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WO2010062034A2 - 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물 - Google Patents

유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물 Download PDF

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WO2010062034A2
WO2010062034A2 PCT/KR2009/005750 KR2009005750W WO2010062034A2 WO 2010062034 A2 WO2010062034 A2 WO 2010062034A2 KR 2009005750 W KR2009005750 W KR 2009005750W WO 2010062034 A2 WO2010062034 A2 WO 2010062034A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extract
vitis vinifera
relative humidity
seed extract
acetone
Prior art date
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PCT/KR2009/005750
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English (en)
French (fr)
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WO2010062034A3 (ko
Inventor
박세완
이근혁
류종현
김재신
박진하
곽은영
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hanlim Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Hanlim Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Hanlim Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Hanlim Pharmaceutical Co Ltd
Publication of WO2010062034A2 publication Critical patent/WO2010062034A2/ko
Publication of WO2010062034A3 publication Critical patent/WO2010062034A3/ko
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Ceased legal-status Critical Current

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/87—Vitaceae or Ampelidaceae (Vine or Grape family), e.g. wine grapes, muscadine or peppervine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Definitions

  • the present invention relates to pharmaceutical compositions in the form of eye drops or gels containing a seed extract of the European species Vitis vinifera .
  • Vitis is a vine that belongs to Rhamnales and Vitaceae, and grows or grows all over the earth except near the equator and above 50 ° latitude. There are 700 genera of 11 genera, Vitis vinifera , Vitis labrusca , Vitis riparia , Vitis rupestris , Vitis rupestris , and Vitis berladieri , and Vitis. coignetiae ) and Vitis amurensis are mainly grown for fruit use.
  • extracts obtained from seeds of the European species Vitis vinifera include (-) epicatechin, proanthocyanidins B1 and B2, (+) catechins, and mixtures of polymerized derivatives thereof, which are procyano Known as stone or flavonol oligomers (GB-A-1541469 and FR-A-2092743).
  • the extract mainly acts on glycosaminoglycans such as connective tissue, blood vessels, lymph and joints selectively to promote synthesis and inhibit degradation of fibers related to the binding ability of collagen, elastin, fibronectin, etc. It has been reported to inhibit the capillary permeability and quickly restore the elasticity of veins. [Arteres et veines Vol. 5 (5), 397-401 (1986); Sem-dex Hopitaux 48/47, 2009-2013 (1981)]
  • grape seed extract has been reported to have a therapeutic effect on capillary vulnerability, hypertension-related retinopathy, and residual retinal edema after retinal detachment in diabetic patients [Gazette Mde France Vol. 88, No. 14, 2035-2038]. (1981), which protects the various structures of the retina, speeds up the regeneration of visual pigment, and has been reported to be effective in restoring the retina after exposure to scintillation in clinical trials [Bull. Soc. Opth. France Vol 88 (2), 173-4, 177-9 (1988).
  • oral tablets containing seed extracts of the European species Vitis vinifera are commercially available as adjuvants for disorders related to retina and choroid circulation.
  • the direct pharmacological effect can be expected when the seed extract of the European grape varieties ( Vitis vinifera ) is directly administered to the eye.
  • topical ophthalmic eye drops or gel-based external preparations have been reported. none. Particularly, since eye drops or gels are faster than tablets in solid form due to the characteristics of the formulation, securing stability, particularly long-term stability for about three years, is a very important factor in formulation design.
  • the present inventors have conducted various studies to develop an ophthalmic preparation comprising the seed extract of the European grape ( Vitis vinifera ) as an active ingredient, that is, a formulation having excellent physical and chemical stability as an eye drop or gel.
  • a formulation having excellent physical and chemical stability as an eye drop or gel.
  • the present invention provides pharmaceutical compositions in the form of eye drops or gels containing seed extracts of Vitis vinifera having excellent stability.
  • seed extract of the European species grape Vitis vinifera
  • an antioxidant selected from the group consisting of ascorbic acid or salts thereof, sodium bisulfite, potassium pyrosulfite, and L-threonine or salts thereof
  • a pharmaceutical composition in the form of eye drops or gels.
  • the content of the antioxidant may be 0.01 to 15% by weight based on the total weight of the composition
  • the content of the seed extract of the European species grape ( Vitis vinifera ) as an active ingredient may be 0.1 to 30% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the seed extract of the grape varieties ( Vitis vinifera ) is a procyanidolic value (PCV) of 80 to 130; Content of (+) catechin and ( ⁇ ) epicatechin of up to 30%; And a proanthocididine content of 95 to 105%.
  • the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera is (a) extract the seeds of the pulverized grape varieties ( Vitis vinifera ) at room temperature with a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 1: 1 to 2, and filtered step; (b) distilling the filtrate obtained in step (a) to remove acetone, then saturating sodium chloride and filtering; (c) extracting the filtrate obtained in step (b) with ethyl acetate and concentrating; And (d) adding chloroform to the concentrate obtained in step (c) and filtering to obtain a precipitate.
  • the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera may be (1) (i) a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 3-5 to 1: 1 in the ground seed of the grape varieties Vitis vinifera .
  • Extracting with filtration and filtering (ii) concentrating the filtrate obtained in step (i) to remove acetone and filtering; (iii) extracting the filtrate obtained in step (ii) with ethyl acetate; (iv) drying the extract obtained in step (iii) to obtain a first extract; (2) (p) extracting the seeds of crushed Vitis vinifera with water and filtering; (q) extracting the filtrate obtained in step (p) with ethanol and filtering; (r) drying the filtrate obtained in step (q) to obtain a second extract; And (3) it can be obtained by a manufacturing method comprising the step of mixing the first extract and the second extract.
  • the pharmaceutical composition in the form of eye drops or gels according to the present invention comprises a seed extract of grape varieties Vitis vinifera as an active ingredient, ascorbic acid or salts thereof, sodium hydrogen sulfite, potassium pyrosulfite, and L-threonine or By including an antioxidant selected from the group consisting of salts thereof, physical and chemical stability can be maintained for a long time. Therefore, the pharmaceutical composition in the form of eye drops or gels according to the present invention can be usefully applied to the pharmaceutical field because it can be stored for a long time.
  • the present invention is a seed extract of European species grape ( Vitis vinifera ); And an antioxidant selected from the group consisting of ascorbic acid or a salt thereof, sodium bisulfite, potassium pyrosulfite, and L-threonine or a salt thereof.
  • compositions of the present invention enhance the physical and chemical stability of eye drops or gels obtained by the inclusion of certain antioxidants, namely ascorbic acid or salts thereof, sodium bisulfite, potassium pyrosulfite, and / or L-threonine or salts thereof. Let's do it.
  • the amount of the antioxidant is different depending on the type of antioxidant used, but may be 0.01 to 15% by weight, preferably 0.0125 to 1% by weight based on the total weight of the composition.
  • ascorbic acid or a salt thereof about 0.1% by weight of ascorbic acid or a salt thereof, about 0.3% by weight of sodium hydrogen sulfite, 0.0125 to 0.025% by weight of potassium pyrosulfite, 0.3% by weight of L-threonine or a salt thereof It may contain.
  • the content of the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera contained as an active ingredient may be in a range sufficient to provide a therapeutically effective amount.
  • the content of the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera may range from 0.1 to 30% by weight, preferably from 0.5 to 5.0% by weight and more preferably from about 1.0% by weight relative to the total weight of the composition. .
