WO2013062333A1

WO2013062333A1 - 시링가레시놀을 포함하는 피부 개선용 조성물

Info

Publication number: WO2013062333A1
Application number: PCT/KR2012/008816
Authority: WO
Inventors: 신현정; 조시영; 서대방; 박찬웅; 김완기; 이상준
Original assignee: Amorepacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 2011-10-27
Filing date: 2012-10-25
Publication date: 2013-05-02
Anticipated expiration: 2014-04-27
Also published as: JP2014530906A; CN103889413A; EP2772255A4; JP6562631B2; US20150290105A1; EP2772255B1; EP2772255A1

Abstract

본 발명은 화학식 1의 화합물, 그의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물에 관한 것이다.

Description

【명세서】

【발명의 명칭】

시링가레시놀을 포함하는 피부 개선용 조성물

【기술분야】

<ι> 본 발명은 화학식 1의 화합물, 그의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 그 의 염을 유효성분으로 포함하는 포함하는 피부 개선용 조성물에 관한 것이다.

<2>

【배경기술】

<3> 사람의 피부색은 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트 (melanocyte)의 활동성， 혈관 분포， 피부 두께 또는 카로티노이드와 빌리루빈 등올 예로 들 수 있는 색소 함유 여부 둥의 여러 요인들에 의해 결정된다. 그 중에서도 티로시나제를 예로 들 수 있는 여러 효소들의 작용에 의해 멜라노사이트에서 생성되는 혹색 색소인， 멜라 닌의 형성 정도는 피부색을 결정하는 가장 중요한 요인 중 하나이다.

<4> 피부에 존재하는 멜라닌은 자외선 둥으로부터 신체를 보호하는 중요한 기능 을 하지만, 과잉으로 존재하는 경우 기미， 주근깨， 혹자 등의 피부 색소 침착을 야 기할 뿐만 아니라 피부 노화를 촉진하고 피부암을 유발하는 인자로도 작용하는 것 으로 알려져 있다:

<5> 멜라닌 과잉 생산으로 인한 피부 색소 침착을 치료 또는 경감하고자， 아스코 르브산， 코지산， 알부틴 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체를 예로 들 수 있는 피부 미백 효과를 나타내는 여러 물질들을 사용하여 왔으나， 이들은 완벽 한 피부 미백 효과를 나타내지 못 하며， 신체 안전성을 보증할 수 없고， 화장료 등 에 포함되는 경우 제형화가 어려운데다 제형화한다고 해도 안정성이 확보되지 않아 그 사용에 제한이 있다.

<6> 피부는 빛에 직접적으로 노출되기 때문에 자외선에 가장 취약한 부분이다. 자외선에 노출된 피부는 그 정도에 따라 화상, 색소 침착， DNA 손상， 결합 조직의 변화, 암과 같은 생물학적 반웅을 나타내게 된다. 또한 자외선에의 반복적인 노출 은 피부의 조기 노화를 야기하게 되는데， 이러한 피부 노화는 주름 생성 색소 침 착， 결합.조직의 변이 및 표피 세포의 두께 변화 등으로 나타난다.

<7> 피부의 결합 조직은 주로 콜라겐과 엘라스틴으로 이루어진다. 콜라겐과 엘라 스틴은 피부에 탄력을 주므로 이들이 약해지면 피부가 쉽게 손상되고 노화된다. 상 기 콜라겐의 분해에 관여하는 효소가 MMPOlatrix Metal loproteinase)이다. 피부 노 화가 진행되면， MMP들의 발현이 증가되고， 증가된 MMP들이 피부의 콜라겐을 분해하 게 된다. 이런 메커니즘이 반복되면 피부 주름이 생성되고 조기 노화가 진행된다.

<8> TGF-β (transforming growth factor-β)는 여러 세포들의 성장과 분화에 관 여하는 물질이다. 포유류에서 TGF-β는 3가지 다른 이성체 (isoforms)로 존재하며， 그 중 TGF-βΙ은 진피층의 ECM(extracel hilar matrix) 형성에 가장 강한 활성을 나 타내고， 조직의 복구와 분화에 관여한다. TGF-βΙ은 섬유아세포를 자극하여 Type I 및 Type Π 콜라겐， 피브로넥틴 (fibronectin) 및 프로테오글리칸 (proteoglycans) 둥의 여러 ECM 성분들을 생산하게 한다. 따라서， TGF-βΙ의 생성올 촉진하는 물질 은 섬유아세포의 성장을 촉진하고 피부 재생을 촉진함으로써 피부 노화를 방지하고 주름을 개선할 수 있을 것이다.

<9> 피부 조직이 수분을 유지하기 위해서는， 피부 내 천연보습인자 (Natural

Moisturing Factor)가 증가하는 것이 필요하다. 천연보습인자의 주 성분인 아미노 산은 표피 각질형성세포가 생산하는 필라그린 (filaggrin)이라는 단백질의 분해에 의해 공급되기 때문에 필라그린의 생산이 촉진되면 보습 효과를 나타낼 수 있다. 또한 인보루크린 (involucrin)은 피부 손실을 방지하는 세포 외피 (cell envelope)의 형성 및 각질층의 구조화에 있어 매우 증요한 역할을 하는 인자이므로， 이의 발현 이 촉진되면 역시 우수한 피부 보습 효과를 나타낼 수 있다.

<10>

【발명의 상세한 설명】

【기술적 과제】

<π> 본 발명은 뛰어난 피부 개선 효과를 가지는 조성물을 제공하고자 한다.

<12> 본 발명은 또한 뛰어난 피부 미백 효과를 가지는 조성물 및 뛰어난 항노화 효과를 조성물을 제공하고자 한다.

<13> 본 발명은 피부 주름 생성 억제， 피부 재생 능력 강화， 피부 보습 촉진 등을 통해 뛰어난 피부 노화 억제 효과를 가지는 조성물을 제공하고자 한다.

<14> 또한 본 발명은 주름 개선 또는 억제제, 피부 재생 촉진제 및 피부 보습제를 제공하고자 한다.

<15>

【기술적 해결방법】

<16> 본 발명의 일 측면은 하기 화학식 1의 화합물， 그의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물로서， <17> [화학식 1]

<i9> 상기 ¾，，¾또는 t는 독립적으로 직쇄 (unbranched) 또는 분지 (branched) 된， ^내지 C₁₈의 알킬기 (alkyl group) , 내지 C₁₈의 알콕시기 (alkoxy group) , (^내 지 C₁₈의 알케닐기 (alkenyl group) , 내지 C₁₈의 알키 닐기 (alkynyl group) 또는 C₃내 지 C₆의 사이클릭 알킬기 (cycl i c alkyl group)이고，

<20> 상기 ¾， ,¾ᅳ¾,¾， ₀또는 은 독립적으로 수소 또는 직쇄 (unbranched) 또 는 분지 (branched)된 , 내지 C₁₈의 알킬기 (alkyl group) , 내지 C₁₈의 알콕시기 (alkoxy group) , 내지 C₁₈의 알케닐기 (alkenyi group) , 내지 C₁₈의 알키닐기 (alkynyl group) , C₃내지 C₆의 사이클릭 알킬기 (cycl i c alkyl group)이다 .

<2 I>

【유리한 효과】

<22> 본 발명에 따른 조성물은 화학식 1의 화합물 , 구체적으로 시링 가레시놀을 유 효 성분으로 포함함으로써， 멜라닌 생성을 억제하고， 티로시나제 활성을 저해하며 , 우수한 항산화 효과 및 피부 각질 제거능을 가져 뛰 어난 피부 미 백 효과를 나타낼 수 있다.

<23> 본 발명에 따른 조성물은 화학식 1의 화합물， 구체적으로 시링 가레시놀을 유 효 성분으로 포함함으로써， SIRT 1의 발현을 증가시키고 , 자외선으로 인한 MMP-9의 발현을 억제하며， 피부 탄력과 강도에 중요한 영향을 미치는 콜라겐의 분해를 억제 함으로써， 피부 주름을 개선할 수 있다. 또한, 세포의 재생을 촉진하는 TGF-β Ι의 발현을 증가시 키므로 피부 세포 재생 촉진 및 피부 탄력 증진 효과가 우수하다 . 뿐 만 아니라， 피부 보습 인자인 필라그린 및 인보루크린의 발현을 촉진함으로써， 뛰 어난 피부 보습 효과를 나타낼 수 있다 . 이와 같은 작용을 통해 화학식 1의 화합 물， 구체적으로 시 링가레시놀을 포함하는 조성물은 노화， 구체적으로 피부 노화 , 더 구체적으로 자외선에 의한 피부 노화를 억제함에 있어 우수한 효과를 가질 수 있다 .

