WO2010113753A1

WO2010113753A1 - ＪＮＫ（ｃ－Ｊｕｎアミノ末端キナーゼ）阻害ペプチドを用いた網膜疾患の予防または治療剤、網膜疾患の予防または治療方法、ならびに、その使用

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Publication number: WO2010113753A1
Application number: PCT/JP2010/055208
Authority: WO
Inventors: 慎一郎平井; 登起義松下; 由紀恵藤田; 宏明倉島; 康司大橋
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2009-03-30
Filing date: 2010-03-25
Publication date: 2010-10-07
Anticipated expiration: 2011-09-30
Also published as: KR20120022721A; EP2415478A4; EP2415478A1; CA2756864A1; CN102365093A; JP2010254672A; EA201171188A1; US20120101046A1

Abstract

　（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドの硝子体内投与は、スペルミジン誘発網膜色素上皮障害、ツニカマイシン誘発視細胞障害およびレーザー誘発脈絡膜血管新生を抑制した。したがって、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、網膜疾患の予防または治療に有用であり、このようなＪＮＫ阻害ペプチドを用いることで、眼局所投与によっても網膜疾患を予防または治療しうる薬剤、方法が提供され、また、前記薬剤を製造するためのＪＫＮ阻害ペプチドの使用についても提供される。

Description

ＪＮＫ（ｃ－Ｊｕｎアミノ末端キナーゼ）阻害ペプチドを用いた網膜疾患の予防または治療剤、網膜疾患の予防または治療方法、ならびに、その使用

　本発明は、特定のアミノ酸配列を含み、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤に関する。また本発明は、このようなＪＮＫ阻害ペプチドを用いた網膜疾患の予防または治療方法に関する。さらに本発明は、このようなＪＮＫ阻害ペプチドの、網膜疾患の予防または治療剤を製造するための使用にも関する。

　網膜疾患は、眼科領域における最も重要な疾患群の一つであり、難治性疾患が多く、失明の原因となり得る重篤な症状を示すものも多い。代表的な疾患としては、加齢黄斑変性（ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｍａｃｕｌａｒ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）（以下、「ＡＭＤ」ともいう）、糖尿病網膜症（ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、中心性滲出性脈絡膜網膜症（ｃｅｎｔｒａｌ　ｅｘｕｄａｔｉｖｅ　ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｉｄ　ｓｔｒｅａｋｓ）、網膜色素上皮剥離（ｒｅｔｉｎａｌ　ｐｉｇｍｅｎｔ　ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ　ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ）、多発性脈絡膜炎（ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ　ｃｈｏｒｏｉｄｉｔｉｓ）、未熟児網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ　ｏｆ　ｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ）、網膜色素変性症（ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ　ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）、レーベル病（Ｌｅｂｅｒ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）、網膜動脈閉塞症（ｒｅｔｉｎａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）、網膜静脈閉塞症（ｒｅｔｉｎａｌ　ｖｅｉｎ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）、中心性漿液性脈絡網膜症（ｃｅｎｔｒａｌ　ｓｅｒｏｕｓ　ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、網膜動脈瘤（ｒｅｔｉｎａｌ　ｍａｃｒｏａｎｅｕｒｙｓｍ）、網膜剥離（ｒｅｔｉｎａｌ　ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ）、増殖性硝子体網膜症（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、シュタルガルト病（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）、脈絡膜硬化症（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、全脈絡膜萎縮症（ｃｈｏｒｉｏｄｅｒｅｍｉａ）、卵黄状黄斑ジストロフィ（ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ　ｍａｃｕｌａｒ　ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、小口病（Ｏｇｕｃｈｉ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）、眼底白点症（ｆｕｎｄｕｓ　ａｌｂｉｐｕｎｃｔａｔｕｓ）、白点状網膜炎（ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ　ｐｕｎｃｔａｔａ　ａｌｂｅｓｃｅｎｓ）、脳回転状網脈絡膜萎縮症（ｇｙｒａｔｅ　ａｔｒｏｐｈｙ　ｏｆ　ｃｈｏｒｏｉｄ　ａｎｄ　ｒｅｔｉｎａ）などが挙げられる。また、高度近視（ｈｉｇｈ　ｍｙｏｐｉａ）、傾斜乳頭症候群（ｔｉｌｔｅｄ　ｄｉｓｃ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、脈絡膜骨腫（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ　ｏｓｔｅｏｍａ）などを原因とする新生血管黄斑症（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ）も視力に影響を与える網膜疾患として知られている。

　現在、これらの網膜疾患を効果的に予防または治療する薬物の開発が望まれている。特に、加齢黄斑変性および糖尿病網膜症は、欧米諸国や日本などの先進国での壮年から老年期における失明の主要原因疾患となっており、眼科臨床および社会的にも非常に重要な疾患とされている。

　加齢黄斑変性は、後期加齢黄斑症（ｌａｔｅ　ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ）と同一視されることもあり、網膜色素上皮や脈絡膜毛細血管の萎縮をきたす「萎縮型加齢黄斑変性（ａｔｒｏｐｈｉｃ　ＡＭＤ）」と、黄斑部に脈絡膜から脈絡膜新生血管が進展し、出血や滲出性病変を生じ、最終的には瘢痕組織を形成する「滲出型加齢黄斑変性（ｅｘｕｄａｔｉｖｅ　ＡＭＤ）」とに分類される。また、「ポリープ状脈絡膜血管症（ｐｏｌｙｐｏｉｄａｌ　ｃｈｏｒｏｉｄａｌ　ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）」と呼ばれる滲出型加齢黄斑変性の特殊病型も知られている。ポリープ状脈絡膜血管症は、網膜下にある脈絡膜血管がポリープ状に拡張し、網膜下に出血することにより、加齢黄斑変性に類似した病態を示す。なお、ドルーゼンと網膜色素上皮の異常が認められる加齢黄斑変性の初期段階は、特に「初期加齢黄斑症（ｅａｒｌｙ　ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ）」と呼ばれる。

