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WO2010049451A2 - Analogues c-glycosidiques d'alpha-galactosylcéramides ayant des activités immunostimulatrices et immunorégulatrices - Google Patents

Analogues c-glycosidiques d'alpha-galactosylcéramides ayant des activités immunostimulatrices et immunorégulatrices Download PDF

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WO2010049451A2
WO2010049451A2 PCT/EP2009/064221 EP2009064221W WO2010049451A2 WO 2010049451 A2 WO2010049451 A2 WO 2010049451A2 EP 2009064221 W EP2009064221 W EP 2009064221W WO 2010049451 A2 WO2010049451 A2 WO 2010049451A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
mol
carbon atoms
solution
group selected
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/EP2009/064221
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English (en)
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WO2010049451A3 (fr
Inventor
Arnaud Haudrechy
Aline Banchet
Stéphane GUILLARME
Manuel Dauchez
Eric Henon
Jean-Hugues Renault
Laurent Martiny
Fanny Monneaux Gadroy
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of WO2010049451A2 publication Critical patent/WO2010049451A2/fr
Publication of WO2010049451A3 publication Critical patent/WO2010049451A3/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
    • C07H7/02—Acyclic radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants

Definitions

  • the subject of the invention is C-glycosidic analogs of alpha-galactosylceramides having immunostimulatory and immunoregulatory activities as well as pharmaceutical compositions containing these analogs, in particular for the treatment of autoimmune diseases, cancers and for use as an adjuvant in vaccines.
  • KRN 7000 Alpha-galactosylceramide, called KRN 7000, is known for its immunostimulatory and anti-cancer activities. This molecule however comprises an anomeric C-O bond sensitive to hydrolysis which gives it a short duration of action.
  • C-glycosidic analogues of KRN 7000 were prepared and tested for their activities (Chen et al (2004), Toba et al (2005), Yang et al (2004). ), Franck et al (2006)).
  • the C-glycosidic analogs of alpha-galactosylceramides are of great therapeutic interest and there is therefore an important need for this class of molecules.
  • the present invention relates to novel C-glycosidic analogs of alpha-galactosylceramides having an ester, thionoester or ether function in place of the amide function.
  • These C-glycosidic analogs of alpha-galactosylceramides have immunoregulatory and immunostimulatory properties demonstrated ex vivo and in vivo.
  • these molecules can be synthesized in an inexpensive method allowing access to many analogues carrying different structural modifications.
  • R 1 represents a hydrogen atom or a group selected from -CO-R ', -CS-R' and -CH 2 -R ';
  • R 2 represents a group selected from -CO-R '', -CS-R '' and -CH 2 -R '';
  • R 'and R independently represent a group chosen from linear or branched alkyl or alkenyl radicals comprising 5 to 30 carbon atoms, and preferably 20 to 26 carbon atoms
  • R-3 represents a group chosen from linear or branched alkyl or alkenyl radicals comprising 4 to 15 carbon atoms.
  • R 'and R preferably independently represent a group selected from alkyl radicals, linear or branched, comprising 5 to 30 carbon atoms, and preferably 20 to 26 carbon atoms.
  • R3 preferably represents a group selected from alkyl radicals, linear or branched, comprising 4 to 15 carbon atoms
  • alkyl is meant in particular according to the present invention the linear or branched alkyl radicals.
  • alkenyl is preferably used according to the invention to mean a linear or branched unsaturated hydrocarbon-based chain comprising at least one double bond.
  • R 2 and R 3 are as defined above.
  • the invention relates to compounds of general formula (III):
  • n is an integer between 3 and 14.
  • m is equal to 21, 22, 23, 24 or 25 and n is equal to 3, 4, 5, 9, 11, 12, 13 or 14.
  • the invention relates to a compound of formula (IV):
  • the invention relates to the above compounds for use as a medicament.
  • the subject of the invention is also these compounds for the treatment of autoimmune diseases, cancers or infectious diseases.
  • the invention also relates to these compounds for use as an adjuvant in a vaccine.
  • the invention thus relates to pharmaceutical compositions comprising a compound according to one of the preceding claims and a suitable pharmaceutical vehicle.
  • the invention also relates to a process for preparing a compound of formula (I)
  • R 1 represents a hydrogen atom or a group chosen from -CO-R ', -CS-R' and -CH 2 -R ',
  • R 2 represents a group chosen from -CO-R “, -CS-R” and -CH 2 -R ",
  • R 'and R independently represent a group chosen from linear or branched alkyl or alkenyl radicals comprising 5 to 30 carbon atoms, and preferably 20 to 26 carbon atoms,
  • R3 represents a group selected from linear or branched alkyl or alkenyl radicals comprising 4 to 15 carbon atoms, comprising a reaction step of a compound of formula (V) in which
  • R 4 represents a protecting group selected from TBDPS, TBDMS and TIPS
  • R5 represents a protecting group selected from PMB, benzyl and TBDMS; with a compound of formula (VI)
  • TBDPS is tert-butyldiphenylsilyl
  • TIPS is triisopropylsilyl
  • TBDMS is te / t-butyldimethylsilyl
  • PMB is paramethoxybenzyl.
  • R 6 represents a benzyl optionally substituted with an alkoxy group comprising 1 to 6 carbon atoms.
  • R6 is a protecting group selected from benzyl and PMB (paramethoxybenzyl).
  • the compound of general formula (VII) constitutes the pivotal compound from which a wide variety of compounds of formula (I) can be obtained very easily.
  • the invention therefore also relates to a compound of general formula (VII) as described above.
  • the invention thus relates to compounds for the treatment of autoimmune diseases, infectious diseases and cancers.
  • the invention also relates to methods of therapeutic treatment of autoimmune diseases, infectious diseases and cancers comprising administering an effective amount of a compound of the invention to an individual.
  • the invention finally relates to the use of the compounds according to the invention for the manufacture of medicaments for the treatment of autoimmune diseases, infectious diseases and cancers.
  • Autoimmune diseases are diseases caused by the hyperactivity of the immune system against tissues or substances that are normally present in the body.
  • the invention relates to compounds for the therapeutic treatment of autoimmune diseases such as type I diabetes, encephalo myelitis, rheumatism and inflammation, allergies, asthma, contact sensitivity and atherosclerosis.
  • the present invention provides compounds for the treatment of cancers.
  • cancer is meant all neoplastic malignant formations, regardless of the histological nature.
  • carcinomas of epithelial origin and sarcomas of conjunctive origin.
  • Malignant tumors are composed of atypical, invasive or disseminating cells, generally characterized by an autonomous capacity of growth, an imprecise delimitation, a capacity of invasion of the neighboring tissues and vessels and a tendency to disseminate by the production of metastases.
  • These include cancers of the breast, prostate, lungs, esophagus, skin, bladder, stomach, liver, uterus, colon and rectum.