<24>

【도면의 간단한 설명】

<25> 도 1은 인삼 열매 추출물로부터 시 링가레시놀을 분리 및 정 제하는 방법을 나 타낸 개략도이다 .

<26> 도 2는 시링가레시놀의 자유 라디칼 소거능을 비타민 C와 비교한 그래프이 다.

<27> 도 3은 각질형성세포에서 시 링가레시놀의 SIRT 1 발현 촉진 효과를 나타낸 그래프이다.

<28> 도 4는 섬유아세포에서 시 링가레시놀의 SIRT 1 발현 촉진 효과를 나타낸 그 래프이다 .

<29> 도 5는 시 링가레시놀의 필라그린과 인보루크린의 발현 촉진 효과를 나타낸 그래프이다 .

<30> 도 6는 시 링가레시놀의 MMP-9 발현 및 콜라겐 분해 억제 효과를 나타낸 도면 이다.

<31> 도 7은 시 링가레시놀을 도포하거나 경구 투여한 경우 피부 주름 억제 효과를 나타낸 그래프이다 .

<32> 도 8은 시링가레시놀을 도포하거나 경구 투여한 경우 표피 수분 손실 (TEWL) 억제 효과를 나타낸 그래프이다.

<33>

【발명의 실시를 위 한 최선의 형 태】

<34> 본 명세서에서 "추출물' '은 추출 방법 추출 용매， 추출된 성분 또는 추출물 의 형 태를 불문하고 , 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.

<35> 본 명세서 에서 "유도체 "는 화합물들의 치환 가능한 위 치에서 다른 치환기로 변경되는 모든 화합물을 의미한다. 이 러한 치환기의 종류에는 제한이 없으며， 예컨 대 각각 독립적으로 히드록실， 쩨녹시， 티에닐， 푸릴， 피리딜 , 시클로핵실， 알킬알 콜 , 알킬디알콜 또는 임의 치환된 페닐로 치환될 수 있는 d- )비사이클릭 탄화수소 기; 히드록실， 히드톡시메틸， 메틸 또는 아미노로 치환될 수 있는 C₅-₆사이클릭 탄 화수소기; 또는 당 잔기를 포함할 수 있으나， 이에 제한되는 것은 아니다. 본 명세 서에서 "당 잔기"라는 용어는 다당류 분자로부터 1개의 수소 원자의 제거시의 기를 의미하며， 따라서 예를 들어 단당류 또는 올리고당으로부터 유래된 잔기를 의미할 수 있다.

<36> 본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능"이란 통상의 의약적 복용량 (medicinal dosage)으로 이용할 때 상당한 독성 효과를 피함으로써， 동물, 더 구체적으로는 인 간에게 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기구의 승인올 받올 수 있거 나 승인 받거나, 또는 약전에 열거되거나 기타 일반적인 약전으로 인지되는 것을 의미한다 .

<37> 본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능한 염''은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물 (parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일측면에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산， 인산 등과 같은 무기산으로 ¾성되거나; 또는 아세트산， 프로파이온산， 핵사노산， 시클로펜테인프 로피은산， 글라이콜산， 피루브산, 락트산， 말론산， 숙신산， 말산, 말레산， 푸마르 산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산， 신남산， 만델 산， 메테인설폰산， 에테인설폰산, 1,2-에테인 -디설폰산， 2-히드록시에테인설폰산， 벤젠설폰산 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산， 4-를루엔설폰산， 캄퍼설폰산， 4-메틸바이시클로 [2,2,2]-oct— 2-엔 -1-카르복실산, 글루코헵톤산， 3-페닐프로파이 온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산， 라우릴 황산， 글루콘산， 글루탐산， 히드톡시나프토산, 살리실산, 스테아르산， 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염 (acid addition salt); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환 될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다. 아을러， 본 명세서에 따른 화합물은 약제학 적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염， 수화물， 용매화물을 모두 포함할 수 있다.

<38> 본 명세서에서 "피부''라 함은， 동물의 체표를 덮는 조직올 의미하는 것으로 세 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.

<39> 본 명세서에서 "개선 "이라 함은 정상이 아니거나 정상인 피부의 보습， 주름 개선 등의 긍정적인 효과를 가져오는 모든 경우를 의미한다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에서 피부의 미백 증가 또는 노화 억제를 통해 피부 개선 효과를 가져을 수 있으나， 이에 제한되는 것은 아니다. <40> 이하에서， 본 발명을 상세하게 설명한다 .

<41> ^" 본 발명의 일측면은 하기 화학식 1의 화합물， 그의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물로서，

<42> 【화학식 1】

<44>

<45> 상기 ¾，，¾또는 ¾는 독립적으로 직 쇄 (unbranched) 또는 분지 (branched) 내지 C₁₈의 알킬기 (alkyl group) , 내지 C₁₈의 알콕시기 (alkoxy group) , (^내 지 C₁₈의 알케닐기 (alkenyl group) , 내지 C₁₈의 알키닐기 (alkynyl group) 또는 C₃내 지 C₆의 사이클릭 알킬기 (cycl ic alkyl group)이고，

<46> 상기 ¾ ₀또는 Ru은 독립적으로 수소 또는 직 쇄 (unbranched) 또 는 분지 (branched)된， 내지 C₁₈의 알킬기 (alkyl group) , 내지 C₁₈의 알콕시 기 (alkoxy group) , 내지 C₁₈의 알케닐기 (alkenyl group) , 내지 C₁₈의 알키 닐기 (alkynyl group) , C₃내지 C₆의 사이클릭 알킬기 (cycl ic alkyl group)이다 .

<47> 본 발명 의 일 측면인 혈관 노화 억제용 조성물에 있어서， 상기 화합물은 시 링가레시놀일 수 있다.

<48> 본 명세서에서 "시링가레시놀 (syringaresinol ) "은 화학식 2와 같은 화학 구 조를 가지는 리그난계 화합물로， 화학 합성을 통해 얻거나, 아마씨， 황백， 오가피， 참깨 및 인삼 열매 증 하나 이상으로부터 추출할 수 있다 . 상기에서 아마씨 , 황백 , 오가피 및 참깨는 각 식물의 잎， 줄기， 뿌리 열매 또는 씨를 예로 들 수 있는 식 물의 각 부위를 모두 포함하며， 인삼 열매는 인삼 열매 과피 또는 과육을 포함한 다.

<49> 【화학식 2】

<51>

<52> 본 명세서에서 상기 "시링가레시놀"은 아마씨, 황백， 오가피， 참깨 및 인삼 열매 중 하나 이상을 물, 유기 용매 및 물과 유기 용매의 흔합물로 이루어진 군에 서 선택된 하나 이상으로 추출하여 수득할 수 있다. 상기 유기 용매는 알코올， 아 세톤， 에테르， 에틸아세테이트， 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이 루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나， 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 알 코을은 ⁽广^의 저급 알코올을 포함하며 , d-C₅의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올 이 소프로필알코올， _n-프로필알코올， n-부탄올 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선 . 택되는 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

<53> 본 발명의 일측면에서， 시링가레시놀을 인삼 열매로부터 분리 및 정제하는 방법은 다음과 ^'같은 단계를 포함할 수 있다. 인삼 열매 과육의 알코올 추출물을 제 조하는 단계; 제조한 알코을 추출물을 물과 알코을 중 하나 이상을 포함하는 용매 로 용출시켜 분획을 수득하는 단계; 및 수득한 분획에 대해 유기 용매를 전개 용매 로 사용하여 크로마토그래피， 구체적으로 얇은 막 크로마토그래피 (TLC)를 수행하는 단계. 상기에서 유기 용매는 알코을， 아세톤, 에테르， 에틸아세테이트， 디에틸에테 르， 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하 며， 알코올은 d~C₅의 알코올을 포함한다. 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기 와 같이 정제된 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함할 수 있다.

<54> 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 조성물 전체 중량을 기초로 0.001 중량 % 내지 20 중량 ¾， 구체적으로 0.01 중량 % 내지 10 중량 %ᅳ 더 구체적으로 0.1 중량 ¾ 내지 5 중량 %의 유효성분을 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함하는 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며， 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 사용하는 것이 적절 할 수 있다. 구체적으로 유효성분이 0.01 중량 % 미만인 경우 층분한 피부 미백 효 과를 얻을 수 없고, 20 중량 %를 초과하는 경우 안전성 및 제형 안정성이 낮아질 수 있다.

<55> 본 발명의 일 측면인 피부 개선용 조성물에 있어서，'상기 피부 개선은 피부 미백을 포함한다.