　また、糖尿病網膜症は糖尿病に合併した網膜血管障害である。一般的には、糖尿病網膜症は、網膜細動脈瘤、網膜出血、網膜浮腫などが認められる「単純網膜症（ｓｉｍｐｌｅ　ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）」、新生血管、硝子体出血、牽引性網膜剥離などを伴う「増殖網膜症（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）」、およびこの両者の中間にあたる「増殖前網膜症（ｐｒｅ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）」の３つに分類される。また、糖尿病網膜症の中でも、血管透過性亢進に伴う黄斑浮腫が視力に大きく影響することから、黄斑浮腫を伴う糖尿病網膜症の一病態を、特に「糖尿病黄斑浮腫（ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｍａｃｕｌａｒ　ｅｄｅｍａ）」と呼ぶことがある。

　さらに、加齢黄斑変性および糖尿病網膜症以外の網膜疾患について以下に説明する。
　中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎は、いずれもその病態に脈絡膜血管新生が深く関与しているとされ、これらは新生血管黄斑症の原因疾患としても知られている。また、高度近視、傾斜乳頭症候群、脈絡膜骨腫などの眼疾患においても、脈絡膜血管新生が認められることがあり、これらの疾患は新生血管黄斑症に進行することがあるとされている。なお、未熟児網膜症の病因が異常な血管増殖（血管新生）であることはよく知られている。すなわち、前記疾患において認められる視力低下には、これらの脈絡膜血管新生が関与しているものと考えられる。

　網膜色素変性症およびレーベル病は網膜色素上皮細胞および視細胞が障害される疾患であり、夜盲に始まり、徐々に視野狭窄が進行することが知られている。また、網膜動脈閉塞症においても、動脈閉塞による虚血によって視細胞が障害されることが知られている。

　シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症および白点状網膜炎は、いずれも網膜色素上皮が萎縮、変性などにより障害されることで視力低下が認められる疾患である。すなわち、シュタルガルト病の原因は網膜色素上皮の変性であるとされ、また、脈絡膜硬化症および全脈絡膜萎縮症においては、網膜色素上皮の萎縮がその発症原因の一つであると指摘されている。一方、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症および白点状網膜炎については、必ずしもその病態は明らかとなっていないものの、やはり網膜色素上皮の障害が一つの原因であると考えられている。

　脳回転状網脈絡膜萎縮症は、オルニチン代謝酵素の欠損により生ずる常染色体劣勢遺伝疾患であり、網脈絡膜の中間周辺部に小円形の萎縮巣が出現し、視力低下、夜盲、視野狭窄などの視力障害が認められる。なお、Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．　Ｓｃｉ．，４８（１），　４５５－４６３（２００７）（非特許文献１）には、オルニチンの代謝物の一つであるスペルミジンが網膜色素上皮細胞を障害することが開示されており、スペルミジンによる網膜色素上皮障害と脳回転状網脈絡膜萎縮症との関連性が指摘されている。

　網膜静脈閉塞症においては、静脈閉塞により血管内皮細胞が障害されるために血管壁の透過性が亢進し、閉塞領域に強い網膜浮腫をきたし、長期間（１～２年）後に血管新生を認める。また、中心性漿液性脈絡網膜症の病因も脈絡膜血管の透過性亢進であるとされている。さらに、網膜動脈瘤においても網膜浮腫が認められることが知られている。

　網膜剥離は前述の糖尿病網膜症、未熟児網膜症などの眼疾患とも関連していることが知られている。また、増殖性硝子体網膜症と網膜症の間には深い関連性が認められる。

　一方、ＪＮＫ（ｃ－Ｊｕｎアミノ末端キナーゼ：ｃ－Ｊｕｎ　Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｋｉｎａｓｅ）は、マイトゲン活性化タンパク質（ＭＡＰ：Ｍｉｔｏｇｅｎ－Ａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）キナーゼのストレス活性化グループのメンバーであり、ｃ－Ｊｕｎをリン酸化する。特表２００８－５１８９２２号公報（特許文献１）には、非ペプチド性のＪＮＫ阻害剤であるＳＰ６００１２５の腹腔内投与が、虚血／再灌流により誘導されるラットの眼神経障害を保護することが開示されている。また、特許文献１には、ＳＰ６００１２５が血清除去またはグルタミン酸により誘導されるラット培養網膜神経節細胞の細胞死を抑制することも開示されている。以上の知見をもとに、特許文献１には、ＳＰ６００１２５などのＪＮＫ阻害剤が、緑内障、虚血性神経障害、虚血性網膜障害、色素性網膜症、網膜剥離などの眼疾患の治療剤になりうることが記載されている。

　しかしながら、Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．　Ｓｃｉ．，４４（１２），　５３８３－５３９５（２００３）（非特許文献２）には、ＳＰ６００１２５の硝子体内投与は虚血性の網膜障害を保護することができず、むしろ虚血性の障害を悪化させる傾向にあることが示されている。すなわち、ＳＰ６００１２５については、眼局所投与により網膜疾患を治療または予防できない可能性が考えられる。なお、網膜疾患治療剤の投与経路としては硝子体投与などの眼局所投与が一般的であり、全身副作用を防止する観点でも眼局所投与が好ましい。

　また、ＳＰ６００１２５以外のＪＮＫ阻害剤として、ペプチド性のＪＮＫ阻害剤も知られている（非特許文献２、特表２００３－５１１０７１号公報（特許文献２）、特表２００９－５０７５０２号公報（特許文献３）など）。しかしながら、非特許文献２には、ペプチド性のＪＮＫ阻害剤の硝子体内投与においても、虚血性の網膜障害を保護することができず、むしろ障害を悪化させる傾向にあることが示されている。

　以上のように、いずれの先行技術文献にも、眼局所投与によって網膜疾患を治療または予防しうるＪＮＫ阻害剤は開示されていない。また、ＳＰ６００１２５以外のＪＮＫ阻害剤が、網膜疾患の治療または予防に有効であることを示す報告も存在しない。

特表２００８－５１８９２２号公報特表２００３－５１１０７１号公報特表２００９－５０７５０２号公報

Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．　Ｓｃｉ．，４８（１），　４５５－４６３（２００７）Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．　Ｓｃｉ．，４４（１２），　５３８３－５３９５（２００３）

