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WO2013056684A2 - 做为dhodh抑制剂的噻唑衍生物及其应用 - Google Patents

做为dhodh抑制剂的噻唑衍生物及其应用 Download PDF

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WO2013056684A2
WO2013056684A2 PCT/CN2012/086816 CN2012086816W WO2013056684A2 WO 2013056684 A2 WO2013056684 A2 WO 2013056684A2 CN 2012086816 W CN2012086816 W CN 2012086816W WO 2013056684 A2 WO2013056684 A2 WO 2013056684A2
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group
optionally substituted
alkyl
compound
nmr
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黄瑾
李洪林
徐玉芳
朱丽丽
韩乐
许鸣豪
高瑞
刁妍妍
朱俊生
曹贤文
崔坤强
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East China University of Science and Technology
Original Assignee
East China University of Science and Technology
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Definitions

  • the invention belongs to the fields of medicinal chemistry and pharmacotherapy, and in particular to thiazole derivatives as DH0DH inhibitors and their use. Background technique
  • the inhibitor of dihydroorotate dehydrogenase mainly acts on immune system-related cells to produce related biological effects, and reduces the activity and quantity of immune-activated T-lymphocytes and B-lymphocytes by inhibiting the pyrimidine de novo synthesis pathway. And its cell cycle is blocked in the G1/S phase.
  • Dihydroorotate dehydrogenase (DH0DH) inhibitor is a target for anti-rheumatic arthritis, anti-tumor, anti-organ transplant rejection, anti-psoriatic drugs and other autoimmune diseases. DH0DH inhibitors are also used. Antibiotics inhibit H. pylori and antifungal agents. The role of these inhibitors is to inhibit pyrimidine biosynthesis rate control steps. In this step, dihydroorotate is oxidized to orotate, which is a precursor of guanosine monophosphate and pyrimidine synthesis, which is a key component of DNA and RNA.
  • the dihydroorotate dehydrogenase (DH0DH) inhibitor mainly acts on the immune system-related cells to produce related biological effects, and reduces the activity of immune-activated T-lymphocytes and B-lymphocytes by inhibiting the pyrimidine de novo synthesis pathway. Quantity, and block its cell cycle in the G1/S phase to achieve control, and even cure the disease.
  • Rheumatoid arthritis which is significantly associated with DH0DH, is an autoimmune disease and is a chronic systemic inflammatory disease that is prone to recurrent episodes. The cause of the disease is not fully understood, and there is no specific treatment to date. Because rheumatoid arthritis patients often have symptoms such as fatigue, fever, joint swelling and pain, joint dysfunction and even disability, it is also called “immortal cancer", which seriously affects the normal life of patients and even their families. At present, the treatment of rheumatoid arthritis mainly depends on the treatment of inflammation and sequelae, such as controlling inflammation of joints and other tissues, maintaining joint function and preventing degeneration and surgical repair of damaged joints.
  • DH0DH inhibitors can effectively reduce the activity and quantity of immune-activated T-lymphocytes and B-lymphocytes, and can be successfully developed as therapeutic drugs for autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis.
  • immunosuppressive drugs targeting DH0DH have been marketed, including leflunomide and terif lunomide (A771726), and brequinar has also entered phase II clinical trials.
  • all of the above drugs have side effects such as diarrhea, rash, high blood pressure and disorders of the liver enzyme system.
  • Bucura combined with cyclosporine A or cisplatin may cause mucositis and thrombocytopenia. Therefore, it is necessary to find new DH0DH inhibitors with higher efficiency, safety and good drug-forming properties.
  • the DH0DH inhibitor binds to the ubiquinone binding pocket located at the N-terminus of the DH0DH enzyme, the inhibitor will have a polar head and a hydrophobic tail, which allows them to be efficiently incorporated into the ubiquinone binding pocket.
  • the inventors have used a combination of computational drug design, medicinal chemistry, and molecular biology methods and techniques in the preliminary work to find a series of thiazole derivatives that meet the above structural requirements, and the structural skeleton is completely different from the high activity reported in the literature.
  • DH0DH inhibitor levipide, teriflamine, bupina. Some of these compounds have significant immunosuppressive activity at the cellular and animal levels, and at the same time have low toxicity, good safety and good prospects for drug discovery.
  • the inventors designed a composition having the following structural formula:
  • R 1 is selected from H, dC 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl or alkynyl, optionally substituted aryl, nitro, amino, NR 4 R 5 , halogen;
  • R 2 is selected from the group consisting of H, dC 6 alkyl, halogen-substituted dC 6 alkyl, dC 6 unsaturated alkyl, dC 3 alkylcarbonyl, optionally substituted benzoyl, carboxy, aminocarbonyl, dC 6 alkoxy Carbonyl, hydroxy, dC 6 alkoxy, optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, amino, 8 -cycloalkyl, NHR 6 ;
  • R 3 is selected from H, dC 6 alkyl, -C(0)NHR 7 , dC 6 alkoxycarbonyl, halogen substituted alkyl, C 2 -C 6 alkenyl or alkynyl, optionally substituted phenyl , dC 4 alkylcarbonyl, optionally substituted benzoyl, optionally substituted pyridylcarbonyl, dC 3 alkylcarboxy, amide, amino, d-do alkyl substituted amino, carboxy dC 3 alkyl, halogen ;
  • R 4 and R 5 are each independently selected from the group consisting of H, dC 6 alkyl, optionally substituted aryl, optionally substituted heterocyclic group, optionally substituted arylcarbonyl, optionally substituted heterocyclic carbonyl, and a substituted aryloxyalkylcarbonyl group;
  • R 6 is selected from dC 6 alkyl, optionally substituted phenyl, C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, benzoyl, or attached thereto
  • N consists of a 6-membered ring, such as a piperidine ring, or a 6-membered oxygen or nitrogen heterocycle such as a piperidine ring and a morpholine ring;
  • R 7 is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heterocyclic group.
  • the compound is selected from the group consisting of the compounds of formula II:
  • Ar is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group, an optionally substituted heterocyclic group, an optionally substituted arylcarbonyl group, an optionally substituted heterocyclic carbonyl group, and an optionally substituted aryloxyalkylcarbonyl group;
  • R 2 is selected from dC 6 alkyl, halogen-substituted dC 6 alkyl, dC 3 alkylcarbonyl, optionally substituted benzoyl, carboxy, aminocarbonyl, dC 6 alkoxycarbonyl, hydroxy, dC 6 alkoxy , optionally substituted aryl or heteroaryl, amino, C 3 -C 8 cycloalkyl, NHR 6 ;
  • R 3 is selected from the group consisting of CC 6 alkyl, dC 6 alkoxycarbonyl, optionally substituted phenyl, dC 4 alkylcarbonyl, optionally substituted benzoyl, dC 3 alkylcarboxy, amide, carboxy dC 3 alkane And optionally substituted phenylcarbamoyl;
  • R 6 is selected from dC 6 alkyl, optionally substituted phenyl, C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, benzoyl, or attached thereto
  • N constitutes a 6-membered ring, such as a piperidine ring, or a 6-membered oxygen or nitrogen heterocycle such as a piperidine ring and a morpholine ring.
  • the substituent on Ar includes d-doalkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl, dC 4 alkoxy, optionally substituted phenyl, optionally substituted phenoxy, benzyloxy
  • the base, CF 3 , and halogen, the number of substituents is 1, 2, 3, 4 or 5.
  • Ar may be a benzo fused (hetero) ring compound, and the hetero atom includes N, 0, S, Se, such as an anthracenyl group, a carbazolyl group, an indanyl group, a tetrahydronaphthyl group or the like.
  • R 2 is selected from the group consisting of dC 6 alkyl, CF 3 , phenyl, acetyl, benzoyl, carboxy, carbamoyl, dC 6 alkoxycarbonyl, amino. More preferably methyl, CF 3, phenyl.
  • R 3 is selected from the group consisting of dC 6 alkyl, phenyl, dC 3 alkylcarbonyl, optionally substituted benzoyl, carboxy, dC 6 alkoxycarbonyl, amide, optionally substituted aniline Formyl; preferably dC 3 alkylcarbonyl, dC 6 alkoxycarbonyl.
  • R 2 is selected from the group consisting of dC 6 alkyl, halogen-substituted dC 6 alkyl, optionally substituted phenyl, dC 3 alkylcarbonyl, optionally substituted benzoyl, carboxy, carbamoyl, dC 6 alkane Oxycarbonyl, hydroxy, dC 6 alkoxy, optionally substituted aryl or heteroaryl, amino, 8 -cycloalkyl, optionally substituted amino;
  • R 3 is selected from the group consisting of CC 6 alkyl, optionally substituted phenyl, dC 3 alkylcarbonyl, dC 3 alkoxycarbonyl, optionally substituted benzoyl, carboxy, amide, optionally substituted benzoyl;
  • R 8 is selected from C 5 or more alkyl or cycloalkyl, optionally substituted phenyl, 5 or 6 membered aromatic heterocyclic group, or any a substituted phenoxyalkyl group.
  • R 2 is dC 4 alkyl such as methyl, and R 3 is optionally substituted benzoyl.
  • R 2 is an optionally substituted phenyl group and R 3 is a dC 4 alkoxycarbonyl group.
  • R 2 is dC 4 alkyl such as methyl, and R 3 is selected from the group consisting of dC 4 alkylcarbonyl, dC 4 alkoxycarbonyl, and optionally substituted benzoyl.
  • R 2 is an amino group, ! ⁇ is ⁇ - ⁇ alkoxycarbonyl.
  • alkyl generally refers to saturated branched and straight-chain alkyl groups having a carbon chain length of from 1 to 10 carbon atoms, preferably from 1 to 6 carbon atoms, more preferably from one to four or from one to three.
  • Cycloalkyl means a cyclic alkyl group which usually has 3 to 8 ring carbon atoms.
  • Exemplary cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cycloheptyl, cyclohexyl and the like.
  • alkenyl means a radical having 1 to 10 carbon atoms in a straight or branched chain, wherein at least one of the two carbon atoms in the chain contains a double bond.
  • Preferred alkenyl groups are alkenyl groups having from 2 to 4 carbon atoms.
  • Typical alkenyl groups include ethenyl, 1-propenyl, 2-methyl-1-propenyl, 1-butenyl and 2-butenyl.
  • alkynyl means a straight or branched chain containing from 2 to 10 carbon atoms, wherein at least one of the two carbon atoms in the chain contains a hydrazone bond.
  • Preferred alkynyl groups are alkynyl groups having 2 to 4 carbon atoms.
  • Typical alkynyl groups include ethynyl, 1-propynyl, 1-methyl-2-propynyl, 2-propynyl, 1-butynyl and 2-butynyl.
  • aryl refers to a monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic radical containing from 6 to 14 carbon atoms, including phenyl, naphthyl, phenanthryl, anthracenyl, fluorenyl, fluoro, tetrahydronaphthalene. Base, indanyl group, and the like.
  • the aryl group may be optionally substituted by 1 to 5 (for example, 1, 2, 3, 4 or 5) substituents selected from the group consisting of halogen, dC 4 aldehyde group, linear or branched alkyl group of dC 6 , Cyano, nitro, amino, hydroxy, hydroxymethyl, halogen-substituted alkyl (eg trifluoromethyl), halogen-substituted alkoxy (eg trifluoromethoxy), carboxyl, dC 4 alkoxy
  • an aryl group may be substituted with from 1 to 3 groups selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine, dC 4 alkyl, trifluoromethyl, morpholinyl, methoxy, phenyl, methoxy substituted Phenyl, phenoxy, benzyloxy, benzyloxy substituted by halogen, ethoxy, nitro and the like.
  • heterocyclyl refers to a single or fused ring structure, which may be aromatic or non-aromatic in nature, and which preferably contains from 3 to 20 ring atoms, more preferably from 5 to 14 Ring atoms, wherein at least one and preferably up to 4 are heteroatoms selected from the group consisting of 0, S and N.
  • examples of the heterocyclic group include furyl, thienyl, pyrrolyl, pyrrolidinyl, imidazolyl, triazolyl, thiazolyl, tetrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, pyrazolyl, pyridine , pyrimidinyl, pyridyl, fluorenyl, tridecyl, quinolyl, isoquinolyl, quinoxalinyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, benzothienyl, benzofuran Base, morpholinyl, oxazolyl, dibenzothiophene and 1,2-methylenedioxyphenyl.
  • heterocyclic group may be optionally substituted with one to three substituents described herein.
  • heteroatom as used herein includes 0, S and N.
  • the hetero atom is N, the N atom may be further substituted with a group such as hydrogen or a d-do alkyl group.
  • heteroaryl or “aromatic heterocyclic” as used herein, refers to those heterocyclic groups which have aromatic character as described above, including but not limited to furyl, thienyl, pyrrolyl, pyridyl, oxazolyl. , pyridinyl, fluorenyl, pyrimidinyl and the like.
  • halogen as used herein includes fluoro, chloro, bromo and iodo.
  • optionally substituted means that the group modified thereby may be optionally substituted with from 1 to 5 (usually 1, 2 or 3) substituents selected from the group consisting of: DC 4 alkyl, carboxy, halogen, dC 4 alkoxy, cyano, nitro, amino, hydroxy, aldehyde, dC 6 acyl, hydroxymethyl, halogen substituted dC 4 alkyl (eg trifluoromethyl) , halogen-substituted dC 4 alkoxy (e.g., trifluoromethoxy), fluorenyl, and dC 4 acyl.
  • substituents selected from the group consisting of: DC 4 alkyl, carboxy, halogen, dC 4 alkoxy, cyano, nitro, amino, hydroxy, aldehyde, dC 6 acyl, hydroxymethyl, halogen substituted dC 4 alkyl (eg trifluoromethyl) , halogen-substituted
  • amide group itself or as part of another group refers to a "mercapto-CO-NH-" group.
  • exemplary amide groups include, but are not limited to, formamide groups, acetamido groups, and the like.
  • acyl group itself or as part of another group may have 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms.
  • exemplary acyl groups include, but are not limited to, formyl, acetyl, and the like.
  • the present invention is preferably a compound shown in the following Table 1, and those compounds having an inhibition ratio of 50% or more are particularly preferable.
