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WO2014200000A1 - ジケトピペラジンを含有する植物エキス及びその製造方法 - Google Patents

ジケトピペラジンを含有する植物エキス及びその製造方法 Download PDF

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WO2014200000A1
WO2014200000A1 PCT/JP2014/065388 JP2014065388W WO2014200000A1 WO 2014200000 A1 WO2014200000 A1 WO 2014200000A1 JP 2014065388 W JP2014065388 W JP 2014065388W WO 2014200000 A1 WO2014200000 A1 WO 2014200000A1
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WO
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cyclo
extract
phe
plant
leu
Prior art date
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PCT/JP2014/065388
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English (en)
French (fr)
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山本　憲司
佳紀 別府
中原　光一
智典 鈴木
壮一郎 島
由佳 村上
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Suntory Holdings Ltd
Original Assignee
Suntory Holdings Ltd
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Priority to HK16106957.0A priority patent/HK1218841B/zh
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    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/37—Extraction at elevated pressure or temperature, e.g. pressurized solvent extraction [PSE], supercritical carbon dioxide extraction or subcritical water extraction

Definitions

  • the present invention relates to a plant extract containing a high concentration of diketopiperazine and a method for producing the same.
  • a “dipeptide” in which two amino acids are linked is attracting attention as a functional substance.
  • Dipeptides are capable of adding physical properties and new functions that are not present in single amino acids, and are expected to have applications beyond amino acids.
  • diketopiperazine which is a cyclic dipeptide, is known to have various physiological activities such as antibacterial action, antioxidant action (Non-patent documents 1 and 2), and learning motivation improving action (patent document 1). Demand is expected to expand in the medical and pharmacological fields.
  • Non-patent Document 3 a chemical synthesis method
  • Non-patent documents 2 and 4 an enzymatic method
  • a method of synthesizing a cyclic peptide having an arbitrary amino acid sequence by subjecting a linear peptide to dehydration / cyclization reaction with high temperature high pressure water in a supercritical region or a subcritical region (patent document 2), linear dipeptide Or the method (patent document 3, 4) which heat-processes a linear tripeptide in a water solvent, and manufactures a cyclic dipeptide is also proposed.
  • diketopiperazines are expected to have various physiological activities in vivo, almost no naturally occurring diketopiperazines and foods containing high concentrations of diketopiperazines exist.
  • diketopiperazines are known to be present in fermented foods such as sherry, shaoxing, soy sauce, mirin and vinegar (Non-Patent Document 5), but the content is extremely high.
  • Coffee beverages containing Cyclo (Pro-Phe) and Cyclo (Pro-Leu) are also known (Patent Document 5), but these diketopiperazines have a strong bitter taste and are applied to other beverages. difficult.
  • compositions containing a relatively large amount of diketopiperazine which are derived from animal proteins such as collagen and meat, are also known (Patent Documents 4 and 6).
  • An object of the present invention is to provide a good-flavored extract containing naturally occurring highly safe diketopiperazine at a high concentration and a method for producing the same.
  • the present inventors decompose protein-containing plants to produce plant peptides, and high-temperature and high-pressure processes of the plant peptides in liquid. It has been found that by doing, a plant extract containing a high concentration of diketopiperazine can be produced. And it confirmed that this plant extract was favorable in flavor, and came to complete this invention.
  • the present invention relates to the following.
  • Any one of cycloalanyl glutamine, cycloalanylalanine, cycloceryltyrosine, cycloglycylleucine, cycloglycyltryptophan, cyclovalylvaline, cyclotriptophanyltyrosine, cycloleucyltryptophan and cyclophenylalanylphenylalanine A plant extract containing one or more at a concentration of 10 ⁇ g / 100 g / Bx or more.
  • a plant extract containing a high concentration of naturally occurring diketopiperazine at high concentration can be easily produced on a large-scale production scale without complicated processes and complicated equipment. .
  • FIG. 1 shows the results of quantification of the concentration of cyclophenylalanyl phenylalanine in processed vegetable peptide products obtained using soybean protein.
  • FIG. 2 shows the results of quantification of the concentration of cyclophenylalanyl phenylalanine in processed plant peptides obtained using rice protein.
  • FIG. 3 shows the relationship between the number of pre-extractions and the removal rate of soluble components.
  • the plant extract of the present invention can be produced by high temperature high pressure treatment of a vegetable peptide in a liquid.
  • the “vegetable peptide” in the present specification is a known decomposition treatment (decomposition treatment by heat or pressure, decomposition treatment by acid or alkali, or the like) unless otherwise specified.
  • the term “peptide” refers to a peptide in which several amino acids are generated by depolymerizing (oligopeptide) by degradation treatment with an enzyme, etc.).
  • a soy bean peptide, a barley peptide, a wheat peptide, a wheat germ peptide, a pea peptide, a rice peptide etc. can be used for the vegetable peptide of this invention.
  • a plant peptide may be prepared and used from a plant-derived protein or a plant containing a protein, but a commercially available product may be used.
  • Examples of commercially available vegetable peptides include soy peptides such as Hynew AM, Hynew DC, Hynew HK (above, made by Fuji Oil Co., Ltd.), rice peptides such as Oryza peptide P60 (made by Oriza Oil Co., Ltd.), glutamine Examples thereof include wheat peptides such as peptide GP-1N and glutamine peptide GP-N (all manufactured by Nisshin Pharma), and sesame peptides such as sesame peptide KM-20 (manufactured by KISCO).
  • the size of the peptide causes differences in the yield of the diketopiperazine mixture obtained.
  • the vegetable peptide it is preferable to use one having a high proportion of peptide having a molecular weight of 5000 or less, more preferably one having a high proportion of peptide having a molecular weight of 3000 or less, and use one having a high proportion of peptide having a molecular weight of 1000 or less Is particularly preferred.
  • soybeans having a high amino acid score produce higher concentrations of a plurality of diketopiperazines, soybean peptides are an example of a preferred embodiment.
  • a protein derived from a plant or a peptide mixture produced from a plant containing a protein as a raw material can be used.
  • plant-derived proteins such as soybean protein, wheat protein, wheat germ protein, rice protein, sesame protein, leaves such as green tea leaves, barley, wheat, malt, sesame seeds, rice seeds, soybean Known decomposition process (decomposition process by heat or pressure, decomposition process by acid or alkali, enzyme, enzyme, etc.) using as a raw material a protein containing protein that can be eaten, such as beans such as azuki beans and black beans, sweet potatoes and potatoes And peptide mixtures produced by subjecting to decomposition treatment etc.).
  • soybean, malt and tea leaves are preferably used in the present invention.
  • soybeans and tea leaves it is preferable to use soybeans and tea leaves, and it is more preferable to use tea leaves.
  • the protein derived from the above-mentioned plant or a plant body containing the protein is subjected to decomposition treatment as a raw material to obtain a peptide mixture which is a vegetable peptide, and this decomposition treatment is carried out under conditions where an oligopeptide is produced.
  • the decomposition treatment is performed such that the proportion of peptides having a molecular weight of 5000 or less (preferably a peptide having a molecular weight of 3000 or less, more preferably a peptide having a molecular weight of 1000 or less) is high.
  • the decomposition treatment is preferably thermal decomposition treatment and / or enzymatic decomposition treatment from the viewpoint of easiness of production of the target oligopeptide (speed of reaction rate) and ease of mass treatment, and in particular, decomposition treatment with enzyme ( Hereinafter, enzyme treatment is preferably used.
  • the decomposition treatment is performed in a solvent to prevent charring of plants and proteins.
  • the amount thereof is usually about 10 to 100 parts by mass, preferably 15 to 80 parts by mass, more preferably 20 to 60 parts by mass, and particularly preferably about 20 to 40 parts by mass, per 1 part by mass of a plant.
  • the solvent water, ethanol, or a mixture thereof is preferably used, and water is particularly preferably used.
  • the heating conditions are not particularly limited as long as the peptide is produced. As heating conditions, heating at a temperature of 100 ° C. or more, further 125 ° C. or more, for about 30 minutes to several hours, preferably about 2 to 7 hours can be exemplified.
  • a heat processing apparatus a pressure cooker, an autoclave, etc. can be used according to conditions. This heat treatment can be performed simultaneously with the "high temperature high pressure treatment step in liquid" of the present invention.
  • proteolytic enzyme When producing a vegetable peptide by enzyme treatment, although a proteolytic enzyme (protease) is used as the enzyme, it is preferable to use a protease having a strong endo-type degradation activity. Proteases are also roughly classified into three types, alkaline proteases, neutral proteases and acid proteases, according to the difference in pH optimum for action. Furthermore, as the source of protease, there are plant origin, animal origin or microorganism origin, but as for enzyme origin and optimum pH, adverse effects such as poor degradation efficiency and poor flavor of the obtained degradation extract As long as it does not exist, it is not particularly limited.
  • proteases derived from bacteria which can be used in the present invention Protease N, Protease NL, Protease S, ProLeather (registered trademark) FG-F (all, manufactured by Amano Enzyme Inc.); Protin NY, Protin P, Deskin, Depireais, Protin A, Samoase (registered trademark) (above, manufactured by Daiwa Chemical Co., Ltd.); Bioplase (registered trademark) XL-416F, Bioplase (registered trademark) SP-4FG, Bioplase (registered trademark) SP-15FG (above, Nagase Chem) Manufactured by Tex Co., Ltd .; Orientase (registered trademark) 90 N, Nuclein (registered trademark), Orientase (registered trademark) 10 NL, Orientase (registered trademark) 22 BF (all, manufactured by HI Corporation); Alloase (registered trademark) AP-10 (registered trademark
  • proteases derived from Neisseria gonorrhoeae usable in the present invention include Protease A, Protease M, Protease P, Umamizyme, Peptidase R, Neulase (registered trademark) A, Neulase (registered trademark) F (all, Amano Enzyme Inc.
  • actinomycete origin protease for example, Actinase (trademark) AS, Actinase (trademark) AF (above, product made by Kaken Pharma Co., Ltd.), Tosinase (trademark) (made by Genen Core Kyowa Co., Ltd.) as protease which can be used by this invention
  • plant-derived proteases for example, papain W-40 (manufactured by Amano Enzyme), purified papain for food (manufactured by Nagase ChemteX)), pepsin of animal origin, trypsin and the like.
  • proteases it is preferable to use bacterial-derived protease from the viewpoint of degradation efficiency and the flavor of the peptide-containing liquid to be obtained, and neutral protease derived from Bacillus subtilis or Bacillus amylolique It is more preferable to use a protease derived from Bacillus amyloliquefaciens or a protease derived from Bacillus stearothermophilus, and it is particularly preferred to use a neutral protease derived from Bacillus subtilis preferable.
  • a protease in the range of 0.1 to 20% by weight, preferably 1 to 15% by weight, more preferably 3 to 10% by weight based on the protein derived from the plant and the plant containing the protein . If the amount added is smaller than the above range, the effect of improving the peptide production yield can not be exhibited, while if it is added more than the above range, significant improvement in the peptide production yield can not be expected, and cost It will be a disadvantage.
  • water is added to a protein derived from a plant or a plant, and the enzyme is allowed to act in a wet state.
  • the amount of water to be added is usually about 10 to 50 parts by mass, more preferably about 10 to 30 parts by mass, and particularly preferably about 10 to 20 parts by mass per part by mass of protein in a dry state or a plant body.
  • the conditions for treating the enzyme with the protease may be set in view of the optimum conditions of the protease to be used, but it is usually from 30 minutes to 20 to 70 ° C. (preferably 30 to 60 ° C., more preferably 40 to 60 ° C.). It is about 24 hours (preferably 1 hour to 12 hours, more preferably 1 hour to 6 hours).
  • the site of action on the protein which is the substrate may be different, and as a result the composition of the diketopiperazine mixture obtained in the present invention may be changed, in view of the desired composition of the diketopiperazine mixture
  • An enzyme can also be selected. Two or more enzymes may be used in combination.
  • a method of pretreatment for removing water-soluble protein is a method of heating a plant in a liquid to elute water-soluble protein, and then a solid (liquid) separated solid (plant) is decomposed and processed.
  • a method of subjecting the plant body to an extraction treatment with an aqueous solvent such as water, and a method of subjecting the extraction residue to decomposition treatment (hereinafter collectively referred to as "pre-extraction").
  • pre-extraction soluble components such as water-soluble proteins contained in the plant body are preferably immersed in an extraction solvent of at least 15 times by weight, more preferably about 15 to 150 times by weight the weight of the plant body. It is preferable to elute.
  • the extraction solvent may be heated in advance, or may be extracted by heating after immersing the plant body in the extraction solvent.
  • pure water can be suitably used as an extraction solvent, it can also be made to contain organic solvents, such as ethanol, suitably.
  • the hardness can be appropriately adjusted by adding a mineral component to the extraction solvent.
  • the extraction temperature is not particularly limited, but generally 50 to 100 ° C., preferably 60 to 95 ° C., more preferably about 70 to 90 ° C.
  • the extraction time is about 1 minute to 24 hours, preferably about 3 minutes to 20 hours. Extraction conditions such as extraction temperature, time, etc.
  • the removal rate of the soluble component refers to the relative proportion of the solid content recovered in the extract when the soluble component that can be removed to the maximum is 100%, and the formula “( A value calculated by (g) x its brix [Bx] / (soluble component which can be removed to the maximum (g) x its brix [Bx]) x 100 (%).
  • the term “extractable amount when 10 times of extraction with 30 times the amount of hot water with respect to the weight of the plant is repeated 10 times” is described as “a soluble component which can be removed to the maximum”. It shall be.
  • Bx referred to in the present specification can be measured by a commercially available Bx measuring instrument.
  • the pre-extraction of the plant may be performed only once or may be performed multiple times. Although the extract obtained by pre-extraction may be discarded, it can be used by blending it with foods and drinks, for example, it is mixed with the plant extract containing diketopiperazine obtained by the present invention and blended with foods and drinks It can also be done.
  • diketopiperazine is produced by treating such a vegetable peptide in a liquid at high temperature and pressure.
  • Pure water can be suitably used as the liquid in the high-temperature and high-pressure treatment, but an organic solvent such as ethanol can also be suitably contained therein.
  • the hardness can be appropriately adjusted by adding a mineral component to the extraction solvent.
  • the liquid brix (Bx) to be subjected to the heat treatment is preferably concentrated or diluted as necessary to be about 0.1 to 50.
  • high temperature and pressure means a temperature of 100 ° C. or more and a pressure exceeding atmospheric pressure.
  • a pressure-resistant extractor As the high-temperature high-pressure extractor, a pressure-resistant extractor, a pressure cooker, an autoclave or the like can be used according to the conditions.
  • the temperature of the high temperature and high pressure is preferably 100 to 170 ° C., more preferably 110 to 150 ° C., and particularly preferably 120 to 140 ° C.
  • this temperature shows the value which measured the outlet temperature of the extraction column when using a pressure-resistant extraction device as a heating device, and when using an autoclave as a heating device, the temperature of the central temperature in a pressure vessel Indicates the measured value.
  • the pressure is preferably 0.101 to 0.79 MPa, and more preferably 0.101 to 0.48 MPa.
  • the heating time is preferably 30 to 500 minutes, and more preferably about 60 to 300 minutes.
  • More optimal heat treatment conditions are in the time and temperature range surrounded by the following coordinate systems (i) to (Vi) in a coordinate system in which the horizontal axis is time (min.) And the vertical axis is temperature (° C.) It is a heat treatment held by
