WO2013100585A2

WO2013100585A2 - Adonis amurensis extract or anti-cancer composition using same as an active ingredient

Info

Publication number: WO2013100585A2
Application number: PCT/KR2012/011497
Authority: WO
Inventors: 함영민; 김길남; 정용환; 윤원종; 박수영; 오대주
Original assignee: JEJU TECHNOPARK
Current assignee: JEJU TECHNOPARK
Priority date: 2011-12-26
Filing date: 2012-12-26
Publication date: 2013-07-04
Anticipated expiration: 2014-06-26
Also published as: CN104220063B; WO2013100585A3; CN104220063A; KR101530910B1; KR20130074768A; JP2015503551A

Description

[Correction 19.03.2013] according to Article 26 of the Rule Anticancer composition using Sesengseng pear extract or its active substance

본 발명은 세복수초(Adonis amurensis) 추출물 또는 그 유효물질을 이용한 항암제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an anticancer drug composition using Adonis amurensis extract or its active substance.

암이란 일반적으로 인체 조직을 이루고 있는 세포의 주기에 이상이 생겨 세포가 정상적으로 분화하지 않고 성장을 조절할 수 없이 커진 것 중 악성인 것을 말한다.Cancer is generally a malignant one of abnormalities in the cycles of the cells that make up human tissues, and cells that do not differentiate normally and grow uncontrollably.

암은 개시(initiation), 촉진(promotion) 및 진행(progression)의 세 단계를 거쳐 발생하는데, 환경이나 음식물 속에 포함된 발암 물질에 의해 세포 돌연변이가 일어나고 이러한 세포들이 발암 물질의 계속적인 자극을 받으면서 비정상적인 증식을 계속하여 암 조직을 형성하는 것으로 알려져 있다.Cancer occurs through three stages: initiation, promotion, and progression. Cellular mutations are caused by carcinogens in the environment or food, and these cells are abnormal as they are continuously stimulated by carcinogens. It is known to continue to proliferate to form cancer tissue.

암을 치료하기 위한 항암제의 연구 방법에는 암세포에 대한 직접적인 세포 독성 물질을 탐색하는 방법, 생체의 면역 능력을 조절하는 물질을 탐색하는 방법, 암세포의 전이를 억제하는 물질을 탐색하는 방법, 최근에 주목되고 있는 혈관신생을 억제하는 물질을 탐색하는 방법 등이 있다.Research methods for anticancer drugs for treating cancer include a method of searching for direct cytotoxic substances on cancer cells, a method of controlling substances that regulate the immune ability of the living body, a method of searching for substances that inhibit the metastasis of cancer cells, and the like. There is a method of searching for a substance that suppresses angiogenesis.

현재 사용되고 있는 항암제들은 효소 제제나 백신 등의 생물학적 제제, 화학 합성 의약품, 천연물 유래의 의약품 등으로 크게 구분할 수 있는데, 이 중 효소, 백신 등의 생물학적 제제는 실용 단계에 있는 상태는 아니며, 화학 합성 의약품은 암의 종류에 따라 약리작용이 다양하고(Gillman., et al., Maxwell Macmillan. 18, pp1202, 1986), 독성에 의한 부작용이 다양하게 나타나기 때문에 암 치료시 문제점으로 지적되고 있다(Chung., et al., J. Wonkwang Medical Sci. , 3 , pp 13-34, 1987).Currently used anticancer drugs can be broadly classified into biological preparations such as enzyme preparations and vaccines, chemical synthesis medicines, and natural products. Among them, biological preparations such as enzymes and vaccines are not in a practical stage. Pharmacological action varies depending on the type of cancer (Gillman., Et al., Maxwell Macmillan. 18, pp1202, 1986), and various side effects due to toxicity have been indicated as problems in cancer treatment (Chung., et al., J. Wonkwang Medical Sci., 3, pp 13-34, 1987).

이러한 화학 합성 항암제의 부작용을 최소화하고 치료 효과를 높이기 위하여 식물 추출물을 이용한 항암제의 개발이 지속적으로 시도되고 있다.In order to minimize the side effects of the chemosynthetic anticancer drugs and increase the therapeutic effect, the development of anticancer drugs using plant extracts has been continuously attempted.

항암 활성을 갖는 식물 추출물들이 많이 보고되고 있다(Pujol M, Gavilondo J, Ayala M, Rodriguez M,Gonzalez EM, Perez L. 2007 Trends Biotechnol 25(10):455-459). 예컨대 당귀(Angelica gigas) 추출물은 결장암(KanWL, Cho CH, Rudd JA, Lin G. 2008. 120(1): 36-43), 대장암(Lu J. Kim SH Jiang C, Lee H Guo J. 2007. Acta Pharmacol Sin. 28(9):1365-1372), 뇌암(Tasi NM, Chen YL, Lee CC, Lin PC, Cheng YL, Chang WL, LIn SZ, Ham HJ. 2006. J Neurochem 99(4):1251-1262) 등 여러 종류의 암에 대해 항암 효과가 있음이 보고되어 있으며, 또한 예컨대 감초(Glycyrrhiza glabra)의 뿌리 추출물이 전립선암(Kanazawa M, Satomi Y, Mizutani Y, Ukimura O, Kawauchi A, Sakai T, Baba M, Okuyama T, Nishino H, Miki T. 2003. Eur Urol 43(5) :580-586)이나 유방암(Jo EH, Lim SH, Ra JC, Kim SR, Cho SD, Jung JW, Yang SR, Park JS, Hwang JW, Aruoma OI, Kim TY, Lee YS, Kang Ks. 2005. Cancer Lett. 230(2): 239-247)에 항암 효과가 있음이 알려져 있다. Many plant extracts with anticancer activity have been reported (Pujol M, Gavilondo J, Ayala M, Rodriguez M, Gonzalez EM, Perez L. 2007 Trends Biotechnol 25 (10): 455-459). For example, Angelica gigas extract can be used for colon cancer (KanWL, Cho CH, Rudd JA, Lin G. 2008. 120 (1): 36-43), and colon cancer (Lu J. Kim SH Jiang C, Lee H Guo J. 2007). Acta Pharmacol Sin. 28 (9): 1365-1372), brain cancer (Tasi NM, Chen YL, Lee CC, Lin PC, Cheng YL, Chang WL, LIn SZ, Ham HJ. 2006. J Neurochem 99 (4): 1251-1262) have been reported to have an anticancer effect on several types of cancer, and for example, root extracts of licorice ( Glycyrrhiza glabra ) may be used for prostate cancer (Kanazawa M, Satomi Y, Mizutani Y, Ukimura O, Kawauchi A, Sakai). T, Baba M, Okuyama T, Nishino H, Miki T. 2003. Eur Urol 43 (5): 580-586) or breast cancer (Jo EH, Lim SH, Ra JC, Kim SR, Cho SD, Jung JW, Yang SR , Park JS, Hwang JW, Aruoma OI, Kim TY, Lee YS, Kang Ks. 2005. Cancer Lett. 230 (2): 239-247).

본 발명은 세포실험 및/또는 동물실험을 통하여 세복수초 추출물과 그 유효물질의 항암 활성을 확인함으로써 완성된 것이다.The present invention has been completed by confirming the anticancer activity of the three extracts and the active substance through cell experiments and / or animal experiments.

본 발명의 목적은 항암제 조성물을 제공하는 데 있다.An object of the present invention is to provide an anticancer agent composition.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.Other and specific objects of the present invention will be presented below.

본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 세복수초 80% 에탄올 추출물을 제조함과 함께 그 80% 에탄올 추출물을 증류수에 현탁시켜 헥산(n-hexane), 디클로로메탄(CH₂Cl₂), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH)로 순차적으로 분획하여 세복수초 분획 추출물을 제조한 후에, 그 80% 에탄올 추출물과 각 분획 추출물의 항암 활성을 일차적으로 세포실험을 통하여 살펴본 결과 실험에 사용한 암세포주인 폐암 세포주 A549, 위암 세포주 AGS, 대장암 세포주 HCT-15, 유방암 세포주 MDA-MB-231 그리고 간암 세포주 SK-Hep1 모두에 대해서 세포 증식 억제 활성을 보임을 확인하였고, 이 중에서 가장 활성이 뛰어난 에틸아세테이트 분획 추출물을 가지고 동물실험을 수행한 결과, 페암 세포주 A549, 위암 세포주 AGS 또는 간암 세포주 SK-Hep1을 이용한 HF(Hollow fiber) assay 모델 실험에서 에틸아세테이트 분획물은 실험에 사용한 모든 암세포주에서 농도 의존적으로 항암 활성을 나타냄을 확인하였으며, 특히 간암 세포주인 SK-Hep-1 또는 HepG-2를 이식한 누드마우스 동물실험 모델에서도 대체로 농도 의존적으로 항암 활성을 나타냄을 확인하였다. As the present inventors confirmed in the following Examples and Experimental Example, while preparing 80% ethanol extract of Seboksevis, the 80% ethanol extract was suspended in distilled water to hexane (n-hexane), dichloromethane (CH ₂ Cl ₂ ), after fractionation with ethyl acetate (EtOAc) and butanol (BuOH) to prepare a seboksucho fraction extract, the 80% ethanol extract and the anticancer activity of each fraction extract was first examined through cell experiments. The cancer cell line A549, gastric cancer cell line AGS, colon cancer cell line HCT-15, breast cancer cell line MDA-MB-231, and liver cancer cell line SK-Hep1 were found to exhibit cell proliferation inhibitory activity. Animal experiments were performed with ethyl acetate fraction extract, and HF (Hollow fib) using the lung cancer cell line A549, gastric cancer cell line AGS, or liver cancer cell line SK-Hep1. er) Ethyl acetate fractions showed anti-cancer activity in all cancer cell lines used in the experiments. In particular, even in nude mouse animal models transplanted with liver cancer cell lines SK-Hep-1 or HepG-2 It was confirmed that the anticancer activity was shown to be concentration dependent.