  • Seed extracts of the European grape varieties include a procyanidolic value (PCV) of 80-130; Content of (+) catechin and ( ⁇ ) epicatechin of up to 30%; And those having a proanthocididine content of 95 to 105% are particularly preferably used.
  • PCV procyanidolic value
  • PCV procyanidolic value
  • 100 mg of the sample is precisely weighed and operated in the same manner as the standard solution to prepare a sample solution.
  • test tubes 10 ml of the sample solution and 10 ml of standard solution are placed in 5 test tubes, and capped, and then heated in a 100 ° C. water bath for 45 minutes. After heating, the test tubes were cooled in cold water, 2 ml of each test tube was taken, and 20 ml of isopropanol was added thereto. Take the reacted test solution and the standard solution, and measure the absorbance at 550 nm using isopropanol as a reference solution.
  • the content of the (+) catechin and (-) epicatechin means a value quantified as follows.
  • sample solution 50 mg of the sample is precisely weighed, dissolved in an acetonitrile and dilute phosphoric acid mixed solution (5:95), and 10 ml is used as the sample solution.
  • proanthocididine content means a value calculated by the following method and formula.
  • BHT 2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol
  • -Standard solution 2 Accurately weigh 10 mg of proanthocyanidin standard into a 10 ml volumetric flask and dissolve in 5 ml of internal standard solution.
  • Detector ultraviolet absorbance photometer (wavelength: 280 nm)
  • Lithium bromide aqueous solution 1.04 g of lithium bromide is precisely taken and placed in a 1000 ml volumetric flask.
  • Standard solutions 1, 2, 3 and sample solutions 1, 2 are analyzed twice with the following liquid chromatography method.
  • the calibration curve of the standard solution is prepared using the concentration of the standard solution and the corresponding main peak to IS peak area ratio (A proanthocyanidin / A BHT ) and calculated according to the following formula.
  • Ti% ⁇ [(A proanthocyanidin / A BHT ) test -a] / b ⁇ x (1 / C test ) x 100
  • a proanthocyanidin peak area of proanthocyanidins in the sample solution
  • a BHT peak area of BHT in the sample solution
  • Proanthocyanidin content Ti% x [(100-KF std ) / (100-KF test )]
  • the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera may be preferably used by the improved manufacturing method developed by the present inventors (ie, WO2009 / 031826).
  • the seed extract of the grape varieties ( Vitis vinifera ) is (a) the seeds of the pulverized grape varieties ( Vitis vinifera ) are extracted at room temperature with a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 1: 1 to 2, Filtration; (b) distilling the filtrate obtained in step (a) to remove acetone, then saturating sodium chloride and filtering; (c) extracting the filtrate obtained in step (b) with ethyl acetate and concentrating; And (d) adding chloroform to the concentrate obtained in step (c) and filtering to obtain a precipitate.
  • Seeds of crushed European grapes are washed with skin, seeds and branches obtained by pressing European grapes ( Vitis vinifera ) in water, dried using an oven, etc., and then the seeds are separated, and the conventional method is used. It can be obtained by grinding.
  • the manufacturing method is compared to the conventional extraction method (for example, GB-A-1541469)
  • a water-acetone mixed solvent having a low acetone content is used as the primary extraction solvent, and the primary extraction process is performed at room temperature (about 25 ° C.) without additional heating.
  • a water-acetone mixed solvent used in the preparation method a mixed solvent having a volume ratio of acetone and water of 1: 1 to 2, preferably about 1: 1.5 may be used.
  • the first extraction may be performed once or repeatedly, more preferably 2 to 3 times.
  • the filtration of step (a) may be carried out in a conventional manner, and the filtrate is recovered for carrying out the next step.
  • step (b) In the step of distilling the filtrate obtained in step (a) to remove acetone, and then saturating sodium chloride and filtering [step (b)], the acetone having a relatively low boiling point is removed by the distillation and is dissolved in acetone.
  • the impurities are precipitated.
  • the distillation may be performed according to a conventional distillation method, for example, may be carried out by distillation under reduced pressure. Preferably it is carried out under reduced pressure conditions of about 50 °C or less.
  • the extract obtained through the distillation process is subjected to saturation of sodium chloride and filtration immediately, without a separate organic solvent extraction process.
  • the extract that is, the extract obtained by distilling acetone
  • impurities such as a tannin component are precipitated, which is removed through a filtration process.
  • the impurity precipitation by saturation of sodium chloride and filtration is preferably filtered after saturating sodium chloride and then leaving it for 2 to 3 hours.
  • the filtration can be carried out in a conventional manner, and the filtrate is recovered for carrying out the next step.
  • step (c) the extraction with ethyl acetate (secondary extraction) may be performed once or repeatedly, preferably Preference is given to repeating 2-3 times.
  • concentration is preferably carried out to be concentrated to 0.4 to 0.7 times the total volume of the extract (ie filtrate) obtained in step (b).
  • step [c] of adding the chloroform to the concentrate obtained in step (c), and filtering to obtain a precipitate when the chloroform is added, active ingredients including oligomers which are not dissolved in chloroform are precipitated and formed.
  • the precipitates can be isolated by simply filtering the seed extract of Vitis vinifera .
  • the precipitate obtained by filtration can be obtained in the form of a dry powder by drying according to a conventional method, and the drying can be carried out by drying under reduced pressure, for example, a reduced pressure of 50 °C or less.
  • the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera contained as an active ingredient in the pharmaceutical composition of the present invention (1) (i) the seed of the ground grape varieties ( Vitis vinifera ) is a volume ratio of acetone and water of 3 ⁇ 5: extraction with a mixed solvent of acetone and water of 1 and filtration; (ii) concentrating the filtrate obtained in step (i) to remove acetone and filtering; (iii) extracting the filtrate obtained in step (ii) with ethyl acetate; (iv) drying the extract obtained in step (iii) to obtain a first extract; (2) (p) extracting the seeds of crushed Vitis vinifera with water and filtering; (q) extracting the filtrate obtained in step (p) with ethanol and filtering; (r) drying the filtrate obtained in step (q) to obtain a second extract; And (3) it can be obtained by the method of producing a seed extract of the European species grape ( Vitis vinifera ) comprising the step of mixing the first extract and
  • the preparation method is performed by separately preparing the first extract and the second extract, and mixing them to obtain an extract. Therefore, the manufacturing method not only reduces the amount of acetone used as a whole, but also lacks a sodium chloride saturation process and a chloroform extraction process, thereby simplifying extraction and minimizing the problem of environmental pollution due to the use of an organic solvent. In addition, the yield of the resulting extract can be greatly increased by about 10 times.
  • step (i) extracts the seeds of pulverized European grapes ( Vitis vinifera ) with a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 3-5 to 1, more preferably 4: 1, , By filtration.
  • the first extraction may be performed once or repeatedly, more preferably 2 to 3 times.
  • the filtration of step (i) can be carried out in a conventional manner, and the filtrate is recovered for the performance of the next step.
  • step (ii) is carried out by concentrating the filtrate obtained in step (i) to remove acetone and filtering.
  • the acetone having a relatively low boiling point is removed by the concentration, and impurities dissolved in acetone are precipitated.
  • the concentration may be carried out by conventional vacuum concentration (or distillation under reduced pressure), for example, may be carried out by distillation under reduced pressure conditions. After concentration, the precipitate is removed by filtration and the filtrate is recovered.