  • the composition of diketopiperazine in the plant extract contained in the high concentration of diketopiperazine obtained differs depending on the origin of the vegetable peptide (kind of plant used as a raw material) and the type of enzyme, the liquid of the vegetable peptide of the present invention Cycloalanylglutamine (CAS Registry Number: 268221-76-7; Cyclo (Ala-Gln)), cyclohistidyl proline (CAS Registry Number: 53109-32-3; Cyclo (His) by -Pro)), cycloalanylalanine (CAS Registry Number: 5845-61-4; Cyclo (Ala-Ala)), cycloglycylproline (CAS Registry Number: 3705-27-9; Cyclo (Gly-Pro)) , Cycloseryl tyrosine (CAS Registry Number: 21754-31-4; Cyclo (Ser-Tyr)), cycloprolyl threonine (CAS Registry Number: 227777-31-3; Cyclo (Pro-Thr)),
  • the present invention is advantageous for producing a plant extract containing a high concentration of diketopiperazine containing relatively high concentrations of Cyclo (Leu-Leu) and Cyclo (Leu-Phe).
  • the present invention is also advantageous for the production of plant extracts containing high concentrations of Cyclo (Phe-Phe).
  • the present invention is a method for producing a plant extract containing diketopiperazine in high concentration, including cyclo (Leu-Leu) and cyclo (Phe-Phe), and in another aspect the present invention , Specific diketopiperazines (eg, Cyclo (Ala-Ala), Cyclo (Leu-Phe), Cyclo (Leu-Leu), Cyclo (Phe-Phe)).
  • Plant extract refers to a liquid extract
  • plant extract refers to a liquid extract obtained by subjecting a plant to an extraction treatment or a processed product thereof.
  • a plant extract having a content of 10 ⁇ g / 100 g / Bx or more per Bx is obtained, wherein one or more of (Trp) and Cyclo (Phe-Phe) are used.
  • the total amount of diketopiperazines is 900 ⁇ g / 100 g or more, preferably 1000 ⁇ g / 100 g or more, more preferably 2000 ⁇ g / 100 g or more, particularly preferably 5000 ⁇ g / 100 g or more.
  • the total amount of diketopiperazines is cyclo (Ala-Gln), cyclo (His-Pro), cyclo (Ala-Ala), cyclo (Gly-Pro), cyclo Ser-Tyr), Cyclo (Pro-Thr), Cyclo (His-Phe), Cyclo (Ala-Pro), Cyclo (Phe-Ser), Cyclo (Gly-Leu), Cyclo (Gly-Phe), Cyclo (Pro) -Pro), Cyclo (Gly-Trp), Cyclo (Asp-Phe), Cyclo (Val-Pro), Cyclo (Pro-Tyr), Cyclo (Met-Pro), Cyclo (Met-Met), Cyclo (Val- Val), Cyclo (Leu-Pro), Cyclo (Trp-Tyr), Cyclo (Phe-Pro), Cyclo (Leu-Trp), Cyclo (Phe-Trp), Cyclo (Leu-Phe), Cyclo (Leu-Leu) And Cycloclo (Ala-Gln),
  • extracts with high Bx mean that various substances derived from raw materials (for example, bitter components) are contained at high concentrations, and they are not only unsuitable for beverages, but also have an effect on flavor and texture, etc. It is also unsuitable for the addition to the beverage. Therefore, when considering addition to a beverage, Bx is preferably lower.
  • a plant extract containing a large amount of a biologically active substance, diketopiperazine, and having a low Bx that is, a plant extract having a high ratio of the content of diketopiperazine to Bx can be obtained.
  • the ratio of the total amount (unit: ⁇ g / 100 g) of the diketopiperazine to the brix (Bx) is 900 ( ⁇ g / 100 g / Bx) or more, preferably 1000 ( ⁇ g / 100 g / Bx) or more A plant extract having preferably 2000 ( ⁇ g / 100 g / Bx), more preferably 5000 ( ⁇ g / 100 g / Bx) is obtained.
  • the upper limit of the diketopiperazine in the extract is not particularly limited and may be appropriately set in consideration of the solubility of the diketopiperazine and the like, but usually 1,000 mg / 100 g or less, preferably 500 mg / 100 g or less, more preferably It is about 200 mg / 100 g or less.
  • Such a plant extract has a good flavor, is free from precipitation and turbidity, and is excellent in appearance, so that it can be used as it is as an extract, a seasoning, a beverage, etc. without any special post-treatment.
  • the plant extract of the present invention although containing a high content of diketopiperazine, has a relatively low Bx, so the amount thereof to be added to food and drink (particularly, beverage) may be small, and It also has the advantage of increasing design freedom.
  • beverages obtained by blending the extract or squeezed juice of plants such as tea beverages, coffee beverages, soy beverages, fruit juice beverages etc. as main components, and soft drinks such as flavored water, mineral beverages, carbonated beverages, It can be blended as it is.
  • the total amount of diketopiperazines is 10 ⁇ g / 100 g or more, preferably 20 ⁇ g / 100 g or more, more preferably 40 ⁇ g / 100 g or more, still more preferably 60 ⁇ g / 100 g or more It is a drink and can obtain a good-flavored drink which does not exhibit bitter taste.
  • the plant extract obtained by the present invention can also be subjected to clarification treatment and the like according to the aspect of the food to be added.
  • clarification treatment and the like according to the aspect of the food to be added.
  • clarification can be easily performed because of the absence of oil and the presence of fiber.
  • a tea extract As a suitable aspect of the plant extract of this invention, a tea extract, a soybean extract, and a malt extract can be illustrated. Hereinafter, these extracts will be described in detail.
  • tea extract refers to a tea extract obtained by extracting tea leaves.
  • the extractable drinkable site part, such as a leaf of a tea leaf manufactured using tea tree (scientific name: Camellia sinensis), a stem, etc. can be used.
  • the form is also not limited, such as large leaf and powdery. Also about the harvest time of a tea leaf, according to the desired flavor, it can select suitably.
  • the plant extract (tea extract) containing a high concentration of diketopiperazine obtained by the present invention is characterized in that the production of by-products is suppressed and the one with good flavor is obtained by producing without going through the fermentation process.
  • tea leaves are steamed non-fermented tea (green tea) such as sencha, sayha, hojicha, gyokuro, covered tea, mulberry tea, cauldron tea such as Ureshino tea, Aoyanagi tea, various Chinese tea, etc. It is preferred to use unfermented tea.
  • the present inventors have measured the diketopiperazine concentration in the tea extract obtained by extracting commercially available tea leaves. As a result, it has been confirmed that the fermented tea is contained in an extremely small amount (approximately 0 to 200 ⁇ g / 100 g / Bx) and that it is hardly contained in green tea (see Table 1; the same).
  • the tea extract of the present invention is a diketopiperazine which is not contained in conventional teas, Cyclo (Ala-Gln), Cyclo (Ala-Ala), Cyclo (Ser-Tyr), Cyclo (Gly-). Trp), one or more of Cyclo (Val-Val), Cyclo (Trp-Tyr), Cyclo (Leu-Trp) and Cyclo (Phe-Phe) at a concentration of 10 ⁇ g / 100 g / Bx or more.
  • the tea extract of the present invention can be exemplified by Cyclo (Ala-Gln), Cyclo (His-Pro), Cyclo (Ala-Ala), Cyclo (Gly-Pro), Cyclo (Ser-Tyr), Cyclo (Pro-Thr) Cyclo (His-Phe), Cyclo (Ala-Pro), Cyclo (Phe-Ser), Cyclo (Gly-Leu), Cyclo (Gly-Phe), Cyclo (Pro-Pro), Cyclo (Asp-Phe), Cyclo (Val-Pro), Cyclo (Pro-Tyr), Cyclo (Met-Pro), Cyclo (Leu-Pro), Cyclo (Phe-Pro), Cyclo (Leu-Phe), and Cyclo (Leu-Leu) Each is contained at a concentration of 0.1 ppm / Bx (10 ⁇ g / 100 g / Bx) or more.
  • each of the above diketopiperazines is contained at a concentration of 0.2 ppm / Bx or more, more preferably 0.3 ppm / Bx or more, still more preferably 0.4 ppm / Bx or more, particularly preferably 0.5 ppm / Bx or more It is a tea extract.
  • the amount of each of Cyclo (Gly-Trp), Cyclo (Val-Val), Cyclo (Trp-Tyr), Cyclo (Leu-Trp), Cyclo (Phe-Trp) and Cyclo (Phe-Phe) was 0.1 ppm / It can be contained at a concentration of Bx (10 ⁇ g / 100 g / Bx) or more, preferably 0.2 ppm / Bx or more, more preferably 0.3 ppm / Bx or more.
  • diketopiperazines having strong bitter taste diketopiperazines such as Cyclo (Leu-Pro) and Cyclo (Phe-Pro) (see JP-A-2010-166911) in coffee beverages, and Cyclo ( Leu-Trp) (Protein Research Encouragement Society Peptide Research Report, No. 2, 1974) is known.
  • the tea extract of the present invention contains the diketopiperazine having such strong bitter taste, the extract itself has almost no bitter taste.
  • the total amount of diketopiperazines per Bx in the tea extract is 900 ⁇ g / 100 g / Bx or more, preferably 900 to 30000 ⁇ g / 100 g / Bx, more preferably 2000 to 25000 ⁇ g / 100 g / Bx, particularly preferably 5000 to 20000 ⁇ g / 100 g It is / Bx.
  • concentration range is advantageous for producing a food or drink to which the function (bioactivity, etc.) possessed by diketopiperazine is added.
  • Such a tea extract can be conveniently produced by subjecting proteins in tea leaves to decomposition treatment to prepare a tea peptide and subjecting it to a high temperature and high pressure treatment in a liquid.
  • the tea leaves are abundantly containing protein at about 25% (5th revision food composition table). Therefore, if this tea leaf protein is degraded with an enzyme such as protease, a tea peptide should be obtained, but even if tea leaf is treated with a protease, not many tea peptides can be obtained. Since 80% or more of the total protein in tea leaves is an insoluble protein, it is preferable to efficiently cause a protein contained in tea leaves to act on a proteolytic enzyme to obtain a tea peptide.
  • the tea extract of the present invention can efficiently decompose water-insoluble proteins, and can easily produce a tea extract containing a high concentration of diketopiperazine.
  • water-insoluble tea protein in tea leaves is not used as a nutrient source, for example, the extraction residue of up to 22,000 tons that is produced at the time of domestic green tea beverage production is mostly discarded as unused resources.
  • the above method for producing a tea extract is also effective for effective use of the tea bowl which has been conventionally discarded.
  • a tea extract containing a high concentration of Cyclo (Leu-Leu), Cyclo (Leu-Phe), and Cyclo (Ala-Ala) can be produced.
  • 10% or more (by weight) of Cyclo (Leu-Leu), 10% or more of Cyclo (Leu-Phe), Cyclo (Ala-Ala) with respect to the total amount of diketopiperazines in the tea extract It is an extract of 7% or more.
  • concentration When these are expressed as concentration, it becomes a tea extract having a concentration of 5.0 ppm / Bx (500 ⁇ g / 100 g / Bx) or more, preferably 8.0 ppm / Bx or more, more preferably 10.0 ppm / Bx or more.
  • the upper limit of these is 50.0 ppm / Bx or less, preferably 40.0 ppm / Bx or less, more preferably 35.0 ppm / Bx or less, and still more preferably 30.0 ppm / Bx or less.
  • the content of Cyclo (Phe-Phe) in the tea extract is preferably 10 ⁇ g / 100 g / Bx or more, 20 ⁇ g / 100 g / Bx or more, 30 ⁇ g / 100 g / Bx or more.
  • soybean extract refers to a liquid obtained by hydrolyzing soybeans and subjecting to extraction processing or milling processing.
  • the soybean (scientific name: Glycine max) which is the raw material can be used without any restriction on the variety and the production area, and it is also possible to use those in the stage of processed products such as crushed products.
  • Glycine max which is the raw material
  • a liquid obtained by adding water to a soybean protein hydrolyzate is also included for convenience.
  • soy protein in soybean accounts for about 30%. Since soy protein is not abundant in water-insoluble protein as tea protein, pretreatment for removing water-soluble protein is not essential, and may be performed as necessary. When there is no pretreatment for removing the water-soluble protein, a plant extract (soybean extract) containing a high concentration of diketopiperazine can be produced more simply by the One-Pot reaction.
  • the present inventors have measured the diketopiperazine concentration in soy peptides in view of the fact that a commercially available soy peptide (powder) is subjected to heat of about 180 to 220 ° C. during spray drying. As a result, it has been confirmed that the commercially available soybean peptide contains an extremely small amount (about 650 ⁇ g / 100 g / Bx) (see Table 2).
  • the soybean extract of the present invention is a diketopiperazine which is not contained in the conventional soybean protein hydrolyzate (soy peptide), Cyclo (Ala-Gln), Cyclo (Ala-Ala), Cyclo (Ser-Tyr) 1) or more of Cyclo (Gly-Trp), Cyclo (Val-Val), Cyclo (Trp-Tyr), Cyclo (Leu-Trp) and Cyclo (Phe-Phe) at a content of 10 ⁇ g / 100 g per Bx. Contain at / Bx or more.
  • the soy bean extract of the present invention includes Cyclo (Ala-Gln), Cyclo (His-Pro), Cyclo (Ala-Ala), Cyclo (Gly-Pro), Cyclo (Ser-Tyr), Cyclo (Pro-Thr) Cyclo (His-Phe), Cyclo (Ala-Pro), Cyclo (Phe-Ser), Cyclo (Gly-Leu), Cyclo (Gly-Phe), Cyclo (Gly-Trp), Cyclo (Asp-Phe), Cyclo (Val-Pro), Cyclo (Pro-Tyr), Cyclo (Met-Pro), Cyclo (Val-Val), Cyclo (Leu-Pro), Cyclo (Trp-Tyr), Cyclo (Phe-Pro), Cyclo (Leu-Trp), Cyclo (Leu-Phe), Cyclo (Leu-Leu) and Cyclo (Phe-Phe) are contained at a concentration of 0.1 ppm / Bx (10 ⁇ g / 100 g / Bx), respectively
  • each of the above diketopiperazines is 0.5 ppm / Bx or more, more preferably 0.7 ppm / Bx or more, still more preferably 0.9 ppm / Bx or more, particularly preferably 1.0 ppm / Bx or more, particularly preferably 1 It is a soybean extract contained at a concentration of 2 ppm / Bx or more.
  • each of Cyclo (Pro-Pro) and Cyclo (Phe-Trp) is 0.1 ppm / Bx (10 ⁇ g / 100 g / Bx) or more, preferably 0.2 ppm / Bx or more, more preferably 0.3 ppm / Bx or more It can be contained at a concentration of
  • This soybean extract (in particular, an extract obtained using soybean or its pulverized material as a raw material) is known as a strongly bitter diketopiperazine such as Cyclo (Leu-Pro), Cyclo (Phe-Pro) and Cyclo (Leu-Trp).
  • a strongly bitter diketopiperazine such as Cyclo (Leu-Pro), Cyclo (Phe-Pro) and Cyclo (Leu-Trp).
  • Cyclo (Leu-Pro) Cyclo (Leu-Pro)
  • Cyclo (Leu-Pro) Despite containing), its bitterness is reduced.
  • an aqueous solution containing the same concentration of Cyclo (Leu-Pro) and Cyclo (Phe-Pro) was prepared, strong bitterness was felt, so that the other coexisting components of diketopiperazine and soybean are in phase. It is considered that the bitter taste of Cyclo (Leu-Pro), and Cyclo (Phe-Pro) and Cyclo (Leu-Trp) is additionally or synergist
  • the soy extract in which the proportion of B) [(B) / (A)] is 1.0 or less (preferably 0.8 or less, more preferably 0.6 or less, particularly preferably 0.5 or less) has a bitter taste.
  • a significantly reduced diketopiperazine-containing extract and can be advantageously incorporated into foods and drinks (particularly, beverages).
  • the total amount of diketopiperazine per Bx in soybean extract is 900 ⁇ g / 100 g / Bx or more, preferably 900 to 30000 ⁇ g / 100 g / Bx, more preferably 2000 to 25000 ⁇ g / 100 g / Bx, particularly preferably 5000 to 20000 ⁇ g / 100 g It is / Bx.
  • concentration range is advantageous for producing a food or drink to which the function (bioactivity, etc.) possessed by diketopiperazine is added.
  • the soybean extract containing the diketopiperazine of the present invention at a high concentration can be produced by sequentially performing the following steps.
  • Steps (y) and (z) may exchange the order.
  • you may add the process (w) which removes water-soluble protein before a process (x).
  • step (x) is (X ') It becomes a process of obtaining a liquid containing a soy peptide by adding water to a soy peptide containing a large amount of di- or tri-peptide.
  • the other conditions of each process are as described above.
  • a soybean extract containing a high concentration of Cyclo (Leu-Leu), Cyclo (Leu-Phe), Cyclo (Ser-Tyr) and Cyclo (Pro-Thr) can be produced.
  • Cyclo (Leu-Leu) is at least 8% (by weight)
  • Cyclo (Leu-Phe) is at least 8%
  • Cyclo (Ser-Tyr) is the total amount of diketopiperazines in soybean extract. It is an extract of 6% or more.
  • the soybean extract is a soybean extract having a concentration of 5.0 ppm / Bx (500 ⁇ g / 100 g / Bx) or more, preferably 6.0 ppm / Bx or more, more preferably 7.0 ppm / Bx or more.
  • a soy bean extract having an amount of 10.0 ppm / Bx or more, preferably 12.0 ppm / Bx or more of Cyclo (Leu-Leu) and Cyclo (Leu-Phe) is obtained.
  • the upper limit of these is 50.0 ppm / Bx or less, preferably 40.0 ppm / Bx or less, more preferably 35.0 ppm / Bx or less, and still more preferably 30.0 ppm / Bx or less.
  • this method provides a soy extract containing 3.0 ppm / Bx or more of Cyclo (Phe-Phe) not contained in soy peptide, preferably 4.0 ppm / Bx or more of Cyclo (Phe-Phe).
  • this method is also advantageous for the preparation of Cyclo (Phe-Phe) (see the examples below).
  • Cyclo (Phe-Phe) is a component with high hydrophobicity, but has been confirmed to be stably maintained in this soybean extract.
  • malt extract refers to an extract obtained by extracting and processing malt or its ground product.
  • malt soybean (malt) used as a raw material can be used without a restriction
  • the barley malt which made the seed of barley sprout especially is used suitably.
  • the high protein content fraction is a method of gradually removing malt from the surface, removing the husk, and then removing the protein-rich fraction such as the aleurone layer and endosperm.
  • the pre-extracted extraction residue can be utilized as was done with tea extract.
  • the extraction residue can be exemplified by malted malted malt produced during beer production.
  • a plant extract containing a high concentration of diketopiperazine can be produced more simply by the One-Pot reaction.
  • the malt extract of the present invention can be a diketopiperazine which is conventionally not extracted, Cyclo (Ala-Gln), Cyclo (Ala-Ala), Cyclo (Ser-Tyr), Cyclo (Gly-Trp), Cyclo (Val-) Val), one or more of Cyclo (Trp-Tyr), Cyclo (Leu-Trp) and Cyclo (Phe-Phe) at a concentration of 10 ⁇ g / 100 g / Bx or more.