<56> 기미， 주근깨， 혹자 등과 같은 과색소침착은 피부 속 멜라노사이트 및 그 주 변 환경의 이상에서 기인할 수 있다. 본 발명자들은 멜라노사이트와 멜라노사이트 주변의 마이크로 환경을 개선함으로써， 멜라닌 생성을 근본적으로 감소시키고 생성 된 멜라닌을 신속하게 배출시키며 피부색의 밝기와 균일성을 증가시켜 피부 미백 효과를 나타내는 물질을 개발코자 연구를 거듭한 결과, 화학식 1의 화합물, 구체적 으로 시링가레시놀 (syringaresinol)을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물 올 완성하였다.

<57> 화학식 1의 화합물 구체적으로 시링가레시놀은 피부 세포， 구체적으로 피부 색소 세포의 독성을 감소시키고， 멜라노사이트의 멜라닌 생성올 억제하몌 티로시 나제 활성을 저해하여 뛰어난 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다. 또한 우수한 항산 화 효과를 가지므로， 멜라노사이트를 둘러싼 마이크로 환경의 산화를 억제하여 멜 라노사이트를 진정시킴을 통해 태양 광선에 의한 피부 그을림 등과 같은 피부 색소 침착 현상을 억제하는 효과가 뛰어나다. 그리고 각질 형성 세포 등에서 분비되는 사이토카인으로서 피부색과 피부톤을 밝게 하고 기미 및 잡티와 같은 피부 과색소 침착을 억제하는 인터루킨 -6(IL-6)의 발현을 증가시킴으로써， 피부색과 피부톤을 건강하고 밝으면서도 균일하게 하며， 과색소침착을 억제할 수 있다. 게다가 피부 각질을 제거하고 각질 교체 주기인 각질 턴오버 (turn over)를 촉진하는 효과가 우 수하므로 멜라닌을 포함하는 오래된 각질을 제거함으로써 피부가 하얗고 깨끗하게 보이도록 할 수 있다. 또한 화학식 1의 화합물, 구체적으로 시링가레시놀은 멜라닌 의 배출을 용이하게 할 뿐만 아니라 피부 표면을 균일하게 만들어 피부를 매끈하고 부드럽게 만듦으로써， 피부 미백 효과를 배가시킬 수 있다. 따라서 이러한 화학식 1의 화합물, 구체적으로 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 본 발명에 따른 . 조성물은 매우 우수한 피부 미백 효과， 구체적으로 피부색의 밝기와 균일성을 높이 고 피부 과색소침착을 개선하며， 각질 제거 및 각질 턴오버를 촉진하는 우수한 효 과를 가질 수 있다. 상기 피부 과색소침착은 기미， 주근깨， 잡티， 검버섯， 혹자, 모반 및 다크서클 중 선택된 하나 이상을 포함하나， 이에 제한되는 것은 아니다. <58> 본 명세서에서， 피부색의 밝기와 균일성이 높아진다함은 전반적인 피부색의 명도가 높아지며, 얼룩덜룩함이 감소하여 전체적인 피부색의 균일성이 높아짐을 의 미한다.

<59> 본 발명의 다른 일측면에서, 시링가레시놀은 아마씨 , 황백， 오가피， 참깨 및 인삼 열매의 추출물로 조성물에 포함될 수 있으며， 그 중 피부 미백에 특히 효과적 인 분획으로 포함될 수 있다.

<60> 본 발명의 일측면은 상기 조성물을 유효 성분으로 포함하는 피부 외용제 조 성물을 제공한다 . 본 발명의 다른 일측면은 상기 조성물을 유효 성분으로 포함하는 경구용 조성물을 제공한다. 화학식 1의 화합물， 구체적으로 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 피부에 도포되거나， 경구 투여되는 경우 모두 우수한 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

<61>

<62> 시르투인 KSirtuin 1， SIRT 1)은 효모의 잠재 정보 조절자 2(silencing information regulator 2， Sir2)의 포유 동물 호몰로그로서 NAD⁺의존적인 히스톤 탈 아세틸화 효소이다. SIRT 1은 히스톤， 전사인자 등 다양한 단백질의 탈인산화를 조 절함으로써， 노화, 스트레스 저항성 등에 관여한다고 알려져 있으며， 인간 진피 세 포 및 각질형성세포에서 SIRT 1가 활성화되거나 과발현되는 경우， 자외선 조사에 의한 MMP-9의 발현을 억제하여 콜라겐 분해를 방지한다고 알려져 있다. 이러한 결 과는 SIRT 1의 활성 또는 발현 조절제가 피부 노화를 억제 또는 예방할 수 있다는 것을 의미한다. 그러나, 아직까지 SIRT 1의 발현을 증가시키면서 안정성이 있다고 알려진 물질은 없다.

<63> 본 발명의 일 측면인 피부 개선용 조성물에 있어서, 상기 피부 개선은 피부 노화 억제를 포함한다.

<64> 본 명세서에서 노화는 나이가 들면서 일어나는 생체의 쇠퇴적인 변화 현상을 의미하며， 생리 활성 저하， 체내 대사 저하, 피부 노화를 포함한다. 상기에서 피부 노화는 자외선에 의해 주름이 생성되고， 보습 인자가 감소하며， 재생 능력이 상실 된 상태를 포함한다.

<65> 화학식 1의 화합물， 구체적으로 시링가레시놀은 SIRT 1의 발현을 4배 이상 증가시킬 수 있을 뿐만 아니라, 피부 재생 능력 지표인 TGF-βΙ의 발현을 증가시켜 피부 재생을 촉진하고, 자외선으로 인한 MMP-9의 발현을 억제하여 자외선이 조사되 지 않은 정도의 낮은 수준으로 MMP-9를 발현시킬 수 있다. 또한 화학식 1의 화합 물， 구체적으로 시링가레시놀은 피부 탄력과 강도에 중요한 영향을 미치는 콜라겐 의 분해, 구체적으로 자외선에 의한 콜라겐의 분해를 억제할 수 있다. 뿐만 아니 라， 화학식 1의 화합물， 구체적으로 시링가레시놀은 피부 보습에 중요한 인자인 필 라그린 (filaggrin) 및 인보루크린 (involucrin)의 발현을 촉진시켜 피부 건조를 방 지하고 자외선에 의한 피부 장벽 손상을 방지하며, 손상된 피부 장벽을 빠르게 개 선하여 피부 표피의 수분을 유지 시켜줄 수 있다. 그리고 화학식 1의 화합물， 구체 적으로 시링가레시놀은 피부 결합 조직을 견고히 하여 피부 주름 생성을 억제하고 피부 탄력을 증진시킬 수 있다. 즉， 화학식 1의 화합물， 구체적으로 시링가레시놀 을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 주름 개선 또는 억제제, 피부 재생 촉진제 및 피부 보습제로 사용될 수 있다. 이와 같이 화학식 1의 화합물, 구체적으로 시링가 레시놀은 피부 주름 생성 억제, 피부 재생 능력 강화, 피부 보습 촉진 작용을 하여 노화， 구체적으로 피부 노화, 더 구체적으로 자외선에 의한 피부 노화를 억제 또는 예방하는 효과가 뛰억나다.

본 발명의 다른 일측면에서, 시링가레시놀은 아마씨， 황백， 오가피 참깨 및 인삼 열매의 추출물로 조성물에 포함될 수 있으며， 그 중 노화 억제에 특히 효과적 인 분획이 포함될 수 있다.

본 발명의 일측면인 상기 조성물은 피부 외용제 조성물을 포함한다. 본 발명 의 다른 일측면은 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 경구용 조성물을 제공한 다. 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 피부에 도포되거나， 경구 투 여되는 경우 모두 우수한 노화 억제 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 일측면인 조성물은 화장료 조성물을 포함한다. 상기 화장료 조성 물은 피부 미백 효과를 나타낼 수 있으며， 구체적으로 기미， 주근깨, 점， 피부 잡 티, 피부 색소 침착올 개선 또는 예방할 수 있다.

본 발명의 일측면은 시링가레시놀을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물 을 제공한다. 상기 화장료 조성물은 노화 억제 효과를 나타낼 수 있으며, 구체적으 로 피부 주름 생성 억제 피부 재생 능력 강화, 피부 장벽 기능 강화， 피부 보습 촉진 등을 통해 피부 노화를 억제할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액， 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼， 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀견, 현탁액， 고체 겔， 분말， 페이스트， 포말 (foam) 또는.에어 로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통 상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

<71> 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에세 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 구체적으로， 본 발명에 따른 화장료 조성물의 피부 미백 효과를 상승시킬 수 있는 코지산， 알부틴 또는 아스코르브산 유도체를 더 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제， 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제， 방부제， 살균제， 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료， 향료， 넁감 제 또는 제한 (制汗)제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배 합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량 %， 구체적으로 0.01 내지 3 중량 %일 수 있다.