  • step (iii) is carried out by extracting the filtrate obtained in step (ii) with ethyl acetate. Extraction using the ethyl acetate (secondary extraction) may be performed once or repeatedly, preferably 2 to 3 times.
  • step (iii) may further include a dehydration process using anhydrous sodium sulfate after performing the extraction process using the ethyl acetate.
  • step (iv) is carried out by drying the extract obtained in step (iii).
  • the drying may be carried out by conventional methods, for example drying under reduced pressure of up to 50 ° C.
  • the extract obtained in step (iii) may be concentrated to remove ethyl acetate, and the resulting concentrate is dissolved in water and then spray dried.
  • step (p) can be carried out by extracting the seeds of pulverized European grape ( Vitis vinifera ) with water and filtering;
  • step (q) can be carried out by extracting the filtrate obtained in step (p) with ethanol and filtering.
  • the extraction of step (q) may be performed once or repeatedly, preferably two to three times.
  • step (r) may be carried out by drying the filtrate obtained in step (q).
  • the drying of step (r) is carried out by spray drying the filtrate obtained in step (q); It is preferably carried out by concentrating the filtrate obtained in step (q) and then spray drying the obtained concentrate.
  • the concentration may be concentrated to 0.4 to 0.7 times the total volume of the filtrate obtained in step (q), but is not limited thereto.
  • Mixing of the first extract and the second extract obtained as described above may be carried out by simply mixing the extract, the mixing ratio of the first extract and the second extract may be a weight ratio of 1: 0.5 to 1.5.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain additives commonly used in the pharmaceutical field for the preparation of eye drops or gels, such as stabilizers, thickeners, buffers, isotonic agents, preservatives, pH adjusting agents and the like.
  • the stabilizer comprises D-sorbitol, glycerin, sodium edetate and the like;
  • the thickener includes sodium carboxymethyl cellulose;
  • the buffer includes phosphoric acid or a salt thereof, boric acid, borax, citric acid or a salt thereof, and the like;
  • the tonicity agent includes sodium chloride and the like;
  • the preservative includes benzalkonium chloride, methyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, chlorobutanol and the like;
  • the pH adjusting agent (pH 5-8) includes hydrochloric acid, sodium hydroxide and the like.
  • the amount of the additive may be in the range conventionally used in the pharmaceutical field, for example, 0.01-15 wt% of the buffer and 0.01-50 wt% of the stabilizer (specifically, 0.01 g of the concentrated glycerin) based on the total weight of the composition. ⁇ 15.0%, D-sorbitol solution (70%) is 0.01 to 50% by weight), the thickener may be in the range of 0.01 to 30.0% by weight, the content of the additive may be appropriately selected according to the purpose of use.
  • the filtrate obtained was extracted three times with 250 ml of ethyl acetate and then dehydrated with anhydrous sodium sulfate.
  • the resulting extract was concentrated under reduced pressure until the volume was reduced to about 125 ml.
  • About 600 ml of chloroform was added to the obtained concentrate, and a precipitate was produced and filtered.
  • the precipitate obtained by filtration was dried in a vacuum oven at 50 ° C. or lower to obtain about 3.5 g of the seed extract of Vitis vinifera as a brown powder.
  • the obtained extract was hydrolyzed by heating in a dilute acid solution, and then the procyanidolic value (PCV) was measured by quantifying the content of procyanidolic oligomer, and showed a high value of about 105.
  • the proanthocyanidin content was measured as described above and found to be 103%. Therefore, the extract contains a large amount of oligomers in which two or more monomers of (+) catechin and (-) epicatechin are polymerized.
  • the first extract and the second extract were mixed to obtain about 35 g of the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera .
  • the obtained extract was hydrolyzed by heating in a dilute acid solution, and then the procyanidolic value (PCV) was measured by quantifying the content of procyanidolic oligomer, showing a high value of about 98.
  • the proanthocyanidin content was measured as described above and found to be 98.5%. Therefore, the extract contains a large amount of oligomers in which two or more monomers of (+) catechin and (-) epicatechin are polymerized.
  • Example 4 pH change Storage condition Early 3 months 6 months 9 months 12 months
  • Example 1 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 6.0 6.0 6.0 6.0 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 6.0 6.0 5.9 - -
  • Example 2 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 6.0 6.0 6.0 6.0 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 6.0 6.0 5.8 - -
  • Example 3 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 6.0 6.0 6.0 6.0 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 6.0 6.0 5.9 - -
  • Example 4 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 6.0 6.0 6.0 6.0 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 6.0 5.9 - - Comparative Example 1 25 ⁇ 2
  • the composition containing an antioxidant such as ascorbic acid, sodium hydrogen sulfite according to the present invention does not have a significant color change at room temperature and accelerated conditions as well as no precipitate was produced. And there is no pH change. Therefore, it can be seen that the eye drop solution and the gel composition of the present invention have excellent physical stability.
  • procyanidolic oligomer which is an indicator
  • the quantification was performed by calculating the amount (mg) of potential cyanidol chloride in 1 mL of eye drop solution (eye drop gel 1 g), and the amount (mg) of potential cyanidol chloride in 1 ml (or 1 g) of sample was calculated as follows. The results are shown in Table 5.
  • Example 1 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 0.86 0.86 0.85 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 0.86 0.83 -
  • Example 2 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 0.86 0.86 0.85 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 0.86 0.84 -
  • Example 3 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 0.86 0.86 0.86 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 0.86 0.85 -
  • Example 4 25 ⁇ 2 °C / Relative Humidity 60 ⁇ 5% 0.86 0.86 0.83 40 ⁇ 2 °C / relative humidity 75 ⁇ 5% 0.86 0.82 - Comparative Example 1 25 ⁇ 2 °C /
  • the composition containing the antioxidant according to the present invention is chemically stable at room temperature and accelerated conditions without significant change of the indicator material, especially a composition containing ascorbic acid (Example 3 and 7) showed the best chemical stability. Therefore, it can be seen that the eye drop solution and the gel composition of the present invention have excellent chemical stability.

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Abstract

본 발명은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물; 및 아스코르브산 또는 그의 염, 아황산수소나트륨, 피로아황산칼륨, 및 L-트레오닌 또는 그의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 항산화제를 포함하는, 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 장기간 동안 물리적 및 화학적 안정성을 유지할 수 있으며, 따라서, 장기간 동안의 보관이 가능하므로, 제약분야에 유용하게 적용될 수 있다.

Description

유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물
본 발명은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 함유하는 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물에 관한 것이다.
포도속(Vitis) 식물은 갈매나무목(Rhamnales), 포도과(Vitaceae)에 속하는 덩굴성 식물로 적도부근 및 위도 50°이상 지역을 제외한 지구상 전역에서 자생 혹은 재배되고 있다. 포도과에는 11속 700 여종이 알려져 있으며, 유럽종 포도(Vitis vinifera), 미국종 포도(Vitis labrusca), 강변 포도(Vitis riparia), 사막 포도(Vitis rupestris), 겨울 포도(Vitis berladieri), 머루(Vitis coignetiae), 왕머루(Vitis amurensis) 등이 주로 과실을 이용하기 위하여 재배되고 있다.
이 중, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨로부터 얻어지는 추출물은 (-)에피카테킨, 프로안토시아니딘 B1 및 B2, (+)카테킨, 및 이들의 중합 유도체들의 혼합물들을 포함하며, 이들은 프로시아니돌 또는 플라보놀 올리고머로서 알려져 있다 (GB-A-1541469 및 FR-A-2092743).