　本発明は、上述した課題を解決するためになされたものであって、その目的とするところは、ＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有し、眼局所投与によっても網膜疾患を予防または治療しうる薬剤、方法を提供することである。

　本発明者らは、網膜疾患を治療または予防しうるＪＮＫ阻害剤について鋭意研究を行なったところ、特定のアミノ酸配列を含み、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドの硝子体内投与が、スペルミジン誘発網膜色素上皮障害、レーザー誘発脈絡膜血管新生およびツニカマイシン誘発視細胞障害を抑制することを見出し、本発明に至った。その一方で、代表的なＪＮＫ阻害剤であるＳＰ６００１２５では、同様の効果が確認されなかったことを勘案すれば、これは驚くべき結果である。背景技術の項で説明したように、網膜色素上皮障害、脈絡膜血管新生および視細胞障害は多くの網膜疾患の発症および／または進行に深く関与しており、これらを抑制する薬剤は網膜疾患の予防または治療に有用である。

　すなわち、本発明は、（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤である。

　また本発明は、配列番号５および配列番号６の少なくともいずれかのアミノ酸配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤についても提供する。

　さらに本発明は、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤についても提供する。この場合、前記ＪＮＫ阻害ペプチドの全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であることが好ましい。

　本発明における前記網膜疾患は、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）、中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎、新生血管黄斑症（高度近視、傾斜乳頭症候群または脈絡膜骨腫を原因とするものに限る）、未熟児網膜症、網膜色素変性症、レーベル病、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜動脈瘤、網膜剥離、増殖性硝子体網膜症、シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症、白点状網膜炎および脳回転状網脈絡膜萎縮症からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。

　また本発明の網膜疾患の予防または治療剤の投与経路としては、硝子体内投与、結膜嚢内投与、結膜下投与またはテノン嚢下投与であることが好ましい。

　配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する場合の本発明の網膜疾患の予防または治療剤においては、前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）からなる群より選択される少なくとも１種であり、投与経路が硝子体内投与であることが好ましい。

　本発明は、患者に、（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを薬理上有効な量投与することを含む網膜疾患の予防または治療方法についても提供する。

　本発明はまた、患者に、配列番号５および配列番号６の少なくともいずれかのアミノ酸配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを薬理上有効な量投与することを含む網膜疾患の予防または治療方法についても提供する。

　さらに本発明は、患者に、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを薬理上有効な量投与することを含む網膜疾患の予防または治療方法についても提供する。

　本発明の予防または治療方法において、前記ＪＮＫ阻害ペプチドの全てのアミノ酸はＤ－アミノ酸であることが好ましい。

　また本発明における前記網膜疾患は、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）、中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎、新生血管黄斑症（高度近視、傾斜乳頭症候群または脈絡膜骨腫を原因とするものに限る）、未熟児網膜症、網膜色素変性症、レーベル病、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜動脈瘤、網膜剥離、増殖性硝子体網膜症、シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症、白点状網膜炎および脳回転状網脈絡膜萎縮症からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。

　本発明の予防または治療方法における投与経路としては、硝子体内投与、結膜嚢内投与、結膜下投与またはテノン嚢下投与であることが好ましい。

　配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを薬理上有効な量患者に投与する場合の本発明の網膜疾患の予防または治療方法においては、前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）からなる群より選択される少なくとも１種であり、投与経路が硝子体内投与であることが好ましい。

　本発明は、網膜疾患の予防または治療剤を製造するためのＪＮＫ阻害ペプチドの使用であって、前記ＪＮＫ阻害ペプチドが、（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である使用についても提供する。

　本発明はまた、網膜疾患の予防または治療剤を製造するためのＪＮＫ阻害ペプチドの使用であって、前記ＪＮＫ阻害ペプチドが、配列番号５および配列番号６の少なくともいずれかのアミノ酸配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である使用についても提供する。

　本発明はさらに、網膜疾患の予防または治療剤を製造するためのＪＮＫ阻害ペプチドの使用であって、前記ＪＮＫ阻害ペプチドが、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である使用についても提供する。

　本発明のＪＮＫ阻害ペプチドの使用において、前記ＪＮＫ阻害ペプチドの全てのアミノ酸はＤ－アミノ酸であることが好ましい。

　本発明のＪＮＫ阻害ペプチドの使用における投与経路としては、硝子体内投与、結膜嚢内投与、結膜下投与またはテノン嚢下投与であることが好ましい。

　配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを網膜疾患の予防または治療剤を製造するために用いる場合、前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）からなる群より選択される少なくとも１種であり、投与経路が硝子体内投与であることが好ましい。

　後述するように、特定のアミノ酸配列を含み、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドの硝子体内投与は、スペルミジン誘発網膜色素上皮障害、レーザー誘発脈絡膜血管新生およびツニカマイシン誘発視細胞障害を抑制した。すなわち、当該ＪＮＫ阻害ペプチドは、多くの網膜疾患の病因である網膜色素上皮障害、視細胞障害および脈絡膜血管新生の全てを抑制するという驚くべき作用を有する。したがって、当該ＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含むことで、眼局所投与によっても網膜疾患を予防または治療し得る薬剤、方法が提供され、また、前記薬剤を製造するためのＪＫＮ阻害ペプチドの使用についても提供される。

　本発明は、（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤について提供する。また本発明は、このようなＪＮＫ阻害ペプチドを患者に薬理上有効な量投与する網膜疾患の予防または治療方法についても提供する。本発明はさらに、このようなＪＮＫ阻害ペプチドの、網膜疾患の予防または治療剤を製造するための使用についても提供する。

　ここで、本発明でいう「ＪＮＫ阻害ペプチド」とは、ＪＮＫによる基質（ｃ－Ｊｕｎなど）のリン酸化を抑制する活性（以下、「ＪＮＫ阻害活性」ともいう）を有するペプチドを意味する。なお、ＪＮＫ阻害活性は、市販のＪＮＫ活性アッセイキット（Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、ＳＡＰＫ／ＪＮＫ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ（カタログ番号：９８１０）など）により容易に測定することができ、また、特表２００３－５１１０７１号公報（特許文献２）および特表２００９－５０７５０２号公報（特許文献３）に開示された方法によっても測定することができる。