  • the invention also relates to compounds for the treatment of infectious diseases and in particular for infectious diseases of Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus pneumoniae, Plasmodium spp., Trypanosoma cruzi, Cryptococcus neoformans, the hepatitis B virus, the diabetogenic myocardial encephalo and respiratory syncytium virus.
  • the compounds according to the present invention have immunoregulatory and / or immunostimulatory properties.
  • the compounds according to the present invention can be used as an adjuvant in vaccines.
  • adjuvants are classically defined as substances capable of potentiating or modulating the immune response against one or more coadministered antigens.
  • compositions comprising a compound as defined above and a suitable pharmaceutical carrier.
  • These compositions can be formulated for administration to mammals, including humans.
  • the dosage varies according to the treatment and the condition in question.
  • These compositions are made so that they can be administered by the digestive or parenteral route.
  • the active ingredient can be administered in unit dosage forms, in admixture with pharmaceutical carriers. classics, animals or humans.
  • Suitable unit dosage forms include oral forms such as tablets, capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions, sublingual and oral forms of administration, subcutaneous forms of administration intramuscular, intravenous, intranasal or intraocular and forms of rectal administration.
  • the main active ingredient is mixed with a pharmaceutical carrier such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
  • a pharmaceutical carrier such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic or the like.
  • the tablets can be coated with sucrose or other suitable materials or they can be treated in such a way that they have prolonged or delayed activity and continuously release a predetermined amount of active ingredient.
  • a preparation in capsules is obtained by mixing the active ingredient with a diluent and pouring the resulting mixture into soft or hard gelatin capsules.
  • a syrup or elixir preparation may contain the active ingredient together with a sweetener, an antiseptic, as well as a flavoring agent and a suitable colorant.
  • Water-dispersible powders or granules may contain the active ingredient in admixture with dispersing agents or wetting agents, or suspending agents, as well as with taste correctors or sweeteners.
  • the compounds according to the invention can be used in therapy alone, or in combination with at least one other active agent.
  • the present invention therefore also relates to a product comprising a compound according to the invention and another active agent as a combination product for simultaneous, separate or spread over time use in therapy, and in particular in the treatment of cancers.
  • Another subject of the invention is a vaccine composition
  • a vaccine composition comprising a compound according to the invention and at least one antigen.
  • the antigen is typically selected from inactivated infectious agents, live attenuated agents and infectious agent subunits or inactivated toxins.
  • the vaccines are usually inoculated by injection, but they can be ingested orally or by nasal spray.
  • the compounds according to the invention can be prepared according to the different methods of preparation described below and in the examples.
  • the C-glycosidic analogs are synthesized according to the general method described below.
  • FIG. 1 Determination of the Interaction Between the [C-KRN] Ligand According to the Invention and the TNK Cells
  • FIG. 2 Comparison of the activity with the control ligands
  • FIG. 3 [IFN ⁇ ] / [IL4] ratio indicating that the [C-KRN] ligand promotes a Th2 response
  • FIG. 4 In vivo activation of the TNK cells with the ligand [FIG. C-KRN]
  • This compound was synthesized according to the detailed method described below.
  • Alkyne B, epoxyaldehyde (S. Guillarme, K. Plé and A. Haudrechy, J. Org Chem., 2006, 71, 3, 1015 and A. Banchet, S. Guillarme, A. Haudrechy, Synlett, 2007, 9, 1467) and lithium bromide are coevaporated three times with toluene and then dried under vacuum.
  • the temperature is kept at -78 ° C for Ih. Then And 3 N (5 eq.) was slowly added. The temperature is slowly raised to room temperature in about 1h30. After an additional 30 minutes at room temperature and then treatment, the crude reaction product is coevaporated three times with toluene and used for the Wittig reaction step without any additional purification.
  • n and m are defined in the tables below:
  • the splenocytes of the BALB / c naive mice are cultured in the presence of increasing amounts of the ligand (from 0.02 to 20 ⁇ g / ml).
  • the internal controls are carried out with two synthetic ligands: KRN 7000 (marketed by Alexis Biochemicals®) and ⁇ -Gal (C 12) Cer (marketed by Avanti Polar Lipids®), whose effectiveness in inducing a specific cellular response of TNK cells is already recognized ( Figure 1).
  • the cell proliferation is measured after three days of culture by incorporation of tritiated thymidine (measurement of the radioactivity incorporated by the cells during activation).
  • the quantities of cytokines (IL-4 and IFN-gamma) are determined by the ELISA test in the harvested samples after 30 h of culture.
  • our esterified ligand has potential in the treatment of autoimmune pathologies where Th2 responses must be favored in order to counteract the ThI responses.
  • the ligand (KRN 7000 or [C-KRN]) is injected intraperitoneally into naive BALB / c mice (2 mice per ligand). Serum cytokine levels (IL-4 and IFN- ⁇ ) were detected at different times after injection.
  • IL-4 and IFN- ⁇ Serum cytokine levels
  • the esterified ligand is capable of activating the TNK lymphocytes in vivo. Indeed, 6 hours after the injection of the ligand [C-KRN], the ratio [IFN- ⁇ ] / [IL-4] reflects a Th2 response. This remains, however, not very marked but durable because it is also observed that the secretion of IFN- ⁇ appears later than with KRN 7000. The strong secretion of IFN- ⁇ is obtained 24 hours after the injection of [C- KRN] (against 6h for the KRN 7000). Thus, our esterified ligand induces a weak but relatively prolonged Th2 response (Figure 4).
  • the low ratio [IFN- ⁇ ] / [IL-4] may be due to the average purity of our sample. It may also be noted that the impurities present do not appear to be cytotoxic. The information provided by the immunoassays on our esterified ligand is very encouraging. Against all odds, this analogue seems to induce, in vitro and in vivo, a Th2 response favorable to the treatment of autoimmune inflammatory diseases.

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Abstract

Analogues C-glycosidiques d'alpha-galactosylcéramides ayant des activités immunostimulatrices et immunorégulatrices de formule générale (I).

Description

Analogues C-glycosidiques d'alpha-galactosylcéramides ayant des activités immunostimulatrices et immunorégulatrices
L'invention a pour objet des analogues C-glycosidiques des alpha- galactosylcéramides ayant des activités immunostimulatrices et immunorégulatrices ainsi que des compositions pharmaceutiques contenant ces analogues notamment pour le traitement des maladies auto-immunes, des cancers et pour utilisation comme adjuvant dans des vaccins.
L'alpha-galactosylcéramide dénommé KRN 7000 est connu pour ses activités immunostimulatrices et anti-cancéreuses. Cette molécule comprend cependant une liaison anomérique C-O sensible à l'hydrolyse qui lui procure une faible durée d'action.
