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WO2013100660A2 - Ｐｇｅ2 합성 억제제를 포함하는 안구 통증 치료용 약학 조성물 - Google Patents

Ｐｇｅ2 합성 억제제를 포함하는 안구 통증 치료용 약학 조성물 Download PDF

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WO2013100660A2
WO2013100660A2 PCT/KR2012/011631 KR2012011631W WO2013100660A2 WO 2013100660 A2 WO2013100660 A2 WO 2013100660A2 KR 2012011631 W KR2012011631 W KR 2012011631W WO 2013100660 A2 WO2013100660 A2 WO 2013100660A2
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WO
WIPO (PCT)
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eye
pain
pge2
protein
pharmaceutical composition
Prior art date
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PCT/KR2012/011631
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English (en)
French (fr)
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WO2013100660A3 (ko
Inventor
이형근
심종우
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Industry Academic Cooperation Foundation of Yonsei University
Original Assignee
Industry Academic Cooperation Foundation of Yonsei University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Priority to JP2014550020A priority patent/JP5870211B2/ja
Publication of WO2013100660A2 publication Critical patent/WO2013100660A2/ko
Publication of WO2013100660A3 publication Critical patent/WO2013100660A3/ko
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    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating ocular pain comprising a PGE2 synthesis inhibitor.
  • Dry eye syndrome is a very common disease with a prevalence of 5.5-15%, depending on the study population, age, and diagnostic criteria used in various epidemiologic studies worldwide.
  • the disease is characterized by eye pain, irregular corneal surfaces, blurred and fluctuating vision, and increased risk of corneal ulcers.
  • Altered corneal permeability in chronic dry eye and dry keratitis derived from an unstable tear film has been known to cause inflammation, which is due to an increase in inflammation-mediated chemokines and cytokines in the tear, immune activity by conjunctival epithelium and adhesion molecules ( Increased expression of HLA-DR and intercellular adhesion molecule [ICAM-1]), and increased T lymphocyte counts in the conjunctiva.
  • IAM-1 intercellular adhesion molecule
  • Corneal ulcers resulting from keratoconjunctivitis sicca can cause vision loss, vision loss and even eye loss.
  • the concentration and activity of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) has been reported to increase significantly in the corneal epithelium and tear of experimental dry eye (EDE) mice as well as in tears of dry eye patients.
  • Dry eye syndrome generally causes tears or fluctuations in the composition of the tear film, causing various uncomfortable symptoms.
  • a new form of dry eye syndrome has been developed due to diseases caused by changes in tear film composition and neurogenic factors such as dry eye syndrome after LASIK (American Journal of Ophthalmology, 140 507, 2005).
  • Dry eye syndrome is found in more than 50% of all patients who visit ophthalmologists, and the elderly population, especially more than 70 to 80% of women who pass menopause, complain of eye discomfort due to dry eye syndrome.
  • the cause of dry eye was thought to be due to the lack of aqueous layer due to decreased tear production in the tear glands, but recently, the inflammatory response or endogenous inflammatory response due to external stimulation has been found to be the primary cause.
  • Chronic ocular surface damage caused by disorder of epithelial cells and degradation of the interaction between corneal epithelial cells and corneal parenchymal cells has been a problem.
  • Dry eye may be caused by aging, hormonal changes, environmental factors (wind, heat, dust, tobacco smoke, hair dryers), reduction of eye blink frequency (VDT syndrome), contact lens wear, LASIK, cause of medication It can be caused by a variety of causes, including immune diseases (lupus, rheumatoid arthritis and Sjogren's syndrome) (American Journal of Ophthalmology, 137, 337-342, 2004).
  • NASAID a non-specific COX enzyme inhibitor used to reduce inflammation
  • the drug is known to reduce inflammation and reduce pain, but it is also known to cause additional activation to produce leukotrienes, lipoxins and hydroperoxyeicosatetraenoic acids.
  • non-specific COX enzyme inhibitors have been developed and used as eye drops, but serious side effects such as corneal perforation have been reported to the academic community by activation of the additional inflammatory products specified above.
  • the present inventors have made intensive efforts to develop a pharmaceutical composition for treating or preventing ocular diseases causing eye pain, including dry eye syndrome, and thus, expression of PGE2 (prostaglandin E2) in the tears of patients with ocular pain symptoms compared to normal people. It was confirmed that the level is high, and when the PGE2 synthesis inhibitor was applied to an animal model, it was confirmed that the eye pain treatment effect was completed and the present invention was completed.
  • PGE2 prostaglandin E2
  • An object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating ocular pain comprising PGE2 synthesis inhibitor as an active ingredient, and to provide a kit for diagnosing ocular pain, which can measure the level of PGE2.
  • the present invention on the basis of a high level of PGE2 and a low level of PGD2 in tears of a patient with ocular pain symptoms, provides a pharmaceutical composition for preventing or treating ocular pain comprising PGE2 synthesis inhibitor as an active ingredient, A method of screening for reducing ocular pain relief agents is provided. Furthermore, PGE2, PGD2 and COX2 levels may be measured in the tears of patients to provide kits for diagnosing eye pain and information for diagnosing eye pain.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of eye pain comprising PGE2 synthesis inhibitor as an active ingredient.
  • the present invention provides a dietary supplement for preventing or improving ocular pain, comprising as an active ingredient a PGE2 synthesis inhibitor in another embodiment.
  • the PGE2 synthesis inhibitor is 5-Deoxy-A12, 14-PGJ2, Exisulind, NS-398, Leukotnene C4, mk-886, Analogues of MK-886, MF63, Thienopyrrole, Naphthalene disulphonamide, Resveratrol and ⁇ - It may be characterized in that it is selected from the group consisting of hydroxybutenolide.
  • the pharmaceutical composition may be characterized by reducing the expression level of PGE2.
  • the eye pain may be characterized in that the eye pain due to dry eye, inflammatory eye disease or the use of contact lenses.
  • the pharmaceutical composition may be in the form of suspensions, powders, powders, granules, tablets, sustained release preparations, injections, ointments, eye drops, capsules, contact lens cleaners or contact lens lubricants,
  • the composition may be characterized as targeting humans.
  • the health functional food may be characterized in that the capsule, tablets, granules, powder or beverage form.
