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WO2009119167A1 - 抗ｒｎａウイルス作用を有するアニリン誘導体 - Google Patents

抗ｒｎａウイルス作用を有するアニリン誘導体 Download PDF

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WO2009119167A1
WO2009119167A1 PCT/JP2009/052253 JP2009052253W WO2009119167A1 WO 2009119167 A1 WO2009119167 A1 WO 2009119167A1 JP 2009052253 W JP2009052253 W JP 2009052253W WO 2009119167 A1 WO2009119167 A1 WO 2009119167A1
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WO
WIPO (PCT)
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compound
group
aromatic
mmol
virus
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2009/052253
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English (en)
French (fr)
Inventor
小野木博
萩原正敏
鈴木正昭
古山浩子
細谷孝充
平松俊行
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
KinoPharma Inc
Original Assignee
KinoPharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Priority to US12/934,206 priority patent/US8765941B2/en
Priority to JP2010505428A priority patent/JP5404607B2/ja
Priority to EP09724228A priority patent/EP2279750A4/en
Publication of WO2009119167A1 publication Critical patent/WO2009119167A1/ja
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    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Definitions

  • the present invention relates to a compound that inhibits a host cell phosphorylase involved in viral infection.
  • the present invention particularly relates to inhibitors of phosphorylase that control the translation of viral proteins.
  • the present invention provides an antiviral against an RNA virus belonging to the Flaviviridae, Reoviridae, Paramyxoviridae, Orthomyxovirus, Retroviridae, etc., with a phosphorylase inhibitor as a dominant component.
  • agents relates to a compound effective for the prevention or treatment of a disease caused by an RNA virus.
  • the present invention relates to a prevention or treatment agent for hepatitis C, and a prevention or treatment agent for influenza virus infection.
  • Antibiotics can be mentioned as a representative therapeutic agent for infectious diseases.
  • Antibiotics are drugs that exert their effects only by inhibiting metabolic pathways in the body of pathogens.
  • viruses since the virus depends on the host cell for all of its protein synthesis and energy production mechanisms and does not have its own metabolic pathway, antibiotics cannot exert a direct virus-suppressing action. Can not. Therefore, viral infections are now more threatening than bacteria.
  • Viruses are minute microorganisms that do not have a cell structure, and are roughly classified into DNA viruses and RNA viruses. As for the mode of infection of the virus, acute infection with marked host cell destruction, persistent infection that becomes chronic with relatively slight clinical symptoms, and continues to remain in a state where viral protein synthesis is not observed for a long time. There are three forms of latent infection, and in some cases it can induce cancer.
  • RNA viruses that cause disease in humans include the Japanese encephalitis virus, Flaviviridae such as C-type hepatitis virus (HCV), Rheovirus such as rotavirus, Paramyxoviridae such as mumps virus and measles virus, Examples include Orthomyxoviridae, such as influenza virus, and Leto Mouth virus, such as human immunodeficiency virus (HIV).
  • Flaviviridae such as C-type hepatitis virus (HCV)
  • Rheovirus such as rotavirus
  • Paramyxoviridae such as mumps virus and measles virus
  • Orthomyxoviridae such as influenza virus
  • Leto Mouth virus such as human immunodeficiency virus (HIV).
  • hepatitis C caused by infection with hepatitis C virus is a chronic disease that tends to become chronic and progresses to liver cirrhosis and liver cancer at a high rate when it becomes chronic. Therefore, effective treatment is strongly desired. It is rare.
  • influenza viruses it is well known that a global epidemic will occur every few years, and it is well known that if the infection is left untreated, the patient may die. Therefore, there is an urgent need to provide the market with effective treatments against influenza viruses.
  • Antiviral agents against RNA virus include amantadine, zanamivir and oseltamivir for influenza virus, zidovudine, nevirapine and ritonavir for HIV, ribavirin for HCV and the like.
  • Patent Document 1 International Publication Pamphlet WO 2 0 0 5/0 6 3 2 9 3 Disclosure of Invention
  • Viruses particularly RNA viruses, have a high mutation rate, so existing antiviral agents that have been developed so far, targeting viral proteases and reverse transcriptases, can lose their effectiveness quickly. The development of more effective antiviral agents has been awaited.
  • an object of the present invention is to develop a new antiviral agent that can cope with a virus resistant to an existing drug or a novel virus and has a wide applicability.
  • the present inventors have heretofore conducted research focusing on protein kinases of host cells involved in viral gene expression.
  • synthesizing and screening many compounds that inhibit protein phosphorylase that controls the translation of viral proteins it was found that compounds having the structure of the following formula I have excellent antiviral activity. It was.
  • the present invention relates to an antiviral agent containing a compound that inhibits a protein phosphorylase of a host cell, in particular, a virus infection containing a compound having the structure of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention relates to a preventive or therapeutic agent and a method for using it.
  • the present invention relates to a virus caused by an RNA virus.
  • the present invention relates to a preventive or therapeutic agent for infectious diseases and a method for using the same.
  • the present invention has the following features.
  • An antiviral agent comprising as an active ingredient a compound that inhibits host cell protein kinase.
  • R 1 represents a halogen atom or an alkynole group optionally substituted by a halogen atom
  • R 2 represents a hydrogen atom or a C M alkyl group
  • R 3 represents a 6 alkyl group, an alkoxy group, a phenyl group which may be substituted with a halogen atom, or a monocyclic heterocyclic group;
  • Q is, - C (O) primary, one C (S) one, single S_ ⁇ 2 - one C (O) NHC (O) primary, one C (S) NHC (O) primary, or one C (O ) NHC (S) indicates one;
  • w represents a halogen atom, or a monocyclic or bicyclic nitrogen-containing heterocyclic group which may be substituted with a halogen atom.
  • a prophylactic or therapeutic agent for RNA virus infectious diseases comprising a compound represented by the formula: or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 1 represents fluorine or a trifluoromethyl group
  • R 2 is a hydrogen atom
  • R 3 represents a methyl group, a methoxy group, a phenyl group which may be substituted with fluorine, or a monocyclic heterocyclic group which may be substituted with a methyl group;
  • Q represents one C (O) one, one C (S) one, one C (O) NHC (O) one, or one C (S) NHC (O) one;
  • W represents a fluorine atom or a saturated monocyclic or bicyclic heterocyclic group containing 1 nitrogen and 5 to 9 carbons as a ring atom
  • RNA virus infection which is a compound selected from the group consisting of: or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 1 represents a trifluoromethyl group
  • R 2 is a hydrogen atom
  • R 3 represents a phenyl group or a monocyclic heterocyclic group
  • Q represents one C (O) one, -C (S) one, or one C (S) NHC (O) one;
  • W is a saturated single atom containing 1 nitrogen and 5-9 carbons as ring atoms.
  • a cyclic or bicyclic hetero group The agent for preventing or treating RNA virus infection according to [6] above.
  • the prophylactic or therapeutic agent for RNA virus infection according to [6] above which is a compound selected from the group consisting of: or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the present invention relates to the use of the compound represented by the general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the manufacture of an agent for preventing or treating RNA virus infection. .
  • the present invention provides administration of an effective amount of the compound represented by the general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a patient with an RNA virus infection.
  • the present invention relates to a method for treating an RNA virus infection. The invention's effect
  • RNA virus activity As a result of synthesizing and screening a large number of compounds, the present inventors have found that a compound having the structure of Formula I has excellent anti-RNA virus activity. These This compound inhibits phosphorylase present in animal cells. Surprisingly, these compounds have been found to be effective against several different types of RNA viruses.
  • the present invention provides a new option for the treatment of RNA viral diseases.
  • the anti-RNA virus agent according to the present invention is effective against hepatitis C virus and influenza virus, which cause serious social problems.
  • FIG. 1A is a diagram in which LuHCV cells were used to calculate the degree of HCV expression 'replication' using luciferase activity as an index. Calculate the average value for each test compound and each concentration from the numerical value of the obtained luminescence intensity, and set the luminescence intensity of DMS O used as a control for the test substance to 100%. The percentage of was calculated. Black triangle: Compound 2, X: Compound 5, *: Compound 6 is used.
  • Fig. 1B shows the ratio of viable cells of LuHCV cells under the conditions of Fig. 1A. The value calculated with 100% of viable cells when DMSO was used as a control for the test substance was calculated. Show. Black triangle: Compound 2, X: Compound 5, *: When Compound 6 is used.
  • Fig. 2A shows the results of calculating the degree of HCV expression and replication in the presence or absence of the test compound using the luciferase activity as an index using LuHC V cells in the same manner as in Fig. 1A. Assuming that the emission intensity of DMSO used as a control for the test substance is 100%, the ratio of the emission intensity at each concentration is shown for each test compound.
  • Fig. 2B is a diagram showing the ratio of viable cells of LuHCV cells by the same method as in Fig. 1B. The value calculated with 100% of viable cells added with DMSO used as a control for the test substance was calculated. Show.
  • FIG. 3A is a graph showing the translation inhibitory effect of the compound of the present invention on HCV protein.
  • Compound 5 or DMSO as a control for the test compound was added to the LuHCV cell culture and cultured for the respective times shown in the figure.
  • An immunoplot was performed with ⁇ -actin antibody to examine the expression of NS 5 when Compound 5 was added.
  • FIG. 3B shows that the compound of the present invention does not act on HCV-RNA replication.
  • Compound 5 or DMSO as a control for the test compound was added to the LuHC V cell culture, cultured for the respective times shown in the figure, and then incubated with a specific primer for NS 5 A or specific for GAP DH.
  • the amount of NS 5 A—RNA when Compound 5 was added was examined by RT-PCR method using primers.
  • FIG. 4 is a graph showing that Compound 5 has no growth inhibitory activity or cytotoxicity against LuH C V cells.
  • Compound 5 was added at 20 ⁇ , the growth was exactly the same as DMSO used as a control.
  • FIG. 5 is a graph showing that the compound of the present invention also has an antiviral effect against influenza virus.
  • DMS ⁇ control MD CK cells to which no test compound was added were infected with influenza virus, killed at a high rate, and detached from the plate, but in the test compound addition group, cell detachment due to cell death was suppressed.
  • FIG. 6 is a graph showing the cell death inhibitory effect of the compound of the present invention on influenza virus-infected cells. In the absence of the test compound, the proportion of viable cells decreased to 40% or less due to infection with influenza virus, but it was revealed that addition of Compound 5, Compound 6 or Compound 14 reduces cell death.
  • FIG. 7 shows an in vivo toxicity test of Compound 5 of the present invention. l No deaths were observed even after repeated administration for 7 days at OO Omg / kg / d. ay.
  • the test compound administration group was completely different from the control vehicle administration group (PI asebo administration group). Unacceptably smooth weight gain.
  • host protein protein kinase means a protein kinase present in animal cells.
  • protein phosphorylase is sometimes simply referred to as “phosphorase”.
  • Phosphorylase is in particular a phosphorylase that controls the translation of viral proteins.
  • the method for evaluating phosphorylation enzyme activity is well known in the art of art. Specifically, for example, Japanese Patent Laid-Open No. 2 0 0 2-2 3 6 1 2 5, Japanese Patent Laid-Open No. 9-6 8 5 2 7 and Japanese Patent Laid-Open No. 2 0 0 5-1 1 2 8 1 2, etc. It is described in.
  • the “r C i -e alkyl group” in the present specification is a monovalent group derived by removing one arbitrary hydrogen atom from an aliphatic hydrocarbon having 1 to 6 carbon atoms.
  • r C — 6 alkoxy group means an oxy group to which the above-defined “alkyl group” is bonded. Specifically, for example, a methoxy group, an ethoxy group, a 1-propyloxy group, and the like.
  • halogen atom means a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom or an iodine atom.
  • halogenated C- 6 alkyl group means a group obtained by substituting at least one hydrogen atom in the above-defined “dialkyl group” with the above-mentioned “halogen atom”.
  • a trifluoromethyl group, a difluoromethyl group, a monofluoromethyl group and the like can be mentioned.
  • “monocyclic heterocyclic group” and “monocyclic or bicyclic heterocyclic group” mean a group having a cyclic structure including a carbon atom and a hetero atom as a ring atom.
  • the heteroatom is generally oxygen, nitrogen or sulfur.
  • salt in the present specification is not particularly limited as long as it forms a salt with the compound according to the present invention and is pharmaceutically acceptable.
  • inorganic acid salt organic acid salt, inorganic salt base salt Organic base salts, acidic or basic amino acid salts, and the like.
  • inorganic acid salts include hydrochloride, hydrobromide, sulfate, nitrate, phosphate and the like
  • organic acid salts include acetate, succinate
  • examples include fumarate, maleate, tartrate, kenate, lactate, stearate, benzoate, methanesulfonate, and p-toluenesulfonate.
  • the inorganic base salt include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt, aluminum salt and ammonium salt.
  • alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt
  • alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt
  • aluminum salt and ammonium salt Preferable examples include, for example, a jetylamine salt, a diethanolamine salt, a meglumine salt, an N, N, -dibenzylethylenediamine salt, and the like.
  • the acidic amino acid salt include aspartate and glutamate.
  • preferable examples of the basic amino acid salt include arginine. Salt, lysine salt, ornithine salt and the like.
  • the compound of the present invention when left in the air, it may absorb moisture and adsorb water or become hydrates. Such hydrates are also disclosed in the present invention. As a salt.
  • the compounds of the present invention may absorb certain other solvents and become solvates, and such salts are also encompassed by the present invention.
  • A, B, or C is only meant to include at least any element of A, B, or C, and includes two or more of A, B, and C, or all three. Including, and including other elements.
  • antiviral agent means a drug effective for the prevention or treatment of infection caused by a virus.
  • anti-RNA virus agent means an agent effective for the prevention or treatment of infection caused by an RNA virus.
  • antiviral action means a mechanism for preventing or treating viral infection, such as an action of suppressing the growth of virus, an action of reducing viral infection, an action of reducing or eliminating infected virus, etc. It is understood to include any useful action.
  • anti-RNA virus action refers to the prevention of RNA virus infection, such as the action of suppressing the growth of RNA viruses, the action of reducing the infection of RNA viruses, and the action of reducing or eliminating infected RNA viruses. Or, it is understood to include any action useful as a mechanism for treatment.
  • R 1 represents a halogen atom or an alkynole group which may be substituted with a halogen atom
  • R 2 represents a hydrogen atom or an alkyl group
  • R 3 represents an alkyl group, an alkoxy group, a phenyl group which may be substituted with a halogen atom, or a monocyclic heterocyclic group;
  • Q is:-C (O)-, C (S), C, S 0 2- , C (O) NHC (O) C, S (S) NHC (O) C, or C (O ) NHC (S) —
  • W represents a halogen atom, or a monocyclic or bicyclic nitrogen-containing heterocyclic group which may be substituted with a halogen atom.
  • R 1 represents fluorine or a trifluoromethyl group
  • R 2 is a hydrogen atom
  • R 3 represents a methyl group, a methoxy group, a phenyl group that may be substituted with fluorine, or a monocyclic heterocyclic group that may be substituted with a methyl group;
  • Q represents one C (O) one, one C (S) one,-C (O) NHC (O) one, or one C (S) NHC (O) —;
  • W represents a fluorine atom or a saturated monocyclic or bicyclic heterocyclic group containing 1 nitrogen and 5 to 9 carbons as a ring atom.
  • R 1 represents a trifluoromethyl group
  • R 2 is a hydrogen atom
  • R 3 represents a phenyl group or a monocyclic heterocyclic group
  • Q represents one C (O) one, one C (S) one, or one C (S) NHC (O) one
  • W is a saturated single atom containing 1 nitrogen and 5-9 carbons as ring atoms.
  • a cyclic or bicyclic bicyclic group is shown.
  • the present invention is any compound exemplified above, particularly the above exemplified compound numbers: Compound 2, Compound 3, Compound 4, Compound 5, Compound 6, Compound 7, Compound 8, Compound 9, Compound 10 and Compound 1 1, Compound 1 2, Compound 1 3, Compound 14, Compound 1 5, Compound 1 6, Compound 1 7, Compound 1 8, Compound 1 9, Compound 2 0, Compound 2 1, Eich Compound 2 2, an antiviral agent containing at least one of compound 2 3 and compound 24, more preferably the above exemplified compounds represented by the following structural formulas: compound 2, compound 5, compound 6, compound 14 Compound 1 7, Compound 1 8, Compound 20, and Compound 2 2: [Chemical 9]
  • It relates to an antiviral agent containing at least one kind.
  • viruses to which the compound of the present invention is used as an antiviral agent include, but are not limited to, RNA viruses belonging to the Flaviviridae and Orthomyxoviridae families. Other viruses include retroviridae, paramyxoviridae, arenaviridae, firoviridae, rhabdoviridae. Examples include, but are not limited to, RNA viruses. Preferred is a human pathogenic RNA virus. Most favorable Suitable viruses are hepatitis c virus and influenza virus.
  • a typical method for producing the compound represented by the formula (I) according to the present invention will be described below.
  • the compound represented by the above formula (I) according to the present invention is also described in the internationally disclosed pamphlet WO 200 5/0 6 329 3, the contents of which are incorporated herein by reference. It is done.
  • R 1 R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , Q, and W have the same meanings as defined in the formula (I).
  • Room temperature means a temperature of about 20-30 ° C.
  • X F, CI, Br, 1, OMs, OTs, OTf
  • compound 1a is reacted with compound 2a to obtain compound 3a.
  • the raw material -trobenzene derivative 1a is obtained from a commercially available product or a functional group appropriately derived.
  • H a 1 is a halogen atom that serves as a leaving group.
  • Compound 2a is a reagent containing one NR 5 R 6 to be introduced, and X is a hydrogen atom or the like.
  • the compound 2a is preferably used in an amount of 1 to 2 equivalents.
  • the reaction can be performed in a solvent in the presence of a base.
  • triethylamine, diisopropylethylamine, pyridine, 4- (dimethylamino) pyridine and the like can be used. It is preferable to use 1 to 5 equivalents of a base. Alternatively, an excess (1 to 5 equivalents) of X—NR 5 R 6 can be used instead as a base.
  • solvent examples include dimethyl sulfoxide, N, N-dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, dioxane, tetrahydrofuran, toluene and the like.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of 0 ° C. to 150 ° C., preferably at room temperature.
  • the ditro group of compound 3a is reduced to an amino group to obtain compound 4a.
  • the reduction can be performed by contacting concentrated hydrochloric acid or the like in the presence of tin chloride or the like in a solvent.
  • general reduction reactions such as catalytic hydrogenation can also be used.
  • the reaction solvent methanol, ethanol, N, N-dimethylformamide, tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxetane, 1,4-dioxane, water, or a mixed solvent thereof can be used.
  • reaction can be performed at a reaction temperature of 0 ° C to 100 ° C.
  • Compounds 3a and 4a may be commercially available, in which case commercially available products may be used.
  • W in the general formula (I) is hydrogen or halogen, commercially available products are often available.
  • Step 3 a
  • reaction can be carried out in a solvent in the presence of a base and adding a catalyst as necessary. In this case, it is preferable to use 1 to 3 equivalents of compound 5a.
  • reaction solvent dichloromethane, chloroform, 1,4-dioxane, tetrahydrofuran, toluene, pyridine, N, N-dimethylformamide, N-methylpyrrolidone and the like can be used.
  • Examples of the base include triethylamine, diisopropylethylamine, pyridine, and 4- (dimethylamino) pyridine.
  • a general amide bond formation reaction using a condensing agent when L is a hydroxyl group or a general amide bond formation reaction when L is a leaving group such as a succinimidyl group or a imidazolyl group is also used. Is possible.
  • Examples of the catalyst include 4 (dimethylamino) pyridine.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of 0 to 100 ° C.
  • compound 4a is reacted with compound 5b to obtain compound 6b.
  • the reaction can be carried out by reacting acyl isothiocyanate in a solvent in the presence of a base.
  • isyl isothiocyanate commercially available products or those prepared in the reaction solution from isyl halide and thiocyanate as appropriate can be used as they are. It is preferable to use 1 to 5 equivalents of acyl isothiocyanate.
  • the thiocynate potassium thiocyanate, sodium thiocyanate, ammonium thiocyanate and the like can be used, and 1 to 5 equivalents are preferably used.
  • solvent examples include acetonitrile, N, N-dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, tetrahydrofuran, ethylene glycol / resimethinoatenole, 1,4_dioxane, and the like.
  • the base for example, triethylamine, diisopropylamine, pyridine, 4- (dimethylamino) pyridine and the like can be used. It is preferable to use 1 to 5 equivalents of a base.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of 0 to 1500 ° C.
  • Step 4 a
  • the reaction can be performed in a solvent using an alkylating reagent (R 2 — X) in the presence of a base.
  • R 2 — X alkylating reagent
  • solvent examples include N, N-dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, tetrahydrofuran, ethylene glyconoresin methinoreethenole, 1,4-dioxane, acetonitrile, ether and the like.
  • sodium hydride, lithium hydride, lithium hydride, butyl lithium, methyl lithium, phenyl lithium, lithium diisopropyl amide and the like can be used. It is preferable to use 1 to 5 equivalents of a base.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of 0 to 1550 ° C.
  • the carbonyl group of the amide bond of compound 6a is converted into a thiocarbonyl group to obtain compound 7b.
  • the reaction is carried out using a thiocarbonylating reagent in a solvent.
  • the thiocarbonylation reagent include Lawesson, s reagent (2, 4-bis (4-methoxyphenyl)-1, 3, 2, 4-dithiadiphosphetane 2, 4-disulfide), diphosphorus pentasulfide (tetraphosphorus tetrasulfide). , P 4 S 10 ), etc. can be used. It is preferable to use 1 to 5 equivalents of thiocarbonylating reagent.
  • the solvent for example, toluene, benzene, benzene, xylene, N, N-dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, ethylene glycol dimethyl ether, 1,4-dioxane, tetrahydrofuran and the like can be mentioned.
  • the reaction can be carried out at a reaction temperature of 0 to 200 ° C.
  • the raw material compound and various reagents in the production of the compound of the present invention may form a salt, hydrate or solvate.
  • these are all different depending on the starting materials, the solvent used, etc., and are not particularly limited as long as they do not inhibit the reaction.
  • the solvent to be used is not particularly limited as long as it varies depending on starting materials, reagents and the like, and can dissolve the starting materials to some extent without inhibiting the reaction.
  • the compound (I) according to the present invention is obtained as a free form, the compound (I) can be converted into a salt which may be formed by the compound (I) or a hydrate thereof according to a conventional method.
  • the compound (I) according to the present invention When the compound (I) according to the present invention is obtained as a salt of the compound (I) or a hydrate of the compound (I), it can be converted into the free form of the compound (I) according to a conventional method.
  • various isomers eg, geometric isomers, optical isomers based on asymmetric carbon, rotational isomers, stereoisomers, tautomers, etc.
  • a separation method such as recrystallization, diastereomeric salt method, enzyme resolution method, and various chromatography (eg, thin layer chromatography, column chromatography, gas chromatography, etc.).
  • the compound of the present invention can be made into a composition together with a pharmaceutically acceptable carrier.
  • a known pharmaceutical technique may be applied to form a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is used as an antiviral agent (that is, a prophylactic or therapeutic agent for viral infection), or
  • the dosage form is, for example, oral administration by tablets, capsules, granules, powders, pills, troches, syrups, etc., or injections, aerosols, suppositories, patches Examples include parenteral administration with a cloth, a poultice, a lotion, a liniment, an ointment, or an eye drop.
  • additives such as excipients, lubricants, binders, disintegrants, stabilizers, flavoring agents, and diluents.
  • excipients examples include starch, potato starch, starch such as corn starch, lactose, crystalline cellulose, calcium hydrogen phosphate, and the like.
  • Examples of the coating ⁇ J include ethenorecellulose, hydroxypropenoresenorellose, hydroxypropi / remethinoresoleselose, shellac, tanolec, carnauba wax, and paraffin.
  • binder examples include polyvinyl pyrrolidone, macrogol and the same compound as the excipient.
  • Disintegrants include, for example, the same compounds as the above-mentioned excipients and chemically modified starch / celluloses such as croscarmellose sodium, carboxymethyl starch sodium, and crosslinked polybutylpyrrolidone. it can.
  • the stabilizer examples include paraoxybenzoates such as methyl paraben and propyl paraben; alcohols such as chlorobutanol, benzyl alcohol and phenyl chinole alcohol; benzalkonium chloride; phenols such as phenol and cresol; Cicadasar; dehydroacetic acid; and sorbic acid.
  • paraoxybenzoates such as methyl paraben and propyl paraben
  • alcohols such as chlorobutanol, benzyl alcohol and phenyl chinole alcohol
  • benzalkonium chloride examples include phenols such as phenol and cresol; Cicadasar; dehydroacetic acid; and sorbic acid.
  • flavoring agent examples include sweeteners, acidulants, and fragrances that are usually used.
  • ethanol phenol, black mouth cresol, purified water, distilled water and the like can be used as a solvent for producing the liquid agent.
  • surfactant or emulsifier examples include polysorbate 80, polyoxyl stearate 40, lauromacrogol and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention When used as an antiviral agent, the compound of the present invention or The amount of pharmaceutically acceptable salt used varies depending on symptoms, age, and administration method.
  • the lower limit is 0.0 1 mg (preferably 0.1 mg;) per day for patients (warm-blooded animals, particularly humans), and the upper limit is 2000 mg (preferably Or 500 mg, more preferably l O Omg) should be administered in one or several divided doses depending on the symptoms.
  • the lower limit is 0.OO lmg (preferably 0.O lmg) and the upper limit is 500 mg (preferably 50 mg) once or several times. It is desirable to divide and administer according to the symptoms.
  • the target virus for using the compound of the present invention as an antiviral agent is not limited to these, including RNA viruses belonging to Flaviviridae and Orthomyxoviridae.
  • Other target viruses include, for example, retroviridae, paramyxoviridae, arenaviridae, filowinores, ravineinores, bunyaviridae, succulent nawinoles, togavirus, reoviridae, force ricin
  • the ability to include RNA viruses belonging to the family Viridae and Piconaviridae The preferred is the human pathogenic RNA virus.