상기 추출물은 주로 결합조직, 혈관, 림프, 관절 등의 글리코스아미노글리칸(glycosaminoglycan)에 선택적으로 작용하여 콜라겐, 엘라스틴, 피브로넥틴 등의 결합능에 관련하는 섬유들의 합성을 촉진하고 분해를 억제하여, 증가된 모세혈관 투과성을 억제하고 정맥의 신축성을 빠르게 회복시켜 주는 것으로 보고되고 있다.[Arteres et veines Vol.5(5), 397∼401(1986); Sem-dex Hopitaux 48/47, 2009∼2013(1981)]
또한, 포도씨 추출물은 당뇨병 환자의 모세혈관 취약증, 고혈압에 관련된 망막증, 망막분리후의 잔여 망막부종에 대한 치료효과를 갖는 것이 보고된 바 있으며[Gazette Mde France Vol.88, No.14, 2035∼2038(1981)], 망막의 여러 구조를 보호함으로써 시각색소의 재생속도를 빠르게 하며, 임상시험에서 섬광에 노출된 후에 망막을 회복시키는데도 효과가 있는 것으로 보고된 바 있다[Bull. Soc. Opth. France Vol 88(2), 173-4, 177-9(1988)].
또한, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물를 함유한 경구용 정제가 망막, 맥락막 순환과 관련된 장애치료 보조제로 상용화되고 있다. 그러나, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 안구에 직접 투여할 경우 직접적인 약리 효과를 발휘할 것으로 기대할 수 있으나, 아직까지 안구에 국소적으로 투여하는 안과용 점안액이나 겔제 형태의 외용제는 보고된 바 없다. 특히, 점안용 액제 또는 겔제는 제제의 특성상 물리화학적 경시변화가 고체 형태인 정제보다 빠르기 때문에, 제제설계에 있어서, 안정성 확보, 특히 약 3년간의 장기간의 안정성 확보가 매우 중요한 인자로 작용한다.
본 발명자들은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 안과용 제제, 즉 점안용 액제 또는 겔제로서 우수한 물리적 및 화학적 안정성을 갖는 제제를 개발하기 위하여 다양한 연구를 수행하였다. 그 결과, 특정 항산화제를 함유시켜 액제 또는 겔제 형태로 제제화하였을 때, 장기간 동안 물리적 및 화학적 안정성을 유지할 수 있고, 따라서, 장기간 동안의 보관이 가능하므로, 제약분야에 유용하게 적용될 수 있다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명은 우수한 안정성을 갖는, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 함유하는, 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 태양에 따라, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물; 및 아스코르브산 또는 그의 염, 아황산수소나트륨, 피로아황산칼륨, 및 L-트레오닌 또는 그의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 항산화제를 포함하는, 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물이 제공된다.
상기 항산화제의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.01∼15 중량%일 수 있으며, 유효성분인 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ∼ 30 중량%일 수 있다. 또한, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 80 ∼ 130의 프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, PCV); 30 % 이하의 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량; 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는 것이 바람직하다.
상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (a) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2인 아세톤과 물의 혼합용매로 실온에서 추출하고, 여과하는 단계; (b) 단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계; (c) 단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어질 수 있다.
또한, 선택적으로, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (1) (i) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과하는 단계; (ii) 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과하는 단계; (iii) 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하는 단계; (iv) 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조하여 제1 추출물을 얻는 단계; (2) (p) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과하는 단계; (q) 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과하는 단계; (r) 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조하여 제2 추출물을 얻는 단계; 및 (3) 상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어질 수 있다.
본 발명에 따른 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 유효성분으로 포함하고, 아스코르브산 또는 그의 염, 아황산수소나트륨, 피로아황산칼륨, 및 L-트레오닌 또는 그의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 항산화제를 포함함으로써, 장기간 동안 물리적 및 화학적 안정성을 유지할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물은 장기간 동안의 보관이 가능하므로, 제약분야에 유용하게 적용될 수 있다.
본 발명은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물; 및 아스코르브산 또는 그의 염, 아황산수소나트륨, 피로아황산칼륨, 및 L-트레오닌 또는 그의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 항산화제를 포함하는, 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물은 특정 항산화제 즉, 아스코르브산 또는 그의 염, 아황산수소나트륨, 피로아황산칼륨, 및/또는 L-트레오닌 또는 그의 염을 포함함으로써 얻어지는 점안용 액제 또는 겔제의 물리적 및 화학적 안정성을 증진시킨다. 상기 항산화제의 함량은 사용되는 항산화제의 종류에 따라 상이하지만, 조성물 총 중량에 대하여 0.01∼15 중량%, 바람직하게는 0.0125∼1 중량%일 수 있다. 구체적으로는, 조성물 총 중량에 대하여 약 0.1 중량%의 아스코르브산 또는 그의 염, 약 0.3 중량%의 아황산수소나트륨, 0.0125∼0.025 중량%의 피로아황산칼륨, 0.3 중량%의 L-트레오닌 또는 그의 염을 함유할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 있어서, 유효성분으로 함유되는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 함량은 치료학적으로 유효한 양을 제공하기에 충분한 범위일 수 있다. 예를 들어, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ∼ 30 중량%, 바람직하게는 0.5 ∼ 5.0 중량%, 더욱 바람직하게는 약 1.0 중량% 의 범위일 수 있다.
상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 80 ∼ 130의 프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, PCV); 30 % 이하의 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량; 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는 것이 특히 바람직하게 사용된다.
본 명세서에서 상기 "프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, 이하 'PCV'라 칭함)"은 다음 방법 및 식에 의해서 계산된 값을 의미한다.
① 표준액의 조제
유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 표준품 100 mg을 정밀히 달아 이소프로판올을 가해 50 ml로 한다. 이 액 10 ml를 취하여 3M 염산 10 ml를 가하고 이소프로판올을 가해 50 ml로 한 액을 표준액으로 한다.
② 검액 조제
샘플 100mg을 정밀히 달아, 표준액과 동일하게 조작하여 검액으로 한다.
③ 조작
검액 및 표준액 10 ml 씩 각각 5개의 시험관에 넣고 마개를 한 다음, 100℃ 수욕중에서 45분간 가열한다. 가열 후 시험관을 냉수에 넣어 냉각시키고, 각 시험관의 액 2 ml를 취한 후 이소프로판올 20 ml를 가한다. 반응시킨 검액, 표준액을 가지고 이소프로판올을 대조액으로 하여 550 nm에서 흡광도를 측정하고 각 5개의 평균 흡광도를 구한다.
④ 계산식
PCV = 105 X [A(t) X Mt X (100-Et)] / [A(s) X M X (100-E)]
A(t): 반응시킨 검액의 평균 흡광도
A(s): 반응시킨 표준액의 평균 흡광동
Mt: 표준품 취한 량(mg)
M: 검체 취한 량(mg)
Et: 표준품의 수분 함량(%)
E: 검체의 수분함량(%)
상기 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량은 다음과 같이 정량된 값을 의미한다.
① 표준액의 조제
(+)카테킨 표준품, (-)에피카테킨 표준품 각각 50 mg을 정밀하게 달아 아세토니트릴·묽은 인산 혼합액(5:95)에 녹여 100ml로 한 액을 표준액으로 한다.