Afin d'obtenir des molécules plus stables in vivo, des analogues C-glycosidiques du KRN 7000 ont été préparés et testés pour leurs activités (Chen et al. (2004), Toba et al. (2005), Yang et al. (2004), Franck et al. (2006)). Les analogues C-glycosidiques des alpha-galactosylcéramides présentent un grand intérêt thérapeutique et il existe donc un besoin important concernant cette classe de molécules.
La présente invention concerne de nouveaux analogues C-glycosidiques des alpha- galactosylcéramides possédant une fonction ester, thionoester ou éther à la place de la fonction amide. Ces analogues C-glycosidiques des alpha-galactosylcéramides ont des propriétés immunorégulatrices et immunostimulatrices démontrées ex vivo et in vivo. En outre, ces molécules peuvent être synthétisées selon un procédé peu coûteux permettant d'accéder à de nombreux analogues portant différentes modifications structurelles.
L'invention a pour objet des composés de formule générale (I) :
Figure imgf000002_0001
dans laquelle
Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi -CO-R', -CS-R' et -CH2- R' ; R2 représente un groupe choisi parmi -CO-R' ' , -CS-R' ' et -CH2-R' ' ;
R' et R" représentent indépendamment un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés, comprenant 5 à 30 atomes de carbone, et de préférence 20 à 26 atomes de carbone, R-3 représente un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés, comprenant 4 à 15 atomes de carbone.
Dans la présente invention, R' et R" représentent de préférence indépendamment un groupe choisi parmi les radicaux alkyle, linéaires ou ramifiés, comprenant 5 à 30 atomes de carbone, et de préférence 20 à 26 atomes de carbone.
Dans la présente invention, R3 représente de préférence un groupe choisi parmi les radicaux alkyle, linéaires ou ramifiés, comprenant 4 à 15 atomes de carbone
Par alkyle, on entend en particulier selon la présente invention les radicaux alkyles linéraires ou ramifiés.
Par alkényle, on entend de préférence selon l'invention une chaîne hydrocarbonée insaturée, linéaire ou ramifiée, comprenant au moins une double liaison. De préférence, l' alkényle comporte une seule double liaison C=C.
De préférence, ces composés répondent à la formule générale (II) :
Figure imgf000003_0001
dans laquelle R2 et R3 sont tels que définis ci-dessus.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'invention se rapporte à des composés de formule générale (III) :
Figure imgf000003_0002
dans laquelle m est un nombre entier compris entre 4 et 29 et de préférence compris entre 19 et 25, n est un nombre entier compris entre 3 et 14. De préférence, m est égal à 21, 22, 23, 24 ou 25 et n est égal à 3, 4, 5, 9, 11, 12, 13 ou 14.
De façon particulièrement avantageuse, l'invention concerne un composé de formule (IV) :
Figure imgf000004_0001
L'invention se rapporte aux composés ci-dessus pour utilisation comme médicament.
L'invention a également pour objet ces composés pour le traitement des maladies auto-immunes, des cancers ou des maladies infectieuses.
L'invention concerne également ces composés pour utilisation comme adjuvant dans un vaccin.
L'invention a ainsi pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant un composé selon l'une des revendications précédentes et un véhicule pharmaceutique approprié.
L'invention se rapporte également à un procédé de préparation d'un composé de formule (I)
Figure imgf000004_0002
(I) dans lequel
Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi -CO-R', -CS-R' et -CH2-R',
R2 représente un groupe choisi parmi -CO-R", -CS-R" et -CH2-R",
R' et R" représentent indépendamment un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés, comprenant 5 à 30 atomes de carbone, et de préférence 20 à 26 atomes de carbone,
R3 représente un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés, comprenant 4 à 15 atomes de carbone, comprenant une étape de réaction d'un composé de formule (V)
Figure imgf000005_0001
dans lequel
R4 représente un groupe protecteur choisi parmi TBDPS, TBDMS et TIPS, R5 représente un groupe protecteur choisi parmi PMB, benzyle et TBDMS ; avec un composé de formule (VI)
Figure imgf000005_0002
dans lequel R6 représente un groupe benzyle éventuellement substitué ; pour obtenir un composé de formule (VII)
Figure imgf000005_0003
puis l'obtention du composé de formule générale (I) à partir de ce composé (VII).
TBDPS désigne le tert-butyldiphenylsilyl, TIPS désigne le triisopropylsilyl, TBDMS désigne le te/t-butyldimethylsilyl, PMB désigne le paraméthoxybenzyle.
Le radical R6 représente un benzyle éventuellement substitué avec un groupe alkoxy comprenant 1 à 6 atomes de carbone. De préférence R6 est un groupe protecteur choisi parmi le benzyle et le PMB (paraméthoxybenzyle).
L'obtention de composés de formule générale (I) à partir des composés de formule (VII) s'effectue selon des techniques classiques bien connues de l'homme du métier.
Le composé de formule générale (VII) constitue le composé pivot à partir duquel une grande variété de composés de formule (I) peut être obtenue très facilement. L'invention a donc également pour objet un composé de formule générale (VII) tel que décrit ci-dessus.
L'invention se rapporte donc à des composés pour le traitement des maladies auto- immunes, des maladies infectieuses et des cancers. L'invention concerne aussi des méthodes de traitement thérapeutique des maladies auto-immunes, des maladies infectieuses et des cancers comprenant l'administration d'une quantité efficace d'un composé selon l'invention à un individu. L'invention concerne enfin l'utilisation des composés selon l'invention pour la fabrication de médicaments pour le traitement des maladies auto-immunes, des maladies infectieuses et des cancers. Par maladies auto-immunes, on entend des maladies dues à une hyperactivité du système immunitaire à l' encontre de tissus ou de substances qui sont normalement présents dans l'organisme. De préférence, l'invention se rapporte à des composés pour le traitement thérapeutique de maladies auto-immunes telles que le diabète de type I, les encéphalo myélites, les rhumatismes et les inflammations, les allergies, l'asthme, la sensibilité de contact et l'athérosclérose.
Dans un autre mode de réalisation, la présente invention a pour objet des composés pour le traitement des cancers. Par « cancer », on entend toutes les formations néoplasiques malignes, quelle qu'en soit la nature histologique. Il existe deux grandes catégories de tumeurs malignes : les carcinomes, d'origine épithéliale, et les sarcomes, d'origine conjonctive. Les tumeurs malignes sont formées de cellules atypiques, envahissantes ou disséminantes, caractérisées généralement par un pouvoir d'accroissement autonome, une délimitation imprécise, une capacité d'envahissement des tissus et vaisseaux voisins et une tendance à disséminer par la production de métastases. On citera notamment les cancers du sein, de la prostate, des poumons, de l'œsophage, de la peau, de la vessie, de l'estomac, du foie, de l'utérus, du côlon et du rectum.