  • (c) providing a method of screening an ocular pain relief agent comprising determining that the sample is a substance that alleviates ocular pain when the amount or activity of the protein is determined to be modulated.
  • (c) providing a method for screening an ocular pain relief agent, comprising determining that the sample is a substance that alleviates ocular pain when the expression level of the gene is measured to be controlled to be reduced, and the gene encoding the PGE2 protein is It may be characterized by represented by SEQ ID NO: 2.
  • (c) providing a method of screening an ocular pain relief agent comprising determining that the sample is a substance that alleviates ocular pain when the amount or activity of the protein is determined to be modulated.
  • (c) providing a method of screening an ocular pain relief agent, comprising determining that the sample is a substance that alleviates ocular pain when the expression level of the gene is measured to be controlled to be reduced, and the gene encoding the COX2 protein is It may be characterized by represented by SEQ ID NO: 4.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating ocular pain, including the COX2 inhibitor as an active ingredient.
  • the present invention provides a method of preparing a biologically-modified product, comprising: (a) measuring the level of PGE2 represented by SEQ ID NO: 1 from a biological sample isolated from a patient;
  • the information providing method may further comprise the step of measuring the level of PGD2 or COX2 and comparing with the level of the normal control sample. At this time, when the PGE2 and COX2 levels are overexpressed than the normal control, and the PGD2 level is lower than the normal control, eye pain may be determined.
  • the present invention provides a kit for diagnosing or predicting eye pain, which includes an antibody that specifically binds to a protein attached to PGE2.
  • the kit for diagnosing or predicting eye pain may further include an antibody specifically binding to a protein attached to PGD2 or a protein attached to COX2.
  • the kit is characterized in that it comprises an antibody that attaches a protein for detection to PGE2, PGD2 and COX2 and specifically binds to the adhesion protein.
  • the attached protein may be horseradish peroxidase, alkaline phosphatase or ⁇ -galactosidase.
  • the levels of PGE2, PGD2 and COX2 are enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), liquid chromatography-mass spectrometry. It may be characterized by measuring by (LC-MS) or LC-MS / MS.
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • RIA radioimmunoassay
  • GC-MS gas chromatography-mass spectrometry
  • LC-MS liquid chromatography-mass spectrometry
  • composition of the present invention may be prepared as a pharmaceutical composition, a neutraceutical composition or a food composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical compositions of the present invention are those commonly used in the preparation, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, Calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like It doesn't happen.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include a lubricant, a humectant, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifier, a suspending agent, a preservative, and the like.
  • a lubricant e.g., talc, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, kaolin, aminol, sorbitol, sorbitol, sorbitol, talame, sorbitol, sorbitol, sorbitol, talame, fame, famb, fambambambambambambambambambambambambambambambambambambucil, a glycerin,
  • Suitable dosages of the pharmaceutical compositions of the present invention may vary depending on factors such as the formulation method, mode of administration, age, weight, sex, morbidity, condition of food, time of administration, route of administration, rate of excretion and response to response of the patient. Can be.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention may be 0.001-100 mg / kg body weight, 0.01-80 mg / kg body weight, 0.1-60 mg / kg body weight per day on an adult basis.
  • the doctor or pharmacist may be divided administration once a day to several times.
  • the formulation of 0.001 to 3% (w / v, below), preferably about 0.01 to 1% is applied once to several times per day.
  • the pharmaceutical and health food composition of the present invention may be formulated by using a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to a method which can be easily carried out by those skilled in the art. It may be prepared in a dosage form or incorporated into a multi-dose container.
  • the formulation of the composition of the present invention is a solution, suspension, syrup, emulsion, liposome, extract, powder, powder, granule, tablet, sustained release eye drop, capsule, contact It is a lens cleaner and a contact lens lubricant, and may further include a dispersant or stabilizer.
  • diagnosis refers to identifying the presence or characteristics of a pathological condition, determining the susceptibility of an object to a specific disease or condition, determining whether an object currently has a particular disease or condition. And determining the prognosis of one subject with a particular disease or condition.
  • sample refers to an unknown candidate used in screening to test whether it affects the expression level of a gene or affects the amount or activity of a protein.
  • the sample includes, but is not limited to, chemicals, nucleotides, antisense-RNAs and natural extracts.
  • Measurement of the change in the expression level of the gene can be carried out through various methods known in the art. For example, RT-PCR (Sambrook et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Press (2001)), Northern blotting (Peter B. Kaufma et al., Molecular and Cellular Methods in Biology and Medicine , 102-108, CRC press), hybridization reaction using cDNA microarray (Sambrook et al., Molecular Cloning.A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Press (2001)) or in situ hybridization reaction (Sambrook et al. , Molecular Cloning.A Laboratory Manual, 3rd ed.Cold Spring Harbor Press (2001)).
  • RNA is isolated from cells treated with a sample, and then single-stranded cDNA is prepared using oligo dT primers and reverse transcriptase. Then, single-stranded cDNA is used as a template, and PCR reaction is performed using a gene-specific primer set. Gene-specific primer sets are listed in Table 2 below. Then, the PCR amplification product is electrophoresed, and the formed band is analyzed to measure the change in the expression level of the gene.
  • Changes in the amount of protein can be carried out through various immunoassay methods known in the art. Examples include, but are not limited to, radioimmunoassay, radioimmunoprecipitation, immunoprecipitation, enzyme-linked immunosorbentassay (ELISA), capture-ELISA, inhibition or hardwood assays, and sandwich assays.
  • the immunoassay or method of immunostaining is described in Enzyme Immunoassay, ET Maggio, ed., CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980; Gaastra, W., Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in Methods in Molecular Biology, Vol.
  • certain embodiments of the present invention comprise the steps of: (a) coating an extract from the cells to which the sample has been treated on the surface of the solid substrate; (b) reacting the protein-specific antibody with the cell extract; (c) reacting the resultant of step (b) with a secondary antibody to which an enzyme is bound; And (d) measuring the activity of the enzyme.
  • Suitable as the solid substrate are hydrocarbon polymers (eg polystyrene and polypropylene), glass, metals or gels, most preferably microtiter plates.
  • Enzymes bound to the secondary antibody include, but are not limited to, enzymes that catalyze color reaction, fluorescence, luminescence or infrared reaction, for example, alkaline phosphatase, ⁇ -galactosidase, hose Radish peroxidase, luciferase and cytochrome P450.
