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WO2015083996A1 - 백합나무 수피 추출물을 유효 성분으로 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 제형 - Google Patents

백합나무 수피 추출물을 유효 성분으로 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 제형 Download PDF

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WO2015083996A1
WO2015083996A1 PCT/KR2014/011607 KR2014011607W WO2015083996A1 WO 2015083996 A1 WO2015083996 A1 WO 2015083996A1 KR 2014011607 W KR2014011607 W KR 2014011607W WO 2015083996 A1 WO2015083996 A1 WO 2015083996A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
fatty acid
pharmaceutical formulation
bark extract
polyoxyethylene
extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2014/011607
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김기운
유혜동
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHO DANG PHARM Co Ltd
Original Assignee
CHO DANG PHARM Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHO DANG PHARM Co Ltd filed Critical CHO DANG PHARM Co Ltd
Publication of WO2015083996A1 publication Critical patent/WO2015083996A1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical formulation for treating chronic myelogenous leukemia, which contains the extract of the bark of the lily of the valley as an active ingredient. More specifically, in order to selectively inhibit the mutant T315I due to the BCR-ABL fusion gene mutation, which is the cause of chronic myeloid leukemia, poly ADP ribose polymerization related to the change of mitochondrial membrane potential (MMP) and apoptosis pathway in leukemia cells.
  • MMP mitochondrial membrane potential
  • a pharmaceutical formulation for the treatment of chronic myelogenous leukemia which contains an extract of the bark of cauliflower, which causes apoptosis through cleavage of enzyme (PARP) and caspase-3.
  • Liriodendron tulipifera L. (Yellow-poplar) is a deciduous broad-leaved arborescent belonging to the Magnoliaceae, and it has been reported that the extract of the bark of the lily contains various compounds such as alkaloids, sesquiterpins and lignans. .
  • Lily bark extracts include costunolide, tulipinolide, epi-tulipinolide, epi-tulipdienolide and gamma-ririodenola Sesquiterpin lactones such as gamma-liriodenolide and the like are included.
  • the parthenolides have been found to have anti-inflammatory or anti-cancer effects through the nuclear transcription factors NF- ⁇ B, p21 and cyclin D1, and especially LC-, a synthetic derivative of patenolide and patenolide.
  • 1 dimethylamino-parthenolide
  • AML acute myeloid leukemia
  • Leukemia is a type of blood tumor in which blood cells, especially white blood cells, multiply abnormally. Leukocytes that do not mature properly are a disease that exists in the blood in large quantities. Compared with the abnormal proliferation of leukocytes, the normal number of blood cells becomes extremely small, which means that they can't perform basic blood functions such as oxygen transport or nutrition, as well as immune function, and abnormal leukocytes cause similar reactions to autoimmune diseases. It can also destroy normal tissue.
  • Chronic myeloid leukemia is a myeloproliferative disease in which myeloid leukemia cells proliferate uncontrolled in the bone marrow and accumulate in the blood.
  • the types of leukemia are divided into acute myeloid leukemia, chronic myeloid leukemia, acute lymphocytic leukemia (ALL), and chronic lymphocytic leukemia (CLL).
  • abnormal myeloid cells In chronic myelogenous leukemia, abnormal myeloid cells generally appear mature in appearance but fail to function properly. These chronic myeloid leukemias are associated with abnormal genetic markers in cells called the Philadelphia chromosome.
  • Chronic myeloid leukemia is different from other common leukemias, and in particular, the transition from the slow progress of the chronic multiplication stage of abnormal cells to the acute stage of proliferation occurs.
  • Chronic myeloid leukemia can remain chronic for three to four years, at which time it is more effective to suppress rather than cure the disease.
  • most of the patients who have a sudden transition is very difficult to treat.
  • Chronic myeloid leukemia is caused by the BCR-ABL fusion gene, a Philadelphia chromosome in which the ABL gene on chromosome 9 and the BCR gene on chromosome 22 are transcribed.
  • BCR-ABL fusion genes are involved in carcinogenic protein p210 biosynthesis by expressing fusion proteins with Tyrosine kinase activity, and the biosynthesized p210 protein inhibits cell death of myeloid progenitor cells, resulting in abnormal cell death. Leads to myeloproliferative diseases due to proliferation.
  • Imatinib brand name: Gleevec
  • Gleevec is a first-generation ⁇ BCR-ABL '' tyrosine kinase inhibitor that has been used for a long time as a primary treatment for myeloid leukemia, but patients with imatinib resistance develop. Was caused.
  • the second generation of therapies that overcome the resistance to imatinib, such as Dasatinib, Nilotinib, and Bosutinib have been developed to raise expectations for more effective and diverse drug treatments.
  • the present inventors attempted to extract and purify pharmacologically active ingredients such as epi-tulipinide and costunolide from the bark of lily tree, and then, in vitro, to treat the effects of chronic myelogenous leukemia on each active ingredient. It was measured through a growth inhibition experiment of the Korean Patent Application No. 10-2013-46506 'the pharmaceutical composition for treating chronic myelogenous leukemia containing lycopene extract'.
  • lily bark extract is poorly soluble, so that the bioavailability may be lowered because the solubility and dissolution rate in the digestive fluid is low during absorption into the body. Therefore, various formulation means should be devised to improve the solubilization or dissolution rate of poorly soluble drugs, including lily bark extract.
  • the present inventors continued the formulation study to maximize the therapeutic effect and minimize side effects in using the lily bark extract as a treatment for chronic myelogenous leukemia, and the pharmaceutical formulation showing excellent chronic myelogenous leukemia treatment effect from the bark of lily tree bark.
  • the present invention was completed by inventing a pharmaceutical formulation that can improve the solubilization or dissolution rate of the poorly water-soluble lily bark extract.
  • the problem to be solved by the present invention is to develop a pharmaceutical formulation for maximizing the therapeutic effect and minimizing side effects in using the bark extract as a treatment for chronic myelogenous leukemia.
  • a pharmaceutical formulation that can improve the solubilization or dissolution rate of the poorly water-soluble lily bark extract.
  • An object of the present invention is to 1) polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene fatty acid based on 100 parts by weight of the extract of the bark of the bark which contains epi-tulipinlide and costunolide as active ingredients.
