WO2011081214A1 - オートタキシン測定による肝線維化の検査方法および検査薬 - Google Patents
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- fibroscan ECHOSENS
- acoustic radiation based on the principle of transient elasticity, which measures the propagation velocity of pulsed vibration waves in tissue with the elasticity (kPa) by ultrasonic image analysis.
- Ultrasound diagnostic device ACUSON etc. Mochida Siemens Medical
- Force Impulse is clinically applied, and it is reported that fibroscan shows good correlation with pathological liver fibrosis (Intervirology, 51 11-16, 2008; Gastroenterology, 128, 343-350, 2005).
- liver fibrosis test By combining at least one liver fibrosis test and either the autotaxin concentration or the autotaxin index described in (1) to (3), the liver can be diagnosed with higher diagnostic accuracy than the diagnosis by a single test.
- the liver fibrosis test described in (4) is hyaluronic acid, type IV collagen, type IV collagen 7S, procollagen III peptide, procollagen I peptide, laminin, YKL-40, matrix metal protease 2, TIMP-1,
- liver fibrosis described in (4) wherein the liver fibrosis test described in (4) uses an indirect serum marker of Aspartate Aminotransferase to Platelet Ratio Index or Aspartate / alanin aminotransferase ratio Inspection method.
- the specimen described in (1) and (2) is a human blood component such as whole blood, blood cells, serum, plasma, or a human cell or tissue extract (1) to (7) The method for examining liver fibrosis as described.
- the test method for liver fibrosis according to the present invention includes determining the degree of fibrosis.
- the hyaluronic acid concentration (HA) including the autotaxin index (ATX index), the platelet count, and the diagnosis rate by APRI were evaluated by a statistical method using an ROC curve.
- a comparison of the ATX index and the ROC curve of HA is shown in FIG.
- the ATX index was the most excellent at 0.831, and the sensitivity and specificity at that time were 76.81 and 74.55, respectively (Table 1).
- Example 5 Correlation between autotaxin concentration measurement value and fibroscan measurement value in patients with hepatitis B Correlation between autotaxin concentration measurement value and fibroscan measurement value in hepatitis B virus antigen positive patients as in Example 2.
- r 0.660
- r 0.522
- FIG. 10 shows a distribution chart comparing the patient specimens of the histological stages F1 to F3 and the patient specimens of the F4 group.
- the Mann-Whitney U test showed a significant difference of P ⁇ 0.0009 between the F1 to F3 group patient specimens and the F4 group patient specimens.
- Histological stages F1 to F3 group patient specimens and F4 group patient specimens were analyzed by ROC curves, and the curves shown in FIG. 11 were obtained.
- the autotaxin index and hyaluronic acid concentration AUC / sensitivity were obtained.
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Abstract
肝線維化の程度を検査するための非侵襲的、簡便かつ診断効率の高い検査方法、検査薬を提供すること。試料に含まれるオートタキシンを測定することにより、肝線維化の程度を診断可能であることを明らかにし、さらに既存の線維化マーカーと組み合わせることにより、より高精度に診断可能であることを見いだし課題解決に至った。
Description
本発明はヒト検体中のオートタキシン濃度の測定による肝線維化の検査方法および検査薬に関する。