  • alkaline phosphatase When alkaline phosphatase is used as the enzyme binding to the secondary antibody, bromochloroindolyl phosphate (BCIP), nitro blue tetrazolium (NBT), naphthol-ASB1-phosphate (naphthol-AS-B1) as a substrate chloronaphthol, aminoethylcarbazole, diaminobenzidine, D-luciferin, lucigenin (bis-N) when colorimetric substrates such as -phosphate) and enhanced chemifluorescence (ECF) are used, and horse radish peroxidase is used.
  • BCIP bromochloroindolyl phosphate
  • NBT nitro blue tetrazolium
  • naphthol-ASB1-phosphate naphthol-AS-B1
  • aminoethylcarbazole aminoethylcarbazole
  • diaminobenzidine diaminobenz
  • -Methylacridinium nitrate resorupin benzyl ether, luminol, amplex red reagent (10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine), TMB (3,3,5,5-tetramethylbenzidine), ABTS Substrates such as (2,2'-Azine-di [3-ethylbenzthiazoline sulfonate]) and o-phenylenediamine (OPD) can be used.
  • Measurement of the final enzyme activity or signal in the ELISA method can be carried out according to various methods known in the art. If biotin is used as a label, the signal can be easily detected with streptavidin and luciferin if luciferase is used.
  • PGE2, PGD2 and COX2 are preferably detectably labeled.
  • Various methods available for labeling biomolecules are well known to those skilled in the art and are contemplated within the scope of the present invention. Such methods include Tijssen, 'Practice and theory of enzyme immuno assays', Burden, RH and von Knippenburg (Eds), Volume 15 (1985), 'Basic methods in molecular biology'; Davis LG, Dibmer MD; Battey Elsevier (1990), Mayer et al., (Eds) 'Immunochemical methods in cell and molecular biology' Academic Press, London (1987), or in the series 'Methods in Enzymology', Academic Press, Inc.
  • marker types include enzymes, radioisotopes, colloidal metals, fluorescent compounds, chemiluminescent compounds and bioluminescent compounds.
  • markers include phosphors (eg, fluresin, rhodamine, Texas red, etc.), enzymes (eg, horseradish peroxidase, ⁇ -galactosidase, alkaline phosphatase), radioisotopes (eg, 32 P or 125I), biotin, digoxigenin, colloidal metals, chemiluminescent or bioluminescent compounds (eg, dioxetane, luminol or acridinium). Labeling methods such as covalent binding of enzymes or biotinyl groups, iodide methods, phosphorylation methods, biotinylation methods and the like are well known in the art.
  • enzymes eg, horseradish peroxidase, ⁇ -galactosidase, alkaline phosphatase
  • radioisotopes eg, 32 P or 125I
  • biotin digoxigenin
  • colloidal metals eg, chemilum
  • Detection methods include, but are not limited to, autoradiography, fluorescence microscopy, direct and indirect enzyme reactions, and the like. Commonly used detection assays include radioisotopes or non-radioisotope methods. These include Western blotting, overlay-analysis, Radioimmuno Assay (RIA) and Immune Radioimmunometric Assay (IRMA), Enzyme Immuno Assay (EIA), Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA), Fluorescent Immuno Assay (CIA) and Chemiluminoluminescent Immune Assay).
  • RIA Radioimmuno Assay
  • IRMA Immune Radioimmunometric Assay
  • EIA Enzyme Immuno Assay
  • ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
  • CIA Fluorescent Immuno Assay
  • Chemiluminoluminescent Immune Assay Chemiluminoluminescent Immune Assay
  • the ocular pain symptoms can be improved by selectively suppressing the expression level of PGE2, and furthermore, for the treatment and prevention of dry eye syndrome. It works.
  • PGD2 and COX2 can easily diagnose the symptoms of eye pain in the clinic can be widely used to determine the condition of the patient as well as dry eye patients.
  • Figure 1 is a graph showing the relationship between the degree of PGE2 / PGD2 level contained in the tears of patients with eye pain symptoms and the symptoms of patients.
  • Figure 2 is a result showing the degree of eye discomfort after instilling a COX2 inhibitor in the mouse causing the eye pain.
  • Figure 3 is a result of measuring the mRNA level of TNF-alpha after instilling a COX2 inhibitor in the eye-induced mice.
  • Figure 4 is a result of measuring the mRNA level of IL-1 after instilling a COX2 inhibitor in the eye-induced mice.
  • the degree of symptom was checked by visual analogue scale before tears were collected.
  • the visual pain scale was scaled from 0 to 10, with 0 being asymptomatic and 10 being unbearable pain or discomfort. It was statistically analyzed whether this was related to changes in prostaglandin levels.
  • each substance known as a PGE synthesis inhibitor was divided into experimental groups and control groups. 5 ⁇ g / ml celecoxib (sigma) was added twice a day to the experimental group, and 0.1% hyaluronic acid (hyaluronic acid) was added to the control group.
  • PGE2 synthesis inhibitors were administered to patients with ocular pain symptoms, and the number of eye blinks was reduced compared to the control group.
  • PGE2 synthesis inhibitors used were 15-Deoxy-A12, 14-PGJ2, Exisulind, NS-398, Leukotnene C4, mk-886, Analogues of MK-886, MF63, Thienopyrrole, Naphthalene disulphonamide, Resveratrol, ⁇ -hydroxybutenolide .
  • selective COX2 inhibitors were administered to patients with ocular pain symptoms and the number of eye blinks was reduced compared to the control group (Diclofenac) with non-selective COX2 inhibitory properties.
  • Selective COX2 inhibitors were structurally classified and used as Nimesulud, Celecoxib, Meloxicam, S-2474 (3,5-di-tert-buryl-4-hydroxybensylidene) and cis-Stilbenes as the representative substances. Ibuprofen was included as the NSAID with.
  • the ocular pain symptoms can be improved by selectively suppressing the expression level of PGE2, and furthermore, for the treatment and prevention of dry eye syndrome. It is useful because it works.
  • SEQ ID NOs: 1 and 2 represent the PGE2 protein sequence and the gene sequence encoding the protein, respectively
  • SEQ ID NOs: 3 and 4 represent the COX2 protein sequence and the gene sequence encoding the protein, respectively.

