[go: up one dir, main page]

WO2009075605A1 - Souche du champignon hypsizygus ultramarius (bull.) redhead s-ulm 1 utilisée pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante et procédé pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante sur la base de cette souche - Google Patents

Souche du champignon hypsizygus ultramarius (bull.) redhead s-ulm 1 utilisée pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante et procédé pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante sur la base de cette souche Download PDF

Info

Publication number
WO2009075605A1
WO2009075605A1 PCT/RU2008/000563 RU2008000563W WO2009075605A1 WO 2009075605 A1 WO2009075605 A1 WO 2009075605A1 RU 2008000563 W RU2008000563 W RU 2008000563W WO 2009075605 A1 WO2009075605 A1 WO 2009075605A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
antitumor activity
strain
agent
submerged culture
producing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2008/000563
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2009075605A8 (ru
Inventor
Larisa Mikhailovna Krasnopolskaya
Maria Ilyinichna Leontieva
Anastasia Vitalievna Avtonomova
Igor Vladimirovich Belitsky
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
OTKRYTOE AKTSIONERNOE OBSCHESTVO ZAVOD EKOLOGICHESKOY TEKHNIKI I EKOPITANIYA 'DIOD'
Borovichsky Kombinat Ogneuporov OAO
Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo Zavod Ekologicheskoy Tekhniki I Ekopitaniya "Diod"
Original Assignee
OTKRYTOE AKTSIONERNOE OBSCHESTVO ZAVOD EKOLOGICHESKOY TEKHNIKI I EKOPITANIYA 'DIOD'
Borovichsky Kombinat Ogneuporov OAO
Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo Zavod Ekologicheskoy Tekhniki I Ekopitaniya "Diod"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by OTKRYTOE AKTSIONERNOE OBSCHESTVO ZAVOD EKOLOGICHESKOY TEKHNIKI I EKOPITANIYA 'DIOD', Borovichsky Kombinat Ogneuporov OAO, Otkrytoe Aktsionernoe Obschestvo Zavod Ekologicheskoy Tekhniki I Ekopitaniya "Diod" filed Critical OTKRYTOE AKTSIONERNOE OBSCHESTVO ZAVOD EKOLOGICHESKOY TEKHNIKI I EKOPITANIYA 'DIOD'
Publication of WO2009075605A1 publication Critical patent/WO2009075605A1/ru
Publication of WO2009075605A8 publication Critical patent/WO2009075605A8/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi

Definitions

  • the strain of fungus Nursizugis itaria (BuIl.) Redhead S-ulml used to obtain funds with antitumor activity and antioxidant action and a method of obtaining funds with antitumor activity and antioxidant action, based on this strain
  • the technical field The invention relates to biotechnology and medicine and can be used to obtain funds with antitumor activity and antioxidant effect by cultivating a strain of basidiomycete in a liquid nutrient medium in an immersed culture.
  • Basidiomycetes are known that have antitumor and antioxidant properties: Leptipids, Lysiditis, Tatesisolor, Grifola, Schizorhulitis sottype, and others. On their basis, such as onoanole, Rozanomolanum, Anthynolum, Anthraeanum, and Anthynolum. The sensitivity of tumors, depending on their nature to these drugs is different.
  • the recommended regimen for administering anticancer drugs from mushrooms is intravenous, because with other methods of administration, for example, when administered orally, the antitumor effect of the drugs can decrease sharply until it disappears.
  • basidiomycetes are grown for 10-21 days in a submerged culture or 2-5 months to obtain fruiting bodies (Wasser, 2002, Smith et al., 2003). Therefore, the search for new species and strains of basid fungi, producers of biologically active metabolites, is relevant.
  • the task is to detect species capable of rapid growth in culture and the synthesis of biologically active substances that act when administered orally.
  • Known strain Gapoderta lysidit used to obtain funds with antitumor activity, and a method of obtaining funds - proteoglycan G009, which has antitumor activity.
  • the specified strain is cultivated on a liquid nutrient medium in an immersed culture, followed by separation of the mycelium and the allocation of funds from the mycelium, possessing antitumor activity - proteoglycan G009.
  • seed is prepared.
  • the strain is cultivated with stirring 180 rpm at 25 ° C for 10 days until pellets with a diameter of about 5 mm are obtained.
  • the resulting culture is transferred to fresh medium in an amount of 5% and re-grown for 10 days.
  • the resulting seed in an amount of 5% is seeded with fresh medium and cultivated at 180 rpm on a shaker for 7 days.
  • the mycelium is separated from the culture fluid and proteoglycan is isolated from it - an agent with antitumor activity, it is purified and its antitumor activity against sarcoma 180 vaccinated in male mice is checked (RU 2082 755 CI, June 27, 1997).
  • the disadvantage of the above strain is the long preparation of seed (20 days), prolonged fermentation (7 days) and the complex process of isolating an antitumor agent from mycelium.
  • Known strain Nursiugrit itari 812, used to obtain funds with antitumor activity and a method of obtaining funds with antitumor activity from mycelium of the above strain.
  • the strain Nursizugs iltarite is cultivated on a nutrient medium containing: 2% glucose, OD% peptone, OD% yeast extract, OD% KH 2 PO 4 , 0.1% MgSO 4 , 10 ml / l saline (18 mM iron (II) sulfate , 3.7 mM manganese sulphate, 1.5 mM zinc sulphate, 0.8 mM copper sulphate).
  • the duration of submerged cultivation is 2-3 weeks.
  • the mycelium After cultivation, the mycelium is separated and an antitumor agent is isolated from it by extraction with various reagents, such as 70% ethanol, a mixture containing 33% ethyl acetate and 50% methanol, a mixture containing 22% ethyl acetate and 11% methanol, or a mixture consisting of 33% chloroform and 50% methanol (US 200600057157, March 16, 2006, A61K 36/07).
  • various reagents such as 70% ethanol, a mixture containing 33% ethyl acetate and 50% methanol, a mixture containing 22% ethyl acetate and 11% methanol, or a mixture consisting of 33% chloroform and 50% methanol (US 200600057157, March 16, 2006, A61K 36/07).
  • the specified source does not describe the cultivation conditions of the strain (the exact duration of the process, pH level, aeration), and does not describe the extraction conditions (ratio of mycelium and extractant).
  • Testing extracts of mycelium of the indicated fungus was carried out in ip vitro experiments. Of the extracts obtained, only mycelium extract obtained by extraction with a mixture containing 33% chloroform and 50% methanol inhibited the growth of K562 cell line - human myelogenous leukemia by 56.7% and could cause apoptosis of these cells. The antioxidant effect of the extracts has not been studied.
  • the problem is also solved by the method of obtaining funds with antitumor activity and antioxidant action, including the cultivation of a basidiomycete strain in a submerged culture by aeration on a nutrient medium containing carbon, nitrogen and mineral salts, and the allocation of funds with antitumor activity and antioxidant an action in which of the basidiomycetes for cultivation using the above-described strain of the fungus Nursizugs itaria.
  • the allocation of funds with antitumor activity and antioxidant effect is carried out from the submerged culture obtained after culturing the strain by heat treatment: boiling or autoclaving at 1.2-1.8 atm. within 1.5 to 3 hours. After cultivation of the strain, the mycelium is separated from the obtained submerged culture, dried, and an agent having antitumor activity and antioxidant action is isolated from it. In addition, the allocation of funds with antitumor activity and antioxidant effect, carried out by extraction of dry mycelium with water or ethanol.
  • the strain Nursizugis ilaria S-ulml was obtained by isolating the primary culture from the fruiting body of the fungus Nursizugis itaria and the implementation of selection operations. Isolation of the primary pure mycelial culture was carried out from the fetal body of Nursisugs itaria. Mushroom slices cut from the middle fruit body, under sterile conditions, were transferred to a nutrient medium - potato-glucose agar. The grown mycelium was identified as a pure basidial culture by the presence of buckles on the mycelium. Mycelium Nursizugs itariiis, stored in a test tube, was seeded in a liquid medium and grown in submerged culture in flasks on a rotary shaker.
  • the sawdust-grain substrate was seeded with the obtained submerged mycelium, on which under sterile conditions fruiting bodies of Nursisugs itaria were obtained.