<72> 본 발명의 일측면인 조성물은 약학 조성물일 수 있다. 상기 약학 조성물은 피부 미백 효과를 나타낼 수 있으며, 구체적으로 기미， 주근깨, 점， 피부 잡티와 같은 피부 색소 침착을 개선 또는 치료할 수 있다.

<73> 본 발명의 일측면인 조성물은 약학 조성물일 수 있다. 상기 약학 조성물은 노화 억제 효과를 나타낼 수 있으며， 구체적으로 피부 주름을 피부 주름 생성 억 제, 피부 재생 능력 강화， 피부 장벽 기능 강화， 피부 보습 촉진 등을 통해 피부 노화를 예방또는 치료할 수 있다.

<74> 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구， 비경구， 직장， 국소， 경피, 정맥 내， 근육 내， 복강 내， 피하둥으로 투여될 수 있다.

<75> 경구 투여를 위한 제형은 정제 (定劑)， 환제 (丸劑)， 연질 및 경질 캅샐제， 과 립제 (顆粒齊), 산제， 세립제, 액제, 유탁제 (乳獨濟) 또는 펠렛제일 수 있으나, 이 에 제한되는 것은 아니다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제 (예: 락토오스, 덱 스트로오스， 수크로오스， 만니를， 솔비를， 셀를로오스 또는 글리신)， 활택제 (예 : 실리카， 탈크, 스테아르산 또는 폴리에틸렌 글리콜)， 또는 결합제 (예: 마그네슘 알 루미늄 실리케이트， 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스， 메틸셀롤로오스， 나트륨 카르복시메틸샐를로오스 또는 폴리비닐피를리딘)를 함유할 수 있다. 경우에 따라 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 둥의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상작인 흔합， 과립화또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

<76> 비경구 투여를 위한 제제는 주사제, 점적제， 로션， 연고, 겔, 크림， 현탁제, 유제, 좌제 (坐劑), 패취 또는 분무제일 수 있으나， 이에 제한되는 것은 아니다. <77> 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연 령, 성별 체중， 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며， 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일， 보다 구체적으로 는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나， 이에 제한되는 것은 아니다.

<78> 본 발명의 일측면인 상기 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 상기 식품 조성 물은 기호 식품 또는 건강 식품 조성물을 포함한다.

<79> 상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나， 예를 들어， 정제， 과립 제, 분말제， 드링크제와 같은 액제， 캐러멜, 겔， 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용뒤는 성분 들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며ᅳ 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

<80> 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일， 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나 이에 제한되지 않으며， 투여하고자 하는 대상 의 연령， 건강상태， 합병증 둥 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

<81>

【발명의 실시를 위한 형태】

<82> 이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나， 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예 시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것 은 아니다.

<83>

<84> [실시예] 시링가레시놀의 분리 및 분석

<85>

<86> 1. 인삼 열매의 전처리

<87> 생 (生) 인삼 열매를 수확하고, 종자를 분리하여 제거한 후， 인삼 열매의 과 피를 제거하고 과육만을 일광 건조 또는 열풍 건조하여 인삼 열매 과육 건조물을 제조하였다.

<88>

<89> 2. 인삼 열매 과육 추출물로부터 시링가레시놀의 분리 및 분석

<90> 상기에서 제조한 인삼 열매 과육 건조물 1kg에 물 또는 주정 3L를 가하여 상 온 또는_ᅵ환류 추출하고 여과한 다음 40~45^°C에서 감압 농축하여 인삼 열매 과육 추 출물 300g을 얻었다. 추출물에 에테르 (ether)를 처리하여 지용성 성분을 제거한 후 ， 부탄올 (butanol)로 조사포닌을 추출 및 농축하였다. 이를 분리， 정제하여 시링가 레시놀을 얻었으며， 구체적인 방법은 다음과 같다. 먼저 시료 194 g을 역상 컬럼 크로마토그래피 (reversed-phase (ODS) column chromatography)로 정제하였으며， 이 때 용출 용매로 처음에는 100% 물을 사용하였고 메탄올을 10%씩 점차 증가시켜 최 종적으로는 100% 메탄올 용매를.사용하였다. 그 결과 GB-1 내지 GB-10 분획물을 얻 었으며, 이들 분획물 중 인간의 장수 유전자라고 불리는 SIRT KSirtuin 1) 발현 활성을 나타낸 분획 GB-3을 선별하여 농축한 후 50% 수용성 메탄올 (aqueous methanol)을 이용하여 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피 (Sephadex LH-20 column chromatography)를 수행하였다. 얻은 분획물 중 SIRT 1 발현 활성을 나타낸 GB-3- 6(3F)을 선별하여 농축한 후， 클로로포름:메탄을 (10:1)을 전개 용매로 하여 예비 실리카겔 (preparative silica gel) TLC를 수행하였고, 그 결과 Rf값 0.67의 활성 분획을 정제하였다. 상기 분리 및 정제 방법을 도식화하여 도 1에 나타내었다.

NMR분광 분석과 데이터베이스 검색을 수행하여 분리 및 정제한 활성 화합물 을 시링가레시놀 (syringaresinol)로 동정할 수 있었다. 이를 재확인하기 위하여 질 량 (mass) 분석을 수행하였으며， ESI-mass를 positive mode에서 측정한 결과 [M+Na] +가 m/z 440.9에서, [2M+Na] +가 m/z 858.9에서 관찰되어 분자량이 418임을 알 수 있었다. 또한 NMR 분광 분석을 수행한 결과， 화학식 3과 같은 결과를 얻었 다. 이에 따라, 상기 분리 정제한 활성 화합물은 시링가레시놀 (syringaresinol)으 로 확인되었다.

<92> 【화학식 3】

<94>

<95> 이와 같이 인삼 열매 과육으로부터 시링가레시놀을 분리하였다.

<96>

<97> [실험예 1] 세포 독성 정도 확인

<98> 시링가레시놀에 대하여 쥐의 색소 세포에서의 세포 독성 정도를 아래와 같은 방법으로 확인하였다.

<99> C57BL/6 마우스 유래 쥐의 색소 세포 (Mel-Ab cell)(Dooley둥의 방법으로 처 리)를 DMEM(Dulbeccos modified Eagles media)에 10% 우태반 혈청, ΙΟΟηΜ 12-0-테 트라데카노일포르볼 (tetradecanoylphorbol)-13—아세테이트， InM 콜레라 독소 (cholera toxin)을 첨가한 배지에서 37^°C, 5% C0₂의 조건 하 배양하였다. 배양한

Mel-Ab 세포를 0.25% 트립신 -EDTA로 떼어내고， 24-웰 풀레이트에 1C)⁵세포 /웰

(cells/well) 농도로 세포를 배양한 후, 상기 실시예의 시링가레시놀을 처리하였 다. 24시간 동안 배양하고 인산염 완층 용액 (pH 7.2)으로 세척하여 0.1% 크리스탈 바이올렛 (crystal violet. 시그마)， 10% 에탄올 (Et-ΟΗ)을 이용하여 5분 동안 상온 에서 염색하였다. 염색되지 않은 크리스탈 바이올렛 (crystal violet)을 완전히 제 거 한 다음, 인산염 완층 용액 (pH 7.2)로 3회 세척하였다. 염색된 세포로부터 크리 스탈 바이을렛 (crystal violet)을 추출하기 위해 95% 에탄올 (Et-ΟΗ)을 1시간 동안 상온에서 처리하였으며, 추출액을 퍼킨 엘머 (PerkinElmer) (Lambda 25 spectrophotometer) 540 nm 파장에서 측정한 흡광도를 기초로 하여 수학식 1로 세 포의 생존율(¾)을 계산하였다. 그 결과를 아래 표에 나타내었다.

<ιοο> [수학식 1]

<101> 생존율 (%)= 4/ X100

<102> Α: 시링가레시놀을 첨가한 경우의 홉광도

<103> Β: 시링가레시놀을 첨가하지 않은 경우의 흡광도

<104>

<105> 【표 1】

<106> 상기 결과에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 피부 세포의 독성을 현격히 ^'감 소시켜 세포의 생존율을 높일 수 있다.

<107>

<108> [실험예 2] 멜라닌 생성 억제 효과 평가

<109> 실시예에서 얻은 시링가레시놀의 멜라닌 색소 생성 억제 효과를 알아보기 위 하여 쥐의 색소 세포를 이용하여 평가하였다.