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Abstract

본 발명은 PGE2 합성 억제제를 포함하는 안구 통증 치료용 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 이용하면 PGE2의 발현 수준을 선택적으로 억제시킴으로써 안구 통증 증상을 호전시킬 수 있고, 나아가 안구건조증의 치료 및 예방, 수술 후 상태 등의 다양한 염증 발현 상황에 의한 안구 불편감 해소 및 예방에 효과가 있다. 또한, PGE2, PGD2 및 COX2의 양을 검출하는 키트를 이용하여 임상에서 손쉽게 안구 통증 증상을 진단할 수 있어 안구건조증 환자 뿐만 아니라 안 수술 후 환자의 상태를 파악하는 데 널리 활용될 수 있다.

Description

ＰＧＥ2 합성 억제제를 포함하는 안구 통증 치료용 약학 조성물
본 발명은 PGE2 합성 억제제를 포함하는 안구 통증 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
안구건조증은 전 세계적으로 다양한 역학적 연구에 이용되는 연구 집단, 연령 및 진단 기준에 따라 유병률이 5.5-15%로 보고된 매우 일반적인 질환이다. 이 질환은 안구통증, 불규칙한 각막 표면, 흐리고 변동폭이 커진 시력(blurred and fluctuating vision) 및 증가된 각막 궤양의 위험성과 같은 특징을 가진다. 불안정한 눈물막(tear film)으로부터 유래된 만성 안구 건조증 및 건성 각막염에서 변경된 각막 투과성은 염증을 일으키는 것으로 알려져 왔고, 이는 눈물에 염증 매개 케모카인 및 사이토카인의 증가, 결막 상피에 의한 면역 활성 및 접착 분자(HLA-DR 및 세포간 접착 분자 [ICAM-1])의 발현 증가, 그리고 결막(conjunctiva)에 T 림프구 수의 증가에 의해 입증되었다. 건성 각결막염(keratoconjunctivitis sicca, KCS)으로부터 생긴 각막 궤양은 시력 감퇴, 시력 상실 및 심지어 눈의 소실을 야기할 수 있다. MMP-9(matrix metalloproteinase-9)의 농도 및 활성은 안구 건조증 환자의 눈물뿐만 아니라 실험용 안구 건조증(EDE) 마우스의 각막 상피 및 눈물에서도 크게 증가하는 것으로 보고되어 왔다. 안구건조증은 일반적으로 눈물이 부족하거나 그 성분에 변동이 생겨 눈물층(Tear film)에 이상이 생기면서 여러 가지 불편한 증상을 일으키게 된다. 최근에는 눈물막의 조성의 변화에 의한 질환, 라식수술 후에 일어나는 안구건조증과 같은 신경인성(neurogenic) 요소로 인한 새로운 형태의 안구건조증들이 발생하여 그 정의가 더욱 확대해석 되고 있다(American Journal of Ophthalmology, 140. 507, 2005).
이러한 안구건조증은 안과를 방문하는 전체 환자의 50% 이상에서 발견되고 있고, 노령 인구, 특히, 갱년기를 지난 여성들의 70 내지 80% 이상이 안구건조증으로 인한 눈의 불편을 호소하고 있다. 과거에는 안구건조증의 발생 원인이 눈물샘에서의 눈물 생성 저하로 인한 수성층의 부족에 기인한 것으로 생각하였으나, 최근에는 외부자극으로 인한 염증반응 또는 내인성 염증반응이 1차 요인으로 밝혀지고 있으며, 이로 인한 각막상피세포의 장애 및 각막상피세포 및 각막실질세포 간의 상호작용의 저하로 발생하는 만성적 안구 표면손상이 문제가 되고 있다. 안구건조증은 노화, 호르몬 변화, 환경적인 요인(바람, 열, 먼지, 담배연기, 헤어드라이어), 눈 깜박거림 빈도의 감소(VDT 증후군), 콘택트렌즈착용, 라식수술, 약물복용에 의한 원인, 자가면역질환(루푸스, 류마티스관절염 그리고 Sjogren's 증후군)등 다양한 원인에 의해 발병할 수 있다(American Journal of Ophthalmology, 137, 337-342, 2004).
한편, 염증을 줄여주기 위해 사용되는 비 특이적인 COX 효소 억제제인 NASAID 는 프로스타글란딘(prostaglandin) 레벨을 비특이적으로 줄여주는 효과를 가지고 있다. 이 약물은 염증을 줄여주고 통증을 줄여줄 수 있다고 알려져 있지만, leukotrienes, lipoxins, hydroperoxyeicos atetraenoic acids 등을 생성하는 부가적인 활성화가 일어나는 것으로도 알려져 있다. 안과 영역에서는 비 특이적 COX 효소 억제제가 개발되어 점안제로 사용되고 있으나, 상기 명시된 부가적 염증 산물의 활성화에 의해 각막 천공 등의 심각한 부작용이 학계에 보고되어 있다.
이에 본 발명자들은 안구건조증을 포함하여 안구 통증을 유발하는 안질환을 치료 또는 예방하기 위한 약학 조성물을 개발하고자 예의 노력한 결과, 안구 통증 증상이 있는 환자의 눈물에서 정상인에 비하여 PGE2(prostaglandin E2)의 발현 수준이 높음을 확인하였고, PGE2 합성 억제제를 동물모델에 점안한 경우 안구 통증 치료 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하고, PGE2의 수준을 측정할 수 있는 안구 통증 진단용 키트를 제공하는 데 있다.
본 발명에 따르면, 안구 통증 증상이 있는 환자의 눈물에서 PGE2의 수준이 높고 PGD2의 수준이 낮은 것을 토대로 PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하고, PGE2 수준을 감소시키는 안구 통증 완화제를 스크리닝하는 방법을 제공한다. 나아가, 환자의 눈물에서 PGE2 수준, PGD2 수준 및 COX2 수준을 측정하여 안구 통증을 진단할 수 있는 키트 및 안구 통증 진단을 위한 정보를 제공할 수 있다.