  • the compounds of the invention do not include compounds 66-76 and 78.
  • the compounds of the invention can be prepared by the following scheme:
  • R' R 1 is as defined above, wherein R is a substituent on the corresponding group, for example, a substituent on an aryl group, or R may correspond In R 4 or (see the scheme for preparing HL-251-191, 193); the above R 2 0CHN corresponds to R 2 , and _C(0) R 3 ' corresponds to R 3 .
  • R is a substituent on the corresponding group, for example, a substituent on an aryl group, or R may correspond In R 4 or (see the scheme for preparing HL-251-191, 193); the above R 2 0CHN corresponds to R 2 , and _C(0) R 3 ' corresponds to R 3 .
  • Those skilled in the art can prepare the compounds of the present invention by using various starting compounds conventionally obtained in the art as raw materials according to actual preparation needs.
  • a second aspect of the invention comprises a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a compound of formula I, II and/or III of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier or a carrier Shape agent.
  • Examples of pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the invention include, but are not limited to, inorganic and organic acid salts such as hydrochloride, hydrobromide, sulfate, citrate, lactate, tartrate, maleate , fumarate, mandelate and oxalate; and inorganic and formed with bases such as sodium hydroxy, tris(hydroxymethyl)aminomethane (TRIS, tromethamine) and N-methylglucamine Organic base salt.
  • inorganic and organic acid salts such as hydrochloride, hydrobromide, sulfate, citrate, lactate, tartrate, maleate , fumarate, mandelate and oxalate
  • bases such as sodium hydroxy, tris(hydroxymethyl)aminomethane (TRIS, tromethamine) and N-methylglucamine Organic base salt.
  • the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is orally administered to a mammal daily, in an amount of from about 0.0025 to 50 mg / kg body weight. Preferably, it is about 0.01 to 10 mg per kilogram of oral administration.
  • a unit oral dose may include from about 0.01 to 50 mg, preferably from about 0.1 to 10 mg of the compound of the present invention.
  • the unit dose may be administered one or more times per day in one or more tablets, each tablet containing from about 0.1 to 50 mg, conveniently from about 0.25 to 10 mg of the compound of the present invention or a solvate thereof.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated into a form suitable for various administration routes, including but not limited to being formulated for parenteral, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, transdermal, oral, intrathecal, cranial A form of administration, intranasal or topical, for the treatment of tumors and other diseases.
  • the amount administered is an amount effective to ameliorate or eliminate one or more conditions.
  • an effective amount is an amount sufficient to ameliorate or in some way alleviate the symptoms associated with the disease.
  • Such doses can be administered as a single dose or can be administered according to an effective therapeutic regimen.
  • the amount administered may cure the disease, but administration is usually to improve the symptoms of the disease. Repeated administration is generally required to achieve the desired improvement in symptoms.
  • the dosage of the drug will be determined by the age of the patient, the health and weight, the type of concurrent treatment, the frequency of treatment, and the desired therapeutic benefit.
  • the pharmaceutical preparation of the present invention can be administered to any mammal as long as they can obtain the therapeutic effect of the compound of the present invention.
  • the most important of these mammals is humans.
  • the compound of the present invention or a pharmaceutical composition thereof can be used for the treatment or prevention of various diseases mediated by DHODH, including cancer, organ transplant rejection, and autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, psoriasis and the like.
  • diseases mediated by DHODH including cancer, organ transplant rejection, and autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, psoriasis and the like.
  • cancers include, but are not limited to, breast cancer, prostate cancer, head and neck squamous cell carcinoma, and multiple myeloma.
  • the pharmaceutical preparations of the invention can be made in a known manner. For example, it is manufactured by conventional mixing, granulating, tableting, dissolving, or freeze drying processes.
  • the mixture can be selectively ground by combining the solid adjuvant with the active compound. If necessary or necessary, after adding appropriate amounts of auxiliaries, the granule mixture is processed to obtain a tablet or lozenge core.
  • Suitable excipients are, in particular, fillers, such as sugars such as lactose or sucrose, mannitol or sorbitol; cellulose preparations or calcium phosphates, such as tricalcium phosphate or calcium hydrogen phosphate; and binders, such as starch pastes, including corn starch. , wheat starch, rice starch, potato starch, gelatin, tragacanth, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, or polyvinylpyrrolidone.
  • fillers such as sugars such as lactose or sucrose, mannitol or sorbitol
  • cellulose preparations or calcium phosphates such as tricalcium phosphate or calcium hydrogen phosphate
  • binders such as starch pastes, including corn starch. , wheat starch, rice starch, potato starch, gelatin, tragacanth, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, or polyvinylpyr
  • disintegrants such as the starch mentioned above, as well as carboxymethyl starch, crosslinked polyvinylpyrrolidone, agar, or alginic acid or a salt thereof, such as sodium alginate.
  • Adjuvants especially flow regulators and Lubricants, for example, silica, talc, stearates, such as calcium magnesium stearate, stearic acid or polyethylene glycol.
  • the tablet core can be provided with a suitable coating that resists gastric juice.
  • a concentrated sugar solution can be applied. This solution may contain gum arabic, talc, polyvinylpyrrolidone, polyethylene glycol and/or titanium dioxide, a lacquer solution and a suitable organic solvent or solvent mixture.
  • a suitable cellulose solution such as cellulose acetate phthalic acid or hydroxypropyl methylcellulose phthalic acid can be used.
  • a dye or pigment may be added to the coating of the tablet or tablet core. For example, a combination for identifying or for characterizing the dose of an active ingredient.
  • a third aspect of the invention provides a method of treating a DHODH mediated disease, the method comprising administering to a subject in need thereof a compound or pharmaceutical composition of the invention.
  • Methods of administration include, but are not limited to, various methods of administration well known in the art, which can be determined based on the actual circumstances of the patient. These methods include, but are not limited to, parenteral, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, transdermal, buccal, intrathecal, intracranial, nasal or topical routes of administration.
  • the invention also encompasses the use of a compound of the invention in the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of a DHDH mediated disease.
  • the invention also encompasses the use of a compound of the invention in the manufacture of a medicament for inhibiting DHODH activity.
  • detailed description The invention will be further illustrated in the following examples. These examples are for illustrative purposes only, and are not intended to limit the invention in any way. Synthetic part
  • the aromatic amine (8 mmol, 1 eq) was dissolved in 24 mL of acetone, and the weighed triethylenediamine (24 mmol, 3 eq) was added under stirring. Then 20 mL of carbon disulfide was added dropwise, and a large amount of solid appeared. After stirring for 24 h, the reaction mixture was filtered, and the filter cake was washed with petroleum ether. After drying, the filter cake was dissolved in 50 mL of chloroform, and BTC (2.7 mmol, 0.33 eq) was dissolved in 30 mL of chloroform, and added dropwise over 1 h. The reaction solution was stirred at room temperature overnight. After the reaction was completed, the reaction mixture was filtered under suction, and the filter cake was washed with dichloromethane, and the obtained filtrate was directly dried on silica gel and dried (PE eluted).
  • CDCI3 ⁇ 170.04, 165.38, 161.71, 138.05, 137.17, 132.74, 130.59, 120.84, 116.74, 109.63, 60.70, 36.39, 29.27, 20.02, 19.92, 19.20, 14.41.
  • HRMS (ESI) calcd for: C 18 H 24 N 2 0 2 S [M+H] 4 333.1637, found 333.1633.
  • TM HL-251-147, 149, 151, 179, 183, 189
  • DHODH dihydroorotate dehydrogenase activity Material
  • the full-length plasmid of human DHODH gene is provided by Prof. Jon Clardy (Harvard Medical School) (J. Bio. Chem. 2008) , 283 (50), 35078-35085) or can be purchased from Ao Rui Dongyuan Biotechnology Co., Ltd.
  • the pET-19b vector, E. coli DH5a and E. coli BL21 (DE3) strains were purchased from Novagen. Restriction enzymes Nde I and Bam HI were purchased from NEB Corporation.
  • the primers were synthesized by Shanghai Yingjun Biotechnology Co., Ltd. All other reagents were purchased from sigma.
  • Primers were designed based on the human DHODH gene sequence in GenBank.
  • the forward primer was Fw: 5 ' -TGAACTACATATGGCCACGGGAGATGAG-3 '; reverse primer Rv: 5 ' - ATATGGATCCTCACCTCCGATGATCTGC -3 '.
  • the plasmid containing the DHODH gene was used as a template for amplification.
  • the amplification conditions were: pre-denaturation at 95 ° C for 2 min; denaturation at 94 ° C for 30 s; annealing at 60 ° C for 45 s; extension at 72 ° C for 1 min for 50 s; 29 cycles, fully extended at 72 ° C 10min. After the reaction, 1% agarose gel electrophoresis was performed at 2000 bp.
  • the DNA standard is a relative molecular weight reference, the relative molecular weight of the amplified product is verified, the gel is cut, and the amplified product is recovered by a kit.
  • the PCR product and the vector pET-19b were digested with Nde I and Bam HI respectively, and the digested target gene and vector fragment were recovered and ligated with T4 DNA ligase at 16 ° C overnight to construct a recombinant expression vector pET-19b-DHODH. .
  • the recombinant plasmid was transformed into E. coli DH5a competent form, inoculated on LB plate containing Penicillium ampicillin, and positive colonies were randomly picked and inoculated into 2 mL of a small centrifuge tube containing Penicillium ampicillin. After the expansion, the plasmid was extracted and the plasmid was extracted and identified by enzyme digestion and PCR.
  • the DNA sequence was determined by Shanghai Yingjun Biotechnology Co., Ltd.
  • the correctly sequenced recombinant plasmid pET-19b-DHODH was transformed into E. coli BL21 DE3) competent form, plated on LB plate containing ampicillin, and picked up for inoculation into LB medium containing 100 ⁇ M ampicillin. Incubate overnight at ° C, 230 rpm shaker. Inoculation was carried out in a ratio of 1:200 in 500 mL of LB medium containing 100 ⁇ M ampicillin at 37 ° C and expanded at 230 rpm. When the OD value of the cells reached 0.8-1, IPTG was added to the medium to make the final concentration of IPTG 0.5 mM. Expression was induced overnight at 25 °C. The induced cells were collected by centrifugation at 4 ° C and 4000 rpm, washed with deionized water, and centrifuged again to collect the bacterial pellet, which was stored at -80 ° C.
  • the cells When the protein is purified, the cells are resuspended in the lysate.
  • the lysate contained 50 mM HEPES (pH 8.0), 0.15 M NaCl, 10 mM imidazole, 10% glycerol, 0.1% Triton X-100, added a little soy protease inhibitor, and resuspended and mixed to supersonically disrupt the cells.
  • the crushed liquid was centrifuged at 4 ° C, 1000 rpm for 30 min. The supernatant and precipitate were taken for protein electrophoresis to determine the presence of the protein.
  • the supernatant was combined in a prepared Ni-NTA column and collected through a solution.
  • the resin was washed 3-5 times with a lysate containing 20 mM imidazole, and finally the protein was eluted with a lysate containing 300 mM imidazole, and the eluted protein solution was collected. Take the above 10 protein samples for SDS-PAGE electrophoresis to detect the target protein content.
  • the eluted protein solution was dialyzed against the imidazole in a dialyzate containing 50 mM HEPES (pH 8.0), 0.15 M NaCl, 10% glycerol, 0.1% Triton X-100.
  • DHODH activity was determined by measuring the decrease of DCIP.
  • DHODH catalyzes the substrate DHO, and transfers two H to the auxiliary group FMN of DHODH, which is then transferred to coenzyme Q0, and finally passed to coenzyme Q0.
  • DCIP the DCIP is restored.
  • Enzyme activity was determined by measuring the amount of DCIP reduced per minute. The assay was read by a BioTek microplate reader using a 96-well plate. Each well contained 199 ⁇ L of test fluid (50 mM HEPES (pH 8.0), 0.15 M KC1, 100 ⁇ coenzyme Q0, 100 ⁇ DCIP).