L'invention se rapporte aussi à des composés pour le traitement des maladies infectieuses et en particulier pour les maladies infectieuses à Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus pneumoniae, Plasmodium spp., Trypanosoma cruzi, Cryptococcus neoformans, le virus de l'hépatite B, le virus de l' encéphalo myocardie diabétogénique et le virus syncytium respiratoire.
Les composés selon la présente invention ont des propriétés immunorégulatrices et/ou immunostimulatrices. Ainsi, les composés selon la présente invention peuvent être utilisés comme adjuvant dans des vaccins. En vaccination, les adjuvants sont classiquement définis comme des substances capables de potentialiser ou de moduler la réponse immunitaire contre un ou plusieurs antigènes coadministrés.
L'invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant un composé tel que défini ci-dessus et un véhicule pharmaceutique approprié. Ces compositions peuvent être formulées pour l'administration aux mammifères, y compris l'homme. La posologie varie selon le traitement et selon l'affection en cause. Ces compositions sont réalisées de façon à pouvoir être administrées par la voie digestive ou parentérale. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, locale ou rectale, l'ingrédient actif peut être administré sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux ou aux êtres humains. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale et buccale, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire et les formes d'administration rectale.
Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif. On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, un antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié. Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, de même qu'avec des correcteurs du goût ou des édulcorants.
Les composés selon l'invention peuvent être employés en thérapie seuls, ou en combinaison avec au moins un autre agent actif. La présente invention concerne donc également un produit comprenant un composé selon l'invention et un autre agent actif comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie, et en particulier dans le traitement des cancers.
Un autre objet de l'invention est une composition vaccinale comprenant un composé selon l'invention et au moins un antigène. L'antigène est typiquement choisi parmi les agents infectieux inactivés, les agents vivants atténués et les sous-unités d'agents infectieux ou les toxines inactivées. Les vaccins sont habituellement inoculés par injection, mais ils peuvent l'être par voie orale ou par spray nasal. Les composés selon l'invention peuvent être préparés selon les différents modes de préparation exposés ci-dessous et dans les exemples.
Les analogues C-glycosidiques sont synthétisés selon le procédé général décrit ci- dessous.
Figure imgf000008_0001
Une solution 1 mol/L de triméthylsilylacétylure de magnésium dans le THF est préparée par addition lente de bromure de méthylmagnésium (5 éq., 3 mol/L dans le THF) sur du triméthylsilylacétylène (5 éq.) à -200C. Après retour à la température ambiante, le milieu réactionnel est agité vigoureusement pendant lh30. La solution d'alcynure de magnésium (5 éq.) est ensuite ajoutée à - 78°C à l'aide d'une canule sur le dérivé du D- Erythrose A (1 éq.) en solution dans le THF (C = 0.4 mol/L). Après retour rapide à 00C, le milieu réactionnel est ensuite agité à 4°C pendant 12h. Après traitement, le produit désiré est purifié pour donner 1 (75 à 87%) sous forme d'une huile jaune.
Au composé 1 (1 éq.) dissous dans un solvant approprié (C = 0.35 mol/L) est ajoutée au goutte à goutte à 00C une solution du réactif protecteur choisi (RCl, 1.07 éq.) et d'une base (1.1 éq.) dans le même solvant (C = 4 mol/L). De la DMAP (0.09 éq.) est ajoutée et le milieu réactionnel est agité pendant 3h. Après traitement, le produit désiré 2 est isolé.
A une solution de la base (1.7 éq., C = 0.5 mol/L) dans un solvant approprié a été lentement ajoutée à 00C une solution de l'alcool 2 dissous dans le même solvant (C = 0.2 mol/L). De l'iodure de tétra-n-butylammonium (0.11 éq.) et de l'imidazole (0.11 éq.) sont rapidement ajoutés, et ensuite une solution du réactif protecteur choisi (R'Br, 1.07 éq.) dans le même solvant (1.5 éq., C = 0.5 mol/L) est lentement ajoutée. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 4h. Après traitement, le produit désiré B est isolé.
Figure imgf000008_0002
Composé Pivot C L'alcyne B, l'époxyaldéhyde (S. Guillarme, K. Plé and A. Haudrechy, J. Org. Chem., 2006, 71, 3, 1015 et A. Banchet, S. Guillarme, A. Haudrechy, Synlett, 2007, 9, 1467) et le bromure de lithium sont coévaporés trois fois avec du toluène et ensuite séchés sous vide. L'alcynure de lithium est préparé par addition de n-butyl-lithium (0.9 éq.) à -78°C sur une solution de l'alcyne B (C = 0.5 mol/L) dans un solvant approprié. Le milieu réactionnel est agité pendant lh30, laissant la température remonter à 00C. En parallèle, le dichlorure de zinc (1.9 éq.) est fondu sous vide et dissous dans le même solvant (C = 0.9 mol/L) à 00C. Après 20 min, l'alcynure de lithium est lentement ajouté à la solution de dichlorure de zinc. Le milieu réactionnel est concentré sous vide (C~0.9 mol/L) et agité pendant Ih à 00C. Ensuite une solution de l'époxyaldéhyde (0.29 éq.) dans le même solvant (C = 0.2 mol/L) est lentement ajoutée. Le milieu réactionnel est concentré sous vide (C~0.9 mol/L) et agité pendant 4h à 0-50C. Finalement le bromure de lithium (1 éq.) est ajouté et le milieu réactionnel est agité pendant 12h à température ambiante. Après traitement le produit C est isolé.
Figure imgf000009_0001
Le composé C (1 éq.), coévaporé plusieurs fois avec du toluène, en solution dans un solvant approprié (C = 0.1 mol/L), est ensuite lentement ajouté à 00C à une solution d'une base (2.3 éq.) dans le même solvant (C = 0.2 mol/L). Ensuite le réactif protecteur choisi (RiBr ou RiCl, 2.5 éq.) est lentement ajouté. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 3h. Après traitement, le produit désiré 3 est isolé.
Le composé 3 (1 éq.) est dissous dans un solvant approprié (C = 0.06 mol/L). Le réactif déprotecteur est ensuite ajouté et le mélange réactionnel est éventuellement chauffé. Après traitement, le produit désiré 4 est isolé.
A une solution de chlorure d'oxalyle (1.5 éq. C = 0.14 mol/L) dans un solvant approprié à -78°C, est additionnée une solution de diméthylsulfoxyde (3 éq.) dans le même solvant (C = 1.4 mol/L). Le mélange réactionnel est agité pendant 15 min après addition d'une solution de 4 (1 éq.) dans le même solvant (C = 0.1 mol/L). La température est gardée à -78°C pendant Ih. Ensuite la base choisie (5 éq.) est lentement ajoutée. La température est lentement augmentée jusqu'à température ambiante en environ lh30. Après lh30 de plus à température ambiante, puis traitement, le brut réactionnel est co- évaporé trois fois avec du toluène et utilisé pour l'étape de réaction de Wittig sans aucune purification supplémentaire.