본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 다른 구체예에서 PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 PGE2 합성 억제제는 5-Deoxy-A12, 14-PGJ2, Exisulind, NS-398, Leukotnene C4, mk-886, Analogues of MK-886, MF63, Thienopyrrole, Naphthalene disulphonamide, Resveratrol 및 γ-hydroxybutenolide로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물은 PGE2의 발현량을 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 안구 통증은 안구건조증, 염증성 안질환 또는 콘텍트렌즈 사용에 기인한 안구 통증인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물은 현탁액, 산제, 분말제, 과립제, 정제, 서방형 제제, 주사제, 연고제, 점안제, 캡슐제, 콘텍트렌즈 세정제 또는 콘텍트렌즈 윤활제 형태임을 특징으로 할 수 있고, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 건강기능식품은 캡슐제, 정제, 과립제, 분말제 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 또 다른 구체예에서, (a) 서열번호 1로 표시되는 PGE2 단백질을 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
(b) 상기 단백질의 양 또는 활성을 측정하는 단계; 및
(c) 상기 단백질의 양 또는 활성이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명은 또 다른 구체예에서, (a) 서열번호 1로 표시되는 PGE2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
(b) 상기 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및
(c) 상기 유전자의 발현량이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법을 제공하고, 상기 PGE2 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 2로 표시되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 또 다른 구체예에서, (a) 서열번호 3으로 표시되는 COX2 단백질을 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
(b) 상기 단백질의 양 또는 활성을 측정하는 단계; 및
(c) 상기 단백질의 양 또는 활성이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명은 또 다른 구체예에서, (a) 서열번호 3으로 표시되는 COX2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
(b) 상기 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및
(c) 상기 유전자의 발현량이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법을 제공하고, 상기 COX2 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 4로 표시되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 또 다른 구체예에서, COX2 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또 다른 구체예에서, (a) 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 서열번호 1로 표시되는 PGE2의 수준을 측정하는 단계;
(b) 상기 PGE2의 수준을 정상 대조군 시료의 수준과 비교하는 단계를 포함하는 안구 통증 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 정보제공방법은 PGD2 또는 COX2의 수준을 측정하여 정상 대조군 시료의 수준과 비교하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다. 이 때, PGE2 및 COX2 수준이 정상 대조군보다 과발현되고, PGD2 수준이 정상 대조군보다 저발현되는 경우에 안구 통증이 있는 것으로 판단할 수 있다.
본 발명은 또 다른 구체예에서, PGE2에 부착된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 안구 통증 진단 또는 예측용 키트를 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 안구 통증 진단 또는 예측용 키트는 PGD2에 부착된 단백질 또는 COX2에 부착된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 키트는 PGE2, PGD2 및 COX2에 검출을 위한 단백질을 부착시키고 상기 부착 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 것을 특징으로 한다. 상기 부착된 단백질은 고추냉이 퍼옥시다아제(horseradish peroxidase), 염기성 포스파타아제(alkaline phosphatase) 또는 β-갈락토시다아제일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 PGE2, PGD2 및 COX2의 수준은 효소-결합된 면역흡착시험(ELISA), 방사선면역측정법(RIA), 기체크로마토그래피-질량분석(GC-MS), 액체크로마토그래피-질량분석(LC-MS) 또는 LC-MS/MS으로 측정하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적 조성물, 기능성 식품(neutraceutical) 조성물 또는 식품 조성물로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여, 점막 투여 및 점안 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 1일 당 0.001-100 mg/kg(체중), 0.01-80 mg/kg(체중), 0.1-60 mg/kg(체중)일 수 있다. 또한, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. 특히, 점안 투여의 경우에는, 0.001 내지 3%(w/v, 이하 동일), 바람직하게는 0.01 내지 1% 정도의 제제를 1일 1회 내지 수회 점안한다.
본 발명의 약제학적 및 건강식품상의 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
본 발명의 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물의 제형은 용액, 현탁액, 시럽제, 에멀젼, 리포좀, 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제, 서방형제제 점안제(eye drop), 캅슐제, 콘택트렌즈 세정제 및 콘택트렌즈 윤활제이고, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명에서 "진단"이란 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 말하며, 특정 질병 또는 질환에 대한 한 객체의 감수성을 판정하는 것, 한 객체가 특정 질병 또는 질환을 현재 가지고 있는지 여부를 판정하는 것, 특정 질병 또는 질환에 걸린 한 객체의 예후를 판정하는 것을 포함한다.
본 발명의 스크리닝 방법을 언급하면서 사용되는 용어 "시료"는 유전자의 발현량에 영향을 미치거나, 단백질의 양 또는 활성에 영향을 미치는지 여부를 검사하기 위하여 스크리닝에서 이용되는 미지의 후보 물질을 의미한다. 상기 시료는 화학물질, 뉴클레오타이드, 안티센스-RNA 및 천연물 추출물을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
유전자의 발현량 변화의 측정은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 실시될 수 있다. 예를 들어, RT-PCR(Sambrook 등, Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Press (2001)), 노던블롯팅(Peter B. Kaufma et al., Molecular and Cellular Methods in Biology and Medicine, 102-108, CRC press), cDNA 마이크로어레이를 이용한 혼성화 반응(Sambrook 등, Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Press (2001)) 또는 인 시투(in situ) 혼성화 반응(Sambrook 등, Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Press (2001))을 이용하여 실시할 수 있다.
RT-PCR 프로토콜에 따라 실시하는 경우에는 우선, 시료를 처리한 세포에서 총 RNA를 분리한 다음, 올리고 dT 프라이머 및 역전사효소를 이용하여 단일가닥 cDNA를 제조한다. 이어, 단일가닥 cDNA를 주형으로 이용하고, 유전자-특이적 프라이머 세트를 이용하여 PCR 반응을 실시한다. 유전자-특이적 프라이머 세트는 하기 표 2에서 열거 되어 있다. 그런 다음, PCR 증폭 산물을 전기영동하고, 형성된 밴드를 분석하여 유전자의 발현량 변화를 측정한다.
