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WO2013004953A2 - Composition cosmetique comprenant un melange de miels - Google Patents

Composition cosmetique comprenant un melange de miels Download PDF

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Publication number
WO2013004953A2
WO2013004953A2 PCT/FR2012/051499 FR2012051499W WO2013004953A2 WO 2013004953 A2 WO2013004953 A2 WO 2013004953A2 FR 2012051499 W FR2012051499 W FR 2012051499W WO 2013004953 A2 WO2013004953 A2 WO 2013004953A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
honey
composition
skin
honeys
cosmetic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR2012/051499
Other languages
English (en)
Other versions
WO2013004953A3 (fr
Inventor
Elisabeth Devilard
Elodie DUGAS
Bérengère SOUVIGNET
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Laboratoires M&L SA
Original Assignee
Laboratoires M&L SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Laboratoires M&L SA filed Critical Laboratoires M&L SA
Publication of WO2013004953A2 publication Critical patent/WO2013004953A2/fr
Publication of WO2013004953A3 publication Critical patent/WO2013004953A3/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/987—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
    • A61K8/988—Honey; Royal jelly, Propolis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/007—Preparations for dry skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/59—Mixtures
    • A61K2800/592—Mixtures of compounds complementing their respective functions
    • A61K2800/5922—At least two compounds being classified in the same subclass of A61K8/18

Definitions

  • the present invention relates to a cosmetic composition for the treatment of dry skin and / or an anti-aging cosmetic composition.
  • the present invention also relates to the cosmetic use of this composition for stimulating cell proliferation and / or for restoring the epidermal barrier function and / or for stimulating the vasculogenesis of the skin, and to a cosmetic treatment method.
  • the present invention finds particular application in the cosmetics field.
  • references in brackets ([]) refer to the list of references at the end of the text.
  • the skin is an organ of exchange. Its visual aspect but also touch occupies a very important place, particularly in the current society.
  • the skin forms the envelope of the body and constitutes the ultimate barrier between the individual and the environment. Its functional purpose is to protect the body from water loss and various external aggressions (UV radiation, pollution, micro-organisms). This property, called the barrier function, is mainly provided by the stratum corneum.
  • the epidermis Under certain conditions, or at certain moments of life, the epidermis, and thus the epidermal barrier, can be weakened or impaired.
  • the skin barrier function In the case of dry skin, the skin barrier function is not very effective. This is also the case in mature skin subjected to a decreased epidermal regeneration and cell synthesis related to aging. Similarly, during external aggressions (cold, razor, surgery, peeling ...) or dermatological conditions (acne, burns, wounds ...), the epidermis and the barrier function of the skin are affected.
  • dry skin There are different types:
  • the "real" dry skin by real lack of water in the stratum corneum can be either a constitutional disorder due to lack of NMF leading to a decrease in the water retention capacity within the stratum corneum, or dehydrated skin by climatic, environmental, etc. aggression. In this case, all types of skin may be temporarily affected.
  • dry must first be understood as “lacking water”, that is to say, as opposed to a well-hydrated skin and not as a skin lacking lipids, apprehended as opposed to the phenomenon oily skin.
  • Dry skin can be characterized by a decrease in extracellular lipid levels, a dehydrated state and a delay in the reconstitution of the epidermal barrier (Seyfarth F, Schliemann S, Antonov D, Elsner P. Dry skin, barrier function, and irritant contact Dermatol 201 1, 29 (1): 31 -6. [1]).
  • dry skin is particularly uncomfortable: it is painful, not very supple, she draws. Visually, it has a parchment-less appearance. Dry skin can reveal food deficiency, allergy, skin disease (such as ichthyosis, eczema or psoriasis) or other health problem (eg, hypothyroidism).
  • compositions for the treatment of dry skin and / or anti-aging compositions are known in the state of the art. However, these compositions do not make it possible to effectively treat the causes of dry skin or to stimulate the barrier function of the skin associated with this condition.
  • Honey has been known for centuries as a food with beneficial, soothing and regenerative virtues that have a real beneficial effect on the body.
  • honey is known for its effectiveness against burns, certain snake bites, fever, infections and various inflammations.
  • Honey is a complex product of 100% natural origin, derived from the plant and animal environment. It is produced by honey bees from the nectar of flowers. Once harvested, the bees will subject the nectar to chemical, physical and enzymatic reactions (enzymatic hydrolysis of polysaccharides to fructose, glucose, dehydration ). The maturation of the honey nectar consists of a transformation of sugars and a reduction of the water content. It begins when the nectar is harvested by the bees and continues when stored in the hive. Thyme, orange and acacia honeys are so-called nectar honey (or flower honey).
  • honey is derived from the secretions of live insect insects on the plant (aphids, mealybugs, citadels). We are talking about honeydew. There is a very wide variety of honeys corresponding to the flowers and plants visited by the bees. The composition of honey depends on:
  • Table 1 Biochemical composition of European honeys expressed for the main compounds in% by weight relative to the total weight of the honey, in mg per kg for the minority compounds.
  • honeys can be useful to treat primarily dry skin.
  • these compositions do not make it possible to effectively treat the causes of dry skin or to stimulate the barrier function of the skin associated with this condition.
  • the present invention is specifically intended to meet this need by providing a cosmetic composition comprising spring honeys.
  • the cosmetic composition according to the invention comprises acacia honey, thyme honey and orange honey.
  • the present invention also relates to the cosmetic and / or dermatological use of this composition.
  • composition according to the invention may be an anti-aging cosmetic composition and / or for the treatment of dry skin.
  • acacia honey means a monofloral honey derived from acacia belonging, for example, to the family Fabaceae, acacia, for example species Robinia pseudoacacia. It may be, for example, a honey that is in the form of a clear liquid honey, medium strong smell, floral and sweet flavor, floral with a fairly simple pollen spectrum, that is to say including for example a majority of Robinia pseudoacacia pollen and a minority of Prunus / Pyrus and Castanea sativa pollens. It may be for example a honey with a glucose and fructose content greater than 66% relative to the total weight. It may be for example acacia honey marketed by Guy Nicolas Les Charmes 52260 Marac. It may be for example honeys from organic farming.
  • range honey means a monofloral honey produced from a citrus nectar, in particular orange citrus species. It may be, for example, a honey that is in the form of a liquid honey, clear amber, powerful smell, medium floral and fruity flavor, floral, acidulous with a rather complex pollen spectrum, it that is to say comprising mainly pollen of viperine and echium and in a minority of pollens of eucalyptus and brassicaceae. It may be for example a honey with a glucose and fructose content greater than 69% by weight relative to the total weight. It may be for example orange honey marketed by Honeys Villeneuve 81 rue Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis. It may be, for example, honeys from organic farming.
  • thyme honey means a monofloral honey derived from thymes of the species Thymus. It may be, for example, a honey that is in the form of a liquid honey, medium amber, strong smell and complex flavor, fruity, acidulous and quite persistent with a fairly complex pollen spectrum. Indeed, it includes accompanying pollen of brassicaceae and thyme and pollen minority sainfoin of blueberry clover and genista type. It may be, for example, a honey with a glucose and fructose content greater than 60% by weight. It may be for example thyme honey marketed by Honeys Villeneuve 81 rue Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis. It may be for example honeys from organic farming.
  • the term "cosmetic composition” is intended to mean any cosmetic composition, for example a composition that can be brought into contact with the superficial parts of the human body, for example the epidermis, the hair and capillary systems, the external organs, the teeth and mucous.
  • the mixture of honeys may be present in the composition, for example at a concentration of from 0.05 to 100%, for example from 0.1 to 15%, for example from 0.1 to 5%, by example of 0.1 to 2% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the honeys may be in the composition at an identical or different concentration by weight relative to the total weight of said composition.
  • the ratio between the different honeys can be a ratio of 1: 1: 1 of 1: 2: 2 or 1: 2: 3
  • composition of the invention comprising acacia honey, thyme honey and orange honey strengthens the epidermal barrier function.
  • composition of the invention comprising acacia honey, thyme honey and orange honey advantageously stimulates cell proliferation as well as vasculogenesis thus making it possible to revitalize the skin, in particular dry skin and to restore the radiance of the complexion.
  • the present invention therefore also relates to the cosmetic use of the composition comprising acacia honey, thyme honey and orange honey.
  • the present invention also relates to the cosmetic use of the composition of the invention for stimulating cell proliferation and / or for restoring the epidermal barrier function and / or for stimulating the vasculogenesis of the skin.
