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WO2014208799A1 - 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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WO2014208799A1
WO2014208799A1 PCT/KR2013/005748 KR2013005748W WO2014208799A1 WO 2014208799 A1 WO2014208799 A1 WO 2014208799A1 KR 2013005748 W KR2013005748 W KR 2013005748W WO 2014208799 A1 WO2014208799 A1 WO 2014208799A1
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WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
fatty liver
preventing
sewage
composition
extract
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/KR2013/005748
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English (en)
French (fr)
Inventor
이기업
오원근
고은희
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Asan Foundation
Original Assignee
Asan Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Asan Foundation filed Critical Asan Foundation
Priority to PCT/KR2013/005748 priority Critical patent/WO2014208799A1/ko
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Ceased legal-status Critical Current

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    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
    • A61K36/754—Evodia
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    • A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/4866—Organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics

Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing or treating fatty liver containing Evodia rutaecarpa extract and an alkaloid compound isolated therefrom as an active ingredient.
  • Non-alcoholic fatty liver disease is a disease that has no history of alcohol consumption, but has similar tissue findings as alcoholic fatty liver. Obesity is known as the most important cause.
  • the most important mechanism of the development of non-alcoholic fatty liver disease is insulin resistance, which is considered to be a common etiology of metabolic syndrome such as diabetes, obesity and hyperlipidemia.
  • Each disease belonging to the metabolic syndrome may be correlated or independently affect the progression, severity and complications of NAFLD.
  • NAFLDs come in the form of nonalcoholic steatohepatitis (NASH), which is accompanied by the destruction of hepatocytes, and some progress to liver cirrhosis or liver cancer through liver fibrosis.
  • NASH nonalcoholic steatohepatitis
  • Fatty liver disease caused by metabolic syndrome (1) increases the amount of free fatty acids from adipocytes into the liver, resulting in fat accumulation, and (2) an important role in the biosynthesis of triglycerides due to hyperglycemia and hyperinsulinemia. It is known to activate SREBP-1c, a transcription factor that causes fat accumulation in liver tissue. Recently, it has been reported that metformin and PPAR-ligand, which activate AMP-activated protein kinase (AMPK), which are involved in cellular energy metabolism, can prevent the development of fatty liver by inhibiting SREBP-1c activity. It's controversial. In addition, there are no reports of drugs that can efficiently regulate SREBP-1c other than metformin and PPAR-ligand.
  • AMPK AMP-activated protein kinase
  • Evodia rutaecarpa is a deciduous shrub that grows in the southern part of Korea. In oriental medicine, it is called sewage or sewage oil which is obtained by picking green and brown immature fruit around September. It is used for dry, dry, detoxification and diuretic. Sewage extract has been reported to have analgesic activity in experimental animals and is known to increase blood flow improvement. Other efficacies in filthy feeding are known to be effective in treating abdominal pain, headache pain, diarrhea, allodynia and hypertension, and are known to be effective in removing rashes and eczema caused by the skin on the head. Patents and documents related to such sewage oil "whitening cosmetic composition containing sewage oil extract (Korean Patent No.
  • the present inventors searched about 1500 kinds of natural products to develop new non-alcoholic fatty liver preventive or therapeutic substances with low toxicity from natural products, and separated five kinds of alkaloid compounds as active substances from sewage extract.
  • the present invention was completed by confirming that the isolated compound has a prophylactic or therapeutic effect on non-alcoholic fatty liver.
  • Another object of the present invention to provide a food composition for preventing or improving fatty liver comprising sewage oil extract and alkaloid compound isolated therefrom as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of fatty liver comprising sewage oil extract and alkaloid compounds isolated therefrom as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving fatty liver comprising a sewage oil extract and an alkaloid compound separated therefrom as an active ingredient.
  • the present invention relates to a composition for the prevention or treatment of fatty liver, comprising sesame oil extract and alkaloid compounds isolated therefrom as an active ingredient.
  • the sewage extract of the present invention and the alkaloid compound isolated therefrom have in vivo stability, increase the activity of ANT1 enzyme, promote fatty acidization in liver tissue of fatty liver animal model and thereby produce fat accumulation and triglyceride By effectively inhibiting, it can be usefully used for the prevention or treatment of fatty liver, especially non-alcoholic fatty liver.
  • 1 is a diagram showing the HPLC analysis spectrum of the sewage ethanol extract.
  • Figure 2 is a diagram showing the ANT1 activity of alkaloid compounds isolated from the sesame oil extract.
  • Figure 3 is a diagram showing the effect of inhibiting fat accumulation in liver tissue of the evodiamine of db / db mice.
  • Figure 4 is a diagram showing the effect of triglycerides in the liver tissue of the evodiamine of db / db mice.
  • Fig. 5 is a diagram showing the effect of inhibiting fat accumulation in liver tissue of evodiamine in a fatty liver animal model by LXR antagonist.
  • FIG. 6 is a diagram showing the effect of inhibiting triglyceride production in the liver tissue of the evodiamine of a fatty liver animal model by LXR antagonist.
  • FIG. 7 is a diagram showing the effect of evodiamine on fatty acid oxidation inhibitory action by LXR antagonist treatment.
  • the present invention provides a composition for the prevention or treatment of fatty liver, comprising sesame oil extract and alkaloid compounds isolated therefrom as an active ingredient.
  • the composition comprises a pharmaceutical composition or a food composition.
  • Fructus extract of the present invention can be obtained by the following method. Sewage oil is washed with water to remove debris, dried in the shade and crushed. Sewage oil can be used without limitation, cultivated or commercially available. Appropriate amount of solvent is added to the ground sewage oil powder to allow complete immersion to obtain the sewage oil extract.
  • the extraction method can be impregnated or warmed at room temperature.
  • the extraction solvent is not limited thereto, but may be one or more solvents selected from water, alcohols having 1 to 4 carbon atoms, and mixed solvents thereof, preferably methanol or ethanol, and more preferably ethanol.
  • the sewage oil extract concentrate was suspended in distilled water and fractionated sequentially with hexane, ethyl acetate, butanol and water to obtain a fraction.
  • the ethyl acetate fraction of the fraction showed the best ANT1 activity.
  • the active material was separated from the sewage oil ethyl acetate fraction having the highest ANT1 activity using liquid chromatography, and the active material showed the best ANT1 activity among the alkaloid compounds.
  • the alkaloid compound includes evodiamine, evodiamine, rutaecarpine, 7-hydroxyrutaecarpine, norketoyobyrine, and ketoyobyrine. .
  • the alkaloid compound isolated from the sewage oil extract may be obtained by the following method. Specifically, a known method used for isolation and extraction of plant components, such as extraction with an organic solvent alcohol (methanol, ethanol, propanol, etc.) or a water-soluble alcohol, a distribution of an organic solvent and water, a method by column chromatography, or the like alone or suitably Can be easily obtained.