  • Bazidiospores obtained from mature fruit bodies by the spore imprint method were subjected to alternating cooling and heating, and then plated into a liquid medium.
  • the Nursizugs ilaria colonies obtained in the submerged culture were planted on Petri dishes with a dense agar medium (potato glucose agar). S-ulml culture was selected according to kinetic parameters of growth (high growth rate), morphological characteristics (dense, well-developed mycelium), antitumor activity and antioxidant effect.
  • the strain Nursizugis ilaria S-ulml is stored in the Culture Collection of microorganisms of the State Research Institute for the search for new antibiotics named after G.F. Gauze RAMS (acronym INA) under N ° 01060.
  • the strain Nursizugis ilaria S-ulml belongs to the Basidiomycetes (detached Vasidiomusota).
  • Potato-glucose agar (KG A) composition a potato broth - 1 l (200 g of potatoes, diced l ⁇ l ⁇ l cm, filled with 1 l of tap water, boiled for 30 minutes, The broth is cooled, brought to a liter), glucose 20 g / l, agar 20 g / l.
  • the colony of the strain on the KGA medium :
  • BHD Chapek-Doks environment with yeast extract
  • the growth rate of the diameter of the mycelium is 10-15 mm per day at 25-28 0 C.
  • Characteristics of the fruit bodies Nursizugis s-ulmlari grown on wheat grain -
  • the hat is flat, convex-prostrated over time, open, with a curled, wavy edge.
  • the color of the hat is from whitish through beige to fawn or pale whitish-brownish (see Figure 1). records: descending, frequent, wide, broad-grown, white, whitish yellowish with age
  • - the leg is eccentrically attached, thick, uneven thickness (may be extended to the base), sometimes curved.
  • - fruiting bodies solitary or in a group of 2-5 fruiting bodies.
  • the size of the fruiting body is on average 4-25 cm in diameter of the cap.
  • the Nursizugs ilaria S-ulml strain absorbs glucose well, sucrose and xylose are less good.
  • the S-ulml strain prefers peptone and soy flour.
  • the optimal pH range for the growth and development of the strain S-ulml is 4.5 - 6.5.
  • the strain is stored on a slanted agar medium KGA (potato glucose agar), diluted three times with the addition of wood shavings or sawdust of hardwood.
  • Immersed cultivation is carried out in flasks with a volume of 0.5 and 0.75 l on a rotary shaker with a rotation speed of 220 rpm. at 25 ° -28 ° C.
  • the submerged cultivation process includes the cultivation of liquid seed and the actual fermentation.
  • Medium for immersed cultivation contains glucose - 20 g / l, peptone - 10 g / l, potassium dihydrogen phosphate - 2.5 g / l and magnesium sulfate - 0.25 g / l.
  • the duration of the process of obtaining liquid seed is 3 days, fermentation is 3-4 days.
  • the final pH of the culture fluid after fermentation is 4.5 to 5.5.
  • FIG. 1 depicts the fruiting body of Nursisugis ilaria S-ulml.
  • Example 1 Obtaining an immersed culture of the fungus Nursizügis ilaria S-ulml.
  • Submerged cultivation of the strain Nursizugis ilaria S-ulml was carried out in 500 and 750 ml rocking flasks.
  • the process of submerged cultivation was carried out in two stages. The first stage was the cultivation of liquid seed. At the second stage of submerged cultivation, fermentation occurred in order to obtain vegetative biomass.
  • Liquid seed was grown for 3 days in 500 ml flasks with 150 ml of medium containing glucose - 20 g / l, peptone - 10 g / l, potassium dihydrogen phosphate - 2.5 g / l and magnesium sulfate - 0.25 g / l
  • the culture was grown on a circular shaker (220 rpm) at a temperature of 26 ° C.
  • a culture grown on jambs with potato-glucose agar was used, based on the value of VA cant on the flask.
  • the second stage of submerged cultivation - fermentation in order to obtain vegetative biomass was carried out on a circular shaker 220 rpm, in 750 ml flasks with 200 ml of medium.
  • the cultivation temperature was 25 0 C.
  • Medium for immersed cultivation contained glucose - 20 g / l, peptone - 10 g / l, potassium dihydrogen phosphate - 2.5 g / l and magnesium sulfate '- 0.25 g / l.
  • the maximum yield of air-dry biomass with a water content of 5% was 15.3 g / l for 4 days.
  • Example 2. Obtaining funds with antitumor activity and antioxidant action.
  • An immersed culture was obtained as described in Example 1, but the fermentation process was carried out at a temperature of 28 0 C.
  • the immersed culture thus obtained was autoclaved at 1.5 atm. within 2 hours. After autoclaving, the liquid phase was separated from the solid one and a preparation having antitumor activity and antioxidant effect was obtained in the form of a light yellow transparent liquid.
  • Example 3 Obtaining funds with antitumor activity and antioxidant action.
  • Example 2 The submerged culture obtained in Example 1 was filtered, separating the mycelium from the culture medium.
  • the mycelium was washed with distilled water and dried to constant weight at a temperature not exceeding 45 ° C.
  • a weighed portion of dried and ground material at a rate of 36 g / l was filled with distilled water. Extraction was carried out in an autoclave at a rate of 1.2 atm. 3 hours. After that, the extract was separated by filtration through filter paper to obtain an agent with antitumor activity and antioxidant effect, in the form of a clear, light yellow liquid.
  • Example 4 Obtaining funds with antitumor activity and antioxidant action.
  • Example 5 Obtaining funds with antitumor activity and antioxidant action.
  • Example 2 The submerged culture obtained in Example 1 was filtered, separating the mycelium from the culture medium.
  • the mycelium was washed with distilled water and dried to constant weight at a temperature not exceeding 45 "C 5 prepared three sample dried and crushed mycelium and the rate of 60 g / l was poured with ethanol: first - 40%, second - 70% and third - 96%
  • the obtained suspensions in the flasks were put on a rocking chair and kept at 220 rpm and a temperature of 25 0 C.
  • the extract was then filtered off from the mycelium and an antitumor agent and antioxidant agent was obtained in the form of a light yellow liquid.
  • Example 6 Evaluation of the antitumor activity of the funds obtained in examples 1-5.