  • Esters polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymers, polyoxyethylene polyoxypropylene copolymers, reaction products of natural or hydrogenated vegetable oils with ethylene glycol, sodium dioctylsulfosuccinate, sodium lauryl sulfonate, phospholipids, propylene glycol fatty acids 5-100 parts by weight of at least one surfactant selected from esters, trans esterification products of natural vegetable oil triglycerides with polyalkylene polyols, mono-glycerides, di-glycerides or sterols; And 2) 50-400 parts by weight of one or more cosolvents selected from propylene carbonate, propylene glycol, ethanol, diethylene glycol monoethyl ether, glycofurol, polyethylene glycol, dimethyl isosorbide or N-methyl pyrrolidone;
  • the lily bark extract is characterized in that it may further comprise epitulipdienolide (Epitulipdienolide) or ridentin (Ridentin) or deacetyllipiferolide (Deacetyllipiferolide) as an active ingredient.
  • the non-aqueous pharmaceutical formulation is characterized in that it comprises 10 to 50 parts by weight of surfactant and 100 to 200 parts by weight of the cosolvent based on 100 parts by weight of the lily bark extract.
  • the surfactant is at least one selected from polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymer or polyoxyethylene polyoxypropylene copolymer It is done.
  • the co-solvent is characterized in that at least one selected from propylene glycol, polyethylene glycol or diethylene glycol monoethyl ether.
  • the effect of the present invention is to provide a pharmaceutical formulation for maximizing the therapeutic effect and minimizing side effects in using the bark extract as a treatment for chronic myelogenous leukemia. It is to provide a pharmaceutical formulation that can improve the solubilization or dissolution rate of the poorly water-soluble lily bark extract.
  • the non-aqueous pharmaceutical formulation of the present invention comprises 10 to 50 parts by weight of the surfactant and 100 to 200 parts by weight of the cosolvent based on 100 parts by weight of the lily bark extract.
  • the surfactant is at least one member selected from polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymer or polyoxyethylene polyoxypropylene copolymer.
  • the cosolvent is at least one member selected from propylene glycol, polyethylene glycol or diethylene glycol monoethyl ether.
  • the present invention is to provide a soft capsule useful for the treatment of chronic myeloid leukemia containing the non-aqueous pharmaceutical formulation as a solution and molded into a gelatin coating.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition of a lily extract useful for selectively inhibiting the mutation enzyme T315I caused by the BCR-ABL fusion gene, which is a cause of chronic myeloid leukemia, and its active ingredients, epi-tulipinoid and costunolide. It provides, and may contain one or more known active ingredients having the same effect as the pharmaceutical composition or extract.
  • the lily bark extract of the present invention may further comprise epitulipdienolide (Epitulipdienolide) or ridentin (Ridentin) or deacetyllipiferolide (Deacetyllipiferolide) as an active ingredient.
  • the non-aqueous pharmaceutical formulation of the present invention may be administered in the form of general pharmaceutical compositions such as tablets, granules, capsules, powders, syrups, ointments, suppositories, and subcutaneous, intramuscular, intravenous or injectable drops, as well as soft capsules, 1 10 to 500 mg per day can be taken once or several times.
  • general pharmaceutical compositions such as tablets, granules, capsules, powders, syrups, ointments, suppositories, and subcutaneous, intramuscular, intravenous or injectable drops, as well as soft capsules, 1 10 to 500 mg per day can be taken once or several times.
  • composition is eluted by increasing the solubility and absorption in the gastrointestinal tract of substances commonly used in pharmaceuticals, such as lily bark extract, within the range that does not adversely affect the drug efficacy, and dispersed and emulsified with water during oral administration
  • Additives such as acids, fatty acids or fatty alcohols, sugars such as white sugar, macion syrup, white sugar, gelatin, sugars and syrups, glidants such as magnesium stearate and talc, microcrystalline Excipients such as cellulose, calcium dihydrogen phosphate, starch, mannitol, antioxidants, flavoring agents, preservatives, fragrances, sweeteners, pigments, pH adjusting agents and viscosity adjusting agents, which prevent the formulation from oxidizing, which may be lilies It is preferred to add the bark extract in a commonly used amount.
  • Acids, fatty acids or fatty alcohols that may be used in the compositions of the present invention include citric acid, oleic acid, stearyl alcohol, myristic acid, linoleic or lauric acid, capric acid, caprylic acid, caproic acid (caproic acid) ) May be used, but is not limited thereto.
  • Antioxidants that can be used in the compositions of the present invention are butylated hydroxytoluene, sodium bisulfite, ⁇ -tocopherol, vitamin C, ⁇ -carotene, tocopherol acetate, fumaric acid, nalic acid Butylated hydroxyanisole, propyl galate, sodium ascorbate and the like may be used, but are not limited thereto.
  • Flavoring agents that can be used in the composition of the present invention may be mixed fruit flavor, apple flavor, strawberry flavor, cherry flavor, peppermint flavor, vanilla flavor, yogurt flavor, or drink flavor and the like, but are not limited thereto.
  • Preservatives that can be used in the composition of the present invention may be used, but is not limited to benzoic acid, sodium benzoate, ethyl paraben, methyl paraben or propyl paraben.
  • Perfume which can be used in the composition of the present invention may be used, but not limited to, peppermint brain, peppermint oil, orange oil, clove oil, cinnamon oil, strawberry essence and other common fruit or plant essence.
  • Sweeteners that can be used in the compositions of the present invention may be used, but are not limited to, white sugar, glucose, fructose, aspartame, stevioside, sorbitol, mannitol, oligosaccharide, syrup or macion syrup.
  • the pigments that can be used in the composition of the present invention are green No. 3, red No. 2, red No. 3, blue No. 1, blue No. 2, yellow No. 4, yellow No. 5, water-soluble mannitol, caramel, titanium oxide or ferric oxide Can be used, but is not limited to these.
  • PH adjusting agent that can be used in the composition of the present invention may be used, but is not limited to sodium carbonate, sodium hydroxide, potassium hydroxide, triethanolamine or monoethanol amine.
  • Viscosity modifiers that may be used in the compositions of the present invention are hydroxypropyl cellulose (HPC), hydroxypropylmethyl cellulose (HPMC), hydroxyethyl cellulose, ethyl cellulose, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose (CMC), acacia , Bentonite, alginic acid, propylene glycol alginate, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol (PVC), carbopol, polycarbopil, tragacanth or xanthan gum ) May be used, but is not limited thereto.
  • the administration of the pharmaceutical composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient and diluent in addition to the active ingredient.