  • the malt extract of the present invention includes Cyclo (Ala-Gln), Cyclo (His-Pro), Cyclo (Ala-Ala), Cyclo (Gly-Pro), Cyclo (Ser-Tyr), Cyclo (Pro-Thr) , Cyclo (His-Phe), Cyclo (Ala-Pro), Cyclo (Phe-Ser), Cyclo (Gly-Leu), Cyclo (Gly-Phe), Cyclo (Gly-Trp), Cyclo (Asp-Phe), Cyclo (Val-Pro), Cyclo (Pro-Tyr), Cyclo (Met-Pro), Cyclo (Val-Val), Cyclo (Leu-Pro), Cyclo (Trp-Tyr), Cyclo (Phe-Pro), Cyclo (Leu-Trp), Cyclo (Leu-Phe), Cyclo (Leu-Leu) and Cyclo (Phe-Phe) are contained at a concentration of 0.1 ppm / Bx (50 ⁇ g / 100 g / Bx
  • each of the above diketopiperazines is contained at a concentration of 0.3 ppm / Bx or more, more preferably 0.4 ppm / Bx or more, still more preferably 0.5 ppm / Bx or more, particularly preferably 0.6 ppm / Bx or more It is a malt extract.
  • this malt extract contains Cyclo (Leu-Pro), Cyclo (Phe-Pro) and Cyclo (Leu-Trp), which are known as strong bitter diketopiperazines, the bitter taste is reduced.
  • a malt extract having a ratio of (B) / (B) / (A) of 1.0 or less (preferably 0.8 or less) is a diketopiperazine-containing extract with significantly reduced bitter taste, and It can be advantageously incorporated into (especially, beverages).
  • the total amount of diketopiperazines per Bx in malt extract is 900 ⁇ g / 100 g / Bx or more, preferably 900 to 30000 ⁇ g / 100 g / Bx, more preferably 2000 to 25000 ⁇ g / 100 g / Bx, particularly preferably 5000 to 20000 ⁇ g / 100 g It is / Bx.
  • concentration range is advantageous for producing a food or drink to which the function (bioactivity, etc.) possessed by diketopiperazine is added.
  • the malt extract containing the diketopiperazine of the present invention at a high concentration can be produced by sequentially performing the following steps.
  • (X) allowing an endo-type protease to act on malt or malt protein hydrolyzate in the presence of water to obtain a liquid containing malt peptide
  • (Y) a step of obtaining a reaction solution by subjecting a solution containing malt peptide to high temperature and high pressure
  • Steps (y) and (z) may exchange the order.
  • you may add the process (w) which removes water-soluble protein before a process (x). The other conditions of each process are as described above.
  • a malt extract containing a high concentration of Cyclo (Leu-Leu), Cyclo (Leu-Phe) and Cyclo (Ala-Ala) can be produced. Specifically, it becomes a malt extract having a concentration of 5.0 ppm / Bx (500 ⁇ g / 100 g / Bx) or more, preferably 6.0 ppm / Bx or more, more preferably 7.0 ppm / Bx or more. .
  • the upper limit of these is about 50.0 ppm / Bx or less, preferably 40.0 ppm / Bx or less, more preferably 30.0 ppm / Bx or less, and still more preferably about 20.0 ppm / Bx or less.
  • Example 1 Preparation of diketopiperazine from vegetable peptide Using soy peptide and sesame peptide as a vegetable peptide, high-temperature and high-pressure treatment was carried out in liquid to produce a plant extract containing high concentration of diketopiperazine. . Specifically, 15 ml of distilled water is added to 3 g of soybean peptide (Hynew AM, manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.) and sesame peptide (KM-20, manufactured by KISCO), and the mixture is placed in an autoclave (manufactured by Tomy Seiko Co., Ltd.) High temperature and high pressure treatment at 135 ° C., 0.31 MPa for 3 hours.
  • the same peptide was used to prepare one that was not subjected to high temperature and high pressure treatment. 10 ml of the treated liquid was diluted 50 times and subjected to membrane treatment, and subjected to LC-MS / MS to determine various diketopiperazine concentrations. Details of the analysis conditions are as follows. In addition, Brix (Bx) of a plant extract containing a high concentration of diketopiperazine was measured using a digital refractometer RX-5000a (manufactured by ATAGO), and the total amount of diketopiperazine (unit: ⁇ g / 100 g) and the brix were measured. The ratio of (Bx) was calculated.
  • Table 3 shows the results. There was a difference in the degree of formation of cyclophenylalanyl phenylalanine depending on the type of peptide.
  • the soy peptide produced cyclophenylalanyl phenylalanine at a higher concentration than when using the rice peptide or the wheat peptide. From this, it was suggested that it is preferable to use a soy peptide having a high proportion of peptides having a molecular weight of 5000 or less (in particular, a molecular weight of 1000 or less). In addition, it was suggested that it is preferable to use an oligopeptide having a smaller molecular weight and having a large amount of di-tripeptide as a raw material in comparison with soybean peptides.
  • Example 3 Production of diketopiperazine from protein of plant origin A plant-derived protein subjected to an enzyme decomposition treatment was used as a raw material.
  • soybean protein Prorina 900 (manufactured by Fuji Oil Co., Ltd.)
  • rice protein Oriza protein P70 (manufactured by Oriza Oil Co., Ltd.)
  • 300 mg of protein was added to 15 ml of distilled water.
  • Enzyme A Proteax
  • Enzyme B Neuropeptidase
  • Enzyme C Paperain W-40; Protease from Carica papaya
  • Enzyme D Protease A “Amano "SD: protease from Aspergillus sp.”
  • Enzyme E protetease M "Amano”SD; protease from Aspergillus sp.
  • Enzyme F protetease P "Amano"3SD; protease from Aspergillus sp.
  • Enzyme G Protease from Aspergillus sp.
  • Promeline F protease from Ananas comosus
  • Enzyme H Puroase PC10F; Protease from Bacillus stearothermophilus (endopeptidase)
  • Enzyme J Protin SD
  • this enzyme-treated solution was heat-treated without solid-liquid separation.
  • the heat treatment was performed at 132 ° C. for 2 hours in an autoclave (manufactured by Tomy Seiko Co., Ltd.) for 2 hours.
  • soybean protein and rice protein were similarly processed without being treated with enzymes.
  • 10 ml of treated liquid is subjected to solid phase extraction using OASIS MAX (manufactured by Waters), the obtained solid phase extract is concentrated under reduced pressure, dissolved in 100 ⁇ l of DMSO, 10 ⁇ l of which is used for high performance liquid chromatography (HPLC The concentration of cyclophenylalanyl phenylalanine was determined by
  • soybean protein The results for soybean protein are shown in FIG. 1, and the results for rice protein are shown in FIG.
  • Treatment with no enzyme also produced diketopiperazine by heating.
  • There was a difference in the degree of formation of cyclophenylalanyl phenylalanine depending on the type of enzyme and it was found that it tended to be produced more when using a protease derived from Bacillus sp.
  • Example 4 Production of Diketopiperazine from Plant (1)
  • Kagoshima prefecture variety: Yabukita, total nitrogen: 6.3%) were used.
  • the tea leaves were first subjected to pretreatment (three pretreatments) to reduce water-soluble proteins. That is, 200 g of hot water was added to 10 g of tea leaves, and the mixture was appropriately stirred and extracted for 5 minutes. After completion of the extraction, the resultant was filtered through 140 mesh to recover an extraction residue (tea pot). To this tea bowl, 200 g of hot water was poured and extraction was performed for 5 minutes to recover the tea bowl. Again, this tea bowl was subjected to the same extraction process to recover the tea bowl.
  • the tea leaves (tea pots) subjected to this pre-extraction were subjected to enzymatic degradation treatment.
  • Pour 200 g of hot water at 50 ° C into a teacup (total amount) add 1 g of protease (trade name: Protin NY 100, manufactured by Daiwa Kasei Co., Ltd.), and stir with a stirrer (300 rpm) in a water bath at 55 ° C. Reaction for 3 hours. Thereafter, the enzyme was inactivated by maintaining at 95 ° C. for 30 minutes.
  • protease trade name: Protin NY 100, manufactured by Daiwa Kasei Co., Ltd.
  • the enzyme-treated solution was subjected to a heat treatment in the form of a tea leaf liquid mixture without solid-liquid separation.
  • the heat treatment was carried out in an autoclave (manufactured by Tomy Seiko Co., Ltd.) and heat treatment with a high temperature high pressure fluid at 135 ° C. for 3 hours.
  • the treated liquid was filtered through 140 mesh to obtain a tea extract (Extract A).
  • the tea extract (Extract A) (Bx 0.99) was analyzed for diketopiperazine in the extract in the same manner as in Example 1.
  • Table 4 shows the results. It has been found that by subjecting a tea leaf (tea pot) to a high temperature and high pressure treatment in a liquid, a tea extract containing a high concentration of a plant extract containing a high concentration of diketopiperazine can be conveniently produced.
  • Example 5 Production of Diketopiperazine from Plant (2)
  • Commercially available boiled soybeans and malt were used as plants. After pre-extracting boiled soybeans and malt three times with 20 times the amount of hot water with respect to the dry weight of the plant (soy) as in Example 4, respectively, the same enzyme treatment as in Example 3 And high-temperature and high-pressure treatment in a liquid to obtain soybean extract (extract B) and malt extract (extract C). In addition, based on the 5th revision data, the dry weight of soybean was converted as 36.5% of the total amount of boiled soybeans.
  • Extract B and Extract C analysis of diketopiperazine in the extract was performed in the same manner as Example 1 after adjusting Bx to 1. Table 5 shows the results. It has been found that plant extracts containing diketopiperazine at high concentrations can also be conveniently produced from soybeans and malt.
  • Example 6 Preparation of Diketopiperazine from Plant (3) As a plant, using the same tea leaf as in Example 4, the influence of pre-extraction, enzyme treatment and heat treatment was examined. The samples are shown in Table 6. Sample No. 5 and 6 show that heat treatment is carried out simultaneously with the steps of producing an oligopeptide from a plant and cyclizing the oligopeptide by high-temperature and high-pressure treatment in a liquid to produce a dipeptide. The pre-extraction is carried out in the same manner as in Example 4 except that the number of times is twice, the enzyme treatment is carried out at a reaction temperature of 50 ° C., and the heat treatment is carried out in the same manner as in Example 4 I went to. The obtained tea extract (samples. 1 to 8) was analyzed using LC-MS / MS in the same manner as in Example 1.
  • Table 7 shows the results. It was revealed that diketopiperazine was not formed without the high temperature and high pressure treatment in the liquid (Sample Nos. 1 to 4). Further, the following findings were obtained by comparing sample Nos. 5 to 8. Pre-treatment (extraction treatment) increased the concentration of diketopiperazine in the obtained tea extract.
  • the oligopeptide can be obtained by either heat treatment or enzyme treatment, but the enzyme treatment was more effective and efficient.
  • a plant extract (tea extract) was obtained which contained a significantly large amount of diketopiperazine per Bx of 900 ⁇ g / 100 g / Bx or more. From this, it was suggested that the present invention is advantageous for plant extract containing diketopiperazine at high concentration and its production.
  • cyclo (Phe-Phe) was generated by performing pretreatment and enzyme treatment. From this, it was suggested that according to the present invention, a plant extract (tea extract) having a content of Cyclo (Phe-Phe) per Bx of 10 ⁇ g / 100 g / Bx or more can be obtained. Highly hydrophobic Cyclo (Phe-Phe) could be kept stable in the extract (in aqueous solution).
  • Example 7 Preparation of Diketopiperazine from Plant (4)
  • the number of pre-extraction was examined.
  • the first tea leaves from Kagoshima prefecture variety: Yabukita, total nitrogen: 6.3%) were used.
  • examination of the optimal number of pre-extractions was performed.
  • Pre-extraction was carried out in the following manner. To 10 g of tea leaves, 200 g of hot water was added, and the mixture was appropriately stirred and extracted for 5 minutes. After completion of the extraction, the solution was filtered through 140 mesh and the extract was discarded.
  • the obtained tea leaf liquid mixture was placed in an autoclave (Tomy Seiko), and the liquid after high temperature and high pressure treatment at 135 ° C. for 8 hours was filtered through 140 mesh to obtain a tea extract.
  • Each extract obtained was subjected to Bx measurement, and the concentration of diketopiperazine was quantified using LC-MS / MS in the same manner as in Example 1.
  • Table 8 shows the results. Depending on the number of pre-extractions, the amount of diketopiperazine produced increased. The relationship between the number of previous extractions and the removal rate of the soluble component is shown in FIG.
  • the removal rate of the soluble component can be determined by extracting the formula “((collected volume obtained by pre-extraction (total amount) (g) ⁇ the brix [Bx]) / (30 times amount of hot water with respect to the weight of the plant for 10 minutes The operation was repeated 10 times, and the amount of liquid collection (g) ⁇ the brix [Bx]) ⁇ 100 (%) was calculated. It was found that soluble components could be removed by 95% or more by repeating pre-extraction three times.
  • Example 8 Production of Diketopiperazine from Plant (5) Since the usefulness of the enzyme treatment was confirmed in Example 6, the type of enzyme was examined. The following enzymes were examined. ⁇ Sample No. 9> Protin NY 100: Protease (endopeptidase) derived from Bacillus amyloliquefaciens ⁇ Sample No. 10> Thermoase 160: Thermostable protease (endopeptidase) derived from Bacillus stearothermophilus ⁇ Sample No. 11> Thermoase PC10F: Protease (endopeptidase) derived from Bacillus stearothermophilus ⁇ Sample No.
  • Proteax neutral protease from Aspergillus oryzae ⁇ Sample No. 13>
  • Protease M neutral protease from Ananas comosus ⁇ Sample No. 14>
  • Protease P alkaline protease from Aspergillus melleus ⁇ sample No. .15>
  • Protease A Neutral protease from Aspergillus oryzae ⁇ Sample No. 16>
  • Peptidase R Neutral protease from Rhizopus oryzae ⁇ Sample No.
  • Neulase F3G Acid protease from Rhizopus niveus (endopeptidase)
  • Kagoshima prefecture variety: Yabukita, total nitrogen: 6.3%) were used.
  • the enzyme was inactivated by holding at 95 ° C. for 30 minutes.
  • the obtained tea leaf liquid mixture was placed in an autoclave (Tomy Seiko) and subjected to high temperature and high pressure treatment at 135 ° C. for 8 hours.
  • the treated liquid was filtered through 140 mesh to obtain a tea extract.
  • Each extract obtained was subjected to Bx measurement, and the concentration of diketopiperazine was quantified by LS-MS / MS measurement in the same manner as in Example 1.
  • Table 9 shows the results. It was found that the concentration of diketopiperazine was significantly increased when an enzyme having high endopeptidase activity was used as the enzyme derived from bacteria. Among enzymes derived from bacteria, the production amount of diketopiperazine was particularly increased when using a neutral protease derived from Bacillus subtilis or a protease derived from Bacillus stearothermophilus.
  • Example 9 Preparation of Diketopiperazine from Plant (6)
  • a tea extract was produced in the same manner as in Example 4 except that the enzyme (Protin NY100) concentration for tea leaves was changed to 0 to 20%.
  • the sensory evaluation was carried out, and the contents of 17 diketopiperazines shown in Table 10 were quantified using LC-MS / MS in the same manner as Example 1, and the total amount was determined. .
  • Table 10 shows the results.
  • the enzyme concentration was suggested to be in the range of 1 wt% to 20 wt%, preferably 3 wt% to 15 wt%, more preferably 4 wt% to 10 wt% with respect to the plant material.
  • the extract itself had almost no flavor and was an extract that could be used by being mixed with food and drink.
  • the flavor of the combination of pre-extraction, enzyme treatment and heat treatment was excellent.
  • Example 10 Preparation of Diketopiperazine from Plant (7)
  • a tea extract was produced in the same manner as in Example 4 except that the conditions for the high temperature and high pressure treatment were changed. Specifically, the same amount of tea leaves as in Example 4 was used as a plant. The pre-extraction is changed from 20 volumes of water to 30 volumes of water and repeated three times to obtain a tea leaf (tea cup), subjected to the same enzyme treatment as in Example 4, and using the same heat treatment apparatus as in Example 4. The heat treatment was performed under various heating conditions shown in Table 11. The obtained tea extract was analyzed for diketopiperazine in the extract in the same manner as in Example 1.
  • Table 11 shows the results. It was suggested that heating of 100 ° C. or more (preferably 115 ° C. or more, more preferably 125 ° C. or more) is necessary to produce diketopiperazine. The heating time was suggested to be about 30 minutes to 10 hours, preferably about 2 to 8 hours.
  • Example 11 Preparation of diketopiperazine-containing food and drink
  • a sensory evaluation of flavor was performed on these tea beverages. Evaluation is judged by overall preference mainly on bitterness, ⁇ : very good flavor, :: good flavor, :: drinkable flavor, x somewhat difficult to drink flavor, ⁇ : drinkable It went in five stages of a very difficult flavor.
  • Table 12 shows the results. It was confirmed that all the tea beverages containing 0 to 50 g of the tea extract A of Example 4 as a diketopiperazine mixture per 500 g of the beverage have good flavor. From this, it was suggested that the tea extract obtained in the present invention is a highly versatile material in the formulation of beverage flavor.