  • virus infections examples include flavivirus infections such as hepatitis C and Japanese encephalitis, orthomyxovirus infections such as influenza, AIDS, etc. Retroviral infections, paramyxovirus infections such as measles or epidemic parotitis, togavirus infections such as rubella, rotavirus infections, but not limited thereto.
  • the present invention includes a method for preventing or treating a viral infection by administering the agent for preventing or treating a viral infection according to the present invention.
  • the preventive or therapeutic agent for viral infections of the present invention is, for example, intermittently or continuously, orally, transdermally, submucosally, subcutaneously so that the concentration in the body is between 100 nM and 1 mM. It can be administered intramuscularly, intravascularly, cerebrally, or intraperitoneally.
  • a typical synthesis method of Compound 1 is as follows.
  • Reference Example 1 1 2 1 Obtained from 2 A (1-piperidinyl)-5-(trifluoromethyl) aniline (2-(: ⁇ 61 ⁇ (1 1) -5- (1: 1: 1 decimal 61) : 1 ⁇ 1) 3 1 6) (173 mg, 0.708 mmol) in dichloromethane (dichloromethane) (5 mL) in turn, isonicotinoyl chloride hydrochloride (151 mg, 0.850 mmol, commercial product) ), Triethylamine (450 ⁇ L, 3.23 mmol), and a catalytic amount of 4- (dimethylamino) pyridine were added at 0 ° C. The mixture was allowed to warm to room temperature.
  • Triethylamine (103 ⁇ , 0. 730 mmol) was added continuously and the reaction solution was heated to 50 ° C. and stirred for 4 hours. The organic mixture was returned to room temperature and water was added thereto. The mixture was extracted 3 times with ethyl acetate, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered with suction, and concentrated under reduced pressure.
  • Urea N-Nicot inoyl-N,- [2- (azacyclooctan-1-yl) -5- (trifluoromethyl) phenyl] urea
  • Compound 8 (80.1 mg, 51.9%) was obtained as a colorless solid.
  • N, N-dimethylformamide of 2,5-Difunoleo-Takaguchi benzene (2,5-Difluo-ad itorobenzene) (1.00 g, 6.29 mmol, commercially available) (twenty five Heptamethyleneimine (1.84 mL, 14.5 mmol) was added to the solution at 0 ° C. The mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 2 hours. Water was added thereto, and the mixture was extracted three times with ethyl acetate. The extracted organic mixture was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered with suction, and concentrated under reduced pressure.
  • 6-Methylnicotinoic acid (252 mg, 1.84 mmol) in ⁇ solution (5 mL), N, N-dimethylformamide (3 drops), chloride Thionyl chloride (643 ⁇ , 8.81 mmol) was sequentially added, and the mixture was stirred at 60 ° C. for 4 hours.
  • the organic mixed solution was returned to room temperature and concentrated under reduced pressure.
  • the obtained residue was suspended in acetonitrile (5 mL), and potassium thiocyanate (178 mg, 1.84 mmol) was added thereto and stirred at 60 ° C. for 1 hour. .
  • Lu HCV As an HCV virus protein expression assay, the activity and activity of luciferase can be measured to assess the replication and expression of intracellular HCV proteins (NS 3—NS 4—NS 5 A—NS 5 B). Cells (hereinafter referred to as Lu HCV) were used to screen for compounds having anti-HCV activity.
  • L u HC V cells were seeded on 96-well plates at a rate of 5 ⁇ 10 3 cells / 50 ⁇ L / well and incubated overnight.
  • the test compound was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO), and a dilution series was prepared using DMS IV as necessary.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the day after the seeding of Lu HCV cells add medium containing the test compound at twice the final test concentration in 50 ⁇ L Nowell and gently incubate for 48 hours at 37 ° C and 5% CO 2. (Final test compound concentrations 0, 10 and 20 ⁇ ). At that time, each test compound and each concentration were analyzed as test wells using 3 wells.
  • test compounds compound 2, compound 5, and compound 6
  • a decrease in luciferase activity was observed in a concentration-dependent manner.
  • test compound 20 a marked decrease in luciferase activity was observed compared to the control (DMSO).
  • the emission intensity decreased by about 50% compared to the control even at 10%.
  • L u HC V cells were seeded on 96-well plates at a ratio of 5 ⁇ 10 3 cells / 50 L Nowell and incubated.
  • the test compound was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO), and a dilution series was prepared using DMSO as necessary. Luh CV day after cell seeding, the medium containing the test compound of 2-fold concentration of the final test concentration were added at 50 LZ Ueru, 48 hours, was gently cultured under culture conditions of 3 7 ° C, 5% C0 2 ( Test compound final concentration 0, 10, 20 / iM). At that time, analysis was carried out using 3 tools for each test compound and each concentration as test wells.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Example 1B the ratio of viable cells did not change with the addition of the test compound. This indicates that under the conditions of Example 1A, these compounds do not change the proportion of living cells. That is, the result obtained by Example 1A purely means that the test compound suppressed the expression of HCV protein.
  • Subscription structures deployment compound having anti-HC V activity using L UHCV cells - seeded Jung L UHC V cells in 96 ⁇ El plates at a ratio of 5 X 1 0 3 cells Z 50 ⁇ LZ Weru was over ⁇ Inkyubeto .
  • the test compound was dimethyl sulfoxide (D In MS O), a dilution series was prepared using DMSO as necessary.
  • L uH CV day after cell seeding the medium containing the test compound of 2-fold concentration of the final test concentration were added at 50 L Noueru, 48 hours, 3 7 ° C, 5% C_ ⁇ gently in 2 culture conditions Cultured (final test compound concentrations 0, 10 and 20 M). At that time, analysis was carried out using 3 wells for each test compound and each concentration as test wells.
  • L u HCV cells were seeded into 9 6 ⁇ El plates at a ratio of 5 X 1 0 3 cells / 5 0 LZ Ueru was over ⁇ Inkyubeto.
  • the test compound was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO), and a dilution series was prepared using DMS ⁇ as necessary.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • L uH CV day after cell seeding the medium containing the test compound of 2-fold concentration of the final test concentration were added at 50 mu L Noueru, 48 hours, 3 7 ° C, 5% C0 gently in 2 culture conditions Cultured (final test compound concentrations 0, 10 and 20 mg). At that time, analysis was carried out using 3 wells for each test compound and each concentration as test wells.
  • a test compound (containing DMSO used as a control) and a cell containing no cells was also measured.
  • the value obtained by subtracting the obtained value from the absorbance value of the well containing the cells measured at the same concentration for the same compound was used as the measured value of the actual number of living cells not including the background.
  • the ratio of the number of viable cells was calculated. Table 1 1-2 and Figure 2B show the proportion of each test compound and the concentration of viable cells.
  • Example 2A The results showed that for many of the compounds tested, there was no significant decrease in cell viability. This indicates that under the conditions of Example 2A, these compounds have no or no cytotoxicity at all. That is, the result obtained in Example 2A purely means that the test compound suppressed the expression of HCV protein.
  • L UHC V cells were seeded at a rate of 1 X 1 0 6 cells / dish in 1 0 c Hi dish, and incubated on over ⁇ . Then added so that the compound 5 dissolved in DMS O to a final concentration of 20 Myumyu, continued gently further cultured at 3 7 ° C, 5% C0 2 in culture conditions. Only DMS O was added to the control dish. Cells were harvested 14 hours after addition of compound 5 and 60 hours later. Cell lysates (25 mM N a P 0 4 (p H 7.
  • L u HC V cells were seeded in a 10 cm dish at a rate of 1 ⁇ 10 6 cells / dish and incubated at least ⁇ . Then added so that the compound 5 dissolved in DMS O to a final concentration of 20 Myumyu, continued gently further cultured at 3 7 ° C, 5% C0 2 in culture conditions. Only DMS O was added to the control dish. Cells were harvested 14 and 60 hours after compound 5 was added, and total RNA was extracted with Sepazole RNA (Nacalai Tesque), Superscript II reverse transcription enzyme (Invitrogen) and o 1 igo — CDNA synthesis was carried out using dT primer (Promega) or random primer (Invitrogen).
  • NS 5 A-specific primer (5, 1 A GTTTTTC ACGGAGGTGGATGGG—3, (SEQ ID NO: 1), 5, 1 G TCCGGGTTCTTCCAAGACTCTA-3 ′ (SEQ ID NO: 2)), GAP DH primer (5, 1 ACGGATTTGGTCGTATTGGG—3 ′ (SEQ ID NO: 3), 5, 1 GTAGTTGAGGTC AATGAAGGGGTC—3, (SEQ ID NO: 4)), Prime S TAR HS DNA pol ymerase (manufactured by Takara Bio Inc.) PCR used was performed. After the DNA amplification reaction, electrophoresis on agarose gel and staining with ethidium promide were performed. The expression level of each gene was evaluated using a UV transilluminator.
  • Example 3A This indicates that the tested compound 5 does not affect HCV-RNA replication and stability. From the results of both Example 3A and Example 3B, it was revealed that Compound 5 can suppress the expression of HCV protein at the translation level without affecting the replication or stability of HCV-RNA. .
  • LuHCV cells were seeded on a 6-well plate at a ratio of 5 ⁇ 10 4 cells / 1 mL Nowell and incubated. The day after the seeding of LuHC V cells, 1 mL of medium containing Compound 5 at twice the final test concentration was added to each well to make the final concentration of Compound 5 20M. Cells gently and cultured at 3 7 ° C, of 5% C0 2 culture conditions. After addition of Compound 5, collect 3 wells of cells at 0, 6, 1 2, 24, 36 and 48 hours, and count the number of cells surviving per well using a hemocytometer. The average value was calculated. As a control, a well containing only DMSO was used.
  • the growth inhibitory action against influenza A virus was evaluated.
  • MD CK cells were seeded in 6-well plates at a ratio of 5 ⁇ 10 5 cells well and incubated overnight.
  • the test compound was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO), and a dilution series was prepared using DMSO as necessary.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • A-type influenza virus PR one 8 was added so that the test compound to a final concentration of 1 4, 72 h, 3 7 ° C, 5% C0 2 in culture conditions Gently cultured. After 2 72 hours of incubation, 2111?
  • the plate was washed twice with 83 (—), fixed in 15% acetic acid 85% ethanol solution for 30 minutes, and then stained with crystal violet.
  • test compounds Not added DMSO control MDCK cells However, although it was killed and killed at a high percentage, it was peeled off from the plate, but in the group with the addition of the compound for the trial test compound, it was a small cell. The exfoliation of the fine cell vesicles due to the death and death of the cells was suppressed. .
  • test compound has an anti-viral effect even if it is against the flurus. It shows where you have it. .
  • MM DD CC KK cells are seeded in 99 66 ul loop plate 11 XX 11 00 44 cells ZZ 11 00 00 ⁇ LL // seeded at a ratio of werel And then, I was incubating. .
  • the test compound is dissolved and dissolved in DD MM SS DD, and if necessary, DD MM SS ⁇ is used to dilute dilution series. Was created. .
  • the day after the MM DD CC KK cell seeding dilute the test compound in the culture medium for infectious dyeing medium. And replaced with the culture broth in 99 66 well loop. .
  • the reagent for measuring the number of viable cell vesicles was measured after 48 hours, and SS FF ((Nanakara Colory Tesuku Co., Ltd. )) was added with 1 100 ⁇ L LL wallul, and kept still under the conditions of culture culture at 33 77 ° C CC and 55 %% CC OO 22. The cells were cultivated and cultivated, and the reaction of reaction of color development was performed. . After that, use AA RR VV OO (manufactured by PAPERKIKIN ERRUMAMAICHI Co., Ltd.) with a measuring and measuring device, and absorb at 44 55 00 nn mm. Absorbance was measured and determined. .
  • the back absorbance of the absorption spectrophotometer it was used as a test compound ((as a control reference). (Including DD MM SS OO))), and even if it is not necessary to include a small cell vesicle, the measurement is performed. I went there. .
  • the obtained numerical value value is applied to the same compound compound, and includes cell vesicles measured and measured at the same concentration.
  • the value obtained by subtracting and subtracting it from the value of the absorbance of Muwell is subtracted from this value, including the Pacpack gull ground.
  • the measured value of the actual number of viable cell vesicles that was not included was taken as the measured value. .
  • the percentage of viable fine cell vesicles decreased to 4400% or less due to the infectious infection, but the compound compound 55, Material 66 or chemical It was revealed that cell death was reduced by adding Compound 14.
  • mice For mice (C rlj / CD l (ICR) strain, male, 5 weeks old), a one-week acclimatization period was established (from day-7 to day-1), and the group was determined from the body weight average value the day before the start of the study Divided.
  • Test compounds formulated with 0.5% carboxymethylcellulose were orally administered for 7 consecutive days (day OO force et al. Day 0 7), and symptoms during the administration period were observed.
  • the compound of the present invention has antiviral activity against HCV and influenza virus without showing significant cytotoxicity and in vivo toxicity.
  • the present inventors have found that a compound having the structure of Formula I has excellent anti-RNA virus activity.
  • Currently available antiviral agents are very limited, and the agent according to the present invention can provide a new treatment option. That is, the present invention relates to the treatment of RNA virus infections. Provides new options.

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Abstract

　ウイルス、特にＲＮＡウイルスは、突然変異速度が速いため、これまで開発されたウイルスのプロテアーゼや逆転写酵素などを標的とした抗ウイルス剤は、有効性が早期に失われ耐性ウイルスが出現している。また、近年、ＳＡＲＳ、鳥インフルエンザ、Ｃ型肝炎をはじめ、種々の新規ウイルスによるウイルス性疾患が社会的な脅威となっている。それゆえ、既存薬に耐性を示すウイルスや新規なウイルスに対応でき、適用性が広い新たな抗ウイルス剤の開発が希求されている。　本発明は新規の抗ＲＮＡウイルス剤及びその使用方法を提供する。さらに本発明は、新規ウイルスや薬剤耐性ウイルスに対しても有効な抗ＲＮＡウイルス剤及びその使用方法を提供する。

Description

明 細 書 抗 R N Aウィルス作用を有するァニリン誘導体 技術分野
本発明は、 ウィルス感染に関与する宿主細胞のリン酸化酵素を阻害する化合物 に関する。 本発明は、 特にウィルスタンパク質の翻訳を制御するリン酸化酵素の 阻害剤に関する。 さらに、 本発明は、 リン酸化酵素阻害剤を有劾成分として、 フ ラビウィルス科、 レオウィルス科、 パラミキソウィルス科、 オルトミキソウィル ス科、 レトロウィルス科等に属する R N Aウィルスに対する抗ウィルス剤に関す る。 特に、 本発明は、 R N Aウィルスにより引き起こされる疾患の予防又は治療 に有効な化合物に関し、 具体的には、 C型肝炎の予防又は治療剤、 及びインフル ェンザウィルス感染症の予防又は治療剤に関する。 背景技術
従来から微生物のヒ トに対する感染が問題視されている。 特に、 近年は交通手 段の発達や人々の生活圏が拡大するに伴い、 ヒ トに対する様々な感染症の危険性 がさらに高まっている。 感染症に対する治療薬剤の代表的なものとして抗生物質 が挙げられるが、 抗生物質は病原体の体内における代謝経路を阻害することでは じめてその効果を発揮する薬剤である。 しかし、 ウィルスの場合は、 ウィルスが そのタンパク質合成とエネルギー産生機構のすべてを宿主細胞に依存し、 自己の 代謝経路を有しないことから、 抗生物質では直接的なウィルス抑制作用を発揮さ せることはできない。 したがって、 現在では細菌よりもウィルスによる感染症の 方が脅威となりつつある。
ウィルスは、 細胞構造を持たない微小な微生物であり、 D N Aウィルスと R N Aウィルスとに大別される。 ウィルスの感染様式としては、 宿主細胞の崩壊が顕 著な急性感染、 臨床症状は比較的軽微にとどまるものの慢性化する持続感染、 及 ぴウィルスタンパク質の合成が長期間認められない状態で残存し続ける潜伏感染 の 3形態があり、 一部の場合には癌を誘発することもある。 ヒ トで疾患を引き起こす R N Aウィルスとしては、 日本脳炎ウィルス、 C型肝 炎ウィルス (H C V ) などのフラビウィルス科、 ロタウィルスなどのレオウィル ス科、 ムンプスウィルス、 麻疹ウィルスなどのパラミキソウィルス科、 インフル ェンザウィルスなどのオルトミキソウィルス科、 ヒ ト免疫不全ウィルス （H I V ) などのレト口ウィルス科などが挙げられる。
このうち、 C型肝炎ウィルスの感染により引き起こされる C型肝炎は、 慢性化 し易く、 慢性化すると高い割合で肝硬変及び肝癌に進行する重篤な疾患であるた め、 有効な治療法が強く望まれている。 インフルエンザウイルスについては、 数 年毎に世界的な流行が発生することがよく知られており、 感染を放置すれば患者 が死亡する場合があることも周知である。 したがって、 インフルエンザウイルス に対する有効な治療薬を市場に提供することも急務である。
R N Aウィルスに対する抗ウィルス剤としては、 ィンフルェンザウィルスに対 して、 ァマンタジン、 ザナミビル及びォセルタミビルなど、 H I Vに対して、 ジ ドブジン、 ネビラピン及ぴリ トナビルなど、 H C Vに対して、 リバビリンなどが 挙げられる。
しかし、 ウィルス性疾患に対する治療薬は、 現状で用いられているものに対し て副作用や有効性の点で問題が指摘されるなど、 未だ開発途上にある。 また、 有 効とされてきた抗ウィルス剤に対して耐性を有するウィルスが発生するという問 題が生じる場合もある。 したがって、 現在も、 新規な抗ウィルス剤の開発が望ま れている。
本発明者らはこれまで、 スプライシングの調節に関与するタンパク質の研究を 行ってきた。 その過程で、 以下の式で表される化合物をはじめとする一群の化合 物がリン酸化酵素である S R P Kに対する阻害活性を示し、 抗ウィルス作用を有 することを発見し、 特許文献 1中に開示している。
〔化 1〕
Figure imgf000005_0001
特許文献 1 国際公開パンフレッ ト WO 2 0 0 5 / 0 6 3 2 9 3 発明の開示
発明が解決しようとする課題
ウィルス、 特に R N Aウィルスは、 突然変異速度が速いため、 これまでに開発 された、 ウィルスのプロテァーゼや逆転写酵素などを標的とする既存の抗ゥィル ス剤は、 有効性が失われる速度も早く、 さらなる効果的な抗ウィルス剤の開発が 待望されてきた。
特に、 近年、 S A R S、 鳥インフルエンザ、 C型肝炎をはじめ、 種々の新規ゥ ィルスによるウィルス性疾患が社会的な脅威となっている。 それゆえ、 本発明の 課題は、 既存薬に耐性を示すウィルスや新規なウィルスに対応でき、 適用性が広 い新たな抗ウィルス剤の開発である。 課題を解決するための手段
本発明者らは、 従来から、 ウィルス遺伝子の発現に関与する宿主細胞のタンパ ク質リン酸化酵素に着目して研究を行なってきた。 特にウィルスタンパク質の翻 訳を制御するタンパク質リン酸化酵素を阻害する多数の化合物を合成し、 スクリ 一-ングした結果、 下記式 Iの構造を有する化合物が優れた抗ウィルス活性を有 することを見出した。
すなわち本発明は、 宿主細胞のタンパク質リン酸化酵素を阻害する化合物を含 有する抗ウィルス剤、 特に、 式 I の構造を有する化合物又はその製薬上許容され る塩を有効成分として含有する、 ウィルス感染症の予防又は治療剤及ぴその使用 方法に関する。 さらに、 本発明は R N Aウィルスにより引き起こされるウィルス 感染症の予防又は治療剤及ぴその使用方法に関する。