ヒトオートタキシンは、１９９２年Ｍ．Ｌ．ＳｔｒａｃｋｅらによってＡ２０５８ヒト黒色腫細胞培養培地から細胞運動性を惹起する物質として単離された分子量約１２５ｋＤａの糖蛋白質である（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５６、２５２４−２５２９、１９９２）。オートタキシンはそのリゾホスホリパーゼＤ活性によりリゾホスファチジルコリンを基質としリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）を産生する。生体内ではＬＰＡが癌の増殖、転移に関与していることが多くの研究者により示され（Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ、３、５８２−５９１、２００３；Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、１０．１０９、８３３−８３８、２００４；Ｂｌｏｏｄ、１０６、２１３８−２１４６、２００５）、その産生酵素であるオートタキシンと様々な疾病との因果関係が研究されている。最近になり、ヒトオートタキシンを定量する手法が確立され（ＷＯ２００８／０１６１８６号、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、３８８、５１−５８、２００８）、様々な疾患の診断マーカーとして期待されている。
オートタキシンと肝臓疾患の関係は慢性肝疾患において血清中のオートタキシン濃度が高値を示すことが報告されている（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、３８８、５１−５８、２００８）。オートタキシンのヒト組織あるいは体液中の存在濃度が様々な疾病により変動することを示唆する報告がなされているが、これまでその定量方法がないことより様々な疾病との因果関係の解析がなされてこなかった。我々の発明したＷＯ２００８／０１６１８６号に記載の方法よれば、血清などのヒト検体中のオートタキシン濃度を簡便、短時間、かつ信頼性高く定量可能となった。
肝臓疾患は非アルコール性脂肪性肝炎などのウイルスに因らない肝臓疾患とＢ型、Ｃ型に代表されるウイルス性肝炎に大別される。ウイルス性肝炎においては急性肝炎から慢性肝炎、肝硬変に至る病態であるが、病気の進展には肝線維化が関与しており、治療方針決定や効果予測、肝癌発生のリスク診断において線維化診断は重要である。線維化の確定診断は肝生検検査によるものであるが、侵襲的であり患者負担も多く頻回に施行することは困難である。最近になり、非侵襲的検査法としてパルス振動波の組織内伝搬速度を超音波画像解析法により弾性度（ｋＰａ）で測定するｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙを原理としたフィブロスキャン（ＦｉｂｒｏＳｃａｎ；ＥＣＨＯＳＥＮＳ社）やＡｃｏｕｓｔｉｃ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｆｏｒｃｅ Ｉｍｐｕｌｓｅを原理とした超音波診断装置ＡＣＵＳＯＮ等（持田シーメンスメディカル）が臨床応用され、特にフィブロスキャンにおいて病理学的な肝線維化と良好な相関性を示すことが報告されている（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８；Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｒｏｌｏｇｙ、１２８、３４３−３５０、２００５）。しかし、フィブロスキャンは装置が高額なため特定の病院でのみしか受診することができず汎用性に欠ける。一方、非侵襲的であり汎用的な肝線維化血清マーカーであるヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン７Ｓ、プロコラーゲンＩＩＩペプチド、プロコラーゲンＩペプチド、ラミニン、ＹＫＬ−４０、マトリクスメタルプロテアーゼ２、ＴＩＭＰ−１、血小板数、間接的な血清マーカーであるＡＰＲＩ（Ａｓｐａｒａｔａｔｅ Ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｔｏ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒａｔｉｏ Ｉｎｄｅｘ）やＡＡＲ（Ａｓｐａｒａｔａｔｅ／ａｌａｎｉｎ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｒａｔｉｏ）などはフィブロスキャンに比較し十分な診断性能を示さない（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８）。
オートタキシンと肝臓疾患の関係は慢性肝疾患において血清中のオートタキシン濃度が高値を示すことが報告されている（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、３８８、５１−５８、２００８）。オートタキシンのヒト組織あるいは体液中の存在濃度が様々な疾病により変動することを示唆する報告がなされているが、これまでその定量方法がないことより様々な疾病との因果関係の解析がなされてこなかった。我々の発明したＷＯ２００８／０１６１８６号に記載の方法よれば、血清などのヒト検体中のオートタキシン濃度を簡便、短時間、かつ信頼性高く定量可能となった。
肝臓疾患は非アルコール性脂肪性肝炎などのウイルスに因らない肝臓疾患とＢ型、Ｃ型に代表されるウイルス性肝炎に大別される。ウイルス性肝炎においては急性肝炎から慢性肝炎、肝硬変に至る病態であるが、病気の進展には肝線維化が関与しており、治療方針決定や効果予測、肝癌発生のリスク診断において線維化診断は重要である。線維化の確定診断は肝生検検査によるものであるが、侵襲的であり患者負担も多く頻回に施行することは困難である。最近になり、非侵襲的検査法としてパルス振動波の組織内伝搬速度を超音波画像解析法により弾性度（ｋＰａ）で測定するｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙを原理としたフィブロスキャン（ＦｉｂｒｏＳｃａｎ；ＥＣＨＯＳＥＮＳ社）やＡｃｏｕｓｔｉｃ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｆｏｒｃｅ Ｉｍｐｕｌｓｅを原理とした超音波診断装置ＡＣＵＳＯＮ等（持田シーメンスメディカル）が臨床応用され、特にフィブロスキャンにおいて病理学的な肝線維化と良好な相関性を示すことが報告されている（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８；Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｒｏｌｏｇｙ、１２８、３４３−３５０、２００５）。しかし、フィブロスキャンは装置が高額なため特定の病院でのみしか受診することができず汎用性に欠ける。一方、非侵襲的であり汎用的な肝線維化血清マーカーであるヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン７Ｓ、プロコラーゲンＩＩＩペプチド、プロコラーゲンＩペプチド、ラミニン、ＹＫＬ−４０、マトリクスメタルプロテアーゼ２、ＴＩＭＰ−１、血小板数、間接的な血清マーカーであるＡＰＲＩ（Ａｓｐａｒａｔａｔｅ Ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｔｏ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒａｔｉｏ Ｉｎｄｅｘ）やＡＡＲ（Ａｓｐａｒａｔａｔｅ／ａｌａｎｉｎ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｒａｔｉｏ）などはフィブロスキャンに比較し十分な診断性能を示さない（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８）。