<ιιο> 먼저， C57BL/6 마우스 유래 쥐의 색소 세포 (Mel-Ab cellKDooley 등의 방법 으로 처리)를 DMEM(Dulbeccos modified Eagles media)에 10% 우태반 혈청， ΙΟΟηΜ 12-0-테트라데카노일포르볼 (tetradecanoylphorbol)-13-아세테이트, InM 콜레라 독 소 (cholera toxin)을 첨가한 배지에서 37^°C， 5% C0₂의 조건 하 배양하였다. 배양한

Mel-Ab 세포를 0.25% 트립신 -EDTA로 떼어내고， 24-웰 플레이트에 10⁵세포 /웰

(cells/well)의 농도로 세포를 배양하고 이를째부터 3일 연속 각각 양성 대조군으 로서 lOppm의 하이드로퀴논 및 실시.예에서 수득한 시링가레시놀을 가하여 배양하였 다. 그 다음 배양액을 제거하고 PBS로 세척한 후, 1N수산화나트륨으로 세포를 녹 여 400nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정한 흡광도를 기초로 아래 수학식 2에 따라 멜라닌 생성 억제율 (%)을 계산하고 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

<πι> [수학식 2] 멜라닌생성억제율 (%)이00-( X 100)

【표 2】

상기 결과에서 볼 수 있듯이 , 시 링가레시놀은 우수한 멜라닌 생성 억 제율 (%)을 나타내며， 그 효과는 양성 대조군인 하이드로퀴논보다도 월등히 뛰어났다 . 즉 시링가레시놀은 멜라닌 생성을 억 제하여 우수한 피부 미 백 효과를 가짐을 알 수 있다 .

[실험 예 3] 티로시나제 활성 억제 효과 평가

시 링가레시놀이 멜라닌 합성에 가장 중요한 효소인 티로시나제의 활성을 억 제하는지 알아보기 위하여 다음과 같은 실험을 실시하였다 .

0.1M 인산 칼륨 (Potassium Phosphate) 완층액 (pH 6.8)， 0.03% L-티로신 기 질 용액 (0.3 mg/ml in D.W)ᅳ 1.42 units/ μ 1 . 티로시나제 효소 용액 (인산염 완층 액 )을 반웅액 제조에 사용하였다. 반웅액은 0.1M 인산염 완층액 500 ≠, L-티로신 15 μξ , 시 링가레시놀 50 ^를 넣은 후， 최종 부피가 1500 ^가 되도록 증류수를 첨 가하여 제조하였다. 또한 실질적으로 동일한 과정을 통해 시 링가레시놀이 포함되 제조하여 양성 대조군으로 하였다. 실험에 사용한 모든 시료의 농도는 10 ppm으로 하였다 . 위의 반웅액에 버섯 유래의 티로시나제를 10 uni ts으로 넣고 37 ^°C에서 10 분간 반응시 킨 후， 신속하게 얼음에서 5분간 방치하여 반응올 중단시켰다 . 475 nm 에서 흡광도를 측정하여 반웅 생성물인 도파크롬 (dopachrome)의 합성율을 구하고 이를 기초로 티로시나제 활성 억제율 (%)을 계산한 후 그 결과를 아래 표에 나타내 었다.

【표 3]

상기 결과에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 우수한 티로시나제 활성 억 제 효과를 나타냈다. 즉， 시 링가레시놀은 멜라노사이트의 멜라닌 색소 형성을 근본적 으로 차단함으로써 뛰어난 미백 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다.

<122> ^'

<123> [실험예 4] 자유 라디칼 소거능 측정

<124> 자체적으로 라디칼 형태를 띠고 있는 100M 농도의 DPPH(Di phenyl Pi cry 1

Hydrazile)를 99% 에탄을에 녹여서 라디칼 용액을 준비하였다. 시링가레시놀을 농 도 (yg/ml)별로 증류수에 녹여 준비한 후 라디칼 용액과 시링가레시놀을 흔합하여 반웅액을 제조하였다. 또한 시링가레시놀을 포함하지 않는 반웅액을 제조하여 음성 대조군으로 하였고， 비타민 CXVit C)로 반웅액을 제조하여 양성 대조군으로 하였 다. 반웅액을 37 ^°C에서 30분간 충분히 반웅시킨 후， 515 nm에서 흡광도를 측정하 여 라디칼의 소실을 평가하였다. 음성 대조군을 100으로 하여 환산한 각 시험 물질 의 소거능을 도 2에 나타내었다.

<125> - 도 2에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 농도 의존적으로 자유 라디칼을 소 거할 수 있으며, 이 효과는 비타민 C보다 뛰어났다. 즉， 시링가레시놀은 매우 우수 한항산화 효과를 가짐을 알 수 있다.

<126>

<127> [실험예 5] 인터루킨— 6의 유전자 발현 증가 효능 평가

<128> 인터루킨 -6UL-6)는 각질 형성 세포 등에서 분비되는 사이토카인의 한 종류 로서, IL-6 유전자가 활성화되어 분비량이 많아지게 되면 피부색과 피부톤이 밝아 지고 기미와 잡티 생성이 억제되어 피부 색소 침착이 억제된다. 본 실험에서는 시 링가레시놀이 피부 각질 형성 세포의 IL-6 유전자 발현을 증가시킬 수 있는지 평가 하였다.

<129> 각질 형성 세포에 10 ppm 및 100 ppm의 시링가레시놀을 처치하고, 24시간 후 세포를 수거하여 10ml의 인산염 완충액 (Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포 를 두 번 세척한 다음， 트라이졸 (Trizol reagent , Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 이용하여 쎄포 내의 전체 RNA(total 醒)를 분리하였다. 분리한 RNA를 키아 젠사의 RNA 키트 (Qiagen RNeasy kit, Qiagen, Valencia, CA)를 사용하여 한 번 더 정제한 후 분리한 RNA로부터 인비트로젠사의 역전사 키트 (Superscript Reverse Transcriptase (RT) II kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 cDNA를 합성하 였다. 이후 역전사 중합 효소 연쇄 반웅 (real time-reverse transcri tion polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)으로 인터루킨 -6의 유전자 발현 변화를 정 량적으로 분석하였다. 유전자 발현 패턴 변화 어플라이드 바이오시스템사의 택 맨 유전자 발현 분석 키트 (TaqMan gene expression assay kit , Ap lied Biosystems, ForsterCity, CA)를 이용하여 평가하였다. 사용한 프라이머는 인터루 킨 -6: Hs00174360_ml 이었다. 각 세포에서 인터루킨 -6가 발현된 양을 실시간 PCR(Real-Time PCR)로 확인하고 아무 것도 처리하지 않은 대조군을 기준으로 한 결 과는 아래 표와 같다.

<130>

<131> 【표 4】

<132> 상기 결과에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 농도 의존적으로 각질 형성 세 포에서 인터루킨 -6의 발현을 증가시킬 수 있다. 즉， 시링가레시놀은 인터루킨 -6를 멜라노사이트로 분비하여 멜라노사이트의 주변 환경을 바꿔줌으로써 멜라닌 색소를 적게 생산하도록 유도할 수 있으며， 이는 시링가레시놀이 우수한 피부 미백 효과를 가짐을 의미한다.

<133>

<134> [실험예 6] 외용제로서 미백 효과 평가

<135> 시링가레시놀의 인체 피부에 대한 미백 효과를 알아보기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.

<136> 먼저， 건강한 12명의 남자를 대상으로 피검자의 상박 부위에 직경 1.5cm의 구멍이 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤， 각 피검자의 최소 흥반량 (Minimal - Erythema Dose)의 1.5 ~ 2배 정도의 자외선 (UVB)을 조사하여 피부의 혹화를 유도하 였다. 자외선 조사 후 시험 물질로 각각 실시예에서 얻은 시링가레시놀 1¾ (용매는 1,3-부틸렌글리콜:에탄올 = 7:3)， 하이드로퀴논 (양성 대조군)

용매 (vehicle) (음성 대조군) 1% 만을 바르고， 한 곳은 아무 것도 바르지 않은 채 10주 동안 상태 변화를 관찰하였다. 1주 단위로 피부의 색깔을 색차계 CR2002(일본, 미 놀타 사)로 측정하였다. 각 시험 물질의 도포 개시 시점과 도포 완료 시점에서의 피부색 차이 (AL*)를 아래 수학식 3에 따라 계산하고， 이를 아래 표에 나타내었다. 한편， 미백 효과는 시험 물질 도포 부위와 대조군 부위의 AL*의 비교로 판정하는 데, AL*값이 2 정도인 경우는 침착된 색소의 미백화가 뚜렷하다고 볼 수 있으며, 1.5 이상 정도면 미백 효과가 있다고 판정할 수 있다.