より具体的には、 本発明は以下の特徴を有する。
〔1〕宿主細胞のタンパク質リン酸化酵素を阻害する化合物を有効成分として含有 する抗ウィルス剤。
〔2〕前記タンパク質リン酸化酵素が、 ウィルス感染で活性化される宿主細胞のタ ンパク質リン酸化酵素である、 上記 〔1〕 に記載の抗ウィルス剤。
〔3〕前記タンパク質リン酸化酵素が、 ウィルスタンパク質の翻訳を制御する宿主 細胞のタンパク質リン酸化酵素である、 上記 〔1〕 又は 〔2〕 に記載の抗ウィル ス剤。
〔4〕 ウィルス感染症が RN Aウィルスによって引き起こされるものである、上記 〔1〕 〜 〔3〕 のいずれか 1つに記載の抗ウィルス剤。
〔5〕 ウィルス感染症が C型肝炎ウィルス、又はィンフルェンザウィルスによって 引き起こされるものである、 上記 〔1〕 〜 〔4〕 のいずれか 1つに記載の抗ウイ ルス剤。
〔6〕 以下の一般式 （ I )
〔化 2〕
Figure imgf000006_0001
(式中、 R1は、 ハロゲン原子、 又はハロゲン原子で置換されていてもよい ァ ルキノレ基を示し ；
R2は、 水素原子又は CMアルキル基を示し ；
R3は、 6アルキル基、 アルコキシ基若しくはハロゲン原子で置換され ていてもよいフヱニル基又は単環式複素環基を示し；
Qは、 — C (O) 一、 一 C (S) 一、 一 S〇2—、 一 C (O) NHC (O) 一、 一 C (S) NHC (O) 一、 又は一 C (O) NHC (S) 一を示し； wは、 ハロゲン原子、 又はハロゲン原子で置換されていてもよい単環式又は二 環式含窒素複素環基を示す。）
で表される化合物、 又はその製薬上許容される塩を含有する、 RNAウィルス感 染症の予防又は治療剤。
〔7〕 前記式 （ I ) 中、
R1は、 フッ素、 又はトリフルォロメチル基を示し；
R2は、 水素原子であり ；
R3は、 メチル基、 メ トキシ基若しくはフッ素で置換されていてもよいフエニル 基、 又はメチル基で置換されていてもよい単環式複素環基を示し；
Qは、 一 C (O) 一、 一 C (S) 一、 一 C (O) NHC (O) 一、 又は一 C (S) NHC (O) 一を示し；
Wは、 フッ素原子、 又は環原子として窒素 1個と炭素 5〜 9個を含む飽和単環 式又は二環式複素環基を示す、
上記 〔6〕 に記載の RN Aウィルス感染症の予防又は治療剤。
〔8〕 前記式 （ I ) の化合物が、 以下のもの：
〔化 3〕
- 9 -
Figure imgf000008_0001
CSZlS0/600ZJf/X3d .9Τ6ΪΪ/6001 OAV
Figure imgf000009_0001
からなる群より選択される化合物又はその製薬上許容される塩である、上記〔6〕 に記載の RNAウィルス感染症の予防又は治療剤。
〔9〕 前記式 （ I ) 中、
R1は、 トリフルォロメチル基を示し；
R2は、 水素原子であり ；
R3は、 フエ-ル基、 又は単環式複素環基を示し；
Qは、 一 C (O) 一、 -C (S) 一、 又は一 C (S) NHC (O) 一を示し； Wは、 環原子として窒素 1個と炭素 5〜 9個を含む飽和単環式又は二環式複素 璟基を示す、 上記 〔6〕 に記載の RNAウィルス感染症の予防又は治療剤。
〔1 0〕 前記式 （ I) の化合物が、 以下のもの：
〔化 4〕
Figure imgf000010_0001
からなる群より選択される化合物又はその製薬上許容される塩である、上記〔6〕 に記載の RN Aウィルス感染症の予防又は治療剤。
〔1 1〕 以下のもの：
〔化 5〕
Figure imgf000011_0001
からなる群より選択される化合物、 若しくはその製薬上許容される塩、 又はこれ らの水和物。
〔 1 2〕また、本発明は、 R N Aウイルス感染症の予防又は治療剤の製造のための、 前記一般式 （ I ) で表される化合物、 又はその製薬上許容される塩の使用に関す る。
〔1 3〕 さらに、 本発明は、 前記一般式 （ I) で表される表される化合物、 又はそ の製薬上許容される塩の有効量を、 RNAウィルス感染症の患者に投与すること を含む、 RN Aウィルス感染症の治療方法に関する。 発明の効果
本発明者らは、 多数の化合物を合成し、 スク リーニングした結果、 式 Iの構造 を有する化合物が優れた抗 RNAウィルス活性を有することを見出した。 これら の化合物は、 動物細胞内に存在するリン酸化酵素を阻害する。 驚くべきことに、 これらの化合物は、 それぞれ異なる複数のタイプの RN Aウィルスに対して有効 であることが見出された。
すなわち本発明は、 R N Aウィルス疾患の治療に新たな選択肢を提供するもの である。 特に、 本発明に係る抗 RNAウィルス剤は、 社会的に問題となる重篤な 疾患を引き起こす、 C型肝炎ウィルス及びィンフルェンザウィルスに対して有効 である。 図面の簡単な説明
図 1 Aは、 L uHCV細胞を用いて、 HCVの発現 '複製の程度をルシフェラ ーゼ活性を指標に算出した図である。 得られた発光強度の数値から、 各試験化合 物、 各濃度での平均値を算出し、 試験物質の対照として用いた DMS Oの発光強 度を 1 0 0%としてそれぞれの試験化合物の発光強度の割合を算出した。 黒三 角 ：化合物 2、 X ：化合物 5、 * ：化合物 6を用いた場合を示す。
図 1 Bは、図 1 Aの条件下での L uHCV細胞の生細胞の割合を示す図であり、 試験物質の対照として用いた DM S O添加時の生細胞を 1 00%として算出した 値を示している。 黒三角 ：化合物 2、 X ：化合物 5、 * :化合物 6を用いた場合 を示す。
図 2 Aは、 図 1 Aと同様の方法により L uHC V細胞を用いて試験化合物存在 下 ·非存在下での HCVの発現 ·複製の程度をルシフェラーゼ活性を指標に算出 した結果である。 試験物質の対照として用いた DM S Oの発光強度を 1 00%と して、 それぞれの試験化合物について、 それぞれの濃度での発光強度の割合を示 している。
図 2 Bは、 図 1 Bと同様の方法により L uHCV細胞の生細胞の割合を示す図 であり、 試験物質の対照として用いた DM S O添加時の生細胞を 1 00 %として 算出した値を示している。
図 3 Aは、 本発明の化合物の HCVタンパク質に対する翻訳抑制効果を示す図 である。 L uHCV細胞培養中に化合物 5、 又は試験化合物の対照として DM S Oを添加し、 図中に示したそれぞれの時間、 培養した後、 抗 NS 5A抗体又は抗 βーァクチン抗体によりィムノプロットを行い、 化合物 5添加時の NS 5 Αの発 現について検討した。
図 3 Bは、 本発明の化合物が HCV— RN A複製には作用しないことを示す図 である。 L uHC V細胞培養中に化合物 5、 又は試験化合物の対照として DM S Oを添加し、 図中に示したそれぞれの時間、 培養した後、 NS 5 Aに対する特異 的プライマ一、 又は GAP DHに対する特異的プライマーを用い、 RT— P CR 法により化合物 5添加時の NS 5 A— RN Aの量について検討を行った。
図 4は、 化合物 5が L u H C V細胞に対して全く増殖抑制能や細胞障害性を有 さないことを示す図である。 化合物 5の 20 μΜ添加時において、 対照として用 いた DMSOと全く同様な増殖を示している。
図 5は、 本発明の化合物がィンフルェンザウィルスに対しても抗ウィルス効果 を有することを示す図である。 試験化合物を添加しなかった DMS Ο対照の MD CK細胞はインフルエンザウイルスに感染し、 高い割合で死滅し、 プレートから 剥離していたが、 試験化合物添加群では細胞死による細胞の剥離は抑制された。 図 6は、 本発明の化合物のィンフルェンザウィルス感染細胞に対する細胞死抑 制効果を示す図である。 試験化合物非存在下ではィンフルェンザウィルスの感染 により、 生細胞の割合が 40%以下になったが、 化合物 5、 化合物 6又は化合物 14の添加により細胞死が低減されることが明らかとなった。
図 7は、 本発明の化合物 5のインビボ毒性試験を示す図である。 l O O Omg /k g/d. a yでの 7日間の反復投与においても死亡例は認められず、 試験化合 物投与群は、 対照溶媒投与群 （P I a s e b o投与群） と比較して、 全く差異を 認めない順調な体重增加を示した。 発明を実施するための最良の形態
以下に、 本明細書において記載する用語、 記号等の意義を説明し、 本発明を詳 細に説明する。
本発明において、 「宿主細胞のタンパク質リン酸化酵素」 とは、 動物細胞の細胞 内に存在するタンパク質リン酸化酵素を意味する。 本明細書中では、 タンパク質 リン酸化酵素は単に 「リン酸化酵素」 と称される場合もある。 本発明におけるリ ン酸化酵素は、特に、ウィルスタンパク質の翻訳を制御するリン酸化酵素である。 リン酸化酵素活性の評価方法は、 当該秘術分野で周知である。 具体的には、 例 えば、 特開 2 0 0 2— 2 3 6 1 2 5号、 特開平 9 - 6 8 5 2 7号及ぴ特開 2 0 0 5 - 1 1 2 8 1 2号などに記載されている。
本明細書における r C i - eアルキル基」 とは、 炭素数 1〜 6個の脂肪族炭化水 素から任意の水素原子を 1個除いて誘導される一価の基である、 炭素数 1〜6個 の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル基を意味し、 具体的には例えば、 メチル基、 ェ チル基、 1一プロピル基、 2—プロピル基、 2—メチル一 1一プロピル基、 2— メチルー 2—プロピル基、 1一ブチル基、 2—ブチル基、 1一ペンチル基、 2— ペンチル基、 3—ペンチル基、 2—メチルー 1ーブチノレ基、 3—メチノレー 1ーブ チル基、 2—メチルー 2—プチル基、 3—メチルー 2—ブチル基、 2， 2—ジメ チルー 1一プロピル基、 1一へキシル基、 2—^ ^キシル基、 3—へキシル基、 2 —メチルー 1一ペンチノレ基、 3—メチル一 1一ペンチノレ基、 4ーメチルー 1ーぺ ンチノレ基、 2—メチノレー 2—ペンチノレ基、 3—メチノレー 2—ペンチル基、 4ーメ チルー 2—ペンチノレ基、 2—メチルー 3—ペンチノレ基、 3—メチノレー 3一ペンチ ル基、 2 , 3—ジメチル— 1一プチル基、 3 , 3—ジメチルー 1一ブチル基、 2， 2 _ジメチルー 1一ブチル 基、 2—ェチルー 1一ブチル基、 3 , 3—ジメチルー 2—ブチル基、 2 , 3ージメチルー 2—プチル基等が挙げられる。
本明細書における r C — 6アルコキシ基」 とは前記定義の 「じ アルキル基」 が結合したォキシ基であることを意味し、 具体的には例えば、 メ トキシ基、 エト キシ基、 1一プロピルォキシ基、 2—プロピルォキシ基、 2—メチル一 1一プロ ピルォキシ基、 2—メチルー 2—プロピルォキシ基、 1一ブチルォキシ基、 2― プチルォキシ基、 1一ペンチルォキシ基、 2—ペンチルォキシ基、 3—ペンチル ォキシ基、 2—メチルー 1一ブチルォキシ基、 3—メチルー 1一プチルォキシ基、 2—メチルー 2—ブチルォキシ基、 3—メチルー 2—プチルォキシ 基、 2 , 2― ジメチルー 1—プロピルォキシ基、 1一へキシルォキシ基、 2—へキシルォキシ 基、 3—へキシルォキシ基、 2—メチル一 1一ペンチルォキシ基、 3—メチルー 1一ペンチノレォキシ基、 4ーメチノレー 1一ペンチノレ才キシ基、 2—メチノレー 2— ペンチルォキシ基、 3—メチノレー 2—ペンチノレォキシ基、 4—メチノレー 2一ペン チノレ才キシ基、 2—メチルー 3—ペンチルォキシ基、 3 —メチノレー 3一ペンチノレ ォキシ基、 2 , 3—ジメチルー 1 —ブチルォキシ基、 3， 3—ジメチルー 1ーブ チルォキシ基、 2， 2—ジメチル一 1 一ブチルォキシ基、 2—ェチルー 1ーブチ ルォキシ基、 3 , 3ージメチルー 2—プチルォキシ基、 2 ' 3—ジメチルー 2— ブチルォキシ基等があげられる。
本明細書における 「ハロゲン原子」 とは、 フッ素原子、 塩素原子、 臭素原子又 はヨウ素原子を意味する。
本明細書における 「ハロゲン化 C — 6アルキル基」 とは前記定義 「じ アル キル基」 中の任意の少なくとも 1つの水素原子を、 前記定義 「ハロゲン原子」 で 置換した基を意味する。たとえば、 トリフルォロメチル基、ジフルォロメチル基、 モノフルォロメチル基などが挙げられる。
本明細書における 「単環式複素環基」及び「単環式又は二環式複素環基」 とは、 環原子として、炭素原子、及びへテロ原子を含む環状構造を有する基を意味する。 ヘテロ原子は、 一般的には酸素、 窒素又は硫黄である。
本明細書における 「塩」 とは、 本発明に係る化合物と塩を形成し、 かつ製薬上 許容されるものであれば特に限定されず、 例えば、 無機酸塩、 有機酸塩、 無機塩 基塩、 有機塩基塩、 酸性又は塩基性アミノ酸塩などが挙げられる。
無機酸塩の好ましい例としては、 例えば塩酸塩、 臭化水素酸塩、 硫酸塩、 硝酸 塩、 リン酸塩などがあげられ、 有機酸塩の好ましい例としては、 例えば酢酸塩、 コハク酸塩、 フマル酸塩、 マレイン酸塩、 酒石酸塩、 クェン酸塩、 乳酸塩、 ステ アリン酸塩、 安息香酸塩、 メタンスルホン酸塩、 p—トルエンスルホン酸塩など が挙げられる。
無機塩基塩の好ましい例としては、 例えばナトリウム塩、 カリウム塩などのァ ルカリ金属塩、 カルシウム塩、 マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、 アル ミニゥム塩、アンモニゥム塩などがあげられ、有機塩基塩の好ましい例としては、 例えばジェチルァミン塩、 ジエタノールアミン塩、 メグルミン塩、 N , N， ージ ベンジルエチレンジァミン塩などが挙げられる。
酸性アミノ酸塩の好ましい例としては、 例えばァスパラギン酸塩、 グルタミン 酸塩などが挙げられ、 塩基性アミノ酸塩の好ましい例としては、 例えばアルギニ ン塩、 リジン塩、 オル二チン塩などが挙げられる。
また、 本発明の化合物は、 大気中に放置しておくことにより、 水分を吸収し、 吸着水が付いたり、 水和物となったりする場合があり、 そのような水和物も本発 明の塩として包含される。
さらに、 本発明の化合物は、 他のある種の溶媒を吸収し、 溶媒和物となる場合 があるが、 そのような塩も本発明に包含される。
また、 本明細書において、 「又は」 という用語は非排他的に用いられる。 例えば
「A、 B、 又は C」 は、 A、 B、 又は Cのいずれかの要素を少なく とも含むことを 意味しているに過ぎず、 A、 B、 及び Cの 2つ以上又は 3つ全てを含むもの、 及 ぴそれ以外の要素を含むものも含まれる。
また本明細書において下記の表に示す化合物は、化合物番号で表す場合もある。 これらの化合物は、 化合物番号を引用して 「化合物一一」 として表記されること もある。
本明細書において 「抗ウィルス剤」 とは、 ウィルスによる感染症の予防又は治 療に対して有効な薬剤を意味する。 本明細書において 「抗 R N Aウィルス剤」 と は、 R N Aウィルスによる感染症の予防又は治療に対して有効な薬剤を意味する。 本明細書において、 「抗ウィルス作用」 とは、 ウィルスの増殖を抑制する作用、 ウィルスの感染を低減する作用、感染したウィルスを減少又は排除する作用など、 ウィルス感染を予防又は治療するための機構として有用ないずれの作用も含むも のと理解される。 本明細書において、 「抗 R N Aウィルス作用」 とは、 R N Aウイ ルスの増殖を抑制する作用、 R N Aウィルスの感染を低減する作用、 感染した R N Aウィルスを減少又は排除する作用など、 R N Aウィルス感染を予防又は治療 するための機構として有用ないずれの作用も含むものと理解される。
本願発明の R N Aウィルス感染症の予防又は治療剤の有効成分としては、 次の 一般式 （ I ) で示される化合物、 及びそれらの製薬上許容される塩を用いること ができる。
一般式 （ I ) ：
〔化 6〕
Figure imgf000017_0001
式中、
R1は、 ハロゲン原子、 又はハロゲン原子で置換されていてもよい アル キノレ基を示し；
R2は、 水素原子又は アルキル基を示し；
R3は、 アルキル基、 アルコキシ基若しくはハロゲン原子で置換さ れていてもよいフヱニル基又は単環式複素環基を示し；
Qは、 — C (O) ―、 一 C (S) 一、 一 S 02—、 一 C (O) NHC (O) 一、 一 C ( S) NHC (O) 一、 又は一 C (O) NHC (S) —を示し；
Wは、 ハロゲン原子、 又はハロゲン原子で置換されていてもよい単環式又は 二環式含窒素複素環基を示す。
さらに、 好ましくは、 前記式 （ I ) 中、
R1は、 フッ素、 又はトリフルォロメチル基を示し；
R2は、 水素原子であり ；
R3は、 メチル基、メ トキシ基若しくはフッ素で置換されていてもよいフエ二 ル基、 又はメチル基で置換されていてもよい単環式複素環基を示し；
Qは、 一 C (O) 一、 一 C (S) 一、 - C (O) NHC (O) 一、 又は一 C (S) NHC (O) —を示し；
Wは、 フッ素原子、 又は環原子として窒素 1個と炭素 5〜 9個を含む飽和単 環式又は二環式複素環基を示す。
さらに、 好ましくは、 前記式 （I ) 中、
R1は、 トリフルォロメチル基を示し；
R2は、 水素原子であり ；
R3は、 フエ二ル基、 又は単環式複素環基を示し； Qは、 一 C (O) 一、 一 C (S) 一、 又は一 C (S) NHC (O) 一を示し ； Wは、 環原子として窒素 1個と炭素 5〜9個を含む飽和単環式又は二環式複 素環基を示す。
さらにより好ましくは、 式 （ I ) の化合物は、 以下のもの：
〔化 7〕
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000019_0001
からなる群より選択される。
最も好ましくは、 式 （ I ) の化合物は、 以下のもの 〔化 8〕
Figure imgf000019_0002
Figure imgf000020_0001
からなる群より選択される。
以下、 一般式 （ I ) で表される具体的な化合物について、 下記に挙げることが できるが、 本発明は、 以下に列挙された化合物に限定されるものではない。
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
すなわち、 本発明は上記に例示した任意の化合物、 特に上記例示化合物番号： 化合物 2、 化合物 3、 化合物 4、 化合物 5、 化合物 6、 化合物 7、 化合物 8、 化 合物 9、 化合物 1 0、 化合物 1 1、 化合物 1 2、 化合物 1 3、 化合物 1 4、 化合 物 1 5、 化合物 1 6、 化合物 1 7、 化合物 1 8、 化合物 1 9、 化合物 2 0、 化合 物 2 1、 ィヒ合物 2 2、 化合物 2 3、 及び化合物 2 4の少なくとも 1種を含有する 抗ウィルス剤に関し、 さらに好ましくは以下の構造式で示される上記例示化合物 番号：化合物 2、 化合物 5、 化合物 6、 化合物 1 4、 化合物 1 7、 化合物 1 8、 化合物 2 0、 及び化合物 2 2の化合物： 〔化 9〕
Figure imgf000023_0001
の少なく とも 1種を含有する抗ウィルス剤に関する。
これらの化合物 （ァ-リン誘導体）、若しくはその製薬上許容される塩は、 抗 R N Aウィルス剤として有効である。
本発明の化合物を抗ウィルス剤として用いる対象となるウィルスとしては、 フ ラビウィルス科及びオルトミキソウィルス科に属する R N Aウィルスが挙げられ るが、 これらに限定されない。 他のウィルスとしては、 レトロウイルス科、 パラ ミキソウィルス科、 ァレナウィルス科、 フイロウィルス科、 ラブドウィルス科.、 ブ-ァウィルス科、 コロナウィルス科、 トガウィルス科、 レオウィルス科、 カリ シウィルス科、 及びピコナウィルス科に属する R N Aウィルスが挙げられるが、 これらに限定されない。 好適なものはヒ ト病原性 R N Aウィルスである。 最も好 適なウィルスは c型肝炎ウィルス及ぴィンフルェンザウィルスである。 本発明に係る前記式 （ I ) で表される化合物の代表的な製造方法について以下 に記す。 なお、 本発明に係る前記式 （ I ) で表される化合物については、 国際公 開パンフレツト WO 20 0 5/0 6 329 3中にも記載があり、 その内容は参照 により本明細書中に組み入れられる。
以下、 R1 R2、 R3、 R4、 R5、 R6、 Q、 Wは、 前記式 （ I ) における定義と 同意義である。 室温とは、 20〜30°C程度の温度を意味する。
製造方法 A
〔化 1 0〕
W = HNR4R5
Figure imgf000025_0001
X = F, CI, Br, 1, OMs, OTs, OTf
Q = C=0, SOz
Figure imgf000025_0002
4a 6a
Q = C(S)N(H)C(0)
Figure imgf000025_0003
Figure imgf000026_0001
ステップ 1
化合物 1 aと化合物 2 aとを反応させ、 化合物 3 aを得るステップである。 原 料の-トロベンゼン誘導体 1 aは、 市販品又は適宜官能基を誘導して入手する。
H a 1は、 脱離基となるハロゲン原子である。 化合物 2 aは導入する一 N R5R 6 を含む試薬であり、 Xは水素原子などである。 ィ匕合物 2 aは、 1〜2当量用いる ことが好ましい。 反応は、 溶媒中、 塩基の存在下で行うことができる。
塩基としては、 トリェチルァミン、 ジイソプロピルェチルァミン、 ピリジン、 4— (ジメチルァミノ） ピリジン等を用いることができる。 塩基は 1〜5当量用 いることが好ましい。 また、 塩基として過剰量 （1から 5当量） の X— N R 5R 6 を代わりに用いることができる。
溶媒としては、例えばジメチルスルホキシド、 N， N—ジメチルホルムアミ ド、 N—メチルピロリ ドン、 ジォキサン、 テトラヒ ドロフラン、 トルエン等を挙げる ことができる。
反応は、 反応温度を 0 °Cから 1 5 0 °Cとして行うことができるが、 好ましくは 室温で行うことができる。 ステップ 2
化合物 3 aの二トロ基をアミノ基に還元し、化合物 4 aを得るステップである。 還元方法としては、 溶媒中、 塩化スズ等の存在下、 濃塩酸等を接触させて行う ことができる。 その他、 接触水素化などの一般的な還元反応も利用可能である。 反応溶媒としてはメタノール、 エタノール、 N , N—ジメチルホルムアミ ド、 テトラヒ ドロフラン、 1 , 2—ジメ トキシェタン、 1， 4一ジォキサン、 水、 又 はこれらの混合溶媒を用いることができる。
還元剤となる塩化スズ等は質量比で 1〜 2 0当量の量を用いることが好ましい。 反応温度は 0 °Cから 1 0 0 °Cで反応を行うことができる。
なお化合物 3 a及び 4 aは市販品を入手できる場合もあり、 その場合は市販品 を用いればよい。 特に一般式 （I ) の Wが水素又はハロゲンの場合は、 多くの場 合、 市販品を入手可能である。
ステップ 3 a
化合物 4 aと化合物 5 aを反応させ、 化合物 6 aを得るステップである。 Lは ハロゲン原子などである。
反応は、溶媒中、塩基の存在下、必要に応じ触媒を添加して行うことができる。 この場合、 化合物 5 aを 1〜3当量用いることが好ましい。
反応溶媒は、 ジクロロメタン、 クロ口ホルム、 1 , 4一ジォキサン、 テトラヒ ドロフラン、 トルエン、 ピリジン、 N , N—ジメチルホルムアミ ド、 N—メチル ピロリ ドンなどを用いることができる。
塩基としては、 トリェチルァミン、 ジイソプロピルェチルァミン、 ピリジン、 4一 （ジメチルァミノ） ピリジン等を用いることができる。
その他、 Lが水酸基である場合に縮合剤を用いる一般的なアミ ド結合形成反応 などや、 Lとしてスクシンィミジル基ゃィミダゾィル基などの脱離基である場合 の一般的なアミ ド結合形成反応も利用可能である。
触媒としては、 4一 （ジメチルァミノ） ピリジンなどが挙げられる。
反応温度 0 から 1 0 0 °Cで反応を行うことができる。
ステップ 3 b
化合物 4 aと化合物 5 bとを反応させ、 化合物 6 bを得るステップである。 反応は、 溶媒中、 塩基の存在下でァシルイソチオシアナートを作用させて行う ことができる。 ァシルイソチオシアナートは、 市販品、 又は適宜ァシルハライ ド とチオシアン酸塩とから反応溶液中で調製したものをそのまま用いることができ る。 ァシルイソチオシアナートは、 1〜 5当量用いることが好ましい。 チオシァ ン酸塩としては、 チォシアン酸カリウム、 チォシアン酸ナトリウム、 チォシアン 酸アンモニゥム等を用いることができ、 1〜 5当量用いることが好ましい。
溶媒としては、 例えばァセトニトリル、 N , N—ジメチルホルムアミ ド、 N— メチルピロリ ドン、テ トラヒ ドロフラン、エチレングリ コ一/レジメチノレエーテノレ、 1 , 4 _ジォキサン等を挙げることができる。
塩基としては、 例えばトリェチルァミン、 ジイソプロピルァミン、 ピリジン、 4 - (ジメチルァミノ） ピリジン等を用いることができる。 塩基は、 1 ~ 5当量用 いることが好ましい。
反応温度 0でから 1 5 0 °Cで反応を行うことができる。
ステップ 4 a
化合物 6 aのアミ ド基部分をアルキル化 ( R 2化) し、 化合物 7 aを得るステ- ップである。
反応は、 溶媒中、 塩基の存在下でアルキル化試薬 （R 2— X) を用いて行うこ とができる。 は、 脱離基となるハロゲン原子又はスルホン酸エステルである。 アルキル化試薬 （R 2 _ X ) は、 1〜5当量用いることが好ましい。
溶媒としては、例えば N， N—ジメチルホルムアミ ド、 N—メチルピロリ ドン、 テトラヒ ドロフラン、 エチレングリコーノレジメチノレエーテノレ、 1 ， 4ージォキサ ン、 ァセトニトリル、 エーテル等をあげることができる。
塩基としては、 水素化ナトリウム、 水素化力リ ウム、 水素化リチウム、 ブチル リチウム、 メチルリチウム、 フエニルリチウム、 リチウムジイソプロピルアミ ド 等を用いることができる。 塩基は、 1 〜 5当量用いることが好ましい。
反応温度 0 から 1 5 0 °Cで反応を行うことができる。
ステップ 4 b
化合物 6 aのアミ ド結合のカルボニル基をチォカルボ-ル基へと変換し、 化合 物 7 bを得るステップである。 反応は、 溶媒中、 チォカルボニル化試薬を用いて行う。 チォカルボニル化試薬 としては、例えば L a w e s s o n， s試薬（2, 4 - bis (4 - methoxyphenyl)- 1, 3， 2， 4 - dithiadiphosphetane 2, 4- disulfide)、 五硫化二リン （十硫化四リン、 P4 S 10) 等を用いることができる。 チォカルボニル化試薬は、 1〜5当量用いることが好 ましい。
溶媒としては、 例えばトノレェン、 ベンゼン、 ク口口ベンゼン、 キシレン、 N， N—ジメチルホルムァミ ド、 N—メチルピロリ ドン、 エチレングリコールジメチ ルエーテル、 1 , 4一ジォキサン、テトラヒドロフラン等を挙げることができる。 反応温度 0でから 200°Cで反応を行うことができる。
以上が本発明にかかる化合物 （ I ) の製造方法の代表例であるが、 本発明化合 物の製造における原料化合物 ·各種試薬は、 塩や水和物あるいは溶媒和物を形成 していてもよく、 いずれも出発原料、 使用する溶媒等により異なり、 また反応を 阻害しない限りにおいて特に限定されなレ、。用いる溶媒についても、出発原料、 試 薬等により異なり、 また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれ ば特に限定されないことは言うまでもない。 本発明に係る化合物 （ I ) がフリー 体として得られる場合、 前記の化合物 （ I ) が形成していてもよい塩又はそれら の水和物の状態に常法に従って変換することができる。
本発明に係る化合物 ( I ) が化合物 （ I ) の塩又は化合物 ( I ) の水和物とし て得られる場合、 前記の化合物 （ I ) のフリー体に常法に従って変換することが できる。
また、 本発明に係る化合物 （ I ) について得られる種々の異性体 （例えば幾何 異性体、 不斉炭素に基づく光学異性体、 回転異性体、 立体異性体、 互変異性体、 等） は、 通常の分離手段、 例えば再結晶、 ジァステレオマー塩法、 酵素分割法、 種々のクロマトグラフィー （例えば薄層クロマトグラフィー、 カラムクロマトグ ラフィー、 ガスクロマトグラフィー、 等） を用いることにより精製し、 単離する ことができる。
本発明の化合物は、 製薬上許容される担体と共に組成物とすることができる。 例えば、 周知の製剤技術を適用して、 医薬組成物としてよい。 本発明の医薬組成 物を、 抗ウィルス剤 （すなわち、 ウィルス感染症の予防剤又は治療剤）、 あるいは その他の医薬として使用する場合、 その投与形態としては、 例えば錠剤、 カプセ ル剤、 顆粒剤、 散剤、 丸剤、 トローチ剤若しくはシロップ剤等による経口投与、 又は注射剤、 ェァゾール剤、 座剤、 貼布剤、 パップ剤、 ローション剤、 リニメン ト剤、 軟膏剤、 若しくは点眼剤等による非経口投与を挙げることができる。 これ らの製剤は、 賦形剤、 滑沢剤、 結合剤、 崩壊剤、 安定化剤、 矯味矯臭剤、 希釈剤 などの添加剤を用いて周知の方法で製造される。
例えば、 賦形剤としては、 デンプン、 パレイショデンプン、 トウモロコシデン プン等のデンプン、 乳糖、 結晶セルロース、 リン酸水素カルシウム等を挙げるこ とができる。
コーティング^ Jとしては、 ί列えば、 ェチノレセルロース、 ヒ ドロキシプロピノレセ ノレロース、 ヒ ドロキシプロピ /レメチノレセゾレロース、 セラック、 タノレク、 カルナウ バロウ、 パラフィン等を挙げることができる。
結合剤としては、 例えばポリビエルピロリ ドン、 マクロゴール及び前記賦形剤 と同様の化合物を挙げることができる。
崩壊剤としては、 例えば前記賦形剤と同様の化合物及びクロスカルメロースナ トリ ゥム、 カルボキシメチルスターチナトリゥム、 架橋ポリビュルピロリ ドンの ような化学修飾されたデンプン · セルロース類を挙げることができる。
安定化剤としては、 例えばメチルパラベン、 プロピルパラベンのようなパラオ キシ安息香酸エステル類； クロロブタノール、 ベンジルアルコール、 フエニルェ チノレアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニゥム ； フエノール、 ク レゾールのようなフエエノール類； チメ口サール；デヒ ドロ酢酸；及ぴソルビン 酸を挙げることができる。
矯味矯臭剤としては、 例えば通常使用される、 甘味料、 酸味料、 香料等を挙げ ることができる。
また、 液剤を製造するための溶媒としては、 エタノール、 フエノール、 クロ口 クレゾール、 精製水、 蒸留水等を使用することができる。
界面活性剤又は乳化剤としては、 例えば、 ポリソルベート 8 0、 ステアリン酸 ポリオキシル 4 0、 ラウロマクロゴール等を挙げることができる。
本発明の医薬組成物を、 抗ウィルス剤として使用する場合、 本発明の化合物又 はその製薬上許容される塩の使用量は症状、 年齢、 投与方法等により異なる。 例 えば経口投与の場合、 患者 （温血動物、 特に人間） に対して 1 日あたり、 下限と して 0. 0 1 m g (好ましくは 0. 1 m g；)、 上限として、 2000 m g (好まし くは 5 00mg、 より好ましくは l O Omg) を 1回又は数回に分けて、 症状に 応じて投与することが望ましい。 静脈内投与の場合には、 成人に対して 1日当た り、 下限として 0. O O lmg (好ましくは 0. O lmg)、 上限として、 500 mg (好ましくは 50mg) を 1回又は数回に分けて、 症状に応じて投与するこ とが望ましい。
[対象ウィルス]
本発明の化合物を抗ウィルス剤として用いる対象となるウィルスとしては、 上 記のとおり、 フラビウィルス科及びオルトミキソウィルス科に属する RNAウイ ルスが挙げられる力 これらに限定されない。対象となる他のウィルスとしては、 例えば、 レトロウイルス科、 パラミキソウィルス科、 ァレナウィルス科、 フイロ ウイノレス科、 ラブドウイノレス科、 ブニァウィルス科、 コ口ナウイノレス科、 トガウ ィルス科、 レオウィルス科、 力リシウィルス科、 及びピコナウィルス科に属する RN Aウィルスが挙げられる力 好適なものはヒ ト病原性 RN Aウィルスである。
[ウィルス感染症]
本発明の化合物を、 その予防及び治療目的で使用することができるウィルス感 染症としては、 C型肝炎及び日本脳炎などのフラビウィルス感染症、 インフルェ ンザなどのオルトミキソウィルス感染症、 A I D Sなどのレトロウィルス感染症、 麻疹又は流行性耳下腺炎などのパラミキソウィルス感染症、 風疹などのトガウイ ルス感染症、 ロタウィルス感染症などが挙げられるが、 これらに限定されない。
[治療方法]
本発明には、 本発明にかかるウィルス感染症の予防又は治療剤を投与すること によるウィルス感染症の予防又は治療方法が包含される。 本発明のウィルス感染 症の予防又は治療剤は、 例えば、 体内濃度が 1 00 nM〜 1 mMの間のいずれか になるように、 間欠的若しくは持続的に、 経口、 経皮、 粘膜下、 皮下、 筋肉内、 血管内、 脳內、 又は腹腔内に投与することができる。 実施例
以下、 実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、 これらは例示的なもの であって、 本発明はこれら実施例に制限されるものではない。 なお、 本明細書中 に引用された文献は、 すべて本明細書の一部として組み入れられる。
下記で、カラムクロマトグラフィーはシリカゲル (MERCK 9385-5B, 70-230 mesh) を用いて行った。 薄層クロマトグラフィー （T L C ) は、 あらかじめシリカゲル が塗布されたガラスプレート （MERCK 5715， sil ica gel 60 F254) を用いて行った。 融点は、ャナコ社製微量融点測定装置 YANACO MP- 500D又は MP-J3を用いて測定し た。 ^ NMRスぺク トル及び13 C匪 Rスぺク トルは日本電子 （JE0L) 社製 JNM AL- 400 核磁気共鳴装置又はバリアン （Varian) 社製 MERCURY 300を用いて測定した。 丽 R スぺクトル測定用溶媒には、 CDC13又は CD30D (IS0TEC社製又は CIL社製） を使用 した。 化学シフトはテトラメチルシラン ( (CH3) 4Si) を内部標準 （0 ppm) として 相対的な値として表し、 結合定数 （J ) は Hzで示した。 略号 s、 d、 t、 m、 及び brはそれぞれ単重線、 二重線、 三重線、 四重線、 多重線、 及びブロードピークを 表す。 赤外分光スぺク トル （ I R ) は、 島津製作所製 FTIR- 8100A 又は IR Prestige- 21 を用いて測定した。 質量分析 （MS) は島津製作所製 GCMS- QP5050を 用いて測定した。 MSの分子イオンピークは整数値で表記した。 元素分析はャナコ 分析工業社製 MT- 6を用いて行った。
[参考例 1 ] 化合物 1の合成
化合物 1の代表的な合成法は以下の通りである。
〔化 1 1〕
Figure imgf000032_0001
参
Figure imgf000033_0001
化合物 1
[参考例 1一 1 A]
1 ー フノレオロ ー 2 — - ト ロ ー 4 一 ( ト リ フ /レオロ メ チノレ） ベンゼン (1-f luoro-2~nitro-4- (trif luoromethyl) benzene; (427 mg, 2. 04 mmol、 商用品) の N , N—ジメチノレホルムアミ ド (N, N-dimethylformamide (DMF) ) (I mL)溶液に 順次、 ピぺリジン (piperidine) (220 μ ΐ, 2. 22 mmol) 及び N， N—ジイソプロ ピノレエチノレアミン （N，N- di isopropylethylamine) (220 μ ΐ, 2. 40 mmol) を室温 で添加した。 混合物を 1時間撹拌した。 これに水を添加し、混合物をエーテル （X 3 ) で抽出した。 抽出された有機層は、 ブラインで洗浄、 Na2S04上で乾燥、 ブイ ルターにかけ、 減圧下で濃縮した。
残渣は、 シリカゲル力ラムクロマトグラフィー（40 g, hexane/ethyl acetate = 10/1)で精製し、 1一 [ 2—二トロ一 4一 （トリフルォロメチル） フエエル] ピぺ リンン (1 - [2 - nitro - 4 - (trifluo:romethyl) phenyl」 piperidine) (561 mg, 2. 04 mmol, quant. )をオレンジ色の固体として得た。
T L C及ぴ 匪 R (CDC13, 400 MHz)の結果は次の通りである。 ： TLC Rf 0. 47 (hexane/acetone = 16/1)； JH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 61-1. 68 (m, 2H, CH2)， 1. 72 (tt, 4H, J = 5. 3， 5. 3 Hz, 2CH2) , 3. 13 (t, 4H, J = 5. 3 Hz, 2CH2)， 7. 13 (d, 1H, J = 8. 8 Hz, aromatic) 7. 61 (dd, 1H, J = 2. 0, 8. 8 Hz, aromatic) , 8. 03 (d, 1H， J = 2. 0 Hz, aromatic) .