A une solution de sel de Wittig approprié (4 éq., R"-CH2-PPh3 + X", C = 0.1 mol/L) dans un solvant approprié à -400C est lentement ajoutée du n-butyl- lithium (3.9 éq.) en solution dans l'hexane. La solution rouge sombre est agitée pendant Ih, permettant à la température de remonter à 00C. L'aldéhyde (venant de l'oxydation de Swern) dissous dans le même solvant (C = 0.15 mol/L) est ajouté au goutte à goutte. La solution orange est agitée pendant Ih à température ambiante. Après traitement, le produit désiré 5 est isolé.
A une solution de composé 5 (C = 2.2 mol/L) dans un solvant approprié, est ajoutée de la tosylhydrazine (100 éq.) et le milieu réactionnel est agité vigoureusement au reflux. Une solution d'acétate de sodium (200 éq., C = 4.4 mol/L) est additionnée en 6h. Après traitement, le produit désiré D est isolé.
Figure imgf000010_0001
Au composé saturé D (1 éq.), est ajouté le réactif déprotecteur (1.5 éq.) dissous dans un solvant approprié (C = 0.1 mol/L). Après agitation pendant 40 min à température ambiante, puis traitement, le produit désiré 6 est isolé.
A une solution de l'alcool 6 (1 éq., C = 0.03 mol/L) dans un solvant approprié est ajouté l'acide carboxylique choisi (4 éq.), de la DMAP (4 éq.) et de l'EDCI (5.2 éq.). Le mélange réactionnel est ensuite chauffé à 26-28°C. Après agitation pendant 18h, puis traitement, le produit désiré 7 est isolé.
A une solution de 7 (1 éq., C = 0.02 mol/L) dans un solvant approprié est ajouté à 00C de l'acide chlorhydrique 12N (0.45 éq.). Après 5 jours d'agitation, puis traitement, le produit désiré 8 est isolé.
A une solution du diol 8 (C = 0.08 mol/L) dans un solvant approprié est ajouté du dihydroxyde de palladium (II) à 20% sur charbon (0.46 éq.) et le ballon est placé sous une atmosphère d'hydrogène. Après 6h30 d'agitation vigoureuse, le milieu réactionnel est dilué avec un mélange CHCI3 / MeOH (1/1 en volume), filtré, le résidu étant lavé avec ce même mélange. Après évaporation, le solide blanc obtenu est purifié par chromatographie sur colonne (CHCl3/MeOH 85/15 puis CHCl3/MeOH 90/10). Figures
Figure 1 : Détermination de l'interaction entre le ligand [C-KRN] selon l'invention et les cellules TNK
Figure 2 : Comparaison de l'activité avec les ligands de contrôle Figure 3 : Rapport [IFNγ]/[IL4] indiquant que le ligand [C-KRN] favorise une réponse Th2 Figure 4 : Activation in vivo des cellules TNK avec le ligand [C-KRN]
Exemples
Exemple 1 : Synthèse composé [C-KRN]
Un composé actif dénommé [C-KRN] a été synthétisé et testé dans le cadre de la présente invention. Ce composé est représenté ci-dessous :
Figure imgf000011_0001
Ce composé a été synthétisé selon le procédé détaillé décrit ci-dessous.
Figure imgf000011_0002
Une solution 1 mol/L de triméthylsilylacétylure de magnésium dans le THF est préparée par addition lente de bromure de méthylmagnésium (5 éq., 3 mol/L dans le THF) sur du triméthylsilylacétylène (5 éq.) à -200C. Après retour à la température ambiante, le milieu réactionnel est agité vigoureusement pendant lh30. La solution d'alcynure de magnésium (5 éq.) est ensuite ajoutée à - 78°C à l'aide d'une canule sur le dérivé du D-Erythrose A (1 éq.) en solution dans le THF (C = 0.4 mol/L). Après retour rapide à O0C, le milieu réactionnel est ensuite agité à 4°C pendant 12h. Après traitement, le produit désiré est purifié pour donner 1 (75 à 87%) sous forme d'une huile jaune.
Au composé 1 (1 éq.) dissous dans CH2Cl2 (C = 0.35 mol/L) est ajoutée au goutte à goutte à 00C une solution de TBDMSCl (1.07 éq.) et de Et3N (1.1 éq.) dans CH2Cl2 (C = 4 mol/L). De la DMAP (0.09 éq.) est ajoutée et le milieu réactionnel est agité pendant 3h. Après traitement, le produit désiré 2 est isolé (80%).
A une solution de NaH (1.7 éq., C = 0.5 mol/L) dans du THF/DMF (4/1) a été lentement ajoutée à 00C une solution de l'alcool 2 dissous dans du THF/DMF (4/1) (C = 0.2 mol/L). De l'iodure de tétra-n-butylammonium (0.11 éq.) et de l'imidazole (0.11 éq.) sont rapidement ajoutés, et ensuite une solution de PMBBr (1.07 éq.) dans du THF/DMF (4/1) (1.5 éq., C = 0.5 mol/L) est lentement ajoutée. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 4h. Après traitement, le produit désiré B est isolé (80%).
Figure imgf000012_0001
Composé Pivot C
L'alcyne B, l'époxyaldéhyde (S. Guillarme, K. Plé and A. Haudrechy, J. Org. Chem., 2006, 71, 3, 1015 and A. Banchet, S. Guillarme, A. Haudrechy, Synlett, 2007, 9, 1467) et le bromure de lithium sont coévaporés trois fois avec du toluène et ensuite séchés sous vide. L'alcynure de lithium est préparé par addition de n-butyl-lithium (0.9 éq.) à -78°C sur une solution de l'alcyne B (C = 0.5 mol/L) dans de l'éther diéthylique. Le milieu réactionnel est agité pendant lh30, laissant la température remonter à 00C. En parallèle, le dichlorure de zinc (1.9 éq.) est fondu sous vide et dissous dans de l'éther diéthylique (C = 0.9 mol/L) à 00C. Après 20 min, l'alcynure de lithium est lentement ajouté à la solution de dichlorure de zinc. Le milieu réactionnel est concentré sous vide (C~0.9 mol/L) et agité pendant Ih à 00C. Ensuite une solution de l'époxyaldéhyde (0.29 éq.) dans de l'éther diéthylique (C = 0.2 mol/L) est lentement ajoutée. Le milieu réactionnel est concentré sous vide (C~0.9 mol/L) et agité pendant 4h à 0-50C. Finalement le bromure de lithium (1 éq.) est ajouté et le milieu réactionnel est agité pendant 12h à température ambiante. Après traitement, le produit désiré C est isolé (60-65%).