  • an organic solvent alcohol methanol, ethanol, propanol, etc.
  • a water-soluble alcohol a distribution of an organic solvent and water
  • a method by column chromatography, or the like alone or suitably Can be easily obtained.
  • the chromatography used in the present invention is not limited thereto, but silica gel column chromatography, LH-20 column chromatography, thin layer chromatography, or high performance High performance liqid chromatography and the like can be used.
  • sesame oil extract and alkaloid compounds isolated therefrom increase the activity of ANT1 enzyme, promote fatty acidization in liver tissue of fatty liver animal model and thereby effectively inhibit fat accumulation and production of triglycerides.
  • sewage oil extract and alkaloid compound isolated therefrom according to the present invention can be used as a medicine or health functional food useful for the prevention or treatment of fatty liver, especially non-alcoholic fatty liver.
  • composition of the present invention may be used alone or in the form of a combination or aggregate with other pharmaceutically active compounds.
  • the sewage oil extract which is an active ingredient of the composition of the present invention, and the alkaloid-based compound isolated therefrom may be administered in combination with other known preventive or therapeutic drugs for fatty liver.
  • composition of the present invention may be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers for the prevention or treatment of fatty liver.
  • composition of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions. It may also be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like in the form of conventional formulations, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions. Suitable formulations known in the art are preferably those disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, recently, Mack Publishing Company, Easton PA.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline Cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxy benzoate, propylhydroxy benzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and the solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, It is prepared by mixing gelatin.
  • excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, It is prepared by mixing gelatin.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. .
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the dosage of the sewage extract of the present invention and the alkaloid compound isolated therefrom depends on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration, and the judgment of the prescriber. It may vary. Dosage determination based on these factors is within the level of skill in the art and generally dosages range from 0.1 mg / kg / day to approximately 1,000 mg / kg / day. More preferred dosage is 1 mg / kg / day to 500 mg / kg / day. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • the compounds of the present invention can be administered to a subject by various routes. All modes of administration can be expected, for example by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or cerebrovascular injections. Since the compound of the present invention has little toxicity and side effects, it is a drug that can be used safely even when taken for a long time for the purpose of prevention.
  • the health functional food refers to a food having a bioregulatory function, such as prevention and treatment of disease, biodefence, immunity, recovery of the disease, inhibition of aging, and should be harmless to the human body when taken in the long term.
  • the composition of the present invention may be added to a dietary supplement for the purpose of preventing or improving fatty liver.
  • the composition of the present invention When the composition of the present invention is used as a food additive, the composition may be added as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixed amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • the compositions of the present invention are added in an amount of up to 15% by weight, preferably up to 10% by weight relative to the raw materials.
  • the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.
  • Examples of the food to which the substance may be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionary, pizza, ramen, other noodles, dairy products including gum, ice cream, various soups, beverages, tea, drink, Alcoholic beverages and vitamin complexes, and the like and include all of the health foods in the conventional sense.
  • the health beverage composition of the present invention may include various flavors or natural carbohydrates, and the like as an additional ingredient, as in a general beverage.
  • the natural carbohydrates described above may be used as monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and natural sweeteners such as dextrin and cyclodextrin, and synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame.
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 10 g, preferably about 0.01 to 0.1 g per 100 ml of the composition of the present invention.
  • the composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, And carbonating agents used in the carbonated beverage.
  • the composition of the present invention may include a pulp for the production of natural fruit juice, fruit juice drinks and vegetable drinks. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • ANT1 is a carrier protein present in the inner membrane of mitochondria and plays a role (ATP / ADP translocator) to export ATP produced during oxidative phosphorylation of mitochondria into the cytoplasm. Previous studies have shown that mitochondrial protein ANT1 may be an important pathological mechanism for fatty liver prevention. Therefore, in the present invention, in order to search for candidates for the treatment of fatty liver, substances that regulate the activity of ANT1 were searched.
  • Reverse phase (RP-18) column chromatography was performed again under the conditions of increasing the fraction 5 from 2: 1 to 5: 1 using MeOH-H 2 O mixed solvent to obtain five smaller fractions (fr 5.1-5.5).
  • Example 1 The structure of five compounds isolated from the sewage oil extract obtained in Example 1 was analyzed.
  • the chemical structure of the compound was measured using an ESI mass spectrometer (Electrospray Ionization mass spectrometer) to determine the molecular weight, and the chemical structure was confirmed by 1 H and 13 C-NMR analysis.
  • ESI mass spectrometer Electrospray Ionization mass spectrometer
  • Example 1 In order to confirm the feasibility of the sewage oil extract prepared in Example 1 and the compounds 1-5 isolated therefrom as a therapeutic agent for fatty liver, the activity of ANT1 was measured.
  • the activation activity of ANT1 was measured using the ANT1 promoter-luciferase system.
  • the promoter is a sequence that regulates transcription, and the luciferase gene located behind the nucleotide sequence of the promoter increases in expression as the promoter becomes more active. Therefore, the activity of the promoter can be known from the expression level of luciferase.
  • ANT1 is a mitochondrial protein
  • mouse endothelial cell (endothelioma) bEnd.3 cells with relatively high distribution of mitochondria were selected to measure promoter activity.
  • bEnd.3 cells were collected by treatment with 0.25% trypsin, and then the supernatant was removed and suspended in DMEM medium without bovine serum.
  • lipofectamine lipofectamine (lipopectAMINE, life Technologies, Inc) was added to 100 ⁇ l of the DMEM, and the mixture was slowly mixed and allowed to stand at room temperature for 15 minutes. Standard to consistently match the efficiency of 50 ng of pANT1 II-Luc or mpANT1-Luc (plasmid with luciferase gene) and 0.1 ⁇ g of pCMV- ⁇ -galactosidase (transfection, how DNA is introduced into animal cells) Plasmid with ⁇ -galactosidase gene], 0.1 ⁇ g of ANT1 expression vector, or a microprecision tube containing a vector to be used as a control. It was left for another 15 minutes.
  • the mixture of lipofectamine and DNA-plasmid and b-End.3 cells were slowly mixed and incubated at room temperature for 20 minutes in suspension, then aliquoted in a 60 mm culture vessel and incubated in a CO 2 incubator for 24 hours. The next day, 10 ⁇ g / ml of each of the sewage extracts prepared in Example 1 and 1 ⁇ g / ml of each of the compounds separated therefrom were added thereto, followed by further incubation for 24 hours.
  • bEnd.3 cells were washed twice with PBS, 500 ⁇ l of extract solution was added to each culture vessel, and the cells were disrupted and centrifuged at 14,000 rpm for 5 minutes.