[参考例 1一 2 A]
参考例 1— 1 Aで得られた 1一 [ 2—二トロー 4— (トリフルォロメチル） フ ェ-ノレ] ピぺジシン ( 1_ [2— nitro— 4一 (trif luoromethyl) phenylj piperidine) (559 mg, 2.03 mmol)のメタノール（10 mL)溶液に順次、 濃塩酸（2.00 mL, 24.0 mmol) 及ぴ無水二塩化スズ（2.50 g， 13. lmraol)を 0°Cで添加した。混合物を室温に戻し、 1 7. 5時間撹拌した。 これに重炭酸ナトリウムの飽和水溶液を添加した。 混合 物を酢酸ェチル （X 3) で抽出した。 得られた有機層をブラインで洗浄し、 Na2S04 上で乾燥し、 濾過し、 減圧濃縮した。 残渣をシリカゲル力ラムクロマトグラフィ — (50 g, hexane/ethyl acetate = 14/1)で精製し、 2— ( 1—ピベリジ-ル） 一 5 一 ( ト リ フ ル ォ ロ メ チ ル ） ァ ニ リ ン ( 2 -（1-piperidinyl)- 5 - (trif luoromethyl) aniline) (448 mg, 1.83 mmol, 90.4%)を淡黄色の固体として 得た。
T L C及び NMR (CDC13, 400 MHz)の結果は次の通りである。 TLC Rf 0.30 (hexane/acetone = 18/1)； ¾ NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1.59-1.60 (m, 2H, CH2)， 1.71 (tt, 4H, J = 5. , 5.4 Hz, 2CH2) , 2.85 (brs， 4H, 2CH2) , 4.09 (brs, 2H, NH2), 6.92 (d, 1H, J = 1.9 Hz, aromatic), 6.97 (dd， 1H, J = 1.9, 8.4 Hz, aromatic) , 7.01 (d, 1H, J = 8.4 Hz, aromatic) .
[参考例 1一 3 A]
参考例 1一 2 Aで得られた 2一 ( 1―ピペリジニル) - 5 - (トリフルォロメ チル）ァニリン（2-（：^ 61^(1 1)-5-（1：1： 1ひ0進61:1^1)3 1 6) (173 mg, 0.708 mmol)のジクロロメタン (dichloromethane) (5 mL)溶液に順次、 イソニコチノィ ノレク口リ ド塩酸塩 (isonicotinoyl chloride hydrochloride) (151 mg, 0.850 mmol、 商用品）、 トリェチルァミン （triethylamine ) (450 μ L, 3.23 mmol)、 及び触媒 量の 4一 （ジメチルァミノ） ピリジン （4 -（dimethylamino) pyridine) を 0°Cで添 加した。 混合物を室温に戻し、 1 9. 5時間撹拌した。 これに水を添加し、 混合 物を酢酸ェチル（X 3 )で抽出した。 得られた有機層を重炭酸ナトリゥム飽和水溶 液で洗浄し、 Na2S04上で乾燥し、 濾過し、 そして減圧濃縮した。 残渣をシリカゲ ルカラムクロマトグラフィー（10 g, hexane/ethyl acetate = 1.5/1)及び再結晶 (へキサン) にて精製し、 N— [2— ( 1—ピペリジニル) - 5 - (トリフルォロ メ チル） フ ヱニル] イ ソニコチン酸ア ミ ド （N - [2 -（1- piperidinyl) - 5- (trif luoromethyl) phenyl] isonicotinamide) (ィ匕合物 1 ) (83.8 mg, 0.240 mmol, 33.9¾)を無色の固体として得た。 融点、 T L C、 NMR (CDCI3, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。 融点 96—98 °C； TLC Rf 0. 40 (hexane/ethyl acetate = 1/1)； XH NMR (CDC13， 400 MHz) δ 1. 67-1. 68 (m, 2H, CH2)， 1. 78 (tt, 4H, J = 5. 5, 5. 5 Hz, 2CH2) , 2. 88 (t, 4H, J = 5. 5 Hz, 2CH2) , 7. 29 (d， 1H, J = 8. 2 Hz, aromatic) , 7. 40 (dd， 1H， J = 1. 8, 8. 2 Hz, aromatic) , 7, 76 (dd， 2H， J = 2. 0, 4. 4 Hz, aromatic) , 8. 86 (dd, 2H, J = 2. 0， 4. 4 Hz, aromatic) , 8. 87 (d, 1H， J = 1. 8 Hz, aromatic) , 9. 53 (s, 1H， NH)； IR (KBr, cm"1) 497， 586， 648, 682, 750, 887， 881， 898, 918， 931, 1026， 1074, 1122， 1167, 1246, 1336, 1379, 1408, 1441, 1462, 1531, 1556, 1587， 1682， 2818, 2851, 2941, 3323.
[参考例 1一 1 B ]
1一クロロー 2—-トロー 4一 (トリフノレオロメチノレ） ベンゼン （1— chloro - 2 - nitro-4- (trifluoromethyl) benzene) (5. 00 g, 22. 4 mmol、 商用品） の N， N— ジメチルホノレムアミ ド (N, N-dimethylformamide (DMF) ) (7 mL) 溶液に、 ピペリ ジン （piperidine) (5. 50 mL, 55. 5贿 ol、 商用品） を 0 °Cにて加え、 混合物を 4 0分間撹拌した。これに水を加えたのち、混合物を酢酸ェチルで抽出した（ X 3 )。 得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、 濾 過を行い、減圧濃縮した。残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（200 g， へ キサン/酢酸ェチル = 8八） にて精製し、 1一 [ 2—二トロ _ 4一 （トリフルォロ メ チル） フエ二ノレ] ピぺリ ジン ( 1- [2-nitro-4- (trifluoromethyl) phenyl] piperidine) (6. 13 g, quant. ) をオレンジ色の固体として得た。
[参考例 1一 2 B ]
参考例 1一 1 Bで得られた 1一 [ 2—二トロー 4一 (トリフルォロメチル) フ ェ-ル]ピぺジジン（1 - [2- nitro - 4 - (trifluoromethyl) phenyl] piperidine) (6. 13 g, 22. 4 mmol)のジクロロメタン（dichloromethane) ( 10 mL)溶液に、濃塩酸（12. 2 mL, 146 mmol) 及び無水二塩化スズ （12. 7 g, 67. 2 mmol) を 0 °Cにて順次加え、 混合物を 7時間撹拌した。 これに水を加え、 混合物を酢酸ェチル （X 3 ) で抽出 した。 得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥 し、濾過を行い、減圧濃縮した。残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー（200 g, へキサン/酢酸ェチル = 15/1) にて精製し、 2— （1ーピペリジニル） 一 5— ( 卜 リ フノレオロメチノレ） ァニリ ン ( 2- (1-piperidinyl) -5- (trif luoromethyl) aniline) (4.55 g, 83.0%) を淡黄色の固体として得た。
[参考例 1一 3 B]
参考例 1一 2 Bで得られた 2— ( 1 一ピペリジニル) — 5— （トリフルォロメ チノレ)ァニリ V (2-(l-piperidinyl)-5- (trif luoromethyl) aniline; (4.45 g, 18.2 mmol) のジクロロメタン （dichloromethane) (10 mL) 溶液に、 イソェコチノイノレ クロリ ド塩酸塩 (isonicotinoyl chloride hydrochloride) (6.48 g, 36.4 mmol、 商用品）、 及ぴトリエチルァミン （triethylamine) (5.57 mL, 54.6 mmol)、 を 0 °C にて順次加え、 混合物を 0. 5時間撹拌した。 これに水を加え、 混合物を酢酸ェ チル （X 3) で抽出した。 得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸ナト リウムを用いて乾燥し、 濾過を行い、 減圧濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムク 口マトグラフィー （200 g， へキサン/酢酸ェチル = 1/1) 及び再結晶 （へキサン） にて精製し、 N— [2— （1ーピペリジニル） 一 5— （トリフルォロメチル） フ ェ-ノレ] イソニコチン酸アミ ド (N-[2- (1-piperidinyl) -5- (trif luoromethyl) phenyl] isonicotinamide) (ィヒ合物 1 ) (5.49 g, 86.3°/0) を無色の固体として得 た。
[参考例 2] 化合物 2の合成
〔化 1 2〕
参考例 1一 3 參考例 2
Figure imgf000036_0001
参考例 1一 3で得られた N— [2— （ 1ーピペリジニル） - 5 - (トリフルォ ロメ チル） フエニル] イ ソニコチン酸アミ ド ( N - [2- (1-piperidinyl) - 5- (.trif luoromethyl) phenyl] isonicotinamide; (ィ匕合物 1 ) (528 mg, 1.51 mmol) の トノレェン （2.5mL) 溶液に、 ： L a e s s o n s ^；桌 (328 mg, 0.8丄 1 mmol、 商用品）を加え、混合物を 1 0 0°Cにて 1 2時間還流撹拌した。室温に戻した後、 これに 2 M水酸化ナトリゥム水溶液を加えて溶液をアルカリ性にし、 さらに混合 物を 1 2M水酸化ナトリウム水溶液 （X 3) で逆抽出した。 得られた水層に 2M 塩酸を加えて溶液を酸性としたのち混合物をエーテル （X 3) で抽出した。 得ら れた有機層を飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、 濾過を 行い、 減圧濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （50 g, へキ サン/酢酸ェチル =1/1) にて精製し、 N— [ 2— （ 1ーピペリジニル） 一 5— （ト リ フ ルォ ロ メ チル） フ エ ニル ] イ ソ ニ コ チ ン酸チオア ミ ド ( -[2 ― (1一 piperidinyl)— 5— (trif luoromethyl) pheny丄」 isonicotinthioamide) (ィ匕合物 2 ) (186 mg, 33.7%) を無色の固体として得た。
融点、 TLC、 JH NMR (CDC13) 400 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。
融点 108-109 °C； TLC Rf 0.27 (へキサン/酢酸ェチル = 1/1) ； JH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1.61-1.62 (m, 2H, CH2) , 1.68 (tt, 4H, J = 5.0, 5.0 Hz, 2CH2) , 2.87 (t, 4H, J = 5.0 Hz, 2CH2) , 7.32 (d, 1H, J = 7.8 Hz, aromatic), 7.51 (dd, 1H, J = 1.6， 7.8 Hz, aromatic), 7.71 (dd, 2H, J = 1.6, 6.4 Hz, aromatic), 8.76 (dd, 2H , J = 1.6, 6.4 Hz, aromatic), 9.58 (d, 1H， J = 1.6 Hz, aromatic), 10.5 (s， 1H, NH)； IR (KBr, cm一1) 741, 826, 891, 1013, 1076, 1125, 1167, 1233, 1271, 1335, 1377， 1410, 1437, 1462, 1526, 1591， 1616, 2820, 2851, 2938, 3163. [参考例 3 ] 化合物 3の合成
〔化 1 3〕
Figure imgf000037_0001
チォシアン酸カリウム （potassium thiocyanate、 商用品） (198 mg, 2.04 mmol) 及ぴニコチノイノレク口リ ド塩酸塩（nicotinoyl chloride hydrochloride) (272 mg, 1.53 mmol, 商用品） のァセトニトリル （15 L) 溶液を 8 0 °Cにて 1時間撹拌し た。 混合物を室温に戻したのち、 これに参考例 1一 2で得られた 2— (1—ピぺ リ ジ -ル） - 5 - (ト リ フルォロメチル） ァニリ ン （2-(1- piperidinyl) - 5 - (trif luoromethyl) aniline ) ( 250 mg, 1.02 讓 1 ) 及び ト リ ェチルァ ミ ン (triethylamine) (285 /x L, 2.04mmol) を順次加え、 混合物を 50 °Cにて 1時間 撹拌した。 これを飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液へ注ぎ込み、 混合物をジク口口 メタン （X 3) で抽出した。 得られた有機層を水で洗浄後、 無水硫酸ナトリ ウム を用いて乾燥し、 濾過を行い、 減圧濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマト グラフィー （30 g， へキサン/酢酸ェチル /ジクロロメタン = 6/3/4) にて精製し、 1—ニコチノィルー 3一 [2— ( 1一ピぺリジル) 一 5— （トリフルォロメチル） フ エ - ノレ ] テ オ ウ レ ァ ( 1 - nicotinoyl- 3 L2_(l - piperidinyl) - 5 - (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (ィ匕合物 3 ) (70.7 mg, 30.1%) を淡黄色の 固体として得た。
融点、 TLC、 ¾ NMR (CD30D, 400 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。
融点 155-156°C； TLC Rf 0.21 (へキサン/酢酸ェチル /ジクロロメタン = 4/3/3) ； 'Η NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 1.61 (m, 2Η, J = 5.3 Hz, CH2), 1.81 (m, 4H, J = 5.3 Hz, 2CH2)， 2.89 (t， 4H, J = 5.3 Hz, 2CH2)， 7.24 (d, 1H, J = 8.4 Hz, aromatic) : 7. 7 (dd, 1H, J = 2.4, 8.4 Hz, aromatic), 7.52 (dd， 1H， J = 4.8, 8.0 Hz, aromatic), 8.23 (ddd, 1H, J = 1.7, 1.7, 8.0 Hz, aromatic), 8.89 (dd, 1H, J = 1.7， 4.8 Hz, aromatic), 9.09 (br s, 2H， aromatic, NH)， 9.18 (d, 1H， J = 2.4 Hz,' aromatic), 12.9 (br s， 1H， NH)； IR (KBr， cm—1) 644, 704, 731, 804, 826, 883， 908, 1026, 1078, 1123, 1165， 1204, 1221, 1271, 1298, 1335， 1439, 1479, 1531, 1587, 1614, 1678, 2814， 2855, 2940.
[参考例 4 ] 化合物 4の合成
〔化 1 4〕
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
化合物 4
1 一フルオロ ー 2 —二 ト ロー 4 — ( ト リ フ ノレオロメ チノレ） ベンゼン (l-Fluoro-2-nitro-4- (trifluoromethyl) benzene) (500 mg, 2. 39 mmol, 市 |R品） の N， N—ジメチルホルムアミ ド （Ν, Ν-dimethylformamide) (4 mL)溶液に、 へキ サメチレンィミン (Hexamethyleneimine) (673 μ L, 5. 98 mmol) を 0。Cで添カロし た。 混合物を室温に戻し、 1時間撹拌した。 これに水を添加し、 混合物を酢酸ェ チルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物を、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナト リウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムク 口マトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 10/1)により精製し、 1一 [ 2 —二 ト ロー 4 一 （ ト リ フノレオロメ チノレ） フヱニノレ] へキサメ チレンィ ミ ン (1 - L2-Nitro - 4：一 (trifluoromethyJJ pheny丄」 hexamethyleneimine) (696 mg, quant. ) を橙色油状物質として得た。
TLC及び1 H NMR (CDC13, 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0. 38 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； ¾ NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 58-1. 61 (m, 4H, 2CH2) , 1. 84 (s， 4H, 2CH2) , 3. 31 (t, 4H, J = 5. 6 Hz, 2CH2)， 7. 11 (d, 1H, J = 9. 2 Hz, aromatic) , 7. 53 (d， 1H， J = 9. 2 Hz, aromatic) , 7. 98 (s, 1H, aromatic) .
1一 [ 2—エトロ一 4一 (トリフルォロメチノレ) フエ-ル] へキサメチレンィ ン 、 1 - [2 - Nitro - 4 -（trif丄 uoiromethyl) phenyl] hexamethyleneimine ) (500 mg, 1. 73 mmol) のメタノール（5 mL)溶液に、 連続的に 1 2 N H C 1 (0. 94 mL, 11. 3 顧 ol)、 S n C 1 2 (1. 15 g， 6. 06 mmol)を 0 °Cで添加した。 混合物を室温に戻し、 2時間撹拌した。 これに炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液を添加後、 吸引濾過し た。 混合物は、 酢酸ェチルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物を、 飽和食塩水 で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は シリ力ゲルカラムク口マトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 15/1)で精製し、 2一 (ァザシク口へプタンー 1一ィル) — 5— （トリブノレオロメチル） ァニリン (2- (.Azacycloheptan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) ani l ine; (356 mg, 79. 8%) を 橙色油状物質として得た。
TLC及ぴ1 H NMR (CDC13, 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0. 38 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； JH NMR (CDC13， 400 MHz) δ 1. 72-1. 79 (m， 8H, 4CH2) , 3. 04 (t, 4H， J = 6. 0 Hz, 2CH2) , 4. 09 (s, 2H, NH2) , 6. 92 (d, 1H， J = 1. 2 Hz, aromatic) , 6. 93 (dd, 1H, J = 1. 2, 8. 0 Hz, aromatic) , 7. 05 (d, 1H, J = 8. 0 Hz, aromatic) .
チォシアン酸カリ ウム (Potassium thiocyanate) (97. 2 mg, 1. 00 mmol) のァ セト-トリル （acetonitrile) 溶液（15 mL) に、 ニコチノイルクロリ ド塩酸塩 (Nicotinoyl chloride Hydrochroride) (356 mg, 2. 00 mmol) をカロえ、 7 0。Cに て 4 0分間撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2 _ (ァザシクロヘプタン 一 1 一 ィ ル ） 一 5 — （ ト リ フ ル ォ ロ メ チ ル ） ァ - リ ン (2- (Azacycloheptan-1-yl) -5- (.trif luoromethyl) anil ine) (258 mg, 1. 00 mmol のァセ ト ニ ト リ ノレ ( acetonitrile ) (5 mL) 溶液、 ト リ ェチルァ ミ ン (Triethylamine) (279 μ ΐ, 2. 00 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を 5 0 °Cに加 熱して、 1時間撹拌した。 有機混合液を室温に戻し、 これに水を添加した。 混合 液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で 乾燥し、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムクロマトグ ラフィー（hexane/ethyl acetate = 2/1) で精製し、 N—ニコチノィルー N， 一 [ 2 一 (ァザシク口ヘプタン一 1一ィル) 一 5— （トリフルォロメチル） フエニル] テオヮレア (N- Nicotinoyl - N， - [2- (azacycloheptan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (化合物 4 ) (406 mg, 96. 1 。/。）を黄色の固体として得た。
融点、 TLC、 ln丽 R (CDC13， 400 MHz)及ぴ I Rの結果は次の通りである。
融点 42-45°C ； TLC Rf 0. 43 (hexane/ethyl acetate = 1/1) ； ¾ NMR (CDC13， 400 MHz) δ 1. 72-1. 74 (m, 4H, 2CH2)， 1. 79—1. 83 (m， 4H， 2CH2) , 3. 18 (t, 4H, J = 5. 6 Hz, 2CH2)， 7. 22 (d， 1H, J = 8. 4 Hz, aromatic) , 7. 44 (d， 1H， J = 8. 4 Hz, aromatic) , 7. 50 (m， 1H, aromatic) , 8. 20-8. 23 (m, 1H， aromatic) , 8. 68 (s， 1H, aromatic) , 8. 89 (dd, 1H, J = 1. 6, 4. 6 Hz, aromatic) , 9. 06 (s， 1H, NH) , 9. 17 (m， 1H, aromatic) , 12. 5 (s， 1H, NH)； IR (KBr, cm-1) 704, 739， 824, 876, 893， 1024, 1078, 1121, 1163， 1196, 1217, 1265, 1331， 1389， 1420, 1439, 1477, 1533, 1589， 1614, 1676, 2855, 2930， 3150.
[参考例 5 ] 化合物 5の合成
〔化 1 5〕
Figure imgf000041_0001
1ーフノレオロー 2—二トロー 4一（ト リフノレオ口メチノレ）ベンゼン（1-Fluoro - 2 - nitro-4- (trif luoromethyl) benzene) (550 mg, 2. 63 mmol, 販品)の N , N—シ メチ /レホルムァミ ド (N, N-dimethylformamide) (4 mL)溶液にヘプタメチレンイミ ン （Heptamethyleneimine) (760 μ L, 5. 98 mmol) を 0 °Cで添加した。 混合物を 室温に戻し、 1時間撹拌した。 これに水を添加し、 混合物を酢酸ェチルで 3回抽 出した。 抽出した有機混合物を、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾 燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣はシリカゲルカラムクロマトグラフィ 一 （hexane/ethyl acetate = 10/1)で精製し、 1一 [ 2—二トロー 4一 （トリフ ノレオ ロ メ チル） フ エ ニル ] ヘプ タ メ チ レ ンィ ミ ン ( 1- [2- Nitro - 4- (trif luoromethyl) henyl] heptamethyleneimine) (794 mg, quant. ) を橙色油状 物質として得た。
TLC及ぴ1 H NMR (CDC13, 400 MHz) の結果は次の通りである。 TLC Rf 0.44 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； ¾ NMR(CDC13, 400 MHz) δ 1.53 (ra, 6H, 3CH2) , 1.77 (m, 4H, 2CH2) , 3.40 (t, 4H, J = 5.8 Hz, 2CH2)， 7.14 (d， 1H, J = 9.0 Hz, aromatic), 7.54 (d, 1H, J = 9.0 Hz, aromatic), 7.90 (s， 1H, aromatic) .