  • the present invention advantageously makes it possible to stimulate cell proliferation. as well as vasculogenesis thus making it possible to revitalize the skin, in particular the dry skin and to restore the radiance of the complexion.
  • the inventors have clearly demonstrated that the present invention using acacia honey, thyme honey and orange honey synergistically act on the regeneration and restructuring of the epidermis as well as on the radiance and the vitality of the skin.
  • the cosmetic composition of the present invention may further comprise at least one additional active agent chosen, for example from an anti-aging agent, a moisturizing agent a soothing agent or a mixture of these agents.
  • these agents may be those commonly used in cosmetic and / or dermatological products.
  • anti-aging agents that may be used are, for example, silicon or vitamin C.
  • moisturizing agents which may be used are, for example, glycerine or hyaluronic acid.
  • soothing agents that can be used are, for example, bisabolol, extracts of Boswellia serrata or azulene. This or these agent (s) may be used in the composition of the present invention for example at the concentrations usually used and known to those skilled in the cosmetic or dermatological compositions.
  • the cosmetic composition according to the invention may comprise one or more adjuvants known to those skilled in the art. It may be, for example, one or more adjuvants chosen from among ester type agents, moisturizing agents, emollient agents, mineral thickeners, obtained by biotechnology, associative or not, filters mineral sunscreens, perfumes, preservatives, pseudo-ceramides, vitamins and provitamins, proteins, sequestering agents, alkanizing agents, acidifying agents, reducing agents, oxidizing agents, mineral fillers, natural dyes or any other adjuvant that can be cited in the INCI dictionary (International Nomenclature Cosmetic Ingredients) published by the CTFA (Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association).
  • CTFA Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association
  • the cosmetic composition may, for example, be in any form known to those skilled in the art. It may be, for example of a form selected from an oil-in-water emulsion, water-in-oil, a multiple emulsion, a microemulsion, a solid emulsion, an aqueous gel or hydro -alcoholic, a cream, a milk, an ointment, an oil, a balm, an ointment, a gel, a mask, a powder, a soaked support, for example a transdermal patch, a solution, an aqueous or hydroalcoholic lotion , a spray, a suspension and / or a wax.
  • a form selected from an oil-in-water emulsion, water-in-oil, a multiple emulsion, a microemulsion, a solid emulsion, an aqueous gel or hydro -alcoholic, a cream, a milk, an ointment, an oil, a balm
  • the composition may be in any form known to those skilled in the field of cosmetics and dermatology, without any particular pharmaceutical restriction.
  • composition according to the present invention may be, for example a composition for the care of the face, of the body, for example compositions for the face and / or the body.
  • composition of the invention may be obtained by any suitable method known to those skilled in the art for the manufacture of a cosmetic and / or dermatological composition. It may be, for example a simple mixture. It may also be, for example, a method comprising a step of incorporating an internal phase into an external phase by means of an emulsifier, for example a rotor-stator type turbine. It may also be for example a method using Phase Inversion Temperature (TIP), a method conventionally used by those skilled in the art to obtain oil-in-water emulsions whose dispersed droplets are particularly fine.
  • TIP Phase Inversion Temperature
  • the present invention also relates to an anti-aging cosmetic treatment method comprising the application to the skin of a cosmetic composition comprising acacia honey, thyme honey and orange honey.
  • a cosmetic composition comprising acacia honey, thyme honey and orange honey.
  • the acacia honey, the thyme honey and the orange honey are as defined above.
  • It may be, for example a simple application to the skin or an application accompanied by a massage of the skin with the composition of the present invention.
  • the application is preferably carried out with a sufficient amount of the composition so that the entire surface of the skin to be treated is treated. It may be for example a conventional application, such as a cream on the skin. For example, it may also be an application for forming a treating mask.
  • the application can be, for example a daily, weekly and bi-monthly application. This may be for example an application once a day, twice a day or more.
  • the present invention makes it possible to reinforce the epidermal barrier function as well as to stimulate vasculogenesis thus making it possible to revitalize the skin.
  • the present invention advantageously makes it possible to promote the cohesion between the dermis and the epidermis, to regenerate and restructure the epidermis for better surface smoothness and a radiant complexion.
  • Example 1 Example of a facial or body care made from the composition of the present invention
  • a basic composition described in Table 2 below is prepared by mixing the various components:
  • composition of the three honeys used in accordance with the present invention namely Acacia honey, Orange honey and Thyme honey has been studied in order to reveal the chemical particularities of each of the three honeys. Their contents of water, carbohydrates and free amino acids were thus characterized for each one. The total contents are presented in Table 3.
  • Table 3 Average composition of the three honeys expressed in% by weight relative to the total weight of the honey
  • the water content is one of the criteria for quality choice of honeys.
  • the water content preferably does not exceed 21% by weight of the honey, advantageously avoiding the proliferation of microorganisms.
  • the average water content is 18% by weight of the honey. The three honeys selected in this example perfectly meet the quality requirements.
  • Carbohydrate analysis confirmed that sugars represent the majority of the three honeys.
  • the sugar content facilitates the fixing of water molecules thus protecting the skin from dehydration while maintaining flexibility and softness.
  • the various sugars of the carbohydrate fraction of the honeys selected for this example are presented in Table 4.
  • Table 4 Composition of the three honeys in sugars expressed in% by weight with respect to the total weight of honey
  • the majority sugars are monosaccharides (glucose and fructose).
  • the selected acacia honey has the highest fructose content (43.8%) of the three honeys while the selected orange honey has the highest glucose content (30.5%).
  • sugars are also present in the three honeys, in smaller quantities, including disaccharides (sucrose, maltose, isomaltose, turanose) or trisaccharides (raffinose and erlose).
  • disaccharides sucrose, maltose, isomaltose, turanose
  • trisaccharides raffinose and erlose
  • orange honey has the highest erlose content of the three honeys
  • orange honey has a high maltose content
  • thyme honey has specific levels of isomaltose and raffinose.
  • the chemical characterization of the three honeys of the invention confirms carbohydrate compositions that are close to but specific to their botanical origin.
  • the vitamins, minerals and amino acids contained in honeys help to tone and nourish the skin.
  • the free amino acids present in honeys may have several origins: the nectar of the pollinated flowers, the pollen present in the honeys, the bee itself (case of the proline). Analysis of the amino acids present in the three selected honeys allowed to highlight new peculiarities of the composition of each of these honeys (Table 5).
  • Table 5 Composition of the three honeys in free amino acids expressed in mq per kg.
  • honeys contain a great diversity of amino acids.
  • proline Aspartic acid is the major amino acid of acacia honey.
  • Orange honey is distinguished by a high content of asparagine.
  • Thyme honey has the highest amino acid content of all three honeys (815.8 mg / kg). Its phenylalanine (236.3 mg / kg) content is much higher than that of acacia honey (7.4 mg / kg) and orange honey (7.6 mg / kg). Phenylalanine is therefore an amino acid characteristic of thyme honey.
  • the latter also contains alanine (14.9 mg / kg) and tyrosine (47.3 mg / kg) at higher concentrations than those analyzed in the other two honeys.
  • the essential protective functions of the skin can momentarily deteriorate and cause a dry skin with feelings of discomfort (lack of flexibility, tightness, tendency to wrinkle easier). This is mainly due to a delay in the reconstitution of the epidermal barrier and a dehydrated state.
  • the epidermis regenerates continuously and this constant turnover is made from cells of the basal layer comprising epidermal stem cells which have a high proliferative potential, a high ability to self-renew and generate so-called transient cells.
  • the transient cells After a few cycles of division, the transient cells begin a process of terminal differentiation, called keratinization or cornification.
  • keratinization a process of terminal differentiation
  • corneocytes a process of terminal differentiation
  • the barrier function of the skin is largely due to the stratum corneum or stratum corneum.
  • the natural factor of hydration which participates, with the epidermal lipids of structure, with the maintenance of the ideal rate of cutaneous hydration and the maintenance of the barrier function.
  • the natural factor of hydration forms a surface film which will help to retain the water inside the skin, the dry skins suffering from a lack of water, their water reserves are also diminished.
  • the experiments are carried out with a honey of organic thyme, organic orange honey or organic acacia honey and the mixture of the three.
  • the honey of organic thyme came from Montargis by the company Miels Villeneuve (81 rue de la Baraudière ZA Villemandeur 45203
  • the organic orange honey came from Montargis by the company Miels Villeneuve (81 rue Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis).
  • the organic acacia honey came from Guy Nicolas in Marac (Les).