  • carriers, excipients and diluents that may be included include lactose, textose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose It may be at least one selected from microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, purified water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, hard capsules, soft capsules, chewing tablets of caramel or jelly type, and such solid preparations include at least one excipient in the active ingredient.
  • it can be used by mixing starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin and the like.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solvents, emulsions, syrups, and the like, and various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to purified water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents. have.
  • Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, and the like, and non-aqueous solvents and suspending agents include vegetable oils such as propylene glycol, polyethylene glycol, and olive oil, and ethylol. Injectable esters such as late and the like can be used.
  • aqueous solvents and suspending agents include vegetable oils such as propylene glycol, polyethylene glycol, and olive oil, and ethylol.
  • Injectable esters such as late and the like can be used.
  • As the base of the suppository utopsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the lily bark extract of the present invention and its pharmaceutical composition may be administered by various routes according to the desired method in addition to the oral administration, oral, rectal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or cerebrovascular injections, etc. Include.
  • the extract contains epi-tulipinlide and costunolide as main components and is called CD-200.
  • CD-200 extract inhibits leukemia mutant gene cell proliferation by inducing cell death by inducing apolarization of mitochondrial membrane potential (MMP) against T315I, a mutation of the BCR-ABL fusion gene, a cause of chronic myeloid leukemia Tested.
  • MMP mitochondrial membrane potential
  • CD-200 was treated with 1, 5, 10 ⁇ g / ml in Bcr-Abl T315I Ba / F3 cell line (1 ⁇ 10 6 cells / 10ml) and incubated in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 8 hours. It was.
  • CD-200 extract inhibited leukemia mutant gene cell proliferation by inducing apoptosis through induction of Caspase-3 activity against T315I, a mutation of BCR-ABL fusion gene, a cause of chronic myeloid leukemia.
  • CD-200 was treated with 1,5 ⁇ g / ml in a Bcr-AblT315IBa / F3 cell line (8 ⁇ 10 5 cells / 2ml / well) and cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 12 hours.
  • B-C-Abl T315I Ba / F3 cell line (2 ⁇ 10 6 / 10ml) was treated with CD-200 at a concentration of 1 ⁇ 10 ⁇ g / ml and 37 ° C for 14 hours, Incubated in a 5% CO 2 incubator.
  • Western blot experiments were carried out as follows. 30 ⁇ g of protein was added to 10% and 15% SDS polyacrylamide gels, followed by electrophoresis for 2 hours, then transferred to fullovinylidene fluoride (PVDF) and for 1 hour with 5% non-fat skim milk.
  • PVDF fullovinylidene fluoride
  • BCD-200 induces apoptosis in Bcr-Abl T315I Ba / F3 cell line unlike Imatinib by forming a truncated form of the protein PARP, Caspase-3, which is involved in the apoptosis pathway at 5 ⁇ g / ml.
  • composition 100 mg of the yellow bark extract obtained in Preparation Example 1 and 40 mg of polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester were mixed. 20 mg of Cremopoa RH40 and 200 mg of diethylene glycol monoethyl ether were added to the mixed solution, and heated to 80 ° C. to dissolve until clear, thereby preparing a composition.
  • the composition was formulated by filling in soft capsules.
  • composition 100 mg of the lily bark extract obtained in Preparation Example 1, 30 mg of polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, and 10 mg of polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymer were mixed. 20 mg of Cremopoa RH40 and 150 mg of diethylene glycol monoethyl ether were added to the mixed solution, and heated at 80 ° C. to dissolve until clear to prepare a composition. The composition was formulated by filling into soft capsules.
  • the experimental method is as follows.
  • oral preparations (test preparations) by the automatic micelle drug delivery system according to the present invention can be seen that the solubility is very high in the gastrointestinal small intestine and large intestine compared to the preparation prepared by the conventional method, and various pH It can be seen that even under conditions, it dissolves constantly.
  • the dissolution rate of the soft capsule containing the lily bark extract CD-200 by the automatic micelle drug delivery system of the present invention and the oral tablet of the lily bark extract CD-200 without such a system were measured and compared.
  • the experimental method is as follows.

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Abstract

본 발명은 백합나무 수피 추출물을 유효성분으로 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 제형에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 만성 골수성 백혈병의 원인 유전자인 BCR-ABL 융합 유전자 변이로 인한 변이효소 T315I를 선택적으로 저해하기 위하여, 백혈병 세포 내의 미토콘드리아 막 전위(MMP)의 변화와 세포사멸 경로에 관련된 폴리 ADP 리보스 중합효소(PARP)와 카스파제-3의 절단을 통하여 세포사멸을 야기하는 백합나무 수피 추출물을 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 제형에 관한 것이다.

Description

백합나무 수피 추출물을 유효 성분으로 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 제형
본 발명은 백합나무 수피 추출물을 유효성분으로 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 제형에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 만성 골수성 백혈병의 원인 유전자인 BCR-ABL 융합 유전자 변이로 인한 변이효소 T315I를 선택적으로 저해하기 위하여, 백혈병 세포 내의 미토콘드리아 막 전위(MMP)의 변화와 세포사멸 경로에 관련된 폴리 ADP 리보스 중합효소(PARP)와 카스파제-3의 절단을 통하여 세포사멸을 야기하는 백합나무 수피 추출물을 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 제형에 관한 것이다.
백합나무(Liriodendron tulipifera L., Yellow-poplar)는 목련과 (Magnoliaceae)에 속하는 낙엽 활엽 편교목으로서, 백합나무 수피 추출물에는 알칼로이드, 세스퀴터핀 및 리그난계 등의 다양한 화합물이 함유되었음이 보고 되어있다.
백합나무 수피 추출물에는 코스튜놀라이드(costunolide), 튤리피놀라이드(tulipinolide), 에피-튤리피놀라이드(epi-tulipinolide), 에피-튤립디에놀라이드(epi-tulipdienolide) 및 감마-리리오데놀라이드(gamma-liriodenolide) 등과 같은 세스퀴터핀 락톤 류가 포함되어 있다.
이들 세스퀴터핀 락톤 가운데 파테놀라이드는 핵 전사인자 NF-κB, p21 및 cyclin D1 등을 매개하여 항염증 또는 항암 효과를 나타내는 물질로 밝혀져 왔으며 특히 파테놀라이드와 파테놀라이드의 합성 유도체인 LC-1 (dimethylamino-parthenolide)은 핵 전사인자 NF-κB 활동 억제를 통하여 세포예정사를 유도하여 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia (AML))에 항암 효과를 나타내는 것으로 보고되었다.