Figure imgf000012_0002
Le composé C (1 éq.), coévaporé plusieurs fois avec du toluène, en solution dans du DMF anhydre (C = 0.1 mol/L), est ensuite lentement ajouté à 00C à une solution de NaH (2.3 éq.) dans du DMF anhydre (C = 0.2 mol/L). Ensuite BnBr (2.5 éq.) est lentement ajouté. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 3h. Après traitement, le produit désiré 3 est isolé (83-86%).
Le composé 3 (1 éq.) est dissous dans du méthanol 99% (C = 0.06 mol/L). Du fluorure d'ammonium (15 éq.) est ensuite ajouté et le mélange réactionnel est chauffé à 45°C. Après traitement, le produit désiré 4 est isolé (92-95%). A une solution de chlorure d'oxalyle dans CH2Cl2 (1.5 éq. C = 0.14 mol/L) à -78°C, est additionnée une solution de diméthylsulfoxyde (3 éq.) dans CH2Cl2 (C = 1.4 mol/L). Le mélange réactionnel est agité pendant 15 min après addition d'une solution d'alcool 4 (1 éq.) dans CH2Cl2 (C = 0.1 mol/L). La température est gardée à -78°C pendant Ih. Ensuite Et3N (5 éq.) a été lentement ajoutée. La température est lentement augmentée jusqu'à température ambiante en environ lh30. Après lh30 de plus à température ambiante, puis traitement, le brut réactionnel est coévaporé trois fois avec du toluène et utilisé pour l'étape de réaction de Wittig sans aucune purification supplémentaire.
A une solution de CH3-(CH2)I2PPh3 + Cl" dans du THF (4 éq., C = 0.1 mol/L) à -400C est lentement ajouté du n-butyl- lithium (3.9 éq.) en solution dans l'hexane. La solution rouge sombre est agitée pendant Ih, permettant à la température de remonter à 00C. L'aldéhyde (venant de l'oxydation de Swern) dissous dans du THF (C = 0.15 mol/L) est ajouté au goutte à goutte. La solution orange est agitée pendant Ih à température ambiante. Après traitement, le produit désiré 5 est isolé (70-79%).
A une solution de composé 5 (C = 2.2 mol/L) dans du DME, est ajoutée de la tosylhydrazine (100 éq.) et le milieu réactionnel est agité vigoureusement au reflux. Une solution d'acétate de sodium (200 éq., C = 4.4 mol/L) est additionnée en 6h. Après traitement, le produit désiré D est isolé (77-79%).
CH3 χ
Figure imgf000013_0001
C(Me)2)
Figure imgf000013_0002
H, H) Au composé saturé D (1 éq.), est ajouté du DDQ (1.5 éq.) dissous dans CH2CVH2O 18:1
(C = 0.1 mol/L). Après agitation pendant 40 min à température ambiante, puis traitement, le produit désiré 6 est isolé (77-82%).
A une solution de l'alcool 6 dans CH2Cl2 (1 éq., C = 0.03 mol/L) est ajouté CH3(CH2)I4COOH (4 éq.), de la DMAP (4 éq.) et de l'EDCI (5.2 éq.). Le mélange réactionnel est ensuite chauffé à 26-28°C. Après agitation pendant 18h, puis traitement, le produit désiré 7 est isolé (77-82%).
A une solution de 7 dans du méthanol HPLC (1 éq., C = 0.02 mol/L) est ajoutée à 00C de l'acide chlorhydrique 12N (0.45 éq.). Après 5 jours d'agitation, puis traitement, le produit désiré 8 est isolé (78-81%).
A une solution du diol 8 (C = 0.08 mol/L) dans CH2Cl2/Me0H 1 :1 est ajouté du dihydroxyde de palladium (II) à 20% sur charbon (0.46 éq.) et le ballon est placé sous une atmosphère d'hydrogène. Après 6h30 d'agitation vigoureuse, le milieu réactionnel est dilué avec un mélange CHCl3 / MeOH (1/1 en volume), filtré, le résidu étant lavé avec ce même mélange. Après évaporation, le solide blanc obtenu est purifié par chromatographie sur colonne (CHCl3/MeOH 85/15 puis CHCl3/MeOH 90/10).
Les données spectroscopiques sont rassemblées ci-dessous :
1 : 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.58 (dd, IH, J=5.8, 6.0 Hz), 4.3 (ddd, IH, J=4.3, 5.3, 6.4 Hz), 4.24 (q, IH, J=6.4, 12 Hz), 3.99 (dd, IH, J=4.3, 6.0 Hz), 3.91 (dd, IH, J=5.3, 12 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 0.17 (s, 9H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 108.9, 103.7, 91.7, 79.1, 77.4, 62, 60.5, 27.4, 25.3, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour Ci2H22O4Si (M+Na): 281.128, trouvé: 281.09. Micro-analyse : calculé C = 55.78% et H = 8.58%, trouvé C = 55.67% et H = 8.39%.
2 : IR (film, V, cm"1) : 3418, 2957, 2858, 2174, 1472, 1381, 1251, 1217, 1082, 843, 779. 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.61 (dd, IH, J=6.0, 6.3 Hz), 4.31 (dd, IH, J=6.0, 12.4 Hz), 4.25-
4.30 (m, IH), 4.25 (d, IH, J=6.3 Hz), 3.94 (dd, IH, J=7.6, 11 Hz), 3.86 (dd, IH, J=3.5, 11 Hz), 3.11 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 0.43 (s, 9H), 0.32 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 108.9, 104.1, 90.4, 79.9, 76.9, 62, 61.4, 27.7, 25.9, 25.4, 18.4, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour CiSH36O4Si2 (M+Na): 395.214, trouvé: 395.317. Micro-analyse : calculé C = 58.02% et H = 9.74%, trouvé C = 58.11% et H = 10.05%.
B : [CC]19D = + 43,7° (C= 0,0125g/mL, CHCl3). IR (film, v, cm"1) : 3284, 2986, 2954, 2933, 2883, 2856, 2114, 1613, 1586, 1515, 1464, 1381, 1372, 1303, 1251, 1173, 1079, 1037, 837, 778. 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=I.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C23H36O5Si (M+Na): 443.232, trouvé: 443.218. Micro-analyse : calculé C = 65.68% et H = 8.63%, trouvé C = 65.77% et H = 8.40%.