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Abstract

　飲食物への配合に適したジケトピペラジン混合体とその製造法を提供する。　植物性ペプチドを液体中で高温高圧処理することにより、シクロロイシルロイシン及びシクロロイシルフェニルアラニンを含むジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスが製造できる。本発明によれば、植物性天然物由来の香味に優れたジケトピペラジンが得られ、そのまま飲食物に配合してジケトピペラジンの有する機能が付加された飲食物を製造することができる。

Description

ジケトピペラジンを含有する植物エキス及びその製造方法
　本発明は、ジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキス及びその製造方法に関する。
　アミノ酸が二つ結合した「ジペプチド」が機能性物質として注目されている。ジペプチドは単体アミノ酸にない物理的性質や新たな機能を付加することが可能であり、アミノ酸以上の応用範囲を有するものとして期待されている。特に、環状のジペプチドであるジケトピペラジンは、抗菌作用や抗酸化作用（非特許文献１，２）、学習意欲改善作用（特許文献１）などの様々な生理活性を持つことが知られており、医療・薬理分野において需要が拡大することが予想されている。
　通常、ジケトピペラジンは、化学合成法（非特許文献３）や酵素法（非特許文献２，４）などで製造されている。また、直鎖ペプチドを超臨界領域又は亜臨界領域にある高温高圧水で脱水・環化反応させることにより、任意のアミノ酸配列を持った環状ペプチドを合成する方法（特許文献２）、直鎖ジペプチド又は直鎖トリペプチドを水溶媒中で加熱処理して環状ジペプチドを製造する方法（特許文献３，４）も提案されている。
特表２０１２－５１７９９８号公報 特開２００３－２５２８９６号公報 韓国公開特許１０－２０１１－０１２００５１ 特許５４５６８７６号公報 特開２０１０－１６６９１１号公報 特表２０１２－５１７２１４号公報
Peptides, 16(1), 151-164 (1995) バイオサイエンスとインダストリー, 60(7), 454-457 (2002) J. Comb, Chem., 3, 453-460 (2001) Chemistry Biology, 8, 997-1010 (2001) Agr. Biol. Chem., 38 (5), 927-932 (1974)
　このように、生体内で種々の生理活性が期待されるジケトピペラジンであるが、天然由来のジケトピペラジンや、ジケトピペラジンを高濃度に含有する食品はほとんど存在していない。天然由来のジケトピペラジンとしては、シェリー酒、紹興酒、醤油、みりん、酢等の発酵食品中にジケトピペラジンが存在することが知られている（非特許文献５）が、その含有量は極微量であり、これらの食品をジケトピペラジンの有する機能性を期待して摂取するには、相当量を摂取しなければならず、何れも実用性に乏しいものである。また、Cyclo（Pro-Phe）やCyclo（Pro-Leu）を含有するコーヒー飲料も知られている（特許文献５）が、これらのジケトピペラジンは苦味が強く、他の飲料に応用するのは難しい。
　さらに、コラーゲンや蓄肉などの動物性タンパク質を起源とする、ジケトピペラジンを比較的多く含有する組成物も知られている（特許文献４，６）。しかし、これら動物性タンパク質を起源とするジケトピペラジン含有組成物を、茶飲料、コーヒー飲料、大豆飲料、果汁飲料等の植物の抽出液又は搾汁液等を主成分として配合して得られる飲料や、フレーバードウォーター、ミネラル飲料、炭酸飲料などの清涼飲料に、そのまま使用することは香味の影響から難しい。
　本発明の目的は、天然由来であって安全性が高いジケトピペラジンを高濃度で含有する香味良好なエキスとその製造法を提供することにある。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、タンパク質を含有する植物体に分解処理を施して植物性ペプチドを生成させ、この植物性ペプチドを液体中で高温高圧処理することにより、高濃度にジケトピペラジンを含有する植物エキスが製造できることを見出した。そして、この植物エキスが風味良好であることを確認し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は、以下に関する。
（１）シクロアラニルグルタミン、シクロアラニルアラニン、シクロセリルチロシン、シクログリシルロイシン、シクログリシルトリプトファン、シクロバリルバリン、シクロトリプトファニルチロシン、シクロロイシルトリプトファン及びシクロフェニルアラニルフェニルアラニンのいずれか一以上を、１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上の濃度で含有する、植物エキス。
（２）Ｂｘあたりのジケトピペラジンの総量が、９００μｇ/１００g/Ｂｘ以上である、（１）記載の植物エキス。
（３）植物エキスが、茶エキス、大豆エキス又は麦芽エキスである、（１）または（２）記載の植物エキス。
（４）タンパク質を含有する植物体に分解処理を施して植物性ペプチドを生成させ、この植物性ペプチドを液体中で高温高圧処理することにより得られる植物エキス。
（５）植物性ペプチドを、液体中で高温高圧処理する工程を含む、シクロロイシルロイシン及びシクロロイシルフェニルアラニンを含むジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスの製造方法。
（６）高温高圧処理工程での加熱条件が、１００～１７０℃の液体中で３０～数時間である、（５）に記載の製造方法。
（７）植性ペプチドがオリゴペプチドである、（５）又は（６）に記載の製造方法。
（８）植物性ペプチドが、植物由来のタンパク質又はタンパク質を含有する植物体に分解処理を施して得られたものである、（５）～（７）のいずれかに記載の製造方法。
（９）分解処理が加熱処理または酵素処理である、（８）に記載の製造方法。
（１０）分解処理が酵素処理であり、酵素がエンド型プロテアーゼである、（９）記載の製造方法。
　本発明によれば、天然由来であって安全性が高いジケトピペラジンを高濃度で含有する植物エキスを、大量生産規模で煩雑な工程や複雑な設備を伴うことなく簡便に製造することができる。
図1は、大豆タンパク質を用いて得られた植物ペプチド加工品中のシクロフェニルアラニルフェニルアラニン濃度の定量結果を示す。 図２は、米タンパク質を用いて得られた植物ペプチド加工品中のシクロフェニルアラニルフェニルアラニン濃度の定量結果を示す。 図３は、前抽出の回数と可溶性成分の除去率の関係を示す。
　（植物性ペプチド）
　本発明の植物エキスは、植物性ペプチドを液体中で高温高圧処理して製造することが可能である。ここで、本明細書における「植物性ペプチド」とは、特に断りがない限り、植物由来のタンパク質又はタンパク質を含む植物体に既知の分解処理（熱や圧力による分解処理、酸やアルカリによる分解処理、酵素による分解処理等）を施して低分子化（オリゴペプチド）することにより生じるアミノ酸が数個つながったペプチドをいう。
　本発明の植物性ペプチドには、大豆ペプチド、大麦ペプチド、小麦ペプチド、小麦胚芽ペプチド、エンドウペプチド、コメペプチド等を用いることができる。後述するように植物由来のタンパク質又はタンパク質を含む植物体から植物性ペプチドを調製して用いてもよいが、市販品を用いてもよい。市販の植物性ペプチドとしては、例えばハイニュートＡＭ、ハイニュートＤＣ、ハイニュートＨＫ（以上、不二精油社製）などの大豆ペプチド、オリザペプチドＰ６０（オリザ油化社製）などのコメペプチド、グルタミンペプチドＧＰ－１Ｎ、グルタミンペプチドＧＰ－Ｎ（以上、日清ファルマ社製）などの小麦ペプチド、ゴマペプチドＫＭ－２０（KISCO社製）などのゴマペプチドを例示できる。
　本発明者らの検討によると、ペプチドの大きさにより得られるジケトピペラジン混合物の収率に差が生じる。植物性ペプチドは、分子量５０００以下のペプチドの割合が高いものを用いるのが好ましく、分子量３０００以下のペプチドの割合が高いものを用いるのがより好ましく、分子量１０００以下のペプチドの割合が高いものを用いるのが特に好ましい。また、アミノ酸スコアの高い大豆を用いると、複数種のジケトピペラジンがより高い濃度で生成することから、大豆ペプチドは好ましい態様の一例である。
　本発明の植物性ペプチドには、植物由来のタンパク質や、タンパク質を含む植物体を原料として製造されるペプチド混合体を用いることができる。具体的には、大豆タンパク質、小麦タンパク質、小麦胚芽タンパク質、米タンパク質、ゴマたんぱく質等の植物由来のタンパク質や、緑茶葉などの葉類、大麦、小麦、麦芽、胡麻、米などの種子類、大豆、小豆、黒豆などの豆類、さつまいも、じゃがいもなどの芋類など、タンパク質を含有し飲食可能な植物体を原料として、既知の分解処理（熱や圧力による分解処理、酸やアルカリによる分解処理、酵素による分解処理等）を施して製造されるペプチド混合体を挙げることができる。これらタンパク質を含む植物体の中でも、本発明では大豆、麦芽、茶葉が好適に用いられる。特に、大豆や茶葉を用いることが好ましく、茶葉を用いることがより好ましい。　上記の植物由来のタンパク質や、タンパク質を含む植物体を原料として分解処理を施し、植物性ペプチドであるペプチド混合体を得るが、この分解処理は、オリゴペプチドが生成される条件下で行う。具体的には、分子量５０００以下のペプチド（好ましくは分子量３０００以下のペプチド、より好ましくは分子量１０００以下のペプチド）の割合が高くなるように、分解処理を行う。
　分解処理は、目的とするオリゴペプチドの生成のしやすさ（反応速度の速さ）、多量処理の容易さから、熱による分解処理および／又は酵素による分解処理が好ましく、特に酵素による分解処理（以下、酵素処理）が好適に用いられる。
　加熱による分解処理を行う場合、植物体やタンパク質の焦げを防止するため、溶媒中で行う。その量は、通常、植物体１質量部あたり溶媒を１０～１００質量部、好ましくは１５～８０質量部、より好ましくは２０～６０質量部、特に好ましくは２０～４０質量部程度である。溶媒としては、水、エタノール、またはこれらの混合物等を用いるのが好ましく、特に水を用いるのが好ましい。加熱条件は、ペプチドが生成される条件であれば特に限定されない。加熱条件として１００℃以上、さらに１２５℃以上の温度で、３０分～数時間、好ましくは２～７時間程度の加熱を例示できる。加熱処理装置としては、圧力鍋、オートクレーブなどを条件に合わせて用いることができる。なお、この加熱処理は、本発明の「液体中での高温高圧処理工程」と同時に行うことができる。
　酵素処理により植物性ペプチドを製造する場合、酵素には、タンパク質分解酵素（プロテアーゼ）が用いられるが、エンド型分解活性の強いプロテアーゼを用いることが好ましい。プロテアーゼは、また、作用至適ｐＨの差異によりアルカリ性プロテアーゼ、中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼの３種類に大別される。さらにプロテアーゼの起源としては、植物起源、動物起源あるいは微生物起源のものがあるが、酵素起源および至適ｐＨは、分解効率が悪い場合や得られた分解抽出液の香味が悪かった等の悪影響がない限り、特に限定されるものではない。
　例えば、本発明の使用可能な細菌由来のプロテアーゼとして、プロテアーゼＮ、プロテアーゼＮＬ、プロテアーゼＳ、プロレザー（登録商標）ＦＧ－Ｆ、（以上、アマノエンザイム社製）；プロチンＮＹ、プロチンＰ、デスキン、デピレイス、プロチンＡ、サモアーゼ（登録商標）（以上、大和化成社製）；ビオプラーゼ（登録商標）ＸＬ－４１６Ｆ、ビオプラーゼ（登録商標）ＳＰ－４ＦＧ、ビオプラーゼ（登録商標）ＳＰ－１５ＦＧ（以上、ナガセケムテックス社製）；オリエンターゼ（登録商標）９０Ｎ、ヌクレイシン（登録商標）、オリエンターゼ（登録商標）１０ＮＬ、オリエンターゼ（登録商標）２２ＢＦ（以上、エイチビィアイ社製）；アロアーゼ（登録商標）ＡＰ－１０（ヤクルト薬品工業社製）；プロタメックス（登録商標）、ニュートラーゼ（登録商標）、アルカラーゼ（登録商標）（以上、ノボザイムズ社製）；ＣＯＲＯＬＡＳＥ Ｎ、ＣＯＲＯＬＡＳＥ ７０８９、ＶＥＲＯＮ Ｗ、ＶＥＲＯＮ Ｐ（以上、ＡＢエンザイム社製）；エンチロンＮＢＳ（洛東化成工業社製）；アルカリプロテアーゼＧＬ４４０、ピュラフェクト（登録商標）４０００Ｌ、プロテアーゼ８９９、プロテックス６Ｌ（以上、ジェネコン協和社製）などが挙げられる。また、本発明の使用可能な麹菌由来のプロテアーゼとして、プロテアーゼＡ、プロテアーゼＭ、プロテアーゼＰ、ウマミザイム、ぺプチダーゼＲ、ニューラーゼ（登録商標）Ａ、ニューラーゼ（登録商標）Ｆ（以上、天野エンザイム社製）；スミチーム（登録商標）ＡＰ、スミチーム（登録商標）ＬＰ、スミチーム（登録商標）ＭＰ、スミチーム（登録商標）ＦＰ、スミチーム（登録商標）ＬＰＬ（以上、新日本化学工業社製）；プロチン（登録商標）ＦＮ（大和化成社製）；デナプシン２Ｐ、デナチーム（登録商標）ＡＰ、ＸＰ－４１５（以上、ナガセケムテックス社製）；オリエンターゼ（登録商標）２０Ａ、オリエンターゼ（登録商標）ＯＮＳ、テトラーゼ（登録商標）Ｓ（以上、エイチビィアイ社製）；モルシン（登録商標）Ｆ、ＰＤ酵素、ＩＰ酵素、ＡＯ－プロテアーゼ（以上、キッコーマン社製）；サカナーゼ（科研ファルマ社製）パンチダーゼ（登録商標）ＹＰ－ＳＳ、パンチダーゼ（登録商標）ＮＰ－２、パンチダーゼ（登録商標）Ｐ（以上、ヤクルト薬品工業社製）；フレーバザイム（登録商標）（ノボザイムズジャパン社製）；コクラーゼ（登録商標）ＳＳ、コクラーゼ（登録商標）Ｐ（以上、三共ライフテック社製）；ＶＥＲＯＮ ＰＳ、ＣＯＲＯＬＡＳＥ ＰＮ－Ｌ（以上、ＡＢエンザイム社製）などを挙げることができる。その他、本発明で使用可能なプロテアーゼとして、放線菌由来プロテアーゼ（例えばアクチナーゼ（登録商標）ＡＳ、アクチナーゼ（登録商標）ＡＦ（以上、科研ファルマ社製）、タシナーゼ（登録商標）（ジェネンコア協和社製））や、植物由来プロテアーゼ（例えばパパインＷ－４０（アマノエンザイム社製）、食品用精製パパイン（ナガセケムテックス社製））や、動物由来のペプシン、トリプシンなどを挙げることができる。
　上記のプロテアーゼのなかでも、分解効率や得られるペプチド含有液の香味の観点から、細菌由来のプロテアーゼを用いることが好ましく、バチルス・サブティリス（Bacillus subtilis）由来の中性プロテアーゼや、バチルス・アミ ロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）由来のプロテアーゼや、バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus stearothermophilus）由来のプロテアーゼを用いることがより好ましく、バチルス・サブティリス（Bacillus subtilis）由来の中性プロテアーゼを用いることが特に好ましい。
　このようなプロテアーゼを、植物由来のタンパク質やタンパク質を含む植物体に対して０．１～２０重量％、好ましくは１～１５重量％、より好ましくは３～１０重量％の範囲で用いることが好ましい。上記範囲より添加量が少ない場合は、ペプチド生成収率を向上させる効果を発揮することができず、一方上記範囲より多く添加しても大幅なペプチド生成収率の向上が期待できず、コスト面で不利となる。なお、酵素処理は、植物由来のタンパク質や植物体に水を加え、湿潤させた状態で酵素を作用させる。添加する水の量は、通常、乾燥状態のタンパク質や植物体１質量部あたり水を１０～５０質量部、より好ましくは１０～３０質量部、特に好ましくは１０～２０質量部程度である。
　プロテアーゼによる酵素処理条件は、使用するプロテアーゼの至適条件を鑑みて設定すればよいが、通常、２０～７０℃（好ましくは３０～６０℃、より好ましくは４０～６０℃）で、３０分～２４時間（好ましくは１時間～１２時間、より好ましくは１時間～６時間）程度である。
　酵素の種類により、基質であるタンパク質への作用部位が異なり、結果として本発明で得られるジケトピペラジン混合体の組成を変えることができるので、所望するジケトピペラジン混合体の組成を鑑みて、酵素を選択することもできる。酵素は２種以上を併用して用いてもよい。
　植物性ペプチドとして、植物体を用いる場合、上述の分解処理によるペプチド生成工程を施す前に、植物体に含有される水溶性タンパク質を予め低減する前処理を行っておくことが好ましい。本発明者らの検討によると、水溶性タンパク質を予め低減しておくことで、分解処理によるペプチドの生成収率や、本発明の加熱処工程によるジケトピペラジンの生成収率が格段に向上する。水溶性タンパク質を除去する前処理の方法としては、植物体を液体中にて加熱して水溶性タンパク質を溶出させる方法であってその後に固液分離して得られる固体（植物体）を分解処理に供する方法、植物体に水等の水性溶媒で抽出処理を施す方法であってその抽出残渣を分解処理に供す方法などが挙げられる（以下、総称して「前抽出」という）。前抽出の際には、植物体の重量に対して好ましくは１５倍重量以上、より好ましくは１５～１５０倍重量程度の抽出溶媒に浸漬して植物体に含まれる水溶性タンパク質などの可溶性成分を溶出させることが好ましい。この場合、予め抽出溶媒を加熱しておいてもよいが、植物体を抽出溶媒に浸漬した後に加熱して抽出してもよい。抽出溶媒としては純水を好適に用いることができるが、これにエタノール等有機溶媒を適宜含有させることもできる。また、抽出溶媒にミネラル分を添加することにより適宜硬度を調整することもできる。
　前抽出において、その抽出温度は特に限定されないが、通常、５０～１００℃、好ましくは６０～９５℃、より好ましくは７０～９０℃程度である。また、抽出時間は、１分～２４時間、好ましくは３分～２０時間程度である。抽出温度、時間などの抽出条件は、得られる抽出残渣の可溶性成分除去率が６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、特に好ましくは９５％となるようにする。可溶性成分の除去率は、最大限除去できる可溶性成分を１００％とした場合における抽出液で回収される固形分の相対的な割合をいい、式「（前抽出で得られた採液量（総量）（ｇ）×そのブリックス［Bx］）／（最大限除去できる可溶性成分（ｇ）×そのブリックス［Bx］）×１００（％）」で算出される値をいう。本明細書では、「最大限除去できる可溶性成分」として、便宜的に「植物体の重量に対して３０倍量の熱湯で１０分間抽出することを１０回繰り返した際の採液量」で表すものとする。ここで、本明細書でいうＢｘは、市販のＢｘ測定計測器にて計測することができる。
　植物体の前抽出は、１回だけ行ってもよいし、複数回行ってもよい。前抽出で得られる抽出液は廃棄してもよいが、飲食物に配合して利用することもでき、例えば本発明で得られるジケトピペラジンを含有する植物エキスと混合して飲食物に配合することもできる。
　（加熱処理）
　本発明の製造方法では、このような植物性ペプチドを液体中で高温高圧処理することにより、ジケトピペラジンを生成する。高温高圧処理における液体としては純水を好適に用いることができるが、これにエタノール等有機溶媒を適宜含有させることもできる。また、抽出溶媒にミネラル分を添加することにより適宜硬度を調整することもできる。加熱処理に供す液体のブリックス（Ｂｘ）は、０．１～５０程度になるように必要に応じて濃縮又は希釈しておくことが好ましい。
　本明細書でいう高温高圧とは、１００℃以上の温度かつ大気圧を越える圧力を意味する。高温高圧抽出装置としては、耐圧性抽出装置や圧力鍋、オートクレーブなどを条件に合わせて用いることができる。
　高温高圧の温度は、１００～１７０℃が好ましく、１１０～１５０℃がより好ましく、１２０～１４０℃が特に好ましい。なお、この温度は、加熱装置として耐圧性抽出装置を用いた場合には抽出カラムの出口温度を測定した値を示し、加熱装置としてオートクレーブを用いた場合には、圧力容器内の中心温度の温度を測定した値を示す。また、圧力は、０．１０１～０．７９ＭＰａが好ましく、０．１０１～０．４８ＭＰａがより好ましい。さらに、加熱時間は、３０～５００分が好ましく、６０～３００分程度がより好ましい。
　より最適な加熱処理条件は、横軸を時間（min.）、縦軸を温度（℃）とした座標系において、次の座標系(i)～(Vi)によって囲まれる時間及び温度の範囲内で保持される加熱処理である。
　(i)（170℃,30 min.）、(ii)（150℃,30 min.）、(iii)（115℃,180min.）、(iv)（105℃,480min.）、(v)（135℃,480min.）、(vi)（150℃,180min.） 
　液体中での高温高圧処理の後、必要に応じて固液分離を行って液部を回収して、本発明のジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスが得られる。固液分離には、ろ過及び／又は遠心分離手段が用いられる。
　植物性ペプチドの由来（原料となる植物の種類）や酵素の種類によって、得られるジケトピペラジン高濃度に含有する植物エキス中のジケトピペラジンの組成は異なるが、本発明の植物性ペプチドの液体中での高温高圧処理により、シクロアラニルグルタミン（CAS Registry Number:268221-76-7；Cyclo(Ala-Gln)）、シクロヒスチジルプロリン（CAS Registry Number:53109-32-3；Cyclo(His-Pro)）、シクロアラニルアラニン（CAS Registry Number: 5845-61-4；Cyclo(Ala-Ala)）、シクログリシルプロリン（CAS Registry Number:3705-27-9；Cyclo(Gly-Pro)）、シクロセリルチロシン（CAS Registry Number:21754-31-4；Cyclo(Ser-Tyr)）、シクロプロリルスレオニン（CAS Registry Number:227777-31-3；Cyclo(Pro-Thr)）、シクロヒスチジルフェニルアラニン（CAS Registry Number:56586-95-9；Cyclo(His-Phe)）、シクロアラニルプロリン（CAS Registry Number:65556-33-4；Cyclo(Ala-Pro)）、シクロフェニルアラニルセリン（CAS Registry Number:35591-00-5；Cyclo(Phe-Ser)）、シクログリシルロイシン（CAS Registry Number:5845-67-0；Cyclo(Gly-Leu)）、シクログリシルフェニルアラニン（CAS Registry Number:10125-07-2；Cyclo(Gly-Phe)）、シクロプロリルプロリン（Cyclo(Pro-Pro)）、シクログリシルトリプトファン（Cyclo(Gly-Trp)）、シクロアスパルチルフェニルアラニン（CAS Registry Number:5262-10-2；Cyclo(Asp-Phe)）、シクロバリルプロリン（Cyclo(Val-Pro)）、シクロプロリルチロシン（Cyclo(Pro-Tyr)）、シクロメチオニルプロリン（Cyclo(Met-Pro)）、シクロメチオニルメチオニン（Cyclo(Met-Met)）、シクロバリルバリン（Cyclo(Val-Val)）、シクロロイシルプロリン（CAS Registry Number:2873-36-1；Cyclo(Leu-Pro)）、シクロトリプトファニルチロシン（Cyclo(Trp-Tyr)）、シクロフェニルアラニルプロリン（CAS Registry Number:3705-26-8；Cyclo(Phe-Pro)）、シクロロイシルトリプトファン（CAS Registry Number:15136-34-2；Cyclo(Leu-Trp)）、シクロフェニルアラニルトリプトファン（CAS Registry Number:82597-82-8；Cyclo(Phe-Trp)）、シクロロイシルフェニルアラニン（CAS Registry Number:7280-77-5；Cyclo(Leu-Phe)）、シクロロイシルロイシン（CAS Registry Number:952-45-4；Cyclo(Leu-Leu)）、シクロフェニルアラニルフェニルアラニン（CAS Registry Number:2862-51-3；Cyclo(Phe-Phe)）からなる群より選択される少なくとも１種のジケトピペラジンを増加させることができる。
　特に本発明は、Cyclo(Leu-Leu)及びCyclo(Leu-Phe)を比較的高濃度に含有するジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスの製造に有利である。また、本発明は、Cyclo(Phe-Phe) を高濃度に含有する植物エキスの製造に有利である。
　本発明のジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスから、公知の精製処理を施すことにより、特定のジケトピペラジンを高濃度に含有する天然植物由来のジケトピペラジンを選択的に製造することもできる。したがって、１つの観点から本発明はCyclo(Leu-Leu)、及びCyclo(Phe-Phe)を含むジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスの製造方法であり、また別の観点から本発明は、特定のジケトピペラジン（例えばCyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Leu-Leu)、Cyclo(Phe-Phe)）の製造方法である。
　（植物エキス）
　本明細書でいうエキスとは液体状の抽出物をいい、本発明の「植物エキス」とは、植物体に抽出処理を施して得られる液体状の抽出物又はその加工品をいう。
　本発明によると、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Leu-Trp)及びCyclo(Phe-Phe)のいずれか一以上を、Ｂｘあたりの含量が１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上の植物エキスが得られる。