  • Luciferase activity was obtained by supernatant extracted from 100 ⁇ l of cells, 100 ⁇ l of 20 nM D-luciferin (substrate luminescent using luciferase) and 300 ⁇ l of reaction solution (20 mM glycylglycin, 12.5 mM MgSO 4, 3 mM EGTA, 15 mM potassium). phosphate, 1 mM DTT, 1 mM ATP) and measured with a photometer (luminometor, Berthold Clinolumat).
  • luciferase activity was corrected by measuring the activity of ⁇ -galactosidase.
  • the activity of ⁇ -galactosidase was 30 ⁇ l of cell extract, 66 ⁇ l of o-nitrophenyl- ⁇ -D-galactoside (4 mg / ml), and 204 ⁇ l of reaction solution (0.1 M sodium phosphate, 1 mM MgCl 2 , 45 mM ⁇ ).
  • -mercaptoethanol pH 7.5
  • absorbance was measured with a spectrophotometer.
  • Table 1 and FIG. 2 The results of confirming the activity of ANT1 of the sesame oil extract and alkaloid compounds 1-5 separated therefrom are shown in Table 1 and FIG. 2, respectively.
  • mice Twenty ICR mouse strains, which are common mice, were used, and 10 rats were assigned to the control group and 10 rats to the experimental group.
  • the control group was orally administered with only a solvent containing no compound (PEG-400 / tween-80 / EtOH, 8/1/1, v / v / v), and the experimental group was 2.0 g / kg of evodiamine separated from the sesame oil extract. It was administered orally at the concentration.
  • Each mortality was examined 24 hours after administration, and both the control group and the experimental group administered with 2.0g / kg evodiamine survived. It was confirmed that the evodiamine did not show acute toxicity at the concentration of 2.0g / kg.
  • OLETF rats were used as experimental animals, and only control solvent was administered orally with evodiamine at a concentration of 200 mg / kg.
  • blood was collected from the animals, and blood concentrations of GOT (glutamate-oxalate-transferase), GPT (glutamate-pyruvate-transferase), creatine kinase and creatinine were measured.
  • GOT glutamate-oxalate-transferase
  • GPT glutapyruvate-transferase
  • creatine kinase and creatinine were measured.
  • the experimental group of evodiamine did not show any difference between GOT and GPT, which are known to be related to hepatotoxicity, creatinine, which is an indicator of kidney toxicity, and creatine kinase, which is an indicator of muscle toxicity.
  • mice are well known as obese and type 2 diabetic animal models, nonalcoholic fatty liver is also well developed and thus used as animal models.
  • Normal 8-week-old mice (lean) were used as a normal group, and water or evodiamine (Compound 1, 200 mg / kg) was orally administered to 8-week-old db / db mice (control group) for 3 weeks.
  • liver tissue of each group of mice was separated and observed, and the results are shown in FIGS. 3 and 4.
  • the evodiamine isolated from the sewage extract has a prophylactic or therapeutic effect of fatty liver in db / db animal model.
  • LXR Liver X receptor
  • SREBP1c sterol regulatory factor-binding protein 1c
  • mice of 8-week-old C57BL / 6J were orally administered with water or evodiamine 200 mg / kg for 1 week, with oral administration of 50 mg / kg of LXR agonist.
  • the liver tissues of the mice in each group were separated and the triglyceride content in the tissues was measured.
  • Figs. 5 and 6 The inhibitory effect of evodiamine on fat accumulation and neutral fat production in liver tissues of LXR antagonists in liver tissues are shown in Figs. 5 and 6, respectively, and the effects of evodiamine on fatty acid oxidation inhibition by LXR antagonist treatment. The influence is shown in FIG. 7.
  • the evodiamine isolated from the sesame oil extract has a fatty liver prevention and treatment effect in the animal model inducing fatty liver by treatment with LXR antagonist.
  • the sewage oil extract and the alkaloid-based compound separated therefrom were mixed with lactose, potato starch and colloidal silicic acid, 10% gelatin solution was added, and then ground and passed through a mesh body. After drying, the mixture obtained by adding potato starch, syrup and magnesium stearate was made into a tablet.
  • the above composition ratio was dissolved in distilled water to make 100 ml.
  • the solution was bottled and sterilized by heating at 20 ° C. for 30 minutes.
  • the above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
  • the above ingredients are mixed and filled into gelatin capsules to prepare capsules.
  • each component is added to the purified water to dissolve it, the lemon flavor is appropriately added, the above components are mixed, purified water is added, the whole is purified to 100 ml, and then filled in a brown bottle.
  • the solution is prepared by sterilization.
  • Sewage oil extract and alkaloid-based compounds separated therefrom were prepared for health promotion cooking seasoning at 0.2 to 10 parts by weight, respectively.
  • Sewage oil extract and alkaloid-based compounds separated therefrom were added to the flour at 0.1 to 5.0 parts by weight, respectively, and bread, cake, cookies, crackers and noodles were prepared using the mixture to prepare foods for health promotion.
  • Sewage oil extract and alkaloid-based compounds separated therefrom were added to the soup and the juice of 0.1 to 1.0 parts by weight, respectively, to prepare meat products for health promotion, soup of noodles and soup.
  • Sewage oil extract and alkaloid-based compounds separated therefrom were added to the milk at 0.1 to 1.0 parts by weight, respectively, to prepare various dairy products such as butter and ice cream.
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixtures is mixed with a component suitable for a health food in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method.
  • the granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.
  • the extract was added to juice to prepare vegetable juice for health promotion.
  • the extract was added to juice to prepare fruit juice for health promotion.
  • the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 l container, sealed sterilization and refrigerated and then Used to prepare the healthy beverage composition of the invention.
  • composition ratio is mixed with a component suitable for a favorite beverage in a preferred embodiment, the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.

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Abstract

본 발명은 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물은 생체 내 안정성을 가지고 있으며, ANT1 효소의 활성을 증가시키고, 지방간 동물모델의 간조직 내에서 지방산화를 촉진하고 이로 인해 지방축적 및 중성지방 생성을 효과적으로 억제함으로써, 지방간, 특히 비알코올성 지방간에 대한 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 조성물
본 발명은 오수유(Evodia rutaecarpa) 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계(alkaloid) 화합물을 유효성분으로 함유하는 지방간의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
최근, 식생활의 서구화로 인한 비만 인구의 증가와 더불어 대사증후군에 의한 비알코올성 지방간질환(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)이 급증하고 있다. 비알코올성 지방간 질환이란 알코올의 섭취 병력은 없지만 알코올성 지방간과 유사한 조직 소견을 보이는 질환으로 비만이 가장 중요한 원인으로 알려지고 있으며, 현재 비알코올성 지방간의 유병률은 20% 정도로 가장 흔한 간 기능 이상의 원인이다. 비알코올성 지방간 질환의 발생 기전 중 가장 중요한 것은 인슐린 저항성으로 이는 당뇨병, 비만 및 고지혈증 등 대사증후군의 공통적 병인으로 간주되고 있으며, 비알코올성 지방간 질환을 간에서 발현되는 대사증후군의 한 형태로 보고 있다. 상기 대사증후군에 속하는 각각의 질환은 상호 연관성을 가지거나 독립적으로 NAFLD의 진행, 중증도 및 합병증 발생에 영향을 줄 수 있다. 한편 NAFLD의 일부는 간세포의 파괴를 동반하는 비알코올성 지방간염(nonalcoholic steatohepatitis, NASH)의 형태로 나타나며 일부는 간 섬유화를 통해 간 경화증이나 간암으로 진행하기도 한다.