本発明は、肝線維化の程度を診断する上での問題である、侵襲的であり患者負担の多大な肝生検検査、大規模施設のみで設置されている高額な機器フィブロスキャンを用いた診断、線維化診断の信頼性の乏しいヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲンなどの血液診断、これら診断法の有する問題点を解決することを目的とする。本発明者らは、これらの問題を解決すべく、肝線維化と検体中のオートタキシン濃度の関係を鋭意検討した結果、肝線維化の程度と比例して検体中のオートタキシン濃度が上昇することを見いだした。具体的に、フィブロスキャンによる肝線維化の程度と血液中のオートタキシン濃度が良好な相関性を示すことを見いだし、血液中のオートタキシン濃度が肝線維化を反映するマーカーとなりうることを見いだした。これにより、本発明は、ヒト体液、特に血清中のオートタキシン濃度を測定することにより肝臓疾患において肝線維化の程度を非侵襲的、簡便、かつ精度高く診断可能な検査法ならびに検査薬を提供する。
本発明者らが発明したＷＯ２００８／０１６１８６号に記載の測定試薬を用いれば、検体の前処理を必要とすることなくヒトオートタキシンを精度よく定量可能となる。当該測定試薬を用い、オートタキシン濃度と肝線維化との関係を鋭意検討を重ねた結果、肝線維化に伴いオートタキシン濃度の上昇が認められ、さらに線維化の程度に比例して上昇することを見出した。さらに、既存の肝線維化マーカーと組み合わせることにより、さらに高精度で肝線維化の程度を診断できることを見いだした。これにより侵襲的な肝生検検査や高額なフィブロスキャン装置設置等が困難な小規模医療施設での精度の高い肝線維化診断が可能となる。
詳しくは、本願は下記の発明を包含する：
（１）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定することにより肝線維化の程度を診断することを特徴とする肝線維化の検査方法。
（２）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定し、男女健常者それぞれの統計学的数値により補正したオートタキシン指数を用いることにより男女性差の考慮を不要とした肝線維化の程度を診断することを特徴とする肝線維化の検査方法。
（３）（２）記載の統計学的数値がオートタキシン濃度測定値の平均値、中央値、９５パーセンタイル値の内のいずれか一つであることを特徴とする（２）記載の肝線維化の検査方法。
（４）少なくとも一つの肝線維化検査と（１）~（３）記載のオートタキシン濃度あるいはオートタキシン指数のいずれかを組み合わせることにより、単一の検査による診断に比較しより高い診断精度で肝線維化を診断する（１）~（３）記載の肝線維化の検査方法。
（５）（４）記載の肝線維化検査がヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン７Ｓ、プロコラーゲンＩＩＩペプチド、プロコラーゲンＩペプチド、ラミニン、ＹＫＬ−４０、マトリクスメタルプロテアーゼ２、ＴＩＭＰ−１、血小板数のうちのいずれかの直接的血清マーカーを用いることを特徴とする（４）記載の肝線維化の検査方法。
（６）（４）記載の肝線維化検査がＡｓｐａｒａｔａｔｅ Ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｔｏ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒａｔｉｏ Ｉｎｄｅｘ、Ａｓｐａｒａｔａｔｅ／ａｌａｎｉｎ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｒａｔｉｏのうちのいずれかの間接的血清マーカーを用いることを特徴とする（４）記載の肝線維化の検査方法。
（７）（４）記載の肝線維化検査がｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｆｏｒｃｅ Ｉｍｐｕｌｓｅのうちのいずれかの非侵襲的検査法であることを特徴とする（４）記載の肝線維化の検査方法。
（８）（１）および（２）記載の検体が、全血、血球、血清、血漿などのヒト血液成分あるいはヒト細胞、組織の抽出液であることを特徴とする（１）~（７）記載の肝線維化の検査方法。
（９）オートタキシン濃度測定方法が、抗体を用いた免疫化学的方法であることを特徴とする（１）~（８）記載の検査方法。
（１０）（１）~（９）記載の検査方法を原理とすることを特徴とする肝線維化検査薬。
（１１）オートタキシン濃度測定方法が、リゾホスホリパーゼＤ活性であることを特徴とする（１）~（８）記載の検査方法。
（１２）（１１）記載の検査方法を原理とすることを特徴とする肝線維化検査薬。
（１３）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定し、健常者のオートタキシン濃度についての基準と比較し、肝線維化の程度を判定する方法。
（１４）ヒト検体中のオートタキシン指数を測定し、健常者のオートタキシン指数についての基準と比較し、肝線維化の程度を判定する方法。
（１５）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定することによる肝線維化の検査方法。
（１６）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定し、肝線維化の各段階を指標するオートタキシン濃度の基準と比較し、肝線維化の程度を判定する方法。
（１７）オートタキシン濃度測定用の試薬、肝線維化の程度を指標するオートタキシン濃度又は指数についての判定基準を含む、肝線維化検査キット。
（１８）リゾホスホリパーゼＤ活性の計測用の試薬、肝線維化の程度を指標するリゾホスホリパーゼＤ活性についての判定基準を含む、肝線維化検査キット。
詳しくは、本願は下記の発明を包含する：
（１）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定することにより肝線維化の程度を診断することを特徴とする肝線維化の検査方法。