　また、本発明によると、ジケトピペラジンの総量が、９００μｇ／１００ｇ以上、好ましくは１０００μｇ／１００ｇ以上、より好ましくは２０００μｇ／１００ｇ以上、特に好ましくは５０００μｇ／１００ｇ以上となる植物エキスを得ることができる。なお、本明細書では、特に断りがない限り、ジケトピペラジンの総量は、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Gly-Pro)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、Cyclo(Pro-Pro)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Asp-Phe)、Cyclo(Val-Pro)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Met-Pro)、Cyclo(Met-Met)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Trp)、Cyclo(Phe-Trp)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Leu-Leu)、及びCyclo(Phe-Phe)の総量を表すものとする。
　一般に、Ｂｘが高いエキスは、原料由来の様々な物質（例えば、苦味成分）が高濃度で含まれることを意味しており、そのものが飲料に不適なだけでなく、香味や舌触りなどへの影響から飲料への添加にも不適である。したがって、飲料への添加を考えた場合、Ｂｘは低い方が好ましい。本発明によると、生理活性物質であるジケトピペラジンを多く含み、かつＢｘが低い植物エキス、すなわち、ジケトピペラジンの含有量とＢｘの比が高い植物エキスが得られる。具体的には、上記のジケトピペラジンの総量（単位：μｇ／１００ｇ）とブリックス（Ｂｘ）の比が９００（μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上、好ましくは１０００（μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上、より好ましくは２０００（μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）、さらに好ましくは５０００（μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）である植物エキスが得られる。エキス中のジケトピペラジンの上限は、特に制限されず、ジケトピペラジンの溶解性等を考慮して適宜設定すればよいが、通常、１０００ｍｇ／１００ｇ以下、好ましくは５００ｍｇ／１００ｇ以下、より好ましくは２００ｍｇ／１００ｇ以下程度である。
　植物体を原料として本発明の製造方法を適用して得られる植物エキスの場合には、発酵を伴わないことから副生成物が少なく、また前抽出を行った場合には可溶性成分が低く、極めて苦味が少ないという香味的な特徴を有する。
　このような植物エキスは、香味がよく、沈殿や濁り等もなく外観にも優れるので、特別な後処理を施さなくても、エキス、調味料、飲料等にそのまま利用可能である。また、本発明の植物エキスは、ジケトピペラジンを高含有量で含むにも関わらず、Ｂｘが相対的に低いため、飲食物（特に、飲料）への配合量が少なくてよく、飲食物の設計の自由度が増すという利点もある。特に、茶飲料、コーヒー飲料、大豆飲料、果汁飲料等の植物の抽出液又は搾汁液等を主成分として配合して得られる飲料や、フレーバードウォーター、ミネラル飲料、炭酸飲料などの清涼飲料に、そのまま配合して利用できる。例えば、本発明の植物エキスを飲料に配合すると、ジケトピペラジンの総量が１０μｇ／１００ｇ以上、好ましくは２０μｇ／１００ｇ以上、より好ましくは４０μｇ／１００ｇ以上、さらに好ましくは６０μｇ／１００ｇ以上となるような飲料で、かつ苦味を呈しない風味良好な飲料を得ることができる。
　本発明により得られる植物エキスは、添加する飲食物の態様に合わせて、清澄化処理等を行うこともできる。この場合、油分がないこと、繊維質が存在すること等の理由から、清澄化が容易に行えるという利点もある。
　本発明の植物エキスの好適な態様として、茶エキス、大豆エキス及び麦芽エキスが例示できる。以下、これらエキスについて詳述する。
　（茶エキス）
　本明細書でいう「茶エキス」とは、茶葉を抽出処理して得られる茶抽出物をいう。抽出原料となる茶葉としては、茶樹（学名：Camellia sinensis）を用いて製造された茶葉の葉、茎など、抽出して飲用可能な部位を使用することができる。また、その形態も大葉、粉状など制限されない。茶葉の収穫期についても、所望する香味に合わせて適宜選択できる。
　本発明で得られるジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキス（茶エキス）は、発酵過程を経ずに製造することで副生成物の生成を抑え、香味のよいものが得られることを特徴とする。この香味の観点から、茶葉は、煎茶、番茶、ほうじ茶、玉露、かぶせ茶、甜茶等の蒸し製の不発酵茶（緑茶）や、嬉野茶、青柳茶、各種中国茶等の釜炒茶等の不発酵茶を用いることが好ましい。
　本発明者らは、市販の茶葉を抽出して得られる茶エキス中のジケトピペラジン濃度を測定している。その結果、発酵茶に極微量（０～２００μｇ/１００g/Ｂｘ程度）含まれること、また緑茶には殆ど含まれないことを確認している（表１参照、測定方法は後述の実施例１と同じ）。
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　一方、本発明の茶エキスは、従来の茶類には含まれていなかったジケトピペラジンであるCyclo(Ala-Gln)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Leu-Trp)及びCyclo(Phe-Phe)のいずれか一以上を、１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上の濃度で含有する。
　また、本発明の茶エキスは、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Gly-Pro)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、Cyclo(Pro-Pro)、Cyclo(Asp-Phe)、Cyclo(Val-Pro)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Met-Pro)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Phe)、及びCyclo(Leu-Leu)をそれぞれ０．１ｐｐｍ／Ｂｘ（１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上の濃度で含有する。好ましくは上記のジケトピペラジンそれぞれを０．２ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは０．３ｐｐｍ／Ｂｘ以上、さらに好ましくは０．４ｐｐｍ／Ｂｘ以上、特に好ましくは０．５ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度で含有する茶エキスである。さらに、Cyclo(Gly-Trp)、 Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Leu-Trp)、Cyclo(Phe-Trp)及びCyclo(Phe-Phe)を、それぞれ０．１ｐｐｍ／Ｂｘ（１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上、好ましくは０．２ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは０．３ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度で含有させることができる。
　苦味が強いジケトピペラジンとして、コーヒー飲料中のジケトピペラジンであるCyclo(Leu-Pro)やCyclo(Phe-Pro)（特開2010-166911号公報参照）、カゼインの分解処理物であるCyclo(Leu-Trp)（蛋白質研究奨励会ペプチド研究所報，No.2，1974）が知られている。本発明の茶エキスは、これら強い苦味を有するジケトピペラジンを含有するにも関わらず、エキス自体は苦味をほとんど有さない。茶エキスと同じ濃度のCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)を含有する水溶液を調製した場合には、強い苦いが感じられたことから、共存する他のジケトピペラジンや茶由来の成分が相加的又は相乗的にCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)の苦味を低減していると考えられる。特に、Cyclo(Leu-Leu)とCyclo(Leu-Phe)の総量（Ａ）に対する苦味を有するジケトピペラジンCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)の総量（Ｂ）の割合［（Ｂ）／（Ａ）］が、１．０以下（好ましくは０．８以下、より好ましくは０．６以下、特に好ましくは０．４以下）となる茶エキスは、苦味を始めとする味を伴わないジケトピペラジン含有エキスであり、飲食品（特に、飲料）へそのまま配合することができる。
　茶エキス中のＢｘあたりのジケトピペラジンの総量は、９００μｇ/１００g/Ｂｘ以上、好ましくは９００～３００００μｇ/１００g/Ｂｘ、より好ましくは２０００～２５０００μｇ/１００g/Ｂｘ、特に好ましくは５０００～２００００μｇ/１００g/Ｂｘである。このような濃度範囲にすると、ジケトピペラジンの有する機能（生理活性等）が付加された飲食品を製造するのに有利である。
　このような茶エキスは、茶葉中のタンパク質を分解処理して茶ペプチドを調製し、これを液体中で高温高圧処理をすることにより、簡便に製造できる。茶葉中にはタンパク質が約２５％と豊富に含まれている（５訂食品成分表）。したがって、この茶葉タンパク質をプロテアーゼ等の酵素で分解処理すれば、茶ペプチドが得られるはずであるが、茶葉にプロテアーゼを作用させても、それほど多くの茶ペプチドは得られない。茶葉中の全タンパク質の８０％以上は不溶性タンパク質であるため、茶葉に含まれているタンパク質に効率よくタンパク質分解酵素を作用させて、茶ペプチドを得ることが好ましい。具体的には、茶葉から水溶性タンパク質を除去する前処理を行った後、その抽出残渣にプロテアーゼ等のタンパク質分解酵素を作用させて茶ペプチドを調製する。すなわち、本発明の茶エキスは、以下の工程を順次行うことにより、水不溶性のタンパク質を効率よく分解して、ジケトピペラジンを高濃度に含有する茶エキスを簡便に製造することができる。
（ａ）茶葉を水で抽出し、抽出残渣を回収する工程、
（ｂ）抽出残渣に、水存在下でエンド型プロテアーゼを作用させて茶葉タンパク質を分解し、茶ペプチドを含む液を得る工程、
（ｃ）茶ペプチドを含む液を高温高圧処理して反応液を得る工程、及び
（ｄ）反応液を固液分離処理して、ジケトピペラジンを含む液体を回収する工程
または、
（ａ）茶葉を水で抽出し、抽出残渣を回収する工程、
（ｂ）抽出残渣に、水存在下でエンド型プロテアーゼを作用させて茶葉タンパク質を分解し、茶ペプチドを含む液を得る工程、
（ｄ’）茶ペプチドを含む液を固液分離処理して、茶ペプチドを含む液体を回収する工程、及び
（Ｃ’）茶ペプチドを含む液体を高温高圧処理してジケトピペラジンを含む反応液を得る工程　
　各工程の条件は、前述したとおりであるが、工程（ａ）の前抽出では、茶飲料の製造等で抽出処理を行って得られる茶滓等の抽出残渣を用いることもできる。従来、茶葉中の水不溶性茶タンパク質は、栄養源としては利用されておらず、例えば、国内の緑茶飲料製造時に生じる２．２万トンに上る抽出残渣は、その殆どが未利用資源として廃棄されているが、上記の茶エキスの製造方法は、従来廃棄されていた茶滓の有効利用にも有効である。
　この方法によると、Cyclo(Leu-Leu)、Cyclo(Leu-Phe)、及びCyclo(Ala-Ala)を高濃度に含有する茶エキスが製造できる。具体的には、茶エキス中のジケトピペラジン全量に対して、Cyclo(Leu-Leu)が１０％以上（重量基準）、Cyclo(Leu-Phe)が１０％以上、Cyclo (Ala-Ala)が７％以上となるエキスである。これらを濃度で表わすと、それぞれ５．０ｐｐｍ／Ｂｘ（５００μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上、好ましくは８．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは１０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度となる茶エキスとなる。これらの上限は、５０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、好ましくは４０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、より好ましくは３５．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、さらに好ましくは３０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下程度である。
　また、工程（ａ）における茶葉の水抽出（前抽出）を複数回繰り返して行うことにより、Cyclo(Leu-Leu)、Cyclo(Leu-Phe)、及びCyclo(Phe-Phe)の濃度が顕著に高くなることを見出した。したがって、この方法は、Cyclo(Phe-Phe)の製造にも有利である。本発明者らは、この方法で得られたCyclo(Phe-Phe)を３．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上含有する茶エキスが、学習意欲改善作用を有することを確認している。
　ところで、疎水性の官能基を有するジケトピペラジンは、環状化することにより、直鎖ペプチドより、その疎水性が高まることが知られている。Cyclo(Phe-Phe)は、最も疎水性が高い成分であるが、上記の茶エキスを加速保存試験（５５℃、２週間）した結果、Cyclo(Phe-Phe)が安定に維持されることを確認している。したがって、本発明の茶エキスは、Cyclo(Phe-Phe)含有エキスとしても有用なものである。茶エキス中のCyclo(Phe-Phe)含量は、１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上、２０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上、３０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上とすることが好ましい。
　（大豆エキス）
　本明細書でいう「大豆エキス」とは、大豆に加水して抽出処理又はミリング処理して得られる液体をいう。原料となる大豆（学名：Glycine max）は品種や産地などの制限なく用いることができ、粉砕品などの加工品段階のものを用いることもできる。また、本明細書でいう大豆エキスには、大豆タンパク分解物に加水して得られる液体も便宜上含まれるものとする。
　大豆中のタンパク質は、約３割を占めると言われている。大豆タンパク質は、茶タンパク質のように水不溶性タンパク質が多くはないため、水溶性タンパク質を除去する前処理は必須ではなく、必要に応じて行えばよい。水溶性タンパク質を除去する前処理がない場合、ワンポット（One-Pot）反応で、より簡便にジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキス（大豆エキス）を製造することができる。
　本発明者らは、市販の大豆ペプチド（粉体）が、噴霧乾燥時に１８０～２２０℃程度の熱が加わっていることを鑑みて、大豆ペプチド中のジケトピペラジン濃度を測定している。その結果、市販の大豆ペプチドには、極微量（６５０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ程度）含まれることを確認している（表２参照）。
　一方、本発明の大豆エキスは、従来の大豆タンパク分解物（大豆ペプチド）には含まれていなかったジケトピペラジンであるCyclo(Ala-Gln)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Leu-Trp)及びCyclo(Phe-Phe)のいずれか一以上をＢｘあたりの含量が１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上で含有する。
　また、本発明の大豆エキスは、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Gly-Pro)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Asp-Phe)、Cyclo(Val-Pro)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Met-Pro)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Trp)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Leu-Leu)及びCyclo(Phe-Phe)をそれぞれ０．１ｐｐｍ／Ｂｘ（１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）の濃度で含有する。好ましくは上記のジケトピペラジンそれぞれを０．５ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは０．７ｐｐｍ／Ｂｘ以上、さらに好ましくは０．９ｐｐｍ／Ｂｘ以上、特に好ましくは１．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、特に好ましくは１．２ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度で含有する大豆エキスである。さらに、Cyclo(Pro-Pro) 及びCyclo(Phe-Trp)を、それぞれ０．１ｐｐｍ／Ｂｘ（１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上、好ましくは０．２ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは０．３ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度で含有させることができる。
　この大豆エキス（特に、大豆又はその粉砕物を原料として得られるエキス）は、苦味が強いジケトピペラジンとして知られているCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)を含有するにも関わらず、その苦味が低減されている。同じ濃度のCyclo(Leu-Pro)及びCyclo(Phe-Pro)を含有する水溶液を調製した場合には、強い苦いが感じられたことから、共存する他のジケトピペラジンや大豆由来の成分が相加的又は相乗的にCyclo(Leu-Pro)、及びCyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)の苦味を緩和していると考えられる。特に、Cyclo(Leu-Leu)とCyclo(Leu-Phe)の総量（Ａ）に対する苦味を有するジケトピペラジンCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)の総量（Ｂ）の割合［（Ｂ）／（Ａ）］が、１．０以下（好ましくは０．８以下、より好ましくは０．６以下、特に好ましくは０．５以下）となる大豆エキスは、苦味が顕著に低減されたジケトピペラジン含有エキスであり、飲食品（特に、飲料）に有利に配合することができる。
　大豆エキス中のＢｘあたりのジケトピペラジンの総量は、９００μｇ/１００g/Ｂｘ以上、好ましくは９００～３００００μｇ/１００g/Ｂｘ、より好ましくは２０００～２５０００μｇ/１００g/Ｂｘ、特に好ましくは５０００～２００００μｇ/１００g/Ｂｘである。このような濃度範囲にすると、ジケトピペラジンの有する機能（生理活性等）が付加された飲食品を製造するのに有利である。
　本発明のジケトピペラジンを高濃度に含有する大豆エキスは、以下の工程を順次行うことにより、製造することができる。
（ｘ）大豆又は大豆タンパク分解物に、水存在下でエンド型プロテアーゼを作用させて、大豆ペプチドを含む液を得る工程、
（ｙ）大豆ペプチドを含む液を高温高圧処理して反応液を得る工程、及び
（ｚ）反応液を固液分離処理して、ジケトピペラジンを含む液体を回収する工程
　茶エキスの製造と同様に、工程（ｙ）及び（ｚ）は順序を交換してもよい。また、工程（ｘ）の前に、水溶性タンパクを除去する工程（ｗ）を加えてもよい。ジ又はトリペプチドを多く含有する大豆ペプチドを原料として用いる場合、工程（ｘ）は、
（ｘ’）ジ又はトリペプチドを多く含有する大豆ペプチドに加水して、大豆ペプチドを含む液を得る工程
となる。その他、各工程の条件は前述したとおりである。
　この方法によると、Cyclo(Leu-Leu)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Ser-Tyr)及びCyclo (Pro-Thr)を高濃度に含有する大豆エキスが製造できる。具体的には、大豆エキス中のジケトピペラジン全量に対して、Cyclo(Leu-Leu)が８％以上（重量基準）、Cyclo(Leu-Phe)が８％以上、Cyclo(Ser-Tyr)が６％以上となるエキスである。これらの濃度がそれぞれ５．０ｐｐｍ／Ｂｘ（５００μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上、好ましくは６．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは７．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度となる大豆エキスとなる。特に、Cyclo(Leu-Leu)及びCyclo(Leu-Phe)は、１０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、好ましくは１２．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上となる大豆エキスが得られる。これらの上限は、５０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、好ましくは４０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、より好ましくは３５．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、さらに好ましくは３０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下程度である。
　また、この方法により、大豆ペプチドには含まれていないCyclo(Phe-Phe)を３．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、好ましくはCyclo(Phe-Phe)を４．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上含有する大豆エキスが得られるので、この方法は、Cyclo(Phe-Phe)の製造にも有利である（後述の実施例参照）。Cyclo(Phe-Phe)は疎水性が高い成分であるが、この大豆エキス中では、安定に維持されることを確認している。
　（麦芽エキス）
　本明細書でいう「麦芽エキス」とは、麦芽又はその粉砕物に抽出処理して得られる抽出物をいう。原料となる麦芽大豆（malt）は、品種や産地などの制限なく用いることができるが、特に大麦の種子を発芽させた大麦麦芽が好適に用いられる。大麦麦芽は、皮部を除去してタンパク質含量の高い画分を分離して用いるのが実用的であり効率的である。タンパク質含量の高い画分は、麦芽を表面から徐々に削り、穀皮を除去し、その後、アリューロン層および胚乳といったタンパク質が多く含まれる画分を削りとるという方法が挙げられる。或いは、茶エキスで実施したように、前抽出を行った抽出残渣を利用することができる。抽出残渣としては、ビール製造時に発生する麦芽の絞り粕を例示できる。
　タンパク質含量の高い画分を原料とすれば、ワンポット（One-Pot）反応で、より簡便にジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキス（麦芽エキス）を製造することができる。
　本発明の麦芽エキスは、従来、抽出されにくかったジケトピペラジンであるCyclo(Ala-Gln)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Leu-Trp)及びCyclo(Phe-Phe)のいずれか一以上を、１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上の濃度で含有する。
　また、本発明の麦芽エキスは、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo (Gly-Pro)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo (Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Asp-Phe)、Cyclo (Val-Pro)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Met-Pro)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo (Trp-Tyr)、Cyclo(Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Trp)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Leu-Leu) 及びCyclo(Phe-Phe)をそれぞれ０．１ｐｐｍ／Ｂｘ（５０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上の濃度で含有する。好ましくは上記のジケトピペラジンそれぞれを０．３ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは０．４ｐｐｍ／Ｂｘ以上、さらに好ましくは０．５ｐｐｍ／Ｂｘ以上、特に好ましくは０．６ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度で含有する麦芽エキスである。