백혈병은 혈액 세포, 특히 백혈구가 이상 증식하는 혈액종양의 일종이다. 제대로 성숙하지 못한 백혈구가 대량으로 혈액 속에 존재하는 질병이다. 백혈구의 비정상적인 증식에 비해, 정상적인 혈구 세포의 수는 극히 적어지게 되어 면역기능은 물론 산소 운반이나 영양 공급과 같은 기본적인 혈액의 기능을 수행할 수 없게 되며 또한 비정상적인 백혈구는 자가 면역 질환과 유사한 반응을 일으켜 정상 조직을 파괴하기도 한다.
만성 골수성 백혈병은 골수 내에 골수성 백혈병 세포들이 통제되지 않고 증식하여 혈액 내 축적되는 골수증식성 질환이다. 백혈병의 종류는 크게 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(Acute lymphocytic leukemia, ALL), 만성 림프구성 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia, CLL)으로 나뉜다.
만성 골수성 백혈병의 경우 외양상 일반적으로 비정상 골수계 세포가 성숙한 것으로 보이나 제대로 기능을 다하지 못 한다. 이러한 만성 골수성 백혈병은 '필라델피아 염색체(Philadelphia chromosome)'라 불리는 세포 내 비정상적인 유전자 마커와 연관이 있다.
만성 골수성 백혈병은 보편적인 다른 백혈병과 차이점을 지니고 있으며, 특히 서서히 진행되는 비정상세포의 만성적 증식(chronic multiplication) 단계로부터 급작스럽게 증식하는 급성단계로의 전환이 발생한다는 점이다. 만성 골수성 백혈병은 3-4년 간 만성상태를 유지하기도 하며 이때의 치료는 병을 완치하기보다는 억제하는 것이 더욱 효과적이다. 그러나 급작스런 전환이 발생하는 환자의 대부분은 치료가 매우 힘든 실정이다.
만성 골수성 백혈병은 9번 염색체의 ABL유전자와 22번 염색체의 BCR 유전자가 전좌된 필라델피아 염색체인 BCR-ABL 융합 유전자에 의해 발병된다. 이러한 BCR-ABL 융합 유전자는 타이로신 카이네이즈(Tyrosine kinase) 활성을 갖는 융합단백질을 발현시킴으로써 발암단백질 p210 생합성에 관여하며, 생합성된 p210 단백질은 골수구 전구세포의 세포예정사를 억제하여 결국 이들 세포의 비정상적인 증식으로 인한 골수증식성 질환을 초래한다.
이매티닙(Imatinib)(상품명 : 글리벡)은 1세대 'BCR-ABL'의 타이로신 카이네이즈 억제제로 골수성 백혈병의 1차 치료제로 오랫동안 각광을 받고 사용되었으나, 이매티닙에 내성을 지닌 환자들이 발생하는 등의 문제가 야기되었다. 다행히 다사티닙(Dasatinib), 닐로티닙(Nilotinib), 보수티닙(Bosutinib) 등의 이매티닙 내성을 극복한 2세대 치료제들이 개발되어 보다 효과적이고 다양한 약물 치료제에 기대를 갖게 되었으나, 최근 'BCR-ABL'의 돌연변이 'T315I' 변형유전자가 발생함에 따라 이들 2세대 약물도 더 이상의 치료 효과를 보지 못하는 경우가 발생하게 되어, 1세대 치료제와 2세대 치료제에 저항 또는 내성의 원인이 되는 돌연변이 'T315I' 변형 유전자 억제에 효과적인 3세대 치료제의 개발이 시급한 실정이다.
이를 위해 본 발명자들은 백합나무 수피로부터 에피-튤리피놀라이드 및 코스튜놀라이드와 같은 약리활성 성분의 추출 분리 정제를 시도한 후, 각각의 활성 성분에 대한 만성 골수성 백혈병 치료 효과를 시험관 내에서 백혈병 세포주의 증식 억제 실험을 통해 측정하고 이를 대한민국 특허출원 제10-2013-46506호 '백합나무 추출물을 함유하는 만성 골수성 백혈병 치료용 의약 조성물'로 특허 출원한 바 있다.
그러나 백합나무 수피 추출물은 난용성이어서 생체에 투여되었을 때 체내로 흡수되는 과정에서 소화액에서의 용해도와 용출 속도가 낮으므로 생체 이용율이 낮아질 수 있다는 단점이 있다. 따라서 백합나무 수피 추출물을 포함한 난용성 약물의 가용화 또는 용출 속도를 향상시키기 위한 다양한 제제화 수단이 강구되어야 한다.
이에, 본 발명자들은 백합나무 수피 추출물을 만성 골수성 백혈병 치료제로 사용하는데 있어서 그 치료 효과를 극대화하고 부작용을 최소화하기 위해 제형 연구를 계속한 결과, 백합나무 수피로부터 우수한 만성 골수성 백혈병 치료효과를 나타내는 의약 제형을 개발하였으며, 상기 난용성인 백합나무 수피 추출물의 가용화 또는 용출 속도를 개선할 수 있는 의약 제형을 발명함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 백합나무 수피 추출물을 만성 골수성 백혈병 치료제로 사용하는데 있어서 그 치료 효과를 극대화하고 부작용을 최소화하기 위한 의약 제형을 개발코자 한 것이다. 상기 난용성인 백합나무 수피 추출물의 가용화 또는 용출 속도를 개선할 수 있는 의약 제형을 개발코자 한 것이다.
본 발명의 목적은 에피-튤리피놀라이드 및 코스튜놀라이드를 유효성분으로 함유하는 백합나무 수피 추출물 100 중량부에 대해 1) 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로피렌 공중합체, 천연 또는 수소화 식물성 오일과 에틸렌 글리콜의 반응 생성물, 디옥틸술포숙신산 나트륨, 라우릴 술폰산 나트륨, 인지질, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 천연 식물성 오일 트리글리세라이드와 폴리알킬렌 폴리올의 트랜스 에스테르화 반응 생성물, 모노-글리세라이드, 디-글리세라이드 또는 스테롤에서 선택된 1종 이상의 계면 활성제 5~100 중량부; 및 2) 프로필렌 카르보네이트, 프로필렌글리콜, 에탄올, 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르, 글리코퓨롤, 폴리에틸렌 글리콜, 디메틸 이소소르비드 또는 N-메틸 피롤리돈에서 선택된 1종 이상의 공용매 50~400 중량부;를 포함하는 BCR-ABL 융합 유전자로 인한 변이 효소인 T315I를 선택적으로 저해함으로서 만성 골수성 백혈병 치료에 유용한 비수성 의약 제형을 제공하는 것이다.