단백질의 양의 변화는 당업계에 공지된 다양한 면역분석 방법을 통해 실시될 수 있다. 예를 들어, 방사능면역분석, 방사능면역침전, 면역침전, ELISA(enzyme-linked immunosorbentassay), 캡처-ELISA, 억제 또는 경재 분석, 그리고 샌드위치 분석을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 면역분석 또는 면역염색의 방법은 Enzyme Immunoassay, E. T. Maggio, ed., CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980; Gaastra, W., Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), in Methods in Molecular Biology, Vol. 1, Walker, J.M. ed., Humana Press, NJ, 1984; 및 Ed Harlow and David Lane, Using Antibodies:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999에 기재되어 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법이 방사능면역분석 방법에 따라 실시되는 경우, 방사능동위원소(예컨대, C14, I125, P32 및 S35)로 표지된 단백질-특이 항체가 이용될 수 있다. 본 발명의 방법이 ELISA 방식으로 실시되는 경우, 본 발명의 특정 실시예는 (a) 시료가 처리된 세포로부터 추출물을 고체 기질의 표면에 코팅하는 단계; (b) 단백질-특이 항체와 상기 세포 추출물을 반응시키는 단계; (c) 상기 단계 (b)의 결과물을 효소가 결합된 이차항체와 반응시키는 단계; 및 (d) 상기 효소의 활성을 측정하는 단계를 포함한다. 상기 고체 기질로 적합한 것은 탄화수소 폴리머(예컨대, 폴리스틸렌 및 폴리프로필렌), 유리, 금속 또는 젤이며, 가장 바람직하게는 마이크로타이터 플레이트이다. 상기 이차항체에 결합된 효소는 발색반응, 형광반응, 발광반응 또는 적외선 반응을 촉매하는 효소를 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 예를 들어, 알칼린 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제, 루시퍼라아제 및 사이토크롬 P450을 포함한다. 상기 이차항체에 결합하는 효소로서 알칼린 포스파타아제가 이용되는 경우에는, 기질로서 브로모클로로인돌일 포스페이트(BCIP), 니트로 블루 테트라졸리움(NBT), 나프톨-ASB1-포스페이트(naphthol-AS-B1-phosphate) 및 ECF (enhanced chemifluorescence)와 같은 발색반응 기질이 이용되고, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제가 이용되는 경우에는 클로로나프톨, 아미노에틸카바졸, 디아미노벤지딘, D-루시페린, 루시게닌(비스-N-메틸아크리디늄 니트레이트), 레소루핀 벤질 에테르, 루미놀, 암플렉스 레드 시약(10-아세틸-3,7-디하이드록시페녹사진), TMB(3,3,5,5-tetramethylbenzidine), ABTS(2,2'-Azine-di[3-ethylbenzthiazoline sulfonate]) 및 o-페닐렌디아민(OPD)과 같은 기질이 이용될 수 있다. 상기 ELISA 방법에서 최종적인 효소의 활성 측정 또는 시그널의 측정은 당업계에 공지된 다양한 방법에 따라 실시될 수 있다. 만일, 레이블로서 바이오틴이 이용된 경우에는 스트렙타비딘으로, 루시퍼라아제가 이용된 경우에는 루시페린으로 시그널을 용이하게 검출할 수 있다.
진단용 키트로 활용하기 위하여, PGE2, PGD2 및 COX2는 검출가능하게 표식되는 것이 바람직하다. 생분자들을 표식시키는데 사용가능한 다양한 방법들이 당업자에게 잘 알려져 있고, 본 발명의 범주내에서 고려된다. 상기 방법들은 Tijssen, 'Practice and theory of enzyme immuno assays', Burden, RH and von Knippenburg (Eds), Volume 15 (1985), 'Basic methods in molecular biology'; Davis LG, Dibmer MD; Battey Elsevier (1990), Mayer et al., (Eds) 'Immunochemical methods in cell and molecular biology' Academic Press, London (1987), or in the series 'Methods in Enzymology', Academic Press, Inc에 기술되어 있다.
당업자에게 공지되어 있는 표식 방법과 많은 다른 표식들이 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 표식 종류의 예로는 효소, 방사성 동위원소, 콜로이드 금속, 형광 화합물, 화학발광 화합물 및 생발광 화합물이 있다.
통상적으로 사용되는 표식들은 형광물질(가령, 플루레신, 로다민, 텍사스 레드 등), 효소(가령, 고추냉이 퍼옥시다아제, β-갈락토시다아제, 알칼리 포스파타 아제), 방사성 동위원소(가령, 32 P 또는 125I), 바이오틴, 디곡시게닌, 콜로이드 금속, 화학발광 또는 생발광 화합물(가령, 디옥세탄, 루미놀 또는 아크리디늄)을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 효소 또는 바이오티닐기의 공유 결합법, 요오드화법, 인산화법, 바이오틴화법 등과 같은 표식 방법들이 당 분야에 잘 알려져 있다.
검출 방법들로는 오토라디오그래피, 형광 현미경, 직접 및 간접 효소반응 등이 있으며, 이에 제한되지는 않는다. 통상적으로 사용되는 검출 분석법으로는 방사성 동위원소 또는 비-방사성 동위원소 방법이 있다. 이들은 그중에서도 웨스턴블롯팅, 오버레이-분석법, RIA(Radioimmuno Assay) 및 IRMA(Immune Radioimmunometric Assay), EIA(Enzyme Immuno Assay), ELISA(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), FIA(Fluorescent Immuno Assay) 및 CLIA(Chemioluminescent Immune Assay)이 있다.
본 발명에 따른 PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 이용하면 PGE2의 발현 수준을 선택적으로 억제시킴으로써 안구 통증 증상을 호전시킬 수 있고, 나아가 안구건조증의 치료 및 예방에 효과가 있다. 또한, PGE2, PGD2 및 COX2의 양을 검출하는 키트를 이용하여 임상에서 손쉽게 안구 통증 증상을 진단할 수 있어 안구건조증 환자 뿐만 아니라 안 수술 후 환자의 상태를 파악하는 데 널리 활용될 수 있다.
도 1은 안구 통증 증상이 있는 환자의 눈물에 포함된 PGE2/PGD2 레벨 정도와 환자의 증상 정도 간의 관련성을 나타내는 그래프이다.
도 2는 안구 통증을 유발시킨 마우스에 COX2 억제제를 점안한 후, 안구 불편감 정도를 나타낸 결과이다.
도 3은 안구 통증을 유발시킨 마우스에 COX2 억제제를 점안한 후, TNF-alpha의 mRNA 레벨을 측정한 결과이다.