<137> [수학식 3]

<138> Δ ^도포완료시점에서의 값-도포개시시점에서의 값

<!39>

<140> 【표 5】

<141> 상기 결과에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 음성 대조군뿐만 아니라 양성 대조군인 하이드로퀴논보다 우수한 피부색 밝기 정도를 나타내었다. 이를 통해 시 링가레시놀이 피부 세포의 사멸을 억제하고, 자외선에 의해 생성된 색소 침착을 개 선하여 피부색을 밝게 함으로써 우수한 피부 미백 효과를 가짐을 알 수 있다.

<142>

<143> [실험예 7] 외용제로서 피부색 균일성 평가

<144> 시링가레시놀의 인체 피부에 ᅳ대한 피부색 균일성 증진 효과를 알아보기 위하 여 다음과 같은 실험을 수행하였다.

<145> 먼저， 상기 실험예 6과 실질적으로 동일한 방법으로 피검자를 모집하고 피부 도포를 실시하였다. 피부색 균일성을 평가하는 방법은， 피부 중 임의로 선정한 3개 의 부위에 대한 피부 밝기를 측정한 후 3개 부위 값의 표준 편차를 구하고 표준 편 차가 작을수록 피부 밝기가 균일한 것으로 판정하였다. 측정 기기와 방법은 실험예 6과 동일하였다.

<146> 【표 6】

<147> 상기 결과에서 볼 수 있듯이, 시링가레시놀은 음성 대조군 뿐만 아니라 양성 대조군인 하이드로퀴논보다 우수한 피부색 균일성을 나타내었다. 이를 통해 시링가 레시놀이 피부를 균일하게 만듦으로써 고른 피부색으로 개선시키는 효과가 우수함 을 알 수 있다.

<148>

<149> [실험예 8] 각질량 감소 효과 평가

<150> 시링가레시놀이 피부 각질량을 감소시킬 수 있는지 알아보기 위해， 피부 질 환이 없는 20~30대 성인 남녀 50명에게 실험예 6과 동일한 농도의 시링가레시놀 용 액을 하박 내측에 도포하고 24시간 경과 후 참뷰 (Charm view; Moritex, Japan)를 이용하여 각질 감소량을 측정하였다. 도포 시작 전 항온， 항습 조건 (24^°C, 습도 40%)에서 참뷰를 이용하여 측정한 초기 피부 각질량 값을 기본값으로 하여， 24시간 경과 후의 피부 각질량 변화를 측정하였으며， 그 결과를 아래 표에 나타내었다. <151> 【표 7】.

<152> 상기 결과에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 피부 각질을 감소시키는 효과 가 월등히 우수하였다. 이를 기초로 시링가레시놀은 멜라닌을 포함하는 오래된 각 질을 체거함으로써， 우수한 피부 미백 효과를 가질 수 있음을 알 수 있다.

<153>

<154> [실험예 9] 경구 섭취시 미백 효과 및 피부색 균일성 증가 시험

<155> 시링가레시놀이 경구 섭취시에도 미백 효과를 나타내는지 알아보기 위하여 , 갈색 기니아피그 (ginea pig)를 동물 모델로 선정하였다. 모든 기니아피그에게 자외 선을 조사하여 최소 홍반량을 측정하고， 각각 10마리씩 군을 분류한 후 최소 홍반 량의 자외선을 1일 1회씩 총 3회 조사하였다. 기니아피그의 식이는 사료를.5주간 자유 급식하여 이루어졌으며， 사료 내에 시링가레시놀 1¾와 양성 대조군으로서 비 타민 C(Vit C) 1%를 포함시켰다. 색소 침착은 색차계를 이용하여 실험예 6과 실질 적으로 동일한 방법으로 측정하고 그 결과를 아래 표에 나타내었다.

<156> 【표 8】

<157> 상기 결과에서 볼 수 있듯이, 경구 섭취시 시링가레시놀은 비타민 C보다 우 수한 미백 효능을 나타내었다. 이는 시링가레시놀이 외용제로 도포하는 경우뿐만 아니라 경구 섭취하는 경우에도 우수한 피부 미백 효과를 나타낼 수 있음을 의미한 다.

<158> ^'

<159> 또한 피부색 균일성 평가를 실험예 7과 실질적으로 동일한 방법으로 수행하 고， 그 결과를 아래 표에 나타내었다 .

<160> 【표 9】

<161> 상기 결과에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 음성 대조군뿐만 아니라 양성 대조군인 비타민 C보다 우수한 피부색 균일성을 나타내었다. 이를 통해 경구 섭취 한 시링가레시놀이 피부를 균일하게 만들어 고른 피부색으로 개선시키는 효과가 우 수함올 알수 있다.

<162>

<163> [실험예 10] 인간각질형성세포와 섬유아세포에서 SIRT 1발현 촉진 효과 평 가

<164> 인간 각질형성세포 및 섬유아세포에서 시링가레시놀의 SIRT 1 유전자 발현 촉진 효과를 평가하기 위하여 아래와 같은 실험을 수행하였다.

<165>

<166> 1. 세포주와 세포 배양

<167> 인간 각질형성세포주 (human kerat inocyte)인 HaCaT 흑은 인간 섬유아세포주

(human fibroblast)인 HDF를 10% 우태아 혈청 (fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지 (Dulbeccos modified Eagles Medium, Gibco 1210-0038)에서 37 ^°C, 5% C0₂조건 하 배양하였다.

<168>

<i69> 2. SIRT 1 발현 증가 효과 평가

<170> 상기에서 배양한 세포에 시링가레시놀을 DMS0에 녹여 20, 50, 100 μΜ농도 로 24시간 처리하였다. 별도로 배지 부피 1八 000의 DMS0를 처리한 세포를 음성 대 조군으로 하였다. 각 시료를 처리한 세포들을 차가운 PBS로 2회 세척한 후 트리졸 시약 (TRIzol agent , Invitrogen)으로 RNA를 추출하였다. 상기에서 추출하여 정량한 1 i /!ii^ RNA와 역전사 시스템 (Promega)을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 cDNA 및 SIRT 1과 GAPDH의 각 유전자에 대해 미리 디자인된 프라이머 (Primer)와 프 루브 (probe) (Applied biosystems; SIRT 1， Hs01009006_ml; GAPDH, Hs99999905_ml) 를 이용하여 각 유전자들의 발현 양상을 측정하였다. PCR 반응과 분석은 로터 _:진 3000 시스템 (Rotor-Gene 3000 system; Corbet t Research, Sydney, Australia)을 이 용하였다. 결과를 도 3(각질형성세포) 및 도 4(섬유아세포)에 나타내었다.

<i7i> 도 3 및 도 4에서 볼 수 있듯이， 시링가레시놀은 농도 의존적으로 인간 각질 형성세포와섬유아세포에서 SIRT 1의 발현을 4배 이상 증가시킬 수 있다. <172>

<173> [실험 예 11] 인간 각질형성세포에서 필라그린과 인보루크린의 발현 촉진 효 과 평가

<174> 인간 각질형성세포에서 시 링가레시놀의 필라그린 (f i laggrin)과 인보루크린 발현 촉진 효과를 평가하기 위하여 아래와 같은 실험을 수행하였다.

<175>

<Π6> 1. 세포주와 세포 배양

<177> 인간 각질형성세포주 (human kerat inocyte)인 HaCaT세포를 실험 예 1과 실질적 으로 동일한 방법으로 배양하였다 .

<178>

<179> 2. 필라그린과 인보루크린의 발현 증진 효과 평가

<180> 실험 예 10과 실질적으로 동일한 방법으로 cDNA를 합성하고 , 합성한 cDNA 및 필라그린， 인보루크린과 GAPDH의 각 유전자에 대해 미 리 디자인된 프라이머 (Primer)와 프루브 (probe) (Appl ied biosystems ; SIRT 1， Hs01009006_ml ; GAPDH, Hs99999905_tnl)를 이용하여 각 유전자들의 발현 양상을 실험 예 1과 실질적으로 동 일한 방법으로 측정하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다 .

<181 > 도 5에서 볼 수 있듯이， 시 링가레시놀은 농도 의존적으로 인간 각질형성세포 에서 필라그린과 인보루크린의 발현을 증가시켰다. 아를 토대로 시 링가레시놀은 피 부 장벽 기능을 강화하고 피부 보습 효과를 가짐을 알 수 있다 .

<182>

<183> [실험 예 12] 인간 각질형성세포에서 M P-9의 발현 및 콜라겐 분해 억제 효과 평가

<184> 인간 각질형성세포에서 시 링가레시놀의 MMP-9의 발현 및 콜라겐 분해 억 제 효과를 평가하기 위해 아래와 같은 실험을 수행하였다.