C : [CC]19D = + 68,7° (C = 0,011g/mL, CHCl3) IR (film, v, cm"1) : 3484, 3063, 3030, 2929, 2358, 1721, 1612, 1586, 1514, 1497, 1454, 1371, 1077, 836, 735, 697. UV (ε en Lm0F1Cm" 1Y εl = 1129 (CHCl3, C = 0,002 mol/L, λ = 244 nm, Abs = 2,257), ε2 = 1486 (CHCl3, C = 0,002 mol/L, λ = 268 nm, Abs = 2,972). 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 7.32-7.50 (m, 15H), 7.30 (d, 2H, J=8Hz), 6.82 (d, 2H, J=8Hz), 5.02 (d, IH, J=5Hz), 4.8-4.88 (dd, 2H, J=12, 68 Hz), 4.80-4.83 et 4.92-4.96 (dd, 2H, J=U, 170 Hz), 4.70-4.75 et 5.00-5.05 (dd, 2H, J=U, 128 Hz), 4.43 (d, IH, J=4Hz), 4.27-4.30 (m, 2H, J=4, 6 Hz), 4.20 (dd, IH, J=5, 9 Hz), 4.08 (ddd, IH, J=6, 7, 11 Hz), 4.05 (dd, 2H, J=I, 11 Hz), 4.00 (2dd, 2H, J=6, 9 Hz), 3.84 (s, 3H), 3.77 (dd, 2H, J=4.5, 11 Hz), 3.70 (dd, 2H, J=9, 11 Hz), 3.56 (dd, 2H, J=5, 11 Hz), 1.52 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 0.91 (s, 9H), 0.08 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 159.4, 138.2-138.7, 130.0, 129.3, 127.5-128.6, 113.9, 108.9, 85.2, 82.6, 80.5, 78.0, 75.9, 74.9, 74.6, 74.1, 73.7, 73.1, 70.2, 67.6, 62.4, 61.9, 55.3, 27.6, 25.9, 25.2, 18.4. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C50H64Oi0Si (M+Na): 875.426, trouvé: 875.4. Micro-analyse : calculé C = 70.39% et H = 7.56%, trouvé C = 70.16% et H = 7.88%.
3 : IR (film, V, cm"1) : 3418, 2931, 2361, 2341,1732, 1615, 1587, 1516, 1455, 1110, 836. UV (ε en Lm0I 1Cm"1): εl = 1717 (CHCl3, C= 0,00146 mol/L, λ= 245 nm, Abs = 2,507) ε2 = 1962 (CHCl3, C= 0,00146 mol/L, λ= 264 nm, Abs = 2,865). 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=1.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C57H70Oi0Si (M+Na): 965.473, trouvé: 965,400. Micro-analyse : calculé C = 72.74% et H = 7.49%, trouvé C = 72.46% et H = 7.84%.
4 : UV (ε en Lm0I 1Cm"1): εl = 1544 (CHCl3, C= 0,00169 mol/L, λ= 247 nm, Abs = 2,609) ε2 = 1841 (CHCl3, C= 0,00146 mol/L, λ= 264 nm, Abs = 3,111). 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=1.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C57H70Oi0Si (M+Na): 851.386, trouvé: 851.357. Micro-analyse : calculé C = 73.89% et H = 6.81%, trouvé C = 73.87% et H = 6.91%. D : 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=I.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C64H86O9 (M+Na): 1021.626, trouvé: 1021.630. Micro-analyse : calculé C = 76.98% et H = 8.69%, trouvé C = 76.94% et H = 8.62%.
6 : 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=I.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C56H78O8 (M+Na): 901.569, trouvé: 901,500. Micro-analyse : calculé C = 76.50% et H = 8.94%, trouvé C = 76.92% et H = 9.03%. 7 : PF = 70-720C. 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=I.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C82Hi28O9 (M+Na): 1279.955, trouvé: 1279.954. Micro-analyse : calculé C = 78.30% et H = 10.26%, trouvé C = 77.90% et H = 10.26%.
8 : PF = 40-410C. 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=I.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C79Hj24O9 (M+Na): 1239.924, trouvé: 1239.886. Micro-analyse (% calculé avec une molécule d'eau M = 1235,858 g/mol): C = 76,78 % et H = 10,28 %, trouvé C = 76.91% et H = 10.17%. (I) : 1H RMN (ppm, CDCl3) δ: 4.72 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.42 (d, IH, J=I 1.2 Hz), 4.10-4.35 (m, 3H, J=I.9, 4.6, 5.9 Hz), 3.92 (dd, IH, J=4.7, 9.5 Hz), 3.67 (dd, IH, J=5.8, 9.5 Hz), 2.55 (d, IH, J=I.9 Hz), 1.47 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 0.82 (s, 9H), 0 (s, 6H). 13C RMN (ppm, CDCl3) δ: 158.9, 129.5, 128.6, 113.3, 108.4, 80.0, 77.1, 74.9, 69.6, 66.8, 61.1, 54.7, 26.7, 25.4, 24.5, 17.7, 0. MS (HR) (ESI) m/z calculé pour C5iHi00O9 (M+Na): 879.736, trouvé: 879.50.
Exemple 2 : Synthèse d'autres composés
D'autres composés préférés répondant à la formule générale III ayant une activité biologique potentielle seront synthétisés.
Figure imgf000017_0001
n et m sont définis dans les tableaux ci-dessous :
Figure imgf000017_0002
Figure imgf000017_0003
Ces molécules pourront être testées selon notamment les protocoles décrits ci-dessous. Exemple 3 : Capacité du ligand estérifïé à activer les cellules TNK ex vivo
a) Protocole expérimental Le ligand est dissous dans le DMSO pour obtenir un échantillon de concentration 2mg/mL.
Les splénocytes des souris naïves BALB/c sont cultivés en présence de quantités croissantes du ligand (de 0,02 à 20 μg/mL).
Les contrôles internes sont effectués avec deux ligands synthétiques : le KRN 7000 (commercialisé par Alexis Biochemicals®) et le α-Gal (C 12) Cer (commercialisé par Avanti Polar Lipids®), dont l'efficacité à induire une réponse cellulaire spécifique des cellules TNK est déjà reconnu (Schéma 1).
Schéma 1 : Ligands de contrôle
Figure imgf000018_0001
KRN 7000 β-Gal(C12)Cer
La prolifération cellulaire est mesurée après trois jours de culture par incorporation de thymidine tritiée (mesure de la radioactivité incorporée par les cellules pendant l'activation). Les quantités de cytokines (IL-4 et IFN-γ) sont déterminées par le test ELISA dans les récoltés après 3Oh de culture.
Afin de déterminer si la reconnaissance des ligands est restreinte à la molécule CDId, les cultures ont été réalisées en absence ou en présence d'anticorps anti-CDld bloquant. Ils rendent alors impossible la présentation du ligand par la molécule CDId au TCR invariant du lymphocyte TNK. b) Tests effectués ex vivo
Les résultats obtenus nous montrent que notre ligand estérifïé est capable d'induire la prolifération des splénocytes ainsi que la sécrétion d'IL-4 et d'IFN-γ. Ces réponses sont dose-dépendantes et spécifiques des cellules TNK puisqu'elles sont totalement inhibées en présence d'anticorps anti-CDld bloquant (Figure 1). Toutefois, comparé aux contrôles internes, le ligand [C-KRN] donne des réponses plus faibles, à la fois pour la prolifération cellulaire et pour la sécrétion de cytokines. Mais, étant donné la pureté moyenne du ligand, ces résultats sont très encourageants (Figure 2). Il est à noter également que les gammes de concentrations sont différentes pour les contrôles internes et le ligand [C-KRN].