　この麦芽エキスは、苦味が強いジケトピペラジンとして知られているCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)を含有するにも関わらず、その苦味が低減されている。特に、 Cyclo(Leu-Leu)とCyclo(Leu-Phe)の総量（Ａ）に対する苦味を有するジケトピペラジンCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)の総量（Ｂ）の割合［（Ｂ）／（Ａ）］が、１．０以下（好ましくは０．８以下）となる麦芽エキスは、苦味が顕著に低減されたジケトピペラジン含有エキスであり、飲食品（特に、飲料）に有利に配合することができる。
　麦芽エキス中のＢｘあたりのジケトピペラジンの総量は、９００μｇ/１００g/Ｂｘ以上、好ましくは９００～３００００μｇ/１００g/Ｂｘ、より好ましくは２０００～２５０００μｇ/１００g/Ｂｘ、特に好ましくは５０００～２００００μｇ/１００g/Ｂｘである。このような濃度範囲にすると、ジケトピペラジンの有する機能（生理活性等）が付加された飲食品を製造するのに有利である。
　本発明のジケトピペラジンを高濃度に含有する麦芽エキスは、以下の工程を順次行うことにより、製造することができる。
（ｘ）麦芽又は麦芽タンパク分解物に、水存在下でエンド型プロテアーゼを作用させて、麦芽ペプチドを含む液を得る工程、
（ｙ）麦芽ペプチドを含む液を高温高圧処理して反応液を得る工程、及び
（ｚ）反応液を固液分離処理して、ジケトピペラジンを含む液体を回収する工程
　茶エキスの製造と同様に、工程（ｙ）及び（ｚ）は順序を交換してもよい。また、工程（ｘ）の前に、水溶性タンパクを除去する工程（ｗ）を加えてもよい。その他、各工程の条件は前述したとおりである。
　この方法によると、Cyclo(Leu-Leu)、Cyclo(Leu-Phe)及びCyclo(Ala-Ala)を高濃度に含有する麦芽エキスが製造できる。具体的には、これらの濃度がそれぞれ５．０ｐｐｍ／Ｂｘ（５００μｇ／１００ｇ／Ｂｘ）以上、好ましくは６．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、より好ましくは７．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上の濃度となる麦芽エキスとなる。これらの上限は、５０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、好ましくは４０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、より好ましくは３０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下、さらに好ましくは２０．０ｐｐｍ／Ｂｘ以下程度である。
　また、この方法により、Cyclo(Phe-Phe)を１．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、好ましくは２．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上、さらに好ましくは３．０ｐｐｍ／Ｂｘ以上含有する麦芽エキスが得られるので、この方法は、Cyclo(Phe-Phe)の製造にも有利である。
　以下、実施例に基づいて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。また、本明細書において特記しない限り、濃度等は重量基準であり、数値範囲はその端点を含むものとして記載される。
　（実施例１）植物性ペプチドからのジケトピペラジンの製造
　植物性ペプチドとして大豆ペプチドおよびゴマペプチドを用い、液体中にて高温高圧処理してジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスを製造した。具体的には、大豆ペプチド（ハイニュートAM、不二製油社製）およびゴマペプチド（KM-20、KISCO社製）３ｇに、それぞれ１５ｍｌの蒸留水を加え、オートクレーブ（トミー精工社製）に入れて、１３５℃、０．３１ＭＰａ、３時間高温高圧処理を加えた。また、比較例として、同じペプチドを用いて高温高圧処理を行わないものを調製した。処理後の液体１０ｍｌを５０倍希釈して膜処理したものをLC-MS/MSに供し、各種ジケトピペラジン濃度を求めた。分析条件詳細は、下記の通り。また、ジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスのブリックス（Bx）をデジタル屈折計 RX-5000a（ATAGO社製）を用いて測定し、ジケトピペラジンの総量（単位：μｇ／１００ｇ）とブリックス（Ｂｘ）の比を算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　表２に結果を示す（本明細書中、Cyclo(Leu-Leu)はCyclo(Leu-Leu)とCyclo(Ile-Ile)の合算値を表わす）。本発明の液体中での高温高圧処理により、ジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスが簡便に製造できることがわかった。また、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Gly-Pro)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、Cyclo(Pro-Pro)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Asp-Phe)、Cyclo(Val-Pro)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Met-Pro)、Cyclo(Met-Met)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Trp)、Cyclo(Phe-Trp)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Leu-Leu)、及びCyclo(Phe-Phe)からなる群より選択される少なくとも１種のジケトピペラジンを増加させることができることが示唆された。特に、Cyclo(Leu-Leu)およびCyclo(Leu-Phe)を高濃度に含有し、その含有量は、ジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキス中２１．５％であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　（実施例２）植物性ペプチドからのCyclo(Phe-Phe)の製造
　植物性ペプチドとして、以下のペプチドを用いた。　
１）大豆ペプチド「ハイニュートＡＭ」（不二製油社製）：ジ・トリペプチドが６７％、平均分子量５００　　
２)大豆ペプチド「ハイニュートＤＣ」（不二製油社製）：鎖長３～７、平均分子量１０００
３）大豆ペプチド「ハイニュートＨＫ」（不二製油社製）
４）コメペプチド「オリザペプチド」（オリザ油化社製）：トリペプチドが４０～５０％
５）小麦ペプチド「グルタミンペプチドGP-1N」（日清ファルマ社製）：分子量５０００～１００００
６）小麦ペプチド「グルタミンペプチドGP-N」（日清ファルマ社製）：分子量５０００～１００００
　植物性ペプチド３ｇに、それぞれ１５ｍｌの蒸留水を加え、オートクレーブ（トミー精工社製）に入れて、１３２℃、０．２９ＭＰａ、２時間高温高圧処理を加えた。処理後の液体１０ｍｌをＯＡＳＩＳ　ＭＡＸ（Waters社製）を用いて固相抽出し、得られた固相抽出物を減圧濃縮後、ＤＭＳＯ　１００μｌに溶解し、そのうち１０μｌを用いて高速液体クロマトグラフィー（HPLC）によりシクロフェニルアラニルフェニルアラニン濃度を求めた。
　表３に結果を示す。ペプチドの種類により、シクロフェニルアラニルフェニルアラニンの生成度合いに違いがあった。大豆ペプチドは、コメペプチドや小麦ペプチドを用いた場合に比べて、シクロフェニルアラニルフェニルアラニンが高濃度に生成した。これより、分子量５０００以下（特に分子量１０００以下）のペプチドの割合が高い大豆ペプチドを用いるのが好ましいことが示唆された。また、大豆ペプチドで比較すると、分子量がより小さく、ジ・トリペプチドを多く含むオリゴペプチドを原料とするのが好ましいことが示唆された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　（実施例３）植物由来のタンパク質からのジケトピペラジンの製造
　植物由来のタンパク質を原料として酵素による分解処理を施したものを用いた。植物由来のタンパク質には、大豆タンパク質（プロリーナ900（不二製油社製））と米タンパク質（オリザプロテインP70（オリザ油化社製））を用いた。タンパク質３００ｍｇを１５ｍｌの蒸留水に加えた。次いで、酵素A（プロテアックス）、酵素B（ニューラーゼF3G；Rhizopus niveus由来の酸性プロテアーゼ（エンドペプチダーゼ））、酵素C（パパインW-40；Carica papaya 由来のプロテアーゼ）、酵素D（プロテアーゼA「アマノ」SD；Aspergillus sp. 由来のプロテアーゼ）、酵素E（プロテアーゼM「アマノ」SD；Aspergillus sp. 由来のプロテアーゼ）、酵素F（プロテアーゼP「アマノ」3SD；Aspergillus sp. 由来のプロテアーゼ）、酵素G（プロメラインF；Ananas comosus 由来のプロテアーゼ）、酵素H（ペプチダーゼR）、酵素I（サモアーゼPC10F；Bacillus stearothermophilus由来のプロテアーゼ（エンドペプチダーゼ））、酵素J（プロチンSD-NY10；Bacillus sp. 由来のプロテアーゼ）、酵素K（プロチンSD-AY10；Bacillus sp. 由来のプロテアーゼ）（以上、いずれも天野エンザイム社製）のいずれかを１５ｍｇ添加し、３７℃、２時間振とう混和した。その後、この酵素処理液を固液分離せずに加熱処理した。加熱処理はオートクレーブ（トミー精工社製）にて、１３２℃、２時間高温高圧処理を行った。また、大豆タンパク質および米タンパク質を酵素で処理せずに同様に処理したものも製造した。処理後の液体１０ｍｌをＯＡＳＩＳ　ＭＡＸ（Waters社製）を用いて固相抽出し、得られた固相抽出物を減圧濃縮後、ＤＭＳＯ　１００μｌに溶解し、そのうち１０μｌを用いて高速液体クロマトグラフィー（HPLC）によりシクロフェニルアラニルフェニルアラニン濃度を求めた。
　大豆タンパク質を用いた場合の結果を図１に、米タンパク質を用いた場合の結果を図２に示す。酵素による分解処理を行わないもの（未）も加熱による処理により、ジケトピペラジンが生成した。酵素の種類により、シクロフェニルアラニルフェニルアラニンの生成度合いに違いがあり、Bacillus sp. 由来のプロテアーゼを用いた場合に多く生成する傾向にあることがわかった。
　（実施例４）植物体からのジケトピペラジンの製造（１）
　植物体として、鹿児島県産の一番茶茶葉（品種：やぶきた、全窒素：６．３％）を用いた。この茶葉に対して、まず、水溶性タンパク質を低減する前処理（３回の前抽出）を行った。すなわち、茶葉１０ｇに対して、熱湯２００ｇを加えて適宜攪拌し、５分間抽出を行った。抽出終了後、１４０メッシュでろ過し、抽出残渣（茶滓）を回収した。この茶滓に対して、２００ｇの熱湯を注ぎ５分間抽出を行って茶滓を回収した。再度、この茶滓に対して同様に抽出処理を行い茶滓を回収した。
　次に、この前抽出を行った茶葉（茶滓）に対して、酵素による分解処理を行った。茶滓（全量）に対して５０℃の湯を２００ｇ注ぎ、プロテアーゼ（商品名：プロチンNY100、大和化成社製）を１ｇ添加し、攪拌子で攪拌（３００ｒｐｍ）しながら、５５℃のウォーターバス内にて３時間反応させた。その後、９５℃、３０分間保持して酵素を失活させた。
　この酵素処理液を固液分離せずに茶葉液体混合物の形態で、加熱処理を施した。加熱処理は、オートクレーブ（トミー精工社製）に入れて、１３５℃、３時間の高温高圧流体による加熱処理とした。処理後の液体を１４０メッシュでろ過し、茶エキス（エキスＡ）を得た。この茶エキス（エキスＡ）（Ｂｘ０．９９）について、実施例１と同様に、エキス中のジケトピペラジンの分析を行った。
　表４に結果を示す。茶葉（茶滓）に液体中での高温高圧処理を行うことにより、ジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスを高濃度に含有する茶エキスが簡便に製造できることがわかった。また、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Gly-Pro)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、Cyclo(Pro-Pro)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Asp-Phe)、Cyclo(Val-Pro)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Met-Pro)、Cyclo(Met-Met)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Trp-Tyr)、Cyclo(Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Trp)、Cyclo(Phe-Trp)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Leu-Leu)、及びCyclo(Phe-Pheからなる群より選択される少なくとも１種のジケトピペラジンを増加させることができることが示唆された。特に、シクロロイシルロイシンおよびシクロロイシルフェニルアラニンを高濃度に含有し、その含有量は、ジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキス中２７．２％であった。この茶エキスの風味を官能評価すると、ほとんど無味無臭であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　（実施例５）植物体からのジケトピペラジンの製造（２）
　植物体として、市販の水煮大豆および麦芽を使用した。水煮大豆および麦芽に対し、それぞれ実施例４と同様に、植物体（大豆）の乾燥重量に対して２０倍量の熱湯で前抽出を３度行った後に、実施例３と同様の酵素処理及び液体中での高温高圧処理を行い、大豆エキス（エキスＢ）および麦芽エキス（エキスＣ）を得た。なお、五訂データに基づき、大豆の乾燥重量は水煮大豆全量の３６．５％として換算した。エキスＢおよびエキスＣについて、Bxを１に調整した後に実施例１と同様に、エキス中のジケトピペラジンの分析を行った。表５に結果を示す。大豆や麦芽からもジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスが簡便に製造できることがわかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　（実施例６）植物体からのジケトピペラジンの製造（３）
　植物体として、実施例４と同じ茶葉を用い、前抽出、酵素処理、加熱処理の影響について検討した。サンプルを表６に示す。サンプルＮｏ．５及び６は、植物体からオリゴペプチドを生成させる工程と液体中での高温高圧処理によりオリゴペプチドを環化させてジペプチドを生成させる工程とを同時に加熱処理で実施していることを示す。前抽出は回数を２回にする他は、実施例４と同様にして行い、酵素処理は反応温度を５０℃に、また加熱処理は加熱時間を８時間に変える他は、実施例４と同様にして行った。得られた茶エキス（サンプルNo.1～8）について、実施例１と同様にLC-MS/MSを用いて分析を行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　表７に結果を示す。液体中での高温高圧処理を行わないと、ジケトピペラジンは生成しないことが明らかとなった（サンプルNo.1～4）。また、サンプルNo.5～8を比較して、以下の知見が得られた。
・前処理（抽出処理）を行うことで、得られる茶エキス中のジケトピペラジン濃度は増加した。
・加熱処理と酵素処理のいずれの方法でもオリゴペプチドが得られるが、酵素処理がより効果的かつ効率的であった。
　前抽出、加熱処理及び酵素処理を適切に用いることによて、Ｂｘあたりのジケトピペラジンの総量が、９００μｇ/１００g/Ｂｘ以上と格段に多量に含む植物エキス（茶エキス）が得られた。これより、本発明が、ジケトピペラジンを高濃度に含む植物エキス及びその製造に有利であることが示唆された。また、Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Gly-Pro)、Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo(Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、Cyclo(Pro-Pro)、Cyclo(Asp-Phe)、Cyclo(Val-Pro)、Cyclo(Pro-Tyr)、Cyclo(Met-Pro)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Phe)、及びCyclo(Leu-Leu)をそれぞれ１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上の濃度で含有する植物エキス（茶エキス）が得られることが示唆された。本発明は、これらジケトピペラジンの一以上の製造にも有用であることが示唆された。
　さらに、前処理や酵素処理を行うことによってCyclo(Phe-Phe)が生成した。これより、本発明によると、ＢｘあたりのCyclo(Phe-Phe)含量が１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上である、植物エキス（茶エキス）が得られることが示唆された。疎水性の高いCyclo(Phe-Phe)は、エキス中（水溶液中）で安定に維持できた。
　サンプルNo.5～8の香味評価を行ったが、エキス自体は苦味を始めとする味を伴わないエキスであった。No5.サンプルと同濃度のCyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Phe-Pro)及びCyclo(Leu-Trp)をそれぞれ1種類又は３種類全てを含有する水溶液を調製して香味評価を行ったところ、苦味が顕著に知覚されたことから、茶エキス中で存在することにより、苦味が低減されることが示唆された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　（実施例７）植物体からのジケトピペラジンの製造（４）
　実施例６において、前抽出の有用性が確認されたことから、前抽出の回数について検討した。植物体として、鹿児島県産の一番茶茶葉（品種：やぶきた、全窒素：6.3％）を用いた。ジケトピペラジンの濃度をより高めるため、前抽出の最適回数の検討を実施した。前抽出は次の要領で実施した。茶葉１０ｇに対して、熱湯２００ｇを加えて適宜攪拌し５分間抽出を行った。抽出終了後、140メッシュで濾過し、抽出液は廃棄した。前抽出を二回以上実施する水準においては、濾過して得た茶殻に再度熱湯を２００ｇ加えて同様の操作を繰り返した。このようにして、前抽出を０回～３回実施した茶葉（初期量１０ｇ）対して５０℃の湯を２００ｇ注ぎ、酵素プロテアーゼ（天野エンザイム、プロチンNY100）を１ｇ添加し、攪拌子で攪拌（300rpm）しながら、５０℃のウォーターバス内にて３時間反応させた。その後、９５℃、３０分間保持することで酵素を失活させた。得られた茶葉液体混合物をオートクレーブ（トミー精工）に入れて、１３５℃、８時間高温高圧処理を行った後の液体を140メッシュで濾過し、茶エキスを得た。得られた抽出液はそれぞれBx測定をした後に、実施例１同様にLC-MS/MSを用いてジケトピペラジンの濃度を定量した。
　表８に結果を示す。前抽出の回数に応じて、ジケトピペラジンの生成量が増加した。前抽出の回数と可溶性成分の除去率の関係を図３に示す。可溶性成分の除去率は、式「（前抽出で得られた採液量（総量）（ｇ）×そのブリックス［Bx］）／（植物体の重量に対して３０倍量の熱湯で１０分間抽出することを１０回繰り返した際の採液量（ｇ）×そのブリックス［Bx］）×１００（％）」で算出した。前抽出を３回繰り返すことで、可溶性成分を９５％以上除去できることがわかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　（実施例８）植物体からのジケトピペラジンの製造（５）
　実施例６において、酵素処理の有用性が確認されたことから、酵素の種類について検討を行った。検討した酵素は次の９種類である。
＜サンプルNo.9＞プロチンNY100：Bacillus amyloliquefaciens由来のプロテアーゼ（エンドペプチダーゼ）
＜サンプルNo.10＞サモアーゼ160：Bacillus stearothermophilus由来の耐熱性プロテアーゼ（エンドペプチダーゼ）
＜サンプルNo.11＞サモアーゼPC10F：Bacillus stearothermophilus由来のプロテアーゼ（エンドペプチダーゼ）
＜サンプルNo.12＞プロテアックス：Aspergillus oryzae由来の中性プロテアーゼ
＜サンプルNo.13＞プロテアーゼM：Ananas comosus 由来の中性プロテアーゼ
＜サンプルNo.14＞プロテアーゼP：Aspergillus melleus由来のアルカリ性プロテアーゼ
＜サンプルNo.15＞プロテアーゼA：Aspergillus oryzae由来の中性プロテアーゼ
＜サンプルNo.16＞ペプチダーゼR：Rhizopus oryzae由来の中性プロテアーゼ
　＜サンプルNo.17＞ニューラーゼF3G：Rhizopus niveus由来の酸性プロテアーゼ（エンドペプチダーゼ）
　植物体として、鹿児島県産の一番茶茶葉（品種：やぶきた、全窒素：６．３％）を用いた。茶葉１０ｇに実施例６と同様の前抽出を３回実施して得た茶滓に対して５５℃（サモアーゼ160およびサモアーゼPC10Fに関しては７０℃）の湯を２００ｇ注ぎ、各種酵素を１ｇ添加し、攪拌子で攪拌（300rpm）しながら、５５℃（サモアーゼ160およびサモアーゼPC10Fに関しては７０℃）のウォーターバス内にて３時間反応させた。その後、９５℃、３０分間保持することで酵素を失活させた。得られた茶葉液体混合物をオートクレーブ（トミー精工）に入れて、１３５℃、８時間高温高圧処理を加えた。処理後の液体を140メッシュで濾過し、茶エキスを得た。得られた抽出液はそれぞれBx測定をした後に、実施例１同様にLS-MS/MS測定によりジケトピペラジンの濃度を定量した。
　表９に結果を示す。細菌由来の酵素でエンドペプチダーゼ活性が高い酵素を用いた場合に、ジケトピペラジンの濃度が顕著に増加することがわかった。細菌由来の酵素の中でも、Bacillus subtilis由来の中性プロテアーゼやBacillus stearothermophilus由来のプロテアーゼを用いた場合に、特にジケトピペラジンの生成量が増加した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　（実施例９）植物体からのジケトピペラジンの製造（６）
　茶葉に対する酵素（プロチンNY100）濃度を０～２０％に変える他は、実施例４と同様にして茶エキスを製造した。得られた茶エキスについて、官能評価を実施するとともに、実施例１と同様にLC-MS/MSを用いて表１０に示す１７種のジケトピペラジンの含有量を定量し、その総量を求めた。
　表１０に結果を示す。酵素濃度は、植物原料に対して１重量％～２０重量％、好ましくは３重量％～１５重量％、より好ましくは４重量％～１０重量％の範囲であることが示唆された。また、いずれの茶エキスもエキス自体にほとんど風味はなく、飲食物に配合して利用可能なエキスであると判断した。特に、前抽出、酵素処理、加熱処理を組み合わせて行ったものの香味が優れていた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　（実施例１０）植物体からのジケトピペラジンの製造（７）
　高温高圧処理の条件を変える他は、実施例４と同様にして茶エキスを製造した。具体的には、植物体として、実施例４と同じの茶葉を同量用いた。前抽出を２０倍量の水から３０倍量の水に変えて３回繰り返して茶葉（茶滓）を得、実施例４と同様に酵素処理を行い、実施例４と同じ加熱処理装置を用いて表１１に示す種々の加熱条件で加熱処理を行った。得られた茶エキスについて、実施例１と同様に、エキス中のジケトピペラジンの分析を行った。
　表１１に結果を示す。ジケトピペラジンを生成するためには、１００℃以上（好ましくは１１５℃以上、より好ましくは１２５℃以上）の加熱が必要であることが示唆された。また、加熱時間は、３０分～１０時間、好ましくは２～８時間程度の加熱であることが示唆された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　（実施例１１）ジケトピペラジン含有飲食物の製造
　市販のＰＥＴ緑茶飲料４５０ｇに、実施例４で製造した茶エキスＡ及び／又は水を表１２のとおり５０ｇずつ添加して、全量５００ｇのジケトピペラジン含有茶飲料を調製した。これら茶飲料について香味の官能評価を実施した。評価は、苦味を中心に総合的な好ましさで判断し、◎：香味が非常に良好、○：香味良好、△：飲用可能な香味、×やや飲用が困難な香味、××：飲用が非常に困難な香味の五段階で行った。
　表１２に結果を示す。飲料５００ｇあたり、ジケトピペラジン混合体として実施例４の茶エキスＡを０～５０ｇ含有する茶飲料は、いずれも香味良好であることを確認した。このことから、本発明で得られる茶エキスが飲料香味の配合設計において、汎用性の高い素材であることが示唆された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013