  • the transcriptome is the set of messenger RNAs (molecules that serve as a template for the synthesis of proteins) resulting from the expression of a part of the genome of a cellular tissue or a cell type.
  • the characterization and quantification of the transcriptome in a given tissue and under given conditions makes it possible to identify the active genes, to determine the mechanisms for regulating gene expression and to define the expression networks of the genes.
  • One of the techniques used to simultaneously measure the level of expression of a large number of different types of messenger RNA is that of the DNA chip. DNA microarrays can measure and visualize very quickly the differences in expression between genes at the level of a complete genome.
  • Extracts of thyme honey, orange honey, acacia honey and the combination of these three honeys at the different concentrations presented in example 1 are made for transcriptomic analyzes.
  • Microarray analysis revealed different gene expression patterns in HepG2 cells treated with low and high concentrations of Western Anacardium shoots. Genes Nutr. 201 1 Mar 29. [9]) which made it possible to determine for each composition a maximum diluted concentration to be applied, 5 explants of skin from facelift of a patient aged 55 were incubated independently in presence of these compositions for 24 hours in DMEM (DulbeccoA / ogt modified Eagle's minimal essential medium) without serum at 37 ° C in a humid atmosphere at 5% CO2. An untreated skin explant was incubated under the same conditions. Table 6 summarizes the concentrations applied for each composition.
  • DMEM DulbeccoA / ogt modified Eagle's minimal essential medium
  • RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent Technologies, Boblingen, Germany).
  • the cycles of retrotranscription and amplification of the total RNAs in cRNA then in cDNA are carried out using the Ambion WT Expression kits (Ambion, Applied Biosystem, USA) and the GeneChip WT kit. Labeling and Hybridization User (Affymetrix ).
  • the hybridization of the chips and the measurements were carried out by Microarray Facility Tubingen.
  • the chips were then scanned using the Gene Chip GCS3000 scanner (Affymetrix) and the GCOS 1 .4 software.
  • the scanned images are then analyzed using the Expression 1 .0 (Affymetrix) console to convert light intensity measurements into digital data and normalize this data.
  • Xn represents the stimulation factor relative to the untreated skin
  • db EST is a database containing the reference of the gene as well as its sequence corresponding to the gene spotted on the oligonucleotide chip Affymethx Human Gene 1 .0 ST Whole Genome.
  • ANGPTL1 R aagtgggcgcagtttcct 60 56 2
  • HBEGF catgcccaacttcactttctc 59 48 10
  • a retrotranschption step is first performed using the Superscript First-Srand Synthesis System for RT-PCR system (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) of the RNAs from the preceding skin explants (Devilard E, Bladou F, Ramuz O, Karsenty G, Dalès JP, Gravis G, Nguyen C, Bertucci F, Xerri L, Birnbaum D.
  • FGFR1 and WT1 are markers of human prostate cancer progression, BMC Cancer, 2006 Nov 30, 6: 272 [1 1]).
  • the HBEGF gene encodes a growth factor related to EGF (Fitsialos G, Chassot AA, Turchi L, Dayem MA, LeBrigand K, Moreilhon C, Meneguzzi G, Buscà R, Mari B, Barbry P, Ponzio G.
  • Transcriptional signature of epidermal keratinocytes investigated for in vitro scratch wounding reveals selective roles for ERK1 / 2, p38, and phosphatidylinositol 3-kinase signaling pathways, J Biol Chem 2007 May 18, 282 (20): 15090-102. [13]).
  • proliferation of keratinocytes signal transmitted via its specific EGFR receptors (Fitsialos G, Chassot AA, Turchi L, Dayem MA, LeBrigand K, Moreilhon C, Meneguzzi G, Buscà R, Mari B, Barbry P, Ponzio G.
  • the mixture comprising honeys of thyme, orange and acacia stimulates keratinocyte proliferation and effectively restores the barrier function (Bellemère G, Stamatas GN, Bruère V, Bertin C, Issachar N, Oddos T Antiaging action of retinol: from molecular to clinical Skin Pharmacol Physiol 2009; 22 (4): 200-9 [15]).
  • ANGPTL1, ANGPTL2 and ANGPTL4 genes coding respectively for the angiopoietin-related protein 1, 2 and 4 were multiplied by 3 in the presence of the mixture of the three honeys.
  • These genes regulate angiogenesis and vasculogenesis (Morisada T, Kubota Y, Urano T, Suda T, Oike Y.
  • the mixture comprising acacia, thyme and orange honey stimulates vasculogenesis thus making it possible to revitalize dry skin and also restore the radiance of the complexion since dry skin lacks radiance.
  • the real-time PCR results for validating the HBEGF, CRABP2, ANGPTL1, ANGPTL2 and ANGPTL4 genes include the microarray data in Table 9.
  • Table 9 gene expression of HBEGF, CRABP2, ANGPTL1, ANGPTL2 and ANGPTL4 by RT-QPCR following the application of the mixture of 3 honeys on skin explants compared to the same untreated explant.
  • Taormina P.J. Niemira B.A., Beuchat L.R. "Inhibitory activity of honey against foodborne pathogens as influenced by the presence of hydrogen peroxide and level of antioxidant power."
  • Tonks A., Cooper R.A., Price A.J., Molan P.C., Jones K.P. stimulation of TNF-alpha release in monocytes by honey.

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Abstract

La présente invention se rapporte à une composition cosmétique comprenant du miel d'acacia, du miel d'oranger et du miel de thym. La présente invention a également pour objet l'utilisation cosmétique de la composition pour stimuler la prolifération cellulaire et/ou pour restaurer la fonction barrière épidermique et/ou pour stimuler la vasculogénèse de la peau, et un procédé de traitement cosmétique de la peau sèche comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique de l'invention.

Description

COMPOSITION COSMETIQUE COMPRENANT UN MELANGE DE
MIELS
DESCRIPTION
Domaine technique
La présente invention se rapporte à une composition cosmétique pour le traitement de la peau sèche et/ou une composition cosmétique anti-âge.
La présente invention se rapporte également à l'utilisation cosmétique de cette composition pour stimuler la prolifération cellulaire et/ou pour restaurer la fonction barrière épidermique et/ou pour stimuler la vasculogénèse de la peau, et à un procédé de traitement cosmétique. La présente invention trouve notamment une application dans le domaine cosmétique.
Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([ ]) renvoient à la liste des références présentées à la fin du texte.
Etat de la technique
La peau est un organe d'échange. Son aspect visuel mais aussi tactile occupe une place très importante, particulièrement dans la société actuelle. La peau forme l'enveloppe du corps et constitue l'ultime barrière entre l'individu et l'environnement. Sa finalité fonctionnelle est de protéger l'organisme de la perte en eau et des agressions externes diverses (rayonnements UV, pollution, micro-organismes). Cette propriété, appelée fonction barrière, est principalement assurée par la couche cornée (stratum corneum).
Dans certaines conditions, ou à certains moments de la vie, l'épiderme, et donc la barrière épidermique, peut être fragilisée ou altérée. Dans le cas des peaux sèches, la fonction de barrière cutanée s'avère peu efficace. C'est aussi le cas chez les peaux matures, soumises à une baisse de la régénération épidermique et des synthèses cellulaires liées au vieillissement. De même, lors d'agressions extérieures (froid, rasoir, chirurgie, peeling...) ou d'affections dermatologiques (acné, brûlures, plaies...), l'épiderme et la fonction barrière de la peau se trouvent affectés. II existe différents types de peaux sèches :
- La « vraie » peau sèche par réel manque d'eau dans la couche cornée. Il peut s'agir soit d'un trouble constitutionnel par manque de NMF entraînant une diminution du pouvoir de rétention de l'eau au sein du stratum corneum, soit d'une peau déshydratée par les agressions climatiques, environnementales etc. Dans ce cas, tous les types de peaux peuvent être temporairement concernés.
- Les peaux sèches alipidiques correspondant à un trouble constitutionnel impliquant une sécrétion de sébum trop faible.
- Les peaux sèches dites « apparentes » dont le mécanisme n'est pas un manque d'eau. On retrouve notamment ici les troubles de la desquamation liés à l'âge ou les conséquences d'une exposition aux ultraviolets avec un épaississement de la couche cornée.
- Les peaux sèches dermatologiques avec des pathologies telles que l'ichtyose, la kératose pilaire, le psoriasis. Dans ces cas, on observe une diminution d'eau dans le stratum corneum et des troubles de la desquamation.