대사증후군에 의한 지방간질환의 발생은 (1) 지방세포로부터 나온 유리지방산이 간 내로 유입되는 양이 증가되어 지방축적이 일어남과 동시에 (2) 고혈당과 고인슐린 혈증으로 인해 중성지방의 생합성에 중요한 역할을 하는 전사인자인 SREBP-1c를 활성화시켜 간 조직에 지방 축적을 유발하는 것으로 알려져 있다. 최근 세포 내 에너지 대사에 관여하는 AMPK(AMP-activated protein kinase)를 활성화하는 메트포민과 PPAR-리간드가 SREBP-1c의 활성을 억제하여 지방간의 발병을 예방할 수 있음이 보고된 바 있으나 임상적 효용성에 대해서는 논란의 여지가 많은 상태이다. 또한 현재까지 메트포민과 PPAR- ligand 이외에 SREBP-1c를 효율적으로 조절할 수 있는 약제에 대한 보고는 없는 상태이다. 최근, 비알코올성 지방간 질환의 치료에 비타민 E와 같은 항산화제와 간세포 보호제인 우르소데옥시콜산(우루사)이 이용되고 있으나 임상적으로 뚜렷한 치료효과는 없는 상태이다. 따라서 현재 이들 약물을 이용한 비알코올성 지방간 질환의 치료는 임상적으로 권고 되지 않고 있고, 체중감량, 식사요법, 운동요법 등의 기본적인 치료법만이 권고 되고 있는 상태로 대사성 지방간 질환의 치료제의 개발이 시급한 상황이다. 따라서, 상기 질환을 효과적으로 치료할 수 있는 기술을 개발한다면 경제적, 사회적 파급 효과는 매우 클 것으로 판단된다.
한편, 오수유(Evodia rutaecarpa)는 우리나라 남부지방에 자생하는 낙엽성 작은 관목으로 운향과 식물이다. 한방에서는 9월경에 녹갈색의 미숙과실을 채취하여 말린 것을 오수 또는 오수유라고 하며, 건위, 구풍, 해독, 이뇨제로 사용된다. 오수유 추출액은 실험동물에서 진통작용이 보고되었고 혈류개선을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 그 외 오수유의 효능으로는 복통, 두통 동통, 설사, 이질복통, 고혈압에 치료 효과가 있다고 알려져 있으며, 머리의 피부가 헐어 생긴 발진과 습진을 제거하는데도 유효하다고 알려져 있다. 이러한 오수유와 관련된 특허 및 문헌으로 "오수유 추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물(대한민국 등록특허 제10-345225호)", "오수유 추출물을 포함하는 콜레스테롤 에스터레이즈 저해조성물(대한민국 등록특허 제10-399529호) 등이 있으나 오수유 추출물 및 오수유 추출물로부터 분리된 알칼로이드계 화합물의 지방간의 예방 및 치료 효과에 대해서는 밝혀진 바 없다.
일반적으로 새로운 성분의 약제를 개발하기 위한 여러 가지 방법 중, 기존 약제의 실험적 변형에 의한 노력보다는 전통 의학에서 사용되고 있는 천연물 약제들로부터 새로운 활성 성분을 발견할 수 있는 가능성이 매우 높으며, 이러한 활성 성분들은 오랫동안 사용되어 왔기 때문에 약물들에 의한 독성 염려가 적은 장점이 있다.
따라서, 본 발명자들은 천연물 유래의 독성이 적은 새로운 비알코올성 지방간의 예방 또는 치료물질을 개발하기 위하여 1500여종의 천연물 소재를 탐색한 결과, 오수유 추출물로부터 활성 물질인 5종의 알칼로이드계 화합물을 분리하였고, 상기 분리된 화합물이 비알코올성 지방간에 예방 또는 치료 효과가 있음을 확임함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공함에 있다.
본 발명의 다른 목적은 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공함에 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은, 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물은 생체 내 안정성을 가지고 있으며, ANT1 효소의 활성을 증가시키고, 지방간 동물모델의 간조직 내에서 지방산화를 촉진하고 이로 인해 지방축적 및 중성지방 생성을 효과적으로 억제함으로써, 지방간, 특히 비알코올성 지방간에 대한 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 오수유 에탄올 추출물의 HPLC 분석 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 2는 오수유 추출물로부터 분리된 알칼로이드계 화합물들의 ANT1 활성을 나타낸 도이다.
도 3은 db/db 마우스의 에보디아민의 간 조직 내에서 지방 축적 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 4는 db/db 마우스의 에보디아민의 간 조직 내에서 중성지방 생성 효과를 나타낸 도이다.
도 5는 LXR 길항제에 의한 지방간 동물모델의 에보디아민의 간 조직 내에서 지방 축적 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 6은 LXR 길항제에 의한 지방간 동물모델의 에보디아민의 간 조직 내에서 중성지방 생성 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 7은 에보디아민이 LXR 길항제 처리에 의한 지방산 산화억제작용에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물을 포함한다.
본 발명의 오수유 추출물은 하기와 같은 방법으로 얻을 수 있다. 오수유를 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고 분쇄한다. 오수유는 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다. 분쇄된 오수유 분말에 적당한 양의 용매를 가하여 완전히 침지되도록 하여 오수유 추출물을 수득한다. 추출 방법은 실온에서 함침 하거나 가온할 수 있다. 상기 추출 용매는 이에 제한되지 않으나, 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 이들의 혼합용매로부터 선택된 1 종 이상의 용매를 이용할 수 있으며, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올이며, 더욱 바람직하게는 에탄올이다. 상기 오수유 추출물을 여과 및 농축한 후, 오수유 추출 농축액을 증류수에 현탁시키고, 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물로 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는다. 상기 분획물 중 에틸아세테이트 분획물이 가장 우수한 ANT1 활성을 나타내었다.