본 발명자들은 나아가 상기 에틸아세테이트 분획물로부터 유효물질을 분리하고 그 물질을 동정한 결과, 아래의 <화학식 1>의 화합물로서 신규 화합물임을 확인하였다.The present inventors further separated the effective substance from the ethyl acetate fraction and identified the substance, and as a result, it was confirmed that the compound was a novel compound as the following Chemical Formula 1.

<화학식 1><Formula 1>

본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로서, 본 발명은 일 측면에 있어서, 상기 <화학식 1>의 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염으로서 파악할 수 있고, 다른 측면에 있어서는 세복수초 추출물, 상기 <화학식 1>의 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항암제 조성물로서 파악할 수 있다.The present invention is provided on the basis of the experimental results, in one aspect, the present invention can be understood as the compound of <Formula 1> or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in another aspect, Seboksera extract, It can be regarded as an anticancer composition comprising the compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 명세서에서, "항암"이란 암세포의 사멸, 암세포의 증식 억제, 암세포의 전이 억제, 암이 가지는 병리적 증상의 개선, 치료 또는 그러한 병리적 증상의 발병 억제/지연을 포함하는 의미이다. As used herein, "anti-cancer" is meant to include killing cancer cells, inhibiting the proliferation of cancer cells, inhibiting the metastasis of cancer cells, ameliorating the pathological symptoms of cancer, treating or inhibiting / delaying the development of such pathological symptoms.

또 본 명세서에서, "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.In addition, in the present specification, the "active ingredient" means a component that can exhibit the desired activity alone or in combination with a carrier which is itself inactive.

또 본 명세서에서, "세복수초 추출물"은 추출 방법을 불문하고 추출 대상인 세복수초 전초, 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급알콜, 아세톤, 헥산, 에틸아세테이트, 클로로포름, 디클로로메탄, 물 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 추출물과 그 추출물을 상기 열거된 용매 중 하나 이상으로 분획하여 얻은 추출물을 포함하는 의미로서 이해된다. 추출 방법을 불문하므로, 추출 대상인 세복수초 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 추출 용매에 침지시키는 단계를 통하여 추출되는 한, 추출 방법은 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사 등 임의의 방식이 모두 적용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 그럼에도 상기 "세복수초 추출물"은 바람직하게는 추출 대상인 세복수초 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하고 얻어진 것으로서, 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물, 그 고형상의 추출물을 물과 헥산, 물과 디클로로메탄, 물과 에틸아세테이트 또는 물과 부탄올로 분획하여 얻어진 어느 한 분획 용매층의 추출물, 또는 그 고형상의 추출물을 물에 현탁한 후, 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올을 이용하여 순차적으로 분획하여 얻어진 추출물을 의미한다. 여기서 "순차적으로 분획한다"는 것의 의미는 물층의 분획물을 분획 후에도 계속 사용하여 상기 열거된 순서의 용매로 분획한다는 의미이다. In addition, in the present specification, regardless of the extraction method, "seboksucho extract" refers to the extract of Seboksucho starch, leaves, stems, flowers, roots or mixtures thereof, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, butanol and acetone. , Hexane, ethyl acetate, chloroform, dichloromethane, water, or an extract obtained by extraction with a mixed solvent thereof and an extract obtained by fractionating the extract with one or more of the solvents listed above. Regardless of the extraction method, the extraction method may be any method such as cooling, refluxing, warming, ultrasonic radiation, or the like, as long as the extraction is performed by immersing the three leaf plants, stems, flowers, roots, or mixtures thereof, to be extracted. All should be understood as applicable. Nevertheless, the "seboritis myrtle extract" is preferably obtained by extracting the leaf of perennial leaf, stem, flower, root or mixture thereof, which is the object of extraction with water, ethanol or a mixed solvent thereof, Extract or solid extract, extract of solid fraction obtained by fractionation of water and hexane, water and dichloromethane, water and ethyl acetate or water and butanol, or extract of solid form After suspension in, it means an extract obtained by sequentially fractionating with hexane, dichloromethane, ethyl acetate and butanol. By "sequentially fractionating" here is meant that fractions of the water layer continue to be used after fractionation with the solvents in the order listed above.

본 발명의 <화학식 1>의 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염을 사용될 수 있다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서의 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, <화학식 1>의 화합물을 유기용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조하여 제조되거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조하거나 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.The compound of Formula 1 of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and the salt may be an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid. Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid and aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes. From non-toxic organic acids such as dioate, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid. Such pharmaceutically toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide and iodide Id, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suverate , Sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitro benzoate, hydroxybenzoate, meth Oxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, chlorobenzenesul Nate, xylenesulfonate, phenylacetate, phenylpropionate, phenylbutyrate, citrate, lactate, β-hydroxybutyrate, glycolate, malate, tartrate, methanesulfonate, propanesulfonate, naphthalene-1- Sulfonates, naphthalene-2-sulfonates or mandelate. Acid addition salt in the present invention is a conventional method, for example, a precipitate produced by dissolving the compound of Formula 1 in an organic solvent, such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile and adding an organic or inorganic acid The solvent may be prepared by filtration, drying, or by distillation under reduced pressure of the solvent and excess acid, followed by drying or crystallization under an organic solvent.

또한, 본 발명의 <화학식 1>의 화합물은 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다. In addition, the compound of <Formula 1> of the present invention can be used to make a pharmaceutically acceptable metal salt using a base. Alkali metal or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving a compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt. In addition, corresponding silver salts are obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).

또한, 본 발명의 상기 <화학식 1>의 화합물은 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 입체이성질체 등의 형태로도 사용될 수 있다.In addition, the compound of <Formula 1> of the present invention can be used in the form of not only pharmaceutically acceptable salts thereof, but also possible solvates, hydrates, stereoisomers and the like that can be prepared therefrom.

본 발명의 항암제 조성물에 있어서, 아래 실험예의 암세포 증식 억제 실험 결과를 참조할 때, 항암 활성은 폐암 또는 간암에 대한 항암 활성인 것이 바람직하고, 그 유효성분은 메틸렌클로라이드 분획 추출물, 에틸아세테이트 분획 추출물 또는 부탄올 추출물인 것이 바람직하다. 특히 유효성분은 메틸렌클로라이드 분획 추출물 또는 에틸아세테이트 분획 추출물인 것이 바람직하다. 아래 실험예의 동물실험 결과까지 고려하면 가장 바람직하게는 항암 활성은 간암에 대한 항암 활성이고 유효성분은 에틸아세테이트 분획 추출물인 경우이다.In the anticancer agent composition of the present invention, referring to the cancer cell proliferation inhibition test results of the following experimental example, the anticancer activity is preferably anticancer activity against lung cancer or liver cancer, the active ingredient is methylene chloride fraction extract, ethyl acetate fraction extract or It is preferably a butanol extract. In particular, the active ingredient is preferably methylene chloride fraction extract or ethyl acetate fraction extract. Considering the results of animal experiments in the following experimental examples, most preferably the anticancer activity is the anticancer activity against liver cancer and the active ingredient is an ethyl acetate fraction extract.