En bref, le terme « sec » doit d'abord être compris comme « manquant d'eau », c'est-à-dire par opposition à une peau bien hydratée et non comme une peau manquant de lipides, appréhendée par opposition au phénomène des peaux grasses.
Une peau sèche peut se caractériser par une diminution du taux de lipides extracellulaires, un état déshydraté et un retard dans la reconstitution de la barrière épidermique (Seyfarth F, Schliemann S, Antonov D, Elsner P. Dry skin, barrier function, and irritant contact dermatisis in the ederly. Clin Dermatol 201 1 , 29 (1 ):31 -6.[1 ]). Sur le plan sensoriel, la peau sèche est particulièrement inconfortable : elle est douloureuse, peu souple, elle tire. Sur le plan visuel, elle possède un aspect parcheminé sans éclat. Une peau sèche peut révéler une carence alimentaire, une allergie, une maladie cutanée (comme l'ichtyose, l'eczéma ou le psoriasis) ou un autre problème de santé (par exemple, l'hypothyroïdie).
De nombreuses compositions pour le traitement de la peau sèche et/ou des compositions anti-âges sont connues dans l'état de la technique. Toutefois, ces compositions ne permettent pas de traiter efficacement les causes de la peau sèche ni de stimuler la fonction barrière de la peau lié à cet état.
Le miel est connu depuis des siècles, comme un aliment aux vertus bienfaisantes, adoucissantes et régénératrices qui ont un réel effet bénéfique sur l'organisme.
1/ Historique
Les premiers écrits faisant mention du miel non pas comme un aliment mais comme un médicament datent de l'époque mésopotamienne (2700 ans avant J-C). Les Egyptiens l'utilisaient pour panser les blessures, soigner les affections oculaires, embaumer les morts mais également pour embellir la peau. Des textes médicaux Assyriens préconisaient également l'usage du miel dans le traitement des affections de l'œil et de l'oreille mais également en gynécologie. Hippocrate le conseillait pour guérir les plaies, apaiser les douleurs d'oreilles, fortifier la vue. Aristote lui reconnaissait également des vertus médicinales pour les contusions et les plaies suppurantes. Au Moyen-âge, Avicenne loua également ses vertus cicatrisantes. En Afrique noire, le miel est reconnu pour son efficacité contre les brûlures, certaines morsures de serpents, la fièvre, les infections et inflammations variées.
Depuis quelques années, de nombreuses études scientifiques ont permis de confirmer les propriétés traditionnellement accordées au miel comme des propriétés antibactériennes (Taormina P.J., Niemira B.A.,
Beuchat L.R. « Inhibitory activity of honey against foodborne pathogens as influencée! by the présence of hydrogen peroxide and level of antioxidant power." International Journal of Food Microbiology, 2001 , 69(3), 217-225 [2]) (Dimitrova B., Gevrenova R., Anklam E. «Aromatic and arylaliphatic carboxylic acids as markers for th efloral origin of heather honey. » European Journal of drug metabolism and pharmacokinetics, 2003, 28(1 ), spécial issue 44 [3]), des propriétés anti-inflammatoires (Tonks A., Cooper R.A., Price A.J., Molan P.C., Jones K.P. "Stimulation of TNF-alpha release in monocytes by honey." Citokine, 2001 , 14(4), 240-242 [4]) mais également de lui en découvrir de nouvelles notamment des propriétés antioxydantes (Gheldof N., Engeseth N.J. "Antioxidant capacity of honey from various floral sources based on the détermination of oxygen radical absorbance capacity and inhibition of in vitro lipoprotein oxidation in human sérum sample." J.Agric. Food Chem., 2002, 50(10), 3050-3055 [5]). Sous l'impulsion du Professeur B. Descottes, le miel a même fait son entrée à l'hôpital depuis le début des années 80 (Cicatrisation par le miel, l'expérience de 25 années : B. Descottes Phytothérapie (2009) 7 :1 12-1 16 [6]).
2/Composition des miels
Le miel est un produit complexe d'origine 100% naturelle, issu du milieu végétal et animal. Il est produit par les abeilles mellifiques à partir du nectar de fleurs. Une fois récolté, les abeilles vont faire subir au nectar des réactions chimiques, physiques et enzymatiques (hydrolyse enzymatique des polysaccharides en fructose, glucose, déshydratation...). La maturation du nectar en miel consiste en une transformation des sucres et une diminution de la teneur en eau. Elle commence dès la récolte du nectar par les abeilles et se poursuit lors du stockage dans la ruche. Les miels de thym, d'oranger et d'acacia sont des miels dits de nectar (ou miel de fleurs). Pour d'autres miels, tel le sapin, le miel est issu des sécrétions des insectes parasites vivants sur la plante (pucerons, cochenilles, citadelles). On parle alors de miellat. Il existe une très grande variété de miels correspondants aux fleurs et plantes visitées par les abeilles. La composition du miel dépend :
- De la composition initiale du nectar
- Du travail des abeilles : échanges successifs entre les abeilles qui vont enrichir le liquide en enzymes (présents dans les sécrétions des abeilles) et le déshydrater. Les sucres caractéristiques du miel apparaissent suite à différentes réactions enzymatiques.
Chaque miel présente donc une composition spécifique. Cependant, les miels européens présentent tous une composition moyenne détaillée ci-dessous dans le tableau 1 .
Tableau 1 : Composition biochimique des miels Européens exprimée pour les principaux composés en % en poids par rapport au poids total du miel, en mg par kg pour les composés minoritaires.
Figure imgf000006_0001
Si les bienfaits du miel sont connus depuis fort longtemps dans le traitement de nombreuses affections, il n'a jamais été envisagé qu'une association de miels puisse être utile pour traiter en priorité la peau sèche. En particulier, malgré le grand nombre de compositions cosmétiques disponibles pour traiter des problèmes de peau, ces compositions ne permettent pas de traiter efficacement les causes de la peau sèche ni de stimuler la fonction barrière de la peau liée à cet état.
Il existe donc un réel besoin de trouver un nouveau composé, composition et/ou un moyen de traitement efficace de la peau sèche et/ou des causes à l'origine de cet état palliant l'ensemble des défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur.
Description de l'invention
La présente invention a précisément pour but de répondre à ce besoin en fournissant une composition cosmétique comprenant des miels de printemps. Avantageusement, la composition cosmétique selon l'invention comprend du miel d'acacia, du miel de thym et du miel d'oranger.
La présente invention se rapporte également à l'utilisation cosmétique et/ou dermatologique de cette composition.
La composition selon l'invention peut être une composition cosmétique anti-âge et/ou pour le traitement de la peau sèche.
En outre, Les travaux réalisés par les inventeurs dans le cadre de l'invention ont permis de caractériser chacun de ces extraits et de mettre en évidence leur complémentarité et synergie d'action.
Dans la présente par « miel d'acacia » on entend un miel monofloral issu d'acacia appartenant, par exemple à la famille des Fabacées, de robinier, par exemple de l'espèce Robinia pseudoacacia. Il peut s'agir, par exemple, d'un miel qui se présente sous la forme d'un miel liquide clair, odeur puissante moyenne, florale et saveur douce, florale avec un spectre pollinique assez simple, c'est-à-dire comprenant par exemple une majorité de pollens de Robinia pseudoacacia et une minorité de pollens de Prunus/Pyrus et de Castanea sativa. Il peut s'agir par exemple d'un miel avec une teneur en glucose et fructose supérieure à 66% par rapport au poids total. Il peut s'agir par exemple du miel d'acacia commercialisé par Guy Nicolas Les Charmes 52260 Marac. Il peut s'agir par exemple de miels issus de l'agriculture biologique.
Dans la présente par « miel d'oranger » on entend un miel monofloral produit à partir d'un nectar d'agrumes, en particulier d'oranger de l'espèce Citrus. Il peut s'agir, par exemple, d'un miel qui se présente sous la forme d'un miel liquide, ambré clair, odeur puissante, moyenne florale et de saveur fruitée, florale, acidulée avec un spectre pollinique assez complexe, c'est-à-dire comprenant majoritairement des pollens de vipérine et échium et minoritairement des pollens d'eucalyptus et de brassicacée. Il peut s'agir par exemple d'un miel avec une teneur en glucose et fructose supérieure à 69% en poids par rapport au poids total . Il peut s'agir par exemple du miel d'oranger commercialisé par Miels Villeneuve 81 rue de la Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis. Il peut s'agir, par exemple, de miels issus de l'agriculture biologique.