② 검액 조제
샘플 50mg을 정밀하게 달아, 아세토니트릴·묽은 인산 혼합액(5:95)에 녹여 10ml로 한 액을 검액으로 한다.
③ 분석조건
- 컬럼: 옥타데실실릴화한 실리카겔을 충진한 컬럼 (0.46 X 25 cm, 5 um)
- 이동상 (표 1)
표 1
시간(분) 이동상A 이동상 B
0 95 5
50 85 15
60 20 80
70 95 5
이동상 A: 묽은 인산 (묽은 인산: 0.3%, V/V 수용액)
이동상 B: 아세토니트릴
- 유속: 0.7 ml/분
- 검출기: 자외부흡광도측정 (측정파장: 278 nm)
- 주입량: 10 ul
④ 계산식
에피카테킨으로서 카테킨의 함량(%)
= [A1 X Me X 100 X 100] / [Ae X M1 X (100-E) X 10]
에피카테킨의 함량(%)
= [A2 X Me X 100 X 100] / [Ae X M1 X (100-E) X 10]
A1: 검액 중 카테킨의 피크면적
A2: 검액 중 에피카테킨의 피크면적
Ae: 표준액 중 에피카테킨의 피크면적
Me: 표준액 중 에피카테킨의 양(mg)
M1: 검액 중 추출물의 양(mg)
E: 추출물중 수분(%)
또한, 상기 "프로안토시아디딘 함량"이라 함은 다음 방법 및 식에 의해서 계산된 값을 의미한다.
① 내부표준액의 조제
2,6-디-tert-부틸-4-메틸페놀(2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol, BHT) 30.0 mg을 정밀하게 달아 100 ml 용량플라스크에 넣고 이동상으로 표선을 맞추어 내부표준액으로 한다.
② 검액 1의 조제
샘플 10 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액 용액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 검액으로 한다.
③ 검액 2의 조제
샘플 10 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액 용액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 검액으로 한다.
④ 표준액의 검량선 조제
- 표준액 1: 프로안토시아니딘 표준품 8 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 표준액 1로 한다.
- 표준액 2: 프로안토시니딘 표준품 10 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 표준액 2로 한다.
- 표준액 3: 프로안토시아니딘 표준품 12 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 표준액 3으로 한다.
⑤ 조작조건
- 컬럼: PL Gel Column (7.6 X 300 mm, 5 um) 또는 그와 유사한 컬럼
- 검출기: 자외부흡광광도계 (측정파장: 280 nm)
- 이동상: 테트라히드로퓨란과 리튬 브로마이드 수용액의 혼합용매(95:5)
* 리튬 브로마이드 수용액: 리튬 브로마이드 1.04g을 정밀하게 취하여 1000 ml 용량플라스크에 넣고 물로 표선을 맞춘다.
- 유속: 1.0 ml/min
- 주입량: 10 uL
- 측정시간: 15분
⑥ 조작방법
표준액 1, 2, 3 및 검액 1, 2를 아래의 액체크로마토그래피법으로 각각 2회씩 분석한다. 단 표준액의 농도와 그에 상응하는 주피크 대 IS피크 면적비(Aproanthocyanidin/ABHT)로 표준액의 검량선을 작성하고 아래의 식에 따라 계산한다.
⑦ 계산식
- Ti% = {[(Aproanthocyanidin/ABHT)test - a] / b} x (1 / Ctest) x 100
Aproanthocyanidin = 검액에서 프로안토시아니딘의 피크면적
ABHT = 검액에서 BHT의 피크면적
a = 표준액 검량선의 Y 절편값
b = 표준액 검량선의 기울기값
Ctest = 검액의 농도(mg/ml)
- 프로안토시아니딘 함량(%) = Ti% x [(100-KFstd)/(100-KFtest)]
KFstd = 표준품 수분보정
KFtest = 검체 수분보정
또한, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 본 발명자들에 의해 개발된 개선된 제조방법(즉, 국제특허공개 제WO2009/031826호)에 의해 제조된 것을 바람직하게 사용할 수 있다.
즉, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (a) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2인 아세톤과 물의 혼합용매로 실온에서 추출하고, 여과하는 단계; (b) 단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계; (c) 단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 얻어질 수 있다.
분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨는 유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 얻어진 껍질, 씨, 가지를 물에 세척하고 오븐 등을 사용하여 건조시킨 후, 씨를 분리하고, 이를 통상의 방법으로 분쇄함으로써 얻을 수 있다.
상기 제조방법은 종래의 추출방법(예를 들어, GB-A-1541469)에 비하여 아세톤 함량이 낮은 물-아세톤 혼합용매를 1차 추출용매로 사용하고, 별도의 가온 없이 실온(약 25 ℃)에서 1차 추출공정을 수행한다. 상기 제조방법에서 사용하는 물-아세톤 혼합용매로는 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2, 바람직하게는 약 1 : 1.5인 혼합용매를 사용할 수 있다. 상기 1차 추출은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 더욱 바람직하다. 단계(a)의 상기 여과는 통상의 방법으로 수행할 수 있으며, 다음 단계의 수행을 위하여 여액을 회수한다.
단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계[단계(b)]에 있어서, 상기 증류에 의하여 상대적으로 비등점이 낮은 아세톤이 제거되게 되며, 아세톤에 용해되어 있는 불순물들이 침전되게 된다. 상기 증류는 통상의 증류 방법에 따라 수행될 수 있으며, 예를 들어 감압 조건에서 증류하여 수행될 수 있다. 바람직하게는 약 50 ℃ 이하의 감압 조건에서 수행되는 것이 바람직하다. 증류 과정을 거쳐 얻어진 추출액은 별도의 유기용매 추출과정 없이, 곧바로 염화나트륨 포화 및 여과 과정이 수행된다. 상기 추출액(즉, 아세톤이 증류된 추출액)을 염화나트륨으로 포화시키면, 탄닌 성분 등의 불순물이 침전되게 되며, 이는 여과 과정을 통하여 제거되게 된다. 상기 염화나트륨 포화 및 여과에 의한 불순물 침전은 염화나트륨을 포화시킨 다음, 2 내지 3 시간 동안 방치한 후, 여과하는 것이 바람직하다. 상기 여과는 통상의 방법으로 수행할 수 있으며, 다음 단계의 수행을 위하여 여액을 회수한다.
단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계[단계(c)]에 있어서, 상기 에틸 아세테이트를 이용한 추출(2차 추출)은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 농축은 단계(b)에서 얻어진 추출액(즉, 여액) 총 부피에 대하여 0.4 내지 0.7 배로 농축되도록 수행되는 것이 바람직하다.
단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계[단계(d)]에 있어서, 상기 클로로포름을 가할 경우, 클로로포름에 용해되지 않는 올리고머를 포함한 유효성분들이 침전되게 되며, 생성된 침전물은 간단히 여과함으로써 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 간단히 분리해낼 수 있다. 여과하여 얻어진 침전물은 통상의 방법에 따라 건조함으로써, 건조 분말 형태로 얻을 수 있으며, 상기 건조는 감압 조건, 예를 들어 50 ℃ 이하의 감압 조건에서 건조함으로써 수행될 수 있다.