  • mice were obtained from the nursery RAMS "Krukovo". After admission, the mice were quarantined for 21 days.
  • Lymphoma was maintained under syngeneic conditions in ascites form by serial intraperitoneal passages on mice of the DB A / 2 line.
  • the tumor was inoculated under the skin of the right side with 10 b cells per day "0".
  • the effect of the studied drugs was evaluated by oral administration. Treatment was started 48 hours after tumor inoculation.
  • Each of the agents was administered using a probe intragastric daily 1 time per day for 10 days at 0.3 ml / mouse.
  • the tool obtained in example 4 was dissolved in distilled water at the rate of 2 and 20 mg / kg / day.
  • the agent obtained in example 1 was administered in starch paste at 0.3 ml / mouse / day at the rate of 50 mg / kg / day.
  • TPO Tumor growth inhibition
  • TPO tumor growth inhibition coefficient
  • Example 5 When treating animals with an antitumor activity and antioxidant effect obtained in Example 4, it was shown that at a dose of 2 mg / kg it showed a higher antitumor effect compared to the aqueous extract (72-86%). Comparison of the antitumor effect of the agent with antitumor activity and antioxidant effect obtained in Example 4 at a dose of 2 mg / kg and 20 mg / kg showed that a dose of 2 mg / kg is a much more effective oral dose. Funds received by Example 5, had an average activity with a TPO coefficient of 52-58%.
  • Example 7 Evaluation of the antioxidant effect of the funds obtained in examples 2-5.
  • the total content of antioxidants in the agent with antitumor activity and antioxidant effect obtained in Examples 2-5 was determined by coulometric method using electro-generated bromine on the analyzer “Expert-006” NPK Ekoniks-Expert. The instrument was calibrated with a standard quercetin solution. Total antioxidant capacity (AOE) was expressed in mg of quercetin per 100 ml of product. When using the funds obtained in example 4, it was previously dissolved in a ratio of 2 mg in 10 ml of distilled water.
  • AOE funds obtained in example 2 amounted to 35 mg of quercetin per 100 ml of funds.
  • the AOE of the agent obtained in Example 3 was 31 mg of quercetin per 100 ml of agent.
  • the AOE of the agent obtained in Example 4 was 42 mg of quercetin per 100 ml of agent.
  • the strain of the fungus Nursizugis ilaria (BuIl.) Redhead.
  • S-ulml has a higher growth rate and not only high antitumor activity, but also an antioxidant effect.
  • the present invention allows to obtain a new strain of fungus Nursizugis ilaria S-ulml, which has a higher growth rate in a submerged culture (3 days compared to 7-14 days).
  • the resulting product has not only antitumor activity, but also an antioxidant effect.
  • the tool can be obtained in the form of a clear liquid of light yellow color or in the form of a light beige powder.
  • preparations in the form of tablets, capsules, tinctures with the addition of fillers, vitamins and other agents that increase the biological activity of the agent can be obtained.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Штамм гриба Нурsizуgиs иlтаriиs (BuIl.) Rеdhеаd S-ulml, используемый для получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием и способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, на основе этого штамма
Область техники Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, путем культивирования штамма базидиомицета на жидкой питательной среде в погруженной культуре.
Предшествующий уровень техники
Известны базидиальные грибы, обладающие противоопухолевыми и антиоксид антными свойствами: Lепtiпиs еdоdеs, Gапоdеrта lисidит, Тrатеtеs vеrsiсоlоr, Grifоlа frопdоsа, Sсhizорhуllит соттипе и др. На их основе созданы такие противоопухолевые препараты как лентинан, Сан-Рекам, крестин, грифолан, сонифилан. Чувствительность опухолей, в зависимости от их природы, к этим препаратам различна. Рекомендуемый режим введения противоопухолевых препаратов из грибов - внутривенный, поскольку при других способах введения, например, при пероральном введении, противоопухолевый эффект препаратов может резко снижаться вплоть до исчезновения. Для получения противоопухолевых препаратов и антиоксидантов базидиальные грибы выращивают в течение 10-21 суток в погруженной культуре или 2-5 месяцев для получения плодовых тел (Wаssеr, 2002, Smith еt аl., 2003). Поэтому актуален поиск новых видов и штаммов базидальных грибов - продуцентов биологически активных метаболитов. Задача состоит в обнаружении видов, способных к быстрому росту в культуре и синтезу биологически активных веществ, осуществляющих свое действие при пероральном введении.
Известен штамм Gапоdеrта lисidит, используемый для получения средства, обладающего противоопухолевой активностью, и способ получения средства - протеогликана G009, обладающего противоопухолевой активностью. Указанный штамм культивируют на жидкой питательной среде в условиях погруженной культуры с последующим отделением мицелия и выделением из мицелия средства, обладающего противоопухолевой активностью - протеогликана G009. В качестве жидкой питательной среды используют среду, содержащую: 50 г глюкозы, 20 г пептона, 0,87 г KH2PO4, 0,5 г MgSO4, 10 мг FeCl2x6H2O, 7 мг MnCl2x4H2O, 10 мг ZnSO3x5H2O, 4 мг ZnCl2 на 1 л воды, рН среды - 5,5. Вначале готовят посевной материал. Для этого штамм культивируют при перемешивании 180 об/мин при 250C в течение 10 суток до получения пеллет диаметром около 5 мм. Полученную культуру переносят в свежую среду в количестве 5 % и вновь выращивают в течение 10 суток. Полученным посевным материалом в количестве 5% засевают свежую среду и культивируют при 180 об/мин на качалке в течение 7 суток. Мицелий отделяют от культуральной жидкости и выделяют из него протеогликан — средство, обладающее противоопухолевой активностью, очищают его и проверяют его противоопухолевую активность в отношении саркомы 180, привитой самцам мышей (RU 2082 755 CI, 27.06.1997). Недостатком вышеописанного штамма является длительное приготовление посевного материала (20 суток), продолжительная ферментация (7 суток) и сложный процесс выделения из мицелия противоопухолевого средства. Известен штамм Нурsi∑уgиs иlтаriит 812, используемый для получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью из мицелия вышеуказанного штамма. Штамм Нурsizуgиs иlтаriит культивируют на питательной среде, содержащей: 2% глюкозы, ОД % пептона, ОД % дрожжевого экстракта, ОД % KH2PO4, 0,1% MgSO4, 10 мл/л солевого раствора (18мM сульфата железа (II), 3,7 мМ сульфата марганца, 1,5 мМ сульфата цинка, 0,8 мМ сульфата меди). Длительность погруженного культивирования - 2-3 недели. После культивирования отделяют мицелий и из него выделяют средство, обладающее противоопухолевой активностью, путем экстракции различными реагентами, такими как 70% этанол, смесью содержащей 33% этилацетата и 50% метанола, смесью, содержащей 22% этилацетата и 11% метанола или смесью, состоящей из 33% хлороформа и 50% метанола (US 200600057157, 16.03.2006, A61K 36/07).