본 발명의 항암제 조성물은 그 유효성분을 제형, 배합 목적 등에 따라 의도하는 항암 활성을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게서, 암세포의 사멸, 암세포의 증식 억제, 암세포의 전이 억제, 암이 가지는 병리적 증상의 개선, 치료 또는 그러한 병리적 증상의 발병 억제/지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다. 본 발명의 항암제 조성물이 적용(처방)될 수 있는 대상은 포유동물 및 사람이며, 특히 사람인 경우가 바람직하다.The anticancer agent composition of the present invention may include the active ingredient in any amount (effective amount) as long as it can exhibit the intended anticancer activity according to the formulation, formulation purpose, etc., a typical effective amount is 0.001 based on the total weight of the composition Will be determined in the range of weight% to 15 weight%. The term “effective amount” herein refers to the killing of cancer cells, inhibition of proliferation of cancer cells, inhibition of metastasis of cancer cells, improvement of the pathological symptoms of cancer, treatment or suppression / delay of the development of such pathological symptoms in a mammal, preferably a human subject. It refers to the amount of active ingredient that can be derived. Such effective amounts can be determined experimentally within the range of ordinary skill in the art. Subjects to which the anticancer agent compositions of the present invention can be applied (prescribed) are mammals and humans, particularly humans.

본 발명의 항암제 조성물은 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.The anticancer agent composition of the present invention can be used as a pharmaceutical composition in a specific embodiment.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효물질 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.Pharmaceutical compositions of the present invention, in addition to the active substance, include pharmaceutically acceptable carriers, excipients, and the like, oral formulations (tablets, suspensions, granules, emulsions, capsules, syrups, etc.), parenteral formulations (sterile injectable aqueous or Oily suspensions), topical formulations (solutions, creams, ointments, gels, lotions, patches) and the like.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성(충분히 낮은 독성)을 지니지 않는다는 의미이다.As used herein, "pharmaceutically acceptable" means that the subject of application (prescription) does not have more toxicity (adequately less toxic) than is applicable without inhibiting the activity of the active ingredient.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등) 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.Examples of pharmaceutically acceptable carriers include lactose, glucose, sucrose, starch (such as corn starch, potato starch, etc.), cellulose, derivatives thereof (such as sodium carboxymethyl cellulose, ethylcellulose, etc.) malt, gelatin, talc, solids Lubricants (e.g. stearic acid, magnesium stearate, etc.), calcium sulfate, vegetable oils (e.g. peanut oil, cottonseed oil, sesame oil, olive oil, etc.), polyols (e.g. propylene glycol, glycerin, etc.), alginic acid, emulsifiers (e.g. TWEENS), wetting agents (e.g. Sodium lauryl sulfate), colorants, flavoring agents, tableting agents, stabilizers, antioxidants, preservatives, water, saline, phosphate buffer solutions and the like. Such a carrier may be used by selecting one or more appropriate ones according to the formulation of the pharmaceutical composition of the present invention.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.Excipients may be selected and used according to the formulation of the pharmaceutical composition of the present invention, for example, when the pharmaceutical composition of the present invention is prepared with an aqueous suspending agent, suitable excipients are sodium carboxymethyl cellulose, methyl cellulose, hydropropylmethyl cellulose And suspending agents and dispersing agents such as sodium alginate and polyvinylpyrrolidone. Suitable excipients when prepared as injections include Ringer's solution, isotonic sodium chloride, and the like.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 경우에 따라서는 국소적으로 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally and in some cases may be administered topically.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.The daily dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is usually 0.001 ~ 150 mg / kg body weight range, it can be administered once or divided into several times. However, since the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is determined in view of various related factors such as the route of administration, the age, sex, weight of the patient, and the severity of the patient, the dosage may limit the scope of the present invention in any aspect. It should not be understood as.

다른 구체적인 양태에 있어서, 본 발명은 식품 조성물로서 파악될 수 있다.In another specific embodiment, the present invention can be understood as a food composition.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.The food composition of the present invention may include sweeteners, flavoring agents, bioactive ingredients, minerals, etc. in addition to the active ingredients.

감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다. Sweeteners may be used in amounts that give the food a suitable sweet taste, and may be natural or synthetic. Preferably, a natural sweetener is used. Examples of the natural sweetener include sugar sweeteners such as corn syrup solids, honey, sucrose, fructose, lactose and maltose.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다. Flavoring agents can be used to enhance the taste or aroma, both natural and synthetic. It is the case of using a natural thing preferably. In addition to flavors, the use of natural ones can be combined with nutritional purposes. The natural flavor may be obtained from apples, lemons, citrus fruits, grapes, strawberries, peaches, and the like, or may be obtained from green tea leaves, round leaves, jujube leaves, cinnamon, chrysanthemum leaves, jasmine and the like. In addition, ginseng (red ginseng), bamboo shoots, aloe vera, ginkgo and the like can be used. Natural flavors can be liquid concentrates or solid extracts. In some cases, synthetic flavoring agents may be used, and synthetic flavoring agents may include esters, alcohols, aldehydes, terpenes, and the like.

생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.As the physiologically active substance, catechins such as catechin, epicatechin, gallocatechin, epigallocatechin, vitamins such as retinol, ascorbic acid, tocopherol, calciferol, thiamine, riboflavin, and the like can be used.

미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.As the mineral, calcium, magnesium, chromium, cobalt, copper, fluoride, germanium, iodine, iron, lithium, magnesium, manganese, molybdenum, phosphorus, potassium, selenium, silicon, sodium, sulfur, vanadium, zinc and the like can be used.

또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다. In addition, the food composition of the present invention may contain a preservative, an emulsifier, an acidulant, a thickener, and the like, in addition to the sweetener.

이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.Such preservatives, emulsifiers and the like are preferably added and used in very small amounts as long as the use to which they are added can be achieved. By trace amount is meant numerically expressed in the range of 0.0005% to about 0.5% by weight based on the total weight of the food composition.

사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다. Examples of preservatives that can be used include sodium sorbate, sodium sorbate, potassium sorbate, calcium benzoate, sodium benzoate, potassium benzoate, EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), and the like.

사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.Emulsifiers that can be used include acacia gum, carboxymethylcellulose, xanthan gum, pectin and the like.

사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.Examples of acidulants that may be used include lead acid, malic acid, fumaric acid, adipic acid, phosphoric acid, gluconic acid, tartaric acid, ascorbic acid, acetic acid, phosphoric acid, and the like. Such acidulant may be added so that the food composition is at an appropriate acidity for the purpose of inhibiting the growth of microorganisms in addition to the purpose of enhancing taste.

사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.Thickeners that can be used include suspending implements, sedimenters, gel formers, swelling agents and the like.

또한 향미나 기호성을 향상시키고 다른 기능성(예컨대 골다공증 예방 등)을 추가하기 위하여 여러 한약재가 본 발명의 식품 조성물에 추가될 수 있는데, 추가될 수 있는 한약재로서는 두충 추출물, 속단 추출물, 녹용 추출물, 홍화인 추출물, 토사자 추출물, 숙지황 추출물, 별갑 추출물, 산수유 추출물, 구기자 추출물, 감초 추출물, 당귀 추출물, 갈근 추출물, 강진향 추출물, 합환피 추출물, 산두근 추출물, 괴화 추출물, 고삼 추출물 등이 예시될 수 있다.In addition, various herbal medicines may be added to the food composition of the present invention in order to improve flavor and palatability and to add other functionalities (such as prevention of osteoporosis), which may be added as a medicinal herb extract, soybean extract, antler extract, safflower extract Extracts, Tosa extract, Sukjihwang extract, Tortoiseshell extract, Cornus extract, Goji berry extract, Licorice extract, Angelica extract, Brown root extract, Gangjinhyang extract, Haphwanpi extract, Sandugeun extract, lump extract, Gosam extract and the like can be exemplified.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 세복수초 추출물 또는 그 유효물질을 유효성분으로 하는 항암제 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 항암제 조성물은 특히 폐암, 위암, 대장암, 유방암, 간암 등에 대하여 적응증을 가지며, 약제학적 조성물 또는 식품 조성물로 제품화되어 사용될 수 있다.As described above, according to the present invention can provide an anticancer composition comprising the extract of Sebokseu herb or an active substance thereof as an active ingredient. In particular, the anticancer agent composition of the present invention has indications for lung cancer, stomach cancer, colorectal cancer, breast cancer, liver cancer and the like, and may be used as a pharmaceutical composition or a food composition.

도 1은 세복수초에 분리한 유효물질의 1H NMR 스펙트럼이다.1 is a 1 H NMR spectrum of an active substance isolated in three or more plants.

도 2는 세복수초에 분리한 유효물질의 13C NMR 스펙트럼이다.Figure 2 is a 13C NMR spectrum of the active material separated in three abdominal seconds.

도 3은 세복수초에 분리한 유효물질의 1H NMR과 13C NMR 스펙트럼 데이타를 정리한 것이다.Figure 3 summarizes the 1H NMR and 13C NMR spectral data of the active material isolated in three abdominal seconds.

도 4는 세복수초에 분리한 유효물질의 DEPT NMR 스펙트럼이다.Figure 4 is a DEPT NMR spectrum of the active material separated in three abdominal seconds.

도 5는 세복수초에 분리한 유효물질의 H-H COSY 스펙트럼이다.5 is an H-H COSY spectrum of an active material isolated in three or more plants.