Dans la présente par « miel de thym » on entend un miel monofloral issu de thyms de l'espèce Thymus. Il peut s'agir, par exemple, d'un miel qui se présente sous la forme d'un miel liquide, ambré moyen, odeur puissante et saveur complexe, fruitée, acidulée et assez persistante avec un spectre pollinique assez complexe. En effet, il comprend des pollens d'accompagnement de brassicacée et de thym et de pollens minoritaires de sainfoin de lamiacée de trèfle de bleuet et de genista type. Il peut s'agir, par exemple, d'un miel avec une teneur en glucose et fructose supérieure 60% par rapport au poids. Il peut s'agir par exemple du miel de thym commercialisé par Miels Villeneuve 81 rue de la Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis. Il peut s'agir par exemple de miels issus de l'agriculture biologique. Dans la présente par composition cosmétique on entend toute composition à visée cosmétique, par exemple une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires, les organes externes, les dents et les muqueuses.
Selon l'invention, le mélange de miels peut être présent dans la composition par exemple à une concentration comprise de 0,05 à 100%, par exemple de 0,1 à 15%, par exemple de 0,1 à 5%, par exemple de 0,1 à 2% en poids par rapport au poids total de la composition.
Selon l'invention, les miels peuvent être dans la composition à une concentration identique ou différente en poids par rapport au poids total de ladite composition. Par exemple selon l'invention le rapport entre les différents miels peut être un rapport de 1 :1 :1 de 1 :2 :2 ou de 1 :2 :3
Avantageusement, la composition de l'invention comprenant du miel d'acacia, du miel de thym et du miel d'oranger permet de renforcer la fonction barrière épidermique.
En outre, la composition de l'invention comprenant du miel d'acacia, du miel de thym et du miel d'oranger permet avantageusement de stimuler la prolifération cellulaire ainsi que la vasculogénèse permettant ainsi de revitaliser la peau, en particulier la peau sèche et de restaurer l'éclat du teint.
La présente invention a donc également pour objet l'utilisation cosmétique de la composition comprenant le miel d'acacia, le miel de thym et le miel d'oranger.
La présente invention a également pour objet l'utilisation cosmétique de la composition de l'invention pour stimuler la prolifération cellulaire et/ou pour restaurer la fonction barrière épidermique et/ou pour stimuler la vasculogénèse de la peau.
Les inventeurs ont également clairement démontré que la présente invention permet avantageusement de stimuler la prolifération cellulaire ainsi que la vasculogénèse permettant ainsi de revitaliser la peau, en particulier la peau sèche et de restaurer l'éclat du teint.
De plus, les inventeurs ont clairement démontré que la présente invention utilisant le miel d'acacia, le miel de thym et le miel d'oranger agissent de façon synergique sur la régénération et la restructuration de l'épiderme ainsi que sur l'éclat et la vitalité de la peau.
Selon l'invention, quel que soit l'extrait ou le mélange d'extraits utilisés, la composition cosmétique de la présente invention peut comprendre en outre au moins un agent actif additionnel choisi, par exemple parmi un agent anti-âge, un agent hydratant, un agent apaisant ou un mélange de ces agents. Ces agents peuvent être ceux couramment utilisés dans les produits cosmétiques et/ou dermatologiques. Des exemples d'agents anti-âges utilisables sont par exemple le silicium ou la vitamine C. Des exemples d'agents hydratants utilisables sont par exemple la glycérine ou l'acide hyaluronique. Des exemples d'agents apaisants utilisables sont par exemple le bisabolol, les extraits de Boswellia serrata ou l'azulène. Ce ou ces agent(s) peuvent être utilisé(s) dans la composition de la présente invention par exemple aux concentrations usuellement utilisées et connues de l'homme du métier dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques.
La composition cosmétique selon l'invention peut comprendre un ou plusieurs adjuvants connus de l'homme du métier. Il peut s'agir par exemple d'un ou plusieurs adjuvant(s) choisi(s) parmi des agents de type esters, des agents hydratants, des agents émollients, des agents épaississants minéraux, obtenus par biotechnologie, associatifs ou non, des filtres solaires minéraux, des parfums, des conservateurs, des pseudo- céramides, des vitamines et des provitamines, des protéines, des agents séquestrants, des agents alcanisants, des agents acidifiants, des agents réducteurs, des agents oxydants, des charges minérales, des colorants naturels ou tout autre adjuvant pouvant être cité dans le dictionnaire INCI (International Nomenclature Cosmetic Ingrédients) publié par le CTFA (Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association).
Selon l'invention, la composition cosmétique peut, par exemple, se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier. Il peut s'agir, par exemple d'une forme choisie parmi une émulsion huile-dans-l'eau, eau-dans-l'huile, une émulsion multiple, une microémulsion, d'une émulsion solide, un gel aqueux ou hydro-alcoolique, une crème, un lait, une pommade, une huile, un baume, un onguent, un gel, d'un masque, une poudre, un support imbibé, par exemple un patch transdermique, une solution, une lotion aqueuse ou hydroalcoolique, un spray, une suspension et/ou une cire.
Selon l'invention, la composition peut être sous toute forme connue de l'homme du métier dans les domaines de la cosmétique et de la dermatologie, sans aucune restriction galénique particulière.
La composition selon la présente invention peut être, par exemple une composition pour le soin du visage, du corps, par exemple des compositions pour le visage et/ou le corps.
La composition de l'invention peut être obtenue par tout procédé approprié connu de l'homme du métier pour la fabrication d'une composition cosmétique et/ou dermatologique. Il peut s'agir, par exemple d'un simple mélange. Il peut s'agir également, par exemple, d'un procédé comprenant une étape d'incorporation d'une phase interne dans une phase externe au moyen d'un émulseur, par exemple d'une turbine de type rotor- stator. Il peut s'agir également par exemple d'un procédé utilisant la Température d'Inversion de Phase (TIP), procédé classiquement utilisé par l'homme de l'art pour obtenir des émulsions huile dans eau dont les gouttelettes dispersées sont particulièrement fines.
La présente invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique anti-âge comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comprenant du miel d'acacia, du miel de thym et du miel d'oranger. Le miel d'acacia, le miel de thym et le miel d'oranger sont tels que définis ci-dessus.
Pour cette application, on peut, par exemple, utiliser les formes galéniques décrites ci-dessus. L'application sur la peau peut donc être réalisée en fonction de la forme galénique utilisée.
Il peut s'agir, par exemple d'une simple application sur la peau ou d'une application accompagnée d'un massage de la peau avec la composition de la présente invention.
L'application est de préférence réalisée avec une quantité suffisante de la composition afin que toute la surface de la peau à traiter soit traitée. Il peut s'agir par exemple d'une application classique, comme une crème sur la peau. Il peut s'agir par exemple aussi d'une application pour former un masque traitant.
L'application peut être, par exemple une application quotidienne, hebdomadaire et bi-mensuelle. Il peut s'agir par exemple d'une application une fois par jour, deux fois par jour ou plus.
Avantageusement, la présente invention permet de renforcer la fonction barrière épidermique ainsi que stimuler la vasculogénèse permettant ainsi de revitaliser la peau.
En outre, la présente invention permet avantageusement de favoriser la cohésion entre le derme et l'épiderme, de régénérer et restructurer l'épiderme pour un meilleur lissage en surface et un teint éclatant.
D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif.
EXEMPLES
Exemple 1 : Exemple d'un soin du visage ou pour le corps réalisé à partir de la composition de la présente invention On prépare par mélange des différents composants, une composition de base décrite dans le tableau 2 ci-dessous :
Tableau 2 : Composition du soin visage exprimée en % par rapport au
Figure imgf000013_0001
Exemple 2 : Caractérisation chimique des différents miels (thym, oranger et acacia)
La composition des trois miels utilisés conformément à la présente invention, à savoir miel d'Acacia, miel d'Oranger et miel de Thym a été étudiée afin de révéler les particularités chimiques de chacun des trois miels. Leurs teneurs en eau, en glucides et en acides aminés libres ont été ainsi caractérisées pour chacun. Les teneurs totales sont présentées dans le tableau 3.