상기 ANT1 활성이 가장 우수한 오수유 에틸아세테이트 분획물으로부터 액체 크로마토그래피를 이용하여 활성 물질을 분리하였으며, 그 중 ANT1 활성이 가장 우수하게 나타난 활성물질이 알칼로이드계 화합물임을 확인하였다.
상기 알칼로이드계 화합물은 에보디아민(evodiamine), 루타에카르핀(rutaecarpine), 7-하이드록시루타에카르핀(7-hydroxyrutaecarpine), 노르케토요비린(norketoyobyrine) 및 케토요비린(ketoyobyrine)을 포함한다.
상기 오수유 추출물로부터 분리된 알칼로이드계 화합물은 하기와 같은 방법에 의해 수득될 수 있다. 구체적으로는 유기용매 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올 등) 또는 수용성 알코올에 의한 추출, 유기용매와 물의 분배, 칼럼크로마토그래피에 의한 방법 등, 식물체 성분의 분리 추출에 이용되는 공지의 방법을 단독 또는 적합하게 조합하여 용이하게 얻을 수 있다.
본 발명에서 사용하는 크로마토그래피는 이에 제한되지 않으나, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), LH-20 칼럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 박층 크로마토그래피(TLC; Thin layer chromatography) 또는 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liqid chromatography) 등이 이용될 수 있다.
본 발명에 따른 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물은 ANT1 효소의 활성을 증가시키고, 지방간 동물모델의 간 조직 내에서 지방산화를 촉진하고 이로 인해 지방 축적 및 중성지방의 생성을 효과적으로 억제한다.
따라서, 본 발명에 따른 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물은 지방간 특히 비알코올성 지방간의 예방 또는 치료에 유용한 의약품 또는 건강기능식품으로 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물 단독으로 사용하거나 또는 다른 약학적 활성 화합물과의 결합체나 집합체의 형태로도 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물의 유효성분인 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알카로이드계 화합물은 다른 공지된 지방간의 예방 또는 치료 약물과 혼합하여 복합제제 형태로 제형화하여 투여할 수 있다.
본 발명의 조성물은 지방간의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등이 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 본 발명의 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여 경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 수 있다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.1mg/kg/일 내지 대략 1,000mg/kg/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1mg/kg/일 내지 500mg/kg/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 화합물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
본 발명에서, 건강기능식품이란 질병의 예방 및 치료, 생체방어, 면역, 병후의 회복, 노화 억제 등 생체조절기능을 가지는 식품을 말하는 것으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.
본 발명의 조성물은 지방간의 예방 또는 개선을 목적으로 건강기능식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15중량 % 이하, 바람직하게는 10 중량 % 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10 g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1 g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예, 실험예 및 제조예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1: 오수유 추출물로부터 ANT1 활성 물질의 분리 및 정제>
오수유 열매 3kg을 에탄올 10L에 담가 1주일간 실온에서 추출하였다. 상기 오수유 에탄올 추출물을 감압 농축한 후, 이 농축액(345g)에 물을 가하여 현탁하고, n-헥산, 에틸 아세테이트, 부탄올로 순차적으로 분획하였다. ANT1은 미토콘드리아 내막에 존재하는 캐리어 프로테인으로서 미토콘드리아의 산화적 인산화 과정에서 생성된 ATP를 세포질로 내보내는 역할(ATP/ADP translocator)을 한다. 지난 연구를 통하여 미토콘드리아 단백질인 ANT1이 지방간 예방에 중요한 병리 기전이 될 수 있음이 밝혀졌다. 따라서 본 발명에서는 지방간 치료제의 후보물질을 검색하기 위하여, ANT1의 활성을 조절하는 물질을 검색하였다.
각각의 용매분획에 대하여 ANT1의 활성을 확인한 결과, 에틸 아세테이트 분획에서 강한 활성을 나타냄을 확인하였다. 에틸 아세테이트 분획 48g을 헥산-아세톤 1:0→0:1의 용매 구배 조건으로 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 실시하여 6개의 분획을 얻었다(fr.1~6). 이 분획들 중 분획 2, 3 및 5가 ANT1 활성을 나타내었으며, 분획 2로부터 결정화 과정을 통하여 200mg의 화합물 2(루타에카르핀)를, 분획 3으로부터 동일과정을 거쳐 1g의 화합물 1(에보디아민)을 수득하였다. 분획 5를 MeOH-H2O 혼합용매를 사용하여 2:1 부터 5:1까지 순차적으로 증가시키는 조건을 사용하여 역상(RP-18) 컬럼크로마토그래피를 실시하여 다시 5개의 소분획을 얻었다(fr. 5.1 - 5.5). 소분획 Fr5.3을 43% MeCN-H2O을 사용하여 HPLC [RS Tech Optima Pak C18 column 20mm×50mm; 10㎛입자 크기 2ml/min; UV detection: 254nm]를 실시하여, 화합물 3(7-하이드록시루타에카르핀, tR = 28.5 min), 화합물 5 (케토요비린, tR = 51.2 min), 화합물 4(노르케토요비린, tR = 65.0 min)을 수득하였다. (도 1 참조).
<실시예 2: 오수유 추출물로부터 분리된 화합물의 구조 분석>
상기 실시예 1에서 수득한 오수유 추출물로부터 분리된 5종의 화합물의 구조를 분석하였다. 화합물의 화학적 구조를 ESI 질량분석기(Electrospray Ionization mass spectrometer)을 사용하여 분자량을 측정하고, 1H 및 13C-NMR 분석을 통해 화학구조를 확인하였다. 화합물 1 내지 5의 화학식 및 화학적 특성을 하기에 나타내었다.
화합물 1: 에보디아민 (Evodiamine)
Figure PCTKR2013005748-appb-I000001
성상: 노르스름한 분말 (yellowish powder);
1H NMR (500 MHz, Acetone-d6) δH (ppm): 10.32 (1H, br, s, 1-NH), 7.93 (1H, dd, J = 1.5, 7.5, H-19), 7.54 (1H, br, d, J = 7.5, H-9), 7.47 (1H, ddd, J = 1.5, 7.5, 8.0, H-17), 7.41 (1H, br, d, J = 8.0, H-16), 7.41 (1H, br, d, J = 8.0, H-12), 7.14 (1H, br, t, J = 8.0, H-18), 7.08 (1H, br, t, J = 7.5, H-10), 7.04 (1H, ddd, J = 0.5, 7.5, 8.0, H-11), 6.06 (1H, s, H-3), 4.77, 3.22 (each 1H, m, H-5), 1.96 (2H, m, H-6), 2.80 (3H, s, N-CH3);
13C NMR (125 MHz, Acetone-d6) δC (ppm): 165.2 (C-21), 150.8 (C-15), 138.1 (C-13), 135.0 (C-2), 134.0 (C-17), 130.8 (C-19), 129.3 (C-10), 125.1 (C-8), 123.1 (C-11), 122.4 (C-18), 120.2 (C-9), 119.3 (C-16), 113.4 (C-20), 112.5 (C-12), 110.8 (C-7), 70.8 (C-3), 41.3 (C-5), 37.3 (N-CH3), 20.7 (C-6).