도 6은 세복수초에 분리한 유효물질의 HSQC 스펙트럼이다.6 is an HSQC spectrum of an active substance isolated in three or more plants.

도 7은 세복수초에 분리한 유효물질의 HMBC 스펙트럼이다.7 is an HMBC spectrum of an active substance isolated in three or more plants.

도 8은 누드마우스에 이식된 SK-Hep-1에 대한 항암 활성 실험 기간 동안 실험동물의 체중 변화를 나타낸 그래프이다.Figure 8 is a graph showing the weight change of the experimental animals during the anti-cancer activity test for SK-Hep-1 implanted in nude mice.

도 9는 누드마우스에 이식된 SK-Hep-1에 대한 항암 활성 실험 기간 동안 종양 부피 변화를 나타낸 그래프이다.9 is a graph showing the change in tumor volume during the anticancer activity experiment for SK-Hep-1 implanted in nude mice.

도 10은 누드마우스에 이식된 SK-Hep-1에 대한 항암 활성 실험 기간 동안 종양 부피 변화를 나타낸 그래프이다.10 is a graph showing the change in tumor volume during the anticancer activity experiment for SK-Hep-1 implanted in nude mice.

도 11은 누드마우스에 이식된 SK-Hep-1에 대한 항암 활성 실험 기간 동안 종양 중량 변화를 나타낸 그래프이다.11 is a graph showing the change in tumor weight during the anticancer activity experiment for SK-Hep-1 implanted in nude mice.

도 12는 누드마우스에 이식된 HepG-2에 대한 항암 활성 실험 기간 동안 실험동물의 체중 변화를 나타낸 그래프이다.12 is a graph showing the weight change of the experimental animals during the anti-cancer activity test for HepG-2 implanted in nude mice.

도 13은 누드마우스에 이식된 HepG-2에 대한 항암 활성 실험 기간 동안 종양 부피 변화를 나타낸 그래프이다.Figure 13 is a graph showing the change in tumor volume during the anti-cancer activity experiment for HepG-2 implanted in nude mice.

도 14는 누드마우스에 이식된 HepG-2에 대한 항암 활성 실험 기간 동안 종양 중량 변화를 나타낸 그래프이다.Figure 14 is a graph showing the change in tumor weight during the anticancer activity experiment for HepG-2 implanted in nude mice.

도 15는 세복수초에 분리한 유효물질의 SK-Hep-1에 대한 증식 억제 활성을 MTT 방법에 의하여 측정한 결과이다.Figure 15 is the result of measuring the proliferation inhibitory activity against SK-Hep-1 of the active material isolated in three abdominal plants by the MTT method.

<실시예 1> <Example 1> 세복수초 추출물과 분획물의 제조Preparation of Seboksera Extracts and Fractions

세절한 세복수초(전초) 1kg을 80% 에탄올에 넣고 48시간 동안 침지시켜 3회 반복 추출한 후 여과하여 얻어진 추출액을 감압 농축하여 용매를 제거하고 동결건조하여 분말상의 추출물을 얻었다.1 kg of fine sesame plants (outposts) were put in 80% ethanol, immersed for 48 hours, extracted three times, and the extract obtained by filtration was concentrated under reduced pressure to remove the solvent and freeze-dried to obtain a powdery extract.

그리고 상기 얻어진 에탄올 추출물을 10 중량의 증류수에 현탁 및 용해시킨 후에 헥산(n-hexane), 디클로로메탄(CH₂Cl₂), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 부탄올(BuOH)로 순차적으로 분획하여, 헥산층, 디클로로메탄층, 에틸아세테이트층 및 부탄올층 및 잔여 물층의 순차적 분획물을 얻었다.The ethanol extract obtained above was suspended and dissolved in 10 weight of distilled water, and then sequentially partitioned into hexane (n-hexane), dichloromethane (CH ₂ Cl ₂ ), ethyl acetate (EtOAc) and butanol (BuOH), and a hexane layer. The sequential fractions of the dichloromethane layer, ethyl acetate layer, butanol layer and residual water layer were obtained.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples and Experimental Examples. However, the scope of the present invention is not limited to these examples and experimental examples.

<실시예> <Example> 세복수초 추출물과 분획물의 제조 및 그 유효물질의 분리Preparation of Seboksuchocho extract and Fractions and Isolation of Their Active Substances

<실시예 2> <Example 2> 유효물질의 분리 및 동정Isolation and Identification of Active Substances

상기 에틸아세테이트 분획물 8g을 취해 셀라이트545와 혼합한 후 감압농축하여 혼합물을 만든 후 오픈컬럼크로마토그래피를 실시하였다. n-Hex., MC(methylene chloride), DE(Diethyl ether), EA(Ethyl acetate), Methanol(MeOH)을 이동상으로 사용하여 총 5개의 소분획을 얻었다. 그 중 DE(800mg) 분획물에 대해 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 실시하였다. Chloroform/MeOH(9/2)을 이동상으로 사용하였으며 분 당 2.5ml 유속으로 흘려주어 총 18개의 소분획을 얻었다. 그 중 14번(DE-14)분획에 대해 간단히 정제를 실시하여 단일화합물(compound 1)을 확보하였다.8 g of the ethyl acetate fractions were mixed with celite 545, concentrated under reduced pressure to form a mixture, and then subjected to open column chromatography. Five small fractions were obtained using n-Hex., MC (methylene chloride), DE (Diethyl ether), EA (Ethyl acetate), and Methanol (MeOH) as mobile phases. Among them, DE (800 mg) fractions were subjected to silica gel column chromatography. Chloroform / MeOH (9/2) was used as the mobile phase and a total of 18 small fractions were obtained by flowing at a flow rate of 2.5 ml per minute. The 14th fraction (DE-14) was briefly purified to obtain a single compound (compound 1).

분리된 물질의 구조를 분석하기 위해 단일화합물 10mg을 메탄올-d에 녹여 NMR spectrum을 측정하였다. 1H NMR 스펙트럼(도 1 및 도 3)에서 3개의 메틸기를 확인했으며 모두 싱글렛으로 3개의 메틸기 모두 4차 탄소와 결합하고 있음을 예상하였고, 4ppm 시그널들로 미루어 1개 이상의 벤젠고리가 있음을 예상하였다. 또한 3.7-3.3ppm 부근의 복잡한 시그널들로 미루어 1개 이상의 당이 결합하고 있음을 예상하였다. 13C NMR(도 2 및 도 3) 및 DEPT NMR(도 4) 스펙트럼에서 총 21개 이상의 탄소가 존재함을 예측하였고 105.8ppm에서 아노머 탄소를 확인하였다. To analyze the structure of the separated material, 10 mg of a single compound was dissolved in methanol-d and the NMR spectrum was measured. Three methyl groups were identified in the 1 H NMR spectra (FIGS. 1 and 3) and all were predicted that all three methyl groups bound to quaternary carbon as singlets, and that at least one benzene ring was expected from 4 ppm signals. It was. It was also expected that more than one sugar would bind due to complex signals around 3.7-3.3 ppm. A total of 21 or more carbons were predicted in 13C NMR (FIGS. 2 and 3) and DEPT NMR (FIG. 4) spectra and anomer carbon was identified at 105.8 ppm.