В указанном источнике не описаны условия культивирования штамма (точная длительность процесса, уровень рН, аэрация), не описаны и условия экстракции (соотношение мицелия и экстрагента). Тестирование экстрактов мицелия указанного гриба проводили в опытах iп vitrо. Из получаемых экстрактов только экстракт мицелия, полученный с помощью экстракции смесью, содержащей 33% хлороформа и 50% метанола, ингибировал рост клеток линии K562 - миелогенной лейкемии человека на 56,7% и мог вызывать апоптоз этих клеток. Антиоксидантное действие экстрактов изучено не было.
Раскрытие изобретения
Поставленная задача решается Штаммом гриба Нурsizуgиs иlтаriиs (BuIl.) Rеdhеаd S-ulml - 01060 (KKM ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф.Гаузе РАМН), используемым для получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием.
Поставленная задача решается также способом получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, включающим культивирование штамма базидиомицета в погруженной культуре при аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, и выделение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, в котором из базидиомицетов для культивирования используют вышеописанный штамм гриба Нурsizуgиs иlтаriиs.
При этом выделение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, осуществляют из погруженной культуры, полученной после культивирования штамма, путем термообработки: кипячением или автоклавированием при 1,2-1,8 атм. в течение 1,5 - 3 часа. После культивирования штамма из полученной погруженной культуры отделяют мицелий, сушат его, и из него выделяют средство, обладающее противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием. Кроме того, выделение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, осуществляют путем экстракции сухого мицелия водой или этанолом.
Штамм Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml получен путем выделения первичной культуры из плодового тела гриба Нурsizуgиs иlтаriиs и осуществления селекционных операций. Выделение первичной чистой мицелиальной культуры было проведено из плодового тела Нурsizуgиs иlтаriиs. Кусочки гриба, вырезанные из середины плодового тела, в стерильных условиях были перенесены на питательную среду - картофельно-глюкозный агар. Выросший мицелий был идентифицирован, как чистая базидиальная культура по наличию пряжек на мицелии. Мицелий Нурsizуgпs иlтаriиs, хранившийся в пробирке, был посеян в жидкую среду и выращен в погруженной культуре в колбах на ротационной качалке. Полученным погруженным мицелием был засеян опилочно-зерновой субстрат, на котором в стерильных условиях были получены плодовые тела Нурsizуgиs иlтаriиs. Базидиоспоры, полученные из зрелых плодовых тел методом спорового отпечатка, были подвергнуты чередованию охлаждения и нагревания и, затем, высеяны в жидкую среду. Полученные в погруженной культуре колонии Нурsizуgиs иlтаriиs были посажены на чашки Петри с плотной агаризованной средой (картофельно- глюкозный агар). Культура S-ulml была отобрана по кинетическим параметрам роста (высокой скорости роста), морфологическим признакам (плотный, хорошо развитый мицелий), противоопухолевой активности и антиоксидантному действию. Штамм Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml хранится в Коллекции культур микроорганизмов ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе РАМН (акроним ИНА) под N° 01060. Штамм Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml относится к Базидиомицетам (отд. Ваsidiоmусоtа).
Характеристика мицелия Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml на плотных агаризованных средах. 1. Картофельно-глюкозный агар (КГ А) состав: отвар картофеля - 1 л (200 г картофеля, нарезанного кубиками lхlхl см, залитые 1 л водопроводной воды, прокипячены в течение 30 мин. Отвар охлажден, доведен до литра), глюкоза 20 г/л, агар 20 г/л. Колония штамма на среде КГА:
- ватно-войлочная,
- белая,
- интенсивность развития воздушного мицелия 2-3 бала по трехбалльной шкале, - край колонии ровный, слегка приподнятый к краю колонии,
- отсутствует концентрическая зональность,
- отсутствует радиальная исчерченность,
- скорость роста диаметра мицелия 15-20 мм в сутки при 25-280C.
2. Среда Чапек-Докса с дрожжевым экстрактом (ЧДд) состав: Вода 1 л, дигидрофосфат калия 1 г, сульфат магния 0,5 г, нитрат натрия 2 г, дрожжевой экстракт 10 г, глюкоза 30 г, агар 20 г. Колония штамма на среде ЧДд:
- ватная,
- белая,
- интенсивность развития воздушного мицелия 3 бала по Зх-бальной шкале,
- край колонии ровный, приподнятый, пушистый к краю колонии,
- есть концентрическая зональность,
- отсутствует радиальная исчерченность, - скорость роста диаметра мицелия 10-15 мм в сутки при 25-280C.
3. Пшеничный агар с кукурузным экстрактом (пш+кэ) рН 6,2, состав: Отвар зерен пшеницы 1 л (100 г пшеницы, залитые 1 л водопроводной воды, прокипячены в течение 1 ч. Отвар охлажден, доведен до литра), кукурузный экстракт 10 мл/л, агар 20 г/л. Колония штамма на среде пш+кэ:
- войлочно-спутанная,
- белая, - интенсивность развития воздушного мицелия 2 бала по трехбалльной шкале,
- край колонии ровный,
- отсутствует концентрическая зональность,
- отсутствует радиальная исчерченность, - скорость роста диаметра мицелия 19-22 мм в сутки при 25-28°C.
Характеристика плодовых тел Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml, выращенных на зерне пшеницы: - шляпка плоская, выпукло-распростертая со временем распростертая, с завернутым, волнистым краем. Цвет шляпки от беловатого через бежевый к палевому или бледно-беловато-буроватому (см. рисунок 1). пластинки: нисходящие, частые, широкие, широкоприросшие, белые, беловатые с возрастом желтоватые
- ножка эксцентрически прикрепленная, толстая, неравномерной толщины (может быть расширенная к основанию), иногда изогнутая. - плодовые тела одиночные или в группе по 2-5 плодовых тел.