화합물 2: 루타에카르핀 (Rutaecarpine)
Figure PCTKR2013005748-appb-I000002
성상:엷은 노란색의 무정형 분말 (light yellow amorphous powder);
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δH (ppm): 9.67 (1H, br, s, 1-NH), 8.34 (1H, dd, J = 1.2, 7.8, H-19), 7.70 (1H, ddd, J = 1.8, 1.2, 7.2, H-9), 7.65 (1H, d, J = 7.5, 8.0, H-17), 7.41 (1H, br, d, J = 8.0, H-16), 7.41 (1H, br, d, J = 8.0, H-12), 7.14 (1H, br, t, J = 8.0, H-18), 7.08 (1H, br, t, J = 7.5, H-10), 7.04 (1H, ddd, J = 0.5, 7.5, 8.0, H-11), 6.06 (1H, s, H-3), 4.77, 3.22 (each 1H, m, H-5), 1.96 (2H, m, H-6), 2.80 (3H, s, N-CH3);
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δC (ppm): 165.2 (C-21), 150.8 (C-15), 138.1 (C-13), 135.0 (C-2), 134.0 (C-17), 130.8 (C-19), 129.3 (C-10), 125.1 (C-8), 123.1 (C-11), 122.4 (C-18), 120.2 (C-9), 119.3 (C-16), 113.4 (C-20), 112.5 (C-12), 110.8 (C-7), 70.8 (C-3), 41.3 (C-5), 37.3 (N-CH3), 20.7 (C-6).
화합물 3: 7-하이드로옥시루타에카르핀 (7-Hydroxyrutaecarpe)
Figure PCTKR2013005748-appb-I000003
성상:연 노란색 분말 (pale yellow powder);
1H NMR (500 MHz, Acetone-d6) δH (ppm): 10.32 (1H, br, s, 1-NH), 8.23 (1H, dd, J = 1.5, 8.5, H-19), 7.78 (1H, ddd, J = 1.5, 8.5, 9.0, H-17), 7.71 (1H, br, d, J = 8.0, H-9), 7.62 (1H, br, d, J = 9.0, H-12), 7.46 (1H, br, t, J = 8.0, H-18), 7.31 (1H, br, t, J = 7.5, H-10), 7.26 (1H, br, d, J = 9.0, H-16), 7.14 (1H, br, t, J = 7.5, H-11), 6.91 (1H, dd, J = 1.5, 5.0, H-5), 3.55 (1H, dd, J = 1.5, 17.0, H-6eq), 3.43 (1H, dd, J = 5.0, 17.0, H-6ax);
13C NMR (125 MHz, Acetone-d6) δC (ppm): 161.7 (C-21), 148.9 (C-3), 145.2 (C-15), 139.9 (C-13), 135.4 (C-17), 127.9 (C-19), 127.8 (C-18), 127.5 (C-2), 127.3 (C-8), 126.8 (C-16), 125.8 (C-10), 122.4 (C-20), 120.9 (C-11), 120.8 (C-9), 115.7 (C-7), 74.8 (C-5), 28.3 (C-6).
화합물 4:노르케토요비린 (Norketoyobyrine)
Figure PCTKR2013005748-appb-I000004
성상: 엷은 노란색 무정형 분말 (pale yellow amorphous powder);
1H NMR (500 MHz, Acetone-d6)δH (ppm): 10.04 (1H, br, s, 1-NH), 8.16 (1H, dd, J = 1.5, 7.5, H-19), 7.86 (1H, br, d, J = 8.0, H-12), 7.77 (1H, ddd, J = 1.5, 7.5, 8.0, H-17), 7.44 (1H, br, d, J = 8.5, H-16), 7.39 (1H, br, d, J = 8.0, H-18), 7.30 (1H, ddd, J = 0.5, 7.5, 8.0, H-18), 7.24 (1H, s, H-14), 7.11 (1H, ddd, J = 0.5, 7.5, 8.0, H-10), 7.06 (1H, ddd, J = 0.5, 7.5, 8.0, H-11), 4.32, (2H, m, H-5), 3.10 (2H, m, H-6);
13C NMR (125 MHz, Acetone-d6) δC (ppm): 162.2 (C-21), 151.7 (C-3), 141.9 (C-2), 137.8 (C-13), 135.8 (C-17), 128.9 (C-19), 128.6 (C-8), 123.5 (C-15), 123.4 (C-18), 123.3 (C-12), 122.2 (C-10), 119.7 (C-11), 119.6 (C-9), 116.6 (C-7), 115.0 (C-16), 112.8 (C-20), 112.2 (C-14), 43.2 (C-5), 24.7 (C-6).
화합물 5: 케토요비린 (Ketoyobyrine)
Figure PCTKR2013005748-appb-I000005
성상: 옅은 노란색 무정형 분말 (light yellow amorphous powder);
1H NMR (500 MHz, Acetone-d6) δH (ppm): 9.88 (1H, br, s, 1-NH), 8.17 (1H, br, d, J = 7.5, H-19), 7.77 (1H, br, t, J = 8.0, H-11), 7.45 (1H, br, d, J = 8.0, H-10), 7.39 (1H, dd, J = 2.0, 7.5, H-12), 7.31 (1H, br, t, J = 7.5, 8.0, H-18), 7.27 (1H, d, 8.5, H-9), 7.24 (1H, s, H-14), 6.76 (1H, dd, J = 2.0, 8.5, H-17), 4.32, (2H, m, H-5), 3.84 (3H, s, -OCH3), 3.10 (2H, m, H-6);
13C NMR (125 MHz, Acetone-d6) δC (ppm): 162.3 (C-21), 154.9 (C-16), 151.7 (C-3), 141.9 (C-2), 135.9 (C-11), 133.1 (C-13), 129.3 (C-8), 129.1 (C-19), 124.1 (C-7), 124.0 (C-9), 123.5 (C-18), 116.6 (C-20), 115.1 (C-10), 112.9 (C-12), 112.8 (C-15), 112.5 (C-14), 101.6 (C-17), 55.9 (-OCH3), 43.0 (C-5), 24.7 (C-6).
<실험예 1: ANT1 프로모터를 이용한 활성 측정>
실시예 1에서 제조한 오수유 추출물 및 이로부터 분리된 화합물 1~5의 지방간 치료제로서의 가능성을 확인하기 위하여, ANT1의 활성을 측정하였다.