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Abstract

发明涉及做为通式I所示的DHODH抑制剂的噻唑衍生物及其应用。本发明的化合物能用于治疗或预防DHODH介导的各种疾病，包括但不限于类风湿关节炎、抗肿瘤、抗器官移植排异、抗牛皮癣等多种自身免疫性疾病。

Description

做为 DHODH抑制剂的噻唑衍生物及其应用 技术领域
本发明属于药物化学和药物治疗学领域， 具体涉及做为 DH0DH抑制剂的噻唑衍生物 及其应用。 背景技术
双氢乳清酸脱氢酶（DH0DH)抑制剂主要作用于免疫系统相关细胞产生相关生物学效 应，通过抑制嘧啶从头合成途径减少免疫激活的 T-淋巴细胞和 B-淋巴细胞的活性和数量， 并且将其细胞周期阻滞在 G1/S期。
双氢乳清酸脱氢酶 （DH0DH) 抑制剂是抗类风湿关节炎、 抗肿瘤、 抗器官移植排异、 抗牛皮癣等多种自身免疫性疾病药物的靶点， DH0DH抑制剂还被用来作为抗生素抑制幽门 螺杆菌和抗真菌剂。这些抑制剂的作用是抑制嘧啶生物合成速度控制步骤。在此步反应中， 双氢乳清酸被氧化为乳清酸，乳清酸是鸟苷单磷酸和嘧啶合成的前体，嘧啶又是 DNA， RNA 的关键组成部分。 因此， 双氢乳清酸脱氢酶 （DH0DH) 抑制剂主要作用于免疫系统相关细 胞产生相关生物学效应， 通过抑制嘧啶从头合成途径减少免疫激活的 T-淋巴细胞和 B-淋 巴细胞的活性和数量， 并且将其细胞周期阻滞在 G1/S期以达到控制， 甚至治愈疾病的目 的。
与 DH0DH显著相关的类风湿性关节炎 （rheumatoid arthritis, RA) 属于自身免疫 性疾病， 为易反复发作的慢性全身性炎症疾病， 目前其致病原因尚未完全清楚， 至今尚无 特效疗法。 由于类风湿性关节炎患者常出现乏力、 发烧、 关节肿痛、 关节功能障碍乃至残 废等症状， 又被称为 "不死的癌症"，严重影响着患者个人甚至其家庭的正常生活。 目前 对类风湿关节炎的治疗主要停留于对炎症及后遗症的治疗， 如控制关节及其它组织的炎 症， 保持关节功能和防止变性及手术修复受损关节。
DH0DH抑制剂可有效减少免疫激活的 T-淋巴细胞和 B-淋巴细胞的活性和数量， 可被 成功开发为类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的治疗药物。目前靶向 DH0DH的免疫抑制药 物已上市药物包括来氟米特 ( leflunomide ) 及特立氟胺 ( terif lunomide, A771726 ) ， 而布奎那（brequinar)也已进入 I I期临床试验阶段。 但上述药物均存腹泻、 皮疹、 高血 压以及肝脏酶系统的紊乱等副作用，布奎那与环孢霉素 A或顺铂共同服用可能会造成黏膜 炎和血小板减少症。 因此， 寻找新的更加高效、安全性及成药性好的的 DH0DH抑制剂具有 重要的学术
)
Figure imgf000003_0001
发明内容
根据 DH0DH抑制剂与位于 DH0DH酶 N末端的泛醌结合口袋结合的原理， 抑制剂都会 具有一个极性的头部和一个疏水的尾部，这种结构使它们可以有效地结合在泛醌结合口袋 中。据此， 本发明人在前期工作中综合运用计算药物设计、药物化学和分子生物学方法和 技术，发现了符合上述结构要求的一系列噻唑衍生物，结构骨架完全不同于文献报道过的 高活性 DH0DH抑制剂（来氟米特、 特立氟胺、 布奎那）。其中的一些化合物在细胞及动物 水平具有显著的免疫抑制活性， 且同时毒性很低， 安全性好， 具有良好的成药前景。针该 系列先导化合物， 本发明人设计合成 物， 结构通式如下：
Figure imgf000003_0002
式中，
R1选自 H， d-C6烷基， C2-C6链烯基或炔基，任选取代的芳基，硝基，氨基， NR4R5， 卤素;
R2选自 H， d-C6烷基， 卤素取代的 d-C6烷基， d-C6不饱和烷基， d-C3烷基羰基， 任选取代的苯甲酰基， 羧基， 氨基羰基， d-C6烷氧基羰基， 羟基， d-C6烷氧基， 任选取 代的芳基， 任选取代的杂芳基， 氨基， 8环烷基， NHR6;
R3选自 H， d-C6烷基， -C(0)NHR7， d-C6烷氧基羰基， 卤素取代的烷基， C2-C6 链烯基或炔基， 任选取代的苯基， d-C4烷基羰基， 任选取代的苯甲酰基， 任选取代的吡 啶基羰基， d-C3烷基羧基， 酰胺基， 氨基， d-do烷基取代的氨基， 羧基 d-C3烷基， 卤素；
R4和 R5各自独立选自 H， d-C6烷基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂环基， 任选 取代的芳基羰基， 任选取代的杂环基羰基， 和任选取代的芳氧基烷基羰基；
R6选自 d-C6烷基， 任选取代的苯基， C3-C8环烷基羰基， 苯甲酰基， 或与所连接的
N组成 6员环， 如哌啶环， 或 6员含氧或氮杂环， 如哌嗉环和吗啉环； 和
R7选自任选取代的芳基和任选取代的杂环基。 在优选实施例中， 所述化合物选自下式 II的化合物:
Figure imgf000004_0001
Ar选自任选取代的芳基， 任选取代的杂环基， 任选取代的芳基羰基， 任选取代的杂 环基羰基， 和任选取代的芳氧基烷基羰基；
R2选自 d-C6烷基， 卤素取代的 d-C6烷基， d-C3烷基羰基， 任选取代的苯甲酰基， 羧基， 氨基羰基， d-C6烷氧基羰基， 羟基， d-C6烷氧基， 任选取代的芳基或杂芳基， 氨 基， C3-C8环烷基， NHR6;
R3选自 C C6烷基， d-C6烷氧基羰基， 任选取代的苯基， d-C4烷基羰基， 任选取 代的苯甲酰基， d-C3烷基羧基， 酰胺基， 羧基 d-C3烷基， 任选取代的苯胺甲酰基； R6选自 d-C6烷基， 任选取代的苯基， C3-C8环烷基羰基， 苯甲酰基， 或与所连接的
N组成 6员环， 如哌啶环， 或 6员含氧或氮杂环， 如哌嗉环和吗啉环。
在优选实施例中， Ar上的取代基包括 d-do烷基， C3-C8环烷基， d-C4烷氧基， 任 选取代的苯基， 任选取代的苯氧基， 苄氧基， CF3， 和卤素， 取代基的数量为 1、 2、 3、 4 或 5个。 Ar可以是苯并稠 （杂） 环化合物， 杂原子包括 N， 0， S， Se， 例如蒽基、 咔唑 基、 二氢化茚基、 四氢化萘基等。
在更优选实施例中， R2选自 d-C6烷基， CF3， 苯基， 乙酰基， 苯甲酰基， 羧基， 氨 基甲酰基， d-C6烷氧基羰基， 氨基。 更优选为甲基， CF3， 苯基。
在更优选实施例中， R3选自 d-C6烷基， 苯基， d-C3烷基羰基， 任选取代的苯甲酰 基， 羧基， d-C6烷氧基羰基， 酰胺基， 任选取代的苯胺甲酰基； 优选 d-C3烷基羰基， d-C6烷氧基羰基。
在优选实施例中， 所述化合物
Figure imgf000004_0002
式中， R2选自 d-C6烷基， 卤素取代的 d-C6烷基， 任选取代的苯基， d-C3烷基羰 基， 任选取代的苯甲酰基， 羧基， 氨基甲酰基， d-C6烷氧基羰基， 羟基， d-C6烷氧基， 任选取代的芳基或杂芳基， 氨基， 8环烷基， 任选取代的氨基；
R3选自 C C6烷基， 任选取代的苯基， d-C3烷基羰基， d-C3烷氧基羰基， 任选取 代的苯甲酰基， 羧基， 酰胺基， 任选取代的苯胺甲酰基；
R8选自 C5以上的烷基或环烷基， 任选取代的苯基， 5或 6员芳香杂环基， 或任选取 代的苯氧基烷基。
在某些式 I、 Π和 III的实施例中， R2为 d-C4烷基如甲基， R3为任选取代的苯胺甲 酰基。 在其它实施例中， R2为任选取代的苯基， R3为 d-C4烷氧基羰基。 在其它实施例 中， R2为 d-C4烷基如甲基， R3选自 d-C4烷基羰基、 d-C4烷氧基羰基和任选取代的苯 甲酰基。 在其它实施例中， R2是氨基， ！^是^-^烷氧基羰基。
本文中， "烷基 "通常指碳链长度为 1一 10个碳原子的饱和的支链和直链烷基， 优选 长 1一 6个碳原子、 更优选长 1一 4个或 1一 3个碳原子的烷基。 "环烷基"指环状烷基， 其成 环碳原子数通常为 3— 8个。 示例性的环烷基包括环丙基、 环丁基、 环戊基、 环庚基和环己 基等。
本文中， "链烯基"指直链或支链含有 2-10个碳原子、 其中至少是链中的两个碳原 子之间含有一个双键的基团。优选的烯基是含有 2— 4个碳原子的烯基。典型的链烯基包括 乙烯基、 1-丙烯基、 2-甲基 -1-丙烯基、 1-丁烯基 和 2-丁烯基。
本文所用 "炔基"是指直链或支链含有 2-10个碳原子， 其中至少是链中的两个碳原 子之间含有一个叁键的基团。优选的炔基是含有 2— 4个碳原子的炔基。典型的炔基包括乙 炔基、 1-丙炔基、 1-甲基 -2-丙炔基、 2-丙炔基、 1-丁炔基和 2-丁炔基。
本文中， "芳基"指含有 6到 14个碳原子的单环、 双环或三环芳族基团， 包括苯基、 萘基、菲基、蒽基、茚基、弗基、 四氢化萘基、二氢化茚基等。芳基可任选地被 1 _5个（例 如， 1、 2、 3、 4或 5个） 选自以下的取代基取代： 卤素、 d-C4醛基、 d-C6的直链或支链 烷基、 氰基、 硝基、 氨基、 羟基、 羟甲基、 卤素取代的烷基（例如三氟甲基） 、 卤素取代 的烷氧基 （例如三氟甲氧基） 、 羧基、 d-C4的烷氧基、 巯基、 d-do硫代烷基和 d-C4的 酰基、 吗啉基、 任选取代的芳基（例如任选取代的苯基） 、 任选取代的芳氧基（例如任选 取代的苯氧基）和任选取代的苄氧基。例如，芳基可以被 1 -3个选自以下的基团取代：氟、 氯、 溴、 d-C4烷基、 三氟甲基、 吗啉基、 甲氧基、 苯基、 甲氧基取代的苯基、 苯氧基、 苄氧基、 被卤素取代的苄氧基、 乙氧基和硝基等。
本文所使用的术语 "杂环基"指单一或稠合的环结构， 在性质上可以是芳族或非芳 族的， 并且其优选含有 3-20个成环原子， 更优选含有 5-14个环原子， 其中至少 1个并且 优选最多可至 4个是选自 0、 S和 N的杂原子。本文中， 杂环基的例子包括呋喃基、 噻吩 基、 吡咯基、 吡咯烷基、 咪唑基、 三唑基、 噻唑基、 四唑基、 噁唑基、 异噁唑基、 吡唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 吡嗉基、 哒嗉基、 三嗉基、 喹啉基、 异喹啉基、 喹喔啉基、 苯并噻唑基、 苯并噁唑基、 苯并噻吩基、 苯并呋喃基、 吗啉基、 咔唑基、 二苯并噻吩和 1,2-亚甲基二氧 苯基。 本文中， 杂环基可任选地被 1一 3个本文所述的取代基取代。 本文所使用的术语 "杂原子 "包括 0、 S和N。 当杂原子是 N时， 此 N原子可以进 一步由例如氢或 d-do烷基的基团所取代。
本文所使用的术语 "杂芳基"或 "芳香杂环基"指如上所述具有芳族特性的那些杂 环基， 包括但不限于呋喃基、 噻吩基、 吡咯基、 吡啶基、 噁唑基、 吡嗉基、 哒嗉基、 嘧啶 基等。
本文所使用的术语 "卤素"包括氟、 氯、 溴和碘。
除非另有说明， 本文所使用的术语 "任选取代的"指其所修饰的基团可任选地被 1 一 5个（通常为 1、 2或 3个）选自以下的取代基取代： d-C4 烷基、羧基、 卤素、 d-C4烷 氧基、 氰基、 硝基、氨基、 羟基、 醛基、 d-C6酰基、 羟甲基、 卤素取代的 d-C4 烷基（例 如三氟甲基） 、 卤素取代的 d-C4 烷氧基 （例如三氟甲氧基） 、 巯基和 d-C4 酰基。
本文中， 酰胺基自身或作为其它基团的一部分， 指" 焼基 -CO-NH-"基团。 示例 性的酰胺基包括但不限于甲酰胺基、 乙酰胺基等。
本文中， 酰基自身或作为其它基团的一部分， 可含有 1一 6个碳原子， 优选 1一 3个碳 原子。 示例性的酰基包括但不限于甲酰基、 乙酰基等。
本发明优选下文表 1中所示的化合物， 尤其优选抑制率在 50 %以上的那些化合物。在 某些实施例中， 本发明化合物不包括化合物 66-76和 78。
本发明的化合物可采用以下流程制备获得：
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
化合物 19-26,28-30,33,35-43,45 流程 3
Figure imgf000007_0002
化合物 47-48,50-52,55-59,61 -62
Figure imgf000007_0003
Figure imgf000007_0004
HL-251-133,135,137,139,143
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000008_0002
TM: HL-251-191 , 193 上述制备流程中， R' R1的定义如上文所述， 其中， R为相应基团上的取代基， 例如芳 基上的取代基， 或者 R也可对应于 R4或 (见制备 HL-251-191, 193的流程） ； 上述 R20CHN对 应于 R2， _C (0) R3'对应于 R3。 本领域技术人员可根据实际制备需要， 采用本领域常规获得 的各种起始化合物为原料， 制备本发明的化合物。
本发明第二方面包括一种药物组合物， 该组合物含有治疗有效量的本发明式 I、 I I 和 /或 I I I的化合物或其药学上可接受的盐， 以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明化合物的药学上可接受的盐的例子包括但不限于无机和有机酸盐， 例如盐酸 盐、 氢溴酸盐、 硫酸盐、 柠檬酸盐、 乳酸盐、 酒石酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 扁桃酸盐 和草酸盐； 以及与碱例如钠羟基、 三 （羟基甲基） 胺基甲烷 （TRIS,胺丁三醇） 和 N-甲基 葡糖胺形成的无机和有机碱盐。
虽然每个人的需求各不相同， 本领域技术人员可确定本发明药物组合物中每种活性 成分的最佳剂量。一般情况下， 本发明的化合物或其药学上可接受的盐， 对哺乳动物每天 口服给药， 药量按照约 0. 0025到 50毫克 /公斤体重。 但最好是每公斤口服给药约 0. 01到 10 毫克。 例如， 单位口服剂量可以包括约 0. 01到 50毫克， 最好是约 0. 1到 10毫克的本发明化 合物。 单位剂量可给予一次或多次， 每天为一片或多片， 每片含有约 0. 1到 50毫克， 合宜 地约 0. 25到 10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。
本发明的药物组合物可被配制成适合各种给药途径的制剂形式， 包括但不限于被配 制成用于肠外， 皮下， 静脉， 肌肉， 腹腔内， 透皮， 口腔， 鞘内， 颅内， 鼻腔或外用途径 给药的形式，用于治疗肿瘤和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一个或多个病症的药 量。对于特定疾病的治疗，有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。 这样的药量可作为单一剂量施用，或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾 病， 但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。药 的剂量将根据病人的年龄， 健康与体重， 并行治疗的种类， 治疗的频率， 以及所需治疗效 益来决定。
本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物， 只要他们能获得本发明化合物的治疗效 果。 在这些哺乳动物中最为重要的是人类。
本发明的化合物或其药物组合物可用于治疗或预防 DH0DH介导的各种疾病， 包括癌 症、 器官移植排异、 和自身免疫性疾病， 例如类风湿关节炎、 牛皮癣等。 所述癌症包括但 不限于乳腺癌， 前列腺癌， 头颈部鳞状细胞癌和多发性骨髓癌。
本发明的药物制剂可用已知的方式制造。 例如， 由传统的混合， 制粒， 制锭， 溶解， 或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时， 可结合固体辅料和活性化合物， 选择性研磨混合 物。 如果需要或必要时加入适量助剂后， 加工颗粒混合物， 获得片剂或锭剂芯。
合适的辅料特别是填料， 例如糖类如乳糖或蔗糖， 甘露醇或山梨醇;纤维素制剂或钙 磷酸盐，例如磷酸三钙或磷酸氢钙； 以及粘结剂，例如淀粉糊，包括玉米淀粉， 小麦淀粉， 大米淀粉， 马铃薯淀粉， 明胶， 黄芪胶， 甲基纤维素， 羟丙基甲基纤维素， 羧甲基纤维素 钠， 或聚乙烯吡咯烷酮。 如果需要， 可增加崩解剂， 比如上面提到的淀粉， 以及羧甲基淀 粉， 交联聚乙烯吡咯烷酮， 琼脂， 或褐藻酸或其盐， 如海藻酸钠. 辅助剂特别是流动调节 剂和润滑剂， 例如， 硅石， 滑石， 硬脂酸盐类， 如镁硬脂酸钙， 硬脂酸或聚乙二醇。 如果 需要， 可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。 为此， 可以应用浓缩糖类溶液。这 个溶液可以含有阿拉伯树胶， 滑石， 聚乙烯吡咯烷酮， 聚乙二醇和 /或二氧化钛， 漆溶液 和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣， 可使用适当的纤维素溶液， 例 如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加 入染料或色素。 例如， 用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。
因此， 本发明第三方面提供一种治疗 DH0DH介导的疾病的方法， 该方法包括给予需要 的对象以本发明的化合物或药物组合物。
给药方法包括但不限于本领域周知的各种给药方法， 可根据患者的实际情况加以确 定。这些方法包括但不限于肠外， 皮下， 静脉， 肌肉， 腹腔内， 透皮， 口腔， 鞘内， 颅内， 鼻腔或外用途径给药。
本发明也包括本发明化合物在制备治疗或预防 DH0DH介导的疾病用的药物中的用途。 本发明还包括本发明化合物在制备抑制 DH0DH活性用的药物中的用途。 具体实施方式 在以下的实施例中将进一步举例说明本发明。 这些实施例仅用于说明本发明， 但不 以任何方式限制本发明。 合成部分
实施例 1: 化合物 1-18的合成通法：
Figure imgf000010_0001
将氯代乙酰乙酸乙酯 （9.52 g， 57.84 mmol) 溶解在 100 mL乙醇中， 搅拌条件下加 入硫代乙酰胺 （4.8 g， 63.9 mmol) ， 升温至回流温度， 搅拌回流 2 h， 待反应结束， 将反 应液减压除溶剂,得桔粉色固体 9.80 g， 收率 91.1 %， 直接用于下一步反应。