그리고 H-H COSY 스펙트럼(도 5)에서 벤젠고리의 프로톤(H-11, δ6.40)과 메틸기의 프로톤(H-15, δ2.2)이 커플링하고 있음을 확인하였다. 따라서 H-15 메틸기는 벤젠고리에 결합하고 있으며, HSQC 스펙트럼과 HMBC 스펙트럼(도 7) 분석 결과(도 6) 아노머 수소(H-1', δ105)와 벤젠고리 탄소(C-9, δ146)의 커플링을 확인하였다. 그리고 벤젠고리에 연결된 메틸기는 C-9(δ146), C-10(δ129), C-11(δ116)과 커플링하고 있어 C-10과 결합하고 있음을 예상하였다. 또한 벤젠링의 수소(H-11, δ6.4)가 각각 C-9, C-12, C-7과 커플링하고 있어 C-9, C-7과는 오르토, C-12와 메타, C-8과는 파라 위치에 있음을 확인하였다. 메틸기 수소(H-14, δ1.7)가 벤젠고리 탄소(C-7, δ125), 4차 탄소(C-6, δ74.4), C-5(δ37)과 커플링되어 있어 4차 탄소와 결합하고 있음을 예측하였으며 다른 메틸기 수소(H-13, δ1.2)는 4차 탄소(C-2, δ74.5), C-1(δ29.6)와 커플링하고 있어 C-2와 결합하고 있음을 확인하였다. 또한 H-1(δ2.3)는 C-3(δ75.5), C-7(δ125)와, H-4(δ1.16)은 C-6(δ74.4), H-5(δ2.02)는 C-3(δ75.5)와 커플링하고 있어 C-1부터 C-8은 거대고리를 형성하고 있음을 예상하였다. 또한 C-2와 C-6은 단일결합 형태의 4차 탄소임에도 불구하고 케미컬 쉬프트가 저자장으로 이동한 것으로 보아 전기음성도가 큰 원소가 결합했음을 예상하였다. 따라서 NMR 스펙트럼을 분석한 결과 분리된 화합물은 1개의 β-glucose와 벤젠고리, 8각 다환고리로 구성되어 있음을 확인하였고 예상구조를 문헌 검색한 결과 기존에 보고되지 않은 신규물질임을 밝혀 <화학식 1>의 신규물질인 Multioside로 명명하였다.In the H-H COSY spectrum (FIG. 5), it was confirmed that the protons (H-11, δ6.40) of the benzene ring and the protons (H-15, δ2.2) of the methyl group were coupled. Therefore, the H-15 methyl group is bound to the benzene ring, and HSQC spectrum and HMBC spectrum (FIG. 7) analysis results (FIG. 6) anomer hydrogen (H-1 ', δ 105) and benzene ring carbon (C-9, δ 146). The coupling of was confirmed. The methyl group linked to the benzene ring was coupled with C-9 (δ146), C-10 (δ129), and C-11 (δ116), which was expected to bind with C-10. In addition, hydrogen (H-11, δ6.4) of the benzene ring couples with C-9, C-12, and C-7, respectively, and with C-9 and C-7, ortho, C-12, meta, C It was confirmed that -8 is in the para position. Methyl hydrogen (H-14, δ1.7) is coupled to benzene ring carbon (C-7, δ125), quaternary carbon (C-6, δ74.4), and C-5 (δ37) And other methyl hydrogens (H-13, δ1.2) are coupled with quaternary carbons (C-2, δ74.5) and C-1 (δ29.6). It was confirmed that the binding. H-1 (δ2.3) is C-3 (δ75.5), C-7 (δ125), and H-4 (δ1.16) is C-6 (δ74.4) and H-5 (δ2). .02) is coupled to C-3 (δ75.5), and C-1 to C-8 are expected to form macrocycles. In addition, although C-2 and C-6 are quaternary carbons in the form of a single bond, the chemical shift shifted to the low field, suggesting that elements with high electronegativity were bound. Therefore, NMR spectrum analysis showed that the isolated compound was composed of one β-glucose, a benzene ring, and an octagonal polycyclic ring, and the expected structure revealed that it was a novel substance that was not previously reported. It was named Multioside, a novel substance of>.

분리된 물질의 분자량을 측정하기 위해 HR-FABMS 분석을 실시했다. 신규물질의의 분자량은 426.46이며 HR-FABMS 분석 결과 소듐이 결합된 형태인 449.1791(Calcd for C₂₁H₃₀O₉Na: 449.1788)로 분석되어 예상한 분자구조가 정확함을 확인하였다.HR-FABMS analysis was performed to determine the molecular weight of the isolated material. The molecular weight of the new material was 426.46 and HR-FABMS analysis showed 449.1791 (Calcd for C ₂₁ H ₃₀ O ₉ Na: 449.1788) in the form of sodium to confirm that the expected molecular structure was accurate.

<실험예> Experimental Example 세복수초 추출물 및 분획물의 항암 활성 실험Anticancer Activity Tests of Seboksucho Extracts and Fractions

<실험예 1> Experimental Example 1 MTT 방법에 의한 암세포 증식 억제 활성실험Cancer Cell Proliferation Inhibitory Activity Test by MTT Method

<1> 실험 방법<1> experimental method

5종의 암세포(폐암: A549, 위암: AGS, 대장암: HCT-15, 유방암: MDA-MB-231, 간암: SK-Hep1)에 대한 실시예의 세복수초 80% 에탄올 추출물과 각 분획물의 세포 증식 억제 효과는 MTT 방법을 사용하여 평가하였다. 이를 위해 암세포별로 3~5×10⁴/mL의 농도로 세포수를 조정하여 96-well plate의 각 well에 넣고 24시간 부착시켰다. 24시간 후 시료를 처리하여 3일간 배양한 후 MTT시약을 첨가하여 4시간 더 배양하였다. Plate를 1,000 rpm에서 10분간 원심분리하고 조심스럽게 배지를 제거한 다음 DMSO를 가한 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. Cell proliferation of Seboksae herb 80% ethanol extract and each fraction of the example for five cancer cells (lung cancer: A549, stomach cancer: AGS, colon cancer: HCT-15, breast cancer: MDA-MB-231, liver cancer: SK-Hep1) Inhibitory effects were evaluated using the MTT method. To this end, the number of cells was adjusted to a concentration of 3 ~ 5 × 10 ⁴ / mL for each cancer cell and placed in each well of a 96-well plate and attached for 24 hours. After 24 hours, the sample was treated and incubated for 3 days, followed by further incubation for 4 hours by adding MTT reagent. The plate was centrifuged at 1,000 rpm for 10 minutes, the medium was carefully removed and the absorbance was measured at 540 nm after DMSO was added.

<2> 실험 결과<2> experimental results

실험 결과를 도 8, 표 1 및 표 2에 나타내었다.The experimental results are shown in FIG. 8, Table 1, and Table 2.

A549, AGS, HCT-15, MDA-MB-231 및 SK-Hep1를 이용한 암세포 증식 억제 효과를 본 결과, 도 1에서 확인되는 바와 같이 100 ㎍/mL에서 세복수초 80% 에탄올 추출물에서 A549와 SK-Hep1에서 80% 이상의 억제 효과를 보였다. 상기 A549와 SK-Hep1에 대해서 세복수초 추출물의 각 분획물을 농도별로 처리하였을 때 표 1 및 표 2에서 확인되는 바와 같이 A549 및 SK-Hep1에 대해 농도 의존적으로 세포 증식 억제 효과를 보였다. As a result of cancer cell proliferation inhibition using A549, AGS, HCT-15, MDA-MB-231 and SK-Hep1, as shown in FIG. Hep1 showed more than 80% inhibitory effect. As a result of treating each fraction of the extracts of Sebokseviaceae against A549 and SK-Hep1 by concentration, it showed a concentration-dependent cell proliferation inhibitory effect on A549 and SK-Hep1 as shown in Table 1 and Table 2.

이와 같은 실험 결과에 기초하여 가장 효과가 우수한 나타난 EtOAc 분획물(AAM-EA)을 사용하여 동물실험을 수행하였다.Based on these experimental results, animal experiments were performed using the EtOAc fraction (AAM-EA), which was shown to be the most effective.

표 1

Table 1

표 2

TABLE 2

<실험예 2> Experimental Example 2 AAM-EA의 Hollow fiber (HF) assay 모델에서 항암 활성 실험Anticancer activity experiment in Hollow fiber (HF) assay model of AAM-EA

<1> 실험 방법<1> experimental method

<1-1> 투여 방법 및 투여 횟수<1-1> administration method and administration frequency

시험물질의 투여는 경구투여용 존데를 부착한 일회용주사기를 이용하여 1 HF 이식 후 일 1회씩 7일간 위내 강제투여하였다.The test substance was administered by intragastric injection once a day for 7 days after 1 HF transplantation using a disposable syringe attached with oral administration sonde.

<1-2> 군 구성 및 투여 용량<1-2> Group Composition and Dosage

<1-2-1> 군 구성<1-2-1> Group Composition

군 구성은 아래의 [표 3]과 같다.The group configuration is shown in Table 3 below.

표 3

TABLE 3

<1-2-2> 투여 용량의 설정<1-2-2> Dose Setting

시험물질의 투여용량은 25, 50 및 100 mg/kg 으로 설정하였으며 음성대조군은 부형제인 주사용수를 투여하였다. 음성대조군 및 시험물질투여군의 투여액량은 10 mL/kg으로 설정하고, 개체별 투여액량은 최근 주 1회 측정된 체중을 기준으로 산출하였다.Doses of test substance were set at 25, 50 and 100 mg / kg and the negative control group received water for injection as an excipient. The dose of the negative control group and the test substance administration group was set to 10 mL / kg, and the dose of each individual was calculated based on the body weight measured once a week.

<1-3> 관찰 및 체중 측정<1-3> Observation and Weight Measurement

<1-3-1>. 일반 증상 관찰<1-3-1>. General symptoms observed

투여 전 기간에 걸쳐 1일 1회 투여 직후의 일반증상을 관찰하였다. 일반 증상의 관찰은 사망 여부, 증상의 종류 및 정도, 발현일을 개체별로 기록하였다. General symptoms immediately after administration were observed once a day over the entire period of administration. General symptoms were recorded by death, type and extent of symptoms, and date of onset.