ANT1의 활성화 작용 측정은 ANT1 프로모터(promoter)-루시퍼라제(luciferase) 시스템을 이용하였다. 프로모터는 전사를 조절하는 서열이며, 프로모터의 염기서열 뒤에 위치한 루시퍼라제 유전자는 프로모터가 활성이 많이 될수록 그 발현양이 많아진다. 따라서 루시퍼라제의 발현량을 통해 프로모터의 활성을 알 수 있다. ANT1이 미토콘드리아 단백질이므로, 미토콘드리아가 상대적으로 많이 분포하는 마우스 유래의 내피세포종(endothelioma) bEnd.3 세포를 선택하여 프로모터의 활성을 측정하였다. bEnd.3 세포를 0.25%의 트립신(trypsin) 처리하여 모은 후, 상층액을 제거한 뒤 우혈청이 제거된 DMEM 배지로 현탁하였다. 그리고 상기 DMEM 100㎕에 3㎕의 리포펙타민(lipopectAMINE, life Technologies, Inc)을 세포현탁액에 점적한 후 천천히 섞어 15분간 실온에 방치 하였다. 50ng의 pANT1 II-Luc 또는 mpANT1-Luc(루시퍼라제 유전자를 가진 플라즈미드), 0.1㎍의 pCMV-β-galactosidase[형질도입(transfection, DNA를 동물 세포에 유입하는 방법)의 효율을 일정하게 맞추기 위한 표준물질로 β-갈락토시다제(β-galactosidase) 유전자를 가진 플라스미드(plasmid)], 0.1㎍의 ANT1 발현 벡터 또는 대조군으로 쓰일 벡터를 넣은 미세 원침 튜브에 30초에 걸쳐 천천히 점적하면서 혼합하여 실온에서 다시 15분간 방치하였다. 리포펙타민과 DNA-플라스미드의 혼합액과 b-End.3 세포를 천천히 섞어 현탁액 상태로 20분간 실온에서 배양한 후, 60mm 배양용기에 분주하고 CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 다음날 실시예 1에서 제조한 오수유 추출물 각각 10㎍/ml 및 이로부터 분리한 화합물을 각각 1㎍/ml씩을 첨가한 후 다시 24시간 동안 배양하였다. bEnd.3 세포는 PBS로 2회 세척하고 각각의 배양용기에 500㎕의 추출용액을 가하여 세포를 파괴한 뒤 14,000rpm에서 5분간 원심분리 하였고, 얻어진 상층액을 루시퍼라제와 β-갈락토시다제의 활성 측정에 사용하였다. 루시퍼라제의 활성은 100㎕의 세포에서 추출된 상층액과 100㎕의 20nM D-루시페린(루시퍼라제를 이용해 발광 되는 기질)과 300㎕의 반응액 (20mM glycylglycin, 12.5mM MgSO4, 3mM EGTA, 15mM potassium phosphate, 1mM DTT, 1mM ATP)을 사용하여 광도계(luminometor, Berthold Clinolumat)로 측정하였다. 유전자 주입 효율을 보정 하기 위하여β-갈락토시다제의 활성을 측정하여 루시퍼라제의 활성을 보정하였다. β-갈락토시다제의 활성은 30㎕의 세포추출액과 66㎕의 o-nitrophenyl-β-D-galactoside(4mg/ml), 204㎕의 반응액(0.1M sodium phosphate, 1mM MgCl2, 45mM β-mercaptoethanol, pH 7.5)을 37℃ 항온조에서 반응시킨 후 분광광도계(spectrophotometer)로 흡광도를 측정하였다. 오수유 추출물 및 이로부터 분리한 알칼로이드계 화합물 1~5의 ANT1의 활성을 확인한 결과를 각각 표 1 및 도 2에 나타내었다.
표 1
오수유 추출물의 분획 에탄올 에틸아세테이트 부탄올 물
오수유의 ANT1 프로모터 활성(%) 65 76 45 20
표 1에 나타낸 바와 같이, 오수유 추출물 중 에틸아세테이트 분획의 ANT1의 프로모터 활성이 76%로 가장 우수하게 나타남을 확인하였다.
또한 도 2에 나타낸 바와 같이, 오수유 추출물로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 1~5의 최종농도 5㎍/ml에서 ANT1의 프로모터의 활성이 평균 2배 이상 증가함을 확인하였다.
<실험예 2:독성 실험>
2-1. 급성독성
오수유 추출물로부터 분리된 화합물의 일종인 에보디아민(화합물 1)의 생체 안정성을 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
일반적인 마우스인 ICR 마우스 계통 20 마리를 이용하였으며, 대조군에 10 마리, 실험군에 10 마리씩 배정하였다. 대조군에는 화합물이 포함되지 않는 용매(PEG-400/tween-80/EtOH, 8/1/1, v/v/v)만을 경구투여하였고, 실험군은 오수유 추출물로부터 분리된 에보디아민의 2.0g/kg 농도로 경구 투여하였다. 투여 24시간 후에 각각의 치사율을 조사한 결과, 대조군과 2.0g/kg 농도의 에보디아민을 투여한 실험군 모두 생존하였다. 이를 통해 에보디아민은 2.0g/kg 농도에서 급성독성 효과는 나타나지 않았음을 확인하였다.
2-2. 장기 및 조직독성
오수유 추출물로부터 분리된 화합물의 일종인 에보디아민(화합물 1)의 장기 및 조직독성을 확인하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
실험동물로는 OLETF 랫트를 이용하였으며, 대조군에는 용매만을 실험군에는 200mg/kg 농도의 에보디아민을 경구 투여하였다. 4주 후 상기동물의 혈액을 채취하여 GOT(glutamate-oxalate-transferase), GPT(glutamate-pyruvate-transferase), 크레아틴 카이네이즈(creatin kinase) 및 크레아티닌(creatinine) 등의 혈액 내 농도를 측정하였다. 그 결과, 간독성과 관계있는 것으로 알려진 GOT 및 GPT, 신장독성의 지표인 크레아티닌과 근육독성의 지표인 크레아틴 카이네이즈 모두 대조군과 비교하여 에보디아민의 실험군도 별다른 차이를 보이지 않았다. 또한, 각 동물로부터 심장, 폐, 췌장, 부신, 간, 신장 및 근육 등을 절취하여 통상적인 조직절편 제작과정을 거쳐 광학현미경으로 조직학적 관찰을 시행하였으나 특이한 이상이 나타났거나 독성 효과가 유도되었다는 결과는 확인할 수 없었다. 상기 결과를 통해 에보디아민은 장기 및 조직독성이 없는 안정한 물질임을 확인하였다.