1 - [ 2—二トロー 4— (トルフルォロメチル） フエニル] ヘプタメチレンィ ミン (1一 [2— Nitro— 4— (trif luoromethyl)pheny丄」 heptamethyleneimine) (500 mg, 1.65 mmol) のメタノール（6mL) 溶液に、連続的に 1 2 N HC 1 (890 L, 10.7 mmol)、 S n C 1 2 (1.10 g, 5.78 mmol) を 0 °Cで添加した。 混合物を室温に戻し、 1時間撹拌した。 これに炭酸水素ナトリ ウムの飽和水溶液を添加後、 吸引濾過し た。 混合物は、 酢酸ェチルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物は、 飽和食塩水 で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。
残渣はシリカゲルカラムクロマトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 15/1) で精製し、 2— (ァザシクロォクタン一 1一ィル) 一 5 -- (トリフルォロメチル) ァニリ ン ( 2- (Azacyclooctan-1-yl) -5- (.trif luoromethyl) aniline) (323 mg, 71.7%)を橙色油状物質として得た。
TLC及び1 H NMR (CDC13， 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0.44 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； Hi腿（CDC13, 400 MHz) δ 1. 69-1.80 (br s, 10H, 5CH2) , 2.98-3.10 (br s， 4H, 2CH2)， 4.21 (s， 2H, NH2) , 6.94-6.96 (m， 2H， aromatic), 7.12 (d, 1H， J = 8.3 Hz, aromatic).
チォシアン酸カリウム (Potassium thiocyanate) (97.2 mg, 1.00 mmol) のァ セ トニ ト リル （acetonitrile) 溶液（15 mL) に、 ニコチノイルクロ リ ド塩酸塩 (Nicotinoyl chloride Hydrochroride) (356 mg, 2.00 mmol) をカロえ、 7 0 °Cに て 4 0分間撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロオクタン 一 1 一ィル） 一 5— （トリフルォロメチル） ァニリン （2 -（Azacyclooctan- 1 - yl) -5-(trifluoromethyl)aniline ) (272 mg, 1.00 mmol) の ァ セ ト ュ ト リ ル (acetonitrile) (5 mL) 溶液、 トリェチルァミン（Triethylamine) (278 μΐ, 2.00 讓 ol) を連続的に加え、 反応溶液を室温で 1時間撹拌した。 有機混合液を室温に 戻し、 これに水を添加した。 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水 で洗浄、無水硫酸ナトリゥム上で乾燥、吸引濾過後、減圧下で濃縮した。残渣は、 シリカゲル力ラムクロマトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 2/1) で精製し、 N—ニコチノィル一 N， 一 [2— （ァザシクロオクタン一 1一ィル） ー 5— （ト リフルォロメチル） フエ-ノレ]チォゥレア (N-Nicotinoyl-N' - [2 -（azacyclooctan -1-yl) -5- (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (ィ匕合物 5 ) (405 mg, 92.8 %) を 黄色の固体として得た。
融点、 TLC、 XH NMR (CDC13, 400 MHz)及ぴ I Rの結果は次の通りである。
融点 102 - 105。C ； TLC Rf 0.45 (hexane/ethyl acetate = 1/1) ； l NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1.65-1.76 (m, 10H, 5CH2), 2.98-3.10 (m, 4H, 2CH2) , 7.22 (d, 1H， J = 8.8 Hz, aromatic), 7.44 (d, IH, J = 8.4 Hz, aromatic), 7.50-7.53 (m, IH, aromatic), 8.21 (m, IH, aromatic), 8.28 (s, IH, aromatic), 8.89 (d, IH, J = .8 Hz, aromatic), 9.11 (s， IH, NH) , 9.17 (d, 1H， J = 2.4 Hz, aromatic), 12.1 (s, IH, NH) ； 13C NMR (CDC13, 100 MHz) δ 25.3 (2C), 27.0, 27.4 (2C) , 53.7 (2C), 120.5, 122.6 (q, J = 32.8 Hz), 123.8, 124.5 (d, J = 4.1 Hz), 124.6 (d, J = 4.1 Hz) , 125.5, 127.8， 129.5, 135.4， 148.8, 150,5, 154.2, 165.1， 178.4； IR (KBr, cm— 610, 702， 739, 806， 858， 891, 962, 1024, 1082, 1117， 1165， 1206， 1271, 1333, 1395， 1420, 1530, 1589， 1616, 1676, 2851, 2924, 3156； MS (EI) ra/z 436 (M+) ·
[参考例 6 ] 化合物 6の合成
〔化 1 6〕
Figure imgf000043_0001
Figure imgf000044_0001
1 ーフ レオロ ー 2 —二 ト ロ ー 4 一 （ ト リ フスレオロメ チル） ベンゼン (l-Fluoro-2-nitro-4- (trif luoromethyl) benzene; (500 mg, 2. 39 mmol, 巿販品) の N , N—ジメチルホルムアミ ド (N, N-dimethylformamide) (4 mL)溶液にォクタ メチレンィミン（Octamethyleneimine) (855 ,し， 5. 98 mmol)を 0 で添加した。 混合物を室温に戻し、 1時間半撹拌した。 これに水を添加し、 混合物を酢酸ェチ ルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物は、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリ ゥム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣はシリカゲルカラムクロマ トグラフィー （hexane/ethyl acetate = 10/1)で精製し、 1— [ 2—-トロー 4 - (トリフルォロメチル) フェニル] ォクタメチレンィミン ( l- [2-Nitro-4- (,trif luoromethyl) phenyl] octamethyleneimine) (771 mg, quant. ) を澄色油状物 質として得た。
TLC及び1 H NMR (CDC13, 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0. 2 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 47-1. 60 (m, 8H， 4CH2) , 1. 70—1. 76 (m, 4H, 2CH2)， 3. 44 (t, 4H, J = 4. 0 Hz, 2CH2)， 7. 19 (d， 1H, J = 8. 0 Hz, aromatic) , 7. 56 (d, 1H, J = 8. 0 Hz, aromatic) , 7. 89 (s, aromatic) .
1 - [ 2—ュトロー 4一 （トリフ /レオロメチノレ） フエエグレ] オタタメチレンィ ミ ン ( 1 -し 2- Nitro - 4 - (trifluoromethyl) phenyl」octamethyleneimine ) (500 mg, 1· 58 mmol)のメタノール（6 mL) 溶液に、 連続的に 1 2 N H C 1 (860 μ ΐ, 10. 3 mmol) , S n C 1 2 (1. 05 g, 5. 53 mmol) を 0 °Cで添加した。 混合物を室温に戻し、 2時間撹拌した。 これに炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液を添加後、 吸引濾過し た。 混合物を酢酸ェチルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物は、 飽和食塩水で 洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣はシ リカゲノレカラムクロマトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 15/1)で精製し、 2一 (ァザシク口ノナン一 1—ィル) 一' 5— (トリフルォロメチル） ァニリン (2- (Azacyclononan-1-ylj -5- (trif luoromethyl) aniline; (200 mg, 44. 2%) ¾rfe 色油状物質として得た。
TLC及び1 H NMR (CDC13， 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0. 30 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； ¾ NMR (CDC13， 400 MHz) δ 1. 61-1. 71 (m, 12H， 6CH2) , 3. 01 (t, 4H, J = 5. 2 Hz, 2CH2) , 4. 25 (s, 2H， NH2) , 6. 93-6. 97 (m, 2H， aromatic) , 7. 18 (d, 1H, J = 8. 0 Hz, aromatic) .
チォシアン酸カリウム (Potassium thiocyanate) (34. 0 mg, 0. 350 mmol) のァ セ ト- トリル （acetonitri le) 溶液（6 mL) に、 ニコチノイルクロリ ド塩酸塩 (Nicotinoyl chloride Hydrochroride) (125 mg, 0. 700 mmol) をカロえ、 7 0 °Cに て 4 0分間撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロノナン一 1 一ィル） - 5 - (トリフルォロメチル） ァニリン (2- (Azacyclononan-1-yl) - 5 -（trifluo扇 ethyl) ani line ) (100 mg, 0. 349 mmol) のァセ トニ ト リ ル (acetonitri le) (2 mL) 溶液、トリェチノレアミン（Triethylamine) (97. 6 μ L, 0. 700 mmol) を連続的に加え、 室温で 1時間撹拌した。 有機混合液を室温に戻し、 これ に水を添加した。 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無 水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲ ルカラムクロマトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 2/1) で精製し、 N—二 コチノィルー N， 一 [ 2— （ァザシクロノナン一 1一ィル） 一 5— （トリフルォ 口メチル) フエニノレ] チォゥレア (N— Nicotinoyl一 N' - [2- (azacyclononan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (化合物 6 ) (146 mg, 92. 9 %) を黄色の 固体として得た。
融点、 TLC、 lH NMR (CDC13, 400 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。
融点 57-59 °C ； TLC Rf 0. 52 (hexane/ethyl acetate = 1/1) ； XR NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 58 (m， 4H, 2CH2) , 1. 67 (m, 8H, 4CH2) , 3. 31 (m, 4H, 2CH2) , 7. 22 (d, 1H, J = 8. 4 Hz, aromatic) , 7. 46 (dd, 1H， J = 1. 9, 8. 4 Hz, aromatic) , 7. 52 (dd, 1H， J = 5. 0, 7. 8 Hz, aromatic) , 7. 97 (d， 1H, J = 1. 9 Hz, aromatic) , 8. 20 (ddd, 1H, J = 1. 6, 2. 0, 7. 8 Hz, aromatic) , 8. 90 (dd, 1H, J = 1. 6, 5. 0 Hz, aromatic), 9.12 (s， 1H， NH), 9.16 (d， 1H, J = 2.0 Hz, aromatic) 11.9 (s， 1H, NH) ； 13C匪 R (CDC13, 100 MHz) δ 24.3 (2C), 26.6 (2C), 27.4 (2C), 53.5 (2C), 120.0， 122.3 (q, J = 32.8 Hz), 123.8， 125.0 (d, J = 4.1 Hz), 125.5， 126.5 (d, J = 4.1 Hz), 127.8, 129.2， 135.4， 148.8, 150.5, 154.2, 165.3， 179.4; IR (KBr， cm—り 610， 702, 741, 816， 887, 1024, 1084, 1117, 1165， 1219, 1271, 1333, 1395， 1420, 1526, 1589， 1616, 1674, 2853, 2924, 3155； MS (EI) m/z 450 (M+) , [参考例 7 ] 化合物 7の合成
〔化 1 7〕
Figure imgf000046_0001
チォシアン酸カリウム (Potassium thiocyanate) (70.9 mg, 0.730讓 ol) のァ セ トニトリル （acetonitrile) 溶液（15 mL) に、 イソニコチノイルクロリ ド塩酸 塩 sonicotinoyl chloride Hydroch oride) (261 mg, 1.47 讓 ol) をカロえ、 7 0°Cにて 4 0分間撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロォ クタンー 1一ィル）一 5—（トリフルォロメチル）ァニリン（2-(Azacyclooctan - 1一 yl) -5- (trif luoromethyl) aniline) (200mg, 0.730 mmol) のァセ 卜二 卜 リ ル (acetonitrile) (5 mL) 溶液、 ト リェチルァミン （Triethylamine) (205 μΐ, 1.47 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を 5 0 °Cに加熱して、 1時間撹拌した。 有機混 合液を室温に戻し、これに水を添加した。混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮し た。残渣は、シリカゲノレ力ラムクロマトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 1/1) で精製し、 N—イソ-コチノィルー N' — [ 2— (ァザシク口オクタン一 1一^ { ル） 一 5 ^ (トリフルォロメチル） フエニル] チォゥレア （N- Isonicotinoyl - N， - L2 -、azacyclooctan - 1 - yl) - 5 -（trif luoromethyl) phenyl] thiourea) 、化合物 7 ) (149 mg, 46.8 %) を黄色の固体として得た。 融点、 TLC、 JH NMR (CDCI3, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 136- 139°C ； TLC Rf 0. 33 (hexane/ethyl acetate = 1/1) ； XH NMR (CDC13， 400 MHz) δ 1. 65 (m, 6H， 3CH2)， 1. 75 (m， 4H, 2CH2)， 3. 29 (t， 4H, J = 5. 4 Hz, 2CH2) , 7. 23 (d， 1H， J = 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 45 (dd, 1H， J = 1. 7, 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 75 (d， 2H, J = 6. 0 Hz, aromatic) , 8. 31 (d, 1H, J = 1. 7 Hz, aromatic) , 8. 90 (d， 2H, J = 6. 0 Hz, aromatic) , 9. 11 (s, 1H, NH) , 12. 1 (s， 1H， NH)； IR (KBr, cm"1) 608, 656， 679, 702, 737, 756， 804, 839, 962， 1082, 1117, 1165, 1206, 1271, 1333, 1395, 1437, 1524, 1616, 1680, 2853， 2924, 3154； MS (EI) m/z 436 (M+) ； Anal. Calcd for C21H23F3N40S， C 57. 78, H 5. 31， N 12. 84. Found， C 57. 74, H 5. 42, N 12. 54.
[参考例 8 ] 化合物 8の合成
〔化 1 8〕
Figure imgf000047_0001
シアン酸ナトリ ウム （Sodium cyanate) (47. 5 mg, 0. 730 mmol) のァセ トニト リル （acetonitrile) 溶液（5 mL) に、 ニコチノイルクロリ ド塩酸塩 （Nicotinoyl chloride Hydrochroride) (130 mg, 0. 730 mmol) を加え、 Ί 0 °Cにて 1 . 5時間 撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロオクタン一 1一ィル） 一 5 — （ ト リ フ ノレオ ロ メ チ /レ） ァ ニ リ ン ( 2- (Azacyclooctan-1-yl) - 5 -（trifluo進 ethyl) ani l ine ) (lOOmg, 0. 367 mmol) の ァセ 卜 二 卜 リ ル (acetonitri le) (5 mL) 溶液、 トリェチルァミン（Triethylamine) (103 μ ΐ, 0. 730 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を 5 0 °Cに加熱して、 4時間撹拌した。 有機混 合液を室温に戻し、これに水を添加した。混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮し た。残渣は、シリ力ゲルカラムク口マ トグラフィー （hexane/ethyl acetate = 2/1) で精製し、 N— -コチノィルー N， 一 [ 2— (ァザシクロオクタン一 1 一ィル) 一 5 — （ ト リ フノレオロメ チル） フ エ 二ノレ] ゥ レア ( N-Nicot inoyl-N， - [2- (azacyclooctan-1-yl) -5- (trifluoromethyl) phenyl] urea) (ィ匕合物 8 ) (80. 1 mg, 51. 9 %) を無色の固体として得た。
融点、 TLC、 ¾ NMR (CDC13, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 193 - 196。C ； TLC Rf 0. 15 (hexane/ethyl acetate = 2/1) ； 'Η NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 73-1. 79 (m， 10H, 5CH2)， 3. 22 (t, 4H, J = 5. 1 Hz, 2CH2)， 7. 30 (d, 1H， J = 8. 2 Hz, aromatic) , 7. 36 (dd, 1H， J = 1. 9, 8. 5 Hz, aromatic) , 7. 45 (dd, IH, J" = 4. 8， 8. 0 Hz, aromatic) , 8. 36-8. 39 (m, 2H, aromatic) , 8. 85 (dd, IH, J = 1. 6， 4. 8 Hz, aromatic) , 9. 24 (d, IH, J = 2. 2 Hz aromatic) , 9. 96 (s, IH, NH) , 11. 3 (s, IH, NH)； IR (KBr, cm"1) 573, 677, 718, 754, 826， 895, 102,6, 1078, 1121, 1167， 1217, 1277, 1333, 1435, 1472, 1539, 1585, 1611, 1686, 2853, 2924, 3140 ； MS (EI) ra/z 420 (M+) ； Anal. Calcd for C21H23F3N402 ， C 59. 99, H 5. 51, N 13. 33. Found , C 59. 84, H 5. 64, N 13. 03.
[参考例 9 ] 化合物 9の合成
〔化 1 9〕
Figure imgf000048_0001
2 , 5 -ジフノレオ口-卜口ベンゼン（2， 5- Difluo進 itorobenzene) (1. 00 g， 6. 29 mmol, 市販品）の N， N—ジメチルホルムアミ ド （N， N- dimethylf ormamide) (2. 5 mL)溶液にヘプタメチレンィミン（Heptamethyleneimine) (1. 84 mL， 14. 5 mmol) を 0 °Cで添加した。 混合物を室温に戻し、 2時間撹拌した。 これに水を添加し、 混 合物を酢酸ェチルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物を、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣はシリカゲ ルカラムクロマトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 10/1)で精製し、 1一 （4 —フルォロ一 2—二トロフエニル）ヘプタメチレンィミン（1- (4 - Fluoro - 2 - nitro - phenyl) heptamethyleneimine) (quant. ) を橙色油状物質として得た。
TLC及び1 H匪 R (CDC13, 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0. 57 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； !H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 54-1. 73 (m, 10H, 5CH2) , (t, 4H, J = 5. 8 Hz, 2CH2) , 7. 12-7. 14 (m, 2H, aromatic) , 7. 34-7. 37 (m, 1H, aromatic) .
1 ― ( 4 ーフノレオロー 2 —ニ ト ロ フ エ二ノレ） ヘプタメ チレンィ ミ ン (1 -（4- Fluoro- 2 - nitro- phenyl) heptamethyleneimineノ (1. 50 g, 5. 95 mmol) のメ タノール（10 mL) 溶液に、 連続的に 1 2 N H C 1 (3. 22 mL, 38. 6 mmol) S n C 1 2 (3. 95 g, 20. 8 讓 ol) を 0 °Cで添加した。 混合物を室温に戻し、 ー晚撹拌 した。 これに炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液を添加後、 吸引濾過した。 混合物 は、 酢酸ェチルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物は、 飽和食塩水で洗浄、 無 水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣はシリカゲル カラムクロマトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 10/1)で精製し、 5—フル オロー 2 — (ァザシク 口オク タ ン一 1 一ィル） ァニ リ ン ( 5 - Fluoro - 2- (Azacyclooctan-l-yl) anil ine) (478 mg, 36. 1%)を黄色油状物質として得た。
TLC及び1 H NMR (CDC13， 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0. 45 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； JH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 71 (s, 10H, 5CH2) , 2. 95 (s， 4H, 2CH2) , 4. 23 (s, 2H， NH2)， 6. 35-6. 43 (m， 2H, aromatic) , 7. 12 (dd, 1H, J = 6. 0, 8. 7 Hz, aromatic) .
チォシアン酸カリウム （Potassium thiocyanate) (87. 5 mg, 0. 900 mmol) のァ セトニトリル （acetonitrile) 溶液 （10 mL) に、 ニコチノイルクロリ ド塩酸塩 (Nicotinoyl chloride Hydroch oride) (320 rag, 1. 80 mmol) をカロえ、 7 0 °Cに て 1時間撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロオクタン一 1一ィル） 一 5—フルォロァニジン (2- (Azacyclooctan-l-yl) -5-f luoroaniline) (200mg, 0.900 mmol) のァセトニトリル (acetonitrile) (5 mL) 溶液、 トリェチ ルァミン （Triethylamine) (251 U 1.80 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を 50°Cに加熱して、 4時間撹拌した。 有機混合液を室温に戻し、 これに水を添加 した。 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナト リウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムク 口マトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 2/1) で精製し、 N— -コチノイノレ 一 N， - [2— (ァザシク口オクタン一 1一ィル) 一 5— （トリフルォロメチル） フ エ 二ノレ] チォ ゥ レア ^ N-Nicotinoyl-N， - [2 - (azacyclooctan- 1 - yl) - 5 - (trif luoromethyl) henyl] thiourea) (ィ匕合物 9 ) (117 mg, 33.6 %) を黄色の固 体として得た。
融点、 TLC；、 NMR (CDC13， 400 MHz)及ぴ I Rの結果は次の通りである。
融点 122-124°C ； TLC Rf 0.30 (hexane/ethyl acetate = 1/1) ； XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1.75 (m, 10H, 5CH2) , 3, 11 (t, 4H, J = 5.4 Hz, 2CH2) , 6.92 (ddd, 1H, J = 0.9, 3.1， 10.4 Hz, aromatic), 7.22 (dd, 1H, J = 5.5, 8.7 Hz, aromatic), 7.51 (dd, 1H, J = 0.9, 4.8 Hz, aromatic), 8.21 (ddd, 1H, J = 1.7， 2.4, 8.7 Hz, aromatic), 8.47 (dd, 1H， J = 2· 8， 10.4 Hz, aromatic), 8.88 (dd, 1H, J = 1.7， 5.5 Hz, aromatic), 9.03 (s, 1H, NH), 9.16 (d, 1H， J = 2.4 Hz， aromatic), 12.7 (s, 1H, NH) ； IR (KBr, cm"1) 704, 737, 816, 862, 908, 1024, 1096, 1150, 1198， 1269, 1288, 1346, 1420, 1477, 1530, 1591， 1680, 2849, 2920, 3150; MS (EI) m/z 386 (M+) ； Anal. Calcd for C2。H23FN40S , C 62.15, H 6.00， N 14.50. Found , C 61.76, H 6.04, 14.27.
[参考例 1 0 ] 化合物 1 0の合成
〔化 20〕
Figure imgf000051_0001
6—メチルニコチン酸 (6-Methylnicotinoic acid) (252 mg, 1.84 mmol) の卜 ルェン溶液（5 mL) に、 N， N—ジメチルホルムアミ ド （N, N- dimethylf ormamide) (3滴）、 塩化チォニル （Thionyl chloride) (643 μ ΐ, 8.81 mmol) を順次加え、 6 0 °Cにて 4時間撹拌した。この有機混合溶液を室温に戻し、減圧下で濃縮した。 得られた残渣をァセトニトリル （acetonitrile) (5 mL) に懸濁し、 これにチオシ アン酸カリ ウム （Potassium thiocyanate) (178 mg, 1.84 mmol) をカ卩え、 6 0 °C にて 1時間撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロオクタン 一 1 一ィル) 一 5— （トリ フノレオロメチノレ） ァニリ ン (2-(Azacyclooctan - 1一 yl) -5- (trif luoromethyl) aniline) (200 mg, 0.734 mmol)、 ト リェチノレア ミン (Triethylamine) (256 μΐ, 1.84 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を室温にて、 ー晚撹拌した。 水を加え、 得られた有機混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。 そして、 濾過を行い、 減 圧濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （20 g， hexane/ethyl acetate = 2/1) にて精製し、 N— （ 6—メチルニコチノィル） 一 N' — [ 2— （ァ ザシクロオクタン一 1一ィル） 一 5— （トリフルォロメチル） フエニル] チォゥ レ ァ 、 N- (6 - Methylnicotinoy丄） - N -[2- i.azacyclooctan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (化合物 1 0 ) (I9.2 mg， 5· δΐ %) を赤色の固体として 得た。
融点、 TLC、 lR NMR (CDCI3, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 57- 60°C ； TLC Rf 0.26 (hexane/ethyl acetate = 2/1) ； XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1.73—1, 76 (m, 10H, 5CH2) , 2.69 (s， 3H, CH3), 3.31 (t, 4H, J = 5.8 Hz, 2CH2)， 7.21 (d, 1H, J = 8.5 Hz, aromatic), 7.35 (d, 1H， J = 8.0 Hz, aromatic), 7.44 (dd, 1H, J = 2.2, 8.5 Hz, aromatic), 8.10 (dd, 1H， J = 2.4, 8. 0 Hz, aromat i c) , 8. 25 (d, 1H, J = 2. 2 Hz, aromatic) , 9. 05 (d， 1H, J = 2. 4 Hz, aromatic) , 9. 18 (s, 1H， NH) , 12. 2 (s, 1H, NH)； IR (KBr, cm"1) 754, 893, 1024， 1082, 1119, 1167, 1206, 1271， 1333, 1375, 1437, 1489, 1533， 1597, 1614, 1674, 2853, 2924， 3150 ； MS (EI) m/z 450 (M+) .