称取 LiOH.H20 ( 1.25 g, 29.7 mmol)溶解在 50 mL水中， 搅拌条件下加上一步反应 合成的酯 （2.5g， 13.5 mmol) ， 升温至 90 °C， 随着反应进行， 固体逐渐溶解， 1 h后停 止反应， 用稀盐酸调节反应液 pH至中性偏酸性， 有大量固体析出， 抽滤， 滤饼用水洗后， 干燥， 得淡黄色固体 2.05 g， 收率 96.6 %。
Figure imgf000010_0002
化合物 1-18
称取噻唑甲酸 （1.1 eq) 和 HATU ( 1.2eq) 溶解于 7 mL DMF中， 搅拌均匀后， 滴 加 8滴 DIPEA, 搅拌 5 min后， 再加入芳胺类化合物（leq)， 室温条件下搅拌过夜， TLC 跟踪反应。
后处理方法一： 于反应液中滴加饱和氯化铵溶液， 溶液逐渐变混浊出现大量固体， 滴加饱和氯化铵溶液至不再出现固体， 抽滤反应液， 滤饼先用饱和氯化铵水溶液洗， 再用 饱和碳酸氢钠水溶液洗， 干燥滤饼， 即得目标化合物， 用乙酸乙酯 /饱和氯化铵对其进行 萃取，收集得到的有机相用无水硫酸钠干燥后减压除溶剂，得到的固体再进一步硅胶柱层 析纯化 （PE:EA=5:1 ) 。
目标化合物谱图数据
N-(4-氯苯基 )-2， 4-二甲基噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 1 )
Figure imgf000010_0003
JH NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 10.24 (s， IH) ， 7.70 (d， J= 8.8 Hz ， 2H)， 7.40 (d， J= 8.8 Hz ， 2H)， 2.66 (s， 3H)， 2.54 (s， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for C12H11CI 2OS (M+H) 267.0359, found 267.0355。
N-[ 4-二甲基 -噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 2)
Figure imgf000011_0001
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.69 (d， J= 8.4 Hz ， 2H) ， 7.62 (d， J= 8.8 Hz ， 2H)， 7.51 (s， IH)， 2.73 (s， 3H)， 2.72 (s， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for : C13H13FN2OS (M+H) 265.0811 , found 265.0805。
N-( 甲基噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 3)
Figure imgf000011_0002
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.46 (dd， J 1= 2.0 Hz ， J2= 11.2 Hz ， IH)， 7.41 (s， IH)， 7.15 (t， J= 8.0 Hz ， IH)， 7.10 (dd， J 1= 2.0 Hz ， J2= 8.4 Hz ， IH) ， 2.72 (s， 6H) ， 2.26 (d， J= 1.6 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C13H13FN2OS (M+H) 265.0811 , found 265.0805。
N-(4-溴 噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 4)
Figure imgf000011_0003
O NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.80 (d， J = 9.2 Hz ， IH) ， 7.37-7.35 (m， 2H)， 7.21 (s， IH)， 2.73 (s， 3H)， 2.71 (s， 3H)， 2.28 (s， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for： C13H13BrN2OS (M+H) 325.0010, found 325.0009。
N-(4-溴 -3- (三氟甲基)苯基) -2,4-二甲基噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 7)
Figure imgf000012_0001
JH NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.76 (d， J = 4.4 Hz ， 1H) ， 8.47 (d， J= 8.4 Hz ， 1H) ， 7.50-7.47 (m， 1H) ， 2.82 (s， 3H) ， 2.80 (s， 3H) 。
HRMS(ESI) calcd for： C13H10BrF3N2OS (M-H) 376.9571 , found 376.9572。
N-(3,5 噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 8)
Figure imgf000012_0002
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.77 (dd， J 1= 1.2 Hz ， J 2= 4.4 Hz ， 1H) ， 8.48 (dd， Ji= 1.2 Hz ， J2= 8 Hz ， 1H) ， 7.51-7.48 (m， 1H) ， 2.83 (s， 3H) ， 2.81 (s， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C12H10Ci2N2OS (M-H) 298.9813， found 298.9806。
2,4-二甲基 -N-(4-吗啉苯基)噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 9)
Figure imgf000012_0003
O NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 9.86 (s， 1H) ， 7.50 (d， J= 8.4 Hz ， 2H) ， 6.92 (d， J= 8.8 Hz ， 2H) ， 3.73 (t， J = 4.4 Hz ， 4H) ， 3.06 (t， J= 4.4 Hz ， 4H)， 2.65 (s， 3H)， 2.52 (s， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for : C16H19N302S (M+H) 318.1276， found 318.1276ο
2,4- 5-甲酰胺 （化合物 11 )
Figure imgf000012_0004
H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.57 (d， J= 7.6 Hz ， 2H) ， 7.43 1H) ， 7.39 (t， J =7.6 Hz ， 2H) ， 7.18 (t， J = 7.2 Hz ， 1H) ， 2.75 (s， 3H) ， 2.74 (s， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for： C12H12N2OS (M+H) 233.0749, found 233.0745。
N- 唑 -5-甲酰胺 （化合物 13)
Figure imgf000013_0001
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.81 (s， 1H) ， 7.55 (d， J=8.8Hz ， 2H)， 7.52 (s， 1H)， 7.36 (d， J= 8.8 Hz ， 2H)， 2.83 (s， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for : C11H9CI 2OS (M+H) 253.0202, found 253.0206。
4 -5-甲酰胺 （化合物 17)
Figure imgf000013_0002
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.77 (s， 1H) ， 7.63 (s， 1H) ， 7.58
(d， J=7.6Hz ， 2H) ， 7.38 (t， J= 8.0 Hz ， 2H) ， 7.19 (t， J= 8.4 Hz ， 1H) ， 2.80 (s， 3H) 。 HRMS(ESI)calcdfor : CuHujNsOSiM-H) 217.0436， found 217.0435。 采用上述类似方法制备得到以下化合物 5、 6、 10、 12、 14、 15、 16和 18。
N-(9- 基噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 5)
Figure imgf000013_0003
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.36 (s， 1H) ， 8.10 (d， J=7.6Hz ， 1H) ， 7.57-7.55 (m， 2H) ， 7.52-7.49 (m， 1H) ， 7.44-7.39 (m， 2H) ， 7.25 (t， J =12 Hz ， 1H) ， 4.41-4.36 (m， 2H) ， 2.78 (s， 3H) ， 2.74 (s， 3H) ， 1.45 (t， J=7.2Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C20H19N3OS (M+H) 350.1327， found 350.1332。
N- (蒽 -2-基) -2,4-二甲基噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 6)
Figure imgf000014_0001
1H NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm )： 8.52 (s， 2H)， 8.48 (s， 1H)， 8.08-8.04 (m， 3H) ， 7.70 (dd， J尸 1.6 Hz ， J2= 9.2 Hz ， 1H) ， 7.50-7.47 (m， 2H) ， 2.68 (s， 3H)， 2.59 (s， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for： C20H16N2OS (M-H) 331.0905, found 331
2,4- -甲酰胺 （化合物 10)
O NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 10.28 (s， 1H) ， 8.33 (d， J= 2.4 Hz ， 1H) ， 7.90-7.84 (m， 3H) ， 7.72 (dd，
Figure imgf000014_0003
， J2= 10.0 Hz ， 1H) ， 7.49-7.42 (m， 2H)， 2.68 (s， 3H)， 2.59 (s， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for : C16H14N2OS (M+H) 283.0905， found 283.0900。
N- (二苯 基噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 12)
Figure imgf000014_0004
HRMS(ESI) calcd for： C18H14N2OS2 (M+H) 339.0626, found
N-(9-乙 噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 14)
Figure imgf000014_0005
O NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 10.25 (s， 1H) ， 9.14 (s， 1H) ， 8.45 (s， 1H) ， 8.10 (d， J= 8.0 Hz ， 1H) ， 7.68-7.66 (m， 1H) ， 7.61 (s， 1H) ， 7.61-7.59 (m， 1H) ， 7.46 (t， J= 7.6 Hz ， 1H) ， 7.19 (t， J= 7.6 Hz ， 1H) ， 4.47-4.42 (m， 2H)， 2.66 (s， 3H)， 1.31 (t， J= 7.2 Hz ， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for： C19H17N3OS (M+H) 336.1171 , found 336.1176
Figure imgf000015_0001
JH NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 9.17 (s， 1H) ， 8.53 (d， J= 4.4 Hz ， 2H) ， 8.50 (s， 1H) ， 8.09-8.05 (m， 3H) ， 7.72 (dd， J尸 2.0 Hz ， J2= 10.0 Hz ， 1H) ， 7.51-7.46 (m， 2H) ， 2.68 (s， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C19H14N2OS (M-H) 317.0749， found 317.0750。
4—甲 酰胺 （化合物 16)
Figure imgf000015_0002
1H NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 10.43 (s， 1H) ， 9.15 (s， 1H) ， 8.35 (s， 1H) ， 7.91-7.85 (m， 3H) ， 7.73 (d， J = 8.8 Hz ， 1H) ， 7.52-7.42 (m， 2H) ， 2.66 (s， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C15H12N2OS (M-H) 267.0592， found 267.0590。 -2-甲基噻唑 -5-甲酰胺 （化合物 18)
Figure imgf000015_0003
HRMS(ESI) calcd for： C17H12N2OS2 (M+H) 325.0469, found 325.0468。 实施例 2: 化合物 19-46的合成通法:
硫脲的合成
Figure imgf000016_0001
将芳胺 （8 mmol， 1 eq) 溶解于 24 mL丙酮中， 于搅拌条件下加入称好的三乙烯二 胺 （24 mmol， 3 eq) ， 再滴加二硫化碳 20 mL， 出现大量固体， 继续室温搅拌 24 h， 抽 滤反应液，滤饼用石油醚洗，干燥后，将滤饼溶解于 50 mL氯仿中，称取 BTC (2.7mmol， 0.33eq) 溶解于 30 mL氯仿中， l h内滴加至反应液中， 室温下搅拌该溶液过夜。 反应结 束后， 抽滤反应液， 滤饼用二氯甲烷洗， 得到的滤液直接加硅胶旋干后干法上样 （PE洗 脱） 。
将 NCS溶解于少量二氯甲烷中， 加大大过量的氨水， 0 °C下搅拌 3 h， 抽滤反应液， 滤饼用水洗， 干燥滤饼， 即得硫脲， 直接用于下一步反应。
目
Figure imgf000016_0002
化合物 19-26,28-30,33,35-43,45 将 β-环糊精 （590 mg, 0.52 mmol) 溶于 10 mL H20中， 将该溶液升温至 50 °C至 β- 环糊精全部溶解形成一个无色透明的溶液， 将相对应的乙酰乙酸乙酯用 0.5 mL丙酮稀释 后滴加至 β-环糊精水溶液中， 搅拌均匀后称取 NBS ( 138.9 mg, 0.780 mmol)加入该混合 溶液， 搅拌 1 h后， 再加芳香硫脲 （0.52 mmol) ， TLC跟踪反应， 待反应进行完全， 用 乙酸乙酯 /饱和食盐水萃取反应液， 收集得到的有机相用无水硫酸钠干燥后减压除溶剂， 得到的粗品用硅胶柱层析进一步纯化 （PE:EA=10:1 ) 。
目标化合物谱图数据
2-苯胺基 -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 19)
Figure imgf000016_0003
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.74-7.72 (m， 2H)， 7.38 (d， J= 3.6 Hz ， 3H) ， 7.38 (t， J= 8.0 Hz ， 2H) ， 7.14 (d， J= 6.8 Hz ， 3H) ， 4.23 (q， J= 7.2 Hz ， 2H) ， 1.26 (t， J= 6.8 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C18H16N202S (M+H) 325.1011， found 325.1009。 2-(3,4- 酸乙酯 （化合物 20)
Figure imgf000017_0001
JHNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.74-7.72 (m， 2H)， 7.40-7.39 (m， 3H)， 7.12 (d， J=8.4Hz ， 1H) ， 7.02 (dd， Ji=2.4 Hz ， J2=8.0Hz ， 1H) ， 6.97 (d， J = 2.0 Hz ， 1H)， 4.23 (q， J =7.2 Hz ， 2H)， 2.27 (s， 6H)， 1.26 (t， J=6.8Hz ， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for： C20H20N2O2S (M+H) 353.1324, found 353.1324c
2-(3-氯 -4 酸乙酯 （化合物 21)