<185>

<186> 1. 세포주와 세포 배양

<187> ^' 인간 각질형성 세포주 (human kerat inocyte)인 HaCaT세포를 실험 예 1과 실질 적으로 동일한 방법으로 배양하였다 .

<188>

<189> ᅳ 2. 자외선 조사에 의해 증가된 MMP- 발현 및 콜라겐 분해의 억제 효과 평가

<190> 상기 배양한 세포주를 트립신 처리하여 단일 세포 현탁액을 만들고 6-웰에 2

X 10⁵개씩 분주하여， 24 시간 배양하였다 . 그 후 우태아 혈청 이 포함되지 않은 DMEM 배지로 교환하여 다시 24시간 동안 배양한 후， DMS0에 녹인 50 μΜ 농도의 시링가 레시놀을 처리하였다. 24시간 동안 처리한 다음， 인산 완층 용액 (PBS)으로 세척하 고， 인산 완층 용액을 넣은 상태에서 30 mJ/cm²농도의 UVB를 조사하였다. 인산 완충 용액을 버리고， 다시 같은 농도의 시링가레시놀이 포함된 배지로 교환하였다. 대조 군으로 시링가레시놀을 처리하지 않은 세포를 동일한 방법으로 배양하였다. 자외선 조사 24 시간 후， 시링가레시놀을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포를 인산완충용 액 (PBS)으로 세척하고， 트립신을 처리하여 세포를 수거하고， 이에 8 M 우레아 2% CHAPS, 50 mM DTT, 2 M 티오우레아 (thiourea)， 2 mM PMSF, 100 mg/ml 류펩틴 (leupeptine)의 단백질 추출 완층 용액 500 ml을 처리한 후 10분간 상온에서 방치 하였다. 그 후 4^°C에서 10 분간 15,000 g의 중력 가속도로 원심 분리하고, 상층액 을 수거한 후 BI0-라드 단백질 염색제 ^TM(BI0-Rad Protein Dye Reagent™)을 이용하 여 단백질을 정량하였다. 20 mg의 단백질을 8 % SDS-PAGE를 이용하여 크기 별로 분 리하고， 50 V로 12 시간 동안 PDF(BioRad) 막에 블로팅 (blotting)하였다. 이 블랏 을 5¾ 무지방 우유 용액으로 1 시간 동안 블로킹 한 후 일차 항체로는 단일 항체 항 -MMP-9(San.ta Cruz, CA, USA)와 단일 항체 항-콜라겐 IV(Abcam, Cambridge, MA, USA)를， 이차 항체로는 호오스 래디쉬 퍼옥시다아제 (horse radish peroxidase)가 결합된 항-마우스 IgG(amersham)를 이용하였고， Amersham 사의 enhanced chemiluminescence(ECL) 키트를 이용하여 반웅시켰다. 반응시킨 블랏은 X선 후지 필름에 감광시킨 후 현상하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 필름 상의 밴드는 파워룩 (PowerLook) 2100 XL(umax)를 이용하여 스캐닝한 후 이미지마스터 2D 엘리트 (Amersham Bioscience) 이미지 분석 프로그램을 이용하여 분석하고， 그 결과를 도 6에 나타내었다.

<i9i> 도 6에서 볼 수 있듯이， 자외선 조사에 의해 각질형성세포의 MMP-9 발현이 증가하고， 또한 콜라겐 분해가 촉진되어 콜라겐의 양이 감소한다. 그러나， 시링가 레시놀을 처리하는 경우 자외선 조사에 의한 MMP-9 발현의 증가가 억제되어 콜라겐 분해를 방지되므로, 자외선에 의한 콜라겐 생성 감소를 막을 수 있다. 즉， 시링가 레시놀은 MMP-9의 발현을 억제하고， 나아가 콜라겐의 분해를 억제하여 피부 주름을 예방 및 개선하고 나아가 피부 노화를 억제할 수 있음을 확인할 수 있다.

<192>

<193> [실험예 13] 섬유아세포에서 TGF-βΙ 발현 촉진 효과 평가

<194> 섬유아세포에서 시링가레시놀의 TGF-βΙ 발현 촉진 효과를 평가하기 위해 아 래와 같은 실험을 수행하였다. <195>

<196> 1. 세포주와 세포 배양

<i97> 인간 섬유아세포주 (human fibroblast)인 HDF를 실험예 1과 실질적으로 동일 한 방법으로 배양하였다.

<198>

<199> 2. TGF- Ι 발현 증가 효과 평가

<200> 상기에서 배양한 세포에 시링가레시놀을 DMS0에 녹여 20， 50, 100 μΜ 동도 로 24시간 처리하였다. 배양후， 24시간째에 세포 배양액을 채취하였다.

<20ΐ> R&D시스템 (R&D system, 마국)의 ELISA 키트 (Quant ikineTM high sensitivity

EL ISA kit)를 사용하여 제조사의 지침에 따라， 채취한 세포 배양액에서 .생성된 TGF-βΙ의 양올 측정하였다. TGF-βΙ의 양 측정에 필요한 시료는 모두 상기 키트에 서 제공하는 것을 사용하였다. 먼저， TGF-βΙ 항체가 균일하게 도포된 96-웰 마이 크로 플레이트에 채취한 세포 배양액을 첨가하여 37^°C에서 1시간 동안 항원—항체 반웅이 일어나도록 하였다. 웰 내의 세포 배양액을 제거하고 PBS 완층용액으로 3회 세척하였다. 각 웰에 발색 효소 호스라디쉬 퍼옥시다제 (horseradish peroxidase)가 결합된 2차 항체를 첨가하여 1시간 동안 항원 -항체 반웅이 일어나도록 하였다. 다 음으로， 각 웰에 발색 유발 물질 테트라메틸벤지딘 (tetramethylbenzidine)을 넣고 상온에서 15분간 반웅시킨 후， 1 N 황산 용액을 첨가하여 반웅을 중지시켰다. 분광 광도계로 450 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준 용액을 이용하여 표준 곡 선을 작성하고， 측정한 흡광도를 표준 곡선에 대입하여 각 시료가 첨가된 세포 배 양액의 TGF-βΙ 생성량을 계산하였다. 그 결과는 아래 표와 같다.

<202> 【표 10】

<203> 상기 결과에서 볼 수 있듯이 시링가레시놀은 농도 의존적으로 섬유아세포의

TGF-βΙ 생성을 증가시켰다. 이를 토대로 시링가레시놀은 TGF-βΙ 생성을 증가시켜 피부 재생을 촉진하고， 나아가 피부 노화를 방지하며 주름을 개선할 수 있음을 알 수 있다.

<204>

<205> [실험예 14] 무모 생쥐 피부에서의 주름 생성 억제 및 표피 수분 손실량 억 제 효과 평가 <206> 시링가레시놀의 주름 생성 억제 효과 및 표피 수분 손실량 억제를 평가하기 위해 아래와 같은 실험을 수행하였다.

<207>

<208> 1. 무모 생쥐의 처리

<209> 체중이 25-39 g 정도 되는 30 주령의 암컷 무모 생쥐 (Skh: HR-1)를 Charles

River Laboratories(Wilmington, MA, U.S.A.)로부터 구입하여 사용하였다. 실험 쥐 들을 일주일 동안 동물 사육실에서 적웅시킨 후 정상군, 시료 처치군으로 군 당 5 마리씩 나누어 실험 기간 동안 사육하였다. 사육은 ₁₂시간 주기로 조명하는 명암 조건， 23.2^°C의 은도 및 55.10%의 습도 조건 하에서 먹이와 물은 자유롭게 섭취할 수 있도록 하여 이루어졌다.

<210>

<211> 2. 시링가레시놀의 피부 도포 또는 경구 투여에 의한 피부 주름 생성 억제 효과 평가

<212> 시료 처치군에는 1% 농도로 용매 (1,3-부틸렌 글리콜:에탄을 = 7:3)에 녹인 시링가레시놀을 패취의 형태로 2일간 2회 처치하거나， 200mg/kg농도의 시링가레시 놀을 4주간 경구 투여 하였다. 대조군에는 시링가레시놀 대신 동일한 양의 용매를 같은 방법으로 처치하였다. 시링가레시놀을 도포한 군 및 그 대조군, 시링가레시놀 을 경구 투여한 군 및 그 대조군에 대해 각각 180 mJ/cm²의 UVB를 조사하였다. 자외 선을 조사하기 전 주름 상태와 자외선 조사 후의 동일한 부위에 대한 주름을 레플 리카 (replica)로 떠서 비시오메타 시스템 (Visiometer system; C+K사)으로 피부 주 름을 측정하였다. 피부 주름 변화량을 아래 수학식에 따라 계산하였으며， 그 결과 를 도 7에 나타내었다.