（２）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定し、男女健常者それぞれの統計学的数値により補正したオートタキシン指数を用いることにより男女性差の考慮を不要とした肝線維化の程度を診断することを特徴とする肝線維化の検査方法。
（３）（２）記載の統計学的数値がオートタキシン濃度測定値の平均値、中央値、９５パーセンタイル値の内のいずれか一つであることを特徴とする（２）記載の肝線維化の検査方法。
（４）少なくとも一つの肝線維化検査と（１）~（３）記載のオートタキシン濃度あるいはオートタキシン指数のいずれかを組み合わせることにより、単一の検査による診断に比較しより高い診断精度で肝線維化を診断する（１）~（３）記載の肝線維化の検査方法。
（５）（４）記載の肝線維化検査がヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン７Ｓ、プロコラーゲンＩＩＩペプチド、プロコラーゲンＩペプチド、ラミニン、ＹＫＬ−４０、マトリクスメタルプロテアーゼ２、ＴＩＭＰ−１、血小板数のうちのいずれかの直接的血清マーカーを用いることを特徴とする（４）記載の肝線維化の検査方法。
（６）（４）記載の肝線維化検査がＡｓｐａｒａｔａｔｅ Ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｔｏ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒａｔｉｏ Ｉｎｄｅｘ、Ａｓｐａｒａｔａｔｅ／ａｌａｎｉｎ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｒａｔｉｏのうちのいずれかの間接的血清マーカーを用いることを特徴とする（４）記載の肝線維化の検査方法。
（７）（４）記載の肝線維化検査がｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｆｏｒｃｅ Ｉｍｐｕｌｓｅのうちのいずれかの非侵襲的検査法であることを特徴とする（４）記載の肝線維化の検査方法。
（８）（１）および（２）記載の検体が、全血、血球、血清、血漿などのヒト血液成分あるいはヒト細胞、組織の抽出液であることを特徴とする（１）~（７）記載の肝線維化の検査方法。
（９）オートタキシン濃度測定方法が、抗体を用いた免疫化学的方法であることを特徴とする（１）~（８）記載の検査方法。
（１０）（１）~（９）記載の検査方法を原理とすることを特徴とする肝線維化検査薬。
（１１）オートタキシン濃度測定方法が、リゾホスホリパーゼＤ活性であることを特徴とする（１）~（８）記載の検査方法。
（１２）（１１）記載の検査方法を原理とすることを特徴とする肝線維化検査薬。
（１３）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定し、健常者のオートタキシン濃度についての基準と比較し、肝線維化の程度を判定する方法。
（１４）ヒト検体中のオートタキシン指数を測定し、健常者のオートタキシン指数についての基準と比較し、肝線維化の程度を判定する方法。
（１５）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定することによる肝線維化の検査方法。
（１６）ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定し、肝線維化の各段階を指標するオートタキシン濃度の基準と比較し、肝線維化の程度を判定する方法。
（１７）オートタキシン濃度測定用の試薬、肝線維化の程度を指標するオートタキシン濃度又は指数についての判定基準を含む、肝線維化検査キット。
（１８）リゾホスホリパーゼＤ活性の計測用の試薬、肝線維化の程度を指標するリゾホスホリパーゼＤ活性についての判定基準を含む、肝線維化検査キット。
本発明によれば、ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定することにより肝線維化の程度を診断することが可能となる。オートタキシンの測定はオートタキシンの有する酵素活性であるリゾホスホリパーゼＤ活性測定でも可能であるが、ＷＯ２００８／０１６１８６号に記載の方法に従い免疫学的定量試薬を用い、測定を実施すれば検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることなく、かつ短時間でヒトオートタキシンを定量可能であり、小規模医療施設においても簡便、低コストで診断可能な検査薬を提供することが可能である。
図１はフィブロスキャン測定値と男性Ｃ型肝炎患者血清中のオートタキシン測定値の相関性を示す。
図２はフィブロスキャン測定値と女性Ｃ型肝炎患者血清中のオートタキシン測定値の相関性を示す。
図３はフィブロスキャン測定値とＣ型肝炎患者全体のオートタキシン指数の相関性を示す。オートタキシン指数（ＡＴＸ ｉｎｄｅｘ）＝オートタキシン測定値／９５パーセンタイル上限値、にて算出した。
図４はフィブロスキャン値７．１ｋＰａをＦ２スコアカットオフ値とした際の、ＡＴＸ指数ならびにヒアルロン酸濃度（ＨＡ）のＲＯＣ曲線の比較を示す。実線はＡＴＸ指数、破線がＨＡ、丸はＡＴＸ指数、ＨＡそれぞれのカットオフ値を示している。
図５はフィブロスキャン値７．１ｋＰａをＦ２スコアカットオフ値とした際の、ＡＴＸ指数単独ならびにＡＴＸ指数およびＨＡ測定値の積による値からなるＲＯＣ曲線の比較を示す。実線はＡＴＸ指数単独、破線がＡＴＸ指数およびＨＡ測定値の積、丸はＡＴＸ指数単独、ＡＴＸ指数およびＨＡ測定値の積それぞれのカットオフ値を示している。
図６はフィブロスキャン値７．１ｋＰａをＦ２スコアカットオフ値とした際の、ＡＴＸ指数単独ならびにＡＴＸ指数およびＡＰＲＩ測定値の積による値からなるＲＯＣ曲線の比較を示す。実線はＡＴＸ指数単独、破線がＡＴＸ指数およびＡＰＲＩ測定値の積、丸はＡＴＸ指数単独、ＡＴＸ指数およびＡＰＲＩ測定値の積それぞれのカットオフ値を示している。
図７はフィブロスキャン測定値と男性Ｂ型肝炎患者血清中のオートタキシン測定値の相関性を示す。
図８はフィブロスキャン測定値と女性Ｂ型肝炎患者血清中のオートタキシン測定値の相関性を示す。
図９はフィブロスキャン値１２．５ｋＰａをＦ４スコアカットオフ値とした際のＡＴＸ指数のＲＯＣ曲線を示す。
図１０は組織学的ステージＦ１からＦ３群の患者検体とＦ４群の患者検体のオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）ならびにヒアルロン酸濃度測定値の分布図を示す。
図１１は組織学的ステージＦ１からＦ３群の患者検体とＦ４群の患者検体のオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）ならびにヒアルロン酸濃度測定値からなるＲＯＣ曲線を示す。
図２はフィブロスキャン測定値と女性Ｃ型肝炎患者血清中のオートタキシン測定値の相関性を示す。
図３はフィブロスキャン測定値とＣ型肝炎患者全体のオートタキシン指数の相関性を示す。オートタキシン指数（ＡＴＸ ｉｎｄｅｘ）＝オートタキシン測定値／９５パーセンタイル上限値、にて算出した。