Figure imgf000017_0002
1HNMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 7.82 (d， J=2.0Hz ， 1H) ， 7.74-7.72 (m， 2H) ， 7.45-7.42 (m， 4H) ， 7.32 (d， J= 8.4 Hz ， 1H) ， 4.16 (q， J=7.2Hz ， 2H)， 2.28 (s， 3H)， 1.18 (t， J=7.2Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : Ci9H17Cl 202S (M+H) 373.0778, found 373.0778。
2-(4- 酸乙酯 (化合物 22)
Figure imgf000017_0003
ONMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 10.59 (s， 1H) ， 7.73-7.70 (m， 2H) ， 7.52 (d， J= 9.2 Hz ， 2H)， 7.42 (t， J=3.2Hz ， 3H)， 6.96 (dd， J i= 2.0 Hz ， J2= 6.8 Hz ， 2H) ， 4.13 (q， J =7.2 Hz ， 2H) ， 3.74 (s， 3H) ， 1.16 (t， J =7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for： C19H18N203S (M+H) 355.1116, found 355.1115。
2-(3-三 -噻唑甲酸乙酯 （化合物 23)
Figure imgf000017_0004
JHNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.69-7.67 (m， 2H)， 7.53 (d， J= 8.8 Hz ， 1H) ， 7.47 (d， J=2.8Hz ， 1H) ， 7.33-7.29 (m， 3H) ， 7.10 (dd， J尸 2.8 Hz ， J2= 8.6 Hz ， 1H) ， 4.26 (q， J =7.2 Hz ， 2H) ， 1.28 (t， J =7.2 Hz ， 3H) 。
HRMS(ESI) calcd for： C19H14BrF3N202S (M+H) 470.9990, found 470.9986。
2-(3 唑甲酸乙酯 （化合物 24)
Figure imgf000018_0001
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.70-7.67 (m， 2H) ， 7.35 (dd， J尸 2.0 Hz ， J 2= 5.4 Hz ， 3H) ， 7.26 (d， J= 8.8 Hz ， 1H) ， 7.14 (d， J= 2.4 Hz ， 1H) ， 6.88 (dd， Ji=2.8Hz ， J2= 8.6 Hz ， 1H)， 4.24 (q， J=7.2Hz ， 2H) ， 1.27 (t， J =12
Hz ， 3H) 。
2-(4-氯 乙酯 （化合物 25)
Figure imgf000018_0002
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 10.59 (s， 1H) ， 7.67 (d， J=6.4Hz ， 2H) ， 7.36-7.28 (m， 3H) ， 7.13 (d， J=8.4Hz ， 2H) ， 6.85 (d， J= 8.8 Hz ， 2H) ， 4.23 (q， J= 7.2 Hz ， 2H)， 1.25 (t， J= 7.2 Hz ， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for： C18H15C1 202S (M+H) 359.0621, found 359.0615。
2-(2-甲基 唑甲酸乙酯 （化合物 26)
Figure imgf000018_0003
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.52-7.50 (m， 2H) ， 7.36 (dd， J尸 2.4 Hz ， J 2= 8.4 Hz ， 1H) ， 7.29 (d， J=2.0Hz ， 1H) ， 7.27-7.23 (m， 2H) ， 7.15 (t， J=3.6Hz ， 2H) ， 4.17 (q， J =7.2 Hz ， 2H) ， 2.08 (s， 3H) ， 1.21 (t， J = 7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for： C19H17BrN202S (M+H) 417.0272, found 417.0271。
2-(3-三氟甲基 -4-氯)-苯胺基 -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 28)
Figure imgf000019_0001
JHNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.70-7.67 (m， 2H)， 7.50 (d， J=2.8Hz ， 1H) ， 7.38-7.32 (m， 4H) ， 7.22 (dd， J 1= 2.8 Hz ， J2=8.8Hz ， 1H) ， 4.26 (q， J= 7.2 Hz ， 2H)， 1.27 (t， J= 7.2 Hz ， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for： C19H14C1F3N202S (M+H) 427.0495, found 427.0493。
2-(4-三氟 酸乙酯 （化合物 29)
Figure imgf000019_0002
!HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.78-7.75 (m， 2H)， 7.59 (d， J=8.4Hz ， 2H) ， 7.43-7.41 (m， 3H) ， 7.34 (d， J= 8.4 Hz ， 2H) ， 4.27 (q， J =7.2 Hz ， 2H) ， 1.29 (t， J=7.2Hz ， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for : C19H15F3N202S (M+H) 393.0885， found 393.0884。
2-((3- ，-联苯] -4-基)氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 30)
Figure imgf000019_0003
Ή NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.98 (t， J = 8.4 Hz ， 1H) ， 7.81-7.79 (m， 2H) ， 7.61-7.59 (m， 2H) ， 7.50-7.40 (m， 8H) ， 4.21 (q， J =7.2 Hz ， 2H) ， 1.30 (t， J=7.2Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C24H19FN202S (M+H) 419.1230， found 419.1232。
2-(3,5 唑甲酸乙酯 （化合物 33)
Figure imgf000019_0004
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.74-7.72 (m， 2H)， 7.39-7.37 (m， 3H)， 7.06 (d， J= 1.6 Hz ， 1H) ， 7.00 (d， J= 1.6 Hz ， 2H) ， 4.24 (q， J =7.2 Hz ， 2H) ， 1.29 (t， J=7.2Hz ， 3H) 。 2-(4-叔 甲酸乙酯 （化合物 35)
Figure imgf000020_0001
JHNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.75-7.73 (m， 2H)， 7.40-7.38 (m， 5H)， 7.19 (d， J= 8.4 Hz ， 2H) ， 4.24 (q， J =1.2 Hz ， 2H) ， 1.36 (s， 9H) ， 1.27 (t， J= 7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C22H24N202S(M+H) 381.1637， found 381.1635。
2-(3-氟 -4- 酸乙酯 （化合物 36)
Figure imgf000020_0002
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.72-7.70 (m， 2H)， 7.38-7.37 (m， 3H)， 7.08 (t， J=7.6Hz ， 1H) ， 6.84-6.78 (m， 2H) ， 4.23 (q， J =1.2 Hz ， 2H) ， 2.25 (s， 3H) ， 1.26 (t， J =7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C19H17FN202S (M+H) 357.1073， found 357.1068。
2-([U，-联苯] -4-基-氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 37)
Figure imgf000020_0003
1HNMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.11-8.09 (m， 1H) ， 7.75 (dd， J尸 2.4 Hz ， J2=6.6Hz ， 2H) ， 7.64-7.61 (m， 4H) ， 7.48-7.44 (m， 5H) ， 7.38 (d， J=8.0 Hz ， 2H) ， 4.26 (q， J =7.2 Hz ， 2H) ， 1.29 (t， J =12 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for： C24H20N2O2S (M+H) 401.1324, found 401.1318。
2-((3，-甲氧基 -[U，-联苯] -4-基)氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 38)
Figure imgf000020_0004
ONMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.76-7.74 (m， 2H)， 7.51 (d， J=8.4Hz ， 2H) ， 7.41-7.37 (m， 4H) ， 7.17 (d， J=8.4Hz ， 3H) ， 7.12 (d， J=2.0Hz ， 1H) ， 6.93 (dd， J i= 2.4 Hz ， J2= 8.0 Hz ， 1H) ， 4.25 (q， J = 12 Hz ， 2H) ， （m， 2H) ， 3.91 (s, 3H), 1.28(t,J= 7.2 Hz ， 3H)。HRMS(ESI) calcd for : C25H22N203S (M+H) 431.1429, found 431.1432。 ，-甲氧基 -[U，-联苯] -4-基)氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 39)
Figure imgf000021_0001
Ή NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.00 (t， J = 8.4 Hz ， 1H) ， 7.82-7.79 (m， 2H) ， 7.48-7.38 (m， 6H) ， 7.18 (d， J = 7.6 Hz ， 1H) ， 7.12 (s， 1H) ， 6.94 (dd， J i= 2.4 Hz ， J 2= 8.4 Hz ， 1H) ， 4.28 (q， J = 7.2 Hz ， 2H) ， 3.90 (s， 3H) ，
1.30 (t， J= 7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for : C25H21FN203S (M+H) 449.1335， found
449.1331。 ，-甲氧基 -[U，-联苯] -4-基)氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 40)
Figure imgf000021_0002
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.74-7.73 (m， 2H)， 7.39-7.38 (m， 3H)， 7.19 (d， J = 8.0 Hz ， 1H) ， 7.07-6.99 (m， 2H) ， 4.19 (q， J = 7.2 Hz ， 2H) ， 2.91 (t， J= 7.6 Hz ， 4H) ， 2.14-2.07 (m， 2H) ， 1.26 (t， J = 7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for： C25H20F2N2O3S (M+H) 467.1241 , found 467.1235。
2-((3-氯 -4-苯氧基苯基)氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 41 )
Figure imgf000021_0003
H NMR (400MHz, CDC13): δ 7.72 (s, 2Η), 7.40-7.31 (m, 6H), 7.15 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.07-7.05 (m, 1H), 6.99 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 6.93 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.27-4.22 (m, 2H), 1.27 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 168.09, 161.52, 158.51, 157.03, 149.29, 135.91, 133.93, 129.81, 129.66, 129.19, 127.70, 126.70, 123.41, 123.07, 121.57, 120.40, 117.68 110.70, 60.96, 14.19. HRMS (ESI) calcd for： C24H19C1 203S [m+H]+ 451.0883, found 451.0882. 基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 42)
Figure imgf000022_0001
Ή NMR (400MHz, CDC13): δ 7.70 (d, J= 3.2 Hz, 2H), 7.50 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.44 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.39-7.36 (m, 4H), 7.30 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.09 (dd, J尸 2.4 Hz, J2= 8.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.25-4.20 (m, 2H), 1.26 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 169.48, 161.58, 158.70, 151.90, 136.39, 133.97, 133.30, 129.52, 129.03, 128.68, 128.15, 127.59, 127.12, 124.33, 124.00, 121.36, 114.76, 110.10, 77.35, 60.82, 14.19. HRMS (ESI) calcd for: C25H21C1N203S [m+H]+ 465.1040, found 465.1032. )氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 43 )
Figure imgf000022_0002
H NMR (400MHz, CDC13): S 7.63-7.61 (m, 2H), 7.37-7.32 (m, 2H), 7.30-7.26 (m, 3H), 7.10 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.01 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.90 (dd, J尸 2.4 Hz, J2= 8.8 Hz, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.21 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.24 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCI3): δ 169.36, 163.32, 161.62, 160.81, 158.77, 151.79, 136.72, 136.68, 133.91, 133.82, 131.07, 130.97, 129.53, 129.10, 127.63, 125.70, 125.67, 124.61, 124.14, 121.98, 121.81 121.20, 115.65, 114.51, 114.28, 109.99, 62.96, 62.92, 60.86, 14.22. HRMS (ESI) calcd for: C25HI9C12FN2O3S [m+H]+ 517.0556, found 517.0562.