<1-3-2> 체중 측정<1-3-2> weight measurement

모든 동물에 대하여 입수시, 군분리시, 투여개시시, 투여기간 동안 매주 1회 측정하였다.All animals were measured once weekly during acquisition, group separation, start of administration, and duration of administration.

<1-4> HF assay<1-4> HF assay

<1-4-1> 세포 배양<1-4-1> Cell Culture

시험물질을 이용하여 5가지 세포주에 대한 세포 독성 시험을 실시한 후(supplementary data) 선별하여 HF assay에 사용된 사람 유래 암세포주는 다음과 같다; A549(폐암), AGS(위암), SK-Hep1(간암). The human-derived cancer cell lines used for HF assay after screening for cytotoxicity against five cell lines using the test material (supplementary data) are as follows; A549 (lung cancer), AGS (stomach cancer), SK-Hep1 (liver cancer).

A549와 AGS는 RPMI 1640 배지에, SK-Hep1은 DMEM 배지에 sodium bicarbonate, L-glutamine, penicillin/streptomycin을 첨가한 후 최종 농도가 10%가 되도록 FBS를 첨가하여 humidified CO₂ incubator에서 배양하였다. 충분히 자란 세포주를 trypsin으로 분리한 후 HF(Cellmax implant membrane, Spectrum)에 1x10⁶ cells/ml의 농도로 loading한 후 humidified CO₂ incubator에서 24 hr 배양하였다. A549 and AGS were added to RPMI 1640 medium, and SK-Hep1 was incubated in humidified CO ₂ incubator by adding sodium bicarbonate, L-glutamine, penicillin / streptomycin to DMEM medium, and adding FBS to a final concentration of 10%. Fully grown cell lines were separated with trypsin and loaded in HF (Cellmax implant membrane, Spectrum) at a concentration of 1x10 ⁶ cells / ml and incubated in a humidified CO ₂ incubator for 24 hr.

<1-4-2> Implantation<1-4-2> Implantation

누드 마우스를 zoletil과 rompun을 사용하여 마취한 후 복벽을 약간 절개하여 24 hr 배양한 HF를 이식한 후 3일이 지난 다음 시험물질 투여를 시작하였다.Nude mice were anesthetized using zoletil and rompun, followed by a small incision in the abdominal wall and transplanted with HF incubated for 24 hr.

<1-4-3> HF 적출 및 암세포 증식 억제 정도의 측정<1-4-3> Measurement of HF Extraction and Inhibition of Cancer Cell Proliferation

시험 종료 후 마우스를 경추탈골로 희생시킨 후 이식했던 fiber를 적출하여 표면의 이물질을 제거한 후 미리 37℃로 맞춰둔 배지에 넣어 30분 동안 humidified CO₂ incubator에서 안정화시킨 후 MTT(final conc. 1 ㎎/㎖)를 처리한 후 4시간 동안 배양하였다.After the end of the test, the mice were sacrificed with cervical distal bone, and the fibers were removed to remove foreign substances on the surface, and then placed in a medium previously set at 37 ° C., stabilized in a humidified CO ₂ incubator for 30 minutes, followed by MTT (final conc. 1 mg). / Ml) and then incubated for 4 hours.

배양 종료 후 2.5% protamine sulfate로 washing한 후 새 2.5% protamine sulfate에 fiber를 담근 후 4℃에서 O/N하였다. 다시 새 2.5% protamine sulfate를 넣은 후 4시간 동안 반응시킨 후 fiber를 세로로 잘라 O/N dry하였다. Fiber가 완전히 마른 것을 확인한 후 DMSO를 넣고 실온에서 4시간 동안 shaking하면서 formazan 염을 용해시킨 후 ELISA reader를 사용하여 흡광도를 측정하였다. After the incubation period, washed with 2.5% protamine sulfate and soaked fiber in fresh 2.5% protamine sulfate and O / N at 4 ℃. After adding 2.5% protamine sulfate and reacting for 4 hours, the fiber was cut vertically and dried O / N dry. After confirming that the fiber was completely dried, DMSO was added and the formazan salt was dissolved by shaking for 4 hours at room temperature, and then absorbance was measured using an ELISA reader.

<1-5> 자료의 통계처리<1-5> Statistical Processing of Data

얻은 자료에 대한 부형제 대조군과 시험물질 투여군간의 비교는 일반적으로 Student-t test를 사용하여 검정하였다. 부종율과 억제율의 표기는 일반적으로 백분율로 나타내었다. 통계방법은 상용으로 널리 사용되는 통계 패키지인 SPSS 12.1K 프로그램을 이용하였다. Comparison between the excipient control group and the test substance administration group for the data obtained was generally assayed using the Student-t test. Indications of edema and inhibition rates are generally expressed as percentages. The statistical method used SPSS 12.1K program, which is a commercially available statistical package.

<2> 실험 결과 <2> experimental results

결과를 [표 4]에 나타내었다.The results are shown in [Table 4].

[표 4]에서 확인되듯이, A549, AGS 및 SK-Hep1를 이용한 HF assay 결과, 전 투여군에서 유의적인 세포 증식 억제 효과를 나타내었고, 특히 SK-Hep1의 경우에 가장 높은 수준으로 암세포 증식이 억제되었다.As shown in Table 4, the results of HF assay using A549, AGS and SK-Hep1 showed a significant inhibitory effect on cell proliferation in all groups. Especially, SK-Hep1 inhibited cancer cell proliferation at the highest level. It became.

표 4

Table 4

<실험예 3> Experimental Example 3 AAM-EA의 누드마우스에 이식된 SK-Hep-1에 대한 항암 활성 실험Anticancer Activity Test against SK-Hep-1 Implanted in Nude Mouse of AAM-EA

<1> 실험 방법<1> experimental method

시험물질의 투여는 경구투여용 존데를 부착한 일회용주사기를 이용하여 1 일 1 회, 4 주간, 총 28 회 위내에 강제 투여하였다.The test substance was administered by intragastric injection once a day, four weeks, and a total of 28 times using a disposable syringe with oral administration sonde.

양성대조물질의 투여는 일회용 주사기 (26G, 1 mL, Doowon meditec. Corp., Korea)를 이용하여 주 2 회, 4 주간, 총 8 회 복강에 투여하였다.Positive control was administered to the abdominal cavity twice a week, four weeks, and a total of eight times using a disposable syringe (26G, 1 mL, Doowon meditec. Corp., Korea).

<1-2> 군 구성 및 투여용량<1-2> Group Composition and Dosage

<1-2-1> 군 구성<1-2-1> Group Composition

군 구성은 아래의 [표 5]와 같다.The group configuration is shown in Table 5 below.

표 5

Table 5

<1-2-2> 투여 용량의 설정<1-2-2> Dose Setting

시험물질의 투여용량은 50, 200 및 500 mg/kg 으로 설정하였으며 양성대조물질(Cis-Diamine platinum(Ⅱ) dichloride)의 투여용량은 2 mg/kg으로 설정하였다. 음성대조군은 부형제인 주사용수를 투여하였다. 음성대조군, 시험물질투여군 및 양성대조군의 투여액량은 10 mL/kg으로 설정하고, 개체별 투여액량은 투여 일에 가깝게 측정된 체중을 기준으로 산출하였다.Doses of test substance were set at 50, 200 and 500 mg / kg and doses of positive control substance (Cis-Diamine platinum (II) dichloride) were set at 2 mg / kg. The negative control group received water for injection as an excipient. The dose of the negative control group, test substance administration group, and positive control group was set to 10 mL / kg, and the amount of the individual dose was calculated based on the weight measured close to the administration day.

<1-3> 관찰 및 체중 측정<1-3> Observation and Weight Measurement

<1-3-1> 일반 증상 관찰<1-3-1> General Symptom Observation

관찰기간 동안 매일 1회 외관, 행동 및 배설물 등의 일반증상을 관찰하고, 사망동물을 확인하였다.During the observation period, general symptoms such as appearance, behavior, and excreta were observed once daily, and death animals were identified.

<1-3-2> 체중 측정<1-3-2> weight measurement

체중은 투여개시일부터 주 2 회 (화, 금), 투여 전에 측정하였다.Body weight was measured twice a week (Tue, Fri) from the start of administration, before administration.