図４はフィブロスキャン値７．１ｋＰａをＦ２スコアカットオフ値とした際の、ＡＴＸ指数ならびにヒアルロン酸濃度（ＨＡ）のＲＯＣ曲線の比較を示す。実線はＡＴＸ指数、破線がＨＡ、丸はＡＴＸ指数、ＨＡそれぞれのカットオフ値を示している。
図５はフィブロスキャン値７．１ｋＰａをＦ２スコアカットオフ値とした際の、ＡＴＸ指数単独ならびにＡＴＸ指数およびＨＡ測定値の積による値からなるＲＯＣ曲線の比較を示す。実線はＡＴＸ指数単独、破線がＡＴＸ指数およびＨＡ測定値の積、丸はＡＴＸ指数単独、ＡＴＸ指数およびＨＡ測定値の積それぞれのカットオフ値を示している。
図６はフィブロスキャン値７．１ｋＰａをＦ２スコアカットオフ値とした際の、ＡＴＸ指数単独ならびにＡＴＸ指数およびＡＰＲＩ測定値の積による値からなるＲＯＣ曲線の比較を示す。実線はＡＴＸ指数単独、破線がＡＴＸ指数およびＡＰＲＩ測定値の積、丸はＡＴＸ指数単独、ＡＴＸ指数およびＡＰＲＩ測定値の積それぞれのカットオフ値を示している。
図７はフィブロスキャン測定値と男性Ｂ型肝炎患者血清中のオートタキシン測定値の相関性を示す。
図８はフィブロスキャン測定値と女性Ｂ型肝炎患者血清中のオートタキシン測定値の相関性を示す。
図９はフィブロスキャン値１２．５ｋＰａをＦ４スコアカットオフ値とした際のＡＴＸ指数のＲＯＣ曲線を示す。
図１０は組織学的ステージＦ１からＦ３群の患者検体とＦ４群の患者検体のオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）ならびにヒアルロン酸濃度測定値の分布図を示す。
図１１は組織学的ステージＦ１からＦ３群の患者検体とＦ４群の患者検体のオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）ならびにヒアルロン酸濃度測定値からなるＲＯＣ曲線を示す。
オートタキシン定量試薬及びオートタキシン測定方法は、ＷＯ２００８／０１６１８６号に記載されている。当該定量試薬及び測定方法において用いる抗ヒトオートタキシンモノクローナル抗体についてもＷＯ２００８／０１６１８６号に記載の方法により取得をすることができる。
上記定量試薬を用い、被験者検体中のヒトオートタキシン濃度を測定することが可能となる。ここで、男性におけるオートタキシン濃度とフィブロスキャン測定値との間の相関係数は０．５７５であり、女性におけるオートタキシン濃度とフィブロスキャン測定値との間の相関係数は０．６７４であり、良好な正の相関性が示されており、オートタキシン濃度の測定により肝線維化の程度の診断が可能となる。肝線維化診断の絶対基準は肝臓の生検検査であるが、非侵襲性の診断装置であるフィブロスキャンによる線維化の診断も利用されており、生体検査と、フィブロスキャンによる線維化の診断とでは非常に良好な相関性が得られているからである。被験者検体中において健常者対照のオートタキシン濃度よりも有意に高いオートタキシン濃度が存在する場合に、肝線維化を診断することができる。
男性のオートタキシン濃度と女性のオートタキシン濃度とは、Ｍａｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定ではｐ＜０．００１の有意差が存在する。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パーセンタイル上限値である０．９１４ｍｇ／Ｌ、１．３２３ｍｇ／Ｌで除した値オートタキシン指数（ＡＴＸ指数 ＝ オートタキシン測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値についてもフィブロスキャン測定値との相関性を調べると、ｒ＝０．６４４の相関係数を示し、良好な相関性が示される。したがって、オートタキシン指数の測定によっても、肝線維化の診断が可能となる。
本発明の肝線維化の検査法は、線維化の程度を判定することを含む。線維化の程度は、Ｆ０（線維化なし）、Ｆ１（門脈域線維性拡大）、Ｆ２（線維性架橋形成）、Ｆ３（小葉の歪みを伴う線維性架橋形成）、Ｆ４（肝硬変）の５段階に分類される。肝線維化診断の絶対基準は肝臓の生検検査であるが、非侵襲性の診断装置であるフィブロスキャンによる線維化の診断も利用されている。フィブロスキャン測定値におけるＦ２ステージの参考診断基準の一つとして７．１ｋＰａが、Ｆ４ステージの肝硬変参考基準値のひとつとして１２．５ｋＰａがそれぞれ基準として採用されている（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８）。本発明の検査法においても、各段階を指標する基準として、オートタキシン濃度及びオートタキシン指数を選択することができ、当該基準に基づき被験者がどの段階に属するかを判定できる。好ましくは、インターフェロンなどの治療の目安となるＦ２ステージ、肝硬変の目安となるＦ４ステージを判定できる。
オートタキシン濃度の測定はオートタキシンの有する酵素活性であるリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することに代替することも可能であるが、この場合オートタキシン以外の他のリゾホスフォリパーゼＤ活性を含んだ測定値が得られてしまうこと、活性測定の際に用いるリゾホスファチジルコリン基質や活性測定の際に生じるコリンが検体中に内在的に含まれること、などのため、真のオートタキシン特異的定量方法としては信頼性が劣るものの、肝線維化の診断に用いることができる。ＷＯ２００８／０１６１８６号に記載の方法に従い免疫学的定量試薬を用いて、測定を実施すれば、検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることがなく、かつ短時間でヒトオートタキシン濃度を定量可能であるため好ましい。リゾフォスフォリパーゼＤ活性の測定法についても、ＷＯ２００８／０１６１８６号に記載されている。
オートタキシン濃度又はオートタキシン指数と他の線維化マーカーとを組み合わせることによりさらに診断効率を向上することができる。好ましくは、他の線維化マーカーとしてヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン７Ｓ、プロコラーゲンＩＩＩペプチド、プロコラーゲンＩペプチド、ラミニン、ＹＫＬ−４０、マトリクスメタルプロテアーゼ２、ＴＩＭＰ−１、血小板数などの直接的血清マーカーを使用することができる。好ましくはヒアルロン酸マーカーと組み合わせることができる。
本明細書において、「検体」とは、全血、血球、血清、血漿などのヒト血液成分又はヒト細胞、組織の抽出液を意味し、人体から採取されたものを指す。
上記定量試薬を用い、被験者検体中のヒトオートタキシン濃度を測定することが可能となる。ここで、男性におけるオートタキシン濃度とフィブロスキャン測定値との間の相関係数は０．５７５であり、女性におけるオートタキシン濃度とフィブロスキャン測定値との間の相関係数は０．６７４であり、良好な正の相関性が示されており、オートタキシン濃度の測定により肝線維化の程度の診断が可能となる。肝線維化診断の絶対基準は肝臓の生検検査であるが、非侵襲性の診断装置であるフィブロスキャンによる線維化の診断も利用されており、生体検査と、フィブロスキャンによる線維化の診断とでは非常に良好な相関性が得られているからである。被験者検体中において健常者対照のオートタキシン濃度よりも有意に高いオートタキシン濃度が存在する場合に、肝線維化を診断することができる。