Le calcul du rapport [IFN-γ]/[IL-4] permet de déterminer si le ligand favorise les réponses de type ThI (inflammatoire) ou Th2 (immuno -régulatrices). Une diminution significative du rapport [IFN-γ]/[IL-4] est observable avec le ligand estérifîé, comme avec le ligand α- GaI(C 12)Cer, traduisant un déséquilibre de la balance cytokinique vers une réponse de type Th2 (sécrétion d'IL-4 supérieure à la sécrétion d'IFN-γ) (Figure 3).
Ce résultat est surprenant et nous amène à penser que la nature de la ramification entre les chaînes phytosphingosine et acyle pourrait avoir une influence non négligeable sur la production de certaines cytokines. Cette implication peut alors soit améliorer soit compromettre les interactions entre le ligand et le CDId ou entre le complexe GalCer/CDld et le récepteur des lymphocytes TNK.
Ainsi notre ligand estérifîé présente un potentiel dans le traitement de pathologies auto- immunes où les réponses Th2 doivent être favorisées afin de contrecarrer les réponses ThI .
Exemple 4 : Capacité du ligand estérifîé à activer les cellules TNK in vivo a) Protocole expérimental
Le ligand (KRN 7000 ou [C-KRN]) est injecté par voie intra-péritonéale à des souris naïves BALB/c (2 souris par ligand). Le taux de cytokines sériques (IL-4 et IFN-γ) a été détecté à différents temps après l'injection. b) Résultats obtenus Le ligand estérifîé est capable d'activer in vivo les lymphocytes TNK. En effet, 6h après l'injection du ligand [C-KRN], le rapport [IFN-γ]/[IL-4] reflète une réponse Th2. Celle-ci reste toutefois peu marquée mais durable car on observe également que la sécrétion d'IFN- γ semble plus tardive qu'avec le KRN 7000. La forte sécrétion d'IFN-γ est obtenue 24h après l'injection du [C-KRN] (contre 6h pour le KRN 7000). Ainsi, notre ligand estérifîé induit une réponse Th2 faible mais relativement prolongée dans le temps (Figure 4).
Remarque : le faible rapport [IFN-γ]/[IL-4] peut être dû à la pureté moyenne de notre échantillon. On peut noter aussi que les impuretés présentes ne semblent pas cytotoxiques. Les informations fournies par les tests immuno logiques sur notre ligand estérifïé sont très encourageantes. Contre toute attente, cet analogue semble induire, in vitro et in vivo, une réponse Th2 favorable aux traitements des maladies auto-immunes inflammatoires.
REFERENCES
Banchet A., S. Guillarme, A. Haudrechy, Synlett, 2007, 9, 1467 Chen et al, Organic Letters, 2004, Vol. 6, No 22, p. 4077-4080. Franck and Tsuji, Accounts of Chemical Research, 2006, Vol.39, No 10, p. 692-701. Guillarme S., K. Plé and A. Haudrechy, J. Org. Chem., 2006, 71, 3, 1015. Toba et al, Tetrahedron Letters, 2005, Vol. 46, p. 5043-5047. Yang et al, Angewandte Chemie, Int. Ed., 2004, Vol. 43, p. 3818-3822.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé de formule générale (I) :
Figure imgf000021_0001
dans laquelle
Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi -CO-R', -CS-R' et -CH2-R' ;
R2 représente un groupe choisi parmi -CO-R", -CS-R" et -CH2-R" ;
R' et R" représentent indépendamment un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés, comprenant 5 à 30 atomes de carbone, et de préférence 20 à 26 atomes de carbone, R3 représente un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés, comprenant 4 à 15 atomes de carbone.
2. Composé selon la revendication 1 dans lequel
R' et R' ' représentent indépendamment un groupe choisi parmi les radicaux alkyle, linéaires ou ramifiés, comprenant 5 à 30 atomes de carbone, et de préférence 20 à
26 atomes de carbone, et
R3 représente un groupe choisi parmi les radicaux alkyle, linéaires ou ramifiés, comprenant 4 à 15 atomes de carbone.
3. Composé selon la revendication 1 de formule générale (II) :
Figure imgf000021_0002
dans laquelle R2 et R3 sont tels que définis dans la revendication 1.
4. Composé selon l'une des revendications 1-3 de formule générale (III)
Figure imgf000022_0001
dans laquelle m est un nombre entier compris entre 4 et 29 et de préférence compris entre 19 et
25, n est un nombre entier compris entre 3 et 14.
5. Composé selon la revendication 4 dans lequel m est égal à 21, 22, 23, 24 ou 25, n est égal à 3, 4, 5, 9, 11, 12, 13 ou 14.
6. Composé de formule (IV) :
Figure imgf000022_0002
7. Composé selon l'une des revendications précédentes pour utilisation comme médicament.
8. Composé selon l'une des revendications précédentes pour utilisation dans le traitement des maladies auto-immunes, des cancers ou des maladies infectieuses.
9. Composé selon l'une des revendications précédentes pour utilisation comme adjuvant dans un vaccin.
10. Composition pharmaceutique comprenant un composé selon l'une des revendications précédentes et un véhicule pharmaceutique approprié.
11. Procédé de préparation d'un composé de formule (I)
Figure imgf000023_0001
(I) dans lequel Ri représente un atome d'hydrogène ou un groupe choisi parmi
-CO-R', -CS-R' et -CH2-R',
R2 représente un groupe choisi parmi -CO-R", -CS-R" et -CH2-R",
R' et R" représentent indépendamment un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés comprenant 5 à 30 atomes de carbone, et de préférence 20 à 26 atomes de carbone,
R3 représente un groupe choisi parmi les radicaux alkyle ou alkényle, linéaires ou ramifiés, comprenant 4 à 15 atomes de carbone ; comprenant une étape de réaction d'un composé de formule (V)
Figure imgf000023_0002
dans lequel
R4 représente un groupe protecteur choisi parmi TBDPS, TBDMS et TIPS,
R5 représente un groupe protecteur choisi parmi PMB, Bn et TBDMS ; avec un composé de formule (VI)
Figure imgf000024_0001
dans lequel R6 représente un groupe protecteur choisi parmi le benzyle et le PMB ; pour obtenir un composé de formule (VII)
Figure imgf000024_0002
puis l'obtention du composé de formule générale (I) à partir de ce composé (VII).
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