　本発明において、「配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列」とは、ＪＮＫと結合しその活性を阻害するアミノ酸配列であるＮＨ₂－ＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ－ＣＯＯＨ（配列番号１）およびＮＨ₂－ＤＱＳＲＰＶＱＰＦＬＮＬＴＴＰＲＫＰＲ－ＣＯＯＨ（配列番号２）のいずれか一方または両方のアミノ酸配列を意味する。ここで、ＪＮＫ阻害配列は、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸または両方の組み合わせから構成され得るが、ＪＮＫ阻害配列の少なくとも１つのアミノ酸がＤ－アミノ酸であることが好ましく、ＪＮＫ阻害配列の全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であることがより好ましい。

　本発明において、「配列番号３および配列番号４の輸送配列」とは、ペプチドを所望の細胞内に誘導するアミノ酸配列であるＮＨ₂－ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ－ＣＯＯＨ（配列番号３）およびＮＨ²－ＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧ－ＣＯＯＨ（配列番号４）のいずれか一方または両方のアミノ酸配列を意味する。ここで、輸送配列は、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸または両方の組み合わせから構成され得るが、輸送配列の少なくとも１つのアミノ酸がＤ－アミノ酸であることが好ましく、輸送配列の全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であることがより好ましい。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、ＮＨ₂－ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ－ＣＯＯＨ（配列番号５）およびＮＨ₂－ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤＴ－ＣＯＯＨ（配列番号６）の少なくともいずれかのアミノ酸配列を有し、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であることが好ましい。

　さらに、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、ＮＨ₂－ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ－ＣＯＯＨ（配列番号５）またはＮＨ₂－ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤＴ－ＣＯＯＨ（配列番号６）のアミノ酸配列からなり、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であることが好ましい。

　また、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であることが特に好ましい。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドの最も好ましい具体例としては、ＮＨ₂－ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＲＰＫＲＰＴＴＬＮＬＦＰＱＶＰＲＳＱＤ－ＣＯＯＨ（配列番号５）のアミノ酸配列からなり、全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であるペプチド（以下、「ペプチドＡ」ともいう）が挙げられる。

　ここで、配列番号１～６の配列を表１に記す。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、市販のペプチド合成装置などを用いた固相上での化学合成により合成することができるし、特表２００９－５０７５０２号公報（特許文献３）に開示された方法で合成することもできる。また、ペプチドＡについては、商品名「Ｄ－ＪＮＫｉ１」（カタログ番号：ＥＩ－３５５）としてＢＩＯＭＯＬ社より市販されている。

　本発明における網膜疾患としては、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）、中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎、未熟児網膜症、網膜色素変性症、レーベル病、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜動脈瘤、網膜剥離、増殖性硝子体網膜症、シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症、白点状網膜炎、脳回転状網脈絡膜萎縮症などの疾患が挙げられる。また、高度近視、傾斜乳頭症候群、脈絡膜骨腫を原因とする新生血管黄斑症も本発明における網膜疾患に含まれる。本発明の網膜疾患の予防または治療剤は、これらの網膜疾患の少なくとも１種の予防または治療に好適に適用され得る。

　なお、上述したように、本発明における加齢黄斑変性には、初期加齢黄斑症、萎縮型加齢黄斑変性および滲出型加齢黄斑変性が含まれ、ポリープ状脈絡膜血管症も加齢黄斑変性に含まれるものとする。また、糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）には、単純糖尿病網膜症、増殖前糖尿病網膜症および増殖糖尿病網膜症が含まれる。

　さらに、網膜動脈閉塞症には、網膜中心動脈閉塞症（ｃｅｎｔｒａｌ　ｒｅｔｉｎａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）および網膜動脈分枝閉塞症（ｂｒａｎｃｈ　ｒｅｔｉｎａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）が含まれる。また、網膜静脈閉塞症には、網膜中心静脈閉塞症（ｃｅｎｔｒａｌ　ｒｅｔｉｎａｌ　ｖｅｉｎ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）および網膜静脈分枝閉塞症（ｂｒａｎｃｈ　ｒｅｔｉｎａｌ　ｖｅｉｎ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）も含まれるものとする。

　上述した網膜疾患のうち、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドが特に有効であるのは、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）である。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、必要に応じて、医薬として許容される添加剤を加え、単独製剤または配合製剤として汎用されている技術を用いて製剤化することができる。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、上述した網膜疾患の予防または治療に使用する場合、患者に対して経口的または非経口的に投与することができ、投与形態としては、経口投与、静脈内投与、眼への局所投与（点眼投与、結膜嚢内投与、硝子体内投与、結膜下投与、テノン嚢下投与など）、経皮投与などが挙げられる。中でも、硝子体内投与、結膜嚢内投与、結膜下投与またはテノン嚢下投与が好ましく、硝子体内投与が特に好ましい。

　本発明の網膜疾患の予防または治療剤は、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分とするものであり、この場合に、網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）からなる群より選択される少なくとも１種であり、投与経路が硝子体内投与であることが特に好ましい。本発明の網膜疾患の予防または治療方法、ＪＮＫ阻害ペプチドの使用についても同様である。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、必要に応じて、製薬学的に許容され得る添加剤と共に、投与に適した剤型に製剤化される。経口投与に適した剤型としては、たとえば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤などが挙げられ、非経口投与に適した剤型としては、たとえば、注射剤、点眼剤、眼軟膏、貼布剤、ゲル剤、挿入剤などが挙げられる。これらは当該分野で汎用されている通常の技術を用いて調製することができる。また、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドはこれらの製剤の他に眼内インプラント用製剤やマイクロスフェアーなどのＤＤＳ（ドラッグデリバリーシステム）化された製剤にすることもできる。