Figure imgf000022_0003
H NMR (400 MHz, CDC13): δ 8.54 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 3.2 Hz, J2 = 4.4 Hz, 2H), 7.37-7.35 (m, 3H), 7.14 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 6.88 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 4.20 (q, J= 7.2 Hz, 2H) 3.85 (s, 3H), 1.24 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 170.58, 161.75, 159.06, 157.30, 134.33, 132.62, 129.64, 128.87, 127.54, 123.84, 114.71, 109.40, 60.65, 55.51, 14.21. HRMS (ESI) calcd for： C19H18N203S [m+H]+ 355.1116, found 355.1115. 采用上述方法制备得到以下化合物 27、 31-32、 34、 44和 46。
2-蒽氨基 -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 27)
Figure imgf000023_0001
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 8.43 (s， 2H) ， 8.03 (d， J= 8.8 Hz ， 3H) ， 7.99 (d， J = 2.0 Hz ， IH) ， 7.83-7.81 (m， 2H) ， 7.54-7.46 (m， 5H) ， 7.27 (d， J= 2.0 Hz ， IH)， 4.30 (q， J= 7.2 Hz ， 2H)， 1.31 (t， J= 7.2 Hz ， 3H)。 HRMS(ESI) calcd for： C26H20N2O2S (M+H) 425.1324, found 425.1324。 2- (苯并 [d][l,3]二氧戊环 -5-基-氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 31 )
Figure imgf000023_0002
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm )： 7.68-7.66 (m， 2H)， 7.37-7.34 (m， 3H)， 6.75 (d， J= 8.0 Hz ， IH)， 6.65-6.68 (m， 2H)， 6.01 (s， 2H)， 4.20 (q， J= 7.2 Hz ， 2H) ， 1.24 (t， J = 7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for： C19H16N2O4S (M+H) 369.0909, found 369.0902。 ) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 32)
Figure imgf000023_0003
O NMR (400MHz, DMSO) δ ( ppm ) ： 10.71 (s， IH) ， 8.36 (d， J= 1.2 Hz ， IH)， 8.12 (d， J= 7.6 Hz ， IH)， 7.79-7.76 (m， 2H)， 7.67-7.61 (m， 3H)， 7.49-7.44 (m， 4H) ， 7.21 (t， J = 7.2 Hz ， IH) ， 4.48-4.43 (m， 2H) ， 4.13 (q， J= 7.2 Hz ， 2H)， 1.33(t, J= 7.2 Hz ，3H)， 1.12(t，J= 7.2 Hz ， 3H)。HRMS(ESI) calcd for : C26H23N302S (M+H) 442.1589， found 442.1582。
2-((5,6,7,8-四氢萘 -2-基)氨基) -4-苯基 -5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 34)
Figure imgf000024_0001
JH NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.76-7.73 (m， 2H) ， 7.42-7.41 (m， 3H)， 7.72 (d， J= 8.4 Hz ， 1H) ， 7.02 (dd， J尸 2.4 Hz ， J2= 7.4 Hz ， 1H) ， 6.94 (d， J = 2.0 Hz ， 1H) ， 4.24 (q， J = 12 Hz ， 2H) ， 2.78 (s， 4H) ， 1.85-1.81 (m， 4H) ， 1.26 (t， J = 7.2 Hz ， 3H) 。 HRMS(ESI) calcd for ： C22H22N202S (M+H) 379.1480, found 379.1481。
2-((2,3-二 5-噻唑甲酸乙酯 （化合物 44)
Figure imgf000024_0002
1H NMR (400MHz, CDC13) δ ( ppm ) ： 7.74-7.73 (m， 2H) ， 7.39-7.38 (m， 3H)， 7.19 (d， J = 8.0 Hz ， 1H) ， 7.07-6.99 (m， 2H) ， 4.22 (q， J = 7.2 Hz ， 2H) ， 2.91 (t， J= 7.6 Hz ， 4H) ， 2.14-2.07 (m， 2H) ， 1.26 (t， J = 7.2 Hz ， 3H) 。
HRMS(ESI) calcd for： C21H20N2O2S (M+H) 365.1324, found 365.1326。 化合物 46
Figure imgf000024_0003
Ή NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.90 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.92-7.63 (m, 6H), 7.52-7.34 (m, 5H), 4.27 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.30 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。 ESI [M+H]+ found 375.3。 实施例 3: 化合物 47-63、 64、 65、 77、 89-92的合成
化合物 47-48、 50-52、 55_59、 61-62, 89_92可按以下流程合成。
Figure imgf000025_0001
化合物 47-48,50-52,55-59,61 -62 合成方法： 取 1 mmol的取代苯基硫脲和 1 mmol的 2-氯乙酰丙酮 （2-氯乙酰乙酸乙 酯） 溶于 20 mL甲醇， 回流过夜， 旋干甲醇， 加入少量稀碳酸钾水溶液中和， 饱和食盐 水洗涤， 乙酸乙酯萃取， 有机层浓缩干燥柱层析得产品。 目标化合物谱图数据
2—(3,4-甲基苯胺基) -4-甲基 -5-乙酰基噻唑 （化合物 47)
Figure imgf000025_0002
1H NMR(400MHz, DMSO)S( ppm ): 7.32(d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.28(s, 1H), 7.11(d, J= 8.4 Hz, 1H), 2.53(s, 3H), 2.41(s, 3H), 2.21(s, 3H), 2.18(s, 3H)。 HRMS (ESI) calcd for C14H16N2OS(M+H+) 261.1062, found 261.1065。
2—(4-甲基 -3-氯苯胺基) -4-甲基 -5-乙酰基噻唑 （化合物 48)
Figure imgf000025_0003
1H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.79(d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.48-7.38(m, 1H), 7.30(d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.55(s, 3H), 2.42(s, 3H), 2.27(s, 3H) 。 HRMS (ESI) calcd for C13H13C1 20S(M+H+) 281.0515, found 281.0515。
2-(4-溴 -3-三氟甲基苯胺基) -4-甲基 -5-乙酰基噻唑 （化合物 50)
Figure imgf000025_0004
Ή NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 8.25(s, 1H), 7.82(s, 3H), 2.57(s, 3H), 2.45(s, 3H)。 HRMS (ESI) calcd for C13H10BrF3N2OS(M+H+) 378.9728, found 378.9724。 -乙酰基噻唑 （化合物 51 )
Figure imgf000026_0001
1H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.61(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.53(d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.56(s, 3H), 2.44(s, 3H)。 HRMS(ESI) calcd for C12H„BrN2OS(M+H+) 310.9854, found 310.9854。 乙酰基噻唑 （化合物 52)
Figure imgf000026_0002
1H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.60(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.37(t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.05(d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.56(s, 3H), 2.43(s, 3H) 。 HRMS (ESI) calcd for Ci2Hi2N2OS(M+H+)233.0749, found 233.0746。 5-乙酰基噻唑 （化合物 55 )
Figure imgf000026_0003
1H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.40(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.91(d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.02-3.97(m, 2H), 2.50(s, 3H), 2.36(s, 3H), 1.32(t, J = 6.8 Hz, 3H)。 HRMS (ESI) calcd for C14H16N202S(M+H+) 277.1011, found 277.1009。 -5-乙酰基噻唑 （化合物 56)
Figure imgf000026_0004
H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.49(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.38(d, J 2.54(s, 3H), 2.42(s, 3H), 1.28(s, 9H)。 HRMS(ESI) calcd for C16H20N2OS(M+H十） 289.1375 found 289.1374。 ) -4-甲基 -5-乙酰基噻唑 （化合物 57)
Figure imgf000027_0001
'H NMR(400MHz， DMSO)S( ppm ): 11.13(s, 1H), 8.26(d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.91(dd， Ji 2.4 Hz, J2 = 8.8 Hz， 1H)， 7.69(d, J= 8.8 Hz, 1H), 2.58(s, 3H), 2.46(s, 3H)。 -5-甲酸乙酯噻唑 （化合物 58)
Figure imgf000027_0002
H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.45(d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.92(d, J = 8.8 Hz, 4.21-4.16(m, 2H), 4.02-3.97(m, 2H), 2.46(s, 3H), 1.32(t, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25(t, J = 7.2 3H)。 HRMS(ESI) calcd for C15H18N203S(M+H+) 307.1116, found 307.1114。 -5-甲酸乙酯噻唑 （化合物 59)
Figure imgf000027_0003
!H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.33(dd, Ji = 2.0 Hz, J2= 8.0 Hz, 1H), 7.28(s, 1H), 7.11(d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.23-4.17(m, 2H), 2.22(s, 3H), 2.18(s, 3H), 1.26(t, J = 7.2 Hz, 3H)。 HRMS(ESI) calcd for C15H18N202S(M+H+) 291.1167, found 291.1169。 基 -5-甲酸乙酯噻唑 （化合物 61 )
Figure imgf000027_0004
1H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.82(d, J= 2.0 Hz, 2H), 7.42-7.39(m, 2H), 7.3 l(d, J 8.4 Hz, 1H), 4.24-4.19(m, 2H), 2.53(s, 3H), 2.28(s, 3H), 1.27(t, J= 7.2 Hz, 3H)。HRMS (ESI) calcd for C14H15C1 202S(M+H十） 311.0621, found 311.06200 甲酸乙酯噻唑 （化合物 62)
Figure imgf000028_0001
Ή NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 7.61(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.52(d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24-4.19(m, 2H), 2.53(s, 3H), 1.27(t, J = 7.2 Hz, 3H) 。 HRMS (ESI) calcd for C13H13BrN202S(M+H+) 340.9959, found 340.9951。 化合物 64
Figure imgf000028_0002
H NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.79 (s, 1H), 7.80 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.75 (dd, J; = 2.4 Hz, J2 = 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.27 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-t¾): δ 189.70, 165.12, 156.91, 139.58, 133.81, 131.93, 129.60, 123.15 118.37, 117.12, 56.51, 30.17, 19.33, 19.00, 18.94. HRMS (ESI) calcd for: C13H13C1 20S
[M+H]+ 281.0515, found 281.0515.
Figure imgf000028_0003
H NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 7.41 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 4.00 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.32 (t, J= 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-t¾): δ 188.95, 166.63, 157.61, 154.96, 134.21, 120.95, 115.35, 63.65, 56.49, 30.09, 18.96, 15.15. HRMS (ESI) calcd for: C13H13C1 20S [M+H]+ 277.1011, found 277.1009. 化合物 77
Figure imgf000028_0004
Ή NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.87 (s, 1H), 7.61 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.53 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.44 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-t¾): 189.26, 164.55, 156.38, 139.30, 131.78, 122.76, 119.81, 113.93, 56.01, 29.68, 18.41. HRMS (ESI) calcd for:
C12H„BrN2OS [M+H]+ 310.9854, found 310.9854.
HL-251-91 (化合物 89)
2- ( (2,3-二氢 -1Η-茚 -5-基)氨
Figure imgf000029_0001
Ή NMR (400MHz, CDC13): δ 7.25 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.09 (dd, J尸 2.0 Hz, J2= 8.0 Hz, 1H), 4.29 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.97-2.91 (m, 4H), 2.57 (s, 3H), 2.17-2.10 (m, 2H), 1.35 (t, J= 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 169.47, 162.67, 158.77, 146.06, 141.57, 137.66, 125.23, 119.50, 117.59, 60.47, 33.01, 32.42, 25.59, 17.41, 14.45. HRMS (ESI) calcd for： C16H18N202S [M+H]+ 303.1167, found 303.1163。
Figure imgf000029_0002
H NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.73 (s, 1H), 7.60 (dd, J尸 1.6 Hz, J2= 12.2 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 8.4 Hz, 1H), 7.19 (dd, J= 2.0 Hz, J2= 8.4 Hz, 1H), 4.21 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.18 (q, J= 1.2 Hz, 3H), 1.27 (t, J= 7.2 Hz, 3H).13C NMR (100 MHz, CDC13) ： δ 167.80, 162.71, 162.49, 160.27, 158.48, 138.54, 138.43, 132.20, 132.14, 121.37, 121.20, 115.87, 115.83, 110.09, 107.73, 107.48, 60.68, 17.36, 14.41, 14.12, 14.09. HRMS (ESI) calcd for：
C14H15FN2O2S [M+H]+ 295.0917, found 295.0916。
HL-251-97 (化合物 91 )
Figure imgf000029_0003
Ή NMR (400MHz, CDC13): S 7.20-7.13 (m, 1H), 7.07 (d, J= 2.0 Hz, 2H), 4.27 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.32 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCI3): S 169.59, 162.67, 158.71, 138.14, 137.23, 133.86, 130.69, 122.80, 118.80, 60.47 19.91, 19.26, 17.42, 14.44. HRMS (ESI) calcd for： C15H18N202S [M+H]+ 291.1167, found
291.1164。
Figure imgf000030_0001
H NMR (400MHz, CDC13): S 7.42 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 3H), 7.17 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.99 (dd, J尸 2.0 Hz, J2= 8.0 Hz, 1H), 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.33 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 170.60, 162.34, 160.17, 159.45, 157.94, 156.95, 141.95, 139.59, 130.20, 119.32, 115.70, 114.10, 112.66, 111.08, 111.02, 110.84, 60.64, 55.41, 16.85, 14.383. HRMS (ESI) calcd for： C20H18F2N2O3S [M+H]+ 405.1084, found 405.1083 c 采用与上述方法类似的方法制备得到化合物 49、 53、 54、 60、 63、 64、 65和 77。
基噻唑） （化合物 49)
Figure imgf000030_0002
H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 8.25(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.91(d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.86(d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.61(dd, Ji = 2.4 Hz，J2 = 8.8 Hz, 1H)， 7.51-7.47(m, 1H), 7.43-7.39(m, 1H), 2.62(s, 3H), 2.46(s, 3H)。 HRMS (ESI) calcd for C16H14N2OS(M+H+) 283.0905, found 283.0903。 唑 （化合物 53 )
Figure imgf000030_0003
Ή NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 8.51-8.47(m, 3H), 8.10-8.04(m, 3H), 7.57-7.45(m, 3H), 2.65(s, 3H), 2.48(s, 3H)。 HRMS(ESI) calcd for C20H16N2OS(M+H+) 333.1062, found 333.1057。 基 -5-乙酰基噻唑 （化合物 54)
Figure imgf000031_0001
Ή NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 10.68(s, 1H), 8.33(s, 1H), 8.13(d, J= 8.0 Hz, 1H): 7.65-7.55(m, 3H), 7.47(t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.20(t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.47-4.42(m, 2H)， 2.57(s: 3H), 2.40(s, 3H)， 1.32(t, J= 6.0 Hz, 3H)。HRMS (ESI) calcd for C20H19N3OS(M+H+) 350.1327, found 350.1319。 -甲基 -5-甲酸乙酯噻唑 （化合物 60)
Figure imgf000031_0002
1H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 10.57(s, 1H), 8.32(d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.13(d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65-7.55(m, 3H), 7.47(d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20(d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.47-4.42(m, 2H), 4.22-4.16(m, 2H), 2.54(s, 3H), 1.33(t, J= 7.2 Hz, 3H), 1.25(t, J= 7.2 Hz, 3H)。HRMS(ESI) calcd for C21H21N302S(M+H+) 380.1433, found 380.1436。 酯噻唑 （化合物 63 )
Figure imgf000031_0003
H NMR(400MHz, DMSO)5( ppm ): 8.51-8.46(m, 3H), 8.10-8.05(m, 3H), 7.56-7.46(m,
3H), 4.28-4.23(m, 2H), 2.62(s, 3H), 1.91(s, 3H), 1.30(t, J 实施例 4
采用流程 4或其类似方法制备化合物 79-88。
Figure imgf000031_0004
Ή NMR (400MHz, CDC13): S 7.52 (s, 1H), 7.14 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 4.32 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.06 - 2.99 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.36 (t, J= 7.2 Hz: 3H), 1.10-1.09 (m, 2H), 1.04-1.02 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 167.42, 164.91, 163.14, 137.98, 137.06, 132.92, 130.55, 121.13, 117.14, 108.84, 60.46, 19.95, 19.15, 14.50, 11.65, 9.75. HRMS (ESI) calcd for： C17H20N2O2S [M+H]+ 317.1324, found 317.1175.