도 4는 안구 통증을 유발시킨 마우스에 COX2 억제제를 점안한 후, IL-1의 mRNA 레벨을 측정한 결과이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
안구 통증 환자의 눈물 성분 분석
non-Sjogren형 안구 통증 증세를 보이는 환자 23명과 정상안 17명의 눈물을 폴리에스테르 섬유 로드(polyester fiber rod (TRANSORB® WICKS, FILTRONA, Richmond, VA)) 를 이용하여 수집한 후 나노규모의 액체크로마토그래피 탄템 질량분석(Nano-liquid chromatography tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)) 방법을 통해 눈물 속 프로스타글란딘(prostgalndin)의 수준을 측정하였다(an Applied Biosystem/MDS Sciex 4000 Qtrap quadrupole mass spectrometer (AB/MDS Sciex, Concord, Canada)를 이용).
그 결과, 안구 통증 증세를 보이는 환자군의 눈물 속에서 PGE2 수준이 정상안에 비하여 3배 이상 증가 되었고, PGD2 수준은 정상안의 7% 수준으로 감소하였을 확인하였다(표 1).
표 1
건성안 환자 (n=46) 대조군 (n=33) p value
PGE2 (ng/ml) 136.25±170.82 43.89±41.83 0.003**
PGD2 (ng/ml) 5.41±11.00 72.15±202.42 0.028*
실시예 2
PGE2 수준에 따른 안구 통증 증상 정도의 확인
안구 통증 증세를 보이는 환자군과 정상군에서, 눈물을 채취하기 전에 증상의 정도를 시각통증척도(Visual analogue scale)를 이용하여 확인하였다. 시각통증척도는 0 부터 10 까지의 눈금으로 되어 있고, 0은 증상이 없는 상태, 10은 참을 수 없는 통증 혹은 불편감을 표현하는 상태로, 환자의 증상을 정도를 점수화하여 확인하였다. 이를 프로스타글란딘 수준의 변화와 관련성이 있는지를 통계학적으로 분석하였다.
그 결과, 안구 통증으로 인한 환자의 불편감이 증가할수록 PGE2/PGD2 비율의 값이 증가하는 것을 확인할 수 있었다(도 1).
실시예 3
안구 통증을 유발시킨 마우스 실험
B6 마우스를 dry eye chamber를 이용하여 안구통증을 유발시키는 환경에 1주일 간 노출시킨 후, 실험군과 대조군으로 나누어 PGE 합성 억제제로 알려진 각 물질을 실험군에 점안하였다. 실험군에는 5μg/ml의 celecoxib(sigma)를 하루에 두 번 점안하고, 대조군에는 0.1%의 히알루론산(hyaluronic acid)을 점안하였다.
점안 1 주일 후, 실험군과 대조군 마우스의 각막 손상 상태를 표준화된 프로토콜을 이용하여 측정하였다. 그 결과, celecoxib을 점안한 실험군의 경우 각막 손상의 정도가 유의적으로 감소함을 확인할 수 있었다(도 2).
또한, 점안 1 주일 후 실험군과 대조군 마우스의 안구를 적출하여 안구표면에서의 TNF-alpha, IL-1 mRNA의 수준을 real time RT-PCR로 측정하였다. 그 결과, celecoxib을 점안한 실험군의 경우, TNF-alpha, IL-1 mRNA 수준이 크게 감소함을 확인하였다(도 3, 도 4).
실시예 4
안구 통증 환자를 대상으로 한 PGE2 합성 억제제 투여 실험
안구 통증 증세가 있는 환자를 대상으로 PGE2 합성 억제제를 점안하고, 대조군과 비교하여 눈 깜빡임의 횟수가 감소하였는지를 확인하였다. 사용된 PGE2 합성 억제제는 15-Deoxy-A12, 14-PGJ2, Exisulind, NS-398, Leukotnene C4, mk-886, Analogues of MK-886, MF63, Thienopyrrole, Naphthalene disulphonamide, Resveratrol, γ-hydroxybutenolide를 사용하였다.
그 결과, PGE 합성 억제제를 점안한 경우, 안구의 불편감을 줄여주어 대조군에 비하여 눈 깜빡임의 횟수가 감소한 것을 확인하였다(표 2).
표 2
사용된 물질 치료군 (n=10)의 눈 깜빡임(회수/5min) Control 군 (n=10)의 눈 깜빡임(회수/5min) Pvalue
15-Deoxy-A12, 14-PGJ2 11 25 0.03*
Exisulind 14 18 0.02*
NS-398 13 20 0.015*
Leukotnene C4 17 21 0.04*
mk-886 15 24 0.04*
Analoguesof MK-886 10 27 0.012*
MF63 9 24 0.02*
Thienopyrrole 13 23 0.005*
Naphthalene disulphonamide 16 20 0.004*
Resveratrol 17 19 0.04*
γ-hydroxybutenolide 18 22 0.037*
실시예 5
안구 통증 환자를 대상으로 한 선택적 COX2 억제제 투여 실험
선택적 COX2 억제제가 비선택적 COX2 억제제에 비하여 안구 통증 증세 감소에 효과적인지 여부를 확인하기 위하여, 선택적 COX2 억제제, 비선택적COX2 억제제 및 NSAID를 투여하하였다. 안구 통증 증세가 있는 환자를 대상으로 선택적 COX2 억제제를 점안하고, 비선택적 COX2 억제특성을 가지는 대조군(Diclofenac)과 비교하여 눈 깜빡임의 횟수가 감소하였는지를 확인하였다. 사용된 선택적 COX2 억제제는 구조적으로 분류하여 각 대표 물질로Nimesulud, Celecoxib, Meloxicam, S-2474(3,5-di-tert-buryl-4-hydroxybensylidene), cis-Stilbenes를 사용하였고, 선택적 COX2 억제제 특성을 갖는 NSAID로 Ibuprofen을 포함하였다.
그 결과, 선택적 COX2 억제제를 점안한 경우, 안구의 불편감을 줄여주어 대조군에 비하여 눈 깜빡임의 횟수가 감소한 것을 확인하였다(표 3).
표 3
분류 사용된 물질 치료군 눈 깜빡임 횟수(n=3) 대조군 눈 깜빡임 횟수(n=3) p value
선택적 COX-2 억제제 특성을 갖는 Classic NSAID Ibuprofen 17 25 0.03
디아릴- 또는 아릴-헤테로아릴 에테르 및 티오에테르 Nimesulud 16 22 0.04
비아시날 디아릴 헤테로사이클 Celecoxib 17 23 0.012
구조적으로 변형된 classic NSAID 및 다른 화합물 Meloxicam 20 26 0.04
항산화 구성성분을 가지는 화합물 S-2474 15 27 0.004
1,2-디아릴에틸렌 유도체 cis-Stilbenes 22 29 0.03
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명에 따른 PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 이용하면 PGE2의 발현 수준을 선택적으로 억제시킴으로써 안구 통증 증상을 호전시킬 수 있고, 나아가 안구건조증의 치료 및 예방에 효과가 있어 유용하다.