　たとえば、錠剤は、乳糖、ブドウ糖、Ｄ－マンニトール、無水リン酸水素カルシウム、デンプン、ショ糖などの賦形剤；カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポピドン、デンプン、部分アルファー化デンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースなどの崩壊剤；ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、デンプン、部分アルファー化デンプン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、含水二酸化ケイ素、硬化油などの滑沢剤；精製白糖、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどのコーティング剤；クエン酸、アスパルテーム、アスコルビン酸、メントールなどの矯味剤などを適宜選択して用い、調製することができる。

　注射剤は、塩化ナトリウムなどの等張化剤；リン酸ナトリウムなどの緩衝化剤；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレートなどの界面活性剤；メチルセルロースなどの増粘剤などから必要に応じて選択して用い、調製することができる。

　点眼剤は、塩化ナトリウム、濃グリセリンなどの等張化剤；リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどの緩衝化剤；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などの界面活性剤；クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウムなどの安定化剤；塩化ベンザルコニウム、パラベンなどの防腐剤などから必要に応じて選択して用い、調製することができ、ｐＨは眼科製剤に許容される範囲内にあればよいが、通常４～８の範囲内が好ましい。また、眼軟膏は、白色ワセリン、流動パラフィンなどの汎用される基剤を用い、調製することができる。

　挿入剤は、生体分解性ポリマー、たとえば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸などの生体分解性ポリマーを本化合物とともに粉砕混合し、この粉末を圧縮成型することにより、調製することができ、必要に応じて、賦形剤、結合剤、安定化剤、ｐＨ調整剤を用いることができる。眼内インプラント用製剤は、生体分解性ポリマー、たとえば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸・グリコール酸共重合体、ヒドロキシプロピルセルロースなどの生体分解性ポリマーを用い、調製することができる。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドの投与量は、剤型、投与すべき患者の症状の軽重、年令、体重、医師の判断などに応じて適宜変えるこができるが、経口投与の場合、一般には、成人に対し１日あたり０．０１～５０００ｍｇ、好ましくは０．１～２５００ｍｇ、より好ましくは１～１０００ｍｇを１回または数回に分けて投与することができる。静脈内投与の場合、成人に対し１日あたり０．０１～５０００ｍｇ、好ましくは０．１～２５００ｍｇ、より好ましくは１～１０００ｍｇを１回または数回に分けて投与することができる。眼への局所投与（点眼投与を除く）の場合、成人に対し１日あたり０．００００１～１０ｍｇ、好ましくは０．００００５～５ｍｇ、より好ましくは０．０００１～１ｍｇを１回または数回に分けて投与することができる。また、点眼剤または挿入剤の場合には、０．０００００１～１０％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．００００１～１％（ｗ／ｖ）、より好ましくは０．０００１～０．１％（ｗ／ｖ）の有効成分濃度のものを１日１回または数回投与することができる。さらに、貼布剤の場合は、成人に対し０．００００１～１０００ｍｇを含有する貼布剤を貼布することができ、眼内インプラント用製剤の場合は、成人に対し０．００００１～１０００ｍｇ含有する眼内インプラント用製剤を眼内にインプラントすることができる。

　以下に、薬理試験および製剤例の結果を示すが、これらの例は本発明をよりよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

　［薬理試験１］
　背景技術の項で示したように、スペルミジンは網膜色素上皮障害を誘発し、その結果として視細胞障害を導くことが明らかとなっている。そのため、スペルミジン誘発網膜変性モデルは、萎縮型加齢黄斑変性などの網膜色素上皮障害が関与する疾患の治療剤を評価するモデルとして用いられている（Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．　Ｓｃｉ．，４８（１），　４５５－４６３（２００７）（非特許文献１）、Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．　Ｓｃｉ．５１，　ＡＲＶＯ　Ｅ－ａｂｓｔｒａｃｔ　３６４４（２０１０）など）。そこで、当該モデルを用いて、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドが網膜色素上皮障害に伴い生じる視細胞障害に及ぼす効果を検討し、代表的なＪＮＫ阻害剤であるＳＰ６００１２５と比較した。

　（スペルミジン誘発網膜変性モデルの作製および薬物投与）
　ラットに５％（Ｗ／Ｖ）　塩酸ケタミン注射液および２％　塩酸キシラジン注射液の混合液（７：１）１ｍＬ／ｋｇを筋肉内投与して全身麻酔し、０．５％（Ｗ／Ｖ）　トロピカミド－０．５％　塩酸フェニレフリン点眼液を点眼して散瞳させ、眼底透視下で３３Ｇ針を装着したマイクロシリンジ（２５μＬ容量、ハミルトン）を用いて硝子体腔内に刺入し、コントロール群はダルベッコＰＢＳを１０μＬ投与した。基剤投与群はダルベッコＰＢＳに溶解した２ｍＭ　スペルミジン溶液を１０μＬ投与した。ペプチドＡ投与群は、ダルベッコＰＢＳに溶解した４ｍＭ　スペルミジン溶液とダルベッコＰＢＳに溶解した０．６ｍｇ／ｍＬ　ペプチドＡの混合液を１：１となるように混合し、硝子体腔内に１０μＬ投与した。ＳＰ６００１２５投与群はダルベッコＰＢＳに溶解した０．３ｍｇ／ｍＬ　ＳＰ６００１２５溶液にて２ｍＭとなるようにスペルミジンを溶解させ、硝子体腔内に１０μＬ投与した。なお、スペルミジンとしては、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社より購入した「Ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ，Ｔｒｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ」（カタログ番号：５６７６６）を使用した。ペプチドＡとしては、ＢＩＯＭＯＬ社より購入した「Ｄ－ＪＮＫｉ１」（カタログ番号：ＥＩ－３５５）を使用した。また、ＳＰ６００１２５としては、シグマアルドリッチ社より購入した「ＳＰ６００１２５」（カタログ番号：Ｓ５５６７－５０ＭＧ）を使用した。