Tableau 3 : Composition moyenne des trois miels exprimée en % en poids par rapport au poids total du miel
Acacia Oranger Thym
Eau 18% 18% 18%
Glucides 79,3% 81 ,1 % 80,3%
Acides Aminés libres 0,04% 0,041 % 0,082%
Substances diverses
(vitamines, sels minéraux, 2,6% 0,9% 1 ,6% enzymes, polyphénols) Conformément à la présente invention, la teneur en eau est un des critères de choix de qualité des miels. Concernant les miels d'acacia, d'oranger et de thym, la teneur en eau ne dépasse pas, de préférence, 21 % en poids du miel, permettant avantageusement d'éviter la prolifération de microorganismes. Selon, l'invention, de préférence, la teneur moyenne en eau est de 18% en poids du miel. Les trois miels sélectionnés dans cet exemple répondent parfaitement aux exigences de qualité.
L'analyse des glucides ont confirmé que les sucres représentent les composés majoritaires des trois miels. Avantageusement, la richesse en sucre facilite la fixation des molécules d'eau protégeant ainsi la peau de la déshydratation tout en conservant souplesse et douceur. Les différents sucres de la fraction glucidique des miels sélectionnés pour cet exemple sont présentés dans le tableau 4.
Tableau 4 : Composition des trois miels en sucres exprimée en % de poids par rapport au poids total du miel
Figure imgf000014_0001
Les sucres majoritaires sont des monosaccharides (glucose et fructose). Le miel d'acacia sélectionné présente la teneur en fructose la plus élevée (43,8%) des trois miels tandis que le miel d'oranger sélectionné présente la teneur en glucose la plus importante (30,5%). De nombreux autres sucres sont également présents dans les trois miels, en plus faible quantité, notamment des disaccharides (saccharose, maltose, isomaltose, turanose) ou encore des trisaccharides (raffinose et erlose). Ainsi, le miel d'oranger présente la teneur en erlose la plus élevée des trois miels, le miel d'oranger une teneur élevée en maltose et le miel de thym par des teneurs spécifiques en isomaltose et raffinose.
La caractérisation chimique des trois miels de l'invention confirme des compositions en glucides proches mais spécifiques à leur origine botanique.
Les vitamines, minéraux et les acides aminés contenus dans les miels permettent de tonifier et de nourrir la peau. Les acides aminés libres présents dans les miels peuvent avoir plusieurs origines : le nectar des fleurs butinées, le pollen présent dans les miels, l'abeille elle-même (cas de la proline). L'analyse des acides aminés présents dans les trois miels sélectionnés a permis de mettre en évidence de nouvelles particularités de la composition de chacun ces miels (tableau 5).
Tableau 5 : Composition des trois miels en acides aminés libres exprimée en mq par Kg.
Acacia Oranger Thym
Acide aspartique 15,8 14,4 12,7
Acide glutamique 9,8 1 1 ,8 15,3
Asparagine 14,6 30,5 14,9
Serine 5,3 9,2 7,9
Glutamine 10,5 16,3 20
Histidine 8,8 4,1 7,2
Glycine 2,7 2,5 4,2
Thréonine 3 4,9 4,7
Alanine 6,4 7,7 14,9
Arginine 8,2 10,3 12
Tyrosine 3 6 47,3
Cystéine 3,4 3,1 7,9
Cystine 5,6 5 13,8 Valine 4,9 5,1 6,7
Méthionine 1 0,5 1 ,7
Tryptophane 2,8 3,7 5
Phénylalanine 7,4 7,6 236,3
Isoleucine 2,8 2,4 7,1
Leucine 2,1 1 ,2 3,6
Lysine 21 18,9 21 ,8
Proline 226,9 241 350,8
TENEUR TOTALE 366 406,2 815,8
Ces miels contiennent une grande diversité d'acides aminés. Ainsi, pour les trois miels sélectionnés l'acide aminé majoritaire est la proline. Après la proline, l'acide aspartique est l'acide aminé majoritaire du miel d'acacia. Le miel d'oranger se distingue par une teneur élevée en asparagine. Quant au miel de thym il présente la teneur la plus élevée des trois miels en acides aminés (815,8 mg/Kg). Sa teneur en phénylalanine (236,3 mg/Kg) est très supérieure à celle du miel d'acacia (7,4 mg/Kg) et du miel d'oranger (7,6 mg/Kg). La phénylalanine est donc un acide aminé caractéristique du miel de thym. Ce dernier contient également de l'alanine (14,9 mg/Kg) et de la tyrosine (47,3 mg/Kg) à des concentrations supérieures à celles analysées dans les deux autres miels.
Matériel et méthodes
1.1 Teneur en eau
Dosage au réfractomètre sans préparation préalable des échantillons réalisé à partir du protocole expérimental décrit dans Taormina P.J., Niemira B.A., Beuchat L.R. « Inhibitory activity of honey against foodborne pathogens as influenced by the présence of hydrogen peroxide and level of antioxidant power." International Journal of Food Microbiology, 2001 , 69(3), 217-225 [2]. Dimitrova B., Gevrenova R., Anklam E. «Aromatic and arylaliphatic carboxylic acids as markers for th efloral origin of heather honey. » European Journal of drug metabolism and pharmacokinetics, 2003, 28(1 ), spécial issue 44 [3]. Tonks A., Cooper R.A., Price A.J., Molan P.C., Jones K.P. "Stimulation of TNF-alpha release in monocytes by honey." Citokine, 2001 , 14(4), 240-242. [4], Gheldof N., Engeseth N.J. "Antioxidant capacity of honey from vahous floral sources based on the détermination of oxygen radical absorbance capacity and inhibition of in vitro lipoprotein oxidation in human sérum sample." J.Agric. Food Chem., 2002, 50(10), 3050-3055. [5] Cicatrisation par le miel, l'expérience de 25 années : B. Descottes Phytothérapie (2009) 7 :1 12-1 16.
[6], "Détermination of honey sugars by HPLC with pulsed amperometric détection" dans "Harmonised methods of the international honey commission". International Honey Commission 2002 [7] ».
1.2 Dosage des glucides
Le protocole expérimental réalisé est décrit dans la publication Détermination of honey sugars by HPLC with pulsed amperometric détection [7].
1.3 Dosage des acides aminés
Les acides aminés ont été identifiés et quantifiés par chromatographie liquide selon le protocole analytique décrit dans « Développement de méthodes analytiques et de banque de données appliquées au contrôle de la naturalité des miels monofloraux », Jean- François Cotte, thèse de l'université Claude Bernard-Lyon 1 , école doctorale de chimie, 2003 [8]. Exemple 3 : Effet d'un extrait de miel de thym ou d'un extrait de miel d'oranger ou d'un extrait de miel d'acacia et/ou du mélange des trois pour restaurer les peaux sèches.
Les fonctions protectrices essentielles de la peau peuvent momentanément s'altérer et entraîner une sécheresse cutanée avec des sensations d'inconfort (manque de souplesse, tiraillement, tendance à rider plus facilement). Ceci est dû principalement à un retard dans la reconstitution de la barrière épidermique et à un état déshydraté.
L'épiderme se régénère continuellement et ce turnover constant est réalisé à partir de cellules de la couche basale comprenant des cellules souches épidermiques qui présentent un haut potentiel prolifératif, une grande capacité à s'auto-renouveler et à générer des cellules dites transitoires. Après quelques cycles de division, les cellules transitoires entament un processus de différenciation terminale, dénommé kératinisation ou cornification. Lors du processus normal de différenciation, le passage des kératinocytes de la couche basale aux couches épineuse, granuleuse puis cornée aboutit à la formation des cornéocytes. La fonction barrière de la peau est en grande partie due au stratum corneum ou couche cornée.
Dans l'épiderme se trouve le facteur naturel d'hydratation, qui participe, avec les lipides épidermiques de structure, au maintien du taux idéal d'hydratation cutanée et au maintien de la fonction barrière. Constitué de nombreuses substances (sucres, lipides complexes), le facteur naturel d'hydratation forme un film de surface qui va aider à retenir l'eau à l'intérieur de la peau, les peaux sèches souffrant d'un manque d'eau, leurs réserves d'eau sont aussi amoindries.
Les expériences sont réalisées avec un miel de thym biologique, miel d'oranger biologique ou de miel d'acacia biologique et le mélange des trois.
Le miel de thym biologique provenait de Montargis par la Société Miels Villeneuve (81 rue de la Baraudière ZA Villemandeur 45203
Montargis).
Le miel d'oranger biologique provenait de Montargis par la Société Miels Villeneuve (81 rue de la Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis).
Le miel d'acacia biologique provenait de Guy Nicolas à Marac (Les
Charmes 52260 Marac). Cet exemple démontre clairement par une analyse transcriptomique ex-vivo par Puces à ADN que la composition de l'invention permet de stimuler la restauration de la fonction barrière, le maintien d'une bonne hydratation ainsi que l'éclat du teint.
