覚に作用させることを特徴とする、鎮静用の自律神経調整剤又は日周リズム改善剤である旨の表示を製品の外装に付す工程を含んでいてもよい。
　本発明自律神経調整剤及び日周リズム改善剤は、発酵乳から常温付近又はそれ以上の温度で揮発性の匂い成分を水蒸気蒸留法や減圧蒸留法、溶剤抽出法等を用いて抽出した抽出物、発酵乳や抽出物を蒸発法や膜濃縮法等を用いて濃縮した濃縮物、及び、それらの抽出物や濃縮物を製剤化した形態であってもよい。また、芳香剤、香粧品、医薬品、食品、飼料添加物、繊維製品用洗剤、繊維製品等に添加して利用されてもよい。さらに、口腔内に一定期間留まる飲料や食品等はレトロネーザル経路を介して嗅覚に作用するものであってもよい。
　付香組成物
　本発明は、乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を含有する「付香組成物」も提供する。本発明の付香組成物は、発酵乳から常温付近又はそれ以上の温度で揮発性の匂い成分を水蒸気蒸留法や減圧蒸留法、溶剤抽出法等を用いて抽出した抽出物、発酵乳や抽出物を蒸発法や膜濃縮法等を用いて濃縮した濃縮物、及び、それらの抽出物や濃縮物を製剤化した香料等の形態で、芳香剤、香粧品、医薬品、食品、飼料添加物、繊維製品用洗剤、繊維製品等に添加して使用される。
　以下、実施例及び比較例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１：乳酸菌と酵母で発酵させた発酵乳による自律神経調整作用
１．材料・方法
１．１　発酵乳A (乳酸菌+酵母) の調製
　殺菌脱脂乳100質量％に、乳酸菌(L. helveticus)と酵母(S. cerevisiae)を含む混合スターター3質量％を接種して、37℃、24時間発酵を行った。その後、ショ糖を添加し、25℃、24時間発酵を行った後、加熱殺菌処理を行い、発酵乳Aを調製した。
１．２　ラットの自律神経調整作用
(1)供試試料：発酵乳A、水（コントロール)
(2)試験動物：Wistar系ラット(n=3)を12時間毎の明暗周期下(8時より12時間点灯)、24℃の恒温条件の下、餌及び水を自由摂取させ一週間以上予備飼育し、体重約300gの個体を試験に供した。
(3)試験方法：
　試験当日は3時間絶食させた後、ラットをウレタン麻酔下(１g / kgのウレタン水溶液を腹腔内投与)で開腹した後、各自律神経の遠心枝について電気活動の変化を測定した。具体的には開腹したラットの各自律神経の遠心枝を、実体顕微鏡下で銀製記録電極で釣り上げて行った。乾燥を防ぐ為に電極は予め液体パラフィンとペトロレウムゼリーの混合物に十分浸しておいた。得られた神経の電気活動はコンデンサー式差動増幅器にて増幅し、オッシロスコープにてモニターし、磁気テープに記録した。全ての神経活動は、その生データをバックグランド・ノイズと分離するためにスライサーとウィンドウ・ディスクリミネーターを用いて標準パルスに変換した後に解析した。放電頻度はレイトメーターにより5秒間のリセットタイムにてペンレコーダー上に表示した。なお、手術開始から実験終了までチューブを気管に挿入して気道を確保し、保温装置にて体温(ラットの直腸温)を35℃±0.5℃に保つようにした。匂い刺激は、プラスチック容器(直径4.5cm、高さ5cm)の底に入れた医薬用カット綿(4cm×4cm×0.5cm)に発酵乳Aの100倍水希釈液もしくは水を4mL注入してカット綿に浸し、その容器の口をラットの鼻孔に10分間あてて実施した。データは5分間毎の5秒あたりの発火頻度(pulse / 5s)の平均値にて解析し、匂い刺激直前(0分値)を100%と百分率で示した。有意差に関する統計学的検定はanalysis of variance (ANOVA) with repeated measuresにより行った。
２．試験結果
　発酵乳Aの匂い刺激はコントロールと比較して副腎交感神経活動を低下させ(図1)、胃副交感神経活動を上昇させた(図2)。このことから発酵乳Aの嗅覚を介した匂い刺激は鎮静様の自律神経調整作用を有することが明らかとなった。
実施例２：乳酸菌と酵母で発酵させた発酵乳による日周リズム改善作用
１．材料・方法
１．１　発酵乳A(乳酸菌+酵母)の調製
　実施例１に記載した方法で発酵乳Aを調製した。
１．２　ラットの日周リズム改善作用