Figure imgf000032_0001
H NMR (400 MHz, CDC13): S 7.19-7.11 (m, 2H), 6.96 (dd, J = 2.0 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H):
4.33 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.05-2.99 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.37 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 1.11-1.09 (m, 2H), 1.07-1.04 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 165.88, 164.58, 162.87, 162.65, 160.21, 138.35, 138.25, 132.04, 131.97, 120.46, 120.28, 114.35, 109.56, 106.36, 106.10, 60.61, 14.45, 14.03, 14.00, 11.63, 9.85. HRMS (ESI) calcd for： C16H17FN202S [M+H]+ 319.0917, found 319.0916.
HL-YRJ-9-1 (化合物 81 )
Figure imgf000032_0002
H NMR (400 MHz, CDC13): S 7.40 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.22 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 2.4 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H), 4.33 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.05 - 2.99 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.37 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 1.13-1.09 (m, 2H), 1.07-1.03 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 165.96, 164.67, 162.87, 138.04, 135.04, 131.76, 131.55, 119.73, 117.39, 60.60, 29.69, 19.39, 14.47, 11.63, 9.84. HRMS (ESI) calcd for： C16H17C1 202S [M+H]+ 337.0778, found 337.0770.
Figure imgf000032_0003
Ή NMR (400 MHz, CDC13): S 7.56 (s, 1H), 7.09-7.03 (m, 2H), 7.01 (s, 1H), 4.32 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.06-3.00 (m, 1H), 2.78-2.76 (m, 4H), 1.81-1.80 (m, 4H), 1.36 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 1.11- 1.08 (m, 2H), 1.05-1.00 (m, 2H). "C NMR (100 MHz, CDC13): S 167.37, 164.81, 163.10, 138.55, 136.64, 133.65, 130.13, 120.13, 117.24, 108.83, 60.46, 29.55, 28.88, 23.16, 22.99, 14.51, 11.62, 9.75. HRMS (ESI) calcd for： C19H22N202S [M+H]+ 343.1480, found 343.1477.
HL-YRJ-8-2 (化合物 83 )
Figure imgf000033_0001
H NMR (400MHz, CDC13): S 7.73 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.20 (d, J= 8.00 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.32 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.06-3.00 (m, 1H), 2.95 - 2.88 (m, 4H), 2.15-2.08 (m, 2H), 1.36 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 1.11-1.08 (m,2H), 1.04 - 1.00 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): 167.67, 164.97, 163.15, 145.93, 140.71, 137.57, 125.11, 118.12, 116.16, 108.80, 60.46 33.05, 32.35, 25.62, 14.51, 11.66, 9.75. HRMS (ESI) calcd for： C18H20N2O2S [M-H]+ 327.1167: found 327.1169.
Figure imgf000033_0002
H NMR (400MHz, CDC13): S 7.16 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.10 (s, 2H), 4.28 (q, J= 7.2 Hz: 2H), 2.30 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.35 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz,
CDCI3): δ 170.04, 165.38, 161.71, 138.05, 137.17, 132.74, 130.59, 120.84, 116.74, 109.63, 60.70, 36.39, 29.27, 20.02, 19.92, 19.20, 14.41. HRMS (ESI) calcd for： C18H24N202S [M+H]4 333.1637, found 333.1633.
Figure imgf000033_0003
H NMR (400MHz, CDC13): δ 7.20-7.15 (m, 2H), 6.99 (dd, J = 2.0 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H): 4.29 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.37 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCI3): δ 169.59, 163.87, 162.69, 161.51, 160.25, 138.49, 138.38, 132.08, 132.01, 120.23, 120.05, 114.06, 114.03, 110.43, 106.05, 105.78, 60.90, 36.44, 29.26, 14.37. HRMS (ESI) calcd for： C17H21FN202S [M-H]十 335.1230, found 335.1223.
Figure imgf000034_0001
Ή NMR (400MHz, CDC13): S 7.47 (d, J= 2.0 Hz, IH), 7.23 (d, J= 8.4 Hz, IH), 7.16 (dd， Ji = 2.4 Hz, J2 = 8.4 Hz, IH), 4.29 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.36 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 169.80, 163.94, 161.58, 138.29, 135.03, 131.53, 131.40, 119.43, 117.06, 110.58, 60.87, 36.48, 29.29, 19.39, 14.36. HRMS (ESI) calcd for：
C17H21CI 2O2S [M-H]+ 351.0934, found 351.0937.
Figure imgf000034_0002
H NMR (400MHz, CDC13): S 7.11-7.07 (m, 2H), 7.05 (s, IH), 4.28 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.80-2.77 (m, 4H), 1.83 (s, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.35 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCI3): δ 169.81, 165.27, 161.64, 138.62, 136.68, 133.51, 130.20, 119.82, 116.88, 109.62, 60.71, 36.35, 29.25, 26.64, 23.16, 22.99, 14.40. HRMS (ESI) calcd for： C20H26N2O2S [M+H] 359.1793, found 359.1782.
Figure imgf000034_0003
H NMR (400MHz, CDC13): S 7.45 (s, IH), 7.25-7.21 (m, 2H), 7.09 (dd, J = 2.0 Hz, J2 = 8.0 Hz, IH), 4.27 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.97-2.90 (m, 4H), 2.17-2.09 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.35 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): 169.96, 165.58, 161.68, 146.03, 140.59, 137.61, 125.17, 117.73, 115.82, 109.57, 60.69, 36.36, 33.07, 32.36, 29.26, 25.63, 14.41. HRMS (ESI) calcd for： C19H24N202S [M-H]+ 343.1480, found 343.1482. 实施例 5
采用流程 5或其类似方法制备得到以下化合物 93-97。
将乙醇钠 （41 mmol) 溶解在 40 mL乙醇中， 冰浴条件下， 将此溶液缓慢滴加至溶 解有氰胺 （41 mmol)和取代异硫氰酸酯 （41 mmol) 的乙醇 （25 mL) 混合溶液中， 搅拌 过夜后， 于反应液中滴加氯乙酸乙酯 （41 mmol) ， 继续搅拌过夜。 待反应结束后， 减压 除去大量乙醇溶剂，粗品用乙酸乙酯和饱和食盐水萃取，收集到的有机相用无水硫酸钠干 燥， 旋蒸除去溶剂之后进一步用硅胶柱层析 (PE/EA=2/1， v/v), 得到白色纯品。
HL-251-133 (化合物 93 )
2-(3-氯 -4-三氟甲基) -苯胺基 -4-氨基 -5-噻唑甲酸甲酯
e
Figure imgf000035_0002
H NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 11.00 (s, IH), 8.20 (d, J= 2.4 Hz, IH), 7.91 (dd, J尸 2.4 Hz, J2= 8.8 Hz, IH), 7.67 (d, J= 8.4 Hz, IH), 7.01 (s, 2H), 3.32 (s, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-t¾): δ 164.75, 164.17, 139.79, 132.67, 127.59, 127.29, 124.52, 123.25, 123.07, 121.80, 117.25, 117.20, 117.14, 51.17. HRMS (ESI) calcd for： C12H9C1F3N302S [M+H]+ 352.0134, found 352.0130c
HL-251-135 (化合物 94)
基 -4-氨基 -5-噻唑甲酸乙酯
Figure imgf000035_0003
1H NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.98 (s, IH), 8.17 (d, J= 2.4 Hz, IH), 7.92 (dd, J尸 2.4 Hz, J2= 8.8 Hz, IH), 7.67 (d, J= 8.8 Hz, IH), 6.98 (s, 2H), 4.15 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.23 (t J= 7.2 Hz, 3H). "C NMR (100 MHz, DMSO-t¾): δ 164.71, 163.86, 139.80, 132.68, 127.60, 127.29, 124.52, 123.22, 123.05, 121.80, 117.27, 117.22, 117.16, 117.10, 59.60, 15.09. HRMS (ESI) calcd for: C13H„C1F3N302S [M+H]+ 366.0291, found 366.0292。
HL-251-137 (化合物 95 )
基 -5-噻唑甲酸乙酯
Figure imgf000036_0001
H NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.40 (s, 1H), 7.34 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.09 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.89 (s, 2H), 4.12 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.21 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-t 6): δ 166.06, 163.90, 138.14, 137.29, 131.40, 130.37, 120.46, 116.76, 59.30, 20.14, 19.22, 15.14. HRMS (ESI) calcd for： C14H17N302S
[M+H]+ 292.1120, found 292.1117。
HL-251-139 (化合物 96)
2-(3,4-二氯) -苯胺基 -4-氨基 -5-噻唑甲酸乙酯
Figure imgf000036_0002
H NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.87 (s, 1H), 8.11 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J尸 2.4 Hz, J2= 9.0 Hz, 1H), 7.02 (s, 2H), 4.14 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-t¾): δ 164.72, 163.88, 140.43, 131.77, 131.20, 124.16, 119.58, 118.57, 59.57, 15.10. HRMS (ESI) calcd for: C12H„C12N302S [M+H]+ 332.0027, found 332.0025。
HL-251-143 (化合物 97)
2-(3-氟 -4-甲基)-苯胺基 -4-氨基 -5-噻唑甲酸乙酯
Figure imgf000037_0001
Ή NMR (400MHz, DMSO-t¾): δ 10.68 (s, 1H), 7.68 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 8.4 Hz, 1H), 7.16 (dd, J= 1.6, 8.0 Hz, 1H), 6.97 (s, 2H), 4.13 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.22 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO-t¾): 3 165.17, 163.93, 162.18, 159.79, 139.82, 139.71, 132.07, 132.00, 118.27, 118.09, 114.29, 105.68, 105.40, 59.44, 15.09, 14.03. HRMS (ESI) calcd for: C13H14FN302S [M+H]+ 296.0869, found 296.0865。 实施例 6
Figure imgf000037_0002
TM: HL-251-147,149,151 , 179,183,189
称取 4-氨基 -2- (取代苯胺基)噻唑 -5-甲酸乙酯 （304 μη )1) 于 25 mL单口烧瓶中， 加 入 5 mL甲苯， 滴加 15滴三乙胺， 待搅拌均匀后， 于冰浴条件下缓慢滴加苯甲酰氯 （456 μηιοΐ) ， 滴加完毕， 冰浴搅拌 lO min后， 升温至 90 °C， 继续反应， TLC跟踪至原料完 全转化。 将反应液降至室温， 减压除去过量溶剂， 得到的粗品进一步用硅胶柱层析 (PE/EA=4/1 , v/v), 得到的淡黄色固体再用 PE/EA重结晶。
HL-251-147 (化合物 98)
4—环丙基—2-(3,4-二甲基)-苯胺基 -4-氨基 -5-噻唑甲酸乙酯
Figure imgf000037_0003
H NMR (400MHz, CDC13): ^ 7.31 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.13 (s,l H), 7.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.27 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.43-1.40 (m, 1H), 1.33 (t J= 7.2 Hz, 3H), 1.20 - 1.18 (m, 2H), 0.84-0.81 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 173.98, 165.07, 162.69, 159.21, 138.58, 138.17, 136.47, 130.99, 129.84, 126.20, 59.82, 19.93, 19.67, 14.53, 13.63, 10.62. HRMS (ESI) calcd for： C18H21N303S [M+H]十 360.1382, found 360.1388。