Le transcriptome est l'ensemble des ARN messagers (molécules servant de matrice pour la synthèse des protéines) issu de l'expression d'une partie du génome d'un tissu cellulaire ou d'un type de cellule. La caractérisation et la quantification du transcriptome dans un tissu donné et dans des conditions données permettent d'identifier les gènes actifs, de déterminer les mécanismes de régulation d'expression des gènes et de définir les réseaux d'expression des gènes. Une des techniques utilisées pour mesurer simultanément le niveau d'expression d'un grand nombre de types différents d'ARN messager est celle de la puce à ADN. Les puces à ADN permettent de mesurer et de visualiser très rapidement les différences d'expression entre les gènes et ceci à l'échelle d'un génome complet.
1. Matériel et méthode
1.1 Préparation des échantillons :
Des extraits de miel de thym, de miel d'oranger, de miel d'acacia et la combinaison de ces trois miels aux différentes concentrations présentées dans l'exemple 1 sont réalisés en vue des analyses transcriptomiques.
Après avoir réalisé un test de viabilité cellulaire tel que décrit dans la publication de Khalegi S et al. (Khaleghi S, Aziz AA, Razali N, Junit SM.
Microarray analysis revealed différent gene expression patterns in HepG2 cells treated with low and high concentrations of the extracts of Anacardium occidentale shoots. Gènes Nutr. 201 1 Mar 29. [9]) qui a permis de déterminer pour chaque composition une concentration maximale diluée à appliquer, 5 explants de peau provenant de lifting du visage d'une patiente âgée de 55 ans ont été incubés indépendamment en présence de ces compositions pendant 24h dans du DMEM (DulbeccoA/ogt modified Eagle's minimal essential médium) sans sérum à 37°C en atmosphère humide à 5% de CO2. Un explant de peau non traité a été incubé dans les mêmes conditions. Le tableau 6 récapitule les concentrations appliquées pour chaque composition.
Tableau 6 : concentrations maximales exprimées en % pour chaque miel et pour le mélange de ces trois miels
Figure imgf000020_0001
1.2 Extraction des ARN totaux et amplification linéaire
Après incubation, les explants de peau ont été broyés puis les ARN totaux issus de chaque explant ont été extraits en utilisant le RNeasy Kit (Qiagen, Hilden, Germany). Les ARN totaux ont été ensuite quantifiés puis la qualité a été vérifiée en utilisant le BlOanalyzer 2100 avec le RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent Technologies, Boblingen, Germany). Un RIN entre 7,5 et 10 atteste de la bonne qualité des ARN totaux issus de chaque explant préalablement incubé ou non avec les trois extraits de miels biologiques de thym, d'oranger ou acacia ainsi que le mélange des 3.
1.3 Mesure de l'expression génique sur puce oligonucléotide et acquisition des data : Les puces oligonucléotides Affymetrix Human Gene 1 .0 ST Whole Génome ont été utilisées pour chaque analyse d'expression génique (GeneChip HU Gene 1 .0, Affymetrix, Santa Clara, USA).
Une documentation complète ainsi que le protocole expérimental décrit dans Seitz G, Bonin M, Fuchs J et al. Inhibition of glutathione-S- transferase as a treatment strategy for multidrug résistance in childhood rhabdomyosarcoma. International Journal of Oncology 2010 36:491-500.
[10] est disponible sur le site : http://media.affymetrix.com/support/technical/datasheets/gene_1_0_st_dat asheet.pdf
Plus simplement, les cycles de rétrotranscription et d'amplification des ARN totaux en ARNc puis en ADNc sont réalisés à l'aide des kits Ambion WT Expression (Ambion, Applied Biosystem, USA) et du kit GeneChip WT terminal Labelling and Hybridization User (Affymetrix). L'hybridation des puces et les mesures ont été réalisées par les Microarray Facility Tubingen. Les Puces ont ensuite été scannées en utilisant le scanner GCS3000 Gene Chip (Affymetrix) et le software GCOS 1 .4. Les images scannées sont ensuite analysées en utilisant la console Expression 1 .0 (Affymetrix) afin de convertir des mesures d'intensité lumineuse en données numériques et de normaliser ces données. L'analyse complète des données et une analyse statistique sont réalisées grâce au logiciel Genespring GX 1 1 (Agilent Technologies) sur la base, en particulier, d'algorithmes de classification. Des différences d'expression de gènes ainsi obtenues suite à l'application des différents miels seuls et/ou du mélange des trois miels sur des explants de peau par rapport à un explant non traité sont rassemblées dans le tableau 7. La valeur des gènes différentiel lement exprimés en regard de la peau traitée ou non à l'aide des trois miels biologiques et/ou du mélange des trois présente une p-value < 0,01 (valeur statistique très significative). Tableau 7 : différence d'expression génique et signification biologique des gènes suite à l'application des différents miels biologiques et du mélange des 3 sur explants de peau par rapport à un même explant non traité.
STATUT dans étude: stimulation
GENES db EST FONCTIONS
par rapport à la peau non traitée protéine impliquée
CRABP2
dans la voie liée par
("cellular X 2,5 avec le l'acide rétinoïque
retinoic acid BT019827.1 mélange des 3 entraînant la
binding miels
prolifération des
protein 2")
kératinocytes
HBEGF protéine appartenant à
("heparin- la famille du facteur de
X2 avec le binding croissance
NM 001945.2 mélange des 3 epidermal épidermique entraînant
miels growth la prolifération des
factor") kératinocytes
protéine impliquée
X3 avec le
ANGPTL1 NM 004673.3 dans la vasculogénèse
mélange des trois et angiogénèse
protéine impliquée
X3 avec le
ANGPTL2 AF169312.1 dans la vasculogénèse
mélange des trois et angiogénèse
protéine impliquée
X3 avec le
ANGPTL4 AY358275.1 dans la vasculogénèse
mélange des trois et angiogénèse Dans le tableau précité, Xn représente le facteur de stimulation par rapport à la peau non traitée, et db EST est une base de données regroupant la référence du gène ainsi que sa séquence correspondant au gène spotté sur la puce oligonucléotide Affymethx Human Gene 1 .0 ST Whole Génome.
1.4 Validation des données d'expression génique par PCR en temps réel
Afin de valider au niveau génique, par une autre méthode, ces données, une expérience de QPCR a été réalisée sur plusieurs gènes cibles impliqués respectivement dans le renouvellement épidermique et la microcirculation cutanée. Pour cela, des amorces en position 3' et 5 'de chaque gène ont été sélectionnées puis synthétisées afin d'amplifier chaque gène pris séparément. Le tableau 8 regroupe la séquence et les caractéristiques de ces amorces. Tableau 8 : séquence et caractéristique des amorces permettant d'amplifier ANGPTL1. ANGPTL2, ANGPTL4, CRABP2 et HBEGF.
Amorces Séquences TM %GC SEQ ID
ANGPTL1 L atgatgtggcataatggtaaaca 59 35 1
ANGPTL1 R aagtgggcgcagtttcct 60 56 2
ANGPTL2 L gcccactatgcccactctc 60 63 3
ANGPTL2 R ctgcaggcagtctctccat 59 58 4
ANGPTL4 L gttgacccggctcacaat 59 56 5
ANGPTL4 R ggaacagctcctggcaatc 60 58 6
CRABP2 L cggaaaacttcgaggaattg 59 45 7
CRABP2 R ccctcctgtttgatctccac 59 55 8
HBEGF L tggggcttctcatgtttagg 60 50 9
HBEGF R catgcccaacttcactttctc 59 48 10
GAPDH L agccacatcgctcagacac 60 58 1 1
GAPDH R gcccaatacgaccaaatcc 60 53 12 Une étape de rétrotranschption est tout d'abord réalisée en utilisant le système Superscript First-Srand Synthesis System for RT-PCR (Invitrogen Corp, Carlsbad, CA) des ARN issus des explants de peau précédant (Devilard E, Bladou F, Ramuz O, Karsenty G, Dalès JP, Gravis G, Nguyen C, Bertucci F, Xerri L, Birnbaum D. FGFR1 and WT1 are markers of human prostate cancer progression. BMC Cancer. 2006 Nov 30;6:272. [1 1 ]).