또한 상기 백합나무 수피 추출물은 유효성분으로 에피튤립디에놀라이드(Epitulipdienolide) 또는 리덴틴(Ridentin) 또는 데아세틸리피페롤라이드(Deacetyllipiferolide)를 더욱 포함할 수 있음을 특징으로 한다.
이때 상기 비수성 의약 제형은 백합나무 수피 추출물 100 중량부에 대해 계면 활성제 10~50 중량부 및 공용매 100~200 중량부를 포함함을 특징으로 한다.
또한 상기 계면 활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체 또는 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로피렌 공중합체에서 선택된 1종 이상임을 특징으로 한다.
또한 상기 공용매는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 또는 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르에서 선택된 1종 이상임을 특징으로 한다.
본 발명의 또다른 목적은 상기 비수성 의약 제형을 내용액으로 함유하고 젤라틴 피막으로 성형시킨 만성 골수성 백혈병 치료에 유용한 연질캡슐제를 제공하는 것이다.
본 발명의 효과는 백합나무 수피 추출물을 만성 골수성 백혈병 치료제로 사용하는데 있어서 그 치료 효과를 극대화하고 부작용을 최소화하기 위한 의약 제형을 제공하는 것이다. 상기 난용성인 백합나무 수피 추출물의 가용화 또는 용출 속도를 개선할 수 있는 의약 제형을 제공하는 것이다.
도 1은 실시예 2의 pH=1.2 완충 용액에서 백합나무 수피 추출물 30mg을 함유하는 본 발명의 연질캡슐 제제(시험제제) 및 정제(비교제제)를 시간에 따른 용출율을 비교한 것이다.
도 2는 실시예 2의 pH=6.8 완충 용액에서 백합나무 수피 추출물 30mg을 함유하는 본 발명의 연질캡슐 제제(시험제제) 및 정제(비교제제)를 시간에 따른 용출율을 비교한 것이다.
본 발명은 에피-튤리피놀라이드 및 코스튜놀라이드를 유효성분으로 함유하는 백합나무 수피 추출물 100 중량부에 대해 1) 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로피렌 공중합체, 천연 또는 수소화 식물성 오일과 에틸렌 글리콜의 반응 생성물, 디옥틸술포숙신산 나트륨, 라우릴 술폰산 나트륨, 인지질, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 천연 식물성 오일 트리글리세라이드와 폴리알킬렌 폴리올의 트랜스 에스테르화 반응 생성물, 모노-글리세라이드, 디-글리세라이드 또는 스테롤에서 선택된 1종 이상의 계면 활성제 5~100 중량부; 및 2) 프로필렌 카르보네이트, 프로필렌글리콜, 에탄올, 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르, 글리코퓨롤, 폴리에틸렌 글리콜, 디메틸 이소소르비드 또는 N-메틸 피롤리돈에서 선택된 1종 이상의 공용매 50~400 중량부;를 포함하는 BCR-ABL 융합 유전자로 인한 변이 효소인 T315I를 선택적으로 저해함으로서 만성 골수성 백혈병 치료에 유용한 비수성 의약 제형에 관한 것이다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명의 비수성 의약 제형은 백합나무 수피 추출물 100 중량부에 대해 계면 활성제 10~50 중량부 및 공용매 100~200 중량부를 포함한다.
또한 상기 계면 활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체 또는 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로피렌 공중합체에서 선택된 1종 이상이다.
또한 상기 공용매는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 또는 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르에서 선택된 1종 이상이다.
한편 본 발명은 상기 비수성 의약 제형을 내용액으로 함유하고 젤라틴 피막으로 성형시킨 만성 골수성 백혈병 치료에 유용한 연질캡슐제를 제공하는 것이다.
본 발명은 만성 골수성 백혈병의 원인 유전자인 BCR-ABL 융합 유전자로 인한 변이 효소인 T315I를 선택적으로 저해하는데 유용한 백합나무 추출물의 약학적 조성물과 그의 유효성분인 에피-튤리피놀라이드 및 코스튜놀라이드를 제공하며, 상기의 약학적 조성물 또는 추출물과 같은 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
한편 본 발명에서 연질캡슐제 이외의 또다른 의약제형으로 백합나무 수피 추출물을 유효 성분으로 함유하는 정제, 환제, 산제, 경질캡슐제, 젤라틴 밴딩한 경질캡슐제, 카라멜 또는 젤리 타입의 츄잉 정 및 경구용 액제에서 선택된 경구용 제제를 제공할 수 있다.
또한 본 발명의 백합나무 수피 추출물은 유효성분으로 에피튤립디에놀라이드(Epitulipdienolide) 또는 리덴틴(Ridentin) 또는 데아세틸리피페롤라이드(Deacetyllipiferolide)를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 비수성 의약 제형은 연질캡슐제 뿐만 아니라 정제, 과립, 캡슐, 분말, 시럽, 연고, 좌제 및 피하, 근육, 정맥 또는 점적 주사제 등의 일반적인 약제학적 조성물의 형태로 투여될 수 있으며, 1일 10~500mg 을 1회 내지 수회에 나누어 복용할 수 있다.