선택적으로, 본 발명의 약학 조성물에 유효성분으로 함유되는 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (1) (i) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과하는 단계; (ii) 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과하는 단계; (iii) 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하는 단계; (iv) 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조하여 제1 추출물을 얻는 단계; (2) (p) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과하는 단계; (q) 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과하는 단계; (r) 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조하여 제2 추출물을 얻는 단계; 및 (3) 상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하는 단계를 포함하는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 제조방법에 의해 얻어질 수 있다.
상기 제조방법은 제1 추출물 및 제2 추출물을 별도로 제조하고, 이들을 혼합하여 추출물을 얻음으로써 수행된다. 따라서, 상기 제조방법은 전체적으로 아세톤의 사용량을 줄일 수 있을 뿐만 아니라, 염화나트륨 포화공정 및 클로로포름 추출공정을 결여하므로, 추출이 간단하고 유기용매 사용으로 인한 환경오염의 문제도 최소화할 수 있다. 또한, 얻어지는 추출물의 수율을 약 10배 정도로 크게 높일 수 있다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(i)는 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1, 더욱 바람직하게는 4 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과함으로써 수행된다. 상기 1차 추출은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 더욱 바람직하다. 단계(i)의 상기 여과는 통상의 방법으로 수행할 수 있으며, 다음 단계의 수행을 위하여 여액을 회수한다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(ii)는 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과함으로써 수행된다. 상기 농축에 의하여 상대적으로 비등점이 낮은 아세톤이 제거되게 되며, 아세톤에 용해되어 있는 불순물들이 침전되게 된다. 상기 농축은 통상의 감압 농축(또는 감압 증류)에 의해 수행될 수 있으며, 예를 들어 감압 조건에서 증류하여 수행될 수 있다. 농축 과정을 거친 후 여과에 의해 침전물을 제거하고 여액을 회수한다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(iii)은 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출함으로써 수행된다. 상기 에틸 아세테이트를 이용한 추출(2차 추출)은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 바람직하다. 또한, 단계(iii)은 상기 에틸 아세테이트를 이용한 추출공정 수행 후, 무수 황산나트륨 등을 이용한 탈수 공정을 추가로 포함할 수 있다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(iv)는 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조함으로써 수행된다. 상기 건조는 통상의 방법, 예를 들어 50 ℃ 이하의 감압 조건에서의 건조에 의해 수행될 수 있다. 더욱 바람직하게는 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 농축하여 에틸 아세테이트를 제거하고, 얻어진 농축물을 물에 용해시킨 후, 분무건조함으로써 수행될 수 있다.
제2 추출물 제조에 있어서, 단계(p)는 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과함으로써 수행할 수 있고; 단계(q)는 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과함으로써 수행할 수 있다. 단계(q)의 상기 추출은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 바람직하다.
또한, 제2 추출물 제조에 있어서, 단계(r)은 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조함으로써 수행할 수 있다. 단계(r)의 상기 건조는 단계(q)에서 얻어진 여액을 분무건조함으로써 수행되거나; 단계(q)에서 얻어진 여액을 농축한 후, 얻어진 농축액을 분무건조함으로써 수행되는 것이 바람직하다. 상기 농축은 단계(q)에서 얻어진 여액 총 부피에 대하여 0.4 내지 0.7 배로 농축될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기와 같이 얻어진 제1 추출물 및 제2 추출물의 혼합은 단순히 추출물들을 혼합함으로써 수행될 수 있으며, 상기 제1 추출물 및 상기 제2 추출물의 혼합비는 1 : 0.5∼1.5 의 중량비일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 점안용 액제 또는 겔제 제조를 위하여 약제학 분야에서 통상적으로 사용되는 첨가제, 예를 들어 안정화제, 점증제, 완충제, 등장화제, 보존제, pH 조절제 등을 함유할 수 있다.
상기 안정화제는 D-솔비톨, 글리세린, 에데트산 나트륨 등을 포함하고; 상기 점증제는 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등을 포함하고; 상기 완충제는 인산 또는 그의 염, 붕산, 붕사, 구연산 또는 그의 염 등을 포함하고; 상기 등장화제는 염화나트륨 등을 포함하고; 상기 보존제는 염화벤잘코늄, 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 클로로부탄올 등을 포함하고; 상기 pH 조절제(pH 5∼8)는 염산, 수산화나트륨 등을 포함한다.
상기 첨가제의 함량은 약제학 분야에서 통상적으로 사용되는 범위일 수 있으며, 예를 들어, 조성물 총 중량에 대하여 완충제는 0.01∼15 중량%, 안정화제는 0.01∼50 중량%(구체적으로, 농글리세린은 0.01∼15.0%, D-솔비톨액(70%)은 0.01∼50 중량%), 점증제는 0.01∼30.0 중량%의 범위일 수 있으나, 상기 첨가제의 함량은 사용목적에 따라 적절히 선택될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 시험예에 한정되는 것은 아니다.
추출물 제조예 1. 유럽종 포도( Vitis vinifera )의 씨 추출물의 제조
유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 껍질, 씨, 가지를 모아 물에 세척하고 회전 오븐에서 건조시킨 후, 씨를 분리하였다. 얻어진 씨 1 kg을 분쇄한 다음, 정제수 300 ml 및 아세톤 200 ml로 이루어진 아세톤 수용액 500 ml를 가하여, 실온에서 추출하였다. 상기 추출 과정을 3회 반복하고, 얻어진 추출액을 모두 합하여 여과하였다. 얻어진 여액을 50 ℃ 이하의 감압하에서 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시킨 후, 약 3 시간 동안 실온에서 방치한 다음 여과하였다. 얻어진 여액을 에틸 아세테이트 250 ml을 사용하여 3회 추출한 다음, 무수 황산나트륨으로 탈수하였다. 얻어진 추출액을 부피가 약 125 ml로 줄어들 때까지 감압 농축시켰다. 얻어진 농축액에 클로로포름 약 600 ml를 가하여 침전물을 생성시킨 후, 여과하였다. 여과하여 얻어진 침전물을 50 ℃ 이하의 진공 오븐에서 건조하여 약 3.5 g의 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 갈색 분말 상으로 얻었다. 얻어진 추출물을 희산성 용액에서 가열하여 가수분해한 다음, 프로시아니돌릭 올리고머의 함량을 정량하여 PCV (Procyanidolic value)를 측정한 결과, 약 105의 높은 값을 나타내었다. 또한, 상기한 바와 같이 프로안토시아디딘 함량을 측정한 결과 103 % 이었다. 따라서 상기 추출물은 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 모노머가 2개 이상 중합된 올리고머류를 다량으로 함유한다.
추출물 제조예 2. 유럽종 포도( Vitis vinifera )의 씨 추출물의 제조
유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 껍질, 씨, 가지를 모아 물에 세척하고 회전 오븐에서 건조시킨 후, 씨를 분리하였다. 얻어진 씨 1 kg을 분쇄한 다음, 아세톤 수용액 (아세톤/물 = 8/2, v/v) 500 ml를 가하여 추출하였다. 상기 추출 과정을 3회 반복하고, 얻어진 추출액을 모두 합하여 여과하였다. 얻어진 여액을 감압농축하여 아세톤을 제거한 후, 여과하였다. 얻어진 여액을 에틸 아세테이트 250 ml을 사용하여 3회 추출한 다음, 무수 황산나트륨으로 탈수하였다. 얻어진 추출액을 감압농축하여 에틸 아세테이트를 제거하고, 얻어진 농축물을 물 500 ml에 용해시킨 후, 분무건조하여 분말상의 추출물(제1 추출물) 약 20 g을 얻었다.