<213> [수학식 4] 변화량 (%)={ {Td Tdo)l{Tdo)} X 100

<214>

<215> Τ ·:실험 종료 후 피부 주름 측정 부위 값

<216> Tc/O:자외선 조사 전 피부 주름 측정 부위 값

<217> 도 7에서 볼 수 있듯이， 도포 및 경구 투여 대조군의 피부 주름은 각각 230

±35%， 224 ±45%로 증가한 반면， 시링가레시놀을 도포한 군 및 경구 투여한 군의 피부 주름은 각각 121±35%， 123±25%로 매우 근소한 증가만을 나타내었다. 이를 통해 시링가레시놀은 우수한주름 방지 억제 효과를 가짐을 확인할 수 있다. <218>

<2i9> 3. 표피 수분 손실량 (TEWL, transepi dermal water loss) 측정

<220> 실험 시작 3주 후에 Del fin vapometer wireless(Technologies ltd. SWL

4102)를 이용하여 각 군의 무모 쥐의 둥 부위 피부에서 경표피 수분 손실량 (Trans- Epidermal Water Loss , TEWL)을 측정하고， 그 결과를 도 8에 나타내었다 . 측정 당 시 환경 조건은 상대 습도 60± 5%, 온도 25.5土0.51：이 었다 .

<221> 경표피 수분 손실량은 피부로부터 발산되는 수분량으로서 이 수치가 높을 수 록 피부의 보습 기능이 떨어져 있으며 , 피부 고유의 장벽 기능이 손상되 었음을 의 미 한다. 따라서 ^'경표피 수분 손실량은 피부 장벽 기능， 피부 장벽 손상 후의 회복 정도， 자외선과 같은 자극에 대한 피부 보호 효과 등올 판정함에 있어 지표로 사용 될 수 있다 .

<222> 도 8에서 볼 수 있듯이 , UV를 조사하는 경우 피부 장벽 이 손상되어 피부 보 습 기능이 감소하며， 시 링가레시놀을 경구 섭취 또는 도포하면 자외선에 의해 유발 되는 경표피 수분 손실량이 감소된다. 이를 통해 , 시 링가레시놀은 자외선에 의 한 피부 수분 손실을 막아 우수한 피부 장벽 기능 회복 , 외부 자극에 대한 피부 보호 및 피부 보습 효과를 가짐을 알 수 있다.

<223>

<224> 본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제형 예를 아래에서 설명하나，' 다른 여 러 가지 제형으로도 웅용 가능하며 , 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체 적으로 설명하고자 함이다 .

<225> [제형 예 1] 로션 .

<226> 아래 표에 기 재된 조성으로 통상의 방법에 따라 로션을 제조한다.

<227> 【표 11】

<228>

<229> [제형 예 2] 크림

<230> 아래 표에 기 재된 조성으로 통상의 방법에 따라 크림을 제조한다 .

<231> 【표 12】

<232>

<233> [제형예 3] 팩

<234> 아래 표에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 팩을 제조한다.

<235> 【표 13】

<236>

<237> [제형예 4] 연질 캅셀제

<238> 시링가레시놀 100 mg, 대두추출물 50 mg, 대두유 180 mg, 흥삼추출물 50 mg, 팜유 2 mg, 팜경화유 8 mg, 황납 4 mg 및 레시틴 6 mg을 흔합하고， 통상의 방법에 따라 연질 캅셀을 제조한다.

<239>

<240> [제형예 5] 정제

<24i> 시링가레시놀 100 mg, 대두 추출물 50 mg, 포도당 100 mg, 흥삼 추출물 50 mg， 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 흔합하고 30% 에탄을을 40 mg 첨 가하여 과립을 형성한 후 건조하고 정제로 타정한다.

<242>

<243> [제형예 6] 건강 식품

<244> 시링가레시놀 1000 mg

<245>. 비타민 흔합물

<246> 비타민 A 아세테이트. ..70 ag <24?> 비타민 E 1.0 mg

<248> 비타민 Bl 0.13 mg

<249> 비타민 B2 0.15 mg

<250> 비타민 B6 0.5 mg

<25i> 비타민 B12 0.2 g

<252> 비타민 C 10 mg

<253> 비오틴 10

<254> 니코틴산아미드 1.7 mg

<255> 엽산 50 lg

<256> 판토텐산 칼슴 0.5 mg

<257> 무기질 흔합물

<258> 황산제 1철 1.75 mg

<259> 산화아연 0.82 mg

<260> 탄산마그네슘 25.3 mg

<26i> 제 1인산칼륨 15 mg

<262> 제 2인산칼슘 55 mg

<263> 구연산칼륨 90 rag

<264> 탄산칼슘 . 100 mg

<265> 염화마그네슘 24.8 mg

<266> 상기의 비타민 및 미네랄 흔합물의 조성비는 비교적 건강 식품에 적합한 성 분을 바람직한 실시예로 흔합 조성하였지만， 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

<267>

<268> [제형예 7] 건강 음료

<269> 시링가레시놀 1000 mg

<270> 구연산 1000 mg

<271> 올리고당 100 g

<272> 타우린 1 g

<273> 정제수 잔량

<274> 통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음, 약 1시간 동안 약 85^°C에서 교반 가열한 후， 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.

<275> 【산업상 이용가능성】

본 발명에 따른 조성물은 우수한 항산화 효과 및 피부 각질 쩨거능을 가져 뛰어난 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 노화， 구체적으로 피부 노화， 더 구체적으로 자외 선에 의한 피부 노화를 억제함에 있어 우수한 효과를 가질 수 있다.

Claims

【청구의 범위】【청구항 1】 하기 화학식 1의 화합물， 그의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물 .

[화학식 1]

상기 ¾，，¾또는 R4는 독립적으로 직쇄 (unbranched) 또는 분지 (branched) 된， ^내지 C₁₈의 알킬기 (alkyl group) , 내지 C₁₈의 알콕시기 (alkoxy group) , ^내 지 C₁₈의 알케닐기 (alkenyl group) , 내지 C₁₈의 알키 닐기 (alkynyl group) 또는 C₃내 지 C₆의 사이클릭 알킬기 (cycl ic alkyl group)이고， 상기 R₅ , R6,R₇,R₈,R₉,R₁₀또는 ¾Γ8Γ 독립적으로 수소 또는 직쇄 (unbranched) 또 는 분지 (branched)된， ⁽ 내지 C₁₈의 알킬기 (alkyl group) , 내지 C₁₈의 알콕시기

(alkoxy group) , 내지 Ci₈의 알케닐기 (alkenyl group) , 내지 C₁₈의 알키 닐기 (alkynyl group) , C₃내지 C₆의 사이클릭 알킬기 (cycl ic alkyl group)이다 .

【청구항 2】

제 1항에 있어서，

상기 화합물은 시 링가레시놀^ ！ 크^^！！：！인 , 조성물 .

【청구항 3】

제 2항에 있어서， 상기 시링가레시놀은 아마씨， 황백 오가피, 참깨 및 인삼 열매 중 선택된 하나 이상의 추출물에 포함된， 조성물.

【청구항 4】

제 1항 내지 제 3항 중 어느 하나의 항에 있어서，

상기 피부개선은 피부 미백인, 조성물.

【청구항 5】

제 4항에 있어서，

상기 조성물은 피부색의 밝기 및 균일성을 높이는 조성물.

【청구항 6]

제 4항에 있어서,

상기 조성물은 피부 과색소침착을 개선하는 조성물.

【청구항 7】

제 6항에 있어서，

상기 피부 과색소침착은 기미, 주근깨， 잡티, 검버섯， 혹자， 모반 및 다크서 클 중 선택된 하나 이상을 포함하는 조성물.

【청구항 8】

제 4항에 있어서，

상기 조성물은 각질을 제거하고, 각질 턴오버 (turn over)를 촉진하는 조성 물.

【청구항 9]

제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서，

상기 피부 개선은 노화 억제인， 조성물.

【청구항 10]

제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서，

상기 피부 개선은 주름 개선 또는 억제인 조성물.

【청구항 11】 .

제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 피부 개선은 피부 재생인 조성물.

【청구항 12】

제 1항 내지 제 3항 증 어느 한 항에 있어서，

상기 피부 개선은 피부 보습인 조성물. ·

【청구항 13]

제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서，

상기 조성물은 화장료 조성물인， 조성물.

【청구항 14]

제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서，

상기 조성물은 약학 조성물인 , 조성물.

【청구항 15】

제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서，

상기 조성물은 조성물 전체 중량을 기초로 0.001 중량 % 내지 20 중량 %의 유 효성분을 포함하는 조성물.