또한 상기 조성물은 약효에 악영향을 미치지 아니하는 범위 내에서 약제학적으로 통상 사용되는 물질, 예를 들면 백합나무 수피 추출물의 용해도 및 위장관내 흡수를 증가시키고 경구 투여시에 물과 함께 분산 및 유화됨으로써 용출을 증가시키고 생체 이용율 향상에 널리 활용될 수 있는 산, 지방산 또는 지방산 알코올과 같은 첨가제, 백당, 맥아이온 엿, 정백당, 젤라틴, 설탕 및 물엿과 같은 당류, 스테아르산 마그네슘, 탈크와 같은 활택제, 미결정셀룰로오스, 인산일수소칼슘, 전분, 만니톨과 같은 부형제, 제제가 산화되는 것을 방지하는 항산화제, 착향제, 방부제, 방향제, 감미료, 색소, pH 조절제 및 점도 조절제를 추가로 포함할 수 있으며, 이들은 백합나무수피 추출물에 대하여 통상적으로 사용되는 사용량으로 첨가하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 산, 지방산 또는 지방산 알코올로는 구연산, 올레인산, 스테아릴알코올, 미리스틱산(myristic acid), 리놀레산 또는 라우릭산, 카프릭산, 카프릴릭산, 카프로익산(caproic acid)등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 항산화제는 부틸화된 히드록시톨루엔, 소듐 바이설파이트(sodium bisulfite), α-토코페롤, 비타민 C, β-카로틴, 토코페롤 아세테이트, 푸마릭산, 날릭산(nalic acid), 부틸화된 히드록시아니솔(butylated hydroxyanisole), 프로필 갈레이트(propyl galate) 및 소듐 아스코베이트 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 착향제는 혼합 과일향, 사과향, 딸기향, 체리향, 박하향, 바닐라향, 요쿠르트향 또는 드링크향 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 보존제는 안식향산, 안식향산 나트륨, 에틸파라벤, 메틸파라벤 또는 프로필파라벤 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 방향제는 박하뇌, 박하유, 오렌지 오일, 정향 오일, 시나몬 오일, 딸기 에센스 및 기타 통상의 과일향 또는 식물 에센스 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 감미제는 정백당, 포도당, 과당, 아스파탐, 스테비오사이드, 솔비톨, 만니톨, 올리고당, 물엿 또는 맥아이온 엿 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 색소는 녹색3호, 적색2호, 적색3호, 청색1호, 청색2호, 황색4호, 황색5호, 수용성 만니톨, 캐러멜, 산화티타늄 또는 산화제이철 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 pH 조절제는 탄산나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 트리에탄올아민 또는 모노에탄올 아민 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 점도 조절제는 히드록시프로필 셀룰로오스(HPC), 히드록시프로필메틸 셀룰로오스(HPMC), 히드록시에틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스(CMC), 아카시아(acacia), 벤토나이트(bentonite), 알긴산, 프로필렌글리콜알지네이트, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 알콜(PVC), 카보풀(carbopol), 폴리카르보필(polycarbopil), 트라가칸타(tragacanth) 또는 산탄 검(xanthan gum) 등이 사용될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물의 투여를 위해 상기 유효성분 외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
이에 따라 포함할 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 텍스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 인산칼슘, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 정제수, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘스테아레이트, 광물유에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 경질캡슐제, 연질캡슐제, 카라멜 또는 젤리타입의 츄잉 정 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 사용될 수 있다. 또한 이외에도 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.
경구투여를 위한 액상제제에는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 정제수, 액상 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구투여를 위한 제제에는 멸균 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함되며, 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브오일과 같은 식물성 오일 및 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 백합나무 수피 추출물 및 그의 약학적 조성물은 상기 경구투여 외에도 목적하는 방법에 따라 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 경구, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 등을 포함한다.
이하, 본 발명을 실시예를 통해 상세히 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것이며 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
(제조실시예 1) 백합나무 수피 추출물(CD-200)의 분리 제조
1. 용매 추출 공정
세절한 3~5년생 백합나무 수피 200g을 에틸아세테이트 2000ml로 상온에서 24시간 진탕배양하여 추출하고 추출여액을 감압 농축 여과시킨 후 에틸아세테이트 1차 추출액을 수득하고, 수득된 1차 추출액에 부탄올 500ml를 가하여 상온에서 2~4시간 추출시킨 후 부탄올층을 분리 제거시켜 부탄올에 용해된 성분을 제거시킨 후 감압 농축시켜 조 추출물 12.54g을 수득하였다.
2. 정제 공정
수득된 조 추출물 12.54g에 70% 에탄올 200ml에 용해시킨 후 n-헥산 200ml를 가하여 진탕 분획한 다음 70% 에탄올층을 수득하고 상기 에탄올층을 분리시켜 감압 농축 동결 건조시킨 후 2.75g의 추출물을 수득하였다. 상기 추출물은 에피-튤리피놀라이드 및 코스튜놀라이드를 주성분으로 포함하며 이를 CD-200으로 칭한다.
(실험예 1) CD-200에 의한 백혈병 세포의 미토콘드리아 의존적인 세포사멸
CD-200 추출물이 만성 골수성 백혈병 원인 유전자인 BCR-ABL 융합 유전자의 돌연변이로 알려진 T315I에 대해 MMP(Mitochondrial membrane potential)의 비극성화 유도를 통하여 세포예정사를 유발하여 백혈병 돌연변이 유전자 세포증식을 저해하는지 확인 시험하였다. 구체적으로는, Bcr-AblT315IBa/F3세포주(1×106cells/10ml)에 CD-200을 1, 5, 10 μg/ml로 처리하고 8시간동안 37℃, 5% CO2배양기에서 배양하였다. 세포를 모은 뒤, 빛을 차단한 조건에서 0.5 ml JC-1 working solution(BD Biosciences)을 넣어주고 15분간 37℃, 5% CO2 배양기에서 반응시키고 유세포분석기를 이용하여 미토콘드리아 막 전위의 변화로 인한 세포예정사를 분석한 결과 CD-200을 1 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/ml의 농도로 BaF3/T315I 돌연변이 종에 6시간 처리한 그룹에서 비극성화가 각각 9.42%, 18%, 77.9% 농도 의존적으로 세포사멸(MMP depolarization)이 일어나는 것을 확인하였다. 반면 Imatinib(4.02%)은 대조군(4.36%)과 비슷한 비극성화 값을 보였다,
(실험예 2) CD-200에 의한 백혈병 세포의 Caspase-3 활성 의존적인 세포사멸
CD-200 추출물이 만성 골수성 백혈병 원인 유전자인 BCR-ABL 융합 유전자의 돌연변이로 알려진 T315I에 대해 Caspase-3 활성 유도를 통하여 세포사멸을 유발하여 백혈병 돌연변이 유전자 세포증식을 저해하는지 확인 시험하였다. 구체적으로는, Bcr-AblT315IBa/F3세포주(8×105cells/2ml/well)에 CD-200을 1,5μg/ml로 처리하고 12시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 세포를 모은 뒤, Anti-Cleaved Caspase-3(1:800, Cell Signaling Technology, Beverly,MA, USA) 항체 및 대응되는 이소-타입인 Rabbit (DA1E) mAb IgG XPㄾ Isotype Control(1:800, Cell Signaling Technology, Beverly,MA, USA)을 30분 동안 반응시키고, Green rabbit-FITC 형광을 20분간 반응시키고 유세포분석기를 이용하여 Caspase-3 활성을 분석한 결과, 대조군과 비교하였을 때, 5μg/ml의 CD-200에서 절단된 Caspase-3가 증가되는 것을 확인하였다, 하지만 CD-200과 비교하여 봤을 때 Imatinib에서는 아무런 변화가 관찰되지 않았다.