- размер плодового тела в среднем 4-25 см в диаметре шляпки.
Из источников углерода штамм Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml хорошо усваивает глюкозу, менее хорошо сахарозу и ксилозу. Среди источников азота штамм S- ulml предпочитает пептон и соевую муку. Оптимальный диапазон значений рН для роста и развития штамма S- ulml является 4,5 - 6,5. И
Штамм хранят на скошенной агаризованной среде КГА (картофельно-глюкозный агар), разведенной в три раза с добавлением древесной стружки или опилок лиственных пород. Погруженное культивирование осуществляют в колбах объемом 0,5 и 0,75 л на ротационной качалке со скоростью вращения 220 об./мин. при 25°-28°C. Процесс погруженного культивирования включает выращивание жидкого посевного материала и собственно ферментацию. Среды для погруженного культивирования содержат глюкозу - 20 г/л, пептон - 10 г/л, дигидрофосфат калия - 2,5 г/л и сульфат магния - 0,25 г/л. Длительность процесса получения жидкого посевного материала составляет 3 суток, ферментация - 3-4 суток. Конечный уровень рН культуральной жидкости после ферментации - 4,5 - 5,5.
Краткое описание фигур чертежей
На Фиг. 1 изображено плодовое тело Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml.
Лучший пример осуществления изобретения
Изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами, которые не ограничивают объем притязаний. Пример 1. Получение погруженной культуры гриба Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml.
Погруженное культивирование штамма Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml осуществляли в качалочных колбах на 500 и 750 мл. Процесс погруженного культивирования проводили в два этапа. Первый этап представлял собой выращивание жидкого посевного материала. На втором этапе погруженного культивирования происходила ферментация с целью получения вегетативной биомассы.
Жидкий посевной материал выращивали в течение 3 суток в колбах объемом 500 мл со 150 мл среды, содержащей глюкозу - 20 г/л, пептон - 10 г/л, дигидрофосфат калия - 2,5 г/л и сульфат магния - 0,25 г/л. Выращивание культуры проводили на круговой качалке (220 об/мин) при температуре 260C. Для засева колб с посевной средой использовали культуру, выращенную на косяках с картофельно-глюкозным агаром, из расчета VA косяка на колбу. Второй этап погруженного культивирования - ферментация с целью получения вегетативной биомассы, проводили на круговой качалке 220 об/мин, в колбах на 750 мл с 200 мл среды. Температура культивирования составляла 250C. Среда для погруженного культивирования содержала глюкозу - 20 г/л, пептон - 10 г/л, дигидрофосфат калия - 2,5 г/л и сульфат магния '— 0,25 г/л. Максимальный выход воздушно-сухой биомассы с содержанием воды 5% составил 15,3 г/л на 4 сутки. Пример 2. Получение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием.
Погруженную культуру, получили, как описано в примере 1, но процесс ферментации осуществляли при температуре 280C. Полученную таким образом погруженную культуру автоклавировали при 1,5 атм. в течение 2 часов. После автоклавирования жидкую фазу отделили от твердой и получили средство, обладающее противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, в виде светло-желтой прозрачной жидкости.
Пример 3. Получение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием.
Погруженную культуру, полученную по примеру 1, фильтровали, отделяя мицелий от культуральной среды. Мицелий промывали дистиллированной водой и сушили до постоянного веса при температуре, не превышающей 45° С. Навеску высушенного и измельченного материала из расчета 36 г/л заливали дистиллированной водой. Экстракцию осуществляли в автоклаве при режиме 1,2 атм. 3 часа. После этого экстракт отделяли фильтрованием через фильтровальную бумагу и получали средство, обладающее противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, в виде прозрачной светло- желтой жидкости. Готовый экстракт хранили при t= - 2O0C.
Пример 4. Получение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием.
К одному объему водного экстракта сухого мицелия, полученного по примеру 3, добавляли четыре объема 96% этанола, выпавший осадок отделяли центрифугированием при 3000 об./мин. в течение 20 минут. Затем осадок растворяли в небольшом количестве воды, раствор фильтровали, лиофилизировали и получали средство, обладающее противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, в виде порошка светло- бежевого цвета. Пример 5. Получение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием.
Погруженную культуру, полученную по примеру 1, фильтровали, отделяя мицелий от культуральной среды. Мицелий промывали дистиллированной водой и сушили до постоянного веса при температуре, не превышающей 45 "C5 приготовили три навески высушенного и измельченного мицелия и из расчета 60 г/л заливали их этанолом: первую - 40%, вторую - 70% и третью - 96%. Полученные взвеси в колбах ставили на качалку и при 220 об/мин и температуре 250C выдерживали сутки. Затем экстракт фильтрованием отделяли от мицелия и получали средство, обладающее противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием виде светло-желтой жидкости.
Пример 6. Оценка противоопухолевой активности средств, полученных по примерам 1-5.
Полученные средства испытывали в опытах iп vivо на взрослых самцах мышей-гибридов (C57B1/6 х DBA/2)Fi (далее B6D2Fi) с перевиваемой солидной T- клеточной лимфомой P388.
Мышей получали из питомника РАМН «Kpюкoвo». После поступления мышей выдерживали в карантине 21 день.