　（評価）
　スペルミジン投与から１３日後、暗順応下にてラットに５％（Ｗ／Ｖ）　塩酸ケタミン注射液および２％　塩酸キシラジン注射液の混合液（７：１）１ｍＬ／ｋｇを筋肉内投与して全身麻酔し、０．５％（Ｗ／Ｖ）　トロピカミド－０．５％　塩酸フェニレフリン点眼液を点眼して散瞳させた後、Ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｍ（ＥＲＧ；網膜電位図）測定機（トーメーコーポレーション社製、ポータブルＥＲＧ＆ＶＥＰ　ＬＥ－３０００）にてＥＲＧ（ａ波）を測定した。その後、下記式１を用いてＥＲＧ振幅減弱抑制率を算出した。結果を表２に示す。

　［式１］
　　ＥＲＧ振幅減弱抑制率（％）＝（（Ｅ_ｘ－Ｅ_ｖ）／（Ｅ_ｃ－Ｅ_ｖ））×１００
　　　Ｅ_ｃ：コントロール群のａ波振幅値
　　　Ｅ_ｖ：基剤投与群のａ波振幅値
　　　Ｅ_ｘ：薬物投与群のａ波振幅値

　（結果）
　表２に示すように、ペプチドＡの硝子体内投与はスペルミジン誘発網膜変性モデルにおいてＥＲＧ振幅減弱を約７３％抑制した。一方、ＳＰ６００１２５の硝子体内投与はＥＲＧ振幅減弱を約１８％増悪した。

　（考察）
　以上の結果から、ペプチドＡをはじめとする本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、スペルミジンによって誘発される網膜色素上皮障害およびこれに起因する視細胞障害を抑制することが示唆された。背景技術の項で示したように、網膜色素上皮障害およびこれに起因する視細胞障害は、加齢黄斑変性症（特に、初期加齢黄斑症および萎縮型加齢黄斑変性）、網膜色素変性症、レーベル病、シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症、白点状網膜炎、脳回転状網脈絡膜萎縮症などの網膜疾患の発症および／または進行にも関与していると考えられている。したがって、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、加齢黄斑変性（特に、初期加齢黄斑症および萎縮型加齢黄斑変性）をはじめとする網膜疾患の予防または治療に有用であると考えられる。

　一方で、代表的なＪＮＫ阻害剤であるＳＰ６００１２５は、本モデルにおいて障害抑制効果を示さず、背景技術の項で説明したように、むしろ網膜障害を増悪する可能性が示唆された。ＪＮＫ阻害活性を有する本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドが、代表的なＪＮＫ阻害剤においては認められない網膜色素上皮障害抑制作用および視細胞障害抑制作用を有することは、驚くべきことである。

　［薬理試験２］
　脈絡膜血管新生に対する阻害効果を検討する薬理試験モデルとして、レーザー誘発脈絡膜血管新生モデルが汎用されている（日本眼科紀要，　４５，　８５３－８５６（１９９４））。そこで、当該モデルを用いて本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドの有用性を評価した。

　（レーザー誘発ラット脈絡膜血管新生モデルの作製）
　ラットに５％（Ｗ／Ｖ）　塩酸ケタミン注射液および２％　塩酸キシラジン注射液の混合液（７：１）１ｍＬ／ｋｇを筋肉内投与して全身麻酔し、０．５％（Ｗ／Ｖ）　トロピカミド－０．５％　塩酸フェニレフリン点眼液を点眼して散瞳させた後、クリプトンレーザー光凝固装置（ニデック社製、マルチカラーレーザー光凝固装置　ＭＣ－７０００）により光凝固を行なった。光凝固は、眼底後局部において、太い網膜血管を避け、焦点を網膜深層に合わせて１眼につき８ヶ所散在状に実施した。光凝固後、眼底撮影を行ない、レーザー照射部位を確認した。

　（薬物投与）
　モデル作成直後、眼底透視下で３３Ｇ針を装着したマイクロシリンジ（２５μＬ容量、ハミルトン）を用いて硝子体腔内に刺入し、生理食塩水を用いて溶解した０．６ｍｇ／ｍＬ　ペプチドＡ投与液を５μＬ投与した（薬物投与群）。なお、ペプチドＡとしては、ＢＩＯＭＯＬ社より購入した「Ｄ－ＪＮＫｉ１」（カタログ番号：ＥＩ－３５５）を使用した。また、基剤投与群においては、生理食塩水５μＬを投与した。

　（評価）
　光凝固後７日目、ラットに５％（Ｗ／Ｖ）　塩酸ケタミン注射液および２％　塩酸キシラジン注射液の混合液（７：１）１ｍＬ／ｋｇを筋肉内投与して全身麻酔し、０．５％（Ｗ／Ｖ）　トロピカミド－０．５％　塩酸フェニレフリン点眼液を点眼して散瞳させた後、１０％　フルオレセインナトリウム溶液０．１ｍＬを尾静脈から注入して、蛍光眼底造影（興和社製、ファンダスカメラ　コーワＰＲＯＩＩＩ）を行なった。蛍光眼底造影で、蛍光露出が認められなかったスポットを陰性（血管新生なし）、蛍光露出が認められたスポットを陽性（血管新生あり）と判断した。また、若干の蛍光露出が認められる光凝固部位は、それが２箇所存在した時に陽性（血管新生あり）と判定した。その後、下記式２に従い、レーザー照射８箇所のスポットに対する陽性スポット数から脈絡膜血管新生発生率（％）を算出し、下記式３に従い、評価薬物の抑制率（％）を算出した。結果を表３に示す。なお、薬物投与群ならびに基剤投与群の例数は８である。

　［式２］
　　脈絡膜血管新生発生率（％）＝（陽性スポット数／全光凝固部位数）×１００
　［式３］
　　抑制率（％）＝（（Ａ_０－Ａ_Ｘ）／Ａ_０）×１００
　　　Ａ_０：基剤投与群の脈絡膜血管新生発生率
　　　Ａ_Ｘ：薬物投与群の脈絡膜血管新生発生率