Les expériences de PCR en temps réel ont été réalisées en utilisant le LightCycler 2.0 Détection (Roche Diagnostic, Suisse) en triplicate avec la GAPDH comme gène de référence et contrôle interne. Le kit d'amplification utilisé dans cette expérience est le FastStart DNA Master plus SYBR Green I Master Mix (Roche Diagnostics, Suisse) (Archambaud C, Sansoni A, Mingueneau M, Devilard E, Delsol G, Malissen B, Malissen M. STAT6 deletion converts the Th2 inflammatory pathology afflicting Lat(Y136F) mice into a lymphoproliferative disorder involving Th1 and CD8 effector T cells. J Immunol. 2009 Mar 1 ;182(5):2680-9.[12]).
2. RESULTATS
2.1 Profil d'expression génique
2.1 .1 . Impact sur la prolifération cellulaire et la restauration de la barrière épidermique du mélange composé de miel de thym, d'oranger et d'acacia.
Les résultats des analyses d'expression de gènes regroupés dans le tableau 7 ont permis de montrer que l'expression du gène codant pour le facteur de croissance se liant à l'héparine du type facteur de croissance épithélial (HBEGF « Heparin-binding EGF-like growth factor ») est multipliée par 2 (X2) en présence du mélange de miel d'acacia, d'oranger et de thym par rapport à la peau non traitée et par rapport à chaque extrait pris séparément. Aucune surexpression de ce gène ne fut détectée dans la peau non traitée ainsi que dans la peau traitée respectivement avec les trois miels. De plus, le mélange des 3 miels stimule par 2,5 l'expression du gène codant pour la protéine cellulaire de liaison à l'acide rétinoïque (CRABP2 « Cellular retinoic acid-binding protein 2 ») avec aucune surexpression de ce gène dans la peau non traitée et la peau traitée respectivement avec les trois miels. De ce fait, il existe un réel effet synergique de ces trois miels constituant le mélange concernant ces deux gènes et leur effet. Le gène HBEGF code pour un facteur de croissance apparenté à l'EGF (Fitsialos G, Chassot AA, Turchi L, Dayem MA, LeBrigand K, Moreilhon C, Meneguzzi G, Buscà R, Mari B, Barbry P, Ponzio G. Transcriptional signature of epidermal keratinocytes subjected to in vitro scratch wounding reveals sélective rôles for ERK1/2, p38, and phosphatidylinositol 3-kinase signaling pathways. J Biol Chem. 2007 May 18;282(20):15090-102. [13]) entraînant la prolifération des kératinocytes, signal transmis via ses récepteurs spécifiques EGFR (Fitsialos G, Chassot AA, Turchi L, Dayem MA, LeBrigand K, Moreilhon C, Meneguzzi G, Buscà R, Mari B, Barbry P, Ponzio G. Transcriptional signature of epidermal keratinocytes subjected to in vitro scratch wounding reveals sélective rôles for ERK1/2, p38, and phosphatidylinositol 3-kinase signaling pathways. J Biol Chem. 2007 May 18;282(20):15090-102. [13]). Le gène CRABP2 code quand à lui pour une protéine impliquée dans la signalisation de l'acide rétinoïque (Amann PM, Eichmiiller SB, Schmidt J, Bazhin AV. Régulation of gene expression by retinoids. Curr Med Chem. 201 1 ; 18(9):1405-12. [14]). Cela donne lieu à un pool de cellules kératinocytaires plus important qui vont ensuite se différencier et ainsi reconstruire efficacement la barrière épidermique.
Tel que démontré ici, le mélange comprenant des miels de thym, d'oranger et d'acacia stimule la prolifération kératinocytaire et permet de restaurer efficacement la fonction barrière (Bellemère G, Stamatas GN, Bruère V, Bertin C, Issachar N, Oddos T. Antiaging action of retinol: from molecular to clinical. Skin Pharmacol Physiol. 2009;22(4):200-9.[15]). 2.1 .2. Impact sur la vasculogénèse et l'éclat du teint du mélange composé de miel de thym, d'oranger et acacia. Les résultats des analyses d'expression génique (tableau 8) permettent de montrer que plusieurs gènes d'une même famille impliqués dans la vasculogénèse, l'angiogénèse sont surexprimés en présence du mélange des trois miels par rapport à chaque miel pris séparément et par rapport à la peau non traitée. De ce fait, il existe un réel effet synergique de ces trois miels constituant le mélange. En effet, l'expression des gènes ANGPTL1, ANGPTL2 et ANGPTL4 codant respectivement pour la protéine 1 , 2 et 4 liée à l'angiopoietine (ANGPTL1 « Angiopoietin-related protein 1 », ANGPTL2 « Angiopoietin-related protein 2 » et ANGPTL4 «- Angiopoietin-related protein 4)) a été multipliée par 3 en présence du mélange des trois miels. Ces gènes régulent l'angiogénèse et la vasculogénèse ( Morisada T, Kubota Y, Urano T, Suda T, Oike Y. Angiopoietins and angiopoietin-like proteins in angiogenesis. Endothelium. 2006 Mar-Apr;13(2):71 -9.[16]). De ce fait, il existe un réel effet synergique du mélange comprenant les trois miels ce qui permet de revitaliser les peaux sèches avec un apport de nutriments et d'oxygène facilités aux cellules cutanées par une micro-circulation renforcée.
Tel que démontré ici, le mélange comprenant le miel d'acacia, de thym et d'oranger stimule la vasculogénèse permettant ainsi de revitaliser les peaux sèches et de restaurer également l'éclat du teint puisqu'une peau sèche manque d'éclat.
2.2 PCR en temps réel
Les résultats de PCR en temps réel permettant de valider sur les gènes HBEGF, CRABP2, ANGPTL1, ANGPTL2 et ANGPTL4 les données de micro-array sont regroupées dans le tableau 9.
Tableau 9 : expression génique de HBEGF, CRABP2, ANGPTL1, ANGPTL2 et ANGPTL4 par RT-QPCR suite à l'application du mélange des 3 miels sur explants de peau par rapport à un même explant non traité. Miel de Miel Mélange des
GENES Miel d'Acacia
thym d'oranger 3 Miels
HBEGF * * * X3
CRABP2 * * * X3
ANGPTL1 * * * X3
ANGPTL2 * * * X 3,5
ANGPTL4 * * * X3
Dans le tableau 9 ci-dessus, * signifie qu'aucune augmentation génique n'a été observé, Xn correspond au facteur d'augmentation de l'expression.
L'expression des gènes HBEGF, CRABP2, ANGPTL1,4 est multipliée par 3 en présence du mélange des 3 Miels et par 3,5 pour ANGPTL2. Aucune surexpression ne fut retrouvée en présence de chaque miel pris séparément ainsi que dans la peau non traitée.
Les résultats obtenus lors de cette expérience sont identiques à l'expérience sur puces à ADN ce qui confirme et valide les données de micro-arrays.
Ces exemples démontrent que l'association du miel de thym, du miel d'oranger et du miel d'acacia génère plusieurs effets synergiques et permet de lutter efficacement contre la sécheresse cutanée. La richesse en sucre apportée par les trois miels sélectionnés améliore la fixation des molécules d'eau protégeant ainsi la peau de la déshydratation tout en conservant souplesse et douceur. Elle permet également de nourrir, d'hydrater, de revitaliser la peau et de restaurer la fonction barrière, permettant ainsi d'améliorer encore le traitement des peaux sèches De plus, ce mélange de miels particuliers favorise la vasculogénèse, l'angiogénèse et la prolifération kératinocytaire. BIBLIOGRAPHIE
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Claims

Revendications
1 . Composition cosmétique comprenant du miel d'acacia, du miel de thym et du miel d'oranger.
2. Composition selon la revendication 1 , dans laquelle le mélange de miel est compris de 0,05 à 100% en poids par rapport au poids total de la composition.
3. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, ladite composition étant sous l'une des formes choisies parmi une crème, un lait, une lotion, une huile, un baume, un onguent un gel, un masque.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ladite composition étant une composition cosmétique antiâge.
5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ladite composition étant une composition cosmétique pour le traitement de la peau sèche.
6. Composition l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle les miels sont en quantité équivalente.
7. Procédé de fabrication d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 comprenant un mélange de miel d'acacia, de miel de thym et de miel d'oranger.
8. Utilisation cosmétique de la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour stimuler la prolifération cellulaire.
9. Utilisation cosmétique de la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour la restauration de la fonction barrière.
10. Utilisation cosmétique de la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour la stimulation de la vasculogénèse.
1 1 . Procédé cosmétique comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.
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