HL-251-149 (化合物 99)
-4-氨基 -5-噻唑甲酸乙酯
Figure imgf000038_0001
H NMR (400MHz, CDC13): δ 7.66 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.26 (dd Ji= 2.4 Hz, J2= 8.8 Hz, 1H), 4.28 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.43-1.37 (m, 1H), 1.34 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 1.26-1.23 (m, 2H), 0.95-0.90 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 173.00, 165.07, 161.88, 158.80, 138.10, 133.92, 133.87, 131.55, 131.33, 128.70, 60.04, 14.50, 13.87, 10.92. HRMS (ESI) calcd for： C16H15C12N303S [M+H]+ 400.0289, found 400.0289。
HL-251-151 (化合物 100)
4—环丙基 -2-(3,三氟甲基 -4-氯)-苯胺基 -4-氨基 -5-噻唑甲酸乙酯
Figure imgf000038_0002
H NMR (400MHz, CDC13): δ 7.73-7.71 (m, 2H), 7.53 (dd, J尸 2.0 Hz, J2= 8.4 Hz, 1H)， 4.28 (q, J= 7.20 Hz, 2H), 1.36-1.32 (m, 4H), 1.28-1.26 (m, 2H), 0.94-0.89 (m, 2H). 13C NMR (100 MHz, CDCI3): δ 172.82, 164.89, 161.82, 158.73, 137.63, 133.80, 133.46, 133.10, 130.27, 129.95, 128.81, 128.75, 128.70, 128.65, 123.50, 120.78, 60.07, 14.49, 13.98, 10.95. HRMS (ESI) calcd for: C17H15C1F3N303S [M+H]+ 434.0553, found 434.0556。
HL-251-179 (化合物 101 )
Figure imgf000038_0003
H NMR (400MHz, CDC13): δ 7.55 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J= 8.8 Hz, 1H): 7.40-7.27 (m, 6H), 5.63 (s, 2H), 4.32 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.38 (t, J= 7.2 Hz, 3H). "C NMR (100 MHz, CDC13): δ 169.13, 164.83, 161.83, 158.70, 138.11, 133.95, 133.26, 132.59, 132.23, 131.17, 129.39, 129.12, 129.07, 129.01, 128.96, 128.43, 128.34, 123.38, 120.66, 60.25, 14.55。
HL-251-183 (化合物 102)
Figure imgf000039_0001
Ή NMR (400MHz, CDC13): S 7.40-7.30 (m, 6H), 7.26-7.20 (m, 4H), 5.64 (s, 2H), 4.32 (q, J = 12 Hz, 2H), 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 169.64, 165.02, 162.63, 159.07, 139.38, 134.03, 130.60, 129.68, 129.17, 128.78, 128.59, 127.89, 60.06, 14.60。
HL-251-189 (化合物 103 )
Figure imgf000039_0002
Ή NMR (400MHz, CDC13): δ 7.31 (d, J= 8.0 Hz, 3H), 7.21 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.95 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.31 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.37 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 169.77, 165.03, 162.97, 159.19, 137.68, 137.43, 136.88, 134.28, 130.45, 130.35, 130.23, 128.56, 127.79, 126.75, 59.99, 19.73, 19.53, 14.58。
实施例 7
Figure imgf000039_0003
TM: HL-251-191 ,193
称取 4-苯基 -2- (芳香胺基)噻唑 -5-甲酸乙酯（617 μιηοΐ )于 25 mL烧瓶中，加入 3 mL DMF, 于氩气保护下加入 NaH ( 1 mmol ) ， 待搅拌均匀后， 将溶解于 2 mL DMF中的 Etl ( 617 μιηο1 ) 滴加至反应液中， 滴加完毕继续室温搅拌反应 2 h。 待反应结束后， 用 饱和 NH4C1水溶液淬灭反应， 再用乙酸乙酯 /饱和食盐水萃取反应液， 得到的有机相用无 水 Na2S04干燥， 减压除去溶剂， 得到的粗品进一步用硅胶柱层析 （PE:EA=15:1 ) ， 得到 白色纯品。 104)
Figure imgf000040_0001
H NMR (400MHz, CDC13): δ 7.80 (dd, J= 2.4 Hz, J2= 8.0 Hz, 2H), 7.55-7.51 (m, 2H) 7.45-7.39 (m, 6H), 4.19-4.08 (m, 4H), 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 170.44, 161.95, 159.51, 143.88, 134.93, 130.30, 129.87, 128.86, 128.19, 127.52, 127.36, 110.41, 60.47, 47.44, 14.23, 13.15。
Figure imgf000040_0002
H NMR (400 MHz, CDC13): δ 7.79 (dd, J = 2.4 Hz, J2 = 7.6 Hz, 2H), 7.45-7.42 (m, 3H)
7.18-7.13 (m, 3H), 4.17 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.58 (s, 3H), 2.83 (s, 4H), 1.86 (s, 4H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDC13): δ 170.81, 162.00, 159.55, 142.90, 139.22, 137.04, 134.92, 130.76, 129.83, 128.87, 127.56, 125.99, 122.62, 110.52, 60.50, 40.13, 29.44, 29.12, 23.01, 22.87, 14.27。
DH0DH活性测试部分
实施例 1
本发明提供的化合物对二氢乳清酸脱氢酶 （DHODH) 活性的体外抑制效果 材料： 人 DHODH基因全长的质粒有 Prof. Jon Clardy (哈佛医学院)惠赠 （J. Bio. Chem.2008, 283(50),35078-35085 ) 或者可以从傲锐东源生物科技有限公司购得。 pET-19b 载体， E.coli DH5a和 E.coli BL21(DE3)菌株均购自 Novagen公司。 限制性内切酶 Nde I和 Bam HI购自NEB公司。引物由上海英骏生物技术有限公司合成。其他试剂均购自 sigma。
根据 GenBank 中人 DHODH 基因序列设计引物， 正向引物为 Fw: 5 ' -TGAACTACATATGGCCACGGGAGATGAG-3 ' ； 反 向 引 物 Rv: 5 ' - ATATGGATCCTCACCTCCGATGATCTGC -3 ' 。 以含有 DHODH基因的质粒为模板扩 增， 扩增条件： 95 ° C预变性 2min; 94° C变性 30s; 60° C退火 45s; 72° C延伸 lmin 50s; 29个循环， 72° C完全延伸 10min。反应结束后进行 1%琼脂糖凝胶电泳， 以 2000bp
DNA标准为相对分子量参照， 验证扩增产物相对分子量大小， 切胶， 用试剂盒回收扩增 产物。
用 Nde I和 Bam HI分别对 PCR产物和载体 pET-19b进行双酶切， 回收消化过的目 的基因和载体片段， 用 T4 DNA 连接酶 16 ° C 连接过夜， 构建重组表达载体 pET-19b-DHODH。重组质粒转化 E.coli DH5a感受态， 接种于含氨苄青霉的 LB平板上培 养， 随机挑取阳性菌落， 分别接种于 2mL含氨苄青霉的小离心管中扩培。 扩培后取菌液 小量提取质粒进行酶切鉴定和菌液 PCR鉴定，并由上海英骏生物技术有限公司进行 DNA 序列测定。
将测序正确的重组质粒 pET-19b-DHODH转化 E.coli BL21 DE3)感受态，涂布于含氨 苄青霉素的 LB平板上培养， 挑取单克隆接种于含 100 μΜ氨苄青霉素的 LB培养基中 37 ° C、 230rpm摇床培养过夜。 按 1:200的比例接种于 500mL含 100 μΜ氨苄青霉素的 LB 培养基中 37° C、 230rpm扩大培养。 待菌体 OD值达到 0.8-1时， 向培养基中加入 IPTG， 使 IPTG终浓度为 0.5mM。 25°C过夜诱导表达。 4° C、 4000rpm离心收集诱导后菌体， 用去离子水洗涤后再次离心收集菌体沉淀， 放于 -80° C保存。
蛋白纯化时用裂解液重悬菌体。 裂解液含有 50 mM HEPES (pH 8.0)， 0.15M NaCl, lOmM 咪唑， 10%甘油， 0.1%Triton X-100， 加入少许大豆蛋白酶抑制剂， 重悬混匀后超 声破碎菌体。 破碎液 4° C、 lOOOOrpm离心 30min。 取上清和沉淀进行蛋白电泳确定蛋白 存在形式。 将上清加入准备好的 Ni-NTA层析柱中结合， 收集穿过液。 再用含 20mM咪 唑的裂解液洗树脂 3-5次，最后用含 300mM咪唑的裂解液洗脱蛋白，收集洗脱后蛋白液。 取以上各步 10 蛋白样进行 SDS-PAGE电泳， 检测目的蛋白含量。 洗脱后蛋白液在透 析液中透析去咪唑，透析液含 50 mM HEPES (pH 8.0)， 0.15M NaCl， 10%甘油， 0.1%Triton X-100。
DHODH活性通过测定 DCIP减少的方法确定， 在辅酶 Q0存在的条件下， DHODH 催化底物 DHO， 并将两个 H转移到 DHODH的辅基 FMN上， 进而传递给辅酶 Q0， 最后 由辅酶 Q0传递给 DCIP， 使 DCIP被还原。 通过测定每分钟减少的 DCIP的量确定酶活。 测定方法采用 96孔板由 BioTek酶标仪读取。 每孔含测活液 199 μL (50 mM HEPES (pH 8.0)， 0.15M KC1， 100 μΜ辅酶 Q0,100 μΜ DCIP)。加入 0.2 μΜ抑制剂（溶解于 DMSO)， 使抑制剂终浓度为 10 μΜ， 室温孵育 10min， 最后加入 1 底物 DHO， 使 DHO终浓度 为 500 μΜ。 混匀后用酶标仪在 600nm波长下读取 6min， 间隔 30s读取一次数据。每个实 验至少设 3个平行。最后通过化合物不同浓度的抑制率来计算半数有效抑制浓度（IC5()) 根据上述方法测试了化合物 1-65和 77以及如下的化合物 66-76和 78的活性，结果 显示在下表：
o
化合物结构和 hDHODH抑制率
化合物编 讲 化合物编
号 IC5。值 号 IC5。值
1 9.7270 39 24.4507
2 44.8247 40 82.3038 0.3109±0.0185
3 12.7260 41 48.3306
4 4.1765 42 37.6784
5 28.8169 43 38.4990
6 26.2065 44 91.6029 0.0260±0.0047
7 7.0808 45 71.2 0.99
o
8 13.4580 46 82 0.0297
9 6.8469 47 69.6331 2.8589±0.2796
讲
10 46.6015 48 79.2238 1.0149±0.0579
11 16.5413 49 82.6398 0.4350±0.0155
12 46.1820 50 72.8908 0.9628±0.1849
13 13.6697 51 28.8674
14 27.4907 52 20.1885
15 23.3942 55 36.8049
16 32.0062 56 0.5432±0.0750
17 57 62.7295 2.8750±0.1911
18 39.5901 58
19 74.9719 0.7838±0.0164 59 82.1540 0.9834 + 0.0822
20 90.8832 0.0575±0.0003 61 78.8106 0.2798±0.0233
21 0.0354±0.0042 62 53.8973 9.0737±0.9535
22 67.3839 1.4398±0.5117 63 61.7799 3.6998±0.1659
23 0.1281±0.0180 64 85.6 0.93
24 87.8278 0.1743 + 0.0142 65 53.0 7.58
25 79.2829 0.2389±0.0068 66 51.4 4.17 26 67 34.2
27 0.4534±0.0223 68 52.1 8.90
28 87.6048 0.1310±0.0006 69 37.9
29 76.3375 0.4082±0.0145 70 19.0
o
30 38.0253 71 5.1
31 76.2914 1.1082±0.1435 72 47.4
32 47.4559 73 13.8
33 76.3759 0.3931±0.0058 74 5.1
34 90.0581 0.0186±0.0052 75 22.0
35 72.0719 0.2844±0.0124 76 45.8
36 92.9568 0.0489±0.0035 77 43.7
37 35.9963 78 39.5
38 33.8809
Figure imgf000043_0001
ϋ3/: O 9ϊ8981£99s0iAV
Figure imgf000044_0001

Claims

1 . 下式 I化合物:
Figure imgf000045_0001
R1选自 H， d-C6烷基， C2-C6链烯基或炔基， 任选取代的芳基， 硝基， 氨基， NR4R5， 卤素；
R2选自 H， d-C6烷基， 卤素取代的 d-C6烷基， d-C6不饱和烷基， d-C3烷基 羰基， 任选取代的苯甲酰基， 羧基， 氨基羰基， d-C6烷氧基羰基， 羟基， d-C6烷氧 基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 氨基， C3Uf烷基， NHR6;
R3选自 H， d-C6烷基， -C(0)NHR7， d-C6烷氧基羰基， 卤素取代的烷基， C2-C6 链烯基或炔基， 任选取代的苯基， d-C4烷基羰基， 任选取代的苯甲酰基， 任选取代 的吡啶基羰基， d-C3烷基羧基， 酰胺基， 氨基， d-do烷基取代的氨基， 卤素；
R4和 R5各自独立选自 H， 任选取代的芳基， 任选取代的杂环基， 任选取代的芳 基羰基， 任选取代的杂环基羰基， 和任选取代的芳氧基烷基羰基；
R6选自 Ci- 烷基， 任选取代的苯基， C3-C8环烷基羰基， 苯甲酰基， 或与所连 接的 N组成 6员环， 如哌啶环， 或 6员含氧或氮杂环， 如哌嗉环和吗啉环； 和
R7选自任选取代的芳基和任选取代的杂环基。
2. 如权利要求 1所述的化合物 其特征在于， 所述化合物选自下式 II的化合物：
Figure imgf000045_0002
Ar选自任选取代的芳基， 任选取代的杂环基， 任选取代的芳基羰基， 任选取代 的杂环基羰基， 和任选取代的芳氧基烷基羰基；
R2选自 d-C6烷基， 卤素取代的 d-C6烷基， d-C3烷基羰基， 任选取代的苯甲 酰基， 羧基， 氨基羰基， d-C6烷氧基羰基， 羟基， d-C6烷氧基， 任选取代的芳基或 杂芳基， 氨基， NHR6;
R3选自 Ci- 烷基， d-C6烷氧基羰基， 任选取代的苯基， d-C4烷基羰基， 任 选取代的苯甲酰基， d-C3烷基羧基， 酰胺基， 任选取代的苯胺甲酰基。
3. 如权利要求 2所述的化合物， Ar上的取代基选自 d-do烷基， C3-C8环烷基， d-C4烷氧基， 任选取代的苯基， 任选取代的苯氧基， 苄氧基， CF3， 和卤素， 取代基 的数量为 1、 2、 3、 4或 5个。
4. 如权利要求 2所述的化合物， 其特征在于， R2选自 d-C6烷基， CF3， 苯基， 乙酰基， 苯甲酰基， 羧基， 氨基甲酰基， d-C6烷氧基羰基， 氨基， 更优选为甲基， CF3， 苯基。
5. 如权利要求 2所述的化合物， 其特征在于， R3选自 d-C6烷基， 苯基， d-C3 烷基羰基， 任选取代的苯甲酰基， 羧基， d-C6烷氧基羰基， 酰胺基， 任选取代的苯 胺甲酰基； 优选 d-C3烷基羰基， d-C6烷氧基羰基。
6. 如权利要求 1所述的化合 其特征在于， 所述化合物选自下式 III的化合物：
Figure imgf000046_0001
R2选自 d-C6烷基， 卤素取代的 d-C6烷基， 任选取代的苯基， d-C3烷基羰基， 任选取代的苯甲酰基， 羧基， 氨基甲酰基， d-C6烷氧基羰基， 羟基， d-C6烷氧基， 任选取代的芳基或杂芳基， 氨基， 任选取代的氨基；
R3选自 d-C6烷基， 任选取代的苯基， d-C3烷基羰基， d-C3烷氧基羰基， 任 选取代的苯甲酰基， 羧基， 酰胺基， 任选取代的苯胺甲酰基；
R8选自 C5以上的烷基或环烷基， 任选取代的苯基， 5或 6员芳香杂环基， 或任 选取代的苯氧基^-^烷基。
7. 如权利要求 1所述的化合物， 其特征在于， 所述化合物选自化合物 1一 65、 77、 79— 105。
8. 一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物含有权利要求 1一 7中任一 项所述的化合物或其药学上可接受的盐， 和药学上可接受的载体或赋形剂。
9. 权利要求 1一 7中任一项所述的化合物在制备治疗或预防双清乳清酸脱氢酶 介导的疾病用的药物中的用途。
10. 如权利要求 9所述的用途， 其特征在于， 所述双清乳清酸脱氢酶介导的疾 病选自癌症、 器官移植排异和自身免疫性疾病。
11. 权利要求 1一 7中任一项所述的化合物在制备抑制双清乳清酸脱氢酶活性用 的药物中的用途。
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