유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 껍질, 씨, 가지를 모아 물에 세척하고 회전 오븐에서 건조시킨 후, 씨를 분리하였다. 얻어진 씨 1 kg을 분쇄한 다음, 정제수 500 ml를 가하여 추출하였다. 상기 추출 과정을 3회 반복하고, 얻어진 추출액을 모두 합하여 여과하였다. 얻어진 여액을 에탄올 250 ml을 사용하여 3회 추출한 다음, 여과하였다. 얻어진 여액을 감압농축한 후, 얻어진 농축액을 분무건조하여 분말상의 추출물(제2 추출물) 약 15 g을 얻었다.
상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하여 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 약 35 g을 얻었다. 얻어진 추출물을 희산성 용액에서 가열하여 가수분해한 다음, 프로시아니돌릭 올리고머의 함량을 정량하여 PCV (Procyanidolic value)를 측정한 결과, 약 98 의 높은 값을 나타내었다. 또한, 상기한 바와 같이 프로안토시아디딘 함량을 측정한 결과 98.5 % 이었다. 따라서 상기 추출물은 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 모노머가 2개 이상 중합된 올리고머류를 다량으로 함유한다.
실시예 1. 점안용 액제
멸균 정제수 800 ml에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 붕산 8 g, 붕사 9 g, 농글리세린 2 g, D-솔비톨액(70%) 15 g, 아황산수소나트륨 3 g, 에데트산나트륨 0.5 g을 가하여 용해시킨 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 부피를 1,000 ml로 맞추어 점안용 액제를 제조하였다. (pH 6.0)
실시예 2. 점안용 액제
멸균 정제수 800 ml에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 붕산 8 g, 붕사 8 g, 농글리세린 2 g, D-솔비톨액(70%) 15 g, 피로아황산칼륨 0.125 g, 에데트산나트륨 0.5 g을 가하여 용해시킨 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 부피를 1,000 ml로 맞추어 점안용 액제를 제조하였다. (pH 6.0)
실시예 3. 점안용 액제
멸균 정제수 800 ml에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 붕산 8 g, 붕사 9 g, 농글리세린 2 g, D-솔비톨액(70%) 15 g, 아스코르브산 1 g, 에데트산나트륨 0.5 g을 가하여 용해시킨 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 부피를 1,000 ml로 맞추어 점안용 액제를 제조하였다. (pH 6.0)
실시예 4. 점안용 액제
멸균 정제수 800 ml에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 붕산 8 g, 붕사 9 g, 농글리세린 2 g, D-솔비톨액(70%) 15 g, L-트레오닌 3 g, 에데트산나트륨 0.5 g을 가하여 용해시킨 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 부피를 1,000 ml로 맞추어 점안용 액제를 제조하였다. (pH 6.0)
비교예 1. 점안용 액제
멸균 정제수 800 ml에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 인산이수소칼륨 6.8 g, 염화나트륨 5 g을 가하여 용해시킨 다음, 1N-수산화나트륨액을 첨가하여 pH 6.0으로 조절하고 멸균 정제수를 가하여 최종 부피를 1,000 ml로 맞추어 점안용 액제를 제조하였다. (pH 6.0)
비교예 2. 점안용 액제
멸균 정제수 800 ml에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 구연산 1 g, 구연산나트륨 19 g, 에데트산나트륨 0.5 g, 염화나트륨 5 g을 가하여 용해시킨 다음, 1N-수산화나트륨액을 첨가하여 pH 6.0으로 조절하고 멸균 정제수를 가하여 최종 부피를 1,000 ml로 맞추어 점안용 액제를 제조하였다. (pH 6.0)
비교예 3. 점안용 액제
멸균 정제수 800 ml에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 붕산 8 g, 붕사 8 g, 농글리세린 2 g, D-솔비톨(70%) 15 g, 에데트산나트륨 0.5g을 가하여 용해시킨 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 부피를 1,000 ml로 맞추어 점안용 액제를 제조하였다. (pH 6.0)
실시예 5. 점안용 겔제
멸균 정제수 800 mL에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 16.5 g, D-솔비톨액(70%) 50 g, 아황산수소나트륨 3 g, 에데트산나트륨 1 g을 균질하게 용해시켰다. 이 액에 0.1N-수산화나트륨액을 가하여 pH 6.0으로 조절한 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 무게를 1,000 g로 맞추어 점안용 겔제를 제조하였다. (pH 6.0)
실시예 6. 점안용 겔제
멸균 정제수 800 mL에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 16.5 g, D-솔비톨액(70%) 50 g, 피로아황산칼륨 0.25 g, 에데트산나트륨 1 g을 균질하게 용해시켰다. 이 액에 0.1N-수산화나트륨액을 가하여 pH 6.0으로 조절한 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 무게를 1,000 g로 맞추어 점안용 겔제를 제조하였다. (pH 6.0)
실시예 7. 점안용 겔제
멸균 정제수 800 mL에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 16.5 g, D-솔비톨액(70%) 50 g, 아스코르브산 1 g, 에데트산나트륨 1 g을 균질하게 용해시켰다. 이 액에 0.1N-수산화나트륨액을 가하여 pH 6.0으로 조절한 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 무게를 1,000 g로 맞추어 점안용 겔제를 제조하였다. (pH 6.0)
실시예 8. 점안용 겔제
멸균 정제수 800 mL에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 16.5 g, D-솔비톨액(70%) 50 g, L-트레오닌 3 g, 에데트산나트륨 1 g을 균질하게 용해시켰다. 이 액에 0.1N-수산화나트륨액을 가하여 pH 6.0으로 조절한 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 무게를 1,000 g로 맞추어 점안용 겔제를 제조하였다. (pH 6.0)
비교예 4. 점안용 겔제
멸균 정제수 800 mL에 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 10 g, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 16.5 g, D-솔비톨액(70%) 50 g, 에데트산나트륨 1 g을 균질하게 용해시켰다. 이 액에 0.1N-수산화나트륨액을 가하여 pH 6.0으로 조절한 다음, 멸균 정제수를 가하여 최종 무게를 1,000 g로 맞추어 점안용 겔제를 제조하였다. (pH 6.0)
시험예 1. 물리적 및 화학적 안정성 시험
실시예 1 내지 8 및 비교예 1 내지 4에서 제조한 점안용 액제 및 겔제를 용기에 충전하여 실온 조건(25±2℃/상대습도 60±5%)에서 12개월, 가속 조건(40±2℃/상대습도 75±5%)에서 6개월 동안 보관하면서, 물리적 및 화학적 안정성을 시험하였다. (용기재질: 점안용 액제-PET재질, 안과용 겔제- 알루미늄)
(1) 물리적 안정성
3 개월 단위로 성상 변화(색깔과 침전물 생성 여부) 및 pH 변화를 측정하였다. 성상 변화중 색깔의 변화 및 침전물 생성 정도는 육안으로 관찰하였다. 성상 변화 시험결과는 하기 표 2 및 표 3과 같으며, pH 변화에 대한 시험결과는 표 4와 같다.