<1-4> 종양의 이식<1-4> Tumor Transplantation

"Attachment. Succeeding generations on transplanted tumor in nude mice (㈜바이오톡스텍, Study No.: B10999)"에서 형성된 종양괴를 약 3×3×3 mm³의 절편을 만들었다. 동물을 Isoflurane 으로 흡입 마취시킨 후 동물의 좌측 후지 전측방 부위를 약 4 mm 정도 절개하고 투관침 (trocar)의 끝에 종양 조각을 올린 후, 투관침을 좌측 후지 절개 부위로 관통시켜 좌측 전지 근처의 등 부위까지 밀어 넣었다. 다음 투관침을 빠르게 360도 회전시키면서 빼내고 피부 표면을 관찰하여 종양의 위치를 확인한 후에 동물의 좌측 후지 절개부위를 약 1 주일간 포비돈 요오드 액 (Lot No.: 1005, Dongin-dang Pharm Co., Ltd., Korea )으로 소독하였다. Tumor masses formed in "Attachment.Succeeding generations on transplanted tumor in nude mice (Biotoxtec, Study No .: B10999)" were made into sections of about 3 × 3 × 3 mm ³ . After inhalation anesthesia of the animal with Isoflurane, incision about 4 mm of the left side of the left side of the animal, incised the tumor fragment at the tip of the trocar, and then through the trocar through the left side of the left incision to the dorsal area near the left cell. Pushed in. Next, the trocar was removed while rotating 360 degrees rapidly and the skin surface was observed to determine the location of the tumor, and the left Fuji incision of the animal was removed for about 1 week in povidone iodine solution (Lot No .: 1005, Dongin-dang Pharm Co., Ltd., Korea).

<1-5> 종양의 성장억제 평가<1-5> Growth Inhibition Evaluation of Tumors

<1-5-1> 종양의 부피 측정<1-5-1> Volume of tumor

관찰기간 동안 주 2 회 (화, 금), 캘리퍼스 (caliper)를 사용하여 종양의 장축 (maximum length, L)과 단축 (perpendicular width, W)을 측정하고, 다음의 계산식에 대입하여 종양의 부피 (tumor volume, TV)를 계산하였다.Twice a week (Tue, Fri) during the observation period, the maximum length (L) and the shortest (W) of the tumor were measured using a caliper, and the volume of the tumor ( tumor volume (TV) was calculated.

TV(mm³) = L (mm)×W²(mm²)×1/2TV (mm ³ ) = L (mm) × W ² (mm ² ) × 1/2

각 개체의 투여 전의 종양의 부피는 군 분리 시 측정된 값으로 설정하였다.Tumor volume before administration of each individual was set to the value measured at group separation.

<1-5-2> 종양의 적출 및 중량 측정<1-5-2> Extraction and Weight Measurement of Tumors

관찰기간 종료일에 동물을 isoflurane (ASJ9AE, Choongwae Pharma Corp., Korea)으로 흡입 마취시킨 후, 개체별로 종양을 적출하여 중량을 측정하였다. At the end of the observation period, animals were inhaled anesthesia with isoflurane (ASJ9AE, Choongwae Pharma Corp., Korea), and tumors were collected from each individual and weighed.

<1-6> 자료의 통계처리<1-6> Statistical Processing of Data

실험에서 얻어진 체중, 종양의 부피, 종양의 중량은 SAS (Version 9.2, SAS Institute Inc., U.S.A.)를 사용하여 검정하였다.Body weight, tumor volume, and tumor weight obtained in the experiment were assayed using SAS (Version 9.2, SAS Institute Inc., U.S.A.).

Bartlett test를 실시하여 등분산성을 검정하였다 (유의수준 : 0.05). 등분산성인 경우, One-way analysis of variance (ANOVA) 를 실시 (유의수준 : 0.05)하여, 유의성이 관찰되면 음성대조군에 대한 각 시험군의 유의성을 확인하기 위해 Dunnett's t-test의 다중검정을 실시하였고 (유의수준: 단측 0.05 및 0.01), 등분산성이 기각된 경우에는 Kruskal-wallis test를 실시 (유의수준 : 0.05)하여, 유의성이 관찰되면 음성대조군에 대한 각 시험군의 유의성을 확인하기 위해 Steel's test의 다중검정을 실시하였다. Bartlett test was performed to test for equal dispersion (significance level: 0.05). In case of equal variance, one-way analysis of variance (ANOVA) was performed (significance level: 0.05), and if significance was observed, multiple tests of Dunnett's t-test were performed to confirm the significance of each test group to the negative control group. (Significance level: one-sided 0.05 and 0.01), and if dispersity was rejected, the Kruskal-wallis test was performed (significance level: 0.05) .If significance was observed, Steel's was used to confirm the significance of each test group for the negative control group. Multiple tests of the test were performed.

<2> 실험 결과 <2> experimental results

결과를 도 9 내지 도 11에 나타내었다.The results are shown in FIGS. 9 to 11.

체중 측정에서 50 mg/kg 용량의 시험물질투여군은 음성대조군과 비교하여 통계학적으로 유의한 차이가 나타나지 않았다. 200 및 500 mg/kg 용량의 시험물질투여군은 투여 후 28 일째에 음성대조군과 비교하여 통계학적으로 유의하게 증가되었다. 2 mg/kg 용량의 양성대조군은 음성대조군과 비교하여 통계학적으로 유의한 차이는 나타나지 않았으나 감소되는 경향을 나타냈다.The 50 mg / kg dose of the test substance group did not show a statistically significant difference compared to the negative control group in body weight measurement. The 200 and 500 mg / kg dose groups were significantly increased compared to the negative control at 28 days after administration. The positive control group at 2 mg / kg did not show any statistically significant difference compared to the negative control group, but tended to decrease.

종양의 부피에서 50, 200 및 500 mg/kg 용량의 시험물질투여군 및 2 mg/kg용량의 양성대조군은 투여 후 7 ~ 28 일째에 음성대조군과 비교하여 통계학적으로 유의하게 억제되었다. The 50, 200 and 500 mg / kg doses of the test substance dose and the positive control dose of 2 mg / kg dose in the tumor volume were statistically significantly inhibited compared to the negative control 7-28 days after administration.

종양의 중량 측정에서, 50, 200 및 500 mg/kg 용량의 시험물질투여군 및 2 mg/kg 용량의 양성대조군은 음성대조군과 비교하여 유의하게 작게 나타났다.In weighing tumors, the 50, 200 and 500 mg / kg doses of the test substance dose and the 2 mg / kg dose of the positive control group were significantly smaller than the negative control.

조직병리학적 검사 결과에서, 50, 200 및 500 mg/kg 용량의 시험물질투여군은 종양이 생착되어 있는 개체의 종양의 괴사(necrosis)정도가 음성대조군과 비교하여 비슷하게 관찰되었으나, 대부분의 개체에서 종양이 소실되어 전체적인 평가는 실시할 수 없었다. 세포자멸사도 종양이 대부분 소실되었고 적출된 종양에서도 괴사가 발생되어 음성대조군과 비교평가 할 수 없었다. In the histopathological examination, the 50, 200 and 500 mg / kg doses of the test substance group showed a similar degree of necrosis of the tumors in the grafted individual compared with the negative control group, but in most individuals the tumors This disappeared and the overall evaluation could not be performed. Most of the apoptotic tumors disappeared and necrosis occurred in the extracted tumors, which could not be compared with the negative control group.

결론적으로 누드마우스에 이식된 인체 유래의 간암 세포주인 SK-HEP-1에 대한 항암 시험에서, 시험물질인 AAM-EA는 50, 200 및 500 mg/kg 용량에서 종양의 성장을 억제하는 효과가 뚜렷한 것으로 판단된다.In conclusion, in the anticancer test of SK-HEP-1, a human-derived liver cancer cell line transplanted into nude mice, the test substance AAM-EA has a marked effect of inhibiting tumor growth at doses of 50, 200 and 500 mg / kg. It seems to be.

<실험예 4> Experimental Example 4 AAM-EA의 누드마우스에 이식된 HepG-2에 대한 항암 활성 실험Antitumor Activity of HepG-2 Transplanted into Nude Mouse of AAM-EA

<1> 실험 방법<1> experimental method

양성대조물질의 투여는 일회용 주사기(26G, 1 mL, Doowon meditec. Corp., Korea)를 이용하여 주 2 회, 4 주간, 총 8 회 복강에 투여하였다.Positive control was administered to the abdominal cavity twice a week, four weeks, and a total of eight times using a disposable syringe (26G, 1 mL, Doowon meditec. Corp., Korea).

<1-2> 군 구성 및 투여 용량<1-2> Group Composition and Dosage

군 구성은 아래의 [표 6]과 같다.The group configuration is shown in [Table 6] below.

표 6

Table 6

<1-2-2> 투여 용량의 설정<1-2-2> Dose Setting

시험물질의 투여용량은 20, 80 및 200 mg/kg 으로 설정하였으며 양성대조물질의 투여용량은 2 mg/kg 으로 설정하였다. 음성대조군은 부형제인 주사용수를 투여하였다. 음성대조군, 시험물질투여군 및 양성대조군의 투여액량은 10 mL/kg으로 설정하고, 개체별 투여액량은 투여 일에 가깝게 측정된 체중을 기준으로 산출하였다.Doses of test substance were set at 20, 80 and 200 mg / kg and doses of positive control were set at 2 mg / kg. The negative control group received water for injection as an excipient. The dose of the negative control group, test substance administration group, and positive control group was set to 10 mL / kg, and the amount of the individual dose was calculated based on the weight measured close to the administration day.