Лимфому поддерживали в сингенных условиях в асцитной форме серийными внутрибрюшинными пассажами на мышах линии DB А/2. В опыте опухоль прививали под кожу правого бока по 10б клеток в день «0». Действие изучаемых средств оценивали при пероральном введении. Лечение начинали через 48 часов после прививки опухоли. Каждое из средств вводили с помощью зонда внутригастрально ежедневно 1 раз в сутки в течение 10 суток по 0,3 мл/мышь. Средство, полученное по примеру 4, растворяли в дистиллированной воде из расчета 2 и 20 мг/кг/сутки. Средство, полученное по примеру 1 , вводили в крахмальном клейстере по 0,3 мл/мышь/сутки из расчета 50 мг/кг/сутки. Количество мышей в контрольных и экспериментальных группах составляло 8-10 животных. В течение опытов следили за общим состоянием мышей, изменением массы тела, прививаемостью опухоли, динамикой роста опухоли. Торможение роста опухоли (TPO) рассчитывали по формуле: TPO (%)=(MK- Mo)/(Mк)xl00, где MK и M0 - средняя расчётная масса опухоли в контроле и опыте, соответственно. Массу опухоли рассчитывали по формуле M (мг) = (а х b х c)/2, где M -расчётная масса опухоли, а, b, с - 3 наибольших взаимоперпедикулярных диаметра опухолевого узла в мм. Достоверность различий средних значений массы опухоли определяли по t-критерию Стьюдента. За достоверные принимали различия при P < 0,05. Коэффициент торможения роста опухоли (TPO) при лечении средствами, полученными по примерам 1-5, составил 43-86%. Полученные данные по противоопухолевой активности представлены в таблице 1. При введении мышам биомассы Нурsizуgиs иlтаriиs штамм S-ulml, полученной по примеру 1, TPO составил 43%. Средства, полученные по примерам 2-5 имели более высокую противоопухолевую активность. TPO при введении средства, полученного по примеру 2 составило 60 %. При введении мышам средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, полученного по примеру 3, коэффициент торможения роста опухоли составлял 63-80%. При лечении животных средством, обладающем противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, полученном по примеру 4, было показано, что в дозе 2 мг/кг оно демонстрировало более высокий противоопухолевый эффект по сравнению с водным экстрактом (72-86%). Сравнение противоопухолевого действия средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, полученного по примеру 4, в дозе 2 мг/кг и 20 мг/кг показало, что значительно более эффективной дозой при пероральном введении является доза 2 мг/кг. Средства, полученные по примеру 5, обладали средней активностью с коэффициентом TPO - 52-58%.
Пример 7. Оценка антиоксидантного действия средств, полученных по примерам 2-5. Суммарное содержание антиоксидантов в средстве, обладающем противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, полученном по примерам 2- 5, определяли кулонометрическим методом с помощью электрогенерированного брома на анализаторе «Экcпepт- 006» НПК ООО «Экoникc-Экcпepт». Прибор калибровали по стандартному раствору кверцетина. Суммарную антиоксидантную емкость (AOE) выражали в мг кверцетина на 100 мл средства. При использовании средства, полученного по примеру 4, его предварительно растворяли в соотношении 2 мг в 10 мл дистиллированной воды.
Антиоксидантное действие средств, полученных по примерам 2-5, представлено в таблице 2.
AOE средства, полученного по примеру 2, составило 35 мг кверцетина на 100 мл средства. AOE средства, полученного по примеру 3, было 31 мг кверцетина на 100 мл средства. AOE средства, полученного по примеру 4, было 42 мг кверцетина на 100 мл средства. AOE средств, полученных по примеру 5, было для 40% этанола - 114 мг кверцетина на 100 мл средства, 70% - 440 мг кверцетина на 100 мл средства, 96% - 524 мг кверцетина на 100 мл средства.
Результаты показали, что AOE в средствах, полученном по примеру 5, в несколько раз выше, чем в других средствах.
Таким образом, Штамм гриба Нурsizуgиs иlтаriиs (BuIl.) Rеdhеаd. S-ulml обладает более высокой скоростью роста и не только высокой противоопухолевой активностью, но и антиоксидантным действием.
Таблица 1.
Противоопухолевая активность средств полученных из погруженной культуры штамма Нурsizуgиs иlтаriиs S- ulml.
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
* Среднее значение расчетной массы опухоли ± стандартная ошибка.
** Отличие от контроля достоверны при P < 0,05.
Таблица 2.
Антиоксидантная емкость средств полученных из погруженной культуры штамма Нурsizуgиs иlтаriиs S- ulml.
Figure imgf000023_0001
Промышленная применимость
Предлагаемое изобретение позволяет получить новый штамм гриба Нурsizуgиs иlтаriиs S-ulml, обладающего более высокой скоростью роста в погруженной культуре (3 суток по сравнению с 7-14 сутками). Кроме того, полученное средство обладает не только противоопухолевой активностью, но и антиоксидантным действием.
Средство может быть получено в виде прозрачной жидкости светло-желтого цвета или в виде светло-бежевого порошка. На основе средства могут быть получены препараты в виде таблеток, капсул, настоек с добавлением наполнителей, витаминов и других средств, повышающих биологическую активность средства.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Штамм гриба Нурsizуgиs иlтаriиs (BuIl.) Rеdhеаd S-ulml - 01060 (KKM ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф.Гаузе PAMH)5 используемый для получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием.
2. Способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, включающий культивирование штамма базидиомицета в погруженной культуре при аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, и выделение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, отличающийся тем, что из базидиомицетов для культивирования используют штамм по п.1.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что выделение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, осуществляют из погруженной культуры, полученной после культивирования штамма, путем термообработки: кипячением или автоклавированием при 1,2-1,8 атм. в течение 1,5 - 3 часа.
4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что после культивирования штамма из полученной погруженной культуры отделяют мицелий, сушат его, и из него выделяют средство, обладающее противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что выделение средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, осуществляют путем экстракции сухого мицелия водой или этанолом.
PCT/RU2008/000563 2007-12-11 2008-08-20 Souche du champignon hypsizygus ultramarius (bull.) redhead s-ulm 1 utilisée pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante et procédé pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante sur la base de cette souche Ceased WO2009075605A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007145748/13A RU2007145748A (ru) 2007-12-11 2007-12-11 Штамм гриба hypsizygus ulmarius (bull.) redhead s-ulm1, используемый для получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием и способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью и антиоксидантным действием, на основе этого штамма
RU2007145748 2007-12-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2009075605A1 true WO2009075605A1 (fr) 2009-06-18
WO2009075605A8 WO2009075605A8 (ru) 2009-12-10