　（結果）
　表３に示すように、ペプチドＡの硝子体内投与は、レーザー誘発ラット脈絡膜血管新生モデルにおいて脈絡膜血管新生を約１４％抑制した。

　（考察）
　背景技術の項で示したように、脈絡膜血管新生は滲出型加齢黄斑変性における主たる病変である。また、糖尿病網膜症（特に、増殖網膜症）においても、血管新生は主要所見の一つとして知られている。さらに、中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎、脈絡膜血管新生（高度近視、傾斜乳頭症候群または脈絡膜骨腫を原因とするものに限る）、未熟児網膜症などの網膜疾患の発症および／または進行にも、脈絡膜血管新生は関与していると考えられている。したがって、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、加齢黄斑変性（特に、滲出型加齢黄斑変性）および糖尿病網膜症（特に、増殖網膜症）をはじめとする網膜疾患の予防または治療に有用であると考えられる。

　［薬理試験３］
　加齢黄斑変性や網膜色素変性症などの網膜疾患においては、小胞体ストレスの関与が示唆されている（Ｅｘｐｅｒｔ　Ｒｅｖ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　３（１），　２９－４２（２００８））。また、小胞体ストレス誘発剤であるツニカマイシンを硝子体内に投与することにより、視細胞の障害が誘発されることも報告されている（Ｎａｔｕｒｅ　３１１，　５７５－５７７（１９８４））。そこで、当該モデルを用いて視細胞障害に対する本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドの有用性を評価した。

　（ツニカマイシン誘発ラット視細胞障害モデルの作製および薬物投与）
　ラットに５％（Ｗ／Ｖ）　塩酸ケタミン注射液および２％　塩酸キシラジン注射液の混合液（７：１）１ｍＬ／ｋｇを筋肉内投与して全身麻酔し、０．５％（Ｗ／Ｖ）　トロピカミド－０．５％　塩酸フェニレフリン点眼液を点眼して散瞳させ、眼底透視下で３３Ｇ針を装着したマイクロシリンジ（２５μＬ容量、ハミルトン）を用いて硝子体腔内に刺入し、コントロール群はジメチルスルホキシドと生理食塩水の混合液（１：９）を５μＬ投与した。基剤投与群はジメチルスルホキシドに溶解した２００μｇ／ｍＬ　ツニカマイシン溶液と生理食塩水の混合液（１：９）を５μＬ投与した。ペプチドＡ投与群は、ジメチルスルホキシドに溶解した２００μｇ／ｍＬ　ツニカマイシン溶液と生理食塩水に溶解した０．６ｍｇ／ｍＬ　ペプチドＡの混合液（１：９）を硝子体腔内に５μＬ投与した。なお、ツニカマイシンとしては、シグマアルドリッチ社より購入した「ストレプトマイセスＳＰ由来ツニカマイシン」（カタログ番号：Ｔ７７６５）を使用した。また、ペプチドＡとしては、ＢＩＯＭＯＬ社より購入した「Ｄ－ＪＮＫｉ１」（カタログ番号：ＥＩ－３５５）を使用した。

　（評価）
　ツニカマイシン投与から７日後、暗順応下にてラットに５％（Ｗ／Ｖ）　塩酸ケタミン注射液および２％　塩酸キシラジン注射液の混合液（７：１）１ｍＬ／ｋｇを筋肉内投与して全身麻酔し、０．５％（Ｗ／Ｖ）　トロピカミド－０．５％　塩酸フェニレフリン点眼液を点眼して散瞳させた後、Ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｍ（ＥＲＧ；網膜電位図）測定機（トーメーコーポレーション社製　ポータブルＥＲＧ＆ＶＥＰ　ＬＥ－３０００）にてＥＲＧ（ａ波）を測定した。その後、下記式４を用いてＥＲＧ振幅減弱抑制率を算出した。結果を表４に示す。

　［式４］
　　ＥＲＧ振幅減弱抑制率（％）＝（（Ｂ_ｘ－Ｂ_ｖ）／（Ｂ_ｃ－Ｂ_ｖ））×１００
　　　Ｂ_ｃ：コントロール群のａ波振幅値
　　　Ｂ_ｖ：基剤投与群のａ波振幅値
　　　Ｂ_ｘ：薬物投与群のａ波振幅値

　（結果）
　表４に示すように、ペプチドＡはツニカマイシン誘発視細胞障害モデルにおいてＥＲＧ振幅減弱を約５０％抑制した。

　（考察）
　上述したように、小胞体ストレスは加齢黄斑変性症（特に、初期加齢黄斑症および萎縮型加齢黄斑変性）、網膜色素変性症などの網膜疾患の病態に深く関与しており、光受容細胞である視細胞の障害は視力低下の主たる要因である。また、レーベル病、網膜動脈閉塞症などの網膜疾患においても、視細胞の障害が認められることが知られている。したがって、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、加齢黄斑変性（特に、初期加齢黄斑症および萎縮型加齢黄斑変性）をはじめとする網膜疾患の予防または治療に有用であると考えられる。

　［製剤例］
　製剤例を挙げて本発明の薬剤をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの製剤例にのみ限定されるものではない。

　（処方例１：注射剤）
　１０ｍｌ中
　　ペプチドＡ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０ｍｇ
　　塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　９０ｍｇ
　　ポリソルベート８０　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　滅菌精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　ペプチドＡおよびそれ以外の前記成分を滅菌精製水に溶解して注射剤を調製する。ペプチドＡの添加量を変えることにより、１０ｍｌ中の含有量が０．１ｍｇ、１ｍｇまたは５０ｍｇの注射剤を調製できる。

　（処方例２：点眼剤（０．０１％（ｗ／ｖ）））
　１００ｍｌ中
　　ペプチドＡ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０ｍｇ
　　塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　９００ｍｇ
　　ポリソルベート８０　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　リン酸水素二ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　リン酸二水素ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　滅菌精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　滅菌精製水にペプチドＡおよびそれ以外の前記成分を加え、これらを十分に混合して点眼液を調製する。ペプチドＡの添加量を変えることにより、濃度が０．０５％（ｗ／ｖ）、０．１％（ｗ／ｖ）、０．５％（ｗ／ｖ）または１％（ｗ／ｖ）の点眼剤を調製できる。