(실험예 3) CD-200의 세포사멸 확인을 위한 웨스턴 블롯
CD-200에 의한 Bcr-AblT315IBa/F3 세포주의 세포사멸을 유도하는지 확인하기 위해 세포사멸 표지 단백질인 PARP, Caspage-3등의 발현 변화 여부를 확인하기 위해 웨스턴 블롯을 수행하였다.
천연추출물 CD-200의 세포사멸 경로를 확인하기 위해 Bcr-AblT315IBa/F3세포주(2×106/10ml)에 CD-200을 1~10μg/ml의 농도로 처리하고 14시간 동안 37℃, 5% CO2배양기에서 배양하였다. 웨스턴 블롯 실험은 다음과 같이 진행하였다. 10% 및 15% SDS 폴리아크릴 아마이드 겔에 30μg의 단백질을 적하하고 2시간 동안 전기영동을 진행한 뒤, 풀로비닐리덴 플루오라이드(PVDF)로 이전시키고 5% 비-지방 탈지 우유로 1시간 동안 블로킹시키고, anti-Cleaved Caspase-3(1:1000, Cell Signaling Technology, Beverly,MA, USA), PARP(1:3000, Cell Signaling Technology, Beverly,MA, USA)와 반응시키고 4℃에서 하룻밤 인큐베이션시키고 그에 대응되는 항-토끼 IgG horseradish 페록시다제-콘쥬게이트를 처리한 뒤 ECL로 검출하였다.
BCD-200이 5μg/ml에서 세포사멸 경로에 관여하는 단백질 PARP, Caspase-3의 절단형을 형성함으로써 Imatinib과 달리 Bcr-AblT315IBa/F3 세포주에서 세포사멸을 유도시킴을 확인하였다.
(제조실시예 2) 백합나무 수피 추출물(CD-200)을 포함하는 연질캡슐제
제조실시예 1에서 얻은 백합나무 수피 추출물 100mg, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 30mg 및 크레모포아 EL 20mg을 혼합하였다. 상기 혼합액에 디에틸렌 글리콜 모노 에틸에테르 150mg을 첨가하고 80℃에서 가열하여 투명할 때까지 용해시켜 조성물을 제조하였다. 상기 조성물을 연질캅셀에 충진하여 제제화하였다.
(제조실시예 3) 백합나무 수피 추출물(CD-200)을 포함하는 연질캡슐제
제조실시예 1에서 얻은 백합나무 수피 추출물 100mg, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 40mg을 혼합하였다. 상기 혼합액에 크레모포아 RH40 20mg 및 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르 200mg을 첨가하고 80℃에서 가열하여 투명할 때까지 용해시켜 조성물을 제조하였다. 상기 조성물을 연질캅셀에 충진하여 제제화하였다.
(제조실시예 4) 백합나무 수피 추출물(CD-200)을 포함하는 연질캡슐제
제조실시예 1에서 얻은 백합나무 수피 추출물 100mg, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 30mg 및 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체 10mg를 혼합하였다. 상기 혼합액에 크레모포아 RH40 20mg 및 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르 150mg을 첨가하고 80℃에서 가열하여 투명할 때까지 용해시켜 조성물을 제조하였다. 상기 조성물을 연질 캅셀에 충진하여 제제화하였다.
(제조비교예 1) 백합나무 수피 추출물(CD-200)을 포함하는 경구용 정제
제조실시예 1에서 얻은 백합나무 수피 추출물 100mg, 크레모포아 EL 30mg을 혼화하고 콜로이드성 실리콘디옥사이드(에어로실 200) 80mg을 첨가하여 혼합, 건조한 후 포비돈 20mg,미결정셀룰로오스 80mg, 스테아르산 마그네슘 2mg을 혼합하고 타정하여 정제를 얻었다.
(제조비교예 2) 백합나무 수피 추출물(CD-200)을 포함하는 경구용 정제
제조실시예 1에서 얻은 백합나무 수피 추출물 100mg, 크레모포아 EL 30mg을 혼화하고 콜로이드성 실리콘디옥사이드(에어로실 200) 70mg을 첨가하여 혼합, 건조한 후 포비돈 50mg, 미결정셀룰로오스 50mg, 스테아르산 마그네슘 2mg을 혼합하고 타정하여 정제를 얻었다.
(실시예 1) 용해도 비교 실험
본 발명의 자동 미셀화 약물 송달 시스템에 의한 백합나무 수피 추출물 CD-200의 연질캡슐제와 이러한 시스템이 없는 백합나무 수피 추출물 CD-200의 경구용 정제의 용해도를 측정하여 비교하였다.
구체적으로는, 제조실시예 2의 내용물과 제조비교예 1의 타정 전 혼합물을 가지고 위장관내의 pH 조건(pH=1.2)과 소장 및 대장에서의 pH 조건(pH=6.8)에서 약물의 용해도를 측정하였다.
실험 방법은 다음과 같다.
제조실시예 2 및 제조비교예 1로부터 제조된 경구용 제제를 가지고 백합나무 수피 추출물 60mg에 해당하는 양을 취하여, pH 1.2의 완충 용액(대한약전 제 8개정: 염화나트륨 2.0g에 염산 7.0ml 및 물을 넣어 총 부피가 1L가 되도록 하였다.) 및 pH 6.8의 완충 용액(대한약전 제 8개정: 0.2mol/L 인산이수소칼륨용액 250ml에 0.2mol/L 수산화나트륨 용액 118ml 및 물을 넣어 총 부피가 1L가 되도록 하였다.) 150ml를 각각 첨가하였다. 상기 용액을 37℃에서 1시간동안 교반한 후, 용해도를 측정하였다. 용해도는 여과 후 UV를 이용해서 측정하였다. 분석 파장은 270nm 이었다.
그 결과는 표 1에 나타내었다.