[参考例 1 1 ] 化合物 1 1の合成
〔化 2 1〕
Figure imgf000052_0001
チォシアン酸アンモニゥム (Ammonium thiocyanate) (55. 6 rag, 0. 730 ramol) の アセトン溶液（5 raL) に、 4ーメ トキシベンゾィノレクロリ ド (4-Methoxybenzoyl chloride) (96. 5 μ ΐ, 0. 730 mmol) を加え、 6 0 °Cにて 1時間撹拌した。 この有 機混合液を室温に戻し、 2— (ァザシクロオクタン一 1一ィル) - 5 - (トリフ ノレ ^ メ チノレ ) ァ：^ リ ン ( 2- (Azacyclooctan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) ani l ine) (100 mg, 0. 367 mmol)、 トリェチルアミン (Triethylamine) (102 μ L, 0. 730 mmol) を連続的に加え、反応溶液を室温にて、 5時間撹拌した。水を加え、 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム 上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムクロマト グラフィー （hexaneん thyl acetate = 10/1) で精製し、 N— （6—メチルベンゾ ィル) 一 N ' — [ 2一 (ァザシクロオクタン一 1一ィル） 一 5— (トリフルォロ メチノレ） フエ二ノレ]チォゥレア (N - (6- ethylbenzoyl) - N， - [2 - (azacyclooctan-1- yl) -5- (trif luoromethyl) henyl] t iourea) (ィ匕合物 1 1 ) (80. 4 rag, 48. 7 %) を 無色の固体として得た。
融点、 TLC、 XH NMR (CDC13, 400 MHz)及ぴ I Rの結果は次の通りである。
融点 39- 44°C ； TLC Rf 0. 25 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； JH NMR (CDC13， 400 MHz) δ 1. 64-1. 75 (m, 10H, 5CH2)， 2. 46 (s, 3H, CH3)， 3. 31 (t， 4H, J = 5. 8 Hz, 2CH2) , 7.19 (d， 1H, J = 8.5 Hz, aromatic), 7.34—7.36 (AA， BB， , 2H, aromatic), 7.43 (dd, 1H， J = 2.2, 8.5 Hz, aromatic), 8.08-8.11 (AA， BB' ， 2H, aromatic), 8.21 (d, 1H, J = 2.2 Hz, aromatic), 9.13 (s, 1H, NH) , 12.3 (s， 1H, NH) ； 13C丽 R (CDC13, 100 MHz) δ 21.7, 25.3 (2C), 27.0， 27.4 (2C), 53.7 (2C)， 120.2, 122.3 (q, J = 32.8 Hz)， 124.4 (d， J = 3.3 Hz), 125.0 (d， J = 3.3 Hz), 125.6, 127.6 (2C), 128.7, 129.5, 129.9 (2C)， 144.9, 150.5, 166.5, 178.9； IR (KBr, cm一1) 608, 746, 831, 891， 1080, 1119, 1165, 1206， 1263， 1333， 1395, 1452, 1499, 1524, 1611, 1670, 2851, 2924, 3140 ； MS (EI) m/z 449 (M+) ； Anal. Calcd for C23H26F3N30S , C 61.45， H 5.83， N 9.35. Found， C 61.51, H 5.83， N 9.50.
[参考例 1 2] 化合物 1 2の合成 .
〔化 2 2〕
Figure imgf000053_0001
チォシアン酸アンモニゥム (Ammonium thiocyanate) (55.6 mg, 0.730 ramol) の アセ トン溶液（5 mL) に、 4ーメチルべンゾイルクロ リ ド (4-Methylbenzoyl chloride) (125 mg, 0.730 mmol) を加え、 6 0 °Cにて 1時間撹拌した。 この有機 混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロオクタン一 1一ィル） 一 5— （トリフル ォロメチ /レ) フ -ジン (2- (Azacyclooctan-1-yl) -5- (.trif luoromethyl) aniline; (100 mg, 0.367 mmol)、 トリェチルァミン（Triethylamine) (102 μ L, 0.730 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を室温にて、 5時間撹拌した。 水を加え、 混合液を酢 酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 5/1) で精製し、 N— (4—メ トキシベンゾィル） 一 N， 一 [ 2— (ァザシク口オクタン一 1 一ィル) 一 5— （トリフルォロメチル） フエ -ル] チォゥレア ( N- (4-Methoxybenzoyl) -N ' - [2 - (azacyclooctan - 1 - yl) - 5 - (trif luoromethyl) henyl] thiourea) (化合物 1 2 ) (77. 8 mg, 45. 5 %) を無色の 固体として得た。
融点、 TLC、 lR NMR (CDC13, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 39-44°C ； TLC Rf 0. 33 (hexane/ethyl acetate = 5/1) ； ¾ NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 61-1. 75 (m, 10H, 5CH2)， 3. 32 (t, 4H, J = 5. 8 Hz, 2CH2)， 3. 91 (s， 3H, OCH3) , 7. 01-7. 03 (AA， BB， ， 2H, aromatic) , 7. 19 (d, 1H， J = 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 42 (dd, 1H, J = 2. 2, 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 88-7. 90 (AA' BB' , 2H, aromatic) , 8. 20 (d， 1H, J = 2. 2 Hz, aromatic) , 9. 09 (s, 1H, NH) , 12. 3 (s, 1H, NH)； IR (KBr, cm—1) 611, 702, 739, 764, 814， 843, 891， 1028, 1080, 1117, 1173, 1206, 1261, 1333， 1395, 1499, 1533, 1576, 1605, 1668, 2847, 2926, 3142 ； Anal. Calcd for C23H26F3N302S , C 59. 34, H 5. 63, N 9. 03. Found , C 59. 00, H 5. 57, N 8. 96.
[参考例 1 3 ] 化合物 1 3の合成
〔化 2 3〕
Figure imgf000054_0001
チォシアン酸アンモ -ゥム (Ammonium thiocyanate) (55. 6 mg, 0. 730 mmol) の アセ トン溶液（5 mL) に、 4一フルォ口べンゾィノレクロリ ド （4—Fluorobenzoyl chloride) (86. 3 L, 0. 730 mmol) を加え、 6 0 °Cにて 1時間撹拌した。 この有 機混合液を室温に戻し、 2一 (ァザシクロオクタン一 1一ィル) 一 5— （トリフ ルォロ メ チル) ァ - ジ ン ( 2- (Azacyclooctan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) ani l ine) (100 rag, 0. 367 mmol)、 トリェチノレァミン (Triethylamine) (102 ιχ L, 0. 730讓 ol) を連続的に加え、反応溶液を室温にて、 5時間撹拌した。水を加え、 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム 上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムクロマト グラフィー （hexane/ethyl acetate = 10/1) で精製し、 N— （4一フルォロベン ゾィル） - N ' 一 [ 2— (ァザシクロオクタン一 1—ィル) - 5 - (トリフルォ 口メチル)フエ二ノレ〕チォゥレア (N- (4-Fluorobenzoyl) -N' - [2- (azacyclooctan-l- yl) -5- (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (ィヒ合物 1 3 ) (93. 9 mg, 56·. 4 %) を 無色の固体として得た。
融点、 TLC、 XH匪 R (CDC13, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 95-97 °C ； TLC Rf 0. 29 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； ¾ NMR (CDC13, 400 MHz) 6 1. 65-1. 75 (m, 10H, 5CH2) , 3. 31 (t， 4H, J = 5. 5 Hz, 2CH2)， 7. 19-7. 22 (m, 2H, aromatic) , 7. 24 (s, 1H, aromatic) , 7. 43 (dd， 1H, J = 2. 2, 8. 5 Hz, aromatic) , 7. 95 (dd， 2H, J = 5. 1, 8. 9 Hz, aromatic) , 8. 24 (d， 1H， J = 2. 2 Hz, aromatic) , 9. 01 (s, 1H, NH)， 12. 2 (s， 1H， NH)； IR (KBr, cm"1) 604, 700, 762, 816， 849, 891， 1080, 1119， 1161， 1206, 1240, 1263, 1333, 1345, 1499, 1530， 1603, 1672， 2853, 2924, 3154 ； Anal. Calcd for C22H23F4N30S ， C 58. 27， H 5. 11， N 9. 27. Found , C 58. 49, H 5. 28, N 9. 40.
[参考例 1 4 ] 化合物 1 4の合成
〔化 2 4〕
Figure imgf000055_0001
チォシアン酸アンモニゥム （Ammonium thiocyanate) (55. 6 mg, 0. 730 mmol) の アセ トン溶液（5 mL) に、 塩化ベンゾィル （Benzoyl chloride) (84. 7 μ L, 0. 730 讓 ol) を加え、 6 0 °Cにて 1 . 5時間撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2 - (ァザシクロォクタンー 1一ィル) 一 5— （トリフルォロメチル） ァニリン (2- Azacyclooctan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) ani l ine) (100 mg, 0. 367 mmol)、 トリェチルァミン （Triethylamine (102 μ ΐ, 0. 730 mmol) ) を連続的に加え、 反 応溶液を室温にて、 一晩撹拌した。 水を加え、 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出し た後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で 濃縮した。残渣は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 8/1) で精製し、 N—べンゾィルー N ' — [ 2— （ァザシクロオクタン一 1ーィ ル） 一 5— （ト リ フルォロメチル） フエニル] チォゥレア （N- Benzoy!L - N， - [2- (azacyclooctan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (ィ匕合物 1 4 ) (95. 2 mg, 59. 6 %) を無色の固体として得た。
融点、 TLC、 ¾ NMR (CDC13, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 92- 93°C ； TLC Rf 0. 20 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； JH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 65-1. 76 (m， 10H, 5CH2) , 3. 31 (t, 4H, J = 5. 8 Hz, 2CH2) , 7. 20 (d, 1H， J = 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 43 (dd, 1H, J = 2. 0, 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 54-7. 58 (m, 2H, aromatic) , 7. 65-7. 69 (m, 1H， aromatic) , 7. 92 (d, 2H， J = 7. 5 Hz, aromatic) , 8. 23 (d, 1H, J = 2. 0 Hz, aromatic) , 9. 16 (s, 1H, NH) , 12. 3 (s, 1H, NH) ； 13C雇 R (CDC13) 100 MHz) δ 25. 3 (2C) , 27. 1, 27. 4 (2C) , 53. 7 (2C) , 120. 3, 122. 5 (q， J = 33. 6 Hz) , 124. 4 (d, J = 3. 3 Hz) , 124. 9 (d, J = 3. 3 Hz) , 125. 5， 127. 5 (2C)， 129. 2 (2C)， 129. 5, 131. 6, 133. 8， 150. 6, 166. 5, 178. 8； IR (KBr, cm"1) 606, 656， 689， 708, 806, 1080, 1117, 1148， 1165， 1206， 1263, 1333， 1395, 1449, 1489, 1518, 1578, 1616, 1672, 2851, 2924, 3146 ； MS (EI) m/z 435 (M+) ； Anal. Calcd for C22H24F3N30S , C 60. 67, H 5. 55， N 9. 65. Found , C 60. 30， H 5. 61, N 9. 54.
[参考例 1 5 ] 化合物 1 5の合成
〔化 2 5〕
Figure imgf000056_0001
チォシアン酸アンモ -ゥム (Ammonium thiocyanate) (55. 6 mg， 0. 730讓 ol) の アセ トン溶液（5 mL) に、 2—メ 1、キシベンゾィノレク口リ ド (2- ethoxybenzoyl chloride) (109 β ΐ, 0. 730 mmol) を加え、 6 0 °Cにて 1時間撹拌した。 この有 機混合液を室温に戻し、 2— （ァザシクロオクタン一 1一ィル） 一 5— （トリフ ノレォロメチノレ ァニ ン (2- (azacyclooctan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) ani l ine) (100 mg， 0. 367 mmol)、 ト リエチルァミン (Triethylamine) (102 μ, L, 0. 730 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を室温にて、 一晩撹拌した。 水を加え、 混合液を酢酸 ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸 引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (hex騰 /ethyl acetate = 5/1) で精製し、 N— ( 2—メ トキシベンゾィノレ) - N ' 一 [ 2— （ァザシクロオクタン一 1一ィル） - 5 - (トリフルォロメチノレ） フエ ニル] チォゥレア ( N- (2-Methoxybenzoyl) -N ' - [2 -（azacyclooctan -ト yl) - 5 - (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (ィ匕合物 1 5 ) (51. 5 mg, 30. 1 %) を無色の 固体として得た。
融点、 TLC、 ¾ NMR (CDC13, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 30- 31で ； TLC Rf 0. 30 (hexane/ethyl acetate = 5/1) ； ¾ NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 64-1. 75 (m, 10H, 5CH2) , 3. 31-3. 34 (m, 4H, 2CH2) , 4. 11 (s， 3H， 0CH3) ,
7. 07 (d， 1H， J = 8. 8 Hz, aromatic) , 7. 17 (d, 1H， J = 8. 5 Hz， aromatic) , 7. 17 (d, 1H, J = 7. 7 Hz, aromatic) , 7. 41 (dd, 1H， J = 1. 7, 8. 8 Hz, aromatic) , 7. 61 (ddd, 1H， J = 1. 7, 7. 7， 8. 5 Hz, aromatic) , 8. 19 (d, 1H， J = 1. 7 Hz, aromatic) ,
8. 22 (dd, 1H， J = 1. 7， 7. 7 Hz, aromatic) , 11. 2 (s, 1H, NH)， 12. 4 (s, 1H, NH)； IR (KBr, cm一1) 600, 615， 648, 698， 756, 814, 858， 891， 964, 1018, 1084, 1117, 1163, 1248, 1290， 1331, 1395， 1512， 1578, 1603, 1614, 1663, 2849, 2924, 3136, 3316 ； Anal. Calcd for C23H26F3N302S， C 59. 34, H 5. 63, N 9. 03. Found， C 60. 23, H 5. 93, N 8. 64.
[参考例 1 6 ] 化合物 1 6の合成
〔化 2 6〕
Figure imgf000058_0001
1 一 フルオロ ー 2 —二 ト ロ ー 4 — ( ト リ フノレオロ メ チ /レ） ベンゼン (l-Fluoro-2-nitro-4- (trifluoromethylj benzene) (1. 50 g, 7. 17 mmol) のメタ ノール（5 niL) 溶液に、 連続的に 1 2 N H C 1 (3. 89 mL, 46. 6 mmol)、 S n C l 2 (4. 76 g, 25. 1 mmol) を 0 °Cで添加した。 混合物を室温に戻し、 ー晚撹拌した。 これに炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液を添加後、 吸引濾過した。 混合物は、 酢 酸ェチルで 3回抽出した。 抽出した有機混合物は、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸 ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣はシリカゲルカラム ク 13マトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 10/1)で精製し、 2—フノレ才口一 5— (トリフノレオ口メチル） ァニリ ン (2-Fluoro-5- (trifluoromethyl) ani l ine) (942 mg, 73. 4%)を橙色油状物質として得た。
TLC及ぴ1 H NMR (CDC13， 400 MHz) の結果は次の通りである。
TLC Rf 0. 37 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 3. 90 (s, 2H, NH2) , 6. 96-7. 26 (m, 3H, aromatic) .
チォシアン酸アンモ-ゥム (Ammonium thiocyanate) (85. 3 mg, 1. 12 mmol) の アセ トン溶液（5 mL) に、 ニコチノイルクロリ ド塩酸塩 （Nicotinoyl chloride Hydrochroride) (199 mg, 1. 12 mmol) を加え、 6 0 °Cにて 1時間撹拌した。 この 有機混合液を室温に戻し、 2—フルオロー 5— （トリフルォロメチル） ァ-リン (2-Fluoro-5- (trifluoromethyl) ani l ine) (100 mg, 0. 558 mmol) , 卜リエチノレア ミン （Triethylamine) (155 μ ΐ, 1. 12 mmol) を連続的に加え、 反応溶液を室温 にて、 一晩撹拌した。 水を加え、 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食 塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残 、渣は、 シリカゲノレカラムクロマトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 2/1) で 精製し、 N— -コチノィルー N' — [ 2—フルオロー 5— （トリフルォロメチル） フエニル] チォゥレア (N-Nicotinoyl-N ' -[2-f luoro-5- (trif luoromethyl) phenyl] thiourea) (化合物 1 6 ) (128 mg, 66.8 %) を無色の固体として得た。 融点、 TI 、 ¾ NMR (CDC13, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 163- 165°C ； TLC Rf 0.31 (hexane/ethyl acetate = 2/1) ； XH NMR (CDC13， 400 MHz) δ 7.32 (t, 1H, J = 9.2 Hz, aromatic), 7.51-7.57 (m, 3H， aromatic), 8.23 (ddd, 1H, J = 1.7, 2.2, 8.1 Hz, aromatic), 8.92 (d, 1H, J = 2.4 Hz, aromatic), 9.17 (d， 1H, J = 2. Hz, aromatic), 9.20 (s， 1H, NH) , 12.7 (s, 1H, NH) ； IR (KBr, cm—り 702, 729, 800, 887, 901, 1030, 1070, 1107， 1121， 1148, 2265, 1202, 1265, 1281, 1310， 1335， 1349, 1422, 1443, 1483, 1551， 1607, 1668, 3007, 3181.
[参考例 1 7 ] 化合物 1 7の合成
〔化 2 7〕
Figure imgf000059_0001
3—フランカ/レポン酸 (3-Furancarboxyl ic acid) (100 mg, 0.892 mmol) のン クロ pメタン（dichloromethane)溶液（5 niL) に、塩ィ匕チ才ュノレ（Thionyl chloride) (130 μΐ, 1.78 mmol) を加え、 6 0 °Cにてー晚撹拌した。 この有機混合溶液を室 温に戻し、 減圧下で濃縮した。 得られた残査をァセトニ トリル （acetonitrile) (5mL) に懸濁し、 これにチォシアン酸カリウム （Potassium thiocyanate) (95.4 mg, 0.982 mmol) を加え、 6 0 °Cにて 1時間撹拌した。 この有機混合液を室温に 戻し、 2— (ァザシクロオクタン一 1 一ィル） 一 5— （トリフルォロメチル） ァ -リン (2- (Azacyclooctan-l-yl) -5- (trif luoromethyl) ani line) (100 mg, 0. 367 mmol) を加え、 反応溶液を室温にて、 一晩撹拌した。 水を加え、 得られた有機混 合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で洗浄、 無水硫酸ナトリウムに て乾燥した。 そして、 濾過を行い、 減圧濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロ マトグラフィー （hexane/ethyl acetate = 10/1) にて精製し、 N— （3—フラニ ル） 一 N， 一 [ 2— (ァザシクロオクタン一 1一ィル) - 5 - (トリフルォロメ チル） フエニル] チォゥレア (N -（3 - Franyl) - N， - [2- (azacyclooctan-1-yl) - 5 - rif luoromethyl) henyl] thiourea) (化合物 1 7 ) (quant. ) を黄色の固体とし て得た。
融点、 TLC、 JH NMR (CDC13, 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
融点 42-45°C ； TLC Rf 0. 24 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； !H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 73-1. 74 (br s, 10H, 5CH2)， 3. 29-3. 32 (m, 4H, 2CH2)， 6. 77 (d, 1H, J = 1. 2 Hz, aromatic) , 7. 18 (d, 1H， J = 8. 5 Hz, aromatic) , 7. 42 (dd， 1H, J = 1. 2， 8. 5 Hz, aromatic) , 7. 55 (s, 1H, aromatic) , 8. 16 (s, 1H, aromatic) , 8. 18 (s， 1H， aromatic) , 8. 78 (s, 1H， NH) , 12. 1 (s， 1H， NH) ； 13C NMR (CDC13， 100 MHz) δ 25. 2 (2C) , 26. 9， 27. 3 (2C)， 53. 5 (2C)， 108. 1， 120. 0, 120. 7, 122. 1 (q， J = 33. 6 Hz) , 124. 4 (d， J = 4. 1 Hz) , 125. 1 (d, J = 4. 1 Hz) , 125. 5， 129. 1， 144. 8, 147. 1， 150. 3, 161. 7, 178. 7； IR (KBr, cm— 602, 698, 754, 818, 853， 874, 891， 970, 1018, 1082， 1117， 1163, 1207, 1263， 1331, 1395, 1454, 1526， 1570, 1616, 1674, 2853, 2926, 3138 ； MS (El) m/z 425 (M+) ； Anal. Calcd for C20H22F3N3O2S， C 56. 46, H 5. 21, N 9. 88. Found， C 56. 12， H 5. 20, N 9. 72. [参考例 1 8 ] 化合物 1 8の合成
〔化 2 8〕
Figure imgf000060_0001
チォシアン酸カジ ゥム (Potassium thiocyanate) (98. 2 mg, 1. 01 mmol) のジ クロロメタン (dichloromethane) 溶液（5 mL) に、 3—チォフェンカノレポ-ノレク ロリ ド (3-Thiophenecarbonyl chloride) (135 mg, 0. 920 mmol) をカロえ、 6 0 °C にてー晚撹拌した。 この有機混合液を室温に戻し、 2— (ァザシクロオクタン一 1一ィル) 一 5— ( ト リ フルォロメチノレ) ァニリ ン (2 - (Azacyclooctan-1-yl) - 5 - (trifluoromethyl) aniline) (100 mg, 0. 367 mmol) をカロえ、反応、溶液を室温にて、 ー晚撹拌した。 水を加え、 混合液を酢酸ェチルで 3回抽出した後、 飽和食塩水で 洗浄、 無水硫酸ナトリウム上で乾燥、 吸引濾過後、 減圧下で濃縮した。 残渣は、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (hexane/ethyl acetate = 10/1) で精製し、 N— (チオフラン一 3—ィル) 一 N， 一 [ 2— （ァザシクロオクタン一 1一ィル） 一 5— （トリフルォロメチル） フエニル] チォゥレア （N- (Thiofuran - 3 - yl) - N， 一し 2— (azacyclooctan— 1一 yl)— ΰ— (trifluoromethy丄ノ phenylj thioureaノ (ィ匕合物 1 8 ) (157 mg, 96. 9 %) を黄色の固体として得た。
融点、 TLC、 ¾ NMR (CDC13) 400 MHz)及び I Rの結果は次の通りである。
S虫点 134 - 137°C ； TLC Rf 0. 22 (hexane/ethyl acetate = 10/1) ； XH NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1. 66-1. 75 (m, 10H, 5CH2)， 3. 30-3. 33 (m， 4H, 2CH2) , 7. 19 (d, 1H, J = 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 2 (dd, 1H， J = 1. 7， 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 47 (dd, 1H， J = 2. 9, 5. 1 Hz, aromatic) , 7. 53 (dd, 1H, J = 1. 4, 5. 1 Hz, aromatic) , 8. 15 (dd, 1H, J = 1. 4, 2. 9 Hz, aromatic) , 8. 20 (d, 1H， J = 1. 7 Hz, aromatic) , 8. 98 (s, 1H, NH) , 12. 2 (s, 1H, NH) ； 13C NMR (CDC13， 100 MHz) δ 25. 2 (2C) , 26. 9, 27. 3 (2C) , 53. 5 (2C) , 120. 1, 122. 2 (q, J = 33. 6 Hz) , 124. 4 (d, J = 3. 3 Hz) , 125. 0 (d, J = 3. 3 Hz) , 125. 5, 126. 0, 127. 8, 129. 2， 131. 8， 134. 5, 150. 3, 161. 6, 178. 8 ； IR (KBr, cm— 745, 814, 1082, 1117, 1146, 1165, 1209, 1263, 1333, 1396, 1412, 1523, 1616, 1668, 2851, 2926, 3111； MS (EI) m/z 441 (M+) , [参考例 1 9 ] 化合物 1 9の合成
〔化 2 9〕
Figure imgf000062_0001
Figure imgf000062_0002
1 一フルオロー 2 — - ト ロ 一 4 一 ( ト リ フノレオロメ チノレ) ベンゼン (1-f luoro-2-nitro-4~ (trif luoromethyl) benzene; (2.50 g, 12.0 mmolN の N, N—ジメチルホルムアミ ド （N，N— dimethylformamide (DMF) ) (6.0 raL) 溶 液に順次、 t r a n s一デカヒドロキノ ])ン (trans-decahydroquinoline) (1.84 g， 13.2 mmol、 商用品） 及び N , N—ジイ ソプロ ピルェチルァ ミ ン (N, N-diisopropylethylamine) (2.51 mL， 14.4 mmol) を室温で添加した。 混合物 を室温にて 1 9時間撹拌した。この混合溶液を水へ注ぎ込、混合物をエーテル（X 3) で抽出した。 抽出された有機層は、 水 （X 3)、 ブライン （X I) で順次洗浄 し、 Na2S04上で乾燥し、 フィルターにかけ、 減圧下で濃縮した。
残渣を、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (220 g， hex騰 /diethyl ether = 50/1) で精製し、 4一 (t r a n s一 2—ァザビシク口 [4. 4. 0 ] デカン 一 2—ィノレ) 一 3— ^ 卜 Pベンゾ 卜 ジ フノレ才ジ ) ( 4- (trans-2-azabicyclo [4.4.0]decan-2-yl)-3-nitrobenzotrifluoride) (3.57 g, 10.9 mmol, 91.8 %) を橙色油状物質として得た。
TLC、 ¾ NMR (CDC13) 300 MHz) 及ぴ I Rの結果は次の通りである。
TLC Rf 0.71 (hexane/ethyl acetate = 9/1) ； XH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 0.85—1.53 (m, 7H, 3CH2, CH)， 1.58 - 1.88 (m, 6H, 3CH2) , 2.50 (ddd, 1H， J = 3.3, 9.0， 11.1 Hz, CH), 2.63 (ddd, 1H, J = 3.0, 11.1， 11.1 Hz, CH), 3.12-3.26 (m, 1H， CH), 7.49 (d, 1H, J = 8.4 Hz, aromatic), 7.73 (dd, 1H, J = 2.0, 8.4 Hz, aromatic), 7.82 (d, 1H, J = 2.0 Hz, aromatic)； IR (KBr, cm"1) 687， 800, 831， 844, 881， 899， 995, 1074， 1096, 1134, 1175, 1229, 1256, 1265, 1285, 1325, 1368, 1449, 1541， 1622, 2805， 2857， 2930.
アルゴン雰囲気下、 4一 ( t r a n s— 2—ァザビシク口 [4. 4 · 0 ] デカ ンー 2—ィノレ） 一 3—二トロべンゾトリフノレ才リ ド) (4- (trans-2-azabicyclo [4.4.0]decan-2-yl)-3-nitrobenzotrifluoride) (2.94 g, 8.95 mmol) の酢酸ェ チル （25 mL) 溶液に、 パラジウム一炭素 （1 0%P d) (palladium I charcoal activated (10% Pd) ) (100 mg、 商用品） を室温にて添加し、 水素雰囲気下、 室温 にて 1 0時間撹拌した。 アルゴンに置換後、 これにジクロロメタン （60mL) を添 加し、 室温にて 3 0分間撹拌した後、 濾過によりパラジウム一炭素を除去し、 減 圧濃縮した。
残渣を、 シリカゲノレカラムクロマトグラフィー (110 g, hexane/diethyl ether = 50/1) で精製し、 2— ( t r a n s - 2—ァザビシク口 [4. 4. 0] デカン 一 2—ィノレ） - 5 - ( ト リ フノレオロメチノレ） ァュリ ン (2-(trans-2-azabicyclo [4.4.0]decan-2-yl) -5- (trif luoromethyl) aniline) (2.63 g， 8.82 mmol, 98.4%) を無色の固体として得た。
TLC、 'Η NMR (CDC13, 300 MHz) 及ぴ I Rの結果は次の通りである。
TLC Rf 0.50 (hexane/ethyl acetate = 9/1) ； XH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 0.80-0.98 (m, 1H， CH), 1.02-1. 2 (m， 5H， 2CH2, CH), 1.56—1.77 (m, 7H, 3CH2, CH)， 2.41 (ddd, 1H, J = 2.9， .8.4, 11.3 Hz, CH) , 2.47-2.56 (m, 1H, CH), 2.84-2.95 (m, 1H, CH), 4.30-4. 0 (br s， 2H, NH2)， 6.91—6.97 (m, 2H, aromatic), 7.10 (d, 1H， J = 8.7 Hz, aromatic)； IR (KBr, cm"1) 471, 498, 652, 667, 743, 814, 866, 883， 932, 995, 1059, 1088， 1121， 1163, 1217， 1242, 1285, 1335, 1375， 1441, 1512， 1566, 1593, 1614, 2801, 2855, 2924, 3368, 3474.