Claims (10)

  1. シクロアラニルグルタミン、シクロアラニルアラニン、シクロセリルチロシン、シクログリシルロイシン、シクログリシルトリプトファン、シクロバリルバリン、シクロトリプトファニルチロシン、シクロロイシルトリプトファン及びシクロフェニルアラニルフェニルアラニンのいずれか一以上を、１０μｇ／１００ｇ／Ｂｘ以上の濃度で含有する、植物エキス。
  2. Ｂｘあたりのジケトピペラジンの総量が、９００μｇ/１００g/Ｂｘ以上である、請求項１記載の植物エキス。
  3. 植物エキスが、茶エキス、大豆エキス又は麦芽エキスである、請求項１または２記載の植物エキス。
  4. タンパク質を含有する植物体に分解処理を施して植物性ペプチドを生成させ、この植物性ペプチドを液体中で高温高圧処理することにより得られる植物エキス。
  5. 植物性ペプチドを、液体中で高温高圧処理する工程を含む、シクロロイシルロイシン及びシクロロイシルフェニルアラニンを含むジケトピペラジンを高濃度に含有する植物エキスの製造方法。
  6. 高温高圧処理工程での加熱条件が、１００～１７０℃の液体中で３０～数時間である、請求項５に記載の製造方法。
  7. 植物性ペプチドがオリゴペプチドである、請求項５又は６に記載の製造方法。
  8. 植物性ペプチドが、植物由来のタンパク質又はタンパク質を含有する植物体に分解処理を施して得られたものである、請求項５～７のいずれかに記載の製造方法。
  9. 分解処理が加熱処理または酵素処理である、請求項８に記載の製造方法。
  10. 分解処理が酵素処理であり、酵素がエンド型プロテアーゼである、請求項９記載の製造方法。
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SG (2) SG11201510062VA (ja)
TW (1) TWI665970B (ja)
WO (1) WO2014200000A1 (ja)