서열번호 1 및 2는 각각 PGE2 단백질 서열 및 상기 단백질을 코딩하는 유전자 서열을 나타내고, 서열번호 3 및 4는 각각 COX2 단백질 서열 및 상기 단백질을 코딩하는 유전자 서열을 나타낸다.

Claims (32)

  1. PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 PGE2 합성 억제제는 5-Deoxy-A12, 14-PGJ2, Exisulind, NS-398, Leukotnene C4, mk-886, Analogues of MK-886, MF63, Thienopyrrole, Naphthalene disulphonamide, Resveratrol 및 γ-hydroxybutenolide로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 약학 조성물은 PGE2의 발현량을 감소시키는 것을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 약학 조성물은 현탁액, 산제, 분말제, 과립제, 정제, 서방형 제제, 주사제, 연고제, 점안제, 캡슐제, 콘텍트렌즈 세정제 또는 콘텍트렌즈 윤활제 형태임을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 안구 통증은 안구건조증, 염증성 안질환 또는 콘텍트렌즈 사용에 기인한 안구 통증인 것을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. PGE2 합성 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 PGE2 합성 억제제는 5-Deoxy-A12, 14-PGJ2, Exisulind, NS-398, Leukotnene C4, mk-886, Analogues of MK-886, MF63, Thienopyrrole, Naphthalene disulphonamide, Resveratrol 및 γ-hydroxybutenolide로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  9. 제 7항에 있어서,
    상기 건강기능식품은 PGE2의 발현량을 감소시키는 것을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  10. 제 7항에 있어서,
    상기 건강기능식품은 캡슐제, 정제, 과립제, 분말제 또는 음료 형태임을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  11. 제 7항에 있어서,
    상기 안구 통증은 안구건조증, 염증성 안질환 또는 콘텍트렌즈 사용에 기인한 안구 통증인 것을 특징으로 하는 안구 통증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  12. (a) 서열번호 1로 표시되는 PGE2 단백질을 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
    (b) 상기 단백질의 양 또는 활성을 측정하는 단계; 및
    (c) 상기 단백질의 양 또는 활성이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  13. 제 12항에 있어서,
    상기 안구 통증은 안구건조증, 염증성 안질환 또는 콘텍트렌즈 사용에 기인한 안구 통증인 것을 특징으로 하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  14. (a) 서열번호 1로 표시되는 PGE2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
    (b) 상기 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및
    (c) 상기 유전자의 발현량이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  15. 제 14항에 있어서,
    상기 PGE2 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 2로 표시되는 것을 특징으로 하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  16. 제 14항에 있어서,
    상기 안구 통증은 안구건조증, 염증성 안질환 또는 콘텍트렌즈 사용에 기인한 안구 통증인 것을 특징으로 하는 안구 통증 완화의 스크리닝 방법.
  17. (a) 서열번호 3으로 표시되는 COX2 단백질을 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
    (b) 상기 단백질의 양 또는 활성을 측정하는 단계; 및
    (c) 상기 단백질의 양 또는 활성이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  18. 제 17항에 있어서,
    상기 안구 통증은 안구건조증, 염증성 안질환 또는 콘텍트렌즈 사용에 기인한 안구 통증인 것을 특징으로 하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  19. (a) 서열번호 3으로 표시되는 COX2 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 세포에 분석할 시료를 접촉시키는 단계;
    (b) 상기 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및
    (c) 상기 유전자의 발현량이 감소조절되는 것으로 측정될 때, 상기 시료가 안구 통증을 완화시키는 물질임을 판별하는 단계를 포함하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  20. 제 19항에 있어서,
    상기 COX2 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 4로 표시되는 것을 특징으로 하는 안구 통증 완화제의 스크리닝 방법.
  21. 제 19항에 있어서,
    상기 안구 통증은 안구건조증, 염증성 안질환 또는 콘텍트렌즈 사용에 기인한 안구 통증인 것을 특징으로 하는 안구 통증 완화의 스크리닝 방법.
  22. COX2 억제제를 유효성분으로 포함하는 안구 통증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  23. (a) 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 서열번호 1로 표시되는 PGE2의 수준을 측정하는 단계;
    (b) 상기 PGE2의 수준을 정상 대조군 시료의 수준과 비교하는 단계를 포함하는 안구 통증 진단을 위한 정보제공방법.
  24. 제 23항에 있어서,
    PGD2 또는 COX2의 수준을 측정하여 정상 대조군 시료의 수준과 비교하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 안구 통증 진단을 위한 정보제공방법.
  25. 제 23항 또는 제 24항에 있어서,
    상기 PGE2, PGD2 또는 COX2의 수준은 효소-결합된 면역흡착시험(ELISA), 방사선면역측정법(RIA), 기체크로마토그래피-질량분석(GC-MS), 액체크로마토그래피-질량분석(LC-MS) 또는 LC-MS/MS에 의해서 측정하는 것을 특징으로 하는 안구 통증을 위한 정보제공방법.
  26. PGE2에 부착된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 안구 통증 진단 또는 예측용 키트.
  27. 제 26항에 있어서,
    PGD2에 부착된 단백질 또는 COX2에 부착된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 안구 통증 진단 또는 예측용 키트.
  28. 제 26항 또는 제 27항에 있어서,
    상기 부착된 단백질은 고추냉이 퍼옥시다아제(horseradish peroxidase), 염기성 포스파타아제(alkaline phosphatase) 및 ββ-갈락토시다아제로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 안구 통증진단 또는 예측용 키트.
  29. PGE2 합성 억제제를 포유동물에 투여하여 안구통증을 예방 또는 치료하는 방법.
  30. COX2 억제제를 포유동물에 투여하여 안구통증을 예방 또는 치료하는 방법.
  31. 안구통증을 예방 또는 치료하기 위한 PGE2 합성 억제제의 용도.
  32. 안구통증을 예방 또는 치료하기 위한 COX2 억제제의 용도.
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