표 2 색깔의 변화
보관조건 초기 3개월 6개월 9개월 12개월
실시예 1 25±2℃/상대습도60±5% 미황색 미황색 미황색 미황색 미황색
40±2℃/상대습도75±5% 미황색 미황색 미황색 - -
실시예 2 25±2℃/상대습도60±5% 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색
40±2℃/상대습도75±5% 연갈색 연갈색 갈색 -- -
실시예 3 25±2℃/상대습도60±5% 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색
40±2℃/상대습도75±5% 연갈색 연갈색 연갈색 - -
실시예 4 25±2℃/상대습도60±5% 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색
40±2℃/상대습도75±5% 연갈색 연갈색 갈색 - -
비교예 1 25±2℃/상대습도60±5% 갈색 진한갈색 흙갈색 흙갈색 흙갈색
40±2℃/상대습도75±5% 갈색 흙갈색 흙갈색 -- -
비교예 2 25±2℃/상대습도60±5% 연갈색 갈색 흙갈색 흙갈색 흙갈색
40±2℃/상대습도75±5% 연갈색 흙갈색 흙갈색 - -
비교예 3 25±2℃/상대습도60±5% 갈색 진한갈색 흙갈색 흙갈색 흙갈색
40±2℃/상대습도75±5% 갈색 흙갈색 흙갈색 - -
실시예 5 25±2℃/상대습도60±5% 미황색 미황색 미황색 미황색 미황색
40±2℃/상대습도75±5% 미황색 미황색 미황색 - -
실시예 6 25±2℃/상대습도60±5% 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색
40±2℃/상대습도75±5% 연갈색 연갈색 갈색 - -
실시예 7 25±2℃/상대습도60±5% 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색
40±2℃/상대습도75±5% 연갈색 연갈색 연갈색 - -
실시예 8 25±2℃/상대습도60±5% 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색 연갈색
40±2℃/상대습도75±5% 연갈색 연갈색 갈색 - -
비교예 4 25±2℃/상대습도60±5% 갈색 진한갈색 흙갈색 흙갈색 흙갈색
40±2℃/상대습도75±5% 갈색 흙갈색 흙갈색 - -
표 3 침전물 생성 여부
보관조건 초기 3개월 6개월 9개월 12개월
실시예 1 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
실시예 2 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
실시예 3 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
실시예 4 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
비교예 1 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. + ++ +++
40±2℃/상대습도75±5% N.D. ++ ++++ - -
비교예 2 25±2℃/상대습도60±5% N.D. + ++ +++ ++++
40±2℃/상대습도75±5% N.D. +++ ++++ - -
비교예 3 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
실시예 5 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
실시예 6 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
실시예 7 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
실시예 8 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
비교예 4 25±2℃/상대습도60±5% N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
40±2℃/상대습도75±5% N.D. N.D. N.D. - -
※ N.D. : Not detected
표 4 pH 변화
보관조건 초기 3개월 6개월 9개월 12개월
실시예 1 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 6.0 5.9 - -
실시예 2 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 6.0 5.8 - -
실시예 3 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 6.0 5.9 - -
실시예 4 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 5.9 5.8 - -
비교예 1 25±2℃/상대습도60±5% 7.0 6.9 6.7 6.5 6.2
40±2℃/상대습도75±5% 7.0 6.7 6.1 - -
비교예 2 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 5.9 5.8 5.2 5.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 5.7 4.9 - -
비교예 3 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 5.9 5.9
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 5.9 5.7 - -
실시예 5 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 6.0 5.9 - -
실시예 6 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 6.0 5.8 - -
실시예 7 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 6.0 5.9 - -
실시예 8 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 6.0 5.8 - -
비교예 4 25±2℃/상대습도60±5% 6.0 6.0 6.0 5.8 5.6
40±2℃/상대습도75±5% 6.0 5.9 5.5 - -
상기 표 2 내지 표 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라 아스코르브산, 아황산수소나트륨 등의 항산화제를 함유하는 조성물은 실온과 가속조건에서 유의성 있는 색깔 변화가 없을 뿐 아니라 침전물도 생성되지 않았으며, 또한 pH 변화가 없다. 따라서, 본 발명의 점안용 액제 및 겔제 조성물은 우수한 물리적 안정성을 가짐을 알 수 있다.
(2) 화학적 안정성
12 개월(6개월) 단위로 지표물질인 프로시아니돌릭 올리고머(Procyanidolic oligomer)의 함량을 정량하였다. 상기 정량은 점안용 액제 1mL(점안용 겔제 = 1g) 중 potential cyanidol chloride의 양(mg)을 계산함으로써 수행하였으며, 검체 1 ml(혹은 1g) 중의 potential cyanidol chloride의 양(mg)은 다음과 같이 계산하였으며, 그 결과는 표 5와 같다.
※ 검액의 PCV = 105 X [A(t) X Mt X (100-Et)] / [A(s) X M X (100-E)]
※ 검액의 potential cyanidol chloride (%) = [검액의 PCV X 7%] / 80
※ 검체 1mL (겔제=1g) 중 potential cyanidol chloride의 양 (mg)
=[10 mg X 검액의 potential cyanidol chloride (%) ] / 100
- A(t): 반응시킨 검액의 평균 흡광도
- A(s): 반응시킨 표준액의 평균 흡광도
- Mt: 표준품 취한 량(mg)
- M: 검체중 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 양(mg)
- Et: 표준품의 수분 함량(%)
표 5 검체 1mL(안과용 겔제=1g)중 potential cyanidol chloride의 양 (mg)
보관조건 초기 6개월 12개월
실시예 1 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.85
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.83 -
실시예 2 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.85
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.84 -
실시예 3 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.86
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.85 -
실시예 4 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.83
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.82 -
비교예 1 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.53 0.31
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.21 -
비교예 2 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.48 0.21
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.15 -
비교예 3 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.68 0.51
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.39 -
실시예 5 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.85
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.84 -
실시예 6 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.85
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.83 -
실시예 7 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.86
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.85 -
실시예 8 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.86 0.86
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.83 -
비교예 4 25±2℃/상대습도60±5% 0.86 0.75 0.66
40±2℃/상대습도75±5% 0.86 0.57 -
상기 표 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라 항산화제를 함유하는 조성물은 실온과 가속조건에서 지표 물질의 유의성 있는 변화 없이 화학적으로 안정하며, 특히 아스코르브산을 함유하는 조성물(실시예 3 및 7)이 가장 우수한 화학적 안정성을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 점안용 액제 및 겔제 조성물은 우수한 화학적 안정성을 가짐을 알 수 있다.

Claims (6)

  1. 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물; 및 아스코르브산 또는 그의 염, 아황산수소나트륨, 피로아황산칼륨, 및 L-트레오닌 또는 그의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 항산화제를 포함하는, 점안용 액제 또는 겔제 형태의 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항산화제의 함량이 조성물 총 중량에 대하여 0.01∼15 중량%인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항 있어서, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 함량이 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ∼ 30 중량%인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항 있어서, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 80 ∼ 130의 프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, PCV); 30 % 이하의 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량; 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항 있어서, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 (a) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2인 아세톤과 물의 혼합용매로 실온에서 추출하고, 여과하는 단계; (b) 단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계; (c) 단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어진 추출물임을 특징으로 하는 약학 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항 있어서, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 (1) (i) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과하는 단계; (ii) 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과하는 단계; (iii) 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하는 단계; (iv) 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조하여 제1 추출물을 얻는 단계; (2) (p) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과하는 단계; (q) 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과하는 단계; (r) 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조하여 제2 추출물을 얻는 단계; 및 (3) 상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어진 추출물임을 특징으로 하는 약학 조성물.
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