男性のオートタキシン濃度と女性のオートタキシン濃度とは、Ｍａｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定ではｐ＜０．００１の有意差が存在する。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パーセンタイル上限値である０．９１４ｍｇ／Ｌ、１．３２３ｍｇ／Ｌで除した値オートタキシン指数（ＡＴＸ指数 ＝ オートタキシン測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値についてもフィブロスキャン測定値との相関性を調べると、ｒ＝０．６４４の相関係数を示し、良好な相関性が示される。したがって、オートタキシン指数の測定によっても、肝線維化の診断が可能となる。
本発明の肝線維化の検査法は、線維化の程度を判定することを含む。線維化の程度は、Ｆ０（線維化なし）、Ｆ１（門脈域線維性拡大）、Ｆ２（線維性架橋形成）、Ｆ３（小葉の歪みを伴う線維性架橋形成）、Ｆ４（肝硬変）の５段階に分類される。肝線維化診断の絶対基準は肝臓の生検検査であるが、非侵襲性の診断装置であるフィブロスキャンによる線維化の診断も利用されている。フィブロスキャン測定値におけるＦ２ステージの参考診断基準の一つとして７．１ｋＰａが、Ｆ４ステージの肝硬変参考基準値のひとつとして１２．５ｋＰａがそれぞれ基準として採用されている（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８）。本発明の検査法においても、各段階を指標する基準として、オートタキシン濃度及びオートタキシン指数を選択することができ、当該基準に基づき被験者がどの段階に属するかを判定できる。好ましくは、インターフェロンなどの治療の目安となるＦ２ステージ、肝硬変の目安となるＦ４ステージを判定できる。
オートタキシン濃度の測定はオートタキシンの有する酵素活性であるリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することに代替することも可能であるが、この場合オートタキシン以外の他のリゾホスフォリパーゼＤ活性を含んだ測定値が得られてしまうこと、活性測定の際に用いるリゾホスファチジルコリン基質や活性測定の際に生じるコリンが検体中に内在的に含まれること、などのため、真のオートタキシン特異的定量方法としては信頼性が劣るものの、肝線維化の診断に用いることができる。ＷＯ２００８／０１６１８６号に記載の方法に従い免疫学的定量試薬を用いて、測定を実施すれば、検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることがなく、かつ短時間でヒトオートタキシン濃度を定量可能であるため好ましい。リゾフォスフォリパーゼＤ活性の測定法についても、ＷＯ２００８／０１６１８６号に記載されている。
オートタキシン濃度又はオートタキシン指数と他の線維化マーカーとを組み合わせることによりさらに診断効率を向上することができる。好ましくは、他の線維化マーカーとしてヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン７Ｓ、プロコラーゲンＩＩＩペプチド、プロコラーゲンＩペプチド、ラミニン、ＹＫＬ−４０、マトリクスメタルプロテアーゼ２、ＴＩＭＰ−１、血小板数などの直接的血清マーカーを使用することができる。好ましくはヒアルロン酸マーカーと組み合わせることができる。
本明細書において、「検体」とは、全血、血球、血清、血漿などのヒト血液成分又はヒト細胞、組織の抽出液を意味し、人体から採取されたものを指す。
以下に実施例を示すが、本発明は実施例に記載された例に限られるものではない。以下の実験を行うに当たっては、研究倫理について東京大学大学院医学研究科倫理委員会での承認のもと、東京大学医学部附属病院にて血清検体の採取および測定を実施した。オートタキシン濃度測定は、自動免疫測定装置ＡＩＡシリーズ（東ソー社製）を用い実施した。
実施例１：健常者検体の測定
患者検体測定に先立ち、コントロール群として健常者血清のオートタキシン濃度を測定した。血液は採血７日前より投薬のない健常な成人ボランティアからインフォームドコンセントを得た後、肘前中静脈より採取し、室温１５分放置後、１５００×ｇにて５分間遠心分離することにより血清を取得し測定を実施した。男性７４名（２３~６５歳）、女性４６名（２１~６０歳）の健常者血清中のオートタキシン濃度の測定を実施した。１２０名全員のオートタキシン濃度測定値は０．７３１±０．１７６ｍｇ／Ｌ（算術平均値±標準偏差）であり、９５パーセンタイルからなる参考基準範囲は０．４６８~１．１３４ｍｇ／Ｌであった。男性オートタキシン濃度測定値は０．６５６±０．１２１ｍｇ／Ｌ、中央値０．６４１ｍｇ／Ｌ、９５パーセンタイル参考基準範囲０．４３８~０．９１４ｍｇ／Ｌであった。一方、女性オートタキシン濃度測定値は０．８５２±０．１８４ｍｇ／Ｌ、中央値０．８２０ｍｇ／Ｌ、９５パーセンタイル参考基準範囲０．６２５~１．３２３ｍｇ／Ｌであった。女性血清中のオートタキシン濃度は男性に比べ明らかに高濃度であり、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔではＰ＜０．００１の有意差を示した。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パー線タイル上限値である０．９１４ｍｇ／Ｌ、１．３２３ｍｇ／Ｌで除した値オートタキシン指数（ＡＴＸ指数 ＝ オートタキシン測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値を用い以下の評価を実施した。
実施例２：オートタキシン測定値とフィブロスキャン測定値の相関性
肝線維化診断の絶対基準は肝臓の生検検査であり、線維化の程度はＦ０（線維化なし）、Ｆ１（門脈域線維性拡大）、Ｆ２（線維性架橋形成）、Ｆ３（小葉の歪みを伴う線維性架橋形成）、Ｆ４（肝硬変）の５段階に分類されている。最近になり非侵襲性の診断装置であるフィブロスキャンによる線維化の診断が生検検査と非常に良好な相関性が得られることが明らかとなり利用されるようになっている。そこで男女それぞれのオートタキシン濃度ならびにオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）とフィブロスキャン測定値の相関性を検証した。測定検体はＣ型肝炎患者血清を用いＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）測定値１００ＩＵ／Ｌ以上の検体はフィブロスキャンで正確な値を示さないとの報告があるため除外し、男性５４検体、女性７０検体にて検討した。男性におけるフィブロスキャンとオートタキシン濃度の相関係数はｒ＝０．５７５（図１）、女性における相関係数はｒ＝０．６７４（図２）、全体の相関性であるオートタキシン指数との相関係数はｒ＝０．６４４（図３）であり、いずれもフィブロスキャンと良好な正の相関性を示した。