<실험예 3: db/db 마우스에서 오수유 추출물로부터 분리한 에보디아민의 지방간 예방 및 치료 효과 규명>
오수유 추출물로부터 분리된 화합물이 db/db 마우스에서 지방간을 예방하는 효과가 있는지 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
db/db 마우스는 비만 및 제 2형 당뇨병 동물 모델로 잘 알려져 있으나 비알코올성 지방간도 잘 발생하기 때문에 이를 동물 모델로 이용하였다. 8주령의 일반 마우스(lean)를 정상군으로 이용하였으며, 8주령의 db/db 마우스(대조군)에 물 또는 에보디아민(화합물 1, 200mg/kg)을 3주 간 경구 투여하였다.
3주 후, 각 군의 마우스의 간 조직을 분리하여 관찰하였으며, 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내였다.
도 3에서 나타낸 바와 같이, 정상군인 일반 마우스의 간 조직 내에서는 현저하게 증가한 지방 축적이 관찰되었다. 반면 200mg/kg의 에보디아민을 투여시 db/db 마우스의 간 조직내 지방 축적이 유의하게 감소함을 관찰하였다.
또한 도 4에 나타낸 바와 같이, db/db 마우스의 증가된 간 조직 내 중성지방이 에보디아민 투여시 유의하게 감소함을 확인하였다.
상기 결과를 통하여, 오수유 추출물로부터 분리한 에보디아민은 db/db 동물모델에서 지방간의 예방 또는 치료효과가 있음을 알 수 있다.
<실험예 4: LXR 길항제(agonist)를 처리하여 지방간을 유도한 마우스에서 오수유 추출물로부터 분리된 에보디아민의 지방간 예방 및 치료 효과 규명>
LXR(Liver X receptor)는 산화된 콜레스테롤 부산물(oxysterol)에 결합하는 수용체로, LXR은 세포 내에 콜레스테롤 부산물이 증가하면 말초조직에서 간으로 콜레스테롤을 운반하는 단백질을 암호화하는 유전자들을 활성화 시킨다. 특히 지방산 대사에서 가장 중요한 효소인 스테롤 조절 인자-결합 단백질 1c(SREBP1c)의 발현을 증가시킨다. 따라서 LXR 길항제를 처리할 경우, 지방간이 유발되는 것이 알려져 있다.
8주령 C57BL/6J의 수컷 마우스에 LXR 작용물질 50 mg/kg을 경구투여하면서, 물 또는 에보디아민 200 mg/kg을 1주간 함께 경구 투여하였다. 1주 후, 각 군의 마우스의 간조직을 분리하고, 조직 내 중성지방함량을 측정하였다.
LXR 길항제에 의한 지방간 동물모델의 간 조직 내에서 에보디아민의 지방 축적 억제 효과 및 중성 지방 생성 억제 효과를 각각 도 5 및 도 6에 나타내었으며, 에보디아민이 LXR 길항제 처리에 의한 지방산 산화억제 작용에 미치는 영향은 도 7에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, LXR 길항제 처리시 지방간 생성이 확인되었고, 에보디아민을 함께 투여할 경우 LXR 길항제 처리에 의해 유발된 지방간 발생이 억제됨을 확인하였다.
또한 도 6에서 나타낸 바와 같이, 에보디아민을 함께 투여한 경우 간 조직 내 중성 지방 축적이 유의하게 감소함을 확인하였다.
또한, 도 7에 나타낸 바와 같이, LXR 작용물질에 의해 감소된 지방산 산화가 에보디아민 투여시 유의하게 증가하는 것을 확인하였다.
상기 결과를 통하여, 오수유 추출물로부터 분리한 에보디아민은 LXR 길항제를 처리하여 지방간을 유도한 동물모델에서 지방간 예방 및 치료효과가 있음을 알 수있다.
<제제예 1: 약학적 제제예>
1-1. 정제의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 200g
락토오스 175.9g
감자전분 180g
콜로이드성 규산 32g
감자전분 160g
활석 50g
스테아린산 마그네슘 5g
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물을 락토오스, 감자전분 및 콜로이드성 규산과 혼합하여, 10%의 젤라텐 용액을 첨가시킨 후, 분쇄하여 메쉬체에 통과시켰다. 이를 건조시킨 후, 감자전분, 활설 및 스테아린산 마그네슘을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
1-2. 주사액제의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 1g
염화나트륨 0.6g
아스코르브산 0.1g
상기의 조성비를 증류수에 용해시켜서 100ml를 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.
1-3. 산제의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 20mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
1-4. 캡슐제의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 10mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
1-5. 액제의 제조
오수츄 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 20mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
<제제예 2 : 식품 제조예>
2-1. 조리용 양념의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물을 각각 0.2~10 중량부로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
2-2. 밀가루 식품의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물을 각각 0.1~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
2-3. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물을 각각 0.1~1.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
2-4. 유제품(dairy products)의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물을 각각 0.1~1.0 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
2-5. 건강식품의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 100mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 μg
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 μg
비타민 C 10 mg
비오틴 10 μg
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 μg
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<제제예 3 : 음료 제조예>
3-1. 야채쥬스 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 0.5g
토마토 또는 당근 쥬스 1,000ml
상기 추출물을 쥬스에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.
3-2. 과일쥬스 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 0.1g
사과 또는 포도 쥬스 1,000ml
상기 추출물을 쥬스에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.
3-3. 건강음료의 제조
오수유 추출물 및 이로부터 분리된 알칼로이드계 화합물 100mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (17)

  1. 오수유 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 오수유 추출물은 오수유 에틸아세테이트 분획인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 오수유 추출물은 ANT1(adenine nucleotide translocator 1) 효소의 활성을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 오수유 추출물은 간 조직 내에서 지방 산화를 촉진하는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 오수유 추출물은 간 조직 내에서 지방 축적 및 중성지방 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방간은 비알코올성 지방간인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 에보디아민(evodiamine), 루타에카르핀(rutaecarpine), 7-하이드록시루타에카르핀(7-hydroxyrutaecarpine), 노르케토요비린(norketoyobyrine) 및 케토요비린(ketoyobyrine)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 화합물은 오수유 추출물로부터 분리된 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 오수유 추출물은 오수유 에틸아세테이트 분획으로부터 분리된 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방간은 비알코올성 지방간인 것을 특징으로 하는 지방간 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  11. 오수유 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 오수유 추출물은 에틸아세테이트 분획인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 지방간은 비알코올성 지방간인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물
  14. 에보디아민(evodiamine), 루타에카르핀(rutaecarpine), 7-하이드록시루타에카르핀(7-hydroxyrutaecarpine), 노르케토요비린(norketoyobyrine) 및 케토요비린(ketoyobyrine)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물을 유효성분으로 포함하는 지방간 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 화합물은 오수유 추출물로부터 분리된 것임을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 오수유 추출물은 오수유 에틸아세테이트 분획인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  17. 청구항 14 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방간은 비알코올성 지방간인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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