2— ( t r a n s一 2—ァザビシクロ [4. 4. 0] デカン一 2—ィル） 一 5 一 （トリ フルォロメチル） ァニリ ン （2- (trans - 2 - azabicyclo[4.4.0]decan - 2- yl) -5- (trif luoromethyl) ani line) (430 mg, 1. 4 mmol) のジクロロメタン (9 mL) 溶液にトリェチルァミン （triethylamine) (605 μ L, 4.34 mmol) 及びイソニコ チン酸ク口リ ド塩酸塩（isonicotinoyl chloride hydrochloride、商用品） (385 mg, 2.16删 ol)を 0°Cにて順次添加し、混合物を室温に戻した後、 23時間撹拌した。 これを水へ注ぎ込み、 混合物をジクロロメタン （X 3) で抽出した。 抽出された 有機層は、 水 （X I) で洗浄し、 Na2S04上で乾燥、 フィルターにかけ、 減圧下で 濃縮した。
残澄を、 シリカゲノレカラムク t3マトグラフィー (50 g, hexane/ethyl acetate = 4/1) で精製し、 N— [2— (tr a n s一 2—ァザビシクロ [4. 4. 0] デカン — 2—ィル) 一 5— （ ト リ フルォロメチル） フエ-ル]イ ソニコチン酸アミ ド (N-し 2 - (trans-2-azabicyclo [4.4.0」 decan- 2-yl) - 5 - (tr if luoromethyl) pheny丄」 is onicotinamide) (化合物 1 9 ) (574 mg, 1.42 mmol, 98.7%) を無色の固体として 得た。
融点、 TLC、 !H NMR (CDC13， 300 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。 融点 128-131°C； TLC Rf 0.44 (hexane/ethyl acetate = 2/1) ； H NMR (CDC13, 300 MHz) δ 0.78-0.96 (m, 1H, CH) , 1.06—1.55 (m， 6H， 3CH2) , 1.56—1.78 (m, 4H, 2CH2)， 1.78-1.96 (m， 2H, CH2) , 2.51 (ddd, 1H, J = 3.5， 8.9， 11.8 Hz, CH), 2.73 (ddd, 1H， J = 2.6, 11.8， 11.8 Hz, CH) , 2.83-2.94 (m， 1H, CH), 7.36 (d, 1H, J = 8.3 Hz, aromatic), 7.40 (dd, 1H， J = 1.9， 8.3 Hz, aromatic), 7.73-7.80 (AA' BB， ， 2H, aromatic), 8.85—8.89 (AA， BB， ， 2H, aromatic), 8.93 (d, 1H， J = 1.9 Hz, aromatic), 10.2—10.3 (br s, 1H， NH)； IR (KBr, cm"1) 509， 586, 602, 652, 685， 733, 839, 901, 918, 930， 995, 1070, 1101， 1123, 1165， 1242, 1333, 1366, 1408, 1443, 1528, 1591, 1612, 1682, 2855, 2928， 3292.
[参考例 20 ] 化合物 20の合成
〔化 30〕
Figure imgf000065_0001
化合物 20
2— (ァザシクロノナン一 1 一ィル) 一 5— (トリフルォロメチル) ァニリン (2一 (Azacyclononan一 1一 yl)一 5一 (trif luoromethy丄ノ aniline) (381 mg, 1.33 mmol) のジクロロメタン（7 mL)溶液にトリェチルァミン（triethylamine) (560 μ L, 4.02 mmol ) 及びイ ソニ コ チン酸ク ロ リ ド塩酸塩 ( isonicotinoyl chloride hydrochloride, 商用品） （356 mg， 2.00 mmol) を 0 °Cにて順次添加し、 混合物を 室温に戻した後、 1 4時間撹拌した。 これを水へ注ぎ込み、 混合物をジクロロメ タン （X 3 ) で抽出した。 抽出された有機層は、 水 （X I ) で洗浄し、 Na2S04上 で乾燥、 フィルターにかけ、 減圧下で濃縮した。
残澄を、 シリカゲノレ力ラムクロマトグラフィー (30 g, hexane/ethyl acetate = 2/1) で精製し、 N— [2— (ァザシク口ノナン一 1 一ィル) 一 5— (トリフルォ ロメチノレ） フエニル]イ ソニコチン酸ア ミ ド (N-[2-(azacyclononan-l-yl) -5- (trif luoromethyDphenyl] isonicotinamide) (ィ匕合物 2 0) (392 mg, 1.00 mmol: 75.3%) を無色の固体として得た。
融点、 T L C、 JH NMR (CDC13) 300 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。 融点 113-115°C； TLC Rf 0.27 (hexane/ethyl acetate = 2/1) ； !H NMR (CDC13, 300 MHz) δ 1.53 - 1.70 (br s, 12H， 6CH2) , 2.99-3.08 (br s, 4H, 2CH2)， 7.40 (dd, IH, J" = 1.2， 8.8 Hz, aromatic), 7.45 (dd, 1H， J = 8.8 Hz, aromatic), 7.71-7.76 (AA， BB， , 2H, aromatic), 8.79-8.86 (m, 3H, aromatic), 9.50-9.60 (br s, IH, NH)； IR (KBr, cm"1) 664, 677, 694, 735, 754, 833， 903, 920, 1123， 1163, 1242, 1333， 1408, 1437， 1462, 1526, 1555, 1587, 1614, 1682, 2849, 2928, 3323. [参考例 2 1 ] 化合物 2 1の合成
〔化 3 1〕
Figure imgf000066_0001
化合物 21
[参考例 1 9] で得られた N— [2 - ( t r a n s一 2—ァザビシク口 [4. 4. 0 ] デカン一 2—ィル） 一 5— （トリフルォロメチル） フエニル] イソニコ チ ン 酸 ア ミ ド ( N-[2- (trans-2-azabicyclo[4.4.0] decan-2-yl)-5- trif luoromethyl) phenyl] isonicotinamide) (138 mg, 342 μ molj のトルエン (5 mL) 溶液に、 L a w e s s o n， s試薬 (82.9 mg, 205 / mol、 商用品） を室温 にて加え、 混合物を 1 20°Cにて 7時間撹拌した。 撹拌後、 混合溶液を室温に戻 した後、 減圧下で濃縮した。
残 渣 を 、 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ 8 g, hexane/dichloromethane/ethyl acetate = 4/3/1) で ff製し、 N— [2— ( t r a n s— 2—ァザビシクロ [4. 4. 0] デカン一 2—ィル） 一 5— （トリフルォ ロメチル） フエニル] イソニコチン酸チオアミ ド （N- [2- (trans- 2- azabicyclo
2 1) (85.3 rag, 203 ； z mol， 59.4%) を黄色の固体として得た。
融点、 TLC、 XH NMR (CDC13, 300 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。 融点 147 - 148。C； TLC Rf 0.36 (hexane/dichloromethane/ethyl acetate = 3/3/1) ； XH NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 0.74-0.92 (m, IH, CH), 1.06-1. 0 (m， 5H, 2CH2, CH), 1.42-1.54 (m, 1H， CH), 1.56-1.75 (m, 4H, 2CH2) , 1.75—1.90 (m， 2H, CH2) , 2.47-2.59 (m, IH, CH), 2.75 (ddd, 1H， J = 2.4, 12.0, 12.0 Hz, CH), 2.83-2.93 (m, IH, CH), 7.43 (d, IH, J = 8.2 Hz, aromatic), 7.53 (d, IH, J = 8.2 Hz, aromatic), 7.68-7.80 (ΑΑ' BB' , 2H, aromatic), 8.73-8.83 (AA' BB' ， 2H, aromatic), 9， 96 (s, IH, aromatic), 11.5 - 11.7 (br s, IH, NH)； IR (KBr, cm"1) 650, 733, 760, 826, 895, 995, 1013, 1070， 1125， 1167， 1229, 1273, 1285, 1333， 1366, 1408, 1449, 1526, 1589， 2855, 2928， 3171. ' [参考例 22 ] 化合物 22の合成 〔化 3 2〕
Figure imgf000067_0001
化合物 22
1 一フルオロ ー 2 —ェ ト ロ ー 4 一 ( ト リ フノレオロ メ チノレ） ベンゼン (1-f luoro-2-nitro-4- (trif luoromethyl) benzene; (2.00 g, 9.56 mmol、 の N， N—ジメチルホルムアミ ド (N, N-difflethylformamide (DMF) ) (5.0 ml) 溶 液に順次、 t r a n sーデカヒ ドロイソキノリン (trans— decahydroisoquinoline) (1.58 mL, 10.6 mmol、 商用品） 及ぴ N， N—ジィソプロピルェチルアミン (N, N-diisopropylethylamine) (2.00 mL, 11.5 mmol) を室温で添加した。 混合物 を室温にて 24時間撹拌した。 この混合溶液を水へ注ぎ込み、 混合物をエーテル (X 3) で抽出した。 抽出された有機層は、 水 （X 3)、 ブライン （X I) で順次 洗浄し、 Na2S04上で乾燥、 フィルターにかけ、 減圧下で濃縮した。 .
残渣を、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （50 g, hexane/diethyl ether = 50/1) で精製し、 4一 (t r a n s一 3—ァザビシクロ [4. 4. 0] デカン一 3 ーィ ノレ） 一 3 — 二 ト ロ べンゾ ト リ フノレ才リ ド） (4- (trans-3-azabicyclo [4.4.0]decan-3-yl) -3-nitrobenzotrif luoride) (3.06 g, 9.32 mmol, 97.4%) を 橙色油状物質として得た。
TLC、 JH NMR (CDC13, 300 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。
TLC Rf 0.56 (hexane/ethyl acetate = 9/1) ； 'Η NMR (CDC13, 300 MHz) δ 0.90-1.18 (m, 3H, CH2, CH), 1.18—1.63 (m, 6H, 3CH2), 1.63-1.72 (m， 1H, CH)， 1.72—1.84 (m, 2H, CH2)， 2.64 (dd, 1H, J = 11· 3， 12.3 Hz, CH), 3.00 (ddd, 1H, J = 2.8, 12.6, 12.6 Hz, CH), 3.14 (ddd, 1H, J = 2.4, 3.7, 12.3 Hz, CH), 3.35 (dddd,
IH, J = 2.4, 2.4, 4.5， 12.6 Hz, CH), 7.13 (d， 1H, J = 8.8 Hz, aromatic), 7.60 (dd, 1H， J = 1.7, 8.8 Hz, aromatic), 8.04 (d， 1H, J = 1.7 Hz, aromatic)； IR (KBr, cm—1) 642， 683， 791， 824， 885, 907， 972, 1086, 1123, 1159, 1177, 1206， 1217, 1242, 1263, 1300, 1325, 1391, 1447, 1508, 1533, 1560, 1624, 2851, 2922, 3447.
アルゴン雰囲気下、 4一 ( t r a n s— 3—ァザビシクロ [4. 4. 0 ] デカ ンー 3—ィノレ） 一 3—二トロべンゾ ト リ フノレオリ ド） （4一（trans— 3— azabicyclo [4.4.0]decan-3-yl)-3-nitrobenzotrifluoride) (2.93 g, 8.92 mmol) の酢酸ェ チル （17 mL) 溶液に、 パラジウム一炭素 （1 0%P d) (palladium / charcoal activated (10% Pd) ) (100 mg, 商用品） を室温にて添加し、 水素雰囲気下、 室温 にて 22. 5時間撹拌した。 アルゴンに置換後、 これにジクロロメタン （200 mL) を添加し、室温にて 30分間撹拌した後、濾過によりパラジウム一炭素を除去し、 減圧濃縮した。
残渣を、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (100 g, hexane/diethyl ether = 50/1) で精製し、 2— ( t r a n s— 3—ァザビシク口 [4. 4. 0] デカン — 3—ィル) 一 5— (トリフルォロメチル) ァエリン （2 -（trans— 3— azabicyclo [4.4.0]decan-3-yl) -5- (trifluoromethyl) aniline) (2.58 g， 8.65 mmol, 96.9%) を無色の固体として得た。
TLC、 ' NMR (CDC13, 300 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。
TLC Rf 0.50 (hexane/ethyl acetate = 9/1) ； !H NMR (CDC13， 300 MHz) δ 0.93-1.15 (m, 3H， CH , CH), 1.20-1.50 (m, 4H, 2CH2) , 1.53-1.63 (m, 1H, CH)， 1.63-1.84 (m, 4H, 2CH2) , 2.28 (dd, 1H, J = 11.2, 11.2 Hz, CH)， 2.61 (ddd, 1H, J = 2.5,
II.9, 11.9 Hz, CH), 3.01 (ddd, 1H, J = 2.1, 3.5， 11.2 Hz, CH), 3.17 (dddd, 1H， J = 2.1, 2.1， 4.1， 11.9 Hz, CH), 3.98-4.12 (br s, 2H, NH2), 6.92 (d, 1H， J = 1.8 Hz, aromatic), 6.96 (d, 1H, J = 1.8, 8.2 Hz, aromatic), 7.01 (d, 1H, J = 7.0 Hz, aromatic)； IR (KBr, cm—1) 656, 669， 741, 818, 874, 895, 935, 972, 1121, 1152， 1169, 1200, 1217, 1236， 1254, 1294， 1335, 1381， 1439, 1460, 1514, 1568, 1593, 1612, 2783， 2851， 2920, 3331, 3428.
2一 ( t r a n s— 3—ァザビシク口 [4. 4. 0] デカンー 3一ィル） 一 5 ― (卜 ] i フノレオロメチノレ） ァニ ン (2-(trans-3-azabicyclo[4.4.0]decan-3- yl) -5- (trif luoromethyl) ani line) (784 rag, 2.63 mmol)のジクロロメタン (14 mL) 溶液にトリェチルァミ ン （triethylamine) (1.10 mL, 7.89 mmol) 及びイ ソニコ チン酸クロリ ド塩酸塩 (isonicotinoyl chloride hydrochloride) (2.10 g, 11.8 mmol, 商用品） を 0°Cにて順次添加し、 混合物を室温に戻した後、 2 0時間撹拌 した。 これを水へ注ぎ込み、 混合物をジクロロメタン （X 3) で抽出した。 抽出 された有機層は、 水 （X I ) で洗浄し、 Na2S04上で乾燥し、 フィルターにかけ、 減圧下で濃縮した。
残澄を、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (50 g, hexane/ethyl acetate = 7/2) で精製し、 N— [2— （ t r a n s — 3—ァザビシクロ [4. 4. 0] デカ ンー 3—ィル） 一 5— （トリフルォロメチル） フエ-ル] イソニコチン酸アミ ド (N一し 2一 (trans一 3一 azabicyclo L4.4.0] decan一 3— yl)—ΰ一 (trif luoromethy丄ノ phenylj is onicotinamide) (574 mg, 1.42 mmol, 98.7%) を無色の固体として得た。
T L C、 'Η NMR (CDC13， 300 MHz) 及ぴ I R ©結果は次の通りである。
TLC Rf 0.27 (hexane/ethyl acetate = 3/1) ； XH NMR (CDC13， 300 MHz) δ 0.98—1.22 (m, 3H， CH2, CH), 1.28-1· 50 (m， 4H, 2CH2) , 1.52-1.62 (m, 1H, CH), 1.70-1.86 (m, 4H, 2CH2)， 2.50 (dd, 1H, J = 11.1, 11.1 Hz, CH) , 2.77 (ddd, 1H， J = 2.2, 11.8, 11.8 Hz, CH), 2.89 (ddd, 1H， J = 1.9, 3.5, 11.1 Hz, CH), 3.04 (dddd, 1H， J = 1.8, 1.8， 3.9， 11.8 Hz, CH) , 7.29 (d， 1H, J = 8.2 Hz, aromatic), 7.39 (dd, 1H, J = 1.4, 8.2 Hz, aromatic), 7.73-7.78 (AA， BB， ， 2H, aromatic), 8.84-8.89 (m, 3H, aromatic), 9.45—9.55 (br s, 1H， NH)； IR (KBr， cm"1) 658， 687, 735， 750, 837, 881, 899, 918， 930, 970, 1072, 1101, 1123, 1167, 1219, 1246, 1333， 1381, 1408, 1441, 1530, 1587, 1614， 1682, 2853, 2922, 3321.
N— [2— ( t r a n s — 3—ァザビシクロ [4. 4. 0] デカン一 3—ィル） 一 5 — ( ト リ フルォロ メ チル） フ エ ニル] イ ソ ニ コ チン酸ア ミ ド (N-L2- (trans-3-azabicyclo[4. i.0」 decan - 3_yl) -5 - (trif luoromethyl) phenyl」 is onicotinamide) (261 mg, 647 mol) の 卜ノレェン (10.0 mL) 溶液こ、 L a w e s s o n， s試薬 （158 mg, 391 zmol、 商用品） を室温にて加え、 混合物を 1 2 0°Cにて 1 4時間撹拌した。 撹拌後、 混合溶液を室温に戻した後、 減圧下で濃縮 した。
残法を、 シリカゲノレカラムクロマ卜グラフィー (30 g, hexane/dichloromethane /ethyl acetate = 4/3/1) で精製し、 N— [ 2— （ t r a n s — 3—ァザビシク 口 [4. 4. 0 ] デカン一 3—ィル) - 5 - (トリフルォロメチル） フエニル] イ ソニコチン酸チォアミ ド (N-[2-(trans-3-azabicyclo[4.4.0] decan-3-yl) -5- (.trif luoromethyl) phenyl] isonicotinthioamide; (ィ匕合物 2 2 ) (.173 mg, 412 ίαοΐ, 63.7%) を黄色の固体として得た。
融点、 T L C、 JH NMR (CDC13, 300 MHz) 及び I Rの結果は次の通りである。 融点 128- 129°C； TLC Rf 0.53 (hexane/dichloromethane/ethyl acetate = 3/5/2) ； ¾ NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 0.94-1.14 (m， 2H, CH2)， 1.16—1.38 (m, 4H， 2CH2) ,
I. 7-1.57 (m, 1H, CH)， 1.65—1.84 (m, 5H, 2CH2, CH)， 2.50 (dd， 1H， J = 11.1,
II.1 Hz, CH), 2.79 (ddd, 1H， J = 2.5, 12.1, 12.1 Hz, CH), 2.81-2.91 (m, 1H, CH)， 2.96-3.08 (m, 1H, CH) , 7.32 (d， 1H, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.51 (d, 1H, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.65-7.80 (AA' BB' , 2H， aromatic), 8.70-8.85 (AA' BB' ， 2H， aromatic), 9.58 (s， 1H， aromatic), 10.4-10.6 (br s, 1H， NH)； IR (KBr, cm— 652， 733， 826, 891, 970, 1011, 1076， 1123， 1167, 1217， 1238, 1275, 1333, 1410, 1437, 1458, 1528, 1591， 1616， 2853， 2922, 3171.
[参考例 2 3 ] 化合物 2 3の合成
〔化 3 3〕
Figure imgf000070_0001
アルゴン雰囲気下、 2— （ t r a n s — 3—ァザビシクロ [4. 4. 0] デカ ンー 3—ィル） 一 5— （トリフルォロメチル） ァニリン （2— (trans— 3— azabicyclo [4.4.0]decan-3-yl)-5-(trifluoromethyl) aniline) (2.99 mg, 1.00 画 1) のジ クロロメタン （5mL) 溶液にトリェチルァミン （triethylamine) (280 μ L, 2.01 IMIOI)及びィソチオシアン酸べンゾィノレ（benzoyl isothiocyanate) (165 μ L， 1.23 mmol、 商用品） を室温にて順次添加し、 混合物を 5 0°Cにて 3時間撹拌した。 撹 拌後、 混合溶液を室温に戻した後、 これを水へ注ぎ込み、 混合物をジクロ口メタ ン （X 3) で抽出した。 抽出された有機層を、 水 （X I ) で洗浄し、 Na2S04上で 乾燥し、 フィルターにかけ、 減圧下で濃縮した。
残渣を、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (30 g, hexane/ethyl acetate = 15/1) で精製し、 1—ベンゾィルー 3— [ 2一 ( t r a n s - 3ーァザビシク口 [4. 4. 0] デカン一 3—ィル) - 5 - (トリフルォロメチル) フエニル] チォ ウ レ フ 、 1一 benzoyl— 3ー[2— (trans— 3— azabicycloL4.4.0]decan一 3— y丄ノー 0— (trif luoromethyl) henyl] thiourea) (ィ匕合物 2 3 ) (158 mg, 342 mol, 3¾.2%) を無色の固体として得た。
融点、 TL C、 'Ε NMR (CDC13, 300 MHz) 及ぴ I Rの結果は次の通りである。 融点 147-149°C； TLC Rf 0.31 (hexane/ethyl acetate = 9/1) ； JH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 0.92-1.21 (br s, 3H, CH2， CH), 1.22-1.40 (m, 2H， CH2), 1.50-1.82 (m, 7H， 3CH2, CH), 2.47 (dd， 1H， J = 10.9， 10.9 Hz, CH), 2.69 (ddd， 1H， J = 3.5， 11.2, 11.2 Hz, CH), 2.95 (ddd, 1H, J = 2.0, 3.3, 10.9 Hz, CH) , 3.08-3.17 (m, 1H， CH), 7.21 (d， 1H, J = 8.3 Hz, aromatic), 7.44 (dd, 1H， J = 2.1, 8.3 Hz, aromatic) , 7.53-7.62 (m， 2H, aromatic) , 7.63-7.72 (m, 1H, aromatic) , 7.89-7.95 (m, 2H, aromatic), 9.00-9.15 (br s, 2H, aromatic, NH) , 12.9-13.0 (br s， 1H, NH)； IR (KBr, cm"1) 646, 662, 689, 706, 735, 826， 881, 893， 910， 970, 1076, 1121， 1152, 1213， 1254, 1298, 1333, 1381, 1447, 1487, 1516, 1535, 1580， 1616, 1676, 2814, 2849, 2922, 3084.
[参考例 2 4 ] 化合物 2 4の合成
〔化 3 4〕
Figure imgf000072_0001
化合物 24
アルゴン雰囲気下、 2— (ァザシクロノナン一 1一ィル) - 5 - (トリフルォ 口メチノレ）ァニリ (2- (azacyclononan-1-yl) -5- (trif luoromethyl) ani l ine) (287 mg, l. OO mmol)のジク口ロメタン（5 mL)溶液にトリエチルアミン（triethylamine) ( 280 μ L, 2. 01 mmol ) 及ぴィ ソチオシア ン酸べンゾィ ノレ ( benzoyl isothiocyanate) (165 μ ΐ, 1. 23 mmol、 商用品） を室温にて順次添加し、 混合物 を 5 0 °Cにて 3時間撹拌した。 撹拌後、 混合溶液を室温に戻した後、 これを水へ 注ぎ込み、 混合物をジクロロメタン （X 3 ) で抽出した。 抽出された有機層は、 水 （X 1 ) で洗浄し、 Na2S04上で乾燥し、 フィルターにかけ、 減圧下で濃縮した。 残法を、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー (30 g, hexane/ethyl acetate = 10/1) で精製し、 1一べンゾィルー 3— [ 2— (ァザシク口ノナン一 1一ィル) 一 5 一 ( ト リ フルォロ メ チル） フヱエル]チォゥ レア ( 1 - benzoyl- 3 - [2- azacyclononan-1-yl) -5 - (trif luoromethyl) phenylj thiourea ) 、化合物 2 4 j (88. 7 mg, 197 μ mol, 19. 7%) を無色の固体として得た。
融点、 T L C、 NMR (CDC13， 300 MHz) 及ぴ I Rの結果は次の通りである。 融点 65— 67°C ； TLC Rf 0. 19 (hexane/ethyl acetate = 9/1) ； JH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 1. 20-1. 35 (br s, 4H, 2CH2) , 1. 51-1. 75 (br s， 8H, 4CH2) , 3. 22-3. 40 (br s, 4H, 2CH2) , 7. 20 (d, 1H, J = 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 45 (dd, 1H, J = 2. 0, 8. 7 Hz, aromatic) , 7. 52-7. 61 (m, 2H， aromatic) , 7. 63-7. 72 (m, 1H, aromatic) , 7. 87-7. 98 (m, 3H， aromatic) , 9. 05-9. 25 (br s, 1H, NH) , 12. 0-12. 2 (br s, 1H， NH)； IR (KBr, cm"1) 604, 654, 733， 814, 908, 1084, 1117, 1155, 1267, 1333， 1395， 1449, 1518, 1616, 1672, 2851, 2922, 3150.