実施例３：オートタキシン指数による肝線維化Ｆ２スコア以上の診断効率
肝線維化の程度においてＦ２スコア以上の線維化はインターフェロン等の治療の目安とされており、Ｆ２スコアの診断効率は診断マーカーの重要な性能指標となる。フィブロスキャン測定値におけるＦ２ステージの参考診断基準の一つとして７．１ｋＰａを基準（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８）に、７．１ｋＰａ以上の検体をＦ２スコア以上の線維化群に分類したところ陽性検体６９例、陰性検体５５例となった。本診断分類にてオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）を含めヒアルロン酸濃度（ＨＡ）、血小板数、ＡＰＲＩによる診断率をＲＯＣ曲線による統計学的方法にて評価した。代表としてＡＴＸ指数とＨＡのＲＯＣ曲線の比較を図４に示す。ＲＯＣ曲線のＡＵＣ値（ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｃｕｒｖｅ）値の比較ではＡＴＸ指数が０．８３１と最も優れており、その際の感度、特異性はそれぞれ７６．８１、７４．５５であった（表１）。
実施例４：オートタキシン指数と他の血清マーカーの組み合わせによる肝線維化Ｆ２スコア以上の診断効率
実施例３のデータを用いＡＴＸ指数およびＨＡの組み合わせ、ＡＴＸ指数およびＡＰＲＩの組み合わせによる診断効率をＡＴＸ指数単独の診断と比較した。組み合わせた方法における診断効率は、いずれのマーカーも線維化に伴い上昇するため、それぞれのマーカー測定値の積を用いて統計解析した。その結果、いずれの組み合わせにおいてもＡＴＸ指数単独と比較しＡＵＣ値が高い結果を示した（表２、図５および６）。
また、ＡＴＸ指数およびＨＡの組み合わせによるＲＯＣ曲線、ＨＡ単独によるＲＯＣ曲線間では有意差ｐ＝０．０５を示し、ＡＴＸ指数を組み合わせることによる診断効率の向上が確認された。
実施例５：Ｂ型肝炎患者におけるオートタキシン濃度測定値とフィブロスキャン測定値の相関性
実施例２と同様にＢ型肝炎ウイルス抗原陽性患者において、オートタキシン濃度測定値とフィブロスキャン測定値の相関性を男性２５検体、女性１５検体にて検討した。男性におけるフィブロスキャンとオートタキシン濃度の相関係数はｒ＝０．６６０（図７）、女性における相関係数はｒ＝０．５２２（図８）であり、いずれもフィブロスキャンと良好な正の相関性を示した。
実施例６：オートタキシン指数による肝線維化Ｆ４スコア以上の診断効率
肝線維化の程度においてＦ４スコア以上の線維化は肝硬変と位置づけられ治療方針が大きく変化するためＦ４スコアの肝硬変の診断効率は診断マーカーの重要な性能指標となる。フィブロスキャン測定値におけるＦ４ステージの参考診断基準の一つとして１２．５ｋＰａを基準（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｒｏｌｏｇｙ、１２８、３４３−３５０、２００５）に、１２．５ｋＰａ以上の検体をＦ４スコア以上の肝硬変群に分類したところ陽性検体８０例、陰性検体４４例となった。本診断分類にてオートタキシン指数による診断率をＲＯＣ曲線による統計学的方法にて評価した。ＲＯＣ曲線のＡＵＣ値は０．８５８であり、その際の感度８１．８２、特異性７３．７５と肝硬変診断の有効性を示した（図９）。
実施例７：生検検査検体を用いた診断効率評価
生検検査により組織学的ステージが決定された患者血清サンプルを用い、実施例６同様に肝硬変の診断効率を検証した。使用した検体の一覧を表３に示す。
これら検体を用いオートタキシン濃度およびオートタキシン指数の測定並びにヒアルロン酸濃度の測定を行い、統計解析を用いて診断効率を比較検討した。組織学的ステージＦ１からＦ３群の患者検体とＦ４群の患者検体を比較した分布図を図１０に示す。オートタキシン指数及びヒアルロン酸濃度のいずれにおいてもＦ１からＦ３群の患者検体とＦ４群の患者検体との間のＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔでＰ＜０．０００９の有意差を示し、肝硬変診断の有効性が確認された。組織学的ステージＦ１からＦ３群の患者検体とＦ４群の患者検体とを比較したＲＯＣ曲線による解析を行なったところ、図１１に示す曲線が得られ、オートタキシン指数およびヒアルロン酸濃度のＡＵＣ／感度／特異性はそれぞれ、０．７３７／７１．９％／７１．４％および０．７３６／５６．２％／８２．８％であり、肝硬変診断においてもオートタキシン測定が有効であることが確認できた。さらにオートタキシン指数は本ＲＯＣ解析から得られたカットオフ値２．１２を、ヒアルロン酸濃度は一般的に肝硬変診断に用いられるカットオフ値１３０μｇ／Ｌを、それぞれ用い各検体の診断的中率を換算した（表４）。陽性的中率（Ｆ４群患者検体の陽性判定数／患者検体全体の陽性判定数×１００）、陰性的中率（Ｆ１からＦ３群患者検体の陰性判定数／患者検体全体の陰性判定数×１００）、的中率（［Ｆ４群患者検体の陽性判定数＋Ｆ１からＦ３群患者検体の陰性判定数］／患者検体全数×１００）のいずれについてもオートタキシン指数がヒアルロン酸濃度に比較し優れていることが示された。
実施例１：健常者検体の測定
患者検体測定に先立ち、コントロール群として健常者血清のオートタキシン濃度を測定した。血液は採血７日前より投薬のない健常な成人ボランティアからインフォームドコンセントを得た後、肘前中静脈より採取し、室温１５分放置後、１５００×ｇにて５分間遠心分離することにより血清を取得し測定を実施した。男性７４名（２３~６５歳）、女性４６名（２１~６０歳）の健常者血清中のオートタキシン濃度の測定を実施した。１２０名全員のオートタキシン濃度測定値は０．７３１±０．１７６ｍｇ／Ｌ（算術平均値±標準偏差）であり、９５パーセンタイルからなる参考基準範囲は０．４６８~１．１３４ｍｇ／Ｌであった。男性オートタキシン濃度測定値は０．６５６±０．１２１ｍｇ／Ｌ、中央値０．６４１ｍｇ／Ｌ、９５パーセンタイル参考基準範囲０．４３８~０．９１４ｍｇ／Ｌであった。一方、女性オートタキシン濃度測定値は０．８５２±０．１８４ｍｇ／Ｌ、中央値０．８２０ｍｇ／Ｌ、９５パーセンタイル参考基準範囲０．６２５~１．３２３ｍｇ／Ｌであった。女性血清中のオートタキシン濃度は男性に比べ明らかに高濃度であり、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔではＰ＜０．００１の有意差を示した。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パー線タイル上限値である０．９１４ｍｇ／Ｌ、１．３２３ｍｇ／Ｌで除した値オートタキシン指数（ＡＴＸ指数 ＝ オートタキシン測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値を用い以下の評価を実施した。
実施例２：オートタキシン測定値とフィブロスキャン測定値の相関性