(1)供試試料：発酵乳A、水(コントロール)
(2)試験動物：7週齢(♂)のWistar系ラット（n=6）を一週間予備飼育後、更に一週間試験環境で馴致した後、9週齢で試験に供した。
(3)試験方法：
　12時間毎の明暗周期下(8時より12時間点灯)に24℃の恒温条件にて飼育し、餌及び水は自由摂取とした。最初の一週間はコントロールである水の匂い刺激期間とし、次の一週間は発酵乳Aの匂い刺激期間とした。毎日14時より30分間匂い刺激を行い、動物が赤外線を横切る回数の測定による自発活動量測定を行った。自発活動量は経時的に測定し、一日活動量、明期(昼間)活動量、暗期活動量などを算出した。また、それらの値から明期活動率[明期活動量×100 / 一日活動量]及び暗期活動率[暗期活動量×100 / 一日活動量]を計算した。なお、匂い刺激はポンプを用いて水又は発酵乳Aの1000倍希釈液50mLをバブリングして液の匂いを含む風を各動物飼育ケージに送風した。有意差に関する統計学的検定はWilcoxon signed-rank testにより行った。なお、ヒトでは明るい期間(明期)が活動期間であり、暗い期間（暗期）が休眠期間であるが、ラットでは明期が休眠期、暗期が活動期であり、ヒトと逆である。
２．試験結果
　発酵乳Aの匂い刺激はコントロールと比較して総活動量に影響を及ぼさなかったが(図3)、明期活動率を低下させた(図4)。このことから発酵乳Aの嗅覚を介した匂い刺激により日周リズムを改善させる作用があることが明らかとなった。
比較例１：乳酸菌発酵乳、酵母発酵乳、及び脱脂乳による日周リズム改善作用
１．材料・方法
１．１　発酵乳B(乳酸菌)、発酵乳C(酵母)、脱脂乳の調製
　殺菌脱脂乳100質量％に、乳酸菌(L. helveticus)スターター3質量％を接種して、37℃、24時間発酵を行った後、加熱殺菌処理を行い、発酵乳Bを調製した。
　殺菌脱脂乳100質量％に、酵母(S. cerevisiae)スターター3質量％を接種して、ショ糖を添加し、25℃、24時間発酵を行った。その後、加熱殺菌処理を行い、発酵乳Cを調製した。
　市販の脱脂粉乳を9％(w/w)に溶解した後、加熱殺菌処理を行い、脱脂乳を調製した。
１．２　ラットの日周リズム改善作用
(1)供試試料：発酵乳B、発酵乳C、脱脂乳、水(コントロール)
(2)試験動物：7週齢(♂)のWistar系ラット（n=6）を一週間予備飼育後、更に一週間試験環境で馴致した後、9週齢で試験に供した。
(3)試験方法：
　実施例２にしたがい、ラットへの匂い刺激による日周リズム改善作用を評価した。
２．試験結果
　発酵乳B、発酵乳C、及び脱脂乳の匂い刺激はコントロールと比較して総活動量(図5、図6、図7)、明期活動率に影響を及ぼさなかった(図8、図9、図10)。このことから発酵乳B、発酵乳C、及び脱脂乳の嗅覚を介した匂い刺激は日周リズムを改善させる作用はないことが明らかとなった。よって、日周リズム改善作用は発酵乳Aに特徴的な効果と考えられた(図11)。
実施例３：乳酸菌と酵母で発酵させた発酵乳によるリラックス効果(官能評価)
１．材料・方法
１．１　発酵乳A(乳酸菌+酵母)、発酵乳B(乳酸菌)、脱脂乳の調製
　発酵乳A、発酵乳B、脱脂乳は、上記実施例及び比較例に従って調製した。
１．２　発酵乳A'(乳酸菌+酵母)の調製
　殺菌脱脂乳100質量％に、乳酸菌(L. helveticus CM4株　受託番号：FERM BP-6060)スターターを3質量％接種して、37℃、24時間乳酸発酵を行い、乳酸菌発酵乳を調製した。次いで得られた乳酸菌発酵乳に酵母(S. cerevisiae JCM7255株)スターターを3質量％接種した後、ショ糖を添加し、25℃、24時間発酵を行った後、加熱殺菌処理を行い、発酵乳A'を調製した。
１．３　ヒトのリラックス効果(官能評価）
(1)試験試料：発酵乳A、発酵乳A'、発酵乳B、脱脂乳
(2)被験者：訓練された分析型パネラー10名
(3)試験方法：
　50mLプラスチックカップに各試験試料をそれぞれ30mL入れ被験者に提示し、自然曝露した匂いに関して官能評価を実施した。匂いの評価にはVisual Analogue Scale(VAS)法を用いた。
２．試験結果