Family

ID=40755724

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2008/000563 Ceased WO2009075605A1 (fr) 2007-12-11 2008-08-20 Souche du champignon hypsizygus ultramarius (bull.) redhead s-ulm 1 utilisée pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante et procédé pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante sur la base de cette souche

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2007145748A (ru)
WO (1) WO2009075605A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2416418C1 (ru) * 2009-12-10 2011-04-20 Открытое Акционерное Общество Завод Экологической Техники И Экопитания "Диод" Способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью, и средство, полученное этим способом (варианты)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57206618A (en) * 1981-06-12 1982-12-18 Noda Shiyokukin Kogyo Kk Preparation of antitumor substance
SU1291027A3 (ru) * 1981-02-10 1987-02-15 Куреха Кагаку Когио Кабусики Кайся (Фирма) Способ получени гликопротеина,обладающего противоопухолевой и лектиноподобной активностью
RU2082755C1 (ru) * 1990-12-04 1997-06-27 Ил-Янг Фармасьютикал Ко., Лтд. Штамм ganoderma lucidum - продуцент протеогликана gоо9, обладающий противоопухолевой и иммуностимулирующей активностью
RU2192873C1 (ru) * 2001-05-08 2002-11-20 Герасименя Валерий Павлович Препарат, влияющий на тканевой обмен, и применение штамма гриба pleurotus 1137 для его получения
US20060057157A1 (en) * 2004-08-25 2006-03-16 Gavish-Galilee Bio Applications Ltd. Mushroom extracts having anticancer activity

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1291027A3 (ru) * 1981-02-10 1987-02-15 Куреха Кагаку Когио Кабусики Кайся (Фирма) Способ получени гликопротеина,обладающего противоопухолевой и лектиноподобной активностью
JPS57206618A (en) * 1981-06-12 1982-12-18 Noda Shiyokukin Kogyo Kk Preparation of antitumor substance
RU2082755C1 (ru) * 1990-12-04 1997-06-27 Ил-Янг Фармасьютикал Ко., Лтд. Штамм ganoderma lucidum - продуцент протеогликана gоо9, обладающий противоопухолевой и иммуностимулирующей активностью
RU2192873C1 (ru) * 2001-05-08 2002-11-20 Герасименя Валерий Павлович Препарат, влияющий на тканевой обмен, и применение штамма гриба pleurotus 1137 для его получения
US20060057157A1 (en) * 2004-08-25 2006-03-16 Gavish-Galilee Bio Applications Ltd. Mushroom extracts having anticancer activity

Also Published As

Publication number Publication date
WO2009075605A8 (ru) 2009-12-10
RU2007145748A (ru) 2009-06-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102195870B1 (ko) 차가버섯균 및 그의 응용
CN101979499A (zh) 一种大量产生β-聚苹果酸的诱变菌株出芽短梗霉TKPM00006及其培养方法
CN113308378B (zh) 高产麦角硫因的灵芝菌株及其应用
CN101294137A (zh) 一种节菱孢菌株及其用途
CN101502218A (zh) 桦褐孔菌菌核及子实体的人工栽培方法
RU2409658C1 (ru) Посевной мицелий базидиомицета и способ его приготовления
CN112358971B (zh) 一种具有抗菌、抗氧化和抗癌作用的真菌dym25及其应用
CN114085781A (zh) 一种灵芝菌gz及其应用
CN112574893A (zh) 鲍氏桑黄孔菌、其发酵产物的制备方法及应用
RU2418062C1 (ru) Способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью, и средство, обладающее противоопухолевой активностью
CN110447457B (zh) 一种血红密孔菌菌株及其人工栽培方法和用途
US4339435A (en) Anti-tumor substance
KR20040047730A (ko) 펠리누스 린테우스 균사체 배양용 배지 조성물
JPS5973519A (ja) スワインソニンの製造法およびそれを含む免疫調整剤
CN112195105B (zh) 田纳西曲霉及其应用
CN115386497A (zh) 一株硬毛粗盖孔菌及其栽培方法与应用
WO2009075605A1 (fr) Souche du champignon hypsizygus ultramarius (bull.) redhead s-ulm 1 utilisée pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante et procédé pour fabriquer un produit possédant une activité antitumorale et une action antioxydante sur la base de cette souche
RU2430155C1 (ru) Посевной мицелий базидиомицета и способ его приготовления
CN104403952A (zh) 一种菌核侧耳新菌种及其栽培方法和应用
KR100706132B1 (ko) 펠리누스 린테우스 균사체 배양용 배지 조성물
CN100420679C (zh) 化合物、菌株、及应用该菌株生产该化合物的方法
CN1212387C (zh) 从虫草体分离培养的细棒束孢sx－1及其培养方法和用途
CN110387333A (zh) 一种用兰坪虫草菌粉培养牛樟芝的方法
JP2002045035A (ja) 九州虫草菌の人工培養方法及びその子実体造粒物
KR101999273B1 (ko) 고순도 코디세핀의 제조 방법, 고함량의 코디세핀을 함유하는 동충하초 및 그로부터 얻어지는 고순도 코디세핀

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08859005

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 08859005

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1