<1-3> 관찰 및 체중 측정<1-3> Observation and Weight Measurement

<1-3-1> 일반증상 관찰<1-3-1> General Symptom Observation

<1-3-2> 체중측정<1-3-2> weight measurement

<1-4> 종양의 이식<1-4> Tumor Transplantation

"Attachment. Succeeding generations on transplanted tumor in nude mice (㈜바이오톡스텍, Study No.: B10999)"에서 형성된 종양괴를 약 3×3×3 mm³의 절편을 만들었다. 동물을 Isoflurane 으로 흡입 마취시킨 후 동물의 좌측 후지 전측방 부위를 약 4 mm 정도 절개하고 투관침 (trocar)의 끝에 종양 조각을 올린 후, 투관침을 좌측 후지 절개 부위로 관통시켜 좌측 전지 근처의 등 부위까지 밀어 넣었다. 다음 투관침을 빠르게 360도 회전시키면서 빼내고 피부 표면을 관찰하여 종양의 위치를 확인한 후에 동물의 좌측 후지 절개부위를 약 1 주일간 포비돈 요오드 액 (Lot No.: 1005, Dongin-dang Pharm Co., Ltd., Korea )으로 소독하였다.Tumor masses formed in "Attachment.Succeeding generations on transplanted tumor in nude mice (Biotoxtec, Study No .: B10999)" were made into sections of about 3 × 3 × 3 mm ³ . After inhalation anesthesia of the animal with Isoflurane, incision about 4 mm of the left side of the left side of the animal, incised the tumor fragment at the tip of the trocar, and then through the trocar through the left side of the left incision to the dorsal area near the left cell. Pushed in. Next, the trocar was removed while rotating 360 degrees rapidly and the skin surface was observed to determine the location of the tumor, and the left Fuji incision of the animal was removed for about 1 week in povidone iodine solution (Lot No .: 1005, Dongin-dang Pharm Co., Ltd., Korea).

<1-5> 종양의 성장 억제 평가<1-5> Evaluation of Growth Inhibition of Tumors

<1-5-1> 종양의 부피 측정<1-5-1> Volume of tumor

관찰기간 동안 주 2 회 (화, 금), 캘리퍼스 (caliper)를 사용하여 종양의 장축 (maximum length, L)과 단축 (perpendicular width, W)을 측정하고, 다음의 계산식에 대입하여 종양의 부피 (tumor volume, TV)를 계산하였다. Twice a week (Tue, Fri) during the observation period, the maximum length (L) and the shortest (W) of the tumor were measured using a caliper, and the volume of the tumor ( tumor volume (TV) was calculated .

TV(mm³) = L(mm)×W²(mm²)×1/2TV (mm ³ ) = L (mm) × W ² (mm ² ) × 1/2

각 개체의 투여 전의 종양의 부피는 군분리 시 측정된 값으로 설정하였다.Tumor volume before administration of each individual was set to the value measured at group separation.

<1-6> 자료의 통계처리<1-6> Statistical Processing of Data

<2> 실험 결과 <2> experimental results

실험 결과는 도 12 내지 도 14에 나타내었다.Experimental results are shown in FIGS. 12 to 14.

체중 측정 결과, 20 및 80 mg/kg 용량의 시험물질투여군은에서 음성대조군과 비교하여 유의한 차이가 나타나지 않았다. 200 mg/kg 용량의 시험물질투여군에서 투여 후 14 ~ 21 일째에 음성대조군과 비교하여 유의하게 증가되었다. 2 mg/kg 용량의 양성대조군에서 투여 후 18 ~ 28 일째에 음성대조군과 비교하여 유의하게 감소되었다.Body weight measurements showed no significant differences in the 20 and 80 mg / kg doses of the test substance compared to the negative control in. In the 200 mg / kg dose group, it was significantly increased compared with the negative control group 14 to 21 days after administration. The positive control at the 2 mg / kg dose was significantly reduced compared to the negative control 18 to 28 days after administration.

종양의 부피 측정 결과, 20 mg/kg 용량의 시험물질투여군에서 투여 후 11 및 18 ~ 25 일째에, 80 및 200 mg/kg 용량의 시험물질투여군 및 2 mg/kg 용량의 양성대조군에서 투여 후 11 ~ 28 일째에 음성대조군과 비교하여 유의하게 억제되었다. As a result of measuring the volume of the tumor, 11 and 18 to 25 days after the administration in the 20 mg / kg dose of the test substance, 11 after the administration in the 80 and 200 mg / kg dose of the test substance and 2 mg / kg of the positive control group. At day 28, it was significantly inhibited compared to the negative control.

종양의 중량 측정 결과, 20 mg/kg 용량의 시험물질투여군에서 음성대조군과 비교하여 유의한 차이가 나타나지 않았으나, 80 및 200 mg/kg 용량의 시험물질투여군 및 2 mg/kg 용량의 양성대조군에서 음성대조군과 비교하여 유의하게 작게 나타났다.As a result of weighing the tumor, no significant difference was found in the 20 mg / kg dose of the test substance compared with the negative control, but negative in the 80 and 200 mg / kg dose of the test substance and the 2 mg / kg positive control. It was significantly smaller than the control group.

조직병리학적 검사 결과에서, 20, 80 및 200 mg/kg 용량의 시험물질투여군 및 2 mg/kg 용량의 양성대조군에서 종양의 괴사(necrosis), 세포자멸사 (apoptosis)의 정도 및 세포자멸사 (apoptosis)를 계수한 결과가 음성대조군과 비교하여 유사한 경향으로 나타났다. Histopathological findings indicate tumor necrosis, apoptosis, and apoptosis in 20, 80 and 200 mg / kg doses of the test substance and 2 mg / kg of the positive control group. The results of counting were similar to those of the negative control.

결론적으로 누드마우스에 이식된 인체 유래의 간암 세포주인 HepG2 에 대한 항암 시험에서, 시험물질인 AAM-EA 는 80 및 200 mg/kg 용량에서 종양의 성장을 억제하는 효과가 뚜렷한 것으로 판단된다.In conclusion, in the anticancer test of HepG2, a human-derived liver cancer cell line transplanted into nude mice, the test substance AAM-EA was found to have a clear effect of inhibiting tumor growth at doses of 80 and 200 mg / kg.

<실험예 5> Experimental Example 5 세복수초에서 분리한 유효물질의 MTT 방법에 의한 SK-Hep-1 세포 증식 억제 활성 실험Inhibitory activity of SK-Hep-1 cell proliferation by MTT method

상기 <실험예 1>과 동일한 방법으로 세복수초에서 분리한 유효물질의 SK-Hep-1 세포에 대한 증식 억제 활성을 평가하였다.In the same manner as in <Experimental Example 1>, the proliferation inhibitory activity of SK-Hep-1 cells of the active substance isolated from three abdominal plants was evaluated.

실험 결과를 도 15에 나타내었는데, 세복수초에 분리한 유효물질은 농도 의존적으로 SK-Hep-1 세포의 증식을 억제함을 보여준다.Experimental results are shown in Figure 15, showing that the active material isolated in three or several seconds inhibits the proliferation of SK-Hep-1 cells in a concentration-dependent manner.

Claims

An anticancer composition comprising Seboksucho extract, the compound of Formula 1 below or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

The method of claim 1,

The seboksucho extract is an anticancer composition, characterized in that the extract obtained by immersing the seboksucho water, ethanol or a mixed solvent of water and ethanol.

The method of claim 1,

The seboksucho extract is a dichloromethane layer obtained when the extract obtained by immersing the seboksuseo in water, ethanol or a mixed solvent of water and ethanol suspended in water, and sequentially fractionated with hexane, dichloromethane, ethyl acetate and butanol Anticancer composition, characterized in that the fraction extract, ethyl acetate layer fraction extract or fraction extract of butanol layer.

The method of claim 1,

The extract of E. g. Myelin acetate fraction obtained when the extract obtained by immersing the ginseng myelin in water, ethanol or a mixed solvent of water and ethanol is suspended in water and sequentially fractionated with hexane, dichloromethane, ethyl acetate and butanol. Anticancer composition, characterized in that.

The method of claim 1,

The anticancer activity is an anticancer agent, characterized in that the anticancer activity against cancer of the lung, stomach cancer, colon cancer, breast cancer or liver.

The method of claim 1,

The anticancer activity is an anticancer agent, characterized in that the anticancer activity against liver cancer.

The method according to any one of claims 1 to 6,

The composition is an anticancer composition, characterized in that the pharmaceutical composition.

The method according to any one of claims 1 to 6,

The composition is an anticancer composition, characterized in that the food composition.

A compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.