[実施例 1 A]
L u H C V細胞を用いた抗 H C V活性を有する化合物のスクリーニング H CVウィルスタンパク質発現アツセィとして、 ルシフヱラーゼの活性を測定 することで、細胞内の HCVタンパク質（N S 3— N S 4— N S 5 A— N S 5 B) の複製及び発現を評価することができるヒ ト肝細胞 （以下、 L u HCVと記す。） を用いて、 抗 HCV活性を有する化合物のスクリ一二ングを行った。
L u HC V細胞を 9 6ゥエルプレートに 5 X 1 03細胞ノ 5 0 μ L/ゥエルの 割合で播種し、一晩インキュベートした。試験化合物はジメチルスルホキシド（D MS O) に溶解し、 必要に応じて DMS Οを用いて希釈系列を作成した。 L u H C V細胞播種の翌日、 最終試験濃度の 2倍濃度の試験化合物を含む培地を 5 0 μ Lノウエルで添加し、 4 8時間、 3 7 °C、 5 %C O 2の培養条件下で静かに培養 した （試験化合物最終濃度 0、 1 0、 2 0 μ Μ)。 その際、 試験ゥエルとして各試 験化合物、 各濃度について、 3ゥエルずつ用いて解析した。
4 8時間後に培養液を除去し、 G l o L y s i sバッファー （P r o m e g a社） を各ゥエルに 1 0 0 L加え、 細胞を破砕することにより、 細胞抽出液を 得た。 得られた細胞抽出液 5 O ^ Lを用い、 B r i g h t — G l o TM L u c i f e r a s e A s s a y S y s t e m (P r o m e g a社) 試薬を 5 0 L 添加した。 抽出液中のルシフェラーゼ活性を、 測定装置 ARVO (パーキンエル マー社製） を用いる 1秒間の発光強度の測定により行った。
得られた発光強度の数値から、 各試験化合物、 各濃度の平均値を算出した。 試 験物質の対照として用いた DM S Oの発光強度を 1 0 0 %としたそれぞれの試験 化合物の発光強度の割合を算出した。 図 1 Aに試験化合物の発光強度の割合を示 す。
試験化合物 （化合物 2、 化合物 5、 及び化合物 6 ) 存在下で、 濃度依存的にル シフヱラーゼ活性の低下が認められた。 さらに、 試験化合物 2 0 の存在下で は、 対照 （DM S O) と比較して顕著なルシフェラーゼ活性の低下を認めた。 特' に、 化合物 5及び化合物 6では、 1 0 Μにおいても対照と比較して 5 0 %程度 の発光強度の低下を認めた。
この結果から、 試験した化合物が有効に HCVタンパク質の発現を抑制するこ とが示された。
[実施例 1 Β] L u H C V細胞を用いた試験化合物の細胞増殖抑制の評価
L u HC V細胞を 96ゥエルプレートに 5 X 1 03細胞ノ 50 Lノウエルの 割合で播種し、ー晚ィンキュベートした。試験化合物はジメチルスルホキシド（D MSO) に溶解し、 必要に応じて DM S Oを用いて希釈系列を作成した。 LuH CV細胞播種の翌日、 最終試験濃度の 2倍濃度の試験化合物を含む培地を 50 LZゥエルで添加し、 48時間、 3 7°C、 5%C02の培養条件下で静かに培養 した （試験化合物最終濃度 0、 10、 20 /iM)。 その際、 試験ゥエルとして各試 験化合物、 各濃度について、 3ゥヱルずつ用いて解析を進めた。
48時間後に生細胞率を測定するために、 生細胞数測定試薬 S F (ナカラィテ スク社製） を 10 μ L ウエルで添加し、 37°C、 5 %C02の培養条件下で静 かに培養し、 発色反応を行った。 その後、 測定装置 ARVO (パーキンエルマ一 社製） を用い、 450 nmにおける吸光度を測定した。
その際、 吸光度のバックグラウンドとして、 試験化合物 （対照として用いた D MS Oを含む）を含有し、かつ、細胞を含まないゥヱルについても測定を行った。 得られた数値を、 同じ化合物について同じ濃度で測定された、 細胞を含むゥエル の吸光度の値から差し引くことにより得た値を、 バックグラウンドを含まない実 際の生細胞数の測定値とした。 得られた実際の生細胞数の測定値から、 各試験化 合物、 各濃度での平均値を算出し、 試験物質の対照として用いた DMSOの測定 平均値を 100%とし、 それぞれの試験化合物の生細胞数の割合を算出した。 図 1 Bに試験化合物添加時に算出された生細胞数の割合を示す。
その結果、 図 1 Bで認められるように、 試験化合物添加により生細胞数の割合 が変化することはなかった。 このことは、 実施例 1 Aの条件下でこれらの化合物 が生細胞の割合を変えることはないことを表している。 即ち、 実施例 1 Aにより 得られた結果は、 純粋に試験化合物が HCVタンパク質の発現を抑制したことを 意味している。
[実施例 2 A]
L uHCV細胞を用いた抗 HC V活性を有する構造展開化合物のスクリ—ユング L uHC V細胞を 96ゥエルプレートに 5 X 1 03細胞 Z 50 ^ LZゥェルの 割合で播種し、ー晚ィンキュベートした。試験化合物はジメチルスルホキシド（D MS O) に溶解し、 必要に応じて DM S Oを用いて希釈系列を作成した。 L uH CV細胞播種の翌日、 最終試験濃度の 2倍濃度の試験化合物を含む培地を 50 Lノウエルで添加し、 4 8時間、 3 7°C、 5 %C〇2の培養条件下で静かに培養 した （試験化合物最終濃度 0、 1 0、 20 M)。 その際、 試験ゥエルとして各試 験化合物、 各濃度について、 3ゥエルずつ用いて解析を進めた。
4 8時間後に培養液を除き、 G l o L y s i sバッファー （P r ome g a 社） を各ゥエルに 1 00 μ L加え、 細胞を破砕することにより、 細胞抽出液を得 た。 得られた細胞抽出液 50 μ Lを用い、 B r i g h t— G l o TM Lu c i f e r a s e A s s a y S y s t e m (P r ome g a社) 薬を 5 0 /x L添 加した。 抽出液中のルシフェラーゼ活性の測定を、 測定装置 ARVO (パーキン エルマ一社製） を用いる 1秒間の発光強度から測定した。
得られた発光強度の数値から、 各試験化合物、 各濃度の平均値を算出した。 試 験物質の対照として用いた DM S Oの発光強度を 1 00 %としたそれぞれの試験 化合物の発光強度の割合を算出した。 表 1一 1、 図 2 Aに試験化合物の発光強度 の割合を示す。
結果から、 試験したすべての化合物について、 濃度依存的なルシフェラーゼ活 性の低下が示された。 このことは、 これらの化合物が濃度依存的に細胞内での H CVタンパク質の発現を抑制する活性を有することを表している。
[実施例 2 B]
L uHCV細胞を用いた構造展開化合物の細胞増殖抑制の評価
L u H C V細胞を 9 6ゥエルプレートに 5 X 1 03細胞/ 5 0 LZゥエルの 割合で播種し、ー晚ィンキュベートした。試験化合物はジメチルスルホキシド（D MS O) に溶解し、 必要に応じて DMS◦を用いて希釈系列を作成した。 L uH CV細胞播種の翌日、 最終試験濃度の 2倍濃度の試験化合物を含む培地を 50 μ Lノウエルで添加し、 4 8時間、 3 7°C、 5 %C02の培養条件下で静かに培養 した （試験化合物最終濃度 0、 1 0、 20 Μ)。 その際、 試験ゥエルとして各試 験化合物、 各濃度について、 3ゥエルずつ用いて解析を進めた。
4 8時間後に生細胞率を測定するために、 生細胞数測定試薬 S F (ナカラィテ スク社製） を 1 0 Lノウエル添加し、 3 7°C、 5%C02の培養条件下で静か に培養し、 発色反応を行った。 その後、 測定装置 A R V O (パーキンエルマ一社 製） を用い、 4 5 0 n mにて吸光度を測定した。
その際、 吸光度のバックグラウンドとして、 試験化合物 （対照として用いた D M S Oを含む）を含有し、かつ、細胞を含まないゥエルにつ.いても測定を行った。 得られた数値を、 同じ化合物について同じ濃度で測定された細胞を含むゥエルの 吸光度の値から差し引くことにより得た値を、 バックグラウンドを含まない実際 の生細胞数の測定値とした。 得られた実際の生細胞数の測定値から、 各試験化合 物、 各濃度の平均値を算出し、 試験物質の対照として用いた D M S O添加時の値 を 1 0 0 %としたそれぞれの試験化合物の生細胞数の割合を算出した。表 1一 2、 図 2 Bに各試験化合物、 各濃度の生細胞の割合を示す。
結果から、 試験した化合物の多ぐで、 顕著な細胞生存率の低下がないことが示 された。 このことは、 実施例 2 Aの条件下でこれらの化合物が細胞毒性を全く有 しないか、 有していても弱い細胞毒性しか有しないことを表している。 即ち、 実 施例 2 Aにより得られた結果は、 純粋に試験化合物が H C Vタンパク質の発現を 抑制したことを意味している。
〔表 1〕
luc activity viability compound (μ ) (% control) compound (uM) (% control)
20 10 20 10 化合物 3 43.23 69.31 化合物 3 93.82 103.79 化合物 4 44.50 65.79 化合物 4 89.76 93.86 化合物 7 16.37 30.70 化合物 7 71.85 76.97 化合物 8 57.97 55.66 化合物 8 77.81 77.35 化合物 9 26.03 33.65 化合物 9 73.39 82.79 化合物 10 26.88 41.18 化合物 10 89.38 96.19 化合物 11 29.76 35.77 化合物 11 89.20 89.95 化合物 12 28.57 32.81 化合物 12 88.78 94.69 化合物 13 28.46 34.15 化合物 13 104.05 101.56 化合物 14 14.78 30.30 化合物 14 103.76 103.81 化合物 15 37.60 45.76 化合物 15 107.33 107.86 化合物 16 48.90 58.12 化合物 16 79.86 85.21 化合物 17 17.55 26.15 化合物 17 108.81 112.89 化合物 18 22.00 26.83 化合物 18 113.41 113.01 化合物 19 33.45 50.97 化合物 19 91.02 99.02 化合物 20 22.67 48.26 化合物 20 105.35 111.50 化合物 21 34.03 56.76 化合物 21 93.56 94.44 化合物 22 21.88 42.61 化合物 22 96.39 104.65 化合物 23 49.35 64.05 化合物 23 104.93 106.72 化合物 24 39.44 56.39 化合物 24 110.15 108.20 表 1一 表 1—2
[実施例 3 A]
化合物 5の H C Vタンパク質発現抑制活性の解析
L uHC V細胞を 1 0 c Hiディッシュに 1 X 1 06細胞/ディッシュの割合で 播種し、 ー晚以上インキュベートした。 その後、 DMS Oに溶解された化合物 5 を最終濃度 20 μΜとなるよう添加し、 さらに 3 7°C、 5%C02の培養条件下 で静かに培養を続けた。 対照ディッシュには DMS Oのみを添加した。 化合物 5 の添加 1 4時間後、及び 6 0時間後に細胞を回収した。細胞溶解液（ 25 mM N a P 04 ( p H 7. 5)、 1 50 mM N a C l、 l % T r i t o n X— 1 0 0、 1 mM EDTA、 20%グリセロール、 プロテアーゼインヒビタ一カクテ ル （ロシュ 'ダイァグノスティックス）） を用いて細胞を溶解し、 細胞抽出液を得 た。 得られたそれぞれの細胞抽出液各 1 0 gを用いて、 ウェスタンプロッティ ング法にて HC V— N S 5 Aタンパク質 （抗体販売元： V i r o g e n；)、 及ぴ、 β—ァクチン (抗体販売元： S i gma) の発現解析をおこなった。 結果を図 3Aに示す。 化合物 5添加 1 4時間後、 6 0時間後のそれぞれの時間 において、 化合物 5添加の有無に関わらず —ァクチンの発現量に変化はなかつ たが、 化合物 5添加細胞においては、 N S 5 Αの発現低下が見られた。
このことは、試験した化合物 5力 S、正常な細胞機能に悪影響を与えることなく、 HCVタンパク質に対して効率的にその発現を抑制し得ることを示唆している。
[実施例 3 B]
HCV RN Aの複製及び安定性に対する化合物 5の影響
L u HC V細胞を 1 0 c mディッシュに 1 X 1 06細胞/ディッシュの割合で 播種し、 ー晚以上インキュベートした。 その後、 DMS Oに溶解された化合物 5 を最終濃度 20 μΜとなるよう添加し、 さらに 3 7°C、 5%C02の培養条件下 で静かに培養を続けた。 対照ディッシュには DMS Oのみを添加した。 化合物 5 添加 14時間後、 及び 60時間後に細胞を回収し、 セパゾール RNA (ナカライ テスク社製） により全 RN Aを抽出し、 S u p e r s c r i p t I I逆転写酵 素 （インビトジェン社製） 及ぴ o 1 i g o— d Tプライマー （プロメガ社製） 又 はランダムプライマー（ィンビトロジェン社製）を用いて c DNA合成を行った。 合成された c DNAを錶型として用いて、 N S 5 A特異的プライマ一 （ 5， 一 A GTTTTTC ACGGAGGTGGATGGG— 3，（配列番号 1)、 5，一 G TCCGGGTTCTTCCAAGACTCTA- 3 ' (配列番号 2 ) )、 GAP D Hプライマー （5， 一 ACGGATTTGGTCGTATTGGG— 3 ' (配列番 号 3)、 5， 一 GTAGTTGAGGTC AATGAAGGGGTC— 3， （配列 番号 4))、 P r i me S TAR H S DNA p o l yme r a s e (タカラ バイオ社製） を用いる PC Rを行った。 DN A増幅反応の後、 ァガロースゲルに て電気泳動、 ェチジゥムプロマイ ドによる染色を行った。 UVトランスイルミネ 一ターを用いてそれぞれの遺伝子の発現量を評価した。
結果を図 3 Bに示す。 化合物 5添加 14時間後、 60時間後のそれぞれの時間 において、 化合物 5添加の有無に関わらず、 NS 5A、 GAPDH共に量的変化 を認めなかった。
このことは、 試験した化合物 5が、 HCV— RNAの複製及び安定性には影響 しないことを表している。 実施例 3 A及び実施例 3 B双方の結果から、 化合物 5は、 HCV— RNAの複 製や安定性に影響することなく、 HCVタンパク質の発現を翻訳レベルで抑制し 得ることが明らかとなった。
[実施例 4 ]
L uHCV細胞の細胞増殖に対する化合物 5の影響
L uHC V細胞を 6ゥェルプレートに 5 X 1 04細胞/ 1 mLノウエルの割合 で播種し、 ー晚インキュベートした。 L uHC V細胞播種の翌日、 最終試験濃度 の 2倍濃度の化合物 5を含む培地を各ゥエルに 1 mLずつ添加し、 化合物 5の最 終濃度を 20 Mとした。 細胞を、 3 7°C、 5 %C02の培養条件下で静かに培 養した。 化合物 5添加の後、 0、 6、 1 2、 24、 3 6及び 48時間後に各 3ゥ エルずつの細胞を回収し、 血球計算盤を用いてゥエル当たりに生存している細胞 数を計測し、 平均値を算出した。 対照として、 DM S Oのみを加えたゥエルを用 いた。
結果を図 4に示す。 DM S Oを添加した対照と、 化合物 5添加細胞との間で、 各時間での細胞数には全く変化がなかった。 このことから、 化合物 5は L uHC V細胞の細胞増殖を抑制せず、また細胞傷害性を有しないことが明らかとなった。
[実施例 5 ]
インフルエンザウイルスに対する抗ウィルス活性の評価
本発明に開示する試験化合物について、 A型インフルエンザウイルス （PR— 8) に対する増殖抑制作用を評価した。 MD CK細胞を 6ゥヱルプレートに 5 X 1 05細胞 ゥエルの割合で播種し、 一晩インキュベートした。 試験化合物はジ メチルスルホキシド （DM SO) に溶解し、 必要に応じて DM S Oを用いて希釈 系列を作成した。 MDCK細胞播種の翌日、 A型インフルエンザウイルス （PR 一 8) を添加すると同時に、 試験化合物を最終濃度 1 4 となるよう添加し、 72時間、 3 7°C、 5%C02の培養条件下で静かに培養した。 72時間培養後 に、 2111 の？83 (—） にて 2回洗浄を行い、 次いで、 1 5%酢酸ノ 8 5%ェ タノール溶液中で 3 0分間固定の後、 クリスタルバイオレツトによる染色を行つ た。
位相差顕微鏡下で染色後の細胞を観察した。 図 5に示すように、 試験化合物を 添加しなかった D M S O対照の M D C K細胞
Figure imgf000080_0001
し、 高高いい割割合合でで死死滅滅しし、、 ププレレーートトかからら剥剥離離ししてていいたたがが、、 試試験験化化合合物物添添加加群群でではは細細胞胞死死 にによよるる細細胞胞のの剥剥離離はは抑抑制制さされれてていいたた。。
ここののここととはは、、 試試験験化化合合物物ががィィンンフフルルェェンンザザウウィィルルススにに対対ししててもも抗抗ウウィィルルスス効効果果 をを有有すするるここととをを示示ししてていいるる。。
[[実実施施例例 66 ]]
ィィンンフフルルェェンンザザウウィィルルスス感感染染にによよるる細細胞胞死死のの抑抑制制
MM DD CC KK細細胞胞をを 99 66ゥゥヱヱルルププレレーートトにに 11 XX 11 00 44細細胞胞 ZZ 11 00 00 μμ LL //ゥゥェェルルのの 割割合合でで播播種種しし、、 ーー晚晚イインンキキュュベベーートトししたた。。 試試験験化化合合物物はは DD MM SS ΟΟにに溶溶解解しし、、 必必要要 にに応応じじてて DD MM SS ΟΟをを用用いいてて希希釈釈系系列列をを作作成成ししたた。。 MM DD CC KK細細胞胞播播種種のの翌翌日日、、 試試験験 化化合合物物ををィィンンフフルルェェンンザザウウィィルルスス感感染染用用培培地地でで希希釈釈しし、、 99 66ゥゥエエルルププレレーートト中中のの 培培養養液液とと置置換換ししたた。。 そそのの後後、、 イインンフフルルエエンンザザウウイイルルススをを必必要要ななゥゥ--ルルにに添添加加しし、、 44 88時時間間、、 33 77 °°CC、、 55 %% CC 00 22のの培培養養条条件件下下でで静静かかにに培培養養ししたた （（試試験験化化合合物物最最終終 濃濃度度 00、、 55、、 11 00 MM))。。 そそのの際際、、 試試験験ゥゥヱヱルルととししてて各各試試験験化化合合物物、、 各各濃濃度度ににつついい てて、、 33ゥゥヱヱルルずずつつ用用いいてて解解析析をを行行っったた。。
生生細細胞胞率率をを測測定定すするるたためめにに、、 44 88時時間間後後にに生生細細胞胞数数測測定定試試薬薬 SS FF ((ナナカカララィィテテ ススクク社社製製)) をを 11 00 μμ LL ウウヱヱルルでで添添加加しし、、 33 77 °°CC、、 55 %% CC OO 22のの培培養養条条件件下下でで静静 かかにに培培養養しし、、 発発色色反反応応をを行行っったた。。 そそのの後後、、 測測定定装装置置 AA RR VV OO ((パパーーキキンンエエルルママ一一 社社製製）） をを用用いい、、 44 55 00 nn mmににてて吸吸光光度度をを測測定定ししたた。。
そそのの際際、、 吸吸光光度度ののババッッククググララウウンンドドととししてて、、 試試験験化化合合物物 （（対対照照ととししてて用用いいたた DD MM SS OOをを含含むむ））をを含含有有しし、、かかつつ、、細細胞胞をを含含ままなないいゥゥヱヱルルににつついいててもも測測定定をを行行っったた。。 得得らられれたた数数値値をを、、 同同じじ化化合合物物ににつついいてて同同じじ濃濃度度でで測測定定さされれたた細細胞胞をを含含むむゥゥエエルルのの 吸吸光光度度のの値値かからら差差しし引引くくここととにによよりり得得たた値値をを、、 パパッッククググララウウンンドドをを含含ままなないい実実際際 のの生生細細胞胞数数のの測測定定値値ととししたた。。 得得らられれたた実実際際のの生生細細胞胞数数のの測測定定値値かからら、、 各各試試験験化化合合 物物、、 各各濃濃度度のの平平均均値値をを算算出出ししたた。。 試試験験物物質質のの対対照照ととししてて用用いいたた DD MM SS OO添添加加時時のの 算算出出さされれたた値値をを 11 00 00 %%ととしし、、 そそれれぞぞれれのの試試験験化化合合物物のの生生細細胞胞数数のの割割合合をを算算出出しし たた。。
結結果果をを図図 66、、 表表 22にに示示すす。。
Figure imgf000080_0002
感感染染にによよりり、、 生生細細胞胞のの割割合合がが 44 00 %%以以下下ににななっったたがが、、 化化合合物物 55、、 化化合合物物 66又又はは化化 合物 1 4の添加により細胞死が低減されることが明らかとなった。
〔表 2〕
Figure imgf000081_0001
[実施例 7 ]
化合物 5のインビボ反復投与毒性試験
マウス （C r l j /CD l ( I CR) 系統、 ォス、 5週齢） について、 1週間 の馴化期間を設け（d a y— 7から d a y— 1)、試験開始前日の体重量平均値よ り群分けを行った。 また、 体重平均値から化合物 5の投与量を算出した （d a y - Do 投与群は、 p 1 a s e b o投与群 （n = 6)、 化合物 5投与群 （n = 6) の 2群とした。 投与当日 （d a y O O力 ら d a y 0 7) に、 0. 5%カルポキシ メチルセルロースを用いて製剤化した試験化合物を、 7日間連続で経口投与し、 投与期間中の症状を観察した。
試験期間中、 d a y— 7、 d a y— 3、 d a y— 1、 d a y 4、 d a y 7にお いて各個体の体重を測定した。化合物 5投与開始当日の投与 iZ2、 1、 2、 3、 4時間後、 投与開始 2日後からは 1日 1回の症状観察をおこなった。
結果、 7日間の投与期間において、 p 1 a s e b o群と比較して、 1 000m g/k g/d a yでの化合物 5投与群による死亡個体は見られず、 その無毒性量 は l O O OmgZk g以上であるという結果が得られた。
各群の体重推移について、 p 1 a s e b o群と試験化合物投与群とに有意な差 はなく、 投与期間において順調な体重量増加が認められ、 健康状態を維持してい た （図 7、 表 3)。
〔表 3〕
Figure imgf000082_0001
表 3—1
Figure imgf000082_0002
表 3— 2 このことは、 試験化合物がインビポでの毒性を有しないことを意味する。 まとめ
以上より、 本発明の化合物は、 顕著な細胞毒性及びインビボ毒性を示さずに、 H C V及びィンフルェンザウィルスに対する抗ウィルス活性を有することが示さ れた。 産業上の利用可能性
本発明者らは、 多数の化合物を合成し、 スクリーニングした結果、 式 Iの構造 を有する化合物が優れた抗 R N Aウィルス活性を有することを見出した。 現在利 用できる抗ウィルス剤は非常に限られており、 本発明に係る薬剤は新たな治療選 択肢を提供しうるものである。 すなわち本発明は、 R N Aウィルス感染症の治療 に新たな選択肢を提供するものである。

Claims

請求の範囲
1 . 宿主細胞のタンパク質リン酸化酵素を阻害する化合物を有効成分として含 有する抗ウィルス剤。
2 . 前記タンパク質リン酸化酵素が、 ウィルス感染で活性化される宿主細胞の タンパク質リン酸化酵素である、 請求項 1に記載の抗ウィルス剤。
3 . 前記タンパク質リン酸化酵素が、 ウィルスタンパク質の翻訳を制御する宿 主細胞のタンパク質リン酸化酵素である、請求項 1又は 2に記載の抗ゥィルス剤。
4 . ウィルス感染症が R N Aウィルスによって引き起こされるものである、 請 求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の抗ウィルス剤。
5 . ウィルス感染症が C型肝炎ウィルス、 又はインフルエンザウイルスによつ て引き起こされるものである、 請求項 1〜4のいずれか 1項に記載の抗ウィルス 剤。
6 . 以下の一般式 （ I )
Figure imgf000084_0001
(式中、 R 1は、 ハロゲン原子、 又はハロゲン原子で置換されていてもよい 6ァ ノレキ /レ基を示し；
R2は、 水素原子又は C -6アルキル基を示し；
R3は、 C ,— 6アルキル基、 アルコキシ基若しくはハロゲン原子で置換され ていてもよいフエエル基又は単環式複素環基を示し； '
Qは、 一 C (O) 一、 一 C (S) ―、 一 S〇2—、 - C (O) NHC (O) —、 一 C (S) NHC (O) 一、 又は一 C (O) NHC (S) —を示し；
Wは、 ハロゲン原子、 又はハロゲン原子で置換されていてもよい単環式又は二 環式含窒素複素環基を示す。）
で表される化合物、 又はその製薬上許容される塩を含有する、 RNAウィルス感 染症の予防又は治療剤。
7. 前記式 （I ) 中、
R1は、 フッ素、 又はトリフルォロメチル基を示し；
R2は、 水素原子であり ；
R3は、 メチル基、 メ トキシ基若しくはフッ素で置換されていてもよいフエ-ル 基、 又はメチル基で置換されていてもよい単環式複素環基を示し；
Qは、 一 C (O) 一、 - C ( S) 一、 - C (O) NHC (O) 一、 又は一 C (S) NHC (O) 一を示し；
Wは、 フッ素原子、 又は環原子として窒素 1個と炭素 5〜 9個を含む飽和単環 式又は二環式複素環基を示す、
請求項 6に記載の RN Aウィルス感染症の予防又は治療剤。
8. 前記式 （ I ) の化合物が、 以下のもの ：
一 8 —
Figure imgf000086_0001
CSZZS0/600Zdf/X3d .9Ϊ6ΪΪ/600Ζ OAV
Figure imgf000087_0001
からなる群より選択される化合物又はその製薬上許容される塩である、 請求項 6 に記載の RN Aウィルス感染症の予防又は治療剤。
9. 前記式 （ I ) 中、
R1は、 トリフルォロメチル基を示し；
R2は、 水素原子であり ；
R3は、 フエ-ル基、 又は単環式複素環基を示し；
Qは、 — C (O) 一、 — C (S) 一、 又は一 C ( S) NHC (O) 一を示し； Wは、 環原子として窒素 1個と炭素 5〜 9個を含む飽和単環式又は二環式複素 環基を示す、
請求項 6に記載の R N Aウィルス感染症の予防又は治療剤。
10. 前記式 （ I) の化合物が、 以下のもの：
Figure imgf000088_0001
に記載の R N Aウィルス感染症の予防又は治療剤。
1 1. 以下のもの ：
Figure imgf000089_0001
からなる群より選択される化合物、 若しくはその製薬上許容される塩、 又はこれ らの水和物。
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