　（処方例３：錠剤）
　１００ｍｇ中
　　ペプチドＡ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１ｍｇ
　　乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６６．４ｍｇ
　　トウモロコシデンプン　　　　　　　　　　　　　　２０ｍｇ
　　カルボキシメチルセルロースカルシウム　　　　　　　６ｍｇ
　　ヒドロキシプロピルセルロース　　　　　　　　　　　６ｍｇ
　　ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　０．６ｍｇ
　ペプチドＡ、乳糖を混合機中で混合し、その混合物にカルボキシメチルセルロースカルシウムおよびヒドロキシプロピルセルロースを加えて造粒し、得られた顆粒を乾燥後整粒し、その整粒顆粒にステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、打錠機で打錠する。また、ペプチドＡの添加量を変えることにより、１００ｍｇ中の含有量が０．１ｍｇ、１０ｍｇまたは５０ｍｇの錠剤を調製できる。

　本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドの硝子体内投与は、スペルミジン誘発網膜色素上皮障害、ツニカマイシン誘発視細胞障害およびレーザー誘発脈絡膜血管新生を抑制した。すなわち、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、多くの網膜疾患の病因である網膜色素上皮障害、視細胞障害および脈絡膜血管新生の全てを抑制するという驚くべき作用を有する。したがって、本発明におけるＪＮＫ阻害ペプチドは、網膜疾患の予防または治療剤、網膜疾患の予防または治療方法に有用である。

Claims

　（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ（ｃ－Ｊｕｎアミノ末端キナーゼ）阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤。
　配列番号５および配列番号６の少なくともいずれかのアミノ酸配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤。
　配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを有効成分として含有する網膜疾患の予防または治療剤。
　前記ＪＮＫ阻害ペプチドの全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸である、請求の範囲第３項に記載の予防または治療剤。
　前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）、中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎、新生血管黄斑症（高度近視、傾斜乳頭症候群または脈絡膜骨腫を原因とするものに限る）、未熟児網膜症、網膜色素変性症、レーベル病、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜動脈瘤、網膜剥離、増殖性硝子体網膜症、シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症、白点状網膜炎および脳回転状網脈絡膜萎縮症からなる群より選択される少なくとも１種である請求の範囲第１項～第４項のいずれかに記載の予防または治療剤。
　投与経路が硝子体内投与、結膜嚢内投与、結膜下投与またはテノン嚢下投与である、請求の範囲第１項～第４項のいずれかに記載の予防または治療剤。
　前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）からなる群より選択される少なくとも１種であり、投与経路が硝子体内投与である請求の範囲第４項に記載の予防または治療剤。
　患者に、（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを薬理上有効な量投与することを含む、網膜疾患の予防または治療方法。
　患者に、配列番号５および配列番号６の少なくともいずれかのアミノ酸配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを薬理上有効な量投与することを含む、網膜疾患の予防または治療方法。
　患者に、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸であるＪＮＫ阻害ペプチドを薬理上有効な量投与することを含む、網膜疾患の予防または治療方法。
　前記ＪＮＫ阻害ペプチドの全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸である、請求の範囲第１０項に記載の予防または治療方法。
　前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）、中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎、新生血管黄斑症（高度近視、傾斜乳頭症候群または脈絡膜骨腫を原因とするものに限る）、未熟児網膜症、網膜色素変性症、レーベル病、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜動脈瘤、網膜剥離、増殖性硝子体網膜症、シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症、白点状網膜炎および脳回転状網脈絡膜萎縮症からなる群より選択される少なくとも１種である請求の範囲第８項～第１１項のいずれかに記載の予防または治療方法。
　投与経路が硝子体内投与、結膜嚢内投与、結膜下投与またはテノン嚢下投与である、請求の範囲第８項～第１１項のいずれかに記載の予防または治療方法。
　前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）からなる群より選択される少なくとも１種であり、投与経路が硝子体内投与である請求の範囲第１１項に記載の予防または治療方法。
　網膜疾患の予防または治療剤を製造するためのＪＮＫ阻害ペプチドの使用であって、前記ＪＮＫ阻害ペプチドが、（ａ）配列番号１および配列番号２の少なくともいずれかのＪＮＫ阻害配列、ならびに、（ｂ）配列番号３および配列番号４の少なくともいずれかの輸送配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である、使用。
　網膜疾患の予防または治療剤を製造するためのＪＮＫ阻害ペプチドの使用であって、前記ＪＮＫ阻害ペプチドが、配列番号５および配列番号６の少なくともいずれかのアミノ酸配列を有する、長さが１５０アミノ酸よりも短く、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である、使用。
　網膜疾患の予防または治療剤を製造するためのＪＮＫ阻害ペプチドの使用であって、前記ＪＮＫ阻害ペプチドが、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列からなり、アミノ酸の少なくとも１つがＤ－アミノ酸である、使用。
　前記ＪＮＫ阻害ペプチドの全てのアミノ酸がＤ－アミノ酸である、請求の範囲第１７項に記載の使用。
　前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）、中心性滲出性脈絡膜網膜症、網膜色素線条症、網膜色素上皮剥離、多発性脈絡膜炎、新生血管黄斑症（高度近視、傾斜乳頭症候群または脈絡膜骨腫を原因とするものに限る）、未熟児網膜症、網膜色素変性症、レーベル病、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜動脈瘤、網膜剥離、増殖性硝子体網膜症、シュタルガルト病、脈絡膜硬化症、全脈絡膜萎縮症、卵黄状黄斑ジストロフィ、小口病、眼底白点症、白点状網膜炎および脳回転状網脈絡膜萎縮症からなる群より選択される少なくとも１種である請求の範囲第１５項～第１８項のいずれかに記載の使用。
　投与経路が硝子体内投与、結膜嚢内投与、結膜下投与またはテノン嚢下投与である、請求の範囲第１５項～第１８項のいずれかに記載の使用。
　前記網膜疾患が、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫および糖尿病網膜症（糖尿病黄斑浮腫を除く）からなる群より選択される少なくとも１種であり、投与経路が硝子体内投与である請求の範囲第１８項に記載の使用。