肝線維化診断の絶対基準は肝臓の生検検査であり、線維化の程度はＦ０（線維化なし）、Ｆ１（門脈域線維性拡大）、Ｆ２（線維性架橋形成）、Ｆ３（小葉の歪みを伴う線維性架橋形成）、Ｆ４（肝硬変）の５段階に分類されている。最近になり非侵襲性の診断装置であるフィブロスキャンによる線維化の診断が生検検査と非常に良好な相関性が得られることが明らかとなり利用されるようになっている。そこで男女それぞれのオートタキシン濃度ならびにオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）とフィブロスキャン測定値の相関性を検証した。測定検体はＣ型肝炎患者血清を用いＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）測定値１００ＩＵ／Ｌ以上の検体はフィブロスキャンで正確な値を示さないとの報告があるため除外し、男性５４検体、女性７０検体にて検討した。男性におけるフィブロスキャンとオートタキシン濃度の相関係数はｒ＝０．５７５（図１）、女性における相関係数はｒ＝０．６７４（図２）、全体の相関性であるオートタキシン指数との相関係数はｒ＝０．６４４（図３）であり、いずれもフィブロスキャンと良好な正の相関性を示した。
実施例３：オートタキシン指数による肝線維化Ｆ２スコア以上の診断効率
肝線維化の程度においてＦ２スコア以上の線維化はインターフェロン等の治療の目安とされており、Ｆ２スコアの診断効率は診断マーカーの重要な性能指標となる。フィブロスキャン測定値におけるＦ２ステージの参考診断基準の一つとして７．１ｋＰａを基準（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ、５１、１１−１６、２００８）に、７．１ｋＰａ以上の検体をＦ２スコア以上の線維化群に分類したところ陽性検体６９例、陰性検体５５例となった。本診断分類にてオートタキシン指数（ＡＴＸ指数）を含めヒアルロン酸濃度（ＨＡ）、血小板数、ＡＰＲＩによる診断率をＲＯＣ曲線による統計学的方法にて評価した。代表としてＡＴＸ指数とＨＡのＲＯＣ曲線の比較を図４に示す。ＲＯＣ曲線のＡＵＣ値（ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｃｕｒｖｅ）値の比較ではＡＴＸ指数が０．８３１と最も優れており、その際の感度、特異性はそれぞれ７６．８１、７４．５５であった（表１）。
実施例３のデータを用いＡＴＸ指数およびＨＡの組み合わせ、ＡＴＸ指数およびＡＰＲＩの組み合わせによる診断効率をＡＴＸ指数単独の診断と比較した。組み合わせた方法における診断効率は、いずれのマーカーも線維化に伴い上昇するため、それぞれのマーカー測定値の積を用いて統計解析した。その結果、いずれの組み合わせにおいてもＡＴＸ指数単独と比較しＡＵＣ値が高い結果を示した（表２、図５および６）。
実施例５：Ｂ型肝炎患者におけるオートタキシン濃度測定値とフィブロスキャン測定値の相関性
実施例２と同様にＢ型肝炎ウイルス抗原陽性患者において、オートタキシン濃度測定値とフィブロスキャン測定値の相関性を男性２５検体、女性１５検体にて検討した。男性におけるフィブロスキャンとオートタキシン濃度の相関係数はｒ＝０．６６０（図７）、女性における相関係数はｒ＝０．５２２（図８）であり、いずれもフィブロスキャンと良好な正の相関性を示した。
実施例６：オートタキシン指数による肝線維化Ｆ４スコア以上の診断効率
肝線維化の程度においてＦ４スコア以上の線維化は肝硬変と位置づけられ治療方針が大きく変化するためＦ４スコアの肝硬変の診断効率は診断マーカーの重要な性能指標となる。フィブロスキャン測定値におけるＦ４ステージの参考診断基準の一つとして１２．５ｋＰａを基準（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｒｏｌｏｇｙ、１２８、３４３−３５０、２００５）に、１２．５ｋＰａ以上の検体をＦ４スコア以上の肝硬変群に分類したところ陽性検体８０例、陰性検体４４例となった。本診断分類にてオートタキシン指数による診断率をＲＯＣ曲線による統計学的方法にて評価した。ＲＯＣ曲線のＡＵＣ値は０．８５８であり、その際の感度８１．８２、特異性７３．７５と肝硬変診断の有効性を示した（図９）。
実施例７：生検検査検体を用いた診断効率評価
生検検査により組織学的ステージが決定された患者血清サンプルを用い、実施例６同様に肝硬変の診断効率を検証した。使用した検体の一覧を表３に示す。
Claims (12)
- ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定することによる肝線維化の検査方法。
- ヒト検体中のオートタキシン濃度を測定し、男女健常者それぞれの統計学的数値により補正したオートタキシン指数を用いることにより男女性差の考慮を不要とした肝線維化の検査方法。
- 請求項２記載の統計学的数値がオートタキシン濃度測定値の平均値、中央値、９５パーセンタイル値の内のいずれか一つであることを特徴とする、請求項２記載の肝線維化の検査方法。
- 少なくとも一つの肝線維化検査と請求項１~３記載のオートタキシン濃度あるいはオートタキシン指数のいずれかを組み合わせることにより、単一の検査に比較し、より精度が高い、請求項１~３記載の肝線維化の検査方法。
- 請求項４記載の肝線維化検査がヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン７Ｓ、プロコラーゲンＩＩＩペプチド、プロコラーゲンＩペプチド、ラミニン、ＹＫＬ−４０、マトリクスメタルプロテアーゼ２、ＴＩＭＰ−１、血小板数のうちのいずれかの直接的血清マーカーを用いることを特徴とする、請求項４記載の肝線維化の検査方法。
- 請求項４記載の肝線維化検査がＡｓｐａｒａｔａｔｅ Ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｔｏ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒａｔｉｏ Ｉｎｄｅｘ、Ａｓｐａｒａｔａｔｅ／ａｌａｎｉｎ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｒａｔｉｏのうちのいずれかの間接的血清マーカーを用いることを特徴とする請求項４記載の肝線維化の検査方法。
- 請求項４記載の肝線維化検査がｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｆｏｒｃｅ Ｉｍｐｕｌｓｅのうちのいずれかの非侵襲的検査法であることを特徴とする請求項４記載の肝線維化の検査方法。
- 請求項１および２記載の検体が、全血、血球、血清、血漿などのヒト血液成分あるいはヒト細胞、組織の抽出液であることを特徴とする請求項１~７記載の検査方法。
- オートタキシン濃度測定方法が、抗体を用いた免疫化学的方法であることを特徴とする請求項１~８記載の検査方法。
- 請求項１~９記載の検査方法を原理とすることを特徴とする肝線維化検査薬。
- オートタキシン濃度測定方法が、リゾホスホリパーゼＤ活性を計測することを特徴とする請求項１~８記載の検査方法。
- 請求項１１記載の検査方法を原理とすることを特徴とする肝線維化検査薬。
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