Cited By (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015194070A1 (ja) * 2014-06-20 2015-12-23 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド高含有組成物
WO2016133157A1 (ja) * 2015-02-19 2016-08-25 サントリーホールディングス株式会社 リパーゼ阻害剤
WO2017002894A1 (ja) * 2015-07-01 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 血圧降下用組成物
WO2017002838A1 (ja) * 2015-07-01 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 レニン－アンジオテンシン系抑制用組成物
WO2017002786A1 (ja) * 2015-07-02 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 Ｇｌｐ－２分泌促進用組成物
WO2017002906A1 (ja) * 2015-07-02 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 アルコール吸収抑制用組成物
WO2017002765A1 (ja) * 2015-06-30 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 カロリー低減用組成物
WO2017010538A1 (ja) * 2015-07-16 2017-01-19 サントリーホールディングス株式会社 動植物由来ペプチド含有血清カルノシン分解酵素阻害用組成物
WO2017014149A1 (ja) * 2015-07-17 2017-01-26 サントリーホールディングス株式会社 抗肥満用組成物
WO2017018404A1 (ja) * 2015-07-27 2017-02-02 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド及び甘味料を含有する組成物
WO2017034011A1 (ja) * 2015-08-27 2017-03-02 アサヒグループホールディングス株式会社 腸内有用菌増殖剤
JPWO2015194205A1 (ja) * 2014-06-20 2017-04-20 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド含有組成物
US9650415B2 (en) * 2014-06-20 2017-05-16 Suntory Holdings Limited Uric acid-lowering agent
WO2017115438A1 (ja) * 2015-12-28 2017-07-06 サントリーホールディングス株式会社 ビールテイスト飲料
WO2017115439A1 (ja) * 2015-12-28 2017-07-06 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
WO2017119476A1 (ja) * 2016-01-08 2017-07-13 サントリーホールディングス株式会社 神経性疾患予防用組成物
WO2017168718A1 (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
WO2017168717A1 (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
JPWO2016133155A1 (ja) * 2015-02-19 2017-11-30 サントリーホールディングス株式会社 α−グルコシダーゼ阻害剤
WO2017209022A1 (ja) * 2016-05-31 2017-12-07 サントリーホールディングス株式会社 カフェイン及びシクロアラニルアラニンを含有する組成物
WO2018117002A1 (ja) * 2016-12-21 2018-06-28 サントリーホールディングス株式会社 エピガロカテキンガレート及びシクロプロリルトレオニンを含有する飲食品
CN110099576A (zh) * 2016-12-21 2019-08-06 三得利控股株式会社 含有环丙氨酰丝氨酸和乙醇及/或丙二醇的饮食品
CN110099574A (zh) * 2016-12-21 2019-08-06 三得利控股株式会社 含有环天冬氨酰甘氨酸、葡萄糖及麦芽糖的饮食品
WO2022004715A1 (ja) * 2020-07-01 2022-01-06 サントリーホールディングス株式会社 ビールテイストアルコール飲料
WO2022004713A1 (ja) * 2020-07-01 2022-01-06 サントリーホールディングス株式会社 ノンアルコールビールテイスト飲料
WO2022004711A1 (ja) * 2020-07-01 2022-01-06 サントリーホールディングス株式会社 ノンアルコールビールテイスト飲料
JP2022012538A (ja) * 2020-07-01 2022-01-17 サントリーホールディングス株式会社 ビールテイストアルコール飲料
US11382911B2 (en) 2013-06-10 2022-07-12 Suntory Holdings Limited Plant extract containing diketopiperazine and method for producing same
CN119454499A (zh) * 2025-01-06 2025-02-18 广州天然国度生物科技有限公司 一种复合植物提取物及其制备方法和应用

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105580932B (zh) 2014-10-22 2021-11-30 可口可乐公司 制备具有不同味道的茶叶提取物的方法
CN107746426B (zh) * 2017-11-14 2020-12-01 重庆三峡学院 经蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法
CN108660174B (zh) * 2018-05-31 2021-09-14 郑州大学 一种抗疲劳、促进肠道益生菌增殖的芝麻生物活性肽
JP7269613B2 (ja) 2018-07-02 2023-05-09 株式会社Mizkan Holdings 発酵セルロース含有食酢及びその製造方法
CN109824757B (zh) * 2019-02-15 2020-12-25 山东蓬勃生物科技有限公司 一种环（异亮-异亮）二肽、其制备方法及其应用
JP7492823B2 (ja) * 2019-12-19 2024-05-30 株式会社カネカ 植物病害の防除剤及び植物の栽培方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003252896A (ja) 2002-02-26 2003-09-10 Toyohashi University Of Technology 高温高圧水を用いた環状ペプチドの合成方法
JP2010166911A (ja) 2008-12-26 2010-08-05 Suntory Holdings Ltd 環状ジペプチド含有飲料
JP2011136916A (ja) * 2009-12-25 2011-07-14 Suntory Holdings Ltd ２，５−ピペラジンジオン，３，６−ビス（フェニルメチル）−，（３ｓ，６ｓ）−を含有する酸性飲食品
KR20110120051A (ko) 2010-04-28 2011-11-03 공주대학교 산학협력단 2,5-다이케토피페라진 화합물의 제조방법
JP2012517214A (ja) 2009-12-25 2012-08-02 サントリーホールディングス株式会社 ２，５−ピペラジンジオン，３，６−ビス（フェニルメチル）−，（３ｓ，６ｓ）−含有飲食品
JP2012517998A (ja) 2009-12-25 2012-08-09 サントリーホールディングス株式会社 学習意欲改善剤
JP5456876B1 (ja) 2012-12-25 2014-04-02 ゼライス株式会社 環状ジペプチドの製造方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE65900B1 (en) * 1988-10-15 1995-11-29 Satake Eng Co Ltd Apparatus for evaluating quality of raw coffee beans
WO2001056959A1 (en) 2000-02-01 2001-08-09 Stevia Aps A substance for the use in a dietary supplementation or for the preparation of a medicament for the treatment of non-insulin dependent diabetes mellitus, hypertension and/or the metabolic syndrome
EP1698703A4 (en) * 2003-11-28 2011-08-17 Kyowa Hakko Bio Co Ltd PROCESS FOR DIPEPTIDE PRODUCTION
JP4605631B2 (ja) 2004-01-23 2011-01-05 カルピス株式会社 アンジオテンシン変換酵素阻害剤
WO2006062133A1 (ja) * 2004-12-08 2006-06-15 Takasago International Corporation 酵素処理茶類エキス、酵素処理茶類ナチュラルアロマ、及び酵素処理茶類ナチュラルアロマ濃縮エキスの製造方法およびそれによって得られる酵素処理茶類エキス、酵素処理茶類ナチュラルアロマならびに酵素処理茶類ナチュラルアロマ濃縮エキス
US20090074895A1 (en) 2005-05-02 2009-03-19 Vanadis Bioscience Ltd Composition and uses thereof
US8945652B2 (en) 2005-11-23 2015-02-03 The Coca-Cola Company High-potency sweetener for weight management and compositions sweetened therewith
US20080107787A1 (en) 2006-11-02 2008-05-08 The Coca-Cola Company Anti-Diabetic Composition with High-Potency Sweetener
CN101461441A (zh) * 2008-12-29 2009-06-24 浙江工商大学 茶叶蛋白的双酶提取法
SG187986A1 (en) 2010-09-07 2013-03-28 Dmi Acquisition Corp Treatment of diseases
US20140243514A1 (en) 2010-11-19 2014-08-28 Cargill, Incorporated Method for the enrichment of rebaudioside b and/or rebaudioside d in stevia-derived glycoside compositions using adsorb-desorb chromatography with a macroporous neutral adsorbent resin
AU2012218372C1 (en) 2011-02-17 2016-09-08 Suntory Holdings Limited Method for manufacturing ingredient for tea drink
BR112014028819A2 (pt) 2012-05-22 2017-07-25 Purecircle Sdn Bhd glicosídeos de esteviol de pureza elevada
KR102189566B1 (ko) 2013-06-10 2020-12-11 산토리 홀딩스 가부시키가이샤 디케토피페라진을 함유하는 식물 엑기스 및 그 제조 방법
CN104817615A (zh) 2014-01-30 2015-08-05 陈光健 寡肽cd05及其制备方法和应用
WO2015194035A1 (ja) 2014-06-20 2015-12-23 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド含有組成物
AU2015278036A1 (en) 2014-06-20 2017-01-05 Suntory Holdings Limited Carbohydrate metabolism - ameliorating agent
US9650415B2 (en) 2014-06-20 2017-05-16 Suntory Holdings Limited Uric acid-lowering agent
JP6796487B2 (ja) 2014-06-20 2020-12-09 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド高含有組成物

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003252896A (ja) 2002-02-26 2003-09-10 Toyohashi University Of Technology 高温高圧水を用いた環状ペプチドの合成方法
JP2010166911A (ja) 2008-12-26 2010-08-05 Suntory Holdings Ltd 環状ジペプチド含有飲料
JP2011136916A (ja) * 2009-12-25 2011-07-14 Suntory Holdings Ltd ２，５−ピペラジンジオン，３，６−ビス（フェニルメチル）−，（３ｓ，６ｓ）−を含有する酸性飲食品
JP2012517214A (ja) 2009-12-25 2012-08-02 サントリーホールディングス株式会社 ２，５−ピペラジンジオン，３，６−ビス（フェニルメチル）−，（３ｓ，６ｓ）−含有飲食品
JP2012517998A (ja) 2009-12-25 2012-08-09 サントリーホールディングス株式会社 学習意欲改善剤
KR20110120051A (ko) 2010-04-28 2011-11-03 공주대학교 산학협력단 2,5-다이케토피페라진 화합물의 제조방법
JP5456876B1 (ja) 2012-12-25 2014-04-02 ゼライス株式会社 環状ジペプチドの製造方法

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AGR. BIOL. CHEM., vol. 38, no. 5, 1974, pages 927 - 932
BIOSCIENCE & INDUSTRY, vol. 60, no. 7, 2002, pages 454 - 457
CHEMISTRY BIOLOGY, vol. 8, 2001, pages 997 - 1010
HIROSHI KANZAKI: "Production of novel bioactive compounds by cyclic dipeptide dehydrogenase", BIOSCIENCE & INDUSTRY, vol. 60, no. 7, 1 July 2002 (2002-07-01), pages 26 - 29, XP008181645 *
J. COMB. CHEM., vol. 3, 2001, pages 453 - 460
PEPTIDES, vol. 16, no. 1, 1995, pages 151 - 164
PRASAD, C. ET AL.: "Could dietary proteins serve as cyclo(His-Pro) precursors?", NEUROPEPTIDES, vol. 19, no. 1, May 1991 (1991-05-01), pages 17 - 21, XP026324411 *
PRASAD, C.: "Bioactive cyclic dipeptides", PEPTIDES, vol. 16, no. 1, 1995, pages 151 - 164, XP002477201 *
See also references of EP3012264A4

Cited By (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11382911B2 (en) 2013-06-10 2022-07-12 Suntory Holdings Limited Plant extract containing diketopiperazine and method for producing same
US9650415B2 (en) * 2014-06-20 2017-05-16 Suntory Holdings Limited Uric acid-lowering agent
WO2015194070A1 (ja) * 2014-06-20 2015-12-23 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド高含有組成物
JPWO2015194205A1 (ja) * 2014-06-20 2017-04-20 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド含有組成物
WO2016133157A1 (ja) * 2015-02-19 2016-08-25 サントリーホールディングス株式会社 リパーゼ阻害剤
JPWO2016133157A1 (ja) * 2015-02-19 2017-11-30 サントリーホールディングス株式会社 リパーゼ阻害剤
JPWO2016133155A1 (ja) * 2015-02-19 2017-11-30 サントリーホールディングス株式会社 α−グルコシダーゼ阻害剤
WO2017002765A1 (ja) * 2015-06-30 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 カロリー低減用組成物
WO2017002894A1 (ja) * 2015-07-01 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 血圧降下用組成物
WO2017002838A1 (ja) * 2015-07-01 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 レニン－アンジオテンシン系抑制用組成物
JPWO2017002894A1 (ja) * 2015-07-01 2018-04-19 サントリーホールディングス株式会社 血圧降下用組成物
JPWO2017002838A1 (ja) * 2015-07-01 2018-04-12 サントリーホールディングス株式会社 レニン−アンジオテンシン系抑制用組成物
JPWO2017002906A1 (ja) * 2015-07-02 2018-04-19 サントリーホールディングス株式会社 アルコール吸収抑制用組成物
JPWO2017002786A1 (ja) * 2015-07-02 2018-04-12 サントリーホールディングス株式会社 Ｇｌｐ−２分泌促進用組成物
WO2017002906A1 (ja) * 2015-07-02 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 アルコール吸収抑制用組成物
WO2017002786A1 (ja) * 2015-07-02 2017-01-05 サントリーホールディングス株式会社 Ｇｌｐ－２分泌促進用組成物
WO2017010538A1 (ja) * 2015-07-16 2017-01-19 サントリーホールディングス株式会社 動植物由来ペプチド含有血清カルノシン分解酵素阻害用組成物
JPWO2017014149A1 (ja) * 2015-07-17 2018-04-26 サントリーホールディングス株式会社 抗肥満用組成物
WO2017014149A1 (ja) * 2015-07-17 2017-01-26 サントリーホールディングス株式会社 抗肥満用組成物
AU2016299590B2 (en) * 2015-07-27 2022-09-01 Suntory Holdings Limited Composition containing cyclic dipeptide and sweetening agent
US11219663B2 (en) 2015-07-27 2022-01-11 Suntory Holdings Limited Composition containing cyclic dipeptide and sweetening agent
WO2017018404A1 (ja) * 2015-07-27 2017-02-02 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド及び甘味料を含有する組成物
JPWO2017018404A1 (ja) * 2015-07-27 2018-05-17 サントリーホールディングス株式会社 環状ジペプチド及び甘味料を含有する組成物
WO2017034011A1 (ja) * 2015-08-27 2017-03-02 アサヒグループホールディングス株式会社 腸内有用菌増殖剤
JPWO2017034011A1 (ja) * 2015-08-27 2018-07-26 アサヒグループホールディングス株式会社 腸内有用菌増殖剤
WO2017115439A1 (ja) * 2015-12-28 2017-07-06 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
WO2017115438A1 (ja) * 2015-12-28 2017-07-06 サントリーホールディングス株式会社 ビールテイスト飲料
WO2017119476A1 (ja) * 2016-01-08 2017-07-13 サントリーホールディングス株式会社 神経性疾患予防用組成物
JPWO2017168717A1 (ja) * 2016-03-31 2019-02-28 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
JPWO2017168718A1 (ja) * 2016-03-31 2019-02-28 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
WO2017168718A1 (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
WO2017168717A1 (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 サントリーホールディングス株式会社 容器詰飲料
WO2017209022A1 (ja) * 2016-05-31 2017-12-07 サントリーホールディングス株式会社 カフェイン及びシクロアラニルアラニンを含有する組成物
JPWO2017209022A1 (ja) * 2016-05-31 2019-03-28 サントリーホールディングス株式会社 カフェイン及びシクロアラニルアラニンを含有する組成物
AU2017272650B2 (en) * 2016-05-31 2021-04-01 Suntory Holdings Limited Composition containing caffeine and cycloalanylalanine
AU2017381503B2 (en) * 2016-12-21 2022-03-17 Suntory Holdings Limited Food and beverages containing epigallocatechin gallate and cyclo(prolyl-threonine)
WO2018117002A1 (ja) * 2016-12-21 2018-06-28 サントリーホールディングス株式会社 エピガロカテキンガレート及びシクロプロリルトレオニンを含有する飲食品
CN110099574A (zh) * 2016-12-21 2019-08-06 三得利控股株式会社 含有环天冬氨酰甘氨酸、葡萄糖及麦芽糖的饮食品
CN110099576A (zh) * 2016-12-21 2019-08-06 三得利控股株式会社 含有环丙氨酰丝氨酸和乙醇及/或丙二醇的饮食品
CN110099574B (zh) * 2016-12-21 2023-02-28 三得利控股株式会社 含有环天冬氨酰甘氨酸、葡萄糖及麦芽糖的饮食品
CN110099576B (zh) * 2016-12-21 2023-02-28 三得利控股株式会社 含有环丙氨酰丝氨酸和乙醇及/或丙二醇的饮食品
JPWO2022004715A1 (ja) * 2020-07-01 2022-01-06
WO2022004713A1 (ja) * 2020-07-01 2022-01-06 サントリーホールディングス株式会社 ノンアルコールビールテイスト飲料
WO2022004711A1 (ja) * 2020-07-01 2022-01-06 サントリーホールディングス株式会社 ノンアルコールビールテイスト飲料
WO2022004715A1 (ja) * 2020-07-01 2022-01-06 サントリーホールディングス株式会社 ビールテイストアルコール飲料
JP2022012538A (ja) * 2020-07-01 2022-01-17 サントリーホールディングス株式会社 ビールテイストアルコール飲料
JP7411513B2 (ja) 2020-07-01 2024-01-11 サントリーホールディングス株式会社 ビールテイストアルコール飲料
CN119454499A (zh) * 2025-01-06 2025-02-18 广州天然国度生物科技有限公司 一种复合植物提取物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
AU2014279129A1 (en) 2016-01-07
TWI665970B (zh) 2019-07-21
KR102189566B1 (ko) 2020-12-11
US20190336569A1 (en) 2019-11-07
CN105307514A (zh) 2016-02-03
JP7121059B2 (ja) 2022-08-17
CN105307514B (zh) 2018-11-27
RU2015155291A (ru) 2017-07-14
EP3012264B1 (en) 2020-03-18
CA2914836A1 (en) 2014-12-18
MY178970A (en) 2020-10-26
JP6669802B2 (ja) 2020-03-18
AU2014279129B2 (en) 2018-07-12
EP3012264A4 (en) 2017-01-25
JP2020073578A (ja) 2020-05-14
JP2018126158A (ja) 2018-08-16
JP6669497B2 (ja) 2020-03-18
SG10201710187UA (en) 2018-01-30
EP3012264A1 (en) 2016-04-27
US11382911B2 (en) 2022-07-12
TW201536194A (zh) 2015-10-01
CA2914836C (en) 2022-05-31
ES2781558T3 (es) 2020-09-03
HK1218841A1 (zh) 2017-03-17
SG11201510062VA (en) 2016-01-28
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