표 1 pH=1.2 및 pH=6.8에서 용해도 및 비교
제제 용해도(μg/ml)
pH 1.2 pH 6.8
제조실시예 2 내용물(시험제제) 400 400
제조비교예 1 혼합물(비교제제) 197 191
용해도 비교(제조실시예 2/제조비교예 1) 2배 이상 2배 이상
상기 표 1에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 제조실시예 2로부터 제조된 경구용 제제(시험제제)의 용해도는 pH=1.2 및 pH=6.8에서 각각 400μg/ml 및 400μg/ml이었으며, 제조비교예 1로부터 제조된 경구용 제제(비교제제)의 용해도는 각각 197μg/ml 및 191μg/ml이었다. 상기 결과를 비교하였을 때 본 발명에 따른 시험제제가 비교제제에 비하여 용해도가 pH=1.2 및 pH=6.8에서 각각 2배이상 높음을 알 수 있다. 따라서 본 발명에 따른 자동 미셀화 약물 송달 시스템에 의한 경구용 제제(시험제제)는 통상적인 방법으로 제조된 제제에 비하여 위장관내 소장 및 대장의 pH 조건에서 용해도가 매우 높음을 알 수 있으며, 다양한 pH조건에서도 일정하게 용해됨을 알 수 있다.
(실시예 2) 용출율 비교 실험
본 발명의 자동 미셀화 약물 송달 시스템에 의한 백합나무 수피 추출물 CD-200을 포함하는 연질캡슐제 및 이러한 시스템이 없는 백합나무 수피 추출물 CD-200의 경구용 정제의 용출율을 측정하여 비교하였다.
실험 방법은 다음과 같다.
제조실시예 2로부터 제조된 연질캡슐제와 제조비교예 1으로부터 제조된 경구용 정제를 가지고, 백합나무 수피 추출물 30mg에 해당하는 양을 취하여, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 제조한 pH=1.2 및 pH=6.8의 완충 용액 900ml에 첨가하고 50rpm에서 교반하였다. 패들 방법에 의하여 교반 시간 5분, 10분, 15분, 30분, 45분, 60분, 90분 및 120분에 시료를 취하여 이로부터 추출되는 백합나무 수피 추출물의 함량을 측정하였다. 용출율은 경구용 제제에 포함되어 있는 백합나무 수피 추출물의 함량을 100으로 하고 상기 시료로부터 측정된 백합나무 수피 추출물을 이용하여 %로 측정하였다.
pH=1.2에서 측정한 용출율은 도 1에 나타내었으며, pH=6.8에서 측정한 용출율은 도 2에 나타내었다.
도 1에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 제조실시예 2로부터 제조된 연질캡슐제(시험제제)는 pH=1.2에서 10분에 60% 이상의 용출율을 보여주었으며, 15분~120분 동안 70% 이상의 일정한 용출율을 보여주었다. 반면에 제조비교예 1로부터 제조된 경구용 정제(비교제제)는 제조실시예 2로부터 제조된 연질캡슐제에 비하여 낮은 용출율을 보여주었다. 따라서, 본 발명에 따른 자동 미셀화 약물 송달 시스템에 의한 백합나무 수피 추출물의 경구용 조성물을 포함하는 경구용 제제는 pH=1.2 완충 용액에서 높은 용출율을 가지고 있음을 알 수 있다.
도 2에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 제조실시예 2로부터 제조된 연질캡슐제(시험제제)는 pH=6.8에서 15분에 60%이상의 용출율을 보여주었으며, 15분~60분동안 70% 이상의 일정한 용출율을 보여주었다. 반면에 제조비교예 1로부터 제조된 경구용 정제(비교제제)는 제조실시예 2로부터 제조된 연질캡슐제에 비하여 낮은 용출율을 보여주었다. 따라서, 본 발명에 따른 자동 미셀화 약물 송달 시스템에 의한 백합나무 수피 추출물의 경구용 조성물을 포함하는 경구용 제제는 pH=6.8 완충 용액에서 높은 용출율을 가지고 있음을 알 수 있다.
도 1 및 도 2에서 보여지는 바와 같이 본 발명에 따른 자동 미셀화 약물 송달 시스템에 의한 백합나무 수피 추출물의 경구용 조성물을 포함하는 경구용 제제는 이러한 시스템이 없는 백합나무 수피 추출물의 경구용 조성물을 포함하는 경구용 제제에 비하여 pH=1.2 및 pH=6.8에서 높은 용출율을 가지고 있음을 알 수 있으며, 다양한 pH에서도 일정한 용출율을 가지고 있음을 알 수 있다.

Claims (6)

  1. 에피-튤리피놀라이드 및 코스튜놀라이드를 유효성분으로 함유하는 백합나무 수피 추출물 100 중량부에 대해
    1) 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로피렌 공중합체, 천연 또는 수소화 식물성 오일과 에틸렌 글리콜의 반응 생성물, 디옥틸술포숙신산 나트륨, 라우릴 술폰산 나트륨, 인지질, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 천연 식물성 오일 트리글리세라이드와 폴리알킬렌 폴리올의 트랜스 에스테르화 반응 생성물, 모노-글리세라이드, 디-글리세라이드 또는 스테롤에서 선택된 1종 이상의 계면 활성제 5~100 중량부; 및
    2) 프로필렌 카르보네이트, 프로필렌글리콜, 에탄올, 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르, 글리코퓨롤, 폴리에틸렌 글리콜, 디메틸 이소소르비드 또는 N-메틸 피롤리돈에서 선택된 1종 이상의 공용매 50~400 중량부;
    를 포함하는 BCR-ABL 융합 유전자로 인한 변이 효소인 T315I를 선택적으로 저해함으로서 만성 골수성 백혈병 치료에 유용한 비수성 의약 제형.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 백합나무 수피 추출물은 유효성분으로 에피튤립디에놀라이드(Epitulipdienolide) 또는 리덴틴(Ridentin) 또는 데아세틸리피페롤라이드(Deacetyllipiferolide)를 더욱 포함할 수 있음을 특징으로 하는 비수성 의약 제형.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 비수성 의약 제형은 백합나무 수피 추출물 100 중량부에 대해 계면 활성제 10~50 중량부 및 공용매 100~200 중량부를 포함함을 특징으로 하는 비수성 의약 제형.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 계면 활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 공중합체 또는 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로피렌 공중합체에서 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는 비수성 의약 제형.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 공용매는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 또는 디에틸렌글리콜 모노에틸 에테르에서 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는 비수성 의약 제형.
  6. 제 1항의 비수성 의약 제형을 내용액으로 함유하고 젤라틴 피막으로 성형시킨 만성 골수성 백혈병 치료에 유용한 연질캡슐제.
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