　発酵乳A及び発酵乳A'の匂いは発酵乳Bや脱脂乳の匂いと比較して快であり、リラックス（鎮静）効果を有することが示された(表1)。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　以上の結果から、乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳の匂いには自律神経調整作用（鎮静作用）、日周リズム改善作用、ヒトをリラックスさせる効果があることが確認された。上記効果は、乳酸菌発酵乳、酵母発酵乳、脱脂乳には認められず、乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳に特有のものである。
　本発明の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤は、ストレス等による自律神経のバランス及び日周リズムの乱れを改善し、これらに起因する血圧や血糖の上昇、消化管機能の異常、睡眠障害等の種々の症状・疾患の緩和、予防、治療に有用である。
　本発明の自律神経調整剤及び日周リズム改善剤は、体内に摂取（投与）することを必要とせず、嗅覚に作用することで効果を奏するため、安全性が高く、芳香剤、香粧品、食品、医薬品、飼料添加物、繊維製品用洗剤、繊維製品等、様々な製品に付香組成物として添加して使用することができる。
　本明細書中で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書中にとり入れるものとする。

Claims (15)

  1. 　乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることを特徴とする、鎮静用の自律神経調整剤。
  2. 　乳酸菌がラクトバチルス属の微生物であることを特徴とする、請求項１に記載の鎮静用の自律神経調整剤。
  3. 　乳酸菌がラクトバチルス・ヘルベティカス（L. helveticus）であることを特徴とする、請求項２に記載の鎮静用の自律神経調整剤。
  4. 　酵母がサッカロマイセス属の微生物であることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の鎮静用の自律神経調整剤。
  5. 　酵母がサッカロマイセス・セレビシエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の鎮静用の自律神経調整剤。
  6. 　乳が脱脂乳であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１項に記載の鎮静用の自律神経調整剤。
  7. 　乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を有効成分とし、当該有効成分を嗅覚に作用させることを特徴とする、日周リズム改善剤。
  8. 　乳酸菌がラクトバチルス属の微生物であることを特徴とする、請求項７に記載の日周リズム改善剤。
  9. 　乳酸菌がラクトバチルス・ヘルベティカス（L. helveticus）であることを特徴とする、請求項８に記載の日周リズム改善剤。
  10. 　酵母がサッカロマイセス属の微生物であることを特徴とする、請求項７～９のいずれか１項に記載の日周リズム改善剤。
  11. 　酵母がサッカロマイセス・セレビシエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする、請求項７～１０に記載の日周リズム改善剤。
  12. 　乳が脱脂乳であることを特徴とする、請求項７～１１のいずれか１項に記載の日周リズム改善剤。
  13. 　嗅覚に作用させる、鎮静用の自律神経調整剤の製造方法であって、乳を乳酸菌によって発酵した後に、酵母によって発酵することを特徴とする、自律神経調整剤の製造方法。
  14. 　嗅覚に作用させる、日周リズム改善剤の製造方法であって、乳を乳酸菌によって発酵した後に、酵母によって発酵することを特徴とする、日周リズム改善剤の製造方法。
  15. 　乳を乳酸菌及び酵母によって発酵して得られる発酵乳由来成分を含有する付香組成物。
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